特許 7109674 肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを含有する医薬品

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-07-21

(45)【発行日】2022-07-29

(54)【発明の名称】肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを含有する医薬品

(51)【国際特許分類】

   C07H 15/04 20060101AFI20220722BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20220722BHJP

   A61K 31/198 20060101ALI20220722BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20220722BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220722BHJP

【ＦＩ】

C07H15/04 F CSP

A61K47/54

A61K31/198

A61P1/16

A61K9/08

【請求項の数】 4

(21)【出願番号】P 2021531388

(86)(22)【出願日】2019-12-02

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-19

(86)【国際出願番号】 CN2019122318

(87)【国際公開番号】W WO2020108657

(87)【国際公開日】2020-06-04

【審査請求日】2021-07-28

(31)【優先権主張番号】201811452803.5

(32)【優先日】2018-11-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】521235062

【氏名又は名称】キロノヴァ （シアメン） バイオファーマ カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100166729

【弁理士】

【氏名又は名称】武田 幸子

(72)【発明者】

【氏名】ツイ クンユアン

【審査官】高橋 樹理

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１０７９２９２７３（ＣＮ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

Ｃ０７Ｈ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを構造中に含有する化合物であって、
構造中の肝臓標的化特異的リガンドＸは、順次、立体障害安定化構造を含有する分岐鎖Ｌ、リンカーＢ、及び連結鎖Ｄを介して、甲状腺ホルモン受容体アゴニストＴに連結され、該化合物の構造一般式（Ｉ）は以下に示され、
（Ｘ－Ｌ）_ｎ－Ｂ－Ｄ－Ｔ
（ここで、ｎは３であり、且つ当該（Ｘ－Ｌ） _ｎ －Ｂ－Ｄ－Ｔの構造式は

【化1】

であり、
前記化合物は下記Ｋｙｌｏ－０１０１～Ｋｙｌｏ－０１０３に示される構造のうちの１種である、ことを特徴とする化合物。

【化2】

【化3】

【化4】

【請求項2】

請求項１に記載の化合物の、甲状腺ホルモン受容体に作用して非アルコール性脂肪肝または非アルコール性脂肪性肝炎である肝疾患を治療するための医薬品の製造における使用。

【請求項3】

請求項１に記載の化合物と、薬学的に許容可能な補助材料とを含む、医薬組成物。

【請求項4】

前記医薬組成物は注射剤である、ことを特徴とする請求項３に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、バイオ医薬分野に関し、具体的には標的化医薬品の分野に関し、より具体的には、肝臓を標的とする肝疾患治療用の化合物に関する。

【背景技術】

【0002】

肝臓におけるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）は肝細胞により特異的に発現される受容体であり、高効率なエンドサイトーシス型受容体である。生体内の生理学的条件下で各種の糖タンパク質は、酵素や酸でシアル酸を加水分解された後、露出したペナルティメートがガラクトース残基であるため、ＡＳＧＰＲが特異的に結合する糖はガラクトシル基であり、それでガラクトース特異的受容体とも呼ばれる。ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンなどの単糖や多糖分子はそれに対して高い親和性を有する。ＡＳＧＰＲの主な生理学的機能は血液中のアシアロ糖タンパク質、リポタンパク質などの物質の除去を媒介することであり、ウイルス性肝炎、肝硬変、肝臓癌などの肝疾患の発症や進行と密接な関係がある。このようなＡＳＧＰＲの特性の発見によって、肝疾患の診断や治療に重要な役割が果たされている（ＡｓｈｗｅｌｌＧ、ＨａｒｆｏｒｄＪ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｖｅｒ［Ｊ］，ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ １９８２ ５１：５３１－５５４）。

【0003】

単糖又は多糖分子が細胞の膜上の受容体を標的として薬物送達システムに使用される場合のフィージビリティスタディは１９７１年に始まった（Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｇら，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ５： ２７９－２８８；Ｒｏｇｅｒｓ ＪＣ ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ４５：６２２－６２９）。ガラクトース分子に対して特異的に結合するというＡＳＧＰＲの特性は、バイオ医薬品の研究開発分野で重要視されている（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＡＬら，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５５：９０３３－９０３６；Ｍ． Ｓｐｉｅｓｓ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９：１０００９－１００１８）。このようなＡＳＧＰＲの特性は、ガラクトース又はガラクトサミン及びその誘導体を構造中に含有する肝疾患治療薬の送達に標的性を持たせ、その薬効が肝臓で発生することを確保し、他の組織への分布を減少させることで、他の部位への医薬品の副作用を低減させることができる。初期の研究者は、ＡＳＧＰＲの利点を認識して、多くの努力をしている。このようなＡＳＧＰＲの特性を利用して、遺伝子断片をその特異的リガンドであるガラクトース又はアセチルガラクトサミンに連結して、肝細胞に標的に導入するということが既に研究されている（Ｓｅｙｍｏｕｒ Ｌ． Ｊ．，Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ２０：１６６８－１６７６）。研究した結果、クラスター化された糖残基は同時にＡＳＧＰＲ受容体の結合部位を占めることによって、その親和性をクラスター化されていない糖残基よりはるかに高くすることができ、三糖残基の親和性は単糖残基より５０～１００倍高く、その親和性の順序は、四糖残基＞三糖残基＞＞二糖残基＞＞単糖残基である。四糖残基は、三糖残基に対して、ＡＳＧＰＲとの親和性が大きく改善されたことがない。これは、受容体への三糖残基の結合が飽和していることによる可能性がある。このような現象は「クラスター効果」（ｃｌｕｓｔｅｒ ｅｆｆｅｃｔ）と呼ばれる。

【0004】

初期の研究では、Ｍｅｒｗｉｎら（Ｍｅｒｗｉｎ Ｊ Ｒら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １９９４ ５ （６）： ６１２－６２０）は３つのガラクトサミンで修飾されたベクターシステムを設計して合成している。このシステムは、動物の体内でプラスミドＤＮＡが迅速で大量にマウス肝臓に濃縮することを媒介し、ルシフェラーゼをうまく発現することができることが証明されている。その後、研究では、ガラクトサミンをアンチセンスヌクレオチド（オリゴデオキシヌクレオシドメチルホスホネート、ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｍｅｔｈｙｌ ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ， Ｏｌｉｇｏ－ＭＰ）（Ｈａｎｇｅｌａｎｄ Ｊ Ｊら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １９９５ ６（６）：６９５－７０１）、アンチセンスペプチド核酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ａｓＰＮＡ）（Ｂｉｅｓｓｅｎ Ｅ Ａ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ２００２ １３（２）： ２９５－３０２）などの投与に適用したことがありいずれも好適な治療効果が得られた。米国のアルナイラム・ファーマシューティカルズ社（Ａｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）は、このようなＡＳＧＰＲの特性を利用した投与メカニズムにおいて画期的な進展を遂げており、アミロイド病変の治療に使用されるＡＬＮ－ＴＴＲＳＣ製品がすでに臨床第ＩＩ相である。

【0005】

本明細書は、ＡＳＧＰＲの上記特性を利用してＡＳＧＰＲの特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを構造中に含有する化合物を提供し、分岐鎖、リンカー、及び連結鎖を介して、肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを連結して、新たな化合物構造とするものである。

【0006】

甲状腺ホルモン受容体（ＴＲｓ）はＴＲ－αとＴＲ－βという２つのサブタイプに分けられている。これらは２つの遺伝子の核ホルモン受容体である（Ｌａｚａｒ Ｍ．，Ｅｎｄｏｃｒ． Ｒｅｖ． １４： ３４８－３９９）。この２つの受容体は、組織発現の存在量の違いにより、異なる生理学的効果を媒介し、つまり、この２つの受容体は異なる組織特異性を有する（Ｆｏｒｒｅｓｔ Ｄ．ら，Ｔｈｙｒｏｉｄ １０：４１－５１）。そのうち、ＴＲ－αは心拍（ＨＲ）を調節する主な受容体であり（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ Ｃ．ら，Ａｍ Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７５：Ｒ６４０－Ｒ６４６．；Ｇｌｏｓｓ Ｂ．ら， Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４２：５４４－５５１．）、ＴＲ－βは主に肝臓で発現し、ＴＲ－βアゴニスト（甲状腺ホルモンの構造に基づいて改変した新規化合物の一種であるサイロキシンアナログ化合物）は非アルコール性脂肪性肝（ＮＡＦＬＤ）を治療する新薬の重要な開発分野であり、新薬の一部はすでに臨床研究に進んでおり、例えばＴＲｓ選択的アゴニストＧＣ－１（Ｓｏｂｅｔｉｒｏｍｅ、ＴＲｓ選択的アゴニストの一種であり、非アルコール性脂肪性肝治療薬として期待されるものであり、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社によって開発された）は血漿コレステロールレベルを効率的に低下させ、マウスの心臓への作用を最小限に抑えるが、ＧＣ－１も、心臓への侵入が比較的低く現れただけであり、期待されるＴＲ－βを特異的に作動させる高選択性アゴニスト（Ｔｒｏｓｔ Ｓら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４１：３０５７－３０６４）ではなく、最終的に臨床第Ｉ相で終了した。もう一つのＴＲｓ選択的アゴニストであるＫＢ２１１５（一般名Ｅｐｒｏｔｒｏｍｅ、米国Ｋａｒｏ Ｂｉｏ社により開発された）は特異的な薬理学のため、臨床第ＩＩＩ相で終了した。臨床価値のある肝疾患治療用のＴＲ－βアゴニストについては、広い治療用量範囲を持っていなければならなく、心拍数の過速や他の組織への副作用がなく、コレステロール（ＴＣ）の低下に対して高い選択性を有し、安全で有効である。現在開発中のＴＲｓ選択的アゴニストはこれらの条件を完全に満たすことができない。

【0007】

非アルコール性脂肪性肝は、アルコールと他の明確な肝臓損傷因子以外の因子によるものであり、肥満、高コレステロール血症や糖尿病に関連する代謝性疾患であり、単純性脂肪肝及びそれから発展した脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変を含む。現在、治療介入方法は主にライフスタイルの変化に基づいたものであり、食事と運動を含む（Ｍｅ’ｎｄｅｚ－Ｓａ’ｎｃｈｅｚ Ｎ，ら Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｔ ２００７ ２７：１１５７－１１６５；Ｏｈ ＭＫら， Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２８： ５０３－５２２）。まだ、承認された治療薬がない。

【0008】

生理的甲状腺ホルモン［サイロキシン（Ｔ４）及び３，３’，５－トリヨード－Ｌ－サイロニン（Ｔ３）］は、様々な経路を介してグルコースや脂質代謝を調節し、脂質代謝について重要な生理的役割を果たしている。全身に広く分布している特定のホルモン受容体ＴＲ－αやＴＲ－βと相互作用することで影響を及ぼす。ＴＲ－βは主に肝臓で発現し、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールの低下、全身肥満と体重の減少を含む重要な影響を脂質代謝に与え（Ｐｒａｍｆａｌｋ Ｃ ら，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １８１２： ９２９－９３７）、かつ、肝臓の脂質代謝率を高めることによって脂質含有量を減らすことができる。Ｐｅｒｒａ Ａらのある研究結果から、Ｔ３が肝細胞の脂肪変性を抑制し、脂肪変性した肝細胞を修復できることが明らかにした（Ｐｅｒｒａ Ａら，ＦＡＳＥＢ Ｊ ２２： ２９８１－２９８９）。これは、非アルコール性脂肪性肝に対するＴ３の優れた潜在的治療効果を示している。

【0009】

しかし、過量の甲状腺ホルモンは副作用、特に心臓（頻脈や突然死を含む）、骨や筋肉の不良反応を引き起こしやすい（Ｂｒａｖｅｒｍａｎ ＬＥ ら，ｅｄｉｔｏｒｓ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ： Ｔｈｅ Ｔｈｙｒｏｉｄ ２０００：５１５－５１７）。甲状腺ホルモンのこれら悪影響により、非アルコール性脂肪性肝治療への更なる適用が制限されている。甲状腺ホルモンによる心臓や他の臓器への副作用を解消又は低減できれば、予測可能な治療効果が得られる。肝臓を標的とする送達によって、甲状腺ホルモン、ＧＣ－１、及びＫＢ２１１５などのサイロキシンアナログ化合物を肝臓に送達し、肝臓以外の他の組織への送達を減少したり、回避したりする。これは、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ治療用の新薬の開発における革新である。この発明は臨床的かつ現実的な経済的意義を有する。

【0010】

したがって、発明により、甲状腺ホルモンＴ３、Ｔ４及びその代謝物、又は副作用のために薬剤化できない肝疾患治療用のサイロキシンアナログ化合物を化合物の一部として、肝細胞に直接標的化した、新しい構造を有する化合物を製造し、他の組織に対する従来の医薬品の副作用を減少させた方が、研究開発の考え方を革新しただけでなく、現在、非アルコール性脂肪性肝の治療において臨床的に専用の有効な薬物がないという現状を改善した。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

本発明は、アシアロ糖タンパク質受容体の上記特性を利用して、副作用のために薬剤化できない肝疾患治療用の化合物又は候補化合物を肝臓に標的に送達し、対応する疾患を治療するものである。より具体的に、本発明は、アシアロ糖タンパク質受容体とそのリガンドとの高い親和性を利用して、治療用化合物を肝臓以外の組織細胞にほとんど又は全く送達せずに、肝細胞に特異的に送達可能な化合物を合成することで、治療用化合物の肝臓以外の組織細胞への副作用を低減することができる。

【課題を解決するための手段】

【0012】

本発明は、肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを構造中に含有する医薬品を製造する。

【0013】

前記肝臓標的化特異的リガンドは、ガラクトース及びその誘導体、好ましくは、ガラクトサミン、アセチルガラクトサミン又は三価アセチルガラクトサミンである。

【0014】

前記医薬品中の肝臓標的化特異的リガンドＸは、順次、立体障害安定化構造を含有する分岐鎖Ｌ、リンカーＢ、及び連結鎖Ｄを介して、甲状腺ホルモン受容体アゴニストＴに連結され、該医薬品の構造一般式（Ｉ）は以下に示される。

【0015】

（Ｘ－Ｌ）_ｎ－Ｂ－Ｄ－Ｔ

【0016】

（ここで、ｎは１～１５の正の整数である。）

【0017】

前記構造一般式（Ｉ）中、リンカーＢは複数回分岐しており、得られた分岐鎖は、構造一般式（Ｉ）中のｎ個の（Ｘ－Ｌ）と１つの（Ｄ－Ｔ）とを連結する。

【0018】

いくつかの好適な実施例では、ｎが１より大きい場合、各Ｘの構造は同一であってもよく、異なってもよい。

【0019】

いくつかの好適な実施例では、ｎが１より大きい場合、各Ｌの構造は同一であってもよく、異なってもよい。

【0020】

ｎ＝１である場合、構造一般式（Ｉ）は、Ｘ－Ｌ－Ｂ－Ｄ－Ｔである。

【0021】

ｎ＝２、３、４、５又は６である場合、構造一般式（Ｉ）の構造は順次下記式に示される。

【化1】

；

【化2】

；

【化3】

；

【化4】

；

【化5】

。

【0022】

前記肝臓標的化特異的リガンドは、多糖、多糖誘導体、単糖、及び単糖誘導体の構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0023】

前記単糖はマンノース、ガラクトース、Ｄ－アラビノース、グルコース、フルクトース、キシロース、グルコサミン、リボースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0024】

前記マンノースは、Ｄ－マンノピラノース、Ｌ－マンノピラノース、α－Ｄ－マンノフラノース、β－Ｄ－マンノフラノース、α－Ｄ－マンノピラノース、β－Ｄ－マンノピラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0025】

前記ガラクトースは、Ｌ－ガラクトース、Ｄ－ガラクトース、α－Ｄ－ガラクトピラノース、β－Ｄ－ガラクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトフラノース、β－Ｄ－ガラクトフラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0026】

前記グルコースは、Ｄ－グルコース、Ｌ－グルコース、α－Ｄ－グルコピラノース、β－Ｄ－グルコピラノース、α－Ｄ－グルコフラノース、β－Ｄ－グルコフラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0027】

前記フルクトースは、α－Ｄ－フルクトフラノース、α－Ｄ－フルクトピラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0028】

前記キシロースは、Ｄ－キシロフラノース、Ｌ－キシロフラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0029】

前記リボースは、リボース、Ｄ－リボース、Ｌ－リボースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0030】

前記単糖誘導体は、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、グルコース誘導体、リボース誘導体及び他の誘導体の構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0031】

前記マンノース誘導体は、４，６－ジデオキシ－４－ホルミルアミノ－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノースである。

【0032】

前記ガラクトース誘導体は、α－Ｄ－ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0033】

前記グルコース誘導体は、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノース、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、２－デオキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－１－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシドの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0034】

前記リボース誘導体は、Ｄ－４－チオリボース、Ｌ－４－チオリボースの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0035】

前記他の誘導体は、２，５－アンヒドロ－Ｄ－アロースニトリル、シアル酸、Ｎ－グリコリル－α－ノイラミン酸、エチル３，４，６，７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコヘプトピラノシドの構造から選ばれる１種又は複数種である。

【0036】

前記肝臓標的化特異的リガンドの一般的な構造式（ＩＩ）は以下に示される。

【化6】

（ここで、Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_３は水素又はヒドロキシ保護基である。）

【0037】

前記ヒドロキシ保護基は、アシル基、及びシラニル基の構造から選ばれる。

【0038】

好ましくは、前記ヒドロキシ保護基は、アセチル基、ベンゾイル基、フェノキシ－アセチル基、ピバロイル基、イソブチリル基、ｔ－ブチルジメチルシラニル基、ｔ－ブチルジフェニルシリル基、トリイソプロピルシリル基、及びイソプロピルジメチルシリル基の構造から選ばれる。

【0039】

いくつかの好適な実施例では、前記肝臓標的化特異的リガンドは、以下の構造から選ばれる１種又は複数種である。

【化7】

（ここで、Ｒ１は、ＯＨ、及びＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_３から選ばれる１種又は２種類である。）

【0040】

いくつかの好適な実施例では、肝臓標的化特異的リガンドはアセチルガラクトサミンである。

【0041】

前記分岐鎖Ｌは、下記構造から選ばれる１種又は複数種である。

【化8】

（式中、ｎ１は１～１０の正の整数であり、ｍは１～５の正の整数であり、ｎ２は０～２０の整数であり、ｎ３は０～１２の正の整数であり、ＺはＨ又はＣＨ_３であり、立体障害安定化構造を含有する分岐鎖Ｌの左側末端は肝臓標的化特異的リガンドＸに連結され、右側末端はリンカーＢの左側末端部分に連結される。）

【0042】

前記リンカーＢは、以下の構造式から選ばれる。

【化9】

（ここで、Ａ_１はＣ、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、ｒ１は１～１５の正の整数であり、Ａ_２は、Ｃ１～Ｃ１０直鎖アルカン、アミノ基、アミド基、ホスホリル根、チオホスホリル基、酸素原子、硫黄原子又は環状化合物を有する断片から選ばれ、ｒ２は０～１５の整数である。）

【0043】

前記リンカーＢは、以下の構造式から選ばれる。

【化10】

【化11】

【化12】

【化13】

【化14】

（ここで、ｒ１、ｒ３、ｒ４、ｒ５は１～１５の正の整数であり、ｒ６は１～２０の正の整数であり、ｒ７は２～６の正の整数であり、ｒ８は１～３の正の整数である。）

【0044】

前記リンカーＢは、以下の構造から選ばれる。

【化15】

【化16】

前記連結鎖Ｄは、Ｃ５～Ｃ２０を含有し、アミノ基、カルボニル基、アミド基、酸素原子、硫黄原子、チオホスホリル基、ホスホリル基、環状構造又はこれらの基の組み合わせを含有することができ、連結鎖Ｄの右側末端は甲状腺ホルモン受容体アゴニストＴの対応する部位に連結される。

【0045】

前記連結鎖Ｄは、下記構造から選ばれてもよい。

【化17】

（ここで、ｎは、それぞれ、１～２０の正の整数であり、且つｎは、それぞれ、同一又は異なる正の整数である。）

【0046】

前記連結鎖Ｄは、以下の構造から選ばれる１種である。

【化18】

【化19】

前記連結鎖Ｄは、ピロリジン又はアミドを含まない。

【0047】

前記連結鎖Ｄは、ピロリジン、ＰＥＧ、アミド、アミン、ジスルフィド結合及び少なくとも２つのアミドの構造式のうちの１種を含む。

【0048】

前記連結鎖Ｄは、以下の構造から選ばれる１種である。

【化20】

【化21】

【化22】

【化23】

（ここで、ｎは、それぞれ、１～２０の正の整数であり、ｎは、それぞれ、同一又は異なる正の整数であり、ｐは１～６の正の整数であり、ｓは２～１３の正の整数であり、Ｒ_１及びＲ_２は、同一又は異なる置換基であり、その構造式は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ－（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_５、－Ｃ_８ＮＨ_６、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－ＣＨ_２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２－ＣＯＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_２－ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_２－ＣＯＮＨ_２、－（ＣＨ_２）－Ｓ－ＣＨ_３、－ＣＨ_２－ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ_３）－ＯＨ、－ＣＨ_２－ＳＨ、－ＣＨ_２－Ｃ_３Ｈ_３Ｎ_２、－（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２のうちの１種であってもよい。）

【0049】

前記連結鎖Ｄは、以下の構造から選ばれる１種である。

【化24】

【化25】

前記医薬品の一般式構造中、（Ｘ－Ｌ）_ｎ－Ｂ基は、以下の構造から選ばれる１種であり、且つ（Ｘ－Ｌ）_ｎ－Ｂの右側末端は連結鎖Ｄの左側末端に連結される。

【化26】

【化27】

【化28】

【化29】

【化30】

前記甲状腺ホルモン受容体アゴニストは、以下の構造一般式を有する。

【化31】

（ここで、Ａは、酸素、硫黄、カルボニル基、メチレン基、又はアミノ基であり、Ｒ１はＣ１～Ｃ４直鎖又は分岐アルキル基、－ＣＨ_２（含窒素複素環）、－ＣＨ（ＯＨ）（ハロゲン化ベンゼン又は芳香族炭化水素）、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、ハロゲン原子又は水素であり、Ｒ_２はハロゲン原子、－ＣＨ_３又は水素であり、Ｒ_３はハロゲン原子、ＣＨ_３又は水素であり、Ｒ_４は－ＣＨ_２ＣＨ（ＮＨ）ＣＯＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＯＣＨ_２ＰＯ_３ ^２－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＯＯＨ、ＯＨ、ハロゲン原子又はＣ１～Ｃ４アルキル基である。）

【0050】

前記甲状腺ホルモン受容体アゴニストは、サイロキシン（Ｔ４）又はトリヨードサイロニン（Ｔ３）又はその代謝物であり、甲状腺ホルモン受容体アゴニスト構造は下図に示される構造のうちの１種である。

【化32】

前記甲状腺ホルモン受容体アゴニストは下記特徴的構造のうちの１種である。

【化33】

（ここで、Ｒ６はＣ１～Ｃ４直鎖又は分岐アルキル基又は水素であり、Ｒ５はＣ１～Ｃ８アルキル基であり、Ｒ７はハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ４アルキル基であり、Ｒ８はＣ１～Ｃ４直鎖又は分岐アルキル基又は水素であり、Ｒ９は－ＣＨ_２ＣＨ（ＮＨ）ＣＯＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＯＯＨ、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＯＣ_Ｈ２ＰＯ_３ ^２－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＯＯＨ、ＯＨ、ハロゲン原子又はＣ１～Ｃ４アルキル基である。）

【0051】

前記甲状腺ホルモン受容体アゴニストの構造は以下に示される。

【化34】

（ここで、Ｘは酸素、硫黄、カルボニル基、メチレン基、又はアミノ基であり、ＹはＣ１～Ｃ５アルキル炭素鎖及びＣ＝Ｃのうちの１種であり、Ｒ_１はハロゲン原子、トリフルオロメチル基、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基、Ｃ３～Ｃ７のシクロアルキル基であり、Ｒ_２及びＲ_３は水素、ハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基又はＣ３～Ｃ７のシクロアルキル基のうちの１種又は２種類であり、Ｒ_２及びＲ_３のうち、一方は必ず水素原子であり、Ｒ_４は水素又はＣ１～Ｃ４のアルキル基であり、Ｒ_５は水素又はＣ１～Ｃ４のアルキル基であり、Ｒ_６はカルボン酸又はエステル結合であり、Ｒ_７は水素、アシル基又はアロイル基である。）

【0052】

具体的には、前記甲状腺ホルモン受容体アゴニストの構造は下記構造のうちの１種である。

【化35】

【化36】

【化37】

【化38】

。

【0053】

前記医薬品の一般式構造（Ｘ－Ｌ）_ｎ－Ｂ－Ｄ－Ｔは、Ｋｙｌｏ－０１０１～Ｋｙｌｏ－０１０４に示される構造のうちの１種である。

【化39】

【化40】

【化41】

【化42】

甲状腺ホルモン受容体に作用して肝疾患を治療する医薬品の製造における、前記医薬品の適用。

【0054】

前記甲状腺ホルモン受容体はアシアロ糖タンパク質受容体であり、前記肝疾患は非アルコール性脂肪性肝及び非アルコール性脂肪性肝炎である。

【発明の効果】

【0055】

従来技術に比べて、本発明の有益な効果は次の通りである。

【0056】

（１）本発明は、肝細胞内の甲状腺ホルモン受容体を特異的に標的化・活性化することにより、脂質代謝障害及び関連合併症を治療し、非アルコール脂肪肝臓、非アルコール脂肪肝臓炎及び肝臓線維症を逆転させる。

【0057】

（２）本明細書は、分岐鎖、リンカー、及び連結鎖を介して、肝臓標的化特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを連結して、新たな化合物構造とする、肝臓標的化アシアロ糖タンパク質受容体の特異的リガンドと甲状腺ホルモン受容体アゴニストとを構造中に含有する医薬品を提供する。

【0058】

（３）甲状腺ホルモン受容体（ＴＲｓ）は、ＴＲ－αとＴＲ－βという２つのサブタイプに分けられ、ＴＲ－βは主に肝臓、ＴＲ－αは主に心臓や神経系などで発現しており、本発明による医薬品は、肝臓を標的とする作用を有し、甲状腺ホルモン受容体アゴニストを肝臓に特異的に送達し、心臓や他の組織への侵入を回避し、ＴＲ－αに対する甲状腺ホルモン受容体アゴニストの作用に起因する副作用を回避しながら、脂質代謝障害及び関連合併症に対する治療効果を保持することができる。

【0059】

（４）含有する立体障害安定化構造である分岐鎖Ｌは、新薬において立体障害安定化剤として機能し、立体障害安定化構造を含まない医薬品に比べて、分岐鎖Ｌは結合した医薬品の分子間又は分子内の相互作用を阻止又は抑制することができ、結合した医薬品の静電相互作用への関与も阻止できる。前記静電相互作用は、正電荷と負電荷との間の引力による２つ以上の物質間の非共有結合である。本発明の医薬品では、分岐鎖Ｌは、医薬品と血液成分との相互作用、例えばファージ作用を阻害し、結合する分子のサイクル時間を延ばすことができる。

【図面の簡単な説明】

【0060】

本発明の目的、技術案及び有益な効果をより明確にするために、本発明は以下のような図面を提供して説明する。

【図1】Ｋｙｌｏ－０１０１の高分解能質量分析スペクトルである。

【図2】Ｋｙｌｏ－０１０２の高分解能質量分析スペクトルである。

【図3】Ｋｙｌｏ－０１０３の高分解能質量分析スペクトルである。

【図4】実施例４におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中の総コレステロール（ＴＣ）含有量の検出結果である。

【図5】実施例４におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）含有量の検出結果である。

【図6】実施例４におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のトリグリセリド（ＴＧ）含有量の検出結果である。

【図7】実施例４におけるｄｂ／ｄｂマウス骨密度（ＢＭＤ）の検出結果である。

【図8】実施例４におけるｄｂ／ｄｂマウス体重、脂肪含有量、及び筋肉含有量に対する実験医薬品の影響である。

【図9】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のＴＣレベルに対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図10】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のＬＤＬレベルに対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図11】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のＴＧレベルに対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図12】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウス体重に対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図13】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの体内脂肪及び筋肉の含有量に対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図14】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウス骨密度に対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図15】実施例５におけるｄｂ／ｄｂ肝臓の重量に対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図16】実施例５におけるオイルレッド及びＨＥ染色肝臓切片の組織病理学写真である。

【図17】実施例５における肝臓病理学的検査染色の平均定量結果である。

【図18】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のｆＴ３濃度に対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【図19】実施例５におけるｄｂ／ｄｂマウスの血清中のＴＳＨに対する各用量のＫｙｌｏ－０１０１の影響である。

【発明を実施するための形態】

【0061】

以下の実施例は、本発明で開示されるいくつかの実施形態を説明するが、これらに限定されるものではない。また、発明者は、具体的な実施形態を提供する際に、それらの具体的な実施形態の適用を予測した。例えば、特定の同種又は類似の化学構造を有する化合物は、異なる肝疾患の治療に用いられる。

【0062】

説明：
ｐｉｐ：ピペリジン；
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；
Ｄｄｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ：Ｎ－１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル－Ｎ’－フルオレニルメトキシカルボニル－Ｌ－リジン；
ＨＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；
ＤＩＰＥＡ（ＤＩＥＡ）：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン；
Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ：フルオレニルメトキシカルボニル－Ｌ－グルタミン酸－１－ｔ－ブチルエステル；
ＴＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート；
ＡＣＮ：アセトニトリル；
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル；

【化43】

：固相担体、たとえば樹脂（Ｒｅｓｉｎ）；
本出願に係る２種類の物質の比とは、特に明記していない場合、いずれも体積比をいう。

【0063】

本出願に係る含有量とは、特に明記していない場合、いずれも体積パーセント濃度をいう。

【0064】

実施例１：医薬品１（Ｋｙｌｏ－０１０１）の製造
（１）化合物１－１から下記に示される化学反応によって化合物１－２を生成した。

【化44】

【0065】

化合物１－１（０．３１ｇ，０．１ｍｍｏｌ）を秤量して合成管に注入し、ｐｉｐ／ＤＭＦ（２ｍｌ／８ｍｌ）を加えて、窒素バブリングを３０～４０ｍｉｎ行った後、真空で取り除き、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて化合物１－２を３回洗浄し、ｐｉｐ及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0066】

（２）化合物１－２から下記に示される化学反応によって化合物１－３を生成した。

【化45】

Ｄｄｅ－Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨ（０．１６ｇ，０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．１１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を秤量して合成管に加えて、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えて以上の固体を溶解した後、ＤＩＰＥＡ（５５μＬ）を加えて窒素バブリングを３０～６０ｍｉｎ行い、反応液を除去した後、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて残りの固体化合物１－３を３回洗浄し、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0067】

（３）化合物１－３から下記に示される化学反応によって化合物１－４を生成した。

【化46】

【0068】

化合物１－３を容れた合成管にｐｉｐ／ＤＭＦ（２ｍｌ／８ｍｌ）を加えて、窒素バブリングを２０～３０ｍｉｎ行った後、反応液及び反応により生成された不純物を真空吸引し、次に、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて残りの固体化合物１－４を２回洗浄し、ｐｉｐ及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0069】

（４）化合物１－４から下記に示される化学反応によって化合物１－５を生成した。

【化47】

Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（０．１３ｇ，０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．１１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を秤量して化合物１－４（０．１ｍｍｏｌ）に加えて、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えて以上の固体を溶解した後、ＤＩＰＥＡ（５５μＬ）を加えて窒素バブリングを１５～３０ｍｉｎ行い、反応液を除去した後、毎回ＤＭＦ１０ｍｌを用いて残りの固体化合物１－５を３回洗浄し、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0070】

（５）化合物１－５から下記に示される化学反応によって化合物１－６を生成した。

【化48】

【0071】

化合物１－５（０．１ｍｍｏｌ）にｐｉｐ／ＤＭＦ（２ｍｌ／８ｍｌ）を加えて、窒素バブリングを１５～３０ｍｉｎ行った後、反応液及び反応により生成された不純物を真空除去し、次に、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて、残りの化合物１－６を６回洗浄し、ｐｉｐ、及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0072】

（６）トリヨードサイロニンから下記に示される化学反応によって化合物１－７を生成した。

【化49】

【0073】

トリヨードサイロニン０．５ｇを秤量して、ナスフラスコに投入し、ジオキサン４ｍｌ、精製水１ｍｌ、トリエチルアミン０．３ｍｌ、Ｂｏｃ－酸無水物２３２ｍｇを加え、室温、遮光下、撹拌しながら２ｈ反応させ、水４ｍｌ、ジクロロメタン１０ｍｌを加え、塩酸を滴下してｐＨ値を４に調整し、静置して成層し、水層にジクロロメタン１０ｍｌを加えて再度１回抽出し、有機層を併合し、無水硫酸ナトリウム５ｇを加えて乾燥させ、ろ過してろ液をロータリーエバポレータで乾固まで濃縮させ、濃縮物に石油エーテル２０ｍｌを加えてビーティングし、ろ過してろ過ケーキを石油エーテル４０ｍｌで洗浄し、ろ過ケーキを減圧下で吸引乾燥し、化合物１－７（白色固体）６３０ｍｇを得た。

【0074】

（７）化合物１－６から下記に示される化学反応によって化合物１－８を生成した。

【化50】

【0075】

化合物１－７（０．２３ｇ，０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．１１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を秤量して化合物１－６ ０．１ｍｍｏｌを含有する合成管に加え、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えて以上の固体を溶解した後、ＤＩＰＥＡ （５５μＬ）を加えて、窒素バブリングを１０～２０ｍｉｎ行い、反応液を除去した後、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて、残りの化合物１－８を３回洗浄し、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、及び反応にて生じた活性エステルを除去した。

【0076】

（８）化合物１－８から下記に示される化学反応によって化合物１－９を生成した。

【化51】

【0077】

化合物１－８（０．１ｍｍｏｌ）にヒドラジン水和物／ＤＭＦ（０．２ｍｌ／９．８ｍｌ）溶液を加え、窒素バブリングを１０ｍｉｎ行った後、ヒドラジン水和物のＤＭＦ溶液を真空除去し、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて、化合物１－９を６回洗浄し、ヒドラジン水和物及び反応にて生じた不純物を除去した。

【0078】

（９）化合物１－１０の製造：
ステップ１：

【化52】

１，５－グルタル酸モノベンジル０．２１ｇを秤量して、ＤＭＦ ２ｍｌで溶解し、次に、ＴＢＴＵ ０．３６ｇ及びＤＩＥＡ ０．４ｍｌを加え、撹拌しながら５分間反応させ、化合物ａ １．０９ｇをＤＭＦ １０ｍｌに溶解して、上記反応液に緩やかに加え、室温で撹拌しながら一晩反応させ、反応液を減圧下で乾固まで蒸発させた後、ジクロロメタン４０ｍｌ、水２０ｍｌを加えて、１５分間撹拌し、成層して、有機層を無水硫酸ナトリウム１０ｇで乾燥させ、乾燥後の有機層をクロマトグラフィーカラム（溶離剤：ジクロロメタン：メタノール＝１％～１０％）に通し、薄層クロマトグラフィー（展開剤には、体積比で１０：１のジクロロメタンとメタノールが含まれる）によって、収集すべき目標物質の化合物ｂを同定し、純品化合物ｂを含有する溶離剤を収集し、溶媒を減圧下で乾固まで蒸発させ、白色製品の化合物ｂ ０．８５ｇを得た。

【0079】

ステップ２：

【化53】

１００ｍｌの一つ口フラスコに化合物ｂ ０．８５ｇを投入して、パラジウム炭素１２７ｍｇを加え、水ポンプで真空吸引し、水素ガスを補充して、３回繰り返し、水素ガスを加圧して一晩反応させ、翌日、反応液のＴＬＣ薄層クロマトグラフィーにおいて化合物ｂの点が見られなかった。ろ過し（１２ｇ珪藻土でろ過促進）、ろ液を減圧下で乾固まで蒸発させ、化合物１－１０を重量で９０．７６ｇ得た。

【0080】

（１０）化合物１－９及び化合物１－１０から下記に示される化学反応によって化合物１－１１を生成した。

【化54】

【0081】

化合物１－１０（０．５７ ｇ，０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．１１４ｇ，０．３ｍｍｏｌ）を秤量して、化合物１－９（０．１ｍｍｏｌ）を容れた合成管に投入し、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えて以上の固体を溶解した後、ＤＩＰＥＡ（５５μＬ）を加えた後、窒素バブリングを１０～２０ｍｉｎ行い、反応液を除去した後、毎回ＤＭＦ １０ｍｌを用いて、残りの化合物１－１１を洗浄した。

【0082】

（１１）化合物１－１１から下記に示される化学反応によって化合物１－１２を生成した。

【化55】

【0083】

Ｆ溶液（６ｍｌ、トリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：水＝９０：３．５：５．５）を、化合物１－１１（０．３ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を容れた遠心分離管に緩やかに注入し、温度３０～３５℃、回転数２００ｒ／ｍｉｎに制御して、１時間切断した後取り出し、固体をろ過除去し、ろ液（５ｍｌ）をＭＴＢＥ（２０ｍｌ）に緩やかに注入し、懸濁液を遠心分離機で遠心分離し、回転数を３０００ｒ／ｍｉｎに設定して、固体をＭＴＢＥ（２０ｍｌ）で分散させた後、再度遠心分離し、固体を収集して１時間真空吸引し、白色粉末４６ｍｇを得て、化合物１－１１換算で収率は３４％であった。

【0084】

得られた白色粉末をＡＣＮ／水２ｍｌ（０．２ｍｌ／１．８ｍｌ）で溶解してローディングした後、フィラーとして商品名ＧＥ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ（５０ｍｌ）を用い、移動相を水とアセトニトリルの混合物（アセトニトリル含有量１０％～９０％）として、勾配溶離を行い、全部の製品を収集して、凍結乾燥させ、純品化合物１－１２を１２ｍｇ得た。

【0085】

（１２）化合物１－１２から下記に示される化学反応によって医薬品１（Ｋｙｌｏ－０１０１）を生成した。

【化56】

凍結乾燥後の化合物１－１２（１２ｍｇ、０．００４３ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド／メタノール（２０ｍｇ／ｍｌ）溶液に加えて、シェーカー温度３０～３５℃、回転数２００ｒ／ｍｉｎに設定して、２０ｍｉｎ振とうさせ、反応液に１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ（５～７滴）を加えてｐＨを７に調整し、回転蒸発により溶媒を蒸発させ、水浴温度４０～４５℃で、残留物にＡＣＮ／水２ｍｌ（０．２ｍｌ／１．８ｍｌ）を加えて溶解した後、ローディングし、フィラーとして商品名ＧＥ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ（１０ｍｌ）を用い、移動相を水とアセトニトリルの混合物（アセトニトリル含有量１０％～９０％）として精製し、溶離して全部の製品を収集し、凍結乾燥させた後、純品医薬品１（Ｋｙｌｏ－０１０１）７ｍｇを収率６７．３％で得て、図１に示すように、Ｋｙｌｏ－０１０１の質量分析検出の結果、質量対電荷比が２である場合、目標ピークは１２３２．３５１０８（２＋）であった。

【0086】

実施例２：医薬品２（Ｋｙｌｏ－０１０２）の製造
化合物２～１から下記に示される化学反応によって医薬品２（Ｋｙｌｏ－０１０２）を生成した。

【化57】

【0087】

化合物２～１（２０ｍｇ、０．００７８ｍｍｏｌ）にナトリウムメトキシド／メタノール（２０ｍｇ／５ｍｌ）溶液を加えて、シェーカー温度３０－３５℃、回転数２００ｒ／ｍｉｎに設定して、３０ｍｉｎ振とうさせ、反応液に１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ（５～７滴）を加えてｐＨを７に調整し、回転蒸発により溶媒を蒸発させ、水浴温度４０～４５℃で、残留物にＡＣＮ／水（０．２ｍｌ／１．８ｍｌ）を加えて溶解した後、ローディングし、フィラーとして商品名ＧＥ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ（１０ｍｌ）を用い、移動相を水とアセトニトリルの混合物（アセトニトリル含有量１０％～９０％）として精製し、溶離して全部の製品を収集し、凍結乾燥させて純品医薬品２（Ｋｙｌｏ－０１０２）１２ｍｇを収率７１．１％で得て、図２に示すように、Ｋｙｌｏ－０１０２の質量分析検出の結果、質量対電荷比が１である場合、目標産物は２２０１．５５６１３（１＋）であり、質量対電荷比が２である場合、目標産物は１１１１．７５９６２（２＋）であった。

【0088】

実施例３：医薬品３（Ｋｙｌｏ－０１０３）の製造方法
化合物３－１から下記に示される化学反応によって医薬品３（Ｋｙｌｏ－０１０３）を生成した。

【化58】

【0089】

化合物３－１（２０ｍｇ、０．００７６ｍｍｏｌ）にナトリウムメトキシド／メタノール（２０ｍｇ／５ｍｌ）溶液を加えて、シェーカー温度３０～３５℃、回転数２００ｒ／ｍｉｎに設定して、３０ｍｉｎ振とうさせ、反応液に１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ（５～７滴）を加えてｐＨを７に調整し、回転蒸発により溶媒を蒸発させ、水浴温度４０～４５℃で、残留物にＡＣＮ／水（０．２ｍｌ／１．８ｍｌ）を加えて溶解した後、ローディングし、フィラーとして商品名ＧＥ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ（１０ｍｌ）を用い、移動相を水とアセトニトリルの混合物（アセトニトリル含有量１０％～９０％）として精製し、溶離して全部の製品を収集し、凍結乾燥させて純品医薬品３（Ｋｙｌｏ－０１０３）１２．５ｍｇを収率７２．７％で得て、図３に示すように、Ｋｙｌｏ－０１０３の質量分析検出の結果、質量対電荷比が１である場合、目標産物は２２８３．６９９７５（１＋）であった。

【0090】

実施例４ 動物実験１
材料：６週齢、雄性、ＳＰＦグレード、南京大学－南京生物医薬研究院より提供、生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１５－０００１、動物合格証番号ＮＯ．２０１８２０４６９、使用ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－００２７の遺伝的肥満モデルマウス（ｄｂ／ｄｂマウス）３０匹を投与群として選択する。実験前にマウスを環境に適応させる必要があり、健全マウスを試験動物とした。ＩＶＣケージにおいて５匹／ケージの密度で飼育し、１週あたりマットを２回交換した。実験動物室への要求：室温２２～２４℃、相対湿度４０～７０％、自動照明、１２ｈ明暗交替（０８時００分点灯、２０時００分消灯）、実験動物室標準は中華人民共和国国家標準ＧＢ１４９２５－２０１０に合致する。

【0091】

実験医薬品：表１を参照。

【表1】

備考：Ｋｙｌｏ－０１００はＴ３であり、陽性対照薬として使用され、実験医薬品は生理食塩水で溶解した。

【0092】

キシラジンとケタミンの混合麻酔剤の調製：混合液中のキシラジン及びケタミンの濃度はそれぞれ１０ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌであった。

【0093】

群分け及び投与プロトコルを表２に示す。

【0094】

【表2】

【0095】

１週あたり体重を２回秤量し、２１日間連続して投与し、最後の投与終了後、一晩１５～１６時間断食させ、マウスをＣＯ_２で麻酔して殺し、心臓穿刺で血液を採取し、室温で２時間静置し、低温遠心分離機３０００ＲＰＭで１０分間遠心分離し、血清を収集して－８０℃の冷蔵庫で保存して使用に備えた。血液生化学装置を用いて血清中の総コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、トリグリセリド（ＴＧ）の含有量を測定した。

【0096】

投与介入１８日目に、マウスに麻酔剤（キシラジンとケタミン、１０ｍｌ／Ｋｇ、ＩＰ）を腹腔内注射し、骨密度計でマウスの骨密度と体脂肪率を検出した。

【0097】

図４の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１００～Ｋｙｌｏ－０１０３群のマウスの血清ＴＣレベルは生理食塩水対照群より有意に低く、低下率はそれぞれ３４．６８％、５２．２５％、３７．６１％、及び４４．３７％に達した。

【0098】

図５の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１００～Ｋｙｌｏ－０１０３群のマウスの血清ＬＤＬレベルは生理食塩水対照群より有意に低く、低下率は４０．６８％、５４．２４％、２２．０３％、及び１５．２５％に達した。

【0099】

図６の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１００～Ｋｙｌｏ－０１０３群のマウスの血清ＴＧレベルは生理食塩水対照群より有意に低く、低下率はそれぞれ４２．５５％、６２．４２％、４４．８８％、及び４３．９４％に達した。

【0100】

図７の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１００群のマウスの骨密度（ＢＭＤ）は生理食塩水対照群のマウスの骨密度より有意に低く、このうち、Ｋｙｌｏ－０１０１投与群のマウスの骨密度は生理食塩水対照群と比較して、ほとんど変化しなかった。

【0101】

図８の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１００は、マウスの体重に顕著な影響を与えており、そのうち、Ｋｙｌｏ－０１０１はマウスの体重に顕著な影響を与えておらず、Ｋｙｌｏ－０１０１は主に肝臓に作用し、マウス全体に悪影響を与えていないことを示している。

【0102】

実施例５ 動物実験２
動物及び飼育：南京大学－南京生物医薬研究院より提供、生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１５－０００１、動物合格証番号ＮＯ．２０１８２６８９７、使用ライセンス番号：ＳＣＸＫ（蘇）２０１８－００２７の雄性、６週齢の遺伝的肥満マウスモデル（ｄｂ／ｄｂマウス）３６匹と同腹の野生型マウス５匹を投与群として選択する。

【0103】

実験前にマウスを環境に適応させる必要があり、健全マウスを試験動物として選択した。ＩＶＣケージにおいて５匹／ケージの密度で飼育し、１週あたりマットを２回交換した。実験動物室への要求：室温２２～２４℃、相対湿度４０～７０％、自動照明、１２ｈ明暗交替（０８時００分点灯、２０時００分消灯）、実験動物室標準は中華人民共和国国家標準ＧＢ１４９２５－２０１０に合致する。

【0104】

実験医薬品を表３に示す。

【表3】

【0105】

キシラジンとケタミンの混合麻酔剤の調製：混合液中のキシラジン及びケタミンの濃度はそれぞれ１０ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌであった。

【0106】

群分けと投与プロトコルを表４に示す。

【0107】

【表4】

備考：投与した医薬品は生理食塩水で溶解した。

【0108】

実験設計：実験開始前に、体重を計量し、体重によってランダムに群分けした。毎週の月曜日と木曜日にマウスの体重を量った。投与介入１８日目に、マウスに麻酔剤（キシラジンとケタミン、１０ｍｌ／ｋｇ、ＩＰ）を腹腔内注射して麻酔を行い、マウスの骨密度と体脂肪率を検出した。２１日間連続して投与し、最後の投与終了後、一晩１５～１６時間断食させた。マウスをＣＯ_２で麻酔して殺し、心臓穿刺で全血を採取し、２時間静置して血清を収集した。血清を３つに分け、１つは１００μｌとし、血清中の血糖、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ－Ｃ）、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、ホスホエステラーゼ（ＡＰ）レベルを検出することに用い、残りの２つは等分して、それぞれ、トリヨードサイロニン（Ｔ３結合と遊離）、サイロキシン（Ｔ４結合と遊離）、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）含有量の測定に用いた。肝臓の重量、心臓の重量を量り、肝臓を３つに分け、１つを液体窒素で凍結保存し、１つを１０％中性ホルムアルデヒドで固定化し、１つをＯＣＴ（ポリエチレングリコールとポリビニルアルコールの水溶性混合物）で凍結包埋した。

【0109】

組織分析及び病理学的検査：肝臓組織をイソプロピルアルコールで質量体積比１：９となるようにホモジネート処理し、一晩静置した後、遠心分離して上清を取り、血液生化学的検査で上清中のＴＣとＴＧの含有量を検出した。１０％中性ホルムアルデヒドに浸漬した肝臓組織について通常パラフィン包埋、切片（３μｍ）及びヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色をした後、脱水してブロックし、肝臓病変の状況を観察し、全切片を走査して写真を撮影し、ＯＣＴに浸漬した肝臓組織について凍結切片（５μｍ）、オイルレット染色、ヘマトキシリンで核を染色し、脱水してブロックした後、肝臓組織の脂質沈着の状況を観察し、写真を撮影した。投与群とモデル対照群の肝臓での脂肪蓄積の状況を比較した。

【0110】

統計分析：定量指標は平均±平均標準誤差（Ｍｅａｎ±ｓｅｍ）を用い、Ｔ検定（ＴＴｅｓｔ２．３）を用いてモデル対照群と残りの群に対して群間差異比較を行い、すべての統計分析はＥｘｃｅｌシートで行われた。

【0111】

図９の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量群におけるマウスの血清中のＴＣレベルは低下し、しかも明らかな用量効果関係を呈し、３０μｇ／ｋｇ用量では、血清ＴＣレベルは４８％低下した。

【0112】

図１０の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量群におけるマウスの血清中のＬＤＬレベルは低下し、しかも明らかな用量効果関係を呈し、３０μｇ／ｋｇ用量では、血清ＬＤＬレベルは５８％低下した。

【0113】

図１１の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量群におけるマウスの血清中のＴＧレベルは低下し、しかも明らかな用量効果関係を呈し、３０μｇ／ｋｇ用量では、血清ＴＧレベルは４１．８％低下した。

【0114】

図１２の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量群のマウスの体重減少を示しているが、顕著ではなかった。

【0115】

図１３の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量は、体内の脂肪と筋肉の含有量を明らかに低下させていなかった。

【0116】

図１４の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量群のマウスの骨密度はモデル対照群と比較してほとんど変化していなかった。

【0117】

図１５の実験データから明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１用量の増加と肝臓重量の低下は顕著な用量効果関係を示している。

【0118】

オイルレット染色は主に細胞内の脂肪滴の特異性染色であり、染色した脂肪滴は図１６中の濃い色の斑点に示す通りであり、オイルレット染色による病理組織学的検査の結果、モデル対照群と比べて、Ｋｙｌｏ－０１０１の４つの用量群の脂肪滴陽性染色の程度は明らかに弱まり、脂肪滴の数は明らかに減少し、そして顕著な用量効果反応を呈した。肝臓小葉の中心性脂肪変性は肝細胞内にさまざまなサイズの脂肪空胞を形成し、その中でも小空胞が主であり、ＨＥ染色をした結果、図１６に示すような淡色の斑点が形成された。図１６において、ＨＥ染色切片の病理組織学的検査の結果、Ｋｙｌｏ－０１０１の４つの用量群の肝細胞の脂肪変性の程度はモデル対照群より明らかに低く、肝臓切片には、脂肪変性による肝細胞空胞が明らかに減少し、顕著な用量効果反応を呈した。

【0119】

図１７における肝臓病理学的検査染色の平均定量化の結果、ＨＥ染色とオイルレット染色では、一致性が高く、Ｋｙｌｏ－０１０１の用量が３０μｇ／ｋｇである場合、肝臓の脂肪含有量はほぼ正常（野生型）マウスの肝臓の脂肪含有量に近くなるまで低下した。一般に、正常の平均定量化値が１未満であれば、正常と考えられる。

【0120】

図１８の検出結果から明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量では、マウスの血清中のｆＴ３濃度はわずかに増加したが、有意差はなかった。

【0121】

図１９の検出結果から明らかなように、Ｋｙｌｏ－０１０１の各用量では、マウスの血清中のＴＳＨ濃度に影響を与えなかった。

【0122】

実施例６ 医薬品とＡＳＧＰＲとの結合率、心拍数及び骨密度に対する、肝臓標的化特異的リガンドＸの影響

【表5】

備考：数字６～１は、この組み合わせによって形成された医薬品とアシアロ糖タンパク質受容体ＡＳＧＰＲとの結合率の降順、心臓毒性及び骨密度への影響の降順を示している。

【0123】

表５において、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１、Ｋｙｌｏ－０１０５～Ｋｙｌｏ－０１０７は、Ｘ構造だけが異なり、表中の実験データから明らかなように、Ｌ、Ｂ、Ｄ、Ｔの構造が同じ場合、Ｘの構造を変えることにより医薬品とＡＳＧＰＲとの結合率、心拍数、及び骨密度に影響を与え、この中でも、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１は、効果が最も高く、ＡＳＧＰＲの結合率が高い一方、心拍数、骨密度への影響が最低であった。これにより、本発明で製造される組成物において、肝臓標的化特異的リガンドＸは、ＡＳＧＰＲと結合することに使用されているが、医薬品全体の治療効果にも一定の影響を与えることを示している。

【0124】

実施例７ 医薬品安定性に対する、立体障害安定化構造を含む分岐鎖Ｌの影響

【表6】

表６において、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１、Ｋｙｌｏ－０１０８～Ｋｙｌｏ－０１１０、Ｋｙｌｏ－０１１５は、Ｌ構造だけが異なり、表中の実験データから明らかなように、Ｘ、Ｂ、Ｄ、Ｔ構造が同じ場合、Ｌの構造を変えることにより医薬品の安定性に影響を与え、Ｋｙｌｏ－０１０１、Ｋｙｌｏ－０１１０及びＫｙｌｏ－０１１５医薬品のＬ構造を選択した場合、安定性の高い医薬品が得られた。

【0125】

実施例８ 医薬品とＡＳＧＰＲとの結合率、心拍数、及び骨密度に対するリンカーＢの影響

【表7A】

【表7B】

備考：数字６～１は、この組み合わせによって形成された医薬品とアシアロ糖タンパク質受容体ＡＳＧＰＲとの結合率の降順、心臓毒性及び骨密度への影響の降順を示している。

【0126】

表７において、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１、Ｋｙｌｏ－０１１１～Ｋｙｌｏ－０１１３は、Ｂ構造だけが異なり、表中の実験データから明らかなように、Ｘ、Ｌ、Ｄ、Ｔ構造が同じ場合、Ｂの構造を変えることにより医薬品とＡＳＧＰＲとの結合率、心拍数、及び骨密度に影響を与え、Ｋｙｌｏ－０１０１、及びＫｙｌｏ－０１１２医薬品のＢ構造を選択した場合、受容体結合率が良好であり、心臓、骨密度への副作用が小さかった。

【0127】

実施例９ 医薬品の血中脂質低下機能に対する連結鎖Ｄの影響

【表8】

備考：ＴＣ、ＬＤＬ、及びＴＧの下の数字は、それぞれ、この組成物によるＴＣ、ＬＤＬ、及びＴＧの低下機能の強さを表し、数字６～１は機能の強さの降順を示している。

【0128】

表８において、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１、Ｋｙｌｏ－０１０２、Ｋｙｌｏ－０１１４は、Ｄ構造だけが異なる。Ｄ単独では連結構造として脂質低下効果はなかったが、表中の実験データから明らかなように、Ｘ、Ｌ、Ｂ、Ｔの構造が同じ場合、Ｄの構造を変えることにより、医薬品のＴＣ、ＴＧ、及びＬＤＬの機能低下に影響を与えた。本発明の実験条件下では、医薬品Ｋｙｌｏ－０１０１構造のＤを選択した場合、最適なＴＣ、ＴＧ、及びＬＤＬ低下効果が得られた。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】