特許 7062754 ｈａＮＫセツキシマブ併用及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-04-22

(45)【発行日】2022-05-06

(54)【発明の名称】ｈａＮＫセツキシマブ併用及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/704 20060101AFI20220425BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220425BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20220425BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20220425BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220425BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220425BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220425BHJP

   A61K 45/06 20060101ALN20220425BHJP

【ＦＩ】

A61K31/704 ZMD

A61K35/17 Z

A61K38/20

A61K39/00 H

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K45/06

【請求項の数】 33

(21)【出願番号】P 2020508476

(86)(22)【出願日】2018-08-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-11-05

(86)【国際出願番号】 US2018046735

(87)【国際公開番号】W WO2019036485

(87)【国際公開日】2019-02-21

【審査請求日】2020-04-01

(31)【優先権主張番号】62/545,744

(32)【優先日】2017-08-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】518203696

【氏名又は名称】ナントセル，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100091487

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 行孝

(74)【代理人】

【識別番号】100120031

【弁理士】

【氏名又は名称】宮嶋 学

(74)【代理人】

【識別番号】100120617

【弁理士】

【氏名又は名称】浅野 真理

(74)【代理人】

【識別番号】100126099

【弁理士】

【氏名又は名称】反町 洋

(72)【発明者】

【氏名】スーン－シオン，パトリック

【審査官】濱田 光浩

(56)【参考文献】

【文献】CytRx Corporation Announces Global Strategic License With NantCell Inc. For Aldoxorubicin, An Albumin Mediated Chemotherapeutic，CISION PR Newswire, Jul 28, 2017，https://www.prnewswire.com/news-releases/cytrx-corporation-announces-global-strategic-license-with-nantcell-inc-for-aldoxorubicin-an-albumin-mediated-chemotherapeutic-300495897.html

【文献】The generation and analyses of a novel combination of recombinant adenovirus vaccines targeting three tumor antigens as an immunotherapeutic，Oncotarget. 2015; 6:31344-31359.，https://doi.org/10.18632/oncotarget.5181

【文献】An NK cell line (haNK) expressing high levels of granzyme and engineered to express the high affinity CD16 allele，Oncotarget. 2016; 7:86359-86373.，https://doi.org/10.18632/oncotarget.13411

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｋ ３１／７０４

Ａ６１Ｋ ３８／２０

Ａ６１Ｋ ３９／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ６１Ｋ ３５／１７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍を有する患者の治療をするための化学療法組成物であって、
ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含む免疫療法組成物、抗体および免疫刺激性スーパーカインと組み合わせて使用するための、アルドキソルビシンを含む化学療法組成物であり、
前記ワクチン成分が、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡからなる群から選択される腫瘍関連抗原であり、
前記細胞傷害性細胞成分が、ＮＫ－９２誘導体細胞であり、
前記抗体が、セツキシマブであり、かつ
前記免疫刺激性スーパーカインが、ＡＬＴ８０３である、
化学療法組成物。

【請求項2】

腫瘍を有する患者の治療をするための免疫療法組成物であって、
アルドキソルビシンを含む化学療法組成物、抗体および免疫刺激性スーパーカインと組み合わせて使用するための、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含む免疫療法組成物であり、
前記ワクチン成分が、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡからなる群から選択される腫瘍関連抗原であり、
前記細胞傷害性細胞成分が、ＮＫ－９２誘導体細胞であり、
前記抗体が、セツキシマブであり、かつ
前記免疫刺激性スーパーカインが、ＡＬＴ８０３である、
免疫療法組成物。

【請求項3】

アベルマブ、ベバシズマブ、カペシタビン、シスプラチン、シクロホスファミド、５－ＦＵ、ロイコボリン、Ｎａｂ－パクリタキセルおよびネシツムマブからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに組み合わせて使用するための、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記ワクチン成分が、改変細菌、改変酵母、及び改変ウイルスのうちの少なくとも１つを含み、及び前記ワクチン成分が、腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記ワクチン成分が、改変細菌、改変酵母、及び改変ウイルスのうちの少なくとも２つを含み、及び前記ワクチン成分が、腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を更に含む、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記細胞傷害性細胞成分がｈａＮＫ細胞及びＴ細胞のうちの少なくとも１つを含んでなり、前記ｈａＮＫ細胞又は前記Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体及びＣＤ１６高親和性変異体のうちの少なくとも１つを発現するように遺伝子操作されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質をさらに組み合わせて使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記抗体が前記細胞傷害性細胞成分にカップリングされる、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記抗体が、成長因子受容体、血管成長受容体、免疫チェックポイント阻害薬、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープのうちの少なくとも１つに特異的に結合する、請求項７又は８に記載の組成物。

【請求項10】

チェックポイント阻害に干渉する又はそれを下方制御する前記タンパク質が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストである、請求項７～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記細胞傷害性細胞成分がｈａＮＫ細胞及びＴ細胞のうちの少なくとも１つを含んでなり、前記ｈａＮＫ細胞又は前記Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体及びＣＤ１６高親和性変異体のうちの少なくとも１つを発現するように遺伝子操作されている、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質をさらに組み合わせて使用するための、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記抗体が前記細胞傷害性細胞成分にカップリングされる、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記抗体が、成長因子受容体、血管成長受容体、免疫チェックポイント阻害薬、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープのうちの少なくとも１つに特異的に結合する、請求項１２又は１３に記載の組成物。

【請求項15】

チェックポイント阻害に干渉する又はそれを下方制御する前記タンパク質が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストである、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記腫瘍が固形腫瘍である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインをさらに組み合わせて使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

前記免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト、ＩＬ－２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記ワクチン成分と前記細胞傷害性細胞成分とが少なくとも１日空けて投与される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記患者が、過去の白金系化学療法及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法のうちの少なくとも一方の治療歴を有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記患者の分子プロファイルが決定され、前記分子プロファイルがＨＥＲ２発現レベル又はＲＡＳ突然変異状態を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

腫瘍を有する患者の治療をするための免疫療法組成物であって、アルドキソルビシンを含む化学療法組成物、抗体および免疫刺激性スーパーカインと組み合わせて使用するための、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含む免疫療法組成物であり、
前記ワクチン成分が、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡからなる群から選択される腫瘍関連抗原であり、
前記細胞傷害性細胞成分が、ＮＫ－９２誘導体細胞であり、
前記抗体が、セツキシマブであり、
前記免疫刺激性スーパーカインが、ＡＬＴ８０３であり、かつ
前記免疫療法組成物が、成長因子受容体、血管成長受容体、癌関連抗原、癌特異抗原、若しくは癌特異的及び患者特異的ネオエピトープに特異的に結合する抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質を更に含む、
免疫療法組成物。

【請求項23】

腫瘍を有する患者の治療をするための化学療法組成物であって、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含む免疫療法組成物、抗体および免疫刺激性スーパーカインと組み合わせて使用するための、アルドキソルビシンを含む化学療法組成物であり、
前記ワクチン成分が、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡからなる群から選択される腫瘍関連抗原であり、
前記細胞傷害性細胞成分が、ＮＫ－９２誘導体細胞であり、
前記抗体が、セツキシマブであり、
前記免疫刺激性スーパーカインが、ＡＬＴ８０３であり、かつ
前記免疫療法組成物が、成長因子受容体、血管成長受容体、癌関連抗原、癌特異抗原、若しくは癌特異的及び患者特異的ネオエピトープに特異的に結合する抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質を更に含む、
化学療法組成物。

【請求項24】

前記ワクチン成分が、改変細菌、改変酵母、及び改変ウイルスのうちの少なくとも１つを含み、及び前記ワクチン成分が、腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を更に含む、請求項２２または２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記細胞傷害性細胞成分がｈａＮＫ細胞及びＴ細胞のうちの少なくとも１つを含んでなり、前記ｈａＮＫ細胞又は前記Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体及びＣＤ１６高親和性変異体のうちの少なくとも１つを発現するように遺伝子操作されている、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項26】

前記細胞傷害性細胞成分が、抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質とカップリングされる、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項27】

前記抗体が、成長因子受容体、血管成長受容体、免疫チェックポイント阻害薬、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープのうちの少なくとも１つに特異的に結合する、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

チェックポイント阻害に干渉する又はそれを下方制御する前記タンパク質が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストである、請求項２６に記載の組成物。

【請求項29】

前記ワクチン成分と前記細胞傷害性細胞成分とが、前記患者に共投与されるように製剤化される、請求項２２～２８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項30】

前記ワクチン成分と前記細胞傷害性細胞成分とが、前記患者に別々に投与するように製剤化される、請求項２２～２８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインをさらに組み合わせて使用するための、請求項２２～３０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項32】

前記免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト、ＩＬ－２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

前記患者が、過去の白金系化学療法及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法のうちの少なくとも一方の治療歴を有する、請求項２２～３２のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、２０１７年８月１５日に出願された本発明者らの同時係属中の米国仮特許出願第６２／５４５，７４４号明細書に対する優先権を主張するものであり、この仮特許出願は全体として本明細書に援用される。

【0002】

本発明の分野は、特に本発明が標的化型ドキソルビシンとの併用での免疫療法薬に関することに伴い、癌治療用組成物及び方法である。

【背景技術】

【0003】

以下の説明には、本発明の理解に有用となり得る情報が含まれる。これは、本明細書に提供される情報のいずれかが現在特許請求されている発明の先行技術である、若しくはそれと関連性がある、又は具体的若しくは暗黙的に参照されるいずれかの刊行物が先行技術であると認めるものではない。

【0004】

本明細書において特定される全ての刊行物は、個別の刊行物又は特許出願がそれぞれ参照によって援用されることが具体的且つ個別的に示されたものとするのと同程度に参照によって援用される。援用される参考文献中の用語の定義又は使用が、本明細書に提供される当該用語の定義と矛盾する、又はそれに反する場合、本明細書に提供される当該用語の定義が適用され、その参考文献中の当該用語の定義は適用されない。

【0005】

セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）、ヒト上皮成長因子受容体に対するモノクローナル抗体）は、転移性結腸直腸癌、転移性非小細胞肺癌及び頭頸部癌の治療用に、並びに放射線療法と併用した頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）の治療への使用に、又は先行する白金系療法を受けた患者において単剤として、承認されている。ＥＧＦＲシグナル伝達の直接的な阻害に加え、抗体のＦｃ部分を介した細胞傷害性エフェクター細胞の動員による抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が、セツキシマブの重要な作用様式であると考えられている。

【0006】

セツキシマブの見かけ上の二重標的化を利用して、膠芽腫に対するセツキシマブをベースとしたキメラ抗原受容体を有する遺伝子改変ＮＫ９２細胞が報告された（例えば、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１６を参照のこと）。同様に、ＣＤ１６のＶ１５８変異体を有する高親和性ＮＫ（ｈａＮＫ）細胞が、これらの細胞は照射後であっても高レベルのグランザイム及び高レベルの溶解活性を有するため、潜在的に有効性が高い治療モダリティとして報告されている。これらの細胞がセツキシマブと併せて種々の癌細胞に対して使用され、有意な抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を示した（Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１６，Ｖｏｌ．７，（Ｎｏ．５２），ｐｐ：８６３５９－８６３７３）。少なくとも概念上は有望であるが、かかる手法を用いた免疫応答は、使用する抗体の標的化された効果になおも限られている。加えて、腫瘍微小環境が抑制的である場合、かかる標的化された手法であっても、予想ほど有効でないこともある。

【0007】

アルドキソルビシン（ドキソルビシンの（６－マレイミドカプロイル）ヒドラゾン）はプロドラッグ型のドキソルビシンであり、様々なタンパク質のチオール基、特に個体への注射時にアルブミンのシステインチオールＣ３４にコンジュゲートすることができる。ヒドラジン基の酸に不安定な性質に起因して、ドキソルビシン－アルブミンコンジュゲートが癌微小環境によく見られるとおりの酸性環境に直面すると、ドキソルビシンがアルブミンから加水分解的に切断される。従って、アルドキソルビシンは腫瘍微小環境中に遊離ドキソルビシンを特異的に放出することが期待される。有利には、循環アルブミンもまた、腫瘍に優先的に蓄積する傾向があり、これは腫瘍新生血管系の内皮を通じたｇｐ６０媒介性トランスサイトーシスに起因する可能性が最も高い。従って、アルドキソルビシンは、腫瘍微小環境を特異的に標的化するための魅力的な治療モダリティを呈すると考えられる。

【0008】

これを受けて、膠芽腫の第二選択治療（臨床試験識別番号ＮＣＴ０２０１４８４４）、カポジ肉腫（臨床試験識別番号２０２９４３０）、進行又は転移性膵管腺癌（臨床試験識別番号ＮＣＴ０１５８０３９７）、及び転移性小細胞肺癌（臨床試験識別番号ＮＣＴ０２２００７５７）の治療を含め、様々な臨床試験が行われている。アルドキソルビシンはまた、転移性又は局所進行肉腫の治療のためイホスファミドとの併用でも報告されている（臨床試験識別番号ＮＣＴ０２２３５７０１）。注目すべきことに、アルドキソルビシンは、免疫療法剤との併用では使用されておらず、これは恐らくは、ＤＮＡ損傷応答からの有害作用が疑われるとともに、ドキソルビシンに曝露した様々な細胞でエピジェネティック調節及びメタトランスクリプトミック調節が解除されることが理由である。

【0009】

従って、癌の治療におけるアルドキソルビシンの併用が限られていることが当該技術分野において公知であるとしても、特に免疫療法組成物との併用での、改良された併用療法の提供がなおも必要とされている。

【発明の概要】

【0010】

本発明の主題は、特に転移性腫瘍における腫瘍を治療するための、免疫療法組成物と化学療法組成物との併用の様々な組成物、方法、及び使用に関する。特に注目すべきことに、アルドキソルビシンを含む化学療法組成物の共投与によって腫瘍に対する免疫応答が亢進しており、ここで免疫療法組成物は、１つ以上の腫瘍関連抗原に対する癌ワクチンとＮＫ細胞ベースの療法薬とを含む。有利には、ｈａＮＫ細胞並びにアルドキソルビシンの両方の治療利益とも、低酸素腫瘍微小環境による悪影響を受けない。実際、ドキソルビシン（酸性腫瘍微小環境でアルドキソルビシンから優先的に放出される）を使用すると、低酸素腫瘍微小環境によく見られる骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を減少させることができ、又は更には消失させることさえできる。

【0011】

本発明の主題の一態様において、本発明者らは、腫瘍を有する患者の治療方法を企図する。この方法では、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含む免疫療法組成物及びアルドキソルビシンを含む化学療法組成物が提供される。次に、この免疫療法組成物及び化学療法組成物が、腫瘍（例えば、固形腫瘍、転移性腫瘍等）を治療するのに十分な用量及びスケジュールで患者に投与される。好ましくは、かかる方法で治療される患者は、過去の白金系化学療法及び過去の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法のうちの少なくとも一方の治療歴を有する。

【0012】

特に好ましい態様において、ワクチン成分は、改変細菌、改変酵母、及び改変ウイルスのうちの少なくとも１つ又は２つを含む。ワクチン成分は、腫瘍関連抗原（例えば、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡ）をコードする組換え核酸を含むことが好ましい。更にまた、細胞傷害性細胞成分がｈａＮＫ細胞及びＴ細胞のうちの少なくとも一方であり、このｈａＮＫ細胞又はＴ細胞は、キメラ抗原受容体及びＣＤ１６高親和性変異体のうちの少なくとも一方を発現するように遺伝子操作されていることが好ましい。

【0013】

好適な方法はまた、抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質を投与するステップを含んでもよく、この抗体又はタンパク質は、例えばｈａＮＫ細胞のＣＤ１６を介して細胞傷害性細胞成分にカップリングされてもよい。例えば、好適な抗体は、成長因子受容体、血管成長受容体、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープに選択的に結合することになる。加えて、チェックポイント阻害に干渉する又はそれを下方制御するタンパク質は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストであってもよい。

【0014】

所望に応じて、企図される方法はまた、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５等）又は免疫刺激性スーパーカイン（ｓｕｐｅｒｋｉｎｅ）（例えば、ＡＬＴ８０３）を投与するステップも含み得る。最も典型的には、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とは少なくとも１日空けて投与されることが企図される。しかしながら、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とは同時に又は少なくとも同じ日に投与されることが企図される。任意選択で、この方法に係る治療前及び治療後に、患者の分子プロファイル、特にＨＥＲ２発現レベル又はＲＡＳ突然変異状態を含むものを決定してもよく、これは、治療が成功する可能性の決定、治療における抗体タイプの決定、及び更なる治療計画のための指針を与え得る。

【0015】

本発明の主題の別の態様において、本発明者らは、腫瘍を有する患者の治療における免疫療法組成物とアルドキソルビシンを含む化学療法組成物との使用を企図する。好ましくは、かかる方法で治療される患者は、過去の白金系化学療法及び過去の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法のうちの少なくとも一方の治療歴を有する。免疫療法組成物はワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とを含み、更に任意選択で、成長因子受容体、血管成長受容体、癌関連抗原、癌特異抗原、若しくは癌特異的及び患者特異的ネオエピトープに特異的に結合する抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質を含む。

【0016】

特に好ましい態様において、ワクチン成分は、改変細菌、改変酵母、及び改変ウイルスのうちの少なくとも１つ又は２つを含む。ワクチン成分は、腫瘍関連抗原（例えば、ブラキウリ、ＭＵＣ１、及びＣＥＡ）をコードする組換え核酸を含むことが好ましい。更にまた、細胞傷害性細胞成分がｈａＮＫ細胞及びＴ細胞のうちの少なくとも１つであり、このｈａＮＫ細胞又はＴ細胞は、キメラ抗原受容体及びＣＤ１６高親和性変異体のうちの少なくとも一方を発現するように遺伝子操作されていることが好ましい。一部の実施形態において、細胞傷害性細胞成分は、抗体又はチェックポイント阻害に干渉する若しくはそれを下方制御するタンパク質とカップリングされる。この抗体は、成長因子受容体、血管成長受容体、免疫チェックポイント阻害薬、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープのうちの少なくとも１つに特異的に結合することが好ましい。また、チェックポイント阻害に干渉する又はそれを下方制御するタンパク質が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストであることも好ましい。

【0017】

一部の実施形態において、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とは、患者に共投与されるように製剤化される。他の実施形態において、ワクチン成分と細胞傷害性細胞成分とは、患者に別々に投与されるように製剤化される。

【0018】

本使用は、治療における免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインの使用を更に含み得る。最も好ましくは、免疫刺激性サイトカイン又は免疫刺激性スーパーカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト（ＡＬＴ８０３）、ＩＬ－２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される。

【0019】

以下の好ましい実施形態の詳細な説明から、添付の図面と併せて、本発明の主題の様々な目的、特徴、態様及び利点が更に明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】転移性膵癌と診断された患者＃１に対する癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療後の患者の血中における正規化した糖鎖抗原（ＣＡ）１９－９（ＣＡ１９－９）レベルのグラフを示す。ｘ軸は日数（時間）を表し、ｙ軸は量を表す。

【図2】転移性膵癌と診断された患者＃２に対する癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療後の患者の血中における正規化した糖鎖抗原（ＣＡ）１９－９（ＣＡ１９－９）レベルのグラフを示す。ｘ軸は日数（時間）を表し、ｙ軸は量を表す。

【図3】転移性膵癌と診断された患者＃３に対する癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療後の患者の血中における癌胎児性抗原（ＣＥＡ）レベルのグラフを示す。ｘ軸は日数（時間）を表し、ｙ軸は量を表す。

【図4】転移性膵癌と診断された患者＃４に対する癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療後の患者の血中における正規化した糖鎖抗原（ＣＡ）１９－９（ＣＡ１９－９）レベルのグラフを示す。ｘ軸は日数（時間）を表し、ｙ軸は量を表す。

【図5】転移性膵癌と診断された患者＃５に対する癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療後の患者の血中における正規化した糖鎖抗原（ＣＡ）１９－９（ＣＡ１９－９）レベルのグラフを示す。ｘ軸は日数（時間）を表し、ｙ軸は量を表す。

【図6】患者＃６の癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療前及び治療後のＰＥＴスキャン写真を示す。

【図7】患者＃６の癌ワクチン及び細胞傷害性細胞治療前及び治療後の横断ＰＥＴスキャン写真を示す。

【発明を実施するための形態】

【0021】

ここで本発明者らは、免疫療法組成物及びアルドキソルビシンを含む化学療法剤の有効性が、これらの２つの薬剤を癌患者に共投与することにより、場合によっては相乗的にすら（即ち、単に相加的に留まらない程度まで）亢進させ得ることを発見した。別の見方をすれば、本発明者らは更に、免疫療法組成物とアルドキソルビシンを含む化学療法剤とを含む治療レジメンを提供することにより、患者の腫瘍、特に転移性腫瘍をより有効に治療し得ることを見出した。アルドキソルビシンはドキソルビシンの前駆体であるため、及びドキソルビシンは免疫抑制薬として報告されているため、かかる知見は予想外であり、むしろ驚きでさえある（例えば、Ａｎｎ Ｐｌａｓｔ Ｓｕｒｇ．２０１２ Ｆｅｂ；６８（２）：２１５－２１を参照のこと）。従って、特に好ましい態様において、本発明者らは、ｉ）ワクチン成分及び細胞傷害性細胞成分を含む免疫療法組成物と、ｉｉ）アルドキソルビシンを含む化学療法組成物とを含む治療レジメンを提供し得ること、及び腫瘍を治療するのに十分な用量及びスケジュールでこの免疫療法組成物及び化学療法組成物を投与することにより、かかる治療レジメンを用いて腫瘍を治療し得ることを企図する。

【0022】

本明細書で使用されるとき、用語「腫瘍」は、人体の１つ以上の解剖学的部位に位置し得る又は見出され得る１つ以上の癌細胞、癌組織、悪性腫瘍細胞、又は悪性腫瘍組織を指し、且つそれらと同義的に使用される。本明細書で使用されるとき、用語「結合する」は、１０－６Ｍ以下又は１０－７Ｍ以下のＫＤによる高親和性での２つの分子間の相互作用を「認識する」及び／又は「検出する」という用語を指し、且つそれと同義的に使用される。本明細書で使用されるとき、用語「提供する」又は「提供すること」は、製造する、生成する、置く、使用を可能にする、又はすぐに使用できるようにすることを指し、且つそうすることの任意の行為を含む。

【0023】

本明細書で使用されるとき、用語「共投与すること」又は「共投与」は、患者に２つ以上の薬剤を単一の治療レジメンで投与することを指す。従って、薬剤Ａと薬剤Ｂとを共投与するとは、患者に薬剤Ａと薬剤Ｂとを単一の製剤で、又は２つの別個の製剤で同時投与することを指し得る。また、薬剤Ａと薬剤Ｂとを共投与するとは、薬剤Ａと薬剤Ｂとを単一の腫瘍を標的化する目的で単一の治療レジメンに従い投与することも指し得る。例えば、患者Ａについての腫瘍の治療用治療レジメンは、１日目に薬剤Ａを投与し、２日目に薬剤Ｂを投与することを含み、かかる投与が２週間繰り返され得る。かかる例では、薬剤Ａ及び薬剤Ｂは患者Ａに共投与されると見なされる。

【0024】

最も好ましい態様において、ワクチン成分は、腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を含む改変細菌、改変酵母、又は改変ウイルスのうちの少なくとも１つ、又はそのうちの少なくとも２つである。腫瘍微小環境において免疫細胞による免疫応答を誘発することのできる任意の好適な腫瘍関連抗原が企図される。従って、腫瘍関連抗原としては、限定はされないが、ＭＵＣ１、ＣＥＡ、ブラキウリ、ＲＡＳ（例えば、突然変異ＲＡＳ（例えば、Ｇ１２Ｖ、Ｑ６１Ｒ及び／又はＱ６１Ｌ突然変異等を有するＲＡＳ））などの腫瘍関連抗原、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２などの腫瘍特異抗原、又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオ抗原若しくはネオエピトープを挙げることができ、これらは患者のオミクスデータから同定することができる。一部の実施形態において、改変細菌、改変酵母、又は改変ウイルスの各々は、単一の腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を含み得る。他の実施形態において、改変細菌、改変酵母、又は改変ウイルスのうちの少なくとも１つは、ポリトープとして２つ以上の腫瘍関連抗原をコードする組換え核酸を含み得る。

【0025】

本明細書で使用されるとき、ポリトープとは、単一のポリペプチドとして発現する２つ以上の抗原のタンデムアレイを指す。好ましくは、２つ以上のヒト疾患関連抗原はリンカー又はスペーサーペプチドによって分離されている。リンカー又はスペーサーには、任意の好適な長さ及び順序のペプチド配列を使用することができる。しかしながら、リンカーペプチドの長さは３～３０アミノ酸、好ましくは５～２０アミノ酸、より好ましくは５～１５アミノ酸であることが好ましい。また本発明者らは、２つの抗原間にポリトープの可動性を付与するため、グリシンリッチ配列（例えば、ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｓｅｒ－ｇｌｙ－ｇｌｙ等）が好ましいことも企図する。

【0026】

一部の実施形態において、ワクチン成分の組換え核酸はまた、１つ以上の共刺激分子をコードする１つ以上の核酸配列も含み得る。共刺激分子としては、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、ＩＣＯＳ－Ｌ、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ－Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ３（ＣＤ５８）、及びＳＬＡＭファミリーのメンバーを挙げることができる。その上、核酸は更に、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト（ＩＬ－１５Ｎ７２Ｄ）、及び／又はＩＬ－１５スーパーアゴニスト／ＩＬ－１５ＲαＳｕｓｈｉ－Ｆｃ融合複合体）をコードする配列を含み得る。それに代えて、又は加えて、核酸は更にまた、ＳＭＡＣの少なくとも１つの成分（例えば、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、ＬＦＡ－１、ＣＤ４３、及び／又はＣＤ４５又はそのそれぞれの結合カウンターパート）をコードする配列も含み得る。所望の場合、加えて核酸は、ＥＢＶのＬＭＰ１の膜貫通ドメインがＩＰＳ－１のシグナル伝達ドメインに融合しているキメラタンパク質など、ＳＴＩＮＧ経路のアクチベーターをコードする配列を含み得る。かかる改変は、適応免疫応答を活性化させる追加的なシグナルを提供することにより、適応免疫応答の発生を更に一層亢進させると考えられる。

【0027】

本明細書で企図される組換え核酸がウイルス、酵母、又は細菌発現ベクターに限定される必要はないことが企図される。或いは、組換え核酸としてはまた、ＤＮＡワクチンベクター、線状化ＤＮＡ、及びｍＲＮＡも挙げることができ、これらは全て、当該技術分野において周知のプロトコルに従い好適な細胞にトランスフェクトすることができる。

【0028】

ワクチン成分を作成する任意の好適な方法が企図される。最も典型的には、腫瘍関連抗原をコードする核酸配列が発現ベクターに置かれ得る。ベクターに組換え核酸が挿入されて、患者の抗原提示細胞（例えば樹状細胞等）に核酸を送達することができるようになり、又は細菌若しくは酵母において核酸配列が転写されて、その核酸配列によってコードされる組換えタンパク質を全体として、又は断片として、抗原提示細胞に送達することができるようになる。タンパク質を発現させるために使用することのできる任意の好適な発現ベクターが企図される。特に好ましい発現ベクターとしては、少なくとも１ｋ、好ましくは２ｋ、より好ましくは５ｋ塩基対のカセットサイズを担持し得るものを挙げることができる。

【0029】

従って、一実施形態において、好ましい発現ベクターとしては、ウイルスベクター（例えば、任意選択でＥ１及び／又はＥ２ｂ遺伝子が欠失した又は非機能性である非複製組換えアデノウイルスゲノム）が挙げられる。発現ベクターがウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、特にＥ１及びＥ２ｂが欠失したＡｄＶ）である場合、次には組換え核酸を含む組換えウイルスは、典型的には投薬量単位当たり１０^６～１０^１３ウイルス粒子、及びより典型的には１０^９～１０^１２ウイルス粒子のウイルス力価の滅菌注射用組成物として製剤化された医薬組成物中の治療ワクチンとして個々に、又は組み合わせで使用し得ることが企図される。或いは、ウイルスは、エキソビボで患者（又は他のＨＬＡ適合）細胞を感染させるために用いられてもよく、そのように感染させた細胞は、次には患者に輸注される。更なる例において、ウイルスによる患者の治療は、裸の形態の、又はネオエピトープ、ネオエピトープ類、腫瘍関連抗原又はウイルスと同じペイロードを標的とする抗体を発現するキメラ抗原受容体を担持する、同種移植される又は自家性のナチュラルキラー細胞又はＴ細胞を伴い得る。患者由来のＮＫ－９２細胞株を含むナチュラルキラー細胞はまた、ＣＤ１６を発現してもよく、抗体とカップリングすることができる。

【0030】

更に別の実施形態において、発現ベクターは、遺伝子操作された細菌で発現させることのできる細菌ベクターであってもよく、これは、人体への導入時にヒト細胞においてエンドトキシン反応を引き起こさない十分に低いレベルで及び／又はＣＤ－１４媒介性敗血症を生じさせるのに不十分なレベルでエンドトキシンを発現する。改変リポ多糖類を有する一つの例示的細菌株としては、ＣｌｅａｒＣｏｌｉ（登録商標）ＢＬ２１（ＤＥ３）エレクトロコンピテント細胞が挙げられる。この細菌株は、遺伝子型Ｆ－ｏｍｐＴ ｈｓｄＳＢ（ｒＢ－ ｍＢ－）ｇａｌ ｄｃｍ ｌｏｎ λ（ＤＥ３［ｌａｃＩ ｌａｃＵＶ５－Ｔ７遺伝子１ ｉｎｄ１ ｓａｍ７ ｎｉｎ５］）ｍｓｂＡ１４８ ΔｇｕｔＱΔｋｄｓＤ ΔｌｐｘＬΔｌｐｘＭΔｐａｇＰΔｌｐｘＰΔｅｐｔＡのＢＬ２１である。これに関連して、幾つかの特異的欠失突然変異（ΔｇｕｔＱ ΔｋｄｓＤ ΔｌｐｘＬ ΔｌｐｘＭΔｐａｇＰΔｌｐｘＰΔｅｐｔＡ）がＬＰＳからリピドＩＶＡへの改変をコードする一方、１つの付加的補償突然変異（ｍｓｂＡ１４８）が、ＬＰＳ前駆体リピドＩＶＡの存在下における細胞の生存の維持を可能にすることが理解されなければならない。これらの突然変異はＬＰＳからのオリゴ糖鎖の欠失を生じさせる。より具体的には、６つのアシル鎖のうちの２つが欠失する。ＬＰＳのこれらの６つのアシル鎖は、ミエロイド系分化因子２（ＭＤ－２）と複合体化したＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）によって認識されるトリガーであり、ＮＦ－κＢの活性化及び炎症誘発性サイトカインの産生を引き起こす。４つのアシル鎖しか含有しないリピドＩＶＡは、ＴＬＲ４によって認識されず、従ってエンドトキシン反応を惹起しない。エレクトロコンピテントＢＬ２１細菌を例として提供するが、本発明者らは、遺伝子改変細菌がまた化学的にコンピテントな細菌であってもよいことを企図する。それに代えて、又は加えて、発現ベクターはまた、酵母、好ましくはサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（例えば、ＧＩ－４００系列の組換え免疫療法酵母株等）で発現することのできる酵母ベクターであってもよい。

【0031】

本発明者らは、上記に記載されるとおりの組換え核酸を有する組換えウイルス、細菌又は酵母を任意の薬学的に許容可能な担体に更に製剤化（例えば、好ましくは滅菌注射用組成物として製剤化）して医薬組成物を形成し得ることを更に企図した。医薬組成物が組換えウイルスを含む場合、組成物のウイルス力価は投薬量単位当たり１０^４～１０^１２ウイルス粒子であることが好ましい。しかしながら、代替的な製剤もまた本明細書における使用に好適と見なされ、本明細書においてはあらゆる公知の投与経路及び投与方式が企図される。医薬組成物が組換え細菌を含む場合、組成物の細菌力価は投薬量単位当たり１０^２～１０^３、１０^３～１０^４、１０^４～１０^５細菌細胞が好ましい。医薬組成物が組換え酵母を含む場合、組成物の細菌力価は投薬量単位当たり１０^２～１０^３、１０^３～１０^４、１０^４～１０^５酵母細胞が好ましい。

【0032】

本明細書で使用されるとき、ウイルス、細菌又は酵母製剤を「投与する」という用語は、ウイルス、細菌又は酵母製剤の直接投与及び間接投与の両方を指し、ここで製剤の直接投与は、典型的には医療専門家（例えば、医師、看護師等）によって実施され、及び間接投与は、直接投与（例えば、注射、注入、経口送達、局所送達等による）のため製剤を医療専門家に提供する又は利用可能にするステップを含む。

【0033】

一部の実施形態において、ウイルス、細菌又は酵母製剤は、皮下、真皮下注射、又は静脈内注射を含めた全身注射によって投与される。他の実施形態において、全身注射が効率的でない可能性がある場合（例えば、脳腫瘍に対して等）、製剤は腫瘍内注射によって投与されることが企図される。

【0034】

製剤投与の用量及びスケジュールに関して、用量及び／又はスケジュールは、ウイルス、細菌又は酵母のタイプ、疾患のタイプ及び予後（例えば、腫瘍型、サイズ、部位）、患者の健康状態（例えば、年齢、性別等を含む）に応じて変わり得ることが企図される。用量及びスケジュールは変わり得るが、製剤が宿主正常細胞にいかなる重大な毒性作用ももたらさず、しかし免疫応答を誘発するには十分であるように選択及び調節され得る。従って、好ましい実施形態において、製剤の最適な又は所望の投与条件は、所定の閾値を基準として決定することができる。例えば、所定の閾値は、特定のタイプのサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０等）の所定の局所又は全身濃度であってもよい。

【0035】

例えば、医薬組成物が組換えウイルスを含む場合、腫瘍溶解性ウイルス製剤の企図される用量は、少なくとも１０^６ウイルス粒子／日、又は少なくとも１０^８ウイルス粒子／日、又は少なくとも１０^１０ウイルス粒子／日、又は少なくとも１０^１１ウイルス粒子／日である。一部の実施形態において、ウイルス製剤の単一用量は、少なくとも１日１回又は１日２回（各回の投与につき半分の用量）、少なくとも１日、少なくとも３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも１ヵ月にわたって、又は任意の他の所望のスケジュールで投与することができる。他の実施形態において、ウイルス製剤の用量はスケジュール中に漸増させるか、又はスケジュール中に漸減させることができる。なおも他の実施形態において、ウイルス製剤の一続きの投与を複数行うのに間隔を空けることができる（例えば、連続３日の各１投与、及び７日の間隔を置いて別の連続３日の各１投与等）。

【0036】

一部の実施形態において、医薬製剤の投与は２つ以上の異なる段階：プライミング投与及びブースト投与であってもよい。プライミング投与の用量は後続のブースト投与よりも高い（例えば、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％）ことが企図される。更にまた、プライミング投与の用量が後続のブースト投与よりも低いことも企図される。加えて、複数のブースト投与がある場合、各ブースト投与が異なる用量を有する（例えば、漸増用量、漸減用量等）。

【0037】

企図される細胞傷害性細胞成分に関して、細胞成分は好ましくはＮＫ細胞（及びそのあらゆる誘導体）、ＮＫＴ細胞、及び／又は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞等）であることに留意しなければならない。一部の実施形態において、細胞傷害性細胞成分は、患者にとってナイーブな又は同種異系のＮＫ、ＮＫＴ、又は細胞傷害性Ｔ細胞を含み得る。例えば、ＮＫ細胞はまた、患者から入手されるか若しくは患者の前駆細胞から産生されてもよく、又は細胞バンクから入手されてもよい（好ましくはアロタイプ適合）。更なる例において、細胞成分はまた活性化Ｔ細胞であってもよく、これは患者から単離されるか（及びアネルギー性の場合、任意選択で再活性化させる）、又はドナー若しくは細胞培養物から単離されてもよい。適切な場合、かかるＴ細胞はまた、腫瘍細胞に対する細胞の特異性を増加させるためキメラ抗原受容体及び／又はＣＤ１６を発現するように遺伝子改変されてもよい。他の実施形態において、細胞傷害性細胞成分は、患者にとって異種の細胞、好ましくは不死化され、遺伝子操作された細胞を含み得る。例えば、特に企図されるＮＫ細胞としては、ａＮＫ細胞（複数の抑制性受容体を欠く活性化ＮＫ－９２誘導体細胞）、ｈａＮＫ細胞（高親和性ＣＤ１６変異体（例えば、Ｖ１５８変異体等）を含むＮＫ－９２誘導体細胞、及びｔａＮＫ細胞（キメラ抗原受容体を含むＮＫ－９２誘導体細胞）が挙げられ、これらは当該技術分野において公知である（例えば、ＮａｎｔＫｗｅｓｔ，Ｉｎｃ．，９９２０ Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｂｌｖｄ．；Ｃｕｌｖｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ ９０２３２）。加えて、また、ＮＫ細胞の細胞傷害性が低酸素条件下（例えば腫瘍微小環境）でも活性なままであるように、ＮＫ９２細胞がＩＬ－２を発現して細胞内に（例えば小胞体に）保持するように更に遺伝子改変されることも好ましい。

【0038】

特に、企図される方法においてｈａＮＫ細胞が用いられる場合、低酸素環境中でｈａＮＫ細胞の細胞傷害活性は大部分が維持されることが理解されなければならず、このことは典型的に低酸素である腫瘍微小環境において特に有利である。従って、特に好ましい方法は、ｈａＮＫ細胞にカップリングされた抗体を伴う又は伴わないｈａＮＫ細胞の投与を含む。別の見方をすれば、腫瘍微小環境において、その環境が低酸素の場合であっても、標的化した細胞溶解活性を実現することができる。更に、以下で更により詳細に考察するとおり、ｈａＮＫ細胞死滅活性はアルドキソルビシンによって更に増加させるか、又は少なくとも維持することができる。

【0039】

企図される細胞傷害性細胞は、典型的には輸注１回当たり１～５×１０^９細胞の量で患者に投与され、ｈａＮＫ細胞が使用される場合、この細胞には抗体又はタンパク質が「負荷」され、そのようにして標的特異性が付与され、又は腫瘍における免疫応答が誘発及び／又は促進され得ることが理解されなければならない。容易に理解されるであろうとおり、かかる「負荷」は、抗体をｈａＮＫ細胞上の高親和性ＣＤ１６変異体に結合させることにより実現されることになる。それに代えて又は加えて、抗体は細胞傷害性細胞と別個に投与されてもよく、あらゆる投与方法が本明細書における使用（例えば、静脈内注射）に好適と見なされることに留意しなければならない。

【0040】

腫瘍細胞を特異的に標的化することのできる任意の好適な抗体が企図される。例示的抗体としては、成長因子受容体（例えば、ＨＥＲ２等）、血管成長受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２等）、腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、並びに腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープに特異的及び／又は選択的に結合するものを挙げることができる。例えば、企図されるｈａＮＫ細胞は、セツキシマブ（ＥＧＦＲに結合する）と会合させるか、又はセツキシマブと共投与してもよい。加えて、細胞傷害性細胞は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、又はＣＤ１６０の抗体又はアンタゴニストを挙げることができる免疫チェックポイント阻害薬に対する結合タンパク質を負荷するか、又はそれと共投与することができる。

【0041】

一部の実施形態において、抗体及び／又は免疫チェックポイント阻害薬に対するアンタゴニストであるタンパク質は、切断可能若しくは切断不可能のいずれかのリンカーを介して、及び／又は直接若しくは間接的に、細胞傷害性免疫細胞にカップリングされてもよい。例えば、リンカーは、３～３０アミノ酸、好ましくは５～２０アミノ酸、より好ましくは５～１５アミノ酸である短い長さのペプチドであってもよい。好ましくは、かかる短いペプチドリンカーはグリシンリッチ配列（例えば、ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｓｅｒ－ｇｌｙ－ｇｌｙ等）を有して可動性を付与する。別の例において、リンカーは、腫瘍微小環境で、及び／又は免疫系の活性化時に優先的に切断される切断可能リンカーであってもよく、企図される。一つの好ましい切断可能リンカーは、弱酸性環境（例えば、３～６のｐＨ、４～６のｐＨ、４．５～５．５のｐＨ等）で切断可能であり、しかし中性ｐＨでは安定である。例えば、好ましい酸に不安定なリンカーとしては、チマレアミド酸（ｔｈｉｍａｌｅａｍｉｃ ａｃｉｄ）リンカー及び酸で切断可能なヒドラジンリンカー（例えば、ヒドラジンリンカー等）が挙げられる。酸に不安定なリンカーを介して細胞傷害性免疫細胞にカップリングした抗体又は結合タンパク質／分子は、弱酸性腫瘍微小環境で放出させることができ、従ってこの抗体又は結合タンパク質／分子は腫瘍微小環境において腫瘍細胞を選択的及び特異的に標的化できることが企図される。

【0042】

このように企図されるリンカーは、免疫担当細胞に直接又は間接的にカップリングさせることができる。リンカーの直接的なカップリングに関して、リンカーを細胞にコンジュゲートする方法は、リンカーの化学構造及び成分に応じて変わることができ、任意の好適なコンジュゲーション方法が企図される。一部の実施形態において、リンカーは、好ましくは細胞の正常機能に干渉することなく、免疫担当細胞の膜タンパク質に直接コンジュゲートすることができる。更に、リンカーがカップリングされる細胞膜タンパク質は、カップリングされたリンカーが膜タンパク質の再生処理に起因してエンドサイトーシスを受けないように、比較的長い半減期を有することが好ましい。かかる実施形態において、リンカーはＮ－ヒドロキシスクシンイミジル－ＰＥＧ（ＰＥＧ－ＮＨＳ）にコンジュゲートすることができ、それによりリンカーは、細胞表面にアミノ基を有するあらゆる種類の膜タンパク質と共有結合的に結合する。或いは、リンカーをＰＥＧとコンジュゲートしてＰＥＧ－糖脂質を形成するか、又はアルキル側鎖を担持するポリ（ビニルアルコール）とコンジュゲートして（ＰＶＡ－アルキル）、コンジュゲートされるリンカーを免疫担当細胞の膜脂質二重層に疎水性相互作用でアンカリングすることができる。

【0043】

更に、本明細書に提供される方法及び使用を１つ以上の免疫刺激性サイトカイン及び／又は免疫刺激性スーパーカインで更に増強し得ることが企図される。特に好ましいサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１、及びそのスーパーアゴニストバージョンが挙げられる。例えば、スーパーカインの場合、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト（ＩＬ－１５Ｎ７２Ｄ）、及び／又はＩＬ－１５スーパーアゴニスト／ＩＬ－１５ＲαＳｕｓｈｉ－Ｆｃ融合複合体（ＡＬＴ８０３）が特に好ましい。

【0044】

最も好ましくは、企図される化合物及び組成物は、時間的／空間的に編成された免疫療法製剤の併用を用いて投与されることにより腫瘍微小環境を調節し、自然、適応免疫系を活性化し、及び免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を更に誘導するものであり、これらは全て、アルドキソルビシンによって（相乗的に）亢進させることができる。これに関連して、特に、アルドキソルビシンがドキソルビシンのマレイミドカプロイルヒドラゾンプロドラッグ形態であり、これは利用可能なチオール基（例えばアルブミンにおけるＣ３４）に共有結合的に結合する反応基を含むこと、及び加水分解切断時にドキソルビシンを放出する酸に不安定なヒドラジン結合を有することが認識されなければならない。従って、アルドキソルビシンが低酸素酸性腫瘍微小環境に曝露されると、腫瘍微小環境中にドキソルビシンが優先的に放出される。かかる優先性は、アルドキソルビシンをアルブミンにカップリングすることにより更に亢進し、アルブミンは腫瘍微小環境中へと（典型的にはｇｐ６０媒介性トランスサイトーシスを介して）再循環する。特定の癌では、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が、免疫抑制を編成するその「選択的活性化」（又はＭ２）表現型に主に起因して、腫瘍進行の促進において極めて重要な役割を果たすことが知られている。有利には、ドキソルビシンはＭ２マクロファージ及びＭＤＳＣに対抗する。

【0045】

これを受けて、及び他の企図される選択肢の中でも特に、好ましい治療成分としては、（ａ）腫瘍微小環境に（例えばトランスサイトーシスによって）侵入して腫瘍抑制環境に打ち勝つためのナノ粒子アルブミン結合（Ｎａｂ）化学療法併用、（ｂ）腫瘍関連抗原及び／又は患者特異的及び腫瘍特異的ネオ抗原を免疫担当細胞に直接又は間接的に送達して未熟樹状細胞を患者特異的且つ腫瘍特異的に活性化することにより適応免疫応答を誘導し及び／又は亢進させる抗原産生ワクチン実体（例えば、組換えアデノウイルス、細菌、及び／又は酵母）、（ｃ）内因性であっても（例えば、ＩＬ－１５又はＩＬ－１５スーパーアゴニストでの刺激による）及び／又は外因性であってもよい（例えば、ａＮＫ、ｈａＮＫ、ｔａＮＫ細胞などの遺伝子改変ＮＫ細胞）、自然免疫応答を誘導し及び／又は亢進させるためのナチュラルキラー細胞、及び（ｄ）好ましくはワクチン、細胞療法、及び融合タンパク質（例えば、遺伝子操作された融合タンパク質サイトカイン刺激物質及び／又はチェックポイント阻害薬）によって活性化する、長期寛解を持続させるための内因性活性化メモリーＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を挙げることができる。

【0046】

免疫療法組成物（ワクチン成分及び細胞傷害性細胞成分）及び化学療法組成物（アルドキソルビシン）の任意の好適な投与順序が企図される。例えば、免疫療法組成物及び化学療法組成物は両方とも、同時に若しくは同じ日に（例えば、１時間以内、３時間以内、６時間以内、１２時間以内、２４時間以内等に）又は異なる日に（例えば、少なくとも１日空けて、少なくとも２日空けて等）患者に投与することができる。これらの組成物の最も好ましい投与スケジュールは、以下の例に提供する。

【0047】

本発明者らは、概して、本明細書に提供される治療が、哺乳類、特にヒトの固形癌及び血液由来癌を含めた様々な癌に好適となるであろうことを企図する。加えて、本発明者らは更に、本明細書に提供される治療が、ワクチン成分及び／又は細胞傷害性細胞成分による標的となるはずの腫瘍関連抗原、腫瘍特異抗原、及び／又は腫瘍特異的及び患者特異的ネオエピトープを発現する腫瘍細胞を持つ患者に好適となるであろうことを企図する。別の見方をすれば、本発明者らは、患者の腫瘍細胞の分子プロファイルを治療前及び／又は治療後に決定して治療に最も好適なワクチン成分及び／又は細胞傷害性細胞成分を同定し、治療が成功する可能性を予測し、及び／又は治療の有効性を決定し得ることを企図する。従って、分子プロファイルとしては、１つ以上の腫瘍関連遺伝子のゲノミクスプロファイル、特に患者の腫瘍から同定される及び／又は当該技術分野において公知のかかる腫瘍関連遺伝子における１つ以上の突然変異（例えば、ＲＡＳにおけるＧ１２Ｖ、Ｑ６１Ｒ及び／又はＱ６１Ｌ突然変異等）を挙げることができる。好適な分子プロファイルとしてはまた、腫瘍組織において過剰発現又は過少発現する１つ以上の腫瘍関連遺伝子（例えばＨＥＲ２）のトランスクリプトミクスプロファイルも挙げることができる。患者の腫瘍のゲノミクス及び／又はトランスクリプトミクスプロファイルを入手する任意の好適な方法が企図される。特に好ましい方法には、患者の体液（例えば、血清、全血等）から入手した腫瘍関連遺伝子に由来する１つ以上のセルフリーＤＮＡ及び／又はセルフリーＲＮＡを同定及び／又は定量化すること、及び腫瘍の分子的特徴及び／又は腫瘍予後とのその関係を決定することが含まれる。

【実施例】

【0048】

実施例Ｉ：進行脊索腫を有する対象における免疫療法
実施例Ｉで使用される治療組成物及びモダリティには、以下の表１に示すとおりの様々な生体分子及び組成物が含まれる。

【0049】

【表1】

【0050】

治療は、以下に記載するとおり、誘導相と維持相との２相で投与される。対象は、最長１年又は対象に進行性疾患（ＰＤ）若しくは許容できない毒性（用量減量によって修正可能でない）が生じるまで誘導治療を継続する。誘導相で完全奏効（ＣＲ）を示す者が、本試験の維持相に進む。対象は本試験の維持相に最長１年留まり得る。対象にＰＤ又は許容できない毒性（用量減量によって修正可能でない）が生じるまで、維持相で治療を継続する。誘導相及び維持相の両方を含めた、試験治療を受ける最長時間は２年である。

【0051】

スクリーニング時、初期誘導相の終了時（治療開始から８週間後）、及び長期にわたる可能性のある誘導相及び維持相の間（奏効に応じて）、腫瘍生検及び探索的腫瘍分子プロファイリングを行うことができる。探索的免疫学及びｃｔＤＮＡ／ｃｔＲＮＡ分析のため誘導相で４週間毎及び維持相で８週間毎にルーチンの採血時に別個の血液チューブを収集することができる。固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）バージョン１．１及び免疫関連効果判定基準（ｉｒＲＣ）に従い標的及び非標的病変のコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、又は陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）－ＣＴによってスクリーニング時に腫瘍を評価し、誘導相の間は８週間毎及び維持相の間は１２週間毎に腫瘍奏効を評価する。

【0052】

誘導相：誘導相は、２週間サイクルを最長１年の治療期間にわたって繰り返すことからなる。治療レジメンには、ＡＬＴ－８０３、アベルマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、シクロホスファミド、アルドキソルビシン、ＥＴＢＸ－０５１、ＥＴＢＸ－０６１、ＧＩ－６３０１、ｈａＮＫ細胞、ｎａｂ－パクリタキセル、ω３酸エチルエステル類、トラベクテジン、及び放射線療法が含まれる。最初の４回の２週間サイクルの間に同時にＳＢＲＴが提供されることになる。放射線照射は、ＳＢＲＴを用いて５ヵ所以下の実行可能な腫瘍部位に投与される。試験治療の誘導相は以下の投与レジメンに従い行われる。

【0053】

毎日：ω３酸エチルエステル類（経口［ＰＯ］１日２回［ＢＩＤ］［３×１ｇカプセル及び２×１ｇカプセル］）。

【0054】

１日目、２週間毎：ベバシズマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）。

【0055】

１～５及び８～１２日目、２週間毎：シクロホスファミド（５０ｍｇ ＰＯ ＢＩＤ）。

【0056】

１及び８日目、２週間毎：Ｎａｂ－パクリタキセル（７５ｍｇ ＩＶ）；アルドキソルビシン（２５ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）；トラベクテジン（０．２ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）。

【0057】

５、１９、３３日目（３用量は２週間毎、次にその後８週間毎）：ＥＴＢＸ－０５１及びＥＴＢＸ－０６１（５×１０^１１ウイルス粒子［ＶＰ］／ワクチン／用量 皮下［ＳＣ］）；ＧＩ－６３０１（４０酵母単位［ＹＵ］／ワクチン／用量 ＳＣ）、ＥＴＢＸ－０５１／ＥＴＢＸ－０６１の投与から２時間後。

【0058】

８日目、毎週：セツキシマブ（２５０ｍｇ ＩＶ）。

【0059】

８日目、２週間毎：アベルマブ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ １時間かけて）。

【0060】

８、２２、３６、５０日目（４用量は２週間毎）：ＳＢＲＴ（８Ｇｙを超えないこと、正確な線量は放射線腫瘍医が決定する）。

【0061】

９日目、２週間毎：ＡＬＴ－８０３（１０μｇ／ｋｇ ＳＣ ｈａＮＫ注入の３０分前）。

【0062】

９及び１１日目、２週間毎：ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。

【0063】

維持相：維持相の継続期間は、誘導相における最終回の治療の完了後最長１年である。維持相には２週間サイクルの繰り返しが含まれる。治療レジメンは、ＡＬＴ－８０３、アベルマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、シクロホスファミド、ＥＴＢＸ－０５１、ＥＴＢＸ－０６１、ＧＩ－６３０１、ｈａＮＫ細胞、ｎａｂ－パクリタキセル、ω３酸エチルエステル類、及びトラベクテジンからなる。試験治療の維持相は以下の投与レジメンに従い行われることになる。

【0064】

毎日：ω３酸エチルエステル類（ＰＯ ＢＩＤ［３×１ｇカプセル及び２×１ｇカプセル］）。

【0065】

１日目、２週間毎：ベバシズマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）；Ｎａｂ－パクリタキセル（７５ｍｇ ＩＶ）；アベルマブ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ １時間かけて）；セツキシマブ（２５０ｍｇ ＩＶ）；トラベクテジン（０．２ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）。

【0066】

１～５及び８～１２日目、２週間毎：シクロホスファミド（５０ｍｇ ＰＯ ＢＩＤ）。

【0067】

２日目、２週間毎：ＡＬＴ－８０３（１０μｇ／ｋｇ ＳＣ）（ｈａＮＫ注入の３０分前）；ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。

【0068】

５日目、その後８週間毎：ＥＴＢＸ－０５１及びＥＴＢＸ－０６１、（５×１０^１１ＶＰ／ワクチン／用量 ＳＣ）；ＧＩ－６３０１（４０ＹＵ／ワクチン／用量 ＳＣ）、ＥＴＢＸ－０５１の投与から２時間後。

【0069】

本明細書での使用に好適な更なる方法、組成物、使用、及び考慮点については、２０１７年６月３０日に出願された本発明者らの同時係属中の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１７／４０２９７号明細書に記載される。

【0070】

実施例ＩＩ：ＮＡＮＴ扁平上皮癌（ＳＣＣ）ワクチン：白金系化学療法及び抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）／プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）による治療中又は治療後に進行したＳＣＣを有する対象において自然高親和性ナチュラルキラー（ｈａＮＫ）細胞療法をアデノウイルス及び酵母ベースのワクチンと組み合わせてＴ細胞応答を誘導する分子情報に基づく統合免疫療法。

【0071】

実施例ＩＩで使用される治療組成物及びモダリティには、以下の表２に示すとおりの様々な生体分子及び組成物が含まれる。

【0072】

【表2】

【0073】

本例の治療は、白金系化学療法及び抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法による治療を過去に受けたことがある、治療中又は治療後に腫瘍が進行した患者に提供される。本例の治療は、以下に記載するとおり、誘導相と維持相との２相で投与される。対象は誘導治療を最長１年継続する。誘導相で完全奏効（ＣＲ）を示す者が、本試験の維持相に進む。１年の時点で進行中の安定（ＳＤ）又は進行中の部分奏効（ＰＲ）が得られている対象は、維持相に進んでもよい。対象は本試験の維持相に最長１年留まり得る。対象がＰＤ又は許容できない毒性（用量減量で修正されない）を生じるか、同意を撤回するまで、又は治療継続がもはや対象の最大の利益でなくならない限り、維持相で治療を継続する。誘導相及び維持相の両方を含めた、試験治療を受ける時間は最長２年である。

【0074】

本試験での治療前、治療開始８週間後、及び長期にわたる可能性のある誘導相及び維持相の間（奏効に応じて）に収集した試料に関して探索的腫瘍分子プロファイリングを行う。探索的免疫学及びｃｔＤＮＡ／ｃｔＲＮＡ分析のため誘導相で６週間毎及び維持相で８週間毎にルーチンの採血時に別個の血液チューブを収集する。

【0075】

固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）に従い標的及び非標的病変のコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、又は陽電子放射断層撮影法－コンピュータ断層撮影法（ＰＥＴ－ＣＴ）によってスクリーニング時に腫瘍を評価し、誘導相の間は８週間毎、及び維持相の間は１２週間毎に腫瘍奏効を評価する。

【0076】

前向き腫瘍分子プロファイリングを行うことによりＨＥＲ２発現及びＲＡＳ突然変異状態に関して情報を入手し、これはＥＴＢＸ－０２１及びＧＩ－４０００を投与するかどうかを決定するために使用されることになる。ＥＴＢＸ－０２１及びＧＩ－４０００投与は、腫瘍分子プロファイリングの結果が利用可能になり次第、開始することができる。全ての対象が、その腫瘍分子プロファイルに関わらず、他の全ての薬剤の投与を受ける。前向き腫瘍分子プロファイリングはまた、本試験での治療前に収集されるＦＦＰＥ腫瘍組織及び全血（腫瘍組織に対する対象対応正常対照）に関して実施することもできる）。対象は、その腫瘍がＨＥＲ２を過剰発現する場合（≧７５０アトモル／μｇの腫瘍組織、質量分析法を伴う定量的プロテオミクスによって決定したとき）、ＥＴＢＸ－０２１の投与を受ける。対象は、全ゲノムシーケンシングによって決定したとき、その腫瘍が特異的ＲＡＳ突然変異に関して陽性である場合、ＧＩ－４０００の投与を受ける。

【0077】

本例の治療レジメンは、２相：誘導相及び維持相である。誘導相の目的は、腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激し、腫瘍微小環境における免疫抑制を軽減することである。維持相の目的は、腫瘍細胞に対する進行中の免疫系活性を持続させて、長続きする治療応答を生じさせることである。

【0078】

誘導相：誘導相における治療は、以下のとおりの治療レジメンに示される３週間サイクルを最長１年の治療期間にわたって繰り返すことからなる。

【0079】

１日目、３週間毎：ベバシズマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）、ロイコボリン（２０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶボーラス）、Ｎａｂ－パクリタキセル（１２５ｍｇ ＩＶ）、シスプラチン（４０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ １時間かけて）。

【0080】

１～５日目、３週間毎：５－ＦＵ（１，５００ｍｇ／ｍ^２持続静脈内注入、８５～９６時間かけて）、シクロホスファミド（２５ｍｇ経口［ＰＯ］１日２回［ＢＩＤ］）

【0081】

５日目（±１日）、３サイクルは３週間毎、次にその後９週間毎：ＥＴＢＸ－０１１、ＥＴＢＸ－０２１、ＥＴＢＸ－０５１、及びＥＴＢＸ－０６１（１×１０^１１ウイルス粒子［ＶＰ］／ワクチン／用量 皮下［ＳＣ］）。

【0082】

上記に記載されるとおり、前向き腫瘍分子プロファイリングにより、ＥＴＢＸ－０２１を投与するかどうかを決定し得ることが理解されなければならない。

【0083】

８日目：アルドキソルビシンＨＣｌ（８０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ、３０分かけて）、シスプラチン（２０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ １時間かけて）、ＳＢＲＴ（８Ｇｙを超えないこと、正確な線量は放射線腫瘍医が決定する；最初の２サイクルのみ）、及びセツキシマブ（２５０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）又はネシツムマブ（４００ｍｇ ＩＶ）。セツキシマブは頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）の対象に投与されることになり、一方、ネシツムマブは扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の対象に投与されることになる点が注記される。

【0084】

８～１２日目、３週間毎：シクロホスファミド（２５ｍｇ ＰＯ 毎日［ＱＤ］）。

【0085】

９日目、３週間毎：アベルマブ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ １時間かけて）、ＡＬＴ－８０３（１０μｇ／ｋｇ ＳＣ ｈａＮＫ注入の少なくとも３０分前）、ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。

【0086】

１１日目、３週間毎：ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。

【0087】

１１日目、３サイクルは３週間毎及びその後９週間毎：ＧＩ－４０００、ＧＩ－６２０７、ＧＩ－６３０１（４０酵母単位［ＹＵ］／ワクチン／用量 ＳＣ）。上記に記載されるとおり、前向き腫瘍分子プロファイリングにより、ＧＩ－４０００を投与するかが決定されることになる。

【0088】

１５日目、３週間毎：ＳＢＲＴ（８Ｇｙを超えないこと、正確な線量は放射線腫瘍医が決定する；最初の２サイクルのみ）。

【0089】

１６日目、３週間毎：ＡＬＴ－８０３（１０μｇ／ｋｇ ＳＣ ｈａＮＫ注入の少なくとも３０分前）、ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）、セツキシマブ（２５０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）又はネシツムマブ（４００ｍｇ ＩＶ）。

【0090】

１８日目、３週間毎：ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。

【0091】

維持相：維持相の継続期間は、誘導相における最終回の治療の完了後最長１年となる。維持相は、以下のとおりの治療レジメンに示す２週間サイクルの繰り返しからなることになる。

【0092】

１日目、２週間毎：アルドキソルビシンＨＣｌ（６０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ、３０分かけて）、ベバシズマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）、Ｎａｂ－パクリタキセル（１００ｍｇ ＩＶ）。

【0093】

１～５日目、２週間毎：カペシタビン（６５０ｍｇ／ｍ^２ ＰＯ ＢＩＤ）。

【0094】

１～５及び８～１２日目、２週間毎：シクロホスファミド（２５ｍｇ ＰＯ ＢＩＤ）。

【0095】

２日目、２週間毎：アベルマブ（１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ １時間かけて）、セツキシマブ（２５０ｍｇ／ｍ^２ ＩＶ）又はネシツムマブ（４００ｍｇ ＩＶ）、ＡＬＴ－８０３（１０μｇ／ｋｇ ＳＣ）（ｈａＮＫ注入の少なくとも３０分前）、ｈａＮＫ（２×１０^９細胞／用量 ＩＶ）。セツキシマブは、ＨＮＳＣＣの対象に投与されることになり、一方、ネシツムマブは扁平上皮ＮＳＣＬＣの対象に投与されることになる。

【0096】

５日目（±１日）、その後８週間毎：ＥＴＢＸ－０１１、ＥＴＢＸ－０２１、ＥＴＢＸ－０５１、ＥＴＢＸ－０６１（１×１０^１１ＶＰ／ワクチン／用量 ＳＣ）、ＧＩ－４０００、ＧＩ－６２０７、ＧＩ－６３０１（４０ＹＵ／ワクチン／用量 ＳＣ）、Ａｄ－５系ワクチンの投与から２時間後。

【0097】

本発明者らは、いかなる特定の理論によっても拘束されることを望むものではないが、低用量メトロノミック化学療法（ＬＤＭＣ）、ベバシズマブ、セツキシマブ又はネシツムマブ、癌ワクチン、低線量放射線療法、ＩＬ－１５スーパーアゴニスト、ＮＫ細胞療法、及びチェックポイント阻害薬を組み合わせる上記の治療レジメンが、免疫原性細胞死（ＩＣＤ）を最大化し、癌細胞に対する自然及び適応免疫応答を増強及び維持し得ることを企図する。具体的には、本発明者らは、かかる治療レジームが、１）腫瘍微小環境における免疫抑制を軽減すること、２）ＩＣＤシグナルを誘導し、協調させること、３）樹状細胞及びＴ細胞をコンディショニングすること、４）自然免疫応答を亢進させること、及び５）免疫応答を維持することにより、免疫編集のエスケープ段階を妨げ得ることを企図する。

【0098】

より具体的には、本発明者らは、腫瘍微小環境中で免疫抑制に寄与するＴｒｅｇ、ＭＤＳＣ、及びＭ２マクロファージの密度を低線量放射線療法によって減少させることができるため、腫瘍微小環境における免疫抑制を軽減し得ることを企図する。ベバシズマブもまた、腫瘍微小環境において形態学的変化を引き起こす原因であり、リンパ球輸送を促進する。ＩＣＤシグナルは、ＬＤＭＣとして誘導し、協調させることができ、及び低線量放射線療法は腫瘍細胞の抗原性を増加させることができる。加えて、ベバシズマブがＴＭＥを変化させ、これにより一層効率的な抗原特異的Ｔ細胞応答が実現し、腫瘍細胞がＩＣＤを受け易くなる。更に、セツキシマブ、ネシツムマブ、及びアベルマブを使用すると、ＡＤＣＣ及び細胞傷害性Ｔ細胞活性が亢進されることになる。

【0099】

本発明者らは更に、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答を亢進させる癌ワクチン及びＩＬ－１５スーパーアゴニストによって樹状細胞及びＴ細胞をコンディショニングし得ることを企図する。加えて、自然免疫系を増強することのできるＮＫ細胞療法により、並びに内因性の及び導入されたＮＫ細胞の活性を亢進させることのできるＩＬ－１５スーパーアゴニストにより、自然免疫応答が亢進し得る。少分割照射線量による放射線療法は腫瘍細胞ＮＫリガンドを上方制御し、ＮＫ細胞の腫瘍細胞傷害性を亢進させることができる。最後に、長期抗癌免疫応答を促進することのできるチェックポイント阻害薬により、免疫応答を維持することができる。従って、本治療レジメンは、腫瘍成長を可能にする個別的だが補完的な機構を同時に標的化する薬剤を組み合わせることにより、抗癌活性を最大化し、治療に対する応答の持続期間を延ばすことを目指す。

【0100】

本発明者らは、ワクチン成分、細胞傷害性細胞成分、及び／又はアルドキソルビシンを使用したかかる併用治療及び治療レジメンが、転移癌と診断された一部の患者の腫瘍の治療において有効であることを発見した。一例では、肝臓及び肺への転移を有する膵癌と診断された、過去に標準的化学療法が失敗している３５歳男性患者が、１３サイクルにわたるＮＡＮＴ癌ワクチンと細胞傷害性免疫細胞（最初はａＮＫにより、凍結保存ｈａＮＫへと展開した）との併用治療で治療された。治療前及び治療全体を通じて患者の血中の糖鎖抗原（ＣＡ１９－９）レベルを決定した。図１に示すとおり、ＣＡ１９－９レベルは約３２０日間の治療で約７５０から約２２０へと有意に低下した。この患者はまた体重も１０ポンド増加し、無痛状態を保った。加えて、治療開始以来６．５ヵ月の間に腫瘍サイズが減少した。治療中、用量制限毒性（ＤＬＴ）を認めることはできなかった。

【0101】

別の例では、膵癌と診断された、過去に標準的化学療法が失敗している５０歳女性患者が、１２サイクルにわたるＮＡＮＴ膵癌ワクチンと細胞傷害性免疫細胞（最初はａＮＫにより、凍結保存ｈａＮＫへと展開した）との併用治療で治療された。治療前及び治療全体を通じて患者の血中の糖鎖抗原（ＣＡ１９－９）レベルを決定した。図２に示すとおり、ＣＡ１９－９レベルは約２２０日間の治療で約１３００から約２２０へと（標準化した値では１２９から３４へと、５０％超）有意に低下した。この患者はまた体重も１２ポンド増加し、無痛状態を保った。治療中、用量制限毒性（ＤＬＴ）を認めることはできなかった。

【0102】

なおも別の例では、肝臓への転移を伴う膵癌と診断された、過去に標準的化学療法が失敗している６３歳男性患者が、８サイクルにわたるＮＡＮＴ膵癌ワクチン（例えば、臨床試験識別番号ＮＣＴ０３１３６４０６を参照のこと）と細胞傷害性免疫細胞（最初はａＮＫにより、凍結保存ｈａＮＫへと展開した）との併用治療で治療された。治療前及び治療全体を通じて患者の血中のＣＥＡレベルを決定した。図３に示すとおり、ＣＥＡレベルは約２６０日間の治療で約４５０から約２００へと（標準化した値では４５から２０へと、５０％超）有意に低下した。患者は無痛状態を保った。治療中、用量制限毒性（ＤＬＴ）を認めることはできなかった。

【0103】

なおも別の例では、肝臓及び肺への転移を伴う膵癌と診断された、過去に標準ケア化学療法が失敗している６６歳女性患者が、４サイクルにわたるＮＡＮＴ膵癌ワクチンと細胞傷害性免疫細胞（凍結保存ｈａＮＫ）との併用治療で治療された。治療前及び治療全体を通じて患者の血中の糖鎖抗原（ＣＡ１９－９）レベルを決定した。図４に示すとおり、ＣＡ１９－９レベルは約１１００から約６５０へと（約８５日間の治療で有意に低下した。治療中、用量制限毒性（ＤＬＴ）を認めることはできなかった。患者はまた、８週間の治療でＲＥＣＩＳＴに従う腫瘍サイズの２３％の低下も示した。

【0104】

なおも別の例では、肝臓及び腹膜への転移を伴う膵癌と診断された、過去に標準ケア化学療法が失敗している４０歳男性患者が、１７サイクルにわたるＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（５－ＦＵ、ロイコボリン、イリノテカン、及びオキサリプラチン）と１サイクルにわたるＮＡＮＴ膵癌ワクチン及び細胞傷害性免疫細胞（凍結保存ｈａＮＫ）との併用治療で治療された。治療前及び治療全体を通じて患者の血中の糖鎖抗原（ＣＡ１９－９）レベルを決定した。図５に示すとおり、ＣＡ１９－９レベルは約１４００から約１００へと（約１５０日間の治療で有意に低下した。治療中、用量制限毒性（ＤＬＴ）を認めることはできなかった。

【0105】

なおも別の例では、ＨＮＳＣＣと診断された５６歳男性患者（ＨＰＶの既往歴有り）。この患者は当初シスプラチン及び放射線照射で治療され、後にペンブロリズマブ及びニボルマブで治療された。この患者を６サイクルにわたる実施例ＩＩに示すとおりの治療レジメンで治療した。図６（左が治療後である）及び図７（右が治療後である）に示すとおり、照射していない腎臓標的病変のサイズが８週間の治療で４６％減少した（図６に矢印で示され、及び図７に点線を付した範囲に示されるとおり）。

【0106】

一部の実施形態において、本発明の特定の実施形態を説明し、特許請求するために使用される成分の量、濃度などの特性、反応条件などを表す数字は、一部の例では用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。従って、一部の実施形態において、明細書の記載及び添付の特許請求の範囲に示される数値パラメータは、特定の実施形態によって達成しようとする所望の特性に応じて変わり得る近似である。一部の実施形態において、数値パラメータは、報告される有効桁数を考慮して、且つ通常の丸め処理法を適用することにより解釈されなければならない。本発明の一部の実施形態の広い範囲を示す数値の範囲及びパラメータが近似であるにも関わらず、具体的な例に示される数値は、実行可能な限りにおいて正確に報告される。本発明の一部の実施形態に提示される数値は、そのそれぞれの検査測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含み得る。

【0107】

本明細書で使用されるとき、語句「Ａ及びＢのうちの少なくとも一方」は、「Ａ」及び「Ｂ」の性質に関わらず、「Ａ」及び／又は「Ｂ」を指すことが意図される。例えば、一部の実施形態において、「Ａ」は単一の個別的な種であってよく、一方、他の実施形態において「Ａ」は、「Ａ」と称される属の範囲内にある単一の種を表してもよい。同様に、一部の実施形態において、「Ｂ」は単一の個別的な種であってよく、一方、他の実施形態において「Ｂ」は、「Ｂ」と称される属の範囲内にある単一の種を表してもよい。

【0108】

本明細書における記載において、及び以下の特許請求の範囲全体を通じて使用されるとき、「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」の意味には、文脈上特に明確に指示されない限り、複数形の参照が含まれる。また、本明細書における記載において使用されるとき、「～の中に（ｉｎ）」の意味には、文脈上特に明確に指示されない限り、「～の中に（ｉｎ）」及び「～の上に（ｏｎ）」が含まれる。本明細書における値の範囲の記載は単に、その範囲内に含まれる別々の各値に個別に言及する簡略化した方法として供されることが意図されるに過ぎない。本明細書に特に指示されない限り、範囲に伴う各個別の値は、それが本明細書に個別に記載されたものとして本明細書に援用される。

【0109】

本明細書に記載される方法は全て、本明細書に特に指示されない限り、又は文脈上特に明確に否定されない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書において特定の実施形態に関連して提供される一部及び全部の例、又は例を示す文言（例えば「など」）の使用は、単に、本発明をより分かりやすく説明し、且つ本来特許請求される本発明の範囲に制限をかけないことが意図されるに過ぎない。本明細書における文言が、本発明の実施に不可欠な何らかの特許請求されていない要素を指示していると解釈されてはならない。

【0110】

当業者には、既に記載されているものに加えて、本明細書における発明概念から逸脱することなく更に多くの変形例が可能であることは明らかなはずである。従って、添付の特許請求の範囲の趣旨を除き、本発明の主題は限定されるべきでない。更に、明細書及び特許請求の範囲の両方の解釈に際し、用語は全て、文脈に合わせて可能な限り最も広義に解釈されなければならない。詳細には、用語「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「～を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、要素、成分、又はステップへの非排他的な言及であり、言及される要素、成分、又はステップが存在してもよく、又は利用されてもよく、又は明示的に言及されない他の要素、成分、若しくはステップと組み合わされてもよいことを示していると解釈されなければならない。本明細書の特許請求の範囲が、Ａ、Ｂ、Ｃ．．．．及びＮからなる群から選択される何かのうちの少なくとも１つに言及する場合、その文は、その群からの１つの要素のみが必要であり、Ａ＋Ｎ、又はＢ＋Ｎ等ではないと解釈されなければならない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】