特許 7023933 セコ－シクロプロパピロロインドール化合物、その抗体－薬物コンジュゲート、ならびに製造および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-02-14

(45)【発行日】2022-02-22

(54)【発明の名称】セコ－シクロプロパピロロインドール化合物、その抗体－薬物コンジュゲート、ならびに製造および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/04 20060101AFI20220215BHJP

   A61K 31/407 20060101ALI20220215BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220215BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20220215BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220215BHJP

   C07D 519/00 20060101ALI20220215BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20220215BHJP

【ＦＩ】

C07D487/04 137

C07D487/04 CSP

A61K31/407

A61P35/00

A61K47/68

A61K39/395 T

A61K39/395 E

C07D519/00 311

A61K31/5377

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2019509530

(86)(22)【出願日】2017-08-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-09-05

(86)【国際出願番号】 US2017047465

(87)【国際公開番号】W WO2018035391

(87)【国際公開日】2018-02-22

【審査請求日】2020-08-17

(31)【優先権主張番号】62/377,052

(32)【優先日】2016-08-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】391015708

【氏名又は名称】ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー

【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ

(73)【特許権者】

【識別番号】501244222

【氏名又は名称】ザ スクリプス リサーチ インスティテュート

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100156155

【弁理士】

【氏名又は名称】水原 正弘

(72)【発明者】

【氏名】フカン・ヤン

(72)【発明者】

【氏名】チアン・ジャン

(72)【発明者】

【氏名】ローレンス・ビー・スナイダー

(72)【発明者】

【氏名】サンジーブ・ギャングウォー

(72)【発明者】

【氏名】デイル・エル・ボジャー

【審査官】伊佐地 公美

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１１／１０３５５７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１６－５２０５３３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５２５３４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】TICHENOR, M. S. et al.，Journal of the American Chemical Society，2007年，Vol. 129，pp. 10858-10869

【文献】STEPHENSON, M. J. et al.，The Journal of Organic Chemistry，2015年，Vol. 80，pp. 9454-9467

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｐ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

構造式（Ｉ）：

【化1】

［式中：
Ｈａｌは、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ^１は

【化2】

であり；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｒ^３は

【化3】

であり；
Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、またはＲ^７は、独立して、Ｈ、ＯＭｅ、ＯＨ、６員のアリール基、５員または６員のヘテロアリール基、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２、ＮＨ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｎ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）_２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ^１、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２Ｘ^１、または

【化4】

であり；
ここで、Ｃ_２－Ｃ_４アルキル基は、置換されていないか、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されていてもよく、アリールまたはヘテロアリール基は、Ｃ_１－Ｃ_２アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されてもよい；
ただし、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７のうち少なくとも１つはＨ以外の基であり；
Ｒ^８およびＲ^８’は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｏ（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、またはＯ（ＣＨ_２）_２－４ＯＨであり；
Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、（ＣＨ_２）_２－４ＯＨ、（ＣＨ_２）_２－４Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、または（ＣＨ_２）_２－４Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｘ^１は、各々独立して、６員のアリール、または５ないし６員のヘテロアリール基であって、置換されていないか、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されており；
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｍｅ、またはＣ_２－Ｃ_４アルキル基であって、置換されていないか、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されていてもよく；ならびに
Ｘ^３は、各々独立して、Ｏ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＳである］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項2】

Ｒ^２がＨであり、ＨａｌがＣｌである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^３が

【化5】

である、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

構造式（Ｉａ）：

【化6】

で示される、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７が、各々、Ｈであり、Ｒ^１が

【化7】

であり；および
Ｒ^５が

【化8】

である、請求項４に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^１が、その対応するＲ^１Ｈの化合物にて、０.３００未満のＣＬｏｇＰ値を有する、基である、請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ^１が

【化9】

である、請求項４に記載の化合物。

【請求項8】

構造式（Ｉｂ）：

【化10】

で示される、請求項１に記載の化合物。

【請求項9】

構造式（Ｉｃ）：

【化11】

で示される、請求項１に記載の化合物。

【請求項10】

構造式（Ｉｄ）：

【化12】

で示される、請求項１に記載の化合物。

【請求項11】

構造式（ＩＩＩａ）：

【化13】

［式中：
Ｔは、

【化14】

の構造で示される基であり、ここで、星印（＊）は、セコ－ＣＰＩ化合物のフェノール性酸素と結合する末端を示し、波線

【化15】

はポリペプチド－ＡＡ ^ａ －［ＡＡ ^ｂ ］ _ｐ －に結合する末端を示し；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３、または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
ｒは１、２、３、４、または５であり；
ｓは０または１であり；
ｖは０または１であり；
Ｒ^３１は、

【化16】

である：
ただし、ｓが１で、ｖが０の場合にのみ、Ｒ^３１はＨとすることができ、そしてｓが１で、Ｒ^３１がＨである場合にのみ、ｖは０とすることができ；
ＨａｌはＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ^１は

【化17】

であり；
Ｒ^２はＨ、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｒ^３は

【化18】

であり；
Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、またはＲ^７は、独立して、Ｈ、ＯＭｅ、ＯＨ、６員のアリール基、５員または６員のヘテロアリール基、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２、ＮＨ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｎ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）_２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ^１、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２Ｘ^１、または

【化19】

であり；
ここで、Ｃ_２－Ｃ_４アルキル基は置換されていないか、またはＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されていてもよく、アリールまたはヘテロアリール基は、Ｃ_１－Ｃ_２アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されていてもよい；
ただし、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７のうち少なくとも１つはＨ以外の基であり；
Ｒ^８およびＲ^８’は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｏ（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、またはＯ（ＣＨ_２）_２－４ＯＨであり；
Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、（ＣＨ_２）_２－４ＯＨ、（ＣＨ_２）_２－４Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、または（ＣＨ_２）_２－４Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｘ^１は、各々独立して、６員のアリール、または５ないし６員のヘテロアリール基であって、置換されていないか、またはＣ_１－Ｃ_３アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されており；
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｍｅ、またはＣ_２－Ｃ_４アルキル基であって、置換されていないか、またはＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されていてもよく；および
Ｘ^３は、各々独立して、Ｏ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＳである］
で示されるセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物またはその医薬的に許容される塩。

【請求項12】

構造式（ＩＩＩａ’）：

【化20】

［式中：
Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７は、各々、Ｈであり；および
Ｒ^５は、

【化21】

であり；
Ｒ^１０は

【化22】

であり；
Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ、ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、または（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２であり；および
Ｒ^１４は

【化23】

である、請求項１１に記載のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物。

【請求項13】

構造式（ＩＶａ）：

【化24】

［式中
Ａｂは抗体であり；
Ｒ^４０は、結合手、

【化25】

であり、ここでＡｂと結合するＲ^４０ の共有結合部位は星印（＊）で示され、（ＣＨ_２）_ｒと結合するＲ^４０ の共有結合部位は波線

【化26】

で示され；
ｍは１、２、３、または４であり；
ｖは０または１である：ただし、ｓが１で、Ｒ^４０が結合手の場合にのみ、ｖは０とすることができ、そしてｖが０で、ｓが１である場合にのみ、Ｒ^４０は結合手とすることができ；
Ｔは、

【化27】

の構造で示される基であり、ここで、星印（＊）は、セコ－ＣＰＩ化合物のフェノール性酸素と結合する末端を示し、波線

【化28】

はポリペプチド－ＡＡ ^ａ －［ＡＡ ^ｂ ］ _ｐ －に結合する末端を示し；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３、または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２（好ましくは、２、３、４、または８）であり；
ｒは１、２、３、４、または５であり；
ｓは０または１であり；
ＨａｌはＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ^１は

【化29】

であり；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｒ^３は

【化30】

であり；
Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、またはＲ^７は、独立して、Ｈ、ＯＭｅ、ＯＨ、６員のアリール基、５員または６員のヘテロアリール基、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２、ＮＨ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｎ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）_２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ^１、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２Ｘ^１、または

【化31】

であって、
ここでＣ_２－Ｃ_４アルキル基は、置換されていなくても、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２によって置換されてもよく、アリールまたはヘテロアリール基はＣ_１－Ｃ_２アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されてもよい；
ただし、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７のうち少なくとも１つはＨ以外の基であり；
Ｒ^８およびＲ^８’は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｏ（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、またはＯ（ＣＨ_２）_２－４ＯＨであり；
Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、（ＣＨ_２）_２－４ＯＨ、（ＣＨ_２）_２－４Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、または（ＣＨ_２）_２－４Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｘ^１は、各々独立して、６員のアリールまたは５ないし６員のヘテロアリール基であって、置換されていないか、またはＣ_１－Ｃ_３アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されており；
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｍｅ、またはＣ_２－Ｃ_４アルキル基であって、置換されていないか、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されていてもよく；および
Ｘ^３は、各々独立して、Ｏ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＳである］
で示される、抗体－薬物コンジュゲート、またはその医薬的に許容される塩。

【請求項14】

がんを治療するための、請求項１に記載の化合物、またはその抗体とのコンジュゲートを含む医薬組成物。

【請求項15】

化合物が抗体とコンジュゲートしている、請求項１４に記載の医薬組成物。

【請求項16】

がんが、肺がん、胃がん、卵巣がん、または結腸がんである、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本願は、３５ Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１９（ｅ）の下に、２０１６年８月１９日付け出願の米国仮特許出願番号６２／３７７,０５２の利益を主張するものであり；その内容を出典明示により本明細書に組み込むものとする。

【背景技術】

【0002】

本願は、セコ－シクロプロパピロロインドール化合物、そのコンジュゲート、ならびにかかる化合物およびコンジュゲートの製造および使用方法に関する。

【0003】

二重らせんＤＮＡは、その外側に沿って長手方向に走る、２本の螺旋溝を有し、それは理髪店のポールにある縞とよく似ている。２本の溝は同一ではなく：一方は主稿と呼ばれ、副溝と称される他方よりもずっと大きい。

【0004】

副溝の幅はベンゼン環の厚みとほとんど同じである。生物学的に活性なＤＮＡ結合分子の多くは、弓形の痕跡を有する実質的に平坦な多芳香族分子であり、かかる形状によりそれらが副溝中をぴったりと摺動することを可能とする。一連のこれらの分子は、ＤＮＡと結合するだけでなく、それをアルキル化することもでき、ＤＮＡ副溝結合体－アルキレーター（「ＭＧＢＡ」）と称される。

【0005】

ＭＧＢＡのサブクラスは、天然物である、ＣＣ－１０６５、デュオカルマイシンＳＡ（Duocarmycin SA）、およびヤタケマイシン（yatakemycin）によって代表される（BogerおよびJohnson、1995；Tichenorら、2007）。（本明細書にて引用される刊行物について第１の著者または発明者と、発表年とによる十分な記載を本明細書の末尾に列挙する。）それらの化合物は、アルキル化サブユニット、および１または複数の結合サブユニットを含み、後者のサブユニットはＤＮＡとの結合に寄与するが、それとは化学的に反応しない。ＣＣ－１０６５およびデュオカルマイシンＳＡでは、アルキル化サブユニットは分子の一端にあり、結合サブユニットは他端にある。ヤタケマイシンでは、アルキル化サブユニットはその両側面が結合サブユニットによって位置づけられる。全体のＭＧＢＡ構造に対応するように、アルキル化および結合サブユニットはそれ自体がポリ芳香族であり、実質的に平坦である。アルキル化サブユニットは、シクロプロパピロロ－インドール（「ＣＰＩ」）コア構造を有するため、このサブクラスでのＭＧＢＡは、エポニム的にＣＰＩ化合物と称される。

【化1】

【0006】

ＤＮＡと結合すると、そのＣＰＩのシクロプロピル環は活性化され、ＤＮＡをアデニンのＮ３窒素でアルキル化する（Hurleyら、1984）。その活性化を説明するために提案された一の理論が、結合が既に歪んだシクロプロピル環にさらなる立体配座歪みを導入し、その反応性を増大させるというものである（Boger 2001；Bogerら、1997；Tichenorら1997）。

【化2】

【0007】

セコ－ＣＰＩ化合物は、シクロプロピル環が開環し、ハロメチル基で置換された、ＣＰＩ化合物の変種である。セコ－ＣＰＩ化合物それ自体はＤＮＡをアルキル化しないが、それらはインビトロまたはインビボにてＣＰＩ化合物に容易に変換可能であり、その生物学的活性は本質的に後者と同じである（Liら、2012）。かくして、セコ－ＣＰＩ化合物は、ＣＰＩ化合物の合成に都合のよい機能的等価物として、またはその合成のための中間体として興味のある化合物である（Bogerら，2000）．

【化3】

【0008】

セコ－ＣＰＩ化合物の利点は、該化合物をプロドラッグとし、ＣＰＩ形態への変換を調整しうることである。プロドラッグ化基ＰＤをフェノール性ヒドロキシル基と結合させることで、ＰＤがまず切断されない限り、ＣＰＩ形態への変換が防止される。ＰＤは、腫瘍などの、それが意図する生物学的作用の部位で、またはその付近で見つかる、剤で切断され、全身毒性の危険性を減少させるように、選択され得る。ＰＤは、好ましくは、カルバマート、ホスファート、グリコシド、またはグルクロニドなどの、酵素で切断できる基であり、それは、各々、カルボキシエステラーゼ、ホスファターゼ、グリコシダーゼ、またはグルクロニダーゼによって切断される。例えば、Kobayashiら、1994；Lajinessら、2010；Sufiら、2013；Tietzeら、2001；Zhangら、2014を参照のこと。

【化4】

【0009】

ＣＰＩ化合物のアナログについて研究することで、ＣＰＩピロール基がベンゼン環と置き換えられる、もう一つ別のＭＧＢＡサブクラスが開発されるに至った。かかる化合物は、以後、アルキル化サブユニットがシクロプロパベンズインドール（「ＣＢＩ」）コアである、ＣＢＩ化合物と称される。ＣＰＩ化合物と同様に、ＣＢＩ化合物は、セコおよびプロドラッグ化されたセコ形態で存在し得る。ＣＢＩ構造を簡素化するほどに、合成においてアクセスがより多くなされ、ＣＢＩ化合物は安定性および生物学的強度の両方を有することが明らかにされた（Lajinessら、2010；Bogerら、1990および1999）。

【化5】

【0010】

ＣＰＩおよびＣＢＩの化合物は、共に、抗がん剤として魅力的な候補体となる、強力な細胞傷害性を有する。実質的な研究努力は、かかる化合物を、およびかかる使用のためにそのセコ変種を合成し、評価することに専念された。例えば、Boger 2003；Kobayashiら、1994；Liら、1992；NagamuraおよびSaito、1998；Nagamuraら、1996；Tichenorら、2007；Tietzeら、2008を参照のこと。

【0011】

強い興味をかき立てる一型の抗がん剤が、がん細胞上にあるリガンドと結合する標的剤と薬物が付着している、コンジュゲートである。標的剤はこうして薬物をがん細胞に指向させ、そこで数種の作用機構の一つで薬物が放出され、がん細胞に対して作用する。

【0012】

一般的な型のコンジュゲートが抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ、免疫コンジュゲートとも称される）である。ＡＤＣ中で、薬物（治療剤、細胞毒素、ペイロード、または弾頭とも称される）は抗体と共有結合しており、それに対する抗原は、腫瘍関連抗原、すなわち、腫瘍細胞によって発現される抗原である。

【0013】

抗体と薬物を共有結合させる部分はリンカーと称される。各抗体が１の薬物と付着する場合、ＡＤＣの構造は
［抗体］－［リンカー］－［薬物］
で表すことができる。

【0014】

抗体は、抗原と結合すると、ＡＤＣをがん部位にデリバリーする。そこで、リンカーを切断するか、または抗体を分解して、薬物を放出する。ＡＤＣがエンドサイトーシスにより標的細胞に内在化され、薬物の放出がその内部で起こることが多い。ＡＤＣが血中を循環している間は、抗体と結合しているため、その薬物は不活性を保持する。結果として、ＡＤＣ中にある薬物は、その局所化された放出が全身毒性を軽減するため、通常の化学療法剤よりもずっと強力（細胞傷害性）であるとすることができる。

【0015】

ＣＰＩおよびＣＢＩ化合物が、そのセコであるカウンターパートと共に、ＡＤＣ中の薬物として提案されてきた。例えば、Boydら、2008；Chariら、1995；Chenら、2014；Ducryら、2010；Gangwarら、2011；Ngら、2006、2009および2011；Sufiら、2013；Zhang et al.ら、2014；Zhaoら、2010を参照のこと。

【発明の概要】

【0016】

本発明は、ＡＤＣまたは他のコンジュゲート中の薬物として用いるのに適する、新規で、かつ非常に強力なセコ－ＣＰＩ化合物を提供する。これらの化合物は、セコ－ＣＰＩサブユニットのピロール基に結合するアミド基と、その他の末端に結合する１または複数の結合サブユニットとを有する。

【0017】

１の態様において、本発明は、構造式（Ｉ）：

【化6】

［式中
ＨａｌはＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ^１は、

【化7】

であり；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｒ^３は、

【化8】

であり；
Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、またはＲ^７は、独立して、Ｈ、ＯＭｅ、ＯＨ、６員のアリール（好ましくは、フェニル）基、５員または６員のヘテロアリール基、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２、ＮＨ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｎ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）_２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ^１、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２Ｘ^１、または

【化9】

であり；
ここで、Ｃ_２－Ｃ_４アルキル基は、置換されていなくても、またはＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されてもよく、アリールまたはヘテロアリール基は、Ｃ_１－Ｃ_２アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されてもよい；
ただし、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７のうち少なくとも１つはＨ以外の基であり；
Ｒ^８およびＲ^８’は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｏ（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、またはＯ（ＣＨ_２）_２－４ＯＨであり；
Ｒ^９は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、（ＣＨ_２）_２－４ＯＨ、（ＣＨ_２）_２－４Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_２－４ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、または（ＣＨ_２）_２－４Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２であり；
Ｘ^１は、各々独立して、６員のアリール（好ましくは、フェニル）または５ないし６員のヘテロアリール基であって、置換されていないか、またはＣ_１－Ｃ_３アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されており；
Ｘ^２は、各々独立して、Ｈ、Ｍｅ、またはＣ_２－Ｃ_４アルキル基であって、置換されていないか、またはＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されてもよく；および
Ｘ^３は、各々独立して、Ｏ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_３アルキル）、またはＳである］
で示されるセコ－ＣＰＩ化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

【0018】

もう一つ別の態様において、本発明は、標的とする部分、特に抗体とのコンジュゲーションに適する、リンカーに付着する本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を提供する。

【0019】

もう一つ別の態様において、本発明は、標的とする部分に、特に抗体にリンカーを介してコンジュゲートした、本発明のセコ－ＣＰＩ化合物のコンジュゲートを提供する。

【0020】

もう一つ別の態様において、本発明は、がんに罹患している対象においてそのがんを治療する方法であって、治療的に効果的な量の本発明の化合物、またはそれと抗体とのコンジュゲートを該対象に投与することを含む、方法を提供する。好ましい実施態様において、治療されるがんは、肺、胃、卵巣または結腸がんである。

【0021】

もう一つ別の態様において、本発明は、がんに罹患している対象を治療するのに用いるための、本発明のセコ－ＣＰＩ化合物、またはそれと抗体とのコンジュゲートを提供する。該がんは、肺、胃、卵巣または結腸がんであり得る。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】図１Ａおよび１Ｂは、本発明の化合物を製造するのに用いることができる、セコ－ＣＰＩコアの化合物を合成するためのスキームを示す。

【図2】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。当業者は、ある場合に、そのスキームが主に、化合物の種々のセグメントを組み立てる順序にて、または保護基を除去する順序にて異なり、これらの工程を行う順序が個々の好みの問題であり得ることが分かるであろう。

【図3】図３Ａおよび３Ｂは、本発明のセコ－ＣＰＩリンカー化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。またも、当業者であれば、特定の工程を行う順序の変更が個々の好みに供され得ることが分かるであろう。

【図4】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【0023】

【図5】本発明のセコ－ＣＰＩリンカー化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図6】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図7】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図8】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【0024】

【図9】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図10】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図11】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【図12】本発明のセコ－ＣＰＩ化合物を合成するための例示としてのスキームを示す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

定義
「抗体」は、全抗体、およびいずれかの抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部」）またはその単一鎖変種を意味する。全抗体は、ジスルフィド結合により相互に結合した、少なくとも２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）とを含むタンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、３種のドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３を含む重鎖定常領域とを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（Ｖ_ＬまたはＶ_Ｋ）と、１つの単一ドメイン、Ｃ_Ｌを含む軽鎖定常領域とを含む。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域と、保存性のより高い散在したフレームワーク領域（ＦＲ）に細分割することができる。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、各々、３個のＣＤＲと４個のＦＲとを含み、アミノ末端からカルボキシ末端の方向に、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４で配列されている。可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。定常領域は、抗体の、宿主組織または因子（免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および典型的な補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む）との、結合を媒介してもよい。抗体が、抗原Ｘと、５ｘ１０^－８Ｍ未満、より好ましくは６ｘ１０^－９Ｍ未満、さらにより好ましくは３ｘ１０^－９未満、その上より好ましくは２ｘ１０^－９Ｍ未満のＫ_Ｄで、抗原Ｘと結合するならば、その抗体はその抗原Ｘに「特異的に結合する」と言える。抗体はキメラ、ヒト化と、または好ましくはヒトとすることができる。重鎖定常領域は、グリコシル化の型または程度に影響を及ぼし、抗体の半減期を延ばし、エフェクター細胞または補体系との相互作用を強化または軽減し、あるいは他のいくつかの特性を調整するように操作され得る。その工学操作は、１または複数のアミノ酸を置換、付加または欠失することにより、またはドメインをもう一つ別の免疫グロブリン型からのドメインと置換すること、あるいはそれらの組み合わせにより達成され得る。

【0026】

抗体の「抗原結合フラグメント」および「抗原結合部」（あるいは簡単に「抗体部」または「抗体フラグメント」）は、抗体と特異的に結合する能力を保持する、抗体の１または複数のフラグメントを意味する。抗体の抗原と結合する作用は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣ_Ｈ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）本質的に、Ｆａｂと、ヒンジ領域の一部とを含む、Ｆａｂ’フラグメント（例えば、Abbasら、Cellular and Molecular Immunology、6th Ed.、Saunders Elsevier 2007を参照のこと）；（ｉｖ）Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｖ）抗体の一本のアームのＶ_ＬおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖｉ）Ｖ_Ｈドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Wardら、（1989） Nature 341：544-546）；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（ｖｉｉｉ）ナノボディ、単一の可変ドメインと２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域、などの全長抗体のフラグメントによって実施され得ることが示された。好ましい抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、およびＦｄフラグメントである。さらには、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈは、別の遺伝子によりコードされるが、それらのフラグメントは、組換え技法を用い、それらの中のＶ_ＬおよびＶ_Ｈ領域が組み合わさって一価の分子を形成する、単一のタンパク鎖（単一鎖Ｆｖ、またはｓｃＦｖとして知られる）として製造され得るようにする、合成リンカーによって接合させることができる；例えば、Birdら（1988） Science 242：423-426；およびHustonら（1988） Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：5879-5883）を参照のこと。かかる単一鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部」なる語の範囲内にも含まれる。

【0027】

「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する（例えば、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は抗原Ｘ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、抗原Ｘと特異的に結合する単離された抗体は、他の種から由来の抗原Ｘ分子などの他の抗原に対して交差反応性を有するかもしれない。特定の実施態様において、単離された抗体はヒト抗原Ｘと特異的に結合し、他の（ヒト以外の）抗原Ｘの抗原と交差反応しない。さらには、単離された抗体は他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まないかもしれない。

【0028】

「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す、単一分子組成の抗体分子の調製物を意味する。

【0029】

「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方（そしてあるとすれば、定常領域）が、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列より誘導される、可変領域を有する抗体を意味する。ヒト抗体は、自然のまたは合成による修飾を含む、後の修飾を包含し得る。ヒト抗体はヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異誘発、あるいはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含んでもよい。しかしながら、「ヒト抗体」は、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖系より由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている、抗体を含まない。

【0030】

「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列から由来の可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。１の実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞と融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、ヒト以外の遺伝子導入動物、例えば、遺伝子導入マウスより得られるＢ細胞を含む、ハイブリドーマによって産生される。

【0031】

「脂肪族」は、直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和の、特定数の炭素原子（例えば、「Ｃ_３脂肪族」、「Ｃ_１－５脂肪族」、「Ｃ_１－Ｃ_５脂肪族」または「Ｃ_１ないしＣ_５脂肪族」のように、後者の３つの用語は１～５個の炭素原子を有する脂肪族部分の同意語である）を有するか、あるいは炭素原子の数が明示的に特定されていない場合には、１～４個の炭素原子（不飽和脂肪族部分の場合には、２～４個の炭素）を有する、芳香族ではない炭化水素部分を意味する。Ｃ_２－４アルケン、Ｃ_４－Ｃ_７脂環式等にあるような、他の型における炭素数にも同様の理解が適用される。同様にして、「（ＣＨ_２）_１－３」なる語は、かかる語がＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２、およびＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２を表すように、下付き文字が１、２または３である場合の省略形であるものと理解されるべきである。

【0032】

「アルキル」は、炭素原子の数を指定するのに同じ慣例が適用され得る、飽和脂肪族部分を意味する。例として、Ｃ_１－Ｃ_４アルキル部分は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔ－ブチル、１－ブチル、２－ブチル等を包含するが、これらに限定されない。「アルキレン」は、ＣＨ_２ＣＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２、およびＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２などのアルキル基の二価のカウンターパートを意味する。

【0033】

「アルケニル」は、炭素原子の数を指定するのに同じ慣例が適用され得る、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する脂肪族部分を意味する。例として、Ｃ_２－Ｃ_４アルケニル部分は、エテニル（ビニル）、２－プロペニル（アリルまたはプロパ－２－エニル）、シス－1－プロペニル、トランス－１－プロペニル、Ｅ－（またはＺ－）２－ブテニル、３－ブテニル、１,３－ブタジエニル（ブタ－１,３－ジエニル）等を包含するが、これらに限定されない。

【0034】

「アルキニル」は、炭素原子の数を指定するのに同じ慣例が適用され得る、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する脂肪族部分を意味する。例として、Ｃ_２－Ｃ_４アルキニル基は、エチニル（アセチレニル）、プロパルギル（プロパ－２－イニル）、１－プロピニル、ブタ－２－イニル等を包含する。

【0035】

「脂環式」は、１～３個の環を有し、各環が３～８個（好ましくは、３～６個）の炭素原子を有する、飽和または不飽和の非芳香族炭化水素部分を意味する。「シクロアルキル」は、各環が飽和している脂環式部分を意味する。「シクロアルケニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する、脂環式部分を意味する。「シクロアルキニル」は、少なくとも１個の環が少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する、脂環式部分を意味する。例として、脂環式部分は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびアダマンチルを包含するが、これらに限定されない。好ましい脂環式部分は、シクロアルキル部分、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルである。「シクロアルキレン」はシクロアルキル基の二価のカウンターパートを意味する。

【0036】

「ヘテロ脂環式」は脂環式部分を意味し、ここで、その中の少なくとも１個の環では、３個まで（好ましくは１ないし２個）の炭素が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択されるヘテロ原子と置き換えられており、そのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、Ｎは所望により四級化されてもよい。好ましい脂環式部分は、大きさが５ないし６員の１個の環からなる。同様に、「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」および「ヘテロシクロアルキニル」は、その少なくとも１個の環が上記のように修飾されている、各々、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはシクロアルキニル部分を意味する。代表的なヘテロ脂環式部分は、アジリジニル、アゼチジニル、１,３－ジオキサニル、オキセタニル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニル スルホン、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニル スルホキシド、チオモルホリニル スルホン、１,３－ジオキソラニル、テトラヒドロ－１,１－ジオキソチエニル、１,４－ジオキサニル、チエタニル等を包含する。「ヘテロシクロアルキレン」はヘテロシクロアルキル基の二価のカウンターパートを意味する。

【0037】

「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「アルキルチオ」および「アリールチオ」は、各々、－Ｏ（アルキル）、－Ｏ（アリール）、－Ｓ（アルキル）、および－Ｓ（アリール）を意味する。一例が、各々、メトキシ、フェノキシ、メチルチオ、およびフェニルチオである。

【0038】

「ハロゲン」または「ハロ」は、より狭い意味が示されない限り、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。

【0039】

「アリール」は、単環、二環または三環式環系（好ましくは、単環式環系）の炭化水素部分であって、ここで各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が芳香族である、炭化水素部分を意味する。該環系の環は、（ナフチルのように）相互に縮合しても、あるいは（ビフェニルのように）相互に結合してもよく、（インダニルまたはシクロヘキシルフェニルのように）非芳香族環と縮合しても、結合してもよい。さらなる例として、アリール部分は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントラセニル、およびアセナフチルを包含するが、これらに限定されない。「アリーレン」はアリール基の二価のカウンターパート、例えば１,２－フェニレン、１,３－フェニレン、または１,４－フェニレンを意味する。

【0040】

「ヘテロアリール」は、単環、二環または三環式環系（好ましくは、５ないし７員の単環）の部分であって、ここで各環が３ないし７個の炭素原子を有し、少なくとも１個の環が、Ｎ、ＯまたはＳより独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含有し、そのＮおよびＳは所望により酸化されてもよく、Ｎは所望により四級化されてもよい、芳香族環である、部分を意味する。そのような少なくとも１個のヘテロ原子を含有する芳香族環は、（ベンゾフラニルまたはテトラヒドロイソキノリルのように）別の型の環に縮合しても、あるいは（フェニルピリジルまたは２－シクロペンチルピリジルのように）別の型の環に直接結合してもよい。さらなる例として、ヘテロアリール部分は、ピロリル、フラニル、チオフェニル（チエニル）、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、Ｎ－オキソピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、キノザリニル、ナフチリジニル、ベンゾフラニル、インドリル、バンゾチオフェニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フェノチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ジベンゾフラニル、カルバゾリル、ジベンゾチオフェニル、アクリジニル等を包含する。「ヘテロアリーレン」は、ヘテロアリール基の二価のカウンターパートを意味する。

【0041】

「置換されていないか、置換されているＣ_１－Ｃ_５アルキル」または「所望により置換されてもよいヘテロアリール」にあるような「置換されていないか、置換されている」または「所望により置換されてもよい」なる語を用いることによるなどの、部分が置換されてもよいことを示す場合、かかる部分は、１または複数の、好ましくは１～５個の、より好ましくは１または２個の、独立して選択される置換基を有してもよい。置換基および置換パターンは、置換基が結合する部分に配慮して、化学的に安定しており、当該分野にて公知の技法、ならびに本明細書に記載の方法によって合成され得る化合物を提供するように、当業者により選択され得る。部分が「置換されていないか、置換されている」または「所望により置換されてもよい」として特定される場合、好ましい実施態様は、かかる部分は置換されていない化合物である。

【0042】

「アリールアルキル」、「（ヘテロ脂環式）アルキル」、「アリールアルケニル」、「アリールアルキニル」、「ビアリールアルキル」等は、場合によっては、例えば、ベンジル、フェネチル、Ｎ－イミダゾイルエチル、Ｎ－モルホリノエチル等のように、アルキル、アルケニル、またはアルキニル部分で原子価がオープンである（満足の行かない）（open valence）、場合によっては、アリール、ヘテロ脂環式、ビアリール等の部分で置換されているものを意味する。反対に、「アルキルアリール」、「アルケニルシクロアルキル」等は、場合によっては、例えば、メチルフェニル（トリル）またはアリルシクロヘキシルのように、アリール、シクロアルキル等の部分が、場合によっては、アルキル、アルケニル等の部分で置換されているものを意味する。「ヒドロキシアルキル」、「ハロアルキル」、「アルキルアリール」、「シアノアリール」等は、アルキル、アリール等の部分が、場合によっては、１または複数の特定される置換基（場合によっては、ヒドロキシル、ハロ等）で置換されるものである。

【0043】

例えば、許容される置換基は、アルキル（特にメチルまたはエチル）、アルケニル（特にアリル）、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ（特にフルオロ）、ハロアルキル（特にトリフルオロメチル）、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル（特にヒドロキシエチル）、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）（特員－ＯＣＦ_３）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、－Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（シクロアルキル）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２等を包含するが、これらに限定されない。

【0044】

置換される部分が脂肪族の部分である場合、好ましい置換基は、アリール、ヘテロアリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、－Ｏ（アリール）、アルキルチオ、アリールチオ、＝Ｏ、＝ＮＨ、＝Ｎ（アルキル）、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－Ｓ（シクロアルキル）、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（アリール）、＝Ｏ、＝ＮＯＨ、＝ＮＯ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。フェニル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｃ_１－Ｃ_４アルコキシ、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキレン）ＯＨ、および－Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキレン）ハロが特に好ましい。

【0045】

置換される部分が脂環式、ヘテロ脂環式、アリール、またはヘテロアリール部分である場合、好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｏ（ハロアルキル）、－Ｏ（アリール）、－Ｏ（シクロアルキル）、－Ｏ（ヘテロシクロアルキル）、アルキルチオ、アリールチオ、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、アジド、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨ（ヒドロキシアルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＯＳＯ_２（アルキル）、－ＳＨ、－Ｓ（アルキル）、－Ｓ（アリール）、－Ｓ（シクロアルキル）、－Ｓ（＝Ｏ）アルキル、－ＳＯ_２（アルキル）、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＳＯ_２ＮＨ（アルキル）、および－ＳＯ_２Ｎ（アルキル）_２である。より好ましい置換基は、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、－Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ（ヒドロキシアルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ_２、－ＮＨ（アルキル）、－Ｎ（アルキル）_２、－ＮＨ（アリール）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）_２、および－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２である。Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、シアノ、ニトロ、ハロ、およびＣ_１－Ｃ_４アルコキシが特に好ましい。

【0046】

「Ｃ_１－Ｃ_５アルキル」または「５～１０％」のように範囲が特定されている場合、かかる範囲は、第１の例のＣ_１およびＣ_５、および第２の例の５％および１０％のように、その範囲の両端を含む。

【0047】

特定の立体異性体が（例えば、構造式中の関連する立体中心で太字または破線での結合により、構造式中で二重結合をＥまたはＺ配置で記載することにより、あるいは立体化学を特定する命名法を用いることにより）具体的に示されていない限り、あらゆる立体異性体が、純粋な化合物として、ならびにその混合物として本発明の範囲内に含まれる。特記されない限り、個々のエナンチオマー、ジアステレオマー、幾何異性体、ならびにそれらの組み合わせおよび混合物はすべて本発明に含まれる。

【0048】

当業者は、化合物が、本明細書で使用される構造式で示される形態と均等である、互変異性体の形態（例えば、ケトおよびエノール形態）、共鳴形態、および両性イオン形態を有し、その構造式がかかる互変異性形態、共鳴形態または両性イオン形態を包含し得ることを認識するであろう。

【0049】

「医薬的に許容されるエステル」は、インビボにて（例えば、人体にて）加水分解して親化合物またはその塩を生成するか、それ自体が親化合物と同様の活性を有する、エステルを意味する。適切なエステルは、Ｃ_１－Ｃ_５アルキル、Ｃ_２－Ｃ_５アルケニルまたはＣ_２－Ｃ_５アルキニルエステル、特にメチル、エチルまたはｎ－プロピルを包含する。

【0050】

「医薬的に許容される塩」は、医薬製剤に適する化合物の塩を意味する。化合物が１または複数の塩基性基を有する場合、該塩は、硫酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、塩酸塩、乳酸塩、メチル硫酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、メシル酸塩、ラクトビオン酸塩、スベリン酸塩、トシル酸塩等などの酸付加塩であり得る。化合物が１または複数の酸性基を有する場合、該塩は、カルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニウム塩、亜鉛塩、ピペラジン塩、トロメタミン塩、リチウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、４－フェニルシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、ナトリウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等などの塩であり得る。多形結晶形態および溶媒和物も本発明の範囲内に包含される。

【0051】

本明細書の式中、結合を横断する波線

【化10】

または結合の末端にある星印（＊）は、共有結合部位を示す。例えば、式

【化11】

で、Ｒが

【化12】

である、またはＲが

【化13】

である状況は、

【化14】

を意味する。

【0052】

本明細書の式において、芳香族環の２個の炭素間を横切る結合手は、その結合手と結合する基がその芳香族環の利用可能ないずれの位置に配置されてもよいことを意味する。例示として、式：

【化15】

は、

【化16】

を表す。

【0053】

セコ－ＣＰＩ化合物
式（Ｉ）およびこれらの可変基が存在する他の式において、文脈上、異なる好ましい実施態様または好ましい実施態様の組み合わせが適用され得ることが示されない限り、以下の好ましい実施態様が、個々に、または他の好ましい実施態様と組み合わせるかのいずれかで適用される。
（ｉ）ＨａｌがＣｌである。
（ｉｉ）Ｒ^２がＨである。
（ｉｉｉ）Ｒ^３が、

【化17】

である。
（ｉｖ）Ｒ^５が、ＯＭｅ、ＯＨ、フェニル、ＮＨ_２、ＮＨＭｅ、ＮＭｅ_２、ＮＨ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｎ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）_２、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ^１、Ｏ（Ｃ_２－Ｃ_４アルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２（Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル）、Ｏ（ＣＨ_２）_０－２Ｘ^１、または式：

【化18】

で示される基であり；
ここで、Ｃ_２－Ｃ_４アルキル基は、置換されていなくても、あるいはＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、ＯＨ、またはＮＨ_２で置換されてもよく、フェニル基はＣ_１－Ｃ_２アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_２アルキル）_２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ_２、またはＣＮで置換されてもよい；
（すなわち、Ｒ^５はＲ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、またはＲ^７の一つであり、Ｈ以外の基である）。
（ｖ）Ｒ^１が

【化19】

であり、より好ましくは、

【化20】

であり、最も好ましくは、

【化21】

である。
（ｖｉ）Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７のうち３個未満は、より好ましくは２個未満は、Ｈ以外の基である。
（ｖｉｉ）Ｘ^１中にあるアリールまたはヘテロアリール基は、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、またはピラジニルであり；より好ましくは、フェニル、特にＮＨ_２またはＯＨで置換されるフェニルである。
（ｖｉｉｉ）Ｒ^１が、

【化22】

である場合、Ｘ^２のうち少なくとも１つはＨ以外の基である。

【0054】

上記した選択肢（ｉｉｉ）について、Ｒ^３は、より好ましくは、

【化23】

であり、さらにより好ましくは、Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７の各々がＨである場合である。

【0055】

本発明の好ましい態様において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）

【化24】

で示される構造（式中、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、上記の「発明の概要」のセクションにおいて式（Ｉ）について定義されるとおりである）を有する。

【0056】

式（Ｉａ）の化合物の例を表Ｉに列挙する。特記されない限り、Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７は、各々、Ｈである。

【表1】

【表2】

【表3】

【0057】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０１）であり、その完全な構造を次に示す。

【化25】

【0058】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０２）であり、その完全な構造を次に示す。

【化26】

【0059】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０３）であり、その完全な構造を次に示す。

【化27】

【0060】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０９）であり、その完全な構造を次に示す。

【化28】

【0061】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０１６）であり、その完全な構造を次に示す。

【化29】

【0062】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－０１８）であり、その完全な構造を次に示す。

【化30】

【0063】

好ましいセコ－ＣＰＩ化合物は（Ｉａ－３０）であり、その完全な構造を次に示す。

【化31】

【0064】

もう一つ別の好ましい実施態様において、式（Ｉ）に係る化合物は、式（Ｉｂ）：

【化32】

で示される構造（式中、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、上記の「発明の概要」のセクションにおいて式（Ｉ）について定義されるとおりである）を有する。

【0065】

式（Ｉｂ）で示される化合物の例を表ＩＩにおいて列挙する（Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^６、およびＲ^７は、各々、Ｈである）。

【表4】

【0066】

もう一つ別の好ましい実施態様において、式（Ｉ）に係る化合物は、式（Ｉｃ）：

【化33】

で示される構造（式中、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、上記の「発明の概要」のセクションにおいて式（Ｉ）について定義されるとおりである）を有する。

【0067】

化合物（Ｉｃ）の一例が、

【化34】

で示される化合物（Ｉｃ－０１）である。

【0068】

もう一つ別の好ましい実施態様において、化合物（Ｉ）は、式（Ｉｄ）：

【化35】

で示される構造（式中、Ｒ^１、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、上記の「発明の概要」のセクションにおいて式（Ｉ）について定義されるとおりである）を有する。

【0069】

化合物（Ｉｄ）の例が、（Ｉｄ－０１）および（Ｉｄ－０２）：

【化36】

である。

【0070】

Ｒ^１の特に好ましい実施態様が、

【化37】

であり；Ｒ^５の特に好ましい実施態様が、

【化38】

である。

【0071】

理論により束縛されるものではないが、本発明のＲ^１基は、親水性で、有利にはその改善された特性を有すると考えられる。ＣＬｏｇＰの低いＲ^１基を有することが有利である。というのも、それはセコ－ＣＰＩ化合物およびそのリンカー構造物の水溶性を増大させるからである。下記の実施例１および２に示されるように、抗体とのコンジュゲーションは、本質的に、水性媒体中で行われ、より可溶性のセコ－ＣＰＩ化合物－リンカー化合物はより効果的にコンジュゲートすることができる。さらには、セコ－ＣＰＩ化合物を血中に放出するＡＤＣの時期尚早な意図いない切断が生じた場合には、親水性の増加は、該化合物が細胞膜に浸透し、的外れの傷害性を惹起するであろう可能性を減少させる。（ＡＤＣの細胞へのエントリーは異なる工程によるものであり：抗体とその抗原とが結合することによってエンドサイトーシスが作動する。）

【0072】

各Ｒ^１基の原子価がオープンであるのは（例えば、表Ｉを参照のこと）、それがセコ－ＣＰＩコアのカルボキシル基とアミド結合を形成するように、窒素にある。その親水性は、対応するアミンＲ^１Ｈの親水性を介して推定することができる。

【0073】

化合物の親水性（または、逆に、疎水性）は、その構造から算定可能な値である、そのＣＬｏｇＰより推定することができる：値が小さいほど親水性の大きな分子を示し、一方で値が大きいほど疎水性の大きな分子を示す。表Ｉに示されるＲ^１基に対応するアミンＲ^１ＨについてのＣＬｏｇＰ値を次に示す。ＣＬｏｇＰ値はすべて０.３００未満であり、－１.４８４～０.２４８の範囲にある。（ＣＬｏｇＰ値は、パーキン・エルマー社からのCHEMBIODRAW（登録商標）Ultraソフトウェア（Version 14.0.0.126）を用いて算定された。（同じソフトウェアを用い、この明細書のどのような箇所においても引用されるＣＬｏｇＰ値を算定した。）

【化39】

【0074】

比較のために、Tichenorら、2007は、セコ－ＣＰＩコアと結合した、ピロロジニルアミドを有する化合物１５ａおよび１５ｂを開示するが、その対応するアミン（ピロリン）のＣＬｏｇＰ値は有意に高い（０.３７６）。

【化40】

【0075】

かくして、１の実施態様において、基Ｒ^１は、上記したCHEMBIODRAW（登録商標）ソフトウェアを用いて算定した場合に、その対応するアミンＲ^１ＨのＣＬｏｇＰ値が、０.３００未満のものである。

【0076】

コンジュゲート
概要
本発明のセコ－ＣＰＩ化合物は、それ自体で治療薬として用いることができるが、コンジュゲートにて使用されるのが好ましい。より好ましくは、そのコンジュゲートの標的部分が抗体またはその抗原結合部であり、その抗原が腫瘍関連抗原、すなわち、腫瘍細胞により発現される抗原である。腫瘍関連抗原は、正常細胞と比べて、がん細胞によって独自に発現されるか、または過剰発現されることが好ましい。腫瘍関連抗原はがん細胞の表面に位置付けられるか、またはがん細胞によりその近辺に分泌されることが好ましい。

【0077】

かくして、本発明のもう一つ別の態様は、本発明のセコ－ＣＰＩ化合物、およびリガンドを含む、式（ＩＩ）：
［Ｄ（Ｘ^Ｄ）_ａ（Ｃ）_ｃ（Ｘ^Ｚ）_ｂ］_ｍＺ
［式中、Ｚは標的部分であり、Ｄは本発明のセコ－ＣＰＩ化合物であり、－（Ｘ^Ｄ）_ａ（Ｃ）_ｃ（Ｘ^Ｚ）_ｂ－は、ＺとＤを連結するために、総称して「リンカー部分」または「リンカー」と称される。リンカーの中で、ＣはＤの意図する生物学的作用の部位で、またはその近辺で切断されるように設計された設計可能な基であり；Ｘ^ＤおよびＸ^Ｚは、各々、ＤとＣおよびＣとＺの間に間隔を設ける、スペーサー部分（または「スペーサー」）であり；ａ、ｂおよびｃの下付き文字は、独立して、０または１である（すなわち、Ｘ^Ｄ、Ｘ^Ｚ、およびＣの存在は任意である）。下付き文字のｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（好ましくは、１、２、３、または４）である。Ｄ、Ｘ^Ｄ、Ｃ、Ｘ^ＺおよびＺは、下記においてさらに十分に記載される。

【0078】

標的組織または細胞に結合することにより、その抗原または受容体は位置付けられ、Ｚはコンジュゲートをそこに向くように指示する。標的組織または細胞でのＣ基の切断は、Ｄを放出し、その細胞傷害性作用を局所的に発揮する。ある場合には、コンジュゲートは、エンドサイトーシスにより標的細胞中に内在化され、切断が標的細胞内で起こる。この場合、Ｄの正確なデリバリーが意図する作用部位で達成され、必要とされる用量が減る。また、Ｄはそのコンジュゲートした状態で正常では生物学的に不活性（または活性が有意に低い）であり、そのため標的としない組織または細胞に対する望ましくない傷害性が減少する。

【0079】

下付き文字のｍによって示されるように、Ｚは、各々、コンジュゲーションのために利用できるＺの部位の数、および利用される実験条件に応じて、１個より多くのＤとコンジュゲートし得る。当業者にとって、個々のＺが、各々、整数のＤとコンジュゲートするとはいえ、コンジュゲートの製造は、統計的平均を反映する、ＤのＺに対する非整数割合について分析し得る。この割合は置換割合（「ＳＲ」）または薬物－抗体割合（「ＤＡＲ」）と称される。

【0080】

標的とする部分Ｚ
好ましくは、標的とする部分Ｚは抗体である。便宜および簡潔のためであって、限定するものではなく、本明細書中で、Ｚおよびそのコンジュゲートに関する詳細な考察は、その文脈にて、抗体であると記載されているが、当業者であれば、変更すべきところは変更して、他の型のＺがコンジュゲートし得ることを理解するであろう。例えば、標的とする部分としての葉酸とのコンジュゲートは、その表面に葉酸レセプターを有する細胞を標的としうる（Leamonら、Cancer Res. 2008, 68 (23), 9839）。同じ理由で、本明細書中の詳細な考察は、主に、ＺがＤに対して１：１の割合の単位で記載されている（ｍ＝１）。

【0081】

好ましくは、Ｚは腫瘍関連抗原に対する抗体であり、がん細胞を選択的に標的化することができる。かかる抗原の例として、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｏ８Ｅとしても公知）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン－３、ＲＧ１、フコシル－ＧＭ１、ＣＴＬＡ４、およびＣＤ４４を挙げることができる。抗体は動物（例、ネズミ）、キメラ、ヒト化、または、好ましくは、ヒト抗体とすることができる。抗体はモノクローナル、特にモノクローナルヒト抗体であることが好ましい。上記したいくつかの抗原に対するヒトモノクローナルヒト抗体の製造が、Kormanら、US 8,609,816 B2（2013；Ｂ７Ｈ４、０８Ｅとしても知られる；特に抗体２Ａ７、１Ｇ１１、および２Ｆ９）；Rao－Naikら、8,097,703 B2（2012；ＣＤ１９；特に抗体５Ｇ７、１３Ｆ１、４６Ｅ８、２１Ｄ４、２１Ｄ４ａ、４７Ｇ４、２７Ｆ３、および３Ｃ１０）；Kingら、US 8,481,683 B2（2013；ＣＤ２２；特に抗体１２Ｃ５、１９Ａ３、１６Ｆ７、および２３Ｃ６）；Kelerら、US 7,387,776 B2（2008；ＣＤ３０；特に抗体５Ｆ１１、２Ｈ９、および１７Ｇ１）；Terrettら、US 8,124,738 B2（2012；ＣＤ７０；特に抗体２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７、および６９Ａ７）；Kormanら、US 6,984,720 B1（2006；ＣＴＬＡ－４；特に抗体１０Ｄ１、４Ｂ６、および１Ｅ２）；Visticaら、US 8,383,118 B2（2013、フコシル－ＧＭ１、特に抗体５Ｂ１、５Ｂ１ａ、７Ｄ４、７Ｅ４、１３Ｂ８、および１８Ｄ５）；Kormanら、US 8,008,449 B2（2011；ＰＤ－１；特に抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、４Ａ１１、７Ｄ３、および５Ｆ４）；Huangら、US 2009／0297438 A1（2009；ＰＳＭＡ．特に抗体１Ｃ３、２Ａ１０、２Ｆ５、２Ｃ６）；Cardarelliら、US 7,875,278 B2（2011；ＰＳＭＡ；特に抗体４Ａ３、７Ｆ１２、８Ｃ１２、８Ａ１１、１６Ｆ９、２Ａ１０、２Ｃ６、２Ｆ５、および１Ｃ３）；Terrettら、US 8,222,375 B2（2012；ＰＴＫ７；特に抗体３Ｇ８、４Ｄ５、１２Ｃ６、１２Ｃ６ａ、および７Ｃ８）；Terrettら、US 8,680,247 B2（2014；グリピカン－３；特に抗体４Ａ６、１１Ｅ７、および１６Ｄ１０）；Harkinsら、US 7,335,748 B2（2008；ＲＧ１；特に抗体Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤ）；Terrettら、US 8,268,970 B2（2012；メソテリン；特に抗体３Ｃ１０、６Ａ４、および７Ｂ１）；Xuら、US 2010／0092484 A1（2010；ＣＤ４４；特に抗体１４Ｇ９．Ｂ８．Ｂ４、２Ｄ１．Ａ３．Ｄ１２、および１Ａ９．Ａ６．Ｂ９）；Deshpandeら、US 8,258,266 B2（2012；ＩＰ１０；特に抗体１Ｄ４、１Ｅ１、２Ｇ１、３Ｃ４、６Ａ５、６Ａ８、７Ｃ１０、８Ｆ６、１０Ａ１２、１０Ａ１２Ｓ、および１３Ｃ４）；Kuhneら、US 8,450,464 B2（2013；ＣＸＣＲ４；特に抗体Ｆ７、Ｆ９、Ｄ１、およびＥ２）；およびKormanら、US 7,943,743 B2（2011；ＰＤ－Ｌ１；特に抗体３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、および１３Ｇ４）にて開示されており；それらの開示は出典を明示することで本明細書に組み込まれる。

【0082】

抗体であることに加えて、Ｚは、抗原フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、またはＦｖなど）と、あるいはアフィボディ（affibody）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ナノボディ、ウニボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、ベルサボディ、デュオカリン、リポカリン、またはアビマーとすることもできる。

【0083】

リシン残基上のε－アミノ基、ペンダント炭水化物部分、アスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖上のカルボン酸基、システイン－システインのジスルフィド基、およびシステインチオール基を含め、Ｚにある数種の異なる反応基のいずれの基もコンジュゲーション部位であり得る。コンジュゲーションに適する抗体反応基を再検討するために、例えば、Garnett、Adv. Drug Delivery Rev. 2001, 53, 171－216、ならびにDubowchikおよびWalker、Pharmacology & Therapeutics 1999, 83, 67－123を参照のこと；それらの開示は、その出典を明示することにより本明細書に組み込まれる。

【0084】

大抵の抗体は複数のレジン残基を有し、それはそのε－アミノ基を介して、アミド、尿素、チオ尿素、またはカルバマート結合を通してコンジュゲートしうる。

【0085】

もう一つ別の実施態様において、Ｚは、多数の抗体がグリコシル化されるように、炭水化物側鎖を介してコンジュゲートされうる。炭水化物側鎖は過ヨウ素酸塩を用いて酸化されてアルデヒド基を生成し、それは順次にアミンと反応してセミカルバゾン、オキシムまたはヒドラゾンにあるようなイミン基を形成し得る。所望により、該イミン基は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元することでより安定したアミン基に変換され得る。炭水化物側鎖を介するコンジュゲーションに対するさらなる開示については、例えば、Rodwellら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83、2632－2636（1986）を参照のこと；その内容を出典明示により本明細書の一部とする。

【0086】

もう一つ別の実施態様において、Ｚはアスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖を介して、例えば、カルボヒドラジドへの変換によってコンジュゲートし、次にそれをアルデヒド担持のリンカーと反応させることができる。Fischら、Bioconjugate Chemistry 1992, 3, 147－153を参照のこと。

【0087】

システインの側鎖にあるチオール（－ＳＨ）基を、数種の方法によって用い、コンジュゲートを形成することができる。それを用いてそれとリンカーにあるチオール基との間でジスルフィド結合を形成することができる。もう一つ別の方法は、それをマイケル（Michael）付加を介してリンカーにあるマレイミド基に付加することである。

【0088】

典型的には、抗体はシステイン残基を有するが、そのすべてのシステインが鎖内または鎖間ジスルフィド結合に携わっているため、それらは遊離チオール基を欠く。遊離チオール基を生成するには、本来あるジスルフィド基を還元することができる。例えば、Packardら、Biochemistry 1986, 25, 3548；Kingら、Cancer Res. 1994, 54, 6176；およびDoroninaら、Nature Biotechnol. 2003, 21, 778を参照のこと。あるいはまた、遊離－ＳＨ基を有するシステインは、抗体を変異させるか、システインを他のアミノ酸と置換するか、または遊離基をポリペプチド鎖に挿入することにより導入することができる。例えば、Eigenbrotら、US 7,521,541 B2（2009）；Chilkotiら、Bioconjugate Chem. 1994, 5, 504；Urnovitzら、US 4,698,420（1987）；Stimmelら、J. Biol. Chem. 2000, 275, 30445；Bamら、US 7,311,902 B2（2007）；Kuanら、J. Biol. Chem. 1994, 269, 7610；Poonら、J. Biol. Chem. 1995, 270, 8571；Junutulaら、Nature Biotechnology 2008, 26, 925およびRajpalら、US仮出願番号62/270245（２０１５年１２月２１日出願）を参照のこと。さらにもう一つ別の方法において、システインを重鎖または軽鎖のＣ－末端に付加する。例えば、Liuら、US 8,865,875 B2（2014）；Cumberら、J. Immunol. 1992, 149, 120；Kingら、Cancer Res. 1994, 54, 6176；Liら、Bioconjugate Chem. 2002, 13, 3, 985；Yangら、Protein Engineering 2003, 16, 761；およびOlafsonら、Protein Engineering Design & Selection 2004, 17, 21を参照のこと。この段落で引用される文献の開示内容は出典明示により本明細書の一部とされる。

【0089】

リンカーおよびその成分
上記されるように、リンカーは、３個までの因子：切断可能な基Ｃ、および任意のスペーサーＸ^ＺおよびＸ^Ｄを含む。

【0090】

基Ｃは生理学的条件で切断可能である。コンジュゲートが血中において循環している間は、該基は相対的に安定しているが、一旦、該コンジュゲートが標的細胞の付近の、標的細胞の、またはその内部にある意図する作用部位に到達すると、容易に切断されることが好ましい。該コンジュゲートは、抗体Ｚの、標的細胞の表面で提示される抗原と結合して、標的細胞により内在化されることが好ましい。その後で、Ｃの切断が標的細胞の小胞体（初期エンドソーム、後期エンドソーム、または特にリソソーム）で生じる。

【0091】

１の実施態様において、ＣはｐＨ感受性基である。リソソーム内部のｐＨは酸性であり、約５であるが、血漿中のｐＨは中性よりも若干上である。かくして、酸感受的なＣは、血中よりもリソソーム内部で桁違いに速い速度で切断するであろう。酸感受性基の例は、Shenら、US 4,631,190（1986）；Shenら、US 5,144,011（1992）；Shenら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 1981, 102, 1048；およびYangら、Proc. Natl Acad. Sci（USA） 1988, 85, 1189（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるように、シス－アコニチルアミドおよびヒドラゾンである。

【0092】

もう一つ別の実施態様において、Ｃはジスルフィドである。ジスルフィドは、周辺のチオール濃度に依存する速度で、チオール－ジスルフィド交換機構により切断され得る。グルタチオンおよび他のチオールの細胞内濃度はその血清中濃度よりも高いため、ジスルフィドの切断速度は細胞内においてより速いであろう。さらには、チオール－ジスルフィドの交換速度は、血清中安定性および特定の切断速度を強化する、ジスルフィドの連結を設計することを可能とする、ジスルフィドの立体特性および電子的特性を調整すること（例、アルキル－アリールのジスルフィド ｖｓ アルキル－アルキルジスルフィド；アリール環での置換等）により制御され得る。例えば、Thorpeら、Cancer Res. 2008, 48, 6396－6403；Santiら、US 7,541,530 B2（2009）；Ngら、US 6,989,452 B2（2006）；Ngら、WO 2002/096910 A1；Boydら、US 7,691,962 B2（2010）；およびSufiら、US 8,461,117 B2（2013）（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0093】

好ましい基Ｃは、血清中のプロテアーゼによる切断とは対照的に、標的細胞の内部にあるプロテアーゼにより選択的に切断されるペプチドである。典型的には、該ペプチドは１～２０個のアミノ酸、好ましくは、１～６個のアミノ酸、より好ましくは、２～３個のアミノ酸を含む。アミノ酸は、天然および／または非天然のα－アミノ酸とすることができる。天然アミノ酸は、遺伝コードによってコード化されるアミノ酸、ならびに天然アミノ酸より誘導されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタマート、シトルリン、およびＯ－ホスホセリンである。本明細書において、「アミノ酸」なる語はまた、アミノ酸アナログおよび模倣体を包含する。アナログは、Ｒ基が天然アミノ酸の内で見られる基とは異なることを除いて、天然アミノ酸と同じ一般構造：Ｈ_２Ｎ（Ｒ）ＣＨＣＯ_２Ｈを有する化合物である。アナログの例として、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニン－スルホキシド、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。アミノ酸模倣体は、α－アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、α－アミノ酸と類似する様式にて機能する化合物である。アミノ酸は、遺伝的にコードされたアミノ酸の「Ｌ」立体化学とすることができ、ならびにエナンチオマー「Ｄ」立体化学とすることもできる。

【0094】

Ｃ基は、プロテアーゼに対して切断可能な認識配列である、アミノ酸配列を含有することが好ましい。多くの切断可能な認識配列は当該分野にて知られている。例えば、Matayoshiら、Science 247: 954（1990）；Dunnら、Meth. Enzymol. 241: 254（1994）；Seidahら、Meth. Enzymol. 244: 175（1994）；Thornberry、Meth. Enzymol. 244: 615（1994）；Weberら、Meth. Enzymol. 244: 595（1994）；Smithら、Meth. Enzymol. 244: 412（1994）；およびBouvierら、Meth. Enzymol. 248: 614（1995）（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0095】

細胞によって内在化されることを意図としないコンジュゲートでは、Ｃ基は、それががんの近辺にある細胞外マトリックス中に存在するプロテアーゼにより、例えば、がん細胞の死亡により付近に放出されるプロテアーゼ、またはがん細胞により分泌される腫瘍関連性プロテアーゼにより切断されるように選択され得る。代表的な細胞外腫瘍関連性プロテアーゼは、プラスミン、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、チメットオリゴペプチダーゼ（thimet oligopeptidase）（ＴＯＰ）およびＣＤ１０である。例えば、Trouetら、US 7,402,556 B2（2008）；Duboisら、US 7,425,541 B2（2008）；およびBebbingtonら、US 6,897,034 B2（2005）を参照のこと。

【0096】

細胞により内在化されるように設計されたコンジュゲートでは、Ｃは、好ましくは、エンドソームまたはリソソームのプロテアーゼ、特に後者によって切断されるように選択されたアミノ酸配列を含む。限定されないが、かかるプロテアーゼの例として、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳが、特にカテプシンＢが挙げられる。カテプシンＢで切断可能な典型的なペプチドは、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｇｌｙ、Ｖａｌ－Ｇｌｎ、およびＡｓｐ－Ｖａｌ－Ｃｉｔを包含する。（ここで、アミノ酸配列は、文脈にてそうでないと明確に記載されない限り、Ｈ_２Ｎ ＡＡ^２ ＡＡ^１ ＣＯ_２Ｈにあるように、ＮからＣへの方向で記載される。）Dubowchikら、Biorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3341；Dubowchikら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3347；およびDubowchikら、Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）。

【0097】

ペプチドリンカーを切断するのに利用され得るもう一つ別の酵素が、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎを優先的に切断する、レグマイン、リソソームシステインプロテアーゼである。

【0098】

１の実施態様において、基Ｃは、２個のアミノ酸配列－ＡＡ^２－ＡＡ^１－を含むペプチドであり、ここでＡＡ^１はリシン、アルギニン、またはシトルリンであり、ＡＡ^２はフェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシンである。もう一つ別の実施態様において、Ｃは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ、Ｃｉｔ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、およびＧｌｕからなる群より選択される１～３個のアミノ酸の配列より構成される。より好ましくは、上記の群より選択される２ないし３個のアミノ酸ペプチドである。

【0099】

単一のアミノ酸からなる切断可能な基Ｃの製造および設計は、その開示が出典明示により本明細書の一部を形成する、Chenら、US 8,664,407 B2（2014）に開示される。

【0100】

基Ｃは、ＺまたはＤに直接結合され得る；すなわち、スペーサーＸ^ＺまたはＸ^Ｄが、場合によっては、不在とすることができる。

【0101】

存在する場合、スペーサーＸ^Ｚは、前者が立体的に後者による抗原結合を立体的に干渉しないように、または後者が立体的に前者の切断を干渉しないように、ＣとＺの間に空間的隔離を提供する。さらには、スペーサーＸ^Ｚは、コンジュゲートに対して安定性を増やすか、凝集を減らす特性を付与するのに使用され得る。スペーサーＸ^Ｚは、１または複数のモジュラーセグメントを含み、それはある数の組み合わせにてアセンブルされ得る。スペーサーＸ^Ｚについて適切なセグメントの例として、

【化41】

およびその組み合わせであり、
ここで、下付き文字のｇは０または１であり、下付き文字のｈは１～２４であり、好ましくは２～４である。これらのセグメントは、下記：

【化42】

に示されるように組み合わせることができる。

【0102】

スペーサーＸ^Ｄは、存在するならば、後者が立体的または電子的に前者の切断を干渉しないように、ＣとＺの間に空間的隔離を提供する。スペーサーＸ^Ｄはまた、分子量を付加し、化学官能性をコンジュゲートに導入するのに供することもできる。一般的に、質量および機能性の付加は血清の半減期およびコンジュゲートの他の特性に影響を及ぼすであろう。かくしてスペーサー基の思慮深い選択を通して、コンジュゲートの血清中半減期は調整され得る。スペーサーＸ^Ｄもまた、スペーサーＸ^Ｚについて上記されるのと同様にモジュール式セグメントより組み立てることができる。

【0103】

スペーサーＸ^Ｚおよび／またはＸ^Ｄは、存在する場合には、各々、ＺとＣ、またはＤとＣの間で、好ましくは４～２５個の、より好ましくは４～２０個の原子のリンカー分離を提供する。

【0104】

リンカーは、抗体と薬物とを共有結合させるのに加えて、他の機能も果たしうる。例えば、リンカーはポリ（エチレングリコール）（「ＰＥＧ」）基を含有しうる。コンジュゲーション工程は、典型的には、水性媒体中で薬物－リンカーを抗体にカップリングさせることを含むため、ＰＥＧ基は薬物－リンカーの水溶解度を向上させ得る。また、ＰＥＧ基は、ＡＤＣを得るにおいて、溶解度を向上させるか、または凝集を減らすかもしれない。ＰＥＧ基が存在する場合、それはスペーサーＸ^ＺまたはＸ^Ｄのいずれかに、あるいはその両方に導入されてもよい。ＰＥＧの繰り返し単位の数は、２～２０、好ましくは４～１０とすることができる。

【0105】

スペーサーＸ^ＺまたはＸ^Ｄのいずれかに、あるいはその両方に自己犠牲部分を含めることができる。自己犠牲部分は、場合によっては、（１）Ｃに結合し、そしてＺおよびＤのいずれかに結合し、および（２）基Ｃから切断されることで反応シーケンスが始まり、それ自体をＺまたはＤから剥離する自己犠牲部分をもたらすような構造を有する、部分である。言い換えれば、ＺまたはＤから遠く離れた部位での反応（基Ｃからの切断）はＸ^Ｚ－ＺまたはＸ^Ｄ－Ｄ結合を、その上に断裂をも引き起こす。自己犠牲部分の存在は、スペーサーＸ^Ｄの場合には望ましい。というのも、コンジュゲートの切断後に、仮にスペーサーＸ^Ｚまたはその一部がＤに結合したまま残った場合、Ｄの生物学的活性が損なわれるこもしれないからである。自己犠牲部分の使用は、切断可能な基Ｃがポリペプチドである場合、その際には自己犠牲部分は、Ｄがペプチドの切断を立体的に、または電子的に干渉することを防止するように、典型的には、それに隣接して配置されることが特に望ましい。

【0106】

Ｄのヒドロキシル基またはアミノ基と結合する例示としての自己犠牲部分（ｉ）－（ｖ）は以下のとおりである。

【化43】

【0107】

自己犠牲部分は、点線のａとｂ（または点線のｂとｃ）の間の構造式で示される部分であり、隣接する構造的特徴を一緒に示すことで前後関係を明確にする。自己犠牲部分（ｉ）および（ｖ）はＤ－ＮＨ_２と結合し（すなわち、コンジュゲーションはアミノ基を介してなされている）、その一方で自己犠牲部分（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）はＤ－ＯＨに結合する（すなわち、コンジュゲーションはヒドロキシルまたはカルボキシル基を介してなされている）。点線ｂでの酵素による結合の切断、構造式（ｉ）－（ｖ）の場合にはペプチダーゼ、および構造式（ｖｉ）の場合にはβ－グルクロニダーゼによる切断は、場合によっては、自己犠牲の一連の反応を開始し、点線ａで結合が切断され、その結果としてＤ－ＯＨまたはＤ－ＮＨ_２の放出が始まる。具体的には、構造式（ｉ）および（ｉｖ）の自己犠牲機構を以下に示す：

【化44】

【0108】

言い換えれば、自己犠牲基の一の部分で第１の化学結合が切断されて、自己犠牲基を薬物と接続する結合である、第２の化学結合が自己犠牲基の異なる部分で切断され、それにより薬物の放出がなされる、一連の工程が始まる。

【0109】

ある場合には、自己犠牲基は、構造式（ｖｉｉ）に示されるように、タンデムで使用され得る。そのような場合には、点線ｃでの切断がトリガーとなり、１,６－脱離反応によって点線ｂとｃの間にある部分を自己犠牲に付し、つづいて環化脱離反応によって点線ａとｂの間にある部分が自己犠牲に付される。自己犠牲部分に関するさらなる開示については、Carlら、J. Med. Chem. 1981, 24, 479；Carlら、WO 81/01145（1981）；Dubowchikら、Pharmacology & Therapeutics 1999, 83, 67；Firestoneら、US 6,214,345 B1（2001）；Tokiら、J. Org. Chem. 2002, 67, 1866；Doroninaら、Nature Biotechnology 2003, 21, 778（誤字、p. 941）；Boydら、US 7,691,962 B2；Boydら、US 2008/0279868 A1；Sufiら、WO 2008/083312 A2；Feng、US 7,375,078 B2；Jeffreyら、US 8,039,273；およびSenterら、US 2003/0096743 A1（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0110】

もう一つ別の実施態様は、ＺとＤが、切断できないリンカーで連結されている、すなわち、Ｃが不在の場合である。Ｄの代謝作用は、最終的には、リンカーを、Ｄの生物学的活性に干渉しない小さな添付部分にまで縮小する。

【0111】

コンジュゲーション技法
本発明のコンジュゲートは、好ましくは、Ｄおよびリンカー：（Ｘ^Ｄ）_ａ（Ｃ）_ｃ（Ｘ^Ｚ）_ｂ（ここで、Ｘ^Ｄ、Ｃ、Ｘ^Ｚ、ａおよびｂは式（ＩＩ）で定義されたとおりである）を含む化合物をまず調製し、式（ＩＩＩ）：
Ｄ－（Ｘ^Ｄ）_ａ（Ｃ）_ｃ（Ｘ^Ｚ）_ｂ－Ｒ^３１ （ＩＩＩ）
［式中、Ｒ^３１は、Ｚにある補足的官能基と反応するのに適する官能基である］
で示される薬物－リンカーの化合物を形成することにより製造される。適切な基Ｒ^３１の例として、アミノ、アジド、チオール、シクロオクチン、

【化45】

が挙げられ、ここでＲ^３２はＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、メシラート、またはトシラートであり、Ｒ^３３はＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、ＯＨ、－Ｏ－Ｎ－スクシニミジル、－Ｏ－（４－ニトロフェニル）－Ｏ－ペンタフルオロフェニル、または－Ｏ－テトラフルオロフェニルである。適切な部分のＤ－（Ｘ^Ｄ）_ａＣ（Ｘ^Ｚ）_ｂ－Ｒ^３１を製造するのに一般的に使用できる化学が、Ngら、US 7,087,600 B2（2006）；Ngら、US 6,989,452 B2（2006）；Ngら、US 7,129,261 B2（2006）；Ngら、WO 02/096910 A1；Boydら、US 7,691,962 B2；Chenら、US 7,517,903 B2（2009）；Gangwarら、US 7,714,016 B2（2010）；Boydら、US 2008/0279868 A1；Gangwarら、US 7,847,105 B2（2010）；Gangwarら、US 7,968,586 B2（2011）；Sufiら、US 8,461,117 B2（2013）；およびChenら、US 8,664,407 B2（2014）（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）に開示されている。

【0112】

好ましくは、反応性官能基－Ｒ^３１は、－ＮＨ_２、－ＯＨ、－ＣＯ_２Ｈ、－ＳＨ、マレイミド、シクロオクチン、アジド（－Ｎ_３）、ヒドロキシルアミノ（－ＯＮＨ_２）またはＮ－ヒドロキシスクシンイミドである。特に好ましい官能基Ｒ^３１は：

【化46】

である。

【0113】

－ＯＨ基は、抗体にある、例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸側鎖にあるカルボキシ基でエステル化され得る。

【0114】

－ＣＯ_２Ｈ基は、抗体にある、－ＯＨ基でエステル化されるか、アミノ基でアミド化され得る（例えば、リシン側鎖にある）。

【0115】

Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド基は、機能的に、活性化されたカルボキシル基であり、都合よくは（例えば、リシンからの）アミノ基との反応によってアミド化され得る。

【0116】

マレイミド基は、抗体にある－ＳＨ基（例えば、システインから由来の、または抗体を化学的に修飾してスルフヒドリル官能基を導入してから由来の－ＳＨ基）と、マイケル付加反応にてコンジュゲートされ得る。

【0117】

抗体がコンジュゲーションに利用できるシステイン－ＳＨを有しない場合、リシン残基の側鎖にあるε－アミノ基を２－イミノチオランまたはＮ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（「ＳＰＤＰ」）と反応させて、遊離チオール（－ＳＨ）基を作り出すシステインサロゲートを導入することができる。そのチオール基はマレイミドまたは他の求核アクセプター基と反応してコンジュゲーションを行うことができる。下記に２－イミノチオランとの反応機構で例証する。

【化47】

【0118】

典型的には、抗体に付き２ないし３個のチオールのチオール化レベルが達成される。典型的な操作については、Congら、US 8,980,824 B2（2015）（その開示を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。

【0119】

逆の順序で、抗体ＺをＮ－スクシンイミジル４－（マレイミドメチル）－シクロヘキサンカルボキシラート（「ＳＭＣＣ」）またはそのスルホン酸化変種のスルホ－ＳＭＣＣ（両方ともSigma－Aldrichより入手可能である）を用いて修飾し、マレイミド基をその中に導入することができる。次に、コンジュゲーションは、リンカーに－ＳＨ基のある薬物－リンカー化合物を用いて行われうる。

【0120】

別のコンジュゲーション方法は、銅不含の「クリックケミストリー」を利用するものであり、それではアジド基をストレインの（strained）シクロオクチンをアクロスして加え、１,２,３－トリアゾール環を形成する。例えば、Agardら、J. Amer. Chem. Soc. 2004, 126, 15046；Best, Biochemistry 2009, 48, 6571（それらの開示を出典明示により本明細書の一部とする）を参照のこと。アジドを抗体に、シクロオクチンを薬物－リンカー部分に位置付けること、またはその逆にすることができる。好ましいシクロオクチン基はジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）である。ＤＩＢＯ基を有する種々の試薬がInvitrogen/Molecular Probes, Eugene, Oregonより入手可能である。次の反応は、ＤＩＢＯ基が抗体（Ａｂ）と結合した、例示としてのクリックケミストリーのコンジュゲーションを例証する。

【化48】

【0121】

さらにもう一つ別のコンジュゲーション技法は、非天然アミノ酸を抗体中に導入することを含み、ただしその非天然アミノ酸は薬物部分の反応性官能基とコンジュゲーションするために官能基を導入するものである。例えば、TianらがWO 2008/030612 A2（2008）において教示するように、非天然アミノ酸のｐ－アセチルフェニルアラニンを抗体または他のポリペプチドの中に組み込むことができる。ｐ－アセチルフェニルアラニン中のケトン基は、リンカー－薬物部分にあるヒドロキシルアミン基とで、オキシムを形成することを介するコンジュゲーション部位とすることができる。あるいはまた、非天然アミノ酸のｐ－アジドフェニルアラニンは、上記されるように、抗体に組み込まれ、クリックケミストリーを介するコンジュゲーションのためのアジド官能基を提供することができる。非天然アミノ酸はまた、GoerkeらがUS 2010/0093024 A1（2010）にて、およびGoerkeらがBiotechnol. Bioeng. 2009, 102（2）, 400－416にて教示するように、細胞不含の方法を用いて、抗体または他のポリペプチドに組み込むこともできる。上記文献の開示を出典明示により本明細書の一部とする。かくして、１の実施態様において、本発明の薬物とのコンジュゲートを製造するのに使用される抗体は、１または複数のアミノ酸が非天然アミノ酸、好ましくはｐ－アセチルフェニルアラニンまたはｐ－アジドフェニルアラニン、より好ましくはｐ－アセチルフェニルアラニンと置き換えられている。

【0122】

さらに別のコンジュゲーション技法は、Jegerら、Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995を通して、酵素トランスグルタミナーゼ（好ましくは、ストレプトマイセス・モバラエンシス（Streptomyces mobaraensis）から由来の細菌性トランスグルタミナーゼ、またはＢＴＧ）を用いる。ＢＴＧはグルタミンのカルボキシアミド側鎖（アミンレセプター）と、例えば、リシンのε－アミノ基または５－アミノ－ｎ－ペンチル基であり得る、アルキレン基（アミンドナー）との間でアミド結合を形成する。典型的なコンジュゲーション反応において、下記に示されるように、グルタミン残基は抗体上に位置付けられ、その一方でアルキレンアミノ基はリンカー－薬物部分に位置付けられる。

【化49】

【0123】

ポリペプチド鎖上にグルタミン残基を配置することは、ＢＴＧ介在のトランスアミド化に対するその感受性に対して大きな効果を有する。抗体にあるグルタミン残基は、正常では、一つとしてＢＴＧ基質ではない。しかしながら、抗体が脱グリコシル化されると、重鎖のアスパラギン２９７（Ｎ２９７；ＥＵインデックスによる番号付け、Kabatら、「免疫学的に関心のあるタンパク質の配列（Sequences of proteins of immunological interest）、第5版、Pub. No. 91－3242、U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda、Md.,1991；以下「Kabat」という）－近接するグルタミン２９５（Ｑ２９５）であるグリコシル化部位はＢＴＧに感受性とされる。抗体はＰＮＧａｓｅＦ（ペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＦ）を用いて処理されると酵素的に脱グリコシル化され得る。あるいはまた、抗体は、Ｎ２９７Ａ変異を定常領域に導入し、Ｎ２９７グリコシル化部位を排除することによって、グリコシド不含で合成され得る。さらには、Ｎ２９７Ｑ置換はグリコシル化を排除するだけでなく、（２９７位で）アミンレセプターでもある、第２のグルタミン残基を導入することも明らかにされた。かくして、１の実施態様において、本発明の薬物とコンジュゲートする抗体は、脱グリコシル化される。もう一つ別の実施態様において、抗体はＮ２９７Ｑ置換を有する。当業者にとって、合成後に修飾することで、またはＮ２９７Ａ変異を導入することによる脱グリコシル化は、抗体当たり２個のＢＴＧ反応性グルタミン残基（２９５位で、重鎖に付き１個）を作製し、一方でＮ２９７Ｑ置換のあった抗体は４個のＢＴＧ反応性グルタミン残基を有するであろう（２９５と２９７位で、重鎖に付き２個）。

【0124】

抗体は、例えば、Ponsら、US 2013/0230543 A1（2013）およびRao－Naikら、PCT Application No. PCT/US2016/020192（2016年３月１日出願）にて教示されるように、グルタミン含有のペプチドを、または「タグ」を導入することによって、ＢＴＧ介在性コンジュゲーションに対して感受的とすることもできる。

【0125】

補足的な解決方法において、ＢＴＧの基質特異性は、Rao－Naikら、US仮出願No. 62/236274（2015年10月2日出願）にて教示されるように、それが修飾された抗体におけるグルタミン２９５と反応できるようにするために、そのアミノ酸配列を変えることによって改変させることができる

【0126】

最後に、一般に最も利用可能な細菌性トランスグルタミナーゼは、エス・モバラエンシス（S. mobaraensis）から由来の細菌性トランスグルタミナーゼであり、少し違う基質特異性を有する、他の細菌から由来のトランスグルタミナーゼ、例えば、ストレプトベルチシリウム・ラダカヌム（Streptoverticillium ladakanum）から由来のトランスグルタミナーゼ（Huら、US 2009/0318349 A1（2009）、US 2010/0099610 A1（2010）、およびUS 2010/0087371 A1（2010））を考慮することもできる。

【0127】

コンジュゲーションはまた、Levaryら、PLoS One 2011、6（4）, e18342；Proft、Biotechnol. Lett. 2010, 32, 1－10；Ploeghら、WO 2010/087994 A2（2010）；およびMaoら、WO 2005/051976 A2（2005）にて教示されるように、酵素ソルターゼＡを用いて行うこともできる。ソルターゼＡ認識モチーフ（典型的には、ＬＰＸＴＧであり、ここでＸは任意の天然アミノ酸である）がリガンドＺに位置付け、求核アクセプターモチーフ（典型的にはＧＧＧ）が式（ＩＩＩ）中の基Ｒ^３１であってもよく、その逆であってもよい。

【0128】

セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物
本発明のセコ－ＣＰＩ化合物のＡＤＣは、セコ－ＣＰＩ化合物にある官能基に結合したリンカーを含み、そのリンカーは抗体と結合している。当該分野にて知られるコンジュゲーション技法の多様性を鑑みて、本発明のセコ－ＣＰＩ化合物は、抗体とのコンジュゲーションに適する多数の異なるセコ－ＣＰＩ化合物－リンカー化合物を構成することができる。

【0129】

一般に、リンカーと、本発明のセコ－ＣＰＩ化合物との結合には、下記に示されるように、３つの異なる部位がある。

【化50】

【0130】

（ａ）型のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物において、リンカーは結合サブユニットのフェニール性ヒドロキシルに結合し、結合するも、ＣＰＩ構造との環化を妨げるプロドラッグ基として作用する。（ｂ）型のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物において、リンカーはＲ^１基にある、アミノ、カルボキシ、またはヒドロキシル基などの、適切な官能基を介して結合する。（ｃ）型のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物において、リンカーはＲ^３基にある、アミノ、カルボキシ、またはヒドロキシル基などの、適切な官能基を介して結合する。（ｂ）および（ｃ）型において、フェニール性ヒドロキシル基が、所望により、上記されるように、プロドラッグ化され得る。

【0131】

１の実施態様において、（ａ）型セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ）：

【化51】

［式中：
Ｔは自己犠牲基であり；
ｔは０または１であり；
ＡＡ^ａおよび各ＡＡ^ｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、and バリンからなる群より独立して選択され；
ｕは０または１であり；
ｐは１、２、３、または４であり；
ｑは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２（好ましくは、２、３、４、または８）であり；
ｒは１、２、３、４、または５であり；
ｓは０または１であり；
ｖは０または１であり；
Ｒ^３１はＨ、

【化52】

である；ただし、ｓが１で、ｖが０の場合にのみ、Ｒ^３１はＨと、そしてｓが１で、Ｒ^３１がＨである場合にのみ、ｖは０とすることができ；および
Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、式（Ｉ）に関して、上記の「発明の概要」のセクションにて定義されるとおりである］
で示されうる。

【0132】

式（ＩＩＩａ）に関するセコ－ＣＰＩリンカーの１の実施態様において、Ｒ^３は、

【化53】

であり、とりわけＲ^４、Ｒ^６、およびＲ^７の各々がＨの場合である。

【0133】

１の実施態様において、ｕは、式（ＩＩＩａ）において、１である。

【0134】

部分－ＡＡ^ａ－［ＡＡ^ｂ］_ｐ－は、その長さがｐ値によって定められるポリペプチド（ｐが１ならば、ジペプチドを、ｐが３ならばテトラペプチド等）を表す。ＡＡ^ａは、ポリペプチドのカルボキシ末端にあり、そのカルボキシル基は、セコ－ＣＰＩ化合物のアミン窒素とペプチド（アミド）結合を形成する。逆に、最後のＡＡ^ｂはポリペプチドのアミノ末端にあり、そのα－アミノ基は、ｓが１または０のいずれであるかに応じて、各々、

【化54】

とペプチド結合を形成する。好ましいポリペプチド－ＡＡ^ａ－［ＡＡ^ｂ］_ｐ－は、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｇｌｙ、Ｖａｌ－Ｇｌｎ、およびＡｓｐ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ（慣用的にＮ末端からＣ末端方向に、Ｈ_２Ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＣＯ_２Ｈのように記載される）である。より好ましくは、該ポリペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、またはＶａｌ－Ａｌａである。好ましくは、ポリペプチド－ＡＡ^ａ－［ＡＡ^ｂ］_ｐ－は、標的とする（がん）細胞内にある酵素、例えば、カテプシン、特にカテプシンＢによって切断され得る。

【0135】

下付き文字ｔが０または１であることで示されるように、自己犠牲基Ｔが所望により存在してもよい。好ましい自己犠牲基Ｔは、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢＡ）基であり、下記：

【化55】

に示される構造を有し（フェノール性酸素は示されない）、星印（＊）はセコ－ＣＰＩ化合物のフェノール性酸素と結合する末端を示し、波線

【化56】

はポリペプチド－ＡＡ^ａ－［ＡＡ^ｂ］_ｐ－に結合する末端を示す。

【0136】

もう一つ別の好ましい自己犠牲基Ｔは、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）基であり、下記：

【化57】

に示される構造を有する。

【0137】

ある場合には、ＰＡＢＡ基が、加水分解に対してより安定しているため、ＰＡＢＣ基よりも好ましいかもしれない。

【0138】

好ましい実施態様において、基Ｒ^３１は

【化58】

である。

【0139】

もう一つ別の好ましい実施態様において、基Ｒ^３１は

【化59】

であるか、またはｖが０で、ｓが１であると同時にＲ^３１はＨである。各場合において、その結果が、各々、トランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーションに関するアミンドナーとして適する、構造式

【化60】

で示される、アミノ末端基を有するセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物である。

【0140】

好ましい（ａ）型のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、式（ＩＩＩａ’）：

【化61】

［式中：
Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^７は、上記した「発明の概要」のセクションにおいて式（Ｉ）にて定義されるとおりであり；
Ｒ^１０は

【化62】

であり；
Ｒ^１１、Ｒ^１２およびＲ^１３は、独立して、Ｈ、ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ、ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_４ＮＨ_２、（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、または（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２であり（すなわち、Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、アミノ酸のグリシン、バリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、およびシトルリンの側鎖残基に相当する）；および
Ｒ^１４は

【化63】

で示される化合物である。

【0141】

好ましくは、Ｒ^１０にあるペプチドが、すなわち、式：

【化64】

に相当する、ペプチドにあるアミノ酸ＨＯ_２ＣＣＨ（Ｒ^１３）ＮＨ_２に関する接尾辞が０である、ジペプチドである。

【0142】

式（ＩＩＩａ’）で示される特定の化合物を表ＩＩＩに示し、ここでＲ^４、Ｒ^６、およびＲ^７は、特記されない限り、Ｈであり、Ｒ^１０はＡまたはＢである：

【化65】

【表5】

【表6】

【0143】

好ましいセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、その完全な構造が次式：

【化66】

で示される（ＩＩＩａ－０６）である。

【0144】

好ましいセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、その完全な構造が次式：

【化67】

で示される（ＩＩＩａ－０９）である。

【0145】

好ましいセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、その完全な構造が次式：

【化68】

で示される（ＩＩＩａ－１２）である。

【0146】

Ａ型のリンカーを有するセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、上記されるように、抗体にあるチオール基と、マイケル付加反応をコンジュゲートするように設計される。Ｂ型のリンカーを有する化合物も、上記されるように、トランスグルタミナーゼを介在してコンジュゲートするように設計される。

【0147】

さらに好ましくは、式（ＩＩＩａ’）において、Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７は、各々、Ｈであり；Ｒ^５は

【化69】

である。

【0148】

コンジュゲート
１の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、（ａ）型のセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物より誘導され、式（ＩＶａ）：

【化70】

［式中：
Ａｂは抗体であり；
Ｒ^４０は、結合手、

【化71】

であり；ここでＡｂと結合するＲ^４０の原子価がオープンであるのは星印（＊）で示され、（ＣＨ_２）_ｒと結合するＲ^４０の原子価がオープンであるのは波線

【化72】

で示され；
ｍは１、２、３、または４であり；
ｖは０または１である：ただし、ｓが１で、Ｒ^４０が結合手の場合にのみ、ｖは０と、そしてｖが０で、ｓが１である場合にのみ、Ｒ^４０は結合手とすることができ；
Ｔ、ｔ、ＡＡ^ａ、ＡＡ^ｂ、ｕ、ｐ、ｑ、ｓ、ｒ、およびＸ^Ａは、式（ＩＩＩａ）に関して定義されるとおりであり；および
Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、上記の「発明の概要」のセクションにて定義されるとおりである。

【0149】

Ｒ^４０が結合手である場合、

【化73】

にある窒素は、下記の式：

【化74】

に付き、抗体Ａｂと直に結合する。

【0150】

式（ＩＶａ）に係るコンジュゲートの１の実施態様において、Ｒ^３は

【化75】

であり、とりわけ、Ｒ^４、Ｒ^６、およびＲ^７は、各々、Ｈである。

【0151】

好ましい実施態様は、式（ＩＶａ）におけるｕが１の場合である。

【0152】

式（ＩＶａ）において、下付き文字のｔとｕが共に０であるならば、その場合リンカーは非切断型のものであり、抗体Ａｂの分解に応じて薬物を放出する。ポリエチレングリコール成分は、もしその存在が、例えばコンジュゲーションの間に薬物－リンカー化合物の溶解性を高め、薬物の生物学的活性に干渉しないことによって有益であるならば、存在してもよい（すなわち、ｓが１である）。

【0153】

医薬組成物
もう一つ別の態様において、本開示は、本発明の化合物、またはそのコンジュゲートの化合物が、医薬的に許容される担体または賦形剤と一緒に処方されて含む、医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、所望により、抗体または他の薬物などの、１または複数の医薬的に活性なさらなる成分を含有してもよい。該医薬組成物は、もう一つ別の治療剤、特にもう一つ別の抗がん剤との併用療法にて投与され得る。

【0154】

医薬組成物は１または複数の賦形剤を含んでもよい。使用されてもよい賦形剤として、担体、界面活性剤、増粘剤または乳化剤、固形結合剤、分散剤または沈殿防止助剤、可溶化剤、着色剤、矯味矯臭剤、被覆剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、保存剤、等張剤、およびそれらの組み合わせが挙げられる。適切な賦形剤の選択および使用は、Gennaro編、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed.（Lippincott Williams & Wilkins 2003）において教示されており、その開示を出典明示により本明細書の一部とする。

【0155】

好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入）に適する。投与経路に応じて、該活性な化合物は、それを酸の作用から、およびそれを不活化し得る他の自然条件から該化合物を保護するためにある材料にて被覆されてもよい。「非経口投与」なる語は、腸内投与、および一般に注射による局所投与以外の投与方法を意味し、限定するものではなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨下注射および注入を包含する。あるいはまた、医薬組成物は、局所、表皮または粘膜経路による、例えば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下または局所投与などの非経口以外の経路を通して投与され得る。

【0156】

医薬組成物は滅菌水溶液または水性分散液の形態とすることができる。それらはマイクロエマルジョン、リポソームまたは高い薬物濃度を達成するのに適する他の秩序だった構造物にて製剤化することもできる。該粗製物はまた、投与前に水中に復元する、凍結乾燥体の形態にて提供され得る。

【0157】

単回剤形を製造するのに担体材料と合わせることのできる活性成分の量は、治療される対象、および個々の投与形式に応じて変化するであろうし、一般に、治療作用を生じさせる組成物の量であろう。この量は、一般に１００％ではなく、約０.０１％～約９９％の活性成分の範囲、好ましくは約０.１％～約７０％の、最も好ましくは約１％～約３０％の活性成分の範囲であり、医薬的に許容される担体と組み合わせられるであろう。

【0158】

投薬計画は治療応答を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスを投与してもよく、複数に分割した用量を経時的に投与してもよく、あるいはその投与量はその状況の緊急性によって、指示されるように比例して減少または増加させてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために、単位投与形の非経口用組成物に処方するのが特に有利である。「単位投与形」なる語は、治療される対象のために、単位投与量として適する物理的に分離した単位をいい；各単位は、必要とされる医薬担体と合わせて、所望の治療応答を惹起するように計算された、所定量の活性化合物を含有する。

【0159】

投与量の範囲は、宿主の体重１ｋｇ当たり約０.０００１～１００ｍｇ、より一般的には０.０１～５ｍｇの範囲である。例えば、投与量は、体重１ｋｇ当たり０.３ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり３ｍｇ、体重１ｋｇ当たり５ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、あるいは１～１０ｍｇ／ｋｇ、あるいはまた０.１～５ｍｇ／ｋｇとすることができる。典型的な治療方法は、週に１回、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、月に１回、３ヶ月毎に１回、または３ないし６ヶ月毎に１回の投与である。好ましい投薬計画は、体重１ｋｇに付き１ｍｇまたは体重１ｋｇに付き３ｍｇを次の投薬スケジュール：（ｉ）４週間毎に６回投与し、次に３ヶ月毎に投与する；（ｉｉ）３週間毎に投与する；（ｉｉｉ）体重１ｋｇに付き３ｍｇを１回投与し、つづいて３週間毎に体重１ｋｇに付き３ｍｇを投与する、の１つを用いて静脈内投与することを含む。ある方法においては、投与量を調整し、約１－１０００μｇ／ｍＬの、ある方法においては約２５－３００μｇ／ｍＬの血漿中抗体濃度を達成する。

【0160】

本発明の化合物の「治療的に効果的な量」は、好ましくは、疾患症状の重篤度の減少、疾患症状のない状態の頻度および持続期間の増加、あるいは疾患に起因する損傷または障害の予防をもたらす。例えば、腫瘍を担持する対象を治療する場合、「治療的に効果的な量」は、好ましくは、腫瘍の成長を、未処理の対象と比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、その上より好ましくは少なくとも約８０％阻害する。治療用化合物を治療的に効果的な量で用い、腫瘍の大きさを減少させ、あるいはまた対象における症状を改善することができ、それは典型的にはヒトにおいてであるが、他の哺乳動物とすることもできる。

【0161】

医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化された送達システムを含め、制御または持続放出性製剤とすることができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生物分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems、J.R. Robinson編、Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。

【0162】

投与は（１）無針皮下注射装置（US 5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；and 4,596,556）；（２）マイクロ輸液ポンプ（US 4,487,603）；（３）経皮装置（US 4,486,194）；（４）注入装置（US 4,447,233および4,447,224）；および（５）浸透装置（US 4,439,196および4,475,196）（それらの開示は出典明示により本明細書の一部とされる）などの医療装置を介して行うことができる。

【0163】

特定の実施態様において、医薬組成物を処方して、インビボにおける適切な分布を保証することができる。例えば、本発明の治療用化合物が血液－脳関門を確実に通過するように、それらは、特定の細胞または器官への選択的輸送を強化するために標的とする部分をさらに含んでもよい、リポソームに処方することができる。例えば、US 4,522,811；5,374,548；5,416,016；および5,399,331；Ranade、J. Clin. Pharmacol. 1989, 29, 685；Umezawaら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988, 153, 1038；Bloemanら、FEBS Lett. 1995, 357, 140；Briscoeら、Am. J. Physiol. 1995, 1233, 134；Schreierら、J. Biol. Chem. 1994, 269, 9090；KeinanenおよびLaukkanen、FEBS Lett. 1994, 346, 123；ならびにKillionおよびFidler、Immunomethods 1994, 4, 273を参照のこと。

【0164】

使用
本発明の化合物またはそのコンジュゲートは、限定されないが、頭部、頚部、鼻腔、鼻洞、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺、および傍神経節腫の腫瘍を含む、頭頸部がん；肝臓および胆管がん、特に肝細胞がん；腸がん、特に大腸がん；卵巣がん；小細胞および非小細胞肺がん（ＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣ）；繊維肉腫、悪性繊維性組織細胞腫、胚性横紋筋肉腫、骨髄肉腫、神経繊維肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫、および肺胞軟部肉腫などの乳がん肉腫；急性前骨髄性白血病（ＡＰＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）などの白血病；中枢神経系の新生物、特に脳がん；多発性骨髄腫（ＭＭ）、リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫、リンパ球黄斑性リンパ腫、毛嚢リンパ腫、粘膜関連性リンパ組織リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ系列大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびＴ細胞未分化大細胞リンパ腫を含む高増殖性疾患などの疾患を治療するために使用され得る。
臨床的に、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、がん性腫瘍の大きさまたは数の減少、および／または（適用される場合に）関連する徴候の減少をもたらすであろう。病理学的には、本明細書に記載の方法の実施および組成物の使用は、がん細胞増殖の阻害、がんまたは腫瘍の大きさの減少、さらなる転移の防止、および腫瘍血管新生の阻害などの病理学的に関連する応答を惹起するであろう。かかる疾患の治療方法は治療的に効果的な量の本発明の組み合わせを対象に投与することを含む。該方法は必要に応じて繰り返すことができる。

【0165】

本発明の化合物またはそれらのコンジュゲートは、抗体、アルキル化剤、血管新生阻害剤、抗代謝剤、ＤＮＡ切断剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ干渉剤、ＤＮＡ小溝結合剤、エンジシン、熱ショックタンパク質９０阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、免疫調整剤、微小管安定化剤、ヌクレオシド（プリンまたはピリミジン）アナログ、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、およびセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤を含む、他の治療剤と組み合わせて投与され得る。特定の治療剤として、アダリムマブ、アンサミトシンＰ３、アウリスタチン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリスタチンＡ、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、シスプラチン、クラドリビン、シタラビン、クリプトフィシン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ジネマイシンＡ、エポチロン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、５－フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、イピリムマブ、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、インフリキシマブ、インターフェロン、インターロイキン、β－ラパコン、レナリドミド、イリノテカン、マイタンシン、メクロレタミン、メルファラン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトマイシンＣ、ニロチニブ、ビボルマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、プロカルバジン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、６－チオグアニジン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、トラスツズマブ、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンが挙げられる。

【0166】

実施例
本発明の実施は、限定ではなく、例示として提供される、以下の実施例を参照することによりさらに理解され得る。

【0167】

実施例１－マイケル付加反応によるコンジュゲーション
この一般的な操作は、リシンε－アミノ基と２－イミノチオランとの反応により、遊離チオール基を抗体に導入し、つづいて上記されるような、マレイミド含有の薬物－リンカー部分と反応させることを基礎とする。抗体を、最初に、５０ｍＭ ＮａＣｌおよび２ｍＭジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）含有の０.１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８.０）に緩衝液交換に付し、５－１０ｍｇ／ｍＬに濃縮する。チオール化は２－イミノチオランの抗体への添加を通して達成される。２－イミノチオランの添加量は予備実験により決定され得、抗体ごとに変化する。予備実験では、漸増する量の２－イミノチオランを抗体に添加して滴定し、該抗体と一緒に室温（「ＲＴ」、約２５℃）で１時間インキュベートした後、該抗体をSEPHADEX（登録商標）Ｇ－２５カラムを用い、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５中に脱塩し、ジチオジピリジン（ＤＴＤＰ）と反応させることによって、導入されたチオール基の数を迅速に測定する。チオール基とＤＴＤＰとの反応はチオピリジンの遊離をもたらし、それは３２４ｎｍで分光学的にモニター観察され得る。典型的には、サンプルは、０.５－１.０ｍｇ／ｍＬのプロトン濃度で使用される。２８０ｎｍでの吸光度を用いてサンプル中のタンパク質の濃度を正確に測定することができ、次に各サンプル（０.９ｍＬ）のアリコートを０.１ｍＬ ＤＴＤＰ（エタノール中５ｍＭストック溶液）と一緒に室温で１０分間インキュベートした。緩衝液単独にＤＴＤＰを加えたブランクサンプルも並行してインキュベートされた。１０分後、３２４ｎｍでの吸光度を測定し、チオール基の数をチオピリジンについて１９,８００Ｍ^－１での吸光係数を用いて定量した。

【0168】

典型的には、チオール化レベルは、抗体当たり約２ないし３個のチオール基であることが望ましい。例えば、いくつかの抗体で、このことは１５倍モル過剰の２－イミノチオランを添加し、つづいて室温で１時間インキュベートすることで達成され得る。次に該抗体を２－イミノチオランと所望のモル割合でインキュベートし、次にコンジュゲーション緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭグリシン、２ｍＭ ＤＴＰＡ、ｐＨ５.５）中に脱塩する。導入されたチオールの数を上記されるように定量しながら、そのチオール化材料を氷上で維持する。

【0169】

導入されたチオールの数を確認した後に、セコ－ＣＰＩ－リンカー部分をチオール当たり２.５倍モルの過剰量で添加する。コンジュゲーション反応は２５％プロピレングリコールおよび５％トレハロースを最終濃度で含有するコンジュゲーション緩衝液中で進行させることができる。通常は、薬物－リンカーのストック溶液を１００％ＤＭＳＯに溶かす。そのストック溶液をチオール化抗体に直接加える。

【0170】

そのコンジュゲーション反応混合物を緩やかに攪拌しながら室温で２時間インキュベートする。次に１０倍モル過剰のＮ－エチルマレイミド（ＤＭＳＯ中１００ｍＭストック）を該コンジュゲーション混合物に加え、さらに１時間攪拌して未反応のいずれのチオールも遮断する。次に該サンプルを０.２μフィルターを通して濾過する。該サンプルをＴＦＦVivaFlow 50 Sartorius 30 MWCO PES膜を介して１０ｍｇ／ｍＬグリシン、２０ｍｇ／ｍＬソルビトール、１５％アセトニトリル（「ＡＣＮ」）、ｐＨ５.０（５ｘ ＴＦＦ緩衝液交換容量）に緩衝液交換に付し、未反応のいずれの薬物も除去した。最終の製剤化は、ＴＦＦによって２０ｍｇ／ｍＬソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬグリシン、ｐＨ５.０にて実施された。

【0171】

実施例２－トランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーション
次の操作は、リンカーがアミンドナーとして作用しうるアミン基を有する際の、セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物のトランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーションに用いることができる。抗体は、トランスグルタミナーゼ反応性グルタミンを有する抗体、例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ置換の抗体とすることができる。コンジュゲーションは、抗体：酵素のモル比を５：１として、組換え細菌性トランスグルタミナーゼによって実施される。該コンジュゲーションは、５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ８.０中で標準的プロトコルを用い、３７℃で一夜インキュベートして実施される。得られたコンジュゲートを、５０ｍＭトリス、ｐＨ８.０で予め平衡状態にしたプロテインＡ（Protein A）カラムで精製した。該コンジュゲートを０.１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ３.５で溶出する。溶出したフラクションを１Ｍトリス、ｐＨ９.０を用いて中和する。該コンジュゲートは、２０ｍｇ／ｍＬソルビトール、１０ｍｇ／ｍＬグリシン、ｐＨ５.０にて処方され得る。

【0172】

当業者は、これら２つの実施例における条件および方法が、例示であって、限定するものではなく、そのコンジュゲーションのための変法または他の方法が当該分野にて公知であり、本発明において使用可能であることを理解するであろう。

【0173】

実施例３－セコ－ＣＰＩ化合物の特性
表ＩＶは、種々のがん細胞株に対する増殖阻害効能およびＣＬｏｇＰを含め、本発明の化合物の特性を示す。増殖阻害は７２時間のＡＴＰ発光アッセイを用いて測定された（Chengら、US 8,394,922 B2（2013））。

【0174】

（ａ）Ｈ２２６（ヒト中皮腫（肺）がん細胞株）；（ｂ）Ｎ８７（ヒト胃がん細胞株）；（ｃ）ＯＶＣＡＲ３（ヒト卵巣がん細胞株）；（ｄ）ＨＣＴ１１６（ヒト大腸がん細胞株）；および（ｅ）ＨＣＴ１１６／ＶＭ４６（ＨＣＴ１１６の多剤およびパクリタキセル耐性下位細胞株）に対する増殖阻害を測定した。

【表7】

【表8】

【表9】

【0175】

実施例４－化合物１０
この実施例および図１Ａは化合物１０の合成に関する。

【0176】

３,５－ジニトロベンジルアルコール１（５ｇ、２５.２ミリモル）のＥｔＯＡｃ（１６０ｍＬ）中溶液を２－ヨードキシ安息香酸（「ＳＩＢＸ」、Sigma-Aldrichより入手可能、１７.６７ｇ、６３.１ミリモル）に加えた。反応混合物を９０℃で２０時間還流させ、室温に冷却して濾過した。固体を捨て、濾液を真空下で濃縮し、粗生成物２を黄色の固体として得、それを１００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶かし、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で、ついで水で洗浄した。次にそれを無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。該溶液を真空下で濃縮し、４.２ｇ（８１％）の３,５－ジニトロベンズアルデヒド２を黄色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １０.２４（ｓ，１Ｈ）、９.０８－９.０６（ｍ，１Ｈ）、９.０４（ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ_７Ｈ_４Ｎ_２Ｏ_５としての分析：計算値：１９６.０１；測定値：１９４.９９ ［Ｍ－Ｈ］^＋

【0177】

syn－ベンズアルデヒド オキシム（６.１８ｇ、５１.０ミリモル）のＮ,Ｎ－ジメチル－ホルムアミド（「ＤＭＦ」、５０ｍＬ）中の攪拌した溶液をＫ_２ＣＯ_３（１４.３８ｇ、１０２ミリモル）で処理し、１０分間攪拌した。３,５－ジニトロベンズアルデヒド２（５ｇ、２５.５ミリモル）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液を添加した。該反応混合物を９０℃で２時間攪拌し、室温に冷却した。（ブロモメチル）ベンゼン（７.１２ｍＬ、５８.６ミリモル）を該反応混合物に加え、次にそれを１８時間攪拌した。該反応混合物をＥｔ_２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈した。水性ＨＣｌ（１Ｎ、１００ｍＬ）を攪拌しながらゆっくりと添加した。エーテル層を厚め、水層をＥｔ_２Ｏ（８０ｍＬｘ２）およびＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、ＮａＨＣＯ_３飽和溶液で、次にブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮し、１６ｇの褐色の油を得、それをBiotageからの３３０ｇカラム（４５～５５％ジクロロメタン／ヘキサン）に付して精製し、３.４１ｇ（５２.１％）の３－（ベンジルオキシ）－５－ニトロベンズアルデヒド３を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １０.０７（ｓ，１Ｈ）、８.３７－８.２９（ｍ，１Ｈ）、８.１０（ｔ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.８２（ｄｄ，Ｊ＝２.４、１.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.５３－７.３６（ｍ，５Ｈ）、５.２４（ｓ，２Ｈ）；Ｃ_１４Ｈ_１１Ｎ_１Ｏ_４としての分析：計算値：２５７.０；測定値：２７９.３ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0178】

ナトリウムメタノラート（２５％）（１.３１３ｍＬ、５.９１ミリモル）を３－（ベンジルオキシ）－５－ニトロベンズアルデヒド３（４００ｍｇ、１.５５５ミリモル）およびメチル ２－アジド－アセタート４（Sigma-Aldrichから入手可能、５９１ｍｇ、５.１３ミリモル）のテトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」、３ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３ｍＬ）の混合液中の攪拌した溶液に－２５℃で２０分間にわたって滴下して加えた。該反応混合物を－２０℃で６４時間、ついで０℃で１時間攪拌した。該反応混合物を氷と水の混合物中に注ぎ、ジクロロメタン（「ＤＣＭ」、１５ｍＬｘ３）で抽出し、水で、ついでブラインで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させて粗生成物を得、それをBiotageからの３３０ｇカラム（５％～９％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、３２３ｍｇ（５８.６％）の化合物５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ８.２２（ｓ，１Ｈ）、７.８４（ｓ，１Ｈ）、７.８０（ｔ，Ｊ＝２.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.５３－７.３３（ｍ，５Ｈ）、６.８６（ｓ，１Ｈ）、５.２０（ｓ，２Ｈ）、３.９６（ｓ，３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １６３.４、１５９.１、１４９.２、１３５.６、１３５.３、１２８.８、１２８.５、１２８.２、１２７.６、１２２.８、１２２.０、１１８.０、１０９.８、７０.９、５３.３；Ｃ_１７Ｈ_１４Ｎ_４Ｏ_５としての分析：計算値：３５４.０９；測定値：３７７.３０ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0179】

化合物５（３１３ｍｇ、０.８８３ミリモル）をキシレン（８０ｍＬ）に加え、５分間超音波処理に付した。均質な溶液を形成し、それを２回脱気処理に付した。該反応混合物を１６０℃で２０時間還流させ、室温に冷却した。キシレンを真空下で蒸発させて黄色の固体を得、それをBiotageからの２４ｇカラム（５％～１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、４７.３ｍｇ（１６.４１％）の化合物６ａおよび１６０.３ｍｇ（５５.６％）の化合物６ｂを得た。
化合物６ａ：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １０.１９（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.０６（ｄ，Ｊ＝２.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.６３（ｄ，Ｊ＝１.９Ｈｚ，１Ｈ）、７.５２－７.４７（ｍ，２Ｈ）、７.４４（ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.４１－７.３５（ｍ，１Ｈ）、５.２０（ｓ，２Ｈ）、４.０１（ｓ，３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １６１.２、１５２.７、１３６.２、１３３.２、１３１.２、１３０.５、１２８.８、１２８.３、１２７.６、１２５.６、１１５.２、１１２.０、１０８.９、７１.５、５２.４；Ｃ_１７Ｈ_１４Ｎ_２Ｏ_５としての分析：計算値：３２７.１；測定値：３２７.３ ［Ｍ＋Ｈ］^＋
化合物６ｂ：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ９.３８（ｂｒｓ，１Ｈ）、８.３８（ｓ，１Ｈ）、７.７５（ｄ，Ｊ＝１.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７－７.５１（ｍ，２Ｈ）、７.５１－７.４２（ｍ，３Ｈ）、７.３８（ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ，１Ｈ）、５.３２（ｓ，２Ｈ）、３.９９（ｓ，３Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １６１.４、１４５.２、１４３.３、１３５.３、１３０.９、１２９.７、１２８.９、１２８.８、１２８.２、１２６.７、１１３.２、１１１.０、１００.５、７１.１、５２.４；Ｃ_１７Ｈ_１４Ｎ_２Ｏ_５としての分析：計算値：３２７.１；測定値：３２７.３ ［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0180】

化合物６ｂ（１５０ｍｇ、０.４６０ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）中の攪拌した溶液に、Ｂｏｃ－無水物（０.１９２ｍＬ、０.８２７ミリモル）および４－ジメチルアミノピリジン（「ＤＭＡＰ」、１１.２３ｍｇ、０.０９２ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で１８時間攪拌した。ブライン（５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を加え、攪拌を５分間続けた。有機層を集めた。水層を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、黄色の固体を得、それをBiotageからの２４ｇカラム（５％～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、１８４.２ｍｇ（９４％）の化合物７を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ８.２９（ｄ，Ｊ＝１.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.７０（ｄ，Ｊ＝１.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.５０（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４５－７.３９（ｍ，２Ｈ）、７.３９－７.３３（ｍ，２Ｈ）、５.３５（ｓ，２Ｈ）、３.９７（ｓ，３Ｈ）、１.５０（ｓ，９Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １６０.４、１４９.２、１４５.５、１４３.５、１３５.１、１３０.１、１３０.０、１２８.８、１２８.６、１２８.１、１２６.３、１１２.６、１１２.４、１０２.１、８６.４、７１.２、５２.４、２７.２；Ｃ_２２Ｈ_２２Ｎ_２Ｏ_７としての分析：計算値：４２６.１；測定値：４４９.４ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0181】

亜鉛粉末（１３０ｍｇ、１.９８２ミリモル）およびＮＨ_４Ｃｌ（２１２ｍｇ、３.９６ミリモル）を化合物７（１６９ｍｇ、０.３９６ミリモル）のアセトン（４ｍＬ）／水（０.８００ｍＬ）中の攪拌した溶液に添加した。反応混合物を室温で１８時間攪拌した。該反応混合物を真空下で濃縮し、１８０ｍｇの粗化合物８を得、それをＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）に再び溶かし、水（８ｍＬ）で、ついでブライン（８ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。それを真空下で濃縮し、１６０ｍｇの粗化合物８（褐色）を得、それをBiotageからの１２ｇカラム（１５％to ３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、１３８.１ｍｇ（８８％）の化合物８を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.４６（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.３９（ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.３５－７.３０（ｍ，１Ｈ）、７.０３（ｓ，１Ｈ）、６.５０（ｄ，Ｊ＝１.４Ｈｚ，１Ｈ）、６.２９（ｄ，Ｊ＝１.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.２２（ｓ，２Ｈ）、３.９１（ｓ，３Ｈ）、３.５３（ｂｒｓ，２Ｈ）、１.４９（ｓ，９Ｈ）；Ｃ_２２Ｈ_２４Ｎ_２Ｏ_５としての分析：計算値：３９７.１７；測定値：３９７.１３ ［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0182】

Ｂｏｃ－無水物（０.１１２ｍＬ、０.４８４ミリモル）を化合物８（１２８ｍｇ、０.３２３ミリモル）のＴＨＦ（３.５ｍＬ）中の攪拌した溶液に添加した。該反応混合物を室温で２０時間攪拌し、真空下で濃縮し、１７８ｍｇの褐色で、ワックス状の粗化合物９を得、それをBiotageからの１２ｇカラム（５％～１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、１５６ｍｇ（９７％）の化合物９を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.４８（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.３９（ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.３６－７.３０（ｍ，２Ｈ）、７.１３（ｓ，１Ｈ）、６.８６（ｓ，１Ｈ）、６.４１（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.２４（ｓ，２Ｈ）、３.９２（ｓ，３Ｈ）、１.５４（ｓ，９Ｈ）、１.４７（ｓ，９Ｈ）；Ｃ_２７Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_７としての分析：計算値：４９６.２；測定値：４９７.５ ［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0183】

Ｎ－ヨードスクシンイミド（１２７ｍｇ、０.５６４ミリモル）および酢酸（０.０６５ｍＬ、１.１２８ミリモル）を化合物９（１４０ｍｇ、０.２８２ミリモル）のトルエン（８ｍＬ）中の攪拌した溶液に添加した。その反応フラスコをアルミホイールで覆い、室温で１８時間攪拌した。該反応混合物を水（２０ｍＬ）中に注いだ。ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を添加し、該混合物を２分間攪拌した。有機層を集めた。水層をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して暗紫色のワックスを得、それをBiotageからの１２ｇカラム（５％～１２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、１１０.６ｍｇ（６３.０％）の化合物１０を黄色のワックスとして得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.８１（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.５０（ｄ，Ｊ＝７.１Ｈｚ，２Ｈ）、７.４３－７.３６（ｍ，２Ｈ）、７.３５－７.３０（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｓ，１Ｈ）、６.７９（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.２７（ｓ，２Ｈ）、３.９４（ｓ，３Ｈ）、１.５６（ｓ，９Ｈ）、１.４３（ｓ，９Ｈ）；Ｃ_２７Ｈ_３１ＩＮ_２Ｏ_７としての分析：計算値：６２２.１；測定値：６２３.４ ［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0184】

実施例５－エステル１２
この実施例および図３Ｂはエステル１２の調製に関する。

【0185】

ＮａＨ（７.７１ｍｇ、０.１９３ミリモル）および１,３－ジクロロプロペン（２３.５０μｌ、０.２４１ミリモル）を化合物１０（１００ｍｇ、０.１６１ミリモル）のＤＭＦ中の０℃での攪拌した溶液に添加した。該反応混合物を３時間攪拌した。該反応混合物をＮＨ_４Ｃｌ飽和溶液（１００ｍＬ）中に注ぎ、Ｅｔ_２Ｏ（２ｘ８０ｍＬ）で抽出した。抽出液をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して褐色のワックスを得、それをBiotageからの１２ｇカラム（５％～１２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、８８.７ｍｇ（７９％）の化合物１１を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.４７－７.３１（ｍ，５Ｈ）、７.２１（ｓ，１Ｈ）、６.５３（ｄ，Ｊ＝１８.３Ｈｚ，１Ｈ）、６.０３－５.８３（ｍ，３Ｈ）、５.３４－５.２１（ｍ，２Ｈ）、３.９６（ｓ，２Ｈ）、４.５７－３.７０（ｍ，２Ｈ）、１.５８（ｓ，９Ｈ）、１.３０（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，９Ｈ）；Ｃ_３０Ｈ_３４ＣｌＩＮ_２Ｏ_７としての分析：計算値：６９６.１；測定値：７１９.５ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋

【0186】

水素化トリ－ｎ－ブチルスズ（１.７９３ｍＬ、６.５９ミリモル）および２,２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）（「ＡＩＢＮ」、０.０８５ｇ、０.５０７ミリモル）を、化合物１１（３.５３０５ｇ、５.０７ミリモル）のベンゼン（１００ｍＬ）中の攪拌した溶液に添加した。反応混合物を１回脱気処理に付し、８０℃で４時間攪拌した。該反応混合物を真空下で室温に冷却し、褐色のワックスを得、それをBiotageからの１２０ｇカラム（５％～１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に付して精製し、２.７５５２ｇの化合物１２と１２ａの混合物を得た。該混合物をＳＦＣキラル分離：キラルパック（Chiralpak）：ＡＤ－Ｈ分取用カラム、３０ｘ２５０ｍｍ、５μｍ；移動相：３５％ＭｅＯＨ／ＣＯ_２、１３０バール；温度：３５℃；流速：７０.０ｍＬ／分、１３分間；ＵＶモノター（２２０ｎｍ）により分離した。この操作により０.９５６２ｇ（３３.１％）の化合物１２；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.５２－７.３０（ｍ，６Ｈ）、７.１１（ｓ，１Ｈ）、５.２７（ｓ，２Ｈ）、４.２０－４.１３（ｍ，１Ｈ）、４.０１－３.８２（ｍ，６Ｈ）、３.５３（ｔ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、１.５７（ｓ，９Ｈ）、１.４３（ｂｒｓ，９Ｈ）；Ｃ_３０Ｈ_３５ＣｌＮ_２Ｏ_７としての分析：計算値：５７０.２；測定値：５７１.５ ［Ｍ＋Ｈ］^＋；［α］^２０ _Ｄ －１７.０６（ｃ ２.４５、ＣＨＣｌ_３）、および０.９２５２ｇ（３２.０％）の化合物１２ｂ；^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.５３－７.３０（ｍ，６Ｈ）、７.１１（ｓ，１Ｈ）、５.２７（ｓ，２Ｈ）、４.２２－４.１３（ｍ，１Ｈ）、４.１２－３.８３（ｍ，６Ｈ）、３.５３（ｔ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，１Ｈ）、１.５７（ｓ，９Ｈ）、１.４３（ｂｒｓ，９Ｈ）；Ｃ_３０Ｈ_３５ＣｌＮ_２Ｏ_７としての分析：計算値：５７０.２；測定値：５７１.５ ［Ｍ＋Ｈ］^＋；［α］^２０ _Ｄ ＋１７.０６（ｃ ２.４５、ＣＨＣｌ_３）を得た。

【0187】

実施例６－化合物１６
この実施例および図２は化合物１６の製造に関する。

【0188】

エステル１２（１ｇ、１.７５１ミリモル）のＡＣＮ（Aldrich、４０ｍＬ）中溶液を製造した。ＬｉＯＨ（０.１２５ｇ、５.２２ミリモル）／蒸留水（１０ｍＬ）を加えた。該反応混合物を５０℃で２時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を６Ｎ ＨＣｌでｐＨ４の酸性にし、真空下で濃縮し、ＡＣＮを除去した。該反応混合物をＥｔＯＡＣ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機相を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、高真空下で一夜濃縮して乾燥させ、粗製酸１３（０.９８ｇ）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：５５７.０

【0189】

Ｎ,Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＰＥＡ」、Aldrich、０.６１２ｍＬ、３.５０ミリモル）を、酸１３（０.９８ｇ）、モルホリン１３ａ（Aldrich、０.４５８ｇ、５.２５ミリモル）およびＮ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウム ヘキサフルオロホスファート（「ＨＡＴＵ」、CAS Reg. No. 148893-10-1、Oakwood Chemical、０.９９９ｇ、２.６３ミリモル）の無水ＤＭＦ（Acros、５ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で４５分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ、水およびブラインで後処理した。有機相を合わせ、２ｇのシリカゲルと一緒にスラリーに濃縮した。該スラリーを２４ｇCOMBIFLASH（登録商標）カラムに付し、ヘキサン中０－３５％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、高真空下で濃縮して乾燥させ、化合物１４（０.８７２ｇ、２工程にわたって収率８０％）を固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：６２６.１

【0190】

化合物１４（３９６ｍｇ、０.６３３ミリモル）の無水ＴＨＦ（Acros、５ｍＬ）中溶液を製造した。ギ酸アンモニウム（Aldrich、１.１０４ｇ、８.７６ミリモル）／蒸留水（１ｍＬ）を添加した。窒素気体を５分間にわたって該反応混合物に吹き込み、次にＰｄ／炭素（Aldrich-Sigma、１０％、６０ｍｇ）を添加した。該反応混合物を室温で０.５時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡＣ（５０ｍＬ）で希釈して濾過した。濾液を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮して残渣を得、それをＡＣＮおよび水と一緒に凍結乾燥させ、化合物１５（白色の固体、２２５ｍｇ、収率６６％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：５３６.２

【0191】

トリフルオロ酢酸（「ＴＦＡ」、Aldrich、１ｍＬ）を、化合物１５（７８ｍｇ、０.１４６ミリモル）の無水ＤＣＭ（Acros、１ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を真空下で濃縮し、ＡＣＮおよび水と一緒に凍結乾燥させ、化合物１６（８１ｍｇ、二ＴＦＡ塩、９８％）を緑色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：３３６.０

【0192】

実施例７－化合物１８
この実施例は、図２に示されるように、化合物１８の製造に関する。

【0193】

エチルエステル１７ａ（Alfa Aesar、３００ｍｇ、１.４６ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（「ＴＰＰ」、Aldrich-Sigma、７６７ｍｇ、２.９２ミリモル）の無水ＴＨＦ（Acros Organics、１０ｍＬ）中溶液を製造した。ジ－tert-ブチル アゾジカルボキシラート（「ＤＢＡＤ」、Aldrich、６７３ｍｇ、２.９２ミリモル）／無水ＴＨＦ（Acros、無水物、２ｍＬ）を１０分間にわたって、つづいて２－メトキシエタノール１７ｂ（Aldrich、４４５ｍｇ、５.８５ミリモル）を滴下して加えた。該反応混合物を室温で一夜攪拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応がほとんど完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ、水、およびブラインで後処理した。有機相を合わせ、シリカゲル（１ｇ）と一緒に真空下で濃縮してスラリーを得た。該スラリーを２４ｇ COMBIFLASH（登録商標）カラムに付し、ヘキサン中０－３０％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、高真空下で濃縮して乾燥させ、化合物１７（３１４ｍｇ、１.１９ミリモル、８２％）を固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：２６４.１

【0194】

ＬｉＯＨ（Aldrich、５０ｍｇ）／蒸留水（１ｍＬ）を化合物１７（３１４ｍｇ、１.１９ミリモル）のＡＣＮ（Acros、１０ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を４０℃で３時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を酢酸（０.５ｍＬ）で中和し、真空下で濃縮して２ｍＬとした。得られた混合物をCOMBIFLASH（登録商標）AQ Goldの５０ｇカラムにロードし、水中０－６０％ＡＣＮの勾配（共に０.０５％ギ酸を含む、５０ｍＬ／分）で溶出した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物１８（２２６ｇ、０.９６１ミリモル、８１％）を白色の粉末として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：２３６.０

【0195】

実施例８－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－０１
この実施例および図２はセコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－０１の製造に関する。

【0196】

化合物１６（５ｍｇ、０.０１５ミリモル）および１８（７.０ｍｇ、０.０３０ミリモル）の無水ＤＭＦ（Acros、１ｍＬ）中溶液を製造した。Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド・塩酸塩（「ＥＤＣ」、Aldrich、５.７１ｍｇ、０.０３０ミリモル）を添加した。該反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）５μｍ ＥＶＯ Ｃ１８ １５０ｘ２１.２ｍｍカラムに供し、水中４５－６０％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させてＩａ－０１（４.１ｍｇ、７.４マイクロモル、収率５０％）をオフホワイトの固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：５５３.１；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６、４００ＭＨｚ）１１.５４（１Ｈ，ｓ）、１１.２９（１Ｈ，ｓ）、９.７５（１Ｈ，ｓ）、７.７５（１Ｈ，ｓ）、７.３９（１Ｈ，ｄ）、７.１５（１Ｈ，ｄ）、７.０２（１Ｈ，ｄ）、６.９１（２Ｈ，ｄ）、４.７４（１Ｈ，ｔ）、４.４５（１Ｈ，ｄ）、４.１４（４Ｈ，ｍ）、３.８９（２Ｈ，ｍ）、３.４０－３.８０（１２Ｈ，ｍ）

【0197】

一般に、この実施例の操作および図２に従うが、別の先駆体の材料を用いて、下記の表Ｖに列挙されるさらなるセコ－ＣＰＩ化合物を製造した。

【表10】

【0198】

実施例９－化合物２６
この実施例および図３Ａは化合物２６の合成に関する。

【0199】

化合物１９ａ（Bachem、７.５ｇ、２４.０９ミリモル）および（４－アミノフェニル）メタノール１９ｂ（Aldrich、３.８６ｇ、３１.３ミリモル）の無水ＤＣＭ（Acros、５０ｍＬ）および無水メタノール（Acros、５０ｍＬ）中溶液を製造した。２－エトキシ－１－エトキシカルボニル－１,２－ジヒドロキノリン（「ＥＥＤＱ」、Bachem、８.９４ｇ、３６.１ミリモル）を添加した。該反応混合物を室温で一夜攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応がほとんど完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液を水およびブラインで洗浄した。有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮して１００ｍＬの容量とした。沈殿した白色の固体を濾過で集め、週末にわたって風乾させて化合物２０（白色の固体、８.９ｇ、２１.３７ミリモル、８９％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：４１７.１

【0200】

ピペリジン（Aldrich、１ｍＬ）を化合物２０（２.２ｇ、５.２８ミリモル）のＤＭＦ（Acros、無水物、１０ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物をＡＣＮおよび水と一緒に凍結乾燥させ、粗製化合物２１（２.１２ｇ）をＦｍｏｃ残渣と共に白色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：１９５.０

【0201】

化合物２１（２.１２ｇ、粗製物）および化合物２２ａ（Aldrich、１.６１０ｇ、５.２８ミリモル）のＤＭＦ（Acros、無水物、１０ｍＬ）中溶液を製造した。ＤＩＰＥＡ（Aldrich）を添加して反応混合物のｐＨを８より上に調整した。該反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ、水およびブラインで後処理した。有機相を合わせ、濃縮して残渣を得た。該残渣をＡＣＮ（Aldrich、５ｍＬ）および蒸留水（１０ｍＬ）に再び溶かした。その懸濁液を濾過した。濾液を１３０ｇ COMBIFLASH（登録商標）AQ Goldカラムにロードし、７５ｍＬ／分で２５－４０％ＡＣＮ（０.０５％ギ酸を含む）および水（同様に０.０５％ギ酸を含む）を用いて溶出した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物２２（０.８９ｇ、２.２６２ミリモル、４２.８％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：３９４.１

【0202】

化合物２２（１４７ｍｇ、０.３７４ミリモル）およびペルブロモメタン（Aldrich、２１７ｍｇ、０.６５３ミリモル）の無水ＤＣＭ（Acros、４ｍＬ）中溶液を製造した。ＴＰＰ（Aldrich、１７１ｍｇ、０.６５３ミリモル）を添加した。該反応混合物を室温で５分間攪拌し、その後で透明な溶液を形成した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を１２ｇ COMBIFLASH（登録商標）Goldカラムにロードし、ヘキサン中５０－１００％ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ／分）で溶出した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、高真空下で濃縮して１５分間乾燥させ、化合物２３（９２ｍｇ、５４％）を固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：４５６.１

【0203】

メチルリチウム／ジエチルエーテル（Aldrich、１.６Ｍ、０.２３３ｍＬ、０.３７３ミリモル）を化合物１５（図２、１００ｍｇ、０.１８７ミリモル）の無水ＴＨＦ（Acros、１ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で５分間攪拌した。化合物２３（９２ｍｇ、０.２０２ミリモル）を加えた。該反応混合物を室温で１０分間攪拌した。ＬＣＭＳは反応が完了していることを示した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ、水およびブラインで後処理した。有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、高真空下で濃縮して乾燥させ、化合物２４（１５３ｍｇ、粗製物）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：９１１.２

【0204】

ＴＦＡ（Aldrich、２ｍＬ）を粗化合物２４（１５３ｍｇ）の無水ＤＣＭ（Acros、０.５ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。反応混合物を濃縮し、COMBIFLASH（登録商標）AQ Gold ３０ｇ カラムに付し、脱イオン水（０.０５％ギ酸を含む）中１５－３０％ＡＣＮ（０.０５％ギ酸を含む）で３５ｍＬ／分にて溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物２５（６１ｍｇ、５３.５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：６１１.２

【0205】

化合物２５（６１ｍｇ、０.１００ミリモル）およびＢＯＣ無水物（Oakwood、０.０３０ｍＬ、０.１３０ミリモル）の無水ＤＭＦ（Acros、１ｍＬ）中溶液を製造した。ＤＩＰＥＡ（Aldrich、０.０６０ｍＬ、０.３４８ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）Ｃ１８ ＥＶＯ５μｍ １５０ｘ２２.１ｍｍカラムに供し、水中３０－５０％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）を用いて精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物２６（６０ｍｇ、８４.４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：７１１.２

【0206】

実施例１０－セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０３
この実施例および図３Ｂは化合物ＩＩＩａ－０３の製造に関する。

【0207】

ＤＩＰＥＡ（Aldrich、０.０７４ｍＬ、０.４２２ミリモル）を化合物１８（図２、２９.８ｍｇ、０.１２７ミリモル）およびＨＡＴＵ（Oakwood、４８.１ｍｇ、０.１２７ミリモル）の無水ＤＭＦ（Acros、０.７ｍＬ）中溶液に加えた。該反応混合物を室温で５分間攪拌した。化合物２６（図３Ｂ、３０ｍｇ、０.０４２ミリモル）を添加した。該反応混合物を室温で一夜攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が７０％完了していることを示した。反応物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）Ｃ１８ ＥＶＯ５μ １５０ｘ２２.１ｍｍカラムに供し、水中５０－６５％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物２７（２７ｍｇ、６８.８％）を粉末として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：９２８.３

【0208】

ＴＦＡ（Sigma、１ｍＬ）を化合物２７（２７ｍｇ、０.０２９ミリモル）の無水ＤＣＭ（Acros、１ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で１５分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。反応物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）Ｃ１８ ＥＶＯ５μ １５０ｘ２２.１ｍｍカラムに供し、水中４０－５０％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物２８（２０ｍｇ、８３.０％）を粉末として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：８２８.２

【0209】

ＤＩＰＥＡ（Sigma、２０μＬ、０.１１４ミリモル）を化合物２８（２０ｍｇ、０.０２４ミリモル）および６－マレイミドヘキサン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル２９（SIGMA-Aldrichより入手可能、１１.１７ｍｇ、０.０３６ミリモル）の無水ＤＭＦ（Acros、０.７ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）Ｃ１８ ＥＶＯ５μ １５０ｘ２２.１ｍｍカラムに供し、水中５０－６５％アセトニトリル（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）で溶出して精製した。生成物を含有すると考えられるフラクションを合わせ、凍結乾燥させてセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０３（１２.８ｍｇ、５１.９％）を粉末として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：１０２１.５；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６）： δ １１.９８（ｓ，１Ｈ）、１１.７７（ｓ，１Ｈ）、９.７９（ｓ，１Ｈ）、８.１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６.９Ｈｚ）、７.７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.８Ｈｚ）、７.２９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８.３Ｈｚ）、７.１９（ｓ，１Ｈ）、６.９８－７.０３（ｍ，４Ｈ）、６.６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７.１９Ｈｚ）、６.５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.５Ｈｚ）、５.０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４.７Ｈｚ）、４.４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０.７Ｈｚ）、４.３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７.１Ｈｚ）、４.１１－４.１７（ｍ，３Ｈ）、３.５２－３.７２（ｍ，１０Ｈ）、３.０９－３.３８（ｍ，９Ｈ）、２.１５（ｍ，２Ｈ）、１.９５（ｍ，１Ｈ）、１.４８（ｍ，４Ｈ）、１.２７（ｍ，３Ｈ）、１.１７（ｍ，２Ｈ）、０.８４（ｍ，６Ｈ）

【0210】

以下の表ＶＩに列挙されるようなさらなるセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、一般に、この実施例の操作および図３Ａ－３Ｂのスキームに従うが、別の先駆体の材料を用いて製造された。

【表11】

化合物６６の製造

【化76】

【0211】

実施例１１－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２１
この実施例および図４は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２１の製造に関する。

【0212】

ＨＣｌ／ジオキサン（４Ｎ、１５ｍＬ）をエステル１２（０.２５ｇ、０.４３８８ミリモル）に添加した。該反応混合物を５０℃で５時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を窒素下でブローして乾燥させ、暗青色の残渣３０を粗製酸として得、次の工程にさらに精製することなく用いた。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：３７１.１

【0213】

Ｎ,Ｎ－ジメチルアセトアミド（「ＤＭＡ」、５ｍＬ）を、粗製酸３０（塩酸塩、１７８ｍｇ、０.４３７ミリモル）、５－メトキシ－１Ｈ－インドール－２－カルボン酸３０ａ（CAS Reg. No. 4382-54-1、Sigma-Aldrichより入手可能、１２５ｍｇ、０.６５６ミリモル）、ＥＤＣ（２５１ｍｇ、１.３１１ミリモル）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（「ＨＯＢＴ」、２０１ｍｇ、１.３１１ミリモル）、およびＮａＨＣＯ_３（１８４ｍｇ、２.１８５ミリモル）に添加した。その黒色の溶液を室温で４.５時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は生成物のピークの出現を示した。該反応混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、室温で１５分間攪拌し、濾過した。粗生成物を褐色の固体として集め、ＤＣＭ／メタノールに再び溶かした。得られた溶液をシリカゲル（１.３ｇ）と共に濃縮乾固させてスラリーを形成させた。該スラリーを１５ｇ シリカゲルカラムに付し、ＤＣＭ中０－３％酢酸エチルの溶出液の勾配を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、濃縮し、真空下で乾燥させて粗生成物（２０６ｍｇ）を得た。該粗生成物をクロロホルム中２０％メタノールに再び溶かし、１.３ｇのシルカゲルと共にスラリーになるまで濃縮した。そのスラリーをシリカゲルカラムに付し、１００％ＤＣＭおよびヘキサン中１－５％酢酸エチルの溶出液を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、高真空下で濃縮して乾燥させ、若干不純物の混ざった化合物３１（０.１０８ｇ、０.１９９ミリモル、４５.４％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：５４４.４

【0214】

ＴＨＦ（３ｍＬ）、水（１.０００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（２.０００ｍＬ）を化合物３１（１０４ｍｇ、０.１９１ミリモル）に加え、水酸化リチウム水和物（１３８ｍｇ、３.２９ミリモル）を添加した。その黄色の不均一な混合物を一夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳは官能が完了していることを示した。該反応混合物を１Ｎ ＨＣｌで酸性にし、ついで濾過した。固体を集め、乾燥させて粗化合物３２（０.１６８ｇ、８８％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：５２９.９

【0215】

ＤＭＡ（０.５ｍＬ）を、化合物３２（１５ｍｇ、０.０２８ミリモル）、Ｎ,Ｎ’－ジメチル－エタン－１,２－ジアミン３２ａ（CAS Reg. No. 110-70-3、Sigma-Aldrichより入手可能、１.２４７ｍｇ、０.０１４ミリモル）、ＥＤＣ（１０.８５ｍｇ、０.０５７ミリモル）、ＨＯＢＴ（８.６７ｍｇ、０.０５７ミリモル）、およびＮａＨＣＯ_３（９.５１ｍｇ、０.１１３ミリモル）に加えた。ＬＣ／ＭＳは反応が５０％完了していることを示す。該反応混合物をＭｅＯＨで希釈し、分取性ＬＣに付し、水中１５－１００％ＡＣＮ（共に０.１％ＴＦＡを含む、４０ｍＬ／分）の勾配を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物３３（５.８ｍｇ、７.９８マイクロモル、２８.２％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：６００.１０

【0216】

ＭｅＯＨ（０.５ｍＬ）を化合物３３（ＴＦＡ塩、５.７ｍｇ、７.９８マイクロモル）、ギ酸アンモニウム（１５.１０ｍｇ、０.２３９ミリモル）、およびＰｄ－Ｃ（１.６９９ｍｇ、１.５９６マイクロモル）に添加した。該反応混合物を加熱して３０秒間還流させた。１０分後、ＬＣ／ＭＳは反応が完了していることを示した。該反応混合物を濾過し、濾液を分取性ＨＰＬＣによって、ウォーターズ－ＹＭＣ－ＯＢＤ Ｓ５ ２０ｘ１００ｍｍカラムに供し、水中０－７５％ＡＣＮ（共に０.１％ＴＦＡを含む、２５ｍｌ／分）を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥させてセコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２１（１.５ｍｇ、２.１２マイクロモル、２６.５％）を琥珀色の固体として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：５１０.１５；^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ、５００ＭＨｚ）７.９２（１Ｈ，ｓ）、７.４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）、７.１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ）、 ７.１４（１Ｈ，ｓ）、７.０７（１Ｈ，ｓ）、６.９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）、４.７６（１Ｈ，ｔ）、４.６１（１Ｈ，ｄｄ）、４.０９（２Ｈ，ｍ）、３.８６（３Ｈ，ｓ）、３.８０（３Ｈ，ｍ）、３.４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ）、３.０３（６Ｈ，ｓ）

【0217】

一般に、この実施例の操作および図４に従うが、別の先駆体の材料を用いて，以下の表ＶＩＩに列挙されるようなさらなるセコ－ＣＰＩ化合物が製造された。

【表12】

【0218】

実施例１２－セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０５
この実施例および図５はセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０５の製造に関する。

【0219】

ＤＩＰＥＡ（Sigma、０.０５２ｍＬ、０.２９９ミリモル）を化合物２５（６１ｍｇ、０.１００ミリモル）およびヒドロキシスクシンイミドエステル２５ａ（QuiantaBiodesign、７６ｍｇ、０.１３０ミリモル）のＤＭＦ（Acros、無水物、１ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で６０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物を酢酸（４０μＬ）で中性にし、３０ｇ COMBIFLASH（登録商標）AQ Goldカラムにロードし、水中５０－７５％ＡＣＮ（共に０.０５％ギ酸を含む、３５ｍＬ／分）を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物３４（５２ｍｇ、０.０４８ミリモル、収率４８.２％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：１０８０.３

【0220】

ＤＩＰＥＡ（Sigma、０.０４２ｍＬ、０.２４１ミリモル）を、酸１８（３４.０ｍｇ、０.１４４ミリモル）、化合物３４（５２ｍｇ、０.０４８ミリモル）およびＨＡＴＵ（Oakwood、５４.９ｍｇ、０.１４４ミリモル）のＤＭＦ（Acros、無水物、０.７ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で一夜攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が７０％完了していることを示した。該反応混合物を分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）５μ Ｃ１８ ＥＶＯ １５０ｘ２１.２ｍｍカラムに供し、水中４５－６５％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）を用いて精製した。生成物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥させて化合物３５（３１ｍｇ、４９.８％）を得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ （Ｍ＋Ｈ）：１２９７.３

【0221】

ピペリジン（Aldrich、５０μＬ）を化合物３５（３１ｍｇ）のＤＭＦ（Acros、無水物、０.５ｍＬ）中溶液に添加した。該反応混合物を室温で３０分間攪拌した。ＬＣＭＳ分析は反応が完了していることを示した。該反応混合物をＡｃＯＨ（５０μＬ）で中性にし、分取性ＨＰＬＣによって、KINETEX（登録商標）Ｃ１８ ５μ １５０ｘ２１.２ｍｍカラムに供し、水中３０－４０％ＡＣＮ（０.１％ＴＦＡを含む、２０ｍＬ／分）の勾配を用いて精製した。期待の生成物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥させてセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０５（２２ｍｇ. ６４.２％）をＴＦＡ塩として得た。ＥＳＩ－ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：１０７５.６；^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６）： δ １１.９７（ｓ，１Ｈ）、１１.７７（ｓ，１Ｈ）、９.８１（ｓ，１Ｈ）、８.１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３.１Ｈｚ）、７.８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.８Ｈｚ）、７.７９（ｓ，３Ｈ）、７.４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９.１Ｈｚ）、７.３０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、７.１９（ｓ，１Ｈ）、６.９６－７.０２（ｍ，２Ｈ）、６.６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.９Ｈｚ）、６.５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.６Ｈｚ）、５.０６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４.９Ｈｚ）、４.４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０.７Ｈｚ）、４.３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７.１Ｈｚ）、４.２１（ｍ，１Ｈ）、４.１２（ｓ，２Ｈ）、２.９６－３.７２（ｍ，３２Ｈ）、２.３６－２.４８（ｍ，４Ｈ）、１.９７（ｍ，２Ｈ）、１.２８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７.１Ｈｚ）、０.８５（ｍ，６Ｈ）

【0222】

以下の表ＶＩＩＩに列挙されるようなさらなるセコ－ＣＰＩ－リンカー化合物は、一般に、この実施例の操作および図５のスキームに従うが、別の先駆体の材料を用いて製造された。

【表13】

【表14】

【0223】

実施例１３－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－１５
図６は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－１５の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。表ＩＸは化合物Ｉａ－１５について、同様にして製造された他の化合物についての分析データを示す。

【表15】

【表16】

【0224】

実施例１４－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－１８
図７は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－１８の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。表Ｘは化合物Ｉａ－１８について、同様にして製造された他の化合物についての分析データを示す。

【表17】

【0225】

実施例１５－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉｂ－０１およびＩｂ－０２
図８は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉｂ－０１およびＩｂ－０２の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。Ｉｂ－０１ ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６１５.０；Ｉｂ－０２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６５９.４

【0226】

実施例１６－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉｄ－０２
図９は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉｄ－０２の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。表ＸＩは化合物Ｉｄ－０２および同様にして製造された他の化合物についての分析データを示す。

【表18】

【0227】

実施例１７－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２５
図１０は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２５の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。

【0228】

化合物Ｉａ－２６は、１－Ｃｂｚ－ピペラジンの代わりに１－メチルピペラジンを用いて同様にして製造された。

【0229】

２つの化合物についての質量スペクトルデータは：Ｉａ－２５ ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４９３.２；Ｉａ－２６ ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５０７.３であった。

【0230】

実施例１８－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２７
図１１は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２７の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。化合物Ｉａ－２７についての質量スペクトルデータ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５８８.１

【0231】

実施例１９－セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２９
図１２は、セコ－ＣＰＩ化合物Ｉａ－２９の合成についてのスキームを示す。使用の試薬、およびその使用のための条件は、当該分野において知られており、および／または上記の実施例において例示されている。化合物Ｉａ－２９についての質量スペクトルデータ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７４.１

【0232】

実施例２０－コンジュゲートの生物学的活性
セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０１、ＩＩＩａ－０２、ＩＩＩａ－０３、およびＩＩＩａ－０４を、上記した実施例１のマイケル付加反応と略同様にして、抗メソテリン抗体６Ａ４（Terrettら、US 8,268,970 B2（2012））とコンジュゲートさせた。得られた抗体－薬物のコンジュゲートを、各々、６Ａ４／ＩＩＩａ－０１ ＡＤＣ、６Ａ４／ＩＩＩａ－０２ ＡＤＣ、６Ａ４／ＩＩＩａ－０３ ＡＤＣ、および６Ａ４／ＩＩＩａ－０４ ＡＤＣと称した。

【0233】

さらには、セコ－ＣＰＩ－リンカー化合物ＩＩＩａ－０６およびＩＩＩａ－１２を、一般的に実施例２のトランスグルタミナーゼ介在のコンジュゲーション操作に従って、重鎖にてＮ２９７Ａ（KabatにてＥＵで示される番号）置換を施すように遺伝子操作した抗メソテリン抗体６Ａ４とコンジュゲートさせた。Ｎ２９７Ａ置換は、抗体のグリコシル化を無効にし、その近くにあるグルタミン２９５（Ｑ２９５）をトランスグルタミン触媒によるアミノ基転移反応のアミンアクセプターとして利用できるようにする（Jegerら、Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995）。得られた抗体－薬物のコンジュゲートは、各々、６Ａ４（Ｎ２９７Ａ）／ＩＩＩａ－０６ ＡＤＣおよび６Ａ４（Ｎ２９７Ａ）／ＩＩＩａ－１２ ＡＤＣと称された。

【0234】

これらのＡＤＣの、Ｈ２２６およびＮ８７がん細胞（共にメソテリンを発現する）に対する活性を、^３Ｈチミジン組み込みアッセイ（Chengら、US 8,394,922 B2（2013））を用いて測定した。結果を表ＸＩＩにおいて表示する。

【表19】

【0235】

上記した発明の詳細な記載は、本発明の特定の部分または態様と主にまたは独占的に関連付けられる記載を包含する。これは、明確化および利便性のためであり、特定の特徴は、単に開示されている記載よりもより多くの記載と関連付けらることができ、本明細書の開示はその異なる記載において見られる情報の適切なすべての組み合わせを包含することを理解すべきである。同様に、本明細書における種々の数値および記載は本発明の特定の実施態様に関するものであるが、具体的な特徴が特定の数値または実施態様の文脈の中で開示される場合に、かかる特徴はまた、もう一つ別の数値または実施態様の文脈において、ある適切な程度まで、もう一つ別の特徴と組み合わせて、あるいは一般に本発明において、使用され得ると理解すべきである。

【0236】

さらには、本発明は、特に、特定の好ましい実施態様に関して記載されるが、本発明はそのような好ましい実施態様に限定されるものではない。どちらかと言えば、発明の範囲は添付した特許請求の範囲によって限定される。

【0237】

参考文献
第１著者（または発明者）および本明細書よりも早い日付で、省略された形式で引用される次の参考文献についての十分な引用部を以下において提供する。これらの参考文献は、各々、あらゆる目的のために、出典明示により本明細書に組み込まれる。

【0238】

Boger、US 6,281,354 B1（2001）；
Boger、US 6,548,530 B1（2003）；
BogerおよびJohnson、Proc. Nat. Acad. Sci.（USA） 1995, 92, 3642；
Bogerら、J. Org. Chem. 1990, 55, 5823；
Bogerら、J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 4987；
Bogerら、Synthesis 1999, SI, 1505；
Bogerら、J. Org. Chem. 2000, 65, 4101；
Boydら、US 2008／0279868 A1（2008）；
Chari ら、Cancer Res. 1995, 55, 4079；
Chenら、US 8,664,407 B2（2014）；
Ducryら、Bioconjug. Chem. 2010, 21, 5；
Gangwarら、US 7,968,586 B2（2011）；
Ｈurleyら、Science 1984, 226, 843；
Kobayashiら、Cancer Res. 1994, 54, 2404；
Lajinessら、J. Med. Chem. 2010, 53, 7731；
Liら、Cancer Res. 1992, 52, 4904；
NagamuraおよびSaito、Chem. Heterocyclic Compounds 1998, 34（12）, 1386；
Nagamuraら、Chem. Pharm. Bull. 1996, 44（9）, 1723；
Ngら、US 7,129,261 B2（2006）；
Ngら、US 7,507,420 B2（2009）；
Ngら、US 8,034,959 B2（2011）；
Schramaら、Nature Rev. Drug Disc. 2006, 5, 147-159；
Sufiら、US 8461,117 B2（2013）；
Tichenorら、J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 10858；
Tietzeら、ChemBioChem 2001, 2, 758；
Tietzeら、Bioorg. Med. Chem. 2008, 16, 6312；
Zhangら、US 8,852,599 B2（2014）；
Zhaoら、US 7,655,660 B2（2010）

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】