特許 7107493 液状ラクターゼ組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-07-19

(45)【発行日】2022-07-27

(54)【発明の名称】液状ラクターゼ組成物

(51)【国際特許分類】

   C12N 9/38 20060101AFI20220720BHJP

   C12N 9/96 20060101ALI20220720BHJP

   C12P 19/02 20060101ALN20220720BHJP

【ＦＩ】

C12N9/38

C12N9/96

C12P19/02

【請求項の数】 1

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2019187061

(22)【出願日】2019-10-10

(62)【分割の表示】P 2016552605の分割

【原出願日】2015-03-05

(65)【公開番号】P2020022477

(43)【公開日】2020-02-13

【審査請求日】2019-11-11

(31)【優先権主張番号】14157897.1

(32)【優先日】2014-03-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】503220392

【氏名又は名称】ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ．

【氏名又は名称原語表記】ＤＳＭ ＩＰ ＡＳＳＥＴＳ Ｂ．Ｖ．

【住所又は居所原語表記】Ｈｅｔ Ｏｖｅｒｌｏｏｎ １， ＮＬ－６４１１ ＴＥ Ｈｅｅｒｌｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(72)【発明者】

【氏名】ジョリンク， フェナ ヨハンナ カタリーナ

(72)【発明者】

【氏名】スハープ， アルバート

【審査官】野村 英雄

(56)【参考文献】

【文献】特開２００９－０３４１１６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ ９／００－ ９／９９

Ｃ１２Ｑ １／００－ ３／００

Ａ２３Ｃ １／００－２３／００

Ｃ１２Ｐ １／００－４１／００

Ａ２３Ｌ ２／００－３５／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

１０００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、
さらに１３～１９重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩および５～１５重量％のＮａＣｌを含み、
前記水性液状ラクターゼ調製物に含まれる成分の各々の濃度は、水分活性 _Ａｗ が多くとも０．８２であるような濃度であり、
グリセロールを含まない、水性液状ラクターゼ調製物。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な発明】

【0001】

［技術分野］
本発明は、液状ラクターゼ調製物、その製造方法、乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳を製造する方法、ラクターゼ調製物を含む乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳および乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳の製造における前記調製物の使用に関する。

【0002】

［背景技術］
ラクターゼもしくはβ－ガラクトシダーゼ（Ｅ．Ｃ：３．２．１．２３）は、ラクトース（二糖）からその成分の単糖類であるグルコースおよびガラクトースへの加水分解を触媒する酵素である。ラクトースは、酪農製品中および詳細には、牛乳、スキムミルク、クリーム、ヨーグルト、アイスクリームおよび他の乳製品中に存在する。

【0003】

年少者やラクトース耐性である人々では、ラクトースは年少者の小腸刷子縁において「ラクターゼ・フロリジン・ヒドラーゼ」（ＬＰＨ）によりガラクトースおよびグルコースに加水分解される。ＬＰＨは、ヒトにおいては単一ラクターゼ遺伝子であるＬＣＴによってコードされるが、成人におけるラクトースを消化する能力が遺伝子発現におけるシス作用性突然変異に起因し、優性遺伝することが見いだされている。ラクトースは、単糖類（すなわち、グルコースおよびガラクトース）とは対照的に、小腸内では吸収が不良である。ＬＣＴ遺伝子内で突然変異を有していない人々はラクトースを消化および吸収することがなく、良好に吸収されないラクトースは腸内腔内へ浸透圧により流体を引き込み、軟便をもたらすことになる。さらに、ラクトースはラクトースを代謝する結腸内の腸内細菌のための基質であり、揮発性脂肪酸ならびに二酸化炭素、水素およびメタンなどのガスを産生し、鼓腸や痙攣を引き起こす。現在では、ＬＣＴ遺伝子内の突然変異を有しているのは世界人口の２５～３０％に過ぎないが、成人になれば小腸内でラクトースを消化できるようになると推測されている。世界人口の残りはラクトース消化に関して様々な困難を有しており、これは酪農製品の摂取減少をもたらすことが多い。そのような個人は、「ラクトース不耐症」と呼ばれる。酪農製品は、数種のビタミン類、タンパク質およびミネラル類が存在するために健康に良い食品にとって重要な成分であるため、これは望ましくない状態である。

【0004】

ラクターゼは、微生物を含む大きな多様性もしくは生物について報告されており、それらから単離されてきた。ラクターゼは、クルイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）およびバシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のような微生物の細胞内成分であることが多い。クルイベロミセス属、特にＫ．フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）、Ｋ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）およびＫ．ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）ならびに他の酵母類、例えばカンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、トルラ属（Ｔｏｒｕｌａ）およびトルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）は酵母ラクターゼの一般的起源であるが、他方Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）またはＢ．サーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）は細菌性ラクターゼの周知の起源である。これらの生物に由来する数種の商業的ラクターゼ製剤、例えばＭａｘｉｌａｃｔ（Ｋ．ラクティス）由来、ＤＳＭ社（オランダ国デルフト）製）を入手できる。これらのラクターゼは全部が、ｐＨ＝６～ｐＨ＝８の間の最適ｐＨを有するので、いわゆる中性ラクターゼである。例えばアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）およびアスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）などの数種の生物は細胞外ラクターゼを生成することができ、米国特許第５，７３６，３７４号明細書は、アスペルギルス・オリザエによって生成されたそのようなラクターゼの例について記載している。最適ｐＨおよび最適温度のようなラクターゼの酵素特性は種間で変動する。しかし一般に、排泄されたラクターゼは、ｐＨ＝３．５～ｐＨ＝５．０のより低い最適ｐＨを示す（酸性ラクターゼ）；細胞内ラクターゼは、通例は中性ラクターゼについてはｐＨ＝６．０～ｐＨ＝７．５の範囲内のより高い最適ｐＨを示すが、これらの一般原則の例外が存在する。

【0005】

現在、ラクターゼは液体として調製され、市販されている。液状調製物を製造する場合には２つの要素、つまり微生物安定性および酵素安定性が極めて重要である。微生物安定性は、液状調製物が微生物を全く含まないままで存在する、または少なくともその増殖が予防もしくは緩徐化されることを意味する。

【0006】

現在は、数種の液状ラクターゼ製品が市販されている。これらの例（中性ラクターゼのみ）は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社によって販売されているＬａｃｔｏｚｙｍ Ｐｕｒｅ ６５００Ｌ；Ｃｈｒ．Ｈａｎｓｅｎ社によって販売されているＨａ－Ｌａｃｔａｓｅ ５２００；ＤｕＰｏｎｔ－Ｄａｎｉｓｃｏ社によって販売されているＧＯＤＯ ＹＮＬ－２；およびどちらもＤＳＭ Ｆｏｏｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ社によって販売されているＭａｘｉｌａｃｔ ＬＧＸ ５０００およびＬＧｉである。上記の全製品および現在市販されている実際の全液状ラクターゼ調製物は、およそ５０％のグリセロールを含有している。グリセロールは、優れた微生物安定化および酵素安定化のどちらも備えることが見いだされている。グリセロールの量は、水分活性（Ａｗ）が多くとも０．８２であるような量である。これは微生物増殖を防止する。さらに、グリセロールは、さらに酵素安定性も備える。市販のラクターゼ液の典型的な強度は、約１０００、２０００または５０００ＮＬＵ／ｇである。用語ＮＬＵ／ｇは、最終製品１グラム当たりのラクターゼ活性の量を意味する。

【0007】

ラクターゼの重要な産業上の用途は、ラクトース不耐症の人のためのラクトース加水分解乳製品の製造にある。そのような加水分解乳製品には、低温殺菌乳、ＵＨＴ乳、例えばタンパク質加水分解などの中間加工処理工程を用いて、または用いずに元々の構成要素の全部もしくは一部から再構成された牛乳ならびに乳児用調製粉乳が含まれる。

【0008】

ラクターゼの特に興味深い用途は乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳である。乳児用調製粉乳は、哺乳瓶またはコップで授乳するために通常は（水と混合する）粉末または（水を追加して、もしくは追加せずに）液体から調製される、生後１２カ月未満の乳幼児に与えるために設計および市販されている加工食品である。連邦食品・医薬品・化粧品法（ＦＦＤＣＡ）は、乳児用調製粉乳を「ヒトの母乳に代わる完全または部分人工乳としての母乳の模擬もしくはその安定性の理由によって乳児用食品専用の特別用途食品であることを意図する、または意味する食品」であると規定している。最も一般的に使用される乳児用調製粉乳はタンパク質源としての精製牛乳由来乳清およびカゼイン、脂肪源としての植物油のブレンド、炭水化物源としてのラクトース、ビタミン―ミネラルミックスならびに製造業者に依存するその他の成分を含有している。

【0009】

現在入手可能なラクターゼ調製物に関する問題は、数多くの国々では乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳へのグリセロールの添加またはキャリーオーバーが法律によって禁じられている点である。これは、全てがグリセロールを含有している現在のラクターゼ調製物を乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳を製造するためには不適合にさせる。このため、乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳に好適である、実質的にグリセロールを含んでいない安定性の液状ラクターゼ調製物に対する必要がある。

【0010】

［発明の概要］
本発明は、乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳に使用するために好適である、グリセロールを含んでいない安定性の水性液状ラクターゼ調製物を提供する。安定性のラクターゼ調製物は、少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含むが、好ましくはこれら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である。そのような調製物中の任意選択的成分の１つの例は糖である。そのような調製物中の任意選択的成分のまた別の例は、塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせである。そのような調製物中の組み合わせの任意選択的成分の１つの例は、塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせならびに糖である。これらの調製物は、インベルターゼを含まないラクターゼを使用した場合に特に好適であり、安定剤としてのスクロースの使用を可能にする。本発明はさらに、本発明の液状ラクターゼ調製物を製造する方法、本発明の液状ラクターゼ調製物を含む（例えば、顆粒の粉末としての）乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳、上記の乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳を製造する方法ならびに乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳の製造における上記調製物の使用も提供する。

【0011】

［発明の詳細な説明］
本明細書で使用する用語「１つの」は、他に特に規定しない限り「少なくとも１つの」であると規定する。名詞（例えば、化合物、細胞など）について単数形で言及する場合、複数形も含まれることが意図されている。

【0012】

第一態様では、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、好ましくはこれら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。好ましくは、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、これら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。

【0013】

１つの好ましい実施形態では、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに１種の糖を含み、好ましくはこれら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。好ましくは、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに１種の糖を含み、これら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。

【0014】

１つの好ましい実施形態では、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含み、好ましくはこれら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。好ましくは、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含み、これら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。

【0015】

１つの好ましい実施形態では、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに１種の糖を含み、さらに塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含み、好ましくはこれら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。好ましくは、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含み、さらに１種の糖を含み、さらに塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含み、これら成分の各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である水性液状ラクターゼ調製物を提供する。

【0016】

本発明者らは、驚くべきことに、酵素安定性の液体酵素調製物は、グリセロールを使用せずに実現可能であることを見いだした。好ましくは、上記液体酵素調製物は、さらに微生物安定性でもある。本発明者らは、少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩（好ましくはナトリウム－Ｌ－乳酸塩）またはそれらの組み合わせおよび任意選択的に糖および／または任意選択的に塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせおよび任意選択的に乳清タンパク質を含む、および多くとも０．８２の水分活性を有する、液体として調製されたラクターゼが優れていることを見いだした。さらに、微生物安定性も同様に優れていた。これは、ラクターゼ自体はそもそも余り安定性ではないので、なおさら驚くべきことである。

【0017】

酵素安定性は、酵素の活性が減少する速度についての尺度である。微生物安定性は、組成物中で微生物が増殖および成長できる速度についての尺度である。

【0018】

本発明のラクターゼ調製物は、好ましくは、乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳中で使用するために好適である。つまり、本ラクターゼ調製物は、乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳を製造する方法において使用できる。このために、本発明のラクターゼ調製物は、実質的にポリオールもしくはジオールを含んでおらず、より好ましくはグリセロールおよび／またはソルビトールを含んでいない。グリセロールの量、好ましくはグリセロールおよびソルビトールの量は、好ましくは４５重量％未満、４０重量％未満、より好ましくは３５重量％未満、３０重量％未満、２５重量％未満、より好ましくは２０重量％未満、１５重量％未満、いっそうより好ましくは１０重量％未満、５重量％未満である。最も好ましくは、ラクターゼは、グリセロールまたは任意の他のポリオールもしくはジオールを含んでいない。

【0019】

本発明のラクターゼ調製物は、好ましくは、例えばソルビン酸塩および／または安息香酸塩および／またはパラベン（パラヒドロキシ安息香酸塩のアルキルエステル）などの化合物（保存料）もまた含んでいない。

【0020】

本発明のラクターゼ調製物の成分（すなわち、例えばナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩、糖、塩化ナトリウムもしくはカリウム）は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような量で加えられる。個々の成分の水分活性は、当業者であれば公知であり、ハンドブックに記載されている。当業者であれば、この調製物中の成分の量は、水分活性が多くとも０．８２のままであるように変動させたり入れ替えたりできることを理解するであろう。これらの成分の組み合わせの水分活性への寄与は、個別成分の寄与の合計、つまり作用は累積的である。本明細書で使用する「水分活性」は、２５℃で測定した数値を表す。相当に低い水分活性は、所望の微生物安定性を達成するために寄与できる。本特許出願の状況において、用語「水分活性」は、グリセロールまたは任意の他のポリオールもしくはジオールを全く含まない、または少ししか含まない貯蔵安定性のラクターゼ調製物を調製するために使用される。

【0021】

用語「水性液状ラクターゼ調製物」は、水を含む任意の組成物もしくは液体、例えば、少なくとも２０重量％の水、例えば少なくとも３０もしくは４０重量％の水を含む。

【0022】

本発明のラクターゼ調製物（またはラクターゼ製剤；これらの用語は本明細書では互換的に使用される）は、少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含む。そこでラクターゼ調製物は、少なくとも２０重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩もしくは少なくとも２０重量％のカルシウム－Ｌ－乳酸塩もしくは少なくとも２０重量％のカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせ、例えば少なくとも２０重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩およびカルシウム－Ｌ－乳酸塩または少なくとも２０重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩およびカリウム－Ｌ－乳酸塩または少なくとも２０重量％のカルシウム－Ｌ－乳酸塩およびカリウム－Ｌ－乳酸塩または少なくとも２０重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩およびカルシウム－Ｌ－乳酸塩およびカリウム－Ｌ－乳酸塩を含むことができる。乳酸塩の組み合わせの場合は、「少なくとも２０重量％」の特徴は、個々のＬ－乳酸塩の結合濃度を意味する。

【0023】

乳酸ナトリウムは、乳酸のナトリウム塩である。乳酸カルシウムおよび乳酸カリウムは、各々乳酸のカルシウム塩およびカリウム塩である。一般に、たとえば乳酸ナトリウム、カルシウムおよびカリウムなどの乳酸塩は、乳酸の中和から引き出される塩であり、商業的に最も多く使用されている乳酸は、例えばコーンスターチ、ジャガイモもしくは糖蜜糖またはタピオカなどの酪農製品を含まない製品から発酵させられる。しかし一部の乳酸は、例えば乳清やラクトースなどの酪農製品から発酵させられる。乳性は、その４．８％が固体ラクトースである６．５％の固体から構成されている。廃棄乳清は、典型的には特定の酪農製品の製造中に乳清自体が廃棄物として生成された場合に乳酸を製造するために使用される。

【0024】

乳酸ナトリウム、カルシウムもしくはカリウムは、Ｄ形、Ｌ形またはＤＬ形で存在することができる。好ましくは、Ｌ形が排他的に使用される。しかし、ナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩についての言及は、微量の例えばナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｄ（またはＤＬ）－乳酸塩の存在を排除しない。微量のナトリウム、カルシウムもしくはカリウムのＤ形は、全乳酸塩の５％以下、好ましくはＬ形のストック中に存在するＤ形の全乳酸塩の３％以下の量である。好ましくは、使用されるＬ－乳酸塩は、ナトリウム－Ｌ－乳酸塩である。

【0025】

本発明のラクターゼ調製物は、ラクターゼおよび少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせの他に、さらに１種の糖を含むことができる。好ましくは、上記の糖は、スクロース、フルクトース、グルコースもしくはラクトースまたはそれらの組み合わせであるが、より好ましくは、上記の糖はスクロースである。使用されるＬ－乳酸塩および糖の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるように選択されなければならない。当業者であれば、何の過度の負担も伴わずに好適な濃度を決定できる。フルクトースは、フォローアップミルクまたは幼児用調製粉乳に使用されるラクターゼ調製物のためにのみ使用される。

【0026】

本発明のラクターゼ調製物は、ラクターゼおよび少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせの他に、さらに塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含むことができる。さらに、各濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるように選択される。当業者であれば、何の過度の負担も伴わずに好適な濃度を決定できる。

【0027】

本発明のラクターゼ調製物は、さらにタンパク質、好ましくは乳清タンパク質を含むことができる。液状調製物中の乳清タンパク質の量は、好ましくは、β－ラクトグロブリンとして測定して１～１５ｇ／Ｌ、より好ましくは３～１２ｇ／Ｌ、より好ましくは４～６ｇ／Ｌである。

【0028】

本調製物中のラクターゼは、好ましくは中性ラクターゼである。本発明の調製物中のラクターゼ、好ましくは中性ラクターゼの濃度は、５００～１５０００ＮＬＵ／ｇのいずれかであってよく、典型的には１０００、２０００または５０００ＮＬＵ／ｇである。中性ラクターゼは好ましくは、ｐＨ６～９、好ましくはｐＨ７～８またはより好ましくはｐＨ６．５～７．５で活性である、またはその最適活性を有する。

【0029】

ラクターゼ活性は、ＦＣＣ（ｓｉｘｔｈ ｅｄ，２００８，ｐ１１２４－１１２６：Ｌａｃｔａｓｅ（ｎｅｕｔｒａｌ）β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）に記載された手順にしたがって、中性ラクターゼ単位（ＮＬＵ）として基質としてのｏ－ニトロフェニル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）を使用して決定される。

【0030】

本発明の調製物中のラクターゼは、好ましくは細胞内生成中性ラクターゼであり、その場合には中性ラクターゼは当業者には公知の方法によってその宿主細胞から抽出される。

【0031】

中性ラクターゼは、微生物を含む大きな多様性もしくは生物について報告されており、それらから単離されてきた。ラクターゼは、クルイベロミセス属およびバシラス属のような微生物の細胞内成分であることが多い。クルイベロミセス属、特にＫ．フラジリスおよびＫ．ラクティスならびに他の酵母類、例えばカンジダ属、トルラ属およびトルロプシス属は酵母ラクターゼの一般的起源であるが、他方Ｂ．コアギュランス、Ｂ．サーキュランスまたは乳酸菌は細菌性ラクターゼの周知の起源である。これらの生物に由来する数種の商業的ラクターゼ調製物、例えばＭａｘｉｌａｃｔ（登録商標）（Ｋ．ラクティス）由来、ＤＳＭ社（オランダ国デルフト）製）を入手できる。好ましくは、本発明のラクターゼ調製物は、中性クルイベロミセス・ラクティス由来ラクターゼおよびより好ましくは中性Ｋ．ラクティス由来ラクターゼを含む。

【0032】

本発明の調製物中のラクターゼは、例えばＫ．ラクティスからの任意選択的濃縮抽出物として入手することができる。好ましくは、そのような抽出物は、例えば固体を除去するために遠心分離または濾過による、固液分離工程を受けている。そのような抽出物は、酵母ならびに発酵培地の残余物からの中性成分を含有している場合がある。そのような成分の例は、核酸、タンパク質、残留糖、オリゴ糖、内因性酵素、塩、ミネラル類、細胞内成分、イオン、およびヌクレオチドまたは他の成分である。これらの成分は、ある程度は、最後に本発明の調製物中に達することになる。例えば、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ調製物中では、ラクターゼ以外のタンパク質の量は、組成物の総重量に基づくと典型的には０．１～１０重量％であり、１～５または１～４、２～３重量％である可能性がより高い。そのような調製物中の塩、灰分、糖類、核酸などの量は、典型的には０．５～４重量％である。

【0033】

または、ラクターゼは、酸性ラクターゼ、すなわち最適ｐＨが３．５～５．０の範囲内にあるラクターゼであってよい。

【0034】

曖昧さを避けるために、本明細書で言及した例えばナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩または１種の糖または塩化ナトリウムもしくはカリウム（または何らかの他の添加された成分）の量は、添加された成分の量を意味し、上述したラクターゼ抽出物中に存在する成分からの可能性のあるキャリーオーバーを含んでいない。

【0035】

さらに、水分活性Ａ_ｗは、使用されたバッチに依存してわずかに変動する可能性があるラクターゼ溶液（例えば、ラクターゼ抽出物または精製ラクターゼ製剤）の水分活性もさらに考慮に入れている。

【0036】

本発明の調製物中のラクターゼは、濃縮（非精製）ラクターゼであってよい、または精製されていてもよい。濃縮（非精製）ラクターゼは、宿主細胞から酵素を遊離させる工程、例えば濾過もしくは遠心分離によって固体を除去する工程、および例えば限外濾過によって液相（ラクターゼ）を濃縮する工程によって入手できる。または、ラクターゼは、例えばクロマトグラフィーを使用する工程によって精製される。

【0037】

本発明の液状ラクターゼ調製物中の糖は、例えばフルクトースもしくはグルコースなどの単糖類；例えばラクトースもしくはスクロースまたはオリゴ糖などの二糖類を含むことができる。好ましい糖類は水溶性である。

【0038】

本発明のラクターゼ調製物は、好ましくは実質的にインベルターゼを含んでいない。インベルターゼ［ＥＣ３．２．１．２６］は、スクロースの加水分解を触媒してグルコースの１つの単量体およびフルクトースの１つの単量体を生成する酵素である。結果として生じたフルクトースおよびグルコースの混合物は転化糖と呼ばれる。市販のラクターゼは、微量のインベルターゼを含有することが多い。本発明者らは、スクロースがラクターゼの酵素安定性に関して満足できる結果を生じさせないことが多いことを見いだした。本発明者らは、インベルターゼの存在がこの問題に関係する可能性があると推測した。本発明者らはさらに、グルコースが安定剤としては他の糖類より非効率であり、これはおそらくスクロースの不十分な安定化作用についての説明であると考えられることも見いだした。実際に、本発明者らは、インベルターゼを含まないラクターゼを本発明の調製物中に使用した場合に、スクロースが酵素安定性にとって効果的な安定剤であることを見いだした。そこで、１つの好ましい実施形態では、本発明の調製物は、スクロースを含み、実質的にインベルターゼを含んでいない。

【0039】

上述のように、本発明は、ラクターゼを含む水性液状ラクターゼ調製物であって、さらに少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含む水性液状ラクターゼ調製物を提供する。そのような調製物は、任意選択的に、
－ １種の糖；または
－ 塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせ；または
－ 塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせならびに１種の糖を含むことができるが、
好ましくはこれらの成分各々の濃度は、水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるような濃度である。

【0040】

１つの好適なラクターゼ調製物は、少なくとも２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３％、２４％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３１重量％、３２重量％、３３重量％、３４重量％または３５重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩（好ましくはナトリウム－Ｌ－乳酸塩）またはそれらの組み合わせを含む。好ましくは、そのようなラクターゼ調製物は、５００～１５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼを含む。

【0041】

本発明のラクターゼ調製物は、本質的にラクターゼおよびナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩（好ましくはナトリウム－Ｌ－乳酸塩）またはそれらの組み合わせからなってよい。または、ラクターゼ調製物は、（ｉ）ラクターゼ、（ｉｉ）少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせ、および（ｉｉｉ）１種の糖を含んでいてよい。好ましくは、上記の糖は、スクロース、フルクトース、グルコースもしくはラクトースまたはそれらの組み合わせであるが、より好ましくは上記の糖は、スクロースである。

【0042】

または、ラクターゼ調製物は、（ｉ）ラクターゼ、（ｉｉ）少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせ、および（ｉｉｉ）塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含んでいてよい。

【0043】

または、ラクターゼ調製物は、（ｉ）ラクターゼ、（ｉｉ）少なくとも２０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせ、および（ｉｉｉ）１種の糖ならびに（ｉｖ）塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせを含んでいてよい。

【0044】

全ての場合に、個別の成分の濃度は、最終水分活性Ａ_ｗが多くとも０．８２であるように選択される。

【0045】

本発明のラクターゼ調製物のｐＨは、ｐＨ６～９、好ましくはｐＨ７～８．５、好ましくはｐＨ７～８の範囲内である。

【0046】

１つの好適なラクターゼ調製物は、１０００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３１重量％、３２重量％、３３重量％、３４重量％または３５重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩、好ましくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび３０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩を含む。

【0047】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、３０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩および乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。

【0048】

また別の好適なラクターゼ調製物は、１０００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％または１５重量％のＮａＣｌおよび３５重量％、３６重量％、３７重量％、３８重量％、３９重量％、４０％、４１重量％、４２重量％、４３重量％、４４重量％または４５重量％のスクロース、好ましくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、１０重量％のＮａＣｌならびに４０重量％のスクロースを含む。

【0049】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、１０重量％のＮａＣｌ、４０重量％のスクロースおよび乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。

【0050】

また別の好適なラクターゼ調製物は、１０００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％または１５重量％のＮａＣｌおよび１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％もしくは２３重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩、好ましくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、１０重量％のＮａＣｌならびに１８重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩を含む。

【0051】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、１０重量％のＮａＣｌ、１８重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩および乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。

【0052】

また別の好適なラクターゼ調製物は、１０００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％または２５重量％のフルクトースおよび１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％もしくは２７重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩、好ましくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、２０重量％のフルクトースならびに２２重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩を含む。

【0053】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、２０重量％のフルクトース、２２重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩および乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。

【0054】

また別の好適なラクターゼ調製物は、１００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％または３０重量％のスクロースおよび１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％もしくは２５重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩、好ましくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、２５重量％のスクロースならびに２０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩を含む。

【0055】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、２５重量％のスクロース、２０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩および乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。

【0056】

また別の好適なラクターゼ調製物は、１００、２０００もしくは５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％または２５重量％のフルクトースおよび１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％もしくは２５重量％のスクロースを含む。

【0057】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼ、２０重量％のスクロース、２０重量％のフルクトースおよび乳清タンパク質（β－ラクトグロブリンとして測定して、５～１０ｇ／Ｌ、好ましくは５ｇ／Ｌ）を含む。
好ましい組成物の幾つかのまた別の例について記載する：

【0058】

１つの好ましいラクターゼ調製物は、５００～８０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび少なくとも２８、２９もしくは３０重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせ、好ましくは少なくとも３１重量％もしくは３２重量％もしくは３２．５重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせを含む。

【0059】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５００～８０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび少なくとも２８、２９もしくは３０重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩、好ましくは少なくとも３１重量％もしくは３２重量％もしくは３２．５重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩を含む。

【0060】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５００～８０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび少なくとも２５重量％のナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせならびに０．０１～５重量％、好ましくは０．０１～３重量％、より好ましくは０．０１～３重量％、最も好ましくは０．０１～２重量％の範囲内の塩化ナトリウムもしくはカリウムを含む。

【0061】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５００～８０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび少なくとも２５重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩ならびに０．０１～５重量％、好ましくは０．０１～３重量％、より好ましくは０．０１～３重量％、最も好ましくは０．０１～２重量％の範囲内の塩化ナトリウムもしくはカリウムを含む。

【0062】

また別の好ましいラクターゼ調製物は、５００～８０００ＮＬＵ／ｇのラクターゼおよび少なくとも２５重量％のナトリウム－Ｌ－乳酸塩ならびに０．０１～３重量％、好ましくは０．０１～２重量％の範囲内の塩化カリウムを含む。

【0063】

本発明の調製物は、酵素安定性であり、好ましくは微生物および酵素安定性である。つまり、２～８℃（例えば４℃）での２カ月間の保管後に調製物中の残留酵素活性は、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、いっそうより好ましくは少なくとも９９％である。同様に、微生物安定性は、全細菌数は、２～８℃（例えば４℃）での２カ月間の保管後に好ましくは１０００ＣＦＵ（コロニー形成単位）未満、より好ましくは５００未満、より好ましくは３００未満、いっそうより好ましくは２００未満、最も好ましくは１００ＣＦＵ／ｍＬ未満である。

【0064】

本発明の組成物の微生物特性は、明確に規定された標準手技を使用して、一般細菌数、酵母数および糸状菌数によって表示することができる。例えば、一般細菌数は、１ｍＬ中に≦１００ＣＦＵ（コロニー形成単位）であってよく、酵母数は１ｍＬ中に≦１０ＣＦＵであってよく、糸状菌数は１ｍＬ中に≦１０ＣＦＵであってよい。組成物は使用前には保管されていることが多いので、細菌数、酵母数および糸状菌数は少なくとも２カ月間にわたり所定の境界値未満のままであるのが望ましい。

【0065】

本明細書で使用する酵母数および糸状菌数は、ＮＥＮ－ＩＳＯ２１５２７－２を遵守して決定される。

【0066】

また別の態様では、本発明は、本発明の液状ラクターゼ調製物を製造する方法であって、ラクターゼ、ナトリウム、カルシウムもしくはカリウム－Ｌ－乳酸塩またはそれらの組み合わせおよび任意選択的に糖、および／または任意選択的に塩化ナトリウムもしくはカリウムまたはそれらの組み合わせ、および／または水を添加する工程、および任意選択的に混合する工程を含む方法を提供する。上記の方法におけるラクターゼは、任意選択的に濃縮された発酵ブロス、例えばＫ．ラクティスであってよい、またはそれから（細胞を溶解させた後に）入手されてよい。または、ラクターゼは、精製ラクターゼ、例えばクロマトグラフィーによって精製されたラクターゼであってよい。ラクターゼおよび他の成分を添加する順序は、重要ではない。本方法は、透明溶液を得るための混合する工程を含むことができる。

【0067】

また別の態様では、本発明は、本発明の液状ラクターゼ調製物または上述の本発明の方法によって製造されたラクターゼ組成物を含む乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳を提供する。上記の乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳は、好ましくは、例えば顆粒の粉末形にある乾燥調製物である。本発明の乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳中のラクトースの量は、全てが乳児用調製粉乳、フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳の全重量に基づいて、好ましくは１重量％未満、好ましくは０．５重量％未満、より好ましくは０．２重量％未満、いっそうより好ましくは０．１重量％未満である。乳児用調製粉乳は、生後１２カ月未満の乳幼児に与えるために設計および市販されている加工食品である。フォローアップミルクもしくは幼児用調製粉乳は、生後６カ月～２歳用に販売されている。

【0068】

さらにまた別の態様では、本発明は、例えば本発明の乳児用調製粉乳などの乳児用調製粉乳を製造する方法であって、液状ラクターゼ調製物を濃縮乳および任意選択的に他の成分、例えばミネラル類、ビタミン類および脂肪に添加する工程；混合および／またはホモジナイズする工程；蒸発させる工程；およびスプレー乾燥する工程を含む方法を提供する。成分を添加する順序は重要ではない。例えば、本方法は、ラクターゼ調製物がそれに例えばミネラル類、ビタミン類および脂肪が既に添加されている（液状）濃縮乳に添加されるように実施されてよい。または、そのような他の成分は、ラクターゼ調製物を添加する工程の後に添加される。また別の実施形態では、本ラクターゼ調製物が他の成分に添加され、その後にこの混合物が濃縮乳に添加される。混合、ホモジナイゼーション、スプレー乾燥および造粒は、全部が当分野において公知の標準方法にしたがって実施される。

【0069】

さらに別の態様では、本発明は、乳児用調製粉乳の製造における本発明の液状ラクターゼ調製物の使用を提供する。

【0070】

以下では、下記の実施例を参照しながら、しかしそれらに限定せずに本発明について説明する。

【0071】

［実施例］
［実施例１ ３２．５重量％のＮａ－乳酸塩を含むラクターゼ調製物］
酵母クルイベロミセス・ラクティスから抽出された濃縮ラクターゼは、先行技術において記載された方法（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ Ｐｉｎｈｏ ａｎｄ Ｌｏｐｅｓ Ｐａｓｓｏｓ（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５，３２３－３３６）または以前に記載されたクルイベロミセス属からラクターゼを抽出および濃縮するための任意の他の方法を使用して入手することができる。約１４０００ＮＬＵ／ｇの活性を備える２８０グラムのこの濃縮（非精製）ラクターゼに、５２０ｇのＮａ－Ｌ－乳酸塩（５０重量％のストック液）を添加した。これは、４９５０ＮＬＵ／ｇの活性、７．０のｐＨおよび０．８１５の水分活性を備える３２．５重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩調製物を生じさせた。ｐＨ測定は、超高品質（ＵＨＱ）水中の１％のサンプル液を使用して実施した。水分活性は、Ａｗ値が安定性になるまで、２５℃でサンプルの上方で相対湿度を測定することによって測定した。Ａｗ値は、４分間にわたり＞０．００１Ａｗの変化が検出されなければ安定性であると見なされる。Ａｗ値は、標準装置を用いて決定する。

【0072】

およそ調製物１グラムのサンプルは、各２、４および８週間にわたり５℃で保管した。試験からサンプルを取り出した後、それらを視覚的に観察し、活性について決定した。

【0073】

８週間後、調製物の残留酵素活性は９４％であった。

【0074】

【表1】

【0075】

［実施例２ ２０重量％のＮａ－乳酸塩＋２５重量％のスクロースを含むラクターゼ調製物］
約１４０００ＮＬＵ／ｇの活性を備える２８０グラムの濃縮ラクターゼ（濃縮（非精製）ラクターゼ）に、３２０ｇのＮａ－Ｌ－乳酸塩（５０重量％溶液）および２００ｇのスクロースを添加した。これは、５０４０ＮＬＵ／ｇの活性、７．０のｐＨおよび０．８１５の水分活性を備える２０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩＋２５重量％のスクロース調製物を生じさせた。ｐＨ測定は、超高品質（ＵＨＱ）水中の１％のサンプル液を使用して実施した。水分活性は、Ａｗ値が安定性になるまで、２５℃でサンプルの上方で相対湿度を測定することによって測定した。Ａｗ値は、４分間にわたり＞０．００１Ａｗの変化が検出されなければ安定性であると見なされる。Ａｗ値は、標準装置を用いて決定する。

【0076】

およそ調製物１グラムのサンプルは、各２、４および８週間にわたり５℃で保管した。試験からサンプルを取り出した後、それらを視覚的に観察し、活性について決定した。

【0077】

８週間後、調製物の残留酵素活性は８２％であった。

【0078】

【表2】

【0079】

［実施例３ （ｉ）３２重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩調製物または（ｉｉ）２０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩＋２５重量％のスクロースまたは（ｉｉｉ）５０重量％のグリセロール調製物を含むラクターゼ調製物の微生物負荷試験］
約１３６００ＮＬＵ／ｇの活性を備える３５０グラムの濃縮ラクターゼ（濃縮（非精製）ラクターゼ）に、６５０ｇのＮａ－Ｌ－乳酸塩（５０重量％溶液）を添加した。ｐＨは、ＮａＯＨを用いてｐＨ７．８へ調整した。これは、約４７６０ＮＬＵ／ｇの活性および０．８０の水分活性を備える３２．５重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩調製物を生じさせた。

【0080】

約１３６００ＮＬＵ／ｇの活性を備える４００グラムの濃縮ラクターゼ（濃縮（非精製）ラクターゼ）に、約４５７ｇのＮａ－Ｌ－乳酸塩（５０重量％溶液）および２８５ｇのスクロースを添加した。ｐＨは、ＮａＯＨを用いてｐＨ７．８へ調整した。これは、約４７６０ＮＬＵ／ｇの活性および０．７９４の水分活性を備える２０重量％のＮａ－Ｌ－乳酸塩＋２５重量％のスクロース調製物を生じさせた。

【0081】

参照物質として、約１３６００ＮＬＵ／ｇの活性を備える４００グラムの濃縮ラクターゼに、１５０ｇの水および５５０ｇのグリセロールを添加した。ｐＨは、ＮａＯＨを用いてｐＨ７．８へ調整した。これは、約４９４５ＮＬＵ／ｇの活性および０．７６９の水分活性を備える５０重量％のグリセロール調製物を生じさせた。

【0082】

この試験の目的は、５０％のグリセロールラクターゼ組成物の微生物安定性を本発明のラクターゼ調製物と比較することであった。これは、ＮＥＮ－ＩＳＯ２１５２７－２にしたがって様々な調製物に酵母または糸状菌の標準もしくはロバスト・カクテルを負荷することによって実施した。そのような標準カクテルは、（食品）製品、成分または工業プロセスもしくは工業設備中に存在する可能性が高い精選の一般的な遍在性微生物を含んでいる。ロバスト・カクテルは、負荷条件下で増殖できる精選の菌株である。

【0083】

標準糸状菌、ロバスト糸状菌、標準酵母またはロバスト酵母のカクテルを本調製物に添加し、８℃および２５℃でインキュベートし、微生物増殖を決定するために０、１、２、３週間後ならびに１および２カ月後にサンプル採取した。

【0084】

２カ月後、乳酸塩を含む調製物は、標準およびロバスト酵母ならびにロバスト糸状菌についてグリセロール調製物よりはるかに微生物安定性であった。乳酸塩を含む調製物は、標準糸状菌についてグリセロール調製物と同等に微生物安定性であった。