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▶ カルビスタ・ファーマシューティカルズ・リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-05-23
(45)【発行日】2022-05-31
(54)【発明の名称】血漿カリクレイン阻害剤を含む剤形
(51)【国際特許分類】
A61K 31/444 20060101AFI20220524BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20220524BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20220524BHJP
A61K 47/18 20060101ALI20220524BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20220524BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20220524BHJP
A61K 9/28 20060101ALI20220524BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220524BHJP
A61P 27/10 20060101ALI20220524BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220524BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220524BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220524BHJP
A61P 7/10 20060101ALI20220524BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20220524BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220524BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220524BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220524BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220524BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220524BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220524BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20220524BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220524BHJP
A61P 11/16 20060101ALI20220524BHJP
A61P 7/02 20060101ALI20220524BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20220524BHJP
【ＦＩ】
A61K31/444
A61K47/38
A61K47/32
A61K47/42
A61K47/36
A61K47/02
A61K47/26
A61K47/12
A61K47/20
A61K47/24
A61K47/18
A61K9/48
A61K9/20
A61K9/28
A61K45/00
A61P27/10
A61P27/02
A61P9/10
A61P3/10
A61P7/10
A61P1/18
A61P9/00
A61P13/12
A61P25/00
A61P1/04
A61P19/02
A61P29/00
A61P31/04
A61P35/00
A61P11/16
A61P7/02
A61P7/04
【請求項の数】
22
(21)【出願番号】P 2020526986
(86)(22)【出願日】2018-11-28
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-02-15
(86)【国際出願番号】 GB2018053443
(87)【国際公開番号】W WO2019106361
(87)【国際公開日】2019-06-06
【審査請求日】2021-11-16
(31)【優先権主張番号】62/592,242
(32)【優先日】2017-11-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】1721515.3
(32)【優先日】2017-12-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】515004935
【氏名又は名称】カルビスタ・ファーマシューティカルズ・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】特許業務法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】コレット，ジョン・ハーマン
(72)【発明者】
【氏名】クック，ゲイリー・ポール
(72)【発明者】
【氏名】ファーラー，ジェイミー・ジョーセフ
(72)【発明者】
【氏名】フロッドシャム，マイケル・ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ロー，マイケル・ブライアン
(72)【発明者】
【氏名】トッド，リチャード・サイモン
(72)【発明者】
【氏名】ワード，ロバート・ニール
【審査官】井上 能宏
(56)【参考文献】
【文献】特許第６６５３７０２（ＪＰ，Ｂ２）
【文献】特許第６９９５１０１（ＪＰ，Ｂ２）
【文献】特表２０１３－５３２７１３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５４５６１１（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１３／１１１１０８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／１０８６７９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2008年，Vol.18, No.14，pp.3865-3869
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ａ：【化1】
【請求項2】
前記剤形中の前記式Ａの化合物の固体形態の量が、０．１ｍｇ～１，０００ｍｇであり、及び／又は前記式Ａの化合物の固体形態が、前記経口固体剤形の総重量に対して１ｗｔ％～７０ｗｔ％の量で存在する、請求項１に記載の経口固体剤形。
【請求項3】
以下をさらに含む、請求項１又は２に記載の経口固体剤形：（ｉ）結合剤、及び／又は
（ｉｉ）希釈剤、及び／又は
（ｉｉｉ）崩壊剤、及び／又は
（ｉｖ）滑沢剤及び／又は流動促進剤、及び／又は
（ｖ）酸、及び／又は
（ｖｉ）界面活性剤、及び／又は
（ｖｉｉ）コーティング、及び／又は
（ｖｉｉｉ）１つ以上のさらなる有効成分。
【請求項4】
（ｉ）前記結合剤が、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、コポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、デンプン、アルファ化デンプン、寒天、トラガント及びアルギン酸ナトリウムのうちの１以上を含み、及び／又は前記結合剤が、前記経口固体剤形の総重量に対して、０．１ｗｔ％～３０ｗｔ％の量で存在し、及び／又は
前記式Ａの化合物と前記結合剤との重量比が、１：０．０１～１：１であり、及び／又は
（ｉｉ）前記希釈剤が、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム二塩基性、リン酸カルシウム三塩基性、硫酸カルシウム、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、デキストリン、デキストロース賦形剤、フルクトース、カオリン、ラクチトール、ラクトース、ラクトース一水和物、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、デンプン、アルファ化デンプン及びスクロースのうちの１つ以上を含み、及び／又は
前記希釈剤が、前記経口固体剤形の総重量に対して１ｗｔ％～９９ｗｔ％の量で存在し、及び／又は
前記式Ａの化合物と前記希釈剤との重量比が、１：０．１～１：５００であり、及び／又は
（ｖ）前記酸が、マレイン酸、酒石酸、コハク酸及びクエン酸のうちの１つ以上を含み、及び／又は
前記酸が、経口固体剤形の総重量に対して１ｗｔ％～４０ｗｔ％の量で存在し、及び／又は
前記式Ａの化合物と前記酸との重量比が、１：０．１～１：２であり、及び／又は
（ｖｉ）前記界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム及び／又はＴｗｅｅｎ８０を含み、及び／又は
前記界面活性剤が、前記経口固体剤形の総重量に対して１ｗｔ％～２０ｗｔ％の量で存在し、及び／又は
前記式Ａの化合物と前記界面活性剤との重量比が、１：０．０１～１：１であり、及び／又は
（ｖｉｉ）前記コーティングが、腸溶性コーティングである、
請求項３に記載の経口固体剤形。
【請求項5】
以下をさらに含む、請求項１又は２に記載の経口固体剤形：脂質賦形剤、及び／又は
コーティング、及び／又は
１つ以上のさらなる有効成分。
【請求項6】
前記脂質賦形剤が、スクロース脂肪酸エステル、リン脂質誘導体、ホスファチジル誘導体、グリコシルセラミド誘導体、脂肪酸誘導体、非イオン性界面活性剤、ビタミンＥコフェリルスクシネートポリエチレングリコール（ＴＰＧＳ）誘導体、モノオレイン酸グリセリル、グリセリド誘導体及びこれらの混合物のうちの１つ以上を含み、及び／又は前記脂質賦形剤が、前記経口固体剤形の総重量に対して１０ｗｔ％～９９ｗｔ％の量で存在し、及び／又は
前記式Ａの化合物と前記脂質賦形剤との重量比が、１：０．１～１：１００であり、及び／又は
前記コーティングが、腸溶性コーティングである、
請求項５に記載の経口固体剤形。
【請求項7】
前記スクロース脂肪酸エステルが、ステアリン酸スクロース、パルミチン酸スクロース、ラウリン酸スクロース、ベヘン酸スクロース、オレイン酸スクロース、エルカ酸スクロース及びこれらの混合物のうちの１つ以上を含む、請求項６に記載の経口固体剤形。
【請求項8】
（ｉ）前記経口固体剤形が、カプセルの形態であり、又は（ｉｉ）前記経口固体剤形が、錠剤の形態である、請求項１～７のいずれか一項に記載の経口固体剤形。
【請求項9】
（ｉ）前記カプセルの外殻が、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース又はデンプンから作られている、請求項８に記載の経口固体剤形。
【請求項10】
式Ａ：【化2】
（ａ）少なくとも以下の約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す前記式Ａの化合物の固体形態を、結合剤を含む顆粒化液と混合するステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）の分散液を顆粒化させて、顆粒を形成するステップ；
（ｃ）前記顆粒を乾燥させるステップ；
；及び
（ｅ）前記顆粒を、固体経口剤形に圧縮又は充填するステップ
を含み、前記「約」という用語が、°２θの測定値に、±０．３（°２θにおいて表された）の不確実性が存在することを意味する、方法。
【請求項11】
（ａ）少なくとも以下の約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す前記式Ａの化合物の固体形態を、結合剤と、希釈剤、崩壊剤及び／又は界面活性剤とを含む顆粒化液と混合するステップ；及び／又は（ｄ）ステップ（ｂ）又は（ｃ）の前記顆粒を、希釈剤、酸、界面活性剤及び／又は潤滑剤とブレンドして、ブレンドされた顆粒を形成するステップ；及び／又は
（ｅ）前記顆粒又は前記ブレンドされた顆粒を、固体経口剤形に圧縮又は充填するステップ
を含み、前記「約」という用語が、°２θの測定値に、±０．３（°２θにおいて表された）の不確実性が存在することを意味する、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記顆粒化液が、水をさらに含み、及び／又はステップ（ｃ）における乾燥させることが、４５℃を超える温度において実施され、及び／又は
ステップ（ｅ）において、前記顆粒又はブレンドされた顆粒が、錠剤の形態の固体経口剤形に圧縮される、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項13】
ステップ（ｃ）における乾燥させることが、５５℃を超える温度において実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
式Ａ：【化3】
（ａ）少なくとも以下の約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す前記式Ａの化合物の固体形態を、融解した脂質賦形剤中に分散させるステップ；
（ｂ）前記融解した分散液をカプセルに充填するステップ
を含み、前記「約」という用語が、°２θの測定値に、±０．３（°２θにおいて表された）の不確実性が存在することを意味する、方法。
【請求項15】
前記脂質賦形剤が、ＴＰＧＳ又はＧｅｌｕｃｉｒｅ（商標登録） ４４／１４であり、及び／又は前記カプセルの外殻が、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース又はデンプンから作られている、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記脂質賦形剤が、ＴＰＧＳである、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
式Ａ：【化4】
【請求項18】
（ｉ）前記式Ａの化合物の固体形態が、以下に示されたＸ線粉末回折パターンと同じＸ線粉末回折パターンを有し、【表1】
（ｉｉ）前記式Ａの化合物の固体形態が、そのＤＳＣサーモグラムにおいて１５１±３℃の吸熱ピークを示し、及び／又は
前記式Ａの化合物の固体形態が、以下に示されたＤＳＣサーモグラムと同じＤＳＣサーモグラムを有する、
【表2】
【請求項19】
（ｉ）前記式Ａの化合物の固体形態が、以下に示されたＸ線粉末回折パターンと同じＸ線粉末回折パターンを有し、【表3】
（ｉｉ）前記式Ａの化合物の固体形態が、そのＤＳＣサーモグラムにおいて１５１±３℃の吸熱ピークを示し、及び／又は
前記式Ａの化合物の固体形態が、以下に示されたＤＳＣサーモグラムと同じＤＳＣサーモグラムを有する、
【表4】
【請求項20】
治療における使用のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の経口固体剤形。
【請求項21】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置における使用のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の経口固体剤形であって、（ｉ）前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、視力障害、糖尿病網膜症、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管性浮腫、網膜静脈閉塞症、糖尿病、膵炎、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧症、がん、成人呼吸促迫症候群、播種性血管内凝固、心血管バイパス手術中の血液凝固及び外科術後の出血から選択され、又は
（ｉｉ）前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫から選択され、又は
（ｉｉｉ）前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫から選択され、又は
（ｉｖ）前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性黄斑浮腫である、
経口固体剤形。
【請求項22】
前記血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、遺伝性血管性浮腫である、請求項２１に記載の使用のための経口固体剤形。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、血漿カリクレイン阻害剤、特に式Ａの化合物の固体形態（形態１）を含む経口固体剤形に関する。また、式Ａの化合物の形態１を使用して、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法も提供される。
【背景技術】
【0002】
血漿カリクレインの阻害剤は、特に、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫の処置において、多数の治療的適用を有する。
【0003】
血漿カリクレインとは、キニンを、キニノーゲンから遊離させうる、トリプシン様セリンプロテアーゼである（Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－Ｋｉｎｉｎ Ｃａｓｃａｄｅ」、「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、４８３～４９３頁；Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－ｋｉｎｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４～２５０頁、２００９；Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１；及びＤ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－ｋｉｎｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｋｉｎｉｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０００、３３、６６５～６７７を参照されたい。）。血漿カリクレインは、内因性の血液凝固カスケードの不可欠のメンバーであるが、このカスケードにおけるその役割は、ブラジキニンの放出又は酵素による切断を伴わない。血漿プレカリクレインは、単一の遺伝子によりコードされ、肝臓内において合成される。血漿カリクレインは、高分子量キニノーゲンに結合したヘテロ二量体複合体として血漿中を循環する、不活性の血漿プレカリクレインとして、肝細胞により分泌されるが、これが活性化されて、活性の血漿カリクレインがもたらされる。キニンは、Ｇタンパク質共役受容体を介して作用する、炎症の強力なメディエーターであり、キニンアンタゴニスト（ブラジキニンアンタゴニストなど）は、多数の障害の処置のための潜在的な治療剤として、既に研究されている（Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５～８５２）。
【0004】
血漿カリクレインは、多数の炎症性障害において、役割を果たすと考えられる。主要な血漿カリクレインの阻害剤は、Ｃ１エステラーゼ阻害剤であるセルピンである。Ｃ１エステラーゼ阻害剤の遺伝性欠損を提示する患者は、顔面、手掌、咽頭、消化管及び生殖器の間欠的な腫脹を結果としてもたらす遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）に罹患する。急性エピソード中に形成される水疱は、高分子量のキニノーゲンを切断し、ブラジキニンを遊離させて血管透過性の増大をもたらす、高レベルの血漿カリクレインを含有する。大型のタンパク質である、血漿カリクレイン阻害剤による処置は、血管透過性の増大を引き起こすブラジキニンの放出を阻止することにより、ＨＡＥを、効果的に処置することが示されている（Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ、「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ－８８），ａ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｌｏｓｓ ｉｎ ｏｎ－ｐｕｍｐ ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７～９９頁）。
【0005】
血漿カリクレイン－キニン系は、進行型糖尿病性黄斑浮腫を伴う患者において、異常に夥多である。近年、血漿カリクレインが、糖尿病性ラットにおいて、網膜血管機能不全に寄与することが公表されている（Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｔｉｎａｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｔｉｎａｌ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０～９８頁）。さらに、血漿カリクレイン阻害剤であるＡＳＰ－４４０の投与は、糖尿病性ラットにおける、網膜血管透過性の異常及び網膜血流の異常の両方を改善した。したがって、血漿カリクレイン阻害剤は、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫を軽減する処置としての有用性を有するはずである。
【0006】
血漿カリクレインはまた、血液凝固においても役割を果たす。内因性の凝固カスケードは、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）により活性化されうる。ＦＸＩＩが活性化される（ＦＸＩＩａに）と、ＦＸＩＩａは、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）の活性化を介して、フィブリンの形成を誘発し、この結果として、血液の凝固をもたらす。血漿カリクレインは、ＦＸＩＩを、ＦＸＩＩａに活性化させ、この結果として、内因性凝固経路の活性化をもたらすため、内因性の凝固カスケードにおいて、主要な構成要素である。さらに、ＦＸＩＩａはまた、さらなる血漿プレカリクレインも活性化させる結果として、血漿カリクレインをもたらす。これは、正のフィードバックによる、血漿カリクレイン系及び内因性凝固経路の増幅を結果としてもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３～３３９）；Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１～５０）。
【0007】
血液中のＦＸＩＩの、負に帯電した表面（心血管バイパス手術中に、血液が流過する人工肺の外部配管又は膜の表面など）との接触は、チモーゲンである、ＦＸＩＩのコンフォメーション変化を誘導する結果として、少量の活性ＦＸＩＩ（ＦＸＩＩａ）をもたらす。ＦＸＩＩａの形成は、上記において記載された通り、血漿カリクレインの形成を誘発する結果として、血液の凝固をもたらす。ＦＸＩＩの、ＦＸＩＩａへの活性化はまた、多様な供給源の、負に帯電した表面（例えば、敗血症中の細菌、分解する細胞に由来するＲＮＡ）との接触により、体内においても生じ、この結果として、播種性血管内凝固をもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３～３３９））。
【0008】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、上記において記載された血液凝固カスケードを阻害するので、播種性血管内凝固及び血液の凝固が所望されない心血管バイパス術時の血液凝固の処置において有用である。例えば、Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１～３６８）は、ＬＰＳ誘導性の播種性血管内凝固のための、血漿カリクレイン阻害剤であるＰＫＳＩ－５２７の投与が、血小板カウントの減少及びフィブリノーゲンレベルの低下のほか、播種性血管内凝固において生じることが通例である、ＦＤＰレベルの上昇も、著明に抑制することを示した。Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１～５０）は、血漿カリクレイン欠損マウスにおいて、凝固時間が延長され、血栓が著明に軽減されることを示した。Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２～５３１１）は、マウスにおいて、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置を使用する、血漿プレカリクレインレベルの低減が、抗血栓効果を結果としてもたらすことを示した。Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００４、１１３、３３３～３３９）は、血液を、ＤＸ－８８（血漿カリクレイン阻害剤）と接触させることが、活性化凝固時間（ＡＣＴ）の延長を結果としてもたらすことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７～９９）は、エカランチド（血漿カリクレイン阻害剤）が、接触により活性化される誘導性凝固を遅延させることが見出されることを示した。Ｌｅｈｍａｎｎらは、エカランチドが、「血漿カリクレインを阻害することにより、凝固の内因性経路を阻害したため、インビトロ抗凝固剤効果を有した」と結論づける。
【0009】
血漿カリクレインはまた、血小板活性化の阻害においても役割を果たすので、出血の阻止においても役割を果たす。血小板の活性化は、血管への損傷後における、血小板プラグの形成及び迅速な出血の阻止をもたらす、止血における最早期のステップのうちの１つである。血管損傷部位において、露出したコラーゲンと、血小板との相互作用は、血小板の保持及び活性化並びに後続する出血の阻止に極めて重要である。
【0010】
活性化されると、血漿カリクレインは、コラーゲンに結合し、これにより、ＧＰＶＩ受容体により媒介される、コラーゲン媒介性の血小板の活性化に干渉する（Ｌｉｕら（Ｎａｔ Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６～２１０））。上記において論じられた通り、血漿カリクレイン阻害剤は、血漿カリクレイン媒介性の因子ＸＩＩの活性化を阻害し、これにより、接触活性化系を介して、正のフィードバックによるカリクレイン系の増幅を低減することにより、血漿プレカリクレインの活性化を低減する。
【0011】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、血漿カリクレインの、コラーゲンへの結合を低減し、これにより、出血の阻止における、血漿カリクレインの干渉を低減する。したがって、血漿カリクレイン阻害剤は、脳出血及び外科術後の出血を処置する処置において有用である。例えば、Ｌｉｕら（Ｎａｔ Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６～２１０）は、低分子ＰＫ阻害剤であるＡＳＰ－４４０の全身投与が、ラットにおける血腫の拡大を低減することを裏付けた。脳血腫は、脳内出血後に生じる可能性があり、血管損傷の結果としての、血管から周囲の脳組織への出血により引き起こされる。Ｌｉｕらにより報告された、脳出血モデルにおける出血は、血管を損傷させる、脳実質における切開を伴う、手術介入により誘導された。これらのデータは、血漿カリクレインの阻害が、外科術後の出血及び血腫の量を低減することを裏付ける。Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９～ ４０７）は、アプロチニン（血漿カリクレインを含む、セリンプロテアーゼを阻害するタンパク質）を使用して、術後出血を減少させうることを裏付けた。
【0012】
それらの全てが血漿カリクレインと関連する脳出血、腎症、心筋症及び神経障害など、糖尿病の他の合併症もまた、血漿カリクレイン阻害剤の標的として検討されうる。
【0013】
合成血漿カリクレイン阻害剤及び低分子血漿カリクレイン阻害剤は、例えば、Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓ．５２、６２～７１頁（１９９８））、Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｋｉｎｉｎｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２～７００頁（２００２））、Ｅｖａｎｓ（「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、国際公開第ＷＯ０３／０７６４５８号）、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ９２／０４３７１号）、Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５～１１６頁（１９９６））、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ９５／０７９２１号）、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎら（「Ｎｅｗ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、国際公開第ＷＯ９４／２９３３５号）、Ｊ．Ｃｏｒｔｅら（「Ｓｉｘ ｍｅｍｂｅｒｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ ｕｓｅｆｕｌ ａｓ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ２００５／１２３６８０号）、Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９～３４頁（１９９４））、Ｋｅｔｔｎｅｒら（米国特許第５，１８７，１５７号）、Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９～１０９０頁（１９９３））、Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．、１６、２０３４～２０３６頁（２００６））、Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｌａｓｍｉｎ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４８、１９６４～７２頁（２０００））、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｔｒｙｐｓｉｎ－ｌｉｋｅ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｓｅ」、国際公開第ＷＯ０８／０４９５９５号）、Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２、５４５～５５３頁（２００６））、Ｓｉｎｈａら（「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、国際公開第ＷＯ０８／０１６８８３号）、Ｓｈｉｇｅｎａｇａら（「Ｐｌａｓｍａ Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ２０１１／１１８６７２号）、及びＫｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９～１６４９）により、既に記載されている。Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ２０１２／００４６７８号）はまた、ヒトプラスミン及び血漿カリクレインの阻害剤である環化ペプチド類似体についても記載している。
【0014】
現在のところ、医学的使用のために承認された、唯一の選択的血漿カリクレイン阻害剤は、エカランチドである。エカランチドは、注射用溶液として製剤化されている。エカランチドは、アナフィラキシー反応の危険性をもたらす、大型のタンパク質による血漿カリクレイン阻害剤である。当技術分野において公知の、他の血漿カリクレイン阻害剤は、一般に、それらの一部が、グアニジン又はアミジンなど、極性が大きく、イオン化可能な官能基を含む低分子である。近年、グアニジン官能基又はアミジン官能基を特色としない血漿カリクレイン阻害剤が報告されている。例えば、Ｂｒａｎｄｌら（「Ｎ－（（６－ａｍｉｎｏ－ｐｙｒｉｄｉｎ－３－ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）－ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、国際公開第ＷＯ２０１２／０１７０２０号）、Ｅｖａｎｓら（「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、国際公開第ＷＯ２０１３／００５０４５号）、Ａｌｌａｎら（「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、国際公開第ＷＯ２０１４／１０８６７９号）、Ｄａｖｉｅら（「Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｄｅｒｉｖａｔｅｓ」、国際公開第ＷＯ２０１４／１８８２１１号）、及びＤａｖｉｅら（「Ｎ－（（ｈｅｔ）ａｒｙｌｍｅｔｈｙｌ）－ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｓ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、国際公開第ＷＯ２０１６／０８３８２０号）である。
【0015】
商業的に実現可能な製造工程を得るために、医薬製剤の製造において、活性化合物は、簡便に操作及び加工されうる形態にあることが重要である。したがって、活性化合物の化学的安定性及び物理的安定性は、重要な因子である。活性化合物及びこれを含有する製剤は、活性化合物の物理化学的特徴（例えば、化学組成、密度、吸湿性及び可溶性）の著明な変化を示さずに、相当の期間にわたり、有効な保管が可能でなければならない。
【0016】
医薬成分の特定の固体形態を製造することは、その固体特性の多くの側面に影響を及ぼし、可溶性、溶出速度、化学的安定性、物理的特性、技術的実現可能性、加工可能性、薬物動態及びバイオアベイラビリティーの側面において、利点をもたらすことが公知である。これらの一部は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）において記載されている。固体形態を製造する方法は、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）及び「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ ＶＣＨ）においてもまた記載されている。医薬結晶における多形は、Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ－Ｓｔａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９）、Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９）又はＢｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２００２）において記載されている。
【0017】
本出願者は、国際公開第ＷＯ２０１６／０８３８２０号（英国特許第ＰＣＴ／ＧＢ２０１５／０５３６１５号明細書）において開示された、血漿カリクレインの阻害剤である、新規の化合物シリーズを開発した。これらの化合物は、血漿カリクレインに対する、良好な選択性を裏付け、糖尿病網膜症、黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫の処置において、潜在的に有用である。１つのこのような化合物は、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドである。Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドという名称は、式Ａ
【0018】
【化1】
【0019】
式Ａの化合物を調製しようとする初期の試みは、クロマトグラフィー中に使用された、１％のアンモニアメタノール／ジクロロメタン溶媒の蒸発により実施されて、主に、アモルファスの内容物を示す、Ｘ線粉末回折データを伴うフォームをもたらした。本出願者は、それを、開発に適した有利な物理化学的特性を有する、この化合物の新規の固体形態（本明細書において、「形態１」と称される）を開発した。形態１は、英国特許第ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９号明細書において、形態１として開示されている。本出願者はまた、それを、開発に適した有利な物理化学的特性を有する、この化合物の新規の固体形態（本明細書において、「形態３」と称される）も開発した。形態３は、英国特許第ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９号明細書において、形態３として開示されている。
【0020】
現在、式Ａの化合物の４つの固体形態が単離されて、特徴付けられており、これらは、英国特許第ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９号明細書において開示されている。英国特許第ＰＣＴ／ＧＢ２０１７／０５１５７９号明細書において、これらの固体形態は、「形態１」、「形態２」、「形態３」及び「形態４」と称される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0021】
【文献】国際公開第２００３／０７６４５８号
【文献】国際公開第９２／０４３７１号
【文献】国際公開第９５／０７９２１号
【文献】国際公開第９４／２９３３５号
【文献】国際公開第２００５／１２３６８０号
【文献】国際公開第２００８／０４９５９５号
【文献】米国特許第５１８７１５７号明細書
【文献】国際公開第２００８／０１６８８３号
【文献】国際公開第２０１１／１１８６７２号
【文献】国際公開第２０１２／００４６７８号
【文献】国際公開第２０１２／０１７０２０号
【文献】国際公開第２０１３／００５０４５号
【文献】国際公開第２０１４／１０８６７９号
【文献】国際公開第２０１４／１８８２１１号
【文献】国際公開第２０１６／０８３８２０号
【非特許文献】
【0022】
【文献】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－Ｋｉｎｉｎ Ｃａｓｃａｄｅ」、「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、４８３～４９３
【文献】Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－ｋｉｎｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４～２５０、２００９
【文献】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１
【文献】Ｄ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－ｋｉｎｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｋｉｎｉｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０００、３３、６６５～６７７
【文献】Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５～８５２
【文献】Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ、「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ－８８），ａ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｌｏｓｓ ｉｎ ｏｎ－ｐｕｍｐ ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７～９９頁
【文献】Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｔｉｎａｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｔｉｎａｌ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０～９８頁
【文献】Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３～３３９）
【文献】Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１～５０
【文献】Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１～３６８）
【文献】Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２～５３１１）
【文献】Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７～９９）
【文献】Ｌｉｕら（Ｎａｔ Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６～２１０）
【文献】Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９～ ４０７）
【文献】Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓ．５２、６２～７１頁（１９９８））
【文献】Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｋｉｎｉｎｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２～７００頁（２００２））
【文献】Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５～１１６頁（１９９６））
【文献】Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９～３４頁（１９９４））
【文献】Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９～１０９０頁（１９９３））
【文献】Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．、１６、２０３４～２０３６頁（２００６））
【文献】Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｌａｓｍｉｎ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４８、１９６４～７２頁（２０００））
【文献】Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２、５４５～５５３頁（２００６））
【文献】Ｋｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９～１６４９））
【文献】「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）
【文献】「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）
【文献】「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ ＶＣＨ）
【文献】Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ－Ｓｔａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９
【文献】Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９
【文献】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0023】
本発明の目的は、式Ａの化合物の形態１を含む経口固体剤形を提供することである。本発明はまた、式Ａの化合物の形態１を使用して、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法を提供することにも関する。
【0024】
本発明のさらなる目的は、式Ａの化合物の形態３を含む経口固体剤形を提供することである。本発明はまた、式Ａの化合物の形態３を使用して、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法を提供することにも関する。
【課題を解決するための手段】
【0025】
したがって、本発明の態様に従い、少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の固体形態を含む、経口固体剤形が提供される。本出願において、この固体形態は、「形態１」と称されうる。
【0026】
式Ａの化合物の形態１は、開発に適した有利な物理化学的特性を有する。例えば、図４における、式Ａの化合物の形態１についての重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）データは、通常の条件（例えば、７０％以下の相対湿度）下において、水分含量の増大が、比較的漸進的であるに過ぎないことを示す。これは、著明な吸湿性が存在しないことと符合する。これに対し、アモルファス材料は、典型的に、吸湿性が著明であり、又は潮解性でさえあり、材料を加工不能なガムにすることが多い。さらに、形態１の試料の融解の前における、重量減少の非存在（図２のＳＴＡデータを参照されたい。）は、形態１が、水和又は溶媒和されていないことを指し示す。安定的な水和物は、薬物がヒト体内の水性環境に遭遇すると、投与された薬物の無水形態の所望されない変質を誘導しうるために、医薬開発に不適切でありうる。式Ａの化合物の形態１の、別の利点は、容易に加工可能であることである。すなわち、結晶化によるその調製（実施例を参照されたい。）は、所望されない不純物を除去するのに、一般的かつ容易に拡大可能な手順である。
【0027】
本明細書において開示された安定性データにより、式Ａの化合物の形態１の、医薬開発に対する適性のさらなる証拠が提示される。式Ａの化合物の形態１の２つの試料を、二重のポリエチレンバッグ内に詰め、高密度ポリエチレンボトル内に封入して、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨにおいて保管した。初期時点において、Ｘ線粉末回折は、試料が結晶であり、形態１と符合することを示した。２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨの保管条件下において、Ｘ線粉末回折は、１カ月後及び３カ月後において、変化を示さなかった（図７及び８）。
【0028】
本明細書において、Ｘ線粉末回折ピーク（°２θにおいて表された）は、ＣｕＫα放射線を使用して測定される。
【0029】
本発明は、少なくとも以下：約
（１）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５及び１６．３；又は
（２）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、１６．３、１７．４及び１７．９；又は
（３）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、１６．３、１７．４、１７．９、２１．２及び２２．０
度における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の固体形態（形態１）を含む経口固体剤形を提供する。
（１）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５及び１６．３；又は
（２）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、１６．３、１７．４及び１７．９；又は
（３）１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、１６．３、１７．４、１７．９、２１．２及び２２．０
度における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の固体形態（形態１）を含む経口固体剤形を提供する。
【0030】
この文脈における「約」という用語は、°２θの測定値に、±０．３（°２θにおいて表された）、好ましくは、±０．２（°２θにおいて表された）の不確実性が存在することを意味する。
【0031】
本発明はまた、約４．４、１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、１６．３、１７．４、１７．９、２１．２、２２．０及び２２．６度における、特徴的なピーク（°２θで表された）を含む、Ｘ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形も提供する。
【0032】
本発明はまた、図１ａに示されたパターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形も提供する。
【0033】
本明細書において、固体形態のＸ線粉末回折パターンは、図において描示されたＸ線粉末回折パターンと、「実質的に」同じ形において記載されうる。Ｘ線粉末回折パターンのピークは、当業者に公知の多様な因子のために、それらの位置及び相対強度が、わずかにシフトしうることが認められる。例えば、パターンのピーク位置又はピークの相対強度のシフトは、使用された装置、試料調製の方法、好ましい充填及び配向性、放射線源並びにデータ収集の方法及びデータ収集期間の長さのために生じうる。しかし、当業者は、本明細書の図に示されたＸ線粉末回折パターンを、未知の固体形態のＸ線粉末回折パターンと比較して、固体形態の識別を確認することが可能である。
【0034】
当業者は、Ｘ線粉末回折パターンを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料についてのＸ線粉末回折パターンは、Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｘ－Ｐｅｒｔ ＭＰＤ回折計を、以下の実験条件：
陽極管：Ｃｕ；
発電機の電圧：４０ｋＶ；
陽極管の電流：４０ｍＡ；
波長アルファ１：１．５４０６Å；
波長アルファ２：１．５４４４Å；
試料：解析下にある２ｍｇの試料を、Ｘ線粉末回折バックグラウンドをゼロとする、単一の斜めに切断されたシリカ製の試料ホルダー上において、静かに圧縮した
と共に使用して記録されうる。
陽極管：Ｃｕ；
発電機の電圧：４０ｋＶ；
陽極管の電流：４０ｍＡ；
波長アルファ１：１．５４０６Å；
波長アルファ２：１．５４４４Å；
試料：解析下にある２ｍｇの試料を、Ｘ線粉末回折バックグラウンドをゼロとする、単一の斜めに切断されたシリカ製の試料ホルダー上において、静かに圧縮した
と共に使用して記録されうる。
【0035】
本発明は、そのＤＳＣサーモグラムにおいて１５１±３℃、好ましくは、１５１±２℃、より好ましくは、１５１±１℃の吸熱ピークを示す、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形を提供する。
【0036】
本発明は、図３に示されたＤＳＣサーモグラムと実質的に同じＤＳＣサーモグラムを有する、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形を提供する。
【0037】
当業者は、ＤＳＣサーモグラムを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＤＳＣサーモグラムは、
（ａ）５ｍｇの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンに秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に封入すること；
（ｂ）試料を、とＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｊａｄｅ ＤＳＣにロードし、安定的な熱流応答が得られるまで、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、試料を、３０℃に保持すること；
（ｃ）試料を、１０℃／分の走査速度において、２００～３００℃の間の温度に加熱し、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、結果として得られる熱流応答をモニタリングすること
により記録されうる。
（ａ）５ｍｇの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンに秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に封入すること；
（ｂ）試料を、とＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｊａｄｅ ＤＳＣにロードし、安定的な熱流応答が得られるまで、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、試料を、３０℃に保持すること；
（ｃ）試料を、１０℃／分の走査速度において、２００～３００℃の間の温度に加熱し、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、結果として得られる熱流応答をモニタリングすること
により記録されうる。
【0038】
本発明は、上記において記載されたＸ線粉末回折パターン及び上記において記載されたＤＳＣサーモグラムを有する、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形を提供する。
【0039】
本発明はまた、図６ａに示されたパターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、式Ａの化合物の固体形態を含む経口固体剤形も提供する。
【0040】
特定の化合物に対する言及はまた、全ての同位体バリアントも含む。
【0041】
本明細書において記載された「固体形態」という用語は、結晶形態を含む。任意選択的に、本発明の固体形態は結晶形態である。
【0042】
ある実施形態において、固体経口剤形中での式Ａの化合物の固体形態の量は、約０．１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、任意選択的に、約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約５ｍｇ～約５００ｍｇ、約８ｍｇ～約２００ｍｇ又は約１０ｍｇ～約１００ｍｇである。
【0043】
式Ａの化合物の固体形態は、経口固体剤形の総重量に対して約１ｗｔ％～約７０ｗｔ％、任意選択的に、約５ｗｔ％～約６０ｗｔ％又は約５ｗｔ％～約５０ｗｔ％の量において存在しうる。
【0044】
経口固体剤形は、結合剤を含みうる。存在する場合、結合剤は、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン、コポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、デンプン、アルファ化デンプン、寒天、トラガント及びアルギン酸ナトリウムのうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、結合剤は、ポビドンである。任意選択的に、結合剤は、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ Ｋ２５（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能なポビドン製剤）である。
【0045】
式Ａの化合物と結合剤との重量比は、約１：０．０１～約１：１、任意選択的に、約１：０．０３～約１：０．５の間又は約１：０．０５～約１：０．３の間でありうる。
【0046】
結合剤は、経口固体剤形の総重量に対して約０．１ｗｔ％～約３０ｗｔ％、任意選択的に、約０．５ｗｔ％～約１０ｗｔ％又は約１ｗｔ％～約５ｗｔ％の量において存在しうる。
【0047】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、希釈剤を含みうる。希釈剤は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム二塩基性、リン酸カルシウム三塩基性、硫酸カルシウム、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、デキストリン、デキストロース賦形剤、フルクトース、カオリン、ラクチトール、ラクトース、ラクトース一水和物、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、デンプン、アルファ化デンプン及びスクロースのうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、希釈剤は、微結晶セルロースである。任意選択的に、希釈剤は、Ａｖｉｃｅｌ ＰＨ １０１及び／又はＡｖｉｃｅｌ ＰＨ １０２（いずれも、ＦＭＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能な、微結晶セルロース賦形剤である）である。
【0048】
式Ａの化合物の固体形態の、希釈剤に対する重量比は、約１：０．１～約１：５００、任意選択的に、約１：０．２～約１：１００、約１：０．５～約１：５０、約１：０．７５～約１：２０又は約１：１～約１：５の間でありうる。
【0049】
希釈剤は、経口固体剤形の総重量に対して約１ｗｔ％～約９９ｗｔ％、任意選択的に、約１０ｗｔ％～約７０ｗｔ％又は約２０ｗｔ％～約６０ｗｔ％又は約４０ｗｔ％～約６０ｗｔ％の量において存在しうる。
【0050】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、崩壊剤を含みうる。崩壊剤は、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、架橋型ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、粉末セルロース、微結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ポラクリリンカリウム、デンプン、アルファ化デンプン、アルギン酸及びアルギン酸ナトリウムのうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウムである。任意選択的に、崩壊剤は、ＡｃＤｉＳｏｌ（ＦＭＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能な、クロスカルメロースナトリウム製剤）である。
【0051】
式Ａの化合物の固体形態の、崩壊剤に対する重量比は、約１：０．０１～約１：１、任意選択的に、約１：０．０３～約１：０．５の間、約１：０．０５～約１：０．３の間又は約１：０．０８～約１：０．１６の間でありうる。
【0052】
崩壊剤は、経口固体剤形の総重量に対して約０．１ｗｔ％～約５０ｗｔ％、任意選択的に、約０．５ｗｔ％～約３０ｗｔ％又は約１ｗｔ％～約２０ｗｔ％又は約１ｗｔ％～約１０ｗｔ％の量において存在しうる。
【0053】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、滑沢剤を含みうる。滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセリン、パルミトステアリン酸グリセリル、水素化ヒマシ油、水素化植物油、鉱物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン酸、滑石及びステアリン酸亜鉛のうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムである。
【0054】
式Ａの化合物の固体形態の、滑沢剤に対する重量比は、約１：０．００１～約１：１、任意選択的に、約１：０．００５～約１：０．５の間、約１：０．００７５～約１：０．２の間又は約１：０．０１～約１：０．１でありうる。
【0055】
滑沢剤は、経口固体剤形の総重量に対して約０．１ｗｔ％～約１０ｗｔ％、任意選択的に、約０．２ｗｔ％～約５ｗｔ％又は約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％の量において存在しうる。
【0056】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、流動促進剤を含みうる。流動促進剤は、滑石、コロイド状二酸化ケイ素、三ケイ酸マグネシウム、粉末セルロース、デンプン及び三塩基性リン酸カルシウムのうちの１つ以上を含みうる。
【0057】
式Ａの化合物の固体形態の、流動促進剤に対する重量比は、約１：０．０１～約１：１でありうる。
【0058】
流動促進剤は、経口固体剤形の総重量に対して約０．１ｗｔ％～約１０ｗｔ％、任意選択的に、約０．２ｗｔ％～約５ｗｔ％又は約０．５ｗｔ％～約２ｗｔ％の量において存在しうる。
【0059】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、酸を含みうる。酸は、酒石酸、マレイン酸、コハク酸及びクエン酸のうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、酸は、酒石酸である。代替的に、酸は、マレイン酸でありうる。
【0060】
式Ａの化合物の固体形態の、酸に対する重量比は、約１：０．１～約１：２の間、任意選択的に、約１：０．２～約１：１でありうる。
【0061】
酸は、経口固体剤形の総重量に対して約１ｗｔ％～約４０ｗｔ％、任意選択的に、約２ｗｔ％～約３０ｗｔ％又は約５ｗｔ％～約２０ｗｔ％の量において存在しうる。
【0062】
代替的に、又は加えて、経口固体剤形は、界面活性剤を含みうる。界面活性剤は、イオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤でありうる。界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０及びポリソルベート８０のうちの１つ以上を含みうる。任意選択的に、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート８０から選択される。任意選択的に、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムである。代替的に、界面活性剤は、ポリソルベート８０でありうる。
【0063】
式Ａの化合物の固体形態の、界面活性剤に対する重量比は、約１：０．０１～約１：１、任意選択的に、約１：０．０３～約１：０．５の間又は約１：０．０５～約１：０．３の間でありうる。
【0064】
界面活性剤は、経口固体剤形の総重量に対して約１ｗｔ％～約２０ｗｔ％、任意選択的に、約０．５ｗｔ％～約１０ｗｔ％又は約１ｗｔ％～約５ｗｔ％の量において存在しうる。
【0065】
経口固体剤形は、脂質賦形剤を含みうる。脂質賦形剤は、ステアリン酸スクロース、パルミチン酸スクロース、ラウリン酸スクロース、ベヘン酸スクロース、オレイン酸スクロース、エルカ酸スクロースなどのスクロース脂肪酸エステル、及びこれらの混合物；リン脂質誘導体、ホスファチジル誘導体、グリコシルセラミド誘導体、脂肪酸誘導体、非イオン性界面活性剤、ビタミンＥトコフェリルスクシネートポリエチレングリコール誘導体（Ｄ－α－トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート（ＴＰＧＳ）を含む）、モノオレイン酸グリセリル、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（商標登録）シリーズの界面活性剤（例えば、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ３３／０１及びＧｅｌｕｃｉｒｅ ５０／１３を含む）及びグリセリド誘導体のうちの１つ以上を含みうる。任意選択的に、脂質賦形剤は、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４及び／又はＤ－α－トコフェロールポリエチレングリコールコハク酸エステル（ＴＰＧＳ）である。好ましくは、脂質賦形剤は、Ｄ－α－トコフェロールポリエチレングリコールコハク酸エステル（ＴＰＧＳ）である。代替的に、脂質賦形剤は、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４である。
【0066】
脂質賦形剤の融点は、約２５℃を超える、約３０℃を超える、約３５℃を超える、又は約４０℃を超えうる。任意選択的に、脂質賦形剤の融点は、約３５℃を超えうる。
【0067】
脂質賦形剤の融点は、約１００℃未満、約７０℃未満、約６０℃未満又は約５０℃未満でありうる。任意選択的に、脂質賦形剤の融点は、約５０℃未満でありうる。
【0068】
式Ａの化合物の固体形態の、脂質賦形剤に対する重量比は、約１：０．１～約１：１００、任意選択的に、約１：０．５～約１：５０、約１：１～約１：５０又は約１：１～約１：２０でありうる。
【0069】
脂質賦形剤は、経口固体剤形の総重量に対して約１０ｗｔ％～約９９ｗｔ％、任意選択的に、約５０ｗｔ％～約９５ｗｔ％又は約６０ｗｔ％～約９０ｗｔ％の量において存在しうる。
【0070】
本発明の経口固体剤形は、カプセルの形態にありうる。カプセルの外殻は、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース又はデンプンから作られうる。任意選択的に、カプセルの外殻は、ゼラチンから作られている。任意選択的に、カプセルの外殻は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースから作られている。
【0071】
代替的に、本発明の経口固体剤形は、錠剤の形態にありうる。
【0072】
本発明の経口固体剤形は、薄膜の形態にありうるコーティングを含みうる。コーティングは、腸溶性コーティングでありうる。腸溶性コーティングは、胃の強酸ｐＨにおいて不溶性であるが、小腸内の弱酸性状態において可溶性である。コーティングは、約１ｍｇ／ｃｍ２～約１０ｍｇ／ｃｍ２の間、任意選択的に、約２ｍｇ／ｃｍ２～約８ｍｇ／ｃｍ２の間又は約３ｍｇ／ｃｍ２～約７ｍｇ／ｃｍ２の間の、単位面積当たりの質量を有しうる。
【0073】
コーティングは、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、任意選択的に、約２０ｍｇ～約８０ｍｇ又は約３０ｍｇ～約７０ｍｇの質量を有しうる。
【0074】
任意選択的に、カプセルの形態の、サイズ０の剤形の表面積当たりのコーティングの質量は、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、任意選択的に、約２０ｍｇ～約８０ｍｇ又は約３０ｍｇ～約７０ｍｇでありうる。
【0075】
腸溶性コーティングは、シェラック、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、トリメリテート、ポリビニルアセテートフタレート又はＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０Ｄ及びＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－Ｄ５５など、メタクリレートベースのポリマーのうちの１つ以上を含みうる腸溶性ポリマーを含みうる。好ましくは、腸溶性コーティングは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－Ｄ５５である。
【0076】
腸溶性コーティングはまた、可塑剤も含みうる。可塑剤は、クエン酸トリエチル、フタル酸ジブチル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、フタル酸ジエチル、クエン酸アセチルトリエチルのうちの１つ以上を含みうる。好ましくは、可塑剤は、クエン酸トリエチルである。
【0077】
本発明の経口固体剤形は、剤形のコアの周囲を包む薄膜を含みうる。適切な薄膜材料の例は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン及びＥｕｄｒａｇｉｔポリマーを含む。好ましくは、薄膜材料は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
【0078】
本発明の経口固体剤形は、１つ以上のさらなる活性成分を含みうる。
【0079】
本発明はまた、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法であって、
（ａ）少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の固体形態を、結合剤と、任意選択的に、希釈剤、崩壊剤及び／又は界面活性剤とを含む顆粒化液と混合するステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）の分散液を顆粒化させて、顆粒を形成するステップ；
（ｃ）顆粒を乾燥させるステップ；
（ｄ）任意選択的に、ステップ（ｂ）又は（ｃ）の顆粒を、希釈剤、酸、界面活性剤及び／又は滑沢剤とブレンドして、ブレンドされた顆粒を形成するステップ；並びに
（ｅ）顆粒又はブレンドされた顆粒を、固体経口剤形に圧縮又は充填するステップ
を含む方法も提供する。
（ａ）少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の固体形態を、結合剤と、任意選択的に、希釈剤、崩壊剤及び／又は界面活性剤とを含む顆粒化液と混合するステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）の分散液を顆粒化させて、顆粒を形成するステップ；
（ｃ）顆粒を乾燥させるステップ；
（ｄ）任意選択的に、ステップ（ｂ）又は（ｃ）の顆粒を、希釈剤、酸、界面活性剤及び／又は滑沢剤とブレンドして、ブレンドされた顆粒を形成するステップ；並びに
（ｅ）顆粒又はブレンドされた顆粒を、固体経口剤形に圧縮又は充填するステップ
を含む方法も提供する。
【0080】
顆粒化液は、水をさらに含みうる。
【0081】
ステップ（ｃ）における乾燥させることは、約４５℃を超える温度、好ましくは、約５５℃を超える温度において実施されうる。ステップ（ｃ）における乾燥させることは、約４５℃～約９０℃の間の温度、好ましくは、約５０℃～約８０℃の間の温度において実施されうる。
【0082】
ステップ（ｅ）において、顆粒又はブレンドされた顆粒は、錠剤の形態の固体経口剤形に圧縮されうる。
【0083】
本発明はまた、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法であって、
（ａ）少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の結晶形態を、融解した脂質賦形剤中に分散させるステップ；並びに
（ｂ）融解した分散液をカプセルに充填するステップ
を含む方法も提供する。
（ａ）少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の結晶形態を、融解した脂質賦形剤中に分散させるステップ；並びに
（ｂ）融解した分散液をカプセルに充填するステップ
を含む方法も提供する。
【0084】
本発明はまた、式Ａの化合物を含む経口固体剤形を調製する方法であって、カプセルに、少なくとも以下：約１１．２、１２．５、１３．２、１４．５、及び１６．３における特性Ｘ線粉末回折ピーク（ＣｕＫα線、°２θで表される）を示す、式Ａの化合物の結晶形態を充填するステップを含む方法も提供する。
【0085】
本発明の方法において使用された成分（例えば、結合剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、酸及び脂質賦形剤）は、本発明の経口固体剤形について記載された同じ成分であり、これらの成分について記載された、任意の定義及び／又は限定は、本発明の方法において使用された成分へも、同様に適用されうることを理解されたい。
【0086】
本発明はまた、本発明の方法のうちのいずれか１つにより得られる経口固体剤形も提供する。
【0087】
本発明の経口固体剤形は、特に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置において、多数の治療的適用を有する。
【0088】
したがって、本発明は、治療における使用のための、式Ａの化合物の形態１を含む経口固体剤形を提供する。
【0089】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法における使用のための、本明細書において記載された経口固体剤形も提供する。
【0090】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法であって、このような処置を必要とする哺乳動物に、本明細書において記載された経口固体剤形を投与するステップを含む方法も提供する。
【0091】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置のための医薬の製造における、本明細書において記載された経口固体剤形の使用も提供する。
【0092】
ある態様において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、視力障害、糖尿病網膜症、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管性浮腫、網膜静脈閉塞症、糖尿病、膵炎、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧症、がん、成人呼吸促迫症候群、播種性血管内凝固、心血管バイパス手術中の血液凝固、及び外科術後の出血から選択される。好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性黄斑浮腫である。別の好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管性浮腫である。
【0093】
代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管性浮腫から選択されうる。代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病網膜症に伴う網膜血管透過性又は糖尿病性黄斑浮腫でありうる。
【0094】
本発明の文脈において、本明細書における「処置」への言及は、特に逆の指示がない限り、治癒的処置、緩和的処置及び予防的処置への言及を含む。「治療」、「治療的」及び「治療的に」という用語は、同様に理解されるものとする。
【0095】
本発明の経口固体剤形は、単独において投与される場合もあり、１つ以上の他の薬学的活性物質と組み合わせられて投与される場合もある。この点で、経口固体剤形は、別の薬学的活性成分をさらに含みうる。代替的に、本発明の経口剤形は、他の薬学的活性物質（複数可）を組み込む、１つ以上のさらに個別の剤形と共に共投与（同時に、連続的に、又は逐次的に）されうる。
【0096】
別の態様では、本発明の経口固体剤形は、網膜のレーザー処置と組み合わせて投与されうる。
【0097】
ヒト患者への投与のために、式Ａの化合物の毎日の総用量は、当然ながら、投与方式に応じて、典型的に、約０．１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ又は約１ｍｇ～約５０００ｍｇ又は約１０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲である。
【0098】
毎日の総用量は、単回投与により投与される場合もあり、分割投与により投与される場合もあり、医師の熟慮により、本明細書において示された、典型的な範囲から外れる場合もある。これらの投与量は、約６０ｋｇ～７０ｋｇの体重を有する、平均的なヒト対象に基づく。医師は、乳児及び老齢者など、その体重がこの範囲から外れる対象のための用量をたやすく決定する。
【0099】
本発明の経口固体剤形は、経口投与されることが意図される。経口投与は、化合物が、消化管に入るように、嚥下を伴う場合もあり、かつ／又は化合物が、口腔から、直接血流に入る、口腔内投与、舌上投与、又は舌下投与を伴う場合もある。
【0100】
ここで、本発明は、以下の非限定的な実施例により例示される。実施例において、以下の図が提示される。
【図面の簡単な説明】
【0101】
【図1a】式Ａの化合物の形態１のＸ線粉末回折パターン（実施例１）を示す図である。
【図1b】式Ａの化合物の形態１のＸ線粉末回折パターン（実施例２）を示す図である。
【図1c】式Ａの化合物の形態１のＸ線粉末回折パターン（実施例３）を示す図である。
【図2】式Ａの化合物の形態１のＳＴＡ（実施例１）を示す図である。
【図3】式Ａの化合物の形態１のＤＳＣサーモグラム（実施例１）を示す図である。
【図4】式Ａの化合物の形態１の、重量測定蒸気吸脱着等温線（吸着及び脱着）（実施例１）を示す図である。
【図5】イソプロパノール：水を９０：１０とする、形態１のスラリーに従う、式Ａの化合物のＸ線粉末回折パターン（上）を示す図である。下のＸ線粉末回折パターンは、基準としての、形態１のＸ線粉末回折パターン（実施例１）である。
【図6a】式Ａの化合物の形態３のＸ線粉末回折パターン（実施例４ａ）を示す図である。
【図6b】式Ａの化合物の形態５のＸ線粉末回折パターン（実施例４ｃ）を示す図である。
【図6c】式Ａの化合物の形態５のＤＳＣサーモグラム（実施例４ｃ）を示す図である。
【図6d】式Ａの化合物の形態５の粒度分布を示す図である。
【図6e】式Ａの化合物の形態５の重量測定蒸気吸脱着等温線（吸着及び脱着）（実施例４ｃ）を示す図である。
【図7】２５℃／６０％ＲＨ安定性試験時の、０日後（上）、１カ月後（中）及び３カ月後（下）における、式Ａの化合物の形態１のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図8】４０℃／７５％ＲＨ安定性試験時の、０日後（上）、１カ月後（中）及び３カ月後（下）における、式Ａの化合物の形態１のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図9】初期並びに２５℃及び４０℃における保管の後の、ＴＰＧＳを充填されたカプセルについての０．１ＭのＨＣｌ及びｐＨ３の緩衝液中の溶出曲線を示す図である。
【図10】初期並びに２５℃及び４０℃における保管の後の、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４を充填されたカプセルについての０．１ＭのＨＣｌ及びｐＨ３の緩衝液中の溶出曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【0102】
一般的な実験の詳細
以下の例において、以下の略号及び定義が使用される：
以下の例において、以下の略号及び定義が使用される：
【0103】
【表1】
【0104】
全ての反応は、そうでないことが指定されない限り、窒素雰囲気下において実行した。
【0105】
１ＨＮＭＲスペクトルは、重水素溶媒を基準として、室温において、Ｂｒｕｋｅｒ（４００ＭＨｚ）分光計上又はＪＥＯＬ（４００ＭＨｚ）分光計上において記録した。
【0106】
分子イオンは、Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｓｐｅｅｄｒｏｄ ＲＰ－１８ｅカラム、５０×４．６ｍｍを、０．１％ＨＣＯ２Ｈ／アセトニトリルから、０．１％ＨＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏへの、１０％～９０％の直線勾配と共に、流量１．５ｍＬ／分において、１３分間にわたり使用して、又はＡｇｉｌｅｎｔ、Ｘ－Ｓｅｌｅｃｔ、ａｃｉｄｉｃ、５～９５％のアセトニトリル／水を、４分間にわたり使用して実行されたＬＣＭＳを使用して得た。データは、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ Ｓｕｒｖｅｙｏｒ ＬＣ ｓｙｓｔｅｍと共に、エレクトロスプレーイオン化を伴う、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ Ｓｕｒｖｅｙｏｒ ＭＳＱ質量分析計を使用して収集した。
【0107】
代替的に、分子イオンは、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８（２．７μｍ、３．０×５０ｍｍ）カラムを、水［溶離液Ａ］中；アセトニトリル［溶離液Ｂ］中に０．１％ｖ／ｖのギ酸；０．８ｍＬ／分の流量及び試料間の１．５分間の平衡時間、下記に示された勾配と共に使用して実行された、ＬＣＭＳを使用して得た。質量の検出は、ＡＰＩ ２０００質量分析計（エレクトロスプレー）によりなされた。
勾配：
勾配：
【0108】
【表2】
【0109】
生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した場合の「シリカ」とは、０．０３５～０．０７０ｍｍ（メッシュ２２０～４４０）のクロマトグラフィー用のシリカゲル（例えば、Ｍｅｒｃｋ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０）を指し、適用された１０ｐ．ｓ．ｉ以下の窒素圧が、カラムによる溶離を加速させた。逆相調製用ＨＰＬＣによる精製は、Ｗａｔｅｒｓ ２５２５ ｂｉｎａｒｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｕｍｐｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍを、典型的に、２０ｍＬ／分の流量において使用し、Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒを使用して実行した。
【0110】
全ての溶媒及び市販の試薬は、入手した時の状態のものを使用した。
【0111】
化学名は、ＭＤＬ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＩＳＩＳ Ｄｒａｗパッケージの一部として提供されるＡｕｔｏｎｏｍソフトウェア又はＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈの構成要素として、若しくはＩＤＢＳ Ｅ－ＷｏｒｋＢｏｏｋの構成要素として提供されるＣｈｅｍａｘｏｎソフトウェアなどの自動式ソフトウェアを使用して生成した。
【0112】
Ｘ線粉末回折パターンは、Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｘ－Ｐｅｒｔ ＭＰＤ回折計上において収集し、そうでないことが指定されない限り、以下の実験条件（方法Ａ）を使用して解析した。
陽極管：Ｃｕ
発電機の電圧：４０ｋＶ
陽極管の電流：４０ｍＡ
波長アルファ１：１．５４０６Å
波長アルファ２：１．５４４４Å
開始角度［２θ］：４
終了角度［２θ］：４０
連続走査
解析下にある約２ｍｇの試料を、Ｘ線粉末回折バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上において、静かに圧縮した。次いで、試料を、解析のために、回折計にロードした。
陽極管：Ｃｕ
発電機の電圧：４０ｋＶ
陽極管の電流：４０ｍＡ
波長アルファ１：１．５４０６Å
波長アルファ２：１．５４４４Å
開始角度［２θ］：４
終了角度［２θ］：４０
連続走査
解析下にある約２ｍｇの試料を、Ｘ線粉末回折バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上において、静かに圧縮した。次いで、試料を、解析のために、回折計にロードした。
【0113】
指定された場合、以下の方法（方法Ｂ）を使用して、Ｘ線粉末回折パターンを収集した：
Ｘ線粉末回折試験は、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ２ ＰＨＡＳＥＲ（Ｄ２－２０５３５５）を、Ｂｒａｇｇ－Ｂｒｅｎｔａｎｏ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ、装置＃２３５３において使用して実施した。３０ｋＶ、１０ｍＡにおけるＣｕ陽極、ビームストップ及び単色化Ｋβフィルター（０．５９％のＮｉ）を伴う、標準回転（５回／分）型の試料ステージを使用する。使用したスリットは、１．０ｍｍの固定分岐スリット（＝０．６１°）、軸方向２．５°の一次ソーラースリット及び軸方向２．５°の二次ソーラースリットである。受光スリット５°検出器開口を伴う線形検出器である、ＬＹＮＸＥＹＥ検出器である。標準試料ホルダー（（５１０）型シリコンウェハーにおける、０．１ｍｍの空洞）は、バックグラウンドシグナルに対して、最小の寄与を有する。測定条件：走査範囲を５～４５°２θとし、試料回転速度を５ｒｐｍとし、ステップ１つ当たり０．５秒間、ステップ１つ当たり０．０１０°とし、検出器スリットを３．０ｍｍとし；全ての測定条件は、測定器制御ファイル内に記録する。データの収集のために使用したソフトウェアは、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ４．０である。データ解析は、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａ Ｖ４．１評価ソフトウェアを使用して実施する。パターンに、バックグラウンド補正又は平滑化を適用しない。
Ｘ線粉末回折試験は、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ２ ＰＨＡＳＥＲ（Ｄ２－２０５３５５）を、Ｂｒａｇｇ－Ｂｒｅｎｔａｎｏ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ、装置＃２３５３において使用して実施した。３０ｋＶ、１０ｍＡにおけるＣｕ陽極、ビームストップ及び単色化Ｋβフィルター（０．５９％のＮｉ）を伴う、標準回転（５回／分）型の試料ステージを使用する。使用したスリットは、１．０ｍｍの固定分岐スリット（＝０．６１°）、軸方向２．５°の一次ソーラースリット及び軸方向２．５°の二次ソーラースリットである。受光スリット５°検出器開口を伴う線形検出器である、ＬＹＮＸＥＹＥ検出器である。標準試料ホルダー（（５１０）型シリコンウェハーにおける、０．１ｍｍの空洞）は、バックグラウンドシグナルに対して、最小の寄与を有する。測定条件：走査範囲を５～４５°２θとし、試料回転速度を５ｒｐｍとし、ステップ１つ当たり０．５秒間、ステップ１つ当たり０．０１０°とし、検出器スリットを３．０ｍｍとし；全ての測定条件は、測定器制御ファイル内に記録する。データの収集のために使用したソフトウェアは、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ４．０である。データ解析は、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａ Ｖ４．１評価ソフトウェアを使用して実施する。パターンに、バックグラウンド補正又は平滑化を適用しない。
【0114】
ＤＳＣデータは、以下の方法を使用して収集した：約５ｍｇの各試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンに秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に封入する。次いで、試料を、とＰｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ Ｊａｄｅ ＤＳＣにロードし、３０℃に保持する。安定的な熱流応答が得られたら、試料を、１０℃／分の走査速度において、２００～３００℃の間の温度に加熱し、結果として得られる熱流応答をモニタリングした。２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用した。解析の前に、インジウム標準を使用して、測定器を、温度及び熱流動について検証した。
【0115】
重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）データは、以下の方法を使用して収集した：約１０ｍｇの試料を、ワイヤーメッシュ製の蒸気吸脱着用天秤皿に入れ、「ＩｇａＳｏｒｐ」蒸気吸脱着用天秤（Ｈｉｄｅｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にロードした。次いで、０％の環境湿度を維持することにより、さらなる重量変化が記録されなくなるまで、試料を乾燥させた。次いで、その後、平衡（ステップの９９％の完了）に到達するまで、試料を、各ステップに維持しながら、試料を、ＲＨの増分を１０％とする、０～９０％ＲＨの傾斜プロファイルにかけた。平衡に達したら、装置内の％ＲＨを、次のステップに傾斜させ、平衡手順を繰り返した。吸脱着サイクルが完了した後、次いで、同じ手順を使用して、試料を乾燥させた。次いで、吸着／脱着サイクルにおける重量の変化をモニタリングし、試料の吸湿性を決定した。
【0116】
同時熱分析（ＳＴＡ）データは、以下の方法を使用して収集した：約５ｍｇの試料を、セラミック製のるつぼに正確に秤量し、周囲温度において、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ ＳＴＡ ６００ ＴＧＡ／ＤＴＡ ａｎａｌｙｚｅｒのチャンバーに入れた。次いで、試料を、１０℃／分の速度において、典型的に、２５℃～３００℃に加熱し、この間における、重量の経時変化並びにＤＴＡ信号をモニタリングした。使用したパージガスは、流量２０ｃｍ３／分の窒素であった。
【0117】
Ｉ．式Ａの化合物の形態１の調製
Ａ．１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン
４－（クロロメチル）ベンジルアルコール（５．０ｇ、３１．９３ミリモル）を、アセトン（１５０ｍＬ）中に溶出させた。２－ヒドロキシピリジン（３．６４ｇ、３８．３ミリモル）及び炭酸カリウム（１３．２４ｇ、９５．７８ミリモル）を添加し、反応混合物を、５０℃において、３時間にわたり攪拌し、この時間の後、溶媒を真空中において除去し、残留物をクロロホルム（１００ｍＬ）中に溶解させた。この溶液を水（３０ｍＬ）、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中において蒸発させた。溶離液を３％メタノール／９７％ＣＨＣｌ３とする、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ）により残留物を精製して、１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オンとして同定される白色固体を得た（５．３０ｇ、２４．６２ミリモル、収率７７％）。
［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２３８
Ｂ．１－（４－クロロメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン
１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン（８．４５ｇ、３９．３ミリモル）、乾燥ジクロロメタン（８０ｍＬ）及びトリエチルアミン（７．６６ｍｌ、５５．０ミリモル）を氷冷浴中において冷却した。メタンスルホニルクロリド（３．９５ｍｌ、５１．０ミリモル）を添加し、氷冷浴中において、１５分間にわたり攪拌した。氷冷浴を除去し、攪拌を、室温において、一晩にわたり継続した。反応混合物を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）と、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）との間において分割した。さらなるジクロロメタン（２×５０ｍＬ）により水性層を抽出し、合わせた有機物を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上において脱水し、濾過及び濃縮して、淡黄色固体としての１－（４－クロロメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン（８．６５ｇ、３６．６ミリモル、収率９３％）を得た。
［ＭＨ］＋＝２３４．１
Ｃ．メチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート
炭酸カリウム（５１９ｍｇ、３．７６ミリモル）を、メチル３－（メトキシメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３２０ｍｇ、１．８８ミリモル；ＣＡＳ番号：３１８４９６－６６－１（ＷＯ２０１２／００９００９において記載された方法に従い合成された））及び１－（４－（クロロメチル）ベンジル）ピリジン－２（１Ｈ）－オン（５２７ｍｇ、２．２６ミリモル）の、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に添加し、６０℃において、一晩にわたり加熱した。反応混合物を、酢酸エチル（５０ｍＬ）により希釈し、塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、真空中において濾過及び還元した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのカラム、イソヘキサン中に０～１００％の酢酸エチル）により精製して、２つの位置異性体をもたらした。カラムから、第２の異性体を回収して、メチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３７８ｍｇ、１．０１ミリモル、収率５３．７％）を、無色ガムとして得た。
［ＭＨ］＋＝３６８．２
Ｄ．３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸
テトラヒドロフラン（５ｍＬ）及びメタノール（５ｍＬ）中のメチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３．７７ｇ、１０．２６ミリモル）に、２ＭのＮａＯＨ溶液（１５．３９ｍｌ、３０．８ミリモル）を添加し、室温において、一晩にわたり攪拌した。１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（５０ｍＬ）により抽出した。有機層を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、真空中において濾過及び還元して、３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（１．２２ｇ、３．４５ミリモル、収率３３．６％）を、白色粉末として得た。
［ＭＨ］＋＝３５４．２
Ｅ．３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル
シアン化銅（Ｉ）（１．３０４ｇ、１４．５６ミリモル）を、大型のマイクロウェーブバイアルの、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の２－ブロモ－３－フルオロ－４－メトキシピリジン（１ｇ、４．８５ミリモル）の溶液に添加した。反応バイアルを封入し、１６時間にわたり、１００℃に加熱した。反応混合物を、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）により希釈した。濃厚な懸濁液を超音波処理し、また沈殿させた固体を粉砕するには、さらなる水（４０ｍＬ）及び酢酸エチル（２×５０ｍＬ）が、超音波処理と共に必要であった。合わせた層をセライトプラグを通して濾過し、有機層を単離し、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、濾過し、減圧下において溶媒を除去し、所望の化合物である、３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．５７８ミリモル、収率１２％）として同定される淡緑色固体を得た。
Ｆ．（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル
３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．５７８ミリモル）を、無水メタノール（１０ｍＬ、２４７ミリモル）中に溶出させ、塩化ニッケル六水和物（１４ｍｇ、０．０５８ミリモル）に続き、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２５５ｍｇ、１．１５７ミリモル）を添加した。結果として得られる淡緑色溶液を氷冷塩浴中において、－５℃に冷却し、次いで、約０℃の反応温度を維持しながら、ホウ化水素ナトリウム（１５３ｍｇ、４．０５ミリモル）を、少しずつ添加した。濃褐色の溶液を０℃における攪拌に委ね、室温までゆっくりと温め、次いで、室温において、３時間にわたり攪拌した。反応混合物を４０℃で蒸発乾燥させて、黒色の残留物を得たら、これを、ジクロロメタン（１０ｍＬ）により希釈し、炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）で洗浄した。エマルジョンが形成されたので、有機物を、相分離カートリッジを介して分離し、濃縮した。粗液体を、酢酸エチル／イソヘキサンにより溶離させるクロマトグラフィーを介して精製して、標題化合物である、（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルを、透明の黄色油（１０８ｍｇ、収率６２％）として得た。
［ＭＨ］＋＝２５７
Ｇ．Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩
（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１０８ｍｇ、０．３５８ミリモル）を、イソプロピルアルコール（１ｍＬ）中に溶解させ、次いで、ＨＣｌ（イソプロピルアルコール中に６Ｎ）（１ｍＬ、０．５７８ミリモル）を室温において添加し、４０℃において、２時間にわたり攪拌した。反応混合物を、減圧下において濃縮し、次いで、エーテルにより練和し、超音波処理し、次いで、デカントして、Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩として同定される、クリーム状の有色固体（７５ｍｇ、収率５５％）を得た。
［ＭＨ］＋＝１５７
Ａ．１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン
４－（クロロメチル）ベンジルアルコール（５．０ｇ、３１．９３ミリモル）を、アセトン（１５０ｍＬ）中に溶出させた。２－ヒドロキシピリジン（３．６４ｇ、３８．３ミリモル）及び炭酸カリウム（１３．２４ｇ、９５．７８ミリモル）を添加し、反応混合物を、５０℃において、３時間にわたり攪拌し、この時間の後、溶媒を真空中において除去し、残留物をクロロホルム（１００ｍＬ）中に溶解させた。この溶液を水（３０ｍＬ）、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中において蒸発させた。溶離液を３％メタノール／９７％ＣＨＣｌ３とする、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ）により残留物を精製して、１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オンとして同定される白色固体を得た（５．３０ｇ、２４．６２ミリモル、収率７７％）。
［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２３８
Ｂ．１－（４－クロロメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン
１－（４－ヒドロキシメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン（８．４５ｇ、３９．３ミリモル）、乾燥ジクロロメタン（８０ｍＬ）及びトリエチルアミン（７．６６ｍｌ、５５．０ミリモル）を氷冷浴中において冷却した。メタンスルホニルクロリド（３．９５ｍｌ、５１．０ミリモル）を添加し、氷冷浴中において、１５分間にわたり攪拌した。氷冷浴を除去し、攪拌を、室温において、一晩にわたり継続した。反応混合物を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）と、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）との間において分割した。さらなるジクロロメタン（２×５０ｍＬ）により水性層を抽出し、合わせた有機物を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上において脱水し、濾過及び濃縮して、淡黄色固体としての１－（４－クロロメチル－ベンジル）－１Ｈ－ピリジン－２－オン（８．６５ｇ、３６．６ミリモル、収率９３％）を得た。
［ＭＨ］＋＝２３４．１
Ｃ．メチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート
炭酸カリウム（５１９ｍｇ、３．７６ミリモル）を、メチル３－（メトキシメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３２０ｍｇ、１．８８ミリモル；ＣＡＳ番号：３１８４９６－６６－１（ＷＯ２０１２／００９００９において記載された方法に従い合成された））及び１－（４－（クロロメチル）ベンジル）ピリジン－２（１Ｈ）－オン（５２７ｍｇ、２．２６ミリモル）の、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に添加し、６０℃において、一晩にわたり加熱した。反応混合物を、酢酸エチル（５０ｍＬ）により希釈し、塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、真空中において濾過及び還元した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのカラム、イソヘキサン中に０～１００％の酢酸エチル）により精製して、２つの位置異性体をもたらした。カラムから、第２の異性体を回収して、メチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３７８ｍｇ、１．０１ミリモル、収率５３．７％）を、無色ガムとして得た。
［ＭＨ］＋＝３６８．２
Ｄ．３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸
テトラヒドロフラン（５ｍＬ）及びメタノール（５ｍＬ）中のメチル３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキシレート（３．７７ｇ、１０．２６ミリモル）に、２ＭのＮａＯＨ溶液（１５．３９ｍｌ、３０．８ミリモル）を添加し、室温において、一晩にわたり攪拌した。１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）を添加し、酢酸エチル（５０ｍＬ）により抽出した。有機層を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、真空中において濾過及び還元して、３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（１．２２ｇ、３．４５ミリモル、収率３３．６％）を、白色粉末として得た。
［ＭＨ］＋＝３５４．２
Ｅ．３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル
シアン化銅（Ｉ）（１．３０４ｇ、１４．５６ミリモル）を、大型のマイクロウェーブバイアルの、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の２－ブロモ－３－フルオロ－４－メトキシピリジン（１ｇ、４．８５ミリモル）の溶液に添加した。反応バイアルを封入し、１６時間にわたり、１００℃に加熱した。反応混合物を、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）により希釈した。濃厚な懸濁液を超音波処理し、また沈殿させた固体を粉砕するには、さらなる水（４０ｍＬ）及び酢酸エチル（２×５０ｍＬ）が、超音波処理と共に必要であった。合わせた層をセライトプラグを通して濾過し、有機層を単離し、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、濾過し、減圧下において溶媒を除去し、所望の化合物である、３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．５７８ミリモル、収率１２％）として同定される淡緑色固体を得た。
Ｆ．（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル
３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．５７８ミリモル）を、無水メタノール（１０ｍＬ、２４７ミリモル）中に溶出させ、塩化ニッケル六水和物（１４ｍｇ、０．０５８ミリモル）に続き、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２５５ｍｇ、１．１５７ミリモル）を添加した。結果として得られる淡緑色溶液を氷冷塩浴中において、－５℃に冷却し、次いで、約０℃の反応温度を維持しながら、ホウ化水素ナトリウム（１５３ｍｇ、４．０５ミリモル）を、少しずつ添加した。濃褐色の溶液を０℃における攪拌に委ね、室温までゆっくりと温め、次いで、室温において、３時間にわたり攪拌した。反応混合物を４０℃で蒸発乾燥させて、黒色の残留物を得たら、これを、ジクロロメタン（１０ｍＬ）により希釈し、炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）で洗浄した。エマルジョンが形成されたので、有機物を、相分離カートリッジを介して分離し、濃縮した。粗液体を、酢酸エチル／イソヘキサンにより溶離させるクロマトグラフィーを介して精製して、標題化合物である、（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルを、透明の黄色油（１０８ｍｇ、収率６２％）として得た。
［ＭＨ］＋＝２５７
Ｇ．Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩
（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イルメチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステル（１０８ｍｇ、０．３５８ミリモル）を、イソプロピルアルコール（１ｍＬ）中に溶解させ、次いで、ＨＣｌ（イソプロピルアルコール中に６Ｎ）（１ｍＬ、０．５７８ミリモル）を室温において添加し、４０℃において、２時間にわたり攪拌した。反応混合物を、減圧下において濃縮し、次いで、エーテルにより練和し、超音波処理し、次いで、デカントして、Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩として同定される、クリーム状の有色固体（７５ｍｇ、収率５５％）を得た。
［ＭＨ］＋＝１５７
【0118】
実施例１
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（８２５ｍｇ、２．３４ミリモル）及びＣ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩（４５０ｍｇ、２．３４ミリモル）を、０℃に冷却しながら、ジクロロメタン中に溶出させた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（６２７．０ｍｇ、３．２７ミリモル）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３７８．８ｍｇ、２．８０ミリモル）及びトリエチルアミン（１．６３ｍＬ、１１８２ミリモル）を、攪拌しながら添加し、混合物を室温に温め、攪拌を２０時間にわたり継続した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、真空中において還元した。粗材料を、メタノール／ジクロロメタンにより溶離させながら、クロマトグラフィーにより精製した。溶媒を、真空中において除去し、結果として得られる固体を、ジエチルエーテルにより練和した。結果として得られる固体を、濾過により回収して、標題化合物を得た。
［ＭＨ］＋＝４９２．０
ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ： ３．４１ （３Ｈ， ｓ）， ４．０３ （３Ｈ， ｓ）， ４．６５ （２Ｈ， ｓ）， ４．７２ （２Ｈ， ｄ， Ｊ＝２．３Ｈｚ）， ５．２４ （２Ｈ， ｓ）， ５．３７ （２Ｈ， ｓ）， ６．４４ （１Ｈ， ｔｄ， Ｊ ＝ １．４， ６．８Ｈｚ）， ６．６２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ９．０Ｈｚ）， ７．１８－７．２２ （１Ｈ， ｍ）， ７．３１－７．３８ （４Ｈ， ｍ）， ７．５６－７．６０ （１Ｈ， ｍ）， ７．７５ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ７．１Ｈｚ）， ８．１８ （１Ｈ， ｓ）， ８．２７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ５．６Ｈｚ） ｐｐｍ．
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（８２５ｍｇ、２．３４ミリモル）及びＣ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩（４５０ｍｇ、２．３４ミリモル）を、０℃に冷却しながら、ジクロロメタン中に溶出させた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（６２７．０ｍｇ、３．２７ミリモル）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３７８．８ｍｇ、２．８０ミリモル）及びトリエチルアミン（１．６３ｍＬ、１１８２ミリモル）を、攪拌しながら添加し、混合物を室温に温め、攪拌を２０時間にわたり継続した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、真空中において還元した。粗材料を、メタノール／ジクロロメタンにより溶離させながら、クロマトグラフィーにより精製した。溶媒を、真空中において除去し、結果として得られる固体を、ジエチルエーテルにより練和した。結果として得られる固体を、濾過により回収して、標題化合物を得た。
［ＭＨ］＋＝４９２．０
ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ： ３．４１ （３Ｈ， ｓ）， ４．０３ （３Ｈ， ｓ）， ４．６５ （２Ｈ， ｓ）， ４．７２ （２Ｈ， ｄ， Ｊ＝２．３Ｈｚ）， ５．２４ （２Ｈ， ｓ）， ５．３７ （２Ｈ， ｓ）， ６．４４ （１Ｈ， ｔｄ， Ｊ ＝ １．４， ６．８Ｈｚ）， ６．６２ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ９．０Ｈｚ）， ７．１８－７．２２ （１Ｈ， ｍ）， ７．３１－７．３８ （４Ｈ， ｍ）， ７．５６－７．６０ （１Ｈ， ｍ）， ７．７５ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ７．１Ｈｚ）， ８．１８ （１Ｈ， ｓ）， ８．２７ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ５．６Ｈｚ） ｐｐｍ．
【0119】
式Ａの化合物（形態１）のＸ線粉末回折ディフラクトグラムを、図１ａに示す。
ピーク位置の表：
ピーク位置の表：
【0120】
【表3】
【0121】
同時熱分析（ＳＴＡ）
形態１についてのＳＴＡデータを、図２に示す。
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
形態１についてのＤＳＣデータを、図３に示す。
重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）
形態１についてのＧＶＳデータ下記の表に列挙し、図４に示す。
形態１についてのＳＴＡデータを、図２に示す。
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
形態１についてのＤＳＣデータを、図３に示す。
重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）
形態１についてのＧＶＳデータ下記の表に列挙し、図４に示す。
【0122】
【表4】
【0123】
スラリー試験
形態１（２０ｍｇ）を、９０／１０のイソプロパノール／水（２００μＬ又は３００μＬ）中に懸濁させ、周囲温度において、７２時間にわたり振とうした。上清は、少量のために、濾過せずに蒸発させ、結果として得られる固体を、Ｘ線粉末回折により検討した（図５）。結果として得られるＸ線粉末回折（図５）は、遊離塩基が、おそらく、水和物を形成する傾向を有することを指し示す、図１ａのＸ線粉末回折と異なった。
形態１（２０ｍｇ）を、９０／１０のイソプロパノール／水（２００μＬ又は３００μＬ）中に懸濁させ、周囲温度において、７２時間にわたり振とうした。上清は、少量のために、濾過せずに蒸発させ、結果として得られる固体を、Ｘ線粉末回折により検討した（図５）。結果として得られるＸ線粉末回折（図５）は、遊離塩基が、おそらく、水和物を形成する傾向を有することを指し示す、図１ａのＸ線粉末回折と異なった。
【0124】
目視による水溶性
形態１（１０ｍｇ）をガラス製バイアルに秤量し、水を３ｍＬまで、１００μＬずつ添加し、次いで、その後、１ｍＬずつ添加した。短い平衡時間の後、目視により、可溶性を評価した。
形態１（１０ｍｇ）をガラス製バイアルに秤量し、水を３ｍＬまで、１００μＬずつ添加し、次いで、その後、１ｍＬずつ添加した。短い平衡時間の後、目視により、可溶性を評価した。
【0125】
形態１は、２０ｍＬの水中において、溶解の徴候を全く示さなかった（＜＜０．５ｍｇ／ｍＬ）。
【0126】
実施例２
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（８２５ｍｇ、２．３４ミリモル）及びＣ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩（４５０ｍｇ、２．３４ミリモル）を、０℃に冷却しながら、ジクロロメタン中に溶出させた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（６２７．０ｍｇ、３．２７ミリモル）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３７８．８ｍｇ、２．８０ミリモル）及びトリエチルアミン（１．６３ｍＬ、１１８２ミリモル）を、攪拌しながら添加し、混合物を室温に温め、攪拌を２０時間にわたり継続した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、真空中において還元した。粗材料を、メタノール／ジクロロメタンにより溶離させながら、クロマトグラフィーにより精製した。結果として得られる固体を、高温アセトニトリル中に溶出させ、冷却し、沈殿させ、結果として得られる固体を、濾過により回収して、標題化合物を、白色固体として得た（１３０ｍｇ、収率１１％）。
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（８２５ｍｇ、２．３４ミリモル）及びＣ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン塩酸塩（４５０ｍｇ、２．３４ミリモル）を、０℃に冷却しながら、ジクロロメタン中に溶出させた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（６２７．０ｍｇ、３．２７ミリモル）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３７８．８ｍｇ、２．８０ミリモル）及びトリエチルアミン（１．６３ｍＬ、１１８２ミリモル）を、攪拌しながら添加し、混合物を室温に温め、攪拌を２０時間にわたり継続した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、真空中において還元した。粗材料を、メタノール／ジクロロメタンにより溶離させながら、クロマトグラフィーにより精製した。結果として得られる固体を、高温アセトニトリル中に溶出させ、冷却し、沈殿させ、結果として得られる固体を、濾過により回収して、標題化合物を、白色固体として得た（１３０ｍｇ、収率１１％）。
【0127】
式Ａの化合物（形態１）のＸ線粉末回折ディフラクトグラム（方法Ｂを使用して記録した）を、図１ｂに示す。単離固体のＸ線粉末回折ディフラクトグラム（図１ｂ）は、それらが、形態１（実施例１）（図１ａ）と同じ固体形態であることを確認した。
【0128】
ピーク位置の表：
【0129】
【表5】
【0130】
実施例３
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（６１ｇ、０．１７３モル）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４００ｍＬ）中に溶出させ、１，１’－カルボニルジイミダゾール（２７．９９ｇ、０．１７３モル）を、少しずつ添加した。添加が完了したら、反応物を、２時間にわたり、５０℃に加熱した。Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン（２６．９５ｇ、０．１７３モル）を、反応混合物に、少しずつ添加した。反応物を、一晩にわたり、５０℃に加熱した。反応物を、室温に冷却し、水と飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（４０００ｍＬ）との３：１混合物に、滴下により添加した。結果として得られる懸濁液を、３０分間にわたり攪拌してから、固体を、濾過により単離した。固体を水（２×５００ｍＬ）で洗浄してから、真空オーブン内において乾燥させて、１１９ｇの粗生成物を得た。粗生成物を、他の２つの個別のバッチ（それぞれ、０．１７３モル及び０．０８７４モルの酸出発材料から出発する。）と合わせ、イソプロパノール（１４００ｍＬ）中において、併せてスラリー化させ、還流させるように加熱する。還流時に、全ての材料が溶出するまで、追加分のイソプロパノールを添加した（合計２０００ｍＬのイソプロパノールを添加した。）。溶液を３０分間にわたり、還流に保持してから、室温に冷却した。混合物を氷冷浴／水浴により３０分間にわたり、さらに冷却してから、生成物を濾過により回収した。固体をイソプロパノールにより洗浄し、乾燥させて、１６７．２ｇの標題生成物（収率７８．５％）を得た。
［ＭＨ］＋＝４９１．９
ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）スペクトルは、形態ＡのＮＭＲスペクトルと符合した。
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態１）
３－（メトキシメチル）－１－（４－（（２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル）メチル）ベンジル）－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸（６１ｇ、０．１７３モル）を、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４００ｍＬ）中に溶出させ、１，１’－カルボニルジイミダゾール（２７．９９ｇ、０．１７３モル）を、少しずつ添加した。添加が完了したら、反応物を、２時間にわたり、５０℃に加熱した。Ｃ－（３－フルオロ－４－メトキシ－ピリジン－２－イル）－メチルアミン（２６．９５ｇ、０．１７３モル）を、反応混合物に、少しずつ添加した。反応物を、一晩にわたり、５０℃に加熱した。反応物を、室温に冷却し、水と飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（４０００ｍＬ）との３：１混合物に、滴下により添加した。結果として得られる懸濁液を、３０分間にわたり攪拌してから、固体を、濾過により単離した。固体を水（２×５００ｍＬ）で洗浄してから、真空オーブン内において乾燥させて、１１９ｇの粗生成物を得た。粗生成物を、他の２つの個別のバッチ（それぞれ、０．１７３モル及び０．０８７４モルの酸出発材料から出発する。）と合わせ、イソプロパノール（１４００ｍＬ）中において、併せてスラリー化させ、還流させるように加熱する。還流時に、全ての材料が溶出するまで、追加分のイソプロパノールを添加した（合計２０００ｍＬのイソプロパノールを添加した。）。溶液を３０分間にわたり、還流に保持してから、室温に冷却した。混合物を氷冷浴／水浴により３０分間にわたり、さらに冷却してから、生成物を濾過により回収した。固体をイソプロパノールにより洗浄し、乾燥させて、１６７．２ｇの標題生成物（収率７８．５％）を得た。
［ＭＨ］＋＝４９１．９
ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）スペクトルは、形態ＡのＮＭＲスペクトルと符合した。
【0131】
【0132】
ピーク位置の表：
【0133】
【表6】
【0134】
安定性データ
形態１の試料を二重のポリエチレンバッグ内に詰め、高密度ポリエチレンボトル内に封入し、２５℃／６０％ＲＨの条件において保管した。試料は、１カ月後及び３カ月後において、Ｘ線粉末回折（方法Ｂを使用する。）により再度解析した。データを、図７に示す。試料を、２５℃／６０％ＲＨの条件において保管したところ、１カ月後又は３カ月後において、Ｘ線粉末回折ディフラクトグラムの変化は観察されなかった。
形態１の試料を二重のポリエチレンバッグ内に詰め、高密度ポリエチレンボトル内に封入し、２５℃／６０％ＲＨの条件において保管した。試料は、１カ月後及び３カ月後において、Ｘ線粉末回折（方法Ｂを使用する。）により再度解析した。データを、図７に示す。試料を、２５℃／６０％ＲＨの条件において保管したところ、１カ月後又は３カ月後において、Ｘ線粉末回折ディフラクトグラムの変化は観察されなかった。
【0135】
２５℃／６０％ＲＨにおいて保管された形態１の試料についてのさらなる試験は、表１において記載される通りに実行した。
【0136】
【表7】
【0137】
形態１の第２の試料を二重のポリエチレンバッグ内に詰め、高密度ポリエチレンボトル内に封入し、４０℃／７５％ＲＨの、加速化安定性条件下において保管した。試料は、１カ月後及び３カ月後において、Ｘ線粉末回折（方法Ｂを使用する。）により、再度解析した。データを図８に示す。試料を４０℃／７５％ＲＨにおいて保管したところ、１カ月後又は３カ月後において、Ｘ線粉末回折ディフラクトグラムの変化は観察されなかった。
【0138】
４０℃／７５％ＲＨにおいて保管された形態１の試料についてのさらなる試験は、表２において記載される通りに実行した。
【0139】
【表8】
【0140】
実施例４Ａ
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態３）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（３０ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（１００μＬ）中懸濁液を温度サイクリングにより２日間にわたり成熟させた。結果として得られる固体を単離して、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態３）を得た。
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態３）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（３０ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（１００μＬ）中懸濁液を温度サイクリングにより２日間にわたり成熟させた。結果として得られる固体を単離して、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態３）を得た。
【0141】
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態３）のＸ線粉末回折ディフラクトグラムを、図６ａに示す。
【0142】
ピーク位置の表：
【0143】
【表9】
【0144】
実施例４Ｂ
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（５００ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（２．５ｍＬ）中懸濁液を２０℃～５０℃の温度サイクリングにより、２４時間にわたり成熟させた。結果として得られる固体を単離して、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）を得た。
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（５００ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（２．５ｍＬ）中懸濁液を２０℃～５０℃の温度サイクリングにより、２４時間にわたり成熟させた。結果として得られる固体を単離して、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）を得た。
【0145】
実施例４Ｃ
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（５００ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（２０ｍＬ）中溶液を調製した。溶液を真空下において乾燥するように蒸発させて、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）を得た。
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）
Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（５００ｍｇ）の５０／５０のメタノール／水（２０ｍＬ）中溶液を調製した。溶液を真空下において乾燥するように蒸発させて、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）を得た。
【0146】
実施例４Ｃから得られた、Ｎ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミド（形態５）のＸ線粉末回折ディフラクトグラムを、図６ｂに示す。このＸ線粉末回折ディフラクトグラムは、上記の方法Ｂを使用して得た。
【0147】
最も顕著なピークについてのピーク位置の表：
【0148】
【表10】
【0149】
形態５は、形態１、２又は３より不安定であり、時間経過にわたり、多形体である形態３に転換される。形態５に対する、Ｘ線粉末回折測定の実施は、形態３を結果として得た。
【0150】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
熱重量分析／示差走査熱量測定試験は、４０μｌのピンホール付きＡｌ製るつぼを使用する、オートサンプラー装備型Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ１ Ｓｔａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ、装置＃１５４７を使用して実施した。測定条件：３０．０℃において５分間にわたり、１０℃／分により３０．０～３５０．０℃とし、Ｎ２流を４０ｍｌ／分とする。測定器制御及びデータ解析のために使用されたソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ ｖ１２．１０である。形態５についての熱重量分析／示差走査熱量測定データを、図６ｃに示す。
熱重量分析／示差走査熱量測定試験は、４０μｌのピンホール付きＡｌ製るつぼを使用する、オートサンプラー装備型Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ１ Ｓｔａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ、装置＃１５４７を使用して実施した。測定条件：３０．０℃において５分間にわたり、１０℃／分により３０．０～３５０．０℃とし、Ｎ２流を４０ｍｌ／分とする。測定器制御及びデータ解析のために使用されたソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ ｖ１２．１０である。形態５についての熱重量分析／示差走査熱量測定データを、図６ｃに示す。
【0151】
粒度分布
粒度分布試験は、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ、装置＃１７１２を使用して実施した。Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒは、レンズ範囲を０．０５μｍ～９００ｍｍとする３００ＲＦを使用した。多分散系を、解析モデルとして使用した。バックグラウンドの測定は、各試料測定の前に実施し、バックグラウンドの走査時間は、１２秒間（スナップ撮影１２０００回）であった。各試料を、屈折率を１．４２として、Ｍｕｌｔｉｐａｒ Ｇ内において分散させた。試料分散液に対する掩蔽範囲は、１０％～３０％であった。各試料は、ｔ＝０及びｔ＝３０分後において、６回ずつ測定し、測定走査時間は、１０秒間（スナップ撮影１００００回）であった。試料分散ユニットの目標攪拌速度は、２０００±１０ｒｐｍであった。データの収集及び評価は、Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｓ Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１９ソフトウェアを使用して実施した。結果として得られる多形体である形態５についての粒度分布分析を、図６ｄに示す。
粒度分布試験は、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ、装置＃１７１２を使用して実施した。Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒは、レンズ範囲を０．０５μｍ～９００ｍｍとする３００ＲＦを使用した。多分散系を、解析モデルとして使用した。バックグラウンドの測定は、各試料測定の前に実施し、バックグラウンドの走査時間は、１２秒間（スナップ撮影１２０００回）であった。各試料を、屈折率を１．４２として、Ｍｕｌｔｉｐａｒ Ｇ内において分散させた。試料分散液に対する掩蔽範囲は、１０％～３０％であった。各試料は、ｔ＝０及びｔ＝３０分後において、６回ずつ測定し、測定走査時間は、１０秒間（スナップ撮影１００００回）であった。試料分散ユニットの目標攪拌速度は、２０００±１０ｒｐｍであった。データの収集及び評価は、Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｓ Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１９ソフトウェアを使用して実施した。結果として得られる多形体である形態５についての粒度分布分析を、図６ｄに示す。
【0152】
重量測定蒸気吸脱着
形態５は、重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）試験により決定された通り、２３％の質量取込みを伴う吸湿性である。ＧＶＳ試験は、Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ． ＤＶＳ－１ Ｎｏ Ｖｉｄｅｏ、装置＃２１２６を使用して実施した。典型的に、２０～３０ｍｇの試料を、天秤皿にロードし、０％のＲＨにおいて平衡させた。材料を乾燥させた後、ステップ１つ当たり１０％ずつ、増分１つ当たり１時間にわたり、ＲＨを増大させ、９５％のＲＨにおいて停止させた。吸脱着サイクルが完了した後、同じ方法を使用して試料を乾燥させた。データを収集するために使用されたソフトウェアは、ＤＶＳＷｉｎ ｖ３．０１ Ｎｏ Ｖｉｄｅｏであった。データ解析は、ＤＶＳ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ ｖ６．３．０（Ｓｔａｎｄａｒｄ）を使用して実施した。結果として得られるＧＶＳを、図６ｅに示す。
形態５は、重量測定蒸気吸脱着（ＧＶＳ）試験により決定された通り、２３％の質量取込みを伴う吸湿性である。ＧＶＳ試験は、Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ． ＤＶＳ－１ Ｎｏ Ｖｉｄｅｏ、装置＃２１２６を使用して実施した。典型的に、２０～３０ｍｇの試料を、天秤皿にロードし、０％のＲＨにおいて平衡させた。材料を乾燥させた後、ステップ１つ当たり１０％ずつ、増分１つ当たり１時間にわたり、ＲＨを増大させ、９５％のＲＨにおいて停止させた。吸脱着サイクルが完了した後、同じ方法を使用して試料を乾燥させた。データを収集するために使用されたソフトウェアは、ＤＶＳＷｉｎ ｖ３．０１ Ｎｏ Ｖｉｄｅｏであった。データ解析は、ＤＶＳ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ ｖ６．３．０（Ｓｔａｎｄａｒｄ）を使用して実施した。結果として得られるＧＶＳを、図６ｅに示す。
【0153】
形態５についてのデータを、以下の表にまとめる。
【0154】
【表11】
【0155】
ＩＩ．式Ａの化合物の形態１からの経口固体剤形の調製
【0156】
実施例５Ａ
（カプセル内の式Ａの化合物の形態１）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。次いで、結果として得られる１００ｍｇの粉末を、サイズ０のゼラチンカプセルに秤量し、カプセルを閉止した。
（カプセル内の式Ａの化合物の形態１）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。次いで、結果として得られる１００ｍｇの粉末を、サイズ０のゼラチンカプセルに秤量し、カプセルを閉止した。
【0157】
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通すことにより調製された粉末の流動特性及び密度特性並びに粒度分布は、以下の通りに決定した。特徴付け時の湿度範囲は、４２～６５％であった。
形態１の粉末についての流動及び密度の特徴付け
ＡＰＩの密度（タップ密度及びバルク密度）は、タップ密度装置を使用して、ＵＳＰ［６１６］２０１２に従い、二連において決定した。カー指数及びハウスナー比の値は、ＵＳＰ［１１７４］２０１０に従い記録された、タップ密度及びバルク密度の数量から計算した。
形態１の粉末についての流動及び密度の特徴付け
ＡＰＩの密度（タップ密度及びバルク密度）は、タップ密度装置を使用して、ＵＳＰ［６１６］２０１２に従い、二連において決定した。カー指数及びハウスナー比の値は、ＵＳＰ［１１７４］２０１０に従い記録された、タップ密度及びバルク密度の数量から計算した。
【0158】
二連測定並びにバルク密度、タップ密度、カー指数及びハウスナー比の計算から得られた平均値結果を表３にまとめる。
【0159】
【表12】
【0160】
１．２５未満のハウスナー比及び５～１５％のカー指数値は、良好な／優れた流動特性を指し示す（Ｍ．Ｅ．Ａｕｌｔｏｎ、「Ａｕｌｔｏｎ’ｓ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ」、３版、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｈｕｎｇａｒｙ、２００７、３５６頁）。形態１についての表３における結果は、カー指数及びハウスナー比に基づく流動特性の不良を指し示す。
【0161】
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通すことにより調製された粉末の粉体流の決定（グラム／秒）は、「オリフィス装置を通る流動」を使用して、二連（２５ｍｍ及び１０ｍｍの二連）において実施した。測定は、流量計を振とうさせずに実施した。流動が生じなかった場合、鋼製スパチュラにより（各回、一定の強度を使用して）、流量計を、静かに、繰り返しタッピングして、試験を繰り返した。２５ｍｍ及び１０ｍｍのオリフィスを通る粉体流について得られた結果を表４に示す。
【0162】
【表13】
【0163】
式Ａの化合物の形態１の粉末は、２５ｍｍ又は１０ｍｍのオリフィス内を、タッピングせずには流動せず、前者の場合に限り、タッピングにより流動したことから、カー指数及びハウスナー比について得られた結果が確認される（表３）。湿度は比較的高かったが、式Ａの化合物の形態１の粉末は、スパチュラ及びふるいに付着した。この挙動は、湿度条件により影響されうる。
【0164】
式Ａの化合物の形態１について測定されたバルク密度値は、低値であったが、これは、十分な流動（適切な用量サイズの容器内の）を確保するのに必要とされる賦形剤のために利用可能な容量が限定されるため、単純な粉末ブレンド（直接カプセル化された、又は錠剤に圧縮された）を使用して、高用量を達成することが困難であることを意味する。
【0165】
粒度分布（ＰＳＤ）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通すことにより調製された粉末の粒度分布は、１ｍｍの振幅に設定したふるい振とう機を５分間にわたり使用するふるい分け分析により、二連において決定した。使用したふるいサイズは、１ｍｍ、７１０μｍ、５００μｍ、３５５μｍ、２５０μｍ、１２５μｍ、６３μｍ及びパンであった。
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通すことにより調製された粉末の粒度分布は、１ｍｍの振幅に設定したふるい振とう機を５分間にわたり使用するふるい分け分析により、二連において決定した。使用したふるいサイズは、１ｍｍ、７１０μｍ、５００μｍ、３５５μｍ、２５０μｍ、１２５μｍ、６３μｍ及びパンであった。
【0166】
粒度の決定について得られた結果を表５に示す。
【0167】
【表14】
【0168】
大アパーチャーメッシュ内に保持された材料は、軟質の凝集物であると考えられた。式Ａの化合物の形態１の粉末を１．０ｍｍのメッシュを通して既にスクリーニングされていた後で、材料が１．０ｍｍのメッシュ内に保持されたという事実は、この観察を裏付け、式Ａの化合物の形態１の粉末が自発的に凝集することを含意する。形態１の大部分は、１２５及び２５０μｍのふるい上に保持される。
【0169】
実施例５Ｂ
（カプセル内の式Ａの化合物の形態１）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。次いで、結果として得られる１０ｍｇの粉末を、サイズ０のゼラチンカプセルに秤量し、カプセルを閉止した。
（カプセル内の式Ａの化合物の形態１）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。次いで、結果として得られる１０ｍｇの粉末を、サイズ０のゼラチンカプセルに秤量し、カプセルを閉止した。
【0170】
実施例６
式Ａの化合物の形態１のＴＰＧＳ製剤
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
式Ａの化合物の形態１のＴＰＧＳ製剤
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
【0171】
水浴を使用して、トコフェロールポリエチレングリコールコハク酸エステル（ＴＰＧＳ）（１７２ｇ）を、６５℃に加熱し、次いで、式Ａの化合物の形態１（２８ｇ）を、融解したＴＰＧＳに添加し、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを使用して、混合した（形態１を、２６分間にわたり添加し、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを、５４００ＲＰＭに設定して、４分間にわたり、さらに混合した。）。カプセル化のために、混合物の温度を、５５℃に調整した。Ｇｉｌｓｏｎピペット（７１０μＬに設定した）を使用して、混合物のアリコートを吸い上げ、サイズ０のゼラチンカプセルに分注し、室温に冷却した。
【0172】
式Ａの化合物の形態１のＴＰＧＳ中の薬物ロードは、１４．０％（ｗ／ｗ）であり、混合物のカプセル内充填量は、７１９．０ｍｇであった。式Ａの化合物の形態１のカプセル内用量は、１００．７ｍｇであった。
【0173】
初期並びに２５℃及び４０℃の保管の後における、結果として得られるカプセルについての０．１ＭのＨＣｌ及びｐＨ３緩衝液中の溶出試験の結果を図９に示す。
【0174】
溶出試験は、０．１ＭのＨＣｌ又はｐＨ３のクエン酸－リン酸緩衝液による溶出媒体を使用する、Ｄｉｓｔｅｋ溶出装置を使用して、欧州薬局方２．９．３に従い実施した。溶出は、パドル速度を５０ｒｐｍとして３７℃において行う。試料（２ｍＬ）は、４μｍのカニューレフィルターを介して回収し、オフライン解析のために、０．２μｍのポリフッ化ビニリデン製シリンジフィルターを介して、ＵＰＬＣバイアルに加工した。ＵＰＬＣ解析は、２．５分間にわたる、ＵＶ検出及びアセトニトリル：水勾配を伴う、試料の、Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８、２．１×７５ｍｍ、１．７μｍカラムへの、１．５μＬの注入を使用して実施する。
【0175】
実施例７
式Ａの化合物の形態１のＧｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４製剤
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
式Ａの化合物の形態１のＧｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４製剤
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
【0176】
水浴を使用して、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４（１７２ｇ）を、６５℃に加熱し、次いで、式Ａの化合物の形態１（２８ｇ）を、融解したＧｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４に添加し、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを使用して、混合した（形態１を、１７分間にわたり添加し、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを、５４００ＲＰＭに設定して、５分間にわたり、さらに混合した。）。カプセル化のために、混合物の温度を、５５℃に調整した。Ｇｉｌｓｏｎピペット（７１０μＬに設定した）を使用して、混合物のアリコートを吸い上げ、サイズ０のゼラチンカプセルに分注し、室温に冷却した。
【0177】
式Ａの化合物の形態１の、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４中の薬物ロードは、１４．０％（ｗ／ｗ）であり、混合物の、カプセル内充填量は、７１３．０ｍｇであった。式Ａの化合物の形態１の、カプセル内用量は、９９．８ｍｇであった。
【0178】
初期並びに２５℃及び４０℃の保管の後における、結果として得られるカプセルについての０．１ＭのＨＣｌ及びｐＨ３緩衝液中の溶出試験の結果を図１０に示す。
【0179】
溶出試験は、０．１ＭのＨＣｌ又はｐＨ３のクエン酸－リン酸緩衝液による溶出媒体を使用する、Ｄｉｓｔｅｋ溶出装置を使用して、欧州薬局方２．９．３に従い実施した。溶出は、パドル速度を５０ｒｐｍとして、３７℃において行う。試料（２ｍＬ）は、４μｍのカニューレフィルターを介して回収し、オフライン解析のために、０．２μｍのポリフッ化ビニリデン製シリンジフィルターを介して、ＵＰＬＣバイアルに加工した。ＵＰＬＣ解析は、２．５分間にわたる、ＵＶ検出及びアセトニトリル：水勾配を伴う、試料の、Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８、２．１×７５ｍｍ、１．７μｍカラムへの、１．５μＬの注入を使用して実施する。
【0180】
実施例８
式Ａの化合物の形態１のＴＰＧＳ製剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセル）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
式Ａの化合物の形態１のＴＰＧＳ製剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセル）
実施例３において調製したＮ－［（３－フルオロ－４－メトキシピリジン－２－イル）メチル］－３－（メトキシメチル）－１－（｛４－［（２－オキソピリジン－１－イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール－４－カルボキサミドの形態１を、１．０ｍｍのふるいに通した。
【0181】
水浴を使用して、トコフェロールポリエチレングリコールコハク酸エステル（ＴＰＧＳ）（１７２ｇ）を、７８．４℃に加熱し、次いで、式Ａの化合物の形態１（２８ｇ）を、融解したＴＰＧＳに添加した（形態１を、２６分間にわたり添加し、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサーを、５４００ＲＰＭに設定して、４分間にわたり、さらに混合した。）。混合物の温度を、５５℃に調整し、次いで、高せん断ホモジネーションにかけた（１２００ＲＰＭにおいて、１７４分間、次いで、２６００ＲＰＭにおいて、２３０分間にわたり）。Ｇｉｌｓｏｎピペット（７１０μＬに設定した）を使用して、混合物のアリコートを吸い上げ、サイズ０のヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセルに分注し、室温に冷却した。
【0182】
式Ａの化合物の形態１の、ＴＰＧＳ中の薬物ロードは、１４．０％（ｗ／ｗ）であり、混合物の、カプセル内充填量は、７１７．８ｍｇであった。式Ａの化合物の形態１の、カプセル内用量は、１００．５ｍｇであった。
【0183】
実施例９
式Ａの化合物の錠剤製剤
４つの顆粒製剤（ＷＧＡ、ＷＧＢ、ＷＧＣ及びＷＧＤと称する。）を、以下の方法に従い、表６及び表７に記載された量を使用して調製した：
一次顆粒化液は、表６に従う成分を、混合容器（ＷＧＡについては、２５０ｇであり、ＷＧＢ、ＷＧＣ及びＷＧＤについては、２００ｇである）に添加することにより調製した。一次顆粒化液を、磁気フレアスターラー又はオーバーヘッドスターラーを使用して、均一となるまで攪拌した。
式Ａの化合物の錠剤製剤
４つの顆粒製剤（ＷＧＡ、ＷＧＢ、ＷＧＣ及びＷＧＤと称する。）を、以下の方法に従い、表６及び表７に記載された量を使用して調製した：
一次顆粒化液は、表６に従う成分を、混合容器（ＷＧＡについては、２５０ｇであり、ＷＧＢ、ＷＧＣ及びＷＧＤについては、２００ｇである）に添加することにより調製した。一次顆粒化液を、磁気フレアスターラー又はオーバーヘッドスターラーを使用して、均一となるまで攪拌した。
【0184】
各サブロットについて、式Ａの化合物の形態１、Ａｖｉｃｅｌ ＰＨ１０１及びＡｃＤｉＳｏｌを、Ｍｕｌｔｉｐｒｏ高せん断ブレンダーに添加し、高速において、５分間にわたりブレンドした。高速においてブレンドし続けながら、さらに５分間にわたり、一次顆粒化液を混合物に注いだ。材料がＭｕｌｔｉｐｒｏ高せん断ブレンダーの側壁に付着したら、工程を中断し、材料を容器からこすり落としてから、混合及び流体の添加を再開した。
【0185】
一次顆粒化液の添加の終了時において、湿潤顆粒をさらに１分間にわたり混合した。次いで、さらに５分間にわたり混合しながら、二次顆粒化液をゆっくりと添加した。
【0186】
結果として得られる湿潤顆粒を、４．０ｍｍのメッシュに通した。次いで、湿潤顆粒をステンレス鋼製トレーに並べ、オーブン内で指定の温度において、一晩にわたり乾燥させた。次いで、乾燥させた顆粒を、１ｍｍのメッシュに通し、周囲条件下において、２時間にわたり静置して、平衡させた。顆粒製剤であるＷＧＡ、ＷＧＢ、ＷＧＣ及びＷＧＤを単離した。
【0187】
【表15】
【0188】
【表16】
【0189】
結果として得られるＷＧＡ顆粒、ＷＧＢ顆粒、ＷＧＣ顆粒及びＷＧＤ顆粒を特徴付け、結果を表８に示す。パラメータの各々を測定するのに使用された方法を、下記に記載する。
【0190】
顆粒の乾燥減量は、５ｇの顆粒試料を使用し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｂａｌａｎｃｅを、１０５℃において使用して決定した。
【0191】
顆粒の密度（タップ密度及びバルク密度）は、タップ密度装置を使用して、ＵＳＰ［６１６］２０１２に従い、二連において決定した。カー指数及びハウスナー比の値は、ＵＳＰ［１１７４］２０１０に従い記録された、タップ密度及びバルク密度の数量から計算した。
【0192】
顆粒の粉体流の決定（グラム／秒）は、「オリフィス装置を通る流動」を使用して、二連（２５ｍｍ及び１０ｍｍの二連）において実施した。測定は、まず流量計を振とうさせずに実施した。流動が生じなかった場合、鋼製スパチュラにより（各回、一定の強度を使用して）、流量計を、静かに、繰り返しタッピングして、試験を繰り返した。
【0193】
顆粒の粒度分布は、１ｍｍの振幅に設定したふるい振とう機を、５分間にわたり使用するふるい分け分析により、二連において決定した。使用したふるいサイズは、１ｍｍ、７１０μｍ、５００μｍ、３５５μｍ、２５０μｍ、１２５μｍ、６３μｍ及びパンであった。
【0194】
【表17】
【0195】
物理的特徴付けデータは、全てのバッチの顆粒は、良好な流動特性（カー指数及びハウスナー比の値は、いずれも低値であり、オリフィスを通る質量流は、１０ｍｍの場合であってもなお、著明であった。）を伴い、乾燥していた（すなわち、＜３．５％ｗ／ｗ）ことを示す。顆粒を、６０℃の温度において乾燥させることは、顆粒の水分含量を、４０℃において乾燥させた顆粒と比較して低減した。顆粒は、稠密（バルク密度＞０．４ｇ／ｍＬ）かつ顆粒状（材料の大部分は、ふるい分け分析時の２５０及び３５５μｍのメッシュ上において保持された）であったので、錠剤化に適した。
【0196】
８つの錠剤化製剤（Ｔ１～Ｔ５、Ｔ１Ａ、Ｔ２Ａ及びＴ５Ａと称し、９５ｇずつとする。）を、以下の方法に従い、表９に記載された量を使用して調製した：
必要とされる量の顆粒及び顆粒外賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを除く）の各々を、Ｅｒｗｅｋａ ＡＲ４０１ブレンダーのブレンド容器に分注した。混合物は、１５ＲＰＭにおいて、１５分間にわたりブレンドした。ステアリン酸マグネシウムを、ブレンド容器に添加し、混合物を、１５ＲＰＭにおいて、５分間にわたり、さらにブレンドした。
必要とされる量の顆粒及び顆粒外賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを除く）の各々を、Ｅｒｗｅｋａ ＡＲ４０１ブレンダーのブレンド容器に分注した。混合物は、１５ＲＰＭにおいて、１５分間にわたりブレンドした。ステアリン酸マグネシウムを、ブレンド容器に添加し、混合物を、１５ＲＰＭにおいて、５分間にわたり、さらにブレンドした。
【0197】
【表18】
【0198】
次いで、結果として得られる混合物を、以下の方法に従い、錠剤にプレス加工する：
Ｍａｎｅｓｔｙ Ｆ３プレスを使用して、錠剤をプレス加工した。工具を用いずに、プレスを６０ＴＰＭに設定し、次いで、直径を８．３ｍｍとし、１１ｋＮの過負荷設定とする、丸形の通常用凹面工具を用いてセットアップした。過負荷スプリングに対する目標重量を３００ｍｇとして、錠剤を作製するように、プレスをセットアップした。カムの設定は、表１０に示された設定に照らして調整した。
Ｍａｎｅｓｔｙ Ｆ３プレスを使用して、錠剤をプレス加工した。工具を用いずに、プレスを６０ＴＰＭに設定し、次いで、直径を８．３ｍｍとし、１１ｋＮの過負荷設定とする、丸形の通常用凹面工具を用いてセットアップした。過負荷スプリングに対する目標重量を３００ｍｇとして、錠剤を作製するように、プレスをセットアップした。カムの設定は、表１０に示された設定に照らして調整した。
【0199】
各錠剤製剤について、２５０錠ずつを調製した。錠剤化工程の開始時、途中及び終了時において、５つのユニットの厚さ、重量及び硬度を測定した。
【0200】
錠剤製剤Ｔ１～Ｔ５、Ｔ１Ａ、Ｔ２Ａ及びＴ５Ａについての物理的特徴付けデータを、表１０に示す。
【0201】
表１０におけるデータは、以下の標準的手順を使用して生成した：
硬度：欧州薬局方２．９．８
摩損度：欧州薬局方２．９．７
崩壊：欧州薬局方２．９．１
硬度：欧州薬局方２．９．８
摩損度：欧州薬局方２．９．７
崩壊：欧州薬局方２．９．１
【0202】
【表19】
【0203】
２５℃及び４０℃において、４週間にわたる保管の後の、錠剤製剤の物理的安定性を、表１１において、初期データ（表１０）と比較する。製剤Ｔ１、Ｔ４及びＴ５は、初期から、ほとんど変化がない、又は変化がない。
【0204】
【表20】
【0205】
剤形の内容物の均一性は、以下の標準的手順：欧州薬局方２．９．４０（「投与量単位の均一性」）を使用して決定した。結果を表１２に示す。
【0206】
【表21】
【0207】
実施例１０
錠剤製剤であるＴ１Ａ、Ｔ２Ａ及びＴ５Ａを、腸溶性コーティングのために選択した。
錠剤製剤であるＴ１Ａ、Ｔ２Ａ及びＴ５Ａを、腸溶性コーティングのために選択した。
【0208】
Ａｅｒｏｍａｔｉｃ Ｓｔｒｅａ－１ ｆｌｕｉｄ ｂｅｄ ｄｒｙｅｒを、制御された温度範囲及び１分間当たり１．２グラムの平均噴霧速度において使用して、Ｔ１Ａ錠、Ｔ２Ａ錠及びＴ５Ａ錠のコーティング及び物理的試験を実施して、適切に、コーティング５０ｍｇの最終重量増加を達成した。
【0209】
コーティング材料は、Ｐｌａｓａｃｒｙｌ ＨＴＰ２０（３３％において、可塑剤としてのクエン酸トリエチル（ＴＥＣ）と、粘着防止剤としてのモノステアリン酸グリセロールとを含有する乾燥ポリマー物質を有する。）により可塑化された、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－Ｄ５５の水性懸濁液である。成分は、Ｅｖｏｎｉｋ製である。
【0210】
コーティング製剤は、表１３に記載した量を使用して調製した。Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－Ｄ５５を、オーバーヘッドスターラーにより攪拌しながら、脱イオン水に添加した。液体を曝気しないように、注意深く攪拌しながら、Ｐｌａｓａｃｒｙｌ ＨＴＰ２０をゆっくりと添加した。混合物が均一となるまで、混合物を少なくともさらに１０分間にわたり攪拌した。懸濁液を５００μｍのメッシュに通した。
【0211】
表１４に記載したパラメータを使用する、Ａｅｒｏｍａｔｉｃ Ｓｔｒｅａ－１ ｆｌｕｉｄ ｂｅｄ ｄｒｙｅｒを使用して、Ｔ１Ａ錠、Ｔ２Ａ錠及びＴ５Ａ錠に、コーティング製剤を噴霧して、コーティング錠である、ＣＴ１Ａ、ＣＴ２Ａ及びＣＴ５Ａを作製した。
【0212】
【表22】
【0213】
【表23】
【0214】
腸溶性コーティングは、崩壊／溶出試験の２つの段階において、以下の基準（欧州薬局方２．９．１に基づく）を満たさなければならなかった：
１．ｐＨ３のクエン酸緩衝液：（ａ）２時間以内の剤形の崩壊及び（ｂ）溶出試験時に、ＡＰＩのうちの＜１０％が、２時間以内に放出されること
２．ｐＨ６のリン酸緩衝液：剤形が、１時間以内に崩壊すべきこと
１．ｐＨ３のクエン酸緩衝液：（ａ）２時間以内の剤形の崩壊及び（ｂ）溶出試験時に、ＡＰＩのうちの＜１０％が、２時間以内に放出されること
２．ｐＨ６のリン酸緩衝液：剤形が、１時間以内に崩壊すべきこと
【0215】
溶出試験は、ｐＨ３のクエン酸－リン酸緩衝液による溶出媒体を使用する、Ｄｉｓｔｅｋ溶出装置を使用して、欧州薬局方２．９．３に従い実施した。溶出は、パドル速度を５０ｒｐｍとして、３７℃において行う。試料（２ｍＬ）は、４μｍのカニューレフィルターを介して回収し、オフライン解析のために、０．２μｍのポリフッ化ビニリデン製シリンジフィルターを介して、ＵＰＬＣバイアルに加工した。ＵＰＬＣ解析は、２．５分間にわたり、ＵＶ検出及びアセトニトリル：水勾配を伴う、試料の、Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８、２．１×７５ｍｍ、１．７μｍカラムへの、１．５μＬの注入を使用して実施する。
【0216】
【表24】
【0217】
ＣＴ１Ａ
適用されたコーティング量（４８．６ｍｇ）は、目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤は、ｐＨ３試験に合格し（２時間以内に、破断が見られなかった。）、崩壊が、１９分間以内に完了したｐＨ６試験にも合格した。６つの錠剤を、ｐＨ３における溶出について調べたが、ＡＰＩの溶出は、６時間以内に検出されなかった。よって、これらの錠剤は、２時間以内の溶出が、＜１０％であるという規格に合格した。
適用されたコーティング量（４８．６ｍｇ）は、目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤は、ｐＨ３試験に合格し（２時間以内に、破断が見られなかった。）、崩壊が、１９分間以内に完了したｐＨ６試験にも合格した。６つの錠剤を、ｐＨ３における溶出について調べたが、ＡＰＩの溶出は、６時間以内に検出されなかった。よって、これらの錠剤は、２時間以内の溶出が、＜１０％であるという規格に合格した。
【0218】
ＣＴ２Ａ
適用されたコーティング量（４７．１ｍｇ）は、目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤は、ｐＨ３試験に合格した（２時間以内に、破断が見られなかった。）。しかし、６つの錠剤のうちの３つはｐＨ６試験に不合格であり（すなわち、崩壊時間＞１時間）、残りの３つの錠剤は、崩壊がＣＴ１Ａより著明に緩徐であった。ｐＨ６において、見かけ上、機能的コーティングは、２３～２４分間後において完全に崩壊したが、コアの大きな断片が試験の１時間後に残存した。あらかじめコーティングされたコアの崩壊は、全ての崩壊媒体中において極めて迅速であるので、ｐＨ６において、コーティングがコアの崩壊を緩徐化していることに留意されたい。
適用されたコーティング量（４７．１ｍｇ）は、目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤は、ｐＨ３試験に合格した（２時間以内に、破断が見られなかった。）。しかし、６つの錠剤のうちの３つはｐＨ６試験に不合格であり（すなわち、崩壊時間＞１時間）、残りの３つの錠剤は、崩壊がＣＴ１Ａより著明に緩徐であった。ｐＨ６において、見かけ上、機能的コーティングは、２３～２４分間後において完全に崩壊したが、コアの大きな断片が試験の１時間後に残存した。あらかじめコーティングされたコアの崩壊は、全ての崩壊媒体中において極めて迅速であるので、ｐＨ６において、コーティングがコアの崩壊を緩徐化していることに留意されたい。
【0219】
錠剤コアの過度に緩徐な崩壊に対する最も蓋然性の高い説明は、腸溶性ポリマーがコーティング時又は崩壊試験時にコアに浸透し、酒石酸の存在下において中和されたという説明である。その中性形態においてポリマーは不溶性であり、コアの崩壊を妨げる結合剤として作用しうる。
【0220】
ＣＴ５Ａ
適用されたコーティング量（４９．０ｍｇ）は目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤はｐＨ３試験に合格し（２時間以内に、破断が見られなかった。）、崩壊が３１～４０分間以内に完了したｐＨ６試験にも合格した。６つの錠剤のｐＨ３における溶出について調べたが、ＡＰＩの溶出は、６時間以内に検出されなかった。よって、これらの錠剤は、２時間以内の溶出が、＜１０％ＡＰＩであるという規格に合格した。
適用されたコーティング量（４９．０ｍｇ）は目標（４９．５ｍｇ）に近く、コーティングの欠損は見られなかった。これらの錠剤はｐＨ３試験に合格し（２時間以内に、破断が見られなかった。）、崩壊が３１～４０分間以内に完了したｐＨ６試験にも合格した。６つの錠剤のｐＨ３における溶出について調べたが、ＡＰＩの溶出は、６時間以内に検出されなかった。よって、これらの錠剤は、２時間以内の溶出が、＜１０％ＡＰＩであるという規格に合格した。
【0221】
実施例１１
ＴＰＧＳカプセルのコーティング
ＨＰＭＣ ６０６のエタノール／水溶液を使用して、実施例６のカプセルを保護し、その後、Ｃａｌｅｖａ ｍｉｎｉコーティング装置内において、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－５５の水性分散液によりコーティングして、５．５ｍｇ／ｃｍ２のポリマー重量増加を達成した。カプセルを、各々がカプセル１４個ずつの２つのバッチとしてコーティングした。コーティング溶液の組成を、表１６に提示する。
ＴＰＧＳカプセルのコーティング
ＨＰＭＣ ６０６のエタノール／水溶液を使用して、実施例６のカプセルを保護し、その後、Ｃａｌｅｖａ ｍｉｎｉコーティング装置内において、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０－５５の水性分散液によりコーティングして、５．５ｍｇ／ｃｍ２のポリマー重量増加を達成した。カプセルを、各々がカプセル１４個ずつの２つのバッチとしてコーティングした。コーティング溶液の組成を、表１６に提示する。
【0222】
まず、クエン酸トリエチルを水と高せん断速度において１０分間にわたり、あらかじめ混合し、次いで、Ｅｕｄｒａｇｉｔ懸濁液を溶液に添加し、Ｈｅｉｄｏｌｐｈミキサーを使用して、静かに混合した。使用の前に、混合物を、０．５ｍｍのふるいに通し、コーティング時に、連続的に攪拌した。コーティングパラメータを、表１７に提示する。
【0223】
【表25】
【0224】
【表26】
【0225】
実施例１２
顆粒製剤であるＷＧＡ’及びＷＧＡ’’を以下の方法に従い、表１８及び表１９に記載された量を使用して調製した：
一次顆粒化液は、表１８に従う成分を、混合容器（６００ｇ）に添加することにより調製した。一次顆粒化液を磁気フレアスターラー又はオーバーヘッドスターラーを使用して、均一となるまで攪拌した。
顆粒製剤であるＷＧＡ’及びＷＧＡ’’を以下の方法に従い、表１８及び表１９に記載された量を使用して調製した：
一次顆粒化液は、表１８に従う成分を、混合容器（６００ｇ）に添加することにより調製した。一次顆粒化液を磁気フレアスターラー又はオーバーヘッドスターラーを使用して、均一となるまで攪拌した。
【0226】
各サブロットについて、式Ａの化合物の形態１、Ａｖｉｃｅｌ ＰＨ１０１及びＡｃＤｉＳｏｌを、Ｍｕｌｔｉｐｒｏ高せん断ブレンダーに添加し、高速において、５分間にわたりブレンドした。高速においてブレンドし続けながら、さらに５分間にわたり、一次顆粒化液を混合物に注いだ。材料がＭｕｌｔｉｐｒｏ高せん断ブレンダーの側壁に付着したら、工程を中断し、材料を容器からこすり落としてから、混合及び流体の添加を再開した。
【0227】
一次顆粒化液の添加の終了時において、湿潤顆粒を、さらに１分間にわたり混合した。次いで、さらに５分間にわたり混合しながら、二次顆粒化液をゆっくりと添加した。
【0228】
結果として得られる湿潤顆粒を４．０ｍｍのメッシュに通した。次いで、湿潤顆粒をステンレス鋼製トレーに並べ、オーブン内で６０℃において一晩にわたり乾燥させた。次いで、乾燥させた顆粒を１ｍｍのメッシュに通し、周囲条件下において一晩にわたり静置して平衡させた。顆粒製剤であるＷＧＡ’及びＷＧＡ’’を単離した。
【0229】
【表27】
【0230】
【表28】
【0231】
ＷＧＡ’顆粒及びＷＧＡ’’顆粒を特徴付け、結果を表２０に示す。各パラメータの測定に使用された方法を下記に記載する。
【0232】
顆粒の乾燥減量は、５ｇの顆粒試料を使用し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｂａｌａｎｃｅを、１０５℃において使用して決定した。
【0233】
顆粒の密度（タップ密度及びバルク密度）は、タップ密度装置を使用して、ＵＳＰ［６１６］２０１２に従い、二連において決定した。カー指数及びハウスナー比の値は、ＵＳＰ［１１７４］２０１０に従い記録されたタップ密度及びバルク密度の数量から計算した。
【0234】
顆粒の粉体流の決定（グラム／秒）は、「オリフィス装置を通る流動」を使用して、二連（２５ｍｍ及び１０ｍｍの二連）において実施した。測定は流量計を振とうさせずに実施した。流動が生じなかった場合、鋼製スパチュラにより（各回、一定の強度を使用して）、流量計を静かに繰り返しタッピングして試験を繰り返した。
【0235】
顆粒の粒度分布は、１ｍｍの振幅に設定したふるい振とう機を５分間にわたり使用するふるい分け分析により、二連において決定した。使用したふるいサイズは、１ｍｍ、７１０μｍ、５００μｍ、３５５μｍ、２５０μｍ、１２５μｍ、６３μｍ及びパンであった。
【0236】
【表29】
【0237】
２つの錠剤化製剤（Ｔ１Ａ’及びＴ１Ａ’’と称し、１５０ｇずつとする。）を以下の方法に従い、表２１に記載された量を使用して調製した：
必要とされる量の顆粒及び顆粒外賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを除く）の各々を、Ｅｒｗｅｋａ ＡＲ４０１ブレンダーのブレンド容器に分注した。混合物は、１５ＲＰＭにおいて、１５分間にわたりブレンドした。ステアリン酸マグネシウムをブレンド容器に添加し、混合物を１５ＲＰＭにおいて５分間にわたり、さらにブレンドした。
必要とされる量の顆粒及び顆粒外賦形剤（ステアリン酸マグネシウムを除く）の各々を、Ｅｒｗｅｋａ ＡＲ４０１ブレンダーのブレンド容器に分注した。混合物は、１５ＲＰＭにおいて、１５分間にわたりブレンドした。ステアリン酸マグネシウムをブレンド容器に添加し、混合物を１５ＲＰＭにおいて５分間にわたり、さらにブレンドした。
【0238】
【表30】
【0239】
次いで、結果として得られる混合物を以下の方法に従い、錠剤にプレス加工する：
Ｍａｎｅｓｔｙ Ｆ３プレスを使用して錠剤をプレス加工した。プレスを、工具を用いずに４０ＴＰＭに設定し、次いで、直径を８．３ｍｍとし、表２２に示された過負荷設定とする、丸形の通常用凹面工具を用いてセットアップした。過負荷スプリングに対する目標重量を３００ｍｇとして、錠剤を作製するようにプレスをセットアップした。カムの設定は、表２２に示された設定に照らして調整した。
Ｍａｎｅｓｔｙ Ｆ３プレスを使用して錠剤をプレス加工した。プレスを、工具を用いずに４０ＴＰＭに設定し、次いで、直径を８．３ｍｍとし、表２２に示された過負荷設定とする、丸形の通常用凹面工具を用いてセットアップした。過負荷スプリングに対する目標重量を３００ｍｇとして、錠剤を作製するようにプレスをセットアップした。カムの設定は、表２２に示された設定に照らして調整した。
【0240】
各錠剤製剤について、１００錠ずつを調製した。錠剤化工程の開始時、途中及び終了時において、５つのユニットの厚さ、重量及び硬度を測定した。
【0241】
表２２におけるデータは、以下の標準的手順を使用して生成した：
硬度：欧州薬局方２．９．８
摩損度：欧州薬局方２．９．７
崩壊：欧州薬局方２．９．１
錠剤の乾燥減量は、５ｇの試料を使用し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｂａｌａｎｃｅを、１０５℃において使用して決定した。
硬度：欧州薬局方２．９．８
摩損度：欧州薬局方２．９．７
崩壊：欧州薬局方２．９．１
錠剤の乾燥減量は、５ｇの試料を使用し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｂａｌａｎｃｅを、１０５℃において使用して決定した。
【0242】
【表31】
【0243】
Ｔ１Ａ’錠剤は、７７±１５Ｎ（低硬度）～１６２±２０Ｎ（高硬度）の間において作製した。全ての錠剤セットは目標重量に近く、良好な相対標準偏差、許容可能な摩損度（＜０．５％）及び良好な水中崩壊時間（＜１５分間）を伴っていた。
【0244】
Ｔ１Ａ’’バッチの錠剤化時に、硬度目標の下限を満たす錠剤を達成することは可能でなく、作製された錠剤は、４０ｋＮより硬くなかった。錠剤は軟らかい見かけであった。Ｔ１Ａ’（高レベルの細粒を有する顆粒により、圧縮に成功した）と、Ｔ１Ａ’’（低レベルの細粒を伴う顆粒により、圧縮されなかった）とは、ＡｃＤｉＳｏｌを添加する時点に関してだけ異なった。
【0245】
ＩＩＩ．生物学的方法
式Ａの化合物が血漿カリクレインを阻害する能力は、以下の生物学的アッセイを使用して決定することができる：
式Ａの化合物が血漿カリクレインを阻害する能力は、以下の生物学的アッセイを使用して決定することができる：
【0246】
血漿カリクレインについてのＩＣ５０の決定
インビトロにおける血漿カリクレインの阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）を、蛍光発光基質であるＨ－ＤＰｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
インビトロにおける血漿カリクレインの阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）を、蛍光発光基質であるＨ－ＤＰｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【0247】
このアッセイにおいて調べたところ、式Ａの化合物は、３．３ｎＭのＩＣ５０（ヒトＰＫａｌ）を示した。
【0248】
式Ａの化合物はまた、類縁の酵素ＫＬＫ１に対する阻害活性についても、以下の生物学的アッセイを使用してスクリーニングした：
【0249】
ＫＬＫ１についてのＩＣ５０の決定
インビトロにおける、ＫＬＫ１の阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、蛍光発光基質であるＨ－ＤＶａｌ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
インビトロにおける、ＫＬＫ１の阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、蛍光発光基質であるＨ－ＤＶａｌ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【0250】
このアッセイにおいて調べたところ、式Ａの化合物は、＞４００００ｎＭのＩＣ５０（ヒトＫＬＫ１）を示した。
【0251】
式Ａの化合物はまた、類縁の酵素ＦＸＩａに対する阻害活性についても、以下の生物学的アッセイを使用してスクリーニングした：
ＦＸＩａについての阻害％の決定
インビトロにおけるＦＸＩａの阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＦＸＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、蛍光発光基質であるＺ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び４０μＭの被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定した。
ＦＸＩａについての阻害％の決定
インビトロにおけるＦＸＩａの阻害活性は、公表されている標準法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ－Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＦＸＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、蛍光発光基質であるＺ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＦＣ及び４０μＭの被験化合物と共に、２５℃においてインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定した。
【0252】
このアッセイにおいて調べたところ、式Ａの化合物は、４０μＭにおいて、０％の阻害％（ヒトＦＸＩａ）を示した。
【0253】
ＩＶ．薬物動態
式Ａの化合物についての薬物動態試験を実施して、雄のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口投与後の薬物動態を評価した。２匹のラットに名目量２ｍｇ／ｍＬの被験化合物の媒体中組成物５ｍＬ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）の単回経口投与を施した。投与後、血液試料を２４時間にわたり回収した。サンプリング時間は、５、１５及び３０分後、次いで、１、２、４、６、８及び１２時間後であった。回収後、血液試料を遠心分離し、ＬＣＭＳにより血漿画分を被験化合物の濃度について解析した。
式Ａの化合物についての薬物動態試験を実施して、雄のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口投与後の薬物動態を評価した。２匹のラットに名目量２ｍｇ／ｍＬの被験化合物の媒体中組成物５ｍＬ／ｋｇ（１０ｍｇ／ｋｇ）の単回経口投与を施した。投与後、血液試料を２４時間にわたり回収した。サンプリング時間は、５、１５及び３０分後、次いで、１、２、４、６、８及び１２時間後であった。回収後、血液試料を遠心分離し、ＬＣＭＳにより血漿画分を被験化合物の濃度について解析した。
【0254】
式Ａの化合物について、この試験から得られた経口曝露データを、表２３に示す。
【0255】
【表32】
【0256】
表２４：本発明の経口固体剤形についてのインビボにおける薬物動態データ
生体内試験
被験種は、カニクイザルであった。経口固体剤形は、強制経口投与管及び排気を使用する、動物の胃への直接的留置により投与した。名目量１ｍＬの採血物は抗凝固剤として３．２％クエン酸三ナトリウムを含有する採血管に回収した。血液試料は遠心分離により処理し、血漿試料を調製した。血漿試料は、解析の前に、－５０℃未満において保管した。
生体内試験
被験種は、カニクイザルであった。経口固体剤形は、強制経口投与管及び排気を使用する、動物の胃への直接的留置により投与した。名目量１ｍＬの採血物は抗凝固剤として３．２％クエン酸三ナトリウムを含有する採血管に回収した。血液試料は遠心分離により処理し、血漿試料を調製した。血漿試料は、解析の前に、－５０℃未満において保管した。
【0257】
血漿の解析は、以下の方法により実施した：
クエン酸により防腐処理された血漿からの式Ａの化合物の定量は、アセトニトリル中に４％の酢酸を使用するタンパク質沈殿により実施した。Ｂｉｏｔａｇｅ ＩＳＯＬＵＴＥ（商標登録）ＰＰＴ＋タンパク質沈殿プレートを使用して、沈殿したタンパク質を濾過した。ＬＣ－ＭＳによる式Ａの化合物の定量は、較正範囲を１～３，１６０ｎｇ／ｍＬとするＷａｔｅｒｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ ＡＰＩ測定器上において実施した。血漿濃度のデータ解析は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎにおいて、ノンコンパートメントモデルを使用して実施した。
クエン酸により防腐処理された血漿からの式Ａの化合物の定量は、アセトニトリル中に４％の酢酸を使用するタンパク質沈殿により実施した。Ｂｉｏｔａｇｅ ＩＳＯＬＵＴＥ（商標登録）ＰＰＴ＋タンパク質沈殿プレートを使用して、沈殿したタンパク質を濾過した。ＬＣ－ＭＳによる式Ａの化合物の定量は、較正範囲を１～３，１６０ｎｇ／ｍＬとするＷａｔｅｒｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ ＡＰＩ測定器上において実施した。血漿濃度のデータ解析は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎにおいて、ノンコンパートメントモデルを使用して実施した。
【0258】
【表33】
【図1a】
【図1b】
【図1c】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6a】
【図6b】
【図6c】
【図6d】
【図6e】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】