特許 7039083 ＡＭＰＫ活性化剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-03-11

(45)【発行日】2022-03-22

(54)【発明の名称】ＡＭＰＫ活性化剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 33/243 20190101AFI20220314BHJP

   A61K 33/24 20190101ALI20220314BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220314BHJP

   A23L 33/10 20160101ALN20220314BHJP

   A61P 3/00 20060101ALN20220314BHJP

   A61K 9/10 20060101ALN20220314BHJP

   A61P 37/02 20060101ALN20220314BHJP

【ＦＩ】

A61K33/243

A61K33/24

A61P43/00 111

A61P43/00 105

A61P43/00 107

A61P43/00 121

A23L33/10

A61P3/00

A61K9/10

A61P37/02

【請求項の数】 1

(21)【出願番号】P 2021124108

(22)【出願日】2021-07-29

【審査請求日】2021-07-29

【早期審査対象出願】

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】397046397

【氏名又は名称】株式会社東洋厚生製薬所

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100126653

【弁理士】

【氏名又は名称】木元 克輔

(74)【代理人】

【識別番号】100165526

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 寛

(74)【代理人】

【識別番号】100215957

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 明照

(72)【発明者】

【氏名】輪嶋 将一

(72)【発明者】

【氏名】川上 智史

(72)【発明者】

【氏名】佐々木 亜由美

【審査官】六笠 紀子

(56)【参考文献】

【文献】特開２００１－０１０９５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２００４／０７３７２２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特許第６６３５３１９（ＪＰ，Ｂ１）

【文献】特許第６３４３８５１（ＪＰ，Ｂ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／３３－３３／４４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、ＡＭＰＫ活性化剤（但し、抗老化剤を除く）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、サーチュイン遺伝子活性化剤に関する。本発明は、より詳細には、ＡＭＰＫ活性化剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ＡＭＰＫ（ＡＭＰ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ）は、セリン／スレオニンキナーゼの一種であり、代謝酵素及び栄養トランスポーターをリン酸化する働き、ミトコンドリア新生及びミトコンドリア機能を促進する働き等を有する（非特許文献１）。ＡＭＰＫが活性化することにより、エネルギー代謝を調節し、エネルギーの恒常性を保つといわれており、２型糖尿病やがんを含む代謝疾患の潜在的な治療効果が期待できるものとして着目されている（非特許文献２）。人間は生きていく上でエネルギーの存在が不可欠となっているが、そのエネルギー源はＡＴＰ（アデノシン三リン酸）であり、ＡＴＰが加水分解され、ＡＤＰ（アデノシン二リン酸）に変化する際に発生する（非特許文献３）。ＡＭＰＫはこのＡＴＰレベルの調節を行うことで、恒常性を保ち、がんや２型糖尿病、肥満などの代謝疾患に対する効果が期待されている（非特許文献４～６）。さらに、ＡＭＰＫは、肺炎症を抑え、ＣＯＰＤ／肺気腫の治療標的となり得ることも期待されている（非特許文献７～９）。また、ＡＭＰＫが活性化されることにより、寿命延長作用を有するとされるサーチュイン遺伝子が活性化されることも知られている（非特許文献１０）。

【0003】

このような背景の下、ＡＭＰＫの活性化剤の開発が望まれている。例えば、特許文献１には、５－（３，４，５－トリヒドロキシフェニル）－γ－バレロラクトンを有効成分とするＡＭＰＫ活性化剤が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特開２０２０－０８３７６９号公報

【非特許文献】

【0005】

【文献】Marin, T. L., et al., “AMPK promotes mitochondrial biogenesis andfunction by phosphorylating the epigenetic factors DNMT1, RBBP7, and HAT1.”,Sci Signal. 2018; 10(464): eaaf7478.

【文献】Carling, D., “AMPK signalingin health and disease.”, Curr Opin Cell Biol. 2017; 45: 31-37.

【文献】Boyer, P.D., et al. “Oxidativephosphorylation and photophosphorylation.”, Annu Rev Biochem. 1977; 46: 955-1026.

【文献】Cool, B., et al. “Identificationand characterization of a small molecule AMPK activator that treats keycomponents of type 2 diabetes and the metabolic syndrome.”, Cell Metab. 2006; 3:403-416.

【文献】Giordanetto, F. and Karis D., “DirectAMP-activated protein kinase activators: a review of evidence from the patentliterature.”, Exprt Opin Ther Pat. 2012; 22: 1467-1477.

【文献】Xiao, B., et al., “Structuralbasis of AMPK regulation by small molecule activators.”, Nat Commun. 2013; 4:3017.

【文献】Cheng X. Y. et al., “AMP-activatedprotein kinase reduces inflammatory responses and cellular senescence inpulmonary emphysema.”, Oncotarget. 2017; 8(14): 22513-22523.

【文献】Lee, J. S., et al., “Role ofAMP-Activated Protein Kinase (AMPK) in Smoking-Induced Lung Inflammation andEmphysema.”, Tuberc Respir Dis. 2015; 78(1): 8-17.

【文献】Carlos, S. P., et al., “Oxidativedamage induced by cigarette smoke exposure in mice: impact on lung tissue anddiaphragm muscle.”, J Bras Pneumol. 2014; 40(4): 411-420.

【文献】Canto,C., et al., “AMPK regulatesenergy expenditure by modulating NAD+ metabolism and SIRT1 activity.”, Nature 2009; 458: 1056-1060.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明は、新規なＡＭＰＫ活性化剤の提供を目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、白金コロイドとパラジウムコロイドとを共に用いることでＡＭＰＫを活性化できることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0008】

すなわち、本発明は、以下の各発明に関する。
［１］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、ＡＭＰＫ活性化剤。
［２］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、長寿延命剤。
［３］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、抗老化剤。
［４］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、酵素活性化剤。
［５］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、細胞周期制御剤。
［６］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、ミトコンドリア活性化剤。
［７］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、ＡＴＰ産生恒常性持続剤。
［８］白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、免疫応答機能調節剤。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、新規なＡＭＰＫ活性化剤の提供が可能となる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】白金パラジウムコロイドの添加後１時間後、１２時間後、及び２４時間後の各時点におけるＡＭＰＫ活性を示したグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0011】

以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。

【0012】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する。当該ＡＭＰＫ活性化剤は、白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する液剤であってよい。

【0013】

白金コロイドは、水にコロイド状に分散する白金粒子である。白金コロイドは、公知の方法（例えば、特公昭５７－４３１２５号公報、特公昭５９－１２０２４９号公報、特公平２－４３８０１号公報、特開平９－２２５３１７号公報、特開平１０－１７６２０７号公報等に記載の方法）により製造することができる。白金コロイドの製造方法としては、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されないが、例えば、沈殿法又は金属塩還元反応法として知られる化学的な方法、あるいは燃焼法として知られる物理的な方法等を利用することができる。白金コロイドの製造方法としては、ＡＭＰＫ活性化作用をより有効に奏するという観点から、燃焼法を用いることが好ましい。

【0014】

燃焼法としては、例えば、塩化白金酸溶液及び低級アルコールの混合溶液、並びに、水素ガスを、それぞれ別の供給系から送出し、燃焼させた水素ガス炎と、上記混合溶液とを混合させ８３０～８７０℃で燃焼させ、燃焼火炎をコロイド生成槽中の槽底近くに達する渦流を生じさせた液体分散媒中に吹き込むこと等によって、白金コロイドを製造する方法が挙げられる。

【0015】

ＡＭＰＫ活性化剤が液剤である場合において、白金コロイドの濃度は特に限定されず、使用される白金コロイドの種類、ＡＭＰＫ活性化剤の用途、製剤形態、使用方法等によって適宜設定される。液剤における白金コロイドの濃度は、ＡＭＰＫ活性化作用をより有効に奏するという観点から、液剤全量に対して、０．０８～１６ｍＭであることが好ましく、０．１～１０ｍＭであることが好ましく、０．４～８ｍＭであることがさらに好ましい。

【0016】

パラジウムコロイドは、水にコロイド状に分散するパラジウム粒子である。パラジウムコロイドは、公知の方法（例えば、特公昭５７－４３１２５号公報、特公昭５９－１２０２４９号公報、特公平２－４３８０１号公報、特開平９－２２５３１７号公報、特開平１０－１７６２０７号公報等に記載の方法）により製造することができる。パラジウムコロイドの製造方法としては、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されないが、例えば、沈殿法又は金属塩還元反応法として知られる化学的な方法、あるいは燃焼法として知られる物理的な方法等を利用することができる。パラジウムコロイドの製造方法として、白金の酸化による劣化を防止するという観点から、燃焼法を用いることが好ましい。

【0017】

燃焼法としては、例えば、塩化パラジウム溶液及び低級アルコールの混合溶液、並びに、水素ガスを、それぞれ別の供給系から送出し、燃焼させた水素ガス炎と、上記混合溶液とを混合させ６３０～６７０℃で燃焼させ、燃焼火炎をコロイド生成槽中の槽底近くに達する渦流を生じさせた液体分散媒中に吹き込むこと等によって、パラジウムコロイドを製造する方法が挙げられる。

【0018】

ＡＭＰＫ活性化剤が液剤である場合において、パラジウムコロイドの濃度は特に限定されず、使用されるパラジウムコロイドの種類、併用される白金コロイドの種類及び濃度、ＡＭＰＫ活性化剤の用途、製剤形態、使用方法等によって適宜設定される。液剤におけるパラジウムコロイドの濃度は、白金の酸化による劣化を防止し、かつ継続投与した場合にも副作用を起こりにくくするという観点から、液剤全量に対して、０．１～３０ｍＭであることが好ましく、０．４～１６ｍＭであることがより好ましく、０．８～１２ｍＭであることがさらに好ましい。

【0019】

パラジウムコロイドに対する白金コロイドのモル比（パラジウムに対する白金のモル比（Ｐｔ／Ｐｄ））は、特に制限されず、使用される白金コロイド及びパラジウムコロイドの種類及び濃度、該ＮＫ細胞活性化剤の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定される。パラジウムコロイドに対する白金コロイドのモル比は、ＡＭＰＫ活性化作用をより有効に奏するという観点から、好ましくは１／３０～１０／１であり、より好ましくは１／９～３／１である。

【0020】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、界面活性剤をさらに含有していてもよい。界面活性剤としては、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば特に制限されず、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤のいずれであってもよい。本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、ＡＭＰＫ活性化作用をより有効に奏するという観点から、界面活性剤として、非イオン性界面活性剤を含有することが好ましい。

【0021】

非イオン性界面活性剤としては、例えば、モノラウリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０）、モノパルミチン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート４０）、モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート６０）、トリステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート６５）、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）等のＰＥＯソルビタン脂肪酸エステル；ＰＯＥ（４０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０）、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０）等のＰＯＥ硬化ヒマシ油；ＰＯＥ（９）ラウリルエーテル等のＰＯＥアルキルエーテル；ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテル等のＰＯＥ－ＰＯＰアルキルエーテル；ＰＯＥ（１９６）ＰＯＰ（６７）グリコール（ポロクサマー４０７、プルロニック（登録商標）Ｆ１２７）、ＰＯＥ（２００）ＰＯＰ（７０）グリコール等のポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；ポリオキシエチレンヒマシ油３５、ポリオキシエチレンヒマシ油４０、ポリオキシエチレンヒマシ油５０、ポリオキシエチレンヒマシ油６０等の酸化エチレンの平均付加モル数が３０を上回るポリオキシエチレンヒマシ油等が挙げられる。本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤において、上記非イオン性界面活性剤を、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。

【0022】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、固体（例えば、粉末）、液体、ペースト等のいずれの形状であってもよく、タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠、トローチ剤等を含む。）、カプセル剤、丸剤、粉末剤（散剤）、細粒剤、顆粒剤、液剤（懸濁液、乳濁液、シロップ等を含む。）、ペースト等の形態であってもよい。これらの各種製剤は、薬理学的又は生理学的に許容されるものであれば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定剤、懸濁化剤等の添加剤を混合し、周知の方法で製造することができる。

【0023】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、医薬品、医薬部外品、食品組成物及び飼料組成物等の製品として、又はこれら製品の成分として使用することができる。当該食品組成物は、例えば、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、栄養補助食品、サプリメント及び特定保健用食品であってもよい。食品組成物の具体例としては、例えば、飲料等が挙げられる。上記製品は、ＡＭＰＫ活性化用であってよい。ＡＭＰＫ活性化用製品における白金コロイド及びパラジウムコロイドそれぞれの濃度は、上記例示したとおりであってよい。

【0024】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、ヒトに投与又は摂取されても、非ヒト哺乳動物に投与又は摂取されてもよい。本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤の投与量（摂取量）は、白金コロイドの質量に換算して、成人１日あたり、例えば、０．０６～６ｍｇであることが好ましく、０．１～４ｍｇであることがより好ましく、０．３～３ｍｇであることがさらに好ましい。投与量は、個体の状態、年齢等に応じて適宜決定することができる。

【0025】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、経口投与（摂取）されてもよく、非経口投与されてもよいが、経口投与されることが好ましい。ＡＭＰＫ活性化剤は、１日あたりの白金コロイドの質量に換算した値が上記範囲内にあれば、１日１回投与されてもよく、１日複数回に分けて投与されてもよい。

【0026】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、１週間以上継続して投与されてよく、２週間以上継続して投与（摂取）されてよく、３週間以上継続して投与（摂取）されてよく、４週間以上継続して投与（摂取）されてよい。

【0027】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、ＡＭＰＫを活性化することができる。そのため、ＣＯＰＤ、間質性肺炎、肺気腫等の肺疾患の予防又は治療に有効である。また、がんの抑制又は治療、生活習慣病の予防又は治療、２型糖尿病の予防又は治療、内臓脂肪減少、オートファジーの促進等に有効である（例えば、北田宗弘, 古家大祐., “栄養センシングと細胞機能の制御.”, 化学と生物. 2013; 51(5): 294-301.を参照）。

【0028】

また、本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、ＡＭＰＫを活性化するため、酵素（ＡＭＰＫ）を活性化する効果、ミトコンドリア新生及びミトコンドリア機能を活性化する効果、ＡＴＰ産生の恒常性を持続させる効果、及び長寿遺伝子の一種であるＳＩＲＴ１等のサーチュイン遺伝子を活性化する効果を有する。つまり、本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、酵素活性化剤、ミトコンドリア活性化剤、ＡＴＰ産生恒常性持続剤、又はサーチュイン遺伝子活性化剤でもある。

【0029】

サーチュイン遺伝子は、長寿遺伝子又は抗老化遺伝子とも呼ばれ、サーチュイン遺伝子の活性化により寿命を延長できること、加齢に伴う様々な機能の低下（老化）を抑制できることが知られている（例えば、特開２０１３－１９３９９３号公報、特開２０１６－２０４２７３号公報、特開２０１９－２１８２９６号公報等を参照）。そのため、本実施形態に係るサーチュイン遺伝子活性化剤は、長寿延命剤又は抗老化剤ともいえる。

【0030】

本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、オートファジーを促進するため、細胞周期制御剤でもある（例えば、Green, D. R., et al., “Metabolic control of cell death.”, Science.2014; 345(6203): 1250256.を参照）。また、本実施形態に係るＡＭＰＫ活性化剤は、キラーＴ細胞（ＣＤ８＋細胞）を活性化させるため、免疫応答機能調節剤でもある（例えば、Pearce, E. L., et al., “Enhancing CD8 T-cell memory by modulatingfatty acid metabolism.”, Nature. 2009; 460(7251): 103-107.を参照）。

【実施例】

【0031】

以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。

【0032】

［白金パラジウムコロイドによるＡＭＰＫ活性促進効果の検討］
ＣｙｃＬｅｘ（登録商標） ＡＭＰＫ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＭＢＬ社製）を用いて、以下の条件で、ＡＭＰＫ活性促進効果を調べた。検体群として、ＰＡＰＬＡＬ（登録商標）水（６ｍｌの液剤中、白金コロイドを１．２ｍｇ、パラジウムコロイドを１．８ｍｇ含む。）を１％添加した群を平板法により作製した。具体的には、ＰＡＰＬＡＬ（登録商標）水を減菌し、培養液で１０倍に希釈することにより調製した１０％パプラール溶液１ｍＬを、フラスコにて培養した乳がん細胞の培養液９ｍＬに対して添加することにより、検体群を作製した。また、コントロール群としては、ＰＡＰＬＡＬ（登録商標）水に変えて超純水を１％添加した群を用いた。
使用キット：ＣｙｃＬｅｘ（登録商標） ＡＭＰＫ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ
使用試薬：Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ， １０Ｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ， Ｋｉｎａｓｅ Ｂｕｆｆｅｒ， ２０Ｘ ＡＴＰ， ２０Ｘ ＤＴＴ， Ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｍｏｕｓｅ ＩＲＳ－１ Ｓ７８９ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＳ－４Ｃ４）， ＨＲＰ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ， Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｒｅａｇｅｎｔ， Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ
使用細胞：ヒト乳がん細胞（ＭＣＦ－７）５×１０^６個
培養条件：３７℃、５％ＣＯ_２にてインキュベート

【0033】

サンプルを添加してから１時間後、１２時間後、及び２４時間後の各時点において、吸光度を測定した結果を表１に示す。また、各時点におけるＡＭＰＫ活性を示したグラフを図１に示す。表１及び図１において、「ＡＭＰＫ活性」は、各時点において、コントロールの吸光度を１００としたときの検体の吸光度であり、コントロールを基準とした相対的なＡＭＰＫ活性を表す。

【0034】

【表1】

【0035】

表１及び図１のとおり、白金パラジウムコロイドを添加した検体は、超純水を添加したコントロールと比較して吸光度が大きく、ＡＭＰＫ活性が増加していた。なお、全ての群においてＦ検定を行ったところ、等分散が仮定されなかった。そこでＷｅｌｃｈのｔ検定を行ったところ、全ての群において有意水準１％（信頼率９９％）において有意差が認められた。各時点におけるＰ値は以下の通りである。
１時間後：Ｐ＝０．００３０７
１２時間後：Ｐ＝０．００８９７
２４時間後：Ｐ＝０．００００３１１

【要約】

【課題】新規なＡＭＰＫ活性化剤の提供。
【解決手段】白金コロイドとパラジウムコロイドとを含有する、ＡＭＰＫ活性化剤。
【選択図】なし

【図1】