(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-03-07
(45)【発行日】2022-03-15
(54)【発明の名称】分析標準及びその使用方法
(51)【国際特許分類】
C12Q 1/6851 20180101AFI20220308BHJP
G01N 33/50 20060101ALI20220308BHJP
C12Q 1/6869 20180101ALI20220308BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20220308BHJP
【FI】
C12Q1/6851 Z ZNA
G01N33/50 P
G01N33/50 F
C12Q1/6869 Z
C12N15/09 Z
(21)【出願番号】P 2018558331
(86)(22)【出願日】2017-05-05
(86)【国際出願番号】 US2017031271
(87)【国際公開番号】W WO2017192974
(87)【国際公開日】2017-11-09
【審査請求日】2020-02-27
(32)【優先日】2016-05-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】305023366
【氏名又は名称】リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100150810
【氏名又は名称】武居 良太郎
(74)【代理人】
【識別番号】100182730
【氏名又は名称】大島 浩明
(72)【発明者】
【氏名】ケネス ベックマン
(72)【発明者】
【氏名】ダリル ゴール
【審査官】原 大樹
(56)【参考文献】
【文献】特開2015-204813(JP,A)
【文献】特開2015-171372(JP,A)
【文献】特表2015-535431(JP,A)
【文献】特表2000-500007(JP,A)
【文献】Biologicals,2004年,Vol.32,p.84-87
(58)【調査した分野】(Int.Cl.,DB名)
C12Q
C12N
C12M
G01N
MEDLINE/BIOSIS/EMBASE/WPIDS/WPIX/CAplus(STN)
JSTPlus/JMEDPlus/JST7580(JDreamIII)
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
複数のポリヌクレオチドを含むサンプルにおける増幅バイアスを測定し、そして補正するための方法であって、
少なくとも第1サンプルポリヌクレオチド及び第2サンプルポリヌクレオチドを含むサンプルを入手し;
2つのサンプルポリヌクレオチド間の増幅バイアスを検出するよう設計された少なくとも1つの
プライマー編集標準を含む合成標準ポリヌクレオチドによりサンプルをスパイクし;
前記スパイクされたサンプル中のポリヌクレオチドを増幅し;
第1サンプルポリヌクレオチド、第2サンプルポリヌクレオチド及び
合成標準ポリヌクレオチドを配列決定し;
合成標準ポリヌクレオチド、第1サンプルポリヌクレオチド、及び第2サンプルポリヌクレオチドの出現頻度を測定し;
合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度と、
合成標準ポリヌクレオチドの出現頻度を比較し、それにより、合成標準ポリヌクレオチドバイアス値を生成し;そして
合成標準ポリヌクレオチドバイアス値に従って、第1サンプルポリヌクレオチド及び第2サンプルポリヌクレオチドの出現頻度を補正することを含む方法。
【請求項2】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、16S rRNA遺伝子ヌクレオチドを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項3】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、複数の異なる合成標準ポリヌクレオチドを含む、請求項1又は2に記載の方法。
【請求項4】
前記異なる合成標準ポリヌクレオチドが、増幅における異なるバイアスを検出するよう設計された差異を含む、請求項3に記載の方法。
【請求項5】
第1合成標準ポリヌクレオチド及び第2合成標準ポリヌクレオチドが、G-C含量、二次構造、アンプリコンサイズ、又はプライマー配列に対するミスマッチの程度において異なる、請求項3又は4に記載の方法。
【請求項6】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、サンプルに添加される生物学的標準生物から得られたポリヌクレオチドを含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
【請求項7】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、環状ポリヌクレオチドを含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
【請求項8】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、サンプル中のポリヌクレオチドの絶対量又は相対量を測定するために、規定のレベルでサンプル中にスパイクされる、請求項1~7のいずれか1項に記載の方法。
【請求項9】
複数の合成標準ポリヌクレオチドが、検出限界を測定するために、複数の規定された濃度でサンプル中にスパイクされる、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
【請求項10】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、少なくとも1:10、000及び100:1以下の標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比でサンプルにスパイクされる、請求項8又は9に記載の方法。
【請求項11】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、少なくとも1:3及び3:1以下の標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比でサンプルにスパイクされる、請求項10に記載の方法。
【請求項12】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、1分子~100,000分子の量でサンプルにスパイクされる、請求項8又は9に記載の方法。
【請求項13】
前記ポリヌクレオチドの増幅が、1組のプライマーを用いることを含む、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項14】
前記合成標準ポリヌクレオチドが、合成標準のPCRフリー定量化を可能にする特徴を含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項15】
前記合成標準のPCRフリー定量化を可能にする特徴が、バーコードを含む、請求項14に記載の方法。
【請求項16】
前記第1サンプルポリヌクレオチドが第1微生物由来のポリヌクレオチドを含み;そして前記第2サンプルポリヌクレオチドが、第2微生物由来のポリヌクレオチドを含む、請求項1~15のいずれか1項に記載の方法。
【請求項17】
前記第1微生物及び第2微生物が、マイクロバイオーム(microbiome)サンプルのメンバーである、請求項16に記載の方法。
【請求項18】
複数のポリヌクレオチド間の増幅バイアスを決定する方法であって、
サンプル中の複数のポリヌクレオチドを増幅し、ここで前記サンプルは、
第1サンプルポリヌクレオチド;
第2サンプルポリヌクレオチド;及び
複数の合成標準ポリヌクレオチドを含み、ここで前記合成標準ポリヌクレオチドは、
プライマー編集標準を含む第1合成標準ポリヌクレオチド;及び
G-C含量、二次構造、アンプリコンサイズ又はプライマー配列に対するミスマッチの程度において第1合成標準ポリヌクレオチドとは異なる第2合成標準ポリヌクレオチドを含み;
前記第1サンプルポリヌクレオチド、前記第2サンプルポリヌクレオチド、及び前記複数の合成標準ポリヌクレオチドを配列決定し;
前記第1サンプルポリヌクレオチド、前記第2サンプルポリヌクレオチド、前記第1合成標準ポリヌクレオチド、及び前記第2合成標準ポリヌクレオチドの出現頻度を測定し;
前記第1合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度と、前記第1合成標準ポリヌクレオチドの測定された出現とを比較し、それにより、第1合成標準値を生成し;
前記第2合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度と、前記第2合成標準ポリヌクレオチドの測定された出現とを比較し、それにより、第2合成標準値を生成し;そして
前記第1合成標準値が前記第2合成標準値と異なる場合、増幅バイアスを検出することを含む方法。
【請求項19】
前記複数の合成標準ポリヌクレオチドが、複数の濃度で提供され;そして合成標準の検出の失敗が検出の限界を定義する、請求項18に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、2016年5月6日に出願された米国仮出願第62/332,879号の利益を請求し、その内容は参照により本明細書に組込まれる。
【背景技術】
【0002】
配列表
本出願は、2017年5月5日に作成された313キロバイトのサイズの「2017-05-05-SequenceListing_ST25.txt」と題されたASCIIテキストファイルとして米国特許商標庁にEFS-Web経由で電子的に提出された配列表を含む。配列表に含まれる情報は、参照により本明細書に組込まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0003】
本開示は一般的に、複数のポリヌクレオチド分子を含むサンプルにおけるサンプリング、プロセッシング、及び/又は増幅誤差の検出及び/又は測定を可能にする分析標準を記載する。
【課題を解決するための手段】
【0004】
1つの側面によれば、本開示は、サンプル中の増幅バイアスを測定し、そして補正するための方法を記載する。一般的に、前記方法は、ポリヌクレオチド分子を含むサンプルを入手し;2つのサンプルポリヌクレオチド間の増幅バイアスを検出する少なくとも1つの合成標準によりサンプルをスパイクし;前記スパイクされたサンプル中のポリヌクレオチドを増幅し;第1サンプルポリヌクレオチド、第2サンプルポリヌクレオチド及び標準を配列決定し;合成標準ポリヌクレオチド、第1サンプルポリヌクレオチド、及び第2サンプルポリヌクレオチドの出現頻度を測定し;合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度に、合成標準ポリヌクレオチドの出現頻度を比較し、それにより、合成標準ポリヌクレオチドバイアス値を生成し;そして合成標準ポリヌクレオチドバイアス値に従って、第1サンプルポリヌクレオチド及び第2サンプルポリヌクレオチドの出現頻度を補正することを含む。
【0005】
別の側面によれば、本開示は、複数のポリヌクレオチド間の増幅バイアスを決定する別の方法を記載する。一般的に、前記方法は、サンプル中の複数のポリヌクレオチドを増幅し、ここで前記サンプルは、第1サンプルポリヌクレオチド;第2サンプルポリヌクレオチド;及び複数の合成標準ポリヌクレオチドを含み、ここで前記複数の合成標準は、第1合成標準ポリヌクレオチド;及びG-C含量、二次構造、アンプリコンサイズ又はプライマー配列に対するミスマッチの程度において第1合成標準ポリヌクレオチドとは異なる第2合成標準ポリヌクレオチドを含み;前記第1サンプルポリヌクレオチド、前記第2サンプルポリヌクレオチド、及び前記複数の合成標準ポリヌクレオチドを配列決定し;前記第1サンプルポリヌクレオチド、前記第2サンプルポリヌクレオチド、前記第1合成標準ポリヌクレオチド、及び前記第2合成標準ポリヌクレオチドの出現頻度を測定し;前記第1合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度と、前記第1合成標準ポリヌクレオチドの測定された出現とを比較し、それにより、第1合成標準値を生成し;前記第2合成標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度と、前記第2合成標準ポリヌクレオチドの測定された出現とを比較し、それにより、第2合成標準値を生成し;そして前記第1合成標準値が前記第2合成標準値と異なる場合、増幅バイアスを検出することを含む。
【0006】
別の側面によれば、本開示は、複数のポリヌクレオチドの増幅バイアスを決定する別の方法を記載する。一般的に、前記方法は、サンプル中の複数のポリヌクレオチドを入手し、ここで前記サンプルは、第1PCRフリー定量化タグを含む第1合成ポリヌクレオチド;及び第2PCRフリー定量化タグを含む第2合成ポリヌクレオチドを含み;第1PCRフリー定量化タグを遊離するために前記第1合成ポリヌクレオチドを消化し;第2PCRフリー定量化タグを遊離するために前記第2合成ポリヌクレオチドを消化し;前記第1PCRフリー定量化タグ及び前記第2PCRフリー定量化タグを配列決定し;そして前記第1PCRフリー定量化タグ及び前記第PCRフリー定量化タグの存在量を測定することを含む。
【0007】
別の側面によれば、本開示は、複数のポリヌクレオチドを含むサンプルにおけるサブサンプリング誤差を検出する方法を記載する。一般的に、前記方法は、少なくとも第1サンプルポリヌクレオチド及び第2サンプルポリヌクレオチドを含むサンプルを入手し;サブサンプリング誤差を検出するよう設計された少なくとも1つの合成多様性標準により前記サンプルをスパイクし;前記スパイクされたサンプル中のポリヌクレオチドを増幅し;第1サンプルオリゴヌクレオチド、第2サンプルオリゴヌクレオチド、及び少なくとも1つの合成多様性標準を配列決定し;合成多様性標準ポリヌクレオチドの出現頻度を測定し;前記合成多様性標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度に、前記合成多様性標準ポリヌクレオチドの測定された現頻度を比較し;そして前記合成多様性標準の測定された出現頻度が前記合成多様性標準ポリヌクレオチドの予測出現頻度よりも小さい場合、サンプル中のサブサンプリング誤差を検出することを含む。
【0008】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、合成標準ポリヌクレオチドは、16SrRNA遺伝子ヌクレオチドを含むことができる。
【0009】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、複数の異なる合成標準ポリヌクレオチドを含む。それらの実施形態のいくつかによれば、前記異なる合成標準ポリヌクレオチドは、増幅における異なるバイアスを検出するよう設計された差異を含む。例えば、第1合成標準ポリヌクレオチド及び第2合成標準ポリヌクレオチドは、G-C含量、二次構造、アンプリコンサイズ、又はプライマー配列に対するミスマッチの程度において異なる。
【0010】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、プライマー編集標準を含むことができる。
【0011】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、サンプルに添加される生物学的標準生物から得られたポリヌクレオチドを含む。
【0012】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、環状ポリヌクレオチドを含む。
【0013】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、サンプル中のポリヌクレオチドの絶対量又は相対量を測定するために、規定のレベルでサンプル中にスパイクされる。
【0014】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、複数の合成標準ポリヌクレオチドは、検出限界を測定するために、複数の規定された濃度でサンプル中にスパイクされる。
【0015】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、記ポリヌクレオチドの増幅は、1組のプライマーを用いることを含むことができる。
【0016】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記合成標準ポリヌクレオチドは、合成標準のPCRフリー定量化を可能にする特徴を含むことができる。例えば、前記合成標準のPCRフリー定量化を可能にする特徴は、バーコードを含むことができる。
【0017】
上記で要約された様々な方法の様々な実施形態によれば、前記第1サンプルポリヌクレオチドは、第1微生物由来であり、そして第2サンプルポリヌクレオチドは、第2微生物由来であり得る。
【0018】
本発明の上記概要は、本発明の各開示された実施形態又はすべての実施形態を説明することを意図するものではない。以下の説明は、例示的な実施形態を、より具体的に開示する。本出願のいくつかの場所において、種々の組合せで使用され得る例の列挙を通してガイダンスが提供される。各場合においては、引用された列挙は、代表的なグループとしてのみ機能し、そして排他的な列挙として解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【
図1】
図1は、標準分子、プラスミド線状化のためのホーミングエンドヌクレアーゼI-SceI部位、及び標準及び標準プールの配列決定ベースの定量化のためのMlyIを両端に有するPCRフリーイルミナ配列決定カセットを含む典型的な標準コンストラクトの設計を示す。
【0020】
【
図2】
図2は、16SrRNA遺伝子V4 515F領域プライマー編集標準(配列番号288-318)の設計を示す。 プライマーのミスマッチは、陰影が付けられている。
【0021】
【
図3】
図3は、ホスホロチオール結合(ITS
*プライマー組)の導入がアダプターダイマーの形成(プライマー編集工程の所望しない副作用)を低めることができ、このことは、プライマー編集の程度がホスホロチオール修飾を用いて調節され得ることを示唆することを示す。
【0022】
【
図4】
図4は、MlyIによる消化が、定量化バーコードを含む148bpの分子を遊離させることができることを示す。
【0023】
【
図5】
図5は、イルミナアダプターを両端に有する、MlyIにより遊離された定量化バーコードが、直接的に配列決定され、そして複合プール中の標準分子の存在量を定量化するために使用され得ることを示す。
【0024】
【
図6】
図6は、擬似集団配列決定データセットにおけるスパイクイン合成標準に対応する読み取りの割合は予測(標的化された)割合と良好に相関することを示す。
【0025】
【
図7】
図7は、以下の典型的な擬似集団の存在量の分析を示す。上部:KAPA HiFi(左)又はTaq(右)のいずれかを用いて増幅されたHMP平坦擬似集団(HM-276D)についての未補正(生)存在量測定値。底部:線状化されたV4合成標準に基く補正係数が適用された存在量測定値。
【0026】
【
図8】
図8は、3種の濃度のスパイクイン合成標準についての擬似集団データ(左)又は線状化されたV4合成標準データ(右)において観察されたP.アクネ(P.acnes)読み込みの量を示す。
【0027】
【
図9】
図9は、環状(非切断)又は線状化されたV4合成標準ベースの補正係数のいずれかを用いて、HMV平坦擬似集団(HM-276D)についての補正されていないデータ及び補正されたデータの比較を示す。黒のボックスは、線状化された標準がサンプルを「過補正する」場合を示す。
【0028】
【
図10】
図10は、環状化された(上部)又は線状化された(底部)標準を用いてV4合成標準ベースの補正の油有無を伴って、HMP平坦(HM-276D、左)又はジグザグ状(HM-277D、右)凝集集団についての集計誤差(RMSD)測定値を示す。
【0029】
【
図11】
図11は、鋳型DNAの剪断を伴って(右)又は伴わないで(左)、環状(上部)又は線状(底部)V4合成標準を用いての未補正及び補正されたデータの比較を示す。
【0030】
【
図12】
図12は、補正係数が、種々の読み取りの深さまでサブサンプリングされた環状(上部)又は線状(底部)V4合成標準読み取りを用いて適用された場合のHMP擬似集団の定量化の精度の変動を示すプロットを示す。
【0031】
【
図13】
図13は、環状標準分子が、その検出がプライマー編集に依存する種であるP.アクネに対応する読み取りの割合としてここで検出される、高められたプライマー編集を示すことを示す。
【0032】
【
図14】
図14は、線状化されたV4合成標準ベースの補正係数(KAPA.HM.276D.2500L 及び KAPA.HM.276D.1kb.2500L)がP.アクネの存在量の推定を膨らませ(標準の良好でないプライマー編集は擬似的に高い補正係数につながる)、ところが、環状V4合成標準ベースの補正係数(KAPA.HM.276D.2500C 及びKAPA.HM.276D.1kb.2500C)は、P.アクネの定量精度は改善することを示す。
【0033】
【
図15】
図15は、合成標準分子についての読み取りの不在が、増幅産物による分類群からの脱落を示すために使用され得る(この場合、P.アクネ鋳型を増幅するためのTagポリメラーゼの不全)ことを示す。
【0034】
【
図16】
図16は、誤差補正ポリメラーゼによるプライマー編集が、増幅プライマーとのミスマッチを有する生物の回収を可能にすることを示す。(A)V4 515F(配列番号320)及びV4 806Rプライマー(配列番号322)配列に対するP.アクネ16S rRNA遺伝子(配列番号319及び配列番号321)の16S rRNA遺伝子V4プライマー領域のアラインメント。V4 515F及びV4 806Rプライマーとのミスマッチを有する位置は陰影を付けられている。(B)示される方法におけるP.アクネにマッピングされた読み取りの割合。誤差バーは、+/-SEMである。
***P<0.01、
*P<0.05;Tukey HSD post-hoc試験を用いてANOVAにより決定された。(C)Q5ポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 515Fプライマー(配列番号320)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。(D)Q5ポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 806Rプライマー(配列番号322)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。(E)KAPA HiFiポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 515Fプライマー(配列番号320)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。(F)KAPA HiFiポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 806Rプライマー(配列番号322)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。(G)Taqポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 515Fプライマー(配列番号320)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。(H)Taqポリメラーゼを用いたDIプロトコールにより測定されたHM-276D平坦擬似集団データにおける、V4 806Rプライマー(配列番号322)領域中の編集された塩基の平均%。誤差バーは+/-SEMである。n=4。
【0035】
【
図17】
図17は、精度、キメラ形成、サンプルバランス及びアダプターダイマー形成に対するKAPA HiFi酵素濃度の効果を示す。0.25x、0.5x、1x KAPA HiFiポリメラーゼ 又はKAPA ReadyMixを用いて20、25、30又は35サイクルの間、増幅された5種の異なる鋳型濃度でのHM-276D平坦擬似集団についてのプロットは以下を示す:(A-D)RMSD;(E-H)ダイマー読み取りの%;(I-J)読み取りの合計数:(M-P)アダプターダイマーの%。
【0036】
【
図18】
図18は、KAPA HiFi酵素濃度プライマー編集効率及びプライマー編集産物の出現の効果を示す。(A)KAPA ReadyMixを用いたDIプロトコールにより測定されたカンピロバクター・ジェジュニ(Campylobacter jejuni)の純粋単離物由来のデータにおけるV4 515Fプライマー(配列番号320)領域における編集された塩基の分布。(B)KAPA ReadyMixを用いたDIプロトコールにより測定されたカンピロバクター・ジェジュニ(Campylobacter jejuni)の純粋単離物由来のデータにおけるV4 806Rプライマー(配列番号322)領域における編集された塩基の分布。(C)カンピロバクター・ジェジュニの純粋単離物由来の16S V3-V5増幅の模式図。このアンプリコンは、V4 515Fプライマー配列を含み、内因性配列の評価を可能にする。(D)カンピロバクター・ジェジュニの純粋単離物由来のV3-V5アンプリコン中のV4 515Fプライマー配列に対応する配列の6位で観察される各塩基の割合。
【0037】
【
図19】
図19は、16S rRNA遺伝子V4領域%GC及び予測される二次構造(dG)(黒塗りの丸)及び設計されたプロセス制御標準(薄く満たされた丸)の分布を示す。黒塗りは、黒塗りの丸が密集している結果である。
【0038】
【
図20】
図20は、16S rRNA遺伝子V4領域サイズの自然分布を示す。プロセス制御標準は、193bp~313bpの範囲である。
【0039】
【
図21】
図21は、KAPA HiFiポリメラーゼを用いての読み取りの分布を示す。(A-D)PCRサイクル数及び出発鋳型濃度の範囲にわたって、異なる濃度のKAPA HiFiポリメラーゼにより回収されたP.アクネ読み取りの割合。(E)グアニンに編集されたV4 515Fプライマー(配列番号320)塩基の割合。(F)グアニンに編集されたV4 806Rプライマー(配列番号322)塩基の割合。
【0040】
【
図22】
図22は、多様性標準の設計及び使用を示す。(A)標準に固有である10bp配列タグ(配列番号323)が、例えばPCR増幅によりサンプルからタグを回収するために使用される、他の多様性標準に共通する配列領域を両端に有する、1つの多様性標準の設計の例。(B)100タグに等しい複雑さの多様性標準のプールの濃度、各タグは全集団の0.1%で存在する。例示のために、タグ配列は、タグ1-3及びタグ1000(配列番号323-326が図示されている)について示されているが、全プールは1000のユニークタグ配列を含む。(C)多様性標準のプールの分子の集団サイズを制限した結果として経験される配列タグ多様性の損失の実例。(D)いくつかの分子段階を通して担持されるサンプル集団ボトルネックを検出し、そして評価するための多様性標準の使用の実例。そのような評価のために必要とされるものは、最終データにおける各タグの頻度の信頼できる測定値である。
【0041】
【
図23】
図23は、多様性標準組の設計及び使用を示す。(A)5つの多様性標準組の設計の例、それぞれは、9つの多様性標準の等モルプールを含む(
図22)。各多様性標準組は、各組の各タグの頻度が知られるように、すべての5つの組のスーパープールに異なる濃度で組合される。例えば、セットAにおけるすべてのタグは10%で存在し、セットBにおけるすべてのタグは1%で存在するという具合である。(B)多様性標準組のプールの分子の集団サイズを制限した結果として経験される配列タグ多様性の損失の実例。
【0042】
【
図24】
図24は、プライマー編集標準の設計及び分析を示す。(A)プライマー編集標準(配列番号288-318)のV4 515F領域の設計。プライマーミスマッチは陰影を付けられている。(B)多くのプルーフリーディングポリメラーゼが種々の程度までプライマー編集を支持できることを実証するためにしようされるプライマー編集(配列番号288)。(C)鋳型配列(配列番号327)のプライマー編集に対する明らかな配列特性がほとんどないことを実証するために使用されるプライマー編集標準。(D)KAPA HiFiポリメラーゼによる鋳型配列(配列番号327)のプライマー編集が濃度依存性であることを実証するために使用されるプライマー編集標準。(E)プライマー編集は、所定のプライマー位置で類似する効率を伴って、野生型E.コリプライマーを変異体鋳型(明るい曲線);又は変異体プライマーを野生型E.コリ鋳型(暗い曲線)と適合するよう変更する編集をもたらすことができる。
【0043】
【
図25】
図25は、KAPA HiFiポリメラーゼによるプライマー編集が単一のホスホロチオール結合により特定位置で阻止され得ることを実証するために使用されるプライマー編集標準を示す。
【0044】
【
図26】
図26は、生物物理学的標準及びサイズ標準を用いてのバイアスの分析を示す。(A)Greengenesデータベース(黒の円)及び企画される生物物理学的標準(明るい塗りつぶされた円)における配列に基いて、16S rRNA遺伝子V4領域%GC及び予測される二次構造(dG)の分布。
図19におけるように、黒スミアは、密に重なった黒丸の結果である。(B)Greengenesデータベースにおける配列に基く16S rRNA遺伝子V4領域サイズの分布。V4サイズ標準は、193bp~313bpの範囲である。(C-D)KAPA HiFiポリメラーゼによる増幅される場合、配列特性によるバイアスについて報告するために使用される生物物理学的標準及びサイズ標準。(E-F)Accuprime Taqポリメラーゼにより増幅される場合、配列特性によるバイアスについて報告するために使用される生物物理学的標準及びサイズ標準。
【0045】
【
図27】
図27は、スパイクインコントロールを用いてのPCRバイアスの分析を示す。(A)合成スパイクインコントロールは、未知の組成のサンプルと共に増幅される。スパイクインコントロールは、異なる鋳型分子に対して特異的なPCRバイアスを測定するために使用され、そしてサンプル中の異なる種の開始存在量を推定するために使用される補正マトリックスを生成するために使用される。(B)16S V4領域を用いて、8種の細菌種(そのうち5種(ダークドット)は合成標準により標的とされ、そして3種(明るいドット)は標的とされない)から成る擬似集団の測定された存在量。(C)16S VI-V3領域を用いて同じ擬似集団の測定された存在量。(D-E)合成スパイクイン標準からの補正係数が増幅バイアスを補正するために使用される場合の存在量の測定値。補正された分類群(グークドット)についての存在量は、予測される値に近い(対角線)。
【0046】
【
図28】
図28は、PCRフリーバーコードの設計及び分析を示す。(A)PCRフリー定量化バーコードコンストラクトを組込む合成DNA標準プラスミドの設計。(B)PCRフリー定量化バーコードを用いてのプラスミド標準プールの定量化。この同じ組の標準がこの存在量の情報を用いて再プールされ、そして第2プールがPCRフリーバーコード定量化方法を用いて定量化された。(C)PCRフリーバーコード定量化により測定された均等に再プールされた混合物の3種の独立した技術的複製物。これは、この技法により得られた測定値が非常に正確であることを実証する。
【0047】
【
図29】
図29は、PCRフリーバーコードを用いての存在量の分析を示す。(A-B)イルミナ配列決定のためのライブラリーを調製するために、PCRフリーバーコード定量化方法、又は異なる量のPCRサイクルのいずれかを用いての均等に混合されたプラスミド標準プールの定量化の比較(破線は期待値を示した)。(C)PCRフリーバーコード又は異なる数のPCRサイクルにより測定された均等に混合されたプラスミドプールについての期待値からの平均平方根偏差。(D)PCRフリーバーコード又は異なる数のPCRサイクルにより測定されたジグザグ状にされたプラスミドについての期待値からの平均平方根偏差。(E)PCRフリーバーコード測定値は、液滴デジタルPCRデータと非常に良好に相関する。PCRのサイクルの増加は、液滴デジタルPCRデータとの測定された存在量の相関の低下をもたらす。
【0048】
【
図30】
図30は、PCRフリーバーコードコンストラクトを示す。(A)E.コリにおいて13,000以上の挿入トランスポゾンのライブラリーを生成するために使用されたPCRフリーバーコードコンストラクト(配列番号328)を含むTn5トランスポゾンコンストラクト。(B)E.コリ中に形質転換する前、MlyIを用いてPCRフリーバーコードコンストラクトを遊離し(前転置ライブラリー、黒の曲線)、そしてPCRフリーバーコードコンストラクトがE.コリゲノムから遊離され、そして直接的に配列決定され得ることを実証する(転置されたライブラリー、灰色の曲線)ことによるライブラリーのバーコード多様性の試験。(C)PCRフリー定量化バーコードコンストラクトの多重化を可能にするために複数の酵素を用いるための戦略。(D)MlyIにより切断されたそれらの4種のプラスミドの均等にプールされた混合物のクラスター形成の特異性の試験。他のバーコードのブリードスルーが存在するという事実は、サイズ選択が特異性を改善するために必要とされることを示唆する。(E)コンカテマー化されたPCRフリーバーコードコンストラクトは、トランスポゾン又はプラスミドベクター主鎖中にクローン化され、PCRフリーバーコード測定値の多重化を潜在的に可能にされ得る。
【発明を実施するための形態】
【0049】
本開示は、増幅成分を含むアンプリコンベースの分析、例えば増幅成分、例えばTn-Seq又はプールされたRNA干渉又はCRISPR-Cas9スクリーンを有するマイクロバイオーム実験及び/又は定量化実験における誤差及びバイアスを定量化し、そして補正するためのいくつかの分析標準を記載する。
【0050】
特定の用途に使用される分析標準は、合成核酸標準又は生物学的(組換え生物に基く)標準であり得る。分析標準は、合成標準又は生物学的標準であり得る。生物学的標準は、任意のタイプの合成標準配列を含む組換え生物であり得る。生物学的標準は、生物学的標準細胞からの核酸の抽出及び回収の効率の測定を可能にするよう特別に設計された追加の合成配列をさらに含むことができる。
【0051】
合成標準は、単独で増幅されるスタンドアロン試薬であり得るか、又は増幅及び続くサンプルの処理の間に生じる誤差及びバイアスをモニターし、そして/又は制御するためにサンプルに添加される「スパイクイン」標準でもあり得る。例えば、合成スパイクイン標準は、増幅反応中にスパイクされるよう設計される修飾された16S rRNA遺伝子ヌクレオチドを含むことができる。合成標準が修飾された16S rRNA遺伝子ヌクレオチドを含むことが典型的な実施形態との関連で以下に論じられるが、合成標準は、例えば18S rRNA又は真核生物のための内部転写スペーサー(IST)などの任意の適切なマーカー遺伝子に由来するヌクレオチドを含むことができる。
【0052】
いくつかの実施形態によれば、「スパイクイン」標準として使用される場合、合成標準分子は、例えば標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチドの比が1:10,000~100:1になるようサンプルに添加され得る。例えば、合成標準は、最小標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチドの比が、少なくとも1:10,000、少なくとも1:5、000、少なくとも1:1000、少なくとも1:500、少なくとも1:100、少なくとも1:50、少なくとも1:10、少なくとも1:5、少なくとも1:1、少なくとも5:1、少なくとも10:1、又は少なくとも50:1になるよう、サンプルに添加され得る。合成標準は、最大標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチドの比が、100:1以下、50:1以下、10:1以下、5:1以下、1:1以下、1:5以下、1:10以下、又は1:50以下になるよう、サンプルに添加され得る。合成標準は、上記で示された任意の最小標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比、及び最小標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比よりも大きい上記で示された任意の最大標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比として、エンドポイントを有する範囲により定義される標準ポリヌクレオチド:サンプルポリヌクレオチド比を提供するようサンプルに添加され得る。
【0053】
他の実施形態によれば、スパイクイン標準として使用される場合、合成標準分子(又は複数の分子)は、1分子~100,000分子の量でサンプルに添加され得る。例えば、合成標準分子(又は複数の分子)は、少なくとも1分子、少なくとも10分子、少なくとも100分子、少なくとも500分子、少なくとも1000分子、少なくとも5000分子、又は少なくとも10,000分子の最小量で提供され得る。合成標準分子(又は複数の分子)は、100,000以下の分子、50,000以下の分子、10,000以下の分子、5000以下の分子、1000以下の分子、500以下の分子、100以下の分子、50以下の分子、又は10以下の分子の最大量で提供され得る。合成標準は、上記で示された標準合成分子(又は複数の分子)の任意の最小量、及び合成標準分子(又は複数の分子)の最小量よりも大きい、上記で示された合成標準分子の任意の最大量をエンドポイントして有する範囲内で合成標準分子(又は複数の分子)を提供するあめにサンプルに添加され得る。
【0054】
合成標準がスタンドアロン試薬であるが、又はスパイクイン標準であるかに関わらず、合成標準は、1又は2以上の以下のタイプの配列特異的標準であり得る:定量的バイアス標準、プロセス標準、プライマー編集標準及び/又は多様性標準。本明細書において使用される場合、定量化バイアス標準は、異なる生物学的種からの配列の増幅効率に差異的に影響を及ぼす配列特異的定量的増幅誤差及びバイアスを測定するよう設計される。本明細書において使用される場合、プロセス標準は、増幅バイアスに対する配列特性の効果を評価するよう設計される。本明細書において使用される場合、プライマー編集標準は、増幅の間、DNAポリメラーゼによるプライマー編集の発生及び程度を測定するよう設計される。本明細書において使用される場合、多様性標準は、実験室での処理の間、分子集団におけるボトルネックを測定するよう設計される。
【0055】
プロセス標準は、増幅に影響を及ぼすことができる多くの異なる配列特性において系統的に変化する分子の集合を含むことができる。増幅に影響を及ぼすことができる典型的な特性は、例えばGC含量、二次構造、アンプリコンサイズ及び/又はプライマー配列に対するミスマッチの程度を含む。プロセス標準は、増幅プロセスにおいて体系的なバイアスを検出するために、実験サンプルと並行して実施されるよう設計され得る。
【0056】
プライマー編集標準は、それらのプライマー結合部位において系統的に異なるよう修飾され、そしてPCR反応においてプライマー編集の有効性について報告する16S rRNA遺伝子ヌクレオチド配列を含むことができる。プライマー編集標準は、増幅反応にスパイクされ得る。再び、合成標準が修飾された16S rRNA遺伝子ヌクレオチドを含むことが典型的な実施形態との関連で以下に論じられるが、合成標準は、例えば18S rRNA又は真核生物のための内部転写スペーサー(IST)などの任意の適切なマーカー遺伝子に由来するヌクレオチドを含むことができる。
【0057】
多様性標準は、混合物中の既知濃度でのユニーク配列タグの集団を含むことができ、その結果、それらの標準は、分子集団の絶対的サイズ(すなわち、分子数)、及びその集団内でその操作中に発生する収縮(ボトルネック)を報告するために使用され得る。集団サイズ(分子数)が、多様性タグの数以下の数に低められる場合、タグの多様性は混合物からのタグのいくつかの確率的損失により永久的に低められるであろう。タグの「ドロップアウト」の可能性は、集団サイズがタグ多様性に近づくにつれて、高まるであろう。
【0058】
さらに、多様性タグ組は、そのような多様性タグ組を、ある範囲の相対濃度(例えば、各組について濃度の2倍希釈)で混合することにより、広範囲での分子集団サイズの測定を可能にするよう設計され得、結果的に、最初に、多様性の損失は、より低い相対濃度での組みについて観察される。
【0059】
多様性標準又は多様性標準組が一連の操作にゆだねられるサンプルにスパイクされる場合、それらは、例えば次世代シーケンシングにより、操作後の最終店で、多様性標準又は多様性標準組の回収を測定することにより、それらの操作中、集団「ボトルネック」の統合的評価を可能にする。
【0060】
存在量標準は、サンプル鋳型分子の絶対的又は相対的定量化を可能にするために、サンプルスパイクされる分子の集合であり得る。
【0061】
生物学的標準は、抽出におけるバイアスを検出するために使用され得、そしてグラム陰性細菌、グラム陽性細菌、菌類又は他の微生物を含む異なるタイプの微生物からのDNA抽出の効率をモニターするために、抽出の前にサンプルにスパイクされ得る。生物学的標準は、例えば増幅及び定量化され得るユニーク配列タグを含むよう設計される異なる膜特性を有する1又は2以上の生物を含むことができる。それらの実施形態によれば、配列タグは、例えば編集された16S rRNA遺伝子ポリヌクレオチド又は異なる配列であり得る。他の実施形態によれば、そのようなユニークタグは、集団サイズ及び集団サイズにおけるボトルネックを測定し、絶対的又は相対的定量化を可能にし、又は検出限界を評価するよう設計された多様性標準又は多様性標準組であり得る。生物学的標準は、複製欠陥であるか、又は他方では、不活性化され得、その結果、それらは、商業的分析キットに提供される場合、消費者により「再増殖」され得ない。他の場合、生物学的標準は、複製可能であり、そしてサンプルの輸送又は貯蔵中に起こる細菌増殖を報告するよう設計され得る。
【0062】
本明細書に記載される標準及び方法の種々の実施形態は、1又は2以上の以下の特性を提供することができる。第1に、特定の標準及び方法は、既知標的に対する異なるプライマー組間の増幅効率の差異に起因するバイアスを補正することができる。標準及び方法は、1組のプライマーを用いてアンプリコン特性に起因するバイアスを補正することができる。第2に、複数のタイプの標準を組込むことにより、本明細書に記載される特定の標準及び方法は、鋳型分子及び/又は追加のタイプのPCR産物の固有の生物物理学的特性に起因するバイアス、例えばプライマーミスマッチ由来のドロップアウトの測定及び補正を可能にする。第3に、特定の合成標準は、例えば標準分子の正確な定量化を可能にするPCRフリー定量化バーコードを組込んでいる。第4に、多様性標準及び標準組は、サンプル処理の間、分子集団サイズにおけるボトルネックによりもたらされる産物の検出及び半定量的測定を可能にする。
【0063】
典型的なヌクレオチド標準のためのコンストラクトの設計が
図1に示されている。合成の後、標準は、プラスミドにクローニングされ、そして増殖のために宿主細胞(例えば、E.コり)に形質転換され得る。コンストラクトは、(1)標準配列、(2)増幅の前、プラスミドを任意に線状化するための制限部位、及び(3)バーコードを含む。標準配列は、上記で要約された任意の1又は2以上のヌクレオチド標準、すなわち合成増幅バイアス標準、プロセス標準、プライマー編集標準、及び/又は多様性標準を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、制限部位は、例えばI-SeIなどのホーミングエンドヌクレアーゼのための認識配列を含むことができる。制限部位が存在する場合、制限エンドヌクレアーゼのための認識配列が増幅プライマー間に存在する限り、任意の制限エンドヌクレアーゼにより、その部位は認識され得る。
【0064】
図1に示される実施形態によれば、コンストラクトは、12bpのi7バーコード:AATCAGTCTCGT(配列番号7)を含む。特定のバーコード配列は、任意であり得る。
【0065】
さらに、PCRフリー定量化を可能にする実施形態によれば、コンストラクトは、標準分子の直接的PCRフリー定量化を可能にする追加のバーコード配列を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、PCRフリー定量化バーコードは、例えば、MlyIを両端に有するイルミナアダプタータグ付の20bpのバーコードであり得、その結果、標準は、イルミナ配列決定を用いて、PCR増幅を伴わないで、直接的に定量化され得る。PCRフリー定量化は、合成標準のプールの精度の改善を可能にする。標準プールを定量化するための従来の方法は、定量的PCRを実施することであり、これは分析にバイアスをもたらし、そして従って、不正確な濃度測定をもたらす。
図1に例示される典型的な実施形態は、適切なエンドヌクレアーゼ、例えば
図1に例示されるようなMlyIによる消化により遊離される、各合成標準とは典型的には異なる148bpのバーコード配列を含む。しかしながら、このバーコードは、任意の適切な長さのものであり得る。遊離された分子は、介在するライブラリー調製物又はPCRを用いないで、直接的に配列決定され得る(例えば、イルミナ配列決定を用いて)。
【0066】
合成スパイクイン標準:
いくつかの実施形態によれば、スパイクイン合成標準は、分析の対象であるサンプル中のすべての生物に存在するヌクレオチドを含むことができる。例えば、いくつかの実施形態によれば、スパイクイン標準は、16s rRNA遺伝子のV4可変領域をコードするヌクレオチドを含むことができる。合成標準分子は、均等な存在量(平坦な擬似集団)又は種々の存在量(ジグザグ状擬似集団)のいずれかに存在する20の異なる生物から成る定義された細菌擬似集団のために設計された。擬似集団を構成する生物のゲノムに存在するユニーク16S-V4コード領域のそれぞれについての合成標準が合成された(下記合成標準01-23を参照のこと;配列番号8~配列番号30)。合成の後、標準を用いて、プラスミドにクローニングされ、そしてE.コリを形質転換した。16S V4領域(プライマー部位の外側のいずれかの側に+20bp)が、HMP擬人集団に存在する各分子の類似位置に「TCT」タグを有するよう修飾された。この修飾は、ClustalWを用いてGreengenesデータベースから500の16Sの遺伝子を整列させることにより同定された高度に保有された位置で行われた。予測されるステム-ループ領域内の高度に保存された部位は、「TCT」挿入が合成標準分子の二次構造に対して有する任意の効果を最小限にするよう選択された。さらに、いくつかの分子が、16S V4領域に付加されるタグの配列組成又は長さが増幅反応速度に影響を及ぼすかどうかを試験するために設計された(以下の3bpのタグ配列「TTT」、「TCA」、「CCC」、「GGG」、及び1、2、5、7及び10bpのタグを試験した;下記合成標準24-32を参照のこと;配列番号31~配列番号39)。
【0067】
他の実施形態によれば、スパイクイン合成標準は、分析の対象となるすべての生物に存在する全長ヌクレオチドを含むことができる。従って、1つの実施形態によれば、合成スパイクイン標準は、分析されるサンプルに存在する生物のそれぞれからの全長16S rRNAヌクレオチド配列を含むことができる。全長16S rRNAコード配列、及びV3-V6可変コード領域の両者の対様Hamming距離を計算することにより、分子が種内にどれほど密接に関連しているかを評価できる。16S rRNAの典型的な事例においては、Hamming距離は、1つの種内で、16S rRNA遺伝子が1%未満しか変化しないことを示し、これは典型的には、操作分類単位(OTU)の定義の際の配列類似性の厳しいカットオフとして使用される。従って、標準は、全長標準の基礎として、生物当たりの1つの代表的配列(例えば、所定の生物からの他のすべての16s rRNA配列からの最小累積Hamming距離を有する配列)に基いて設計され得る。
【0068】
鋳型特異的PCRバイアスをモデル化する標準の能力に対する3bp外因性配列タグの一次配列又は位置の影響を評価するためにそれらの全長標準を使用するために、3種の異なる3bpのタグ、「TAG」、「TCT」及び「CAT」が、それぞれ、V3、V4及びV5の領域の高度に保存されたセグメントに挿入された(下記合成標準78-97を参照のこと;配列番号85~配列番号104)。HMP擬似集団生物を標的とするタグされた全長合成標準に加えて、一般的ヒト腸内細菌のための別の25のタグされた全長合成標準が製造された(下記合成標準208-232を参照のこと;配列番号215~配列番号239)。
【0069】
増幅バイアスを補正するための合成標準の使用の有効性を試験するために、平坦擬似集団DNA及びジグザグ状にされた擬似集団DNAが、広範囲の鋳型濃度及び2種の異なる酵素(KAPA HiFi及び5 PRIME Taq)を用いて増幅された。異なる量及び異なる相対存在量の合成標準DNAが、擬似集団サンプル(生物当たり0、25、250及び2500の標準サンプル)にスパイクされた。サンプルが、16S rRNA遺伝子V4領域を増幅し、そしてまた、アダプター端を含むプライマーを用いて増幅された。一次増幅の後、アンプリコンが、ヌクレアーゼフリー水において1:100に希釈され、そしてアダプター端を標的とし、そしてイルミナ配列決定のために必要とされるフロー細胞アダプター及びインデックスを付加するインデックスプライマーを用いて、さらに、10サイクル、増幅された。インデックスPCRの後、反応物は、SequalPrepプレートを用いて標準化され、プールされ、そして洗浄され、そして1.8×AmPure XPビーズにより濃縮した。次に、プールがPicoGreenにより定量化され、8pMに希釈され、そしてMiSeq2×300bpランの一部について配列決定された。
【0070】
配列決定の後、各サンプルについての読み取りが、カスタム・スクリプトを用いて2つのファイルに分割された。1つのファイルは、付加された「TCT」タグにより同定された合成標準読み取りを含み、そして標準配列を含む参照ファイルにマッピングされた。他のファイルは、残る読み取りを含み、そして擬似集団配列を含む参照ファイルにマッピングされた。
【0071】
標準ファイル及び擬似集団ファイルに割り当てられた相当数の読み取りに基いて、擬似集団分子に対するスパイクイン分子の相対濃度は良好に標的化された(
図6)。この比を正確に標的化する能力は、標準分子の存在量を正確に定量化するのに十分なほど深く標準分子の配列決定を可能にするが、しかし標準読み取りが調べられるサンプルを窮地に追い込むほど深くはない。
【0072】
いくつかの用途においては、標準分子は、擬似集団データにおける増幅バイアスを補正するために使用され得る。種特異的補正係数は、観察される標準分子:予測される標準分子の比に基いて生成された(予測される値は、以下に詳細に記載される、PCRフリー定量化バーコードを用いて測定された)。次に、それらの補正係数は、擬似集団データに適用され、そして既知の出発存在量に対するデータの精度が、補正が適用される前後で比較された(
図7)。いくつかの種(例えば、アクチノマイセス・オドントリチカス(Actinomyces odontolyticus)及びラクトバシルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)に関しては、合成標準ベースの補正係数の使用が、定量化の精度を改善した。しかしながら、他の種(最も顕著には、P.アクネ)に関しては、合成標準ベースの補正係数の使用は、定量化の精度を高めた。
【0073】
P.アクネは、V4増幅プライマーに対するその16S rRNA遺伝子のミスマッチを有するHMP擬似集団における唯一の生物である。この生物からの読み取りは、プルーフリーディングポリメラーゼが使用される場合の配列決定データにおいてのみ見られ、プライマー配列をP.アクネ鋳型に適合するよう編集を可能にする(
図16)。擬似集団又は合成標準のいずれかからのP.アクネ配列の回収の程度が評価される場合、標準ベースの補正係数は、P.アクネの存在量を高め、このことは、標準分子がP.アクネ鋳型と共に起こっているプライマー編集について正確に報告しなかったことを示唆する(
図8)。
【0074】
合成標準ベースの補正係数を用いる場合、いくつかの種の誤解を解決するために、(a)標準配列の増幅、及び(b)プライマー補正の程度に対するプライマーの線状化の効果が評価された。再び、平坦擬似集団及びジグザグ状擬似集団DNAの両者が、広範囲の鋳型濃度及び2種の異なる酵素(KAPA HiFi及び5 PRIME Taq)を用いて増幅された。合成標準DNAの異なる量及び異なる相対存在量が、擬似集団DNAサンプルにスパイクされた(生物当たり0、25、250及び2500標準分子)。
【0075】
環状(切断されていない)プラスミドの使用は、P.アクネを含む標準ベースの補正の精度を改善した(
図9)。さらに、平坦擬似集団全体の全体的精度(予測される値からの平均平方根偏差(RMSD)により測定される場合)は、補正されていないデータ及び線状標準補正データ(末補正データよりも低い精度であった)の両者に対する環状標準ベースの補正により改善された。この効果は、集団における高存在量生物のいくつかによりたぶん駆動されると思われるが、線状及び環状標準の両者は、ジグザグ状擬似集団についての定量化の精度を改善した(
図10)。
【0076】
また、精度に対する鋳型DNA(線状標準分子にさらに近似させる)の剪断の効果が、試験された。300bp、1kb、又は5kbの平均サイズに剪断された鋳型と剪断されていない鋳型との間で環状又は線状標準の測定又は補正には実質的な差異は存在しなかった(
図11)。
【0077】
さらに、標準プールが、標準分子の相対存在量の正確な測定を得るために配列決定される必要がある深さを評価した。標準読み取りが異なるレベルにサブサンプリングされ、補正係数が計算され、補正係数が擬似集団データに適用され、そして定量化の全体的精度の変動が試験された。低いサブサンプリング深度(1,000以下の読み取り)で、計算されたRMSD値の変動は高かった。しかしながら、2,500の読み取りは、堅牢な定量化をもたらした(
図12)。これは、標準がサンプル濃度の小部分でスパイクインされ得、そしてさらに、正確に定量化され得ることを示している。
【0078】
環状標準に見られる精度の改善は、少なくとも部分的には、プライマー編集をより効果的に報告する環状標準のためであり得る。環状標準は、P.アクネに対応する多量の標準読み取りを回収し(
図13)、これは、この生物に対する改善された標準ベースの補正を導いた(
図14)。環状及び線状標準鋳型間のプライマー編集のこの差異のメカニズムは、現在未知であり、そして調査中である。
【0079】
プロセス標準:
例示的なプロセス制御標準は、増幅条件及び試薬と、鋳型分子の生物物理学的特性、例えばGC含量、アンプリコンサイズ及び/又は二次構造との相互作用を介して生じ得る増幅バイアスについて報告するよう設計された。16S rRNA遺伝子のV4領域における天然の遺伝的変異により包含されるパラメーター空間が、Greengenesデータベースにおける同定可能なV4領域の全てのGC含量及び予測される二次構造を評価することにより評価された。次に、E.コリ16S rRNA遺伝子の配列が、異なる量のGC又はATバイアスを加え、そして数百万の変異体配列のインシリコライブラリーを生成するようインシリコ中で変化させられた。次に、二次構造予測が、それらの配列について生成され、Greengenesデータベースにおける配列と97%以上同一であるは配列が濾過され、天然のGC含量及び二次構造変化の程度を並べた分子組が選択された(
図19)。V4領域サイズの天然に存在する分布が特徴付けられ、そしてサイズ選択又は増幅によるアンプリコンサイズのバイアスを検出するために使用され得るこのサイズ分布をカバーする標準組が製造された(
図20)(以下のプロセス制御標準33-96、配列番号40~配列番号103参照のこと)。類似する設計考察を用いて、さらなるプロセス制御標準組が、真核生物ITS2領域について製造された(以下の合成標準160-207、配列番号167~配列番号214を参照のこと)。
【0080】
プライマー編集標準:
プライマー編集標準の生成は、予測せぬ現象に起因した。誤った補正ポリメラーゼは、プライマー配列と鋳型分子との間のミスマッチを補正するために、増幅の間、プライマー配列を編集することができる(
図16)。V4 515F及びV4 806Rプライマーは典型的には、P.アクネ16S rRNA遺伝子とのミスマッチのためにP.アクネを検出するためには、ほとんど機能しない(
図16)。低レベルのP.アクネは、EMPプロトコル又はDI(Taq)プロトコルを用いて検出され;その種はまた、公開された擬似集団EMPデータ組においては効果的に欠如していた(
図16;Nelson et al., 2014, PLoS One 9:e94249)。驚くべきことには、比較的高レベルのP.アクネは、DI(Q5)及びDI(KAPA)プロトコルにより観察された(
図16)。DI(Q5)及びDI(KAPA)データ組についての増幅プライマーに対応する読み取り部分が試験された場合、V4 515Fプライマー配列の約4%が位置18でA>Gから編集され、そしてV4 806Rプライマー配列の約4%が位置20でT>Gから編集されており、修飾は、P.アクネ鋳型配列と適合した(
図16)。そのような修飾は、DI(Tag)データ組には観察されなかった(
図16)。それらの結果は、それらの鋳型プライマーミスマッチを含む生物からの配列の増幅を可能にする、PCR反応における増幅プライマーを編集することができることを示している。プライマー編集の効率は、編集が最終配列決定読み取りにおいて観察されるために、実質的にすべてのPCRサイクルにおいて行われなければならないので、注目すべきものである。
【0081】
アダプターダイマー形成の程度、及び従って、アッセイの全体的感度もまた、ポリメラーゼ濃度を調節することにより調整され得る(
図21)。この一連の希釈からのサンプルが、製造業者の推薦される酵素濃度(1x)、0.5x又は0.25xの推薦される酵素濃度のいずれかで、KAPA HiFiポリメラーゼを用いて増幅された。さらに、さらに、それらのデータ組が、KAPA PeadyMix(前もって製造された2xマスター混合物)により増幅されたサンプルと比較された。使用される酵素濃度とアダプターダイマー形成の程度と間に強い相関性が存在した。KAPA ReadyMixにより増幅されたサンプルは最も大きな程度のアダプターダイマー形成を有し、ところが0.24x KAPA ReadyMixにより増幅されたサンプルは、非常に低い鋳型濃度でさえ、無視できる量のアダプターダイマー形成を有した(
図17)。最も低い鋳型濃度を有するサンプルについて非常に少ない読み取りを有するKAPA ReadyMixサンプルを除いて、精度は、低められた濃度のKAPA HiFiにより、特に少ないPCRサイクル数で、単に適度に低められた(
図17)。KAPA HiFi濃度の減少、及び従って、アダプターダイマー汚染のレベルの減少は、サンプルバランスを非常に改善した(
図17)。過剰酵素濃度は、例えば、プライマーへテロダイマーのチューバック及び伸長を通してアダプターダイマー形成を仲介することができる。従って、酵素濃度の最適化は、オン-標的/オフ-標的編集(
図18)、感度、及び全体的な精度間のトレードオフを含むことができる。プライマー編集の程度はまた、ポリメラーゼ濃度の関数としても変化する(
図21)。
【0082】
非増幅による鋳型分子の脱落はPCRバイアスの最も重大な形を表し、すなわち定量的な誤評価に反して定量的な誤差であるので、プライマー編集の効率を報告できる標準分子を有することが所望される。E.コリ16S rRNA遺伝子鋳型からのV4_515Fプライマー部位がプライマー結合部位のほとんどの3′側10bpにおいて可能なすべての単一塩基ミスマッチにより修飾されている標準組が設計された(
図2)。それらの標準は、編集の程度、及びプライマー編集に関連する任意の塩基選択を評価するために使用され得る(下記プライマー編集標準97-128を参照のこと;配列番号104~配列番号135)。追加の組のプライマー編集標準が、類似する設計考察を用いて、真核生物ITS2領域について製造された(下記合成標準129-159を参照のこと;配列番号136~配列番号166)。さらに、
図3は、プライマー編集の程度が、増幅プライマーにおけるエキソヌクレアーゼ保護ホスホロチオール修飾を用いて制御され得ることを示唆するデータを提供する。
【0083】
プライマーミスマッチを有する生物、例えばP.アクネは、プルーフリーディングポリメラーゼが使用される場合、単に増幅され、そして配列決定データ中にかなりのレベルで存在する。従って、プライマー編集の有効性を報告し、そしてプライマーミスマッチに起因する分類群の潜在的な欠落を報告することができる合成標準は、アンプリコンベースのミクロバイオーム配列決定における定量的誤差を同定するのに役立つであろう。合成標準分子は、そのような分類群の欠落を同定するために使用され得る。HMP擬似集団が、配列決定の前、標準Taqポリメラーゼにより増幅される場合、プライマー編集は行われず、そしてP.アクネは検出されない。同様に、対応するプライマーミスマッチを含むP.アクネ標準分子の欠落がまた、観察される(
図15)。これは、定量的誤差の補正に加えて、合成標準は定量的誤差(分類群の欠落)を示すために使用され得ることを実証する。
【0084】
PCRフリー定量化バーコード:
上記のように、いくつかの実施形態によれば、合成標準は、PCRフリー定量化を可能にするバーコードを含むことができる。PCRフリー定量化は、バイアスPCR介在性増幅バイアスを排除した。20の16S rRNA遺伝子V4合成標準の収集が合成され、pTOPOベクター中にクローン化され、E.コリ(DH5α)中に形質転換され、そして個々のクローンがSanger配列決定により配列確認された。プラスミドが、Qiagen MiniPrepキットを用いて、20の配列確認されたクローンのそれぞれから精製され、そしてプラスミドDNAがPicoGreenアッセイを用いて定量化された。20のクローンからのプラスミドDNAが等モル比でプールされ、各プラスミドが標準プールの5%を構成すると予測された。次に、プラスミドプールがMlyIにより切断され、定量化バーコードが遊離された(
図4;また
図1も参照のこと)。次に、MlyIにより消化されたプラスミド材料が、100bpの単一読み取りイルミナHiSeqレーンの画分を用いて直接的に配列決定され、592,728の読み取りが生成された。イルミナアダプターが得られる読み取りから切り取られ、そしてそれらの読み取りは、既知バーコード配列を含む参照ファイルにカスタム・スクリプトを用いてマッピングされた。それらの計算を用いて、標準プールにおける標準分子の実際の存在量を測定することができ、これは、標準が定量的補正を行うために正確に評価されなければならない。標準分子の実際の存在量は、ほぼ5%に近いが、正確には5%ではなく、3.4%~6.3%の範囲であった(
図5)。
【0085】
本明細書に記載されるPCRフリーバーコードを定量化する技法は、多くの実用的な用途を有し、そしてPCRフリーバーコードが挿入される構築されたDNAコンストラクトの実質的に任意の混合物の信頼できる測定を行うために使用され得る。例示的な用途は、例えば以下を含む:プラスミドプールの定量化;shRNA、 CRISPR sgRNAプラスミド、又はウィルスベクターのプールの定量化(例えば、大規模な遺伝子スクリーニングに使用される);トランスポゾン又は他の挿入ライブラリー、例えばTn-Seq及び関連方法の定量化。
【0086】
この技法の例示的用途を実証するために、トランスポゾン内にランダムバーコード含有PCRフリーバーコードコンストラクトを含むTn5トランスボゾンライブラリーが構築された。このTn5要素は、エレクトロポレーションによりTn5トランスポザーゼと共にE.コリ中にクローン化され、そして形質転換され、13,000以上の挿入株のライブラリーが生成された(
図30A)。形質転換の前、Tn5ライブラリーのバーコード組成が、MlyIにより消化し、精製し、そしてPCRフリーバーコードコンストラクトを配列決定することにより非常に多様性であることが確認された(
図30B)。トランスポゾン中のPCRフリーバーコードを用いて、Tn-Seqライブラリーを定量化するために、バーコードが、ライブラリーDNAを断片化し、アダプター上で連結し、そしてトランスポゾン中のプライマー及びアダプター中のプライマーにより増幅することによりTn5:ゲノム連結部を富化することにより、トランスポゾン連結部にマッピングされた。バーコード/ゲノム関連付けがなされると、ライブラリーは、MlyIを用いてPCRフリーバーコードを単に遊離し、そしてそれらを配列決定することにより、PCRの不在下で定量化され得る。
【0087】
精製されたE.コリゲノムDNAからトランスポゾンコンストラクト中のPCRフリー定量化バーコードカセットを配列決定することが可能である。統合されたトランスポゾン上のバーコードカセットは、E.コリゲノムの小画分(約40,000分の1)しか占めないので、消化された材料のイルミナ配列決定が多量の非機能的バックグラウンドDNAの状況下で可能であるかどうかは不明であった。さらに、PCRフリー定量化バーコード分子は、いずれの介在性増幅も伴わないで、直接的に配列決定されるので、ほとんどの場合、回収され得る材料の量は、イルミナシーケンサーを読み込むためには、推薦される濃度よりも低くなるであろう。従って、精製されたE.コリゲノムDNAからトランスポゾンコンストラクト中のPCRフリー定量化バーコードカセットを配列決定するためには、MlyIによるゲノムDNAの消化の後、その消化されたサンプル中のトランスポゾンの量が定量化された。2μg以上のゲノムDNAから出発して、PCRフリー定量化バーコードコンストラクトは、qPCRにより評価される場合、112pMの濃度、大まかには、イルミナMiSeqを読み込むための推薦される濃度の20分の1で回収された。それらのライブラリーの配列決定は、配列決定の前、DNAを変性するために使用されるNaOHが等量のHClにより中和され、結果的に、サンプル中の過剰のNaOHがクラスター化及び配列決定を妨害しない修飾された変性プロトコルを必要とした。コロニー数に基くトランスポゾンライブラリーの複雑性に関する我々の推定と一致する、約15,000の豊富な固有のバーコードを表す、トランスポゾンからのPCRフリー定量化バーコードコンストラクトに対応する300万以上の読み取りが得られた(
図30B)。
【0088】
多くの実験経緯にわたって同じライブラリーを評価するなどのいくつかの用途においては、それらの測定値を単一の配列決定レーンにおいて多重化することが所望される。コンストラクトは、小さな一本鎖オーバーハングを残す酸素がPCRフリーバーオードコンストラクトを遊離するために使用され、その結果、複数のタグがコンカテマー化されたコンストラクト中に配置されるかどうかを試験するよう設計され得る(
図30C-E)。多重化されたPCRフリーバーコードコンストラクトの特異性が、
図30Cにおける4つのプラスミドの均等プールを製造し、そしてMlyIにより切断し、4つのバーコードの1つを遊離することにより試験された。
図30Dは、MlyIによるバーコードの成功した遊離を示す。
【0089】
この技法の別の例示的用途を実証するために、サイズ標準が、異なる配列決定プラットフォーム上の種々のサイズの分子のクラスター化効率を特徴づけるよう製造された。それらの標準分子は、同じプラスミド上に2つのPCRフリー定量化バーコードコンストラクトを含み、各対が真に等しいモル比で存在することを保証した。各プラスミドは、150bp刻みで150bp~1500bpの範囲の可変サイズの164bpのMlyI遊離可能PCRフリーバーコードコンストラクト、及び第2のMlyI遊離可能PCRフリーバーコードコンストラクトを含む。可変サイズのコンストラクト:164bpの標準化対象の比は、各標準分子に起因する読み取りの数を定量化し、そして比較するために使用され得、配列決定プラットフォーム特異的サイズバイアスの直接的測定を可能にする(下記合成標準232-262を参照のこと;配列番号240~配列番号269)。
【0090】
前述の説明及び以下の特許請求の範囲においては、用語「及び/又は(and/or)」は、列挙される要素の1つ又はすべて、又は列挙される要素の任意の2つ以上の組合せを意味し;用語「含む(comprises)」、「含む(comprising)」及びそれらの変形は、オープンエンドとして解釈されるべきであり、すなわち追加の要素又は工程は、任意であり、そして存在してもしなくても良く;特にことわらない限り、「a」、「an」、「the」及び「少なくとも1つ(at least one)」は、交換可能的に使用され、そして1又は2以上を意味し;そしてエンドポイントによる数値範囲の列挙は、その範囲内に包含される全ての数を含む(例えば、1~5は、1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等を含む)。
【0091】
前述の説明においては、特定の実施形態は、明確にするために単独で記載され得る。特定の実施形態の特徴が別の実施形態の特徴と互換性がないことが特に明記されない限り、特定の実施形態は、1又は2以上の実施形態に関して本明細書に記載される互換性のある特徴の組合せを含むことができる。
【0092】
異なる工程を含む本明細書に開示される任意の方法に関して、その工程は任意の実行可能な順序で実行され得る。そして、適切な場合、複数の工程の任意の組合せが同時に実行され得る。
【0093】
本発明の以下の実施例により例示される。特定の例、材料、量及び手順は、本明細書に示される本発明の範囲及び精神に従って、広く解釈されるべきであることが理解されるべきである。
【実施例】
【0094】
実施例1
サンプル及び標準:
擬似集団DNAを、ヒトマイクrオバイオームプロジェクト:ゲノム擬似集団B(HM-276D、平坦、高濃度、v5.1H、及びHM-277D、ジグザグ状、高濃度、v5.2H)の一環として、BEI Resourse,NIAID、NIHから入手した。
【0095】
16S V4合成標準を、SGI-DNA BioXP 3200を用いて合成した。それらのコンストラクトを、72℃で10分間、Taqポリメラーゼ及びdATPと共にインキュベートすることにより3′アデニル化した。次に、合成DNAを、製造業者のプロトコルに従って、pTOPOベクター(Invitrogen)中にクローン化し、E.コリ(DH5α)を形質転換し、そして個々のクローンを、Sanger配列決定により配列確認した。プラスミドを、20の配列確認されたクローンのそれぞれから、Qiagen MiniPrepキットを用いて精製し、そしてプラスミドDNAを、PicoGreenアッセイを用いて定量化し、そして上記のようにしてプールした。
【0096】
全長16S rRNA標準、プロセス制御標準、及びプライマー編集標準を、完全プラスミド(PUCGA主鎖における)として合成した。
【0097】
DI方法:
16S rRNAのV4領域を、2段階PCRプロトコルを用いて増幅した。一次増幅を、PCR反応の運動学がモニターされ得るよう、ABI7900を用いて、qPCR反応において行った。次のレシピを使用した:3 μlの鋳型 DNA、 0.48 μl のヌクレアーゼフリー水、1.2μlの5×KAPA HiFi緩衝液(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、0.18μlの10mM dNTP(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、 0.3 μl のDMSO (Fisher Scientific, Waltham, MA)、 0.12 μlの ROX (25 μM) (Life Technologies, Carlsbad, CA)、0.003 μl の1000x SYBR Green、 0.12 μlの KAPA HiFi ポリメラーゼ (Kapa Biosystems, Woburn, MA)、0.3 μl の前方向プライマー (10 μM)、0.3 μl の逆方向プライマー(10 μM)。サイクリング条件は以下の通りであった:95℃で5分間、続いて98℃で20秒、55℃で15秒及び72℃で1分の20サイクル。一次増幅のためのプライマーは、16S特異的プライマー(V4 515F及びV4 806R)、及び二次増幅における指標及びイルミナフロー細胞アダプターを付加するためのアダプター端の両者を含んだ。
【0098】
以下のプライマーを使用した(下線部での16S特異的配列):
V4_515F_Nextera:
TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA
(配列番号1)
V4_806R_Nextera:
GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGGACTACHVGGGTWTCTAAT (配列番号2)
【0099】
一次PCRからのアンプリコンを、減菌したヌクレアーゼフリー水により1:100に希釈し、そして二次PCR反応を、イルミナフロー細胞アダプター及び指標を加えるよう設定した。二次増幅を、以下のレシピを用いて行った:5μlの鋳型 DNA、 1 μl のヌクレアーゼフリー水、2μlの5×KAPA HiFi緩衝液(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、0.3μlの10mM dNTP(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、 0.5 μl のDMSO (Fisher Scientific, Waltham, MA)、0.2 μlの KAPA HiFi ポリメラーゼ (Kapa Biosystems, Woburn, MA)、0.5 μl の前方向プライマー (10 μM)、0.5 μl の逆方向プライマー(10 μM)。サイクリング条件は以下の通りであった:95℃で5分間、続いて98℃で20秒、55℃で15秒、72℃で1分間の10サイクル、続いて72℃で10分間の最終伸長。次の指標プライマーを用いた(Xは、8bpの指標の位置を示す);
前方向指標プライマー:
AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACXXXXXXXXTCGTCGGCAGCGTC (配列番号3)
逆方向指標プライマー:
CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTCTCGTGGGCTCGG (配列番号4)
【0100】
希釈シリーズ実験:
希釈シリーズ実験に関しては、DI方法プライマー(V4_515F_Nextera及びV4_806R_Nextera、上記を参照のこと)を、すべての比較のために使用した。HM-276D擬似集団DNAの10倍希釈シリーズを、次の2種の異なるポリメラーゼの1つを用いて、20、25、30又は35サイクル増幅した: Kapa HiFi HotStart (Kapa Biosystems, Woburn, MA)又は5 PRIME HotMasterMix (5 PRIME, Gaithersberg, MD)。一次増幅のためのPCRレシピ及びサイクリング条件は、以下の通りであった:
【0101】
KAPA HiFi一次PCRレシピ:2.5μlのDNA鋳型、 0.48 μl のヌクレアーゼフリー水、2μlの5×KAPA HiFi緩衝液(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、0.3μlの10mM dNTP(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、 0.5 μl のDMSO (Fisher Scientific, Waltham, MA)、0.2 μlの KAPA HiFi ポリメラーゼ (Kapa Biosystems, Woburn, MA)、0.5 μl の前方向プライマー (10 μM)、0.5 μl の逆方向プライマー(10 μM)。
【0102】
KAPA HiFiサイクリング条件:95℃で5分間、続いて98℃で20秒、55℃で15秒、72℃で1分、続いて72℃で5分の20、25、30又は35サイクル。
【0103】
5PRIME Taqサイクリング条件:94℃で3分間、続いて94℃で20秒、55℃で15秒、72℃で1分、続いて72℃で5分間の20、25、30又は35サイクル。
【0104】
一次PCRを、減菌したヌクレアーゼフリー水により1:100に希釈し、そして二次PCR反応を、イルミナフロー細胞アダプター及び指標を加えるよう設定した。それらの反応に関しては、以下のレシピを使用した(ポリメラーゼ特異的サイクリング条件は、上記と同じであったが、しかし指標化段階において10サイクルを用いた)。
【0105】
KAPA HiFi指標PCRレシピ:5μlの1:100 DNA鋳型、5μlのDNA鋳型、 1 μl のヌクレアーゼフリー水、2μlの5×KAPA HiFi緩衝液(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、0.3μlの10mM dNTP(Kapa Biosystems、Woburn、MA)、 0.5 μl のDMSO (Fisher Scientific, Waltham, MA)、0.2 μlの KAPA HiFi ポリメラーゼ (Kapa Biosystems, Woburn, MA)、0.5 μl の前方向プライマー (10 μM)、0.5 μl の逆方向プライマー(10 μM)。
【0106】
5PRIME Tag指標PCRレセピ:5μlの1:100 DNA鋳型、4μlの2x 5 PRIME Hot Start High-Fidelity Master Mix、1μlの、減菌したヌクレアーゼフリー水、乾燥-ダウン指標プライマー(各プライマーにつき0.5μMの最終濃度)。
【0107】
KAPA HiFi濃度試験:
KAPA HiFi濃度試験に関しては、増幅を、KAPA HiFi一次PCRレシピ、及び上記希釈シリーズ実験セクションに記載されるサイクリング条件を用いて実施したが、しかし0.5x反応に添加されるKAPA HiFiポリメラーゼの量は半分に減じられ(100μlの反応当たり0.1μl)、そして0.25x反応に添加される量は1x濃度の1/4であり(10μlの反応当たり0.05μl);ヌクレアーゼフリー水が、失われた容量を補足するために添加された。それらの条件の個々のための指標反応は、0.5x濃度のKAPA HiFiポリメラーゼを用いて行われ、その結果、それらの条件間で観察される差異は、一次PCR反応における異なるKAPA HiFiポリメラーゼ濃度の結果である。
【0108】
KAPA HiFi ReadyMix増幅:
KAPA HiFi ReadyMix PCRを、以下のレシピを用いて、DIプライマー(V4_515F_Nextera and V4_806R_Nextera、上記を参照のこと)を使用して、上記のようにして実施した:KAPA HiFi ReadyMix PCRレシピ、2.5 μlの鋳型 DNA、5μのl2x Kapa HiFi HotStart Readymix、0.5 μl の前方向プライマー (10 μM)、0.5 μl の逆方向プライマー(10 μM)、1.5μlの滅菌したヌクレアーゼフリー水。
【0109】
KAPA HiFi ReadyMix指標PCRレシピ:5μlの1:100 DNA鋳型、5μlの2x Kapa HiFi HotStart Readymix、乾燥した指標プライマー(各プライマーについて最終濃度0.5μM)。
【0110】
C.ジェジュニV4及びV3-V5可変領域の増幅:
C.ジェジュニ(81-176)の純粋単離物からのDNAを、V4 515F及びV4 806Rプライマー及び上記KAPA ReadyMixプロトコルを用いて、又はV3-V5可変領域のためのプライマーを用いたKAPA HiFi(1x)プロトコルを用いて、増幅した。V3-V5可変領域についての一次増幅のためのプライマー配列は以下の通りであった(下線部の16S特異的配列):
V3F_Nextera:
TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGAGGCAGCAG (配列番号5)
V5R_Nextera:
GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGCCGTCAATTCMTTTRAGT (配列番号6)
【0111】
配列決定ライブラリーの標準化及びプール:
配列決定の前のサンプル標準化のために、合成標準分子を含まない実験に関しては、PCR生成物を、PicoGreen dsDNAアッセイ (Life Technologies, Carlsbad, CA)を用いて定量化し、そしてサンプルを標準化し、プールし、そして約1μgの材料を、1.8x AMPureXP ビーズ (Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を用いて、10μlに濃縮した。次に、プールされたサンプルを、Caliper XT DNA 750 チップ (Caliper Life Science, Hopkinton, MA)上で、DIプールについては427bp+/-20%で、又はEMPプールについては368bp+/-20%でサイズ選択した。サイズ選択された材料を、AMPureXPビーズを用いて洗浄し、そして20μlのEB緩衝液(10mMのトリス-HCl、pH8.5)により溶出した。最終のプールされたサンプルを、PicoGreen dsDNAアッセイを用いて定量化した。
【0112】
合成標準を含む実験に関しては、サンプルを、SequalPrep標準化プレートキット(ThermoFisher)を用いて、その製造業者の説明書に従って、配列決定の前、標準化した。
【0113】
PCRフリー定量化バーコードを含むライブラリーを、消化物についての製造業者の推薦に従って、MlyI(New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)により標準プラスミドプールを処理することにより調製した。得られる消化物を、AmPureXPビーズを用いて精製し、そしてPicoGreenアッセイにより定量化した。
【0114】
配列決定:
サンプルプールを、PicoGreen測定に基いて2nMに希釈し、そして10μlの2nMPCRプールを、10μlの0.2NのNaOHよにより変性し、イルミナHT1緩衝液において8pMに希釈し、15%PhiXによりスパイクし、96℃で2分間、過熱変性し、そしてMiSeq 600サイクルv3 キット (Illumina, San Diego, CA)を用いて配列決定した。
【0115】
分析;
擬似集団サンプルを、サンプル当たり10,000の読み取りの深さまでサブサンプリングした。次に、配列決定アダプター配列を、Trimmomatic (Bolger et al., 2014, Bioinformatics btu170)を用いてトリミングし、そしてPANDAseq (Masella et al., 2012, BMC Bioinformatics 13:31)を用いて、プライマー配列(該当する場合)を除去し、そして対の末端読み取りを結び付けた。Fastqファイルを、カスタムスクリプトを用いて、QIIME (Caporaso et al., 2010, Nat. Methods 7:335-336) fastqフォーマットに転換した。次に、個々のサンプルFastaファイルを、1つのFastaファイルに連結し、そしてキメラ検出及び除去を、ChimeraSlayer’s usearch61 法 (Haas et al., 2011, Genome Res. 21:494-504)を用いて行った。得られる読み取りを、HMP擬似集団参照ファイルにマッピングし(Salipante et al., 2014, Appl. Environ. Microbiol. AEM.02206-14-; doi:10.1128/AEM.02206-14)、%存在量、RMSD及びMAPE値を計算した。プライマー補正の分布を、カスタムPythonスクリプト及びBioPython (Cock et al., 2009, Bioinformatics 25:1422-1423)を用いて、V4プライマー配列に対するミスマッチを分類することにより分析した。イルミナアダプターを、cutadapt (Martin, M., 2011, EMBnet.journal 17:10-12)を用いてトリミングし、そして対の読み取りを、PANDAseq (Masella et al., 2012, BMC Bioinformatics 13:31)を用いて併合した。プライマー領域のインデル(indels)からノイズを除去するために、配列当たり最大3つのミスマッチの閾値を、この分析のために使用した。NHP及びヒトデータベースにおける差異的に豊富なOTUに関連するプライマー配列を、トリミングされていない、サブサンプリングされたfastqにおけるそれらのOTUからのrep_set配列への正確な一致を調べるために分析した。PCRフリー定量化バーコード及び合成標準実験の分析を、カスタムPythonスクリプトを用いて実施した。
【0116】
実施例2
プライマー編集標準:
プライマー編集のより詳細な研究及びプロセス品質の管理/品質保証のためのモニターを可能にする合成標準を設計した。それらの標準は、E.コリのV4 515Fプライマー領域に基かれ、そしてプライマー配列の最後の10bpにおけるあらゆる可能な単一塩基ミスマッチを有するE.コリ16S rRNA遺伝子V4(可変領域4)を含む30のプラスミド、及び1つの野生型プラスミドを含む(
図27A)。類似する標準を、目的の任意のプライマー領域、例えばITS2のために開発された追加の標準組のために設計した。合成プライマー編集標準を合成し、pUCGA1.0クローニングベクター中にクローン化し、そしてNEB5AαE.コリコンピテント細胞を形質転換した。複数のクローンを各コンストラクトのために採取し、DNAを抽出し、そしてコンストラクトを、Sanger配列決定により配列決定し、合成DNAの配列が正しいことを確証した。以下のプライマーを、それらのコンストラクトのSanger検証のために使用した:
pUCGA1.0_Sanger_For: CGACTCTAGAGGATCGAGCACA (配列番号270)
pUCGA1.0_Sanger_Rev: TTCGAGCTCGGTACCCGCAT (配列番号271)
【0117】
31の標準プラスミドからのDNAを、Quant-iT PicoGreen dsDNA 定量化アッセイ(Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA)を用いて定量化し、そしてプラスミドを等しい質量でプールした。プラスミド中のPCRフリー定量化バーコードコンストラクトを用いて、各コンストラクトがプールに存在することを検証し、そしてコンストラクトの存在量の正確な比を決定した。以下の制限消化物を用いて、PCRフリー定量化バーコードを遊離した:17μlのプライマー編集鎖プールDNA(10ng/μl)、2μlのCutsmart 緩衝液(New England Biolabs Inc., Ipswich, MA)、1μlのMlyI(New England Biolabs Inc., Ipswich, MA)。消化物を37℃で1時間インキュベートし、次に30μlの水を、その消化物に添加し(50μlの容積をもたらす)、次に、30μlの磁気ビーズ(0.6x AMPure XP, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を添加し、そして上清液を添加し、新しい管に移した(ビーズは破棄した)。制限消化物(0.6x結合からの上清液)を、磁気ビーズ(1.8x AmpureXP beads, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を用いて精製し、そして12μlの溶出緩衝液に溶出した。
【0118】
Quant-iT PicoGreen dsDNA 定量化アッセイ(Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA)、及びBioanalyzer HS 分析(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)の両者を用いて、溶出されたDNAを定量化した。プールを2nMに希釈し、そしてMISEQ 2 × 300 bpレーン (Illumina, Inc., San Diego, CA)の画分上で、その製造業者の説明書(8pMのクラスター濃度)に従って配列決定した。プラスミドプールの組成(バーコード数及び%)を、カスタムpythonスクリプトを用いて決定した。
【0119】
プライユー編集を報告し、そして異なる酵素の編集能力を比較するそれらの標準の能力を評価するために、4種の異なる濃度(0.25x、0.5x、1x又は2x製造業者の推薦される濃度)で、以下の8種の異なるポリメラーゼ:KAPA HiFi (KAPA Biosystems, Woburn, MA)、 Qiagen Taq (Qiagen USA, Germantown, MD)、Q5 (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)、 PHUSION (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA)、VENT (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)、Pfu DNA ポリメラーゼ (Promega Corp., Madison, WI)、ACCUPRIME Taq (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA)及びTaq (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)、及び4種の異なる鋳型濃度(標準当たり250,000)鋳型分子、25,000の鋳型分子、2,500の鋳型分子又は250の鋳型分子)でのプライマー編集標準プールを用いて、プライマー編集標準プールを増幅した。E.コリ特異的プライマー(非縮重V4 515F/V4 806R)を、それらの増幅のために使用した:
E_coli_V4_515F:
TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCAGCCGCGGTAA (配列番号272)
E_coli_V4_806R:
GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGGACTACCAGGGTATCTAAT (配列番号273)
【0120】
PCRスクリプト及び条件が下記表1に列挙される(容量はμlであり、温度は℃であり、すべての増幅は30PCRサイクル、行われた)。
【0121】
【0122】
次に、それらのアンプリコンを、1:100に希釈し、そして指標プライマーを用いて10サイクルのPCR(KAPA HiFi 0.5×条件を用いて)で増幅し、サンプル特異的指標及びイルミナフロー細胞アダプターを加えた。指標プライマーは、以下の配列を有した(「i5」及び[i7]は、イルミナにより使用される指標細胞アダプターを言及し、p5及び37のフリー細胞アダプターは下線部で示される):
前方向指標プライマー:
AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]TCGTCGGCAGCGTC (配列番号274)
逆方向指標プライマー:
CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7]GTCTCGTGGGCTCGG (配列番号275)
【0123】
指標サンプルを、標準化プレート(SEQUALPREP, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)を用いて標準化し、等量の各サンプルをプールし、そしてサンプルプールを、磁気ビーズ(1x AmPureXP, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を用いて精製し、そして濃縮し、そして25μlの溶出緩衝液により溶出した。溶出されたDNAを、Quant-iT PicoGreen dsDNA 定量化アッセイ (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) 及び Bioanalyzer HS分析 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)の両者を用いて定量化した。プールを2nMに希釈し、そしてMISEQ 2 × 300 bpレーン(Illumina, Inc., San Diego, CA)の画分上で、その製造業者の説明書(8pMのクラスター濃度)に従って、配列決定した。プラスミドプールの組成(バーコード数及び%)を、カスタムpython スクリプトを用いて決定した。
【0124】
プライマー編集は、非プルーフリーディングポリメラーゼ(例えば、NEB Taq, Qiagen Taq, or Accuprime Taq)では観察されなかった。試験されたプルーフリーディングポリメラーゼは、プライマー編集標準鋳型と一致するよう増幅プライマーを全て編集できたが、ところが編集が行われる程度、製造業者の推薦される酵素濃度(1x)で異なる酵素間で可変であった(
図24B)。ポリメラーゼのプルーフリーディングにより観察される編集に対する明らかな配列特異性はほとんどなく、2つの3’末端位置におけるG/C編集に対するわずかなバイアスを多分除く(
図24℃)。観察されたプライマー編集の程度は、使用される酵素の濃度に依存するが(
図24D)、但し濃度依存性の大きさもまた、研究される異なる酵素間で変化した(データは示されていない)。それらのデータは、酵素濃度依存性プライマー編集の直接的な証拠を提供する。鋳型濃度初めて、確実に試験され得た濃度でプライマー編集に対する認識可能な効果はほとんどなかった。それらの結果は、プライマー編集標準が、種々の反応条件下で起こるプライマー編集の量を評価するために使用され得ることを示している。
【0125】
次に、野生型E.コリプラスミド標準を、KAPA FiFiポリメラーゼ(1x反応条件)を用いて、プライマー編集プラスミドにおける31の可能なコードされた配列を含むプライマーの混合プールにより増幅した。突然変異体プライマーを、プライマー編集標準を用いて以前の実験に見られる編集と類似する程度及び頻度で野生型鋳型配列と一致するよう編集した。これは、プライマー編集標準がプライマー編集の程度及び頻度を正確に報告することを示している。
【0126】
プライマー配列における特定の位置でホスホロチオール結合の導入がプライマー編集の程度を制限するかどうかを決定するために、プライマー編集標準プールを、E._coli_V4_806Rプライマーと共に、位置15,16,17,18又は19で単一のホスホロチオールに結合を含むE._coli_V4_515F誘導体を用いて、KAPA HiFiポリメラーゼ(1x反応条件)により増幅した。それらのアンプリコンを、上記のようにして指標化し、そして配列決定した。特定位置でのホスホロチオール結合の導入は、ホスホロチオール結合の位置の5′側の任意のプライマー編集活性の切断を引起した(
図25)。それらの結果は、プライマー編集がホスホロチオオール修飾プライマーを用いて調整可能であることを示す。
【0127】
実施例3
生物物理学的標準:
1組の生物物理学的プロセス制御標準を、増幅条件及び試薬と、鋳型分子の生物物理学的特性、例えばGC含量、アンプリコンサイズ、及び/又は二次構造との相互作用を介して生じる増幅バイアスを報告するよう設計した。それらの制御は、Greengenesデータベース中の同定可能なV4領域のすべてのGC含量及び予測される二次構造により評価されるように、16S rRNA遺伝子のV4領域における天然の遺伝的変動により包含されるパラメーター空間をカバーするよう設計した(DeSantis et al., 2006. Appl Environ Microbiol 72:5069-72)(
図26A)。次に、E.コリ16r RNA分子の配列を、異なる量のGC又はATバイアスを加え、そして数百万の変異体配列のインシリコライブラリーを生成するよう、イン・シルコで変化させた。次に、それらの配列についての二次構造予測を生成し、Greengenesデータベースにおける配列に対して97%以上同一である配列を濾過し、そして天然のGC含量及び二次構造変動の程度をカバーする1組の分子(
図26A)を選択した。V4領域サイズの天然に存在する分布をまた特徴づけ、そしてサイズ選択又は増幅バイアスのためにアンプリコンサイズにおけるバイアスを検出するために使用され得るこのサイズ分布をカバーするために、1組の標準を作成した(
図26B)。
【0128】
生物物理学的プロセス制御標準を合成し、クローン化し、形質転換し、そして実施例2のプライマー編集標準について記載したように配列を検証した。それらを標準化し、プールし、そしてPCRフリー定量化バーコードを、実施例2におけるプライマー編集標準について記載されるように、正確なプール組成を決定するために使用した。
【0129】
増幅バイアスを報告し、そして異なる酵素のバイアスを比較するそれらの標準の能力を評価するために、生物物理学的標準プールを、4種の異なる濃度(0.25x、0.5x、1x、又は2xの製造業者の推薦する濃度)で、以下の8種の異なるポリメラーゼ:KAPA HiFi (KAPA Biosystems, Woburn, MA)、Qiagen Taq (Qiagen USA, Germantown, MD)、Q5 (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)、PHUSION (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA)、 VENT (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)、Pfu DNA ポリメラーゼ (Promega Corp., Madison, WI)、 ACCUPRIME Taq (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA)及び Taq (New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)を用いて、及び4種の異なる鋳型濃度(標準当たり250,000の鋳型分子、25,000の鋳型分子、2,500の鋳型分子、又は250の鋳型分子)で生物物理学的標準プールを用いて、増幅した。
【0130】
標準縮退V4 515F/V4 806Rを、それらの増幅のために使用した:
V4_515F_Nextera:
TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA (配列番号276)
V4_806R_Nextera:
GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGGACTACHVGGGTWTCTAAT (配列番号277)
【0131】
PCRレシピ及び条件が、上記実施例2における表1に列挙されている。それらのアンプリコンを、上記のようにして、指標化し、そして配列決定した。配列データを、cutadapt (Martin, M., 2011. EMBnet.journal 17(1):10-12)を用いて、アダプター及びプライマー配列をトリミングし、対の最終読み取りを、pandaseq (Masella et al., 2012. BMC Bioinformatics 13:31) or PEAR (Zhang et al., 2014. Bioinformatics 30(5):614-620)を用いて合併し、そして読み取りを、bowtie2 (Langmead et al., 2012. 9(4):357-359)を用いて、生物物理学的標準参照ファイルにマッピングした。サイズ標準を、カスタムpythonスクリプトを用いて、読み取りマージの後、種々のサイズの配列を計算することにより分析した。異なるポリメラーゼが、GC含量及びアンプリコンサイズに関して特徴的パターンを有したデータを生成した(
図26C-F)。それらの結果は、生物物理学的標準が、増幅反応におけるアンプリコン生物物理学的特性に起因するバイアスについて報告するために使用され得ることを実証する。
【0132】
実施例4
全長16S rRNA遺伝子合成スパイクイン標準:
16S rRNA遺伝子可変領域V4のみを標的とする合成標準による一貫性のない結果を見出した後、可変領域V3、V4及びV5における3つの独立した3bpタグを有する1組の20の全長16S rRNA遺伝子標準を設計した。
【0133】
タグされたスパイクイン標準を、上記実施例2に記載のようにして、合成し、クローン化し、形質転換し、そして配列確認した。それらを標準化し、プールし、そしてPCRフリー定量化バーコードを、上記実施例2に記載のようにして、正確なプール組成を決定するために使用した。
【0134】
増幅バイアスを補正するそれらの全長16S rRNA遺伝子合成標準の能力を試験するために、市販の擬似集団参照標準を、タグされた合成スパイクイン標準のプールを伴って又はそれなしで増幅した。タグされた合成スパイクイン標準のプールは、擬似微生物集団における8つの細菌株のうち5つに対応するプラスミドを含んだ。それらのサンプルを、上記のKAPA HiFi 1x、又はQiagen Taq 1x反応条件のいずれかを用いて、細菌16S rRNA遺伝子可変領域V1-V3、V3-V4、V4及びV5-V6、及び表2に示されるプライマー組により増幅した。
【0135】
【0136】
それらのアンプリコンを、上記のようにして、指標化し、そして配列決定した。カスタムpythonスクリプトを用いて、スパイクイン標準に対応するような読み取りを識別する3bp配列タグを含む読み取りを同定し、そしてスパイクイン標準及び非スパイクイン標準を個々のFastqファイルに分けた。次に、それらの読み取りを、実施例3に記載のようにして、トリミングし、そしてそれらのそれぞれの参照ファイルにマッピングした。次に、タグ付き合成スパイクイン標準に対応する読み取りの存在量値を、各コンストラクトについて観察される増幅バイアスの程度を決定するために、標準プールからのPCRフリーバーコード数を用いて決定されたそれらの予測値と比較した。各コンストラクトについて観察される存在量:予測される存在量の比が、補正係数を計算するために使用され、そしてこの補正係数を、各サンプルについての擬似集団データに適用し(タグ付きのスパイクイン標準により標的化された5つの菌株について)、一方、すべての生物についての合計%を100%に維持するためにデータを標準化した(
図27A)。
図27B-Eに示されるように、タグ付きスパイクイン標準(暗い点)により標的化された菌株についての測定は、計算された補正係数がデータに適用される場合、一般的にかなり正確であった。さらに、全体の擬似集団(標的化されていない株についてのデータ点(淡い点)を含む)についての測定の集計精度もまた、補正係数が適用される場合、最善された(
図27D-E)。
【0137】
実施例5
PCRフリーバーコード定量化技法の精度及び正確性を、16S rRNA遺伝子可変領域V4を標的化する20のタグ付き合成スパイクインコンストラクトから成り、そして個々は、別個の20bpのPCRフリー定量化バーコードコンストラクトを含む、上記実施例1に記載される標準プールを用いて試験した。
【0138】
PCRフリー定量化バーコード測定の精度:
20のコンストラクト標準プールを、以下のようにしてMlyIにより切断した:
10μlのプラスミドDNA(プールされたサンプルから-50ng/μl)
20μlのCutsmart緩衝液 (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA)
7μlの水
1μlのMlyI制限酵素(New England Biolabs Inc., Ipswich, MA)。
【0139】
反応物を、37℃で1時間インキュベートした。次に、1μlの固相可逆的固定化ビーズ(SPRI 0.7x, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を添加した。上清液(35μl)を、70μlのSPR1ビーズ(2x)を有する管に移し、80%エタノールにより2度、洗浄し、10分間、空気乾燥し、次に、20μlの溶出緩衝液で溶出した。溶出されたDNAを、Quant-iT PicoGreen dsDNA 定量的アッセイ (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) 及び Bioanalyzer HS分析(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)の両者を用いて定量化した。プールを、2nMに希釈し、そしてMISEQ 2 × 300 bpレーン (Illumina, Inc., San Diego, CA)の画分上で、その製造業者の説明書(8pMのクラスター濃度)に従って、配列決定した。バーコード数を、カスタムpythonスクリプトを用いて決定した(
図28A)
【0140】
この初期の配列決定データに基いて、それらの標準の2つの以下の追加のプールを製造した:
再プールされた平坦プール(各コンストラクトについて5%の存在量を標的とする)及びジグザグ状プール(およそ4つのログに及ぶ各コンストラクトについて標的化された存在量の範囲)。平坦な再プールされたサンプルを、上記のようにして処理し、そして配列決定し、そしてコンストラクトのバランスがプールにおいて改善されたテータを生成した(
図28B)。
【0141】
PCRフリーバーコード定量化技法の精度を試験するために、再プールされた平坦標準プールの3つの独立した消化を、上記のように実施し、精製し、そして配列決定した。3つの技術的複製物は、ほぼ同一のデータをもたらし、このPCRフリーバーコード定量化技法が非常に正確であることを実証した(
図28C)。
【0142】
PCRフリー定量化バーコード測定の精度:
次に、PCRフリーバーコード定量化法の精度を、第1に、バーコードカセットを増幅するためにPCRを用いることにより得られる測定値と、それらの測定値とを比較し、続いて、PCRフリー及びPCR測定値と、液滴デジタルPCR測定値とを比較することにより評価した。
【0143】
500ngのDNAがMlyIにより消化されたのに対して、初期再プールされた平坦混合物及びジグザグ状プールのPCRフリーバーコード測定を上記のようにして行った。但し、ジグザグ状混合物197.2ngの場合を除く。PCR反応を設定するために、プールされたDNAを1ngのDNA(24μlの水に希釈された1μl)を添加した。1×Qiagen Taq条件を、以下のプライマー(PCRフリーバーコードコンストラクトの末端を標的とする)を用いて、10サイクル、20サイクル、30サイクル又は40サイクル増幅するために使用した:
p5: AATGATACGGCGACCACCGA (配列番号286)
p7: CAAGCAGAAGACGGCATACGA (配列番号287)
【0144】
混合物を以下のようにして増幅した:
95℃-5分
Xサイクル
94℃-30秒
60℃-30秒
72℃-10分
4℃-維持。
【0145】
PCR反応物を、磁気ビーズ(0.8x AmpureXP ビーズ, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA)を用いて精製し、そして精製されたDNAを0.25μlの溶出緩衝液に溶出した。溶出されたDNAを、Quant-iT PicoGreen dsDNA 定量化アッセイ (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) 及びBioanalyzer HS分析(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)を用いて定量化した。プールを2nMに希釈し、そしてMISEQ 2 × 300 bp レーン (Illumina, Inc., San Diego, CA)の画分上で、その製造業者の説明書(8pMのクラスター濃度)に従って配列決定した。バーコード数を、カスタムpytonスクリプトを用いて決定した。
【0146】
PCRサイクルの数の増加は、予測される値からの定量的偏差、及び平坦及びジグザグ状プラスミドプールの両者についてのPCRフリーバーコード定量化法により測定される値を高めた(
図29A-D)。
【0147】
PCRフリーバーコード定量化方法の精度をさらに確認するために、それらの測定値を、正確な定量化のためのゴールド標的である液滴デジタルPCR(ddPCR)測定と比較した。平坦及びジグザグ状プールにおける各バーコードの相対量をddPCRにより測定するために、前方向及び逆方向の両者におけるプラスミド骨格と、固有の20bpバーコード配列の個々との間で増幅した40のプライマー組の収集を設計した。それらのプライマー組の特性を、qPCRにより、すべての40の可能なプライマーを用いて、個々のプラスミドコンストラクトを増幅することにより決定した。ddPCR反応を、QX200 液滴デジタルPCRシステム (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA)を用いて、その製造業者の説明書異従って実施した。
【0148】
次の反応レシピを使用した:
5μlの鋳型(1ng/μlのプラスミドプール鋳型の1:10,000希釈、注:ジグザグ状鋳型に関しては、異なる希釈がすべての測定が装置の定量的範囲であることを確認するために異なるアッセイのために行われた):
0.4μlのプライマー1
0.44μlのプライマー2
5.12μlの水
11μlの色素(EVAGREEN, Biotium, Fremont, CA)
2μlのI-SceI(New England Biolabs, Inc., Ipswich, MA)が、プラスミドを線状化するために、反応ミックスに添加された。
【0149】
反応物を、エマルジョンに分配し、そして次に以下のPCR条件(蓋温度=105℃)を用いて循環した:
95℃-10分
95℃で30秒
55℃で1分
の40サイクル
75℃で5分
12℃での維持
【0150】
結果を、QuantaSoftソフトウェア(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA)を用いて分析した。陽性及び陰性の液滴シグナルの明確な分離が存在する場合、各アッセイについての分子数を生成するために、液滴のそれらの集団を分離する閾値が描かれた。陽性及び陰性液滴シグナルの明確な分離を示さなかったアッセイを、分析しなかった。任意の複製物について、及び各バーコードコンストラクトについての1つの測定値を生成するために各コンストラクトについての前方向及び逆方向アッセイについてのデータを平均した。
【0151】
平坦プラスミドプールのddPCR測定値は、PCRフリーバーコード測定値と非常に良く相関したが、しかし10-40のPCRサイクルで作製されたバーコードコンストラクトの測定値とは良く相関しなかった(
図29E)。類似する結果が、ジグザグ状プラスミドプールについて得られた。PCRフリーバーコード測定値とddPCR測定値との強い相関関係は、PCRフリーバーコード定量化方法が非常に正確であることを示している。
【0152】
全ての特許、特許出願、及び刊行物、及び電子的に入手可能な材料(例えば、GenBank及びRefSeqにおけるヌクレオチド配列の提出、及び例えばSwissProt、PIR、PRF、PDBにおけるアミノ酸配列の提出、及びGenBank及びRefSeqにおける注釈付きコード領域からの翻訳を含む)の完全な開示は、その全体が引用により本明細書に組込まれる。本出願の開示と、引用により本明細書に組込まれる任意の文献の開示との間に任意の矛盾が存在する場合、本出願の開示が適用される。前述の詳細な説明及び実施例は、理解を明確にするためにのみ与えられている。それから、不必要な制限が理解されるべきではない。本発明は、示される説明された正確な詳細に限定される、当業者に自明な変形が特許請求の範囲によって定義される本発明に含まれる。
【0153】
特にことわらない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量などを表す全ての数字は、全ての場合において、用語「的」により修飾されるものとして理解されるべきである。従って、特にことわらない限り、明細書及び特許請求の範囲に記載される数値のパラメーターは、本発明によって得られることが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。少なくとも、請求の範囲に等価物の教義を限定しようとするものではなく、各数値パラメーターは少なくとも報告された有効数字の数と通常の丸め技法を適用して解釈されるべきである。
【0154】
本発明の広い範囲を示す数値範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示される数値は可能な限り正確に報告される。 しかしながら、すべての数値は、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる範囲を本質的に含む。
【0155】
すべての見出しは読者の便宜のためであり、見出しに続くテキストの意味を限定するために使用されるべきではありません。
【0156】
配列表
合成標準配列-初期16S rRNA遺伝子V4領域試験(HMP擬似集団)
下線部での配列タグ
小文字でのイルミナアダプター
>01_ABa_V4_TCT (配列番号8)
AATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTAC
TGGGCGTAAATCTGCGTGCGTAGGCGGCTTATTAAGTCGGATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAAT
TGCATTCGATACTGGTGAGCTAGAGTATGGGAGAGGATGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGAGATCTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCATCTGGCCTAATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCA
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCTACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tGCACATTGTAGCGTTGATAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>02_BCe_V4_TCT (配列番号9)
AGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTAT
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGG
GTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCGGAGGAGCTATAAATGACCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>03_BVu_V4_TCT (配列番号10)
AATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTAT
TGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGATGGATGTTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTCAACCGTAAAAT
TGCAGTTGATACTGGATATCTTGAGTGCAGTTGAGGCAGGCGGAATTCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCTT
AGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCTAAGCTGCAACTGACATTGAGGCTCGAAAGTG
TGGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACGGTAAACGATGAATACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTAATCGTACAAATTTCGAAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>04_BVu_V4_TCT (配列番号11)
AATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTAT
TGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGATGGATATTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTCAACCGTAAAAT
TGCAGTTGATACTGGATATCTTGAGTGCAGTTGAGGCAGGCGGAATTCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCTT
AGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCTAAGCTGCAACTGACATTGAGGCTCGAAAGTG
TGGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACGGTAAACGATGAATACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tAACATTCAGGCGCACCTACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>05_BVu_V4_TCT (配列番号12)
AATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTAT
TGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGATGGATGTTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTCAACCGTAAAAT
TGCAGTTGATACTGGATATCTTGAGTGCAGTTGAGGCAGGCGGAATTCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCTT
AGATATCACGAGGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCTAAGCTGCAACTGACATTGAGGCTCGAAAGTG
TGGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACGGTAAACGATGAATACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTATGCCGCTCGAGACCCATTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>06_CBe_V4_TCT (配列番号13)
AGGAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAC
TGGGCGTAAATCTGGGAGCGTAGGTGGATATTTAAGTGGGATGTGAAATACTCGGGCTTAACCTGGGTGC
TGCATTCCAAACTGGATATCTAGAGTGCAGGAGAGGAAAGTAGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGAGATTAGGAAGAATACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGACTGTAACTGACACTGAGGCTCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTTGGATCACTACGCCAGGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>07_CBe_V4_TCT (配列番号14)
AGGAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAC
TGGGCGTAAATCTGGGAGCGTAGGTGGATATTTAAGTGGGATGTGAAATACTCGGGCTTAACCTGGGTGC
TGCATTCCAAACTGGATATCTAGAGTGCAGGAGAGGAAAGTAGAATTCTTAGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGAGATTAGGAAGAATACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGACTGTAACTGACACTGAGGCTCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCATCCTACAGGCTTGTAGCGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>08_DRa_V4_TCT (配列番号15)
TAATAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTACCCGGAATCAC
TGGGCGTAAATCTGGGCGTGTAGGCGGAAATTTAAGTCTGGTTTTAAAGACCGGGGCTCAACCTCGGGGA
TGGACTGGATACTGGATTTCTTGACCTCTGGAGAGGTAACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGT
AGATACCAGGAGGAACACCAATGGCGAAGGCAAGTTACTGGACAGAAGGTGACGCTGAGGCGCGAAAGTG
TGGGGAGCAAACCGGATTAGATACCCGGGTAGTCCACACCCTAAACGATGTACGTTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tAGGCGTTTAGGTACCTGTTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>09_EFa_V4_TCT (配列番号16)
AGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGG
GTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTCACAAGTTTCGCAATCGAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>10_ECo_V4_TCT (配列番号17)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTATTGCTAAGGCTATGGAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>11_HPy_V4_TCT (配列番号18)
AATAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATCAC
TGGGCGTAAATCTGAGCGCGTAGGCGGGATAGTCAGTCAGGTGTGAAATCCTATGGCTTAACCATAGAAC
TGCATTTGAAACTACTATTCTAGAGTGTGGGAGAGGTAGGTGGAATTCTTGGTGTAGGGGTAAAATCCGT
AGAGATCAAGAGGAATACTCATTGCGAAGGCGACCTGCTGGAACATTACTGACGCTGATTGCGCGAAAGC
GTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGGATGCTAGGGATAACAGGG
TAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgat
ctCTGACGGGACAAACGGATCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTat
ctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>12_LGa_V4_TCT (配列番号19)
AGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAAT
TGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGT
AGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCA
TGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCATCGCGGACAACGCCAACCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>13_NMe_V4_TCT (配列番号20)
AATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGCGGGCGCAGACGGTTACTTAAGCAGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCCGGGAAC
TGCGTTCTGAACTGGGTGACTCGAGTGTGTCAGAGGGAGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGT
AGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCTCCTGGGACAACACTGACGTTCATGCCCGAAAGCG
TGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAATTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tAAGGGTCACACAGTATCATCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>14_PAc_V4_TCT (配列番号21)
AAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTGATACGTAGGGTGCGAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGGGCTCGTAGGTGGTTGATCGCGTCGGAAGTGTAATCTTGGGGCTTAACCCTGAGCG
TGCTTTCGATACGGGTTGACTTGAGGAAGGTAGGGGAGAATGGAATTCCTGGTGGAGCGGTGGAATGCGC
AGATATCAGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGTTCTCTGGGCCTTTCCTGACGCTGAGGAGCGAAAGCG
TGGGGAGCGAACAGGCTTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGGTGGGTACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tGAAGTAGAGAGCCGGCTAACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>15_PAr_V4_TCT (配列番号22)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCCCGGCGGTATACGTTCAAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>16_RSp_V4_TCT (配列番号23)
AAGAAGCCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGCTAGCGTTATTCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGCGCACGTAGGCGGATCGGAAAGTCAGAGGTGAAATCCCAGGGCTCAACCCTGGAAC
TGCCTTTGAAACTCCCGATCTTGAGGTCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGT
AGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGATACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tGGATGATGCGTTCGTACACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>17_SAu_V4_TCT (配列番号24)
AGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTAT
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGG
GTCATTGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGC
AGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGATGTGCGAAAGCG
TGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCGCCACGAGGATTAGAAATTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>18_SEp_V4_TCT (配列番号25)
AGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATCAT
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGG
GTCATTGGAAACTGGAGGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGC
AGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGATGTGCGAAAGCG
TGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTTTCGGTGCTAAATCACACTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>19_SAg_V4_TCT (配列番号26)
AGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTTAACCATTGTAC
GCTTTGGAAACTGGAGGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTA
GATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGT
GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGTA
ATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct
CCTGCGCATTGCAATGGCGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatct
cgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>20_SMu_V4_TCT (配列番号27)
AGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGGGAGCGCAGGCGGTCAGGAAAGTCTGGAGTAAAAGGCTATGGCTCAACCATAGTGT
GCTCTGGAAACTGTCTGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTA
GATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTCACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGT
GGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGTA
ATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct
TCTGGCGGGCGTATCGGAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatct
cgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>21_SPn_V4_TCT (配列番号28)
AGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTAGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTTAACCATAGTAG
GCTTTGGAAACTGTTTAACTTGAGTGCAAGAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTA
GATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGCTTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGT
GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGTA
ATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct
ATAGTTAAATAAAGAGCCAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatct
cgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>22_AOd_V4_TCT (配列番号29)
AAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTAT
TGGGCGTAAATCTGGGCTTGTAGGCGGTTGGTCGCGTCTGCCGTGAAATCCTCTGGCTTAACTGGGGGCG
TGCGGTGGGTACGGGCTGACTTGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAACTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGC
AGATATCAGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGGGTCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCG
TGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGGGCACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCTTCCTGGCTCCTAAATTACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>23_LMo_V4_TCT (配列番号30)
AGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTTAACCGGGGAGG
GTCATTGGAAACTGGAAGACTGGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tTGTGTTGGCATATTTAAGTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>24_PAr_V4_TTT (配列番号31)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATTTGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCCGAATGAAAGTACCCGAAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>25_PAr_V4_TCA (配列番号32)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCAGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tGGTCGTGCTATCAATCCAACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>26_PAr_V4_CCC (配列番号33)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAACCCGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tCAGTTACTCGAAGGTATAGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>27_PAr_V4_GGG (配列番号34)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGGGGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tGTGATAGCCGGGCGTTACATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>28_PAr_V4_1 (配列番号35)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTG
CATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAG
ATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTG
GGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAA
TGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctT
TTGATAGTGCGCGCATAGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctc
gtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>29_PAr_V4_2 (配列番号36)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACT
GCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTA
GATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGT
GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTA
ATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct
GTTCTATGCCTTACCTAAAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatct
cgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>30_PAr_V4_5 (配列番号37)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGAGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGA
ACTGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGC
GTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAG
CGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGG
GTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccga
tctGCAGCTTCTTGATGAGGCTTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTa
tctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>31_PAr_V4_7 (配列番号38)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGACTGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGG
GAACTGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAAT
GCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAA
AGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACA
GGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttcc
gatctTTTCATTACGCTCCACTTCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCG
TatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>32_PAr_V4_10 (配列番号39)
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGACTAAGGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACC
TGGGAACTGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGA
AATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGC
GAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATA
ACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctct
tccgatctGCTCCTATTTAACCTGGACCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTC
TCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
16S rRNA Gene V4 プロセス標準配列
小文字でのイルミナアダプター
>33_GC_dG_35-40_V4 (配列番号40)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATATGAAGGTTGAAAGCGTAATTAGGAATTAT
TGATAGTAAAGTGCACACTAGCGTTTTGTTAAATCTTAAGTGTAATCCCCGAGCTAAAACAAGGAATAAC
ATCTGATAATTACAAGATTGAAAATCGTATTTGGAGGTAGAATTCCAGGAGTAAAGGAGAAATTAATAGT
GTTCTGTAATAATACAAGTATCGTATGCAGCAACTAGGTCGAAGACTGATGATCAGGTGAGAAAGTGTTG
GGAGCTAACTGAATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
TTTGGCACTGTAGGTACTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>34_GC_dG_35-50_V4 (配列番号41)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATATGGAGGATTCAAACATAAATCAGAATTAC
TGGGCTTAAAATAATCGCATTCTGTTTGTTAAGTAATATGTGTAATCCCCGGGCTAATCCTGGGAAATGC
ATTTAATACTGGCAATCTAGAGTATAATAAAGGAGAATAGTATTTTAGTAGAAACAGAGAATTGTTTAGA
TATTTGGAGGAATAAAGTTAGCATTTGCTGCCCCATGGACGAAAAATGATGCTCATATGCAAAAGCGTGG
TGTACAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGG
TGCTATAGGCCCTCTTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>35_GC_dG_35-60_V4 (配列番号42)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAAATGAAGAATGAATGCTTTAATCGGTATTAT
TGGTCGTAAAACGCACGCAGGAGGATTGTTAAATTAGATGTGAAATCCACTGGCTTAACATTAGATAAGC
ATCTGATACAGGATAGCTTGATTTTCATATAAGAGGTTTGAAATCCAGATATAGCTTTGTAATTCGTAGA
AATCTGGATGATTACCGGTTATGAAGGCGGTCTCATGGATGAAATCTGATGCTAAAATACGAATGCGTGG
TTATCAAATAATATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAT
CACATGCTGCTGCGTCCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>36_GC_dG_36-70_V4 (配列番号43)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAAACTGATGGTGTAAACGTTTTTCGGTTTAAC
TGAACATAATGTTCACGAAAGATAAATGTTATTACATTTGATATTTATCTTGACTCAACATGGGAACAGC
ATATGATACAGGAAAACTTGAGTCTCGTAGAAGGGAGTTTAATTCCAGGTTAAGCTATTATATGATAATA
GAACTGGAGAAAATCCGGTGTTGATGGCGGTTACTTGGATTTAGACTTACGTTCAGGAACAAAATCTTGT
GGTGCTAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAG
GCATGGGATCATGTCAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>37_GC_dG_40-40_V4 (配列番号44)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGATAGTGTTAATCGTAATTAC
TAGGCGTTAAGCACAAACAGGTGGATTGTTAAGACAGATATGATATCCCAGGGCTTAAACAGGAAACTGC
AAATGATACTAGCTAGCTTGAGACTCGAATATGGGGGTAGAATACCAGGATTAAAGATGATTTACGTAGA
GATAAGGAGTATTACCGTTGTTAAAGGCGGCAACCTGAATTAATACTAACTAACAGGAAAGAAAGCGTGG
TAAGAAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
GGACCAGATCATGTGATCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>38_GC_dG_40-50_V4 (配列番号45)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAATTTTAATCGGAATTAC
TGGTAATAAAGCGCACGTAGTCGGTTTGTTAATTCATATTTGAATTCCTAAGTCTAAACCTAGTAACTAC
ATCTGATACTGGTAAACTTGAGTCTCTTAGAGGGGGATAGAATTATAGTTGTAGCGGTGAAATTCGAAGA
GTTCTGGAGTAATACCGGTAGCAAAGACGACCAACTGGACGAAGTCTGACGTTAAGATAAGAAAGTATGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
TGCATGTAAGACGCTCCGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>39_GC_dG_40-60_V4 (配列番号46)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGTAAGCGTTAATAGAAATTAC
TGGGCGTAAAAAGCACGCAGGCGGTTTGTAAAGTTAGATATAAATTCATTGGACTCTAACTGAGAACTGC
ATTTGATACTTTCAAGCTTTTGTCTCGTTGAGGAGGGTAGAAATTCAGGAGTTGCGATGATATGCTTAGA
GATCTTGAGGAATTCCGGTGTCGAATGCAAACTCCTGGACGAAGACTAACGTTCAGTTGCAAAAGAGTGG
AAATTAAACATTATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
GACAGTCGCTTATCTGCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>40_GC_dG_40-70_V4 (配列番号47)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAAGGAATGAGCTAGCGTTAATCGAAATTAC
TGGGTGTTTTGCTCATGCAGGAGATTAGTTTATTCAGATGTAAAAAACCCGGGTACAACCTGGGAATTGC
ATCTGATACTTATAAGCTAAATACTCGTAGAGGGAGGTAGTATTCCTGGTGTTGTGGTGAAATGTGTAGA
GATCTATATAATTACATGTTGCGAAGGCGGACCCAAGGACGAAGACTGATGCTCAGAAATTAAAACGTGG
AAATCAAACTTGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
TCGTAATTGCCTATGAGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>41_GC_dG_40-80_V4 (配列番号48)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCAGAATGTGTAAGCGTAATTCGAAATTTC
TGAGAGTAAAGCGAATGCAGATGGTTTATTTTGTTAGAAGTGAAATCCCCGGGCTATACCTGGTTACTGC
ATCTGTTACTGGTAAACTTGAAACTCGAAGAGGGTGATAATATTCCAGGTATTTAGGTTAAATGTGTAGA
TATCTGGATGAATACTAGTGTCTAAGGCAGTCCACTGGACGTAGACTTACTCTCAGGTTCGAAAGCGTGG
GGAACATTCATAATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
AAGGTCGCGGCGGATATGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>42_GC_dG_45-50_V4 (配列番号49)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAAGGAGGGTGCTTGCGTTAAACAGAAATAC
TGGGTGTAAAACGTACGTAGACGGTTTATTAAGTAAGATGTGAAATCCCCGTGCTCAACCTAGGAACTGC
ATATGATATTGGAAAACTTGAGACATATAGAGGGAGATAGAATACTTGGAGTAGCGTTGTAATGCGTATA
GATTTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACAGACGCTCAGGTGCGAAATCGTTG
TGATCAAATAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGC
CCGCAGCTTCGCTCTAAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>43_GC_dG_45-60_V4 (配列番号50)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGTGTGAAAACGTTATTAAGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGTTCGCAGGCGGTTTGTTAAGTCATAAGTGAAATCCCCGGGCACAAACTGGGAACTGA
ATCTGTAACTGACAAGCTTGAGTATCTTATAATGGGATAGAATTTAATGTGTAGCTGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGATATACCGGTGACTAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCTAAATCGTGG
GGAACAAAAAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAA
TGATTTAAAGTCAAGAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>44_GC_dG_45-70_V4 (配列番号51)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAAACTGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGTGCATAAAGCTCACGCATTCGTTTTGTTAAGTCAGATAATAAATCCTCGAGTTAAACCTGGGAAATGC
ATCTGATACTGAAAAGCTTGATTCTCGTAGAGGGGTGTAGAATTCCAGGTGTAGCAGTAAAATACGTAGA
GATCAGAATGAATTCCGGTGGTGAAGTCGGCCTACTGGACGAAGACTGACGCTAAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
GTAGGTGATCGGTACCACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>45_GC_dG_45-80_V4 (配列番号52)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGTGTTAAATCGTTAATAGGAATTAC
TGGGCGAAAAGTGCTAGCAGGCGGTTTGTTAAATCAGTTGTGAAATCCCTGGGCACAACCTGGGATCTGC
ATCTGATTTTGGCAAGCTTTAGTCTATTAGAGGGGGGTAAATTTCCATGTGTAGATTTGAAATGCGTTTA
GATCTGGAGGAATACCGGAGGTGAAGGCGATCCCCTGGACGTAGACTGAAGCTCAAGTGAGAAAGCTTGG
AGTGCAAACTAGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAG
AACACCACTGGTGACCCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>46_GC_dG_45-90_V4 (配列番号53)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGATAATAGTATTTAC
TGTGCGAAAAGCATACTTAGGAAGATTTTTATGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGACAAGTTTGAGACTCGTATAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTTGCAGTGAAAAGTGTAGA
GATCTGGAAGAATACCGGTGGCGAAGGTTGCCCCCTGTACGAATAATGACGCTATGGTGCGAAAGCATTG
TGTGCAAACAAGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
AGAGGGCAATGACGTACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>47_GC_dG_50-60_V4 (配列番号54)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAAGGTGCAAGTGTTAATCGGAATTAC
TGGGCATAAAGCGCACGAAGGCGGTATGTTAAGTTAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAATCTGTGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCAAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTAGATGAATACCGGTGGCGAAGGAGGTCCCCTGGACGAAGACTGACACTCTGGTGCGAAATAGTGG
GGAGCAAACAGAATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTC
ATTGACAGGTTGGGTTAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>48_GC_dG_50-70_V4 (配列番号55)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAATCGTTAATCGGATTTAC
TGGGCTTAAATCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCATATGTGAAAACCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTTGCAAGCTTGAGTCTCGTATAGGGAGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGAAGTAATACCGGTAGCTAATACGGCCCACTGGACGAAGACTGACGCACAGGTGCTAAAGCGTGT
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
ACTGTATGGACCGGTCACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>49_GC_dG_50-80_V4 (配列番号56)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGTGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGTCGTAAAGCGCACGTAGACGGTTTGTTAATTCAGATGTTAAATTCCAGGGCAAAACCTGGGAACTGC
ATCTTATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGTTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGTGTAAA
GATCTGGAGGAATACCGGTGTTGAAGGCGGCCTCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
GCCTGGCTCTTATGTAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>50_GC_dG_50-90_V4 (配列番号57)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGAACAAGCGTTAATCGAAATAAC
TGGGCGTAAAGCGCTCGTAGGTTGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGTTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATTATGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTATAATTCCAGTTGAAGCGGTAAAATGCGTTGA
GATCTGGAGGTATACCGGTGGCGAAAGCGGCCCCATGGACGAAGACTGACGCTCATTTGCGAAATCGTTG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAA
TAGGCCCGCTCATCCCGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>51_GC_dG_49-100_V4 (配列番号58)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCTTCGGGTACTAGCGTTAATTAGGATTTC
TGCGCGTAAAGTGAACGCAGGCTTGTTGGTCAGTGAGATGTGTATTACAGGTACTTAACCTGTGAACCGC
ATCTGATACTCGCAAGCCTGAGGCTCCTAGTGGGGGGTAGAAATCTATGTGTATCGTTGGAACCCGTAAA
CATCTGTAGGATGGCATGTGTCCAAGGCAGCCCCCTGGTCTGAGACTGACAATCAGTTTCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGCATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCT
TAGAGACACTCTTACCGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>52_GC_dG_55-70_V4 (配列番号59)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAAGACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATAAC
TGGGCGTAAAGCGGTCGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAATTCCCCGGGCTCAACGTGGGAACTTC
ACCTAATACGGGCAAGCTTTAGAATCGTAGAGGGGGGTAGAATTATAGGTATAGCGGTGCAATGCGAAGA
GAGCTGGAGGAATCCCGGTGGAGAAGGCAGCCCCCTGGACGAAGACAGAAGCTCAGGGGCGAAACCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTA
TCGGGCGCTCTCCGGTACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>53_GC_dG_55-80_V4 (配列番号60)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTTATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGTTTGTTAAGTCAGAAGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCTAGCATGAGTATCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGTAATGCGTAGA
GATCTAGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGTGAAAGCGAGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTA
CCTATCGCAGCGCGTATAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>54_GC_dG_55-90_V4 (配列番号61)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCAAGCAGGCAGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGA
GAACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGTGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCC
CGCGTACAGGATTGTTCGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>55_GC_dG_55-100_V4 (配列番号62)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTTAGTCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACTCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGGACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCCTGAGTCTCGTAGTGGGGGGTATAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCAGGAAGAAGTCCAGTTGTGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGAGGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAAGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
AGCAAAGGGAGAGCGCGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>56_GC_dG_55-110_V4 (配列番号63)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACCGAGGGTGCAAGAGTTAAGCGGAATTGC
TGGCCGTAAAGCGCACACAGGCGCTTTGTCAAGTTAGATGCGAAATCCCCAGGTTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTAACTCTCGTAGAGGGGGTTACAATTCCAGGTGGAGCGCTGAAATGCGTAGA
CATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGACCCCCTGGACGAAGACTCCCGCTTAGGTTCGCAAGCGGGG
GGAGCAAACAGAATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAT
AGTCGTTTGCGCACCCGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>57_GC_dG_60-80_V4 (配列番号64)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGCAAGCGTTGATCGGAATTAC
CCGGCGTGAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACGTGGGAACTGC
ATGTGATACTGGCACGCTTGAGTCTCGCAGAGGGGGGGAGAATTGCAGGGGTAGCGGTGAAAGGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAGGGCGGCCCCCTGGAGGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
CGAGCAAACACGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCC
TTTCCTGCTCCCGCCTGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>58_GC_dG_60-90_V4 (配列番号65)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATGAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGCTGTGTTAAGTCAGATGTGGAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGGTTGAGTCTGGTGGAGGGGGGGAGAATCCCAGGTGTGGCGGTGAAATGCGGAGA
GAGCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGGAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
GATTCGTGTCCTCCACATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>59_GC_dG_60-100_V4 (配列番号66)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGGTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAACCGCACGCAGGCGGTCTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCGGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGCCTCGTAGAGGGGGGTAGAAGTCCGGGTGTAGCGGTGAACTGCGTAGA
CATCTGGAGGAATACCGGGGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGGGCAGGTGCGACAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
CTTCTAAACGTGCGAAGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>60_GC_dG_60-110_V4 (配列番号67)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATCCGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTAC
TGCGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTCTTAAGTCAGCTGTGAAATCCCCGGGCTCACCCCGGGAACTGC
ATCTGATACTCGCAACCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGCCAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCCGGAGGAATACCGGGGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGCGG
GGAGCAAACCGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGG
CTTCGCTGTGCCTATGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>61_GC_dG_60-120_V4 (配列番号68)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATCCGGAGCGTGCAAGCGTCAATCCGCATTAG
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGGTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCGGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGAGACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTACAGGGGGGTAGAATTCCAGGTCTGGCGCTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGCAGACCGGTCGCGAAGGCGGCCCCCTGCACGACGAGTGACCCTCAGGCGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAA
ATAAGACCGCATAGTTATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>62_GC_dG_65-90_V4 (配列番号69)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGCAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGGAAGGCGCACGCACGCGGCCTGTCAAGTGAGATGTGACATCCCCGGGCTCAACCTCGGAACTGC
GTCTGATACTGGCACGCTTGCGTCGCGTACAGGGGGCGAGAATTCCAGGGGGAGGGGTGAAATGCGTGGC
GATCCGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCGGGACGAAGACGGCCGCTCAGGGGCCAAAGCGTGG
GGGGCAGACACGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
AACTACAGGGACGAGAGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>63_GC_dG_65-100_V4 (配列番号70)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGGGGGTGCAAGCGTGGATCGGAATTGC
TGGGCGTCAAGGGCACGCAGGCGGTTTGTGAAGTCAGACGCGAGAGCCCCGGGCTCCACCGGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGACGGGGGCAGAATCCCGGGTGTGGCGGGGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGGATCCCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGGAGACTGACGCTCAGGTGCGGAAGCGGGG
GGACCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAT
CGGTTCTTGGTCCGCTTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>64_GC_dG_65-110_V4 (配列番号71)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGCAGGGTGCCAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTGAAGCGCACGCGGGCGGTTTGTTAAGTCAGACGTGAAATCCCCGCGCTCAACCTGGGAGCCGC
ACCTGAGAGTGGCGAGCTTGGGTGTCGTAGAGGGGGGTAGACTTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGC
GCTCTGGCGGGATACCGCTGGCGAAGGCGGCCCCCCGGGCGAAGCCTGCCGCTCAGGGGCGAAAGCGTGG
GGAGCACACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCC
GCCTGATGTCACGGCCTTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>65_GC_dG_65-120_V4 (配列番号72)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGCGTGCAAGCGCTAACCGGAATTAC
TGCGCGTCAAGCGGACGCAGGCGGTTCGTTAAGTCAGGTGTGAGATCCCCGGGGTCAACCGGGGACCTGC
ATCTGACACCGGCACGCTTGAGTCCCGTAGGGGCGGGTAGAATCCCCGGTGTAGCGGTGCGAGCCGTAGC
GATCCGGAGGAATACCGGTGGCGACGGCCGCCCCCTGGACGAAGGCTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
TCACTTAAACACTTCAATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>66_GC_dG_65-130_V4 (配列番号73)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACCGCCGGTGCACGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGGGTACAGCGCGCGCGGGCGGTTTGTTAGCTCCGGTGTGAAGTCCCGGGGCTCAACCTGGGAACTCC
AGCGGACACTGGCAAGCCTGAGTCTCGTCCCGGGGGGGAGAGTTCCAGCTGTAGCGGTGACGTCCCTGGA
GATCTCGGGGAATACGGGTGGCCAAGGCCGCCCCCTCGAGGAGGAGTCACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTC
CTGCCAGCGTCGGCAGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>67_GC_dG_70-100_V4 (配列番号74)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATGCGGGGGGTGGAAGCGGCGAGCGGACTGGC
GGGGCGCCAAGCGCGCGCCGGCGGCTTGCTAGGTCAGATGTGAGGTGCCCGGCCTCAACCTGGGAACTGC
AGGTGATACTGGGCAGCCGGAGTCGGGTAGACGGGGGTACAATGCCAGGTGTAGCGGGGCAACGGGTAGC
GATGTGGGGGAATACCGGTGGCGAACGGGGCCCCCCGGACGAAGGCTGGCGCTCGGGTGCCACAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTC
GAAGGATTTATAACGATGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>68_GC_dG_70-110_V4 (配列番号75)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATGCGGAGGGTGCACGGGGTAACGGGAATGCC
TGGGCGCCCAGCCGACGGAGCCGGTTCGGTAAGTCAGAGGTGAACGCGCCGGGCTCAACCCGCGAACTGC
CGCTGATACCGGGGCGCTTCCGTCTCGTAGAGGGGGGTCGAATTCCAGGTGTGGCGCTGAAGTCCCGAGA
GCTCTGGAGGAAGCGCGGTGGCGAGGGCGCCCGCCCGGACCAAGACTGGCGGCCAGGTGCGAAAGCGCGG
GGAGCGAACGGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTG
CTGTCTGCGATCCGGAACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>69_GC_dG_70-120_V4 (配列番号76)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAACACGGAGGGCGCAAGCGTTAATCGGAACCAC
TGGCCCTAAAGCGGCCCCAGGCGGGTCGTGAGGTCAGATGTGAAACCGCCGGGGTCAACCGGGGGGGGGC
GGCTGACACTGGCGAGCCTGGGTCTCGTACACGGGGGCAGACCTCCAGGTGTCCCGCTGAGGCGCGTGGA
GATCCGGAGGAGTACCGGTGGGGACGCCGGCCCCCTCGAGGCAGACTGACGCGCAGGTGCGAAAGCGCGG
GGAGCAAACGGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGT
CTGATCGTTATATGCCGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>70_GC_dG_70-130_V4 (配列番号77)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGCGGGTGCCAGCCTTAATCGGAATGCC
CGGGCGCACAGCGGACGCGGGCGGTTCGTTAAGCCGCAGGCGAGATCCCCGGGCCCAACCTCGGCACGGC
GTCTGACACTGGCGAGGTTGAGTCTCGGAGAGGGGGGTAGGATTCCAGGTCCACCGGTGGAACCCCTAGA
GCTCTGGGGGACTACCGGTGGCCCAGGCCGCGGCCTGGACGAACGCTGGCGCTCAGGTCCGCAAGCCTGC
GGCGCACACGGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
TATCGCATCCGCAGAAATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>71_GC_dG_70-140_V4 (配列番号78)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACCGCGGGTGCAAGCGTTAATGCGGCTTAC
TGGGCGTAAAGCGGACCCCGGCGGTTTGTGAGGTCACATGTGAAGCCCCCGCCCTCCGCCTGGGAACTGC
GTCTGATACTGGCGGGCTCGGGGCCCGTACAGGGGGGTAGAATCCCAGGTGGAGGGCGGAACCGGGTGCC
GAGCTGCAGGAAGGCCGGCGGCGAAGCCGGCCCCCCGGGCGGAGACTGACGCCCAGGGGCGCGACCGTGG
GGAGCAAGCAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAT
TCCCTTCTACATGAGTGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>72_Size_233_V4 (配列番号79)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAAGCGCAAGCAG
GCAGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCAGATACTGGCAAGCTTG
AGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGAGAACTGGAGGAATACCGGTG
GCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGTGCAAACAGGATTAGATA
CCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacgg
cgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCAAAGACTAACGAATCCGCAag
atcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTT
GTCGACTC
>73_Size_213_V4 (配列番号80)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAAAAGTCAGATG
TGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAG
AATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGAGAACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGAC
GAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGTGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTA
AACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacact
ctttccctacacgacgctcttccgatctGTCTGAGGTGATAAGGGCATagatcggaagagcacacgtctg
aactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>74_Size_193_V4 (配列番号81)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACC
TGGGAACTGCATCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGA
ATTGCGTAGAGAACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGC
GAAAGCGTGGGGTGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATA
ACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctct
tccgatctTTGATGGTGAGTGGTGAATGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTC
TCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>75_Size_273_V4 (配列番号82)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGTAGGGATGGCGATGCATTGGCGCAAGCAGGCAGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCC
GGGCTCAACCTGGGAACTGCATCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGT
GTAGCGGTGAATTGCGTAGAGAACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGAC
GCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGTGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCG
ACTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctac
acgacgctcttccgatctCGGTATACTACCTTACCAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtc
acAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>76_Size_293_V4 (配列番号83)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGTAGGGATGGCGATGCATTGTCCTGTGTCGCCAACCTTGAGCGCAAGCAGGCAGTTTGTT
AAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTG
AGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGAGAACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGG
CCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGTGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGT
CCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccga
gatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACATATCACAACCAGGCCTCagatcggaagag
cacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>77_Size_313_V4 (配列番号84)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACTGAGGGTGCAAGCGTAAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGTAGGGATGGCGATGCATTGTCCTGTGTCGCCAACCTTGACTGTACCGCTGTGATAACGC
GCGCAAGCAGGCAGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCAGATACT
GGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGAGAACTGGAGG
AATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGTGCAAACA
GGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAA
aatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCCCGTAGACTGG
GTCGACGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtct
tctgcttgTTGTCGACTC
合成標準配列 - 全長16S rRNA 遺伝子試験(HMP擬似集団)
下線部での配列タグ
小文字でのイルミナアダプタ-
>78_ABa_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号85)
AGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGGGGGAAGGT
AGCTTGCTACTGGACCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCTTAGGAATCTGCCTATTAGTGGGGGACAAC
ATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGATCTTCGGACCTTGCGCTA
ATAGATGAGCCTAAGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCGGG
TCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGA
ATATTGGACAATTAGGGGGGGAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTATGGTTGTA
AAGCACTTTAAGCGAGGAGGAGGCTACTTTAGTTAATACCTAGAGATAGTGGACGTTACTCGCAGAATAA
GCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGATTTACTGGGC
GTAAATCTGCGTGCGTAGGCGGCTTATTAAGTCGGATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAATTGCAT
TCGATACTGGTGAGCTAGAGTATGGGAGAGGATGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGA
TCTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCATCTGGCCTAATACTGACGCTGAGGTACGAAAGCATGGGG
AGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGTCTACTAGCCGTTGGGGCCTTTGAG
GCTTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAGTAGACCGCCTGGCATGGAGTACGGTCGCAAGACTAAAACTCA
AATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTA
CCTGGCCTTGACATACTAGAAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAATCTAGATACAGGTGCTG
CATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTTTCCTTA
CTTGCCAGCATTTCGGATGGGAACTTTAAGGATACTGCCAGTGACAAACTGGAGGAAGGCGGGGACGACG
TCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCTACA
CAGCGATGTGATGCTAATCTCAAAAAGCCGATCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAA
GTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCC
CGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCACCAGAAGTAGCTAGCCTAACTGCAAAGAGGGCGGTTACCACGGTG
TGGCCGATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTA
GGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacga
cgctcttccgatctGCTTGTCTGTTCAAGCATCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAA
TCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>79_BCe_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号86)
GATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTTGCTCTTATGAAGT
TAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGG
CTAATACCGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGAT
GGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAG
AGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTC
CGCAATTAGGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTC
TGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCTAGTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACG
GCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAT
CTGCGCGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAA
CTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATATGGA
GGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAA
CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTT
AGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGA
ATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGG
TCTTGACATCCTCTGACAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGG
TTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGC
CATCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAAT
CATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGAGCTGCAAGACCGCGA
GGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGGA
ATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAC
ACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGACAG
ATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTC
GACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTCTCCCT
GTGATTAATGAACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgc
cgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>80_BVu_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号87)
TATTACAATGAAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTAGCTACAGGCTTAACACATGCAAGTCGAG
GGGCAGCATGGTCTTAGCTTGCTAAGGCCGATGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACACGTATCCAACCT
GCCGTCTACTCTTGGACAGCCTTCTGAAAGGAAGATTAATACAAGATGGCATCATGAGTCCGCATGTTCA
CATGATTAAAGGTATTCCGGTAGACGATGGGGATGCGTTCCATTAGATAGTAGGCGGGGTAACGGCCCAC
CTAGTCTTCGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGAACTGAGACACGGTCCAAACTC
CTACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATTAGGGGCGAGAGCCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGAA
GGATGACTGCCCTATGGGTTGTAAACTTCTTTTATAAAGGAATAAAGTCGGGTATGGATACCCGTTTGCA
TGTACTTTATGAATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTA
TCCGGATTTATTGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGATGGATGTTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTC
AACCGTAAAATTGCAGTTGATACTGGATATCTTGAGTGCAGTTGAGGCAGGCGGAATTCGTGGTGTAGCG
GTGAAATGCTTAGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCTAAGCTGCAACTGACATTGAG
GCTCGAAAGTGTGGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACGGTAAACGATGAATACTCGC
TGTTTGCGATATACGGCAAGCGGCCAAGCGAAAGCGTTAAGTATTCCACCTGGCATGGAGTACGCCGGCA
ACGGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATAC
GCGAGGAACCTTACCCGGGCTTAAATTGCAGATGAATTACGGTGAAAGCCGTAAGCCGCAAGGCATCTGT
GAAGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAGTGCCATAACGAGCGCAACC
CTTGTTGTCAGTTACTAACAGGTCATGCTGAGGACTCTGACAAGACTGCCATCGTAAGATGTGAGGAAGG
TGGGGATGACGTCAAATCAGCACGGCCCTTACGTCCGGGGCTACACACGTGTTACAATGGGGGGTACAGA
GGGCCGCTACCACGCGAGTGGATGCCAATCCCCAAAACCTCTCTCAGTTCGGACTGGAGTCTGCAACCCG
ACTCCACGAAGCTGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCACGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTG
TACACACCGCCCGTCAAGCCATGGGAGCCGGGGGTACCTGAAGTGCGTAACCGCGAGGAGCGCCCTAGGG
TAAAACTGGTGACTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGTAGGGATAACAGGGTAATGAG
TCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAGAG
CCATAGACTGCTGTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtat
gccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>81_CBe_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号88)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGATGAAGCTC
CTTCGGGAGTGGATTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTCATAGAGGGGAATAGCC
TTTCGAAAGGAAGATTAATACCGCATAAGATTGTAGTGCCGCATGGCATAGCAATTAAAGGAGTAATCCG
CTATGAGATGGACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGC
CGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGG
GGAATATTGCACAATTAGGGGGGAAACCCTGATGCAGCAACGCCGCGTGAGTGATGACGGTCTTCGGATT
GTAAAGCTCTGTCTTCAGGGACGATAATGACGGTACCTGAGGAGGAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGC
AGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTACTGGGCGTAAATCTGGGAGCGTAGGTGGA
TATTTAAGTGGGATGTGAAATACTCGGGCTTAACCTGGGTGCTGCATTCCAAACTGGATATCTAGAGTGC
AGGAGAGGAAAGTAGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATTAGGAAGAATACCAGTGGCGAA
GGCGACTTTCTGGACTGTAACTGACACTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTG
GTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTAGGGGTTGTCATGACCTCTGTGCCGCCGCTAACGCA
TTAAGTATTCCGCCTGGCATGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCAC
AAGCAGCGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTAGACTTGACATCTCCTGAAT
TACCCTTAATCGGGGAAGCCCTTCGGGGCAGGAAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGT
GAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCTACCATTTAGTTGAGCACTC
TAGCGAGACTGCCCGGGTTAACCGGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTA
GGGCTACACACGTGCTACAATGGCTGGTACAGAGAGATGCTAAACCGCGAGGTGGAGCCAAACTTTAAAA
CCAGTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGAAACTCGCCTACATGAAGCTGGAGTTGCTAGTAATCGCGAATCA
GAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTGGCAATACC
CAAAGTTCGTGAGCTAACGCGTAAGCGGGGCAGCGACCTAAGGTAGGGTCAGCGATTGGGGTGAAGTCGT
AACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGAC
AAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAAAGATTAT
TTGCAGCCACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgt
cttctgcttgTTGTCGACTC
>82_DRa_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号89)
TTTATGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGGTGAACGCTGGCGGCGTGCTTAAGACATGCAAGTCGAACGCG
GTCTTCGGACCGAGTGGCGCACGGGTGAGTAACACGTAACTGACCTACCCAGAAGTCACGAATAACTGGC
CGAAAGGTCCGCTAATACGTGATGTGGTGATGCACCGTGGTGCATCACTAAAGATTTATCGCTTCTGGAT
GGGGTTGCGTTCCATCAGCTGGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGACGGATAGCCGGCCTGAG
AGGGTGGCCGGCCACAGGGGCACTGAGACACGGGTCCCACTCCTACGGGAGGCAGCAGTTAGGAATCTTC
CACAATTAGGGGCGCAAGCCTGATGGAGCGACGCCGCGTGAGGGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAACCTC
TGAATCTGGGACGAAAGAGCCTTAGGGCAGATGACGGTACCAGAGTAATAGCACCGGCTAACTCCGTGCC
AGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTACCCGGAATCACTGGGCGTAAATCTGGGCGTGTAGGC
GGAAATTTAAGTCTGGTTTTAAAGACCGGGGCTCAACCTCGGGGATGGACTGGATACTGGATTTCTTGAC
CTCTGGAGAGGTAACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATACCAGGAGGAACACCAATGGC
GAAGGCAAGTTACTGGACAGAAGGTGACGCTGAGGCGCGAAAGTGTGGGGAGCAAACCGGATTAGATACC
CGGGTAGTCCACACCCTAAACGATGTACGTTGGCTAAGCGCAGGATGCTGTGCTTGGCGAAGCTAACGCG
ATAAACGTACCGCCTGGCATGAAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCAC
AAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATGCTAGGAAC
TTTGCAGAGATGCAGAGGTGCCCTTCGGGGAACCTAGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTG
TCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCCTTTAGTTGTCAGCATTCAGTTGGAC
ACTCTAGAGGGACTGCCTATGAAAGTAGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCTAGTCAGCATGGTCCTTACGT
CCTGGGCGACACACGTGCTACAATGGGTAGGACAACGCGCAGCAAACCCGCGAGGGTAAGCGAATCGCTA
AAACCTATCCCCAGTTCAGATCGGAGTCTGCAACTCGACTCCGTGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGG
GTCAGCATACCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTAGATTG
CAGTTGAAACCGCCGGGAGCTTAACGGCAGGCGTCTAGACTGTGGTTTATGACTGGGGTGAAGTCGTAAC
AAGGTAACTGTACCGGAAGGTGCGGTTGGATCACCTCCTTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAa
atgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTATTCAGCCGTC
AACTTATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtctt
ctgcttgTTGTCGACTC
>83_EFa_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号90)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGCTTCTTTCC
TCCCGAGTGCTTGCACTCAATTGGAAAGAGGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTACCCA
TCAGAGGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGCATAACAGTTTATGCCGCATGGCATAAGAGT
GAAAGGCGCTTTCGGGTGTCGCTGATGGATGGACCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTC
ACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGAC
TCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATTAGGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTG
AGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGACGTTAGTAACTGAACGTC
CCCTGACGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCA
AGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCC
CCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATG
TGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGA
CGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAG
TGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGA
GTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAA
TTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTTCCCT
TCGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCG
CAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTGACAA
ACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAAT
GGGAAGTACAACGAGTCGCTAGACCGCGAGGTCATGCAAATCTCTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTGC
AGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGT
TCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCT
TTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAA
GGTGCGGCTGGATCACCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatc
tacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGCTGGGCTCAGAGGTGAATagatcggaagagcaca
cgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>84_ECo_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号91)
AAATTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGT
AACAGGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGAT
GGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTC
GGGCCTCTTGCCATCGGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGAC
GATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAG
GCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATTAGGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGG
CCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGGAGTAAAGTTAATACCTTTGCTCATTGACGTTA
CCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCG
GAATTACTGGGCGTAAATCTGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACC
TGGGAACTGCATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGA
AATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGC
GAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGT
TGTGCCCTTGAGGCGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGCATGGAGTACGGCCGCAA
GGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACG
CGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTGTG
AGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAA
CCCTTATCTTTTGTTGCCAGCGGTCCGGCCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCAGTGATAAACTGGAGGAAG
GTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAA
AGAGAAGCGACCTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACT
CGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTT
GTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCG
CTTACCACTTTGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAGGGGAACCTGCGGTTGGA
TCACCTCCTTATAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactc
tttccctacacgacgctcttccgatctAACAGCACTGTCGCACGGCTagatcggaagagcacacgtctga
actccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>85_HPy_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号92)
TTTATGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAGTGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAT
GAAGCTTCTAGCTTGCTAGAGTGCTGATTAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCATAGGTTATGTGCCTCTT
AGTTTGGGATAGCCATTGGAAACGATGATTAATACCAGATACTCCTACGGGGGAAAGATTTATCGCTAAG
AGATCAGCCTATGTCCTATCAGCTTGTTGGTAAGGTAATGGCTTACCAAGGCTATGACGGGTATCCGGCC
TGAGAGGGTGAACGGACACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAAT
ATTGCTCAATTAGGGGGGAAACCCTGAAGCAGCAACGCCGCGTGGAGGATGAAGGTTTTAGGATTGTAAA
CTCCTTTTGTTAGAGAAGATAATGACGGTATCTAACGAATAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCG
CGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTACTCGGAATCACTGGGCGTAAATCTGAGCGCGTAGGCGGGATAGT
CAGTCAGGTGTGAAATCCTATGGCTTAACCATAGAACTGCATTTGAAACTACTATTCTAGAGTGTGGGAG
AGGTAGGTGGAATTCTTGGTGTAGGGGTAAAATCCGTAGAGATCAAGAGGAATACTCATTGCGAAGGCGA
CCTGCTGGAACATTACTGACGCTGATTGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAG
TCCACGCCCTAAACGATGGATGCTAGTTGTTGGAGGGCTTAGTCTCTCCAGTAATGCAGCTAACGCATTA
AGCATCCCGCCTGGCATGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATAGACGGGGACCCGCACAAG
CGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGATACACGAAGAACCTTACCTAGGCTTGACATTGAGAGAATCCG
CTAGAAATAGTGGAGTGTCTGGCTTGCCAGACCTTGAAAACAGGTGCTGCACGGCTGTCGTCAGCTCGTG
TCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTTTTCTTAGTTGCTAACAGGTTATGCTGA
GAACTCTAAGGATACTGCCTCCGTAAGGGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACG
CCTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGGGTGCACAAAGAGAAGCAATACTGCGAATGGAGCCAATCTTCA
AAACACCTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCAAA
TCAGCCATGTTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACTCACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGTGTT
TGCCTTAAGTCAGGATGCTAAATTGGCTACTGCCCACGGCACACACAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACA
AGGTAACCGTAGTGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatga
tacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCACGTACTAGTGGTCAG
CGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgc
ttgTTGTCGACTC
>86_LGa_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号93)
GAAGGAAAATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAG
CGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAGATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGA
GTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAA
CACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAG
CTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATT
GGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATTAGGGACGCAAG
TCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAG
ATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAG
CCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGCGAGTGCAGGCGGTTC
AATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAG
AAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGG
CGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGT
AGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCAT
TAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACA
AGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAA
CCTAAGAGATTAGGTGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCG
TGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACT
CTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACC
TGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCAAGCGGATCTCTGAA
AGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGAT
CAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACA
CCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTCTAAGGTAGGACAGATGATTAGGGTGAAGTC
GTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGT
CGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACGTAA
AGGGTTATTGCATTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatg
ccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>87_NMe_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号94)
TGAACATAAGAGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCTTTACACATGCAAGTCGGACGG
CAGCACAGAGAAGCTTGCTTCTCGGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACATATCGGAACGTACCGAG
TAGTGGGGGATAACTGATCGAAAGATCAGCTAATACCGCATACGTCTTGAGAGAGAAAGCAGGGGACCTT
CGGGCCTTGCGCTATTCGAGCGGCCGATATCTGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGA
CGATCAGTAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGA
GGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATTAGGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTCTGAAGAAG
GCCTTCGGGTTGTAAAGGACTTTTGTCAGGGAAGAAAAGGCTGTTGCTAATATCAGCGGCTGATGACGGT
ACCTGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATC
GGAATTACTGGGCGTAAATCTGCGGGCGCAGACGGTTACTTAAGCAGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAAC
CCGGGAACTGCGTTCTGAACTGGGTGACTCGAGTGTGTCAGAGGGAGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTG
AAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCTCCTGGGACAACACTGACGTTCATGCC
CGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAATTAGCTGT
TGGGCAACCTGATTGCTTGGTAGCGTAGCTAACGCGTGAAATTGACCGCCTGGCATGGAGTACGGTCGCA
AGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAAC
GCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATGTACGGAATCCTCCGGAGACGGAGGAGTGCCTTCGGGAGCCGT
AACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCA
ACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAGCCGGAGGAAG
GTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGACCAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGTACAG
AGGGTAGCCAAGCCGCGAGGCGGAGCCAATCTCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATTGCACTCTGCAACT
CGAGTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTT
GTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGGGATACCAGAAGTAGGTAGGATAACCACAAGGAGTCCG
CTTACCACGGTATGCTTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGA
TCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacac
tctttccctacacgacgctcttccgatctAGTCCCAGGATTGCTGAAATagatcggaagagcacacgtct
gaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>88_PAc_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号95)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGGAAAGGCCC
TGCTTTTGTGGGGTGCTCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTGACTTTGGGAT
AACTTCAGGAAACTGGGGCTAATACCGGATAGGAGCTCCTGCTGCATGGTGGGGGTTGGAAAGTTTCGGC
GGTTGGGGATGGACTCGCGGCTTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAGTGGCTTACCAAGGCTTTGACGGGTAG
CCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTG
GGGAATATTGCACAATTAGGGGCGGAAGCCTGATGCAGCAACGCCGCGTGCGGGATGACGGCCTTCGGGT
TGTAAACCGCTTTCGCCTGTGACGAAGCGTGAGTGACGGTAATGGGTAAAGAAGCACCGGCTAACTACGT
GCCAGCAGCCGCGGTGATACGTAGGGTGCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGGGCTCGTA
GGTGGTTGATCGCGTCGGAAGTGTAATCTTGGGGCTTAACCCTGAGCGTGCTTTCGATACGGGTTGACTT
GAGGAAGGTAGGGGAGAATGGAATTCCTGGTGGAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCAGT
GGCGAAGGCGGTTCTCTGGGCCTTTCCTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGCTTAGAT
ACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGGTGGGTACTAGGTGTGGGGTCCATTCCACGGGTTCCGTGCCGTAG
CTAACGCTTTAAGTACCCCGCCTGGCATGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGG
CCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGTAGAACCTTACCTGGGTTTGACATG
GATCGGGAGTGCTCAGAGATGGGTGTGCCTCTTTTGGGGTCGGTTCACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCA
GCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTCACTGTTGCCAGCACGTT
ATGGTGGGGACTCAGTGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATG
CCCCTTATGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCTGGTACAGAGAGTGGCGAGCCTGTGAGGGTGAG
CGAATCTCGGAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCTCATGAAGTCGGAGTCGCTA
GTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGGCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATG
AAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCGTTGTGGGGGAGCCGTCGAAGGTGGGACTGGTGATT
AGGACTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTAAGGATAGGGA
TAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgct
cttccgatctGATCACCCTGCATGTACACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAG
TCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>89_PAr_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号96)
AACTGAAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGAT
GAAGGGAGCTTGCTCCTGGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGG
GATAACGTCCGGAAACGGGCGCTAATACCGCATACGTCCTGAGGGAGAAAGTGGGGGATCTTCGGACCTC
ACGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCGT
AACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAG
TGGGGAATATTGGACAATTAGGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGG
ATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCAACAG
AATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAAC
TGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGT
AGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCGTTGGGATCC
TTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAGTCGACCGCCTGGCATGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAA
ACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAA
CCTTACCTGGCCTTGACATGCTGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCAGACACAGG
TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGT
CCTTAGTTACCAGCACCTCGGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGA
TGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTG
CCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGC
GTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACA
CCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAGCTAGTCTAACCGCAAGGGGGACGGTTACCA
CGGAGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCTC
CTTAATAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccc
tacacgacgctcttccgatctGGTAACATATAAGCTTCTCGagatcggaagagcacacgtctgaactcca
gtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>90_RSp_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号97)
CAACTTGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAATGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGAA
GTCTTCGGACTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTGCCCTTTGCTTCGGAATAGCCCCGG
GAAACTGGGAGTAATACCGAATGTGCCCTTTGGGGGAAAGATTTATCGGCAAAGGATCGGCCCGCGTTGG
ATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCGACGATCCATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCC
ACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTAGACAATTAGGGGC
GCAAGCCTGATCTAGCCATGCCGCGTGATCGATGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGATCTTTCAGGTGGGAA
GATAATGACGGTACCACCAGAAGAAGCCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGG
CTAGCGTTATTCGGAATTACTGGGCGTAAATCTGCGCACGTAGGCGGATCGGAAAGTCAGAGGTGAAATC
CCAGGGCTCAACCCTGGAACTGCCTTTGAAACTCCCGATCTTGAGGTCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCG
AGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGATACT
GACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATG
AATGCCAGTCGTCGGGCAGCATGCTGTTCGGTGACACACCTAACGGATTAAGCATTCCGCCTGGCATGGA
GTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAA
TTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACCCTTGACATGGCGATCGCGGTTCCAGAGATGGTTCCTTCAG
TTCGGCTGGATCGCACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGGTTAAGTCC
GGCAACGAGCGCAACCCACGTCCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGGGAAACTGCCGGTGAT
AAGCCGGAGGAAGGTGTGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGTTGGGCTACACACGTGCTACA
ATGGCAGTGACAATGGGTTAATCCCAAAAAGCTGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCAT
GAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGTAACAGCATGACGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACC
GCCCGTCACACCATGGGAATTGGTTCTACCCGAAGGCGGTGCGCCAACCTCGCAAGAGGAGGCAGCCGAC
CACGGTAGGATCAGTGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACC
TCCTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccc
tacacgacgctcttccgatctGTAGAAATAATCGGATTCGAagatcggaagagcacacgtctgaactcca
gtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>91_SAr_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号98)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAACGGACGA
GAAGCTTGCTTCTCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGATAACCTACCTATAAGACTGGG
ATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATATTTTGAACCGCATGGTTCAAAAGTGAAAGACGGT
CTTGCTGTCACTTATAGATGGATCCGCGCTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCAAC
GATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAG
GCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATTAGGGGCGAAAGCCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGG
TCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTATTAGGGAAGAACATATGTGTAAGTAACTGTGCACATCTTGACGGTA
CCTAATCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCG
GAATTATTGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACC
GTGGAGGGTCATTGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGA
AATGCGCAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGATGTGC
GAAAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTT
AGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTACGACCGCA
AGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAAC
GCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTTTGACAACTCTAGAGATAGAGCCTTCCCCTTCGGGGGACA
AAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCG
CAACCCTTAAGCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAGTTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGA
AGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAATAC
AAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTCAAGCAAATCCCATAAAGTTGTTCTCAGTTCGGATTGTAGTCTGCAA
CTCGACTACATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGCATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGTC
TTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGAGTAACCTTTTAGGAGC
TAGCCGTCGAAGGTGGGACAAATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCT
GGATCACCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctt
tccctacacgacgctcttccgatctTCACCTGCCGGGCGGGCGCGagatcggaagagcacacgtctgaac
tccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>92_SEp_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号99)
TTTTATGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGA
ACAGACGAGGAGCTTGCTCCTCTGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGATAACCTACCTATA
AGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATATATTGAACCGCATGGTTCAATAGTGA
AAGACGGTTTTGCTGTCACTTATAGATGGATCCGCGCCGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACC
AAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCC
TACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATTAGGGGCGAAAGCCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGT
GATGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTATTAGGGAAGAACAAATGTGTAAGTAACTATGCACGTCT
TGACGGTACCTAATCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGC
GTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAATCTGCGCGCGTAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACG
GCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGT
AGCGGTGAAATGCGCAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGC
TGATGTGCGAAAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGC
TAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTA
CGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTC
GAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTCTGACCCCTCTAGAGATAGAGTTTTCCCCTTC
GGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGC
AACGAGCGCAACCCTTAAGCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAGTTGACTGCCGGTGACAAA
CCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTACAATG
GACAATACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTCAAGCAAATCCCATAAAGTTGTTCTCAGTTCGGATTGTA
GTCTGCAACTCGACTATATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGCATGCTACGGTGAATACGTT
CCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGAGTAACCAT
TTGGAGCTAGCCGTCGAAGGTGGAACAAATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGG
TGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccg
agatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGATAATTTCGGATCGGGATagatcggaaga
gcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>93_SAg_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号100)
TTTAATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCT
GAGGTTTGGTGTTTACACTAGACTGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTCATA
GCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAGAGTAATTAACACATGTTAGTTATTTAAA
AGGAGCAATTGCTTCACTGTGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAA
GGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTA
CGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATTAGGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGA
AGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAACGTTGGTAGGAGTGGAAAATCTACCAAGT
GACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCG
TTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGG
CTTAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAG
CGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTG
AGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTA
GGTGTTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTACG
ACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGA
AGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTCTGACCGGCCTAGAGATAGGCTTTCTCTTCGGA
GCAGAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACG
AGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGG
AGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTG
GTACAACGAGTCGCAAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCT
GCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCG
GGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAG
GAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGC
GGCTGGATCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgaga
tctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTCATGTCGCCGTTTGGCAAAagatcggaagagca
cacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>94_SMu_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号101)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTGGGACGCAAGAGGAC
ACACTGTGCTTGCACACCGTGTTTTCTTGAGTCGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTATT
AGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAATATTAATTATTGCATGATAATTGATTGA
AAGATGCAAGCGCATCACTAGTAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTAAGGTAAGAGCTTACCA
AGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCT
ACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATTAGGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTG
AAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGTCAAGAACGTGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACAG
TGACGGTAGCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGC
GTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGGGAGCGCAGGCGGTCAGGAAAGTCTGGAGTAAAAGGCTATG
GCTCAACCATAGTGTGCTCTGGAAACTGTCTGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTA
GCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTCACTGACGCT
GAGGCTCGAAAGCGTGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCT
AGGTGTTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGGAGCTAACGCAATAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTAC
GACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCG
AAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGATGCTATTCTTAGAGATAGGAAGTTACTTCGG
TACATCGGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAAC
GAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCG
GAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTC
GGTACAACGAGTTGCGAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTGAAAGCCGATCTCAGTTCGGATTGGAGGC
TGCAACTCGCCTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCC
GGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTA
GGGGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATGGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTG
CGGCTGGATCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgag
atctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTTCTAGCACTGTAAGACACCagatcggaagagc
acacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>95_SPn_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号102)
AAACTTTTTAATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAG
AACGCTGAAGGAGGAGCTTGCTTCTCTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCT
GGTAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAGAGTAGATGTTGCATGACATTTGCT
TAAAAGGTGCACTTGCATCACTACCAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCTCA
CCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACT
CCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATTAGGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGA
GTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGAGAAGAACGAGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACA
CTGTGACGGTATCTTACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCG
AGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTAGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCT
GTGGCTTAACCATAGTAGGCTTTGGAAACTGTTTAACTTGAGTGCAAGAGGGGAGAGTGGAATTCCATGT
GTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGCTTGTAACTGAC
GCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGAGT
GCTAGGTGTTAGACCCTTTCCGGGGTTTAGTGCCGTAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAG
TACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAT
TCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTCTGACCGCTCTAGAGATAGAGCTTTCCTT
CGGGACAGAGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGC
AACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAA
CCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATG
GCTGGTACAACGAGTCGCAAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTTAAAGCCAGTCTCAGTTCGGATTGTA
GGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTT
CCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCGT
AAGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGG
TGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTAAGGATTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcga
ccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGACCTACGGATTAGACTATTagatc
ggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGT
CGACTC
>96_AOd_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号103)
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGCTGAAGCCC
AGCTTGCTGGGTGGATGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCCCTTCTTTGGGATAA
CGCCCGGAAACGGGTGCTAATACTGGATATTCACTGATCTTCGCATGGGGGTTGGTGGAAAGGTTTTTTC
TGGTGGGGGATGGGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTGATGGCCTACCAAGGCTTTGACGGGTA
GCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGTCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGT
GGGGAATATTGCACAATTAGGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGGAGGCCTTCGGG
TTGTAAACCTCTTTCGCTCATGGTCAAGCCGCAACTCAAGGTTGTGGTGAGGGTAGTGGGTAAAGAAGCG
CCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTA
AATCTGGGCTTGTAGGCGGTTGGTCGCGTCTGCCGTGAAATCCTCTGGCTTAACTGGGGGCGTGCGGTGG
GTACGGGCTGACTTGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAACTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCA
GGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGGGTCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGC
GAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGGCCACCCGTGGT
TTCTGCGCCGTAGCTAACGCTTTAAGTGCCCCGCCTGGCATGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAA
GGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACC
AAGGCTTGACATGCACGGCGGCACTGCAGAGATGTGGTGGCATTTAGTTGGTCGTGTGCAGGTGGTGCAT
GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGCCCTATGTT
GCCAGCACGTGATGGTGGGGACTCGTGGGGGACTGCCGGGGTTAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTC
AAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCTGGTACAGAGGGTTGCGATACT
GTGAGGTGGAGCGAATCCCTTAAAGCCAGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGG
TGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCTCGGGCCTTGTACACACCGCCC
GTCACGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCCATGGCCTAACCGCTTTGTGCTAGGGATAACAGGGTA
ATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct
TTTAAACTCTATCCATCCCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatct
cgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>97_LMo_Full_TAG_TCT_CAT (配列番号104)
GAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACGGAGG
AAGAGCTTGCTCTTCCAATGTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGTTGGG
GATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGAATGATAAGATGTGGCGCATGCCACGCCTTTGAAAGATGG
TTTCGGCTATCGCTTACAGATGGGCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAGGGTAATGGCCTACCAAGGCA
ACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGG
AGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATTAGGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGTATGAAGAA
GGTTTTCGGATCGTAAAGTACTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGATAAGAGTAACTGCTTGTCCCTTGACGG
TATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTC
CGGATTTATTGGGCGTAAATCTGCGCGCGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTTAA
CCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGAAGACTGGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGT
GAAATGCGTAGATATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGC
GCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTG
TTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGAGTACGACCG
CAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCA
ACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTGGAGACAGAGCTTTCCCTTCGGGGACA
AAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCG
CAACCCTTGATTTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAAGTGACTGCCGGTGCAAGCCGGAGGAA
GGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATAGTACA
AAGGGTCGCGAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACTATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAAC
TCGCCTACATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCT
TGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTAGGGTAACCTTTATGGAGCC
AGCCGCCGAAGGTGGGACAGATAATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTG
GATCACCTCCTTTCTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctac
actctttccctacacgacgctcttccgatctCTAACTTATGTGTCGTCGGTagatcggaagagcacacgt
ctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
16S rRNA遺伝子V4 プライマー編集標準配列
小文字でのイルミナアダプター
>98_Eco_V4_WT (配列番号105)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAT
GACATCAGAATTGAGTGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>99_Eco_V4_10_A(配列番号106)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAACCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
ACACTGCCAGTGTCACTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>100_Eco_V4_10_T (配列番号107)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCATCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
AGTGGACTTGCTTATACGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>101_Eco_V4_10_C (配列番号108)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCACCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGG
AGGCGTTGATTGGCGGCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>102_Eco_V4_11_A (配列番号109)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGACGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
CGACCAATAATGAACTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>103_Eco_V4_11_T (配列番号110)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGTCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCC
CGGAAACAAATCCGGGCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>104_Eco_V4_11_G (配列番号111)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGGCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
TTAAAGACCATTTGATGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>105_Eco_V4_12_A (配列番号112)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCAGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
GTGCCAGACTTAAGTTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>106_Eco_V4_12_T (配列番号113)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCTGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAG
CTCTCTGCTTAGATGACGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>107_Eco_V4_12_G (配列番号114)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCGGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGG
TTATTAGGATATGCCGTTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>108_Eco_V4_13_A (配列番号115)
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GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
CAAATGCCGAGGTTTGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>109_Eco_V4_13_T (配列番号116)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCTCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCG
ATATATAAAGGTAACCAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>110_Eco_V4_13_C (配列番号117)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCCCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGC
TGTGGTCAGCTTATCATAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>111_Eco_V4_14_A (配列番号118)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGAGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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AGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTG
GGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
GTGGTTACTCCAGCCCGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>112_Eco_V4_14_T (配列番号119)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGTGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAG
TAATTGCACTAGAGGCGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>113_Eco_V4_14_G (配列番号120)
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTG
CGCGGGTAAGCCCATAGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>114_Eco_V4_15_A (配列番号121)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCAGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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ACACGGAGCGTGTTATACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>115_Eco_V4_15_T (配列番号122)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCTGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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ATGATGATCACACTACCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>116_Eco_V4_15_C (配列番号123)
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>117_Eco_V4_16_A (配列番号124)
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>118_Eco_V4_16_T (配列番号125)
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAC
GTCCCTGAGCTACGTGTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>119_Eco_V4_16_C (配列番号126)
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCA
TTCCCTCACGGACCGGTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>120_Eco_V4_17_A (配列番号127)
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTA
CTCTCAGACGAGCGGCCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>121_Eco_V4_17_G (配列番号128)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGGAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAG
GCAGGTCACATCGCTGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>122_Eco_V4_17_C (配列番号129)
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TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
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GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGA
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>123_Eco_V4_18_T (配列番号130)
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ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTT
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>124_Eco_V4_18_G (配列番号131)
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCT
GCTCTCTGGTTTACAGGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>125_Eco_V4_18_C (配列番号132)
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCC
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
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GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTT
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tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>127_Eco_V4_19_G (配列番号134)
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GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGT
ATGCCTTGAGGCCCATAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>128_Eco_V4_19_C (配列番号135)
AAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTACTACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTAC
TGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGC
ATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGA
GATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGG
GGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGGGATAACAGGGTAAT
GAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGT
ACTTTCAAGTAGATTGAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcg
tatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
ITS2プライマー編集標準配列
小文字でのイルミナアダプター
>129_Sce_ITS2_WT
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tgcttgTTGTCGACTC
>130_Sce_ITS2_09_A
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TACGAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>131_Sce_ITS2_09_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAATAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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AGGCTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>132_Sce_ITS2_09_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAACAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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TGGCCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>133_Sce_ITS2_10_T
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CTCTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>134_Sce_ITS2_10_G
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tgcttgTTGTCGACTC
>135_Sce_ITS2_10_C
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tgcttgTTGTCGACTC
>136_Sce_ITS2_11_T
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tgcttgTTGTCGACTC
>137_Sce_ITS2_11_G
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TCGACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>138_Sce_ITS2_11_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGACCGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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CCGTGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>139_Sce_ITS2_12_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAAAGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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tgcttgTTGTCGACTC
>140_Sce_ITS2_12_T
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ACGCATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>141_Sce_ITS2_12_G
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAAGGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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tgcttgTTGTCGACTC
>142_Sce_ITS2_13_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACACAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
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tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTCCTGGGAGGGAGG
TCTCGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>143_Sce_ITS2_13_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACTCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
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CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAAGAATATACCTA
CCGGAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>144_Sce_ITS2_13_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACCCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
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GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGGGCAGAGCGCTT
ACGTACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>145_Sce_ITS2_14_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGAAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGTGGAATATTTGG
GTTCGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>146_Sce_ITS2_14_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGCACCCGACAAGGG
TTCGGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>147_Sce_ITS2_14_G
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGGAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
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tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAGAGCGTTCGTAAT
ACCGGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>148_Sce_ITS2_15_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCTGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
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CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTACGCCTGTCATCA
TGACTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>149_Sce_ITS2_15_G
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCGGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACGCATCACGCCTA
CGACGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>150_Sce_ITS2_15_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCCGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAGGGAGGATGACC
GTAGGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>151_Sce_ITS2_16_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAACGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGATAATATCATCC
CGGACTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>152_Sce_ITS2_16_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCATCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctATGACGATCACTTT
CTAGCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>153_Sce_ITS2_16_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCACCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAGTACTCGGTCCCT
TCCTAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>154_Sce_ITS2_17_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGAGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctATTCATACCAGATA
TCCCTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>155_Sce_ITS2_17_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGTGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGACTGTGTGTTACT
GCTGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>156_Sce_ITS2_17_G
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGGGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAATACTGTTTATA
CGGTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>157_Sce_ITS2_18_A
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTAAACAGTAAGGA
GGCATCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>158_Sce_ITS2_18_T
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCTAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTTGCAGACAGGTGC
GGGATGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
>159_Sce_ITS2_18_C
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCCAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGAGTACCCGCTGAACTTAA
GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaa
tgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCTCATTCAGCTTTG
TTAAAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttc
tgcttgTTGTCGACTC
ITS2プロセス標準配列
小文字でのイルミナアダプター
>160_GC_dG_35-40_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTATGAAGGTTGAAAGCGTAATTAGGAATTATT
GATAGTAAAGTGCACACTAGCGTTTTGTTAAATCTTAAGTGTAATCCCCGAGCTAAAACAAGGAATAACA
TCTGATAATTACAAGATTGAAAATCGTATTTGGAGGTAGAATTCCAGGAGTAAAGGAGAAATTAATAGTG
TTCTGTAATAATACAAGTATCGTATGCAGCAACTAGGTCGAAGACTGATGATCAGGTGAGAAAGTGTTGG
GAGCTAACTGAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGGC
CATACTCGCAGTGGCTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>161_GC_dG_35-50_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTATGGAGGATTCAAACATAAATCAGAATTACT
GGGCTTAAAATAATCGCATTCTGTTTGTTAAGTAATATGTGTAATCCCCGGGCTAATCCTGGGAAATGCA
TTTAATACTGGCAATCTAGAGTATAATAAAGGAGAATAGTATTTTAGTAGAAACAGAGAATTGTTTAGAT
ATTTGGAGGAATAAAGTTAGCATTTGCTGCCCCATGGACGAAAAATGATGCTCATATGCAAAAGCGTGGT
GTACAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTG
TCCTACCGCTATACCGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>162_GC_dG_35-60_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAATGAAGAATGAATGCTTTAATCGGTATTATT
GGTCGTAAAACGCACGCAGGAGGATTGTTAAATTAGATGTGAAATCCACTGGCTTAACATTAGATAAGCA
TCTGATACAGGATAGCTTGATTTTCATATAAGAGGTTTGAAATCCAGATATAGCTTTGTAATTCGTAGAA
ATCTGGATGATTACCGGTTATGAAGGCGGTCTCATGGATGAAATCTGATGCTAAAATACGAATGCGTGGT
TATCAAATAATGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGCT
CGAACACACAGCCGGTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>163_GC_dG_36-70_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTGATGGTGTAAACGTTTTTCGGTTTAACT
GAACATAATGTTCACGAAAGATAAATGTTATTACATTTGATATTTATCTTGACTCAACATGGGAACAGCA
TATGATACAGGAAAACTTGAGTCTCGTAGAAGGGAGTTTAATTCCAGGTTAAGCTATTATATGATAATAG
AACTGGAGAAAATCCGGTGTTGATGGCGGTTACTTGGATTTAGACTTACGTTCAGGAACAAAATCTTGTG
GTGCTAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCCA
GGTGGGTAGGTCTTTGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>164_GC_dG_40-40_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGATAGTGTTAATCGTAATTACT
AGGCGTTAAGCACAAACAGGTGGATTGTTAAGACAGATATGATATCCCAGGGCTTAAACAGGAAACTGCA
AATGATACTAGCTAGCTTGAGACTCGAATATGGGGGTAGAATACCAGGATTAAAGATGATTTACGTAGAG
ATAAGGAGTATTACCGTTGTTAAAGGCGGCAACCTGAATTAATACTAACTAACAGGAAAGAAAGCGTGGT
AAGAAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTC
TCACTCAGTCAGTACGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>165_GC_dG_40-50_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAAATTTTAATCGGAATTACT
GGTAATAAAGCGCACGTAGTCGGTTTGTTAATTCATATTTGAATTCCTAAGTCTAAACCTAGTAACTACA
TCTGATACTGGTAAACTTGAGTCTCTTAGAGGGGGATAGAATTATAGTTGTAGCGGTGAAATTCGAAGAG
TTCTGGAGTAATACCGGTAGCAAAGACGACCAACTGGACGAAGTCTGACGTTAAGATAAGAAAGTATGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGA
TCTCGAGTGTCGTCACAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>166_GC_dG_40-60_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACAGAGGGTGTAAGCGTTAATAGAAATTACT
GGGCGTAAAAAGCACGCAGGCGGTTTGTAAAGTTAGATATAAATTCATTGGACTCTAACTGAGAACTGCA
TTTGATACTTTCAAGCTTTTGTCTCGTTGAGGAGGGTAGAAATTCAGGAGTTGCGATGATATGCTTAGAG
ATCTTGAGGAATTCCGGTGTCGAATGCAAACTCCTGGACGAAGACTAACGTTCAGTTGCAAAAGAGTGGA
AATTAAACATTGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTG
TAGCTAACTTAAGGTGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>167_GC_dG_40-70_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTAAGGAATGAGCTAGCGTTAATCGAAATTACT
GGGTGTTTTGCTCATGCAGGAGATTAGTTTATTCAGATGTAAAAAACCCGGGTACAACCTGGGAATTGCA
TCTGATACTTATAAGCTAAATACTCGTAGAGGGAGGTAGTATTCCTGGTGTTGTGGTGAAATGTGTAGAG
ATCTATATAATTACATGTTGCGAAGGCGGACCCAAGGACGAAGACTGATGCTCAGAAATTAAAACGTGGA
AATCAAACTTGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAC
GTTGTCCAGCCGTATGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>168_GC_dG_40-80_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTTCAGAATGTGTAAGCGTAATTCGAAATTTCT
GAGAGTAAAGCGAATGCAGATGGTTTATTTTGTTAGAAGTGAAATCCCCGGGCTATACCTGGTTACTGCA
TCTGTTACTGGTAAACTTGAAACTCGAAGAGGGTGATAATATTCCAGGTATTTAGGTTAAATGTGTAGAT
ATCTGGATGAATACTAGTGTCTAAGGCAGTCCACTGGACGTAGACTTACTCTCAGGTTCGAAAGCGTGGG
GAACATTCATAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACC
CGGACGGCGGTCAATAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>169_GC_dG_45-50_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTAAGGAGGGTGCTTGCGTTAAACAGAAATACT
GGGTGTAAAACGTACGTAGACGGTTTATTAAGTAAGATGTGAAATCCCCGTGCTCAACCTAGGAACTGCA
TATGATATTGGAAAACTTGAGACATATAGAGGGAGATAGAATACTTGGAGTAGCGTTGTAATGCGTATAG
ATTTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACAGACGCTCAGGTGCGAAATCGTTGT
GATCAAATAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTCA
CTCGGGTTCTCGGCACGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>170_GC_dG_45-60_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGAAGTGTGAAAACGTTATTAAGAATTACT
GGGCGTAAAGCGTTCGCAGGCGGTTTGTTAAGTCATAAGTGAAATCCCCGGGCACAAACTGGGAACTGAA
TCTGTAACTGACAAGCTTGAGTATCTTATAATGGGATAGAATTTAATGTGTAGCTGTGAAATGCGTAGAG
ATCTGGAGATATACCGGTGACTAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCTAAATCGTGGG
GAACAAAAAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAA
CAACTCTGGCTCGATAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>171_GC_dG_45-70_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACT
GTGCATAAAGCTCACGCATTCGTTTTGTTAAGTCAGATAATAAATCCTCGAGTTAAACCTGGGAAATGCA
TCTGATACTGAAAAGCTTGATTCTCGTAGAGGGGTGTAGAATTCCAGGTGTAGCAGTAAAATACGTAGAG
ATCAGAATGAATTCCGGTGGTGAAGTCGGCCTACTGGACGAAGACTGACGCTAAGGTGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGA
CAGTCCGACCGCAACAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>172_GC_dG_45-80_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGTGTTAAATCGTTAATAGGAATTACT
GGGCGAAAAGTGCTAGCAGGCGGTTTGTTAAATCAGTTGTGAAATCCCTGGGCACAACCTGGGATCTGCA
TCTGATTTTGGCAAGCTTTAGTCTATTAGAGGGGGGTAAATTTCCATGTGTAGATTTGAAATGCGTTTAG
ATCTGGAGGAATACCGGAGGTGAAGGCGATCCCCTGGACGTAGACTGAAGCTCAAGTGAGAAAGCTTGGA
GTGCAAACTAGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACA
GATACGAGGGAGCAGGTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>173_GC_dG_45-90_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAAGCGATAATAGTATTTACT
GTGCGAAAAGCATACTTAGGAAGATTTTTATGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCA
TCTGATACTGACAAGTTTGAGACTCGTATAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTTGCAGTGAAAAGTGTAGAG
ATCTGGAAGAATACCGGTGGCGAAGGTTGCCCCCTGTACGAATAATGACGCTATGGTGCGAAAGCATTGT
GTGCAAACAAGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAGT
TTCCAGTCGGTTCTCACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>174_GC_dG_50-60_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAAGGTGCAAGTGTTAATCGGAATTACT
GGGCATAAAGCGCACGAAGGCGGTATGTTAAGTTAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAATCTGTGAACTGCA
TCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCAAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAG
ATCTAGATGAATACCGGTGGCGAAGGAGGTCCCCTGGACGAAGACTGACACTCTGGTGCGAAATAGTGGG
GAGCAAACAGAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCAC
GTTTACTGACACGAAGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>175_GC_dG_50-70_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAATCGTTAATCGGATTTACT
GGGCTTAAATCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCATATGTGAAAACCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGATACTTGCAAGCTTGAGTCTCGTATAGGGAGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAG
ATCTGAAGTAATACCGGTAGCTAATACGGCCCACTGGACGAAGACTGACGCACAGGTGCTAAAGCGTGTG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAT
ATAAGCAGCCTCCGCAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>176_GC_dG_50-80_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGTGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACT
GGTCGTAAAGCGCACGTAGACGGTTTGTTAATTCAGATGTTAAATTCCAGGGCAAAACCTGGGAACTGCA
TCTTATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGTTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGTGTAAAG
ATCTGGAGGAATACCGGTGTTGAAGGCGGCCTCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAA
TTTAGTGAGCACGAAGGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>177_GC_dG_50-90_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGAACAAGCGTTAATCGAAATAACT
GGGCGTAAAGCGCTCGTAGGTTGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGTTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGATTATGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTATAATTCCAGTTGAAGCGGTAAAATGCGTTGAG
ATCTGGAGGTATACCGGTGGCGAAAGCGGCCCCATGGACGAAGACTGACGCTCATTTGCGAAATCGTTGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctATT
TAAGTGCAGCTATGTCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>178_GC_dG_49-100_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTTCTTCGGGTACTAGCGTTAATTAGGATTTCT
GCGCGTAAAGTGAACGCAGGCTTGTTGGTCAGTGAGATGTGTATTACAGGTACTTAACCTGTGAACCGCA
TCTGATACTCGCAAGCCTGAGGCTCCTAGTGGGGGGTAGAAATCTATGTGTATCGTTGGAACCCGTAAAC
ATCTGTAGGATGGCATGTGTCCAAGGCAGCCCCCTGGTCTGAGACTGACAATCAGTTTCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGCGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAG
AGGATAACTCCAGTCTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>179_GC_dG_55-70_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGGACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATAACT
GGGCGTAAAGCGGTCGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAATTCCCCGGGCTCAACGTGGGAACTTCA
CCTAATACGGGCAAGCTTTAGAATCGTAGAGGGGGGTAGAATTATAGGTATAGCGGTGCAATGCGAAGAG
AGCTGGAGGAATCCCGGTGGAGAAGGCAGCCCCCTGGACGAAGACAGAAGCTCAGGGGCGAAACCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGG
GCAAGGTAATCCGTGCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>180_GC_dG_55-80_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAAGCGTTTATCGGAATTACT
GGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGTTTGTTAAGTCAGAAGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGATACTGGCTAGCATGAGTATCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGTAATGCGTAGAG
ATCTAGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGTGAAAGCGAGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCTT
CCGTCTTTATCTAACTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>181_GC_dG_55-90_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACTGAGGGTGCAAGCGTAAATCGGAATTACT
GGGCGTAAAGCGCAAGCAGGCAGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCA
TCAGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTTGAGGGGGGTAGAATTCCATGTGTAGCGGTGAATTGCGTAGAG
AACTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGG
GTGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctATG
TAGGTGGAATACCCAAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>182_GC_dG_55-100_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACTGAGGGTGCAAGCGTTAGTCGGAATTACT
GGGCGTAAAGCGCACTCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGGACTGCA
TCTGATACTGGCAAGCCTGAGTCTCGTAGTGGGGGGTATAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAG
ATCAGGAAGAAGTCCAGTTGTGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGAGGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAAGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGG
ATACCTAGACCCGAGGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>183_GC_dG_55-110_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACCGAGGGTGCAAGAGTTAAGCGGAATTGCT
GGCCGTAAAGCGCACACAGGCGCTTTGTCAAGTTAGATGCGAAATCCCCAGGTTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGATACTGGCAAGCTTAACTCTCGTAGAGGGGGTTACAATTCCAGGTGGAGCGCTGAAATGCGTAGAC
ATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGACCCCCTGGACGAAGACTCCCGCTTAGGTTCGCAAGCGGGGG
GAGCAAACAGAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTTG
TGCTAACAAGCCGCGGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>184_GC_dG_60-80_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGGGCAAGCGTTGATCGGAATTACC
CGGCGTGAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACGTGGGAACTGCA
TGTGATACTGGCACGCTTGAGTCTCGCAGAGGGGGGGAGAATTGCAGGGGTAGCGGTGAAAGGCGTAGAG
ATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAGGGCGGCCCCCTGGAGGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGC
GAGCAAACACGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAA
TTTGTCCAGTCACGCATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>185_GC_dG_60-90_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATGACT
GGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGCTGTGTTAAGTCAGATGTGGAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGATACTGGCAAGGTTGAGTCTGGTGGAGGGGGGGAGAATCCCAGGTGTGGCGGTGAAATGCGGAGAG
AGCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGGAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAGG
GAAGATAGGAGGCTCCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>186_GC_dG_60-100_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGGGTGCAAGCGGTAATCGGAATTACT
GGGCGTAAACCGCACGCAGGCGGTCTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCGGGGAACTGCA
TCTGATACTGGCAAGCTTGAGCCTCGTAGAGGGGGGTAGAAGTCCGGGTGTAGCGGTGAACTGCGTAGAC
ATCTGGAGGAATACCGGGGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGGGCAGGTGCGACAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAT
TGTACGGTACAGGTTCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>187_GC_dG_60-110_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTCCGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACT
GCGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTCTTAAGTCAGCTGTGAAATCCCCGGGCTCACCCCGGGAACTGCA
TCTGATACTCGCAACCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGCCAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAG
ATCCGGAGGAATACCGGGGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGCGGG
GAGCAAACCGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAG
AAGGCACCTGAAGCTCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>188_GC_dG_60-120_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTCCGGAGCGTGCAAGCGTCAATCCGCATTAGT
GGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGGTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCGGGGCTCAACCTGGGAACTGCA
TCTGAGACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTACAGGGGGGTAGAATTCCAGGTCTGGCGCTGAAATGCGTAGAG
ATCTGGAGGCAGACCGGTCGCGAAGGCGGCCCCCTGCACGACGAGTGACCCTCAGGCGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGC
CGACGTTCGACCCGTTAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>189_GC_dG_65-90_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGCAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACT
GGGCGGAAGGCGCACGCACGCGGCCTGTCAAGTGAGATGTGACATCCCCGGGCTCAACCTCGGAACTGCG
TCTGATACTGGCACGCTTGCGTCGCGTACAGGGGGCGAGAATTCCAGGGGGAGGGGTGAAATGCGTGGCG
ATCCGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCGGGACGAAGACGGCCGCTCAGGGGCCAAAGCGTGGG
GGGCAGACACGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAA
ATGATCCGCCTGGTCAGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>190_GC_dG_65-100_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGGGGGTGCAAGCGTGGATCGGAATTGCT
GGGCGTCAAGGGCACGCAGGCGGTTTGTGAAGTCAGACGCGAGAGCCCCGGGCTCCACCGGGGAACTGCA
TCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGACGGGGGCAGAATCCCGGGTGTGGCGGGGAAATGCGTAGAG
ATCTGGAGGGATCCCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGGAGACTGACGCTCAGGTGCGGAAGCGGGGG
GACCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGCA
GCTCCGCACTAAGCGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>191_GC_dG_65-110_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGCAGGGTGCCAGCGTTAATCGGAATTACT
GGGCGTGAAGCGCACGCGGGCGGTTTGTTAAGTCAGACGTGAAATCCCCGCGCTCAACCTGGGAGCCGCA
CCTGAGAGTGGCGAGCTTGGGTGTCGTAGAGGGGGGTAGACTTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGCG
CTCTGGCGGGATACCGCTGGCGAAGGCGGCCCCCCGGGCGAAGCCTGCCGCTCAGGGGCGAAAGCGTGGG
GAGCACACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAC
TTGGGTCCTAGGGACCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>192_GC_dG_65-120_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGAGCGTGCAAGCGCTAACCGGAATTACT
GCGCGTCAAGCGGACGCAGGCGGTTCGTTAAGTCAGGTGTGAGATCCCCGGGGTCAACCGGGGACCTGCA
TCTGACACCGGCACGCTTGAGTCCCGTAGGGGCGGGTAGAATCCCCGGTGTAGCGGTGCGAGCCGTAGCG
ATCCGGAGGAATACCGGTGGCGACGGCCGCCCCCTGGACGAAGGCTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGG
ATTTACGATAGTAGGACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>193_GC_dG_65-130_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACCGCCGGTGCACGCGTTAATCGGAATTACT
GGGGGTACAGCGCGCGCGGGCGGTTTGTTAGCTCCGGTGTGAAGTCCCGGGGCTCAACCTGGGAACTCCA
GCGGACACTGGCAAGCCTGAGTCTCGTCCCGGGGGGGAGAGTTCCAGCTGTAGCGGTGACGTCCCTGGAG
ATCTCGGGGAATACGGGTGGCCAAGGCCGCCCCCTCGAGGAGGAGTCACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTTA
TCACTGTAGACGGGAATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>194_GC_dG_70-100_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTGCGGGGGGTGGAAGCGGCGAGCGGACTGGCG
GGGCGCCAAGCGCGCGCCGGCGGCTTGCTAGGTCAGATGTGAGGTGCCCGGCCTCAACCTGGGAACTGCA
GGTGATACTGGGCAGCCGGAGTCGGGTAGACGGGGGTACAATGCCAGGTGTAGCGGGGCAACGGGTAGCG
ATGTGGGGGAATACCGGTGGCGAACGGGGCCCCCCGGACGAAGGCTGGCGCTCGGGTGCCACAGCGTGGG
GAGCAAACAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTAA
GTTCTTATGCAGCTATTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>195_GC_dG_70-110_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTGCGGAGGGTGCACGGGGTAACGGGAATGCCT
GGGCGCCCAGCCGACGGAGCCGGTTCGGTAAGTCAGAGGTGAACGCGCCGGGCTCAACCCGCGAACTGCC
GCTGATACCGGGGCGCTTCCGTCTCGTAGAGGGGGGTCGAATTCCAGGTGTGGCGCTGAAGTCCCGAGAG
CTCTGGAGGAAGCGCGGTGGCGAGGGCGCCCGCCCGGACCAAGACTGGCGGCCAGGTGCGAAAGCGCGGG
GAGCGAACGGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTGA
CAGAGAGACCTCCCTACagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>196_GC_dG_70-120_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGCACGGAGGGCGCAAGCGTTAATCGGAACCACT
GGCCCTAAAGCGGCCCCAGGCGGGTCGTGAGGTCAGATGTGAAACCGCCGGGGTCAACCGGGGGGGGGCG
GCTGACACTGGCGAGCCTGGGTCTCGTACACGGGGGCAGACCTCCAGGTGTCCCGCTGAGGCGCGTGGAG
ATCCGGAGGAGTACCGGTGGGGACGCCGGCCCCCTCGAGGCAGACTGACGCGCAGGTGCGAAAGCGCGGG
GAGCAAACGGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCCT
ACGTTAATGCGCAAATTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>197_GC_dG_70-130_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACGGCGGGTGCCAGCCTTAATCGGAATGCCC
GGGCGCACAGCGGACGCGGGCGGTTCGTTAAGCCGCAGGCGAGATCCCCGGGCCCAACCTCGGCACGGCG
TCTGACACTGGCGAGGTTGAGTCTCGGAGAGGGGGGTAGGATTCCAGGTCCACCGGTGGAACCCCTAGAG
CTCTGGGGGACTACCGGTGGCCCAGGCCGCGGCCTGGACGAACGCTGGCGCTCAGGTCCGCAAGCCTGCG
GCGCACACGGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAAC
CCATGTAAAGAGTTATCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>198_GC_dG_70-140_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGTACCGCGGGTGCAAGCGTTAATGCGGCTTACT
GGGCGTAAAGCGGACCCCGGCGGTTTGTGAGGTCACATGTGAAGCCCCCGCCCTCCGCCTGGGAACTGCG
TCTGATACTGGCGGGCTCGGGGCCCGTACAGGGGGGTAGAATCCCAGGTGGAGGGCGGAACCGGGTGCCG
AGCTGCAGGAAGGCCGGCGGCGAAGCCGGCCCCCCGGGCGGAGACTGACGCCCAGGGGCGCGACCGTGGG
GAGCAAGCAGGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCGT
GTGTATCTCTAGCCTTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>199_Size_213_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACC
AACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactc
tttccctacacgacgctcttccgatctGTTGTCTCTTAGGCCCTCAGagatcggaagagcacacgtctga
actccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>200_Size_243_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAa
atgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACGCAATGTTTCG
ATGAGCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtctt
ctgcttgTTGTCGACTC
>201_Size_273_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATT
GTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctaca
cgacgctcttccgatctCACCTTTGGAGAATGTCACCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtca
cAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>202_Size_303_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATGCATATCAA
TAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggc
gaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctAGGACCCGACAAGCACACGTaga
tcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTG
TCGACTC
>203_Size_333_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAA
CAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctctt
ccgatctTTTAGCGGTGCGAGTGATCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCT
CGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>204_Size_363_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGCATATCAATAAGCGGAGG
AAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgag
atctacactctttccctacacgacgctcttccgatctTCTCGCAATCGACATGACCGagatcggaagagc
acacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>205_Size_403_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGCCTTAGTAACGGCGAGTGA
AGCGGCAAAAGCTCAAATTTGGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAA
CAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctctt
ccgatctAGTGACAGTGTTGAGAGGATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCT
CGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>206_Size_433_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGCCTTAGTAACGGCGAGTGA
AGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAGCATATCAATAAGCGGAGG
AAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgag
atctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCCAAAGCACGTACGGGAAGTagatcggaagagc
acacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>207_Size_463_ITS2
CGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTC
CGTGAATCATCGAATCGCCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCATGCCTGTTTGAG
CGTCATTTCCTTCTCAAACATTCTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTTTGGAGTTAACTTGAAATTGCTGG
CCTTTTCATTGGATGTTTTTTTTCCAAAGAGAGGTTTCTCTGCGTGCTTGAGGTATAATGCAAGTACGGT
CGTTTTAGGTTTTACCAACTGCGGCTAATCTTTTTTTATACTGAGCGTATTGGAACGTTATCGATAAGAA
GAGAGCGTCTAGGCGAACAATGTTCTTAAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGCCTTAGTAACGGCGAGTGA
AGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGGAGAGGGCAACTTT
GGGGCCGTTCCGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGTAGGGATAACAGGGTAATG
AGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTA
CCCGAGGTTCCATACTCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgt
atgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
合成標準配列- 全長16S rRNA 遺伝子試験 (ヒト腸細菌を選択する)
小文字でのイルミナアダプター
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GCAGCATTTTAGTTTGCTTGCAAACTGAAGATGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACACGTATCCAACCT
GCCGATAACTCCGGAATAGCCTTTCGAAAGAAAGATTAATACCGGATAGCATACGAATATCGCATGATAT
TTTTATTAAAGAATTTCGGTTATCGATGGGGATGCGTTCCATTAGTTTGTTGGCGGGGTAACGGCCCACC
AAGACTACGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGAACTGAGACACGGTCCAAACTCC
TACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTACAATAGTGGGCGAGAGCCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGAA
GGATGAAGGCTCTATGGGTCGTAAACTTCTTTTATATGGGAATAAAGTTTTCCACGTGTGGAATTTTGTA
TGTACCATATGAATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTA
TCCGGATTTATTGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGGTGGATTGTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTC
AACCGTAAAATTGCAGTTGAAACTGGCAGTCTTGAGTACAGTAGAGGTGGGCGGAATTCGTGGTGTAGCG
GTGAAATGCTTAGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCTCACTAGACTGTTACTGACACTGAT
GCTCGAAAGTGTAGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACAGTAAACGATGAATACTCGC
TGTTTGCGATATACAGTAAGCGGCCAAGCGAAAGCATTAAGTATTCCACCTGGCATGGTACGCCGGCAAC
GGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGC
GAGGAACCTTACCCGGGCTTAAATTGCAACAGAATATATTGGAAACAGTATAGCCGTAAGGCTGTTGTGA
AGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAGTGCCATAACGAGCGCAACCCT
TATCTTTAGTTACTAACAGGTTATGCTGAGGACTCTAGAGAGACTGCCGTCGTAAGATGTGAGGAAGGTG
GGGATGACGTCAAATCAGCACGGCCCTTACGTCCGGGGCTACACACGTGTTACAATGGGGGGTACAGAAG
GCAGCTACACGGCGACGTGATGCTAATCCCAAAAACCTCTCTCAGTTCGGATCGAAGTCTGCAACCCGAC
TTCGTGAAGCTGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTA
CACACCGCCCGTCAAGCCATGAAAGCCGGGGGTACCTGAAGTACGTAACCGCAAGGAGCGTCCTAGGGTA
AAACTGGTAATTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAACACCTCCTTTC
TTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctaca
cgacgctcttccgatctCTCAGCCAATGAGAAGGAGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtca
cAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>209_Pdi_Full_TAG_TCT_CAT
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AGCGGGGTGTAGCAATACACCGCCGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTATGCAACTTGCCTATCA
GAGGGGGATAACCCGGCGAAAGTCGGACTAATACCGCATGAAGCAGGGATCCCGCATGGGAATATTTGCT
AAAGATTCATCGCTGATAGATAGGCATGCGTTCCATTAGGCAGTTGGCGGGGTAACGGCCCACCAAACCG
ACGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGTACTGAGACACGGACCAAACTCCTACGGG
AGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTACAATAGTGGGCGTAAGCCTGAACCAGCCAAGTCGCGTGAGGGATGA
AGGTTCTATGGATCGTAAACCTCTTTTATAAGGGAATAAAGTGCGGGACGTGTCCCGTTTTGTATGTACC
TTATGAATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGA
TTTATTGGGTTTAAATCTGGGTGCGTAGGCGGCCTTTTAAGTCAGCGGTGAAAGTCTGTGGCTCAACCAT
AGAATTGCCGTTGAAACTGGGGGGCTTGAGTATGTTTGAGGCAGGCGGAATGCGTGGTGTAGCGGTGAAA
TGCATAGATATCACGCAGAACCCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCCAAGCCATTACTGACGCTGATGCACGA
AAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCAGTAAACGATGATCACTAGCTGTTTG
CGATACACTGTAAGCGGCACAGCGAAAGCGTTAAGTGATCCACCTGGCATGGTACGCCGGCAACGGTGAA
ACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGCGAGGAA
CCTTACCCGGGTTTGAACGCATTCGGACCGAGGTGGAAACACCTTTTCTAGCAATAGCCGTTTGCGAGGT
GCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAGTGCCATAACGAGCGCAACCCTTGCC
ACTAGTTACTAACAGGTTAGGCTGAGGACTCTGGTGGGACTGCCAGCGTAAGCTGCGAGGAAGGCGGGGA
TGACGTCAAATCAGCACGGCCCTTACATCCGGGGCGACACACGTGTTACAATGGCGTGGACAAAGGGAGG
CCACCTGGCGACAGGGAGCGAATCCCCAAACCACGTCTCAGTTCGGATCGGAGTCTGCAACCCGACTCCG
TGAAGCTGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACA
CCGCCCGTCAAGCCATGGGAGCCGGGGGTACCTGAAGTCCGTAACCGCGAGGATCGGCCTAGGGTAAAAC
TGGTGACTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAACACCTCCTTTAGGGA
TAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgct
cttccgatctCCCACAAAGATCGCGCCGGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAG
TCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>210_Fpr_Full_TAG_TCT_CAT
GAGAGTTTGATTCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGCGCCTAACACATGCAAGTCGAACGAGCGAGAG
AGGAGCTTGCTTTCTCAAGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACGCGTGAGGAACCTGCCTCAAAGAGGGGG
ACAACAGTTGGAAACGACTGCTAATACCGCATAAGCCCACGACCTGGCATCGGGTAGAGGGAAAAGGAGC
AATCCGCTTTGAGATGGCCTCGCGTCCGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATC
GGTAGCCGGACTGAGAGGTTGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAG
CAGTGGGGAATATTGCAACAATAGTGGGGGAAACCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGGAGGAAGAAGGTCT
TCGGATTGTAAACTCCTGTTGTTGAGGAAGATAATGACGGTACTCAACAAGGAAGTGACGGCTAACTACG
TGCCAGCAGCCGCGGTAAAACGTAGGTCACAAGCGTTGTCCGGAATTACTGGGTGTAAATCTGGGAGCGC
AGGCGGGAAGGCAAGTTGGAAGTGAAATCCATGGGCTCAACCCATGAACTGCTTTCAAAACTGTTTTTCT
TGAGTAGTGCAGAGGTAGGCGGAATTCCCGGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATCGGGAGGAACACCAG
TGGCGAAGGCGGCCTACTGGGCACCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTGTGGGTAGCAAACAGGATTAGA
TACCCTGGTAGTCCACACTGTAAACGATGATTACTAGGTGTTGGAGGATTGACCCCTTCAGTGCCGCAGT
TAACACAATAAGTAATCCACCTGGCATGGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC
CGCACAAGCAGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGTCTTGACATCCTG
CGACGCGCATAGAAATATGTGTTTCTTCGGGACCAGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGT
CGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGGTCAGTTACTACGCAAGAGGACTCTG
GCCAGACTGCCGTTGACAAAACGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCTTTATGACTTGG
GCTACACACGTACTACAATGGCGTTAAACAAAGAGAAGCAAGACCGCGAGGCGAGCAAAACTCAGAAACT
TCGTCCCAGTTCGGACTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCACGAAGTCGGAATTGCTAGTAATCGCAGATCAG
CATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGCCGGGGGGACCCG
AAGTCGGTAGTCTAACCGCAAGGAGGACGCCGCCGAAGTAAAACTGGTGATTGGGGTGAAGTCGTAACAA
GGTAGCCGTAGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatga
tacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCAAGTCAATGAAAGCGC
ATGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgc
ttgTTGTCGACTC
>211_Rin_Full_TAG_TCT_CAT
TTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGAAGCACTTTTACAG
ATTTCTTCGGAATGAAGTTTTAGTGACTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGTAACCTGCCTCAC
ACAGGGGGATAACAGTTGGAAACGGCTGCTAATACCGCATAAGCGCACAGTACCGCATGGTACAGTGTGA
AAAACTCCGGTGGTGTGAGATGGACCCGCGTCTGATTAGCTAGTTGGCAGGGCAACGGCCTACCAAGGCG
ACGATCAGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGG
AGGCAGCAGTGGGGAATATTGCAACAATAGTGGGGGAAACCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGCGAAGA
AGTATTTCGGTATGTAAAGCTCTATCAGCAGGGAAGAAGAAATGACGGTACCTGACTAAGAAGCACCGGC
TAAATACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTATGGTGCAAGCGTTATCCGGATTTACTGGGTGTAAATCT
GGGAGCGCAGGCGGAAGGCTAAGTCTGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCCCGGTACTGCATTGGAAACT
GGTCATCTAGAGTGTCGGAGGGGTAAGTGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATTAGGAGG
AACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGACGATAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACA
GGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTCGGAAAGCACAGCTTTTCGGT
GCCGCCGCAAACGCATTAAGTATTCCACCTGGCATGGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCAAAGGAATTGA
CGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGTCTTG
ACATCCTTCTGACCGGACAGTAATGTGTCCTTTCCTTCGGGACAGAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTC
GTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCCCAGTAGCCAGCG
GTTCGGACGGGCACTCTGAGGAGACTGCCAGGGATAACCTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATC
ATGCCCCTTATGACTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTAAACAAAGGGAAGCGAGACCGTGAGGTG
GAGCAAATCCCAAAAATAACGTCTCAGTTCGGACTGTAGTCTGCAACCCGACTACACGAAGCTGGAATCG
CTAGTAATCGCAGATCAGAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCA
TGGGAGTTGGAAATGCCCGAAGTCAGTGACCCAACCGCAAGGAGGGAGCTGCGAAGGCAGGTTAGGGATA
ACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctct
tccgatctGTTAGGGAGCTAGTTTAGGCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTC
TCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>212_Bbi_Full_TAG_TCT_CAT
TTTTTGTGGAGGGTTCGATTCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACG
GGATCCATCAAGCTTGCTTGGTGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCGACCTGCCCCATG
CTCCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATGCCGGATGTTCCACATGATCGCATGTGATTGTGGGAAA
GATTCTATCGGCGTGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCTTC
GACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAG
GCAGCAGTGGGGAATATTGCAACAATAGTGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGGAG
GCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTGTTTGGGAGCAAGCCTTCGGGTGAGTGTACCTTTCGAATAAGCGCC
GGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAA
TCTGGGCTCGTAGGCGGCTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCTTAACGGTGGATCTGCGCCGGGT
ACGGGCGGGCTGGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGG
AAGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTCACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGA
ACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGACGCTGGATGTGGGGCACGTTCCACGTGT
TCCGTGTCGGAGCTAACGCGTTAAGCGTCCCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAA
ATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGG
GCTTGACATGTTCCCGACGACGCCAGAGATGGCGTTTCCCTTCGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGT
CGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCCGTGTTGCC
AGCACGTTATGGTGGGAACTCACGGGGGACCGCCGGGGTTAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGA
TCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAGCGGGATGCGACATGGCG
ACATGGAGCGGATCCCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGGAGCCTGCAACCCGGCTCCGTGAAGGCGG
AGTCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAACGCCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTC
AAGTCATGAAAGTGGGCAGCACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCCTTGTGGGATGGAGCCGTCTAAGGTGA
GGCTCGTGATTGGGACTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCT
ACGGAGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttcc
ctacacgacgctcttccgatctGAGCACGGGAATTACTCCGAagatcggaagagcacacgtctgaactcc
agtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>213_Hpa_Full_TAG_TCT_CAT
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CTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGCTTGGGTATCTGGCTTATGGAGGGGGATAACTACGGGAAACT
GTAGCTAATACCGCGTAGTATCGGAAGATGAAAGTGTGGGACCGCAAGGCCACATGCCATAGGATGAGCC
CAAGTGGGATTAGGTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGCCGACGATCTCTAGCTGGTCTGAGAGGAT
GACCAGCCACACCGGGACTGAGACACGGCCCGGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGACA
ATAGTGGGGGCAACCCTGACGCAGCCATGCCGCGTGAATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTTCTTTC
GGTAGCGAGGAAGGCATTTAGTTTAATAGACTAGATGATTGACGTTAACTACAGAAGAAGCACCGGCTAA
CTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATAACTGGGCGTAAATCTGGG
CACGCAGGCGGACTTTTAAGTGAGGTGTGAAAGCCCCGGGCTTAACCTGGGAATTGCATTTCAGACTGGG
AGTCTAGAGTACTTTAGGGAGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAAT
ACCGAAGGCGAAGGCAGCCCCTTGGGAATGTACTGACGCTCATGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGA
TTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGCTGTCGATTTGGGGATTGGGCTTAATGCTTGGTGCCCGT
AGCTAACGTGATAAATCGACCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGG
GCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATC
CAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAG
CTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGATTTG
GTCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGC
CCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTATACAGAGGGAGGCGAAGCAGCGATGTGGAGCG
AATCCCAGAAAGTGCGTCTAAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGT
AATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGA
GTGGGTTGTACCAGAAGTAGATAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGTTTACCACGGTATGATTCATGACTGGG
GTGATAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccct
acacgacgctcttccgatctGAGCCATAAACCAGCTCGGAagatcggaagagcacacgtctgaactccag
tcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>214_Ssa_Full_TAG_TCT_CAT
TGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGAAGAGAGGAGCT
TGCTCTTCTTGGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTGGTAGCGGGGGATAACT
ATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAAATTGATTATTGCATGATAATTAATTGAAAGATGCAATTGCA
TCACTACCAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATACAT
AGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAG
TAGGGAATCTTCGGACAATAGTGGGGGGAACCCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCG
GATCGTAAAGCTCTGTTGTAAGAGAAGAACGGGTGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTGACGGTATCTTA
CCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTT
ATTGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTAGATAAGTCTGAAGTTAAAGGCTGTGGCTTAACCATAGT
ATGCTTTGGAAACTGTTTAACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCG
TAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGC
GTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGCCC
TTTCCGGGGCTTAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGTACGACCGCAAGGTTGAA
ACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAA
CCTTACCAGGTCTTGACATCCCTCTGACCGCTCTAGAGATAGAGTTTTCCTTCGGGACAGAGGTGACAGG
TGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTAT
TGTTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGAT
GACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCTGGTACAACGAGTCGC
AAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTGAAAGCCAGTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACA
TGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACAC
CGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCGTAAGGAGCCAGCCGCCTTA
GGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacga
cgctcttccgatctTTGGCCGGAGTACAGTATCAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAA
TCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>215_Vpa_Full_TAG_TCT_CAT
GCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGAAGAGCGATGGAAGCTTGCTTCTATCAATCTTAGTG
GCGAACGGGTGAGTAACGCGTAATCAACCTGCCCTTCAGAGGGGGACAACAGTTGGAAACGACTGCTAAT
ACCGCATACGATCTAACCTCGGCATCGAGGAAAGATGAAAGGTGGCCTCTATTTATAAGCTATCACTGAA
GGAGGGGATTGCGTCTGATTAGCTAGTTGGAGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGATGATCAGTAGCCGGTC
TGAGAGGATGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAAT
CTTCCGACAATAGTGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGACGGCCTTCGGGTTGTAA
AGCTCTGTTAATCGGGACGAAAGGCCTTCTTGCGAACAGTTAGAAGGATTGACGGTACCGGAATAGAAAG
CCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCG
TAAATCTGCGCGCGCAGGCGGATCAGTCAGTCTGTCTTAAAAGTTCGGGGCTTAACCCCGTGATGGGATG
GAAACTGCTGATCTAGAGTATCGGAGAGGAAAGTGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATT
AGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGACGAAAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCCAGGGGAG
CGAACGGGATTAGATACCCCGGTAGTCCTGGCCGTAAACGATGGGTACTAGGTGTAGGAGGTATCGACCC
CTTCTGTGCCGGAGTTAACGCAATAAGTACCCCGCCTGGCATGGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAG
GAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCA
GGTCTTGACATTGATGGACAGAACCAGAGATGGTTCCTCTTCTTCGGAAGCCAGAAAACAGGTGGTGCAC
GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCTTATGTT
GCCAGCACTTTGGGTGGGAACTCATGAGAGACTGCCGCAGACAATGCGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCA
AATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTACTACAATGGGAGTTAATAGACGGAAGCGAGATC
GCGAGATGGAGCAAACCCGAGAAACACTCTCTCAGTTCGGATCGTAGGCTGCAACTCGCCTACGTGAAGT
CGGAATCGCTAGTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCG
TCACACCACGAAAGTCGGAAGTGCCCAAAGCCGGTGGGGTAACCTTCGGGAGCCAGCCGTCTAAGGTAAA
GTCGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgata
cggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTCCCGCTATTCGGCTTGT
CagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgctt
gTTGTCGACTC
>216_Ele_Full_TAG_TCT_CAT
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAACACATGCAAGTCGAACGATGAAACCG
CCCTCGGGCGGACATGAAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGACCAACCTGCCCCTTGCTCCGGGACAA
CCTTGGGAAACCGAGGCTAATACCGGATACTCCTCGCCCCCCTCCTGGGGGGCCCGGGAAAGCCCAGACG
GCAAGGGATGGGGTCGCGGCCCATTAGGTAGTAGGCGGGGTAACGGCCCACCTAGCCCGCGATGGGTAGC
CGGGTTGAGAGACCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGG
GGAATTTTGCGACAATAGTGGGGGAAACCCTGACGCAGCAACGCCGCGTGCGGGACGACGGCCTTCGGGT
TGTAAACCGCTTTCAGCAGGGAAGAAATTCGACGGTACCTGCAGAAGAAGCTCCGGCTAACTACGTGCCA
GCAGCCGCGGTAATACGTAGGGAGCGAGCGTTATCCGGATTCATTGGGCGTAAATCTGAGCGCGTAGGCG
GCCTCTCAAGCGGGATCTCTAATCCGAGGGCTCAACCCCCGGCCGGATCCCGAACTGGGAGGCTCGAGTT
CGGTAGAGGCAGGCGGAATTCCCGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCGGGAAGAACACCGATGGCGA
AGGCAGCCTGCTGGGCCGCAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCTAGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCT
GGTAGTCCTAGCCGTAAACGATGGATACTAGGTGTGGGGCTCCGCCCTCCGTGCCGCAGCCAACGCATTA
AGTATCCCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCA
GCGGAGCATGTGGCTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGGCTTGACATGGACGTGAAGCCGG
GGAAACCCGGTGGCCGAGAGGAGCGTCCGCAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGT
TGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTGCCCCATGTTGCCAGCATTAGGTTGGGGACTCATGGGGG
ACTGCCGGCGTCAAGCCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCTTTATGCCCTGGGCTGC
ACACGTGCTACAATGGCCGGTACAACGGGCTGCGAGACCGCGAGGTCGAGCGAATCCCTCAAAGCCGGCC
CCAGTTCGGATCGGAGGCTGCAACCCGCCTCCGTGAAGTCGGAGTTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGC
CGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACCCGAGTCGTATGCACCCGAAGC
CGCCGGCCGAACCCGCAAGGGGCGGAGGCGTCGAAGGTGTGGAGGGTAAGGGGGGTGAAGTCGTAACAAG
GTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatg
atacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctCTTCGTGTTGGTGCCG
GTCTagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctg
cttgTTGTCGACTC
>217_Dde_Full_TAG_TCT_CAT
TGAACTGGAGAGTTTGATTCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGC
GAAAGGGACTTCGGTCCTGAGTAAAGTGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTGGATAATCTGCCCTTATGATC
GGGATAACAGTTGGAAACGGCTGCTAATACCGGATACGCTCAAAATGAACTTTTTGAGGAAAGATGGCCT
CTGCTTGCATGCTATCACGTAAGGATGAGTCCGCGTCCCATTAGCTTGTTGGCGGGGTAACGGCCCACCA
AGGCATCGATGGGTAGCCGATTTGAGAGGATGATCGGCCACACTGGAACTGAAACACGGTCCAGACTCCT
ACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGACAATAGTGGGCGAAAGCCTGACGCAGCGACGCCGCGTGAGG
GATGAAGGTTTTCGGATCGTAAACCTCTGTCAGAAGGGAAGAAACTACGTTGTGCTAATCAGCAGCGTAC
TGACGGTACCTTCAAAGGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGC
GTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAATCTGCGCACGTAGGCTGTAGTGTAAGTCAGGGGTGAAATCCCACG
GCTCAACCGTGGAACTGCCTTTGATACTGCACAACTTGAATCCGGGAGAGGGTGGCGGAATTCCAGGTGT
AGGAGTGAAATCCGTAGATATCTGGAGGAACATCAGTGGCGAAGGCGGCCACCTGGACCGGTATTGACGC
TGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGGATGC
TAGATGTCGGGGAGTATTCTTCGGTGTCGTAGTTAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGCATGGTACGGTCG
CAAGGCTGAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGATGCA
ACGCGAAGAACCTTACCTAGGTTTGACATCCACGGAACCCTCCCGAAAAGGAGGGGTGCCCTTCGGGGAG
CCGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG
CGCAACCCCTATGGATAGTTGCCAGCAAGTAATGTTGGGCACTCTATTCAGACTGCCCGGGTTAACCGGG
AGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGCCTAGGGCTACACACGTACTACAATGGCGC
GCACAAAGGGGAGCGAGACCGCGAGGTGGAGCCAATCCCAAAAAACGCGTCCCAGTCCGGATTGCAGTCT
GCAACTCGACTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATTCGAGATCAGCATGCTCGGGTGAATGCGTTCCCG
GGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAAAGTCGGTTTTACCCGAAGCCGGTGAGCCAACCAGCAAT
GGAGGCAGCCGTCTACGGTAGGGCCGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTG
CGGCTGGATCACCTCCTTTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatc
tacactctttccctacacgacgctcttccgatctGTCCGATCAGTCGCGTGCACagatcggaagagcaca
cgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>218_Apa_Full_TAG_TCT_CAT
ATGGAGAGTTCGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGCGCCTAACACATGCAAGTCGAACGATTAA
AGCACCTTCGGGTGTGTATAAAGTGGCGAACGGCTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCCCTTTCATTGGG
ATAGCCACGGGAAACCGTGGATAATACCGAATACTTCGAGACTTCCGCATGGAAGACTCGAGAAAGCTCC
GGCGGAGAGGGATGGGCCCGCGGCCTGTTAGCTTGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGCAATGATGGG
TAGCTGGGTTGAGAGACCGACCAGCCAGATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCA
GTGGGGAATCTTGCAACAATAGTGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGCGGGATGAAGGCCTTC
GGGTTGTAAACCGCTTTCAGCAGGGACGAGGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCCCCGGCTAACT
ACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTATCCGGATTCATTGGGCGTAAATCTGCGCT
CGTAGGCGGTCTGTTAGGTCGGGAGTTAAATCCGGGGGCTCAACCCCCGCTCGCTCTCGATACCGGCAGA
CTTGAGTTTGGTAGGGGAAGGTGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATTAGGAAGAACACC
AGTGGCGAAGGCGGCCTTCTGGGCCATAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCTAGGGGAGCAAACAGGATTA
GATACCCTGGTAGTCCTAGCCGTAAACGATGGACACTAGGTGTGGGGGAGTATTTCTTCCGTGCCGCAGC
TAACGCATTAAGTGTCCCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC
CGCACAAGCAGCGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGGCTTGACATTTAG
GTGAAGCGGCGGAAACGTCGTGGCCGAAAGGAGCCTAAACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGT
CGTGAGATGTTAGGTTAAGTCCTGCAACGAGCGCAACCCTCGTCGTATGTTGCCAGCGGTTAGGCCGGGC
ACCCATACGAGACCGCCGGCGTCAAGCCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATG
TCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCCGGCACAATGGGCTGCCAACCCGCGAGGGTGAGCGAATCCCT
AAAGCCGGTCCCAGTTCGGATTGGAGGCTGCAACCCGCCTCCATGAAGTCGGAGTTGCTAGTAATCGCGG
ATCAGCACGCCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACCCGAGTCGATTG
CACCCGAAGTCGTCGGCCTAACCTTTTAGGAGGGAGACGCCGAAGGTGTGGTTGGTAAGGGGGGTGAAGT
CGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTAGGGAGTAGGGATAACAGGGT
AATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatc
tACACGTCAAGCAGCAGTGGAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatc
tcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
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TGCTTGCACTGGTCAATCTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCATCAGAGGGGGAT
AACATCCGGAAACGGATGCTAAAACCGCATAGGTCTTCGAGCCGCATGGCTTGAAGAGGAAAAGAGGCGC
AAGCTTCTGCTGATGGATGGACCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCGTG
ATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGG
CAGCAGTAGGGAATCTTCCGACAATAGTGGACGCAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGG
TTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGTGCTAGAGTAACTGTTAGCGCCTTGACGGTA
TCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCG
GATTTATTGGGCGTAAATCTGCGAGCGCAGGCGGTTCCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACC
GGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGA
AATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTC
GAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTT
GGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGTTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGCATGGTACGACCGCAAG
GTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGC
GAAGAACCTTACCAAGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTTCCCTTCGGGGACAAAGT
GACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAAC
CCTTATTACTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGT
GGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACG
AGCAGCGAACTCGCGAGGGTAAGCGAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCG
CCTACATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGT
ACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGAGGTAACCATTTGGAGCCAGCC
GCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATAGGGATAACAGGGTAATGA
GTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctATCC
TTGCGCAGGTCACCTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgta
tgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>220_Aca_Full_TAG_TCT_CAT
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AGGATTGAAGTTTTCGGATGGATTTCCTATATGACTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGGAACC
TGCCCTATACAGGGGGATAACAGCTGGAAACGGCTGCTAATACCGCATAAGCGCACAGAATCGCATGATT
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CCAAGGCGACGATCAGTAGCCGGCTTGAGAGAGTGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACT
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AGTGAAGAAGTATTTCGGTATGTAAAGCTCTATCAGCAGGGAAGAAAACAGACGGTACCTGACTAAGAAG
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TAAATCTGGGTGCGTAGGTGGCATGGTAAGTCAGAAGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGACTGCTTT
TGAAACTGTCATGCTGGAGTGCAGGAGAGGTAAGCGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATAT
TAGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGACTGTCACTGACACTGATGCACGAAAGCGTGGGGA
GCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTCGGGGCCGTAGAGG
CTTCGGTGCCGCAGCAAACGCAGTAAGTATTCCACCTGGCATGGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCAAAG
GAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCT
GGTCTTGACATCCCAATGACCGAACCTTAACCGGTTTTTTCTTTCGAGACATTGGAGACAGGTGGTGCAT
GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCTTTAGTA
GCCAGCATTTGAGGTGGGCACTCTAGAGAGACTGCCAGGGATAACCTGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCA
AATCATCATGCCCCTTATGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTAAACAAAGGGAAGCGAAGTCG
TGAGGCGAAGCAAATCCCAGAAATAACGTCTCAGTTCGGATTGTAGTCTGCAACTCGACTACATGAAGCT
GGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGT
CACACCATGGGAGTCAGTAACGCCCGAAGTCAGTGACCCAACCGCAAGGAGGGAGCTGCCGAAGGTGGGA
CCGATAACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAa
atgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGGCACCTAGAATA
GCCGTTGagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtctt
ctgcttgTTGTCGACTC
>221_Rmu_Full_TAG_TCT_CAT
AGAGTTTGATCATGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAAGCCT
AGCTTGCTAGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACGTGAGTAACCTACCTTTAACTCTGGGATAA
GCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATACGACCAATCTCCGCATGGGGTGTTGGTGGAAAGCGTTATGT
AGTGGTTATAGATGGGCTCACGGCCTATCAGCTCGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGACGGG
TAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCA
GTGGGGAATATTGCAACAATAGTGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTC
GGGTTGTAAACCTCTGTTAGCAGGGAAGAAGAGAGATTGACGGTACCTGCAGAGAAAGCGCCGGCTAACT
ACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAATCTGAGCT
TGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGCTGTGAAAGGCCGGGGCTTAACTCCGTGTATTGCAGTGGGTACGGGCA
GACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACA
CCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGAAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGAT
TAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGGACATTCCACGTTTTCCGCGC
CGTAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACG
GGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGAC
ATATACTGGACCGCATCAGAGATGGTGTTTCCCTTCGGGGCTGGTATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTC
AGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCTATGTTGCCAGCACGT
TATGGTGGGGACTCATAGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCAT
GCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAGAGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGA
GCTAATCCCTAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCT
AGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCAC
GAAAGTTGGTAACACCCAAAGCCGGTGGCCTAACCCTTTTGGGAGGGAGCCGTCTAAGGTGGGATTGGCG
ATTGGGACTAAGTCGTAACAAGGTAGCCTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgac
caccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctACACCTATTAGAGGTCAGACagatcg
gaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCG
ACTC
>222_Kpn_Full_TAG_TCT_CAT
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GCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTA
ATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACCTTCGGGCCTCATGCCATCAGATGTGCCCAGATGG
GATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGC
CACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCAACAATAGTGG
GCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGCGGGG
AGGAAGGCGATAAGGTTAATAACCTTGTCGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTG
CCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAATCTGCGCACGCAG
GCGGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCGAAACTGGCAGGCTAG
AGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTG
GCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATA
CCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGATTTGGAGGTTGTGCCCTTGAGGCGTGGCTTCCGGAGCTA
ACGCGTTAAATCGACCGCCTGGCATGGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCG
CACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATCCACAG
AACTTAGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGGAACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGT
GTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGGTTAGGCCGG
GAACTCAAAGGAGACTGCCAGTGATAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTA
CGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCATATACAAAGAGAAGCGACCTCGCGAGAGCAAGCGGACCT
CATAAAGTATGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCG
TAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGG
TTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTCATGATAGGGATAAC
AGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttc
cgatctTTTGTATGCACCTTGTAAATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTC
GTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>223_Pco_Full_TAG_TCT_CAT
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AAACGACATCGAAAGCTTGCTTTTGATGGGCGTCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTATCCAACCTG
CCCACCACTTGGGGATAACCTTGCGAAAGTAAGACTAATACCCAATGATATCTCTAGAAGACATCTGAAA
GAGATTAAAGATTTATCGGTGATGGATGGGGATGCGTCTGATTAGCTTGTTGGCGGGGTAACGGCCCACC
AAGGCGACGATCAGTAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGAACTGAGACACGGTCCAAACTCC
TACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTACAATAGTGGGCGAGAGCCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGCA
GGATGACGGCCCTATGGGTTGTAAACTGCTTTTATAAGGGAATAAAGTTAGTCTCGTGAGACTTTTTGCA
TGTACCTTATGAATAAGGACCGGCTAATTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAAGGTCCGGGCGTTA
TCCGGATTTATTGGGTTTAAATCTGGGAGCGTAGGCCGGAGATTAAGCGTGTTGTGAAATGTAGGCGCTC
AACGTCTGCACTGCAGCGCGAACTGGTTTCCTTGAGTACGCACAAAGTGGGTGGAATTCGTGGTGTAGCG
GTGAAATGCTTAGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCTCACTGGAGCGCAACTGACGCTGAA
GCTCGAAAGTGCGGGTATCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCGCACGGTAAACGATGGATGCCCGC
TGTTGGTCTGAACAGGTCAGCGGCCAAGCGAAAGCATTAAGCATCCCACCTGGCATGGTACGCCGGCAAC
GGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGC
GAGGAACCTTACCCGGGCTTGAATTGCAGAGGAAGGATTTGGAGACAATGACGCCCTTCGGGGCCTCTGT
GAAGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAGTGCCATAACGAGCGCAACC
CCTCTCCTTAGTTGCCATCAGGTTATGCTGGGCACTCTGGGGACACTGCCACCGTAAGGTGTGAGGAAGG
TGGGGATGACGTCAAATCAGCACGGCCCTTACGTCCGGGGCTACACACGTGTTACAATGGCAGGTACAGA
GAGACGGTTGTACGTAAGTACGATCAAATCCTTAAAGCCTGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACCCG
ACCCCACGAAGCTGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTG
TACACACCGCCCGTCAAGCCATGAAAGCCGGGGGCGCCTAAAGTCCGTGACCGTAAGGAGCGGCCTAGGG
CGAAACTGGTAATTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAACACCTCCTT
TAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacac
gacgctcttccgatctGGAACGGGTGTTGCCCAGATagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac
AATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>224_Apu_Full_TAG_TCT_CAT
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ATGGATAGCAATATCTATGGTGGCGACCGGCGCACGGGTGCGTAACGCGTATGCAACCTACCTTTAACAG
GGGGATAACACTGAGAAATTGGTACTAATACCCCATAATATCATAGAAGGCATCTTTTATGGTTGAAAAT
TCCGATGGTTAGAGATGGGCATGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGAT
ACATAGGGGGACTGAGAGGTTAACCCCCCACACTGGTACTGAGACACGGACCAGACTCCTACGGGAGGCA
GCAGTGAGGAATATTGGTACAATAGTGGACGCAAGTCTGAACCAGCCATGCCGCGTGCAGGATGACGGCT
CTATGAGTTGTAAACTGCTTTTGTACGAGGGTAAACGCAGATACGTGTATCTGTCTGAAAGTATCGTACG
AATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATTCAAGCGTTATCCGGATTTAT
TGGGTTTAAATCTGGGTGCGTAGGCGGTTTGATAAGTTAGAGGTGAAATTTCGGGGCTCAACCCTGAACG
TGCCTCTAATACTGTTGAGCTAGAGAGTAGTTGCGGTAGGCGGAATGTATGGTGTAGCGGTGAAATGCTT
AGAGATCATACAGAACACCGATTGCGAAGGCAGCTTACCAAACTATATCTGACGTTGAGGCACGAAAGCG
TGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCAGTAAACGATGATAACTCGTTGTCGGCGATA
CACAGTCGGTGACTAAGCGAAAGCGATAAGTTATCCACCTGGCATGGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCA
AAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGCGAGGAACCTTA
CCCGGGCTTGAAAGTTAGCGACGATTCTTGAAAGAGGATTTCCCTTCGGGGCGCGAAACTAGGTGCTGCA
TGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGGTTAAGTCCCATAACGAGCGCAACCCCTACCGTTAGT
TGCCATCAGGTGAAGCTGGGCACTCTGGCGGGACTGCCGGTGTAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGT
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AGCGATGGGATGCGAATCTCGAAAGCCTATCTCAGTTCGGATTGGAGGCTGAAACCCGCCTCCATGAAGT
TGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCC
GTCAAGCCATGGGAGCCGGGGGTGCCTGAAGTTCGTGACCGCAAGGAGCGACCTAGGGCAAAACTGGTGA
CTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAACACCTCCTTTCTTAGGGATAA
CAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctctt
ccgatctCAGTGCTCGACCCGACACCCagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCT
CGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>225_Ere_Full_TAG_TCT_CAT
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GCCTTGTACAGGGGGATAACAGTTGGAAACGACTGCTAATACCGCATAAGCGCACAGTATCGCATGATGC
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CAAGGCGACGATCCATAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTC
CTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCAACAATAGTGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGA
GCGAAGAAGTATTTCGGTATGTAAAGCTCTATCAGCAGGGAAGATAATGACGGTACCTGACTAAGAAGCA
CCGGCTAAATACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTATGGTGCAAGCGTTATCCGGATTTACTGGGTGTA
AATCTGGGAGCGCAGGCGGTGCGGCAAGTCTGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCCCGGTACTGCATTGG
AAACTGTCGTACTAGAGTGTCGGAGGGGTAAGCGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATTA
GGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGACGATAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGC
AAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATACTAGGTGTTGGGAAGCATTGCTTC
TCGGTGCCGTCGCAAACGCAGTAAGTATTCCACCTGGCATGGTACGTTCGCAAGAATGAAACTCAAAGGA
ATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAG
TCTTGACATCCTTCTGACCGGTACTTAACCGTACCTTCTCTTCGGAGCAGGAGTGACAGGTGGTGCATGG
TTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCTTTAGTAGC
CAGCGGTTCGGCCGGGCACTCTAGAGAGACTGCCAGGGATAACCTGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAA
TCATCATGCCCCTTATGACTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGTAAACAAAGGGAAGCAAAGCTGTG
AAGCCGAGCAAATCTCAAAAATAACGTCTCAGTTCGGACTGTAGTCTGCAACCCGACTACACGAAGCTGG
AATCGCTAGTAATCGCAGATCAGAATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCA
CACCATGGGAGTTGGGAATGCCCGAACCAGTGACCTAACCGTAAGGAAGGAGCTGTCGAAGGCAGGCTCG
ATAACTGGGGTGAAGTCTAACAAGGTAACCTAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcg
accaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatctGAGTTTACCTGCGCCCAGTTagat
cggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGT
CGACTC
>226_Rbr_Full_TAG_TCT_CAT
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AATTTGATTTAGTTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGAGTAACCTGCCTTCAAGAGGGGGATAACA
TTCTGAAAAGAATGCTAATACCGCATGACATATCGGAACCACATGGTTTTGATATCAAAGATTTTATCGC
TTGAAGATGGACTCGCGTCCGATTAGTTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGACCGCGATCGGTAGCC
GGACTGAGAGGTTGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGG
GGATATTGCGACAATAGTGGGGGCAACCCTGACGCAGCAACGCCGCGTGAAGGATGAAGGTTTTCGGATT
GTAAACTTCTTTTATTAAGGACGAAACTTGACGGTACTTAATGAATAAGCTCCGGCTAACTACGTGCCAG
CAGCCGCGGTAATACGTAGGGAGCAAGCGTTGTCCGGATTTACTGGGTGTAAATCTGGGTGCGTAGGCGG
CTTTGCAAGTCAGATGTGAAATCTATGGGCTCAACCCATAAACTGCATTTGAAACTGTAGAGCTTGAGTG
AAGTAGAGGCAGGCGGAATTCCCCGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGGGGAGGAACACCAGTGGCGA
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AAGTAGAGATACATTAGGTGCCCTTCGGGGAAAGTTGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTG
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GGCTACACACGTACTACAATGGATGTTAACAGAGGGAAGCAAGACAGCGATGTGGAGCAAACCCCTAAAA
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GCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGCCGGTAATACC
CGAAGTCAGTAGTCCAACCTCGTGAGGACGCTGCCGAAGGTAGGATTGGCGACTGGGGTGTAGGGATAAC
AGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttc
cgatctAAGATGCATACGAGGAGCAAagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacAATCAGTCTC
GTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>227_Osp_Full_TAG_TCT_CAT
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATAACGCTAGCGACAGGCTTAACACATGCAAGTCGAGGGGCATCATGAG
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TAGCCCATGGAAACGTGGATTAACACCCCATAGTACTTTTATCCTGCATGGGATGTGAGTTAAATGTTCA
AGGTATCGGATGGGCATGCGTCCTATTAGTTAGTTGGCGGGGTAACAGCCCACCAAGACGATGATAGGTA
GGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGAACTGAGACACGGTCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGT
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GGTTGTAAACCTCTTTTATAAGGGAAGAATAAGTTCTACGTGTAGAATGATGCCTGTACCTTATGAATAA
GCATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATGCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGT
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ACGGGATTAAGCGAAAGTATTAAGTGAGCCACCTGGCATGGTACGTCGGCAACGATGAAACTCAAAGGAA
TTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGCGAGGAACCTTACCTGGG
TTTAAATGGGAAATGTCGTATTTGGAAACAGATATTCTCTTCGGAGCGTTTTTCAAGGTGCTGCATGGTT
GTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGGTTAAGTCCCATAACGAGCGCAACCCTTACCGTTAGTTGCTA
GCATGTAATGATGAGCACTCTAACGGGACTGCCACCGTAAGGTGAGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAAT
CAGCACGGCCCTTACACCCAGGGCTACACACGTGTTACAATGGCCGGTACAGAGGGCCGCTACCAGGTGA
CTGGATGCCAATCTCAAAAGCCGGTCGTAGTTCGGATTGGAGTCTGTAACCCGACTCCATGAAGTTGGAT
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GCCATGGAAGCCGGGGGTGCCTGAAGTCCGTAACCGCGAGGATCGGCCTAGGGCAAAACTGGTAACTGGG
GCTAAGTCGTAACATAGGGATAACAGGGTAATGAGTCGACAAaatgatacggcgaccaccgagatctaca
ctctttccctacacgacgctcttccgatctATCATGATACTGCCGTTTCGagatcggaagagcacacgtc
tgaactccagtcacAATCAGTCTCGTatctcgtatgccgtcttctgcttgTTGTCGACTC
>228_Amu_Full_TAG_TCT_CAT
AACGAACGCTGGCGGCGTGGATAAGACATGCAAGTCGAACGAGAGAATTGCTAGCTTGCTAATAATTCTC
TAGTGGCGCACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCCCGAGAGCGGGATAGCCCTGGGAAACTGGGA
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ACTGAGACACGGTCCAGACACCTACGGGTGGCAGCAGTCGAGAATCATTCAACAATAGTGGGGGAAACCC
TGATGGTGCGACGCCGCGTGGGGGAATGAAGGTCTTCGGATTGTAAACCCCTGTCATGTGGGAGCAAATT
AAAAAGATAGTACCACAAGAGGAAGAGACGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGTCTC
AAGCGTTGTTCGGAATCACTGGGCGTAAATCTGCGTGCGTAGGCTGTTTCGTAAGTCGTGTGTGAAAGGC
GCGGGCTCAACCCGCGGACGGCACATGATACTGCGAGACTAGAGTAATGGAGGGGGAACCGGAATTCTCG
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