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特許7090611ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤とプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物及びその使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-06-16
(45)【発行日】2022-06-24
(54)【発明の名称】ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤とプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物及びその使用方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220617BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20220617BHJP
A61K 31/505 20060101ALI20220617BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20220617BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220617BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T
A61K31/454
A61K31/505
A61K31/573
A61P35/00
【請求項の数】
7
(21)【出願番号】P 2019527336
(86)(22)【出願日】2017-11-21
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-01-09
(86)【国際出願番号】 US2017062822
(87)【国際公開番号】W WO2018098168
(87)【国際公開日】2018-05-31
【審査請求日】2020-11-04
(31)【優先権主張番号】62/425,885
(32)【優先日】2016-11-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】512190767
【氏名又は名称】アセチロン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＡＣＥＴＹＬＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】スティーヴン・クウェイル
(72)【発明者】
【氏名】サイモン・スチュワート・ジョーンズ
(72)【発明者】
【氏名】テル・ヒデシマ
(72)【発明者】
【氏名】ケネス・シー・アンダーソン
【審査官】新留 素子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１５／１５７１６２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１６－５３２６６７（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１５／０８４９０５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１５４０６８（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
多発性骨髄腫を治療するための医薬組み合わせ物であって、（ａ）
【化1】
（ｂ）アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）から選択される、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含み、
さらに、
（ｃ）ポマリドミドまたは薬学上許容できるそれらの塩を含む、医薬組み合わせ物。
【請求項2】
前記ＨＤＡＣ阻害剤及び前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が同一製剤に存在する請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
【請求項3】
前記組み合わせ物がさらに、１以上の薬学上許容できるキャリアを含む請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
【請求項4】
前記ＨＤＡＣ阻害剤及び前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が別々の製剤に存在する請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
【請求項5】
前記組み合わせ物がさらに、デキサメタゾンを含む請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
【請求項6】
多発性骨髄腫の治療を必要とする対象にて多発性骨髄腫を治療するための組成物であって、治療上有効な量の
（ａ）
【化2】
（ｂ）アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）から選択される、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含み、
さらに、
（ｃ）ポマリドミドまたは薬学上許容できるそれらの塩を含む、組成物。
【請求項7】
さらに、治療上有効な量のデキサメタゾンを含む請求項６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願との相互参照
本出願は、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１６年１１月２３日に出願された米国仮特許出願番号６２／４２５，８８５の利益を主張する。
本出願は、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１６年１１月２３日に出願された米国仮特許出願番号６２／４２５，８８５の利益を主張する。
【背景技術】
【0002】
ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）の阻害はがん細胞の増殖停止を引き起こすことができる。しかしながら、全体的なＨＤＡＣの阻害は有意な有害効果をもたらし、選択性のＨＤＡＣ阻害のプロファイルが望ましい。
【0003】
ＨＤＡＣ６はクラスＩＩｂのＨＤＡＣであり、α－チューブリン及びＨＳＰ９０を含む多数の細胞性タンパク質からアセチル基を取り外すことが知られている。ＨＳＰ９０の過剰アセチル化はＥＲ及びＥＧＦＲを含むその標的タンパク質を不安定化することが報告されている。ＨＤＡＣ６の阻害剤は種々のがん型で抗がん増殖活性を明らかにしている。ＨＤＡＣ６活性を遮断することは種々のメカニズムを介してがん細胞の増殖阻害を引き起こすことが示されている。
【0004】
がん患者にとって多数の治療選択肢があるにもかかわらず、有効でかつ安全な治療法の選択肢が引き続き必要である。特に、がん、特に現在の治療法に耐性である及び／または不応性であるがんを治療するまたは予防する有効な方法についての必要性がある。この必要性は本明細書に記載されているもののような併用療法の使用によって満たすことができる。
【発明の概要】
【0005】
本明細書で提供されているのは、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ６）阻害剤とプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物である。
【0006】
第１の態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量のＨＤＡＣ６阻害剤または薬学上許容できるその塩とＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む医薬組み合わせ物である。
【0007】
種々の実施形態では、組み合わせ物はさらに、サリドマイドまたはその類似体、または薬学上許容できるその塩から選択される化合物を含む。特定の実施形態では、化合物は、サリドマイド、ポマリドミド、及びレナリドミド、または薬学上許容できるそれらの塩から選択される。例となる実施形態では、化合物はポマリドミドである。
【0008】
種々の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤はＨＤＡＣ６選択的阻害剤である。他の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は式Ｉ：
の化合物または薬学上許容できるその塩であり、
式中、
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれがＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである。
【化1】
式中、
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれがＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである。
【0009】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、環Ｂはアリールである。
【0010】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれがハロによって置換される。
【0011】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、式ＩのＨＤＡＣ６阻害剤は
または薬学上許容できるその塩である。
【化2】
【0012】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、式ＩのＨＤＡＣ６阻害剤は
または薬学上許容できるその塩である。
【化3】
【0013】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は阻害性抗体である。
【0014】
種々の実施形態では、阻害性ＰＤ－Ｌ１抗体は重鎖及び軽鎖を含み、その際、重鎖は配列番号１のアミノ酸配列内でのアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む可変領域を含み、軽鎖は配列番号２のアミノ酸配列内でのアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む可変領域を含む。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害性抗体は配列番号１のアミノ酸配列内でのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。種々の実施形態では、重鎖は配列番号１のアミノ酸配列の誘導体または一部を含む。たとえば、重鎖は配列番号１のアミノ酸配列に対して７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害性抗体は配列番号２のアミノ酸配列内でのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。種々の実施形態では、軽鎖は配列番号２のアミノ酸配列の誘導体または一部を含む。たとえば、軽鎖は配列番号２のアミノ酸配列に対して７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害性抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0015】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害性抗体が同一製剤に存在する。医薬組み合わせ物の他の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害性抗体が別々の製剤に存在する。
【0016】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤が経口投与用の製剤に存在し、ＰＤ－Ｌ１阻害性抗体が静脈内投与用の製剤に存在する。
【0017】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療にて医薬組み合わせ物が使用される。別の実施形態では、がんの治療のための医薬製剤または薬物の製造のために医薬組み合わせ物が使用される。
【0018】
別の態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療する方法である。
【0019】
態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、抗体依存性細胞介在性の細胞障害性の上方調節を必要とする対象にて抗体依存性細胞介在性の細胞障害性を上方調節する方法である。
【0020】
態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、リンパ球の機能活性の上方調節を必要とする対象にてリンパ球の機能活性を上方調節する方法である。
【0021】
種々の実施形態では、リンパ球はナチュラルキラー細胞である。他の実施形態では、リンパ球はＴリンパ球である。他の実施形態では、Ｔリンパ球は細胞障害性Ｔリンパ球である。
【0022】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、組み合わせ物はさらにデキサメタゾンを含む。
【0023】
方法の種々の実施形態では、方法はさらに治療上有効な量のデキサメタゾンを対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【図1】１μＭのレナリドミド（ＬＥＮ１）、３μＭのレナリドミド（ＬＥＮ３）、１μＭのポマリドミド（ＰＯＭ１）、１μＭの化合物Ａ（化合物Ａ１）または２μＭの化合物Ａ（化合物Ａ２）と共に４８時間培養した骨髄腫細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現を示す棒グラフである。
【図2】化合物Ｂと共に４８時間培養したＭＭ．１Ｓ、Ｈ９２９、ＫＭＳ１２－ＰＥ、ＯＰＭ１、及びＵ２６６骨髄腫細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現を示す棒グラフである。
【図3】化合物Ｂの存在下または非存在下で間質細胞上清にて培養したＵ２６６細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現を示す棒グラフである。
【図4】Ｕ２６６細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対する化合物Ｂに加えた間質細胞上清の効果を示す棒グラフである。
【図5】ＲＰＭＩ８２６６細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対するポマリドミドの効果を示す棒グラフである。
【図6】Ｈ９２９細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対するポマリドミドと組み合わせた化合物Ｂの効果を示す棒グラフである。
【図7】Ｈ９２９細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対するポマリドミド（単独）、化合物Ｂ（単独）、または化合物Ｂと組み合わせたポマリドミドの効果を示す棒グラフである。
【図8】多発性骨髄腫患者の骨髄吸引物に由来する単核細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対する化合物Ｂの効果を示す棒グラフである。平均の細胞障害性（平均値±ＳＤ）は５人の患者試料から算出した。
【発明を実施するための形態】
【0025】
本明細書で提供されているのは、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤とプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物である。本明細書で具体的に提供されているのは、
（ａ）式Ｉ：
のＨＤＡＣ６阻害剤または薬学上許容できるその塩
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と；
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物である。
（ａ）式Ｉ：
【化4】
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と；
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物である。
【0026】
定義
本明細書で使用される特定の用語は以下に記載されている。本発明の化合物は標準の命名法を用いて記載される。定義されない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語はすべて本発明が属する当該技術の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
本明細書で使用される特定の用語は以下に記載されている。本発明の化合物は標準の命名法を用いて記載される。定義されない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語はすべて本発明が属する当該技術の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【0027】
用語「アルキル」は、特定の実施形態では、それぞれ１～６の間のまたは１～８の間の炭素原子を含有する飽和で直鎖または分岐鎖の炭化水素部分を指す。Ｃ１－６－アルキル部分の例にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシルの部分が挙げられるが、これらに限定されず、Ｃ１－８－アルキル部分の例にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、ヘプチル、及びオクチルの部分が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル置換基における炭素原子の数は接頭辞「Ｃｘ－ｙ」によって示すことができ、その際、ｘは置換基における炭素原子の数の最小であり、ｙは最大である。
【0028】
本明細書で使用されるとき、用語「ハロ」または「ハロゲン」は単独でまたは別の置換基の一部として特に言及されない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素の原子、好ましくは、フッ素、塩素、または臭素、さらに好ましくは、塩素を意味する。
【0029】
用語「アリール」は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル、等を含むが、これらに限定されない縮合したまたは縮合しない１以上の芳香環を有する単環式または多環式の炭素環系を指す。一部の実施形態では、アリール基は６つの炭素原子を有する。一部の実施形態では、アリール基は６～１０の炭素原子を有する。一部の実施形態では、アリール基は６～１６の炭素原子を有する。実施形態では、Ｃ５－Ｃ７アルキル基が本明細書で提供されている。
【0030】
用語「ヘテロアリール」は少なくとも１つの芳香環を有する単環式または多環式（たとえば、二環式または三環式それ以上）の縮合または非縮合部分または環系を指し、その際、環形成原子の１以上は、たとえば、酸素、イオウ、または窒素のようなヘテロ原子である。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は１～６の炭素原子を有し、さらなる実施形態では、１～１５の炭素原子を有する。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、１つの環原子が酸素、イオウ、及び窒素から選択される５～１６の環原子を含有し；０、１、２または３の環原子は酸素、イオウ、及び窒素から独立して選択される追加のヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリールには、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル、アクリジニル、等が挙げられるが、これらに限定されない。実施形態では、Ｃ４－Ｃ７ヘテロアリール基が本明細書で提供されている。
【0031】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学上許容できる塩」は、親化合物が既存の酸または塩基の部分をその塩形態に変換することによって修飾されている開示されている化合物の誘導体を指す。薬学上許容できる塩の例には、アミンのような塩基性残基の鉱物酸塩または有機酸塩；カルボン酸等のような酸性残基のアルカリ塩または有機塩が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学上許容できる塩には、たとえば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩が挙げられる。本発明の薬学上許容できる塩は、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から従来の化学法によって合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離の酸または塩基の形態を化学量論的な量の適当な塩基または酸と、水中、または有機溶媒にて、または２つの混合物にて反応させることによって調製することができ；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好まれる。好適な塩のリストは、そのそれぞれが全体として参照によって本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）にて見いだされる。
【0032】
用語「薬学上許容できる」は本明細書で使用されるとき、理に適った利益／リスクの比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応及び他の問題の合併を伴わない、健全な医学的判断の範囲内で、温血動物、たとえば、哺乳類またはヒトの組織との接触に好適であるそれら化合物、物質、組成物及び／または剤形を指す。
【0033】
用語「固定した組み合わせ」、「固定用量」及び「単一製剤」は本明細書で使用されるとき、がんの治療に合わせて治療上有効である量の双方の治療剤を患者に送達するように製剤化された単一のキャリアまたはビヒクルまたは剤形を指す。単一ビヒクルは薬学上許容できるキャリアまたは賦形剤と共に作用物質のそれぞれの量を送達するように設計される。一部の実施形態では、ビヒクルは錠剤、カプセル剤、丸薬または貼付剤である。他の実施形態では、ビヒクルは溶液または懸濁液である。
【0034】
用語「固定されない組み合わせ」、「パーツのキット」及び「別々の製剤」は、有効成分、すなわち、ＨＤＡＣ６阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤が、別々の実体として特定の時間制限なしで同時に、付随してまたは順次、患者に投与されることを意味し、その際、そのような投与は、それを必要とする対象の体内にて２つの化合物の治療上有効なレベルを提供する。後者はカクテル療法、たとえば、３以上の有効成分の投与にも適用される。
【0035】
「経口剤形」には、経口投与のために処方されるまたはそれが意図される単位剤形が含まれる。本明細書で提供されている医薬組み合わせ物の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤（たとえば、化合物ＡまたはＢ）は経口剤形として投与される。
【0036】
用語「治療すること」または「治療」は本明細書で使用されるとき、対象にて少なくとも１つの症状を緩和する、軽減するもしくは和らげる治療、または疾患の進行の遅延を達成する治療を含む。たとえば、治療は疾病の１または幾つかの症状の軽減または、たとえば、がんのような疾病の完全な撲滅であることができる。
【0037】
用語「予防する」、「予防すること」または「予防」は本明細書で使用されるとき、予防される状態、疾患または疾病に関連する、またはそれが原因で生じる少なくとも１つの症状の予防を含む。
【0038】
治療剤の組み合わせ物の、用語「薬学上有効な量」、「治療上有効な量」または「臨床上有効な量」は、組み合わせ物で治療される疾病の臨床上観察できる兆候及び症状のベースラインを超える観察可能なまたは臨床上有意な改善を提供するのに十分な量である。
【0039】
用語「合わせて治療上活性がある」または「合わせた治療効果」は本明細書で使用されるとき、治療される温血動物、特にヒトにてそれらが好み、（好ましくは相乗的な）相互作用（合わせた治療効果）を依然として示すような時間間隔で治療剤が別々に（時系列で調整して、特に順序別に）与えられ得ることを意味する。これが本当かどうかは、とりわけ、化合物の血中レベルを追跡し、少なくとも特定の時間間隔の間、治療されるヒトの血中にて双方の化合物が存在することを示すことによって判定することができる。
【0040】
用語「相乗効果」は本明細書で使用されるとき、単独で投与される各薬剤の効果の単純な足し算よりも大きい、たとえば、式Ｉの化合物（たとえば、化合物Ｂ）または薬学上許容できるその塩及びＰＤ－Ｌ１阻害剤（たとえば、ＭＤＸ－１１０５）のような２つの治療剤の、たとえば、がんまたはその症状の症候性の進行を遅らせる効果を生じる作用を指す。相乗効果は、たとえば、Ｓ字状－Ｅｍａｘ方程式（Ｈｏｌｆｏｒｄ，Ｎ．Ｈ．Ｇ．及びＳｃｈｅｉｎｅｒ，Ｌ．Ｂ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９－４５３（１９８１））、Ｌｏｅｗｅ相加性の方程式（Ｌｏｅｗｅ，Ｓ．及びＭｕｉｓｃｈｎｅｋ，Ｈ．，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３－３２６（１９２６））及び半有効方程式（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．及びＴａｌａｌａｙ，Ｐ．Ａｄｖ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．２２：２７－５５（１９８４））のような好適な方法を用いて算出することができる。上記で参照された各方程式を実験データに適用して相当するグラフを生成し、薬剤の組み合わせの効果を評価するのに役立てることができる。上記で参照された方程式に関連する相当するグラフはそれぞれ、濃度効果曲線、アイソボログラム曲線及び併用係数曲線である。
【0041】
用語「対象」または「患者」は本明細書で使用されるとき、がんまたはがんに直接もしくは間接的に関与する疾病を患うまたはそれに冒されることが可能である動物を含むように意図される。対象の例には、哺乳類、たとえば、ヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット及びトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。実施形態では、対象は、ヒト、たとえば、がんを患っている、がんを患うリスクがある、またはがんを患う可能性があるヒトである。
【0042】
本明細書で使用されるとき、がん患者を参照する際の治療剤に対する用語「耐性の」または「屈折性の」は、がんが治療剤に接触した結果、治療剤の効果に対して本質的な耐性または達成された耐性を有することを意味する。言い換えれば、がんは特定の治療剤に関連するケアの普通の標準に耐性である。
【0043】
用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」は言及されない限り、制約がない且つ非限定の意味で本明細書にて使用される。
【0044】
本発明を説明する文脈（特に以下のクレームの文脈）における用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び類似の参照は、本明細書で指示されない限りまたは文脈によって明瞭に否定されない限り、単数及び複数の双方を取り扱うように解釈されるべきである。化合物、塩、等について複数形態が使用される場合、これは単一の化合物、塩、等も意味するように解釈される。
【0045】
用語「約」または「およそ」は関連する主題領域で博識な人々によって一般に理解されるが、特定の状況では、所与の値または範囲の２０％以内、１０％以内または５％以内を意味することができる。或いは、生物系では特に、用語「約」は、ほぼ対数（すなわち、一桁）の範囲内または所与の値の２つの因子の範囲内を意味する。用語「組み合わせ物」、「治療組み合わせ物」、または「医薬組み合わせ物」は本明細書で使用されるとき、１つの単位剤形における固定した組み合わせ、または２以上の治療剤が時間間隔の範囲内で独立して、同時にまたは別々に投与されてもよい併用投与のための固定されない組み合わせ、またはパーツのキットのいずれかを指し、その際、特に、これらの時間間隔は組み合わせ相手が共同的効果、たとえば、相乗効果を示すことを可能にする。
【0046】
用語「併用療法」は本開示に記載されている治療状態または疾病を治療するための２以上の治療剤の投与を指す。そのような投与は、たとえば、固定した比の有効成分を有する単一製剤または各有効成分について別々の製剤（たとえば、カプセル剤及び／または静脈内製剤）における実質的に同時の方法でのこれら治療剤の同時投与を包含する。加えて、そのような投与は、近似的に同時にまたは異なる時間に順次または別々に各型の治療剤を使用することも包含する。有効成分が単一製剤としてまたは別々の製剤にて投与されるかどうかにかかわらず、治療の同一経過の一部として薬剤は同一患者に投与される。どんな場合でも、治療投薬計画は本明細書に記載されている状態または疾病を治療することにおいて有益な効果を提供するであろう。
【0047】
用語「ヒストン脱アセチル化酵素」または「ＨＤＡＣ」は、コアのヒストンにおけるリシン残基からアセチル基を取り外すので、凝縮クロマチン及び転写上サイレンス化したクロマチンの形成をもたらす酵素を指す。４つの群に分離される１８の現在知られるヒストン脱アセチル化酵素がある。ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、及びＨＤＡＣ８を含むクラスＩのＨＤＡＣは、酵母のＲＰＤ３遺伝子に関係する。ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９、及びＨＤＡＣ１０を含むクラスＩＩのＨＤＡＣは酵母のＨｄａ１遺伝子に関係する。サーチュインとしても知られるクラスＩＩＩのＨＤＡＣはＳｉｒ２遺伝子に関係し、ＳＩＲＴ１－７を含む。ＨＤＡＣ１１のみを含有するクラスＩＶのＨＤＡＣはクラスＩ及びクラスＩＩのＨＤＡＣ双方の特徴を有する。用語「ＨＤＡＣ」は特定されない限り、１８の既知のヒストン脱アセチル化酵素のいずれか１以上を指す。
【0048】
用語「ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤」（ＨＤＡＣ阻害剤、ＨＤＡＣｉ、ＨＤＩｓ）は本明細書で使用されるとき、ヒストン脱アセチル化酵素の少なくとも１つの活性を選択的に標的とする、低下させるまたは阻害する化合物を指す。
【0049】
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
本明細書で提供されているのは、式Ｉ：
のＨＤＡＣ６阻害剤（本明細書では「式Ｉの化合物」とも呼ぶ）または薬学上許容できるその塩を含む医薬組み合わせ物であり、
式中、
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれがＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである。
本明細書で提供されているのは、式Ｉ：
【化5】
式中、
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１は、アリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれがＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである。
【0050】
式Ｉの化合物の種々の実施形態では、環Ｂはアリールである。式Ｉの化合物の種々の実施形態では、Ｒ１は、それぞれハロによって置換されるアリールまたはヘテロアリールである。
【0051】
式Ｉの実施形態では、Ｒ１は、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるアリールである。
【0052】
式Ｉの別の実施形態では、Ｒ１は、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるＣ５－Ｃ７アリールである。
【0053】
式Ｉの別の実施形態では、Ｒ１は、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるＣ４－Ｃ７ヘテロアリールである。
【0054】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１は、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるフェニルである。
【0055】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１はハロによって置換されるフェニルである。
【0056】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１はクロロによって置換されるフェニルである。
【0057】
式Ｉの別の実施形態では、環ＢはＣ５－Ｃ７アリールである。
【0058】
式Ｉの別の実施形態では、環ＢはＣ４－Ｃ７ヘテロアリールである。
【0059】
式Ｉのさらに別の実施形態では、環Ｂはフェニルである。
【0060】
具体的な実施形態では、式Ｉの化合物は、表１に示すような化合物Ａもしくは薬学上許容できるその塩、または化合物Ｂもしくは薬学上許容できるその塩である。
【表1】
【0061】
便宜上、式ＩのＨＤＡＣ６阻害剤及びその塩の群をまとめて式Ｉの化合物と呼び、式Ｉの化合物への言及は別の方法ではその化合物または薬学上許容できるその塩のいずれかを指すことを意味する。
【0062】
式Ｉの化合物（たとえば、化合物Ａ及びＢ）は既知のＨＤＡＣ６阻害剤であり、その内容が全体として参照によって本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１１／０９１２１３に記載されている。
【0063】
化合物Ａ及びＢの調製は実施例１のように本明細書にも記載されている。好ましくは、化合物Ａ及びＢは遊離の塩基の形態である。
【0064】
ＰＤ－Ｌ１阻害剤
用語「プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤」は本明細書で使用されるとき、ＰＤ－Ｌ１の少なくとも１つの活性を選択的に標的とする、低下させるまたは阻害する化合物を指す。調節不全のＰＤ－Ｌ１に関連する疾病は、たとえば、肺癌、乳癌及び卵巣癌、膵臓癌及び食道癌、腺癌、腎臓癌及び膀胱癌、頭頚部の癌、黒色腫を含むが、これらに限定されない固形腫瘍癌、と同様に白血病及びリンパ腫（たとえば、ＡＭＬ、ＡＬＬ及びＣＭＬ）を含む血液癌である（Ｇｈｅｂｅｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，８（３）：１９０－８，２００６，Ｍａｒ）。
用語「プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤」は本明細書で使用されるとき、ＰＤ－Ｌ１の少なくとも１つの活性を選択的に標的とする、低下させるまたは阻害する化合物を指す。調節不全のＰＤ－Ｌ１に関連する疾病は、たとえば、肺癌、乳癌及び卵巣癌、膵臓癌及び食道癌、腺癌、腎臓癌及び膀胱癌、頭頚部の癌、黒色腫を含むが、これらに限定されない固形腫瘍癌、と同様に白血病及びリンパ腫（たとえば、ＡＭＬ、ＡＬＬ及びＣＭＬ）を含む血液癌である（Ｇｈｅｂｅｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，８（３）：１９０－８，２００６，Ｍａｒ）。
【0065】
ＰＤ－Ｌ１阻害剤の非限定例には、たとえば、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、または薬学上許容できるそれらの塩が挙げられる。これらＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを本明細書で提供されている医薬組み合わせ物で使用することができる。
【0066】
従って、医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、または薬学上許容できるそれらの塩から成る群から選択される。医薬組み合わせ物の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はアテゾリズマブである。医薬組み合わせ物の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はアベルマブである。医薬組み合わせ物の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はデュルバルマブである。医薬組み合わせ物の例となる実施形態では、ＭＤＸ－１１０５が使用される。ＭＤＸ－１１０５の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表２に示す。
【表2】
【0067】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、本明細書に記載されている抗体（たとえば、表２におけるアテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びＭＤＸ－１１０５の抗ＰＤ－Ｌ１抗体）のいずれかの誘導体または一部である。たとえば、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、または薬学上許容できるその塩の誘導体または断片である。特定の実施形態では、誘導体または断片は、本明細書に記載されている抗体と同様に独特な構造（たとえば、７０％～９９％の類似性）及び類似の生物活性を共有する分子であることができる。特定の実施形態では、誘導体または断片は、本明細書に記載されているＰＤ－Ｌ１阻害剤との７０～７５％、７５～８０％、８０～８５％、８５～９０％、９５～９７％または９７～９９％の配列（すなわち、核酸及びアミノ酸）同一性を含む。
【0068】
配列同一性を決定する方法は当該技術で既知である。同一性または相同性は、所与のクエリ配列の間での同一性の程度、たとえば、比較される対応する配列の残基と同一である抗体配列におけるヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基の比率であってもよい。配列比較のための方法及びコンピュータプログラムは当該技術で利用でき、周知である。たとえば、国際公開番号ＷＯ２００７０８４３８５及びＷＯ２０１２１１３８６３を参照のこと。
【0069】
可変領域は通常、抗体の一部を指し、一般に、特定の抗原についての特定の抗体の結合及び特異性で使用される軽鎖及び重鎖の一部（たとえば、成熟重鎖におけるアミノ末端のおよそ１１０～１２０のアミノ酸及び成熟軽鎖におけるアミノ末端のおよそ９０～１００のアミノ酸）を指す。配列における可変性は相補性決定領域と呼ばれる領域で濃縮されている一方で、可変ドメインにおけるさらに高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
【0070】
特定の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１によって表されるアミノ酸配列との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列によってコードされる重鎖を含む。本発明はまた、配列番号２によって表されるアミノ酸配列との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を持つアミノ酸配列を有する軽鎖を含むＰＤ－Ｌ１阻害剤にも関する。種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１によって表されるアミノ酸配列との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列によってコードされる重鎖を含み、且つ配列番号２によって表されるアミノ酸配列との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を持つアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【0071】
特定の実施形態では、重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、ＰＤ－Ｌ１に結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ.，１９８７，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．を参照のこと。重鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１では３１～３５位のアミノ酸、ＣＤＲ２では５０～６５位のアミノ酸、及びＣＤＲ３では９５～１０６位のアミノ酸に及ぶ。軽鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１では２４～３４位のアミノ酸、ＣＤＲ２では５０～５６位のアミノ酸、及びＣＤＲ３では８９～９７位のアミノ酸に及ぶ。たとえば、米国特許第７，７０９，２２６Ｂ２号を参照のこと。
【0072】
これらＣＤＲの正確な境界は様々な方式に従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））によって記載された方式は、抗体の任意の可変領域に適用できる明白な残基番号付け方式を提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基の境界も提供している。これらのＣＤＲはＫａｂａｔのＣＤＲと呼ぶことができる。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者ら（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７）ならびにＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．（１９８９），Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３）は、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ＫａｂａｔのＣＤＲ内の特定の亜部分がほぼ同一のペプチド主鎖構成を採用することを見いだした。これらの亜部分はＬ１、Ｌ２及びＬ３またはＨ１、Ｈ２及びＨ３と名付けられ、その際、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ軽鎖及び重鎖の領域を指す。これらの領域はＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲと呼ばれてもよく、ＫａｂａｔのＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔのＣＤＲと重複するＣＤＲを定義している他の境界はＰａｄｌａｎ，（１９９５），ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９及びＭａｃＣａｌｌｕｍ，（１９９６），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２－７４５によって記載されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、特定の残基または残基の群またはＣＤＲ全体さえもが抗原結合に有意に影響を及ぼさないという予測または実験的知見の観点で、短縮されてもよく、または伸ばされてもよいけれども、それらは上記の方式の１つに厳密に従わなくてもよいが、それにもかかわらず、ＫａｂａｔのＣＤＲと重複するであろう。特定の実施形態はＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲを使用するが、本明細書で使用される方法はこれらの方式のいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用してもよい。たとえば、国際公開番号ＷＯ２０１６１４９３６８を参照のこと。
【0073】
特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、本明細書に記載されている抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を含む。たとえば、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、本明細書に記載されている抗体、たとえば、アテゾリズマブ及びアベルマブの範囲内で見いだされる１以上のＣＤＲ領域を含む結合ドメインを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１の重鎖アミノ酸配列内で見いだされる少なくとも１つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１の重鎖アミノ酸配列内で見いだされるＣＤＲを１つ、ＣＤＲを２つまたはＣＤＲを３つ含む。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号２の軽鎖アミノ酸配列内で見いだされるＣＤＲを１つ、ＣＤＲを２つまたはＣＤＲを３つ含む。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１のアミノ酸配列内で見いだされる少なくとも１つのＣＤＲとの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む。種々の実施形態では、本発明のＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号２のアミノ酸配列内で見いだされる少なくとも１つのＣＤＲとの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する軽鎖ＣＤＲを含む。
【0074】
治療方法
本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物、すなわち、
（ａ）式Ｉ：
のＨＤＡＣ６阻害剤または薬学上許容できるその塩
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療する方法である。
本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物、すなわち、
（ａ）式Ｉ：
【化6】
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療する方法である。
【0075】
方法の実施形態では、環Ｂはアリールである。種々の実施形態では、Ｒ１はハロによって置換されるアリールまたはヘテロアリールである。
【0076】
式Ｉの実施形態では、Ｒ１はＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるアリールである。
【0077】
式Ｉの別の実施形態では、Ｒ１はＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるＣ５－Ｃ７アリールである。
【0078】
式Ｉの別の実施形態では、Ｒ１はＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるＣ４－Ｃ７ヘテロアリールである。
【0079】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１はＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって置換されるフェニルである。
【0080】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１はハロによって置換されるフェニルである。
【0081】
式Ｉのさらに別の実施形態では、Ｒ１はクロロによって置換されるフェニルである。
【0082】
式Ｉの別の実施形態では、環ＢはＣ５－Ｃ７アリールである。
【0083】
式Ｉの別の実施形態では、環ＢはＣ４－Ｃ７ヘテロアリールである。
【0084】
式Ｉのさらに別の実施形態では、環Ｂはフェニルである。
【0085】
方法の別の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩である。方法の別の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩である。
【0086】
方法の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、たとえば、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、または薬学上許容できるそれらの塩から成る群から選択される阻害性抗体である。
【0087】
実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の本明細書で提供されている医薬組み合わせ物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療する方法である。
【0088】
本明細書で提供されている方法は固形腫瘍及び液性腫瘍の双方に使用することができる。さらに、腫瘍の型及び使用される特定の組み合わせ物に応じて、腫瘍容量の低下を得ることができる。本明細書で開示されている組み合わせ物はまた、腫瘍の転移拡散及び微小転移巣の増殖または発生を防ぐのにも適している。本明細書で開示されている組み合わせ物は予後不良の患者の治療に好適である。
【0089】
本明細書で提供されている方法のいずれかの実施形態では、がんは、肺（小細胞肺癌及び非小細胞肺癌を含む）、乳腺（散発性乳癌及びコーデン病の患者を含む）、膵臓、消化管、結腸、結腸腺癌、肝臓、胃癌、混合グリオーマ、ＣＮＳ（膠芽細胞腫を含む）、腎臓、腎性、膀胱、卵巣、頭頚部、多発性骨髄腫、食道の良性または悪性の腫瘍、黒色腫、白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群、巨核芽球性白血病、赤白血病及び骨髄性白血病を含む）、及びリンパ腫（非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む）から選択される。
【0090】
種々の実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病または骨髄腫である。特定の実施形態では、がんは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または多発性骨髄腫（ＭＭ）である。さらなる実施形態では、がんはＴ細胞リンパ腫またはＢ細胞リンパ腫である。
【0091】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、がんは非固形腫瘍である。特定の実施形態では、がんは多発性骨髄腫である。
【0092】
一部の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤とを対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療する方法である。
【0093】
別の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の式ＩのＨＤＡＣ阻害剤または薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、血液癌の治療を必要とする対象にて血液癌を治療する方法である。一部の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、血液癌の治療を必要とする対象にて血液癌を治療する方法である。
【0094】
別の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の式ＩのＨＤＡＣ阻害剤または薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、白血病の治療を必要とする対象にて白血病を治療する方法である。一部の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、白血病の治療を必要とする対象にて白血病を治療する方法である。
【0095】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療するためのものである。この実施形態は、少ない治療量の化合物ＡまたはＰＤ－Ｌ１抗体を方法にて使用できるように相乗作用を示す。
【0096】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、血液癌の治療を必要とする対象にて血液癌を治療するためのものである。
【0097】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、白血病の治療を必要とする対象にて白血病を治療するためのものである。
【0098】
さらに別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量の、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）から成る群から選択されるＰＤ－Ｌ１阻害剤、または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療するためのものである。
【0099】
他の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、それを必要とする対象にてがんを治療する方法である。
【0100】
一部の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、及びＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）から成る群から選択される治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤、または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む。
【0101】
一部の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、血液癌の治療を必要とする対象にて血液癌を治療する方法である。
【0102】
一部の実施形態では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、白血病の治療を必要とする対象にて白血病を治療する方法である。
【0103】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１抗体または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象にてがんを治療するためのものである。この実施形態は、少ない治療量の化合物ＢまたはＰＤ－Ｌ１阻害剤を方法で使用できるように相乗作用を示す。
【0104】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１抗体または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、血液癌の治療を必要とする対象にて血液癌を治療するためのものである。
【0105】
別の実施形態では、方法は、治療上有効な量の化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と治療上有効な量のＰＤ－Ｌ１抗体または薬学上許容できるその塩とを対象に投与することを含む、白血病の治療を必要とする対象にて白血病を治療するためのものである。
【0106】
本明細書で検討されている対象は通常ヒトである。しかしながら、対象は、治療が所望される任意の哺乳類であることができる。従って、本明細書に記載されている方法はヒト及び獣医の応用に適用することができる。
【0107】
本明細書で提供されている方法の特定の実施形態では、医薬組み合わせ物は、
（ａ）化合物Ｂ
または薬学上許容できるその塩と
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む。この実施形態の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩である。本明細書で提供されている方法のその上さらなる実施形態では、化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩とＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物はさらに、ポマリドミドまたは薬学上許容できるその塩を含む。
（ａ）化合物Ｂ
【化7】
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む。この実施形態の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩である。本明細書で提供されている方法のその上さらなる実施形態では、化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩とＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物はさらに、ポマリドミドまたは薬学上許容できるその塩を含む。
【0108】
態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の、本明細書で提供されている医薬組み合わせ物のいずれか１つを対象に投与することを含む、抗体依存性細胞介在性の細胞障害性の上方調節を必要とする対象にて抗体依存性細胞介在性の細胞障害性を上方調節する方法である。
【0109】
態様では、本明細書で提供されているのは、治療上有効な量の、本明細書で提供されている医薬組み合わせ物のいずれか１つを対象に投与することを含む、リンパ球の機能活性の上方調節を必要とする対象にてリンパ球の機能活性を上方調節する方法である。
【0110】
種々の実施形態では、リンパ球はナチュラルキラー細胞である。他の実施形態では、リンパ球はＴリンパ球である。他の実施形態では、Ｔリンパ球は細胞障害性Ｔリンパ球である。
【0111】
方法の種々の実施形態では、方法はさらに治療上有効な量のデキサメタゾンを対象に投与することを含む。
【0112】
医薬組み合わせ物及び医薬組成物
本明細書で提供されているのは、ヒストン脱アセチル化酵素６（ＨＤＡＣ６）阻害剤とＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む医薬組み合わせ物である。
本明細書で提供されているのは、ヒストン脱アセチル化酵素６（ＨＤＡＣ６）阻害剤とＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む医薬組み合わせ物である。
【0113】
態様では、本明細書で提供されているのは、
（ａ）式Ｉ
のＨＤＡＣ６阻害剤または薬学上許容できるその塩
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよい）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物である。
（ａ）式Ｉ
【化8】
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよい）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組み合わせ物である。
【0114】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、環Ｂはアリールである。
【0115】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、Ｒ１は、それぞれハロによって置換されるアリールまたはヘテロアリールである。
【0116】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、式Ｉの化合物は化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩である。別の実施形態では、式Ｉの化合物は化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩である。
【0117】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、たとえば、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ－１１０５及びデュルバルマブのような阻害性抗体である。
【0118】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤は同一製剤に存在する。或いは、ＨＤＡＣ６阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤は別々の製剤に存在する。
【0119】
種々の実施形態では、医薬組み合わせ物はがんの治療を必要とする対象にてがんを治療するのに使用するためのものである。
【0120】
実施形態では、組み合わせ物は、有効量のＨＤＡＣ６阻害剤（すなわち、化合物Ｂのような式Ｉの化合物）と有効量のＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む併用療法を対象に投与することを含むがんの治療で使用される。好ましくは、これらの化合物は、併用した場合、有益な効果を提供する治療上有効な投与量で投与される。投与は、各成分の別々の投与を同時にまたは順次含むことができる。
【0121】
種々の実施形態では、医薬組み合わせ物はがんの治療のための薬物の調製で使用するためのものである。
【0122】
本明細書で提供されている医薬組み合わせ物は固形腫瘍及び液性腫瘍双方の増殖を阻害することもできる。さらに、腫瘍の型及び使用される特定の組み合わせ物に応じて、腫瘍容量の低下を得ることができる。本明細書で開示されている組み合わせ物はまた、腫瘍の転移拡散及び微小転移巣の増殖または発生を防ぐのにも適している。本明細書で開示されている組み合わせ物は予後不良の患者の治療に好適である。
【0123】
本明細書で提供されている医薬組み合わせ物のいずれかの実施形態では、がんは、肺（小細胞肺癌及び非小細胞肺癌を含む）、乳腺（散発性乳癌及びコーデン病の患者を含む）、膵臓、消化管、結腸、結腸腺癌、肝臓、胃癌、混合グリオーマ、ＣＮＳ（膠芽細胞腫を含む）、腎臓、腎性、膀胱、卵巣、頭頚部、多発性骨髄腫、食道の良性または悪性の腫瘍、黒色腫、白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群、巨核芽球性白血病、赤白血病及び骨髄性白血病を含む）、及びリンパ腫（非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む）から選択される。
【0124】
種々の実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病または骨髄腫（すなわち、血液癌）である。特定の実施形態では、がんは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または多発性骨髄腫（ＭＭ）である。さらなる実施形態では、がんはＴ細胞リンパ腫またはＢ細胞リンパ腫である。
【0125】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、がんは非固形腫瘍である。特定の実施形態では、がんは多発性骨髄腫である。
【0126】
種々の実施形態では、がんは少なくとも１つの従来の治療法による治療に耐性または不応性である。
【0127】
特定の実施形態では、医薬組み合わせ物は、
（ａ）化合物Ｂ
または薬学上許容できるその塩と、
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む。この実施形態の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩である。化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と、ＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩とを含む組み合わせ物のその上さらなる実施形態では、組み合わせ物はさらにポマリドミドまたは薬学上許容できるその塩を含む。
（ａ）化合物Ｂ
【化9】
（ｂ）ＰＤ－Ｌ１阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む。この実施形態の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤はＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩である。化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩と、ＭＤＸ－１１０５または薬学上許容できるその塩とを含む組み合わせ物のその上さらなる実施形態では、組み合わせ物はさらにポマリドミドまたは薬学上許容できるその塩を含む。
【0128】
本明細書で提供されているデータは、式ＩのＨＤＡＣ６阻害剤とＰＤ－Ｌ１阻害剤とを含む併用療法がいずれかの単剤のみと比べて抗体依存性細胞介在性の細胞障害性及びアポトーシスをさらに有意な程度に高めることを示している（たとえば、実施例５及び実施例６を参照のこと）。
【0129】
式Ｉの化合物またはＰＤ－Ｌ１阻害剤は遊離の形態、または薬学上許容できる塩の形態で投与することができる。
【0130】
医薬組み合わせ物の種々の実施形態では、組み合わせ物はさらにデキサメタゾンを含む。
【0131】
本明細書で提供されているのは、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む医薬組成物である。
【0132】
本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、哺乳類を冒す特定の疾患または状態を予防するまたは治療するために対象、たとえば、哺乳類またはヒトに投与される治療剤（複数可）を含有する混合物または溶液を指すように本明細書で定義されている。
【0133】
態様では、本明細書で提供されているのは、
（ａ）式Ｉ：
のＨＤＡＣ６阻害剤または薬学上許容できるその塩
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組成物である。
（ａ）式Ｉ：
【化10】
（式中、
環Ｂは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、そのそれぞれが、ＯＨ、ハロ、またはＣ１－６－アルキルによって任意で置換されてもよく；
ＲはＨまたはＣ１－６－アルキルである）と、
（ｂ）プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤または薬学上許容できるその塩とを含む医薬組成物である。
【0134】
組成物の実施形態では、環Ｂはアリールである。種々の実施形態では、Ｒ１はハロによって置換されるアリールまたはヘテロアリールである。
【0135】
組成物の別の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は化合物Ａまたは薬学上許容できるその塩である。組成物の別の実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤は化合物Ｂまたは薬学上許容できるその塩である。
【0136】
医薬組成物の種々の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、たとえば、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６）、または薬学上許容できるその塩から成る群から選択される阻害性抗体である。
【0137】
組成物の実施形態では、医薬組成物はさらに、１以上の賦形剤、たとえば、薬学上許容できる賦形剤を含む。本明細書で使用されるとき、用語「薬学上許容できる賦形剤」または「薬学上許容できるキャリア」には、当業者に知られるように（たとえば、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９－１３２９を参照のこと）、任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（たとえば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬剤、薬剤安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、風味剤、染料、等、及びそれらの組み合わせが挙げられる。従来のキャリアが有効成分と不適合である限りを除いて、治療用組成物または医薬組成物におけるその使用が熟考される。
【0138】
医薬組成物は、約０．１％～約９９．９％、好ましくは約１％～約６０％の治療剤（複数可）を含有してもよい。
【0139】
腸内投与または非経口投与のための併用療法に好適な医薬組成物は、たとえば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤、または坐薬またはアンプル剤のような単位剤形におけるものである。記載されない限り、これらは、たとえば、当業者に容易に明らかな種々の従来の混合、粉砕、直接圧縮、造粒、糖衣、溶解、凍結乾燥過程、融解造粒、または製造技術によって、それ自体既知の方法で調製される。各剤形の個々の用量に含有される組み合わせ相手の単位含量は、必要な有効量が複数の投与量単位の投与によって到達されてもよいので、それ自体有効量を構成する必要はないことが十分に理解されるであろう。
【0140】
特定されない限り、または本文によって明瞭に指示されない限り、本明細書で提供されている医薬組み合わせ物で有用な治療剤への言及には、化合物の遊離の塩基、及び化合物の薬学上許容できる塩すべての双方が含まれる。
【0141】
投与／用量
本明細書で提供されている開示に従ってがんを治療する方法は、任意の順序で、合わせて治療上有効な量、好ましくは相乗的に有効な量、たとえば、１日投与量または間欠投与量での同時のまたは順次の（ｉ）（ａ）遊離の形態または薬学上許容できる塩の形態でのＨＤＡＣ６阻害剤の投与と、（ｉｉ）（ｂ）遊離の形態または薬学上許容できる塩の形態でのＰＤ－Ｌ１阻害剤の投与とを含むことができる。本明細書で提供されている医薬組み合わせ物の個々の組み合わせ相手は、治療の経過の間の異なる時間に別々に投与することができ、または分割したもしくは単一の組み合わせ形態で同時に投与することができる。従って、本明細書で提供されている方法は、同時治療または交互治療のそのような投薬計画すべてを含むと理解されるべきであり、用語「投与すること」はそれに応じて解釈されるべきである。たとえば、方法の一実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤が先ず投与され、それに続いてＰＤ－Ｌ１阻害剤が投与される。方法の別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤が先ず投与され、それに続いてＨＤＡＣ６阻害剤が投与される。
本明細書で提供されている開示に従ってがんを治療する方法は、任意の順序で、合わせて治療上有効な量、好ましくは相乗的に有効な量、たとえば、１日投与量または間欠投与量での同時のまたは順次の（ｉ）（ａ）遊離の形態または薬学上許容できる塩の形態でのＨＤＡＣ６阻害剤の投与と、（ｉｉ）（ｂ）遊離の形態または薬学上許容できる塩の形態でのＰＤ－Ｌ１阻害剤の投与とを含むことができる。本明細書で提供されている医薬組み合わせ物の個々の組み合わせ相手は、治療の経過の間の異なる時間に別々に投与することができ、または分割したもしくは単一の組み合わせ形態で同時に投与することができる。従って、本明細書で提供されている方法は、同時治療または交互治療のそのような投薬計画すべてを含むと理解されるべきであり、用語「投与すること」はそれに応じて解釈されるべきである。たとえば、方法の一実施形態では、ＨＤＡＣ６阻害剤が先ず投与され、それに続いてＰＤ－Ｌ１阻害剤が投与される。方法の別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤が先ず投与され、それに続いてＨＤＡＣ６阻害剤が投与される。
【0142】
式Ｉの化合物は単回用量または複数回用量にて１日当たり約１０ｍｇ～約１０００ｍｇ（約１０ｍｇ～約５００ｍｇを含む）の量で経口投与することができる。従って、本明細書で提供されている治療の方法の実施形態では、式Ｉの化合物は、１日当たり約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７０ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、４００ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４７０ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、または５００ｍｇの投与量で投与される。さらなる実施形態では、式Ｉの化合物は１日当たり２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１８０ｍｇ、または２００ｍｇの投与量で投与される。
【0143】
医薬組み合わせ物の実施形態では、化合物Ａは、６００ｍｇ～３０００ｍｇ（たとえば、約６００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１６００、約１８００、約２０００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらなる実施形態では、化合物Ａは６００ｍｇ～２０００ｍｇの量である。医薬組み合わせ物の好まれる実施形態では、化合物Ａは１８０ｍｇ～４８０ｍｇの量である。
【0144】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物Ａは、５ｍｇ～６００ｍｇ（たとえば、約５、約２５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらに別の実施形態では、化合物Ａは１０ｍｇ～２００ｍｇである。
【0145】
医薬組み合わせ物の実施形態では、化合物Ｂは、６００ｍｇ～３０００ｍｇ（たとえば、約６００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１６００、約１８００、約２０００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらなる実施形態では、化合物Ｂは６００ｍｇ～２０００ｍｇの量である。医薬組み合わせ物の好まれる実施形態では、化合物Ｂは１８０ｍｇ～４８０ｍｇの量である。
【0146】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物Ｂは、５ｍｇ～６００ｍｇ（たとえば、約５、約２５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらに別の実施形態では、化合物Ｂは１０ｍｇ～２００ｍｇである。
【0147】
医薬組み合わせ物の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、６００ｍｇ～３０００ｍｇ（たとえば、約６００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１６００、約１８００、約２０００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらなる実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は６００ｍｇ～２０００ｍｇの量である。
【0148】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、５ｍｇ～６００ｍｇ（たとえば、約５、約２５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらに別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は１０ｍｇ～２００ｍｇである。医薬組み合わせ物の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、６００ｍｇ～３０００ｍｇ（たとえば、約６００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１６００、約１８００、約２０００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらなる実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は６００ｍｇ～２０００ｍｇの量である。
【0149】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、５ｍｇ～６００ｍｇ（たとえば、約５、約２５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００ｍｇ）の量である。医薬組み合わせ物のさらに別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は１０ｍｇ～２００ｍｇである。
【0150】
本発明の組み合わせ物で採用される組み合わせ相手のそれぞれの有効な投与量は、採用される特定の化合物または医薬組成物、投与の方式、治療される状態、及び治療される状態の重症度に応じて変化してもよい。従って、本発明の組み合わせ物の投与量投薬計画は、投与の経路及び患者の腎臓や肝臓の機能を含む種々の因子に従って選択される。
【0151】
毒性のない有効性が得られる本明細書で提供されている組み合わせ物の最適な比、個々の及び組み合わせた投与量、ならびに組み合わせ相手（たとえば、式Ｉの化合物とＰＤ－Ｌ１阻害剤）の濃度は、標的部位に対する治療剤の利用率の動態に基づき、当業者に既知の方法を用いて決定される。
【0152】
医薬組み合わせ物の実施形態では、式Ｉの化合物のＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は７００：１～１：４０の範囲である。別の実施形態では、式Ｉの化合物のＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は２：１～１：２、たとえば、２：１、１：１、または１：２；１７０：１～１５０：１、たとえば、１７０：１、１６０：１または１５０：１；３：１～１：１、たとえば、３：１、２：１または１：１；４：１～１：１、たとえば、４：１、３：１、２：１または１：１；または３０：１～１０：１、たとえば、３０：１、２０：１または１０：１の範囲である。
【0153】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物ＡのＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は７００：１～１：４０の範囲である。別の実施形態では、化合物ＡのＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は２：１～１：２、たとえば、２：１、１：１、または１：２；１７０：１～１５０：１、たとえば、１７０：１、１６０：１または１５０：１；３：１～１：１、たとえば、３：１、２：１または１：１；４：１～１：１、たとえば、４：１、３：１、２：１または１：１；または３０：１～１０：１、たとえば、３０：１、２０：１または１０：１の範囲である。
【0154】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物ＢのＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は７００：１～１：４０の範囲である。別の実施形態では、化合物ＢのＰＤ－Ｌ１阻害剤に対する比は２：１～１：２、たとえば、２：１、１：１、または１：２；１７０：１～１５０：１、たとえば、１７０：１、１６０：１または１５０：１；３：１～１：１、たとえば、３：１、２：１または１：１；または３０：１～１０：１、たとえば、３０：１、２０：１または１０：１の範囲である。
【0155】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物ＡのＰＤ－Ｌ１抗体に対する比は７００：１～１：４０の範囲である。別の実施形態では、化合物ＡのＰＤ－Ｌ１抗体に対する比は２：１～１：２、たとえば、２：１、１：１、または１：２；１７０：１～１５０：１、たとえば、１７０：１、１６０：１または１５０：１；３：１～１：１、たとえば、３：１、２：１または１：１または３０：１～１０：１、たとえば、３０：１、２０：１または１０：１の範囲である。
【0156】
医薬組み合わせ物の別の実施形態では、化合物ＢのＰＤ－Ｌ１抗体に対する比は７００：１～１：４０の範囲である。別の実施形態では、化合物ＢのＰＤ－Ｌ１抗体に対する比は２：１～１：２、たとえば、２：１、１：１、または１：２；１７０：１～１５０：１、たとえば、１７０：１、１６０：１または１５０：１；３：１～１：１、たとえば、３：１、２：１または１：１または３０：１～１０：１、たとえば、３０：１、２０：１または１０：１の範囲である。
【0157】
組み合わせ相手のそれぞれの有効な投与量は、組み合わせ物にて他方の化合物（複数可）と比べて一方の化合物（複数可）のさらに頻繁な投与を必要としてもよい。従って、適当な投薬を可能にするために、包装された医薬品は、化合物の組み合わせ物を含有する１以上の剤形と、化合物の組み合わせ物の一方を含有するが、組み合わせ物の他方の化合物（複数可）を含有しない１以上の剤形とを含有してもよい。
【0158】
本発明の組み合わせ物で採用されている組み合わせ相手が単剤として市販されているような形態で適用される場合、本明細書で言及されない限り、その投与量及び投与の方式は各市販された薬剤の添付文書で提供されている情報に従うことができる。
【0159】
がんの治療のための各組み合わせ相手の最適な投与量は、既知の方法を用いて各個体について経験的に決定することができ、疾患の進展の程度；個体の年齢、体重、全身状態、性別及び食事；投与の時間及び経路；ならびに個体が服用している他の薬剤を含むが、これらに限定されない種々の因子に左右されるであろう。最適な投与量は当該技術で周知である日常の検査及び手順を用いて確立されてもよい。
【0160】
キャリア物質と組み合わせて単一剤形を作製してもよい各組み合わせ相手の量は、治療される個体及び投与の特定の方式に応じて変化するであろう。一部の実施形態では、本明細書に記載されているような作用物質の組み合わせ物を含有する単位剤形は、作用物質が単独で投与される場合通常投与される量の組み合わせの各作用物質を含有するであろう。投与の頻度は使用される化合物及び治療されるまたは予防される特定の状態に応じて変化してもよい。患者は一般に、当業者に精通するであろう、治療されるまたは予防される状態に好適なアッセイを用いて治療の有効性についてモニターされてもよい。
【0161】
本明細書で提供されているのはまた、がんの進行の遅延またはがんの治療にて使用するためのその同時投与、別々投与または順次投与についての指示書と一緒に、治療剤として本明細書で提供されている医薬組み合わせ物を含む商業包装である。
【0162】
本明細書で提供されているような医薬組み合わせ物は前に本明細書に記載されている有益な効果を生じることを確立された試験モデルによって示すことができる。当業者はそのような有益な効果を証明するための関連する試験モデルを選択することが完全に可能になる。本明細書で提供されている医薬組み合わせ物の薬理活性は、たとえば、臨床試験または動物モデルで実証されてもよい。
【0163】
実施形態では、本明細書で提供されている医薬組み合わせ物または医薬組成物またはその双方は相乗効果を示す。別の実施形態では、医薬組み合わせ物または医薬組成物は、ＨＤＡＣ阻害剤及びＰＤ－Ｌ１阻害剤の一方または双方が単独で投与されると有効ではないが、その量が組み合わせで有効である投与量で投与される。
【0164】
１以上の成分の間での相乗的な相互作用を判定することにおいて、効果についての最適な範囲及び効果についての各成分の絶対用量範囲は、治療を必要とする患者への様々なｗ／ｗ比の範囲及び用量にわたる成分の投与によって明確に測定されてもよい。ヒトについては、患者にて臨床試験を行う複雑さ及びコストが、相乗作用についての一次モデルとしての検査のこの形態の使用を実行困難にしてもよい。しかしながら、特定の実験における相乗作用の観察は他の種における効果を予測することができ、動物モデルの存在を利用して相乗効果をさらに定量してもよい。そのような試験の結果を使用して有効な用量比の範囲及び絶対用量及び血漿濃度も予測することができる。
【0165】
さらなる実施形態では、本明細書で提供されているのは、本発明の組み合わせ物を含む対象への投与のための相乗的な組み合わせ物であり、その際、各成分の用量範囲は好適な腫瘍モデルまたは臨床試験で示唆された相乗作用の範囲に相当する。
【0166】
本出願の全体を通して引用されている参考文献（資料参考文献。交付済み特許、公開された特許出願、及び同時係属特許出願）すべての内容は、参照によって全体として本明細書で明白に組み入れられる。定義されない限り、本明細書で使用されている専門用語及び科学用語はすべて当業者に共通して知られる意味を与えられる。
【実施例】
【0167】
以下の実施例は上記に記載されている本発明を説明する。しかしながら、それらは本発明の範囲を限定するようには決して意図されない。本発明の医薬組み合わせ物の有益な効果は当業者にそれ自体で知られる他の試験モデルによっても判定することができる。
【0168】
実施例１：２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ａ）及び２－（（２－クロロフェニル）（フェニル）アミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成
Ｉ．２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ａ）の合成
中間体２の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）におけるアニリン（３．７ｇ，４０ミリモル）と、化合物１（７．５ｇ，４０ミリモル）と、Ｋ２ＣＯ３（１１ｇ，８０ミリモル）との混合物を脱気し、Ｎ２のもとで１２０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ブラインで洗浄した（２００ｍＬ×３）。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルのクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して白色固形物（６．２ｇ、６４％）として所望の生成物を得た。
Ｉ．２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ａ）の合成
【化11】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）におけるアニリン（３．７ｇ，４０ミリモル）と、化合物１（７．５ｇ，４０ミリモル）と、Ｋ２ＣＯ３（１１ｇ，８０ミリモル）との混合物を脱気し、Ｎ２のもとで１２０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ブラインで洗浄した（２００ｍＬ×３）。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルのクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して白色固形物（６．２ｇ、６４％）として所望の生成物を得た。
【0169】
中間体３の合成
ＴＥＯＳ（２００ｍＬ）における化合物２（６．２ｇ，２５ミリモル）と、ヨードベンゼン（６．１２ｇ，３０ミリモル）と、ＣｕＩ（９５５ｍｇ，５．０ミリモル）と、Ｃｓ２ＣＯ３（１６．３ｇ，５０ミリモル）との混合物を脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を１４０℃で１４時間撹拌した。室温に冷却した後、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。シリカゲル［５０ｇ，水中（１５００ｍｌ）でのＮＨ４Ｆ（１００ｇ）のシリカゲル（５００ｇ，１００－２００メッシュ）への添加によって予備調製した］における９５％ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）及びＮＨ４Ｆ－Ｈ２Ｏを加え、得られた混合物を室温で２時間保持した。固化した物質を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を乾燥するまで蒸発させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製し、黄色の固形物（３ｇ、３８％）を得た。
ＴＥＯＳ（２００ｍＬ）における化合物２（６．２ｇ，２５ミリモル）と、ヨードベンゼン（６．１２ｇ，３０ミリモル）と、ＣｕＩ（９５５ｍｇ，５．０ミリモル）と、Ｃｓ２ＣＯ３（１６．３ｇ，５０ミリモル）との混合物を脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を１４０℃で１４時間撹拌した。室温に冷却した後、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。シリカゲル［５０ｇ，水中（１５００ｍｌ）でのＮＨ４Ｆ（１００ｇ）のシリカゲル（５００ｇ，１００－２００メッシュ）への添加によって予備調製した］における９５％ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）及びＮＨ４Ｆ－Ｈ２Ｏを加え、得られた混合物を室温で２時間保持した。固化した物質を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を乾燥するまで蒸発させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製し、黄色の固形物（３ｇ、３８％）を得た。
【0170】
中間体４の合成
化合物３（３．０ｇ，９．４ミリモル）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）溶液に２ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間撹拌した。溶媒の蒸発の後、溶液を２ＮのＨＣｌで中和し、白色の沈殿物を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を除去して茶色の固形物（２．５ｇ、９２％）を得た。
化合物３（３．０ｇ，９．４ミリモル）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）溶液に２ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間撹拌した。溶媒の蒸発の後、溶液を２ＮのＨＣｌで中和し、白色の沈殿物を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を除去して茶色の固形物（２．５ｇ、９２％）を得た。
【0171】
中間体６の合成
化合物４（２．５ｇ，８．５８ミリモル）と、化合物５（２．５２ｇ，１２．８７ミリモル）と、ＨＡＴＵ（３．９１ｇ，１０．３０ミリモル）と、ＤＩＰＥＡ（４．４３ｇ，３４．３２ミリモル）との混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を乾燥するまで蒸発させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製して茶色の固形物（２ｇ、５４％）を得た。
化合物４（２．５ｇ，８．５８ミリモル）と、化合物５（２．５２ｇ，１２．８７ミリモル）と、ＨＡＴＵ（３．９１ｇ，１０．３０ミリモル）と、ＤＩＰＥＡ（４．４３ｇ，３４．３２ミリモル）との混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を乾燥するまで蒸発させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２／１）によって精製して茶色の固形物（２ｇ、５４％）を得た。
【0172】
２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミドの合成
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）及びＤＣＭ（２５ｍＬ）における化合物６（２．０ｇ，４．６ミリモル）、水酸化ナトリウム（２Ｎ，２０ｍＬ）の混合物を０℃にて１０分間撹拌した。ヒドロキシルアミン（５０％）（１０ｍＬ）を０℃に冷却し、混合物に加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物を１ＭのＨＣｌで中和して白色の沈殿物を得た。粗生成物を濾過し、プレＨＰＬＣによって精製して白色の固形物（９５０ｍｇ、４８％）を得た。
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）及びＤＣＭ（２５ｍＬ）における化合物６（２．０ｇ，４．６ミリモル）、水酸化ナトリウム（２Ｎ，２０ｍＬ）の混合物を０℃にて１０分間撹拌した。ヒドロキシルアミン（５０％）（１０ｍＬ）を０℃に冷却し、混合物に加えた。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物を１ＭのＨＣｌで中和して白色の沈殿物を得た。粗生成物を濾過し、プレＨＰＬＣによって精製して白色の固形物（９５０ｍｇ、４８％）を得た。
【0173】
ＩＩ．合成経路１：２－（（２－クロロフェニル）（フェニル）アミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ｂ）
中間体２の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）におけるアニリン（３．７ｇ，４０ミリモル）と、２－クロロピリミジン－５－カルボン酸エチル１（７．５ｇ，４０ミリモル）と、Ｋ２ＣＯ３（１１ｇ，８０ミリモル）の混合物を脱気し、Ｎ２のもとで１２０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ブラインで洗浄した（２００ｍＬ×３）。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して白色固形物（６．２ｇ、６４％）として所望の生成物を得た。
【化12】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）におけるアニリン（３．７ｇ，４０ミリモル）と、２－クロロピリミジン－５－カルボン酸エチル１（７．５ｇ，４０ミリモル）と、Ｋ２ＣＯ３（１１ｇ，８０ミリモル）の混合物を脱気し、Ｎ２のもとで１２０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ブラインで洗浄した（２００ｍＬ×３）。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）によって精製して白色固形物（６．２ｇ、６４％）として所望の生成物を得た。
【0174】
中間体３の合成
ＤＭＳＯ（６９０ｍＬ）における化合物２（６９．２ｇ，１当量）と、１－クロロ－２－ヨードベンゼン（１３５．７ｇ，２当量）と、Ｌｉ２ＣＯ３（４２．０４ｇ，２当量）と、Ｋ２ＣＯ３（３９．３２ｇ，１当量）と、Ｃｕ（１当量，４５μｍ）の混合物を脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を１４０℃で３６時間撹拌した。反応の後処理によって９３％の収率で化合物３を得た。
ＤＭＳＯ（６９０ｍＬ）における化合物２（６９．２ｇ，１当量）と、１－クロロ－２－ヨードベンゼン（１３５．７ｇ，２当量）と、Ｌｉ２ＣＯ３（４２．０４ｇ，２当量）と、Ｋ２ＣＯ３（３９．３２ｇ，１当量）と、Ｃｕ（１当量，４５μｍ）の混合物を脱気し、窒素でパージした。得られた混合物を１４０℃で３６時間撹拌した。反応の後処理によって９３％の収率で化合物３を得た。
【0175】
中間体４の合成
化合物３（３．０ｇ，９．４ミリモル）のＥｔＯＨ（２００ｍｌ）溶液に２ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間撹拌した。溶媒の蒸発の後、溶液を２ＮのＨＣｌで中和して白色の沈殿物を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を除去して茶色の固形物（２．５ｇ、９２％）を得た。
化合物３（３．０ｇ，９．４ミリモル）のＥｔＯＨ（２００ｍｌ）溶液に２ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間撹拌した。溶媒の蒸発の後、溶液を２ＮのＨＣｌで中和して白色の沈殿物を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を除去して茶色の固形物（２．５ｇ、９２％）を得た。
【0176】
中間体５の合成
この実施例の第Ｉ部における中間体６の合成に類似する手順を使用した。
この実施例の第Ｉ部における中間体６の合成に類似する手順を使用した。
【0177】
２－（（２－クロロフェニル）（フェニル）アミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミドの合成
この実施例の第Ｉ部における２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミドの合成に類似する手順を使用した。
この実施例の第Ｉ部における２－（ジフェニルアミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミドの合成に類似する手順を使用した。
【0178】
ＩＩＩ．合成経路２：２－（（２－クロロフェニル）（フェニル）アミノ）－Ｎ－（７－（ヒドロキシアミノ）－７－オキソヘプチル）ピリミジン－５－カルボキサミド（化合物Ｂ）
工程（１）：化合物１１の合成
２－クロロピリミジン－５－カルボン酸エチル（７．０Ｋｇｓ）と、エタノール（６０Ｋｇｓ）と、２－クロロアニリン（９．５Ｋｇｓ，２当量）と、酢酸（３．７Ｋｇｓ，１．６当量）とを不活性雰囲気下で反応器に充填した。混合物を加熱して還流した。少なくとも５時間後、ＨＰＬＣ分析のために反応物から試料採取した。分析によって反応の完了が示されると混合物を７０±５℃に冷却し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加えた。次いで反応物を２０±５℃に冷却し、混合物をさらに２～６時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、エタノール（２×６Ｋｇｓ）及びヘプタン（２４Ｋｇｓ）で洗浄した。５０±５℃での減圧下で一定重量までケーキを乾燥させ、８．４Ｋｇｓの化合物１１（８１％の収率及び９９．９％の純度）を生成した。
【化13】
２－クロロピリミジン－５－カルボン酸エチル（７．０Ｋｇｓ）と、エタノール（６０Ｋｇｓ）と、２－クロロアニリン（９．５Ｋｇｓ，２当量）と、酢酸（３．７Ｋｇｓ，１．６当量）とを不活性雰囲気下で反応器に充填した。混合物を加熱して還流した。少なくとも５時間後、ＨＰＬＣ分析のために反応物から試料採取した。分析によって反応の完了が示されると混合物を７０±５℃に冷却し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を加えた。次いで反応物を２０±５℃に冷却し、混合物をさらに２～６時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、エタノール（２×６Ｋｇｓ）及びヘプタン（２４Ｋｇｓ）で洗浄した。５０±５℃での減圧下で一定重量までケーキを乾燥させ、８．４Ｋｇｓの化合物１１（８１％の収率及び９９．９％の純度）を生成した。
【0179】
工程（２）：化合物３の合成
銅粉（０．６８Ｋｇｓ，１当量，＜７５ ミクロン）と、炭酸カリウム（４．３Ｋｇｓ，１．７当量）と、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，１２．３Ｋｇｓ）とを反応器（容器Ａ）に加えた。得られた溶液を１２０±５℃に加熱した。別の反応器（容器Ｂ）にて、化合物１１（２．９Ｋｇｓ）とヨードベンゼン（４．３Ｋｇｓ，２当量）とのＤＭＳＯ（５．６Ｋｇｓ）溶液を４０±５℃で加熱した。次いで混合物を２～３時間かけて容器Ａに移した。ＨＰＬＣ分析が≦１％の化合物１１が残っていると判定するまで、反応混合物を１２０±５℃にて８～２４時間加熱した。
銅粉（０．６８Ｋｇｓ，１当量，＜７５ ミクロン）と、炭酸カリウム（４．３Ｋｇｓ，１．７当量）と、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，１２．３Ｋｇｓ）とを反応器（容器Ａ）に加えた。得られた溶液を１２０±５℃に加熱した。別の反応器（容器Ｂ）にて、化合物１１（２．９Ｋｇｓ）とヨードベンゼン（４．３Ｋｇｓ，２当量）とのＤＭＳＯ（５．６Ｋｇｓ）溶液を４０±５℃で加熱した。次いで混合物を２～３時間かけて容器Ａに移した。ＨＰＬＣ分析が≦１％の化合物１１が残っていると判定するまで、反応混合物を１２０±５℃にて８～２４時間加熱した。
【0180】
工程（３）：化合物４の合成
工程（２）の混合物を９０～１００℃に冷却し、精製水（５９Ｋｇｓ）を加えた。ＨＰＬＣが≦１％の化合物３が残っていることを示すまで反応混合物を９０～１００℃で２～８時間撹拌した。反応器を２５℃に冷却した。セライト、次いで０．２ミクロンのフィルターを介して反応混合物を濾過し、濾液を回収した。濾液をメチルｔ－ブチルエーテルで２回抽出した（２×１２．８Ｋｇｓ）。水性層を０～５℃に冷却し、次いで＜２５℃の温度を維持しながら、６Ｎの塩酸（ＨＣｌ）でｐＨ２～３に酸性化した。次いで反応物を５～１５℃に冷却した。沈殿物を濾過し、冷水で洗浄した。減圧下にて４５～５５℃でケーキを一定重量まで乾燥させて９０．３％のＡＵＣ純度で２．２ｋｇ（６５％の収率）の化合物４を得た。
工程（２）の混合物を９０～１００℃に冷却し、精製水（５９Ｋｇｓ）を加えた。ＨＰＬＣが≦１％の化合物３が残っていることを示すまで反応混合物を９０～１００℃で２～８時間撹拌した。反応器を２５℃に冷却した。セライト、次いで０．２ミクロンのフィルターを介して反応混合物を濾過し、濾液を回収した。濾液をメチルｔ－ブチルエーテルで２回抽出した（２×１２．８Ｋｇｓ）。水性層を０～５℃に冷却し、次いで＜２５℃の温度を維持しながら、６Ｎの塩酸（ＨＣｌ）でｐＨ２～３に酸性化した。次いで反応物を５～１５℃に冷却した。沈殿物を濾過し、冷水で洗浄した。減圧下にて４５～５５℃でケーキを一定重量まで乾燥させて９０．３％のＡＵＣ純度で２．２ｋｇ（６５％の収率）の化合物４を得た。
【0181】
工程（４）：化合物５の合成
ジクロロメタン（４０．３Ｋｇｓ）と、ＤＭＦ（３３ｇ，０．０４当量）と、化合物４（２．３Ｋｇ）を反応フラスコに充填した。０．２μｍのフィルターを介して溶液を濾過し、フラスコに戻した。＜３０℃にて３０～１２０分かけて添加漏斗を介して塩化オキサリル（０．９Ｋｇｓ，１当量）を加えた。次いで、反応の完了（化合物４≦３％）がＨＰＬＣによって確認されるまでバッチを＜３０℃で撹拌した。次に、ジクロロメタン溶液を濃縮し、残留塩化オキサリルを＜４０℃にて減圧下で取り除いた。ＨＰＬＣ分析が＜０．１０％の塩化オキサリルが残っていること示すと、濃縮物を新しいジクロロメタン（２４Ｋｇｓ）に溶解し、反応容器（容器Ａ）に移し戻した。
ジクロロメタン（４０．３Ｋｇｓ）と、ＤＭＦ（３３ｇ，０．０４当量）と、化合物４（２．３Ｋｇ）を反応フラスコに充填した。０．２μｍのフィルターを介して溶液を濾過し、フラスコに戻した。＜３０℃にて３０～１２０分かけて添加漏斗を介して塩化オキサリル（０．９Ｋｇｓ，１当量）を加えた。次いで、反応の完了（化合物４≦３％）がＨＰＬＣによって確認されるまでバッチを＜３０℃で撹拌した。次に、ジクロロメタン溶液を濃縮し、残留塩化オキサリルを＜４０℃にて減圧下で取り除いた。ＨＰＬＣ分析が＜０．１０％の塩化オキサリルが残っていること示すと、濃縮物を新しいジクロロメタン（２４Ｋｇｓ）に溶解し、反応容器（容器Ａ）に移し戻した。
【0182】
第２の容器（容器Ｂ）に７－アミノヘプタン酸メチル塩酸塩（化合物Ａ１，１．５Ｋｇｓ，１．０９当量）と、ＤＩＰＥＡ（２．５Ｋｇｓ，２．７当量）と、４（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ，４２ｇ，０．０５当量）と、ＤＣＭ（４７．６Ｋｇｓ）を充填した。混合物を０～１０℃に冷却し、温度を５℃～１０℃で維持しながら容器Ａにおける酸塩化物を容器Ｂに移した。その時点でＨＰＬＣ分析が反応の完了（化合物４≦５％）を示す３～２４時間、反応物を５～１０℃で撹拌した。次いで混合物を１ＭのＨＣｌ溶液（２０Ｋｇｓ）、精製水（２０Ｋｇｓ）、７％重炭酸ナトリウム（２０Ｋｇｓ）、精製水（２０Ｋｇｓ）、及び２５％塩化ナトリウム溶液（２０Ｋｇｓ）で抽出した。次いで＜４０℃にてジクロロメタンを真空蒸留し、イソプロピルアルコールで繰り返し追跡した。分析によって＜１モル％のＤＣＭが残っていることが示されると、混合物を徐々に０～５℃に冷却し、０～５℃で少なくとも２時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、冷イソプロピルアルコール（６．４Ｋｇｓ）で洗浄した。ケーキをフィルター上で４～２４時間吸引乾燥させ、次いでさらに４５～５５℃にて減圧下で一定重量まで乾燥させた。９５．９％のＡＵＣ純度法及び９９．９重量％で２．２Ｋｇｓ（７７％の収率）が単離された。
【0183】
工程（５）：化合物（Ｉ）の合成
ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．３Ｋｇｓ，１０当量）及びメタノール（９．６Ｋｇｓ）を反応器に充填した。得られた溶液を０～５℃に冷却し、温度を０～１０℃で維持して２５％のナトリウムメトキシド（１１．２Ｋｇｓ，１１当量）をゆっくり充填した。いったん添加が完了すると、反応物を２０℃で１～３時間混合し、濾過し、濾過ケーキをメタノール（２×２．１Ｋｇｓ）で洗浄した。濾液（ヒドロキシルアミンを含まない塩基）を反応器に戻し、０±５℃に冷却した。化合物５（２．２Ｋｇｓ）を加えた。反応が完了する（化合物５≦２％）まで反応物を撹拌した。混合物を濾過し、水（２８Ｋｇｓ）及び酢酸エチル（８．９Ｋｇｓ）を濾液に加えた。６ＮのＨＣｌを用いてｐＨを８～９に合わせ、次いで濾過する前に３時間まで撹拌した。濾過ケーキを冷水（２５．７Ｋｇｓ）で洗浄し、次いで減圧下で一定重量まで乾燥させた。粗精製の固形化合物（Ｉ）を形態ＩＶ／パターンＤであると判定した。
ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．３Ｋｇｓ，１０当量）及びメタノール（９．６Ｋｇｓ）を反応器に充填した。得られた溶液を０～５℃に冷却し、温度を０～１０℃で維持して２５％のナトリウムメトキシド（１１．２Ｋｇｓ，１１当量）をゆっくり充填した。いったん添加が完了すると、反応物を２０℃で１～３時間混合し、濾過し、濾過ケーキをメタノール（２×２．１Ｋｇｓ）で洗浄した。濾液（ヒドロキシルアミンを含まない塩基）を反応器に戻し、０±５℃に冷却した。化合物５（２．２Ｋｇｓ）を加えた。反応が完了する（化合物５≦２％）まで反応物を撹拌した。混合物を濾過し、水（２８Ｋｇｓ）及び酢酸エチル（８．９Ｋｇｓ）を濾液に加えた。６ＮのＨＣｌを用いてｐＨを８～９に合わせ、次いで濾過する前に３時間まで撹拌した。濾過ケーキを冷水（２５．７Ｋｇｓ）で洗浄し、次いで減圧下で一定重量まで乾燥させた。粗精製の固形化合物（Ｉ）を形態ＩＶ／パターンＤであると判定した。
【0184】
粗精製の固形物（１．８７Ｋｇｓ）をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ、２７．１Ｋｇ）に懸濁した。スラリーを７５±５℃に加熱し、固形物を溶解した。溶液に化合物（Ｉ）（形態Ｉ／パターンＡ）の結晶で播種し、常温に冷却させた。得られた沈殿物を濾過の前に１～２時間撹拌した。濾過ケーキをＩＰＡ（２×９．５Ｋｇｓ）ですすぎ、減圧下で４５～５５℃にて一定重量まで乾燥させ、８５％の収率及び９９．５％の純度（たとえば、表３のＨＰＬＣ法によるＡＵＣ％）にて１．８６ｋｇの結晶性の白色固形物の化合物（Ｉ）を生じた。
【表3】
【0185】
実施例２：ＨＤＡＣ酵素アッセイ
化合物を最終濃度の５０倍にＤＭＳＯで希釈することによって先ず化合物Ｂを調べ、１０点の３倍連続希釈を作った。化合物をアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＫＣｌ、０．００１％のＴｗｅｅｎ－２０、０．０５％のＢＳＡ、２０μＭのＴＣＥＰ）で最終濃度の６倍に希釈した。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入した）をアッセイ緩衝液でその最終濃度の１．５倍に希釈した。０．０５μＭの最終濃度でのトリペプチド基質及びトリプシンは最終濃度の６倍でアッセイ緩衝液にて希釈した。これらの酵素で使用した最終的な酵素濃度は３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）及び２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）であった。使用した最終的な基質濃度は１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）及び１４μＭ（ＨＤＡＣ６）であった。５μＬの化合物及び２０μＬの酵素を２つ組で黒色不透明の３８４穴プレートのウェルに加えた。酵素及び化合物を一緒に室温で１０分間インキュベートした。５μＬの基質を各ウェルに加え、プレートを６０秒間振盪し、Ｖｉｃｔｏｒ２マイクロタイタープレートリーダーに入れた。蛍光の発生を６０分間モニターし、反応の線形速度を算出した。４パラメータ曲線適合によるＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてＩＣ５０を決定した。化合物Ａ及びＢに関連するＩＣ５０については表１を参照のこと。
化合物を最終濃度の５０倍にＤＭＳＯで希釈することによって先ず化合物Ｂを調べ、１０点の３倍連続希釈を作った。化合物をアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＫＣｌ、０．００１％のＴｗｅｅｎ－２０、０．０５％のＢＳＡ、２０μＭのＴＣＥＰ）で最終濃度の６倍に希釈した。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから購入した）をアッセイ緩衝液でその最終濃度の１．５倍に希釈した。０．０５μＭの最終濃度でのトリペプチド基質及びトリプシンは最終濃度の６倍でアッセイ緩衝液にて希釈した。これらの酵素で使用した最終的な酵素濃度は３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）及び２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）であった。使用した最終的な基質濃度は１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）及び１４μＭ（ＨＤＡＣ６）であった。５μＬの化合物及び２０μＬの酵素を２つ組で黒色不透明の３８４穴プレートのウェルに加えた。酵素及び化合物を一緒に室温で１０分間インキュベートした。５μＬの基質を各ウェルに加え、プレートを６０秒間振盪し、Ｖｉｃｔｏｒ２マイクロタイタープレートリーダーに入れた。蛍光の発生を６０分間モニターし、反応の線形速度を算出した。４パラメータ曲線適合によるＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてＩＣ５０を決定した。化合物Ａ及びＢに関連するＩＣ５０については表１を参照のこと。
【0186】
実施例３：方法
細胞株
ＭＭ．１Ｓ、ＮＣＩ－Ｈ９２９、ＲＰＭＩ８２２６及びＵ２６６の細胞株はアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。ＫＭＳ１１及びＫＭＳ１２－ＰＥの細胞株はＪＣＲＢ細胞バンク（日本）から入手した。ＯＰＭ－１細胞株（市販されている）はこの実施例ではＬｅｉｆ Ｂｅｒｇｓａｇｅｌ博士（Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ，ＡＺ）によって提供された。ＭＭ細胞株はすべて１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、２μＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０にて培養した。
細胞株
ＭＭ．１Ｓ、ＮＣＩ－Ｈ９２９、ＲＰＭＩ８２２６及びＵ２６６の細胞株はアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。ＫＭＳ１１及びＫＭＳ１２－ＰＥの細胞株はＪＣＲＢ細胞バンク（日本）から入手した。ＯＰＭ－１細胞株（市販されている）はこの実施例ではＬｅｉｆ Ｂｅｒｇｓａｇｅｌ博士（Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ，ＡＺ）によって提供された。ＭＭ細胞株はすべて１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、２μＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０にて培養した。
【0187】
骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）
骨髄吸引物からＦｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ密度沈降によって分離した単核細胞を１５％ＦＢＳ－ＲＰＭＩ１６４０にて５～６週間培養し、長期骨髄間質細胞を樹立した。ＢＭＳＣに由来する培養上清をＭＭ細胞株の刺激に使用した。
骨髄吸引物からＦｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ密度沈降によって分離した単核細胞を１５％ＦＢＳ－ＲＰＭＩ１６４０にて５～６週間培養し、長期骨髄間質細胞を樹立した。ＢＭＳＣに由来する培養上清をＭＭ細胞株の刺激に使用した。
【0188】
試薬
化合物Ａ及び化合物ＢはＡｃｅｔｙｌｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって提供された。抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＡｃｅｔｙｌｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって提供された。
化合物Ａ及び化合物ＢはＡｃｅｔｙｌｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって提供された。抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＡｃｅｔｙｌｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって提供された。
【0189】
試験管内でのＭＭ細胞株を用いた抗体依存性細胞介在性（ＡＤＣＣ）アッセイ
多発性骨髄腫細胞をカルセイン－ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、２μｇ／ｍＬ／１００万個の細胞）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄の後、細胞を標的細胞に使用した。単核細胞はＦｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ密度遠心分離によって健常志願者の末梢血から得て、エフェクター細胞に使用した。標的細胞及びエフェクター細胞（Ｅ／Ｔ＝１５～２０）の双方を３～４時間インキュベートし、培養上清を、４９０ｎｍの励起フィルターと５２０ｎｍの発光フィルターを用いた蛍光の測定に供した。特異的溶解の百分率は以下のように算出した、％特異的溶解＝［実験の蛍光－自然発生の蛍光（エフェクターなし］／［完全な溶解（界面活性剤による１００％の溶解）－自然発生の蛍光（エフェクターなし］×１００
多発性骨髄腫細胞をカルセイン－ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、２μｇ／ｍＬ／１００万個の細胞）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄の後、細胞を標的細胞に使用した。単核細胞はＦｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ密度遠心分離によって健常志願者の末梢血から得て、エフェクター細胞に使用した。標的細胞及びエフェクター細胞（Ｅ／Ｔ＝１５～２０）の双方を３～４時間インキュベートし、培養上清を、４９０ｎｍの励起フィルターと５２０ｎｍの発光フィルターを用いた蛍光の測定に供した。特異的溶解の百分率は以下のように算出した、％特異的溶解＝［実験の蛍光－自然発生の蛍光（エフェクターなし］／［完全な溶解（界面活性剤による１００％の溶解）－自然発生の蛍光（エフェクターなし］×１００
【0190】
フローサイトメトリーに基づく生体外のＡＤＣＣアッセイ
骨髄の吸引の後、赤血球の塩化アンモニウムに基づく溶解とそれに続くリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）による洗浄によって新鮮な骨髄単核細胞（ＭＮＣ）を得た。ＡＤＣＣアッセイについては、９６穴プレートにおける完全培地にて化合物Ａまたは化合物Ｂの存在下で細胞を速やかに抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＢＭＳ－９３６５５９、「ＭＤＸ－１１０５」とも呼ばれる、１μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。細胞を５％ＣＯ２の環境にて３７℃で７２時間インキュベートした。ＢＭ ＭＮＣにおける初代ＭＭ細胞の生存率を近赤外（ｎ－ＩＲ）生存率染料によって決定した。生存しているＣＤ１３８＋ＭＭ細胞をフローカウント蛍光球（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）の存在下で数え、生存ＭＭ細胞の絶対数を決定した。ＭＮＣの表現型分析は、ＢＶ４２１／ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）－ＢＶ７１１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を含有するモノクローナル抗体の単回５色の組み合わせを用いて行った。形質細胞上のＰＤ－Ｌ１は市販のアッセイ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて測定した。インキュベートの後、２％ＢＳＡを含有するＰＢＳで細胞を２回洗浄し、次いでＦｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）での解析のためにＰＢＳに再浮遊させた。ＭＭ細胞もいくつかの実験でこの方法に適用した。
骨髄の吸引の後、赤血球の塩化アンモニウムに基づく溶解とそれに続くリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）による洗浄によって新鮮な骨髄単核細胞（ＭＮＣ）を得た。ＡＤＣＣアッセイについては、９６穴プレートにおける完全培地にて化合物Ａまたは化合物Ｂの存在下で細胞を速やかに抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＢＭＳ－９３６５５９、「ＭＤＸ－１１０５」とも呼ばれる、１μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。細胞を５％ＣＯ２の環境にて３７℃で７２時間インキュベートした。ＢＭ ＭＮＣにおける初代ＭＭ細胞の生存率を近赤外（ｎ－ＩＲ）生存率染料によって決定した。生存しているＣＤ１３８＋ＭＭ細胞をフローカウント蛍光球（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）の存在下で数え、生存ＭＭ細胞の絶対数を決定した。ＭＮＣの表現型分析は、ＢＶ４２１／ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）－ＢＶ７１１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を含有するモノクローナル抗体の単回５色の組み合わせを用いて行った。形質細胞上のＰＤ－Ｌ１は市販のアッセイ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて測定した。インキュベートの後、２％ＢＳＡを含有するＰＢＳで細胞を２回洗浄し、次いでＦｏｒｔｅｓｓａサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）での解析のためにＰＢＳに再浮遊させた。ＭＭ細胞もいくつかの実験でこの方法に適用した。
【0191】
ＲＮＡ抽出及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応
Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＲＮＡを抽出し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ｌａｂｔｅｃｈ）によって定量した。具体的には、ある量（５×１０６個）の細胞をペレットにし、冷ＰＢＳで洗浄し、１ｍＬのＴｒｉｚｏｌに再浮遊させた。再浮遊させた細胞を次いで１－ブロモ－３－クロロプロパン（Ｓｉｇｍａ）と共にインキュベートし、先ずイソプロピルアルコールで洗浄し、次いで７５％エタノールで洗浄し、ヌクレアーゼを含まない水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に再浮遊させた。定量の後、製造元の指示書に従ってＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ第１の鎖の合成キットを用い、２０００ｎｇのＲＮＡを用いてｃＤＮＡを合成した。リアルタイムｑＰＣＲのためのＰＤ－Ｌ１のプライマー情報は、順行：ＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＡ；逆行：ＴＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴである。
Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＲＮＡを抽出し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ｌａｂｔｅｃｈ）によって定量した。具体的には、ある量（５×１０６個）の細胞をペレットにし、冷ＰＢＳで洗浄し、１ｍＬのＴｒｉｚｏｌに再浮遊させた。再浮遊させた細胞を次いで１－ブロモ－３－クロロプロパン（Ｓｉｇｍａ）と共にインキュベートし、先ずイソプロピルアルコールで洗浄し、次いで７５％エタノールで洗浄し、ヌクレアーゼを含まない水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に再浮遊させた。定量の後、製造元の指示書に従ってＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ第１の鎖の合成キットを用い、２０００ｎｇのＲＮＡを用いてｃＤＮＡを合成した。リアルタイムｑＰＣＲのためのＰＤ－Ｌ１のプライマー情報は、順行：ＴＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＴＧＡＧＡＡＴＣＡＡ；逆行：ＴＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴである。
【0192】
実施例４：ＰＤ－Ｌ１の発現はＨＤＡＣ６阻害剤によって高められる
ＰＤ－Ｌ１の発現に対するＨＤＡＣ６阻害剤の効果を評価するために、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞をレナリドミド（ＬＥＮ、１μＭ及び３μＭ）、ポマリドミド（ＰＯＭ、１μＭ）、または化合物Ａ（１μＭ及び２μＭ）と共に４８時間培養した。データは、フローサイトメトリー（ＦＣＭ）によって評価されたようにＨＤＡＣ６阻害剤で処理した細胞にてＰＤ－Ｌ１の発現は上昇したことを示している（図１）。
ＰＤ－Ｌ１の発現に対するＨＤＡＣ６阻害剤の効果を評価するために、Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞をレナリドミド（ＬＥＮ、１μＭ及び３μＭ）、ポマリドミド（ＰＯＭ、１μＭ）、または化合物Ａ（１μＭ及び２μＭ）と共に４８時間培養した。データは、フローサイトメトリー（ＦＣＭ）によって評価されたようにＨＤＡＣ６阻害剤で処理した細胞にてＰＤ－Ｌ１の発現は上昇したことを示している（図１）。
【0193】
同様に、ＭＭ．１Ｓ、Ｈ９２９、ＫＭＳ１２－ＰＥ、ＯＰＭ１及びＵ２６６の多発性骨髄腫細胞を化合物Ｂ（２μＭ）と共に４８時間培養した場合、データは、阻害剤と共に培養した細胞にてＰＤ－Ｌ１の発現は高められたことを示している（図２）。
【0194】
化合物Ｂで処理したＵ２６６細胞におけるＰＤ－Ｌ１の発現に対する間質細胞の予備刺激が有する効果を判定するために、化合物Ｂ（１μＭ）の存在下または非存在下で間質細胞上清（ｓｕｐ）にてＵ２６６細胞を４８時間培養した。ＰＤ－Ｌ１の発現はＦＣＭによって評価した。ＰＤ－Ｌ１の発現は、化合物Ｂの存在下で間質細胞上清にて培養した細胞において最高だった（図３）。
【0195】
実施例５：抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性は間質細胞上清、ポマリドミド及び化合物Ｂによって高められる。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対する化合物Ｂと間質細胞上清の組み合わせの効果を評価するために、化合物Ｂ（１μＭ）及び／または２つの別々の供給源に由来する間質細胞上清と共にＵ２６６細胞を４８時間培養した。次いで細胞を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（１μｇ／ｍＬ）及び末梢血単核細胞（Ｅ／Ｔ＝１５／１及び３０／１）と共に５時間インキュベートした。双方の群において、ＦＣＭによって評価されたように最高の特異的溶解百分率は化合物Ｂ及び間質細胞上清の双方と共に培養した細胞で観察された（図４）。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性に対する化合物Ｂと間質細胞上清の組み合わせの効果を評価するために、化合物Ｂ（１μＭ）及び／または２つの別々の供給源に由来する間質細胞上清と共にＵ２６６細胞を４８時間培養した。次いで細胞を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（１μｇ／ｍＬ）及び末梢血単核細胞（Ｅ／Ｔ＝１５／１及び３０／１）と共に５時間インキュベートした。双方の群において、ＦＣＭによって評価されたように最高の特異的溶解百分率は化合物Ｂ及び間質細胞上清の双方と共に培養した細胞で観察された（図４）。
【0196】
同様に、ＲＰＭＩ８２２６細胞をポマリドミド（Ｐｏｍ、０．１μＭ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣ（Ｅ／Ｔ＝１５／１）と共に７２時間培養した。それに続く抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０．５μｇ／ｍＬ）との３時間の培養の後、特異的殺傷の百分率をＦＣＭによって評価した。細胞のポマリドミド処理が細胞障害性を高めた（図５）。
【0197】
実施例６：化合物Ｂは抗体依存性細胞介在性の細胞障害性を高める
Ｈ９２９細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性を用いてＡＤＣＣに対するポマリドミドと併用した化合物Ｂの効果を評価するために、Ｈ９２９細胞をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、ポマリドミド（０．１μＭ）、化合物Ｂ（０．２５、０．５、１μＭ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣと共に７２時間培養した。次いで細胞を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０．５μｇ／ｍＬ ＰＤ－Ｌ１）と共に３時間インキュベートした。細胞障害性はＦＣＭによって評価した。ポマリドミドと組み合わせた化合物ＢはＡＤＣＣを高めた（図６）。同様に、化合物Ｂは単独でＨ９２９細胞にて抗ＰＤ－Ｌ１抗体が誘導した細胞障害性も高めた。
Ｈ９２９細胞における抗ＰＤ－Ｌ１抗体依存性細胞介在性の細胞障害性を用いてＡＤＣＣに対するポマリドミドと併用した化合物Ｂの効果を評価するために、Ｈ９２９細胞をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、ポマリドミド（０．１μＭ）、化合物Ｂ（０．２５、０．５、１μＭ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣと共に７２時間培養した。次いで細胞を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０．５μｇ／ｍＬ ＰＤ－Ｌ１）と共に３時間インキュベートした。細胞障害性はＦＣＭによって評価した。ポマリドミドと組み合わせた化合物ＢはＡＤＣＣを高めた（図６）。同様に、化合物Ｂは単独でＨ９２９細胞にて抗ＰＤ－Ｌ１抗体が誘導した細胞障害性も高めた。
【0198】
Ｈ９２９細胞をＣＦＳＥで染色し、ポマリドミド（０．１μＭ）、化合物Ｂ（０．２５、０．５、１μＭ）の存在下または非存在下でＰＢＭＣと共に７２時間培養した。次いで細胞をＡｂ（０．５μｇ／ｍＬ ＰＤ－Ｌ１）と共に３時間インキュベートした。細胞障害性はＦＣＭによって評価した（図７）。化合物Ｂは単独で、自家設定における抗ＰＤ－Ｌ１抗体が誘導した細胞障害性も高めた。ＭＭ患者の骨髄吸引物に由来する単核細胞を化合物Ｂ（０．５μＭ）の有無にて抗ＰＤ－Ｌ１抗体（０．５μｇ／ｍＬ）と共に７２時間培養した（図８Ａ及び図８Ｂ）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】