特許 7015322 ＭＩＣ－１化合物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-01-25

(45)【発行日】2022-02-02

(54)【発明の名称】ＭＩＣ－１化合物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20220126BHJP

   C07K 14/575 20060101ALI20220126BHJP

   C07K 14/435 20060101ALI20220126BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20220126BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20220126BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20220126BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20220126BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20220126BHJP

   C12N 15/19 20060101ALN20220126BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00

C07K14/575

C07K14/435

A61P3/04

A61K38/19

A61K38/22

A61K47/54

A61K47/64

C12N15/19 ZNA

【請求項の数】 27

(21)【出願番号】P 2019563484

(86)(22)【出願日】2018-05-23

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-07-16

(86)【国際出願番号】 EP2018063476

(87)【国際公開番号】W WO2018215525

(87)【国際公開日】2018-11-29

【審査請求日】2020-01-14

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2017/085576

(32)【優先日】2017-05-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2017/113335

(32)【優先日】2017-11-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【早期審査対象出願】

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】509091848

【氏名又は名称】ノヴォ ノルディスク アー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】カオ、シアン

(72)【発明者】

【氏名】チャン、シュージ

(72)【発明者】

【氏名】グァン、ホンタオ

(72)【発明者】

【氏名】チョイアーセン、ヘニング

(72)【発明者】

【氏名】サース－オルム、クリスチャン

(72)【発明者】

【氏名】アイバーセン、ラーズ、フォー

(72)【発明者】

【氏名】ノーガード、ペール

(72)【発明者】

【氏名】ヨルゲンセン、セバスチャン、ベック

(72)【発明者】

【氏名】ハンセン、クリスチャン、タージュ

(72)【発明者】

【氏名】ワン、イー

(72)【発明者】

【氏名】フリーボア、キラン、ウォルダーマー、コンデ

(72)【発明者】

【氏名】ヴィツォレク、ブリジット

【審査官】藤澤 雅樹

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５１８４６８（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１６／１０２５６２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／１４９５０１（ＷＯ，Ａ２）

【文献】国際公開第２０１５／２０００７８（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ｃ１２Ｎ １５／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＭＩＣ－１ポリペプチドと、
前記ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端に結合されたアミノ酸延長部と、
前記アミノ酸延長部に結合されたプロトラクターと、を含むＭＩＣ－１化合物であって、
前記アミノ酸延長部が、３０～３６個のアミノ酸残基を含み、
前記アミノ酸延長部が、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２５）、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２６）、
ＳＥＰＡＴＳＣＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２７）、
ＳＥＰＡＣＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＣＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＣＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＣＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＣＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＣＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＣＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３６）、および
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＣＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３７）からなる群から選択される配列を含み、
前記Ｃｙｓ残基と前記ＭＩＣ－１ポリペプチドの前記Ｎ末端アミノ酸との間の距離が、少なくとも３個のアミノ酸であり、
前記プロトラクターが、前記Ｃｙｓ残基において前記アミノ酸延長部に結合され、
前記プロトラクターが、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４を含み、
Ｃｈｅｍ．１が、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、かつ
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２が、
Ｃｈｅｍ．２Ａ：＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊および
Ｃｈｅｍ．２Ｂ：＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、かつ
式中、Ｃｈｅｍ．２のｋは、０～４の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．３が、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
式中、ｎは、１～５の範囲の整数であり、かつ
式中、ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４が、
Ｃｈｅｍ．４Ａ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊および
Ｃｈｅｍ．４Ｂ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．４のｍは、１～５の範囲の整数であり；
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４が、アミド結合を介して相互連結され、
Ｃｈｅｍ．４が、そのＣＨ_２－＊末端において、前記アミノ酸延長部の前記Ｃｙｓ残基のイオウ原子に連結され、かつ
前記アミノ酸延長部を有する前記ＭＩＣ－１ポリペプチドが、６．５より低いｐＩ計算値を有する、ＭＩＣ－１化合物。

【請求項2】

Ｃｈｅｍ．１が、
Ｃｈｅｍ．１ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_９－ＣＯ－＊からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項3】

Ｃｈｅｍ．２が、
Ｃｈｅｍ．２ａ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＯ－＊および
Ｃｈｅｍ．２ｂ：＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_３－ＣＯ－＊からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項4】

Ｃｈｅｍ．４が、
Ｃｈｅｍ．４ａ：＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊および
Ｃｈｅｍ．４ｂ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項5】

Ｃｈｅｍ．１が、
Ｃｈｅｍ．１ａ：ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｂ：ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１ｃ：ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_９－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
Ｃｈｅｍ．２が、
Ｃｈｅｍ．２ａ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＯ－＊および
Ｃｈｅｍ．２ｂ：＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_３－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
Ｃｈｅｍ．４が、
Ｃｈｅｍ．４ａ：＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊および
Ｃｈｅｍ．４ｂ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項6】

前記プロトラクターが、式ＩＸ、式Ｘ、式ＸＩ、式ＸＩＩ、および式ＸＩＩＩ：

【化1】

（式ＩＸ）、

【化2】

（式Ｘ）、

【化3】

（式ＸＩ）、

【化4】

（式ＸＩＩ）

【化5】

（式ＸＩＩＩ）
からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項7】

前記ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１と比較したとき、Ｍ５７ＬおよびＭ８６Ｌのうちの少なくとも一つを含む、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項8】

前記ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１と比較したとき、最初の三つの残基の欠失またはＮ３の欠失を含む、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項9】

前記ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１と比較したとき、（ｉ）Ｍ５７ＬおよびＭ８６Ｌのうちの少なくとも一つ、ならびに（ｉｉ）最初の三つの残基の欠失またはＮ３の欠失を含む、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項10】

前記ＭＩＣ－１ポリペプチドと前記アミノ酸延長部との組み合わせが、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、および配列番号２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項11】

前記化合物が、

【化6】

（式０１）、

【化7】

（式０２）、

【化8】

（式０３）、

【化9】

（式０５）、

【化10】

（式０７）、

【化11】

（式１１）、

【化12】

（式１７）、

【化13】

（式１８）、

【化14】

（式１９）、

【化15】

（式２０）、および

【化16】

（式２１）
からなる群から選択される、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項12】

前記化合物が、

【化17】

（式０１）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項13】

前記化合物が、

【化18】

（式０２）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項14】

前記化合物が、

【化19】

（式０３）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項15】

前記化合物が、

【化20】

（式０５）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項16】

前記化合物が、

【化21】

（式０７）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項17】

前記化合物が、

【化22】

（式１１）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項18】

前記化合物が、

【化23】

（式１７）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項19】

前記化合物が、

【化24】

（式１８）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項20】

前記化合物が、

【化25】

（式１９）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項21】

前記化合物が、

【化26】

（式２０）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項22】

前記化合物が、

【化27】

（式２１）
である、請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物。

【請求項23】

請求項１に記載のＭＩＣ－１化合物を含む、肥満を処置するための医薬組成物。

【請求項24】

Ｃｈｅｍ．１が、
Ｃｈｅｍ．１ａ：ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｂ：ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１ｃ：ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_９－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
Ｃｈｅｍ．２が、
Ｃｈｅｍ．２ａ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＯ－＊および
Ｃｈｅｍ．２ｂ：＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_３－ＣＯ－＊からなる群から選択され、かつ
Ｃｈｅｍ．４が、
Ｃｈｅｍ．４ａ：＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊および
Ｃｈｅｍ．４ｂ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊からなる群から選択される、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記アミノ酸延長部が、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２５）、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２６）、
ＳＥＰＡＴＳＣＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２７）、
ＳＥＰＡＣＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＣＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＣＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＣＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＣＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＣＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＣＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３６）、および
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＣＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３７）からなる群から選択される配列を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記ＭＩＣ－１ポリペプチドと前記アミノ酸延長部との組み合わせが、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、および配列番号２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項27】

前記ＭＩＣ－１化合物が、

【化28】

（式０１）、

【化29】

（式０２）、

【化30】

（式０３）、

【化31】

（式０５）、

【化32】

（式０７）、

【化33】

（式１１）、

【化34】

（式１７）、

【化35】

（式１８）、

【化36】

（式１９）、

【化37】

（式２０）、および

【化38】

（式２１）
からなる群から選択される、請求項２３に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＭＩＣ－１化合物およびその医薬品の使用に関する。

【0002】

配列表の参照による組み込み
「配列表」と題される配列表は、２０５．０３２バイトであり、２０１８年５月２３日に作成され、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

マクロファージ阻害性サイトカイン－１（ＭＩＣ－１）は、活性化マクロファージの発現の増加を示す実験に基づき、１９９７年に初めて記載された（Ｂｏｏｔｃｏｖ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｏｃｔ １９９７）。その後、ＭＩＣ－１は、他者によって同定され、胎盤トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＰＴＧＦ－β）、胎盤骨形成タンパク質、増殖分化因子－１５（ＧＤＦ１５）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）、非ステロイド性抗炎症薬物活性化遺伝子（ＮＡＧ－１）、およびＰＬ７４などのいくつかの追加の名前が付けられた。ＭＩＣ－１は、ＴＧＦ－ベータスーパーファミリーの遠縁のメンバーであり、細胞増殖および分化に関与するペプチドホルモンのファミリーである。ＭＩＣ－１は、システインに富むホモ二量体として循環し、２４．５ＫＤａの分子質量を有する。ヒト野生型ＭＩＣ－１は短い半減期を有し、このことは、野生型ＭＩＣ－１による処置は有効性（ｅｆｆｉｃａｃｙ）を維持するためには投与を毎日必要とすることを意味する。

【0004】

累積した証拠により、肥満および糖尿病などの代謝障害におけるＭＩＣ－１の治療的な有用性が裏付けられる。進行癌を有する患者からのデータにより、体重の減少がＭＩＣ－１の循環レベルと相関していることが示された（Ｊｏｈｎｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｍｅｄ．，Ｎｏｖ，２００７）。ＭＩＣ－１を過剰発現するトランスジェニックマウスは、正常な低脂肪食餌および高脂肪食餌の両方において、体重および体脂肪の増加がより少ない（Ｍａｃｉａ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，Ａｐｒ，２０１２）。低脂肪および高脂肪食餌の両方を与えたＭＩＣ－１を過剰発現するトランスジェニックマウスはそれぞれ、同等の食餌での野生型動物と比較して、グルコースも改善した。

【0005】

国際特許公開公報第２００５０９９７４６号は、ＭＩＣ－１調節剤を投与することにより食欲および／または体重を調節する方法に関する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドおよびアミノ酸延長部に結合されたプロトラクター（ｐｒｏｔｒａｃｔｏｒ）を含むＭＩＣ－１化合物に関する。一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドと、アミノ酸延長部に結合されたプロトラクターとを含み、アミノ酸延長部は、３～２００個のアミノ酸残基を含み、かつアミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、６．５より低いｐＩ計算値を有する。

【0007】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、１個のシステイン残基を有するＮ末端アミノ酸延長部を有し、プロトラクターは、システイン残基に結合されている。これらの実施形態では、プロトラクターは、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ： ＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－（ＮＨ－（ＣＨ２）ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ）_ｋ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、かつ
Ｃｈｅｍ．２のｋは、０～４の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．３は、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、かつ
ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４は、
Ｃｈｅｍ．４Ａ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、
Ｃｈｅｍ．４Ｂ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、
Ｃｈｅｍ．４Ｃ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４Ｄ

【化1】

から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．４のｍは、１～５の範囲の整数であり、ｎは、２～６の範囲の整数であり、かつ
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４は、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結するアミド結合を介して相互連結され、Ｃｈｅｍ．４は、アミノ酸延長部のシステイン残基のイオウ原子に連結されている。

【0008】

化学式中のアスタリスク（＊）は、結合点を示す。

【0009】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、が、塩基性アミノ酸残基（リジン、アルギニン、および／またはヒスチジンなど）の数と比較して、少なくとも３個、４個、５個、または６個の過剰な酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸および／またはグルタミン酸など）を有するＮ末端延長部を含む。

【0010】

本発明のいくつかの実施形態では、ＭＩＣ－１化合物は、Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、およびＤからなる群の中から選択されるアミノ酸残基からなるＮ末端延長部を含み、アミノ酸延長部は、少なくとも３個のＥおよび／またはＤアミノ酸残基を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、配列番号１のＭＩＣ－１と少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を示すＭＩＣ－１ポリペプチドを含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、最初の３個の残基の欠失（ＭＩＣ－１－Δ１－３）またはアスパラギン３の欠失（ｄｅｓ－Ｎ３）を含むＭＩＣ－１ポリペプチドを含む。

【0013】

本発明の特定の実施形態では、ＭＩＣ－１化合物は、配列番号８７、９０、９２、９３、９４、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０８、１０９、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１６４、２８８、２８９、２９０、２９１、または２９２によるアミノ酸配列を有する、ＭＩＣ－１ポリペプチドおよびＮ末端アミノ酸延長部を含む。

【0014】

一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、保持されたＭＩＣ－１受容体効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）、および食物摂取量および体重の低下に対するインビボでの有効性を有する。したがって、これらのＭＩＣ－１化合物は、代謝障害、例えば、肥満、糖尿病、脂質異常症および動脈硬化症などの心血管疾患、ならびに脂肪性肝炎および糖尿病性腎症などの他の障害の処置のために使用することができる。

【0015】

一態様では、本発明は、本発明のＭＩＣ－１化合物またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステル、および一つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

【0016】

一態様では、本発明は、代謝障害の予防および／または処置で使用するためのＭＩＣ－１化合物を提供し、代謝障害は、肥満、２型糖尿病、脂質異常症、もしくは糖尿病性腎症である。

【0017】

一態様では、本発明は、脂質異常症、動脈硬化症、非アルコール性脂肪性肝炎、もしくは糖尿病性腎症の予防および／または処置に使用するためのＭＩＣ－１化合物を提供する。

【0018】

一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、ヒト野生型ＭＩＣ－１と比較して、長期化された（ｐｒｏｔｒａｃｔｅｄ）血漿曝露、すなわち延長された半減期を有する。

【0019】

一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、改善された溶解度を有する。一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、改善された化学的安定性を有する。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】図１は、単一の１２ｍｅｒ構成ブロック（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）を有するＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現。すべての細胞をＴＢ中３７℃で増殖させ、ＯＤ６００が１．０に達した後に０．５ｍＭ ＩＰＴＧを添加することによってタンパク質の発現を誘導した。細胞を一晩後に採取し、全溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上に充填することにより発現レベルを調べた。野生型ヒトＭＩＣ－１（ＭＩＣ－１）を陽性対照として充填した。

【図2】図２は、二つの１２ｍｅｒ構成ブロックを有するＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現。すべての細胞をＴＢ中３７℃で増殖させ、ＯＤ６００が１．０に達した後に０．５ｍＭ ＩＰＴＧを添加することによってタンパク質の発現を誘導した。細胞を一晩後に採取し、全溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上に充填することにより発現レベルを調べた。ＭＩＣ－１を陽性対照として充填した。

【図3】図３は、ａ）１２ｍｅｒ－（４＋２＋＿）、１２ｍｅｒ－（４＋４＋＿）、および１２ｍｅｒ－（４＋３＋＿）で開始するＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの中での発現レベルの比較。１２ｍｅｒ－（４＋３＿）を有する群およびドット（ｄｏｔ）によって示される構築体が、ＭＩＣ－１ポリペプチド配列中にＭ５７Ｌを含むことに留意すべきである。ｂ）発現レベルに対する延長した１２ｍｅｒの効果。さらに、３．６の群内の最低データ点は、Ｍ５７Ｌを含有するＭＩＣ－１ポリペプチドである。この図では、「１．６後部」はＴＳＴＥＥＧを表し、「２．６」はＴＳＥＳＡＴを表し、「３．６」はＴＳＴＥＰＳを表し、また「４．６」はＳＥＰＡＴＳを表す。

【図4】図４は、１２ｍｅｒ－（４＋２＋＿）、１２ｍｅｒ－（４＋３＋＿）＋Ｍ５７Ｌ、１２ｍｅｒ－（３個の反復）、および１２ｍｅｒ－（４個の反復）を有する代表例のＳＤＳ－ＰＡＧＥ。Ｔ：総タンパク質、Ｓ：可溶性画分、Ｐ：細胞ペレット（封入体）。

【図5】図５は、配列内変異を有するＭＩＣ－１ポリペプチド。この図では、ＭＩＣ－１ポリペプチド配列はＭＩＣ－１Δ１－３である。Ｔ：総タンパク質、Ｓ：可溶性画分、Ｐ：細胞ペレット（封入体）。

【図6】図６は、ブタにおける薬力学（ＰＤ）研究中の経時的な体重変化。０１：化合物０１、０５：化合物０５。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本発明は、Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドおよびアミノ酸延長部に結合されたプロトラクターを含むＭＩＣ－１化合物に関する。

【0022】

一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、ＭＩＣ－１ポリペプチドと、Ｎ末端アミノ酸延長部と、アミノ酸延長部に結合されたプロトラクターとを含み、アミノ酸延長部は、３～２００個のアミノ酸残基を含み、かつＭＩＣ－１ポリペプチドおよびアミノ酸延長部は一緒に、６．５より低いｐＩ計算値を有する。

【0023】

本発明のＭＩＣ－１化合物は、生物学的に活性である。例えば、それらは、ＭＩＣ－１と比較して、効力があり、完全な有効性を保持し、また、長期化された血漿曝露プロファイル、すなわち、延長された半減期も有する。効力および長い半減期の特定の組み合わせが望ましい。

【0024】

ＭＩＣ－１
本明細書で使用する場合、「ＭＩＣ－１」という用語は、増殖分化因子１５（ＧＤＦ－１５）、胎盤骨形成タンパク質（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＰＬＡＢ）、および非ステロイド性抗炎症薬物活性化遺伝子（ＮＡＧ－１）としても知られる、マクロファージ阻害性サイトカイン－１（ＭＩＣ－１）を意味する。次いで、ＭＩＣ－１は、６２ｋＤａの細胞内ホモ二量体前駆体タンパク質として合成され、これはフーリン様プロテアーゼによって２４．５ｋＤａのホモ二量体へと切断される。全長野生型ヒトＭＩＣ－１の配列は、アクセッション番号Ｑ９９９８８にてＵＮＩＰＲＯＴデータベースから入手可能である。３０８個のアミノ酸の前駆体配列は、シグナルペプチド（アミノ酸１～２９）、プロペプチド（アミノ酸３０～１９６）、およびＭＩＣ－１単量体配列（アミノ酸１９７～３０８）を含む。１１２個のアミノ酸のＭＩＣ－１単量体配列は、配列番号１として本明細書に含まれる。ＭＩＣ－１単量体は、９個のシステイン残基を含有し、これは、４個の鎖内ジスルフィド結合および１個の鎖間ジスルフィド結合の形成を生じさせて、共有結合した２４．５ＫＤａのホモ二量体を生成させる。ＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）中のＨ６Ｄに対応する自然発生の変異が記載されている。

【0025】

本明細書で使用する場合、「ＭＩＣ－１化合物」という用語は、ＭＩＣ－１ポリペプチド、Ｎ末端アミノ酸延長部、およびプロトラクターを含む化合物を指す。ＭＩＣ－１化合物は、典型的には、ホモ二量体の形態である。

【0026】

本明細書で使用する場合、「ＭＩＣ－１ポリペプチド」という用語は、配列番号１のヒトＭＩＣ－１単量体配列またはその類似体を指す。特定のＭＩＣ－１残基に対する数値の言及は、別段の記載のない場合、１１２個のアミノ酸の単量体配列（すなわち、残基１はアラニン（Ａ１）であり、残基１１２はイソロイシン（Ｉ１１２）である）を指す。

【0027】

本明細書で使用する場合、「ＭＩＣ－１類似体」または「ＭＩＣ－１の類似体」という用語は、配列番号１の単量体ＭＩＣ－１配列のアミノ酸変異体であるＭＩＣ－１ポリペプチドを指す。言い換えれば、ＭＩＣ－１類似体は、ヒトＭＩＣ－１（配列番号１）と比較したとき、アミノ酸残基の数が変化したＭＩＣ－１ポリペプチドである。これらの変化は、独立して、一つ以上のアミノ酸置換、付加、および／または欠失を表し得る。

【0028】

ＭＩＣ－１類似体は、変化したアミノ酸残基、アミノ酸残基の数（すなわち、ＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）中の対応する位置）、および変化（例えば、アミノ酸残基の変化）を参照することによって記載されてもよい。

【0029】

一態様では、ＭＩＣ－１類似体は、配列番号１のＭＩＣ－１の機能性変異体である。本発明の一態様では、ＭＩＣ－１類似体は、配列番号１のＭＩＣ－１と少なくとも８５％、９０％、または９５％の配列同一性を示す。二つの類似体の間の配列同一性を決定する方法の一例として、Ｈ６Ｄ ＭＩＣ－１および配列番号１のＭＩＣ－１の二つのペプチドを整列する。配列番号１のＭＩＣ－１に対するＨ６Ｄ ＭＩＣ－１類似体の配列同一性は、整列した同一残基の数を配列番号１のＭＩＣ－１の整列した残基の総数で除算することによって与えられる。したがって、この例では、配列同一性をパーセントで表すと、（１１２－１）／１１２×１００である。ＭＩＣ－１類似体の配列同一性の決定において、Ｎ末端アミノ酸延長部は含まれない。好適な整列プログラムは、好適な整列プログラムで試験された「ｎｅｅｄｌｅ」することができ、これはＮｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ整列である。この整列プログラムのアルゴリズムは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．，（１９７０），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４８：４４３－４５３に記載されている。

【0030】

本発明の別の態様では、ＭＩＣ－１類似体は、配列番号１のヒトＭＩＣ－１に対して、１５個、１０個、または５個未満のアミノ酸修飾（置換、欠失、付加（挿入を含む）、およびそれらの任意の組み合わせ）を含む。本出願全体を通して使用される「アミノ酸修飾」という用語は、単量体ＭＩＣ－１（配列番号１）と比較して、アミノ酸に対する修飾の意味で使用される。この修飾は、アミノ酸の欠失、アミノ酸の付加、あるアミノ酸を別のアミノ酸で置換すること、またはペプチドのアミノ酸に共有結合した置換基の結果とすることができる。

【0031】

置換：一態様では、アミノ酸は、保存的置換によって置換され得る。本明細書で使用する場合、「保存的置換」という用語は、一つ以上のアミノ酸を別の生物学的に類似した残基で置換することを意味する。例としては、アミノ酸残基を類似する特徴物（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）、例えば、小さなアミノ酸、酸性アミノ酸、極性アミノ酸、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸、および芳香族アミノ酸で置換することが挙げられる。

【0032】

一態様では、アミノ酸は、非保存的置換によって置換されてもよい。本明細書で使用する場合、「非保存的置換」という用語は、一つ以上のアミノ酸を異なる特徴を有する別のアミノ酸で置き換えることを意味する。例としては、酸性アミノ酸残基での塩基性アミノ酸残基の置換、芳香族アミノ酸残基での極性アミノ酸残基の置換などが挙げられる。一態様では、非保存的置換は、コード化されたアミノ酸を異なる特徴を有する別のコード化されたアミノ酸で置換することである。一態様では、ＭＩＣ－１類似体は、一つ以上の非天然アミノ酸および／または非アミノ酸、例えばアミノ酸模倣体のＭＩＣ－１配列の中への置換を含み得る。

【0033】

本発明の一態様では、単量体ＭＩＣ－１配列（配列番号１）の３位に対応する位置のアスパラギンが、セリン（Ｎ３Ｓ）、グルタミン酸（Ｎ３Ｅ）、アラニン（Ｎ３Ａ）、またはグルタミン（Ｎ３Ｑ）に置換される。本発明の一態様では、ヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の３位に対応する位置のアスパラギンが、グルタミン酸（Ｎ３Ｅ）に置換される。

【0034】

本発明の一態様では、ヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の２位に対応する位置のアルギニンがアラニン（Ｒ２Ａ）に置換され、ヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の３位に対応する位置のアスパラギンがグルタミン酸（Ｎ３Ｅ）に置換されている。

【0035】

本発明の一態様では、ヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の２位に対応する位置のアルギニンがグルタミン酸（Ｒ２Ｅ）に置換され、ヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の３位に対応する位置のアスパラギンがセリン（Ｎ３Ｓ）に置換されている。

【0036】

欠失および切断：一態様では、本発明のＭＩＣ－１類似体は、ＭＩＣ－１のアミノ酸配列（配列番号１）から欠失された一つ以上のアミノ酸残基を単独でまたは一つ以上の挿入もしくは置換と組み合わせて有し得る。

【0037】

アミノ酸が欠失したＭＩＣ－１類似体は、「ｄｅｓ」、および欠失されたアミノ酸残基、続いて欠失されたアミノ酸の数（すなわち、単量体ＭＩＣ－１（配列番号１）の対応する位置）への言及によって記述され得る。本発明のいくつかの実施形態では、ヒト単量体ＭＩＣ－１（配列番号１）の３位に対応する位置のアスパラギンが欠失されている（ＭＩＣ－１ ｄｅｓ－Ｎ３、配列番号２）。本発明のいくつかの実施形態では、ヒト単量体ＭＩＣ－１（配列番号１）の１位に対応する位置のアラニンが欠失されている（ＭＩＣ－１、ｄｅｓ－Ａ１）。

【0038】

Ｎ末端またはＣ末端において一つ以上のアミノ酸残基が切断されたＭＩＣ－１類似体は、「ＭＩＣ－１－Δ」および欠失されたアミノ酸残基の番号（すなわち、単量体ＭＩＣ－１（配列番号１）における対応する位置）への言及によって記述され得る。本発明のいくつかの実施形態では、Ｎ末端における最初の３個の残基（Ａ１、Ｒ２、Ｎ３）が欠失されている（ＭＩＣ－１－Δ１－３、配列番号３）。

【0039】

挿入：一態様では、本発明のＭＩＣ－１類似体は、ヒトＭＩＣ－１のアミノ酸配列に単独でまたは一つ以上の欠失および／または置換と組み合わせて挿入された一つ以上のアミノ酸残基を有する。

【0040】

一態様では、本発明のＭＩＣ－１類似体は、一つ以上の非天然アミノ酸および／または非アミノ酸のＭＩＣ－１配列への挿入を含む。

【0041】

例えば、本明細書で使用する場合、「タンパク質」または「ポリペプチド」という用語は、アミド（またはペプチド）結合によって相互連結された一連のアミノ酸を含む化合物を指す。アミノ酸は、アミン基およびカルボン酸基、ならびに側鎖と呼ばれることの多い一つ以上の追加的な基を任意選択で含有する分子である。

【0042】

「アミノ酸」という用語は、コード化された（またはタンパク質原性（ｐｒｏｔｅｉｎｏｇｅｎｉｃ）または天然）アミノ酸（それらのうち、２０個の標準アミノ酸）だけでなくコード化されていない（または非タンパク質原性または非天然）アミノ酸を含む。コード化されたアミノ酸は、タンパク質に天然で組み込まれるアミノ酸である。標準アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたアミノ酸である。コード化されていないアミノ酸は、タンパク質中に見出されないか、または標準的な細胞機構によって産生されないかのいずれかである（例えば、それらは、翻訳後修飾を享受している場合がある）。以下では、光学異性体が記載されていないときのＭＩＣ－１タンパク質のすべてのアミノ酸は、（別段の指定がない限り）Ｌ－異性体を意味すると理解されるべきである。

【0043】

上記の例から明らかなように、アミノ酸残基は、その完全な名称、１文字のコード、および／または３文字のコードによって識別されうる。これらの三つの方法は完全に均等である。読み手の便宜のために、１文字および３文字のアミノ酸コードを以下に提供する：
グリシン：ＧおよびＧｌｙ；プロリン：ＰおよびＰｒｏ；アラニン：ＡおよびＡｌａ；バリン：ＶおよびＶａｌ；ロイシン：ＬおよびＬｅｕ；イソロイシン：ＩおよびＩｌｅ；メチオニン：ＭおよびＭｅｔ；システイン：ＣおよびＣｙｓ；フェニルアラニン：ＦおよびＰｈｅ；チロシン：ＹおよびＴｙｒ；トリプトファン：ＷおよびＴｒｐ；ヒスチジン：ＨおよびＨｉｓ；リジン：ＫおよびＬｙｓ；アルギニン：ＲおよびＡｒｇ；グルタミン：ＱおよびＧｉｎ；アスパラギン：ＮおよびＡｓｎ；グルタミン酸：ＥおよびＧｌｕ；アスパラギン酸：ＤおよびＡｓｐ；セリン：ＳおよびＳｅｒ；ならびにトレオニン：ＴおよびＴｈｒ。

【0044】

Ｎ末端アミノ酸延長部
本発明のＭＩＣ－１化合物は、Ｎ末端アミノ酸延長部を含む。

【0045】

本明細書で使用する場合、「Ｎ末端アミノ酸延長部」という用語は、ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端が、ペプチド結合を介してＮ末端アミノ酸延長部のＣ末端に結合されていることを意味する。「Ｎ末端アミノ酸延長部」、「Ｎ末端延長部」、および「Ｎ延長部」という用語は、本明細書では同じものを意味し、互換的に使用される。一実施形態では、本発明の化合物は、Ｎ末端、すなわち、１位のアラニン１（Ａ１）においてペプチド結合を介して結合されたアミノ酸延長部を有するヒトＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）を含む。

【0046】

本発明のいくつかの実施形態では、Ｎ末端アミノ酸延長部は、最大２００個のアミノ酸残基長である。本発明の特定の実施形態では、Ｎ末端アミノ酸延長部は、３～３６個のアミノ酸残基を有する。

【0047】

本発明の一態様では、Ｎ末端アミノ酸延長部は、塩基性アミノ酸残基（リジン、アルギニン、および／またはヒスチジン）の数と比較して、少なくとも３個、４個、５個、または６個の過剰な酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸および／またはグルタミン酸）を有する。「過剰な」酸性アミノ酸残基とは、酸性残基の数が塩基性残基の数を超えることを意味する。過剰な酸性アミノ酸残基の定義された値は、酸性残基の数から塩基性残基の数を引いた数として計算される。

【0048】

メチオニンは、原核細胞（例えば細菌、例えばＥ．ｃｏｌｉ）でのタンパク質発現のための当初のアミノ酸である。本発明のいくつかの実施形態では、当初のメチオニンは、タンパク質発現中にタンパク質から除去される。したがって、当初のメチオニンは、ＭＩＣ－１化合物のＮ延長部の配列には含まれない。しかしながら、当業者は、当初のメチオニンをコード化する開始コドンはタンパク質翻訳の開始に必要であり、例外なく、タンパク質発現のためにヌクレオチド配列の直前に組み込まれるべきであることを知っている。

【0049】

一方で、当初のメチオニンを有するＮ延長部を有するＭＩＣ－１化合物も本発明の範囲の中へと含まれると理解することができる。

【0050】

プロトラクター
本発明のＭＩＣ－１化合物は、プロトラクターを含む。プロトラクターは、ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端アミノ酸延長部の特定のアミノ酸残基に共有結合している。

【0051】

「プロトラクター」という用語は、血漿曝露の延長をもたらす特性（「半減期延長部分」）に関し、ＭＩＣ－１に結合されたときにＭＩＣ－１のインビボ循環半減期を増加することができる、－ＳＨ、－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２などのアミノ酸部位鎖官能基に結合される化学基を指すと本明細書では理解される。プロトラクターの例としては、脂肪酸およびその誘導体、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、例えばヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（Ｇｌｙｘ－Ｓｅｒｙ）ｎ（ＨＡＰ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ヘパロサン（Ｈｅｐａｒｏｓａｎ）ポリマー（ＨＥＰ）、ホスホリルコリン系のポリマー（ＰＣポリマー）、フレキシマー（Ｆｌｅｘｉｍｅｒ）、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、Ｆｃドメイン、トランスフェリン、アルブミン、エラスチン様ペプチド、非構造化反復アミノ配列（ｕｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔｅｄ ａｍｉｎｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（例えばＸＴＥＮポリマー）、アルブミン結合ペプチド、ＣＴＰペプチド、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0052】

本発明のいくつかの実施形態では、プロトラクターは、アルブミンと非共有結合を形成することができ、これによって、ＭＩＣ－１化合物の血液／血漿曝露時間を増加させ、また、ＭＩＣ－１化合物とアルブミンとの会合が活性医薬成分を放出するために低速でしか分解されないという事実により、ＭＩＣ－１化合物の作用時間を延長する効果も有する。

【0053】

いくつかの実施形態では、本発明の脂肪酸を含むプロトラクターは、アルブミンと非共有結合を形成することができ、それによって、ヒト野生型ＭＩＣ－１と比較してＭＩＣ－１化合物の血漿半減期を延長する。

【0054】

本発明のいくつかの実施形態では、プロトラクターは、ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸延長部のシステイン残基に共有結合している。一実施形態では、プロトラクターは、ハロアセトアミド基を含み、これは、チオ－エーテル結合とも称されるイオウ－炭素共有結合の形成下で、システイン残基のチオール基と反応する（このプロセスをＣｙｓアルキル化と称する）。別の実施形態では、プロトラクターは、マレイミド基を含み、これは、イオウ－炭素共有結合の形成下で、システイン残基のチオール基と反応する。

【0055】

本発明のいくつかの実施形態では、プロトラクターは、Ｎ末端アミノ酸延長部のＮ末端アミノ酸と共有結合している。

【0056】

脂肪酸を含むプロトラクター
本発明の一態様では、プロトラクターは、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり；
Ｃｈｅｍ．３は、＊ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊であり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、かつ
Ｃｈｅｍ．４は、
Ｃｈｅｍ．４Ａ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、
Ｃｈｅｍ．４Ｂ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、
Ｃｈｅｍ．４Ｃ：＊－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４Ｄ

【化2】

から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．４のｍは、１～５の範囲の整数であり、かつｎは、２～６の範囲の整数であり、または
Ｃｈｅｍ．４は、式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩからなる群から選択され：

【化3】

（式Ｉ）

【化4】

（式ＩＩ）または

【化5】

（式ＩＩＩ）
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４は、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結するアミド結合を介して相互連結されている。

【0057】

いくつかの実施形態では、本発明のプロトラクターは、一つのＣｈｅｍ．１、一つＣｈｅｍ．４、ならびにＣｈｅｍ．２およびＣｈｅｍ．３のうちの一つ以上を含む。非限定的な例として、プロトラクターは、一つのＣｈｅｍ．１要素、二つのＣｈｅｍ．２要素、二つのＣｈｅｍ．３要素、および一つのＣｈｅｍ．４要素からなる。

【0058】

Ｃｈｅｍ．２要素およびＣｈｅｍ．３要素は両方とも、－ＮＨ－およびＣＯ－末端を保有し、それらはアミド結合により相互に連結され、Ｃｈｅｍ．１またはＣｈｅｍ．４のＣＯ－または－ＮＨ－のいずれかに連結されている。Ｃｈｅｍ．４は、－ＮＨ末端（Ｃｈｅｍ．２またはＣｈｅｍ．３とアミド結合を形成することができる）を有する。Ｃｈｅｍ．４は、未反応形態において、システイン残基のチオール基と反応することができるハロアセトアミドである、－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－末端、または未反応形態において、システインのチオール基と反応することができるマレイミドである、括弧内が環構造を表す（－Ｎ＊－ＣＯ－ＣＨ２－ＣＨ＊＊－ＣＯ）－末端のいずれかを有するか、あるいは還元的アルキル化反応においてＮ末端アミノ基と反応することができるアルデヒドをさらに有する。

【0059】

ｘまたはｙによって定義されるＣｈｅｍ．１の炭素鎖の長さは、ｘについては１２～２０で変動し、ｙについては５～１５で変動し得る。より短い型またはより長い型は、異なる種類のプロトラクターに対して好ましいものであり得る。Ｃｈｅｍ．１Ａの特定の実施形態では、＊－（ＣＨ_２）_ｘ－＊は、ｘが１２～２０の範囲の整数（１４～１８など、または１６など）である、直鎖状アルキレンを指す。

【0060】

このＣｈｅｍ．１は、Ｃ１８二酸、すなわち、１８個の炭素原子を有する脂肪酸ジカルボン酸として簡潔に呼んでもよい。ｘ＝１６のとき、このリンカー要素の構造は、Ｃｈｅｍ．１ａ：ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊に対応する。

【0061】

さらなる実施形態では、Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）２－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_９－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊からなる群から選択される。

【0062】

さらなる実施形態では、Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２ａ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．２ｂ：＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_３－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．２ｃ：＊－ＮＨ－ＣＨ_２－シクロヘキサン－ＣＯ－＊からなる群から選択される。

【0063】

本発明の一態様では、プロトラクターは、システイン残基に結合し、プロトラクターは、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ： ＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－（ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ）_ｋ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、また
ｋは、０～４の範囲の整数であり；
Ｃｈｅｍ．３は、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、また
ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４は、
Ｃｈｅｍ．４Ａ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４Ｂ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．４のｍは、１～５の範囲の整数であり、また
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４は、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結するアミド結合を介して相互連結され、Ｃｈｅｍ．４のＣＨ_２－＊末端は、アミノ酸延長部のシステイン残基のイオウ原子に連結されている。

【0064】

本発明の一態様では、プロトラクターは、Ｎ末端アミノ酸に結合され、かつＣｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ：＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－（ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ）_ｋ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、
ｋは、０～４の範囲の整数であり；
Ｃｈｅｍ．３は、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、また
ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４は、式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩ：

【化6】

（式Ｉ）

【化7】

（式ＩＩ）、または

【化8】

（式ＩＩＩ）
からなる群から選択され、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４は、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結するアミド結合を介して相互連結され、Ｃｈｅｍ．４のＣＨ_２－＊末端は、アミノ酸延長部のＮ末端のアルファ－アミノ基に連結されている。

【0065】

命名法は、当該技術分野で通常のものであり、例えば、上記の式では、＊－ＣＯ－＊はカルボニル（＊－Ｃ（＝Ｏ）－＊）を指す。ベンゼンは、Ｃｈｅｍ．１Ｃにおいて、Ｃ１およびＣ３またはＣ４において－Ｏ－（ＣＨ_２）ｘ－＊および－ＣＯＯＨによってそれぞれ置換されている、環構造を指す。ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－＊は、スルホン酸基を記載する。

【0066】

本発明の化合物／プロトラクターは、同じ分子式および結合原子の配列を有するが、空間におけるそれらの原子の三次元方位のみが異なる、異なる立体異性体形態で存在し得る。本発明の例示的な化合物／プロトラクターの立体異性は、実験セクションにおいて、標準的な命名法を使用した名称だけでなく構造でも示されている。別段の記載のない限り、本発明は、特許請求された化合物／プロトラクターのすべての立体異性の形態に関する。

【0067】

等電点（ｐＩ）
Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＩ計算値は、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの正味の電荷計算値がゼロであるｐＨとして定義される。ｐＨの関数としてのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの電荷計算値は、表１に記載されるアミノ酸残基のｐＫａ値、およびＢ．Ｓｋｏｏｇ ａｎｄ Ａ．Ｗｉｃｈｍａｎ（Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８６，ｖｏｌ．５，ｐｐ．８２－８３）によって記載された方法を使用して得られる。システイン（Ｃｙｓ）の側鎖ｐＫａは、遊離スルフヒドリル基を有するシステインに対する電荷の計算にのみ含まれる。一例として、ホモ二量体としてのヒトの野生型ＭＩＣ－１のｐＩ計算値は８．８である。

【0068】

本明細書に記載されるように、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＩ計算はホモ二量体で行われる。

【0069】

表１：ｐＩの計算に使用されるアミノ酸残基のｐＫａ。ｐＫａ値は、「Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ Ｍｏｂｉｌｉｔｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗｉｔｈ Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｂｙ Ｒｉｃｋａｒｄ ＥＣ，Ｓｔｒｏｈｌ ＭＭ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＲＧ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９１，ｖｏｌ １９７，ｐｐ １９７－２０７」に記載されたものである。

【表1】

【0070】

機能特性
一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、良好な生物物理学的特性を有する。

【0071】

本発明のＭＩＣ－１化合物は、生物学的に活性である。例えば、それらは効力があり、ＭＩＣ－１受容体複合体に結合し、かつこれを活性化する。ＭＩＣ－１化合物は、より長い半減期として定義される長期化された血漿曝露も示す。例えば、ＭＩＣ－１化合物は、ラットおよび／またはミニブタに静脈内投与したときに、ＭＩＣ－１（配列番号１）と比較して著しくより長い血漿半減期を有する。受容体効力の保持および長い血漿半減期の特定の組み合わせは、非常に望ましいものであり得る。

【0072】

インビトロ活性
一態様では、本発明の化合物は、ヒトＭＩＣ－１（配列番号１）に対してＭＩＣ－１受容体効力を保持している。受容体効力および有効性は、ヒトＭＩＣ－１受容体（ｈＧＦＲＡＬ、ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ様）およびそのシグナル伝達共受容体ｈＲＥＴ（癌原遺伝子チロシンタンパク質キナーゼ受容体Ｒｅｔ）をトランスフェクトした哺乳動物細胞で測定することができる。受容体複合体のＭＩＣ－１化合物活性化は、実施例６に記載されるように、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化によって測定される。

【0073】

本明細書に記載されるように、受容体効力および有効性は、ホモ二量体としてのＭＩＣ－１化合物上で測定される。

【0074】

インビボ生物学的活性
一態様では、本発明の化合物は、インビボで効力があり、これは任意の好適な動物モデルで当該技術分野で公知のようにして決定され得る。

【0075】

非肥満Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットは、好適な動物モデルの一例であり、食物摂取量の変化は、例えば、実施例１４に記載されるように、そのようなラットにおいてインビボで決定され得る。一態様では、本発明の化合物は、非肥満Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおけるインビボ食物摂取を阻害する。

【0076】

インビボ血漿半減期
一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、長期化され、延長されたインビボ血漿半減期を有し、これは好適なインビボ薬物動態研究で決定することができる。

【0077】

延長された血漿曝露は、ラットまたはミニブタなどの動物への静脈内投与後の血漿半減期（Ｔ1/2）として決定され得る。

【0078】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、実施例１６に記載されるように決定される、ラットへの静脈内投与後に、少なくとも１０時間、より好ましくは２５～５０時間、または最も好ましくは少なくとも５０時間の血漿半減期を有する。

【0079】

いくつかの実施形態では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、実施例１７に記載されるように決定される、ミニブタへの静脈内投与後に、少なくとも５０時間、より好ましくは５０～２００時間、さらに好ましくは少なくとも２００時間、または最も好ましくは少なくとも３００時間の血漿半減期を有する。

【0080】

第三の態様によれば、本発明の化合物は長期化され、同時にインビボ効力が保持される。効力の保持および長い血漿半減期の特定の組み合わせは、非常に望ましいものであり得る。

【0081】

溶解度
ヒト野生型ＭＩＣ－１は、ホモ二量体に基づき、８．８のｐＩ計算値を有する疎水性タンパク質である。結果として、野生型ＭＩＣ－１は、中性ｐＨの水性緩衝液系中では約０．５ｍｇ／ｍｌまでしか可溶化することができない。ＭＩＣ－１の低溶解度は医薬製剤の特性および治療使用を著しく妨げるので、溶解度が改善されたＭＩＣ－１化合物を開発することは治療の有用性を大幅に改善することになる。

【0082】

一態様では、本発明のＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、配列番号１のヒトのＭＩＣ－１に対して改善された溶解度を有する（すなわち、より可溶性である）。

【0083】

本明細書に記載されるように、溶解度は、実施例４に記載のように測定される。

【0084】

ある特定の実施形態では、本発明のＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、トリス緩衝液中、ｐＨ８．０で少なくとも１ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する。他の実施形態では、本発明のＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、トリス緩衝液中、ｐＨ８．０で少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも４０ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する。

【0085】

プロトラクターを添加してＭＩＣ－１化合物を作製することは、Ｎ延長部を有する対応するＭＩＣ－１ポリペプチドについて測定される改善された溶解度を大きく変化させない（実施例１２）。

【0086】

本明細書に記載されるように、溶解度は、ホモ二量体としてＭＩＣ－１化合物およびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドについて測定される。

【0087】

安定性
ヒト野生型ＭＩＣ－１配列は化学的に不安定であり、アミノ酸配列のいくつかの残基は、３位のアスパラギン（Ｎ３）の脱アミド化ならびにメチオニンＭ４３、Ｍ５７、およびＭ８６の酸化を含んで、保存中に修飾される可能性がある。ある特定の残基の化学的不安定性は医薬特性に影響を与える可能性があるため、化学的に安定なＭＩＣ－１化合物の開発は、ＭＩＣ－１治療化合物を作製するための別の重要な部分であることになる。

【0088】

一態様では、本発明の化合物は、配列番号１のヒトＭＩＣ－１に対して改善された化学的安定性を有する。

【0089】

「化学的安定性」という用語は、インタクトなポリペプチドと比較して、低減した生物活性、低下した溶解度、および／または増加した免疫原性効果を潜在的に有する化学分解産物の形成をもたらすポリペプチド構造の化学的変化を指す。化学的安定性は、例えば、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、および／またはＲＰ－ＨＰＬＣによる異なる環境条件への曝露後の様々な時点での化学分解産物の量を測定することによって評価することができる。

【0090】

本発明のいくつかの実施形態では、ＭＩＣ－１単量体配列（配列番号１）の特定の残基は、ＭＣ－１化合物の化学的安定性を増加させるために例えば置換によって修飾される。脱アミド化を回避するために、Ｎ３が、欠失されるか、または他のアミノ酸、例えばＥまたはＱで置換される。酸化を低減するために、メチオニンが、他のアミノ酸、例えばＥまたはＬで置換される。

【0091】

免疫原性
一態様では、本発明のＭＩＣ－１化合物は、低い免疫原性のリスクを有する。

【0092】

産生プロセス
本発明のＮ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、当業者には公知である組み換え型タンパク質技術によって産生され得る。一般に、目的のタンパク質またはその機能的変異体をコードする核酸配列は、Ｎ延長部を有する所望のＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするように修飾される。次いで、この修飾された配列が発現ベクターに挿入され、これが次に発現宿主細胞へと形質転換またはトランスフェクトされる。

【0093】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードする核酸構築物は、好適に、ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成起源であり得る。アミノ酸配列の改変は、周知の技法によって遺伝子コードを修飾することによって達成される。

【0094】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は通常、組み換えＤＮＡ手順に好都合に供され得る、任意のベクターであり得る組み換えベクターの中へと挿入され、ベクターの選択は、該ベクターが導入される宿主細胞にしばしば依存する。したがって、ベクターは、自律複製ベクター、すなわち染色体外の実体として存在するベクターであり得、その複製は、染色体の複製とは独立し、例えばプラスミドであり得る。別の方法として、ベクターは、宿主細胞に導入されたときに宿主細胞ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体と一緒に複製されるものであり得る。

【0095】

ベクターは、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列が、ＤＮＡの転写に必要な追加のセグメントに動作可能に連結されている（ｏｐｅｒａｂｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）発現ベクターであることが好ましい。「動作可能に連結される」という用語は、セグメントがその意図された目的のために協調して機能するように、例えば、転写がプロモーターにおいて開始され、該転写がターミネーター内で終結するまでポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を通して進むように、セグメントが配置されることを示す。

【0096】

したがって、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現に使用するための発現ベクターは、クローン化された遺伝子またはｃＤＮＡの転写を開始および指示することができるプロモーターを含む。プロモーターは、選択した宿主細胞で転写活性を示す任意のＤＮＡ配列であってもよく、宿主細胞に対して相同または異種のいずれかであるタンパク質をコードする遺伝子に由来してもよい。

【0097】

さらに、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現のための発現ベクターは、転写を終結させるための宿主細胞によって認識される配列であるターミネーター配列も含む。ターミネーター配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の３’末端に動作可能に連結される。選択した宿主細胞で機能性である任意のターミネーターが本発明で使用され得る。

【0098】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現は、宿主細胞の細胞質ゾル中での細胞内発現を目的とするか、または増殖培地への細胞外発現のための分泌経路へと指向させることができるかのいずれかである。

【0099】

細胞内発現は、デフォルト（ｄｅｆａｕｌｔ）経路であり、プロモーター、続いてＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列、続いてターミネーターを含む発現ベクターを必要とする。

【0100】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの配列を宿主細胞の分泌経路へと指向させるために、ＭＩＣ－１配列の延長としての分泌シグナル配列（シグナルペプチドまたはプレ配列としても知られる）を必要とする。シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列は、正確な読み取りフレームにおいて、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の５’末端に結合される。シグナルペプチドは、タンパク質と通常関連付けられるものであってもよいし、または別の分泌タンパク質をコードする遺伝子由来であってもよい。

【0101】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド、プロモーター、ターミネーター、および／または分泌シグナル配列をそれぞれコード化するＤＮＡ配列を連結させ、それらを複製のために必要な情報を含む好適なベクターに挿入するために使用される手順は、当業者に周知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）。

【0102】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列が導入される宿主細胞は、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを細胞内または細胞外のいずれかで発現することができる任意の細胞であり得る。Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含有し、かつＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現を可能とする条件下において、好適な栄養培地中でＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを発現することができる宿主細胞を培養することによって産生され得る。Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現に好適な宿主細胞の非限定的な例は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ならびにヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である。翻訳後修飾が必要な場合、好適な宿主細胞としては、酵母、真菌、昆虫の細胞、および哺乳動物細胞などの高等真核細胞が挙げられる。

【0103】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドが宿主生物で発現されたとき、それは従来の技法によって必要な品質にまで回収および精製され得る。そのような従来の回収および精製技法の非限定的な例は、遠心分離、可溶化、濾過、析出、イオン交換クロマトグラフィー、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、逆相－高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、ゲル濾過、および凍結乾燥である。

【0104】

ＭＩＣ－１タンパク質の組み換え発現および精製の例は、例えば、Ｃｏｒｄｉｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９８９，６３，ｐｐ５０３７－５０４５；Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．，１９９５，６，ｐｐ６０９－６１８および国際特許公開公報第２００８／０４３８４７号に見出され得る。ＭＩＣ－１タンパク質の微生物発現および精製の例は、例えば、Ｃｈｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９５，２２４，ｐｐ２４５－２４９ ａｎｄ Ｘｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．２００２，２４，ｐｐ５３０－５３８に見出すことができる。

【0105】

本発明のＮ延長部を有する多数のＭＩＣ－１ポリペプチドを調製する方法の特定の例が、実験パートに含まれている。

【0106】

封入体およびタンパク質発現
Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌において発現させることができる。本発明の文脈では、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの大規模なタンパク質産生は、封入体（ＩＢ）を使用し得るが、それは、該封入体が、プロセスの回復、タンパク質純度、プロテアーゼ分解、および一般的なタンパク質安定性を制御する有利なアプローチを示すためである。これは大規模なタンパク質産生に特に重要となる。ｐＩ計算値によって部分的に制御されるＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの溶解度とＩＢ形成とのバランスは、ＩＢの質のために非常に重要である。

【0107】

投与形式
投与経路は、本発明の化合物を、例えば非経口的に、例えば皮下、筋肉内、または静脈内で体内の望ましい場所または適切な場所に効果的に運ぶ任意の経路であり得る。あるいは、本発明の化合物は、経口、肺、直腸内、経皮、口腔内、舌下、または経鼻で投与することができる。

【0108】

投与される本発明の化合物の量、本発明の化合物を投与する頻度の決定、および任意選択で別の医薬活性剤と一緒に、どの本発明の化合物を投与するかの選択は、肥満および関連する障害の処置に精通している専門家との相談で決定される。

【0109】

医薬組成物
本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステルおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物は、当該技術分野で公知のように調製され得る。

【0110】

「賦形剤」という語は、活性治療成分以外の任意の成分を広く指す。賦形剤は、非活性物質、不活性物質、および／または医薬的に活性でない物質であり得る。

【0111】

賦形剤は、例えば、担体、ビヒクル、希釈剤、錠剤補助剤などの様々な目的を果たし、ならびに／あるいは活性物質の投与および／または吸収を改善するように機能し得る。

【0112】

様々な賦形剤を伴った薬学的活性成分の製剤化は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば、第１９版（１９９５）および任意のその後の版）を参照のこと。

【0113】

組み合わせ処置（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）
本発明による化合物を用いた処置は、例えば、抗肥満剤、食欲調節剤、ならびに肥満により生じるまたは肥満に関連する合併症および障害の処置および／または予防のための薬剤から選択される、一つ以上の薬理活性物質とも組み合わされてもよい。

【0114】

薬学的表示
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための本発明の化合物に関する。

【0115】

特定の実施形態では、本発明の化合物は、以下の医学的処置に使用され得る：
（ｉ）例えば、食物摂取量を減少させ、体重を減少させ、食欲を抑制し、かつ／または満腹感を誘発することによって、肥満などの摂食障害の防止および／または処置。
（ｉｉ）高血糖症、インスリン抵抗性、および／または耐糖能障害の予防および／または処置。
（ｉｉｉ）脂質異常症の防止および／または処置。

【0116】

いくつかの実施形態では本発明は、体重を管理するための方法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、食欲を低下させるための方法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、食物摂取量を減少させるための方法に関する。

【0117】

一般に、肥満を患っているすべての対象は、過体重も患っていると考えられる。いくつかの実施形態では、本発明は、肥満を処置または予防するための方法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、肥満を処置または予防するための本発明のＭＩＣ－１化合物の使用に関する。いくつかの実施形態では、肥満を患っている対象は、成人のヒトまたは小児（ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ）のヒト（幼児、小児（ｃｈｉｌｄｒｅｎ）、青年を含む）などのヒトである。ボディマス指数（ＢＭＩ）は、身長および体重に基づく体脂肪の尺度である。計算式は、ＢＭＩ＝体重（キログラム）／慎重（メートル）^２である。肥満を患っているヒト対象は３０以上のＢＭＩを有し、この対象は肥満とも呼ばれる場合がある。いくつかの実施形態では、肥満を患っているヒト対象は、ＢＭＩ３５以上を有するか、または３０以上～４０未満の範囲のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、肥満は、ヒト対象がＢＭＩ４０以上を有する重度の肥満または病的肥満（ｍｏｒｂｉｄ ｏｂｅｓｉｔｙ）である。

【0118】

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で少なくとも一つの体重に関連する併存疾患の存在下での過体重の処置または予防のための方法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で少なくとも一つの体重関連の併存疾患の存在下での、過体重の処置または予防のための本発明のＭＩＣ－１化合物の使用に関する。

【0119】

いくつかの実施形態では、過体重を患っている対象は、成人のヒトまたは小児のヒト（幼児、小児、および青年を含む）などのヒトである。いくつかの実施形態では、過体重を患っているヒト対象は、ＢＭＩ２５以上（ＢＭＩ２７以上など）を有する。いくつかの実施形態では、過体重を患っているヒト対象は、２５～３０未満の範囲または２７～３０未満の範囲のＢＭＩを有する。いくつかの実施形態では、体重関連の併存疾患は、高血圧、糖尿病（２型糖尿病など）、脂質異常症、高コレステロール、および閉塞性睡眠時無呼吸からなる群から選択される。

【0120】

いくつかの実施形態では、本発明は、体重を低下させるための方法に関する。いくつかの実施形態では本発明は、体重減少のための本発明のＭＩＣ－１化合物の使用に関する。本発明による体重の減少を享受するヒトは、ＢＭＩ２５以上（ＢＭＩ２７以上またはＢＭＩ３０以上など）を有する。いくつかの実施形態では、本発明による体重減少を享受するヒトは、ＢＭＩ３５以上またはＢＭＩ４０以上を有する。

【0121】

いくつかの実施形態では、本発明は、動脈硬化症などの心血管疾患、ならびに脂肪性肝炎および糖尿病性腎症などの他の障害を処置または予防するための方法に関する。

【0122】

「一つの（ａ）」および「一つの（ａｎ）」という冠詞は、本明細書では、その冠詞文法的対象のうちの一つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも一つ）を指すために使用される。一例として、「一つの（ａｎ）ＭＩＣ－１ポリペプチド」は、一つのＭＩＣ－１ポリペプチドまたは２つ以上のＭＩＣ－１ポリペプチドを意味する。

【0123】

化学式中のアスタリスク（＊）は、結合点を示す。

【0124】

特定の実施形態
本発明は、本発明の以下の非限定的実施形態によってさらに説明される：
１．Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドおよびプロトラクターを含むＭＩＣ－１化合物であって、プロトラクターが、アミノ酸延長部に結合されている、ＭＩＣ－１化合物。
２．化合物が、ホモ二量体である、実施形態１に記載のＭＩＣ－１化合物。
３．Ｎ末端アミノ酸延長部が、システイン残基を含み、かつプロトラクターが、システイン残基においてアミノ酸延長部に結合されている、実施形態１または２に記載のＭＩＣ－１化合物。
４．プロトラクターが、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ： ＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－（ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ）_ｋ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、かつ
ｋは、０～４の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．３は、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、かつ
ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４は、
Ｃｈｅｍ．４Ａ： ＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４Ｂ： ＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、
Ｃｈｅｍ．４Ｃ：＊－ＮＨ－（ＣＨ２）ｍ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４Ｄ：

【化9】

から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．４のｍは、１～５の範囲の整数であり、ｎは、２～６の範囲の整数であり、かつ
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４が、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結しているアミド結合を介して相互連結され、かつＣｈｅｍ．４のＣＨ_２－＊末端が、アミノ酸延長部の前記システイン残基のイオウ原子に連結されている、実施形態３に記載のＭＩＣ－１化合物。
５．プロトラクターが、アミノ酸延長部のＮ末端アミノ酸に結合されている、実施形態１または２に記載のＭＩＣ－１化合物。
６．プロトラクターが、Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４の各々のうちの少なくとも一つを含むか、またはそれらからなり、
Ｃｈｅｍ．１は、
Ｃｈｅｍ．１Ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１Ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１Ｄ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ_２）_ｘ－ＣＯ－＊からなる群から選択され、
式中、ｘは、１２～２０の範囲の整数であり、
式中、ｙは、５～１５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．２は、
Ｃｈｅｍ．２Ａ： ＊－（ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、
Ｃｈｅｍ．２Ｂ： ＊－（ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_ｍ－ＣＯ）_ｋ＊、および
Ｃｈｅｍ．２Ｃ： ＊－（ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｍ－シクロヘキサン－ＣＯ）_ｋ－＊からなる群から選択され、
式中、Ｃｈｅｍ．２のｍは、１～５の範囲の整数であり、かつ
ｋは、０～４の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．３は、＊（ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－［Ｏ－（ＣＨ_２）_２］_ｋ－Ｏ－［ＣＨ_２］_ｎ－ＣＯ－＊）_ｌであり、
式中、Ｃｈｅｍ．３のｋは、１～１０の範囲の整数であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、かつ
ｌは、０～５の範囲の整数であり、
Ｃｈｅｍ．４は、式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩからなる群から選択され：

【化10】

（式Ｉ）

【化11】

（式ＩＩ）または

【化12】

（式ＩＩＩ）
Ｃｈｅｍ．１、Ｃｈｅｍ．２、Ｃｈｅｍ．３、およびＣｈｅｍ．４が、Ｃｈｅｍ．の＊－ＮＨ末端を別のＣｈｅｍ．のＣＯ－＊末端に連結するアミド結合を介して相互連結され、かつ化合物４のＣＨ_２－＊末端が、アミノ酸延長部のＮ末端のアミノ残基に連結されている、実施形態５に記載のＭＩＣ－１化合物。
７．Ｃｈｅｍ．１が、
Ｃｈｅｍ．１ａ： ＨＯＯＣ－（ＣＨ_２）_１６－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｂ： ＨＯ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_１５－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．１ｃ： ＨＯＯＣ－ベンゼン－Ｏ－（ＣＨ_２）_９－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．１ｃ： （１Ｈ－テトラゾール－５－イル）－（ＣＨ２）_１５－ＣＯ－＊からなる群から選択される、実施形態４および６のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８．Ｃｈｅｍ．２が、
Ｃｈｅｍ．２ａ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＯ－＊、
Ｃｈｅｍ．２ｂ：＊－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）_２－（ＣＨ_２）_３－ＣＯ－＊、および
Ｃｈｅｍ．２ｃ：＊－ＮＨ－ＣＨ_２－シクロヘキサン－ＣＯ－＊からなる群から選択される、実施形態４、６、および７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９．Ｃｈｅｍ．２－Ｃｈｅｍ．３が、以下の式ＩＶ：

【化13】

（式ＩＶ）
であり、式中、ｎが０～３であり、ｍが０～３である、実施形態４、６、および７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０．Ｃｈｅｍ．４が、
Ｃｈｅｍ．４ａ：＊－ＮＨ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊、および
Ｃｈｅｍ．４ｂ：＊－ＮＨ－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－ＣＯ－ＣＨ_２－＊からなる群から選択される、実施形態４および７～９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１．Ｃｈｅｍ．４が、

【化14】

（式Ｖ）

【化15】

（式ＶＩ）

【化16】

（式ＶＩＩ）
からなる群から選択され、ｎが１～４である、実施形態４および７～９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１２．Ｃｈｅｍ．４が、以下の

【化17】

（式ＶＩＩＩ）
であり、ｐが１～５であり、ｑが１～５である、実施形態４および７～９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１３．プロトラクターが、式ＩＸ、式Ｘ、式ＸＩ、式ＸＩＩ、および式ＸＩＩＩ：

【化18】

（式ＩＸ）、

【化19】

（式Ｘ）、

【化20】

（式ＸＩ）、

【化21】

（式ＸＩＩ）

【化22】

（式ＸＩＩＩ）
からなる群から選択される、実施形態１～３および５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１４．プロトラクターが、生体適合性脂肪酸およびその誘導体、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、例えば、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（Ｇｌｙｘ－Ｓｅｒｙ）ｎ（ＨＡＰ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ヘパロサンポリマー（ＨＥＰ）、ホスホリルコリン系のポリマー（ＰＣポリマー）、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、Ｆｃドメイン、トランスフェリン、アルブミン、エラスチン様ペプチド、ＸＴＥＮポリマー、アルブミン結合ペプチド、ＣＴＰペプチド、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態１～３および５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１５．アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドが、６．５より低いｐＩ計算値を有する、実施形態１～１４のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１６．ｐＩ計算値が６．１より低い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
１７．ｐＩ計算値が６．０より低い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
１８．ｐＩ計算値が、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、もしくは５．２、５．１、もしくは５．０、４．９、４．８、４．７、４．６、４．５、４．４、４．３、４．２、４．１、または４．０より低い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
１９．ｐＩ計算値が４．７より高い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２０．ｐＩ計算値が４．８より高い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２１．ｐＩ計算値が４．９より高い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２２．ｐＩ計算値が５．０より高い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２３．ｐＩ計算値が５．１より高い、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２４．ｐＩ計算値が、６．５～３．０、６．５～３．５、６．５～４．０、６．１～３．０、６．１～３．５、６．１～４．０、６．１～４．７、６．１～４．９、６．１～５．０、６．１～５．１、６．０～３．０、６．０～３．５、６．０～４．０、５．９～３．０、５．９～３．５、５．９～４．０、５．９～５．０、５．９～５．１、５．８～３．０、５．８～３．５、５．８～４．０、５．８～５．１、５．８～５．２、５．５～３．０、５．５～３．５、５．５～４．０、または５．０～４．０の範囲内である、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２５．ｐＩ計算値が、５．８～５．２の範囲内である、実施形態１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
２６．アミノ酸延長部が、３～２００個のアミノ酸残基を含む、実施形態１～２５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
２７．アミノ酸延長部が、３～１００、３～５０、３～４０、３～３０、５～１００、５～５０、５～４０、５～３０、１０～１００、１０～５０、１０～４０、１０～３０、３～３６、３～３０、３～２５、３～２４、３～１２、４～３６、４～３０、、４～２４、４～１２、５～３６、５～３０、５～２４、５～１２、６～３６、６～３０、６～２４、６～１２、７～３６、７～３０、７～２４、７～１２、８～３６、８～３０、８～２４、８～１２、３０～３６、３２～３６、３０～３４、または３０～３２個の範囲内のアミノ酸残基の長さである、先行する実施形態の１～２６いずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
２８．アミノ酸延長部が、３～３６または３０～３２個の範囲内のアミノ酸残基の長さである、実施形態１～２７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
２９．アミノ酸延長部が、塩基性アミノ酸残基（リジン、アルギニン、またはヒスチジン）の数と比較して、少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の過剰な酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸またはグルタミン酸）を有する、実施形態１～２８のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
３０．アミノ酸延長部が、塩基性アミノ酸残基（リジン、もしくはアルギニン、またはヒスチジン）の数と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または７５％過剰な酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸またはグルタミン酸）を含む、実施形態１～２９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
３１．アミノ酸延長部が、少なくとも１０％の酸性アミノ酸残基を含む、実施形態３０に記載のＭＩＣ－１化合物。
３２．アミノ酸延長部が、少なくとも１５％の酸性アミノ酸残基を含む、実施形態３０に記載のＭＩＣ－１化合物。
３３．アミノ酸延長部が、少なくとも２５％の酸性アミノ酸残基を含む、実施形態１１に記載のＭＩＣ－１化合物。
３４．アミノ酸延長部が、Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、およびＤからなる群の中から選択されるアミノ酸残基から構成され、かつアミノ酸延長部が、少なくとも３個のＥおよび／またはＤアミノ酸残基を含む、実施形態１～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
３５．アミノ酸延長部が、アミノ酸残基Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、およびＴから構成される、実施形態３４に記載のＭＩＣ－１化合物。
３６．アミノ酸延長部が、少なくとも３個のＥおよび少なくとも１個のＰを含む、実施形態３５に記載のＭＩＣ－１化合物。
３７．アミノ酸延長部が、少なくとも６個のＳｅｒ、少なくとも４個のＰｒｏ、少なくとも４個のＧｌｙ、少なくとも４個のＴｈｒ、少なくとも４個のＧｌｕ、および少なくとも２個のＡｌａを含む、実施形態３６に記載のＭＩＣ－１化合物。
３８．アミノ酸延長部が、ＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、ＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、ＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧ、およびＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧからなる群から選択された二つの配列を含み、かつアミノ酸延長部のアミノ酸のうちの一つが、システインで置き換えられている、実施形態３７に記載のＭＩＣ－１化合物。
３９．アミノ酸延長部が、最初の６～８個のアミノ酸残基、最後の６～８個の残基、または内部の６～８個の残基などの、ＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、ＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、ＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧ、またはＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧの６～８個の連続したアミノ酸をさらに含み、かつアミノ酸延長部のアミノ酸のうちの一つが、システインで置き換えられている、実施形態３８に記載のＭＩＣ－１化合物。
４０．システインが、Ｎ末端アミノ酸延長部の任意の位置にある、実施形態３～３９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４１．Ｎ末端延長部のシステイン残基とＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸との間の距離が、少なくとも１個、３個、５個、１０個、１５個、１９個、２３個、２６個、２９個、または３２個のアミノ酸（Ｎ末端延長部のシステイン残基を含むが、ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸を含まない）である、実施形態４０に記載のＭＩＣ－１化合物。
４２．Ｎ末端延長部のシステイン残基とＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸との間の距離が、少なくとも１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、または３２個のアミノ酸（Ｎ末端延長部のシステイン残基を含むが、ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸を含まない）である、実施形態４０に記載のＭＩＣ－１化合物。
４３．Ｎ末端延長部のシステイン残基とＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸との間の距離が、２６～２９個のアミノ酸（Ｎ末端延長部のシステイン残基を含むが、ＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸を含まない）である、実施形態４２に記載のＭＩＣ－１化合物。
４４．アミノ酸延長部が、Ｓで始まる、実施形態１～４３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４５．アミノ酸延長部が、ＳＥで始まる、実施形態１～４４のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４６．アミノ酸延長部が、ＳＥＰで始まる、実施形態１～４５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４７．アミノ酸延長部が、以下の配列のうちの一つ以上：
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２３）
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２２４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２５）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号２４０）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥ（配列番号２４１）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号２４２）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号２４３）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号２４４）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号２４５）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号２４６）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号２４７）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号２４８）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号２４９）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号２５０）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２５１）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２５２）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２５３）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２５４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２５５）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２５６）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２５７）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２５８）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２５９）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号２６０）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号２６１）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号２６２）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号２６３）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号２６４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号２６５）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号２６６）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号２６７）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号２６８）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号２６９）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号２７０）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号２７１）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号２７２）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号２７３）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号２７４）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号２７５）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号２７６）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号２７７）
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号２７８）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号２７９）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号２８０）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号２８１）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号２８２）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号２８３）
ＧＰＣＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥ（配列番号２８４）、
ＧＥＣＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰ（配列番号２８５）、
ＰＡＣＥＥＥＤＤＰＤＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２８６）
ＰＤＥＣＴＥＥＥＴＥＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２８７）、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２６）、
ＳＥＰＡＴＳＣＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２７）、
ＳＥＰＡＣＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＣＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＣＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＣＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＣＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＣＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３６）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＣＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２３７）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＣＥＰＳＥＧ（配列番号２３８）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＣＥＧ（配列番号２３９）、を含む、実施形態１～４６のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４８．アミノ酸延長部が、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｎ、およびＱからなる群の中から選択されるアミノ酸残基から構成され、アミノ酸延長部が、少なくとも３個のＥおよび／またはＤアミノ酸残基を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
４９．アミノ酸延長部が、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、およびＤからなる群の中から選択されるアミノ酸残基からなり、アミノ酸延長部が、少なくとも３個のＥおよび／またはＤアミノ酸残基を含む、実施形態１～４８のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
５０．アミノ酸延長部が、少なくとも３個のＥおよび少なくとも１個のＰを含む、実施形態４８または４９に記載のＭＩＣ－１化合物。
５１．アミノ酸延長部が、Ｓ、Ｇ、Ｔ、およびＡをさらに含む、実施形態５０に記載のＭＩＣ－１化合物。
５２．アミノ酸延長部が、６個のＳｅｒ、４個のＰｒｏ、４個のＧｌｙ、４個のＴｈｒ、４個のＧｌｕ、および２個のＡｌａを含む、実施形態５１に記載のＭＩＣ－１化合物。
５３．アミノ酸延長部が、ＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、ＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、ＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧ、およびＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧからなる群から選択される配列のうちの二つを含む、実施形態５１に記載のＭＩＣ－１化合物。
５４．アミノ酸延長部が、最初の６～８個のアミノ酸残基、最後の６～８個の残基、または内部の６～８個の残基などの、ＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、ＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、ＴＳＴＥＰＳＥＧＳＡＰＧ、またはＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧの６～８個の連続したアミノ酸をさらに含む、実施形態５３に記載のＭＩＣ－１化合物。
５５．アミノ酸延長部が、Ｓで始まる、実施形態４８～５４のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
５６．アミノ酸延長部が、ＳＥで始まる、実施形態５５に記載のＭＩＣ－１化合物。
５７．アミノ酸延長部が、ＳＥＰで始まる、実施形態５６に記載のＭＩＣ－１化合物。
５８．アミノ酸延長部が、以下の配列ＳＰＡＧＳＰ（配列番号４）、ＴＳＥＳＡＴ（配列番号５）、ＴＳＴＥＰＥ（配列番号６）、ＳＥＰＡＴＳ（配列番号７）、ＴＳＴＥＥＧ（配列番号８）、ＰＥＳＧＰＧ（配列番号９）、ＳＧＳＡＰＧ（配列番号１０）、ＧＳＥＴＰＧ（配列番号１１）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号１２）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号１３）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号１４）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号１５）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号１６）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰ（配列番号１７）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号１８）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号１９）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴ（配列番号２０）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２１）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２２）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥ（配列番号２３）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２４）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２５）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳ（配列番号２６）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２７）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２８）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＥＧ（配列番号２９）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号３０）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号３１）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＰＥＳＧＰＧ（配列番号３２）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号３３）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号３４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＧＳＡＰＧ（配列番号３５）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号３６）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号３７）、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＧＳＥＴＰＧ（配列番号３８）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳ（配列番号７０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号７１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号３９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号４０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号４１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号４２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号４３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号４４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号４５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号４６）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号４７）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号４８）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号４９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ（配列番号５０）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ（配列番号５１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ（配列番号５２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ（配列番号５３）、
ＧＥＰＳ（配列番号１１８）、ＧＰＳＥ（配列番号１１９）、ＧＰＥＳ（配列番号１２０）、ＧＳＰＥ（配列番号１２１）、ＧＳＥＰ（配列番号１２２）、ＧＥＰＱ（配列番号１２３）、ＧＥＱＰ（配列番号１２４）、ＧＰＥＱ（配列番号１２５）、ＧＰＱＥ（配列番号１２６）、ＧＱＥＰ（配列番号１２７）またはＧＱＰＥ（配列番号１２８）、ＰＥＤＥＥＴＰＥＱＥ（配列番号１２９）、ＰＤＥＧＴＥＥＥＴＥ（配列番号１３０）、ＰＡＡＥＥＥＤＤＰＤ（配列番号１３１）、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥＤ（配列番号１３２）、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥ（配列番号１３３）、ＡＥＰＥＥＱＥＥＤ（配列番号１３４）、ＡＥＰＥＥＱＥＥ（配列番号１３５）、ＧＧＧＳ（配列番号１３６）、ＧＳＧＳ（配列番号１３７）、ＧＧＳＳ（配列番号１３８）、およびＳＳＳＧ（配列番号１３９）のうちの一つ以上を含む、請求項１～２および５～３３のいずれか一項に記載のＭＩＣ－１化合物。
５９．アミノ酸の延長部が、以下の配列ＳＰＡＧＳＰ、ＴＳＥＳＡＴ、ＴＳＴＥＰＥ、ＳＥＰＡＴＳ、ＴＳＴＥＥＧ、ＰＥＳＧＰＧ、ＳＧＳＡＰＧ、ＧＳＥＴＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＥＰＡＴＳ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＥＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＥＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＥＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＰＥＳＧＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＰＥＳＧＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＰＥＳＧＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＧＳＡＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＧＳＡＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＧＳＡＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＧＳＥＴＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＧＳＥＴＰＧ、ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＧＳＥＴＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ，
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＰＡＧＳＰＴＳＴＥＥＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＥＳＧＳＡＰＧ、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧ、
ＧＥＰＱ、ＧＥＰＳ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの一つ以上を含む、請求項１～２および５～３３のいずれか一項に記載のＭＩＣ－１化合物。
６０．アミノ酸延長部が、以下の配列ＳＰＡＧＳＰ、ＴＳＥＳＡＴ、ＴＳＴＥＰＥ、ＳＥＰＡＴＳ、ＴＳＴＥＥＧ、ＰＥＳＧＰＧ、ＳＧＳＡＰＧ、ＧＳＥＴＰＧ、ＧＥＰＱ、ＧＥＰＳ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのいずれか２個６個のうちの任意の組み合わせを含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
６１．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＳ、ＧＰＳＥ、ＧＰＥＳ、ＧＳＰＥ、ＧＳＥＰ、ＧＥＰＱ、ＧＥＱＰ、ＧＰＥＱ、ＧＰＱＥ、ＧＱＥＰ、ＧＱＰＥ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの一つ以上を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
６２．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＳ、ＧＰＳＥ、ＧＰＥＳ、ＧＳＰＥ、ＧＳＥＰ、ＧＥＰＱ、ＧＥＱＰ、ＧＰＥＱ、ＧＰＱＥ、ＧＱＥＰ、ＧＱＰＥ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの２個９個の任意の組み合わせを含む、実施形態６１に記載のＭＩＣ－１化合物。
６３．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＳ、ＧＰＳＥ、ＧＰＥＳ、ＧＳＰＥ、ＧＳＥＰ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの一つ以上を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
６４．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＳ、ＧＰＳＥ、ＧＰＥＳ、ＧＳＰＥ、ＧＳＥＰ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの２個９個の任意の組み合わせを含む、実施形態６３に記載のＭＩＣ－１化合物。
６５．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＳＧＥＰＳＧＥＰＳＧＥＰＳＧＥＰＳ（配列番号１４０）、ＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥＧＰＳＥ（配列番号１４１）、ＧＰＥＳＧＰＥＳＧＰＥＳＧＰＥＳＧＰＥＳ（配列番号１４２）、ＧＳＰＥＧＳＰＥＧＳＰＥＧＳＰＥＧＳＰＥ（配列番号１４３）、およびＧＳＥＰＧＳＥＰＧＳＥＰＧＳＥＰＧＳＥＰ（配列番号１４４）のうちの一つ以上を含む、実施形態６４に記載のＭＩＣ－１化合物。
６６．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＱ、ＧＥＱＰ、ＧＰＥＱ、ＧＰＱＥ、ＧＱＥＰ、ＧＱＰＥ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの一つ以上を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
６７．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＱ、ＧＥＱＰ、ＧＰＥＱ、ＧＰＱＥ、ＧＱＥＰ、ＧＱＰＥ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、およびＳＳＳＧのうちの２個９個の任意の組み合わせを含む、実施形態６６に記載のＭＩＣ－１化合物。
６８．アミノ酸延長部が、以下の配列ＧＥＰＱＧＥＰＱＧＥＰＱＧＥＰＱＧＥＰＱ（配列番号１４５）、ＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰＧＥＱＰ（配列番号１４６）、ＧＰＥＱＧＰＥＱＧＰＥＱＧＰＥＱＧＰＥＱ（配列番号１４７）、ＧＰＱＥＧＰＱＥＧＰＱＥＧＰＱＥＧＰＱＥ（配列番号１４８）、ＧＱＥＰＧＱＥＰＧＱＥＰＧＱＥＰＧＱＥＰ（配列番号１４９）、およびＧＱＰＥＧＱＰＥＧＱＰＥＧＱＰＥＧＱＰＥ（配列番号１５０）のうちの一つ以上を含む、実施形態６７に記載のＭＩＣ－１化合物。
６９．アミノ酸延長部が、以下の配列ＰＥＤＥＥＴＰＥＱＥ、ＰＤＥＧＴＥＥＥＴＥ、ＰＡＡＥＥＥＤＤＰＤ、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥＤ、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥ、ＡＥＰＥＥＱＥＥＤ、およびＡＥＰＥＥＱＥＥ、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、ならびにＳＳＳＧのうちの一つ以上を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７０．アミノ酸延長部が、以下の配列ＰＥＤＥＥＴＰＥＱＥ、ＰＤＥＧＴＥＥＥＴＥ、ＰＡＡＥＥＥＤＤＰＤ、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥＤ、ＡＥＰＤＥＤＰＱＳＥ、ＡＥＰＥＥＱＥＥＤ、ＡＥＰＥＥＱＥＥ、およびＡＥＥＡＥＥＡＥＥＡＥＥＡＥＥのうちの２個または３個の任意の組み合わせを含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７１．アミノ酸延長部が、以下の配列、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、および配列番号１９５のうちの一つ以上を含む、実施形態１～２および５～３３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７２．アミノ酸延長部が、１～３個のアラニンアミノ酸残基をＮ末端に含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７３．アミノ酸延長部が、１～４個のグリシンおよびセリンアミノ酸残基をＣ末端に含む、実施形態１～７２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７４．アミノ酸延長部が、（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎまたは（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ）ｎ配列をＣ末端に含み、ｎが、１～８の整数である、実施形態１～７３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７５．アミノ酸延長部が、ＧＧＧＳ、ＧＳＧＳ、ＧＧＳＳ、またはＳＳＳＧをＣ末端に含む、実施形態１～７４のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７６．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、野生型ＭＩＣ－１（配列番号１）と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を示す、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７７．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、野生型ＭＩＣ－１（配列番号１）と少なくとも９５％の配列同一性を示す、実施形態７０に記載のＭＩＣ－１化合物。
７８．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、最大１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個のアミノ酸修飾を有する、実施形態１～７０のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
７９．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、最大７個、６個、５個、４個、３個、または２個のアミノ酸修飾を有する、実施形態１～７２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８０．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、野生型ＭＩＣ－１（配列番号１）と比較して、以下の置換Ｐ１１Ｅ、Ｈ１８Ｅ、Ｒ２１Ｅ、Ａ３０Ｅ、Ｍ４３Ｌ、Ｍ４３Ｅ、Ａ４７Ｅ、Ｒ５３Ｅ、Ａ５４Ｅ、Ｍ５７Ｅ、Ｍ５７Ｌ、Ｈ６６Ｅ、Ｒ６７Ｅ、Ｌ６８Ｅ、Ｋ６９Ｅ、Ａ７５Ｅ、Ａ８１Ｅ、Ｐ８５Ｅ、Ｍ８６Ｆ、Ｍ８６Ｌ、Ｑ９０Ｅ、Ｔ９２Ｅ、Ｌ１０５Ｅ、Ｋ１０７Ｅ、Ｋ６９Ｒ、Ｋ１０７Ｒ、およびＫ９１Ｒのうちの一つ以上を含む、実施形態１～７９のＭＩＣ－１化合物。
８１．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、以下の置換Ｒ２Ｓ、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｅ、Ｎ３Ｓ、Ｎ３Ｅ、Ｎ３Ａ、Ｎ３Ｔ、Ｎ３Ｐ、Ｎ３Ｇ、Ｎ３Ｖ、Ｎ３Ｈ、Ｎ３Ｙ、またはＮ３Ｑのうちの一つ以上を含む、実施形態１～８０のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８２．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｎ３の欠失（ｄｅｓ－Ｎ３）を含む、実施形態１～８１のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８３．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｍ５７Ｅ置換またはＭ５７Ｌ置換を含む、実施形態１～８２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８４．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｍ８６Ｌ置換またはＭ８６Ｆ置換を含む、実施形態１～８３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８５．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｑ９０Ｅ置換またはＴ９２Ｅ置換をさらに含む、実施形態８４に記載のＭＩＣ－１化合物。
８６．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｈ６６Ｅ置換を含む、実施形態１～８５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８７．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、Ｒ６７Ｅ置換を含む、実施形態１～８６のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８８．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、最初の３個、４個、５個、または６個の残基の欠失を含む、実施形態１～８７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
８９．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、最初の３個の残基の欠失を含む、実施形態１～８８のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９０．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５４（Ｍ４３Ｌ／ｄｅｓ－Ｎ３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９１．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５５（Ｍ４３Ｌ／Δ１－３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９２．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５６（Ｍ５７Ｅ／Ｈ６６Ｅ／ｄｅｓ－Ｎ３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９３．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５７（Ｍ５７Ｌ／Δ１－３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９４．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５８（Ｍ５７Ｌ／ｄｅｓ－Ｎ３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載の化合物。
９５．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１５９（Ｍ８６Ｌ／Δ１－３）によるものを有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９６．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１６０（Ｍ８６Ｌ／ｄｅｓ－Ｎ３）または配列番号２２２（Ｍ５７Ｌ、Ｍ８６Ｌ／ｄｅｓ－Ｎ３）による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９７．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１による配列を有する、実施形態１～７５のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９８．ＭＩＣ－１ポリペプチドおよびＮ末端アミノ酸延長部が一緒に、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１６４、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２８８）、
ＳＥＰＡＴＳＣＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２８９）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９０）、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９１）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＣＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＣＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＥＨＡＱＩＫＴＳＬＥＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９６）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９７）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９８）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＴＥＰＳＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号２９９）、
ＳＡＰＡＴＳＧＳＡＴＰＧＳＡＰＡＴＳＧＳＡＴＰＧＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３００）、
ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０１）、
ＳＥＰＡＴＣＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０２）、
ＳＥＰＡＴＳＧＣＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０３）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＣＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０４）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＣＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０５）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＣＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０６）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＣＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０７）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＣＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０８）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＣＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３０９）、
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＣＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３１０）、
ＥＥＡＥＡＤＤＤＤＫＥＳＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号３１１）、または
ＳＥＰＡＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧＡＲＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＬＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＲＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＬＶＬＩＱＲＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＲＤＣＨＣＩ（配列番号３１２）によるアミノ酸配列を含む、実施形態１～９７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
９９．以下の式：

【化23】

（式０１）

【化24】

（式０２）

【化25】

（式０３）

【化26】

（式０４）

【化27】

（式０５）

【化28】

（式０６）

【化29】

（式０７）

【化30】

（式０８）

【化31】

（式０９）

【化32】

（式１０）

【化33】

（式１１）

【化34】

（式１２）

【化35】

（式１３）

【化36】

（式１４）

【化37】

（式１５）

【化38】

（式１６）

【化39】

（式１７）

【化40】

（式１８）

【化41】

（式１９）

【化42】

（式２０）

【化43】

（式２１）
のうちの一つを有する、実施形態１に記載のＭＩＣ－１化合物。
１００．配列番号１のＭＩＣ－１と比較して延長された血漿半減期を示す、実施形態１～９９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０１．化合物をラットに静脈内投与し、そして経時的な化合物の血漿濃度の変化から終末相半減期を推定することにより測定したときに、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して改善された血漿半減期を示す、実施形態１～１００のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０２．配列番号１のＭＩＣ－１と比較して維持された効力を示す、実施形態１～１０１のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０３．化合物をラットに皮下投与し、そして毎日の食物摂取量の変化を測定することにより測定したときに、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して保持された有効性を示す、実施形態１～１０２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０４．アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して許容可能な溶解度を有する、実施形態１～１０３のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０５．アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドが、トリス緩衝液系中でｐＨ８．０にて測定したときに、０．５、１．０、５．０、１０、３０、または５０ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する、実施形態１～９９のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１０６．ＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号１のＭＩＣ－１と比較してＮ３の欠失（ｄｅｓ－Ｎ３）を含み、アミノ酸延長部が、以下の配列ＳＥＰＣＴＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳＧＰＧＴＳＴＥＰＳＥＧ（配列番号２２５）を有し、プロトラクターが、以下の式：

【化44】

（式Ｘ）を有し、
かつプロトラクターが、アミノ酸延長部のシステインに結合されている、実施形態１また２に記載のＭＩＣ－１化合物。
１０７．Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドが、配列番号２８８による配列を有し、プロトラクターが、以下の式：

【化45】

（式Ｘ）を有し、
プロトラクターが、アミノ酸延長部のシステインに結合されている、実施形態１または２に記載のＭＩＣ－１化合物。
１０８．実施形態１～１０７のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステル。
１０９．化合物が、配列番号１のＭＩＣ－１と比較して、食物摂取量の低下および／または体重の低下に対して改善されたインビボでの有効性を有する、実施形態１～１０８のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１０．薬剤として使用するための実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１１．代謝障害の予防および／または処置に使用するための実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１２．代謝障害が、肥満、２型糖尿病、脂質異常症、または糖尿病性腎症である、代謝障害の予防および／または処置に使用するための実施形態１１１に記載のＭＩＣ－１化合物。
１１３．肥満などの摂食障害の予防および／または処置に使用するための実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１４．食物摂取量を減少させ、体重を減少させ、食欲を抑制し、かつ／または満腹感を誘発することによる肥満の防止および／または処置に使用するための実施形態１１３に記載のＭＩＣ－１化合物。
１１５．心血管疾患の予防および／または処置に使用するための実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物。
１１６．脂質異常症、動脈硬化症、脂肪性肝炎、または糖尿病性腎症の予防および／または処置に使用するための実施形態１１５に記載のＭＩＣ－１化合物。
１１７．実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物、または薬学的に許容される塩、アミド、もしくはそのエステル、および一つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
１１８．代謝障害の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用であって、代謝障害が、肥満、２型糖尿病、脂質異常症、または糖尿病性腎症である、使用。
１１９．摂食障害の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用。
１２０．肥満の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用。
１２１．食物摂取量を減少させ、体重を減少させ、食欲を抑制し、かつ／または満腹感を誘発することによる肥満の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用。
１２２．心血管疾患の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用。
１２３．脂質異常症、動脈硬化症、脂肪性肝炎、または糖尿病性腎症の予防および／または処置のための薬剤の製造における、実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の使用。
１２４．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによる、代謝障害の処置および／または防止の方法であって、代謝障害が、肥満、２型糖尿病、脂質異常症、または糖尿病性腎症である、方法。
１２５．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによる、摂食障害の処置および／または防止の方法。
１２６．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによる、肥満の処置および／または防止の方法。
１２７．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物の薬学的に活性量を投与することによって、食物摂取量を減少させ、体重を減少させ、食欲を抑制し、かつ／または満腹感を誘発することによる、肥満の処置および／または防止の方法。
１２８．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによる、心血管疾患の処置および／または防止の方法。
１２９．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによる、脂質異常症、動脈硬化症、脂肪性肝炎、または糖尿病性腎症の処置および／または防止の方法。
１３０．実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物をコードするポリヌクレオチド分子。
１３１．薬学的に活性な量の実施形態１～１０９および１３２～１５２のいずれか一つに記載のＭＩＣ－１化合物を投与することによって、食物摂取量を減少させ、体重を減少させ、食欲を抑制し、かつ／または満腹感を誘発することによる、過体重の処置および／または防止の方法。
１３２．式０１：

【化46】

（式０１）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３３．式０２：

【化47】

（式０２）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３４．式０３：

【化48】

（式０３）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３５．式０４：

【化49】

（式０４）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３６．式０５：

【化50】

（式０５）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３７．式０６：

【化51】

（式０６）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３８．式０７：

【化52】

（式０７）
によるＭＩＣ－１化合物。
１３９．式０８：

【化53】

（式０８）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４０．式０９：

【化54】

（式０９）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４１．式１０：

【化55】

（式１０）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４２．式１１：

【化56】

（式１１）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４３．式１２：

【化57】

（式１２）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４４．式１３：

【化58】

（式１３）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４５．式１４：

【化59】

（式１４）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４６．式１５：

【化60】

（式１５）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４７．式１６：

【化61】

（式１６）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４８．式１７：

【化62】

（式１７）
によるＭＩＣ－１化合物。
１４９．式１８：

【化63】

（式１８）
によるＭＩＣ－１化合物。
１５０．式１９：

【化64】

（式１９）
によるＭＩＣ－１化合物。
１５１．式２０：

【化65】

（式２０）
によるＭＩＣ－１化合物。
１５２．式２１：

【化66】

（式２１）
によるＭＩＣ－１化合物。

【実施例】

【0125】

略語リスト
「主ピーク」とは、ミリ吸光度単位の最も高いＵＶ強度を有し、融合タンパク質を含有する精製クロマトグラムのピークを指す。
ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィーである。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動である。
ＩＭＡＣは、固定化金属親和性クロマトグラフィーである。
ＳＥＣは、サイズ排除クロマトグラフィーである。
ＭＳは、質量分析である。
この説明において、ギリシャ文字は、その記号または対応する名称、例えば：α＝アルファ、β＝ベータ、ε＝イプシロン、γ＝ガンマ、ω＝オメガ、Δ＝デルタなどによって表される場合がある。また、μのギリシャ文字は、「ｕ」によって表されてもよく、例えばμｌ＝ｕｌまたはμＭ＝ｕＭである。

【0126】

溶解度が改善されたＭＩＣ－１ポリペプチド
本発明の一態様では、ＭＩＣ－１ポリペプチドは溶解度が増加するように設計された。

【0127】

本発明の一態様では、Ｎ末端「酸性」アミノ酸延長部をＭＩＣ－１ポリペプチドに付加することによって、これを達成した。

【0128】

本発明の一態様では、ＭＩＣ－１ポリペプチドのアミノ酸配列の修飾により、溶解度は増強され、安定性が改善された。例えば、ＭＩＣ－１ポリペプチドのアミノ酸配列内で修飾を行った（配列内変異）。

【0129】

Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌において発現させることができる。本発明の文脈では、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの大規模なタンパク質産生は、封入体（ＩＢ）を使用し得るが、それは、該封入体が、プロセスの回復、タンパク質純度、プロテアーゼ分解、および一般的なタンパク質安定性を制御する有利なアプローチを表すためである。これは大規模なタンパク質産生のために特に重要となる。Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの改善された溶解度とＩＢ形成とのバランスは、ＩＢの質のために非常に重要である。

【0130】

Ｎ延長部の設計：
Ｎ末端アミノ酸延長部の設計において、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｗ、およびＹは、タンパク質凝集の原因となり得るので除外した。Ｈ、Ｋ、およびＲもまた、細胞膜上で望ましくない結合を起こし得るので除外した。Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｎ、およびＱは、Ｎ延長部配列に対して好ましい。ＥおよびＤは、化合物のｐＩ値を減少させることによって溶解度を増加させるので特に好ましい。Ｃは、脂肪酸結合およびＰＥＧ化など、長期化の目的で使用することができる－ＳＨ基を提供する。特に、いくつかのＮ延長部では、Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをＥ．ｃｏｌｉで発現させたとき、当初のメチオニンの除去効率を高めるために、一つまたは二つの追加のアラニン、グリシン、またはセリンを各Ｎ末端に付加した。

【0131】

様々なＮ末端アミノ酸延長部を設計した。いくつかのＮ延長部はヒトタンパク質起源の配列（ヒト化配列）を含み、いくつかは人工的に設計された配列（例えば、ＧＳ、ＳＧ、ＡＥＥ、ＡＥＳ、ＧＥＰＱ（配列番号１２３）、ＧＥＰＳ（配列番号１１８））を含み、いくつかはヒト化配列または人工配列のいくつかの反復を含み、いくつかは上記の組み合わせを含む。いくつかの６残基配列（６ｍｅｒ）を設計した。Ｎ延長部は、６ｍｅｒ、６ｍｅｒの一部（例えば、６ｍｅｒのうちの１～５個の残基）、または上記の組み合わせのうちの一つ以上を含むことができる。人工配列（６ｍｅｒを含む）およびヒト化配列のアミノ酸残基は、任意の順序で配置することができる。

【0132】

いくつかの代表的な６ｍｅｒおよび６ｍｅｒの組み合わせを表２にリストし、またＮ延長部の他の例を表３にリストする。

【0133】

表２：６ｍｅｒおよび６ｍｅｒの組み合わせ

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【0134】

表３：Ｎ延長部の例

【表3-1】

【表3-2】

【0135】

配列内変異：
ＭＩＣ－１のある特定の内部残基（配列番号１）を例えば置換によって修飾した。例えば、ＭＩＣ－１化合物の溶解度を増加させるために、ＭＩＣ－１の疎水性残基を親水性残基、好ましくは酸性残基で置換することができ、陽性に荷電した残基を酸性残基などで置換することができた。酸化を減少させるために、メチオニンを他のアミノ酸、例えば、Ｅ、Ｆ、またはＬで置換することができた。

【0136】

溶解度を増加させるための配列内変異としては、Ｐ１１Ｅ、Ｈ１８Ｅ、Ｒ２１Ｅ、Ａ３０Ｅ、Ａ４７Ｅ、Ｒ５３Ｅ、Ａ５４Ｅ、Ｍ５７Ｅ、Ｈ６６Ｅ、Ｒ６７Ｅ、Ｌ６８Ｅ、Ｋ６９Ｅ、Ａ７５Ｅ、Ａ８１Ｅ、Ｐ８５Ｅ、Ｑ９０Ｅ、Ｔ９２Ｅ、Ｌ１０５Ｅ、およびＫ１０７Ｅが挙げられるが、これらに限定されない。

【0137】

酸化を減少させるための配列内変異としては、Ｍ４３Ｌ、Ｍ４３Ｅ、Ｍ５７Ｅ、Ｍ５７Ｌ、Ｍ８６Ｆ、およびＭ８６Ｌが挙げられるが、これらに限定されない。

【0138】

化学的安定性を増加させるための配列内変異としては、Ｎ３Ｓ、Ｎ３Ｅ、Ｎ３Ａ、Ｎ３Ｔ、Ｎ３Ｐ、Ｎ３Ｇ、Ｎ３Ｖ、Ｎ３Ｈ、Ｎ３Ｙ、およびＮ３Ｑが挙げられるが、これらに限定されない。

【0139】

結合のための配列内変異としては、Ｋ６９Ｒ、Ｋ１０７Ｒ、およびＫ９１Ｒが挙げられるが、これらに限定されない。

【0140】

他の配列内変異としては、Ｎ３の欠失（ｄｅｓ－Ｎ３）および／または最初の３残基の欠失が挙げられるが、これらに限定されない。

【0141】

ｐＩ計算
Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＩ計算値は、Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの正味の電荷計算値（ｎｅｔ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｃｈａｒｇｅ）がゼロであるｐＨとして定義される。ｐＨの関数としてのＮ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの電荷計算値は、表１に記載されるアミノ酸残基のｐＫａ値およびＢ．Ｓｋｏｏｇ ａｎｄ Ａ．Ｗｉｃｈｍａｎ（Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８６，ｖｏｌ．５，ｐｐ．８２－８３）に記載される方法を使用して得られる。システイン（Ｃｙｓ）の側鎖ｐＫａは、遊離スルフヒドリル基を有するシステインについての電荷の計算にのみ含まれる。Ｎ延長部は一つのシステイン変異を含有し得る。一例として、ホモ二量体としてのヒト野生型ＭＩＣ－１のｐＩ計算値は８．８である。ＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＩ計算値を表４に示す。

【0142】

本明細書において、および本文書全体を通して、別段の記載のない場合には、Ｎ末端アミノ酸延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド上のｐＩ計算はホモ二量体で行われる。

【0143】

表４：ｐＩ計算値

【表4】

＊「ＧＥＰＱ」または「ＧＥＰＳ」のアミノ酸残基は、任意の順序で配置され得る。
^∞Ｎ末端延長部における一つのＣｙｓが、ｐＩを０．１未満だけ変化させる。

【0144】

材料および方法
調製の一般的な方法
実施例１：ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現および発酵
ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｃＤＮＡをｐＥＴ１１ｂ由来のベクターへとサブクローニングした。細胞密度が１．０のＯＤ６００に達したときに、封入体としてのＭＩＣ－１ｆポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの過剰発現を、Ｅ．ｃｏｌｉ中で０．５ｍＭのイソプロピルβ－ｄ－チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）により誘導した。ＴＢ中３７℃で２０時間継続的に増殖させた後、細胞を採取し、ＬＣ／ＭＳおよびＵＰＬＣの両方のための試料を調製して、分子量を確認した。

【0145】

栄養補助剤としての既知組成培地中において、流加（ｆｅｄ－ｂａｔｃｈ）プロセスで発酵を行った。発酵収率は、異なるポリペプチドに大きく依存し、ポリペプチド毎に１ｇ／Ｌ～８ｇ／Ｌで変動した。

【0146】

実施例２：精製およびリフォールディング（ｒｅｆｏｌｄｉｎｇ）：
以下のようにして、ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをさらに精製した。

【0147】

１０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．０）中のＥ．ｃｏｌｉのスラリー（２０％ｗ／ｖ）を超音波処理し（氷上において３秒間のオン／オフ間隔で５分間）、そしてＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを遠心分離（１０，０００×ｇ、３０分間）によりペレット化した。２０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）中の８Ｍの尿素によって封入体を再溶解し、遠心分離（１０，０００×ｇ、３０分間）によって破片を除去した。得られた上清中のＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを収集し、リフォールディング緩衝液（５０ｍＭトリス（ｐＨ８．５）および１０％ＤＭＦまたは１０％ＤＭＳＯ）の中へと希釈して、０．１ｍｇ／ｍｌの最終濃度とした。リフォールディングプロセスを低温の部屋で４８時間継続した。得られた溶液を０．４μｍフィルターにより濾過し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｓｅｒｉｅｓ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔｅｘｔｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｃｏｐｅｓ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｋ．３ｒｄ ｅｄ．，１９９４（第６章および第８章）で一般的に記述されるように、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して疎水性相互作用カラムまたは陰イオン交換クロマトグラフィー（５０ｍＭトリス（ｐＨ８．０）、０～５００ｍＭ ＮａＣｌ）の上へと充填した。いくつかの事例では、５０ｍＭトリス（ｐＨ８．０）および２００ｍＭ ＮａＣｌを使用して操作される、ＨｉＬｏａｄ２６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ｐｇ ７５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用したサイズ排除クロマトグラフィーにより、さらなる精製を行った。貯蔵のために、ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドをＤＰＢＳに移し、凍結保存した。表５に、ＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドおよびトリス緩衝液中のｐＨ８でのその最大溶解度を示す。

【0148】

表５：実施例４により試験されたＭＩＣ－１ポリペプチドまたはＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドおよびトリス緩衝液中のｐＨ８でのその最大溶解度

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

＊Ｎ．Ｄ．：未決定

【0149】

実施例３：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ依存性溶解度
この実験の目的は、溶解度が改善されたＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドについてスクリーニングし、製剤のための最適ｐＨウィンドウを決定することであった。

【0150】

Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを、水およびエタノールの混合物（６０％の水および４０％のエタノール）中に３ｍｇ／ｍｌ～１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で溶解した。溶媒をＳｐｅｅｄＶａｃ（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ Ｐｌｕｓ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で６時間蒸発させて、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのペレットを得た。

【0151】

以下の緩衝液をこのｐＨ依存性溶解度曲線アッセイに使用した：酢酸緩衝液（ｐＨ３～ｐＨ６）、トリス緩衝液（ｐＨ７～ｐＨ９）、ＣＡＰＳ緩衝液（ｐＨ１０～ｐＨ１１）。

【0152】

９６ウェルプレートの各ウェルの中へと、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドとともに緩衝液を添加した。使用量は厳密に同じではなくてもよいが、すべて、１２～１８ｍｇ／ｍｌ以内の理論的濃度を標的とする。上清中のＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの濃度をＵＰＬＣによって決定した（表６）。結果に基づくと、本発明のＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの溶解度は、野生型ＭＩＣ－１と比較して、ｐＨ６～９で著しく改善された。Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの最適ｐＨウィンドウは、製剤に好ましいｐＨ範囲内、例えばｐＨ６．５～８．５に収まる。

【0153】

表６：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ依存性溶解度試験（ｍｇ／ｍｌ）

【表6-1】

【表6-2】

【0154】

実施例４：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ８における最大溶解度
最大溶解度を試験するために、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを、水およびエタノール（６０％の水および４０％エタノール）の混合物中に３ｍｇ／ｍｌ～１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で溶解した。次いで、溶液（各ウェルにつき１５０μＬ）を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の中へと等分した。溶媒をＳｐｅｅｄＶａｃ（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ Ｐｌｕｓ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で６時間蒸発させて、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのペレットを得た。トリス緩衝液（ｐＨ８．０、賦形剤なし）を９６ウェルプレートの各ウェルの中へと添加した。ウェルに添加された緩衝液の量は、最大濃度が達成されるように、ウェル中のペレット全体を溶解するのに必要な量よりも少なくした。プレートを、プレート振盪装置上で８００ｒｐｍ（ＭｉｘＭａｔｅ，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）で２時間振盪した。ペレットを３６００ｇで５分間遠心分離した。上清を９６ディープウェルプレートに移し、４０％エタノールを用いて２０倍に希釈した。次いで、すべての試料をＵＰＬＣ（Ａｃｑｕｉｔｙ、Ｗａｔｅｒｓ）、プレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ ｐｒｏ、Ｔｅｃａｎ）、およびＵＶ分光計（ＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に供し、濃度を決定した（表７）。

【0155】

結果に基づくと、本発明のＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの溶解度は、ｐＨ８．０において著しく改善された。特に、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、ｐＨ８．０において３０ｍｇ／ｍｌ超の溶解度を達成した。

【0156】

表７：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ８．０における最大溶解度試験

【表7-1】

【表7-2】

【0157】

Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの改善された溶解度は、ＭＩＣ－１化合物において保持され、すなわち、プロトラクターを付加することによって溶解度は有意に低下しなかった（実施例１２）。

【0158】

インビトロ活性スクリーニングの一般的方法
実施例５：ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴ細胞株の確立
本実施例の目的は、ＭＩＣ－１活性を試験するための細胞ベースのインビトロアッセイを確立することであった。哺乳動物細胞をトランスフェクトし、該細胞は全長ＭＩＣ－１受容体（ｈＧＦＲＡＬ）およびその完全なシグナル伝達共受容体ｈＲＥＴ５１を安定して発現した。

【0159】

全長ｈＧＦＲＡＬおよび全長ｈＲＥＴ５１をコードする合成ＤＮＡヌクレオチドを哺乳動物発現ベクターｐＥＬへと挿入することにより、全長ｈＧＦＲＡＬおよび全長ｈＲＥＴ５１を発現するプラスミドを構築した。ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）は、二つのＤＮＡ配列を同時にｍＲＮＡへと翻訳することができるようにする、２つのＤＮＡ配列間で一般的に使用されるリンカーである。ｐＥＬベクター骨格は、Ｔａｉｈｅｇｅｎｅ ＣＲＯ社によって提供された。

【0160】

２００万個のＢＨＫ２１細胞を１０ｃｍのペトリ皿に播種し、培養培地中（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％ＰＳ）で一晩培養した。ｐＥＬ－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴプラスミドを用いて、細胞をトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を異なる密度で新しい１０ｃｍ皿へと分けて入れ、選択培地中（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％ＰＳ＋１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８）で２週間超にわたって増殖させ、単一クローンを得た。単一クローンを６ウェルプレートに移し、培養して、１００％コンフルエントとした。ｈＧＦＲＡＬおよびｈＲＥＴのｍＲＮＡ発現をｑＰＣＲによって測定した。トランスフェクトが成功したクローンを採取し、ＭＩＣ－１結合について試験した。

【0161】

実施例６：ＭＩＣ－１細胞ベースのインビトロ活性アッセイ
野生型ＭＩＣ－１およびＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴ安定細胞中でＥＲＫ１／２の両方のリン酸化を誘発した（表８）。この結果から、ＭＩＣ－１、ＧＦＲＡＬ、およびＲＥＴの３個からなる複合体は、ＲＥＴタンパク質チロシンキナーゼをリン酸化し、ＥＲＫ１／２のリン酸化により、ＥＲＫ／ＭＡＰＫ経路を含むシグナル伝達経路を通してＭＩＣ－１のインビボ活性を誘発すると結論することができる。

【0162】

ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴを使用するＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのスクリーニングの結果を表８に示す。Ｎ延長部のみを有するＭＩＣ－１ポリペプチドまたは配列内変異のみを有するＭＩＣ－１類似体は、野生型ＭＩＣ－１と等しいか、またはそれよりも高いインビトロ活性を達成した。Ｎ延長部および配列内変異の組み合わせも、同様の活性を達成することができる。

【0163】

表８：インビトロ活性

【表8-1】

【表8-2】

【0164】

インビボでの有効性
実施例７：痩せたＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの食物摂取量に対するＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの効果
Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのインビボでの有効性を、９～１１週齢の痩せた雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットで測定した。８ｎｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で、一日一回、暗期間の開始の１～２時間前に、動物に注射した。適切な緩衝溶液中の化合物を皮下投与した（１～４ｍｌ／ｋｇ）。自動食物モニタリングシステム（ラット用のＢｉｏＤＡＱシステムおよびＨＭ２システム）によって、食物摂取量の変化を測定した。ＢｉｏＤＡＱシステムでは、動物は１匹で収容され、ＨＭ２システムでは、動物は１ケージあたり最大３匹の動物の群で収容された。各化合物がｎ＝４～８匹の動物で試験された。動物を実験前に少なくとも７日間順化させた。収集したデータは、各日の１２時間の暗期間の開始から翌日の暗期間まで測定した１日の食物摂取量（２４時間の食物摂取量）として表される。投与化合物に応答した食物摂取量の日ごとの変化は、処理群の１日の平均食物摂取量からビヒクル群の１日の平均食物摂取量を減算することによって算出した。スチューデントの両側ｔ検定を使用して、ｐ＜０．１である場合に変化を有意とみなした。結果は、研究期間中に記録されたビヒクルと比較した食物摂取量の「最大減少」（パーセント）として表される。データは、研究期間中の食物摂取量の有意な（ｐ＜０．１）日ごとの減少の合計としての食物摂取量の「減少の累計」（パーセント）としても表される。

【0165】

表９：痩せたＳＤラットにおける食物摂取量に対するＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの日ごとの用量（８ｎｍｏｌ／ｋｇ）の効果

【表9-1】

【表9-2】

注：＊は、投与の用量が４ｎｍｏｌ／ｋｇ体重であることを意味する。

【0166】

本発明者らは、驚くべきことに、Ｎ延長部を有するこれらのＭＩＣ－１ポリペプチドが、溶解性分子を増加させるだけでなく、野生型ＭＩＣ－１に等しいか、またはさらにそれよりも良好な有効性をもたらすことも見出した（表９）。例えば、配列番号１０５および配列番号１０６による化合物は、皮下投与で、野生型ＭＩＣ－１よりも４０～５０％大きい最大および累計のインビボでの有効性を有していた。配列番号９２、配列番号１０４、配列番号１０５、および配列番号１０６による化合物はすべて、野生型ＭＩＣ－１と比較して、溶解度が高められ、かつインビボでの有効性が有意により高かったので、有効性の増加は溶解度の増加とさらに関連付けられた。配列番号１０５による化合物を除く表８のすべての化合物が野生型ＭＩＣ－１と同等のＥｍａｘを有していたので、この相関は、インビトロでのＥｍａｘの変化によって説明されないと思われる。事実、配列番号１０５の化合物は、野生型ＭＩＣ－１より低いＥｍａｘを有し、かつインビボで野生型ＭＩＣ－１よりもさらに有効であった。いずれの化合物も野生型ＭＩＣ－１と異なるＥＣ５０を有していなかったため、インビトロ効力も化合物間で同等であった。したがって、インビボでの有効性の増加と溶解度の増加との間に関連性があることは驚くべきことであり、インビトロでの受容体活性化の増加の変化によって単に説明することはできない。

【0167】

実施例８：ＭＩＣ－１発現および異なる１２ｍｅｒブロックの当初のＭｅｔの除去効率
ヒトの体内で、Ｎ－ホルミル－メチオニンは、異物としてまたは損傷した細胞が放出する警報信号として免疫系によって認識され、そして身体を刺激して潜在的感染症に対して闘わせる（Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ５：Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｆ．Ｚａｃｈａｒｙ，Ｍ．Ｄｏｎａｌｄ ＭｃＧａｖｉｎ）。さらに、メチオニンは、容易に酸化される可能性がある不安定な残基である。したがって、Ｎ－Ｍｅｔ切断効率は、ＭＩＣ－１発現に非常に重要である。

【0168】

四つの異なる種類の１２ｍｅｒがあり、それらのすべてが３個のＳｅｒ、２個のＰｒｏ、２個のＧｌｙ、２個のＴｈｒ、２個のＧｌｕ、および１個のＡｌａからなる。しかしながら、各反復の１２個の残基は異なる方法で配置されている。

【0169】

発現レベルに対する異なる１２ｍｅｒの効果およびＮ－Ｍｅｔ切断効率についてはほとんど知られていない。したがって、単一および二つの１２ｍｅｒでそれぞれ始まるＭＩＣ－１ポリペプチドの体系的な調査が非常に必要とされる。

【0170】

Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｃＤＮＡをｐＥＴ１１ｂ由来のベクターへとサブクローニングした。細胞密度が１．０のＯＤ６００に達したとき、封入体または可溶性タンパク質としてのＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの過剰発現が、０．５ｍＭイソプロピルβ－ｄ－チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）によってＥ．ｃｏｌｉ中で誘発された。ＴＢ中で３７℃にて２０時間継続的に増殖させた後、細胞を採取し、緩衝液Ａ（２０ｍＭトリス、ｐＨ８．０）中で超音波処理した。得られた混合物を１０，０００ｇで２０分間遠心分離し、ＬＣ／ＭＳおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、分子量を確認した。

【0171】

栄養補助剤としての既知組成培地において、流加プロセスで発酵を行った。発酵収率は異なる化合物に大きく依存し、化合物毎に１ｇ／Ｌ～８ｇ／Ｌで変化した。
単一の１２ｍｅｒ試験のために設計された化合物および結果を表１０および図１に示す。

【0172】

表１０：単一の１２ｍｅｒ構成ブロックの当初のＭｅｔの除去効率

【表10】

Ｎ／Ａ：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１がＥ．ｃｏｌｉで発現されなかったことを意味する。

【0173】

２つの１２ｍｅｒを有する化合物を表１１にリストし、また結果も示す（表１１および図２を参照のこと）。

【0174】

表１１：２つの１２ｍｅｒ構成ブロックの当初のＭｅｔの除去効率

【表11-1】

【表11-2】

Ｎ／Ａ：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドがＥ．ｃｏｌｉで発現されなかったことを意味する。

【0175】

結論として、１２ｍｅｒ－１ブロックで開始するＮ延長部は、Ｅ．ｃｏｌｉでは発現することができなかった。その他の１２ｍｅｒブロックについては、当初の配列が完全なメチオニン切断をもたらしたため、タンパク質発現が達成されたが、１２ｍｅｒ－４のみであった。さらに、一連の１２ｍｅｒ－２のＮ－ｍｅｔ切断効率は、一連の１２ｍｅｒ－３よりも良好である。

【0176】

実施例９：２＊または２．５＊１２ｍｅｒのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現レベルおよび封入体比
（１）２．５＊１２ｍｅｒのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現
タンパク質産生方法については実施例８を参照のこと。表１２、図３および図４に結果を示す。

【0177】

表１２：２．５＊１２ｍｅｒ試験のための構築およびタンパク質産生

【表12-1】

【表12-2】

【表12-3】

注：「．６」は１２ｍｅｒの最初の６ａａを意味し、「後部」は１２ｍｅｒの最後の６ａａを意味し、「内部」は１２ｍｅｒの内部の６ａａを意味する。「Ｎ．Ｄ．」とは「検出されなかった」ことを意味する。

【0178】

延長された１２ｍｅｒ（６ａａ）はＮ末端から２４ａａ離れて位置し、Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現レベルは異なる群の間で大幅に変動する。１２ｍｅｒ－１由来の断片は発現に好適ではないことが明らかであり、これは以前の結果と一致する。１２ｍｅｒ－（４＋＿＋３．６）および１２ｍｅｒ－（４＋＿＋４．６）の平均発現レベルは、他よりも比較的高い。

【0179】

（２）２＊または２．５＊１２ｍｅｒのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの封入体比
タンパク質の大規模な産生のために、封入体は、主に高い発現レベル、単純な回収工程および高純度、プロテアーゼ耐性、ならびに良好なプロセス安定性を含む、その良好なアップスケーリング特性に主に起因して、通常、良好な選択肢とみなされる。

【0180】

Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、化合物のｐＩおよび延長部の長さに主に依存して、封入体または可溶性形態のいずれかで発現される可能性がある。表１３および図４に結果を示す。

【0181】

表１３：細胞サイトゾル内での溶解度およびそのｐＩ値

【表13-1】

【表13-2】

【表13-3】

注：ここの数字は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって推定される。

【0182】

配列内変異を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの溶解度を表１４および図５に示す（ＭＩＣ－１ポリペプチド配列はＭＩＣ－１Δ１－３である）。

【0183】

表１４：配列内変異を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの溶解度

【表14】

【0184】

封入体を発現する能力について１２ｍｅｒ－（４＋２＋＿）、－（４＋４＋＿）、および－（４＋３＋＿）で開始するＭＩＣ－１ポリペプチドを調べた。封入体比は、ｐＩ＞５．１のときに９０％超であることが示された。さらに、配列内変異Ｍ５７Ｅ／Ｈ６６Ｅを有するＭＩＣ－１ポリペプチドは、可溶性画分を主に発現する。

【0185】

実施例９：Ｃｙｓ変異を含むＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの産生
Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの半減期を増加させるために、部位特異的変異によって導入されたシステインによって媒介されるアルキル化を通して、長期化のために使用される異なる脂肪酸鎖をＮ末端延長部に結合させた。Ｃｙｓ変異の位置を体系的にマッピングし、得られたＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドを実施例８に記載の方法に従ってリフォールディングし、精製した。

【0186】

１．長期化のためにＣｙｓ変異をＮ末端延長部に導入する
合計２０個の異なるシステイン変異体をＰＣＲ法を使用した部位特異的変異によって生成し、構築を表１５にリストする。

【0187】

表１５：異なる位置にＣｙｓ変異を有する構築

【表15-1】

【表15-2】

Ｎ．Ａ．＝適用外。
＊：（Ｃｙｓ変異の列の）括弧内の数字は、ＣｙｓとＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端アミノ酸との間の距離を意味する。

【0188】

これは、Ｃｙｓ変異を有するＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの発現レベルが、Ｃｙｓ変異を有しないものと同様であることを示す。

【0189】

２．Ｃｙｓ変異を含むＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのリフォールディングおよび精製
野生型ＭＩＣ－１ホモ二量体は合計で９対のジスルフィド結合を含有し、かつ理論的には、新しいシステインを導入することにより、ジスルフィド結合のスクランブリング（ｓｃｒａｍｂｌｉｎｇ）によって元のジスルフィド結合マッチングが壊され、これによリフォールディング収率がさらに減少する可能性がある。本発明者らの実験において、リストするこれらのＣｙｓ変異体が、野生型ＭＩＣ－１のリフォールディングのために使用された同一のリフォールディング緩衝液中で試験され、そして記載される野生型ＭＩＣ－１または溶解度操作されたＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドと同様のリフォールディング収率（約５０％～６０％）を示したことは驚くべきことである。

【0190】

３．Ｃｙｓ変異を含むＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ依存性溶解度および最大溶解度
ｐＨ依存性溶解度および最大溶解度を実施例４に記載したものと同じ方法によって決定した。表１６および表１７に結果を示す。

【0191】

表１６：Ｃｙｓ変異を含むＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドのｐＨ依存性溶解度試験

【表16】

【0192】

表１７：Ｃｙｓ変異を含むＮ末端延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドの最大溶解度決定試験

【表17】

Ｃｙｓ変異は、Ｎ末端アミノ酸延長部をＭＩＣ－１ポリペプチドに付加することによって得られる溶解度の改善に影響を与えないことが分かる。

【0193】

実施例１０：ＭＩＣ－１化合物のためのプロトラクターの調製
実施例１０．１：１７－［（Ｓ）－１－カルボキシ－３－（２－｛２－［（２－｛２－［（４－ホルミルベンジルカルバモイル）メトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）－メトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピルカルバモイル］ヘプタデカン酸の調製

【化67】

（式Ａ）
ｔ－Ｂｕ－Ｎ－（４－ホルミルベンジル）カルバメート（１００ｍｇ）をＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１）で１時間処理した。混合物を真空中で濃縮し、トルエンを用いて共濃縮した（２回）。残渣をＴＨＦ（２．５ｍｌ）中に溶解し、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１７－（（Ｓ）－１－カルボキシ－３－｛２－［２－（｛２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イルオキシカルボニルメトキシ）－エトキシ］エチルカルバモイル｝メトキシ）エトキシ］エチルカルバモイル｝プロピルカルバモイル）ヘプタデカン酸（３２０ｍｇ、国際特許公開公報第２００９／０８３５４９号に以前に記載されるように調製した）の溶液を添加した。ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ）をゆっくりと添加した。１３０分後、混合物を真空中で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃおよび１ＮのＨＣｌに溶解した。有機層を１ＮのＨＣｌおよび食塩水で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空中で濃縮して、表題化合物を白色固体として得て、これをさらに精製することなく使用した。
収率：２３４ｍｇ（７２％）
ＬＣＭＳ２：理論的質量：８５１．０、実測値：８５１．５（Ｍ＋１）＋

【0194】

実施例１０．２（Ｃ１６）：１６－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１６－オキソ－ヘキサデカン酸の調製

【化68】

（式Ｂ）
固相合成プロトコル：
ジクロロメタン（５００Ｍｌ）中のＮ－（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（ＺＯＳｕ、１００ｇ、４０１ｍｍｏｌ）の溶液を、ジクロロメタン（７５０Ｍｌ）中のエチレンジアミン（１、１８９ｍＬ、２．８１ｍｏｌ）の溶液に２時間にわたって滴下して添加した。３０分後、懸濁液を濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄した。濾液を蒸発乾固し、残渣をトルエン（１．００Ｌ）および水（０．５０Ｌ）で希釈した。得られた混合物を濾過し、濾液を分離して２相を得た。水相は生成物を含有し、したがって、これをジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）で抽出した。すべての有機相を組み合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をトルエン（７５０ｍＬ）で希釈し、２Ｍの塩酸水溶液（５００ｍＬ）および１Ｍの塩酸水溶液（１００ｍＬ）で抽出した。酸性の水相を組み合わせ、水（９０ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（６０．０ｇ、１．５０ｍｏｌ）の溶液で塩基性化した。得られた混合物をジクロロメタン（４×２００ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮し、ヘキサン（２００ｍＬ）で希釈した。エーテル中の４Ｍの塩化水素溶液（１００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）をその溶液に添加し、得られた懸濁液を真空中で濃縮し、ヘキサン（１．００Ｌ）で希釈した。沈殿した固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥して、（２－アミノ－エチル）－カルバミン酸ベンジルエステル塩酸塩を白色の粉末として得た。
収率：６２．６２ｇ（６８％）。
ＲＦ（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール４：１）：０．２５（遊離塩基）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，８０℃，ｄＨ）：７．４２－７．２６（ｍ，５Ｈ）；５．１６（ｓ，２Ｈ）；３．６０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；３．３２（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）。
２－クロロトリチル樹脂１００～２００メッシュ、１．７ｍｍｏｌ／ｇ（３，４０．１ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中に２０分間放置して膨潤させた。乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－Ａｄｏ－ＯＨ、１７．５ｇ、４５．４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３０．１ｍＬ、１７３ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を５時間振盪した。樹脂を濾過し、メタノール／ジクロロメタン混合物（４：１、２５０ｍＬ、２×５分）中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１５．８ｍＬ、９０．８ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。次いで樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×２５０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２５０ｍＬ）で洗浄した。ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×１０分、１×３０分、３×２５０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２５０ｍＬ）、２－プロパノール（２×２５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３００ｍＬ、２×２５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１４０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－Ａｄｏ－ＯＨ、２６．３ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、Ｏ－（６－クロロ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２４．２ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２１．４ｍＬ、１２３ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×２５０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２５０ｍＬ）で洗浄した。ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×１０分、１×３０分、３×２５０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２５０ｍＬ）、２－プロパノール（２×２５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３００ｍＬ、２×２５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１４０ｍＬ）中の（Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－ペンタンジオン酸１－ｔｅｒｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ、２９．０ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、Ｏ－（６－クロロ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２４．２ｇ，６８．１ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２１．４ｍＬ，１２３ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×２５０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２５０ｍＬ）で洗浄した。ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで処理（１×５分、１×１０分、１×３０分、３×２５０ｍＬ）することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２５０ｍＬ）、２－プロパノール（２×２５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３００ｍＬ、２×２５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン混合物（４：１、２００ｍＬ）中の１６－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－１６－オキソヘキサデカン酸（２３．３ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、Ｏ－（６－クロロ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２４．２ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２１．４ｍＬ、１２３ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加した。樹脂を１時間振盪し、濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２５０ｍＬ）、ジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）、メタノール（２×２５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３５０、６×２５０ｍＬ）で洗浄した。２，２，２－トリフルオロエタノール（２５０ｍＬ）で１８時間処理することによって、生成物を樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（２×２５０ｍＬ）、２－プロパノール／ジクロロメタン混合物（１：１、２×２５０ｍＬ）、２－プロパノール（２５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×２５０ｍＬ）で洗浄した。溶液を組み合わせ、溶媒を蒸発し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲルｌ６０、０．０４０～０．０６０ｍｍ、溶出液：ジクロロメタン／メタノール１：０～９：１）により精製した。純粋な（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４１，４１－ジメチル－１０，１９，２４，３９－テトラオキソ－３，６，１２，１５，４０－ペンタオキサ－９，１８，２３－トリアザドテトラコンタン酸を真空中で乾燥し、淡黄色の濃黄色の油状物として得た。
収率：３０．８８ｇ（８３％）。
ＲＦ（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール４：１）：０．３０。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．３６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；７．０２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）；６．５５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４６（ｍ，１Ｈ）；４．１８（ｓ，２Ｈ）；４．０２（ｓ，２Ｈ）；３．８３－３．３６（ｍ，１６Ｈ）；２．４４－２．１２（ｍ，７Ｈ）；２．０２－１．８６（ｍ，１Ｈ）；１．６０（ｍ，４Ｈ）；１．４７（ｓ，９Ｈ）；１．４５（ｓ，９Ｈ）；１．３６－１．２１（ｍ，２０Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ法４：
純度：１００％
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．６０分
実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：８１８．７（Ｍ＋Ｈ）＋
その後、２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオホスフェート（ＨＡＴＵ、１１．４ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．７７ｍＬ、６２．９ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１１０ｍＬ）中の（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４１，４１－ジメチル－１０，１９，２４，３９－テトラオキソ－３，６，１２，１５，４０－ペンタオキサ－９，１８，２３－トリアザドテトラコンタン酸（２２．４ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。トリエチルアミン（５．７２ｍＬ、４１．０ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１６５ｍＬ）中の（２－アミノ－エチル）－カルバミン酸ベンジルエステル塩酸塩（６．９４ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、得られた混合物を上記溶液に添加した。混合物を室温で一晩攪拌し、次いでこれを蒸発乾固した残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）中に再溶解し、１Ｍ塩酸水溶液（２×２００ｍＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２×２００ｍＬ、非常に遅い相分離）、１Ｍ塩酸水溶液（８×２００ｍＬ）および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発乾固した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、０．０４０～０．０６０ｍｍ、溶出液：ジクロロメタン／メタノール９５：５）により精製して、１５－［（Ｓ）－３－（２－｛２－［（２－｛２－［（２－ベンジルオキシカルボニルアミノ－エチルカルバモイル）－メトキシ］－エトキシ｝－エチルカルバモイル）－メトキシ］－エトキシ｝－エチルカルバモイル）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル］－プロピルカルバモイル］ペンタデカン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルを淡黄色の濃い油状物として得た
収率：２３．８４ｇ（８８％）
ＲＦ（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール９：１）：０．３５
１Ｈ ＮＭＲ スペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３、Ｄｈ）：７．３９－７．２６（ｍ、６Ｈ）；７．１９（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）；６．９１（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）；６．５２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；５．８３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）；５．０９（ｓ，２Ｈ）４．４１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．３、４．６および４．３Ｈｚ， １ Ｈ）；３．９９（ｓ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，２Ｈ）；３．７１－３．３０（ｍ，２０Ｈ）；２．３３－２．０８（ｍ，７Ｈ）；１．９７－１．８３（ｍ，１Ｈ）；１．６７－１．５１（ｍ，４Ｈ）；１．４５（ｓ，９Ｈ）；１．４４（ｓ，９Ｈ）；１．３５－１．２０（ｍ、２０Ｈ）。
ＬＣＭＳ法４
純度：１００％
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ４．６×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：４．１８分
実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：９９４．９（Ｍ＋Ｈ）＋
パラジウム炭素（１０％、１．２７ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）をメタノール（３５０ｍＬ）中の上記化合物（２３．８ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られた混合物を常圧で４時間水素化した。触媒を濾過して取り除き、濾液を蒸発乾固したメタノールの残渣を除去するために残渣をジクロロメタンから数回蒸発させ、真空中で乾燥して、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－１－アミノ－２５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４，１３，２２，２７－テトラオキソ－６，９，１５，１８－テトラオキサ－３，１２，２１，２６－テトラアザドテトラコンタン－４２－オエートを濃い無色の油状物として得た。
収率：２０．５０ｇ（９９％）。
ＲＦ（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール９：１）０．０５．
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．５４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；７．４１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；７．１４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）；６．６８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；５．２５（ｂｓ，２Ｈ）；４．３９（ｔｄ，Ｊ＝８．３および４．２Ｈｚ，１Ｈ）；４．０１（ｓ，４Ｈ）；３．７４－３．３９（ｍ，１８Ｈ）；２．９６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．３４－２．０６（ｍ，７Ｈ）；１．９７－１．８３（ｍ，１Ｈ）；１．６８－１．５０（ｍ，４Ｈ）；１．４５（ｓ，９Ｈ）；１．４３（ｓ，９Ｈ）；１．３７－１．１９（ｍ，２０Ｈ）。
ＬＣＭＳ法４
純度：１００％
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：１．４３分
実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：８６０．８（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．９８ｍＬ、２８．６ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（２９０ｍＬ）中の上記アミン（６、２０．５ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）の溶液にアルゴン下で－３０℃で添加した。臭化ブロモアセチル（２．４８ｍＬ、２８．６ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、得られた溶液を－３０℃でさらに３時間攪拌した。冷浴を取り除き、混合物を室温で１時間攪拌し、次いで溶媒を真空中で除去した。残渣を酢酸エチル（４５０ｍＬ）中に再溶解し、５％クエン酸水溶液（３００ｍＬ）で洗浄した。相は１時間以内に分離された。有機層を水（３００ｍＬ）で洗浄し、得られた乳濁液を一晩分離して放置し、３相を得た。透明な水層を除去し、残りの２相を、臭化カリウム（１００ｍＬ）の飽和水溶液とともに振盪し、添加した。これらの相を一晩分離して放置し、次いで水相を除去し、そして有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を真空中で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、０．０４０～０．０６０ｍｍ、溶出液：ジクロロメタン／メタノール９５：５）により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－１－ブロモ－２８－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２，７，１６，２５，３０－ペンタオキソ－９，１２，１８，２１－テトラオキサ－３，６，１５，２４，２９－ペンタアザペンタテトラコンタン－４５－オエートを無色の固体として得た。
収率：１９．４６ｇ（８３％）。
ＲＦ（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール９：１）：０．２５
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．４６（ｍ，１Ｈ）；７．３３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）；７．２１（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）；６．９２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）；６．５０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）；４．４１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，４．５および４．２Ｈｚ，１Ｈ）；４．０１（ｓ，４Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ）；３．７５－３．４０（ｍ，２０Ｈ），２．３６－２．０８（ｍ，７Ｈ）；１．９９－１．８４（ｍ，１Ｈ）；１．６８－１．５１（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）；１．４４（ｓ，９Ｈ）；１．３８－１．１９（ｍ，２０Ｈ）。
ＬＣＭＳ法４
純度：１００％
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．５１分。
実測値：ｍ／ｚ、ｚ＝１：９８０．９、９８２．９（Ｍ＋Ｈ）＋
上記化合物（１９．５ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１２０ｍＬ）中に溶解し、得られた溶液を室温で１．５時間攪拌した。トリフルオロ酢酸を真空中で除去し、残渣をジクロロメタン（６×２００ｍＬ）から蒸発させた。ジエチルエーテル（２００ｍＬ）を油状の残渣に添加し、混合物を一晩攪拌して懸濁液を得た。固体生成物を濾過し、ジエチルエーテルおよびヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥して、表題生成物１５－｛（Ｓ）－１－カルボキシ－３－［２－（２－｛［２－（２－｛［２－（２－ブロモアセチルアミノ）エチルカルバモイル］メトキシ｝－エトキシ）エチルカルバモイル］メトキシ｝エトキシ）エチルカルバモイル］プロピルカルバモイル｝ペンタデカン酸を白色粉末として得た。
収率：１６．７４ｇ（９７％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：４．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．８および４．８Ｈｚ，１Ｈ）；４．１２（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｓ，２Ｈ）；３．９６（ｓ，２Ｈ）；３．７７－３．３９（ｍ，２０Ｈ），２．４９－２．１８（ｍ，７Ｈ）；２．１６－１．０４（ｍ，１Ｈ）；１．７１－１．５６（ｍ，４Ｈ），１．３０（ｂｓ，２０Ｈ）
ＬＣＭＳ法４：
純度：１００％
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．５１分
理論的ｍ／ｚ、ｚ＝１：８６９，８、実測値：ｍ／ｚ、ｚ＝１：８６８．７、８７０．７

【0195】

実施例１０．３（Ｃ１４）：１４－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１４－オキソ－テトラデカン酸の調製

【化69】

（式Ｃ）
１３－｛（Ｓ）－１－カルボキシ－３－［２－（２－｛［２－（２－｛［２－（２－ブロモアセチルアミノ）エチルカルバモイル］メトキシ｝－エトキシ）エチルカルバモイル］メトキシ｝エトキシ）エチルカルバモイル］プロピルカルバモイル｝トリデカン酸を実施例１０．２に記載したのと同じ方法によって調製し、濃黄色の油状物を得た。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：４．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．９および４．９Ｈｚ，１Ｈ）；４．１３（ｓ，２Ｈ）；４．１１（ｓ，２Ｈ）；３．９６（ｓ，２Ｈ）；３．７７－３．４０（ｍ，２０Ｈ）；２．４９－２．１８（ｍ，７Ｈ）；２．１６－２．０７（ｍ，１Ｈ）；１．７０－１．５６（ｍ，４Ｈ）；１．３１（ｂｓ，１６Ｈ）。
ＬＣＭＳ法４：
純度：１００％（ＥＬＳＤ）
Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．９４分
理論的ｍ／ｚ、ｚ＝１：８４１．９、実測値：ｍ／ｚ、ｚ＝１：８４１．７，８４３．７

【0196】

実施例１０．４（Ｃ１８）：
１８－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸の調製

【化70】

（式Ｄ）
溶液相合成プロトコル：
工程１：ベンジル１８－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエチルアミノ）－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ベンジルオキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカノエート。０℃のＤＣＭ（８０ｍｌ）およびトリエチルアミン（５．２ｍｌ）中のエチレンジアミン（８．５ｍｌ ｍｌ）の溶液に、ＤＣＭ（３２０ｍｌ）中に、国際特許公開公報第１００２９１５９号に記載のように調製したベンジル１８－［［（１Ｓ）－１－ベンジルオキシカルボニル－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカノエート（２６ｇ）の溶液を７５分間にわたって滴下して添加した。２時間攪拌した後、沈殿物を濾過して取り除いた。濾液に水（２００ｍｌ）およびイソプロパノール（５０ｍｌ）を添加した。混合物を抽出した。有機層をＭｇＳＯ４を使用して乾燥した。ＭＧＳＯ４を濾過により除去し、濾液を真空中で乾燥して、表題化合物２０．０７ｇ（８１％）を得た。
ＬＣＭＳ：理論的質量：９５６．２；実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：９５７．０
工程２：ベンジル１８－［［（１Ｓ）－１－ベンジルオキシカルボニル－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－クロロアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカノエート。
クロロ酢酸（０．１９ｇ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に溶解した。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（０．２２ｇ）およびＥＤＡＣ ＨＣｌ（０．４２ｇ）を添加した。２．５時間攪拌した後、ＤＣＭ（５ｍＬ）中のベンジル１８－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエチルアミノ）－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－ベンジルオキシカルボニル－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカノエート（１．５ｇ）を添加した。室温（ＲＴ）で一晩攪拌した後、混合物を１ＭのＨＣｌ（２×２０ｍｌ）および水／食塩水２：１（３０ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮して、透明な油状物１．３７ｇ（８４％）を得た。
ＬＣＭＳ：理論的質量：１０３２．７；実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：１０３３．１
工程３：１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－クロロアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸。
窒素通気後、アセトン（１４０ｍｌ）中のベンジル１８－［［（１Ｓ）－１－ベンジルオキシカルボニル－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－クロロアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカノエート（１０．５ｇ）の溶液に１０％のＰＤ／Ｃ（１．０ｇ）を添加した。６時間水素化した後、混合物を４０～５０℃に加熱した後に濾過した冷えた濾液中の沈殿物を単離し、アセトンで洗浄し、乾燥して、表題化合物７．４２ｇ（８５％）を得た。
工程４：８－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸。
アセトン（６０ｍｌ）中の１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－クロロアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸の懸濁液に臭化ナトリウム（５当量、１．２１ｇ）を添加した。混合物を暗所で室温で攪拌した。２時間後、臭化ナトリウム（１０当量、２．４１ｇ）をさらに添加した。２日後、臭化ナトリウム（５当量、１．２１ｇ）をさらに添加した。５日後、混合物を濃縮した。半分の残渣にＤＣＭ（３０ｍｌ）、１０％アスコルビン酸（２０ｍｌ）、および水３０ｍｌを添加した。乳濁液にイソプロパノール（５０ｍｌ）および水（３０ｍｌ）を添加した。有機相を分離し、１０％アスコルビン酸（２０ｍＬ）およびイソプロパノール（１０ｍＬ）の混合物で二回洗浄した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して、固形油を得た。これをアセトン中で結晶化し、濾過により単離して、出発材料が混ざっている表題化合物０．８０ｇ（７２％）を得た。
ＬＣＭＳ：理論的質量：８９６．９．実測値ｍ／ｚ、ｚ＝１：８９８．９（Ｍ＋１）

【0197】

実施例１０．５（Ｃ１２）：１２－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（４－ホルミルフェニル）メチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１２－オキソ－ドデカン酸の調製

【化71】

（式Ｅ）
化合物を、例えば１０．１に記載のものと同じ方法で調製した。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．３９－７．２９（ｍ，１Ｈ）；７．０３－６．９３（ｍ，１Ｈ）；６．５９－６．５１（ｍ，１Ｈ）；４．４９－４．３７（ｍ，１Ｈ）；４．１５（ｓ，２Ｈ）；４．０１（ｓ，２Ｈ）；３．７８－３．３９（ｍ，１６Ｈ）；２．３６－２．１０（ｍ，７Ｈ）；２．０１－１．８５（ｍ，１Ｈ）；１．６８－１．５０（ｍ，４Ｈ）；１．４８－１．４１（ｍ，１８Ｈ）；１．３４－１．２２（ｍ，１２Ｈ）。

【0198】

実施例１０．６：（２Ｓ）－５－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－５－オキソ－２－（１６－スルホヘキサデカノイルアミノ）ペンタン酸の調製

【化72】

（式Ｆ）
２－クロロトリチル樹脂１００～２００メッシュ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ（１８．０ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１６０ｍＬ）中に２０分間放置して膨潤させた。乾燥ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ，６．９４ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１２．５ｍＬ、７２．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、メタノール／ジクロロメタン混合物（４：１、２×５分、２×１００ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．１２ｍＬ、２３．７ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。次いで、樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×３０分、２×１００ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ））、２－プロパノール（２×１００ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ、１０．４ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、９．６０ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（８．５０ｍＬ、４８．６ｍｍｏｌの溶液を樹脂に添加し、混合物を２時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×３０分、２×１００ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ））、２－プロパノール（２×１００ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中の（Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－ペンタン二酸１－ｔｅｒｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－ｇＧｌｕ－ＯｔＢｕ、１１．５ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、９．６０ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（８．５０ｍＬ、４８．６ｍｍｏｌの溶液を樹脂に添加し、混合物を２時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×３０分、２×１００ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂（２）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ）、２－プロパノール（２×１００ｍＬ）、およびジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で洗浄した。樹脂を４等分に分け、元の量（４．５０ｍｍｏｌ）の４分の１でこの合成を継続した。ジメチルスルホキシド（１８０ｍＬ）中の１６－スルホ－ヘキサデカン酸（３、６．１６ｇ、１７．２ｍｍｏｌ、調製は化合物ＲＥａＤ－２２２９６、バッチ番号１９５－２５７－１の合成の手順に記載されている）、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ、８．９５ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６．００ｍＬ、３４．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を４時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド／水（２：１、２×１００ｍＬ）、ジメチルスルホキシド（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ）で洗浄した。１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール（８０ｍＬ）で２時間処理することによって、生成物を樹脂から切断した。
樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×１００ｍＬ）で洗浄した。溶液を組み合わせ、揮発物を蒸発させ、粗製の（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１０，１９，２４－トリオキソ－３９－スルホ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザノナトリアコンタン酸（４）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
収率：定量的（ＥＬＳＤに基づく）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９６％。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×１００ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．０７分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：８１２．９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0199】

その後、１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（ＨＡＴＵ、１．８７ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．４３ｍＬ、２４．６ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１０，１９，２４－トリオキソ－３９－スルホ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザノナトリアコンタン酸（４．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。トリエチルアミン（１．８２ｍＬ、１３．１ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の（２－アミノ－エチル）－カルバミン酸ベンジルエステル塩酸塩（５、１．９３ｇ、８．３７ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、得られた混合物を上記の溶液に添加した。混合物を室温で一晩攪拌した。１６時間後、１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（ＨＡＴＵ、０．３８ｇ、１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．００ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）、および（２－アミノ－エチル）－カルバミン酸ベンジルエステル塩酸塩（５、０．４０ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）のもう一方の部分を添加し、混合物をさらに２時間攪拌した。溶液を１Ｍの塩酸水溶液（２×１００ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。粗製の（Ｓ）－２９－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３，８，１７，２６，３１－ペンタオキソ－１－フェニル－２，１０，１３，１９，２２－ペンタオキサ－４，７，１６，２５，３０－ペンタアザヘキサテトラコンタン－４６－スルホン酸（６）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
収率：定量的（ＥＬＳＤに基づく）。
ＬＣ－ＭＳ純度：８３％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．３５分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：９８９．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0200】

パラジウム炭素（１０％、０．２２ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）中の上記の化合物（４．５０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、得られた混合物を常圧で１６時間水素化し、次いで、超音波処理装置中に４０℃で１時間入れた。触媒をＣｅｌｉｔｅ（商標）上で濾過して取り除き、濾液を減圧下で蒸発乾固した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｌｔａＰａｋ Ｃ１８、１５ｍ；５０×５００ｍｍ；アセトニトリル／水３０：７０（８０分間）＋０．０５％ＴＦＡ）により精製し、凍結乾燥して、（Ｓ）－１－アミノ－２５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４，１３，２２，２７－テトラオキソ－６，９，１５，１８－テトラオキサ－３，１２，２１，２６－テトラアザドテトラコンタン－４２－スルホン酸（７）を無色の固体として得た。
収率：１．９５ｇ（４５％、１から）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９８％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．８７分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：８５４．７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0201】

２，４，６－コリジン（１．６０ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）を、無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中の上記アミン（７、２．０６ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）の溶液にアルゴン下で０℃で添加した。２－ブロモ酢酸無水物（０．６８ｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を０℃で１時間攪拌した。次いで、反応混合物を減圧下で蒸発乾固し、残渣をジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）を用いて粉砕した。残留化合物（Ｓ）－１－ブロモ－２８－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２，７，１６，２５，３０－ペンタオキソ－９，１２，１８，２１－テトラオキサ－３，６，１５，２４，２９－ペンタアザペンタテトラコンタン－４５－スルホン酸（８）をさらに精製することなく次の工程に使用した。
収率：定量的（ＥＬＳＤに基づく）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９５％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．０４分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：９７６．９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0202】

上記化合物（８、２．００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）、水（２ｍＬ）、およびトリフルオロ酢酸（２５ｍＬ）中に溶解し、得られた溶液を２時間攪拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタン（３×８０ｍＬ）とともに共蒸発させた。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：ＤｅｌｔａＰａｋ Ｃ１８、１５ｍ；５０×５００ｍｍ；アセトニトリル／水３０：７０（７０分間）＋０．０５％ＴＦＡ）により精製し、凍結乾燥して、（Ｓ）－１－ブロモ－２，７，１６，２５－テトラオキソ－２８－（１６－スルホヘキサデカンアミド）－９，１２，１８，２１－テトラオキサ－３，６，１５，２４－テトラアザノナコサン－２９－オイック酸（９）を白色固体として得た。
収率：１．９２ｇ（２工程で９８％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，８０ Ｃ，ｄＨ）：４．６８－４．５８（ｍ，１Ｈ）；４．２０－４．０８（ｍ，４Ｈ）；３．９４（ｓ，２Ｈ）；３．８２－３．６４（ｍ，１２Ｈ）；３．６０－３．４６（ｍ，８Ｈ）；３．２０－３．１０（ｍ，２Ｈ）；２．５１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）；２．２６（ｂｓ，１Ｈ）；１．９２－１．８０（ｍ，２Ｈ）；１．７３－１．６２（ｍ，２Ｈ）；１．５５－１．４４（ｍ，２Ｈ）；１．４３－１．２９（ｍ，２１Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９５％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．７３分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：９２０．９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0203】

実施例１０．７：（２Ｓ）－６－［（２－ブロモアセチル）アミノ］－２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［４－［１７－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘプタデカノイルスルファモイル］ブタノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ヘキサン酸の調製

【化73】

（式Ｇ）
Ｗａｎｇ Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）樹脂０．２９ｍｍｏｌ／ｇ（１７．２４ｇ、５．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６０ｍＬ）中に７×５分間放置して膨潤させ、洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２×６０ｍＬ、２×１５分）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６×６０ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨを、二つの反応のために量り分けた（２ｘ２０ｍｍｏｌ １５．４１６ｇ）。Ｏｘｙｍａ（０．３Ｍ）を含む１２０ｍＬのＤＭＦ中に溶解し、２×５３ｍＬの体積に分けた。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨおよびＯｘｙｍａの溶液（５３．２ｍＬ、０．３Ｍ）をＤＭＦ中のＤＩＣ（２６．６ｍＬ、０．６Ｍ）と混合した。ＡＡを１０分間にわたって活性化し、次いで樹脂に添加し、混合物を８時間振盪した。

【0204】

樹脂を排出し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×６０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２×６０ｍＬ、２×１５分）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６×６０ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨおよびＯｘｙｍａの溶液（５３．２ｍＬ、０．３Ｍ）を、ＤＭＦ中のＤＩＣ（２６．６ｍＬ、０．６Ｍ）と混合した。ＡＡを１０分間にわたって活性化し、次いで樹脂に添加し、混合物を８時間振盪した。樹脂を排出し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×６０ｍＬ）で洗浄し、次いでアセトニトリル（２×６０ｍＬ、２×８時間）で洗浄した。

【0205】

上記樹脂０．２７ｍｍｏｌ／ｇ（２．４６ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２ｍＬ、３×５分）中で膨潤させた。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（２×１２ｍＬ、１×１５分＋１×３０分）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１５ｍＬ）、ＤＣＭ（２×１５ｍＬ）、ＤＭＦ（２×１５ｍＬ）で洗浄した。

【0206】

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の４－［１７－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘプタデカノイルスルファモイル］ブタン酸（０．９６６ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）、Ｏｘｙｍａ（０．２８１ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＣ（０．３０９ｍＬ）の溶液を作り、アミノ酸を活性化するためにおよそ１０分間放置した。次いで、混合物を反応チューブに添加し、一晩振盪した。

【0207】

樹脂を排出し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１５ｍＬ）、ＤＣＭ（５×１５ｍＬ）で洗浄した。ＭＴＴ基を１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノール／ＤＣＭ／トリイソプロピルシラン８０／１８／２、３×２０ｍＬ、（各処理の間にＤＣＭ洗浄を用いて３×２０分間）により切断し、次いで４×２０ｍＬのＤＣＭで洗浄した。１０ｍＬのＤＭＦ中のブロモ酢酸（１．１０ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．６２ｍＬ、３．９６ｍｍｏ）を樹脂に添加し、１時間振盪した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×２０ｍＬ）およびジクロロメタン（５×２０ｍＬ）で洗浄した。

【0208】

ＴＦＡ（９８％）、水（２％）を、１時間にわたり２０ｍＬ用いて、そして０．５時間にわたり２０ｍＬ用いて、生成物を樹脂から切断した。樹脂を２０ｍＬのＤＣＭで洗浄した。溶媒を蒸発させて、黄色の油状物を得た。油状物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に溶解し、水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。白色固体がＥｔＯＡｃ層中に沈殿した。ＥｔＯＡｃの量を真空中で減少させ、濾過した。沈殿物をＥｔＯＡｃで洗浄し、フィルター上で乾燥し、２７０ｍｇの白色固体を得た。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：１０２６．３９（Ｍ＋Ｈ）＋。

【0209】

実施例１０．８：４－［１０－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（５Ｓ）－５－［（２－ブロモアセチル）アミノ］－５－カルボキシペンチル］アミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソブチル］アミノ］－１０－オキソデコキシ］安息香酸の調製

【化74】

（式Ｈ）
２－クロロトリチル樹脂１００～２００メッシュ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ（１，２．７０ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中に３０分間放置して膨潤させた。乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ、１．０４ｇ、２．７０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．８２ｍＬ、１０．３ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、メタノール／ジクロロメタン混合物（４：１、２×５分、２×４０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９４ｍＬ、５．４０ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。次いで樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ、３．１８ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．９３ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．８７ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の（Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－ペンタン二酸１－ｔｅｒｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ、３．５０ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．９３ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．８７ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の１０－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）デカン酸（ＣＮＢ、３．００ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．９３ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．８７ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、およびジクロロメタン（１０×４０ｍＬ）で洗浄した。

【0210】

２，２，２－トリフルオロエタノール（４０ｍＬ）で一晩処理することによって、生成物を樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発乾固して、純粋な（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３３－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）－１０，１９，２４－トリオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザトリトリアコンタン酸を黄色の油状物として得た。
収率：２．２６ｇ（１００％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．９５－７．８７（ｍ，２Ｈ）；７．４１－７．３２（ｍ，１Ｈ）；７．０５－６．９５（ｍ，１Ｈ）；６．９２－６．８２（ｍ，２Ｈ）；６．６１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４９－４．３７（ｍ，１Ｈ）；４．１５（ｓ，２Ｈ）；４．０４－３．９５（ｍ，４Ｈ）；３．７６－３．３６（ｍ，１７Ｈ）；２．３９－２．０９（ｍ，５Ｈ）；２．０４－１．８５（ｍ，１Ｈ）；１．８４－１．７０（ｍ，２Ｈ）；１．６７－１．５２（ｍ，１０Ｈ）；１．５０－１．３９（ｍ，１１Ｈ）；１．３７－１．２４（ｍ，８Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ純度：１００％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５０：５０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：４．４９分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：８４１．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0211】

Ｗａｎｇ－Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨ樹脂、０．３３ｍｍｏｌ／ｇ（３、４．１５ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中に３０分間放置して膨潤させた。ジクロロメタン中の８０％の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－オール（２×５分、２×１０分、１×１５分、１×３０分、６×５０ｍＬ）で処理することにより、Ｍｔｔ基を除去した。樹脂３をジクロロメタン（４×７０ｍＬ）、ジクロロメタン（１×５０ｍＬ）中の１０％Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、およびジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。

【0212】

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３３－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）－１０，１９，２４－トリオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザトリトリアコンタン酸（２、２．３０ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、０．９７ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．２０ｍＬ、６．８５ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×５０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、２－プロパノール（２×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中のブロモ酢酸（０．７６ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０．８５ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）、２，４，６ーコリジン（０．９１ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×５０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（１０×４０ｍＬ）で洗浄した。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン混合物（２：１、３０ｍＬ）で３時間処理することにより、生成物（４）を樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発乾固して、純粋な（２Ｓ，２９Ｓ）－２９－（２－ブロモアセトアミド）－２－（１０－（４－カルボキシフェノキシ）デカンアミド）－５，１４，２３－トリオキソ－９，１２，１８，２１－テトラオキサ－６，１５，２４－トリアザトリアコンタン二酸（４）を黄色油状物として得た。
収率：１．３３ｇ（１００％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６＋ＤＣｌ，ｄＨ）：７．９３－７．７６（ｍ，２Ｈ）；７．０５－６．８９（ｍ，２Ｈ）；４．１６－４．０５（ｍ，３Ｈ）；４．０５－３．９３（ｍ，２Ｈ）；３．９３－３．７９（ｍ，５Ｈ）；３．６０－３．４８（ｍ，９Ｈ）；３．４６－３．３２（ｍ，４Ｈ）；３．３０－３．２１（ｍ，２Ｈ）；３．２１－３．１２（ｍ，２Ｈ）；３．１０－３．００（ｍ，２Ｈ）；２．１９－１．７７（ｍ，６Ｈ）；１．７７－１．４９（ｍ，７Ｈ）；１．４８－１．２２（ｍ，１２Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９５％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．０２分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：９７７．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0213】

実施例１０．９：４－［１２－［［（１Ｓ）－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（６Ｓ）－６－［（２－ブロモアセチル）アミノ］－６－カルボキシヘキシル］アミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１－カルボキシ－４－オキソブチル］アミノ］－１２－オキソドデコキシ］安息香酸の調製

【化75】

（式Ｋ）
２－クロロトリチルクロリド樹脂１００～２００メッシュ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ（２．６０ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中に３０分間放置して膨潤させた。乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ、１．０２ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．７５ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、メタノール／ジクロロメタン混合物（４：１、２×５分、２×４０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９０ｍＬ、５．２０ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。次いで樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の｛２－［２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－エトキシ］－エトキシ｝－酢酸（Ｆｍｏｃ－ＯＥＧ－ＯＨ、３．０６ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．８２ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．７６ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の（Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－ペンタン二酸１－ｔｅｒｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ、３．４０ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．８２ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．７６ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×４０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）、２－プロパノール（２×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×４０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×４０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中の１２－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）ドデカン酸（ＣＵＢ、３．１２ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、２．８２ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．７６ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×４０ｍＬ）、およびジクロロメタン（１０×４０ｍＬ）で洗浄した。

【0214】

２，２，２－トリフルオロエタノール（４０ｍＬ）で一晩処理することによって、生成物を樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発乾固して、純粋な（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）－１０，１９，２４－トリオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザペンタトリアコンタン酸を黄色油状物として得た。
収率：１．９３ｇ（８６％）。
ＬＣ－ＭＳ純度：１００％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：４．８８分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：８６９．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0215】

Ｗａｎｇ－Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨ樹脂０．３３ｍｍｏｌ／ｇ（３．４０ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）中に３０分間放置して膨潤させた。ジクロロメタン中の８０％の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－オール（２×５分、２×１０分、１×１５分、１×３０分、６×５０ｍＬ）で処理することにより、Ｍｔｔ基を除去した。樹脂をジクロロメタン（４×７０ｍＬ）、ジクロロメタン中の１０％Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１×５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。

【0216】

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の（Ｓ）－２２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３５－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェノキシ）－１０，１９，２４－トリオキソ－３，６，１２，１５－テトラオキサ－９，１８，２３－トリアザペンタトリアコンタン酸（１．９３ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）、５－クロロ－１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３－オキシドテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ、０．７９ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．８６ｍＬ、６．６６ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を一晩振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×１０分、１×３０分、２×５０ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、２－プロパノール（２×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中のブロモ酢酸（０．６２ｇ、４．４４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０．６９ｍＬ、４．４４ｍｍｏｌ）、および２，４，６－コリジン（０．５９ｍＬ、４．４４ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加し、混合物を１時間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（４×５０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）、およびジクロロメタン（１０×４０ｍＬ）で洗浄した。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン混合物（２：１、３０ｍＬ）で３時間処理することにより、生成物を樹脂から切断した。樹脂を濾過して取り除き、ジクロロメタン（４×４０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発乾固して、純粋な（２Ｓ，２９Ｓ）－２９－（２－ブロモアセトアミド）－２－（１２－（４－カルボキシフェノキシ）ドデカンアミド）－５，１４，２３－トリオキソ－９，１２，１８，２１－テトラオキサ－６，１５，２４－トリアザトリアコンタンジオン酸を黄色の油状物として得た。
収率：１．１０ｇ（９９％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６＋ＤＣｌ，ｄＨ）：７．９３－７．７４（ｍ，２Ｈ）；７．０６－６．８６（ｍ，２Ｈ）；４．２０－３．９３（ｍ，５Ｈ）；３．９２－３．７８（ｍ，６Ｈ）；３．５４（ｓ，９Ｈ）；３．４６－２．９４（ｍ，１２Ｈ）；２．１９－１．８４（ｍ，５Ｈ）；１．８１－１．５２（ｍ，６Ｈ）；１．５１－１．２３（ｍ，１５Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ純度：９７％（ＥＬＳＤ）。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．２０分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：１００５．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0217】

実施例１０．１０：（２Ｓ）－５－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［（２－ブロモアセチル）アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－５－オキソ－２－［１６－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘキサデカノイルアミノ］ペンタン酸の調製

【化76】

（式Ｊ）
１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＨＣｌ、６．２５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（７０ｍＬ）中の１６－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘキサデカン酸（１、５．２８ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）およびＮ－ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ、３．７５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加し、混合物を一晩攪拌した。反応混合物を１Ｍの塩酸（４００ｍＬ）水溶液で希釈した。粗生成物を酢酸エチル（４×４００ｍＬ）で抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下で除去した。２－プロパノール（１００ｍＬ）を油状の残渣に添加し、沈殿した白色固体を濾過して取り除いた。純粋な生成物（２）を、２－プロパノール（７０ｍＬ）から再結晶することにより白色の微結晶性固体として得た。
収率：４．７３ｇ（６９％）。
ＲＦ（ＳｉＯ２、酢酸エチル）：０．３５。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：３．０２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．８６（ｓ，４Ｈ）；２．６２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）；１．９０－１．６３（ｍ，４Ｈ）；１．３０（ｂｓ，２２Ｈ）。

【0218】

２－クロロトリチル樹脂結合Ｆｍｏｃ－ｇＧｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＥＧ－ＯＥＧ－（１１．５ｍｍｏｌ、調製は実施例１０．６のプロトラクターの合成の手順に記載されている）をジクロロメタン（１００ｍＬ）中に２０分間放置して膨潤させた。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２×１００ｍＬ）で洗浄した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（１×５分、１×３０分、２×１００ｍＬ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。樹脂をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３×１００ｍＬ）、２－プロパノール（２×１００ｍＬ）、およびジクロロメタン（８×１００ｍＬ）で洗浄した。ジクロロメタン（２：８、８０ｍＬ）中の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノールで２時間処理することにより、生成物を樹脂から切断した。樹脂を濾過し、ジクロロメタン（２×８０ｍＬ）で洗浄した。溶液を組み合わせ、溶媒を蒸発させて、生成物（４）を褐色がかった油状物として得た。粗生成物は、２当量の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロ－２－プロパノールを含有した。
収率：９．４９ｇ（９９％、２当量のＨＦＩＰとの付加物に対して計数した）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｄＨ）：７．７２－７．６４（ｍ，１Ｈ）；７．５９－７．５０（ｍ，１Ｈ）；４．００（ｓ，２Ｈ）；３．９４（ｓ，２Ｈ）；３．９４－３．８５（ｍ，１Ｈ）；３．７１－３．３２（ｍ，１６Ｈ）；２．５６－２．４５（ｍ，２Ｈ）；２．４２－２．２６（ｍ，１Ｈ）；２．１６－２．０２（ｍ，１Ｈ）；１．４９（ｓ，９Ｈ）。

【0219】

テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の上記酸（６．１０ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）および２，５－ジオキソピロリジン－１－イル１６－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘキサデカノエート（２、３．３３ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６．９１ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩攪拌した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、０．０４０～０．０６３ｍｍ、溶出液：ジクロロメタン／メタノール／酢酸１５：１：０．２～５：１：０．２）により精製した。残留した酢酸をアセトニトリル／水混合物１：１から凍結乾燥によって除去して、純粋物（５）をオフホワイト色の固体として得た。
収率：１．３９ｇ（２２％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，ｄＨ）：８．１３－８．０７（ｍ，１Ｈ）；８．０１－７．９３（ｍ，１Ｈ）；７．７４－７．６８（ｍ，１Ｈ）；４．１１－３．９９（ｍ，１Ｈ）；３．８８（ｓ，２Ｈ）；３．８２（ｓ，２Ｈ）；３．６２－３．４９（ｍ，８Ｈ）；３．４９－３．３７（ｍ，４Ｈ）；３．３３－３．１５（ｍ，４Ｈ）；２．７３－２．６５（ｍ，２Ｈ）；２．１８－２．０３（ｍ，４Ｈ）；１．９４－１．８１（ｍ，１Ｈ）；１．８０－１．６７（ｍ，１Ｈ）；１．６６－１．５３（ｍ，２Ｈ）；１．５３－１．４１（ｍ，２Ｈ）；１．３８（ｓ，９Ｈ）；１．２３（ｓ，２２Ｈ）。

【0220】

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中の上記化合物（１．３９ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、１－（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（ＨＡＴＵ、６５７ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．２１ｍＬ、６．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンジル（２－アミノエチル）カルバメート（６、４００ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩攪拌した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０、０．０４０～０．０６３ｍｍ；溶出液：酢酸エチル／メタノール／酢酸１５：１：０．２～ジクロロメタン／メタノール／酢酸１５：１：０．２）により精製し、純粋な生成物（７）を褐色がかった粘着性固体として得た。
収率：１．６３ｇ（９７％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：７．３５（ｂｓ，５Ｈ）；５．２５－５．１２（ｍ，２Ｈ）；４．５０－４．４２（ｍ，１Ｈ）；４．１４（ｓ，２Ｈ）；４．０９（ｓ，２Ｈ）；３．７９－３．３０（ｍ，２０Ｈ）；３．０２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）；２．４６－２．２７（ｍ，４Ｈ）；２．２６－２．０９（ｍ，１Ｈ）；２．０５－１．９２（ｍ，１Ｈ）；１．８８－１．７２（ｍ，２Ｈ）；１．７２－１．５３（ｍ，２Ｈ）；１．４７（ｓ，９Ｈ）；１．２９（ｂｓ，２２Ｈ）。

【0221】

メタノール中の上記化合物（１．６３ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、パラジウム炭素（１０％、０．２５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を水素ブランケット（ｂｌａｎｋｅｔ）下で添加し、反応混合物を２時間にわたり激しく攪拌した。次いで、反応混合物を珪藻土の短いパッドを通して濾過し、メタノールで洗浄した。溶媒を減圧下で除去し、純粋な生成物（８）を白色の固体フォームとして得た。
収率：１．３２ｇ（９４％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：４．５０－４．４２（ｍ，１Ｈ）；４．１６－４．１０（ｍ，４Ｈ）；３．７１－３．６１（ｍ，１４Ｈ）；３．５９－３．５１（ｍ，２Ｈ）；３．５１－３．４５（ｍ，２Ｈ）；３．４０－３．３２（ｍ，２Ｈ）；３．０２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）；２．４５－２．２８（ｍ，４Ｈ）；２．２７－２．１２（ｍ，１Ｈ）；２．０５－１．９３（ｍ，１Ｈ）；１．８９－１．７４（ｍ，２Ｈ）；１．７０－１．５８（ｍ，２Ｈ）；１．４７（ｓ，９Ｈ）；１．３０（ｂｓ，２２Ｈ）。

【0222】

上記化合物（１．３２ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（９０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）の混合物中に溶解した。９０分後、減圧下で揮発分を除去し、残渣をトルエン（３×５０ｍＬ）を用いて蒸発させた。残渣をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却した。ブロモ酢酸無水物（６７８ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（２．０２ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）を撹拌しながら添加し、反応混合物を周囲温度まで温めた。６０分後に追加のブロモ酢酸無水物（２００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を添加し、反応を完了した。３０分後、溶媒を減圧下で除去し、ジクロロメタン、酢酸エチル、および水と不混和性の褐色がかった液体を得た。残渣を分液漏斗に定置し、酢酸エチル（５０ｍＬ）および水（５０）中に溶解させることを試みた。これにより、３つの相が生成した。酢酸エチル相および水相を除去し、第３の相を分取ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ：ｌａｂｉｏ ＤｅｌｔａＰａｋ Ｃ１８、１５ｍｍ、５０×５００ｍｍ、アセトニトリル／水２５：７５～５０：５０＋０．０５％ＴＦＡ）により精製した。得られた溶液を凍結乾燥して、表題生成物（９）を白色固体として得た。
収率：２１０ｍｇ（１５％）。
１Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＡｃＯＤ－ｄ４，ｄＨ）：４．６４－４．５６（ｍ，１Ｈ）；４．１２（ｓ，２Ｈ）；４．１０（ｓ，２Ｈ）；３．９５（ｓ，２Ｈ）；３．７７－３．５９（ｍ，１２Ｈ）；３．５９－３．３７（ｍ，８Ｈ）；３．０２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）；２．４４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．３４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．２８－２．１８（ｍ，１Ｈ）；２．１５－２．０４（ｍ，１Ｈ）；１．８６－１．７０（ｍ，２Ｈ）；１．７０－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｂｓ，２２Ｈ）。
ＬＣ－ＭＳ純度：１００％。
ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ（Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、アセトニトリル／水２０：８０～１００：０＋０．１％ＦＡ）：３．３５分。
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：９０８．８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0223】

実施例１１：プロトラクターを有するＭＩＣ－１化合物の調製
実施例１１．１：化合物０１
ＳｅｒＡ－３２、ＧｌｕＡ－３１、ＰｒｏＡ－３０、Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化77】

（式０１）
３０ｍｇのプロトラクター（実施例１０．４、８当量）を１．５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３中に溶解し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４、２．１ｍｇ／ｍＬ）中の１０８ｍｇのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）に添加した。１９ｍｇのビス（ｐ－スルホナトフェニル）フェニルホスフィン、カリウム塩二水和物、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ６９８５３９（８当量）を添加した。室温で２４時間静置後、タンパク質を１０～５０％エタノール／リン酸緩衝液ｐＨ３．０の勾配を使用してＣ４逆相カラム上で精製した。
精製後の収率約２０％。
理論的質量：３２００６．３；実測値：３２００６．５。

【0224】

実施例１１．２：化合物０２
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化78】

（式０２）
Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９１）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０２を調製した。
理論的質量：３１９７４．３；実測値：３１９７４．０

【0225】

実施例１１．３：化合物０３
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１５－カルボキシペンタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１５－カルボキシペンタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化79】

（式０３）
実施例１０．２に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９１）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０３を調製した。
理論的質量３１９１８．２；実測値：３１９１８．０．

【0226】

実施例１１．４：化合物０４
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１３－カルボキシトリデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１３－カルボキシトリデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化80】

（式０４）
実施例１０．３に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９１）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０４を調製した。
理論的質量：３１８６２．１；実測値：３１８６２．０。

【0227】

実施例１１．５：化合物０５
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化81】

（式０５）
実施例１０．４に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８９）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０５を調製した。
理論的質量：３１９６２．２；実測値：３１９６２．０．

【0228】

実施例１１．６：化合物０６
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化82】

（式０６）
実施例１０．４に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号３０３）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０６を調製した。
理論的質量：３１９０２．１；実測値：３１９０２．０

【0229】

実施例１１．７：化合物０７
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化83】

（式０７）
実施例１０．４に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９２）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０７を調製した。
理論的質量：３１８７４．１；実測値：３１８７３．０．

【0230】

実施例１１．８ 化合物０８
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化84】

（式０８）
実施例１０．４に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９３）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物０８を調製した
理論的質量：３１９０２．１；実測値：３１９０１．０

【0231】

実施例１１．９および実施例１１．１０：化合物０９および化合物１０
化合物０９：
Ｎ｛Ｂ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１
化合物１０：
Ｎ｛Ａ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル，Ｎ｛Ｂ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化85】

（式０９）

【化86】

（式１０）
２ｍＬの４０％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンに溶解した２０ｍｇのプロトラクター（実施例１０．１、８当量）を、４０ｍＬのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で７５ｍｇのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号１６４）に添加し、１００μＬのボランピリジン複合体（８Ｍ）を添加した。室温で２４時間静置後、２０ｍｇのプロトラクターおよび１００μＬのボラン試薬を再度添加した。
４８時間後、モノアルキル化およびジアルキル化タンパク質混合物を、１０～５０％エタノール／リン酸緩衝液ｐＨ３．０勾配を使用してＣ４逆相カラム上で精製した。精製後、約１９％のモノアルキル化タンパク質（化合物０９）および６％のジアルキル化タンパク質（化合物１０）を得た。
化合物０９：理論的質量：３１０７３．０；実測値：３１０７３．５
化合物１０：理論的質量：３１９０８．１；実測値：３１９０８．５

【0232】

実施例１１．１１：化合物１１
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＬｅｕＡ８６，ＬｅｕＢ５７，ＬｅｕＢ８６］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化87】

（式１１）
実施例１０．４に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２９０）を使用して実施例１１．１に記載された手順を使用して、化合物１１を調製した。
理論的質量：３１９３４．１；実測値：３１９３８．５。

【0233】

実施例１１．１２および実施例１１．１３：化合物１２および化合物１３
化合物１２：
Ｎ｛Ａ－９｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル，Ｎ｛Ｂ－９｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＧｌｕＡ－９，ＧｌｕＡ－８，ＡｌａＡ－７，ＧｌｕＡ－６，ＡｌａＡ－５，ＡｓｐＡ－４，ＡｓｐＡ－３，ＡｓｐＡ－２，ＡｓｐＡ－１，ＧｌｕＢ－９，ＧｌｕＢ－８，ＡｌａＢ－７，ＧｌｕＢ－６，ＡｌａＢ－５，ＡｓｐＢ－４，ＡｓｐＢ－３，ＡｓｐＢ－２，ＡｓｐＢ－１［ＬｙｓＡ１，ＧｌｕＡ２，ＳｅｒＡ３，ＬｙｓＢ１，ＧｌｕＢ２，ＳｅｒＢ３］－ＭＩＣ－１
化合物１３：
Ｎ｛Ｂ－９｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＧｌｕＡ－９，ＧｌｕＡ－８，ＡｌａＡ－７，ＧｌｕＡ－６，ＡｌａＡ－５，ＡｓｐＡ－４，ＡｓｐＡ－３，ＡｓｐＡ－２，ＡｓｐＡ－１，ＧｌｕＢ－９，ＧｌｕＢ－８，ＡｌａＢ－７，ＧｌｕＢ－６，ＡｌａＢ－５，ＡｓｐＢ－４，ＡｓｐＢ－３，ＡｓｐＢ－２，ＡｓｐＢ－１［ＬｙｓＡ１，ＧｌｕＡ２，ＳｅｒＡ３，ＬｙｓＢ１，ＧｌｕＢ２，ＳｅｒＢ３］－ＭＩＣ－１

【化88】

（式１２）

【化89】

（式１３）
実施例１０．１に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号３１１）を使用して実施例１１．１０に記載された手順を使用して、化合物１２および１３を調製した。
化合物１２：理論的質量：２８２１２．３；実測値：２８２１１．９
化合物１３：理論的質量：２７３７７．２；実測値：２７３７６．８

【0234】

実施例１１．１４：化合物１４
Ｎ｛Ａ－９｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１１－カルボキシウンデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル，Ｎ｛Ｂ－９｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１１－カルボキシウンデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＧｌｕＡ－９，ＧｌｕＡ－８，ＡｌａＡ－７，ＧｌｕＡ－６，ＡｌａＡ－５，ＡｓｐＡ－４，ＡｓｐＡ－３，ＡｓｐＡ－２，ＡｓｐＡ－１，ＧｌｕＢ－９，ＧｌｕＢ－８，ＡｌａＢ－７，ＧｌｕＢ－６，ＡｌａＢ－５，ＡｓｐＢ－４，ＡｓｐＢ－３，ＡｓｐＢ－２，ＡｓｐＢ－１［ＬｙｓＡ１，ＧｌｕＡ２，ＳｅｒＡ３，ＬｙｓＢ１，ＧｌｕＢ２，ＳｅｒＢ３］－ＭＩＣ－１

【化90】

（式１４）
実施例１０．５に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号３１１）を使用して実施例１１．１０に記載された手順を使用して、化合物１４を調製した。
理論的質量：２８０４３．９；実測値：２８０４３．６。

【0235】

実施例１１．１５および実施例１１．１６：化合物１５および化合物１６
化合物１５：
Ｎ｛Ｂ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＡｒｇＡ６９，ＬｅｕＡ８６，ＡｒｇＡ９１，ＡｒｇＡ１０７，ＬｅｕＢ５７，ＡｒｇＢ６９，ＬｅｕＢ８６，ＡｒｇＢ９１，ＡｒｇＢ１０７］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１
化合物１６：
Ｎ｛Ａ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル，Ｎ｛Ｂ－３２｝－［４－［［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１７－カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］メチル］フェニル］メチル－ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，ＡｌａＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，ＡｌａＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１［ＬｅｕＡ５７，ＡｒｇＡ６９，ＬｅｕＡ８６，ＡｒｇＡ９１，ＡｒｇＡ１０７，ＬｅｕＢ５７，ＡｒｇＢ６９，ＬｅｕＢ８６，ＡｒｇＢ９１，ＡｒｇＢ１０７］，ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化91】

（式１５）

【化92】

（式１６）
実施例１０．１に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号３１２）を使用して実施例１１．１０に記載された手順を使用して、化合物１５および１６を調製した。
化合物１５：理論的質量：３１２４１．１；実測値：３１２４２．０。
化合物１６：理論的質量：３２０７６．０；実測値：３２０７５．０。

【0236】

実施例１１．１７：化合物１７
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１６－スルホヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－（１６－スルホヘキサデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化93】

（式１７）
４ｍＬの２Ｍトリス緩衝液を、１５ｍＭのクエン酸／４５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ３、２．２ｍｇ／ｍＬ中の１７６ｍｇのＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）に添加した。実施例１０．６に記載されたプロトラクターを、飽和炭酸水素ナトリウム中に溶解し、２０ｍｇ／Ｌ、８当量とした。次いで、プロトラクターをポリペプチド溶液に添加した。水に溶解した１２．４ｍｇのビス（ｐ－スルホナトフェニル）フェニルホスフィン、カリウム塩二水和物、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ６９８５３９（０．１ｍｇ／ｍＬ）を添加し、反応混合物を１０秒間穏やかに振盪した。６時間後、１０～５０％エタノール／リン酸緩衝液ｐＨ３．０を使用して、Ｃ４逆相カラムを使用したＣ４カラム上で、化合物を精製した。
理論的質量：３２０５０．３；実測値：３２０５０．０。

【0237】

実施例１１．１８：化合物１８
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（５Ｓ）－５－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［４－［１７－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘプタデカノイルスルファモイル］ブタノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（５Ｓ）－５－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［４－［１７－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘプタデカノイルスルファモイル］ブタノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化94】

（式１８）
実施例１０．７に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）を使用して実施例１１．１７に記載された手順を使用して、化合物１８を調製した。
理論的質量：３２２６６．６；実測値：３２２６６．０。

【0238】

実施例１１．１９：化合物１９
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１０－（４－カルボキシフェノキシ）デカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１０－（４－カルボキシフェノキシ）デカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化95】

（式１９）
実施例１０．８に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）を使用して実施例１１．１７に記載された手順を使用して、化合物１９を調製した。
理論的質量：３２１６６．３；実測値：３２１６６．０。

【0239】

実施例１１．２０：化合物２０
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１２－（４－カルボキシフェノキシ）ドデカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－５－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１２－（４－カルボキシフェノキシ）ドデカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］アミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化96】

（式２０）
実施例１０．９に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）を使用して実施例１１．１７に記載された手順を使用して、化合物２０を調製した。
理論的質量：３２２２２．４；実測値：３２２２２．０。

【0240】

実施例１１．２１：化合物２１
ＳｅｒＡ－３２，ＧｌｕＡ－３１，ＰｒｏＡ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１６－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘキサデカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＡ－２９，ＴｈｒＡ－２８，ＳｅｒＡ－２７，ＧｌｙＡ－２６，ＳｅｒＡ－２５，ＧｌｕＡ－２４，ＴｈｒＡ－２３，ＰｒｏＡ－２２，ＧｌｙＡ－２１，ＴｈｒＡ－２０，ＳｅｒＡ－１９，ＧｌｕＡ－１８，ＳｅｒＡ－１７，ＡｌａＡ－１６，ＴｈｒＡ－１５，ＰｒｏＡ－１４，ＧｌｕＡ－１３，ＳｅｒＡ－１２，ＧｌｙＡ－１１，ＰｒｏＡ－１０，ＧｌｙＡ－９，ＴｈｒＡ－８，ＳｅｒＡ－７，ＴｈｒＡ－６，ＧｌｕＡ－５，ＰｒｏＡ－４，ＳｅｒＡ－３，ＧｌｕＡ－２，ＧｌｙＡ－１，ＳｅｒＢ－３２，ＧｌｕＢ－３１，ＰｒｏＢ－３０，Ｓ｛ベータ｝－［２－［２－［［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－カルボキシ－４－［１６－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ヘキサデカノイルアミノ］ブタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエチル］ＣｙｓＢ－２９，ＴｈｒＢ－２８，ＳｅｒＢ－２７，ＧｌｙＢ－２６，ＳｅｒＢ－２５，ＧｌｕＢ－２４，ＴｈｒＢ－２３，ＰｒｏＢ－２２，ＧｌｙＢ－２１，ＴｈｒＢ－２０，ＳｅｒＢ－１９，ＧｌｕＢ－１８，ＳｅｒＢ－１７，ＡｌａＢ－１６，ＴｈｒＢ－１５，ＰｒｏＢ－１４，ＧｌｕＢ－１３，ＳｅｒＢ－１２，ＧｌｙＢ－１１，ＰｒｏＢ－１０，ＧｌｙＢ－９，ＴｈｒＢ－８，ＳｅｒＢ－７，ＴｈｒＢ－６，ＧｌｕＢ－５，ＰｒｏＢ－４，ＳｅｒＢ－３，ＧｌｕＢ－２，ＧｌｙＢ－１ｄｅｓ－ＡｓｎＡ３，ＡｓｎＢ３－ＭＩＣ－１

【化97】

（式２１）
実施例１０．１０に記載されたプロトラクターおよびＮ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチド（配列番号２８８）を使用して実施例１１．１７に記載された手順を使用して、化合物２１を調製した。
理論的質量：３２０２６．３；実測値：３２０２６．０。
化合物０１～２１の構造を表１８に要約する。

【0241】

表１８：ＭＩＣ－１化合物の構造

【表18-1】

【表18-2】

【表18-3】

注：＊は、一つのプロトラクターのみが化合物０９、化合物１３、または化合物１５に結合されていること、すなわち、二量体としての化合物０９、化合物１３、または化合物１５が、その二つのＮ末端延長部のうちの一つに結合された一つのプロトラクターのみを有することを意味する。その他の化合物では、一つのプロトラクターが、二量体の二つのＮ末端延長部の各々に結合されており、すなわち、二量体化合物あたり二つのプロトラクターがある。

【0242】

実施例１２：ＭＩＣ－１化合物の溶解度
ＭＩＣ－１化合物の試料をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で調製し、続いて、試料をより濃縮して３５ｍｇ／ｍｌ超とした。

【0243】

ＰＢＳ中のＭＩＣ－１化合物試料を、Ｖｉｖａｓｐｉｎマニュアルの説明に従ってＶｉｖａｓｐｉｎ２０ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）上で濃縮した。スイングバケットローター（ｓｗｉｎｇｉｎｇ－ｂｕｃｋｅｔ ｒｏｔｏｒ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を装備したＨｅｒａｕｓ Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ Ｘ３Ｒ遠心分離機を４０００ｒｐｍ（３３１０×ｇ）で使用して、ＭＩＣ－１化合物試料を濃縮した。その後、Ｎａｎｏｄｒｏｐ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で２８０ｎｍでＵＶを測定することにより、濃度を決定した。表１９に測定濃度を示す。

【0244】

表１９：ＭＩＣ－１化合物の溶解度

【表19】

【0245】

様々なプロトラクターを結合することは、ＭＩＣ－１ポリペプチドにＮ末端アミノ酸延長部を付加することによって得られる溶解度の改善に影響を与えないことが分かる。

【0246】

実施例１３：プロトラクターを有するＭＩＣ－１化合物のインビトロ効力および結合活性アッセイ
細胞株
安定細胞株ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴを、ルシフェラーゼレポーターの前に血清応答因子（ＳＲＥ）を有するベクターを添加して、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋにおいて生成した（実施例５を参照のこと）。ヒトＧＦＲＡＬおよびヒトＲＥＴの配列をＵｎｉｐｒｏｔ：ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ６ＵＸＶ０（ＧＦＲＡＬ＿ＨＵＭＡＮ）およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０７９４９（ＲＥＴ＿ＨＵＭＡＮ）にて取得した。この細胞株を、機能性ルシフェラーゼアッセイならびにシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）結合用の膜調製のために使用した。

【0247】

ルシフェラーゼアッセイ：ｈＧＦＲＡＬ、ｈＲＥＴ受容体、およびＳＲＥ－ルシフェラーゼレポーター遺伝子が安定してトランスフェクトされたＢＨＫ２１細胞を異なる濃度のＭＩＣ－１化合物によって処理した。ルシフェラーゼ活性を定量することによって受容体の活性化を測定し、化合物の効力をＥＣ５０によって計算した。

【0248】

ＳＰＡ結合：ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴ、ＳＲＥ－ルシフェラーゼ細胞の細胞膜を、異なる濃度のＭＩＣ－１化合物を用いた５０ｐＭのＩ１２５で標識したＭＩＣ－１によって単離処理した。変位（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）曲線のＩＣ５０により、ＭＩＣ－１化合物の結合効力を計算した。

【0249】

ルシフェラーゼアッセイ
凍結細胞を含むバイアルを急速に解凍し、この細胞を高グルコースおよびピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ、熱不活性化１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８－ジェネティシン（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）、および４００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンからなる１０ｍｌの事前に温めた完全培地を含む５０ｍｌのコーニングチューブに移した。細胞を１２００ｒｐｍで遠心分離し、上清を捨てた。この洗浄手順を１回反復して、細胞を２回洗浄する。細胞を完全培地中に再懸濁し、１．２×１０^６細胞／ｍｌの濃度とした。９６ウェルのポリ－Ｄ－リジンで被覆したアッセイプレート中に、ウェルあたり１．２×１０^５細胞（１００μｌ／ウェル）で細胞を播種した。細胞を＋３４℃で４～６時間ウェルの底面に付着させ、続いて、培地を１５ｍＭのＨＥＰＥＳを含むＲＰＭＩ培地からなる８０μｌの飢餓培地（ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）に変えた。細胞を、５％ＣＯ_２を有する加湿環境中で、＋３４℃にて一晩放置してインキュベートした。試験化合物を、５％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むまたは含まない、ＲＰＭＩ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、および０．５％のオボアルブミンからなるアッセイ培地中で段階希釈した。試験化合物を含有する２０μｌのアッセイ緩衝液を各ウェルに添加し、０．１％のオボアルブミン、１％のＨＳＡ、および３００００ｐＭ～３ｐＭの範囲の試験化合物の最終濃度（ブランクを含む）を得た。プレートを、５％のＣＯ_２を有する加湿環境中で、＋３７℃にて４時間インキュベートした。インキュベーション後、１００μｌのルシフェラーゼ基質溶液を各ウェルに添加し、密封した。プレートを１５分間インキュベートし、続いて発光を読み取った。発光の強度測定値を、シグモイド用量応答曲線の非線形回帰分析によるＥＣ_５０値の計算に使用した。

【0250】

ＳＰＡ結合
ＢＨＫ２１－ｈＧＦＲＡＬ－ＩＲＥＳ－ｈＲＥＴ細胞を、５％のＣＯ_２を有する加湿雰囲気中で、＋３７℃にて、高グルコースおよびピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ、熱不活性化した１０％のウシ胎児血清、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８－ジェネティシン、および４００ｕｇ／ｍｌハイグロマイシンからなる完全培地中で培養した。細胞を、氷冷したダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中で２回洗浄し、スクレイピング（ｓｃｒａｐｉｎｇ）によって機械的に分離し、氷冷したＤＰＢＳ中で円錐状の遠心分離用チューブの中へと移し、＋２０℃にて均質化１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、１０ｍｌの合計量の氷冷した均質化緩衝液Ａ（５０ｍＭトリス、２．５ｍＭのＥＤＴＡ、１個のＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤／５０ｍｌでｐＨ７．４に調整）に再懸濁し、２０秒間均質化した。ホモジネートを＋４℃にて１６０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を捨て、ペレットを１０ｍｌの均質化緩衝液Ｂ（５０ｍＭトリス、３２０ｍＭのスクロース、１個のＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤／５０ｍｌでｐＨ７．４に調整）中で再構成し、２０秒間均質化し、＋４℃にて１６０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。この手順をもう一回反復した。上清を捨て、ペレットを３ｍｌの均質化緩衝液Ｂ中で再構成し、低速で１０秒間均質化した。タンパク質濃度を標準的なＢｒａｄｆｏｒｄ法によって決定し、１．５ｍｇタンパク質／チューブをでクライオチューブ（ｃｒｙｏｔｕｂｅ）中に等分し、－８０℃で貯蔵した。結合アッセイを、白色の９６ウェルプレート中で、１ウェルあたり２００μｌの総体積で実施した。小麦胚細胞凝集素ＳＰＡビーズをアッセイ緩衝液（５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、４．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．０２％のＴｗｅｅｎ２０、および０．２５％のオボアルブミン、ｐＨ７．４）中で再構成し、膜調製物と混合して、１ウェルあたり０．５ｍｇのＳＰＡビーズおよび１０μｇの合計タンパク質の最終濃度を得た。１ウェルあたり１分あたり５００００カウントの放射性リガンドヒト［１２５Ｉ］－ＭＩＣ－１（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋにおいて生成された）を５０ｐＭの濃度に対応して添加した。試験されるＭＩＣ－１化合物をアッセイ緩衝液中で段階希釈し、１μＭ～１ｐＭの範囲の最終アッセイ濃度を得た。プレートを密封し、３５０ｒｐｍで設定したプレート振盪機内で＋２２℃にて２時間インキュベートし、その後、１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、ＳＰＡビーズ発光を読み取った。放射性リガンドの変位をＳＰＡビーズからの発光の減少として測定し、シグモイド用量－応答曲線の非線形回帰分析によってＩＣ_５０値を計算した（表２０）。

【0251】

表２０：ＭＩＣ－１化合物の効力および結合活性

【表20】

【0252】

表２０から分かるように、脂肪酸を有するＭＩＣ－１化合物は、脂肪酸を有しないＭＩＣ－１ポリペプチドと比較して、類似のインビトロ効力を有する。しかしながら、Ｃｙｓ変異Ｓ（－３）ＣなどのＣｙｓ変異がＭＩＣ－１ポリペプチドのＮ末端に近い場合、インビトロ効力はより低くなることになる。

【0253】

脂肪酸を有するＭＩＣ－１化合物が脂肪酸を有しないＭＩＣ－１ポリペプチドと類似の効力を有することを見出したことは、驚くべきことである。一般に、長期化のために薬学的生物学的化合物に脂肪酸を付加することによって効力が減少し、この減少は一般に、アルブミンの存在下で効力を測定することによってさらに増強される。したがって、脂肪酸プロトラクターを有するＭＩＣ－１化合物の効力が減少しないことを見出したことは予想外である。

【0254】

実施例１４：痩せたＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける食物摂取量および体重に対するＭＩＣ－１化合物の効果
本発明のＭＩＣ－１化合物のインビボでの有効性を、９～１１週齢の痩せた雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットで測定した。暗期間開始の１～２時間前に毎日、８ｎｍｏｌ／ｋｇ体重の用量を動物に注射した。適切な緩衝溶液中の化合物を皮下（１～４ｍｌ／ｋｇ）投与した。自動食物モニタリングシステム（ラット用のＢｉｏＤＡＱシステムおよびＨＭ２システム）を使用して、食物摂取量の変化を７日間測定した。ＢｉｏＤＡＱシステムでは、動物は１匹で収容され、ＨＭ２システムでは、動物は１ケージあたり最大３匹の動物の群で収容された。８日目に、化合物の投与の２～３時間後に尾部血液試料を採取し、この試料を使用して投与化合物の血漿濃度を測定した。各化合物を、ｎ＝４～８匹の動物で試験した。動物を実験前に少なくとも７日間順化させた。収集した食物摂取量データは、各日の１２時間の暗期間の開始から翌日の暗期間まで測定した１日の食物摂取量（２４時間の食物摂取量）として表される。投与化合物に応答した食物摂取量の日ごとの変化は、処理群の１日の平均食物摂取量からビヒクル群の１日の平均食物摂取量を減算することによって算出した。スチューデントの両側ｔ検定を使用して、ｐ＜０．１である場合に変化を有意とみなした。結果は、研究期間中に記録されたビヒクルと比較した（緩衝溶液、パーセント）食物摂取量の「最大減少」として表される。データは、研究期間中の食物摂取量の有意な（ｐ＜０．１）日ごとの減少の合計としての食物摂取量の「減少の累計」（パーセント）としても表される。較正された秤を使用して、動物の体重を試験終了日に測定した。体重における処理の効果を、研究終了時のビヒクル処理動物と比較した化合物処理動物の体重のパーセント差として計算した（表２１）。

【0255】

表２１：ＳＤラットにおける食物摂取量および体重減少

【表21-1】

【表21-2】

【0256】

表２１の実験データから、プロトラクターを有するまたは有しないＭＩＣ－１化合物が、野生型ＭＩＣ－１ポリペプチドと比較したときに、ラットにおいて同等のまたはより良好なインビボでの有効性を有することが示されている。データは、これらのプロトラクターがＭＩＣ－１化合物のインビボでの有効性に悪影響を及ぼさないことも示している。

【0257】

実施例１５：ブタにおける薬力学（ＰＤ）研究
本実験の目的は、ブタにおける食物摂取量および体重に対するＭＩＣ－１化合物の効果を研究することであった。これは、ビヒクル処理対照群と比較して、ＭＩＣ－１化合物の単回投与の１～２１日後に食物摂取量を測定する、以下に記載する薬力学（ＰＤ）研究において行われた。

【0258】

およそ３ヵ月の月齢で、かつおよそ３０～３５ｋｇの体重の雌ランドレース・ヨークシャー・デュロック（ＬＹＤ）ブタ（ｎ＝４～６匹／群）を使用した。動物施設への順化の間、およそ１週間の間、動物を群で収容した。順化期間の最終部の間（投与前の２週間）、そして個別の食物摂取量の測定のために全実験の間、個別の小屋の中に動物を置いた。投与前の最後の３日間で測定された食物摂取量は、ベースラインとして機能した。

【0259】

動物には、順化期間中および実験期間中の両方でいつでもブタ用飼料（Ｓｖｉｎｅｆｏｄｅｒ Ｄａｎｉｓｈ Ｔｏｐ ＳＩ ６１１＋３’、Ｄａｎｉｓｈ Ａｇｒｏ）が自由に供給された。ＨＭｖｉｅｗシステム（Ｅｌｌｅｇａａｒｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、デンマーク、Ｆａａｂｏｒｇ）を使用して連続的に飼料の重量のログを取ることによって、食物摂取量をオンラインでモニタリングした。任意の顕著なこぼれを収集し、かつ計量して、自動的に測定された食物摂取量をこの量について修正した。

【0260】

研究中、体重を１週間に１回または２回測定した。ＭＩＣ－１化合物を、１ｎｍｏｌ／ｋｇまたは９ｎｍｏｌ／ｋｇの用量に対応するおよそ２５ｎｍｏｌ／ｍｌまたは１００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で適切な緩衝液中に溶解した。緩衝溶液はビヒクルとしても機能した。

【0261】

動物は、１日目の朝にＭＩＣ－１化合物またはビヒクルの単回皮下投与で投与され、投与後２１日の間、食物摂取量が測定された。研究終了時、過剰用量のユサゾール（Ｅｕｔｈａｓｏｌ）を耳静脈カテーテルを通して静脈内投与することにより、動物を安楽死させた。

【0262】

２４時間間隔（０～２４時間、２４～４８時間、４８～７２時間、７２～９６時間、最長２０～２１日間）で食物摂取量を計算した。表２２に、得られた平均食物摂取量を、同じ間隔におけるビヒクル群の平均食物摂取量に対するパーセントで示す。

【0263】

表２２：ブタにおける食物摂取量に対する効果

【表22】

【0264】

データは、ブタにおける試験化合物の単回皮下注射により、注射後２１日までおよび２１日超でさえも食物摂取量の減少（９ｎｍｏｌ／ｋｇの用量の化合物０１について）を生じたことを示している。

【0265】

研究中に体重を測定し、ＭＩＣ－１化合物で処理した群ではブタの体重増加は少なかった（表２３、図６）。

【0266】

表２３：ビヒクル群に対する体重増加の変化

【表23】

【0267】

実施例１６：痩せたＳＤラットにおける薬物動態研究
本研究の目的は、痩せたＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに静脈内および皮下投与した後のＭＩＣ－１化合物のインビボでの終末相半減期（Ｔ1/2）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、最大血漿レベルに対する時間（Ｔｍａｘ）、およびバイオアベイラビリティ（Ｆ）時間を決定することである。これは薬物動態（ＰＫ）研究において行われ、問題のＭＩＣ－１化合物のＰＫパラメータが決定された。Ｔ1/2は、一般に、静脈内投与での初期分布相（ｉｎｉｔｉａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ）の後に測定される、ある特定の血漿濃度を半減するのにかかる時間期間を意味する。ＭＲＴは、一般に、問題の化合物が体内に滞留する平均時間の長さを意味する。Ｔｍａｘは、一般に、問題の化合物の皮下投与後の、問題の化合物が血漿中で最高濃度に達したときの時点を意味する。Ｆは、一般に、血漿中に存在する皮下投与化合物の割合を意味する。前述のＰＫパラメータは、化合物を尾静脈または頸部皮下組織のいずれかの中へと注射し、続いて曝露分析のために様々な時点で血漿試料の採取を行うことにより、３００ｇ～５００ｇの痩せたＳＤラットにおいて測定された。化合物（４～５ｎｍｏｌ／ｋｇ体重）を適切な緩衝溶液中で静脈内投与した（１ｍｌ／ｋｇ）。静脈内群の群の大きさは典型的には４であり、皮下群の群の大きさは典型的には５であった。ラットは全実験の間は目覚めており、食物および水を摂ることができた。

【0268】

１２時間未満のＴ1/2を有する化合物では、典型的には、投与後５分、１５分、３０分、６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、１４時間、２２時間、３０時間、４８時間、または投与後０分、１５分、３０分、６０分、９０分、２時間、２．５時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、２４時間、３０時間、４８時間において舌から血液試料を採取した。２４時間超のＴ1/2を有する化合物では、典型的には、投与後５分、１５分、３０分、６０分、１２０分、３６０分、７２０分、２４時間、３０時間、４８時間、５４時間、７２時間、９６時間、１６８時間、２１６時間、２６４時間、３３６時間において舌から血液試料を採取し、２００μｌの血液をＥＤＴＡチューブの中へと採取し、最大２０分間氷上で保存した。血液試料を４℃で１００００Ｇで５分間遠心分離することにより、血漿試料を生成した。その後、試料をドライアイス上のＭｉｃｒｏｎｉｃチューブの中へとピペットで入れ、ＬＯＣＩまたはＥＬＩＳＡなどの類似の抗体ベースアッセイを使用してそれぞれのＭＩＣ－１化合物の血漿濃度について分析するまで－２０℃で保持した。個々の血漿濃度－時間プロファイルをＰｈｏｅｎｉｘ ｖ．６．４ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州マウンテンビュー）での非コンパートメントモデルによって分析し、生じたＴ1/2、ＭＲＴ、Ｔｍａｘ、およびＦを決定した（表２４）。

【0269】

表２４：Ｎ末端延長部を有するＭＩＣ－１化合物／ポリペプチドの薬物動態プロファイル

【表24-1】

【表24-2】

【0270】

プロトラクターを有するＭＩＣ－１化合物は、長期化されていない（ｎｏｎ－ｐｒｏｔｒａｃｔｅｄ）Ｎ延長部を有するＭＩＣ－１ポリペプチドと比較して、ずっとより長いＴ1/2、ＭＲＴ、およびＴｍａｘを有することが分かる。同等の脂肪酸プロトラクターを有する薬学的生物学的化合物の長期化は、一般にラットにおいて１２時間を超えることが稀である終末相半減期をもたらす。４８時間超の終末相半減期を見出したことは予想外であり、また驚くべきことである。

【0271】

実施例１７：ミニブタにおける薬物動態研究
本研究の目的は、ミニブタへの静脈内投与後のＭＩＣ－１化合物のインビボでの長期化、すなわち体内での該化合物の時間の長期化、およびそれによる該化合物の作用時間の延長を決定することであった。これは薬物動態（ＰＫ）研究において行われ、問題の化合物の終末相半減期が決定された。終末相半減期は、終末消失相においてある特定の血漿濃度を半減するのにかかる時間を意味する。

【0272】

雌のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタをＥｌｌｅｇａａｒｄ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ Ｍｉｎｉｐｉｇｓ（デンマーク、Ｄａｌｍｏｓｅ）から取得し、月齢およそ８ヵ月でかつ体重がおよそ２３～２５ｋｇのものを研究で使用した。ミニブタ（永久的（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ）カテーテルを有するブタ）は小屋の中で個別に収容され、寝床として藁を有し、アルトロミン（Ａｌｔｒｏｍｉｎ）９０３０ミニブタ餌（Ａｌｔｒｏｍｉｎ Ｓｐｅｚｉａｌｆｕｔｔｅｒ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ）を１日１回、制限的に給餌した。

【0273】

３週間の順化後、二つの永久的中心静脈カテーテルを、各動物の大静脈尾部に移植した。動物を手術後１週間回復させ、次いで、連続的な投与の間に好適なウオッシュ・アウト期間を伴う反復薬物動態研究に使用した。

【0274】

化合物の静脈注射（０．１７ｍｌ／ｋｇに対応する体積）を一つのカテーテルを通して与え、投与の１２日後までの所定の時点で血液試料を採取した（好ましくは他のカテーテルから）。

【0275】

血液試料（例えば、０．８ｍｌ）をＥＤＴＡ（８ｍＭ）被覆チューブ内に採取し、次いで４℃および１９４２ｇで１０分間遠心分離した。血液試料を所定の時点で採取した。例として、ｔ＝投与前、投与後０．０８３３時間、０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、２４時間、３０時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１６８時間、１９２時間、２１６時間、２４０時間、２６４時間、および２８８時間に血液試料を採取した。

【0276】

血漿をドライアイス上のＭｉｃｒｏｎｉｃチューブの中へとピペットで入れ、ＬＯＣＩを使用してＭＩＣ－１化合物の血漿濃度について分析するまで－２０℃に保持した。個別の血漿濃度－時間プロファイルをＰｈｏｅｎｉｘ ｖ．６．４（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州マウンテンビュー）での非コンパートメント薬物動態法によって分析し、得られた終末相半減期（調和平均）を決定した。

【0277】

結果
以下の結果が得られた（表２５）。

【0278】

表２５：静脈内投与後のＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタにおけるインビボ研究

【表25】

終末相半減期（ｔ1/2）は調和平均である、ｎ＝３

【0279】

同等の脂肪酸プロトラクターを有する薬学的生物学的化合物の長期化は、一般にミニブタにおいて１００時間を超えることが稀である終末相半減期をもたらす。３００時間超の終末相半減期を見出したことは予想外であり、また驚くべきことである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【配列表】

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