特許 7042274 眼内炎症性眼疾患の治療のためのタクロリムスを含む組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-03-16

(45)【発行日】2022-03-25

(54)【発明の名称】眼内炎症性眼疾患の治療のためのタクロリムスを含む組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/706 20060101AFI20220317BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20220317BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20220317BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20220317BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220317BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20220317BHJP

   A61K 47/06 20060101ALI20220317BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220317BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220317BHJP

【ＦＩ】

A61K31/706

A61P27/02

A61P9/10

A61P25/02 101

A61K9/08

A61K9/10

A61K47/06

A61P29/00

A61K47/10

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2019532960

(86)(22)【出願日】2017-12-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-02-13

(86)【国際出願番号】 EP2017082739

(87)【国際公開番号】W WO2018114557

(87)【国際公開日】2018-06-28

【審査請求日】2020-12-08

(31)【優先権主張番号】16206207.9

(32)【優先日】2016-12-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】512086242

【氏名又は名称】ノバリック ゲーエムベーハー

(74)【代理人】

【識別番号】100133503

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 一哉

(72)【発明者】

【氏名】グンター， バーンハルド

(72)【発明者】

【氏名】シェレー， ディーター

(72)【発明者】

【氏名】シュー， ヘーピング

【審査官】伊藤 幸司

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１３－５１３５８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００３／００１８０４４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１５－５２７３８６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５２２２７２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５４０１４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】Arch Ophthalmol，2005年，123，pp.634-641

【文献】European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics，2014年，88，pp.123-128

【文献】アレルギー，2010年，５９（１１），第１５２５～１５３１頁

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

眼内炎症性眼疾患を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物であって、前記医薬組成物が懸濁液の形態で処方される、医薬組成物。

【請求項2】

前記眼内炎症性眼疾患が、ぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎および視神経炎またはその組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記眼内炎症性眼疾患が、ぶどう膜炎、網膜炎症またはそれらの組合せから選択される、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記眼内炎症性眼疾患がぶどう膜炎である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記ぶどう膜炎が、前部ぶどう膜炎および／または中間部ぶどう膜炎および／または後部ぶどう膜炎である、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

半フッ化アルカンが式Ｆ（ＣＦ_２）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＨの化合物であり、式中、ｎおよびｍが３～１０の範囲から独立に選択される整数である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記半フッ化アルカンが、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物が眼、眼瞼、眼嚢、眼表面または眼組織に局所投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物であって、前記組成物が一眼当たり一用量当たり約５～約５０μｌの体積の単一液滴として投与される、組成物。

【請求項10】

前記組成物が１日当たり最大４回投与される、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記組成物が、最終組成物の重量に基づいて、９９～９９．９９重量％の前記少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルからなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物が、炎症性眼疾患の第一選択治療で治療された患者に投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記組成物が、前記第一選択治療としてステロイドで治療された患者に投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記組成物が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０５％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、０．２～１．４％（ｗ／ｗ）のエタノールを含み、前記半フッ化アルカンがＦ４Ｈ５である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

炎症性眼疾患は、眼または周囲組織のあらゆる部位を冒し得る様々な種類の炎症を含む。広範囲の既知の炎症性眼疾患は、例えば、非常に一般的な状態、例えば花粉症によるアレルギー性結膜炎など、あるいは、それよりも稀で危険な状態、例えばぶどう膜炎、強膜炎、視神経炎、角膜炎、網膜血管炎または慢性血管炎などを含む。これらは全て罹患者の視力を危険にさらす可能性がある。

【0002】

一部の炎症性眼疾患は、副腎皮質ステロイド、例えばデキサメタゾンなどで効果的に治療される。しかし、デキサメタゾンの長期使用は、通常、副腎皮質ステロイドによる長期治療から、一般に知られているように、重篤な副作用をもたらすことがある。デキサメタゾンなどの副腎皮質ステロイドの投与に関連する一般的な副作用は、白内障または緑内障の発症である。白内障または緑内障の発症リスクの増加は、既存の炎症性眼疾患の治療の場合には特に問題となるであろう。

【0003】

ぶどう膜炎は、眼のぶどう膜の炎症状態である。臨床的に、ぶどう膜炎は罹患したぶどう膜の部位に基づいて前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎、後部ぶどう膜炎および汎ぶどう膜炎に分類することができる。前部ぶどう膜炎は、全てのぶどう膜炎の症例の６０～８０％を占める。ぶどう膜炎は労働年齢の人々の失明の大きな原因のままであり、米国の全失明の１０～１５％を占めている。

【0004】

ぶどう膜炎は、感染性または非感染性（自己免疫）の病因を有することがある。自己免疫性ぶどう膜炎は、Ｔｈ１およびＴｈ１７細胞をはじめとする網膜抗原特異的Ｔリンパ球に媒介され、副腎皮質ステロイドがこの状態の主な治療法であり続けている。前部ぶどう膜炎は通常局所ステロイドで治療されるが、患者に他の全身性自己免疫状態もある場合には全身性免疫抑制が必要なこともある。後部ぶどう膜炎には、全身性免疫抑制とは別に、ステロイド（例えば、デキサメタゾン、トリアムシノロンおよびフルオシノロン）の硝子体内注射が現在一般的に使用されている。

【0005】

様々な眼内インプラントも眼内薬物送達を改善するために開発されてきた。ステロイドの硝子体内注射は炎症をより良く制御し、全身性の副作用を制限することができるが、局所的な有害作用が依然として大きな懸念である。例えば、トリアムシノロンの硝子体内注射の後に３０～５０％の患者が緑内障を発症した；Ｒｅｔｉｓｅｒｔインプラントを介してフルオシノロンの硝子体内注射を受けたほぼ全ての患者が緑内障を患い、その４０％が圧力を制御するために外科手術を必要とした。白内障は、特に複数の硝子体内ステロイド注射を受けている患者において、もう一つの一般的な副作用である。明らかに、ぶどう膜炎のより効果的でより安全な治療法が緊急に必要とされている。

【0006】

タクロリムス（ＦＫ５０６）は、真菌ストレプトマイセス・ツクバエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）から単離されたマクロライド系ラクトンであり、強力な免疫抑制薬である。タクロリムスは、シクロスポリンと同様のＴリンパ球シグナル伝達および細胞増殖を阻害する機構作用を有するが、１００倍強力である。タクロリムスは、全身投与によるぶどう膜炎の第二選択治療法として使用されることが報告されており、特にステロイド抵抗性または不耐症の患者に有効であることが証明されている。

【0007】

タクロリムスは、その物理化学的性質のために、局所投与時に組織障壁を貫通する能力が低い（Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９１，７１９－７２９）。

【0008】

米国特許出願公開第２００３／００１８０４４（Ａ１）号明細書は、ドライアイ疾患（ＤＥＤ）などの眼疾患、ならびにその他の眼疾患を治療するためにタクロリムスを含有する製剤を記載している。タクロリムスは、０．９％生理食塩水または５％デキストロースなどの水性溶媒に溶解してもよいし、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはアルコールなどの有機溶媒に溶解してもよい。

【0009】

国際公開第２０１１／０７３１３４（Ａ１）号パンフレットは、１種以上の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルを含む、乾性角結膜炎の治療のための医薬組成物を提供する。組成物は、マクロライド系免疫抑制剤の群から選択される有効成分を組み込む。それらは、眼に局所投与され得る。

【0010】

国際公開第２０１２／１６０１７９（Ａ２）号パンフレットは、半フッ化アルカンを含む、局所投与のための液体または半固体の医薬組成物を記載する。この組成物は、皮膚の深層または皮膚付属器への有効成分の送達に有用である。免疫抑制剤、抗感染剤、抗真菌薬、抗炎症薬、およびレチノイドなどの様々な有効成分が組み込まれてよい。

【0011】

国際公開第２０１２／１６０１８０（Ａ２）号パンフレットは、ヒトの指の爪または足指の爪に局所投与するための半固体または液体の医薬組成物を記載する。組成物は、爪の奥深くまで有効成分を送達するのに有用である。様々な有効成分、例えば抗真菌薬、抗感染薬、抗炎症薬免疫抑制剤、局所麻酔薬、およびレチノイドなどが組み込まれてよい。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

本発明の目的は、広範囲の眼内炎症性眼疾患の治療において有用かつ有効であり、局所投与されてよい医薬組成物を提供することである。

【0013】

本発明のさらなる目的は、そのような治療を必要とする患者による規則的な投与および全体的な服薬率を支えるための、取り扱いが安全で、投与が正確で、投与計画が簡便で従い易い医薬組成物を提供することである。

【0014】

本発明のさらなる目的は、眼内炎症性眼疾患の一般的な第一選択治療に加えてまたはその代用として有用かつ有効であり、眼圧の増加に関して標準的なステロイド治療の副作用を示さない、眼内炎症性眼疾患の治療に用いる医薬組成物を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0015】

本発明は、眼内炎症性眼疾患を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物を提供する。

【0016】

本発明は、眼内炎症性眼疾患の治療のための方法において使用するための、薬剤有効量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物；および、組成物を保持するための容器を含むキットをさらに提供し、該容器は好ましくは組成物の眼表面、好ましくは下瞼、涙嚢または眼組織への局所投与に適合した分配手段を含む。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬治療の内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスモデルの臨床症状への効果を示す図である。

【図2】異なる群のマウスにおけるＥＩＵの病理組織を示す図である。

【図3】タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬治療の実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎（ＥＡＵ）の臨床症状への効果を示す図である。

【図4】異なる群のマウスにおけるＥＡＵの病理組織を示す図である。

【図5】正常なマウス眼の硝子体（図５Ａ）、脈絡膜／強膜（図５Ｂ）、網膜（図５Ｃ）および全血（図５Ｄ）のタクロリムスレベルを示す図である。

【図6】ぶどう膜炎の有るマウス眼と無いマウス眼の硝子体のタクロリムスレベルを示す図である。

【図7】ＥＩＵ研究においてフローサイトメトリーを用いる、網膜中の浸潤性免疫細胞を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

第１の態様において、本発明は、眼内炎症性眼疾患を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物に関する。

【0019】

本発明の医薬組成物は、タクロリムスを治療上有効な量で含む。タクロリムス（ＦＫ－５０６またはフジマイシンとしても公知；ＣＡＳ １０４９８７－１１－３）は、式Ｃ_４４Ｈ_６９ＮＯ_１２および分子量８０４．０１８ｇ／ｍｏｌを有するマクロライド系ラクトンである。

【0020】

タクロリムスは、細菌ストレプトマイセス・ツクバエンシスの発酵ブロスから単離することができ、例えば中国のＺｈｅｊｉａｎ Ｈｉｓｕｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏより市販されており、通常その固体一水和物の形態かまたは原液の形態で供給されている。本明細書において使用されるタクロリムスの「治療上有効な量」という用語は、望ましい薬理効果、より具体的には、以下に詳細に記載される眼内炎症性眼疾患の治療における薬理効果を生じるために有用なタクロリムスの用量、濃度または強度を意味する。

【0021】

好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、液体製剤である。本明細書において使用される用語「液体製剤」とは、完全に固体ではないあらゆる製剤を意味する。本発明による液体製剤は、自由流動性液体、言い換えると低粘度であってもよく、あるいはクリームまたはペーストまたはゲルのような中または高粘度の液体であってもよい。しかし好ましくは、本発明の医薬組成物は、少なくとも生理的温度で自由流動性液体であり、滴下投与することができる。

【0022】

本発明の医薬組成物は、溶液、懸濁液または乳濁液の形態で処方されてよい。好ましくは、本発明の医薬組成物は、溶液として、さらにより好ましくは透明溶液として処方される。

【0023】

上述の、本明細書において理解される用語「透明溶液」とは、全ての溶質が完全に溶解可能であるかまたは室温条件下で、すなわち１５～２５℃の間で溶解されている液体溶液をさす。透明溶液は、いかなる粒子状成分または固相成分も含まず、好ましくは室温で水に近い屈折率（すなわち１．３３３）を有する。

【0024】

したがって、上記のようなタクロリムスは、本発明の医薬組成物の液体ビヒクル中に溶解または懸濁または乳化されることができる。本明細書において使用される用語「液体ビヒクル」は、タクロリムスが溶解または懸濁または乳化されている本発明の医薬組成物の連続（またはコヒーレント）相、通常は溶媒または異なる溶媒の混合物を意味する。

【0025】

本発明の医薬組成物の重要な利点の一部は、本発明の医薬組成物の液体ビヒクル中に、溶液の場合には液体懸濁ビヒクルまたは溶媒として機能する半フッ化アルカンが存在することによってもたらされる。

【0026】

本明細書において使用される用語「半フッ化アルカン」（本文書では「ＳＦＡ」とも呼ばれる）とは、少なくとも１つの全フッ素置換セグメント（Ｆ－セグメント）および少なくとも１つの非フッ化炭化水素セグメント（Ｈ－セグメント）からなる直鎖状または分岐状化合物をさす。より好ましくは、半フッ化アルカンは、１つの全フッ素置換セグメント（Ｆ－セグメント）および１つの非フッ化炭化水素セグメント（Ｈ－セグメント）からなる直鎖状または分岐状化合物である。好ましくは、前記半フッ化アルカンは、４℃～４０℃の温度範囲内の少なくとも１つの温度で液体状態で存在する化合物である。一実施形態では、前記ＳＦＡの全フッ素置換セグメントおよび／または炭化水素セグメントは、任意選択で環状炭化水素セグメントを含むかまたはそれからなるか、あるいは任意選択で前記ＳＦＡは炭化水素セグメント内に不飽和部分を含む。

【0027】

好ましくは、直鎖状または分岐状ＳＦＡのＦ－セグメントは、３～１０個の間の炭素原子を含む。Ｈ－セグメントが３～１０個の間の炭素原子を含むことも好ましい。Ｆ－セグメントとＨ－セグメントが互いに独立に３～１０個の炭素原子を含むことは特に好ましい。好ましくは、各セグメントは互いに独立に３～１０個の炭素原子を有する。

【0028】

さらに好ましくは、直鎖状または分岐状ＳＦＡのＦ－セグメントは、４～１０個の間の炭素原子を含み、かつ／またはＨ－セグメントは４～１０個の間の炭素原子を含む。Ｆ－セグメントとＨ－セグメントが互いに独立に４～１０個の炭素原子を含むことは特にさらに好ましい。好ましくは、各セグメントは互いに独立に４～１０個の炭素原子を有している。

【0029】

したがって、本発明の好ましい実施形態では、液体ビヒクルは、式Ｆ（ＣＦ_２）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＨの化合物、好ましくは直鎖状化合物である、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む。式中、ｎおよびｍは、３～１０の範囲から独立に選択される、好ましくは４～１０の範囲から独立に選択される、さらにより好ましくは４～８の炭素原子の範囲から独立に選択される、整数である。

【0030】

任意選択で、直鎖状または分岐状ＳＦＡは、－ＣＨ_３、－Ｃ_２Ｈ_５、－Ｃ_３Ｈ_７および－Ｃ_４Ｈ_９からなる群から選択される１以上のアルキル基を含む分岐状非フッ化炭化水素セグメントを含んでよく、かつ／あるいは、直鎖状または分岐状ＳＦＡは、－ＣＦ_３、－Ｃ_２Ｆ_５、－Ｃ_３Ｆ_７および－Ｃ_４Ｆ_９からなる群から選択される１以上の全フッ素置換アルキル基を含む分岐状全フッ素置換炭化水素セグメントを含んでよい。さらに好ましくは、直鎖状または分岐状ＳＦＡのＦ－セグメントとＨ－セグメントの炭素原子の比（前記比はＦ－セグメント中の炭素原子の数をＨ－セグメント中の炭素原子の数で除算することによって得る；例えば前記比は１－パーフルオロヘキシルオクタン（Ｆ６Ｈ８）について０．７５である）は０．５以上であり、より好ましくは前記比は０．６以上である。さらに好ましくはＦ－セグメントとＨ－セグメントの炭素原子の比は、０．６～３．０の範囲内であり、より好ましくは前記比は０．６～１．０の間である。

【0031】

本発明の好ましい実施形態では、半フッ化アルカンとは、少なくとも１つの全フッ素置換セグメント（Ｆ－セグメント）と、少なくとも１つの炭化水素セグメント（Ｈ－セグメント）からなる直鎖状化合物をさす。より好ましくは、前記半フッ化アルカンは、１つの全フッ素置換セグメント（Ｆ－セグメント）と１つの炭化水素セグメント（Ｈ－セグメント）からなる直鎖状化合物である。

【0032】

好ましくは、直鎖状ＳＦＡのＦ－セグメントは、３～１０個の間の炭素原子を含む。Ｈ－セグメントが３～１０個の間の炭素原子を含むことも好ましい。Ｆ－セグメントとＨ－セグメントが互いに独立に３～１０個の炭素原子を含むことは特に好ましい。好ましくは、各セグメントは互いに独立に３～１０個の炭素原子を有する。

【0033】

さらに好ましくは、直鎖状ＳＦＡのＦ－セグメントは、４～１０個の間の炭素原子を含み、かつ／またはＨ－セグメントは４～１０個の間、さらにより好ましくは４～８個の間の炭素原子を含む。特にさらに好ましくは、Ｆ－セグメントとＨ－セグメントは互いに独立に４～１０個の炭素原子、さらにより好ましくは４～８個の炭素原子を含む。好ましくは、各セグメントは互いに独立に４～１０個、好ましくは４～８個の炭素原子を有している。

【0034】

別の命名法によれば、本発明で使用される直鎖状半フッ化アルカンは、ＦｎＨｍと呼ばれることがあり、この際、Ｆは全フッ素置換炭化水素セグメントを意味し、Ｈは非フッ化炭化水素セグメントを意味し、ｎ、ｍはそれぞれのセグメントの炭素原子の数である。例えば、Ｆ４Ｈ５は１－パーフルオロブチルペンタンに用いられる。

【0035】

本発明の特に好ましい実施形態では、本発明による使用のための医薬組成物の液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ４Ｈ７、Ｆ４Ｈ８、Ｆ５Ｈ４、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ２、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０、Ｆ６Ｈ１２、Ｆ８Ｈ８、Ｆ８Ｈ１０、Ｆ８Ｈ１２およびＦ１０Ｈ１０からなる群から選択される少なくとも１種の直鎖状半フッ化アルカンを含む。

【0036】

より好ましくは、本発明による医薬組成物の液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ４、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ２、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０、Ｆ８Ｈ８、Ｆ８Ｈ１０、Ｆ８Ｈ１２およびＦ１０Ｈ１０からなる群から選択される少なくとも１種の直鎖状半フッ化アルカンを含み、さらにより好ましくは、直鎖状ＳＦＡは、Ｆ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ４、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０、Ｆ８Ｈ８、Ｆ８Ｈ１０、Ｆ８Ｈ１２およびＦ１０Ｈ１０からなる群から選択され、より好ましくは、直鎖状ＳＦＡは、Ｆ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０、Ｆ８Ｈ８、Ｆ８Ｈ１０、Ｆ８Ｈ１２およびＦ１０Ｈ１０からなる群から選択され、さらにより好ましくは、直鎖状ＳＦＡは、Ｆ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０およびＦ８Ｈ８からなる群から選択される。

【0037】

なおさらに好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物の液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７およびＦ６Ｈ８からなる群から選択される少なくとも１種の直鎖状ＳＦＡを含む。

【0038】

さらに好ましい実施形態では、本発明による液体ビヒクルは、少なくとも１種の直鎖状ＳＦＡ、好ましくはＦ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６およびＦ６Ｈ８からなる群から選択される少なくとも１種の直鎖状ＳＦＡを含む。さらにより好ましくは、本発明による液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８からなる群から選択される少なくとも１つの直鎖状ＳＦＡを含む。 最も好ましくは、本発明において、液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ５（１－パーフルオロブチル－ペンタン）を唯一の半フッ化アルカンとして含む。

【0039】

さらなる実施形態では、液体ビヒクルに含まれる半フッ化アルカンは、上記のように２種以上の異なる半フッ化アルカンの混合物として使用され得る。したがって、本発明の医薬組成物は、２種以上のＳＦＡを含み得る。例えば、ある密度または粘度のような特定の目標特性を達成するために、異なるＳＦＡを組み合わせることは有用であり得る。２種以上の異なるＳＦＡの混合物が使用される場合、混合物は、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０の少なくとも１種、特にＦ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８のうちの１種を含むことがさらに好ましい。もう一つの実施形態では、混合物は、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８、およびＦ６Ｈ１０から選択される少なくとも２つのメンバー、特に、Ｆ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８から選択される少なくとも２つのメンバーを含む。

【0040】

液体ＳＦＡは化学的かつ生理学的に不活性で、無色で安定している。それらの典型的な密度は１．１～１．７ｇ／ｃｍ^３の範囲であり、それらの表面張力は１９ｍＮ／ｍ程度に低くてもよい。ＦｎＨｍ型のＳＦＡは水不溶性であるが、やや両親媒性であり、親油性の増加は、非フッ化セグメントのサイズの増加と相関する。

【0041】

もう一つの実施形態では、本発明の医薬組成物の液体ビヒクルは、室温で液体である少なくとも１種の半フッ化アルカン、例えばＦ４Ｈ４、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ５Ｈ５、Ｆ５Ｈ６、Ｆ５Ｈ７、Ｆ５Ｈ８、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ７、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ９、Ｆ６Ｈ１０およびＦ８Ｈ８などを含む。

【0042】

本発明の医薬組成物の液体ビヒクルに含まれる特に好ましい半フッ化アルカンは、化学式Ｆ（ＣＦ_２）_４（ＣＨ_２）_５Ｈを有する半フッ化アルカンである、１－パーフルオロブチル－ペンタンである。これは不活性の水不溶性の液体であり、密度は２５℃で１．２８４ｇ／ｃｍ^３、屈折率は２０℃で１．３２０４である。この化合物の別の命名法としてはＦ４Ｈ５が挙げられ、この際Ｆは４個の炭素原子を含む直鎖状全フッ素置換アルカンセグメントを表し、Ｈは５個の炭素原子の直鎖状非フッ化アルカン炭化水素セグメントを表す。

【0043】

本発明による使用のための医薬組成物は、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含むが、一実施形態では、本発明の医薬組成物は、最終医薬組成物（最終剤形）の重量に基づいて少なくとも７５％重量％、好ましくは少なくとも８０重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％、さらにより好ましくは少なくとも９０、最も好ましくは少なくとも９５重量％の少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルを含むかまたはそれからなる。タクロリムスと、少なくとも１種の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物は、以下に詳細に記載されるように、任意選択でさらなる溶媒および賦形剤を含み得る。

【0044】

好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、最終組成物の重量に基づいて、約９５～約９９．９９９重量％、より好ましくは約９５～約９９．９９重量％、より好ましくは９９～９９．９９重量％、さらにより好ましくは９９．９５～９９．９９重量％、最も好ましくは約９９．９６～約９９．９８重量％の上記の少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルからなる。

【0045】

いくつかの好ましい実施形態では、本発明による使用のための医薬組成物は、最大１ｍｇ／ｍｌのタクロリムス、好ましくは最大０．５ｍｇ／ｍｌのタクロリムス、より好ましくは最大０．３ｍｇ／ｍｌのタクロリムスを含む（最終組成物（最終剤形）の体積に基づく）。

【0046】

したがって、本発明による使用のための医薬組成物の好ましい実施形態は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）（０．１～１ｍｇ／ｍｌに対応）のタクロリムスを含む。しかし、好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、約０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）（０．１～０．５ｍｇ／ｍｌに対応）、さらにより好ましくは約０．０２％～約０．０４％（ｗ／ｖ）（０．２～０．４ｍｇ／ｍｌに対応）のタクロリムスを含む。

【0047】

本発明の医薬組成物はまた、任意成分および追加成分として１種以上のさらなる賦形剤を含んでもよい。本明細書において使用される用語「賦形剤」とは、本発明の医薬組成物に、より具体的には医薬組成物の液体ビヒクルに添加して、その物理的構成または化学構造または安定性または治療特性を増強するかそうでなければ変更することのできる、任意の薬剤的に許容される天然または合成物質をさす。本発明の医薬組成物は、任意選択で１種以上の賦形剤、例えば、酸化防止剤、保存料、脂質もしくは油状賦形剤、界面活性剤もしくは潤滑剤またはそれらの少なくとも２種の賦形剤の組合せなどを含み得る。

【0048】

本発明の医薬組成物での使用に適した酸化防止剤は、例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、第三級ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体（すなわち、酢酸α－トコフェロール）および／またはアスコルビン酸を含む。

【0049】

本発明の医薬組成物での使用に適した脂質または油状賦形剤は、例えば、トリグリセリド油（すなわち、ダイズ油、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、ヒマシ油、スイートアーモンド油）、トリグリセリド、鉱油（すなわち、ワセリンおよび流動パラフィン）、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、油状脂肪酸、ミリスチン酸イソプロピル、油状脂肪アルコール、ソルビトールおよび脂肪酸のエステル、油状スクロースエステル、または眼によって生理学的に許容される任意のその他の油状物質を含む。

【0050】

本発明の医薬組成物での使用に適した滑沢剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースおよびそのナトリウム塩（ＣＭＣ、カルメロース）、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、ヒプロメロース）、ヒアルロン酸およびそのナトリウム塩、ならびにヒドロキシプロピルグアーガムを含む。

【0051】

本発明による医薬組成物は、例えば、塩化ベンザルコニウムおよびクロルヘキシジンなどの薬剤的に適した天然もしくは合成保存料を含んでも含まなくてもよい。しかし、好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物は、製薬上許容される保存料を含まない。

【0052】

任意成分としての上記の賦形剤に加えて、本発明の医薬組成物の液体ビヒクルは１種以上のさらなる溶媒も含んでよい。本明細書において使用される用語「さらなる溶媒」とは、液体ビヒクルの少なくとも１種の半フッ化アルカン以外の溶媒または２種以上の異なる溶媒の混合物をさす。適したさらなる溶媒は、例えば、エタノール、イソプロパノールなどのアルコール、または眼によって生理学的に許容されるその他のさらなる溶媒から選択されてよい。

【0053】

好ましい溶媒はエタノールであり、これは本発明による使用のための医薬組成物中に、最終組成物（最終剤形）の液体ビヒクルの総重量に基づいて最大約１．４重量％（１．４％（ｗ／ｗ）に対応）以下、好ましくは最大約１．０重量％、例えば０．２～１．０重量％（０．２％～１．０％（ｗ／ｗ）に対応）または０．５～１．０重量％（０．５～１．０％（ｗ／ｗ）に対応）の量で存在し得る。より好ましくは、本発明による使用のための医薬組成物の液体ビヒクルは、１．０重量％のエタノールを（上記の少なくとも１種の半フッ化アルカンに加えて）含む。最も好ましくは、本発明による使用のための医薬組成物の液体ビヒクルは、１．４重量％のエタノールを（上記の少なくとも１種の半フッ化アルカンに加えて）含む。

【0054】

さらなる実施形態では、水も本発明の医薬組成物中に存在することができるが、好ましくは、最終組成物（最終剤形）に基づいて、最大１．０重量％、さらには最大０．１重量％以下の少量で存在する。好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は本質的に水を含まないが、残留水分が、タクロリムスの潜在的残留水分量に起因する可能性がある。本明細書において使用される用語「本質的に」は、存在する場合、本発明の目的に関して技術的な利点または関連性がないように、微量または残留量で存在することを意味する。

【0055】

例えば、１－パーフルオロブチル－ペンタン（Ｆ４Ｈ５）は、本発明のいくつかの実施形態で好ましい半フッ化アルカンとして、水を全く含まないか、または１－パーフルオロブチル－ペンタンの最大水溶解度以下の含水量を有する、例えば、カールフィッシャー滴定法などの水分分析について当技術分野で公知の方法によって決定される１．６×１０^－４ｍｇ／ｍｌ未満の含水量を有する。

【0056】

もう一つの好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、（本質的に）水を含まず、かつ／または保存料を含まない。

【0057】

さらなる好ましい実施形態では、本発明による使用のための医薬組成物は、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、０．２～１．４％（ｗ／ｗ）のエタノール（半フッ化アルカンの量に基づく）を含み、液体ビヒクルに含まれる半フッ化アルカンは、Ｆ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８から選択される。なおさらなる好ましい実施形態では、本発明による使用のための医薬組成物は、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、０．２～１．４％（ｗ／ｗ）のエタノール（半フッ化アルカンの量に基づく）を含み、液体ビヒクルに含まれる半フッ化アルカンは、Ｆ４Ｈ５である。さらなる好ましい実施形態では、本発明の組成物の液体ビヒクルは、０．２～１．４％（ｗ／ｗ）のエタノール（半フッ化アルカンの量に基づく）と、Ｆ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８から選択される半フッ化アルカンからなり、好ましくは半フッ化アルカンはＦ４Ｈ５である。

【0058】

さらなる好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、０．０３％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、１．４％（ｗ／ｗ）のエタノールを含み、半フッ化アルカンはＦ４Ｈ５である。特に好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、全て最終組成物（最終剤形）の重量に基づいて、０．０３％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、１．４％（ｗ／ｗ）のエタノールおよびＦ４Ｈ５から本質的になる。

【0059】

さらなる好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、０．０３％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、１．０％（ｗ／ｗ）のエタノールを含み、半フッ化アルカンはＦ４Ｈ５である。特に好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、全て最終組成物（最終剤形）の重量に基づいて、０．０３％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、１．０％（ｗ／ｗ）のエタノールおよびＦ４Ｈ５から本質的になる。

【0060】

第１の態様によれば、本発明は、眼内炎症性眼疾患を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物に関する。本明細書において使用される用語「眼内炎症性眼疾患」は、眼の中層および眼底におけるあらゆる種類の炎症を意味する。具体的には、角膜および結膜を含む炎症性眼疾患は、本明細書中で使用される場合、眼内炎症性眼疾患の定義に含まれない。

【0061】

本明細書において使用される用語「炎症性眼疾患」とは、眼または周囲組織のあらゆる部位を冒す炎症をさす。眼に関わる炎症は、花粉症のアレルギー性結膜炎から稀な潜在的失明状態、例えばぶどう膜炎、強膜炎、視神経炎、角膜炎、網膜血管炎および慢性結膜炎などに及び得る。

【0062】

好ましい実施形態では、眼内炎症性眼疾患は、ぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎、視神経炎およびそれらの組合せからなる群から選択される。

【0063】

上述のぶどう膜炎および以下にさらに定義するその様々な種類は、眼内の炎症、すなわち、ぶどう膜を構成する眼の３つの部分の１つ以上を特異的に冒す眼内炎症性眼疾患である。

【0064】

本明細書において使用される用語「ぶどう膜炎」とは、虹彩、毛様体および脈絡膜からなる眼の中層である、ぶどう膜の炎症を広くさす。ぶどう膜は、強膜（眼の白色部分）と眼の内部の神経組織（網膜）の間に挟まれている。ぶどう膜炎の種類は、通常、ぶどう膜の炎症が起こる場所によって分類される。ぶどう膜炎は、通常、ステロイドで治療される。

【0065】

本明細書において使用される用語「前部ぶどう膜炎」は、虹彩の炎症（虹彩炎）または虹彩と毛様体（ｃｉｌｉａｒ ｂｏｄｙ）の炎症（虹彩毛様体炎）を意味する。虹彩炎の主な治療法はステロイド点眼薬である。この治療法の主な副作用は、感染症と闘う眼の能力を低下させることにあり、感染症は特定の患者において緑内障および白内障を加速させることがある。

【0066】

本明細書において使用される用語「中間部ぶどう膜炎」とは、毛様体（ｃｉｌｉａｒ ｂｏｄｙ）および硝子体ゼリーの後ろの領域の炎症を意味する。

【0067】

本明細書において使用される用語「後部ぶどう膜炎」とは、眼底、脈絡膜および網膜の炎症を意味する。

【0068】

さらに、本明細書において使用される用語「びまん性ぶどう膜炎」（「汎ぶどう膜炎」とも呼ばれる）は、ぶどう膜の全領域の炎症を意味する。

【0069】

網膜炎症は眼内炎症性眼疾患のさらなる例である。本明細書において使用される用語「網膜炎症」とは、眼の内側の後壁にある組織の腫脹をさす。網膜炎症は、白内障手術、糖尿病、黄斑症、全身性疾患、外傷によって引き起こされる場合もあり、識別できる原因がまったくない場合もある。本明細書において使用される用語「網膜炎症」は、例えば、糖尿病性網膜症および加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）などの炎症性成分を有する網膜の疾患をさらに含む。

【0070】

さらなる例となる眼内炎症性眼疾患は強膜炎である。本明細書において使用される用語「強膜炎」とは、強膜の炎症をさす。強膜は眼の硬く白色の外側のコーティングであり、硬質の構造支持を眼に提供する。強膜炎の治療は、炎症がどの程度重症であるかに依存する。重症型の強膜炎の人は、通常、ステロイドによる治療が必要である。

【0071】

本発明によるなおさらなる眼内炎症性眼疾患は視神経炎である。本明細書において使用される用語「視神経炎」とは、視神経の炎症をさす。主な治療は、通常、副腎皮質ステロイドの投与にある。視神経乳頭の炎症は、乳頭炎または眼内視神経炎と呼ばれる。したがって、本明細書において使用される用語「乳頭炎（ｐａｐｉｌｉｔｉｓ）」は、特定の種類の視神経炎をさす。さらに、神経の眼窩部の炎症は、球後視神経炎または眼窩視神経炎と呼ばれる。

【0072】

上記のような治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物は、ぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎および視神経炎またはそれらの組合せからなる群から選択される眼内炎症性眼疾患に関連する症状の治療法もしくは治療に、またはそのような症状の寛解に有用である。

【0073】

そのため、さらなる実施形態では、本発明は、ぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎および視神経炎またはそれらの組合せからなる群から選択される眼内炎症性眼疾患を治療する方法で使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルを含む医薬組成物に関する。本発明のさらなる実施形態では、眼内炎症性眼疾患は、ぶどう膜炎、網膜炎症およびそれらの組合せから選択される。上記のように、眼内炎症性眼疾患の組合せがあり得る。このことは、一度に前記眼内炎症性眼疾患のうちの１つだけが患者に発生し得ること、あるいは、上述の疾患のうちの２つ、３つまたは全てが同時に患者に発生し得、本発明による医薬組成物で首尾よく治療され得ることを意味する。

【0074】

本発明の好ましい実施形態では、眼内炎症性眼疾患はぶどう膜炎である。したがって、一実施形態では、本発明は、ぶどう膜炎を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物に言及する。

【0075】

そのため、特定の実施形態では、本発明は、前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎および後部ぶどう膜炎またはその組合せからなる群から選択される眼内炎症性眼疾患、好ましくはぶどう膜炎を治療する方法で使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルを含む医薬組成物に言及する。言い換えれば、本発明の好ましい実施形態は、前部ぶどう膜炎および／または中間部ぶどう膜炎および／または後部ぶどう膜炎を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物に言及する。

【0076】

ぶどう膜炎は、治療後すぐに治癒する場合は急性であり、数ヶ月間の間隔で繰り返されるエピソードが起こる場合は再発性であり、その状態が長期にわたって継続する場合またはそれを制御するために長期の投薬を必要とする場合、例えばその状態が３ヶ月以上続く場合は慢性であり得る。本発明のさらなる実施形態は、急性または慢性眼内炎症性眼疾患、例えばぶどう膜炎および／または網膜炎症の治療のための方法で使用するための医薬組成物に言及する。本発明のさらなる好ましい実施形態は、ぶどう膜炎が慢性または急性である、ぶどう膜炎を治療する方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物に言及する。

【0077】

さらにもう一つの実施形態では、本発明は、ぶどう膜炎が難治性ぶどう膜炎である、ぶどう膜炎を治療する方法で使用するための上記のような医薬組成物に言及する。

【0078】

以前に既に述べたように、本発明の医薬組成物で治療される全ての言及された眼内炎症性眼疾患は、単独で、または上記のような１もしくは２以上の異なるその他の眼内炎症性眼疾患と一緒に起こり得る。特に好ましい実施形態では、本発明は、網膜炎症と組み合わせて、ぶどう膜炎、または前部ぶどう膜炎、中間部ぶどう膜炎および／もしくは後部ぶどう膜炎などの特定の種類のぶどう膜炎の治療で使用するための上記のような医薬組成物に関する。他の疾患との組み合わせで発生する可能性のある全ての眼内炎症性眼疾患は、慢性または急性である場合もあれば、そうでない場合もあることに注意する必要がある。例えば、慢性ぶどう膜炎は、急性網膜炎症と一緒に発症してもよいし、その逆であってもよい。

【0079】

本発明の医薬組成物は、眼科用組成物として特に有用であり、好ましくは患者の眼、眼瞼、眼嚢、眼表面および／または患者の眼組織に局所的に投与され得る。しかし、好ましくは、本発明の医薬組成物は、患者の眼の外面に、あるいは患者またはそれを必要とする患者の眼に医薬組成物を投与する別の人が容易にアクセスできる眼組織に局所投与され得る。

【0080】

医薬組成物は、特に低粘度かまたは高粘度（通常１～３．５ｍＰａ ｓの範囲内）の液体として使用される場合に、液剤の形態で有利に投与されるか、あるいは、噴霧によるかまたは注射によって、例えば、硝子体内注射または眼周囲注射などによって有利に投与され得る。しかし、最も好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、液剤として投与され得、より具体的には点眼薬として眼に局所投与され得る。

【0081】

疾患の程度または治療される患者の両眼が冒されているかどうかに応じて、本発明の眼科用医薬組成物の液剤または点眼薬は、患者の一方の眼のみに投与されてもよいし、または両眼に投与されてもよい。主に本発明の医薬組成物の液体ビヒクルに含まれる半フッ化アルカンの特定の物理的特性、例えば高密度および低表面張力のために、液滴の体積は通常約５～約５０μｌの範囲である。この小さい液滴サイズは通常、滴下投与を容易にし、さらに、本発明の医薬組成物の正確な投薬を容易にする。したがって、本発明の眼科用医薬組成物は、単一の液滴として、一眼当たり一用量当たり約５～約５０μｌ、好ましくは一眼当たり一用量当たり約８～１５μｌの体積で、より好ましくは一眼当たり一用量当たり約８～１２μｌの体積で、最も好ましくは一眼当たり一用量当たり約１０μｌの体積で投与される。

【0082】

本発明の医薬組成物は、１日１回または１日数回、通常１日８回までまたは５回まで、好ましくは大体等間隔で投与され得る。多くの例では、本発明の医薬組成物は、好ましくは１日４回まで、例えば毎日１回のみまたは１日２回または１日３もしくは４回投与される。

【0083】

好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、炎症性眼疾患の第一選択治療で治療された患者に、または好ましくは眼内炎症性眼疾患の第一選択治療で治療された患者までも投与できる。本明細書において使用される用語「第一選択治療」とは、タクロリムスと、半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む本発明の医薬組成物以外の活性化合物または組成物による、炎症性眼疾患の治療または、より具体的には、眼内炎症性眼疾患の治療を意味する。したがって、本発明による眼内炎症性眼疾患の治療で使用するための本発明の医薬組成物の投与は、選択された第一選択治療法または治療が第二選択治療の初期化の前に中止されたか否か、あるいは補助療法もしくは治療の場合にはまだ進行中であるかどうかに応じて、第二選択治療法または補助療法もしくは治療として提供され得る。

【0084】

好ましい実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、第一選択治療としてステロイドまたは副腎皮質ステロイド、例えばデキサメタゾン、トリアムシノロンおよびフルオシノロン、好ましくはデキサメタゾンで処置された患者に投与される。そのようなステロイド化合物は、多くの炎症性眼疾患、特に多くの眼内炎症性眼疾患、例えば、上に概説されるようなぶどう膜炎および網膜炎症などの第一選択治療として一般に使用されている。しかし、好ましくは、本発明で用いるための、タクロリムスと、半フッ化アルカンを含む少なくとも１種の液体ビヒクルとを含む医薬組成物は、ぶどう膜炎の第一選択治療としてステロイドで処置された患者に（第二選択治療として）投与される。

【0085】

本発明の医薬組成物は、ステロイドまたは副腎皮質ステロイドによる標準的な治療の臨床的代替法を提供するが、ステロイドまたは副腎皮質ステロイドによる治療の一般的な悪影響として眼内圧の上昇を誘発することはなく、緑内障または白内障などのさらなる合併症の危険性を増加させることもない。さらに、本発明の医薬組成物は、局所的に自己投与され得る第二選択治療の全ての利点を提供する。

【0086】

さらに、驚くべきことに、本発明の医薬組成物は網膜への浸潤性免疫細胞の数を減少させるのに効果的であることが見出された。そのため、本発明は、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物を局所投与することを含む、炎症性眼疾患またはより具体的には眼内炎症性眼疾患を有する患者の網膜の浸潤性免疫細胞の数を減少させる方法にも関する。さらに、本発明は、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物を局所投与することを含む、例えば、糖尿病性網膜症および加齢黄斑変性症などの、網膜が関与する炎症性成分を有する疾患に罹患している患者の網膜の浸潤性免疫細胞の数を減少させる方法にも関する。

【0087】

さらなる態様において、本発明は、タクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む組成物を眼に投与することを含む、眼内炎症性眼疾患を治療する方法を提供する。

【0088】

なおさらなる態様では、本発明は、眼内炎症性眼疾患を治療する方法における治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物の使用に言及する。

【0089】

なおさらなる態様において、本発明は、眼内炎症性眼疾患の治療のための薬物の製造のための、好ましくは治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物の使用に言及する。

【0090】

なおさらなる態様において、本発明は、以下
ｉ．眼内炎症性眼疾患の治療のための方法において使用するための薬剤有効量のタクロリムスと少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物；および
ｉｉ．組成物を保持するための容器であって、好ましくは、眼表面、好ましくは下眼瞼、涙嚢または眼組織への組成物の局所投与に適合した分配手段を含む容器、および
ｉｉｉ．任意選択で、眼内炎症性眼疾患または障害の治療法、治療、予防または寛解における医薬組成物の使用のための説明書または指示書
を含むキットに関する。

【0091】

本発明のこの態様の項目ｉ．によれば、薬学的キットは、本発明の第１の態様に関して上に記載されるような治療上有効な量のタクロリムスを含む医薬組成物を含む。

【0092】

本発明のこの態様の項目ｉｉ．に関連して使用される容器は、単一用量の医薬組成物を保持する単回使用のための容器として、または複数の単一用量を保持する複数回使用のための容器として、任意の適した形態で提供され得る。好ましくは、容器は、容器は、患者の眼の表面への医薬組成物の滴下局所投与を可能にする分配手段を含む。一実施形態では、分配手段を含む容器は、適切な分配手段を備えるガラスまたは熱可塑性エラストマー製のボトルなどの従来の点滴ボトル、または使い捨て点滴器であり得る。

【0093】

本発明のこの態様のさらなる好ましい実施形態では、分配手段は、約８～１５μｌ、好ましくは約８～１２μｌ、より好ましくは約１０μｌの体積を有する液滴を分配するような寸法の点滴器を含む。液滴の体積が小さいと、眼への正確な投薬を達成する（過剰投与を避ける）ことができ、投与後の眼から組成物のかなりの割合の過剰な量の排出を回避することができる。

【0094】

好ましい実施形態では、本発明のこの態様によるキットはさらに、項目ｉｉｉ．として取扱説明書を含む。

【0095】

本発明のこの態様の項目ｉｉｉ．による医薬組成物の使用のための説明書または指示書は、任意の適切な形態、例えば、印刷された形態またはその他の読取可能な形態の同封のラベルまたは説明書として、あるいは任意のその他の適したデータ媒体に提供され得る。あるいは、使用指示書は、バーコードまたはＱＲコードなどの電子的にまたはコンピュータで読み取り可能な形態で提供され得る。

【0096】

項目ｉｉｉ．による指示書は、眼内炎症性眼疾患または障害の治療法、治療、予防または寛解における、好ましくはぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎および視神経炎またはその組合せから選択される眼内炎症性眼疾患の治療法における、本発明の医薬組成物の取扱説明書を含み得る。

【0097】

以下は、本発明に含まれる番号付けられた実施形態である。
１．眼内炎症性眼疾患の治療のための方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物、または
治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む組成物を眼に投与することを含む、眼内炎症性眼疾患を治療する方法、または
眼内炎症性眼疾患を治療する方法における治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物の使用、または
眼内炎症性眼疾患の治療のための薬物の製造のための、好ましくは治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物の使用、または
ｉ．眼内炎症性眼疾患の治療のための方法において使用するための、治療上有効な量のタクロリムスと、少なくとも１種の半フッ化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む医薬組成物；およびｉｉ．組成物を保持するための容器であって、該容器が、好ましくは、眼表面、好ましくは下眼瞼、涙嚢または眼組織への組成物の局所投与に適合した分配手段を含む容器、を含むキットであって、
眼内炎症性眼疾患が、ぶどう膜炎、網膜炎症、強膜炎および視神経炎またはその組合せからなる群から選択される、キット。
２．眼内炎症性眼疾患が、ぶどう膜炎、網膜炎症およびそれらの組合せから選択される、実施形態１に記載の実施形態。
３．眼内炎症性眼疾患がぶどう膜炎である、実施形態２に記載の実施形態。
４．ぶどう膜炎が難治性ぶどう膜炎である、実施形態１～３のいずれか一項に記載の実施形態。
５．ぶどう膜炎が前部ぶどう膜炎および／または中間部ぶどう膜炎および／または後部ぶどう膜炎である、実施形態１～４のいずれか一項に記載の実施形態。
６．ぶどう膜炎が慢性または急性である、実施形態１～５のいずれか一項に記載の実施形態。
７．半フッ化アルカンが式Ｆ（ＣＦ_２）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＨの化合物であり、式中、ｎおよびｍが３～１０の範囲から独立に選択される整数である、実施形態１～６のいずれか一項に記載の実施形態。
８．前記半フッ化アルカンが、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８からなる群から選択され、好ましくは前記半フッ化アルカンが、Ｆ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ８から選択され、より好ましくは前記半フッ化アルカンがＦ４Ｈ５である、実施形態７に記載の実施形態。
９．前記組成物が、最大１ｍｇ／ｍｌのタクロリムス、好ましくは最大０．５ｍｇ／ｍｌのタクロリムス、より好ましくは最大０．３ｍｇ／ｍｌのタクロリムスを含む、実施形態１～８のいずれか一項に記載の実施形態。
１０．前記組成物が、有機賦形剤、好ましくはエタノール、より好ましくは最大１．４重量％のエタノールを含む、実施形態１～９のいずれか一項に記載の実施形態。
１１．組成物が液体製剤である、実施形態１～１０のいずれか一項に記載の実施形態。
１２．液体製剤が水を含まない、かつ／または保存料を含まない、実施形態１１に記載の実施形態。
１３．前記組成物が溶液、懸濁液または乳濁液の形態で処方される、好ましくは前記組成物が溶液として処方される、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の実施形態。
１４．前記組成物が眼、眼瞼、眼嚢、眼表面または眼組織に局所投与される、実施形態１～１３のいずれか一項に記載の実施形態。
１５．組成物が液滴の形態で、または噴霧によるかまたは注射によって投与される、実施形態１～１４のいずれか一項に記載の実施形態。
１６．前記組成物が１眼当たり約５～約５０μｌ、好ましくは約８～１５μｌ、より好ましくは約１０μｌの体積の単一液滴として１日当たり最大４回投与される、実施形態１～１５のいずれか一項に記載の実施形態。
１７．組成物が、第一選択治療で治療された患者に投与される、実施形態１～１６のいずれか一項に記載の実施形態。
１８．組成物が、第一選択治療としてステロイドで治療された患者に投与される、実施形態１～１７のいずれか一項に記載の実施形態。
１９．炎症性疾患がぶどう膜炎である、実施形態１７または１８に記載の実施形態。
２０．組成物が、０．０３％ ｗ／ｖのタクロリムス、１．４％ ｗ／ｗのエタノールを含み、半フッ化アルカンがＦ４Ｈ５である、実施形態１～１９のいずれか一項に記載の実施形態。
２１．組成物が１種以上のさらなる賦形剤をさらに含む、実施形態１～２０のいずれか一項に記載の実施形態。
２２．組成物が、０．０３％（ｗ／ｖ）のタクロリムス、１．４％（ｗ／ｗ）のエタノールから本質的になり、半フッ化アルカンがＦ４Ｈ５である、実施形態１～２１のいずれか一項に記載の実施形態。

【図面の説明】

【0098】

図１は、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬治療の内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスモデルの臨床症状への効果を示す。 ＥＩＵは、下記のように２００ｎｇ／μｌ／眼のＬＰＳの硝子体内注射によってマウスに誘導された。ＬＰＳ注射の直後に、マウスを０．１％デキサメタゾン／ＰＢＳ（ＤＸＭ）、または０．０３％タクロリムス／ＰＢＳ（Ｔａｃｒｏ／ＰＢＳ）、または０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ（Ｔａｃｒｏ／ＳＦＡ）点眼薬のいずれかで１日３回処置した。眼底画像を含む臨床評価を、その後４８時間行った。図１Ａ～Ｅは、未処置（Ａ、Ｃ）、タクロリムス／ＰＢＳ処置（Ｃ）、ＤＸＭ処置（Ｄ）およびタクロリムス／ＳＦＡ処置（Ｅ）マウスの眼底画像を示す。図１（Ｆ）は、異なる群における網膜炎症の臨床スコアを示す；マン・ホイットニー検定による統計。

【0099】

図２は、異なる群のマウスにおけるＥＩＵの病理組織を示す。ＥＩＵマウスを、０．１％デキサメタゾン／ＰＢＳ（ＤＸＭ）、または０．０３％タクロリムス／ＰＢＳ、または０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬で、ＥＩＵの導入後０日目から２日目まで１日３回処置した。２日目に眼を収集し、Ｈ－Ｅ染色（ヘマトキシリンおよびエオシン染色）用に加工した。図２Ａ～Ｄは、対照としての未処置ＥＩＵマウス（Ａ）、タクロリムス／ＰＢＳ処置マウス（Ｂ）、ＤＸＭ処置マウス（Ｃ）、およびタクロリムス／ＳＦＡ処置マウス（Ｄ）の光学顕微鏡画像を示す。図２Ｅは、網膜炎症の病理組織学的スコアを示す。１つのプロットは１匹のマウスのスコア（すなわち、マウスの両眼の平均スコア）を表す。マン・ホイットニー検定による統計（「ＡＣ」は前房を意味し、「ＣＢ」は毛様体を意味し、「Ｉｒ」は虹彩を意味し、「Ｖｉ」は硝子体を意味し、Ｒｅは網膜を意味する）。

【0100】

図３は、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬治療の実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎（ＥＡＵ）の臨床症状への効果を示す。 ＥＡＵは、ＩＲＢＰ_１－２０ペプチド免疫化を用いてＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに誘導した。免疫処置後（ｐ．ｉ．）１４日目に、マウスを異なる点眼薬で１日３回処置した。眼底画像は、ｐ．ｉ．２５日目に、対照未処置ＥＡＵマウス（Ａ）、０．０３％タクロリムス／ＰＢＳ処置マウス（Ｂ）、０．１％デキサメタゾン（ＤＸＭ）処置マウス（Ｃ）、および０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ処置マウス（Ｄ）から撮影した。図３Ｅは、異なる群におけるｐ．ｉ．１４日目からｐ．ｉ．２５日目までのＥＡＵの臨床スコアの変化を示す（ウィルコクソン符号順位和検定による統計）。図３Ｆは、異なる群におけるｐ．ｉ．２５日目のＥＡＵの臨床スコアの比較を示す（マン・ホイットニー検定による統計）。

【0101】

図４は、異なる群のマウスにおけるＥＡＵの病理組織を示す。ＥＡＵマウスを、０．１％デキサメタゾン（ＤＸＭ）、または０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬でｐ．ｉ．１４日目から２４日目まで１日３回で処置した。ｐ．ｉ．２５日目に眼を収集し、Ｈ－Ｅ染色用に加工した。図４Ａ～Ｄは、対照未処置ＥＡＵマウス（Ａ）、デキサメタゾン（ＤＸＭ）処置マウス（Ｂ）、タクロリムス／ＰＢＳ処置マウス（Ｃ）、およびタクロリムス／ＳＦＡ処置マウス（Ｄ）の光学顕微鏡画像を示す。図４Ｅは、網膜炎症の病理組織学的スコアを示す。１つのプロットは１匹のマウスのスコア（すなわち、マウスの両眼の平均スコア）を表す（マン・ホイットニー検定による統計）。

【0102】

図５は、正常なマウス眼の硝子体（図５Ａ）、脈絡膜／強膜（図５Ｂ）、網膜（図５Ｃ）および全血（図５Ｄ）のタクロリムスレベルを示す。マウスを、タクロリムス／ＳＦＡまたはタクロリムス／ＰＢＳ点眼薬で１日３回、３日間で処置した。最後の点眼薬処置後の異なる時点（１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間）で試料を回収し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を用いるタクロリムスの測定のために加工した。タクロリムスのレベルは、網膜および脈絡膜／強膜の組織重量に対して正規化した。平均±ＳＤ。同じ時点でタクロリムス／ＰＢＳ処置眼と比較して、Ｎ＝４、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１、二元配置分散分析。同じ時点のタクロリムス／ＰＢＳ処置眼と比較して、＋Ｐ＜０．０５、＋＋Ｐ＜０．０１（対応のないｔ検定）。「＃」は、検定において検出可能な値よりも低い値を意味する。

【0103】

図６Ａ～Ｄは、ぶどう膜炎の有るマウス眼と無いマウス眼の硝子体のタクロリムスレベルを示す。対照非ぶどう膜炎マウスおよびぶどう膜炎マウスをタクロリムス／ＳＦＡ点眼薬で１日３回、３日間処置した。最後の点眼薬処置後の異なる時点（１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間）で、試料を収集した。図６Ａは、硝子体におけるタクロリムスレベルを示す。図６Ｂは、脈絡膜／強膜組織におけるタクロリムスレベルを示す。図６Ｃは網膜組織におけるタクロリムスレベルを示し、図６ｄは全血中のタクロリムスレベルを示す。タクロリムスのレベルを、網膜および脈絡膜／強膜の組織重量に対して正規化した。平均±ＳＤ。Ｎ＝４；同じ時点の対照非ぶどう膜炎眼と比較して、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１。二元配置分散分析。同じ時点の非ぶどう膜炎眼と比較して、＋Ｐ＜０．０５、＋＋Ｐ＜０．０１（対応のないｔ検定）。「＃」は、検定において検出可能な値よりも低いタクロリムスレベルを示す。

【0104】

図７は、内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスモデルにおいて観察された免疫細胞浸潤を示す。ここでは、網膜中の浸潤性免疫細胞をフローサイトメトリーを用いて測定した。０．０３％（ｗ／ｖ）タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬を用いた場合に、より低いレベルの浸潤性免疫細胞が網膜で観察された。（対照＝未処理、Ｄｅｘ＝ＰＢＳ中０．１％デキサメタゾン、Ｔａｃｒｏ／ＳＦＡ＝タクロリムスＳＦＡ、Ｔａｃｒｏ／ＰＢＳ＝ＰＢＳ中０．１％タクロリムス；浸潤性免疫細胞マーカー：Ｇｒ１＋＝顆粒球マーカー陽性細胞；ＬＦＡ１＋＝リンパ球機能関連抗原１、全てのＴ細胞、さらにはＢ細胞、マクロファージおよび好中球に見られる；ＣＤ６２Ｌ＋＝Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）陽性細胞接着分子、リンパ球上に見られる；ＣＣＲ２＋＝Ｃ－Ｃケモカイン受容体２型陽性炎症性単球）

【0105】

以下の実施例は本発明を説明するのに役立つが、これらは本発明の範囲を限定するものと理解されるべきではない。
実施例
概要：
使用した組成物：

【0106】

１．４％（ｗ／ｗ）エタノールを含むＦ４Ｈ５に溶解した０．０３％ｗ／ｖのタクロリムス［０．３ｍｇ／ｍｌ］の溶液を、１日３回（１滴／眼）適用する点眼薬の形態で局所投与される、高度に親油性の薬物を組み込み送達するように処方した。この製剤は、本明細書において「Ｔａｃｒｏ／ＳＦＡ」または「タクロリムス／ＳＦＡ」または「Ｔａｃ／ＳＦＡ」と略される。

【0107】

ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、０．０３％）に懸濁したタクロリムスを対照として使用した。この製剤は、本明細書において「Ｔａｃｒｏ／ＰＢＳ」または「タクロリムス／ＰＢＳ」または「Ｔａｃ／ＰＢＳ」と略される。

【0108】

さらに、ＰＢＳに懸濁した０．１％デキサメタゾン（ＤＸＭ）（シグマ－アルドリッチ、英国）を標準治療対照として使用した。この製剤は、本明細書において「ＤＸＭ」または「Ｄｅｘ」または「０．１％デキサメタゾン／ＰＢＳ」と略される。
動物：

【0109】

１０～１２週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、１９８６年の動物（科学的処置）法に対する内務省規則（英国）（ｔｈｅ Ｈｏｍｅ Ｏｆｆｉｃｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）Ａｃｔ）、ならびに、眼科および視覚研究における動物の使用に関する視覚と眼科学研究協会の声明（ｔｈｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に従って処置した。全てのプロトコールは管轄倫理委員会によって承認された。
眼炎症の臨床評価：

【0110】

動物をイソフルラン吸入（Ｖｅｔ Ｔｅｃｈ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ、英国）によって麻酔し、１％アトロピンおよび２．５％フェニレフリン（Ｍｉｎｉｍｓ、Ｂａｕｓｃｈ ａｎｄ Ｌｏｍｂ、英国）を使用して瞳孔を散大させた。眼炎症の重症度は、前部および後部の炎症の両方を考慮して顕微鏡下で（眼底イメージングシステムを用いた眼底検査によって）評価した。前部ぶどう膜炎の臨床スコアは、以前に定義されたスコアリングシステムに従って等級付けした（グレード０～４）（Ｇｏｕｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４，６５１８－６５２３）：
－グレード０、炎症反応なし；
－グレード１、虹彩および結膜血管に個別の炎症；
－グレード２、虹彩および結膜血管の拡張と前房の中程度の発赤；
－グレード３、前房のチンダル現象に関連した虹彩の充血；ならびに
－グレード４、３と同じ臨床徴候に加えて、フィブリンまたはシネチアが存在。

【0111】

後部炎症を評価するために、前述のような局所内視鏡下眼底イメージング（ＴＥＦＩ）システムを用いて各々のマウスから眼底画像を撮影した（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８７，３１９－３２６）。各眼のデジタル画像を分析し、以前に本発明者らが開発した標準的な等級付けシステムを用いて２名の独立した研究者によって臨床スコアを評価した（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８７，３１９－３２６）。

組織診断：

【0112】

下記のような実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎（ＥＡＵ）の誘発後２５日目から、または下記のような組織学的検査のための内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスの誘発後２日目から、眼を収集した。全ての眼を２．５％（ｗ／ｖ）グルタルアルデヒド（Ａｇａｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｔｄ、英国スタンステッド）で少なくとも２４時間固定した。次に、眼をパラフィンに包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色用に加工した。各眼について、４つの異なる層からの４つの切片を前述の基準に従って等級付けした（Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９００，４４３－４６９）。

＜実施例１＞内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスモデル
ヒト急性前部ぶどう膜炎のモデルとしての内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）の導入：

【0113】

Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、以下の通りわずかに変更した前述のプロトコール（Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５２，６４７２－６４７７）を使用して、ＬＰＳ（リポ多糖類）の硝子体内注射によってＥＩＵを誘導した：大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）０５５：Ｂ５ ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ、英国）を発熱物質を含まないリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解した。Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（ＰＢ６００－１、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、米国ネバダ州）に入れた３０ゲージ針および２５μＬシリンジを使用して、マウスに１μＬ中２００ｎｇ／眼のＬＰＳを硝子体内注射した。眼内炎症は、硝子体内注射によるＬＰＳ負荷の４～６時間後に始まり、２４～４８時間でピークに達した。その後、炎症は３日後に消散し始めた。眼は１週間以内に正常に戻るであろう（Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５２，６４７２－６４７７）。
ＥＩＵの治療：

【0114】

マウスをＥＩＵ調査において４つの群に無作為化した：群１：対照（点眼薬無し）、ｎ＝６マウス；群２：０．１％デキサメタゾンによる処置、ｎ＝６マウス；群３：０．０３％タクロリムス／ＰＢＳによる処置、ｎ＝６マウス；群４：０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ、ｎ＝８マウス。２日間のＬＰＳの硝子体内注射の直後から始めて、全てのマウスを１日３回点眼薬で処置した。この調査を２回繰り返した。
ＥＩＵの治療におけるタクロリムス／ＳＦＡ点眼薬の効果：

【0115】

臨床試験により、結膜血管の充血、前房における広範囲の免疫細胞浸潤、および４８時間の未処置マウスとタクロリムス－ＰＢＳ処置ＥＩＵマウスの硝子体が明らかになった（図１Ａ、Ｂ；矢印参照）。浸潤細胞は硝子体の下部でより頻繁に観察された（図１Ｂ）。網膜剥離および出血が、重度の炎症を有する眼において観察された（図１Ｃ）。眼内炎症の重症度は、対照およびタクロリムス／ＰＢＳ処置群と比較して、デキサメタゾン（図１Ｄ）またはタクロリムス／ＳＦＡ（図１Ｅ）処置後に低下した（図１Ｆ）。

【0116】

臨床徴候に一致して、組織学的解析により、処置していないマウス（図２Ａ）またはタクロリムス／ＰＢＳ点眼薬で治療したマウス（図２Ｂ）において、前房（ＡＣ）、硝子体腔（Ｖｉ）、および毛様体（ＣＢ）領域の免疫細胞の蓄積を特徴とするＥＩＵの顕著な特徴が明らかになった。広範囲の網膜免疫細胞浸潤に関連する重度の網膜破壊（網膜剥離、無秩序な網膜層、出血）も観察された（図２Ａおよび２Ｂ中の矢印）。硝子体および網膜における軽度の細胞浸潤が、０．１％デキサメタゾンまたはタクロリムス／ＳＦＡ点眼薬で処置した眼で観察され、網膜層の全体構造は無傷のままであった（図２Ｃ、Ｄ）。デキサメタゾンおよびタクロリムス／ＳＦＡ処置眼の組織病理学的スコアは、未処置対照ＥＩＵ眼のスコアよりも有意に低かった（図２Ｅ）。さらなる２組のマウスでの反復試験は同様の結果を示した。

【0117】

要約すると、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬による治療は、内毒素誘発ぶどう膜炎（ＥＩＵ）マウスモデルにおける急性ぶどう膜炎の重症度を軽減した：低下は臨床スコアならびに組織学的スコアにおいて観察された。さらに、網膜（眼底に位置する）においてそれよりも低いレベルの浸潤性免疫細胞が観察された。
＜実施例２＞実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎（ＥＡＵ）
後部ぶどう膜炎のための実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎（ＥＡＵ）マウスモデルの誘導：

【0118】

Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２およびＸｕ ｅｔ ａｌ．，２００５に以前に記載されたようにＥＡＵを誘導した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、Ｈ３７Ｒａ、Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国ミズーリ州デトロイト）に乳化した、５００μｇのＩＲＰＢペプチド１－２０（ＧＰＴＨＬＦＱＰＳＬＶＬＤＭＡＫＶＬＬＤ；ＧＬ（Ｂｉｏｃｈｅｍ）Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｌｔｄ、中国）を皮下免疫した。マウスに、１００μｌ（１．５μｇ）の百日咳菌毒素（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、英国）の追加の腹腔内注射を投与した。網膜炎症は、免疫処置後（ｐ．ｉ．）１２～１４日に発症し、ｐ．ｉ．２２～２５日にピークに達した。炎症の重症度は、ピーク期以降に低下するが、網膜炎症は４ヶ月以上持続する（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。
ＥＡＵの治療：

【0119】

ｐ．ｉ．１４日目にＥＡＵマウスを炎症の臨床スコアに基づいて４つの群に分けたところ、各群のスコアは同等であった。群１：対照（処置無し、ｎ＝７マウス）；群２：０．１％デキサメタゾン（ＤＸＭ）点眼薬（ｎ＝７マウス）；群３：０．０３％タクロリムス／ＰＢＳ点眼薬（ｎ＝７マウス）；群４：０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬（ｎ＝７マウス）。群２～４の全てのマウスにｐ．ｉ．１４日目からｐ．ｉ．２５日目まで１日３回点眼薬処置を行った。
後部ぶどう膜炎（ＥＡＵ）のマウスモデルにおけるタクロリムス／ＳＦＡ点眼薬の治療的役割：

【0120】

タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬による処置がＥＩＵの炎症を抑制することが示されたので、後部ぶどう膜炎のマウスモデルであるＥＡＵにおいてその治療効果をさらに評価した。点眼薬の局所投与は、ぶどう膜炎の発症後、すなわちｐ．ｉ．１４日目に開始した。ＥＡＵの臨床スコアは、処置前（すなわち１４日目）の調査群間で同等であった。広範囲の網膜浸潤（白っぽい病変、図３Ａおよび３Ｂ参照）、血管のカフィング（矢印、図３Ａ）、および直線状の病変（矢頭、図３Ａ）を特徴とする重度の網膜炎症は、未処置およびタクロリムス／ＰＢＳ処置ＥＡＵマウスにおいて観察された。分散した小さな浸潤物、軽度の血管のカフィングおよび視神経乳頭腫脹（図３Ｃ＆３Ｄ）を特徴とする軽度の炎症は、デキサメタゾンおよびタクロリムス／ＳＦＡ処置眼において観察された。網膜炎症の重篤度は全群でｐ．ｉ．１４日目から２５日目まで増加したが、増加量はタクロリムス／ＳＦＡおよびデキサメタゾン処置群と比較して未処置およびタクロリムス／ＰＢＳ処置群でより顕著であった（図３Ｅ）。ｐ．ｉ．２５日目に、デキサメタゾンおよびタクロリムス／ＳＦＡ処置群の臨床スコアは、未処置マウスのスコアよりも有意に低かった（図３Ｆ）。

【0121】

組織学的検査により、未処置（図４Ａ）およびタクロリムス／ＰＢＳ処置（図４Ｃ）マウスの眼の網膜および硝子体における広範囲の免疫細胞浸潤が明らかになった。網膜層はこれらの眼において無秩序であった。少数の免疫細胞浸潤および肉芽腫性病変（図４の矢印）が、デキサメタゾン（図４Ｂ）およびタクロリムス／ＳＦＡ（図４Ｄ）処置眼において観察されたが、網膜構造はこれらのマウスにおいてほとんど無傷であった。ＥＡＵの全体的な病理組織学的スコアは、未処置対照と比較して、デキサメタゾン処置マウスおよびタクロリムス／ＳＦＡ処置マウスにおいて有意に低かった（図４Ｅ）。本発明者らの結果は、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬がＥＡＵにおいて進行中の眼炎症の制御に効果的であることを示唆する。

【0122】

要約すると、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬による治療は、実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎（ＥＡＵ）マウスモデルにおける網膜炎症を軽減した：低下は臨床スコアならびに組織学的スコアにおいて観察された。
＜実施例３＞タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬の薬物動態および吸収調査
点眼薬処置および群：

【0123】

タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬の薬物動態は、正常マウスとＥＩＵマウス（上記の通り）の両方で行った。正常Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスまたはＥＩＵマウス（ＬＰＳ注射の直後）を、０．０３％タクロリムス／ＳＦＡかまたは０．０３％タクロリムス／ＰＢＳ点眼薬（６０μｌ／滴）のいずれかで１日３回３日間処置した。最後の点眼薬処置から異なる時点で（１５分、３０分、１時間、２時間、４時間および６時間）、動物を犠牲にし、タクロリムスの測定のために以下の試料を採取した（１）硝子体液、（２）網膜、（３）脈絡膜／強膜、および（４）血液。各群で４匹のマウスを使用し、点眼薬処置を受けなかった２０匹の正常マウスと８匹のＥＩＵマウスを対照として使用した。
サンプル収集および処理：

【0124】

６～８μｌの硝子体液を各マウスから採取した。動物を犠牲にした直後に網膜組織を解剖して秤量し、エッペンドルフチューブに入れた。動物を犠牲にした直後に脈絡膜／強膜組織を解剖して秤量し、エッペンドルフチューブに入れた。２００～５００μｌの全血を各マウスからＥＤＴＡ被覆チューブに採取した。

【0125】

すべての試料を－２０℃で保存し、次に、試料分析前のそれぞれのマトリックスに対して適格であった液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法によって、タクロリムスを定量的に決定した。定量の下限は、血液について０．２５ｎｇ／ｍｌ、網膜および脈絡膜／強膜ホモジネートについて０．０５ｎｇ／ｍｌ、硝子体について１．２５ｎｇ／ｍｌであった。
正常な非炎症マウスにおけるタクロリムス点眼薬の薬物動態および吸収：

【0126】

タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬処置後１５分～２時間に採取した硝子体液中のタクロリムスのレベルは、２～６ｎｇ／ｍｌであった。４時間～６時間までに、タクロリムスのレベルは、タクロリムス／ＳＦＡ処置マウスの大部分の試料において検出可能レベルよりも低くなった。タクロリムス／ＰＢＳ処置マウスでは、タクロリムスレベルは、１時間からのものを除いて、全ての試料において検出可能レベルよりも低かった。タクロリムス／ＳＦＡ群の硝子体中のタクロリムスのレベルは、投与後１時間のタクロリムス／ＰＢＳ群のものよりも有意に高かった（図５Ａ）。

【0127】

脈絡膜／強膜では、タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬投与後１５分～１時間に高レベルのタクロリムスが検出された（２７６ｎｇ／ｇ組織～３３７ｎｇ／ｇ組織、図５Ｂ）。その後、レベルは２時間後に１５０ｎｇ／ｇ組織、６時間後に７０ｎｇ／ｇ組織に減少した（図５Ｂ）。タクロリムス／ＰＢＳで処置した眼では、２３ｎｇ／ｇおよび３４ｎｇ／ｇ組織のタクロリムスが１５分から１時間の間に検出され、レベルは６時間で８．４５ｎｇ／ｇ組織に減少した（図５Ｂ）。全ての時点のタクロリムス／ＳＦＡ群の脈絡膜／強膜中のタクロリムスのレベルは、タクロリムス／ＰＢＳ群のレベルよりも有意に高かった（図５Ｂ）。

【0128】

タクロリムス／ＳＦＡの網膜中のタクロリムスのレベルは、点眼薬投与後１５分で４８ｎｇ／ｇ組織であり、１時間で９０ｎｇ／ｇ組織に増加した（図５Ｃ）。タクロリムスのレベルは２時間後にわずかに減少したが、点眼薬処置の６時間後に５３ｎｇ／ｇ組織のままであった（図５Ｃ）。タクロリムス／ＰＢＳで処置した眼において、タクロリムスのレベルは全ての時点で２～７ｎｇ／ｇ組織の間であり、タクロリムス／ＳＦＡで処置した眼のレベルよりも有意に低かった（図５Ｃ）。

【0129】

タクロリムス／ＳＦＡで処置した正常マウスの血液中のタクロリムスのレベルは、処置後１５分で３５ｎｇ／ｍｌから３０分で１１８ｎｇ／ｍｌに増加した後、１時間から減少したが、２時間で６２ｎｇ／ｍｌのままであった（図５Ｄ）。タクロリムス／ＰＢＳ点眼薬で処置したマウスの血液中では、より低いレベルのタクロリムス（２～４０ｎｇ／ｍｌ）が検出された。タクロリムス／ＰＢＳ処置と未処置対照との間に差異はなかった（図５Ｄ）。タクロリムス／ＳＦＡ群の血液中のタクロリムスのレベルは、３０分、１時間および４時間の時点でタクロリムス／ＰＢＳ群よりも有意に高かった（図５Ｄ）。

【0130】

これらの結果は、タクロリムス／ＳＦＡが、タクロリムス／ＰＢＳよりも高い透過性を有し、点眼薬投与後に、正常なマウス眼の眼障壁を急速に貫通し、全ての眼組織ならびに血液循環に急速に（１５～３０分以内に）分布し得ることを示す。
ぶどう膜炎マウスにおけるタクロリムス点眼薬の薬物動態および吸収：

【0131】

ぶどう膜炎の眼においてのみタクロリムス／ＳＦＡを試験したので、ぶどう膜炎の眼と非ぶどう膜炎の眼との間のタクロリムス／ＳＦＡ点眼薬の薬物動態を比較した。ぶどう膜炎マウスの硝子体中のタクロリムスのレベルは、１５分および３０分でそれぞれ２４ｎｇ／ｍｌおよび１４ｎｇ／ｍｌであり、非ぶどう膜炎マウス（それぞれ、２．５ｎｇ／ｍｌおよび２．３ｎｇ／ｍｌ）よりも有意に高かった。点眼薬投与の６時間後、非ぶどう膜炎の眼の１．１ｎｇ／ｍｌと比較して、１０ｎｇ／ｍｌのタクロリムスをぶどう膜炎の眼の硝子体において検出した（図６Ａ）。

【0132】

脈絡膜／強膜におけるタクロリムスのレベルは、点眼薬投与後１５分で、正常マウスでの２７６ｎｇ／ｇ組織と比較して、ぶどう膜炎マウスにおいて８５５．５ｎｇ／ｇ組織であった（図６Ｂ）。タクロリムスの濃度は３０分で減少し、ぶどう膜炎の眼では１時間で非ぶどう膜炎の眼と同程度のレベルまで減少した。２時間および６時間で、ぶどう膜炎マウスは、正常な非炎症マウスと比較して有意に高いレベルのタクロリムスを有していた（図６Ｂ）。

【0133】

有意に高いレベルのタクロリムスは、非ぶどう膜炎マウスと比較してぶどう膜炎マウスの網膜において、投与の１５分後（４８ｎｇ／ｇ組織に対して１０２）および２時間後（６１ｎｇ／ｇ組織に対して１１５ｎｇ／ｇ）に検出された（図６Ｃ）。６時間での網膜タクロリムスのレベルは、ぶどう膜炎の眼で１５分のレベルの約６７％であった（図６Ｃ）。

【0134】

タクロリムスの血中濃度は、投与の１５分後にぶどう膜炎マウスにおいて２８０ｎｇ／ｍｌであり、非ぶどう膜炎マウス（３５ｎｇ／ｍｌ）よりも有意に高かった（図６Ｄ）。次に、レベルは、ぶどう膜炎マウスにおいて点眼薬処置後３０分で１４３ｎｇ／ｍｌに、６時間で７３ｎｇ／ｍｌに低下した。非炎症マウスでは、タクロリムスの血中濃度は３０分で１１８ｎｇ／ｍｌに増加し、他の時点でもぶどう膜炎マウスに匹敵するレベルのままであった（図６Ｄ）。

【0135】

本発明の薬物動態調査は、タクロリムス／ＰＢＳではなく、タクロリムス／ＳＦＡが、局所投与後に急速に（１５分以内）組織障壁（例えば、上皮、膜および内皮障壁）を貫通し、正常なマウスにおいて有意なレベルで脈絡膜／強膜などの眼組織に達することを示す。

【0136】

眼が炎症を起こしている場合には、眼組織（例えば脈絡膜／強膜および網膜など）への浸透ははるかに増加し、ぶどう膜炎マウスの脈絡膜／強膜中のタクロリムスのレベルは、投与１５分後に非ぶどう膜炎マウスよりも３倍および８倍高かった。

【0137】

さらに、タクロリムス／ＳＦＡは、一般的な組織障壁だけでなく、眼障壁も貫通する。正常なマウス眼において、局所投与１５分後にかなりの量のタクロリムスが硝子体および網膜に検出され、薬物は少なくとも６時間網膜にとどまった。硝子体および網膜中のタクロリムスのレベルは、投与後１５分で、ぶどう膜炎の眼において非ぶどう膜炎の眼よりも２倍および１０倍高かった。

【0138】

データは、タクロリムス／ＳＦＡがマウスの眼障壁（脈絡膜／強膜など）を貫通し、治療レベルで眼内組織（網膜など）に到達し、網膜炎症を抑制することができることを示唆する。０．０３％タクロリムス／ＳＦＡ点眼薬は、ＥＩＵモデルとＥＡＵモデルの両方において眼内炎症を抑制することが示されている。タクロリムス／ＰＢＳは、ＥＩＵおよびＥＡＵモデルにおいていかなる抑制効果も示さず、眼障壁を貫通することができなかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】