特許 7054924 免疫療法のためのＦＬＴ３指向ＣＡＲ細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-04-07

(45)【発行日】2022-04-15

(54)【発明の名称】免疫療法のためのＦＬＴ３指向ＣＡＲ細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20220408BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20220408BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20220408BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220408BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20220408BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20220408BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20220408BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220408BHJP

   A61K 35/15 20150101ALI20220408BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220408BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20220408BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20220408BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20220408BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C07K14/705 ZNA

C07K19/00

C12N5/10

C12N15/63 Z

C12Q1/02

A61K35/12

A61K35/17 Z

A61K35/15 Z

A61P35/00

A61P35/02

A61P7/00

G01N33/574 D

【請求項の数】 27

(21)【出願番号】P 2018534523

(86)(22)【出願日】2016-09-23

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2018-10-11

(86)【国際出願番号】 US2016053577

(87)【国際公開番号】W WO2017053889

(87)【国際公開日】2017-03-30

【審査請求日】2019-09-18

(31)【優先権主張番号】62/222,695

(32)【優先日】2015-09-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】518096526

【氏名又は名称】サイトイミューン セラピューティクス， インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＣｙｔｏＩｍｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】特許業務法人 ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ユイ、チエンホア

(72)【発明者】

【氏名】カリジューリ、マイケル

(72)【発明者】

【氏名】ディヴァイン、スティーヴン

【審査官】太田 雄三

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１５／１１２６２６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５１５４７２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１１－５２１６４７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１４／１４４６２２（ＷＯ，Ａ２）

【文献】Molecular Therapy，2015年02月03日，Vol. 23, No. 4，p. 648-655

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００

Ｃ０７Ｋ １４／００

Ｃ０７Ｋ １９／００

Ｃ１２Ｎ ５／１０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、（ｂ）ヒンジドメインと、（ｃ）膜貫通ドメインと、（ｄ）細胞内ドメインとを含み、
該抗原結合ドメインが、
ａ）
配列番号２９（ＮＹＧＬＨ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ１、
配列番号３０（ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ２、及び、
配列番号３１（ＧＧＩＹＹＡＮＨＹＹＡＭＤＹ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ３を含む抗ＦＬＴ３重鎖可変領域、並びに、
配列番号３２（ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＭ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ１、
配列番号３３（ＧＡＳＴＲＥＳ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ２、及び、
配列番号３４（ＱＮＤＨＳＹＰＬＴ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ３を含む抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域、又は、
ｂ）
配列番号２１（ＳＹＷＭＨ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ１、
配列番号２２（ＥＩＤＰＳＤＳＹＫＤＹＮＱＫＦＫＤ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ２、及び、
配列番号２３（ＡＩＴＴＴＰＦＤＦ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＨＲ３を含む抗ＦＬＴ３重鎖可変領域、並びに、
配列番号２４（ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ１、
配列番号２５（ＹＡＳＱＳＩＳ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ２、及び、
配列番号２６（ＱＱＳＮＴＷＰＹＴ）を含むアミノ酸配列を有するＣＤＬＲ３を含む抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項2】

前記ａ）の抗ＦＬＴ３重鎖可変領域が、配列番号２７のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、及び、前記ａ）の抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域が、配列番号２８のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、又は、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するそれらの同等物である、請求項１に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項3】

前記ａ）の抗ＦＬＴ３重鎖可変領域が、配列番号１９のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、及び、前記ａ）の抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域が、配列番号２０のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、又は、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するそれらの同等物である、請求項１に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項4】

前記細胞内ドメインが、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項5】

当該ＣＡＲに結合する検出可能なマーカーまたは精製マーカーをさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか一項に記載されるＣＡＲをコードする単離された核酸。

【請求項7】

前記抗ＦＬＴ３抗体の前記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、プロモーターをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６に記載の単離された核酸。

【請求項8】

前記抗ＦＬＴ３抗体の前記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流または下流に位置する、ｉＣａｓｐをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６または７に記載の単離された核酸。

【請求項9】

前記抗ＦＬＴ３抗体の前記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、２Ａペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６～８のいずれか一項に記載の単離された核酸。

【請求項10】

前記抗ＦＬＴ３抗体の前記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項６～９のいずれか一項に記載の単離された核酸。

【請求項11】

請求項６～１０のいずれか一項に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。

【請求項12】

請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、および／または請求項６～１０のいずれか一項に記載の単離された核酸、および／または請求項１１に記載のベクターを含む、単離された細胞。

【請求項13】

前記単離された核酸に結合される検出可能な標識をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１２に記載の単離された細胞。

【請求項14】

真核生物細胞である、請求項１２または１３に記載の単離された細胞。

【請求項15】

請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、および／または請求項６～１０のいずれか一項に記載の単離された核酸、および／または請求項１１に記載のベクター、および／または請求項１２～１４のいずれか一項に記載の単離された細胞を含む、組成物。

【請求項16】

ＦＬＴ３抗原を発現する細胞に結合した請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む単離された細胞、を含む単離された複合体。

【請求項17】

単離された細胞に対して、請求項６～７のいずれか一項に記載される単離された核酸、および／または請求項１１に記載されるベクターまたはｍＲＮＡにより形質導入を行うことを含む、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞を作製する方法。

【請求項18】

効果的な量の、請求項１２～１４のいずれか一項に記載される単離された細胞を含み、
前記単離された細胞が、請求項６又は７に記載される単離された核酸を含む、
ＦＬＴ３を発現するガンの処置をその必要性のある対象において行うための組成物。

【請求項19】

ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性が高いと明らかにされた患者に投与される、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

患者がＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性があるかどうかを決定するための情報を提供するための方法であって、
患者から単離された腫瘍サンプルを効果的な量の抗ＦＬＴ３抗体と接触させ、該腫瘍サンプルに結合したいくらかの抗体の存在を検出することを含み、
ここで、該腫瘍サンプルに結合した抗体の存在により、該患者は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性が高いことが示され、及び、該腫瘍サンプルに結合した抗体の非存在により、該患者は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性がないことが示される、方法。

【請求項21】

請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項６～１０のいずれか一項に記載の単離された核酸、請求項１１に記載のベクター、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の単離された細胞、請求項１５に記載の組成物、又は請求項１６に記載の単離された複合体とを含む、キット。

【請求項22】

さらに、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項23】

前記ＣＡＲが、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは１～６の整数である）を含み、前記抗ＦＬＴ３重鎖可変領域と前記抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域の間に位置するリンカーポリペプチドをさらに含む、請求項１～４、２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項24】

前記プロモーターをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ＣＭＶプロモーター、ＭＮＤプロモーター、またはＥＦ１αプロモーターから選ばれる、請求項７に記載の単離された核酸。

【請求項25】

前記ベクターが、プラスミド、または、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ関連ウイルスベクターからなる群より選択されるウイルスベクターである、請求項１１に記載のベクター。

【請求項26】

前記単離された細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞および骨髄細胞から選ばれる、請求項１４に記載の単離された細胞。

【請求項27】

さらに、結合ドメインおよび／または使用のための説明書を含む、請求項２１に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願への相互参照］
本出願は、米国仮特許出願第６２／２２２，６９５号（２０１５年９月２３日出願）に対しての米国特許法第１１９条（ｅ）による優先権を主張する（その内容は本明細書により、その全体が参照により組み込まれる）。

【0002】

本開示は一般にはヒトの免疫学の分野に関連し、具体的にはヒトの免疫療法の分野に関する。

【背景技術】

【0003】

発明の背景の下記議論は、本発明に対する技術を助けるために単に提供されるにすぎない。

【0004】

２０１６年には合衆国中において、６０，１４０人の白血病の新規症例者（すべての新規ガン症例者の３．５％）が存在するであろうし、予想では、２４，４００人（すべてのガン死亡者の４．１％）がこの疾患で死亡するであろう。白血病は、白血球を含めて多くのタイプの細胞から生じる初期の血液形成細胞の広範囲のガンである。したがって、白血病は多くのカテゴリーを含む：例えば、急性または慢性、骨髄性またはリンパ性（２０１６）。タイプが異なる白血病は処置および見通しが異なる。化学療法および同種血液学的幹細胞移植（ＨＳＣＴ）がこれまで白血病に関して首尾よく適用されている。しかしながら、ＨＳＣＴは、免疫拒絶、感染および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）に起因すると考えられる移植関連の罹患率および死亡率によって制限される。Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ他（２０１６）、Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、ｐｉｉ：Ｓ１０８３－８７９１（１６）３０３２８－７、ｅＰｕｂ（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂｍｔ．２０１６．０９．００２）。化学療法ではまた、難治性ガンが引き起こされることになる。したがって、新規かつ効果的な治療法を開発することが急務である。

【0005】

急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、造血幹細胞（ＨＳＣ）または系譜特異的な始原体細胞のどちらかに由来する不均一なクローン性障害である。合衆国では２０１３年において、１４，５９０人がＡＭＬと診断され、１０，３７０人がＡＭＬで死亡したことが推定された。Ｓｉｅｇｅｌ他（２０１３）、ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ、６３（１）：１１～３０を参照のこと。ＡＭＬの発生率が年齢とともに増大しており、高齢患者（６５歳以上）における５年生存率が１０％未満である。Ｄｏｒｅｓ他（２０１２）、Ｂｌｏｏｄ、１１９（１）：３４～４３を参照のこと。この疾患の分子的複雑さおよび遺伝子的複雑さが広く理解されているにもかかわらず、同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）のみがＡＭＬ患者の臨床結果における著しい改善をもたらしている。しかしながら、高齢者患者はＨＳＣＴについて適格とならない場合があり、また、この取り組みにもまた、著しい罹患率および死亡率をもたらし得る様々な合併症（例えば、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）など）が伴う。そのうえ、ＦＬＴ３の遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）変異を有する患者は、とりわけ有害な予後および高い再発確率を有する。したがって、ＡＭＬを処置するための様々な新規な取り組みは、未だ対処されていない治療的必要性を表している。

【0006】

近年では、細胞療法における著しい改善が、様々な血液学的悪性腫瘍において認められている。様々な血液学的悪性腫瘍を処置するための１つの興味深い新しい取り組みでは、腫瘍関連抗原を直接に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）による免疫細胞の遺伝子改変が伴う。ＣＡＲ Ｔ細胞は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）においてＣＤ１９を標的とすることについて、臨床において成功していることが明らかにされている。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ他（２０１１）、ＮＪＥＭ、３６５（８）：７２５～７３３；Ｇｒｕｐｐ他（２０１３）、ＮＪＥＭ、３６８（１６）：１５０９～１５１８；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ他（２０１３）、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ、５（１７７）：１７７ｒａ３８；および、Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ他（２０１１）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２９（１）：７３～７８を参照のこと。しかしながら、ＣＤ１９^－の血液学的悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）およびＡＭＬなど）を処置するためのＣＡＲ免疫細胞によって標的化され得る腫瘍関連の表面抗原を同定することは、非常に困難であることが判明している。

【0007】

白血病に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の様々な報告は、化学的処置およびＨＳＣＴの後における再発および難治性を伴う疾患の解明に役立っている。ＣＡＲが、モノクローナル抗体から得られる単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を免疫細胞の受容体からの細胞内ドメインに組み込むことによって開発されている。ＣＡＲ操作されたＴ細胞では、腫瘍表面に現れた抗原を認識する活性を獲得し、かつ、この遺伝子改変されたＴ細胞が共刺激分子および免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の協同作用によって活性化されたならば、特定の悪性腫瘍を死滅させるために、接ぎ木のようにモノクローナル抗体の特異性に、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の特異的な抗腫瘍活性が接がれている。Ｇｒａｄａ他（２０１３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、２：ｅ１０５。しかしながら、ＣＡＲ Ｔ細胞による白血病患者の処置では、サイトカインストームが生じる可能性がある。Ｍｏｒｇａｎ他（２０１０）、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、１８：８４３～８５１；Ｐｏｒｔｅｒ他（２０１１）、ＮＪＥＭ、３６５：７２５～７３３。ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、ＣＡＲナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の方が、サイトカインストーム、腫瘍崩壊症候群を、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）と同様に患者での同種状況において誘発する危険性が低い場合がある。これは、ＣＡＲ ＮＫ細胞はクローン増殖を欠いているからである。Ｈａｎ他（２０１５）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ、５：１１４８３；Ｕｈｅｒｅｋ他（２００２）、Ｂｌｏｏｄ、１００：１２６５～１２７３。ＣＡＲ ＮＫ細胞を首尾よく適用するための重要な課題が、標的とするための適切な細胞表面抗原を見出すことである。ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、白血病における、とりわけ急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における高発現の表面タンパク質であり、それに反して、その変異は、白血病の発症の期間中に受容体のリガンド非依存的な活性化および下流側のシグナル伝達経路の活性化を引き起こすので、通常は低いレベルで維持されている。Ｌａｇｕｎａｓ－Ｒａｎｇｅｌ他（２０１６）、Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ、ｅＰｕｂ（ｄｏｉ：１０．１００２／ｈｏｎ．２３３０）。

【0008】

ＡＭＬ細胞はＣＤ１９の表面発現を有していないので、ＣＤ１９－ＣＡＲをＡＭＬの処置のために使用することができない。ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ６、ＬｅＹおよびＣＤ１２３が、ＡＭＬ処置のためのＣＡＲ Ｔ細胞によって標的化されるためのＡＭＬ関連抗原であることが提案されている。例えば、Ｄｉｎｎｄｏｒｆ他（１９８６）、Ｂｌｏｏｄ、６７（４）：１０４８～１０５３；Ｇｒｉｆｆｉｎ他（１９８４）、Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ、８（４）：５２１～５３４；Ｃａｓｕｃｃｉ他（２０１３）、Ｂｌｏｏｄ、１２２（２０）：３４６１～３４７２；Ｐｅｉｎｅｒｔ他（２０１０）、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１７（５）：６７８～６８６を参照のこと。しかしながら、これらのマーカーは、正常な細胞（例えば、造血幹細胞／始原体細胞、骨髄細胞および他の成熟細胞など）の表面に広範囲に発現しているため、前臨床研究または臨床研究では、それらは、腫瘍を根絶するために効果的でないこと、または、正常な細胞が破壊されるために非常に毒性であることのどちらかであることが示された。例えば、Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｃａｓｅｌｌｅｓ他（２００６）、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．、７９（１）：４６～５８；Ｒｉｔｃｈｉｅ他（２０１３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、２１（１１）：２１２２～２１２９；Ｇｉｌｌ他（２０１４）、Ｂｌｏｏｄ、１２３（１５）：２３４３～２３５４を参照のこと。特に、ＣＤ３３（ＳＩＧＬＥＣ－３）がＡＭＬ患者の８５％～９０％の白血病性芽球で発現される。例えば、Ｄｉｎｎｄｏｒｆ他（１９８６）およびＧｒｉｆｆｉｎ他（１９８４）を参照のこと。しかしながら、ＣＤ３３がＴ細胞およびＮＫ細胞のサブセットで発現され、骨髄細胞および長期間正常なＨＳＣで広範囲に発現される。Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｃａｓｅｌｌｅｓ他（２００６）を参照のこと。

【0009】

ＣＤ４４ｖ６（これはＨＳＣには存在しない）もまた、ＣＡＲ Ｔ細胞によって標的とされている。しかしながら、ＣＤ４４ｖ６は、活性化Ｔ細胞、単球およびケラチノサイトで発現しており、ＣＤ４４ｖ６の注入は単球減少症をもたらしている。Ｃａｓｕｃｃｉ他（２０１３）を参照のこと。ＬｅＹもまた、ＡＭＬ処置のためのＣＡＲ Ｔ細胞によって標的とされたが、臨床データは有望な結果を示さなかった。例えば、Ｐｅｉｎｅｒｔ他（２０１０）およびＲｉｔｃｈｉｅ他（２０１３）を参照のこと。近年、いくつかのグループからの前臨床研究では、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞により、ＡＭＬが効果的に根絶され、しかし、これらのＣＡＲ Ｔ細胞もまた骨髄機能除去を引き起こすことが明らかにされた。また、近年の臨床データは、ＣＤ１２３が、正常なＨＳＣ、様々な成熟した免疫細胞、および、それどころか内皮細胞によって発現されるという事実のためであるかもしれないが、ＣＤ１２３－ＣＡＲ Ｔ細胞が非常に毒性であることを示していた。例えば、Ｇｉｌｌ他（２０１４）；Ｔｅｔｔａｍａｎｔｉ他、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌ、３：ｅ２８８３５（２０１４）；Ｐｉｚｚｉｔｏｌａ他（２０１４）、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２８（８）：１５９６～１６０５；Ｍａｒｄｉｒｏｓ他（２０１３）、Ｂｌｏｏｄ、１２２（１８）：３１３８～３１４８；Ｔｅｔｔａｍａｎｔｉ他（２０１３）、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌ、１６１（３）：３８９～４０１；Ｅｈｎｉｎｇｅｒ他（２０１４）、Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ、４：ｅ２１８；Ｇｉｌｌｉｅｔ他（２００４）、Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌ、１４０（１２）：１４９０～１４９５を参照のこと。

【0010】

これらの研究は、ＡＭＬにおいてＣＡＲ免疫細胞によって安全に標的化されるべき理想的な腫瘍抗原が未だ特定されていないことを示唆している。ＡＭＬ腫瘍関連抗原をＡＭＬの処置のために標的とするための新規なＣＡＲ取り組みは、患者の生存を高め、かつ、ＡＭＬの再発を防止する可能性を有する。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

本開示の様々な局面が、（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、（ｂ）ヒンジドメインと、（ｃ）膜貫通ドメインと、（ｄ）細胞内ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関連する。本開示のさらなる様々な局面が、（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、（ｂ）ヒンジドメインと、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関連する。

【0012】

ある特定の実施形態において、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインはＦＬＴ３重鎖可変領域とＦＬＴ３軽鎖可変領域を含み、または代替では、ＦＬＴ３重鎖可変領域とＦＬＴ３軽鎖可変領域から本質的に構成され、または、ＦＬＴ３重鎖可変領域およびＦＬＴ３軽鎖可変領域をさらに含む。

【0013】

いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３重鎖可変領域は、配列番号２１～配列番号２３、配列番号２９～配列番号３１、またはそれらのそれぞれの同等物のいずれか１つを含むＣＤＲ領域を含み、あるいは代替では、該ＣＤＲ領域から本質的になり、あるいは、該ＣＤＲ領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３重鎖可変領域は、配列番号１９、配列番号２７、またはそれらのそれぞれの同等物のいずれか１つによってコードされるアミノ酸配列を含み、あるいは代替では、該アミノ酸配列から本質的に構成され、あるいは、該アミノ酸配列をさらに含む。

【0014】

いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３軽鎖可変領域は、配列番号２４～配列番号２６、配列番号３２～配列番号３４、またはそれらのそれぞれの同等物のいずれか１つを含むＣＤＲ領域を含む。いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３軽鎖可変領域は、配列番号２０、配列番号２８、またはそれらのそれぞれの同等物のいずれか１つによってコードされるアミノ酸配列を含み、あるいは代替では、該アミノ酸配列から本質的に構成され、あるいは、該アミノ酸配列をさらに含む。

【0015】

ある特定の実施形態において、上記ＣＡＲは、上記ＦＬＴ３重鎖可変領域と上記ＦＬＴ３軽鎖可変領域との間に位置するリンカーポリペプチドをさらに含み、またはさらに代替では、該リンカーポリペプチドから構成される。ある特定の実施形態において、上記リンカーはグリシン－セリンリンカーである。さらなる実施形態において、上記リンカーポリペプチドは、グリシンおよびセリンからなる配列（例えば、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号４６）、これはまた（Ｇ４Ｓ）ｎとして示され、ただし、ｎは１～６の整数であり、例えば、１、２、３、４、５または６である）を含み、代替では、該配列から本質的に構成され、または、該配列をさらに含む。

【0016】

ある特定の実施形態において、上記ＣＡＲは、当該ＣＡＲに結合する検出可能なマーカーまたは精製マーカーをさらに含み、あるいはさらに代替では、該検出可能なマーカーまたは該精製マーカーから構成される。

【0017】

本開示のさらなる様々な局面が、上記で記載されるようなＣＡＲをコードする単離された核酸配列またはその相補体、またはそれらのそれぞれの同等物に関連する。

【0018】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、上記ＦＬＴ３抗体の上記ＦＬＴ３抗原結合ドメインの上記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置するポリヌクレオチドプロモーター配列をさらに含み、さらにまたは該ポリヌクレオチドプロモーター配列から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリヌクレオチドプロモーター配列から構成される。

【0019】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、上記ＦＬＴ３抗体の上記ＦＬＴ３抗原結合ドメインの上記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流または下流に位置する、誘導性カスパーゼ（「ｉＣａｓｐ」）または他の「自殺遺伝子」をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、さらにまたは、該ポリヌクレオチド配列から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリヌクレオチド配列から構成される。

【0020】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、上記ＦＬＴ３抗体の上記ＦＬＴ３抗原結合ドメインの上記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流または下流に位置する、２Ａペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、さらにまたは該ポリヌクレオチド配列から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリヌクレオチド配列から構成される。

【0021】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、上記ＦＬＴ３抗体の上記ＦＬＴ３抗原結合ドメインの上記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、さらにまたは、該ポリヌクレオチド配列から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリヌクレオチド配列から構成される。

【0022】

ある特定の局面において、上記単離された核酸は、当該単離された核酸に機能的に結合される、抗生物質耐性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、または代替では、該ポリヌクレオチドから本質的に構成され、または、該ポリヌクレオチドをさらに含む。

【0023】

本開示の様々な局面が、上記で記載される単離された核酸の１つまたは複数を含むベクターに関連する。ある特定の実施形態において、上記ベクターは、プラスミド、または、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ関連ウイルスベクターの群から選択されるウイルスベクターである。上記単離された核酸、および、上記単離された核酸を含む前記ベクターは、本明細書中に記載されるようなＣＡＲを調製するために有用である。

【0024】

本開示のさらなる様々な局面が、上記で記載された構成物（すなわち、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、ＣＡＲをコードする単離された核酸もしくはその相補体、または上記単離された核酸を含有するベクター）の１つまたは複数を含む単離された細胞、あるいは代替では、上記で記載された構成物の１つまたは複数から本質的になる単離された細胞、あるいは、さらには、上記で記載された構成物の１つまたは複数から構成される単離された細胞、に関連する。ある特定の実施形態において、上記単離された細胞は原核生物細胞（例えば、細菌細胞（例えば、大腸菌）など）または真核生物細胞である場合がある。いくつかの実施形態において、上記単離された真核生物細胞は、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ細胞、イヌ細胞、ネズミ細胞、ウマ細胞またはヒト細胞から選択される。さらなる実施形態において、上記単離された細胞は免疫細胞である。さらにさらなる実施形態において、上記単離された免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄細胞、または、任意の他の免疫細胞である。

【0025】

本開示の様々な局面が、上記で記載された構成物の１つまたは複数（例えば、ＣＡＲ、単離された核酸、細胞またはベクター）およびキャリアを含む組成物、あるいは代替では、上記で記載された構成物（例えば、ＣＡＲ、単離された核酸、細胞またはベクター）の１つまたは複数およびキャリアから本質的になる組成物、あるいは、さらには、上記で記載された構成物の１つまたは複数およびキャリアから構成される組成物に関連する。

【0026】

本開示の様々な局面が、ＣＡＲ、または、ＦＬＴ３もしくはそのフラグメントに結合している上記ＣＡＲを含む細胞、ならびに／あるいは、ＦＬＴ３関連抗原を発現する細胞を含む単離された複合体に関連する。１つの局面において、上記抗原結合ドメインが上記細胞の表面に発現する。別の局面において、上記ＦＬＴ３関連抗原がガン／腫瘍において発現する。ガンの限定されない一例が急性骨髄性白血病である。１つの局面において、上記ＦＬＴ３ ＣＡＲを含有する、または発現する上記細胞は、免疫細胞である。さらなる局面において、上記ＦＬＴ３ ＣＡＲを含有する、または発現する上記免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、骨髄細胞、または、任意の他の免疫細胞である。いくつかの実施形態において、上記細胞は遺伝子改変または他の改変を受ける場合がある。例えば、Ｔ細胞は、患者のための同種Ｔ細胞としての使用のために改変されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む場合がある。

【0027】

本開示のいくつかの局面が、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞を作製する方法であって、単離された細胞に対して、本明細書中に記載されるようなＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入を行うことを含む方法、または代替では、単離された細胞に対して、本明細書中に記載されるようなＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入を行うことから本質的になる方法、さらにあるいは、単離された細胞に対して、本明細書中に記載されるようなＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入を行うことからなる方法に関連する。

【0028】

さらなる局面において、上記方法はさらに、上記ＣＡＲを発現する上記細胞を選択し、単離することを含む。さらなる局面において、上記細胞は、真核生物細胞、例えば、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞（例えば、免疫細胞など）であり、免疫細胞の限定されない例には、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、骨髄細胞、または、任意の他の免疫細胞が含まれる。上記細胞には、本明細書中に記載されるようなウイルスベクターを使用して、または代替では、Ｒｉｅｔ他（２０１３）、Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、９６９：１８７～２０１（論文名：“Ｎｏｎｖｉｒａｌ ＲＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ ｍｏｄｉｆｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｗｉｔｈ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｙ”）に記載される技術を使用して形質導入を行うことができる。

【0029】

ある特定の実施形態において、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞を作製する上記方法は、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞の集団を活性化し、拡大することをさらに含み、または代替では、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞の集団を活性化し、拡大することから本質的になり、さらにあるいは、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞の集団を活性化し、拡大することからなる。本開示のある特定の局面が、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む細胞の単離された活性化集団、または代替では、ＦＬＴ３ ＣＡＲから本質的になる細胞の単離された活性化集団、またはそれにもかかわらず、さらには、ＦＬＴ３ ＣＡＲからなる細胞の単離された活性化集団に関連する。ある特定の実施形態において、上記細胞は免疫細胞である。さらなる実施形態において、上記免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、骨髄細胞、または、任意の他の免疫細胞の１つまたは複数である。

【0030】

本開示の様々な局面が、上記腫瘍／ガンを、上記で開示される単離された細胞または組成物の効果的な量と接触させることによってＦＬＴ３を発現する腫瘍／ガンの成長を抑制する方法に関連する。上記接触させることはインビトロまたはインビボにおいてであることが可能である。上記接触させることがインビトロにおいてであるとき、上記方法は、患者の腫瘍／ガンに対する患者に合わせた個別化治療を試験するために、または、様々な併用療法についてアッセイするために使用することができる。上記接触させることがインビボにおいてであるとき、上記方法は、上記腫瘍／ガンの上記成長の抑制をその必要性のある対象において、また、効果的な量の上記細胞を受ける患者において達成するために有用である。ある特定の実施形態において、標的化される上記腫瘍／ガンは、血液および／または骨髄を冒すガンである。ある特定の実施形態において、上記単離された細胞は、処置される対象に対して自己である。別の局面において、上記方法は、効果的な量の細胞減少療法（例えば、化学療法、放射線療法および／または腫瘍溶解性ウイルス療法など）を対象に施すことをさらに含み、あるいは、効果的な量の細胞減少療法を対象に施すことから本質的になり、さらにあるいは、効果的な量の細胞減少療法を対象に施すことからなる。さらなる局面において、上記方法はさらに、上記対象に投与されるべき細胞を単離する工程、上記細胞に対して、本明細書中に記載されるようなＣＡＲをコードする効果的な量の単離された核酸により形質導入を行う工程、上記細胞を培養して、必要な場合には拡大され、また、活性化されるＣＡＲコード細胞の集団を得る工程、および、その後、上記細胞を上記患者に投与する工程を含む。

【0031】

本明細書中にまた、上記で記された構成物の１つまたは複数と、本明細書中に開示されるような方法におけるそれらの使用のための説明書とを含むキットが開示される。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】限定されない例示的なＣＡＲベクター構築物の概略図である。

【0033】

【図2A-F】図２Ａ～図２Ｆは、細胞表面のＦＬＴ３発現についての急性骨髄性白血病細胞株のフローサイトメトリー分析を示す。すべてのグラフについて、ｘ軸は、ＦＬＴ３に対するコンジュゲート化抗体の蛍光強度に基づくＦＬＴ３の表面発現を表し、ｙ軸は細胞数を表す。図２Ａ～図２Ｄは、高まったＦＬＴ３表面発現について陽性であり、一方で、図２Ｅ～図２Ｆは、アイソタイプコントロールよりも大きいＦＬＴ３発現を示さない。

【0034】

【図3】ＡＭＬ ＭＯＬＭ－１３細胞の溶解についての標準的な４時間クロム放出アッセイの結果を示す。空ベクターコントロールと、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞とは、ＡＭＬ細胞の溶解をもたらさなかった。その一方で、ＦＬＴ３－１（ＣＡＲ１）およびＦＬＴ３（ＣＡＲ２）を用いて作製されるＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＡＭＬ細胞の根絶を劇的に強化するようである。

【0035】

【図4】図４Ａ～図４Ｃは、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現するＴ細胞の作製を示す。（図４Ａ）ＦＬＴ３ ＣＡＲレンチウイルス構築物の概略図。ｉＣａｓｐ９、誘導性カスパーゼ９；Ｔ２Ａ、自己切断性２Ａ遺伝子；ＳＰ、シグナルペプチド；ＶＨ、可変Ｈ鎖；Ｌ、リンカー；ＶＬ、可変Ｌ鎖。ＭｙＣ、ＭｙＣ遺伝子配列；ヒンジ、ヒンジ鎖；ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、共刺激ドメイン。（図４Ｂ）初代Ｔ細胞、初代Ｔ－ＥＶ細胞、初代Ｔ－ＦＬＴ３細胞を、ビオチン標識されたヤギ抗マウスＦａｂ特異的またはＩｇＧコントロールにより染色した後でフローサイトメトリーによって分析した。（図４Ｃ）抗ＣＤ３ζによる免疫ブロッティングは、初代Ｔ細胞、および、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入された初代Ｔ細胞（初代Ｔ－ＦＬＴ３；ＥＶ）の表面におけるキメラなＦＬＴ３ ｓｃＦｖの発現を示した。

【0036】

【図5】図５Ａ～図５Ｃは、ＦＬＴ３^＋白血病細胞が認識されることにより、コントロールＴ細胞からの応答よりも強い、ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞からの応答が誘発されることを示す。（図５Ａ）細胞を抗ＦＬＴ３によって染色した後での白血病細胞株の表面におけるＦＬＴ３発現のフローサイトメトリー分析。（図５Ｂ）間接的ＥＬＩＳＡアッセイでは、初代Ｔ細胞、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入された初代Ｔ細胞（Ｔ－ＦＬＴ３；Ｔ－ＥＶ）の、ＭＯＬＭ－１３、ＥＯＬ－１またはＵ９３７の存在下または非存在下でのＩＦＮ－γ分泌が分析される。（図５Ｃ）リアルタイムＰＣＲは、ＭＯＬＭ－１３およびＵ９３７の存在下における、初代Ｔ、初代Ｔ－ＥＶおよび初代Ｔ－ＦＬＴ３のＩＦＮ－γ放出を示す。コントロールは、標的細胞と共培養されていないことを意味する。

【0037】

【図6】図６Ａ～図６Ｂは、ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞が患者の初代ヒト白血病細胞の根絶を高めることを明らかにする。（図６Ａ）間接的ＥＬＩＳＡアッセイでは、初代Ｔ細胞、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入された初代Ｔ細胞（Ｔ－ＦＬＴ３；Ｔ－ＥＶ）のＩＦＮ－γ分泌およびＩＬ－２分泌が、患者および正常コントロールから単離されるＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）との共培養の後で分析される。Ｔ－ＦＬＴ３により、強い応答がＦＬＴ３＋の患者の白血病細胞の存在下で誘発される。（図６Ｂ）総ＲＮＡをＴ細胞と標的ＰＢＭＣとの共培養から抽出し、逆転写した後、Ｑ－ＰＣＲを、患者および正常者からのＰＢＭＣの存在下における初代Ｔ、初代Ｔ－ＥＶおよび初代Ｔ－ＦＬＴ３のＩＦＮ－γ放出を示すために行った。コントロールは、標的ＰＢＭＣと共培養されていないことを意味する。

【0038】

【図7】図７Ａ～図７Ｂは、ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞がインビボ成長の白血病を抑制し、白血病を有するマウスの生存を延長することを明らかにする。（図７Ａ）白血病を有するマウスの腹側および背側のバイオルミネセンス画像化。ＮＳＧマウスに、ルシフェラーゼ発現の白血病細胞を尾静脈注射により接種した（０日目）。接種後９日目および１６日目に、マウスに、空ベクター形質導入のＴ細胞（模擬Ｔ細胞、ＰＣＤＨベクター）、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入の初代Ｔ細胞（Ｔ－ＦＬＴ３、ＣＡＲ）、またはＰＢＳを１回、尾静脈注入した。（図７Ｂ）Ｔ－ＦＬＴ３－ＣＡＲ細胞により処置される白血病保有マウスは、カプラン・マイヤー生存曲線（ｎ＝５、各群について）によって明らかにされるように、初代Ｔ細胞または初代Ｔ－ＰＣＤＨにより処置されるマウスと比較して、有意に増大した全体的生存を示した（^＊＊ｐ＜０．０１）。

【0039】

【図8】図８Ａ～図８Ｃは、ＦＬＴ３－ＣＡＲの作製と、ＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞におけるその発現の試験とを示す。（図８Ａ）ＦＬＴ３ ＣＡＲレンチウイルス構築物の概略図：ｉＣａｓｐ９、誘導性カスパーゼ９；Ｔ２Ａ、自己切断性２Ａ遺伝子；ＳＰ、シグナルペプチド；ＶＨ、可変Ｈ鎖；Ｌ、リンカー；ＶＬ、可変Ｌ鎖。ＭｙＣ、ＭｙＣ遺伝子配列；ヒンジ、ヒンジ鎖； ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、共刺激ドメイン。（図８Ｂ）ＮＫ－９２、および、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入されたＮＫ－９２細胞（ＮＫ－９２－ＦＬＴ３－ＣＡＲ；ＥＶ）の表面におけるキメラなＦＬＴ３ ｓｃＦｖの発現。（図８Ｃ）ＮＫ－９２細胞、ＮＫ－９２－ＥＶ細胞、ＮＫ－９２－ＦＬＴ３細胞を、ビオチン標識されたヤギ抗マウスＦａｂ特異的またはＩｇＧコントロールにより染色した後でフローサイトメトリーによって分析した。

【0040】

【図9】図９Ａ～図９Ｄは、ＦＬＴ３－ＣＡＲ－ＮＫ－９２細胞がＦＬＴ３^＋の白血病細胞株を認識し、その死滅を促進させることを示す。（図９Ａ）白血病細胞株の表面におけるＦＬＴ３発現のフローサイトメトリー分析。（図９Ｂ）クロム－５１放出アッセイを使用する、ＭＯＬＭ－１３細胞、ＥＯＬ－１細胞またはＵ９３７細胞に対する空ベクター（ＥＶ）形質導入ＮＫ－９２細胞またはＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入ＮＫ－９２細胞の細胞傷害性活性。（図９Ｃ）ＥＬＩＳＡアッセイでは、ＮＫ－９２細胞、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入されたＮＫ－９２細胞（ＮＫ－９２－ＦＬＴ３－ＣＡＲ；ＥＶ）の、ＭＯＬＭ－１３、ＥＯＬ－１またはＵ９３７の存在下または非存在下でのＩＦＮ－γ分泌が分析される。（図９Ｄ）Ｑ－ＰＣＲにより、ＭＯＬＭ－１３、Ｕ９３７およびコントロールの存在下におけるＮＫ－９２、ＮＫ９２－ＥＶおよびＮＫ９２－ＦＬＴ３のＩＦＮ－γ放出が示される。

【0041】

【図10】図１０Ａ～図１０Ｃは、ＦＬＴ３－ＣＡＲ－ＮＫ－９２細胞により、患者の初代ヒト白血病細胞の死滅が増強されることを示す。（図１０Ａ）クロム－５１放出アッセイを使用する、患者の白血病細胞に対する空ベクター（ＥＶ）形質導入ＮＫ－９２細胞またはＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入ＮＫ－９２細胞の細胞傷害性活性。（図１０Ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイでは、ＮＫ－９２細胞、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または空ベクター構築物のどちらかにより形質導入されたＮＫ－９２細胞（ＮＫ－９２－ＦＬＴ３－ＣＡＲ；ＥＶ）のＩＦＮ－γ分泌が、患者の白血病細胞または正常コントロールのＰＢＭＣにおいて分析される。（図１０Ｃ）Ｑ－ＰＣＲにより、患者の白血病細胞およびコントロールの存在下におけるＮＫ－９２、ＮＫ９２－ＥＶおよびＮＫ９２－ＦＬＴ３のＩＦＮ－γ放出が示される。

【0042】

【図11】図１１Ａ～図１１Ｂは、ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入される初代ＮＫが、患者の白血病細胞株および腫瘍細胞を死滅させることを効果的に増強し得ることを明らかにする。（図１１Ａ）初代ＮＫ－ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞はＦＬＴ３^＋の白血病細胞株ＭＯＬＭ１３をインビトロにおいて死滅させる。（図１１Ｂ）初代ＮＫ－ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞は患者の腫瘍細胞を死滅させる。

【0043】

【図12】図１２Ａ～図１２Ｄは、ＡＰ１９０３（薬物）がｉＣａｓｐ９によるＮＫ９２－ＦＬＴ３のアポトーシスを効果的に誘発し得ることを示す。（図１２Ａ）ｉＣａｓｐ９がＮＫ－９２－ＦＬＴ３形質導入の細胞において発現する。（図１２Ｂ）ＡＰ１９０３処置により、ＮＫ－９２－ＦＬＴ３の細胞死が４８時間の誘導の後で誘発される。（図１２Ｃ）フローサイトメトリーによるアネキシンＶ分析はＡＰ１９０３処置後におけるＮＫ９２－ＦＬＴ３の有意なアポトーシスを示す。（図１２Ｄ）免疫ブロッティングアッセイにより、ＡＰ１９０３（薬物）処置後におけるＮＫ－９２－ＦＬＴ３の切断されたカスパーゼ－３の増大が示される。

【0044】

【図13】ＮＫ－９２－ＦＬＴ３－ＣＡＲ細胞がインビボ成長の白血病を抑制し、白血病を有するマウスの生存を延長することを明らかにする。白血病を有するマウスの脳のバイオルミネセンス画像化。ＮＳＧマウスに、ルシフェラーゼ発現の白血病細胞を尾静脈注射により接種した（０日目）。接種後７日目に、マウスに、空ベクター形質導入ＮＫ－９２細胞（ＮＫ－９２－ＥＶ）、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入ＮＫ－９２細胞（ＮＫ－９２－ＦＬＴ３）またはＮＫ－９２細胞を１回、尾静脈注入した。

【0045】

【図14】患者から単離されるＡＭＬ細胞の表面におけるＦＬＴ３発現のフローサイトメトリー分析を示す。

【発明を実施するための形態】

【0046】

本開示は、記載される様々な特定の局面には限定されず、そのようなものとして、当然のことながら、変化し得ることが理解されなければならない。本明細書中で使用される用語は、特定の局面のみを記載するという目的のためのものであり、また、本開示の範囲は添付の請求項によってのみ限定されることになるので、限定的であるように意図されないこともまた理解されなければならない。

【0047】

別途定義される場合を除き、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似する、または同等である方法および材料はどのようなものも、本発明の技術の実施または試験において使用することができるにもかかわらず、好ましい方法、デバイスおよび材料が次に記載される。本明細書中に引用されるすべての技術刊行物および特許公報はその全体が参照によって本明細書中に組み込まれる 本明細書中のいかなるものも、本発明の技術は、先行発明によってそのような開示に先行するための資格がないことを認めるものとして解釈してはならない。

【0048】

本開示の実施では、特に明記しない限り、組織培養、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学および組換えＤＮＡの、当該技術分野の技能の範囲内にある従来の技術が用いられるであろう。例えば、下記を参照のこと：ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ編（２０１２）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第４版；双書、Ａｕｓｕｂｅｌ他編（２０１５）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ；双書、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ他（２０１５）、ＰＣＲ １：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ他（１９９５）、ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ他（２００６）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｂａｓｉｃｓ（Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９９９）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ編（２０１４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２０１０）、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ、第６版；Ｇａｉｔ編（１９８４）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第４，６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９９）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ編（２００５）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；ＢｕｚｄｉｎおよびＬｕｋｙａｎｏｖ編（２００７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｍｏｄｅｒｎ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８６））；Ｇｒａｎｄｉ編（２００７）、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２版；Ｇｕｉｓａｎ編（２００６）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｓ；Ｐｅｒｂａｌ（１９８８）、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、第２版；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編（１９８７）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍａｋｒｉｄｅｓ編（２００３）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；ＬｕｎｄｂｌａｄおよびＭａｃｄｏｎａｌｄ編（２０１０）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４版；ならびに、Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ他編（１９９６）、Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第５版。

【0049】

範囲を含めて、すべての数値表示（例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度および分子量）は、必要に応じて１．０または０．１の変化幅によって、あるいは代替では、＋／－１５％の変動によって、または代替では１０％の変動によって、または代替では５％の変動によって、または代替では２％の変動によって増減する概数である。常に明記されているとは限らないが、すべての数値表示の前には用語「約」が先行することが理解されなければならない。常に明記されているとは限らないが、本明細書中に記載される様々な試薬は単に例示にすぎないこと、および、そのような試薬の同等物がこの技術分野では知られていることもまた、理解されなければならない。

【0050】

本発明の技術が、ポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたは抗体に関連するときには、そのようなものの同等物または生物学的同等物が本発明の技術の範囲内において意図されることが、明示的な列挙を伴うことなく、また、別途意図される場合を除いて推測されるものとする。
［定義］

【0051】

本明細書および請求項において使用される場合、“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”の単数形態は、文脈がそうでないことを明確に示す場合を除き、複数の参照物を包含する。例えば、用語“ａ ｃｅｌｌ”（細胞）は、その混合物を含めて、複数の細胞を包含する。

【0052】

本明細書中で使用される場合、用語「動物」は、生きている多細胞の脊椎動物生物、すなわち、例えば、哺乳動物および鳥類を含むカテゴリーを示す。用語「哺乳動物」には、ヒトと、ヒト以外の哺乳動物との両方が含まれる。

【0053】

用語「対象」、用語「宿主」、用語「個体」および用語「患者」は、ヒト対象および獣医学対象を示すために、例えば、ヒト、動物、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ヒツジ、マウス、ウマおよびウシを示すために本明細書中では交換可能に使用される通りである。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。

【0054】

本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、例として、また、限定されないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、それらの組合せ、ならびに、脊椎動物においてどのようなものであっても、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、ヤギ、ウサギおよびマウスなど）において免疫応答の期間中に産生される類似する分子、同様にまた、非哺乳動物種において産生されるもの（例えば、サメ免疫グロブリンなど）を含めて様々な免疫グロブリンまたは様々な免疫グロブリン様分子を総称して示す。具体的に別途記される場合を除き、用語「抗体」には、目的とする分子（または目的とする非常に類似した分子の一群）に対して特異的に結合し、他の分子に対する結合が実質的に除外されるほどである無傷の免疫グロブリンおよび「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」（例えば、生物学的サンプルにおける他の分子についての結合定数よりも少なくとも１０^３Ｍ^－１大きい、少なくとも１０^４Ｍ^－１大きい、または少なくとも１０^５Ｍ^－１大きい、目的とする当該分子についての結合定数を有する抗体および抗体フラグメント）が含まれる。用語「抗体」にはまた、遺伝子操作された様々な形態、例えば、キメラ抗体（例えば、ネズミまたはヒト化された非霊長類抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体など）などが含まれる。下記もまた参照のこと：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４－１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）；Ｏｗｅｎ他、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．、２０１３；Ｍｕｒｐｈｙ、Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、第８版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１４；Ｍａｌｅ他、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｉｔｔ）、第８版、Ｓａｕｎｄｅｒｓ、２０１２；Ｐａｒｈａｍ、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ、第４版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１４。

【0055】

本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンによって、または、ただ１種の抗体の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子がトランスフェクションされている細胞によって産生される抗体を示す。モノクローナル抗体が、当業者に知られている様々な方法によって、例えば、ハイブリッド抗体を形成する細胞をミエローマ細胞の免疫脾臓細胞との融合から作製することによって作製される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれる。

【0056】

抗体構造に関して、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互に連結される重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。ラムダ（λ）およびカッパ（κ）の２つのタイプの軽鎖が存在する。抗体分子の機能的活性を決定する下記の５つの主要な重鎖クラス（またはイソタイプ）が存在する：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ。それぞれの重鎖および軽鎖が定常領域および可変領域を含有する（これらの領域はまた「ドメイン」として知られている）。組合せで、重鎖可変領域および軽鎖可変領域が抗原と特異的に結合する。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域によって中断される「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲が定義されている（Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（米国保健福祉省、１９９１年）を参照のこと。これは本明細書により参照によって組み込まれる）。Ｋａｂａｔデータベースは現在、オンラインで管理されている。様々な異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は種内では比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域（すなわち、構成している軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域）は主にβ－シートの立体配座を取っており、一方、ＣＤＲは、β－シート構造をつなぐループ、また、場合によってはβ－シート構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、ＣＤＲを鎖間の非共有結合相互作用によって正しい配向で配置することを規定する足場を形成するように作用する。

【0057】

ＣＤＲは、抗原のエピトープに結合することに主として関わっている。それぞれの鎖のＣＤＲが典型的には、Ｎ末端から順に番号が付けられて、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として示され、それぞれの鎖のＣＤＲはまた、典型的には、特定のＣＤＲが位置する鎖によって特定される（重鎖領域はＣＤＨＲと呼ばれ、軽鎖領域はＣＤＬＲと呼ばれる）。したがって、ＣＤＨＲ３は、該ＣＤＨＲ３が見出される抗体の重鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ３であり、これに対して、ＣＤＬＲ１は、該ＣＤＬＲ１が見出される抗体の軽鎖の可変ドメインに由来するＣＤＲ１である。ＦＬＴ３抗体は、ＦＬＴ３関連抗原に対して特有である特異的なＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域の配列、したがって、特異的なＣＤＲ配列を有するであろう。特異性が異なる抗体（すなわち、異なる結合部位を異なる抗原について有する抗体）は、異なるＣＤＲを有する。抗体毎に変化するのがＣＤＲであるにもかかわらず、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接に関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置が特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。

【0058】

本明細書中で使用される場合、用語「抗原」は、特異的な体液性免疫または細胞性免疫の産物（例えば、抗体分子またはＴ細胞受容体など）による特異的な結合が生じ得る化合物、組成物または物質を示す。抗原は、例えば、ハプテン、単純な中間代謝産物、糖（例えば、オリゴ糖）、脂質およびホルモン、同様にまた、巨大分子、例えば、複合糖質（例えば、多糖類）、リン脂質およびタンパク質などを含めて、どのようなタイプの分子であっても可能である。抗原の一般的なカテゴリーには、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原虫抗原および他の寄生虫抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患、アレルギーおよび移植片拒絶に関与する抗原、毒素、ならびに他の種々雑多な抗原が含まれるが、これらに限定されない。

【0059】

本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合ドメイン」は、抗原標的に特異的に結合することができるタンパク質ドメインまたはポリペプチドドメインをどのようなものであっても示す。

【0060】

本明細書中で使用される場合、用語「自己」は細胞に関しては、単離され、同じ対象（レシピエントまたは宿主）に注入して戻される細胞を示す。「同種」は、非自己の細胞を示す。

【0061】

本明細書中で使用される場合、用語「Ｂ細胞」は、適応免疫系の体液性免疫における１つのタイプのリンパ球を示す。Ｂ細胞は主として、抗原相互作用による活性化の後において抗体を作製するように、抗原提示細胞として働くように、サイトカインを放出するように、また、メモリーＢ細胞を発達させるように機能する。Ｂ細胞は、細胞表面におけるＢ細胞受容体の存在によって他のリンパ球（例えば、Ｔ細胞など）から区別される。Ｂ細胞は、単離されるか、または、市販の供給元から得られるかのどちらの場合であってもよい。市販されているＢ細胞株の限定されない例には、ＡＨＨ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８１４６（商標））、ＢＣ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２３０（商標））、ＢＣ－２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２３１（商標））、ＢＣ－３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２７７（商標））、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１６４８（商標））、ＤＧ－７５［Ｄ．Ｇ．－７５］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２６２５（商標））、ＤＳ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１１１０２（商標））、ＥＢ－３［ＥＢ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－８５（商標））、Ｚ－１３８（ＡＴＣＣ ＃ＣＲＬ－３００１）、ＤＢ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２２８９）、Ｔｏｌｅｄｏ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３１）、Ｐｆｉｆｆｅｒ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３２）、ＳＲ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２２６２）、ＪＭ－１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１０４２１）、ＮＦＳ－５ Ｃ－１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９３）；ＮＦＳ－７０ Ｃ１０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９４）、ＮＦＳ－２５ Ｃ－３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９５）およびＳＵＰ－Ｂ１５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１９２９）が含まれる。さらなる例には、未分化リンパ腫および大細胞リンパ腫に由来する細胞株（例えば、ＤＥＬ、ＤＬ－４０、ＦＥ－ＰＤ、ＪＢ６、Ｋａｒｐａｓ ２９９、Ｋｉ－ＪＫ、Ｍａｃ－２Ａ Ｐｌｙ１、ＳＲ－７８６、ＳＵ－ＤＨＬ－１、ＳＵ－ＤＨＬ－２、ＳＵ－ＤＨＬ－４、ＳＵ－ＤＨＬ－５、ＳＵ－ＤＨＬ－６、ＳＵ－ＤＨＬ－７、ＳＵ－ＤＨＬ－８、ＳＵ－ＤＨＬ－９、ＳＵ－ＤＨＬ－１０およびＳＵ－ＤＨＬ－１６、ＤＯＨＨ－２、ＮＵ－ＤＨＬ－１、Ｕ－９３７、Ｇｒａｎｄａ ５１９、ＵＳＣ－ＤＨＬ－１、ＲＬ）、ホジキンリンパ腫に由来する細胞株（例えば、ＤＥＶ、ＨＤ－７０、ＨＤＬＭ－２、ＨＤ－ＭｙＺ、ＨＫＢ－１、ＫＭ－Ｈ２、Ｌ４２８、Ｌ５４０、Ｌ１２３６、ＳＢＨ－１、ＳＵＰ－ＨＤ１、ＳＵ／ＲＨ－ＨＤ－１）が含まれるが、これらに限定されない。そのような市販の細胞株についての限定されない例示的な供給元には、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、すなわち、ＡＴＣＣ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）、および、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。

【0062】

本明細書中で使用される場合、「ガン」は、異常な制御されない複製を明らかにする細胞が対象に存在することによって特徴づけられる疾患状態である。いくつかの実施形態において、ガンは白血病である。ある特定の実施形態において、ガンは急性骨髄性白血病である。本明細書中で使用される場合、「白血病」は、未成熟な白血球の異常な増加によって特徴づけられる血液または骨髄のガンである。急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ、ＡＭＬ）（これはまた、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）または急性骨髄芽球性白血病として示される）の特異的な状態が、骨髄に蓄積し、正常な血液細胞の産生を妨げる異常な骨髄細胞の急速な成長によって特徴づけられる骨髄系起源の血液細胞のガンである。

【0063】

用語「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、本明細書中で使用される場合、抗原に結合することが可能である細胞外ドメインと、該細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来する膜貫通ドメインと、少なくとも１つの細胞内ドメインとを含む融合タンパク質を示す。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」はときには、「キメラ受容体」、「Ｔ－ｂｏｄｙ」または「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ）」と呼ばれる。「抗原に結合することが可能である細胞外ドメイン」は、ある特定の抗原に結合することができるオリゴペプチドまたはポリペプチドをどのようなものであっても意味する。「細胞内ドメイン」または「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、細胞における生物学的プロセスの活性化または阻害を生じさせるためにシグナルを伝達するドメインとして機能することが知られているオリゴペプチドまたはポリペプチドをどのようなものであっても意味する。ある特定の実施形態において、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインに加えて、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む場合があり、代替では、一次シグナル伝達ドメインに加えて、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインから本質的になる場合があり、あるいはそれにもかかわらず、一次シグナル伝達ドメインに加えて、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む場合がある。「膜貫通ドメイン」は、細胞膜にまたがることが知られており、かつ、細胞外ドメインと、シグナル伝達ドメインとを連結するために機能することができるオリゴペプチドまたはポリペプチドをどのようなものであっても意味する。キメラ抗原受容体は必要な場合には、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインとの間のリンカーとして働く「ヒンジドメイン」を含む場合がある。それぞれのドメインの構成成分をコードする限定されない例示的なポリヌクレオチド配列が本明細書中に開示される。例えば、
ヒンジドメイン：ＩｇＧ１重鎖ヒンジ配列、配列番号１：
ＣＴＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＧ
膜貫通ドメイン：ＣＤ２８膜貫通領域、配列番号２：
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ
細胞内ドメイン：４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、配列番号３：
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
細胞内ドメイン：ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、配列番号４：
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ
細胞内ドメイン：ＣＤ３ゼータシグナル伝達領域、配列番号５：
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ

【0064】

それぞれの例示的なドメイン構成成分のさらなる実施形態には、類似した生物学的機能を有する他のタンパク質で、上記で開示された核酸配列によってコードされるタンパク質との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他のタンパク質が含まれる。さらに、そのようなドメインの限定されない様々な例が本明細書中に提供される。

【0065】

本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ８αヒンジドメイン」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、類似した生物学的機能を有する任意の他の分子で、本明細書中に示されるようなＣＤ８αヒンジドメイン配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ヒト、マウスおよび他の種についてのＣＤ８αヒンジドメインの例示的配列が、Ｐｉｎｔｏ，Ｒ．Ｄ．他（２００６）、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、１１０：１６９～１７７において提供される。ＣＤ８αヒンジドメインに関連する配列が、Ｐｉｎｔｏ，Ｒ．Ｄ．他（２００６）、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、１１０：１６９～１７７において提供される。そのような配列の限定されない例には、下記の配列が含まれる：
ヒトＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号６：
ＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
マウスＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号７：
ＫＶＮＳＴＴＴＫＰＶＬＲＴＰＳＰＶＨＰＴＧＴＳＱＰＱＲＰＥＤＣＲＰＲＧＳＶＫＧＴＧＬＤＦＡＣＤＩＹ
ネコＣＤ８アルファヒンジドメイン、配列番号８：
ＰＶＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＱＡＰＩＴＴＳＱＲＶＳＬＲＰＧＴＣＱＰＳＡＧＳＴＶＥＡＳＧＬＤＬＳＣＤＩＹ

【0066】

本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ８α膜貫通ドメイン」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるようなＣＤ８α膜貫通ドメイン配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ヒトＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号：ＮＰ＿００１７５９．３）のアミノ酸位置１８３～２０３、またはマウスＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号：ＮＰ＿００１０７４５７９．１）のアミノ酸位置１９７～２１７、およびラットＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８アルファ鎖（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＮＰ＿１１３７２６．１）のアミノ酸配列１９０～２１０に関連するフラグメント配列により、ＣＤ８α膜貫通ドメインのさらなる例示的配列が提供される。列挙されたアクセッション番号のそれぞれに関連する配列が下記のように提供される：
ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号９：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ
マウスＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号１０：
ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＶＡＬＬＬＳＬＩＩＴＬＩ
ラットＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、配列番号１１：
ＩＷＡＰＬＡＧＩＣＡＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＩ

【0067】

本明細書中で使用される場合、用語「４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるような４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域の限定されない例示的配列が米国特許出願公開第２０１３０２６６５５１号Ａ１（米国特許出願第１３／８２６，２５８号として出願されたもの）において提供されており、例えば、下記に提供される例示的配列、および配列番号３によってコードされる配列などである：
４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、配列番号１２：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

【0068】

本明細書中で使用される場合、用語「ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるようなＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域の限定されない例示的配列が米国特許出願公開第２０１５／００１７１４１号Ａ１において提供されており、例示的なポリヌクレオチド配列が下記に提供される：
ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域、配列番号１３：
ＡＣＡＡＡＡＡＡＧＡ ＡＧＴＡＴＴＣＡＴＣ ＣＡＧＴＧＴＧＣＡＣ ＧＡＣＣＣＴＡＡＣＧ ＧＴＧＡＡＴＡＣＡＴ ＧＴＴＣＡＴＧＡＧＡ ＧＣＡＧＴＧＡＡＣＡ ＣＡＧＣＣＡＡＡＡＡ ＡＴＣＣＡＧＡＣＴＣ ＡＣＡＧＡＴＧＴＧＡ ＣＣＣＴＡ

【0069】

本明細書中で使用される場合、用語「ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるようなＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、または代替では９０％の配列同一性、または代替では少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域の限定されない例示的配列が米国特許出願公開第２０１２／２０１４８５５２号Ａ１に開示されており、ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域の限定されない例示的配列には、下記に提供される例示的配列が含まれる。
ＯＸ４０共刺激シグナル伝達領域、配列番号１４：
ＡＧＧＧＡＣＣＡＧ ＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣ ＣＣＧＡＴＧＣＣＣＡ ＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴ ＧＧＧＧＧＡＧＧＣＡ ＧＴＴＴＣＣＧＧＡＣ ＣＣＣＣＡＴＣＣＡＡ ＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧ ＣＣＧＡＣＧＣＣＣＡ ＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧ ＧＣＣＡＡＧＡＴＣ

【0070】

本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ２８膜貫通ドメイン」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるようなＣＤ２８膜貫通ドメイン配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、または代替では少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＸＭ＿００６７１２８６２．２および同ＸＭ＿００９４４４０５６．１に関連するフラグメント配列により、ＣＤ２８膜貫通ドメインのさらなる限定されない例示的配列が提供される。列挙されたアクセッション番号のそれぞれに関連する配列が下記のように提供される：配列番号２によってコードされる配列。

【0071】

本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、または代替では９０％の配列同一性、または代替では少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの例示的配列が、米国特許第５，６８６，２８１号；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｔ．Ｌ．他（２００１）、Ｂｌｏｏｄ、９８：２３６４～２３７１；Ｈｏｍｂａｃｈ，Ａ．他（２００１）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６７：６１２３～６１３１；Ｍａｈｅｒ，Ｊ．他（２００２）、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２０：７０～７５；Ｈａｙｎｅｓ，Ｎ．Ｍ．他（２００２）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６９：５７８０～５７８６（２００２）；Ｈａｙｎｅｓ，Ｎ．Ｍ．他（２００２）、Ｂｌｏｏｄ、１００：３１５５～３１６３において提供されている。限定されない例には、下記の残基１１４～残基２２０、および配列番号４によってコードされる配列が含まれる：
ＣＤ２８配列：ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ ＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫ ＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶ ＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣ ＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥ ＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧ ＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳ ＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬ ＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱ ＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹ ＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧ ＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬ ＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ ＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧ ＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲ ＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤ ＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧ ＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡ ＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１５）、およびその同等物。

【0072】

本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン」は、この名称に関連する特定のタンパク質フラグメント、および、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、本明細書中に示されるようなＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン配列との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも９０％の配列同一性、または代替では少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインの限定されない例示的配列が、米国特許出願第１３／８２６，２５８号において提供されており、例えば、下記の配列である：ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１６）、および配列番号５によってコードされる配列。

【0073】

「組成物」は典型的には、活性な物質（例えば、化合物または組成物）と、不活性体（例えば、検出可能な物質または標識）または活性体にかかわらず、天然に存在するキャリアまたは天然に存在しないキャリア（例えば、アジュバント、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、防腐剤またはアジュバントなど）との組合せ物を意図し、医薬的に許容され得るキャリアを含む。キャリアにはまた、医薬用の賦形剤および添加剤、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、ならびに炭水化物（例えば、糖類（単糖類、二糖類、三糖類、四糖類およびオリゴ糖類を含む）；誘導体化糖類（例えば、アルジトール、アルドン酸およびエステル化糖類など）；ならびに、多糖類または糖ポリマー）が含まれ、これらは、単独での場合、あるいは、重量比または体積比で１％～９９．９９％での組合せでの場合を含んで、単独で、または組合せで存在することができる。例示的なタンパク質賦形剤には、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）など）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチンおよびカゼインなどが含まれる。緩衝化能においてもまた機能し得る代表的なアミノ酸／抗体成分には、アラニン、アルギニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニンおよびアスパルテームなどが含まれる。炭水化物賦形剤もまた、本技術の範囲内において意図され、その例には、単糖類（例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ－マンノースおよびソルボースなど）、二糖類（例えば、ラクトース、スクロース、トレハロースおよびセロビオースなど）、多糖類（例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストランおよびデンプンなど）、ならびに、アルジトール（例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール ソルビトール（グルシトール）およびミオイノシトールなど）が含まれるが、これらに限定されない。

【0074】

本明細書中で使用される場合、用語「含む」（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）は、組成物および方法が、列挙された要素を含み、しかし、他の要素を除外しないことを意味するように意図される。「から本質的に構成される」／「から本質的になる」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）は、組成物および方法を定義するために使用されるときには、意図された使用のための組合せにとって何らかの本質的に意味のある他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書中で定義されるような要素から本質的になる組成物は、単離・精製方法に由来する微量混入物、および、医薬的に許容され得るキャリア（例えば、リン酸塩緩衝化生理的食塩水および防腐剤など）を除外しないであろう。「からなる」／「から構成される」（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）は、微量要素を超える他の成分、および、本明細書中に開示される組成物を投与するための実質的な方法工程を除外することを意味するものとする。これらの移行用語のそれぞれによって定義される様々な局面が本開示の範囲の範囲内である。

【0075】

用語「コンセンサス配列」は、本明細書中で使用される場合、一連の多数の配列をアラインメントすることによって決定され、かつ、多数の配列の各対応位置におけるアミノ酸または塩基の優勢な選択を表す理想化された配列を規定するアミノ酸または核酸配列を示す。一連の多数の配列の当該配列に依存して、この一連の多数の配列についてのコンセンサス配列は、配列のそれぞれと、０個、１個、少数個またはそれ以上の置換によって異なり得る。また、一連の多数の配列の当該配列に依存して、２つ以上のコンセンサス配列がこの一連の多数の配列について決定される場合がある。コンセンサス配列を得ることは、徹底した数学的分析に従っている。様々なソフトウエアプログラムを、コンセンサス配列を決定するために使用することができる。

【0076】

本明細書中で使用される場合、「細胞減少療法」には、化学療法、寒冷療法および放射線療法が含まれるが、これらに限定されない。細胞増殖を低下させるように作用する様々な薬剤がこの技術分野では知られており、広範囲に使用されている。ガン細胞が分裂しているときにだけガン細胞を死滅させる化学療法薬物は、細胞周期特異的と呼ばれている。これらの薬物には、トポイソメラーゼ阻害剤および代謝拮抗剤を含めて、Ｓ期において作用する薬剤が含まれる。

【0077】

トポイソメラーゼ阻害剤は、トポイソメラーゼ酵素（トポイソメラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩ）の作用を妨げる薬物である。化学療法の過程の期間中に、トポイソメラーゼ酵素は、複製のために必要なＤＮＡの構造の操作を抑制し、したがって、細胞周期特異的である。トポイソメラーゼＩ阻害剤の例には、で列挙されるカンプトテカンアナログ、イリノテカンおよびトポテカンが含まれる。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の例には、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシドおよびテニポシドが含まれる。

【0078】

代謝拮抗剤は通常的には、染色体複製に関与するプロセスを多くの場合には妨害する、正常な代謝基質のアナログである。代謝拮抗剤は細胞を細胞周期における非常に特異的な段階で攻撃する。代謝拮抗剤には、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサート）、ピリミジンアンタゴニスト（例えば、５－フルオロウラシル、ホクスウリジン（ｆｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、シタラビン、カペシタビンおよびゲムシタビン）、プリンアンタゴニスト（例えば、６－メルカプトプリンおよび６－チオグアニン）、アデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、クラドリビン、フルダラビン、ネララビンおよびペントスタチン）などが含まれる。

【0079】

植物アルカロイドは、ある特定のタイプの植物に由来する。ビンカアルカロイドがニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅａ）から作製される。タキサンがタイヘイヨウイチイ（イチイ属）の樹皮から作製される。ビンカアルカロイドおよびタキサンはまた、抗微小管剤として知られている。ポドフィロトキシンはポドフィルムに由来する。カンプトテカンアナログはカンレンボク（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ）に由来する。ポドフィロトキシンおよびカンプトテカンアナログはまた、トポイソメラーゼ阻害剤として分類される。植物アルカロイドは一般に、細胞周期特異的である。

【0080】

これらの薬剤の例には、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビン；タキサン、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニソピド；ならびに、カンプトテカンアナログ、例えば、イリノテカンおよびトポテカンが含まれる。

【0081】

寒冷療法には、温度を低下させることを伴う様々な治療法（例えば、低体温療法）が含まれるが、これらに限定されない。

【0082】

放射線療法には、この技術分野では知られているように、放射線（例えば、電離放射線、ＵＶ放射線）への暴露が含まれるが、これに限定されない。例示的な線量には、少なくとも約２Ｇｙから約１０Ｇｙ以下までの範囲での電離放射線の照射線量、および／または、少なくとも約５Ｊ／ｍ^２から約５０Ｊ／ｍ^２以下までの範囲での紫外線の照射線量（通常の場合には約１０Ｊ／ｍ^２）が含まれるが、これらに限定されない。

【0083】

本明細書中で使用される場合、用語「検出可能なマーカー」は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に生じさせることが可能である少なくとも１つのマーカーを示す。このマーカーの非網羅的な列挙には、検出可能なシグナルを、例えば、比色法、蛍光、発光による検出可能なシグナルを生じさせる酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼなど）、発色団（例えば、蛍光性、発光性の色素）、電子顕微鏡法によって、またはその電気的性質（例えば、電気伝導率、アンペロメトリー、ボルタンメトリー、インピーダンス）によって検出される電子密度を有する基、検出可能な基で、例えば、当該分子が、その物理的性質および／または化学的性質における検出可能な改変を誘導するための十分なサイズであり、そのような検出が光学的方法（例えば、回折、表面プラズモン共鳴、表面変化、接触角変化など）または物理的方法（例えば、原子間力分光法、トンネル効果など）によって達成され得る検出可能な基、あるいは、放射性分子（例えば、^３２Ｐ、^３５Ｓまたは^１２５Ｉなど）が含まれる。１つの局面において、検出可能なマーカーには、自然蛍光性のポリヌクレオチドは含まれない。

【0084】

「効果的な量」または「有効量」は、哺乳動物対象または他の対象を処置するために投与されたとき、疾患のためのそのような処置を達成するために十分である薬剤の量または２つ以上の薬剤の組合せ量を示す。「効果的な量」は、薬剤（１つまたは複数）、疾患およびその重篤度、ならびに、処置されるべき対象の年齢、体重などに依存して変化するであろう。

【0085】

用語「コードする」は、核酸配列に対して適用される場合、その生来的状態において、または、当業者には広く知られている方法によって操作されたとき、ポリペプチドおよび／またはそのフラグメントのためのｍＲＮＡを生じさせるように転写および／または翻訳が行われ得るならば、ポリペプチドを「コードする」と言われるポリヌクレオチドを示す。アンチセンス鎖はそのような核酸の相補体であり、コード配列をそのような核酸から推定することができる。

【0086】

本明細書中で使用されるように、用語「エンハンサー」は、本明細書中で使用される場合、核酸配列の転写を、発現させられることになる当該核酸配列に関してその位置および配向にかかわりなく増大させる、改善する、または向上させる配列エレメントを表す。エンハンサーにより、ただ１つのプロモーターからの転写、または同時に２つ以上のプロモーターからの転写が増強される場合がある。転写を改善するこの機能性が保持される、または実質的に保持される限り（例えば、野生型活性、すなわち、全長配列の活性の少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％が保持される限り）、野生型エンハンサー配列の短縮型変化体、変異型変化体または他の改変された変化体はどのような変化体であってもまた、上記定義の範囲内である。

【0087】

１つの局面において、抗体の「同等物」または「生物学的同等物」の用語は、ＥＬＩＳＡまたは他の好適な方法によって測定されるように、そのエピトープタンパク質またはそのフラグメントと選択的に結合する当該抗体の能力を意味する。生物学的に同等な抗体には、参照抗体と同じエピトープに結合するそのような抗体、ペプチド、抗体フラグメント、抗体変化体、抗体誘導体および抗体模倣物が含まれるが、これらに限定されない。

【0088】

本開示が、ポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたは抗体に関連するときには、そのようなものの同等物または生物学的同等物が本開示の範囲内において意図されることが、明示的な列挙を伴うことなく、また、別途意図される場合を除いて推測されるものとする。本明細書中で使用される場合、用語「その生物学的同等物」は、参照のタンパク質、抗体、ポリペプチドまたは核酸を参照するときには「その同等物」と同義であるように意図され、所望の構造または機能性を依然として維持しながら最小限の相同性を有するものを意図する。本明細書中に具体的に記載される場合を除き、本明細書中で言及されるポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはタンパク質はどれもまた、それらの同等物を包含することが意図される。例えば、同等物は、少なくとも約７０％の相同性もしくは同一性、または少なくとも８０％の相同性もしくは同一性、また、代替において、あるいは、少なくとも約８５％、または代替では少なくとも約９０％、または代替では少なくとも約９５％、または代替では９８％のパーセント相同性もしくはパーセント同一性を有し、かつ、参照のタンパク質、ポリペプチドまたは核酸と実質的に同等の生物学的活性を示す。代替において、ポリヌクレオチドを参照するときには、その同等物は、ストリンジェントな条件のもとで参照ポリヌクレオチドまたはその相補体にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドである。

【0089】

ある特定の割合（例えば、８０％、８５％、９０％または９５％）の「配列同一性」を別の配列に対して有するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（あるいはポリペプチドまたはポリペプチド領域）は、アラインメトされたとき、その割合の塩基（またはアミノ酸）が、２つの配列を比較する際において同じであることを意味する。アラインメントおよびパーセント相同性またはパーセント配列同一性は、この技術分野において知られている様々なソフトウエアプログラムを使用して、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ他編、１９８７）、増補３０、セクション７．７．１８、表７．７．１に記載されるソフトウエアプログラムを使用して求めることができる。好ましくは、設定省略時の既定値パラメーターがアラインメントのために使用される。好ましいアライメントプログラムがＢＬＡＳＴであり、設定省略時の既定値パラメーターが使用される。具体的には、好ましいプログラムがＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰであり、下記の設定省略時の既定値パラメーターが使用される：Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ；ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ；ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ；ｃｕｔｏｆｆ＝６０；ｅｘｐｅｃｔ＝１０；Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；ｓｏｒｔ ｂｙ＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ，ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細を下記のインターネットアドレスにおいて見出すことができる：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴ。

【0090】

本明細書中で使用される場合、用語「発現」は、ポリヌクレオチドがｍＲＮＡに転写されるプロセス、および／または、転写されたｍＲＮＡが続いて、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質に翻訳されるプロセスを示す。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来するならば、発現は、真核生物細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含む場合がある。遺伝子の発現レベルが、細胞サンプルまたは組織サンプルにおけるｍＲＮＡまたはタンパク質の量を測定することによって求められる場合がある。１つの局面において、１つのサンプルからの遺伝子の発現レベルが、コントロールサンプルまたは参照サンプルからのその遺伝子の発現レベルと直接に比較される場合がある。別の局面において、１つのサンプルからの遺伝子の発現レベルが、化合物を投与した後の同じサンプルからのその遺伝子の発現レベルと直接に比較される場合がある。

【0091】

用語「ＦＫＢＰ」、すなわち、ＦＫ５０６結合タンパク質は、プロリルイソメラーゼ活性を有し、かつ、機能において様々なシクロフィリンに関連づけられるタンパク質の一群を示す。様々なＦＫＢＰが、酵母からヒトまでの多くの真核生物において特定されており、これらは、プロリン残基を含有するタンパク質のためのタンパク質折り畳みシャペロンとして機能する。シクロフィリンと一緒に、ＦＫＢＰはイムノフィリンファミリーに属する。限定されない例示的なＦＫＢＰの１つがヒトＦＫＢＰ１２である（これはまたＦＫＢＰ１Ａとして示される）（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｒｅｆ．Ｎｏ．Ｐ６２９４２）。ＦＫＢＰのさらなる限定されない例には、ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＡＨ００２８１８、同ＢＣ１１９７３２．１、同ＮＭ＿００１１９９７８６．１および同ＮＭ＿０５４０１４．３によって提供されるものが含まれる。

【0092】

表現「第一選択の」または表現「第二選択の」または表現「第三選択の」は、患者が受ける処置の順序を示す。第一選択の治療計画は、最初に施される処置であり、これに対して、第二選択の治療または第三選択の治療は、第一選択の治療の後で、または、第二選択の治療の後でそれぞれ施される。国立ガン研究所は第一選択の治療を「疾患または状態のための最初の処置」と定義する。ガン患者において、一次処置は、手術、化学療法、放射線療法、またはこれらの治療法の組合せとすることができる。第一選択の治療はまた、当業者には「一次治療および一次処置」として示される。ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖでの国立ガン研究所のウエブサイトを参照のこと（前回閲覧：２００８年５月１日）。典型的には、患者には、それに続いての化学療法計画が施される。これは、当該患者が、第一選択の治療に対する好ましい臨床応答もしくは亜臨床応答を示さなかったか、または、第一選択の治療が中断されているからである。

【0093】

本明細書中で使用される場合、用語「ＦＬＴ３」は、この名前に関連する受容体型チロシン－プロテインキナーゼＦＬＴ３、その代替名のいずれか（Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ、幹細胞チロシンキナーゼ、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ、ＦＬサイトカイン受容体、ＣＤ１３５抗原、ＥＣ２．７．１０．１、ＣＤ１３５、ＦＬＫ－２、ＳＴＫ１、ＦＬＫ２、増殖因子受容体チロシンキナーゼＩＩＩ型、受容体型チロシン－プロテインキナーゼＦＬＴ３、胎児肝臓キナーゼ２、胎児肝臓キナーゼ－２、ＥＣ２．７．１０、ＦＬＴ－３、ＳＴＫ－１）、またはＵｎｉＰｒｏｔアクセション番号Ｐ３６８８８、ならびに、どのような分子であっても、類似した生物学的機能を有する他の分子で、ＦＬＴ３およびそのどのような変異体またはイソ型との少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、または代替では少なくとも９５％の配列同一性を共有する他の分子を示す。ＦＬＴ３の限定されない例には、下記のものが含まれる：
ヒトＦＬＴ３イソ型１、配列番号１７：
ＭＰＡＬＡＲＤＧＧＱＬＰＬＬＶＶＦＳＡＭＩＦＧＴＩＴＮＱＤＬＰＶＩＫＣＶＬＩＮＨＫＮＮＤＳＳＶＧＫＳＳＳＹＰＭＶＳＥＳＰ
ＥＤＬＧＣＡＬＲＰＱＳＳＧＴＶＹＥＡＡＡＶＥＶＤＶＳＡＳＩＴＬＱＶＬＶＤＡＰＧＮＩＳＣＬＷＶＦＫＨＳＳＬＮＣＱＰＨＦＤＬＱＮＲＧＶＶＳＭＶＩＬＫＭＴＥＴＱＡＧＥＹＬＬＦＩＱＳＥＡＴＮＹＴＩＬＦＴＶＳＩＲＮＴＬＬＹＴＬＲＲＰＹＦＲＫＭＥＮＱＤＡＬＶＣＩＳＥＳＶＰＥＰＩＶＥＷＶＬＣＤＳＱＧＥＳＣＫＥＥＳＰＡＶＶＫＫＥＥＫＶＬＨＥＬＦＧＴＤＩＲＣＣＡＲＮＥＬＧＲＥＣＴＲＬＦＴＩＤＬＮＱＴＰＱＴＴＬＰＱＬＦＬＫＶＧＥＰＬＷＩＲＣＫＡＶＨＶＮＨＧＦＧＬＴＷＥＬＥＮＫＡＬＥＥＧＮＹＦＥＭＳＴＹＳＴＮＲＴＭＩＲＩＬＦＡＦＶＳＳＶＡＲＮＤＴＧＹＹＴＣＳＳＳＫＨＰＳＱＳＡＬＶＴＩＶＥＫＧＦＩＮＡＴＮＳＳＥＤＹＥＩＤＱＹＥＥＦＣＦＳＶＲＦＫＡＹＰＱＩＲＣＴＷＴＦＳＲＫＳＦＰＣＥＱＫＧＬＤＮＧＹＳＩＳＫＦＣＮＨＫＨＱＰＧＥＹＩＦＨＡＥＮＤＤＡＱＦＴＫＭＦＴＬＮＩＲＲＫＰＱＶＬＡＥＡＳＡＳＱＡＳＣＦＳＤＧＹＰＬＰＳＷＴＷＫＫＣＳＤＫＳＰＮＣＴＥＥＩＴＥＧＶＷＮＲＫＡＮＲＫＶＦＧＱＷＶＳＳＳＴＬＮＭＳＥＡＩＫＧＦＬＶＫＣＣＡＹＮＳＬＧＴＳＣＥＴＩＬＬＮＳＰＧＰＦＰＦＩＱＤＮＩＳＦＹＡＴＩＧＶＣＬＬＦＩＶＶＬＴＬＬＩＣＨＫＹＫＫＱＦＲＹＥＳＱＬＱＭＶＱＶＴＧＳＳＤＮＥＹＦＹＶＤＦＲＥＹＥＹＤＬＫＷＥＦＰＲＥＮＬＥＦＧＫＶＬＧＳＧＡＦＧＫＶＭＮＡＴＡＹＧＩＳＫＴＧＶＳＩＱＶＡＶＫＭＬＫＥＫＡＤＳＳＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＭＭＴＱＬＧＳＨＥＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＬＳＧＰＩＹＬＩＦＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＹＬＲＳＫＲＥＫＦＨＲＴＷＴＥＩＦＫＥＨＮＦＳＦＹＰＴＦＱＳＨＰＮＳＳＭＰＧＳＲＥＶＱＩＨＰＤＳＤＱＩＳＧＬＨＧＮＳＦＨＳＥＤＥＩＥＹＥＮＱＫＲＬＥＥＥＥＤＬＮＶＬＴＦＥＤＬＬＣＦＡＹＱＶＡＫＧＭＥＦＬＥＦＫＳＣＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＴＨＧＫＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＭＳＤＳＮＹＶＶＲＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＬＦＥＧＩＹＴＩＫＳＤＶＷＳＹＧＩＬＬＷＥＩＦＳＬＧＶＮＰＹＰＧＩＰＶＤＡＮＦＹＫＬＩＱＮＧＦＫＭＤＱＰＦＹＡＴＥＥＩＹＩＩＭＱＳＣＷＡＦＤＳＲＫＲＰＳＦＰＮＬＴＳＦＬＧＣＱＬＡＤＡＥＥＡＭＹＱＮＶＤＧＲＶＳＥＣＰＨＴＹＱＮＲＲＰＦＳＲＥＭＤＬＧＬＬＳＰＱＡＱＶＥＤＳ
ヒトＦＬＴ３イソ型２、配列番号１８：
ＭＰＡＬＡＲＤＧＧＱＬＰＬＬＶＶＦＳＡＭＩＦＧＴＩＴＮＱＤＬＰＶＩＫＣＶＬＩＮＨＫＮＮＤＳＳＶＧＫＳＳＳＹＰＭＶＳＥＳＰ
ＥＤＬＧＣＡＬＲＰＱＳＳＧＴＶＹＥＡＡＡＶＥＶＤＶＳＡＳＩＴＬＱＶＬＶＤＡＰＧＮＩＳＣＬＷＶＦＫＨＳＳＬＮＣＱＰＨＦＤＬＱＮＲＧＶＶＳＭＶＩＬＫＭＴＥＴＱＡＧＥＹＬＬＦＩＱＳＥＡＴＮＹＴＩＬＦＴＶＳＩＲＮＴＬＬＹＴＬＲＲＰＹＦＲＫＭＥＮＱＤＡＬＶＣＩＳＥＳＶＰＥＰＩＶＥＷＶＬＣＤＳＱＧＥＳＣＫＥＥＳＰＡＶＶＫＫＥＥＫＶＬＨＥＬＦＧＴＤＩＲＣＣＡＲＮＥＬＧＲＥＣＴＲＬＦＴＩＤＬＮＱＴＰＱＴＴＬＰＱＬＦＬＫＶＧＥＰＬＷＩＲＣＫＡＶＨＶＮＨＧＦＧＬＴＷＥＬＥＮＫＡＬＥＥＧＮＹＦＥＭＳＴＹＳＴＮＲＴＭＩＲＩＬＦＡＦＶＳＳＶＡＲＮＤＴＧＹＹＴＣＳＳＳＫＨＰＳＱＳＡＬＶＴＩＶＥＫＧＦＩＮＡＴＮＳＳＥＤＹＥＩＤＱＹＥＥＦＣＦＳＶＲＦＫＡＹＰＱＩＲＣＴＷＴＦＳＲＫＳＦＰＣＥＱＫＧＬＤＮＧＹＳＩＳＫＦＣＮＨＫＨＱＰＧＥＹＩＦＨＡＥＮＤＤＡＱＦＴＫＭＦＴＬＮＩＲＲＫＰＱＶＬＡＥＡＳＡＳＱＡＳＣＦＳＤＧＹＰＬＰＳＷＴＷＫＫＣＳＤＫＳＰＮＣＴＥＥＩＴＥＧＶＷＮＲＫＡＮＲＫＶＦＧＱＷＶＳＳＳＴＬＮＭＳＥＡＩＫＧＦＬＶＫＣＣＡＹＮＳＬＧＴＳＣＥＴＩＬＬＮＳＰＧＰＦＰＦＩＱＤＮＩＳＦＹＡＴＩＧＶＣＬＬＦＩＶＶＬＴＬＬＩＣＨＫＹＫＫＱＦＲＹＥＳＱＬＱＭＶＱＶＴＧＳＳＤＮＥＹＦＹＶＤＦＲＥＹＥＹＤＬＫＷＥＦＰＲＥＮＬＥＦＧＫＶＬＧＳＧＡＦＧＫＶＭＮＡＴＡＹＧＩＳＫＴＧＶＳＩＱＶＡＶＫＭＬＫＥＫＡＤＳＳＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＭＭＴＱＬＧＳＨＥＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＬＳＧＰＩＹＬＩＦＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＹＬＲＳＫＲＥＫＦＨＲＴＷＴＥＩＦＫＥＨＮＦＳＦＹＰＴＦＱＳＨＰＮＳＳＭＰＧＳＲＥＶＱＩＨＰＤＳＤＱＩＳＧＬＨＧＮＳＦＨＳＥＤＥＩＥＹＥＮＱＫＲＬＥＥＥＥＤＬＮＶＬＴＦＥＤＬＬＣＦＡＹＱＶＡＫＧＭＥＦＬＥＦＫＳＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＬＦＥＧＩＹＴＩＫＳＤＶＷＳＹＧＩＬＬＷＥＩＦＳＬＧＶＮＰＹＰＧＩＰＶＤＡＮＦＹＫＬＩＱＮＧＦＫＭＤＱＰＦＹＡＴＥＥＩＹＩＩＭＱＳＣＷＡＦＤＳＲＫＲＰＳＦＰＮＬＴＳＦＬＧＣＱＬＡＤＡＥＥＡＭＹＱＮＶＤＧＲＶＳＥＣＰＨＴＹＱＮＲＲＰＦＳＲＥＭＤＬＧＬＬＳＰＱＡＱＶＥＤＳ

【0094】

本明細書中で使用される場合、用語ＦＬＴ３－１は、本明細書中下記に開示される重鎖ポリヌクレオチド配列および軽鎖ポリヌクレオチド配列においてコードされるＣＤＲのいずれか１つとの、好ましくは下記に開示されるＣＤＲ３領域の少なくとも１つとの、最も好ましくは下記に開示されるＣＤＲ３領域の両方との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを有するアミノ酸配列を含む抗体を示す。上記ＣＤＲ領域のアミノ酸配列もまた、本明細書中下記に開示される。
ＦＬＴ３－１重鎖可変領域配列、配列番号１９：
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＴＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＣＣＧＧＧＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＧＡＴＴＧＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＧＴＴＡＴＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＧＧＡＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＣＧＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＦＬＴ３－１軽鎖可変領域配列、配列番号２０：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＣＡＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＡＡＣＡＣＣＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＧ
ＦＬＴ３－１のＣＤＨＲ１、配列番号２１：
ＳＹＷＭＨ
ＦＬＴ３－１のＣＤＨＲ２、配列番号２２：
ＥＩＤＰＳＤＳＹＫＤＹＮＱＫＦＫＤ
ＦＬＴ３－１のＣＤＨＲ３、配列番号２３：
ＡＩＴＴＴＰＦＤＦ
ＦＬＴ３－１のＣＤＬＲ１、配列番号２４：
ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨ
ＦＬＴ３－１のＣＤＬＲ２、配列番号２５：
ＹＡＳＱＳＩＳ
ＦＬＴ３－１のＣＤＬＲ３、配列番号２６：
ＱＱＳＮＴＷＰＹＴ

【0095】

本明細書中で使用される場合、用語ＦＬＴ３－２は、本明細書中下記に開示される重鎖ポリヌクレオチド配列および軽鎖ポリヌクレオチド配列においてコードされるＣＤＲのいずれか１つとの、好ましくは下記に開示されるＣＤＲ３領域の少なくとも１つとの、最も好ましくは下記に開示されるＣＤＲ３領域の両方との少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性、または代替では少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するＣＤＲを有するアミノ酸配列を含む抗体を示す。上記ＣＤＲ領域のアミノ酸配列もまた、本明細書中下記に開示される。
ＦＬＴ３－２重鎖可変領域配列、配列番号２７：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＡＧＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＴＡＡＣＴＡＴＧＧＴＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＴＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＴＧＧＡＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＡＧＡＣＴＡＴＡＡＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＡＴＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＦＬＴ３－２軽鎖可変領域配列、配列番号２８：
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＴＧＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＴＡＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＡＴＣＡＴＡＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＣＧＧ
ＦＬＴ３－２のＣＤＨＲ１、配列番号２９：
ＮＹＧＬＨ
ＦＬＴ３－２のＣＤＨＲ２、配列番号３０：
ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ
ＦＬＴ３－２のＣＤＨＲ３、配列番号３１：
ＧＧＩＹＹＡＮＨＹＹＡＭＤＹ
ＦＬＴ３－２のＣＤＬＲ１、配列番号３２：
ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＭ
ＦＬＴ３－２のＣＤＬＲ２、配列番号３３：
ＧＡＳＴＲＥＳ
ＦＬＴ３－２のＣＤＬＲ３、配列番号３４：
ＱＮＤＨＳＹＰＬＴ

【0096】

本明細書中で使用される場合、「相同性」または「同一（的）」、パーセント「同一性」またはパーセント「類似性」は、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈で使用されるときには、同一である２つ以上の配列または部分配列、あるいは、同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の指定された割合を有する、例えば、少なくとも６０％の同一性、好ましくは少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性を指定された領域（例えば、本明細書中に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列、または本明細書中に記載される抗体のアミノ酸配列）にわたって有する２つ以上の配列または部分配列を示す。相同性は、比較のためにアラインメントされ得るぞれぞれの配列における位置を比較することによって求めることができる。比較されている配列における位置が、同じ塩基またはアミノ酸によって占められるとき、当該分子はその位置において相同的である。配列間における相同性の程度は、これらの当該配列によって共有される一致している位置または相同的位置の数の関数である。アラインメントおよびパーセント相同性またはパーセント配列同一性は、この技術分野において知られている様々なソフトウエアプログラムを使用して、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ他編、１９８７）、増補３０、セクション７．７．１８、表７．７．１に記載されるソフトウエアプログラムを使用して求めることができる。好ましくは、設定省略時の既定値パラメーターがアラインメントのために使用される。好ましいアライメントプログラムがＢＬＡＳＴであり、設定省略時の既定値パラメーターが使用される。具体的には、好ましいプログラムがＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰであり、下記の設定省略時の既定値パラメーターが使用される：Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ；ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ；ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ；ｃｕｔｏｆｆ＝６０；ｅｘｐｅｃｔ＝１０；Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；ｓｏｒｔ ｂｙ＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ，ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細を下記のインターネットアドレスにおいて見出すことができる：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴ。「相同性」または「同一（的）」、パーセント「同一性」またはパーセント「類似性」の用語はまた、試験配列の相補体を示しており、または、試験配列の相補体に対して適用することができる。これらの用語にはまた、欠失および／または付加を有する配列、同様にまた、置換を有する配列が含まれる。本明細書中に記載されるように、好ましいアルゴリズムでは、ギャップなどが生じ得る。好ましくは、同一性が、長さが少なくとも約２５個のアミノ酸またはヌクレオチドである領域にわたって、あるいはより好ましくは、長さが少なくとも５０個～１００個のアミノ酸またはヌクレオチドである領域にわたって存在する。「無関係な」または「非相同的な」配列は、本明細書中に開示される配列の１つとの４０％未満の同一性、または代替では２５％未満の同一性を共有する。

【0097】

「ハイブリダイゼーション」は、１つまたは複数のポリヌクレオチドが反応して、ヌクレオチド残基の塩基の間での水素結合を介して安定化される複合体を形成する反応を示す。水素結合が、ワトソン・クリック塩基対形成、フーグスティーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｉｎ）結合によって、または、どのような様式であれ、他の配列特異的な様式で生じる場合がある。複合体は、二重鎖構造を形成する２つの鎖、多鎖複合体を形成する３つ以上の鎖、自身にハイブリダイゼーションする一本鎖、または、どのような組合せであれ、これらの組合せを含む場合がある。ハイブリダイゼーション反応が、より広範囲にわたるプロセスにおける一工程を構成する場合がある（例えば、ＰＣＲ反応の開始、またはリボザイムによるポリヌクレオチドの酵素的切断など）。

【0098】

ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例には、下記の条件が含まれる：約２５℃～約３７℃のインキュベーション温度、約６×ＳＳＣ～約１０×ＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液濃度、約０％～約２５％のホルムアミド濃度、および、約４×ＳＳＣ～約８×ＳＳＣの洗浄液。中程度のハイブリダイゼーション条件の例には、下記の条件が含まれる：約４０℃～約５０℃のインキュベーション温度、約９×ＳＳＣ～約２×ＳＳＣの緩衝液濃度、約３０％～約５０％のホルムアミド濃度、および、約５×ＳＳＣ～約２×ＳＳＣの洗浄液。高ストリンジェンシーの条件の例には、下記の条件が含まれる：約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液。一般に、ハイブリダイゼーションのインキュベーション時間が、１回、２回またはそれ以上の洗浄工程を伴って５分～２４時間であり、洗浄のインキュベーション時間が、約１分、２分または１５分である。ＳＳＣは、０．１５ＭのＮａＣｌおよび１５ｍＭのクエン酸塩の緩衝液である。他の緩衝液系を使用するＳＳＣの同等物が用いられ得ることが理解される。

【0099】

用語「単離された（される）」は、本明細書中で使用される場合、分子または生物学的物質または細胞物質が他の物質を実質的に含んでいないことを示す。１つの局面において、用語「単離された（される）」は、天然の供給源に存在する他のＤＮＡまたはＲＮＡ、あるいはタンパク質またはポリペプチド、あるいは細胞または細胞オルガネラ、あるいは組織または器官からそれぞれ分離される核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡなど）、あるいはタンパク質またはポリペプチド（例えば、抗体またはその誘導体）、あるいは細胞または細胞オルガネラ、あるいは組織または器官を示す。用語「単離された（される）」はまた、組換えＤＮＡ技術によって作製されたときには細胞物質、ウイルス物質または培養培地を実質的に含んでいない核酸またはペプチドを示し、あるいは、化学合成されたときには化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含んでいない核酸またはペプチドを示す。そのうえ、「単離された核酸」は、天然にはフラグメントとして存在せず、天然の状態では見出されないであろう核酸フラグメントを含むことが意図される。用語「単離された（される）」はまた、他の細胞タンパク質から単離されているポリペプチドを示すために本明細書中では使用され、精製ポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含することが意図される。用語「単離された（される）」はまた、他の細胞または組織から単離されている細胞または組織を示すために本明細書中では使用され、培養された細胞または組織および操作された細胞または組織の両方を包含することが意図される。

【0100】

本明細書中で使用される場合、用語「単離された細胞」は一般には、組織の他の細胞から実質的に分離されている細胞を示す。

【0101】

「免疫細胞」には、例えば、骨髄において産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ））、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、および骨髄由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）が含まれる。

【0102】

本明細書中で使用される場合、用語「リンカー配列」は、１回から１０回まで、または代替では約８回まで、または代替では約６回まで、または代替では約５回、または４回、または代替では３回、または代替では２回繰り返され得る１個～１０個のアミノ酸、または代替では８個のアミノ酸、または代替では６個のアミノ酸、または代替では５個のアミノ酸を含む任意のアミノ酸配列に関連する。例えば、リンカーは、３回繰り返されるペンタペプチドからなる１５個までのアミノ酸残基を含む場合がある。１つの局面において、リンカー配列は、一文字配列表記ではＧＧＧＧＳ（配列番号４８）として表されるｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｓｅｒ－の３コピーを含む（グリシン４セリン）３（配列番号４７）の柔軟なポリペプチドリンカーである。

【0103】

「ガン組織タイプに対応する正常な細胞」は、当該ガン組織と同じ組織タイプに由来する正常な細胞を示す。限定されない一例が、患者から得られる正常な白血球である。

【0104】

本明細書中で使用される場合、用語「ＮＫ細胞」は、ナチュラルキラー細胞としてもまた知られており、骨髄に起源を有し、非常に重要な役割を自然免疫系において果たすリンパ球の一タイプを示す。ＮＫ細胞は、抗体および主要組織適合抗原複合体が細胞表面に存在していない場合でさえ、ウイルス感染細胞、腫瘍細胞または他のストレス細胞に対する迅速な免疫応答をもたらす。ＮＫ細胞は、単離されるか、または、市販の供給元から得られるかのどちらの場合であってもよい。市販のＮＫ細胞株の限定されない例には、ＮＫ－９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２４０７（商標））、ＮＫ－９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２４０８（商標））の系統が含まれる。さらなる例には、ＮＫ系統のＨＡＮＫ１、ＫＨＹＧ－１、ＮＫＬ、ＮＫ－ＹＳ、ＮＯＩ－９０およびＹＴが含まれるが、これらに限定されない。そのような市販の細胞株についての限定されない例示的な供給元には、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、すなわち、ＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）、および、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。

【0105】

調節ポリヌクレオチドに関して本明細書中で使用される場合、用語「機能的に結合された（される）」は、当該調節ポリヌクレオチドと、特定のタンパク質が当該調節ポリヌクレオチドに結合するときには連結されているポリヌクレオチドが転写されるように当該調節ポリヌクレオチドが連結されるポリヌクレオチド配列との間における結合を示す。

【0106】

本明細書中で使用される場合、細胞、組織または器官に関しての用語「過剰発現する」により、タンパク質が、コントロール細胞、コントロール問題（ｉｓｓｕｅ）または器官において産生される量よりも多い量に発現させられる。過剰発現されるタンパク質は、宿主細胞に対して内因性または宿主細胞に対して外因性である場合がある。

【0107】

用語「ポリヌクレオチド」および用語「オリゴヌクレオチド」は交換可能に使用され、ヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはそれらのアナログのいずれか）のポリマー形態をどのような長さのものであっても示す。ポリヌクレオチドは、どのような三次元構造であっても有することができ、既知または不明にかかわらず、何らかの機能を果たす場合がある。下記は、ポリヌクレオチドの限定されない例である：遺伝子または遺伝子フラグメント（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴタグまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐型ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよび核酸プライマー。ポリヌクレオチドは様々な修飾ヌクレオチド（例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログなど）を含むことができる。存在するならば、ヌクレオチド構造に対する改変をポリヌクレオチドの組立て前または組立て後において施すことができる。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドはさらに、例えば、標識化成分との結合などによって重合後に修飾することができる。この用語はまた、二本鎖分子および一本鎖分子の両方を示す。別途明記される場合または別途要求される場合を除き、ポリヌクレオチドであるこの技術の局面はどのような局面であっても、二本鎖形態と、二本鎖形態を構成することが知られている、または予測される２つの相補的な一本鎖形態のそれぞれとをともに包含する。

【0108】

本明細書中で使用される場合、用語「核酸配列」および用語「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのどちらか）のポリマー形態をどのような長さのものであっても示すために交換可能に使用される。したがって、この用語には、一本鎖、二本鎖または多鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、あるいは、プリン塩基およびピリミジン塩基、または他の天然型ヌクレオチド塩基、化学修飾された、もしくは生化学修飾された非天然型ヌクレオチド塩基もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれるが、これらに限定されない。

【0109】

用語「プロモーター」は、本明細書中で使用される場合、コード配列（例えば、遺伝子など）の発現を調節する配列をどのようなものであっても示す。プロモーターは、例えば、構成的、誘導性、抑制的または組織特異的である場合がある。「プロモーター」は、転写の開始および速度が制御されるポリヌクレオチド配列の領域である制御配列である。プロモーターは、調節タンパク質および調節分子（例えば、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子など）が結合し得る遺伝子エレメントを含有する場合がある。

【0110】

用語「タンパク質」、用語「ペプチド」および用語「ポリペプチド」は、２つ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログまたはペプチド模倣体の化合物を示すために交換可能に、また、それらの最も広い意味で使用される。これらのサブユニットはペプチド結合によって連結される場合がある。別の局面において、サブユニットが、他の結合によって、例えば、エステル、エーテルなどによって連結される場合がある。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含有しなければならず、また、どのような制限も、タンパク質またはペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数に関しては設けられない。本明細書中で使用される場合、用語「アミノ酸」は、グリシン、ならびに、Ｄ型およびＬ型の両方の光学異性体、アミノ酸アナログ、ならびにペプチド模倣体を含めて、天然型アミノ酸および／または非天然型アミノ酸もしくは合成アミノ酸のいずれかを示す。

【0111】

本明細書中で使用される場合、用語「精製された（される）」は、絶対的な純度を要求しておらず、むしろ、この用語は、相対的な用語として意図される。したがって、例えば、精製された核酸、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体または他の活性化合物は、様々なタンパク質または他の混入物から全体的または部分的に単離されているものである。一般には、本開示の範囲内における使用のための実質的に精製されたペプチド、タンパク質、生物学的複合体または他の活性化合物は、治療的投与のための完全な医薬配合物における医薬用のキャリア、賦形剤、緩衝剤、吸収強化剤、安定剤、防腐剤、アジュバントまたは他の共成分との、当該ペプチド、タンパク質、生物学的複合体または他の活性化合物の混合または配合に先立つ調製物に存在するすべての巨大分子種の８０％超を構成する。より典型的には、ペプチド、タンパク質、生物学的複合体または他の活性化合物は、他の配合成分と混合する前の精製された調製物に存在するすべての巨大分子種の９０％超を表すように精製され、多くの場合には、そのような巨大分子種の９５％超を表すように精製される。他の場合において、精製された調製物は本質的に均一である場合があり、ただし、この場合、他の巨大分子種は従来の技術によって検出できない。

【0112】

本明細書中で使用される場合、用語「精製マーカー」は、精製または特定のために有用である少なくとも１つのマーカーを示す。このマーカーの非網羅的な列挙には、Ｈｉｓ、ｌａｃＺ、ＧＳＴ、マルトース結合タンパク質、ＮｕｓＡ、ＢＣＣＰ、ｃ－ｍｙｃ、ＣａＭ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ｃｈｅｒｒｙ、チオレドキシン、ポリ（ＮＡＮＰ）、Ｖ５、Ｓｎａｐ、ＨＡ、キチン結合タンパク質、Ｓｏｆｔａｇ１、Ｓｏｆｔａｇ３、ＳｔｒｅｐまたはＳタンパク質が含まれる。好適な直接的または間接的な蛍光マーカーは、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｃｈｅｒｒｙ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＤＮＰ、ＡＭＣＡ、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｔａｍｒａ、テキサスレッド、ローダミン、様々なＡｌｅｘａフルオル、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、あるいは、どのようなものであれ、他の蛍光色素またはハプテンを含む。

【0113】

本明細書中で使用される場合、用語「組換えタンパク質」は、組換えＤＮＡ技術によって産生されるポリペプチドを示し、ただし、この場合、一般には、ポリペプチドをコードするＤＮＡが、好適な発現ベクターに挿入され、この発現ベクターは結果として、宿主細胞を形質転換して異種タンパク質を産生させるために使用される。

【0114】

本明細書中で使用される場合、用語「シグナルペプチド」は、例えば、ある特定の細胞オルガネラ（例えば、小胞体など）および／または細胞表面への、細胞内におけるタンパク質の輸送および局在化を導くペプチド配列を示す。シグナルペプチドの限定されない例が本明細書中に開示されており、例えば、下記の核酸配列によってコードされるペプチドである：

【0115】

本明細書中で使用される場合、用語「特異的（な）結合」は、結合親和性が少なくとも１０^－６Ｍである抗体と抗原との間での接触を意味する。ある特定の局面において、抗体は、少なくとも約１０^－７Ｍの親和性により、好ましくは１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍまたは１０^－１２Ｍの親和性により結合する。

【0116】

「固形腫瘍」は、通常の場合には嚢胞または液体領域を含有しない異常な塊の組織である。固形腫瘍は、良性または悪性、転移性または非転移性であり得る。様々な異なるタイプの固形腫瘍が、固形腫瘍を形成する細胞のタイプにちなんで命名される。固形腫瘍の例には、肉腫、ガン腫およびリンパ腫が含まれる。

【0117】

本明細書中で使用される場合、用語「自殺遺伝子」は、細胞アポトーシスを誘導することが可能である遺伝子であり、限定されない例には、ＨＳＶ－ＴＫ（単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ）、シトシンデアミナーゼ、ニトロレダクターゼ、カルボキシルエステラーゼ、シトクロームＰ４５０もしくはＰＮＰ（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ）、短縮型ＥＧＦＲ、または誘導性カスパーゼ（「ｉＣａｓｐ」）が含まれる。自殺遺伝子は様々な経路に沿って機能する場合があり、場合により、誘導剤（例えば、小分子など）によって誘導され得る場合がある。例えば、ｉＣａｓｐ自殺遺伝子は、誘導剤に結合するために最適化されているタンパク質に機能的に連結されるカスパーゼタンパク質の一部を含む；誘導剤を、自殺遺伝子を含む細胞に導入することにより、カスパーゼの活性化およびそれに続く上記細胞のアポトーシスがもたらされる。

【0118】

本明細書中で使用される場合、用語「Ｔ２Ａ」および用語「２Ａペプチド」は、任意の２Ａペプチドまたはそのフラグメント、任意の２Ａ様ペプチドまたはそのフラグメント、あるいは、必要不可欠なアミノ酸を、コンセンサスなポリペプチドモチーフＤ－Ｖ／Ｉ－Ｅ－Ｘ－Ｎ－Ｐ－Ｇ－Ｐ（配列番号３５）（式中、Ｘは、自己切断性であると一般に考えられる任意のアミノ酸を示す）を含有する（起源のウイルスに依存して２０アミノ酸程度の長さでの）比較的短いペプチド配列において含む人工ペプチドを示すために交換可能に使用される。

【0119】

本明細書中で使用される場合、用語「Ｔ細胞」は、胸腺において成熟するリンパ球の一タイプを示す。Ｔ細胞は重要な役割を細胞媒介性免疫において果たしており、細胞表面におけるＴ細胞受容体の存在によって他のリンパ球（例えば、Ｂ細胞など）から区別される。Ｔ細胞は、単離されるか、または、市販の供給元から得られるかのどちらの場合であってもよい。「Ｔ細胞」には、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｔ調節細胞（Ｔｒｅｇ）およびガンマ・デルタＴ細胞を含めて、ＣＤ３を発現するすべてのタイプの免疫細胞が含まれる。「細胞傷害性細胞」には、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および好中球が含まれ、そのような細胞は細胞傷害性応答を媒介することが可能である。市販のＴ細胞株の限定されない例には、ＢＣＬ２（ＡＡＡ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９０１（商標））、ＢＣＬ２ Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２８９９（商標））、Ｎｅｏ Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２８９８（商標））、ＴＡＬＬ－１０４細胞傷害性ヒトＴ細胞株（ＡＴＣＣ ＃ＣＲＬ－１１３８６）の系統が含まれる。さらなる例には、成熟Ｔ細胞株、例えば、Ｄｅｇｌｉｓ、ＥＢＴ－８、ＨＰＢ－ＭＬｐ－Ｗ、ＨＵＴ７８、ＨＵＴ１０２、Ｋａｒｐａｓ３８４、Ｋｉ２２５、Ｍｙ－Ｌａ、Ｓｅ－Ａｘ、ＳＫＷ－３、ＳＭＺ－１およびＴ３４；未成熟Ｔ細胞株、例えば、ＡＬＬ－ＳＩＬ、Ｂｅ１３、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＣＭＬ－Ｔ１、ＤＮＤ－４１、ＤＵ．５２８、ＥＵ－９、ＨＤ－Ｍａｒ、ＨＰＢ－ＡＬＬ、Ｈ－ＳＢ２、ＨＴ－１、ＪＫ－Ｔ１、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋａｒｐａｓ４５、ＫＥ－３７、ＫＯＰＴ－Ｋ１、Ｋ－Ｔ１、Ｌ－ＫＡＷ、Ｌｏｕｃｙ、ＭＡＴ、ＭＯＬＴ－１、ＭＯＬＴ３、ＭＯＬＴ－４、ＭＯＬＴ１３、ＭＯＬＴ－１６、ＭＴ－１、ＭＴ－ＡＬＬ、Ｐ１２／Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｐｅｅｒ、ＰＥＲ０１１７、ＰＥＲ－２５５、ＰＦ－３８２、ＰＦＩ－２８５、ＲＰＭＩ－８４０２、ＳＴ－４、ＳＵＰ－Ｔ１～ＳＵＰ－Ｔ１４、ＴＡＬＬ－１、ＴＡＬＬ－１０１、ＴＡＬＬ－１０３／２、ＴＡＬＬ－１０４、ＴＡＬＬ－１０５、ＴＡＬＬ－１０６、ＴＡＬＬ－１０７、ＴＡＬＬ－１９７、ＴＫ－６、ＴＬＢＲ－１、ＴＬＢＲ－２、ＴＬＢＲ－３およびＴＬＢＲ－４、ＣＣＲＦ－ＨＳＢ－２（ＣＣＬ－１２０．１）、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５３）、Ｊ４５．０１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１９９０）、Ｊ．ＣａＭ１．６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２０６３）、ＲＳ４；１１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１８７３）、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＣＣＬ－１１９）；ならびに、皮膚Ｔ細胞リンパ腫系統、例えば、ＨｕＴ７８（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＴＩＢ－１６１）、ＭＪ［Ｇ１１］（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－８２９４）、ＨｕＴ１０２（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１６２）が含まれるが、これらに限定されない。ＲＥＨ、ＮＡＬＬ－１、ＫＭ－３、Ｌ９２－２２１（これらに限定されない）を含めてヌル白血病細胞株が、他の白血病およびリンパ腫に由来する細胞株（例えば、Ｋ５６２赤白血病、ＴＨＰ－１単球性骨髄腫、Ｕ９３７リンパ腫、ＨＥＬ赤白血病、ＨＬ６０白血病、ＨＭＣ－１白血病、ＫＧ－１白血病、Ｕ２６６骨髄腫など）が免疫細胞の別の市販供給元であるように、免疫細胞の別の市販供給元である。そのような市販の細胞株についての限定されない例示的な供給元には、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、すなわち、ＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）、および、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。

【0120】

用語「形質導入する」または用語「形質導入」は、キメラ抗原受容体細胞の作製に適用される場合、外来ヌクレオチド配列が細胞内に導入されるプロセスを示す。いくつかの実施形態において、この形質導入はベクターを介して行われる。

【0121】

本明細書中で使用される場合、対象において疾患を「処置する」、または、対象における疾患の「処置」は、（１）症状または疾患が、素因を有する対象、または当該疾患の症状を未だ呈していない対象において生じることを防止すること、（２）当該疾患を阻害すること、またはその発達を停止させること；あるいは（３）当該疾患もしくは当該疾患の症状を改善すること、または当該疾患もしくは当該疾患の症状の退行を生じさせることを示す。この技術分野では理解されているように、「処置」は、臨床結果を含めて、有益な結果または所望の結果を得るための取り組みである。本発明の技術の目的のために、有益な結果または所望の結果には、１つまたは複数の症状の緩和または改善、（疾患を含む）状態の範囲の縮小、（疾患を含む）状態の安定化した状況（すなわち、悪化しない状況）、（疾患を含む）状態の遅延または緩速化、（疾患を含む）状態の進行、改善または軽減、状況および寛解（部分的または全体的であろうと）の１つまたは複数が、検出可能または検出不能にかかわらず含まれるが、これらに限定されない。開示された組成物および方法を含有する処置は、第一選択の治療、第二選択の治療、第三選択の治療、第四選択の治療、第五選択の治療とすることができ、単独の治療法として、または他の適切な治療法との組合せで使用されるように意図される。

【0122】

本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」は、プラスミド、ウイルス、コスミド、ファージ、ＢＡＣ、ＹＡＣなど（これらに限定されない）を含めて、異なる宿主の間における移入のために設計される核酸構築物を示す。いくつかの実施形態において、プラスミドベクターが、市販のベクターから調製される場合がある。他の実施形態において、ウイルスベクターが、この技術分野において知られている様々な技術に従って、バキュロウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶなどから作製される場合がある。１つの実施形態において、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。

【0123】

上記で列挙されたＧｅｎＢａｎｋアクセション番号、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号および参考文献のそれぞれに関連する配列が、参照によって本明細書中に組み込まれる。
（略語のリスト）
ＡＭＬ：急性骨髄性白血病
ＣＡＲ：キメラ抗原受容体
ｉＣａｓｐ：誘導されたカスパーゼ

【0124】

［開示を実施するための態様］
今までに例のない結果が、遺伝子操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞による自己処置を使用してＢ細胞リンパ腫および白血病において近年に得られたことから（Ｍａｕｄｅ，Ｓ．Ｌ．他（２０１４）、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３７１：１５０７～１５１７；Ｐｏｒｔｅｒ，Ｄ．Ｌ．他（２０１１）、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３６５：７２５～７３３）、数多くの研究所が、卵巣ガン、前立腺ガンおよび膵臓腫瘍を含めて様々な固形腫瘍に対してこの取り組み法を適用し始めている。ＣＡＲ改変されたＴ細胞は、モノクローナル抗体のＨＬＡ非依存的な標的化特異性を、活性化Ｔ細胞の細胞溶解活性、増殖およびホーミング特性と組み合わせており、しかし、チェックポイント抑制には応答しない。抗原を発現する標的を直接に死傷させることができるために、ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗原陽性のどのような細胞または組織に対してであっても非常に毒性であり、そのため、高度に腫瘍特異的な抗体を用いてＣＡＲを構築することが求められている。今日に至るまで、ヒト固形腫瘍に対するＣＡＲ改変されたＴ細胞が、α－葉酸受容体、メソテリン、およびＭＵＣ－ＣＤ、ＰＳＭＡ、ならびに他の標的に対して構築されており、しかし、ほとんどが、正常な組織における抗原のいくらかの標的外発現を有する。これらの構築物はその同じ並外れた結果を患者において示しておらず、このことから、固形腫瘍に対して使用することができるＣＡＲ Ｔ細胞構築物の新しい標的および方法を特定するためのさらなる研究が必要であることが強調される。

【0125】

したがって、本開示は、ＦＬＴ３に対して特異的である結合ドメイン（これはいくつかの局面ではＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインである）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびに、その使用および作製に関連する方法および組成物を提供する。
［キメラ抗原受容体およびその使用］
［Ｉ． 成分］

【0126】

本開示は、ＦＬＴ３に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含む細胞活性化部分を含む、または該細胞活性化部分から本質的になる、または該細胞活性化部分からなるＣＡＲを提供する。細胞外ドメインは、他の場合には抗原結合ドメインとして示される標的特異的な結合性エレメントを含む。細胞内ドメインまたは細胞質ドメインは、共刺激シグナル伝達領域と、ゼータ鎖部分とを含む。ＣＡＲは場合によりさらに、３００アミノ酸までのスペーサードメイン、好ましくは１０アミノ酸～１００アミノ酸のスペーサードメイン、より好ましくは２５アミノ酸～５０アミノ酸のスペーサードメインを含む場合がある。

【0127】

スペーサードメイン。ＣＡＲは場合によりさらに、３００アミノ酸までのスペーサードメイン、好ましくは１０アミノ酸～１００アミノ酸のスペーサードメイン、より好ましくは２５アミノ酸～５０アミノ酸のスペーサードメインを含む場合がある。例えば、スペーサーは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個または５０個のアミノ酸である場合がある。スペーサードメインは、例えば、ヒトＦｃドメイン、ＣＨ３ドメイン、または、任意の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭなど）のヒンジ領域の一部、あるいはそれらの変化体を含む場合がある。例えば、いくつかの実施形態は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅおよび／またはＮ２９７Ｑの変異（これらはＫａｂａｔ番号表記に従う）を伴う、または伴わないＩｇＧ４ヒンジを含む場合がある。さらなるスペーサーには、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２８のヒンジ領域が含まれるが、これらに限定されない。

【0128】

＜抗原結合ドメイン＞ある特定の局面において、本開示は、ＦＬＴ３に対して特異的である抗原結合ドメインを含む、または代替では該抗原結合ドメインから本質的に構成される、さらにあるいは、該抗原結合ドメインから構成されるＣＡＲを提供する。

【0129】

いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＦＬＴ３抗体、またはＦＬＴ３と結合する抗体の抗原結合ドメインを含み、あるいは代替では該抗原結合ドメインから本質的になり、あるいはそれにもかかわらず、該抗原結合ドメインからなる。この抗原と特異的に結合する様々なモノクローナル抗体が、例えば、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、および、他の商業的供給元、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｃｏｍｐａｒｅ．ｃｏｍ／Ｓｅａｒｃｈ－Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／？ｓｅａｒｃｈ＝ＦＬＴ３＆ｓａｉｄ＝０において列挙される供給元から市販されている。

【0130】

１つの局面において、抗原結合ドメインはＦＬＴ３抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。限定されない実施形態において、ＦＬＴ３抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は当該ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインを含み、または代替では該抗原結合ドメインから本質的に構成され、さらにまたは、該抗原結合ドメインから構成される。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは標的特異的抗体（すなわち、抗ＦＬＴ３抗体）のフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を含み、または該フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）からなり、または該フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）から本質的に構成される。ｓｃＦｖ領域は、短いリンカーペプチドによりつながれる免疫グロブリンの重鎖の可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖の可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むことができる。リンカーペプチドは１個～５０個のアミノ酸である場合があり、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個または５０個のアミノ酸である場合がある。いくつかの実施形態において、リンカーはグリシンに富んでおり、だが、リンカーまたは、セリンまたはトレオニンを含有する場合がある。

【0131】

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、下記の配列番号１９に開示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド：
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＴＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＣＣＧＧＧＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＡＧＡＴＴＧＡＴＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＧＴＴＡＴＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＧＧＡＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＣＧＡＴＴＡＣＧＡＣＧＡＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
またはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物
を含み、あるいは代替では該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から構成される。

【0132】

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、下記の配列番号２７に開示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＡＧＴＧＣＡＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＴＡＡＣＴＡＴＧＧＴＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＴＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＡＴＧＧＡＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＡＧＡＣＴＡＴＡＡＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＡＴＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
またはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物
を含み、あるいは代替では該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から本質的になり、あるいはそれにもかかわらず、さらには該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物からなる。

【0133】

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、ＳＹＷＭＨ（配列番号２１）、ＮＹＧＬＨ（配列番号２９）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的に構成されるＣＤＲＨ１配列、さらにあるいは、該アミノ酸配列から構成されるＣＤＲＨ１配列を含む。

【0134】

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、ＥＩＤＰＳＤＳＹＫＤＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号２２）、ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ（配列番号３０）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的に構成されるＣＤＲＨ２配列、さらにあるいは、該アミノ酸配列から構成されるＣＤＲＨ２配列を含む。

【0135】

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、ＡＩＴＴＴＰＦＤＦ（配列番号２３）、ＧＧＩＹＹＡＮＨＹＹＡＭＤＹ（配列番号３１）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的に構成されるＣＤＲＨ３配列、さらにあるいは、該アミノ酸配列から構成されるＣＤＲＨ３配列を含む。

【0136】

いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、下記の配列番号２０に開示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＣＡＡＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＡＡＣＡＣＣＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＧ
またはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物
を含み、あるいは代替では該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から構成される。

【0137】

いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、下記の配列番号２８に開示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド：
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＴＧＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＴＡＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＡＴＣＡＴＡＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＣＧＧ
またはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物
を含み、あるいは代替では該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から本質的に構成され、さらにあるいは、該ポリペプチドまたはその抗原結合フラグメントまたはそれらのそれぞれの同等物から構成される。

【0138】

いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨ（配列番号２４）、ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＭ（配列番号３２）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的になるＣＤＲＬ１配列、あるいはそれにもかかわらず、さらには該アミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１配列を含む。

【0139】

いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＹＡＳＱＳＩＳ（配列番号２５）、ＧＡＳＴＲＥＳ（配列番号３３）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的に構成されるＣＤＲＬ２配列、さらにあるいは、該アミノ酸配列から構成されるＣＤＲＬ２配列を含む。

【0140】

いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＱＱＳＮＴＷＰＹＴ（配列番号２６）、ＱＮＤＨＳＹＰＬＴ（配列番号３４）またはそれらのそれぞれの同等物で始まり、その後にはカルボキシ末端におけるさらなる５０個のアミノ酸、または代替では約４０個のアミノ酸、または代替では約３０個のアミノ酸、または代替では約２０個のアミノ酸、または代替では約１０個のアミノ酸、または代替では約５個のアミノ酸、または代替では約４個のアミノ酸もしくは３個のアミノ酸もしくは２個のアミノ酸もしくは１個のアミノ酸が続くアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３配列、あるいは代替では該アミノ酸配列から本質的構成されるＣＤＲＬ３配列、さらにあるいは、該アミノ酸配列から構成されるＣＤＲＬ３配列を含む。

【0141】

本開示の別の局面において、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインは下記特徴の１つまたは複数を含む：
（ａ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインのＣＤＲに対して少なくとも８０％同一である１つまたは複数のＣＤＲを含む；
（ｂ）重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、開示された重鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインのＣＤＲに対して少なくとも８０％同一である１つまたは複数のＣＤＲを含む；
（ｃ）軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、開示された軽鎖配列のいずれかの軽鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％同一である；
（ｄ）ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、開示された軽鎖配列のいずれかの重鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％同一である；かつ
（ｅ）当該抗体は、開示された配列のいずれかが結合するエピトープと重複するエピトープと結合する。

【0142】

同等物のさらなる例には、抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体に高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるペプチドまたはポリペプチドに対する少なくとも８５％のアミノ酸同一性、または代替では少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または代替では少なくとも９５％のアミノ酸同一性、または代替では少なくとも９７％のアミノ酸同一性を有するペプチドが含まれ、ただし、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0143】

例示的な抗原結合ドメインは下記ペプチドの１つまたは複数を含むことができ、１つの局面においては、示されたＨＣおよびＬＣの３つすべてのＣＤＲを表１および表２にそれぞれ開示される特定の抗原について含む場合がある。

【表1】

【表2】

【0144】

１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－１に対して少なくとも８０％同一である、または代替では８５％同一である、または代替では９０％同一である、または代替では９５％同一である、または代替では９７％同一である抗体の抗原結合ドメインを提供する。同等物のさらなる例には、抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体に高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが含まれ、ただし、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0145】

本明細書中に提供される抗体のいくつかの局面において、ＨＣ可変ドメイン配列はＦＬＴ３－１の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列はＦＬＴ３－１の可変ドメイン配列を含む。

【0146】

１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－１のＣＤＲを含む抗体の抗原結合ドメインを提供する。１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－１のＣＤＲに対して、または、ＦＬＴ３のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体に高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに対して少なくとも８５％同一である、または代替では８０％同一である、または代替では８５％同一である、または代替では９０％同一である、または代替では９５％同一である、または代替では９７％同一である抗体の抗原結合ドメインを提供し、ただし、この場合、高ストリンジェンシー条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0147】

１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－２に対して少なくとも８０％同一である、または代替では８５％同一である、または代替では９０％同一である、または代替では９５％同一である、または代替では９７％同一である抗体の抗原結合ドメインを提供する。同等物のさらなる例には、抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体に高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが含まれ、ただし、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0148】

本明細書中に提供される抗体のいくつかの局面において、ＨＣ可変ドメイン配列はＦＬＴ３－２の可変ドメイン配列を含み、ＬＣ可変ドメイン配列はＦＬＴ３－２の可変ドメイン配列を含む。

【0149】

１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－２のＣＤＲを含む抗体の抗原結合ドメインを提供する。１つの局面において、本開示は、ＦＬＴ３－２のＣＤＲに対して、または、ＦＬＴ３のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドの相補体に高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに対して少なくとも８５％同一である、または代替では８０％同一である、または代替では８５％同一である、または代替では９０％同一である、または代替では９５％同一である、または代替では９７％同一である抗体の抗原結合ドメインを提供し、ただし、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0150】

＜膜貫通ドメイン＞膜貫通ドメインは、天然供給源から、または合成供給源からのどちらであっても得られる場合がある。供給源が天然である場合、ドメインは、どのような膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質からであってもそれらに由来する場合がある。本開示において特に有用である膜貫通領域が、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＴＣＲに由来する場合がある。代替において、膜貫通ドメインは合成である場合があり、そのような場合において、膜貫通ドメインは主に疎水性残基（例えば、ロイシンおよびバリンなど）を含むであろう。好ましくは、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの三つ組が、合成された膜貫通ドメインの各末端において見出されるであろう。必要な場合には、長さが好ましくは２アミノ酸～１０アミノ酸の間である短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーにより、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間の連結が形成される場合がある。グリシン－セリンの二つ組により、特に適切なリンカーが提供される。

【0151】

＜細胞質ドメイン＞ＣＡＲの細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置された免疫細胞の従来のエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関わっている。細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを変換し、免疫細胞にその特異的機能を行わせるタンパク質の一部分を示す。短縮型部分が、エフェクター機能シグナルを変換するために十分である限り、シグナル伝達ドメイン全体またはその短縮型部分が使用される場合がある。ＴＣＲおよび共受容体の細胞質配列、同様にまた、それらの誘導体または変化体が、ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインとして機能することができる。本開示において特に有用である細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲ、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤＳ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄに由来する場合がある。いくつかの実施形態において、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインはＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むことができる。

【0152】

ＴＣＲを介して生じるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化のためには単独では不十分であるので、二次的シグナルまたは共刺激シグナルもまた要求される場合がある。したがって、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３の各タンパク質の細胞内ドメイン（これらに限定されない）を含めて共刺激シグナル伝達分子の細胞内領域、または、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドの細胞内領域もまた、ＣＡＲの細胞質ドメインに含まれる場合がある。例えば、ＣＡＲは、シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）に加えて、１つ、２つまたはそれ以上の共刺激ドメインを含む場合がある。

【0153】

いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体の細胞活性化部分は、ＣＤ８タンパク質、ＣＤ２８タンパク質、４－１ＢＢタンパク質、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３およびＣＤ３ゼータタンパク質からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質またはそのフラグメントを含むＴ細胞シグナル伝達ドメインであり、あるいは代替では該１つまたは複数のタンパク質またはそのフラグメントから本質的になるＴ細胞シグナル伝達ドメインであり、さらにあるいは、該１つまたは複数のタンパク質またはそのフラグメントからなるＴ細胞シグナル伝達ドメインである。

【0154】

具体的な実施形態において、ＣＡＲは、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）と、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、共刺激シグナル伝達領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとを含み、または代替では、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）と、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、共刺激シグナル伝達領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとから本質的になり、さらにあるいは、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）と、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、共刺激シグナル伝達領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとからなる。さらなる実施形態において、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域および４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域のどちらかまたは両方を含む。

【0155】

＜スイッチ機構＞いくつかの実施形態において、ＣＡＲはまた、当該ＣＡＲの発現および／または活性化を制御するためのスイッチ機構を含む場合がある。例えば、ＣＡＲは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとを含む場合があり、または、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとから構成される場合があり、または、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内ドメインとから本質的に構成される場合があり、ただし、この場合、細胞外ドメインは、標的細胞表面に発現される、または標的細胞によって発現される標的抗原とは異なる分子について特異的である標識、結合ドメインまたはタグと結合する標的特異的な結合性エレメントを含む。そのような実施形態において、ＣＡＲの特異性が、標的抗原結合ドメイン（例えば、抗ＦＬＴ３抗体もしくはそのフラグメント、または、ＦＬＴ３およびＣＡＲ表面の標識もしくはタグと結合する二重特異性抗体）と、ＣＡＲ表面の標識、結合ドメインもしくはタグによって認識される、または、ＣＡＲ表面の標識、結合ドメインもしくはタグに結合するドメインとを含む第２の構築物によって、あるいは、該標的抗原結合ドメインと、該ドメインとから構成される第２の構築物によって、あるいは、該標的抗原結合ドメインと、該ドメインとから本質的に構成される第２の構築物によって提供される。例えば、国際公開ＷＯ２０１３／０４４２２５、同ＷＯ２０１６／０００３０４、同ＷＯ２０１５／０５７８３４、同ＷＯ２０１５／０５７８５２、同ＷＯ２０１６／０７００６１、米国特許第９，２３３，１２５号、米国特許出願公開第２０１６／０１２９１０９号を参照のこと。このようにして、ＣＡＲを発現するＴ細胞を対象に投与することができ、しかし、このＴ細胞は、ＦＬＴ３特異的結合ドメインを含む第２の組成物が投与されるまでは標的抗原（すなわち、ＦＬＴ３）と結合することができない。

【0156】

本開示の様々なＣＡＲは同様に、それらの機能を活性化するための多量体化（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０３６８３４２号、米国特許出願公開第２０１６／０１７５３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０３６８３６０号を参照のこと）、および／または、Ｔ細胞応答を誘発するための外因性シグナル、例えば、小分子薬物（米国特許出願公開第２０１６／０１６６６１３号、Ｙｕｎｇ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１５）などを必要とする場合がある。

【0157】

さらに、開示されたＣＡＲは、「自殺スイッチ」（これは「自殺遺伝子」としてもまた示される）を、ＣＡＲ細胞の細胞死を処置後に誘導するために含むことができ（Ｂｕｄｄｅｅ他、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、２０１３）、または、標的抗原に結合した後でのＣＡＲの発現をダウンレギュレーションするために含むことができる（国際公開ＷＯ２０１６／０１１２１０）。限定されない例示的な自殺スイッチまたは自殺遺伝子がｉＣａｓｐである。

【0158】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに、検出可能なマーカーまたは精製マーカーを含むことができる。別の局面において、本明細書中に記載されるようなＣＡＲは、組成物、例えば、診断または治療のための医薬的に許容され得るキャリアに含有される。
［ＩＩ． ＦＬＴ３抗体を調製するためのプロセス］

【0159】

本開示における使用のための様々な抗体を購入することができ、あるいは、この技術分野において知られている方法、および、本明細書中に簡単に記載される方法を使用して調製することができる。それらの製造および使用は広く知られており、例えば、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ（２０１４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）において開示される。抗体は、この技術分野において知られている標準的な方法を使用して作製される場合がある。抗体の例には、モノクローナル抗体、単鎖抗体、および、抗体の機能的フラグメントが含まれる（しかし、これらに限定されない）。

【0160】

抗体が、様々な宿主において、例えば、ヤギ、ウサギ、ラット、マウスおよびヒトなどにおいて産生される場合がある。これらの宿主は、免疫原特性を有する標的抗原またはそのフラグメントもしくはオリゴペプチド（例えば、Ｃ末端フラグメントＦＬＴ３または単離されたポリペプチドなど）を注入することによって免疫化される場合がある。宿主種に依存して、様々なアジュバントが、免疫学的応答を増大させるために加えられる場合があり、また、使用される場合がある。そのようなアジュバントには、フロイント、鉱物ゲル（例えば、水酸化アルミニウムなど）、および表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルション、キーホールリンペットヘモシアニンおよびジニトロフェノールなど）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトにおいて使用されるアジュバントの中では、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）が特に有用である。この本開示はまた、単離されたポリペプチドと、アジュバントとを提供する。

【0161】

ある特定の局面において、本開示の抗体はポリクローナルであり、すなわち、異なるアミノ酸配列を有する複数のタイプのＦＬＴ３抗体の混合物である。１つの局面において、ポリクローナル抗体は、異なるＣＤＲを有する複数のタイプのＦＬＴ３抗体の混合物を含む。そのようなものとして、異なる抗体を産生する細胞の混合物が培養され、得られた培養物から精製される抗体を使用することができる（国際公開ＷＯ２００４／０６１１０４を参照のこと）。

【0162】

＜モノクローナル抗体産生＞ＦＬＴ３関連抗原に対するモノクローナル抗体が、抗体分子を培養において連続細胞株によって産生させることを規定する技術をどのような技術であっても使用して調製される場合がある。そのような技術には、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５～４９７を参照のこと）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ他（１９８３）、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、４：７２を参照のこと）、および、ヒトモノクローナル抗体を産生させるためのＥＢＶハイブリドーマ技術（例えば、Ｃｏｌｅ他（１９８５）、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、７７頁～９６頁を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。様々なヒトモノクローナル抗体を、本発明の技術を実施する際に利用することができ、また、ヒトハイブリドーマを使用することによって（例えば、Ｃｏｔｅ他（１９８３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８０：２０２６～２０３０を参照のこと）、または、ヒトＢ細胞をインビトロでエプスタイン・バールウイルスにより形質転換することによって産生させることができる（例えば、Ｃｏｌｅ他（１９８５）、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、７７頁～９６頁を参照のこと）。例えば、様々な抗体の領域をコードする核酸の集団を単離することができる。様々な抗体の保存された領域をコードする配列に由来するプライマーを利用するＰＣＲが、様々な抗体の一部分をコードする配列を集団から増幅し、その後、抗体またはそのフラグメント（例えば、可変ドメインなど）をコードするＤＮＡを増幅された配列から再構築するために使用される。そのような増幅された配列はまた、ファージ表面または細菌表面における融合ポリペプチドの発現および呈示のために、他のタンパク質（例えば、バクテリオファージの外被または細菌の細胞表面タンパク質）をコードするＤＮＡに融合することができる。増幅された配列はその後、その発現を行うことができ、さらに、その選択または単離を、例えば、ＦＬＴ３関連抗原ポリペプチド上に存在する抗原またはエピトープについての発現させた抗体またはそのフラグメントの親和性に基づいて行うことができる。代替において、ＦＬＴ３モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマを、例えば、ＦＬＴ３関連抗原もしくはそのフラグメントのアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを用いて、または代替ではＦＬＴ３関連抗原もしくはそのフラグメントのアミノ酸配列から本質的になる単離されたポリペプチドを用いて、さらにあるいは、ＦＬＴ３関連抗原もしくはそのフラグメントのアミノ酸配列からなる単離されたポリペプチドを用いて、対象を免疫化し、その後、対象の脾臓に由来するハイブリドーマを、常法を使用して単離することによって調製することができる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ他（ＧａｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９８１）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、７３：３～４６）を参照のこと。ハイブリドーマを、標準的な方法を使用してスクリーニングすることにより、様々な特異性（すなわち、異なるエピトープについての様々な特異性）および親和性のモノクローナル抗体がもたらされるであろう。所望の特性（例えば、ＦＬＴ３関連抗原結合）を有する選択されたモノクローナル抗体は、（ｉ）ハイブリドーマによって発現されるように使用することができ、（ｉｉ）その特性を変化させるために所与の分子（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）に結合することができ、または、（ｉｉｉ）当該モノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡを単離し、配列決定し、様々な方法で操作することができる。１つの局面において、ＦＬＴ３モノクローナル抗体が、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物（例えば、トランスジェニックマウス）から得られるＢ細胞を不死化細胞に融合されて含むハイブリドーマによって産生される。ハイブリドーマ技術には、この技術分野において知られている、また、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ（２０１４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ他（１９８１）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、５６３～６８１において教示される様々な技術が含まれる。

【0163】

＜ファージディスプレイ技術＞上記のように、本開示の抗体は、組換えＤＮＡおよびファージディスプレイの技術を適用することによって産生させることができる。例えば、ＦＬＴ３抗体を、この技術分野において知られている様々なファージディスプレイ法を使用して調製することができる。ファージディスプレイ法では、機能的な抗体ドメインが、該抗体ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面に呈示される。所望の結合特性を有するファージが、抗原を用いて、典型的には固体表面またはビーズに結合させた抗原または捕捉された抗原を用いて直接に選択することによって、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から選択される。これらの方法において使用されるファージは典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、この場合、Ｆａｂ抗体ドメイン、Ｆ_ｖ抗体ドメインまたはジスルフィド安定化Ｆ_ｖ抗体ドメインが、ファージの遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのどちらかのタンパク質に組換え融合される。加えて、様々な方法を、ＦＬＴ３ポリペプチドについての所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメント（例えば、ポリペプチドまたはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ）の迅速かつ効果的な特定を可能にするようにＦａｂ発現ライブラリー（例えば、Ｈｕｓｅ他（１９８９）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１２７５～１２８１を参照のこと）を構築するために適合化することができる。本開示の単離された抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の他の例には、下記において開示される方法が含まれる：Ｈｕｓｔｏｎ他（１９８８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５：５８７９～５８８３；Ｃｈａｕｄｈａｒｙ他（１９９０）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８７：１０６６～１０７０；Ｂｒｉｎｋｍａｎ他（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８２：４１～５０；Ａｍｅｓ他（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４：１７７～１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ他（１９９４）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：９５２～９５８；Ｐｅｒｓｉｃ他（１９９７）、Ｇｅｎｅ、１８７：９～１８；Ｂｕｒｔｏｎ他（１９９４）、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５７：１９１～２８０；国際出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；国際公開ＷＯ９０／０２８０９；国際公開ＷＯ９１／１０７３７；国際公開ＷＯ９２／０１０４７；国際公開ＷＯ９２／１８６１９；国際公開ＷＯ９３／１１２３６；国際公開ＷＯ９５／１５９８２；国際公開ＷＯ９５／２０４０１；国際公開ＷＯ９６／０６２１３；国際公開ＷＯ９２／０１０４７（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ他）；国際公開ＷＯ９７／０８３２０（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）；国際公開ＷＯ９２／０１０４７（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；国際公開ＷＯ９１／１７２７１（Ａｆｆｙｍａｘ）；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号および同第５，７３３，７４３号。

【0164】

ジスルフィド結合を介して該ポリペプチドを結合することによって、バクテリオファージ粒子の表面にポリペプチドを呈示するために有用な様々な方法が、Ｌｏｈｎｉｎｇによって記載されている（米国特許第６，７５３，１３６号）。の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域は、完全な抗体（ヒト抗体を含む）、または、任意の他の所望の抗原結合フラグメントを作製するために単離し、使用することができ、また、任意の所望の宿主（哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む）において発現させることができる。例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ’）_２フラグメントを組換え産生するための技術もまた、この技術分野において知られている方法を使用して、例えば、国際公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ他（１９９２）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１２：８６４～８６９；Ｓａｗａｉ他（１９９５）、ＡＪＲＩ、３４：２６～３４；およびＢｅｔｔｅｒ他（１９８８）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０４１～１０４３において開示される方法などを使用して用いることができる。

【0165】

一般には、抗体または抗体フラグメントはファージ粒子またはファージミド粒子の表面に存在することになるので、ディスプレイベクターにクローン化されるハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体フラグメントを、良好な結合活性を維持した変化体を特定するために、好適な抗原に対して選択することができる。例えば、Ｂａｒｂａｓ ＩＩＩ他（２００１）、Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）を参照のこと。しかしながら、他のベクター形式が、この目的のために、例えば、抗体フラグメントライブラリーを選択および／またはスクリーニングのための溶菌ファージベクター（改変されたＴ７システムまたはラムダＺａｐシステム）にクローン化することなどのために使用され得るであろう。

【0166】

＜抗体作製の代替方法＞抗体はまた、リンパ球集団におけるインビボ産生を誘導することによって、あるいは、組換え免疫グロブリンライブラリーまたは非常に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることによって作製される場合がある（Ｏｒｌａｎｄｉ他（１９８９）、ＰＮＡＳ、８６：３８３３～３８３７；Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．他（１９９１）、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３～２９９）。

【0167】

あるいは、単鎖抗体を作製するための技術が使用される場合がある。単鎖抗体（ｓｃＦ_ｖ）は、リンカーペプチド（長さが典型的にはおよそ５アミノ酸～２５アミノ酸）によりつながれる重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ｓｃＦ_ｖにおいて、重鎖および軽鎖の可変領域は、同じ抗体または異なる抗体に由来する場合がある。ｓｃＦ_ｖが、組換え技術を使用して、例えば、ｓｃＦ_ｖをコードするベクターを宿主生物（例えば、大腸菌など）において発現させることによって合成される場合がある。ｓｃＦ_ｖをコードするＤＮＡを、上述の抗体の重鎖または重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ、および、その軽鎖またはその軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡから選択されるＤＮＡのアミノ酸配列全体または所望のアミノ酸配列をコードする部分ＤＮＡをテンプレートとして使用する増幅を、その両末端を規定するプライマー対を使用するＰＣＲによって行い、さらに、ポリペプチドリンカー部分をコードするＤＮＡと、リンカーの両末端を重鎖および軽鎖にそれぞれ連結するようにするためにその両末端を規定するプライマー対とを組み合わせる増幅を行うことで得ることができる。ｓｃＦ_ｖをコードするＤＮＡを含有する発現ベクター、および、この発現ベクターによって形質転換されている宿主を、この技術分野において知られている従来の方法に従って得ることができる。

【0168】

抗原結合フラグメントもまた作製される場合がある：例えば、抗体分子のペプシン消化によって生じ得るＦ（ａｂ’）_２フラグメント、および、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生成し得るＦａｂフラグメント。代替において、Ｆａｂ発現ライブラリーが、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ容易な特定を可能にするために構築される場合がある（Ｈｕｓｅ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：１２７５～１２８１（１９８９））。

【0169】

＜市販抗体＞抗体はまた、市販の供給元から購入される場合がある。市販されているＦＬＴ３抗体の例には、下記の供給者によって製造されるＦＬＴ３抗体が含まれるが、これらに限定されない：例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎｃ．、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ａｂｇｅｎｔ、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｂｉｏｒｂｙｔ、Ａｂｂｅｘａ、Ａｂｇｅｎｔ、ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＧｅｎｅＴｅｘ、Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＧｍｂＨ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ、Ｂｉｏｓｓ Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｊｏｈｎ’ｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｓｏｕｒｃｅ ＢｉｏＳｃｉｃｎｅ、Ａｂｃａｍ、ＰｒｏＳｃｉ，Ｉｎｃ．、Ｃｌｉｎｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、ＧｅｎＷａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｏｗｏｒｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＥＸＢＩＯ Ｐｒａｈａ，ａ．ｓ．、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ、Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．、ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ、ＢｉｏＲａｄ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＥＭＤ Ｍｉｌｉｐｏｒｅ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｒｏｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｋ ＧｍｂＨ、Ｓｐｒｉｎｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ａｔｌａｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａｂｂｉｏｔｅｃ、Ｂｏｓｔｒｅｂｉｏ、Ｎｏｒｄｉｃ ＢｉｏＳｉｔｅ、および、他の一般に知られている抗体製造者。市販されているＦＬＴ３抗体の限定されない例には、供給者およびカタログ番号によって列挙される下記の市販抗体（これらに限定されない）を含めて、ＢＶ１０クローンおよび４Ｇ８クローンから得られるＦＬＴ３抗体、ならびにそれらの生物学的同等物または改変体が含まれる：ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ ＡＢＩＮ４８７４９９、ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｏｎｌｉｎｅ ＡＢＩＮ４８７５００、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳ－Ｃ１７９６２３－１００、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳ－Ｃ１７９６２４－５０、Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｏｂｏｄｙ ＡＭ２００４２ＡＦ－Ｎ、Ａｃｒｉｓ Ａｎｔｏｂｏｄｙ ＡＭ２００４２ＦＣ－Ｎ、ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｋ０１０７－３、ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｋ０１０７－４、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ＮＢＰ１－５４５２２－０．０５ｍｇ、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ＮＢＰ１－５４４１４、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ｓｃ－２１７８８、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６４７０８、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ５６３４９４。さらなる例示的な市販抗体には、市販抗体のＢｉｏｃｏｍｐａｒｅまたは別のデータベースにおいてヒトＦＬＴ３に対して反応性であるとして列挙されるすべての抗体が含まれ、限定されない例には、下記の供給者およびカタログ番号によって列挙される本明細書中に開示される抗体が含まれる：Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎｃ．２１０４９－１－ＡＰ、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎｃ．１５８２７－１－ＡＰ、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎｃ．１５８２６－１－ＡＰ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １７－１３５７－４１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １２－１３５７－４１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １４－１３５７－８０、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １７－１３５７－４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １２－１３５７－４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １４－１３５７－８２、Ａｂｇｅｎｔ ＡＰ７６４４ａ、Ａｂｇｅｎｔ ＡＰ３０６８ａ、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＯＡＡＢ１７１５９、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＯＡＡＦ００４４２、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＡＲＰ３０００９＿Ｔ１００、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＡＲＰ３００１０＿Ｐ０５０、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６２Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６４Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４７４Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６６Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６１Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６１Ｌ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３４６３Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４５７７Ｓ、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ２０Ｒ－２３５１、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ７０Ｒ－１２２５９、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ７０Ｒ－１７３２５。

【0170】

＜抗体同等物＞本開示は、上記で開示された抗体の「同等物」または「生物学的同等物」を規定しており、ただし、この場合、上記で開示された抗体のいずれかの抗原結合ドメインに対して少なくとも８０％同一である、または代替では８５％同一である、または代替では９０％同一である、または代替では９５％同一である、または代替では９７％同一である抗体の抗原結合ドメインにより、当該抗原結合ドメインは、上記で開示された抗体の生物学的同等物になる。同等物のさらなる例には、上記で開示された抗体のいずれか１つの抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの相補体に、高ストリンジェンシーの条件のもとでハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが含まれ、ただし、この場合、高ストリンジェンシーの条件は、約５５℃～約６８℃のインキュベーション温度、約１×ＳＳＣ～約０．１×ＳＳＣの緩衝液濃度、約５５％～約７５％のホルムアミド濃度、および、約１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣまたは脱イオン水の洗浄液を含む。

【0171】

＜抗体修飾＞本開示の抗体は、抗原についての親和性を増大させるために多量体化される場合がある。多量体化されるべき抗体は、同じ抗原の複数のエピトープを認識する１つのタイプの抗体または複数の抗体である場合がある。抗体を多量体化する方法としては、ＩｇＧ ＣＨ３ドメインを２つのｓｃＦ_ｖ分子に結合すること、ストレプトアビジンに結合すること、および、ヘリックス・ターン・ヘリックスモチーフを導入することなどが例示され得る。

【0172】

本明細書中に開示される抗体組成物は、これらの抗体のいずれかと、別の作用因との間で形成されるコンジュゲート（免疫コンジュゲート）の形態である場合がある。１つの局面において、本明細書中に開示される抗体は放射性物質にコンジュゲートされる。別の局面において、本明細書中に開示される抗体は、様々なタイプの分子（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）に結合させることができる。

【0173】

抗体スクリーニング。様々な免疫アッセイが、所望の特異性を有する抗体を特定するためのスクリーニングのために使用される場合がある。立証された特異性を有するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のどちらかを使用する競合結合アッセイまたは免疫放射性測定アッセイのための数多くのプロトコルがこの技術分野では広く知られている。そのような免疫アッセイは典型的には、ＦＬＴ３関連抗原、または、どのようなものであれ、そのフラグメントもしくはオリゴペプチドと、その特異的抗体との間での複合体形成の測定を伴う。干渉しない２つのＦＬＴ３関連抗原エピトープに対して特異的なモノクローナル抗体を利用する二部位モノクローナル型免疫アッセイが使用される場合があり、しかし、競合的結合アッセイもまた用いられる場合がある（Ｍａｄｄｏｘ他（１９８３）、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１５８：１２１１～１２１６）。

【0174】

＜抗体精製＞本明細書中に開示される抗体は均一にまで精製することができる。抗体の分離および精製を、タンパク質の分離および精製の従来方法を用いることによって行うことができる。

【0175】

ほんの例としてではあるが、抗体を、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、透析、分取用ポリアクリルアミドゲル電気泳動および等電点フォーカシング電気泳動などの使用を適切に選択し、組み合わせることによって分離および精製することができる。Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ、Ｄａｎｉｅｌ Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ他編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）。

【0176】

クロマトグラフィーの例には、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが含まれる。１つの局面において、クロマトグラフィーは、液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣまたはＦＰＬＣなど）を使用することによって行うことができる。

【0177】

１つの局面において、プロテインＡカラムまたはプロテインＧカラムが親和性クロマトグラフィーにおいて使用される場合がある。他の例示的なカラムには、プロテインＡカラム、Ｈｙｐｅｒ Ｄ、ＰＯＲＯＳ、およびＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆ．Ｆ．（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などが含まれる。
［ＩＩＩ． ＣＡＲを調製するための単離された核酸およびプロセス］

【0178】

本開示の様々な局面が、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離された細胞、およびそのような細胞を作製する方法に関連する。細胞は原核生物細胞または真核生物細胞である。１つの局面において、細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である。真核生物細胞は、どのような種であれ、好ましい種に由来することができ、例えば、動物細胞、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、ネコ細胞またはイヌ細胞など）であることが可能である。

【0179】

具体的な実施形態において、単離された細胞は、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメイン）と、１つまたは複数の共刺激領域、例えば、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとを含む、あるいは代替では、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメイン）と、１つまたは複数の共刺激領域、例えば、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとから本質的になる、さらにあるいは、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８膜貫通ドメイン）と、１つまたは複数の共刺激領域、例えば、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとからなる外因性ＣＡＲを含み、または代替では該外因性ＣＡＲから本質的になり、またはそれにもかかわらず、さらには該外因性ＣＡＲからなる。ある特定の実施形態において、単離された細胞はＴ細胞であり、例えば、動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコＴ細胞、イヌＴ細胞またはヒトＴ細胞である。ある特定の実施形態において、単離された細胞はＮＫ細胞であり、例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコＮＫ細胞、イヌＮＫ細胞またはヒトＮＫ細胞である。

【0180】

ある特定の実施形態において、ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する細胞を作製する様々な方法が開示され、ただし、該方法は、単離された細胞の集団に対して、ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入を行うことを含み、または代替では、単離された細胞の集団に対して、ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入を行うことから本質的になり、さらにあるいは、単離された細胞の集団に、ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする核酸配列により形質導入することからなる。いくつかの実施形態において、このことが、ＦＬＴ３ ＣＡＲ構築物をコードするベクターを使用することにより達成される。いくつかの実施形態において、このことが、ＦＬＴ３ ＣＡＲ構築物をコードするｍＲＮＡを使用することにより達成され、ただし、この場合、該ｍＲＮＡは結果として、エレクトロポレーションを介して細胞に導入される場合がある。例えば、Ｃｈｏｉ他（２０１０）、Ｂｉｏｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｄｅｖｉｃｅｓ、１２（５）：８５５～８６３を参照のこと。さらなる局面において、上記核酸配列により首尾よく形質導入されている細胞の亜集団が選択される。いくつかの実施形態において、単離された細胞はＴ細胞（動物Ｔ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、ネコＴ細胞、イヌＴ細胞またはヒトＴ細胞）であり、それにより、ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞がもたらされる。ある特定の実施形態において、単離された細胞はＮＫ細胞（例えば、動物ＮＫ細胞、哺乳動物ＮＫ細胞、ネコＮＫ細胞、イヌＮＫ細胞またはヒトＮＫ細胞）であり、それにより、ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＮＫ細胞がもたらされる。いくつかの実施形態において、単離された細胞はＢ細胞（動物Ｂ細胞、哺乳動物Ｂ細胞、ネコＢ細胞、イヌＢ細胞またはヒトＢ細胞）であり、それにより、ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｂ細胞がもたらされる。

【0181】

いくつかの実施形態において、開示されたＣＡＲを発現するＴ細胞はさらに、内因性ＴＣＲの発現を低下させるために、または排除するために改変される場合がある。内因性ＴＣＲの低下または排除により、標的外の影響を軽減することができ、かつ、Ｔ細胞の有効性を増大させることができる。機能的ＴＣＲの発現を安定的に欠くＴ細胞が、様々な取り組みを使用して作製される場合がある。Ｔ細胞はＴ細胞受容体全体を複合体として内在化し、選別し、分解し、この場合、半減期が休止Ｔ細胞では約１０時間であり、刺激されたＴ細胞では３時間である（ｖｏｎ Ｅｓｓｅｎ，Ｍ．他（２００４）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７３：３８４～３９３）。ＴＣＲ複合体が適切に機能するには、ＴＣＲ複合体を構成するタンパク質の適切な化学量論的比率が要求される。ＴＣＲ機能においてはまた、ＩＴＡＭモチーフを有する２つの機能するＴＣＲゼータタンパク質が要求される。そのＭＨＣ－ペプチドリガンドが会合した際のＴＣＲの活性化には、同じＴ細胞の表面におけるいくつかのＴＣＲの会合が要求され、ただし、これらはすべてが、適切にシグナル伝達しなければならない。したがって、ＴＣＲ複合体が、適切に会合しないタンパク質、または最適にシグナル伝達することができないタンパク質により不安定化されるならば、Ｔ細胞は、細胞応答を開始するために十分に活性化されないであろう。

【0182】

したがって、いくつかの実施形態において、ＴＣＲ発現が、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）、ＣＲＩＳＰＲ、あるいは、特異的ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ－αおよびＴＣＲ－β）および／またはＣＤ３鎖をコードする核酸を初代Ｔ細胞において標的とする他の方法を使用して排除される場合がある。これらのタンパク質の１つまたは複数の発現を阻止することによって、Ｔ細胞はもはや、ＴＣＲ複合体の重要な成分の１つまたは複数を産生しないであろうし、それにより、ＴＣＲ複合体を不安定化し、かつ、機能的ＴＣＲの細胞表面発現を妨げるであろう。一部のＴＣＲ複合体が、ＲＮＡ干渉が使用されるときには細胞表面に再利用され得るとしても、当該ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）はＴＣＲタンパク質の新たな産生を妨げるであろうし、それにより、ＴＣＲ複合体全体の分解および除去をもたらすであろうし、その結果、機能的ＴＣＲの発現が安定的に不足しているＴ細胞が作製されるであろう。

【0183】

阻害性ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）の初代Ｔ細胞における発現を、従来の発現系をどのようなものであっても使用して達成することができ、例えば、レンチウイルス発現系を使用して達成することができる。レンチウイルスは、休止している初代Ｔ細胞を標的とするために有用であるにもかかわらず、すべてのＴ細胞がｓｈＲＮＡを発現するとは限らない。これらのＴ細胞のうちの一部は、Ｔ細胞の機能的活性を変化させるためのＴＣＲ発現の十分な阻害を可能にするための十分な量のＲＮＡを発現しない場合がある。したがって、適度なＴＣＲ発現から高いＴＣＲ発現をウイルス形質導入後において保持するＴ細胞を、例えば、細胞選別技術または細胞分離技術によって除くことができ、その結果、残存するＴ細胞は細胞表面のＴＣＲまたはＣＤ３が不足しており、このことにより、機能的なＴＣＲまたはＣＤ３の発現が不足しているＴ細胞の単離された集団の拡大を行うことができる。

【0184】

＜単離された細胞の供給源＞本明細書中に開示される細胞の拡大および遺伝子改変に先立って、細胞が、対象から（例えば、自己治療を伴う実施形態において）、または市販の培養物から得られる場合がある。

【0185】

細胞を、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含めて対象における数多くの供給源から得ることができる。

【0186】

関連のある細胞を単離する様々な方法がこの技術分野では広く知られており、これらは、本発明の適用に対して容易に適合化することができる；例示的な方法が下記の実施例において記載される。本開示に関連して使用されるための単離方法には、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）システム、ＳＴＥＭｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＥＡＳＹＳＥＰ（商標）、ＲＯＢＯＳＥＰ（商標）、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）、ＳＥＰＭＡＴＥ（商標）、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＭＡＣＳ（商標）細胞分離キット、および他の市販の細胞分離・単離キットが含まれるが、これらに限定されない。免疫細胞の特定の亜集団が、特有の細胞表面マーカーに対して特異的なキットにおいて利用可能なビーズまたは他の結合性作用因の使用により単離される場合がある。例えば、ＭＡＣＳ（商標）のＣＤ４＋およびＣＤ８＋のマイクロビーズが、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋のＴ細胞を単離するために使用される場合がある。

【0187】

代替において、細胞が、市販の細胞培養物を介して得られる場合があり、これらには、下記の細胞が含まれるが、それらに限定されない：Ｔ細胞については、ＢＣＬ２（ＡＡＡ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９０２（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ７０Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９００（商標））、ＢＣＬ２（Ｓ８７Ａ）Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２９０１（商標））、ＢＣＬ２ Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２８９９（商標））、Ｎｅｏ Ｊｕｒｋａｔ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２８９８（商標））の各系統：Ｂ細胞については、ＡＨＨ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８１４６（商標））、ＢＣ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２３０（商標））、ＢＣ－２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２３１（商標））、ＢＣ－３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２７７（商標））、ＣＡ４６（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１６４８（商標））、ＤＧ－７５［Ｄ．Ｇ．－７５］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２６２５（商標））、ＤＳ－１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１１１０２（商標））、ＥＢ－３［ＥＢ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－８５（商標））、Ｚ－１３８（ＡＴＣＣ ＃ＣＲＬ－３００１）、ＤＢ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２２８９）、Ｔｏｌｅｄｏ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３１）、Ｐｆｉｆｆｅｒ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３２）、ＳＲ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２２６２）、ＪＭ－１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１０４２１）、ＮＦＳ－５ Ｃ－１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９３）、ＮＦＳ－７０ Ｃ１０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９４）、ＮＦＳ－２５ Ｃ－３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６９５）およびＳＵＰ－Ｂ１５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１９２９）の各系統；および、ＮＫ細胞については、ＮＫ－９２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２４０７（商標））、ＮＫ－９２ＭＩ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２４０８）の各系統。さらなる例には、下記の細胞が含まれるが、それらに限定されない：成熟Ｔ細胞株、例えば、Ｄｅｇｌｉｓ、ＥＢＴ－８、ＨＰＢ－ＭＬｐ－Ｗ、ＨＵＴ７８、ＨＵＴ１０２、Ｋａｒｐａｓ３８４、Ｋｉ２２５、Ｍｙ－Ｌａ、Ｓｅ－Ａｘ、ＳＫＷ－３、ＳＭＺ－１およびＴ３４；未成熟Ｔ細胞株、例えば、ＡＬＬ－ＳＩＬ、Ｂｅ１３、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＣＭＬ－Ｔ１、ＤＮＤ－４１、ＤＵ．５２８、ＥＵ－９、ＨＤ－Ｍａｒ、ＨＰＢ－ＡＬＬ、Ｈ－ＳＢ２、ＨＴ－１、ＪＫ－Ｔ１、Ｊｕｒｋａｔ、Ｋａｒｐａｓ４５、ＫＥ－３７、ＫＯＰＴ－Ｋ１、Ｋ－Ｔ１、Ｌ－ＫＡＷ、Ｌｏｕｃｙ、ＭＡＴ、ＭＯＬＴ－１、ＭＯＬＴ３、ＭＯＬＴ－４、ＭＯＬＴ１３、ＭＯＬＴ－１６、ＭＴ－１、ＭＴ－ＡＬＬ、Ｐ１２／Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｐｅｅｒ、ＰＥＲ０１１７、ＰＥＲ－２５５、ＰＦ－３８２、ＰＦＩ－２８５、ＲＰＭＩ－８４０２、ＳＴ－４、ＳＵＰ－Ｔ１～ＳＵＰ－Ｔ１４、ＴＡＬＬ－１、ＴＡＬＬ－１０１、ＴＡＬＬ－１０３／２、ＴＡＬＬ－１０４、ＴＡＬＬ－１０５、ＴＡＬＬ－１０６、ＴＡＬＬ－１０７、ＴＡＬＬ－１９７、ＴＫ－６、ＴＬＢＲ－１、ＴＬＢＲ－２、ＴＬＢＲ－３およびＴＬＢＲ－４、ＣＣＲＦ－ＨＳＢ－２（ＣＣＬ－１２０．１）、Ｊ．ＲＴ３－Ｔ３．５（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５３）、Ｊ４５．０１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１９９０）、Ｊ．ＣａＭ１．６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２０６３）、ＲＳ４；１１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１８７３）、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＣＣＬ－１１９）；皮膚Ｔ細胞リンパ腫系統、例えば、ＨｕＴ７８（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＴＩＢ－１６１）、ＭＪ［Ｇ１１］（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－８２９４）、ＨｕＴ１０２（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１６２）；未分化リンパ腫および大細胞リンパ腫に由来するＢ細胞株、例えば、ＤＥＬ、ＤＬ－４０、ＦＥ－ＰＤ、ＪＢ６、Ｋａｒｐａｓ２９９、Ｋｉ－ＪＫ、Ｍａｃ－２Ａ Ｐｌｙ１、ＳＲ－７８６、ＳＵ－ＤＨＬ－１、ＳＵ－ＤＨＬ－２、ＳＵ－ＤＨＬ－４、ＳＵ－ＤＨＬ－５、ＳＵ－ＤＨＬ－６、ＳＵ－ＤＨＬ－７、ＳＵ－ＤＨＬ－８、ＳＵ－ＤＨＬ－９、ＳＵ－ＤＨＬ－１０およびＳＵ－ＤＨＬ－１６、ＤＯＨＨ－２、ＮＵ－ＤＨＬ－１、Ｕ－９３７、Ｇｒａｎｄａ５１９、ＵＳＣ－ＤＨＬ－１、ＲＬ；ホジキンリンパ腫、例えば、ＤＥＶ、ＨＤ－７０、ＨＤＬＭ－２、ＨＤ－ＭｙＺ、ＨＫＢ－１、ＫＭ－Ｈ２、Ｌ４２８、Ｌ５４０、Ｌ１２３６、ＳＢＨ－１、ＳＵＰ－ＨＤ１およびＳＵ／ＲＨ－ＨＤ－ｌ；ＮＫ系統、例えば、ＨＡＮＫ１、ＫＨＹＧ－１、ＮＫＬ、ＮＫ－ＹＳ、ＮＯＩ－９０およびＹＴなど。ＲＥＨ、ＮＡＬＬ－１、ＫＭ－３、Ｌ９２－２２１（これらに限定されない）を含めてヌル白血病細胞株が、他の白血病およびリンパ腫に由来する細胞株（例えば、Ｋ５６２赤白血病、ＴＨＰ－１単球性骨髄腫、Ｕ９３７リンパ腫、ＨＥＬ赤白血病、ＨＬ６０白血病、ＨＭＣ－１白血病、ＫＧ－１白血病、Ｕ２６６骨髄腫など）が免疫細胞の別の市販供給元であるように、免疫細胞の別の市販供給元である。そのような市販の細胞株についての限定されない例示的な供給元には、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、すなわち、ＡＴＣＣ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）、および、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｓｍｚ．ｄｅ／）が含まれる。

【0188】

＜ベクター＞ＣＡＲ細胞が、ベクターを使用して調製される場合がある。本開示の様々な局面が、ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする単離された核酸配列、あるいはその相補体または同等物に関連する。

【0189】

いくつかの実施形態において、単離された核酸配列は、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとを含むＣＡＲをコードし、あるいは代替では、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとから本質的になるＣＡＲをコードし、さらにあるいは、ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインと、ヒンジドメインと、ＣＤ２８膜貫通ドメインと、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域と、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインとからなるＣＡＲをコードする。具体的な実施形態において、単離された核酸配列は、（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインをコードする配列、その後に、（ｂ）ヒンジドメインをコードする配列、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメインをコードする配列、その後に、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域をコードする配列、その後に、（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする配列を含み、あるいは代替では、（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインをコードする配列、その後に、（ｂ）ヒンジドメインをコードする配列、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメインをコードする配列、その後に、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域をコードする配列、その後に、（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする配列から本質的になり、さらにあるいは、（ａ）ＦＬＴ３抗体の抗原結合ドメインをコードする配列、その後に、（ｂ）ヒンジドメインをコードする配列、（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメインをコードする配列、その後に、（ｄ）ＣＤ２８共刺激シグナル伝達領域、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達領域およびＯＸ４０共刺激領域から選択される１つまたは複数の共刺激領域をコードする配列、その後に、（ｅ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする配列からなる。

【0190】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、上記ＦＬＴ３抗体の上記ＦＬＴ３抗原結合ドメインの上記抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置するポリヌクレオチドプロモーター配列をさらに含み、またはさらには該ポリヌクレオチドプロモーター配列から本質的になり、またはそれにもかかわらず、さらには該ポリヌクレオチドプロモーター配列からなる。いくつかの実施形態において、このプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー（ＭＮＤ）プロモーター、またはＥＦ１アルファプロモーターである。上記プロモーターの限定されない例示的配列が本明細書中に提供される：
ＣＭＶプロモーター配列、配列番号３６：
ＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧ
ＣＭＶプロモーター配列、配列番号３７：
ＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＴＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣ
ＭＮＤプロモーター配列、配列番号３８：
ＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣ
ＥＦ１アルファプロモーター配列、配列番号３９：
ＡＡＧＧＡＴＣＴＧＣＧＡＴＣＧＣＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＧＴＣＡＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＧＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＴＴＣＧＡＧＧＧＧＣＴＣＧＣＡＴＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＧＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＧＴＴＧＡＧＴＣＧＣＧＴＴＣＴＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＧＴＣＣＧＣＣＧＴＣＴＡＧＧＴＡＡＧＴＴＴＡＡＡＧＣＴＣＡＧＧＴＣＧＡＧＡＣＣＧＧＧＣＣＴＴＴＧＴＣＣＧＧＣＧＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＧＣＴＣＴＣＣＡＣＧＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＴＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＧＴＣＴＴＴＧＴＴＴＣＧＴＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＧＣＧＣＣＧＴＴＡＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＣＣＴＡＣ

【0191】

ある特定の実施形態において、単離された核酸配列は、ＦＬＴ３抗体のＦＬＴ３抗原結合ドメインの抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、誘導性カスパーゼ（「ｉＣａｓｐ」）または他の「自殺遺伝子」をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、あるいはさらには該ポリヌクレオチド配列から本質的になり、さらにあるいは、該ポリヌクレオチド配列からなる；上記ｉＣａｓｐ遺伝子の限定されない例示的なポリヌクレオチド配列が本明細書中に提供される：
ｉＣａｓｐ配列、配列番号４０：
ＡＴＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＣＧＧＧＣＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＣＡＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＣＡＣＣＧＧＧＡＴＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＴＴＣＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＡＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧＧＴＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＡＴＡＴＣＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＴＣＧＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＧＡＴＧＴＣＧＧＴＧＣＴＣＴＴＧＡＧＡＧＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＡＡＴＧＣＡＧＡＴＴＴＧＧＣＴＴＡＣＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＣＴＧＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＡＡＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＣＣＧＧＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＣＡＴＴＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＣＣＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＡＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＧＴＣＧＧＴＣＧＡＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＧＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡＧＡＣＣＡＴＧＧＧＴＴＴＧＡＧＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＣＣＣＴＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＣＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＧＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＴＴＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＣＴＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＴＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＧＧＧＴＣＧＣＴＡＡＴＧＣＴＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴＡＴＡ

【0192】

いくつかの実施形態において、ｉＣａｓｐ遺伝子構築物は、ＦＫＢＰタンパク質ドメインに機能的に連結されるカスパーゼ９の一部分を含む。上記の限定されない例示的配列において、これらのエレメントが明確に示される－下線部は、ＦＫＢＰタンパク質ドメインと、カスパーゼ９タンパク質ドメインとの間におけるリンカーであり、下線部直後のＧＴＣＧＡＣは、付加された制限部位である。カスパーゼ９は、ＣＡＳＰ９遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＮＭ００１２２９）によってコードされており、イニシエーターカスパーゼの限定されない一例であり、ミトコンドリアのアポトーシス経路において役割を果たしている；その一部分が、上記に開示される限定されない例示的配列に存在する。上記で開示された限定されない例示的配列におけるＦＫＢＰタンパク質ドメインは、誘導剤と結合するように、具体的には二量体化の化学的誘導剤（ＣＩＤ）と結合するように最適化されている。上記で開示された配列において、化学的誘導剤は、ＡＰ１９０３、すなわち、健常な志願者において安全であることが証明されている合成薬物である。ＦＫＢＰドメインと、二量体化の化学的誘導剤との両方の同等物（例えば、ＡＰ１９０３またはＦＫＢＰの改変形態）が、列挙された例示的な実施形態の代わりに使用され得ることが想定される。いくつかの局面において、二量体化を、どのような小分子であれ、カスパーゼ９の二量化を促進することが知られている小分子によって誘導することができる。この小分子を投与することにより、カスパーゼ９の架橋および活性化がもたらされ、このことは結果として、ｉＣａｓｐ遺伝子を発現する細胞のアポトーシスを誘導する。

【0193】

ある特定の実施形態において、単離された核酸配列は、ＦＬＴ３抗体のＦＬＴ３抗原結合ドメインの抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、２Ａペプチド（Ｔ２Ａ）をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、あるいはさらには該ポリヌクレオチド配列から本質的になり、あるいはそれにもかかわらず、さらには該ポリヌクレオチド配列からなる；上記Ｔ２Ａポリヌクレオチドの限定されない例示的配列が本明細書中に提供される：
Ｔ２Ａ配列、配列番号４１：
ＧＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＡＴＧＣＧＧＴＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＴ

【0194】

Ｔ２Ａを伴う実施形態において、Ｔ２Ａ媒介の「自己切断」により、２つの別々のタンパク質の１：１の比が生じ得る。

【0195】

ある特定の実施形態において、上記単離された核酸配列は、ＦＬＴ３抗体のＦＬＴ３抗原結合ドメインの抗原結合ドメインをコードするポリヌクレオチドの上流に位置する、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、あるいはさらには該ポリヌクレオチド配列から本質的になり、さらにあるいは該ポリヌクレオチド配列からなる；上記シグナルペプチドの限定されない例示的配列をコードするポリヌクレオチドが本明細書中に提供される：
シグナルペプチド配列、配列番号４２：
ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＴＣＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣ．
シグナルペプチド配列、配列番号４３：
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ
シグナルペプチド配列、配列番号４４：
ＭＤＷＩＷＲＩＬＦＬＶＧＡＡＴＧＡＨＳ

【0196】

いくつかの実施形態において、上記単離された核酸は、検出可能な標識、および／または、抗生物質耐性を与えるポリヌクレオチドを含む。１つの局面において、上記標識またはポリヌクレオチドは、上記単離された核酸により首尾よく形質導入された細胞を選択するために有用である。ある特定の実施形態において、この検出可能な標識は、「ｍｙｃタグ」として知られている、ｃ－ｍｙｃ遺伝子に由来するタンパク質タグである。上記ｍｙｃタグをコードする限定されない例示的配列が本明細書中下記に開示される。
「ｍｙｃ」配列、配列番号４５：
ＧＡＧＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧ

【0197】

いくつかの実施形態において、上記単離された核酸配列はベクター内に含まれる。ある特定の実施形態において、ベクターはプラスミドである。他の実施形態において、ベクターはウイルスベクターである。そのようなベクターの限定されない例には、限定されないが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ関連ウイルスベクターが含まれる。具体的な実施形態において、ベクターはレンチウイルスベクターである。

【0198】

例示的なベクターの調製、および、上記ベクターを使用するＣＡＲ発現細胞の作製が、下記の例において詳しく検討される。要約すると、ＣＡＲまたは免疫調節分子をコードする天然の核酸または合成された核酸の発現が典型的には、ＣＡＲポリペプチドまたはその一部分をコードする核酸をプロモーターに機能的に連結し、その構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成される。同様の方法が、免疫調節分子をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸配列を構築するために使用される場合がある。ベクターは、真核生物における複製および組込みのために好適であり得る。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を作製するための様々な方法がこの技術分野では広く知られている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他（２００１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照のこと。

【0199】

１つの局面において、用語「ベクター」は、分裂していない細胞および／またはゆっくりと分裂している細胞に感染および形質導入し、かつ、標的細胞のゲノムに一体化する能力を保持する組換えベクターを意図する。いくつかの局面において、ベクターは野生型ウイルスに由来し、または野生型ウイルスに基づく。さらなる局面において、ベクターは野生型レンチウイルスに由来し、または野生型レンチウイルスに基づく。そのようなレンチウイルスの例には、限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）が含まれる。代替において、他のレトロウイルスがベクター骨格のための基礎として使用され得ることが意図される（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）など）。本開示によるウイルスベクターは、特定のウイルスの成分に限定される必要がないことは明らかであろう。ウイルスベクターは、２つ以上の異なるウイルスに由来する成分を含む場合があり、同様に、合成された成分も含む場合がある。ベクター成分は、所望の特徴（例えば、標的細胞特異性など）を得るために操作することができる。

【0200】

本開示の組換えベクターは霊長類および非霊長類に由来する。霊長類レンチウイルスの例には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、すなわち、ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因因子、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。非霊長類レンチウイルス群には、プロトタイプ型「遅発性ウイルス」のビスタ／マエデイウイルス（ＶＭＶ）、同様にまた、関連したヤギ関節炎・脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ならびに、より近年に記載されたネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）およびウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）が含まれる。先行技術の様々な組換えレンチウイルスベクターがこの技術分野では知られている。例えば、米国特許第６，９２４，１２３号、同第７，０５６，６９９号、同第７，４１９，８２９号および同第７，４４２，５５１号を参照のこと（これらは参照によって本明細書中に組み込まれる）。

【0201】

米国特許第６，９２４，１２３号には、特定のレトロウイルス配列が標的細胞ゲノムへの組込みを容易にすることが開示される。この特許は、それぞれのレトロウイルスゲノムが、ビリオンタンパク質および酵素をコードする、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖと呼ばれる遺伝子を含むことを教示する。これらの遺伝子の両側には、長い末端反復（ＬＴＲ）と呼ばれる領域が隣接している。ＬＴＲは、プロウイルスの組込みと、転写とに関わっている。ＬＴＲはまた、エンハンサー－プロモーター配列として働く。別の言い方をすれば、ＬＴＲはウイルス遺伝子の発現を制御することができる。レトロウイルスＲＮＡのカプシド形成が、ウイルスゲノムの５’末端に位置するｐｓｉ配列によって生じる。ＬＴＲ自体は、Ｕ３、ＲおよびＵ５と呼ばれる３つのエレメントに分けることができる同一の配列である。Ｕ３は、ＲＮＡの３’末端に対して特有である配列に由来する。Ｒは、ＲＮＡの両末端において繰り返される配列に由来し、Ｕ５は、ＲＮＡの５’末端に対して特有である配列に由来する。これら３つのエレメントのサイズが、異なるレトロウイルスの間ではかなり異なり得る。ウイルスゲノムについて、ポリ（Ａ）付加（終結）の部位が右側ＬＴＲにおけるＲとＵ５との境界にある。Ｕ３は、細胞の転写活性化因子タンパク質に対して、また、場合によってはウイルスの転写活性化因子タンパク質に対して応答性であるプロモーター配列および複数のエンハンサー配列を含むプロウイルスの転写制御エレメントの大部分を含有する。

【0202】

構造遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ）そのものに関して、ｇａｇはウイルスの内部構造タンパク質をコードする。ｇａｇタンパク質は、成熟タンパク質のＭＡ（マトリックス）、ＣＡ（カプシド）およびＮＣ（ヌクレオカプシド）にタンパク質分解的にプロセシングされる。ｐｏｌ遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼ、関連ＲＮａｓｅＨおよびインテグラーゼ（ＩＮ）（これらにより、ゲノムの複製が媒介される）を含有する逆転写酵素（ＲＴ）をコードする。

【0203】

ウイルスベクター粒子を生じさせるために、ベクターＲＮＡゲノムが、該ゲノムをコードするＤＮＡ構築物から宿主細胞において発現させられる。ベクターゲノムによってコードされない粒子の成分が、宿主細胞において発現させられるさらなる核酸配列によってトランスで提供される（「パッケージングシステム」、これは通常の場合、ｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子およびｅｎｖ遺伝子のどちらかまたは両方を含む）。ウイルスベクター粒子の生成のために要求される一組の配列が一過性トランスフェクションによって宿主細胞に導入される場合があり、または宿主細胞ゲノムに組み込まれる場合があり、または様々な方法で提供される場合がある。関係した様々な技術が当業者には知られている。

【0204】

本開示における使用のためのレトロウイルスベクターには、下記のものが含まれるが、それらに限定されない：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ’ｓ ｐＬｅｎｔｉシリーズ、バージョン４、バージョン６およびバージョン６．２、“ＶｉｒａＰｏｗｅｒ”システム、Ｌｅｎｔｉｇｅｎ Ｃｏｒｐ．によって製造される；ｐＨＩＶ－７－ＧＦＰ、研究室で作製され、Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって使用される；“Ｌｅｎｔｉ－Ｘ”レンチウイルスベクター、ｐＬＶＸ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈによって製造される；ｐＬＫＯ．１－ｐｕｒｏ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈによって製造される；ｐＬｅｍｉＲ、Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって製造される；および、ｐＬＶ、研究室で作製され、Ｃｈａｒｉｔｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（ＣＢＦ）（ベルリン、ドイツ）によって使用される）。

【0205】

外因性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法、または他の場合には、細胞を本開示の阻害剤にさらすために使用される方法にかかわらず、宿主細胞における組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが行われる場合がある。そのようなアッセイには、例えば、当業者には広く知られている「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲなど；「生化学的」アッセイ、例えば、特定のペプチドの存在の有無を、例えば、免疫学的手段によって検出する生化学的アッセイ（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）、または、本開示の範囲に含まれる作用因を特定するために本明細書中に記載されるアッセイによって検出する生化学的アッセイなどが含まれる。

【0206】

＜パッケージングベクターおよび細胞株＞上記単離された核酸は、パッケージングベクターおよび細胞株を使用することによってレトロウイルスパッケージングシステムにパッケージングすることができる。パッケージングベクターには、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ関連ウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。パッケージングベクターは、細胞内への遺伝物質の送達を容易にするエレメントおよび配列を含有する。例えば、レトロウイルス構築物は、複製不能レトロウイルスベクターをパッケージングするために要求されるすべてのビリオンタンパク質をトランスでコードする複製不能レトロウイルスゲノムに由来する少なくとも１つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列を含むパッケージングベクターであり、複製不能レトロウイルスベクターをパッケージングすることができるビリオンタンパク質を、複製能を有するヘルパーウイルスの産生を伴うことなく、高力価で産生させるためのものである。レトロウイルスＤＮＡ配列は、ウイルスのウイルス５’ＬＴＲの生来型のエンハンサーおよび／またはプロモーターをコードする領域を欠いており、かつ、ヘルパーゲノムをパッケージングすることに関わるｐｓｉ機能配列と、３’ＬＴＲとの両方を欠いており、しかし、外来のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０のポリアデニル化部位）と、効率的な転写を、ウイルス産生が所望される細胞タイプにおいて導く外来のエンハンサーおよび／またはプロモーターとをコードする。レトロウイルスは白血病ウイルスであり、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）などである。外来のエンハンサーおよびプロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の前初期（ＩＥ）エンハンサーおよび前初期（ＩＥ）プロモーター、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭＭＳＶ）のエンハンサーおよびプロモーター（Ｕ３領域）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）のＵ３領域、脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）のＵ３領域、または、生来型のモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）プロモーターに結合されるＨＣＭＶ ＩＥエンハンサーである場合がある。レトロウイルス用パッケージングベクターは、プラスミドに基づく発現ベクターによってコードされる２つのレトロウイルスヘルパーＤＮＡ配列からなる場合がある（例えば、この場合、第１のヘルパー配列が、同種指向性のＭＭＬＶまたはＧＡＬＶのｇａｇタンパク質およびｐｏｌタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有し、第２のヘルパー配列が、ｅｎｖタンパク質をコードするｃＤＮＡを含有する）。宿主範囲を決定するＥｎｖ遺伝子は、異種指向性ウイルス、両種指向性ウイルス、同種指向性ウイルス、ポリトロピックウイルス（ミンクフォーカス形成ウイルス）または１０Ａ１マウス白血病ウイルスのｅｎｖタンパク質、あるいはテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）のｅｎｖタンパク質、ヒト免疫不全ウイルスのｅｎｖ（ｇｐ１６０）タンパク質、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）のＧタンパク質、ヒトＴ細胞白血病（ＨＴＬＶ）Ｉ型およびＩＩ型のｅｎｖ遺伝子産物、上記ｅｎｖ遺伝子の１つまたは複数の組合せに由来するキメラなエンベロープ遺伝子、あるいは、上記ｅｎｖ遺伝子産物の細胞質および膜貫通と、所望の標的細胞の表面における特異的な表面分子に対するモノクローナル抗体、とをコードするキメラなエンベロープ遺伝子をコードする遺伝子に由来する場合がある。

【0207】

パッケージングプロセスにおいて、パッケージングベクターおよびレトロウイルスベクターは、高力価の組換えレトロウイルス含有上清を生じさせるためにウイルスを産生することができる哺乳動物細胞（例えば、ヒト胚性腎臓細胞［例えば、２９３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．）］など）の第１の集団に一過性に共トランスフェクションされる。本開示の別の方法において、この一過性にトランスフェクションされた第１の細胞集団はその後、標的細胞に高効率で外来遺伝子により形質導入するために哺乳動物標的細胞（例えば、ヒトリンパ球）と共培養される。本発明のさらに別の方法において、上記の一過性にトランスフェクションされた第１の細胞集団から得られる上清が、標的細胞に高効率で外来遺伝子により形質導入するために哺乳動物標的細胞（例えば、ヒトリンパ球または造血幹細胞）と一緒にインキュベーションされる。

【0208】

別の局面において、パッケージングベクターは、ウイルスを産生することができる哺乳動物細胞（例えば、ヒト胚性腎臓細胞（例えば、２９３細胞）など）の第１の集団において安定的に発現させられる。レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターが、選択マーカーとの共トランスフェクションまたは偽型ウイルスによる感染のどちらによってでも細胞に導入される。両方の場合において、ベクターは一体化する。代替において、ベクターをエピソーム維持プラスミドにおいて導入することができる。高力価の組換えレトロウイルス含有上清が産生される。

【0209】

＜ＣＡＲ細胞の活性化および拡大＞所望のＣＡＲを発現させるための細胞の遺伝子改変の前または後にかかわらず、細胞は、一般に知られている方法を使用して、例えば、下記に記載される方法などを使用して活性化および拡大することができる：米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、および参考文献、例えば、Ｌａｐａｔｅｖａ他（２０１４）、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ、１９（１－２）：１２１～１３２；Ｔａｍ他（２００３）、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、５（３）：２５９～２７２；Ｇａｒｃｉａ－Ｍａｒｑｕｅｚ他（２０１４）、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、１６（１１）：１５３７～１５４４など。エクスビボでのＦＬＴ３関連抗原による刺激により、選択されたＣＡＲ発現細胞亜集団を活性化および拡大することができる。代替において、細胞がＦＬＴ３関連抗原との相互作用によってインビボで活性化される場合がある。

【0210】

ある特定の免疫細胞の場合には、さらなる細胞集団、可溶性リガンドおよび／またはサイトカイン、あるいは刺激剤が、細胞の活性化および拡大を行うために要求される場合がある。関連した試薬はこの技術分野では広く知られており、知られている免疫学的原理に従って選択される。例えば、可溶性ＣＤ－４０リガンドが、ある特定のＢ細胞集団の活性化および拡大において役立つ場合がある；同様に、放射線照射されたフィーダー細胞が、ＮＫ細胞の活性化および拡大のための手順において使用される場合がある。

【0211】

関連した細胞を活性化する様々な方法がこの技術分野では広く知られており、これらは本発明の適用に対して容易に適合化することができる；例示的な方法が下記の実施例において記載される。本開示に関連して使用されるための単離方法には、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）システムの活性化・拡大キット、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ（商標）活性化キット、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＭＡＣＳ（商標）活性化／拡大キット、および関連した細胞の活性化部分に対して特異的である他の市販の細胞キットが含まれるが、これらに限定されない。免疫細胞の特定の亜集団が、そのようなキットにおいて利用可能なビーズまたは他の薬剤の使用により活性化または拡大される場合がある。例えば、α－ＣＤ３／α－ＣＤ２８ ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）が、単離されたＴ細胞の集団を活性化し、また拡大するために使用される場合がある。

【0212】

＜治療的適用＞本開示の様々な方法局面が、腫瘍／ガンを抑制することをその必要性のある対象において行うための、および／または、処置を必要としているガン患者を処置するための方法に関連する。いくつかの実施形態において、ガンは、血液および／または骨髄を冒すガンである。いくつかの実施形態において、ガンは急性骨髄性白血病である。いくつかの実施形態において、腫瘍／ガン細胞はＦＬＴ３を発現し、またはＦＬＴ３を過剰発現する。ある特定の実施形態において、これらの方法は、効果的な量の上記単離された細胞を上記対象または患者に投与することを含み、あるいは代替では、効果的な量の上記単離された細胞を上記対象または患者に投与することから本質的になり、さらにあるいは、効果的な量の上記単離された細胞を上記対象または患者に投与することからなる。さらなる実施形態において、この単離された細胞は、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む。さらにさらなる実施形態において、この単離された細胞はＴ細胞またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、この単離された細胞は、処置される対象または患者に対して自己である。さらなる局面において、腫瘍／ガンはＦＬＴ３を発現し、対象は、診断によって、例えば、本明細書中に記載される診断などによって処置のために選択されている。対象は、動物、哺乳動物、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ネズミまたはヒトの患者である。

【0213】

本明細書中に開示されるようなＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞は、単独で、あるいは、希釈剤、既知の抗ガン治療剤との組合せ、および／または、他の成分（例えば、サイトカインなど）、もしくは免疫調節性である他の細胞集団との組合せで、そのどちらであっても投与される場合がある。上記細胞は、第一選択の治療、第二選択の治療、第三選択の治療またはさらなる治療として投与することができる。さらなる治療の限定されない例には、細胞減少療法（例えば、放射線療法、寒冷療法または化学療法など）、または生物学的なもの（例えば、造血幹細胞移植などの）が含まれる。いくつかの実施形態において、ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞は、これらの限定されない例示的な治療法のいずれか１つの前または後において、例えば、造血幹細胞移植の前に、あるいは放射線療法または化学療法の後で投与される場合がある。さらなる限定されない例には、他の関連した細胞タイプが含まれ、例えば、非改変の免疫細胞、１つまたは複数の免疫調節分子を発現するベクターを含む改変された免疫細胞、あるいは、本明細書中に開示される抗原とは異なる抗原に対して特異的であるＣＡＲ細胞などが含まれる。本開示のＣＡＲ細胞の場合と同様に、いくつかの実施形態において、これらの細胞は自己または同種である場合がある。適切な処置計画が、処置する医師または獣医によって決定されるであろう。

【0214】

本開示の医薬組成物は、処置すべき、または防止すべき疾患に対して適切な様式で投与され得る。投与量および投与頻度が、患者の状態、ならびに患者の疾患のタイプおよび重篤度のような要因によって決定されるであろう。だが、適切な投薬量が臨床試験によって決定され得る。１つの局面において、本開示の医薬組成物は直接の注入によって直接に投与され、あるいは、例えば、静脈内注射または静脈内注入などによって全身投与される。

【0215】

ＣＡＲ発現細胞の総用量は、例えば、上記で開示された要因に依存して変化し得る。いくつかの実施形態において、用量は、１細胞～１０^１０細胞の程度である場合がある：例えば、少なくとも１０細胞、少なくとも１０^１細胞、少なくとも１０^２細胞、少なくとも１０^３細胞、少なくとも１０^４細胞、少なくとも１０^５細胞、少なくとも１０^６細胞、少なくとも１０^７細胞、最大でも１０^８細胞、最大でも１０^９細胞、最大でも１０^１０細胞、１０^２細胞～１０^１０細胞の間、１０^３細胞～１０^９細胞の間、１０^４細胞～１０^８細胞の間。いくつかの実施形態において、用量はさらに、桁に対する整数係数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８または９）よって制限される場合があり、それにより、下記の限定されない例に従って列挙される用量範囲がもたらされる：５×１０^４～１×１０^８の間。

【0216】

＜自殺遺伝子＞ＣＡＲをコードする単離された核酸配列の一部として自殺遺伝子を伴う実施形態において、この自殺遺伝子は、ＣＡＲ発現細胞を治療終了時に終了させるために利用される場合がある。自殺遺伝子を含むＣＡＲ発現細胞を伴う様々な方法局面において、自殺遺伝子は、ＦＬＴ３特異的なＣＡＲ細胞応答がもはや必要でない時点での誘導剤分子の導入により誘導される場合がある。自殺遺伝子の誘導により、ＣＡＲ細胞のアポトーシスがもたらされる。したがって、誘導性自殺遺伝子を含むＣＡＲ構築物の使用により、ＣＡＲ細胞適用の安全性が、誘導されたアポトーシスを介してＣＡＲ発現細胞が除かれることによって強化され得ることが意図される。誘導剤（例えば、限定されないが、小分子など）が使用される実施形態において、自殺発現を誘導するために適用される誘導剤の用量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重～１０．０ｍｇ／ｋｇ体重の間でのどのような範囲であってもよく、または代替では０．０１ｍｇ／ｋｇから１．０ｍｇ／ｋｇまでの範囲およびその間での範囲である場合がある。

【0217】

＜診断適用＞本開示の様々な局面により、患者が、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性が高いか、または、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性がないかを明らかにするための例示的な方法が提供される。具体的な実施形態において、この方法は、患者から単離される生物学的サンプルを効果的な量の抗ＦＬＴ３抗体と接触させ、腫瘍サンプルに結合したいくらかの抗体の存在を検出することを含む。さらなる実施形態において、腫瘍サンプルに結合した抗体の存在により、患者は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性が高いことが示され、また、腫瘍サンプルに結合した抗体の非存在により、患者は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性がないことが示される。いくつかの実施形態において、上記方法では、腫瘍またはガンに関連する診断マーカーまたは遺伝子発現プロファイルの使用が伴う。限定されない一例が、ＡＭＬについてのマーカーＣＤ４５^ｄｉｍＳＳＣ^{ｍｅｄｉｕｍ}の使用である。いくつかの実施形態において、上記方法は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療に応答する可能性が高いことが明らかにされる患者に、効果的な量のＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞を投与するさらなる工程を含む。いくつかの実施形態において、患者は、ＦＬＴ３を発現するガン／腫瘍を有し、かつ／または、ＦＬＴ３を発現するガン／腫瘍と診断される。いくつかの実施形態において、ガン／腫瘍はＡＭＬである。
［Ｖ． キャリア］

【0218】

本開示のさらなる局面が、キャリアと、本明細書中に開示される実施形態において記載される製造物（例えば、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離された細胞、ＦＬＴ３ ＣＡＲおよび免疫調節分子ならびに／あるいはそのようなものをコードする核酸を含有する単離された核酸、ベクター、単離された細胞）の１つまたは複数とを含む組成物、あるいは代替では、キャリアと、本明細書中に開示される実施形態において記載される製造物（例えば、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離された細胞、ＦＬＴ３ ＣＡＲおよび免疫調節分子ならびに／あるいはそのようなものをコードする核酸を含有する単離された核酸、ベクター、単離された細胞）の１つまたは複数とから本質的になる組成物、さらにあるいは、キャリアと、本明細書中に開示される実施形態において記載される製造物（例えば、ＦＬＴ３ ＣＡＲ、ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離された細胞、ＦＬＴ３ ＣＡＲおよび免疫調節分子ならびに／あるいはそのようなものをコードする核酸を含有する単離された核酸、ベクター、単離された細胞）の１つまたは複数とからなる組成物に関連する。

【0219】

簡単に記載すると、１つまたは複数の薬学的または生理学的に許容され得るキャリア、希釈剤または賦形剤との組合せで、本明細書中に記載されるような特許請求されている組成物のいずれか１つ（これに限定されない）を含む本開示の医薬組成物。そのような組成物は、緩衝液（例えば、中性緩衝化生理的食塩水およびリン酸塩緩衝化生理的食塩水など）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなど）、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシンなど）、抗酸化剤、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなど）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および防腐剤を含む場合がある。本開示の組成物は、経口投与、静脈内投与、局所投与、経腸投与および／または非経口投与のために配合される場合がある。ある特定の実施形態において、本開示の組成物は静脈内投与のために配合される。

【0220】

上記細胞または組成物の投与を、１回の服用で、または一連の処置を通して連続的もしくは断続的に行うことができる。投与の最も効果的な手段および投薬量を決定する様々な方法が当業者には知られており、これらの方法は、治療のために使用される組成物、当該治療の目的および処置される対象とともに変化するであろう。単回または多数回の投与を、処置医師によって選択される用量レベルおよび服用パターンにより行うことができる。好適な投薬配合物、および上記作用物質を投与する様々な方法がこの技術分野では知られている。さらなる局面において、本開示の細胞および組成物は他の処置との組合せで投与することができる。

【0221】

上記細胞および細胞集団が、この技術分野において知られている方法、および、例えば、ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６４１９１に記載される方法を使用して宿主に投与される。本開示の細胞または組成物のこの投与は、実験アッセイおよびスクリーニングアッセイのための、所望の疾患、障害または状態の動物モデルを作製するために行うことができる。
［ＶＩ． キット］

【0222】

本明細書中に示されるように、本開示は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞を作製するための方法、および、ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞を投与するための方法を提供する。１つの特定の局面において、本開示は、これらの方法を実施するためのキット、同様にまた、本開示の方法を行うための説明書、例えば、細胞および／または組織を採取すること、ならびに／あるいは、スクリーニング／形質導入／その他を行うこと、ならびに／あるいは、結果を分析することなどのための説明書を提供する。

【0223】

１つの局面において、キットは、本明細書中に開示される単離された核酸、および／または上記核酸を含むベクター、および／または単離された同種細胞（好ましくはＴ細胞またはＮＫ細胞）、および／または自己細胞を患者から獲得することに関する説明書のいずれか１つを含み、あるいは代替では、本明細書中に開示される単離された核酸、および／または上記核酸を含むベクター、および／または単離された同種細胞（好ましくはＴ細胞またはＮＫ細胞）、および／または自己細胞を患者から獲得することに関する説明書のいずれか１つから本質的になり、さらにあるいは、本明細書中に開示される単離された核酸、および／または上記核酸を含むベクター、および／または単離された同種細胞（好ましくはＴ細胞またはＮＫ細胞）、および／または自己細胞を患者から獲得することに関する説明書のいずれか１つからなる。そのようなキットはまた、ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞の形質導入および／または選択および／または活性化および／または拡大のために適している培地および他の試薬（例えば、本明細書中に開示される培地および他の試薬など）を含む場合があり、あるいは代替では、ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞の形質導入および／または選択および／または活性化および／または拡大のために適している培地および他の試薬（例えば、本明細書中に開示される培地および他の試薬など）から本質的になる場合があり、さらにあるいは、ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞の形質導入および／または選択および／または活性化および／または拡大のために適している培地および他の試薬（例えば、本明細書中に開示される培地および他の試薬など）からなる場合がある。

【0224】

１つの局面において、キットは、単離されたＣＡＲ発現細胞またはその集団を含み、あるいは代替では、単離されたＣＡＲ発現細胞またはその集団から本質的になり、さらにあるいは、単離されたＣＡＲ発現細胞またはその集団からなる。いくつかの実施形態において、このキットの細胞は、その必要性のある対象への投与に先立つ活性化および／または拡大を必要とする場合がある。さらなる実施形態において、キットは、単離されたＣＡＲ発現細胞の活性化および／または拡大を行うための培地および試薬（例えば、上記の開示において包含される培地および試薬など）をさらに含む場合があり、あるいは、単離されたＣＡＲ発現細胞の活性化および／または拡大を行うための培地および試薬（例えば、上記の開示において包含される培地および試薬など）から本質的になる場合がある。いくつかの実施形態において、細胞は、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療のために使用されることになる。さらなる実施形態において、キットは、ＦＬＴ３ ＣＡＲ治療を必要としている患者への上記単離された細胞の投与に関する説明書を含む。

【0225】

本開示のキットはまた、例えば、緩衝剤、防腐剤またはタンパク質安定化剤を含むことができる。キットはさらに、検出可能な標識を検出するために必要な成分（例えば、酵素または基質など）を含むことができる。キットはまた、アッセイし、試験サンプルと比較することができるコントロールサンプルまたは一連のコントロールサンプルを含有することができる。キットの各成分を個々の容器に納めることができ、そして、様々な容器のすべてを、当該キットを使用して行われるアッセイの結果を解釈するための説明書と一緒に１つの包装物の中に入れることができる。本開示のキットは製品書をキット容器の表面または中に含有する場合がある。製品書には、キットに含有される試薬の使用方法が記載される。

【0226】

受け入れられ得るように、これらの示唆されたキット成分は、当業者による使用のために慣例的である様式で包装される場合がある。例えば、これらの示唆されたキット成分は、溶液で、または液体分散物などとして提供される場合がある。

【0227】

下記の実施例は、本開示を実施する際の様々な場合において使用することができる手順を例示するものである。
［実施例１－ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現Ｔ細胞の作製］

【0228】

ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現Ｔ細胞を作製するために、ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを作製した。上記ＣＡＲのそれぞれを図１における構築物に従って設計した。健常なドナーからの初代Ｔ細胞を、ＣＤ３抗体およびＣＤ２８抗体を使用して拡大し、その後、図１の構築物による形質導入に供した。ＣＡＲ発現Ｔ細胞を、ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩによって単離した。
［実施例２－ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現Ｔ細胞は急性骨髄性白血病細胞をインビトロにおいて標的とする］

【0229】

ＦＬＴ３特異的Ｔ細胞は原発性ＡＭＬ細胞を死滅させることができるかを評価するために、ペアマッチさせたＣＤ１９－ＣＡＲ発現Ｔ細胞およびＦＬＴ３ ＣＡＲ発現Ｔ細胞、ならびに、空ベクター形質導入のコントロールを、標準的な４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞と共培養した。ＣＤ１９－ＣＡＲ発現Ｔ細胞およびコントロールの両方とは対照的に、ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞株は、試験されたＭＯＬＭ－１３細胞を強く溶解した；図３；これらの結果は、ｐ＜０．０１で有意であった。
[実施例３－ＣＡＲ Ｔ細胞の効力のインビボ評価]

【0230】

１×１０^７個のＡＭＬ細胞（細胞株（例えば、ＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ）またはＡＭＬ患者から採取されたもの）を、ＮＯＤ ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウスに注入する。マウスを、診断方法（例えば、インビボ画像化など）を使用してＡＭＬ細胞成長についてモニターする。ＡＭＬがマウスにおいて確立されると、マウスを処置群に分け、マウスに、単回で、または多数の時間間隔にわたって注入される１×１０^６細胞～１×１０^８細胞の間での用量のＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞を投与する。腫瘍抑制をモニターし、生存データを集める。

【0231】

ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現細胞は、ＡＭＬ陽性マウスに対する治療効果を有することが見出される。
［実施例４－ＦＬＴ３発現Ｔ細胞の作製］

【0232】

［材料および方法］

【0233】

＜細胞培養＞すべての細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。これらはＤＮＡプロファイリングにより確認されている。

【0234】

＜マウス＞６週齢～８週齢のオスのＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ－２Ｒガンマヌル（ＮＳＧ）マウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを白血病について頻繁にモニターした。すべての動物研究はオハイオ州立大学動物管理使用委員会によって承認された。

【0235】

ｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａカセットを用いたＦＬＴ３特異的ＣＡＲレンチウイルス構築物の作製：重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域のための、ＦＬＴ３をコードするドメイン配列を別々に増幅し、重複ＰＣＲ反応によってリンカーを使用して組換えた。ＶＨ－リンカー－ＶＬフラグメントを、ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ部分とインフレームで組み込んだ。その後、抗ＦＬＴ３－ｓｃＦｖ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフラグメント全体を、ｐＣＤＨと称されるレンチウイルスベクターに連結して、ｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物を作製した。その後、ｉＣａｓｐ９－Ｔ２ＡカセットをｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲに組み込んで、完全なｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａ－ｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲを組み立てた。

【0236】

＜Ｔリンパ球へのレンチウイルス形質導入＞初代Ｔリンパ球を、本発明者らの以前の報告において記載されるようにヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離した。レンチウイルスによるトランスフェクションおよび感染のプロトコルは本発明者らの以前の報告から改変された。Ｃｈｕ他（２０１４）、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２８：９１７～９２７；Ｈａｎ他（２０１５）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ、５：１１４８３。

【0237】

＜フローサイトメトリー分析＞細胞表面におけるＦＬＴ３－ＣＡＲ発現を検出するために、ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入される初代Ｔ細胞を洗浄緩衝液（ＰＢＳにおける４％ウシ血清アルブミン）により洗浄し、ビオチン標識されたヤギ抗マウス（Ｆａｂ）２ポリクローナル抗体またはイソタイプコントロールとしての正常ポリクローナルヤギ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により染色した。その後、細胞をアロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）およびＶ４５０とコンジュゲート化された抗ＣＤ３ζ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とインキュベーションした後で、細胞をさらに、ＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターで処理した。加えて、白血病細胞の表面におけるＦＬＴ３の発現もまた、腫瘍細胞をフィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲート化マウス抗ＦＬＴ３ ｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により染色した後で、ＢＤ ＬＳＲＩＩフローメーターにより分析した。データ分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウエア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して行った。

【0238】

＜免疫ブロッティング＞免疫ブロッティングを、本発明者らの研究室における改変プロトコルに従って行った。詳しく記載すると、細胞を最初、ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液において溶解した。その後、溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルによって分離し、ＰＶＤＦメンブラン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に転写した。メンブレンをマウス抗ヒトＣＤ３ζｍＡｂ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によりプローブし、その後、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体によりプローブした。抗体結合が、増強化学発光試薬（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用することによって明らかにされた。

【0239】

＜細胞傷害性アッセイ＞標準的な４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイを以前の記載のように行った。Ｙｕ他、Ｂｌｏｏｄ、１１５：２７４～２８１（２０１０）。簡単に記載すると、標的細胞を^５１Ｃｒにより標識し、９６ウエルのＶ底プレートにおいて様々なエフェクター／標的比（Ｅ／Ｔ）で、３７℃で４時間、初代Ｔ細胞、または、ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入される初代Ｔ細胞、または、模擬ベクターにより形質導入される初代Ｔ細胞と共培養した。上清を集め、液体シンチレーションカクテル（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するシンチレーションバイアルに移し、^５１Ｃｒの放出をＴｏｐＣｏｕｎｔカウンター（Ｃａｎｂｅｒｒａ Ｐａｃｋａｒｄ）で測定した。完全培地または１％のＳＤＳにおいてインキュベーションされる標的細胞を使用して、^５１Ｃｒの自然放出または最大放出を求めた。特異的溶解の割合を、下記の標準的な式を使用して計算した：１００×（ｃｐｍ［実験放出］－ｃｐｍ［自然放出］）／（ｃｐｍ［最大放出］－ｃｐｍ［自然放出］）。

【0240】

＜サイトカイン放出アッセイ＞標的細胞を９６ウェルのＶ底プレートにおいて３７℃で２４時間、等しい数のエフェクター細胞と共培養した。細胞非含有の上清を集め、Ｒ＆Ｄシステムから得られる対応するＥＬＩＳＡキットを製造業者のプロトコルに従って使用するＥＬＩＳＡによってＩＦＮ－ガンマおよびインターロイキン（ＩＬ）－２の分泌について評価した。

【0241】

＜白血病を有するマウスのインビボ処置およびバイオルミネセンス画像化＞ＭＯＬＭ１３細胞に対して、ホタルルシフェラーゼを発現するＰｉｎｃｏ－ｐＧＬ３－ｌｕｃ／ＧＦＰウイルスによるレトロウイルス形質導入を行い、ＧＦＰ陽性細胞を、前述の方法を使用して選別し、これにより、ＭＯＬＭ１３－ＧＬ３細胞を得た。オスのＮＳＧマウスに、４００ｍＬのＰＢＳにおける８×１０^６個のＭＯＬＭ１３－ＧＬ３細胞を、異種移植片同所性白血病モデルを樹立するために０日目に尾静脈を介して静脈内注入した。９日目および１６日目に、マウスに、４００ｍＬのＰＢＳにおける１．０ｘ１０^６個のエフェクター細胞、すなわち、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入のＴ細胞または偽（Ｍｏｃｋ）形質導入されたコントロール細胞を、尾静脈注入を介して静脈内投与した。白血病細胞を接種した５週間後に、マウスにＤ－ルシフェリン（１５０ｍｇ／ｋｇ体重；Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を腹腔内注入し、マウスをイソフルランにより麻酔し、Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＶＩＳ）をＬｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウエア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）とともに使用して画像化した。

【0242】

＜統計学分析＞対応のないスチューデントｔ検定を、正規分布しているならば、２つの独立した群を連続エンドポイントについて比較するために使用した。一元配置ＡＮＯＶＡを、３つ以上の独立した群が比較されるときには使用した。生存データについては、カプラン・マイヤー曲線をプロットし、ログランク検定を使用して比較した。すべての検定が両側検定であった。Ｐ値を、ボンフェローニの方法を使用する多重比較のために調整した。０．０５未満のＰ値が、統計的に有意であるとみなされる。

【0243】

結果が図４～図７に示される。
［実施例５－ＦＬＴ３発現ＮＫ細胞の作製］

【0244】

ＮＫ細胞を、ＣＤ２８－ＣＤ３ζ共刺激シグナル伝達ドメインを組み込むＦＬＴ３特異的ＣＡＲを発現するように操作した。副作用を避けるために、ｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａカセットを、ＣＡＲ改変ＮＫ細胞がガン死滅後に根絶されるようにＦＬＴ３特異的ＣＡＲに組み込んだ。ＦＬＴ３特異的ＣＡＲにより操作されたＮＫ細胞の抗白血病能をインビトロで、また、同所性異種移植片マウスモデルでのインビボで評価した。結果から、ＦＬＴ３－ＣＡＲの発現は、ＮＫ細胞を、インビトロおよびインビボの両方でのＦＬＴ３発現の白血病細胞に対する応答における特異的に増強されたサイトカイン放出および細胞傷害性に仕向けることができたこと、そして、この事象がＦＬＴ３依存的であったが明らかにされた。さらには、同所性白血病マウスモデルにおいて、ＦＬＴ３指向ＮＫ細胞はマウスの生存を有意に延長させた。まとめると、本発明者らのデータは、ＦＬＴ３に仕向けられたＮＫ細胞が再発白血病に対する有望な治療法を表していることを示唆する。

【0245】

［材料および方法］

【0246】

＜細胞培養＞すべての細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。これらはＤＮＡプロファイリングにより確認されている。

【0247】

＜マウス＞６週齢～８週齢のオスのＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ－２Ｒガンマヌル（ＮＳＧ）マウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを白血病について頻繁にモニターした。すべての動物研究はオハイオ州立大学動物管理使用委員会によって承認された。

【0248】

＜ｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａカセットを用いたＦＬＴ３特異的ＣＡＲレンチウイルス構築物の作製＞重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域のための、ＦＬＴ３をコードするドメイン配列を別々に増幅し、重複ＰＣＲ反応によってリンカーを使用して再結合した。ＶＨ－リンカー－ＶＬフラグメントを、ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ部分との読み枠を合わせて組み込んだ。その後、抗ＦＬＴ３－ｓｃＦｖ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚフラグメント全体を、ｐＣＤＨと称されるレンチウイルスベクターに連結して、ｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物を作製した。その後、ｉＣａｓｐ９－Ｔ２ＡカセットをｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲに組み込んで、完全なｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａ－ｐＣＤＨ－ＦＬＴ３－ＣＡＲを組み立てた。

【0249】

＜ＮＫリンパ球へのレンチウイルス形質導入＞レンチウイルスによるトランスフェクションおよび感染のプロトコルは本発明者らの以前の報告から改変された。Ｃｈｕ他（２０１４）、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２８：９１７～９２７；Ｈａｎ他（２０１５）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ、５：１１４８３。

【0250】

＜フローサイトメトリー分析＞細胞表面におけるＦＬＴ３－ＣＡＲ発現の検出のために、形質導入されたＮＫ細胞を、４％のウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳにより洗浄し、ビオチン標識されたヤギ抗マウス（Ｆａｂ）２ポリクローナル抗体またはイソタイプコントロールとしての正常ポリクローナルヤギ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とインキュベーションした。その後、細胞をアロフィコシアニン（ＡＰＣ）コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）およびＶ４５０にコンジュゲート化された抗ＣＤ３抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により染色した。白血病細胞の表面におけるＦＬＴ３の発現を明らかにするために、細胞をフィコエリトリン（ＰＥ）コンジュゲート化マウス抗ＦＬＴ３ ｍＡｂ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により染色した。抗体染色を、ＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターを用いて分析した。データ分析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウエア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して行った。

【0251】

＜免疫ブロッティング＞細胞をｌａｅｍｍｌｉ緩衝液において溶解した。溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルによって分離し、ＰＶＤＦメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に転写した。メンブレンをマウス抗ヒトＣＤ３ζｍＡｂ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によりプローブし、その後、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体によりプローブした。抗体結合が、増強化学発光試薬（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を使用することによって明らかにされた。

【0252】

＜ＦＬＴ３を安定的に発現するＮＫ－９２細胞の作製＞レンチウイルスによるトランスフェクションおよび感染のプロトコルは本発明者らの以前の報告から改変された。Ｃｈｕ他（２０１４）、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２８：９１７～９２７；Ｈａｎ他（２０１５）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ、５：１１４８３。

【0253】

＜細胞傷害性アッセイ＞標準的な４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイを以前の記載のように行った。Ｙｕ他、Ｂｌｏｏｄ、１１５：２７４～２８１（２０１０）。簡単に記載すると、標的細胞を^５１Ｃｒにより標識し、９６ウエルのＶ底プレートにおいて様々なエフェクター／標的比（Ｅ／Ｔ）で、３７℃で４時間、ＮＫ細胞と共培養した。上清を集め、液体シンチレーションカクテル（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するシンチレーションバイアルに移し、^５１Ｃｒの放出をＴｏｐＣｏｕｎｔカウンター（Ｃａｎｂｅｒｒａ Ｐａｃｋａｒｄ）で測定した。完全培地または１％のＳＤＳにおいてインキュベーションされる標的細胞を使用して、^５１Ｃｒの自然放出または最大放出を求めた。特異的溶解の割合を、下記の標準的な式を使用して計算した：１００×（ｃｐｍ［実験放出］－ｃｐｍ［自然放出］）／（ｃｐｍ［最大放出］－ｃｐｍ［自然放出］）。

【0254】

サイトカイン放出アッセイ：標的細胞を９６ウエルのＶ底プレートにおいて３７℃で２４時間、等しい数のエフェクター細胞と共培養した。細胞非含有の上清を集め、Ｒ＆Ｄシステムから得られる対応するＥＬＩＳＡキットを製造業者のプロトコルに従って使用するＥＬＩＳＡによってＩＦＮ－ガンマおよびインターロイキン（ＩＬ）－２の分泌について評価した。

【0255】

＜白血病を有するマウスのインビボ処置およびバイオルミネセンス画像化＞ＭＯＬＭ１３細胞に対して、ホタルルシフェラーゼを発現するＰｉｎｃｏ－ｐＧＬ３－ｌｕｃ／ＧＦＰウイルスでレトロウイルス形質導入を行い、ＧＦＰ陽性細胞を、前述の方法を使用して選別し、これにより、ＭＯＬＭ１３－ＧＬ３細胞を得た。オスのＮＳＧマウスに、４００ｍＬのＰＢＳにおける８×１０^６個のＭＯＬＭ１３－ＧＬ３細胞を、異種移植片同所性白血病モデルを樹立するために０日目に尾静脈を介して静脈内注入した。７日目および１４日目に、マウスに、４００ｍＬのＰＢＳにおける１．０ｘ１０^６個のエフェクター細胞（ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入のＮＫ細胞または模擬形質導入されたコントロール細胞）を、尾静脈注入を介して静脈内投与した。白血病細胞を接種した５週間後に、マウスにＤ－ルシフェリン（１５０ｍｇ／ｋｇ体重；Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を腹腔内注入し、マウスをイソフルランにより麻酔し、Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＶＩＳ）をＬｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウエア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）とともに使用して画像化した。

【0256】

＜統計学分析＞対応のないスチューデントｔ検定を、正規分布しているならば、２つの独立した群を連続エンドポイントについて比較するために使用した。一元配置ＡＮＯＶＡを、３つ以上の独立した群が比較されるときには使用した。生存データについては、カプラン・マイヤー曲線をプロットし、ログランク検定を使用して比較した。すべての検定が両側検定であった。Ｐ値を、ボンフェローニの方法を使用する多重比較のために調整した。０．０５未満のＰ値が、統計的に有意であると見なされる。

【0257】

［結果］

【0258】

＜ＦＬＴ３－ＣＡＲの作製およびＣＡＲ形質導入のＮＫ細胞におけるその発現＞ＰＣＤＨレンチウイルスベクター骨格を使用して、ｉＣａｓｐ９－Ｔ２Ａカセット、シグナルペプチド（ＳＰ）、重鎖可変領域（ＶＨ）、リンカー、軽鎖可変領域（ＶＬ）、Ｍｙｃタグ、ヒンジ、ＣＤ２８およびＣＤ３ζを含有する特異的なＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物（図８Ａ）を組み立てた。その後、ＮＫ－９２細胞株に対して、上記ＣＡＲ構築物およびコントロールの空ベクターにより形質導入を行った。さらには、形質導入されたＮＫ－９２細胞株をＧＦＰ（ベクターによって発現される蛍光マーカー）の発現について選別した。選別された細胞および元のＮＫ－９２細胞の抗ＣＤ３ζによる免疫ブロッティングでは、ＦＬＴ３－ＣＡＲが首尾よく導入され、発現することが明らかにされた。図８Ｂに示されるように、キメラなＦＬＴ３－ＳｃＦｖ受容体が、元の細胞およびコントロールベクター形質導入の細胞の場合よりもむしろ、ＣＡＲ形質導入のＮＫ－９２細胞において発現した。さらには、フロー分析では、細胞表面におけるＦＬＴ３－ＣＡＲの発現が、元のＮＫ－９２細胞および形質導入されたＮＫ－９２細胞を抗マウスＦａｂ抗体により染色することによって明らかにされ（この抗体により、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入ＮＫ－９２細胞の８９．４％におけるＳｃＦｖの発現が検出された）、これに対して、ＳｃＦｖ発現が、元ＮＫ－９２細胞のおよびモック形質導入のＮＫ－９２細胞に関してはほとんど検出できないままであった（図８Ｃ）。

【0259】

＜ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞はＦＬＴ３^＋白血病細胞を認識し、偽形質導入のＮＫ－９２細胞よりも効率的に死滅させる＞ＦＬＴ３－ＣＡＲ ＮＫ－９２細胞がＦＬＴ３^＋白血病細胞をＦＬＴ３^－白血病細胞よりも良好に特異的に根絶するかどうかを明らかにするために、白血病細胞株のＭＯＬＭ１３およびＥＯＬ－１は一貫してＦＬＴ３を発現し、これに対して、ＦＬＴ３の発現がＵ９３７の表面では検出できないままであることが確認された（図９Ａ）。その後、ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入されるＮＫ－９２細胞が、元のＮＫ－９２細胞および模擬形質導入のＮＫ－９２細胞と比較してＦＬＴ３^＋白血病細胞株のＭＯＬＭ１３およびＥＯＬ－１を根絶するその能力における改善を有意にもたらすことを明らかにするクロム－５１放出アッセイを行った。しかしながら、白血病細胞を死滅させることにおける増強はＦＬＴ３^＋依存的である。ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入されるＮＫ－９２細胞は、ＦＬＴ３^－細胞株Ｕ９３７を死滅させる能力における検出可能な違いを示さなかった（図９Ｂ）。さらには、ＦＬＴ３^＋白血病細胞株がＣＡＲ－ＦＬＴ３形質導入のＮＫ－９２によって認識されることにより、強いＩＦＮ－γ放出が、元のＮＫ－９２細胞および偽形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して誘導された。ＣＡＲ－ＦＬＴ３が形質導入されるＮＫ－９２細胞によるＩＦＮ－γ放出の強い誘導が、元のＮＫ－９２細胞および偽形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して、ＦＬＴ３^－細胞株Ｕ９３７では生じなかった（図９Ｃ）。同様の結果が、コントロール細胞株のＵ９３７およびＦＬＴ３^＋ ＭＯＬＭ１３と共培養されたときの、元のＮＫ－９２細胞、および、ＦＬＴ３－ＣＡＲ構築物または模擬物により形質導入されるＮＫ－９２細胞におけるＩＦＮ－γのｍＲＮＡレベルによって証明された（図９Ｃ）。

【0260】

＜ＦＬＴ３－ＣＡＲ操作のＮＫ－９２細胞はエクスビボでの原発性白血病をより効果的に根絶する＞ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入されるＮＫ－９２細胞が、元のＮＫ－９２細胞および偽形質導入のＮＫ－９２細胞よりも強い抗腫瘍応答を誘導するかどうかを明らかにするために、患者からの白血病細胞を単離し、これらの腫瘍細胞の表面におけるＦＬＴ３の発現を確認した（図１０Ａ）。その後、クロム５１放出アッセイを、２名の患者から単離されるＦＬＴ３^＋腫瘍細胞に適用した。ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞は、元のＮＫ－９２細胞および模擬形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して、ＦＬＴ３の発現とともに、腫瘍細胞溶解のより強い能力を示した（図１０Ｂ）。しかしながら、ＦＬＴ３－ＣＡＲ ＮＫ－９２細胞は、わずかに増強された細胞溶解活性を正常なコントロール者からの正常な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対して示すことができただけであった（図１０Ｂ）。加えて、サイトカイン放出アッセイを、ＥＬＩＳＡによって測定されるＩＦＮ－γの分泌を調べるために行った。細胞溶解活性に関するデータと一致して、ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞は、患者由来のＦＬＴ３^＋ ＰＢＭＣと共培養したとき、元のＮＫ－９２細胞または模擬形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して、より多くのＩＦＮ－γを放出した。さらには、ＦＬＴ３－ＣＡＲ操作のＮＫ－９２によってもたらされるサイトカイン応答における増強が、正常なコントロール者に由来するＰＢＭＣと共培養したときには消失した（図１０Ｃ）。さらなるリアルタイムＰＣＲ実験により、ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞は、変異した高レベルのＦＬＴ３を有する患者から単離されるＰＢＭＣとの共培養の後では、元のＮＫ－９２細胞および偽形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して、より多くのＩＦＮ－γをｍＲＮＡレベルにおいて産生することが確認された（図１０Ｃ）。患者の腫瘍細胞の表面に発現されるＦＬＴ３がＦＬＴ３－ＣＡＲ操作のＮＫ－９２によって認識されることにより、該ＮＫ細胞の細胞溶解活性およびサイトカイン放出が高まった。

【0261】

＜ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入される初代ＮＫはＦＬＴ３^＋腫瘍細胞の認識および死滅を促進させる＞ＦＬＴ３－ＣＡＲを臨床に移すことができるかどうか、すなわち、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入の初代ＮＫ細胞が、白血病細胞株、とりわけ、ＦＬＴ３^＋の白血病細胞株、および、白血病患者から新たに単離される腫瘍細胞を効率よく認識し、死滅させ得るかどうかを明らかにすることを調べた。Ｄ１、Ｄ２およびＤ３と称される３名のドナーからの初代ＮＫを単離した。その後、ＦＬＴ３－ＣＡＲを、レンチウイルストランスフェクションを使用してこれらの初代ＮＫに導入し、組み込んだ。拡大後、これらの遺伝子改変された初代ＮＫを使用して、クロム－５１放出アッセイを行った。細胞傷害性アッセイでは、ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変の初代ＮＫが、模擬改変の初代ＮＫと比較して、ＦＬＴ３^＋白血病細胞株ＭＯＬＭ１３を５に等しいＥ／Ｔ比において効果的に死滅させ得ることが明らかにされた（図１１Ａ）。ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入された初代ＮＫの根絶活性をより臨床的に関連した状況においてさらに検証するために、患者から新たに単離される白血病細胞に対する遺伝子改変の初代ＮＫの細胞傷害性もまた、クロム－５１放出アッセイによって測定した。ＦＬＴ３－ＣＡＲが形質導入されるＮＫ－９２の細胞溶解活性に関する前述のデータと一致して、細胞傷害性が、白血病の患者から新たに単離される腫瘍細胞に対する応答において、ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変の初代ＮＫでは、モック改変の初代ＮＫの場合よりも大きな程度に生じた（図１１Ｂ）。

【0262】

［ＡＰ１９０３介入は、ｉＣａｓｐ９を有するＦＬＴ３－ＣＡＲ－ＮＫ９２を効果的に根絶する］ＣＡＲ媒介免疫療法の欠点を克服するために、誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）（いわゆる安全スイッチ）が、不適切に活性化されたＣＡＲ細胞の除去を可能にするために遺伝子改変ＣＡＲに導入される。Ｇａｒｇｅｔｔ他、Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、５：２３５（２０１４）を参照のこと。本実施例では、本発明者らのＦＬＴ３－ＣＡＲ（図８Ａ）へのｉＣａｓｐ９もまた導入された。ＡＰ１９０３介入がＣＡＲ改変ＮＫ細胞のアポトーシスを誘導し得るかどうかを検証するために、本発明者は最初に、元のＮＫ－９２細胞、偽形質導入のＮＫ－９２細胞、およびＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入のＮＫ－９２細胞におけるｉＣａｓｐ９の発現を調べた。リアルタイムＰＣＲでは、ｉＣａｓｐ９が、元のＮＫ－９２細胞および模擬形質導入のＮＫ－９２細胞よりもむしろ、ＣＡＲ改変のＮＫ－９２において実際に発現することが明らかにされた（図１２Ａ）。ＡＰ１９０３投与の４８時間後、７－ＡＡＤ染色では、ＡＰ１９０３介入はＣＡＲ改変ＮＫ－９２細胞の死を有意に誘導することができることが示された（図１２Ｂ）。さらに、アネキシンＶおよび７－ＡＤＤの二重染色、ならびにフロー分析では、４８時間のＡＰ１９０３介入は、元のＮＫ－９２細胞のアポトーシスよりもむしろ、ＣＡＲ操作のＮＫ－９２細胞のアポトーシスを有意に誘導することが確認された（図１２Ｄ）。ＣＡＲ改変のＮＫ－９２のアポトーシスがさらに、元のＮＫ－９２細胞よりもむしろ、ＣＡＲ改変のＮＫ－９２における切断カスパーゼ３の発現によって証明された（図１２Ｄ）。データは、ＡＰ１９０３介入が、ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞を免疫療法の期間中に効果的に除くために使用され得ることを明らかにした。

【0263】

＜ＦＬＴ３－ＣＡＲ操作のＮＫ－９２細胞は同所性異種移植片白血病モデルにおいて腫瘍保有マウスの白血病腫瘍成長を抑制し、腫瘍保有マウスの生存を延長する＞ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変ＮＫ－９２細胞の潜在的な治療的適用を、白血病が異種移植されたＮＳＧマウスモデルにおいて評価した。白血病細胞株を、ホタルルシフェラーゼを発現するように遺伝子改変した。その後、ＧＦＰに基づく選別を行って、遺伝子改変された白血病腫瘍細胞を単離し、選別された細胞をＮＳＧマウスに静脈内移植して、腫瘍成長を開始させた。その後、これらのマウスに、ＦＬＴ３－ＣＡＲ改変のＮＫ－９２細胞、偽形質導入のＮＫ－９２細胞、または元のＮＫ－９２細胞を静脈内注入した。ＩＶＩＳを使用するバイオルミネセンス画像化では、ＦＬＴ３－ＣＡＲ形質導入のＮＫ－９２細胞の注入により、全身腫瘍組織量が、元のＮＫ－９２細胞および模擬形質導入のＮＫ－９２細胞と比較して劇的に減少することが示された（図１３Ａ）。さらには、ＦＬＴ３－ＣＡＲ操作のＮＫ－９２細胞の処置では、腫瘍保有マウスの生存が、元のＮＫ－９２細胞および模擬形質導入のＮＫ－９２細胞の注入と比較した場合、著しく延長された（図１３Ｂ）。
［実施例６－異なる共刺激ドメインを含むＦＬＴ３ ＣＡＲ構築物の比較］

【0264】

クロム放出アッセイが、ＦＬＴ３ ＣＡＲ細胞の抗腫瘍効力を、ＣＤ２８共刺激ドメインが使用される場合の抗腫瘍効力と比較するために、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する免疫細胞と、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する免疫細胞とを用いて行われる。

【0265】

［同等物］
別途定義される場合を除き、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。

【0266】

例示的に本明細書中に記載される本発明の技術は、どのような要素または限定であっても、本明細書中に具体的に開示されていない要素（１つまたは複数）、限定（１つまたは複数）がない場合において好適に実施され得る。したがって、例えば、用語“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”（含む）、用語“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ”（含む）、用語“ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ”（含有する）などは、包括的に、かつ制限なく読み取られなければならない。加えて、本明細書中で用いられる用語および表現は、限定の用語としてではなく、説明の用語として使用されており、そのような用語および表現の使用においては、示される特徴および記載される特徴またはそれらの一部の同等物をどのようなものであっても除外するという意図は全くなく、しかし、様々な変更が、請求項に記載される本発明の技術の範囲内で可能であることが認識される。

【0267】

したがって、本明細書において提供される材料、方法および実施例は、好ましい局面を表すものであること、例示であること、および、本発明の技術の範囲に関する限定として意図されないことが理解されなければならない。

【0268】

本発明の技術が、本明細書中に概括的に、また包括的に記載されている。包括的な開示の範囲内に含まれるより狭い種のそれぞれおよび亜属群もまた、本発明の技術の一部を形成する。このことには、削除されているものが本明細書中に具体的に記載されているか否かにかかわらず、何らかの主題を属から除く但し書きまたは否定的限定を伴う本発明の技術の包括的記載が含まれる。

【0269】

加えて、本発明の技術の様々な特徴または局面がマーカッシュ群によって記載される場合、当業者は、本発明の技術がまたそれにより、どのような要素または亜群であっても、マーカッシュ群の個々の要素または様々な要素の亜群によって記載されていることを認識するであろう。

【0270】

本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それぞれが個々に参照により組み込まれていたかのようであるのと同じ程度に、それらの全体が参照により明確に組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が優先するものとする。

【0271】

他の局面が下記の請求項の範囲内において示される。

【図1】

【図2A-F】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【配列表】

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