(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-06-20
(45)【発行日】2022-06-28
(54)【発明の名称】エンドグリン拮抗作用による治療に対する、腫瘍の感受性化法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220621BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220621BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N ZNA
A61P35/00
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2018565397
(86)(22)【出願日】2017-06-14
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-09-05
(86)【国際出願番号】 US2017037558
(87)【国際公開番号】W WO2017218708
(87)【国際公開日】2017-12-21
【審査請求日】2020-06-05
(31)【優先権主張番号】62/350,017
(32)【優先日】2016-06-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】514135801
【氏名又は名称】シーダーズ－サイナイ メディカル センター
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100102118
【弁理士】
【氏名又は名称】春名 雅夫
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(72)【発明者】
【氏名】ボウミック ニール
(72)【発明者】
【氏名】スミス ベサニー
(72)【発明者】
【氏名】プラセンシオ ベロニカ
(72)【発明者】
【氏名】マダフ アニシャ
【審査官】福山 則明
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１６／０００９８１１（ＵＳ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２００７／００７１７６１（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１２－５０２６４９（ＪＰ，Ａ）
【文献】CANCER RESEARCH，2001年，Vol. 61，pp. 7846-7854
【文献】Clinical Cancer Research，2014年，Vol. 20, No. 23，pp. 5918-5926
【文献】Clinical Cancer Research，2012年，Vol. 18, No. 17，pp. 4820-4829
【文献】Clinical Cancer Research，2013年，Vol. 19, No. 1，pp. 170-182
【文献】FATIMA H. KARZAI，A PHASE I STUDY OF TRC105 ANTI‐ENDOGLIN (CD105) ANTIBODY IN METASTATIC CASTRATION‐RESISTANT PROSTATE CANCER，BJU INTERNATIONAL，2015年，VOL:116，PAGE(S):546 - 555，http://dx.doi.org/10.1111/bju.12986
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４
Ａ６１Ｋ ４５／００－４５／０８
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤ１０５アンタゴニストを含む、対象においてがんを感受性化させる及びがんを治療するための治療薬であって、
前記がんを感受性化させるために前記対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それにより前記がんを感受性化させること；および
前記がんを治療するために前記対象にがん療法を施すこと、
を含み、
前記がんが固形腫瘍であり、かつ、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性であり、
前記ＣＤ１０５アンタゴニストが、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である、
前記治療薬。
【請求項2】
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の治療薬。
【請求項3】
前記がんが前立腺癌である、請求項１または２に記載の治療薬。
【請求項4】
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、請求項１～３のいずれか１項に記載の治療薬。
【請求項5】
ＣＤ１０５アンタゴニストを含む、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための治療薬であって、がん療法と組み合わせて使用され、
前記がん療法によって、前記がんが治療され、前記がんの進行が遅らされ、前記がんの重症度が低下され、前記がんの再発が防止され、及び／または前記がんの再発の可能性が低減され、
前記がんが固形腫瘍であり、かつ、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性であり、
前記ＣＤ１０５アンタゴニストが、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である、
前記治療薬。
【請求項6】
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、請求項５に記載の治療薬。
【請求項7】
前記がんが前立腺癌である、請求項５または６に記載の治療薬。
【請求項8】
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、請求項５～７のいずれか１項に記載の治療薬。
【請求項9】
ＣＤ１０５アンタゴニストを含む、がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための治療薬であって、がん療法と組み合わせて使用され、
前記がん療法によって前記がんの再発が防止され、及び／または再発の可能性が低減され、
前記がんが固形腫瘍であり、かつ、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性であり、
前記ＣＤ１０５アンタゴニストが、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である、
前記治療薬。
【請求項10】
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、請求項９に記載の治療薬。
【請求項11】
前記がんが前立腺癌である、請求項９または１０記載の治療薬。
【請求項12】
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、請求項９～１１のいずれか１項に記載の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
連邦支援研究に関する声明
本発明は、国立衛生研究所により付与された助成金番号ＣＡ１０８６４６に基づく政府の支援によってなされたものである。政府は、本発明に特定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所により付与された助成金番号ＣＡ１０８６４６に基づく政府の支援によってなされたものである。政府は、本発明に特定の権利を有する。
【0002】
発明の分野
本発明は、医薬及びがんに関する。
本発明は、医薬及びがんに関する。
【背景技術】
【0003】
背景
本明細書中に引用された全ての刊行物は、個々の刊行物または特許出願が、具体的かつ個々に参照により組み込まれると示されている場合と同一の程度で、その全体が参照により組み込まれる。以下の説明は、本発明の理解に有用と思われる情報を含む。本明細書で提供するいかなる情報も、先行技術であるか、または現在請求されている発明と関連しているということ、または具体的または暗示的に参照されているいかなる出版物も、先行技術であるということを認めるものではない。
本明細書中に引用された全ての刊行物は、個々の刊行物または特許出願が、具体的かつ個々に参照により組み込まれると示されている場合と同一の程度で、その全体が参照により組み込まれる。以下の説明は、本発明の理解に有用と思われる情報を含む。本明細書で提供するいかなる情報も、先行技術であるか、または現在請求されている発明と関連しているということ、または具体的または暗示的に参照されているいかなる出版物も、先行技術であるということを認めるものではない。
【0004】
エンドグリン（ＣＤ１０５とも呼ばれる）は、増殖している内皮細胞上に発現し、血管の生存にとって重要な受容体として元々同定された。したがって、特に新しい血管系に依存する腫瘍を死滅させる目的で、エンドグリンアンタゴニスト（すなわち、Ｔｒａｃｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．製のＴＲＣ１０５）が開発された。
【0005】
本発明において、本発明者らは、ＣＤ１０５アンタゴニストと、化学療法、放射線療法、ホルモン療法及び外科手術を含むがこれらに限定されない種々の治療とを組み合わせることによって、がん及び腫瘍を治療するための方法、キット及びシステムを提供する。
【発明の概要】
【0006】
概要
以下の実施形態及びそれらの態様は、代表的且つ例示的であることが意図され、範囲を限定するものではないシステム、組成物、及び方法と関連して記載されかつ示される。
以下の実施形態及びそれらの態様は、代表的且つ例示的であることが意図され、範囲を限定するものではないシステム、組成物、及び方法と関連して記載されかつ示される。
【0007】
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象において癌を感受性化させる方法であって、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによって癌を感受性化させることを含む。種々の実施形態では、この方法は、癌療法を施すことをさらに含む。種々の実施形態では、この方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与する前に、癌治療により癌を感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む。
【0008】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、癌は、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の実施形態では、がんは、前立腺癌である。
【0009】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0010】
種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、対象は、ＣＤ１０５アンタゴニストの投与及びがん療法によって治療する。
【0011】
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
【0012】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がんは、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の他の実施形態では、がんは、前立腺癌である。
【0013】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0014】
種々の実施形態では、がん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
【0015】
本発明の種々の実施形態は、がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びその後のがん療法を対象に施し、これにより、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
【0016】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がんは、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の実施形態では、がんは、前立腺癌である。
【0017】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0018】
種々の実施形態では、その後のがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
[本発明1001]
それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、
ＣＤ105アンタゴニストを提供すること、及び、
前記対象に前記ＣＤ105アンタゴニストを投与し、それによって前記がんを感受性化させること
を含む、前記方法。
[本発明1002]
がん療法を施すことをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ＣＤ105アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記がんが前立腺癌である、本発明1004の方法。
[本発明1007]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1002の方法。
[本発明1010]
前記対象を、前記ＣＤ105アンタゴニストの投与及び前記がん療法によって治療する、本発明1002の方法。
[本発明1011]
それを必要とする対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、
前記対象にＣＤ105アンタゴニストを投与すること、及び
前記対象にがん療法を施して、これにより、前記対象において、前記がんを治療し、前記がんの進行を遅らせ、前記がんの重症度を低下させ、前記がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させること
を含む、前記方法。
[本発明1012]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1011の方法。
[本発明1013]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記がんが前立腺癌である、本発明1012の方法。
[本発明1015]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1011の方法。
[本発明1016]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1011の方法。
[本発明1017]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1011の方法。
[本発明1018]
がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、
前記対象にＣＤ105アンタゴニストを投与すること、及び
がん療法を施して、これにより、前記がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させること
を含む、前記方法。
[本発明1019]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記がんが前立腺癌である、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1018の方法。
[本発明1023]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1018の方法。
[本発明1024]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1018の方法。
[本発明1001]
それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、
ＣＤ105アンタゴニストを提供すること、及び、
前記対象に前記ＣＤ105アンタゴニストを投与し、それによって前記がんを感受性化させること
を含む、前記方法。
[本発明1002]
がん療法を施すことをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ＣＤ105アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記がんが前立腺癌である、本発明1004の方法。
[本発明1007]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1002の方法。
[本発明1010]
前記対象を、前記ＣＤ105アンタゴニストの投与及び前記がん療法によって治療する、本発明1002の方法。
[本発明1011]
それを必要とする対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、
前記対象にＣＤ105アンタゴニストを投与すること、及び
前記対象にがん療法を施して、これにより、前記対象において、前記がんを治療し、前記がんの進行を遅らせ、前記がんの重症度を低下させ、前記がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させること
を含む、前記方法。
[本発明1012]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1011の方法。
[本発明1013]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記がんが前立腺癌である、本発明1012の方法。
[本発明1015]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1011の方法。
[本発明1016]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1011の方法。
[本発明1017]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1011の方法。
[本発明1018]
がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、
前記対象にＣＤ105アンタゴニストを投与すること、及び
がん療法を施して、これにより、前記がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させること
を含む、前記方法。
[本発明1019]
前記がんが、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記がんが、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記がんが前立腺癌である、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＣＤ105に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、本発明1018の方法。
[本発明1023]
前記ＣＤ105アンタゴニストが、ＴＲＣ105またはその抗原結合断片である、本発明1018の方法。
[本発明1024]
前記がん療法が、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである、本発明1018の方法。
【図面の簡単な説明】
【0019】
例示的な実施形態を、参照図にて示している。本明細書に開示する実施形態及び図面は、限定的ではなく例示的なものとみなすことを意図する。
【0020】
【図1】本発明の種々の実施形態に従って、腫瘍進行における間質制御の果たす役割の一例を示す。
【図2】本発明の種々の実施形態に従って、アンドロゲン除去療法が、間質及び上皮区画におけるＣＤ１０５発現を促進し得ることを示す。示された処置により、低酸素（２％Ｏ２）下でのマウス線維芽細胞との３Ｄ共培養で、ヒト前立腺癌（ＰＣａ）上皮細胞を増殖させた。７２時間後、細胞を解離させ、ＦＡＣＳによりＣＤ１０５発現について、示しているように評価した。Ｍ１０４３（モノクローナルラット抗マウスＣＤ１０５抗体）またはＴＲＣ１０５により、ＣＤ１０５に拮抗することによって、マウス前立腺線維芽細胞及びヒト前立腺癌上皮の両方において、エンザルタミド誘導ＣＤ１０５細胞表面発現をダウンレギュレートさせた。
【図3】本発明の種々の実施形態に従って、アンドロゲン除去療法によってアンドロゲン受容体変異体がアップレギュレートされることを示す。
【図4】本発明の種々の実施形態に従って、アンドロゲン受容体変異体及びＲＮＰＣ１（ＲＢＭ３８としても知られている）がＴＲＣ１０５によってダウンレギュレートされることを示す。エンザルタミドは、ＲＮＰＣ１発現をアップレギュレートする。
【図5】本発明の種々の実施形態に従って、アンドロゲン受容体変異体が、ＲＮＰＣ１依存様式でＴＲＣ１０５によってダウンレギュレートされることを示す。ＲＮＰＣ１発現は、前立腺癌上皮及び間質細胞において亢進する。
【図6】本発明の種々の実施形態に従って、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞におけるＴＲＣ１０５投与量応答を示す。
【図7】本発明の種々の実施形態に従って、エンザルタミドとのＭ１０４３（アンタゴニストとして使用されるマウス特異的ＣＤ１０５中和抗体）の組み合わせ治療は、前立腺腫瘍異種移植片を減少させないことを示す。組織組換えヒトＣＷ２２Ｒｖ１／ＣＡＦ異種同所移植により、血管新生が減少した。
【図8】図８Ａ～８Ｂは、本発明の種々の実施形態に従って、ＴＲＣ１０５が前立腺癌細胞のための放射線増感剤として利用されることを示す。図８Ａ）細胞周期分析は、ヒト前立腺上皮細胞株ＣＷ２２Ｒｖ１において、放射線をＴＲＣ１０５と組み合わせた場合の、Ｇ２期の（ＤＮＡ複製に関連する）慢性的アップレギュレーションを実証する。各群内で、左の列はＧ１を示し、中央の列はＳを示し、右の列はＧ２を示す。図８Ｂ）ＣＷ２２Ｒｖ１、すなわち前立腺上皮は、４Ｇｙ放射線及びＴＲＣ１０５治療の場合に、生存タンパク質（サバイビン及び全長ＰＡＲＰ１）の急激なダウンレギュレーションを有する。示されたすべての研究は、照射後５日間及び／またはＴＲＣ１０５による５日間の治療のものである。
【図9】本発明の種々の実施形態に従って、ＴＲＣ１０５が前立腺癌細胞のためのタキサン増感剤として働くことを示す。細胞死アッセイに用いたＰＣ３細胞を、異なる濃度のＴＲＣ１０５の存在下で、異なる濃度のドセタキセルで処理した。
【図10】図１０Ａ～１０Ｄは、本発明の種々の実施形態に従って、腫瘍促進能力に間質不均質性が必要であることを示す。図１０Ａ）円グラフは、示されたマーカーの細胞表面発現に基づく示された間質線維芽細胞集団の相対比を示し、ｎ＞３である。図１０Ｂ）散布図は、示された線維芽細胞集団及びＣＷ２２Ｒｖ１からなる組織組換え腫瘍の腫瘍体積を示す。バーは腫瘍体積を示し、ｎ＞４である。図１０Ｃ）示された線維芽細胞集団によるＲｖ１の代表的な組換え腫瘍切片の組織学。Ｈ＆Ｅ染色は腫瘍形態を示す（スケールバーは６４μｍを表す）。ヘマトキシリン核対比染色（スケールバーは３２μｍを表す）を用いてＫｉ６７及びサバイビン免疫局在性を定量し、ｎ＞５である。図１０Ｄ）ＲＮＡシーケンシングによって同定された上位２００の差次的発現遺伝子のうち、分泌タンパク質をコードする３３の遺伝子。ベン図は、示された対数変換遺伝子発現に従ってヒートマップに注釈された分泌遺伝子の分布を示す。ヒートマップ上の線は、ベン図の群内に見られる遺伝子に対応する。一元配置ＡＮＯＶＡ及びボンフェローニポストホック補正を行った。エラーバーは平均＋／－ＳＤを示し、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【図11】図１１Ａ～１１Ｅは、本発明の種々の実施形態に従って、間質ＣＤ１０５発現が、隣接する上皮のＮＥＤに関連することを示す。図１１Ａ）ドーナツチャートは、ＦＡＣＳに基づく、解離した良性及びＰＣａ患者の組織の示された間質集団の平均相対百分率を示す。ｎ＝４である。優性集団は、細胞あたり最大強度のマーカーによって決定し、実線ボックス（ＣＤ１０５）、破線ボックス（ＣＤ９０）、二重線ボックス（ＣＤ１１７）、破線及び点線ボックス（Ｓｔｒｏ－１）である。図１１Ｂ）ヘマトキシリンで対比染色した組織アレイの代表的なコア切片からのＣＤ１０５の免疫組織化学染色。矢頭はＣＤ１０５陽性血管を示し、矢印はＣＤ１０５陽性間質染色を示し、ｎ＝９４である。スケールバーは１００μｍを表す。図１１Ｃ）ＣＤ１０５及びクロモグラニンＡについて染色し、ヘマトキシリンで対比染色した組織コアからの代表的な連続切片、ｎ＝３９の対組織。図１４も参照のこと。図１１Ｄ）ウォーターフォールプロットは、段階的スケールで間質ＣＤ１０５の共発現を有するクロモグラニンＡの発現割合（％）を示し、ここで０は染色がないことを示し、５は１００％染色を示し、ｎ＝３９の対コアである。図１１Ｅ）示された遺伝子の相対的なｍＲＮＡ発現を、平均＋／－ＳＤ、ｎ＝５としてＮＡＦ及びＣＤ１０５に富むＣＡＦについてグラフ化している。プライマー配列を表１に列挙する。
【図12】図１２Ａ～１２Ｆは、アンドロゲン軸阻害が、本発明の様々な実施形態に従って、パラクリンＳＦＲＰ１媒介性ＮＥＤを媒介することを示す。図１２Ａ）３Ｄ共培養におけるヒト上皮細胞（ＣＷ２２Ｒｖ１）（各群内の左列）、マウス前立腺線維芽細胞（各群内の右列）におけるＣＤ１０５発現は、ＦＡＣＳ分析によって決定されるようにエンザルタミド処理によって制御され、ｎ＝３である。図１２Ｂ）棒グラフは、ＩｇＧ（対照）処置と比較した、ＴＲＣ１０５によって制御されるヒトＮＡＦ及びＣＡＦにおける相対的ＳＦＲＰ１ｍＲＮＡ発現を示し、ｎ＝５である。図１２Ｃ）ヒートマップは、０、０．０１、０．１、１μｇ／ｍｌのＳＦＲＰ１で処置した場合に、ＧＡＰＤＨに対して正規化されたＲｖ１細胞における神経内分泌遺伝子パネルの相対的発現を示す。ｎ＝５である。図１５も参照のこと。図１２Ｄ）ＰＤＸモデルにおいて、マウスをビヒクルまたはエンザルタミドのいずれかで処置した。良性またはＰＣａ組織におけるＣＤ１０５及びＳＦＲＰ１の免疫組織化学的局在は、血管（ｖ）、上皮（ｅ）及び間質（ｓ）に見られる。ｎ＝４である。スケールバーは１００μｍを表す。図１２Ｅ）マウス前立腺線維芽細胞との３Ｄ共培養におけるヒトＣＷ２２Ｒｖ１の上皮増殖を、ＦＡＣＳ分析のためにＥｐＣａｍ及びＫｉ６７について共染色した。培養物をＴＲＣ１０５、Ｍ１０４３及び／またはエンザルタミドで７２時間処理した。ｎ＞３である。図１６も参照のこと。図１２Ｆ）前立腺上皮ＣＷ２２Ｒｖ１、Ｃ４２Ｂ、及びＰＣ３の生存率は、ＭＴＴアッセイによって、ＴＲＣ１０５及びエンザルタミドの存在下及び非存在下で測定した。ｎ＝５である。エラーバーは平均＋／－ＳＤ、及び他に指示がない限り対照と比較して＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。
【図13】図１３Ａ～１３Ｂは、本発明の様々な実施形態に従って、アンドロゲン軸及びＣＤ１０５に拮抗することによって、腫瘍成長及び神経内分泌分化（ＮＥＤ）が低下することを示す。図１３Ａ）マウスに、ＣＷ２２Ｒｖ１及びＣＡＦの組織組換え体で同所移植した。マウスを去勢し、ＴＲＣ１０５及び／またはエンザルタミドで処置した。棒グラフは、去勢（Ｃｘ）マウスに対して正規化した腫瘍体積を示す。図１３Ｂ）Ｈ＆Ｅ染色の後に、リン酸化ヒストンＨ３（ＰＨ－Ｈ３）、ＴＵＮＥＬ、及びクロモグラニンＡ（ＣｈｒｏｍＡ）の免疫局在化を行った。スケールバーは３２μｍを表す。有糸分裂（ＰＨ－Ｈ３）及び細胞死（ＴＵＮＥＬ）インデックスをプロットした。ｎ＞５であり、エラーバーは平均＋／－ＳＤ、及び他に指示がない限り対照と比較し＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。
【図14】図１４Ａ～１４Ｂは、本発明の種々の実施形態に従って、隣接する上皮の神経内分泌分化との間質ＣＤ１０５発現の関連を示す。図１４Ａ）ボックスプロットは、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ 前立腺癌（ＴＣＧＡ－ＰＲＡＤ）データ収集からの、正常組織及びＰＣａ組織におけるＣＤ１０５発現を示す（ｎ＝４９８）。図１４Ｂ）ヘマトキシリンで対比染色したＣＤ１０５またはクロモグラニンＡの、免疫組織化学によって染色された組織アレイコアからの、代表的な連続対切片を示す。スケールバーは１００μｍを表す。
【図15】図１５Ａ～１５Ｃ本発明の種々の実施形態に従って、ＳＦＲＰ１が、神経内分泌分化に関連することを示す。図１５Ａ）棒グラフは、対照に対して正規化したものであり、示された濃度のヒト組換えＳＦＲＰ１またはＣＡＦ馴化培地により７２時間（平均＋／－ＳＤ）処理したＲｖ１細胞の相対的増殖を示す。図１５Ｂ）Ｚｏｄｉａｃ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｍｐｇｅｎｏｍｅ．ｏｒｇ／ＺＯＤＩＡＣ）を用いて生成されたサーカスプロットは、関連遺伝子間の関係及び関係の性質を示す。コピー数（ＣＮ）、遺伝子発現（ＧＥ）及びメチル化（Ｍｅ）の間の関連は、あるノードから別のノードへの線によって示される（ｐ≦０．０１）。図１５Ｃ）棒グラフは、指定されたＴＣＧＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＮｅｔｗｏｒｋデータセットのＳＦＲＰ１突然変異、欠失及び増幅の改変頻度を示す：ＮＥＰＣ（Ｔｒｅｎｔｏ／Ｃｏｒｎｅｌｌ／Ｂｒｏａｄ ２０１６）、ＰＣａ１（ＦＨＣＲＣ ２０１６）、ＰＣａ２（ＭＩＣＨ）、ＰＣａ３（ＴＣＧＡ）、ＰＣａ４（ＴＣＧＡ ２０１５）、ＰＣａ５（ＳＵ２Ｃ）、ＰＣａ６（ＭＳＫＣＣ ２０１０）、ＰＣａ７（Ｂｒｏａｄ／Ｃｏｒｎｅｌｌ ２０１３）、及びＰＣａ８（Ｂｒｏａｄ／Ｃｏｒｎｅｌｌ ２０１２）。
【図16】本発明の種々の実施形態に従って、種特異的ＣＤ１０５アンタゴニストを示す。棒グラフは、対照に対して正規化したＲｖ１細胞及びマウス野生型線維芽細胞による相対ＩＤ１ ｍＲＮＡ発現を示す。すべての細胞を無血清培地で一晩前処理し、次いで異なる濃度のＴＲＣ１０５またはＭ１０４３の存在下または非存在下で６時間、ＢＭＰ（５０ｎｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした（平均＋／－ＳＤ）。各群内で、左の列はヒトＰＣａを示し、右の列はマウス線維芽細胞を示す。
【図17】本発明の種々の実施形態に従って、種々の処置後の上皮の概略図を示す。
【図18】図１８Ａ～１８Ｆは、本発明の種々の実施形態に従って、前立腺癌細胞における放射線誘導性ＣＤ１０５発現が、放射線耐性を補助することを示す。図１８Ａ）４Ｇｙ照射処理の７２時間後に、細胞表面のＣＤ１０５発現を、ＰＣ３、Ｃ４２ｂ及び２２Ｒｖ１においてＦＡＣＳ分析で測定し、照射していない細胞（対照）と比較した。図１８Ｂ）細胞表面のＣＤ１０５発現を、照射線量範囲（０、２、４または６Ｇｙ）に従って細胞株において測定した。図１８Ｃ）２２Ｒｖ１における細胞表面のＣＤ１０５発現の耐久性を、４Ｇｙ照射後０、０．５、４、８、２４、４８、７２、１２０及び１６８時間で測定した。ＣＤ１０５細胞表面発現の倍率変化を、照射前に発現したレベルに対して正規化した。図１８Ｄ）血清飢餓及び５０ｎｇ／ｍｌ ＢＭＰ４または１μｇ／ｍｌＴＲＣ１０５による処理の存在下または非存在下で、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞におけるリン酸化Ｓｍａｄ１／５のウェスタンブロットを測定した。β－アクチン発現は、ローディングコントロールとして利用した。図１８Ｅ）アネキシン－Ｖ発現を、ＴＲＣ１０５の存在下及び非存在下での４Ｇｙ照射の５日後、ＦＡＣＳ分析によって２２Ｒｖ１細胞において測定した。図１８Ｆ）１μｇ／ｍｌのＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下で、０～６Ｇｙの線量範囲で、ＣＷ２２Ｒｖ１及びＣ４２ｂ細胞の照射の１０日後に、クローン原性アッセイを測定した。データは、平均＋／－Ｓ．Ｄ．として報告する（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図19】本発明の種々の実施形態に従って、無血清条件下で５０ｎｇ／ｍｌのＢＭＰ４を用い、ＣＷ２２Ｒｖ１において測定したＩＤ１ ｍＲＮＡ発現を示す。ＴＲＣ１０５の増加用量（０．０５、０．１、０．５、１、５または１０μｇ／ｍｌ）との関連によるＩｇＧ。ＩＤ１ ｍＲＮＡ発現をＧＡＰＤＨに対して正規化した。（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図20】図２０Ａ～２０Ｆは、本発明の種々の実施形態に従って、放射線がＢＭＰ媒介ＳＩＲＴ１発現を誘導することを示す。図２０Ａ）血清飢餓後及び５０ｎｇ／ｍｌのＢＭＰ４で４時間処理した後、２２Ｒｖ１細胞において測定した、ＳＩＲＴ１発現のウェスタンブロット。リン酸化Ｓｍａｄ１／５及びβ－アクチンを同時に測定した。図２０Ｂ）５０ｎｇ／ｍｌのＢＭＰ４、ＴＲＣ１０５の漸増用量（０．０５、０．１、０．５、１、５または１０μｇ／ｍｌ）との関連でＩｇＧを用い、無血清条件下で、ＣＷ２２Ｒｖ１においてＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現を測定した。ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現をＧＡＰＤＨ及び血清処理対照に対して正規化した。図２０Ｃ）Ｒ２－ゲノム解析から得られた良性前立腺癌患者及び前立腺癌患者におけるＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡの倍率変化を表す（ｎ＝９５）。図２０Ｄ）良性前立腺癌及び前立腺癌組織におけるＳＩＲＴ１発現の免疫組織化学的局在を矢印で示す（Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ）。「ｅ」及び「ｓ」は、それぞれ組織における上皮及び間質区画を示す。図２０Ｅ）０～６Ｇｙの線量範囲で、２２Ｒｖ１への照射７２時間後に、ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現を測定した。図２０Ｆ）ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現は、４Ｇｙ照射後０－７２時間の時間経過で測定した。ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現をＧＡＰＤＨ及び非処理、０Ｇｙに対して正規化した。データは、３回の独立した実験の平均＋／－Ｓ．Ｄ．として報告する（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図21】図２１Ａ～２１Ｃは、本発明の種々の実施形態に従って、ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現が定量されたことを示す。図２１Ａ）Ｃ４－２Ｂに放射線を照射し（０、２、４、または６Ｇｙ）、照射７２時間後にＳＩＲＴ１発現を測定した。図２１Ｂ）Ｃ４－２Ｂ細胞に照射し（４Ｇｙ）、照射０、０．５、４、８、２４、４８及び７２時間後にＳＩＲＴ１発現を測定した。図２１Ｃ）２２Ｒｖ１を、４Ｇｙの照射の２４時間前に１μｇ／ｍｌのＩｇＧまたはＴＲＣ１０５で前処理し、照射７２時間後の相対するＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現と比較した。ＳＩＲＴ１ ｍＲＮＡ発現をＧＡＰＤＨ及び０Ｇｙ対照に対して正規化した。
【図22】図２２Ａ～２２Ｃは、本発明の種々の実施形態に従って、ＣＤ１０５が、一過性ＤＮＡ損傷及び細胞周期停止を誘導することを示す。２２Ｒｖ１を、４Ｇｙの照射の２４時間前に１μｇ／ｍｌのＴＲＣ１０５で前処理した。図２２Ａ）γ－Ｈ２ＡＸまたはｐ５３ｂｐは、放射線照射の４時間後、２４時間後及び４８時間後に免疫局在化した。核当たりの増殖巣を定量した（ｎ＝１００）。図２２Ｂ）照射の３０分後及び２４時間後にコメットアッセイを実施した。テールモーメントを定量化した（ｎ＝５０）。図２２Ｃ）３サイクルの独立した実験において、ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下で、放射線照射の０、４、８及び２４時間後の２２Ｒｖ１について、細胞周期分析を実施した（ｎ＝３）。（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図23】図２３Ａ～２３Ｅは、本発明の種々の実施形態に従ってクローン原生生存アッセイを示す。アッセイは、ｐ５３欠損前立腺癌細胞株を有する細胞株において実施した。示された線量の放射線を用いて、図２３Ａ）ＰＣ３及び２つのｐ５３突然変異膵臓癌細胞株、図２３Ｂ）ＭＩＡＰＡＣＡ－２、及び図２３Ｃ）ＨＰＡＦ－ＩＩを示す。完全なｐ５３を有する乳癌細胞株において、図２３Ｄ）ＭＣＦ７及び突然変異体であるが機能的なｐ５３、図２３Ｅ）ＭＤＡ－ＭＢ２３は、しかしながら１μｇ／ｍｌのＴＲＣ１０５によって放射線増感された。
【図24】図２４Ａ～２４Ｄは、ＰＧＣ１α及びミトコンドリア生合成が、ＢＭＰ／ＣＤ１０５によって制御されることを示す。２２Ｒｖ１細胞を、４Ｇｙ照射を伴うかまたは照射なしで、ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５とともにインキュベートした。放射線照射の７２時間後に、すべての測定を行った。図２４Ａ）全細胞溶解液、核及び細胞質画分のウェスタンブロットを、ＰＧＣ１α発現について独立して分析した。ローディングコントロールには、β－アクチン（全細胞）、ラミンＢ（核マーカー）、及びＲｈｏ Ａ（細胞質マーカー）が含まれた。図２４Ｂ）ＰＧＣ１αの免疫蛍光局在をＤＡＰＩ核対比染色で視覚化した。図２４Ｃ）ＰＧＣ１α標的遺伝子である、ＮＲＦ１、ＭＴＦＡ及びＣＰＴ１ＣのｍＲＮＡ発現を測定した。ｍＲＮＡ発現を、ＧＡＰＤＨ及び非処理ＩｇＧ ０Ｇｙに対して正規化した。図２４Ｄ）総ＤＮＡ抽出物からミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）を測定し、核ＤＮＡに対して正規化し、非処理ＩｇＧ ０Ｇｙと比較した。データは、３回の独立した実験の平均＋／－Ｓ．Ｄ．として報告する（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図25】図２５Ａ～２５Ｂは、本発明の種々の実施形態に従って、２２Ｒｖ１を、４Ｇｙの照射前に１μｇ／ｍｌのＩｇＧまたはＴＲＣ１０５で処理したことを示す。照射７２時間後に、ウェスタンブロットのために溶解物を収集した。図２５Ａ）ミトコンドリア複合体タンパク質のカクテルについてブロットをプローブした。複合体－ＩＶのＭＴＣＯ１及び複合体－ＩのＮＤＵＦＢ８のタンパク質レベルを、ポンソーに対して正規化した。図２５Ｂ）ＭＴＣＯ１及びＮＤＵＦＢ８は、４Ｇｙ＋ＴＲＣ１０５において、放射線単独と比較して有意に低かった。各群内の第１／左の列は０Ｇｙ＋ＩｇＧを示し、第２列は０Ｇｙ＋ＴＲＣ１０５を示し、第３列は４Ｇｙ＋ＩｇＧを示し、最後／右の列は４Ｇｙ＋ＴＲＣ１０５を示す。（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）
【図26】図２６Ａ～２６Ｄは、本発明の種々の実施形態に従って、ＣＤ１０５拮抗作用によって誘発される代謝変化を示す。細胞を、ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下で、４Ｇｙの放射線照射の１６８時間後、Ｓｅａｈｏｒｓｅ－ＸＦによるミトストレス試験について分析した。図２６Ａ）基本呼吸、ミトコンドリアによらない呼吸、プロトンリーク、予備呼吸能、図２６Ｂ）細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）及び図２６Ｃ）ミトコンドリア依存性ＡＴＰ産生を、Ｗａｖｅ２．３．０分析を用いて定量した。データは、３回の独立した実験のうちの代表的な実験（ｎ＝５）の平均＋／－Ｓ．Ｄ．として報告する。図２６Ａ～２６Ｃにおいて、第１／左の列は０Ｇｙ＋ＩｇＧを示し、第２列は０Ｇｙ＋ＴＲＣ１０５を示し、第３列は４Ｇｙ＋ＩｇＧを示し、最後／右の列は４Ｇｙ＋ＴＲＣ１０５を示す。図２６Ｄ）ＩｇＧ、ＴＲＣ１０５またはニコチンアミドで処理した２２Ｒｖ１細胞を照射した（４Ｇｙ）。総細胞ＡＴＰは、放射線照射の０、２４、７２、１２０及び１６８時間後に測定した。各群内で、左の列はＩｇＧであり、中央の列はＴＲＣ１０５であり、右側の列はニコチンアミドである。データは、３回の独立した実験の平均＋／－Ｓ．Ｄ．として報告する（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図27】本発明の種々の実施形態に従って、放射線感受性におけるＡＴＰ枯渇の役割を示す。２２Ｒｖ１細胞を、示された用量のＡＴＰアーゼ阻害剤であるオリゴマイシンにより処理し、４Ｇｙ照射に曝露した。各群内で、左の列は０Ｇｙ、右の列は４Ｇｙである。細胞計数は照射７２時間後に実施した。（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）
【発明を実施するための形態】
【0021】
発明の詳細な説明
本明細書に引用される全ての参考文献は、完全に記載されているようにその全体が参照により組み込まれる。他に定義されない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２２ｎｄ ｅｄ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １５， ２０１２）、Ｈｏｒｎｙａｋ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ （２００８）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３ｒｄ ｅｄ．， ｒｅｖｉｓｅｄ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ ２００６）、Ｓｍｉｔｈ， Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ７ｔｈ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ ２０１３）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３ｒｄ ｅｄ．， Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２８， ２０１２）、及びＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ ２０１２）は、本出願において使用される多くの用語の一般的な指針を、当業者に提供する。抗体を調製する方法については、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ， ２０１３）、Ｋ?ｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｌｉｎｅｓ ｂｙ ｃｅｌｌ ｆｕｓｉｏｎ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９７６ Ｊｕｌ， ６（７）：５１１－９、Ｑｕｅｅｎ ａｎｄ Ｓｅｌｉｃｋ， Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ， Ｕ． Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． ５，５８５，０８９ （１９９６ Ｄｅｃ）、及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ， Ｎａｔｕｒｅ １９８８ Ｍａｒ ２４， ３３２（６１６２）：３２３－７、を参照されたい。
本明細書に引用される全ての参考文献は、完全に記載されているようにその全体が参照により組み込まれる。他に定義されない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２２ｎｄ ｅｄ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ （Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １５， ２０１２）、Ｈｏｒｎｙａｋ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｎａｎｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ （２００８）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３ｒｄ ｅｄ．， ｒｅｖｉｓｅｄ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ ２００６）、Ｓｍｉｔｈ， Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ７ｔｈ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ ２０１３）、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３ｒｄ ｅｄ．， Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２８， ２０１２）、及びＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ ２０１２）は、本出願において使用される多くの用語の一般的な指針を、当業者に提供する。抗体を調製する方法については、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ， ２０１３）、Ｋ?ｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｌｉｎｅｓ ｂｙ ｃｅｌｌ ｆｕｓｉｏｎ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９７６ Ｊｕｌ， ６（７）：５１１－９、Ｑｕｅｅｎ ａｎｄ Ｓｅｌｉｃｋ， Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ， Ｕ． Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． ５，５８５，０８９ （１９９６ Ｄｅｃ）、及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ， Ｎａｔｕｒｅ １９８８ Ｍａｒ ２４， ３３２（６１６２）：３２３－７、を参照されたい。
【0022】
当業者は、本発明の実施において使用することができる、本明細書に記載された方法及び材料と類似または同等の多くの方法及び材料を認識するであろう。本発明の他の特徴及び利点は、本発明の実施形態の種々の特徴を例として示す添付の図面と併せて、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。実際、本発明は、記載された方法及び材料に決して限定されない。便宜上、本発明において本明細書、実施例及び添付の特許請求の範囲で使用する特定の用語をここに収集する。
【0023】
他に記載がない限り、または文脈から暗示されない限り、以下の用語及び語句は、以下に示す意味を含む。明示的に他に記載がない限り、または文脈から明らかでない限り、以下の用語及び語句は、その用語または語句が関連する技術分野で取得した意味を排除するものではない。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコール、及び試薬等に限定されず、したがって変更することができることを理解されたい。本明細書で使用される定義及び用語は、特定の実施形態を説明するのを助けるために提供され、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、特許請求の範囲に記載された発明を限定することを意図するものではない。
【0024】
本明細書で使用する場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、実施形態に有用であり、しかし有用であろうとなかろうと、不特定要素の包含に開放された組成物、方法、及びそれらのそれぞれの構成要素（複数可）に関して使用する。一般に、本明細書で使用する用語は、一般に「オープンな」用語として意図されることが当業者によって理解されるであろう（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「含むが、これに限定されない」と解釈すべきであり、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、「少なくとも有する」と解釈すべきであり、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」という用語は「含むがこれに限定されない」と解釈すべきである、など）。含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、含有する、または有するなどの用語の同義語である「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」というオープンエンドな用語は、本発明を説明及び請求するために本明細書では使用するが、本発明またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「実質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの別の用語を使用して代替的に説明することができる。
【0025】
他に記載がない限り、（特に特許請求の範囲の文脈において）本出願の特定の実施形態を説明する文脈で使用する用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」ならびに同様の表現は、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈することができる。本明細書における値の範囲の列挙は、単にその範囲内に含まれるそれぞれの別個の値を個々に示すのを省略した方法として利用することを意図するに過ぎない。本明細書で他に指示がない限り、それぞれ個々の値は、あたかも本明細書に個々に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書において特に指示がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、本明細書で記載されているすべての方法は、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書の特定の実施形態に関して提供される任意の及びすべての例、または例示語（例えば、「など」）の使用は、単に本出願をよりよく説明するためのものであり、特許請求の範囲に別段の記載がない限り、本出願の範囲を限定するものではない。略語「ｅ．ｇ．（例えば）」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ ｇｒａｔｉａ（例えば）に由来し、ここでは非限定的な例を示すために使用する。したがって、略語「ｅ．ｇ．」は、用語「例えば」と同義である。本明細書におけるいずれの文言も、特許請求の範囲に記載されていない要素が、本出願の実施に不可欠であることを示すものと解釈するべきではない。
【0026】
本明細書で使用する「ＰＣａ」は、前立腺癌を指す。
【0027】
本明細書で使用する「ＡＴＴ」は、アンドロゲン標的療法を指す。
【0028】
本明細書で使用する「ＣＡＦ」は、癌腫関連線維芽細胞を指す。
【0029】
本明細書で使用する「ＣＲＰＣ」は、去勢抵抗性前立腺癌を指す。
【0030】
本明細書で使用する「ＮＥＤ」は、神経内分泌分化を指す。
【0031】
本明細書中で使用する場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」という用語は、疾患、障害または医学的状態に関して使用する場合、治療的処置及び予防的または防御的手段の両方を指し、その目的は、症状または状態の進行または重症度を予防、逆転、緩和、改善、阻害、軽減、減速または停止することである。「治療する」という用語は、状態の少なくとも１つの有害な効果または症状を軽減または緩和することを含む。１つ以上の症状または臨床マーカーが減少する場合、治療は一般的に「有効」である。あるいは、疾患、障害または医学的状態の進行が低減または停止する場合、治療は「有効」である。すなわち、「治療」には、症状またはマーカーの改善のみならず、治療がない状態で予想される症状の進行または悪化の停止または少なくとも減速も含まれる。また、「治療」とは、有益な結果を追求したり取得したり、または治療が最終的に不成功であったとしても、その個人がその状態を発症する可能性を低くすることを意味し得る。治療を必要とする者には、すでにその状態にある者だけでなく、その状態を有する傾向がある者、またはその状態を予防すべきである者も含まれる。
【0032】
「有益な結果」または「望ましい結果」は、疾患状態の重篤度を軽減または緩和すること、疾患状態が悪化するのを防止すること、疾患状態を治癒すること、疾患状態の発症を予防すること、疾患状態を発症する患者の可能性を低下させること、罹患率及び死亡率を低減させること、及び患者の寿命または平均余命を延ばすことを含んでもよいが、これらに限定されるものではない。非限定的な例として、「有益な結果」または「所望の結果」は、１つまたは複数の症状の緩和、障害の程度の縮小、がんの安定した（すなわち、悪化していない）状態、がんの遅延または減速、及びがんに関連する症状の改善または軽減、であり得る。
【0033】
本明細書で使用する「疾患」、「状態」及び「疾患状態」は、悪性腫瘍性細胞増殖障害または疾患のいずれかの形態を含み得るが、これらに限定されない。このような障害の例としては、がん及び腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【0034】
本明細書で使用する「がん」または「腫瘍」とは、身体の器官及び系の正常な機能を妨げる、細胞の制御されない成長、及び／またはすべての腫瘍性細胞の成長及び増殖、悪性または良性のいずれかの、ならびに全ての前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。がんまたは腫瘍を有する対象は、対象の体内に客観的に測定可能ながん細胞を有する対象である。この定義には、良性及び悪性腫瘍ならびに休眠腫瘍または微小転移巣が含まれる。元の位置から移動し、重要な器官に播種するがんは、最終的に、罹患した器官の機能的悪化を介して対象の死をもたらす可能性がある。本明細書で使用する場合、「侵襲的」という用語は、周囲の組織に浸潤してこれを破壊する能力を指す。黒色腫は、皮膚腫瘍の侵襲的形態である。本明細書中で使用する場合、「癌腫」という用語は、上皮細胞から生じるがんを指す。がんの例としては、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、癌腫、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、及びアンドロゲン依存性前立腺癌及びアンドロゲン非依存性前立腺癌を含むがこれらに限定されない前立腺癌が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、「投与する」という用語は、所望の部位に薬剤または組成物を少なくとも部分的に局在化させる方法または経路によって、本明細書に開示する薬剤または組成物を対象に配置することを指す。
【0035】
本明細書で使用される「対象」とは、ヒトまたは動物を意味する。通常、動物は、霊長類、げっ歯類、家畜または狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えばアカゲザルが挙げられる。げっ歯類としては、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ及びハムスターが挙げられる。家畜及び狩猟動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、飼いネコなどのネコ科の種、及びイヌ、キツネ、オオカミなどのイヌ科の種が挙げられる。「患者」、「個体」及び「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用する。一実施形態では、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。さらに、本明細書に記載の方法は、家畜及び／またはペットを治療するために使用することができる。
【0036】
本明細書で使用される「哺乳動物」とは、哺乳綱の任意のメンバーを指し、ヒト、及びチンパンジー及び他の類人猿及びサル種などの非ヒト霊長類、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ及びウマなどの家畜、イヌ及びネコなどの飼育哺乳動物、マウス、ラット及びモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物などが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、特定の年齢または性別を示すものではない。したがって、成体及び新生児対象、ならびに胎児は、雄でも雌でも、この用語の範囲内に含まれることを意図している。
【0037】
対象は、治療を必要とする状態（例えば、がん）またはその状態に関連する１つまたは複数の合併症であると以前に診断されたことがある者、または罹患していると特定された者、及び任意選択で、その状態またはその状態に関連する１つまたは複数の合併症の治療を既に受けている者であり得る。あるいは、対象は、状態または状態に関連する１つ以上の合併症を有すると以前に診断されたことがない者でもあり得る。例えば、対象は、状態またはその状態に関連する１つまたは複数の合併症についての１つもしくは複数の危険因子を示す対象、または危険因子を示さない対象であり得る。例えば、対象は、状態またはその状態に関連する１つまたは複数の合併症についての１つもしくは複数の症状を示す対象、または症状を示さない対象であり得る。特定の状態の診断または治療を「必要とする対象」とは、その状態を有すると疑われる対象、その状態を有すると診断された対象、既にその状態の治療を受けた、または治療を受けている対象、その状態の治療を受けていない対象、またはその状態を発症するリスクがある対象であり得る。
【0038】
「機能的」という用語は、「均等物」、「類似体」、「誘導体」または「変異体」または「断片」とともに使用する場合、均等物、類似体、誘導体、変異体またはその断片である実体または分子の生物学的活性と実質的に類似する生物学的活性を有する実体または分子を指す。
【0039】
本発明によれば、「放射線療法」または「放射線治療」という用語は、Ｘ線、ガンマ線、電子ビーム、またはプロトンなどの高エネルギー粒子または波を使用して、がん細胞を破壊もしくは損傷させるか、またはがん細胞の増殖や分裂を防ぐがん治療を指す。放射線療法の他の名称には、照射またはＸ線療法が含まれる。放射線は、単独で、または外科手術または化学療法などの他の治療と併用することができる。がんの種類と場所によって、放射線療法を施す３つの異なる方法すなわち、外部放射線、内部放射線、全身放射線もある。患者は、同じがんに対して複数の種類の放射線療法を受ける場合がある。
【0040】
外部放射線（または外部ビーム放射線）治療は、身体の外側から高エネルギー線を腫瘍に向ける機械を使用する。外部放射線治療は、通常、直線加速器（しばしば、略して「リニアック」と呼ばれる）と呼ばれる機械で実施する。外部放射線治療の種類としては、標準的な外部ビーム放射線治療、従来の外部ビーム放射線治療（２ＤＸＲＴ）、画像誘導放射線療法（ＩＧＲＴ）、３次元コンフォーマル放射線療法（３Ｄ－ＣＲＴ）、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）、ヘリカルトモセラピー、回転型強度変調放射線治療（ＶＭＡＴ）、粒子線治療、陽子線治療、重粒子線治療、コンフォーマル陽子線放射線療法、オーガー療法（ＡＴ）、術中放射線療法（ＩＯＲＴ）、定位放射線療法、定位放射線手術（ＳＲＳ）、及び体幹部定位放射線治療（ＳＢＲＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。ＳＲＳを実施する３つの異なる方法がある。すなわち、最も一般的なタイプでは、コンピュータによって制御されて回転し、様々な角度から腫瘍を標的にする、可動式リニアック（例えば、Ｘ－ＫＮＩＦＥ、ＣＹＢＥＲＫＮＩＦＥ、及びＣＬＩＮＡＣ）を使用する。第２のタイプはガンマナイフであり、これは、約２００の小ビームを使用して異なる角度から短時間、腫瘍に向け、高用量放射線照射を行う。第３のタイプは、重い荷電粒子ビーム（プロトンまたはヘリウムイオンビームのような）を使用して腫瘍に照射する。
【0041】
内部放射線治療（近接照射療法とも呼ばれる）は、体内の腫瘍の中または近くに置いた放射線源を使用する。近接照射療法の主なタイプは、腔内照射及び組織内照射である。これらの方法はどちらも、ペレット、シード、リボン、ワイヤー、針、カプセル、バルーンまたはチューブなどの放射性インプラントを使用する。高線量率（ＨＤＲ）近接照射療法は、アプリケータに置いた強力な放射線源を用いて一度に数分しか治療することができず、数分後に放射線源が除去される。低線量率の近接照射療法では、インプラントを使用して、より低線量の放射線を長期間にわたって放出する。
【0042】
全身的放射線治療では、特定の種類のがんを治療するために放射性薬物（放射性医薬品と呼ばれる）を使用する。これらの薬物は、口から投与することもできるし、静脈に入れることもでき、その後、これらの薬物は体内中を移動する。これらの放射線源は、放射性物質からなる液体の形態であり、これらの放射線源をがん及び腫瘍に導く標的化剤と結合させることもある。例えば、モノクローナル抗体を用いて、放射性物質をがん細胞に標的化すること、すなわち、放射免疫療法を行うことができる。放射免疫療法は、モノクローナル抗体が放射性物質に結合した全身的放射線治療の一種である。モノクローナル抗体は、がん細胞にしか見られない特定の因子を認識するように設計された人工のタンパク質であり、低線量の放射線を腫瘍に直接照射しながら非がん細胞のみを残すことができる。例示的な放射免疫療法としては、イブリツモマブ（ゼバリン）及びトシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ）が挙げられる。放射性同位体療法（例えば、放射性ヨード、ストロンチウム、サマリウム、ストロンチウム－８９、サマリウム（１５３Ｓｍ）レキシドロナム、及びラジウム）は、甲状腺、骨及び前立腺癌などの特定のタイプのがんを治療するために使用する、別のタイプの全身照射である。放射性同位元素治療の例としては、メタヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、ヨウ素－１３１、ホルモン結合ルテチウム－１７７及びイットリウム－９０、イットリウム－９０放射性ガラスまたは樹脂ミクロスフェア、イブリツモマブ チウキセタン（ゼバリン、イットリウム－９０にコンジュゲートした抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）、トシツモマブ／ヨウ素（１３１Ｉ）トシツモマブレジメン（ＢＥＸＸＡＲ、ヨウ素１３１標識及び非標識抗ＣＤ２０モノクローナル抗体の組合せ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0043】
放射線療法線量は、多分割放射線療法及び少分割放射線療法など、異なる方法で与えてもよい。多分割放射線療法では、放射線の総線量は小線量に分割され、治療は１日に１回以上行う。多分割放射線療法は、標準的な放射線療法と同じ時間（日または週の期間）にわたって行われる。多分割放射線療法は、超分画放射線療法とも呼ばれる。多分割放射線療法の１つのタイプは、連続過分割加速放射線治療（ＣＨＡＲＴ）である。週末に治療を行わないＣＨＡＲＴは、ＣＨＡＲＴＷＥＬと呼ばれる。少分割放射線療法では、放射線の総線量は大きな線量に分割され、治療は１日にまたはそれ以下の頻度で行う。少分割放射線療法は、標準的な放射線療法よりも短い時間（より少ない日または週の期間）にわたって行う。
【0044】
種々の実施形態では、本発明者らは、放射線感受性を補助するために、（例えば、ＴＲＣ１０５を用いて）エンドグリンに拮抗する。固形腫瘍の放射線療法におけるＢＭＰシグナル伝達の役割に関する本発明者らの知見には、多数の新規な側面がある、すなわち、１）本発明者らは、ＢＭＰシグナル伝達が、放射線の結果としてアップレギュレートされることを初めて見出した。２）ＢＭＰシグナル伝達はまた、放射線生存を補助することができる。３）さらに、癌腫関連線維芽細胞によるＢＭＰシグナル伝達は、腫瘍生存のメディエーターである。４）エンドグリンに拮抗することによってＢＭＰシグナル伝達に拮抗することにより、腫瘍とその微小環境との相互作用の結果として、放射線に対する腫瘍感受性化がもたらされる。これらの知見は、結腸、乳房、黒色腫、及び肺を含む任意の固形腫瘍型に適用可能であり得る。
【0045】
種々の実施形態では、本発明者らは、ホルモン療法に対する耐性を担うアンドロゲン受容体スプライスバリアントの発現を制限するために、（例えば、ＴＲＣ１０５を用いて）エンドグリンに拮抗する。アンドロゲン除去療法（ＡＤＴ）は、エンザルタミド及びアビラテロンを含み、一次切除療法後の再発性前立腺癌の最も一般的な治療法である。ＡＤＴは、不適切にスプライシングされたＡＲ発現の増加と関連している。ＴＧＦ－β間質応答性は、隣接する前立腺上皮におけるアンドロゲン感受性を決定することが示されている。前立腺癌間質組織におけるＴＧＦ－β応答の喪失は、アンドロゲン受容体スプライスバリアント（ＡＲｖ）の発現に関連する。ＡＲｖは核に移動し、リガンド非依存的にアンドロゲン応答性遺伝子を活性化することができ、それにより治療耐性を誘発する。過去において、前立腺癌上皮におけるＩＬ－６発現により、その上皮自体にＡＲｖの発現がもたらされ、ＡＤＴ耐性に寄与することが示されている。本発明者らは、前立腺線維芽細胞におけるＴＧＦ－β応答の喪失によって、ＡＲｖ発現の機序においてＮｏｔｃｈ及びＣＤ１０５シグナル伝達が同時に生じることを見出した。本発明者らは、（例えばＴＲＣ１０５を用いて）エンドグリンに拮抗することにより、Ｎｏｔｃｈ及びＩＬ－６媒介性ＡＲｖ発現をダウンレギュレートできることを見出した。本発明者らのインビボデータは、ＴＲＣ１０５とＡＤＴとの組み合わせが、前立腺癌モデルにおいていずれか単独のものより優れていることを示した。同様の結果は、ＥＲ＋がんのＳＥＲＭ（選択的エストロゲン受容体モジュレーター）との関連で乳癌でも起こりうる。
【0046】
種々の実施形態では、本発明者らは、がん上皮の幹特性を低下させるために、（例えば、ＴＲＣ１０５を用いて）エンドグリンに拮抗する。本発明者らのデータは、前立腺上皮において、がん幹細胞マーカー（例えば、ＣＤ４４、ＡＬＤＨ、Ｏｃｔ４、及びＳｏｘ）及びスフィア形成単位（幹特性の別の指標）がダウンレギュレートされることを示す。この観察の意義は、がん細胞における幹機能の獲得が、治療耐性及び転移性進行と関連しているということである。したがって、がんを治療するために、本発明者らは、ＴＲＣ１０５を化学療法（例えば、タキサン、ビンブラスチン、及びプラチナベースの薬物）と組み合わせる。
【0047】
種々の実施形態では、本発明者らは、腫瘍を除去するために乳房形成手術（根治的または小葉）を受ける乳癌患者における局所再発の発生を制限するために、（例えば、ＴＲＣ１０５を用いて）エンドグリンに拮抗する。増殖している脈管構造（多くの場合ＣＤ１０５を発現する）は、隣接する乳癌細胞の増殖を促進することが実証されている。したがって、このような血管内皮をＴＲＣ１０５によって阻害することは、有益であり得る。他の固形腫瘍の場合も、外科的切除後のＴＲＣ１０５の予防的使用から同様に利益を得ることができる。
【0048】
前立腺癌（ＰＣａ）は、男性において２番目に高いがん死亡率をもたらす異種疾患である。ほとんどの限局性前立腺癌の標準治療は、放射線療法または外科的切除である。放射線はまた、外科手術の補助療法として、また骨転移のための緩和的治療においても使用される。放射線アブレーション治療を受けた限局性前立腺癌患者の３０％までが再発性放射線耐性疾患を発症する。さらに、生化学的再発後に救助放射線療法を受ける患者の５０％は、疾患の進行を有するであろう。放射線毒性は治癒用量を達成する上での大きな障害である。
【0049】
再発性ＰＣａの標準治療は、アンドロゲンシグナル伝達の中断である。後期ＰＣａの治療法は、アンドロゲン合成またはアンドロゲン受容体を遮断することにより、アンドロゲン軸を標的とする。ＡＴＴの初期効能にもかかわらず、ＰＣａは耐性になり、多くの患者は、特徴的な神経内分泌特性を有する去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を発症する。アンドロゲン標的療法（ＡＴＴ）に対する最終的な耐性の発生には、現在治癒的アプローチがなく、したがって、当技術分野においてアンメットニーズが存在する。
【0050】
本発明者らは、腫瘍増大を補助するその能力に基づいて、ＣＡＦと名付けたものを構成する様々な線維芽細胞集団を同定した。共通の間葉系細胞表面マーカーを介して同定された様々な線維芽細胞集団のうち、ＣＤ１０５を発現する細胞集団は、既存の腫瘍上皮の増大に重要であり、さらにＰＣａにおける神経内分泌機能を４つの方法で促進することが判明した：１）２つの非腫瘍増強ＮＡＦ及びＣＡＦＨｉＰとＰＣａ上皮との組換えは、腫瘍誘導性ＣＡＦにおけるのと同様の腫瘍を生じ、２）ヒトＰＣａ組織で同定されたＣＤ１０５の濃縮は、ＡＴＴによってさらに強化され、３）ＣＤ１０５＋ＣＡＦの局在化はＮＥＤの領域に限定され、４）３Ｄ培養及びマウス実験におけるＣＤ１０５中和抗体の使用により、アンドロゲン軸標的化との関連において上皮増大が低減した。本発明者らは、ＣＡＦＨｉＰにおけるＣＤ１０５集団の減少と、インビボでの腫瘍増大の低減とを相関させた。ここで、培養に関連する細胞集団ドリフトを利用して、ＣＤ１０５の変化を明らかにした。しかし、この培養関連ドリフトは、組織で観察されたものとは反対に、ＣＤ９０＋集団の変化を含んでいた。ＡＴＴによって誘導された間質ＣＤ１０５の変化は、パラクリンシグナル伝達を介して上皮ＮＥＤを媒介することが見出された。
【0051】
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＡＴＴとＣＤ１０５の拮抗作用の組み合わせは、合成致死性の例である。進行ＣＲＰＣにおけるＡＴＴ耐性は、腫瘍の不均質性に関連する可変応答のために生じることが知られている。本発明者らは、ＣＤ１０５の亢進がＡＴＴ誘発ＮＥＤのメディエーターであることを見出した。これらの研究において、本発明者らは、ＣＤ１０５線維芽細胞集団が、アンドロゲンが切除された状態で生存する潜在的手段としてＳＦＲＰ１を発現することを確認した。ＣＤ１０５に拮抗することにより、前立腺腫瘍のＳＦＲＰ１発現及びＮＥＤを阻害した。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＳＦＲＰ１は、増殖維持と幹様の特徴とのバランスに関与している可能性が高い。以前の研究では、ＳＦＲＰ１が、古典的マーカーであるオーロラキナーゼ、ｎ－ｍｙｃ、及びセクレトグラニン－３を含むＰＣａ細胞において神経内分泌シグネチャーを増強することが、本発明者らによって見出された（Ｂｅｌｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｊ Ａｍｅｒ Ｓｏｃ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３０， ｅ３８６－３８９）。さらに、ＣＲＰＣの組織組換え異種移植モデルでは、去勢とそれに続くエンザルタミド治療は、腫瘍増殖を有意に減少させなかったが、間質のない単層における同じ上皮は、エンザルタミド治療に対して感受性であった。したがって、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、間質線維芽細胞の役割は、ＣＲＰＣのパラクリン介在性発症に必要である。
【0052】
元々、増殖する内皮において同定されたＩＩＩ型ＴＧＦβ／ＢＭＰ共受容体であるエンドグリン（ＣＤ１０５）は、前立腺癌を含むいくつかのがんにおいてアップレギュレートされる。ＣＤ１０５は、ＴＧＦ－βシグナル伝達に拮抗し、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達を促進し、ＴＧＦ－βシグナル伝達に拮抗する。種々のがんにおけるＣＤ１０５発現は、従来の治療法における進行、転移、攻撃性、及び回避と相関している。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、本発明者らは、ＣＤ１０５の標的化が、前立腺癌を、がん療法に対して感受性化させると考えている。実証するために、本発明者らは、ＢＭＰシグナル伝達をブロックする、部分的にヒト化されたモノクローナル抗体である、ＴＲＣ１０５を使用した。
【0053】
本明細書中に記載するように、本発明者らは、ＣＤ１０５発現前立腺線維芽細胞が、腫瘍誘導性ＣＡＦを富化し、アンドロゲン標的療法（ＡＴＴ）によりさらに増幅され、パラクリン様式でＣＲＰＣに寄与すると同定した。線維芽細胞性ＣＤ１０５は、前立腺腫瘍の進行及び神経内分泌の分化を高める。中和抗体でＣＤ１０５に拮抗することにより、ＣＡＦによるＳＦＲＰ１発現をダウンレギュレートする。
【0054】
さらに、本発明者らは、ＴＲＣ１０５を用いたＢＭＰ／ＣＤ１０５シグナル伝達の阻止により、ＳＩＲＴ１発現及びその下流の制御タンパク質である、ｐ５３及びペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ共活性化因子１α（ＰＧＣ１α）が阻害されることを実証する。
【0055】
したがって、ＣＤ１０５に拮抗することにより、ＰＣａ腫瘍を、ＡＴＴ及び放射線に対して感受性化させる。
【0056】
本発明は、これらの知見に少なくとも部分的に基づいている。実施形態は、対象においてがんを感受性化させる方法、及び対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法の、当該技術における必要性に取り組む。実施形態はさらに、がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法を提供する。
【0057】
がんを感受性化させる方法
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを感受性化させることを含む方法を提供する。種々の実施形態では、この方法は、がん療法を施すことをさらに含む。種々の実施形態では、この方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む。
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを感受性化させることを含む方法を提供する。種々の実施形態では、この方法は、がん療法を施すことをさらに含む。種々の実施形態では、この方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む。
【0058】
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを感受性化させることを含む方法を提供する。種々の実施形態では、この方法は、がん療法を施すことをさらに含む。種々の実施形態では、この方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定することをさらに含む。
【0059】
本発明の種々の実施形態は、がん療法に応答しない対象においてがんを感受性化させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを感受性化させることを含む方法を提供する。種々の実施形態では、この方法は、がん療法を施すことをさらに含む。
【0060】
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象においてがんを感受性化させる方法であって、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与する前に、がん治療に対してがんを感受性化させる必要がある対象を特定すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを感受性化させることを含む方法を提供する。種々の実施形態では、この方法は、がん療法を施すことをさらに含む。種々の実施形態では、対象は以前にがん療法を受けたことがある。
【0061】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がんは、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の実施形態では、がんは、前立腺癌である。種々の実施形態では、がんは、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）である。
【0062】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0063】
種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、対象は、ＣＤ１０５アンタゴニストの投与及びがん療法によって治療する。
【0064】
種々の実施形態では、本発明は、対象におけるがんを、がん療法に対して感受性化させる方法を提供する。方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを、がん治療に対して感受性化させることを含む。種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、この方法は、がん療法で対象を治療することをさらに含む。
【0065】
治療方法
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
本発明の種々の実施形態は、それを必要とする対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
【0066】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がんは、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の他の実施形態では、がんは、前立腺癌である。種々の実施形態では、がんは、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）である。
【0067】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0068】
種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
【0069】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法を提供する。方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、及び対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、それによってがんを、がん治療に対して感受性化させること、及び対象にがん療法を施して、これにより、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む。種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
【0070】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法を提供する。方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、及び対象にがん療法を施して、これにより、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む。種々の実施形態ではがん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
【0071】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、去勢抵抗性前立腺癌を治療し、去勢抵抗性前立腺癌の進行を遅らせ、去勢抵抗性前立腺癌の重症度を低下させ、去勢抵抗性前立腺癌の再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法を提供する。方法は、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、対象にアンドロゲン標的療法を施して、これにより、対象において、去勢抵抗性前立腺癌を治療し、去勢抵抗性前立腺癌の進行を遅らせ、去勢抵抗性前立腺癌の重症度を低下させ、去勢抵抗性前立腺癌の再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む。種々の実施形態では、アンドロゲン標的療法はエンザルタミドである。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、抗原は、ＣＤ１０５である。種々の実施形態では、抗原は、エンドグリンである。
【0072】
再発の防止及び／または再発の可能性の低減
本発明の種々の実施形態は、がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
本発明の種々の実施形態は、がん療法により治療を受けている対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
【0073】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がんは、放射線及び／またはアンドロゲン標的療法に耐性である。種々の実施形態では、がんは、前立腺癌である。種々の実施形態では、がんは、去勢抵抗性前立腺癌である。
【0074】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、抗原は、ＣＤ１０５である。種々の実施形態では、抗原は、エンドグリンである。
【0075】
種々の実施形態では、がん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、がん療法は、以前に対象に施されたがん療法と同じである。種々の実施形態では、がん療法は、以前に対象に施されたがん療法と異なっている。
【0076】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法を提供する。方法は、ＣＤ１０５アンタゴニストを提供すること、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与し、これにより、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む。種々の実施形態では、対象は以前にがん療法を受けたことがある。種々の実施形態では、がん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、がん療法は、がんまたはがんの少なくとも一部を除去する外科手術である。いくつかの実施形態では、対象は、がんを除去する外科手術、またはがんの少なくとも一部を除去する外科手術による治療を受けたことがある。一実施形態では、外科手術は乳房切除術である。別の実施形態では、外科手術は睾丸切除術である。
【0077】
本発明の種々の実施形態は、がん療法により治療を受けている対象において、去勢抵抗性前立腺癌の再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させる方法であって、対象にＣＤ１０５アンタゴニストを投与すること、及びがん療法を対象に施し、これにより、去勢抵抗性前立腺癌の再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させることを含む方法を提供する。
【0078】
種々の実施形態では、対象はヒトである。種々の実施形態では、対象は、ヒト、サル、サル、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、ウサギ、マウス及びラットを含むが、これらに限定されない哺乳動物対象である。
【0079】
種々の実施形態では、がんは、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、腎細胞癌、黒色腫、肉腫、頭頸部癌、膠芽腫、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、がんは、前立腺癌である。種々の実施形態では、がんは、去勢抵抗性前立腺癌である。他の実施形態では、がんは、乳癌である。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びがん療法は、連続的に、代替的にまたは同時に投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びがん療法は、連続的に投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びがん療法は、代替的に投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びがん療法は、同時に投与する。種々の実施形態では、複数のがん療法を施すことができる。
【0080】
本明細書で使用する「連続的に」または「連続投与される」という用語は、第１の治療薬が投与され、続いて第２の治療薬が投与されるように、治療薬（すなわち、ＣＤ１０５アンタゴニストまたはがん療法）を順番に投与することを指す。例えば、ＣＤ１０５アンタゴニストを投与した後にがん療法を投与するか、またはその逆を行う。様々な実施形態において、第１の治療薬の投与は、第２の治療薬の投与の直前、１分、５分、１０分、２０分、３０分または４５分前に投与することができる。その他の実施形態では、第１の治療薬は、第２の治療薬の１時間前、２時間前、３時間前、４時間前、５時間前、６時間前、１２時間前または２４時間前に投与する。さらにその他の実施形態では、第１の治療薬は、第２の治療薬の２日前、３日前または４日前に投与する。
【0081】
本明細書で使用する「代替的」という用語は、第２の治療薬に対する第１の治療薬の投与を指し、逆もまた同様である。
【0082】
本明細書で使用する「同時に」という用語は、一時に／一緒に、第１の治療薬及び第２の治療薬を投与することを指す。いくつかの実施形態では、治療薬は単一の組成物である。種々の実施形態では、治療薬は別々の組成物中にある。
【0083】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１日１回、１日２回、１週間に１回、１週間に２回、２週間に１回、３週間に１回、または１か月に１回投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与する。種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、腫瘍がもはや検出されなくなるまでの期間、投与する。いくつかの実施形態では、腫瘍の検出には、Ｘ線撮影及び／または血液検査が含まれるが、これらに限定されない。
【0084】
種々の実施形態では、がん療法は、特定の治療のための標準的治療のために確立された期間にわたって投与する。種々の実施形態では、がん療法は、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月またはこれらの組み合わせの期間投与する。種々の実施形態では、がん療法は、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、またはこれらの組み合わせの期間投与する。
【0085】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、がん療法と並行して投与する。例えば、ＣＤ１０５アンタゴニストを週に１回投与し、がん療法を１か月間投与する場合、ＣＤ１０５アンタゴニストは、それを必要とする対象に４回投与する。
【0086】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は１か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は２か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は４か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は８か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は１年間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、１週間に１回投与し、がん療法は１年以上にわたって投与する。
【0087】
種々の他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は１か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は２か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は４か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は８か月間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は１年間投与する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、２週間に１回投与し、がん療法は１年以上にわたって投与する。
【0088】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、がん療法の投与前、投与中、投与後に投与する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、がん療法の投与前に投与する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、がん療法の投与中に投与する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、がん療法の投与後に投与する。
【0089】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。他の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。種々の実施形態では、抗体は、任意の動物由来であり得る。動物由来の例としては、ヒト、非ヒト霊長類、サル、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ及びロバが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。種々の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、抗原は、ＣＤ１０５である。種々の実施形態では、抗原は、エンドグリンである。
【0090】
種々の実施形態では、がんは、機能性ｐ５３を有する。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストの投与は、がんを有する対象におけるＡＴＰの枯渇をもたらす。種々の実施形態では、機能性ｐ５３を有するがんにおけるＡＴＰの枯渇は、放射線感受性化をもたらす。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0091】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストの投与によって観察される感受性化は、非血管機構を介して起こる。
【0092】
いくつかの実施形態では、がん療法は外科手術である。種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象を外科手術することを含む。種々の実施形態では、外科手術はがんを除去する。特定の実施形態では、外科手術は乳房切除術である。特定の実施形態では、外科手術は睾丸切除術（外科的去勢）である。
【0093】
いくつかの実施形態では、がん療法は放射線療法である。種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象に放射線を投与することを含む。種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象に放射線治療薬を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び放射線治療薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び放射線治療薬は、別々の組成物で提供される。
【0094】
種々の実施形態では、放射線療法は、焦点式照射療法、外部ビーム放射線治療、従来の外部ビーム放射線治療（２ＤＸＲＴ）、画像誘導放射線療法（ＩＧＲＴ）、３次元コンフォーマル放射線療法（３Ｄ－ＣＲＴ）、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）、ヘリカルトモセラピー、回転型強度変調放射線治療（ＶＭＡＴ）、粒子線治療、陽子線治療、コンフォーマル陽子線放射線療法、オーガー療法（ＡＴ）、定位放射線療法、定位放射線手術（ＳＲＳ）、体幹部定位放射線治療（ＳＢＲＴ）、近接照射療法、内部放射線療法、術中放射線療法（ＩＯＲＴ）、放射線免疫療法、放射性同位元素治療、多分割放射線療法もしくは少分割放射線療法、またはそれらの組み合わせである。
【0095】
対象に投与する有効量の放射線の典型的な投与量は、製造業者、放射線生物学者、放射線腫瘍医または医学物理学者によって推奨される、既知の放射線療法技術が使用される範囲内、及び細胞におけるインビトロ応答もしくは動物モデルにおけるインビボ応答によって当業者に示される範囲内であり得る。このような投与量は、典型的には、関連する生物活性を失うことなく、濃度または量を最大約１桁低下させることができる。実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び例えば、関連する培養細胞または組織培養による組織試料のインビトロ応答性、または適切な動物モデルで観察される応答に基づく放射線療法技術の有効性に依存し得る。例えば、膵臓癌のマウスモデルは、ＳｏｎＲｘ技術を用いたエネルギー応答性の薬剤送達、及びＸ－ＲＡＤ小動物照射装置を用いた焦点式照射療法に供してもよい。ＳｏｎＲｘ技術及び放射線療法における担体、薬剤、超音波及び放射線に関する適切なパラメータ（例えば、それらの種類、投与量及びタイミング）を、臨床転帰及び治療可能比を最大化するために特定し、これらのデータは、ヒトにおける臨床試験及び治療へ転換する基礎として利用する。本発明のいくつかの実施形態では、典型的なインビトロ及びインビボの用量は、１Ｇｙ～５０Ｇｙの範囲の全治療用量で、５０ｃＧｙ～８Ｇｙの１日分割分の範囲であり得る。
【0096】
種々の実施形態では、放射線量は、約１～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、または９０～１００ｃＧｙの１日治療線量を有する。種々の実施形態では、放射線量は、約０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、または９～１０Ｇｙの１日治療線量を有する。種々の実施形態では、放射線量は、約１～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、または９０～１００Ｇｙの１日治療線量を有する。種々の実施形態では、放射線量は、約０．１～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、または９～１０Ｇｙの全治療線量を有する。種々の実施形態では、放射線量は、約１～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、または９０～１００Ｇｙの全治療線量を有する。
【0097】
いくつかの実施形態では、がん療法は化学療法である。種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象に化学療法薬を施すことを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び化学療法薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び化学療法薬は、別々の組成物で提供される。
【0098】
種々の実施形態では、がん療法は、チロシンキナーゼ阻害剤を含まない。種々の実施形態では、がん療法は、アキシチニブを含まない。種々の実施形態では、がん療法は、パゾパニブを含まない。種々の実施形態では、がん療法は、ソラフェニブを含まない。
【0099】
いくつかの実施形態では、がん療法はホルモン療法である。種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象にホルモン治療薬を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びホルモン治療薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びホルモン治療薬は、別々の組成物で提供される。ある種の実施形態では、ホルモン治療薬は、エンザルタミドである。ある種の実施形態では、ホルモン治療薬は、アビラテロンである。種々の実施形態では、ＴＲＣ１０５及びアビラテロンを、対象に投与する。
【0100】
いくつかの実施形態では、ホルモン療法は、アンドロゲン除去療法である。他の実施形態では、ホルモン療法はアンドロゲン標的療法（ＡＴＴ）である。本発明によれば、アンドロゲン除去療法（ＡＤＴ、アンドロゲン抑制療法とも呼ばれる）は、前立腺癌を治療するためのホルモン療法を指す。前立腺癌細胞は、通常、テストステロンなどのアンドロゲンホルモンが増殖することを必要とする。ＡＤＴは、薬物または外科手術によりアンドロゲンホルモンのレベルを低下させて前立腺癌細胞の増殖を防ぐ。手術アプローチには、睾丸切除（外科的去勢）が含まれる。薬学的アプローチには、抗アンドロゲン及び化学去勢が含まれる。
【0101】
種々の実施形態では、がん療法を施すことは、対象に第２の治療薬を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び第２の治療薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び第２の治療薬は、別々の組成物で提供される。種々の実施形態では、第２の治療薬は、放射線治療薬、化学療法薬、またはホルモン治療薬、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は放射線治療薬である。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は化学治療薬である。いくつかの実施形態では、第２の治療薬はホルモン治療薬である。
【0102】
本発明によれば、本発明によれば、化学治療薬の例としては、テモゾロマイド、アクチノマイシン、アリトレチノイン、オールトランスレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ベバシズマブ、ベキサトテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、セツキシマブ、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、例えばＤｏｘｉｌ（ペグ化形態）、Ｍｙｏｃｅｔ（非ペグ化形態）及びＣａｅｌｙｘなどのリポソーム封入ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エルロチニブ、エトポシド、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イピリムマブ、イリノテカン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オクレリズマブ、オファツムマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、パニツマブ、ペメトレキセド、リツキシマブ、タフルポシド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、トレチノイン、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、ロミデプシン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、クラドリビン、クロファラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ペントスタチン、マイトマイシン、イクサベピロン、エストラムスチン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾンまたはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、化学治療薬はタキサンである。タキサンの例としては、パクリタキセル、タンパク質結合パクリタキセル、ナブパクリタキセル、ドセタキセル、及びカバジタキセルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、化学療法剤はビンカアルカロイドである。ビンカアルカロイドの例としては、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、化学療法剤は白金系薬剤である。白金系薬物の例としては、オキサリプラチン、シスプラチン、リポプラチン、（シスプラチンのリポソーム型）、カルボプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、及びトリプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、化学療法剤はアントラサイクリンである。アントラサイクリンの例としては、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、バルルビシン、及びミトキサントロンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、担体に負荷される化学療法剤は、ドキソルビシン、またはその機能的同等物、類似体、誘導体、変異体もしくは塩、またはそれらの組み合わせである。
【0103】
本発明によれば、ホルモン治療薬の例としては、抗アンドロゲン、ＶＴ－４６４、ＯＤＭ－２０１、ガレテロン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エンザルタミド、アパルタミド（ＡＲＮ－５０９）、酢酸シプロテロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、スピロノラクトン、カンレノン、ドロスピレノン、ケトコナゾール、トシルタミド（フルリジル（Ｆｌｕｒｉｄｉｌ））、シメチジンなどのＡＲアンタゴニスト；テストステロンエステル（テストステロンエナンテート、プロピオネート、またはシピオネートなど）、エノボサーム（Ｏｓｔａｒｉｎｅ、ＭＫ－２８６６、ＧＴｘ－０２４）、ＢＭＳ－５６４，９２９、ＬＧＤ－４０３３、ＡＣ－２６２，３５６、ＪＮＪ－２８３３０８３５、ＬＧＤ－２２２６、ＬＧＤ－３３０３、Ｓ－４０５０３、Ｓ－２３、及びアンダリン（Ｓ－４）などの選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）；フィナステリド、デュタステリド、アルファトラジオール、及びノコギリヤシ抽出物などの５α－レダクターゼ阻害剤；酢酸シプロテロン、スピロノラクトン、ダナゾール、ゲストリノン、ケトコナゾール、アビラテロン、及び酢酸アビラテロンのようなＣＹＰ１７Ａ１（１７α－ヒドロキシラーゼ、１７，２０－リアーゼ）阻害剤；ダナゾール、ゲストリノン、及び酢酸アビラテロンなどの３β－ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ阻害剤；ダナゾール及びシンバスタチンなどの１７β－ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ阻害剤；アミノグルテチミド、ダナゾールなどのＣＹＰ１１Ａ１（コレステロール側鎖開裂酵素）阻害剤；スタチン（例えば、アトルバスタチン、シンバスタチン）などのＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ阻害剤；抗ゴナドトロピン、プロゲステロン、酢酸シプロテロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、スピロノラクトン及びドロスピレノンなどのプロゲストゲン；エストラジオール、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、及び結合型ウマエストロゲンなどのエストロゲン；ＧｎＲＨ類似体、ブセレリン、デスロレリン、ゴナドレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、リュープロレリン、ナファレリン、トリプトレリンなどのＧｎＲＨアゴニスト；アバレリクス、セトロレリックス、デガレリクス、及びガニレリクスなどのＧｎＲＨアンタゴニスト；アナボリックステロイド（例えば、ナンドロロン、オキサンドロロン）；ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ヒストレリン、及びデガレリクスが挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの薬剤は、複数の作用機序を介して作用することができ、従って、複数のカテゴリーの例として挙げられる。
【0104】
用法及び用量
本明細書に記載されている治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量の典型的な投与量は、製造者によって推奨される、既知の治療分子または化合物が使用される範囲内、及び細胞におけるインビトロ応答もしくは動物モデルにおけるインビボ応答によって当業者に示される範囲内であり得る。このような投与量は、典型的には、関連する生物活性を失うことなく、濃度または量を最大約１桁低下させることができる。実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び例えば、関連する培養細胞または組織培養による組織試料のインビトロ応答性、または適切な動物モデルで観察される応答に基づく治療方法の有効性に依存し得る。種々の実施形態では、治療薬は、１日１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）、またはそれ以上投与され、こうして対象に有効量の治療薬を投与し、有効量は、本明細書に記載の投与量のいずれか１つまたは複数である。
本明細書に記載されている治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量の典型的な投与量は、製造者によって推奨される、既知の治療分子または化合物が使用される範囲内、及び細胞におけるインビトロ応答もしくは動物モデルにおけるインビボ応答によって当業者に示される範囲内であり得る。このような投与量は、典型的には、関連する生物活性を失うことなく、濃度または量を最大約１桁低下させることができる。実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び例えば、関連する培養細胞または組織培養による組織試料のインビトロ応答性、または適切な動物モデルで観察される応答に基づく治療方法の有効性に依存し得る。種々の実施形態では、治療薬は、１日１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）、またはそれ以上投与され、こうして対象に有効量の治療薬を投与し、有効量は、本明細書に記載の投与量のいずれか１つまたは複数である。
【0105】
種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｋｇまたはそれらの組み合わせで投与する。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｍ２またはそれらの組み合わせで投与する。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、１回、２回、３回またはそれ以上の回数で投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、１日に１～３回、１週間に１～７回、１か月に１～９回、または１年に１～１２回投与する。さらにいくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、約１～１０日、１０～２０日、２０～３０日、３０～４０日、４０～５０日、５０～６０日、６０～７０日、７０～８０日、８０～９０日、９０～１００日、１～６か月、６～１２か月、または１～５年投与する。ここで、「ｍｇ／ｋｇ」とは、対象の体重１ｋｇあたりのｍｇを意味し、「ｍｇ／ｍ２」は対象の体表面積１ｍ２当たりのｍｇを指す。
【0106】
種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００μｇ／ｋｇ／日のうちのいずれか１つまたは複数、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００μｇ／ｍ２／日のうちのいずれか１つまたは複数、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｋｇ／日のうちのいずれか１つまたは複数、またはそれらの組み合わせである。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）の有効量は、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｍ２／日のうちのいずれか１つまたは複数、またはそれらの組み合わせである。ここで、「μｇ／ｋｇ／日」または「ｍｇ／ｋｇ／日」とは、１日あたりの対象の体重１ｋｇあたりのμｇまたはｍｇを指し、「μｇ／ｍ２／日」または「ｍｇ／ｍ２／日」とは、１日あたりの対象の体表面積１ｍ２あたりのμｇまたはｍｇを指す。
【0107】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、がんの治療段階で（すなわち、対象が既にがんを発症している場合）投与してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、がんの維持段階で（すなわち、対象が既にがん寛解を達成する過程にある場合）投与してもよい。他の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、がんの再発予防段階で（すなわち、対象ががんの再発を起こさないが、がん再発を発症する可能性のある、またはその過程にある場合）投与してもよい。
【0108】
種々の実施形態では、対象に第２の治療薬を投与する。種々の実施形態では、第２の治療薬は、放射線治療薬、化学療法薬、またはホルモン治療薬、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は放射線治療薬である。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は化学治療薬である。いくつかの実施形態では、第２の治療薬はホルモン治療薬である。
【0109】
種々の実施形態では、組成物中の第２の治療薬は、対象の体重１ｋｇ当たりｍｇ、例えば、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｋｇで提供する。種々の実施形態では、組成物中の第２の治療薬は、対象の体表面積１ｍ２あたりｍｇ、例えば、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｍ２で提供する。
【0110】
本発明によれば、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、適切な投与様式、例えば、治療薬それぞれに対し製造者が推奨する投与様式を用いて投与することができる。本発明によれば、種々の経路を利用して、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）を投与することができる。「投与経路」とは、経口、局所、エアロゾル、鼻内、吸入による、肛門、肛門内、肛門周囲、経粘膜、経皮、非経口、経腸、連続注入による、または埋め込み型ポンプもしくはリザーバによる、または局所投与を含むがこれらに限定されない、当該分野で既知の任意の投与経路を指してもよい。「非経口」は、一般に、注射に関連する投与経路を指し、腫瘍内、頭蓋内、脳室内、髄腔内、硬膜外、硬膜内、眼窩内、眼内、注入、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内、くも膜下腔内、子宮内、血管内、静脈内、動脈内、くも膜下腔、嚢下、皮下、経粘膜、または経気管注射を含む。非経口経路を介して、薬剤または組成物は、注入または注射用の溶液または懸濁液の形態であってもよく、または凍結乾燥粉末として存在してもよい。経腸経路を介する薬剤または組成物は、カプセル剤、ゲルカプセル剤、錠剤、糖衣錠、シロップ剤、懸濁剤、溶液、粉末、顆粒、エマルジョン、制御放出を可能にするマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくは脂質小胞もしくはポリマー小胞の形態であり得る。局所経路を介する薬剤または組成物は、エアロゾル、ローション、クリーム、ゲル、軟膏、懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態であり得る。典型的には、組成物は注射によって投与する。これらの投与のための方法は、当業者に既知である。
【0111】
一実施形態では、薬剤または組成物を粉末形態で提供し、水などの液体と混合して飲料を形成することができる。本発明によれば、「投与すること」は、自己投与することであり得る。例えば、対象が本明細書に開示する組成物を摂取することを「投与する」とみなす。種々の実施形態では、本明細書に記載の治療薬（例えば、ＣＤ１０５アンタゴニスト、放射線治療薬、化学療法薬及びホルモン治療薬）は、頭蓋内に、脳室内に、髄腔内に、硬膜外に、硬膜内に、局所に、腫瘍内に、血管に、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腹腔内に、鼻腔内に、経口で、眼窩内に、または眼内に投与する。
【0112】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。他の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。種々の実施形態では、抗体は、任意の動物由来であり得る。動物由来の例としては、ヒト、非ヒト霊長類、サル、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ及びロバが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。種々の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0113】
種々の実施形態では、組成物中のＣＤ１０５アンタゴニストは、対象の体重１ｋｇ当たりｍｇ、例えば、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｋｇで提供する。種々の実施形態では、組成物中のＣＤ１０５アンタゴニストは、対象の体表面積１ｍ２あたりｍｇ、例えば、約０．００１～０．０１、０．０１～０．１、０．１～０．５、０．５～５、５～１０、１０～２０、２０～５０、５０～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、８００～９００、もしくは９００～１０００ｍｇ／ｍ２で提供する。
【0114】
好ましい治療薬はまた、哺乳動物に投与された場合に、最小限の毒性を示す。
【0115】
種々の実施形態では、組成物は、１回、２回、３回またはそれ以上の回数で投与する。種々の実施形態では、組成物は、１日に１～３回、１週間に１～７回、１か月に１～９回、または１年に１～１２回投与する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１～１０日、１０～２０日、２０～３０日、３０～４０日、４０～５０日、５０～６０日、６０～７０日、７０～８０日、８０～９０日、９０～１００日、１～６か月、６～１２か月、または１～５年投与する。種々の実施形態では、組成物は、１日１回（ＳＩＤ／ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、１日４回（ＱＩＤ）、またはそれ以上投与され、こうして対象に有効量のＣＤ１０５アンタゴニスト及び第２の治療薬を投与し、有効量は、本明細書に記載の投与量のいずれか１つまたは複数である。
【0116】
種々の実施形態では、本発明の治療薬は、任意の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。本明細書で使用する場合、「賦形剤」とは、組成物または処方物を増量する目的で含まれる、組成物または処方物の有効成分と一緒に処方される天然または合成物質である。したがって、「賦形剤」は、多くの場合「増量剤」、「充填剤」または「希釈剤」と呼ばれる。非限定的な例として、本明細書に記載の治療薬に１種または複数の賦形剤を加え、組成物の１回分が１カプセルまたは錠剤に収まるように、組成物の体積またはサイズを増加させることができる。また、「賦形剤」は、活性成分の吸収または溶解を促進するなど、最終剤形中の活性成分を強化することができる。「薬学的に許容される賦形剤」は、一般的に安全で、毒性がなく、望ましい治療薬を調製するのに有用な賦形剤を意味し、獣医学的使用ならびにヒト医薬用途に許容される賦形剤を含む。そのような賦形剤は、固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合にはガス状であり得る。賦形剤の例としては、デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、香料、防腐剤、酸化防止剤、可塑剤、ゲル化剤、増粘剤、硬膜剤、硬化剤、懸濁化剤、界面活性剤、保湿剤、担体、安定剤、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【0117】
種々の実施形態では、治療薬は、任意の薬学的に許容される担体を含み得る。本明細書で使用する「薬学的に許容される担体」とは、目的の化合物を、ある組織、器官、または身体の一部から別の組織、器官、または身体の一部に運搬または輸送することに関与する薬学的に許容される物質、組成物またはビヒクルを指す。例えば、担体は、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、もしくはカプセル化材料、またはそれらの組み合わせであってもよい。担体の各成分は、製剤の他の成分と相溶性がなくてはならないという点で、「薬学的に許容される」ものでなければならない。担体の各成分はまた、接触する可能性がある組織または器官と接触して使用するのに好適でなくてはならず、治療上の利点を過度に上回る毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他のいかなる合併症の危険性をも伴ってはならないことを意味する。
【0118】
治療薬はまた、経口投与用に、カプセル化、錠剤化するか、またはエマルジョンまたはシロップで調製することができる。薬学的に許容される固体または液体担体は、組成物を増強しまたは安定化させるため、または組成物の調製を容易にするために添加し得る。液体担体としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリン、生理食塩水、アルコール及び水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、乳糖、硫酸カルシウム、二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アカシア、寒天またはゼラチンが挙げられる。担体はまた、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートなどの持続放出性材料を、単独で、またはワックスとともに含むことができる。
【0119】
治療薬は、粉末形態のための乾式粉砕、混合、及び配合、必要に応じて、錠剤形態のための粉砕、混合、造粒、及び圧縮、または硬ゼラチンカプセル形態のための粉砕、混合及び充填を含む従来の製薬技術に従って製造する。液体担体を使用する場合、製剤は、シロップ、エリキシル、エマルジョンまたは水性もしくは非水性懸濁液の形態である。そのような液体製剤は、直接経口投与されるか、または軟質ゼラチンカプセルに充填される。
【0120】
治療薬は、治療有効量で送達することができる。正確な治療有効量は、所与の対象における治療の有効性に関して、最も効果的な結果をもたらすであろう組成物の量である。この量は、（活性、薬物動態、薬力学、及び生物学的利用能を含む）治療化合物の特性、（年齢、性別、疾患の種類及び段階、一般的な身体状態、所定の投与量に対する応答性、及び投薬の種類を含む）対象の生理学的状態、製剤中の薬学的に許容される担体（ｃａｒｒｉｅｒ）または担体（ｃａｒｒｉｅｒｓ）の性質、及び投与経路を含むが、これらに限定されない、種々の要因によって異なるであろう。臨床及び薬理学分野の当業者は、例えば、化合物の投与に対する対象の反応を監視し、それに応じて投与量を調整することによって、慣例的な実験を通じて治療有効量を決定することができるであろう。追加の指針については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ （Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄ． ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ ＰＡ， ＵＳＡ） （２０００）を参照されたい。
【0121】
患者に投与する前に、配合物（ｆｏｒｍｕｌａｎｔ）を組成物に添加してもよい。液体配合物が好ましい。例えば、これらの配合物は、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミノ酸、塩、緩衝液、アルブミン、界面活性剤、増量剤またはそれらの組み合わせを含み得る。
【0122】
炭水化物配合物は、糖もしくは糖アルコールなどの単糖類、二糖類または多糖類または水溶性グルカンを含む。糖類またはグルカンとしては、フルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、アルファ及びベータシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルスターチ、及びカルボキシメチルセルロース、またはそれらの混合物を挙げることができる。「糖アルコール」は、－ＯＨ基を有するＣ４～Ｃ８炭化水素として定義され、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロール及びアラビトールを含む。上述のこれらの糖または糖アルコールは、単独でまたは組み合わせて使用してもよい。糖または糖アルコールは、水性調製物中に可溶性である限り、使用量には一定の制限はない。一実施形態では、糖または糖アルコールの濃度は、１．０ｗ／ｖ％～７．０ｗ／ｖ％、より好ましくは２．０～６．０ｗ／ｖ％である。
【0123】
アミノ酸配合物は左旋性（Ｌ）体のカルニチン、アルギニン、及びベタインを含む；しかし、他のアミノ酸も加えられ得る。
【0124】
ポリマー配合物としては、平均分子量２，０００と３，０００との間のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または平均分子量３，０００と５，０００との間のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【0125】
凍結乾燥前または再構成後の溶液のｐＨ変化を最小にする組成の緩衝液を用いることもまた好ましい。ほとんどの任意の生理緩衝液は用いてもよく、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、及びグルタミン酸緩衝液またはそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、濃度は０．０１～０．３モルである。製剤に加えることができる界面活性剤は、欧州特許第２７０，７９９号及び第２６８，１１０号に示されている。
【0126】
循環半減期を増加させるための別の薬物送達システムは、リポソームである。リポソーム送達システムを調製する方法は、Ｇａｂｉｚｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （１９８２） ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ （１９８１） ６４９：１２９；及び Ｓｚｏｋａ， Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｅｎｇ （１９８０） ９：４６７に述べられている。その他の薬物送達システムは、当技術分野において既知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ （Ｒ． Ｌ． Ｊｕｌｉａｎｏ， ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ， Ｎ．Ｙ． １９８０）， ｐｐ． ２５３－３１５；Ｍ． Ｌ． Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ， Ｐｈａｒｍ Ｒｅｖｓ （１９８４） ３６：２７７に記載されている。
【0127】
液体治療薬を調製した後、それを凍結乾燥して、分解を防ぎ、無菌性を保持することができる。液体組成物を凍結乾燥するための方法は、当業者に既知である。使用直前に、組成物は、追加の成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、リンゲル液、蒸留水、または滅菌生理食塩水）で再構成することができる。再構成の際に、組成物は、当業者に知られている方法を用いて対象に投与する。
【0128】
治療薬は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。得られた溶液は、使用のために包装してもよいし、無菌条件下で濾過して凍結乾燥してもよく、凍結乾燥した製剤を投与前に滅菌溶液と混合する。組成物は、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤などの、生理学的条件に近似させるのに必要とされる薬学的に許容される補助物質、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及び安定剤（例えば、１～２０％マルトースなど）を含む。
【0129】
本発明のキット
種々の実施形態では、本発明は、対象におけるがんを感受性化させるためのキットを提供する。このキットには、ある量のＣＤ１０５アンタゴニスト；ＣＤ１０５アンタゴニストを使用してがんを感受性化させるための指示書が含まれている。種々の実施形態では、がんはがん療法に対して感受性化される。
種々の実施形態では、本発明は、対象におけるがんを感受性化させるためのキットを提供する。このキットには、ある量のＣＤ１０５アンタゴニスト；ＣＤ１０５アンタゴニストを使用してがんを感受性化させるための指示書が含まれている。種々の実施形態では、がんはがん療法に対して感受性化される。
【0130】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるためのキットを提供する。このキットには、ある量のＣＤ１０５アンタゴニスト；がん療法；ＣＤ１０５アンタゴニスト及びがん療法を使用して、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための指示書が含まれている。
【0131】
種々の実施形態では、本発明は、対象において、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるためのキットを提供する。このキットには、ある量のＣＤ１０５アンタゴニスト；及びＣＤ１０５アンタゴニストを使用してがんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための指示書が含まれている。種々の実施形態では、対象は以前にがん療法を受けたことがある。
【0132】
種々の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＣＤ１０５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。他の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。種々の実施形態では、抗体は、任意の動物由来であり得る。動物由来の例としては、ヒト、非ヒト霊長類、サル、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ及びロバが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。種々の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。特定の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニストは、ＴＲＣ１０５またはその抗原結合断片である。
【0133】
種々の実施形態では、がん療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、もしくは外科手術、またはそれらの組み合わせである。
【0134】
いくつかの実施形態では、がん療法は外科手術である。種々の実施形態では、キットは、対象に外科手術を行うための器具、道具、材料及び指示を含む。種々の実施形態では、外科手術はがんを除去する。特定の実施形態では、外科手術は乳房切除術である。特定の実施形態では、外科手術は睾丸切除術（外科的去勢）である。
【0135】
いくつかの実施形態では、がん療法は放射線療法である。種々の実施形態では、キットは、対象に放射線療法を施すための器具、道具、材料及び指示を含む。種々の実施形態では、このキットには、ある量の放射線治療薬及び放射線治療薬を使用して、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための指示書が含まれている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び放射線治療薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び放射線治療薬は、別々の組成物で提供される。
【0136】
いくつかの実施形態では、がん療法は化学療法である。種々の実施形態では、このキットには、ある量の化学療法薬を使用して、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための指示書が含まれている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び化学療法薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及び化学療法薬は、別々の組成物で提供される。
【0137】
いくつかの実施形態では、がん療法はホルモン療法である。種々の実施形態では、このキットには、ある量のホルモン治療薬及びホルモン治療薬を使用して、対象において、がんを治療し、がんの進行を遅らせ、がんの重症度を低下させ、がんの再発を防止し、及び／または再発の可能性を低減させるための指示書が含まれている。いくつかの実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びホルモン療法薬は、単一の組成物で提供される。他の実施形態では、ＣＤ１０５アンタゴニスト及びホルモン療法薬は、別々の組成物で提供される。
【0138】
キットは、本発明の組成物または成分の少なくとも１つを含む材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、上記の治療薬と複合体化した薬物送達分子を含む組成物を含有する。
【0139】
本発明のキットに構成された成分の正確な性質は、その意図された目的に依存する。ある実施形態では、キットは、特に、哺乳動物対象を治療する目的で構成されている。別の実施形態では、キットは、特に、ヒト対象を治療する目的で構成されている。さらなる実施形態では、キットは、これらに限定されないが、家畜、飼育動物及び実験動物などの対象を治療する、獣医学的用途のために構成されている。
【0140】
使用のための指示は、キットに含まれていてもよい。「使用のための指示」には、典型的には、キットのコンポーネントを使用して所望の結果に影響を及ぼすのに用いられる技術を記述した具体的な表現が含まれる。任意に、キットにはまた、容器、スプレーボトルもしくは缶、希釈剤、緩衝液、薬学的に許容される担体、シリンジ、カテーテル、アプリケータ（例えば、静脈内注入のアプリケータ、クリーム、ゲルもしくはローションなど）、ピペット操作もしくは測定ツール、包帯材料などの他の有用なコンポーネント、または当業者が容易に認識する他の有用な道具が含まれる。
【0141】
キットに組み込まれた材料またはコンポーネントは、その操作性及び有用性を保持する任意の便利かつ好適な方法で保管されて、開業医に提供することができる。例えば、コンポーネントは、溶解、脱水、または凍結乾燥形態であり得る。それらは、室温、冷蔵または凍結温度で提供することができる。これらのコンポーネントは、典型的には適切な包装材料（複数可）に含まれる。本明細書で使用する「包装材料」という語句は、本発明の組成物などのような、キットの内容物を収容するために使用される１つまたは複数の物理的構造を指す。包装材料は、周知の方法によって構築され、好ましくは滅菌された汚染のない環境を提供する。キットに用いられる包装材料は、アッセイ及び治療において慣習的に利用するものである。本明細書で使用する場合、「パッケージ」という用語は、個々のキットコンポーネントを保持することができる、ガラス、プラスチック、紙、ホイルなどの好適な固体マトリックスまたは材料を指す。したがって、例えば、パッケージは、適切な量の本明細書に記載の組成物を含有する、予め装填されたシリンジ、予め装填された注射ペン、またはガラスバイアルであり得る。包装材料は、一般に、キット及び／またはそのコンポーネントの内容及び／または目的を示す外部ラベルを有する。
【0142】
本発明の実施形態では、多くの変形形態及び代替の要素を開示している。さらに別の変形形態及び代替の要素が、当業者には明らかであろう。これらの変形形態の中には、本発明の方法、組成物、キット、及びシステムの構成モジュール、ならびに診断され、予後診断されまたはこれにより治療され得る種々の状態、疾患及び障害の選択が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明の種々の実施形態は、これらの変形または要素のいずれをも具体的に含むかまたは除外することができる。
【0143】
いくつかの実施形態では、本発明の特定の実施形態を記載及び請求するために使用される、成分の量、濃度、反応条件などの特性などを表す数字は、場合によっては「約」という用語によって修飾されると理解されるべきである。１つの非限定的な例として、当業者は、「約」という用語の意味において、５％を超えない値の差（増加または減少）を一般に考慮するであろう。したがって、いくつかの実施形態では、記述要件及び添付の特許請求の範囲に記載された数値パラメータは、特定の実施形態によって得られることが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された有効数字の数と、通常の丸め技法を適用することによって解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施形態の広い範囲を示す数値範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示された数値は、実施可能な限り正確に報告される。本発明のいくつかの実施形態で提示される数値は、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含むことができる。
【0144】
本明細書で開示する本発明の代替要素または実施形態のグループ分けは、限定として解釈されるべきではない。各グループメンバーは、個別に、またはグループの他のメンバーまたは本明細書に見出される他の要素との任意の組み合わせで参照し、請求することができる。便宜上及び／または特許性の理由から、１つまたは複数のグループの要素をグループに含めたり、グループから削除することができる。そのような任意の包含または削除が生じた場合、明細書は、改変されたグループを含むとみなされ、したがって、添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュグループの記述要件を満たすものとみなされる。
【実施例】
【0145】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これは本発明の純粋な例示であることが意図されており、決して本発明を限定するものとみなすべきではない。以下の実施例は、特許請求の範囲に記載された発明をより良く説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及されている範囲で、それは単なる例示のためのものであり、本発明を限定することを意図するものではない。当業者は、発明能力を働かせることなく、かつ本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段または反応物を開発し得る。
【0146】
実施例１ 去勢抵抗性前立腺癌におけるＴＲＣ１０５の血管外作用
前立腺癌組織由来の癌腫関連線維芽細胞に関するＦＡＣＳ分析を用いて、ＣＤ１０５が腫瘍誘導性を定義する重要な因子であることを確認した。ＣＤ１０５の発現は、放射線曝露により、前立腺癌種関連線維芽細胞において非がん性対応細胞におけるものよりも亢進し、増加した。ＴＲＣ１０５は、ＣＤ１０５に対するブロッキング抗体であり、その同系リガンドの結合を妨げる。前立腺線維芽細胞にＴＲＣ１０５を用いて、ウェスタンブロッティングによりシグナル伝達活性を試験した。
前立腺癌組織由来の癌腫関連線維芽細胞に関するＦＡＣＳ分析を用いて、ＣＤ１０５が腫瘍誘導性を定義する重要な因子であることを確認した。ＣＤ１０５の発現は、放射線曝露により、前立腺癌種関連線維芽細胞において非がん性対応細胞におけるものよりも亢進し、増加した。ＴＲＣ１０５は、ＣＤ１０５に対するブロッキング抗体であり、その同系リガンドの結合を妨げる。前立腺線維芽細胞にＴＲＣ１０５を用いて、ウェスタンブロッティングによりシグナル伝達活性を試験した。
【0147】
がんの間質支持が、その進行に重要であるので、ＣＤ１０５シグナル伝達に拮抗することにより、内皮細胞及びがん関連線維芽細胞の両方でその作用によってがん進行を阻害することができると考えられる。図７において、Ｍ１０４３（マウス特異的ＣＤ１０５アンタゴニスト）を用いて内因性宿主脈管構造をブロックすることにより、腫瘍血管分布が効果的に減少したが、ＡＴＴとの関連において腫瘍サイズに有意な効果はなかった。
【0148】
ＴＲＣ１０５が、インビトロ及びインビボで腫瘍モデルの放射線治療を補完することについて試験する（図８Ａ、８Ｂ及び１８Ａ参照）。前臨床試験は、ＴＲＣ１０５とドセタキセルの組み合わせを用いた前立腺癌モデルでも実施した（図９参照）。さらに、前立腺癌上皮異種移植片を移植した去勢マウスにおけるＴＲＣ１０５処置により、腫瘍サイズが減少した（図１３参照）。ＴＲＣ１０５はまた、アンドロゲンシグナル伝達を阻害する別の方法としてエンザルタミドと組み合わせて、同様の結果を得た（図１３参照）。
【0149】
前立腺間質線維芽細胞においてＣＤ１０５に拮抗することにより、去勢感受性を媒介することができるが、前立腺脈管構造においてＣＤ１０５に拮抗することは治療上の価値が限られている。アビラテロンまたはエンザルタミドとＴＲＣ１０５との、安全で許容できる組み合わせがある。ＣＤ１０５の阻害は、ＡＲ標的治療への耐性を克服することができ、ＡＲ標的治療に対して早期に耐性が発生した患者の臨床的有益性を誘導する。臨床試験デザインでは、ＥＷＯＣ（過剰用量制御をともなう用量漸増－ベイズ適応型薬物用量探索デザイン）コンビナトリアルフェーズＩは、ＭＴＤ（最大耐容量）曲線を作成することである。アビラテロン投与：５００、７５０、１０００ｍｇ ｑｄ；エンザルタミド投与８０、１２０、１６０ｍｇ ｑｄ；及びＴＲＣ１０５投与：１０～２０ｍｇ／ｋｇ（連続変数）。適格性は、ＰＳＡ ＥＣＯＧ ＰＳ ０－１の上昇によって進行の初期の徴候を示している、現在、アビラテロンまたはエンザルタミドのいずれかを受けている患者に対する。
【0150】
実施例２ 異種ＣＡＦ集団のアンドロゲン依存性変化は、去勢抵抗性を増強する
間質細胞の細胞不均質性が腫瘍促進能力を維持する
前立腺切除組織から生成した初代ＣＡＦ培養物は、確立された腫瘍上皮の増大を促進し得る。しかし、初代ＰＣａ ＣＡＦのルーチン培養は、腫瘍促進能力の喪失につながり得ることが観察された。本発明者らは、ＮＡＦ、ＣＡＦ及びＣＡＦＨｉＰ（図１０Ａ）におけるＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７及びＳＴＲＯ－１の細胞表面発現により、低継代ＣＡＦ（３～７継代間）と高継代（ＣＡＦＨｉＰ＞８継代）とを比較した。他のマーカーである、ＰＤＧＦ受容体、ＣＤ１３３、及びＣＤ１０も試験したが、間質細胞型の間で差次的に発現することは見出されなかった。ＣＤ１１７＋／ＣＤ９０＋集団は、非誘導性ＣＡＦＨｉＰ及びＮＡＦのいずれかと比較して、腫瘍誘導性ＣＡＦにおいてダウンレギュレートされた。Ｓｔｒｏ－１＋／ＣＤ９０＋線維芽細胞集団は、ＮＡＦと比較してＣＡＦにおいて亢進し、しかしＣＡＦＨｉＰにおいてさらに亢進した。興味深いことに、ＮＡＦ及びＣＡＦの両方における最も豊富な線維芽細胞集団はＣＤ９０＋／ＣＤ１０５＋集団であり、これは、ＣＡＦＨｉＰにおいて枯渇していることが見出された。
間質細胞の細胞不均質性が腫瘍促進能力を維持する
前立腺切除組織から生成した初代ＣＡＦ培養物は、確立された腫瘍上皮の増大を促進し得る。しかし、初代ＰＣａ ＣＡＦのルーチン培養は、腫瘍促進能力の喪失につながり得ることが観察された。本発明者らは、ＮＡＦ、ＣＡＦ及びＣＡＦＨｉＰ（図１０Ａ）におけるＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７及びＳＴＲＯ－１の細胞表面発現により、低継代ＣＡＦ（３～７継代間）と高継代（ＣＡＦＨｉＰ＞８継代）とを比較した。他のマーカーである、ＰＤＧＦ受容体、ＣＤ１３３、及びＣＤ１０も試験したが、間質細胞型の間で差次的に発現することは見出されなかった。ＣＤ１１７＋／ＣＤ９０＋集団は、非誘導性ＣＡＦＨｉＰ及びＮＡＦのいずれかと比較して、腫瘍誘導性ＣＡＦにおいてダウンレギュレートされた。Ｓｔｒｏ－１＋／ＣＤ９０＋線維芽細胞集団は、ＮＡＦと比較してＣＡＦにおいて亢進し、しかしＣＡＦＨｉＰにおいてさらに亢進した。興味深いことに、ＮＡＦ及びＣＡＦの両方における最も豊富な線維芽細胞集団はＣＤ９０＋／ＣＤ１０５＋集団であり、これは、ＣＡＦＨｉＰにおいて枯渇していることが見出された。
【0151】
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、長期間培養すると、間質の不均質性が失われると考えられる。したがって、本発明者らは、フローソーティングによって、ＣＡＦ中のＣＤ１０５、ＣＤ１１７、及びＳｔｒｏ－１集団を枯渇させないことを試みた。興味深いことに、選別された培養物の過去７日間の増大は、最初の間質細胞表面マーカー分布の回復を明らかにした（データは示していない）。したがって、ヒトＣＷＲ２２Ｒｖ１（Ｒｖ１）ＰＣａ上皮を用いた組織組換え異種移植の生成によりＮＡＦ細胞を加えることによって、ＣＡＦＨｉＰにおける枯渇したＣＤ９０＋／ＣＤ１０５＋集団の回復を達成した。驚くべきことに、２つの非腫瘍誘導性間質集団ＣＡＦＨｉＰ／ＮＡＦの組み合わせは、ＮＡＦまたはＣＡＦＨｉＰ単独における場合の腫瘍よりも大きい腫瘍を生じ、ＣＡＦの場合と統計的に類似していた（図１０Ｂ）。腫瘍の組織学的分析により、Ｋｉ６７免疫組織化学によって判定されるように、ＣＡＦＨｉＰ及びＣＡＦＨｉＰ／ＮＡＦ間質細胞の組み合わせでは、ＮＡＦと比較して上皮増殖が有意に亢進したことを明らかになった（図１０Ｃ）。しかし、ＮＡＦまたはＣＡＦ組換え腫瘍と比較して、ＣＡＦＨｉＰ関連腫瘍における上皮サバイビン発現の有意な減少があった。多少直感に反するが、ＣＡＦＨｉＰにおける腫瘍促進能力の喪失は、非腫瘍原性ＮＡＦを加えることにより回復する可能性がある。
【0152】
３種の間質細胞中のパラクリンメディエーターの相違を同定するために、本発明者らはＲＮＡシークエンシングを行い、それらの発現パターンに基づいて遺伝子を分離した。ＣＡＦ、ＣＡＦＨｉＰ及びＮＡＦの間の差異的遺伝子発現を、ＣＡＦ／ＣＡＦＨｉＰとＣＡＦ／ＮＡＦとのランク付けされた合算比に基づいて分析した。候補パラクリンメディエーター（分泌遺伝子、上位２００の差次的に制御された遺伝子の遺伝子オントロジー分析による）をベン図にプロットして、ＣＡＦＨｉＰで見出されず、ＮＡＦ及びＣＡＦの両方で発現した９つの遺伝子を明らかにした（図１０Ｄ）。逆に、３つの遺伝子が、ＣＡＦ及びＣＡＦＨｉＰ細胞によって共有された。おそらく、ＣＡＦ中のパラクリンメディエーターは、ＣＡＦＨｉＰまたはＮＡＦにおいては差次的に発現し、腫瘍増大が観察されることが見出される。
【0153】
本発明者らは、新鮮な前立腺切除組織から直接得た前立腺間質集団における間質の不均質性の変化を調べた。凍結切片からのＨ＆Ｅ染色によりがんまたは良性であることが確認された組織を解離させ、４人の患者の間質集団内のＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７及びＳｔｒｏ－１の発現について選別した。図１１Ａは、集団ごとの最も豊富なマーカーに基づく細胞表面マーカーの分布を示し、共発現したマーカーは個々の集団の多様性を増す。ＣＤ１１７優性集団は、良性及びＰＣａ組織の両方において最も豊富であった。Ｓｔｒｏ－１優性集団は、良性組織の間質において豊富であった。ＣＤ１０５優性集団は、良性組織と比較してＰＣａ間質において差次的に亢進した。その発現は、組織アレイ中の免疫局在によって、７９個のＰＣａ及び１６個の良性組織において確認された。良性前立腺組織では、ＣＤ１０５染色は主として内皮細胞に限定されていた（図１１Ｂ）。しかし、ＰＣａでは、ＣＤ１０５は内皮細胞で発現し、間質線維芽細胞では不均一に発現した。グリーソングレードと間質線維芽細胞性ＣＤ１０５の発現との相関は観察されなかった。ＴＣＧＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｎｅｔｗｏｒｋのクエリは、良性組織とＰＣａ組織におけるＣＤ１０５発現の差を明らかにしなかったが、ＣＤ１０５遺伝子増幅は、Ｔｒｅｎｔｏ／Ｃｏｒｎｅｌｌ／Ｂｒｏａｄ ２０１６ データにおけるＰＣａ神経内分泌と顕著に関連していた（Ｃｅｒａｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１２， ２， ４０１－４０４；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ， ２０１３， ６， ｐｌ１）、ハザード比＞３（ｐ＜０．００１、図１４）。興味深いことに、神経内分泌マーカー、クロモグラニンＡの染色は、その発現がＣＤ１０５＋線維芽細胞によって限定されていることを明らかにした（図１１Ｃ及び１４）。Ｓｔｒｏｍａｌ ＣＤ１０５はＮＥＤを有する組織の８３％において発現し、ここで受容体作動特性（ＲＯＣ）分析により０．７５１の曲線下面積（ＡＵＣ）が得られた（ｐ ＝ ０．００２６、図１１Ｄ）。次に、遺伝子パネルを測定して、ＣＡＦ集団を定義するのに利用した。ＮＡＦと比較して、ＣＤ１０５発現が豊富な初代ＣＡＦ株において、ＭＭＰ－９、テネイシンＣ及びＳＦＲＰ１（分泌型Ｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質１）は、２５倍を超えて亢進した（図１１Ｅ）。α－平滑筋アクチン、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及びＩＬ－６の従来のマーカーは、興味深いことに、培養ＮＡＦのものに比べてＣＤ１０５が豊富なＣＡＦでは特に亢進しなかった。同時に、間質線維芽細胞性ＣＤ１０５発現は、ＰＣａ上皮と関連していたが、ＮＥＤと高度に相関していた。
【0154】
ＰＣａ神経内分泌分化におけるＣＤ１０５の役割
エンザルタミド及び／または去勢療法でアンドロゲン軸に拮抗することは、最終的に神経内分泌腺分化（ＮＥＤ）につながる進行したＰＣａに対するルーチン介入である。エンザルタミドによって誘導されたＣＤ１０５の細胞表面発現を定量するために、本発明者らは、ヒトＲｖ１及びマウス野生型前立腺線維芽細胞を有する３Ｄ培養物を作製した。エンザルタミドによるこれらの培養物の処理は、ビヒクル（図１２Ａ）と比較して、ＦＡＣＳ分析により、上皮及び線維芽細胞集団におけるＣＤ１０５細胞表面発現の顕著な３倍の増加をもたらした。ＮＡＦ、ＣＡＦ及びＣＡＦＨｉＰ集団におけるＳＦＲＰ１の差次的発現及び観察されたＣＤ１０５及びＳＦＲＰ１発現の相関に基づいて、本発明者らは、ＳＦＲＰ１発現に対するＣＤ１０５の役割を試験した。本発明者らは、ＮＡＦ及びＣＡＦをＣＤ１０５中和抗体ＴＲＣ１０５で処理した。ＣＡＦにおけるＳＦＲＰ１発現は、ＴＲＣ１０５によって有意にダウンレギュレートされ（ｐ＜０．０００１）、ＮＡＦでは影響がなかった。図１５のサーカスプロットは、ＴＣＧＡ遺伝子関連クエリに基づき、ＳＦＲＰ１遺伝子発現と、トロンボスポンジン１（ＴＨＢＳ１）、血小板由来増殖因子１（ＰＤＧＦＣ）、ｔｅｃｔｏｎｉｃファミリーメンバー１（ＴＣＴＮ１）、及びジンクフィンガータンパク質４４９（ＺＦＮ４４９）の発現との関連を示す。４つのＳＦＲＰ１制御遺伝子のうち、ＰＤＧＦＣ、ソニックヘッジホッグ（ＴＣＴＮ１の標的）、及びＴＨＢＳ１は、腫瘍ＮＥＤと関連している。Ｔｒｅｎｔｏｎ／Ｃｏｒｎｅｌｌ／Ｂｒｏａｄ２０１６試験において、その増幅がＮＥＤと関連していた（図１５）という、ＰＣａのＮＥＤにおけるＳＦＲＰ１の役割についてのさらなる証拠が、ＴＣＧＡにあった（Ｃｅｒａｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１２， ２， ４０１－４０４；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ， ２０１３， ６， ｐｌ１）。上皮におけるＳＦＲＰ１の役割を試験するために、本発明者らは、培養したＲｖ１を組換えＳＦＲＰ１で処理して、９ ＰＣａ ＮＥＤ遺伝子のパネルの用量依存的な有意な誘導を見出した（ｐ＜０．００２；図１２Ｃ）。しかし、同じ用量のＳＦＲＰ１は上皮増殖に影響を及ぼさなかった（図１５）。エンザルタミド治療の結果として、ＰＣａ患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルを調べた。ＣＤ１０５の免疫局在化は、エンザルタミド治療の非存在下での良性及びがん組織移植片における血管内皮において、主に発現した。３Ｄ培養と同様に、エンザルタミド投与４日後、ＣＤ１０５の発現は、ＰＤＸ組織の上皮及びＣＡＦ集団の両方で亢進した（図１２Ｄ）。同時に、ＳＦＲＰ１は、エンザルタミド治療に関連するＰＤＸにおいてアップレギュレートされることが見出された。したがって、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、アンドロゲン軸をブロックすることは、ＣＤ１０５の発現ひいてはＰＣａのＮＥＤに寄与するＳＦＲＰ１の発現と関連する。
エンザルタミド及び／または去勢療法でアンドロゲン軸に拮抗することは、最終的に神経内分泌腺分化（ＮＥＤ）につながる進行したＰＣａに対するルーチン介入である。エンザルタミドによって誘導されたＣＤ１０５の細胞表面発現を定量するために、本発明者らは、ヒトＲｖ１及びマウス野生型前立腺線維芽細胞を有する３Ｄ培養物を作製した。エンザルタミドによるこれらの培養物の処理は、ビヒクル（図１２Ａ）と比較して、ＦＡＣＳ分析により、上皮及び線維芽細胞集団におけるＣＤ１０５細胞表面発現の顕著な３倍の増加をもたらした。ＮＡＦ、ＣＡＦ及びＣＡＦＨｉＰ集団におけるＳＦＲＰ１の差次的発現及び観察されたＣＤ１０５及びＳＦＲＰ１発現の相関に基づいて、本発明者らは、ＳＦＲＰ１発現に対するＣＤ１０５の役割を試験した。本発明者らは、ＮＡＦ及びＣＡＦをＣＤ１０５中和抗体ＴＲＣ１０５で処理した。ＣＡＦにおけるＳＦＲＰ１発現は、ＴＲＣ１０５によって有意にダウンレギュレートされ（ｐ＜０．０００１）、ＮＡＦでは影響がなかった。図１５のサーカスプロットは、ＴＣＧＡ遺伝子関連クエリに基づき、ＳＦＲＰ１遺伝子発現と、トロンボスポンジン１（ＴＨＢＳ１）、血小板由来増殖因子１（ＰＤＧＦＣ）、ｔｅｃｔｏｎｉｃファミリーメンバー１（ＴＣＴＮ１）、及びジンクフィンガータンパク質４４９（ＺＦＮ４４９）の発現との関連を示す。４つのＳＦＲＰ１制御遺伝子のうち、ＰＤＧＦＣ、ソニックヘッジホッグ（ＴＣＴＮ１の標的）、及びＴＨＢＳ１は、腫瘍ＮＥＤと関連している。Ｔｒｅｎｔｏｎ／Ｃｏｒｎｅｌｌ／Ｂｒｏａｄ２０１６試験において、その増幅がＮＥＤと関連していた（図１５）という、ＰＣａのＮＥＤにおけるＳＦＲＰ１の役割についてのさらなる証拠が、ＴＣＧＡにあった（Ｃｅｒａｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１２， ２， ４０１－４０４；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ， ２０１３， ６， ｐｌ１）。上皮におけるＳＦＲＰ１の役割を試験するために、本発明者らは、培養したＲｖ１を組換えＳＦＲＰ１で処理して、９ ＰＣａ ＮＥＤ遺伝子のパネルの用量依存的な有意な誘導を見出した（ｐ＜０．００２；図１２Ｃ）。しかし、同じ用量のＳＦＲＰ１は上皮増殖に影響を及ぼさなかった（図１５）。エンザルタミド治療の結果として、ＰＣａ患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルを調べた。ＣＤ１０５の免疫局在化は、エンザルタミド治療の非存在下での良性及びがん組織移植片における血管内皮において、主に発現した。３Ｄ培養と同様に、エンザルタミド投与４日後、ＣＤ１０５の発現は、ＰＤＸ組織の上皮及びＣＡＦ集団の両方で亢進した（図１２Ｄ）。同時に、ＳＦＲＰ１は、エンザルタミド治療に関連するＰＤＸにおいてアップレギュレートされることが見出された。したがって、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、アンドロゲン軸をブロックすることは、ＣＤ１０５の発現ひいてはＰＣａのＮＥＤに寄与するＳＦＲＰ１の発現と関連する。
【0155】
ＣＤ１０５＋ＣＡＦ集団のエンザルタミド誘発性増殖がＡＴＴの有効性に重要であるかどうかを試験するために、本発明者らは、上述のように、ヒトＣＷ２２Ｒｖ１細胞及び野生型マウス前立腺線維芽細胞を有するＰＣａ上皮及び間質を用いて、３Ｄ共培養を作製した。この場合、種差により、ヒト特異的ＣＤ１０５中和抗体、ＴＲＣ１０５による上皮、またはマウス特異的ＣＤ１０５中和抗体Ｍ１０４３による線維芽細胞のいずれかの標的化が可能になった。この試験に用いた用量（１μｇ／ｍｌ）では、２つの抗体の交差反応性は見られなかった（図１６）。ＴＲＣ１０５及び／またはＭ１０４３の存在下または非存在下で共培養物をエンザルタミドで処理した。得られた上皮増殖の変化を、ＥｐＣａｍ及びＫｉ－６７共染色のＦＡＣＳ分析によって定量した。Ｍ１０４３またはＴＲＣ１０５のいずれか単独による処置は、ＩｇＧ対照と比較して上皮増殖を変化させなかった。３Ｄ培養物において、ＣＷ２２Ｒｖ１増殖指数は、ビヒクルと比較してエンザルタミド治療で倍増した（図１２Ｅ、ｐ＜０．０１）。線維芽細胞ＣＤ１０５または上皮ＣＤ１０５のいずれかを、Ｍ１０４３またはＴＲＣ１０５でブロックすると、それぞれエンザルタミド誘発上皮増殖が変化しなかった。しかし、エンザルタミドをＭ１０４３とＴＲＣ１０５の両方と組み合わせると、上皮増殖が対照の増殖に回復した。ＭＴＴアッセイによって判定されるように、（線維芽細胞の非存在下での）Ｒｖ１またはＣ４２Ｂの処理では、エンザルタミド単独で細胞増殖を有意に減少させた（ｐ＜０．０００１、図１２Ｆ）。エンザルタミドにＴＲＣ１０５を加えることは、ＰＣａ上皮の増殖にさらなる影響を与えなかった。アンドロゲン受容体発現のないＰＣ３細胞は、ＴＲＣ１０５の存在下または非存在下でエンザルタミドのいずれに対しても感受性ではなかった。したがって、エンザルタミドに対する間質反応は、上皮増殖に必須であった。
【0156】
ＣＤ１０５に拮抗することにより、去勢抵抗性前立腺癌を、アンドロゲン標的療法に対して感受性化させる
ＣＤ１０５に拮抗することにより、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を、アンドロゲン標的療法（ＡＴＴ）に対して感受性化させるかどうかを決定するために、本発明者らは、初代ヒトＣＡＦ及びＲｖ１の組織組換え同所性異種移植片を試験した。腫瘍を３週間増大させてから、マウスを去勢し、ＴＲＣ１０５の存在下または非存在下で、エンザルタミドによりさらに３週間処置した。エンザルタミドを与えた去勢マウスの去勢抵抗性腫瘍組換えモデルは、腫瘍体積を有し、リン酸化ヒストンＨ３及びＴＵＮＥＬ局在による細胞代謝回転の組織学的測定値は、対照無傷マウスと統計的に同等であった（図１３Ａ、１３Ｂ）。ＴＲＣ１０５単独で処置したマウスは、ビヒクルよりも腫瘍が小さく（ｐ＜０．０５）、対照と比較して増殖または細胞死のいずれかの変化はほとんど観察されなかった。しかし、エンザルタミド処置去勢マウスにおけるＴＲＣ１０５の組み合わせは、ビヒクルまたはエンザルタミドのいずれかと比較して、腫瘍体積の有意な減少をもたらした（それぞれｐ＜０．０１及び＜０．０５）。去勢、エンザルタミド、及びＴＲＣ１０５の組み合わせは、対照または去勢エンザルタミド処置群（それぞれｐ＜０．０５及び＜０．００１）いずれかと比較して増殖を実質的に減少させ、対照またはエンザルタミド処置と比較してＴＵＮＥＬ染色を増加させた（ｐ＜０．０５）。クロモグラニンＡ染色に関連するＡＴＴによって亢進したＮＥＤは、ＴＲＣ１０５の追加投与によって減少した。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、アンドロゲン軸の拮抗に関連するＰＣａのＣＤ１０５及びＮＥＤの観察された増加は、ＣＤ１０５を中和してＮＥＤを制限し、去勢感受性を回復する手段を提供することによって利用することができる
ＣＤ１０５に拮抗することにより、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を、アンドロゲン標的療法（ＡＴＴ）に対して感受性化させるかどうかを決定するために、本発明者らは、初代ヒトＣＡＦ及びＲｖ１の組織組換え同所性異種移植片を試験した。腫瘍を３週間増大させてから、マウスを去勢し、ＴＲＣ１０５の存在下または非存在下で、エンザルタミドによりさらに３週間処置した。エンザルタミドを与えた去勢マウスの去勢抵抗性腫瘍組換えモデルは、腫瘍体積を有し、リン酸化ヒストンＨ３及びＴＵＮＥＬ局在による細胞代謝回転の組織学的測定値は、対照無傷マウスと統計的に同等であった（図１３Ａ、１３Ｂ）。ＴＲＣ１０５単独で処置したマウスは、ビヒクルよりも腫瘍が小さく（ｐ＜０．０５）、対照と比較して増殖または細胞死のいずれかの変化はほとんど観察されなかった。しかし、エンザルタミド処置去勢マウスにおけるＴＲＣ１０５の組み合わせは、ビヒクルまたはエンザルタミドのいずれかと比較して、腫瘍体積の有意な減少をもたらした（それぞれｐ＜０．０１及び＜０．０５）。去勢、エンザルタミド、及びＴＲＣ１０５の組み合わせは、対照または去勢エンザルタミド処置群（それぞれｐ＜０．０５及び＜０．００１）いずれかと比較して増殖を実質的に減少させ、対照またはエンザルタミド処置と比較してＴＵＮＥＬ染色を増加させた（ｐ＜０．０５）。クロモグラニンＡ染色に関連するＡＴＴによって亢進したＮＥＤは、ＴＲＣ１０５の追加投与によって減少した。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、アンドロゲン軸の拮抗に関連するＰＣａのＣＤ１０５及びＮＥＤの観察された増加は、ＣＤ１０５を中和してＮＥＤを制限し、去勢感受性を回復する手段を提供することによって利用することができる
【0157】
実験手順
３Ｄオルガノタイプ共培養： 以前に報告されたものと同様のコラーゲンマトリックスで、３Ｄオルガノタイプ共培養系の改変版を実施した（Ｓｔａｒｋ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１２， ６８１－６９１）。コラーゲンマトリックスゲルは、５倍量のラット尾部コラーゲンＩを、２倍量のマトリゲル（ＮＣＩ）、１倍量の１０×ＤＭＥＭ培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及び１倍量のＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、Ｒｖ１及び初代マウス前立腺線維芽細胞を１：３の比で組み合わせ、混合して調製した。ナイロンマスをコラーゲンでコーティングし、６ウェルプレート中の金属グリッド上に置いた。ゲルプラグ（１５０μｌ）をナイロンマスに移し、培地をナイロンメッシュのレベルに加えた。７２時間後、細胞をコラゲナーゼでマトリックスから解離して、ＦＡＣＳ分析のために分散させた。
３Ｄオルガノタイプ共培養： 以前に報告されたものと同様のコラーゲンマトリックスで、３Ｄオルガノタイプ共培養系の改変版を実施した（Ｓｔａｒｋ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１２， ６８１－６９１）。コラーゲンマトリックスゲルは、５倍量のラット尾部コラーゲンＩを、２倍量のマトリゲル（ＮＣＩ）、１倍量の１０×ＤＭＥＭ培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及び１倍量のＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、Ｒｖ１及び初代マウス前立腺線維芽細胞を１：３の比で組み合わせ、混合して調製した。ナイロンマスをコラーゲンでコーティングし、６ウェルプレート中の金属グリッド上に置いた。ゲルプラグ（１５０μｌ）をナイロンマスに移し、培地をナイロンメッシュのレベルに加えた。７２時間後、細胞をコラゲナーゼでマトリックスから解離して、ＦＡＣＳ分析のために分散させた。
【0158】
ＦＡＣＳ分析： ＦＡＣＳ実験は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ抗体、すなわち、抗ヒトＳｔｒｏ－１－ＦＩＴＣ（３４０１０５）、抗ヒトＣＤ９０－ＰＥ（１２－０９０９－４２）、抗ヒトＣＤ１０５－ＡＰＣ（１７－１０５７－４１）、抗マウスＣＤ１０５－ＡＰＣ（１７－１０５１－８２）、抗ヒトＣＤ１１７－ＰＥ－Ｃｙ７（１５－１１７８－４１）、抗ヒトＫｉ６７－ＰＥＣｙ７（２５－５６９９－４１）、及び抗ヒトＥｐＣＡＭ －ＰＥ（１２－９３２６－４１）を用いて実施した。すべての事象は、ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアをインストールしたＣｅｄａｒｓ－Ｓｉｎａｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ＦＡＣＳコアのＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターで取得した。ファイルは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアｖ１０．２を使用して分析した。ＥｐＣＡＭ陽性細胞を用いて、三次元（３Ｄ）共培養物中のＣＷ２２Ｒｖ１上皮を同定し、ＣＤ１０５またはＫｉ６７陽性細胞についてさらにゲートした。
【0159】
動物試験： 以前に記載されているように（Ｂａｎｅｒｊｅｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３３， ４９２４－４９３１；Ｈａｙｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１， ８１３５－８１４２）、それぞれ腎被膜下または前立腺の同所移植のために、６～８週齢または１０～１２週齢のオスのベージュ／ＳＣＩＤマウス（Ｅｎｖｉｇｏ）を使用した。動物実験委員会の承認に従って、２×１０５のＣＷ２２Ｒｖ１細胞及び６×１０５の間質細胞を２０μＬのＩ型コラーゲンに懸濁させて、７日後に去勢したマウスの腎被膜下に移植し、去勢後２１日目に屠殺した。同所性異種移植については、マウスを３週間後に去勢し、エンザルタミド（１ｍｇ／マウス強制経口投与）及び／またはＴＲＣ１０５（５０μｇ／マウス静脈）で毎週３回処置し、去勢後２１日目に屠殺した。腫瘍体積は、改変された楕円体の式： 体積３ ＝π／６×（幅）２×長さ、を使用して計算した。
【0160】
細胞株及び培養物： ＡＴＣＣのＣＷ２２Ｒｖ１、Ｃ４２Ｂ、及びＰＣ３細胞を指示通りに拡大させた。Ｃｅｄａｒｓ－Ｓｉｎａｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｅｎｔｅｒまたはＧｒｅａｔｅｒ Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｆｆａｉｒｓの前立腺切除標本を、以前に報告されたようにＣ５７ＢＬ／６マウス野生型前立腺線維芽細胞を増殖させるのと同じ方法を用いて、ＮＡＦ及びＣＡＦ細胞を培養して生成した（Ｆｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１， １２７２－１２８１；Ｋｉｓｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ６８， ４７０９－４７１８）。ＴＲＣ１０５及びＭ１０４３は、ＴＲＡＣＯＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって提供された。エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ）は、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から購入した。細胞をＴＲＣ１０５またはＭ１０４３（１μｇ／ｍＬ）及びエンザルタミド（５μＭ）で７２時間処理した。
【0161】
ＣＡＦ条件培地： ＣＡＦは、以前に報告されたように、（Ｆｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１， １２７２－１２８１；Ｑｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ２３， ３３２－３４６）正常な培養培地中で、７２時間でコンフルエントに達するような密度でプレーティングした。７２時間後、培地を収集し、遠心分離して細胞破片を除去し、上清を新鮮なものとして使用したか、または－８０℃で保存した。標的細胞を、５０％対照培地と組み合わせた５０％条件培地で処理した。
【0162】
組織病理学及び免疫組織化学： 以前に報告されたように（Ｐｌａｃｅｎｃｉｏ ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ６８， ４７０９－４７１８）、パラフィン包埋組織を切片化し（厚さ５μｍ）、ヘマトキシリン及びエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色及び免疫組織化学に供した。前立腺癌組織アレイの連続切片組織アレイは、ＵＳ Ｂｉｏｍａｘ， Ｉｎｃ．（Ｄｅｒｗｏｏｄ， ＭＤ）から購入した。抗リン酸化ヒストンＨ３（０６－５７０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、抗ＣＤ１０５（ＮＣＬ－ＣＤ１０５、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）、抗Ｋｉ６７（ａｂ１６６６７、Ａｂｃａｍ）及び抗クロモグラニンＡ（ｓｃ－１３０９０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、抗ＳＦＲＰ１（６０１－４０１－４７５Ｓ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）及び抗サバイビン（２８０８、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）抗体を、４℃で一晩インキュベートした。二次抗体の開発は、Ｄａｋｏ Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎマウスまたはウサギキットを用いて行い、３，３’－ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド基質を用いて視覚化した。ＴＵＮＥＬ染色は、製造業者のプロトコール（Ｓ７１００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って行った。スライドはＬｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｅｒｉｏ ＡＴで走査した。組織当たり最大５つの視野を、特注のマクロを用いてＦｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ）により定量した。有糸分裂及び死亡指数は、陽性染色された核の総数を核の総数で割って定量した。
【0163】
ＲＮＡ分析： ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを抽出した。ｉＳＣＲＩＰＴ ｃＤＮＡ合成キット（１７０８８９１、Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、１μｇのＲＮＡをｃＤＮＡ合成に用いた。定量的ＲＴ－ＰＣＲは、Ｓｔｅｐ Ｏｎｅ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて５回繰り返して実施した。遺伝子のｍＲＮＡ発現をＧＡＰＤＨに対して正規化した。プライマー配列は、表１に見出すことができる。ＲＮＡシーケンシングのために、Ｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ＲＮＡシークエンシングを行い、平均３Ｍの読み取りを達成した。Ｔｏｒｒｅｎｔ Ｓｕｉｔｅバージョン４．４．２を使用して、ヒトゲノムに平均８８％の読み込みをマッピングした。
【0164】
（表１）プライマー配列
【0165】
ＭＴＴ増殖アッセイ： ９６個のウェルあたり３０００個の細胞を、処理当たり５ウェルを用いて７２時間処理した。ＭＴＴ試薬（Ｍ６４９４、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を指示通りに調製し、３７℃で１時間インキュベートし、製造業者の推奨を用いて分析した。
【0166】
統計分析： 間質ＣＤ１０５集団及び上皮クロモグラニンＡ発現の一致を、受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線及びＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）により測定した。マン－ホイットニーＵ検定を用いて、ＡＵＣ（ｃ－統計量）のｐ値を決定した。全ての計算はＲのＲＯＣパッケージを用いて行った。神経内分泌遺伝子のヒートマップは、ＳＦＲＰ１の異なる用量の遺伝子サインによって生成された。ＭＡＴＬＡＢのバイオインフォマティクスツールボックスのＣｌｕｓｔｅｒｇｒａｍ機能を、ヒートマップの作成と遺伝子ごとのクラスタリングに使用した。ＣＡＦ／ＣＡＦＨｉＰ及びＣＡＦ／ＮＡＦ遺伝子値について比の値を生成して、ＲＮＡシークエンシングデータ中トップの分泌遺伝子を引き出した。次に、分析されたすべての遺伝子中の各比率値について比率値をランク付けし、最も高い値は１のランクを有する。２つの比率値があった場合、平均ランクを割り当てた。続いて、ＣＡＦ／ＣＡＦＨｉＰ及びＣＡＦ／ＮＡＦ比率値のランクを合計した。次いで、２つのランクの合計値がランク付けされた。最も低い合計値は最も低いランクを有し、これは最も重要な遺伝子発現と逆相関した。ヒートマップに示されるように、類似のパターンを有する遺伝子は、遺伝子発現において互いにより近接していた。以前に記載されたように（Ｃｅｒａｍｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１２， ２， ４０１－４０４；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ． Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ， ２０１３， ６， ｐｌ１）、ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌを使用して、ＳＦＲＰ１、クロモグラニンＡ及びＣＤ１０５の突然変異、欠失及び増幅頻度ならびにＴＣＧＡ研究ネットワーク： ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｇｅｎｏｍｅ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／によって生成された公に利用可能なデータセットを介した相関性をチェックした。インビトロデータの多重比較は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ）ｖ６．０７を使用して、１元配置または２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）で評価した。複数の比較のために、１元配置ＡＮＯＶＡを用いて腫瘍データを分析した。結果は、個々のデータポイントとして、または平均±Ｓ．Ｄとして表した。０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であると考えられた（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。ＦＡＣＳデータの各群内の相対的発現を、パイまたはドーナツチャートの特徴を用いてＰｒｉｓｍソフトウェアでプロットした。
【0167】
実施例３ ＣＤ１０５に拮抗することにより前立腺癌における放射線感受性を補助する
前立腺癌におけるＣＤ１０５の発現
ＣＤ１０５は、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎臓癌、乳癌、及び小細胞肺癌ならびにグリア芽細胞腫を含むいくつかのがんにおける攻撃性、転移、再発及び治療耐性に関係する。本発明者らは、ＦＡＣＳ分析により、前立腺癌細胞株（ＰＣ３、Ｃ４－２Ｂ、及び２２Ｒｖ１）上のＣＤ１０５の細胞表面発現が、４Ｇｙ放射線治療で増加することを見出した（図１８Ａ）。細胞表面ＣＤ１０５の発現は、時間及び放射線量の両方に依存した（図１８Ｂ、１８Ｃ）。２Ｇｙ放射線は、ＣＤ１０５の発現を有意にアップレギュレートしなかったが、４Ｇｙ及び６Ｇｙの用量は、３つの細胞株すべてについてＣＤ１０５を有意に増加させた。さらに、２２Ｒｖ１におけるＣＤ１０５発現の時間依存性測定は、４Ｇｙ照射の８時間後の有意な亢進を示し、それは１週間後に亢進したままであった。
前立腺癌におけるＣＤ１０５の発現
ＣＤ１０５は、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎臓癌、乳癌、及び小細胞肺癌ならびにグリア芽細胞腫を含むいくつかのがんにおける攻撃性、転移、再発及び治療耐性に関係する。本発明者らは、ＦＡＣＳ分析により、前立腺癌細胞株（ＰＣ３、Ｃ４－２Ｂ、及び２２Ｒｖ１）上のＣＤ１０５の細胞表面発現が、４Ｇｙ放射線治療で増加することを見出した（図１８Ａ）。細胞表面ＣＤ１０５の発現は、時間及び放射線量の両方に依存した（図１８Ｂ、１８Ｃ）。２Ｇｙ放射線は、ＣＤ１０５の発現を有意にアップレギュレートしなかったが、４Ｇｙ及び６Ｇｙの用量は、３つの細胞株すべてについてＣＤ１０５を有意に増加させた。さらに、２２Ｒｖ１におけるＣＤ１０５発現の時間依存性測定は、４Ｇｙ照射の８時間後の有意な亢進を示し、それは１週間後に亢進したままであった。
【0168】
本発明者らは、ＴＲＣ１０５を用いてＢＭＰ依存性ＣＤ１０５シグナル伝達を遮断することにより、放射線応答におけるＣＤ１０５の役割を特定しようとした。５０ｎｇ／ｍＬのＢＭＰで刺激した場合、１μｇ／ｍＬの最小用量で、ＴＲＣ１０５は、２２Ｒｖ１においてリン酸化ＳＭＡＤ１／５活性化及びＩＤ１（ＢＭＰ標的遺伝子）の発現を効果的にブロックした（図１８Ｄ及び図１９）。ＴＲＣ１０５と放射線との組み合わせは、放射線単独と比較して、アネキシン－Ｖによって測定されるように、有意にアポトーシスを増加させた（図１８Ｅ）。ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５処理ＣＷ２２Ｒｖ１及びＣ４－２Ｂ細胞株を、放射線量の増加と比較して、クローン原生生存アッセイを実施して、ＣＤ１０５が放射線耐性を付与するかどうかを判定した（図１８Ｆ）。これらの両細胞株において、ＴＲＣ１０５を用いた治療により、前立腺癌細胞を、放射線治療に対して感受性化させた（ｐ値＜０．００１）。同時に、放射線誘導ＣＤ１０５は、アポトーシスに対するＰＣａ耐性に寄与しているようであり、ＣＤ１０５をＴＲＣ１０５で拮抗して、放射線感受性を回復させた。
【0169】
放射線は、ＢＭＰ媒介性のＳＩＲＴ１発現を誘導する
ヒストンデアセチラーゼであるＳＩＲＴ１は、ＤＮＡ損傷修復のメディエーターとして公知である。本発明者らは、ＢＭＰ／ＣＤ１０５シグナル伝達がＳＩＲＴ１を制御するかどうかを試験した。ＢＭＰを用いた、血清飢餓状態の２２Ｒｖ１の処理は、Ｓｍａｄ１／５のリン酸化に関連するＳＩＲＴ１タンパク質発現を誘導した（図２０Ａ）。さらに、ＳＩＲＴ１転写のＢＭＰ依存性誘導は、ＣＤ１０５が用量依存的様式でＴＲＣ１０５で拮抗された場合、ダウンレギュレートされた（図２０Ｂ）。ＳＩＲＴ１は、前立腺癌においてアップレギュレートされることが以前に報告されている。Ｒ２－ゲノム解析を用いて、良性組織（ｎ＝４８）及び前立腺癌組織（ｎ＝４７）の患者サンプルにおけるＳＩＲＴ１発現を比較した。組織型の比較では、ＳＩＲＴ１発現は、良性前立腺組織と比較して、前立腺癌試料において有意に過剰発現したことを確認した（図２０Ｃ）。ヒト良性及び前立腺癌組織の免疫染色により、ＳＩＲＴ１は、前立腺癌上皮において過剰発現することをさらに確認した（図２０Ｄ）。以前に報告されたように、ＳＩＲＴ１は核に免疫局在していた。予想通り、ＳＩＲＴ１発現は、２２Ｒｖ１及びＣ４－２Ｂにおいて、放射線量依存性及び時間依存性の両方の様式でアップレギュレートされた（図２０Ｅ、２０Ｆ及び２１）。ＴＲＣ１０５を用いた治療により、両方の細胞型における放射線誘導ＳＩＲＴ１発現が排除され、このことは、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＳＩＲＴ１が、ＢＭＰ／ＣＤ１０５シグナル伝達の下流にあることを示唆している。
ヒストンデアセチラーゼであるＳＩＲＴ１は、ＤＮＡ損傷修復のメディエーターとして公知である。本発明者らは、ＢＭＰ／ＣＤ１０５シグナル伝達がＳＩＲＴ１を制御するかどうかを試験した。ＢＭＰを用いた、血清飢餓状態の２２Ｒｖ１の処理は、Ｓｍａｄ１／５のリン酸化に関連するＳＩＲＴ１タンパク質発現を誘導した（図２０Ａ）。さらに、ＳＩＲＴ１転写のＢＭＰ依存性誘導は、ＣＤ１０５が用量依存的様式でＴＲＣ１０５で拮抗された場合、ダウンレギュレートされた（図２０Ｂ）。ＳＩＲＴ１は、前立腺癌においてアップレギュレートされることが以前に報告されている。Ｒ２－ゲノム解析を用いて、良性組織（ｎ＝４８）及び前立腺癌組織（ｎ＝４７）の患者サンプルにおけるＳＩＲＴ１発現を比較した。組織型の比較では、ＳＩＲＴ１発現は、良性前立腺組織と比較して、前立腺癌試料において有意に過剰発現したことを確認した（図２０Ｃ）。ヒト良性及び前立腺癌組織の免疫染色により、ＳＩＲＴ１は、前立腺癌上皮において過剰発現することをさらに確認した（図２０Ｄ）。以前に報告されたように、ＳＩＲＴ１は核に免疫局在していた。予想通り、ＳＩＲＴ１発現は、２２Ｒｖ１及びＣ４－２Ｂにおいて、放射線量依存性及び時間依存性の両方の様式でアップレギュレートされた（図２０Ｅ、２０Ｆ及び２１）。ＴＲＣ１０５を用いた治療により、両方の細胞型における放射線誘導ＳＩＲＴ１発現が排除され、このことは、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＳＩＲＴ１が、ＢＭＰ／ＣＤ１０５シグナル伝達の下流にあることを示唆している。
【0170】
ＣＤ１０５をブロックすると一時的なＤＮＡ損傷が誘導されるが、ｐ５３の長期間の蓄積につながる
ＳＩＲＴ１のサイレンシングまたはノックアウトは、Ｎｂｓ１、Ｂｒｃａ１及びＲａｄ５１を含む下流のＤＮＡ損傷修復タンパク質の動員を損なうことが報告されている。本発明者らは、ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下での４Ｇｙ照射の４時間後、２４時間後、４８時間後及び７２時間後の、γ－Ｈ２ＡＸ及びｐ５３結合タンパク質（ｐ５３ＢＰ）増殖巣を比較して、ＤＮＡ損傷修復の障害が、ＴＲＣ１０５が放射線感受性を与える機構であるかどうかを試験した（図２２Ａ）。ＴＲＣ１０５処理は、照射４時間後及び２４時間後にγ－Ｈ２ＡＸ及びｐ５３ＢＰ増殖巣の有意な増加をもたらしたが、４８時間までに、ＴＲＣ１０５処理と照射単独との間に差はなかった。ＴＲＣ１０５単独処理では、非処理の細胞と比較して、２４時間以内に２本鎖ＤＮＡ切断が有意に増加し、これは７２時間を超えて持続した（データは示さず）。しかし、核１個あたり１０個以上の増殖巣を有する細胞の数は、放射線単独の場合の５９．６％と比較して、ＴＲＣ１０５を用いる場合わずか４．３％であった。ＴＲＣ１０５の存在下及び非存在下で照射された２２Ｒｖ１細胞を用いてＣＯＭＥＴアッセイを実施し、１本鎖切断の発生を含むＤＮＡ損傷の尺度を付与した。結果は、放射線照射の３０分後にＴＲＣ１０５処理細胞の尾部モーメントの有意な増加を示したが（ｐ値＜０．００１）、２４時間後には有意差はなかった（図２２Ｂ）。特定の理論に束縛されるものではないが、放射線の存在下で、ＴＲＣ１０５はＤＮＡ損傷修復を遅延させるが、細胞はＴＲＣ１０５誘導ＳＩＲＴ１抑制をバイパスしてＤＮＡ完全性を回復できるようであることを、データは示唆している。したがって、ＴＲＣ１０５をともなう照射に対する前立腺癌細胞の観察された感受性化は、ＤＮＡ損傷修復へのその影響によってのみ決定されるのではないようである。
ＳＩＲＴ１のサイレンシングまたはノックアウトは、Ｎｂｓ１、Ｂｒｃａ１及びＲａｄ５１を含む下流のＤＮＡ損傷修復タンパク質の動員を損なうことが報告されている。本発明者らは、ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下での４Ｇｙ照射の４時間後、２４時間後、４８時間後及び７２時間後の、γ－Ｈ２ＡＸ及びｐ５３結合タンパク質（ｐ５３ＢＰ）増殖巣を比較して、ＤＮＡ損傷修復の障害が、ＴＲＣ１０５が放射線感受性を与える機構であるかどうかを試験した（図２２Ａ）。ＴＲＣ１０５処理は、照射４時間後及び２４時間後にγ－Ｈ２ＡＸ及びｐ５３ＢＰ増殖巣の有意な増加をもたらしたが、４８時間までに、ＴＲＣ１０５処理と照射単独との間に差はなかった。ＴＲＣ１０５単独処理では、非処理の細胞と比較して、２４時間以内に２本鎖ＤＮＡ切断が有意に増加し、これは７２時間を超えて持続した（データは示さず）。しかし、核１個あたり１０個以上の増殖巣を有する細胞の数は、放射線単独の場合の５９．６％と比較して、ＴＲＣ１０５を用いる場合わずか４．３％であった。ＴＲＣ１０５の存在下及び非存在下で照射された２２Ｒｖ１細胞を用いてＣＯＭＥＴアッセイを実施し、１本鎖切断の発生を含むＤＮＡ損傷の尺度を付与した。結果は、放射線照射の３０分後にＴＲＣ１０５処理細胞の尾部モーメントの有意な増加を示したが（ｐ値＜０．００１）、２４時間後には有意差はなかった（図２２Ｂ）。特定の理論に束縛されるものではないが、放射線の存在下で、ＴＲＣ１０５はＤＮＡ損傷修復を遅延させるが、細胞はＴＲＣ１０５誘導ＳＩＲＴ１抑制をバイパスしてＤＮＡ完全性を回復できるようであることを、データは示唆している。したがって、ＴＲＣ１０５をともなう照射に対する前立腺癌細胞の観察された感受性化は、ＤＮＡ損傷修復へのその影響によってのみ決定されるのではないようである。
【0171】
ＴＲＣ１０５放射線感受性化を媒介する別のプロセスを探索するために、本発明者らは細胞周期の変化を調べた。細胞周期の再分布を受けるＧ２細胞周期停止を引き起こすなどの、細胞周期に対する放射線の影響は、十分に記載されている。したがって、本発明者らは、ＩｇＧ（対照）の存在下でＣＷ２２Ｒｖ１細胞を照射すると（４Ｇｙ）、Ｇ２期に４時間までに細胞が蓄積するが、細胞周期の分布は８時間までに回復することを見出した。しかし、放射線及びＴＲＣ１０５処理細胞の組み合わせは、同じ時間枠でＤＮＡの完全性の回復が観察されたにもかかわらず、２４時間までに解消しなかったＧ２細胞周期の停止を受けた（図２２Ｃ）。ＳＩＲＴ１がｐ５３を脱アセチル化することによって、ｐ５３の安定性を制御することが以前報告されているので、本発明者らはＴＲＣ１０５処理によりｐ５３の状態を調べた。照射前（４Ｇｙ）に、２２Ｒｖ１細胞を、ＴＲＣ１０５またはＳＩＲＴ１活性の阻害剤である２００μＭのニコチンアミドのいずれかで処理した。次いで、放射線照射の０日後、１日後、及び７日後に細胞を収集して、早期及び後期ｐ５３応答を明らかにした。本発明者らは、ニコチンアミドによるＳＩＲＴ１活性の阻害またはＴＲＣ１０５によるＳＩＲＴ１発現の阻害が、アセチル化ｐ５３の増加をもたらし、それによって全－ｐ５３を安定化することを見出した（図２２Ｄ）。アセチル化及び全－ｐ５３は、放射線照射の７日後にＴＲＣ１０５及びニコチンアミド処理群において顕著に増加した。ＴＲＣ１０５またはニコチンアミドによるｐ５３の安定化は、ｐ５３の下流の標的であるｐ２１の増加と相関した。さらに、ｐ５３安定化は、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ－２の減少と相関していた。ｐ５３欠損前立腺癌細胞株ＰＣ３をＴＲＣ１０５で処理し、クローン原生生存のために放射線量を増加させると、放射線感受性化の証拠は得られなかった。前立腺癌では機能喪失ｐ５３突然変異はまれであるが、膵臓癌の９０％はｐ５３突然変異を有する。したがって、本発明者らは、２つのｐ５３突然変異膵臓癌細胞株、ＨＰＡＦ－ＩＩ及びＭＩＡＰＡＣＡ－２を使用して、放射線に対するＴＲＣ１０５の無反応性が、ｐ５３の機能喪失に起因するかどうかを特定した。ＰＣ３細胞株の場合と同様に、放射線で処理したＨＰＡＦ－ＩＩ細胞株またはＭＩＡＰＡＣＡ－２細胞株は、ＴＲＣ１０５によるＣＤ１０５阻害とのクローン原生応答において変化を示さなかった（図２３Ａ～２３Ｃ）。しかし、機能的ｐ５３を有する２つの乳癌細胞株、ＭＣＦ７及びＭＤＡＭＢ２３１は、ＴＲＣ１０５の投与によって、照射に対してポジティブに感受性化されることが見出された（図２３Ｄ及び２３Ｅ）。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、このことは、完全なｐ５３応答が、ＴＲＣ１０５依存性の放射線応答に必要であることを示唆した。
【0172】
ＰＧＣ１α及びミトコンドリア生合成が、ＢＭＰ／ＣＤ１０５によって制御される
本発明者らは、ＳＩＲＴ１の他の下流の機能を再検討して、ＰＧＣ１αに対するＣＤ１０５の役割を試験した。ＳＩＲＴ１標的であるＰＧＣ１αは、ミトコンドリアの生合成の制御に関与する転写因子である。ＰＧＣ１αの活性化及び核局在化は、ＳＩＲＴ１による脱アセチル化を必要とする。ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下での４Ｇｙ放射線による２２Ｒｖ１細胞の処理は、全細胞溶解物のウェスタンブロッティングによってＰＧＣ１α発現に影響を及ぼさなかった（図２４Ａ）。しかしながら、オルガネラ分画による細胞内局在をより詳細に調べると、放射線との関連で、細胞質画分からのＰＧＣ１α枯渇及び核画分中のＰＧＣ１α蓄積が示された。ＣＤ１０５をブロックすることにより、ＰＧＣ１αの放射線誘導性核内移行が妨げられた。免疫蛍光局在化は、これらの同じ知見を裏付けた（図２４Ｂ）。ＰＧＣ１α細胞内局在化は、代謝及びミトコンドリア生合成に関与するＰＧＣ１α標的遺伝子、すなわち、ＮＲＦ１、ＭＴＦＡ及びＣＰＴ１Ｃの発現と相関した（図２４Ｃ）。ＮＲＦ１、ＭＴＦＡ及びＣＰＴ１ＣのｍＲＮＡ発現は、ＴＲＣ１０５の存在下と比較して、放射線により有意に増加した（ｐ値＜０．００１）。放射線は、多くのがんモデルにおいてミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の蓄積を誘導することが示されている。ＴＲＣ１０５の存在下でのｍｔＤＮＡの劇的なダウンレギュレーションが見出された（ｐ値＜０．０００１）（図２４Ｄ）ことで、したがって、ｍｔＤＮＡの定量化は、ＣＤ１０５によるＰＧＣ１α制御に関するこれまでの知見と同等であった。ミトコンドリア電子伝達鎖タンパク質の評価では、ＴＲＣ１０５処理により、ＣＩＶ－ＭＴＣＯ１及びＣＩ－ＮＤＵＦ８８のダウンレギュレーションがもたらされることを示した（図２５）。本発明者らは、ＳＩＲＴ１発現のＣＤ１０５による制御が、ｐ５３の下流のＤＮＡ損傷修復、ならびに放射線との関連でＰＧＣ１αを介してミトコンドリアの完全性を維持することのどちらにも影響を与えることを実証する。
本発明者らは、ＳＩＲＴ１の他の下流の機能を再検討して、ＰＧＣ１αに対するＣＤ１０５の役割を試験した。ＳＩＲＴ１標的であるＰＧＣ１αは、ミトコンドリアの生合成の制御に関与する転写因子である。ＰＧＣ１αの活性化及び核局在化は、ＳＩＲＴ１による脱アセチル化を必要とする。ＩｇＧまたはＴＲＣ１０５の存在下での４Ｇｙ放射線による２２Ｒｖ１細胞の処理は、全細胞溶解物のウェスタンブロッティングによってＰＧＣ１α発現に影響を及ぼさなかった（図２４Ａ）。しかしながら、オルガネラ分画による細胞内局在をより詳細に調べると、放射線との関連で、細胞質画分からのＰＧＣ１α枯渇及び核画分中のＰＧＣ１α蓄積が示された。ＣＤ１０５をブロックすることにより、ＰＧＣ１αの放射線誘導性核内移行が妨げられた。免疫蛍光局在化は、これらの同じ知見を裏付けた（図２４Ｂ）。ＰＧＣ１α細胞内局在化は、代謝及びミトコンドリア生合成に関与するＰＧＣ１α標的遺伝子、すなわち、ＮＲＦ１、ＭＴＦＡ及びＣＰＴ１Ｃの発現と相関した（図２４Ｃ）。ＮＲＦ１、ＭＴＦＡ及びＣＰＴ１ＣのｍＲＮＡ発現は、ＴＲＣ１０５の存在下と比較して、放射線により有意に増加した（ｐ値＜０．００１）。放射線は、多くのがんモデルにおいてミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の蓄積を誘導することが示されている。ＴＲＣ１０５の存在下でのｍｔＤＮＡの劇的なダウンレギュレーションが見出された（ｐ値＜０．０００１）（図２４Ｄ）ことで、したがって、ｍｔＤＮＡの定量化は、ＣＤ１０５によるＰＧＣ１α制御に関するこれまでの知見と同等であった。ミトコンドリア電子伝達鎖タンパク質の評価では、ＴＲＣ１０５処理により、ＣＩＶ－ＭＴＣＯ１及びＣＩ－ＮＤＵＦ８８のダウンレギュレーションがもたらされることを示した（図２５）。本発明者らは、ＳＩＲＴ１発現のＣＤ１０５による制御が、ｐ５３の下流のＤＮＡ損傷修復、ならびに放射線との関連でＰＧＣ１αを介してミトコンドリアの完全性を維持することのどちらにも影響を与えることを実証する。
【0173】
ＢＭＰ／ＣＤ１０５に拮抗することにより、細胞エネルギーを枯渇させる
放射線誘発損傷からの細胞回復は大量のエネルギーを必要とし、したがって細胞代謝を標的とすることにより、細胞を放射線に感受性化させる可能性がある。以前の研究では、エネルギー欠損により、アポトーシスまたはＧ２細胞周期停止が不当になる可能性があることが示されている。前立腺癌は、酸化的リン酸化を受けるミトコンドリアに大きく依存する、比較的成長が遅いがんである。ＣＤ１０５はミトコンドリアの生合成を増強するので、本発明者らは、Ｓｅａｈｏｒｓｅ－ＸＦを用いて酸素消費速度を測定することによって、放射線及びＴＲＣ１０５処理後のミトコンドリアの機能性を試験した（図２６Ａ）。放射線治療は、照射されていない細胞と比較して非ミトコンドリア呼吸を亢進させた。しかし、ミトコンドリア呼吸のみを比較すると、非照射細胞と照射細胞の基底酸素消費量は、類似していた。放射線媒介性のミトコンドリア損傷により、明らかにプロトンの漏出が増加し、予備呼吸能が枯渇した。放射線との関連でＣＤ１０５に拮抗すると、放射線単独の場合と比較して、基底の酸化的リン酸化が減少し、予備呼吸能がさらに低下した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ－ＸＦによる、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における細胞外酸性化の程度は、放射線との関連で解糖に依存することが示唆された（図２６Ｂ）。ＴＲＣ１０５の添加は、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における解糖をブロックした。さらに、放射線またはＴＲＣ１０５いずれかのみの処理により、ミトコンドリア依存性ＡＴＰ産生の枯渇がもたらされた。（図２６Ｃ）。しかし、放射線とＴＲＣ１０５の組み合わせは、いずれかの薬剤単独の場合と比較して、さらなる枯渇をもたらした。したがって、ミトコンドリアＡＴＰ合成阻害剤であるオリゴマイシンを用いたＣＷ２２Ｒｖ１の処理は、オリゴマイシンの用量にほとんど関係なく、連続的細胞計数によって測定されたように、細胞増殖を有意に低下させた（ｐ値＜０．０１、図２７）。放射線治療の１日以内に、全ＡＴＰ貯蔵量の有意な減少が見られ、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における３日までの対照に近いレベルに戻ったようであった（図２６Ｄ）。ＳＩＲＴ１機能がニコチンアミドにより直接ブロックされるか、またはＣＤ１０５アンタゴニズムによりその発現がブロックされた場合、細胞内の貯蔵ＡＴＰは放射線治療に関係なく枯渇した。したがって、ＴＲＣ１０５依存性エネルギーの枯渇は、放射線感受性化を可能にするｐ５３機能の喪失を必要とするとみられる、慢性効果である。
放射線誘発損傷からの細胞回復は大量のエネルギーを必要とし、したがって細胞代謝を標的とすることにより、細胞を放射線に感受性化させる可能性がある。以前の研究では、エネルギー欠損により、アポトーシスまたはＧ２細胞周期停止が不当になる可能性があることが示されている。前立腺癌は、酸化的リン酸化を受けるミトコンドリアに大きく依存する、比較的成長が遅いがんである。ＣＤ１０５はミトコンドリアの生合成を増強するので、本発明者らは、Ｓｅａｈｏｒｓｅ－ＸＦを用いて酸素消費速度を測定することによって、放射線及びＴＲＣ１０５処理後のミトコンドリアの機能性を試験した（図２６Ａ）。放射線治療は、照射されていない細胞と比較して非ミトコンドリア呼吸を亢進させた。しかし、ミトコンドリア呼吸のみを比較すると、非照射細胞と照射細胞の基底酸素消費量は、類似していた。放射線媒介性のミトコンドリア損傷により、明らかにプロトンの漏出が増加し、予備呼吸能が枯渇した。放射線との関連でＣＤ１０５に拮抗すると、放射線単独の場合と比較して、基底の酸化的リン酸化が減少し、予備呼吸能がさらに低下した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ－ＸＦによる、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における細胞外酸性化の程度は、放射線との関連で解糖に依存することが示唆された（図２６Ｂ）。ＴＲＣ１０５の添加は、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における解糖をブロックした。さらに、放射線またはＴＲＣ１０５いずれかのみの処理により、ミトコンドリア依存性ＡＴＰ産生の枯渇がもたらされた。（図２６Ｃ）。しかし、放射線とＴＲＣ１０５の組み合わせは、いずれかの薬剤単独の場合と比較して、さらなる枯渇をもたらした。したがって、ミトコンドリアＡＴＰ合成阻害剤であるオリゴマイシンを用いたＣＷ２２Ｒｖ１の処理は、オリゴマイシンの用量にほとんど関係なく、連続的細胞計数によって測定されたように、細胞増殖を有意に低下させた（ｐ値＜０．０１、図２７）。放射線治療の１日以内に、全ＡＴＰ貯蔵量の有意な減少が見られ、ＣＷ２２Ｒｖ１細胞における３日までの対照に近いレベルに戻ったようであった（図２６Ｄ）。ＳＩＲＴ１機能がニコチンアミドにより直接ブロックされるか、またはＣＤ１０５アンタゴニズムによりその発現がブロックされた場合、細胞内の貯蔵ＡＴＰは放射線治療に関係なく枯渇した。したがって、ＴＲＣ１０５依存性エネルギーの枯渇は、放射線感受性化を可能にするｐ５３機能の喪失を必要とするとみられる、慢性効果である。
【0174】
ＣＤ１０５に拮抗することにより、インビボでの放射線感受性が与えられる
本発明者らは、ＣＷ２２Ｒｖ１異種移植モデルを用いてＣＤ１０５依存性放射線耐性を評価した。皮下にＣＷ２２Ｒｖ１を移植されたマウスには、照射の７２時間前に１回用量のＩｇＧまたはＴＲＣ１０５を投与し、続いて放射線治療の期間中は週に３回投与した。照射ＩｇＧ群及び照射ＴＲＣ１０５群に、２Ｇｙの放射線量を５日間連続して与えた。腫瘍体積の倍率変化を各群について計算した（図２８Ａ）。ＴＲＣ１０５単独では、非処理のものと比較して腫瘍体積に影響しなかった。対照群と比較して放射線及びＩｇＧ群の腫瘍体積は、放射線照射後１週間で有意に低下したが、２週間後にはこの群は、非照射群と有意差はなかった。しかし、放射線とＴＲＣ１０５の組み合わせで処理した腫瘍体積は、他の３つの実験群よりも有意に小さかった（ｐ値＜０．００１）。いずれかの処置単独と比較して、腫瘍の倍加時間は、ＴＲＣ１０５を照射と組み合わせることによって、認識可能な程度まで阻害された（図２８Ｂ）。
本発明者らは、ＣＷ２２Ｒｖ１異種移植モデルを用いてＣＤ１０５依存性放射線耐性を評価した。皮下にＣＷ２２Ｒｖ１を移植されたマウスには、照射の７２時間前に１回用量のＩｇＧまたはＴＲＣ１０５を投与し、続いて放射線治療の期間中は週に３回投与した。照射ＩｇＧ群及び照射ＴＲＣ１０５群に、２Ｇｙの放射線量を５日間連続して与えた。腫瘍体積の倍率変化を各群について計算した（図２８Ａ）。ＴＲＣ１０５単独では、非処理のものと比較して腫瘍体積に影響しなかった。対照群と比較して放射線及びＩｇＧ群の腫瘍体積は、放射線照射後１週間で有意に低下したが、２週間後にはこの群は、非照射群と有意差はなかった。しかし、放射線とＴＲＣ１０５の組み合わせで処理した腫瘍体積は、他の３つの実験群よりも有意に小さかった（ｐ値＜０．００１）。いずれかの処置単独と比較して、腫瘍の倍加時間は、ＴＲＣ１０５を照射と組み合わせることによって、認識可能な程度まで阻害された（図２８Ｂ）。
【0175】
上記の種々の方法及び技術は、本出願を実行するための多くの方法を提供する。当然のことながら、記載された全ての目的または利点が、本明細書に記載の特定の実施形態に従って、必ずしも達成されるわけではないことを理解されたい。したがって、当業者は、例えば、本明細書に教示された利点または利点群を達成または最適化する様式で、本明細書で教示または示唆された他の目的または利点を必ずしも達成することなく、方法を実施することができることを認識するであろう。本明細書には、種々の代替案が記載されている。いくつかの好ましい実施形態は、特に、１つ、別の、またはいくつかの特徴を含むが、他の実施形態は、１つ、別の、またはいくつかの特徴を特に除外し、さらに他の実施形態は、１つ、別の、またはいくつかの有利な特徴を含むことによって、特定の特徴を緩和することを理解されたい。
【0176】
さらに、当業者は、異なる実施形態からの種々の特徴の適用可能性を認識するであろう。同様に、上述した種々の要素、特徴及びステップならびにそのような各要素、特徴またはステップの他の既知の均等物は、本明細書に記載の原理に従って方法を実施するために、当業者が、様々な組み合わせで使用することができる。種々の要素、特徴、及びステップの中には、種々の実施形態に具体的に含まれるものと、特に除外されるものとがある。
【0177】
本出願は、特定の実施形態及び実施例の関連で開示されているが、当業者であれば、本出願の実施形態は、具体的に開示された実施形態を超えて、他の代替実施形態及び／または使用ならびにその改変及び均等物に及ぶことを理解するであろう。
【0178】
本出願を実施するために本発明者らに知られている最良の形態を含む、本出願の好ましい実施形態を本明細書に記載する。これらの好ましい実施形態の変形は、上記の説明を読めば当業者には明らかになるであろう。当業者は、このような変形を適切に用いることができ、本明細書に具体的に記載されている以外の方法で、本出願を実施することができると考えられる。したがって、本出願の多くの実施形態は、適用される法律によって許容されるように、添付の特許請求の範囲に記載された主題のすべての改変及び均等物を含む。さらに、本出願において他に指示されない限り、または文脈から明らかに矛盾しない限り、全ての可能な変形における上記要素の任意の組み合わせが本明細書に包含される。
【0179】
本明細書で言及した全ての特許、特許出願、特許出願の刊行物、及び記事、本、明細書、刊行物、文書、物などの他の資料は、これに関連する訴追ファイルの履歴、本文書と矛盾しているか、または本文書に抵触しているもの、または本文書に関連して現在または後で請求する範囲の最も広い範囲について限定的な影響を及ぼす可能性があるものを除いて、このすべての目的のために、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。例として、組み込まれた資料のいずれかに関連する用語の説明、定義、及び／または使用と、本文書、説明、定義に関連する用語の説明、定義、及び／または使用、及び／または本文書における用語の使用との間に矛盾または対立がある場合には、本明細書の用語の使用が優先する。
【0180】
本明細書で開示される本出願の実施形態は、本出願の実施形態の原理の例示であることを理解されたい。採用することができる他の改変は、本出願の範囲内にあることが可能である。したがって、限定ではなく例として、本明細書の教示に従って、本出願の実施形態の代替の構成を利用することができる。したがって、本出願の実施形態は、図示し説明したものに厳密に限定されない。
【0181】
本発明の種々の実施形態は、上記の詳細な説明に記載されている。これらの記述は上記の実施形態を直接説明しているが、当業者は本明細書に示され説明された特定の実施形態に対する改変及び／または変形を考案することができるということを理解されたい。この説明の範囲内に入るそのような改変または変形は、同様に本明細書に含まれることが意図される。特に明記しない限り、明細書及び特許請求の範囲の単語及び語句は、当業者にとって通常の及び慣用の意味を与えられることが、発明者の意図である。
【0182】
出願の時点で出願人に知られている本発明の種々の実施形態の上記の説明は、例示及び説明のために提示され、意図されている。本説明は網羅的であることを意図するものでもなく、本発明を開示された厳密な形態に限定するものでもなく、上記の教示に照らして多くの改変及び変形が可能である。記載された実施形態は、本発明の原理及びその実用的な適用を説明し、他の当業者が種々の実施形態において、及び企図される特定の用途に適した種々の改変を用いて本発明を利用できるように使用する。したがって、本発明は、本発明を実施するために開示された特定の実施形態に限定されないことが意図される。
【0183】
本発明の特定の実施形態が示され、説明されたが、当業者には、本明細書の教示に基づいて、本発明及びそのより広い態様から逸脱することなく、変更及び改変がなされることがあり、したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の真の精神及び範囲内にあるそのようなすべての変更及び改変をその範囲内に包含するものであることが、明らかであろう。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図10D】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【図11D】
【図11E】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図12D】
【図12E】
【図12F】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【配列表】