特許 7079355 ＰＳＭＡ結合性リガンド－リンカー結合体及び使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-05-24

(45)【発行日】2022-06-01

(54)【発明の名称】ＰＳＭＡ結合性リガンド－リンカー結合体及び使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 51/04 20060101AFI20220525BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220525BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20220525BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20220525BHJP

【ＦＩ】

A61K51/04 200

A61K51/04 100

A61P35/00

A61P13/08

A61K47/65

【請求項の数】 11

(21)【出願番号】P 2021019732

(22)【出願日】2021-02-10

(62)【分割の表示】P 2019179190の分割

【原出願日】2008-08-15

(65)【公開番号】P2021075561

(43)【公開日】2021-05-20

【審査請求日】2021-03-11

(31)【優先権主張番号】60/956,489

(32)【優先日】2007-08-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】61/074,358

(32)【優先日】2008-06-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】598063203

【氏名又は名称】パーデュー・リサーチ・ファウンデーション

【氏名又は名称原語表記】ＰＵＲＤＵＥ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100100158

【弁理士】

【氏名又は名称】鮫島 睦

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100156155

【弁理士】

【氏名又は名称】水原 正弘

(72)【発明者】

【氏名】フィリップ・ステュワート・ロウ

(72)【発明者】

【氏名】スミス・エー・クララトン

【審査官】高橋 樹理

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ４７／００

Ａ６１Ｋ ５１／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式：Ｂ－Ｌ－Ｄの化合物またはその塩であって、
Ｂは式：

（式中、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^２は置換されたカルボン酸化合物であり、該置換されたカルボン酸化合物はＬと共有結合する）で示されるグルタミン酸と別のアミノ酸からなる尿素化合物であり、
Ｌは１４～３１個の原子の長さのリンカーであり、二価のアミノアルキルカルボン酸と、適宜置換されたフェニルアラニンおよび適宜置換されたチロシンから選択される２つのアミノ酸を含むトリペプチドを含み、
Ｄは

【化1】

（式中、＊は化合物の残基との共有結合点を表す）
からなる群から選択されるキレート基に放射性金属同位元素が配位して含まれる、化合物またはその塩。

【請求項2】

Ｂがグルタミン酸と、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、アルギニン、セリン、オルニチン、またはスレオニンから選択されるアミノ酸からなる尿素化合物である、請求項１の化合物またはその塩。

【請求項3】

トリペプチドが、適宜置換されるフェニルアラニンを含む、請求項１または２の化合物またはその塩。

【請求項4】

トリペプチドが、置換されるチロシンを含む、請求項１～３のいずれかの化合物またはその塩。

【請求項5】

キレート基が式：

（式中、＊は化合物の残基との共有結合点を表す）
を含む、請求項１～４のいずれかの化合物またはその塩。

【請求項6】

Ｌが更に二価のカルボニルアルキルカルボニル基を含む、請求項１～５のいずれかの化合物またはその塩。

【請求項7】

Ｌが更に少なくとも１個のヘテロ原子リンカーを含む、請求項１～６のいずれかの化合物またはその塩。

【請求項8】

少なくとも１個のヘテロ原子リンカーが、窒素、酸素、または硫黄である、請求項７の化合物またはその塩。

【請求項9】

少なくとも１個のヘテロ原子リンカーが、窒素である、請求項７又は８の化合物またはその塩。

【請求項10】

請求項１～９のいずれかの化合物またはその塩、および少なくとも１個の医薬的に許容される担体、賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物。

【請求項11】

少なくとも１個の医薬的に許容される担体が水溶液である、請求項１０の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書に記載される発明は、前立腺癌のような前立腺の疾患及び関連する疾患を治療する化合物及び方法に関する。より詳細には、本明細書に記載される発明の実施態様は、ＰＳＭＡ結合性リガンドに結合している生物学的活性剤の結合体に関する。

【背景技術】

【0002】

前立腺は、骨盤内の膀胱の下部に見出される男性生殖器官の一つである。生殖の際に膣の中に導入された精子の生存に重要である栄養素及び流体を提供する精液を産生及び保存するように機能する。他の多くの組織のように、前立腺も悪性（癌性）又は良性（非癌性）腫瘍を発症する傾向がある。米国癌協会は、２００５年に２３０，０００人を超す男性が前立腺癌と診断され、３０，０００人を超す男性がその疾患により死亡していると予測した。事実、前立腺癌は、西洋社会における最も一般的な男性の癌の一つであり、米国男性において２番目に多い悪性形態である。現行の前立腺癌の治療方法には、ホルモン療法、放射線療法、外科治療、化学療法、光力学療法及び併用治療が含まれる。治療の選択は、一般に癌の病期に応じて変わる。しかし、これらの治療の多くは、患者の、特に前立腺癌と診断された５０歳を超えた患者の生活の質に影響を与える。例えば、ホルモン薬の使用は、多くの場合に骨粗鬆症及び肝損傷のような副作用を伴う。そのような副作用は、疾患状態に関与する組織に対してより選択的又は特異的であって、骨又は肝臓のような非標的組織を回避するような治療を使用すれば、緩和することができる。本明細書に記載されるように、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、そのような選択的又は特異的な治療のための標的となる。

【0003】

ＰＳＭＡは、主に前立腺癌細胞におけるその高レベルの発現によって命名されているが、前立腺癌細胞に対するその特定の機能は依然として未解決のままである。ＰＳＭＡは、腎臓、近位小腸及び唾液腺のようなヒトの体の他の臓器と比較したとき、悪性の前立腺組織において過剰に発現する。ＰＳＭＡは脳に発現するが、その発現は最小限のものであり、ＰＳＭＡのリガンドのほとんどは、極性を有しており、血液脳関門を透過することができない。ＰＳＭＡは、細胞内セグメント（アミノ酸１～１８）、膜貫通ドメイン（アミノ酸１９～４３）及び大きな細胞外ドメイン（アミノ酸４４～７５０）を含む、約１１０kDの分子量を有するＩＩ型細胞表面膜結合糖タンパク質である。細胞内セグメント及び膜貫通ドメインの機能は現在有意ではないと考えられているが、細胞外ドメインは、幾つかの異なる活性に関与している。ＰＳＭＡは、中枢神経系において役割を果たし、そこでＮ－アセチル－アスパルチルグルタミン酸（ＮＡＡＧ）を代謝して、グルタミン酸とＮ－アセチルアスパラギン酸にする。したがって、時々、Ｎ－アセチルアルファ結合酸性ジペプチダーゼ（ＮＡＡＬＡＤアーゼ）とも呼ばれる。ＰＳＭＡは、時々、ポリ－γ－グルタミン酸化葉酸からγ結合グルタミン酸を、そしてペプチド及び小型分子からα結合グルタミン酸を除去する近位小腸におけるその役割によって、葉酸ヒドロラーゼＩ（ＦＯＬＨ Ｉ）又はグルタミン酸カルボキシペプチダーゼ（ＧＣＰ ＩＩ）とも呼ばれる。

【0004】

ＰＳＭＡは、ヒトトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）と類似点もあり、それはＰＳＭＡとＴｆＲが両方ともＩＩ型糖タンパク質であるからである。より詳細には、ＰＳＭＡは、ＴｒＲ１とＴｆＲ２にそれぞれ５４％及び６０％の相同性を示す。しかし、ＴｆＲはその鎖間スルフヒドリル架橋の形成により二量体の形態でのみ存在するが、ＰＳＭＡは、二量体又は単量体のいずれの形態でも存在することができる。

【0005】

他の多くの膜結合タンパク質と異なり、ＰＳＭＡは、ビタミン受容体のような細胞表面結合受容体と同様の方法で細胞内に素早く内部移行する。ＰＳＭＡは、クラスリン被覆膜孔を介して内部移行し、続いて細胞表面に再循環することができる又はリソソームに行くことができる。ＰＳＭＡの二量体及び単量体の形態は、相互転換可能であると示唆されてきたが、交互転換の直接的な証拠は議論中である。そうであっても、二量体のＰＳＭＡのみが酵素活性を有し、単量体は有さない。

【0006】

前立腺細胞の細胞表面におけるＰＳＭＡの活性は依然として調査中であるが、ＰＳＭＡが、診断剤、画像化剤及び治療剤を含む生物学的活性剤をそのような前立腺細胞に選択的及び／又は特異的に送達することが実行可能になる標的であることが、本明細書の発明者により認識されている。

【発明の概要】

【0007】

リンカーを介して前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合することができるリガンドに結合している生物学的活性剤は、前立腺癌、並びにＰＳＭＡを発現又は過剰発現する病原性細胞集団が関与する関連疾患の画像化、診断及び／又は治療に有用でありうることが発見された。ＰＳＭＡは、ビタミン受容体のような細胞表面受容体で観察されるエンドサイトーシスと類似のプロセスにより内部移行する、細胞表面タンパク質である。それ故、所定の長さ及び／又は所定の直径及び／又はその長さに沿って予め選択された官能基を有するリンカーを含む特定の結合体を使用して、そのような疾患を治療、画像化及び／又は診断できることが発見された。

【0008】

本発明の一つの例示的な実施態様において、下記式：
Ｂ－Ｌ－Ｄ
を有する結合体が記載され、ここで、Ｂは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合する又はそれを標的化するリガンドであり、Ｌはリンカーであり、そしてＤは薬剤である。本明細書で使用されるとき、薬剤Ｄという用語は、別段の指示のない限り又は文脈にない限り、治療剤、細胞毒性剤、画像化剤、診断剤などを集合的に含む。例えば、一つの例示的な構成において、本明細書に記載される結合体は、病原性細胞集団を除去するために使用され、したがって薬剤Ｄは、治療剤、細胞毒性剤などである。別の例示的な構成において、本明細書に記載される結合体は、疾患又は疾患状態を画像化及び／又は診断するために使用され、したがって薬剤Ｄは、画像化剤、診断剤などである。他の構成も本明細書において考慮及び記載される。前述のＢ、Ｌ及びＤのそれぞれの類似体及び誘導体も本明細書において考慮及び記載され、本明細書に使用されるとき、Ｂ、Ｌ及びＤという用語は、そのような類似体及び誘導体を集合的に意味することが理解されるべきである。

【0009】

一つの例示的な実施態様において、リンカーＬは、放出型又は非放出型のリンカーであることができる。一つの態様において、リンカーＬは、少なくとも原子約７個の長さである。一つの変形態様において、リンカーＬは、少なくとも原子約１０個の長さである。一つの変形態様において、リンカーＬは、少なくとも原子約１４個の長さである。別の変形態様において、リンカーＬは、原子が約７～約３１個、約７～約２４個又は約７～約２０個の長さである。別の変形態様において、リンカーＬは、原子が約１４～約３１個、約１４～約２４個又は約１４～約２０個の長さである。

【0010】

代替的な態様において、リンカーＬは、少なくとも約１０オングストローム（Å）の長さである。一つの変形態様において、リンカーＬは、少なくとも約１５Åの長さである。別の変形態様において、リンカーＬは、少なくとも約２０Åの長さである。別の変形態様において、リンカーＬは、約１０Å～約３０Åの範囲の長さである。

【0011】

代替的な態様において、リンカーＬの長さの少なくとも一部は、結合リガンドＢに連結している末端で約５Å以下の直径である。一つの変形態様において、リンカーＬの長さの少なくとも一部は、結合リガンドＢに連結している末端で約４Å以下又は約３Å以下の直径である。約５Å以下、約４Å以下又は約３Å以下の直径要件を含む例示的な実施態様は、所定の長さのリンカーのための要件を含み、それによってリンカーの円筒状様部分を画定することが理解される。例示的には、別の変形態様において、リンカーは、少なくとも約７Åの長さ及び約５Å以下、約４Å以下又は約３Å以下の直径の円筒状部分を、結合リガンドに連結している末端に含む。

【0012】

別の実施態様において、リンカーＬは、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎなどの残基のような疎水性側鎖を有するアミノ酸を含む１つ以上のＰＳＭＡの残基と相互作用することができる、１つ以上の親水性リンカーを含む。別の実施態様において、リンカーＬは、ＶａＩ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔなどの残基のような親水性側鎖を有するアミノ酸を含む１つ以上のＰＳＭＡの残基と相互作用することができる、１つ以上の疎水性リンカーを含む。前述の実施態様及び態様が、単独で又は互いに組み合わされてリンカーＬに含まれうることが理解されるべきである。例えば、少なくとも原子約７個の長さであり、約５Å以下、約４Å以下又は約３Å以下の直径であるリンカーＬが、本明細書において考慮及び記載され、また、ＶａＩ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔなどの残基を含む１つ以上のＰＳＭＡの残基と相互作用することができる１つ以上の親水性リンカーを含むリンカーＬも、本明細書において考慮及び記載される。

【0013】

別の実施態様において、リンカーの一端は分岐しておらず、炭素、酸素、窒素及び硫黄原子の鎖を含む。一つの実施態様において、炭素、酸素、窒素及び硫黄原子の鎖は、少なくとも原子５個の長さである。一つの変形態様において、リンカー鎖は、原子が少なくとも７個又は原子が少なくとも１０個の長さである。別の実施態様において、炭素、酸素、窒素及び硫黄原子の鎖は、置換されていない。一つの変形態様において、炭素、酸素、窒素及び硫黄原子の鎖の一部は、二価フラグメントで環化されている。例えば、ジペプチドＰｈｅ－Ｐｈｅを含むリンカー（Ｌ）は、エチレンフラグメントで２個の窒素を環化したピペラジン－１，４－ジイル構造又は置換されたその変形態様を含むことができる。

【0014】

別の実施態様において、医薬組成物が本明細書に記載され、医薬組成物は、疾患及び疾患状態を治療する、疾患及び疾患状態を診断する、並びに／又はＰＳＭＡを発現若しくは過剰発現する病原性細胞集団と関連する組織及び／若しくは細胞を画像化するのに有効な量で、本明細書に記載されている結合体を含む。例示的には、そのような医薬組成物は、１つ以上の担体、希釈剤及び／又は賦形剤も含む。

【0015】

別の実施態様において、疾患及び疾患状態を治療する、疾患及び疾患状態を診断する、並びに／又はＰＳＭＡを発現若しくは過剰発現する病原性細胞集団と関連する組織及び／若しくは細胞を画像化する方法が本明細書に記載される。そのような方法は、本明細書に記載されている結合体及び／又は本明細書に記載されている結合体を含有する医薬組成物を、疾患及び疾患状態を治療する、疾患及び疾患状態を診断する、並びに／又はＰＳＭＡを発現若しくは過剰発現する病原性細胞集団と関連する組織及び／若しくは細胞を画像化するのに有効な量で投与する工程を含む。

【0016】

＜関連出願の相互参照＞
本出願は、米国仮出願第６０／９５６，４８９号（２００７年８月１７日出願）及び米国仮出願第６１／０７４，３５８号（２００８年６月２０日出願）の優先権を請求する。なおこの開示は全て参照により本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】過剰ＰＭＰＡの（▲）存在下又は（■）不在下でのＳＫ２８－^99mＴｃ（ Ｋ_d＝１８．１２nM）の濃度に対する細胞結合放射能である。

【図1B】ＬＮＣａＰ細胞及びＳＫ３３（原子１４個のリンカー）を使用したインビトロ結合研究である。過剰ＰＭＰＡの（▲）存在下又は（■）不在下でのＤＵＰＡ－^99mＴｃの増加する濃度を含有するＬＮＣａＰ細胞である。

【図2】（■）４℃及び（▲）３７℃でのＳＫ２８－^99mＴｃの濃度に対する細胞結合放射能である。

【図3A】ＤＵＰＡ－リンカー－^99mＴｃ画像化剤の濃度に対する細胞結合放射能のプロットである：（■）原子０個のリンカー（Ｋ_d＝１７１nM）；（▲）原子７個のリンカー（Ｋ_d＝６８nM）；（▼）原子１４個のリンカー（Ｋ_d＝１５nM）；（◆）原子１６個のリンカー（Ｋ_d＝４０nM）。

【図3B】ＬＮＣａＰ細胞に結合するＤＵＰＡ－リンカー－^99mＴｃ化合物のＫ_D値である。

【図4】ＬＮＣａＰ腫瘍の腫瘍体積に対する注射後の日数のプロットである：（ａ）２千５百万＋マトリゲル；（ｂ）２千５百万＋ＨＣマトリゲル；（ｃ）５百万＋マトリゲル；（ｄ）５百万＋ＨＣマトリゲル。

【図5A】ＬＮＣａＰ腫瘍（マウス２７匹）及び（ｂ）ＫＢ細胞（マウス５匹）及びＡ５４９細胞（マウス５匹）の腫瘍体積に対する注射後の日数のプロットである。

【図5B】ＫＢ細胞（マウス５匹）及びＡ５４９細胞（マウス５匹）の腫瘍体積に対する注射後の日数のプロットである。

【図6A】１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃ（原子１４個のリンカー）で処置した、ＬＮＣａＰ腫瘍を予め注射したマウス（セット１）であり、左側の画像は、白色光画像を示し、この画像は放射線画像と白色光画像の重ね合わせ示す。それぞれのパネルでは、右側のマウスを５０mg/kgのＰＭＰＡで処理し（ＰＳＭＡ結合をブロックするため）、左側のマウスをＰＭＰＡの添加なしで処置した。

【図6B】１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃ（原子１４個のリンカー）で処置した、ＬＮＣａＰ腫瘍を予め注射したマウス（セット２）であり、左側の画像は、白色光画像を示し、この画像は放射線画像と白色光画像の重ね合わせ示す。それぞれのパネルでは、右側のマウスを５０mg/kgのＰＭＰＡで処理し（ＰＳＭＡ結合をブロックするため）、左側のマウスをＰＭＰＡの添加なしで処置した。

【図6C】１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃ（原子１４個のリンカー）で処置した、ＬＮＣａＰ腫瘍を予め注射したマウス（セット３）であり、左側の画像は、白色光画像を示し、この画像は放射線画像と白色光画像の重ね合わせ示す。それぞれのパネルでは、右側のマウスを５０mg/kgのＰＭＰＡで処理し（ＰＳＭＡ結合をブロックするため）、左側のマウスをＰＭＰＡの添加なしで処置した。

【図6D】１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃを皮下注射（腹腔内を介して投与）した４時間後にKodak画像装置を使用して画像化した、ＬＮＣａＰ腫瘍についての単一マウス研究を示しており、左側の画像に腎臓を遮蔽した放射線画像と遮蔽なしの白色光画像との重ね合わせ、右側の画像に腎臓を遮蔽した放射線画像と遮蔽なしのＸ線画像との重ね合わせを示す。

【図7A】ＳＫ６０－^99mＴｃ（原子０個のリンカー）を使用して処置した、ＬＮＣａＰ腫瘍を予め注射したマウスである。左側の画像は、白色光画像を示し、中央の画像は、放射線画像と白色光画像との重ね合わせを示し、右側の画像は、放射線画像とマウスの腎臓を遮蔽した白色光画像との重ね合わせを示す。

【図7B】ＳＫ２８－^99mＴｃ（原子１４個のリンカー）を使用して処置した、ＫＢ細胞を予め注射したマウスである。左側の画像は、白色光画像を示し、中央の画像は、放射線画像と白色光画像との重ね合わせを示し、右側の画像は、放射線画像とマウスの腎臓を遮蔽した白色光画像との重ね合わせを示す。

【図7C】ＳＫ２８－^99mＴｃ（原子１４個のリンカー）を使用して処置した、Ａ５４９細胞を予め注射したマウスである。左側の画像は、白色光画像を示し、中央の画像は、放射線画像と白色光画像との重ね合わせを示し、右側の画像は、放射線画像とマウスの腎臓を遮蔽した白色光画像との重ね合わせを示す。

【図7D】１５０μCiのＤＵＰＡ－^99mＴｃの注射の４時間後に撮影した、ｎｕ／ｎｕマウスにおける固形腫瘍異種移植片の全身画像である。１００倍モル過剰ＰＭＰＡの不在下（ａ、ｃ）又は存在下（ｂ、ｄ）でＤＵＰＡ－^99mＴｃにより処置された、ＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウスの全身の放射線画像と白色光画像の重ね合わせである。ＤＵＰＡ－^99mＴｃで同様に処置された、（ｅ）Ａ５４９腫瘍又は（ｆ）ＫＢ腫瘍を有するマウスの放射線画像と白色光画像の重ね合わせである。

【図8A】雄ヌードマウスの体幹に移植された腫瘍の生体内分布を、ＰＭＰＡ（競合物質）あり又はなしのＳＫ２８－^99mＴｃの組織に対する直接カウントしたcpmとして測定したデータであって、ＬＮＣａＰ腫瘍のＰＭＰＡ（ａ）あり、（ｂ）なし、（ｃ）Ａ５４９腫瘍及び（ｄ）ＫＢ腫瘍について示す。

【図8B】雄ヌードマウスの体幹に移植された腫瘍の生体内分布のデータであって、ＬＮＣａＰ腫瘍について、ＰＭＰＡ（競合物質）（ｂ）あり又は（ａ）なしのＳＫ２８－^99mＴｃの腫瘍及び腎臓のみについて示す。

【図8C】ＬＮＣａＰ、Ａ５４９又はＫＢ腫瘍を有するｎｕ／ｎｕマウスにおけるＤＵＰＡ－^99mＴｃの生体内分布の研究である。

【図9A】生理的食塩水単独、１．１μmol/kg、２．３μmol/kg、４．５μmol/kg及び９μmol/kgのＳＫ７１の単回用量を投与した後の体重変化率を示す急性ＭＴＤ（単回用量）である。

【図9B】生理的食塩水単独、２μmol/kg及び４μmol/kgを隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与した後の体重の変化率を示す慢性ＭＴＤである。

【図10A】１μmol/kgの結合体ＳＫ７１を隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与して処置した動物の腫瘍体積を示す効能研究である。

【図10B】生理的食塩水単独を隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与して処置した動物の腫瘍体積を示す効能研究である（対照群）。

【図10C】過剰量のＰＳＭＡ及び１μmol/kgの結合体ＳＫ７１を隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与して処置した動物の腫瘍体積を示す効能研究である（競合）。

【図11】効能研究である（１μmol/kgを１日おきに１０日間、すなわち５用量）。

【図12A】ＳＫ７１による処置後のＬＮＣａＰ細胞への〔³Ｈ〕－チミジンの取り込みである（ＩＣ₅₀ 約２nM）。

【図12B】ＳＫ７７による処置後のＬＮＣａＰ細胞への〔³Ｈ〕－チミジンの取り込みである（ＩＣ₅₀ 約３nM）。

【図12C】ＳＫ３７による処置後のＬＮＣａＰ細胞への〔³Ｈ〕－チミジンの取り込みである（ＩＣ₅₀ 約３３nM）。

【図12D】ＳＫ４５による処置後のＬＮＣａＰ細胞への〔³Ｈ〕－チミジンの取り込みである（ＩＣ₅₀ 約２９nM）。

【図13A】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける腫瘍体積に対するＳＫ７１（１．５μmol/kg）の処置の効果である。（■）処置マウス、（●）未処置マウス、（▲）１００倍モル過剰のＰＭＰＡが予め注射された処置マウス。

【図13B】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける体重変化率に対するＳＫ７１（１．５μmol/kg）の処置の効果である。（■）処置マウス、（●）未処置マウス、（▲）１００倍モル過剰のＰＭＰＡが予め注射された処置マウス。

【図13C】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける腫瘍体積に対するＳＫ７１（２．０μmol/kg）の処置の効果である。（■）処置マウス、（●）未処置マウス、（▼）３０倍モル過剰のＰＭＰＡが予め注射された処置マウス。

【図13D】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける体重変化率に対するＳＫ７１（２．０μmol/kg）の処置の効果である。（■）処置マウス、（●）未処置マウス、（▲）３０倍モル過剰のＰＭＰＡが予め注射された処置マウス。

【図14A】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける腫瘍体積に対するＳＫ７７（２．０μmol/kg）の処置の効果である。（■）未処置マウス、（▼）処置マウス。

【図14B】ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞で予め処置されたｎｕ／ｎｕマウスにおける体重変化率に対するＳＫ７７（２．０μmol/kg）の処置の効果である。（■）未処置マウス、（▼）処置マウス。

【図15A】エネルギー最小化コンピューターモデルによるＭＵＰＡ ９９ｍｃＴｃ画像化剤結合体（原子９個のリンカー）である。

【図15B】エネルギー最小化コンピューターモデルによるＭＵＰＡ ９９ｍｃＴｃ画像化剤結合体（シンＳＫ３３、原子１４個のリンカー）である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

薬剤送達結合体が本明細書において記載され、そこではＰＳＭＡ結合性リガンドが、薬剤、治療剤、診断剤又は画像化剤に結合している放出型又は非放出型リンカーに結合している。

【0019】

例示的には、本明細書に記載されている二価リンカーは、以下の式：
Ｂ－Ｌ－ＴＡ
Ｂ－Ｌ－ＩＡ
Ｂ－Ｌ－ＤＡ
〔式中、Ｂは、ＰＳＭＡ結合性部分であってその類似体又は誘導体を含み、Ｌは、リンカーであり、ＴＡは、治療剤であってその類似体又は誘導体を含み、ＩＡは、画像化剤であってその類似体又は誘導体を含み、そしてＤＡは、診断剤であってその類似体又は誘導体を含む〕で示されるＰＳＭＡ結合性薬剤結合体、ＰＳＭＡ結合性画像化剤結合体及びＰＳＭＡ結合性診断剤結合体を調製するのに使用されるリンカーに含まれていてもよい。リンカーＬは、本明細書に記載されている二価リンカーを含む複数の二価リンカーを含むことができる。本明細書に使用されるとき、ＴＡは、治療剤及びその類似体と誘導体を集合的に意味し、ＩＡは、画像化剤及びその類似体と誘導体を集合的に意味し、そしてＤＡは、診断剤及びその類似体と誘導体を集合的に意味することも、理解されるべきである。

【0020】

リンカーは、１つ以上のスペーサーリンカー、場合により追加の放出型リンカーも含むことができる。スペーサー及び放出型リンカーは、任意の順番又は組み合わせで互いに結合していることができる。同様に、ＰＳＭＡ結合性リガンドは、スペーサーリンカー又は放出型リンカーに結合することができる。同様に、薬剤、治療剤、診断剤又は画像化剤は、スペーサーリンカー又は放出型リンカーに結合することができる。結合体のこれらの構成要素は、それぞれ、標的リガンド、薬剤、治療剤、診断剤、画像化剤、放出型リンカー又はスペーサーリンカーに既存の又は追加されたヘテロ原子を介して連結することができる。例示的なヘテロ原子には、窒素、酸素、硫黄、並びに式：－（ＮＨＲ¹ＮＨＲ²）－、－ＳＯ－、－（ＳＯ₂）－及び－Ｎ（Ｒ³）Ｏ－が挙げられ、ここでＲ¹、Ｒ²及びＲ³は、互いに独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルなどから選択され、これらはそれぞれ場合により置換されていることができる。

【0021】

一つの例示的な実施態様において、所定の寸法の長さ及び直径を有するリンカーを含む化合物が、本明細書に記載される。一つの態様において、１つ以上の最小長さ要件又は所定の範囲内に入る長さ要件を満たすリンカーが、本明細書に記載される。別の態様において、最小長さ要件を満たすことは、リンカーの拡張立体配座のコンピューターモデリングにより決定されることが理解されうる。別の態様において、最小長さ要件を満たすことは、結合リガンド（Ｂ）を薬剤（Ｄ）と連結する原子の主鎖を形成する、特定の数の原子（置換の有無を問わず）を有することによって決定されることが、理解されるべきである。別の実施態様において、原子の主鎖は、別の二価フラグメントにより環化されている。別の態様において、１つ以上の最大又は最小直径要件を満たすリンカーが、本明細書に記載される。別の態様において、最大又は最小直径要件を満たすことは、空間充填モデル、ＣＰＫモデルなどの立体配置として作製したリンカーの多様な立体配座のコンピューターモデリングにより決定されることが、理解される。別の態様において、最大又は最小直径要件を満たすことは、リンカーの１つ以上の選択された部分、例えば、結合リガンド（Ｂ）に近位のリンカー部分又は薬剤（Ｄ）から遠位のリンカー部分などに適用できることが理解される。別の態様において、ＰＳＭＡの漏斗部分に見出される１つ以上のＡｒｇ若しくはＬｙｓ側鎖の窒素及び／又はＡｓｐ若しくはＧｌｕ側鎖の酸素と正の相互作用をしうる１つ以上の極性基を含むリンカーのような、１つ以上の化学組成要件を満たすリンカーが、本明細書に記載される。一つ態様において、ＰＳＭＡの漏斗部分に見出される１つ以上のＴｙｒ又はＰｈｅ側鎖炭素と正の相互作用をしうる１つ以上の非極性基を含むリンカーのような、１つ以上の化学組成要件を満たすリンカーが、本明細書に記載される。

【0022】

一つの実施態様において、リンカーの原子長さは、結合若しくは標的リガンドＢ、又はその類似体若しくは誘導体と、薬剤Ｄ、又はその類似体若しくは誘導体とを隔てている原子の数によって定義される。したがって、結合リガンド又はその類似体若しくは誘導体が薬剤Ｄ又はその類似体若しくは誘導体に直接結合している立体配置では、結合は本明細書において「原子０個の」リンカーとも呼ばれる。そのような原子０個のリンカーは、Ｂ及びＤが、Ｂ及びＤそれぞれの結合点から水素原子を除去することにより直接結合している立体配置を含むことが理解される。そのような原子０個のリンカーは、Ｂ及びＤが、Ｂ又はＤの一方から水素原子を除去し、Ｂ又はＤの他方からＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂などのようなヘテロ原子官能基を除去することにより、重複ヘテロ原子を介して結合している立体配置を含むことも理解される。そのような原子０個のリンカーは、Ｂ及びＤが、Ｂ及びＤそれぞれの結合点から２個の水素原子を除去することにより形成されうる二重結合を介して結合しているか、又はＢ及びＤが、Ｂ若しくはＤそれぞれから、２個の水素原子か、１個の水素原子及びＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂などのような１個のヘテロ原子官能基か、若しくは２個のヘテロ原子官能基を除去することにより、１つ以上の重複ヘテロ原子を介して結合している立体配置を含むことも理解される。加えて、Ｂ及びＤは、Ｂ又はＤの一方又は両方からＯ、Ｓ、ＮＨなどのような、二重結合ヘテロ原子官能基を除去することにより形成される二重結合を介して結合することができる。そのようなヘテロ原子官能基が、飽和炭素原子、不飽和炭素原子（カルボニル基を含む）及び他のヘテロ原子に結合しているものを含むことも理解されるべきである。同様に、原子０個を超えるリンカーの長さが同様な方法
により定義される。

【0023】

したがって、別の例示的な実施態様において、少なくとも原子７個の鎖長を有するリンカー（Ｌ）が記載される。一つの変形態様において、少なくとも原子１４個の鎖長を有するリンカー（Ｌ）が記載される。別の変形態様において、原子約７個から約２０個の範囲の鎖長を有するリンカー（Ｌ）が記載される。別の変形態様において、原子約１４個から約２４個の範囲の鎖長を有するリンカー（Ｌ）が記載される。

【0024】

別の実施態様において、リンカー（Ｌ）の長さは、リンカーの拡張立体配座の長さを測定することにより定義される。そのような拡張立体配座は、PC Model 7（MMX）のような当該技術で認められたコンピューターモデリングプログラムにより測定することができる。したがって、別の例示的な実施態様において、少なくとも１５Å、少なくとも２０Å又は少なくとも２５Åの鎖長を有するリンカーが記載される。

【0025】

別の実施態様において、それぞれ場合により置換されていることができる、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキルなどの基のような少なくとも１つの疎水性側鎖基を有するリンカーが記載される。一つの態様において、疎水性基は、１つ以上のＰｈｅ又はＴｙｒ基（その置換された変形態様、並びにその類似体及び誘導体を含む）をリンカー鎖に組み込むことによってリンカーに含まれる。そのようなＰｈｅ及び／又はＴｙｒ側鎖基が、ＰＳＭＡの漏斗において見出されるＴｙｒ及びＰｈｅ残基と正のパイ－パイ（π－π）相互作用を形成しうることが理解される。加えて、Ｐｈｅ及びＴｙｒに見出されるアリールアルキル基のような大きな側鎖分岐の存在がリンカーに一定レベルの立体配座剛性をもたらすことができ、したがって自由度を制限し、巻き付きを低減し、リンカーの拡張立体配座を促進することが理解される。理論に束縛されることなく、そのようなエントロピーの制限は、本明細書に記載されている結合した結合体の全体的な結合エネルギーを増加することができる。加えて、本明細書に記載されているＰｈｅ及びＴｙｒのような立体障害側鎖により提供されうる剛性の増加は、リガンドと画像化剤との巻き付き及び相互作用を低減又は防止できることが理解される。例えば、代表的な原子９個及び原子１４個のリンカー（例えば、図１５Ａ及び１５Ｂを参照すること）のエネルギー最小化計算は、リガンドと画像化剤との間に分子内相互作用がないことを示す。更に、側鎖の２つのＰｈｅ側鎖の存在は、アミノヘキサン酸含有結合体（図１５Ａ）よりもシンＳＫ３３（図１５Ｂ）においてより拡張した立体配座を促進すると思われる。

【0026】

ＰＳＭＡの触媒部位又は活性部位に至る漏斗状のトンネルが、ＰＳＭＡ結合性リガンドと治療、診断及び画像化剤との結合体のリンカー部分に、ＰＳＭＡとこれらの結合体との相互作用に肯定的及び否定的な影響を与える、長さ、形状及び／又は化学組成要件を課すことが、本明細書において発見された。本明細書に記載されているものは、リンカーに対するそのような長さ、形状及び／又は化学組成要件を含むこれらの結合体の例示的実施態様である。そのような長さ、形状及び／又は化学組成要件を、分子モデリングを使用して評価した。例えば、（ｓ）－２－（４－ヨードベンゼンシルホスホノメチル）－ペンタン二酸〔２－ＰＭＰＡ誘導体〕ＰＤＢ ＩＤコード２Ｃ６ＰとのＰＳＭＡ複合体の空間充填モデル及び表面モデルは、PROTEIN EXPLORERを使用して生成した。PROTEIN EXPLORERモデルは、２０Åの深さの漏斗を確認し、また、好ましい構造特性を有するリンカーを定義するのに使用できる直径特徴を、漏斗に沿って多様な位置で示した。加えて、このモデルは、ＰＳＭＡの活性部位に近接して、対応する官能基がリンカーに含まれる場合に追加的な結合相互作用をもたらしうる、多数の疎水性残基が存在することを示した。最後に、このモデルは、対応する官能基がリンカーに含まれる場合に追加的な結合相互作用をもたらしうる、３つの疎水性ポケットが存在することを示した。

【0027】

別の例示的な実施態様において、次の、ＭＵＰＡと、原子９個のリンカーにより連結しているトリペプチド^99mＴｃとの結合体（図１５Ａに示されている）及び分岐状で原子１４個のリンカーを含むシンＳＫ３３との結合体（図１５Ｂに示されている）の分子モデルを作製した。モデルは、エネルギー最小化したPC Model 7（MMX）を使用し、次の結合長さパラメーター：Ｃ－Ｃ（ｓｐ³－ｓｐ³）＝１．５３Å、Ｃ－Ｃ（ｓｐ³－ｓｐ²）＝１．５１Å、Ｃ－Ｎ（ｓｐ³－Ｎ）＝１．４７Å、Ｃ－Ｎ（ｓｐ²－Ｎ）＝１．３８Åを使用して作製した。そのようなモデルを使用して、結合リガンド（Ｂ）と薬剤（Ｄ）とを連結するリンカーの長さを計算することができる。加えて、そのようなモデルを改変して、拡張立体配座を作製することができ、続いて、結合リガンド（Ｂ）と薬剤（Ｄ）とを連結するリンカーの長さを計算するために使用することができる。

【0028】

最初のヒトＰＳＭＡ遺伝子は、ＬＮＣａＰ細胞からクローン化され、染色体１１ｐ１１－１２に位置すると報告されている。加えて、ＰＳＭＡ様遺伝子が座位１１ｑ１４．３に位置する。ＰＳＭＡの結晶構造が異なる２つのグループにより異なる分解能で報告されており、それぞれ活性部位が２個の亜鉛原子を含有することを示し、ＰＳＭＡが亜鉛メタロプロテアーゼとも考えられることを確認している。Davis et al, PNAS, 102:5981-86, (2005)は、低い分解能（３．５Å）の結晶構造を報告し、一方、Mesters et al, The EMBO Journal, 1-10 (2006)は、より高い分解能（２～２．２Å）の結晶構造を報告した（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）。この結晶構造は、ＰＳＭＡが、プロテアーゼドメイン、アピカルドメイン、ヘリカルドメイン及びＣＰＧ２二量体化ドメインを含有するホモ二量体であることを示す。ＰＳＭＡのプロテアーゼドメインは、二核亜鉛部位、触媒残基及び３つのアルギニン残基を含む基質結合領域（基質結合アルギニンパッチとも呼ばれる）を含有する。結晶構造において、活性部位の２つの亜鉛イオンは、それぞれリン酸の酸素に連結しているか又は共結晶構造ではインヒビターＧＰＩ １８４３のホスフィン酸部分に連結している。細胞外ドメインの高分解能結晶構造において、ＰＳＭＡは、強力なインヒビター、弱いインヒビターの両方及びグルタミン酸とそれぞれ２．０、２．４及び２．２Åで共結晶化した。高分解能結晶構造は、ＰＳＭＡの触媒部位又は活性部位に至る２０Åの深さの漏斗状トンネルを示す。漏斗は、多数のＡｒｇ及びＬｙｓ残基、Ａｓｐ及びＧｌｕ残基、Ｔｙｒ及びＰｈｅ残基の側鎖で覆われている。

【0029】

別の実施態様において、リンカー（Ｌ）は、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ及びＰから選択される原子の鎖である。リンカーは、約７～約１００個の範囲のような、多種多様な長さを有することができる。リンカーを形成するのに使用される原子を、例えばアルキレン基を形成する炭素原子の鎖、ポリオキシアルキレン基を形成する炭素及び酸素原子の鎖、ポリアミンを形成する炭素及び窒素原子の鎖などのような、化学的に関連する任意の方法によって組み合わせることができる。加えて、鎖における結合連結原子は、例えばアルカン、アルケン、アルキン、シクロアルカン、アリーレン、イミドなどがリンカーに含まれる二価ラジカルでありうるように、飽和でも不飽和でもよいことが理解されるべきである。加えて、リンカーを形成する原子は、また、互いに環化して、リンカーにおいて二価環状ラジカルを形成しうることが理解されるべきである。本明細書に記載されているそれぞれの前述及び他のリンカーにおいて、リンカーを形成する鎖は、多種多様な基により置換されていることができる。

【0030】

別の実施態様において、少なくとも１つの放出型リンカーを含むリンカー（Ｌ）が記載される。一つの変形態様において、少なくとも２つの放出型リンカーを含むリンカー（Ｌ）が記載される。別の変形態様において、少なくとも１つの自壊的リンカーを含むリンカー（Ｌ）が記載される。別の変形態様において、ジスルフィドではない少なくとも１つの放出型リンカーを含むリンカー（Ｌ）が記載される。別の実施態様において、放出型リンカーを含まないリンカー（Ｌ）が記載される。

【0031】

送達される薬剤が結合リガンド－リンカー結合体から有利に遊離され、遊離薬剤が、本明細書に記載されている結合体によりもたらされる標的化なしに投与されたときのように標的に対して同じ又はほぼ同じ効果を有する場合に、放出型リンカーを使用できることが理解される。別の実施態様において、リンカーＬは、非放出型リンカーを含む。非放出型リンカーを、薬剤が、画像化、診断において結合リガンド－リンカー結合体により有利に保持される場合に使用できることが理解され、その結合体の使用は本明細書に記載されている。放出型リンカー又は非放出型リンカーの選択は、本明細書に記載されている発明を制限することなく、それぞれの結合体の用途又は立体配置と関係なく実行できることが理解されるべきである。本明細書に記載されているリンカーＬは、多様な原子、原子の鎖、官能基及び官能基の組み合わせを含むことが更に理解されるべきである。適切であれば、本開示において、リンカーＬを、スペーサーリンカー、放出型リンカー及びヘテロ原子の存在により参照することができる。しかし、そのような選択肢は、本明細書に記載されているリンカーＬの定義を制限するものとして考慮されるべきではない。

【0032】

スペーサーリンカー及び／又は放出型リンカー（すなわち、切断されうるリンカー）を含むリンカー（Ｌ）は、任意の生体適合性リンカーであることができる。放出型又は切断されうるリンカーは、例えば、細胞に存在する還元若しくは酸化条件下で切断に感受性のあるリンカー、酸不安定性若しくは塩基不安定性リンカーでありうるｐＨ感受性リンカー、又は酵素不安定性リンカーのような生化学若しくは代謝過程により切断されうるリンカーであることができる。一つの実施態様において、スペーサー及び／又は放出型リンカーは、約１～約３０個、又は約２～約２０個の原子を含む。低分子量リンカー（すなわち、約３０～約３００のおおよその分子量を有するもの）も記載される。そのようなリンカーの前駆体は、求核若しくは求電子官能基のいずれか又はその両方を、中間体種の合成におけるその使用を促進するため、場合により、容易に切断されうる保護基による保護形態で有するように選択することができる。

【0033】

本明細書で使用されるとき、用語「放出型リンカー」は、生理学的条件下で分断されうる少なくとも１つの結合（例えば、ｐＨ不安定性、酸不安定性、酸化不安定性又は酵素不安定性の結合）を含むリンカーを意味する。切断されうる結合は、切断されうるリンカーの内部及び／又は切断されうるリンカーの一端若しくは両端に存在することができる。結合分断をもたらすような生理学的条件には、例えば生理学的ｐＨで生じる標準的化学加水分解反応又は細胞基質のｐＨよりも低いｐＨを有するエンドソームのような細胞オルガネラへの区画化の結果によるものが含まれることが、理解されるべきである。例示的には、本明細書に記載されている二価リンカーは、グルタチオン仲介機構の作用のような、他の生理学的又は代謝的条件下で切断されうる。切断されうる結合の不安定性は、そのような結合分断を補助する又は促進することができる官能基又はフラグメントを二価リンカーＬに含めることによって調整できることが理解され、これは隣接基補助とも呼ばれる。切断されうる結合の不安定性は、例えば、切断されうるジスルフィド結合に隣接してアルファ分岐を含むこと、加水分解されうるケイ素酸素結合を有する部分のケイ素の置換基の疎水性を増加すること、加水分解しうるケタール又はアセタールの一部を形成するアルコキシ基を同族体化することなどのような、切断されうる結合又はその近傍における置換変化により調整することもできる。加えて、放出型リンカーの結合分断後にＰＳＭＡ結合性薬剤リンカー結合体の追加的な断片化を補助する又は促進することができる追加の官能基又はフラグメントを、二価リンカーＬに含めうることが理解される。

【0034】

別の実施態様において、リンカーは、特定の長さ、直径及び／又は官能基の要件を有し、本明細書に記載されているリンカーを一緒になって形成する、１つ以上のスペーサーリンカー及び／又は放出型リンカーを形成するラジカルを含む。

【0035】

本明細書に記載されているリンカーの別の例示的な実施態様には、ベータ脱離を伴う化学的機構により本明細書に記載されている条件下で切断する放出型リンカーが含まれる。一つの態様において、そのような放出型リンカーには、ベータ－チオ、ベータ－ヒドロキシ及びベータ－アミノ置換カルボン酸、並びに、エステル類、アミド類、炭酸塩類、カルバメート類及び尿素化合物のようなそれらの誘導体が含まれる。別の態様において、そのような放出型リンカーには、２－及び４－チオアリールエステル類、カルバメート類及び炭酸塩類が含まれる。

【0036】

放出型リンカーを、これらが含有している、例えば、例示的には本明細書に記載されているジスルフィド基、ケタール基などによって参照できることも理解されるべきである。したがって、切断されうる結合は、２つの隣接する原子を放出型リンカー内で連結してもよいし、及び／或いは、他のリンカーを、又は本明細書に記載されている結合リガンドＢ又は治療、診断若しくは画像化剤Ｄを、放出型リンカーのどちらか又は両方の末端で連結してもよいことが、理解される。切断されうる結合が２つの隣接する原子を放出型リンカー内で連結する場合、結合の分断の後、放出型リンカーは、２つ以上のフラグメントに分断される。あるいは、切断されうる結合が、放出型リンカーと、追加のヘテロ原子、スペーサーリンカー、別の放出型リンカー、薬剤Ｄ又はその類似体若しくは誘導体、又は結合リガンドＢ又はその類似体若しくは誘導体のような別の部分との間にある場合、結合の分断の後、放出型リンカーは、他の部分から分離される。

【0037】

別の実施態様において、放出型リンカー及びスペーサーリンカーを、上記に記載したように、二価リンカーの結合の切断の後、放出された官能基が追加の結合の分断又は切断を隣接基補助するように配置することができる。そのような二価リンカー又はその一部の例示的な実施態様には、下記の式：

【化1】

〔式中、Ｘは、窒素、酸素又は硫黄のようなヘテロ原子であり、ｎは、０、１、２及び３から選択される整数であり、Ｒは、水素、又は、正電荷を誘導的に又はアルコキシのようなアリール環の共鳴により安定化することができる置換基を含む、置換基であり、そして符号（^*）は、追加のスペーサー若しくは放出型リンカー又は二価リンカーを形成するヘテロ原子の結合点、あるいは薬剤又はその類似体若しくは誘導体、又はビタミン又はその類似体若しくは誘導体の結合点を示す〕を有する化合物が含まれる。ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロなどが含まれるが、これらに限定されない他の置換基が、アリール環、ベンジル炭素、アルカン酸又はメチレン架橋に存在できることが、理解される。補助切断は、ベンジリニウム中間体、ベンジン中間体、ラクトン環化、オキソニウム中間体、ベータ脱離などを伴う機構を含むことができる。放出型リンカーの切断の後の断片化に加えて、放出型リンカーの最初の切断を隣接基補助機構により促進できることが、更に理解される。

【0038】

この実施態様において、環化されうるヒドロキシアルカン酸は、例えばオキソニウムイオンによりメチレン架橋の切断を促進して、結合切断を促進するか又は放出型リンカーの結合切断の後に続いて断片化を促進する。あるいは、メチレン架橋の酸触媒オキソニウムイオン補助切断は、この例示的な二価リンカー又はそのフラグメントの断片化カスケードを開始することができる。あるいは、カルバメートの酸触媒加水分解は、環化しうるヒドロキシアルカン酸のベータ脱離を促進して、例えばオキソニウムイオンによるメチレン架橋の切断を促進することができる。本明細書に記載されている代謝的、生理学的又は細胞条件下での結合分断又は切断の他の化学的機構は、そのような断片化のカスケードを開始できることが理解される。本明細書に記載されている代謝的、生理学的又は細胞条件下での結合分断又は切断の他の化学的機構は、そのような断片化のカスケードを開始できることが理解される。

【0039】

本明細書に記載されている二価リンカーの切断の例示的な機構には、以下の１，４及び１，６断片化機構が含まれ：

【化2】

ここで、Ｘは、外来性又は内在性求核剤、グルタチオン又は生体内還元剤などであり、そしてＺ又はＺ′のいずれかは、ＰＳＭＡ結合性リガンド又は薬剤、治療剤、診断剤若しくは画像化剤であるか、或いはＺ又はＺ′のいずれかは、二価リンカーの他の部分を介して連結しているＰＳＭＡ結合性リガンド又は薬剤、治療剤、診断剤若しくは画像化剤である。上記の断片化機構は協調的機構として描かれているが、任意の数の別個の工程が生じて、二価リンカーの最終的な断片化を実施し、示されている最終生成物にできることが、理解されるべきである。例えば、結合切断は、上記の例に例示されているベータ硫黄又はジスルフィドのいずれかのアリール基により提供される安定化によって隣接基補助されうる、カルバメート部分の酸触媒脱離によっても生じうることが理解される。この実施態様のこれらの変形態様において、放出型リンカーは、カルバメート部分である。あるいは、断片化は、ジスルフィド基への求核攻撃により開始され、切断を引き起こしてチオレートを形成することができる。チオレートは、炭酸又はカルバミン酸部分を分子間で置換して、対応するチアシクロプロパンを形成することができる。ベンジル含有二価リンカーの場合では、例示的なジスルフィド結合分断の後、得られたフェニルチオレートは、共鳴安定化中間体を形成することによって、更に断片化されて炭酸又はカルバミン酸部分を放出することができる。これらのいずれかの場合において、本明細書に記載されている例示的な二価リンカーの放出可能特性は、既存の化学的、代謝的、生理学的又は生物学的条件に関連しうるどのような機構によっても実現することができる。

【0040】

放出型リンカーの結合切断の他の例示的な機構には、下記のようなオキソニウム補助切断が含まれ：

【化3】

ここで、Ｚは、ビタミン又はその類似体若しくは誘導体、又は薬剤又はその類似体若しく誘導体であるか、或いは、それぞれ、１つ以上のスペーサーリンカー及び／又は他の放出型リンカーを含む薬剤又はビタミン部分のような、多価リンカーの他の部分と一緒にしたビタミン若しくは薬剤部分である。この実施態様において、カルバメートの酸触媒脱離は、ＣＯ₂及びＺに結合している窒素含有部分の放出をもたらし、水又は他の任意のルイス酸により捕捉されうるベンジルカチオンの形成をもたらす。

【0041】

一つの実施態様において、放出型リンカーはジスルフィドを含む。

【0042】

別の実施態様において、放出型リンカーは、アルキレンアジリジン－１－イル、アルキレンカルボニルアジリジン－１－イル、カルボニルアルキルアジリジン－１－イル、アルキレンスルホキシルアジリジン－１－イル、スルホキシルアルキルアジリジン－１－イル、スルホニルアルキルアジリジン－１－イル又はアルキレンスルホニルアジリジン－１－イルを含む、二価ラジカルであることができ、ここで放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義されている置換基Ｘ²で置換されている。

【0043】

例示的な追加の放出型リンカーには、メチレン、１－アルコキシアルキレン、１－アルコキシシクロアルキレン、１－アルコキシアルキレンカルボニル、１－アルコキシシクロアルキレンカルボニル、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル（カルボキシアリール）カルボニル、カルボニル（ビスカルボキシアリール）カルボニル、ハロアルキレンカルボニル、アルキレン（ジアルキルシリル）、アルキレン（アルキルアリールシリル）、アルキレン（ジアリールシリル）、（ジアルキルシリル）アリール、（アルキルアリールシリル）アリール、（ジアリールシリル）アリール、オキシカルボニルオキシ、オキシカルボニルオキシアルキル、スルホニルオキシ、オキシスルホニルアルキル、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニル、カルボニルシクロアルキリデンイミニル、アルキレンチオ、アルキレンアリールチオ及びカルボニルアルキルチオが含まれ、ここで放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義されている置換基Ｘ²で置換されている。

【0044】

前述の実施態様において、放出型リンカーは、酸素を含むことができ、放出型リンカーは、メチレン、１－アルコキシアルキレン、１－アルコキシシクロアルキレン、１－アルコキシアルキレンカルボニル及び１－アルコキシシクロアルキレンカルボニルであることができ、ここで、放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義されている置換基Ｘ²で置換されており、放出型リンカーは、酸素と結合してアセタール又はケタールを形成する。あるいは、放出型リンカーは、酸素を含むことができ、放出型リンカーは、メチレンであってもよく、ここで、メチレンは、場合により置換されているアリールで置換されており、放出型リンカーは、酸素と結合してアセタール又はケタールを形成する。更に、放出型リンカーは、酸素を含むことができ、放出型リンカーは、スルホニルアルキルであってもよく、ここで、放出型リンカーは、酸素と結合してアルキルスルホネートを形成する。

【0045】

上記の放出型リンカーの実施態様の別の実施態様において、放出型リンカーは、窒素を含むことができ、放出型リンカーは、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニル及びカルボニルシクロアルキリデンイミニルであることができ、ここで、放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義されている置換基Ｘ²で置換されており、放出型リンカーは、窒素と結合してヒドラゾンを形成する。代替的な形態では、ヒドラゾンは、カルボン酸誘導体、オルトギ酸誘導体又はカルバモイル誘導体でアシル化されて、多様なアシルヒドラゾン放出型リンカーを形成することができる。

【0046】

あるいは、放出型リンカーは、酸素を含むことができ、放出型リンカーは、アルキレン（ジアルキルシリル）、アルキレン（アルキルアリールシリル）、アルキレン（ジアリールシリル）、（ジアルキルシリル）アリール、（アルキルアリールシリル）アリール及び（ジアリールシリル）アリールであることができ、ここで、放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義されている置換基Ｘ²で置換されており、放出型リンカーは、酸素と結合してシラノールを形成する。

【0047】

上記の放出型リンカーの実施態様において、薬剤は、窒素原子を含むことができ、放出型リンカーは、窒素を含むことができ、放出型リンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル（カルボキシアリール）カルボニル、カルボニル（ビスカルボキシアリール）カルボニルであることができ、放出型リンカーは、ヘテロ原子の窒素と結合してアミドを形成することができ、また、薬剤の窒素と結合してアミドを形成することもできる。

【0048】

上記の放出型リンカーの実施態様において、薬剤は、酸素原子を含むことができ、放出型リンカーは、窒素を含むことができ、放出型リンカーは、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル（カルボキシアリール）カルボニル、カルボニル（ビスカルボキシアリール）カルボニルであることができ、放出型リンカーは、アミドを形成することができ、また、薬剤の窒素と結合してエステルを形成することもできる。

【0049】

置換基Ｘ²は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、Ｒ⁴－カルボニル、Ｒ⁵－カルボニルアルキル、Ｒ⁶－アシルアミノ及びＲ⁷－アシルアミノアルキルであることができ、ここで、Ｒ⁴及びＲ⁵は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びペプチドから選択され、そしてＲ⁶及びＲ⁷は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びペプチドから選択される。この実施態様において、放出型リンカーは、窒素を含むことができ、置換基Ｘ²及び放出型リンカーは、複素環を形成することができる。

【0050】

複素環は、ピロリジン、ピペリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピロリジノン、ピペリジノン、オキサゾリジノン、イソオキサゾリジノン、チアゾリジノン、イソチアゾリジノン及びスクシンイミドであることができる。

【0051】

一つの実施態様において、本明細書に記載されている多価リンカーは、以下の式：

【化4】

〔式中、ｎは、１～約４から選択される整数であり；Ｒ^a及びＲ^bは、それぞれ独立して、水素及び、場合により分岐鎖であるＣ₁～Ｃ₄アルキルのような低級アルキルを含む、アルキルからなる群より選択されるか、或いはＲ^a及びＲ^bは、結合している炭素原子と一緒になって炭素環を形成し；Ｒは、場合により置換されているアルキル基、場合により置換されているアシル基又は適切に選択された窒素保護基であり；そして（^*）は、薬剤、ビタミン、画像化剤、診断剤、他の多価リンカー又は結合体の他の部分の結合点を示す〕で示される化合物であるか又はそのような化合物を含む。

【0052】

別の実施態様において、本明細書に記載されている多価リンカーは、以下の式：

【化5】

〔式中、ｍは、１～約４から選択される整数であり；Ｒは、場合により置換されているアルキル基、場合により置換されているアシル基又は適切に選択された窒素保護基であり；そして（^*）は、薬剤、ビタミン、画像化剤、診断剤、他の多価リンカー又は結合体の他の部分の結合点を示す〕で示される化合物であるか又はそのような化合物を含む。

【0053】

別の実施態様において、本明細書に記載されている多価リンカーは、以下の式：

【化6】

〔式中、ｍは、１～約４から選択される整数であり；Ｒは、場合により置換されているアルキル基、場合により置換されているアシル基又は適切に選択された窒素保護基であり；そして（^*）は、薬剤、ビタミン、画像化剤、診断剤、他の多価リンカー又は結合体の他の部分の結合点を示す〕で示される化合物であるか又はそのような化合物を含む。

【0054】

別の実施態様において、リンカーＬは１つ以上のスペーサーリンカーを含む。そのようなスペーサーリンカーは、場合により、下記に定義される置換基Ｘ¹で置換されている１－アルキレンスクシンイミド－３－イルであることができ、放出型リンカーは、メチレン、１－アルコキシアルキレン、１－アルコキシシクロアルキレン、１－アルオキシアルキレンカルボニル、１－アルコキシシクロアルキレンカルボニルであることができ、ここで、放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義される置換基Ｘ²で置換されており、スペーサーリンカー及び放出型リンカーは、それぞれスペーサーリンカーに結合して、スクシンイミド－１－イルアルキルアセタール又はケタールを形成する。

【0055】

スペーサーリンカーは、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレン、シクロアルキレン、アルキレンシクロアルキル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、１－アルキレンスクシンイミド－３－イル、１－（カルボニルアルキル）スクシンイミド－３－イル、アルキレンスルホキシル、スルホニルアルキル、アルキレンスルホキシルアルキル、アルキレンスルホニルアルキル、カルボニルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラニル、カルボニルテトラヒドロフラニル、１－（カルボニルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラニル）スクシンイミド－３－イル及び１－（カルボニルテトラヒドロフラニル）スクシンイミド－３－イルであることができ、ここでスペーサーリンカーは、それぞれ場合により、下記に定義される置換基Ｘ¹で置換されている。この実施態様において、スペーサーリンカーは、追加の窒素を含むことができ、スペーサーリンカーは、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、１－（カルボニルアルキル）スクシンイミド－３－イルであることができ、ここで、スペーサーリンカーは、それぞれ場合により、下記に定義される置換基Ｘ¹で置換されており、スペーサーリンカーは、窒素と結合してアミドを形成する。あるいは、スペーサーリンカーは、追加の硫黄を含むことができ、スペーサーリンカーは、アルキレン及びシクロアルキレンであることができ、ここで、スペーサーリンカーは、場合によりカルボキシで置換されており、スペーサーリンカーは、硫黄と結合してチオールを形成する。別の実施態様において、スペーサーリンカーは、硫黄を含むことができ、スペーサーリンカーは、１－アルキレンスクシンイミド－３－イル及び１－（カルボニルアルキル）スクシンイミド－３－イルであることができ、スペーサーリンカーは、硫黄と結合してスクシンイミド－３－イルチオールを形成する。

【0056】

上記記載の実施態様の代替案として、スペーサーリンカーは、窒素を含むことができ、放出型リンカーは、アルキレンアジリジン－１－イル、カルボニルアルキルアジリジン－１－イル、スルホキシルアルキルアジリジン－１－イル又はスルホニルアルキルアジリジン－１－イルを含む二価ラジカルであることができ、ここで放出型リンカーは、それぞれ場合により、下記に定義される置換基Ｘ²で置換されている。この代替的な実施態様において、スペーサーリンカーは、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、１－（カルボニルアルキル）スクシンイミド－３－イルであることができ、ここで、スペーサーリンカーは、それぞれ場合により、下記に定義される置換基Ｘ¹で置換されており、スペーサーリンカーは、放出型リンカーと結合してアジリジンアミドを形成する。

【0057】

置換基Ｘ¹は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシレート、アルキルアルカノエート、グアニジノアルキル、Ｒ⁴－カルボニル、Ｒ⁵－カルボニルアルキル、Ｒ⁶－アシルアミノ及びＲ⁷－アシルアミノアルキルであることができ、ここで、Ｒ⁴及びＲ⁵は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びペプチドから選択され、そしてＲ⁶及びＲ⁷は、それぞれ独立して、アミノ酸、アミノ酸誘導体及びペプチドから選択される。この実施態様において、スペーサーリンカーは、窒素を含むことができ、置換基Ｘ¹及びスペーサーリンカーは、それに結合して複素環を形成する。

【0058】

スペーサーリンカーの追加的な例示には、アルキレン－アミノ－アルキレンカルボニル、アルキレン－チオ－（カルボニルアルキルスクシンイミド－３－イル）などが含まれ、以下の式：

【化7】

〔式中、整数ｘ及びｙは、１、２、３、４又は５である〕により更に例示されている。

【0059】

別の実施態様において、親水性領域を含むリンカーも記載される。一つの態様において、リンカーの親水性領域は、本明細書に記載される結合体に含まれるスペーサーリンカーの全体又は一部を形成する。例示的な親水性スペーサーリンカーは、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８０９３（２００８年６月２５日出願）に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0060】

本明細書に使用されるとき、用語「シクロアルキル」には、その一部が環を形成する炭素原子の二価鎖を含む、分子フラグメント又はラジカルが含まれる。本明細書に使用されるとき、シクロアルキルという用語には、環原子又は非環原子に結合しているフラグメント及びラジカルが含まれることが理解されるべきであり、例えば、シクロプロピル、シクロヘキシル、３－エチルシクロペンタ－１－イル、シクロプロピルエチル、シクロヘキシルメチルなどである。

【0061】

本明細書に使用されるとき、用語「シクロアルキレン」には、その一部が環を形成する炭素原子の二価鎖を含む、分子フラグメント又はラジカルが含まれる。本明細書に使用されるとき、シクロアルキルという用語には、環原子又は非環原子に結合しているフラグメント及びラジカルが含まれることが理解されるべきであり、例えば、シクロプロパ－１，１－ジイル、シクロプロパ－１，２－ジイル、シクロヘキサ－１，４－ジイル、３－エチルシクロペンタ－１，２－ジイル、１－メチレンシクロヘキサ－４－イルなどである。

【0062】

本明細書に使用されるとき、用語「ヘテロアルキル」及び「ヘテロアルキレン」には、炭素原子及びヘテロ原子（ここでヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄から選択される）の直鎖又は分岐鎖から形成される一価及び二価基をそれぞれ含む、分子フラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、アルコキシアルキル、アルキレンオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルキレンアミノアルキル、アルキルチオアルキル、アルキレンチオアルキル、アルコキシアルキルアミノアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、アルキレンオキシアルキルアミノアルキルなどである。

【0063】

本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロシクリル」には、少なくとも１個のヘテロ原子を含むその一部が環を形成する炭素原子及びヘテロ原子（ここでヘテロ原子は窒素、酸素及び硫黄から選択される）の一価鎖を含む、分子フラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、アジリジン、ピロリジン、オキサゾリジン、３－メトキシピロリジン、３－メチルピペラジンなどである。したがって、本明細書に使用されるとき、ヘテロシクリルには、アルキルヘテロシクリル、ヘテロアルキルヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルへテロアルキルなどが含まれる。本明細書に使用されるとき、ヘテロシクリルという用語には、環原子又は非環原子に結合しているフラグメント及びラジカルが含まれることが理解されるべきであり、例えば、テトラヒドロフラン－２－イル、ピペリジン－１－イル、ピペリジン－４－イル、ピペラジン－１－イル、モルホリン－１－イル、テトラヒドロフラン－２－イルメチル、ピペリジン－１－イルエチル、ピペリジン－４－イルメチル、ピペラジン－１－イルプロピル、モルホリン－１－イルエチルなどである。

【0064】

本明細書で使用されるとき、用語「アリール」には、炭素原子の芳香族単環式又は多環式の環を含むフラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、フェニル、ナフチルなどである。

【0065】

本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアリール」には、炭素原子及び窒素、酸素、硫黄から選択される少なくとも１個ヘテロ原子の芳香族単環式又は多環式の環を含む分子フラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、ピリジニル、ピリミジニル、インドリル、ベンゾオキサゾリルなどである。

【0066】

本明細書に使用されるとき、用語「置換アリール」又は「置換ヘテロアリール」には、１つ以上の置換基で置換されているアリール又はヘテロアリールを含む分子フラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、アルキル、ヘテロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキル又はジアルキルアミノ、アルコキシ、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、カルボキシレート、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、シアノ、ニトロなどである。そのような置換基のアルキル基は場合によりハロで置換されうることが理解されるべきである。

【0067】

本明細書で使用されるとき、用語「イミノアルキリデニル」には、本明細書に定義されているアルキレン及び窒素原子を含有する二価ラジカルを含む分子フラグメン又はラジカルが含まれ、ここでアルキレンの末端炭素は窒素原子に二重結合しており、例えば、式：－（ＣＨ）＝Ｎ－、－（ＣＨ₂）₂（ＣＨ）＝Ｎ－、－ＣＨ₂Ｃ（Ｍｅ）＝Ｎ－などが挙げられる。

【0068】

本明細書で使用されるとき、用語「アミノ酸」には、セリン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのような天然に生じるアミノ酸に対応する基を含むアミノアルキルカルボキシレートを意味し、ここでアルキルラジカルは、場合により、アルキル、ヒドロキシアルキル、スルフヒドリルアルキル、アミノアルキル、カルボキシアルキルなどで置換されている。

【0069】

例えば、一つの実施態様において、アミノ酸は、一般式：

【化8】

〔式中、Ｒは、水素、アルキル、アシル又は適切な窒素保護基であり、Ｒ′及びＲ″は、水素又は置換基であり、それぞれ現れるときに、それぞれ独立して選択され、そしてｑは、１、２、３、４又は５のような整数である〕を有する二価ラジカルである。例示的に、Ｒ′及び／又はＲ″は、独立して、水素又は天然に生じるアミノ酸に存在する側鎖、例えば、メチル、ベンジル、ヒドロキシメチル、チオメチル、カルボキシル、カルボキシルメチル、グアニジノプロピルなど及びそれらの誘導体と保護誘導体に対応するが、これらに限定されない。上記に記載された式は、全ての立体化学的な変形態様を含む。例えば、アミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、アルギニン、セリン、オルニチン、トレオニンなどから選択することができる。一つの変形態様において、アミノ酸は、フェニルアラニン、チロシンなどや、それらの誘導体及び置換された変形態様から選択することができる。

【0070】

本明細書に使用されるとき、用語「アリールアルキル」及び「ヘテロアリールアルキル」には、直鎖又は分岐鎖アルキレン基で置換されている、本明細書に定義されているアリール及びヘテロアリールをそれぞれ含む、分子フラグメント又はラジカルが含まれ、例えば、ベンジル、フェニルエチル、α－メチルベンジル、ピコリニル、ピリミジニルエチルなどである。

【0071】

上記記載の用語を組み合わせて、化学的に関連する基を生じうることが理解されるべきであり、そのような基として、例えば、トリフルオロメチルオキシエチルや１，２－ジフルオロ－２－クロロエタ－１－イルオキシプロピルなどを意味する「ハロアルコキシアルキル」が挙げられる。

【0072】

本明細書に使用されるとき、用語「アミノ酸誘導体」は、一般に、セリン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などに見出されるような天然に生じるアミノ酸に見出される側鎖に対応する基を含む、アミノアルキルカルボキシレートを意味し、ここでアミノラジカル若しくはカルボキシレートラジカルは、それぞれ場合によりアルキル、カルボキシルアルキル、アルキルアミノなどで置換されているか、又は場合により保護されており、介在二価アルキルフラグメントは、場合により、アルキル、ヒドロキシアルキル、スルフヒドリルアルキル、アミノアルキル、カルボキシアルキルなどで置換されている。

【0073】

本明細書で使用されるとき、用語「ペプチド」には、アミド結合により互いに共有結合している一連のアミノ酸及びアミノ酸の類似体と誘導体を含む、フラグメント又はラジカルが含まれる。

【0074】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルオキシメチルオキシを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでメチルは、場合によりアルキル又は置換アリールで置換されている。

【0075】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルカルボニルを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、アシルアジリジン又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0076】

別の実施態様において、二価リンカーは、１－アルコキシシクロアルキレンオキシを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含む。

【0077】

別の実施態様において、二価リンカーは、アルキレンアミノカルボニル（ジカルボキシルアリーレン）カルボキシレートを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含む。

【0078】

別の実施態様において、二価リンカーは、ジチオアルキルカルボニルヒドラジドを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでヒドラジドは、薬剤と共に、ヒドラゾン又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0079】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルカルボニルヒドラジドを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでヒドラジドは、薬剤と共に、ヒドラゾン又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0080】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－チオアルキルスルホニルアルキル（二置換シリル）オキシを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここで二置換シリルは、アルキル又は場合により置換されているアリールで置換されている。

【0081】

別の実施態様において、二価リンカーは、天然に生じるアミノ酸及びそれらの立体異性体からなる群より選択される、複数のスペーサーリンカーを含む。

【0082】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルオキシカルボニルを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、炭酸塩又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0083】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、炭酸塩又はその類似体若しくは誘導体を形成し、アリールは場合により置換されている。

【0084】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルオキシアルキルオキシアルキリデンを一緒になって形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでアルキリデンは、薬剤と共に、ヒドラゾン又はその類似体若しくは誘導体を形成し、アルキルは、それぞれ独立して選択され、そしてオキシアルキルオキシは、場合により、アルキル又は場合により置換されているアリールで置換されている。

【0085】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルオキシカルボニルヒドラジドを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含む。

【0086】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルアミノを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでアミノは、薬剤と共に、ビニル系アミド又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0087】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルアミノを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでアミノは、薬剤と共に、ビニル系アミド又はその類似体若しくは誘導体を形成し、アルキルはエチルである。

【0088】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルアミノカルボニルを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、カルバメート又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0089】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアルキルアミノカルボニルを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、カルバメート又はその類似体若しくは誘導体を形成し、アルキルはエチルである。

【0090】

別の実施態様において、二価リンカーは、３－ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを一緒になって形成する、放出型リンカー、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここでカルボニルは、薬剤と共に、カルバメート若しくはカルバモイルアジリジン又はその類似体若しくは誘導体を形成する。

【0091】

別の実施態様において、多価リンカーは、多価３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルオキシメチルオキシ基を形成する、連結したスペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、以下の式：

【化9】

により例示され、ここで、ｎは、１～６の整数であり、アルキル基は、場合により置換されており、メチルは、場合により、追加のアルキル又は場合により置換されているアリール基で置換されており、これらの基はそれぞれ、独立して選択される基Ｒとして表されている。符号（^*）は、本明細書に記載されている結合体の他の部分への多価リンカーフラグメントの結合点を示す。

【0092】

別の実施態様において、多価リンカーは、連結して、多価３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルカルボニル基を形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、以下の式：

【化10】

により例示され、ここで、ｎは、１～６の整数であり、アルキル基は場合により置換されている。符号（^*）は、本明細書に記載されている結合体の他の部分への多価リンカーフラグメントの結合点を示す。別の態様において、多価リンカーは、連結して、多価３－チオアルキルスルホニルアルキル（二置換シリル）オキシ基を形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、ここで二置換シリルは、アルキル及び／又は場合により置換されているアリール基で置換されている。

【0093】

別の実施態様において、多価リンカーは、連結して、多価ジチオアルキルカルボニルヒドラジド基又は多価３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルカルボニルヒドラジドを形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、以下の式：

【化11】

により例示され、ここで、ｎは１～６の整数であり、アルキル基は、場合により置換されており、ヒドラジドは、（Ｂ）、（Ｄ）又は多価リンカー（Ｌ）の別の部分と共にヒドラゾンを形成する。符号（^*）は、本明細書に記載されている結合体の他の部分への多価リンカーフラグメントの結合点を示す。

【0094】

別の実施態様において、多価リンカーは、連結して、多価３－チオスクシンイミド－１－イルアルキルオキシアルキルオキシアルキリデン基を形成する、スペーサーリンカー及び放出型リンカーを含み、以下の式：

【化12】

により例示され、ここで、ｎは、それぞれ、１～６から独立して選択される整数であり、アルキル基は、それぞれ独立して選択され、場合により、例えばアルキル、又は場合により置換されているアリールで置換されており、アルキリデンは、（Ｂ）、（Ｄ）又は多価リンカー（Ｌ）の他の部分と共にヒドラゾンを形成する。符号（^*）は、本明細書に記載されている結合体の他の部分への多価リンカーフラグメントの結合点を示す。

【0095】

追加の例示的なリンカーは、ＷＯ２００６／０１２５２７に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。追加のリンカーが以下の表に記載されており、（^*）原子は、追加のスペーサー若しくは放出型リンカー、薬剤及び／又は結合リガンドの結合点である。

【0096】

例示的な放出型リンカー

【表1】

【0097】

本明細書に記載されているスペーサー及び放出型リンカーは、それぞれ、二価である。加えて、スペーサーリンカー、放出型リンカー、薬剤Ｄ及びリガンドＢの間の連結は、多様なスペーサーリンカー、放出型リンカー、薬剤Ｄ及びリガンドＢにおいて見出される任意の原子において生じることができる。

【0098】

薬剤は、窒素原子を含むことができ、放出型リンカーは、場合により置換基Ｘ²で置換されている、ハロアルキレンカルボニルであることができ、放出型リンカーは、薬剤の窒素と結合してアミドを形成する。

【0099】

薬剤は、酸素原子を含むことができ、放出型リンカーは、場合により置換基Ｘ²で置換されている、ハロアルキレンカルボニルであることができ、放出型リンカーは、薬剤の酸素と結合してエステルを形成する。

【0100】

薬剤は、二重結合窒素原子を含むことができ、この実施態様において、放出型リンカーは、アルキレンカルボニルアミノ及び１－（アルキレンカルボニルアミノ）スクシンイミド－３－イルであることができ、放出型リンカーは、薬剤の窒素と結合してヒドラゾンを形成することができる。

【0101】

薬剤は、硫黄原子を含むことができ、この実施態様において、放出型リンカーは、アルキレンチオ及びカルボニルアルキルチオであることができ、放出型リンカーは、薬剤の硫黄と結合してジスルフィドを形成することができる。

【0102】

別の実施態様において、ＰＳＭＡに結合する又はそれを標的化することができる結合又は標的リガンドは、リン酸、ホスホン酸若しくはホスフィン酸、又はこれらの誘導体である。一つの態様において、リン酸、ホスホン酸若しくはホスフィン酸、又はこれらの誘導体は、１つ以上のカルボン酸基を含む。別の態様において、リン酸、ホスホン酸若しくはホスフィン酸、又はこれらの誘導体は、１つ以上のチオール基又はそれらの誘導体を含む。別の態様において、リン酸、ホスホン酸若しくはホスフィン酸、又はこれらの誘導体は、１つ以上のカルボン酸の生物学的等価物を含み、例えば、場合により置換されているテトラゾールなどである。

【0103】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、ペンタン二酸の誘導体である。例示的には、ペンタン二酸の誘導体は、下記式：

【化13】

〔式中、Ｘは、ＲＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＣＨ₂－（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９６８，９１５号を参照すること）；ＲＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｎ（Ｒ¹）－（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８６３，５３６号を参照すること）；ＲＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７９５，８７７号を参照すること）；ＲＮ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）Ｙ－又はＲＣ（Ｏ）ＮＨ（ＯＨ）Ｙ（ここでＹは、－ＣＲ₁Ｒ₂－、－ＮＲ₃－又は－Ｏ－である）（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９６２，５２１を参照すること）；ＲＳ（Ｏ）Ｙ、ＲＳＯ₂Ｙ又はＲＳ（Ｏ）（ＮＨ）Ｙ（ここでＹは、－ＣＲ₁Ｒ₂－、－ＮＲ₃－又は－Ｏ－である）（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９０２，８１７号を参照すること）；又はＲＳ－アルキル（ここでＲは、例えば、水素、アルキル、アリール又はアリールアルキルであり、それぞれ場合により置換されている）（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、J. Med. Chem. 46:1989-1996 (2003)を参照すること）である〕で示される化合物である。

【0104】

前述のそれぞれの式において、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は、それぞれ独立して、水素、Ｃ₁～Ｃ₉の直鎖又は分岐鎖アルキル、Ｃ₂～Ｃ₉の直鎖又は分岐鎖アルケニル、Ｃ₃～Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₅～Ｃ₇シクロアルケニル及びアリールから選択される。加えて、Ｒ、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は、それぞれ場合により、例えば、Ｃ₃～Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₅～Ｃ₇シクロアルケニル、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ₁～Ｃ₆の直鎖又は分岐鎖アルキル、Ｃ₂～Ｃ₆の直鎖又は分岐鎖アルケニル、Ｃ₁～Ｃ₄アルコキシ、Ｃ₂～Ｃ₄アルケニルオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アリールから選択される１つ以上の基で置換されていることができる。一つの態様において、アリールは、１－ナフチル、２－ナフチル、２－インドリル、３－インドリル、２－フリル、３－フリル、２－チエニル、３－チエニル、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、ベンジル及びフェニルから選択され、それぞれの場合において、アリールは、場合により、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ₁～Ｃ₆の直鎖又は分岐鎖アルキル、Ｃ₂～Ｃ₆の直鎖又は分岐鎖アルケニル、Ｃ₁～Ｃ₄アルコキシ、Ｃ₂～Ｃ₄アルケニルオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ及びアミノから選択される１つ以上の基、例示的には１～３つの基で置換されていることができる。上記のそれぞれの式の一つの変形態様において、Ｒは水素ではない。

【0105】

米国特許第５，９６８，９１５号に記載されている例示的なＰＳＭＡリガンドには、２－〔〔メチルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔エチルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔プロピルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔ブチルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔シクロヘキシルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔フェニルヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔２－（テトラヒドロフラニル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（２－テトラヒドロピラニル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（４－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（２－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（３－フェニルプロピル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（３－フェニルブチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（（２－フェニルブチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（４－フェニルブチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；及び２－〔〔（アミノメチル）ヒドロキシホスフィニル〕メチル〕ペンタン二酸が含まれる。

【0106】

米国特許第５，８６３，５３６号に記載されている例示的なＰＳＭＡリガンドには、Ｎ－〔メチルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔エチルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔プロピルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔ブチルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔フェニルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；Ｎ－〔（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸；及びＮ－メチル－Ｎ－〔フェニルヒドロキシホスフィニル〕グルタミン酸が含まれる。

【0107】

米国特許第５，７９５，８７７号に記載されている例示的なＰＳＭＡリガンドには、２－〔〔メチルヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔エチルヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔プロピルヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔ブチルヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔フェニルヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔（（４－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔（（２－ピリジル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；２－〔〔（フェニルメチル）ヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸；及び２〔〔（（２－フェニルエチル）メチル）ヒドロキシホスフィニル〕オキシ〕ペンタン二酸が含まれる。

【0108】

米国特許第５，９６２，５２１号に記載されている例示的なＰＳＭＡリガンドには、２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－メチル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ブチル－Ｎ－ヒドロキシ）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ベンジル－Ｎ－ヒドロキシ）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－フェニル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－２－フェニルエチル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－エチル－Ｎ－ヒドロキシ）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－プロピル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－３－フェニルプロピル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ－Ｎ－４－ピリジル）カルバモイル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（Ｎ－ヒドロキシ）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（メチル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（ベンジル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（フェニル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（２－フェニルエチル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（エチル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（プロピル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（３－フェニルプロピル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸；及び２－〔〔Ｎ－ヒドロキシ（４－ピリジル）カルボキサミド〕メチル〕ペンタン二酸が含まれる。

【0109】

米国特許第５，９０２，８１７号に記載されている例示的なＰＳＭＡリガンドには、２－〔（スルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（メチルスルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（エチルスルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（プロピルスルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（ブチルスルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（フェニルスルフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（２－フェニルエチル）スルフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（３－フェニルプロピル）スルフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（４－ピリジル）スルフィニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔（ベンジルスルフィニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（スルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（メチルスルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（エチルスルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（プロピルスルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（ブチルスルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（フェニルスルホニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（２－フェニルエチル）スルホニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（３－フェニルプロピル）スルホニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（４－ピリジル）スルホニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔（ベンジルスルホニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（スルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（メチルスルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（エチルスルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（プロピルスルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（ブチルスルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸；２－〔（フェニルスルホキシイミニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（２－フェニルエチル）スルホキシイミニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（３－フェニルプロピル）スルホキシイミニル〕メチル〕ペンタン二酸；２－〔〔（４－ピリジル）スルホキシイミニル〕メチル〕ペンタン二酸；及び２－〔（ベンジルスルホキシイミニル）メチル〕ペンタン二酸が含まれ
る。

【0110】

本明細書に記載されているペンタン二酸の誘導体は、ＰＳＭＡに高い結合親和性を有することが報告されており、以下のホスホン酸及びホスフィン酸の誘導体が含まれるが、これらに限定されない：

【化14】

式中、Ｅ－Ｉ複合体の解離定数（Ｋ_i値）が示されている（Current Medicinal Chem. 8:949-.957(2001); Silverman, “The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action,” Elsevier Academic Press (2^nd Ed. 2003)を参照すること。なおこの開示は参照により本明細書に組み込まれる）。

【0111】

別の例示的な実施態様において、ペンタン二酸の誘導体は、チオール基を含み、例えば、以下の式：

【化15】

で示される化合物であり、式中、Ｅ－Ｉ複合体の阻害定数（ＩＣ₅₀値）が示されている。

【0112】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、２つのアミノ酸の尿素化合物である。一つの態様において、アミノ酸は、１つ以上の追加のカルボン酸を含む。別の態様において、アミノ酸は、１つ以上のリン酸、ホスホン酸、ホスフィン酸、スルフィン酸、スルホン酸又はボロン酸を含む。別の態様において、アミノ酸は、１つ以上のチオール基又はその誘導体を含む。別の態様において、アミノ酸は、１つ以上のカルボン酸の生物学的等価物、例えばテトラゾールなどを含む。

【0113】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、ペンタン二酸のアミノカルボニル誘導体である。例示的には、アミノカルボニルペンタン二酸誘導体は、下記式：

【化16】

〔式中、Ｒ¹及びＲ²は、それぞれ、水素や、場合により置換されている、チオール酢酸、チオールプロピオン酸などのようなカルボン酸、マロン酸、コハク酸、グルタミン酸、アジピン酸などから選択される〕で示される化合物である。例示的なアミノカルボニルペンタン二酸誘導体は、J. Med. Chem. 44:298-301 (2001) and J. Med. Chem. 47: 1729-38 (2004)に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0114】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、下記式で示される化合物である：

【化17】

【表2】

【0115】

本明細書に記載されている尿素化合物は、これらの化合物のサブナノモル効力、水溶性及び／又は長期安定性によって、同様に本明細書に記載されているリガンドの調製にも有利でありうることが理解される。本明細書に記載されている尿素化合物は、一般に、市販の出発材料から本明細書に記載されるようにして調製することができる。

【0116】

上記の例示のペンタン二酸化合物及び尿素化合物のそれぞれにおいて、少なくとも１つの不斉炭素原子が存在する。したがって、上記の例示式は、全ての立体異性体を、純粋な鏡像異性体として、又は、鏡像異性体及び／若しくはジアステレオマーの混合物として、個別的にも集合的にも参照することが意図され、それらには、ラセミ混合物や、１つのエピマーを最初の不斉炭素原子に含むが、ラセミ混合物を含む他の不斉炭素の混合物も許容するような混合物などが含まれるが、これらに限定されない。

【0117】

別の例示的な実施態様において、結合剤は、アスパラギン酸、グルタミン酸などのようなアミノジカルボン酸と別のアミノジカルボン酸又はその類似体との尿素化合物であり、例えば下記式：

【化18】

〔式中、Ｑは、アスパラギン酸、グルタミン酸などのようなアミノジカルボン酸又はその類似体であり、ｎ及びｍは、それぞれ、１から約６の整数から選択され、そして（^*）は、リンカーＬの結合点を表す〕で示される結合剤である。

【0118】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、少なくとも４つのカルボン酸基を含むか、又は、ＰＳＭＡリガンドが薬剤又はリンカーに結合した後、少なくとも３つの遊離カルボン酸基を含む。本明細書に記載されているように、ＰＳＭＡリガンドのカルボン酸基には、カルボン酸の生物学的等価物が含まれることが理解される。

【0119】

例示的には、ＰＳＭＡリガンドは、下記式で示される化合物である：

【化19】

【0120】

別の実施態様において、ＰＳＭＡリガンドは、２－〔３－（１－カルボキシ－２－メルカプト－エチル）－ウレイド〕－ペンタン二酸（ＭＵＰＡ）又は２－〔３－（１，３－ジカルボキシ－プロピル）－ウレイド〕－ペンタン二酸（ＤＵＰＡ）である。

【0121】

ＰＳＭＡリガンドの他の例示的な例には、キスカル酸、アスパラギン酸グルタミン酸（Ａｓｐ－Ｇｌｕ）、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ、Ｇｌｙ－Ｇｌｕ、γ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ、ベータ－Ｎ－アセチル－Ｌ－アスパラギン酸－Ｌ－グルタミン酸（β－ＮＡＡＧ）などが挙げられる。

【0122】

別の例示的な実施態様において、結合剤は、アスパラギン酸、グルタミン酸などのようなアミノジカルボン酸と、別のアミノジカルボン酸又はその類似体との尿素化合物であり、リンカーは、天然に生じるアミノ酸及び非天然のアミノ酸を含むアミノ酸からなるペプチドである。一つの実施態様において、リンカーは、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、ベータアミノＡｌａ及びアミノアルキルカルボン酸、例えば、Ｇｌｙ、ベータＡｌａ、アミノ吉草酸、アミノカプロン酸などから選択されるアミノ酸を含む、ペプチドである。別の実施態様において、リンカーは、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、ベータアミノＡｌａ及びアミノアルキルカルボン酸、例えば、Ｇｌｙ、ベータＡｌａ、アミノ吉草酸、アミノカプロン酸などから選択されるアミノ酸からなるペプチドである。別の実施態様において、リンカーは、少なくとも１つのＰｈｅを含むペプチドである。変形態様において、リンカーは、少なくとも２つのＰｈｅ残基、又は少なくとも３つのＰｈｅ残基を含むペプチドである。別の実施態様において、リンカーは、Ｇｌｕ－Ｐｈｅを含むペプチド、又はアミノアルキルカルボン酸及びＰｈｅのジペプチドである。別の実施態様において、リンカーは、Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅを含むペプチド、又はアミノアルキルカルボン酸及び２つのＰｈｅ残基のトリペプチドである。別の実施態様において、リンカーは、１つ以上のＰｈｅ残基を含むペプチドであり、ここで少なくとも１つのＰｈｅは、結合リガンドＢから約７～約１１個又は約７～約１４個の原子だけ離れている。別の実施態様において、リンカーは、Ｐｈｅ－Ｐｈｅを含むペプチドであって、Ｐｈｅ原子の少なくとも一つは結合リガンドＢから約７～約１１個又は約７～約１４個の原子だけ離れている。前述のそれぞれの実施態様及び変形態様において、１つ以上のＰｈｅ残基を、Ｔｙｒ又は別の置換変形態
様に交換しうることが理解されるべきである。

【0123】

別の例示的な実施態様において、結合剤は、アスパラギン酸、グルタミン酸などのようなアミノジカルボン酸と別のアミノジカルボン酸又はその類似体との尿素化合物であり、リンカーは、リンカーの主鎖に結合している、それぞれ場合により置換されている１つ以上のアリール又はアリールアルキルを含む。別の実施態様において、リンカーは、結合リガンドＢから約７～約１１個の原子だけ離れたリンカーの主鎖に結合している、それぞれ場合により置換されている１つ以上のアリール又はアリールアルキル基を含む。別の実施態様において、リンカーは、リンカーの主鎖に結合している、それぞれ場合により置換されている２つのアリール又はアリールアルキル基を含み、ここで、一方のアリール又はアリールアルキル基は、結合リガンドＢから約７～約１１個又は約７～約１４個の原子だけ離れており、他方のアルキル又はアリールアルキル基は、結合リガンドＢから約１０～約１４個又は約１０～約１７個の原子だけ離れている。

【0124】

本明細書に記載されているように、結合体は、ＰＳＭＡ結合性リガンドを使用して、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現している細胞を標的化する。いったん送達されると、結合体はＰＳＭＡに結合する。特定の実施態様において、結合体は、画像化及び／又は診断にとって十分な時間細胞の表面に残ることが理解される。別の実施態様において、結合体は、後の画像化及び／若しくは診断、又は治療のため、エンドサイトーシスのような内在性細胞機構により、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現している細胞に内部移行する。いったん内部移行すると、結合体は、そのまま残ってもよいし、分解、解体、そうでなければ変質して、結合体を形成している薬剤の放出を可能にしてもよい。画像化及び／又は診断の形態では、薬剤は、結合体としてそのまま残ってもよいし、又はいったん標的細胞に内部移行すると、放出されてもよいことが理解される。治療の形態では、薬剤は、いったん標的細胞に内部移行すると、結合体から放出されるのが有利であることが、更に理解される。

【0125】

一つの例示的な実施態様において、薬剤は画像化剤である。別の例示的な変形態様において、薬剤は診断剤である。別の例示的な変形態様において、薬剤は化学療法剤である。

【0126】

一つの態様において、画像化剤は、リンカーに共有結合している放射性同位体である。別の態様において、画像化剤は、キレート基に配位している放射性金属同位元素のような、放射性同位元素である。例示的な放射性金属同位元素には、¹¹¹Ｉｎ、^99mＴｃ、⁶⁴Ｃｕ、⁶⁷Ｃｕ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａなどの同位元素を含む、テクネチウム、レニウム、ガリウム、ガドリニウム、インジウム、銅などが含まれる。追加の例示的な放射性核種画像化剤の例は、米国特許第７，１２８，８９３号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。追加の例示的なキレート基は、トリペプチド又はテトラペプチドであり
、下記式：

【化20】

〔式中、Ｒは、独立して、それぞれの場合にＨ、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルなどから選択され、これらはそれぞれ場合により置換されている〕を有するトリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。１つのＲは、ニトロ、酸素又は硫黄のようなヘテロ原子を含み、リンカーＬの結合点であることが理解されるべきである。例示的には、以下のキレート基が記載され：

【化21】

ここで、Ｘは、酸素、窒素又は硫黄であり、Ｘは、リンカーＬに結合しており、そしてｎは１～約５の整数である。

【0127】

別の態様において、画像化剤は蛍光剤である。蛍光剤には、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５１４などが含まれるオレゴングリーン蛍光剤（但しこれらに限定されない）、AlexaFluor 488、AlexaFluor 647などが含まれるAlexaFluor蛍光剤（但しこれらに限定されない）、フルオレセイン及び関連する類似体、BODIPY Fl、BODIPY 505などが含まれるBODIPY蛍光剤（但しこれらに限定されない）、テトラメチルローダミンなどが含まれるローダミン蛍光剤（但しこれらに限定されない）、DyLight 680、DyLight 800などが含まれるDyLight蛍光剤（但しこれらに限定されない）、ＣＷ８００、テキサスレッド、フィコエリトリンなどが含まれる。例示的な蛍光剤が、以下の例示的な一般構造により示されており：

【化22】

ここで、Ｘは、酸素、窒素又は硫黄であり、Ｘは、リンカーＬに結合しており；Ｙは、ＯＲ^a、ＮＲ^a ₂又はＮＲ^a ₃ ⁺であり；そしてＹ′は、Ｏ、ＮＲ^a又はＮＲ^a ₂ ⁺であり；ここで、Ｒは、それぞれ独立して、それぞれの場合にＨ、フルオロ、スルホン酸、スルホネート及びこれらの塩などから選択され、Ｒ^aは、水素又はアルキルである。

【0128】

【化23】

ここで、Ｘは、酸素、窒素又は硫黄であり、Ｘは、リンカーＬに結合しており；Ｒは、それぞれ独立して、それぞれの場合にＨ、アルキル、ヘテロアルキルなどから選択され；そしてｎは、０～約４の整数である。

【0129】

別の態様において、画像化剤は、ＰＥＴ画像化剤又はＦＲＥＴ画像化剤である。ＰＥＴ画像化剤には、¹⁸Ｆ、¹¹Ｃ、⁶⁴Ｃｕ、⁶⁵Ｃｕなどが含まれる。ＦＲＥＴ画像化剤には、⁶⁴Ｃｕ、⁶⁵Ｃｕなどが含まれる。¹⁸Ｆ、¹¹Ｃの場合、画像化同位元素は、リンカーの任意の部分に存在しうるか、あるいはリンカーに結合している構造に存在しうることが理解される。例えば、¹⁸Ｆの場合、フルオロフェニル、ジフルオロフェニル、フルオロニトロフェニルなどのようなフルオロアリール基が記載される。例えば、¹¹Ｃの場合、アルキル及びアルキルアリールが記載される。

【0130】

別の態様において、化学療法剤は細胞毒性化合物である。本明細書に記載される細胞毒性化合物は、多数の作用機構のいずれかにより作動する。一般に、細胞毒性化合物は、細胞の生存及び／若しくは細胞の繁殖に重要である細胞機構を妨害する、及び／又は、アポトーシスを引き起こす。

【0131】

薬剤は、細胞機能を調節、そうでなければ修飾することができる任意の分子であることができ、薬学的に活性な化合物が含まれる。適切な分子には、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ－インバースオリゴペプチド、タンパク質、ペプチド架橋が少なくとも１つの非ペプチド架橋に代わっているタンパク質類似体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素インヒビター、アミノ酸及びそれらの誘導体、受容体及び他の膜タンパク質；抗原及びその抗体；ヘプテン及びその抗体；ホルモン、脂質、リン脂質；リポソーム；毒素；抗生物質；鎮静薬；気管支拡張剤；ベータ－ブロッカー；抗菌剤；抗高血圧剤；抗不整脈薬、強心配糖体、抗狭心症薬及び血管拡張薬を含む心血管剤；興奮薬、向精神薬、抗躁薬及び抑制薬を含む中枢神経剤；抗ウイルス剤；抗ヒスタミン薬；化学療法剤を含む抗癌剤；精神安定剤；抗鬱剤；Ｈ－２アンタゴニスト；抗痙攣薬；制吐薬；プロスタグランジン及びプロスタグランジン類似体；筋弛緩薬；抗炎症性物質；刺激薬；充血除去薬；鎮吐薬；利尿薬；鎮痙薬；抗喘息薬；抗パーキンソン剤；去痰剤；鎮咳薬；粘液溶解薬；並びにミネラルおよび栄養添加物を含めることができるが、これらに限定されない。

【0132】

更に、薬剤は、細胞毒性があるか、腫瘍浸透性を増強するか、腫瘍細胞繁殖を阻害するか、アポトーシスを促進するか、標的細胞の抗アポトーシス活性を減少させるか、感染因子により引き起こされる疾患の治療に使用されるか、病原性細胞に向けられる内因性免疫反応を増強するか、又は任意の種類の病原性細胞により引き起こされる疾患状態の治療に有用であるような、当該技術において既知の任意の薬剤であることができる。本発明の使用に適切な薬剤には、アドレノコルチコイド及びコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシン及びアクラマイシン誘導体、エストロゲン、例えばシトシンアラビノサイド、プリン類似体、ピリミジン類似体及びメトトレキセートなどの抗代謝剤、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン及び他の白金化合物、例えばタモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、Taxotere（登録商標）などのタキサン類、メイタンシン類とそれらの類似体及び誘導体、シクロホスファミド、ダウノマイシン、ドキソルビシン、リゾキシン、Ｔ２毒素、植物アルカロイド、プレドニゾン、ヒドロキシ尿素、 テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管インヒビター、エポチロン、ツブリシン、シクロプロピルベンズ〔ｅ〕インドロン、セコ－シクロプロピルベンズ〔ｅ〕インドロン、Ｏ－Ａｃ－セコ－シクロプロピルベンズ〔ｅ〕インドロン、ブレオマイシン及び他の任意の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、ビンクリスチン、ビンブラスチン、それらの類似体及び誘導体、例えばデアセチルビンブラスチンモノヒドラジド、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンＢ、例えばドラスタチン１０などのドラスタチン類、例えばαアマニチンなどのアマニチン類、カンプトテシン、イリノテカン及び他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシン及びゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４、コルセミド、炎症性及び炎症誘発剤、ペプチド及びペプチド模倣信号伝達インヒビター、並びに、他の任意の当該技術で認められている薬剤又は毒素が含まれる。本発明に使用できる他の薬剤には、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノ配糖体抗生物質、ゲンタマイシ、アンフォテリシンＢ、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、及び他の任意の当該技術で認められている抗菌化合物が含まれる。

【0133】

例示的な薬剤及び他の治療剤は、米国特許出願第２００５－０００２９４２－Ａ１号、同第２００１－００３１２５２－Ａ１号及び同第２００３－００８６９００－Ａ１号に記載されている。例示的な画像化剤及び診断際は、米国特許出願第２００４－００３３１９５－Ａ１号及び国際特許公報ＷＯ０３／０９７６４７に記載されている。前述のそれぞれの特許出願公報の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0134】

本明細書に記載されている発明には、１回以上の用量が投与されたときに宿主動物において病原性細胞の集団を排除するのに有効な量の結合リガンド（Ｂ）薬剤送達結合体を含む、医薬組成物も含まれる。結合リガンド薬剤送達結合体は、好ましくは、宿主動物に非経口投与され、例えば皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内又は鞘内投与される。あるいは、結合リガンド薬剤送達結合体を、経口投与のような、他の医学的に有用な方法により宿主動物に投与することができ、任意の有効用量及び徐放性の投与形態を含む適切な治療投与形態を使用することができる。

【0135】

非経口投与形態の例には、等張食塩水、５％グルコース、又は、液体アルコール、グリコール、エステル及びアミドのような周知の薬学的に許容される他の液体担体に溶解した、活性剤の水溶液が挙げられる。本発明の非経口投与形態は、薬剤送達結合体の用量を含む、再構築可能な凍結乾燥物の形態であることができる。本発明の実施態様の一つの態様において、例えば米国特許第４，７１３，２４９号、同第５，２６６，３３３号及び同第，４１７，９８２号（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている生分解性炭水化物マトリックスのような、当該技術で既知の数多くの徐放性の投与形態のうちのいずれかを投与してもよいし、あるいは低速ポンプ（浸透圧ポンプ）を使用してもよい。

【0136】

一つの例示的な態様において、治療因子を含む少なくとも１つの追加の組成物を、上記に詳述した方法論と組み合わせて又はその佐剤として宿主に投与して、結合リガンド薬剤送達結合体により仲介される病原性細胞集団の排除を増強することができ、２つ以上の追加の治療因子を投与することもできる。治療因子は、化学療法剤から又は投与された結合リガンド薬剤送達結合体の効能を補うことができる他の治療因子から選択することができる。

【0137】

一つの例示的な態様において、これらの因子の治療的に有効な組み合わせを使用することができる。一つの実施態様において、例えば、治療因子の治療有効量、例えば、多回用量１日レジメンにおける約０．１MIU／m²／用量／日から約１５MIU／m²／用量／日の範
の量、又は例えば、多回用量１日レジメンにおける約０．１MIU／m²／用量／日から７．５MIU／m²／用量／日の範囲の量を、結合リガンド薬剤送達結合体と共に使用して、病原性細胞を有する宿主動物において病原性細胞を排除、低減又は中和することができる（MIU＝ミリ国際単位；m²＝平均的なヒトの体表面積の概算）。

【0138】

別の実施態様において、例えばそれ自体細胞毒性である又は腫瘍透過性を増強するように作用できる化学療法剤も、結合リガンド薬剤送達結合体と組み合わせた本発明の方法における使用に適している。そのような化学療法剤には、アドレノコルチコイド及びコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシン及びアクラマイシン誘導体、エストロゲン、例えばシトシンアラビノサイド、プリン類似体、ピリミジン類似体及びメトトレキセートなどの抗代謝剤、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン及び他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、Taxotere（登録商標）、シクロホスファミド、ダウノマイシン、ドキソルビシン、リゾキシン、Ｔ２毒素、植物アルカロイド、プレドニゾン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管インヒビター、エポチロン、ツブリシン、シクロプロピルベンゾ〔ｅ〕インドロン、セコ－シクロプロピルベンゾ〔ｅ〕インドロン、Ｏ－Ａｃ－セコ－シクロプロピルベンゾ〔ｅ〕インドロン、ブレオマイシン及び他の任意の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、ビンクリスチン、ビンブラスチン、それらの類似体及び誘導体、例えばデアセチルビンブラスチンモノヒドラジド、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンＢ、例えばドラスタチン１０などのドラスタチン類、例えばαアマニチンなどのアマニチン類、カンプトテシン、イリノテカン及び他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシン及びゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４、コルセミド、炎症性及び炎症誘発剤、ペプチド及びペプチド模倣信号伝達インヒビター、並びに、他の任意の当該技術で認められている薬剤又は毒素が含まれる。本発明に使用することができる他の薬剤には、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノ配糖体抗生物質、ゲンタマイシ、アンフォテリシンＢ、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、マイタンシン類とその類似体及び誘導体、ゲムシタビン、並びに、他の任意の当該技術で認められている抗菌化合物が含まれる。

【0139】

治療因子を、結合リガンド薬剤送達結合体の投与の前、後、又はそれと同時に、宿主動
物に投与することができ、治療因子を、結合リガンド薬剤送達結合体を含有する同じ組成物の一部として、又は結合リガンド薬剤送達結合体と異なる組成物の一部として、投与することができる。治療因子を治療的に有効な用量で含有する任意のそのような治療組成物を、本発明に使用することができる。

【0140】

加えて、２種類以上の結合リガンド薬剤送達結合体を使用することができる。例示的には、例えば、宿主動物を、異なるビタミンを有する結合体であるが同じ薬剤の共投与プロトコールにより治療することができる。他の実施態様において、宿主動物を、異なる薬剤に結合している同じ結合リガンドを含む又は多様な薬剤に結合している多様な結合リガンドを含む結合体で治療することができる。別の例示的な実施態様において、同じ又は異なるビタミンを有する、並びに同じ薬剤送達結合体の一部として複数のビタミン及び複数の薬剤を含む同じ又は異なる薬剤を有する結合リガンド薬剤送達結合体を使用することができる。

【0141】

別の例示的な態様において、結合リガンド薬剤送達結合体を投与するための任意の有効レジメンを使用することができる。例えば、結合リガンド薬剤送達結合体を、単回用量として投与することができるか又は多回用量１日レジメンとして分割投与することができる。別の実施態様において、時差レジメン、例えば１週間あたり１～３日間を、１日治療の代替案として使用することができ、本発明を定義するため、そのような断続的又は時差的な１日レジメンは、連日治療と同等であって本発明の方法の範囲内であると考慮される。一つの実施態様において、宿主を結合リガンド薬剤送達結合体の多回注射により治療して、病原性細胞の集団を排除する。別の実施態様において、宿主には、結合リガンド薬剤送達結合体を、例えば１２～７２時間間隔又は４８～７２時間間隔で複数回（好ましくは約２回から最大約５０回まで）注射する。他の実施態様において、結合リガンド薬剤送達結合体の追加の注射を、最初の注射の後、数日間又は数か月の間隔で患者に投与することができ、追加の注射は、病原性細胞により引き起こされる疾患状態の再発を防止する。

【0142】

例示的には、結合リガンド薬剤送達結合体を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、疾患状態に罹患している動物又は患者に非経口投与することができ、例えば皮内、皮下、筋肉内、腹腔内又は静脈内投与することができる。別の実施態様において、結合リガンド薬剤送達結合体を、医学的に有用な他の手順により動物又は患者に投与することができ、有効用量を標準的な又は徐放性の投与形態で投与することができる。別の態様において、治療方法は、単独で、又は活性化マクロファージにより仲介される疾患状態の治療において認められている他の治療方法と組み合わせて使用することができる。

【0143】

本明細書に記載されるものは、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現する病原性細胞集団を画像化する方法である。

【0144】

本明細書に記載されるものは、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現する病原性細胞集団に関連する疾患及び疾患状態を診断する方法である。本明細書に記載されている化合物は、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現する細胞に選択的及び／又は特異的に結合する。加えて、病原性細胞と正常細胞の間に選択性を示すばかりでなく、病原性細胞集団の間でも選択性を示す（ＰＳＭＡを発現しているＬｎＣＡＰ細胞が、発現していないＡ５４９腫瘍又はＫＢ腫瘍と比較して優先的に可視化されている、図８を参照すること）。加えて、本明細書に記載されている結合体により実施される競合研究で示されているように、反応はＰＳＭＡ結合に特異的であり、ここで当該研究においては、結合体のみを用いて、又はＰＳＭＡの既知の結合リガンドであるＰＭＰＡの過剰量の存在下で、結合が決定される。腎臓及び腫瘍の両方における結合は、過剰量のＰＭＰＡの存在によりブロックされる（例えば、本明細書に記載されている方法実施例を参照すること）。

【0145】

別の実施態様において、結合体は約１００nM以下の結合定数Ｋ_dを有する。別の態様において、結合体は約７５nM以下の結合定数Ｋ_dを有する。別の態様において、結合体は約５０nM以下の結合定数Ｋ_dを有する。別の態様において、結合体は約２５nM以下の結合
数Ｋ_dを有する。

【0146】

別の実施態様において、本明細書に記載されている結合体は、血液、心臓、肺、肝臓、脾臓、十二指腸、皮膚、筋肉、膀胱及び前立腺のような、正常組織よりも少なくとも３倍の選択性又は少なくとも５倍の選択性でＰＳＭＡを発現又は過剰に発現する細胞又は組織に対して、選択性を示す。一つの変形態様において、本明細書に記載されている結合体は、正常組織よりも少なくとも１０倍の選択性でＰＳＭＡを発現又は過剰発現する細胞又は組織に対して、選択性を示す。画像化において観察される選択性は、ＰＳＭＡを発現又は過剰発現する細胞又は細胞集団の選択的又は特異的排除に反応する疾患状態の治療において観察されうる選択性を示唆することが、理解される。

【0147】

薬剤送達結合体の１日投与単位は、宿主の状態、治療される疾患の状態、結合体の分子量、その投与経路及び組織分布、並びに放射線治療のような他の治療処置の併用の可能性によって有意に変わることができる。患者に投与される有効量は、体表面積、患者の体重及び患者の状態に関する医師の評価に基づいている。有効用量は、約１ng/kg～約１mg/kg、約１μg/kg～約５００μg/kg、約１μg/kg～約１００μg/kg及び約１μg/kg～約１０μg/kgの範囲であることができる。

【0148】

一般に、二価リンカー（Ｌ）と結合リガンド（Ｂ）、又はその類似体若しくは誘導体との間の結合体や、二価リンカー（Ｌ）と薬剤又はその類似体若しくは誘導体（任意の介在ヘテロ原子を含む）との間の結合体を形成するために、本発明に従って任意の方法を利用することができる。また、スペーサーリンカー、放出型リンカー及び二価リンカー（Ｌ）を形成する１個以上のヘテロ原子の間の結合体を形成するために、当該技術で認められた任意の方法を使用することができる。結合体は、例えば水素、イオン又は共有結合を介するような、これらの分子のいずれかの間の直接的な結合により形成することができる。共有結合は、例えば、酸、アルデヒド、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル又はヒドラゾ基の間のアミド、エステル、ジスルフィド又はイミノ結合の形成を介して生じることができる。

【0149】

合成方法は、場合により含まれるヘテロ原子又はスペーサーリンカーに既に存在しているヘテロ原子、放出型リンカー、薬剤及び／又は結合リガンドの選択に応じて選ばれる。一般に、関連する結合形成反応は、Richard C. Larock, “Comprehensive Organic Transformations, a guide to functional group preparations,” VCH Publishers, Inc. New York (1989)及びTheodora E. Greene & Peter G.M. Wuts, “Protective Groups ion Organic Synthesis,” 2d edition, John Wiley & Sons, Inc. New York (1991)に記載されており、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0150】

より詳細には、ジスルフィド基は、一般に、アルキル若しくはアリールスルホニルチオアルキル誘導体又は対応するヘテロアリールジチオアルキル誘導体、例えばピリジン－２－イルジチオアルキル誘導体などを、アルキレンチオール誘導体と反応させることにより形成することができる。例えば、必要とされるアルキル又はアリールスルホニルチオアルキル誘導体は、Ranasinghe and Fuchs, Synth. Commun. 18(3), 227-32 (1988)の方法に従って調製することができ、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。非対称ジアルキルジスルフィドを調製する他の方法は、ＷＯ８８／０１６２２、欧州特許出願第０１１６２０８Ａ１号及び米国特許第４，６９１，０２４号（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている、アルキルチオールによる非対称ヘテロアリール－アルキルジスルフィド、例えば２－チオピリジニル、３－ニトロ－２－チオピリジニルなどのジスルフィドのチオール交換に基づいている。更に、炭酸塩、チオ炭酸塩及びカルバメートは、一般に、ヒドロキシ置換化合物、チオ置換化合物又はアミン置換化合物を、それぞれ、適切な離脱基を有する活性化アルコキシカルボニル誘導体と反応させることにより形成することができる。

【実施例】

【0151】

本明細書に記載されている化合物は、従来の有機合成方法により調製することができる。加えて、本明細書に記載されている化合物は、下記に示されているとおりに調製することもができる。特に指示のない限り、出発材料及び試薬は、全て市販品を利用することができる。アミノ酸出発材料は、全てChem-Impex Int（Chicago, IL）から購入した。¹Ｈ ＮＭＲスペクトルは、特に指示のない限り、Bruker５００MHzクリオプローブを使用して得た。

【0152】

実施例１Ａ。結合体のＰＳＭＡインヒビター中間体の一般的合成。ＤＵＰＡ誘導体の２－〔３－（１，３－ビス－tert－ブトキシカルボニル－プロピル）－ウレイド〕－ペンタン二酸１－tert－ブチルエステル（Ｉ）の特定の合成を例示する。

【0153】

【化24】

【0154】

ＳＫ０９。－７８℃に冷却した、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２５．０mL）中のＬ－グルタミン酸ジ－tert－ブチルエステルＨＣｌ（１．０ｇ、３．３９mmol）及びトリホスゲン（３２９．８mg、１．１２mmol）の混合物に、トリエチルアミン（１．０mL、８．１９mmol）を加た。窒素下、－７８℃で２時間撹拌した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５．０mL）中のＬ－Ｇｌｕ（ＯＢｎ）－Ｏ－tert－Ｂｕ（１．２ｇ、３．７２mmol）及びトリエチルアミン（６００μL、４．９１mmol）の混合物を加えた。反応混合物を１時間かけて室温にして、室温で一晩撹拌を続けた。反応混合物を１N ＨＣｌとブラインで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：１、Ｒ_t＝０．６７）を使用して精製して、ＳＫ０９（１．７６ｇ、９０．２％）を得た。Ｃ₃₀Ｈ₄₆Ｎ₂Ｏ₉；Ｗ＝５７８．６９g/mol；無色の油状物；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ１．４３（ｓ，９Ｈ，ＣＨ₃－^tＢｕ）；１．４４（ｓ，９Ｈ，ＣＨ₃－^tＢｕ）；１．４６（ｓ，９Ｈ，ＣＨ₃－^tＢｕ）；１．８５（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；１．８７（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．０６（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．０７（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．３０（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．４４（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；４．３４［ｓ（ｂｒｏａｄ），１Ｈ，αＨ］；４．３８［ｓ（ｂｒｏａｄ），１Ｈ，α－Ｈ］；５．１０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ₂－Ａｒ）；５．２２［ｓ（ｂｒｏａｄ），２Ｈ，尿素－Ｈ）；７．３４（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ２８．１６；２８．２５；２８．５４；２．６０；３０．５２；３１．７３；５３．１３；５３．２２；６６．５８；８０．７１；８２．２５；８２．３５；１２８．３９；１２８．７１；１３６．０３；１５６．９６；１７２．０１；１７２．１６；１７２．６５；１７３．１３：ＣＩ－ＭＳ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）⁺，ＥＳＩ－ＭＳ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）⁺，６０１（Ｍ＋Ｎａ付加物）。

【0155】

ＳＫ２３。ＣＨ₂Ｃｌ₂中の化合物ＳＫ０９（２５０mg、４３２mmol）の溶液に、３０％Ｐｄ／Ｃ（５０mg）を加えた。反応混合物を、１気圧、室温で２４時間水素化した。Ｐｄ／Ｃをセライトパッドで濾過し、ＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４０：６０、Ｒ_t＝０．５８）を使用して精製して、ＳＫ２３（１６９mg、８０．２％）を得た。Ｃ₂₃Ｈ₄₀Ｎ₂Ｏ₉；ＭＷ＝４８８．５７g/mol；無色の油状物；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ１．４６（ｍ，２７Ｈ，ＣＨ₃－^tＢｕ）；１．９１（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．０７（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．１８（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．３３（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．４６（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；４．３１（ｓ（ｂｒｏａｄ），１Ｈ，αＨ）；４．３５（ｓ（ｂｒｏａｄ），１Ｈ，α－Ｈ）；５．０５（ｔ，２Ｈ，尿素－Ｈ）；ＣＩ－ＭＳ＝４８９（Ｍ＋Ｈ）⁺，ＥＳＩ－ＭＳ＝４８９（Ｍ＋Ｈ）⁺，５１１（Ｍ＋Ｎａ付加物），４８７（Ｍ－Ｈ）^-。

【0156】

実施例１Ｂ。結合体のＰＳＭＡインヒビター中間体の一般的合成。第三級ブチル保護ＭＵＰＡ誘導体の２－〔３－（１－tert－ブトキシカルボニル－２－メルカプト－エチル）－ウレイド〕－ペンタン二酸ジ－tert－ブチルエステル（ＩＩ）の特定の合成を例示する。

【0157】

【化25】

【0158】

ＳＫ１５。－７８℃に冷却した、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５．０mL）中のＬ－グルタミン酸ジ－tert－ブチルエステルＨＣｌ（２００mg、０．６７６mmol）及びトリホスゲン（６７mg、０．２２８mmol）の混合物に、トリエチルアミン（５０μL、０．４１０mmol）を加えた。窒素下、－７８℃で２時間撹拌した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１．０mL）中のＤ－Ｃｙｓ（Ｆｍ）
－Ｏ^tＢｕ（２９１．４mg、０．７７４mmol）及びトリエチルアミン（３０μL、２４０mmol）の混合物を加えた。反応混合物を１時間かけて室温にして、室温で一晩撹拌を続けた。反応混合物を１N ＨＣｌとブラインで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５０：５０、Ｒ_t＝０．６）を使用して精製して、ＳＫ１５（３７４mg、８６．４％）を得た。Ｃ₃₅Ｈ₄₈Ｎ₂Ｏ₇Ｓ；ＭＷ＝６４０．８３g/mol；淡黄色の油状物；¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ１．４５（ｓ，２７Ｈ，ＣＨ₃－^tＢｕ）；１．８８（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．１０（ｍ，１Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．３２（ｍ，２Ｈ，Ｇｌｕ－Ｈ）；２．９７（ｍ，２Ｈ，Ｆｍ－ＣＨ₂）；３．１３（ｍ，２Ｈ，Ｃｙｓ－Ｈ）；４．０９（ｔ，１Ｈ，Ｆｍ－Ｈ）；４．３８（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．６６（ｍ，１Ｈ，α－Ｈ）；５．５５（ｄ，１Ｈ，尿素－Ｈ）；５．６７（ｄ，１Ｈ，尿素－Ｈ）；７．３０（ｑ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；７．３６（ｑ，２Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；７．７３（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ）。¹³Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃）δ２８．０５；２８．１４；２８．４２；３１．６４；３６．２７；３７．２５；５３．０７；５３．７３；８０．５１；８１．９８；８２．４２；１１９．８５；１２４．９５；１２５．０９；１２７．０９；１２７．５１；１４１．０９；１４５．９９；１５６．７６；１７０．８０；１７２．１５；１７２．４３；ＣＩ－ＭＳ＝６４１（Ｍ＋Ｈ）⁺，ＥＳＩ－ＭＳ＝６４１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0159】

実施例２Ａ。ＰＳＭＡ画像化剤結合体の一般的合成。原子１４個のリンカー化合物ＳＫ２８の合成を例示する。

【化26】

【0160】

ＳＫ２８は、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番０４－１２－２０５０）から出発する、標準的なフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を使用して合成した。ＳＫ２８は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル（ＡＣＮ）；λ＝２５７nm；溶媒勾配：２５分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施）を使用して精製した（６１％）。精製した化合物を、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ８μm；３．０×１５mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm、１０分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₄₇Ｈ₆₅Ｎ₂Ｏ₁₇Ｓ；ＭＷ＝１０６０．１３g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝７．７分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ０．９３（ｍ，２Ｈ）；１．０（ｍ，５Ｈ）；１．２７（ｍ，５Ｈ）；１．６９（ｍ，２Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；１．９４（ｍ，２Ｈ）；２．１０（ｍ，２Ｈ）；２．２４（ｑ，２Ｈ）；２．６２（ｍ，２Ｈ）；２．７８（ｍ，４Ｈ）；２．８８（ｄｄ，１Ｈ）；２．９６（ｔ，２Ｈ）；３．０１（ｄｄ，１Ｈ）；３．３１（ｄｄ，１Ｈ）；３．６２（ｄｄ，１Ｈ）；３．８０（ｑ，１Ｈ，αＨ）；４．０７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．４２（ｍ，２Ｈ，αＨ）；４．６６（ｍ，１Ｈ，αＨ）；７．１８（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ）：ＬＣ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＥＳＩ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0161】

実施例２ＡＡ。以下の実施例化合物を同様の方法により合成した。

【化27】

【0162】

実施例２Ｂ～２Ｅ。以下の化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－１２－２０５０）から出発するＦｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して、本明細書に記載されている方法に従って合成し、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm）を使用して精製し、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm）を使用して分析した。

【0163】

【化28】

【0164】

ＳＫ６０（原子０個のリンカー）：溶媒勾配 Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２２０nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施、（７５．３％）。Ｃ₂₁Ｈ₃₂Ｎ₆Ｏ₁₄Ｓ；ＭＷ＝６２４．５８g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝６．３分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ１．７０（ｍ，２Ｈ）；１．９２（ｍ，２Ｈ）；２．１７（ｍ，２Ｈ）；２．２３（ｍ，２Ｈ）；２．５７（ｍ，１Ｈ）；２．７７（ｍ，４Ｈ）；３．４５（ｄｄ，１Ｈ）；３．５４（ｄｄ，１Ｈ）；３．８３（ｔ，１Ｈ，αＨ）；４．０６（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３８（ｍ，１Ｈ，α－Ｈ）；４．６３（ｍ，１Ｈ，α－Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ＝６２５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0165】

【化29】

【0166】

ＳＫ６２（原子７個のリンカー）：溶媒勾配 Ａ＝０．１ ＴＦＡ、ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２２０、２５７nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施、（７２％）。Ｃ₃₅Ｈ₄₈Ｎ₈Ｏ₁₈Ｓ；ＭＷ＝９００．８６g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝８．２分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＯＳ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ１．６２（ｍ，１Ｈ）；１．７０（ｍ，２Ｈ）；１．７９（ｍ，１Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；２．０９（ｔ，２Ｈ）；２．１６（ｍ，２Ｈ）；２．２４（ｍ，２Ｈ）；２．６０（ｍ，１Ｈ）；２．７５（ｍ，４Ｈ）；２．８１（ｍ，１Ｈ）；２．９７（ｍ，１Ｈ）；３．３３（ｄｄ，１Ｈ）；３．６０（ｄｄ，１Ｈ）；３．８１（ｔ，１Ｈ，αＨ）；４．０７（ｍ，２Ｈ，αＨ）；４．３３［ｍ，１Ｈ，α－Ｈ］；４．３９（ｔ，α－Ｈ）；４．６５（ｍ，１Ｈ，α－Ｈ）；７．２０（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ＝９０１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0167】

【化30】

【0168】

ＳＫ３８（原子１６個のリンカー）：溶媒勾配 Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施、（６３％）。Ｃ₄₃Ｈ₆₃Ｎ₉Ｏ₁₉Ｓ，ＭＷ＝１０４２．０７g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝ 分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ０．９４（ｍ，２Ｈ）；１．０８（ｍ，５Ｈ）；１．２７（ｍ，５Ｈ）；１．６６（ｍ，２Ｈ）；１．７０（ｍ，２Ｈ）；１．７９（ｍ，１Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；２．０９（ｔ，２Ｈ）；２．７４（ｍ，２Ｈ）；２．８４（ｍ，１Ｈ）；２．９５（ｔ，３Ｈ）；３．０７（ｄ，２Ｈ）；３．２３（ｍ，１Ｈ）；３．４３（ｄｄ，１Ｈ）；３．５２（ｄｔ，１Ｈ）；３．７８（ｍ，１Ｈ，αＨ）；３．８１（ｍ，１Ｈ，αＨ）；３．８８（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．１１（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３９［ｍ，２Ｈ，α－Ｈ］；４．６５（ｍ，１Ｈ，α－Ｈ）；７．１４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；７．２１（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ）：ＥＳＩ－ＭＳ＝１０４３
（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0169】

【化31】

【0170】

ＳＫ５７（原子２４個のリンカー）：溶媒勾配 Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施、（５６％）。Ｃ₄₅Ｈ₇₀Ｎ₈Ｏ₂₂Ｓ，ＭＷ＝１１０７．１４g/mol；無色の固体；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ１．６６（ｍ，２Ｈ）；２．０７（ｍ，４Ｈ）；２．３１（ｔ，１Ｈ）；２．４３（ｍ，１Ｈ）；２．７７（ｍ，２Ｈ）；２．９８（ｄｄ，１Ｈ）；３．１４（ｔ，２Ｈ）；３．２４（ｄ，１Ｈ）；３．４０（ｍ，４Ｈ，ＰＥＧ－Ｈ）；３．４６（ｓ，２４Ｈ，ＰＥＧ－Ｈ）；３．７８（ｔ，１Ｈ）；３．８１（ｔ，１Ｈ）；４．０３（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．４０（ｍ，２Ｈ，α－Ｈ）；７．１６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；７．２２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ－Ｈ）：ＥＳＩ－ＭＳ＝１１０８（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0171】

実施例２Ｆ。以下の化合物を本明細書に記載されている方法に従って合成することができる。

【化32】

【0172】

実施例３Ａ。キレート基に放射性核種を付加する一般的方法。^99mcＴｃでＳＫ２８を放射標識してＳＫ３３を調製することを例示する。

【化33】

【0173】

ＳＫ２８配合キットの調製。ＨＰＬＣ等級Millipore濾過水（５０mL）を１００mLのボトルに加え、アルゴンで少なくとも１０分間パージした。α－Ｄ－グルコヘプトン酸ナトリウム二水和物（８００mg）を、アルゴンパージ水（５mL）に溶解した。塩化スズ二水和物（１０mg）を、アルゴンで泡立てながら、０．０２M ＨＣｌ（１０mL）に溶解した。塩化スズ（０．８mL）をグルコヘプトン酸ナトリウム溶液にアルゴン下で加えた。ＳＫ２８（１．４mL）をグルコヘプトン酸ナトリウム／塩化スズ溶液にアルゴン下で加えた。反応混合物のｐＨを、０．１N ＮａＯＨを使用して、６．８±０．２に調整した。アルゴンパージ水（５．２mL）を反応混合物に加えて、総容量を１０mLにした。１．０mLの反応混合物をアルゴン雰囲気下で各バイアル（バイアル１０個）に分配し、３６～４８時間凍結乾燥した。バイアルをアルゴン雰囲気下でゴム栓及びアルミニウムシールにより密閉して、ＳＫ２８配合キットを作製した。配合キットバイアルを、使用するまで－２０℃で保存した。

【0174】

^99mＴｃによるＳＫ２８の標識化。^99mＴｃによるＳＫ２８の放射標識は、公表されている手順に従って実施することができる。配合バイアルを、室温に１０分間温め、沸騰水浴で３分間加熱した。次に、１５mCiの過テクネチウム酸ナトリウム^99mＴｃ（１．０mL）を注射し、等容量の気体をバイアルから引き抜いて圧力を正常化した。バイアルを沸騰水浴で１５～２０分間加熱し、次に、実験に使用する前に室温に冷却した。放射化学的純度を、放射能ＴＬＣ（＞９８％）により分析したところ、放射標識化合物のシン及びアンチ異性体（ＳＫ３３／ＳＫ２８－^99mＴｃ）が示された。

【0175】

実施例３Ｂ～３Ｅ。以下の実施例を本明細書に記載されている方法に従って調製した（シン異性体とアンチ異性体の両方が得られたが、シン異性体のみが示されている）：

【化34】

【化35】

【化36】

【化37】

【0176】

実施例３Ｆ。以下の化合物を本明細書に記載されている方法に従って合成することができる。

【化38】

【0177】

実施例４。ＰＳＭＡ画像化剤結合体の一般的合成であり、ユニバーサルＰＳＭＡ（ＤＵＰＡ）樹脂、原子２個のリンカー及びＦＩＴＣを使用してＳＫ５９により例示している。この結合体を使用して、前立腺癌患者において循環性腫瘍細胞を検出することもできる。

【0178】

【化39】

【0179】

ＰＳＭＡユニバーサル樹脂及びＳＫ５９の合成。ユニバーサルＰＳＭＡリガンド（ＤＵＰＡ）樹脂は、ユニバーサルNovaTag（商標）樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－２－３９１０）を使用して合成した。樹脂をＤＣＭ（ＣＨ₂Ｃｌ₂）及びＤＭＦで膨潤させた後、Ｆｍｏｃ基を、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）を使用して脱保護した。tert－ブチル保護ＤＵＰＡを、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ〔ヘキサフルオロリン酸ウロニウム２－（１Ｈ－７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチル〕及びＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）を使用してカップリングした。側基Ｍｍｔ（４－メトキシトリチル）を、ＤＣＭ／ＴＦＥ（トリフルオロエタノール）中の１M ＨＯＢＴ（１－ヒドロキシベンゾトリアゾール）で除去した。樹脂中間体をＤＭＦで洗浄し、続く合成工程に直ぐに使用することができるか、又は後の使用のためにＤＣＭ／ＤＭＦ、次にＭｅＯＨで洗浄し、乾燥することができる。

【0180】

ユニバーサルＰＳＭＡ樹脂を、ＤＭＦ中、ＤＩＰＥＡ（４当量）の存在下で市販のＦＩＴＣ（１．２５当量）と反応させて、ＳＫ５９（原子２個のリンカー）作成物を生じることができる。最終化合物を、ＴＦＡ（トリフルオロ醋酸）、ＴＩＰＳ（トリイソプロピルシラン）及び水の混合物を使用して、樹脂から切断した。精製には、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ ５μm；１９×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を用いた（６３％）。ＳＫ５９は、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₃₄Ｈ₃₃Ｎ₆Ｏ₁₃Ｓ；ＭＷ＝７５１．７２g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝７．２分間；ＥＳＩ－ＭＳ＝７５２（Ｍ＋Ｈ）⁺；７７４（Ｍ＋Ｎａ）⁺；７５０（Ｍ－Ｈ）^-。

【0181】

実施例５Ａ。ＰＳＭＡ画像化剤結合体の一般的合成であり、ユニバーサルＰＳＭＡ（ＤＵＰＡ）樹脂、原子１６個のリンカー及びＦＩＴＣを使用してＳＫ６４により例示している。

【0182】

【化40】

【0183】

ユニバーサルＰＳＭＡ樹脂を、標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－（Ｏ^tＢｕ）－ＯＨ及びＦｍｏｃ－ＥＡＯＡ（８－アミノオクトン酸）とカップリングした。ＤＭＦ中、ＤＩＰＥＡ（４当量）の存在下でイソチオシアン酸フルオレセイン（１．２５当量）に結合した後、ＳＫ６４（原子１６個のリンカー）化合物を、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ₂Ｏを使用して樹脂から切断した。精製は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ ５μm；１９×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して実施した（６３％）。ＳＫ６４は、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₄₇Ｈ₅₅Ｎ₇Ｏ₁₇Ｓ；ＭＷ＝１０２２．０４g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝７．８分間；ＥＳＩ－ＭＳ＝
０２２（Ｍ＋Ｈ）⁺；１０２０（Ｍ－Ｈ）^-。

【0184】

実施例５Ｂ～５Ｃ。以下の化合物は、本明細書に記載されている合成方法を使用して調製した：

【化41】

【0185】

ＳＫ６３（原子７個のリンカー、Ｃ₃₉Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₁₇、分子量：８６４．７６）は、ユニバーサルＰＳＭＡ樹脂及びＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－（Ｏ^tＢｕ）－ＯＨに結合した標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して調製した。ＦＩＴＣとカップリングした後、化合物を、ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ₂Ｏカクテルを使用して樹脂から切断し、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ ５μm；１９×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）により精製し（６３％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。ＳＫ６３：Ｃ₃₉Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₁₆Ｓ；ＭＷ＝８８０．８３g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝６．８分間；ＥＳＩ－ＭＳ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）⁺；９０３（Ｍ＋Ｎａ）⁺；８６３（Ｍ－Ｈ）^-。

【0186】

【化42】

【0187】

ＳＫ５８（原子２４個のリンカー、Ｃ₄₉Ｈ₆₂Ｎ₆Ｏ₂₀Ｓ，分子量：１０８７．１１）は、ユニバーサルＰＳＭＡ樹脂及びＦｍｏｃ－（ＰＥＧ）₆－ＯＨに結合した標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して調製し、ＨＰＬＣ（２５分間で１％Ｂから６０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）により精製し（６５％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm、１０分間で１％Ｂから６０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₄₉Ｈ₆ＯＮ₆Ｏ₂₀Ｓ；ＭＷ＝１０８７．１１g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝７．３分間；ＥＳＩ－ＭＳ＝１０８７（Ｍ＋Ｈ）⁺；１１０９（Ｍ＋Ｎａ）⁺；１０８５（Ｍ－Ｈ）^-。

【0188】

実施例６Ａ。ＣｙｓマレイミドＰＳＭＡ画像化剤結合体の一般的合成であり、Wang ＰＳＭＡ（ＤＵＰＡ）樹脂、原子２８個のリンカー及びオレゴングリーン４８８を使用してＳＫ５６により例示している（ｎ＝３）。

【0189】

【化43】

ｎが４～約３０の整数である関連する類似体も、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。

【0190】

ＳＫ５４は、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－１２－２０５０）から出発し、標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して調製し、逆相分ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ；Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから６０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して精製し（６３％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₃₈Ｈ₅₉Ｎ₅Ｏ₁₈Ｓ，ＭＷ＝９０５．９６g/mol；無色の固体；Ｒ_t＝９．２分間，ＬＣ－ＭＳ＝９０６．３g/mol；ＥＳＩ－ＭＳ＝９０６（Ｍ＋Ｈ）⁺；９０４（Ｍ－Ｈ）^-。

【0191】

ＳＫ５６（原子２４個のリンカー）。ＨＰＬＣ等級Milli-Q水及び飽和ＮａＨＣＯ₃をアルゴンで１０分間パージした。ＳＫ５４を、アルゴンで泡立てながら、１．０mLのアルゴンパージ水に溶解した。溶液のｐＨを６．８まで上昇させ、１．０mLのＴＨＦに溶解したオレゴングリーン４８８マレイミドを、反応混合物に加えた。反応を、分析ＨＰＬＣ（１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、ｐＨ＝７．０；１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）によりモニタリングしたところ、反応は１０分以内に完了した。ＴＨＦを蒸発させ、反応混合物を５．０mLの７mM リン酸緩衝剤で希釈した。精製は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝７mMリン酸緩衝剤、ｐＨ＝７．２、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して実施し（８９％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝４８８nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₆₂Ｈ₇₀Ｆ₂Ｎ₆Ｏ₂₅Ｓ；ＭＷ＝１３６９．３１g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝７．０分間；ＬＣ－ＭＳ＝１３７０．２；ＥＳＩ－ＭＳ＝１３９１（Ｍ＋Ｎａ）⁺。 以下の原子２４個のリンカー化合物を、本明細書に記載されている一般的合成を使用して、本明細書に記載されているものと同様の方法で調製した。

【0192】

実施例６Ｂ。以下のAlexaFluor 488結合体化合物を、ＳＫ５５から出発して本明細書に記載されている方法に従って調製した（ｎ＝３）。

【0193】

【化44】

ｎが４～約３０の整数である関連する類似体も、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。

【0194】

実施例７Ａ～７Ｃ。以下のＤＵＰＡ画像化剤結合体化合物ＳＫ５１、ＳＫ４５及びＳＫ４９を、本明細書に記載されている方法に従って調製した（ｎ＝５）。

【0195】

【化45】

ＳＫ５１（原子２５個のリンカー及びAlexaFluor 647、ＭＷ約２３００（Invitrogenから市販されている））
ｎが０～約１２の整数である関連する類似体も、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。

【0196】

【化46】

ＳＫ４５（原子２５個のリンカー BODIPY 505、Ｃ₆₇Ｈ₈₇ＢＦ₂Ｎ₁₃Ｏ₂₀Ｓ、分子量：１４７５．３５）
ｎが０～約１２の整数である関連する類似体も、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。

【0197】

【化47】

ＳＫ４９（原子２５個のリンカー－オレゴングリーン４８８、Ｃ₇₁Ｈ₇₆Ｆ₂Ｎ₁₀Ｏ₂₄、分子量：１５２３．４８）
ｎが０～約１２の整数である関連する類似体も、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。

【0198】

リンカーの合成。前述のそれぞれの実施例において、リンカーは、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－１２－２０５０）から出発し、標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して合成した。Ｃ₄₇Ｈ₆₅Ｎ₂Ｏ₁₇Ｓ；ＭＷ＝１０６０．１３g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝７．７分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ０．９３（ｍ，２Ｈ）；１．０８（ｍ，５Ｈ）；１．２７（ｍ，５Ｈ）；１．６９（ｍ，２Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；１．９４（ｍ，２Ｈ）；２．１０（ｍ，２Ｈ）；２．２４（ｑ，２Ｈ）；２．６２（ｍ，２Ｈ）；２．７８（ｍ，４Ｈ）；２．８８（ｄｄ，１Ｈ）；２．９６（ｔ，２Ｈ）；３．０１（ｄｄ，１Ｈ）；３．３１（ｄｄ，１Ｈ）；３．６２（ｄｄ，１Ｈ）；３．８０（ｑ，１Ｈ，αＨ）；４．０７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．４２（ｍ，２Ｈ，αＨ）；４．６６（ｍ，１Ｈ，αＨ）；７．１８（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ）：ＬＣ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＥＳＩ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0199】

ＳＫ５１（AlexaFluor 647結合体）、ＳＫ４５（BODIPY結合体）及びＳＫ４９（オレゴングリーン４８８結合体）の合成。ＨＰＬＣ等級Milli-Q水及び飽和ＮａＨＣＯ₃をアルゴンで１０分間パージした。リンカーを、アルゴンで泡立てながら、１．０mLのアルゴンパージ水に溶解した。溶液のｐＨを６．８に上昇させ、AlexaFluorマレイミド、BODIPYマレイミド又はオレゴングリーン４８８マレイミドを１．０mLのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）にそれぞれ溶解し、反応混合物に加えた。反応の進行を、分析ＨＰＬＣ（１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、ｐＨ＝７．０；１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）によりモニタリングしたところ、反応は１０分以内に完了した。ＴＨＦを蒸発させ、反応混合物を５．０mLの１mMリン酸緩衝剤（ｐＨ＝７．２）で希釈した。

【0200】

各化合物は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ ５μm；１８×１５０mm；Ａ＝１mMリン酸緩衝剤、ｐＨ＝７．２、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝６４７又は４８８nm；溶媒勾配：２５分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して精製し、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×５０mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝５８８又は４８８nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。
ＳＫ５１：ＭＷ約２３６０．１３g/mol；青色の固体，Ｒ_t＝６．７分間；（AlexaFluor 647の構造は未知）；
ＳＫ４５：Ｃ₆₇Ｈ₈₇ＢＦ₂Ｎ₁₃Ｏ₂₀Ｓ；ＭＷ＝１４７５．３５g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝７．６分間；ＬＣ－ＭＳ＝１４７５．３（Ｍ＋Ｈ）⁺；
ＳＫ４９：Ｃ₇₁Ｈ₇₆Ｆ₂Ｎ₁₀Ｏ₂₄Ｓ；ＭＷ＝１５２３．４８g/mol；橙色の固体，Ｒ_t＝６．７分間；ＬＣ－ＭＳ＝１５２４（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0201】

実施例８Ａ。放出型薬剤結合体のＰＳＭＡジスルフィトリンカー中間体の一般的合成であり、ＳＫ６８により例示している。

【化48】

【0202】

ＳＫ６８は、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－１２－２０５０）から出発し標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して合成し、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ；Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm；溶媒勾配：３０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して精製し（６８％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₃₂Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₁₇Ｓ；ＭＷ＝８１４．７７g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝８．２分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＯＳ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ１．７０（ｍ，３Ｈ）；１．９０（ｍ，３Ｈ）；２．１０（ｍ，２Ｈ）；２．１７（ｍ，２Ｈ）；２．２３（ｍ，２Ｈ）；２．３６（ｍ，１Ｈ）；２．５９（ｄｄ，１Ｈ）；２．７９（ｍ，３Ｈ）；３．０４（ｄｄ，１Ｈ）；４．０７（ｍ，２Ｈ，αＨ）；４．１３（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３７［ｍ，１Ｈ，α－Ｈ］；４．４７（ｍ，２Ｈ，α－Ｈ）；７．１９（ｍ，５Ｈ，Ａｒ－Ｈ）；７．８７（ｄ，尿素－ＮＨ）；８．２０（ｄ，１Ｈ，尿素－ＮＨ）；ＬＣ－ＭＳ＝８１５．３（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0203】

実施例８Ｂ。放出型薬剤の結合体のＰＳＭＡジスルフィトリンカー中間体の一般的合成であり、ＳＫ２８Ｌにより例示している。

【化49】

【0204】

ＳＫ２８は、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Wang樹脂（Novabiochem；カタログ番号０４－１２－２０５０）から出発して標準Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳを使用して合成し、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ；Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm；溶媒勾配：２５分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を３０分間実施）を使用して精製し（６１％）、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm；Ａ＝０．１ ＴＦＡ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５７nm、１０分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。ＳＫ２８Ｌ：Ｃ₄₇Ｈ₆₅Ｎ₂Ｏ₁₇Ｓ；ＭＷ＝１０６０．１３g/mol；白色の固体；Ｒ_t＝７．７分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）δ０．９３（ｍ，２Ｈ）；１．０８（ｍ，５Ｈ）；１．２７（ｍ，５Ｈ）；１．６９（ｍ，２Ｈ）；１．９０（ｍ，２Ｈ）；１．９４（ｍ，２Ｈ）；２．１０（ｍ，２Ｈ）；２．２４（ｑ，２Ｈ）；２．６２（ｍ，２Ｈ）；２．７８（ｍ，４Ｈ）；２．８８（ｄｄ，１Ｈ）；２．９６（ｔ，２Ｈ）；３．０１（ｄｄ，１Ｈ）；３．３１（ｄｄ，１Ｈ）；３．６２（ｄｄ，１Ｈ）；３．８０（ｑ，１Ｈ，αＨ）；４．０７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．３７（ｍ，１Ｈ，αＨ）；４．４２（ｍ，２Ｈ，αＨ）；４．６６（ｍ，１Ｈ，αＨ）；７．１８（ｍ，１０Ｈ，Ａｒ－Ｈ）：ＬＣ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺；ＥＳＩ－ＭＳ＝１０６１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0205】

実施例９Ａ。ジスルフィド結合した結合体を調製する一般的合成であり、チューブリシンＢ結合体ＳＫ７１（原子２０個のリンカー）により例示している。

【化50】

【0206】

ＥＣ０３１２の合成。チューブリシンＢ（３０mg、０．０３６mmol）をアルゴン下、－１５℃で醋酸エチル（６００μL）に溶解した。クロロギ酸イソブチル（４．７μL、０．０５４mmol）及びジイソプロピルエチルアミン（１３．２μL、０．０７６mmol）を反応混合物に加え、反応をアルゴン下、－１５℃で４５分間撹拌した。醋酸エチル（５００μL)に溶解したＥＣ０３１１（１３．４mg、０．０５４mmol）を加えた。反応混合物を－１５℃で更に１５分間、次に室温で４５分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、短カラム（ＣＨ₂Ｃｌ₂中メタノール２％～８％）を使用して精製して、ＥＣ０３１２（３４．４mg、９０．５％）を得た。ＥＣ０３１２は、ＮＭＲ（Varian 300 MHz、ＣＤＣｌ₃）及びＬＣ－ＭＳ＝１０５８．３（Ｍ＋Ｈ）⁺を使用して特徴決定した。

【0207】

ＳＫ７１の合成。ＨＰＬＣ等級Milli-Q水及び飽和ＮａＨＣＯ₃をアルゴンで１０分間パージした。ＳＫ６８を、溶液をアルゴンで泡立てながら、１．０mLのアルゴンパージ水に溶解した。溶液のｐＨを、アルゴンパージＮａＨＣＯ₃を使用して６．８に上昇させ、ＴＨＦ（２．０mL）に溶解したＥＣ０３１２を反応混合物に加えた。反応の進行を、分析ＨＰＬＣ（１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、ｐＨ＝７．０；λ＝２５４；１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）によりモニタリングしたところ、反応は１０分以内に完了した。ＴＨＦを蒸発させ、反応混合物を５．０mLの２mMリン酸緩衝剤で希釈した。ＳＫ７１（６１．３％）は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝２mMリン酸緩衝剤、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５４nm；２５分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して精製し、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５４nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₇₇Ｈ₁₀₉Ｎ₁₃Ｏ₂₈Ｓ₃：ＭＷ＝１７６０．９５g/mol；白色の固体，Ｒ_t＝７．６分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）はＳＫ７１構造と一致した；ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）（ｍ／ｚ）：（Ｍ－Ｈ）^-Ｃ₇₇Ｈ₁₁₀Ｎ₁₃Ｏ₂₈Ｓ₃の計算値１７５８．６５９４；実測値１７５８．７０３３；ＬＲＭＳ（ＬＣＭＳ）（ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ）⁺計算値１７６１．９；実測値１７６１．８；ＵＶ／Ｖｉｓ：λｍａｘ＝２５４nm。

【0208】

実施例９Ｂ。同様に、ＳＫ７１のＤ－Ｃｙｓ類似体を本明細書に記載されているとおりに調製した。

【化51】

【0209】

実施例９Ｃ。ジスルフィド結合した結合体を調製する一般的合成であり、チューブリシンＢ結合体ＳＫ７７（原子３１個のリンカー）により例示している。

【化52】

【0210】

ＨＰＬＣ等級Milli-Q水及び飽和ＮａＨＣＯ₃をアルゴンで１０分間パージした。ＳＫ６８を、アルゴンで泡立てながら、１．０mLのアルゴンパージ水に溶解した。溶液のｐＨを、アルゴンパージＮａＨＣＯ₃を使用して６．８に上昇させ、ＴＨＦ（２．０mL）に溶解したＥＣ０３１２を反応混合物に加えた。反応の進行を、分析ＨＰＬＣ（１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、ｐＨ＝７．０；λ＝２５４；１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）によりモニタリングしたところ、反応は１０分以内に完了した。ＴＨＦを蒸発させ、反応混合物を５．０mLの２mMリン酸緩衝剤で希釈した。ＳＫ７７（６１％）は、逆相分取ＨＰＬＣ（Waters, xTerra C₁₈ １０μm；１９×２５０mm；Ａ＝２mMリン酸緩衝剤、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５４nm；２５分間で５％Ｂから８０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を４０分間実施）を使用して精製し、逆相分析ＨＰＬＣ（Waters, X-Bridge C₁₈ ５μm；３．０×１５mm；Ａ＝１０mM ＮＨ₄ＯＡｃ、Ｂ＝ＡＣＮ；λ＝２５４nm、１０分間で１％Ｂから５０％Ｂ、８０％Ｂで洗浄を１５分間実施）を使用して分析した。Ｃ₉₃Ｈ₁₃₃Ｎ₁₆Ｏ₂₈Ｓ₃：ＭＷ＝２００６．３２g/moｌ；白色の固体，Ｒｔ＝７．７分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）；ＬＣ－ＭＳ＝２００７．０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0211】

実施例９Ｄ。同様に、ＳＫ７７のＤ－Ｃｙｓ類似体を本明細書に記載されているとおり
に調製した。

【化53】

【0212】

実施例９Ｅ。同様に、ＳＫ７７のＤ－Ｃｙｓプロパン酸類似体を本明細書に記載されているとおりに調製した。

【化54】

【0213】

実施例９Ｆ～９Ｇ。以下のＤＵＰＡビンブラスチン化合物及びＤＵＰＡカンプトテシン化合物であるＳＫ３７及びＳＫ４５を、それぞれ、本明細書に記載されている方法に従って調製した。

【化55】

【0214】

ＳＫ３７（ビンブラスチン結合体，Ｃ₉₃Ｈ₁₂₃Ｎ₁₅Ｏ₂₆Ｓ₂，分子量：１９３１．１９）、収率６３．１％で調製。Ｃ₉₃Ｈ₁₂₃Ｎ₁₅Ｏ₂₆Ｓ₂：ＭＷ＝１９３１．１９g/mol；白色の固体，Ｒ_t＝７．７分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）；ＬＣ－ＭＳ＝１９３２．６（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0215】

【化56】

【0216】

ＳＫ４５（カンプトテシン結合体，Ｃ₇₀Ｈ₈₃Ｎ₁₁Ｏ₂₃Ｓ₂，分子量：１５１０．６０）、収率６６％で調製。Ｃ₇₀Ｈ₈₃Ｎ₁₁Ｏ₂₃Ｓ₂：ＭＷ＝１５１０．６０g/mol；白色の固体，Ｒ_t＝７．５分間；¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆／Ｄ₂Ｏ）；ＬＣ－ＭＳ＝１５１１．１（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【0217】

実施例９Ｈ。同様に、ＳＫ３７のＧｌｕ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ類似体を本明細書に記載されているとおりに調製した。

【0218】

【化57】

【0219】

実施例１０。以下の化合物を、本明細書に記載されている合成方法を使用して調製した：
ＳＫ１２５（ＦＩＴＣ結合体）

【化58】

ＳＫ１３１（ローダミン結合体）

【化59】

ＳＫ１７９（ＦＩＴＣ結合体）

【化60】

ＦＩＴＣ結合体

【化61】

DyLight 680結合体

【化62】

DyLight 800結合体

【化63】

ＰＥＴ剤結合体

【化64】

ＰＥＴ剤結合体

【化65】

ＰＥＴ剤結合体

【化66】

例えば⁶⁴Ｃｕ、⁶⁵Ｃｕなどをキレート化することができるＤＯＴＡ結合体

【化67】

例えば⁶⁴Ｃｕ、⁶⁵Ｃｕなどをキレート化することができるＤＯＴＡ結合体

【化68】

例えばＩｎ、Ｇａ、Ｉｒ、Ｙｒなどをキレート化することができるＤＴＰＡ結合体

【化69】

例えばＴｃ、Ｔｃ酸化物などをキレート化することができるトリペプチド結合体

【化70】

【0220】

前述の例示的な実施態様は、本発明を例示することが意図されており、本明細書に記載されている発明をいかようにも制限するものとして読み取る又は解釈するべきではない。

【0221】

＜方法実施例＞
＝＝ 実施例１Ａ ＝＝
ＬＮＣａＰ細胞及びＳＫ２８（原子１４個のリンカー）を使用したインビトロ結合研究。ＬＮＣａＰ細胞（ＰＳＭＡを過剰発現しているヒト前立腺癌細胞株、American Type Culture Collection（ATCC）から購入）を、２つの２４ウエルファルコンプレートに接種し（１２０，０００細胞／ウエル）、グルタミン（２mM）を有するＲＰＭＩ（Gibco ＲＰＭＩ培地１６４０、カタログ番号２２４００）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ピルビン酸ナトリウム（１００mM）及び１％ＰＳ（ペニシリンストレプトマイシン）中で、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で４８時間増殖させて、接着単層にした。１つ目の２４ウエルプレートの細胞を、０nMから４５０nMまで濃度を増加させたＫ２８－^99mＴｃと共に（それぞれの濃度で３通り）、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。２つ目の２４ウエルプレートの細胞を、５０uMのＰＭＰＡと共に５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で３０分間インキュベートし、次に、０nMから４５０nMまで濃度を増加させたＫ２８－^99mＴｃと共に（それぞれの濃度で３通り）、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした（競合研究）。細胞を１．０mLのＲＰＭＩで３回すすいだ。細胞をトリス緩衝剤で溶解し、個別のガンマシンチグラフィーバイアルに移し、放射能をカウントした。放射標識化合物に対する細胞結合放射能のプロットを使用して、Ｋ_d値を計算した。競合研究を使用して、ＰＳＭＡに対するリガンド（ＤＵＰＡ）の結合特異性を決定した（図１Ａ）。

【0222】

＝＝ 実施例１Ｂ ＝＝
ＬＮＣａＰ細胞及びＳＫ３３（原子１４個のスペーサー）を使用したインビトロ結合研究。ＬＮＣａＰ細胞を２４ウエルファルコンプレートに接種し（１５０，０００細胞／ウエル）、４８時間かけてコンフルエント単層を形成させた。それぞれのウエルの消費培地を、過剰ＰＭＰＡの（▲）存在下又は（■）不在下で、濃度を増加させたＤＵＰＡ－^99mＴｃを含有する新たな培地（０．５mL）に代えた。３７℃で１時間インキュベートした後、細胞を培養培地（２×１．０mL）及びトリス緩衝液（１×１．０mL）ですすいで、あらゆる非結合放射能を除去した。トリス緩衝剤（０．５mL）に懸濁させた後、細胞結合放射能を、γ－カウンター（Packard, Packard Instrument Company）を使用してカウントした。解離定数（Ｋ_D）は、GraphPad Prism 4による非線形回帰を使用し、放射性トレーサーの濃度に対する細胞結合放射能のプロットを使用して計算した。エラーバーは、１標準偏差を表す（ｎ＝３）。実験を３回実施して、同様の結果を得た（図１Ｂ）。

【0223】

＝＝ 実施例２ ＝＝
ＬＮＣａＰ細胞に対するＰＳＭＭＡ分子の定量化。ＬＮＣａＰ細胞を２４ウエルファルコンプレートに接種し、ＲＰＭＩ（Gibco ＲＰＭＩ培地１６４０、カタログ番号２２４００）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％グルタル酸及び１％ＰＳ（ペニシリンストレプトマイシン）中で、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で４８時間増殖させて、接着単層にした。次に細胞を、０nMから４５０nMまで濃度を増加させたＳＫ２８－^99mＴｃと共に（それぞれの濃度で３通り）、５％のＣＯ₂雰囲気下、４℃又は３７℃で１時間インキュベートした。細胞を１．０mLのＲＰＭＩで３回すすいだ。細胞をトリス緩衝剤で溶解し、個別のガンマシンチレーションバイアルに移し、放射能をカウントした。放射標識化合物に対する細胞結合放射能のプロットを使用して、ＰＳＭＡ／ＬＮＣａＰ細胞の数を計算した。ＳＫ２８－^99mＴｃ（２０uL）の３０nMの試料の放射能をカウントした。４℃で（ＰＳＭＡのエンドサイトーシスを防止するため）、３０nMの試料のモル数は、３０nM×２０uL＝（３０×１０^-9mol/L）×（２０×１０^-6L）＝６×１０^-13mol。３０nMの試料の原子の数は、（６×１０^-13mol）×（６．０２３×１０²³原子／mol）＝３．６×１０¹¹原子。３０nMの試料の２０uLの放射能カウントは、２０４７７cpm（cpm／原子＝３．６×１０¹¹／２０４７７＝１．７６×１０⁷）であった。４℃での飽和点の細胞結合放射能は、１２０００cpm。飽和点の原子の数は、（１．７６×１０⁷原子）×（１２，０００cpm）。細胞／ウエルの数は、２４５，０００個。４℃でのＰＳＭＡ／細胞の数は、（２．１２×１０¹¹）／２．４５×１０⁵＝８６４，３９６．４＝約０．９×１０⁶個のＰＳＭＡ／ＬＮＣａＰ細胞。

【0224】

３７℃での飽和点の細胞結合放射能は、３３，０００cpmである（４℃よりおよそ３倍高い）。これは、ＰＳＭＡが、薬剤を放出して再循環するという、細胞表面受容体によるものと同様のエンドサイトーシスを受けることを示している。図２を参照すること。

【0225】

＝＝ 実施例３ ＝＝
スペーサー依存結合研究。ＬＮＣａＰ細胞を２４ウエルファルコンプレート（プレート１０枚）に接種し（１２０，０００細胞／ウエル）、ＲＰＭＩ（Gibco ＲＰＭＩ培地１６４０、カタログ番号２２４００）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ピルビン酸ナトリウム及び１％ＰＳ（ペニシリンストレプトマイシン）中で、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で４８時間増殖させて、接着単層にした。次に細胞を、それぞれ０nMから１２８０nMまで濃度を増加させたＳＫ６０－^99mＴｃ（原子０個のスペーサー）、ＳＫ６２^-99mＴｃ（原子７個のスペーサー）、ＳＫ２８^-99mＴｃ（原子１４個のスペーサー）、ＳＫ３８^-99mＴｃ（原子１６個のスペーサー）及びＳＫ５７－^99mＴｃ（原子２４個のスペーサー）と共に（それぞれの濃度で３通り）、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。また、別のプレートでは、５０uMのＰＭＰＡを５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で３０分間インキュベートし、次に、それぞれ０nMから１２８０nMまで濃度を増加させたＳＫ６０－^99mＴｃ（原子０個のスペーサー）、ＳＫ６２^-99mＴｃ（原子７個のスペーサー）、ＳＫ２８^-99mＴｃ（原子１４個のスペーサー）、ＳＫ３８^-99mＴｃ（原子１６個のスペーサー）及びＳＫ５７－^99mＴｃ（原子２４個のスペーサー）と共に（それぞれの濃度で３通り）、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした（競合研究、データ示さず）。細胞を１．０mLのＲＰＭＩで３回すすいだ。細胞をトリス緩衝剤で溶解し、個別のガンマシンチグラフィーバイアルに移し、放射能をカウントした。放射標識化合物の濃度に対する細胞結合放射能のプロットを使用して、Ｋ_d値を計算した。放射標識化合物の濃度に対する飽和率のプロット、また、スペーサー長さに対するＫ_dのプロットを示す（図３Ａ及びＢ）。

【0226】

＝＝ 実施例４ ＝＝
ヌードマウスにおけるヒトＬＮＣａＰ腫瘍細胞のインビボ増殖。ＬＮＣａＰ細胞を、グルタミン（２mM）を有するＲＰＭＩ１６４０（Gibco ＲＰＭＩ培地１６４０、カタログ番号２２４００）、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ピルビン酸ナトリウム（１００mM）及び１％ＰＳ（ペニシリンストレプトマイシン）中で、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で維持した。４～５週齢の胸腺欠損雄ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）を、NCI Charles Riverから得て、滅菌環境中で維持した。マウスを、ワイヤー上蓋を有するポリカーボネートの靴箱型ケージに収容し、通常の食餌で維持した。マウスを、ＬＮＣａＰ細胞を接種する１週間前に順化させた。マトリゲル及び高濃度（ＨＣ）マトリゲルをBD Biosciencesから購入した。ヌードマウスには、５０％マトリゲル（１００uLのＰＰＭＩ培地＋１００uLのマトリゲル）又は５０％高濃度マトリゲル（１００uLのＰＰＭＩ培地＋１００uLのＨＣマトリゲル）中のインビトロ繁殖ＬＮＣａＰ細胞を２．５×１０⁶個又は５．０×１０⁶個接種して、細胞の数、ビヒクルなどを含む最適条件を決定した。細胞を、ヌードマウスのそれぞれの体幹及びそれぞれの側腹部に皮下注射して、最適部位を決定した。それぞれの腫瘍の体積を、カリパスを使用して一週間に２回、垂直方向で測定し、体重を一週間に１回測定した（データ示さず）。

【0227】

それぞれの腫瘍の体積を、０．５×Ｌ×Ｗ２として計算したが、ここで、Ｌは最長軸の測定値（mm）、ＷはＬに垂直な軸の測定値（mm）である。体幹における５０％ＨＣマトリゲル中のおよそ５．０×１０⁶個のＬＮＣａＰ細胞は、３０日以内に６００mm³の腫瘍を生じた。図４を参照すること。

【0228】

＝＝ 実施例５ ＝＝
マウスにおけるＬＮＣａＰ、ＫＢ及びＡ５４９細胞の腫瘍増殖の比較。ＬＮＣａＰ、ＫＢ及びＡ５４９細胞を、グルタミン（２mM）を有するＲＰＭＩ１６４０（Gibco ＲＰＭＩ培地１６４０、カタログ番号２２４００）、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、１％ピルビン酸ナトリウム（１００mM）及び１％ＰＳ（ペニシリンストレプトマイシン）中で、５％のＣＯ₂雰囲気下、３７℃で維持した。４～５週齢の雄ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）を、NCI Charles Riverから得て、滅菌環境中で維持した。マウスを、ワイヤー上蓋を有するポリカーボネートの靴箱型ケージに収容し、通常の食餌で維持した。マウスを、細胞を接種する１週間前に順化させた。

【0229】

腫瘍細胞接種では、５０％高濃縮マトリゲル中の５．０×１０⁶個のＬＮＣａＰ細胞、ＲＰＭＩ培地中の１．０×１０⁶個のＫＢ細胞又はＲＰＭＩ培地中の１．０×１０⁶個のＡ５４９細胞を、ヌードマウスの体幹右側に皮下注射した（一部の動物には両側に注射した）。それぞれの腫瘍の体積を、カリパスを使用して一週間に２回、２つの垂直方向で測定し（図５Ａ及び５Ｂを参照すること）、体重を一週間に１回測定した（データ示さず）。腫瘍の体積を、０．５×Ｌ×Ｗ２として計算したが、ここで、Ｌは最長軸の測定値（mm）、ＷはＬに垂直な軸の測定値（mm）である。

【0230】

＝＝ 実施例６Ａ ＝＝
ＰＳＭＡ－^99mＴｃを使用したマウス中の腫瘍のインビボ画像化。腫瘍が５００～６００mm³の体積に達したとき、記載されているように調製した^99mＴｃ標識化合物（例えば、ＳＫ２８－^99mＴｃ、ＳＫ６０－^99mＴｃなど）を、腹腔内（皮下）注射によって投与した。４時間後、動物を安楽死させ、血液を、心臓穿孔により採取し、それぞれの動物について個別のガンマシンチグラフィーバイアルに移した。画像化実験は、Kodak又はガンマシンチグラフカメラ画像装置を使用して実施した（図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、７Ａ、７Ｂ及び７Ｃ）。〔注：ＰＭＰＡは、ＳＫ２８－^99mＴｃ注射の３０分前に注射した。癌性塊への取り込み以外では、ＳＫ２８－^99mＴｃの分布は、腎臓に限定されていた（図６Ａ、６Ｂ及び６Ｃ）。両方のマウス（図７Ａ、７Ｂ及び７Ｃ）にＳＫ６０－^99mＴｃを注射したが、分布は、ほぼ腎臓に限定されていた（両方の腎臓を遮蔽した後でも腫瘍取り込みはなかった）。〕

【0231】

図６Ａ、６Ｂ及び６Ｃは、ＳＫ２８－^99mＴｃ（放射標識した原子１４個のスペーサー）を使用した、ヒトＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウスの画像を示す。図６Ａ～６Ｃは、３つの別々のマウスのセットを表し、１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃを、ＰＳＭＡをブロックする５０mg/kgのＰＭＰＡ（競合物質）なしで〔画像の各セットの左側のマウス〕及びありで皮下（腹腔内を介して）注射した４時間後に、Kodakカメラ画像装置を使用して画像化した、ＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウスの、左側の画像は白色光画像を示し、右側の画像は放射線画像と白色光画像との重ね合わせを示す。図６Ｄは、１ng/kgのＳＫ２８－^99mＴｃを皮下注射（腹腔内を介して投与）した４時間後にKodak画像装置を使用して画像化した、ＬＮＣａＰ腫瘍についての単一マウス研究を示しており、左側の画像に腎臓を遮蔽した放射線画像と遮蔽なしの白色光画像との重ね合わせ、右側の画像に腎臓を遮蔽した放射線画像と遮蔽なしのＸ線画像との重ね合わせを示す。

【0232】

＝＝ 実施例６Ｂ ＝＝
ＤＵＰＡ－^99mＴｃを使用したマウス中の腫瘍のインビボ画像化。前立腺癌細胞へのＤＵＰＡ結合体の特異性を更に確立するために、ＤＵＰＡ－^99mＴｃを、ＬＮＣａＰ腫瘍を肩に有する胸腺欠損ヌードマウスに腹腔内注射した。４時間で結合しなかった結合体のクリアランスをさせた後、保持されたＤＵＰＡ－^99mＴｃの分布を、ガンマシンチグラフィーにより画像化した。図７Ｄ（ａ）及び７Ｄ（ｃ）から分かるように、標的^99mＴｃ放射性トレーサーは主にＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ腫瘍に蓄積し、腎臓以外の他の組織にはほとんど又は全く放射能がなかった。重要なことは、腎臓の取り込みがマウスに特有でありうることであり、それは、免疫組織化学的及びＲＴ－ＰＣＲ分析が、ＰＳＭＡ発現がネズミの腎臓において高く、ヒトの腎臓では最小であると示唆しているからである。ＰＳＭＡ標的画像化剤のインビボ特異性を、ＤＵＰＡ－^99mＴｃ投与の前に、全てのＰＳＭＡ部位をブロックする過剰ＰＭＰＡを前投与することにより更に試験した。図７Ｄ（ｂ）及び７Ｄ（ｄ）に示されているように、ブロックされたＬＮＣａＰ腫瘍は、ＤＵＰＡ－９^9mＴｃ取り込みを示さず、インビボにおけるＰＳＭＡへのＤＵＰＡ結合体の特異性が確認される。この特異性を更に証明するために、放射性トレーサーも、２つのＰＳＭＡ陰性マウス異種移植片モデル〔Ａ５４９（ヒト肺癌細胞株）及びＫＢ（ヒト鼻咽腔癌細胞株）〕に投与し、ここでも全身の画像を撮影した。予測されたように、腎臓の遮蔽を実施して他の組織における低レベルのＤＵＰＡ－^99mＴｃの検出を可能にした後でも、ＫＢ腫瘍にもＡ５４９腫瘍にも放射能は観察されなかった（図７Ｄ（ｅ）及び７Ｄ（ｆ））。したがって、これらの研究では、インビボにおいてＰＳＭＡに無関係の部位ではＤＵＰＡ－^99mＴｃ結合はほとんど生じないことが確認される。

【0233】

図７Ｄは、１５０μCiのＤＵＰＡ－^99mＴｃの注射の４時間後に撮影した、ｎｕ／ｎｕマウスにおける固形腫瘍異種移植片の全身画像を示す。１００倍モル過剰ＰＭＰＡの不在下〔７Ｄ（ａ、ｃ）〕又は存在下〔７Ｄ（ｂ、ｄ）〕でＤＵＰＡ－^99mＴｃにより処置された、ＬＮＣａＰ腫瘍を有するマウスの全身の放射線画像と白色光画像の重ね合わせである。ＤＵＰＡ－^99mＴｃで同様に処置された、Ａ５４９腫瘍〔７Ｄ（ｅ）〕又はＫＢ腫瘍〔７Ｄ（ｆ）〕を有するマウスからも、放射線画像と白色光画像の重ね合わせを得た。画像７Ｄ（ａ）及び７Ｄ（ｂ）を除いて、腎臓を鉛パッドで遮蔽した。全ての画像は、ＤＵＰＡ－^99mＴｃの腹腔内注射の４時間後に、Kodak Imaging Stationを使用して撮影した。矢印は固形腫瘍の異種移植片を示す。同様の画像を、各処置群の５匹のマウス全てから得た。

【0234】

＝＝ 実施例７Ａ ＝＝
生体内分布の研究。画像化した後、全ての動物を、ＳＫ２８－^99mＴｃ又はＳＫ６０－^99mＴｃ〔又は他の放射標識化合物（データ示さず）〕を投与したおよそ６～７時間後に解剖し、臓器（血液、腫瘍、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、皮膚、筋肉など）を、それぞれの動物について個別のガンマシンチグラフィーバイアルに移し、放射能をカウントした。注：血液試料は、動物を殺処理した直後及び動物を画像化する直前に（心臓穿孔を使用して）収集した。組織に対する腫瘍と組織のcpm/g比率のプロットを使用して、画像化剤の生体内分布を決定した（図８Ａ及び８Ｂ）。

【0235】

＝＝ 実施例７Ｂ ＝＝
ＬＮＣａＰ、Ａ５４９又はＫＢ腫瘍を有するｎｕ／ｎｕマウスにおけるＤＵＰＡ－^99mＴｃの生体内分布の研究。腫瘍を有するマウスを、ＤＵＰＡ－^99mＴｃ（５０μmol/kg、１５０μCi）の腹腔内注射の４時間後に安楽死させ、組織蓄積放射能をγカウンターを使用してカウントした。湿組織の１グラムあたりの注射用量率を、方法実施例に記載されているとおりに計算した。データは１回の実験から得て、エラーバーは、標準偏差を表す（ｎ＝５）。ＬＮＣａＰ腫瘍（中実バー）、１００倍のモル過剰ＰＭＰＡを予め注射したマウスにおけるＬＮＣａＰ腫瘍（中空バー）、Ａ５４９腫瘍（斜交線バー）、ＫＢ腫瘍（平行線バー）（図８Ｃ）。

【0236】

＝＝ 実施例８ ＝＝
生存マウスにおける単回用量の毒性。ＳＫ７１の投与を、示されているように単回用量で行った。データは、結合体のＭＴＤが単回投与では約４．５μmol/kgであることを示す（図９Ａを参照すること）。

【0237】

＝＝ 実施例９ ＝＝
生存マウスにおける多回用量の毒性。ＳＫ７１を隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与した。データは、ＳＫ７１のＭＴＤが多回投与では２μmol/kgであり、結合体は、ＬＮＣａＰ腫瘍に有効であることを示す（マウスには、処置を開始する前、ＬＮＣａＰ細胞の移植の２週間前にＭＴＤを使用した）。生理的食塩水対照群における４匹のマウス全てが大きな腫瘍を有した一方、２つの処置群のマウスには、処置の１８日後に目に見える腫瘍を有したものはなかった（図９Ｂを参照すること）。

【0238】

＝＝ 実施例１０ ＝＝
対照群と競合群を比較した効能研究。動物を、（ａ）１μmol/kgの結合体ＳＫ７１を隔日（Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）で５用量投与して処置し、（ｂ）ビヒクルで処置した動物（図１０Ｂ）及び（ｃ）ＰＭＰＡと一緒に結合体で処置した動物と比較した。１μmol/kgでの処置は、処置の期間中に腫瘍サイズ（出発腫瘍サイズはおよそ２５０mm³）の連続的な減少を示す。図１０Ａに示す１μmol/kgの低い用量では、腫瘍体積は、投与を中止すると反発した。２μmol/kg以上のより高い用量では、腫瘍の完全な消滅が試験期間中に観察された。競合実験（図１０Ｃを参照すること）から、移植腫瘍の治療が成功したことは、ＰＳＭＡ仲介送達の選択的又は特異的標的化に関係することが示される。

【0239】

＝＝ 実施例１１ ＝＝
効能研究（１μmol/kgを１日おきに１０日間、すなわち５用量）。データは（図１１を参照すること）、処置動物の腫瘍が処置期間中にサイズを減少したことを示す。

【0240】

＝＝ 実施例１２ ＝＝
ＰＳＭＡ標的治療剤のインビトロ評価。培養中のＬＮＣａＰ細胞に対するＳＫ７１（図１２Ａ）、ＳＫ７７（図１２Ｂ）、ＳＫ３７（図１２Ｃ）及びＳＫ４５（図１２Ｄ）の毒性の分析。ＬＮＣａＰ細胞を、濃度を増加させたＳＫ７１又はＳＫ７７により、１００倍モル過剰のＰＭＰＡの（▲）存在下又は（■）不在下で２時間パルスした。２回洗浄した後、細胞を、新たな培地中で３７℃で更に６６時間インキュベートした。次に細胞生存率を、本明細書に記載されている〔³Ｈ〕－チミジン取り込みアッセイを使用して分析した。データは１回の実験から得て、エラーバーは、標準偏差を表す（ｎ＝１つの濃度につき３つのウエル）。

【0241】

＝＝ 実施例１３ ＝＝
インビボ効力。処置マウスの皮下腫瘍の増殖（図１３Ａ及び１３Ｃ）及び体重（図１３Ｂ及び１３Ｄ）に対するＳＫ７１の効果。ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞を、ｎ／ｎ雄マウスの肩に皮下移植した。いったん腫瘍が１００mm³（１３Ａ、１３Ｂ）又は３３０
m³（１３Ｃ、１３Ｄ）の体積に達すると、動物をＳＫ７１〔１．５μmol/kg（ａ、ｂ）又は２．０μmol/kg（ｃ、ｄ）〕で処置した。（■）処置マウス、（●）未処置マウス、（▲）１００倍（１３Ａ、１３Ｂ）又は（▼）３０倍（１３Ｃ、１３Ｄ）モル過剰のＰＭＰＡが予め注射された処置マウス。データは１回の実験から得て、エラーバーは、標準偏差を表す〔ｎ＝４（１３Ａ、１３Ｂ）又は３（１３Ｃ、１３Ｄ）〕。図１０は、ＳＫ７１のインビボ効力を示す。

【0242】

インビボ効力。皮下腫瘍の増殖（図１４Ａ）及び処置マウスの体重（図１４Ｂ）に対するＳＫ７７の効果。ＨＣマトリゲル中のＬＮＣａＰ細胞を、ｎ／ｎ雄マウスの肩に皮下移植した。いったん腫瘍が１００mm³の体積に達すると、動物をＳＫ７７（２μmol/kg）で処置した。（■）未処置マウス、（▼）処置マウス。データは１回の実験から得て、エラーバーは、標準偏差を表す（ｎ＝４匹のマウス／群）。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】