特許 7082336 関節潤滑のためのリポソーム製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-05-31

(45)【発行日】2022-06-08

(54)【発明の名称】関節潤滑のためのリポソーム製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/685 20060101AFI20220601BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220601BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20220601BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220601BHJP

【ＦＩ】

A61K31/685

A61K9/127

A61K47/26

A61K47/10

A61K47/22

A61P19/02

【請求項の数】 20

(21)【出願番号】P 2020511447

(86)(22)【出願日】2018-08-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-11-05

(86)【国際出願番号】 IL2018050923

(87)【国際公開番号】W WO2019038763

(87)【国際公開日】2019-02-28

【審査請求日】2021-08-18

(31)【優先権主張番号】62/548,429

(32)【優先日】2017-08-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】520059236

【氏名又は名称】モエビウス メディカル リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100202267

【弁理士】

【氏名又は名称】森山 正浩

(74)【代理人】

【識別番号】100182132

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 隆

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】バレンホルツ イェチェズケル

(72)【発明者】

【氏名】ドレヴ ヤニヴ

(72)【発明者】

【氏名】トゥルジェマン カレン

(72)【発明者】

【氏名】サルファティ ガディ

(72)【発明者】

【氏名】アヤル－ヘルシュコヴィッツ マティ

【審査官】高橋 樹理

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５１２９２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１０－５４０４０６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ａ６１Ｋ ９／００

Ａ６１Ｋ ４７／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳類関節に潤滑を提供するための、単位用量の形態で製剤化された医薬組成物であって、前記単位用量が、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）及び１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン（ＤＰＰＣ）から本質的になるリポソームであって、前記リポソームが、少なくとも一つの膜及び約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する多重層ベシクル（ＭＬＶ）である、リポソームと、
前記組成物の投与部位における浸透圧性ショックを防止することにより局所的刺激を低減するために十分な量のマンニトールと、
緩衝液または水から選択される流体媒体であって、前記リポソームが懸濁している流体媒体と
から本質的になり、
前記医薬組成物が、ヒアルロン酸及び追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まず、
前記医薬組成物が、前記組成物の潤滑効率性も向上させるための存在するマンニトールの量により、前記相転移温度を上回る温度を有する哺乳類関節の潤滑を提供し、
前記マンニトールが、前記医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在し、
前記リポソームとマンニトールとの間の重量比が約６：１～約２：１を範囲とし、
前記医薬組成物の前記単位用量が、約３０ｍｇ～約５５０ｍｇのＤＰＰＣ、約２０ｍｇ～約４５０ｍｇのＤＭＰＣ、及び約２０ｍｇ～約３５０ｍｇのマンニトールを有する、医薬組成物。

【請求項2】

ＤＭＰＣが、約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで前記医薬組成物中に存在し、ＤＰＰＣが、約２％（ｗ／ｗ）～約１２％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記緩衝液が、ヒスチジン緩衝液である、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

約２００～約６００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

約５～８のｐＨを有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比が約２５：７５～約７０：３０の範囲内にある、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比が約４５：５５である、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

前記リポソームが約０．５μｍから約１０μｍの間の平均直径を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

前記少なくとも一つの膜が、約３０℃～約３５℃の相転移温度を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記哺乳類関節の温度が、前記相転移温度を約１～１５℃上回る範囲内にある、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

前記リポソームが、懸濁液の形態をとる、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物が、関節内注射、関節鏡下投与、及び外科的投与からなる群から選択される投与に好適な形態をとる、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記潤滑が、関節障害もしくは状態、または前記障害もしくは状態から生じる症状を、処置、管理、または防止するためのものである、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

哺乳類関節に潤滑を提供するための、単位用量の形態で製剤化された医薬組成物であって、前記単位用量が、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）及び１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン（ＤＰＰＣ）から本質的になるリポソームであって、前記リポソームが、少なくとも一つの膜及び約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する多重層ベシクル（ＭＬＶ）である、リポソームと、
約２００～約６００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を得るために十分な量のマンニトールと、
前記リポソームが懸濁している、ヒスチジン緩衝液の流体媒体と
から本質的になり、
前記組成物が、約５～８のｐＨを有し、
前記リポソームが約０．５μｍから約１０μｍの間の平均直径を有し、
前記医薬組成物が、ヒアルロン酸及び追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まず、
前記医薬組成物が、前記組成物の潤滑効率性も向上させるための存在するマンニトールの量により、前記相転移温度を上回る温度を有する哺乳類関節の潤滑を提供し、
ＤＭＰＣが、約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで前記医薬組成物中に存在し、ＤＰＰＣが、約２％（ｗ／ｗ）～約１２％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在し、マンニトールが、前記医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在し、
前記リポソームとマンニトールとの間の重量比が約６：１～約２：１を範囲とし、
前記医薬組成物の前記単位用量が、約２０ｍｇ～約３５０ｍｇのマンニトール、約３０ｍｇ～約５５０ｍｇのＤＰＰＣ、及び約２０ｍｇ～約４５０ｍｇのＤＭＰＣを有する、医薬組成物。

【請求項15】

哺乳類の関節における痛みの処置、及び／または局所的刺激の低減のための方法のための医薬の製造のための請求項１に記載の医薬組成物の使用であって、前記方法が、前記関節の腔に、前記医薬を投与することを含む、使用。

【請求項16】

前記医薬が、関節内注射、関節鏡下投与、及び外科的投与からなる群から選択される経路により投与される、請求項１５に記載の使用。

【請求項17】

前記医薬が、前記リポソームの懸濁液を有する非経口用医薬組成物の形態をとり、約０．５ｍｌ～約１０ｍｌの用量で投与される、請求項１５に記載の使用。

【請求項18】

哺乳類の関節における痛みの処置、及び／または局所的刺激の低減のための方法のための医薬の製造のための請求項１４に記載の医薬組成物の使用であって、前記方法が、前記関節の腔に、前記医薬を投与することを含む、使用。

【請求項19】

前記医薬が、関節内注射、関節鏡下投与、及び外科的投与からなる群から選択される経路により投与される、請求項１８に記載の使用。

【請求項20】

前記医薬が、前記リポソームの懸濁液を有する非経口用医薬組成物の形態をとり、約０．５ｍｌ～約１０ｍｌの用量で投与される、請求項１８に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、リン脂質自体が唯一の活性医薬薬剤であるリポソーム医薬組成物と、関節潤滑のためのその治療的使用とに関する。

【背景技術】

【0002】

関節機能不全は、人口の大部分に影響を及ぼす。十分な生体潤滑は適切な関節可動性に不可欠であり、これは関節の分解性変化の防止及び緩和に極めて重要である。

【0003】

一般的な関節機能不全は変形性関節炎（ＯＡ）であり、有病者は米国のみで２，０００万人を超える。現状の処置は、関節の過負荷の低減、理学療法、ならびに痛み及び炎症の軽減（通常は、薬物の全身投与または関節内投与により行われる）に焦点を当てている。

【0004】

関節軟骨は滑らかで強靱で弾力のある柔軟な表面を形成し、この表面によって骨の動きが容易になる。滑膜空間は、ヒアルロン酸（ＨＡ）及び糖タンパク質ラブリシンを含有する粘性の高い滑液（ＳＦ）で満たされている。ＨＡは、Ｄ－グルクロン酸とＤ－Ｎ－アセチルグルコサミンとのポリマーであり、ＯＡの炎症条件下では非常に不安定であり分解する（Ｎｉｔｚａｎ，Ｄ．Ｗ．，Ｋｒｅｉｎｅｒ，Ｂ．＆ Ｚｅｌｔｓｅｒ，Ｒ．ＴＭＪ ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ：ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｊｏｉｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｃｏｍｐｅｎｄ．Ｃｏｎｔｉｎ．Ｅｄｕｃ．Ｄｅｎｔ．２５，４３７－４４４（２００４）；Ｙｕｉ，Ｎ．，Ｏｋａｎｏ，Ｔ．＆ Ｓａｋｕｒａｉ，Ｙ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｇｅｌｓ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ ２２，１０５－１１６（１９９２））。ラブリシンは、約４４％のタンパク質と、約４５％の炭水化物と、約１１％のリン脂質（ＰＬ）とから構成され、リン脂質のうち、約４１％がホスファチジルコリン（ＰＣ）、約２７％がホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、約３２％がスフィンゴミエリンである。これらのＰＬは「表面活性リン脂質」（ＳＡＰＬ）と呼ばれる。

【0005】

潤滑物質分子の層が対向表面を分離する境界潤滑は、関節の負荷下で生じる。ＨＡ及びラブリシンを含めたいくつかの異なる基質が、関節軟骨における天然の境界潤滑物質として提唱されている。Ｐｉｃｋａｒｄ他ならびにＳｃｈｗａｒｔｚ及びＨｉｌｌｓは、ラブリシンの表面活性リン脂質として定義されるリン脂質が、関節軟骨における関節潤滑を容易にすることを実証した（Ｐｉｃｋａｒｄ，Ｊ．Ｅ．，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｊ．，Ｉｎｇｈａｍ，Ｅ．＆ Ｅｇａｎ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｌｉｐｉｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｒｉｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９，１８０７－１８１２（１９９８）；Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｉ．Ｍ．＆ Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．Ｓｕｒｆａｃｅ－ａｃｔｉｖｅ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ａｓ ｔｈｅ ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｌｕｂｒｉｃｉｎ．Ｂｒ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３７，２１－２６（１９９８））。Ｈｉｌｌｓ及び共同研究者は、ＯＡ関節がＳＡＰＬ欠損を有しており、ＯＡ患者の関節に表面活性リン脂質１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン（ＤＰＰＣ）を注射することで、重大な副作用を伴わずに１４週間持続する可動性改善がもたらされることを実証した（Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｐ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｒ．＆ Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）３８，１０２０－１０２１（１９９９）；Ｇｕｄｉｍｅｌｔａ，Ｏ．Ａ．，Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｒ．＆ Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．Ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｄｅｌｉｐｉｄｉｚｅｄ ｃａｒｔｉｌａｇｅ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｍｅｃｈ．１９，５３４－５４２（２００４））。別の研究において、Ｗａｔａｎａｂｅ他は、独自の低温軟骨保存技法を利用して、潤滑に主要な役割を果たすと想定される健康な軟骨の表面上の脂肪球ベシクルを観察した（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｕｐｐｅｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｌａｙｅｒ ｉｎ ｒａｔ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｂｙ’’ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｒｙｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅ’’ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｍｅｄ．Ｅｌｅｃｔ．Ｍｉｃｒｏｓｃ．３３，１６－２４（２０００））。Ｋａｗａｎｏ他及びＦｏｒｓｅｙ他は、動物モデルを用いて、高分子量のＨＡ（約２０００ｋＤａ）をＤＰＰＣと組み合わせて使用することで後者の潤滑能力が改善することを示した（Ｋａｗａｎｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｌｕｓ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｏｎ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｊｏｉｎｔ ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４８，１９２３－１９２９（２００３）；Ｆｏｒｓｅｙ，Ｒ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｂａｓｅｄ ｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ ｏｎ ｆｒｉｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｈｕｍａｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄａｍａｇｅ ｍｏｄｅｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７，４５８１－４５９０（２００６））。

【0006】

米国特許第６，８００，２９８号は、哺乳類関節の潤滑のための、脂質（詳細には、リン脂質）を含有するデキストランベースのヒドロゲル組成物を開示している。

【0007】

米国特許出願第２００５／０１２３５９３号は、変形性関節炎の処置のための関節内投与用のリポソーム送達システム内にカプセル化されたグリコサミノグリカンを含む組成物を対象とする。

【0008】

米国特許第８，８９５，０５４号は、関節潤滑及び／または軟骨摩耗の防止の方法であって、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有するリン脂質膜から本質的になるリポソームを利用する、方法に関する。

【0009】

活性成分としてのヒアルロン酸に基づいた、変形性関節炎の防止及び処置用に市販されている医薬組成物としては、特に、Ａｎｔａｌｖｉｓｃ（登録商標）、Ｋａｒｔｉｌａｇｅ（登録商標）、及びＫａｒｔｉｌａｇｅ（登録商標）Ｃｒｏｓｓが挙げられる。当該医薬組成物は、ＨＡに加えてマンニトールも含む。マンニトールは、酸化ストレス下でのＨＡ分解を低減する能力を有し、そのため、マンニトールが、注入されたＨＡの関節内滞留時間を顕著に増加させ、ＨＡベースの関節内注射の関節内補充療法の有効性を改善させるために使用できることが分かった（Ｍ．Ｒｉｎａｕｄｏ，Ｂ．Ｌａｒｄｙ，Ｌ．Ｇｒａｎｇｅ，ａｎｄ Ｔ．Ｃｏｎｒｏｚｉｅｒ，Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ２０１４，６，１９４８－１９５７）。変形性膝関節症の患者において、高濃度のマンニトールと共に混合した中程度の分子量（ＭＷ）のヒアルロン酸から作製した関節内補充薬と、高ＭＷのＨＡ単独（Ｂｉｏ－ＨＡ）とにおける安全性及び有効性の両方を比較した臨床試験では、マンニトール含有関節内補充薬の有効性が、六ヵ月にわたる疼痛緩和と機能改善の観点において、より多くの副作用の誘発を伴うことなく比較対照Ｂｉｏ‐ＨＡに劣らないことが明らかになった（Ｃｏｎｒｏｚｉｅｒ，Ｔｈｉｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｋｎｅｅ，２０１６，２３（５），８４２－８４８）。マンニトールがＨＡベースの関節内補充薬組成物の効力に及ぼす効果についても、Ｅｙｍａｒｄ他（Ｅｙｍａｒｄ Ｆ，Ｂｏｓｓｅｒｔ Ｍ，Ｌｅｃｕｒｉｅｕｘ Ｒ，Ｍａｉｌｌｅｔ Ｂ，Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ Ｘ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｎｎｉｔｏｌ ｔｏ Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ ｍａｙ Ｓｈｏｒｔｅｎ Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｏｎｓｅｔ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｋｎｅｅ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ｐｏｓｔ－Ｈｏｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａ Ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｔｒｉａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｒｔｈｏｐ ２：２１）及びＣｏｎｒｏｚｉｅｒ，Ｔ．他（Ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍａｎｎｉｔｏｌ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ｉｎ ａｎ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｍｏｄｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｘａｎｔｈｉｎｅ／ｘａｎｔｈｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，Ｖｏｌｕｍｅ ２２ ，Ｓ４７８）が試験を行った。Ｆｅｒｒａｃｃｉｏｌｉ他は、滑液の紫外線照射は、フリーラジカルの産生による粘性低下を誘発するため、薬物のフリーラジカル捕捉効果のスクリーニングに有用な方法であり得ることを示した。ヒト滑液の粘性の保護は、スーパーオキシドジスムターゼ、マンニトール、及びカタラーゼによって媒介される（Ｇ．Ｆ．Ｆｅｒｒａｃｃｉｏｌｉ，Ｕ．Ａｍｂａｎｅｌｌｉ，Ｐ．Ｆｉｅｔｔａ，Ｎ．Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ，Ｃ．Ｇｉｏｒｉ，Ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄ ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｕ．ｖ．ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ：Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３０，（１３）１９８１，１８０５－１８０８）。

【0010】

国際特許出願第ＷＯ２０１２／００１６７９号は、関節刺激を軽減もしくは低減するための、または既存の関節炎症の悪化を低減するための、関節内注射用に製剤化された注射用医薬製剤であって、活性のポリオール成分を含み、当該ポリオール活性成分がキシリトールである、注射用医薬製剤を対象とする。関節刺激の防止におけるキシリトールの効力をマンニトール及びグリセロールの効力と比較し、マンニトールまたはグリセロールの溶液が、ウサギの膝に関節内注射により注射した場合に刺激を防止しなかったことが開示されている。

【0011】

米国特許出願第２０１４／００３８９１７号は、対象の関節内関節の関節内空間に投与するための無菌注射用水性製剤であって、ヒアルロン酸またはその塩と、ポリオール、好ましくは７ｍｇ／ｍｌ以上の濃度のソルビトールとを含むゲルの形態をとる、無菌注射用水性製剤を対象とする。

【0012】

国際特許出願第ＷＯ２００３／０００１９１号は、関節を処置するための組成物及び方法であって、一つ以上のグリコサミノグリカンと一つ以上のヒアルロニダーゼ阻害物質との組み合わせを含み、当該ヒアルロニダーゼ阻害物質が、ヘパラン硫酸、デキストラン硫酸、及びキシロース硫酸から選択され得、ヒアルロン酸が、リポソーム内でヒアルロニダーゼ阻害物質と共にカプセル化され得る、組成物及び方法に関する。

【0013】

注射用ＨＡ組成物は、移動困難、筋肉の痛みまたは硬直、関節の痛み、及び関節の腫脹または発赤などの様々な副作用を有することが知られている。Ａｎｔａｌｖｉｓｃ（登録商標）の副作用の一部には、注射後の一時的な痛み及び注射を受けた関節の腫脹が含まれる。

【0014】

そのため、持続的な効果をもたらすと同時に関節内投与に関連する副作用の可能性を低減する、関節潤滑のための効率的な医薬組成物に対するアンメットニーズが依然として存在する。

【発明の概要】

【0015】

本発明は、滑膜性関節に導入して、痛み及び刺激を低減し関節可動性を改善または回復するために、潤滑をもたらすためのリポソーム製剤を提供する。リポソーム製剤は、具体的には関節内送達用に適応している。本発明の医薬組成物はリポソームを活性成分として含み、このリポソームは、生理的温度よりわずかに低い相転移温度を有するリン脂質膜を含む。そのため、リポソームは滑膜性関節に投与されると無秩序液体（ＬＤ）相となる。当該医薬組成物はさらに、ポリオールである張性剤を含む。張性剤は、適用部位における浸透圧性ショックを防止することにより局所的刺激を低減するために使用される。

【0016】

本発明は、部分的には、リポソーム組成物に添加した非イオン性張性剤がイオン性張性剤に比べて潤滑を増強したという、驚くべき発見に基づいている。詳細には、マンニトールをリポソーム製剤に添加したところ組成物の潤滑有効性が改善されたのに対し、塩化ナトリウムを使用したところリポソームの潤滑効率性の減少がもたらされた。当該医薬組成物が、リン脂質自体の他にはいかなる追加の医薬的活性薬剤も含まないという事実、詳細には、当該医薬組成物が、ポリオールの添加によって活性が増強されることが知られているヒアルロン酸を含有しないという事実に鑑みると、マンニトールの効果はなおいっそう驚くべきことである。異なる非イオン性ポリオール（具体的にはグリセロールを含む）を添加した場合も、著しさの程度は劣るものの、塩化ナトリウムを使用した場合に比べてリポソーム製剤の潤滑能力が増強された。

【0017】

したがって、第一の態様によれば、本発明は、医薬組成物であって、ポリオールを含む張性剤と、同じまたは異なる二つのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するグリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するスフィンゴミエリン（ＳＭ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜を含む、リポソームであって、当該少なくとも一つの膜が約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含み、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、医薬組成物を提供する。当該医薬組成物は、当該相転移温度を上回る温度を有する哺乳類関節の潤滑に有用である。一部の実施形態によれば、張性剤は非イオン性である。さらなる実施形態によれば、ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択される。特定の実施形態によれば、張性剤はマンニトールを含む。

【0018】

別の態様において、哺乳類関節を潤滑するための方法であって、当該関節の腔に、ポリオールを含む張性剤と、同じまたは異なる二つのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するグリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するスフィンゴミエリン（ＳＭ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜を含む、リポソームであって、当該少なくとも一つの膜が約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含む医薬組成物を投与することを含み、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まず、当該関節が、当該相転移温度を上回る関節温度を有する、方法が提供される。一部の実施形態によれば、張性剤は非イオン性である。さらなる実施形態によれば、ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択される。特定の実施形態によれば、張性剤はマンニトールを含む。

【0019】

別の態様において、関節障害を有する対象の関節における痛みまたは刺激の処置のための方法であって、当該関節の腔に、ポリオールを含む張性剤と、同じまたは異なる二つのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するグリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するスフィンゴミエリン（ＳＭ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜を含む、リポソームであって、当該少なくとも一つの膜が約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含む医薬組成物を投与することにより、当該対象の関節を潤滑することを含み、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まず、当該関節が、当該相転移温度を上回る関節温度を有する、方法が提供される。一部の実施形態によれば、張性剤は非イオン性である。さらなる実施形態によれば、ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択される。特定の実施形態によれば、張性剤はマンニトールを含む。

【0020】

別の態様において、本発明は、当該相転移温度を上回る温度を有する哺乳類関節の潤滑のための医薬組成物を調製するための、ポリオールを含む張性剤と、同じまたは異なる二つのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するグリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するスフィンゴミエリン（ＳＭ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜から本質的になるリポソームであって、当該少なくとも一つの膜が約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとの使用であって、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、使用を提供する。一部の実施形態によれば、張性剤は非イオン性である。さらなる実施形態によれば、ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択される。特定の実施形態によれば、張性剤はマンニトールを含む。

【0021】

一部の実施形態において、ポリオールはキシリトールを含まない。

【0022】

一部の実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約２０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、グリセロールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５％（ｗ／ｗ）～約２５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、リン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５０％（ｗ／ｗ）～約９５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。

【0023】

一部の実施形態において、医薬組成物はさらに、リポソームが分散または懸濁している流体媒体を含む。さらなる実施形態において、ポリオールは、当該流体媒体中に分散または溶解している。またさらなる実施形態において、マンニトールは、当該流体媒体中に溶解している。流体媒体は、緩衝液及び水から選択され得る。あるいくつかの実施形態において、当該緩衝液は、ヒスチジン緩衝液またはリン酸緩衝食塩水を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。あるいくつかの実施形態において、当該緩衝液はヒスチジン緩衝液を含む。

【0024】

一部の実施形態において、医薬組成物は、流体媒体中に懸濁したリポソームを含む、医薬的に許容される懸濁液の形態をとる。

【0025】

一部の実施形態によれば、リポソーム内部のポリオールの濃度は、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じである。

【0026】

一部の実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．０５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、ポリオールの重量パーセントは約０．１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする。またさらなる実施形態において、ポリオールの重量パーセントは約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）を範囲とする。

【0027】

一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、マンニトールの重量パーセントは約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする。

【0028】

一部の実施形態において、グリセロールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．０５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、グリセロールの重量パーセントは約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）を範囲とする。

【0029】

一部の実施形態において、医薬組成物は、約２００～約６００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は約３００ｍＯｓｍのオスモル濃度を有する。あるいくつかのこのような実施形態において、医薬組成物は等張性である。

【0030】

一部の実施形態において、医薬組成物は約５～８のｐＨを有する。

【0031】

一部の実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約１５：１～約１：１を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソームとマンニトールとの間の重量比は約１０：１～約１：１を範囲とする。追加の実施形態において、リポソームとグリセロールとの間の重量比は約１５：１～約２：１を範囲とする。

【0032】

一部の実施形態によれば、リポソームは二つ以上の膜を有する。あるいくつかのこのような実施形態において、リポソームは多重層ベシクル（ＭＬＶ）である。

【0033】

一部の実施形態において、ＧＰＬは二つのアシル鎖を含む。さらなる実施形態において、当該鎖は、Ｃ_１４、Ｃ_１５、Ｃ_１６、及びＣ_１８アシル鎖からなる群から選択される。あるいくつかの実施形態において、当該炭化水素鎖のうちの少なくとも一つは飽和炭化水素鎖である。さらなる実施形態において、二つの炭化水素鎖が飽和している。

【0034】

一部の実施形態において、ＰＬはホスファチジルコリン（ＰＣ）である。さらなる実施形態において、少なくとも一つの膜は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）を含む。

【0035】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜は、さらに、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１５）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、及びＮ－パルミトイル－Ｄ－エリスロ－スフィンゴシルホスホリルコリン（Ｄ－エリスロＣ１６）からなる群から選択されるＰＣを含む。一部の実施形態において、少なくとも一つの膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約１０％～約７５％を範囲とする。

【0036】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤＰＰＣを含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は約２５：７５～約７０：３０の範囲内にある。あるいくつかの実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は約４５：５５である。

【0037】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＣ１５を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｃ１５のモルパーセント比は約２５：７５～約４５：５５の範囲内にある。

【0038】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤＳＰＣを含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＳＰＣのモルパーセント比は約７５：２５である。

【0039】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は約１０：９０～約２５：７５の範囲内にある。

【0040】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＣ１５を含む。

【0041】

本発明の一部の実施形態に従う医薬組成物中のリン脂質の合計濃度は、約５０～約３００ｍＭを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、リン脂質の合計濃度は約１００ｍＭ～約２００ｍＭを範囲とする。

【0042】

一部の実施形態において、リン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．５％（ｗ／ｗ）～約３０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、リン脂質の重量パーセントは約３％（ｗ／ｗ）～約３０％（ｗ／ｗ）を範囲とする。

【0043】

一部の実施形態において、リポソームは約０．５μｍから約１０μｍの間の平均直径を有する。

【0044】

あるいくつかの実施形態において、少なくとも一つの膜は約３０℃～約３５℃の相転移温度を有する。

【0045】

一部の実施形態において、関節の温度は、当該相転移温度を約１～１５℃上回る範囲内にある。

【0046】

現時点で好ましい一部の実施形態において、医薬組成物はヒアルロン酸を本質的に含まない。

【0047】

あるいくつかの実施形態において、リポソームは、上記で詳述されているように、少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜から本質的になる。

【0048】

一部の実施形態において、医薬組成物は、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質になる膜を有するＭＬＶリポソームと、マンニトールと、ヒスチジン緩衝液とを含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。またさらなる実施形態において、ＤＰＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約２％（ｗ／ｗ）～約１２％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。なお更なる実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。

【0049】

一部の実施形態において、関節の潤滑は、関節障害、または関節障害から生じる症状を処置するためのものである。さらなる実施形態において、関節障害は、関節炎、変形性関節炎、リウマチ性関節炎患者における変形性関節炎、外傷性関節損傷、関節ロック、スポーツ損傷、関節穿刺後の状態、関節鏡下手術、及び関節置換からなる群から選択される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は、変形性関節炎患者における膝関節痛を低減するためのものである。

【0050】

一部の実施形態において、潤滑は、関節摩耗を防止するためのものである。

【0051】

特定の実施形態によれば、医薬組成物は、リポソームの懸濁液を含む非経口用医薬組成物である。当該医薬組成物は、関節内注射、関節鏡下投与、または外科的投与による投与に好適な形態をとることができる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。

【0052】

本発明の様々な実施形態に従う医薬組成物は、約０．５ｍｌ～約１０ｍｌの用量で投与することができる。さらなる実施形態において、医薬組成物は約１ｍｌ～約６ｍｌの用量で投与される。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は約３ｍｌの用量で投与される。

【0053】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約２０ｍｇ～約３５０ｍｇのマンニトールを含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約１２０ｍｇのマンニトールを含む。

【0054】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約５０ｍｇ～約１０００ｍｇのリン脂質を含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約５０ｍｇ～約５００ｍｇのＤＰＰＣを含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約４０ｍｇ～約３００ｍｇのＤＭＰＣを含む。

【0055】

本発明のさらなる実施形態及び適用性の完全な範囲は、以下に示される詳細な説明から明らかになるであろう。ただし、発明を実施するための形態及び特定の例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方で、例示として与えられるものに過ぎないということが理解されるべきである。というのも、本発明の趣旨及び範囲内の様々な変更及び改変は、当業者にとってはこの発明を実施するための形態から明らかとなるからである。

【図面の簡単な説明】

【0056】

【図1】図１は、ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣを含む等張性及び低張性のリポソーム組成物における未加工の示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）サーモグラムを示している。

【図2】図２は、Ｃ１５を含む等張性及び低張性のリポソーム組成物における未加工の示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）サーモグラムを示している。

【図3】図３は、ＤＳＣ走査から評価した異なるリン脂質の混合物を含むリポソームのＳＯ－ＬＤ相転移温度範囲を示す棒図表グラフである。灰色の区域は２０℃～３９℃の温度範囲を示している。

【図4】図４は、タンパク質ベース液体中での摩耗試験の前後における軟骨ピンのプロファイルを示している。軟骨下骨の出現位置が矢印で示されている。より見やすくするようにプロファイルをシフトさせているため、このスケールは有効な高さを示していない。

【図5】図５Ａ～５Ｂは、タンパク質ベース液体中での摩耗試験の前（図５Ａ）及び１２時間後（図５Ｂ）における軟骨ピン＃９の光学的画像を示している。外側の軟骨リングの他に、軟骨が大きく摩耗した位置では軟骨下骨が出現した（矢印で示す）。

【図6】図６は、リポソーム組成物中での摩耗試験の前後における軟骨ピンのプロファイルを示している。より見やすくするようにプロファイルをシフトさせているため、このスケールは有効な高さを示していない。

【図7】図７Ａ～７Ｂは、リポソーム組成物中での摩耗試験の前（図７Ａ）及び６時間後（図７Ｂ）における軟骨ピン＃１４の光学的画像を示している。

【図8】図８Ａ～８Ｂは、リポソーム組成物中での摩耗試験の前（図８Ａ）及び１２時間後（図８Ｂ）における軟骨ピン＃１７の光学的画像を示している。

【図9】図９Ａ～９Ｂは、タンパク質ベース組成物とリポソーム組成物とにおける質量損失（図９Ａ）及び高さ損失（図９Ｂ）のグラフによる比較を示している。エラーバーは、測定精度の大まかな推定である。

【図10】図１０Ａ～図１０Ｂは、タンパク質ベース液体（図１０Ａ）中及びリポソーム組成物（図１０Ｂ）中での摩耗試験の前後における軟骨表面のプロファイルを示している。

【図11】図１１は、リポソーム組成物中で試験したピン１３～１８における摩耗試験の前（ｔ＝０）及び後（６時間及び１２時間）の粗さパラメーターＲａ（●）、Ｒｋ（◆）、Ｒｐｋ（▲）、及びＲｖｋ（▼）を示しており、Ｒａは粗さプロファイルの算術平均偏差であり、Ｒｋは粗さの深さ（最も高いピーク（Ｒｐｋ）及び最も低い谷（Ｒｖｋ）の値を除外した粗さの深さ）である。

【発明を実施するための形態】

【0057】

本発明は、哺乳類関節の潤滑で使用するためのリポソーム製剤であって、痛み及び刺激を低減し、関節可動性を改善または回復し、関節の摩耗を低減する、リポソーム製剤を提供する。当該医薬組成物は、さらに、関節障害または状態の処置、管理、または防止に使用することができる。本発明の原理に従う医薬組成物は、リポソーム膜において、関節の温度を下回る規定の相転移温度を有する、リポソーム組成物に基づいている。

【0058】

本明細書で使用される「相転移温度」という用語は、一部の実施形態において、秩序固体（ＳＯ）から無秩序液体（ＬＤ）へのリポソームの相転移が生じる温度を指す。リポソームの相転移温度は、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により評価することができる。相転移温度を評価するための検討対象となり得るＤＳＣサーモグラムの様々なパラメーターとしては、Ｔ_ｏｎ（ＳＯ－ＬＤ相転移が開始される温度に相当）、及びＴ_ｏｆｆ（加熱走査中にＳＯ－ＬＤ相転移が終了する温度に相当）、ならびにＴ_ｐ及びＴ_ｍ（それぞれ前転移（Ｔ_ｐ）中及び主転移（Ｔ_ｍ）中に熱容量の最大変化が生じる温度に相当）が挙げられる。

【0059】

多重層ベシクルリポソームは、二つのＣ１２－Ｃ１６炭化水素鎖を有する様々なＰＣから構成されており、ＳＯ－ＬＤ相転移温度をわずかに上回る（例えば、１℃、２℃、３℃、５℃、８℃、１１℃、及び最大約１５℃の場合）温度において有効な軟骨潤滑物質かつ摩耗低減物質であることが過去に示されている（これは米国特許第８，８９５，０５４号で詳述されており、当該文献の内容はその全体が参照により本明細書に援用される）。本発明の医薬組成物はさらに、組成物のオスモル濃度を増加させる非イオン性張性剤を含む。

【0060】

驚くべきことに、非イオン性ポリオールを含む医薬組成物の潤滑効率性は、イオン性張性剤、詳細には塩化ナトリウム塩を含む医薬組成物に比べて、顕著に高いことが分かった。本発明の医薬組成物は、ポリオールの添加により活性が増強されることが知られているヒアルロン酸に基づいていないため、ポリオールにおける塩化ナトリウムと比較しての正の効果は、全く予期されないものであった。

【0061】

発明者らはさらに、マンニトールの添加でリポソーム膜の相転移温度が変化しないことも示した。理論または作用機序に拘泥されることは望まないが、ポリオール添加の驚くべき効果は、潤滑能力をもたらす本質的特徴であることが過去に報告されているリポソームの相転移温度に直接関係するわけではないことが想定され得る。

【0062】

したがって、本発明の一態様によれば、ポリオールを含む張性剤と、グリセロリン脂質（ＧＰＬ）またはスフィンゴ脂質（ＳＰＬ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含み、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含む医薬組成物であって、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、医薬組成物が提供される。一部の実施形態において、医薬組成物は、哺乳類関節の潤滑で使用するためのものである。

【0063】

別の態様において、哺乳類関節を潤滑するための方法であって、当該関節の腔に、ポリオールを含む張性剤と、グリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びスフィンゴ脂質（ＳＰＬ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含み、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含む医薬組成物を投与することを含み、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、方法が提供される。

【0064】

別の態様において、関節障害を有する対象の関節における痛みまたは刺激の処置のための方法であって、当該関節の腔に、ポリオールを含む張性剤と、グリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びスフィンゴ脂質（ＳＰＬ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含み、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとを含む医薬組成物を投与することにより、当該対象の関節を潤滑することを含み、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、方法が提供される。

【0065】

別の態様において、本発明は、哺乳類関節の潤滑のための医薬組成物を調製するための、ポリオールを含む張性剤と、グリセロリン脂質（ＧＰＬ）及びスフィンゴ脂質（ＳＰＬ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含み、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有する、リポソームとの使用であって、当該医薬組成物が、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない、使用を提供する。

【0066】

本明細書で使用される「張性剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）」という用語は、一部の実施形態において、関節内注射用の医薬組成物で使用するのに好適な張性剤を指す。

【0067】

一部の実施形態において、張性剤は非イオン性である。一部の実施形態において、ポリオールは直鎖状ポリオールである。一部の実施形態において、ポリオールは環状ポリオールである。本発明の医薬組成物で使用するのに好適な非イオン性ポリオールの非限定的な例としては、マンニトール、グリセロール、デキストロース、ラクトース、及びトレハロースが挙げられる。

【0068】

現時点で好ましい一部の実施形態において、ポリオールはマンニトールである。マンニトールはよく知られた低コストの賦形剤であり、様々なタイプの医薬組成物で調剤者が頻繁に使用する。上記で述べられているように、マンニトールは、関節潤滑用の医薬組成物でヒアルロン酸と組み合わせて使用されてきた。また、マンニトールは、リポソームの凍結保存で有用であることも報告されている（Ｔａｌｓｍａ Ｈ，ｖａｎ Ｓｔｅｅｎｂｅｒｇｅｎ ＭＪ，Ｓａｌｅｍｉｎｋ ＰＪ，Ｃｒｏｍｍｅｌｉｎ ＤＪ，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１９９１，８（８）：１０２１－６）。

【0069】

一部の実施形態において、張性剤はグリセロールを含む。

【0070】

一部の実施形態において、医薬組成物は、ポリオールの組合せ、すなわちマンニトールとグリセロールとの組合せを含む。当該医薬組成物はさらに、ポリオールと追加の張性剤との組合せを含むことができる。

【0071】

一部の実施形態において、ポリオールはキシリトールを含まない。

【0072】

強調すべきことは、現時点で好ましい一部の実施形態によれば、張性剤はリポソーム内でカプセル化されていないことである。本明細書で使用される「カプセル化」という用語は、一部の実施形態において、リポソーム外部の媒体中張性剤の濃度よりも実質的に高い、リポソーム内部の張性剤の濃度を指す。「リポソーム内部」という用語は、リポソームの少なくとも一つの内部水相を包含するものと理解されたい。「濃度」という用語は、オスモル濃度を含むことができる。本明細書で使用される「実質的により高い」という用語は、一部の実施形態において、少なくとも約９０％の濃度の差を指す。一部の実施形態において、ポリオールはリポソーム内でカプセル化されていない。さらなる実施形態において、マンニトールはリポソーム内でカプセル化されていない。追加の実施形態において、グリセロールはリポソーム内でカプセル化されていない。

【0073】

さらなる実施形態によれば、リポソーム内部の張性剤の濃度は、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じである。本明細書で使用される「本質的に同じ」という用語は、一部の実施形態において、少なくとも約１５％未満の濃度の差を指す。さらなる実施形態において、「本質的に同じ」という用語は、約１０％未満、約５％未満、約２．５％未満、または約１％未満の濃度の差を指す。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。

【0074】

さらなる実施形態によれば、リポソーム内部のポリオールの濃度は、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じである。またさらなる実施形態によれば、リポソーム内部のマンニトールの濃度は、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じである。なお更なる実施形態によれば、リポソーム内部のグリセロールの濃度は、リポソーム外部の媒体中のグリセロールの濃度と本質的に同じである。

【0075】

一部の実施形態において、リポソームは凍結乾燥されない。さらなる実施形態において、リポソームは、関節に投与する前に凍結乾燥及び／または解凍されない。

【0076】

一部の実施形態において、医薬組成物はさらに流体媒体を含む。一部の実施形態において、リポソームは当該流体媒体中に分散または懸濁している。さらなる実施形態において、張性剤は当該流体媒体中に溶解または分散している。さらなる実施形態において、マンニトールまたはグリセロールは当該流体媒体中に溶解している。一部の実施形態において、医薬組成物は、流体媒体中に懸濁したリポソームを含む、医薬的に許容される懸濁液の形態をとる。

【0077】

さらに提供されるのは、上記の様々な実施形態に従う医薬組成物を含み、さらに流体媒体を含む、医薬的に許容される懸濁液である。

【0078】

一部の実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。あるいくつかの実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約３０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。追加の実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約１５％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0079】

一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約１０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、または約２０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約３０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0080】

一部の実施形態において、グリセロールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５％（ｗ／ｗ）～約３５％（ｗ／ｗ）、または約５％（ｗ／ｗ）～約２５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、グリセロールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約１５％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0081】

一部の実施形態において、リポソームを形成するリン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約５０％（ｗ／ｗ）～約９５％（ｗ／ｗ）、または約６０％（ｗ／ｗ）～約８５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、リン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約７０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。さらなる実施形態において、リン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約８５％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0082】

本明細書で使用される「乾燥重量」という用語は、一部の実施形態において、流体媒体を含まない医薬組成物の重量を指す。さらなる実施形態において、「乾燥重量」という用語は、水を含まない医薬組成物の重量を指す。

【0083】

一部の実施形態において、本発明の組成物は医薬的に許容される。本明細書で使用される「医薬的に許容される」という用語は、一部の実施形態において、安全であり、本発明で使用する有効量の活性成分を所望の投与経路に対し適切に送達する、任意の製剤を指す。この用語は、化合物の安定性及び投与経路に従って、ｐＨがｐＨ４．０～ｐＨ９．０を範囲とする特定の所望値で維持される、緩衝製剤の使用も指す。

【0084】

そのため流体媒体は、緩衝液、水、及び塩溶液から選択され得る。一部の実施形態において、流体媒体は緩衝液を含む。あるいくつかの実施形態において、当該緩衝液は、ヒスチジン緩衝液またはリン酸緩衝食塩水を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。ヒスチジンの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌを範囲とすることができる。あるいくつかの実施形態において、ヒスチジンの濃度は約２ｍｇ／ｍｌである。一部の実施形態において、ヒスチジンの濃度は約１ｍＭ～約５０ｍＭを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、ヒスチジンの濃度は約１０ｍＭである。ヒスチジンは、溶解した塩酸塩または酢酸塩の形態で組成物中に存在することができる。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物はさらに、微量の無機酸、例えば塩酸を含む。

【0085】

医薬組成物のｐＨは、約５～約８を範囲とすることができる。一部の実施形態において、ｐＨは約６から約７の間を範囲とする。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物のｐＨは約６．５である。

【0086】

一部の実施形態において、医薬組成物中のポリオールの濃度は約０．５～約１００ｍｇ／ｍｌを範囲とする。さらなる実施形態において、ポリオールの濃度は約１～約７０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。またさらなる実施形態において、ポリオールの濃度は約２．５～約６０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。なお更なる実施形態において、ポリオールの濃度は約５～約５０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。またさらなる実施形態において、ポリオールの濃度は約３０～約５０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、ポリオールの濃度は約５～約３０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。

【0087】

一部の実施形態において、医薬組成物中のマンニトールの濃度は約１ｍｇ／ｍｌ～約７０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。さらなる実施形態において、マンニトールの濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ～約７０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。またさらなる実施形態において、マンニトールの濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、マンニトールの濃度は約４０ｍｇ／ｍｌである。追加の実施形態において、マンニトールの濃度は約２０ｍｇ／ｍｌである。

【0088】

一部の実施形態において、医薬組成物中のグリセロールの濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。さらなる実施形態において、グリセロールの濃度は約１ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。またさらなる実施形態において、グリセロールの濃度は約５ｍｇ／ｍｌ～約３０ｍｇ／ｍｌを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、グリセロールの濃度は約２０ｍｇ／ｍｌである。追加の実施形態において、グリセロールの濃度は約１０ｍｇ／ｍｌである。

【0089】

一部の実施形態において、医薬組成物中のポリオールの濃度は約５０～約５００ｍＭを範囲とする。さらなる実施形態において、ポリオールの濃度は約１００～約４００ｍＭを範囲とする。またさらなる実施形態において、ポリオールの濃度は約２００～約３００ｍＭを範囲とする。ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択され得る。

【0090】

一部の実施形態において、ポリオールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．０５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、または約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。あるいくつかの実施形態において、ポリオールの重量パーセントは約４％（ｗ／ｗ）である。追加の実施形態において、ポリオールの重量パーセントは約２％（ｗ／ｗ）である。

【0091】

一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、または約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。あるいくつかの実施形態において、マンニトールの重量パーセントは約４％（ｗ／ｗ）である。

【0092】

一部の実施形態において、グリセロールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．０５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、または約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。あるいくつかの実施形態において、グリセロールの重量パーセントは約２％（ｗ／ｗ）である。

【0093】

本明細書で使用される「合計重量」という用語は、一部の実施形態において、流体媒体を含む医薬組成物の重量を指す。さらなる実施形態において、「合計重量」という用語は医薬的に許容される懸濁液の重量を指す。

【0094】

一部の実施形態において、医薬組成物は、約２００～約６００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する。さらなる実施形態において、医薬組成物は、約２５０～約５００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する。さらなる実施形態において、医薬組成物は、約２５０～約４００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は約３００ｍＯｓｍのオスモル濃度を有する。あるいくつかのこのような実施形態において、医薬組成物は等張性である。

【0095】

一部の実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約３０：１～約１：２を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約１５：１～約２：１を範囲とする。またさらなる実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約１０：１～約２：１を範囲とする。なお更なる実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約６：１～約２：１を範囲とする。追加の実施形態において、リポソームとポリオールとの間の重量比は約１０：１～約６：１を範囲とする。

【0096】

一部の実施形態において、リポソームとマンニトールとの間の重量比は約１０：１～約１：１を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソームとマンニトールとの間の重量比は約６：１～約２：１を範囲とする。あるいくつかの実施形態において、リポソームとマンニトールとの間の重量比は約４：１である。

【0097】

一部の実施形態において、リポソームとグリセロールとの間の重量比は約１５：１～約２：１を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソームとグリセロールとの間の重量比は約１２：１～約２：１を範囲とする。またさらなる実施形態において、リポソームとグリセロールとの間の重量比は約１０：１～約６：１を範囲とする。

【0098】

一部の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、無機酸または無機塩基の使用によって調整することができる。好適な無機塩基の非限定的な例としては、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムが挙げられる。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。

【0099】

本発明の一部の実施形態によれば、ＧＰＬはホスホコリン頭部（ホスファチジルコリン、ＰＣベース脂質）またはホスホグリセロール頭部（ホスファチジルグリセロール、ＰＧベース脂質）を含み、ＳＰＬはセラミド（ホスホコリン頭部を保有するＮ－アシルスフィンゴシン、Ｎ－アシルスフィンゴシン－ホスホコリン（ＳＭベース脂質）とも呼ばれる）である。

【0100】

ＰＣ及びＳＭは、カチオン性コリン及びアニオン性ジエステルのリン酸部分（ホスホコリン頭部を構成する）を有する双性イオン性リン脂質である。ＰＣ及びＰＧの疎水性部分は、２つの炭化水素（例えば、アシル及びアルキル）鎖を含む。また、ＳＭは、一方がスフィンゴ塩基自身であり他方がＮ－アシル鎖である二つの疎水性炭化水素鎖も有する。炭化水素鎖が１２個の炭素原子を上回るＰＣ、ＳＭ、及びＰＧは、パッキングパラメーターが０．７４～１．０の範囲内にあるため、いずれも円筒様形状である。これらが形成する脂質二重膜は、ＳＯ－ＬＤ相転移温度を上回ると高度に水和及びベシクル化されて脂質ベシクル（リポソーム）を形成する。ＰＣ及びＰＧリポソーム二重膜は、秩序固体（ＳＯ）相または無秩序液体（ＬＤ）相にあり得る。ＳＯ－ＬＤ相間の変換は、主相転移と呼ばれる吸熱性の一次相転移を伴う。Ｔ_ｍは、ＳＤ－ＬＤ相転移中に熱容量変化の最大変化が生じる温度である。ＰＬのＴ_ｍ及びＳＯ－ＬＤ相転移の温度範囲は、特に、ＰＬ炭化水素鎖の組成に依存する。ＬＤ相において（ＳＯ相では生じない）、荷電したホスホコリン及びホスホグリセロール頭部は高度に水和されている。

【0101】

一部の実施形態において、「相転移温度」という用語はＴ_ｍを指す。他の実施形態において、「相転移温度」という用語はＳＯ－ＬＤ相転移の温度範囲を指す。

【0102】

さらに留意されたいのは、ＰＧ及びＳＭが有するＴ_ｍは、対応するＰＣ（同じ長さの置換炭化水素鎖（一つまたは複数））のＴ_ｍに類似することである。例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルグリセロール（ＤＭＰＧ）のＴｍはＤＭＰＣのＴｍと同一で、すなわち２３℃であり、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリルグリセロール（ＤＰＰＧ）またはＮ－パルミトイルＳＭのＴｍはＤＰＰＣのＴ_ｍと同一で、すなわち４１℃である。したがって、以下の実施例では主にＰＣベース脂質が利用されているが、本発明に従うＰＬもＰＧベースまたはＳＭベースの脂質であり得る。

【0103】

本発明の原理によれば、二つ以上のＰＬ（例えば、二つの異なるＰＣ、ＰＣ及びＰＧ、二つの異なるＰＧ、二つのＳＭ、ＰＣまたはＰＧ及びＳＭ、その他）の混合物は、ｉｎ ｓｉｔｕにおいて（例えば、健康な関節または機能不全の関節の関節領域にて）形成される混合物がＬＤ状態にある限りは、使用することができる。

【0104】

一部の特定の実施形態において、リポソームはＰＣを含む。さらなる特定の実施形態において、リポソームは二つの異なるＰＣの組合せを含む。他の特定の実施形態において、リポソームはＰＣとＳＭとの組合せを含む。

【0105】

一部の実施形態において、リポソームは、同じまたは異なる二つのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するグリセロリン脂質及びＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有するスフィンゴ脂質（ＳＰＬ）から選択される少なくとも一つのリン脂質（ＰＬ）を含む、少なくとも一つの膜を含むことを特徴とする。秩序固体（ＳＯ）から無秩序液体（ＬＤ）への相転移が生じる相転移温度は、約２０℃～約３９℃の温度範囲内にある。リポソームは、相転移温度より高い関節温度を有する関節の潤滑に使用される。したがって、リポソームは関節内ではＬＤ相にある。

【0106】

リポソームが含有するＰＬ（単一のＰＬ、またはＰＬと追加のＰＬとの組合せ）は、リポソームが約２０℃から約３９℃の間のＳＯ－ＬＤ相転移温度を有するように選択されることに留意されたい。

【0107】

ＧＰＬまたはＳＰＬは、アルキル、アルケニル、またはアシルのＣ_１２－Ｃ_１８炭化水素鎖を有することができる。ＧＰＬの場合には、二つの鎖は同じであっても異なっていてもよい。一部の実施形態において、ＧＰＬはＣ_１２－Ｃ_１６炭化水素鎖鎖を有する。追加の実施形態において、ＳＰＬは_Ｃ１２－Ｃ_１６炭化水素鎖鎖を有する。

【0108】

一つの特定の実施形態は、少なくとも一つのＣ_１４アシル鎖を伴うＧＰＬまたはＳＰＬを有するリポソームを含む医薬組成物に関する。別の特定の実施形態は、少なくとも一つのＣ_１５アシル鎖を伴うＧＰＬまたはＳＰＬを有するリポソームを含む医薬組成物に関する。また別の特定の実施形態は、Ｃ_１４、Ｃ_１５、Ｃ_１６、及びＣ_１８アシル鎖のうちの少なくとも一つを有するＧＰＬを含む医薬組成物に関する。さらに別の特定の実施形態は、Ｃ_１６アシル鎖を伴うＳＰＬを有するリポソームを含む医薬組成物に関する。追加の実施形態は、上記のリポソームのいずれかの組合せを含む医薬組成物に関する。

【0109】

一部の実施形態において、少なくとも一つのＣ_１２－Ｃ_１８またはＣ_１２－Ｃ_１６の疎水性鎖は飽和している。さらなる実施形態において、Ｃ_１２－Ｃ_１８及びＣ_１２－Ｃ_１６の疎水性鎖はいずれも飽和している。

【0110】

一つの実施形態において、当該Ｃ_１２－Ｃ_１８またはＣ_１２－Ｃ_１６の疎水性鎖は飽和していない。

【0111】

本発明の原理に従うリポソーム内に存在し得るリン脂質の非限定的な例としては、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ、Ｔ_ｍ 約２４℃）：１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ、Ｔ_ｍ ４１．４℃）；１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１５、Ｔ_ｍ ３３．０℃）；１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ、Ｔ_ｍ ５５℃）；及びＮ－パルミトイル－Ｄ－エリスロ－スフィンゴシルホスホリルコリン（Ｄ－エリスロＣ１６、Ｔ_ｍ ４１．０℃）が挙げられる。様々なＰＣベース脂質のＴ_ｍ値は、’’Ｔｈｅｒｍｏｔｒｏｐｉｃ Ｐｈａｓｅ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｕｒｅ Ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｂｙ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ’’，Ｊｏｈｎ Ｒ．Ｓｉｌｖｉｕｓ，Ｌｉｐｉｄ－Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８２に見いだすことができ、またＬｉｐｉｄ Ｔｈｅｒｍｏｔｒｏｐｉｃ Ｐｈａｓｅ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ（ＬＩＰＩＤＡＴ）及びＭａｒｓｈ（１９９０）にも見いだすことができる。

【0112】

一部の実施形態によれば、二つ以上のＰＬを使用する場合、これらの間のモル比は、医薬組成物が関節に投与される際に、この組合わせのＴ_ｍがＬＤ相にあるリポソームをもたらすように設計される。さらなる実施形態において、モル比は、約２０℃～約３９℃の範囲内の相転移温度を有するリポソームをもたらすように選択される。

【0113】

一部の実施形態において、リポソームはＤＭＰＣを含む。さらなる実施形態において、リポソームはＤＭＰＣから本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＤＭＰＣから本質的になる。追加の実施形態において、ＤＭＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、ＤＭＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0114】

一部の実施形態において、医薬組成物は、ＤＭＰＣと追加のＰＣとの組合せを含むリポソームを含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、ＤＭＰＣとＳＰＭとの組合せを含むリポソームを含む。

【0115】

一部の実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約５％～約１００％を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約５％～約８０％を範囲とする。さらなる実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約１０％～約７５％、約１５％～約７０％、約２０％～約６５％、約２５％～約６０％、約３０％～約５５％、約３５％～約５０％、約５％～約１５％、約２０％～約３０％、約５％～約３０％、約４０％～約５０％、または約７０％～約８０％を範囲とする。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。一部の例示的な実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約１０％である。他の例示的な実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約２５％である。さらなる例示的な実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約４５％である。追加の例示的な実施形態において、リポソーム膜中のＤＭＰＣのモルパーセントは約７５％である。

【0116】

一部の実施形態において、リポソームはＤＭＰＣとＤＰＰＣとの組合せを含む。さらなる実施形態において、リポソームはＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になる。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0117】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は約２５：７５～約７０：３０の範囲内にある。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は、約３０：７０～約６５：２５、約３５：６５～約６０：３０、または約４０：６０～約５５：４５の範囲内にある。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。あるいくつかの実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は約４５：５５である。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣのモルパーセント比は約２５：７５である。

【0118】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣとＤＰＰＣとの組合せを含むリポソームの相転移温度は約３３℃から約３７℃の間を範囲とする。

【0119】

一部の実施形態において、リポソームはＤＭＰＣとＣ１５との組合せを含む。さらなる実施形態において、リポソームはＤＭＰＣ及びＣ１５から本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＣ１５から本質的になる。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ及びＣ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＣ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＣ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0120】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｃ１５のモルパーセント比は約１５：８５～約５５：４５の範囲内にある。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｃ１５のモルパーセント比は約２５：７５～約４５：５５の範囲内にある。あるいくつかの実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｃ１５のモルパーセント比は約４５：５５である。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｃ１５のモルパーセント比は約２５：７５である。

【0121】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣとＣ１５との組合せを含むリポソームの相転移温度は約２９℃から約３１℃の間を範囲とする。

【0122】

一部の実施形態において、少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤＳＰＣを含む。さらなる実施形態において、リポソームはＤＭＰＣ及びＤＳＰＣから本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤＳＰＣから本質的になる。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＳＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＳＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤＳＰＣから本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0123】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣ：ＤＳＰＣのモルパーセント比は約７５：２５である。

【0124】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣとＤＳＰＣとの組合せを含むリポソームの相転移温度は約２７℃である。

【0125】

一部の実施形態において、リポソームはＤＭＰＣとＤ－エリスロＣ１６との組合せを含む。さらなる実施形態において、リポソームはＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６から本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６から本質的になる。追加の実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、ＤＭＰＣ及びＤ－エリスロＣ１６から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0126】

さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は約５：９５～約５０：５０の範囲内にある。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は、約１０：９０～約４５：５５、約１０：９０～約４０：６０、または約１０：９０～約３５：６５、約１０：９０～約３０：７０、または約１０：９０～約２５：７５の範囲内にある。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は約５：９５～約５０：５０の範囲内にある。一部の例示的な実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は約１０：９０である。他の例示的な実施形態において、ＤＭＰＣ：Ｄ－エリスロＣ１６のモルパーセント比は約２５：７５である。

【0127】

一部の実施形態において、ＤＭＰＣとＤ－エリスロＣ１６との組合せを含むリポソームの相転移温度は約２７℃から３２℃の間を範囲とする。

【0128】

一部の実施形態において、リポソームはＣ１５を含む。さらなる実施形態において、リポソームはＣ１５から本質的になる。またさらなる実施形態において、リポソームの少なくとも一つの膜はＣ１５から本質的になる。追加の実施形態において、Ｃ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中の張性剤の濃度と本質的に同じ濃度を有する張性剤を含む。さらなる実施形態において、Ｃ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のポリオールの濃度と本質的に同じ濃度を有するポリオールを含む。またさらなる実施形態において、Ｃ１５から本質的になるリポソームは、リポソーム内部で、リポソーム外部の媒体中のマンニトールの濃度と本質的に同じ濃度を有するマンニトールを含む。

【0129】

本発明の一部の実施形態に従う医薬組成物中の合計ＰＬ濃度は、約２０ｍＭ～約５００ｍＭを範囲とする。さらなる実施形態において、濃度は約５０ｍＭ～約３００ｍＭを範囲とする。またさらなる実施形態において、濃度は約１００ｍＭ～約２００ｍＭを範囲とする。なお更なる実施形態において、濃度は約１３０ｍＭ～約１７０ｍＭを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、合計ＰＬ濃度は約１５０ｍＭである。

【0130】

一部の実施形態において、合計ＰＬ濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ～約５００ｍｇ／ｍｌを範囲とする。さらなる実施形態において、濃度は約３０ｍｇ／ｍｌ～約３００ｍｇ／ｍｌを範囲とする。またさらなる実施形態において、濃度は約５０ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌを範囲とする。あるいくつかの実施形態において、合計ＰＬ濃度は約１００ｍｇ／ｍｌである。

【0131】

一部の実施形態において、リポソームを形成するリン脂質は、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約０．１％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約３０％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約３０％（ｗ／ｗ）、または約１％（ｗ／ｗ）～約２０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。あるいくつかの実施形態において、リポソームを形成するリン脂質は、医薬組成物中に約１０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0132】

一部の実施形態によれば、本発明の医薬組成物で使用するのに好適なリポソームは、その二重膜にコレステロールなどの膜活性ステロールを含まない。留意されたいのは、本発明の医薬組成物がプロピレングリコールを含有しないのが好ましいことである。さらに留意すべきなのは、本発明の医薬組成物がデキストランを含有しないのが好ましいことである。

【0133】

加えて、強調すべきなのは、本発明の医薬組成物で使用されるリポソームは、それ自体が活性成分として使用され、ある特定の医薬的活性薬剤の担体として使用されるわけではないことである。そのため、本明細書で上述されているように、本発明の原理に従う医薬組成物は、追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない。本明細書で使用される「追加の医薬的活性薬剤を本質的に含まない」という用語は、一部の実施形態において、治療有効量未満の、関節潤滑、関節機能不全の処置、関節痛の低減、刺激及び／もしくは摩耗、またはこれらの任意の組合せでの使用が知られている医薬的活性薬剤を含む、医薬組成物を指す。本明細書で使用される「使用が知られている」という用語は、一部の実施形態において、示された使用が発明の時点で承認済みの医薬的活性薬剤を指す。さらなる実施形態において、「使用が知られている」という用語は、示された使用が今後承認される医薬的活性薬剤を指す。またさらなる実施形態において、「使用が知られている」という用語は、示された使用に好適であると科学文献及び／または特許で言及されている医薬的活性薬剤を指す。

【0134】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、潤滑剤である医薬的活性薬剤（例えば、特にグリコサミノグリカン）、またはその医薬的に許容される塩、エステル、もしくは誘導体を含まない。あるいくつかの実施形態において、当該グリコサミノグリカンはヒアルロン酸、またはヒアルロナン含有塩もしくはエステルである。あるいくつかの実施形態において、ヒアルロン酸はリポソーム内でカプセル化されていない。追加的にまたは代替的に、ヒアルロン酸は液体媒体に分散されるべきではない。現時点で好ましい一部の実施形態において、医薬組成物はヒアルロン酸、またはその医薬的に許容される塩もしくはエステルを本質的に含まない。「本質的に含まない」という用語は、ヒアルロン酸に関して使用される場合、一部の実施形態において、治療有効量未満のヒアルロン酸またはその塩もしくはエステルを含む医薬組成物を指す。追加の実施形態において、「本質的に含まない」という用語は、検出可能量未満のヒアルロン酸またはその塩もしくはエステルを含む医薬組成物を指す。

【0135】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、表層ゾーンタンパク質（ＳＺＰ）、ラブリシン、プロテオグリカン４、ならびにこれらのアナログ及び誘導体から選択される潤滑剤である医薬的活性薬剤を含まない。

【0136】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗炎症剤である医薬的活性薬剤、例えば、キシリトール、ベタメタゾン、プレドニゾロン、ピロキシカム、アスピリン、フルルビプロフェン、（＋）－Ｎ－｛４－［３－（４－フルオロフェノキシ）フェノキシ］－２－シクロペンテン－１－イル｝－Ｎ－ヒドロキシウレアサルサラート、ジフルニサル、イブプロフェン、フェノプロフェン、フェナマート、ケトプロフェン、ナブメトン、ナプロキセン、ジクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、エトドラク、ケトロラク、オキサプロジン、セレコキシブ、メクロフェナマート、メフェナム酸、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、サリチラート、またはフィトスフィンゴシンタイプの薬剤を含まない。

【0137】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗ウイルス剤である医薬的活性薬剤、例えば、アシクロビル、ネルフィナビル、またはビラゾールを含まない。

【0138】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗生物質である医薬的活性薬剤（ペニシリンファミリーに属する抗生物質、セファロスポリン、アミノグリコシド系薬、マクロライド、カルバペネム、及びペネム、ベータラクタム単環、ベータラクタマーゼ阻害物質、ならびにテトラサイクリン、ポリペプチド抗生物質、クロラムフェニコール及び誘導体、ポリエーテルイオノフォア、ならびにキノロンを含む）を含まない。このような抗生物質の非限定的な例としては、アンピシリン、ダプソン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セファクロル、セファドロキシル、セファレキシン、セフラジン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、シクラシリン、ピクロキサシリン、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、チカルシリン、リファンピン、テトラサイクリン、フシジン酸、リンコマイシン、ノボビオシン、及びスペクチノマイシンが挙げられる。

【0139】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗感染剤である医薬的活性薬剤、例えば、塩化ベンザルコニウムまたはクロルヘキシジンを含まない。

【0140】

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、ステロイドである医薬的活性薬剤を含まない。本明細書で使用される「ステロイド」という用語は、天然に存在するステロイド及びその誘導体、ならびにステロイド様活性を有する合成または半合成のステロイドアナログを指す。ステロイドは、グルココルチコイドまたはコルチコステロイドであり得る。具体的な天然及び合成のステロイドの例としては、以下に限定されないが、アルドステロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロプレドノール、コルチゾン、コルチバゾール、デオキシコルトン、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオロコルチゾン、フルオロコルトロン、フルオロメトロン、フルランドレノロン、フルチカゾン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、イコメタゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、チキソコルトール、またはトリアムシノロン、及びこれらのそれぞれの医薬的に許容される塩または誘導体が挙げられる。

【0141】

一部の実施形態によれば、リン脂質は、唯一の活性成分として本発明の医薬組成物で使用される。

【0142】

一部の実施形態によれば、医薬組成物は、本明細書で説明されているように、ポリオールを含む非イオン性張性剤と、リポソームとから本質的になる。一部の実施形態において、「～から本質的になる」という用語は、唯一の活性成分が、示された活性成分（すなわち、リポソーム）である組成物を指すが、製剤のオスモル濃度、粘性、及び／またはｐＨを安定化、保持、または制御するためのものであり、ただしリポソーム及び／またはリン脂質の治療効果に直接関与することのない他の化合物が含まれてもよい。一部の実施形態において、「なる」という用語は、リポソームと、張性剤と、医薬的に許容される溶媒または賦形剤とを含有する組成物を指す。

【0143】

本発明の様々な実施形態に従う医薬組成物は滅菌し、所望の場合は、リポソームに有害に反応しない助剤（例えば、保存料、安定剤、湿潤剤、合成乳化剤、浸透圧に影響をもたらすための追加の塩、着色料、及び／または芳香物質など）と混合することができる。

【0144】

ＧＰＬ、ＳＰＬ、またはこれらの組合せは、リポソーム、好ましくは、平均直径が約０．３μｍより大きい、約０．５μｍより大きい、約０．８μｍより大きい、または約１μｍより大きいリポソームを形成する。リポソームの平均直径は、約１０μｍ、８μｍ、７μｍ、６μｍ、または５μｍであり得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。一部の実施形態によれば、リポソームは、約０．３μｍから１０μｍの間の範囲内の平均直径を有する。さらなる実施形態によれば、リポソームは、約０．５μｍから９μｍの間の範囲内の平均直径を有する。またさらなる実施形態によれば、リポソームは、約１μｍから８μｍの間の範囲内の平均直径を有する。なお更なる実施形態によれば、リポソームは、約３μｍから５μｍの間の範囲内の平均直径を有する。

【0145】

「平均直径」及び「平均粒子サイズ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、一部の実施形態において、数分布モデルに基づいた粒子サイズ分布に由来するリポソームの平均直径を指す。一部の実施形態において、当該用語は、体積分布モデルに基づいた粒子サイズ分布に由来するリポソームの平均直径を指す。追加の実施形態において、当該用語は、表面積分布モデルに基づいた粒子サイズ分布に由来するリポソームの平均直径を指す。粒子サイズ分布は、特に、レーザー光回折及び／またはコールターカウンター法により定量することができる。

【0146】

リポソームは、単一膜リポソームである場合もあれば、一部の実施形態によれば、多重層ベシクル（ＭＬＶ）リポソームである場合もある。他の実施形態によれば、リポソームは、大型多重層ベシクル（ＬＭＶＶ）または脱水再水和ベシクル（ＤＲＶ）リポソームであってもよい。

【0147】

現時点で好ましい一部の実施形態において、リポソームは多重層ベシクル（ＭＬＶ）である。あるいくつかのこのような実施形態によれば、リポソームは二つ以上の膜を有する。

【0148】

一つの実施形態によれば、ＭＬＶは、０．３μｍから１０μｍの間の範囲内の平均直径により定義される。別の実施形態によれば、ＭＬＶは、０．５μｍから９μｍの間の範囲内の平均直径により定義される。またさらなる実施形態によれば、ＭＬＶは、約１μｍから８μｍの間の範囲内の平均直径により定義される。なお更なる実施形態によれば、ＭＬＶは、約３μｍから５μｍの間の範囲内の平均直径により定義される。

【0149】

あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は、ポリオールと、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質的になる膜を有するＭＬＶリポソームとを含む。ポリオールは、マンニトール及びグリセロールから選択され得る。さらなる実施形態において、医薬組成物は、マンニトールと、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質になる膜を有するＭＬＶリポソームとを含む。追加の実施形態において、マンニトールの濃度は約１から約７０ｍｇ／ｍｌの間を範囲とする。なお別の実施形態において、医薬組成物は、約２００～約６００ｍＯｓｍの範囲内のオスモル濃度を有する。また別の実施形態において、リポソームとマンニトールとの間の重量比は約６：１～約２：１を範囲とする。

【0150】

一部の実施形態において、医薬組成物は、マンニトールと、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質になる膜を有するＭＬＶリポソームとを含む。一部の実施形態において、ＤＭＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約２０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、ＤＭＰＣは、医薬組成物中に約３０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、ＤＰＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、ＤＰＰＣは、医薬組成物中に約４０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の乾燥重量の約２０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に約３０％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0151】

一部の実施形態において、マンニトールと、ＤＭＰＣ及びＤＰＰＣから本質になる膜を有するリポソームとを含む医薬組成物は、さらに、ヒスチジン緩衝液を流体媒体として含む。さらなる実施形態において、ＤＭＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、ＤＭＰＣは、医薬組成物中に約４％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、ＤＰＰＣは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約２％（ｗ／ｗ）～約１２％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、ＤＰＰＣは、医薬組成物中に約５％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。一部の実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に、医薬組成物の合計重量の約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）を範囲とする重量パーセントで存在する。ある実施形態において、マンニトールは、医薬組成物中に約４％（ｗ／ｗ）の重量パーセントで存在する。

【0152】

本発明の様々な実施形態に従う医薬組成物は、天然に存在する軟骨ＰＬの代替物、すなわち関節潤滑物質及び／または摩耗低減物質の調製に使用することができる。

【0153】

留意されたいのは、関節潤滑の低減または関節摩耗（例えば、変形性関節炎）に罹患している患者の関節温度は、疾患が進行するに伴って変動することである［Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ，Ｊ．Ｌ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｒ．，Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｕｓｉｎｇ Ｉｎｔｒａ－Ａｒｔｉｃｕｌａｒ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ．Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ． １９５６，１５，（４），３２０－３２６］。事実上、この温度変化は、変形性関節炎の炎症を評価するための臨床ツールとして使用されていた［Ｔｈｏｍａｓ，Ｄ．；Ａｎｓｅｌｌ，Ｂ．Ｍ．；Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｓ．；Ｉｓａａｃｓ，Ｒ．Ｊ．，Ｋｎｅｅ Ｊｏｉｎｔ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｕｓｉｎｇ ａ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒｍｉｓｔｏｒ Ｔｈｅｒｍｏｍｅｔｅｒ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ １９８０，１９，（１），８－１３］。変形性関節炎患者の手関節では、温度が約２８から約３３Ｃ℃まで変動することが示された［Ｖａｒｊｕ，Ｇ．；Ｐｉｅｐｅｒ，Ｃ．Ｆ．；Ｒｅｎｎｅｒ，Ｊ．Ｂ．；Ｋｒａｕｓ，Ｖ．Ｂ．，Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｈａｎｄ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｒｍｏｇｒａｐｈｉｃ ａｎｄ ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２００４，４３，９１５－９１９］のに対し、健康な顎関節（ＴＭＪ）の温度は約３５から３７℃まで変動する［Ａｋｅｒｍａｎ，Ｓ．；Ｋｏｐｐ，Ｓ．，Ｉｎｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒ ａｎｄ ｓｋｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｅｍｐｏｒｏｍａｎｄｉｂｕｌａｒ ｊｏｉｎｔ．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．１９８７，９５，（６），４９３－４９８］。

【0154】

したがって、本発明の原理によれば、ＰＬまたはその混合物がｉｎ ｓｉｔｕで、当該ＰＬまたはその混合物を用いて潤滑する関節領域にてＬＤ相にあることは必須であり、事実上前提条件である。一部の実施形態において、リポソームは、ｉｎ ｓｉｔｕの、すなわち関節の温度から１５℃より高くはない、約２０℃～約３９℃の範囲内にあるＳＯ－ＬＤ相転移のオフセット温度（上限）を有する。本発明の原理によれば、リポソームは、ＧＰＬ、ＳＰＬ、またはこれらの組合せから形成されており、そのため、上記で説明されているＳＯ－ＬＤ相転移温度は、ＧＰＬ、ＳＰＬ、またはこれらの組合せから形成されるリポソームに関するものであり、そのためＰＬまたはその混合物がＬＤ相にあるリポソームがもたらされる。

【0155】

あるいくつかの実施形態において、ポリオールを含む非イオン性張性剤はリポソームの相転移温度に影響を及ぼさない。さらなる実施形態において、ポリオールを含む非イオン性張性剤と組み合わせたリポソームの相転移温度は、リポソーム単独の相転移温度と約１０％以下異なる。またさらなる実施形態において、ポリオールを含む非イオン性張性剤と組み合わせたリポソームの相転移温度は、リポソーム単独の相転移温度と約５％以下異なる。

【0156】

本発明の医薬組成物は、関節機能不全に関連する任意の関節障害または関節障害から生じる症状の処置、軽減、遅延、防止、管理、または治癒のために使用することができる。本明細書で使用される「関節障害」という用語は、関節の変性、痛み、可動性の低減、炎症、刺激、または生理的破壊及び機能不全を引き起こす関節領域の任意の苦痛（先天性、自己免疫、その他）、損傷、または疾患を意味するとみなされるべきである。この障害は、関節の分泌及び潤滑の低減に関連する可能性があり、さらに膝及び臀部の置換の合併症からのものである可能性もある。

【0157】

本発明の原理に従う関節は、膝、臀部、足首、肩、肘、足根、手根、指節間、及び椎間のうちのいずれか一つであり得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態に相当する。あるいくつかの実施形態において、当該関節は膝関節である。

【0158】

具体的な関節障害としては、以下に限定されないが、哺乳類、好ましくはヒトにおける、関節炎（リウマチ性関節炎における関節びらんの状態を含む）に起因する関節分泌及び／または潤滑の欠乏、変形性関節炎、リウマチ性関節炎患者における変形性関節炎、外傷性関節損傷（スポーツ損傷を含む）、関節ロック（例えば、顎関節（ＴＭＪ））、関節穿刺後の状態、関節鏡下手術、開放関節手術、関節（例えば、膝または臀部）置換が含まれる。本発明の医薬組成物の使用により処置または防止するのに好ましい障害は、変形性関節炎である。

【0159】

あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は、変形性関節炎患者における膝関節痛を低減するためのものである。

【0160】

本発明の医薬組成物は、将来のダメージまたは変性を防止するための予防的措置として使用することができると考えられる。例えば、当該医薬組成物は、運動選手に対し選手人生全体において断続的に関節内投与して、応力関連の損傷または軟骨変性のリスクを最小化することができると考えられる。

【0161】

本発明の医薬組成物は、抗炎症剤、鎮痛剤、筋弛緩薬、抗うつ薬、または関節硬直（例えば、関節炎）に関連する障害の処置のために一般的に使用される関節潤滑を促進する薬剤を除外して、またはその補助剤として、投与することができる。併用療法的アプローチは、関節潤滑の低減に関連する障害（例えば、変形性関節炎）の防止、管理、または処置のために一般的に使用される薬剤（例えば、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））に関連する副作用を低減するのに有益である。安全性の強化に加えて、併用療法的アプローチは、処置の効力を増大するのにも有利であり得る。

【0162】

一部の実施形態において、医薬組成物は、非経口投与に好適な形態をとる。患者の関節腔への本発明の医薬組成物の非経口投与は、関節内注射、関節鏡下投与、または外科的投与からなる群から選択される方法によって実施することができる。したがって、一部の実施形態において、医薬組成物は、関節内注射、関節鏡下投与、または外科的投与から選択される経路による投与に好適な形態で製剤化される。本開示の医薬組成物における有益な特徴の一つは、リポソーム組成物のオスモル濃度を生理的な値に調整し、それにより関節内投与に関連する副作用を低減する張性剤の存在である。

【0163】

本発明の様々な実施形態に従う医薬組成物は、約０．５ｍｌ～約１０ｍｌの用量で投与することができる。さらなる実施形態において、医薬組成物は約１ｍｌ～約６ｍｌの用量で投与される。あるいくつかの実施形態において、医薬組成物は約３ｍｌの用量で投与される。

【0164】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約２０ｍｇ～約３５０ｍｇのマンニトールを含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約４０ｍｇ～約２５０ｍｇのマンニトールを含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約１２０ｍｇのマンニトールを含む。別の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約４０ｍｇのマンニトールを含む。追加の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約２５０ｍｇのマンニトールを含む。

【0165】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約５０ｍｇ～約１０００ｍｇのリン脂質を含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約１００ｍｇ～約８００ｍｇのリン脂質を含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約３００ｍｇのリン脂質を含む。別の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約１００ｍｇのリン燐脂質を含む。追加の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約６００ｍｇのリン脂質を含む。

【0166】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約３０ｍｇ～約５５０ｍｇのＤＰＰＣを含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約５０ｍｇ～約５００ｍｇのＤＰＰＣを含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約１８０ｍｇのＤＰＰＣを含む。別の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約６０ｍｇのＤＰＰＣを含む。追加の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約３６５ｍｇのＤＰＰＣを含む。

【0167】

一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約２０ｍｇ～約４５０ｍｇのＤＭＰＣを含む。一部の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は、約４０ｍｇ～約３００ｍｇのＤＭＰＣを含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約１４０ｍｇのＤＰＰＣを含む。別の実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約４５ｍｇのＤＰＰＣを含む。ある実施形態において、医薬組成物の一単位用量は約２７５ｍｇのＤＰＰＣを含む。

【0168】

医薬組成物は、バイアルもしくは単回注射、または実際の使用に好都合な任意の他の方法で分割することができる。

【0169】

本発明の医薬組成物の投与が企図される対象には哺乳類が含まれ、哺乳類は例えば、ヒト及びその他の霊長類であるが、これに限定されない。

【0170】

本明細書の説明及び請求項の全体において、単数形「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」、及び「当該（ｔｈｅ）」は、文脈による別段の明確な定めがない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「（一つの）ＰＬ（ａ ＰＬ）」に対する言及は一つ以上のＰＬに対する言及であり、「（一つの）リポソーム」とは一つ以上のリポソームを指す。本明細書の説明及び請求項の全体において、単語の複数形は、文脈による別段の明確な定めがない限り、単数の指示対象を含む。留意されたいのは、「及び」という用語または「または」という用語は、文脈による別段の定めがない限り、概して、「及び／または」を含めた意味で用いられる。

【0171】

さらに、本明細書の説明及び請求項全体において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」ならびにこれらの語の変化形態、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、「以下を含むがこれに限定されない」ことを意味し、その他の部分、添加物、構成要素、整数、またはステップを除外するようには意図されていない（かつ除外しない）。

【0172】

本明細書で使用される「約」という用語は、量、時間的期間などの測定可能な値を指す場合、本開示の方法を実施するのに以下のような変動が適切であることから、指定された値の＋／－１０％、より好ましくは＋／－５％、いっそうより好ましくは＋／－１％、更により好ましくは＋／－０．１％の変動を包含するように意図される。

【0173】

以下の実施例は、本発明の一部の実施形態をより十分に例示するために提示される。ただし、この実施例は、決して本発明の広い範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。当業者は、本明細書で開示される原理における多くの変形形態及び変更形態を、本発明の範囲から逸脱することなく、容易に考案することができる。

【実施例】

【0174】

材料及び方法
材料
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ １４：０、カタログ番号５５６２００）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ １６：０、カタログ番号５５６３００）をＬｉｐｏｉｄ（Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から取得した。１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ １８：０、カタログ番号８５０３６５Ｐ）、１，２－ジペンタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１５（本明細書ではＰＣ（１５：０）とも略される）、カタログ番号８５０３５０Ｐ）をＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ（ＡＬ，ＵＳＡ））から取得した。Ｎ－パルミトイル－Ｄ－エリスロ－スフィンゴシルホスホリルコリン（パルミトイルスフィンゴミエリン、Ｄ－エリスロＣ１６（本明細書ではＣ１６ ＳＰＭとも略される）、カタログ番号１６６０８０５０）をＢｉｏ－Ｌａｂ ｌｔｄ．（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ，Ｉｓｒａｅｌ）から取得した。

【0175】

高純度水（１８．２メガオームの抵抗）を、ＷａｔｅｒＰｒｏ ＰＳ ＨＰＬＣ／Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｅｒ Ｈｙｂｒｉｄ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を用いて取得した。ＨＰＬＣグレードエタノールをＢｉｏＬａｂ Ｌｔｄ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ，Ｉｓｒａｅｌ）から取得した。Ｌ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、及びＤ－マンニトールは、いずれもＭｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から取得した。グリセロールをＭｅｒｃｋから取得した（カタログ番号 １．０４０９３）。塩化ナトリウムをＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒから取得した（カタログ番号 ４０５８－０２）。

【0176】

方法
ＭＬＶリポソームを含む低張性組成物の調製
所望のリン脂質の混合物を２．５ｍｌのエタノールに溶解し、１８０ｍＭの濃度にした。この溶液をボルテックスにより撹拌し、２０分間水浴（６０℃）に入れた。リン脂質が完全に溶解するまで撹拌を数回繰り返した。エタノール溶液を温かい１０ｍＭまたは７．５ｍＭのヒスチジン緩衝液１０ｍｌ（ｐＨ６．５）に移し、脂質を水和し所望のＭＬＶの懸濁液を形成するために、ボルテックスにより２分間激しく混合した。

【0177】

５サイクルの遠心分離及び４℃の冷たい緩衝液の置換によりエタノールを除去した。ＰＣからなるリポソームシステムに対する遠心分離は、第１サイクルでは３０００ｒｐｍにて４０分間、以降のサイクルでは４０００ｒｐｍにて３０分間行った。ＳＰＬを含むリポソームシステムに対する遠心分離は、第１サイクルでは４０００ｒｐｍにて５０分間で２回、間に一晩のスタンバイを入れて行い、第２及び第３サイクルでは４０００ｒｐｍにて４０分間で２回行った。第４及び第５サイクルは４０００ｒｐｍにて６０分間行った。エタノール除去のモニタリングはオスモル濃度測定により行った。毎回冷たい緩衝液を置換した後に、滅菌ピペットを用いてペレットを再懸濁させて粘着性のペレットをほぐし、次いでチューブをしっかり閉じ、２分間ボルテックスした。混合物のオスモル濃度が５０ｍＯｓｍ未満になるまで、遠心分離プロセス及び溶液置換を繰り返した。ＨＢ（１０ｍＭ、７．５ｍＭ）の浸透圧を測定し、それぞれ２６及び１９ｍＯｓｍであることが分かった。ＭＬＶは解析を行うまで２～８℃にて保管した。

【0178】

ＭＬＶリポソームと張性剤とを含む等張性組成物の調製
上記で説明されているようにリポソームを調製した。リポソームのエタノール溶液を、マンニトール、グリセロール、及び塩化ナトリウムから選択される張性剤を含む温かい１３．５ｍＭのヒスチジン緩衝液１０ｍｌ（ｐＨ６．５）に移し、脂質を水和し所望のＭＬＶの懸濁液を形成するために、ボルテックスにより２分間激しく混合した。

【0179】

ヒスチジン緩衝液中の張性剤の濃度は以下のようにした：グリセロール：２３５ｍＭ、マンニトール：２３４ｍＭ、及びＮａＣｌ：１３１ｍＭ。

【0180】

混合物のオスモル濃度が約３００ｍＯｓｍになるまで、遠心分離プロセス及び溶液置換を繰り返した。組成物は解析を行うまで２～８℃にて保管した。

【0181】

ＭＬＶリポソームのキャラクタリゼーション
修正バートレット法を用いてリン脂質濃度を定量した［Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ，Ｙ．ａｎｄ Ｓ．Ａｍｓｅｌｅｍ，Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｓｓａｙｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｓｅ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍｅ－ｂａｓｅｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９３．１：ｐ．５２７－６１６］．リポソームのサイズ分布は、４０ｎｍ～２ｍｍの範囲内の粒子サイズの測定を可能にするレーザー回折粒子サイズアナライザー（ＬＳ１３３２０ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて定量した。コールターカウンター法（伝導性流体中に懸濁した粒子が小さな開口部を通過する際の電気伝導性の変化を測定することに基づく）もサイズ分布定量に使用した。

【0182】

潤滑効率性の評価のための軟骨オン軟骨ｅｘ ｖｉｖｏモデル
Ｈａｄａｓｓａｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ）での大腿骨頭骨折の手術からドナー（年齢：男性７０歳、女性６８、７２、８１、８７、９８歳）からの正常な関節軟骨を取得した。組織は解析するまで－２０℃にて凍結した。

【0183】

Ｈａｄａｓｓａｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ）のドナー８名からの滑液をプールした。

【0184】

軟骨試験片の調製に使用した試薬には、Ｓｕｐｅｒｇｌｕｅ（シアノアクリレート接着剤、３ｇ）、ＮａＣｌ（Ｂａｉｏ Ｌａｂ ＬＴＤ（Ｉｓｒａｅｌ）１９０３０２９１、カタログ番号：１９０３０２９１、ロット番号：５７７４７）、及びエタノール（Ｆｒｕｔａｒｏｍ（Ｉｓｒａｅｌ）、カタログ番号：５５５１６４０、ロット番号：２６１４１００７）が含まれた。

【0185】

試料の調製は、Ｔｅｃｈｎｉｏｎ ＩＩＴ（Ｈａｉｆａ，Ｉｓｒａｅｌ）のＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ学部のＣａｒｔｉｌａｇｅ ａｎｄ Ｊｏｉｎｔｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ研究室で行った。試験は、Ｔｅｃｈｎｉｏｎ ＩＩＴ（Ｈａｉｆａ，Ｉｓｒａｅｌ）のＭｅｃｈａｎｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ学部のＳｈａｍｂａｎ ＆ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｔｒｉｂｏｌｏｇｙ研究室で実施した。摩擦測定用のインハウス装置に、ひずみゲージ測定システム（ＨＢＭ Ｚ８（Ｇｅｒｍａｒｙ））及びＬａｂＶｉｅｗソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（ＵＳＡ））を備えたロードセルを装着した。

【0186】

以下のように装置をセットアップした。軟骨プラグを調製し、固定した。各軟骨から、直径４ｍｍまたは８ｍｍのプラグを１０～２０個調製した。これらのプラグを様々な試験対象製剤にランダムに割り当てた。８ｍｍプラグを装置内の固定ホルダーに取り付け、１：１の比（ｖ／ｖ）で２ｍｌの滑液（ＳＦ）及び試験溶液を含有する溶液に浸した。４ｍｍプラグを上部ピストンに固定した。

【0187】

測定：摩擦試験を、異なる試験対象試料の存在下で複数回繰り返し実施した。毎回の測定において上部プラグを底部プラグの上に置き、数秒の滞留間隔の後、摩擦係数を測定した。任意の所与のプラグ対に対し１０回以上の独立的な測定を実施し、全ての繰返しにおいて同様の条件を提供するため、各々の次の試験の前にプラグを回転させた。

【0188】

静止摩擦係数は、表１に示すように、適用荷重、滑り速度、滞留時間、及び温度における具体的なトライボロジー条件下で定量した。

表１：軟骨オン軟骨モデルの実験条件：

【表1】

【0189】

示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定
異なるリポソームシステムのＴ_ｍを定量するため、ＭｉｃｒｏＣａｌ（商標）ＶＰ－ＤＳＣ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ（Ｓｗｅｄｅｎ）、現在はＭａｌｖｅｒｎ（ＵＫ）が所有）を用いて試料を走査した。ＨＢ中ＭＬＶの試料、及びリポソームとマンニトールとを含む医薬組成物の試料を、約２０ｍＭのリン脂質の濃度にて、参照セル中のＨＢ及びマンニトールを伴うＨＢと共に、１℃／分の加熱速度にて１０℃から７５℃の間の範囲で走査した。試験した各試料を同じ割合で三回走査した（温度を１０℃から７５℃に増加させ（走査１）、温度を７５℃から１０℃に減少させ（走査２）、再び温度を１０℃から７５℃に増加した（走査３））。Ｏｒｉｇｉｎ（登録商標）７．０ソフトウェアにより熱量測定データの処理を行った。主相転移のＴ_ｏｎ及びＴｏ_ｆｆは、直線を外挿して主相転移の温度範囲を定義することにより、定量した。システムＦ１については、ピーク２に幅広の「肩」があったため、Ｍｏｄｅｌ：ＭＮ２Ｓｔａｔｅを適合させることによる追加の解析を行った。

【0190】

実施例１：張性剤がリポソーム医薬組成物の潤滑特性に及ぼす効果
張性剤とリポソームとを含む医薬組成物による軟骨潤滑を、軟骨オン軟骨ｅｘ ｖｉｖｏモデルを用いて評価した。軟骨オン軟骨ｅｘ ｖｉｖｏモデルは、生体潤滑調製物が静止摩擦係数に及ぼす相対的効果を試験するための実験システムをもたらす。このタイプの測定は、異なる潤滑物質の軟骨摩擦係数を低減する能力の指標となり得る。軟骨オン軟骨ｅｘ ｖｉｖｏモデルは、固定した二つのヒト軟骨プラグを、異なる潤滑物質溶液に浸しながら一方を他方に対し滑らせる装置を利用する。この装置は、二つの軟骨試験片間の静止摩擦係数の測定を可能にする［Ｍｅｒｋｈｅｒ Ｙ ｅｔ ａｌ． ’’Ａ ｒａｔｉｏｎａｌ ｈｕｍａｎ ｊｏｉｎｔ ｆｒｉｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｕｓｉｎｇ ａ ｈｕｍａｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ－ｏｎ－ｃａｒｔｉｌａｇｅ．’’Ｔｒｉｂｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００６）：２９－３６］。このモデルは、過去に、異なるリポソーム組成物の摩擦係数を比較するために使用されている［Ｓｉｖａｎ Ｓ ｅｔ ａｌ． ’’Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｃｔ ａｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｂｉｏｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ ｆｏｒ ｆｒｉｃｔｉｏｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｊｏｉｎｔｓ．’’Ｌａｎｇｍｕｉｒ（２０１０）：１１０７－１６］。

【0191】

ここでの実験は、静止摩擦係数測定により反映される、張性剤を含むリポソーム製剤の相対的潤滑特性を定量し、当該リポソーム製剤を低張性リポソーム製剤と比較するように設計された。表２は、試験した医薬組成物を提示している。リポソームの組合せは、４５：５５のモルパーセント比のＤＭＰＣ／ＤＰＰＣを選択した。
表２：低張性リポソーム組成物及び等張性リポソーム組成物

【表2】

【0192】

リポソーム組成物は、３ｍｌの１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ＨＢ）ｐＨ６．５中に分散した１８３ｍｇのＤＰＰＣと１３６ｍｇのＤＭＰＣとを含んだ。１０ｍＭヒスチジン緩衝液を含むリポソーム組成物のオスモル濃度は約５０ｍＯｓｍであった（表３）。したがって、オスモル濃度を約３００ｍＯｓｍの等張レベルに増加させるために、張性剤の濃度は約２５０ｍＭの溶質をもたらすように調整すべきである。

【0193】

マンニトールを１２０ｍｇ（４％ｗｔ．または４０ｍｇ／ｍｌ）の量で添加して等張性組成物を形成した。グリセロールを６１ｍｇ（２％ｗｔ．または２０ｍｇ／ｍｌ）の量で添加した。塩化ナトリウムを２１ｍｇの量で添加した。

【0194】

表３は、異なるリポソーム組成物の物理化学的特性を概括している。三つの異なる張性剤を用いてリポソーム組成物を調製した。各張性剤は、調製物の全体的オスモル濃度に等しく寄与する。これらの調製物の等張性は約３００ｍＯｓｍであった。イオン性張性剤（ＮａＣｌ）と非イオン性張性剤（マンニトール及びグリセロール）との間で比較を実施した。張性剤なしの低張性リポソーム組成物（５０ｍＯｓｍ未満）に対しても試験を行った。材料及び方法の項で説明されているように軟骨オン軟骨モデルセットアップを用いて、張性剤がリポソーム組成物の潤滑能力に及ぼす効果を評価した。
表３：リポソーム組成物の物理化学的特性。

【表3】

【0195】

表４は、実験で取得された平均静止摩擦係数の予備的結果を提示している。測定繰返しの精度は、相対ＳＤによって反映されているように、全ての試験対象製剤の間で類似している。
表４：リポソーム組成物の潤滑特性。

【表4】

【0196】

製剤の比較により、マンニトールを含有する調製物は、他の等張性組成物に比べて最も低い静止摩擦係数を示すことが明らかになった。この最も低い静止摩擦係数は、マンニトール製剤がより高い潤滑特性を有することを示すものである。驚くべきことに、マンニトール製剤を使用した場合に取得される静止摩擦係数は、張性剤なしの低張性リポソーム組成物を用いた場合よりも約３０％低いことが分かった。グリセロール製剤も、より良好な潤滑をもたらした（低張性製剤に比べて約２０％低い平均静止摩擦係数）。これに対し、イオン性張性をリポソーム組成物に加えても組成物の潤滑能力を強化することはなかった。

【0197】

実施例２：張性剤がリポソーム医薬組成物のサーモトロピック特性に及ぼす効果
本実験は、張性剤の添加がリポソーム組成物のサーモトロピック挙動及び熱力学的パラメーター（ＳＯ－ＬＤ相転移の範囲（Ｔ_ｏｎ→Ｔ_ｏｆｆ）、Ｔ_ｐ、Ｔ_ｍ、Ｔ_１／２、及びＨを含む）に影響を及ぼすかどうかを定量するように設計された。Ｔ_ｏｎ及びＴｏ_ｆｆは、加熱走査中にＳＯ－ＬＤ相転移が開始及び終了した温度に相当し、Ｔ_ｐ及びＴ_ｍは、前転移中（Ｔ_ｐ）及び主転移中（Ｔ_ｍ）に熱容量の最大変化が生じる温度に相当し、Ｔ_１／２は、ＳＯ－ＬＤ相転移中のエンタルピーの変化に相当する吸熱の半分の高さにおける温度（幅）範囲に相当し、Ｈは、ＳＯ－ＬＤ相転移中のエンタルピーの合計変化に相当する曲線下面積である。

【0198】

二つのタイプのリポソーム組成物を選択し、各組成物に対し（張性剤としての）マンニトールあり及びなしで試験した。試験対象リポソーム組成物を表５に提示する。

表５：低張性リポソーム組成物及び等張性リポソーム組成物

【表5】

【0199】

ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣリポソーム組成物は、３ｍｌの１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ＨＢ）ｐＨ６．５中に分散した１８３ｍｇのＤＰＰＣと１３６ｍｇのＤＭＰＣとを含んだ。Ｃ１５リポソーム組成物は、２１２ｍｇ（７０．６ｍｇ／ｍｌ）のリン脂質を含んだ。マンニトールを１２０ｍｇ（４％ｗｔ．）の量で添加して、等張性組成物を形成した。

【0200】

表６は、異なるリポソーム組成物の物理化学的特性を概括している。

表６：リポソーム組成物の物理化学的特性。

【表6】

【0201】

異なるシステムのサーモトロピック挙動及び熱力学的パラメーター（Ｔ_ｏｎ→Ｔ_ｏｆｆ、Ｔ_ｍ、Ｔ_１／２、ΔＨ）を定量するため、ＭｉｃｒｏＣａｌＴＭ ＶＰ－ＤＳＣ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ））を用いて試料を走査した。Ｏｒｉｇｉｎ（登録商標）７．０ソフトウェアにより熱量測定データの処理を行った。Ｔ_ｏｎ→Ｔ_ｏｆｆ範囲を定量する方法は、材料及び方法の項で説明されている。

【0202】

表７は、ＤＳＣ走査から評価した試験対象リポソーム組成物のサーモトロピックキャラクタリゼーションを提示している。

表７：リポソーム組成物のサーモトロピックキャラクタリゼーション。

【表7】

【0203】

表７ならびに図１及び２で概括されている結果は、マンニトールが、ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣ ４５／５５モル比のＭＬＶ及び１００モル％のＣ１５ ＭＬＶのサーモトロピック挙動に対し効果を及ぼさないことを示している。

【0204】

実施例３：リポソームの組合せにおける相転移温度
本試験は、様々なリポソーム組成物のサーモトロピック挙動及び熱力学的パラメーターを評価するように、詳細には、２０℃～３９℃の範囲内の相転移温度を有するリポソームの組合せを見いだすように構成された。マンニトールの添加は（実施例２で示されたように）リポソームのサーモトロピック挙動に影響を及ぼさないことから、本試験で試験される様々なリポソーム組成物の相転移温度は、対応する等張性組成物の相転移温度に類似するはずである。

【0205】

試験対象リポソーム組成物を表８に提示する。

表８：リポソーム組成

【表8】

【0206】

異なるＭＬＶシステムを、サイズ分布、オスモル濃度、及び合計ＰＣ濃度についてキャラクタリゼーションした。結果を表９～１２に概括する。

表９：異なるＤＰＰＣ：ＤＭＰＣ混合物のＭＬＶにおける物理化学的特性

【表9】

表１０：ＤＳＰＣ：ＤＭＰＣ混合物のＭＬＶにおける物理化学的特性

【0207】

この表に記載されたオスモル濃度の結果に基づけば、全てのＭＬＶシステムにおけるエタノールレベルは０．１％未満である。リポソーム／水の分配係数に基づけば、そのほとんどが水相にある。

表１０：ＤＳＰＣ：ＤＭＰＣ混合物のＭＬＶにおける物理化学的特性

【表10】

【0208】

この表に記載されたオスモル濃度の結果に基づけば、エタノールレベルは０．２％未満である。リポソーム／水の分配係数に基づけば、そのほとんどが水相にある。このＭＬＶは、エタノールの除去中に生じた重大な脂質損失を表す。

表１１：異なるＣ１５：ＤＭＰＣ混合物のＭＬＶにおける物理化学的特性

【表11】

【0209】

この表に記載されたオスモル濃度の結果に基づけば、全てのＭＬＶシステムにおけるエタノールレベルは０．１％未満である。リポソーム／水の分配係数に基づけば、そのほとんどが水相にある。

表１２：異なるＤＭＰＣ／Ｄ－エリスロＣ１６混合物のＭＬＶにおける物理化学的特性

【表12】

【0210】

この表に記載されたオスモル濃度の結果に基づけば、全てのＭＬＶシステムにおけるエタノールレベルは０．１％未満である。リポソーム／水の分配係数に基づけば、そのほとんどが水相にある。

【0211】

実施例２及び材料及び方法の項で説明されているように、リポソームの組合せにおけるサーモトロピック挙動及び熱力学的パラメーターを評価した。表１３は、試験したリポソームの組合せにおけるサーモトロピックキャラクタリゼーション結果を概括し、図３は、ＤＳＣ走査から評価した異なるリン脂質混合物のＭＬＶにおけるＳＯ－ＬＤ相転移温度範囲を示している。

表１３：ＤＳＣ走査から評価した異なる混合物のＭＬＶにおけるサーモトロピックキャラクタリゼーション

【表13】

【0212】

様々なリポソームの組合せ（例えば、ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣ（２５／７５）、ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣ（４５／５５）、ＤＭＰＣ／ＤＳＰＣ（７５／２５）、ＤＭＰＣ／Ｃ１５（４５／５５）、ＤＭＰＣ／Ｃ１５（２５／７５）、Ｄ－エリスロＣ１６／ＤＭＰＣ（７５／２５）、Ｄ－エリスロＣ１６／ＤＭＰＣ（２５／７５）、及びＤ－エリスロＣ１６／ＤＭＰＣ（１０／９０）を含む）が、所望の２０℃～３９℃の温度範囲内でリポソーム膜の相転移温度を有することが分かる。

【0213】

実施例４：ピンオンディスク（ｐｉｎ－ｏｎ－ｄｉｓｃ）軟骨摩滅試験によるリポソーム組成物の評価
ブタ軟骨ピンを用いてＣｏＣｒＭｏディスクに対し滑らせるピンオンディスク試験により、膝における摩擦学的条件をｉｎ ｖｉｔｒｏでシミュレーションした。ピンオンディスク試験は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．（ＡＭＴＩ）（Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ，ＭＡ ０２４７２－４８００，ＵＳＡ）製のＯｒｔｈｏＰＯＤマシンで行った。当該マシンをサーモスタットで加熱して３７±３℃の液体内部温度を確保した。円筒形の容器に２０ｍＬの試験液体を満たした。Ｍｅｃｍｅｓｉｎ力ゲージを用いて３、１０、３０、５０、及び１００Ｎにて各個々の保持アームが適用した力を、ディスクの上方で中心に位置するピンでチェックした。

【0214】

軟骨ピンは豚の肩から回収した。メスを用いて関節包を開いて軟骨表面を露出させた。内径５．０ｍｍの中空パンチを使用することにより少なくとも１０本の円筒形ピンを収集した。各ピンオンディスク摩滅試験向けに、同じ動物から適切な長さ及び最小の表面傾斜を有する６本のピンを選択した。

【0215】

１２時間の摩耗試験後における軟骨下骨の質量損失及び高さ損失を測定することにより、本発明の医薬組成物の潤滑能力を評価した。６本の軟骨ピンを各試験用に使用し、このうち３本のピンは６時間後に除去し、残りの３本のピンはさらに６時間試験した。ピンの重量及び質量の損失を定量することの他に、試験前後における軟骨表面を光学的プロファイラーにより解析した。使用したデバイスはＳ ｎｅｏｘ干渉法共焦点顕微鏡（Ｓｅｎｓｏｆａｒ，Ｓｐａｉｎ）である。粗さパラメーターを定量するため、型除去後にトポグラフィーから１２超のラインプロファイルを抽出した。表面の傾斜を説明するため、南に向いた最も高いレベルでピンが位置決めされるときに、南北方向の５Ｘ共焦点測定からプロファイルを抽出した。明快さを高めるため、Ｋａｌｅｉｄａｇｒａｐｈ ４．０を用いてこれらのプロファイルを平滑化及びシフトした。

【0216】

摩耗試験でマンニトールを含むリポソームベース組成物（表２の製剤＃３）を試験した。この組成物を、臀部シミュレーター試験（ＩＳＯ １４２４２－１）で使用される、３０ｇ／ｌのウシ血清タンパク質、ＥＤＴＡ、及びＮａＮ_３を含有するタンパク質含有液体と比較した。

【0217】

結果
摩耗試験
タンパク質含有液体内のピンオンディスク試験では軟骨の摩耗が明らかになった。ピンの平均質量損失は、試験から６時間後の２２ｍｇから１２時間後の２６ｍｇに増加した。ピンの平均高さ損失の増加はこれよりも著しく、摩耗の６時間後には０．６ｍｍ、１２時間後には１．１ｍｍと増加した。抽出プロファイル（図４）は、摩耗の６時間後には軟骨表面が平坦化していたことを示している。軟骨材料の一部は脇に移動して外側に隆起を形成したが、これは最初のピンにゆるく付着しているに過ぎないものであった。この付着した隆起を含めて重量が定量されたため、実際の質量損失が過小評価された。１２時間の摩耗後、残りの３本のピンは、軟骨が摩耗し軟骨下骨が出現した区域を示した（図４及び図５Ａ、５Ｂ）。

【0218】

リポソーム組成物（製剤＃３）中の軟骨ピンは、除去後に摩耗の徴候を示した。ピンの平均質量損失は、６時間の摩耗後に１４ｍｇであった、追加の６時間の摩耗の間はそのレベルでとどまった。高さ損失は、二つの時点においておよそ０．３～０．４ｍｍであった。６時間の摩耗後、軟骨表面は平坦化しており（図６及び図７Ａ、７Ｂ）、軟骨材料は中心の周囲で隆起を形成していた。１２時間の摩耗後、残りのピンの軟骨表面は依然無傷であり、軟骨下骨が出現する区域を示さなかった（図８Ａ、８Ｂ）。

【0219】

タンパク質液体中の軟骨ピンは１２時間の摩耗後に軟骨下骨の出現を示したが、リポソーム組成物中のピンはこれとは異なり、試験全体において軟骨が無傷のままであった。リポソーム組成物中では、６時間から１２時間の間で追加の質量損失も高さ損失も観察されなかったことから、摩耗の速度が遅くなるように思われた。

【0220】

摩耗の結果は、図９Ａ（質量損失）及び９Ｂ（高さ損失）でさらに説明されている。二つの液体の比較により、リポソーム組成物が軟骨ピンの質量及び高さの損失を小さくすることが示された。

【0221】

粗さ測定
ＤＩ １０Ｘ対物レンズによる干渉法測定に基づいた一連の抽出プロファイルから粗さパラメーターを定量した。測定は、十分に接触表面内にあるピンの中心部分で行った。図１０Ａ及び１０Ｂは、底面の型の除去後の例示的なプロファイルを示している。

【0222】

選択した粗さパラメーターＲａ、Ｒｋ、Ｒｐｋ、及びＲｂｋが図１１に示されている。タンパク質ベース液体における摩耗試験では、摩耗に起因するこれらのパラメーターの有意性の高い増加を観察することができた２（ｐ＜０．０１）。例えば、平均粗さＲａは、摩耗したピンにおいてｔ＝０の０．５±０．２μｍから１．６±０．４μｍに増加し、カーネル粗さＰｋは１．４±０．５μｍから４．５±１．１μｍに増加した。リポソーム組成物中での摩耗試験では、これより小さいものの有意な粗さパラメーターの増加がＲｐｋ（ｐ＞０．２）以外で観察された。平均粗さＲａは、０．４±０．２μｍから０．８±０．３μｍに増加し、カーネル粗さＰｋは０．９±０．４μｍから２．４±０．８μｍに増加した。

【0223】

当業者は、本発明が上記で詳細に示され説明された内容に限定されないことを理解する。むしろ本発明の範囲は、上記で説明されている様々な特徴の組合せ及び部分組合せ、ならびに変形形態及び変更形態を含む。そのため、本発明は、詳細に説明された実施形態に制約されるように構築されるものではなく、本発明の範囲及び概念は、以下の請求項を参照することによってより容易に理解される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11】