特許 7016341 ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト及びＴＩＧＩＴ阻害剤を使用するがんの治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-01-27

(45)【発行日】2022-02-04

(54)【発明の名称】ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト及びＴＩＧＩＴ阻害剤を使用するがんの治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20220128BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220128BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61K39/395 D

A61P35/00

A61P37/04

A61P43/00 121

【請求項の数】 62

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2019227933

(22)【出願日】2019-12-18

(62)【分割の表示】P 2016527082の分割

【原出願日】2014-07-16

(65)【公開番号】P2020073497

(43)【公開日】2020-05-14

【審査請求日】2020-01-16

(31)【優先権主張番号】61/950,754

(32)【優先日】2014-03-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/846,941

(32)【優先日】2013-07-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/985,884

(32)【優先日】2014-04-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/865,582

(32)【優先日】2013-08-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/992,109

(32)【優先日】2014-05-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】グローガン， ジェーン

(72)【発明者】

【氏名】ジョンストン， ロバート ジェー．

(72)【発明者】

【氏名】アーヴィング， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】ハックニー， ジェイソン

(72)【発明者】

【氏名】ユー， シン

(72)【発明者】

【氏名】イートン， ダン

(72)【発明者】

【氏名】ボウルズ， クリスティン

(72)【発明者】

【氏名】コンプス－アグラー， レティシア

【審査官】新熊 忠信

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１３／０１９９０６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１１－５２３０３４（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｐ ３７／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項2】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項3】

個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片及び有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項4】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項5】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項6】

個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片及び有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項7】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項8】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項9】

個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片及び有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項10】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項11】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項12】

個体における減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片及び有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項13】

減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患がＴ細胞機能不全疾患に関連する、請求項７から１２の何れか一項に記載の医薬。

【請求項14】

Ｔ細胞機能不全疾患が、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる、請求項１３に記載の医薬。

【請求項15】

Ｔ細胞機能不全疾患が、Ｔ細胞アネルギー、又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる、請求項１３に記載の医薬。

【請求項16】

Ｔ細胞機能不全疾患がＴ細胞消耗によって特徴付けられる、請求項１３に記載の医薬。

【請求項17】

Ｔ細胞がＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項７から１６の何れか一項に記載の医薬。

【請求項18】

減少した免疫応答性により特徴付けられる免疫関連疾患が、未消散急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍細胞に対する減少した免疫応答性により特徴付けられる腫瘍免疫関連疾患からなる群から選択される、請求項７から１７の何れか一項に記載の医薬。

【請求項19】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項20】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激するための医薬であって、有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項21】

個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激するための医薬であって、有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片及び有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬。

【請求項22】

少なくとも１種の化学療法剤が更に組み合わせて投与される、請求項１から２１の何れか一項に記載の医薬。

【請求項23】

個体ががんに罹患している、請求項１９から２２の何れか一項に記載の医薬。

【請求項24】

個体のＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞が、組合せの投与前と比較して、増大し又は亢進したプライミング、活性化、増殖、サイトカイン放出及び／又は細胞溶解活性を有する、請求項１から２３の何れか一項に記載の医薬。

【請求項25】

ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数が、組合せの投与前に対して増加している、請求項１から２４の何れか一項に記載の医薬。

【請求項26】

活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数が、組合せの投与前に対して増加している、請求項１から２５の何れか一項に記載の医薬。

【請求項27】

活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞が、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞及び／又は組合せの投与前と比較して亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる、請求項１から２６の何れか一項に記載の医薬。

【請求項28】

ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞が、組合せの投与前と比較して、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出増加を示す、請求項２４から２７の何れか一項に記載の医薬。

【請求項29】

ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞が、エフェクターメモリーＴ細胞である、請求項１９から２８の何れか一項に記載の医薬。

【請求項30】

ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞が、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞及び／又は亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる、請求項２９に記載の医薬。

【請求項31】

ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞が、ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗの発現を有することによって特徴付けられる、請求項２９に記載の医薬。

【請求項32】

がんが、増加したレベルのＴ細胞浸潤を有している、請求項１から６及び２２から３１の何れか一項に記載の医薬。

【請求項33】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ＰＶＲ発現及び／又は活性を低減し又は阻害する、ＰＶＲとのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ２とのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ３とのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、及び／又はＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、請求項１から３２の何れか一項に記載の医薬。

【請求項34】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、及びイムノトキシンからなる群から選択される、請求項１から３３の何れか一項に記載の医薬。

【請求項35】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を阻害する、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する、又はＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２双方への結合を阻害する、請求項１から３４の何れか一項に記載の医薬。

【請求項36】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ＭＤＸ－１１０６、ＭＫ－３４７５、ＣＴ－０１１、及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択される、請求項１から３５の何れか一項に記載の医薬。

【請求項37】

がんが、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃がん、膀胱がん、食道がん、中皮腫、メラノーマ、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞がん、及び血液悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項１から６及び２２から３６の何れか一項に記載の医薬。

【請求項38】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が連続的に投与される、請求項１から３７の何れか一項に記載の医薬。

【請求項39】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が間欠的に投与される、請求項１から３７の何れか一項に記載の医薬。

【請求項40】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片の前に投与される、請求項１から３９の何れか一項に記載の医薬。

【請求項41】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と同時に投与される、請求項１から３９の何れか一項に記載の医薬。

【請求項42】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片の後に投与される、請求項１から３９の何れか一項に記載の医薬。

【請求項43】

有効量の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体を含む、請求項１から４２の何れか一項に記載の医薬。

【請求項44】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体が、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ－３又はＩｇＧ－４サブタイプである、請求項４３に記載の医薬。

【請求項45】

有効量の抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体を含む、請求項１から４４の何れか一項に記載の医薬。

【請求項46】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体が、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ－３又はＩｇＧ－４サブタイプである、請求項４５に記載の医薬。

【請求項47】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためのキットであって、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項48】

個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためのキットであって、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片及び抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項49】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためのキットであって、抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項50】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせてがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためのキットであって、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項51】

がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためのキットであって、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片及び抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項52】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片と組合わせてがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためのキットであって、抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を含む、キット。

【請求項53】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ＭＤＸ－１１０６、ＭＫ－３４７５、ＣＴ－０１１、又はＡＭＰ－２２４である、請求項４７から５２の何れか一項に記載のキット。

【請求項54】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片が、ＰＶＲ発現及び／又は活性を低減する又は阻害する、ＰＶＲとのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ２とのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ３とのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、及びＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする、請求項４７から５３の何れか一項に記載のキット。

【請求項55】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体を含む、請求項４７から５４の何れか一項に記載のキット。

【請求項56】

抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体が、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ－３又はＩｇＧ－４サブタイプである、請求項５５に記載のキット。

【請求項57】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体を含む、請求項４７から５６の何れか一項に記載のキット。

【請求項58】

抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体が、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ－３又はＩｇＧ－４サブタイプである、請求項５７に記載のキット。

【請求項59】

パッケージで、抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片、又は抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片及び抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体若しくはその抗原結合断片の両方と、該キットが個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためのものであるか、又はがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためのものであることを示す添付文書を組み合わせることを含む、請求項４７から５８の何れか一項に記載のキットの作製方法。

【請求項60】

個体がヒト患者である、請求項１から４６の何れか一項に記載の医薬。

【請求項61】

個体がヒト患者である、請求項４７から５８の何れか一項に記載のキット。

【請求項62】

個体がヒト患者である、請求項５９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願とのクロスリファレンス）
この出願は、その各々の全体を出典明示によりここに援用する、２０１３年７月１６日出願の米国仮出願第６１／８４６９４１号、２０１３年８月１３日出願の米国仮出願第６１／８６５５８２号、２０１４年３月１０日出願の米国仮出願第６１／９５０７５４号、２０１４年４月２９日出願の米国仮出願第６１／９８５８８４号、及び２０１４年５月１２日出願の米国仮出願第６１／９９２１０９号の優先権を主張する。

【0002】

（ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出）
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、その全体を出典明示によりここに援用する：コンピュータに読み込み可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：146392025940SEQLISTING.TXT、記録された日付：２０１４年７月１６日、サイズ：２５ＫＢ）。

【背景技術】

【0003】

Ｔ細胞への２つの別個のシグナルの提供は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による休止Ｔリンパ球のリンパ球活性化に対して広く受け入れられているモデルである。Lafferty等, Aust. J. Biol. Med. ScL53：27-42(1975)。このモデルは、自己と非自己の識別と免疫寛容を更にもたらす。Bretscher等、Science 169：1042-1049(1970)； Bretscher, PA, PNAS USA 96：185-190(1999)；Jenkins等, J. Exp. Med. 165：302-319(1987)。一次シグナル、又は抗原特異的シグナルは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と関連して提示される外来抗原ペプチドの認識後にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して伝達される。二次又は同時刺激シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現された同時刺激分子によってＴ細胞に送達され、Ｔ細胞を誘導してクローン性増殖、サイトカイン分泌及びエフェクター機能を促進させる。Lenschow等, Ann. Rev. Immunol. 14:233(1996)。同時刺激がない場合には、Ｔ細胞は、抗原刺激に対して不応性になり得、これが外来性又は内在性抗原の何れかに対する免疫寛容原性応答を生じる。

【0004】

２シグナルモデルにおいて、Ｔ細胞は、正の同時刺激と負の同時阻害の両方のシグナルを受け取る。そのような正及び負のシグナルの調節は、免疫寛容を維持し自己免疫を防止しながら、宿主の防御免疫応答を最大にするために重要である。負のシグナルはＴ細胞寛容の誘導に必要なように思われる一方、正のシグナルはＴ細胞活性化を促進する。

【0005】

同時刺激及び同時阻害シグナルの双方が抗原曝露Ｔ細胞にもたらされ、同時刺激シグナルと同時阻害シグナルの間の相互作用が免疫応答の大きさの制御に重要である。更に、Ｔ細胞に提供されるシグナルは、感染又は免疫誘発が排除され、悪化し、又は持続すると変化し、これらの変化は応答性Ｔ細胞に強力に影響を及ぼし、免疫応答を再形成する。

【0006】

同時刺激シグナルの操作は細胞ベースの免疫応答を増強するか又は終了させる手段を提供することが示されているため、同時刺激の機序は治療上興味がある。最近、Ｔ細胞の機能不全又はアネルギーが、阻害性受容体であるプログラムドデス１ポリペプチド（ＰＤ－１）の誘導された持続的な発現と同時に起こることが発見された。その結果、ＰＤ－１及びそのシグナルがＰＤ－１との相互作用を通してシグナル伝達する他の分子、例えばプログラムドデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びプログラムドデスリガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の治療標的化が、強い関心領域である。

【0007】

ＰＤ－Ｌ１は多くのがんにおいて過剰発現しており、しばしば予後不良に関連している（Okazaki T等, Intern. Immun. 2007 19(7)：813）（Thompson RH等, Cancer Res 2006, 66(7)：3381）。興味深いことに、Ｔリンパ球に浸潤する腫瘍の大部分は、正常組織のＴリンパ球及び末梢血Ｔリンパ球とは異なり、主にＰＤ－１を発現するが、これは、腫瘍反応性Ｔ細胞上のＰＤ－１のアップレギュレーションが抗腫瘍免疫応答の不良に寄与しうることを示している（Blood 2009 114(8)：1537）。これは、ＰＤ－１発現Ｔ細胞と相互作用するＰＤ－Ｌ１発現腫瘍細胞によって媒介されるＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の利用によりＴ細胞活性化の減衰と免疫監視の回避がもたらされるためであろう（Sharpe等, Nat Rev 2002）（Keir ME等, 2008 Annu. Rev. Immunol. 26：677）。従って、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用の阻害が、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性殺傷を増強しうる。

【0008】

その直接のリガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）を介してのＰＤ－１軸シグナル伝達の阻害は、がんの治療のためのＴ細胞免疫（例えば、腫瘍免疫）を増強する手段として提案されている。更に、Ｔ細胞免疫への同様の増強が、結合パートナーＢ７－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害することによって、観察されている。更に、腫瘍細胞において調節解除される他のシグナル伝達経路とＰＤ－１シグナル伝達の阻害を組合せることにより、更に治療効果を高めうる。様々ながんの治療、安定化、予防、及び／又は発症遅延のための最適な治療法に対する必要性が残ったままである。

【0009】

ここに開示される全ての文献、刊行物、及び特許出願は、その全体が出典明示によりここに援用される。

【発明の概要】

【0010】

本発明は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを含む併用治療を記述する。

【0011】

ここに提供されるものは、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0012】

ここに提供されるものはまた、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0013】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0014】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0015】

幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連している。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。幾つかの実施態様では、免疫関連疾患は、未消散（unresolved）急性感染症、慢性感染症及び腫瘍免疫からなる群から選択される。

【0016】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0017】

ここに提供されるものはまた、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0018】

ここに提供されるものはまた、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0019】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0020】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0021】

幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連している。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー、又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。幾つかの実施態様では、免疫関連疾患は、未消散急性感染症、慢性感染症及び腫瘍免疫からなる群から選択される。

【0022】

ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0023】

幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激することができる。

【0024】

幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＴＩＧＩＴとのＣＤ２２６の相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲとのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤から選択される。

【0025】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴとのＣＤ２２６の相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴとのＣＤ２２６の相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0026】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0027】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。

【0028】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲとのＴＩＧＩＴの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。

【0029】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。

【0030】

本発明はまたＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを含む併用治療を記載する。

【0031】

ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。

【0032】

幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３の群から選択される。

【0033】

本発明はまたＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを含む併用治療を記載する。

【0034】

ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを個体に投与することを含む、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。

【0035】

幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、及びＧＩＴＲの群から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ及びＧＩＴＲの群から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＯＸ－４０及びＣＤ２７からなる群から選択される。

【0036】

幾つかの実施態様では、上記方法の何れかは少なくとも１種の化学療法剤を投与することを更に含む。

【0037】

幾つかの実施態様では、上記方法の何れかにおける個体はがんに罹患している。幾つかの実施態様では、上記方法の何れかにおける個体はヒトである。

【0038】

幾つかの実施態様では、個体のＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、組合せの投与前に対して、増大し又は亢進したプライミング、活性化、増殖、サイトカイン放出及び／又は細胞溶解活性を有する。

【0039】

幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。幾つかの実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。幾つかの実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又は組合せの投与前に対して亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出増加を示す。

【0040】

幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞である。幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞及び／又は亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗの発現を示すことによって特徴付けられる。

【0041】

幾つかの実施態様では、上記方法の何れかにおけるがんは、増加したレベルのＴ細胞浸潤を有している。

【0042】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、及びＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される相互作用及び／又は細胞内シグナル伝達を阻害する薬剤からなる群から選択される。

【0043】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。

【0044】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。

【0045】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害する薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。

【0046】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0047】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）あるいはＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも一つのＨＶＲを含む。

【0048】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）
に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0049】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）
に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0050】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）
に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体重鎖は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）
に記載のアミノ酸配列を含む。

【0051】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、及びイムノトキシンから選択される。

【0052】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）あるいはＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）の何れかに記載のＨＶＲと少なくとも９０％同一である少なくとも一つのＨＶＲを含む。

【0053】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその断片は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）、あるいは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）
にそれぞれ記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖及び／又は重鎖を含む。

【0054】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。

【0055】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－１結合アンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２双方への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは抗体である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＫ－３４７５（ランブロリズマブ）である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＣＴ－０１１（ピディリズマブ）である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。

【0056】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１のＢ７－１への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１とＢ７－１双方への結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗体である。

【0057】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。

【0058】

幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）のＨＶＲ－Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）のＨＶＲ－Ｈ２配列、及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と；ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）のＨＶＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号：２１）のＨＶＲ－Ｌ２配列、及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。

【0059】

幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0060】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストである。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは抗体である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。

【0061】

幾つかの実施態様では、治療されるがんは、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃がん、膀胱がん、食道がん、中皮腫、メラノーマ、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞がん、及び他の血液悪性腫瘍からなる群から選択される。

【0062】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は連続的に投与される。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は間欠的に投与される。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストの前に投与される。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと同時に投与される。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストの後に投与される。

【0063】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0064】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0065】

ここでまた提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0066】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0067】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0068】

ここでまた提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0069】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0070】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0071】

ここでまた提供されるものは、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0072】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0073】

ここでまた提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0074】

ここでまた提供されるものは、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。

【0075】

幾つかの実施態様では、キットを構成するＰＤ－１軸結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。幾つかの実施態様では、キットを構成するＰＤ－１軸結合アンタゴニストは抗ＰＤ－１抗体である。幾つかの実施態様では、キットを構成するＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される相互作用及び／又は細胞内シグナル伝達を阻害する薬剤からなる群から選択される。幾つかの実施態様では、キットを構成するＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0076】

幾つかの実施態様では、キットは、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ又は刺激することができる、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含む。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節するキットを構成する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲへの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤から選択される。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックするキットを構成する薬剤及び／又はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0077】

所定の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせてがんを治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせてがんを治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0078】

他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。
他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせてがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせてがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0079】

他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0080】

他の態様では、本開示は、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを含む組合せを提供する。

【0081】

他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するるのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0082】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連している。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患はウイルス感染である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ウイルス感染は慢性ウイルス感染である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患は、未消散急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。

【0083】

他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するためのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを含む組合せを提供する。

【0084】

他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためのに使用するためのＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0085】

他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造におけるＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせてがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。
他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせてがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するためのに使用するためのＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0086】

他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤がＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるのに使用するためのＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0087】

他の態様では、本開示は、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを含む組合せを提供する。

【0088】

他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための医薬の製造におけるＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するのに使用するためのＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。

【0089】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連している。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患はウイルス感染である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ウイルス感染は慢性ウイルス感染である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、免疫関連疾患は、未消散急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。

【0090】

他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造における有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストの使用を提供し、ここで、ＰＤ－１軸結合剤はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造におけるＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用される。他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するのに使用するためのＰＤ－１軸結合アンタゴニストを含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するためのに使用するためのＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを含む組合せを提供する。

【0091】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＰＶＲとの相互作用を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＰＶＲへのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びその組合せからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、又は阻害ポリペプチドである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラからなる群から選択される阻害核酸である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、 アンチセンスポリヌクレオチドはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、干渉ＲＮＡはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、触媒ＲＮＡはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＲＮＡ－ＤＮＡキメラはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラからなる群から選択される阻害核酸である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。

【0092】

他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造における一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで使用される。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するためのに使用するための一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と一又は複数の更なる同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを含む組合せを提供する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＣＤ９６からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３からなる群から選択される。

【0093】

他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを個体に投与することを含む方法を提供する。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造におけるＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と組み合わせて使用される。他の態様では、本開示は、個体における免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するための医薬の製造における一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する有効量の薬剤の使用を提供し、ここで、一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで使用される。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するのに使用するためのＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて免疫応答又は機能を亢進し又は刺激するのに使用するための一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を含有する薬学的組成物を提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と一又は複数の更なる同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを含む組合せを提供する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、及び２Ｂ４からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ及びＧＩＴＲからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＯＸ－４０及びＣＤ２７からなる群から選択される。

【0094】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、その方法は、少なくとも１種の化学療法剤を投与することを更に含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、個体はがんに罹患している。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、個体はヒトである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、個体のＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、組合せの投与前に対して、増大し又は亢進したプライミング、活性化、増殖、サイトカイン放出及び／又は細胞溶解活性を有する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又は組合せの投与前に対して亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出増加を示す。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞及び／又は亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗの発現を示すことによって特徴付けられる。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、がんは上昇したレベルのＴ細胞浸潤を有する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びそれらの組合せからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラからなる群から選択される阻害核酸である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、アンチセンスポリヌクレオチドはＴＩＧＩＴを標的とする。

【0095】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、干渉ＲＮＡはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、触媒ＲＮＡはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＲＮＡ－ＤＮＡキメラはＴＩＧＩＴを標的とする。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列（１）ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）；あるいは（２）ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも一つのＨＶＲを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体重鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含み、かつ抗体重鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、及びイムノトキシンからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、（１）ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）；あるいは（２）ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）の何れか一つに記載のＨＶＲと少なくとも９０％同一である少なくとも一つのＨＶＲを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、

に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び／又は

に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－１結合アンタゴニストである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１とＰＤ－Ｌ２双方へのＰＤ－１の結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＤＸ－１１０６である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＫ－３４７５である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＣＴ－０１１である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１のＢ７－１への結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１とＢ７－１双方へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）のＨＶＲ－Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）のＨＶＲ－Ｈ２配列、及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と；ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）のＨＶＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号：２１）のＨＶＲ－Ｌ２配列、及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２３）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号：４０）、又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、がんは、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、卵巣がん、乳がん、膵がん、胃がん、膀胱がん、食道がん、中皮腫、メラノーマ，頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞がん、及び他の血液悪性腫瘍からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は連続的に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は間欠的に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストの前に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストと同時に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤はＰＤ－１軸結合アンタゴニストの後に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の前に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と同時に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の後に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤の前に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と同時に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤の後に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤の前に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と同時に投与される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤の後に投与される。

【0096】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0097】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0098】

他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0099】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0100】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0101】

他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0102】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0103】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0104】

他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0105】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0106】

他の態様では、本開示は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0107】

他の態様では、本開示は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。

【0108】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）のＨＶＲ－Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）のＨＶＲ－Ｈ２配列、及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と；ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）のＨＶＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号：２１）のＨＶＲ－Ｌ２配列、及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖とを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２３）、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号：４０）、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４１）
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは抗ＰＤ－１抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＰＤ－１抗体はＭＤＸ－１１０６、ＭＫ－３４７５、又はＣＴ－０１１である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは抗体である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。

【0109】

他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるために一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＣＤ９６からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３からなる群から選択される。

【0110】

他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるために一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤との組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤との組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。他の態様では、本開示は、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるためにＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットを提供する。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、及び２Ｂ４からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ及びＧＩＴＲからなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＯＸ－４０及びＣＤ２７からなる群から選択される。

【0111】

先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、個体はヒトである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＣＤ２２６のＰＶＲとの相互作用を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＰＶＲへのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤からなる群から選択される。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤はＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、又は阻害ポリペプチドである。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列（１）ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）；あるいは（２）ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも一つのＨＶＲを含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体重鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。先の実施態様の何れかと組み合わせることができる所定の実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含み、かつ抗体重鎖は、

に記載のアミノ酸配列を含む。

【図面の簡単な説明】

【0112】

【図1A-1B】図１は、ＴＩＧＩＴが消耗したＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞上に高度に発現されることを示している。図１Ａは、インビトロで２４～４８時間、プレートに結合された抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激されたＭＡＣＳ富化Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞を示す。フローサイトメトリーヒストグラムはアイソタイプ染色（灰色）に対してＴＩＧＩＴ発現（赤色）を表す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＜０．００１。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝３。図１Ｂ－１Ｃにおいて、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスにアームストロング株ＬＣＭＶを感染させ、脾細胞を感染の７日後に分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図１Ｂは、ナイーブ（ＣＤ４４^ｌｏｗＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）及びエフェクターメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＜０．００１。

【図1C-1D】図１Ｃは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＜０．００１。図１Ｄは、Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスがＣＤ４＋Ｔ細胞を短時間に枯渇され、クローン１３株ＬＣＭＶで感染されたことを示す。脾細胞を感染の４２日後に分析した。フローサイトメトリーヒストグラムは、ナイーブ（ＣＤ４４^ｌｏｗＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）、セントラルメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）、及びエフェクターメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＜０．００１。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0113】

【図2】図２はＴＩＧＩＴ^{ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ}マウスのデザインを示す。ＴＩＧＩＴのエクソン１は標準的技法を使用してｌｏｘＰ部位と隣接させられている。

【0114】

【図3】図３は、ＴＩＧＩＴ欠損ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞が急性ウイルス感染に正常に応答することを示している。ＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４^ｃｒｅ（ＣＫＯ）及びＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}同腹仔（ＷＴ）をアームストロング株ＬＣＭＶで感染させた。感染の７日後に脾細胞を分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図３Ａは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、活性化（ＣＤ４４^ｈｉｇｈ）細胞はボックスで囲まれている。活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化は全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図３Ｂはインビトロでの刺激後にＣＤ８^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮγ産生細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図３Ｃは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、活性化（ＣＤ４４^ｈｉｇｈ）細胞はボックスで囲まれている。活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化は全ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図３Ｄは、インビトロでの刺激後にＣＤ４^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮγ産生細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は全ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0115】

【図4A-4D】図４は、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１がインビボで消耗Ｔ細胞のエフェクター機能を相乗的に調節することを示している。図４Ａ－４Ｅでは、ＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ－（ＷＴ）及びＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ＋（ＣＫＯ）マウスを、短時間でＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染の４２日後に分析した。データは２回の独立した実験の代表値であり、１群当たり、ｎ＝６－９である。図４Ａは、ＣＤ８＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを表し、活性化細胞（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）はボックスで囲まれている。活性化細胞の定量化は全ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図４Ｂは、インビトロでの刺激後にＣＤ８＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮγ＋細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化はＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図４Ｃは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、活性化された細胞（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）はボックスで囲まれている。活性化細胞の定量化は全ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図４Ｄは、インビトロでの刺激後にＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮγ＋細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は全ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。

【図4E-4F】図４Ｅは肝臓ＬＣＭＶ価の定量化を示している。***，Ｐ＜０．０００１。図４Ｆ～４Ｈにおいて、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを、短時間でＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。マウスを、感染の２８日後に開始して、アイソタイプ一致コントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染の４２日後に分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝１０。図４Ｆは、ＣＤ８＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを表し、活性化細胞（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）はボックスで囲まれている。活性化細胞の定量化は全ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。***，Ｐ＜０．０００１。

【図4G-4H】図４Ｇは、インビトロでの刺激後に活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを表し、ＩＦＮγ＋細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。*，Ｐ＝０．０３５２。**，Ｐ＝０．００４７。図４Ｈは肝臓ＬＣＭＶ価の定量化を示している。*，Ｐ＝０．０１０６。**，Ｐ＝０．００４７。エラーバーは平均の標準誤差を表す。

【0116】

【図5】図５は、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断が慢性ウイルス感染中にＣＤ４＋Ｔ細胞エフェクター機能を亢進させることを示している。Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを、ＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。マウスを、感染の２８日後からアイソタイプコントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した。脾細胞及び肝臓ウイルス価感染の４２日後に分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝１０。図５Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、活性化細胞（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）はボックスで囲まれている。活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の定量化は全ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。図５Ｂは、インビトロでの刺激後にＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを表し、ＩＦＮγ＋細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は全ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。*，Ｐ＝０．０１９。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0117】

【図6A-6B】図６は、ＴＩＧＩＴ発現がヒト乳がんにおいて上昇し、ＣＤ８及び阻害性共受容体の発現と相関することを示している。Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ａｔｌａｓ Ｎｅｔｗｏｒｋによって作成された乳がん遺伝子発現マイクロアレイデータを分析した。遺伝子発現データを正規化し、相対比（ｌｏｇ２）として表す。図６Ａは、正常及び全乳腺腫瘍試料（左）及び乳腺腫瘍サブタイプ（右）におけるＴＩＧＩＴ発現を示す。***，Ｐ＝６×１０－１２。箱及びひげプロットを示す。図６Ｂは、ＴＩＧＩＴとＣＤ３ε発現の相関を示す。Ｒ２＝０．６１。

【図6C-6D】図６Ｃは、ＴＩＧＩＴとＣＤ８α（左，Ｒ２＝０．８０）又はＣＤ４（右，Ｒ２＝０．４２）の相関を示す。図６Ｄは、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１（左，Ｒ^２＝０．８７）、ＬＡＧ３（中央，Ｒ^２＝０．８０）、及びＣＴＬＡ４（右，Ｒ^２＝０．７６）の相関を示す。

【0118】

【図7A-7C】図７は、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１が抗腫瘍Ｔ細胞応答を阻害することを示している。図７Ａ－７Ｂにおいて、ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を接種の１４日後に分析し、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達していた。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝６。図７Ａは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。**，Ｐ＝０．００２３。図７Ｂは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＝０．０００２。図７Ｃ－７Ｅにおいて、ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。腫瘍がおよそ２００ｍｍ３のサイズに達したとき、マウスをアイソタイプコントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で３週間、処置した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝１０－２０（図７Ｃ－７Ｄ）又は７－１０（図７Ｅ）。図７Ｃは、経時的なＣＴ２６腫瘍体積中央値を示す。

【図7D】図７Ｄはマウスの生存期間を示す。

【図7E】図７Ｅは、最初の接種のおよそ６０日後に、抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１を投与された完全寛解（ＣＲ）のマウス、並びにナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスの左胸郭側腹部にＣＴ２６細胞を接種し、その乳腺脂肪体中にＥＭＴ６乳がん細胞を接種したことを示す。ＣＲマウス（紫色及び緑色）及びナイーブマウス（黒色及びオレンジ色）腫瘍におけるＣＴ２６（矩形）及びＥＭＴ６（三角形）の腫瘍体積中央値（左）及び個々の値（右）を示す。

【図7F】図７Ｆは、マウスにＣＴ２６腫瘍が接種され、図７Ｃにおけるようにして処置されたことを示す。腫瘍浸潤及び腫瘍流入領域リンパ節常在Ｔ細胞をフローサイトメトリーにより分析した。インビトロでの刺激後のＣＤ８＋ＴＩＬの代表的なＦＡＣＳプロットであり、ＩＦＮγ産生細胞がボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生ＣＤ８＋ＴＩＬの定量化は全ＣＤ８＋ＴＩＬのパーセンテージとしてである。***，Ｐ＝０．０００３。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0119】

【図8】図８は、ＣＴ２６腫瘍浸潤リンパ球ＴＩＧＩＴ発現がＴｉｍ－３発現と相関していることを示す。ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を接種のおよそ１４日後に分析したが、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達していた。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝６。図８Ａは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。**，Ｐ＝０．００２６。図８Ｂは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。***，Ｐ＜０．０００１。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0120】

【図9】図９は、ＭＣ３８腫瘍浸潤リンパ球ＴＩＧＩＴ発現がＰＤ－１及びＴｉｍ－３発現と相関していることを示す。Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスにＭＣ３８結腸直腸がん細胞を接種した。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を接種のおよそ１４日後に分析したが、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達していた。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝５。図９Ａは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。***，Ｐ＜０．０００１。図９Ｂは、脾臓及び腫瘍浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。*，Ｐ＝０．０１３６。**，Ｐ＝０．００２９。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0121】

【図10】図１０は、抗ＰＤ－Ｌ１及び／又は抗ＴＩＧＩＴで処置されたマウスにおけるＣＴ２６腫瘍増殖を示す。ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６腫瘍細胞を接種し、図４Ｄ－４Ｆに記載されたように、抗ＰＤ－Ｌ１及び／又は抗ＴＩＧＩＴあるいはアイソタイプ一致コントロール抗体で処置した。各処置群における個々のマウスに対する経時的腫瘍体積を示す。データは２回の独立した実験の代表値である。

【0122】

【図11A-11C】図１１は、ＣＤ４^＋ＴＩＬ及び腫瘍流入領域リンパ節Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。腫瘍がおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスを７日間、アイソタイプコントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した。腫瘍及び腫瘍流入領域リンパ節を収集した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。インビトロでの刺激後に腫瘍流入領域リンパ節ＣＤ８^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットであり、ＩＦＮγ産生細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ^＋細胞の定量化は全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。***，Ｐ＜０．００１。ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化は全ＴＩＬのパーセンテージとしてである。**，Ｐ＝０．００６５。活性化（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化は全ＣＤ８^＋ＴＩＬのパーセンテージとしてである。*，Ｐ＝０．０１２。ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化は全腫瘍流入領域リンパ節細胞のパーセンテージとしてである。活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化は腫瘍流入領域リンパ節における全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。＊，Ｐ＜０．０５。図１１Ｃは、全ＴＩＬのパーセンテージとしてＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を示す。*，Ｐ＝０．０１６。図１１Ａは、インビトロでの刺激後のＣＤ４^＋ＴＩＬのパーセンテージとしてＩＦＮγ^＋細胞の定量化を示す。図１１Ｂは、インビトロでの刺激後の腫瘍流入領域リンパ節におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてＩＦＮγ^＋細胞の定量化を示す。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【図11D-11F】図１１Ｄは、全ＣＤ４^＋ＴＩＬのパーセンテージとして活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を示す。図１１Ｅは、全腫瘍流入領域リンパ節細胞のパーセンテージとしてＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を示す。図１１Ｆは、腫瘍流入領域リンパ節における全ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を示す。

【0123】

【図12】図１２は、ＣＤ８^＋ＴＩＬの更なるフローサイトメトリー分析を示す。ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種し、図４に記載されているように、アイソタイプコントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した。腫瘍を処置の７日後に収集し、フローサイトメトリーによって分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図１２Ａは、全ＣＤ８^＋ＴＩＬのパーセンテージとしてＴＮＦα^＋細胞の定量化を示す。**，Ｐ＜０．０１。図１２Ｂは、全ＴＩＬのパーセンテージとしてＣＤ８^＋ＴＩＬの定量化を示す。**，Ｐ＜０．０１。図１２Ｃは、全ＣＤ８^＋ＴＩＬのパーセンテージとして活性化（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８^＋ＴＩＬの定量化を示す。*，Ｐ＜０．０５。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0124】

【図13A】図１３は、腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８^＋Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種し、図４に記載されているように、アイソタイプコントロール、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した。腫瘍流入領域リンパ節を処置の７日後に収集し、フローサイトメトリーによって分析した。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図１３Ａは、インビトロでの刺激後の腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮγ産生細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ^＋細胞の定量化は全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。***，Ｐ＜０．００１。

【図13B-13D】図１３Ｂは、腫瘍流入領域リンパ節における全細胞のパーセンテージとしてＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を示す。図１３Ｃは、全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして活性化（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を示す。*，Ｐ＜０．０５。エラーバーは平均の標準誤差を示す。図１３Ｄは、全腫瘍流入領域リンパ節ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてＴＮＦα産生細胞の定量化を示す。

【0125】

【図14】図１４は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＣＤ２２６とＴＩＧＩＴの同時発現を示す。Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスにＭＣ３８結腸直腸がん細胞を接種した。接種のおよそ１４日後に、脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析したが、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達した。脾臓Ｂ細胞（灰色）、脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞（青色）、及びＴＩＧＩＴ＋腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞（赤色）によるＣＤ２２６発現の代表的なヒストグラム。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。

【0126】

【図15】図１５は、トランスフェクト細胞上のＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴの共免疫沈降（ｃｏ－ＩＰ）を示す。ＣＯＳ７細胞を、ＴＩＧＩＴ－ＨＡ（５ｎｇ）又はＣＤ２２６－Ｆｌａｇ（１０ｎｇ）タグ化タンパク質の何れかのｃＤＮＡを含む発現プラスミド、又はコントロールプラスミド（ｐＲＫ）を用いて、同時トランスフェクトさせた。トランスフェクションに続いて、細胞を洗浄し、遠心分離し、細胞ペレットを可溶化した。得られた上清を前もって清澄化し、遠心分離した後、二つのチューブに等しく分割し、標準的な手順を使用して、抗ＨＡ又は抗ｆｌａｇの何れかで免疫沈降させた。免疫沈降したタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、ウェスタンブロットした。ウェスタンブロットは抗Ｆｌａｇ－ＨＲＰ又は抗ＨＡ－ＨＲＰの何れかでプローブした。

【0127】

【図16】図１６は、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が一次ＣＤ８＋Ｔ細胞において相互作用することを示している。ＭＡＣＳ富化脾臓Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ ＣＤ８＋Ｔ細胞を、４８時間、プレート結合させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体及び組換えＩＬ－２で刺激し、可溶化した。細胞可溶化物を抗ＴＩＧＩＴで免疫沈降させ、抗ＣＤ２２６でプローブした。レーン：分子量ラダー（１）、インプット（２）、共免疫沈降フロースルー（３）、及び共免疫沈降物。矢印はＣＤ２２６の予想された分子量を示す。

【0128】

【図17】図１７は、ＴＲ－ＦＲＥＴによるＴＩＧＩＴ／ＣＤ２２６相互作用の検出を示す。図１７Ａは、ＨＡ－ＴＩＧＩＴによるＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６ホモ二量体の解離を示す。一定量のＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６及び増加濃度のＨＡ－ＴＩＧＩＴを発現するＣＯＳ－７細胞上で測定されたＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６間のＦＲＥＴ比。図１７Ｂは、ＰＢＳ（白色バー）又は抗ＴＩＧＩＴ抗体（黒色バー）の何れかの１５分のインキュベーション後に記録したＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６間のＦＲＥＴ比を示す。図１７Ｃは、ＨＡ－ＴＩＧＩＴとのＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６の結合を示す。Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６発現に対するＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴの間のＦＲＥＴ強度は、同じバッチのトランスフェクトＣＯＳ－７細胞上で抗Ｆｌａｇ ＥＬＩＳＡによって測定された。図１７Ｄは、ＰＢＳ（白色バー）又は抗ＴＩＧＩＴ抗体（黒色バー）の１５分のインキュベーション後のＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴとの間のＦＲＥＴ変動を示す。Ａ及びＣにおけるデータは４回の独立した実験の代表値であり、各実験は三通り実施された。Ｂ及びＤにおけるデータは２回の独立した実験の代表値であり、各実験は三通り実施された。

【0129】

【図18】図１８は、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６及びＨＡ－ＴＩＧＩＴの細胞表面発現を示す。示されたタグ化コンストラクトを発現するインタクトＣＯＳ－７細胞上の抗Ｆｌａｇ及び抗ＨＡ ＥＬＩＳＡ。データは３回の独立した実験の代表値であり、各実験は三通り実施された。

【0130】

【図19A-19B】図１９は、ＣＤ２２６遮断が、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断によって誘導される亢進された抗ウイルスＴ細胞応答を逆転させることを示す。図１９Ａ－１９Ｄにおいて、Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスからＣＤ４^＋Ｔ細胞を短時間で枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。マウスを、感染の２８日後に開始して、アイソタイプ一致コントロール、抗ＣＤ２２６、抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＣＤ２２６抗体で処置した。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染の４２日後に分析した。図１９Ａは、脾細胞のパーセンテージとしてＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を示す。図１９Ｂは、全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を示す。***，Ｐ＜０．００１。

【図19C-19D】図１９Ｃは、活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてＩＦＮγ産生細胞の定量化を示す。***，Ｐ＜０．００１。図１９Ｄは、肝臓ＬＣＭＶ価の定量化を示す。***，Ｐ＜０．００１。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0131】

【図20A】図２０は、ＴＩＧＩＴ発現がヒトがんにおいて上昇し、ＣＤ８及びＰＤ－１と強く相関していることを示す。ヒトがんの遺伝子発現分析は実施例１１に記載のように実施された。散布図は、ライブラリーサイズによって正規化された遺伝子当たりのカウントデータを示す。箱及びひげプロットは、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ３ｅの分散安定化した発現比を示す。図２０Ａは、ＬＵＳＣ（灰色）及び正常な肺（黒色）におけるＴＩＧＩＴ及びＣＤ３ｅ ＲＮＡ発現の相関を示す。ρ＝０．８６。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ｅ発現比の定量化もまた示される。ＬＵＳＣ比の増加＝３７２％。***，Ｐ＝１．４６×１０^－４６。

【図20B】図２０Ｂは、ＣＯＡＤ（灰色）及び正常な結腸（黒色）におけるＴＩＧＩＴ及びＣＤ３ｅ ＲＮＡ発現の相関を示す。ρ＝０．８３。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ｅ発現比の定量化もまた示される。ＣＯＡＤ比の増加＝１１６％。***，Ｐ＝３．６６×１０^－６。

【図20C】図２０Ｃは、ＵＣＥＣ（灰色）及び正常な子宮内膜（黒色）におけるＴＩＧＩＴ及びＣＤ３ｅ ＲＮＡ発現の相関を示す。ρ＝０．８７。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ｅ発現比の定量化もまた示される。ＵＣＥＣ比の増加＝４１９％。***，Ｐ＝７．４１×１０^－５。

【図20D】図２０Ｄは、ＢＲＣＡ（灰色）及び正常な乳房（黒色）におけるＴＩＧＩＴ及びＣＤ３ｅ ＲＮＡ発現の相関を示す。ρ＝０．８２。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ｅ発現比の定量化もまた示される。ＢＲＣＡ比の増加＝３１３％。***，Ｐ＝４．６×１０^－４４。

【図20E】図２０Ｅは、腎臓の腎臓明細胞がん（灰色）及び正常な腎臓（黒色）におけるＴＩＧＩＴとＣＤ３ｅのＲＮＡ発現の相関を示す。ρ＝０．９４。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ｅ発現比の定量化もまた示される。

【図20F】図２０Ｆは、肺扁平上皮がん（灰色）及び正常な肺（黒色）におけるＴＩＧＩＴとＣＤ８Ａ（左）又はＴＩＧＩＴとＣＤ４（右）の相関を示す。それぞれ、ρ＝０．７７及び０．４８。

【図20G-20H】図２０Ｇは、肺扁平上皮がん（灰色）及び正常な肺（黒色）におけるＴＩＧＩＴとＰＤ－１（Ｐｄｃｄ１）の相関を示す。ρ＝０．８２。図２０Ｈは、肺扁平上皮がん（赤色）及び正常な肺（黒色）におけるＴＩＧＩＴとＣＤ２２６の相関を示す。ρ＝０．６４。

【0132】

【図21】図２１は、肺扁平上皮がん（ＬＵＳＣ）におけるＴ細胞随伴遺伝子発現の分析を示す。ＬＵＳＣ及び正常な組織試料中における遺伝子発現を、実施例１１に記載されたようにして分析し、ＬＵＳＣ試料中における遺伝子サインと最も良好に相関した遺伝子のヒートマップを作成した。遺伝子及び試料を、中心化されスケール化された発現データに対してユークリッド距離行列上のＷａｒｄ連結を使用する階層的クラスタリングを使用して双方ともクラスター化した。

【0133】

【図22A-22B】図２２は、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１がヒト及びマウス腫瘍浸潤リンパ球によって協調的に発現されることを示している。図２２Ａ－２２Ｃは、新鮮に切除されたヒトＮＳＣＬＣ腫瘍、腫瘍が一致した末梢血、及び正常ドナーの末梢血由来のリンパ球の分析を示す。データは、２回の独立して分析された腫瘍の代表値である。図２２Ａは、末梢及び腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表す代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞がボックスで囲まれている。図２２Ｂは、末梢及び腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表す代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞はボックスで囲まれている。

【図22C-22E】図２２Ｃは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ（赤色）及びＰＤ－１^ｌｏｗ（青色）ＮＳＣＬＣ浸潤ＣＤ８^＋（左）及びＣＤ４^＋（右）Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図２２Ｄ－２２Ｇにおいて、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、同系ＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を接種の１４日後に分析したが、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達していた。データは２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５－６。図２２Ｄは、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞はボックスで囲まれている。図２２Ｅは、腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞はボックスで囲まれている。ＴＩＧＩＴ^＋Ｔ細胞の発生頻度の定量化は全Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。*，Ｐ＝０．０１３４。***，Ｐ＜０．０００１。

【図22F-22G】図２２Ｆは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗ腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞による及び脾臓ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。**，Ｐ＝０．００２３。図２２Ｇは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗ腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞による及び脾臓ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を表すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化もまた示される。***，Ｐ＝０．０００２。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0134】

【図23A-23C】図２３は、ヒト腫瘍浸潤Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の特徴付けを示す。図２３Ａ－２３Ｂは、ＮＳＣＬＣ腫瘍浸潤ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図２３Ａ）による、及びドナー一致ＰＢＭＣＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図２３Ｂ）によるＴＩＧＩＴ発現を示すＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ＋細胞はボックスで囲まれている。図２３Ｃは、ＣＲＣ腫瘍浸潤ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図２３Ｃ）によるＴＩＧＩＴ発現を示すＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ＋細胞はボックスで囲まれている。

【図23D】ドナー一致ＰＢＭＣ ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図２３Ｄ）によるＴＩＧＩＴ発現を示すＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ＋細胞はボックスで囲まれている。

【0135】

【図24】図２４は、ＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６相互作用が、ＴＲ－ＦＲＥＴによって検出されるＰＶＲ ＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴ Ｑ５６Ｒ：ＣＤ２２６相互作用によって駆動されないことを示しており、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６及びＨＡ－ＴＩＧＩＴ又はＨＡ－ＴＩＧＩＴ Ｑ５６Ｒ間のＦＲＥＴ比が、ＷＴ及びＱ５６Ｒ ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６に同じ効力で結合することを示している。データは３通り実施された３回の独立した実験の代表値である。

【0136】

【図25A】図２５は、ＭＣ３８腫瘍を持つマウスにおけるＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１抗体共遮断の効果を示す。図２５Ａ－２５Ｃにおいて、ＭＣ３８腫瘍を持つマウスは上述のようにして産生され、ＰＤ－Ｌ１（赤色）、ＴＩＧＩＴ（青色）、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－Ｌ１（紫色）に対する阻止抗体、又はアイソタイプ一致コントロール抗体（黒色）で３週間、処置された。Ｎ＝１０（コントロール，抗ＰＤ－Ｌ１単独、抗ＴＩＧＩＴ単独）又は２０（抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１）。図２５Ａは、経時的なＭＣ３８腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示している。

【図25B-25C】図２５Ｂは、抗体処置の１４日後のＭＣ３８腫瘍体積を示す。***，Ｐ＝０．０００５。**，Ｐ＝０．００９３。*，Ｐ＝０．０４３３。図２５Ｃは経時的なマウス生存率を示す。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0137】

【図26A-26C】図２６は、マウス腫瘍浸潤Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の更なる特徴付けを示す。図２６Ａは、脾臓Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ ＣＤ８^＋Ｔ細胞をＭＡＣＳによって富化させ、プレートに被覆した抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８アゴニスト抗体と共に培養したことを示す。経時的なＴＩＧＩＴ（赤色）及びアイソタイプ一致コントロール（灰色の塗り潰し）染色の代表的なヒストグラム。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。***，Ｐ＜０．００１。刺激された細胞はＰＤ－１を誘導的に発現し、ＣＤ２２６を構成的に発現した（データは示さず）。データは、２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図２６Ｂ－２６Ｅにおいて、野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスに同系ＭＣ３８結腸直腸がん細胞を皮下的に接種した。腫瘍を、サイズが１５０－２００ｍｍ^３に達するまで介入なしに成長させた。データは、２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図２６Ｂは、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞の代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞はボックスで囲まれている。ＴＩＧＩＴ^＋細胞の頻度の定量化は、全腫瘍浸潤又は脾臓ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。***，Ｐ＜０．０００１。図２６Ｃは、腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞の代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＴＩＧＩＴ^＋細胞はボックスで囲まれている。ＴＩＧＩＴ^＋細胞の頻度の定量化は、全腫瘍浸潤又は脾臓ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。***，Ｐ＜０．０００１。

【図26D-26E】図２６Ｄは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗ腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ぞれぞれ、赤色及び青色）による、並びに脾臓ＣＤ８^＋Ｔ細胞（灰色）によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。***，Ｐ＜０．０００１。図２６Ｅは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗ腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞による、並びに脾臓ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なヒストグラムを示す。ＴＩＧＩＴ ＭＦＩの定量化。*，Ｐ＝０．０１３６。**，Ｐ＝０．００２９。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0138】

【図27】図２７は、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞が高レベルのＣＤ２２６発現を維持することを示す。野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスにここに記載のＣＴ２６腫瘍細胞を接種した。腫瘍がおよそ１５０－２００ｍｍ^３のサイズになった後、腫瘍と脾臓をフローサイトメトリーによって分析した。図２７Ａは、ＣＤ２２６^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、及び非Ｔ細胞の定量化を、それぞれ全ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、及び非Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。図２７Ｂは、腫瘍と脾臓におけるＣＤ２２６発現の代表的なヒストグラムを示す。データは、２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５．エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0139】

【図28A】図２８は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答のＴＩＧＩＴ抑制がＣＤ２２６に依存性であることを示す。ＢＡＬＢ／Ｃマウスの右胸郭側腹部にＣＴ２６結腸直腸がん細胞を皮下的に接種した。腫瘍がおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスをアイソタイプコントロール（黒色）、抗ＣＤ２２６（オレンジ色）、抗ＰＤ－Ｌ１（赤色）、抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１（紫色）、又は抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＣＤ２２６（緑色）抗体で３週間処置した。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝１０（Ａ－Ｂ）又は５（Ｃ－Ｆ）。図２８Ａは、経時的なＣＴ２６腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示す。

【図28B-28F】図２８Ｂは経時的なマウス生存率を示す。図２８Ｃ－２８Ｆにおいて、処置の７日後、腫瘍浸潤リンパ球及び腫瘍流入領域リンパ節常在リンパ球をフローサイトメトリーによって評価した。図２８Ｃは、インビトロでの刺激後のＩＦＮγ産生ＣＤ８^＋ＴＩＬの定量化を全ＣＤ８^＋ＴＩＬのパーセンテージとして示す。**，Ｐ＜０．０１。図２８Ｄは、インビトロでの刺激後のＩＦＮγ産生細胞の定量化を全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。*，Ｐ＜０．０５。図２８Ｅは、ＣＤ８^＋ＴＩＬの定量化を全ＴＩＬのパーセンテージとして示す。**，Ｐ＜０．０１。図２８Ｆは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を、全腫瘍流入領域リンパ節常在リンパ球のパーセンテージとして示す。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0140】

【図29A-29D】図２９は、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６ホモ二量体化を妨害することによってＣＤ２２６機能を損なわせることを示す。図２９Ａは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞をＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４^ｃｒｅ（ＣＫＯ）及びＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４^ｗｔ（ＷＴ）同腹仔からＭＡＣＳ富化させ、示されているように抗ＣＤ２２６又はアイソタイプ一致コントロール抗体の存在下で刺激したことを示す。Ｈ^３－チミジン取り込みは、抗ＣＤ３単独と共に培養された細胞に対する抗ＣＤ３＋ＰＶＲ－Ｆｃと共に培養された細胞の比として示される。**，Ｐ＝０．００６１。***，Ｐ＜０．０００１。データは、２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図２９Ｂは、野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ ＣＤ８^＋Ｔ細胞をＭＡＣＳ富化させ、示されているように抗ＴＩＧＩＴ、抗ＣＤ２２６、及び／又はアイソタイプ一致コントロール抗体の存在下で刺激したことを示す。Ｈ^３－チミジン取り込みは、抗ＣＤ３単独と共に培養された細胞に対する抗ＣＤ３＋ＰＶＲ－Ｆｃと共に培養された細胞の比として示される。***，対応ｔ検定においてＰ＜０．００１。図２９Ｃは、一次ヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞を血液からＭＡＣＳ富化させ、ヒト組換えＰＶＲ－Ｆｃの存在又は不存在下で最適以下レベルのプレート結合抗ＣＤ３で刺激したことを示している。抗ＴＩＧＩＴ抗体又はアイソタイプ一致コントロール抗体を、示されたように加えた。^３Ｈ－チミジン取り込みの定量化。**，それぞれＰ＝０．００７１及び０．００１４。図２９Ｄは、ＣＨＯ細胞を、示されているように、増加濃度のアクセプター及びドナーＦＬＡＧ－ＳＴ－ＣＤ２２６で一過性にトランスフェクトしたことを示している。ドナー発光に対するＦＲＥＴ強度の定量化。データは、３回の独立した実験の代表値である；ｎ＝３。

【図29E-29H】図２９Ｅ－２９Ｆにおいて、示されているように、ＣＨＯ細胞を、ＦＬＡＧ－ＳＴ－ＣＤ２２６と増加濃度のＨＡ－ＴＩＧＩＴで一過性にトランスフェクトした。データは、２回以上の独立した実験の代表値である；ｎ＝４。データはシグナル最大値に対して正規化する。図２９Ｅは、ＣＤ２２６：ＣＤ２２６ ＦＲＥＴ比の定量化を示す（ＦＲＥＴ比１）。図２９Ｆは、ＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６ ＦＲＥＴ比の定量化を示す（ＦＲＥＴ比２）。図２９Ｇは、空のｐＲＫベクター又はＦｌａｇ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴの組み合わせの何れかでトランスフェクトされたＣＯＳ－７細胞から調製された抗ＦＬＡＧ又は抗ＨＡ免疫沈降の何れかで実施された抗ＦＬＡＧ（左）及び抗ＨＡ（右）免疫ブロットを示す。データは、２回の独立した実験の代表値である．図２９Ｈは、ＰＢＳ（白色）又は抗ＴＩＧＩＴ抗体（赤色）と共にインキュベートした後のＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６ ＦＲＥＴ比の定量化を示す。***，Ｐ＜０．００１。データは、４回の独立した実験の代表値である；ｎ＝３。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0141】

【図30】図３０は、一次ヒトＴ細胞を血液からＭＡＣＳ富化し、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激したことを示す。ＴＩＧＩＴ^＋及びＴＩＧＩＴ^－細胞を選別し、休止させ、再刺激し、示されている抗体でＦＲＥＴに対して標識した。データは、２回の独立した実験の代表値である。***，Ｐ＜０．００１。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0142】

【図31】図３１は、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１共遮断が、慢性ウイルス感染中に消耗ＣＤ４^＋Ｔ細胞のエフェクター機能を回復させないことを示している。図３１Ａは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の定量化を、全脾細胞のパーセンテージとして示す。図３１Ｂは、ＧＰ３３五量体^＋細胞を、全脾臓ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。**，Ｐ＝０．００４０。図３１Ｃは、インビトロでの刺激後にｇｐ３３五量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞上にゲーティングされた代表的なＦＡＣＳプロットを示し、ＩＦＮガンマ^＋細胞はボックスで囲まれている。ＩＦＮγ産生細胞の定量化は、全ｇｐ３３五量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとしてである。＊，Ｐ＝０．０３１９。**，Ｐ＝０．００３０。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0143】

【図32A】図３２は、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断効果がＣＤ８^＋Ｔ細胞に依存性であることを示す。図３２Ａ－３２Ｂにおいて、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスに、図７に記載のように、ＣＴ２６腫瘍を接種した。腫瘍が１００－１５０ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスからＣＤ８^＋Ｔ細胞を一時的に枯渇させ、抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１で処置した。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝１０／群。図３２Ａは、経時的なＣＴ２６腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示す。

【図32B-32C】図３２Ｂは、処置開始の１７日後のＣＴ２６腫瘍体積の定量化を示す。***，Ｐ＝０．０００４。図３２Ｃにおいて、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスにＣＴ２６腫瘍を接種し、抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１で処置し、続いて、再暴露の時にＣＤ８^＋Ｔ細胞を一時的に枯渇させたＣＴ２６腫瘍を再暴露した。データは２回の実験の代表値である；ｎ＝５。図３２Ｃは、経時的なＣＴ２６腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示す。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0144】

【図33】図３３は、腫瘍細胞上のＰＶＲ発現がＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断効果に不必要であることを示す。野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスに、記載されたようにして、野生型又はＰＶＲ欠損（ＰＶＲ．ＫＯ）腫瘍を接種した。腫瘍が１５０－２００ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスを抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１又はアイソタイプ一致コントロール抗体で処置した。データは１回の実験の代表値である；ｎ＝１０／群。図３３は、経時的なＣＴ２６腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示す。

【0145】

【図34】図３４は、ＥＭＴ６腫瘍を持つマウスにおけるＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１抗体共遮断の効果を示す。ＥＭＴ６腫瘍を持つマウスを上記のようにして作製し、ＰＤ－Ｌ１（赤色）、ＴＩＧＩＴ（青色）、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－Ｌ１（紫色）に対する阻止抗体又はアイソタイプ一致コントロール抗体（黒色）で３週間処置した。Ｎ＝１０（コントロール、抗ＰＤ－Ｌ１単独、抗ＴＩＧＩＴ単独）又は２０（抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１）。図３４は、経時的なＥＭＴ６腫瘍体積の中央値（左）及び個々の値（右）を示す。

【0146】

【図35】図３５は、ＴＩＧＩＴが腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞エフェクター機能を調節することを示す。ＢＡＬＢ／Ｃマウスの右胸郭側腹部にＣＴ２６結腸直腸がん細胞を皮下的に接種し、図７に記載されているようにして、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、又は抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴで処置した。腫瘍流入領域リンパ節（ｄＬＮ）常在及び腫瘍浸潤Ｔ細胞を、処置開始の７日後にフローサイトメトリーによって分析した。データは、２回の独立した実験の代表値である；ｎ＝５。図３５Ａは、ＩＦＮγ／ＴＮＦα二重産生ｄＬＮ常在ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を、それぞれ全ｄＬＮ常在ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。未刺激Ｔ細胞による二重のサイトカイン産生もまた示される。**，それぞれ、Ｐ＝０．００２、０．００３、及び０．００１。図３５Ｂは、ＩＦＮγ／ＴＮＦα二重産生腫瘍浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の定量化を、それぞれ全腫瘍浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。未刺激Ｔ細胞による二重のサイトカイン産生もまた示される。***，Ｐ＜０．０００１。エラーバーは平均の標準誤差を示す。

【0147】

【図36】図３６は、切除されたヒトＮＳＣＬＣ腫瘍、腫瘍適合末梢血、及び正常ドナー末梢血からのリンパ球の分析を示す。データは、３回の独立して獲得された試料セットからプールされる。図３６Ａは、ＴＩＧＩＴ^＋細胞の定量化を全ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。*，Ｐ＜０．０５。図３６Ｂは、ＴＩＧＩＴ^＋細胞の定量化を全ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージとして示す。

【0148】

【図37】図３７は、ヒト腫瘍中でのＴＩＧＩＴ発現の特徴付けを示す。図３７Ａは、サブセット一致アイソタイプ染色（灰色）に対するＮＳＣＬＣ腫瘍常在リンパ球（赤色，ＣＤ４５^＋ＦＳＣ^ｌｏｗ）、骨髄系細胞（青色，ＣＤ４５^＋ＦＳＣ^ｈｉｇｈ）、及び非造血系細胞（緑色，ＣＤ４５^－）によるＴＩＧＩＴ発現の代表的なフローサイトメトリーヒストグラムを示す。図３７Ｂは、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗＮＳＣＬＣ腫瘍浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞に対するゲーティング方略を示す。

【発明を実施するための形態】

【0149】

Ｉ．一般的技術
ここに記載され又は参照される技術及び手順は、当業者により一般によく理解され、例えばSambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3版(2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel等, 編, (2003))；シリーズMethods in Enzymology(Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames 及び G.R. Taylor編. (1995)), Harlow 及び Lane編 (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney編. (1987))；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis編, 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney)編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather 及び P.E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, 及びD.G. Newell編, 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir 及び C.C. Blackwell編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller 及び M.P. Calos, 編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullisら編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan等編, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C.A. Janeway 及び P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd 及び C. Dean 編, Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow 及び D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti 及び J. D. Capra編, Harwood Academic Publishers, 1995)；及びCancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita等編, J.B. Lippincott Company, 1993)に記載されている広く使用されている方法のような常套的方法を使用して一般に用いられる。

【0150】

ＩＩ．定義
「ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト」なる用語は、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を回復させ又は増強するという結果を伴い、ＰＤ－１シグナル伝達軸上のシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を除去するように、ＰＤ－１軸結合パートナーのその結合パートナーの一又は複数の何れかとの相互作用を阻害する分子である。ここで使用される場合、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

【0151】

「ＰＤ－１結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ－１と、その結合パートナーの一又は複数、例えばＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を低減させ、ブロックし、阻害し、抑止し又は干渉する分子である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－１の結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２に対するＰＤ－１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１の相互作用から生じるシグナル伝達を低減させ、ブロックし、阻害し、抑止し又は干渉する抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全を低下させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ－１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現される細胞表面タンパク質により又はそれを通して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－１抗体である。特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはここに記載のＭＤＸ－１１０６である。他の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはここに記載のメルク３７４５である。他の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはここに記載のＣＴ－０１１である。他の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはここに記載のＡＭＰ－２２４である。

【0152】

「ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ－Ｌ１と、その結合パートナーの何れか一又は複数、例えばＰＤ－１、Ｂ７－１との相互作用から生じるシグナル伝達を低減し、ブロックし、阻害し、抑止し又は干渉する分子である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１及び／又はＢ７－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ１と一又は複数のその結合パートナー、例えばＰＤ－１、Ｂ７－１との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、ブロック、阻害、抑止又は干渉する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全性が低下するように（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強させる）、ＰＤ－Ｌ１を介したシグナル伝達を媒介するＴリンパ球において発現される細胞表面タンパク質により又はそれを通して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はここに記載のＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。他の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はここに記載のＭＤＸ－１１０５である。更に他の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はここに記載のＭＰＤＬ３２８０Ａである。他の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はここに記載のＭＥＤＩ４７３６である。

【0153】

「ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ－Ｌ２と、その結合パートナーの何れか一又は複数、例えばＰＤ－１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減し、ブロックし、阻害し、抑止し又は干渉する分子である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ２とその結合パートナーの何れか一又は複数、例えばＰＤ－１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減し、ブロックし、阻害し、抑止し又は干渉する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全性が低下するように（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強させる）、ＰＤ－Ｌ２を介したシグナル伝達を媒介するＴリンパ球において発現される細胞表面タンパク質により又はそれを通して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。

【0154】

「アプタマー」なる用語は、ポリペプチドなどの標的分子に結合することができる核酸分子を指す。例えば、本発明のアプタマーは、ＴＩＧＩＴポリペプチド、又はＴＩＧＩＴの発現を調節するシグナル伝達経路内の分子に特異的に結合することができる。アプタマーの生成及び治療的使用は当該分野において十分に確立されている。例えば、加齢性黄斑変性症の治療について、米国特許第５４７５０９６号及びＭａｃｕｇｅｎ（登録商標）（Eyetech, New York）の治療効果を参照のこと。

【0155】

「アンタゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示された天然ポリペプチドの生物学的活性を部分的にもしくは完全に阻止し、阻害し、又は中和する任意の分子を含む。同様に「アゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示された天然ポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を含む。好適なアゴニスト又はアンタゴニスト分子は、特に、アゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、天然ポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、有機小分子などを含む。ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストの同定方法は、ポリペプチドを候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子と接触させ、ポリペプチドに正常には関連している一又は複数の生物学的活性の検出可能な変化を測定することを含みうる。

【0156】

「ＴＩＧＩＴアンタゴニスト」及び「ＴＩＧＩＴ活性又はＴＩＧＩＴ発現のアンタゴニスト」なる用語は、交換可能に用いられ、ＴＩＧＩＴコード核酸の転写ないし翻訳を低減するか、又はＴＩＧＩＴポリペプチド活性を阻害ないしはブロックするか、又はその両方によって、ＴＩＧＩＴの正常な機能を妨害する化合物を指す。ＴＩＧＩＴアンタゴニストの例には、限定するものではないが、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、ＲＮＡ－ＤＮＡキメラ、ＴＩＧＩＴ特異的アプタマー、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体のＴＩＧＩＴ結合断片、ＴＩＧＩＴ結合小分子、ＴＩＧＩＴ結合ペプチド、及びＴＩＧＩＴアンタゴニストとＴＩＧＩＴとの相互作用によりＴＩＧＩＴの活性又は発現の低減又は停止を生じさせるように、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する他のポリペプチド（限定するものではないが、場合によっては一又は複数の他のドメインと融合した、一又は複数のＴＩＧＩＴリガンドのＴＩＧＩＴ結合断片を含む）が含まれる。場合によっては、ＴＩＧＩＴアンタゴニストが他のＴＩＧＩＴ活性に影響を及ぼさないで一つのＴＩＧＩＴ活性をアンタゴナイズしうることは、当業者に理解されるであろう。例えば、ここでの方法のあるものに使用するために望ましいＴＩＧＩＴアンタゴニストは、例えば他のＴＩＧＩＴ相互作用の何れにも影響しないか又は最小限の影響で、ＰＶＲ相互作用、ＰＶＲＬ３相互作用、又はＰＶＲＬ２相互作用のうちの一つに応答してＴＩＧＩＴ活性をアンタゴナイズするＴＩＧＩＴアンタゴニストである。

【0157】

「ＰＶＲアンタゴニスト」及び「ＰＶＲ活性又はＰＶＲ発現のアンタゴニスト」なる用語は、交換可能に用いられ、ＰＶＲコード核酸の転写ないし翻訳を低減するか、又はＰＶＲポリペプチド活性を阻害ないしはブロックするか、又はその両方によって、ＰＶＲの正常な機能を妨害する化合物を指す。ＰＶＲアンタゴニストの例には、限定するものではないが、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、ＲＮＡ－ＤＮＡキメラ、ＰＶＲ特異的アプタマー、抗ＰＶＲ抗体、抗ＰＶＲ抗体のＰＶＲ結合断片、ＰＶＲ結合小分子、ＰＶＲ結合ペプチド、及びＰＶＲアンタゴニストとＰＶＲとの相互作用によりＰＶＲの活性又は発現の低減又は停止を生じさせるように、ＰＶＲに特異的に結合する他のポリペプチド（限定するものではないが、場合によって一又は複数の他のドメインと融合した、一又は複数のＰＶＲリガンドのＰＶＲ結合断片を含む）が含まれる。場合によっては、ＰＶＲアンタゴニストが他のＰＶＲ活性に影響を及ぼさないで一つのＰＶＲ活性をアンタゴナイズしうることは、当業者に理解されるであろう。例えば、ここでの方法のあるものに使用するために望ましいＰＶＲアンタゴニストは、ＰＶＲ－ＣＤ９６及び／又はＰＶＲ－ＣＤ２２６の相互作用に影響することなく、ＴＩＧＩＴ相互作用に応答してＰＶＲ活性をアンタゴナイズするＰＶＲアンタゴニストである。

【0158】

免疫機能不全の文脈における「機能不全」なる用語は、抗原刺激に対して免疫応答性が減少した状態を意味する。該用語は、抗原認識が生じうるが、その後の免疫応答が感染又は腫瘍増殖を制御するのに効果的ではない消耗及び／又はアネルギー両方の共通要素を含む。

【0159】

ここで使用される「機能障害性」なる用語は、抗原認識に対する難治性又は不応答性、特に、増殖、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ－２）及び／又は標的細胞死滅のような、下流のＴ細胞のエフェクター機能に抗原認識を翻訳する能力の障害を含む。

【0160】

「アネルギー」なる用語は、Ｔ細胞受容体を介して送達される不完全又は不十分なシグナルから生じる抗原刺激に対する不応答の状態を言う（例えば、ｒａｓ活性化の不存在下における細胞内Ｃａ^＋２の増加）。また、Ｔ細胞アネルギーは、同時刺激の非存在下、抗原での刺激時に生じ得、同時刺激の文脈においてさえ、抗原による続く活性化に対して細胞が不応性になる。無応答状態は、しばしばインターロイキン－２の存在によって覆される場合がある。アネルギーＴ細胞は、クローン増殖を受けず、及び／又はエフェクター機能を獲得しない。

【0161】

「消耗(exhaustion)」なる用語は、多くの慢性感染症及びがんの間に生じる持続的なＴＣＲシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全の状態としてのＴ細胞の消耗を意味する。それが不完全な又は不十分なシグナル伝達を通してではなく、持続的なシグナル伝達から生じるという点でアネルギーとは区別される。これは、乏しいエフェクター機能、阻害性受容体の持続的な発現、及び機能的エフェクター又はメモリーＴ細胞のそれとは異なる転写状態により定まる。消耗は、感染や腫瘍の最適な調節を妨げる。消耗は、外因性の負の調節経路（例えば、免疫調節サイトカイン）、並びに細胞内因性の負の調節（同時刺激）経路（ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４など）の両方から生じうる。

【0162】

「Ｔ細胞機能の亢進」は、持続又は増幅された生物学的機能を有するようにＴ細胞を誘導し、強いり又は刺激し、もしくは消耗した又は不活性なＴ細胞を再生又は再活性化することを意味する。Ｔ細胞機能の亢進の例は、介入前のそのレベルに対しての、ＣＤ８^＋Ｔ細胞からのγ-インターフェロンの分泌増加、増殖増加、抗原応答性増加（例えば、ウイルス、病原体、又は腫瘍クリアランス）を含む。一実施態様では、亢進のレベルは少なくとも５０％、又は６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。この亢進を測定する方法は当業者に知られている。

【0163】

「Ｔ細胞機能不全疾患」は、抗原刺激に対する応答性の低下によって特徴付けられるＴ細胞の疾患又は病態である。特定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、ＰＤ－１を介した不適切なシグナル伝達の増加に特に関連している疾患である。別の実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞がアネルギー性であるか、又はサイトカインを分泌し、増殖し、又は細胞溶解活性を実行する能力が低下しているものである。特定の態様では、応答性の減少により、免疫原を発現する病原体又は腫瘍に対して効果のない制御となる。Ｔ細胞機能不全を特徴とするＴ細胞機能不全疾患の例は、未消散急性感染症、慢性感染症や腫瘍免疫を含む。

【0164】

「腫瘍免疫」は、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを回避するプロセスを意味する。従って、治療概念として、腫瘍免疫は、このような回避が減衰されるとき「治療され」、腫瘍は、免疫系によって認識され、攻撃される。腫瘍認識の例は、腫瘍結合、腫瘍縮小及び腫瘍クリアランスを含む。

【0165】

「免疫原性」は、免疫応答を誘発する特定の物質の能力をいう。腫瘍は免疫原性であり、腫瘍免疫原性の増強が免疫応答による腫瘍細胞のクリアランスに役立つ。腫瘍免疫原性の亢進の例は、限定されないが、ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト（例えば抗ＰＤ－Ｌ１抗体）及びＴＩＧＩＴ阻害剤（例えば抗ＴＩＧＩＴ抗体）での処置を含む。

【0166】

「持続応答」は、処置の中止後の腫瘍増殖の低減に対する持続効果を意味する。例えば、腫瘍サイズは、投与フェーズの開始時におけるサイズと比較して同じか又は小さいままでありうる。幾つかの実施態様では、持続応答は、少なくとも治療期間と同じか、又は治療期間の少なくとも１．５×、２．０×、２．５×、又は３．０×の長さである。

【0167】

「抗体」なる用語は、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、多エピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体、ダイアボディ、及び単鎖分子、並びに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ'）_２、及びＦｖ）を含む。「免疫グロブリン」(Ｉｇ)なる用語は、ここでの「抗体」と交換可能に使用される。

【0168】

塩基性４鎖抗体単位は、２つの同一の軽(Ｌ)鎖と２つの同一の重(Ｈ)鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と称される更なるポリペプチドと共に５つの塩基性ヘテロ四量体単位からなり、１０の抗原結合部位を有する一方、ＩｇＡ抗体は、重合してＪ鎖と共に多価集合体を形成可能な２－５の塩基性４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般的に約１５００００ダルトンである。各Ｌ鎖は一つの共有ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結される一方、２つのＨ鎖はＨ鎖アイソタイプに応じて、一又は複数のジスルフィド結合により互いに連結される。また各Ｈ及びＬ鎖は、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有している。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン(Ｖ_Ｈ)と、これに続いてα及びγ鎖それぞれに対して３つの定常ドメイン(Ｃ_Ｈ)と、μ及びεアイソタイプに対しては４つのＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン(Ｖ_Ｌ)と、これに続いてその他端に定常ドメインを有する。Ｖ_ＬはＶ_Ｈに整列しており、Ｃ_Ｌは重鎖の第１定常ドメイン(Ｃ_Ｈ１)に整列している。特定のアミノ酸残基は軽鎖と重鎖の可変ドメインの界面を形成すると考えられている。Ｖ_ＨとＶ_Ｌは対で一緒になって、単一の抗原結合部位を形成している。異なったクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Basic and Clinical Immunology, 第8版, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow(編), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 71頁, 6章を参照のこと。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと称される、明確に区別される２つのタイプの一方を割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、種々のクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと命名された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがある。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに更に分割され、例えばヒトは、次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。

【0169】

抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端ドメインを意味する。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」とも称されうる。これらのドメインは一般的に（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変の部分であり、抗原結合部位を含む。

【0170】

「可変」なる用語は、可変ドメインのあるセグメントが、抗体間で配列が広範に相違しているという事実を意味する。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原への特異性を定める。しかしながら、可変性は、可変ドメインの全スパンにわたって均一に分布しているのではない。代わりに、それは、軽鎖及び重鎖の可変ドメインの両方の高頻度可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに濃縮されている。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造に連結し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲにより連結されたβシート配置を主にとる４つのＦＲ領域をそれぞれ含んでいる。各鎖のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して保持され、他の鎖由来のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Kabat等, Sequences of Immunological Interest, 第5版, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関連しているものではないが、様々なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害への抗体の関与を示す。

【0171】

ここで使用される「モノクローナル抗体」なる用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在しうる自然に生じる可能性がある突然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物に対し、各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物により合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されていない点で有利である。「モノクローナル」との修飾詞は、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を示し、抗体を何らかの特定の方法で生産する必要があると解釈されるものではない。例えば、本発明において使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（例えば、Kohler及びMilstein., Nature, 256:495-97(1975)；Hongo等, Hybridoma, 14(3):253-260(1995), Harlow等, Antibodies: A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版1988); Hammerling等 Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, 563-681(Elsevier, N.Y., 1981)）、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照）、ファージディスプレイ技術（例えば、Clackson等, Nature, 352: 624-628(1991)；Marks等, J. Mol. Biol., 222:581-597(1992)；Sidhu等, J. Mol. Biol., 338(2):299-310(2004)；Lee等, J. Mol. Biol., 340(5):1073-1093(2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(34):12467-12472(2004)；及びLee等, J. Immunol. Methods, 284(1-2):119-132(2004)、及びヒト免疫グロブリン座位又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部又は全部を有する、ヒト又はヒト様抗体を動物において産生させるための技術（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号；国際公開第１９９６／３４０９６号；国際公開第１９９６／３３７３５号；国際公開第１９９１／１０７４１号；Jakobovits等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551(1993)；Jakobovits等, Nature, 362: 255-258(1993)；Bruggemann等, Year in Immunol., 7:33(1993)；米国特許第５５４５８０７号；同５５４５８０６号；同５５６９８２５号；同５６２５１２６号；同５６３３４２５号；及び同５６６１０１６号；Marks等, Bio/Technology, 10: 779-783(1992)；Lonberg等, Nature, 368:856-859(1994)；Morrison, Nature, 368:812-813(1994)；Fishwild等, Nature Biotechnol., 14:845-851(1996)；Neuberger, Nature Biotechnol., 14:826(1996)；及びLonberg及びHuszar, Intern. Rev. Immunol., 13:65-93(1995)を参照）を含む、様々な技術により作製されうる。

【0172】

「ネイキッド抗体」なる用語は、細胞傷害性部分又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体を意味する。

【0173】

「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」なる用語は、交換可能に使用され、抗体断片とは異なり、その実質的にインタクトな形態の抗体を意味する。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは天然配列定常ドメイン(例えば、ヒト天然配列定常ドメイン)又はそのアミノ酸配列変異体でありうる。幾つかの場合、インタクト抗体は一又は複数のエフェクター機能を有しうる。

【0174】

「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、好ましくはインタクト抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')_２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（米国特許第５６４１８７０号, 実施例２；Zapata等Protein Eng. 8(10): 1057-1062[1995]）；単鎖抗体分子及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した命名である残留「Ｆｃ」断片を生成する。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖（Ｖ_Ｈ）の可変領域ドメイン、及び一方の重鎖の第１定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）と共に、全Ｌ鎖とからなる。各Ｆａｂ断片は抗原結合に対して一価である、すなわち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィドに連結したＦａｂ断片にほぼ相当し、抗原を尚も架橋結合できる、単一の大きなＦ(ａｂ')_２断片を生じる。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含むＣ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に数個の更なる残基を有することによりＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ'-ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（群）が遊離チオール基を担持しているＦａｂ'に対するここでの命名である。Ｆ(ａｂ')_２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ'断片の対として産生された。抗体断片の他の化学結合もまた知られている。

【0175】

Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより互いに保持された双方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列により決定され、該領域はある種の細胞に見出されるＦｃレセプター（ＦｃＲ）によりまた認識される。

【0176】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、堅固な非共有結合をなした一つの重鎖及び一つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの高頻度可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、全結合部位よりも親和性が低くなるが、抗原を認識してそれに結合する能力を有している。

【0177】

「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に連結されるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造の形成を可能にするポリペプチドリンカーをＶ_ＨとＶ_Ｌドメインの間に更に含む。ｓＦｖの概説については、Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照のこと。

【0178】

本発明の抗体の「機能的断片」は、一般にはインタクト抗体の抗原結合又は可変領域あるいはＦｃＲ結合能力を保持しているかもしくは修飾されたＦｃＲ結合能力を有している抗体のＦｃ領域を含む、インタクト抗体の一部を含む。抗体断片の例としては、線形抗体、単鎖抗体分子及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。

【0179】

「ダイアボディ」なる用語は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間ペアリングが達成され、よって二価断片、すなわち２つの抗原-結合部位を有する断片に至るように、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン間に、短いリンカー（約５－１０残基）を有するｓＦｖ断片（前述の段落を参照）を構築することにより調製される小さい抗体断片を意味する。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在している２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)に更に詳細に記載されている。

【0180】

ここでのモノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか相同であり、鎖の残りの部分が他の種由来、あるいは他の抗体クラスあるいはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、並びにそれが所望の生物的活性を有する限りそれら抗体の断片を特に含む（米国特許第４８１６５６７号、及びMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984)）。ここで関心あるキメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば関心ある抗体を用いてマカクザルを免疫化することにより産生される抗体から誘導されたものであるＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。ここで使用される場合、「ヒト化抗体」は「キメラ抗体」のサブセットを使用する。

【0181】

非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一実施態様では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（以下に定める）の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような所望の特異性、親和性及び／又は能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含みうる。これらの修飾は抗体の性能、例えば結合親和性を更に洗練するためになされうる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、全てあるいはほとんど全ての高度可変ループが非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、全てあるいはほとんど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域は、抗体の性能、例えば結合親和性、異性化、免疫原性等を改善する、一又は複数の個々のＦＲ残基置換を含みうる。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的には、Ｈ鎖においては６以下、Ｌ鎖においては３以下である。ヒト化抗体は、場合によっては、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。更なる詳細は、例えばJones等, Nature 321, 522-525(1986)；Reichmann等, Nature 332, 323-329(1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2, 593-596(1992)を参照のこと。また、例えば、Vaswani及びHamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol., 1:105-115(1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038(1995)；Hurle 及びGross, Curr. Op. Biotech., 5:428-433(1994)；及び米国特許第６９８２３２１号及び同第７０８７４０９号を参照のこと。

【0182】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のものに相当するアミノ酸配列を有する抗体、及び／又はここに開示されたヒト抗体を作製するための技術の何れかを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除く。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該分野で既知の様々な技術を使用して産生することができる。Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol., 227:381(1991)；Marks等, J. Mol. Biol., 222:581(1991)。また、ヒトモノクローナル抗体の調製に有用なのは、Cole等, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R.Liss, p. 77(1985)；Boerner等, J. Immunol., 147(1):86-95(1991)に記載の方法である。また、van Dijk及びvan de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74(2001)を参照のこと。ヒト抗体は、抗原暴露に応答してこのような抗体が産生するように修飾されているが、その内在性座位が無能にされているトランスジェニック動物、例えば免疫化キセノマウスに抗原を投与することにより調製することができる（例えば、XENOMOUSE^TM技術に関し、米国特許第６０７５１８１号及び同６１５０５８４号を参照）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体に関しては、例えば、Li等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562(2006)を参照のこと。

【0183】

ここで使用される場合、「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」なる用語は、配列において高頻度可変であり、及び／又は構造的に定まったループを形成する抗体可変ドメインの領域を意味する。一般に、抗体は６つのＨＶＲを含む；つまり、ＶＨに３つ(Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）である。天然の抗体では、Ｈ３及びＬ３は６つのＨＶＲの最大の多様性を示し、特にＨ３は抗体に微細な特異性を付与するのに独特の役割を果たすと考えられている。例えばXu等, Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson及びWu, Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo編, Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照。確かに、重鎖のみからなる天然に生じるラクダ抗体は、軽鎖の不存在下で機能的で安定である。例えば、Hamers-Casterman等, Nature 363:446-448 (1993)；Sheriff等, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照。

【0184】

多数のＨＶＲの描写が使用され、ここで包含される。カバット相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabat党, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造ループの位置を指している（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ ＨＶＲは、カバットＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の妥協を表し、オックスフォード・モレキュラーのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用できる複合体結晶構造の分析に基づく。これらＨＶＲのそれぞれの残基を以下に記す。
ループ カバット AbM Chothia 接触
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (カバット番号付け)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia 番号付け)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101

【0185】

ＨＶＲは次の通り「拡張ＨＶＲ」を含みうる：ＶＬ中の２４－３６又は２４－３４（Ｌ１）、４６－５６又は５０－５６（Ｌ２）及び８９－９７又は８９－９６（Ｌ３）と、ＶＨ中の２６－３５（Ｈ１）、５０－６５又は４９－６５（Ｈ２）及び９３－１０２、９４－１０２又は９５－１０２（Ｈ３）。これらの定義の各々に対して上掲のＫａｂａｔ等に従って、可変ドメイン残基を番号付けした。

【0186】

「カバットにおける可変ドメイン残基番号付け」又は「カバットにおけるアミノ酸位置番号付け」なる表現及びその変形は、上掲のKabat等における抗体の編集の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインについて使用される番号付けシステムを意味する。この番号付けシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＨＶＲを短くするか、又はそこへの挿入に対応するより少ない又は付加的なアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（カバットに従い残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、カバットに従い残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含む。残基のカバット番号付けは、「標準的な」カバット番号の配列と抗体配列を相同領域でアラインメントさせることにより、与えられた抗体に対して決定されうる。

【0187】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、ここで定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0188】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」又は「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般的に、配列のサブグループは、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)にあるようなサブグループである。具体例には以下のものが含まれ、ＶＬについて、サブグループは、上掲のKabat等におけるような、サブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ又はカッパＩＶでありうる。更に、ＶＨについて、サブグループは、上掲のKabat等におけるような、サブグループＩ、サブグループＩＩ、又はサブグループＩＩＩでありうる。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、ヒトフレームワーク残基が、様々なヒトフレームワーク配列のコレクションとドナーフレームワーク配列を整列させることによって、ドナーフレームワークに対するその相同性に基づいて選択される場合のように、上記の特定の残基から誘導することができる。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「から誘導される」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、又は既存のアミノ酸配列変化を含んでいてもよい。幾つかの実施態様では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、又は９以下、又は８以下、又は７以下、又は６以下、又は５以下、又は４以下、又は３以下、又は２以下である。

【0189】

「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、上掲のＫａｂａｔ等の可変重サブグループＩＩＩにおけるアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施態様では、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、次の配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（ＨＣ－ＦＲ１）（配列番号：２５）、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（ＨＣ－ＦＲ２）、（配列番号：２６）、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＨＣ－ＦＲ３、配列番号：２７）、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（ＨＣ－ＦＲ４）（配列番号：２８）のそれぞれの少なくとも一部又は全てを含む。

【0190】

「ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワーク」は、上掲のKabat等の可変軽カッパサブグループＩのアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施態様では、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、次の配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＬＣ－ＦＲ１）（配列番号：２９）、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＬＣ－ＦＲ２）（配列番号：３０）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＬＣ－ＦＲ３）（配列番号：３１）、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（ＬＣ－ＦＲ４）（配列番号：３２）のそれぞれの少なくとも一部又は全てを含む。

【0191】

例えばＦｃ領域での、特定の位置における「アミノ酸修飾」とは、特定の残基の置換又は欠失、又は特定の残基に隣接した少なくとも一つのアミノ酸残基の挿入を意味する。特定の残基に「隣接する」挿入とは、 その１から２残基内への挿入を意味する。挿入は、特定の残基に対してＮ末端又はＣ末端でありうる。ここでの好ましいアミノ酸修飾は置換である。

【0192】

「親和性成熟」抗体とは、その変化を有しない親抗体と比較し、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数のＨＶＲにおける一又は複数の変化を伴うものである。一実施態様では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル又はピコモルさえの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該分野において知られている手順によって産生される。例えば、Marks等, Bio/Technology, 10：779-783(1992)は、ＶＨ及びＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えばBarbas等, Proc Nat Acad. Sci, USA 91：3809-3813(1994)；Schier等, Gene, 169：147-155(1995)；Yelton等, J. Immunol.155：1994-2004(1995)；Jackson等, J. Immunol.154(7)：3310-9(1995)；及びHawkins等, J. Mol. Biol.226：889-896(1992)によって記載されている。

【0193】

ここで使用される場合、「特異的に結合する」又は「に特異的」であるとの用語は、生体分子を含む分子の異種集団の存在下、標的の存在を決定する、標的と抗体との間の結合などの測定可能で再現性のある相互作用を意味する。例えば、標的（エピトープでありうる）に特異的に結合する抗体は、それが他の標的に結合するよりも高い親和性、結合活性、容易性、及び／又は期間で、この標的に結合する抗体である。一実施態様では、無関係な標的への抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定された場合、標的に対する抗体の結合の約１０％未満である。所定の実施態様では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。所定の実施態様では、抗体は、異なる種からのタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施態様では、特異的結合は、排他的結合を含みうるが、それを必要とはしない。

【0194】

ここで用いられる場合、「イムノアドヘシン」なる用語は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能と組合せた抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは、抗体の抗原認識及び結合部位以外である（即ち「異種」である）所望の結合特異性を持つアミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合体を含む。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的にはレセプター又はリガンドの結合部位を少なくとも含む隣接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２（ＩｇＧ２Ａ及びＩｇＧ２Ｂを含む）、ＩｇＧ－３、又はＩｇＧ－４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ－１及びＩｇＡ－２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭ等の任意の免疫グロブリンから得ることができる。Ｉｇ融合体は、好ましくはＩｇ分子内の少なくとも一つの可変領域に換えて、ここに記載の抗体又はポリペプチドのドメインの置換を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５４２８１３０号を参照のこと。例えば、ここに記載の併用療法に有用な第２の医薬として有用なイムノアドヘシンは、それぞれ、ＰＤ－Ｌ１ ＥＣＤ－Ｆｃ、ＰＤ－Ｌ２ ＥＣＤ－Ｆｃ、及びＰＤ－１ ＥＣＤ－Ｆｃ等、免疫グロブリン配列の定常ドメインに融合した、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分、もしくはＰＤ－１の細胞外又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２結合部分を含むポリペプチドを含む。細胞表面レセプターのＩｇ Ｆｃ及びＥＣＤのイムノアドヘシン組み合わせは、時々、可溶性レセプターと呼ばれる。

【0195】

「融合タンパク質」及び「融合ポリペプチド」は、その部分の各々が異なる特性を有するポリペプチドである、互いに共有結合した２つの部分を有するポリペプチドを意味する。特性は生物学的特性、例えばインビトロ又はインビボでの活性でありうる。また特性は、単に化学的又は物理学的特性、例えば標的分子への結合性、反応の触媒性等でもありうる。２つの部分は単一のペプチド結合によって、又はペプチドリンカーを介して直接連結しうるが、互いに読み枠内にある。

【0196】

「ＰＤ－１オリゴペプチド」、「ＰＤ－Ｌ１オリゴペプチド」、又は「ＰＤ－Ｌ２オリゴペプチド」は、それぞれＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２のネガティブ同時刺激ポリペプチドと、好ましくは特異的に、結合するオリゴペプチドであり、それぞれ、ここに記載のレセプター、リガンド又はシグナル伝達成分を含む。このようなオリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成法を使用して化学的に合成することができ、あるいは組換え技術を使用して調製し精製することができる。このようなオリゴペプチドは通常、少なくとも約５アミノ酸長、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００アミノ酸長以上である。このようなオリゴペプチドは、よく知られている技術を用いて同定することができる。これに関して、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドについてオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングするのための技術は、当該分野で周知であることに留意されたい（例えば、米国特許第５５５６７６２号、５７５０３７３号、４７０８８７１号、４８３３０９２号、５２２３４０９号、５４０３４８４号、５５７１６８９号、５６６３１４３号、ＰＣＴ公開番号国際公開第８４／０３５０６号及び同８４／０３５６４号；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)； Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)；Geysen等, Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)；Geysen等, J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)；Schoofs等, J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla, S. E等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990)；Lowman, H.B等 Biochemistry, 30:10832 (1991)；Clackson, T等 Nature, 352: 624 (1991)；Marks, J. D等, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)；Kang, A.S.等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363 (1991)、及び Smith, G. P., Current Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)を参照）。

【0197】

「阻止」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を抑制し又は低減するものである。幾つかの実施態様では、阻止抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的に又は完全に阻害する。本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗原刺激に対する機能不全状態から、Ｔ細胞による機能的応答（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅化）を回復するように、ＰＤ－１を介したシグナル伝達をブロックする。

【0198】

「アゴニスト」又は活性化抗体は、それが結合する抗原によるシグナル伝達を亢進し又は開始させるものである。幾つかの実施態様では、アゴニスト抗体は、天然リガンドの存在なしでシグナル伝達を引き起こすか又は活性化させる。

【0199】

ここでの「Ｆｃ領域」なる用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化するかも知れないが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６の位置又はＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端までの位置のアミノ酸残基から伸長すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによれば残基４４７）は、例えば抗体の産生又は精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え的に操作することによって、取り除くことができる。従って、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体群、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体群、及びＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体の混合物を有する抗体群を含みうる。本発明の抗体に使用される適切な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。

【0200】

「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記述する。好ましいＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマレセプター）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含むものであり、これらのレセプターの対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型を含み、ＦｃγＲＩＩレセプターは、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）を含み、それらは、その細胞質ドメインにおいて主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫レセプターチロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を有する（M. Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234(1997)参照）。ＦｃＲはRavetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994)；及びde Haas等, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41(1995)において概説されている。将来同定されるものも含む他のＦｃＲが、ここにおける「ＦｃＲ」なる用語に包含される。

【0201】

「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」なる用語は、胎児への母のＩｇＧの移動の原因となる、新生児レセプターＦｃＲｎをまた含む。Guyer等, J. Immunol. 117:587(1976)、及びKim等, J. Immunol. 24:249(1994)。ＦｃＲｎへの結合性を測定する方法は既知である（例えば、Ghetie及びWard, Immunology Today,18(12):592-8(1997)；Ghetie等, Nature Biotechnology, 15(7):637-40(1997)；Hinton等, J. Biol. Chem.,279(8):6213-6(2004)；国際公開第２００４／９２２１９号(Hinton等)を参照）。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボにおけるヒトＦｃＲｎへの結合性及び血清半減期は、例えばヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウス又はトランスフェクトされたヒト細胞株、又は変異Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与された霊長類においてアッセイすることができる。国際公開第２０００／４２０７２号（Presta）には、ＦｃＲへの改善された又は低下した結合性を有する抗体変異体が記載されている。また、例えばShields等, J. Biol. Chem., 9(2): 6591-6604(2001)を参照のこと。

【0202】

ここで使用される「実質的に低減された」又は「実質的に異なる」との語句は、当業者が、該値（例えばＫｄ値）により測定される生物学的特徴の範囲内で、２つの値の間に統計的に有意な差異があるとみなすような、２つの数値（一般的に、一方は分子に関連しており、他方は参照／比較分子に関連している）の間の十分高度な差異を示す。前記２つの値の間の差異は、例えば、参照／比較分子に対する値の関数として、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、及び／又は約５０％以上である。

【0203】

ここで使用される「実質的に類似」又は「実質的に同じ」なる用語は、当業者が、該値（例えばＫｄ値）により測定される生物学的特徴の範囲内で、２つの値の間に、ほとんど又は全く生物学的及び／又は統計的に有意差がないとみなすような、２つの数値（例えば、一方は本発明の抗体に関連しており、他方は参照／比較抗体に関連している）の間の十分高度な類似性を示す。前記２つの値の間の差異は、例えば、参照／比較分子に対する値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／又は約１０％未満である。

【0204】

ここで使用される「担体」は、用いられる用量及び濃度でそれらに暴露される細胞又は哺乳動物に対して無毒である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、又は安定化剤を含む。生理学的に許容可能な担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容可能な担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のようなバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール類；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ^ＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ^ＴＭを含む。

【0205】

「パッケージ挿入物」は、適応症、使用法、用量、投与法、禁忌、包装された製品と組合せられる他の医薬、及び／又はこのような医薬の使用に関する注意等についての情報を含む、医薬の市販パッケージに常套的に含まれる指示についての情報を含む、医薬の市販パッケージに常套的に含まれる指示を意味する。

【0206】

ここで使用される場合、「治療」なる用語は、臨床病理の経過中に処置される個体又は細胞の自然経過を変化させるために設計された臨床的介入を意味する。治療の望ましい効果には、疾患の進行速度を低下させること、疾患状態を緩和又は改善すること、及び寛解又は改善された予後が挙げられる。例えば、これに限定されるものではないが、がん細胞の増殖を減少させ（又は破壊する）、疾患に起因する症状を低減させ、疾患に罹患した者の生活の質を向上させ、疾患を治療するために必要な他の薬の用量を減少させ、疾患の進行を遅延させ、及び／又は個体の生存を延長することを含み、がんに関連する一又は複数の症状が軽減又は除去されたならば、個体は成功裏に「治療」されている。

【0207】

ここで使用される場合、「疾患進行の遅延化」は、疾患（例えばがん）の発症を先送りし、妨げ、遅くし、阻止し、安定化させ、及び／又は延期させることを意味する。この遅延化は、処置される疾患及び／又は個体の病歴に応じて、様々な時間になる可能性がある。当業者には明らかであるように、十分又は有意な遅延化は、個体が疾患を発症しない点で、事実上、予防を包含しうる。例えば、転移の発生などの後期がんは、遅延化されうる。

【0208】

ここで使用される場合、「がんの再発を減少させ又は阻害する」とは、腫瘍又はがんの再発あるいは腫瘍又はがんの進行を減少させ又は阻害することを意味する。

【0209】

ここで使用される場合、「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には調節されない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか又は記述する。この定義には良性及び悪性がん、並びに休止状態の腫瘍又は微小転移巣である。がんの例には、限定されるものではないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。このようながんのより特定の例には、扁平細胞がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、及び肺の扁平上皮がんを含む）、腹膜のがん、肝細胞がん、胃（gastric）又は腹部（stomach）がん（胃腸がんを含む）、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝細胞がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮がん、唾液腺がん、腎臓（kidney）又は腎（renal）がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん及び様々なタイプの頭頸部がん、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非分割細胞ＮＨＬ；バルキー疾患ＮＨＬ；外套細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；及びワルデンストロームのマクログロブリン病を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連した異常な血管増殖、浮腫（例えば脳腫瘍に関連したもの）、メイグス症候群を含む。

【0210】

ここで使用される場合、「転移」は、その原発部位から体の他の場所へのがんの広がりを意味する。がん細胞は原発性腫瘍から離れ、リンパ及び血管中に浸透し、血流を通して循環し、体の他の場所の正常組織における遠位の病巣で増殖（転移）しうる。転移は局所的又は遠位でありうる。転移は、原発性腫瘍から別れ、血流を移動し、遠位の部位で止まる腫瘍細胞に付随する逐次的な過程である。新しい部位で、細胞は血液供給を樹立し、増殖して命を脅かす塊を形成しうる。腫瘍細胞内の刺激性及び阻害性分子経路の双方がこの挙動を調節し、遠位部位での腫瘍細胞と宿主細胞の間の相互作用がまた顕著である。

【0211】

「有効量」は、少なくとも、特定の疾患の測定可能な改善又は予防に効果を発揮するのに必要な最小濃度である。ここで有効量は、疾患状態、年齢、性別、及び患者の体重、及び個体において所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて変化し得る。有効量はまた、治療的に有益な効果が、処置の任意の毒性又は有害作用を上回る量である。予防的使用では、有益又は所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的及び／又は行動上の症状、疾患の発症中に提示される合併症及び中間的な病理学的表現型を含む、リスクを排除又は低減し、重症度を軽減し、又は疾患の発症を遅延化させるような結果が含まれる。治療的使用では、有益又は所望の結果には、疾患に起因する一又は複数の症状を減少させ、疾患に罹患している者の生活の質を向上させ、疾患を処置するために必要な他の薬の用量を減少させ、ターゲティングを介して他の医薬の効果を増強させ、疾患の進行を遅延させ、及び／又は生存を延長すること等の臨床結果が含まれる。がん又は腫瘍の場合、薬剤の有効量は、がん細胞数の低減；腫瘍サイズの低減；周辺器官へのがん細胞の浸潤の阻害(すなわち、ある程度までの遅延化又は望ましくは停止)；腫瘍転移の阻害(すなわち、ある程度までの遅延化又は望ましくは停止)；腫瘍成長のある程度までの阻害；及び／又は疾患に関連する一又は複数の徴候のある程度までの軽減の効果を有しうる。有効量は、１又は複数回の投与で投与することができる。この発明の目的のために、薬剤、化合物、又は薬学的組成物の有効量は、直接的又は間接的に予防的又は治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的文脈において理解されるように、薬剤、化合物、又は薬学的組成物の有効量は、別の薬剤、化合物、又は薬学的組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。従って、「有効量」は、一又は複数の治療剤を投与する状況で考慮することができ、単一の薬剤は、一又は複数の他の薬剤と組合せて、望ましい結果が達成される可能性があるか又は達成されるならば、有効量で付与されていると考えてよい。

【0212】

ここで使用される場合、「と組合せて」は、別の処置様式に加えての、一つの処置様式の投与を意味する。而して、「と組合せて」とは、個体への他の処置様式の投与の前、間及び後に、一つの投与様式を投与することを意味する。

【0213】

ここで使用される場合、「対象」とは、限定しないが、ヒト又は非ヒト哺乳動物、例えばウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、又はネコを含む哺乳動物を意味する。好ましくは、対象はヒトである。患者はまたここでの対象である。

【0214】

ここで使用される場合、「完全寛解」又は「ＣＲ」とは、全ての標的病変の消失を意味し、「部分寛解」又は「ＰＲ」とは、ベースラインＳＬＤを参照とし、標的病変の最長径（ＳＬＤ）の合計の少なくとも３０％の減少を意味し；「安定疾患」又は「ＳＤ」は、治療が開始されてからの最小ＳＬＤを参照とし、ＰＲを認定するのに十分な標的病変の収縮も、またＰＤを認定するのに十分な増加もないことを意味する。

【0215】

ここで使用される場合、「進行性疾患」又は「ＰＤ」は、処置開始以来、又は一又は複数の新規の病変の存在下で記録された最小のＳＬＤを参照とし、標的病変のＳＬＤにおいて、少なくとも２０％増加がみられるものを意味する。

【0216】

ここで使用される場合、「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）は、処置される疾患（例えば、がん）が悪化しない、治療中及び治療後の時間の長さを意味する。無増悪生存期間は、患者が完全寛解又は部分寛解を受けている時間の長さ、並びに患者が安定した疾患を経験している時間の長さを含みうる。

【0217】

ここで使用される場合、「奏効率」（ＯＲＲ）は、完全寛解（ＣＲ）率及び部分寛解（ＰＲ）率の合計を意味する。

【0218】

ここで使用される場合、「全生存率」は特定の期間の後に生きている可能性がある群内の個体の割合を意味する。

【0219】

「化学療法剤」はがんの処置に有用な化合物である。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン類、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、アセチルカンプトセシン、スコポレクチン（scopolectin）、及び９－アミノカンプトセシンを含む）；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）及びビゼレシン（bizelesin）合成類似体を含む）；ポドシロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（cryptophycin）（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢＩ－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（pancratistatin）；ＴＬＫ－２８６；ＣＤＰ３２３、経口用アルファ－４インテグリンインヒビター；サルコジクチイン；スポンジスタチン（spongistatin）；ナイトロジェンマスタード、例えばクロランブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、チョロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン（prednimustine）、トロフォスファミド（trofosfamide）、ウラシルマスタード；ニトロス尿素（nitrosureas）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ、カリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Nicolaou等, Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 33：183-186(1994)を参照）；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダラルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、及びイマチニブ（２－フェニルアミノピリミジン誘導体）、並びに他のｃ－ｋｉｔ阻害剤；抗副腎薬、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エフロルニチン（elfornithine）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, OR）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ^ＴＭ）、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのような白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮＲ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；上述した任意のものの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体；並びにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ、及び５－ＦＵ及びロイコボリンと組合せてオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ^ＴＭ）を用いた治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸ等の上述の２又はそれ以上の組合せが含まれる。

【0220】

この定義にまた含まれるものは、がんの増殖を促進可能なホルモンの効果を調整し、低減させ、ブロックし又は抑制するように作用する抗ホルモン剤であり、多くの場合は組織的又は全身処置の形態である。それらはホルモンそれ自体であってもよい。具体例には、抗エストロゲン及び選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）など、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン(EVISTA(登録商標))、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプターダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；エストロゲンレセプターアンタゴニスト、例えばフルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））；卵巣を抑制又は活動停止させるように機能する薬剤、例えば黄体化（leutinizing）ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、例えば酢酸ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプテレリン（tripterelin）；他の抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；及び副腎でのエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）－イミダゾール類、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、ホルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））が含まれる。また、化学治療剤のこのような定義には、ビスホスホネート、例えばクロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリゼドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；並びにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に付粘着性細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を抑制するもの、例えばＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、及び上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦ－Ｒ）；ワクチン、例えばＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療用ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；フルベストラントなどの抗エストロゲン；イマチニブ又はＥＸＥＬ－０８６２（チロシンキナーゼ阻害剤）等のＫｉｔ阻害剤；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ又はセツキシマブ；抗ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ；アリノテカン；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ラパチニブ及びラパチニブジトシレート（ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢ－２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）；１７ＡＡＧ（熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０毒であるゲルダナマイシン誘導体）、及び上述の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸、又は誘導体が含まれる。

【0221】

ここで使用される場合、「サイトカイン」という用語は、一つの細胞集団から放出されるタンパク質であって、他の細胞に対して細胞間メディエータとして作用するか、又はタンパク質生成細胞に対して自己分泌作用を有するものを一般的に意味する。このようなサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン、；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ－２を含む、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－１８からＩＬ－２９（例えばＩＬ－２３）、ＩＬ－３１等のインターロイキン（「ＩＬ」）；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ－α又はＴＮＦ－β、ＴＧＦ－β１－３；及び白血病抑制因子（「ＬＩＦ」）、毛様体神経栄養因子（「ＣＮＴＦ」）、ＣＮＴＦ様サイトカイン（「ＣＬＣ」）、カルジオトロフィン（「ＣＴ」）、及びキットリガンド（「ＫＬ」）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。

【0222】

ここで使用される場合、「ケモカイン」なる用語は、白血球の走化性及び活性化を選択的に誘導する能力を有する可溶性因子（例えば、サイトカイン）を意味する。それらはまた血管新生、炎症、創傷治癒、及び腫瘍形成のプロセスを惹起させる。ケモカインの例には、マウスケラチノサイト誘引物質（ＫＣ）のヒト相同体であるＩＬ－８が含まれる。

【0223】

明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「又は」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。

【0224】

「約」に関して、ここでの値又はパラメータは、値又はパラメータそれ自体を対象とした変動を含む（又は記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及した記述は、「Ｘ」の記述を含む。

【0225】

ここで使用される「薬学的に許容可能な塩」なる語句は、本発明の化合物の薬学的に許容可能な有機又は無機塩を意味する。例示的な塩には、限定されるものではないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸ホスフェート、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸シトレート、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（つまり、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が含まれる。薬学的に許容可能な塩は、アセテートイオン、スクシネートイオン又は他の対イオンのような他の分子の包接を含みうる。対イオンは親化合物上の電荷を安定化する任意の有機又は無機部分でありうる。更に、薬学的に許容可能な塩は、その構造中に一を越える荷電原子を有しうる。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である場合は、複数の対イオンを有しうる。よって、薬学的に許容可能な塩は一又は複数の荷電原子及び／又は一又は複数の対イオンを有しうる。

【0226】

本発明の化合物が塩基である場合、所望される薬学的に許容可能な塩は、当該分野で利用できる任意の適切な方法、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸等のような無機酸で、又は例えば酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸又はガラクツロン酸、αヒドロキシ酸、例えばクエン酸又は酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸又はケイ皮酸、スルホン酸、例えばｐ－トルエンスルホン酸又はエタンスルホン酸等のような有機酸での遊離塩基の処理によって調製することができる。

【0227】

本発明の化合物が酸である場合、所望される薬学的に許容可能な塩は、任意の適切な方法、例えば無機又は有機塩基、例えばアミン(第１級、第２級又は第３級)、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物等での遊離酸の処理によって調製することができる。適切な塩を例証する例には、限定されないが、アミノ酸、例えばグリシン及びアルギニン、アンモニア、第１級、第２級、及び第３級アミン、及び環状アミン、例えばピペリジン、モルホリン及びピペラジンから誘導される有機塩基、及びナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム及びリチウムから誘導される無機塩が含まれる。

【0228】

「薬学的に許容可能な」なる語句は、物質又は組成物が、製剤を構成する他の成分、及び／又はそれで治療されている哺乳動物と、化学的及び／又は毒物学的に適合性でなければならないことを示している。

【0229】

ここに記載の本発明の態様及び変形例には、態様及び変形例「からなる」及び／又は「から本質的になる」が含まれると理解される。

【0230】

ＩＩＩ．方法
一態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを個体に投与することを含む、個体におけるがん治療し又はその進行を遅延させるための方法である。

【0231】

他の態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを個体に投与することを含む、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害するための方法である。ここに開示される場合、がんの再発及び／又はがんの進行は、限定しないが、がん転移を含む。

【0232】

他の態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを個体に投与することを含む、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させるための方法である。

【0233】

他の態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを個体に投与することを含む、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害するための方法である。

【0234】

幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連する。幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はウイルス感染である。所定の実施態様では、ウイルス感染は慢性ウイルス感染である。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、未消散急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍免疫を含む。

【0235】

他の態様では、ここに提供されるものは、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを個体に投与することを含む方法である。

【0236】

他の態様では、ここに提供されるものは、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0237】

他の態様では、ここに提供されるものは、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0238】

他の態様では、ここに提供されるものは、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0239】

他の態様では、ここに提供されるものは、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0240】

幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はＴ細胞機能不全疾患に関連する。幾つかの実施態様では、免疫関連疾患はウイルス感染である。所定の実施態様では、ウイルス感染は慢性ウイルス感染である。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、抗原刺激に対する応答の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患は、Ｔ細胞アネルギー、又はサイトカインを分泌し、増殖し又は細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全疾患はＴ細胞消耗によって特徴付けられる。幾つかの実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。幾つかの実施態様では、免疫関連疾患は、未消散急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。

【0241】

他の態様では、ここに提供されるものは、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することによって、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。

【0242】

幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激し；ＣＤ２２６のＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３との相互作用を増加させ及び／又は刺激し；及びＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激することができる。ここで使用される場合、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、限定しないが、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激する薬剤を含む。ここで使用される場合、ＣＤ２２６のＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３との相互作用を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、限定しないが、ＣＤ２２６のＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３との相互作用を増加させ及び／又は刺激する薬剤を含む。ここで使用される場合、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、限定しないが、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激する薬剤を含む。

【0243】

幾つかの実施態様では、CD226 発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びそれらの組合せから選択される。

【0244】

幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。

【0245】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。

【0246】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0247】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0248】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0249】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0250】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0251】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0252】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。

【0253】

他の態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体の発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することによって、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＣＤ９６から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３から選択される。

【0254】

他の態様では、ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体の発現及び／又は活性を増加させ又は活性化する薬剤とを個体に投与することによって、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、及び２Ｂ４から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、及びＧＩＴＲから選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体はＯＸ－４０及びＣＤ２７から選択される。

【0255】

この発明の方法は、がん又はＴ細胞機能不全疾患の治療のための腫瘍免疫原性の増加のような免疫原性の増強が望まれる病態の治療に用途を見出すことができる。

【0256】

様々ながんを治療することができ、又はその進行を遅延させることができる。

【0257】

幾つかの実施態様では、個体は非小細胞肺がんに罹患している。非小細胞肺がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は小細胞肺がんに罹患している。小細胞肺がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は腎細胞がんに罹患している。腎細胞がん初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は結腸直腸がんに罹患している。結腸直腸がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は卵巣がんに罹患している。卵巣がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は乳がんに罹患している。乳がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は膵がんに罹患している。膵がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は胃がんに罹患している。胃がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は膀胱がんに罹患している。膀胱がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は食道がんに罹患している。食道がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は中皮腫に罹患している。中皮腫は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体はメラノーマに罹患している。メラノーマは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は頭頸部がんに罹患している。頭頸部がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は甲状腺がんに罹患している。甲状腺がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は肉腫に罹患している。肉腫は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は前立腺がんに罹患している。前立腺がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は神経膠芽腫に罹患している。神経膠芽腫は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は子宮頸がんに罹患している。子宮頸がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は胸腺がんに罹患している。胸腺がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は白血病に罹患している。白血病は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体はリンパ腫に罹患している。リンパ腫は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は骨髄腫に罹患している。骨髄腫は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は菌状息肉症に罹患している。菌状息肉症は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体はメルケル細胞がんに罹患している。メルケル細胞がんは初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体は血液悪性腫瘍に罹患している。血液悪性腫瘍は初期又は後期でありうる。幾つかの実施態様では、個体はヒトである。

【0258】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、個体におけるＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、組合せの投与前に対して、増大又は亢進したプライミング、活性化、増殖、サイトカイン放出及び／又は細胞溶解活性を有する。

【0259】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。この発明の方法の幾つかの実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞の数は、組合せの投与前に対して増加している。

【0260】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又は組合せの投与前に対して亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。

【0261】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出増加を示す。

【0262】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞である。この発明の方法の幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、γ－ＩＦＮ^＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８ Ｔ細胞及び／又は亢進した細胞溶解活性によって特徴付けられる。この発明の方法の幾つかの実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクターメモリーＴ細胞は、ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗの発現を示すことによって特徴付けられる。

【0263】

この発明の方法の幾つかの実施態様では、がんは、増加したレベルのＴ細胞浸潤を有している。

【0264】

幾つかの実施態様では、本発明の方法は付加療法を施すことを更に含みうる。付加療法は、放射線療法、外科手術、化学療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイルス性治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、又は前記の組合せでありうる。付加療法は、アジュバント又はネオアジュバント療法の形態であってもよい。幾つかの実施態様では、付加療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／又は重症度を軽減することを意図した薬剤、例えば鎮吐薬等）の投与である。幾つかの実施態様では、付加療法は放射線療法である。幾つかの実施態様では、付加療法は手術である。幾つかの実施態様では、付加療法は、上述した化学療法剤の一又は複数であってもよい。

【0265】

以下に記載されるＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを本発明の方法において使用することができる。

【0266】

幾つかの実施態様では、ここに記載の標的（例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、Ｂ７－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、２Ｂ４等）の何れかはヒトタンパク質である。

【0267】

ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト
ここに提供されるものは、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、個体に投与することを含む方法である。

【0268】

例えば、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

【0269】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－１リガンド結合パートナーはＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２である。他の実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合パートナーはＰＤ－１及び／又はＢ７－１である。他の実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ２結合パートナーはＰＤ－１である。アンタゴニストは抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドでありうる。

【0270】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、メルク３７４５（ランブロリズマブ）、ＣＴ－０１１（ピディリズマブ）、及びＡＭＰ－２２４から選択される。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６から選択される。幾つかの実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。幾つかの実施態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。ＭＤＸ－１１０５は、ＢＭＳ－９３６５５９としても知られ、国際公開第２００７／００５８７４号に記載された抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（配列番号２０）は、出典明示によりここに援用される国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号及び米国特許第８２１７１４９号に記載された抗ＰＤ－Ｌ１である。ＭＤＸ－１１０６は、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、又はニボルマブとしても知られ、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載された抗ＰＤ－１抗体である。メルク３７４５は、ＭＫ３４７５、ＭＫ－３４７５、ＳＣＨ－９００４７５、又はランブロリズマブとしても知られ、国際公開第２００９／１１４３３５号に記載された抗ＰＤ－１抗体である。ＣＴ－０１１は、ｈＢＡＴ、ｈＢＡＴ－１、又はピディリズマブとしても知られ、国際公開第２００９／１０１６１１号に記載された抗ＰＤ－１抗体である。ＡＭＰ－２２４は、Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られ、国際公開第２０１０／０２７８２７号及び国際公開第２０１１／０６６３４２号に記載されたＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合可溶性受容体である。

【0271】

この発明の方法に有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体とその作製方法の例は、出典明示によりここに援用されるＰＣＴ特許出願の国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号、及び米国特許第８２１７１４９号に記載されている。

【0272】

幾つかの実施態様では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１の間及び／又はＰＤ－Ｌ１とＢ７－１の間の結合を阻害することができる。幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はモノクローナル抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）_２断片からなる群から選択される抗体断片である。幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト化抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト抗体である。

【0273】

この発明において有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号及び米国特許第８２１７１４９号に記載されているもののような、そのような抗体を含む組成物を含め、がん又は免疫関連疾患（例えばＴ細胞機能不全疾患、ウイルス感染、慢性ウイルス感染等）を治療するために、何らかの付加療法（例えば化学療法）を伴い又は伴わず、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組合せて使用することができる。

【0274】

一実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ－Ｈ１配列はＧＦＴＦＳＸ_１ＳＷＩＨ（配列番号：３３）であり；
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２配列はＡＷＩＸ_２ＰＹＧＧＳＸ_３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：３４）であり；
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３配列はＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）であり；
更にここで、Ｘ_１はＤ又はＧであり；Ｘ_２はＳ又はＬであり；Ｘ_３はＴ又はＳである。

【0275】

特定の一態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、Ｘ_３はＴである。他の態様では、ポリペプチドは、次式に従ってＨＶＲ間に並置された可変領域重鎖フレームワーク配列を更に含む：（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）。更に別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来である。更なる態様では、フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、フレームワーク配列の少なくとも一つは次のものである：
ＨＣ－ＦＲ１はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）であり、
ＨＣ－ＦＲ２はＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）であり、
ＨＣ－ＦＲ３はＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）であり、
ＨＣ－ＦＲ４はＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２８）である。

【0276】

また更なる態様では、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含む可変領域軽鎖と更に組み合わされ、ここで、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１配列はＲＡＳＱＸ_４Ｘ_５Ｘ_６ＴＸ_７Ｘ_８Ａ（配列番号：３５）であり；
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２配列はＳＡＳＸ_９ＬＸ_１０Ｓ（配列番号：３６）であり；
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３配列はＱＱＸ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４ＰＸ_１５Ｔ（配列番号：３７）であり；
更にここで、Ｘ_４はＤ又はＶであり；Ｘ_５はＶ又はＩであり；Ｘ_６はＳ又はＮであり；Ｘ_７はＡ又はＦであり；Ｘ_８はＶ又はＬであり；Ｘ_９はＦ又はＴであり；Ｘ_１０はＹ又はＡであり；Ｘ_１１はＹ、Ｇ、Ｆ、又はＳであり；Ｘ_１２はＬ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ_１３はＹ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ_１４はＨ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ_１５はＡ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。

【0277】

また更なる態様では、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり；Ｘ１５はＡである。また更なる態様では、軽鎖は、式（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）に従って、ＨＶＲ間に並置された可変領域軽鎖フレームワーク配列を更に含む。また更なる態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。また更なる態様では、フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、フレームワーク配列の少なくとも一つは次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１はＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）であり、
ＬＣ－ＦＲ２はＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）であり、
ＬＣ－ＦＲ３はＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）であり、
ＬＣ－ＦＲ４はＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）である。

【0278】

他の実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片が提供され、ここで、
（ａ）重鎖は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３を含み、ここで更に、
（ｉ）ＨＶＲ－Ｈ１配列はＧＦＴＦＳＸ_１ＳＷＩＨ（配列番号：３３）であり
（ｉｉ）ＨＶＲ－Ｈ２配列はＡＷＩＸ_２ＰＹＧＧＳＸ_３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：３４）であり
（ｉｉｉ）ＨＶＲ－Ｈ３配列はＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）であり
（ｂ）軽鎖は、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含み、ここで更に、
（ｉ）ＨＶＲ－Ｌ１配列はＲＡＳＱＸ_４Ｘ_５Ｘ_６ＴＸ_７Ｘ_８Ａ（配列番号：３５）であり
（ｉｉ）ＨＶＲ－Ｌ２配列はＳＡＳＸ_９ＬＸ_１０Ｓ（配列番号：３６）であり
（ｉｉｉ）ＨＶＲ－Ｌ３配列はＱＱＸ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４ＰＸ_１５Ｔ（配列番号：３７）であり
更にここで：Ｘ_１はＤ又はＧであり；Ｘ_２はＳ又はＬであり；Ｘ_３はＴ又はＳであり；Ｘ_４はＤ又はＶであり；Ｘ_５はＶ又はＩであり；Ｘ_６はＳ又はＮであり；Ｘ_７はＡ又はＦであり；Ｘ_８はＶ又はＬであり；Ｘ_９はＦ又はＴであり；Ｘ_１０はＹ又はＡであり；Ｘ_１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ_１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ_１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ_１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ_１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。

【0279】

特定の態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、かつＸ_３はＴである。別の態様では、Ｘ_４はＤであり；Ｘ_５はＶであり；Ｘ_６はＳであり；Ｘ_７はＡであり；Ｘ_８はＶであり；Ｘ_９はＦであり；Ｘ_１０はＹであり；Ｘ_１１はＹであり；Ｘ_１２はＬであり；Ｘ_１３はＹであり；Ｘ_１４はＨであり；Ｘ_１５はＡである。更に別の態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、かつＸ_３はＴであり、Ｘ_４はＤであり；Ｘ_５はＶであり；Ｘ_６はＳであり；Ｘ_７はＡであり；Ｘ_８はＶであり；Ｘ_９はＦであり；Ｘ_１０はＹであり；Ｘ_１１はＹであり；Ｘ_１２はＬであり；Ｘ_１３はＹであり；Ｘ_１４はＨであり、かつＸ_１５はＡである。

【0280】

更なる態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。また更なる態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は、次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２８）。

【0281】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ （配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0282】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減した又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は、「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0283】

更に他の実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）重鎖は、それぞれＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を更に含み、又は
（ｂ）軽鎖は、それぞれＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号：２１）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を更に含む。
（ｃ）特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。他の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。更に他の態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２８）。

【0284】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0285】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減した又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は、「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0286】

別の更なる実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ－Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２３）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号：４０）、又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４１）
に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有し、あるいは
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有する。

【0287】

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。他の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。更に別の態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は、次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２８）。

【0288】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0289】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減した又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は原核細胞における産生に起因する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0290】

別の更なる実施態様では、本発明は、少なくとも一種の薬学的に許容可能な担体との組合せで上述の抗ＰＤ－Ｌ１抗体の何れかを含有する組成物を提供する。

【0291】

別の更なる実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離された核酸が提供され、ここで、
（ａ）重鎖は、それぞれＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を更に含み、かつ
（ｂ）軽鎖は、それぞれＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）、ＳＡＳＦＬＹＳ （配列番号：２１）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を更に含む。

【0292】

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。ある態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。更なる他の態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号：２８）。

【0293】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0294】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。別の更なる特定の態様では、抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は原核細胞における産生に起因する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0295】

別の更なる実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、
(a)重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４１）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。

【0296】

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。他の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。更なる他の態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４２）。

【0297】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0298】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は原核細胞における産生に起因する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0299】

更なる態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。また更なる態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号：４３）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号：４４）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４５）。

【0300】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ （配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号：４６）。

【0301】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0302】

更に別の実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、
（ｄ）重鎖は、それぞれＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号：１７）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：１８）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号：１９）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を更に含み、あるいは
（ｅ）軽鎖は、それぞれＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号：２０）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号：２１）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号：２２）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を更に含む。

【0303】

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。ある態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。更なる他の態様では、フレームワーク配列はヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する。また更なる態様では、重鎖フレームワーク配列はＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の重鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＨＣ－ＦＲ１ ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号：２５）
ＨＣ－ＦＲ２ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号：２６）
ＨＣ－ＦＲ３ ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号：２７）
ＨＣ－ＦＲ４ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号：４７）。

【0304】

また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。また更なる態様では、軽鎖フレームワーク配列はＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。また更なる態様では、一又は複数の軽鎖フレームワーク配列は次の通りである：
ＬＣ－ＦＲ１ ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号：２９）
ＬＣ－ＦＲ２ ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号：３０）
ＬＣ－ＦＲ３ ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号：３１）
ＬＣ－ＦＲ４ ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：３２）。

【0305】

更に別の特定の態様では、抗体はヒト又はマウス定常領域を更に含む。また更なる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。更に別の特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。また更なる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。更に別の特定の態様では、抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。更に別の特定の態様では、最小のエフェクター機能は「エフェクターレスＦｃ変異」又は非グリコシル化に起因する。別の更なる実施態様では、エフェクターレスＦｃ変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。

【0306】

別の更なる実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号：４０）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有し、あるいは
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：２４）に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有する。

【0307】

幾つかの実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、軽鎖可変領域配列は、配列番号：２４のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。幾つかの実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、重鎖可変領域配列は、配列番号：４０のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。幾つかの実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、軽鎖可変領域配列は、配列番号：２４のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖可変領域配列は、配列番号：４０のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0308】

別の更なる実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号：４８）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号：４９）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。

【0309】

幾つかの実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、軽鎖配列は、配列番号：４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。幾つかの実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、重鎖配列は、配列番号：４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。幾つかの実施態様では、提供されるものは、重鎖及び軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であり、ここで、軽鎖配列は、配列番号：４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有し、かつ重鎖配列は、配列番号：４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0310】

また更なる態様では、核酸は、先に記載した抗ＰＤ－Ｌ１抗体の何れかをコードする核酸の発現に適したベクターを更に含む。更に別の特定の態様では、ベクターは、核酸の発現に適した宿主細胞を更に含む。更に別の特定の態様では、宿主細胞は真核細胞又は原核細胞である。更に別の特定の態様では、真核細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞である。

【0311】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、例えば、先に記載した抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片の何れかをコードする核酸を含む宿主細胞を、発現に適した形態で、そのような抗体又は断片を産生するのに適した条件下で培養し、抗体又は断片を回収することを含む方法によって、当該技術分野で既知の方法を使用して作製することができる。

【0312】

別の更なる実施態様では、本発明は、ここに提供される抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片と少なくとも一種の薬学的に許容可能な担体とを含有する組成物を提供する。

【0313】

ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤
ここに提供されるものは、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストを、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と組み合わせて個体に投与することを含む方法である。
ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。例えば、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤は、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びそれらの組合せを含む。

【0314】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0315】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0316】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0317】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0318】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0319】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0320】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0321】

幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。

【0322】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。

【0323】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。

【0324】

この発明において有用な抗ＴＩＧＩＴ抗体は、国際公開第２００９／１２６６８８号に記載されているもののような、そのような抗体を含む組成物を含め、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せで使用されうる。

【0325】

抗ＴＩＧＩＴ抗体
本発明は抗ＴＩＧＩＴ抗体を提供する。例示的な抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性、及びヘテロコンジュゲート抗体を含む。本発明はまた他のポリペプチドに対する抗体（すなわち、抗ＰＶＲ抗体）を提供し、抗ＴＩＧＩＴ抗体の作成方法、生産、変種、使用又は他の側面に特に関係するここでの記載の何れも他の非ＴＩＧＩＴポリペプチドに特異的な抗体にもまた適用可能であろうことは当業者によって理解されるであろう。

【0326】

ポリクローナル抗体
抗ＴＩＧＩＴ抗体はポリクローナル抗体を含みうる。ポリクローナル抗体の調製方法は当業者に知られている。ポリクローナル抗体は、哺乳動物において、例えば免疫化剤と、所望されればアジュバントを、一又は複数回注射することによって産生させることができる。典型的には、免疫化剤及び／又はアジュバントを複数回の皮下又は腹腔内注射により、哺乳動物に注射する。免疫化剤は、ＴＩＧＩＴポリペプチド又はその融合タンパク質を含みうる。免疫化されている哺乳動物において免疫原性であることが知られているタンパク質に免疫化剤をコンジュゲートさせるのが有用な場合がある。そのような免疫原タンパク質の例には、これらに限定されないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、及び大豆トリプシン阻害剤が含まれる。用いられうるアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ－ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）が含まれる。免疫化プロトコールは、過度の実験なく当業者により選択されうる。

【0327】

モノクローナル抗体
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、別にはモノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495 (1975)に記載されているもののような、ハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、又は他の適切な宿主動物を、典型的には免疫化剤により免疫化することで、免疫化剤に特異的に結合する抗体を生成するかあるいは生成可能なリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。

【0328】

免疫化剤は、典型的には対象とするＴＩＧＩＴポリペプチド又はその融合タンパク質を含む。一般に、ヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、あるいは非ヒト哺乳動物源が望まれる場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。ついで、ポリエチレングリコール等の適当な融合剤を使用してリンパ球を不死化細胞株と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する［Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp.59-103］。不死化細胞株は、通常は、形質転換された哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫細胞株が用いられる。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の不死化細胞の生存又は増殖を阻害する一又は複数の物質を含む適切な培地で培養されうる。例えば、親細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いていると、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、この物質がＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ。

【0329】

好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定した高レベルの抗体発現を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性であるものである。より好ましい不死化細胞株はマウス骨髄腫株であり、これは例えばカリフォルニア州サンディエゴのSalk Institute Cell Distribution Centerやバージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションより入手することができる。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた開示されている［Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp.51-63］。

【0330】

ついで、ハイブリドーマ細胞が培養される培地を、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。そのような技術及びアッセイは当該分野において知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson及びPollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード分析法によって測定することができる。

【0331】

所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させることができる［上掲のGoding］。この目的のための適当な培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地及びＲＰＭＩ－１６４０倍地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物において腹水としてインビボで成長させることもできる。

【0332】

サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ－セファロース法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー法、ゲル電気泳動法、透析法、又はアフィニティークロマトグラフィー等の一般的な免疫グロブリン精製手順によって培地又は腹水液から単離又は精製されうる。

【0333】

また、モノクローナル抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号に記載されたもののような、組換えＤＮＡ法により作製することができる。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、一般的な手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離し配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたら、ＤＮＡは発現ベクター内に配することができ、これがついで宿主細胞、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を生成等しない骨髄腫細胞内に形質移入され、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成をなすことができる。また、ＤＮＡは、例えば相同マウス配列に換えてヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより［米国特許第４８１６５６７号；Morrison等, 上掲］、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は一部を共有結合させることにより、修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインに置換でき、あるいは本発明の抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインに置換でき、キメラ性二価抗体を生成する。

【0334】

抗体は一価抗体であってもよい。一価抗体の調製方法は当該分野においてよく知られてる。例えば、一つの方法は、免疫グロブリン軽鎖と修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖の架橋を防止するように一般にＦｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基を他のアミノ酸残基で置換するか又は欠失させて、架橋を防止する。

【0335】

一価抗体の調製にはインビトロ法がまた適している。抗体の消化によるその断片、特にＦａｂ断片の生成は、当該分野において知られている慣用的技術を使用して達成できる。

【0336】

ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体はヒト化抗体又はヒト抗体を更に含みうる。非ヒト（例えばマウス）抗体のヒト化型とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')_２あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列）であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいは殆ど全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てあるいは殆ど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的に全てを含む。場合によっては、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むであろう［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature, 332:323-329 (1988)；及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)］。

【0337】

非ヒト抗体をヒト化する方法は当該分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそこに導入された一又は複数のアミノ酸残基を有している。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は、ウィンター(Winter)と共同研究者［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988)］の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより本質的に実施することができる。従って、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体（米国特許第４８１６５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基と場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。

【0338】

また、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー［Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)；Marks等, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)］を含む当該分野で知られた様々な方法を使用して産生することもできる。Cole等及びBoerner等の技術もまたヒトモノクローナル抗体の調製に利用することができる（Cole等, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss. p.77(1985)及びBoerner等, J. Immunol., 147(1)：86-95(1991)］。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活化されたマウスに導入することにより、作製することができる。誘発の際に、遺伝子再配列、組立、及び抗体レパートリーを含むあらゆる観点においてヒトに見られるものに非常に類似しているヒト抗体の生産が観察される。このアプローチは、例えば米国特許第５５４５８０７号；同５５４５８０６号；同５５６９８２５号；同５６２５１２６号；同５６３３４２５号；同５６６１０１６号、及び次の科学文献：Marks等, Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Lonberg等, Nature 368 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994);Fishwild等, Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996);Lonberg及びHuszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)に記載されている。

【0339】

また、抗体は、上述のような既知の選択及び／又は突然変異誘発法を利用して親和性成熟させうる。好ましい親和性成熟抗体は、５倍、より好ましくは１０倍、更により好ましくは２０又は３０倍も成熟抗体の調製の元である出発抗体（一般的には、マウス、ヒト化又はヒト）より高い親和性を有する。

【0340】

二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である。本発明の場合において、結合特異性の一方はＴＩＧＩＴに対してであり、他方は任意の他の抗原、好ましくは細胞表面タンパク質又はレセプター又はレセプターサブユニットに対してである。

【0341】

二重特異性抗体を作製する方法は当該分野において知られている。伝統的には、二重特異性抗体の組換え生産は、二つの重鎖が異なる特異性を持つ二つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づく［Milstein及びCuello, Nature, 305:537-539 (1983)］。免疫グロブリンの重鎖と軽鎖を無作為に取り揃えるため、これらハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その内の一種のみが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常達成される。同様の手順が１９９３年５月１３日公開の国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker等, EMBO J.,10:3655-3656 (1991)に開示されている。

【0342】

所望の結合特異性（抗体-抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合できる。融合は、好ましくは少なくともヒンジ部、ＣＨ２及びＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも一つの融合には軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）が存在することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするＤＮＡと、所望されれば免疫グロブリン軽鎖を、別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。二重特異性抗体を作製するための更なる詳細については、例えばSuresh等, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照のこと。

【0343】

国際公開第９６／２７０１１号に記載された他の方法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にすることができる。好適な界面は抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第一抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの（例えばアラニン又はスレオニン）と置き換えることにより第二の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモ二量体のような不要の他の最終産物に対してヘテロ二量体の収量を増大させるメカニズムが提供される。

【0344】

二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製できる。抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennan等, Science, 229:81 (1985) はインタクト抗体をタンパク分解性に切断してＦ（ａｂ’）_２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたＦａｂ’断片はついでチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転換される。Ｆａｂ’-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ’-チオールに再転換し、他のＦａｂ’-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。

【0345】

Ｆａｂ’断片は大腸菌から直接回収でき、化学的にカップリングさせて二重特異性抗体を形成することができる。Shalaby等, J. Exp. Med., 175:217-225 (1992)は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）_２分子の製造を記述している。各Ｆａｂ’断片が大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学カップリングに供されて二重特異性抗体が形成される。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞と正常なヒトＴ細胞に結合し、またヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の細胞溶解活性を惹起することができる。

【0346】

組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作製し分離する様々な技術がまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して産生されている。Kostelny等, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ’部分に結合させている。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元して単量体を形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成する。この方法はまた抗体ホモ二量体の生産に対して利用することもできる。Hollinger等, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)によって記載された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作製するための別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の二つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーにより軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を結合してなる。従って、一つの断片のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは他の断片の相補的Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈドメインと強制的に対形成させられ、二つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用により二重特異性抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruber等, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照のこと。

【0347】

二価より多い抗体も考えられる。非限定的な一例として、三重特異性抗体を調製することができる。例えばTutt等, J.Immunol. 147:60 (1991)を参照のこと。

【0348】

例示的な二重特異性抗体は、ここに与えられたＴＩＧＩＴポリペプチドの二つの異なるエピトープに結合しうる。あるいは、抗ＴＩＧＩＴポリペプチドのアームは、特定のＴＩＧＩＴポリペプチドを発現する細胞に細胞防御メカニズムを集中させるように、Ｔ細胞レセプター分子（例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、又はＢ７）等の白血球上のトリガー分子又はＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲII（ＣＤ３２）及びＦｃγＲIII（ＣＤ１６）等のＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃレセプターに結合するアームと結合されうる。また、二重特異性抗体は、特定のＴＩＧＩＴポリペプチドを発現する細胞に細胞傷害性薬を局在化させるためにも使用されうる。これらの抗体はＴＩＧＩＴ結合アームと細胞傷害性薬又は放射性核種キレート剤、例えばＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、又はＴＥＴＡと結合するアームを有する。興味のある他の二重特異性抗体はＴＩＧＩＴポリペプチドに結合し、更に組織因子（ＴＦ）に結合する。

【0349】

ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロコンジュゲート抗体は、二つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため［米国特許第４６７６９８０号］及びＨＩＶ感染の治療のために［国際公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／２００３７３号；欧州特許第０３０８９号］提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することにより、イムノトキシンを構築することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル－４－メルカプトブチルイミデート、及び例えば米国特許第４６７６９８０号に開示されたものが含まれる。

【0350】

エフェクター機能の加工
本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えばがん治療における抗体の有効性を向上させることが望ましい場合がある。例えば、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成するようにしてもよい。そのようにして生成されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能力及び／又は増加した補体媒介細胞殺傷及び抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する場合がある。Caron等, J. Exp. Med. 176: 1191-1195 (1992)及びShopes, J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)を参照のこと。また、向上した抗腫瘍活性を持つホモ二量体抗体は、Wolff等, Cancer research 53: 2560-2565 (1993)に記載されているヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することができる。あるいは、抗体は、二つのＦｃ領域を有するように操作して、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力を向上させることもできる。Stevenson等, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)を参照のこと。

【0351】

幾つかの実施態様では、ハムスター抗マウス抗体である抗ＴＩＧＩＴ抗体が作製された。二つの抗体１０Ａ７と１Ｆ４がまたヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合した。１０Ａ７抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列は、標準的な技術を使用して決定された。この抗体の軽鎖配列は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）であり、この抗体の重鎖配列は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）であり、ここで、各鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）は太字テキストによって表される。よって、１０Ａ７軽鎖のＣＤＲ１は配列ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）を有し、１０Ａ７軽鎖のＣＤＲ２は配列ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）を有し、１０Ａ７軽鎖のＣＤＲ３は配列ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）を有する。１０Ａ７重鎖のＣＤＲ１は配列ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）を有し、１０Ａ７重鎖のＣＤＲ２は配列ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）を有し、１０Ａ７重鎖のＣＤＲ３は配列ＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）を有する。

【0352】

１Ｆ４抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列もまた決定された。この抗体の軽鎖配列は、
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）であり、この抗体の重鎖配列は、
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）であり、ここで、各鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）は太字テキストによって表される。よって、１Ｆ４軽鎖のＣＤＲ１は配列ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）を有し、１Ｆ４軽鎖のＣＤＲ２は配列ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）を有し、１Ｆ４軽鎖のＣＤＲ３は配列ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）を有する。１Ｆ４重鎖のＣＤＲ１は配列ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）を有し、１Ｆ４重鎖のＣＤＲ２は配列ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）を有し、１Ｆ４重鎖のＣＤＲ３は配列ＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）を有する。

【0353】

１Ｆ４軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＴＣＡＡＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＣＡＧＣＴＴＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＴＴＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＴＧＴＡＡＡＣＡＧＴＴＡＴＧＧＧＡＡＣＡＣＣＴＴＴＴＴＧＴＣＴＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＴＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＧＴＧＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＣＡＡＴＡＡＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＡＣＡＡＧＧＴＡＣＧＣＡＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＡＡ（配列番号：３８）であると決定され、１Ｆ４重鎖をコードするヌクレオチド配列は、
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＴＣＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＧＧＣＣＡＴＣＴＴＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＡＡＧＣＴＡＴＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＡＡＧＡＧＧＣＣＴＴＡＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号：３９）であると決定された。

【0354】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、（１）ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）、あるいは（２）ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）に記載のアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも一つのＨＶＲを含む。

【0355】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）に記載のアミノ酸配列を含む。

【0356】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体重鎖は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）に記載のアミノ酸配列を含む。

【0357】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体軽鎖は、
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）に記載のアミノ酸配列を含み、かつ抗体重鎖は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）に記載のアミノ酸配列を含む。

【0358】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片において、抗体はヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、及びイムノトキシンから選択される。

【0359】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片は、（１）ＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡ（配列番号：１）、ＡＳＩＲＦＴ（配列番号：２）、ＱＱＧＩＮＮＰＬＴ（配列番号：３）、ＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨ（配列番号：４）、ＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号：５）、及びＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳ（配列番号：６）、あるいは（２）ＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳ（配列番号：７）、ＧＩＳＮＲＦＳ（配列番号：８）、ＬＱＧＴＨＱＰＰＴ（配列番号：９）、ＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮ（配列番号：１０）、ＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：１１）、及びＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号：１２）の何れかに記載のＨＶＲと少なくとも９０％同一である少なくとも一つのＨＶＲを含む。

【0360】

幾つかの実施態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその断片は、それぞれ
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＹＹＳＧＶＫＥＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＩＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＭＧＱＹＦＣＱＱＧＩＮＮＰＬＴＦＧＤＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号：１３）又は
ＤＶＶＬＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＦＧＤＱＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＮＳＹＧＮＴＦＬＳＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＦＧＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＴＩＫＰＥＤＬＧＭＹＹＣＬＱＧＴＨＱＰＰＴＦＧＰＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号：１４）、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＴＱＰＧＫＳＬＫＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＳＦＴＭＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＶＡＦＩＲＳＧＳＧＩＶＦＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＬＬＦＬＱＭＮＤＬＫＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＲＰＬＧＨＮＴＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：１５）又は
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＭＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＨＬＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＩＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＳＲＧＬＲＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１６）に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖及び／又は重鎖を含む。

【0361】

ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤
ここに提供されるものは、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体におけるがんの再発又はがんの進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患を治療し又はその進行を遅延させる方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫関連疾患の進行を減少させ又は阻害する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。ここに提供されるものはまた、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法において、有効量のＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを個体に投与することを含む方法である。

【0362】

例えば、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激し、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３とのＣＤ２２６の相互作用を増加させ及び／又は刺激し、及びＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤である。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。幾つかの実施態様では、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３とのＣＤ２２６の相互作用を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３とのＣＤ２２６の相互作用を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。幾つかの実施態様では、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激することができる薬剤は、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、及び／又はＰＶＲＬ３へのＣＤ２２６の結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を増加させ及び／又は刺激する薬剤である。

【0363】

幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤、及びそれらの組合せから選択される。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドから選択される。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。幾つかの実施態様では、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。

【0364】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲとの相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ２との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴのＰＶＲＬ３との相互作用を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ２へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。幾つかの実施態様では、ＰＶＲＬ３へのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害し及び／又はブロックする薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドである。

【0365】

幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。幾つかの実施態様では、ＰＶＲ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドを含む。幾つかの実施態様では、ＰＶＲへのＴＩＧＩＴの結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害する薬剤は、小分子阻害剤、阻害抗体又はその抗原結合断片、アプタマー、阻害核酸、及び阻害ポリペプチドからなる群から選択される。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合断片である。幾つかの実施態様では、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性のアンタゴニストは、アンチセンスポリヌクレオチド、干渉ＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＤＮＡキメラから選択される阻害核酸である。

【0366】

免疫調節性抗体療法のためのＴ細胞標的の組合せ
ＴＣＲを通しての特異的抗原認識に加えて、Ｔ細胞活性化は、同時刺激性受容体によって与えられる正と負のシグナルのバランスを通して調節される。これらの表面タンパク質は典型的にはＴＮＦ受容体又はＢ７スーパーファミリーの何れかのメンバーである。活性化同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、及び２Ｂ４を含む。阻害性同時刺激性受容体は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、Ｂ７Ｈ４、及びＣＤ９６を含む。活性化同時刺激性分子に対するアゴニスト抗体と負の同時刺激性分子に対する阻止抗体はＴ細胞刺激を亢進して腫瘍破壊を促進しうる。

【0367】

ここに提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを個体に投与することにより、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、及びＣＤ９６から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる同時阻害性受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３から選択される。

【0368】

ここに提供されるものはまた、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する有効量の薬剤と一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを個体に投与することにより、個体における免疫応答又は機能を増加させ、亢進し又は刺激する方法である。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、及び２Ｂ４６から選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体は、ＣＤ２２６、ＯＸ－４０、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、ＨＶＥＭ及びＧＩＴＲから選択される。幾つかの実施態様では、一又は複数の更なる同時刺激性受容体はＯＸ－４０及びＣＤ２７から選択される。

【0369】

ＩＶ キット
他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるため、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進するために、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0370】

他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるため、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進するために、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0371】

他の態様では、提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるため、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進するために、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0372】

他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せでＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0373】

他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0374】

他の態様では、提供されるものは、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるためにＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0375】

他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤との組合せで、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0376】

他の態様では、提供されるものは、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0377】

他の態様では、提供されるものは、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤と、がんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストとの組合せでＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、及び／又はＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0378】

他の態様では、提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。
ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0379】

他の態様では、提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0380】

他の態様では、提供されるものは、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0381】

他の態様では、提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤との組合せで、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。
ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0382】

他の態様では、提供されるものは、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤と一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤とを使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0383】

他の態様では、提供されるものは、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤と、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させ、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるために、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤との組合せで、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を使用するための説明書を含むパッケージ挿入物とを含むキットである。ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤、及び／又は一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤の任意のものを該キットに含めることができる。

【0384】

幾つかの実施態様では、キットは、ここに記載の一又は複数のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する薬剤を収容する容器を含む。幾つかの実施態様では、キットは、ここに記載の一又は複数のＰＤ－１軸結合アンタゴニストと、ＣＤ２２６発現及び／又は活性を調節する薬剤を収容する容器を含む。幾つかの実施態様では、キットは、ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する一又は複数の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時阻害性受容体を減少させ又は阻害する薬剤を収容する容器を含む。幾つかの実施態様では、キットは、ここに記載のＴＩＧＩＴ発現及び／又は活性を減少させ又は阻害する一又は複数の薬剤と、一又は複数の更なる免疫同時刺激性受容体を増加させ又は活性化する薬剤を収容する容器を含む。好適な容器は、例えばボトル、バイアル（例えば、二重チャンバーバイアル）、シリンジ（例えば、シングル又は二重チャンバーシリンジなど）、及び試験管を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成することができる。幾つかの実施態様では、キットは、ラべル（例えば、容器上又は容器に付随）又はパッケージ挿入物を含みうる。ラベル又はパッケージ挿入物は、その中に含まれる化合物が、個体におけるがんを治療し又はその進行を遅延させるために、あるいはがんに罹患している個体の免疫機能を亢進させるのに有用でありうるか、又はそれを意図しているものであることを示しうる。キットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料を更に含みうる。

【実施例】

【0385】

本発明は、例示のために提供され、限定することを意図するものではない以下の実施例を参照することによって更に理解することができる。

【0386】

実施例１： ＴＩＧＩＴは消耗したＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞上に高度に発現され、ＰＤ－１発現と相関する。
ＣＤ８^＋Ｔ細胞がインビトロでの刺激後にＴＩＧＩＴを発現する能力があることを確認するために、ＭＡＣＳ富化Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ脾臓ＣＤ８^＋Ｔ細胞を、インビトロで２４～４８時間、プレート結合させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。フローサイトメトリーを使用してＴＩＧＩＴ発現を測定した。ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴの発現（Yu, X.等 The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)）と一致して、マウスＣＤ８^＋Ｔ細胞は、インビトロでの刺激から４８時間以内にＴＩＧＩＴを発現した（図１Ａ）。

【0387】

インビボでの活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を評価するために、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスをアームストロング株リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）で感染させ、感染から７日後に脾細胞を分析した。簡潔に述べると、急性感染では、マウスを２×１０^６プラーク形成単位（ＰＦＵ）のアームストロング株ＬＣＭＶで静脈内感染させた。フローサイトメトリーを使用して、ナイーブ（ＣＤ４４^ｌｏｗＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）及びエフェクターメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を測定した。ＬＣＭＶ Ｔ細胞応答のピークで、ＣＤ４^＋エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）のサブセットとほぼ全てのＣＤ８^＋Ｔ_ＥＭ細胞がＴＩＧＩＴを強く発現した（図１Ｂ）。フローサイトメトリーを使用して、ＰＤ－１^ｈｉｇｈ及びＰＤ－１^ｌｏｗエフェクターメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を測定した。興味深いことに、ＴＩＧＩＴ発現はＰＤ－１発現とほぼ完全に相関していた（図１Ｃ）。

【0388】

ＰＤ－１はＴ細胞消耗に関連しているので、慢性的に刺激されたＴ細胞についてＴＩＧＩＴ発現を調べた。簡潔に述べると、慢性感染では、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを２×１０^６ＰＦＵのクローン１３株ＬＣＭＶで静脈内感染させ、感染の３日前と感染の４日後にそれぞれ５００ｕｇ及び２５０ｕｇの枯渇抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）で処置した。示されている場合、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させられたマウスは、感染後２８日から４２日まで毎週３回、２００ｕｇのアイソタイプコントロール抗体、２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体の腹腔内注射を受けた。感染から４２日後に脾細胞を分析した。フローサイトメトリーを使用して、ナイーブ（ＣＤ４４^ｌｏｗＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）、セントラルメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｈｉｇｈ）、及びエフェクターメモリー（ＣＤ４４^ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴ発現を測定した。確かに、クローン１３株ＬＣＭＶで慢性的に感染させられたマウスにおいて、ＴＩＧＩＴは主にＰＤ－１^ｈｉｇｈＴ細胞上に高度に発現されたが、ナイーブ細胞、ＰＤ－１^ｌｏｗＴ_ＥＭ細胞、又はセントラルメモリーＴ細胞ではなかった（図１Ｄ）。

【0389】

実施例２： ＴＩＧＩＴ欠損マウスにおけるＴ細胞消耗でのＴＩＧＩＴの役割
Ｔ細胞消耗におけるＴＩＧＩＴの役割を特徴付けるために、ＴＩＧＩＴがＴ細胞において条件的に欠失されたマウスを作製した（ＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^＋（ＣＫＯ），図２）。簡潔に述べると、ＣＤ４^ｃｒｅマウスとＴＩＧＩＴ^{ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ}マウスを、標準的技術を用いてＣ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドで作製し、交雑させた。品質が試験されたＥＳ細胞株（Ａｒｔ Ｂ６／３．６（遺伝的背景：Ｃ５７ＢＬ／６ ＮＴａｃ）を、白血病抑制因子及びウシ胎仔血清を含むＥＳ細胞培地中、マウス胎仔線維芽細胞からなる有糸分裂的に不活化された支持細胞層で増殖させた。Ｔａｃｏｎｉｃ Ａｒｔｅｍｉｓの標準作業手順に従って、直線化ＤＮＡ標的化ベクターを用いて細胞を電気穿孔した。Ｇ４１８及びガンシクロビル選択を、相同組換えクローンの富化メカニズムとして使用した。明確な形態を持つ耐性ＥＳ細胞コロニー（ＥＳクローン）を感染の８日後に単離し、一次スクリーニングにおいてサザンブロット法及び／又はＰＣＲによって分析した。相同組換えＥＳ細胞クローンを増殖させ、詳細な分子検証後に液体窒素中で凍結させた。Ｂｌ／６雌アルビノドナー中へのマイクロインジェクション前にｆｌｐＥリコンビナーゼによりネオカセットを除去した。キメラ子孫をつくり、尾部を生殖細胞系伝達のためにＰＣＲによりスクリーニングした。ＴＩＧＩＴ発現は、ＴＩＧＩＴ^{ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ}ＣＤ４^ｃｒｅマウスにおいてＴ細胞から９６％の効率で消えた。

【0390】

そのＴ細胞がＴＩＧＩＴを欠いているマウスは、野生型マウスと同様であった、急性アームストロング株ＬＣＭＶ感染に対するＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を開始した（図３）。

【0391】

慢性感染設定における効果を評価するために、ＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^－（ＷＴ）及びＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^＋（ＣＫＯ）マウスから手短にＣＤ４^＋Ｔ細胞を枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染から４２日後に分析した。クローン１３株ＬＣＭＶでの慢性感染後に、野生型同腹仔マウス（ＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^－（ＷＴ））由来のＴ細胞よりも有意に多いＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^＋（ＣＫＯ）マウス由来のＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞がインターフェロンγ（ＩＦＮγ）を産生する能力を持っていた（８２－８６％増，Ｐ＜０．０１，図４Ａ－４Ｄ）。更に、ウイルス量は慢性的に感染させられたＴＩＧＩＴ^{ｆｌ／ｆｌ}ＣＤ４－ｃｒｅ^＋（ＣＫＯ）マウスにおいて有意に減少していた（６８％減，Ｐ＜０．０００１，図４Ｅ）。

【0392】

これらの結果は、ＴＩＧＩＴが慢性ウイルス感染中のような慢性免疫応答中におけるＴ細胞活性及び応答の調節に重要な役割を果たしており、ＴＩＧＩＴが慢性的に刺激され又は消耗されたＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞のエフェクター機能、特にＩＦＮγ及びＴＮＦαのようなエフェクターサイトカインを作り出す能力を調節することができることを示唆している。

【0393】

実施例３： ＴＩＧＩＴとＰＤ－１はインビボで消耗Ｔ細胞のエフェクター機能を相乗的に調節する
ＴＩＧＩＴ発現は、急性及び慢性ウイルス感染中、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞において、ＰＤ－１発現と密接に相関していたので（図１）、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１を組み合わせてブロックすると、何れかの共受容体を単独にブロックすることによって得られるよりも大きなレベルまでＴ細胞エフェクター機能を回復しうる。

【0394】

この仮説を試験するために、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスから手短にＣＤ４^＋Ｔ細胞を枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。慢性感染では、マウスを２×１０^６ＰＦＵのクローン１３株ＬＣＭＶで静脈内感染させ、感染の３日前と感染の４日後にそれぞれ５００ｕｇ及び２５０ｕｇの枯渇抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）で処置した。示されている場合、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させられたマウスは、感染後２８日から４２日まで毎週３回、２００ｕｇのアイソタイプコントロール抗体、２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体の腹腔内注射を受けた。処置は感染から２８日後に開始したが、これは、この慢性ウイルス感染モデルにおいてこの時点でＴ細胞応答が大きく消耗しているためである（Wherry等, Molecular Signature of CD8+ T cell Exhaustion During Chronic Viral Infection, Immunity. 2007 Oct;27(4):670-84）。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染の４２日後に分析した。

【0395】

これらのマウスにおいて、過去に報告されたように（Barber, D.L.等 Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection. Nature 439, 682-687 (2006)）、抗ＰＤ－Ｌ１処置は、一致したアイソタイプコントロール抗体を用いた処置よりもより強いＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化を誘導した（８８％増，Ｐ＜０．０００１，図４Ｆ）。抗ＴＩＧＩＴ処置は、それだけで又は抗ＰＤ－Ｌ１との組合せでＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化に対して明らかな効果はなかった（図４Ｆ）。同様に、ＰＤ－１単独の遮断はＣＤ８^＋Ｔ細胞サイトカイン能力を中程度に増加させた一方、ＴＩＧＩＴ単独の遮断は効果がなかった（図４Ｇ）。しかしながら、ＩＦＮγ産生ＣＤ８^＋Ｔ細胞の出現頻度は、抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１双方で処置されたマウスにおいて劇的に増加し、抗ＰＤ－Ｌ１単独で処置されたマウスに見られるよりもかなり大なる度合いまで増加した（図４Ｇ ９３％増，Ｐ＝０．００５０）。同様の効果がＣＤ４^＋Ｔ細胞で観察された（図５）。図３１にまた示されるように、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断は、抗ＰＤ－Ｌ１単独で処置されたマウスと比較したマウスにおいてＣＤ８^＋Ｔ細胞エフェクター機能を有意に亢進させたが、ＣＤ４^＋Ｔ細胞エフェクター機能は否であった。ＬＣＭＶ ｇｐ３３抗原特異的Ｔ細胞において、同様の効果がＴ細胞増殖及びエフェクター機能についてまた観察された（図３１）。これらの結果は、消耗ＣＤ８^＋Ｔ細胞上でのＰＤ－１とＴＩＧＩＴの間の強い相乗効果を裏付けており、ＴＩＧＩＴがＣＤ８^＋Ｔ細胞サイトカイン能力及びエフェクター機能を特異的に調節することを示している。

【0396】

これらの結果と一致して、ＬＣＭＶウイルス量は、抗ＰＤ－Ｌ１単独で処置されたマウスにおいて中程度に減少し、抗ＴＩＧＩＴ単独で処置されたマウスでは減少せず、抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１双方で処置されたマウスにおいて大幅に減少した（抗ＰＤ－Ｌ１処置で６８％のウイルス価低減，Ｐ＝０．０００４。抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１処置で９２％のウイルス価低減，Ｐ＜０．０００１，図４Ｈ）。これらのデータは、ＰＤ－１とＴＩＧＩＴの阻害効果間の強い相乗効果を裏付けており、ＰＤ－１と異なり、ＴＩＧＩＴはエフェクターＴ細胞活性化の広範な阻害剤ではなく、むしろＴ細胞サイトカイン能力及びエフェクター機能の制限において限られた役割を有していることを示唆している。

【0397】

実施例４： ＴＩＧＩＴ発現はヒト乳がんにおいて上昇し、ＣＤ８及び阻害性共受容体の発現と相関している
Ｔ細胞消耗はまたがんの主要な免疫学的特徴であり、多くの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）が高レベルの阻害性共受容体を発現し、エフェクターサイトカインを産生する能力を欠いている（Wherry, E.J. T cell exhaustion. Nature immunology 12, 492-499 (2011)；Rabinovich, G.A., Gabrilovich, D. & Sotomayor, E.M. Immunosuppressive strategies that are mediated by tumor cells. Annual review of immunology 25, 267-296 (2007)）。

【0398】

ＴＩＧＩＴがＴＩＬエフェクター機能を阻害するかどうかを決定するために、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＧＡＮ）によって作成された乳がん遺伝子発現マイクロアレイデータを分析した（Network, C.G.A. Comprehensive molecular portraits of human breast tumours. Nature 490, 61-70 (2012)）。

【0399】

ＴＩＧＩＴ発現は、乳腺腫瘍全体（正常試料に対して１３５％の増加，Ｐ＝６×１０^－１２，図６Ａ）と乳がんの４つの主要な分子サブタイプにわたって（図６Ａ）、有意に上昇していた（Perou, C.M.等 Molecular portraits of human breast tumours. Nature 406, 747-752 (2000)；Sorlie, T.等 Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98, 10869-10874 (2001)）。ＴＩＧＩＴの発現は、ＴＩＬによるその発現と一致して、ＣＤ３εの発現と高度に相関していた（Ｒ^２＝０．６１，図６Ｂ）。興味深いことに、ＴＩＧＩＴ発現は、ＣＤ８αと高度に相関していたが、ＣＤ４とでは相関していないか、又はＣＤ４と中程度にのみ相関しており、ＴＩＧＩＴが主としてＣＤ８^＋ＴＩＬ機能を調節するのかもしれないことを示唆している（ＣＤ８α，Ｒ^２＝０．８０。ＣＤ４，Ｒ^２＝０．４２。図６Ｃ）。

【0400】

慢性ウイルス感染中のＴＩＧＩＴとＰＤ－１の同時発現が与えられたので、我々はまた乳がんにおけるＰＤ－１と、ＴＩＧＩＴとの他の阻害性共受容体との相関を評価した。ＴＩＧＩＴと、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、及びＬＡＧ３との間の相関は非常に強かった（ＰＤ－１，Ｒ^２＝０．８７。ＣＴＬＡ４，Ｒ^２＝０．７６。ＬＡＧ３，Ｒ^２＝０．８０。図６Ｄ）。まとめると、これらのデータは、ＴＩＧＩＴがＴＩＬによって、特にＣＤ８^＋Ｔ細胞によって発現され、それがその機能を抑制するかもしれないことを示唆している。

【0401】

実施例５： ＴＩＧＩＴとＰＤ－１が抗腫瘍Ｔ細胞応答を阻害する
マウスにおけるＴＩＬによるＴＩＧＩＴをより良好に特徴付けるため、ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６結腸直腸がん細胞を接種した。簡潔に述べると、マトリゲル（BD Biosciences）中に懸濁させた１×１０^５のＣＴ２６結腸がん細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右片側胸郭側腹部中に皮下的に接種した。２週間後、およそ２００ｍｍ^３の腫瘍を有するマウスを、３週間の間、週３回の腹腔内注射によって３５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプコントロール抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与される処置群に無作為に補充した。腫瘍をノギスによって週２回測定した。腫瘍が潰瘍性／壊死性になったか又は２０００ｍｍ^３より大きくなった動物を安楽死させた。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を接種の１４日後に分析し、そのとき腫瘍はおよそ２００ｍｍ^３のサイズに達していた。

【0402】

ヒト腫瘍中でのＴＩＧＩＴ発現（図６）と一致して、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ＣＴ２６ＴＩＬは双方とも高レベルのＴＩＧＩＴを発現した（図７Ａ－７Ｂ）。更に、慢性ウイルス感染研究と一致して、ＴＩＬでのＴＩＧＩＴ発現は、ＰＤ－１（図７Ａ－７Ｂ）及びＴｉｍ－３（図８）を含む他の阻害性共受容体の発現と密接に相関していた。ＴＩＧＩＴ発現の同様のパターンがＭＣ３８結腸がん腫瘍に見出された（図９）。

【0403】

抗腫瘍免疫応答との関係での生理的関連性を試験するために、樹立ＣＴ２６腫瘍（およそ２００ｍｍ^３のサイズ）を持つＢＡＬＢ／Ｃマウスを、２００ｕｇのアイソタイプコントロール、２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１、５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ、又は２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１＋５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体で３週間、処置した。

【0404】

ＣＴ２６腫瘍増殖は、抗ＴＩＧＩＴ又は抗ＰＤ－Ｌ１単独での処置によって僅かだけ遅くなり、双方とも、僅か３日の生存期間中央値の増加であった（図７Ｃ－７Ｄ）。しかしながら、抗ＰＤ－Ｌ１と抗ＴＩＧＩＴの双方での併用療法は、腫瘍増殖を劇的に減少させた（１６日目までに腫瘍体積中央値が７５％減少，Ｐ＜０．０００１，図７Ｃ及び図１０）。更に、抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１の双方を投与されたマウスの７０％が、更なる抗体処置がない場合でさえ、完全で長い腫瘍寛解を経験し、研究期間中、生存した（図７Ｃ－７Ｄ）。これらの効果は、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１に対する阻止抗体の組合せで処置された担腫瘍マウスにおいても観察された。

【0405】

ＣＴ２６腫瘍細胞に対するこれらの生存マウスの免疫を試験するために、最初の接種からおよそ６０日後に、抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１が投与された完全寛解（ＣＲ）のマウス、並びにナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスの左（前に接種されていない）の片側胸郭側腹部にＣＴ２６細胞を再接種した。これらのマウスの第４乳腺脂肪体中に、マトリゲル中１×１０^５のＥＭＴ６乳がん細胞をまた接種した。腫瘍を１週間に２回測定した。腫瘍が潰瘍性／壊死性になったか又はその全腫瘍量が２０００ｍｍ^３を越えた動物を安楽死させた。

【0406】

図７Ｅに示されるように、双方の腫瘍はナイーブのコントロールマウスにおいて直ぐに増殖したが、ＥＭＴ６腫瘍だけが、ＣＴ２６腫瘍を過去に排除したマウスにおいて増殖した。これらの結果は、腫瘍形成中のＴＩＧＩＴとＰＤ－１の共遮断がＣＴ２６腫瘍細胞に対する特異的免疫の状態を樹立したことを示している。

【0407】

ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断の効果がＣＤ８^＋Ｔ細胞によって媒介されたのかを決定するために、ＣＴ２６腫瘍を持つマウスに、抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤＬ１での処置の開始時に枯渇抗体を使用してＣＤ８^＋Ｔ細胞アブレーションを施した。抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体で処置されたマウスは、処置開始時にＣＤ８^＋Ｔ細胞を枯渇されたときにＣＴ２６腫瘍を拒絶することができなかった（処置１７日目後に平均腫瘍体積が１５３２％増加，Ｐ＝０．０００４，図３２Ａ－３２Ｂ）。また、ＣＤ８^＋Ｔ細胞枯渇は、再接種ＣＴ２６腫瘍を規制する過去に処置されたＣＲマウスの能力を損なわせた（図３２Ｃ）。まとめると、これらの結果は、抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１がＣＤ８^＋Ｔ細胞を通して作用して、効果的な一次及び二次抗腫瘍免疫応答を誘発したことを裏付けている。

【0408】

腫瘍細胞のＰＶＲ発現がＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断効果に不要であるかどうかを決定するために、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスに野生型ＣＴ２６腫瘍（ＰＶＲを発現する）又はＰＶＲ欠損ＣＴ２６腫瘍を接種した。簡潔に述べると、野生型ＣＴ２６腫瘍細胞に、ＰＶＲの発現を低減させた核酸を一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションのおよそ２週間後、ＣＴ２６細胞を、フローサイトメトリー及びｑＰＣＲによるＰＶＲ発現の消失に基づいてサブクローニングした。腫瘍が１５０～２００ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスを抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、あるいはアイソタイプ一致コントロール抗体で処置した。抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体で処置されたマウスは、コントロール抗体で処置された腫瘍接種マウスと比較して、野生型及びＰＶＲ欠損腫瘍の双方を拒絶することができた（図３３）。これらの結果は、抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１が腫瘍発現ＰＶＲとは独立して作用することを裏付けている。

【0409】

ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断の効果をまた試験し、確認した。野生型Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスに同系ＭＣ３８結腸直腸がん細胞を皮下的に接種し、前のように、樹立腫瘍をＴＩＧＩＴ及びＰＤ－Ｌ１阻止抗体の組合せで処置した。ＣＴ２６モデルとは異なり、抗ＰＤ－Ｌ１単独での処置が、幾匹かのマウスにおいて完全寛解を誘導するのに十分であった（図２５）。しかしながら、ＣＴ２６モデルにおけるように、ＭＣ３８腫瘍を持つマウスを抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１双方で処置すると、腫瘍増殖を相乗的に逆転させ、殆どのマウスにおいて腫瘍排除を誘導した（図２６）。これらの効果は、同系ＥＭＴ６乳がん細胞を接種したマウスにおいてもまた観察された（図３４）。

【0410】

これらの結果は、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１の共遮断が持続性で抗原特異的な抗腫瘍免疫応答を誘発することができたことを裏付けている。これらの結果は、適応抗腫瘍応答が充分に機能的に存在し、治療処置されたマウスにおいて再賦活化されたことをまた裏付けている。

【0411】

腫瘍浸潤リンパ球自体に対するＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１遮断の機能的効果を評価するために、マウスにＣＴ２６腫瘍細胞を接種し、前のように、抗ＴＩＧＩＴ及び／又は抗ＰＤ－Ｌ１で処置した。処置開始の７日後に、フローサイトメトリーによる分析のために腫瘍及び腫瘍流入領域リンパ節を集めた。

【0412】

腫瘍浸潤及び腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ４^＋Ｔ細胞は殆どＩＦＮγを産生せず、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１遮断時には更に産生しなかった（図１１）。しかしながら、抗ＴＩＧＩＴ又は抗ＰＤ－Ｌ１単独で処置されたマウス由来のものではなく、抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１の双方で処置されたマウス由来の腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、インビトロでの刺激時に、より有意なＩＦＮγ産生能があった（コントロールに対して１７４％の増加，Ｐ＝０．０００１，図１３Ｄ）。同様な結果がＴＮＦαのＣＤ８^＋ＴＩＬ産生に対して観察された（図１２）。

【0413】

興味深いことに、抗ＴＩＧＩＴ又は抗ＰＤ－Ｌ１単独の何れか又は双方で処置されたマウスでは全て腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増加したサイトカイン能力が見られ（７５～１１３％の増加，Ｐ＜０．００１，図１３）、リンパ節常在ＣＤ８＋Ｔ細胞がその腫瘍浸潤対応物よりも少ない抑制度合い下にあったことを示唆している。腫瘍浸潤及び腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の蓄積及び表現型活性化は変わらず、それぞれ単一抗体処置及び二重抗体及び二重抗体処置によって弱く亢進された（図１２－１３）。腫瘍及び腫瘍流入領域リンパ節におけるＩＦＮγ／ＴＮＦα二重産生ＣＤ８^＋Ｔ細胞の出現頻度は類似のパターンに従った（図３５Ａ－３５Ｂ）。

【0414】

従って、ＴＩＧＩＴ又はＰＤ－Ｌ１の何れかの遮断だけで腫瘍流入領域リンパ節におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞エフェクター機能を亢進させるのに十分であったが、腫瘍微小環境が高度に免疫抑制性であるという考えに一致して、双方の受容体の遮断が、腫瘍自体内の消耗ＣＤ８^＋Ｔ細胞の機能を回復させるのに必要であった。

【0415】

実施例６： 腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＣＤ２２６とのＴＩＧＩＴの同時発現
ＴＩＧＩＴは、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）への結合に対して同時刺激性受容体ＣＤ２２６と競合する（Yu, X.等 The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)）。ＣＤ２２６欠損が慢性ウイルス感染中のＴ細胞消耗を亢進しうるとのことなので（Cella, M.等 Loss of DNAM-1 contributes to CD8+ T-cell exhaustion in chronic HIV-1 infection. European Journal of Immunology 40(4), 949-954 (2010)；Welch, M.等 CD8 T cell defect of TNA-a and IL-2 in DNAM-1 deficient mice delays clearance in vivo of a persistent virus infection. Virology 429(2) 163-170 (2012)）、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６活性を妨害することによって部分的にＴ細胞応答を阻害しうることは可能である。

【0416】

Ｔ細胞応答の阻害においてＣＤ２２６とＴＩＧＩＴの間に関係があるかどうかを評価するために、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６の発現を腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞で測定した。

【0417】

図１４に示されるように、Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスにＭＣ３８結腸直腸がん細胞を接種した。脾細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をＦＡＣｓ分析によって分析した。接種のおよそ１４日後、腫瘍がおよそ２００ｍｍ３のサイズに達した。脾臓Ｂ細胞（灰色）、脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞（青色）、及びＴＩＧＩＴ＋腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞（赤色）によるＣＤ２２６発現の代表的ヒストグラム。データは２回の独立した実験；ｎ＝５の代表値である。図１４は、脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞が高度にＣＤ２２６を発現することを、更に腫瘍浸潤ＴＩＧＩＴ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞がまた高度にＣＤ２２６を発現したことを示している。データは、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６がマウス腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞上で協調的に発現され、ＣＤ８^＋Ｔ細胞上のお互いの機能を調節する場合があることを裏付けている。この知見は、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６をまた同時発現する賦活化ＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるものと類似している。

【0418】

実施例７： トランスフェクト細胞上でのＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６の共免疫沈降
ＴＩＧＩＴが細胞表面でＣＤ２２６と相互作用するかどうかを決定するために、細胞をヒトＴＩＧＩＴ及びヒトＣＤ２２６で同時トランスフェクトし、免疫沈降に供した。簡潔に述べると、１５ｃｍプレートのＣＯＳ７細胞を、ＴＩＧＩＴ－ＨＡ（５ｎｇ）又はＣＤ２２６－Ｆｌａｇ（１０ｎｇ）タグタンパク質の何れかに対するｃＤＮＡを含む発現プラスミド、あるいはコントロールプラスミド（ｐＲＫ）で同時トランスフェクトした。トランスフェクションの２３時間後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、４ｍｌの氷冷ＰＢＳ中に収集し、３００×ｇで５分間遠心分離させ、細胞ペレットを４℃で２ｍｌの溶解バッファー中に再懸濁させた。細胞を１５分毎にボルテックスして５０分かけて溶解し、ついで４Ｃで１５分間、１０，００×ｇで遠心分離した。得られた上清を、４℃で３０分回転させることによって１６０μｌのＣＬ６Ｂセファローススラリーを用いて事前に清澄化し、３０００×ｇで２分間遠心分離した。上清を二つのチューブに等しく分け、標準的な手順を使用して抗ＨＡ又は抗ｆｌａｇの何れかで免疫沈降させた。免疫沈降したタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、ウェスタンブロットした。ウェスタンブロットは抗Ｆｌａｇ－ＨＲＰ又は抗ＨＡ－ＨＲＰの何れかでプローブした。

【0419】

図１５に示されるように、抗ＴＩＧＩＴはＣＤ２２６をプルダウンし、抗ＣＤ２２６はＴＩＧＩＴをプルダウンし、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が細胞表面で物理的接触状態にあることを裏付けている。

【0420】

実施例８： ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６は一次ＣＤ８＋Ｔ細胞中で相互作用する
トランスフェクト細胞中でＣＤ２２６とＴＩＧＩＴが相互作用する能力を証明することに加えて、一次ＣＤ８＋Ｔ細胞中でのＣＤ２２６とＴＩＧＩＴの相互作用をまた評価した。簡潔に述べると、ＭＡＣＳ富化脾臓Ｃ５７ＢＬ６／ＪＣＤ８＋Ｔ細胞を、プレートに結合させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体及び組換えＩＬ－２で４８時間刺激し、溶解した。細胞可溶化物を抗ＴＩＧＩＴで免疫沈降させ、抗ＣＤ２２６でプローブした。図１６は、共免疫沈降において双方が検出可能であるように活性化された一次ＣＤ８＋細胞においてＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が相互作用することを例証している。このデータは、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴがまた一次細胞上で互いに相互作用することを裏付けている。

【0421】

実施例９： ＴＲ－ＦＲＥＴ（時間分解蛍光共鳴エネルギー移動）を使用するトランスフェクト細胞上でのＴＩＧＩＴ／ＣＤ２２６相互作用
ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６の間に何らかの分子相互作用が存在するかどうかを評価するために、ＴＲ－ＦＲＥＴ法を用いた。ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）は、近接した供与体受容体の二つのフルオロフォア間のエネルギー移動に基づく。生体分子間の分子相互作用は、各パートナーを蛍光標識とカップリングさせ、エネルギー移動のレベルを検出することによって評価することができる。二つの実体がが互いに十分に近接すると、エネルギー源による供与体の励起が受容体に向けてのエネルギー移動を惹起し、ついでこれが、与えられた波長で特異的蛍光を発する。これらのスペクトル特性のため、供与体－受容体複合体は、未結合パートナーからの物理的分離を必要とすることなく検出することができる。ＦＲＥＴの時間分解（ＴＲ）測定の組合せは、シグナルからバックグラウンド蛍光を消すことを可能にする。これは、典型的には、システム励起と蛍光測定の間に時間遅延を導入し、シグナルからあらゆる非特異的な短命の発光を消すことによってなされる。

【0422】

ＴＲ－ＦＲＥＴを使用し、ここで我々は、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が同じ細胞で発現されるとＦＲＥＴを誘導し、これら二分子の分子相互作用を示すことを証明する。簡潔に述べると、ＣＯＳ－７細胞を、リポフェクタミン２０００（Life Technologies）を使用してＳＮＡＰタグ（ＳＴ）ＣＤ２２６及びＨＡ－ＴＩＧＩＴでトランスフェクトし、１ウェル当たり１０００００細胞で白色の９６ウェルプレート（Costar）に播種した。２４時間後、細胞を、３７℃、５％ＣＯ２中で１時間、ＤＭＥＭ １０％ ＦＣＳ中に希釈した１００ｎＭのドナー共役ベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ｌｕｍｉ－４Ｔｂ（Cisbio）及び１μＭのドナー共役ベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ａ６４７（New England Biolabs）で標識した。ＰＢＳで３回洗浄後、Ｓａｆｉｒｅ２プレートリーダー（Tecan）を使用して、３４３ｎｍでのレーザ励起後の６０μｓの遅延後に４００μｓの間６６５ｎｍでＦＲＥＴシグナルを記録した。抗ＴＩＧＩＴ抗体を試験したとき、ＦＲＥＴシグナルもまた１５分のインキュベーション後に記録した。ついで、ＦＲＥＴ比を、６２０ｎｍでのドナー発光により割ったＦＲＥＴ強度として計算した。ＦＲＥＴ強度は次の通りである：（ＳＮＡＰ－ドナー及びアクセプターで標識された細胞からの６６５ｎｍでのシグナ）－（ＳＮＡＰ－ドナーだけで標識されたトランスフェクト細胞の同じバッチからの６６５ｎｍでのシグナル）。

【0423】

図１７に示されるように、ＴＩＧＩＴはＣＤ２２６ホモ二量体を直接破壊し、その解離を生じさせることができた。図１７Ａに示されるように、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６ホモ二量体の解離は、一定量のＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６と増加濃度のＨＡ－ＴＩＧＩＴを発現するＣＯＳ－７細胞で測定されたＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６間のＦＲＥＴ比の減少によって例証されるＨＡ－ＴＩＧＩＴの濃度増加で観察された。しかしながら、図１７Ｂに示されるように、抗ＴＩＧＩＴ抗体が細胞培養物に添加されると、これが、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が結合する能力をブロックした。これは、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６ホモ二量体のＦＲＥＴ強度減少の欠如によって例証される。これは、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴが複合体として結合しているが、抗ＴＩＧＩＴ抗体はこれらの相互作用を破壊することができることを裏付けている（図１７Ａ及び１７Ｂ）。

【0424】

ＴＲ－ＦＲＥＴを使用して、ＣＤ２２６と結合するＴＩＧＩＴの能力をまた証明し、図１７Ｃ及び１７Ｄに示した。簡潔に述べると、１μＭのドナーがコンジュゲートされたベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ａ６４７（上記参照）を使用するＳＮＡＰ－タグ標識後、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡ中に希釈した２ｎＭの抗ＨＡドナーコンジュゲートＬｕｍｉ－４Ｔｂ（Cisbio）と共に室温で２時間、インキュベートした。ついで、ＦＲＥＴシグナルを記録した。その場合、ＦＲＥＴ強度は次の通りである：（ＳＮＡＰ－アクセプター及び抗ＨＡドナーで標識された細胞からの６６５ｎｍでのシグナ）－（ＳＮＡＰ－アクセプター及び抗ＨＡドナーで標識された偽トランスフェクト細胞からの６６５ｎｍでのシグナル）。

【0425】

図１７Ｃに示されるように、一定量のＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６と増加濃度のＨＡ－ＴＩＧＩＴを発現するＣＯＳ－７細胞で測定されるＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴとの間の増加するＦＲＥＴ強度によって示されるように、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６のＨＡ－ＴＩＧＩＴとの結合が観察された。抗ＴＩＧＩＴ抗体が添加されると、ＦＲＥＴ強度は、図１７Ｄに示されるように、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴとの間で減少しており、これは、ＴＩＧＩＴのＣＤ２２６との相互作用が抗ＴＩＧＩＴ阻止抗体によってブロックされうることを示唆している。

【0426】

ＦＲＥＴ実験におけるＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６とＨＡ－ＴＩＧＩＴの細胞表面での発現を確認するために、示されたタグを付けられたコンストラクトを発現するインタクトＣＯＳ－７細胞で抗Ｆｌａｇ及び抗ＨＡ ＥＬＩＳＡを実施した。簡潔に述べると、ＣＯＳ７細胞を４％のパラホルムアルデヒドで固定し、２回洗浄し、リン酸緩衝生理食塩水＋１％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）中でブロックした。ついで、細胞を、何れも西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートさせた抗ＨＡモノクローナル抗体（クローン３Ｆ１０， Roche applied science）又は抗Ｆｌａｇ－Ｍ２モノクローナル抗体（Sigma）と共にインキュベートした。洗浄後、細胞をＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ ＥＬＩＳＡ基質（Pierce）と共にインキュベートし、Ｓａｆｉｒｅ２プレートリーダー（Tecan）で化学発光を検出した。特異的シグナルを、偽トランスフェクト細胞で記録したシグナルを減算することによって計算した。図１８に示されるように、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴの双方による細胞表面発現がＥＬＩＳＡアッセイで確認された。

【0427】

ＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６相互作用がＰＶＲ結合によって駆動されないことを確認するために、Stengel等, (2012) PNAS 109(14):5399-5904に記載されているようにして、Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６及びＨＡ－ＴＩＧＩＴ（ＷＴ）又はＨＡ－ＴＩＧＩＴ Ｑ５６Ｒを作製し、記載されているようにしてＦＲＥＴ比を決定した。図２４に示されるように、ＷＴ ＴＩＧＩＴとＱ５６Ｒ ＴＩＧＩＴは同じ効力でＣＤ２２６に結合する。

【0428】

このデータは、ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴが複合体として結合するばかりでなく、抗ＴＩＧＩＴ抗体がこれらの相互作用を破壊しうることと、ＴＩＧＩＴ：ＣＤ２２６相互作用がＰＶＲ結合によっては駆動されないことを証明している。該データは、Ｔ細胞のＣＤ２２６媒介性活性化の制限におけるＴＩＧＩＴの役割と、ＣＤ２２６活性との干渉が、ＴＩＧＩＴがＴ細胞応答及び活性を阻害する重要な作用機序でありうることを裏付けている。

【0429】

実施例１０： ＣＤ２２６遮断がインビボでのＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１遮断のエフェクターを逆転させる
ＣＤ２２６とＴＩＧＩＴの相互作用の生理的な関連性を試験するために、マウスをクローン１３ＬＣＭＶで慢性的に感染させ、ついで抗ＣＤ２２６阻止抗体の不在下又は存在下で抗ＴＩＧＩＴ＋抗ＰＤ－Ｌ１で処置した。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ６／ＪマウスからＣＤ４^＋Ｔ細胞を手短に枯渇させ、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させた。慢性感染では、マウスを２×１０^６ＰＦＵのクローン１３株ＬＣＭＶで静脈内感染させ、感染の３日前と感染の４日後にそれぞれ５００ｕｇ及び２５０ｕｇの枯渇抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）で処置した。示されている場合、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させられたマウスは、感染後２８日から４２日まで毎週３回、２００ｕｇのアイソタイプコントロール抗体、５００ｕｇの抗ＣＤ２２６抗体、２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体＋５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体、又は５００ｕｇの抗ＣＤ２２６抗体＋２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体＋５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体の腹腔内注射を受けた。Ｔ細胞はこの慢性ウイルス感染モデルにおいてこの時点で大きく消耗しているので、処置は感染後２８日目に開始した（Wherry等, Molecular Signature of CD8+ T cell Exhaustion During Chronic Viral Infection, Immunity. 2007 Oct;27(4):670-84）。脾細胞及び肝臓ウイルス価を感染後４２日目に分析した。

【0430】

これらのマウスにおいて、抗ＣＤ２２６単独の処置では、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の出現頻度、活性化、又はサイトカイン能力に対して限られた効果しかなかった（図１９Ａ－１９Ｃ）。しかしながら、抗ＣＤ２２６処置は、抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴで処置されたマウスに見られるＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化及びＩＦＮγ産生の増加を強力に逆転させた（それぞれ、５９％及び５８％の減少，Ｐ＜０．００１。図１９Ｂ－１９Ｄ）。

【0431】

これらの結果と一致して、ＬＣＭＶウイルス量は、抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴだけで処置されたマウスにおけるよりも抗ＣＤ２２６＋抗ＰＤ－Ｌ１＋抗ＴＩＧＩＴで処置されたマウスにおいて有意に高かった（２７２％の増加，Ｐ＜０．００１，図１９Ｄ）。

【0432】

このデータは、ＴＩＧＩＴが慢性的Ｔ細胞応答を制限する主要な機序がＣＤ２２６媒介性同時刺激の障害であることを示唆している。該データは、ＣＤ２２６と相互作用し、それを破壊し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞における重要な同時刺激性シグナルの減少又は消失を生じる点におけるＴＩＧＩＴのこれまで知られていない役割を特定する。該データは、ＣＤ２２６媒介性Ｔ細胞同時刺激の障害が、がん又は慢性ウイルス感染中におけるようにＴＩＧＩＴが慢性Ｔ細胞応答を制限する主要な機序でありうることを証明している。該データはまたＣＤ２２６と相互作用するＴＩＧＩＴの能力及び／又はＣＤ２２６二量体化を破壊するＴＩＧＩＴの能力を妨害することによって、慢性的に刺激され又は消耗したＣＤ８^＋又はＣＤ４^＋Ｔ細胞のエフェクター機能を回復させることを意図した抗ＴＩＧＩＴ抗体の本質的なパラメーターを定める。

【0433】

材料と方法
マウス。 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃマウスをジャクソン研究所及びチャールスリバー研究所から購入した。ＣＤ４^ｃｒｅマウス及びＴＩＧＩＴ^{ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ}マウスは、標準的な技法を用いてＣ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドで産生し、交配させた。ＴＩＧＩＴ発現はＴＩＧＩＴ^{ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ}ＣＤ４^ｃｒｅマウスにおいてＴ細胞から９６％の効率で消えた。

【0434】

フローサイトメトリー。 脾臓、リンパ節、及び腫瘍の単個細胞浮遊液を、穏やかな機械的破砕を用いて調製した。表面染色をＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＰＤ－１（eBiosciences）及びＣＤ２２６（Biolegend）に対する市販の抗体で実施した。ＴＩＧＩＴ抗体を、以前に記載されたようにして（Yu, X.等 The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)）ジェネンテックで作製し、製造者（Molecular Probes）の指示書に従ってＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７にコンジュゲートさせた。

【0435】

細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）では、３μｇ／ｍＬのブレフェルジンＡ（eBiosciences）の存在下で２０ｎｇ／ｍＬのホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ， Sigma）及び１μＭのイオノマイシン（Sigma）を用いて、細胞を４時間、刺激した。刺激後、細胞を、記載されたようにして表面マーカーについて染色し、固定し、製造者の指示書に従ってｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのＦｏｘＰ３固定バッファーを用いて透過処理した。固定した細胞をＩＦＮγ及びＴＮＦαに対する抗体（eBiosciences）を用いて染色した。

【0436】

阻止抗体。 阻止抗ＴＩＧＩＴ ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（マウス及びヒトＴＩＧＩＴの双方に対して反応性であるクローン１０Ａ７）を先に記載されたようにして産生し、マウスＩｇＧ２ａ骨格上へクローニングした。阻止抗ＰＤ－Ｌ１ ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（クローン２５Ａ１）は、Ｐｄｌ１^－／－マウスをＰＤ－１－Ｆｃ融合タンパク質で免疫化することによって産生し、マウスＩｇＧ２ａ骨格上にクローニングした。クローン２５Ａ１を、Ｆｃγ受容体への結合を消失させる先に記載された変異を用いて修飾した。阻止抗ＣＤ２２６ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（クローン３７Ｆ６）を、組換えマウスＣＤ２２６でのハムスターの免疫化によって産生させ、マウスＩｇＧ２ａ骨格上にクローニングした。これらの抗体をまたここに記載の他の実施例に記載された試験において使用した。

【0437】

ウイルス感染。 急性感染では、マウスを２×１０^６プラーク形成単位（ＰＦＵ）のアームストロング株ＬＣＭＶで静脈内感染させた。慢性感染では、マウスを２×１０^６ＰＦＵのクローン１３株ＬＣＭＶで静脈内感染させ、それぞれ感染の３日前と４日後に５００ｕｇ及び２５０ｕｇの枯渇抗ＣＤ４抗体（クローンＧＫ１．５）で処置した。示されている場合、クローン１３株ＬＣＭＶで感染させられたマウスは、感染後２８日から４２日まで毎週３回、２００ｕｇのアイソタイプコントロール抗体、２００ｕｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は５００ｕｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体の腹腔内注射を受けた。

【0438】

ウイルス価アッセイ。 ＭＣ５７細胞単層を、１％のメチルセルロースをオーバーレイさせて培養し、ＬＣＭＶ感染マウス由来の段階希釈された肝臓ホモジネートを用いて感染させた。感染の７２時間後に、細胞を４％のパラホルムアルデヒドで固定し、０．５％のトリトンＸで透過処理した。ウイルスプラークを抗ＬＣＭＶ ＮＰ（クローンＶＬ－４）及びＨＲＰコンジュゲート抗ラットＩｇＧで染色し、Ｏ－フェニレンジアミン（ＯＰＤ, Sigma）で可視化させた。

【0439】

バイオインフォマティックス。 乳がん遺伝子発現データマイクロアレイデータを Cancer Gene Atlas Network（Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012))から得た。マイクロアレイデータの処理及び正規化を、Ｒプログラミング言語（http://r-project.org）及びＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒのｌｉｍｍａパッケージ（http://bioconductor.org）を使用して実施した。各チャンネルからのマイクロアレイ強度値を、以前に記載されたようにして^２２、正規＋指数背景修正法を使用して前処理した。ついで、修正された強度値を、以前に記載されたようにして^２３、分位数正規化法を使用して正規化した。正規化された対数比データを、各アレイに対して試験チャンネルから参照チャンネルを減算することによって計算した。データを、以前に記載されたような^２４、非特異的フィルターを使用し、既知遺伝子にマップしないプローブを除去し、データセットを１遺伝子当たり１プローブまで減少させて更にフィルター処理した。差次的遺伝子発現では、以前に記載されたようにして（Smyth, G.K. Linear models and empirical bayes methods for assessing differential expression in microarray experiments. Statistical applications in genetics and molecular biology 3, Article3 (2004)）、モデレート（moderated）ｔ－統計をｌｉｍｍａパッケージを用いて計算した。相関を評価するために、ピアソン相関係数を使用した。

【0440】

ＣＴ２６結腸がん。 ＢＡＬＢ／ｃの右の片側胸郭側腹部中に、マトリゲル（BD Biosciences）に懸濁させた１×１０^５のＣＴ２６結腸がん細胞を皮下的に接種した。２週間後、およそ２００ｍｍ^３の腫瘍を持つマウスを、週３回３週間の間、腹腔内注射によって３５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプコントロール抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体が投与される処置群に無作為に補充した。腫瘍をノギスによって週２回測定した。その腫瘍が潰瘍性／壊死性になったか又は２０００ｍｍ^３より大きくなった動物を安楽死させた。

【0441】

ＥＭＴ６乳がん。 ＢＡＬＢ／ｃマウスの第４乳腺脂肪体中に、マトリゲル（BD Biosciences）中１×１０^５の同系ＥＭＴ６乳がん細胞を皮下的に接種した。２週間後、１５０－２００ｍｍ^３の腫瘍を持つマウスを、週３回３週間の間、腹腔内注射によって３５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプコントロール抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体が投与される処置群に無作為に補充した。腫瘍をノギスによって週２回測定し、腫瘍体積を、修正楕円体計算式１／２×（長さ×幅^２）を使用して計算した。その腫瘍が３２ｍｍ^３又はそれ以下に縮んだ動物が完全寛解（ＣＲ）であると考えられた。その腫瘍が２０００ｍｍ^３より大きくなった動物は進行したと考え、安楽死させた。その腫瘍が進行又は完全寛解前に潰瘍性になった動物は安楽死させ、研究から除外した。

【0442】

ＣＴ２６再曝露。 示されている場合、上述のようにしてＣＴ２６結腸がん細胞が先に接種されたＢＡＬＢ／ｃマウスの左の（先に接種されていない）片側胸郭側腹部に、ＣＴ２６細胞を再接種した。これらのマウスの第４乳腺脂肪体中に、マトリゲル中の１×１０^５のＥＭＴ６乳がん細胞をまた接種した。腫瘍を１週間に２回測定した。その腫瘍が潰瘍性／壊死性になったか又はその全腫瘍量が２０００ｍｍ^３を越えた動物を安楽死させた。

【0443】

統計。 統計検定を、独立（特定されている場合はペアード）両側ステューデントｔ検定を使用して実施した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。

【0444】

動物実験監視。 全ての動物実験は、ジェネンテックの企業内動物ケア及び使用委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）によって承認された。

【0445】

実施例１１： ＴＩＧＩＴ発現はヒトがんにおいて上昇し、ＣＤ８及びＰＤ－１の発現とＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤に相関する
材料と方法
バイオインフォマティックス。 ＲＮＡ－配列決定データの処理と解析を、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒプロジェクトからの幾つかのパッケージ（http://www.bioconductor.org）と共にＲプログラミング言語（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）を使用して実施した。がん及び一致した正常な試料のＲＮＡ－配列決定データは、５種の異なった徴候に対してＴＣＧＡから得た：乳がん（Network, C.G.A. Comprehensive molecular portraits of human breast tumours. Nature 490, 61-70 (2012)）、結腸腺がん（Network, T.C.G.A. Comprehensive molecular characterization of human colon and rectal cancer. Nature 487, 330-337 (2012)）、腎明細胞がん（Network, C.G.A. Comprehensive molecular characterization of clear cell renal cell carcinoma. Nature 499, 43-49 (2013)）、 肺扁平上皮がん（Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012)）、及び子宮内膜がん（Network, T.C.G.A. Integrated genomic characterization of endometrial carcinoma. Nature 497, 67-73 (2012)）。

【0446】

生のＲＮＡ－ｓｅｑ読み取りデータを、ＨＴＳｅｑＧｅｎｉｅ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを使用して処理した。簡潔に述べると、読み取りデータを、ＧＳＮＡＰアルゴリズム（Wu, T.D.及びNacu, S. Fast and SNP-tolerant detection of complex variants and splicing in short reads. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 873-881 (2010)）を使用して、ヒトゲノム（ＮＣＢＩビルド３７）にアラインさせた。エキソン内に入った独特にアラインされた読み取り対を計数して、個々の遺伝子に対する遺伝子発現レベルの推定値を得た。我々はｅｄｇｅＲパッケージ（Robinson, M.D., McCarthy, D.J. & Smyth, G.K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 139-140 (2010)）からのライブラリーサイズ推定値を使用し、その各シークエンシング深さに対して異なった試料にわたって正規化した。

【0447】

Ｔ細胞特異的遺伝子サインを導き出すために、我々は、ＩＲＩＳプロジェクトによって同定されたＴ細胞遺伝子を手作業で管理し、細胞周期過程に関連する遺伝子、他の組織において高度に発現される遺伝子、及び既知の同時活性化及び同時阻害性受容体を除去した。これにより、Ｔ細胞に特異的な１５－遺伝子サインを得た。肺扁平上皮がんデータにおけるＴ細胞遺伝子発現サインを計算するために、我々は、ｌｉｍｍａ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージからのｖｏｏｍ関数を使用して生のカウントデータで分散安定化変換を最初に実施した。ついで、我々は、１５－遺伝子Ｔ細胞サインからの中心にしスケール化した分散安定化データの最初の固有ベクトルを計算した。このアプローチ法は、相対的なＴ細胞存在量の強い試料当たりの推定値をもたらす。ついで、Ｔ細胞サインスコアを含む線形モデルを、ｌｉｍｍａパッケージを再び使用して、各遺伝子に対して適合させた。ついで、我々は、我々の線形モデルにおけるＴ細胞サインとのその相関によって遺伝子をランク付けし、Ｔ細胞サインとポジティブに相関した遺伝子のみを選択した。Ｔ細胞随伴遺伝子をヒートマップとして可視化するために、我々は分散安定化データを中心にし、単位分散にスケール化し、異なった平均の発現レベルを持つ遺伝子の比較を可能にした。

【0448】

ＴＩＧＩＴと他の遺伝子の発現間の相関を判定するために、我々は、ｅｄｇｅＲ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージからの方法（Robinson, M.D., McCarthy, D.J. & Smyth, G.K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 139-140 (2010)）を使用して、ライブラリーサイズの差を説明するためにＲＮＡ－シークエンシングカウントデータを正規化した。ついで、我々は、正規化されたカウントについてスピアマンの順位相関係数を計算した。我々は、ρ＞０．７５が強い相関を示し、ρ≦０．７５でρ＞０．５が中程度の相関を示し、ρ≦０．５でρ＞０．２５が弱い相関を示すと考える。

【0449】

各表示にわたるＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ε比の計算に対しては、我々は各ＲＮＡ－シークエンシングデータセットに対して分散安定化データを最初に計算した。ついで、我々は、ＴＩＧＩＴとＣＤ３εに対する分散安定化データのｌｏｇ２比を計算した。腫瘍及び正常試料間の差を計算するために、我々は、標準的なＲ関数を使用して標準的な線形モデル解析を実施した。我々は腫瘍と正常との間の有意差の証拠として＜０．０１のｐ値を受け入れた。

【0450】

腫瘍浸潤Ｔ細胞に関連する遺伝子を同定するために、我々は、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）肺扁平上皮がん（ＬＵＳＣ）コレクションからの遺伝子発現データを調べるために遺伝子サインベースのアプローチ法を使用した（Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012))。免疫応答インシリコプロジェクト（Abbas, A.R.等 Immune response in silico (IRIS): immune-specific genes identified from a compendium of microarray expression data. Genes and immunity 6, 319-331 (2005)）によって定義された免疫細胞特異的遺伝子セットと、上述の方法を使用して、我々は高度に特異的な１５遺伝子サインを開発した。Ｔ細胞サインに最も高度に関連している遺伝子を調べて、我々は、腫瘍におけるＴ細胞機能不全にこれまで関連していた幾つかの同時阻害性受容体、特にＰＤ－１を同定した（図２１）。ＬＵＳＣにおいて、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ３εの発現は、あるスペアマンの順位相関係数（０．８２のρ（図２０Ａ））で、高度に相関していた。確かに、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ３εの発現はまた、結腸腺がん（ＣＯＡＤ）、子宮体部類内膜がん（ＵＣＥＣ）、乳がん（ＢＲＣＡ）、及び腎臓の腎臓明細胞がん（ＫＩＲＣ）を含む多くの更なるＴＣＧＡ腫瘍遺伝子発現データセットにおいて高度に相関しており、ρは０．８３から０．９４の範囲であった（図２０Ｂ－２０Ｅ）。更に、ＴＩＧＩＴの発現は、多くの腫瘍試料においてＣＤ３εの発現に対して上昇しており、匹敵する正常組織と比較してＬＵＳＣ、ＣＯＡＣ、ＵＣＥＣ、及びＢＲＣＡ腫瘍試料においてＴＩＧＩＴ／ＣＤ３ε比は増加した（１１６％－４１９％の増加，図２０Ａ－２０Ｄ）。ＫＩＲＣ試料におけるＣＤ３εに対するＴＩＧＩＴの発現比は、ＴＩＧＩＴとＣＤ３ε双方の発現が正常な組織試料においてよりもＫＩＲＣ試料において更に高かったけれども、変化しなかった（図２０Ｅ）。これらのデータは、ＴＩＧＩＴ発現が広範な固形腫瘍において腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）によってアップレギュレートされたことを示している。

【0451】

ＴＩＧＩＴは、ＣＤ４＋Ｔ細胞プライミングの阻害剤として過去に記載されており、ＣＤ８＋Ｔ細胞における既知の機能はなかった。しかしながら、ＬＵＳＣ試料におけるＴＩＧＩＴ発現はＣＤ８Ａと高度に相関しており、ＣＤ４とはほんの弱く相関している（それぞれ、ρ＝０．７７及び０．４８，図２０Ｆ）。ＴＩＧＩＴの発現はまたその相補的同時刺激性受容体ＣＤ２２６の発現、並びに腫瘍における及び他の慢性免疫応答中におけるＴ細胞抑制の重要なメディエーターのＰＤ－１の発現とまた相関していた（それぞれ、ρ＝０．６４及び０．８２，図２０Ｇ－２０Ｈ）。これらの遺伝子の幾つかの非リンパ球細胞源が腫瘍中に存在するが、これらのデータは、腫瘍浸潤Ｔ細胞、特に「消耗した」ＣＤ８^＋Ｔ細胞が高レベルのＴＩＧＩＴを発現させたことを強く示唆している。

【0452】

実施例１２： ＴＩＧＩＴとＰＤ－１はヒト及びマウス腫瘍浸潤リンパ球によって協調的に発現される
材料と方法
ヒト腫瘍及びＰＢＭＣ試料。 適合した全血及び新鮮な手術で摘出された腫瘍組織はＣｏｎｖｅｒｓａｎｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ又はＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｂｉｏから得た。全ての検体は同意書と共に得られ、Ｈａｒｔｆｏｒｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）（ＮＳＣＬＣ患者１，図２２に示す）又はＷｅｓｔｅｒｎ ＩＲＢ（ＮＳＣＬＣ患者２及びＣＲＣ患者１，図２３及び図３７に示す）によって承認されたプロトコルを使用して集めた。正常な成人の全血は健常者から得た。ＰＢＭＣはＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって全血から精製した。腫瘍組織は小片に切断し、コラゲナーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼ（Roche）と共にインキュベートし、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Miltenyi）を使用して解離させた。

【0453】

フローサイトメトリー。 マウス脾臓、リンパ節、及び腫瘍の単個細胞浮遊液を、穏やかな機械的破砕で調製した。表面染色を、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＰＤ－１（eBiosciences）及びＣＤ２２６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する市販の抗体を用いて実施した。ＴＩＧＩＴ抗体をジェネンテックで産生させ、製造者の指示書（Molecular Probes）に従ってＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７にコンジュゲートさせた。

【0454】

細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）では、細胞を、３μｇ／ｍＬのブレフェルジンＡ（eBiosciences）の存在下、２０ｎｇ／ｍＬのホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ, Sigma）及び１μＭのイオノマイシン（Sigma）を用いて４時間刺激した。刺激後、記載のようにして表面マーカーのために細胞を染色し、固定させ、製造者の指示書に従ってｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＦｏｘＰ３固定化バッファーを用いて透過処理した。固定した細胞を、ＩＦＮγ及びＴＮＦαに対する抗体（eBiosciences）を用いて染色した。

【0455】

ヒト腫瘍及びＰＢＭＣ試料を、上記のようにして調製した。表面染色を、生細胞染料（Molecular Probes）、ＣＤ４５（eBiosciences）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＰＤ－１（BD Biosciences）に対する市販の抗体、及び上述のようにして調製された抗ＴＩＧＩＴ抗体を用いて実施した。

【0456】

全ての試料はＬＳＲ－ＩＩ又はＬＳＲ－Ｆｏｒｔｅｓｓａ機器（BD Biosciences）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Treestar）を使用して分析した。

【0457】

腫瘍浸潤Ｔ細胞によるＴＩＧＩＴのアップレギュレーションを確認するために、我々は、ヒト非小細胞肺がん腫瘍浸潤Ｔ細胞、適合した末梢Ｔ細胞、及び正常なドナー末梢Ｔ細胞上でのＴＩＧＩＴタンパク質の発現を評価した。細胞表面ＴＩＧＩＴはＮＳＣＬＣ浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞のサブセットによって発現された（それぞれ、５１％及び３９％ｙ，図２２Ａ－２２Ｂ）。図３６は、細胞表面ＴＩＧＩＴが多くの割合のＮＳＣＬＣ浸潤ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞によって発現されたことを更に証明する（それぞれ、５８％及び２８％ＴＩＧＩＴ^＋，図３６Ａ－３６Ｂ）。興味深いことに、ＮＳＣＬＣ腫瘍ドナー由来の末梢ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞はまた健康なドナー由来の細胞よりも高レベルのＴＩＧＩＴを発現した（図２２Ａ－２２Ｂ及び図３６Ａ－３６Ｂ）。同様の結果が、適合ＮＳＣＬＣ及びＰＢＭＣ試料の第二セットと適合結腸直腸がん（ＣＲＣ）及びＰＢＭＣ試料のセットで得られた（図２３及び図３７）。高レベルのＴＩＧＩＴを発現するほぼ全ての腫瘍浸潤Ｔ細胞は、図１に記載されたＴＩＧＩＴとＰＤ－１の発現間の相関と一致してＰＤ－１を同時発現した（図２２Ｃ）。

【0458】

ヒトでの知見を前臨床がんモデルに拡張するために、我々は、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウス及びＣ５７ＢＬ６／ＪマウスそれぞれにおいてＴ細胞浸潤皮下ＣＴ２６及びＭＣ３８結腸直腸腫瘍によるＴＩＧＩＴ発現を特徴付けした。接種の２週間後、ＣＴ２６及びＭＣ３８腫瘍が樹立され、１５０－２００ｍｍ^３のサイズになったとき、ＴＩＧＩＴが、およそ５０％の腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞及び２５％の腫瘍浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞によって発現され、インビトロで刺激された一次ＣＤ８^＋Ｔ細胞のものと同様のレベルであった（図２２Ｄ－２２Ｅ及び図２６）。ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋双方のマウスＴＩＬにおいて、ＣＤ２２６は構成的に発現され、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１発現はまた密接に相関していた（図２２Ｆ－２２Ｇ）。

【0459】

これらの結果は、ＴＩＧＩＴが腫瘍浸潤Ｔ細胞によって高度に発現されたこと、及びＴＩＧＩＴの発現が他の同時阻害性受容体、中でも注目すべきはＰＤ－１の発現と並行して起こったこと裏付ける。

【0460】

実施例１３： ＣＤ８＋Ｔ細胞応答のＴＩＧＩＴ抑制はＣＤ２２６に依存性である
ＰＤ－１又はＣＴＬＡ－４と異なり、シスのＴＩＧＩＴによって開始されるＴ細胞阻害性シグナル伝達カスケードの直接的な生化学的証拠はない。しかしながら、同時阻害性受容体は、相補的同時刺激性受容体の活性を制限することにより、例えばＣＴＬＡ－４によるＣＤ２８シグナル伝達の抑制で、また機能しうる。ＴＩＧＩＴを腫瘍浸潤及び抗ウイルスＣＤ８^＋Ｔ細胞の負の制御因子として樹立したので、我々は、ＴＩＧＩＴが、末梢及び腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞によって高度に発現されるその相補的同時刺激性受容体ＣＤ２２６の抑制を介して間接的にＴ細胞消耗を誘導したのかどうかを問うた（図２７）。

【0461】

１５０－２００ｍｍ^３のＣＴ２６腫瘍を持つ野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスを、阻止抗ＣＤ２２６抗体の存在又は不存在下、抗ＰＤ－Ｌ１及び抗ＴＩＧＩＴ抗体の組合せ、又は抗ＣＤ２２６単独を用いて処置した。抗ＣＤ２２６単独での処置は、コントロールマウスに対して、僅かに腫瘍増殖を加速させ、２日の減少した生存期間中央値となった（抗ＣＤ２２６単独対コントロール，Ｐ＝０．０１１８，図２８Ａ－２８Ｂ）。際だったことに、抗ＴＩＧＩＴ及び抗ＰＤ－Ｌ１共遮断で処置したマウスに対する抗ＣＤ２２６阻止抗体の添加は、腫瘍増殖を大きく亢進させ、腫瘍退縮及び生存に対するＴＩＧＩＴ／ＰＤ－Ｌ１共遮断の効果を完全に逆転させた（図２８Ａ－２８Ｂ）。同様の効果が、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＰＤ－Ｌ１、及び／又は抗ＣＤ２２６で処置された慢性的に感染させられたマウスにおいてＬＣＭＶ価で観察された（図１９Ｄ）。これらのデータは、ＣＤ２２６が抗腫瘍及び他の慢性Ｔ細胞応答に寄与し、ＴＩＧＩＴが少なくとも部分的にＣＤ２２６の抑制によりこれらの応答を抑制したことを示している。

【0462】

ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６活性が抗腫瘍Ｔ細胞応答に如何に影響したかをより十分に理解するために、我々は、ＣＤ２２６が単独で及びＴＩＧＩＴと協働して、如何にＴ細胞活性化、腫瘍浸潤、及びエフェクター機能に影響を及ぼしたかを試験した。我々は、７日間、上述のように処置されたＣＴ２６腫瘍を持つマウス由来の腫瘍及び腫瘍流入領域リンパ節を分析した。前のように、ＰＤ－Ｌ１とＴＩＧＩＴの共遮断は、腫瘍浸潤及び腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８^＋Ｔ細胞双方のＩＦＮγ産生を亢進した（それぞれ、１３０％及び９９％の増加，Ｐ＜０．００１，図２８Ｃ－２８Ｄ）。ＣＤ２２６単独の遮断は、腫瘍浸潤及び腫瘍流入領域リンパ節常在ＣＤ８^＋Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生に効果はなく、ＣＤ２２６同時刺激の効果は消耗したＴ細胞に既に限られていたことを示唆している（図２８Ｃ－２８Ｅ）。しかしながら、ＣＤ２２６遮断は、抗ＴＩＧＩＴと抗ＰＤ－Ｌ１の組合せで処置されたマウスにおいて腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞の発生頻度とエフェクター機能の双方を損なった（５７％の減少，Ｐ＝０．００１５，図２８Ｄ）。抗ＣＤ２２６での処置は、腫瘍流入領域リンパ節に存在するＣＤ８^＋Ｔ細胞に対してそのような効果を有していなかったが、抗ＰＤ－Ｌ１単独ではＣＤ８^＋Ｔ細胞エフェクター機能を亢進しており、ＣＤ２２６の不存在下においてさえＣＤ８^＋Ｔ細胞エフェクター機能を亢進させるのに十分であったことを示唆している。ＣＤ２２６遮断はまた腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞の発生頻度減少を生じさせた（５３％の減少，Ｐ＝０．００４４，図２８Ｅ－２８Ｆ）。併せると、これらのデータは、腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞の蓄積とエフェクター機能の双方を支援するように機能し、ＴＩＧＩＴが後者に対抗することを示唆している。

【0463】

実施例１４： ＴＩＧＩＴはＣＤ２２６ホモ二量体化を直接妨害することによりＣＤ２２６機能を損なう
ＴＩＧＩＴがシスでＣＤ２２６活性をアンタゴナイズしうるかどうかを試験するために、インビトロでのＣＤ２２６同時刺激に対するＴＩＧＩＴの効果を試験した。最適以下のレベルの抗ＣＤ３で刺激されたＴＩＧＩＴ欠損ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、野生型同腹仔ＣＤ８^＋Ｔ細胞よりもＰＶＲ同時刺激に対してより強く応答し、この亢進された応答はＣＤ２２６に依存性であった（４６％の増殖増加，Ｐ＝０．００６１，図２９Ａ）。これらのデータと一致して、最適以下の抗ＣＤ３及びＰＶＲで刺激された野生型ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、アイソタイプ一致コントロール抗体の存在下においてなされたよりも抗ＴＩＧＩＴ抗体の存在下でより強力に増殖し、この効果もまたＣＤ２２６に依存性であった（１０５％の増殖増加，Ｐ＝０．００１０，図２９Ｂ）。

【0464】

一次ヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞に対するＴＩＧＩＴの関連性を試験するために、我々は、健康なドナーの血液由来のＣＤ８^＋Ｔ細胞を精製し、最適以下のレベルのプレートに結合した抗ＣＤ３及び組換えヒトＰＶＲ－Ｆｃ融合タンパク質でそれらを刺激した。アイソタイプ一致コントロール抗体の存在下で、ＰＶＲ同時刺激は、Ｔ細胞刺激及び増殖を中程度に亢進させた。更に、阻止抗ＴＩＧＩＴ抗体の添加は、一次マウスＣＤ８^＋Ｔ細胞へのＴＩＧＩＴの効果と一致して、ＰＶＲ同時刺激の効果を有意に亢進させた（６９％の増殖増加，Ｐ＝０．００７１，図２９Ｃ）。これらのデータは、一次マウス及びヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞でのＣＤ２２６機能のＴＩＧＩＴ阻害に対する細胞に本来的な役割を裏付けている。

【0465】

ＴＲ－ＦＲＥＴ（時間分解蛍光共鳴エネルギー移動）を使用して、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６活性を損なわせた分子機序を決定した。最初に、我々はヒトＳＴ－ＣＤ２２６を発現させ、非透過性ドナー及びアクセプターフルオロフォアで標識した。これらの細胞は強いＦＲＥＴシグナルを生じ、ホモ二量体化するＣＤ２２６の能力を確信させる（図２９Ｄ）。細胞表面におけるＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴ相互作用をモニターするために、我々は、ＳＮＡＰ－タグ基質及び抗ＨＡ抗体でそれぞれ標識したヒトＨＡ－ＴＩＧＩＴの不存在下又は存在下でＳＴ－ＣＤ２２６を発現させた。際だったことに、増加量のＴＩＧＩＴの同時発現（ＥＬＩＳＡによりモニターされる）は、ＣＤ２２６／ＣＤ２２６ＦＲＥＴシグナルを減弱させ、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６ホモ二量体化を妨害し得たことを示している（図２９Ｅ）。確かに、アクセプターＣＤ２２６及びドナーＴＩＧＩＴはまた有意なＦＲＥＴシグナルを生じ、これら二つのタンパク質間の直接の相互作用を示している（図２９Ｆ）。この相互作用は共免疫沈降により更に確認された（図２９Ｇ）。これらのデータは、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が細胞表面で直接相互作用し、この相互作用がＣＤ２２６ホモ二量体化を損ないうることを証明している。

【0466】

ＴＩＧＩＴ－ＣＤ２２６相互作用に対するＴＩＧＩＴ抗体遮断の効果を試験するために、我々はヒトＳＴ－ＣＤ２２６及びＨＡ－ＴＩＧＩＴを、今度はヒトＴＩＧＩＴに対する阻止抗体の存在又は不存在下で、再び同時発現させた。細胞培養物に対する抗ＴＩＧＩＴの添加は、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６が結合する能力を有意に低減させた（図２９Ｈ）。これらのデータは、抗ＴＩＧＩＴ処置がＴＩＧＩＴのＣＤ２２６との相互作用を制限しうることを示唆しており、ＣＤ２２６活性の抑制が、ＴＩＧＩＴがＣＤ８^＋Ｔ細胞消耗を共生する重要な作用機序であるという考えと一致する。これはまた、ＣＤ２２６同時刺激を亢進させる抗ＴＩＧＩＴ抗体の能力と一致する。

【0467】

次に、我々は、内因性ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６が相互作用する能力を確認した（図３０）。一次ヒトＴ細胞を抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体でインビトロで刺激し、ＴＩＧＩＴ発現に基づいて選別し、休止させ、再刺激し、ＴＲ－ＦＲＥＴと適合性があるフルオロフォアにコンジュゲートさせた内因性ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６に対する抗体で標識した。ドナーコンジュゲート抗ＴＩＧＩＴ及びアクセプターコンジュゲート抗ＣＤ２２６抗体で標識されたＴＩＧＩＴ発現Ｔ細胞は、強いＦＲＥＴシグナルを生じた（図３０）。これに対して、ＴＩＧＩＴを発現しなかったか、又はドナーコンジュゲート抗ＴＩＧＩＴ及びアクセプターコンジュゲート抗ＨＶＥＭ抗体で標識されたＴ細胞では、僅かな無視できるＦＲＥＴシグナルだけが検出され（図３０）、内因性ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６間の検出された相互作用の特異性が確認された。

【0468】

これらの結果は、内因性ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６が細胞表面で直接相互作用し得、この相互作用がＣＤ２２６ホモ二量体化を損なうことを証明している。インビボでのＴ細胞応答の共刺激因子としてのＣＤ２２６の役割が与えられたので、理論によって拘束されることを望むものではないが、ＣＤ２２６の抑制は、慢性ウイルス感染及びがん中にＴＩＧＩＴがＣＤ８^＋Ｔ細胞消耗を強制する重要な作用機序でありうると思われる。

【0469】

材料と方法
トランスフェクト細胞株を用いた時間分解蛍光共鳴エネルギー移動。 ＣＨＯ細胞を、リポフェクタミン２０００（Life Technologies）を使用してＮ末端ＳＮＡＰ標識（ＳＴ）ＣＤ２２６及びＮ末端ＨＡ－ＴＩＧＩＴでトランスフェクトさせ、１ウェル当たり１０００００細胞で９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に播種した。２４時間後、細胞を標識してＳＮＡＰ－ドナー／ＳＮＡＰ－アクセプター間又はＳＮＡＰ－アクセプー／抗ＨＡドナー間の何れかのＴＲ－ＦＲＥＴを測定した。１）ＳＮＡＰ－ドナー／ＳＮＡＰ－アクセプター標識：細胞を、ＤＭＥＭ １０％ＦＣＳに希釈した１００ｎＭのドナーコンジュゲートベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ｌｕｍｉ－４Ｔｂ（Cisbio）及び１μＭのアクセプターコンジュゲートベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ａ６４７（New England Biolabs）と共に３７℃，５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。ついで、細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、ＦＲＥＴシグナルを読み取った。２）ＳＮＡＰ－アクセプター／抗ＨＡドナー：細胞を、ＤＭＥＭ １０％ＦＣＳに希釈した１μＭのアクセプターコンジュゲートベンジル－グアニンＳＮＡＰ－Ａ６４７と共に３７℃，５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。ＰＢＳでの３回の洗浄後、細胞を、ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡ中の２ｎＭの抗ＨＡ Ｌｕｍｉ－４Ｔｂ（Cisbio）と共に室温で２時間インキュベートした。ついで、ＦＲＥＴシグナルを、Ｓａｆｉｒｅ２プレートリーダー（Tecan）を使用し、３４３ｎｍでのレーザー励起後６０μｓの遅延後に４００μｓの間６６５ｎｍで記録した。抗ＴＩＧＩＴを最終１０μｇ／ｍｌで試験したとき、ＦＲＥＴシグナルをまた１５分のインキュベーション後に記録した。Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６／Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６相互作用に対しては、ＦＲＥＴ比を６２０ｎｍでのドナー発光によって割ったＦＲＥＴ強度として計算したが、これはＣＤ２２６発現に比例している。ＦＲＥＴ強度は次の通りである：（ＳＮＡＰ－ドナー及びアクセプターで標識された細胞からの６６５ｎｍでのシグナル）－（ＳＮＡＰ－ドナーのみで標識されたトランスフェクト細胞の同じバッチからの６６５ｎｍでのシグナル）。Ｆｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６／ＨＡ－ＴＩＧＩＴ相互作用に対しては、ＦＲＥＴ比は、抗Ｆｌａｇ ＥＬＩＳＡによって測定されるＦｌａｇ－ＳＴ－ＣＤ２２６発現によって割られたＦＲＥＴ強度を表す。その場合、ＦＲＥＴ強度＝（ＳＮＡＰ－アクセプター及び抗ＨＡドナーで標識された細胞からの６６５ｎｍでのシグナル）－（ＳＮＡＰ－アクセプター及び抗ＨＡドナーで標識された偽トランスフェクト細胞からの６６５ｎｍでのシグナル）。

【0470】

ヒトＴ細胞を用いた時間分解蛍光共鳴エネルギー移動。 ヒト抗ＴＩＧＩＴ（Genentechクローン１Ｆ４）、抗ＣＤ２２６（Santa Cruz Biotechnology）、及び抗ＨＶＥＭ（eBioscience）抗体にＴＲ－ＦＲＥＴ（Cisbio）に適合性のフルオロフォアで標識をコンジュゲートさせた。一次ヒトＴ細胞を血液からＭＡＣＳ富化させ、プレートに結合させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で７２時間インビトロで刺激した。ついで、ＴＩＧＩＴ発現及び非発現Ｔ細胞（全てＣＤ２２６を発現）を選別し、７２時間刺激なしで休止させ、４８時間、再刺激した。ついで、各集団をＴｒｉｓ－ＫＲＥＢＳバッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４，１１８ｍＭ ＮａＣｌ，５．６ｍＭ グルコース，１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４，４．７ｍＭ ＫＣｌ，１．８ｍＭ ＣａＣｌ２）で一回洗浄し、次の条件下で３組、培養した：１）抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ（５μｇ／ｍｌ）、２）抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ（５μｇ／ｍｌ）＋抗ＨＶＥＭ－ｄ２（１０μｇ／ｍｌ）、３）抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ（５μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２２６（１０μｇ／ｍｌ）、４）抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ（５μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２２６（１０μｇ／ｍｌ）＋冷抗ＴＩＧＩＴ Ａｂ（クローン１Ｆ４）（５０μｇ／ｍｌ）。示された濃度を最適化して最も高いＦＲＥＴシグナルを確保した。細胞をローテータ上で室温で２時間インキュベートし、ついでＴｒｉｓ－ＫＲＥＢＳバッファーで３回洗浄した。ついで、Ｔ細胞を白色の９６ウェルプレート（Costar）に４００，０００細胞／ウェルで播種し、ＴＲ－ＦＲＥＴを、ＰＨＥＲＡｓｔａｒプレートリーダー（BMG Labtech）を使用し、３４３ｎｍでのレーザー励起後６０μｓの遅延後に４００μｓの間、６６５ｎｍで記録した。ＦＲＥＴ強度は、Ａｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ＋Ａｂ－ｄ２で標識された細胞からの６６５ｎｍでのシグナルからＡｂ－Ｌｕｍｉ４－Ｔｂ単独で標識された細胞の同じバッチからの６６５ｎｍでのシグナルを引いたものとして表した。非特異的ＦＲＥＴシグナルは、Ｌｕｍｉ４Ｔｂ＋ｄ２＋過剰の冷Ａｂと共にインキュベートしたＴ細胞によって与えられた。

【0471】

共免疫沈降。 簡潔に述べると、１５ｃｍプレート中のＣＯＳ７細胞を、ＴＩＧＩＴ－ＨＡ（５ｎｇ）又はＣＤ２２６－Ｆｌａｇ（１０ｎｇ）の何れかがタグ化されたタンパク質に対するｃＤＮＡを含む発現プラスミド、又はコントロールプラスミド（ｐＲＫ）を用いて同時トランスフェクトさせた。トランスフェクションの２３時間後、細胞をＰＢＳで洗浄し、４ｍｌの氷冷ＰＢＳ中に収集し、３００×ｇで５分間遠心分離し、細胞ペレットを４℃で２ｍｌの溶解バッファー中に再懸濁させた。細胞を、１５分毎にボルテックスさせて５０分かけて可溶化し、ついで４℃で１０，００×ｇで１５分間、遠心分離した。得られた上清を、４℃で３０分回転させて１６０μｌのＣＬ６Ｂセファローススラリーで前もって清澄化させ、３０００×ｇで２分間、遠心分離した。上清を二つのチューブに均等に分け、標準的な手順を使用して、抗ＨＡ又は抗ｆｌａｇの何れかで免疫沈降させた。免疫沈降させたタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥに供し、ウェスタンブロットした。ウェスタンブロットは抗Ｆｌａｇ－ＨＲＰ又は抗ＨＡ－ＨＲＰの何れかでプローブした。

【0472】

ここで引用される全ての特許、特許出願、書類、及び文献はその全体を出典明示によりここに援用する。

【図1A-1B】

【図1C-1D】

【図2】

【図3】

【図4A-4D】

【図4E-4F】

【図4G-4H】

【図5】

【図6A-6B】

【図6C-6D】

【図7A-7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A-11C】

【図11D-11F】

【図12】

【図13A】

【図13B-13D】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19A-19B】

【図19C-19D】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図20D】

【図20E】

【図20F】

【図20G-20H】

【図21】

【図22A-22B】

【図22C-22E】

【図22F-22G】

【図23A-23C】

【図23D】

【図24】

【図25A】

【図25B-25C】

【図26A-26C】

【図26D-26E】

【図27】

【図28A】

【図28B-28F】

【図29A-29D】

【図29E-29H】

【図30】

【図31】

【図32A】

【図32B-32C】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【配列表】

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