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特許7058026新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-04-13
(45)【発行日】2022-04-21
(54)【発明の名称】新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/197 20060101AFI20220414BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20220414BHJP
A61K 31/28 20060101ALI20220414BHJP
A61K 31/295 20060101ALI20220414BHJP
A61K 31/30 20060101ALI20220414BHJP
A61K 31/315 20060101ALI20220414BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20220414BHJP
A61K 33/26 20060101ALI20220414BHJP
A61K 33/30 20060101ALI20220414BHJP
A61K 33/34 20060101ALI20220414BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220414BHJP
【ＦＩ】
A61K31/197
A61P31/14
A61K31/28
A61K31/295
A61K31/30
A61K31/315
A61K33/24
A61K33/26
A61K33/30
A61K33/34
A61P43/00 121
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2021072865
(22)【出願日】2021-04-22
(65)【公開番号】P2022008060
(43)【公開日】2022-01-13
【審査請求日】2021-05-21
(31)【優先権主張番号】P 2020076370
(32)【優先日】2020-04-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2020174820
(32)【優先日】2020-10-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】517198735
【氏名又は名称】ネオファーマジャパン株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】504205521
【氏名又は名称】国立大学法人 長崎大学
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】北 潔
(72)【発明者】
【氏名】森田 公一
(72)【発明者】
【氏名】安田 二朗
(72)【発明者】
【氏名】櫻井 康晃
(72)【発明者】
【氏名】河田 聡史
(72)【発明者】
【氏名】田中 徹
(72)【発明者】
【氏名】富岡 基康
(72)【発明者】
【氏名】藤根 清考
【審査官】福山 則明
(56)【参考文献】
【文献】米国特許第１０９８７３２９（ＵＳ，Ｂ１）
【文献】米国特許出願公開第２０２１／０３３０６２２（ＵＳ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１６３０８２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０００－５１０１２３（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１４／０１３６６４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／２１８５７７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Nature，2020年02月03日，Vol. 579，pp. 265-269
【文献】Free Radical Biology and Medicine，2020年10月19日，Vol. 161，pp. 263-271
【文献】Medical Hypotheses，2020年09月03日，Vol. 144, 110242，pp. 1-4
【文献】PLoS ONE，2008年，Vol. 3, issue 12, e4023，pp. 1-14
【文献】History of Changes for Study: NCT04542850，ClinicalTrials.gov archive [online], [retrieved on 2021.05.24]，2020年09月06日，Retrieved from the Internet: <URL: https://clinicaltrials.gov/ct2/history/NCT04542850?V_1=View#StudyPageTop>
【文献】European Journal of Pharmacology，2018年，Vol. 833，pp. 25-33
【文献】Am J Physiol Cell Physiol，2015年，Vol. 308，pp. C665-C672
【文献】International Journal of Molecular Sciences，2015年，Vol. 16，pp. 25865-25880
【文献】Biochemical and Biophysical Research Communications，2021年01月29日，Vol. 545，pp. 203-207
【文献】Frontiers in Veterinary Science，2021年02月10日，Vol. 8, Article 647189，pp. 1-6
【文献】bioRxiv (INTERNET ARCHIVE WAYBACK MACHINE) [online], [retrieved on 2021.05.17]，2020年11月05日，Retrieved from the Internet: <URL: https://web.archive.org/web/20201105145733/https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.04.30.071290v2>
【文献】Bioorganic Chemistry，2021年01月05日，Vol. 107, 104619，pp. 1-11
【文献】Journal of Molecular Medicine，2020年06月29日，Vol. 98，pp. 1053-1054
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０
Ａ６１Ｋ ３３／００－３３／４４
Ａ６１Ｐ ３１／１２－３１／２２
Ａ０１Ｐ １／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（Ｉ）【化1】
で示される化合物又はその塩を含有する新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
【請求項2】
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、請求項１に記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
【請求項3】
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有し、該金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする請求項１又は２記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
【請求項4】
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする請求項３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
【請求項5】
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする請求項３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤に関し、さらに詳しくは、５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）若しくはその誘導体又はそれらの塩を含む新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤およびこれを用いた新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防に関する。
【背景技術】
【0002】
新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）は、２０１９年１２月に発症例が報告された、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）によって引き起こされる新型肺炎である。新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ： ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を引き起こすＳＡＲＳ－ＣｏＶに類似性を有する、新規に同定されたウイルスである。新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）は肺炎症状の他、発熱、咳、息切れ、呼吸困難、悪寒、悪寒を伴う震え、筋肉痛、頭痛、咽頭痛、味覚障害、または嗅覚障害などの、幅広い症状を引き起こすことが知られている。新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）患者は世界各地で急速に増大しており、１５万人以上の死亡が報告されている。
【0003】
現在、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して特異的な治療法は存在しておらず、他のウイルスに対する既存薬の効果が試験されているが、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して効果を示す既存の抗ウイルス薬剤は限定されている（非特許文献１）。したがって、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して有効な、更なる治療薬の開発が急務となっている。
【0004】
さらに、最近では、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の変異株が複数検出されているが、これらの変異株は、従来株よりも、感染力が強い可能性、病原性が高い可能性、及び／または、従来株よりも免疫やワクチンの効果を低下させる可能性が指摘され、新たな臨床上の問題となっていることから（非特許文献３及び４）、これらの変異株に対しても有効な、更なる治療薬の開発が切望されている。
【0005】
５－ＡＬＡは、細胞内のミトコンドリア内で産生されるヘム系化合物の共通前駆体であり、最終的にプロトポルフィリン（ＰＰＩＸ）からヘム（Ｈｅｍｅ）に変換される５－ＡＬＡは特定の炎症性疾患に対して抗炎症作用を示すことなどが知られている。また、癌細胞の一部においてはＰＰＩＸからヘムへの変換の阻害によりＰＰＩＸが蓄積することが知られており、蓄積したＰＰＩＸを用いて癌細胞を可視化する研究が行われている（非特許文献２）。しかしながら、５－ＡＬＡおよびその誘導体が新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染、増殖および／またはウイルスタンパク質発現を抑制し新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療または予防し得ること、ならびにＰＰＩＸ排出阻害剤の併用が当該治療または予防効果を増強することは知られていなかった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
非特許文献１：Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０２０，Ｖｏｌ．３０，ｐｐ．２６９－２７１
【文献】Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１９，Ｖｏｌ．９，ｐｐ．ｎｏ．８６６６，ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１９－４４９８１－ｙ
【文献】Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ． ２０２１ Ｍａｒ １６． ｄｏｉ： １０．１００２／ｒｍｖ．２２３１
【文献】「新型コロナウイルス感染症（変異株）への対応」厚生労働省（ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｈｌｗ．ｇｏ．ｊｐ／ｃｏｎｔｅｎｔ／１０９０００００／０００７６６５４５．ｐｄｆ、アクセス日：２０２１年４月２０日）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明の課題は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤を提供することである。より詳細には、５－ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩を含む新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤を提供することである。また、別の態様において、５－ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩を用いた新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法を提供することである。別の態様において、本発明の課題は５－ＡＬＡ又はその誘導体又はそれらの塩とＰＰＩＸ排出阻害剤を併用し、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法、ならびに当該治療及び／又は予防のために用いるための医薬を提供することである。また別の態様において、本願発明は５－ＡＬＡ又はその誘導体又はそれらの塩を、好ましくはＰＰＩＸ排出阻害剤と併用して用いることにより、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染、増殖および／またはウイルス核酸もしくはタンパク質の発現を抑制する方法、ならびに当該方法に用いるための医薬を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者等は、上記課題解決に向けて鋭意研究を重ねた結果、全く意外にも５－ＡＬＡが新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因ウイルスである新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染、増殖および／またはウイルスタンパク質発現を抑制し、ＣＯＶＩＤ－１９を治療または予防することを見いだし、さらにＰＰＩＸ排出阻害剤を併用することで相乗的に優れた効果を有することを見出して本発明を完成した。
【0009】
５－ＡＬＡは、細胞内のミトコンドリア内で産生されるヘム系化合物の共通前駆体である。５－ＡＬＡは特定の炎症性疾患に対して抗炎症作用を示すことなどが知られていたが、５－ＡＬＡおよびその誘導体が新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染、増殖および／またはウイルスタンパク質発現を抑制し新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療または予防し得ることは知られていなかった。本発明は新たに、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療または予防するための、５－ＡＬＡおよびその誘導体を含有する医薬およびその使用を提供するものである。
【0010】
さらに、本発明者等は、５－ＡＬＡとクエン酸第一鉄ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｆｅｒｒｏｕｓ Ｃｉｔｒａｔｅ、ＳＦＣ）などの金属含有化合物を組み合わせて用いることにより、極めて優れた新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療または予防効果が得られることも見出した。
【0011】
すなわち、本発明は以下を提供する。
［項目１］
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を含有する新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目２］
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目３］
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目４］
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目５］
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目６］
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目７］
ＰＰＩＸ排出阻害剤と併用するための、項目１～６のいずれか１項記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目８］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、トランスポータ阻害剤またはエキソサイトーシス阻害剤である、項目７記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目９］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、ＡＢＣＧ２阻害剤またはダイナミン阻害剤である、項目７又は８記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目１０］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、ＡＢＣＧ２阻害剤である、項目７～９のいずれか１項記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目１１］
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法。
［項目１２］
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩の、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防における使用。
［項目１］
下記式（Ｉ）
【化1】
で示される化合物又はその塩を含有する新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目２］
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目３］
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目４］
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目５］
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目６］
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目７］
ＰＰＩＸ排出阻害剤と併用するための、項目１～６のいずれか１項記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目８］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、トランスポータ阻害剤またはエキソサイトーシス阻害剤である、項目７記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目９］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、ＡＢＣＧ２阻害剤またはダイナミン阻害剤である、項目７又は８記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目１０］
ＰＰＩＸ排出阻害剤が、ＡＢＣＧ２阻害剤である、項目７～９のいずれか１項記載の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤。
［項目１１］
下記式（Ｉ）
【化2】
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法。
［項目１２］
下記式（Ｉ）
【化3】
で示される化合物又はその塩の、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防における使用。
【発明の効果】
【0012】
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、特にウイルスの細胞感染もしくは増殖、ウイルスキャプシドタンパク質の発現もしくは集合、及び／又はウイルス粒子の放出等を強力に抑制することにより、感染細胞の増加を抑制し、優れた新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）治療及び／または予防効果を奏する。また、別の態様において、本発明の５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）若しくはその誘導体又はそれらの塩をＰＰＩＸ排出阻害剤と併用する新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法、および当該治療及び／又は予防のために用いる医薬は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）治療及び／または予防を提供するという効果を有している。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【発明を実施するための形態】
【0014】
（定義）
本明細書において、複数の数値の範囲が示された場合、それら複数の範囲の任意の下限値および上限値の組み合わせからなる範囲も同様に意味する。
本明細書において、複数の数値の範囲が示された場合、それら複数の範囲の任意の下限値および上限値の組み合わせからなる範囲も同様に意味する。
【0015】
（新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２））
本発明の対象である新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、従来株のみでなく、変異株をも含む（非特許文献３、４等参照）。例えば、「Ｎ５０１Ｙの変異がある変異株」としては、英国で確認された変異株（ＶＯＣ－２０２０１２／０１）、南アフリカで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ２）、ブラジルで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ３）及びフィリピンで確認された変異株が挙げられ、また、「Ｅ４８４Ｋの変異がある変異株」としては、南アフリカで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ２）、ブラジルで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ３）及びフィリピンで確認された変異株が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の対象である新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、従来株のみでなく、変異株をも含む（非特許文献３、４等参照）。例えば、「Ｎ５０１Ｙの変異がある変異株」としては、英国で確認された変異株（ＶＯＣ－２０２０１２／０１）、南アフリカで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ２）、ブラジルで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ３）及びフィリピンで確認された変異株が挙げられ、また、「Ｅ４８４Ｋの変異がある変異株」としては、南アフリカで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ２）、ブラジルで確認された変異株（５０１Ｙ．Ｖ３）及びフィリピンで確認された変異株が挙げられるが、これらに限定されない。
【0016】
（本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤、並びに新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）タンパク質発現抑制剤の有効成分）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤、並びに新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）タンパク質発現抑制剤の有効成分として用いられる化合物は、式（Ｉ）で示される化合物又はその塩（以下、これらを総称して「ＡＬＡ類」ということもある）として例示することができる。δ－アミノレブリン酸とも呼ばれる５－ＡＬＡは、式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であり、アミノ酸の１種である。５－ＡＬＡ誘導体としては、式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、５－ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤、並びに新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）タンパク質発現抑制剤の有効成分として用いられる化合物は、式（Ｉ）で示される化合物又はその塩（以下、これらを総称して「ＡＬＡ類」ということもある）として例示することができる。δ－アミノレブリン酸とも呼ばれる５－ＡＬＡは、式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であり、アミノ酸の１種である。５－ＡＬＡ誘導体としては、式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、５－ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
【0017】
式（Ｉ）におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１－ナフトイル、２－ナフトイル基等の炭素数７～１４のアロイル基を挙げることができる。
【0018】
式（Ｉ）におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基を挙げることができる。
【0019】
式（Ｉ）におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１－シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３～８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【0020】
式（Ｉ）におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６～１４のアリール基を挙げることができる。
【0021】
式（Ｉ）におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７～１５のアラルキル基を挙げることができる。
【0022】
上記５－ＡＬＡ誘導体としては、Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物や、上記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が好ましく、上記Ｒ１とＲ２の組合せが、ホルミルとメチル、アセチルとメチル、プロピオニルとメチル、ブチリルとメチル、ホルミルとエチル、アセチルとエチル、プロピオニルとエチル、ブチリルとエチルの組合せである化合物などを好ましく挙げることができる。
【0023】
５－ＡＬＡ類は、生体内で式（Ｉ）の５－ＡＬＡ又はその誘導体の状態で有効成分として作用すればよく、投与する形態に応じて、溶解性を上げるための各種の塩、エステル、または生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与すればよい。例えば、５－ＡＬＡ及びその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
【0024】
以上のＡＬＡ類のうち、望ましいものは、５－ＡＬＡ、及び５－ＡＬＡメチルエステル、５－ＡＬＡエチルエステル、５－ＡＬＡプロピルエステル、５－ＡＬＡブチルエステル、５－ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩であり、ＡＬＡ塩酸塩、５－ＡＬＡリン酸塩を特に好適に例示することができる。
【0025】
上記ＡＬＡ類は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの公知の方法によって製造することができる。また、上記ＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。
【0026】
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤、並びに新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）タンパク質発現抑制剤は、過剰症を生じない範囲で、さらに金属含有化合物を含有するものが好ましく、かかる金属含有化合物の金属部分としては、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、コバルト、銅、クロム、モリブデンを挙げることができるが、鉄、マグネシウム、亜鉛が好ましく、中でも鉄を好適に例示することができる。
【0027】
上記ＡＬＡ類と金属含有化合物を併用することで、より低濃度のＡＬＡ類の使用でも、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染、増殖及び／又はウイルスタンパク質発現抑制効果、並びに優れた新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防効果を得ることができる。
【0028】
上記鉄化合物としては、有機塩でも無機塩でもよく、無機塩としては、塩化第二鉄、三二酸化鉄、硫酸鉄、ピロリン酸第一鉄を挙げることができ、有機塩としては、カルボン酸塩、例えばヒドロキシカルボン酸塩である、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸第一鉄ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｆｅｒｒｏｕｓ Ｃｉｔｒａｔｅ、ＳＦＣ）、クエン酸鉄アンモニウム等のクエン酸塩や、ピロリン酸第二鉄、ヘム鉄、デキストラン鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン五酢酸鉄アンモニウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄アンモニウム、フマル酸第一鉄、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム等の有機酸塩や、トリエチレンテトラアミン鉄、ラクトフェリン鉄、トランスフェリン鉄、鉄クロロフィリンナトリウム、フェリチン鉄、含糖酸化鉄、グリシン第一鉄硫酸塩を挙げることができる。
【0029】
上記マグネシウム化合物としては、クエン酸マグネシウム、安息香酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、酸化マグネシウム、塩化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、ジエチレントリアミン五酢酸マグネシウムジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸マグネシウムジナトリウム、マグネシウムプロトポルフィリンを挙げることができる。
【0030】
上記亜鉛化合物としては、塩化亜鉛、酸化亜鉛、硝酸亜鉛、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジエチレントリアミン五酢酸亜鉛ジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸亜鉛ジナトリウム、亜鉛プロトポルフィリン、亜鉛含有酵母を挙げることができる。
【0031】
上記金属含有化合物は、それぞれ１種類又は２種類以上を用いることができ、金属含有化合物の投与量としては、５－ＡＬＡの投与量に対してモル比で０～１００倍であればよく、０．０１倍～１０倍が望ましく、０．１倍～８倍がより望ましい。
【0032】
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、過剰症を生じない範囲で、さらに他の抗ウイルス剤や、他の疾患治療薬と併用することができる。これら他の薬剤の投与量、および５－ＡＬＡの投与量との比率は、当業者が適宜調整することができる。
【0033】
本発明のＡＬＡ類は、好ましくはＰＰＩＸ排出阻害剤と併用される。ＰＰＩＸ排出阻害剤としては、トランスポータ阻害剤またはエキソサイトーシス阻害剤を使用することができ、これらとして例えばＡＢＣＧ２阻害剤などの多剤耐性トランスポータ阻害剤、ダイナミン阻害剤、キレート剤、ビタミンＤの活性化体を使用することができる。
【0034】
本発明に使用される具体的なＰＰＩＸ排出阻害剤は特に限定されない。例えばＡＢＣＧ２阻害剤、キレート剤、ビタミンＤの活性化体が挙げられる。キレート剤が細胞内のＰｐＩＸの蓄積量の増加に用い得ることは、例えば、ＷＯ２０１４／２０２３８３３、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．２０１０，Ｖｏｌ．８６，ｎｏ．２，ｐｐ．４７１－４７５に記載されている。また、ビタミンＤの活性化体が細胞内のＰｐＩＸの蓄積量の増加に用い得ることは、例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１１，Ｖｏｌ，７１，ｎｏ．１８，ｐｐ．６０４０－６０５０に記載されている。
【0035】
本発明において任意選択的に用い得るＡＢＣＧ２阻害剤は、例えば、Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１２，Ｖｏｌ．３，ｎｏ．１，ｐｐ．１－２７のＴａｂｌｅ ３およびＴａｂｌｅ ４に記載された化合物、Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，Ｖｏｌ．３１，ｎｏ．２，ｐ７５－９９のＴａｂｌｅ ２に記載された化合物、ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ ＩＩ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ （Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ、Ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ、Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、Ｂｅｃａｔｅｃａｒｉｎ、ＮＢ－５０６，Ｊ－１０７０８８など）； Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ （Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ、Ｄｏｘｏｂｕｃｉｎｃｉｎ、Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ、Ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎなど）； Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎａｌｏｇｓ（ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ Ｉ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ） （Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ、ＳＮ－３８、ＣＰＴ－１１、９－ａｍｉｎｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ、ＮＸ２１１、ＤＸ－８９５１ｆ、Ｈｏｍｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ、ＢＮ８０９１５（ｄｉｆｌｏｍｏｔｅｃａｎ）、Ｇｉｍａｔｅｃａｎ、Ｂｅｌｏｔｅｃａｎなど）；チロシンキナーゼ阻害剤（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ、Ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｔａｎｄｕｔｉｎｉｂ、ＣＩ１０３３ （Ｐａｎ－ＨＥＲ ＴＫＩ）、ＣＰ－７２４，７１４ （ＨＥＲ２ ＴＫＩ）、Ｓｙｍａｄｅｘ （ｆｍｓ－ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）など）； Ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ（ＭＴＸ， ＭＴＸ ｄｉｇｌｕｔａｍａｔｅ， ＭＴＸ ｔｒｉｇｌｕｔａｍａｔｅ （ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ）、ＧＷ１８４３， Ｔｏｍｕｄｅｘ （ａｎｔｉｆｏｌａｔｅｓ）、Ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｔｅ， ｐｉｒｉｔｒｅｘｉｍ， ｍｅｔｏｐｒｉｎｅ， ｐｙｒｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ （ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ａｎｔｉｆｏｌａｔｅｓ）、５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ （ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ａｎａｌｏｇ）、ＣｄＡＭＰ （ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）， ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ （ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）など）；ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌなど）；ＣＤＫ ａｎｄ ａｕｒｏｒａ ｋｉｎａｓｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＪＮＪ－７７０６６２１など）；ｎｏｎ－ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ－ａｎｄｒｏｇｅｎ（Ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅなど）；ＰＥＩＴＣ（Ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅなど）；ｉｎｄａｚｏｌｅ－ｂａｓｅｄ ｔｕｂｕｌｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＴＨ－３３７など）；Ｓｕｆａｔｅ ａｎｄ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓ （Ｅｓｔｒｏｎｅ ３－ｓｕｌｆａｔｅ （Ｅ１Ｓ）、１７ｂｅｔａ－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｓｕｌｆａｔｅ、ＤＨＥＡＳ、４［３５Ｓ］－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｅ３０４０ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、３－Ｏ－ｓｕｌｆａｔｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｏｆ １７ａｌｐｈａ－ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ、ＳＮ－３８－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ、［３Ｈ］１７ｂｅｔａ－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ－１７ｂｅｔａ－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ、［１４Ｃ］４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ、ＢＰ－３－ｓｕｌｆａｔｅ、ＢＰ－３－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ、Ｐｈｅｎｏｌｉｃ ＭＰＡ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅなど）；Ｎａｔｕｒａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｔｏｘｉｎｓ （Ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ、Ｕｒａｔｅ、Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ、Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ （ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ２）、ｐｌｕｍｂａｇｉｎ （Ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ３）、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ （ＧＳＨ）、Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ １－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＰｈＩＰ （ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ）など）；その他（［（１２５）Ｉ］ｌｏｄｏａｒｙｌａｚｉｄｏｐｒａｚｏｓｉｎ （ＩＡＡＰ）， ［（３）Ｈ］ａｚｉｄｏｐｉｎｅ； Ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ （ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）； Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ （ｍａｃｒｏｌｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）； Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ、ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ｇｒｅｐａｆｌｏｘａｃｉｎ、ｕｌｉｆｌｏｘａｃｉｎ（ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）； Ｎｉｔｒｏｆｕｒａｎｔｏｉｎ （ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）； Ｍｏｘｉｄｅｃｔｉｎ （ｐａｒａｓｉｔｉｃｉｄｅ）；Ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ ｓｕｌｏｘ
ｉｄｅ ａｎｄ ｏｘｆｅｎｄａｚｏｌｅ（ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃｓ）； Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ （ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｒｕｇ）； Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ （ＮＲＴＩ）；Ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ、Ａ７７１７２６ （ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｒｕｇｓ）； Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ （ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇ）； Ｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅ （ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ２－ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； ＭＥ３２７７ （ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＩＩｂ／ＩＩＩａ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｐｉｔａｖａｓｔａｔｉｎ、Ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ （ＨＭＧ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ （ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｇｌｙｂｕｒｉｄｅ （ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ａｇｅｎｔ）； Ｎｉｃａｒｄｉｐｉｎｅ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ、ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ （Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）； Ｏｌｍｅｓａｒｔａｎ ｍｅｄｏｘｏｍｉｌ （ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ＡＴ１－Ｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｂｅｆｌｏｘａｔｏｎｅ （ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｐｒａｚｏｓｉｎ （ａｌｐｈａ－１－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｒｉｌｕｚｏｌｅ （Ｎａ＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｂｌｏｃｋｅｒ）； Ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ｏｓｔｅｏｔｒｏｐｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）； Ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ （ｆｌａｖｏｎｏｉｄ、ＷＯ２００４／０６９２３３も参照）； ＦＴＣ （Ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎ Ｃ）およびその誘導体 （Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００２，１：４１７－４２５参照）； エストロゲンや抗エストロゲン（Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００３，２：１０５－１１２参照）； ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ （Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００４，１０８：１４６－１５１参照）； ジフェニルアクリロニトリル誘導体（ＷＯ２００４／０６９２４３参照）； 複素環
を有するアクリロニトリル誘導体（ＷＯ２００６／１０６７７８、ＷＯ２００９／０７２２６７参照）等を使用することができる。
ｉｄｅ ａｎｄ ｏｘｆｅｎｄａｚｏｌｅ（ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃｓ）； Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ （ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｒｕｇ）； Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ （ＮＲＴＩ）；Ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ、Ａ７７１７２６ （ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｒｕｇｓ）； Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ （ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇ）； Ｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅ （ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ２－ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； ＭＥ３２７７ （ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＩＩｂ／ＩＩＩａ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｐｉｔａｖａｓｔａｔｉｎ、Ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ （ＨＭＧ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ （ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｇｌｙｂｕｒｉｄｅ （ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ａｇｅｎｔ）； Ｎｉｃａｒｄｉｐｉｎｅ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ、ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ （Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋｅｒ）； Ｏｌｍｅｓａｒｔａｎ ｍｅｄｏｘｏｍｉｌ （ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ＡＴ１－Ｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｂｅｆｌｏｘａｔｏｎｅ （ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）； Ｐｒａｚｏｓｉｎ （ａｌｐｈａ－１－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）； Ｒｉｌｕｚｏｌｅ （Ｎａ＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｂｌｏｃｋｅｒ）； Ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ｏｓｔｅｏｔｒｏｐｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）； Ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ （ｆｌａｖｏｎｏｉｄ、ＷＯ２００４／０６９２３３も参照）； ＦＴＣ （Ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎ Ｃ）およびその誘導体 （Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００２，１：４１７－４２５参照）； エストロゲンや抗エストロゲン（Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００３，２：１０５－１１２参照）； ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ （Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００４，１０８：１４６－１５１参照）； ジフェニルアクリロニトリル誘導体（ＷＯ２００４／０６９２４３参照）； 複素環
を有するアクリロニトリル誘導体（ＷＯ２００６／１０６７７８、ＷＯ２００９／０７２２６７参照）等を使用することができる。
【0036】
上記ＰＰＩＸ排出阻害剤は、それぞれ１種類又は２種類以上を用いることができ、ＰＰＩＸ排出阻害剤の投与量は、所望の治療効果に併せて適宜選択することができ、例えば、５－ＡＬＡの投与量に対してモル比で０～１００００倍、好ましくは０．０倍～１０００倍、より好ましくは１倍～３００倍、さらに好ましくは１０～１００倍の投与量を用いることができる。
【0037】
（本発明の治療及び／又は予防剤の投与方法）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法またはこれらの方法に用いるための医薬において、ＡＬＡ類、ＰＰＩＸ排出阻害剤、金属含有化合物または他の薬剤は、これらすべてを含む組成物としても、あるいは、それぞれを単独あるいはその一部のみを含有する組成物としても投与することできる。一態様において、ＡＬＡ類と他の薬剤とを、それぞれ単独あるいはその一部のみを含有する組成物を用いる場合、これらを同時に投与してもよく、また、別々に投与してもよい。好ましくは、ＡＬＡ類と他の薬剤との投与が相加的効果あるいは相乗的効果を奏することができるように組み合わせて投与することができる。ＡＬＡ類と他の薬剤をそれぞれ単独あるいはその一部のみを含有する組成物を別々に投与する場合、それらの投与間隔は５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間等に設定できるが、これらに限定されない。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防方法またはこれらの方法に用いるための医薬において、ＡＬＡ類、ＰＰＩＸ排出阻害剤、金属含有化合物または他の薬剤は、これらすべてを含む組成物としても、あるいは、それぞれを単独あるいはその一部のみを含有する組成物としても投与することできる。一態様において、ＡＬＡ類と他の薬剤とを、それぞれ単独あるいはその一部のみを含有する組成物を用いる場合、これらを同時に投与してもよく、また、別々に投与してもよい。好ましくは、ＡＬＡ類と他の薬剤との投与が相加的効果あるいは相乗的効果を奏することができるように組み合わせて投与することができる。ＡＬＡ類と他の薬剤をそれぞれ単独あるいはその一部のみを含有する組成物を別々に投与する場合、それらの投与間隔は５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間等に設定できるが、これらに限定されない。
【0038】
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤の投与経路としては特に限定されないが、経口投与、吸入投与、注射、点滴等による静脈内投与、経皮投与、座薬、又は経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを使用することができる。
【0039】
（本発明の治療及び／又は予防剤の剤型）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤の剤型としては、上記投与経路に応じて適宜決定することができるが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤の剤型としては、上記投与経路に応じて適宜決定することができるが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
【0040】
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤を調製するために、必要に応じて、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等を添加することができ、当業者は各具体的な成分を目的に応じて選択することができる。
【0041】
（本発明の治療及び／又は予防剤の投与量）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤の投与量・頻度・期間としては、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療又は予防しようとする動物の種類、年齢、体重、症状等により異なるが、例えばヒトに投与する場合、ＡＬＡ類の投与量としては、５－ＡＬＡ重量換算で、０．０１－２００ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５－１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１－５０ｍｇ／体重ｋｇ／日、さらに好ましくは５－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日を挙げることができ、特に予防剤として用いる場合は、低用量を継続して摂取することが望ましい。例えば予防剤サプリメントとして投与する場合には、０．１－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．３～１０ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１．0～５ｍｇ／体重ｋｇ／日などの投与量で投与することができる。投与頻度としては、一日一回～複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。治療剤または予防剤としての投与期間は、医師等当該技術分野の専門家が既知の方法により決定することができる。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤の投与量・頻度・期間としては、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療又は予防しようとする動物の種類、年齢、体重、症状等により異なるが、例えばヒトに投与する場合、ＡＬＡ類の投与量としては、５－ＡＬＡ重量換算で、０．０１－２００ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５－１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１－５０ｍｇ／体重ｋｇ／日、さらに好ましくは５－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日を挙げることができ、特に予防剤として用いる場合は、低用量を継続して摂取することが望ましい。例えば予防剤サプリメントとして投与する場合には、０．１－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．３～１０ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１．0～５ｍｇ／体重ｋｇ／日などの投与量で投与することができる。投与頻度としては、一日一回～複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。治療剤または予防剤としての投与期間は、医師等当該技術分野の専門家が既知の方法により決定することができる。
【0042】
（本発明の治療及び／又は予防剤の適用症状）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染および／または新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）発症を原因として生じる様々な症状の治療および予防に適用することができる。そのような症状として、肺炎、発熱、咳、息切れ、呼吸困難、悪寒、悪寒を伴う震え、筋肉痛、頭痛、咽頭痛、味覚障害、または嗅覚障害を例示することができるが、これらに限定されない。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染および／または新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）発症を原因として生じる様々な症状の治療および予防に適用することができる。そのような症状として、肺炎、発熱、咳、息切れ、呼吸困難、悪寒、悪寒を伴う震え、筋肉痛、頭痛、咽頭痛、味覚障害、または嗅覚障害を例示することができるが、これらに限定されない。
【0043】
（本発明の治療及び／又は予防剤の適用動物）
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ミンク、牛、豚およびこれらの近縁動物、その他の哺乳類、鳥類等に投与することができる。
本発明の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療及び／又は予防剤は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ミンク、牛、豚およびこれらの近縁動物、その他の哺乳類、鳥類等に投与することができる。
【0044】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例1】
【0045】
（治療例）
１．患者：５３歳男性 １名
２．治療経過
２０２０年２月２８日金曜日の夜から普段感じたことのない強い倦怠感と悪寒、鼻水、のどの痛み、胸の痛みを感じ、空咳があり、夜中に目が覚め、体温を測ったところ３７．５℃であった。喉の渇きを癒やすためにオレンジジュースを飲用したが味を感じなかった。
耐えがたい倦怠感に眠ることもままならず、５－ＡＬＡリン酸塩５０ｍｇとＳＦＣ２８．７ｍｇを含有するサプリメント（カプセル）の摂取を２月２９日土曜日に開始したところ、以下の経過が観察された。
２月２９日土曜日
２：００ ４カプセル摂取したところ悪寒が改善、体温は３７．５℃
４：００ 再び悪寒を感じたため２カプセル摂取、体温は３７．２℃
５：００ 咳、くしゃみは続く物ののどの痛みが軽減、体温は３６．８℃
８：００ 体温が３７．９℃に上昇したため再び４カプセル摂取、体温は３７．２に低下
１０：００ 体温３７．５℃、２カプセル摂取、体温は３７．１℃に低下
１２：００ 体温３７．４℃、２カプセル摂取、体温は３７．０℃に低下
１５：００ 体温３７．２℃、２カプセル摂取、体温３６．８℃に正常化、倦怠感が改善し始める。
１９：００ 体温３６．９℃、夕食を採ることが出来、味覚が正常化、２カプセル摂取、就寝
３月１日日曜日
５：００ 体温３６．８℃ ４カプセル摂取、風邪症状軽快
１０：００ 体温３６．９℃ ４カプセル摂取、症状なし
１２：００ 体温３６．８℃ ４カプセル摂取、症状なし
１６：００ 体温３６．８℃ 軽い筋肉痛を覚え、４カプセル摂取
１７：３０ 筋肉痛軽快 体温３６．９℃ 症状なし
その後４月１７日に新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）抗体検査試薬キット（倉敷紡績株式会社製品コードＲＦ－ＮＣ００２）を用いて男性患者の抗新型コロナウイルス抗体を調べたところ陽性であった。
１．患者：５３歳男性 １名
２．治療経過
２０２０年２月２８日金曜日の夜から普段感じたことのない強い倦怠感と悪寒、鼻水、のどの痛み、胸の痛みを感じ、空咳があり、夜中に目が覚め、体温を測ったところ３７．５℃であった。喉の渇きを癒やすためにオレンジジュースを飲用したが味を感じなかった。
耐えがたい倦怠感に眠ることもままならず、５－ＡＬＡリン酸塩５０ｍｇとＳＦＣ２８．７ｍｇを含有するサプリメント（カプセル）の摂取を２月２９日土曜日に開始したところ、以下の経過が観察された。
２月２９日土曜日
２：００ ４カプセル摂取したところ悪寒が改善、体温は３７．５℃
４：００ 再び悪寒を感じたため２カプセル摂取、体温は３７．２℃
５：００ 咳、くしゃみは続く物ののどの痛みが軽減、体温は３６．８℃
８：００ 体温が３７．９℃に上昇したため再び４カプセル摂取、体温は３７．２に低下
１０：００ 体温３７．５℃、２カプセル摂取、体温は３７．１℃に低下
１２：００ 体温３７．４℃、２カプセル摂取、体温は３７．０℃に低下
１５：００ 体温３７．２℃、２カプセル摂取、体温３６．８℃に正常化、倦怠感が改善し始める。
１９：００ 体温３６．９℃、夕食を採ることが出来、味覚が正常化、２カプセル摂取、就寝
３月１日日曜日
５：００ 体温３６．８℃ ４カプセル摂取、風邪症状軽快
１０：００ 体温３６．９℃ ４カプセル摂取、症状なし
１２：００ 体温３６．８℃ ４カプセル摂取、症状なし
１６：００ 体温３６．８℃ 軽い筋肉痛を覚え、４カプセル摂取
１７：３０ 筋肉痛軽快 体温３６．９℃ 症状なし
その後４月１７日に新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）抗体検査試薬キット（倉敷紡績株式会社製品コードＲＦ－ＮＣ００２）を用いて男性患者の抗新型コロナウイルス抗体を調べたところ陽性であった。
【0046】
３．結果
以上の経過より、５－ＡＬＡの摂取によって、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の諸症状が短期間に著しく改善できることが明らかとなった。
以上の経過より、５－ＡＬＡの摂取によって、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の諸症状が短期間に著しく改善できることが明らかとなった。
【実施例2】
【0047】
（細胞試験）
（方法）
実験材料
アフリカミドリザル腎臓由来のＶｅｒｏＥ６は北海道大学の高田博士より入手した。ヒト結腸癌由来のＣａｃｏ－２細胞は大阪大学の飯田博士より入手した。
アフリカミドリザル腎臓由来のＶｅｒｏＥ６細胞は、１０％ Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ （ＦＢＳ）及び１％ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ溶液を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）にて培養した。
Ｃａｃｏ－２細胞も同様の方法で培養した。
５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）塩酸塩は純水にて１００ ｍＭ溶液に調製、クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ）は純水と１Ｎ ＨＣｌにて２５ ｍＭ溶液に調製、ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎ Ｃ（ＦＴＣ）はＤＭＳＯにて５ ｍＭに調製し、実験毎にそれらをＤＭＥＭにて希釈して使用した。免疫染色法では、ｇｏａｔ ｓｅｒｕｍ、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＮＯＶＵＳ社）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用した。
（方法）
実験材料
アフリカミドリザル腎臓由来のＶｅｒｏＥ６は北海道大学の高田博士より入手した。ヒト結腸癌由来のＣａｃｏ－２細胞は大阪大学の飯田博士より入手した。
アフリカミドリザル腎臓由来のＶｅｒｏＥ６細胞は、１０％ Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ （ＦＢＳ）及び１％ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ溶液を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）にて培養した。
Ｃａｃｏ－２細胞も同様の方法で培養した。
５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）塩酸塩は純水にて１００ ｍＭ溶液に調製、クエン酸第一鉄ナトリウム（ＳＦＣ）は純水と１Ｎ ＨＣｌにて２５ ｍＭ溶液に調製、ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎ Ｃ（ＦＴＣ）はＤＭＳＯにて５ ｍＭに調製し、実験毎にそれらをＤＭＥＭにて希釈して使用した。免疫染色法では、ｇｏａｔ ｓｅｒｕｍ、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＮＯＶＵＳ社）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用した。
【0048】
ウイルス
本実験で使用したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、日本国内の感染者より分離された（Ａ ＪＰＮ／ＮＧＳ／ＩＡ－１／２０２０，ＧＩＳＡＩＤ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ． ＥＰＩ－ＩＳＬ－４８１２５１）。また、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異株として、国立感染症研究所より入手した英国株ＱＫ００２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＫ００２／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿７６８５２６）、英国株ＱＨＮ００１（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００１／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８０４００７）、英国株ＱＨＮ００２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００２／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８０４００８）、ブラジル株ＴＹ７－５０１（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０１／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８３３３６６）、ブラジル株ＴＹ７－５０３（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０３／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８７７７６９）、南アフリカ株ＴＹ８－６１２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ ＴＹ８－６１２／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿１１２３２８９）、の６株を用いた。ウイルスはＶｅｒｏＥ６細胞を用いて継代し、３～４日間培養した後に培養上清を回収し、２０００ｘｇにて１５分間遠心した後、上清を－８０℃にて保存し、実験毎に解凍した後に使用した。本ウイルスを用いた感染実験は全て、長崎大学が有するＢＳＬ３実験室にて行った。
本実験で使用したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、日本国内の感染者より分離された（Ａ ＪＰＮ／ＮＧＳ／ＩＡ－１／２０２０，ＧＩＳＡＩＤ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ． ＥＰＩ－ＩＳＬ－４８１２５１）。また、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異株として、国立感染症研究所より入手した英国株ＱＫ００２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＫ００２／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿７６８５２６）、英国株ＱＨＮ００１（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００１／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８０４００７）、英国株ＱＨＮ００２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００２／２０２０、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８０４００８）、ブラジル株ＴＹ７－５０１（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０１／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８３３３６６）、ブラジル株ＴＹ７－５０３（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０３／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿８７７７６９）、南アフリカ株ＴＹ８－６１２（ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ ＴＹ８－６１２／２０２１、ＧＩＳＡＩＤ ＩＤ： ＥＰＩ＿ＩＳＬ＿１１２３２８９）、の６株を用いた。ウイルスはＶｅｒｏＥ６細胞を用いて継代し、３～４日間培養した後に培養上清を回収し、２０００ｘｇにて１５分間遠心した後、上清を－８０℃にて保存し、実験毎に解凍した後に使用した。本ウイルスを用いた感染実験は全て、長崎大学が有するＢＳＬ３実験室にて行った。
【0049】
薬効評価試験
（ａ）ＶｅｒｏＥ６細胞を用いた試験
ＶｅｒｏＥ６細胞を９６ウェルプレートに０．５ｘ１０＾４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、細胞がプレート底に接着した後、各薬剤を培地に添加した。試験薬剤としては、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＦＴＣ（１０ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＳＦＣ（２５０ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＳＦＣ（２５０ｕＭ）＋ＦＴＣ（１０ｕＭ）、ＦＴＣ（１０ｕＭ）を用いた。薬剤添加後、細胞を３７℃にて４８時間又は７２時間培養した。その後、ＢＳＬ３実験室にて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた。感染開始から４８時間後、感染細胞を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）にて一晩浸漬し、細胞の固定とウイルスの不活化を行った。更に細胞を０．２％ ＴｒｉｔｏｎＸ－１００にて透過処理した後、１０％ ｇｏａｔ ｓｅｒｕｍにてブロッキングを行い、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ ａｎｔｉｂｏｄｙにて一次抗体処理し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔにて二次抗体処理し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２により細胞核の染色を行った。そして、Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５細胞イメージングプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ社）を用いて感染細胞の画像撮影を行った。それら画像の解析はＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒ画像解析ソフト（Ｂｒｏａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＭＩＴ）を用いて行い、感染細胞数及び全細胞数を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＭＤＦ社）を用いてグラフの作成と統計処理を行った。
各薬剤にて４８時間の前処理を行った条件では、５－ＡＬＡとＦＴＣを共添加することでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を有意に抑制した。その他の薬剤添加条件では効果が認められなかった（図１）。各薬剤にて７２時間の前処理を行った条件では、５－ＡＬＡとＦＴＣの共添加、又は５－ＡＬＡとＳＦＣとＦＴＣの共添加により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が強く抑制された（図２）。
（ａ）ＶｅｒｏＥ６細胞を用いた試験
ＶｅｒｏＥ６細胞を９６ウェルプレートに０．５ｘ１０＾４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、細胞がプレート底に接着した後、各薬剤を培地に添加した。試験薬剤としては、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＦＴＣ（１０ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＳＦＣ（２５０ｕＭ）、５－ＡＬＡ（１０００ｕＭ）＋ＳＦＣ（２５０ｕＭ）＋ＦＴＣ（１０ｕＭ）、ＦＴＣ（１０ｕＭ）を用いた。薬剤添加後、細胞を３７℃にて４８時間又は７２時間培養した。その後、ＢＳＬ３実験室にて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた。感染開始から４８時間後、感染細胞を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）にて一晩浸漬し、細胞の固定とウイルスの不活化を行った。更に細胞を０．２％ ＴｒｉｔｏｎＸ－１００にて透過処理した後、１０％ ｇｏａｔ ｓｅｒｕｍにてブロッキングを行い、ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ ａｎｔｉｂｏｄｙにて一次抗体処理し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔにて二次抗体処理し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２により細胞核の染色を行った。そして、Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５細胞イメージングプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ社）を用いて感染細胞の画像撮影を行った。それら画像の解析はＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒ画像解析ソフト（Ｂｒｏａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＭＩＴ）を用いて行い、感染細胞数及び全細胞数を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＭＤＦ社）を用いてグラフの作成と統計処理を行った。
各薬剤にて４８時間の前処理を行った条件では、５－ＡＬＡとＦＴＣを共添加することでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を有意に抑制した。その他の薬剤添加条件では効果が認められなかった（図１）。各薬剤にて７２時間の前処理を行った条件では、５－ＡＬＡとＦＴＣの共添加、又は５－ＡＬＡとＳＦＣとＦＴＣの共添加により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が強く抑制された（図２）。
【0050】
以上の結果より、５－ＡＬＡとＦＴＣの共添加、又は５－ＡＬＡとＳＦＣとＦＴＣにより抗ウイルス活性の増強が認められた。
また、播種細胞数を１ｘ１０＾４細胞／ｗｅｌｌにすると、５－ＡＬＡ単独の添加あるいは５－ＡＬＡとＳＦＣの添加によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を有意に抑制した。
また、播種細胞数を１ｘ１０＾４細胞／ｗｅｌｌにすると、５－ＡＬＡ単独の添加あるいは５－ＡＬＡとＳＦＣの添加によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を有意に抑制した。
【0051】
（ｂ）Ｃａｃｏ－２細胞を用いた試験
Ｃａｃｏ－２細胞を用いた薬物評価試験では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させてから不活化までの時間を７２時間に変更した点、および、感染させたウイルス量がＶｅｒｏＥ６細胞では０．００２ＭＯＩであったのに対して、Ｃａｃｏ－２細胞では０．０２ＭＯＩであった点を除いて同様に行った。
薬剤添加後７２時間培養した後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた場合、５－ＡＬＡ単独又は５ＡＬＡとＳＦＣの併用処理した細胞では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染及び／又は増殖が強力に阻害された（図３）。Ｃａｃｏ－２細胞では、薬剤添加後４８時間培養した後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた場合にも、同様のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害作用が得られた（図４）。
また、同様に変異株を感染させた場合でも、５－ＡＬＡ単独又は５ＡＬＡとＳＦＣの併用処理した細胞では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への感染及び／又は増殖阻害効果が期待される。
本結果は、５－ＡＬＡがヒト細胞においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示すことを裏付けるものである。
なお、Ｃａｃｏ－２細胞は細胞外から供給される５－ＡＬＡの代謝を行うことが知られている（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｐ．，２０１７．Ｖｏｌ／１１，ｐｐ．１０５－１１１）。
Ｃａｃｏ－２細胞を用いた薬物評価試験では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させてから不活化までの時間を７２時間に変更した点、および、感染させたウイルス量がＶｅｒｏＥ６細胞では０．００２ＭＯＩであったのに対して、Ｃａｃｏ－２細胞では０．０２ＭＯＩであった点を除いて同様に行った。
薬剤添加後７２時間培養した後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた場合、５－ＡＬＡ単独又は５ＡＬＡとＳＦＣの併用処理した細胞では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染及び／又は増殖が強力に阻害された（図３）。Ｃａｃｏ－２細胞では、薬剤添加後４８時間培養した後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた場合にも、同様のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害作用が得られた（図４）。
また、同様に変異株を感染させた場合でも、５－ＡＬＡ単独又は５ＡＬＡとＳＦＣの併用処理した細胞では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２への感染及び／又は増殖阻害効果が期待される。
本結果は、５－ＡＬＡがヒト細胞においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示すことを裏付けるものである。
なお、Ｃａｃｏ－２細胞は細胞外から供給される５－ＡＬＡの代謝を行うことが知られている（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｐ．，２０１７．Ｖｏｌ／１１，ｐｐ．１０５－１１１）。
【0052】
（ｃ）用量依存的感染及び／又は増殖阻害効果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果における用量依存性を確認するために、各濃度の薬剤を試験した。
その結果、ＶｅｒｏＥ６細胞に対して５－ＡＬＡ単独のＩＣ５０は５７０ｕＭであり、５－ＡＬＡとＳＦＣの併用適用のＩＣ５０は６９５ｕＭであった。一方、ＳＦＣの単独適用はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示さなかった（図５）。
また、Ｃａｃｏ－２細胞に対して５－ＡＬＡ単独のＩＣ５０は３９ｕＭであり、５－ＡＬＡとＳＦＣの併用適用のＩＣ５０は６３ｕＭであった。一方、ＳＦＣの単独適用はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示さなかった（図６）。
なお、試験したすべての濃度範囲（最大２０００ｕＭ）で、５－ＡＬＡは有意な細胞毒性を示さなかった。
以上の結果は、５－ＡＬＡが様々な細胞型において、特異的かつ強力なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を有することを示している。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果における用量依存性を確認するために、各濃度の薬剤を試験した。
その結果、ＶｅｒｏＥ６細胞に対して５－ＡＬＡ単独のＩＣ５０は５７０ｕＭであり、５－ＡＬＡとＳＦＣの併用適用のＩＣ５０は６９５ｕＭであった。一方、ＳＦＣの単独適用はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示さなかった（図５）。
また、Ｃａｃｏ－２細胞に対して５－ＡＬＡ単独のＩＣ５０は３９ｕＭであり、５－ＡＬＡとＳＦＣの併用適用のＩＣ５０は６３ｕＭであった。一方、ＳＦＣの単独適用はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を示さなかった（図６）。
なお、試験したすべての濃度範囲（最大２０００ｕＭ）で、５－ＡＬＡは有意な細胞毒性を示さなかった。
以上の結果は、５－ＡＬＡが様々な細胞型において、特異的かつ強力なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及び／又は増殖阻害効果を有することを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
