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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-07-07
(45)【発行日】2022-07-15
(54)【発明の名称】除菌組成物及びそれを用いる細菌芽胞の除菌方法
(51)【国際特許分類】
A01N 63/20 20200101AFI20220708BHJP
A01N 37/06 20060101ALI20220708BHJP
A01N 37/02 20060101ALI20220708BHJP
A01N 63/50 20200101ALI20220708BHJP
A01P 3/00 20060101ALI20220708BHJP
【ＦＩ】
A01N63/20
A01N37/06
A01N37/02
A01N63/50
A01P3/00
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2021528335
(86)(22)【出願日】2020-10-12
(86)【国際出願番号】 JP2020038418
(87)【国際公開番号】W WO2021075391
(87)【国際公開日】2021-04-22
【審査請求日】2021-05-26
(31)【優先権主張番号】P 2019190206
(32)【優先日】2019-10-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】595137941
【氏名又は名称】タマ化学工業株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】304020292
【氏名又は名称】国立大学法人徳島大学
(74)【代理人】
【識別番号】100098707
【弁理士】
【氏名又は名称】近藤 利英子
(74)【代理人】
【識別番号】100135987
【弁理士】
【氏名又は名称】菅野 重慶
(74)【代理人】
【識別番号】100168033
【弁理士】
【氏名又は名称】竹山 圭太
(74)【代理人】
【識別番号】100161377
【弁理士】
【氏名又は名称】岡田 薫
(72)【発明者】
【氏名】延嶋 浩文
(72)【発明者】
【氏名】白井 昭博
【審査官】▲高▼岡 裕美
(56)【参考文献】
【文献】特開２００４－００２２２９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００３－５１９１８４（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許第０６６５６９１９（ＵＳ，Ｂ１）
【文献】特開２０１８－１９９６３２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５１９７２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０８－１７５９２１（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１５／１５７６１０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】有路 昌彦，特集 保存料・日持ち向上剤，食品工業 第５５巻第２号 ，p.55-63，鎌田 恒男 株式会社光琳
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ０１Ｎ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）の少なくともいずれかの芽胞形成菌の
細菌芽胞を除菌するために用いる除菌組成物であって、発芽促進成分、除菌成分、及び水を含む液媒体を含有する一剤型の液状組成物であり、
前記発芽促進成分が、アミノ酸、糖、及び無機塩を含み、
前記無機塩が、塩化アンモニウムであり、
前記除菌成分が、ε－ポリリジン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン、モノラウリン、及びナイシンからなる群より選択される少なくとも一種であり、
前記アミノ酸の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．００１～０．１質量％であり、
前記糖の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１質量％であり、
前記無機塩の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．０１～１質量％であ る除菌組成物。
【請求項2】
前記アミノ酸が、Ｌ－アラニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－チロシン、Ｌ－プロリン、Ｌ－バリン、Ｌ－セリン、及びカザミノ酸からなる群より選択される少なくとも一種である請求項１に記載の除菌組成物。
【請求項3】
前記糖が、Ｄ－グルコース、Ｄ－フルクトース、Ｄ－マンノース、Ｄ－ガラクトース、マルトース、ラクトース、スクロース、及びこれらのカラメル化反応物からなる群より選択される少なくとも一種である請求項１又は２に記載の除菌組成物。
【請求項4】
前記除菌成分の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１，０００ｍｇ／Ｌである請求項１～３のいずれか一項に記載の除菌組成物。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか一項に記載の除菌組成物を被処理物に接触させる工程を有する細菌芽胞の除菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細菌芽胞を除菌するために用いる除菌組成物、及びそれを用いる細菌芽胞の除菌方法に関する。
【背景技術】
【0002】
飲食店、介護施設、病院の厨房や食品工場等の食品を取り扱う施設において、食器、調理器具、及び各種の設備等を除菌又は殺菌するための組成物として、各種の除菌・殺菌成分を配合した除菌・殺菌剤が用いられている。このような除菌・殺菌剤としては、消毒用エタノール等のアルコール製剤；次亜塩素酸ナトリウム等の塩素系製剤；過酸化水素水等の過酸化物製剤；塩化ベンザルコニウム等の陽イオン界面活性剤；等が汎用されている。しかしながら、これまで汎用されてきた上記の除菌・殺菌剤は、一般的な細菌やカビ類に対して効果を示す一方で、バチルス属やクロストリジウム属等の細菌芽胞に対しては十分な効果が期待されるものではなかった。
【0003】
一方、細菌芽胞を有効に除菌又は殺菌しうる方法として、エチレンオキサイド等のガスを用いるガス滅菌方法、ガンマ線照射方法、及び高圧蒸気滅菌（オートクレーブ）方法等が知られている。また、所定の温度に加熱してから常温で一晩程度放置した後、再加熱する工程を繰り返す、いわゆる間欠滅菌方法が知られている。しかしながら、これらの方法は、操作が煩雑である、装置が大掛かりである、又は装置内に入る大きさのものしか処理できない等の課題があった。
【0004】
また、細菌芽胞を有効に除菌又は殺菌しうる方法としては、次亜塩素酸ナトリウムや加酢酸を作用させる方法、グルタルアルデヒドやフタラール等のアルデヒド類を作用させる方法等が知られている。しかしながら、これらの方法に用いる薬剤は毒性や、皮膚刺激性、又は強い臭気を有するため、保護具の着用が必要になる等の種々の課題があり、汎用性が高い方法であるとは言えなかった。
【0005】
関連する方法及びそれに用いる薬剤として、例えば、アミノ酸や糖等の発芽誘起物質で処理した後、殺菌剤で処理する細菌芽胞の殺菌方法、及びそれに用いる２剤型の殺菌剤が提案されている（特許文献１）。また、芽胞形成菌とジピコリン酸を接触させる工程、芽胞形成菌とカチオン界面活性剤を接触させる工程、及び芽胞形成菌を加熱する工程を有する殺芽方法、及びそれに用いる組成物が提案されている（特許文献２）。さらに、特定のポリアルキレンビグアナイド化合物及びアルカリ剤を含有する、そのｐＨが１２．５以上の細菌芽胞用の殺菌剤組成物が提案されている（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【文献】特開２００４－２２２９号公報
【文献】国際公開第２０１７／０１７８１０号
【文献】特許第６４０９２０１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
しかしながら、特許文献１及び２で提案された方法では、除菌・殺菌のための操作が多段階であることから、操作が煩雑であるとともに、除菌・殺菌するのに長時間を要するといった課題があった。また、特許文献３で提案された殺菌剤組成物は、特異な構造を有する化合物を用いる必要があるとともに、強アルカリ性の組成物であることから取り扱いが容易であるとは言えず、必ずしも汎用性の高い薬剤ではなかった。
【0008】
本発明は、このような従来技術の有する問題点に鑑みてなされたものであり、その課題とするところは、細菌芽胞を比較的短時間で有効かつ容易に除菌又は殺菌することが可能であるとともに、安全性及び汎用性に優れた一剤型の除菌組成物を提供することにある。また、本発明の課題とするところは、上記の除菌組成物を用いる細菌芽胞の除菌方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
すなわち、本発明によれば、以下に示す除菌組成物が提供される。
［１］バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）の少なくともいずれかの芽胞形成菌の細菌芽胞を除菌するために用いる除菌組成物であって、発芽促進成分、除菌成分、及び水を含む液媒体を含有する一剤型の液状組成物であり、前記発芽促進成分が、アミノ酸、糖、及び無機塩を含み、前記無機塩が、塩化アンモニウムであり、前記除菌成分が、ε－ポリリジン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン、モノラウリン、及びナイシンからなる群より選択される少なくとも一種であり、前記アミノ酸の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．００１～０．１質量％であり、前記糖の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１質量％であり、前記無機塩の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．０１～１質量％である除菌組成物。
［２］前記アミノ酸が、Ｌ－アラニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－チロシン、Ｌ－プロリン、Ｌ－バリン、Ｌ－セリン、及びカザミノ酸からなる群より選択される少なくとも一種である前記［１］に記載の除菌組成物。
［３］前記糖が、Ｄ－グルコース、Ｄ－フルクトース、Ｄ－マンノース、Ｄ－ガラクトース、マルトース、ラクトース、スクロース、及びこれらのカラメル化反応物からなる群より選択される少なくとも一種である前記［１］又は［２］に記載の除菌組成物。
［４］前記除菌成分の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１，０００ｍｇ／Ｌである前記［１］～［３］のいずれかに記載の除菌組成物。
［１］バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）の少なくともいずれかの芽胞形成菌の細菌芽胞を除菌するために用いる除菌組成物であって、発芽促進成分、除菌成分、及び水を含む液媒体を含有する一剤型の液状組成物であり、前記発芽促進成分が、アミノ酸、糖、及び無機塩を含み、前記無機塩が、塩化アンモニウムであり、前記除菌成分が、ε－ポリリジン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン、モノラウリン、及びナイシンからなる群より選択される少なくとも一種であり、前記アミノ酸の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．００１～０．１質量％であり、前記糖の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１質量％であり、前記無機塩の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．０１～１質量％である除菌組成物。
［２］前記アミノ酸が、Ｌ－アラニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－チロシン、Ｌ－プロリン、Ｌ－バリン、Ｌ－セリン、及びカザミノ酸からなる群より選択される少なくとも一種である前記［１］に記載の除菌組成物。
［３］前記糖が、Ｄ－グルコース、Ｄ－フルクトース、Ｄ－マンノース、Ｄ－ガラクトース、マルトース、ラクトース、スクロース、及びこれらのカラメル化反応物からなる群より選択される少なくとも一種である前記［１］又は［２］に記載の除菌組成物。
［４］前記除菌成分の含有量が、除菌組成物全体を基準として、０．１～１，０００ｍｇ／Ｌである前記［１］～［３］のいずれかに記載の除菌組成物。
【0010】
また、本発明によれば、以下に示す細菌芽胞の除菌方法が提供される。
［５］前記［１］～［４］のいずれかに記載の除菌組成物を被処理物に接触させる工程を有する細菌芽胞の除菌方法。
［５］前記［１］～［４］のいずれかに記載の除菌組成物を被処理物に接触させる工程を有する細菌芽胞の除菌方法。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、細菌芽胞を比較的短時間で有効かつ容易に除菌又は殺菌することが可能であるとともに、安全性及び汎用性に優れた一剤型の除菌組成物を提供することができる。また、本発明によれば、上記の除菌組成物を用いる細菌芽胞の除菌方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】実施例１及び２、比較例１の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図2】実施例１及び２、比較例１の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図3】実施例３及び４、比較例２の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図4】実施例３及び４、比較例２の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図5】実施例５及び６の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図6】実施例５及び６の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図7】実施例７及び８の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図8】実施例７及び８の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図9】実施例９、比較例３及び４の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図10】実施例９、比較例３及び４の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図11】実施例１０、比較例５及び６の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図12】実施例１０、比較例５及び６の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図13】実施例１１、比較例７の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図14】実施例１１、比較例７の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図15】実施例１２、比較例８の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図16】実施例１２、比較例８の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図17】実施例１３、比較例９の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図18】実施例１３、比較例９の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図19】実施例１４、比較例１０の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図20】実施例１４、比較例１０の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図21】実施例１５、比較例１１の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図22】実施例１６、比較例１２の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図23】実施例１７、比較例１３の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図24】実施例１８、比較例１４の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図25】実施例１９、比較例１５の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図26】実施例２０及び２１、比較例１６の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図27】実施例２０及び２１、比較例１６の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図28】実施例２２及び２３、比較例１７の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図29】実施例２２及び２３、比較例１７の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図30】実施例２４及び２５、比較例１８の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図31】実施例２４及び２５、比較例１８の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【図32】実施例２６、比較例１９の除菌効果確認試験（濁度減少）の結果を示すグラフである。
【図33】実施例２６、比較例１９の除菌効果確認試験（生菌数濃度減少）の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0013】
＜除菌組成物＞
以下、本発明の実施の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではない。本発明の一実施形態である除菌組成物は、細菌芽胞を除菌するために用いる、発芽促進成分及び除菌成分を含有する一剤型の組成物である。そして、発芽促進成分が、アミノ酸、糖、及び無機塩を含む。なお、本明細書における「除菌」とは、芽胞の状態の菌体（細菌芽胞）を含む細菌（芽胞形成菌）に作用し、全体の菌数を顕著に減少させること、又は実質的に殺菌する（死滅させる）ことを意味する。以下、本実施形態の除菌組成物の詳細について説明する。
以下、本発明の実施の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではない。本発明の一実施形態である除菌組成物は、細菌芽胞を除菌するために用いる、発芽促進成分及び除菌成分を含有する一剤型の組成物である。そして、発芽促進成分が、アミノ酸、糖、及び無機塩を含む。なお、本明細書における「除菌」とは、芽胞の状態の菌体（細菌芽胞）を含む細菌（芽胞形成菌）に作用し、全体の菌数を顕著に減少させること、又は実質的に殺菌する（死滅させる）ことを意味する。以下、本実施形態の除菌組成物の詳細について説明する。
【0014】
発芽促進成分は、芽胞の状態の菌体（細菌芽胞）に作用し、発芽を促進させて栄養型の菌体へと導く成分である。そして、除菌成分は、細菌芽胞、発芽途中の菌体、及び栄養型の菌体の少なくともいずれかに作用し、生菌数を顕著に減少させる、又は実質的に殺菌する成分である。本実施形態の除菌組成物は、一の製剤中に発芽促進成分及び除菌成分のいずれもが含まれる、いわゆる一剤型の組成物である。このため、細菌芽胞が存在する被処理物に、本実施形態の除菌組成物を噴霧、散布、又は塗布する等の接触させるための操作を一回実施することで、細菌芽胞の発芽と除菌を進行させ、比較的短時間で有効かつ容易に除菌することができる。さらに、本実施形態の除菌組成物は、食品添加物のみ又は食品添加物と医療用の除菌成分によって有効成分を実質的に構成することが可能であるため、皮膚に接触したり、口にしたりしてもほとんど問題を生ずることがなく、安全性に優れている。
【0015】
（細菌芽胞）
本実施形態の除菌組成物の除菌対象となる細菌芽胞は、熱や乾燥等の環境に対して一定の抵抗性を示す。このような細菌芽胞は、一般的に「芽胞形成菌」と呼ばれる、貧栄養下で細菌芽胞を形成する特定の細菌である。細菌芽胞は、発芽することで栄養型の菌体となる。細菌芽胞を形成しうる芽胞形成菌は、通常、飲食店の厨房や食品工場等の食品を取り扱う施設の他、医療施設等にも存在する。本実施形態の除菌組成物が除菌対象とする細菌芽胞を形成する芽胞形成菌としては、例えば、バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）等のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；クロストリジウム デフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）等のクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属の細菌；アンフィバチルス（Ａｍｐｈｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；スポロサルシナ（Ｓｐｏｒｏｓａｒｃｉｎａ）属の細菌；ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；エアリバチルス（Ａｅｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；アリサイクロバチルス（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；スポロラクトバチルス（Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；等を挙げることができる。
本実施形態の除菌組成物の除菌対象となる細菌芽胞は、熱や乾燥等の環境に対して一定の抵抗性を示す。このような細菌芽胞は、一般的に「芽胞形成菌」と呼ばれる、貧栄養下で細菌芽胞を形成する特定の細菌である。細菌芽胞は、発芽することで栄養型の菌体となる。細菌芽胞を形成しうる芽胞形成菌は、通常、飲食店の厨房や食品工場等の食品を取り扱う施設の他、医療施設等にも存在する。本実施形態の除菌組成物が除菌対象とする細菌芽胞を形成する芽胞形成菌としては、例えば、バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）等のバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；クロストリジウム デフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）等のクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属の細菌；アンフィバチルス（Ａｍｐｈｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；スポロサルシナ（Ｓｐｏｒｏｓａｒｃｉｎａ）属の細菌；ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；エアリバチルス（Ａｅｒｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；アリサイクロバチルス（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；スポロラクトバチルス（Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属の細菌；等を挙げることができる。
【0016】
（発芽促進成分）
発芽促進成分は、アミノ酸、糖、及び無機塩を含む。これらの成分を含む発芽促進成分を含有させることで、細菌芽胞を発芽させ、共存する除菌成分が有効に作用する状態とすることができると考えられる。なお、これらの三成分のうちのいずれかを含有しない場合には、発芽速度が低下するため除菌に時間がかかるか、又は発芽不良で細菌芽胞が残りやすくなり、除菌効果が低下する。
発芽促進成分は、アミノ酸、糖、及び無機塩を含む。これらの成分を含む発芽促進成分を含有させることで、細菌芽胞を発芽させ、共存する除菌成分が有効に作用する状態とすることができると考えられる。なお、これらの三成分のうちのいずれかを含有しない場合には、発芽速度が低下するため除菌に時間がかかるか、又は発芽不良で細菌芽胞が残りやすくなり、除菌効果が低下する。
【0017】
アミノ酸としては、タンパク質を構成する２０種類のＬ－アミノ酸を用いることができる。なかでも、Ｌ－アラニン（Ａｌａ）、Ｌ－アスパラギン（Ａｓｎ）、Ｌ－チロシン（Ｔｙｒ）、Ｌ－プロリン（Ｐｒｏ）、Ｌ－バリン（Ｖａｌ）、Ｌ－セリン（Ｓｅｒ）、及びカザミノ酸を用いることが好ましい。これらのアミノ酸は、一種単独で又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【0018】
糖としては、芽胞形成菌を培養するための合成培地に一般的に配合される糖類を用いることができる。なかでも、糖としては、Ｄ－グルコース（ブドウ糖）、Ｄ－フルクトース（果糖）、Ｄ－マンノース、Ｄ－ガラクトース、マルトース、ラクトース（乳糖）、スクロース（ショ糖）、及びこれらのカラメル化反応物等を用いることが好ましい。これらの糖は、一種単独で又は二種以上を組み合わせて用いることができる。
【0019】
無機塩としては、芽胞形成菌を培養するための合成培地に一般的に配合される無機塩を用いることができる。なかでも、無機塩としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硝酸カリウム、及び硝酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも一種を用いることが好ましい。
【0020】
（除菌成分）
除菌成分としては、通常の細菌に作用して除菌又は殺菌しうる一般的な除菌成分を用いることができる。なかでも、除菌成分としては、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム、ε－ポリリジン、１，４－ビス（３，３’－（１－デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン、モノラウリン、及びナイシンからなる群より選択される少なくとも一種を用いることが好ましい。さらに、人体への影響や安全性等を考慮すると、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム、ε－ポリリジン、ソルビン酸、及びソルビン酸カリウムがより好ましい。
除菌成分としては、通常の細菌に作用して除菌又は殺菌しうる一般的な除菌成分を用いることができる。なかでも、除菌成分としては、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム、ε－ポリリジン、１，４－ビス（３，３’－（１－デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロタミン、モノラウリン、及びナイシンからなる群より選択される少なくとも一種を用いることが好ましい。さらに、人体への影響や安全性等を考慮すると、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム、ε－ポリリジン、ソルビン酸、及びソルビン酸カリウムがより好ましい。
【0021】
（液媒体）
除菌組成物は、液状担体、ゲル状担体、エマルション、固体担体等を用いて、液状、ペースト状、ゲル状、乳状、固形状等の種々の形態で使用することができる。なかでも、本実施形態の除菌組成物は、液媒体をさらに含有する液状組成物であることが好ましい。液状組成物とすることで、短時間で広範囲の被処理物を除菌することができる。なお、本明細書における「液状」の概念には、「ペースト状、ゲル状、乳状」等の液状に準ずる性状が包含される。液状組成物は、例えば、計量キャップ付きボトル、トリガータイプのスプレー容器、スクイーズタイプのスプレー容器、ポンプスプレー容器、刷毛付き容器等に充填することで、容易に散布、噴霧又は塗布等して用いることができる。
除菌組成物は、液状担体、ゲル状担体、エマルション、固体担体等を用いて、液状、ペースト状、ゲル状、乳状、固形状等の種々の形態で使用することができる。なかでも、本実施形態の除菌組成物は、液媒体をさらに含有する液状組成物であることが好ましい。液状組成物とすることで、短時間で広範囲の被処理物を除菌することができる。なお、本明細書における「液状」の概念には、「ペースト状、ゲル状、乳状」等の液状に準ずる性状が包含される。液状組成物は、例えば、計量キャップ付きボトル、トリガータイプのスプレー容器、スクイーズタイプのスプレー容器、ポンプスプレー容器、刷毛付き容器等に充填することで、容易に散布、噴霧又は塗布等して用いることができる。
【0022】
液媒体としては、水、又は水と水溶性有機溶媒の混合溶媒を用いることが好ましい。水を含む液媒体を用いることで、取り扱い性を向上させることができるとともに、被処理物の腐食を抑制することができる。水溶性有機溶媒としては、例えば、エタノール、イソプロパノール、ブタノール等の低級アルコール；エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ブチレングリコール等の多価アルコール等を用いることができる。
【0023】
除菌組成物が液媒体を含有する液状組成物である場合に、除菌組成物中のアミノ酸の含有量は、除菌組成物全体を基準として、０．０００１～１質量％であることが好ましく、０．００１～０．１質量％であることがさらに好ましい。アミノ酸の含有量を上記の範囲内とすることで、細菌芽胞をより効率的に発芽させることができ、除菌効率をさらに高めることができる。
【0024】
除菌組成物が液媒体を含有する液状組成物である場合に、除菌組成物中の糖の含有量は、除菌組成物全体を基準として、０．００１～１０質量％であることが好ましく、０．１～１質量％であることがさらに好ましい。糖の含有量を上記の範囲内とすることで、細菌芽胞をより効率的に発芽させることができ、除菌効率をさらに高めることができる。
【0025】
除菌組成物が液媒体を含有する液状組成物である場合に、除菌組成物中の無機塩の含有量は、除菌組成物全体を基準として、０．００１～１０質量％であることが好ましく、０．０１～１質量％であることがさらに好ましい。無機塩の含有量を上記の範囲内とすることで、細菌芽胞をより効率的に発芽させることができ、除菌効率をさらに高めることができる。
【0026】
除菌組成物が液媒体を含有する液状組成物である場合に、除菌組成物中の除菌成分の含有量は、除菌組成物全体を基準として、０．１～１，０００ｍｇ／Ｌであることが好ましく、１～５００ｍｇ／Ｌであることがさらに好ましい。除菌成分の含有量を上記の範囲内とすることで、除菌効率をさらに高めることができる。除菌成分の含有量が少なすぎると、除菌効率がやや不十分になることがある。一方、除菌成分の含有量が多すぎると、除菌効率が頭打ちになる傾向にある。
【0027】
（その他の成分）
本実施形態の除菌組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて、上記各成分以外の成分（その他の成分）を含有させることができる。その他の成分としては、界面活性剤、ｐＨ調整剤、消泡剤、酸化防止剤、乳化剤等を挙げることができる。
本実施形態の除菌組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて、上記各成分以外の成分（その他の成分）を含有させることができる。その他の成分としては、界面活性剤、ｐＨ調整剤、消泡剤、酸化防止剤、乳化剤等を挙げることができる。
【0028】
ｐＨ調整剤としては、一般的な酸や塩基を用いることができる。酸としては、塩酸、硫酸等の無機酸；乳酸、クエン酸、これらの塩等の有機酸；等を挙げることができる。塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩基；モノエタノールアミン、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン等の有機塩基；等を挙げることができる。なかでも、ｐＨ調整剤としては、塩酸、硫酸等の無機酸；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩基；を用いることが好ましい。
【0029】
本実施形態の除菌組成物の２５℃におけるｐＨは特に限定されないが、除菌効果や取り扱い性等を考慮すると、通常、中性域であり、好ましくはｐＨ５～９の範囲である。
【0030】
＜除菌方法＞
次に、本発明の一実施形態である除菌方法について説明する。本実施形態の除菌方法は、前述の除菌組成物を被処理物に接触させる工程を有する。被処理物は、除菌組成物が除菌対象とする細菌芽胞がその表面に付着する等して存在する、又は存在する可能性のある物、設備、施設等である。前述の除菌組成物を被処理物に接触させることで、細菌芽胞を除菌し、全体の菌数を顕著に減少させる、又は実質的に殺菌する（死滅させる）ことができる。
次に、本発明の一実施形態である除菌方法について説明する。本実施形態の除菌方法は、前述の除菌組成物を被処理物に接触させる工程を有する。被処理物は、除菌組成物が除菌対象とする細菌芽胞がその表面に付着する等して存在する、又は存在する可能性のある物、設備、施設等である。前述の除菌組成物を被処理物に接触させることで、細菌芽胞を除菌し、全体の菌数を顕著に減少させる、又は実質的に殺菌する（死滅させる）ことができる。
【0031】
被処理物は、細菌芽胞が存在しうる物、設備、施設等であれば特に限定されない。具体的には、食器、調理器具等の物品；飲食店の厨房、食品工場、スーパーのバックヤード等の主として食品を取り扱う施設；食品加工工場内の各種設備；医療現場内の各種物品や設備等を挙げることができる。
【0032】
除菌組成物が液状である場合には、例えば、被処理物の表面が全体的に濡れる程度の量の除菌組成物を付与して接触させればよい。液状の除菌組成物を被処理物に接触させる方法としては、噴霧、散布、及び塗布等の任意の方法を選択すればよい。また、被処理物が設備の配管等であれば、配管等の内部（流路）に液状の除菌組成物を流通させてもよい。除菌組成物を被処理物に接触させる時間は、例えば、０．５～１０時間、好ましくは１～８時間、さらに好ましくは２～６時間である。除菌組成物を被処理物に上記の時間範囲内で接触させることで、十分な除菌効果を得ることができる。また、必要に応じて、除菌組成物を被処理物に接触させた状態で加温してもよい。適度に加温することで細菌芽胞の発芽が促進され、除菌効率をさらに高めることができる。除菌組成物を被処理物に接触させた状態で加温する場合の温度は、例えば、２０～４０℃であればよく、２５～３７℃とすることが好ましい。
【実施例】
【0033】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例、比較例中の「部」及び「％」は、特に断らない限り質量基準である。また、試験には滅菌済の試薬及び器具を使用した。
【0034】
＜芽胞懸濁液の調製＞
（芽胞懸濁液（１））
バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） ＡＴＣＣ６６３３株の芽胞を凍結乾燥した後、－８０℃で保存して、芽胞の粉末（芽胞粉末）を得た。芽胞粉末をイオン交換水１０ｍＬに添加して懸濁した後、７０℃で２０分間加熱処理した。７，０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して集菌した後、イオン交換水に再度懸濁してＯＤ６５０を３．００に調整し、芽胞懸濁液（１）を得た。
（芽胞懸濁液（１））
バチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） ＡＴＣＣ６６３３株の芽胞を凍結乾燥した後、－８０℃で保存して、芽胞の粉末（芽胞粉末）を得た。芽胞粉末をイオン交換水１０ｍＬに添加して懸濁した後、７０℃で２０分間加熱処理した。７，０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して集菌した後、イオン交換水に再度懸濁してＯＤ６５０を３．００に調整し、芽胞懸濁液（１）を得た。
【0035】
（芽胞懸濁液（１－１））
芽胞懸濁液（１）をイオン交換水で１，０００倍に希釈し、芽胞懸濁液（１－１）（約６．０×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）を得た。
芽胞懸濁液（１）をイオン交換水で１，０００倍に希釈し、芽胞懸濁液（１－１）（約６．０×１０４ＣＦＵ／ｍＬ）を得た。
【0036】
（芽胞懸濁液（２））
バチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ） ＮＢＲＣ１５３０５株の芽胞を凍結乾燥した後、－８０℃で保存して、芽胞の粉末（芽胞粉末）を得た。芽胞粉末をイオン交換水１０ｍＬに添加して懸濁した後、７０℃で２０分間加熱処理した。７，０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して集菌した後、イオン交換水に再度懸濁してＯＤ６５０を３．００に調整し、芽胞懸濁液（２）を得た。
バチルス セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ） ＮＢＲＣ１５３０５株の芽胞を凍結乾燥した後、－８０℃で保存して、芽胞の粉末（芽胞粉末）を得た。芽胞粉末をイオン交換水１０ｍＬに添加して懸濁した後、７０℃で２０分間加熱処理した。７，０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離して集菌した後、イオン交換水に再度懸濁してＯＤ６５０を３．００に調整し、芽胞懸濁液（２）を得た。
【0037】
＜発芽促進液の調製＞
（発芽促進液（１））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液、１０％Ｄ－グルコース水溶液、及び５．３５％塩化アンモニウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン、Ｄ－グルコース、及び塩化アンモニウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（１）を調製した。
（発芽促進液（１））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液、１０％Ｄ－グルコース水溶液、及び５．３５％塩化アンモニウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン、Ｄ－グルコース、及び塩化アンモニウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（１）を調製した。
【0038】
（発芽促進液（１－１））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液、１０％Ｄ－グルコース水溶液、５．３５％塩化アンモニウム水溶液、及び１ｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン、Ｄ－グルコース、塩化アンモニウム、及び塩化カリウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（１－１）を調製した。
０．５％Ｌ－アラニン水溶液、１０％Ｄ－グルコース水溶液、５．３５％塩化アンモニウム水溶液、及び１ｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン、Ｄ－グルコース、塩化アンモニウム、及び塩化カリウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（１－１）を調製した。
【0039】
（発芽促進液（２））
１０％Ｄ－グルコース水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｄ－グルコースを所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（２）を調製した。
１０％Ｄ－グルコース水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｄ－グルコースを所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（２）を調製した。
【0040】
（発芽促進液（３））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液及び１０％Ｄ－グルコース水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン及びＤ－グルコースをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（３）を調製した。
０．５％Ｌ－アラニン水溶液及び１０％Ｄ－グルコース水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン及びＤ－グルコースをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（３）を調製した。
【0041】
（発芽促進液（４））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニンを所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（４）を調製した。
０．５％Ｌ－アラニン水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニンを所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（４）を調製した。
【0042】
（発芽促進液（５））
０．５％Ｌ－アラニン水溶液及び５．３５％塩化アンモニウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン及び塩化アンモニウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（５）を調製した。
０．５％Ｌ－アラニン水溶液及び５．３５％塩化アンモニウム水溶液をイオン交換水に添加した後、ろ過滅菌して、Ｌ－アラニン及び塩化アンモニウムをそれぞれ所定の濃度で含有する、ｐＨ７．０の発芽促進液（５）を調製した。
【0043】
＜除菌成分液の調製＞
除菌成分として、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、及び塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、１，４－ビス（３，３’－（１－デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド（商品名「ハイジェニア（登録商標）」、タマ化学工業社製）、ε－ポリリジン、モノラウリン、及びナイシンを用意した。これらの除菌成分をイオン交換水にそれぞれ溶解させて、以下に示す種類の除菌成分液を調製した。
・５ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・５ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・５ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ モノラウリン水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ナイシン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ソルビン酸水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ プロタミン水溶液
除菌成分として、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、及び塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、１，４－ビス（３，３’－（１－デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド（商品名「ハイジェニア（登録商標）」、タマ化学工業社製）、ε－ポリリジン、モノラウリン、及びナイシンを用意した。これらの除菌成分をイオン交換水にそれぞれ溶解させて、以下に示す種類の除菌成分液を調製した。
・５ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液
・５ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ＢＡＣ水溶液
・５ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ハイジェニア水溶液
・１０ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ε－ポリリジン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ モノラウリン水溶液
・５０ｍｇ／ｍＬ ナイシン水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ ソルビン酸水溶液
・１００ｍｇ／ｍＬ プロタミン水溶液
【0044】
＜除菌効果確認試験＞
（実施例１及び２、比較例１）
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１及び２）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうし、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認した。測定結果を図１に示す。
（実施例１及び２、比較例１）
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１及び２）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうし、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認した。測定結果を図１に示す。
【0045】
また、経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１に示す。
【0046】
さらに、ＣＰＣ水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１）。結果を図１及び２に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１に示す。
【0047】
【0048】
図１に示すように、いずれの場合（実施例１及び２、比較例１）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図２及び表１に示すように、実施例１及び２では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0049】
（実施例３及び４、比較例２）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例３及び４）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例３及び４と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例２）。結果を図３及び４に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表２に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例３及び４）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例３及び４と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例２）。結果を図３及び４に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表２に示す。
【0050】
【0051】
図３に示すように、いずれの場合（実施例３及び４、比較例２）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図４及び表２に示すように、実施例３及び４では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0052】
（実施例５及び６）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例５及び６）。結果を図５及び６に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表３に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例５及び６）。結果を図５及び６に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表３に示す。
【0053】
【0054】
図５に示すように、いずれの場合（実施例５及び６）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図６及び表３に示すように、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0055】
（実施例７及び８）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例７及び８）。結果を図７及び８に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表４に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（１０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例７及び８）。結果を図７及び８に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表４に示す。
【0056】
【0057】
図７に示すように、いずれの場合（実施例７及び８）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図８及び表４に示すように、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0058】
（実施例９、比較例３及び４）
１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液を用いて、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例９）。また、発芽促進液（１）に代えて、発芽促進液（２）及び発芽促進液（３）をそれぞれ用いたこと以外は、前述の実施例９と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例３及び４）。結果を図９及び１０に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表５に示す。
１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液を用いて、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例９）。また、発芽促進液（１）に代えて、発芽促進液（２）及び発芽促進液（３）をそれぞれ用いたこと以外は、前述の実施例９と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例３及び４）。結果を図９及び１０に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表５に示す。
【0059】
【0060】
図９に示すように、いずれの場合（実施例９、比較例３及び４）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図１０及び表５に示すように、実施例９では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。これに対して、発芽促進成分のうちのいずれかを含有しない比較例３及び４では、発芽速度が遅く、有効に発芽しておらず、生菌数濃度はさほど低下しなかった。このことから、発芽促進成分が不十分であった（不足していた）ことがわかる。
【0061】
（実施例１０、比較例５及び６）
１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液を用いて、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１０）。また、発芽促進液（１）に代えて、発芽促進液（４）及び発芽促進液（５）をそれぞれ用いたこと以外は、前述の実施例１０と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例５及び６）。結果を図１１及び１２に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表６に示す。
１００ｍｇ／ｍＬ ＣＰＣ水溶液を用いて、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１０）。また、発芽促進液（１）に代えて、発芽促進液（４）及び発芽促進液（５）をそれぞれ用いたこと以外は、前述の実施例１０と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例５及び６）。結果を図１１及び１２に示す。また、初期及び振とう開始から６時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表６に示す。
【0062】
【0063】
図１１に示すように、いずれの場合（実施例１０、比較例５及び６）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図１２及び表６に示すように、実施例１０では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。これに対して、発芽促進成分のうちのいずれかを含有しない比較例５及び６では、発芽速度が遅く、有効に発芽しておらず、生菌数濃度はさほど低下しなかった。このことから、発芽促進成分が不十分であった（不足していた）ことがわかる。
【0064】
（実施例１１、比較例７）
ＣＰＣ水溶液に代えて、モノラウリン水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１１）。また、モノラウリン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例７）。結果を図１３及び１４に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表７に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、モノラウリン水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１１）。また、モノラウリン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例７）。結果を図１３及び１４に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表７に示す。
【0065】
【0066】
図１３に示すように、実施例１１では経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図１４及び表７に示すように、実施例１１では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0067】
（実施例１２、比較例８）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ナイシン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１２）。また、ナイシン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例８）。結果を図１５及び１６に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表８に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ナイシン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１２）。また、ナイシン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例８）。結果を図１５及び１６に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表８に示す。
【0068】
【0069】
図１５に示すように、実施例１２では経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図１６及び表８に示すように、実施例１２では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0070】
（実施例１３、比較例９）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ソルビン酸水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１３）。また、ソルビン酸水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１３と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例９）。結果を図１７及び１８に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表９に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ソルビン酸水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１３）。また、ソルビン酸水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１３と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例９）。結果を図１７及び１８に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表９に示す。
【0071】
【0072】
図１７に示すように、実施例１３では経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図１８及び表９に示すように、実施例１３では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0073】
（実施例１４、比較例１０）
ＣＰＣ水溶液に代えて、プロタミン水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１４）。また、プロタミン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１４と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１０）。結果を図１９及び２０に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１０に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、プロタミン水溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１及び２と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例１４）。また、プロタミン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例１４と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１０）。結果を図１９及び２０に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１０に示す。
【0074】
【0075】
図１９に示すように、実施例１４では経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図２０及び表１０に示すように、実施例１４では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0076】
（実施例１５、比較例１１）
発芽促進液（１－１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１－１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１５）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうした。経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２１に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１１に示す。
発芽促進液（１－１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１－１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１５）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうした。経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２１に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１１に示す。
【0077】
さらに、ＣＰＣ水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１１）。結果を図２１に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１１に示す。
【0078】
【0079】
図２１及び表１１に示すように、より現実的な生菌数濃度（約６．０×１０３ＣＦＵ／ｍＬ）とした場合であっても、実施例１５では生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0080】
（実施例１６、比較例１２）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１６）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１６と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１２）。結果を図２２に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１２に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１６）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１６と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１２）。結果を図２２に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１２に示す。
【0081】
【0082】
図２２及び表１２に示すように、より現実的な生菌数濃度（約６．０×１０３ＣＦＵ／ｍＬ）とした場合であっても、実施例１６では生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0083】
（実施例１７、比較例１３）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１７）。また、ハイジェニア水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１７と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１３）。結果を図２３に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１３に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１７）。また、ハイジェニア水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１７と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１３）。結果を図２３に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１３に示す。
【0084】
【0085】
図２３及び表１３に示すように、より現実的な生菌数濃度（約６．０×１０３ＣＦＵ／ｍＬ）とした場合であっても、実施例１７では生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0086】
（実施例１８、比較例１４）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１８）。また、ε－ポリリジン水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１８と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１４）。結果を図２４に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１４に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例１５と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（実施例１８）。また、ε－ポリリジン水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１８と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１４）。結果を図２４に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１４に示す。
【0087】
【0088】
図２４及び表１４に示すように、より現実的な生菌数濃度（約６．０×１０３ＣＦＵ／ｍＬ）とした場合であっても、実施例１８では生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0089】
（実施例１９、比較例１５）
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びナイシン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１－１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１９）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうした。経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２５に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１５に示す。
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びナイシン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（１－１）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例１９）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうした。経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２５に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１５に示す。
【0090】
さらに、ナイシン水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例１９と同様にして、懸濁液中の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を経時的に算出した（比較例１５）。結果を図２５に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１５に示す。
【0091】
【0092】
図２５及び表１５に示すように、より現実的な生菌数濃度（約６．０×１０３ＣＦＵ／ｍＬ）とした場合であっても、実施例１９では生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0093】
（実施例２０及び２１、比較例１６）
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（２）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例２０及び２１）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうし、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認した。測定結果を図２６に示す。
発芽促進液（１）１８ｍＬ及びＣＰＣ水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）２０μＬを１００ｍＬ容の三角フラスコに入れた後、芽胞懸濁液（２）２ｍＬを添加して評価用の懸濁液を得た（実施例２０及び２１）。３７℃、１２５ｒｐｍでフラスコを振とうし、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認した。測定結果を図２６に示す。
【0094】
また、経時的に懸濁液を取り出し、ＳＣＤＬＰ液体培地で段階的に希釈して希釈液を得た。得られた希釈液をＳＣＤＬＰ寒天培地に塗布した後、３７℃で４８時間培養し、生育したコロニー数を計測して、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。結果を図２７に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１６に示す。
【0095】
さらに、ＣＰＣ水溶液を用いなかったこと以外は、上記の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１６）。結果を図２６及び２７に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１６に示す。
【0096】
【0097】
図２６に示すように、いずれの場合（実施例２０及び２１、比較例１６）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図２７及び表１６に示すように、実施例２０及び２１では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0098】
（実施例２２及び２３、比較例１７）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２２及び２３）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２２及び２３と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１７）。結果を図２８及び２９に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１７に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ＢＡＣ水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２２及び２３）。また、ＢＡＣ水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２２及び２３と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１７）。結果を図２８及び２９に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１７に示す。
【0099】
【0100】
図２８に示すように、いずれの場合（実施例２２及び２３、比較例１７）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図２９及び表１７に示すように、実施例２２及び２３では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0101】
（実施例２４及び２５、比較例１８）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２４及び２５）。また、ハイジェニア水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２４及び２５と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１８）。結果を図３０及び３１に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１８に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ハイジェニア水溶液（５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２４及び２５）。また、ハイジェニア水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２４及び２５と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１８）。結果を図３０及び３１に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１８に示す。
【0102】
【0103】
図３０に示すように、いずれの場合（実施例２４及び２５、比較例１８）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図３１及び表１８に示すように、実施例２４及び２５では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【0104】
（実施例２６、比較例１９）
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２６）。また、ε－ポリリジン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２６と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１９）。結果を図３２及び３３に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１９に示す。
ＣＰＣ水溶液に代えて、ε－ポリリジン水溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、前述の実施例２０及び２１と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（実施例２６）。また、ε－ポリリジン水溶液を用いなかったこと以外は、前述の実施例２６と同様にして、懸濁液の濁度（ＯＤ６５０）を経時的に測定して芽胞の発芽状態を確認するとともに、生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した（比較例１９）。結果を図３２及び３３に示す。また、初期及び振とう開始から３時間後の生菌数濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を表１９に示す。
【0105】
【0106】
図３２に示すように、いずれの場合（実施例２６、比較例１９）も経時的に濁度が低下しており、芽胞の発芽を確認することができた。また、図３３及び表１９に示すように、実施例２６では、芽胞の発芽に伴って生菌数濃度が急激に低下しており、効率的に除菌が進行したことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【0107】
本発明の除菌組成物は、除菌することが従来困難であった細菌芽胞を簡易な操作で除菌しうる安全性の高い組成物として有用である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【図32】
【図33】