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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-06-28
(45)【発行日】2022-07-06
(54)【発明の名称】ＪＡＫ阻害剤およびこれらの利用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20220629BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20220629BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/505 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/277 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/437 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/41 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/5025 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/498 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/12 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/4985 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/4184 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/403 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/56 20060101ALI20220629BHJP
A61K 31/497 20060101ALI20220629BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220629BHJP
A61K 45/00 20060101ALN20220629BHJP
C12Q 1/6876 20180101ALN20220629BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P17/04
A61P43/00 111
A61K31/506
A61K31/505
A61K31/277
A61K31/437
A61K31/41
A61K31/5025
A61K31/498
A61K31/12
A61K31/4985
A61K31/4184
A61K31/4439
A61K31/403
A61K31/56
A61K31/497
A61K39/395 U
A61K45/00
C12Q1/6876 ZNA
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2018544171
(86)(22)【出願日】2017-02-16
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-03-07
(86)【国際出願番号】 US2017018097
(87)【国際公開番号】W WO2017143014
(87)【国際公開日】2017-08-24
【審査請求日】2020-01-20
(31)【優先権主張番号】62/295,875
(32)【優先日】2016-02-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】597025806
【氏名又は名称】ワシントン・ユニバーシティ
【氏名又は名称原語表記】Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】キム，ブライアン
【審査官】池上 文緒
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５２２６２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５１８８８２（ＪＰ，Ａ）
【文献】J. Dermatolog. Treat. (2015) vol.26, no.2, p.121-123
【文献】J. Vet. Pharmacol. Ther. (2015) vol.38, suppl.1, p.60-61(19.4.)
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ４５／００
Ａ６１Ｐ １７／０４
Ａ６１Ｐ ４３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
その方法を必要とする被験体における神経原性掻痒症、慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）、または炎症性成分が存在しないまたは最少の炎症性成分で現れる掻痒症の治療用の組成物であって、治療上効果的な量のＪＡＫ１阻害剤を含み、前記ＪＡＫ１阻害剤が、トファシチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、イタシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、オクラシチニブ、ＡＺＤ１４８０、フェデラチニブ、ＡＴ９２８３、ＡＧ－４９０、モメロチニブ、ＴＧ１０１２０９、ガンドチニブ、ＮＶＰ－ＢＳＫ８０５、ＡＺ９６０、ＣＥＰ－３３７７９、パクリチニブ、ＸＬ０１９、Ｓ－ルキソリチニブ、ＺＭ３９９２３、デセルノチニブ、セルデュラチニブ、フィルゴニブ、ＦＬＬＬ３２、ＢＭＳ－９１１５４３、ペフィシチニブ、ＧＬＰＧ０６３４、ＧＬＰＧ０６３４アナログ、Ｇｏ６９７６、クルクモール、ククルビタシン、レスタウルチニブ、ウパダシチニブ、ＣＨＺ８６８、ソルシチニブ（ＧＳＫ２５８６１８４）、ＮＳ－０１８、またはこれらの誘導体、あるいはこれらの医薬的に許容される塩からなる群の１つ以上から選択される、組成物。
【請求項2】
前記被験体が掻痒症または慢性特発性掻痒症と診断され、治療が前記被験体における掻痒症を防止または低下する、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記被験体が極めて重度の痒みまたは重度の痒みを有する、あるいは前記被験体が中度または軽度の痒みを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記掻痒症が少なくとも７週間継続している、前記掻痒症が少なくとも８週間継続している、前記掻痒症が少なくとも９週間継続している、または前記掻痒症が少なくとも１０週間継続している、請求項１に記載の組成物。
【請求項5】
治療が被験体における痒みの重症度を低下する、前記被験体における痒みのない日数を増加する、前記被験体の生活の質を改善する、またはこれらのいずれかの組み合わせである、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記被験体が掻痒症または慢性特発性掻痒症に罹り易く、ＪＡＫ１阻害剤による治療が前記被験体における慢性掻痒症の再発を防止、または前記被験体における急性掻痒症の頻度を低下する、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
前記ＪＡＫ１阻害剤が、【化3】
【化4】
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項8】
前記ＪＡＫ１阻害剤が、非経口に、くも膜下腔内に、髄腔内に、鼻腔内に、または経口に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
前記ＪＡＫ１阻害剤が、毎日を基本として投与される、または少なくとも連続した７日間、少なくとも連続した１４日間、もしくは少なくとも連続した３０日間、毎日投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項10】
前記ＪＡＫ１阻害剤がＴＲＰＶ１阻害剤であり、ＩＬ－４またはＩＬ－１３経路のシグナル化を調節する、またはＩＬ－４Ｒαシグナル化経路を標的にする、請求項１に記載の組成物。
【請求項11】
ＴＲＰＶ１阻害剤、デュピルマブ、またはセクキヌマブの投与をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項12】
前記掻痒症が慢性特発性掻痒症である、請求項１に記載の組成物。
【請求項13】
前記ＪＡＫ１阻害剤は、トファシチニブ、ルキソリチニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項14】
前記ＪＡＫ１阻害剤は、オクラシチニブではない、請求項１２に記載の組成物。
【請求項15】
ヒト被験体における慢性特発性掻痒症の治療用の組成物であって、治療上効果的な量のトファシチニブ、ルキオリチニブ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるＪＡＫ阻害剤を含む、組成物。
【請求項16】
前記掻痒症がアトピー性皮膚炎に関連しない、請求項１に記載の組成物。
【請求項17】
前記掻痒症が神経原性の痒み成分を含む、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連案件の相互参照
本出願は、２０１６年２月１６日出願、米国特許仮出願第６２／２９５、８７５号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、２０１６年２月１６日出願、米国特許仮出願第６２／２９５、８７５号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0002】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
適用なし。
適用なし。
【0003】
参考によって組み込まれている材料
配列リストは、本開示の一部であり、本発明のヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列を含むコンピュータ読み取り可能な形式を含む。配列リストの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列リストは、本開示の一部であり、本発明のヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列を含むコンピュータ読み取り可能な形式を含む。配列リストの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0004】
発明の分野
本開示は全般的には、この方法を必要とする被験体における慢性特発性掻痒症を含む掻痒症、および本明細書で説明される他の掻痒性障害の掻痒性成分を治療するための方法に関するものであり、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を投与することを含む。
本開示は全般的には、この方法を必要とする被験体における慢性特発性掻痒症を含む掻痒症、および本明細書で説明される他の掻痒性障害の掻痒性成分を治療するための方法に関するものであり、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を投与することを含む。
【背景技術】
【0005】
痒み、すなわち引っ掻きたいという欲求を生じる感覚が「掻痒症」として臨床的に意味される。掻痒症について複数の病因論があり、十分な治療するために潜在的な原因を診断することは、しばしば重要な臨床的難題である。
【0006】
痒み経験の多次元的な特徴は、脳における痒み処理の複雑性に反映される。痒みの感覚を生じるために関与する複数の神経経路および分子メカニズムが、ヒスタミン依存性およびヒスタミン非依存性経路を含めて特定されている。理想的には、掻痒症の有効な治療は、各特定疾患に含まれる潜在的な病因および神経経路の理解によって分かるであろう。最近の神経生理学的研究は、痒み反応に含まれる神経経路のより優れた理解をもたらしているが、病態生理学は依然として完全には理解されていない。従って、従来技術の状態では、特に掻痒症の原因が特定できないとき、治療が異なる病因の掻痒症を効果的に管理するかどうか、医師は予測することができない。
【発明の概要】
【0007】
本開示の様々な態様では、ＪＡＫ阻害剤を用いた掻痒症の治療方法が提供される。
【0008】
いくつかの実施形態では、本方法は被験体にＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を投与することを含む。
【0009】
いくつかの実施形態では、被験体は掻痒症または慢性特発性掻痒症を有すると診断され、治療が被験体における掻痒症を防止または低下させる。
【0010】
いくつかの実施形態では、被験体は極めて重度の痒みまたは重度の痒みを有する、あるいは被験体は中度または軽度の痒みを有する。
【0011】
いくつかの実施形態では、掻痒症は少なくともせめて７週間継続している、掻痒症は少なくともせめて８週間継続している、掻痒症は少なくともせめて９週間継続している、または掻痒症は少なくともせめて１０週間継続している。
【0012】
いくつかの実施形態では、治療は被験体における痒みの重症度を低下させ、被験体における痒みのない日数を増加させ、被験体の生活の質を改善し、あるいはこれらのいずれかの組み合わせである。
【0013】
いくつかの実施形態では、被験体は掻痒症または慢性特発性掻痒症に罹り易く、治療は被験体における慢性掻痒症の再発を防止し、または被験体における急性掻痒症の頻度を低下させる。
【0014】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は式（Ｉ）、
または、この医薬的に許容される塩であり、これらのすべての互変異性体および立体異性体を含み、ここで
Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺはＣおよびＮからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は独立して、水素；非置換または置換アルキル；非置換または置換アルケン；非置換または置換アルキン；アセトアミド；
からなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリール；非置換フェニル環；置換フェニル環；非置換ヘテロシクリル；および置換ヘテロシクリルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換フェニル環または置換フェニル環は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルは、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；ヘテロシクリル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換される。
【化1】
Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺはＣおよびＮからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は独立して、水素；非置換または置換アルキル；非置換または置換アルケン；非置換または置換アルキン；アセトアミド；
【化2】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリール；非置換フェニル環；置換フェニル環；非置換ヘテロシクリル；および置換ヘテロシクリルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換フェニル環または置換フェニル環は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルは、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；ヘテロシクリル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換される。
【0015】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、トファシチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、オクラシチニブ、ＡＺＤ１４８０、フェデラチニブ、ＡＴ９２８３、ＡＧ－４９０、モメロチニブ、ＷＰ１０６６、ＴＧ１０１２０９、ガンドチニブ、ＮＶＰ－ＢＳＫ８０５、ＡＺ９６０、ＣＥＰ－３３７７９、パクリチニブ、ＷＨＩ－Ｐ１５４、ＸＬ０１９、Ｓ－ルキソリチニブ、ＺＭ３９９２３、デセルノチニブ、セルデュラチニブ、フィルゴチニブ、ＦＬＬＬ３２、ＢＭＳ－９１１５４３、ペフィシチニブ、ＧＬＰＧ０６３４、ＧＬＰＧ０６３４アナログ、Ｇｏ６９７６、クルクモール、ククルビタシン、レスタウルチニブ、ウパダシチニブ、ＣＨＺ８６８、ソルシチニブ（ＧＳＫ２５８６１８４）、ＮＳ－０１８、またはこれらの誘導体、あるいはこれらの医薬的に許容される塩からなる群の１つ以上から選択される。
【0016】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、
または
である。
【化3】
【化4】
【0017】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は非経口投与される。
【0018】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は髄腔内投与される。
【0019】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は鼻腔内投与される。
【0020】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は経口投与される。
【0021】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は毎日を基本として投与される。
【0022】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は少なくとも連続した７日間、毎日投与される。
【0023】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は少なくとも連続した１４日間、毎日投与される。
【0024】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は少なくとも連続した３０日間、毎日投与される。
【0025】
いくつかの実施形態では、掻痒症は、免疫反応の広範な活性化、またはニューロンプロセスおよび知覚認知の調節不全の徴候である。
【0026】
いくつかの実施形態では、被験体は次からなる群の１つ以上から選択される疾患または症状を有すると診断される、または掻痒症はこれらの徴候であり、アレルギー反応、節足動物咬傷、水虫、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、アトピー性痒み、アトピー性皮膚炎関連痒み、自己免疫性結合組織病、細菌感染症、胆汁性痒み、免疫応答の広範な活性化、コロモジラミ、水疱性疾患、腕橈骨掻痒症、脳腫瘍、慢性特発性掻痒症、接触性皮膚炎、胆汁うっ滞、皮膚幼虫移行症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、神経系損傷、頭垢、皮膚寄生虫妄想、皮膚筋炎、妊娠皮膚症、糖尿病、薬疹、ニューロンプロセスおよび知覚認知の調節不全、湿疹、好酸球性毛包炎、皮膚上の異物またはデバイス、真菌感染症、妊娠性類天疱瘡、アタマジラミ、疱疹、化膿性汗腺炎、皮疹、ホジキン病、副甲状腺機能亢進症、特発性慢性痒み、炎症、昆虫外寄生、昆虫咬傷、昆虫刺傷、妊娠性肝内胆汁うっ滞症、鉄欠乏性貧血、外因性オピオイドまたは合成オピオイドの蓄積増加、内臓癌、黄疸、扁平苔癬、硬化性苔癬、紅斑性狼瘡、リンパ腫、リンパ腫関連痒み、白血病関連痒み、悪性腫瘍、マスト細胞症、閉経、多発性硬化症、新生物、神経刺激、神経原性痒み、神経障害性痒み、錯感覚性背痛、錯感覚性強迫性障害、感覚異常症、寄生虫感染症、丘疹状蕁麻疹、シラミ寄生症、末梢性神経障害、光線皮膚炎、真性多血症、精神病、心因性痒み、ＨＩＶの掻痒性流行性発疹、妊娠性そう痒性蕁麻疹様丘疹（ＰＵＰＰＰ）、乾癬、乾癬関連痒み、乾癬性痒み、ケジラミ、斑点状手掌足底角化症、腎臓性痒み、関節リウマチ、疥癬、瘢痕成長、剃毛、脂漏性皮膚炎、うっ滞性皮膚炎、日焼け、水泳性痒疹、全身免疫老化、幻触、Ｔｈ１７関連炎症、甲状腺疾患、尿毒症、掻痒症または尿毒性痒み、蕁麻疹、蕁麻疹性痒み、水痘、ウイルス感染症、創傷または痂皮の治癒、および乾皮症が挙げられる。
【0027】
いくつかの実施形態では、掻痒症は炎症性病因を有し、掻痒症は神経機能障害病因を有し、または掻痒症は未知の病因を有する。
【0028】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＴＲＰＶ１阻害剤であり、ＩＬ－４またはＩＬ－１３経路のシグナル化を調節し、あるいはＩＬ－４Ｒαシグナル化経路を標的にする。
【0029】
いくつかの実施形態では、本方法はさらにＴＲＰＶ１阻害剤、デュピルマブ、またはセクキヌマブの投与を含む。
【0030】
他の目的および特徴は、後述で部分的に明らかになり、部分的に指摘されるであろう。
【0031】
当業者は、後述の図が説明の目的のみのためのものであることを理解するであろう。図は本教示の範囲を限定することは何ら意図されていない。
【0032】
出願はカラーでなされた少なくとも１つの図を含む。カラーの図を伴う本特許出願公開のコピーは、請求および必要な費用の支払いによって特許庁により提供される。
【図面の簡単な説明】
【0033】
【図1A-B】（Ａ）アトピー性皮膚炎を有する被験体、および（Ｂ）ＣＩＰを有する被験体の代表的な写真を示す図である。ＣＩＰを有する被験体は、アトピー性皮膚炎で認められる明らかな皮膚炎症を欠いている。
【図2A-C】ＣＩＰを有する被験体から得られる皮膚バイオプシーの代表的な写真および組織病理学的所見を示す図である。（図２Ａ）症例１で説明される患者の臨床写真（例１、表２を参照）。多くのＣＩＰ患者における症例のように、明確な発赤は認められない。皮膚バイオプシーを矢印で示される部位で採取した。（図２Ｂ）および（図２Ｃ）症例４（例１、表２を参照）で説明される患者から得た皮膚バイオプシーは、（図２Ｂ）低倍率（スケールバーは５００μｍを示す）で密度の高いリンパ球浸潤（矢印）を有する海綿状変化、および（図２Ｃ）高倍率（スケールバーは５０μｍを示す）で多量な好酸球を示す。
【図3A-B】ＣＩＰを有する被験体（ｎ＝５）へのＪＡＫ阻害剤の投与がこれらの掻痒症を改善したことを説明するグラフを示す図である。（図３Ａ）痒みスコア平均は、ＪＡＫ阻害剤による１ヶ月間の治療によって約５０％低下した。痒みは数値評価スケール（ＮＲＳ）を用いて評価した。（図３Ｂ）図３Ａから得る単一被験体における７０日間（ｘ軸）にわたる毎日の痒みスコア（ｙ軸、ＮＲＳ）。被験体はシクロスポリン単独によって治療されたとき掻痒症の改善を示さなかったが、ＪＡＫ阻害剤（ゼルヤンツまたはトファシチニブ）に切り換えられたときに著しい改善を示した。
【図4】ＪＡＫ仲介ＣＩＰのモデルを示す図である。複数のサイトカイン（ＴＳＬＰ、ＩＬ－４、ＩＬ－３１）および他の因子（例えば、セロトニンなど）が知覚神経に作用して痒みを仲介し得る。しかし、単一サイトカインの遮断は痒みを和らげるのに十分ではない可能性がある。ニューロンレベルでのＪＡＫ阻害は、複数の痒み活性化経路を遮断する治療戦略を示し得る。
【図5A-5I】２型サイトカインが痒み知覚経路を直接的に活性化することを示す図である。（図５Ａ）全マウス後根神経節（ＤＲＧ）のＲＴ－ＰＣＲ産物の代表的なゲル、ｎ＝４。（図５Ｂ）全ヒトＤＲＧのＲＴ－ＰＣＲ産物の代表的なゲル、ｎ＝３。（図５Ｃ）全マウスＤＲＧにおけるＲＴ－ｑＰＣＲによるＩｌ４ｒａ、Ｉｌ１３ｒａ１、およびＩｌ３１ｒａの定量、ｎ＝４。（（図５Ｄ）組換えネズミ（ｒｍ）ＩＬ－４および塩化カリウム（ＫＣｌ）に反応するマウスＤＲＧニューロンの代表的なカルシウム画像トレース。（図５Ｅ）ｒｍＩＬ－１３およびＫＣｌに反応するマウスＤＲＧニューロンの代表的なカルシウム画像トレース。（図５Ｆ）ｒｍＩＬ－３１およびＫＣｌに反応するマウスＤＲＧニューロンの代表的なカルシウム画像トレース。（図５Ｇ）全マウスＤＧＲニューロンのパーセントとしてのｒｍＩＬ－４－、ｒｍＩＬ－１３－、ｒｍＩＬ－３１－、およびヒスタミン－反応性ニューロン、ｎ＞５００ニューロン。（図５Ｈおよび図５Ｉ）（図５Ｈ）ｒｍＩＬ－４または（図５Ｉ）ｒｍＩＬ－１３および引き続きｒｍＩＬ－３１およびヒスタミン負荷による刺激に対するマウスＤＲＧニューロンの反応を重ねたベンの図、ｎ＞３００ニューロン。データは平均±ＳＥＭとして示す。図１２および図１３も参照されたい。
【図6A-6G】慢性痒みが知覚神経節における２型サイトカイン受容体の発現増加と関連することを示す図である。（図６Ａ）野生型（ＷＴ）マウスの耳に対する賦形剤コントロール（エタノール、ＥｔＯＨ）またはＭＣ９０３による毎日の局所処置を示す実験概略。（図６Ｂ）コントロールまたはＭＣ９０３処置の経過におけるベースラインからの変動率としての耳厚測定、群あたりｎ≧４。コントロールおよびＭＣ９０３処置マウスの（図６Ｃ）代表的な組織病理学および（図６Ｄ）組織学スコア、群あたりｎ≧４。（図６Ｅ）０、４、８、および１２日目におけるコントロールおよびＭＣ９０３処置マウスの引っ掻き行動、群あたりｎ≧４。（図６Ｆ）コントロールおよびＭＣ９０３処置マウスの皮膚における選択したアトピー性皮膚炎（ＡＤ）関連遺伝子の規則化対数発現値の遺伝子列Ｚスコアの比較。群あたりｎ＝４。（図６Ｇ）コントロールおよびＭ９０３処置マウスから得られる知覚三叉神経節におけるＩｌ４ｒａ、Ｉｌ５ｒａ、およびＩｌ１３ｒａ１のＲＴ－ｑＰＣＲ、群あたりｎ＝８。スケールバーは１００μｍを示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。図１４も参照されたい。
【図7A-7E】２型免疫細胞が皮膚における知覚神経線維と相互作用することを示す図である。（図７Ａ）ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋マウスの１つの耳に対する賦形剤コントロール（ＥｔＯＨ）および第二耳に対するＭＣ９０３による毎日の局所処置を示す実験概略。（図７Ｂおよび図７Ｃ）（図７Ｂ）コントロールおよび（図７Ｃ）ＭＣ９０３処置した耳の生体内二光子イメージングの代表的な画像。赤色矢印はＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋知覚線維を示す。緑色矢印はＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞を示す。動画からの代表的な静止画を図１６および図１７に示す。（図７Ｄ）ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋マウスのＭＣ９０３処置皮膚における知覚神経線維との相互作用の際の代表的なＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞の瞬時速度。グラフは３成分に分割され、これが接近、相互作用、そして知覚神経線維を離れる時の細胞の速度を示す。この細胞追跡の動画から得た静止画を図１８に示す。（図７Ｅ）ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋マウスのＭＣ９０３処理皮膚において、神経線維と関連させないときと比較した、知覚神経線維と関連させたときのＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞の画像化期間における平均速度、群あたりｎ＞４０。誤差バーはＳＤを表す。スケールバーは１００μｍを示す。図１６～図１８も参照されたい。
【図8A-8F】ニューロンのＩＬ－４Ｒα発現が慢性痒みに必要であることを示す図である。（図８Ａ）ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎの耳へのＭＣ９０３による毎日の局所処置および同腹仔コントロールマウスを示す実験概略。（図８Ｂ）ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスの知覚三叉神経節のＲＴ－ｑＰＣＲ、群あたりｎ≧７。（図８Ｃ）ＭＣ９０３処置の経過にわたって同腹仔コントロールと比較したＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスの引っ掻き行動、群あたりｎ≧７。同腹仔コントロールと比較したＭＩ９０３処置ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスの（図８Ｄ）耳厚測定、（図８Ｅ）代表的な組織病理学、および（図８Ｆ）組織学スコア、群あたりｎ≧４。スケールバーは１００μｍを示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。
【図9A-9O】神経ＪＡＫ１の中断が慢性の痒みを低下することを示す図である。（図９Ａ）野生型（ＷＴ）マウスの耳へのＭＣ９０３処置の間のコントロール賦形剤または高用量ルキソリチニブ（ｒｕｘ）（１００μｇ）の１日２回の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を示す実験概略。ｉ．ｐ．コントロールおよびｒｕｘ処置マウスの７日目における、（図９Ｂ）引っ掻き行動、（図９Ｃ）耳厚測定、（図９Ｄ）代表的な組織病理学、および（図９Ｅ）組織学スコア、群あたりｎ≧１０。（図９Ｆ）ＭＣ９０３処置ＷＴマウスの行動測定の２４時間前における、コントロール賦形剤または低用量ｒｕｘ（１０μｇ）の単回髄腔内（ｉ．ｔ．）注射を示す実験概略。ｉ．ｔ．コントロールおよびｒｕｘ処置マウスの７日目における（図９Ｇ）引っ掻き行動、（図９Ｈ）耳厚測定、（図９Ｉ）代表的な組織病理学、および（図９Ｊ）組織学スコア、群あたりｎ≧１０。（図９Ｋ）ＪＡＫ１ΔｎｅｕｒｏｎのＭＣ９０３処置および同腹仔コントロールマウスを示す実験概略。７日目に同腹仔マウスと比べたＪＡＫ１Δｎｅｕｒｏｎマウスの、（図９Ｌ）引っ掻き行動、（図９Ｍ）耳厚測定、（図９Ｎ）代表的な組織病理学、および（図９Ｏ）組織学スコア、群あたりｎ≧８。スケールバーは１００μｍを示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。図１５も参照されたい。
【図10A-10H】ＣＩＰが最小の皮膚炎症にも関わらずニューロン調節不全および重度の痒みを示す明らかな慢性痒み障害であることを示す図である。（図１０Ａおよび図１０Ｂ）（図１０Ａ）アトピー性皮膚炎（ＡＤ）および（図１０Ｂ）慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）の代表的な肉眼的な臨床写真。（図１０Ｃおよび図１０Ｄ）（図１０Ｃ）ＡＤおよび（図１０Ｄ）ＣＩＰの代表的な組織病理学画像。（図１０Ｅ）ＡＤおよびＣＩＰ患者バイオプシーの組織学スコア、群あたりＮ≧４。（図１０Ｆ）ＡＤおよびＣＩＰ患者の数値評価スケール（ＮＲＳ）痒みスコア、群あたりＮ≧２２。（図１０Ｇ）ＡＤ対健常コントロール皮膚において上位１００種の差次的に発現された遺伝子の規則化対数発現値の遺伝子列Ｚ－スコアによるＡＤ、ＣＩＰ、および健常コントロール皮膚サンプルのクラスタリング。（図１０Ｈ）ＣＩＰおよびＡＤ皮膚間の直接的な比較の遺伝子セットエンリッチメント分析（ＧＳＥＡ）。陽性エンリッチメントスコアはＣＩＰにおける増加を示す。スケールバーは１００μｍを示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。表３および表４も参照されたい。
【図11A-11B】難治性ＣＩＰを有する患者がＪＡＫ阻害剤によって治療されたときに改善することを示す図である。（図１１Ａ）ＪＡＫ阻害剤トファシチニブが与えられたＣＩＰ患者（Ｎ＝５）のコホートにおけるＮＲＳ痒みスコア。各ポイントはトファシチニブによる治療前後の患者を表す。有意はペアードｔ検定を用いて計算した。誤差バーはＳＤを表す。（図１１Ｂ）トファシチニブによって治療された２名のＣＩＰ患者における毎日のＮＲＳ痒みスコアであり、１名はトファシチニブによる治療の直前にシクリスポリンによって治療された（黒色）。表５も参照されたい。
【図12】ＩＬ－５がＤＲＧニューロンを活性化しないことを示す図である。図５と関連する。組換えネズミＩＬ－５、ヒスタミン（Ｈｉｓｔ）、カプサイシン（Ｃａｐ）、および塩化カリウム（ＫＣｌ）を負荷されたマウスＤＲＧニューロンの代表的なカルシウム画像トレース、ｎ＞３００ニューロン。
【図13】予測される掻痒受容性経路が、他の予測される知覚モダリティと比べてニューロン発現性２型サイトカイン受容体を豊富化していることを示す図である。図５と関連する。予測される知覚モダリティにおけるクラスター明確化および選択された痒み関連遺伝子の単一細胞レベルでのマウスＤＲＧニューロン内の発現プロファイル。ヒートマップ中の数値は閾値法による陽性細胞の割合を示す。全データセットおよび方法は、Ｕｓｏｓｋｉｎら、２０１５で利用可能である。
【図14】ＭＣ９０３治療が皮膚における炎症変化をもたらし、またヒトアトピー性皮膚炎（ＡＤ）でも観察されることを示す図である。図６と関連する。ｐ値によって判断されたコントロールと比較されたＭＣ９０３処置マウスの皮膚における、上位１００種の差次的に発現される遺伝子の規則化対数発現値の遺伝子列Ｚ－スコアの比較。遺伝子は高めて調整されたｐ値に基づいてリスト化される。
【図15】予測された痒み知覚ニューロンがＪＡＫシグナル化成分を発現することを示す図である。図９と関連する。予測される知覚モダリティにおけるタンパク質のＪＡＫファミリーに関する単一細胞レベルでのマウスＤＲＧニューロン内の発現プロファイル。ヒートマップ中の数値は閾値法による陽性細胞の割合を示す。全データセットおよび方法は、Ｕｓｏｓｋｉｎら、２０１５で利用可能である。
【図16】コントロール処置が皮膚における２型免疫細胞をほとんどもたらさないことを示す動画の静止画を示す図である。図７と関連する。ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋コントロール耳の生体内二光子画像の代表的な低速度撮影動画。動画は耳皮膚におけるＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞をほとんど示さない。
【発明を実施するための形態】
【0034】
本開示は、免疫防御メカニズムがホストの行動を直接的に調節する、２型免疫細胞が皮膚において知覚神経線維と相互作用する、ＩＬ－４ＲαまたはＪＡＫ１の知覚ニューロン特異的欠損が慢性痒みを低下する、および臨床試験がＪＡＫ阻害剤が慢性痒みを緩和することを実証している、という発見に少なくとも部分的に基づいている。本明細書で示されるように、本開示はこの方法を必要とする被験体における慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）を治療するための方法を提供する。
【0035】
特に、現在まで、ＣＩＰの治療は成功していない。本明細書において、ＣＩＰを治療する上で未対処のままである必要性に対する解決が説明される。さらに、ＪＡＫ阻害剤の鼻腔内投与を用いて成功した治療が本明細書で示されている。鼻腔内投与は、利用し易く、患者コンプライアンスを高めるため、臨床的に有用である。
【0036】
局所および全身の両抗炎症剤に一般的に反応する多くの炎症性掻痒性疾患と対照的に、慢性特発性掻痒症は多くの異なるタイプの抗炎症性治療に対してしばしば耐性である。驚くべきことに、本出願者らは抗炎症性化合物であることもできるＪＡＫ阻害剤が、慢性特発性掻痒症を効果的に治療するために使用できることを発見している。本発明のさらなる態様は、後述でさらに詳細に説明される。
【0037】
哺乳動物は侵入する病原体および有害な環境因子を追い払うために、咳および引っ掻きのような神経生理学的な反射作用を進化させている。これらの反応はまた、喘息およびアトピー性皮膚炎のような慢性炎症性疾患とも関連することが十分確立されている。しかし、炎症経路が痒みのような知覚を促進するメカニズムはほとんど理解されていないままである。
【0038】
本明細書で説明されるように、２型サイトカインであるＩＬ－４およびＩＬ－１３は知覚ニューロンを直接的に刺激し、慢性痒みはニューロンのＩＬ－４ＲαおよびＪＡＫ１シグナル化に依存している。本明細書で説明されるように、困難な慢性痒みを有する患者は、ＪＡＫ阻害剤によって治療されるとき、著しく改善する。このため、免疫系に対して既に説明されているシグナル化メカニズムは、神経系内の新規治療標的を示し得る。まとめると、これらの試験は知覚神経系が古典的な免疫シグナル化経路を使用して哺乳動物の行動に影響を及ぼす、進化的に保存されたパラダイムを明らかにする。
【0039】
本明細書で説明されるように、知覚ニューロンが既に定められている痒み知覚経路に沿って古典的免疫シグナル化分子ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって直接的に活性化されることが実証されており、ニューロン２型サイトカインシグナル化が慢性痒みを仲介するという仮説を引き起こす。実際、ＩＬ－４Ｒαの知覚ニューロン特異的遺伝子欠失を使用して、ＩＬ－４Ｒαのニューロン発現が頑強な痒みと関連するアトピー性皮膚炎（ＡＤ）の確立されたマウスモデルにおける慢性痒みの発症に必要とされることが発見された。ＩＬ－４Ｒαシグナル化生物学に基づき、調節不全化したニューロンのヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）シグナル化は、そのため慢性痒みが仲介される保存的メカニズムであり得ると仮定される。際立ったことに、薬理学的ＪＡＫ阻害およびＪＡＫ１の知覚ニューロン特異的遺伝子欠失の両方が慢性痒みの減少を示した。ＪＡＫ阻害剤は抗炎症剤として十分確立されているが（Ｈｉｒａｈａｒａら，２０１６、Ｓｃｈｗａｒｔｚら，２０１６）、これらがさらなる神経調節特性を示すかどうかは分かっていない。これらの可能性を支持するものとして、ＪＡＫ阻害剤トファシチニブによって、他の広範な抗炎症療法が失敗した後に適応外で治療されたＣＩＰ患者の小コホートにおける痒み徴候の劇的な改善が認められた。このため、免疫系に既に帰せられているこれらのシグナル化メカニズムはまた、慢性痒みの治療のための知覚神経系内の新規標的を示し得る。痒みを超えて、ＩＬ－４ＲαおよびＪＡＫ１シグナル化を含むこれらの新しい神経免疫学的経路の発見は、複数の障壁面における知覚認識への新たな洞察およびこれらの経路がホスト行動をいかに調節するかを明らかにし得る。ＩＬ－４およびＩＬ－１３以上に多くのサイトカイン、神経伝達物質（例えば、セロトニン）さえもＪＡＫを通してシグナルを送ることが認められている。このため、ＪＡＫ阻害の作用メカニズムは、アトピー性皮膚炎またはＣＩＰのような２型サイトカイン関連痒みを超えて多くの他の痒み疾患まで拡大する可能性がある。
【0040】
ＪＡＫ阻害剤
本開示の別の態様は、ＪＡＫ阻害剤を提供する。「ＪＡＫ阻害剤」または「ヤヌスキナーゼ阻害剤」は、ヤヌスキナーゼファミリー（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）の１種類以上の酵素の活性を阻害することによって機能し、これによってＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル化経路を干渉する、医薬品として有効な成分を意味することができる。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＪＡＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ３およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。適切なＪＡＫ阻害剤の非限定的な例には、イタシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、バリシチニブ、ククルビタシン（ＪＳＩ１２４）、フェドラチニブ、フィルゴチニブ（ＧＬＰＧ０６３４）、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、レスタウルチニブ、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ウパダシチニブ、ＡＺＤ１４８０、ＢＭＳ９１１５４３、ＣＨＺ８６８、ソルシチニブ（ＧＳＫ２５８６１８４）、ＮＳ－０１８、およびＸＬ－０１９が含まれる。例示的な実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はルキソリチニブおよびトファシチニブから選択される。
本開示の別の態様は、ＪＡＫ阻害剤を提供する。「ＪＡＫ阻害剤」または「ヤヌスキナーゼ阻害剤」は、ヤヌスキナーゼファミリー（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）の１種類以上の酵素の活性を阻害することによって機能し、これによってＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル化経路を干渉する、医薬品として有効な成分を意味することができる。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＪＡＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ３およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＪＡＫ３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２を阻害する。適切なＪＡＫ阻害剤の非限定的な例には、イタシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、バリシチニブ、ククルビタシン（ＪＳＩ１２４）、フェドラチニブ、フィルゴチニブ（ＧＬＰＧ０６３４）、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、レスタウルチニブ、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、ウパダシチニブ、ＡＺＤ１４８０、ＢＭＳ９１１５４３、ＣＨＺ８６８、ソルシチニブ（ＧＳＫ２５８６１８４）、ＮＳ－０１８、およびＸＬ－０１９が含まれる。例示的な実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はルキソリチニブおよびトファシチニブから選択される。
【0041】
「ＪＡＫ阻害剤」または「ヤヌスキナーゼ阻害剤」は、ヤヌスキナーゼファミリー（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）の１種類以上の酵素の活性を阻害することによって機能し、これによってＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル化経路を干渉する、医薬品として有効な成分であることができる。
【0042】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、
ベンゾイミダゾール核、
プリン核、
または、
ピロロピリジン核
に基づくことができる。
ベンゾイミダゾール核、
【化5】
【化6】
ピロロピリジン核
【化7】
【0043】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は式（Ｉ）であることができ、
ここで、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＺはＣおよびＮからなる群から選択される。
【化8】
【0044】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、水素、アルキル（例えば、メチル）、アセトアミド；
であることができる。
【化9】
【0045】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリール；非置換フェニル環；置換フェニル環；非置換ヘテロシクリル；および置換ヘテロシクリルを含むアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換フェニル環または置換フェニル環は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルは、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；ヘテロシクリル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換される。
非置換フェニル環または置換フェニル環は、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；ヘテロシクリル；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換され、
非置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルは、ヒドロキシル；Ｃ１－１０アルキルヒドロキシル；アミン；Ｃ１－１０カルボン酸；Ｃ１－１０カルボキシル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキル；任意に不飽和を含む直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；任意に不飽和あるいは１つの酸素または窒素原子を含むＣ２－６シクロアルキル；ヘテロシクリル；直鎖または分枝Ｃ１－１０アルキルアミン；複素環アミン；フェニルを含むアリール；および１～４個のＮ、Ｏ、またはＳ原子を含むヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意に置換される。
【0046】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はトファシチニブ、
であることができる。
【化10】
【0047】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はルキソリチニブ、
であることができる。
【化11】
【0048】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はバリシチニブ、
であることができる。
【化12】
【0049】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はイタシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、
であることができる。
【化13】
【0050】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はオクラシチブ、
であることができる。
【化14】
であることができる。
【0051】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＡＺＤ１４８０、
であることができる。
【化15】
【0052】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はフェドラチニブ、
であることができる。
【化16】
【0053】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＡＴ９２８３、
であることができる。
【化17】
【0054】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＡＧ－４９０、
であることができる。
【化18】
【0055】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はモメロチニブ、
であることができる。
【化19】
【0056】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＷＰ１０６６、
であることができる。
【化20】
【0057】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＴＧ１０１２０９、
であることができる。
【化21】
【0058】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はガンドチニブ、
であることができる。
【化22】
【0059】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＮＶＰ－ＢＳＫ８０５・２ＨＣｌ、
であることができる。
【化23】
【0060】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＡＺ９６０、
であることができる。
【化24】
【0061】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＣＥＰ－３３７７９、
であることができる。
【化25】
【0062】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はパクリチニブ、
であることができる。
【化26】
【0063】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＷＨＩ－Ｐ１５４、
であることができる。
【化27】
【0064】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＸＬ０１９、
であることができる。
【化28】
【0065】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＳ－ルキソリチニブ、
であることができる。
【化29】
【0066】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＺＭ３９９２３・ＨＣｌ、
であることができる。
【化30】
【0067】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はデセルノチニブ、
であることができる。
【化31】
【0068】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はセルデュラチニブ、
であることができる。
【化32】
【0069】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はフィルゴチニブ、
であることができる。
【化33】
【0070】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＦＬＬＬ３２、
であることができる。
【化34】
【0071】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＢＭＳ－９１１５４３、
であることができる。
【化35】
【0072】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はペフィシチニブ、
であることができる。
【化36】
【0073】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＧＬＰＧ０６３４アナログ、
であることができる。
【化37】
【0074】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＧｏ６９７６、
であることができる。
【化38】
【0075】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はクルクモール、
であることができる。
【化39】
【0076】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はククルビタシン、
であることができる。
【化40】
【0077】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はレスタウルチニブ、
であることができる。
【化41】
【0078】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はウパダシチニブ、
であることができる。
【化42】
【0079】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＣＨＺ８６８、
であることができる。
【化43】
【0080】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はソルシチニブ（ＧＳＫ２５８６１８４）、
であることができる。
【化44】
【0081】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤はＮＳ－０１８、
であることができる。
【化45】
【0082】
用語「イミン」または「イミノ」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、炭素－窒素二重結合を含む官能基または化学化合物を含む。表現「イミノ化合物」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、本明細書で定められる「イミン」または「イミノ」基を含む化合物を意味する。
【0083】
用語「ヒドロキシル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、－ＯＨを含む。
【0084】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、塩素、クロロ、Ｃｌ；フッ素、フルオロ、Ｆ；臭素、ブロモ、Ｂｒ；あるいはヨウ素、ヨード、またはＩを含む。
【0085】
用語「アリール」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、炭素環芳香族を含む。アリール基の例には、限定されないが、フェニル、ベンジル、ナフチル、またはアントラセニルが含まれる。
【0086】
用語「アミン」および「アミノ」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、孤立電子対を有する窒素原子を含み、ここで１つ以上の水素原子が、限定されないが、アルキル基またはアリール基のような置換基によって置換されている官能基を含む。
【0087】
用語「アルキル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル基などの直鎖または分枝部分を有する飽和一価炭化水素ラジカルを含む。代表的な直鎖低級アルキル基には、限定されないが、－メチル、－エチル、－ｎ－プロピル、－ｎ－ブチル、－ｎ－ペンチル、－ｎ－ヘキシル、－ｎ－ヘプチル、および－ｎ－オクチルが含まれ、一方、分枝低級アルキル基には、限定されないが、－イソプロピル、－ｓ－ブチル、－イソブチル、－ｔ－ブチル、－イソペンチル、２－メチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、２，２－ジメチルブチル、２，３－ジメチルブチル、２，２－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２，３，４－トリメチルペンチル、３－メチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、３，５－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルペンチル、２－メチルヘプチル、３－メチルヘプチルが含まれ、不飽和Ｃ１～Ｃ８アルキルには、限定されないが、－ビニル、－アリル、－１－ブテニル、－２－ブテニル、－イソブチレニル、－１－ペンテニル、－２－ペンテニル、－３－メチル－１－ブテニル、－２－メチル－２－ブテニル、－２，３－ジメチル－２－ブテニル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、－アセチレニル、－プロピニル、－１－ブチニル、－２－ブチニル、－１－ペンチニル、－２－ペンチニル、または－３－メチル－１－ブチニルが含まれる。アルキルは、飽和、部分的に飽和、または不飽和であることができる。
【0088】
用語「カルボキシル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、酸素原子と二重結合され、ヒドロキシル基と単結合された炭素原子からなる官能基（－ＣＯＯＨ）を含む。
【0089】
用語「アルケニル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有するアルキル部分を含み、ここでアルキルは前述の通り定められ、当該アルケニル部分のＥおよびＺアイソマーを含む。アルケニルは部分的に飽和または不飽和であることができる。
【0090】
用語「アルキニル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有するアルキル部分を含み、ここでアルキルは前述で定められる通りである。アルキニルは部分的に飽和または不飽和であることができる。
【0091】
用語「アシル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、脂肪族カルボン酸から、ヒドロキシル（－ＯＨ）基を除くことによって引き出される官能基を含む。
【0092】
用語「アルコキシル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、Ｏ－アルキル基を含み、ここでアルキルは前述で定められる通りであり、Ｏは酸素を表す。代表的なアルコキシル基には、限定されないが、－Ｏ－メチル、－Ｏ－エチル、－Ｏ－ｎ－プロピル、－Ｏ－ｎ－ブチル、－Ｏ－ｎ－ペンチル、－Ｏ－ｎ－ヘキシル、－Ｏ－ｎ－ヘプチル、－Ｏ－ｎ－オクチル、－Ｏ－イソプロピル、－Ｏ－ｓ－ブチル、－Ｏ－イソブチル、－Ｏ－ｔ－ブチル、－Ｏ－イソペンチル、－Ｏ－２－メチルブチル、－Ｏ－２－メチルペンチル、－Ｏ－３－メチルペンチル、－Ｏ－２，２－ジメチルブチル、－Ｏ－２，３－ジメチルブチル、－Ｏ－２，２－ジメチルペンチル、－Ｏ－２，３－ジメチルペンチル、－Ｏ－３，３－ジメチルペンチル、－Ｏ－２，３，４－トリメチルペンチル、－Ｏ－３－メチルヘキシル、－Ｏ－２，２－ジメチルヘキシル、－Ｏ－２，４－ジメチルヘキシル、－Ｏ－２，５－ジメチルヘキシル、－Ｏ－３，５－ジメチルヘキシル、－Ｏ－２，４－ジメチルペンチル、－Ｏ－２－メチルヘプチル、－Ｏ－３－メチルヘプチル、－Ｏ－ビニル、－Ｏ－アリル、－Ｏ－１－ブテニル、－Ｏ－２－ブテニル、－Ｏ－イソブチレニル、－Ｏ－１－ペンテニル、－Ｏ－２－ペンテニル、－Ｏ－３－メチル－１－ブテニル、－Ｏ－２－メチル－２－ブテニル、－Ｏ－２，３－ジメチル－２－ブテニル、－Ｏ－１－ヘキシル、－Ｏ－２－ヘキシル、－Ｏ－３－ヘキシル、－Ｏ－アセチレニル、－Ｏ－プロピニル、－Ｏ－１－ブチニル、－Ｏ－２－ブチニル、－Ｏ－１－ペンチニル、－Ｏ－２－ペンテニル、－Ｏ－３－メチル－１－ブチニル、－Ｏ－シクロプロピル、－Ｏ－シクロブチル、－Ｏ－シクロペンチル、－Ｏ－シクロヘキシル、－Ｏ－シクロヘプチル、－Ｏ－シクロオクチル、－Ｏ－シクロノニル、－Ｏ－シクロデシル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロプロピル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロブチル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロペンチル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロヘキシル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロヘプチル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロオクチル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロノニル、－Ｏ－ＣＨ２－シクロデシル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロプロピル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロブチル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロペンチル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロヘキシル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロヘプチル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロオクチル、－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロノニル、または－Ｏ－（ＣＨ２）２－シクロデシルが含まれる。アルコキシルは飽和、部分的に飽和、または不飽和であることができる。
【0093】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、非芳香族、飽和、部分的飽和、または不飽和、単環または融合、スピロまたは非融合二環または三環炭化水素を含み、本明細書では全３～１０個の炭素原子、好ましくは３～８個の環炭素原子を含むことを意味する。シクロアルキルの例には、限定されないが、－シクロプロピル、－シクロブチル、－シクロペンチル、－シクロペンタジエニル、－シクロヘキシル、－シクロヘキセニル、－１，３－シクロヘキサジエニル、－１，４－シクロヘキサジエニル、－シクロヘプチル、－１，３－シクロヘプタジエニル、－１，３，５－シクロヘプタトリエニル、－シクロオクチル、および－シクロオクタジエニルを限定されないが含むＣ３－Ｃ８シクロアルキル基が含まれる。
【0094】
用語「シクロアルキル」はまた、－低級アルキル－シクロアルキルを含み、ここで低級アルキルおよびシクロアルキルは前述で定められる通りである。－低級アルキル－シクロアルキル基の例には、限定されないが、－ＣＨ２－シクロプロピル、－ＣＨ２－シクロブチル、－ＣＨ２－シクロペンチル、－ＣＨ２－シクロペンタジエニル、－ＣＨ２－シクロヘキシル、－ＣＨ２－シクロヘプチル、または－ＣＨ２－シクロオクチルが含まれる。
【0095】
用語「複素環」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、環炭素原子の１～４個がＯ、Ｓ、およびＮからなる群からのヘテロ原子で独立して置換されている芳香族または非芳香族シクロアルキルを含む。複素環の代表的な例には、限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、ピロリジニル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、（１，４）－ジオキサン、（１，３）－ジオキソラン、４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾリル、またはテトラゾリルが含まれる。複素環は置換または非置換であることができる。複素環はまた、いずれかの環原子（すなわち、複素環の任意の炭素原子またはヘテロ原子）で結合され得る。複素環は飽和、部分的に飽和、または不飽和であることができる。
【0096】
用語「シアノ」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、－ＣＮ基を含む。
【0097】
用語「アルコール」は、本明細書で使用されるとき、他に指示がない限り、ヒドロキシル基（－ＯＨ）が炭素原子と結合される化合物を含む。特に、この炭素中心は飽和であり、３つの他の原子との単結合を有する。
【0098】
カルボシクリルおよびヘテロシクリルが置換されるとき、これらは一般的に１または２つの置換基によって置換される（例えば、１置換基）。一般的に置換基はメチルである。より一般的には、カルボシクリルおよびヘテロシクリル基は非置換である。
【0099】
アリールおよびヘテロアリールが置換されるとき、これらは一般的に１、２、または３つ（例えば、１または２つ）の置換基によって置換される。アリールおよびヘテロアリールの置換基は、Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル）、Ｃ２－６アルケニル（例えば、ブテン－３－イル）、Ｃ２－６アルキニル（例えば、ブチン－３－イル）、Ｃ１－６ハロアルキル（例えば、フルオロメチル、トリフルオロメチル）、－Ｃ１－６チオアルキル（例えば、－Ｓ－メチル）、－ＳＯＣ１－４アルキル（例えば、－ＳＯメチル）、－ＳＯ２Ｃ１－４アルキル（例えば、－ＳＯ２メチル）、Ｃ１－６アルコキシ－（例えば、メトキシ、エトキシ）、－Ｏ－Ｃ３－８シクロアルキル（例えば、－Ｏ－シクロペンチル）、Ｃ３－８シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロヘキシル）、－ＳＯ２Ｃ３－８シクロアルキル（例えば、－ＳＯ２シクロヘキシル）、－ＳＯＣ３－６シクロアルキル（例えば、－ＳＯシクロプロピル）、Ｃ３－６アルケニルオキシ－（例えば、－Ｏ－ブテン－２－イル）、Ｃ３－６アルキニルオキシ－（例えば、－Ｏ－ブテン－２－イル）、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－６アルキル（例えば、－Ｃ（Ｏ）エチル）、－Ｃ（Ｏ）ＯＣ１－６アルキル（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－メチル）、Ｃ１－６アルコキシ－Ｃ１－６アルキル－（例えば、メトキシ－エチル－）、ニトロ、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、ヒドロキシル、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣ１－４アルキル（例えば、－ＮＨメチル）、－Ｎ（Ｃ１－４アルキル）（Ｃ１－４アルキル）（例えば、－Ｎ（メチル）２）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－４アルキル）（Ｃ１－４アルキル）（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（メチル）２）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１－４アルキル）（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＮＨメチル）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ３－１０シクロアルキル）（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＮＨシクロプロピル）から選択される。より一般的には、置換基は、Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル）、Ｃ１－６ハロアルキル（例えば、Ｃ１－６フルオロアルキル、例えばＣＦ３）、Ｃ１－６アルコキシ（例えば、ＯＭｅ）、ハロゲン、およびヒドロキシから選択される。
【0100】
Ｒ基がヘテロアリールを表すとき、例には単環（例えば、５および６員）および二環（例えば、９および１０員、特に９員）ヘテロアリール環が含まれ、特に環は窒素原子（例えば、１または２個の窒素原子）を含む。適切な二環ヘテロアリール環は、１または２個の窒素原子を含む９員ヘテロアリール環であり、特に１または２個の窒素原子を含む５員環と融合されるベンゼン環（例えば、１Ｈ－ベンゾイミダゾリル）である。最も好適には、結合点はベンゼン環を通るものであり、例えば、基は１Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－イルである。前述のヘテロアリール基は非置換（より一般的である）であり得、あるいは好適にはアルキル（例えば、ＭｅのようなＣ１－４アルキル）、アルコキシ－（例えば、ＯＭｅのようなＣ１－４アルコキシ）、およびハロゲン（例えば、Ｆ）から選択される１つ以上（例えば、１または２つ）の置換基によって置換され得る。
【0101】
Ｒ基が－Ｃ３－８カルボシクリル－ヘテロアリールを表すとき、カルボシクリルの例には、シクロアルキル（例えば、シクロヘキシル）およびシクロアルケニル（例えば、シクロヘキセニル）が含まれ、ヘテロアリール基の例には、単環（例えば、５または６員、特に５員）が含まれ、特に環は窒素原子、例えば、１または２個の窒素原子を含む。前述のヘテロアリール基は非置換（より一般的である）であり得、あるいは好適にはアルキル（例えば、ＭｅのようなＣ１－４アルキル）、アルコキシ－（例えば、ＯＭｅのようなＣ１－４アルコキシ）、およびハロゲン（例えば、Ｆ）から選択される１つ以上（例えば、１または２つ）の置換基によって置換され得る。適切なヘテロアリール基はイミダゾール－１－イルである。例示的な－Ｃ３－８カルボシクリル－ヘテロアリール基は３－イミダゾール－１－イル－シクロヘキシル－である。
【0102】
Ｒ基が－Ｃ２－６アルキニルヘテロアリールを表すとき、Ｃ２－６アルキニルの例にはＣ２－４アルケニル、特にプロペニルが含まれ、ヘテロアリール基の例には単環（例えば、５または６員、特に５員）が含まれ、特に環は窒素原子、例えば、１または２個の窒素原子を含む。前述のヘテロアリール基は非置換（より一般的である）であり得、あるいは好適にはアルキル（例えば、ＭｅのようなＣ１－４アルキル）、アルコキシ－（例えば、ＯＭｅのようなＣ１－４アルコキシ）、およびハロゲン（例えば、Ｆ）から選択される１つ以上（例えば、１または２つ）の置換基によって置換され得る。適切なヘテロアリール基はイミダゾリル、特にイミダゾール－１－イルである。例示的な－アルケニルヘテロアリール基は３－イミダゾール－１－イル－プロプ－２－エニル－である。
【0103】
Ｒ基が－Ｃ１－６アルキルヘテロアリールを表すとき、Ｃ１－６アルキルの例にはＣ１－５アルキルまたはＣ１－４アルキル、特にＣ２－５アルキルまたはＣ２－４アルキル、特にプロピルが含まれ、ヘテロアリール基の例には単環（例えば、５または６員、特に５員）が含まれ、特に環は窒素原子、例えば、１または２個の窒素原子を含む。前述のヘテロアリール基は非置換（最も一般的である）であり得、あるいは好適にはアルキル（例えば、ＭｅのようなＣ１－４アルキル）、アルコキシ－（例えば、ＯＭｅのようなＣ１－４アルコキシ）、およびハロゲン（例えば、Ｆ）から選択される１つ以上（例えば、１または２つ）の置換基によって置換され得る。適切なヘテロアリール基はイミダゾール－１－イルである。特に適切な－アルキルヘテロアリール基は３－イミダゾール－１－イル－プロピル－である。
【0104】
Ｒが－Ｃ１－６アルキルヘテロアリールを表すとき、例としてアルキルは分枝であり、
を含む。
【化46】
【0105】
Ｒ基が（ＣＨ２）ａＣＲ５Ｒ６（ＣＨ２）ｂヘテロアリールを表し、ここでａおよびｂは独立して整数０～５を表してａ＋ｂ＝０～５であり、Ｒ５およびＲ６はこれらが結合されてＣ３－Ｃ５アシクロアルキル基を形成する炭素をともに有するアルキレンであるとき、例には
を含む。
【化47】
【0106】
Ｒヘテロアリール基の特定な例は２または３個の窒素原子を含む５員環を含み、環は任意に置換され得（例えば、特にメチルのような１または２つの基によって）、例えば、
が挙げられる。
【化48】
【0107】
Ｒヘテロアリール基の他の例には、２個の窒素原子を含む９員二環が含まれ、環は任意に置換され得、例えば、
が挙げられる。
【化49】
【0108】
明らかに、前述で示されるヘテロアリール基はまた、－Ｃ３－８カルボシクリル－ヘテロアリール、－Ｃ２－６アルケニルヘテロアリール、または－Ｃ１－６アルキルヘテロアリールのような大きなＲ基の一部として存在し得る。
【0109】
Ｒ基が－Ｃ１－８アルキルを表すとき、例にはメチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ－ブチ－ｓ－ブチル、イソブチル、およびｔ－ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ－ペンチル、３，３－ジメチルプロピル）、ヘキシル、ヘプチル、およびオクチルが含まれる。
【0110】
Ｒ基が任意に置換されたアリールを表すとき、アリールは一般的にフェニルを表し得る。例示的な置換フェニル基には、３－メチルフェニル－、２，３－ジクロロフェニル－、２，３－ジフルオロフェニル－、２，４－ジクロロフェニル－、２，４－ジフルオロフェニル－、２，４－ジメトキシフェニル－、２，４－ジメチルフェニル－、２，４－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－、２，４，６－トリフルオロフェニル－、２，４，６－トリメチルフェニル－、２，６－ジクロロフェニル－、２，６－ジフルオロフェニル－、２，６－ジメトキシフェニル－、２，６－ジフルオロ－４－（メトキシ）フェニル－、２－イソプロピル－６－メチルフェニル－、３－（シクロペンチルオキシ）－４－メトキシフェニル－、３，４，５－トリメトキシフェニル－、３，４－ジメトキシフェニル－、３，４－ジクロロフェニル－、３，４－ジフルオロフェニル－、３，４－ジメチルフェニル－、３，４，５－トリフルオロフェニル－、３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－、３，５－ジメトキシフェニル－、２－メトキシフェニル－、３－メトキシフェニル－、４－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－ブロモフェニル－、４－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－クロロフェニル－、４－シアノフェニル－、４－エトキシフェニル－、４－エチルフェニル－、４－フルオロフェニル－、４－イソプロピルフェニル－、４－メトキシフェニル、４－エトキシフェニル、４－プロポキシフェニル－、４－ブトキシフェニル－、４－ペントキシフェニル－、４－イソプロピルオキシフェニル－、４－テトラフルオロエチルオキシフェニル－が含まれる。あるいは、Ｒ２は非置換フェニル－を表し得る。さらなる置換フェニル基の例には、２，３，４－トリフルオロフェニル、２，３－ジフルオロ－４－メチルフェニル、２－ブロモ－４－フルオロフェニル－、２－ブロモ－５－フルオロフェニル－、２－クロロフェニル－、２－フルオロフェニル－、２－フルオロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル－、２－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル－、２－ヒドロキシ－５－メチルフェニル－、３－クロロフェニル－、３－フルオロフェニル－、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル－、３－フルオロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル－、２－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル－、３－フルオロ－４－（メトキシ）フェニル－、３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル－、４－ブロモ－２－フルオロフェニル－、４－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－クロロ－３－メチルフェニル、４－クロロフェニル－、４－フルオロフェニル－、および４－プロポキシフェニル－が含まれる。
【0111】
Ｒ基が任意に置換されたアリールを表し、アリールがナフチルを表すとき、例には非置換ナフチル（例えば、ナフタレン－１－イル、ナフタレン－２－イル、ナフタレン－３－イル）、ならびに置換ナフチル（例えば、４－メチル－ナフタレン－２－イル－、５－メチル－ナフタレン－３－イル－、７－メチル－ナフタレン－３－イル－、および４－フルオロ－ナフタレン－２－イル－）が含まれる。
【0112】
Ｒ基が任意に置換ヘテロアリールを表すとき、例には任意に置換され得る単環（例えば、５または６員環）および二環（例えば、９または１０員環）が含まれる。５員環の例には、ピロリル（例えば、ピロール－２－イル）およびイミダゾリル（例えば、１Ｈ－イミダゾール－２－イルまたは１Ｈ－イミダゾール－４－イル）、ピラゾリル（例えば、１Ｈ－ピラゾール－３－イル）、フラニル（例えば、フラン－２－イル）、チアゾリル（例えば、チアゾール－２－イル）、チオフェニル（例えば、チオフェン－２－イル、チオフェン－３－イル）が含まれる。６員環の例には、ピリジニル（例えば、ピリジン－２－イルおよびピリジン－４－イル）が含まれる。言及される特定の置換基は、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル（例えば、メチル）、およびアルコキシ－（例えば、メトキシ－）から選択される１つ以上、例えば、１、２、または３つの基であり得る。置換５員環の例には、４，５－ジメチル－フラン－２－イル－、５－ヒドロキシメチル－フラン－２－イル－、５－メチル－フラン－２－イル－、および６－メチル－ピリジン－２－イル－が含まれる。置換６員環の例には、１－オキシ－ピリジン－４－イル－が含まれる。９員環の例には、１Ｈ－インドリル（例えば、１Ｈ－インドール－３－イル、１Ｈ－インドール－５－イル）、ベンゾチオフェニル（例えば、ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル、特に２－ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）、ベンゾ［１，２，５］－オキサジアゾリル（例えば、ベンゾ［１，２，５］－オキサジアゾール－５－イル）、ベンゾ［１，２，５］－チアジアゾリル（例えば、ベンゾ［１，２，５］－チアジアゾール－５－イル、ベンゾ［１，２，５］チアジアゾール－６－イル）が含まれる。１０員環の例にはキノリニル（例えば、キノリン－３－イル、キノリン－４－イル、キノリン－８－イル）が含まれる。言及される特定の置換基は、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル（例えば、メチル）、およびアルコキシ－（例えば、メトキシ－）から選択される１つ以上、例えば、１、２、または３つの基であり得る。置換９員環の例には、１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル、２－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル、６－メチル－１Ｈ－インドール－３－イルが含まれる。置換１０員環の例には、２－クロロ－キノリン－３－イル、８－ヒドロキシ－キノリン－２－イル、オキソ－クロメニル（例えば、４－オキソ－４Ｈ－クロメン－３－イル）、および６－メチル－４－オキソ－４Ｈ－クロメン－３－イルが含まれる。
【0113】
Ｒ基がカルボシクリルを表すとき、例にはシクロアルキルおよびシクロアルケニルが含まれる。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルが含まれる。シクロアルケニルの例には、シクロヘキセニル（例えば、シクロヘキサ－２－エニル、シクロヘキサ－３－エニル）が含まれる。置換カルボシクリルの例には、２－メチル－シクロヘキシル－、３－メチル－シクロヘキシル－、４－メチル－シクロヘキシル－、２－メチル－クロヘキサ－２－エニル、２－メチル－シクロヘキサ－３－エニル、３－メチル－シクロヘキサ－３－エニル、３－メチル－シクロヘキサ－３－エニルが含まれる。
【0114】
Ｒ基がヘテロシクリル（任意に置換され得る）を表すとき、例には、テトラヒドロフラニル、モルホリニル、ピペリジニル、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、ピロリジニル、メチルテトラヒドロフラニル－（例えば、５－メチルテトラヒドロフラン－２－イル－）が含まれる。
【0115】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキルアリールを表すとき、例には、－アルキル（置換フェニル）が含まれ、例えば、ここでフェニルはアルキル、フルオロアルキル、ハロゲン、およびアルコキシ（例えばメチル、トリフルオロメチル、ｔ－ブチル、クロロ、フルオロ、およびメトキシ）から選択される１つ以上の基で置換されており、例えば、アルキルはＣ１－４アルキルである。別の特定の基は－アルキル（二環アリール）であり、例えば、ここで二環アリールは任意に置換されたナフチルである。さらなる特定な例はベンジルである。
【0116】
Ｒ基が、ヘテロアリールが任意に置換されている－Ｃ１－４アルキルヘテロアリールを表すとき、例にはヘテロアリールが任意に置換れているメチルヘテロアリールおよび－エチルヘテロアリール（例えば１－ヘテロアリールエチルおよび２－ヘテロアリールエチル－）、－プロピルヘテロアリール、および－ブチルヘテロアリールが含まれる。－アルキルヘテロアリール基の特定の例には、ピリジニルメチル－、Ｎ－メチル－ピロール－２－メチル－、Ｎ－メチル－ピロール－２－エチル－、Ｎ－メチル－ピロール－３－メチル－、Ｎ－メチル－ピロール－３－エチル－、２－メチル－ピロール－１－メチル－、２－メチル－ピロール－１－エチル－、３－メチル－ピロール－１－メチル－、３－メチル－ピロール－１－エチル－、４－ピリジノ－メチル－、４－ピリジノ－エチル－、２－（チアゾール－２－イル）－エチル－、２－エチル－インドール－１－メチル－、２－エチル－インドール－１－エチル－、３－エチル－インドール－１－メチル－、３－エチル－インドール－１－エチル－、４－メチル－ピリジン－２－メチル－、４－メチル－ピリジン－２－イル－エチル－、４－メチル－ピリジン－３－メチル－、４－メチル－ピリジン－３－エチル－が含まれる。
【0117】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル－カルボシクリル（任意に置換され得る）を表すとき、例には、－メチル－シクロペンチル、－メチル－シクロヘキシル、－エチル－シクロヘキシル、－プロピル－シクロヘキシル、－メチル－シクロヘキセニル、－エチル－シクロヘキセニル、－メチル（４－メチルシクロヘキシル）、および－プロピル（３－メチルシクロヘキシル）が含まれる。
【0118】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキルヘテロシクリル（任意に置換され得る）を表すとき、例には、－メチル－テトラヒドロフラニル（例えば、－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル、－メチル－テトラヒドロフラン－３－イル）、－エチル－テトラヒドロフラニル、－メチル－ピペリジニルが含まれる。
【0119】
Ｒ基がフェニル基によって置換されたフェニル、または単環ヘテロアリール基によって置換されたフェニルを表すとき、上記フェニルおよびヘテロアリール基のいずれかは任意に置換され得、一般的には窒素原子と直接的に結合されるフェニル環が非置換であり、末端フェニル環または単環ヘテロアリール環は任意に１、２、または３つの置換基（例えば、１または２つ、例えば、１つ）によって置換される。一般的に末端フェニルまたは単環ヘテロアリール基は非置換である。一般的に末端フェニルまたは単環ヘテロアリール基は４位で他のフェニル基を置換する。
【0120】
Ｒ基がフェニルによって置換されるフェニルを表すとき、上記フェニル基のいずれかは任意に置換され得、例には、－ビフェニル－４－イルを含む。
【0121】
Ｒ基が単環ヘテロアリールによって置換されるフェニルを表すとき、上記フェニルおよびヘテロアリール基のいずれかは任意に置換され得、例には、－４－（オキサゾール－５－イル）フェニル－を含む。
【0122】
Ｒ基がベンジルオキシによって置換されるフェニルを表すとき、上記フェニルおよびベンジルオキシ基のいずれかは任意に置換され得、例えば、４－ベンジルオキシ－フェニル－、４－（３－メチルベンジルオキシ）フェニル－、および４－（４－メチルベンジルオキシ）フェニル－を含む。
【0123】
Ｒ基が任意に置換されたカルボシクリルと融合された任意に置換されたフェニルを表すとき、例にはインダニル（例えば、インダン－４－イル－、２－メチル－インダン－４－イル－）、インデニル、およびテトラリニルを含む。
【0124】
Ｒ基が任意に置換されたヘテロシクリルに融合された任意に置換されたフェニルを表すとき、例にはベンゾ［１，３］ジオキソ－４－イル－および２，３－ジヒドロ－ベンゾ［１，４］ジオキシン－４－イル－を含む。
【0125】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル（フェニルによって置換されたフェニル）を表すとき、例にはビフェニル－４－イル－メチル－を含む。
【0126】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル（単環ヘテロアリールによって置換されたフェニル）を表すとき、例には４－（オキサゾール－５－イル）フェニル－メチル－を含む。
【0127】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル（ベンジルオキシによって置換されたフェニル）を表すとき、上記フェニルおよびベンジルオキシ基のいずれかは任意に置換され得、例えば、４－ベンジルオキシ－フェニル－メチル－、４－（３－メチルベンジルオキシ）フェニル－メチル－、および４－（４－メチルベンジルオキシ）フェニル－メチル－を含む。
【0128】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル（任意に置換されたカルボシクリルと融合された任意に置換されたフェニル）を表すとき、例にはインダニル－メチル－（例えば、インダン－４－イル－メチル－、２－メチル－インダン－４－イル－メチル－）、インデニル－メチル－、およびテトラリニル－メチル－を含む。
【0129】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキル（任意に置換されたヘテロシクリルに融合された任意に置換されたフェニル）を表すとき、例にはベンゾ［１，３］ジオキソ－４－イル－メチル－および２，３－ジヒドロ－ベンゾ［１，４］ジオキシン－４－イル－メチル－を含む。
【0130】
Ｒ基が－Ｃ１－４アルキルを表すとき、例にはメチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ－プロピル、イソプロピル）、およびブチル（例えば、ｎ－ブチ－ｓ－ブチル、イソブチル、およびｔ－ブチル）を含む。
【0131】
Ｒ基が任意に置換されたアリールを表すとき、アリールは一般的にフェニルを表し得る。例示的な置換フェニル基には、２，４－ジクロロフェニル－、２，４－ジフルオロフェニル－、２，４－ジメトキシフェニル－、２，４－ジメチルフェニル－、２，４－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－、２，４，６－トリフルオロフェニル－、２，４，６－トリメチルフェニル－、２，６－ジクロロフェニル－、２，６－ジフルオロフェニル－、２，６－ジメトキシフェニル－、２－イソプロピル－６－メチルフェニル－、３－（シクロペンチルオキシ）－４－メトキシフェニル－、３，４，５－トリメトキシフェニル－、３，４－ジメトキシフェニル－、３，４－ジクロロフェニル－、３，４－ジメチルフェニル－、３，４，５－トリフルオロフェニル－、３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル－、３，５－ジメトキシフェニル－、３－メトキシフェニル－、４－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－ブロモ－２－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－ブロモフェニル－、４－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－クロロフェニル－、４－シアノフェニル－、４－エトキシフェニル－、４－エチルフェニル－、４－フルオロフェニル－、４－イソプロピルフェニル－、４－メトキシフェニル－が含まれる。あるいは、Ｒ３は非置換フェニル－を表し得る。さらなる置換フェニル基の例には、２－ブロモ－４－フルオロフェニル－、２－ブロモ－５－フルオロフェニル－、２－クロロフェニル－、２－フルオロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル－、２－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル－、２－ヒドロキシ－５－メチルフェニル－、３－クロロフェニル－、３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル－、３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル－、４－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル－、４－クロロフェニル－、４－フルオロフェニル－、および４－プロポキシフェニル－が含まれる。
【0132】
Ｒ１およびＲ２またはＲ３およびＲ４が結合されてカルボシクリル環を形成するとき、１つ以上のＣ１－２アルキル基によって任意に置換され、例にはシクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシル）およびシクロアルケニル（例えば、シクロヘキセニル）を含む。
【0133】
Ｒ１およびＲ２またはＲ３およびＲ４が結合されてフェニルと融合されるカルボシクリル環を形成するとき、例にはインダニル（例えば、インダン－２－イル）およびテトラリニルを含む。
【0134】
Ｒ１およびＲ２またはＲ３およびＲ４が結合されて単環ヘテロアリールと融合されるカルボシクリル環を形成するとき、例には６員ヘテロアリールと融合された５員カルボシクリル、６員ヘテロアリールと融合された６員カルボシクリル、５員ヘテロアリールと融合された５員カルボシクリル、および５員ヘテロアリールと融合された６員カルボシクリルを含む。カルボシクリルが融合される単環ヘテロアリールは、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、１、２または３個のヘテロ原子、例えば、１または２個、例えば、１個のヘテロ原子）を含む。
【0135】
Ｒ基が－Ｃ１－８アルキルを表すとき、例にはメチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ－ブチル－、ｓ－ブチル、イソブチル、およびｔ－ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ－ペンチル、３，３－ジメチルプロピル）、ヘキシル、ヘプチル、およびオクチルを含む。
【0136】
Ｒ基が－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－６アルキルを表すとき、例には、－Ｃ（Ｏ）メチル、－Ｃ（Ｏ）エチル、－Ｃ（Ｏ）プロピル、および－Ｃ（Ｏ）ブチルのような－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－４アルキルを含む。
【0137】
用語「溶媒和物」は、特定された化合物の溶媒和物型を意味することが意図され、当該化合物の有効性を保持する。溶媒和物の例には、例えば、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル、酢酸、またはエタノールアミンと組み合わせた本発明の化合物を含む。
【0138】
用語「ｍｍｏｌ」は、本明細書で使用されるとき、ミリモルを意味することが意図される。用語「当量」は、本明細書で使用されるとき、等価である量を意味することが意図される。用語「ｍＬ」は、本明細書で使用されるとき、ミリリットルを意味することが意図される。用語「ｇ」は、本明細書で使用されるとき、グラムを意味することが意図される。用語「ｋｇ」は、本明細書で使用されるとき、キログラムを意味することが意図される。用語「μｇ」は、本明細書で使用されるとき、マイクログラムを意味することが意図される。用語「ｈ」は、本明細書で使用されるとき、時間を意味することが意図される。用語「ｍｉｎ」は、本明細書で使用されるとき、分を意味することが意図される。用語「Ｍ」は、本明細書で使用されるとき、モルを意味することが意図される。用語「μＬ」は、本明細書で使用されるとき、マイクロリットルを意味することが意図される。用語「μＭ」は、本明細書で使用されるとき、マイクロモルを意味することが意図される。用語「ｎＭ」は、本明細書で使用されるとき、ナノモルを意味することが意図される。用語「Ｎ」は、本明細書で使用されるとき、規定を意味することが意図される。用語「ａｍｕ」は、本明細書で使用されるとき、原子量単位を意味することが意図される。用語「℃」は、本明細書で使用されるとき、摂氏度を意味することが意図される。用語「ｗｔ／ｗｔ」は、本明細書で使用されるとき、重量／重量を意味することが意図される。用語「ｖ／ｖ」は、本明細書で使用されるとき、容量／容量を意味することが意図される。用語「ＭＳ」は、本明細書で使用されるとき、マススペクトロメトリーを意味することが意図される。用語「ＨＰＬＣ」は、本明細書で使用されるとき、高性能液体クロマトグラフィーを意味することが意図される。用語「ＲＴ」は、本明細書で使用されるとき、室温を意味することが意図される。用語「例えば」は、本明細書で使用されるとき、例を意味することが意図される。用語「Ｎ／Ａ」は、本明細書で使用されるとき、試験されていないことを意味することが意図される。
【0139】
本明細書で使用されるとき、語句「医薬的に許容される塩」は、本発明の化合物の医薬的に許容される有機または無機の塩を意味する。好ましい塩には、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、またはパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエ酸））塩が含まれる。医薬的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンのような別の分子の包含を含み得る。対イオンは親化合物における電荷を安定化する任意の有機または無機部分であり得る。さらに、医薬的に許容される塩は、その構造に１つを超える荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が医薬的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有することができる。そのため、医薬的に許容される塩は１つ以上の荷電原子および／または１つ以上の対イオンを有することができる。本明細書で使用されるとき、語句「医薬的に許容される溶媒和物」は、１つ以上の溶媒分子と本発明の化合物の会合を意味する。医薬的に許容される溶媒和物を形成する溶媒の例には、限定されないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、およびエタノールアミンが含まれる。本明細書で使用されるとき、語句「医薬的に許容される水和物」は、本発明の化合物、またはこの塩を意味し、さらに非共有分子内力によって結合される水の化学量論的または非化学量論的な量を含む。
【0140】
掻痒症および掻痒症と関連する症状
ＪＡＫ阻害剤は、本明細書で使用されるように、掻痒症および徴候として掻痒症と関連する症状を治療することができる。掻痒症は引っ掻きたい欲求を生じる知覚として意味することができる。本明細書で説明されるように、困難な慢性痒みを有する患者は、ＪＡＫ阻害剤によって治療されるとき、著しく改善することが示される。
ＪＡＫ阻害剤は、本明細書で使用されるように、掻痒症および徴候として掻痒症と関連する症状を治療することができる。掻痒症は引っ掻きたい欲求を生じる知覚として意味することができる。本明細書で説明されるように、困難な慢性痒みを有する患者は、ＪＡＫ阻害剤によって治療されるとき、著しく改善することが示される。
【0141】
本明細書で使用されるとき、用語「掻痒症」および「痒み」は交換可能であることができる。
【0142】
下記の表１は、主徴候として掻痒症と関連する一般的な疾患または症状のまとめを示す。掻痒症の原因が特定されないとき（すなわち、既知疾患に起因しない、例えば表１を参照）、症状は特発性掻痒症と呼ばれる。
【表1】
【0143】
慢性掻痒症および慢性特発性掻痒症
「慢性掻痒症」は６週より長く続く掻痒症であることができる。「慢性特発性掻痒症」または「ＣＩＰ」は、６週より長く続く原因不明の痒みを意味する。痒みは原因不明であるため、慢性特発性掻痒症を有する被験体は表１に示される疾患を有さない。慢性特発性掻痒症と診断された被験体は、アトピー性皮膚炎のような他の炎症性掻痒性疾患で認められる明白な皮膚炎症を有さない。慢性特発性掻痒症を有する患者の最初の評価には、一般的に、分画数を伴う全血球数、胸部Ｘ線像、ならびに肝臓、腎臓、および甲状腺の機能試験が含まれる。多くの症例では、慢性特発性掻痒症と診断された被験体は、少なくとも６週間にわたる２種類以上の治療にも関わらず掻痒症を有する。治療の例には、限定されないが、穏やかな洗剤、柔軟剤、局所麻酔剤、冷却剤、抗ヒスタミン剤、抗痙攣剤、抗うつ剤、μ－オピオイド拮抗剤、向神経活性医薬品（例えば、ガバペンチン、プレガバリンなど）、コルチコステロイド、および光線療法が含まれ得る。
「慢性掻痒症」は６週より長く続く掻痒症であることができる。「慢性特発性掻痒症」または「ＣＩＰ」は、６週より長く続く原因不明の痒みを意味する。痒みは原因不明であるため、慢性特発性掻痒症を有する被験体は表１に示される疾患を有さない。慢性特発性掻痒症と診断された被験体は、アトピー性皮膚炎のような他の炎症性掻痒性疾患で認められる明白な皮膚炎症を有さない。慢性特発性掻痒症を有する患者の最初の評価には、一般的に、分画数を伴う全血球数、胸部Ｘ線像、ならびに肝臓、腎臓、および甲状腺の機能試験が含まれる。多くの症例では、慢性特発性掻痒症と診断された被験体は、少なくとも６週間にわたる２種類以上の治療にも関わらず掻痒症を有する。治療の例には、限定されないが、穏やかな洗剤、柔軟剤、局所麻酔剤、冷却剤、抗ヒスタミン剤、抗痙攣剤、抗うつ剤、μ－オピオイド拮抗剤、向神経活性医薬品（例えば、ガバペンチン、プレガバリンなど）、コルチコステロイド、および光線療法が含まれ得る。
【0144】
ＪＡＫ阻害剤によって治療可能な掻痒症と関連する症状は、徴候が掻痒症である疾患または症状であることができる。例えば、慢性特発性掻痒症と関連する疾患または症状は、掻痒症と関連するものとして当業者によって知られているこれらの疾患または症状のいずれかであることができる。本明細書で使用されるとき、用語「徴候」および「臨床的前兆」は交換可能であり得る。徴候は、これらの観察可能または測定可能な症状または行動を含み、既知または確立された診断評価で測定される。例えば、掻痒症の判断のための診断評価は、数値評価スケール（ＮＲＳ）スコア、視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）スコア、または痒みのない日数（ＩＦＤ）スコアによって、あるいはエッペンドルフ痒み質問表または患者ベネフィットインデックスの掻痒症を有する患者版（ＰＢＩ－Ｐ）、または５－Ｄ痒みスケールのようなスコア化システムによって実施することができる。慢性特発性掻痒症のいくつかの徴候の非限定例は、このような評価またはスコア化システムにおいて使用され得、生活の質または痒み（例えば、分布、期間、程度、改善／悪化、睡眠への影響、レジャー、社会性、家事、用事、仕事／学校など）を含む。痒みは、極めて重度（例えば、ＶＡＳを用いて９．０～１０．０）から、重度（例えば、ＶＡＳを用いて７．０～８．９）まで、中度（例えば、ＶＡＳを用いて３．０～６．９）まで、軽度（例えば、ＶＡＳを用いて０．１～２．９）までの等級分けとして報告され得る。
【0145】
本開示の一つの態様は、慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）の治療を必要とする被験体を示す。いくつかの実施形態では、ＣＩＰの治療を必要とする被験体は、ＣＩＰと診断された被験体である。ＣＩＰと診断された被験体は、少なくとも６週間継続している原因不明の掻痒症を有する。例えば、掻痒症は少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、または少なくとも１２週間継続している。被験体は極めて重度の痒み、重度の痒み、中度の痒み、または軽度の痒みを有し得る。別の実施形態では、ＣＩＰの治療を必要とする被験体は、ＣＩＰに対する素因がある被験体である。例えば、被験体が過去にＣＩＰについて治療されて掻痒症が回復した場合、被験体はＣＩＰに対する素因があり得る。被験体は極めて重度の痒み、重度の痒み、中度の痒み、または軽度の痒みを有していたことがあり得る。本明細書ではいずれの年齢の被験体の治療も考慮される。
【0146】
上記実施形態のいくつかにおいて、ＣＩＰの治療を必要とする被験体は、Ｔｈ２分極化と関連する免疫学的な欠如を有し得、限定されないが、血清ＩｇＥ量の増加、末梢好酸球増加、組織好酸球浸潤、ＣＤ８リンパ球減少症、またはこれらのいずれかの組み合わせが含まれる。被験体は≧５０歳、≧５５歳、≧６０歳、または≧６５歳であり得る。あるいは、被験体は≦５０歳であり得る。
【0147】
掻痒症と関連し、ＪＡＫ阻害剤によって治療可能である症状は、限定されないが、アレルギー反応、節足動物咬傷、水虫、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、アトピー性痒み、アトピー性皮膚炎関連痒み、自己免疫性結合組織病、細菌感染症、胆汁性痒み、免疫応答の広範な活性化、コロモジラミ、水疱性疾患、腕橈骨掻痒症、脳腫瘍、慢性特発性掻痒症、接触性皮膚炎、胆汁うっ滞、皮膚幼虫移行症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、損傷した神経系、頭垢、皮膚寄生虫妄想、皮膚筋炎、妊娠皮膚症、糖尿病、薬疹、ニューロンプロセスおよび知覚認知の調節不全、湿疹、好酸球性毛包炎、皮膚上の異物またはデバイス、真菌感染症、妊娠性類天疱瘡、アタマジラミ、疱疹、化膿性汗腺炎、皮疹、ホジキン病、副甲状腺機能亢進症、特発性慢性痒み、炎症、昆虫外寄生、昆虫咬傷、昆虫刺傷、妊娠性肝内胆汁うっ滞症、鉄欠乏性貧血、外因性オピオイドまたは合成オピオイドの蓄積増加、内臓癌、黄疸、扁平苔癬、硬化性苔癬、紅斑性狼瘡、リンパ腫、リンパ腫関連痒み、白血病関連痒み、悪性腫瘍、マスト細胞症、閉経、多発性硬化症、新生物、神経刺激、神経原性痒み、神経障害性痒み、錯感覚性背痛、錯感覚性強迫性障害、感覚異常症、寄生虫感染症、丘疹状蕁麻疹、シラミ寄生症、末梢性神経障害、光線皮膚炎、真性多血症、精神病、心因性痒み、ＨＩＶの掻痒性流行性発疹、妊娠性そう痒性蕁麻疹様丘疹（ＰＵＰＰＰ）、乾癬、乾癬関連痒み、乾癬性痒み、ケジラミ、斑点状手掌足底角化症、腎臓性痒み、関節リウマチ、疥癬、瘢痕成長、剃毛、脂漏性皮膚炎、うっ滞性皮膚炎、日焼け、水泳性痒疹、全身免疫老化、幻触、Ｔｈ１７関連炎症、甲状腺疾患、尿毒症、掻痒症または尿毒性痒み、蕁麻疹、蕁麻疹性痒み、水痘、ウイルス感染症、創傷または痂皮の治癒、あるいは乾皮症を含むことができる。
【0148】
分子工学
次の定義および方法が、本発明をより良く定めて、本発明の実施において当業者を手引きするために提供される。他に注釈がない限り、用語は関連技術における従来技術の当業者による通常使用に従って理解されるべきである。
次の定義および方法が、本発明をより良く定めて、本発明の実施において当業者を手引きするために提供される。他に注釈がない限り、用語は関連技術における従来技術の当業者による通常使用に従って理解されるべきである。
【0149】
用語「異種ＤＮＡ配列」、「外因性ＤＮＡセグメント」、または「異種核酸」は、本明細書で使用されるとき、特定のホスト細胞にとって外来である起源から生じる、または同一起源である場合、その本来の形態から改変されている配列をそれぞれ意味する。このため、ホスト細胞における異種遺伝子は、特定のホスト細胞に内因性であるが、例えば、ＤＮＡ組換えの使用によって改変されている。本用語はまた、自然発生ＤＮＡ配列の非自然発生する複数コピーを含む。このため、本用語は細胞に対して外来または異種である、あるいは細胞に対して同種であるが構成要素が本来認められないホスト細胞核酸内の位置にあるＤＮＡセグメントを意味する。外因性ＤＮＡセグメントが発現されて、外因性ポリペプチドを生じる。「同種」ＤＮＡ配列は、それが導入されるホスト細胞と本来関連しているＤＮＡ配列である。
【0150】
発現ベクター、発現構築体、プラスミド、または組換えＤＮＡ構築体は、ヒトの介入によって生じている核酸を意味すると一般的に理解され、例えばホスト細胞における特定核酸の転写または翻訳を可能にする一連の特定核酸構成要素を用いた組換え手段または直接的な化学的合成によることを含む。発現ベクターは、プラスミド、ウイルス、または核酸フラグメントの一部であることができる。一般的に、発現ベクターはプロモーターと操作可能に連結された転写されるべき核酸を含むことができる。
【0151】
「プロモーター」は、核酸の転写を指示する核酸制御配列として一般的に理解される。誘導性プロモーターは、特定の刺激物質に反応する、操作可能に連結された遺伝子の転写を仲介するプロモーターとして一般的に理解される。プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーター、ＴＡＴＡ構成要素の例のように、転写の開始部位付近に必要な核酸配列を含むことができる。プロモーターは任意に遠位エンハンサーまたはリプレッサー構成要素を任意に含むことができ、転写の開始部位から数千塩基対のような大きさで配置することができる。
【0152】
本明細書で使用される「転写可能な核酸分子」は、ＲＮＡ分子に転写されることが可能な任意の核酸分子を意味する。構築体を細胞に導入するために、転写可能な核酸分子が、翻訳され、従ってタンパク質産物として発現される機能的ｍＲＮＡ分子に転写される手段などの方法が知られている。構築体はまた、対象の特定ＲＮＡ分子の翻訳を阻害するため、アンチセンスＲＮＡ分子を発現することができるように構築され得る。本開示の実施のため、構築体およびホスト細胞を調製して用いる従来の組成物および方法が、当業者に良く知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００６）Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９７７１７、Ａｕｓｕｂｅｌら（２００２）Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＩＳＢＮ－１０：０４７１２５０９２９、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９５７７３、Ｅｌｈａｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｗｏｌｋ，Ｃ．Ｐ．１９８８．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １６７，７４７－７５４を参照）。
【0153】
「転写開始部位」または「開始部位」は、転写される配列の一部である第一ヌクレオチドを囲む位置であり、＋１位としても定められる。この部位に対して、遺伝子のすべての他の配列およびその制御領域が付番される。下流配列（すなわち、３’方向におけるさらなるタンパク質コード配列）はプラスで名付けることができ、一方、上流配列（５’方向における制御配列のほとんど）はマイナスで名付けられる。
【0154】
「操作可能で連結された」または「機能的に連結された」は、好ましくは、単一核酸フラグメントにおける核酸配列の結合を意味し、一つのものの機能は他によって影響される。例えば、調節ＤＮＡ配列は、ＲＮＡまたはポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と「操作可能で連結される」または「結合される」といわれ、調節ＤＮＡ配列がコード化ＤＮＡ配列の発現に影響するように２つの配列が条件化される場合である（すなわち、コード化配列または機能的ＲＮＡがプロモーターの転写制御下にある）。コード化配列はセンスまたはアンチセンス方向で調節配列と操作可能で連結することができる。２つの核酸分子は単一連続核酸分子の一部であり得、隣接し得る。例えば、プロモーターが細胞における対象の遺伝子の転写を調節または仲介する場合、プロモーターは対象の遺伝子に操作可能で連結される。
【0155】
「構築体」は、任意の組換え核酸分子として理解され、いずれかの起源由来で、ゲノム統合または自律的複製が可能であり、１つ以上の核酸分子が操作可能で連結されている核酸分子を含み、プラスミド、コスミド、ウイルス、自律的複製核酸分子、ファージ、あるいは線状または環状一本鎖または二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ核酸分子が挙げられる。
【0156】
本開示の構築体は、３’転写末端核酸分子と操作可能で連結された転写可能な核酸分子と操作可能に連結されたプロモーターを含むことができる。さらに、構築体は、限定されないが、例えば３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）由来のさらなる調節核酸分子を含むことができる。構築体は、限定されないが、転写開始において重要な役割を演じることができ、また発現構築体における遺伝子成分であることができるｍＲＮＡ核酸分子の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含むことができる。これらの追加の上流および下流調節核酸分子は、プロモーター構築体に存在する他の構成要素に本来的または異種である起源由来であり得る。
【0157】
用語「形質転換」は、核酸フラグメントのホスト細胞ゲノムへの移行を意味し、遺伝子的に安定な遺伝を生じる。形質転換された核酸フラグメントを含むホスト細胞は、「遺伝子導入」細胞として意味され、遺伝子導入細胞を含む生物は「遺伝子導入生物」と呼ばれる。
【0158】
「形質転換された」、「遺伝子導入」、および「組換え」は、異種核酸分子が導入されている細菌、藍藻、動物、または植物のようなホスト細胞または生物を意味する。核酸分子は、当該技術分野で一般的に知られている、および開示されているように、ゲノムに安定して統合することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９、Ｉｎｎｉｓ，１９９５、Ｇｅｌｆａｎｄ，１９９５、ＩｎｎｉｓおよびＧｅｌｆａｎｄ，１９９９）。ＰＣＲの既知の方法には、限定されないが、プライマー対、ネスティドプライマー、単一特異的プライマー、縮重プライマー、遺伝子特異的プライマー、ベクター特異的プライマー、部分的ミスマッチプライマーなどを用いる方法が含まれる。用語「非形質転換」は、形質転換過程を経ていない通常細胞を意味する。
【0159】
「野生型」は、いずれかの既知変異を有さない自然で認められるウイルスまたは生物を意味する。
【0160】
上記の要求される割合の同一性を有し、発現されるタンパク質の要求される活性を維持する変異ヌクレオチドおよびこれらのコード化ポリペプチドの設計、作製、および試験は、従来技術の範囲内である。例えば、変異体の指示された展開および迅速な単離は、参考で報告される方法に従うことができ、限定されないが、Ｌｉｎｋら，（２００７）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５（９），６８０－６８８、Ｓａｎｇｅｒら，（１９９１）Ｇｅｎｅ ９７（１），１１９－１２３、Ｇｈａｄｅｓｓｙら（２００１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８（８），４５５２－４５５７が含まれる。従って、当業者は、本明細書において説明される対照配列と、例えば少なくとも９５～９９％の同一性を有する非常に多くのヌクレオチドおよび／またはポリペプチド変異体を作製し、従来技術において定型的である方法に従って所望の表現型についてスクリーニングすることができる。
【0161】
ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列の同一性割合（％）は、候補配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸残基と対照配列を、２つの配列を整列させて比較して、同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基のパーセンテージとして理解される。パーセント同一性を測定するため、配列を整列させ、必要に応じて、ギャップを導入して最大パーセント配列同一性を達成する。パーセント同一性を測定するための配列整列処理は、当業者に良く知られている。しばしば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ２、ＡＬＩＧＮ２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）のような公衆に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して配列を整列させる。当業者は、配列を測定するために適切なパラメータを決定することができ、比較される配列の全長にわたって最大整列化を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む。配列が整列化されるとき、所定配列Ａの所定配列Ｂとの、による、または、に対するパーセント配列同一性（あるいは、所定配列Ｂとの、による、または、に対する特定のパーセント配列同一性を有するまたは含む所定配列Ａとして表現することができる）は、パーセント配列同一性＝Ｘ／Ｙ×１００として計算することができ、ここでＸはＡとＢの配列整列プログラムまたはアルゴリズムの整列による同一のマッチングとしてスコア化される残基の数であり、ＹはＢにおける残基の全数である。配列Ａの長さが配列Ｂの長さと等しくないとき、Ｂに対するＡのパーセント配列同一性は、Ａに対するＢのパーセント配列同一性と等しくない。
【0162】
一般的に、保存的置換は、要求される活性が維持される限りいずれの位置でも実施することができる。いわゆる保存的交換は、置換されるアミノ酸は元のアミノ酸と類似した特性を有することで実施することができ、例えば、ＡｓｐによるＧｌｕ、ＡｓｎによるＧｌｎ、ＩｌｅによるＶａｌ、ＩｌｅによるＬｅｕ、およびＴｈｒによるＳｅｒの交換が挙げられる。例えば、類似した特性を有するアミノ酸は、脂肪族アミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン）、ヒドロキシルまたはイオウ／セレン含有アミノ酸（例えば、セリン、システイン、セレノシステイン、トレオニン、メチオニン）、環状アミノ酸（例えば、プロリン）、芳香族アミノ酸（例えば、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン）、塩基性アミノ酸（例えば、ヒスチジン、リジン、アルギニン、）、または酸性およびこれらのアミド（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン）であることができる。欠失は直接結合によるアミノ酸の置換である。欠失の位置は、ポリペプチドの末端および個別タンパク質領域間の結合を含む。挿入はポリペプチド鎖へのアミノ酸の導入であり、直接結合は１つ以上のアミノ酸によって形式的に置換される。アミノ酸配列は、当該技術分野で知られているコンピュータシミレーションプログラムの支援によって調節することができ、例えば改善された活性または変化した調節を有するポリペプチドを産生することができる。この人工的に作製されたポリペプチド配列に基づいて、このような調節されたポリペプチドをコードする相当する核酸分子を、所望のホスト細胞の特異的コドン利用を用いてインビトロで合成することができる。
【0163】
「高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、６×ＳＳＣ緩衝液（すなわち、０．９Ｍ塩化ナトリウムおよび０．０９Ｍクエン酸ナトリウム）における６５℃でのハイブリダイゼーションとして定められる。これらの条件で、測定は所定の配列セットが２つの配列間のＤＮＡ二本鎖の融解温度（Ｔｍ）を計算することによってハイブリダイゼーションするかどうかについて行うことができる。特定の二本鎖が６×ＳＳＣの塩条件において６５℃よりも低い融解温度を有する場合、２つの配列はハイブリダイゼーションしないであろう。他方、融解温度が同一塩条件において６５℃を超える場合、配列はハイブリダイゼーションするであろう。一般的に、いずれかのハイブリダイゼーションしたＤＮＡ：ＤＮＡ配列に関する融解温度は、式として
Ｔｍ ＝ ８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（分数Ｇ／Ｃ含量）－０．６３（％ホルムアミド）－（６００／ｌ）
を用いて判断することができる。従って、ＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドのＴｍは、ヌクレオチド同一性における１％低下毎に１～１．５℃低下する（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌ，２００６を参照）。
Ｔｍ ＝ ８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（分数Ｇ／Ｃ含量）－０．６３（％ホルムアミド）－（６００／ｌ）
を用いて判断することができる。従って、ＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドのＴｍは、ヌクレオチド同一性における１％低下毎に１～１．５℃低下する（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌ，２００６を参照）。
【0164】
ホスト細胞は当該技術で知られている様々な標準的技術を用いて形質転換することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００６）Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９７７１７、Ａｕｓｕｂｅｌら（２００２）Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ５ｔｈ ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＩＳＢＮ－１０：０４７１２５０９２９、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９５７７３、Ｅｌｈａｉ，Ｊ． ａｎｄ Ｗｏｌｋ，Ｃ．Ｐ．１９８８．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １６７，７４７－７５４を参照）。このような技術には、限定されないが、ウイルス感染、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポソーム仲介トランスフェクション、マイクロプロジェクティル仲介送達、受容体仲介取り込み、細胞融合、エレクトロポレーションなどが含まれる。遺伝子導入された細胞は、選択および増殖させて、ホスト細胞のゲノムに安定的に統合された発現ベクターを含む組換えホスト細胞を得ることができる。
【0165】
ホスト細胞に導入され得る例示的な核酸には、例えば、別の種由来のＤＮＡ配列または遺伝子、あるいは同一種由来または同一種に存在するが、遺伝子工学法によってレシピエント細胞に組み込まれる遺伝子または配列さえ含まれる。用語「外因性」はまた、形質転換される細胞に通常存在しない、またはおそらく単に形質転換するＤＮＡセグメントまたは遺伝子に認められるような形態、構造などで存在しない遺伝子、あるいは通常存在するが、本来の発現パターンと、例えば、過剰発現して異なるような手段で発現することが望まれる遺伝子を意味することが意図される。このため、用語「外因性」遺伝子またはＤＮＡは、類似遺伝子が既に当該細胞に存在し得るかどうかに関わらず、レシピエント細胞に導入されるいずれかの遺伝子またはＤＮＡセグメントを意味することが意図される。外因性ＤＮＡに含まれるＤＮＡ型は、細胞に既に存在するＤＮＡ、同型生物の別の個体由来のＤＮＡ、異なる生物由来のＤＮＡ、あるいは、遺伝子のアンチセンスメッセージを含むＤＮＡ配列あるいは遺伝子の合成または改良型をコードするＤＮＡ配列のような外因的に作製されるＤＮＡを含む。
【0166】
本明細書において説明される方法に従って開発されたホスト株は、当該技術分野で知られている多くの手段によって評価することができる（例えば、Ｓｔｕｄｉｅｒ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．４１（１），２０７－２３４、Ｇｅｌｌｉｓｓｅｎ，ｅｄ．（２００５）Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｎｏｖｅｌ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，ＩＳＢＮ－１０：３５２７３１０３６３、Ｂａｎｅｙｘ（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，ＩＳＢＮ－１０：０９５４５２３２５３を参照）。
【0167】
遺伝子を下方調節またはサイレンシングする方法は当該技術分野で知られている。例えば、発現されるタンパク質活性は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、タンパク質アプタマー、ヌクレオチドアプタマー、およびＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）（例えば、小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ））を用いて下方調節または排除することができる（例えば、Ｆａｎｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｙｍｏｎｄｓ（２００６）Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３，２８９－３０３Ｇ，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．，ら（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０，２７－３６、Ｍａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ１４（１２）：８０７－１５，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；Ｌｅｅら（２００６）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．１０，１－８，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ａｐｔａｍｅｒｓ；Ｒｅｙｎｏｌｄｓら２００４） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２２（３），３２６－ ３３０，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ＲＮＡｉ；Ｐｕｓｈｐａｒａｊ ａｎｄ Ｍｅｌｅｎｄｅｚ（２００６）Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ３３（５－６），５０４－５１０，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ＲＮＡｉ、；Ｄｉｌｌｏｎら（２００５） Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ６７，１４７－１７３，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ＲＮＡｉ；Ｄｙｋｘｈｏｏｒｎ ａｎｄ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ（２００５）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ５６，４０１－４２３，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇＲＮＡｉを参照）。ＲＮＡｉ分子は様々な供給元から市販されている（例えば、Ａｍｂｉｏｎ，ＴＸ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。様々なアルゴリズムを用いたいくつかのｓｉＲＮＡ分子設計プログラムが当該技術分野で知られている（例えば、Ｃｅｎｉｘ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ，Ａｍｂｉｏｎ；ＢＬＯＣＫ－ｉＴ（商標） ＲＮＡｉ Ｄｅｓｉｇｎｅｒ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｓｉＲＮＡ Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｄｅｓｉｇｎ Ｔｏｏｌｓ，Ｂｉｏｉｎｏｆｒｍａｔｉｃｓ ＆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇを参照）。最適なｓｉＲＮＡを定める上で有力な特性には、ｓｉＲＮＡの末端におけるＧ／Ｃ含量、ｓｉＲＮＡの特異的な内部領域のＴｍ、ｓｉＲＮＡ長、ＣＤＳ（コード化領域）内の標的配列の位置、および３’オーバーハングのヌクレオチド含量が含まれる。
【0168】
製剤化
本明細書で説明される薬剤および組成物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．），２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０７８１７４６７３６（２００５）に記載されている１種類以上の医薬的に許容される担体または賦形剤を用いていずれかの従来の方法によって製剤化することができる。このような製剤は、精製型であり得る本明細書で説明される生物学的に活性な薬剤の治療上効果的な量を担体の適切な量とともに含み、被験体への適切な投与のための剤形を提供する。
本明細書で説明される薬剤および組成物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．），２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０７８１７４６７３６（２００５）に記載されている１種類以上の医薬的に許容される担体または賦形剤を用いていずれかの従来の方法によって製剤化することができる。このような製剤は、精製型であり得る本明細書で説明される生物学的に活性な薬剤の治療上効果的な量を担体の適切な量とともに含み、被験体への適切な投与のための剤形を提供する。
【0169】
用語「治療上効果的な量」は、疾患を治療するために被験体に投与されるとき、別の薬剤と併用または単独で、１回以上の投与で、疾患の当該治療に効果を及ぼすのに十分である化合物の量を意味する。「治療上効果的な量」は、化合物、疾患の重症度、および治療される被験体の年齢、体重などに応じて変化し得る。本開示の目的のため、「ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量」は、１日あたり約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日あたり約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは高または低頻度で投与される等量の投与量を意味する。
【0170】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重であることができる。例えば、デバイス径は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２１ｍｇ／ｋｇ、約２２ｍｇ／ｋｇ、約２３ｍｇ／ｋｇ、約２４ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約２６ｍｇ／ｋｇ、約２７ｍｇ／ｋｇ、約２８ｍｇ／ｋｇ、約２９ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３１ｍｇ／ｋｇ、約３２ｍｇ／ｋｇ、約３３ｍｇ／ｋｇ、約３４ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約３６ｍｇ／ｋｇ、約３７ｍｇ／ｋｇ、約３８ｍｇ／ｋｇ、約３９ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４１ｍｇ／ｋｇ、約４２ｍｇ／ｋｇ、約４３ｍｇ／ｋｇ、約４４ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約４６ｍｇ／ｋｇ、約４７ｍｇ／ｋｇ、約４８ｍｇ／ｋｇ、約４９ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５１ｍｇ／ｋｇ、約５２ｍｇ／ｋｇ、約５３ｍｇ／ｋｇ、約５４ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約５６ｍｇ／ｋｇ、約５７ｍｇ／ｋｇ、約５８ｍｇ／ｋｇ、約５９ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６１ｍｇ／ｋｇ、約６２ｍｇ／ｋｇ、約６３ｍｇ／ｋｇ、約６４ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約６６ｍｇ／ｋｇ、約６７ｍｇ／ｋｇ、約６８ｍｇ／ｋｇ、約６９ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７１ｍｇ／ｋｇ、約７２ｍｇ／ｋｇ、約７３ｍｇ／ｋｇ、約７４ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約７６ｍｇ／ｋｇ、約７７ｍｇ／ｋｇ、約７８ｍｇ／ｋｇ、約７９ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８１ｍｇ／ｋｇ、約８２ｍｇ／ｋｇ、約８３ｍｇ／ｋｇ、約８４ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約８６ｍｇ／ｋｇ、約８７ｍｇ／ｋｇ、約８８ｍｇ／ｋｇ、約８９ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９１ｍｇ／ｋｇ、約９２ｍｇ／ｋｇ、約９３ｍｇ／ｋｇ、約９４ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約９６ｍｇ／ｋｇ、約９７ｍｇ／ｋｇ、約９８ｍｇ／ｋｇ、約９９ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１０１ｍｇ／ｋｇ、約１０２ｍｇ／ｋｇ、約１０３ｍｇ／ｋｇ、約１０４ｍｇ／ｋｇ、約１０５ｍｇ／ｋｇ、約１０６ｍｇ／ｋｇ、約１０７ｍｇ／ｋｇ、約１０８ｍｇ／ｋｇ、約１０９ｍｇ／ｋｇ、約１１０ｍｇ／ｋｇ、約１１１ｍｇ／ｋｇ、約１１２ｍｇ／ｋｇ、約１１３ｍｇ／ｋｇ、約１１４ｍｇ／ｋｇ、約１１５ｍｇ／ｋｇ、約１１６ｍｇ／ｋｇ、約１１７ｍｇ／ｋｇ、約１１８ｍｇ／ｋｇ、約１１９ｍｇ／ｋｇ、約１２０ｍｇ／ｋｇ、約１２１ｍｇ／ｋｇ、約１２２ｍｇ／ｋｇ、約１２３ｍｇ／ｋｇ、約１２４ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１２６ｍｇ／ｋｇ、約１２７ｍｇ／ｋｇ、約１２８ｍｇ／ｋｇ、約１２９ｍｇ／ｋｇ、約１３０ｍｇ／ｋｇ、約１３１ｍｇ／ｋｇ、約１３２ｍｇ／ｋｇ、約１３３ｍｇ／ｋｇ、約１３４ｍｇ／ｋｇ、約１３５ｍｇ／ｋｇ、約１３６ｍｇ／ｋｇ、約１３７ｍｇ／ｋｇ、約１３８ｍｇ／ｋｇ、約１３９ｍｇ／ｋｇ、約１４０ｍｇ／ｋｇ、約１４１ｍｇ／ｋｇ、約１４２ｍｇ／ｋｇ、約１４３ｍｇ／ｋｇ、約１４４ｍｇ／ｋｇ、約１４５ｍｇ／ｋｇ、約１４６ｍｇ／ｋｇ、約１４７ｍｇ／ｋｇ、約１４８ｍｇ／ｋｇ、約１４９ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１５１ｍｇ／ｋｇ、約１５２ｍｇ／ｋｇ、約１５３ｍｇ／ｋｇ、約１５４ｍｇ／ｋｇ、約１５５ｍｇ／ｋｇ、約１５６ｍｇ／ｋｇ、約１５７ｍｇ／ｋｇ、約１５８ｍｇ／ｋｇ、約１５９ｍｇ／ｋｇ、約１６０ｍｇ／ｋｇ、約１６１ｍｇ／ｋｇ、約１６２ｍｇ／ｋｇ、約１６３ｍｇ／ｋｇ、約１６４ｍｇ／ｋｇ、約１６５ｍｇ／ｋｇ、約１６６ｍｇ／ｋｇ、約１６７ｍｇ／ｋｇ、約１６８ｍｇ／ｋｇ、約１６９ｍｇ／ｋｇ、約１７０ｍｇ／ｋｇ、約１７１ｍｇ／ｋｇ、約１７２ｍｇ／ｋｇ、約１７３ｍｇ／ｋｇ、約１７４ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約１７６ｍｇ／ｋｇ、約１７７ｍｇ／ｋｇ、約１７８ｍｇ／ｋｇ、約１７９ｍｇ／ｋｇ、約１８０ｍｇ／ｋｇ、約１８１ｍｇ／ｋｇ、約１８２ｍｇ／ｋｇ、約１８３ｍｇ／ｋｇ、約１８４ｍｇ／ｋｇ、約１８５ｍｇ／ｋｇ、約１８６ｍｇ／ｋｇ、約１８７ｍｇ／ｋｇ、約１８８ｍｇ／ｋｇ、約１８９ｍｇ／ｋｇ、約１９０ｍｇ／ｋｇ、約１９１ｍｇ／ｋｇ、約１９２ｍｇ／ｋｇ、約１９３ｍｇ／ｋｇ、約１９４ｍｇ／ｋｇ、約１９５ｍｇ／ｋｇ、約１９６ｍｇ／ｋｇ、約１９７ｍｇ／ｋｇ、約１９８ｍｇ／ｋｇ、約１９９ｍｇ／ｋｇ、または約２００ｍｇ／ｋｇであることができる。これらの個別値のそれぞれの列挙は、各値の間の範囲を含むものと理解される。
【0171】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日あたり約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．１～約１ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．２５～約２．５ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。さらに他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．５～約５ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。なお他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約０．７５～約７．５ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。異なる実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、１日あたり約１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。これらの範囲のそれぞれの列挙は、各値の間の個別値を含むものと理解される。
【0172】
用語「治療上効果的な量」は１日あたりのＪＡＫ阻害剤の量として説明されるが、当業者は、１日の量は、１日に１回、２回、３回、またはそれ以上投与される１回以上の投与量に分割され得ることを認識するであろう。あるいは、ＪＡＫ阻害剤をより少ない頻度に基づいて投与することが望ましい可能性があり得る（例えば、週あたり１回、２回、または３回、あるいは月あたり１回、２回、または３回）。当業者は、投与頻度は投与される量に影響し得（例えば、一般的にいうと、毎月投与＞毎週投与＞毎日投与＞１日あたり複数回投与）、本明細書における開示に基づいたＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を得るように医薬組成物を製剤化することができることを認識するであろう。
【0173】
本開示の別の態様は、ＪＡＫ阻害剤と併用して１種類以上の「追加有効成分」を投与することを提供する。追加有効成分は、同一または異なる投与経路によって投与され得る。同一投与経路によって投与されるとき、追加有効成分はＪＡＫ阻害剤とともに（すなわち、同一医薬組成物）、またはＪＡＫ阻害剤と別々に製剤化され得る。本開示のＪＡＫ阻害剤と併用して投与され得る追加有効成分の非限定的な例には、限定されないが、抗ヒスタミン剤（例えば、セチリジン、ジフェンヒドラミン、ドキセピン、フェキソフェナジン、ヒドロキシジン、ロラタジン、デスロラチジン）、コルチコステロイド（例えば、トリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン）、局所麻酔剤（例えば、ベンゾカイン、カプサイシン、ジペロドン、リドカイン、メントール、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン）、局所免疫調節剤（例えば、ピメクロリムス、タクロリムスなどのカルシニューリン阻害剤）、μ－オピオイド受容体拮抗剤およびκ－オピオイド受容体作用剤（例えば、ブトルファノール、ナルフラフィン、メチルナルトレキソン、ナルメフェン、ナルトレキソン）、抗生物質（リファンピシン）、コレスチラミン、サリチル酸、抗うつ剤（例えば、フルボキサミン、ミルタザピン、パロキセチン、セルトラリン）、および神経遮断薬（例えば、ガバペンチン、プレガブリン）が含まれる。
【0174】
用語「製剤化」は、ヒトのような被験体への投与に適した剤形に薬剤を調製することを意味する。このため、「製剤化」は、希釈剤または担体を含む、医薬的に許容される賦形剤を含むことができる。
【0175】
本明細書で使用される用語「医薬的に許容される」は、薬理学的活性の許容できない損失または許容できない有害副作用を生じない物質または成分を説明することができる。医薬的に許容される原料の例には、米国薬局方（ＵＳＰ２９）および国民医薬品集（ＮＦ２４），米国薬局方協会、ロックビル、メリーランド州、２００５（ＵＳＰ／ＮＦ）またはさらに最新版におけるモノグラフに記載されるもの、ならびにＦＤＡの継続的に更新される不活性原料検索オンラインデータベースに示される成分であることができる。ＵＳＰ／ＮＦなどに記載されない他の有用な成分も使用され得る。
【0176】
本明細書で使用される用語「医薬的に許容される賦形剤」は、任意およびすべての溶媒、分散メディウム、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張剤、または吸収遅延剤を含むことができる。医薬品として活性な物質のためのこのようなメディウムおよび薬剤の使用は、当該技術分野で良く知られている（一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ， Ｅｄ．），２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０７８１７４６７３６（２００５）を参照）。従来のメディウムまたは薬剤が有効成分と不適合性でない限り、治療用組成物におけるその使用が考えられる。補助有効成分も組成物に組み込むことができる。
【0177】
「安定な」製剤または組成物は、約０～約６０℃のような通常温度で、少なくとも約１日、少なくとも約１週間、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１年、または少なくとも約２年のような商業的に妥当な期間、保存可能である十分な安定性を有する組成物を意味することができる。
【0178】
製剤化は投与方式に適しているべきである。本開示による使用の薬剤は、いくつかの経路を用いた被験体への投与のために既知の方法によって製剤化することができ、限定されないが、非経口、肺、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、眼、口腔内、および直腸が含まれる。個別薬剤はまた、１種類以上の追加薬剤と併用して、または他の生物学的に活性または生物学的に不活性な薬剤とともに投与され得る。このような生物学的に活性または不活性な薬剤は、本薬剤と流体または機械的に接続され得、あるいは本薬剤とイオン、共有、ファンデルワース、疎水性、親水性、または他の物理学的力によって結合され得る。
【0179】
制御放出（または持続放出）調製物が、薬剤活性を延長して投与頻度を低下するために製剤化され得る。制御放出調製物はまた、作用の開始時間、または薬剤の血中量のような他の特性に効果をもたらし、結果として副作用の発生に影響を及ぼすことができるようにも使用することができる。制御放出調製物は、所望の治療効果を生じる薬剤の量を最初に放出し、そして徐々に継続して薬剤の他の量を放出して延長された期間にわたって治療効果のレベルを維持するように設計され得る。薬剤を体内でほぼ一定量に維持するため、薬剤は代謝または体から排出される薬剤量を交換する速度で投与剤形から放出させることができる。薬剤の制御放出は、様々な誘発因子、例えば、ｐＨの変化、温度の変化、酵素、水、あるいは他の生理学的条件または分子によって刺激され得る。
【0180】
本明細書で説明される薬剤または組成物はまた、さらに後述される他の治療方式と併用して使用することができる。このため、本明細書で説明される療法に加えて、疾患、障害、または症状の治療のために有効であることが知られている他の療法を被験体にもたらし得る。
【0181】
治療方法
また、この方法を必要とする被験体における慢性特発性掻痒症を治療するプロセスが提供される。プロセスには、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量の投与を含み、掻痒症の徴候を予防、低下、または緩和する。
また、この方法を必要とする被験体における慢性特発性掻痒症を治療するプロセスが提供される。プロセスには、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量の投与を含み、掻痒症の徴候を予防、低下、または緩和する。
【0182】
本明細書で説明されるように、困難な慢性痒みを有する患者は、ＪＡＫ阻害剤によって治療されるとき、著しく改善することが示される。
【0183】
本開示の別の態様は、慢性特発性掻痒症の治療を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は本疾患に対する素因があり得る被験体にＣＩＰの臨床徴候を発症させない（すなわち、掻痒症を予防する）。他の実施形態では、本開示の方法は、ＣＩＰの進行またはＣＩＰの徴候を停止または低下させる。他の実施形態では、本開示の方法は、ＣＩＰまたはＣＩＰの徴候を後退させる。
【0184】
特定の実施形態では、被験体における痒みのない日数が、治療期間の最後に、治療期間の最初と比べて増加される。例えば、痒みのない日数は、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、または少なくとも９日増加し得る。あるいは、痒みのない日数は、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも１６日、少なくとも１７日、少なくとも１８日、または少なくとも１９日増加し得る。
【0185】
特定の実施形態では、被験体における痒みの重症度は、治療期間の最後に、治療期間の最初と比べて低下される。例えば、痒みのＶＡＳスコアは、約０．５、約１．０、または約１．５低下し得る。あるいは、痒みのＶＡＳスコアは、約１．５、約２．０、約２．５、または約３．０低下し得る。別の代替例では、痒みのＶＡＳスコアは、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５低下し得る。さらに別の代替例では、痒みの重症度は、極めて重度から重度、好ましくは極めて重度から中度、またはより好ましくは極めて重度から軽度に改善し得る。さらに別の代替例では、痒みの重症度は、重度から中度、または好ましくは重度から軽度に改善し得る。別の例では、痒み重症度は中度から軽度に改善し得る。
【0186】
特定の実施形態では、被験体の生活の質は、治療期間の最後に、治療期間の開始と比べて低下される。
【0187】
当業者は、投与経路が治療効果を達成するために投与される必要がある量に影響し得ることを認識する。一般的には、経口＞ＩＶ＞経皮＞経粘膜＞鼻腔内＞髄腔内＞硬膜外である。
【0188】
当業者は、投与量もＧｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｏｌｄｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （２００１），Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＩ，ｐｐ．４７５－４９３、およびＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅの手引きによって判断され得ることを認識するであろう。
【0189】
本明細書で説明される方法は、この方法を必要とする被験体に一般的に実施される。本明細書で説明される治療方法を必要とする被験体は掻痒症を、有する、診断された、有することが疑われる、または発症するリスクがある被験体であることができる。治療が必要なことの判断は、一般的には問題となる疾患または症状と一致する病歴および身体検査によって評価される。本明細書において説明される方法によって治療可能である様々な症状の診断は、当該技術分野の範囲内である。被験体は動物被験体であることができ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、マウス、ラット、サル、ハムスター、モルモット、およびニワトリ、ならびにヒトのような哺乳動物を含む。例えば、被験体はヒト被験体であることができる。別の例として、被験体は哺乳動物であることができる。哺乳動物には、限定されないが、ヒト、愛玩動物、家畜動物、動物園動物、または研究動物を含むことができる。愛玩動物の非限定的な例にはイヌまたはネコを含む。家畜動物の非限定的な例にはウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、またはヤギを含む。研究動物の非限定的な例には非ヒト霊長類またはげっ歯類を含む。
【0190】
用語「治療する」は本明細書で使用されるとき、慢性特発性掻痒症の進行を制御または防止することを意味する。慢性特発性掻痒症の用語「制御する」、「治療する」、または「治療」は、（１）慢性特発性掻痒症を予防する（すなわち、疾患に対する素因があり得るが、疾患の徴候／前兆をまだ有さないまたは現わさない被験体に、慢性特発性掻痒症の臨床的徴候または前兆を発症させない）、（２）慢性特発性掻痒症を阻害する（すなわち、疾患の進行あるいはその臨床的徴候または前兆を停止または低下する）、または（３）慢性特発性掻痒症を緩和する（すなわち、疾患あるいはその臨床的徴候または前兆を後退させる）、ことを含むことができる。
【0191】
一般的に、ＪＡＫ阻害剤の安全で有効な量は、例えば、被験体における所望の治療効果を、望まれない副作用を最小限にしながら生じる量である。様々な実施形態では、本明細書において説明されるＪＡＫ阻害剤の有効な量は、掻痒症を著しく阻害する、掻痒症の進行を遅らせる、または掻痒症の発症を制限することができる。
【0192】
本明細書において説明される方法により、投与は非経口、肺、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、髄腔内、皮下、鼻腔内、硬膜外、眼、口腔内、および直腸投与であることができる。
【0193】
非経口投与は、本明細書で使用されるとき、注射、注入、または埋め込みによる投与であることができる。非限定的な例には、硬膜外、動脈内、心臓内、筋肉内、腹腔内、脊髄内、胸腔内、髄腔内、静脈内、または皮下の技術を含む。
【0194】
本明細書で説明される治療において使用されるとき、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量は、純粋型、または当該型が存在する場合は医薬的に許容される塩型で、医薬的に許容される賦形剤の添加または無添加とともに使用することができる。例えば、本開示の化合物は、掻痒症を低下、予防、または治療するのに十分な量において、いずれかの医療処置に適用可能である妥当な利益／リスク比で投与することができる。
【0195】
単回投与剤形を製造するために医薬的に許容される担体と組み合わされ得る本明細書において説明される組成物の量は、治療されるホストおよび特定の投与方式に応じて変化する。各投与剤形の個別用量に含まれる薬剤の単位含量は、必要な治療上効果的な量が個別用量数の投与によって達せられるため、それ自体で治療上効果的な量を構成する必要がないことは、当業者によって認識されるであろう。
【0196】
本明細書で説明される組成物の毒性および治療効果は、ＬＤ５０（集団の５０％までの致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％における用量治療効果）を測定する、細胞培養または実験動物における標準的な医薬品手順によって判断することができる。毒性と治療効果の間の用量比は、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる治療インデックスであり、治療インデックスが大きいほど最適であると当該技術分野で一般的に理解される。
【0197】
いずれかの特定の被験体における具体的な治療上効果的な用量レベルは、様々な要因に依存し、治療される障害および障害の重症度；使用される特定化合物の活性；使用される特定組成物；被験体の年齢、体重、健康全般、性別、および食事制限；投与時期；投与経路；使用される組成物の排泄速度；治療期間；使用される特定化合物と併用または同時に使用される薬剤；および医療技術で良く知られているような要因が含まれる（例えば、Ｋｏｄａ－Ｋｉｍｂｌｅら（２００４）Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｕｓｅ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，ＩＳＢＮ ０７８１７４８４５３、Ｗｉｎｔｅｒ（２００３）Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，ＩＳＢＮ ０７８１７４１４７５、Ｓｈａｒｑｅｌ（２００４）Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ＆Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ／Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，ＩＳＢＮ ００７１３７５５０３を参照）。例えば、組成物の用量を所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低い量で開始し、所望の効果が達成されるまで用量を徐々に増加させることは当該技術分野の十分範囲内である。必要に応じて、効果的な一日用量は、投与の目的のために複数用量に分割され得る。結果として、単回用量組成物は一日用量になるまでの量またはその約数を含み得る。しかし、本開示の化合物および組成物の１日の全用法は、確実な医療判断の範囲内で担当医師によって決定されるものと理解される。
【0198】
また、本明細書で説明される状態、疾患、障害、および症状のそれぞれ、ならびに他は、本明細書で説明される組成物および方法から効果を受けることができる。一般的に、状態、疾患、障害、または症状を治療することは、状態、疾患、障害、または症状に罹るまたは素因があり得るが、まだこの臨床的または亜臨床的徴候を有さないまたは現わさない哺乳動物における臨床徴候の出現を予防または遅延することを含む。治療することはまた、状態、疾患、障害、または症状を阻害することを含み、例えば、疾患またはこの少なくとも１つの臨床的または亜臨床的徴候の発症を停止または低下することが挙げられる。さらに、治療することは疾患を緩和することを含むことができ、例えば、状態、疾患、障害、または症状、あるいは臨床的または亜臨床的徴候の少なくとも１つの後退を生じることが挙げられる。治療される被験体に対する効果は、統計的に有意、あるいは被験体または医師に少なくとも認知されることであり得る。
【0199】
ＪＡＫ阻害剤の投与は、単一事象として、または治療の時間経過にわたってもたらすことができる。例えば、ＪＡＫ阻害剤は、毎日、毎週、隔週、または毎月投与することができる。急性症状の治療では、治療期間は通常少なくとも数日である。特定の症状は、治療を数日から数週間延長することができる。例えば、治療は１週間、２週間、または３週間にわたって延長することができる。より慢性的な症状では、治療は数週間から数ヶ月、または１年以上にさえ延長することができる。
【0200】
本明細書で説明される方法による治療は、掻痒症の従来治療方式の前、同時、または後に実施することができる。従来治療は、しばしば市販されるクリームおよびスプレーの剤形での局所抗掻痒剤または経口抗痒み剤を含むことができる。例えば、従来治療には、ジフェンヒドラミン（Ｂｅｎａｄｒｙｌ）などの抗ヒスタミン剤；コルチコステロイド（例えば、ヒドロコルチゾン局所クリーム、局所ステロイド）；ミントオイル、メントール、またはカンフルのような反対刺激剤；クロタミトン（商品名：Ｅｕｒａｘ）；ベンゾカイン局所用クリーム（Ｌａｎａｃａｎｅ）などの局所麻酔剤；適切な皮膚水分を維持する光線療法（例えば、ＵＶＢ）；または局所軟化剤を含むことができる。さらに、ＴＲＰＶ１阻害剤、デュピルマブ、またはセクキヌマブを使用して痒みを治療することができる。
【0201】
ＪＡＫ阻害剤は、抗生物質、抗炎症剤、または別の薬剤（例えば、前述のパラグラフにおける上記のいずれか）のような、別の薬剤と同時または連続的に投与することができる。例えば、ＪＡＫ阻害剤は抗生物質または抗炎症剤のような別の薬剤と同時に投与することができる。同時投与は、それぞれがＪＡＫ阻害剤、抗生物質、抗炎症剤、または別の薬剤の１種類以上を含む別々の組成物の投与によってもたらされ得る。同時投与は、ＪＡＫ阻害剤、抗生物質、抗炎症剤、または別の薬剤の２種類以上を含む１つの組成物の投与によってもたらされ得る。ＪＡＫ阻害剤は、抗生物質、抗炎症剤、または別の薬剤と連続して投与することができる。例えば、ＪＡＫ阻害剤は、抗生物質、抗炎症剤、または別の薬剤の投与の前または後に投与することができる。
【0202】
投与
本開示の別の態様は、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を期間にわたった全身投与することを提供する。
本開示の別の態様は、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量を期間にわたった全身投与することを提供する。
【0203】
本明細書において説明される薬剤および組成物は、当該技術分野で知られている様々な手段で、本明細書において説明される方法に従って投与することができる。薬剤および組成物は外因性物質または内因性物質のどちらかとして治療によって使用することができる。外因性薬剤は、体の外部で産生または調製されて体に投与されるものである。内因性薬剤は、ある種のタイプのデバイス（生物製剤またはその他）によって体内で産生または調製されるものであり、体の他の器官の内部または器官へ送達する。
【0204】
投与経路
ＪＡＫ阻害剤は医薬組成物に製剤化し、多くの種々の手段によって全身に投与して、治療上効果的な量を送達し得る。このような組成物は、例えば、鼻腔投与、経口投与、非経口投与、結腸投与、局所投与、経皮投与、または経粘膜投与によって、必要に応じて、従来の非毒性な医薬的に許容される担体、補助剤、および賦形剤を含む投与単位剤形で投与され得る。薬剤の製剤化は、例えば、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）、およびＬｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ． Ａ． ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ， Ｌ．， Ｅｄｓ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８０）で考察されている。
ＪＡＫ阻害剤は医薬組成物に製剤化し、多くの種々の手段によって全身に投与して、治療上効果的な量を送達し得る。このような組成物は、例えば、鼻腔投与、経口投与、非経口投与、結腸投与、局所投与、経皮投与、または経粘膜投与によって、必要に応じて、従来の非毒性な医薬的に許容される担体、補助剤、および賦形剤を含む投与単位剤形で投与され得る。薬剤の製剤化は、例えば、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）、およびＬｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ． Ａ． ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ， Ｌ．， Ｅｄｓ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８０）で考察されている。
【0205】
経口投与用の調製物は、一般的に有効な医薬品成分に加えて不活性賦形剤を含む。経口調製物は、ゼラチンカプセルに封入または錠剤に圧縮され得る。このような調製物に使用される一般的な賦形剤には、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、第二リン酸カルシウム、または炭酸カルシウムのような医薬品として適合性の増量剤／希釈剤；アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、ゼラチン、トラガカントゴム、またはポリビニルピロリドンのような結合剤；アルギン酸、セルロース、デンプン、またはポリビニルピロリドンのような崩壊剤；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、またはステアリルフマル酸ナトリウムのような滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素のような滑剤；スクロースまたはサッカリンのような甘味剤；ペパーミント、サリチル酸メチル、または柑橘類香料のような香味剤；着色剤；および抗酸化剤（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、またはパルミチン酸レチニル）、クエン酸、またはクエン酸ナトリウムのような保存剤が含まれる。経口調製物はまた、水性懸濁液、エリキシル、またはシロップとして投与され得る。これらでは、有効成分は様々な甘味または香料剤、着色剤、および必要に応じて、乳化および／または懸濁化剤、ならびに水、エタノール、グリセリン、およびこれらの組み合わせのような希釈剤と混合され得る。
【0206】
非経口投与では、調製物は水性またはオイルベース溶液であり得る。水性溶液は、水、生理食塩水、グリセロール、プロピレングリコール、または他の合成溶媒のような医薬的に許容されるポリオールのような無菌希釈剤；ベンジルアルコール、メチルパラベン、クロロブタノール、フェノール、チメロサールなどの抗細菌剤および／または抗真菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩のような緩衝剤；および／または塩化ナトリウム、デキストロース、あるいはマンニトールまたはソルビトールのようなポリアルコールなどの浸透圧調整剤を含み得る。水性溶液のｐＨは塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基によって調整され得る。オイルベース溶液または懸濁液はさらにゴマ、ラッカセイ、オリーブオイル、またはミネラルオイルを含み得る。組成物はまた、限定されないが無菌のパイロジェンフリー水を含む安定した媒体による再構成のための粉末剤形で提供され得る。
【0207】
局所、経皮、または経粘膜投与では、透過されるべき障壁に適した浸透剤が一般的に調製物に含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレー、エアゾールスプレー、錠剤、または坐薬の使用によって実施され得、経皮投与は当該技術分野で一般的に知られている軟膏、膏薬、ゲル、パッチ、またはクリームを介し得る。経皮の実施形態に適した担体の非限定的な例には、ミネラルオイル、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水が含まれる。これらの実施形態では、組成物の分子量は約１～約５０ダルトンの範囲であり得る。
【0208】
鼻腔投与では、組成物は溶液、懸濁液、またはエマルションとして製剤化され得、乾燥粉末あるいはジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタンのような高圧ガスを用いたエアゾール剤形として投与され得る。鼻腔スプレーは生理食塩水スプレーを含むことができる。
【0209】
いくつかの実施形態では、投与経路は皮下、硬膜外、髄腔内、静脈内、鼻腔、経口、または局所から選択される。他の好ましい実施形態では、投与経路は髄腔内および鼻腔から選択される。
【0210】
前述で考察されるように、投与は非経口、肺、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、眼、口腔内、および直腸投与であることができる。
【0211】
送達方法
本明細書において説明される薬剤および組成物は、当該技術分野で良く知られている様々な方法で投与することができる。投与には、例えば、経口摂取、直接注射（例えば、全身または定位的）、対象の因子を分泌するように工学処理された細胞の埋め込み、薬剤放出生体材料、ポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、浸透システム、多層コーティング、マイクロ粒子、埋め込み可能なマトリックスデバイス、ミニ浸透ポンプ、埋め込み可能なポンプ、注射可能なゲルおよびハイドロゲル、リポソーム、ミセル（例えば、３０μｍまで）、ナノスフェア（例えば、１μｍ未満）、マイクロスフェア（例えば、１～１００μｍ）、リサーバーデバイス、上記の任意の組み合わせ、または比率を変化させて所望の放出プロファイルを得る他の適切な送達媒体を含むことができる。薬剤または組成物の制御放出送達の他の方法は、当業者に知られており、本開示の範囲内である。
本明細書において説明される薬剤および組成物は、当該技術分野で良く知られている様々な方法で投与することができる。投与には、例えば、経口摂取、直接注射（例えば、全身または定位的）、対象の因子を分泌するように工学処理された細胞の埋め込み、薬剤放出生体材料、ポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、浸透システム、多層コーティング、マイクロ粒子、埋め込み可能なマトリックスデバイス、ミニ浸透ポンプ、埋め込み可能なポンプ、注射可能なゲルおよびハイドロゲル、リポソーム、ミセル（例えば、３０μｍまで）、ナノスフェア（例えば、１μｍ未満）、マイクロスフェア（例えば、１～１００μｍ）、リサーバーデバイス、上記の任意の組み合わせ、または比率を変化させて所望の放出プロファイルを得る他の適切な送達媒体を含むことができる。薬剤または組成物の制御放出送達の他の方法は、当業者に知られており、本開示の範囲内である。
【0212】
送達システムは、例えば、薬剤または組成物を、特定器官または腫瘍にインスリンまたは化学療法剤を送達するために使用されるのと類似な手段で投与するために使用され得るインフュージョンポンプを含み得る。一般的に、このようなシステムを用いて、薬剤または組成物は、選択された部位に制御された期間にわたって薬剤を放出する生体分解性で生物適合性のポリマーインプラントと組み合わせて投与することができる。ポリマー材の例には、ポリアンヒドリド、ポリオルトエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリエチレン酢酸ビニル、およびコポリマー、ならびにこれらの組み合わせが含まれる。さらに、制御放出システムは、治療標的の近位に配置することができ、このため、全身投与量の一部のみを必要とする。
【0213】
薬剤は様々な担体送達システムにカプセル化して投与することができる。担体送達システムの例には、マイクロスフェア、ハイドロゲル、ポリマーインプラント、スマートポリマー担体、およびイポソームが含まれる（一般的に、Ｕｃｈｅｇｂｕ ａｎｄ Ｓｃｈａｔｚｌｅｉｎ， ｅｄｓ．（２００６）Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＣＲＣ，ＩＳＢＮ－１０：０８４９３２５３３１を参照）。分子または生体分子薬剤の担体ベースシステムは、細胞内送達のために調製する、生体分子／薬剤放出速度に適合する、その作用部位に到達する生体分子の割合を増加する、その作用部位への薬剤の輸送を改善する、他の薬剤または賦形剤と共存した沈着を可能にする、インビボでの薬剤の安定性を改善する、クリアランスを低下させることによってその作用部位での薬剤の滞留時間を延長する、非標的組織に対する薬剤の非特異的送達を低下する、薬剤によって生じる刺激を低下する、薬剤の高い初期投与による毒性を低下する、薬剤の免疫原性を変化する、投与頻度を低下する、調製物の味を改善する、または生成物の寿命を改善することができる。
【0214】
治療期間
本発明の方法により、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量がこの方法を必要とする被験体にＣＩＰを治療するのに十分な期間（治療期間）投与される。ＪＡＫ阻害剤が投与される期間は、「治療期間」と呼ばれる。
本発明の方法により、ＪＡＫ阻害剤の治療上効果的な量がこの方法を必要とする被験体にＣＩＰを治療するのに十分な期間（治療期間）投与される。ＪＡＫ阻害剤が投与される期間は、「治療期間」と呼ばれる。
【0215】
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の量および投与の頻度は治療期間の間、変化しない。例えば、ＪＡＫ阻害剤は約１、２，３、４、５、６、または７日間、毎日投与され得る。あるいは、ＪＡＫ阻害剤は約２、３，４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間、毎日投与され得る。別の代替例では、ＪＡＫ阻害剤は３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月またはそれ以上、毎日投与され得る。さらに他の代替例では、ＪＡＫ阻害剤は約２、３、４、５、６、７，８、９、１０、１１、または１２週間、毎週投与され得る。さらに別の代替例では、ＪＡＫ阻害剤は３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月またはそれ以上、毎週投与され得る。別の代替例では、ＪＡＫ阻害剤は３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月またはそれ以上、毎月投与され得る。あるいは、ＪＡＫ阻害剤は「必要とされる」基準に基づいて投与され得る。
【0216】
他の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤の量および投与の頻度は治療期間の間、変化し得る。例えば、治療期間は第一期および第二期を含み得、ここで、（ａ）第一期に投与されるＪＡＫ阻害剤の量は、第二期に投与されるＪＡＫ阻害剤の量よりも多い、（ｂ）ＪＡＫ阻害剤は第一期において第二期よりも多い頻度で投与される、または（ｃ）第一期に投与されるＪＡＫ阻害剤の量は、第二期におけるＪＡＫ阻害剤の量よりも多く、投与は第一期において第二期よりも高い頻度である。また、投与の経路は第一期と第二期の間で異なることも考慮される。第一期の期間は、約２、３、４、５，６、７、８、９、１０、１１、または１２週であり得、第二期は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１週であり得る。治療期はまた、２期を超えて含み得る（例えば、３、４、５、またはそれ以上の期）。
【0217】
スクリーニング
また、ＪＡＫ阻害剤をスクリーニングするための方法が提供される。
また、ＪＡＫ阻害剤をスクリーニングするための方法が提供される。
【0218】
対象方法は、様々な異なる候補分子（例えば、可能性がある治療候補分子）のスクリーニングにおいて用途を見つけ出す。本明細書で説明される方法によるスクリーニングのための候補物質には、限定されないが、組織または細胞の一部、核酸、ポリペプチド、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイム、三重らせん化合物、抗体、および小さい（例えば、約２０００ＭＷ未満、または約１０００ＭＷ未満、または約８００ＭＷ未満）有機分子あるいは塩または金属を限定されずに含む無機分子が含まれる。
【0219】
候補分子は多くの化学的クラス、例えば、５０ダルトンを超えて約２，５００ダルトン未満の分子量を有する小有機化合物のような有機分子を包含する。候補分子は、タンパク質との構造的相互作用、特に水素結合に必要な官能基を含むことができ、一般的には少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシル、またはカルボキシル基、および通常少なくとも官能的化学基の少なくとも２つを含むことができる。候補分子は、上記官能基の１つ以上で置換された環状炭素または複素環構造、および／または芳香族またはポリ芳香族構造を含むことができる。
【0220】
候補分子は、化合物のライブラリーデータベースにおける化合物であることができる。当業者は、例えば、スクリーニングのために市販の化合物に関する多数のデータベースを一般的に熟知しているであろう（例えば、ＺＩＮＣデータベース，ＵＣＳＦ，分子の異なる１２サブセットにおける２．７百万種の化合物、Ｉｒｗｉｎ ａｎｄ Ｓｈｏｉｃｈｅｔ（２００５）Ｊ Ｃｈｅｍ Ｉｎｆ Ｍｏｄｅｌ４５，１７７－１８２を参照）。当業者はまた、販売元または所望の化合物およびさらに試験するために化合物のクラスを特定する様々な検索エンジンを熟知しているであろう（例えば、ＺＩＮＣデータベース、ｅＭｏｌｅｃｕｌｅｓ．ｃｏｍ、および供給者によって提供される市販化合物の電子ライブラリー、例えば、ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ ＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ、Ａｍｂｉｎｔｅｒ ＳＡＲＬ、Ｅｎａｍｉｎｅ、ＡＳＤＩ、Ｌｉｆｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓなどを参照）。
【0221】
本明細書において説明される方法によるスクリーニングのための候補分子には、リードライク化合物およびドラッグライク化合物の両方が含まれる。リードライク化合物は、一般的に、比較的少ない特徴（例えば、約３個未満の水素ドナーおよび／または約６個未満の水素アクセプター、約－２～約４の疎水性指標ｘｌｏｇＰ）を有する比較的小さいスキャホルド様構造（例えば、約１５０～約３５０ｋＤの分子量）を有するものと理解される（例えば、Ａｎｇｅｗａｎｔｅ（１９９９）Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．ｅｄ．Ｅｎｇｌ．２４，３９４３－３９４８を参照）。これに対し、ドラッグライク化合物は、一般的に、比較的多くの特徴（例えば、約１０個未満の水素アクセプターおよび／または約８個未満の回転可能な結合、約５未満の疎水性指標ｘｌｏｇＰ）を有する比較的大きいスキャホルド（例えば、約１５０～約５００ｋＤの分子量）を有するものと理解される（例えば、Ｌｉｐｉｎｓｋｉ（２０００）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ４４，２３５－２４９を参照）。最初のスクリーニングはリードライク化合物で実施することができる。
【0222】
空間配向データからリードを設計するとき、特定の分子構造が「ドラッグライク」であるとして特徴付けられると理解することが有用であり得る。このような特徴付けは、薬局方内の幅広い既知薬剤と類似性を比較することによって引き出される一連の実験的に認められた質に基づくことができる。薬剤がこれらの特徴付けのすべてまたはいずれかにさえ適合することは要求されないが、これがドラッグライクである場合、薬剤候補として臨床的に成功する可能性がかなり高くなる。
【0223】
これらの「ドラッグライク」特性のいくつかは、リピンスキーの４つの規則にまとめられている（これらの中で数字５が多いため、「ルールオブファイブ」として一般的に知られている）。これらの規則は一般的に経口吸収と関連し、リード最適化の際の化合物の生物学的利用能を予測するために使用されるが、本開示の方法を用いることによって実施され得る理論的薬剤設計取り組みの際に、リード分子を構築するための効果的なガイドラインとして利用することができる。
【0224】
４つの「ルールオブファイブ」は、ドラッグライク化合物候補が、（ｉ）５００ダルトン未満の分子量、（ｉｉ）５未満のｌｏｇＰ、（ｉｉｉ）５個以下の水素結合ドナー（ＯＨおよびＮＨ基の合計として表される）、および（ｉｖ）１０個以下の水素結合アクセプター（ＮおよびＯ原子の合計）の特徴の少なくとも３つを有するべきであると述べている。また、ドラッグライク分子は一般的に約８～約１５Åのスパン（幅）を有する。
【0225】
キット
またキットも提供される。このようなキットは、本明細書で説明される薬剤または組成物、および特定の実施形態では、投与のための説明書を含むことができる。このようなキットは、本明細書で説明される方法の実施を容易にすることができる。キットとして提供されるとき、組成物の異なる成分は別々の容器にパッケージ化されて使用直前に混合することができる。成分には、限定されないが、ＪＡＫ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の送達用成分が含まれる。成分のこのような別々のパッキングは、必要に応じて、組成物を含む１回以上の単位投与剤形を含み得るパックまたは分配デバイス中に存在することができる。パックは、例えばブリスターパックのような金属またはプラスチックホイルを含み得る。成分のこのような別々のパッキングはまた、特定の例では、成分の活性を失うことなく長期保存を可能にすることができる。
またキットも提供される。このようなキットは、本明細書で説明される薬剤または組成物、および特定の実施形態では、投与のための説明書を含むことができる。このようなキットは、本明細書で説明される方法の実施を容易にすることができる。キットとして提供されるとき、組成物の異なる成分は別々の容器にパッケージ化されて使用直前に混合することができる。成分には、限定されないが、ＪＡＫ阻害剤およびＪＡＫ阻害剤の送達用成分が含まれる。成分のこのような別々のパッキングは、必要に応じて、組成物を含む１回以上の単位投与剤形を含み得るパックまたは分配デバイス中に存在することができる。パックは、例えばブリスターパックのような金属またはプラスチックホイルを含み得る。成分のこのような別々のパッキングはまた、特定の例では、成分の活性を失うことなく長期保存を可能にすることができる。
【0226】
キットはまた別々の容器に試薬を含み、例えば、無菌水または生理食塩水を別にパッキングされた凍結乾燥有効成分に加える。例えば、密封ガラスアンプルが凍結乾燥成分を含み、別のアンプルに無菌水、無菌生理食塩水、または窒素のような中性非反応性ガス下でパッキングされている無菌のそれぞれを含み得る。アンプルはいずれかの適切な材料からなり得、ガラス、ポリカーボネートのような有機ポリマー、ポリスチレン、セラミック、金属、または試薬を保持するために一般的に使用されるいずれかの他の材料からなり得る。適切な容器の他の例には、アンプルと同様な物質から加工されるボトル、およびアルミニウムまたは合金のようなホイル裏打ちされた内部からなるエンベロープが含まれる。他の容器には、試験管、バイアル、フラスコ、ボトル、シリンジなどが含まれる。容器は、皮下注射針によって穿刺することができる栓を有するボトルのような、無菌的なアクセルポートを有し得る。他の容器は、容易に取り外し可能な膜によって分離され、この取り外しで成分を混合することができる２つの区画を有し得る。取り外し可能な膜はガラス、プラスチック、ラバーなどであり得る。
【0227】
特定の実施形態では、キットは取扱説明書材料とともに提供され得る。取扱説明書は、紙または他の物質に印刷され得、および／または電子による読み取り可能メディアとして提供され得、フロッピーディスク、ミニＣＤ－ＲＯＭ、ＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ、ジップディスク、ビデオテープ、オーディオテープなどが挙げられる。詳細な取扱説明書は、キットと物理的に組み合わされ得ず、代わりに、使用者はキットの製造業者または販売業者によって特定されるインターネットウェブサイトで指示され得る。
【0228】
分子生物学プロトコルを使用する本明細書において説明される組成物および方法は、当該技術分野で知られている様々な標準的技術に従うことができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００６）Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９７７１７、Ａｕｓｕｂｅｌら（２００２）Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＩＳＢＮ－１０：０４７１２５０９２９、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ－１０：０８７９６９５７７３、Ｅｌｈａｉ，Ｊ． ａｎｄ Ｗｏｌｋ，Ｃ．Ｐ．１９８８．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １６７， ７４７－７５４、Ｓｔｕｄｉｅｒ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．４１（１），２０７－２３４、Ｇｅｌｌｉｓｓｅｎ，ｅｄ．（２００５）Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｎｏｖｅｌ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，ＩＳＢＮ－１０：３５２７３１０３６３、Ｂａｎｅｙｘ（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ，ＩＳＢＮ－１０：０９５４５２３２５３を参照）。
【0229】
本明細書で説明される定義および方法が、本開示をより良く定めて、本開示の実施において当業者を手引きするために提供される。他に注釈がない限り、用語は関連技術において当業者による通常使用に従って理解されるべきである。
【0230】
いくつかの実施形態では、本開示の特定の実施形態を説明および請求するために使用される原料の量、分子量のような特性、反応条件などを表す数値は、用語「約」によっていくつかの場合には修飾されると理解されるべきである。いくつかの実施形態では、用語「約」は値が、値を測定するために使用されるデバイスまたは方法における平均の標準偏差を含むことを示すために使用される。いくつかの実施形態では、記載される説明および添付される請求項において示される数値パラメータは、特定の実施形態によって得られると考えられる所望の特性に依存して変化し得る近似値である。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された多くの重要な数字に照らし合わせて、標準的な周辺技術を適用することによって解釈されるべきである。本開示のいくつかの実施形態の広範な範囲を示す数値範囲およびパラメータが近似値であるにも関わらず、具体的な例で示される数値は、実行可能な正確さによって報告される。本開示のいくつかの実施形態で示される数値は、これらの各試験測定で認められる標準偏差から必ず生じる特定の誤差を含み得る。本明細書における値の範囲の列挙は、範囲内にあるそれぞれ別の値を個別に意味する簡略な方法として用いられる。本明細書に他の指示がない限り、各個別値は、それが本明細書で個別に列挙されているように本明細書に組み込まれる。
【0231】
いくつかの実施形態では、特定の実施形態で説明される文脈で使用される用語「一つ（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」、あるいは同様な意味は（特に、後述の請求項の特定の文脈において）、特に他に記載がない限り、単一および複数の両方を網羅すると解釈することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される用語「または」は、請求項を含め、二者択一のみまたは二者択一が相互に排他的であることを意味することが明白に示されていない限り、「および／または」を意味するために使用される。
【0232】
用語、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」は、制限のない連結動詞である。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」のような、これらの動詞の１つ以上のいずれかの形態または時制もまた、制限がない。例えば、１つ以上のステップを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、または「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」いずれかの方法は、これらの１つ以上のステップのみを保有することに限定されず、他の記載されないステップも網羅することができる。同様に、１つ以上の特性を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、または「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」いずれかの組成物またはデバイスは、これらの１つ以上の特性のみを保有することに限定されず、他の記載されない特性も網羅することができる。
【0233】
本明細書において説明されるすべての方法は、本明細書に他に指示がない、または文脈によって他に明確に矛盾しない限り、いずれかの適切な順序で実施することができる。本明細書における特定の実施形態に関して提供されるいずれかまたはすべての例、または例示的な用語（例えば、「のような」）の使用は、単に本開示をより良く説明することが意図され、他で請求される本開示の範囲に制限をもたらさない。本明細書の用語は、本開示の実施に必須であるいずれかの請求されていない要素を示すと解釈されるべきでない。
【0234】
本明細書で開示される本開示の二者択一要素または実施形態の群分けは限定されると解釈されるべきでない。各群要素は個別、あるいは群の他の要素または本明細書で認められる他の要素とのいずれかの組み合わせで言及および請求され得る。群の１つ以上の要素は、便宜的または特許性の理由のため、群に含める、または群から排除することができる。いずれかのこのような包含または除外が生じる場合、本明細書は添付請求項で使用されるすべてのマーカッシュ群の記載説明を満たすように改善された群を含むように考えられる。
【0235】
本明細書における参照の引用は、これが本開示に先立つ技術であるという容認として解釈されるべきでない。
【0236】
本開示を詳細に説明しており、修正、変更、および均等な実施形態は、添付請求項で定められる本開示の範囲を逸脱せずに可能であることは明らかであろう。さらに、本開示におけるすべての例は、非限定的な例として提供されると認識されるべきである。
【0237】
例
次の非限定的な例が、本開示をさらに説明するために示される。後述の例で開示される技術は本開示の実施において十分機能することを本発明者らが認めている方法を代表し、そのためその実施のための方式の例を構成すると考えることができることは、当業者によって認識されるべきである。しかし、当業者は、本開示に照らし合わせ、多くの変更が開示される特定の実施形態でなされ得、本開示の精神および範囲を逸脱することなく同様または類似の結果をさらに得ることができることを認識するべきである。
次の非限定的な例が、本開示をさらに説明するために示される。後述の例で開示される技術は本開示の実施において十分機能することを本発明者らが認めている方法を代表し、そのためその実施のための方式の例を構成すると考えることができることは、当業者によって認識されるべきである。しかし、当業者は、本開示に照らし合わせ、多くの変更が開示される特定の実施形態でなされ得、本開示の精神および範囲を逸脱することなく同様または類似の結果をさらに得ることができることを認識するべきである。
【0238】
例１：慢性特発性掻痒症を有する患者のサブセットの根拠となる免疫調節不全
慢性掻痒症は、慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）、または６週間を超えて継続する原因不明の痒みを有する高齢者の多くに偏って影響を及ぼす非常に衰弱的な症状である。複数の因子がＣＩＰの根拠になると考えられ、加齢関連皮膚障壁機能不全、感覚ニューロパチー、および「アレルギー性」ヘルパー２型（Ｔｈ２）細胞反応を生じる免疫機能の欠如である免疫老化が含まれる。しかし、ＣＩＰ患者の免疫学的プロファイルは理解が乏しいままである。
慢性掻痒症は、慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）、または６週間を超えて継続する原因不明の痒みを有する高齢者の多くに偏って影響を及ぼす非常に衰弱的な症状である。複数の因子がＣＩＰの根拠になると考えられ、加齢関連皮膚障壁機能不全、感覚ニューロパチー、および「アレルギー性」ヘルパー２型（Ｔｈ２）細胞反応を生じる免疫機能の欠如である免疫老化が含まれる。しかし、ＣＩＰ患者の免疫学的プロファイルは理解が乏しいままである。
【0239】
本例は、掻痒症の他の皮膚および全身発生の排除後に著しい免疫調節不全のエビデンスを有する老齢ＣＩＰ患者４名について説明する。原発性皮膚科学的過程の欠如にも関わらず、患者４名中３名が皮膚バイオプシーでリンパ球浸潤を示し、そのうち２名が好酸球の増加を示した（図２Ｂおよび図２Ｃ、ならびに表２を参照）。免疫グロブリンパネルおよび血液フローサイトメトリーは、過去に認められない体液性および細胞性免疫欠如を示し、ＴおよびＢ細胞リンパ球減少、好酸球増加、および低ガンマグロブリン血症が含まれた（表２を参照）。
【0240】
患者の広範な免疫性欠如が得られ、分類不能型免疫不全症（ＣＶＩＤ）のような原発性免疫不全が最初に考えられた。しかし、患者の低下したＩｇＧ値は、ＣＶＩＤにおけるようなＩｇＡまたはＩｇＭの低下と関連しなかった。患者はまた、再発性感染症、自己免疫、および悪性腫瘍のようなＣＶＩＤ関連合併症のいずれの病歴もなかった。これらの所見は、ＣＩＰ患者が加齢過程の結果としてＣＶＩＤと類似する二次性免疫欠如を獲得し得ることを示唆する。
【0241】
免疫老化は、アレルギー性Ｔｈ２反応に向かって進むことに関与するＴヘルパー細胞１型（Ｔｈ１）細胞由来防護免疫の欠如をもたらす。実際、ＣＩＰ患者は血清ＩｇＥの増加、末梢好酸球増加、および／または組織好酸球浸潤によって証明されるＴｈ２分極化を示した（表２を参照）。さらに、これらのＣＤ８リンパ球減少はＴｈ１反応の喪失、さらに慢性痒みの発症に関与する可能性がある加齢依存性Ｔｈ２分極化を裏付ける。際立ったことに、年齢の一致するコントロール集団との比較は、これらのＣＩＰ患者が同様な年齢の同等者を超えて免疫学的アンバランスを有することを示す。４名のうち３名の患者のＣＤ８＋Ｔ細胞数は、一致する年齢のコントロール被験体と比べて有意に低下しおり、例えば、症例３における６７個／ｍｍ３のＣＤ８＋Ｔ細胞数はＰｒｏｖｉｎｃｉａｌｌらによって報告される平均よりもほぼ２標準偏差低かった。同様に、患者４名のうちの２名（症例１および３）のＩｇＧ量は、年齢の一致するコントロールで報告されている最低値よりも２．５％低下した。これらの結果は、ＣＩＰ患者が老齢者で既に認められているリスク増加さえ超えて、慢性掻痒症に対する増加した感受性を生じる免疫機能不全をより高い程度で有し得ることを示唆する。
【0242】
結論として、これらのＣＩＰ患者はＴｈ２分極化と関連する免疫性欠如を示す。これらの所見は、加齢関連免疫老化が、老齢者における慢性特発性掻痒症の増加した罹患率を部分的に説明し得る免疫調節不全を促進し得ることを示唆する。このため、組換えサイトカインまたは免疫グロブリン補充による免疫恒常性の回復が、ＣＩＰのための新規治療方法を示し得る。
【0243】
表２の注釈：（ａ）本発明者らの病院に紹介された時点でのそれぞれ平均および最大の数値評価スケール（ＮＲＳ）痒みスコア。（ｂ）徹底的な精密検査を実施して、精神的および神経的症状、腎不全、胆汁機能不全、甲状腺異常、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎を含む掻痒症の他の皮膚および全身の原因を除外することによってＣＩＰの診断を確立した。再発性感染症、自己免疫症状、または悪性腫瘍の病歴を有する患者はいなかった。（ｃ）とりわけ、症例２のリウマチ性多発筋痛症のために処方された経口プレドニゾンの経過は、患者の筋肉弱化を改善したが、掻痒症は回復しなかった。（ｄ）膝置換術から生じている化膿性関節炎の２件のエピソードを除いて、患者は持続的または再発性の感染症、自己免疫、あるいは悪性腫瘍の病歴を有さなかった。（ｅ）症例３の患者は、３２９ＩＵ／ｍＬの初期ＩｇＥ量を有したが、２ヶ月後に１９５ＩＵ／ｍＬに正常化した。
【表2】
【0244】
例２：痒み知覚経路に従って２型サイトカインに反応する知覚ニューロン
炎症促進性２型サイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３は、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）発症を促進することが知られている（Ｇｉｔｔｌｅｒら，２０１２、ＷｅｉｄｉｎｇｅｒおよびＮｏｖａｋ，２０１６）。重要なことに、ＡＤ患者におけるアレルギー性炎症を抑制するためにＩＬ－４／１３受容体（ＩＬ－４Ｒα）拮抗剤であるデュピルマブを使用するフェーズＩＩおよびＩＩＩ臨床試験は、疾患および痒み重症度の両方における顕著な改善を示した（Ｂｅｃｋら，２０１４、Ｓｉｍｐｓｏｎら，２０１６、Ｔｈａｃｉら，２０１６）。ＩＬ－４／１３依存性炎症プロセスはＡＤにおける皮膚炎症の十分確立された仲介物質であるが、これらのサイトカインが直接的に慢性痒みを促進しているかどうか知られていない。２型サイトカインが直接的に知覚ニューロンを活性化することができるか試験するため、野生型（ＷＴ）マウスから得る後根神経節（ＤＲＧ）のＲＴ－ＰＣＲを実施し、ＩＬ－４Ｒα（Ｉｌ４ｒａ）およびＩＬ－１３受容体α１（ＩＬ－１３Ｒα１；Ｉｌ１３ｒａ１）の発現を認めたが、ＩＬ－５受容体α（ＩＬ－５Ｒα；Ｉｌ５ｒａ）は認めなかった（例えば、図５Ａを参照）。予想されたように、既知のサイトカイン起痒物質ＩＬ－３１に対する受容体（Ｉｌ３１ｒａ）の発現も検出することができた（例えば、図５Ａを参照）（Ｃｅｖｉｋｂａｓら，２０１４、Ｄｉｌｌｏｎら，２００４、Ｓｏｎｋｏｌｙら，２００６）。同様に、ヒト死体ドナーから得られるＤＲＧも、ＩＬ－４Ｒα（ＩＬ４ＲＡ），ＩＬ－１３Ｒα１（ＩＬ１３ＲＡ１）、およびＩＬ－３１ＲＡ（ＩＬ３１ＲＡ）を発現したが、ＩＬ－５Ｒα（ＩＬ５ＲＡ）は発現しなかった（例えば、図５Ｂを参照）。際立ったことに、知覚神経節がＩ１４ｒａを、Ｉｌ１３ｒａ１およびＩｌ３１ｒａと比べて非常に高い量を発現することを認めた（例えば、図５Ｃを参照）。まとめると、これらの結果は、知覚ニューロンが２型サイトカインＩＬ－４およびＩＬ－１３によって直接的に刺激され得るという仮説を引き起こす。
炎症促進性２型サイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３は、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）発症を促進することが知られている（Ｇｉｔｔｌｅｒら，２０１２、ＷｅｉｄｉｎｇｅｒおよびＮｏｖａｋ，２０１６）。重要なことに、ＡＤ患者におけるアレルギー性炎症を抑制するためにＩＬ－４／１３受容体（ＩＬ－４Ｒα）拮抗剤であるデュピルマブを使用するフェーズＩＩおよびＩＩＩ臨床試験は、疾患および痒み重症度の両方における顕著な改善を示した（Ｂｅｃｋら，２０１４、Ｓｉｍｐｓｏｎら，２０１６、Ｔｈａｃｉら，２０１６）。ＩＬ－４／１３依存性炎症プロセスはＡＤにおける皮膚炎症の十分確立された仲介物質であるが、これらのサイトカインが直接的に慢性痒みを促進しているかどうか知られていない。２型サイトカインが直接的に知覚ニューロンを活性化することができるか試験するため、野生型（ＷＴ）マウスから得る後根神経節（ＤＲＧ）のＲＴ－ＰＣＲを実施し、ＩＬ－４Ｒα（Ｉｌ４ｒａ）およびＩＬ－１３受容体α１（ＩＬ－１３Ｒα１；Ｉｌ１３ｒａ１）の発現を認めたが、ＩＬ－５受容体α（ＩＬ－５Ｒα；Ｉｌ５ｒａ）は認めなかった（例えば、図５Ａを参照）。予想されたように、既知のサイトカイン起痒物質ＩＬ－３１に対する受容体（Ｉｌ３１ｒａ）の発現も検出することができた（例えば、図５Ａを参照）（Ｃｅｖｉｋｂａｓら，２０１４、Ｄｉｌｌｏｎら，２００４、Ｓｏｎｋｏｌｙら，２００６）。同様に、ヒト死体ドナーから得られるＤＲＧも、ＩＬ－４Ｒα（ＩＬ４ＲＡ），ＩＬ－１３Ｒα１（ＩＬ１３ＲＡ１）、およびＩＬ－３１ＲＡ（ＩＬ３１ＲＡ）を発現したが、ＩＬ－５Ｒα（ＩＬ５ＲＡ）は発現しなかった（例えば、図５Ｂを参照）。際立ったことに、知覚神経節がＩ１４ｒａを、Ｉｌ１３ｒａ１およびＩｌ３１ｒａと比べて非常に高い量を発現することを認めた（例えば、図５Ｃを参照）。まとめると、これらの結果は、知覚ニューロンが２型サイトカインＩＬ－４およびＩＬ－１３によって直接的に刺激され得るという仮説を引き起こす。
【0245】
知覚ニューロンが２型サイトカインによって活性化され得るかどうか試験するため、ネズミＤＲＧニューロンのレシオ測定によるカルシウム画像化を使用した。組換えネズミＩＬ－４（例えば、図５Ｄを参照）またはＩＬ－１３（例えば、図５Ｅを参照）による培養されたニューロンの体外刺激は、ニューロンサブセットにおける細胞内カルシウムの急速な上昇を示した。これらの反応は、ＩＬ－３１刺激によって認められるものと同様だった（例えば、図５Ｆを参照）。つぎに、ＤＲＧにおけるＩＬ－４およびＩＬ－１３反応性ニューロンの組成を広範に試験するために探索した。培養したニューロンのＩＬ－４またはＩＬ－１３による刺激は、それぞれ全ＤＲＧニューロンの４．１±０．５％および３．３±０．８％にカルシウム反応をもたらした（例えば、図５Ｇを参照）。過去の報告（Ｃｅｖｉｋｂａｓら，２０１４、Ｌｉｕら，２００９）と一致して、ニューロンの約５％および２５％がそれぞれＩＬ－３１およびヒスタミンに対して反応性だった（例えば、図５Ｇを参照）。予想されたように、ＤＲＧにおけるＩｌ５ｒａの発現が欠如すると（例えば、図５Ａ～Ｂを参照）、ＤＲＧニューロンがＩＬ－５によって刺激されたときに反応が認められなかった（例えば、図１２を参照）。まとめると、これらの試験は、知覚ニューロンが２型サイトカインＩＬ－４およびＩＬ－１３と選択的に反応することを示す。
【0246】
つぎに、所定の起痒原の連続的な負荷に反応するＤＲＧニューロンのカルシウム画像化を実施して、ＩＬ－４またはＩＬ－１３が既定の痒み知覚経路を活性化するかどうか試験した。ＤＲＧニューロンがＩＬ－４、ならびにＩＬ－３１およびヒスタミンによって連続して刺激されたとき、ＩＬ－４反応性ニューロンの８８．９％がＩＬ－３１またはヒスタミンにも反応した（例えば、図５Ｈを参照）。同様に、ＩＬ－１３反応性ニューロンの７５．０％がＩＬ－３１またはヒスタミンにも反応した（例えば、図５Ｉを参照）。合わせると、これらの試験はＩＬ－４およびＩＬ－１３の両方が、既定の痒み知覚経路を含むニューロンのファミリーを活性化できることを示す。しかし、ＩＬ－４およびＩＬ－１３がともにＬ－３１またはヒスタミンのどちらと反応しない知覚ニューロンも活性化することができることを認めている。
【0247】
結果を単一細胞レベルで検証するため、マウスにおける予測される知覚モダリティに対して単一ニューロンの転写プロファイルを関連付けた既に公表されている単一細胞ＲＮＡシークエンシングデータを再分析した（Ｕｓｏｓｋｉｎら，２０１５）。このデータセットの再試験は、痒みを仲介することが予測される小直径ニューロンのファミリー（ＮＰ１、ＮＰ２、およびＮＰ３）は、侵害受容（ＰＥＰ１およびＰＥＰ２）および機械受容（ＴＨ）を仲介することが予測される小直径ニューロンの他のファミリーと比べて、Ｉｌ４ｒａおよびＩｌ１３ｒａ１を発現するニューロンが豊富化されることを示した（例えば、図１３を参照）。Ｍａｓ関連Ｇタンパク質結合受容体Ａ３（ＭｒｇｐｒＡ３）およびＩＬ－３１ＲＡのような既定の掻痒受容器は、それぞれＮＰ２およびＮＰ３のような定められた痒みクラスターに対して高い特異性であるが（Ｕｓｏｓｋｉｎら，２０１５）、Ｉｌ４ｒａの発現は複数の掻痒受容器クラスターに及んでいる（例えば、図１３を参照）。これらの分析および本発明者らの機能的カルシウム画像結果は、２型サイトカインが複数の痒み経路を同時に活性化することができることを示す。まとめると、これらの試験は２型サイトカインが、免疫細胞に対するこれらの十分定められた効果に加えて、ニューロンの直接的な刺激を介して慢性痒みを促進するという仮説を引き起こす。
【0248】
例３：慢性痒みの設定における知覚神経節で高まる２型サイトカイン受容体発現
インビボでの２型サイトカインの痒みに対する関与を探求するため、マウスを局所刺激性カルシポトリオール（ＭＣ９０３）によって処置する、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）様皮膚炎症の既に確立されているネズミモデルを使用した（例えば、図６Ａを参照）（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｌｉら，２００６，２００９、Ｍｏｒｉｔａら，２０１５、Ｎｏｔｉら，２０１３，２０１４、Ｓｉｒａｃｕｓａら，２０１１）。賦形剤（エタノール、ＥｔＯＨ）のみで処置されたコントロールマウスと比べて、ＭＣ９０３処置マウスは耳皮膚厚によって測定される頑強な皮膚炎症を発症し（例えば、図６Ｂを参照）、炎症の組織学的特徴には、角質層厚化（角化症）、表皮過形成（表皮肥厚）、および混合皮膚炎症性浸潤が含まれる（例えば、図６Ｃを参照）。従って、既に確立されている組織病理学的等級付けシステム（Ｋｉｍら，２０１４）を用いて、ＭＣ９０３処置マウスが炎症の高い組織学的スコアを示すことを認めた（例えば、図６Ｄを参照）。重要なことに、皮膚炎症の特徴に加え、ＭＣ９０３処置マウスは時間経過で引っ掻き動作を定量化することによって測定するとき、顕著な慢性痒み表現型を示す（例えば、図６Ｅを参照）。
インビボでの２型サイトカインの痒みに対する関与を探求するため、マウスを局所刺激性カルシポトリオール（ＭＣ９０３）によって処置する、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）様皮膚炎症の既に確立されているネズミモデルを使用した（例えば、図６Ａを参照）（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｌｉら，２００６，２００９、Ｍｏｒｉｔａら，２０１５、Ｎｏｔｉら，２０１３，２０１４、Ｓｉｒａｃｕｓａら，２０１１）。賦形剤（エタノール、ＥｔＯＨ）のみで処置されたコントロールマウスと比べて、ＭＣ９０３処置マウスは耳皮膚厚によって測定される頑強な皮膚炎症を発症し（例えば、図６Ｂを参照）、炎症の組織学的特徴には、角質層厚化（角化症）、表皮過形成（表皮肥厚）、および混合皮膚炎症性浸潤が含まれる（例えば、図６Ｃを参照）。従って、既に確立されている組織病理学的等級付けシステム（Ｋｉｍら，２０１４）を用いて、ＭＣ９０３処置マウスが炎症の高い組織学的スコアを示すことを認めた（例えば、図６Ｄを参照）。重要なことに、皮膚炎症の特徴に加え、ＭＣ９０３処置マウスは時間経過で引っ掻き動作を定量化することによって測定するとき、顕著な慢性痒み表現型を示す（例えば、図６Ｅを参照）。
【0249】
ＡＤと関連した慢性痒みの設定で誘発される炎症変化を広範に試験するため、コントロールおよびＭＣ９０３処置マウスの両方から得る皮膚サンプルのＲＮＡシークエンシングを実施した。予想されるように、ＭＣ９０３処置マウスから得られる皮膚はコントロール皮膚と比べて明確な転写プログラムを示し、ＩＬ－４（Ｉｌ４）、ＩＬ－１３（Ｉｌ１３）、ＩＬ－４Ｒα（Ｉｌ４ｒａ）、およびＩＬ－１３Ｒα１（Ｉｌ１３ｒａ１）のような主要なＡＤ関連サイトカインシグナル化分子転写の上方調節を含む（例えば、図６Ｆを参照、例えば、図１５を参照）。さらに、Ｉｌ４ｒａおよびＩｌ１３ｒａ１の発現はまた、ＡＤ関連痒みを有するマウスから得られる知覚神経節で有意に上方調節されるが、Ｉｌ５ｒａの発現では認められない（例えば、図６Ｇを参照）。このため、これらのデータは、知覚神経系が慢性痒みの設定でＩＬ－４およびＩＬ－１３の両受容体の上方調節を介して２型サイトカインシグナル化を選択的に高めることができることを示唆し、知覚ニューロンにおける調節不全化２型サイトカインシグナル化が病理的な慢性痒みを促進するという仮説を引き起こす。
【0250】
例４：知覚神経線維と直接的に相互作用する２型免疫細胞
２型サイトカイン発現細胞が皮膚を神経支配する知覚神経線維と近接化するかどうか試験するため、知覚神経線維がｔｄＴｏｍａｔｏを知覚ニューロン特異的（Ｎａｖ１．８）Ｃｒｅリコンビナーゼ下で発現し（Ａｇａｒｗａｌら，２００４）、２型免疫細胞が増強されたＧＦＰ（ｅＧＦＰ）をＩＬ－４レポーター下で発現する（Ｍｏｈｒｓら，２００１）、新しい二重レポーターマウスを作製した。従って、これらの二重レポーターマウスは、２型免疫細胞（ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋）が知覚神経線維（Ｎａｖ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋）と相互作用するかどうか、視覚化することができる。そしてこれらの二重レポーターマウスを、一つの耳は賦形剤コントロール（ＥｔＯＨ）で、第二の耳はＭＣ９０３で処置し、両耳の皮膚の生体内二光子イメージングを実施した（例えば、図７Ａを参照）（Ｚｉｎｓｅｌｍｅｙｅｒら，２００９）。コントロール皮膚ではＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞がほとんど認められなかったが（例えば、図７Ｂ、図１６を参照）、ＭＣ９０３で処置した皮膚において知覚神経線維に近接する多くの運動性２型免疫細胞を認めた（例えば、図７Ｃ，図１７を参照）。単一細胞レベルで、２型免疫細胞のサブセットが知覚神経線維との相互作用でのこれらの瞬時速度を著しく低下したが、線維を去った後に迅速な通過を再開したことを認めた（例えば、図７Ｄ、図１８を参照）。全体として、ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋と関連するＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋２型免疫細胞が、知覚線維と関連しなかったものと比べて画像化経緯にわたって低い平均速度を有した（例えば、図７Ｅを参照）。まとめると、これらの結果は、変化した免疫細胞輸送および知覚線維の活性化の両方をもたらす、免疫系と知覚神経系の間の頑強な二方向性相互作用の存在を示唆する。２型免疫細胞がインビボで知覚線維と物理学的に相互作用するという観察は、２型サイトカインシグナル化が直接的なニューロン刺激を介して慢性痒みを仲介し得るという仮説にさらなる裏付けを与える。
２型サイトカイン発現細胞が皮膚を神経支配する知覚神経線維と近接化するかどうか試験するため、知覚神経線維がｔｄＴｏｍａｔｏを知覚ニューロン特異的（Ｎａｖ１．８）Ｃｒｅリコンビナーゼ下で発現し（Ａｇａｒｗａｌら，２００４）、２型免疫細胞が増強されたＧＦＰ（ｅＧＦＰ）をＩＬ－４レポーター下で発現する（Ｍｏｈｒｓら，２００１）、新しい二重レポーターマウスを作製した。従って、これらの二重レポーターマウスは、２型免疫細胞（ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋）が知覚神経線維（Ｎａｖ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋）と相互作用するかどうか、視覚化することができる。そしてこれらの二重レポーターマウスを、一つの耳は賦形剤コントロール（ＥｔＯＨ）で、第二の耳はＭＣ９０３で処置し、両耳の皮膚の生体内二光子イメージングを実施した（例えば、図７Ａを参照）（Ｚｉｎｓｅｌｍｅｙｅｒら，２００９）。コントロール皮膚ではＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞がほとんど認められなかったが（例えば、図７Ｂ、図１６を参照）、ＭＣ９０３で処置した皮膚において知覚神経線維に近接する多くの運動性２型免疫細胞を認めた（例えば、図７Ｃ，図１７を参照）。単一細胞レベルで、２型免疫細胞のサブセットが知覚神経線維との相互作用でのこれらの瞬時速度を著しく低下したが、線維を去った後に迅速な通過を再開したことを認めた（例えば、図７Ｄ、図１８を参照）。全体として、ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋と関連するＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋２型免疫細胞が、知覚線維と関連しなかったものと比べて画像化経緯にわたって低い平均速度を有した（例えば、図７Ｅを参照）。まとめると、これらの結果は、変化した免疫細胞輸送および知覚線維の活性化の両方をもたらす、免疫系と知覚神経系の間の頑強な二方向性相互作用の存在を示唆する。２型免疫細胞がインビボで知覚線維と物理学的に相互作用するという観察は、２型サイトカインシグナル化が直接的なニューロン刺激を介して慢性痒みを仲介し得るという仮説にさらなる裏付けを与える。
【0251】
例５：慢性痒みの発症に必要とされるニューロン２型サイトカインシグナル化
知覚ニューロン内在性２型サイトカインシグナル化を研究するため、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅマウスを用いて知覚ニューロンに対して特異的にＩＬ－４Ｒαを欠如するマウス（ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋ Ｉｌ４ｒａｆｌ／ｆｌ；ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎ）を作製した（例えば、図８Ａを参照）。ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスを正常なメンデルの法則で出生させ、Ｉｌ４ｒａの欠如を知覚神経節で確証した（例えば、図８Ｂを参照）。そしてＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスをＭＣ９０３で処置して、慢性痒みに対するＩＬ－４／１３シグナル化の直接的なニューロン関与を探索した（例えば、図８Ａを参照）。際立ったことに、皮膚炎症の導入では、ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスは同腹仔コントロールと比べて期間にわたって引っ掻き動作の有意な低下を示した（例えば、図８Ｃを参照）。さらに、皮膚炎症は耳厚測定（例えは、図８Ｄを参照）および組織病理学的評価（例えば、図８Ｅ～Ｆを参照）によって測定されたとき著しく低下した。まとめると、これらの試験は以前には認められていない知覚ニューロン制限化ＩＬ－４Ｒαシグナル化が慢性痒みの誘発、ならびに皮膚炎症の発症の両方で重要であることを示す。
知覚ニューロン内在性２型サイトカインシグナル化を研究するため、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅマウスを用いて知覚ニューロンに対して特異的にＩＬ－４Ｒαを欠如するマウス（ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋ Ｉｌ４ｒａｆｌ／ｆｌ；ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎ）を作製した（例えば、図８Ａを参照）。ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスを正常なメンデルの法則で出生させ、Ｉｌ４ｒａの欠如を知覚神経節で確証した（例えば、図８Ｂを参照）。そしてＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスをＭＣ９０３で処置して、慢性痒みに対するＩＬ－４／１３シグナル化の直接的なニューロン関与を探索した（例えば、図８Ａを参照）。際立ったことに、皮膚炎症の導入では、ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスは同腹仔コントロールと比べて期間にわたって引っ掻き動作の有意な低下を示した（例えば、図８Ｃを参照）。さらに、皮膚炎症は耳厚測定（例えは、図８Ｄを参照）および組織病理学的評価（例えば、図８Ｅ～Ｆを参照）によって測定されたとき著しく低下した。まとめると、これらの試験は以前には認められていない知覚ニューロン制限化ＩＬ－４Ｒαシグナル化が慢性痒みの誘発、ならびに皮膚炎症の発症の両方で重要であることを示す。
【0252】
例６：慢性痒みを低下するニューロンＪＡＫ１シグナル化の中断
２型サイトカインが免疫細胞におけるＪＡＫ依存経路を通してシグナル化することが知られており（Ｋｅｌｌｙ－Ｗｅｌｃｈら，２００３、Ｓｃｈｗａｒｔｚら，２０１６）、知覚ニューロンが単一細胞レベルでＪＡＫシグナル化成分を発現することを確証する試みをした。このことを試験するため、ＤＲＧニューロンの単一細胞ＲＮＡシークエンシングの既に公表されているデータセット（Ｕｓｏｓｋｉｎら，２０１５）を再度分析し、ＪＡＫ１が掻痒受容器ニューロンにおいて高度に発現されることを特定した（例えば、図１５を参照）。そして、ＪＡＫ阻害が慢性痒みの新規治療戦略を示し得るという仮説を立てた。インビボでのＪＡＫシグナル化の薬理学的阻害が痒みを低下するかどうか試験するため、ＭＣ９０３処置を使用してＷＴマウスにＡＤ関連痒みを誘発し、同時にＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブによって治療した（例えば、図９Ａを参照）。実際、ルキソリチニブの全身性腹腔内（ｉ．ｐ．）送達は、ＭＣ９０３処置マウスにおける引っ掻き動作を有意に低下した（例えば、図９Ｂを参照）。驚くべきことに、耳皮膚厚化（例えば、図９Ｃを参照）および疾患の組織学的パラメータ（例えば、図９Ｄ～Ｅを参照）は、その十分確立された抗炎症特性にも関わらず、全身ルキソリチニブ治療の設定で、統計的に有意だが、ごくわずかな低下を示した。このため、ルキソリチニブの抗痒み効果は、皮膚炎症の抑制によるよりも、直接的なニューロンＪＡＫ阻害によって主として仲介され得ると推測した。
２型サイトカインが免疫細胞におけるＪＡＫ依存経路を通してシグナル化することが知られており（Ｋｅｌｌｙ－Ｗｅｌｃｈら，２００３、Ｓｃｈｗａｒｔｚら，２０１６）、知覚ニューロンが単一細胞レベルでＪＡＫシグナル化成分を発現することを確証する試みをした。このことを試験するため、ＤＲＧニューロンの単一細胞ＲＮＡシークエンシングの既に公表されているデータセット（Ｕｓｏｓｋｉｎら，２０１５）を再度分析し、ＪＡＫ１が掻痒受容器ニューロンにおいて高度に発現されることを特定した（例えば、図１５を参照）。そして、ＪＡＫ阻害が慢性痒みの新規治療戦略を示し得るという仮説を立てた。インビボでのＪＡＫシグナル化の薬理学的阻害が痒みを低下するかどうか試験するため、ＭＣ９０３処置を使用してＷＴマウスにＡＤ関連痒みを誘発し、同時にＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブによって治療した（例えば、図９Ａを参照）。実際、ルキソリチニブの全身性腹腔内（ｉ．ｐ．）送達は、ＭＣ９０３処置マウスにおける引っ掻き動作を有意に低下した（例えば、図９Ｂを参照）。驚くべきことに、耳皮膚厚化（例えば、図９Ｃを参照）および疾患の組織学的パラメータ（例えば、図９Ｄ～Ｅを参照）は、その十分確立された抗炎症特性にも関わらず、全身ルキソリチニブ治療の設定で、統計的に有意だが、ごくわずかな低下を示した。このため、ルキソリチニブの抗痒み効果は、皮膚炎症の抑制によるよりも、直接的なニューロンＪＡＫ阻害によって主として仲介され得ると推測した。
【0253】
ニューロンコンパートメントにおけるＪＡＫ遮断だけで慢性痒みを低下するのに十分であるかどうか試験するため、ＷＴマウスにＭＣ９０３によってＡＤ様痒みを誘発させ、ルキソリチニブの単回低用量を髄腔内（ｉ．ｔ．）で送達させた（例えば、図９Ｆを参照）。際立ったことに、ｉ．ｔ．ルキソリチニブを受けたマウスは、単回注射の２４時間後、末梢皮膚炎症に効果がないにも関わらず（例えば、図９Ｈ～Ｊを参照）、引っ掻き動作の著しい低下を示した（例えば、図９Ｇを参照）。このため、神経系に限定された薬理学的なＪＡＫ遮断は痒みを和らげるのに十分だった。まとめると、これらの試験はＪＡＫ阻害が慢性痒みの実行可能な治療戦略を示すことを実証する。さらに、これらの観察は、知覚ニューロンにおけるＪＡＫシグナル化が、慢性痒みが皮膚炎症と無関係で仲介される主要なメカニズムであるという仮説を引き起こす。
【0254】
知覚ニューロン特異的ＪＡＫシグナル化が慢性痒みの誘発に必要かどうか検討するため、知覚ニューロンで条件的に欠失され、掻痒受容器におけるＪＡＫ１の頑強な発現が与えられたマウス（ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋ ＪＡＫ１ｆｌ／ｆｌ；ＪＡＫ１Δｎｅｕｒｏｎ）を作製した（例えば、図１５を参照）。ＡＤ様痒みの誘発では（例えば、図９Ｋを参照）、ＪＡＫ１Δｎｅｕｒｏｎマウスは頑強な皮膚炎症の存在下でさえ（例えば、図９Ｍ～Ｏを参照）、慢性痒みにおける著しい低下を示した（例えば、図９Ｌを参照）。まとめると、これらの試験はニューロンＪＡＫ１が慢性痒みの誘発に極めて重要であることを示す。そのため、ＪＡＫ１は炎症病因の存在において現れる慢性痒み障害の治療に関連する標的であることが示される。
【0255】
例７：明白な皮膚炎症が存在せずに重度痒みおよびニューロン調節不全を示す慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）患者
ＡＤの設定における皮膚炎症と痒みの間に強い関連があるため、慢性痒みの理解を広げるために明白な皮膚炎症が存在せずに現れる別の痒み障害である慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）を試験することを考えた。ＣＩＰは加齢と強く関連し、全身性免疫老化の発現であると考えられる（Ｎｏｒｍａｎ，２００３、ＰａｔｅｌおよびＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈ，２０１０、Ｒｅｉｃｈら，２０１１）。結果として、ＣＩＰ患者は１型免疫の喪失による２型免疫プロファイルを示すことが提唱されている（ＢｅｒｇｅｒおよびＳｔｅｉｎｈｏｆｆ，２０１１）。このことの裏付けとして、本発明者らは、ＣＩＰ患者が低度末梢好酸球増加およびＩｇＥの増加と関連する全身性２型炎症の特徴を現わすことを最近示した（Ｘｕら，２０１６）。ＡＤにおける皮膚炎症の良好な排除は、痒みの徴候を消失させることが知られているが、ＣＩＰを有する患者はしばしば抗炎症剤に対して難治性である。
ＡＤの設定における皮膚炎症と痒みの間に強い関連があるため、慢性痒みの理解を広げるために明白な皮膚炎症が存在せずに現れる別の痒み障害である慢性特発性掻痒症（ＣＩＰ）を試験することを考えた。ＣＩＰは加齢と強く関連し、全身性免疫老化の発現であると考えられる（Ｎｏｒｍａｎ，２００３、ＰａｔｅｌおよびＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈ，２０１０、Ｒｅｉｃｈら，２０１１）。結果として、ＣＩＰ患者は１型免疫の喪失による２型免疫プロファイルを示すことが提唱されている（ＢｅｒｇｅｒおよびＳｔｅｉｎｈｏｆｆ，２０１１）。このことの裏付けとして、本発明者らは、ＣＩＰ患者が低度末梢好酸球増加およびＩｇＥの増加と関連する全身性２型炎症の特徴を現わすことを最近示した（Ｘｕら，２０１６）。ＡＤにおける皮膚炎症の良好な排除は、痒みの徴候を消失させることが知られているが、ＣＩＰを有する患者はしばしば抗炎症剤に対して難治性である。
【0256】
特徴的な炎症性皮膚疾患であるＡＤ（例えば、図１０Ａを参照）とは異なり、ＣＩＰは肉眼的に正常な皮膚所見を示す（例えば、図１０Ｂを参照）。さらに、ＡＤ組織病理学は角化症、表皮肥厚、および頑強な混合皮膚炎症浸潤を含む皮膚炎症の明確な特徴を示す（例えば、図１０Ｃを参照）。しかし、ＣＩＰ患者の組織病理学は最も痒みのある皮膚部位から得るバイオプシーでさえ最小の炎症のみを示し、積層した健康な「バスケット織り模様」の角質層（角化症がない）を有する正常な表皮（表皮肥厚がない）によって証明される（例えば、図１０Ｄを参照）。実際、患者バイオプシーの組織学的な等級付けは、ＣＩＰ患者がＡＤ患者と比べて皮膚炎症の著しく低いレベルを示すことを実証した（例えば、図１０Ｅを参照）。注目すべきことは、かなり軽度な皮膚炎症にも関わらず、ＣＩＰ患者はＡＤ患者と比べて高い数値評価スケール（ＮＲＳ）痒みスコアを示す（ＡＤのＮＲＳ痒みスコア：５．５５±０．５１、ＣＩＰのＮＲＳ痒みスコア：７．０７±０．２６）（例えば、図１０Ｆを参照）。まとめると、これらの結果はＡＤ患者と比べて皮膚炎症が低いにも関わらず、ＣＩＰ患者はより衰弱的な痒みの徴候を有する。このため、これらの結果は慢性痒みが、頑強な皮膚炎症の設定ならびに顕著な炎症プロセスが存在しない両方で現れ得ることを示す。
【0257】
分子レベルでＣＩＰを特徴付けするため、４名のＣＩＰ患者から得る皮膚、４名のＡＤ患者から得る病変皮膚、および４名のコントロール被験体から得る健常皮膚についてＲＮＡシークエンシングを実施した。コントロールおよびＡＤ皮膚間で最も差次的に発現された上位１００種の発現された遺伝子による各群のクラスタリングによって、ＣＩＰ皮膚がコントロール皮膚よりもＡＤ皮膚と密接に関連することが示された（例えば、図１０Ｇを参照）。これらの結果は、ＣＩＰがＡＤと皮膚炎症に関する著しい差にもかかわらず共有される分子署名を示すことを示唆する。しかし、ＣＩＰとＡＤ皮膚を比較する遺伝子セットエンリッチメント分析（ＧＳＥＡ）（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎら，２００５）は、ＣＩＰをＡＤと区別する特異的な転写プログラムを示した。この分析は、ＡＤ皮膚が免疫反応の広範な活性化と関連し（例えば、図１０Ｈ、表３を参照）、ＣＩＰ皮膚がニューロンプロセスおよび知覚認知の調節不全と関連することを示した（例えば、図１０Ｈ、表４を参照）。まとめると、これらのデータは、ＡＤの顕著な炎症促進性署名にも関わらず、ＣＩＰは最少の炎症を関連するニューロン機能不全のプロファイルによって主に特徴付けられる原発性痒み症状であることを示す。このため、ＪＡＫ１は炎症性病因が存在しないまたは最少の炎症性病因で現れる慢性痒み障害の治療と関連する標的であることが示される。
【表3】
【表4】
【0258】
例８：ＣＩＰを有する患者における掻痒症を改善するＪＡＫ阻害
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）を有する患者における最近の概念実証パイロット試験およびフェーズＩＩ臨床試験は、市販のＪＡＫ阻害剤トファシチニブによる治療に反応する痒み徴候の迅速で有意な低下を示している（Ｂｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅら，２０１６、Ｌｅｖｙら，２０１５）。これらの試験はＪＡＫ阻害をＡＤのための抗炎症治療として検討することを考えたが、薬理学的なＪＡＫ阻害（例えば、図９Ａ～Ｊを参照）および系統特異的ニューロンＪＡＫ１欠如（例えば、図９Ｋ～Ｏを参照）の両方が痒みを制限するという本発明者らの前臨床結果は、ＪＡＫ阻害が選択的に痒みを標的にする新規神経調節方法を示すことを示唆する。従って、ＣＩＰに明白な皮膚炎症が存在しないにも関わらず、ＣＩＰ患者はＪＡＫ遮断から恩恵を得ると仮定した。
アトピー性皮膚炎（ＡＤ）を有する患者における最近の概念実証パイロット試験およびフェーズＩＩ臨床試験は、市販のＪＡＫ阻害剤トファシチニブによる治療に反応する痒み徴候の迅速で有意な低下を示している（Ｂｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅら，２０１６、Ｌｅｖｙら，２０１５）。これらの試験はＪＡＫ阻害をＡＤのための抗炎症治療として検討することを考えたが、薬理学的なＪＡＫ阻害（例えば、図９Ａ～Ｊを参照）および系統特異的ニューロンＪＡＫ１欠如（例えば、図９Ｋ～Ｏを参照）の両方が痒みを制限するという本発明者らの前臨床結果は、ＪＡＫ阻害が選択的に痒みを標的にする新規神経調節方法を示すことを示唆する。従って、ＣＩＰに明白な皮膚炎症が存在しないにも関わらず、ＣＩＰ患者はＪＡＫ遮断から恩恵を得ると仮定した。
【0259】
ＣＩＰの適応に特定的なＦＤＡ承認治療剤が欠如しているため、重度なＣＩＰを有する患者５名に対するＪＡＫ阻害剤トファシチニブによる適応外治療を処方した。これらの患者のすべてが、強力な免疫抑制を含む複数の他の適応外治療で既に失敗している（表５）。しかし、経口トファシチニブによる治療１ヶ月後、５名の患者すべてが各自のＮＲＳ痒みスコアにおける顕著な改善を示した（例えば、図１１Ａを参照）。際立ったことに、患者は過去の免疫抑制療法にも関わらず、ＪＡＫ遮断によって痒みの緩和の迅速な発生を報告した（例えば、図１１Ｂを参照）。このため、これらの結果は、ＪＡＫ阻害が従来の抗炎症剤だけでは耐性である慢性痒み障害を有する患者のための新規治療戦略を示し得る。まとめると、本発明者らの試験は、古典的な免疫シグナル化経路が慢性痒みを仲介する知覚神経系で機能することを示す。慢性痒みについて特定的にＦＤＡ承認された治療は現在ないが、知覚神経系におけるこれらの免疫シグナル化経路の重要性に関する本発明者らの発見は、これらの共有された経路を標的にする新規治療の開発を促進し得る。
ａアザチオプリンまたはシクロスポリン
【表5】
【0260】
考察
慢性痒みは、侵入する病原体を取り除くために哺乳動物によって通常使用される知覚反応の病的調節不全の一般的な例である。これは複数の皮膚科学的、神経学的、および全身性医学的症状における非常に衰弱的な徴候である。さらに、慢性痒みはまたＣＩＰのように、明確に定められた障害が存在せずに現れ得る（ＢｅｒｇｅｒおよびＳｔｅｉｎｈｏｆｆ，２０１１、Ｍｏｌｌａｎａｚａｒら，２０１６、Ｘｕら，２０１６、ＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈおよびＢｅｒｎｈａｒｄ，２０１３）。痒みはしばしば患者看護においてしばしば見過ごされる症状であるが、臨床試験は慢性痒みが生活の質のおいて深刻な負の影響を有することを確証している（Ｋｉｎｉ ＳＰら，２０１１、Ｍａｔｔｅｒｎｅら，２０１１、Ｓｔａｎｄｅｒら，２００７、ＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈおよびＢｅｒｎｈａｒｄ，２０１３）。しかし、社会におけるその相当な負担にもかかわらず、現在のところ慢性痒みに適応される特定の治療はない。
慢性痒みは、侵入する病原体を取り除くために哺乳動物によって通常使用される知覚反応の病的調節不全の一般的な例である。これは複数の皮膚科学的、神経学的、および全身性医学的症状における非常に衰弱的な徴候である。さらに、慢性痒みはまたＣＩＰのように、明確に定められた障害が存在せずに現れ得る（ＢｅｒｇｅｒおよびＳｔｅｉｎｈｏｆｆ，２０１１、Ｍｏｌｌａｎａｚａｒら，２０１６、Ｘｕら，２０１６、ＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈおよびＢｅｒｎｈａｒｄ，２０１３）。痒みはしばしば患者看護においてしばしば見過ごされる症状であるが、臨床試験は慢性痒みが生活の質のおいて深刻な負の影響を有することを確証している（Ｋｉｎｉ ＳＰら，２０１１、Ｍａｔｔｅｒｎｅら，２０１１、Ｓｔａｎｄｅｒら，２００７、ＹｏｓｉｐｏｖｉｔｃｈおよびＢｅｒｎｈａｒｄ，２０１３）。しかし、社会におけるその相当な負担にもかかわらず、現在のところ慢性痒みに適応される特定の治療はない。
【0261】
ＡＤの設定では、２型サイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３が疾患発病で重要である複雑な炎症反応を調整する。この炎症カスケードは衰弱的な慢性痒みをもたらす。しかし、２型サイトカインのような炎症促進性仲介物質が痒みを誘発するメカニズムは、ほとんど理解されないままである。本明細書で説明されるように、慢性痒みの理解を広げる３つの概念的な進歩が得られた。第一に、古典的な免疫シグナル化分子ＩＬ－４およびＩＬ－１３が痒み知覚ニューロンを直接的に活性化し、ＩＬ－４Ｒαの知覚ニューロン特異的欠如がインビボで慢性痒みを弱めるのに十分であることが実証された。第二に、本発明者らは、免疫細胞における２型サイトカインに対する主要な下流シグナル化分子であるＪＡＫ１の知覚ニューロン特異的欠如が慢性痒みを低下することを示す。第三に、本発明者らは、皮膚炎症のレベルに関わりなく、薬理学的なＪＡＫ阻害が痒みを弱めるのに十分であることを実証する。重要なことに、本発明者らは、標準的な免疫抑制療法に不応性である慢性痒みの特発性型を有する患者でさえ、全身性ＪＡＫ阻害剤で改善することを示す。まとめると、本試験は、知覚認知を調節する古典的な免疫シグナル化経路の新規機能を特定する。
【0262】
古典的に、ＡＤ病変皮膚における２型サイトカインの有力な供給源は、Ｔヘルパー２型（Ｔｈ２）細胞を介した適応免疫系であると考えられた（ＷｅｉｄｉｎｇｅｒおよびＮｏｖａｋ，２０１６）。さらに、最近の研究は、Ｔｈ２細胞由来ＩＬ－３１がインビボで引っ掻きを誘発することができることを示している（Ｃｅｖｉｋｂａｓら，２０１４、Ｄｉｌｌｏｎら，２００４、Ｓｏｎｋｏｌｙら，２００６）。このため、ＡＤ関連の炎症および痒みの両方が適応免疫系によって仲介されていると広く考えられた。しかし、本発明者らおよび他は最近、２群自然リンパ系細胞（ＩＬＣ２）および好塩基球のような自然免疫細胞集団が、適応免疫系の皮膚炎症を独立して決定的に仲介することを示している（Ｉｍａｉら，２０１３、Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｒｏｅｄｉｇｅｒら，２０１３、Ｓａｌｉｍｉら，２０１３）。この裏付けとして、多数の試験がＩＬＣ２および好塩基球の両方がインビボで２型サイトカインの重要な供給源であることを実証している（Ｉｍａｉら，２０１３、Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｒｏｅｄｉｇｅｒら，２０１３、Ｓａｌｉｍｉら，２０１３）。ニューロンＩＬ－４／１３シグナル化が慢性痒みを決定的に仲介することを示す本発明者らの新しいデータに基づき、適応Ｔｈ２細胞に加え、ＩＬＣ２および好塩基球のような自然免疫細胞が痒みを仲介する決定的な役割を演じると本発明者らは推測している。今後試験が実施されて、適応および自然の両免疫細胞の慢性痒みの発症に対する機能的関与を完全に定めるであろう。
【0263】
２型サイトカイン関連免疫反応の上流で、優勢な上皮細胞由来サイトカインである胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）およびＩＬ－３３は、Ｔｈ２細胞ならびにＩＬＣ２ｓおよび好塩基球を含む様々な細胞に対するこれらの影響を介した２型炎症の支配的な開始物質であることが示されている（ＨａｍｍａｄおよびＬａｍｂｒｅｃｈｔ，２０１５、ＫｉｍおよびＡｒｔｉｓ，２０１５、Ｋｉｍら，２０１３ｂ、Ｏｅｔｊｅｎら，２０１６、Ｓｉｒａｃｕｓａら，２０１３ａ）。際立ったことに、２件の最近の試験は、ＴＳＬＰおよびＩＬ－３３が知覚ニューロンに直接作用して、起痒原として機能することができることを実証している（Ｌｉｕら，２０１６、Ｗｉｌｓｏｎら，２０１３）。実際、本発明者らおよび他は、ＴＳＬＰおよびＩＬ－３３がＭＣ９０３誘発ＡＤ様疾患の設定で高度に発現されることを示している（Ｋｉｍら，２０１３ａ、Ｌｉら，２００６，２００９、Ｓａｌｉｍｉら，２０１３）。ＡＤにおけるこれらのサイトカインの高い発現および多数の下流サイトカイン経路の頑強な活性化にも関わらず、本発明者らの試験は、ＩＬ－４Ｒαのみの知覚ニューロン特異的欠如が痒みを弱めるのに十分であることを特定している。このため、ニューロンＩＬ－４Ｒαシグナル化はＡＤ関連痒みの対する非常に頑強な標的であると考えられる。しかし、ＩＬ－４Ｒαが新たな痒み知覚経路を表す、またはＩＬ－３１、ＴＳＬＰ、およびＩＬ－３３のような既に特定されている起痒原に対する知覚ニューロンの反応性を調節するかどうかは、判断されるべきものとして残っている。
【0264】
痒み知覚の伝達に加え、ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎマウスにおける疾患重症度の著しい低下は、２型サイトカインによるニューロン活性化も神経原性炎症を仲介し得るという仮定を引き起こす。際立ったことに、臨床報告は、ＡＤおよび乾癬病変の両方における、病変皮膚の除神経後の改善を報告しており、両疾患の神経原性成分を示唆する（ＡｍｏｎおよびＷｏｌｆｆ，１９９４、Ａｚｉｍｉら，２０１５、ＲａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉおよびＦａｒｂｅｒ，１９９３）。これらの可能性の裏付けとして、最近の試験は、皮膚における知覚ニューロンがＴｈ１７関連炎症および乾癬を促進できることを示している（Ｋａｓｈｅｍら，２０１５、Ｒｉｏｌ－Ｂｌａｎｃｏら，２０１４）。神経原性プロセスが皮膚における２型炎症を調節することができるかどうかは、明確に決定されるべきこととして残っている。肺ではＴａｌｂｏｔらは最近、２型サイトカインＩＬ－５が下神経節から突起するニューロンを刺激して、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）の放出を介してアレルギー性気道炎症を仲介することを示している（Ｔａｌｂｏｔら，２０１５）。しかし、本発明者らは、ＩＬ－５が皮膚を神経支配する知覚ニューロンを活性化する証拠を見つけることができなかった。このため、２型炎症による知覚ニューロンの活性化のメカニズムおよび機能的な帰結は組織特異的であり得る。将来的な試験は、どのようなパラダイムが皮膚および神経原性２型皮膚炎症の基礎となる分子メカニズムに適用されるか判断することが要求されるであろう。
【0265】
抗ＩＬ－４Ｒαモノクローナル抗体であるデュピルマブに関するフェーズＩＩおよびＩＩＩ臨床試験は、患者における痒み徴候の顕著な改善を繰り返し実証している（Ｂｅｃｋら，２０１４、Ｓｉｍｐｓｏｎら，２０１６、Ｔｈａｃｉら，２０１６）。さらに、ＪＡＫ阻害剤を使用する初期臨床試験は、ＡＤを有する患者における痒みの有意な改善を実証している（Ｂｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅら，２０１６、Ｌｅｖｙら，２０１５）。現在まで、これらの変化はＩＬ－４ＲαおよびＪＡＫ遮断の抗炎症特性に帰されている。しかし、本発明者らの試験は、痒み徴候のこのような改善は、これらの療法の特定な抗炎症特性と無関係に生じ得、むしろこれらの以前に認識されていない神経調節効果に帰することができ得ることを示唆する。マウスにおけるＪＡＫ阻害の有力な神経調節効果および条件的な遺伝子欠如に基づき、本発明者らはＪＡＫ阻害が頑強な皮膚炎症の存在しないときでさえ、抗痒み療法として作用するものと仮定した。このことの裏付けとして、本発明者らは、明確な皮膚炎症を伴わずに現れるＣＩＰを有する患者が、トファシチニブによって治療されたときに有意に改善したことを認めた。まとめると、これらの結果はＪＡＫ阻害が抗炎症および神経調節の二重の役割を果たすことができることを示唆する。重要なことに、本発明者らの最近の試験に基づき、本発明者らはＣＩＰを有する患者における新規ＪＡＫ１選択的阻害剤（ＩＮＣＢ０３９１１０）の使用を探索する前向き臨床試験を設計している（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ＩＤ：ＮＣＴ０２９０９５６９）。しかし、大規模な前向き無作為対照試験が、このような治療の効能を完全に判断するために必要とされる。
【0266】
上皮障壁表面での免疫は、病原体ならびに可能性がある毒素の迅速な排除を仲介するために進化していると考えられる。上皮は物理的障壁のみとして以前は考えられたが、最近の進歩は様々な免疫機能におけるその直接的役割を強調している（ＡｒｔｉｓおよびＳｐｉｔｓ，２０１５、ＨａｍｍａｄおよびＬａｍｂｒｅｃｈｔ，２０１５、Ｐａｌｍら，２０１２）。免疫系および上皮障壁それ自体に加え、哺乳動物ホストは組織損傷の前に有害な刺激を機械的に取り除くために咳および引っ掻きのような行動的な反応も使用する。本発明者らの最近の試験は、古典的免疫介在物質がホスト行動を調節する知覚回路で必須な部分を演じることを実証する。過去に認められていない神経免疫経路を特定することによって、本発明者らは慢性痒みのような病的知覚障害の治療のために新規治療方法を明らかにしている。
【0267】
例９：方法
次の例は、他に記載がない限り、前述の例２～８で使用された方法を説明する。
次の例は、他に記載がない限り、前述の例２～８で使用された方法を説明する。
【0268】
マウス
マウスはすべて、ワシントン大学メディカルスクールで標準的な環境条件（１２時間明暗サイクル、２３℃、食餌および水を自由摂取）において飼育した。Ｃ５７Ｂｌ／６およびＲｏｓａ２６－ｔｄＴｏｍａｔｏマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＮａＶ１．８－ＣｒｅマウスはＤｒ．Ｒｏｈｉｎｉ Ｋｕｎｅｒ（ハイデンベルグ大学）によって提供された。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ（４ｇｅｔ）マウスはＤｒ．Ｅｄｗａｒｄ Ｐｅａｒｃｅ（ＭＰＩ－ＩＥ）によって提供された。Ｉｌ４ｒａｆｌｏｘマウスはＤｒ．Ａｊａｙ Ｃｈａｗｌａ（ＵＣＳＦ）によって提供された。Ｊａｋ１ｆｌｏｘマウスは南京大学南京生物医学研究所から購入した。ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋レポーターマウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＲｏｓａ２６－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋マウスを最初に交配し、ついで子孫をＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋マウスと交配して作製した。ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎ（ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋Ｉｌ４ｒａｆｌ／ｆｌ）マウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＩｌ４ｒａｆｌｏｘマウスを交配して作製した。ＪＡＫ１Δｎｅｕｒｏｎ （ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋ ＪＡＫ１ｆｌ／ｆｌ）マウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＪａｋ１ｆｌｏｘマウスを交配して作製した。マウスのジェノタイピングを標準的なＰＣＲを用いて実施した。ネズミの作業はすべて、医学実験動物委員会（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）におけるワシントン大学医学部のガイドライン（プロトコル番号２０１４０１７０）に従って実施した。
マウスはすべて、ワシントン大学メディカルスクールで標準的な環境条件（１２時間明暗サイクル、２３℃、食餌および水を自由摂取）において飼育した。Ｃ５７Ｂｌ／６およびＲｏｓａ２６－ｔｄＴｏｍａｔｏマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＮａＶ１．８－ＣｒｅマウスはＤｒ．Ｒｏｈｉｎｉ Ｋｕｎｅｒ（ハイデンベルグ大学）によって提供された。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ（４ｇｅｔ）マウスはＤｒ．Ｅｄｗａｒｄ Ｐｅａｒｃｅ（ＭＰＩ－ＩＥ）によって提供された。Ｉｌ４ｒａｆｌｏｘマウスはＤｒ．Ａｊａｙ Ｃｈａｗｌａ（ＵＣＳＦ）によって提供された。Ｊａｋ１ｆｌｏｘマウスは南京大学南京生物医学研究所から購入した。ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋レポーターマウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＲｏｓａ２６－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋マウスを最初に交配し、ついで子孫をＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋マウスと交配して作製した。ＩＬ－４ＲαΔｎｅｕｒｏｎ（ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋Ｉｌ４ｒａｆｌ／ｆｌ）マウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＩｌ４ｒａｆｌｏｘマウスを交配して作製した。ＪＡＫ１Δｎｅｕｒｏｎ （ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋ ＪＡＫ１ｆｌ／ｆｌ）マウスは、ＮａＶ１．８－Ｃｒｅ＋とＪａｋ１ｆｌｏｘマウスを交配して作製した。マウスのジェノタイピングを標準的なＰＣＲを用いて実施した。ネズミの作業はすべて、医学実験動物委員会（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）におけるワシントン大学医学部のガイドライン（プロトコル番号２０１４０１７０）に従って実施した。
【0269】
ネズミＤＲＧおよびＴＧからのＲＮＡ単離ならびにＲＴ－ｑＰＣＲ
ＲＮＡ単離のため、ネズミ後根神経節（ＤＲＧ）または三叉神経節（ＴＧ）を収集し、結合組織を除去して１ｍＬのトリゾール試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でホモジナイズした。全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉキット（キアゲン）を製造業者の取扱説明書に従って用いて抽出した。抽出後、サンプルをＤＮアーゼ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ－Ｆｒｅｅ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって製造業者の取扱説明書に従って処理した。次いで、ｃＮＤＡをＨｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（高容量ｃＤＮＡ逆転写キット）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて合成した。遺伝発現量をＲＴ－ｑＰＣＲ（ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ；Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。簡単に説明すると、遺伝子発現をＧａｐｄｈに対して基準化して、相対発現を必要に応じてｅΔＣｔまたはΔΔＣｔ法のどちらかを用いて計算した。ゲル電気泳動では、ＲＴ－ｑＰＣＲ反応から得られる産物を、臭化エチジウム（１μｇ／ｍＬ）添加した２％アガロースゲルに加えて１４０Ｖで２５分間泳動した。各遺伝子で使用したプライマーおよびプローブ配列は、事前に検証されたＰｒｉｍｅＴｉｍｅ ｑＰＣＲ Ａｓｓａｙ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から選択した。使用したプライマーおよびプローブは次の通りである。
１．Ｇａｐｄｈ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＧＣＡＡＡＴＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＣＣＣＴＧＧＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）
プライマー１：ＧＴＧＧＡＧＴＣＡＴＡＣＴＧＧＡＡＣＡＴＧＴＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）
プライマー２：ＡＡＴＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＧＴＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）
２．Ｉｌ４ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＣＡＧＡＡＣＣＡＧ／ＺＥＮ／ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＡ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）
プライマー１：ＧＴＴＡＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）
プライマー２：ＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＣＴＣＧＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）
３．Ｉｌ５ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＧＡＧＣＡＡＧＣ／ＺＥＮ／ＴＴＣＴＣＣＣＡＣＴＧＡＧＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）
プライマー１：ＡＧＡＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）
プライマー２：ＣＡＡＧＧＡＴＣＴＡＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）
４．Ｉｌ１３ｒａ１－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＡＣＡＧＧＴＧＧＣ／ＺＥＮ／ＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＴＧＧＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）
プライマー１：ＧＡＧＡＴＴＴＴＣＧＡＣＡＧＡＧＡＣＧＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）
プライマー２：ＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＡＣＴＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）
５．Ｉｌ３１ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＣＧＴＣＡＴＣＴ／ＺＥＮ／ＧＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＡＡＣＡＡＣＴＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）
プライマー１：ＧＡＴＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＴＴＡＣＡＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）
プライマー２：ＴＡＧＴＧＣＣＧＴＴＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）
ＲＮＡ単離のため、ネズミ後根神経節（ＤＲＧ）または三叉神経節（ＴＧ）を収集し、結合組織を除去して１ｍＬのトリゾール試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でホモジナイズした。全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉキット（キアゲン）を製造業者の取扱説明書に従って用いて抽出した。抽出後、サンプルをＤＮアーゼ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ－Ｆｒｅｅ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって製造業者の取扱説明書に従って処理した。次いで、ｃＮＤＡをＨｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（高容量ｃＤＮＡ逆転写キット）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて合成した。遺伝発現量をＲＴ－ｑＰＣＲ（ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ；Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。簡単に説明すると、遺伝子発現をＧａｐｄｈに対して基準化して、相対発現を必要に応じてｅΔＣｔまたはΔΔＣｔ法のどちらかを用いて計算した。ゲル電気泳動では、ＲＴ－ｑＰＣＲ反応から得られる産物を、臭化エチジウム（１μｇ／ｍＬ）添加した２％アガロースゲルに加えて１４０Ｖで２５分間泳動した。各遺伝子で使用したプライマーおよびプローブ配列は、事前に検証されたＰｒｉｍｅＴｉｍｅ ｑＰＣＲ Ａｓｓａｙ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から選択した。使用したプライマーおよびプローブは次の通りである。
１．Ｇａｐｄｈ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＧＣＡＡＡＴＧＧ／ＺＥＮ／ＣＡＧＣＣＣＴＧＧＴＧ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）
プライマー１：ＧＴＧＧＡＧＴＣＡＴＡＣＴＧＧＡＡＣＡＴＧＴＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）
プライマー２：ＡＡＴＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＴＧＴＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）
２．Ｉｌ４ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＣＡＧＡＡＣＣＡＧ／ＺＥＮ／ＣＡＡＧＣＡＣＧＣＡＧＡ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）
プライマー１：ＧＴＴＡＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）
プライマー２：ＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＣＴＣＧＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）
３．Ｉｌ５ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＧＡＧＣＡＡＧＣ／ＺＥＮ／ＴＴＣＴＣＣＣＡＣＴＧＡＧＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）
プライマー１：ＡＧＡＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）
プライマー２：ＣＡＡＧＧＡＴＣＴＡＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）
４．Ｉｌ１３ｒａ１－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＡＣＡＧＧＴＧＧＣ／ＺＥＮ／ＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＴＧＧＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）
プライマー１：ＧＡＧＡＴＴＴＴＣＧＡＣＡＧＡＧＡＣＧＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）
プライマー２：ＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＡＣＴＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）
５．Ｉｌ３１ｒａ－プローブ：／５６－ＦＡＭ／ＴＣＧＴＣＡＴＣＴ／ＺＥＮ／ＧＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＡＡＣＡＡＣＴＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）
プライマー１：ＧＡＴＣＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＴＴＡＣＡＣＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）
プライマー２：ＴＡＧＴＧＣＣＧＴＴＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）
【0270】
ヒトＤＲＧからのＲＮＡ単離ならびにＲＴ－ＰＣＲ
ヒト後根神経節（ｈＤＲＧ）をＩＲＢ承認プロトコル下で匿名化されたＵＳ移植ドナーから得た。ｈＤＲＧ採取後、脂肪、硬膜、および結合組織を既に報告されている方法（Ｖａｌｔｃｈｅｖａら，２０１６）に従って取り除いた。ｈＤＲＧは続いて、ＲＮＡ単離が実施されるまで、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で－８０℃に保存した。ＲＮＡ単離では、一つのｈＤＲＧの半分から得る組織を１ｍＬトリアゾール試薬（（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で製造業者の取扱説明書に従ってホモジナイズした。全ＲＮＡ抽出後、ゲノムＤＮＡを除去し、Ｍａｘｉｍａ Ｈ Ｍｉｎｕｓ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｄｓＤＮａｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて製造業者の取扱説明書に従ってｃＤＮＡを合成した。ＲＴ－ｑＰＣＲ産物を、臭化エチジウム（１μｇ／ｍＬ）添加した２％アガロースゲルに加えて１００Ｖで４５分間泳動した。ＲＴ－ＰＣＲは次のプライマーセットを用いて実施した。
１．ＩＬ４ＲＡ－プライマー１：ＧＡＣＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＧＧＡＴＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）
プライマー２：ＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）
２．ＩＬ５ＲＡ－プライマー１：ＣＴＴＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＴＴＡＡＣＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）
プライマー２：ＣＧＡＧＴＧＡＡＣＧＧＧＴＡＣＧＴＴＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）
３．ＩＬ１３ＲＡ１－プライマー１：ＣＣＴＡＣＧＧＡＡＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）
プライマー２：ＣＧＡＧＴＧＡＡＣＧＧＧＴＡＣＧＴＴＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）
４．ＩＬ３１ＲＡ－プライマー１：ＣＡＣＡＡＧＡＡＡＡＧＣＴＣＧＣＡＧＡＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）
プライマー２：ＧＧＴＧＧＴＴＣＡＧＴＴＴＴＣＧＣＴＡＴＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）
ヒト後根神経節（ｈＤＲＧ）をＩＲＢ承認プロトコル下で匿名化されたＵＳ移植ドナーから得た。ｈＤＲＧ採取後、脂肪、硬膜、および結合組織を既に報告されている方法（Ｖａｌｔｃｈｅｖａら，２０１６）に従って取り除いた。ｈＤＲＧは続いて、ＲＮＡ単離が実施されるまで、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で－８０℃に保存した。ＲＮＡ単離では、一つのｈＤＲＧの半分から得る組織を１ｍＬトリアゾール試薬（（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で製造業者の取扱説明書に従ってホモジナイズした。全ＲＮＡ抽出後、ゲノムＤＮＡを除去し、Ｍａｘｉｍａ Ｈ Ｍｉｎｕｓ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｄｓＤＮａｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて製造業者の取扱説明書に従ってｃＤＮＡを合成した。ＲＴ－ｑＰＣＲ産物を、臭化エチジウム（１μｇ／ｍＬ）添加した２％アガロースゲルに加えて１００Ｖで４５分間泳動した。ＲＴ－ＰＣＲは次のプライマーセットを用いて実施した。
１．ＩＬ４ＲＡ－プライマー１：ＧＡＣＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＧＧＡＴＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）
プライマー２：ＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）
２．ＩＬ５ＲＡ－プライマー１：ＣＴＴＧＣＧＧＴＧＣＴＴＧＴＴＡＡＣＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）
プライマー２：ＣＧＡＧＴＧＡＡＣＧＧＧＴＡＣＧＴＴＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）
３．ＩＬ１３ＲＡ１－プライマー１：ＣＣＴＡＣＧＧＡＡＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）
プライマー２：ＣＧＡＧＴＧＡＡＣＧＧＧＴＡＣＧＴＴＴＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）
４．ＩＬ３１ＲＡ－プライマー１：ＣＡＣＡＡＧＡＡＡＡＧＣＴＣＧＣＡＧＡＣＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）
プライマー２：ＧＧＴＧＧＴＴＣＡＧＴＴＴＴＣＧＣＴＡＴＧＴＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）
【0271】
一昼夜ネズミＤＲＧニューロン培養
ネズミＤＲＧニューロンを単離して、既に公開されているプロトコルにわずかな変更を加えて用いて培養した（Ｍａｌｉｎら，２００７）。簡単に説明すると、マウスに椎弓切除を実施して両側ＤＲＧを取り出した。結合組織の除去後、ＤＲＧを１μＬの飽和ＮａＨＣＯ３、０．３５ｍｇのＬ－システイン、および２０Ｕパパイン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）を含む１ｍＬのＣａ２＋／Ｍｇ２＋無含有ハンクス平衡化塩溶液（ＨＢＳＳ）に移して、３７℃で２０分間インキュベーションした。懸濁液を遠心分離し、上清を取り除いて、３．７５ｍｇコラゲナーゼＩＩ型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）および７．５ｍｇディスパーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）を含む１ｍＬのＣａ２＋／Ｍｇ２＋無含有ＨＢＳＳで置換し、３７℃で２０分間インキュベーションした。消化後、ニューロンを優しく粉砕し、ペレット化してから、２％Ｂ－２７サプリメント（ギブコ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（シグマ）、１００ｎｇ／ｍＬ神経増殖因子（シグマ）、および１０％熱不活化ＦＢＳ（シグマ）を含むＮｅｕｒｏｂａｓａｌ－Ａ培地に再懸濁させた。そしてニューロンをポリ－Ｌ－リジン（シグマ）およびラミニン（シグマ）によってプレコーティングした１２ｍｍガラスカバースリップに載せ、使用前に３７℃で５％ＣＯ２の加湿大気下において１８～２４時間培養した。
ネズミＤＲＧニューロンを単離して、既に公開されているプロトコルにわずかな変更を加えて用いて培養した（Ｍａｌｉｎら，２００７）。簡単に説明すると、マウスに椎弓切除を実施して両側ＤＲＧを取り出した。結合組織の除去後、ＤＲＧを１μＬの飽和ＮａＨＣＯ３、０．３５ｍｇのＬ－システイン、および２０Ｕパパイン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）を含む１ｍＬのＣａ２＋／Ｍｇ２＋無含有ハンクス平衡化塩溶液（ＨＢＳＳ）に移して、３７℃で２０分間インキュベーションした。懸濁液を遠心分離し、上清を取り除いて、３．７５ｍｇコラゲナーゼＩＩ型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）および７．５ｍｇディスパーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）を含む１ｍＬのＣａ２＋／Ｍｇ２＋無含有ＨＢＳＳで置換し、３７℃で２０分間インキュベーションした。消化後、ニューロンを優しく粉砕し、ペレット化してから、２％Ｂ－２７サプリメント（ギブコ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（シグマ）、１００ｎｇ／ｍＬ神経増殖因子（シグマ）、および１０％熱不活化ＦＢＳ（シグマ）を含むＮｅｕｒｏｂａｓａｌ－Ａ培地に再懸濁させた。そしてニューロンをポリ－Ｌ－リジン（シグマ）およびラミニン（シグマ）によってプレコーティングした１２ｍｍガラスカバースリップに載せ、使用前に３７℃で５％ＣＯ２の加湿大気下において１８～２４時間培養した。
【0272】
カルシウム画像化
培養したＤＲＧニューロンを４μＭのＦｕｒａ－２ＡＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともに一昼夜ＤＲＧ培養培地に３７℃で４５分間加えた。そして細胞を３回洗浄して、使用前にカルシウム画像化緩衝液（１３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＫＣｌ、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、０．６ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのグルコース、１．２ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ７．４５）中で室温、３０分間インキュベーションした。すべての組換えネズミサイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３：Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ＩＬ－３１：Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）を３００ｎＭで使用したが、ヒスタミン（シグマ）およびカプサイシン（シグマ）はそれぞれ５０μＭおよび３００ｎＭで使用した。１００ｍＭのＫＣｌの最終添加に反応した知覚ニューロンのみを分析に使用した。蛍光をＮＩＳ－Ｅｌｅｍｅｎｔｓ画像ソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｔｓ）を備えたニコンＴｉ－Ｅ倒立顕微鏡を用いて３４０ｎｍおよび３８０ｎｍ（Ｆ３４０、Ｆ３８０）励起波長で記録した。蛍光比（Ｆ３４０／Ｆ３８０）をベースラインに対して基準化して、刺激に対する細胞内部Ｃａ２＋およびニューロン活性の変化を反映させた。細胞は、これらがベースラインの＞１０％蛍光比の変化を示す場合に反応性と考えられた。データを２～３回の独立した実験から得た。
培養したＤＲＧニューロンを４μＭのＦｕｒａ－２ＡＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともに一昼夜ＤＲＧ培養培地に３７℃で４５分間加えた。そして細胞を３回洗浄して、使用前にカルシウム画像化緩衝液（１３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＫＣｌ、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、０．６ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのグルコース、１．２ｍＭのＮａＨＣＯ３、ｐＨ７．４５）中で室温、３０分間インキュベーションした。すべての組換えネズミサイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３：Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、ＩＬ－３１：Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）を３００ｎＭで使用したが、ヒスタミン（シグマ）およびカプサイシン（シグマ）はそれぞれ５０μＭおよび３００ｎＭで使用した。１００ｍＭのＫＣｌの最終添加に反応した知覚ニューロンのみを分析に使用した。蛍光をＮＩＳ－Ｅｌｅｍｅｎｔｓ画像ソフトウェア（Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｔｓ）を備えたニコンＴｉ－Ｅ倒立顕微鏡を用いて３４０ｎｍおよび３８０ｎｍ（Ｆ３４０、Ｆ３８０）励起波長で記録した。蛍光比（Ｆ３４０／Ｆ３８０）をベースラインに対して基準化して、刺激に対する細胞内部Ｃａ２＋およびニューロン活性の変化を反映させた。細胞は、これらがベースラインの＞１０％蛍光比の変化を示す場合に反応性と考えられた。データを２～３回の独立した実験から得た。
【0273】
ＭＣ９０３処置および病理学的評価
ＡＤ様炎症および痒みの誘発では、マウスを２ｎｍｏｌのＭＣ９０３（カルシポトリオール、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって７日間、または１ｎｍｏｌのＭＣ９０３によって１２日間、既に報告されているようにエタノール（賦形剤）２０μＬ中で両耳に毎日１回局所処置した（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｓｉｒａｃｕｓａら，２０１１，２０１３ｂ）。耳厚測定を既に報告されているようにダイアル式カルパスによって実施した（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４）。ＭＣ９０３処置の最後に、ネズミ耳皮膚組織を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定して、パラフィン包理してから、切片化してヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）によって染色した。組織学的スコアを既に報告されているように、ＩｍａｇｅＪ分析ソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて式として、
（高倍率視野当たりの全リンパ球数（ＨＰＦ）＋角質層の基層から最上部までのミクロンで測定した表皮の厚み）／１００
によって決定した（Ｋｉｍら，２０１４）。全ての画像をＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ２．０－ＨＴ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）によって撮像した。ネズミ疾患および行動的評価データ（後述）を２～３回の独立した実験から得た。
ＡＤ様炎症および痒みの誘発では、マウスを２ｎｍｏｌのＭＣ９０３（カルシポトリオール、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって７日間、または１ｎｍｏｌのＭＣ９０３によって１２日間、既に報告されているようにエタノール（賦形剤）２０μＬ中で両耳に毎日１回局所処置した（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４、Ｓｉｒａｃｕｓａら，２０１１，２０１３ｂ）。耳厚測定を既に報告されているようにダイアル式カルパスによって実施した（Ｋｉｍら，２０１３ａ，２０１４）。ＭＣ９０３処置の最後に、ネズミ耳皮膚組織を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定して、パラフィン包理してから、切片化してヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）によって染色した。組織学的スコアを既に報告されているように、ＩｍａｇｅＪ分析ソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて式として、
（高倍率視野当たりの全リンパ球数（ＨＰＦ）＋角質層の基層から最上部までのミクロンで測定した表皮の厚み）／１００
によって決定した（Ｋｉｍら，２０１４）。全ての画像をＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ２．０－ＨＴ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）によって撮像した。ネズミ疾患および行動的評価データ（後述）を２～３回の独立した実験から得た。
【0274】
行動評価
行動評価では、試験する前にマウスを最初に記録室および行動チャンバーに少なくとも１日順応させた。試験する日に、マウスを記録室および行動チャンバーに再度順応させて動画に記録した。そして動画記録を３０分のブロックごとに引っ掻き動作の回数についてマニュアルでスコア化した。１回の引っ掻き動作は、後足を床から持ち上げて、引っ掻き、足を床に戻す、または足を自分の口に位置する１つの過程として定めた。全ての行動試験を、性別および齢の一致した成体マウス（８～１２週齢）で実施した。
行動評価では、試験する前にマウスを最初に記録室および行動チャンバーに少なくとも１日順応させた。試験する日に、マウスを記録室および行動チャンバーに再度順応させて動画に記録した。そして動画記録を３０分のブロックごとに引っ掻き動作の回数についてマニュアルでスコア化した。１回の引っ掻き動作は、後足を床から持ち上げて、引っ掻き、足を床に戻す、または足を自分の口に位置する１つの過程として定めた。全ての行動試験を、性別および齢の一致した成体マウス（８～１２週齢）で実施した。
【0275】
ネズミおよびヒト皮膚ＲＮＡ抽出
ネズミ皮膚のサンプルを得て、製造業者の取扱説明書に従って処理する前に、ＲＮＡｌａｔｅｒ（シグマ）中で－８０℃に保存した。ヒト皮膚組織を４ｍｍパンチバイオプシーとして得、処理する前にＲＮＡｌａｔｅｒ（シグマ）中で－８０℃に保存した。全組織ＲＮＡを抽出するため、サンプルをビーズホモジナイザーを用いてホモジナイズし、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙキットを製造業者の取扱説明書に従って用いて処理した。全ＲＮＡ抽出後、サンプルをＤＮアーゼ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ－Ｆｒｅｅ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって製造業者の取扱説明書に従って処理してからライブラリー調製物をシークエンシングした。ＲＮＡシークエンシング分析のためのすべてのヒト皮膚サンプルは、セントルイスＩＲＢにおけるワシントン大学によって承認されたプロトコル（プロトコルＮｏ．２０１４１００１４、Ｎｏ．２０１４１２１１７、およびＮｏ．２０１５０７０４２）で採取した。
ネズミ皮膚のサンプルを得て、製造業者の取扱説明書に従って処理する前に、ＲＮＡｌａｔｅｒ（シグマ）中で－８０℃に保存した。ヒト皮膚組織を４ｍｍパンチバイオプシーとして得、処理する前にＲＮＡｌａｔｅｒ（シグマ）中で－８０℃に保存した。全組織ＲＮＡを抽出するため、サンプルをビーズホモジナイザーを用いてホモジナイズし、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙキットを製造業者の取扱説明書に従って用いて処理した。全ＲＮＡ抽出後、サンプルをＤＮアーゼ（Ｔｕｒｂｏ ＤＮＡ－Ｆｒｅｅ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって製造業者の取扱説明書に従って処理してからライブラリー調製物をシークエンシングした。ＲＮＡシークエンシング分析のためのすべてのヒト皮膚サンプルは、セントルイスＩＲＢにおけるワシントン大学によって承認されたプロトコル（プロトコルＮｏ．２０１４１００１４、Ｎｏ．２０１４１２１１７、およびＮｏ．２０１５０７０４２）で採取した。
【0276】
ライブラリー調製物およびＲＮＡシークエンシング
ライブラリー調製物、シークエンスアラインメント、および転写量の測定はワシントン大学メディカルスクールのＧｅｎｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｃｃｅｓｓ Ｃｅｎｔｅｒ（ＧＴＡＣ）によって実施された。簡単に説明すると、ライブラリー調製を全ＲＮＡの１μｇで実施し、ＲＮＡ完全性をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを用いて測定した。リボソームＲＮＡをＲｉｂｏ－ＺＥＲＯキット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ－ＥｐｉＣｅｎｔｒｅ）を用いたハイブリダイゼーション法によって取り出した。そしてｍＲＮＡを４０ｍＭトリス酢酸（ｐＨ８，２）、１００ｍＭ酢酸カリウム、および３０ｍＭ酢酸マグネシウムを含む緩衝液中でフラグメント化し、９４℃で１５０秒間加熱した。ｍＲＮＡを逆転写してＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ ＲＴ酵素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、製造業者の取扱説明書に従う）を用いてｃＤＮＡおよびランダムヘキサマーを得た。第二鎖反応を実施してｄｓ－ｃＤＮＡを得た。ｃＤＮＡを平滑端化して、３’端にＡ塩基を加えてから、端にイルミナシークエンシングアダプターを連結させた。そして連結したフラグメントを独自のインデックスタグを組み込んだプライマーを用いて１２サイクルで増幅させた。フラグメントを単一読み取り伸長５０塩基を用いたイルミナＨｉＳｅｑ－３０００でシークエンシングした。
ライブラリー調製物、シークエンスアラインメント、および転写量の測定はワシントン大学メディカルスクールのＧｅｎｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｃｃｅｓｓ Ｃｅｎｔｅｒ（ＧＴＡＣ）によって実施された。簡単に説明すると、ライブラリー調製を全ＲＮＡの１μｇで実施し、ＲＮＡ完全性をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを用いて測定した。リボソームＲＮＡをＲｉｂｏ－ＺＥＲＯキット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ－ＥｐｉＣｅｎｔｒｅ）を用いたハイブリダイゼーション法によって取り出した。そしてｍＲＮＡを４０ｍＭトリス酢酸（ｐＨ８，２）、１００ｍＭ酢酸カリウム、および３０ｍＭ酢酸マグネシウムを含む緩衝液中でフラグメント化し、９４℃で１５０秒間加熱した。ｍＲＮＡを逆転写してＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ ＲＴ酵素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、製造業者の取扱説明書に従う）を用いてｃＤＮＡおよびランダムヘキサマーを得た。第二鎖反応を実施してｄｓ－ｃＤＮＡを得た。ｃＤＮＡを平滑端化して、３’端にＡ塩基を加えてから、端にイルミナシークエンシングアダプターを連結させた。そして連結したフラグメントを独自のインデックスタグを組み込んだプライマーを用いて１２サイクルで増幅させた。フラグメントを単一読み取り伸長５０塩基を用いたイルミナＨｉＳｅｑ－３０００でシークエンシングした。
【0277】
ＲＮＡシークエンシング読み取りは、ＳＴＡＲバージョン２．０．４ｂを用いたＥｎｓｅｍｂｌリリース７６アセンブリーに配列させた。遺伝子数は、Ｓｕｂｒｅａｄ：ｆｅａｔｕｒｅＣｏｕｎｔバージョン１．４．５によって独自に配列した明確な読み取りによって引き出された。転写数はＳａｉｌｆｉｓｈバージョン０．６．３によって得られた。シークエンス性能は、配列した読み取りの全数、独自配列した読み取りの全数、検出された遺伝子および転写、リボソーム分画、既知の結合飽和、およびＲＳｅＱＣバージョン２．３による既知遺伝子モデルにおける分布読み取りについて評価した。
【0278】
差次的遺伝子発現および遺伝子セットエンリッチメント分析
ＲＮＡシークエンスデータからの差次的遺伝子発現分析およびサンプルクラスタリングをデフォルト構成で用いたＲが利用可能なＤＥＳｅｑ２パッケージによって実施した。２倍以上大きい変化および補正ｐ値＜０．１を有する遺伝子が有意と考えられた。ヒートマップにおけるデンドログラムをサンプル間のユークリッド距離での階層クラスタリングによって実施した。遺伝子セットエンリッチメント分析（ＧＳＥＡ）を、オンラインで利用可能なｊａｖａＧＳＥＡアプリケーションで利用できるプレランク化遺伝子リスト特性を用いて実施した（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ．ｊｓｐ）。遺伝子を倍数変化の生成およびＤＥＳｅｑ２によって測定される差次的発現の補正ｐ値の逆数によってプレランク化した。遺伝子セットは生物学的プロセス概念体系（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ）から引き出した。
ＲＮＡシークエンスデータからの差次的遺伝子発現分析およびサンプルクラスタリングをデフォルト構成で用いたＲが利用可能なＤＥＳｅｑ２パッケージによって実施した。２倍以上大きい変化および補正ｐ値＜０．１を有する遺伝子が有意と考えられた。ヒートマップにおけるデンドログラムをサンプル間のユークリッド距離での階層クラスタリングによって実施した。遺伝子セットエンリッチメント分析（ＧＳＥＡ）を、オンラインで利用可能なｊａｖａＧＳＥＡアプリケーションで利用できるプレランク化遺伝子リスト特性を用いて実施した（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ．ｊｓｐ）。遺伝子を倍数変化の生成およびＤＥＳｅｑ２によって測定される差次的発現の補正ｐ値の逆数によってプレランク化した。遺伝子セットは生物学的プロセス概念体系（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ）から引き出した。
【0279】
生体内二光子イメージング
低速度イメージングを、前述のように、１．０ＮＡ ２０×水浸対物レンズ（オリンパス）を備えた特注二光子顕微鏡を用いて、ＩｍａｇｅＷａｒｐ取得ソフトウェア（Ａ＆Ｂソフトウェア）を作動させて実施した（Ｚｉｎｓｅｌｍｅｙｅｒら，２００９）。簡単に説明すると、マウスに麻酔をかけて、ＶｅｔＢｏｎｄ（３Ｍ）を用いて、加熱した支持体に固定されたプラスチック製カバーガラスに耳を接着させた。マウスを加温パッドの上に置き、９０分を超えて継続するイメージング実験のため、水分補給用に所定の腹腔内（ｉ．ｐ．）生理食塩水を与えた。水滴を皮膚に置き、耳を水浸対物レンズによって直接画像化した。ビデオレートイメージングを使用して、ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋神経線維を有する部位を特定した。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞移動動態について３Ｄ低速イメージングを用いて、各時点について３時間まで分析した。組織を９１５ｎｍに設定したＣｈａｍｅｌｅｏｎ Ｖｉｓｉｏｎ ＩＩ Ｔｉ：Ｓａｐｐｈｉｒｅレーザー（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ）によって画像化し、蛍光放出を４９５ｎｍおよび５６０ｎｍの二色性フィルターを用いてＰＭＴによって同時に、青色（＜４９５ｎｍ、ＳＨＧコラーゲン）、緑色（４９５～５６０ｎｍ、ｅＧＦＰ）、および赤色（＞５６０ｎｍ、ｔｄＴｏｍａｔｏ）を検出した。表皮の自己蛍光は色の混合（４９５～６００ｎｍ）として現れ、そのため、ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞と区別することができる。低速イメージングでは、約４２秒の時間分解能を用いて３１コマの連続した２．５μｍのｚステップとして２２０×２４０×７５μｍ容積を取得した。Ｘ、Ｙは分解能０．７５μｍ／ピクセルであり、個別のＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞および神経線維を分析するに十分だった。多次元データセットはＩｍａｒｉｓ（Ｂｉｔｐｌａｎｅ）を用いて３Ｄで得た。細胞追跡およびデータ分析は、ＩｍａｒｉｓおよびＭｏｔｉｌｉｔｙ Ｌａｂ（２ｐｔｒａｃｋ．ｎｅｔ）を用いて実施した。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞は、これらが知覚線維と重なり、ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞とＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋神経線維の間の接触が３Ｄ画像で相互にマニュアルで確証された場合、知覚線維関連として定めた。
低速度イメージングを、前述のように、１．０ＮＡ ２０×水浸対物レンズ（オリンパス）を備えた特注二光子顕微鏡を用いて、ＩｍａｇｅＷａｒｐ取得ソフトウェア（Ａ＆Ｂソフトウェア）を作動させて実施した（Ｚｉｎｓｅｌｍｅｙｅｒら，２００９）。簡単に説明すると、マウスに麻酔をかけて、ＶｅｔＢｏｎｄ（３Ｍ）を用いて、加熱した支持体に固定されたプラスチック製カバーガラスに耳を接着させた。マウスを加温パッドの上に置き、９０分を超えて継続するイメージング実験のため、水分補給用に所定の腹腔内（ｉ．ｐ．）生理食塩水を与えた。水滴を皮膚に置き、耳を水浸対物レンズによって直接画像化した。ビデオレートイメージングを使用して、ＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋神経線維を有する部位を特定した。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞移動動態について３Ｄ低速イメージングを用いて、各時点について３時間まで分析した。組織を９１５ｎｍに設定したＣｈａｍｅｌｅｏｎ Ｖｉｓｉｏｎ ＩＩ Ｔｉ：Ｓａｐｐｈｉｒｅレーザー（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ）によって画像化し、蛍光放出を４９５ｎｍおよび５６０ｎｍの二色性フィルターを用いてＰＭＴによって同時に、青色（＜４９５ｎｍ、ＳＨＧコラーゲン）、緑色（４９５～５６０ｎｍ、ｅＧＦＰ）、および赤色（＞５６０ｎｍ、ｔｄＴｏｍａｔｏ）を検出した。表皮の自己蛍光は色の混合（４９５～６００ｎｍ）として現れ、そのため、ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞と区別することができる。低速イメージングでは、約４２秒の時間分解能を用いて３１コマの連続した２．５μｍのｚステップとして２２０×２４０×７５μｍ容積を取得した。Ｘ、Ｙは分解能０．７５μｍ／ピクセルであり、個別のＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞および神経線維を分析するに十分だった。多次元データセットはＩｍａｒｉｓ（Ｂｉｔｐｌａｎｅ）を用いて３Ｄで得た。細胞追跡およびデータ分析は、ＩｍａｒｉｓおよびＭｏｔｉｌｉｔｙ Ｌａｂ（２ｐｔｒａｃｋ．ｎｅｔ）を用いて実施した。ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞は、これらが知覚線維と重なり、ＩＬ－４－ｅＧＦＰ＋細胞とＮａＶ１．８－ｔｄＴｏｍａｔｏ＋神経線維の間の接触が３Ｄ画像で相互にマニュアルで確証された場合、知覚線維関連として定めた。
【0280】
薬理学的ＪＡＫ阻害
ストックルキソリチニブ（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）溶液を製造業者の取扱説明書に従ってＤＭＳＯ（シグマ）で調製した。全身処置では、マウスは１００μＬのＰＢＳで希釈された１００μｇのルキソリチニブを用いて、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって毎日２回処置した。髄腔内（ｉ．ｔ．）ルキソリチニブの処置では、マウスは行動測定の２４時間前に、１０μＬのＰＢＳで希釈された１０μｇのルキソリチニブを用いて注射した。コントロールマウスは、等容量の適切な賦形剤コントロール（ＰＢＳ中のＤＭＳＯ）によって注射した。
ストックルキソリチニブ（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）溶液を製造業者の取扱説明書に従ってＤＭＳＯ（シグマ）で調製した。全身処置では、マウスは１００μＬのＰＢＳで希釈された１００μｇのルキソリチニブを用いて、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって毎日２回処置した。髄腔内（ｉ．ｔ．）ルキソリチニブの処置では、マウスは行動測定の２４時間前に、１０μＬのＰＢＳで希釈された１０μｇのルキソリチニブを用いて注射した。コントロールマウスは、等容量の適切な賦形剤コントロール（ＰＢＳ中のＤＭＳＯ）によって注射した。
【0281】
ヒト組織病理学
ヒト皮膚組織を４ｍｍパンチバイオプシー標本として得、ついで１０％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定して、パラフィンで包理した。切片をＨ＆Ｅによって染色した。患者バイオプシーの臨床分析を、ワシントン大学皮膚病理学センターで実施した。すべてのサンプルは完全に同意された個人から収集され、ヒト試験はＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ ＩＲＢによって承認された（プロトコルＮｏ．２０１４１００１４およびＮｏ．２０１４１２１１７）。組織学的スコアを既に報告されているＩｍａｇｅＪ分析ソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて、式として
（高倍率視野当たりの全リンパ球数（ＨＰＦ）＋角質層の基層から最上部までのミクロンで測定した表皮の厚み）／１００
によって決定した（Ｋｉｍら，２０１４）。
ヒト皮膚組織を４ｍｍパンチバイオプシー標本として得、ついで１０％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定して、パラフィンで包理した。切片をＨ＆Ｅによって染色した。患者バイオプシーの臨床分析を、ワシントン大学皮膚病理学センターで実施した。すべてのサンプルは完全に同意された個人から収集され、ヒト試験はＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ ＩＲＢによって承認された（プロトコルＮｏ．２０１４１００１４およびＮｏ．２０１４１２１１７）。組織学的スコアを既に報告されているＩｍａｇｅＪ分析ソフトウェア（ＮＩＨ）を用いて、式として
（高倍率視野当たりの全リンパ球数（ＨＰＦ）＋角質層の基層から最上部までのミクロンで測定した表皮の厚み）／１００
によって決定した（Ｋｉｍら，２０１４）。
【0282】
数値評価スケール（ＮＲＳ）痒みスコア化
ワシントン大学メディカルスクール、先進医療センター（ＣＡＭ）の痒み専門外来の患者は、各自のＮＲＳ痒みスコアについて日常的にあらかじめ評価されている。簡単に説明すると、患者は自分の痒み強度を過去２４時間にわたって０から１０まで等級付けし、ここで０は「痒みがない」を表し、１０は「考えられ最悪の痒み」を表す。ＡＤおよびＣＩＰ患者比較では、ＮＲＳ痒みスコアは２０１４年８月と２０１６年２月の間で認められた患者から得たチャートの後向き分析によって得た。経口によるトファシチニブ５ｍｇ治療を毎日２回受けた患者では、ＮＲＳ痒みスコアは治療の最初から前向きで得られた。患者２名の毎日のＮＲＳ痒みスコアの記録が、トファシチニブ治療の際に図７Ｂに示すように報告されている。これらの分析は、セントルイスＩＲＢ（プロトコルＮｏ．２０１６０５１４４）におけるワシントン大学によって承認された。
ワシントン大学メディカルスクール、先進医療センター（ＣＡＭ）の痒み専門外来の患者は、各自のＮＲＳ痒みスコアについて日常的にあらかじめ評価されている。簡単に説明すると、患者は自分の痒み強度を過去２４時間にわたって０から１０まで等級付けし、ここで０は「痒みがない」を表し、１０は「考えられ最悪の痒み」を表す。ＡＤおよびＣＩＰ患者比較では、ＮＲＳ痒みスコアは２０１４年８月と２０１６年２月の間で認められた患者から得たチャートの後向き分析によって得た。経口によるトファシチニブ５ｍｇ治療を毎日２回受けた患者では、ＮＲＳ痒みスコアは治療の最初から前向きで得られた。患者２名の毎日のＮＲＳ痒みスコアの記録が、トファシチニブ治療の際に図７Ｂに示すように報告されている。これらの分析は、セントルイスＩＲＢ（プロトコルＮｏ．２０１６０５１４４）におけるワシントン大学によって承認された。
【0283】
統計的分析
データは他に指示がない限り、平均±ＳＥＭとして示される。統計的有意は、他に注釈がない限り、ウェルチの補正によるアンペアードスチューデントのｔ検定によって判断された。統計的分析はＰｒｉｓｍ ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアｖ７．０を用いて実施された。有意は、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、Ｎ．Ｓ．：有意でない、として表示される。
データは他に指示がない限り、平均±ＳＥＭとして示される。統計的有意は、他に注釈がない限り、ウェルチの補正によるアンペアードスチューデントのｔ検定によって判断された。統計的分析はＰｒｉｓｍ ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアｖ７．０を用いて実施された。有意は、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、Ｎ．Ｓ．：有意でない、として表示される。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A-5I】
【図6A-6F】
【図6G】
【図7A-7C】
【図7D-7E】
【図8A-8F】
【図9A-9O】
【図10A-10F】
【図10G-10H】
【図11A-11B】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【配列表】