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▶ アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディシン，インコーポレイティドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-03-30
(45)【発行日】2022-04-07
(54)【発明の名称】組換え単純ヘルペスウィルス２（ＨＳＶ－２）ワクチンベクター
(51)【国際特許分類】
A61K 39/295 20060101AFI20220331BHJP
A61K 39/245 20060101ALI20220331BHJP
A61K 35/763 20150101ALI20220331BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20220331BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20220331BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220331BHJP
C12N 7/01 20060101ALN20220331BHJP
【ＦＩ】
A61K39/295
A61K39/245
A61K35/763
A61P31/22
A61P37/04
A61K39/395 D
C12N7/01 ZNA
【請求項の数】
8
(21)【出願番号】P 2021026943
(22)【出願日】2021-02-24
(62)【分割の表示】P 2020009043の分割
【原出願日】2015-03-02
(65)【公開番号】P2021088590
(43)【公開日】2021-06-10
【審査請求日】2021-03-25
(31)【優先権主張番号】62/080,663
(32)【優先日】2014-11-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】61/946,965
(32)【優先日】2014-03-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】515314797
【氏名又は名称】アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディシン
(74)【代理人】
【識別番号】100110423
【弁理士】
【氏名又は名称】曾我 道治
(74)【代理人】
【識別番号】100111648
【弁理士】
【氏名又は名称】梶並 順
(74)【代理人】
【識別番号】100122437
【弁理士】
【氏名又は名称】大宅 一宏
(72)【発明者】
【氏名】ジェーコブス、ウィリアム
(72)【発明者】
【氏名】ゴンサレス・ムノス、パブロ・エイ
(72)【発明者】
【氏名】ヘロルド、ベッツィ
(72)【発明者】
【氏名】ペトロ、クリストファー
【審査官】柴原 直司
(56)【参考文献】
【文献】特表平８－５０７７８４（ＪＰ，Ａ）
【文献】FASEB J., (2013), 28, [7], p.2584-2599
【文献】Virology, (2014), 318, [1], p.420-428
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３５／７６３
Ａ６１Ｋ ３９／２４５
Ａ６１Ｐ ３１／２２
Ｃ１２Ｎ ７／０１
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）Ｕｓ６遺伝子が欠失し、かつ、脂質二重層上に単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２、又はそのビリオンを含む、対象においてＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染又はＨＳＶ－１感染及びＨＳＶ－２感染の重感染に対する免役応答を誘発するためのワクチン又は医薬組成物であって、前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは前記組換えＨＳＶ－２のゲノムによってコードされていない、ワクチン又は医薬組成物。
【請求項2】
ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）Ｕｓ６遺伝子が欠失し、かつ、脂質二重層上に単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２、又はそのビリオンを含む、ＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染又はＨＳＶ－２及びＨＳＶ－１の重感染に対して対象を免役化するためのワクチン又は医薬組成物であって、前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは前記組換えＨＳＶ－２のゲノムによってコードされていない、ワクチン又は医薬組成物。
【請求項3】
前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは、脂質二重層上に存在するが、これは、細胞を、Ｕｓ６遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で感染させて、前記細胞がトランスフェクトされて、その細胞膜上に前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現し、脂質二重層上に存在する前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む前記組換えＨＳＶ－２が、前記細胞から産生されることによるものである、請求項１又は２に記載のワクチン又は医薬組成物。
【請求項4】
組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）で免疫化した第１の対象から得られた産物を含む、前記産物を第２の対象へ受動伝達によりもたらすことによって、第２の対象においてＨＳＶ－１感染、ＨＳＶ－２感染又はＨＳＶ－１感染及びＨＳＶ－２感染の重感染に対する免役応答を誘発するための組成物であって、前記組換えＨＳＶ－２はそのゲノム中のＵｓ６遺伝子が欠失しており、かつ、脂質二重層上に単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄを含み、前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは前記組換えＨＳＶ－２のゲノムによりコードされていない、組成物。
【請求項5】
前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは、脂質二重層上に存在するが、これは、細胞を、Ｕｓ６遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で感染させて、前記細胞がトランスフェクトされて、その細胞膜上に前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現し、脂質二重層上に存在する前記ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む前記組換えＨＳＶ－２が、前記細胞から産生されることによるものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
前記産物は血清を含む、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項7】
前記産物が前記組換えＨＳＶ－２による免疫化に応答した第１の対象により産生される抗体を含む、請求項４～６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項8】
前記第１の対象及び第２の対象がヒトである、請求項４～７のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年３月３日出願の米国仮特許出願第６１／９４６９６５号明細書、および２０１４年１１月１７日出願の米国仮特許出願第６２／０８０６６３号明細書の利益を主張する。各出願の内容は、引用を以て本明細書中に組み込まれる。
本出願は、２０１４年３月３日出願の米国仮特許出願第６１／９４６９６５号明細書、および２０１４年１１月１７日出願の米国仮特許出願第６２／０８０６６３号明細書の利益を主張する。各出願の内容は、引用を以て本明細書中に組み込まれる。
【0002】
連邦政府による資金提供の記載
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）によって授与された認可番号ＡＩ－０６１６７９およびＡＩ－５１５１９の下に、政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において、一定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）によって授与された認可番号ＡＩ－０６１６７９およびＡＩ－５１５１９の下に、政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において、一定の権利を有する。
【背景技術】
【0003】
本出願の全体を通して、種々の刊行物が引用され、角括弧内に番号によって挙げられる。これらの引用文献の完全な引用を、本明細書の最後に見出すことができる。これらの刊行物、ならびに本明細書中に引用される全ての特許、特許出願公開、および書籍の開示は、それらの全体が、本発明が属する技術をより完全に記載するために、引用を以て本出願中に組み込まれる。
【0004】
単純ヘルペスウィルス１型および２型（ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２）は、世界的に重大な健康問題として残存しており、世界中の発展途上国および貧困コミュニティに不均衡に影響を与え、かつＨＩＶエピデミックをあおっている。現在、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、またはＨＩＶの有効なワクチンがないので、これらの感染用のワクチンが緊急に必要とされている。ＨＳＶ－１は感染性失明の主な原因である一方、ＨＳＶ－２は世界的に、性器潰瘍の主な原因であるが、ＨＳＶ－１は目下、先進諸国において、性器疾患と関連してより一般的に同定されている。性器ヘルペスは、感染した人々に汚名をきせ、かつ心理的に衝撃を与えるおそれがある、再発性の、生涯にわたる疾患である。ＨＳＶ－２による感染は、ＨＩＶに感染して伝染させる可能性を著しく増大させる一方、いずれかの血清型の垂直伝染は多くの場合、重度の乳児罹患または乳児死亡の原因となる。ウィルス糖タンパク質Ｄを単独で、または糖タンパク質Ｂと組み合わせて（ｇＤおよびｇＢ）用いるサブユニット製剤に基づくＨＳＶ－２ワクチンの最近の臨床試験は、全身の中和抗体を誘導するにもかかわらず、失敗した。驚くべきことに、ＨＳＶ－２ ｇＤサブユニット（ｇＤ－２）ワクチンが、ＨＳＶ－１に対する部分的な防御を提供したが、ＨＳＶ－２からの防御を実現しなかった。いくつかの弱毒化ウィルスがプレ臨床的に評価されてきたが、臨床研究は現在まで、治療薬用途（再発の頻度の引下げ）に限定されてきた。そしてまた、有効性を示すこともなかった。ゆえに、新規のワクチン戦略が開発され、かつ評価されなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明はこの、新しく、かつ向上したＨＳＶ－１ワクチンおよびＨＳＶ－２ワクチンの必要性を扱う。
【課題を解決するための手段】
【0006】
ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子（Ｕｓ６）が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0007】
また、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子（Ｕｓ６）が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0008】
本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ゲノムまたは本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－１遺伝子を内部に含む単離細胞であって、ヒト中に存在しない細胞が提供される。
【0009】
また、本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含むワクチン組成物が提供される。
【0010】
また、本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含む組成物であって、ウィルスまたはビリオンのゲノムは、少なくとも第２の遺伝子の欠失を含み、第２の遺伝子は、ＨＳＶ－２ウィルスの複製または病原性に必須である、組成物が提供される。
【0011】
本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオン、および医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【0012】
また、対象において免疫応答を誘発する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において免疫応答を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0013】
また、対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、もしくは重感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは重感染を処置する、またはＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは重感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0014】
また、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0015】
また、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0016】
ワクチン、組成物および医薬組成物の、そしてこれらの使用の方法の実施形態において、組換えＨＳＶ－２の量は、明示された目的を達成するのに有効な組換えＨＳＶ－２のｐｆｕの量である。
【0017】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生されたＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0018】
また、組換え核酸がＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まないこと以外、野生型ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組換え核酸が提供される。
【0019】
また、対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0020】
また、対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染を処置または予防するための、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0021】
ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0022】
また、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0023】
また、本明細書中に記載されるウィルスまたは本明細書中に記載されるビリオンを内部に含む単離細胞であって、ヒト中に存在しない細胞が提供される。
【0024】
本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含むワクチン組成物。
【0025】
また、提供されるのは、本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含む組成物であり、当該ウィルスまたは当該ビリオンのゲノムは、少なくとも第２の遺伝子の欠失を含み、第２の遺伝子は、ＨＳＶ－２ウィルスの複製に必須である。
【0026】
また、本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオン、および医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物が提供される。
【0027】
また、対象において免疫応答を誘発する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において免疫応答を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0028】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において、ＨＳＶ－２感染を処置する、またはＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0029】
また、対象にＨＳＶ－２感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－２のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0030】
また、ＨＳＶ－２感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－２に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0031】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む、組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生された、脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0032】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質をコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生された、脂質二重層上に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0033】
また、配列がＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まないこと以外、ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組換え核酸が提供される。
【0034】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0035】
また、対象においてＨＳＶ－１感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0036】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置または予防するための、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0037】
また、対象においてＨＳＶ－１感染もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－２感染もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象においてＨＳＶ－２感染を処置する、もしくはＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量、または対象においてＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染を処置する、もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0038】
また、対象にＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0039】
また、ＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0040】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、さらに病原体の異質抗原を含む単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0041】
また、対象において抗原性標的に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する方法であって、対象に、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、さらに脂質二重層上に異質抗原を含む単離組換えＨＳＶ－２を、抗原性標的に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0042】
【図1】ＨＳＶ－２ ΔｇＤが、不稔感染を誘導する：ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋が、ｇＤをトランスで提供する細胞（例えばＶＤ６０［４０、４１］）においてのみ首尾よく複製するが、ＵＳ６をコードしないＶｅｒｏ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８１、ミドリザルの腎臓）またはＣａＳｋｉ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５５０、ヒト、頸部）等の細胞において複製しない。非補完ＨＳＶ－２ ΔｇＤ（Ｖｅｒｏ細胞から得られたΔｇＤ－／－）は、ＵＳ６をコードしない、ＶｅｒｏおよびＣａＳｋｉ等の細胞に感染することができない。
【図2】Ａ．最大１０７プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ウィルスを接種した重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスは、高い用量の膣内接種または皮下接種後に、疾患の徴候を呈しない。対照的に、１，０００倍低いウィルス用量（１０４ｐｆｕ）にて野生型ウィルスを接種したＳＣＩＤマウスは、疾患に屈する。Ａにおいて生存曲線が、Ｂにおいて紅斑、浮腫、または性器潰瘍の証拠に関する上皮スコア（０から５のスケール）が、そしてＣにおいてニューロン感染の証拠に関する神経学的スコア（０から５のスケール）が示される。
【図3】ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ウィルスによる免疫処置が、抗ＨＳＶ－２抗体を誘発する。ｓｃ．－ｓｃ．免疫処置が、かなりのレベルの全身性抗ＨＳＶ－２抗体および粘膜（膣洗浄液）抗ＨＳＶ－２抗体を誘発する一方、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によるｓｃ．－ｉ．ｖａｇ．免疫化が、全身性抗ＨＳＶ－２抗体をより低いレベルで誘発し、膣洗浄液中の抗体レベルの増大を誘発しなかった。Ａにおいて血清中の抗ＨＳＶ－２抗体レベルが示され、Ｂにおいて膣洗浄液中の抗ＨＳＶ－２抗体レベルが示される。ΔｇＤ－／＋で免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後、血清中に中和抗ＨＳＶ－２抗体を示す。ΔｇＤ－／＋免疫化によって誘発される抗体の中和能力は、Ｃにおいて示される（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図4】Ａ：Ｔｇ Ｔ細胞が伝達されてから、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋またはＶＤ６０溶解物（コントロール）でプライムブーストされたＣ５７Ｂｌ／６マウスの脾臓におけるＣＤ８＋ｇＢＴ－Ｉ Ｔ細胞カウント。Ｂ：ワクチン接種マウスまたはコントロールマウスの脾臓におけるｇＢＴ－Ｉ記憶Ｔ細胞のパーセンテージ。Ｃ：ブースト後１４日目に、脾細胞が単離されて、ｇＢ４９８－５０５ペプチドによりｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激されて、細胞内サイトカイン染色およびフローサイトメトリによって、サイトカイン産生について６時間後に分析された（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図5】ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋（１０６ｐｆｕ／マウス）による免疫化が、マウスを致死ＨＳＶ－２チャレンジから防御する。マウスは皮下でプライムされ、かつ３週間の間隔をあけてｓｃ．またはｉ．ｖａｇ．でブーストされてから、ブーストの３週後、ＬＤ９０の病原性野生型ＨＳＶ－２（４６７４）により膣内でチャレンジされた。コントロール（ＶＤ６０細胞溶解物で免疫化された）マウスが、かなりの体重損失（Ａ）および死亡（Ｂ）によって呈されるように、疾患に屈したが、ΔｇＤ－／＋免疫化マウスが、有意に少ない病状しか示さなかった。さらに、ΔｇＤ－／＋免疫化マウスは、致死チャレンジ後、より少ない上皮疾患（Ｃ）および神経学的病状（Ｄ）しか示さなかった。加えて、ΔｇＤ－／＋ワクチン接種マウスが、病原性ＨＳＶ－２の致死用量による膣内チャレンジ後、膣洗浄液（Ｅ）、膣組織および後根神経節（ＤＲＧ）（Ｆ）において、コントロールとしての、ＶＤ６０細胞溶解物により免疫化したマウスと比較して、有意に少ないウィルス負荷しか示さなかった。感染性ウィルスは、ΔｇＤ－／＋免疫化マウスから、４日目の膣洗浄液または５日目の膣組織およびＤＲＧ中に回収され得なかった（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図6】ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により免疫化したマウスが、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後、膣洗浄液においてより少ない炎症サイトカインしか分泌しない。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋により免疫化したマウスの膣洗浄液中に分泌したＴＮＦ－α、ＩＬ－６およびＩＬ－１βは、ＶＤ６０溶解物により免疫化され、かつ病原性ＨＳＶ－２によりチャレンジされたマウスよりも少ない。炎症サイトカイン発現の差異が、チャレンジ後の様々な時点にて観察される（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図7】ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋による免疫化が、感染部位、および関連するＬＮにＴ細胞をリクルートする。ΔｇＤ－／＋によりｓｃ．－ｓｃ．で免疫化したマウスが、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後、仙骨リンパ節（ＬＮ）中の活性化抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｂ）のパーセンテージの増大を示した。フローサイトメトリ分析のために、ＬＮが抽出されて、ＵＶ不活化ΔｇＤ－／－と６時間インキュベートされてから抗体で染色された。ΔｇＤ－／＋によりｓｃ．－ｉ．ｖａｇ．で免疫化したマウスが、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後、膣中の抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｃ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｄ）の数の増大を示した。フローサイトメトリ分析のために、Ｔ細胞を抽出し、かつ抗体で染色するように、膣の組織がプロセシングされた。細胞カウンティングが、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によりなされた（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。
【発明を実施するための形態】
【0043】
ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0044】
ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む：
ＭＧＲＬＴＳＧＶＧＴＡＡＬＬＶＶＡＶＧＬＲＶＶＣＡＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨＡＰＡＡＰＳＮＰＧＬＩＩＧＡＬＡＧＳＴＬＡＶＬＶＩＧＧＩＡＦＷＶＲＲＲＡＱＭＡＰＫＲＬＲＬＰＨＩＲＤＤＤＡＰＰＳＨＱＰＬＦＹ（ＨＳＶ－２参照株ＨＧ５２）。
ＭＧＲＬＴＳＧＶＧＴＡＡＬＬＶＶＡＶＧＬＲＶＶＣＡＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨＡＰＡＡＰＳＮＰＧＬＩＩＧＡＬＡＧＳＴＬＡＶＬＶＩＧＧＩＡＦＷＶＲＲＲＡＱＭＡＰＫＲＬＲＬＰＨＩＲＤＤＤＡＰＰＳＨＱＰＬＦＹ（ＨＳＶ－２参照株ＨＧ５２）。
【0045】
ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に、単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄを含む。
【0046】
ある実施形態において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含む：
ＭＧＧＡＡＡＲＬＧＡＶＩＬＦＶＶＩＶＧＬＨＧＶＲＧＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡＴＰＮＮＭＧＬＩＡＧＡＶＧＧＳＬＬＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＲＲＲＴＱＫＡＰＫＲＩＲＬＰＨＩＲＥＤＤＱＰＳＳＨＱＰＬＦＹ（ＨＳＶ－１参照株Ｆ）。
ＭＧＧＡＡＡＲＬＧＡＶＩＬＦＶＶＩＶＧＬＨＧＶＲＧＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＹＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡＴＰＮＮＭＧＬＩＡＧＡＶＧＧＳＬＬＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＲＲＲＴＱＫＡＰＫＲＩＲＬＰＨＩＲＥＤＤＱＰＳＳＨＱＰＬＦＹ（ＨＳＶ－１参照株Ｆ）。
【0047】
ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。（例えば、ＨＳＶ－２ゲノムおよびＵＳ６遺伝子について、Ｄｏｌａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９８ Ｍａｒｃｈ；７２（３）：２０１０－２０２１．（ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ１０９４９４）“Ｔｈｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２”参照（その全体が引用を以て本明細書中に組み込まれる））。
【0048】
また、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0049】
ある実施形態において、ビリオンはさらに、その脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む。実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
【0050】
ある実施形態において、ウィルスはさらに、その脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む。実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
【0051】
ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子を含まない組換えＨＳＶ－２ゲノムを内部に含む単離細胞が提供される。
【0052】
ある実施形態において、細胞は、組換えＨＳＶ－２ゲノムによってコードされない発現ＨＳＶ １糖タンパク質または発現ＨＳＶ ２糖タンパク質を提供する補完細胞(complementing cell)である。ある実施形態において、補完細胞は、ＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む。ある実施形態において、該細胞は、その膜上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現する。該細胞のある実施形態において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは、異種核酸によってコードされ、当該異種核酸は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子もしくはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ遺伝子である、またはＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子もしくはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ遺伝子と同一の配列を有する核酸である。
【0053】
また、本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含むワクチン組成物が提供される。ある実施形態において、該ワクチンは免疫アジュバントを含む。ある実施形態において、該ワクチンは免疫アジュバントを含まない。組換えＨＳＶ－２を含む、本明細書中に記載されるワクチン、組成物、または医薬組成物の実施形態において、ＨＳＶ－２は生きている。
【0054】
また、本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含む組成物であって、ウィルスまたはビリオンのゲノムは、少なくとも第２の遺伝子の欠失を含み、第２の遺伝子は、ＨＳＶ－２ウィルスの複製または病原性に必須である、組成物が提供される。
【0055】
本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス、または本明細書中に記載されるビリオン、および医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【0056】
ある実施形態において、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、ヒト対象への皮下投与に適切であるように製剤化される。ある実施形態において、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、ヒト対象への膣内投与に適切であるように製剤化される。ある実施形態において、組成物、医薬組成物、またはワクチンは、ヒト対象への筋肉内投与、鼻腔内投与、または粘膜投与に適切であるように製剤化される。
【0057】
また、対象において免疫応答を誘発する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において免疫応答を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0058】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは重感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは重感染を処置する、またはＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２もしくは重感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。ある実施形態において、本方法は、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染によって引き起こされるＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の病状を処置することを含む。本方法の実施形態において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染によって引き起こされる疾患は、性器潰瘍である。本方法の実施形態において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染によって引き起こされる疾患は、ヘルペス、口腔ヘルペス、ヘルペスひょうそ、性器ヘルペス、ヘルペス性湿疹、闘技ヘルペス（herpes gladiatorum）、ＨＳＶ角膜炎、ＨＳＶ網膜炎、ＨＳＶ脳炎、またはＨＳＶ髄膜炎である。
【0059】
ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染（すなわち、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の双方による感染）のための処置またはワクチン接種に関する本明細書中の方法の実施形態において、ＨＳＶ－１感染を処置する、ＨＳＶ－２感染を処置する、重感染を処置する、ＨＳＶ－１感染に対してワクチン接種する、ＨＳＶ－２感染に対してワクチン接種する、そして重感染に対してワクチン接種する、別個の、個々の実施形態がそれぞれ提供される。
【0060】
また、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0061】
また、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載される組換えＨＳＶ－２ウィルス；（ｉｉ）その、本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0062】
本方法のある実施形態において、対象は、皮下または膣内にプライミング用量が投与され、そして第２の用量が、皮下または膣内に投与される。本方法のある実施形態において、該対象は、抗ＨＳＶ抗体およびＴ細胞を誘発するために、皮下または膣内のプライミング用量と同じくらい多く投与される。
【0063】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生されたＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0064】
ある実施形態において、細胞は、その膜上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを発現する。
【0065】
また、組換え核酸がＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まないこと以外、野生型ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組換え核酸が提供される。ある実施形態において、組換え核酸はＤＮＡである。ある実施形態において、組換え核酸はＲＮＡである。
【0066】
また、対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄまたは単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄを含む。単離組換えＨＳＶ－２のある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
【0067】
また、対象においてＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染を処置または予防するための、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。ある実施形態において、ビリオンはさらに、その脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質ＤまたはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄを含む。ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。
【0068】
記載されるウィルスまたはビリオンのある実施形態において、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２または重感染は、性器潰瘍を引き起こす。
【0069】
ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）が提供される。
【0070】
ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に表面糖タンパク質を含み、これは、単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄである。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に非ＨＳＶ－２ウィルス表面糖タンパク質を含む。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に細菌表面糖タンパク質を含む。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２はさらに、その脂質二重層上に寄生体の表面糖タンパク質を含み、寄生体は、哺乳類の寄生体である。
【0071】
ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。ある実施形態において、表面糖タンパク質は、組換えＨＳＶ－２のゲノム中に挿入されたトランスジーンによってコードされる。ある実施形態において、表面糖タンパク質は、脂質二重層上に存在するが、これは、細胞を、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で感染させて、当該細胞がトランスフェクトされて、その細胞膜上に表面糖タンパク質を発現し、脂質二重層上に存在する表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２が、細胞から産生されることによるものである。ある実施形態において、ウィルス糖タンパク質は、ＨＩＶ、エンテロウィルス、ＲＳＶ、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ブタコロナ呼吸器ウィルス、狂犬病ウィルス、ラッサ熱ウィルス、ブニアウィルス、ＣＭＶ、またはフィロウィルス由来である。ある実施形態において、糖タンパク質はＨＩＶ ｇｐ１２０である。ある実施形態において、フィロウィルスはエボラウィルスである。ある実施形態において、ウィルスは、ＨＩＶ、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アブセンシエンス（Ｍ． ａｂｓｅｎｓｃｅｎｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｎｏｒｈｅａ）、またはトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）である。ある実施形態において、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）は梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ ｐａｌｉｄｕｍ）である。
【0072】
また、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0073】
ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２のビリオンはさらに、その脂質二重層上に表面糖タンパク質を含み、これは、単純ヘルペスウィルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄである。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２のビリオンはさらに、その脂質二重層上に非ＨＳＶ－２ウィルス表面糖タンパク質を含む。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２のビリオンはさらに、その脂質二重層上に細菌表面糖タンパク質を含む。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２のビリオンはさらに、その脂質二重層上に寄生体表面糖タンパク質を含み、寄生体は、哺乳類の寄生体である。ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。ある実施形態において、表面糖タンパク質は、ビリオンの組換えＨＳＶ－２のゲノム中に挿入されたトランスジーンによってコードされる。ある実施形態において、表面糖タンパク質は、脂質二重層上に存在するが、これは、細胞を、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で感染させて、当該細胞がトランスフェクトされて、その細胞膜上に表面糖タンパク質を発現し、脂質二重層上に存在する表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２が、細胞から産生されることによるものである。ある実施形態において、ビリオンはそのようなものから回収された。ある実施形態において、ウィルス糖タンパク質は、ＨＩＶ、エンテロウィルス、ＲＳＶ、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ブタコロナ呼吸器ウィルス、狂犬病ウィルス、ラッサ熱ウィルス、ブニアウィルス、ＣＭＶ、またはフィロウィルス由来である。ある実施形態において、糖タンパク質はＨＩＶ ｇｐ１２０である。ある実施形態において、フィロウィルスはエボラウィルスである。ある実施形態において、ウィルスは、ＨＩＶ、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アブセンシエンス（Ｍ． ａｂｓｅｎｓｃｅｎｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｎｏｒｈｅａ）、またはトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）である。ある実施形態において、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）は梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ ｐａｌｉｄｕｍ）である。
【0074】
また、本明細書中に記載されるウィルスまたは本明細書中に記載されるビリオンを内部に含む単離細胞であって、ヒト中に存在しない細胞が提供される。該細胞のある実施形態において、細胞は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む。該細胞のある実施形態において、細胞は、その膜上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを発現する。
【0075】
前記細胞のある実施形態において、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄは、異種核酸によってコードされ、当該異種核酸は、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子である、またはＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ遺伝子と同一の配列を有する核酸である。
【0076】
本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含むワクチン組成物。ワクチン組成物のある実施形態において、該ワクチン組成物は、免疫アジュバントを含む。
【0077】
また、本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオンを含む組成物が提供され、当該ウィルスまたは当該ビリオンのゲノムは、少なくとも第２の遺伝子の欠失を含み、第２の遺伝子は、ＨＳＶ－２ウィルスの複製に必須である。ある実施形態において、組成物は、免疫応答を誘発するためにウィルスまたはビリオンが予め導入されている哺乳類由来の血清を含む、または当該血清に由来する。
【0078】
また、本明細書中に記載されるウィルス、または本明細書中に記載されるビリオン、および医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物が提供される。
【0079】
また、対象において免疫応答を誘発する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において免疫応答を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0080】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象において、ＨＳＶ－２感染を処置する、またはＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0081】
また、対象にＨＳＶ－２感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－２のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0082】
また、ＨＳＶ－２感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－２に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0083】
ＨＳＶ－２疾患およびＨＳＶ－１疾患は、当該技術分野において知られており、そしてまた本明細書中に記載されている。ＨＳＶ－２疾患およびＨＳＶ－１疾患の処置および予防が、それぞれ別個に包含される。ＨＳＶ－２およびＨＳＶ－１の重感染の処置または予防もまたカバーされる。予防は、未処置の対象と比較して、本明細書中に記載されるウィルス、ビリオン、ワクチンまたは組成物で処置された対象において、関連する疾患または感染の発症の程度の改善を意味すると理解される。
【0084】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む、組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄをコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生された、脂質二重層上にＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄを含む組換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0085】
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、かつ脂質二重層上に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２のビリオンを生産する方法であって、非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質をコードする異種核酸を含む細胞を、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した組換えＨＳＶ－２で、組換え単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）の複製を可能にする条件下で感染させることと、細胞によって産生された、脂質二重層上に非ＨＳＶ－２表面糖タンパク質を含む組換えＨＳＶ－２ビリオンを回収することとを含む方法が提供される。
【0086】
また、配列がＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする配列を含まないこと以外、ＨＳＶ－２のゲノムと同じ配列を有する組換え核酸が提供される。
【0087】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0088】
また、対象においてＨＳＶ－１感染を処置または予防するための、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２が提供される。
【0089】
また、対象においてＨＳＶ－２感染を処置または予防するための、ゲノム中のＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失した単離組換えＨＳＶ－２のビリオンが提供される。
【0090】
また、対象においてＨＳＶ－１感染もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染を処置する、または対象においてＨＳＶ－２感染もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染によって引き起こされる疾患を処置する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象においてＨＳＶ－２感染を処置する、もしくはＨＳＶ－２感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量、または対象においてＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染を処置する、もしくはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染によって引き起こされる疾患を処置するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0091】
また、対象にＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染のワクチン接種をする方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、対象にＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染のワクチン接種をするのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0092】
また、ＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染に対して対象を免疫化する方法であって、対象に、（ｉ）本明細書中に記載されるウィルス；（ｉｉ）本明細書中に記載されるビリオン；（ｉｉｉ）本明細書中に記載されるワクチン；（ｉｖ）本明細書中に記載される組成物；または（ｖ）本明細書中に記載される医薬組成物の量を、ＨＳＶ－１感染、またはＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の重感染に対して対象を免疫化するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0093】
免疫化する、ワクチン接種をする、または免疫応答を誘発する、本明細書中の方法のある実施形態において、ビリオンもしくはウィルスの受動伝達、またはそれによって誘導される抗体もしくは免疫因子は、ある対象から別の対象にもたらされてよい。関連する産物は、一方の対象からの獲得後に、第２の対象への投与前に、処理されてよい。本明細書中に記載される本発明の好ましい実施形態において、対象は、哺乳類の対象である。ある実施形態において、哺乳類の対象は、ヒト対象である。
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、さらに病原体の異質抗原を含む単離組換えＨＳＶ－２が提供される。ある実施形態において、異質抗原は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、または糖タンパク質である。ある実施形態において、異質抗原は、ＨＳＶ－２に関する異質抗原であるが、関連する「病原体」に見られる抗原である。ウィルス病原体および細菌病原体が、本明細書中に記載される。ある実施形態において、病原体は、哺乳類の細菌病原体または哺乳類のウィルス病原体である。ある実施形態において、抗原、または病原体をコードするトランスジーンは、病原体から実際にとられることはない、または物理的に取り出されないが、それでもやはり、病原体抗原またはコードする核酸配列と同じ配列を有する。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層上に病原体の異質抗原を含む。単離組換えＨＳＶ－２のある実施形態において、病原体は、細菌またはウィルスである。ある実施形態において、病原体は、哺乳類の寄生体である。ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。単離組換えＨＳＶ－２のある実施形態において、異質抗原は、組換えＨＳＶ－２のゲノム中に挿入されたトランスジーンによってコードされる。
また、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、さらに病原体の異質抗原を含む単離組換えＨＳＶ－２が提供される。ある実施形態において、異質抗原は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、または糖タンパク質である。ある実施形態において、異質抗原は、ＨＳＶ－２に関する異質抗原であるが、関連する「病原体」に見られる抗原である。ウィルス病原体および細菌病原体が、本明細書中に記載される。ある実施形態において、病原体は、哺乳類の細菌病原体または哺乳類のウィルス病原体である。ある実施形態において、抗原、または病原体をコードするトランスジーンは、病原体から実際にとられることはない、または物理的に取り出されないが、それでもやはり、病原体抗原またはコードする核酸配列と同じ配列を有する。ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２は、その脂質二重層上に病原体の異質抗原を含む。単離組換えＨＳＶ－２のある実施形態において、病原体は、細菌またはウィルスである。ある実施形態において、病原体は、哺乳類の寄生体である。ある実施形態において、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子は、ＨＳＶ－２ ＵＳ６遺伝子である。単離組換えＨＳＶ－２のある実施形態において、異質抗原は、組換えＨＳＶ－２のゲノム中に挿入されたトランスジーンによってコードされる。
【0094】
また、対象において抗原性標的に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する方法であって、対象に、ゲノム中の単純ヘルペスウィルス－２（ＨＳＶ－２）糖タンパク質Ｄ－コード遺伝子が欠失しており、さらに脂質二重層上に異質抗原を含む単離組換えＨＳＶ－２を、抗原性標的に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発するのに有効な量投与することを含む方法が提供される。
【0095】
適切なトランスジーンを発現する組換えＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ ｇＤ－／＋は、病原体による皮膚感染または粘膜感染から防御する抗体および細胞免疫応答を選択的に誘導するであろう。
【0096】
ある実施形態において、異質抗原は、表面抗原である。
【0097】
ある実施形態において、トランスジーンは、ＨＩＶ、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、マイコバクテリウム・ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アブセンシエンス（Ｍ． ａｂｓｅｎｓｃｅｎｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｎｏｒｈｅａ）、またはトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）由来の抗原をコードする。ある実施形態において、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ）は梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍｅ ｐａｌｉｄｕｍ）である。ある実施形態において、トランスジーンは、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）バイオフィルム－コード遺伝子である。ある実施形態において、トランスジーンは、ＨＩＶ ｇｐ１２０－コード遺伝子である。
【0098】
ある実施形態において、異質抗原は、抗原性標的の表面抗原である。実施形態において、異質抗原は、寄生体抗原である。ある実施形態において、異質抗原は、細菌抗原またはウィルス抗原である。
【0099】
ある実施形態において、抗原性標的はウィルスであり、ラッサ熱ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス、ＲＳＶ、エンテロウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ブタコロナ呼吸器ウィルス、狂犬病ウィルス、ブニアウィルス、またはフィロウィルスである。
【0100】
ある実施形態において、抗原性標的は細菌であり、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．ウルセランス（Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ）、Ｍ．マリヌム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、らい菌（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、Ｍ．アブセンシエンス（Ｍ． ａｂｓｅｎｓｃｅｎｓ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｎｏｒｈｅａ）、または梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）である。
【0101】
ある実施形態において、単離組換えＨＳＶ－２トランスジーンは、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）バイオフィルム－コード遺伝子であり、トランスジーンは、ＨＩＶ ｇｐ１２０－コード遺伝子である。
【0102】
本明細書中に記載される方法の好ましい実施形態において、対象はヒトである。本明細書中に記載される方法の実施形態において、対象は、ＨＳＶ－１にもＨＳＶ－２にもまだ感染していないし、重感染もしていない。本明細書中に記載される方法の実施形態において、対象は、ＨＳＶ－１もしくはＨＳＶ－２に感染し、または重感染している。
【0103】
本明細書中に記載されるように、重感染は、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２による重感染を意味する。
【0104】
本明細書中に記載される種々の要素の全ての組合せは、本明細書中で特に明記しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本発明の範囲内である。
【0105】
本発明は、以下の実験の詳細からよりよく理解されるであろう。しかしながら、当業者であれば、議論される具体的な方法および結果は単に、後に続く特許請求の範囲においてより完全に記載される本発明の例示であると容易に理解するであろう。
【0106】
実験の詳細
本明細書中で、遺伝子操作した、ＨＳＶ－２のｇＤ（ＵＳ６）遺伝子の欠失変異体を開示し、その安全性、免疫原性、およびワクチンの有効性を、マウス感染モデルにおける膣内ＨＳＶ－２チャレンジに照らして評価した。ｇＤ遺伝子を、緑色蛍光タンパク質（ｇｆｐ）をコードするＤＮＡフラグメントと置き換えて、ＨＳＶ－１ ｇＤを発現するＶｅｒｏ細胞（ＶＤ６０細胞）をこの構築体でトランスフェクトして、緑色プラークを形成する相同組換えウィルスに関してスクリーニングした。分子分析により、正確な組換えが操作されたことが明らかとなった。これは、補完ＶＤ６０細胞において高い力価となるように複製するが、非補完細胞で増殖した場合には非感染性である。野生型マウスまたはＳＣＩＤマウスの、１０７ｐｆｕ／マウスの補完ｇＤ－ヌルウィルス（本明細書中で、遺伝子型的にｇＤが欠失しているが、ＶＤ６０細胞上での増殖によって表現型的に補完されているウィルスについて、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と表す）による膣内チャレンジは、病原性を明らかにしなかったが、１０４ｐｆｕ／マウスほどに低い用量の親の野生型ウィルスでは、１００％致死であった。さらに、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によるマウスの免疫化は、ＨＳＶ－２の臨床単離体による膣内チャレンジに対して完全な防御をもたらした。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によって誘発したロバストな体液性免疫および細胞性免疫を測定して、ｇＤが、ｉｎ ｖｉｖｏ増殖性感染に必要であること、そして必須の糖タンパク質において欠失した弱毒化株が、ＨＳＶ－２に対して防御免疫を誘発することが結論される。ゆえに、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、性器ヘルペスの予防または処置に有望なワクチンである。
本明細書中で、遺伝子操作した、ＨＳＶ－２のｇＤ（ＵＳ６）遺伝子の欠失変異体を開示し、その安全性、免疫原性、およびワクチンの有効性を、マウス感染モデルにおける膣内ＨＳＶ－２チャレンジに照らして評価した。ｇＤ遺伝子を、緑色蛍光タンパク質（ｇｆｐ）をコードするＤＮＡフラグメントと置き換えて、ＨＳＶ－１ ｇＤを発現するＶｅｒｏ細胞（ＶＤ６０細胞）をこの構築体でトランスフェクトして、緑色プラークを形成する相同組換えウィルスに関してスクリーニングした。分子分析により、正確な組換えが操作されたことが明らかとなった。これは、補完ＶＤ６０細胞において高い力価となるように複製するが、非補完細胞で増殖した場合には非感染性である。野生型マウスまたはＳＣＩＤマウスの、１０７ｐｆｕ／マウスの補完ｇＤ－ヌルウィルス（本明細書中で、遺伝子型的にｇＤが欠失しているが、ＶＤ６０細胞上での増殖によって表現型的に補完されているウィルスについて、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と表す）による膣内チャレンジは、病原性を明らかにしなかったが、１０４ｐｆｕ／マウスほどに低い用量の親の野生型ウィルスでは、１００％致死であった。さらに、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によるマウスの免疫化は、ＨＳＶ－２の臨床単離体による膣内チャレンジに対して完全な防御をもたらした。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によって誘発したロバストな体液性免疫および細胞性免疫を測定して、ｇＤが、ｉｎ ｖｉｖｏ増殖性感染に必要であること、そして必須の糖タンパク質において欠失した弱毒化株が、ＨＳＶ－２に対して防御免疫を誘発することが結論される。ゆえに、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、性器ヘルペスの予防または処置に有望なワクチンである。
【0107】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によって誘発した防御の機構および関連。ｇＤ－２ヌルウィルスが生じ、これは、免疫正常マウスおよび免疫不全マウスの双方において非常に弱毒化され、そして、ワクチン候補として試験すると、ＨＳＶ－２による膣内チャレンジに対する防御免疫応答を誘導することが実証された。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋による皮下免疫化は、ＨＳＶの双方の血清型（ＨＳＶ－２およびＨＳＶ－１）による膣内チャレンジに対する防御に必要とされる体液性免疫応答および細胞性免疫応答を誘導するであろう。
【0108】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、不稔感染を誘導する：ＵＳ６が欠失しているＨＳＶ－２株を、シグナリング事象の初めの、細胞感染中に起こる際の寄与を評価するために構築した［４１］。このウィルスは、ＵＳ６をコードするｇＤ補完細胞系統（例えば、ｇＤ－１をコードするＶＤ６０細胞［４０、４１］）上で、内在性プロモータ（例えば、ある実施形態において、ｇＤ－１プロモータ）の制御下で増殖しない限り、宿主細胞に感染することができない。実際に、非補完細胞から単離したＨＳＶ－２ ΔｇＤ粒子は、上皮細胞（図１）にもニューロン細胞（ＳＫ－Ｎ－ＳＨ、不図示）にも感染しない。しかしながら、ＶＤ６０細胞中で増殖すれば、表現型的に補完されたウィルス（ΔｇＤ－／＋）が得られ、これは、野生型ＨＳＶ－２に共通の標的である細胞に完全に感染することができる。しかしながら、ΔｇＤ－／＋による感染後、感染性の粒子もウィルスプラーク（ｐｆｕ）も、これらの細胞から産生されず、ウィルスは、感染細胞から非感染細胞に広がることができない。このことは、これらのプロセスにおけるｇＤの必要条件を反映している；ゆえに、これは不稔感染である。
【0109】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、マウス感染モデルにおいて安全である：野生型マウスおよび重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおいて、皮下に、または膣内に高用量接種することによって、ΔｇＤ－／＋を安全性についてｉｎ ｖｉｖｏ評価した。１０７ｐｆｕのΔｇＤ－／＋（補完細胞で力価測定（titered）した）を膣内接種したマウスは、実験全体を通して、ウィルス誘導病状の徴候を何ら呈しなかったが、１，０００倍低い野生型ウィルス（１０４ｐｆｕ）を接種した動物は、ＨＳＶ－２疾患に屈して、接種後８日目から死亡し始めた（図２Ａ）。１０７ｐｆｕのΔｇＤ－／＋を膣内接種したマウスは、実験全体を通して、ウィルス誘導上皮疾患または神経疾患の徴候を何ら呈しなかった（図２Ｂおよび図２Ｃ）。感染性ウィルスは、プラークアッセイまたはＶｅｒｏ細胞とのＤＲＧの共存培養によって判定して（不図示）、性器組織からもＤＲＧからも回収されなかった。
【0110】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、ＨＳＶ－２に対する全身性抗体および粘膜抗体を誘発する：マウスにΔｇＤ－／＋を接種して皮下でブーストして（ｓｃ．－ｓｃ．）、またはこの候補ワクチン株（１０６ｐｆｕ／マウス）を皮下接種して膣内でブーストして（ｓｃ．－ｉ．ｖａｇ．）、血清および膣洗浄液の抗ＨＳＶ－２抗体の増大によって明示されるように、ＨＳＶ－２に対する体液性免疫応答を誘発した（図３Ａおよび図３Ｂ）。コントロール動物を、非感染ＶＤ６０細胞溶解物で免疫化した（コントロールと呼ぶ）。抗体は、抗原として感染細胞溶解物を用いるＥＬＩＳＡによって測定した（非感染細胞溶解物に対する反応は、バックグラウンドとして差し引いた）。注目すべきは、抗体反応の大きさは、免疫化の経路に応じて異なることである。実際に、ｓ．ｃ．－ｓ．ｃ．免疫処置は、ｓ．ｃ．－ｉ．ｖａｇ．免疫化よりも有意に多くの、ＨＳＶ－２に対する血清および膣洗浄液の抗体を誘発した。この発見は、膣洗浄液抗体がおそらく、血液由来のＩｇＧの漏出液を表すことを示唆し、そしてｓｃ．－ｓｃ．が、ＨＳＶ－２に対する高いレベルの全身性ＩｇＧ抗体および局所ＩｇＧ抗体を誘発するのにより適切な経路であることを示唆している。加えて、ΔｇＤ－／＋（１０６ｐｆｕ／マウス）を接種して皮下でブーストした（ｓｃ．－ｓｃ．）マウスは、ウィルスおよびこれらのマウス由来の血清によるＶｅｒｏ細胞単層のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和によって明示されるように、中和抗ＨＳＶ－２を誘発した（図３Ｃ）。
【0111】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋は、ＨＳＶ－２特異的Ｔ細胞活性化を誘発する：ｇＢ４９８－５０５－特異的トランスジェニックＣＤ８＋Ｔ細胞（ｇＢＴ－Ｉ）を、ワクチン接種前にＣ５７ＢＬ／６マウス中に伝達した。ワクチン接種済みマウスに、１０６ｐｆｕ ΔｇＤ－／＋を、またはＶＤ６０細胞溶解物（コントロール）を接種した。ブースト後１４日目に脾臓を採取して、カウンティングビーズ（ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）、Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いるフローサイトメトリによって定量化した（図４Ａ）。同じ日に、脾臓を記憶表面マーカーについて染色して、フローサイトメトリによって分析した（図４Ｂ）。最後に、同じ日に採取した脾細胞を、アゴニストｇＢ４９８－５０５－ペプチドで６時間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激し、細胞内サイトカイン染色を実行して、これらの細胞によるＩＦＮ－γ産生を測定した。ΔｇＤ－／＋による免疫化は、コントロールマウスと比較して、ワクチン接種済みマウスにおいて、ＩＦＮ－γ産生を増大させた（図４Ｃ）。コントロールマウスの反応は、おそらく、伝達後の未感作マウスにおけるｇＢＴ－Ｉ Ｔ細胞の持続性を反映している。同様の結果が、ｇＢ４９８－５０５－ペプチドによりｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激した脾細胞の上澄みにマルチプレックスサイトカイン分析を用いて得られた（不図示）。これらの発見は、ワクチンがＴ細胞反応を誘導することを実証している。
【0112】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋で免疫化したマウスは、膣内ＨＳＶ－２致死チャレンジから防御される：ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によりｓｃ．－ｓｃ．またはｓｃ．－ｉ．ｖａｇのいずれかでワクチン接種をした動物は、ＬＤ９０に等しい膣内致死用量チャレンジ（５×１０４ｐｆｕ／マウス）後、体重減を伴ってチャレンジを生存するが、ＶＤ６０コントロール溶解物で免疫化したマウスは、１０日目までに疾患に屈した（図５Ａおよび図５Ｂ）。ワクチンはまた、ＬＤ９０の１０倍（５×１０５ｐｆｕ／マウス、図示せず）に対して完全な防御を提供した。この防御は、有意に引き下げられた上皮疾患スコア（図５Ｃ）および神経学的徴候の完全な不在（図５Ｄ）を伴った。スコアリングは、先に記載されるように実行した［４４］。さらに、膣チャレンジ後２日目に、コントロールマウスと比較して有意に少ないウィルスが、ΔｇＤ－／＋免疫化マウスの膣洗浄液において回収され、これにより迅速なクリアランスが示唆された（図５Ｅ）。さらに、非感染性ウィルスを、４日目の膣洗浄液中で（図５Ｅ）、またはチャレンジ後５日目に単離した膣組織もしくはＤＲＧ中で（図５Ｆ）回収した。後者は、ワクチンが、ＤＲＧへのウィルスの到達および／またはＤＲＧ中での複製を予防することを示唆している。
【0113】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋による免疫化は、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後に感染部位での炎症を予防する：ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋でワクチン接種をし、かつ病原性ＨＳＶ－２により膣内でチャレンジしたマウスは、ＶＤ６０溶解物を接種した動物（コントロール）と比較して、感染部位にて有意に少ない炎症サイトカインしか示さない。実際に、ワクチン接種済みマウスは、感染後２日目および７日目の膣洗浄液中に、コントロールマウスよりも有意に少ないＴＮＦ－α（図６Ａ）、ＩＬ－６（図６Ｂ）およびＩＬ－１β（図６Ｃ）しか分泌しない。注目すべきは、炎症サイトカインのレベル増大が、ＨＩＶ複製の増大、ならびにＨＳＶ－２およびＨＩＶにより重感染した性器での排出を伴うことである［４５、４６］。同様の現象がｉｎ ｖｉｔｒｏでも観察されている［４７］。
【0114】
ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋による免疫化は、Ｔ細胞を、感染部位および関連するＬＮにリクルートする。ΔｇＤ－／＋によりｓｃ．－ｓｃ．で免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後の仙骨リンパ節（ＬＮ）において、活性化抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ａ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ｂ）のパーセンテージの増大を示した。ΔｇＤ－／＋によりｓｃ．－ｉ．ｖａｇ．で免疫化したマウスは、病原性ＨＳＶ－２によるチャレンジ後の膣において、抗ＨＳＶ－２ ｇＢＴ－Ｉ ＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｃ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ｄ）の数の増大を示し、ΔｇＤ－／＋によるワクチン接種が、抗ＨＳＶ－２ ＣＤ８＋Ｔ細胞および活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞（抗ＨＳＶ－２の可能性がある）を、感染部位および関連するリンパ節にリクルートすることが示唆された。
【0115】
更なる実験において、ＨＳＶ－２－ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１による免疫化は、Ｃ５７ＢＬ／６およびＢａｌｂ／Ｃにおける防御を、病原性ＨＳＶ－２による膣チャレンジに対して与えることが見出された。また、膣内ＨＳＶ－２チャレンジ済みΔｇＤ－／＋ｇＤ－１免疫化マウスは、チャレンジ後５日目に膣または神経組織においてＨＳＶ－２が検出可能でなかった。ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１ ｓｃ．ｓｃ．抗体は、ＨＳＶ－２病的結合マウス（HSV-2 morbid-bound mice）とは異なり、多数のＨＳＶ－２タンパク質（ｇＤおよびｇＢの双方）を認識することが見出された。ワクチン接種した動物由来の血清抗体は、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和を示した。さらに、ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１ワクチン接種済みマウス由来の血清は、ＨＳＶ－２感染した細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘発した。
【0116】
要約すると、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１は弱毒化され、ｗｔマウスおよびＳＣＩＤマウスにおいて完全に安全である。組換えＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋ｇＤ－１は、致死ＨＳＶ－２膣内感染およびＨＳＶ－２／ＨＳＶ－１皮膚感染から防御した。防御が、２つの異なるマウス株において観察された。検出可能な感染および殺菌免疫はなかった。また、観察されたのは、ＨＳＶ－２特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、ならびに全身性ＨＳＶ抗体および粘膜ＨＳＶ抗体の誘導であった。ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂが、主な抗ＨＳＶアイソタイプであった。また、観察されたのは、ＦｃｙＲＩＩＩ／ＩＩ－依存性ＡＤＣＣであった。驚くべきことに、免疫血清の受動伝達が、感作マウスを防御し、ＦｃＲｎノックアウトマウスおよびＦｃｙＲノックアウトマウスは、免疫血清により防御されなかった。
【0117】
考察
世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）は、５億を超える人々が世界中で単純ヘルペスウィルス２型（ＨＳＶ－２）に感染し、毎年おおよそ２０００万の新しい症例を伴うと推定した［１］。感染リスクは年齢と共に増大する。ウィルスは頻度の高い亜臨床的再活性または臨床的再活性により潜在性を確立するので、感染の影響は生涯にわたる。憂慮すべきことに、ＨＳＶ－２は、ＨＩＶの感染および伝染の危険を著しく増大させる［２～４］。ＨＳＶ－２の蔓延は、世界地域間で異なり、日本の８．４％から、ＨＩＶ蔓延がエピデミックな地域であるサハラ以南のアフリカの７０％にまで変動する（［５、６］）。米国において、ＨＳＶ－２の蔓延は約１６％であり、ＨＳＶ－１の蔓延は約５４％に下落した。米国（および他の欧州の国）におけるＨＳＶ－１の蔓延の減少は、性器ヘルペス疾患の大部分の症例がＨＳＶ－１によって引き起こされた、最近の予想外の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）サブユニットワクチン試験の結果［７～９］によって明示されるように、性器ＨＳＶ－１の増大と関連がある。ＨＳＶ－１が、ＨＳＶ－２と比較して、より少ない再発、およびより少ない性器ウィルス排出を伴う一方、双方の血清型が周産期に伝染して、新生児疾患を引き起こす；新生児疾患は、アシクロビル処置によってすら、高い罹患率および死亡率を伴う［１０～１２］。性器ヘルペスを伴う罹患率、ＨＩＶエピデミックとの相乗効果、およびその直接的な医学コスト（米国だけで５億ドルを越える）は、安全かつ有効なワクチンを開発する緊急事態を強調している［１３］。
世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）は、５億を超える人々が世界中で単純ヘルペスウィルス２型（ＨＳＶ－２）に感染し、毎年おおよそ２０００万の新しい症例を伴うと推定した［１］。感染リスクは年齢と共に増大する。ウィルスは頻度の高い亜臨床的再活性または臨床的再活性により潜在性を確立するので、感染の影響は生涯にわたる。憂慮すべきことに、ＨＳＶ－２は、ＨＩＶの感染および伝染の危険を著しく増大させる［２～４］。ＨＳＶ－２の蔓延は、世界地域間で異なり、日本の８．４％から、ＨＩＶ蔓延がエピデミックな地域であるサハラ以南のアフリカの７０％にまで変動する（［５、６］）。米国において、ＨＳＶ－２の蔓延は約１６％であり、ＨＳＶ－１の蔓延は約５４％に下落した。米国（および他の欧州の国）におけるＨＳＶ－１の蔓延の減少は、性器ヘルペス疾患の大部分の症例がＨＳＶ－１によって引き起こされた、最近の予想外の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）サブユニットワクチン試験の結果［７～９］によって明示されるように、性器ＨＳＶ－１の増大と関連がある。ＨＳＶ－１が、ＨＳＶ－２と比較して、より少ない再発、およびより少ない性器ウィルス排出を伴う一方、双方の血清型が周産期に伝染して、新生児疾患を引き起こす；新生児疾患は、アシクロビル処置によってすら、高い罹患率および死亡率を伴う［１０～１２］。性器ヘルペスを伴う罹患率、ＨＩＶエピデミックとの相乗効果、およびその直接的な医学コスト（米国だけで５億ドルを越える）は、安全かつ有効なワクチンを開発する緊急事態を強調している［１３］。
【0118】
アジュバントと組み合わせたウィルスエンベロープ糖タンパク質からなるサブユニット製剤が、ほぼ２０年間、ＨＳＶ－２ワクチン分野を支配し、そして大部分の臨床試験は、この戦略に集中してきた［８、１４～１９］。サブユニット調製が安全であり、かつ中和抗体を誘発するが、この製剤は、臨床試験において、ＨＳＶ－２感染または疾患に対して少しの有効性しか提供しなかった［８、１４］。驚くべきことに、ＨＳＶ－２ ｇＤサブユニットワクチンが、ＨＳＶ－２ではなく性器ＨＳＶ－１からの防御を提供した［８、２０］。以降の研究により、血清ＨＳＶ－２ ｇＤ抗体レベルがＨＳＶ－１からの防御に相関することが見出され、ＨＳＶ－２防御に必要とされる抗体力価は、ＨＳＶ－１から防御するのに必要な抗体力価よりも高くなり得ることが示唆された［２１］。対照的に、細胞媒介性免疫（重なり合うｇＤペプチドに対する細胞内サイトカインの反応）が、どちらの血清型からの防御とも相関しなかった［２１］。ワクチンは、ＣＤ８＋Ｔ細胞反応ではなくＣＤ４＋Ｔ細胞反応を誘発したが、ワクチン接種した感染女性と非感染女性との間で、ＣＤ４＋Ｔ細胞反応の差異はなかった［２１］。性器または他の粘膜の抗体反応は、測定されなかった。ｇＨがゲノムから欠失したＨＳＶ－２ワクチン候補は、血清反応陽性の対象間で行なった臨床試験において、ウィルスの再発の頻度を引き下げることができず、ワクチンは主な感染に対する有効性について評価されなかった［２９］。
【0119】
中和血清抗体の誘導にも拘らず、ＣＤ８＋Ｔ細胞反応を何ら誘発できないｇＤサブユニットワクチンと組み合わせた、ＨＩＶ感染患者におけるＨＳＶ－２再活性率の増大を示す臨床研究により、有効なワクチンは、防御Ｔ細胞反応も誘発しなければならないことが示唆される［２８、３０～３２］。Ｔ細胞の重要性はさらに、ヒト三叉神経節におけるＨＳＶ－１反応性Ｔ細胞の選択的な保持を示す研究によって強調される。ニューロンを取り囲むＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が同定された。標的とされるウィルスタンパク質の異質性が存在する一方、外皮タンパク質、ビリオンタンパク質１６（ＶＰ１６）は、多様なＨＬＡ－Ａおよび－Ｂ対立遺伝子との関連で、複数の三叉神経節Ｔ細胞によって認識された；これらの発見は、外皮タンパク質が重要な免疫原であるかもしれないことを示唆する［３３］。同様に、外皮タンパク質に向けられる細胞障害性Ｔ細胞は、ＨＳＶ－２に潜在的に感染したヒトの研究においても同定された［３４］。ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ８αα＋Ｔ細胞を含む）が、ＨＳＶ再活性後の真皮－表皮接合部の性器皮膚および粘膜中に残存することから、それらは免疫制御に関与することが示唆される［３５］。
【0120】
本明細書中で開示されるのは、本来あるＨＳＶ－２ ｇＤが遺伝的に欠失した操作済みＨＳＶ－２ウィルスである。ＨＳＶ－２ ｇＤ遺伝子は、ウィルス侵入および細胞間スプレッドに必須のエンベロープ糖タンパク質をコードする。糖タンパク質Ｄはまた、ヘルペスウィルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）としても知られる免疫調節スイッチである腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリメンバ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）に結合する。ＨＶＥＭが複数のリガンドのためのドッキング部位を保有し、そしてシグナリングが、これらの分子がシスまたはトランスのいずれでＨＶＥＭに結合するかに応じて異なるので、ｇＤは、免疫細胞に調節影響を及ぼし得る［３６、３７］。実際に、最近の研究は、ｇＤが、この受容体の本来あるリガンド(natural ligand)と競合して、ウィルスに対するサイトカイン反応を調節することを示唆している［３８、３９］。ｇＤ遺伝子は、緑色蛍光タンパク質（ｇｆｐ）をコードするＤＮＡフラグメントと置き換えられて、この構築体により形質転換された、ＨＳＶ－１ ｇＤを発現する補完Ｖｅｒｏ細胞（ＶＤ６０細胞［４０］）（例えば、ｇＤ－１プロモータ下にｇＤ－１がある）が、緑色のプラークを形成する相同組換えウィルスに関してスクリーニングされた。変異体ウィルスは、補完Ｖｅｒｏ細胞系統において、高い力価となるように複製する（補完細胞で継代された場合、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋と表される）が、非補完細胞において非感染性である（非補完細胞から単離された場合、ＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／－と表される）。このウィルスが精製されて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで特徴付けられた［４１］。免疫正常マウスまたは免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスの膣内接種または皮下接種により、親の野生型ウィルスによって引き起こされる致死感染と比較して、病原性がないことが明らかとなった。免疫化（皮下プライムに続く、皮下投与または膣内投与の単回ブースト）が、病原性ＨＳＶ－２による膣内チャレンジから１００％防御された。ロバストな体液性免疫および細胞性免疫がＨＳＶ－２ ΔｇＤ－／＋によって誘発され、ＵＳ６（ｇＤ－２）は、ｉｎ ｖｉｖｏ増殖性感染に必要とされると結論された。この生弱毒化ウィルス株は、ＨＳＶに対する殺菌免疫を提供するであろう。また、血清または血清産物の受動伝達が利用されてもよい。
【0121】
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】