(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-04-25
(45)【発行日】2022-05-09
(54)【発明の名称】抗ＴＮＦα糖操作抗体群およびその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220426BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220426BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20220426BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220426BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220426BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20220426BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P1/04
A61P17/06
A61P19/02
A61P29/00
A61P29/00 101
C12P21/08
【請求項の数】
21
(21)【出願番号】P 2016569732
(86)(22)【出願日】2015-05-27
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2017-07-13
(86)【国際出願番号】 US2015032737
(87)【国際公開番号】W WO2015184001
(87)【国際公開日】2015-12-03
【審査請求日】2018-05-18
【審判番号】
【審判請求日】2020-08-03
(31)【優先権主張番号】62/003,908
(32)【優先日】2014-05-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/020,199
(32)【優先日】2014-07-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/110,338
(32)【優先日】2015-01-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】596118493
【氏名又は名称】アカデミア シニカ
【氏名又は名称原語表記】ＡＣＡＤＥＭＩＡ ＳＩＮＩＣＡ
【住所又は居所原語表記】１２８ Ｓｅｃ ２，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｋａｎｇ，Ｔａｉｐｅｉ １１５２９ ＴＷ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ウォン， チ－フェイ
(72)【発明者】
【氏名】ウー， チュン－イ
【合議体】
【審判長】岡崎 美穂
【審判官】冨永 みどり
【審判官】齋藤 恵
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１３／１２００６６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１１／０２６３８２８（ＵＳ，Ａ１）
【文献】Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０１２年，Ｖｏｌ．２８，ｐ１４７－１７５
【文献】ヒト型ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体製剤 ヒュミラ 皮下注４０ｍｇ，添付文書，２００９年，ｐ１－７
【文献】科学技術動向（Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｔｒｅｎｄｓ），２００９年，１０月号，ｐ１３－２５，＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｈｄｌ．ｈａｎｄｌｅ．ｎｅｔ／１１０３５／２０８３＞
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
A61K39/00-39/44
ＣＡ／Ｂｉｏｓｉｓ／Ｍｅｄｌｉｎｅ／Ｅｍｂａｓｅ（ＳＴＮ）
ＪＳＴｐｌｕｓ／ＪＭＥＤｐｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍ ＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
各抗ＴＮＦα ＩｇＧ分子のＦｃ領域に同じＮ－グリカンを有する抗ＴＮＦα ＩｇＧ分子の単離された均一な集団を含む抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗ＴＮＦアルファ結合性断片の組成物であって、前記Ｎ－グリカンがコアフコースを含まず、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ ２ の配列を含み、
前記抗ＴＮＦα ＩｇＧ糖操作抗体群は、アダリムマブと比較して、最大結合の程度の測定値に基づいてより強力なＦｃγＲＩＩＩａへの結合親和性を有する、組成物。
【請求項2】
前記抗ＴＮＦα ＩｇＧ分子が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記抗ＴＮＦα ＩｇＧ分子が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）の軽鎖配列および重鎖配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記最大結合が少なくとも約３倍改善される、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
前記Ｎ－グリカンが前記Ｆｃ領域のＡｓｎ－２９７に付着している、および／または前記Ｎ－グリカンが、少なくとも１つのα２－６末端シアル酸もしくは２つのα２－６末端シアル酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記Ｎ－グリカンが、バイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を少なくとも１つ含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項8】
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を２つ含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
請求項１から８までに記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗原結合性断片の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
【請求項10】
ＴＮＦ媒介性炎症性疾患の処置を必要とするヒトにおけるＴＮＦ媒介性炎症性疾患の処置において使用するための、請求項９に記載の医薬製剤であって、前記製剤が前記ヒトに有効量で投与されることを特徴とする、医薬製剤。
【請求項11】
前記ＴＮＦ媒介性炎症性疾患が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または若年性特発性関節炎から選択される、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項12】
前記ヒトに少なくとも１種の抗ＴＮＦ治療剤がさらに投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項13】
前記抗ＴＮＦ治療剤がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、請求項１２に記載の医薬製剤。
【請求項14】
第２の治療剤が、前記医薬製剤と組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項15】
脱フコシル化糖操作抗体を作出する方法であって、（ａ）抗ＴＮＦαモノクローナル抗体をα－フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に単一のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、
（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップであって、ここで、前記炭水化物部分がＳｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃであるステップと
を含む、方法。
【請求項16】
前記抗ＴＮＦαモノクローナル抗体がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体をｉｎ ｖｉｔｒｏで作製し、ここで、前記抗ＴＮＦα糖操作抗体を、細胞培養によって得られた抗体から酵素的に工学的に作製し、ここで、前記方法は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を使用して流加培養するステップを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
ステップ（ｂ）の前記付加をトランスグリコシラーゼによって行う、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
前記エンドグリコシダーゼが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳまたはそのバリアントである、請求項１５に記載の方法。
【請求項20】
前記α－フコシダーゼが、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項21】
前記α－フコシダーゼが組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ α－フコシダーゼである、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
この出願は、２０１４年５月２８日に出願された米国仮出願連続番号第（ＵＳＳＮ）６２／００３，９０８号、２０１４年７月２日に出願されたＵＳＳＮ ６２／０２０，１９９号および２０１５年１月３０日に出願されたＵＳＳＮ ６２／１１０，３３８号への優先権の利益を主張する。これらそれぞれの内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される。
この出願は、２０１４年５月２８日に出願された米国仮出願連続番号第（ＵＳＳＮ）６２／００３，９０８号、２０１４年７月２日に出願されたＵＳＳＮ ６２／０２０，１９９号および２０１５年１月３０日に出願されたＵＳＳＮ ６２／１１０，３３８号への優先権の利益を主張する。これらそれぞれの内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【0002】
Ｆｃグリコシル化は、治療用モノクローナル抗体の分野において重要な主題となっている。Ｆｃグリコシル化により、Ｆｃ受容体結合および補体活性化などのＦｃエフェクター機能を有意に改変する、したがって、治療用抗体のｉｎ ｖｉｖｏにおける安全性および有効性プロファイルに影響を及ぼすことができる。
【0003】
遺伝子操作に基づくいくつかの発現系により治療用モノクローナル抗体が産生されることが報告されている。これらとしては、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓなどの酵母、昆虫細胞株、および、さらには細菌が挙げられる。しかし、これらの発現系には、治療用抗体のエフェクター機能に負の影響を及ぼす可能性があるいくつかの欠点がある。
【0004】
大多数の認可を受けた生物製剤は、所望のグリコシル化パターンを有するタンパク質を送達し、したがって、免疫原性の低下およびより高いｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性および安定性を確実にするために、哺乳動物細胞培養系において産生される。ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞などの非ヒト哺乳動物発現系は、複雑な、ヒト型グリカンを付加するために必要な機構を有する。しかし、これらの系において産生されるグリカンは、ヒトにおいて産生されるグリカンとは異なる可能性がある。それらのグリコシル化機構により、多くの場合、タンパク質フォールディングを変更させ、免疫原性を誘導し、薬物の循環寿命を短縮させる可能性がある望ましくない炭水化物決定因子が付加される。特に、Ｎ－アセチルノイラミン酸のようなシアル酸は大多数の哺乳動物細胞では効率的に付加されず、これらの細胞では６－結合が欠けている。シアル酸の移行に必要な種々の酵素活性を用いた細胞の工学的操作では、タンパク質薬にヒト様パターンのグリコフォームを成功裏にもたらすことが未だできていない。現在まで、動物細胞または糖タンパク質を工学的に操作してヒトタンパク質と可能な限り密接に類似した、高度にシアリル化された産物をもたらすことが必要とされている。
【0005】
さらに、哺乳動物の細胞培養では、全てが同じ性質を有するとは限らないグリコシル化パターンの不均一な混合物が送達される。治療用タンパク質の安全性、有効性および血清中半減期のような性質は、これらのグリコシル化パターンの影響を受ける可能性がある。
【0006】
自己免疫障害は、重要な広範にわたる医学的問題である。ＴＮＦα（壊死因子アルファ）は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病および乾癬などの自己免疫疾患における炎症の主要な一因である。
【0007】
炎症におけるＴＮＦの重要性は、関節リウマチおよび他の炎症性の状態における疾患活動性の制御における抗ＴＮＦ抗体の有効性により強調されている。現在、キメラ抗ＴＮＦαｍＡｂであるＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）（インフリキシマブ）、ＴＮＦＲ－Ｉｇ Ｆｃ融合タンパク質であるＥＮＢＲＥＬ（商標）（エタネルセプト）、ヒト抗ＴＮＦαｍＡｂであるＨＵＭＩＲＡ（商標）（アダリムマブ）、およびペグ化Ｆａｂ断片であるＣＩＭＺＩＡ（登録商標）（セルトリズマブペゴル）を含め、関節リウマチの処置に関して認可を受けた抗ＴＮＦαｍＡｂが４種存在する。
【0008】
アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））は、遺伝子技術により工学的に作製されたヒト由来組換えＩｇＧ１モノクローナル抗体である。アダリムマブは、ＴＮＦ－αには結合するがＴＮＦ－βには結合せず、半減期はおよそ２週間である。アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））は、ＲＡの患者への使用に関して２００２年１２月３１日に認可を受けている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
アダリムマブは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において産生され、Ｆｃドメインにおけるグリコシル化パターンが非常に不均一である。不均一な混合物中のＩｇＧ分子のそれぞれは全てが同じ性質を有するとは限らない可能性があり、また、治療用タンパク質に結合したある特定のＮ結合オリゴ糖により患者において望ましくない影響が誘発される可能性があり、したがって、これらは安全性に懸念があるとみなされる。
【課題を解決するための手段】
【0010】
したがって、本開示の一態様は、Ｆｃのそれぞれに同じＮ－グリカンを有する抗ＴＮＦαＩｇＧ分子の均一な集団を含む抗ＴＮＦα糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）の組成物に関する。本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。重要なことに、本明細書に記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、糖鎖工学により操作されていない対応するモノクローナル抗体と比較してＴＮＦα結合親和性が増大した、改善された治療的価値を有する。
【0011】
好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンはＦｃ領域のＡｓｎ－２９７に付着している。
【0012】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｙ）は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態では、糖操作抗体は、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））の軽鎖配列および重鎖配列を含む。
【0013】
アダリムマブに由来する、機能的に活性な抗ＴＮＦα糖操作抗体群が本明細書に開示されている。抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、アダリムマブと比較して同様のまたは改善されたＴＮＦα結合親和性を示す。
【0014】
一部の実施形態では、本発明の糖操作抗体のＮ－グリカンは二分岐（ｂｉａｎｔｅｎｎａｒｙ）構造を有する。一部の実施形態では、Ｎ－グリカンは、バイセクティング（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）ＧｌｃＮＡｃを含む。
【0015】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ－グリカンは、α２－６末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－６末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－６末端シアル酸を２つ含む。
【0016】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ－グリカンは、α２－３末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－３末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－３末端シアル酸を２つ含む。
【0017】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ－グリカンは、ガラクトースを少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、ガラクトースを１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、ガラクトースを２つ含む。
【0018】
好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンはフコシル化されている。一部の実施形態では、Ｎ－グリカンは脱フコシル化されている。
【0019】
一部の実施形態では、Ｎ－グリカンは、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）およびＳｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）からなる群より選択されるグリカン配列を有する。
【0020】
好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）およびＳｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）からなる群より選択されるグリカン配列を有する。
【0021】
本開示の別の態様は、本明細書に記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。
【0022】
本開示による医薬組成物は、治療薬に使用することができる。本開示には、ヒト患者においてＴＮＦ媒介性炎症性疾患を処置するための方法であって、それを必要とするヒトに有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が含まれる。
【0023】
一部の実施形態では、投与するステップは、前記医薬組成物を前記ヒトに経口投与するステップを含む。ＴＮＦ媒介性炎症性疾患の例としては、これだけに限定されないが、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および若年性特発性関節炎が挙げられる。
【0024】
一部の実施形態では、本明細書に記載の処置方法は、患者に、抗ＴＮＦα治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、抗ＴＮＦα治療剤は、アダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである。
【0025】
本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、細胞において産生される抗ＴＮＦαモノクローナル抗体から生成することができる。好ましい実施形態では、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体は、治療的使用のためのものである。一部の実施形態では、治療用モノクローナル抗体は市販されているものまたは開発中のものである。抗ＴＮＦαモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体であってよい。
【0026】
本明細書に記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群はｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて作製することができる。抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、Ｆｃ糖鎖工学によって生成することができる。ある特定の実施形態では、抗ＴＮＦα糖操作抗体群を、哺乳動物細胞などの細胞において産生される抗ＴＮＦαモノクローナル抗体から酵素的にまたは化学酵素的に工学的に作製する。
【0027】
本明細書には、フコシル化糖操作抗体を作出するための方法であって、（ａ）モノクローナル抗体を少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）を有する抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下で二糖のＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップとを含む方法が記載されている。
【0028】
脱フコシル化糖操作抗体を作出するための方法であって、（ａ）モノクローナル抗体をα－フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に単糖（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップとを含む方法も本明細書の記載に含まれる。
【0029】
本発明の方法のモノクローナル抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であってよい。一部の実施形態では、本発明の方法の抗ＴＮＦαモノクローナル抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである。
【0030】
一部の実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）およびＳｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）からなる群より選択される。
【0031】
ステップ（ｂ）の付加は、トランスグリコシラーゼによって実施することができる。トランスグリコシラーゼとしては、これだけに限定されないが、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２およびＥｎｄｏＦ３が挙げられる。
【0032】
一部の実施形態では、本発明の方法のエンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳまたはそのバリアントである。
【0033】
一部の実施形態では、アルファ－フコシダーゼは、配列番号５と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【0034】
ある特定の実施形態では、アルファ－フコシダーゼは、組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓアルファ－Ｌ－フコシダーゼである。
【0035】
一部の実施形態では、炭水化物部分は、糖オキサゾリンである。
【0036】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細が以下の説明に記載されている。本発明の他の特徴または利点は、以下の図およびいくつかの実施形態の詳細な説明から、ならびに添付の特許請求の範囲からも明らかになるであろう。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
各抗ＴＮＦαＩｇＧ分子のＦｃ領域に同じＮ－グリカンを有する抗ＴＮＦαＩｇＧ分子の均一な集団を含む抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗ＴＮＦアルファ結合性断片の組成物。
（項目２）
前記抗ＴＮＦαＩｇＧ分子が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記抗ＴＮＦαＩｇＧ分子が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）の軽鎖配列および重鎖配列を含む、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）と比較してＴＮＦαへの改善された結合を示すことを特徴とする、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記結合が少なくとも約３倍改善される、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記Ｎ－グリカンが前記Ｆｃ領域のＡｓｎ－２９７に付着している、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記Ｎ－グリカンがコアフコースを含まない、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記Ｎ－グリカンが、バイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を少なくとも１つ含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を２つ含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記Ｎ－グリカンが、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２、 Ｓｉａ（α２－３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記Ｎ－グリカンが、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
項目１から１２までに記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗原結合性断片の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
（項目１４）
ＴＮＦ媒介性炎症性疾患の処置を必要とするヒトにおいてＴＮＦ媒介性炎症性疾患を処置する方法であって、前記ヒトに有効量の項目１３に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目１５）
前記投与するステップが、前記ヒトに項目１３に記載の医薬製剤を投与するステップを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ＴＮＦ媒介性炎症性疾患が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または若年性特発性関節炎から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ヒトに少なくとも１種の抗ＴＮＦ治療剤を投与するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記抗ＴＮＦ治療剤がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
第２の治療剤を共投与としてまたは共製剤として前記患者に投与するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
脱フコシル化糖操作抗体を作出する方法であって、
（ａ）モノクローナル抗体をα－フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に単一のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、
（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップと
を含む、方法。
（項目２１）
フコシル化糖操作抗体を作出する方法であって、
（ａ）モノクローナル抗体を少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）を有する抗体を得るステップと、
（ｂ）適切な条件下で前記二糖のＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップと
を含む、方法。
（項目２２）
前記モノクローナル抗体が抗ＴＮＦαモノクローナル抗体である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記抗ＴＮＦαモノクローナル抗体がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群をｉｎ ｖｉｔｒｏで作製する、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群を、細胞培養によって得られた抗体から酵素的に工学的に作製する、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を使用して流加培養するステップを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
ステップ（ｂ）の前記炭水化物部分が、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２、 Ｓｉａ（α２－３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２８）
ステップ（ｂ）の前記炭水化物部分が、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）からなる群より選択される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
ステップ（ｂ）の前記付加をトランスグリコシラーゼによって行う、項目２０または２１に記載の方法。
（項目３０）
前記エンドグリコシダーゼが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳまたはそのバリアントである、項目２０または２１に記載の方法。
（項目３１）
前記α－フコシダーゼが、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、項目２０に記載の方法。
（項目３２）
前記α－フコシダーゼが組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ α－フコシダーゼである、項目２０に記載の方法。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
各抗ＴＮＦαＩｇＧ分子のＦｃ領域に同じＮ－グリカンを有する抗ＴＮＦαＩｇＧ分子の均一な集団を含む抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗ＴＮＦアルファ結合性断片の組成物。
（項目２）
前記抗ＴＮＦαＩｇＧ分子が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記抗ＴＮＦαＩｇＧ分子が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）の軽鎖配列および重鎖配列を含む、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）と比較してＴＮＦαへの改善された結合を示すことを特徴とする、項目１に記載の組成物。
（項目５）
前記結合が少なくとも約３倍改善される、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記Ｎ－グリカンが前記Ｆｃ領域のＡｓｎ－２９７に付着している、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記Ｎ－グリカンがコアフコースを含まない、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記Ｎ－グリカンが、バイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を少なくとも１つ含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記Ｎ－グリカンが、α２－６シアル酸を２つ含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記Ｎ－グリカンが、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２、 Ｓｉａ（α２－３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
前記Ｎ－グリカンが、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
項目１から１２までに記載の抗ＴＮＦα糖操作抗体群または抗原結合性断片の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
（項目１４）
ＴＮＦ媒介性炎症性疾患の処置を必要とするヒトにおいてＴＮＦ媒介性炎症性疾患を処置する方法であって、前記ヒトに有効量の項目１３に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目１５）
前記投与するステップが、前記ヒトに項目１３に記載の医薬製剤を投与するステップを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ＴＮＦ媒介性炎症性疾患が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または若年性特発性関節炎から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ヒトに少なくとも１種の抗ＴＮＦ治療剤を投与するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記抗ＴＮＦ治療剤がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
第２の治療剤を共投与としてまたは共製剤として前記患者に投与するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
脱フコシル化糖操作抗体を作出する方法であって、
（ａ）モノクローナル抗体をα－フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に単一のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、
（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップと
を含む、方法。
（項目２１）
フコシル化糖操作抗体を作出する方法であって、
（ａ）モノクローナル抗体を少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）を有する抗体を得るステップと、
（ｂ）適切な条件下で前記二糖のＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップと
を含む、方法。
（項目２２）
前記モノクローナル抗体が抗ＴＮＦαモノクローナル抗体である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記抗ＴＮＦαモノクローナル抗体がアダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群をｉｎ ｖｉｔｒｏで作製する、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記抗ＴＮＦα糖操作抗体群を、細胞培養によって得られた抗体から酵素的に工学的に作製する、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株を使用して流加培養するステップを含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
ステップ（ｂ）の前記炭水化物部分が、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２、 Ｓｉａ（α２－３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ 、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ ２ （Ｆ）からなる群より選択される、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２８）
ステップ（ｂ）の前記炭水化物部分が、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ ２ （α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ２ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ ２ （α２－３／α２－６）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）およびＳｉａ ２ （α２－６／α２－３）Ｇａｌ ２ ＧｌｃＮＡｃ ３ Ｍａｎ ３ ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）からなる群より選択される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
ステップ（ｂ）の前記付加をトランスグリコシラーゼによって行う、項目２０または２１に記載の方法。
（項目３０）
前記エンドグリコシダーゼが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳまたはそのバリアントである、項目２０または２１に記載の方法。
（項目３１）
前記α－フコシダーゼが、配列番号５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、項目２０に記載の方法。
（項目３２）
前記α－フコシダーゼが組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ α－フコシダーゼである、項目２０に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【0037】
【0038】
【発明を実施するための形態】
【0039】
したがって、改善された抗ＴＮＦα抗体を用いてモノクローナル抗体療法を改善することが依然として必要とされている。グリコシル化パターンの不均一な混合物中の数種類の特定のグリコフォームにより所望の生物学的機能が付与されることが公知である。したがって、治療目的で、所望のグリコフォームとして明確に定義されたグリカン構造および配列を含有する治療用抗体を生成することが大変興味深い。
【0040】
本開示は、「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という名称の新規クラスのモノクローナル抗体の開発に関する。「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ－Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、Ｆｃ上に単一の一様なグリコフォームを有するモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。
【0041】
本発明の実施では、別段の指定のない限り、当技術分野の技術の範囲内に入る分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学の従来の技法を使用する。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９年）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｉ巻およびＩＩ巻（Ｄ． Ｎ． Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８５年）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ｒ． Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．、１９８７年）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８６年）；Ｂ． Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）；論文集、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ． Ｈ． ＭｉｌｌｅｒおよびＭ． Ｐ． Ｃａｌｏｓ編、１９８７年、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１５４巻および１５５巻（Ｗｕら編）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９８７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８８年）；およびＨａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉ～ＩＶ巻（Ｄ． Ｍ． ＷｅｉｒおよびＣ． Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、１９８６年）を参照されたい。
【0042】
定義：
本明細書で使用される場合、「抗ＴＮＦα糖操作抗体群」（「抗ＴＮＦαＧＡｂｓ」）という用語は、Ｆｃ上に同じグリコフォームを有する抗ＴＮＦαＩｇＧ分子の均一な集団を指す。「抗ＴＮＦα糖操作抗体」（「抗ＴＮＦαＧＡｂ」）という用語は、抗ＴＮＦα糖操作抗体群内の個々のＩｇＧ抗体分子を指す。本明細書で使用される場合、「分子」とは、抗原結合性断片も指し得る。
本明細書で使用される場合、「抗ＴＮＦα糖操作抗体群」（「抗ＴＮＦαＧＡｂｓ」）という用語は、Ｆｃ上に同じグリコフォームを有する抗ＴＮＦαＩｇＧ分子の均一な集団を指す。「抗ＴＮＦα糖操作抗体」（「抗ＴＮＦαＧＡｂ」）という用語は、抗ＴＮＦα糖操作抗体群内の個々のＩｇＧ抗体分子を指す。本明細書で使用される場合、「分子」とは、抗原結合性断片も指し得る。
【0043】
本明細書で使用される場合、「グリカン」という用語は、多糖、オリゴ糖または単糖を指す。グリカンは糖残基の単量体であってもポリマーであってもよく、直鎖であっても分枝していてもよい。グリカンとしては、天然の糖残基（例えば、グルコース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルノイラミン酸、ガラクトース、マンノース、フコース、ヘキソース、アラビノース、リボース、キシロースなど）および／または修飾された糖（例えば、２’－フルオロリボース、２’－デオキシリボース、ホスホマンノース、６’スルホＮ－アセチルグルコサミンなど）が含まれ得る。本明細書で使用される場合、「グリカン」という用語は、多糖、オリゴ糖または単糖を指す。グリカンは糖残基の単量体であってもポリマーであってもよく、直鎖であっても分枝していてもよい。グリカンには、天然の糖残基（例えば、グルコース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルノイラミン酸、ガラクトース、マンノース、フコース、ヘキソース、アラビノース、リボース、キシロースなど）および／または修飾された糖（例えば、２’－フルオロリボース、２’－デオキシリボース、ホスホマンノース、６’－スルホＮ－アセチルグルコサミンなど）が含まれ得る。グリカンとは、本明細書では、糖タンパク質、糖脂質、グリコペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖またはプロテオグリカンなどの複合糖質の炭水化物部分を指すためにも使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ－グリコシド結合のみからなる。例えば、セルロースはβ－１，４結合したＤ－グルコースで構成されるグリカン（または、より詳細にはグルカン）であり、キチンはβ－１，４結合したＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンで構成されるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーであってもヘテロポリマーであってもよく、直鎖であっても分枝していてもよい。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンのようにタンパク質に付着して見いだされ得る。グリカンは、一般に、細胞の外表面上に見いだされる。Ｏ結合およびＮ結合グリカンは、真核生物では非常に一般的であるが、原核生物においても、一般的ではないが見いだされ得る。Ｎ結合グリカンは、シークオン（ｓｅｑｕｏｎ）内のアスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に付着して見いだされる。シークオンは、Ａｓｎ－Ｘ－ＳｅｒまたはＡｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ配列であり、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である。
【0044】
本明細書で使用される場合、「フコース」、「コアフコース」および「コアフコース残基」という用語は、互換的に使用され、Ｎ－アセチルグルコサミンとα１，６位結合したフコースを指す。
【0045】
本明細書で使用される場合、「フコシル化された」という用語は、ＦｃのＮ－グリカンにコアフコースが存在することを指し、「脱フコシル化された」という用語は、ＦｃのＮ－グリカンにコアフコースが存在しないことを指す。
【0046】
本明細書で使用される場合、「Ｎ－グリカン」、「Ｎ結合グリカン」、「Ｎ結合グリコシル化」、「Ｆｃグリカン」および「Ｆｃグリコシル化」という用語は、互換的に使用され、Ｆｃを含有するポリペプチド内のアスパラギン残基のアミド窒素と結合したＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が付着したＮ結合オリゴ糖を指す。「Ｆｃを含有するポリペプチド」という用語は、Ｆｃ領域を含む、抗体などのポリペプチドを指す。
【0047】
本明細書で使用される場合、「グリコシル化パターン」および「グリコシル化プロファイル」という用語は、互換的に使用され、糖タンパク質または抗体から酵素的にまたは化学的に放出され、次いで、それらの炭水化物構造について、例えば、ＬＣ－ＨＰＬＣ、またはＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳなどを使用して分析されたＮ－グリカン種の特徴的な「指紋」を指す。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１巻、１号（２００５年）、２８～５７頁の総説を参照されたい。
【0048】
本明細書で使用される場合、「糖鎖工学により操作されたＦｃ」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｆｃ領域上のＮ－グリカンが、酵素的にまたは化学的に変更または工学的に操作されていることを指す。「Ｆｃ糖鎖工学」という用語は、本明細書で使用される場合、糖鎖工学により操作されたＦｃを作出するために使用される酵素的または化学的なプロセスを指す。工学的操作の典型的な方法は、例えば、その内容が本明細書によって参照により組み込まれるＷｏｎｇら、ＵＳＳＮ１２／９５９，３５１に記載されている。ある特定の実施形態では、グリカンは、エンド－ＧｌｃＮＡＣａｓｅおよびフコシダーゼを使用することによって、次いで、エンド－Ｓ変異体およびグリカンオキサゾリンを使用することによって調製することができる。
【0049】
「エフェクター機能」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域のＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用によって生じる生化学的事象を指す。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。
【0050】
本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」という用語は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した、分泌されたＩｇにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後、細胞毒により標的細胞を死滅させることが可能になる、細胞傷害性の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」させるものであり、そのような死滅に絶対必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ９巻：４５７～９２頁（１９９１年）の４６４頁、表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または米国特許第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。その代わりにまたはそれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５巻：６５２～６５６頁（１９９８年）に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価することができる。
【0051】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」という用語は、本明細書で使用される場合、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は、同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスのもの）に補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載のＣＤＣアッセイを実施することができる。
【0052】
「アポトーシスを誘導する」抗体とは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞の収縮、小胞体の拡大、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と称される）の形成によって決定されるプログラム細胞死を誘導する抗体である。細胞は、感染細胞であることが好ましい。アポトーシスに関連する細胞事象を評価するために種々の方法が利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）のトランスロケーションはアネキシン結合によって測定することができ、ＤＮＡ断片化はＤＮＡラダー化によって評価することができ、ＤＮＡ断片化に伴う核／クロマチン凝縮は低二倍体細胞の何らかの増加によって評価することができる。アポトーシスを誘導する抗体は、アネキシン結合アッセイにおいて、無処理の細胞に対して約２～５０倍、好ましくは約５～５０倍、最も好ましくは約１０～５０倍のアネキシン結合の誘導をもたらす抗体であることが好ましい。
【0053】
「キメラ」抗体（免疫グロブリン）は、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である重鎖および／または軽鎖の一部を有し、鎖（複数可）の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびに所望の生物活性を示す限りはそのような抗体の断片、の対応する配列と同一または相同である（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１巻：６８５１～６８５５頁（１９８４年））。ヒト化抗体とは、本明細書で使用される場合、キメラ抗体のサブセットである。
【0054】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分に関して、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域残基で置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエントまたはアクセプター抗体）である。いくつかの場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体においては見いだされない残基を含んでよい。これらの改変は、結合親和性などの抗体の性能をさらに磨くために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域であるが、ＦＲ領域は結合親和性を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含んでよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、一般には、Ｈ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は、場合により、一般にはヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含む。さらなる詳細に関しては、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１巻：５２２～５２５頁（１９８６年）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２巻：３２３～３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２巻：５９３～５９６頁（１９９２年）を参照されたい。
【0055】
「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「緩和」とは、治療的処置および予防または防止措置の両方を指し、ここで、目的は、標的とした病的状態または障害を防止するまたは減速させる（減らす）ことである。処置を必要とするものとしては、すでに障害を有するものならびに障害を有しやすいものまたは障害が防止されるべきものが挙げられる。被験体または哺乳動物は、治療量の抗体を本発明の方法に従って受けた後、患者が以下のうちの１つまたは複数の観察可能かつ／または測定可能な低下または不在を示した場合、感染に対して成功裏に「処置」されている：感染細胞の数の低下または感染細胞の不在；感染した総細胞のパーセントの低下；ならびに／または特定の感染に付随する症状のうちの１つまたは複数のいくらかの程度までの軽減；罹患率および死亡率の低下、ならびに生活の質の問題の改善。疾患における成功裏の処置および改善を評価するための上記のパラメータは医師によく知られている常套的な手順によって容易に測定可能である。
【0056】
１種または複数種の別の治療剤「と組み合わせた（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」投与は、同時（並行（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ））投与および任意の順序での連続した（ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ）投与を含む。
【0057】
「担体」とは、本明細書で使用される場合、使用される投与量および濃度でそれに暴露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【0058】
「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ－Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、単一の一様化されたグリコフォームがＦｃ領域に結合したモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。基本的に均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。
【0059】
「均一な（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）」、「一様な（ｕｎｉｆｏｒｍ）」、「一様に（ｕｎｉｆｏｒｍｌｙ）」および「均一性（ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ）」という用語は、Ｆｃ領域のグリコシル化プロファイルに関しては、互換的に使用され、１つの所望のＮ－グリカン種によって単一のグリコシル化パターンが表され、前駆Ｎ－グリカンの痕跡量はほとんどないまたは全くないことを意味するものとする。ある特定の実施形態では、前駆Ｎ－グリカンの痕跡量は約２％未満である。
【0060】
「基本的に純粋な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、例えば、少なくとも約９１重量％、少なくとも約９２重量％、少なくとも約９３重量％、少なくとも約９４重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９６重量％、少なくとも約９７重量％、少なくとも約９８重量％、または少なくとも約９９重量％を含め、少なくとも約９０重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。
【0061】
「基本的に均一な」タンパク質は、組成物の総重量に基づいて、例えば、少なくとも約９８．５％、少なくとも約９９％を含め、少なくとも約９８重量％のタンパク質で構成される組成物を意味する。ある特定の実施形態では、タンパク質は、抗体、構造バリアント、および／またはその抗原結合性断片である。
【0062】
本明細書で使用される場合、「ＩｇＧ」、「ＩｇＧ分子」、「モノクローナル抗体」、「免疫グロブリン」、および「免疫グロブリン分子」という用語は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「分子」とは、抗原結合性断片も指し得る。
【0063】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体について述べるものである。好ましいＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび代替的にスプライスされた形態を含め、ＦｃγＲＩサブクラスの受容体（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩサブクラスの受容体（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（ＣＤ１６）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩ受容体としてはＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」）があり、これらは、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメイン内に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメイン内に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（総説、Ｍ．ｉｎ Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５巻：２０３～２３４頁（１９９７年）を参照されたい）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ９巻：４５７～９２頁（１９９１年）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４巻：２５～３４頁（１９９４年）；およびｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ． １２６巻：３３０～４１頁（１９９５年）に概説されている。今後同定されるものを含めた他のＦｃＲが本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語は、母系ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４巻：２４９頁（１９９４年））。
【0064】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を引き出すことができる任意の物質と定義される。本明細書で使用される場合、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原または抗原の断片の供給により特異的な細胞増殖がもたらされるような細胞集団の性質を指す。
【0065】
本明細書で使用される場合、「免疫原性」という用語は、免疫応答を刺激する免疫原、抗原、またはワクチンの能力を指す。
【0066】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位と接触する、抗原分子の一部と定義される。
【0067】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合すること」という用語は、結合対（例えば、抗体と抗原）間の相互作用を指す。種々の例では、特異的に結合することは、約１０－６モル／リットル、約１０－７モル／リットル、または約１０－８モル／リットル、またはそれ未満の親和性定数によって具体化することができる。
【0068】
「単離された」抗体とは、同定され、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の混入構成成分は、抗体の研究、診断または治療的な使用に干渉する材料であり、それらとして、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。
【0069】
「実質的に類似した」、「実質的に同じ」、「等価の」、または「実質的に等価の」という句は、本明細書で使用される場合、２つの数値（例えば、一方が分子に関連し、他方が参照／比較用（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）分子に関連する）間の類似性の程度が十分に高く、したがって、当業者により、前記値（例えば、Ｋｄ値、抗ウイルス効果など）により測定される生物学的特性の文脈内で、その２つの値の差異の生物学的および／または統計的有意性がほとんどまたは全くないとみなされるだろうことを示す。前記２つの値の差異は、参照／比較用分子についての値の関数として、例えば、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、および／または約１０％未満である。
【0070】
「実質的に低下した」または「実質的に異なる」という句は、本明細書で使用される場合、２つの数値（一般に、一方が分子に関連し、他方が参照／比較用分子に関連する）の差異の程度が十分に高く、したがって、当業者により、前記値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特性の文脈内で、その２つの値の差異が統計的に有意であるとみなされるだろうことを示す。前記２つの値の差異は、参照／比較用分子についての値の関数として、例えば、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、および／または約５０％超である。
【0071】
「結合親和性」とは、一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合性の相互作用の総計の強度を指す。別段の指定のない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含めた当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法は当技術分野で公知であり、そのいずれも本発明の目的に関して使用することができる。特定の例示的な実施形態は以下に記載されている。
【0072】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の部分であり、抗原結合部位を含有する。
【0073】
「可変性」という用語は、可変ドメインのある特定の部分が、その配列が抗体の間で広範囲にわたって異なり、特定の抗体のそれぞれのその特定の抗原に対する結合および特異性に使用されるという事実を指す。しかし、可変性は抗体の可変ドメイン全体を通して一様に分布しているのではない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方にある相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と称される３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と称される。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、大部分がベータ－シート立体配置をとっている４つのＦＲ領域を含み、これは、ベータ－シート構造の一部と接続し、いくつかの場合にはそれを形成するループを形成する３つのＣＤＲと接続している。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域の極めて近傍に一緒に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ（１９９１年）を参照されたい）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）への抗体の関与などの、種々のエフェクター機能を示す。
【0074】
抗体のパパイン消化により、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一の抗原結合性断片と、容易に結晶化できることが名称に反映されている残りの「Ｆｃ」断片とが生じる。ペプシン処理により、抗原結合性部位を２つ有し、なお抗原と架橋結合することが可能なＦ（ａｂ’）２断片がもたらされる。
【0075】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。二本鎖Ｆｖ種では、この領域は、密接に非共有結合により結びついた重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つの二量体からなる。単鎖Ｆｖ種では、重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つが柔軟なペプチドリンカーによって共有結合により連結していてよく、したがって、軽鎖および重鎖が二本鎖Ｆｖ種のものと類似した「二量体」構造で結びついていてよい。この立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位が規定される。集合的に、６つのＣＤＲによって抗原結合特異性が抗体に付与される。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つのみ含むＦｖの半分）でさえ、結合性部位全体よりも親和性は低いが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【0076】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含めた重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端の数残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）に遊離のチオール基を有するＦａｂ’に対する名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、最初は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生じた。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【0077】
任意の脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と称される、２つの明白に異なる型のうちの一方に割り当てることができる。
【0078】
抗体（免疫グロブリン）は、重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには主要なクラスが５つ存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらの一部は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体配置は周知であり、一般に、例えば、Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版（２０００年）に記載されている。抗体は、抗体と１つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合による結びつきによって形成されるより大きな融合分子の一部であってよい。
【0079】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」および「全抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、下で定義される通り、抗体断片ではなく実質的にインタクトな形態にある抗体を指す。この用語は、特に、Ｆｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【0080】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分のみを含み、その部分は、インタクトな抗体内に存在する場合にその部分に通常付随する機能の少なくとも１つ、できるだけ多く、大多数または全てを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体の抗原結合部位を含み、したがって、抗原に結合する能力を保持する。別の実施形態では、抗体断片、例えば、Ｆｃ領域を含む断片は、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期調節、ＡＤＣＣ機能および補体結合などの、Ｆｃ領域がインタクトな抗体内に存在する場合に通常付随する生物学的機能の少なくとも１つを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体と実質的に類似したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体断片は、断片にｉｎ ｖｉｖｏにおける安定性を付与することが可能なＦｃ配列に連結した抗原結合性アームを含んでよい。
【0081】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る、可能性のある天然に存在する変異以外は同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特性を示す。そのようなモノクローナル抗体は、一般には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、ここで、標的結合性ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合性ポリペプチド配列を選択することを含むプロセスによって得られたものである。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローンまたは組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンから固有のクローンを選択することであってよい。例えば、標的に対する親和性を改善するため、標的結合配列をヒト化するため、細胞培養物中でのその産生を改善するため、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるその免疫原性を低下させるため、多重特異性抗体を創出するためなどで、選択された標的結合配列をさらに変更できること、および、変更された標的結合配列を含む抗体も本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。一般には異なる決定因子（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子を対象とする。モノクローナル抗体調製物は、それらの特異性に加えて、一般には他の免疫グロブリンが混入していないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の特性を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の作製が必要であるとは解釈されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５年）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８年）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３～６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１年））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４～６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２巻：５８１～５９７頁（１９９２年）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３８巻（２号）：２９９～３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３４０巻（５号）：１０７３～１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０１巻（３４号）：１２４６７～１２４７２頁（２００４年）；およびＬｅｅら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４巻（１～２号）：１１９～１３２頁（２００４年）を参照されたい）、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生させるための技術（例えば、ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２巻：２５５～２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７巻：３３頁（１９９３年）；米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６号；５，５６９，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ． Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：７７９～７８３頁（１９９２年）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８５６～８５９頁（１９９４年）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８１２～８１３頁（１９９４年）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １４巻：８４５～８５１頁（１９９６年）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １４巻：８２６頁（１９９６年）およびＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３巻：６５～９３頁（１９９５年）を参照されたい）を含めた様々な技法によって作出することができる。
【0082】
本明細書のモノクローナル抗体は、詳細には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、鎖（複数可）の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびに所望の生物活性を示す限りはそのような抗体の断片、の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１巻：６８５１～６８５５頁（１９８４年））。
【0083】
以下の総説論文およびそこに引用されている参考文献も参照されたい：ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ． Ａｌｌｅｒｇｙ， Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １巻：１０５～１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３巻：１０３５～１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ５巻：４２８～４３３頁（１９９４年）。
【0084】
「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列内で超可変性であり、および／または構造的に定義されているループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つの超可変領域を含む；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。いくつもの超可変領域の記述が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造ループの場所に言及する（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６巻：９０１～９１７頁（１９８７年））。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの折衷を示すものであり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅに使用されている。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、入手可能な複合体結晶構造の解析に基づくものである。これらの超可変領域のそれぞれに由来する残基を以下に示す。
ループ Ｋａｂａｔ ＡｂＭ Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃｏｎｔａｃｔ
Ｌ１ Ｌ２４－Ｌ３４ Ｌ２４－Ｌ３４ Ｌ２６－Ｌ３２ Ｌ３０－Ｌ３６
Ｌ２ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ５０－Ｌ５２ Ｌ４６－Ｌ５５
Ｌ３ Ｌ８９－Ｌ９７ Ｌ８９－Ｌ９７ Ｌ９１－Ｌ９６ Ｌ８９－Ｌ９６
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５Ｂ Ｈ２６－Ｈ３５Ｂ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５Ｂ
（Ｋａｂａｔ番号付け）
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５ Ｈ２６－Ｈ３５ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５
（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け）
Ｈ２ Ｈ５０－Ｈ６５ Ｈ５０－Ｈ５８ Ｈ５３－Ｈ５５ Ｈ４７－Ｈ５８
Ｈ３ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９６－Ｈ１０１ Ｈ９３－Ｈ１０１
ループ Ｋａｂａｔ ＡｂＭ Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃｏｎｔａｃｔ
Ｌ１ Ｌ２４－Ｌ３４ Ｌ２４－Ｌ３４ Ｌ２６－Ｌ３２ Ｌ３０－Ｌ３６
Ｌ２ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ５０－Ｌ５２ Ｌ４６－Ｌ５５
Ｌ３ Ｌ８９－Ｌ９７ Ｌ８９－Ｌ９７ Ｌ９１－Ｌ９６ Ｌ８９－Ｌ９６
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５Ｂ Ｈ２６－Ｈ３５Ｂ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５Ｂ
（Ｋａｂａｔ番号付け）
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５ Ｈ２６－Ｈ３５ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５
（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け）
Ｈ２ Ｈ５０－Ｈ６５ Ｈ５０－Ｈ５８ Ｈ５３－Ｈ５５ Ｈ４７－Ｈ５８
Ｈ３ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９６－Ｈ１０１ Ｈ９３－Ｈ１０１
【0085】
超可変領域は、以下の通り「伸長された超可変領域」を含み得る：ＶＬにおける２４－３６または２４－３４（Ｌ１）、４６－５６または５０－５６または４９－５６（Ｌ２）および８９－９７または８９－９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおける２６－３５（Ｈ１）、５０－６５または４９－６５（Ｈ２）および９３－１０２、９４－１０２、または９５－１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義のそれぞれについて、Ｋａｂａｔら、上記に従って番号付けされる。
【0086】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基とは、本明細書において定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【0087】
「Ｋａｂａｔと同様の可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔと同様のアミノ酸位番号付け」という用語およびその変形は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）における抗体の編集物（ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ）の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのために使用される番号付け系を指す。この番号付け系を使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲにおける短縮、または挿入に対応して、より少ないまたは追加的なアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後ろに単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後ろに挿入残基（Ｋａｂａｔに従って例えば残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体について、「標準の」Ｋａｂａｔ番号付けされた配列を有する抗体の配列の相同性の領域におけるアラインメントによって残基のＫａｂａｔ番号付けを決定することができる。
【0088】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖内に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【0089】
「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、断片は、同じポリペプチド鎖内で接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＨ－ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成が可能になるには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは強制的に別の鎖の相補的なドメインと対形成し、２つの抗原結合部位が創出される。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０巻：６４４４～６４４８頁（１９９３年）により詳細に記載されている。
【0090】
「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された抗体および／または本明細書に開示されているヒト抗体を作出するための技法のいずれかを使用して作出された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合性残基を含むヒト化抗体を明確に排除する。
【0091】
「親和性成熟した」抗体とは、その１つまたは複数のＨＶＲに１つまたは複数の変更を伴う抗体であり、その変更により、それらの変更（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性の改善がもたらされる。一実施形態では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：７７９～７８３頁（１９９２年）には、ＶＨドメインおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１巻：３８０９～３８１３頁（１９９４年）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ １６９巻：１４７～１５５頁（１９９５年）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５巻：１９９４～２００４頁（１９９５年）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４巻（７号）：３３１０～９頁（１９９５年）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２６巻：８８９～８９６頁（１９９２年）により説明されている。
【0092】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物活性を阻害するまたは低下させる抗体である。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【0093】
「アゴニスト抗体」とは、本明細書で使用される場合、目的のポリペプチドの機能活性の少なくとも１つを模倣する抗体である。
【0094】
「障害」とは、本発明の抗体を用いた処置から利益を得る任意の状態である。障害には、哺乳動物に問題の障害の素因を与える病的状態を含めた慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書において処置される障害の非限定的な例としてはがんが挙げられる。
【0095】
「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害はがんである。
【0096】
「腫瘍」とは、本明細書で使用される場合、悪性であるか良性であるかにかかわらず全ての新生細胞成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性細胞および組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」および「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互排他的なものではない。
【0097】
「がん」および「がん性」という用語は、一般に、調節されていない細胞成長／増殖を一般に特徴とする哺乳動物の生理的状態を指すまたは記述する。がんの例としては、これだけに限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。そのようながんのより詳細な例としては、扁平上皮細胞がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ）、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、神経膠芽腫、子宮頸がん（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病および他のリンパ球増殖性障害、および種々の型の頭頸部がんが挙げられる。
【0098】
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を引き出すことができる任意の物質と定義される。
【0099】
本明細書で使用される場合、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原または抗原の断片の供給により特異的な細胞増殖がもたらされるような細胞集団の性質を指す。
【0100】
本明細書で使用される場合、「処置」とは、処置される個体または細胞の自然経過を変更する試みにおける臨床介入を指し、予防法のためまたは臨床病理の過程中のいずれかで実施することができる。望ましい処置の効果としては、疾患の出現または再発の防止、症状の緩和、疾患のあらゆる直接または間接的な病理学的影響の減弱、炎症および／または組織／器官損傷の防止または減少、疾患の進行の速度の低下、病態の好転または一時的緩和（ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ）、および寛解または予後の改善が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または障害の発生を遅延させるために本発明の抗体を使用する。
【0101】
「個体」または「被験体」は、脊椎動物である。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物である。哺乳動物としては、これだけに限定されないが、農場動物（例えば、ウシなど）、競技動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、およびウマなど）、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、ヒトである。
【0102】
「哺乳動物」とは、処置の目的に関しては、ヒト、家畜動物および農場動物、ならびに動物園の動物、競技動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含めた、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【0103】
「有効量」とは、治療的または予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。
【0104】
本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子の能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、物質／分子のあらゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。必ずではないが、一般に、予防用量は、被験体に疾患の前またはより早い段階で使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。
【0105】
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害するもしくは妨げ、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生物質、ならびに、断片および／もしくはそのバリアントを含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素などの毒素、ならびに以下に開示されている種々の抗腫瘍剤または抗がん剤を含むものとする。他の細胞傷害性薬剤が下に記載されている。殺腫瘍剤（ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ ａｇｅｎｔ）は腫瘍細胞の破壊を引き起こすものである。
【0106】
「化学療法剤」はがんの処置において有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチルオロメラミンを含めた、エチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン（ｌａｐａｃｈｏｎｅ）；ラパコール（ｌａｐａｃｈｏｌ）；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、カリチアマイシンガンマ１ＩおよびカリチアマイシンオメガＩ１など（例えば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ．、３３巻：１８３～１８６頁（１９９４年）を参照されたい）；ジネミシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含めたジネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌ）；フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフロルニチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミンで工学的に操作したナノ粒子製剤であるＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ－ｆｒｅｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ならびに、上記の２つまたはそれ超の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ、および、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５－ＦＵおよびロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）の組み合わせの処置レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸなどが挙げられる。
【0107】
本明細書で使用される場合、「処置」とは、処置される個体または細胞の自然経過を変更する試みにおける臨床介入を指し、予防法のためまたは臨床病理の過程中のいずれかで実施することができる。望ましい処置の効果としては、疾患の出現または再発の防止、症状の緩和、疾患のあらゆる直接または間接的な病理学的影響の減弱、炎症および／または組織／器官損傷の防止または減少、疾患の進行の速度の低下、病態の好転または一時的緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または障害の発生を遅延させるために本発明の抗体を使用する。
【0108】
「個体」または「被験体」は、脊椎動物である。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物である。哺乳動物としては、これだけに限定されないが、農場動物（例えば、ウシなど）、競技動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、およびウマなど）、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、ヒトである。
【0109】
「哺乳動物」とは、処置の目的に関しては、ヒト、家畜動物および農場動物、ならびに動物園の動物、競技動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含めた、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【0110】
「有効量」とは、所望される治療的または予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。
【0111】
本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子の能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、物質／分子のあらゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。必ずではないが、一般に、予防用量は、被験体に疾患の前またはより早い段階で使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。
【0112】
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害するもしくは妨げ、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生物質、ならびに、その断片および／もしくはバリアントを含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素などの毒素、および以下に開示されている種々の抗腫瘍剤または抗がん剤を含むものとする。他の細胞傷害性薬剤が下に記載されている。殺腫瘍剤は腫瘍細胞の破壊を引き起こすものである。
【0113】
１種または複数種の別の治療剤「と組み合わせた」投与は、同時（並行）投与および任意の順序での連続した投与を含む。
【0114】
糖操作抗体群
培養物中で哺乳動物細胞から産生された組換えタンパク質のグリコシル化は、治療用抗体の有効な使用を確実にすることにおける重要なプロセスである（Ｇｏｏｃｈｅｅら、１９９１年；ＪｅｎｋｉｎｓおよびＣｕｒｌｉｎｇ、１９９４年）。哺乳動物の細胞培養では、全てが同じ性質を有するわけではない、グリコシル化パターンの不均一な混合物が送達される。治療用タンパク質の安全性、有効性および血清中半減期のような性質は、これらのグリコシル化パターンの影響を受ける可能性がある。本発明者らは、「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という名称の新規クラスのモノクローナル抗体を開発することにより、グリコフォーム不均一性問題に成功裏に対処した。
培養物中で哺乳動物細胞から産生された組換えタンパク質のグリコシル化は、治療用抗体の有効な使用を確実にすることにおける重要なプロセスである（Ｇｏｏｃｈｅｅら、１９９１年；ＪｅｎｋｉｎｓおよびＣｕｒｌｉｎｇ、１９９４年）。哺乳動物の細胞培養では、全てが同じ性質を有するわけではない、グリコシル化パターンの不均一な混合物が送達される。治療用タンパク質の安全性、有効性および血清中半減期のような性質は、これらのグリコシル化パターンの影響を受ける可能性がある。本発明者らは、「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という名称の新規クラスのモノクローナル抗体を開発することにより、グリコフォーム不均一性問題に成功裏に対処した。
【0115】
「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ－Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、Ｆｃ上に単一の一様化されたグリコフォームを有するモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。
【0116】
糖操作抗体群は、細胞において産生されるモノクローナル抗体、好ましくは治療用モノクローナル抗体から生成することができる。糖操作抗体群は、市販されているものであっても臨床開発中のものであってもよい。治療的使用のためのモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体であってよい。治療的使用のための認可されたモノクローナル抗体の例としては、これだけに限定されないが、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｍａｂ）、アブシキシマブ、リツキシマブ、ダクリズマブ、バシリキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、イブリツモマブ（Ｉｂｒｉｔｏｍｏｍａｂ）、アダリムマブ、アレファセプト、オマリズマブ、エファリズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、エクリズマブおよびセルトリズマブが挙げられる。
【0117】
治療用モノクローナル抗体からＦｃ糖鎖工学によって導出された機能的に活性な糖操作抗体群が本明細書に記載されている。最適化グリコフォームを有する糖操作抗体群は、治療用モノクローナル抗体と比較して同様のまたはより良好な活性を示す。最適化グリコフォームを有する糖操作抗体群により、治療的使用のための代替物がもたらされ得ることが意図されている。
【0118】
抗ＴＮＦα糖操作抗体
単球およびマクロファージは、内毒素または他の刺激に応答して、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦα）および腫瘍壊死因子－β（ＴＮＦβ）として公知のサイトカインを分泌する。ＴＮＦαは、１７ｋＤタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２巻：６９５１～６９５４頁（１９８７年））。膜に結合した２６ｋＤの前駆形態のＴＮＦも存在する（Ｋｒｉｅｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ ５３巻：４５～５３頁（１９８８年））。ＴＮＦ－αは、先天免疫の重要な調節因子である炎症反応の強力な誘導因子であり、細胞内細菌およびある特定のウイルスの感染に対するＴｈ１免疫応答の調節において重要な役割を果たす。しかし、調節不全ＴＮＦは、多数の病理学的状況の一因となる可能性もある。これらの病理学的状況としては、関節リウマチ、クローン病、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎および重症慢性尋常性乾癬を含めた免疫媒介性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）が挙げられる。
単球およびマクロファージは、内毒素または他の刺激に応答して、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦα）および腫瘍壊死因子－β（ＴＮＦβ）として公知のサイトカインを分泌する。ＴＮＦαは、１７ｋＤタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２巻：６９５１～６９５４頁（１９８７年））。膜に結合した２６ｋＤの前駆形態のＴＮＦも存在する（Ｋｒｉｅｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ ５３巻：４５～５３頁（１９８８年））。ＴＮＦ－αは、先天免疫の重要な調節因子である炎症反応の強力な誘導因子であり、細胞内細菌およびある特定のウイルスの感染に対するＴｈ１免疫応答の調節において重要な役割を果たす。しかし、調節不全ＴＮＦは、多数の病理学的状況の一因となる可能性もある。これらの病理学的状況としては、関節リウマチ、クローン病、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎および重症慢性尋常性乾癬を含めた免疫媒介性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）が挙げられる。
【0119】
本開示は、「抗ＴＮＦα糖操作抗体群」（「抗ＴＮＦαＧＡｂｓ」）と称される新規クラスの抗ＴＮＦαモノクローナル抗体を特徴とする。抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって生成することができる。「親抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＴＮＦα糖操作抗体群を作製するために使用される抗ＴＮＦαモノクローナル抗体を指す。均一な集団を構成する個々の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は同一であり、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、その親抗体が結合するのと同じヒトＴＮＦα抗原のエピトープに結合し得る。
【0120】
親抗体は、哺乳動物細胞、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓまたは昆虫細胞などの細胞において産生させることができる。親抗体は哺乳動物細胞において産生させることが好ましい。親抗体はＦＤＡの認可を受けたものであってもよく、開発中のものであってもよい。認可を受けたまたは開発中の抗ＴＮＦαモノクローナル抗体としては、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、ＣＤＰ８７０（セルトリズマブ）、ＴＮＦ－ＴｅＡｂおよびＣＤＰ５７１が挙げられる。
【0121】
本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含み得る。本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））の軽鎖配列および重鎖配列を含み得る。
【0122】
以下の表１は、アダリムマブの重鎖および軽鎖配列を示す。
【表1】
【0123】
本明細書に記載の通り、Ｎ－グリカンをＦｃ領域のＡｓｎ－２９７に付着させることができる。
【0124】
本発明によるＮ－グリカンは、「トリマンノースコア（ｔｒｉｍａｎｎｏｓｅ ｃｏｒｅ）」または「五糖コア」とも称されるＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２という共通の五糖コアを有し、ここで、「Ｍａｎ」はマンノースを指し、「Ｇｌｃ」はグルコースを指し、「ＮＡｃ」はＮ－アセチルを指し、ＧｌｃＮＡｃはＮ－アセチルグルコサミンを指す。
【0125】
本明細書に記載のＮ－グリカンは、二分岐構造を有してよい。
【0126】
Ｎ－グリカンは、「バイセクティング」ＧｌｃＮＡｃを含む鎖内置換を有し得る。グリカンがトリマンノースコア上にバイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む場合、構造は、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ３と表される。グリカンがトリマンノースコアに付着したコアフコースを含む場合、構造は、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆ）と表される。Ｎ－グリカンは、１つまたは複数の末端シアル酸（例えば、Ｎ－アセチルノイラミン酸）を含んでよい。「Ｓｉａ」と表される構造は、末端シアル酸を指す。シアリル化は、二分岐構造のα１－３アームまたはα１－６アームのいずれかにおいて起こり得る。
【0127】
本明細書に記載のＮ－グリカンは、少なくとも１つのα２－６末端シアル酸を含んでよい。一部の実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－６末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－６末端シアル酸を２つ含む。
【0128】
Ｎ－グリカンは、少なくとも１つのα２－３末端シアル酸を含んでよい。ある特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－３末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、α２－３末端シアル酸を２つ含む。
【0129】
Ｎ－グリカンは、少なくとも１つのガラクトースを含んでよい。ある特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、ガラクトースを１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ－グリカンは、ガラクトースを２つ含む。
【0130】
Ｎ－グリカンはフコシル化されていても脱フコシル化されていてもよい。Ｎ－グリカンはフコシル化されていることが好ましい。
【0131】
表２は、抗ＴＮＦα糖操作抗体群の例示的なＮ－グリカンの一覧である。本開示の複数の実施形態は、本明細書において列挙されているＮ－グリカンのいずれを含んでもよく排除してもよい。
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【0132】
例示的な抗ＴＮＦα糖操作抗体の調製
本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。一部の実施形態では、親抗体はアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））である。
本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。一部の実施形態では、親抗体はアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））である。
【0133】
本明細書には、フコシル化糖操作抗体を作出するための方法であって、（ａ）モノクローナル抗体を少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）を有する抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下で二糖のＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップとを含む方法が記載されている。
【0134】
本発明の方法のモノクローナル抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であってよい。一部の実施形態では、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブまたはエタネルセプトである。
【0135】
本発明の方法に使用されるエンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳまたはそのバリアントであってよい。
【0136】
本発明の方法では、トランスグリコシラーゼを使用したステップ（ｂ）におけるその後の酵素媒介性グリコシル化を、炭水化物部分をＧｌｃＮＡｃに付加して糖鎖を伸長させることによって実施する。トランスグリコシラーゼの例としては、これだけに限定されないが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳ、およびそのバリアントが挙げられる。
【0137】
グリコシル化反応は付加反応であり、いかなる酸、水などの付随的な排除も伴わずに進行するので、糖ドナーとして糖オキサゾリンを使用するグリコシル化がオリゴ糖の合成に関して有用であることが当技術分野で周知である（Ｆｕｊｉｔａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ２００１年、１５２８巻、９～１４頁）。
【0138】
一部の実施形態では、炭水化物部分は、糖オキサゾリンである。
【0139】
一部の実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ（α２－６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）、Ｓｉａ２（α２－３／α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）およびＳｉａ２（α２－６／α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ（Ｆ）からなる群より選択される。
【0140】
脱フコシル化糖操作抗体を作出するための改善された方法であって、（ａ）モノクローナル抗体をα－フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、Ｆｃ上に単糖（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップとを含む方法も本明細書の記載に含まれる。
【0141】
本発明の改善された方法によるモノクローナル抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であってよい。一部の実施形態では、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体はアダリムマブである。
【0142】
本発明の改善された方法のα－フコシダーゼは、配列番号５、その機能的バリアントの配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含有するポリペプチドを含む。
【0143】
α－フコシダーゼは、配列番号５の配列（表３に列挙されている）、そのバリアントまたは断片に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含んでよい。ある特定の実施形態では、α－フコシダーゼは、組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ α－フコシダーゼである。
【表3】
【0144】
本発明のα－フコシダーゼのポリペプチドは、それらの単離または精製を補助するために、誘導体化または修飾することができることは理解されよう。したがって、本発明の一実施形態では、本発明において使用するためのポリペプチドを、分離手段に直接かつ特異的に結合することができるリガンドを付加することによって誘導体化または修飾する。あるいは、ポリペプチドを、結合対の一方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾し、分離手段に、結合対の他方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾される試薬を含める。任意の適切な結合対を使用することができる。本発明において使用するためのポリペプチドを、結合対の一方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾する好ましい実施形態では、ポリペプチドにヒスチジン－タグを付けるまたはビオチン－タグを付けることが好ましい。一般には、ヒスチジンまたはビオチンタグのアミノ酸コード配列を遺伝子レベルで含め、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて組換えによりタンパク質を発現させる。ヒスチジンまたはビオチンタグは、一般には、ポリペプチドの一端、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかに存在する。ヒスチジンタグは、一般には６つのヒスチジン残基からなるが、これより長くてもよく、一般には、最大７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸または２０アミノ酸またはそれ未満、例えば、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸または１アミノ酸であってよい。さらに、ヒスチジンタグは、アミノ酸置換、好ましくは上で定義されている保存的置換を１つまたは複数含有してよい。
【0145】
本明細書に記載のバリアントポリペプチドは、アミノ酸配列が配列番号５のものから変動するが、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む酵素と同じまたは同様の機能を示すものである。
【0146】
本明細書で使用される場合、配列に関するパーセント（％）配列同一性は、配列をアラインメントし、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップを導入した後の、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補ポリペプチド配列内のアミノ酸残基の百分率と定義される。パーセント配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術の範囲内である種々のやり方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【0147】
いくつかの好ましい本発明の実施形態が実施例において実証されている。
【0148】
医薬組成物および製剤
抗ＴＮＦαＧＡｂを本明細書に記載の通り調製した後、「凍結乾燥前製剤」を作製することができる。製剤を調製するための抗ＴＮＦαＧＡｂは、基本的に純粋であることが好ましく、基本的に均一であることが望ましい（すなわち、混入タンパク質などを含まない）。「基本的に純粋な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約９５重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。「基本的に均一な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９９重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。ある特定の実施形態では、タンパク質は抗体である。
抗ＴＮＦαＧＡｂを本明細書に記載の通り調製した後、「凍結乾燥前製剤」を作製することができる。製剤を調製するための抗ＴＮＦαＧＡｂは、基本的に純粋であることが好ましく、基本的に均一であることが望ましい（すなわち、混入タンパク質などを含まない）。「基本的に純粋な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約９５重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。「基本的に均一な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９９重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。ある特定の実施形態では、タンパク質は抗体である。
【0149】
凍結乾燥前製剤中の抗ＴＮＦαＧＡｂの量は、所望の用量体積、投与の様式（複数可）などを考慮に入れて決定する。選択されたタンパク質がインタクトな抗体（全長抗体）である場合、例示的な出発タンパク質濃度は、約２ｍｇ／ｍＬから約５０ｍｇ／ｍＬまで、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬから約４０ｍｇ／ｍＬまで、最も好ましくは約２０ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでである。タンパク質は、一般に、溶液中に存在する。例えば、タンパク質は、ｐＨ緩衝溶液中に約４～８、好ましくは約５～７のｐＨで存在し得る。例示的な緩衝液としては、ヒスチジン、リン酸、トリス、クエン酸、コハク酸および他の有機酸が挙げられる。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液および製剤（例えば、再構成製剤）の所望の等張性に応じて、約１ｍＭから約２０ｍＭまで、または約３ｍＭから約１５ｍＭまでであり得る。以下で実証される通り、凍結保護性を有し得るという点で、ヒスチジンが好ましい緩衝液である。コハク酸が別の有用な緩衝液であることが示された。
【0150】
凍結保護剤を凍結乾燥前製剤に添加する。好ましい実施形態では、凍結保護剤は、スクロースまたはトレハロースなどの非還元糖である。凍結乾燥前製剤中の凍結保護剤の量は、一般に、再構成した時に得られる製剤が等張性になるような量である。しかし、高張性の再構成製剤も適切であり得る。さらに、凍結保護剤の量は、凍結乾燥した時に許容されない量のタンパク質の分解／凝集が起こるほど少ないものであってはならない。凍結保護剤が糖（例えば、スクロースまたはトレハロースなど）であり、タンパク質が抗体である場合、凍結乾燥前製剤中の例示的な凍結保護剤濃度は、約１０ｍＭから約４００ｍＭまで、好ましくは約３０ｍＭから約３００ｍＭまで、最も好ましくは約５０ｍＭから約１００ｍＭまでである。
【0151】
タンパク質と凍結保護剤の比は、各々のタンパク質と凍結保護剤の組み合わせに対して選択する。タンパク質濃度が高い等張性の再構成製剤を生成するためにタンパク質としての選択された抗体と、凍結保護剤としての糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）との場合、抗体に対する凍結保護剤のモル比は、１モルの抗体に対して約１００モルから約１５００モルまでの凍結保護剤、好ましくは１モルの抗体に対して約２００モルから約１０００モルまでの凍結保護剤、例えば、１モルの抗体に対して約２００モルから約６００モルまでの凍結保護剤であり得る。
【0152】
本発明の好ましい実施形態では、凍結乾燥前製剤に界面活性剤を添加することが望ましいことが見いだされた。その代わりに、またはそれに加えて、凍結乾燥製剤および／または再構成製剤に界面活性剤を添加することができる。例示的な界面活性剤としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｅｌ ｓｕｌｆａｔｅ）；オクチルグリコシドナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｏｃｔｙｌ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシンまたはステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルニドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えばラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；ナトリウムメチルココイルタウレート、または二ナトリウムメチルオレイルタウレート；およびＭＯＮＡＱＵＡＴＴＭシリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリプロピルグリコール（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌ ｇｌｙｃｏｌ）、およびエチレンとプロピレングリコールの共重合体（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。添加する界面活性剤の量は、再構成されたタンパク質の凝集が減少し、再構成後の微粒子物の形成が最小限になるような量にする。例えば、界面活性剤は、凍結乾燥前製剤中に、約０．００１～０．５％、好ましくは約０．００５～０．０５％の量で存在してよい。
【0153】
本発明のある特定の実施形態では、凍結乾燥前製剤の調製において、凍結保護剤（例えば、スクロースまたはトレハロースなど）と増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）の混合物を使用する。増量剤により、中に過剰なポケットを伴わない一様な凍結乾燥ケーキなどの作製が可能になり得る。
【0154】
製剤の所望の特性に悪影響を及ぼさないのであれば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ， Ａ．編（１９８０年）に記載されているものなどの、他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を凍結乾燥前製剤（および／または凍結乾燥製剤および／または再構成製剤）に含めることができる。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性のものであり、それらとして、追加的な緩衝剤；防腐剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ポリエステルなどの生分解性ポリマー；ならびに／またはナトリウムなどの塩形成性対イオンが挙げられる。
【0155】
本明細書に記載の医薬組成物および製剤は、安定であることが好ましい。「安定な」製剤／組成物とは、保管に際してその中の抗体の物理的安定性および化学的安定性および完全性が基本的に保持される製剤／組成物である。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技法が当技術分野において利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７～３０１頁、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ（１９９１年）およびＪｏｎｅｓ， Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０巻：２９～９０頁（１９９３年）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された期間にわたって測定することができる。
【0156】
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用する製剤は、無菌であるべきである。これは、凍結乾燥および再構成の前またはその後に滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。あるいは、混合物全体の無菌性は、タンパク質以外の成分を、例えば約１２０℃で約３０分にわたってオートクレーブすることによって達成することができる。
【0157】
タンパク質、凍結保護剤および他の任意選択の構成成分を混合した後、製剤を凍結乾燥する。この目的のために、Ｈｕｌｌ５０（登録商標）（Ｈｕｌｌ、ＵＳＡ）またはＧＴ２０（登録商標）（Ｌｅｙｂｏｌｄ－Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）フリーズドライヤーなどの多くの異なるフリーズドライヤーが利用可能である。フリーズドライは、製剤を凍結させ、その後、一次乾燥に適した温度で凍結した内容物から氷を昇華させることによって達成される。この条件の下で、産物の温度は製剤の共融点または崩壊温度を下回る。一般には、一次乾燥の棚温度は、一般には約５０～２５０ｍＴｏｒｒにわたる適切な圧力で、約－３０～２５℃にわたる（産物が一次乾燥の間凍結したままであることを条件とする）。乾燥に必要な時間は、主に、製剤、試料を保持する容器のサイズおよび型（例えば、ガラスバイアル）ならびに液体の体積により規定され、これは、数時間から数日（例えば、４０～６０時間）までにわたる。二次乾燥段階は、主に、使用する容器の型およびサイズならびにタンパク質の型に応じて、約０～４０℃で行うことができる。しかし、本明細書では、二次乾燥ステップは必要でない場合があることが見いだされた。例えば、凍結乾燥の水除去相全体を通した棚温度は、約１５～３０℃（例えば、約２０℃）であり得る。二次乾燥に必要な時間および圧力は、例えば温度および他のパラメータに応じて、適切な凍結乾燥ケーキが生じる時間および圧力である。二次乾燥時間は、産物中の所望の残留水分レベルにより規定され、一般には、少なくとも約５時間（例えば、１０～１５時間）かかる。圧力は、一次乾燥ステップの間に使用する圧力と同じであってよい。フリーズドライ条件は、製剤およびバイアルサイズに応じて変動し得る。
【0158】
いくつかの場合には、移行ステップを回避するために、タンパク質の再構成を行う容器中でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい。この場合、容器は、例えば、３ｃｃ、５ｃｃ、１０ｃｃ、２０ｃｃ、５０ｃｃまたは１００ｃｃのバイアルであってよい。一般命題として、凍結乾燥により、水分含量が約５％未満、および好ましくは約３％未満である凍結乾燥製剤がもたらされる。
【0159】
所望の段階、一般には、タンパク質を患者に投与する時に、希釈剤を用いて凍結乾燥製剤を再構成し、したがって、再構成製剤中のタンパク質の濃度を少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬから約４００ｍｇ／ｍＬまで、より好ましくは約８０ｍｇ／ｍＬから約３００ｍｇ／ｍＬまで、最も好ましくは約９０ｍｇ／ｍＬから約１５０ｍｇ／ｍＬまでにすることができる。そのような再構成製剤中の高タンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図されている場合に特に有用であると考えられる。しかし、静脈内投与などの他の投与経路に関しては、再構成製剤中のタンパク質の濃度はより低いことが所望される場合がある（例えば、再構成製剤中、約５～５０ｍｇ／ｍＬ、または約１０～４０ｍｇ／ｍＬのタンパク質）。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質の濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質の濃度よりも有意に高い。例えば、再構成製剤中のタンパク質の濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質の濃度の約２～４０倍、好ましくは３～１０倍、最も好ましくは３～６倍（例えば、少なくとも３倍または少なくとも４倍）であり得る。
【0160】
さらに、本開示は、単独療法、または実質的に均一な本明細書に記載の糖操作抗体群と他の抗体および／もしくは他の治療剤とを含む併用療法に適した組み合わせ医薬組成物も提供する。医薬組成物は、共製剤（ｃｏｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）として投与することもでき、共投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）治療レジメンで使用することもできる。
【0161】
一般には、再構成は、完全な湿潤化（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）を確実にするために約２５℃の温度で行うが、所望であれば他の温度を使用することができる。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の型、賦形剤（複数可）およびタンパク質の量に依存する。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌食塩溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。希釈剤は、場合によって防腐剤を含有する。例示的な防腐剤が上に記載されており、好ましい防腐剤はベンジルまたはフェノールアルコールなどの芳香族アルコールである。使用する防腐剤の量は、異なる防腐剤濃度をタンパク質との適合性について評価すること、および防腐剤有効性試験によって決定する。例えば、防腐剤が芳香族アルコール（例えば、ベンジルアルコールなど）である場合、約０．１～２．０％、好ましくは約０．５～１．５％、しかし最も好ましくは約１．０～１．２％の量で存在してよい。再構成製剤は、サイズが１０μｍ超の粒子をバイアル当たり６０００個未満有する。
【0162】
免疫コンジュゲート
別の態様では、本発明は、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、もしくは放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））などの細胞傷害性薬剤とコンジュゲートした抗体を含む免疫コンジュゲート、または抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
別の態様では、本発明は、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、もしくは放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））などの細胞傷害性薬剤とコンジュゲートした抗体を含む免疫コンジュゲート、または抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
【0163】
がんの処置において、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤、すなわち、腫瘍細胞を死滅させるまたは阻害するための薬物を局所送達するために抗体－薬物コンジュゲートを使用することにより（ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９年）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９巻：６０５～６１４頁；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ－ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ（１９９７年）Ａｄｖ． Ｄｒｇ Ｄｅｌ． Ｒｅｖ． ２６巻：１５１～１７２頁；米国特許第４，９７５，２７８号）、薬物部分の腫瘍への標的化送達、およびそこでの細胞内蓄積が可能になり、これらのコンジュゲートしていない薬物薬剤を全身投与した場合には、排除しようとする腫瘍細胞だけでなく、正常細胞に対しても許容されないレベルの毒性が生じる可能性がある（Ｂａｌｄｗｉｎら、（１９８６年）Ｌａｎｃｅｔ（１９８６年３月１５日）：６０３～０５頁；Ｔｈｏｒｐｅ、（１９８５年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａ． Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５～５０６頁）。そのため、最小の毒性での最大の有効性が求められる。ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体のどちらもこれらの戦略において有用であることが報告されている（Ｒｏｗｌａｎｄら、（１９８６年）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２１巻：１８３～８７頁）。これらの方法において使用される薬物としては、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、およびビンデシンが挙げられる（Ｒｏｗｌａｎｄら、（１９８６年）、上記）。抗体－毒素コンジュゲートに使用される毒素としては、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンなどの小分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００年）Ｊｏｕｒ． ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ９２巻（１９号）：１５７３～１５８１頁；Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １０巻：１０２５～１０２８頁；Ｍａｎｄｌｅｒら（２００２年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １３巻：７８６～７９１頁）、メイタンシノイド（ＥＰ１３９１２１３；Ｌｉｕら、（１９９６年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９３巻：８６１８～８６２３頁）、およびカリチアマイシン（Ｌｏｄｅら（１９９８年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８巻：２９２８頁；Ｈｉｎｍａｎら（１９９３年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３巻：３３３６～３３４２頁）が挙げられる。毒素は、チューブリン（ｔｕｂｕｔｉｎ）結合、ＤＮＡ結合、またはトポイソメラーゼ阻害を含めた機構によってそれらの細胞傷害効果および細胞増殖抑制効果に影響を及ぼす可能性がある。いくつかの細胞傷害性薬物は、大型の抗体またはタンパク質受容体リガンドとコンジュゲートすると不活性になるまたは活性が低くなる傾向がある。
【0164】
抗体誘導体
本発明の抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加的な非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変することができる。一実施形態では、抗体の誘導体化に適した部分は水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、これだけに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダム共重合体）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中で安定であるので、製造において有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、また、分枝していても分枝していなくてもよい。抗体に付着させるポリマーの数は変動し得、１つ超のポリマーを付着させる場合、そのポリマー分子は同じであっても異なってもよい。一般に、誘導体化に使用するポリマーの数および／または型は、これだけに限定されないが、改善しようとする抗体の特定の性質または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法に使用されるものであるかなどを含めた考察に基づいて決定することができる。
本発明の抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加的な非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変することができる。一実施形態では、抗体の誘導体化に適した部分は水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、これだけに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダム共重合体）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中で安定であるので、製造において有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、また、分枝していても分枝していなくてもよい。抗体に付着させるポリマーの数は変動し得、１つ超のポリマーを付着させる場合、そのポリマー分子は同じであっても異なってもよい。一般に、誘導体化に使用するポリマーの数および／または型は、これだけに限定されないが、改善しようとする抗体の特定の性質または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法に使用されるものであるかなどを含めた考察に基づいて決定することができる。
【0165】
別の実施形態では、放射に曝露させることによって選択的に加熱することができる抗体と非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、炭素ナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． １０２巻：１１６００～１１６０５頁（２００５年））。放射は、任意の波長のものであってよく、これだけに限定されないが、普通の細胞は害されないが、非タンパク質性部分は抗体－非タンパク質性部分の近位の細胞が死滅する温度まで加熱される波長を含む。
【0166】
治療適用
自己免疫障害は、重要な広範にわたる医学的問題である。例えば、関節リウマチ（ＲＡ）は、米国において２百万人超に影響を及ぼしている自己免疫疾患である。ＲＡは、関節の慢性炎症を引き起こし、一般には、関節破壊および機能障害を引き起こす潜在性がある進行性の疾病である。関節リウマチの原因は分かっていないが、遺伝的素因、感染因子および環境因子の全てがこの疾患の病因に関係づけられている。活動性ＲＡでは、症状として、疲労、食欲不振、低度の発熱、筋肉痛および関節痛、ならびに硬直が挙げられる。疾患の再燃時には、滑膜の炎症に起因して、関節が頻繁に赤くなり、膨張し、痛みがあり、圧痛があるようになる。さらに、ＲＡは、全身性疾患であるので、炎症が、眼および口の腺、肺の内層、心膜、および血管を含めた関節以外の体の器官および領域に影響を及ぼす可能性がある。
自己免疫障害は、重要な広範にわたる医学的問題である。例えば、関節リウマチ（ＲＡ）は、米国において２百万人超に影響を及ぼしている自己免疫疾患である。ＲＡは、関節の慢性炎症を引き起こし、一般には、関節破壊および機能障害を引き起こす潜在性がある進行性の疾病である。関節リウマチの原因は分かっていないが、遺伝的素因、感染因子および環境因子の全てがこの疾患の病因に関係づけられている。活動性ＲＡでは、症状として、疲労、食欲不振、低度の発熱、筋肉痛および関節痛、ならびに硬直が挙げられる。疾患の再燃時には、滑膜の炎症に起因して、関節が頻繁に赤くなり、膨張し、痛みがあり、圧痛があるようになる。さらに、ＲＡは、全身性疾患であるので、炎症が、眼および口の腺、肺の内層、心膜、および血管を含めた関節以外の体の器官および領域に影響を及ぼす可能性がある。
【0167】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）は、単球およびマクロファージを含めた多数の細胞型によって産生されるサイトカインであり、最初はある特定のマウス腫瘍の壊死を誘導する能力に基づいて同定された。その後、悪液質に関連するカケクチンと称される因子がＴＮＦ－αと同一であることが示された。ＴＮＦ－αは、ショック、敗血症、感染、自己免疫疾患、ＲＡ、クローン病、移植片拒絶反応および移植片対宿主病を含めた種々の他のヒト疾患および障害の病態生理に関係づけられている。
【0168】
本開示は、ヒトにおいてＴＮＦ媒介性炎症性疾患を処置する方法であって、それを必要とするヒトに、炎症に有効な量の、本明細書に記載の例示的な抗ＴＮＦα糖操作抗体またはその抗原結合性断片およびその医薬製剤／組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【0169】
本発明の方法による例示的な炎症性疾患は、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および若年性特発性関節炎の群より選択することができる。
【0170】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細が以下の説明に記載されている。本発明の他の特徴または利点は、以下の図およびいくつかの実施形態の詳細な説明から、ならびに添付の特許請求の範囲からも明らかになるであろう。
【0171】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例に開示されている技法は、本発明者により、本発明の実施においてよく機能することが発見された技法であり、したがって、それを実施するための好ましい方式を構成するとみなすことができることが当業者には理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態に多くの変更を行うことができ、それでもなお、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果が得られることを理解するべきである。
【実施例】
【0172】
（実施例１）
抗ＴＮＦαのＮ－グリコシル化を分析するための一般手順
本発明者らは、グリコペプチド前駆体に適用した衝突解離（ＣＩＤ）エネルギーに対するオリゴ糖由来断片イオン（オキソニウムイオン）の収量をモニターする質量分析法を開発した。オキソニウムイオン法の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）は、来たるバイオシミラー（ｂｉｏｓｉｍｉｌａｒ）治療薬の常套的な品質管理分析に関する規制要件を満たすことができた。
抗ＴＮＦαのＮ－グリコシル化を分析するための一般手順
本発明者らは、グリコペプチド前駆体に適用した衝突解離（ＣＩＤ）エネルギーに対するオリゴ糖由来断片イオン（オキソニウムイオン）の収量をモニターする質量分析法を開発した。オキソニウムイオン法の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）は、来たるバイオシミラー（ｂｉｏｓｉｍｉｌａｒ）治療薬の常套的な品質管理分析に関する規制要件を満たすことができた。
【0173】
アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））（Ａｂｂｖｉｅから購入）５ｕｇを２Ｍのグアニジン－ＨＣｌ、２５ｕｌに溶解させ、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を添加して最終濃度を５ｍＭにした。１１０℃で１０分インキュベートした後、１０ｍＭのヨードアセトアミド（ＩＡＡ）中、３７℃で１時間にわたって還元型システイン残基をアルキル化した。５ｍＭのＤＴＴを添加して室温で１０分にわたって過剰なＩＡＡをクエンチした。産物を５０ｍＭの炭酸水素アンモニウム中１５倍に希釈した後、スピンカラムを用いて微量遠心分離した（タンパク質ＭＷカットオフ１０ｋＤａ）。トリプシン消化を、酵素：タンパク質比１：２５（ｗ／ｗ）を使用し、３７℃で４時間にわたって実施した。試料をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析のために－２０℃で凍結させた。
【0174】
計装
ｍ／ｚ２０４オキソニウムイオン（ＨｅｘＮＡｃ）モニタリングによるグリコペプチド定量化を、４０００ ＱＴｒａｐトリプル四重極質量分析計（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）をＡｇｌｉｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステムと共に使用して実施した。グリコペプチドの微小不均一性を相対的に定量化するために、可能性のあるグリカン組成物全てを網羅する前駆イオンｍ／ｚをｉｎ－ｓｉｌｉｃｏで導き、各前駆イオンについて単一の定量的トランジションをモニターした（Ｑ３ ｍ／ｚ＝２０４）。
ｍ／ｚ２０４オキソニウムイオン（ＨｅｘＮＡｃ）モニタリングによるグリコペプチド定量化を、４０００ ＱＴｒａｐトリプル四重極質量分析計（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）をＡｇｌｉｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステムと共に使用して実施した。グリコペプチドの微小不均一性を相対的に定量化するために、可能性のあるグリカン組成物全てを網羅する前駆イオンｍ／ｚをｉｎ－ｓｉｌｉｃｏで導き、各前駆イオンについて単一の定量的トランジションをモニターした（Ｑ３ ｍ／ｚ＝２０４）。
【0175】
ＭＳデータ解析
取得した生データを、Ａｎａｌｙｓｔ １．５（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）を用いて処理した。各トランジションの質量クロマトグラムを統合し、ピーク面積によって定量化した。全ての構成成分を合わせた合計に対する各構成成分の百分率組成を算出した。
取得した生データを、Ａｎａｌｙｓｔ １．５（ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）を用いて処理した。各トランジションの質量クロマトグラムを統合し、ピーク面積によって定量化した。全ての構成成分を合わせた合計に対する各構成成分の百分率組成を算出した。
【0176】
（実施例２）
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓの生成
抗ＴＮＦαＧＡｂ３０１
アダリムマブのＦｃ領域からのＡｓｎ２９７のＮ結合グリカンの完全な除去はＰＮＧａｓｅ Ｆによって達成され、改変ＩｇＧおよび無改変ＩｇＧからのトリプシン処理グリコペプチド（ｔｒｙｐｔｉｃ ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）の４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ＮｅｕＰＡＧＥおよびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を用いて評価される。各アスパラギンにおけるＮ結合グリコシル化の潜在的部位を決定するため、および優勢なグリカンの種を解明するために、トリプシン処理グリコペプチドの分子量を使用した。
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓの生成
抗ＴＮＦαＧＡｂ３０１
アダリムマブのＦｃ領域からのＡｓｎ２９７のＮ結合グリカンの完全な除去はＰＮＧａｓｅ Ｆによって達成され、改変ＩｇＧおよび無改変ＩｇＧからのトリプシン処理グリコペプチド（ｔｒｙｐｔｉｃ ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ）の４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ＮｅｕＰＡＧＥおよびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を用いて評価される。各アスパラギンにおけるＮ結合グリコシル化の潜在的部位を決定するため、および優勢なグリカンの種を解明するために、トリプシン処理グリコペプチドの分子量を使用した。
【0177】
抗ＴＮＦαＧＡｂ２００
リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０、１．２５ｍＬ）中アダリムマブ（２．５ｍｇ）をＥｎｄｏ Ｓ（１２５μｇ）と一緒に３７℃で５時間インキュベートして、アダリムマブのＦｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）をもたらした（抗ＴＮＦαＧＡｂ２００）。反応混合物を、リン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）を用いて予め平衡化したプロテインＡ－アガロース樹脂（１ｍＬ）のカラムでのアフィニティークロマトグラフィーに供した。カラムをリン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０、１０ｍＬ）で洗浄した。結合したＩｇＧをグリシン－ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ３．０、１０ｍＬ）を用いて放出させ、溶出画分をＴｒｉｓ－Ｃｌ緩衝液（１．０Ｍ、ｐＨ８．３）ですぐに中和した。Ｆｃ断片を含有する画分を合わせ、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｆｉｌｔｅｒ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）によって濃縮して抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１を生じさせた。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ２００のグリコシル化パターンを検証した。抗ＴＮＦαＧＡｂ２００のＮ－グリカンプロファイリングの結果が図１に示されている。
リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０、１．２５ｍＬ）中アダリムマブ（２．５ｍｇ）をＥｎｄｏ Ｓ（１２５μｇ）と一緒に３７℃で５時間インキュベートして、アダリムマブのＦｃ上に二糖（ＧｌｃＮＡｃ－Ｆｕｃ）をもたらした（抗ＴＮＦαＧＡｂ２００）。反応混合物を、リン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）を用いて予め平衡化したプロテインＡ－アガロース樹脂（１ｍＬ）のカラムでのアフィニティークロマトグラフィーに供した。カラムをリン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０、１０ｍＬ）で洗浄した。結合したＩｇＧをグリシン－ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ３．０、１０ｍＬ）を用いて放出させ、溶出画分をＴｒｉｓ－Ｃｌ緩衝液（１．０Ｍ、ｐＨ８．３）ですぐに中和した。Ｆｃ断片を含有する画分を合わせ、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｆｉｌｔｅｒ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）によって濃縮して抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１を生じさせた。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ２００のグリコシル化パターンを検証した。抗ＴＮＦαＧＡｂ２００のＮ－グリカンプロファイリングの結果が図１に示されている。
【0178】
抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１
リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０、１．２５ｍＬ）中アダリムマブ（２．５ｍｇ）をＥｎｄｏ Ｓ（１２５μｇ）とＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓアルファ－Ｌ－フコシダーゼ（２．５ｍｇ）の混合物と一緒に３７℃で５時間インキュベートしてアダリムマブのＦｃ上に単糖（ＧｌｃＮＡｃ）をもたらした（抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１）。反応混合物を、リン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）を用いて予め平衡化したプロテインＡ－アガロース樹脂（１ｍＬ）のカラムでのアフィニティークロマトグラフィーに供した。カラムをリン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０、１０ｍＬ）で洗浄した。結合したＩｇＧをグリシン－ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ３．０、１０ｍＬ）を用いて放出させ、溶出画分をＴｒｉｓ－Ｃｌ緩衝液（１．０Ｍ、ｐＨ８．３）ですぐに中和した。Ｆｃ断片を含有する画分を合わせ、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｆｉｌｔｅｒ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）によって濃縮して抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１を生じさせた。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲをナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ２０１のグリコシル化パターンを確認した。
リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０、１．２５ｍＬ）中アダリムマブ（２．５ｍｇ）をＥｎｄｏ Ｓ（１２５μｇ）とＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓアルファ－Ｌ－フコシダーゼ（２．５ｍｇ）の混合物と一緒に３７℃で５時間インキュベートしてアダリムマブのＦｃ上に単糖（ＧｌｃＮＡｃ）をもたらした（抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１）。反応混合物を、リン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０）を用いて予め平衡化したプロテインＡ－アガロース樹脂（１ｍＬ）のカラムでのアフィニティークロマトグラフィーに供した。カラムをリン酸ナトリウム緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７．０、１０ｍＬ）で洗浄した。結合したＩｇＧをグリシン－ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ３．０、１０ｍＬ）を用いて放出させ、溶出画分をＴｒｉｓ－Ｃｌ緩衝液（１．０Ｍ、ｐＨ８．３）ですぐに中和した。Ｆｃ断片を含有する画分を合わせ、遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｆｉｌｔｅｒ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）によって濃縮して抗ＴＮＦαＧＡｂ２０１を生じさせた。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲをナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ２０１のグリコシル化パターンを確認した。
【0179】
抗ＴＮＦαＧＡｂ１０１
鶏卵の卵黄からのシアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）の単離は公開されている方法に従った。簡単に述べると、鶏卵の卵黄のフェノール抽出物を遠心分離し、濾過し、セファデックスＧ－５０、セファデックスＧ－２５、ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅｒａｒｌ ６５０Ｍ、ＣＭ－セファデックスＣ－２５およびセファデックスＧ－２５を含むクロマトグラフィーカラムによって精製した。リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．０、５ｍＭ）中シアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）（５２ｍｇ）の溶液をＥｎｄｏ Ｍ（５３μｇ）と一緒に３７℃でインキュベートした。７時間後、反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、水により溶出した。産物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して産物（グリカン－１０１）を白色粉末として生じさせた（３０ｍｇ、収率８２％）。
鶏卵の卵黄からのシアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）の単離は公開されている方法に従った。簡単に述べると、鶏卵の卵黄のフェノール抽出物を遠心分離し、濾過し、セファデックスＧ－５０、セファデックスＧ－２５、ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅｒａｒｌ ６５０Ｍ、ＣＭ－セファデックスＣ－２５およびセファデックスＧ－２５を含むクロマトグラフィーカラムによって精製した。リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．０、５ｍＭ）中シアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）（５２ｍｇ）の溶液をＥｎｄｏ Ｍ（５３μｇ）と一緒に３７℃でインキュベートした。７時間後、反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、水により溶出した。産物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して産物（グリカン－１０１）を白色粉末として生じさせた（３０ｍｇ、収率８２％）。
【0180】
水中、グリカン－１０１（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０１）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0181】
グリカンオキサゾリン－１０１を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２０１の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ１０１を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ１０１のグリコシル化パターンを確認した。
【0182】
抗ＴＮＦαＧＡｂ１０４
水中、グリカン－１０４（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０４）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０４（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０４）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0183】
グリカンオキサゾリン－１０４を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２０１の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ１０４を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ１０４のグリコシル化パターンを確認した。
【0184】
抗ＴＮＦαＧＡｂ１０７
水中、グリカン－１０７（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０７）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０７（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０７）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0185】
グリカンオキサゾリン－１０７を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２０１の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ１０７を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ１０７のグリコシル化パターンを確認した。
【0186】
抗ＴＮＦαＧＡｂ１０９
水中、グリカン－１０９（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０９）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０９（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－１０９）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0187】
グリカンオキサゾリン－１０９を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２０１の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ１０９を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ１０９のグリコシル化パターンを確認した。
【0188】
抗ＴＮＦαＧＡｂ４０１
鶏卵の卵黄からのシアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）の単離は公開されている方法に従った。簡単に述べると、鶏卵の卵黄のフェノール抽出物を遠心分離し、濾過し、セファデックスＧ－５０、セファデックスＧ－２５、ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅｒａｒｌ ６５０Ｍ、ＣＭ－セファデックスＣ－２５およびセファデックスＧ－２５を含むクロマトグラフィーカラムによって精製した。リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．０、５ｍＭ）中シアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）（５２ｍｇ）の溶液をＥｎｄｏ Ｍ（５３μｇ）と一緒に３７℃でインキュベートした。７時間後、反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、水により溶出した。産物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して産物（グリカン－１０１）を白色粉末として生じさせた（３０ｍｇ、収率８２％）。
鶏卵の卵黄からのシアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）の単離は公開されている方法に従った。簡単に述べると、鶏卵の卵黄のフェノール抽出物を遠心分離し、濾過し、セファデックスＧ－５０、セファデックスＧ－２５、ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅｒａｒｌ ６５０Ｍ、ＣＭ－セファデックスＣ－２５およびセファデックスＧ－２５を含むクロマトグラフィーカラムによって精製した。リン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．０、５ｍＭ）中シアリルグリコペプチド（ＳＧＰ）（５２ｍｇ）の溶液をＥｎｄｏ Ｍ（５３μｇ）と一緒に３７℃でインキュベートした。７時間後、反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、水により溶出した。産物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して産物（グリカン－１０１）を白色粉末として生じさせた（３０ｍｇ、収率８２％）。
【0189】
水中、グリカン－１０１（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０１）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0190】
グリカンオキサゾリン－４０１を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２００の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ４０１を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ４０１のグリコシル化パターンを確認した。Ｎ－グリカンプロファイリングの結果が図１に示されている。
【0191】
抗ＴＮＦαＧＡｂ４０４
水中、グリカン－１０４（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０４）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０４（Ｓｉａ２（α２－６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０４）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0192】
グリカンオキサゾリン－４０４を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２００の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ４０４を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ４０４のグリコシル化パターンを確認した。
【0193】
抗ＴＮＦαＧＡｂ４０７
水中、グリカン－１０７（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０７）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０７（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６２．７ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（８９μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０７）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0194】
グリカンオキサゾリン－４０７を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２００の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ４０７を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ４０７のグリコシル化パターンを確認した。
【0195】
抗ＴＮＦαＧＡｂ４０９
水中、グリカン－１０９（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０９）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
水中、グリカン－１０９（Ｓｉａ２（α２－３）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）（３０ｍｇ）、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（６４ｍｇ）およびＥｔ３Ｎ（９５μＬ）の溶液を４℃で１時間にわたって撹拌した。反応混合物をセファデックスＧ－２５カラムでのゲル濾過クロマトグラフィーに供し、０．０５％水性Ｅｔ３Ｎによって溶出した。産物（グリカンオキサゾリン－４０９）を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して白色粉末を生じさせた。
【0196】
グリカンオキサゾリン－４０９を５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．８）中エンドグリコシダーゼとＧＡｂ２００の混合物に添加し、室温で１時間インキュベートした。反応混合物を、プロテインＡアフィニティーカラム、その後、陰イオン交換カラムｃａｐｔｏ Ｑを用いて精製して、所望の産物である抗ＴＮＦαＧＡｂ４０９を収集した。産物をトリプシン処理し、グリコペプチドＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲおよびＥＥＱＹＮＳＴＹＲを、ナノスプレーＬＣ／ＭＳを用いて分析してＧＡｂ４０９のグリコシル化パターンを確認した。
【0197】
（実施例３）
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓの結合親和性
１５８アミノ酸を含有するヒト組換えＴＮＦ－α（ＭＷ＝１７．５ｋＤａ）をＥ．ｃｏｌｉ（ＰＲＯＳＰＥＣ）において産生させ、精製した。組換えヒトＴＮＦ－αタンパク質の力価設定を行い（ｔｉｔｒａｔｅ）、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液中、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、および３．１２５ｎＭの段階希釈物を調製した。アダリムマブおよび抗ＴＮＦαＧＡｂ２００および４０１をＨＢＳ－ＥＰ緩衝液中、１０μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、次いで、抗ヒトＦｃドメイン抗体を予め固定化したＣＭ５チップに捕捉した。段階的な濃度の組換えヒトＴＮＦアルファを分析物とし、次いで、毎分３０μｌの流量で注射し、チップ上に捕捉された抗体に結合させた。結合後、抗体－分析物複合体を再生緩衝液、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．５により、毎分５０μｌの流量で洗浄した。さらなる使用のために、ＣＭ５チップをＰＢＳ、ｐＨ７．４中、４℃で維持した。単一サイクルの動力学データを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して１：１結合モデルに当てはめて、平衡定数（Ｋａ／Ｋｄ）を測定した。図２の結果から、ＧＡｂ２００、ＧＡｂ４０１およびアダリムマブの結合親和性定数が同等であり、１．２７ Ｅ－１１Ｍから１．９５ Ｅ－１１Ｍまでにわたることが示された。
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓの結合親和性
１５８アミノ酸を含有するヒト組換えＴＮＦ－α（ＭＷ＝１７．５ｋＤａ）をＥ．ｃｏｌｉ（ＰＲＯＳＰＥＣ）において産生させ、精製した。組換えヒトＴＮＦ－αタンパク質の力価設定を行い（ｔｉｔｒａｔｅ）、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液中、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、および３．１２５ｎＭの段階希釈物を調製した。アダリムマブおよび抗ＴＮＦαＧＡｂ２００および４０１をＨＢＳ－ＥＰ緩衝液中、１０μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、次いで、抗ヒトＦｃドメイン抗体を予め固定化したＣＭ５チップに捕捉した。段階的な濃度の組換えヒトＴＮＦアルファを分析物とし、次いで、毎分３０μｌの流量で注射し、チップ上に捕捉された抗体に結合させた。結合後、抗体－分析物複合体を再生緩衝液、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．５により、毎分５０μｌの流量で洗浄した。さらなる使用のために、ＣＭ５チップをＰＢＳ、ｐＨ７．４中、４℃で維持した。単一サイクルの動力学データを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して１：１結合モデルに当てはめて、平衡定数（Ｋａ／Ｋｄ）を測定した。図２の結果から、ＧＡｂ２００、ＧＡｂ４０１およびアダリムマブの結合親和性定数が同等であり、１．２７ Ｅ－１１Ｍから１．９５ Ｅ－１１Ｍまでにわたることが示された。
【0198】
（実施例４）
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓのＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性
ＦｃγＲＩＩＩＡ組換えタンパク質を、トランスフェクトしたＨＥＫ－２９３細胞株から精製し、次いで、ＥＬＩＳＡコーティング緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３、５０ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ１０）中０．５ｕｇ／ｍＬに調製した。抗ＴＮＦαＧＡｂｓを、２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中、１５０ｎＭから１．５４×１０－５ｎＭまで５倍の力価設定を行い、次いで、組換えＦｃγＲＩＩＩＡを予め固定化したＥＬＩＳＡプレートに適用した。室温で１時間インキュベートした後、プレートを、２％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中の抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰを用いて室温で０．５時間にわたって処理した。ＴＢＳＴを用いて３回洗浄した後、発色のために色素原を添加し、次いで、２．５ＮのＨ２ＳＯ４を添加することによって停止させた。吸光度をＯＤ４５０において読み取り、ソフトウェアＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ ６．０によってＥＣ５０を得た。表４の結果から、抗ＴＮＦαＧＡｂ１０１およびＧＡｂ４０１が、Ｈｕｍｉｒａと比較して、ＥＣ５０および最大結合の程度のどちらによってもより強力なＦｃγＲＩＩＩＡ結合親和性を示すことが示された。
例示的な実施形態では、Ｆｃ受容体結合は、少なくとも約１．３５倍、１．５倍、１．７５倍、２倍、２．５倍、３倍またはそれを超えて増大する。
例示的な抗ＴＮＦαＧＡｂｓのＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性
ＦｃγＲＩＩＩＡ組換えタンパク質を、トランスフェクトしたＨＥＫ－２９３細胞株から精製し、次いで、ＥＬＩＳＡコーティング緩衝液（５０ｍＭのＮａ２ＣＯ３、５０ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ１０）中０．５ｕｇ／ｍＬに調製した。抗ＴＮＦαＧＡｂｓを、２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中、１５０ｎＭから１．５４×１０－５ｎＭまで５倍の力価設定を行い、次いで、組換えＦｃγＲＩＩＩＡを予め固定化したＥＬＩＳＡプレートに適用した。室温で１時間インキュベートした後、プレートを、２％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中の抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰを用いて室温で０．５時間にわたって処理した。ＴＢＳＴを用いて３回洗浄した後、発色のために色素原を添加し、次いで、２．５ＮのＨ２ＳＯ４を添加することによって停止させた。吸光度をＯＤ４５０において読み取り、ソフトウェアＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ ６．０によってＥＣ５０を得た。表４の結果から、抗ＴＮＦαＧＡｂ１０１およびＧＡｂ４０１が、Ｈｕｍｉｒａと比較して、ＥＣ５０および最大結合の程度のどちらによってもより強力なＦｃγＲＩＩＩＡ結合親和性を示すことが示された。
【表4】
【図1】
【図2】
【配列表】