特許 7096933 尿酸値低下効果を有するラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株及びそのラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-06-28

(45)【発行日】2022-07-06

(54)【発明の名称】尿酸値低下効果を有するラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株及びそのラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20220629BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20220629BHJP

   A61P 19/06 20060101ALI20220629BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 E

A61K35/747 ZNA

A61P19/06

【請求項の数】 5

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2021097224

(22)【出願日】2021-06-10

【審査請求日】2021-06-11

【微生物の受託番号】NPMD  NITE BP-03110

(73)【特許権者】

【識別番号】520207734

【氏名又は名称】康品科技有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000176

【氏名又は名称】一色国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】陳 福安

【審査官】池上 京子

(56)【参考文献】

【文献】特開２０２１－６５２２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１７－３１１０２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－７／０８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示す１６ＳｒＤＮＡ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すｃｌｐＰ配列を有し、且つ前記ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は日本独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、寄託番号はＮＩＴＥ
ＢＰ－０３１１０であることを特徴とする尿酸値低下効果を有する、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株。

【請求項2】

尿酸値低下剤を製造するのに用いられることを特徴とする請求項１のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用。

【請求項3】

前記ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は高尿酸個体の血液中の尿酸含有量を低減するように、前記高尿酸個体に投与することを特徴とする請求項２に記載のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用。

【請求項4】

前記ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は経口投与により高尿酸個体に投与することを特徴とする請求項３に記載のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用。

【請求項5】

ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を１日当たり1.25×10⁵～2.5×10⁵Ｃ
ＦＵ／ｋｇ体重の投与量で、７～３０日に連続的に高尿酸個体に投与することを特徴とする請求項３に記載のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ラクトバチルスプランタルムに関するもので、特に、尿酸値低下効果を有するラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株、及びそのラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用に関するものである。

【背景技術】

【0002】

尿酸は炭素、窒素、酸素と水素を含有する複素環式化合物（heterocyclic compound）
で、プリンヌクレオチド（purine nucleotide）の代謝産物であり、尿の排泄により体か
ら排出される。また、尿酸を排出することができない場合、血液によって結合組織に流れ、針状結晶（needle-like crystal）の形で関節、微血管、皮膚などの組織に蓄積する。
その場合、白血球が針状結晶を外来物と認定し、捕食を行うので炎症が発生し、即ち痛風（gout）と言う。一般的には血液中の尿酸の高濃度〔即ち、高尿酸血症（hyperuricemia
）〕が痛風発生の主の原因であり、さらに、尿酸の高濃度により糖尿病（diabetes）、腎疾患（kidney disease）、動脈硬化症（arteriosclerosis）と心血管系疾患（cardiovascular disease）などの併発症を引き起こす可能性がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【文献】中華民国公告第Ｉ６３４２０７号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

臨床上、従来の尿酸排泄薬（uricosuric agent）、又はキサンチン酸化酵素阻害薬（xanthine oxidase inhibitor）により、血液中の尿酸の濃度を控えることができる。尿酸排泄薬〔例えば、アロプリノール（allopurinol）〕は近位尿細管（proximal tubule）の尿酸に対する再吸収（reabsorption）を抑制することで、尿酸の排泄を促進するものである。キサンチン酸化酵素阻害薬〔例えば、プロベネシド（probenecid）〕はキサンチン（xanthine）を尿酸に代謝する主な酵素であるキサンチン酸化酵素（xanthine oxidase）を抑制することで、尿酸を形成させないものである。ただし、アロプリノールの副作用の発生率が低いが、一部の患者に対して、致命的な薬害を生じる。また、患者のクレアチニンクリアランス率が低すぎる場合、プロベネシドの効果が失われ、且つ尿路結石及び尿酸腎症の危険性がある。

【0005】

故、尿酸値を低下させる効果を有する活性成分を発見し、尿酸値を低下させる薬物の開発に用いることができれば、人の健康問題を効果的に改善することがてきる。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、上記の課題を解決するために、優れる尿酸値低下効果を有する、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を提供する。

【0007】

本発明は、さらに、尿酸値低下剤を製造するのに用いられる、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用を提供する。

【0008】

本発明の尿酸値低下効果を有する、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示す１６ＳｒＤＮＡ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すｃｌｐＰ配列を有し、且つ前記ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は日本独立行
政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、寄託番号はＮＩＴＥ
ＢＰ－０３１１０である。

【0009】

よって、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株はキサンチンを分解することができるだけではなく、キサンチン酸化酵素の活性を抑制することができるため、尿酸値を低下させる効果を有する活性成分として、尿酸値低下剤を製造するのに用いられることができる。本発明は、従来の尿酸排泄薬、又は従来のキサンチン酸化酵素阻害薬の投与により副作用を引き起こす患者に対して、尿酸値低下剤の選択として提供することができる効果を有する。

【0010】

同じ技術概念に基づいて、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用は尿酸値低下剤を製造するのに用いられ、また、前記ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は日本独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、寄託番号はＮＩＴＥ ＢＰ－０３１１０である。

【0011】

よって、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は尿酸値低下剤を製造するのに用いられることができるため、高尿酸個体に投与することができ、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が高尿酸個体の体内に作用することにより、高尿酸個体の血液中の尿酸含有量を低減し、ひいては高尿酸血症による痛風、糖尿病、腎疾患、動脈硬化症と心血管系疾患などの併発症を引き起こすことを防止する効果を有する。

【0012】

また、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用は、高尿酸個体の血液中の尿酸含有量を低減するように、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を高尿酸個体に投与する。

【0013】

また、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用は、経口投与により高尿酸個体に投与する。よって、使用者が便利な形式でラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を摂取し、ひいてはラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が高尿酸個体の体内に作用する効果を有する。

【0014】

また、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の使用は、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を１日当たり1.25×10⁵～2.5×10⁵ＣＦＵ／ｋｇ体
重の投与量で、７～３０日に連続的に高尿酸個体に投与する。よって、投与量の調整により、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の生物活性を効果的に活かせることができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1a】本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株と、他のラクトバチルスプランタルム菌株の１６ｓ ｒＤＮＡ遺伝子の系統樹。

【図1b】本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株と、他のラクトバチルスプランタルム菌株のｃｌｐＰ遺伝子の系統樹。

【図2】試験（Ａ）において異なる環境によりラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の生存率変化柱状グラフ。

【図3】試験（Ｂ）において各組のラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン分解率変化柱状グラフ。

【図4】試験（Ｃ）において各組のラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン酸化酵素抑制率変化柱状グラフ。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本発明の実施の一形態について、以下、図面を参照して説明する。

【0017】

本発明のラクトバチルスプランタルム（Lactobacillus plantarum）ＢＦＡ－ＬＡ４菌
株はキサンチンを分解し、キサンチン酸化酵素の活性を抑制することができ、ひいては尿酸の生成を抑制することができるため、尿酸値低下剤とすることができる。

【0018】

ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株はマクワウリの実からクローニングし獲得するものであり、詳しく言うと、マクワウリの実の汁を搾り出し、そのマクワウリの実の搾汁を炭酸カルシウムを含有するＭＲＳ固形培養基（成分は表１に示す）に塗布し、単一のコロニーを選択し、さらに選択するコロニーの中から、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を選別する。ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は２０２０年１月２０日に日本独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（NITE Patent Microorganisms Depositary，NPMD）に寄託され、寄託番号はＮＩＴＥ ＢＰ－０３１１０である。

【0019】

【表1】

【0020】

また、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株に対して１６ｓ ｒＤＮＡ及び
ｃｌｐＰ遺伝子の分子同定を行い、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示す１６ＳｒＤＮＡ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すｃｌｐＰ配列を有する。その１６ＳｒＤＮＡ配列と、ｃｌｐＰ配列をアメリカ国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology；略称NCBI）の配列比較データベース（BLAST）により配列比較を行い、その結果は表２、３に示す。

【0021】

【表2】

【0022】

【表3】

【0023】

また、前記の１６ＳｒＤＮＡ配列と、前記のｃｌｐＰ配列により、それぞれ図１ａ、１ｂに示すような系統樹を描き出すことができ、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株はラクトバチルスプランタルムを属する新たな菌株であることを示した。

【0024】

ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を、医薬的に許容可能なキャリア或いは賦形剤と組み合わせ、医薬組成物或いは食品組成物として形成することができる。その医薬組成物或いは食品組成物は、尿酸を代謝するのに役に立つ活性成分（例えば、緑茶ポリフェノール、山査子など）、及び／或いは、キサンチン酸化酵素を抑制するのに役に立つ活性成分（例えば、アントシアニジン、クルクミンなど）をさらに添加することができ、また、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は、例えば錠剤、カプセル剤、粉薬、粒剤または液剤など、いかなる食用に便利な形式として製造することができ、食用に適した態様として経口投与するように生物体に提供することができる。

【0025】

また、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株における活性成分を高尿酸個体の体内に作用させるように、例えば１日当たり1.25×10⁵～2.5×10⁵ＣＦＵ／ｋｇ体重の
投与量で、７～３０日に連続的に高尿酸個体に投与することができる。

【0026】

ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は確実にキサンチンを分解し、キサンチン酸化酵素の活性を抑制することができることを証明するため、以下に示す試験を行った。

【0027】

（Ａ）ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株の耐酸性及び耐胆汁酸塩試験

【0028】

ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は強酸の環境に生存することができることを証明するため、本試験では定常期（stationary phase）まで培養したラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株をｐＨ６．５とｐＨ３．０それぞれのＭＲＳ固形培養基に３時間に静置培養をし、続いて連続希釈法により適当な倍数に希釈した後、ＭＲＳ固形培養基に塗布し、３７℃で２４時間培養してから菌数を計算した。

【0029】

図２に示すように、ｐＨ３．０の環境に、３時間を経ても、約10⁵ＣＦＵ／ｍｌのラク
トバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が生存し、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が強酸の環境に生存することができ、胃液を通過して腸内に作用することができることを示した。

【0030】

そして、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は胆汁酸塩の環境に生存することができることを証明するため、本試験では定常期まで培養したラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株を、０．２％、０．３％と０．４％の胆汁酸塩を含有するＭＲＳ固形培養基にそれぞれに３時間に静置培養をし、続いて連続希釈法により適当な倍数に希釈した後、ＭＲＳ固形培養基に塗布し、３７℃で２４時間培養してから菌数を計算した。

【0031】

図２に示すように、０．２％、０．３％と０．４％の胆汁酸塩を含有する環境に、３時間を経ても、生存する菌数は10⁵ＣＦＵ／ｍｌ以上を達することができ、ラクトバチルス
プランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が胆汁酸塩を含有する環境に生存することができ、腸内に長時間で生存して作用することができることを示した。

【0032】

（Ｂ）ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株のキサンチン分解能力

【0033】

本試験では、マクワウリの実からクローニングした新たなラクトバチルスプランタルム菌株（即ち、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株）と他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株とのキサンチン分解能力を比較した。詳しく言うと、前記他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株とは、台湾食品工業発展研究所生物資源保存及び研究センターから購入したラクトバチルスプランタルム菌株を含み、その番号はＢＣＲＣ１００６９とＢＣＲＣ９１０７８７である。

【0034】

本試験では、前記ラクトバチルスプランタルム菌株を定常期まで培養した後、菌を１０倍に希釈したＭＲＳ液体培養基に加え、そしてキサンチンとぶどう糖を添加し、それぞれ２と４時間培養した後、上澄み液を獲得し、続いてＨＰＬＣでその上澄み液のキサンチン含有量を分析して各ラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン分解率を換算した。

【0035】

図３に示すように、２時間培養した後、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株のキサンチン分解率は、既に他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン分解率より高かった（ＢＣＲＣ９１０７８７、ＢＣＲＣ１００６９、Ｐ＜０．０５）、そして、４時間培養した後、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株のキサンチン分解率は、既に他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン分解率より高かった（ＢＣＲＣ９１０７８７、ＢＣＲＣ１００６９、Ｐ＜０．０２）。ラクトバ
チルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株より確実に優れるキサンチン分解能力を有することを示した。

【0036】

（Ｃ）ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株のキサンチン酸化酵素抑制能力

【0037】

本試験では同様に前記ラクトバチルスプランタルム菌株を定常期まで培養した後、新しいＭＲＳ液体培養基を加え、それぞれに２、４、６時間培養した後、上澄み液を獲得し、続いてキサンチン酸化酵素をその上澄み液に加え、３７℃で１０分反応させて、キサンチンを加えてから３７℃で１０分反応させ、最終的に塩酸で反応を中止させ、そしてＨＰＬＣで尿酸の含有量を分析し、さらに各ラクトバチルスプランタルム菌株のキサンチン酸化酵素抑制率を換算した。

【0038】

図４に示すように、２、４、６時間のいずれで培養したものでも、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株のキサンチン酸化酵素抑制率は明らかに他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株より高かった（ＢＣＲＣ９１０７８７、ＢＣＲＣ１００６９、Ｐ≦０．００１）。ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は他の同属同種のラクトバチルスプランタルム菌株より確実に優れるキサンチン酸化酵素抑制能力を有することを示した。

【0039】

綜合すると、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株はキサンチンを分解することができるだけではなく、キサンチン酸化酵素の活性を抑制することができるため、尿酸値を低下させる効果を有する活性成分として、尿酸値低下剤を製造するのに用いられることができる。本発明は、従来の尿酸排泄薬、又は従来のキサンチン酸化酵素阻害薬の投与により副作用を引き起こす患者に対して、尿酸値低下剤の選択として提供することができる効果を有する。

【0040】

また、本発明のラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株は尿酸値低下剤を製造するのに用いられることができるため、高尿酸個体に投与することができ、ラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株が高尿酸個体の体内に作用することにより、高尿酸個体の血液中の尿酸の含有量を低減し、ひいては高尿酸血症による痛風、糖尿病、腎疾患、動脈硬化症と心血管系疾患などの併発症を引き起こすことを防止する効果を有する。

【0041】

本発明は、その精神と必須の特徴事項から逸脱することなく他のやり方で実施することができる。従って、本明細書に記載した好ましい実施形態は例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

【要約】      （修正有）

【課題】優れた尿酸値低下効果を有する薬物を提供する。
【解決手段】特定の配列からなる１６ＳｒＤＮＡ配列と、特定の塩基配列からなるｃｌｐＰ配列を有し、且つ日本独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、寄託番号はＮＩＴＥ ＢＰ－０３１１０であるラクトバチルスプランタルムＢＦＡ－ＬＡ４菌株、およびその使用を提供する。
【選択図】図１ａ

【図1a】

【図1b】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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