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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-07-27
(45)【発行日】2022-08-04
(54)【発明の名称】花粉症を予防及び／又は改善するための組成物
(51)【国際特許分類】
A23L 7/10 20160101AFI20220728BHJP
A23L 2/52 20060101ALI20220728BHJP
A23L 2/38 20210101ALI20220728BHJP
A23L 33/105 20160101ALI20220728BHJP
A23G 3/48 20060101ALI20220728BHJP
A23C 9/152 20060101ALI20220728BHJP
A61K 36/70 20060101ALI20220728BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220728BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20220728BHJP
【ＦＩ】
A23L7/10 H
A23L2/00 F
A23L2/38 J
A23L33/105
A23G3/48
A23C9/152
A61K36/70
A61P37/02
A61P37/08
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2018100694
(22)【出願日】2018-05-25
(65)【公開番号】P2019201609
(43)【公開日】2019-11-28
【審査請求日】2021-02-03
(73)【特許権者】
【識別番号】500380572
【氏名又は名称】池田製粉株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110001999
【氏名又は名称】特許業務法人はなぶさ特許商標事務所
(72)【発明者】
【氏名】池田 康一朗
【審査官】中島 芳人
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１０－１７８６８３（ＪＰ，Ａ）
【文献】松原一美ら，蕎麦摂食の免疫機能に及ぼす影響について，京都教育大学環境教育研究年報，2011年，第19号，113-123
【文献】Food & Function，2015年，6，2664-2670
【文献】永井由美子ら，市販そば乾麺中のルチン含量について，明和学園短期大学紀要 2012，2013年03月31日，第22集，69-72
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ２３Ｌ
Ａ６１Ｋ ３６／７０
Ａ６１Ｐ ３７／０２
Ａ６１Ｐ ３７／０８
Ａ２３Ｌ ７／１０
Ａ２３Ｌ ２／５２
Ａ２３Ｇ ３／４８
Ａ２３Ｃ ９／１５２
Ａ２３Ｌ ２／３８
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
花粉症を予防及び／又は改善するため、かつ体内のＩＬ－１０産生能を促進させる組成物であって、そば（韃靼そばを除く）の表層粉を有効成分として含むことを特徴とする組成物。
【請求項2】
そば（韃靼そばを除く）の表層粉を１０μｇ／ｍＬ以上含む、請求項１に記載する組成物。
【請求項3】
食品組成物である請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項4】
食品組成物が、即席食品類、飲料類、小麦粉製品、菓子類、乳製品又は農産加工品である請求項３記載の組成物。
【請求項5】
健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品又は病者用食品である請求項３記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、花粉症を予防及び／又は改善するための組成物に関するものであり、詳細には、そばの表層粉を含むことを特徴とする組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、スギ花粉などによる季節性アレルギー性鼻炎に代表される花粉症の患者数の増加が顕著であり、スギ花粉症では、今後さらに原因となるスギ花粉が増加すると予測する報告もあり、患者の増加が懸念されている。
【0003】
花粉症に対して用いられる主な薬物としては、抗ヒスタミン剤が挙げられるが、抗ヒスタミン剤は副作用として眠気や口渇が出ることがあり、日常生活に支障が生じる場合があった。
【0004】
一方、薬剤ではなく、食経験が豊富で安全が確認されている食品、あるいはその原料から、花粉症を予防及び／又は改善し得る素材の探索が盛んに行われており、例えば、ヨーグルトや乳酸菌飲料は、花粉症に効果があると報告されており、また、納豆菌及びバチルス属菌体の胞子組成物を用いた花粉症抑制剤も報告されている（特許文献１参照）。
【0005】
上記の様に、花粉症を予防及び／又は改善し得る食品、あるいはその原料に対する要求が依然として存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【文献】特開２００４－９７２１６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、食経験が豊富な食品を含む組成物であって、花粉症を予防及び／又は改善し得る新たな組成物の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、食経験が豊富なそばの表層粉が、花粉症を予防及び／又は改善し得ることを見出し、本発明を完成させた。
【0009】
即ち、本発明は、
［１］花粉症を予防及び／又は改善するための組成物であって、そばの表層粉を含むことを特徴とする組成物、
［２］食品組成物である前記［１］記載の組成物、
［３］食品組成物が、即席食品類、飲料類、小麦粉製品、菓子類、乳製品又は農産加工品である前記［２］記載の組成物、
［４］健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品又は病者用食品である前記［２］記載の組成物
に関する。
［１］花粉症を予防及び／又は改善するための組成物であって、そばの表層粉を含むことを特徴とする組成物、
［２］食品組成物である前記［１］記載の組成物、
［３］食品組成物が、即席食品類、飲料類、小麦粉製品、菓子類、乳製品又は農産加工品である前記［２］記載の組成物、
［４］健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品又は病者用食品である前記［２］記載の組成物
に関する。
【発明の効果】
【0010】
本発明により、食経験が豊富な食品を含む組成物であって、花粉症を予防及び／又は改善し得る新たな組成物を提供することができる。
本発明に使用されるそばの表層粉は、ＮＯ、ＩＬ－１０及びＩＮＦ－γの産生量を増加させることができ、そのため、本発明の組成物は、マクロファージの活性化作用を有し、抗アレルギー作用を有し、且つ、Ｔｈ２系の活性化だけでなく、Ｔｈ１系の活性化作用も有し得るものであるため、花粉症の予防及び／又は改善において有利である。
本発明に使用されるそばの表層粉は、ＮＯ、ＩＬ－１０及びＩＮＦ－γの産生量を増加させることができ、そのため、本発明の組成物は、マクロファージの活性化作用を有し、抗アレルギー作用を有し、且つ、Ｔｈ２系の活性化だけでなく、Ｔｈ１系の活性化作用も有し得るものであるため、花粉症の予防及び／又は改善において有利である。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】各サンプル（酢酸菌糖脂質、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂ）におけるＮＯ産生量（実数表記）を示すグラフである。
【図2】各サンプル（酢酸菌糖脂質、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂ）におけるＩＬ－１０産生量（対数表記）を示すグラフである。
【図3】各サンプル（酢酸菌糖脂質、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂ）におけるＩＬ－１０産生量（実数表記）を示すグラフである。
【図4】各サンプル（酢酸菌糖脂質、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂ）におけるＩＮＦ－γ産生量（対数表記）を示すグラフである。
【図5】各サンプル（酢酸菌糖脂質、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂ）におけるＩＮＦ－γ産生量（実数表記）を示すグラフである。
【図6】スギ花粉で感作したマウス（花粉症マウス）の鼻かきの回数に対するそばの表層粉投与（表層粉投与群）及び酢酸菌糖脂質投与（酢酸菌糖脂質投与群）の効果を示すグラフである（１回目の鼻症状評価）。
【図7】スギ花粉で感作したマウス（花粉症マウス）の鼻かき＋こすりつけの回数に対するそばの表層粉投与（表層粉投与群）及び酢酸菌糖脂質投与（酢酸菌糖脂質投与群）の効果を示すグラフである（１回目の鼻症状評価）。
【図8】スギ花粉で感作したマウス（花粉症マウス）のスギ花粉溶液注入後０～４０分間における鼻かきの回数に対するそばの表層粉投与（表層粉投与群）及び酢酸菌糖脂質投与（酢酸菌糖脂質投与群）の効果を示すグラフである（２回目の鼻症状評価）。
【図9】スギ花粉で感作したマウス（花粉症マウス）のスギ花粉溶液注入後１０～４０分間における鼻かきの回数に対するそばの表層粉投与（表層粉投与群）及び酢酸菌糖脂質投与（酢酸菌糖脂質投与群）の効果を示すグラフである（２回目の鼻症状評価）。
【発明を実施するための形態】
【0012】
更に詳細に本発明を説明する。
本発明は、花粉症を予防及び／又は改善するための組成物であって、そばの表層粉を含むことを特徴とする組成物に関する。
本発明は、花粉症を予防及び／又は改善するための組成物であって、そばの表層粉を含むことを特徴とする組成物に関する。
【0013】
本発明の組成物は、そばの表層粉を含むことを特徴とする。
そばの実は外側から中心に向かって、黒皮、甘皮、表層粉、中層粉、内層粉となっており、そして、本発明においては、表層粉が使用される。表層粉は、３番粉とも呼ばれるものであり、粘り香り繊維があるとされる部位である。
本発明の組成物において、そばの表層粉は、活性成分に相当する。
（本明細書中、そばの表層粉は、４Ｆ粉とも記載される。）
そばの実は外側から中心に向かって、黒皮、甘皮、表層粉、中層粉、内層粉となっており、そして、本発明においては、表層粉が使用される。表層粉は、３番粉とも呼ばれるものであり、粘り香り繊維があるとされる部位である。
本発明の組成物において、そばの表層粉は、活性成分に相当する。
（本明細書中、そばの表層粉は、４Ｆ粉とも記載される。）
【0014】
本発明の組成物は、食品組成物とするのが好ましい。
食品組成物としては、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；油脂類；乳製品；卵加工品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品などが挙げら
れる。
食品組成物としては、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；油脂類；乳製品；卵加工品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品などが挙げら
れる。
【0015】
また、本発明の組成物としては、所謂、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメントを包含し、疾病リスク低減表示を付した食品などの保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品）、病者用食品も包含される。また、サプリメントとしては、表層粉に賦形剤、結合剤等を加え練り合わせた後に打錠することにより製造された錠剤の形態などが挙げられる。
【0016】
本発明の組成物には、そばの表層粉の他に、本発明の効果を損なわない範囲で、通常食品に用いられる材料、添加物（例えば、賦形剤、崩壊剤、乳化剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、香料など）を必要に応じて適宜配合することができる。
【0017】
これら通常食品に用いられる材料、添加物の含有量は、特に限定されず、食品形態などに応じて適宜設定することができる。
【0018】
本発明の組成物中、そばの表層粉の配合量は、その目的や形態等により異なる。
【0019】
本発明の組成物によるそばの表層粉の摂取量は、食品の形態、摂取するヒトの年齢、体重、性別、摂取の目的などを考慮して、個々の場合に応じて適宜設定される。例えば、好ましくは２００ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ以上、さらに好ましくは６００ｍｇ／ｋｇ以上、特に好ましくは１０００ｍｇ／ｋｇ以上である。これを１日１回または数回に分けて摂取する。
【0020】
本発明の組成物は、原則的に、そばアレルギーを有する対象者への使用が禁止される。
【実施例】
【0021】
試験例１：ＮＯ産生能、ＩＬ－１０産生能及びＩＮＦ－γ産生能評価
そばの表層粉におけるマクロファージ活性化能を評価するために、ＮＯ産生能を評価し、抗アレルギー作用の指標として、ＩＬ－１０産生能を評価し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスへの影響を評価するために、ＩＮＦ－γ産生能の評価を行った。
そばの表層粉におけるマクロファージ活性化能を評価するために、ＮＯ産生能を評価し、抗アレルギー作用の指標として、ＩＬ－１０産生能を評価し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスへの影響を評価するために、ＩＮＦ－γ産生能の評価を行った。
【0022】
１．サンプル
（１）４Ｆ粉Ａ：そばの表層粉、中国産１００％、６０ｇ
（２）４Ｆ粉Ａ＋：（１）をオートクレーブ加熱したもの
（３）４Ｆ粉Ｂ：そばの表層粉、中国産１００％を約１００℃にて２分間加熱したもの、５０ｇ
（１）４Ｆ粉Ａ：そばの表層粉、中国産１００％、６０ｇ
（２）４Ｆ粉Ａ＋：（１）をオートクレーブ加熱したもの
（３）４Ｆ粉Ｂ：そばの表層粉、中国産１００％を約１００℃にて２分間加熱したもの、５０ｇ
【0023】
２．試験溶液の調製
蒸留水で各サンプル１００ｍｇ／ｍＬを調製した。
（２）４Ｆ＋については、加熱による抽出作業の前に、９０℃、２０分間のオートクレーブ滅菌を実施した。サンプル（２）の滅菌終了後、全サンプル、（１）～（３）を９０℃、２０分間加熱を行い、試験溶液を作製した。
酢酸菌糖脂質を陽性対照物質とした。用量は、終濃度１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．００１μｇ／ｍＬ及び０．０００１μｇ／ｍＬとした。希釈操作は全てクリーンベンチ内にて実施した。酢酸菌糖脂質は注射用水に２．５ｍｇ／ｍＬになるように溶解し４℃にて保存しているものを使用した。使用時に３７℃で５分間加温した後、３７℃で超音波処理を１分間行った。処理後、９９２μＬの培養液に８μＬ加え、よく混ぜ、２０μｇ／ｍＬの溶液を調製し、希釈系列の作製に用いた。
蒸留水で各サンプル１００ｍｇ／ｍＬを調製した。
（２）４Ｆ＋については、加熱による抽出作業の前に、９０℃、２０分間のオートクレーブ滅菌を実施した。サンプル（２）の滅菌終了後、全サンプル、（１）～（３）を９０℃、２０分間加熱を行い、試験溶液を作製した。
酢酸菌糖脂質を陽性対照物質とした。用量は、終濃度１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．００１μｇ／ｍＬ及び０．０００１μｇ／ｍＬとした。希釈操作は全てクリーンベンチ内にて実施した。酢酸菌糖脂質は注射用水に２．５ｍｇ／ｍＬになるように溶解し４℃にて保存しているものを使用した。使用時に３７℃で５分間加温した後、３７℃で超音波処理を１分間行った。処理後、９９２μＬの培養液に８μＬ加え、よく混ぜ、２０μｇ／ｍＬの溶液を調製し、希釈系列の作製に用いた。
【0024】
３．使用細胞
ＮＯ産生能評価には、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞株（ＡＴＣＣより購入したもの）を用いた。ＩＬ－１０産生能及びＩＮＦ－γ産生能評価には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスより脾臓細胞を回収し培養したものを用いた。
ＮＯ産生能評価には、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞株（ＡＴＣＣより購入したもの）を用いた。ＩＬ－１０産生能及びＩＮＦ－γ産生能評価には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスより脾臓細胞を回収し培養したものを用いた。
【0025】
４．試験操作条件
試験操作は全てクリーンベンチ内で行った。
Ｔ２５培養フラスコ４枚にて前培養した細胞をピペッティングにより壁から剥がし、得られた細胞の懸濁液を５０ｍＬコニカルチューブに移した。チューブを室温で遠心分離し（１０００ｒｐｍ、５分間）、上清をデカンテーションで捨て、細胞を回収した。タッピングにより細胞をほぐした後、培養液５ｍＬを加え、ピペッティングによって細胞を均一に懸濁した後、１１μＬを別のチューブに移し０．５％トリパンブルー１１μＬを添加した後、血液計算板に液を移して細胞数と生存率を測定した。生存率が、９０％以上であったので、残液を試験に用いた。
測定した細胞数に基づいて、残液に培養液を加えて希釈し４×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるよう細胞数を調製した。この細胞懸濁液を１００μＬづつ９６ｗｅｌｌ平底プレート３枚の各ウェルに加えた。インキュベーターに移して、細胞がウェルの底に接着して伸展するまで２時間前培養を行った。
被験液は、終濃度の２倍濃度のものを調製し、予め細胞（４×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１００μＬを播種してあるウェルに１００μＬづつ加えた。酢酸菌糖脂質群も同様に試験を行った。
各検体を添加後、２４時間培養し、培養上清１５０μＬを回収した。回収した培養上清を５０μＬづつ別の９６ウェル平底プレートに移し、各測定に用いた。
試験操作は全てクリーンベンチ内で行った。
Ｔ２５培養フラスコ４枚にて前培養した細胞をピペッティングにより壁から剥がし、得られた細胞の懸濁液を５０ｍＬコニカルチューブに移した。チューブを室温で遠心分離し（１０００ｒｐｍ、５分間）、上清をデカンテーションで捨て、細胞を回収した。タッピングにより細胞をほぐした後、培養液５ｍＬを加え、ピペッティングによって細胞を均一に懸濁した後、１１μＬを別のチューブに移し０．５％トリパンブルー１１μＬを添加した後、血液計算板に液を移して細胞数と生存率を測定した。生存率が、９０％以上であったので、残液を試験に用いた。
測定した細胞数に基づいて、残液に培養液を加えて希釈し４×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるよう細胞数を調製した。この細胞懸濁液を１００μＬづつ９６ｗｅｌｌ平底プレート３枚の各ウェルに加えた。インキュベーターに移して、細胞がウェルの底に接着して伸展するまで２時間前培養を行った。
被験液は、終濃度の２倍濃度のものを調製し、予め細胞（４×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１００μＬを播種してあるウェルに１００μＬづつ加えた。酢酸菌糖脂質群も同様に試験を行った。
各検体を添加後、２４時間培養し、培養上清１５０μＬを回収した。回収した培養上清を５０μＬづつ別の９６ウェル平底プレートに移し、各測定に用いた。
【0026】
６．操作及び結果
１）ＮＯ産生能評価
各ウェルに蒸留水を指定の容量（１０００、９５０、９００、８００、６００、２００μＬ）加え、検量線用の２００μＭの亜硝酸ナトリウム水溶液を指定の容量（０、５０、１００、２００、４００、８００μＬ）加え、検量線用スタンダード亜硝酸ナトリウム溶液を調製した（亜硝酸ナトリウムの濃度：０、１０、２０、４０、８０、１６０μＭ）。
検量線用スタンダード亜硝酸ナトリウム溶液を各５０μＬづつ対応するウェルに加えた。
３％スルファニルアミド７．５％リン酸水溶液と、０．１５％ナフチルエチレンジアミン液を１：２の比率で混合してＧｒｉｅｓｓ試薬を調製した。
調製したＧｒｉｅｓｓ試薬を各ウェル当たり５０μＬづつ加え、１０分間室温でインキュベートした後、主波長５５０ｎｍ、副波長６６８ｎｍで、プレートリーダー（Ｂｉｏ－ｒａｄ ｍｏｄｅｌ ６８０）により吸光度を測定して、ＮＯ産生能を評価した。
各サンプルにおけるＮＯ産生量を、図１（実数表記）に示した。
尚、図１中のバーは、ｎ＝４での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
ＮＯ産生量は、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂの何れにおいても、１０００μｇ／ｍＬ及び１００００μＬ／ｍＬでプラスの値になっており、陰性対照群であるｍｅｄｉｕｍ（媒体）のみの群よりも有意に増加していた（ｐ＜０．０５）（図１参照）。
何れのサンプルでも同じ１０００μｇ／ｍＬ及び１００００μＬ／ｍＬで値が増えていたこと、またそれぞれの値は１７～１８μＭとほぼ同じであったことから、そばの表層粉への加熱滅菌処理による自然免疫賦活作用の低下は観られなかった。
以上のことから、そばの表層粉にはマクロファージ活性化能があることが認められた。
１）ＮＯ産生能評価
各ウェルに蒸留水を指定の容量（１０００、９５０、９００、８００、６００、２００μＬ）加え、検量線用の２００μＭの亜硝酸ナトリウム水溶液を指定の容量（０、５０、１００、２００、４００、８００μＬ）加え、検量線用スタンダード亜硝酸ナトリウム溶液を調製した（亜硝酸ナトリウムの濃度：０、１０、２０、４０、８０、１６０μＭ）。
検量線用スタンダード亜硝酸ナトリウム溶液を各５０μＬづつ対応するウェルに加えた。
３％スルファニルアミド７．５％リン酸水溶液と、０．１５％ナフチルエチレンジアミン液を１：２の比率で混合してＧｒｉｅｓｓ試薬を調製した。
調製したＧｒｉｅｓｓ試薬を各ウェル当たり５０μＬづつ加え、１０分間室温でインキュベートした後、主波長５５０ｎｍ、副波長６６８ｎｍで、プレートリーダー（Ｂｉｏ－ｒａｄ ｍｏｄｅｌ ６８０）により吸光度を測定して、ＮＯ産生能を評価した。
各サンプルにおけるＮＯ産生量を、図１（実数表記）に示した。
尚、図１中のバーは、ｎ＝４での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
ＮＯ産生量は、４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂの何れにおいても、１０００μｇ／ｍＬ及び１００００μＬ／ｍＬでプラスの値になっており、陰性対照群であるｍｅｄｉｕｍ（媒体）のみの群よりも有意に増加していた（ｐ＜０．０５）（図１参照）。
何れのサンプルでも同じ１０００μｇ／ｍＬ及び１００００μＬ／ｍＬで値が増えていたこと、またそれぞれの値は１７～１８μＭとほぼ同じであったことから、そばの表層粉への加熱滅菌処理による自然免疫賦活作用の低下は観られなかった。
以上のことから、そばの表層粉にはマクロファージ活性化能があることが認められた。
【0027】
２）ＩＬ－１０産生能評価
ＩＬ－１０のＥＬＩＳＡを、キット（Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－１０ ＥＬＩＳＡ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に記載の方法に従って実施した。
各サンプルにおけるＩＬ－１０産生量を、図２（対数表記）及び図３（実数表記）に示した。
尚、図中のバーは、ｎ＝３での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂは、何れも濃度依存的にＩＬ－１０産生量を増加した（図２、３参照）。この結果から、そばの表層粉には、抗アレルギー作用があることが示された。また、ＮＯ産生能評価において観察されたように、ＩＬ－１０産生能評価においても、加熱滅菌処理による影響は観られなかった。
ＩＬ－１０のＥＬＩＳＡを、キット（Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－１０ ＥＬＩＳＡ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に記載の方法に従って実施した。
各サンプルにおけるＩＬ－１０産生量を、図２（対数表記）及び図３（実数表記）に示した。
尚、図中のバーは、ｎ＝３での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂは、何れも濃度依存的にＩＬ－１０産生量を増加した（図２、３参照）。この結果から、そばの表層粉には、抗アレルギー作用があることが示された。また、ＮＯ産生能評価において観察されたように、ＩＬ－１０産生能評価においても、加熱滅菌処理による影響は観られなかった。
【0028】
３）ＩＮＦ－γ産生能評価
ＩＮＦ－γのＥＬＩＳＡを、キット（Ｍｏｕｓｅ ＩＮＦ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ Ｓｔａｎｄａｒｄ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に記載の方法に従って実施した。
各サンプルにおけるＩＮＦ－γ産生量を、図４（対数表記）及び図５（実数表記）に示した。
尚、図中のバーは、ｎ＝３での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂは、何れも１０００μｇ／ｍＬ以上の濃度で、ＩＮＦ－γ産生量を増加した（図４、５参照）。この結果から、そばの表層粉は、Ｔｈ２系を活性化するだけでなく、Ｔｈ１系も活性化することが示唆された。
ＩＮＦ－γのＥＬＩＳＡを、キット（Ｍｏｕｓｅ ＩＮＦ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ Ｓｔａｎｄａｒｄ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に記載の方法に従って実施した。
各サンプルにおけるＩＮＦ－γ産生量を、図４（対数表記）及び図５（実数表記）に示した。
尚、図中のバーは、ｎ＝３での平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
４Ｆ粉Ａ、４Ｆ粉Ａ＋及び４Ｆ粉Ｂは、何れも１０００μｇ／ｍＬ以上の濃度で、ＩＮＦ－γ産生量を増加した（図４、５参照）。この結果から、そばの表層粉は、Ｔｈ２系を活性化するだけでなく、Ｔｈ１系も活性化することが示唆された。
【0029】
試験例２：花粉症マウス試験
１．動物
１）動物種：マウス ＢＡＬＢ／ｃマウス 雌性 ５週齢（購入時）、１０匹／群
供給源：日本クレア株式会社
馴化：動物搬入後、一週間の予備飼育を行った。
食餌：餌（ＣＥ－２固形飼料）及び水は自由摂取とした。
２）飼育条件
温度：２４±２℃
湿度：５０．０～７０．０％
照明時間：１２時間／日（８時から２０時までの人工照明）
ケージ：アイソラック内で、プラスチックケージを用いて飼育した。
２．試薬
・ＰＢＳ（－）、カタログＮｏ．Ｄ５６５２－１０×１Ｌ、シグマ
・Ｉｎｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍ Ａｄｊｕｖａｎｔ、カタログＮｏ．７７１６１、ＴＨＥＲＭＯ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ
・花粉粗抽出物、ビオスタ
・ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、カタログＮｏ．ＡＭ７０２４、Ａｍｂｉｏｎ（登録商標）
３．装置及び器具
・クリーンベンチ ＭＣＶ９１
・ボルテックスミキサー Ｖｏｒｔｅｘ－ｇｅｎｉｅ２
・冷蔵庫、Ｎａｔｉｏｎａｌ ＮＲ－Ｃ３７４Ｍ－Ｈ
・冷凍庫、ＮＩＨＯＮ ＦＲＥＥＺＥＲ ＧＳＳ－３１５６ＨＣ
・マイクロピペット（Ｐ－１０００、Ｐ－２００、Ｐ－２０）、Ｇｉｌｓｏｎ
・冷却マイクロ遠心機 ＫＵＢＯＴＡ ５２２０
・３７℃恒温槽 ＳＡＮＹＯ
１．動物
１）動物種：マウス ＢＡＬＢ／ｃマウス 雌性 ５週齢（購入時）、１０匹／群
供給源：日本クレア株式会社
馴化：動物搬入後、一週間の予備飼育を行った。
食餌：餌（ＣＥ－２固形飼料）及び水は自由摂取とした。
２）飼育条件
温度：２４±２℃
湿度：５０．０～７０．０％
照明時間：１２時間／日（８時から２０時までの人工照明）
ケージ：アイソラック内で、プラスチックケージを用いて飼育した。
２．試薬
・ＰＢＳ（－）、カタログＮｏ．Ｄ５６５２－１０×１Ｌ、シグマ
・Ｉｎｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍ Ａｄｊｕｖａｎｔ、カタログＮｏ．７７１６１、ＴＨＥＲＭＯ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ
・花粉粗抽出物、ビオスタ
・ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、カタログＮｏ．ＡＭ７０２４、Ａｍｂｉｏｎ（登録商標）
３．装置及び器具
・クリーンベンチ ＭＣＶ９１
・ボルテックスミキサー Ｖｏｒｔｅｘ－ｇｅｎｉｅ２
・冷蔵庫、Ｎａｔｉｏｎａｌ ＮＲ－Ｃ３７４Ｍ－Ｈ
・冷凍庫、ＮＩＨＯＮ ＦＲＥＥＺＥＲ ＧＳＳ－３１５６ＨＣ
・マイクロピペット（Ｐ－１０００、Ｐ－２００、Ｐ－２０）、Ｇｉｌｓｏｎ
・冷却マイクロ遠心機 ＫＵＢＯＴＡ ５２２０
・３７℃恒温槽 ＳＡＮＹＯ
【0030】
４．試薬調製
１）ＰＢＳ（－）溶液
）ＰＢＳ（－）１０×ｃｏｎｃ．１容量に大塚蒸留水を９容量、無菌的に加えて調製し
た。
２）スギ花粉懸濁液
スギ花粉粗抽出物にＰＢＳを無菌的に加え、０．２μｇ／ｍＬのスギ花粉溶液を作製した。腹腔内投与用液は等量のアラムアジュバント（Ｉｎｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍ Ａｄｊｕｖａｎｔ）を加え、ボルテックスで混合した。２０分間振とう機で攪拌した後、試験に供試した。鼻腔内投与溶液は、等量のＰＢＳを加え、ボルテックスで混合した。１．７ｍＬチューブに５００μＬづつ分注し、使用するまで－２０℃で保存した。
３）酢酸菌糖脂質懸濁液
酢酸菌糖脂質の１日摂取量が、１μｇ／ｋｇ／日になるように、経口投与用の懸濁液を調製した。今回試験に供試した素材の酢酸菌糖脂質配合量は、４８．５μｇ／ｇであるため、素材としての摂取量は、２０．７ｍｇ／ｋｇ／日となる。２０．７ｍｇ／ｍＬの懸濁液を調製し、経口投与に用いた。８２．８ｍｇの酢酸菌糖脂質を量りとり、大塚蒸留水で４０ｍＬに調製した（２．０７ｍｇ／ｍＬ）。ボルテックス、ソニケーション後、２ｍＬチューブに分注した。使用するまで－２０℃で保存した。
４）そばの表層粉懸濁液
そばの表層粉（４Ｆ粉）の１日摂取量が０．２ｇ／ｋｇ／日になるように、経口投与用の懸濁液を調製した。２０ｍｇ／ｍＬの懸濁液を調製し、経口投与に用いた。０．８ｇのそばの表層粉を量りとり、大塚蒸留水で４０ｍＬに調製した（０．２ｍｇ／ｍＬ）。ボルテックス、ソニケーション後、２ｍＬチューブに分注した。使用するまで－２０℃で保存した。
１）ＰＢＳ（－）溶液
）ＰＢＳ（－）１０×ｃｏｎｃ．１容量に大塚蒸留水を９容量、無菌的に加えて調製し
た。
２）スギ花粉懸濁液
スギ花粉粗抽出物にＰＢＳを無菌的に加え、０．２μｇ／ｍＬのスギ花粉溶液を作製した。腹腔内投与用液は等量のアラムアジュバント（Ｉｎｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍ Ａｄｊｕｖａｎｔ）を加え、ボルテックスで混合した。２０分間振とう機で攪拌した後、試験に供試した。鼻腔内投与溶液は、等量のＰＢＳを加え、ボルテックスで混合した。１．７ｍＬチューブに５００μＬづつ分注し、使用するまで－２０℃で保存した。
３）酢酸菌糖脂質懸濁液
酢酸菌糖脂質の１日摂取量が、１μｇ／ｋｇ／日になるように、経口投与用の懸濁液を調製した。今回試験に供試した素材の酢酸菌糖脂質配合量は、４８．５μｇ／ｇであるため、素材としての摂取量は、２０．７ｍｇ／ｋｇ／日となる。２０．７ｍｇ／ｍＬの懸濁液を調製し、経口投与に用いた。８２．８ｍｇの酢酸菌糖脂質を量りとり、大塚蒸留水で４０ｍＬに調製した（２．０７ｍｇ／ｍＬ）。ボルテックス、ソニケーション後、２ｍＬチューブに分注した。使用するまで－２０℃で保存した。
４）そばの表層粉懸濁液
そばの表層粉（４Ｆ粉）の１日摂取量が０．２ｇ／ｋｇ／日になるように、経口投与用の懸濁液を調製した。２０ｍｇ／ｍＬの懸濁液を調製し、経口投与に用いた。０．８ｇのそばの表層粉を量りとり、大塚蒸留水で４０ｍＬに調製した（０．２ｍｇ／ｍＬ）。ボルテックス、ソニケーション後、２ｍＬチューブに分注した。使用するまで－２０℃で保存した。
【0031】
５．操作及び結果
ＢＡＬＢ／ｃ系雌系マウスに、被験物質として、表層粉０．２ｇ／ｋｇ／日（表層粉投与群）、酢酸菌糖脂質（陽性対照：自然免疫応用技術研（株））１μｇ／ｋｇ／日（酢酸菌糖脂質投与群）及び蒸留水（対照群）を２週間連日経口投与した。
３０μｇ／マウスのスギ花粉懸濁液を、０日目（感作開始日）、３日目及び７日目の計３回腹腔内に投与し、感作開始日から１４日～２８日目の間、連続して０．５μｇ／マウスのスギ花粉懸濁液をマウスの鼻腔内に注入した。
感作開始日から３５日目に、マウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、３０分間鼻症状を評価した。
評価方法は、投与後３０分間の鼻を前足でこする行為（鼻かき）の回数及び鼻を腹部や背部にこすりつける行為（こすりつけ）の回数を目視により計測して比較した。
鼻かきの結果を図６に示し、鼻かき＋こすりつけの結果を図７に示した。
尚、図中のグラフは平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：５％有意）。
図中、花粉無感作群は、被験物質として蒸留水を投与し、スギ花粉懸濁液による感作を行わなかった群を意味する。
図６及び図７において、対象群における鼻かきの回数及び鼻かき＋こすりつけの回数が、花粉無感作群よりも有意に増加していることから花粉症の成立が確認された。
表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群は、対象群に比べて鼻かきの回数及び鼻かき＋こすりつけの回数が減少する傾向が認められたものの、有意ではなかった。
上記の鼻症状の評価後から１週間の間、連続してマウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、マウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、４０分間鼻症状（鼻かき）を評価した。
０～４０分間の鼻かきの結果を図８に示し、１０～４０分間の鼻かきの結果を図９に示した。
尚、図中のグラフは平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊＊：１％水準、＊：５％水準）。
図８において、表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群は、対象群に比べて鼻かきの回数を有意に減少した（ｐ＜０．０５）。同様に鼻かき＋こすりつけの回数も、表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群において有意に少なかった（ｐ＜０．０５：図示しない。）。
開始直後から１０分間は、鼻かき回数にばらつきが生じやすかったため、図９では、この期間を除く１０～４０分間で解析を行った。傾向は図８（０～４０分間）と同じであったが、酢酸菌糖脂質投与群と対象群とは、１％水準で有意差が認められ（ｐ＜０．０１）、表層粉投与群と対象群とは、５％水準で有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。
以上より、そばの表層粉の継続的な摂取により、スギ花粉症の予防及び／又は改善効果が期待できると考えられる。
ＢＡＬＢ／ｃ系雌系マウスに、被験物質として、表層粉０．２ｇ／ｋｇ／日（表層粉投与群）、酢酸菌糖脂質（陽性対照：自然免疫応用技術研（株））１μｇ／ｋｇ／日（酢酸菌糖脂質投与群）及び蒸留水（対照群）を２週間連日経口投与した。
３０μｇ／マウスのスギ花粉懸濁液を、０日目（感作開始日）、３日目及び７日目の計３回腹腔内に投与し、感作開始日から１４日～２８日目の間、連続して０．５μｇ／マウスのスギ花粉懸濁液をマウスの鼻腔内に注入した。
感作開始日から３５日目に、マウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、３０分間鼻症状を評価した。
評価方法は、投与後３０分間の鼻を前足でこする行為（鼻かき）の回数及び鼻を腹部や背部にこすりつける行為（こすりつけ）の回数を目視により計測して比較した。
鼻かきの結果を図６に示し、鼻かき＋こすりつけの結果を図７に示した。
尚、図中のグラフは平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊：５％有意）。
図中、花粉無感作群は、被験物質として蒸留水を投与し、スギ花粉懸濁液による感作を行わなかった群を意味する。
図６及び図７において、対象群における鼻かきの回数及び鼻かき＋こすりつけの回数が、花粉無感作群よりも有意に増加していることから花粉症の成立が確認された。
表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群は、対象群に比べて鼻かきの回数及び鼻かき＋こすりつけの回数が減少する傾向が認められたものの、有意ではなかった。
上記の鼻症状の評価後から１週間の間、連続してマウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、マウスの鼻腔内にスギ花粉懸濁液を注入し、４０分間鼻症状（鼻かき）を評価した。
０～４０分間の鼻かきの結果を図８に示し、１０～４０分間の鼻かきの結果を図９に示した。
尚、図中のグラフは平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す（＊＊：１％水準、＊：５％水準）。
図８において、表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群は、対象群に比べて鼻かきの回数を有意に減少した（ｐ＜０．０５）。同様に鼻かき＋こすりつけの回数も、表層粉投与群及び酢酸菌糖脂質投与群において有意に少なかった（ｐ＜０．０５：図示しない。）。
開始直後から１０分間は、鼻かき回数にばらつきが生じやすかったため、図９では、この期間を除く１０～４０分間で解析を行った。傾向は図８（０～４０分間）と同じであったが、酢酸菌糖脂質投与群と対象群とは、１％水準で有意差が認められ（ｐ＜０．０１）、表層粉投与群と対象群とは、５％水準で有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。
以上より、そばの表層粉の継続的な摂取により、スギ花粉症の予防及び／又は改善効果が期待できると考えられる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
