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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-07-29
(45)【発行日】2022-08-08
(54)【発明の名称】ＲＡＦ阻害剤及びＥＲＫ阻害剤を含む治療用組合せ
(51)【国際特許分類】
A61K 31/5377 20060101AFI20220801BHJP
A61K 31/4965 20060101ALI20220801BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220801BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20220801BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220801BHJP
【ＦＩ】
A61K31/5377 ZMD
A61K31/4965
A61P35/00
A61P35/04
A61P43/00 121
A61P43/00 111
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2019515203
(86)(22)【出願日】2017-09-18
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-11-07
(86)【国際出願番号】 IB2017055641
(87)【国際公開番号】W WO2018051306
(87)【国際公開日】2018-03-22
【審査請求日】2020-09-14
(31)【優先権主張番号】62/396,504
(32)【優先日】2016-09-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100186897
【弁理士】
【氏名又は名称】平川 さやか
(74)【代理人】
【識別番号】100104282
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 康仁
(72)【発明者】
【氏名】カポニーロ，ジョルダーノ
(72)【発明者】
【氏名】メイヤー，マシュー ジョン
(72)【発明者】
【氏名】クック，ヴェセリーナ
(72)【発明者】
【氏名】スチュアート，ダリン
【審査官】六笠 紀子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１６－５１７４１７（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１５／０６６１８８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１１５３７６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１４／１５１６１６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Expert Opin. Pharmacother.，15(5)，2014年，pp.589-592
【文献】Nature Reviews Drug Discovery，13，2014年，pp.928-942
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／３３－３３／４４
Ａ６１Ｐ ３５／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）化合物Ａ：【化1】
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含有し、
（ｉｉ）化合物Ｂ：
【化2】
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と組み合わせて使用するための、医薬組成物。
【請求項2】
１つ以上のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）の変化を有する固形腫瘍である増殖性疾患の治療に使用するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんからなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記増殖性疾患は、ＲＡＦ変異であるＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、及びＧ４６４Ｅ、並びにＲＡＳ変異であるＡ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの変異を発現するがん又は腫瘍である、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記ＣＲＡＦ阻害剤またはその医薬的に許容される塩は、１日量を約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、又は約２５０ｍｇとして投与される、請求項２～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、用量を１日当たり約５０ｍｇ、又は１日当たり約７５ｍｇ、又は１日当たり約１００ｍｇとして投与される、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
（ｉ）化合物Ａは１日量を１００ｍｇとして投与され、且つ化合物Ｂは用量を１００ｍｇとして投与され、又は（ｉｉ）化合物Ａは１日量を２００ｍｇとして投与され、且つ化合物Ｂは用量を１００ｍｇとして投与される、請求項２～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
化合物Ａ：【化3】
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含む、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんからなる群から選択される増殖性疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、化合物Ｂ：
【化4】
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と組み合わせて使用するための、医薬組成物。
【請求項9】
前記増殖性疾患は、ＲＡＦ変異であるＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、及びＧ４６４Ｅ、並びにＲＡＳ変異であるＡ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの変異を発現するがんである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
化合物Ｂ：【化5】
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含む、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんからなる群から選択される増殖性疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、化合物Ａ：
【化6】
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と組み合わせて使用するための、医薬組成物。
【請求項11】
前記増殖性疾患は、ＲＡＦ変異であるＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、及びＧ４６４Ｅ、並びにＲＡＳ変異であるＡ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの変異を発現するがんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
（a）請求項１に記載のＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩の１種又は複数種の投与単位と、（ｂ）請求項１に記載のＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩の１種又は複数種の投与単位と、少なくとも１種の医薬的に許容される担体と、を含む、組合せ製剤。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＫＲＡＳ変異型腫瘍、特に、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、黒色腫、膵臓がん、大腸がん、及び卵巣がん等のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）が変化（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）している切除不能な（ａｄｖａｎｃｅｄ）固形がんであるがんを治療するためのＲＡＦ阻害剤、特にｃ－ＲＡＦ（Ｃ－ＲＡＦ又はＣＲＡＦ）の阻害剤の使用に関する。特に本発明は、少なくとも１種のＲＡＦ阻害剤を使用するがんを治療するための治療用組合せに関する。
【0002】
本発明はまた、がん、特にＫＲＡＳ変異、とりわけＫＲＡＳの機能獲得型変異を有する、肺がん（特にＮＳＣＬＣ）、黒色腫、膵臓がん、及び卵巣がんを含むがんを治療するためのＥＲＫ阻害剤（ＥＲＫｉ）の使用にも関する。
【0003】
更に本発明は、（ａ）少なくとも１種のＥＲＫ阻害剤（ＥＲＫｉ）と、（ｂ）ＲＡＦ阻害剤、好ましくは、ｂ－Ｒａｆも阻害し得るｃ－ＲＡＦ（ＣＲＡＦ）阻害剤であるＲＡＦ阻害剤と、を含む組合せ医薬であって、この２種の化合物は、増殖性疾患の治療用として、同時に、別々に、若しくは順次投与するために調製及び／又は使用される、組合せ医薬、並びにこの種の組合せを含む医薬組成物；増殖性疾患を有する対象を治療する方法であって、それを必要とする対象に上記組合せを投与することを含む、方法；この種の組合せの、増殖性疾患を治療するための使用；この種の組合せを含む商業用パッケージ；にも関する。本発明における上記増殖性疾患は、多くの場合、ＫＲＡＳ変異型腫瘍等のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）が変化している固形腫瘍、特に、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、黒色腫、膵臓がん、大腸がん、及び卵巣がんである。通常、ＣＲＡＦ阻害剤及びＥＲＫ阻害剤はいずれも低分子量化合物であり、特に本発明は、本明細書に記載する通りに使用するための化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せに関する。
【0004】
特に、化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩と、化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩とを含む組合せ医薬が提供される。この組合せ医薬は、切除不能な又は遠隔転移を有する（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ）ＫＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ等のＫＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に特に有用な可能性がある。
【背景技術】
【0005】
ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ即ちＭＡＰＫ経路は、細胞増殖、分化、及び生存を駆動する重要なシグナル伝達経路である。腫瘍発生の多くはこの経路の調節不全が原因となって起こる。黒色腫、肺がん、及び膵臓がんを含む複数の種類の腫瘍にこのＭＡＰＫ経路のシグナル伝達異常又は不適切な活性化が認められており、これらは、ＲＡＳ及びＢＲＡＦの活性化型変異を含む幾つかの異なる機序を介して発生し得る。ＲＡＳはＧＴＰアーゼのスーパーファミリーである。ＲＡＳにはＫＲＡＳ（ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステン・ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ）が含まれ、これは機能獲得型変異として知られる様々な点突然変異によってスイッチがオンの状態になり（活性化され）得るシグナル伝達タンパク質である。ＭＡＰＫ経路はヒトがんにおける変異頻度が高く、その中でもＫＲＡＳ変異及びＢＲＡＦ変異が最も高頻度に認められる（およそ３０％）。ＲＡＳ変異、特に機能獲得型変異はがん全体の９～３０％で検出されており、ＫＲＡＳ変異が最も頻度が高く（８６％）、ＮＲＡＳ（１１％）及び低頻度のＨＲＡＳ（３％）がそれに続く（Ｃｏｘ ＡＤ，Ｆｅｓｉｋ ＳＷ，Ｋｉｍｍｅｌｍａｎ ＡＣ，ｅｔ ａｌ（２０１４），Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｎｏｖ；１３（１１）：８２８－５１．）。ＢＲＡＦ変異型腫瘍には、選択的ＢＲＡＦ阻害剤（ＢＲＡＦｉ）及びそれよりも効果は低いもののＭＥＫ阻害剤（ＭＥＫｉ）も良好な活性を示すが、現時点においてＫＲＡＳ変異型腫瘍に対する有効な治療法は存在しない（Ｃａｎｔｗｅｌｌ－Ｄｏｒｒｉｓ ＥＲ，Ｏ’Ｌｅａｒｙ ＪＪ，Ｓｈｅｉｌｓ ＯＭ（２０１１）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．Ｍａｒ；１０（３）：３８５－９４．）。
【0006】
ＣＲＡＦが、ＫＲＡＳシグナル伝達の媒介及びＫＲＡＳ変異型非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の発生に関与しているという新たな証拠に基づけば、ＣＲＡＦは治療的介入の標的として好適である（Ｂｌａｓｃｏ ＲＢ，Ｆｒａｎｃｏｚ Ｓ，Ｓａｎｔａｍａｒｉａ Ｄ，ｅｔ ａｌ（２０１１） ｃ－Ｒａｆ，ｂｕｔ ｎｏｔ Ｂ－Ｒａｆ，ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｋ－Ｒａｓ ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｄｒｉｖｅｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｍａｙ １７；１９（５）：６５２－６３）。ＣＲＡＦは、ＫＲＡＳ変異型がんをＭＥＫｉで治療した後に、フィードバックを介した経路の再活性化を促進することが示されている（Ｌｉｔｏ Ｐ，Ｓａｂｏｒｏｗｓｋｉ Ａ，Ｙｕｅ Ｊ，ｅｔ ａｌ（２０１４） Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＡＦ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ ＭＥＫ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ＭＥＫ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ＫＲＡＳ Ｍｕｔａｎｔ Ｔｕｍｏｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２５，６９７－７１０．，Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ ２０１４）。更にＣＲＡＦは、ＢＲＡＦｉ治療後に起こる逆説的な活性化の媒介に必須の役割を果たす（Ｐｏｕｌｉｋａｋｏｓ ＰＩ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，Ｂｏｌｌａｇ Ｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１０），Ｎａｔｕｒｅ．Ｍａｒ １８；４６４（７２８７）：４２７－３０．，Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ ｅｔ ａｌ ２０１０，Ｈｅｉｄｏｒｎ ｅｔ ａｌ ２０１０）。したがって、ＣＲＡＦ及びＢＲＡＦの活性を強力に阻害する選択的ｐａｎ－ＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦ変異型腫瘍及びＲＡＳ変異体により駆動される腫瘍化の阻止に有効な可能性があり、また、フィードバックの活性化も軽減することができる。本明細書に記載する化合物Ａは、ＣＲＡＦ及びＢＲＡＦの両方の強力な阻害剤である。
【0007】
肺がんは全世界の男女に発症している一般的な種類のがんである。ＮＳＣＬＣは最も一般的な種類（約８５％）の肺がんであり、その患者のおよそ７０％が診断時に病期が進行（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）している。ＮＳＣＬＣ腫瘍の約３０％に活性化型ＫＲＡＳ変異が認められており、この変異はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）に対する耐性に関与している（Ｐａｏ Ｗ，Ｗａｎｇ ＴＹ，Ｒｉｅｌｙ ＧＪ，ｅｔ ａｌ（２００５） ＰＬｏＳ Ｍｅｄ；２（１）：ｅ１７）。活性化型ＫＲＡＳ変異は、黒色腫（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１２，２１７－２６（２０１５））、膵臓がん（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．１４４（６），１２２０－２９（２０１３））、及び卵巣がん（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９９（１２），２０２０－２８（２００８））にも認められている。ＢＲＡＦ変異は最大３％のＮＳＣＬＣにも観察されており、ＥＧＦＲ変異陽性ＮＳＣＬＣにおける耐性獲得機序に関与することも述べられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
ＫＲＡＳの直接阻害は困難であることが証明されている。現時点において、ＮＳＣＬＣのようなＫＲＡＳ変異型がんの患者に利用することができる承認された標的療法は存在しない。したがって、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣに罹患している患者及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣに罹患している患者のための非常に満たされていない医学的ニーズが存在する。安全且つ／又は十分な忍容性を示す標的療法が求められている。臨床環境において奏効期間が長期に亘る（ｄｕｒａｂｌｅ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）治療法も有益であろう。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明はまた、（ａ）化合物Ａ：
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、
（ｂ）化合物Ｂ：
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬を提供する。本明細書においては、この組合せを「本発明の組合せ」と称する。
【化1】
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、
（ｂ）化合物Ｂ：
【化2】
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬を提供する。本明細書においては、この組合せを「本発明の組合せ」と称する。
【0010】
更に本発明は、増殖性疾患の治療に使用するために同時に、別々に、又は順次（任意の順序で）投与するための、本明細書に記載する、化合物Ａであるｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬を提供する。特に本発明は、ＭＡＰＫ経路の活性化型変異、特にＫＲＡＳ又はＢＲＡＦの１つ又は複数の突然変異を特徴とする増殖性疾患の治療に使用するための本発明の組合せに関する。特に本発明は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんの治療に関する。
【0011】
化合物Ａは、ＢＲＡＦ（本明細書においてはｂ－ＲＡＦ又はｂ－Ｒａｆとも称する）及びＣＲＡＦ（本明細書においてはｃ－ＲＡＦ又はｃ－Ｒａｆとも称する）プロテインキナーゼのアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）競合阻害剤である。本開示全体を通して、化合物Ａをｃ－ＲＡＦ（又はＣＲＡＦ）阻害剤又はＣ－ＲＡＦ／ｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤とも称する。
【0012】
化合物Ａは、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）イソニコチンアミドであり、次に示す構造を有する化合物である。
【化3】
【0013】
化合物Ａは、細胞ベースのアッセイにおいて、ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する種々の突然変異を含む細胞株に対する増殖抑制効果が示されている。ｉｎ ｖｉｖｏにおいては、ＮＳＣＬＣ由来のＣａｌｕ－６（ＫＲＡＳ Ｑ６１Ｋ）及びＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ）を含む幾つかのＫＲＡＳ変異モデルを化合物Ａで処理することにより腫瘍が退縮することが認められている。総括すると、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにおいて、十分に忍容される用量の化合物Ａに関しＭＡＰＫ経路抑制及び増殖抑制作用が観察されたことは、化合物Ａが、ＭＡＰＫ経路に活性化型の障害（ｌｅｓｉｏｎ）を有する腫瘍を持つ患者において抗腫瘍作用を発揮し得ることを示唆している。更に化合物Ａは、キナーゼポケットの立体構造を不活性型に保ち、それによって多くのＢ－Ｒａｆ阻害剤に認められる逆説的活性化を低減し、突然変異したＲＡＳにより駆動されるシグナル伝達を遮断し、細胞増殖を阻止する、Ｂ－Ｒａｆ及びＣ－Ｒａｆの両方のＴｙｐｅ ＩＩ ＡＴＰ競合阻害剤である。化合物Ａは、ＭＡＰＫを介して活性化される数多くのヒトがん細胞株、並びにＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、及びＢＲＡＦがん遺伝子に障害を持つヒト腫瘍を異種移植したモデルにおいて有効性が示されている。
【0014】
化合物Ｂは、細胞外シグナル制御キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１／２）の阻害剤である。化合物Ｂは、４－（３－アミノ－６－（（１Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシシクロヘキシル）ピラジン－２－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（３－ブロモ－５－フルオロフェニル）－２－（メチルアミノ）エチル）－２－フルオロベンズアミドの名称で知られる、次に示す構造を有する化合物である。
【化4】
【0015】
化合物Ｂは、種々の固形腫瘍モデルにおいて単剤療法で活性が示されており、特に、第２の抗がん治療剤と組み合わせて使用した場合に有効であった。例えば、特に治療困難ながんである膵管腺がん（ＰＤＡＣ）（Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ），ｖｏｌ．８（４），４５（Ａｐｒｉｌ ２０１６）によれば、ＰＤＡＣの５年生存率は７％）のモデルで、化合物Ｂを幾つかの異なる抗がん剤と組み合わせると顕著な腫瘍縮小が認められ、特定の成分の組合せが、単剤の活性に基づき予測されるよりも効果が高かった。特に、ヒトＮＳＣＬＣであるＣａｌｕ－６の異種移植モデルにおいては、化合物Ｂに化合物Ａを組み合わせると、いずれかの単剤療法と比較して奏効の深さ及び奏効期間が向上した。
【0016】
したがって、化合物Ａ等のｐａｎ－ＲＡＦ阻害剤と化合物Ｂ等のＥＲＫ１／２キナーゼ阻害剤とを組み合わせてＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）を垂直方向に阻害することにより、ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣにおけるＭＡＰＫシグナル伝達の抑制が最適化されることが期待される。この組合せはまた、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異型ＮＳＣＬＣにおけるＢＲＡＦ阻害剤及びＭＥＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ）阻害剤の組合せに対する耐性出現の防止にも役立つ可能性がある。
【0017】
したがって本発明は、固形腫瘍、特にＮＳＣＬＣ、その中でも特にＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣを含む、ＫＲＡＳ変異を発現する腫瘍に加えて、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異型ＮＳＣＬＣを含むＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬを治療するための、化合物ＢをＲＡＦ阻害剤、特に化合物Ａと組み合わせて使用する組成物及び方法を提供する。
【0018】
本明細書においては、（ａ）化合物Ａ等のｃ－ＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、（ｂ）化合物Ｂ等のＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬であって、増殖性疾患、特に、ＫＲＡＳ変異型腫瘍及び特定のＢＲＡＦ変異型腫瘍等のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）が変化している固形腫瘍を治療するために、同時に、別々に、又は順次投与するための組合せ医薬を開示する。そのようなものとして、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＫＲＡＳ変異及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ（ＫＲＡＳ－ｍｕｔａｎｔ ａｎｄ ＢＲＡＦ ｍｕｔａｎｔ ＮＳＣＬＣ）（非小細胞肺がん）、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、並びにＫＲＡＳ変異型卵巣がんが挙げられる。本発明はまた、再発性又は難治性のＢＲＡＦ Ｖ ６００変異型黒色腫を含むＢＲＡＦ Ｖ ６００変異型黒色腫の治療に使用するための本発明の組合せ医薬も提供する。この種の組合せを含む医薬組成物；それを必要とする対象にこの種の組合せを投与することを含む、増殖性疾患を有する対象を治療する方法；増殖性疾患を治療するためのこの種の組合せの使用；及びこの種の組合せを含む商品パッケージも開示する。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、明細書、及び図面、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1A】マウスのＣａｌｕ－６ ＮＳＣＬＣ異種移植腫瘍モデルに化合物Ａ及び化合物Ｂを別々に及び一緒に使用した場合の有効性を示すものである。ここに示すように、化合物を１日１回（ｑｄ）又は隔日（ｑ２ｄ）のいずれかで経口投与した。
【発明を実施するための形態】
【0020】
本発明の組合せ医薬は、化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩と、化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩との組合せ医薬である。好ましい実施形態においては、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ（ＢＲＡＦＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異型ＮＳＣＬＣを含む）、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんから選択される増殖性疾患の治療に使用するための本発明の組合せ医薬を提供する。本発明の組合せ医薬の利益を受ける可能性が高い患者には、切除不能な又は遠隔転移を認める疾患の患者、例えば、標準的な治療を受けた後に増悪した可能性がある、切除不能な又は遠隔転移を認めるＫＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣと診断されたＮＳＣＬＣ患者が含まれる。
【0021】
ＣＲＡＦキナーゼ阻害剤
本発明のＣＲＡＦキナーゼ阻害剤は化合物Ａを含む。化合物Ａは、国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに実施例１１５６として開示されている。国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットには、その製造方法及び化合物Ａを含む医薬組成物も記載されている。
本発明のＣＲＡＦキナーゼ阻害剤は化合物Ａを含む。化合物Ａは、国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに実施例１１５６として開示されている。国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットには、その製造方法及び化合物Ａを含む医薬組成物も記載されている。
【0022】
本明細書に記載する方法、治療、組合せ、及び組成物の好ましい実施形態において、ＣＲＡＦ阻害剤は、化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩である。
【0023】
化合物Ａは次に示す構造を有する。
【化5】
【0024】
化合物Ａ（化合物Ａ）は、Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）イソニコチンアミドの名称でも知られる。
【0025】
細胞ベースのアッセイにおいて、化合物Ａは、ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する種々の突然変異を含む細胞株において増殖抑制作用を示した。ｉｎ ｖｉｖｏでは、ＮＳＣＬＣ由来のＣａｌｕ－６（ＫＲＡＳ Ｑ６１Ｋ）及びＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ）を含む幾つかのＫＲＡＳ変異モデルを化合物Ａで処理することにより腫瘍が退縮した。総括すると、ｉｎ ｖｉｔｒｏ 及びｉｎ ｖｉｖｏにおいて、十分に忍容される用量の化合物Ａに関しＭＡＰＫ経路抑制及び増殖抑制作用が観察されたことは、化合物Ａが、ＭＡＰＫ経路に活性化型の障害を有する腫瘍を持つ患者に対し抗腫瘍作用を発揮し得ることを示唆している。更に化合物Ａは、キナーゼポケットの立体構造を不活性型に保ち、それによって多くのＢ－Ｒａｆ阻害剤に認められる逆説的活性化を低減し、突然変異したＲＡＳにより駆動されるシグナル伝達を遮断し、細胞増殖を阻止する、Ｂ－Ｒａｆ及びＣ－Ｒａｆの両方のＴｙｐｅ ＩＩ ＡＴＰ競合阻害剤である。化合物Ａは、ＭＡＰＫを介して活性化される数多くのヒトがん細胞株、並びにＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、及びＢＲＡＦがん遺伝子に障害を持つヒト腫瘍を異種移植したモデルにおいて有効性が示されている。
【0026】
化合物Ａの作用機序、前臨床データ、及びＭＡＰＫ経路の調節におけるＣＲＡＦの重要性に関し公開されている文献に基づけば、化合物Ａは、化合物Ｂ等の他の少なくとも１種のＭＡＰＫ経路阻害剤と併用すると、ＭＡＰＫ経路が変化している切除不能な固形がんを有する患者の治療に有用となり得る。化合物Ａは、この種の治療を必要としている対象における、ＫＲＡＳ変異型腫瘍等のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）が変化している切除不能な固形がんである増殖性疾患、特に、肺がん、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、卵巣がん、膵臓がん、大腸がん、又は黒色腫等の、ＲＡＳ又はＲＡＦの少なくとも１つの機能獲得型変異を発現している腫瘍の治療（例えば、進行の緩和、阻止、又は遅延のうちの１つ又は複数）に使用することができる。
【0027】
ＥＲＫ阻害剤
本発明に使用される本明細書におけるＥＲＫｉ化合物は、通常、遊離形態にあるか又は医薬的に許容される塩としてのいずれかの化合物Ｂである。
本発明に使用される本明細書におけるＥＲＫｉ化合物は、通常、遊離形態にあるか又は医薬的に許容される塩としてのいずれかの化合物Ｂである。
【0028】
化合物Ｂは、細胞外シグナル制御キナーゼ１及び２（ＥＲＫ１／２）の阻害剤である。この化合物は開示されており、その調製及びこの化合物を含む医薬組成物は、ＰＣＴ公開出願である国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットに記載されている。化合物Ｂは次に示す構造を有する。
【化6】
【0029】
幾つかの実施形態においては、化合物Ｂの塩酸塩が使用される。
【0030】
治療用途
一実施形態において、本発明は、対象における疾患、例えば、過剰増殖状態又は過剰増殖性疾患（例えば、がん）を治療（例えば、阻害、緩和、改善、又は予防）する方法を特徴とする。この方法は、ＥＲＫ阻害剤をｃ－ＲＡＦ阻害剤と組み合わせて対象に投与することを含み、特定の実施形態においては、ｃ－ＲＡＦ阻害剤は化合物Ａであり、ＥＲＫ阻害剤は化合物Ｂである。この種の方法においてこれらの化合物を使用するための適切な投与量及び投与スケジュールを本明細書に記載する。
一実施形態において、本発明は、対象における疾患、例えば、過剰増殖状態又は過剰増殖性疾患（例えば、がん）を治療（例えば、阻害、緩和、改善、又は予防）する方法を特徴とする。この方法は、ＥＲＫ阻害剤をｃ－ＲＡＦ阻害剤と組み合わせて対象に投与することを含み、特定の実施形態においては、ｃ－ＲＡＦ阻害剤は化合物Ａであり、ＥＲＫ阻害剤は化合物Ｂである。この種の方法においてこれらの化合物を使用するための適切な投与量及び投与スケジュールを本明細書に記載する。
【0031】
幾つかの実施形態において、増殖性疾患は、本明細書に記載する少なくとも１種のＫＲＡＳの機能獲得型変異を発現する腫瘍等のＫＲＡＳ変異型腫瘍、特に、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）等のＫＲＡＳ変異型がんである。そのようなものとして、Ｖ６００Ｅ等のＢＲＡＦ変異を有する腫瘍、例えば、少なくとも１つのＶ６００Ｅ又は典型的若しくは非典型的な他のＢＲＡＦ変異を有するＮＳＣＬＣが挙げられる。本明細書に開示する方法、治療、及び組合せに使用するためのＣＲＡＦ阻害剤は、少なくとも１種のＣＲＡＦの阻害剤であり、且つ任意選択でＢＲＡＦの強力な阻害剤でもある。幾つかの実施形態において、ＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は経口投与される。幾つかの実施形態において、ＣＲＡＦ阻害剤は化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩である。
【0032】
本明細書において、投与量を「約」を付記した特定量として記載する場合、実際の投与量は、記載した量に対し最大１０％、例えば５％まで変化し得る。この「約」の用法は、所与の剤形に含まれる正確な量は、様々な理由から、投与される化合物のｉｎ ｖｉｖｏ効果に実質的に影響を与えることなく、意図された量とは僅かに異なる可能性があることを認めるものである。当業者は、治療用化合物の用量又は投与量が本明細書に引用されている場合、その量はその治療用化合物の遊離形態の量を指すことを理解するであろう。
【0033】
ＣＲＡＦ阻害剤の単位投与量は、患者の年齢、体重、性別；治療すべきがんの範囲及び重症度；並びに治療医の判断等の基準により決定される実際の投与量及び投与タイミングで、１日１回、又は１日２回、又は１日３回、又は１日４回投与することができる。
【0034】
一実施態様において、化合物Ａは経口投与用として調製され、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、又は４００ｍｇの用量で経口投与され、送達は１日４回までである。１００ｍｇを１日１回又は２回という用量は、アロメトリックスケール則に基づき、動物の対応する血中濃度から、ヒト対象でヒトに有効となり得る血中濃度が得られるように予測したものである。依然として十分な治療指数をもたらしながらより高い効力を達成するためには、２００ｍｇの用量を１日４回まで投与することができる。幾つかの実施形態において、化合物Ａは、１日１回１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、又は４００ｍｇの用量で投与される。前臨床モデルのアロメトリックスケーリングは、化合物Ａの１日量を３００ｍｇ以上とすると（これは１日１回、又は２、３、若しくは４分割した用量を１日間で投与することができる）、単剤としては、ＫＲＡＳ変異を含むか又は発現する固形腫瘍を含む多くの適応症において治療効果が得られるはずであることを示唆している。
【0035】
本発明の組合せにおいて、これらの対象における化合物Ａの治療投与量はより低くなることが期待され、したがって、併用療法においては、通常、この種の対象には化合物Ａの１日量を１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、又は３００ｍｇとして使用する。好適には、本発明の組合せ及び方法において、化合物Ａは、１００ｍｇ、又は２００ｍｇ、又は２５０ｍｇ、又は３００ｍｇの投与量で１日１回投与される。
【0036】
一実施形態において、化合物Ｂは、経口送達により投与するために調製され、その塩酸塩として使用することができる。幾つかの実施形態において、化合物又はそのＨＣｌ塩は、経口投与用硬質又は軟質ゲルカプセル等の医薬的に許容される容器で単純にカプセル化される。ゲルカプセルは投与に自由度を持たせられるように様々な投与量で製造することができ、例えば、ゲルカプセルは、化合物Ｂ又はそのＨＣｌ塩を約５ｍｇ、約２０ｍｇ、約５０ｍｇ、又は約１００ｍｇ含むように調製することができる。
【0037】
本明細書の組合せ及び本明細書に記載する治療用途において、化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩は、１日量を約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、又は約２５０ｍｇとして、１日量を約５０ｍｇ、又は約７５ｍｇ、又は約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇとして投与することができる化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩と組み合わせて投与することができる。例えば、化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩は、総用量が約１００ｍｇの化合物Ａを毎日と、総用量が約１００ｍｇの化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩を毎日と、を投与することができ、この用量は、好ましくは１日１回投与される。それを必要とする患者には、総用量が約２００ｍｇの化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩を毎日と、総用量が約１００ｍｇの化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩を毎日と、を投与することができ、この用量は、好ましくは１日１回投与される。
【0038】
化合物Ａ及び化合物Ｂは本明細書に開示した方法に従い一緒に使用することができる。本発明の治療は、治療医が適切と看做し、更に、好適な投与量及び投与頻度を決定するための本明細書に記載する方法を用いて導かれた場合、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、又は４週間を超えて継続できることが想定されているので、この２種の化合物は一緒に投与することもできるし、意図された投与量及び投与頻度に応じて任意の順序で別々に投与することもできる。本明細書に開示する方法及び使用において、化合物Ａ及び／又は化合物Ｂは少なくとも５日間連続して毎日投与することができる。
【0039】
他の態様において、本発明は、過剰増殖（例えば、がん）細胞の活性（例えば、増殖、生着（ｓｕｒｖｉｖａｌ）、若しくは生存能（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）、又は全て）を低下させる方法を特徴とする。他の態様において、本発明は、固形腫瘍を治療するための方法及び化合物Ｂを用いた組成物を提供し、これはＣＲＡＦ阻害剤と別々に、同時に、又は順次投与されるか又は投与するために調製される。ＭＡＰＫ経路における機能獲得型変異を発現する固形腫瘍、例えば、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＫＲＡＳ変異及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、並びにＫＲＡＳ変異型卵巣がん、並びにＢＲＡＦ Ｖ６００変異型黒色腫の治療に使用するためのＣＲＡＦ阻害剤も提供され、ＣＲＡＦ阻害剤は、化合物Ｂ等のＥＲＫ阻害剤と別々に、同時に、若しくは順次投与されるか又は投与するために調製される。通常、化合物Ｂは経口投与され、同じく経口投与されることの多いＣＲＡＦ阻害剤と、別々に、同時に、若しくは順次投与される。好適な方法、これらの方法及び組成物に使用するための化合物Ａ及び化合物Ｂの投与経路、投与量、及び投与頻度を本明細書に記載する。
【0040】
他の態様において、本発明は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するため、及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、ＥＲＫ１／２阻害剤を提供し、このＥＲＫ１／２阻害剤は、ＣＲＡＦ阻害剤と別々に、同時に、若しくは順次投与されるか又は投与するために調製される。本発明は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するため及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するためのＣＲＡＦ阻害剤も提供し、このＣＲＡＦ阻害剤は、ＥＲＫ１／２阻害剤と別々に、同時に、若しくは順次投与されるか又は投与するために調製される。通常、ＥＲＫ１／２阻害剤は経口投与され、同じく経口投与することができるＣＲＡＦ阻害剤と別々に又は順次投与することができる。ＣＲＡＦ阻害剤及びＥＲＫ１／２阻害剤に好適な方法、経路、投与量、及び投与頻度を本明細書に記載する。幾つかの実施形態において、ＣＲＡＦ阻害剤は化合物Ａであり、幾つかの実施形態において、ＥＲＫ１／２阻害剤は化合物Ｂである。
【0041】
本明細書に開示する組合せは、単一組成物中で一緒に投与することもできるし、又は２種以上の異なる組成物中で別々に、例えば本明細書に記載する組成物又は剤形で投与することもできる。本明細書に記載する組合せ医薬、特に本発明の組合せ医薬は、自由に組み合わせられる製品（ｆｒｅｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）、即ち、２種以上の別個の剤形として同時に、別々に、又は順次投与される２種以上の活性成分、例えば化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せとすることができる。治療剤の投与は任意の順序で行うことができる。第１の薬剤及び追加の薬剤（例えば、第２、第３の薬剤）は、同じ投与経路又は異なる投与経路を介して投与することができる。
【0042】
他の態様において、本発明は、化合物Ａ及び化合物Ｂを含み、少なくとも１種の、任意選択で２種以上の、医薬的に許容される賦形剤又は担体も任意選択で含む、組成物を特徴とする。この種の組成物は、固形腫瘍、典型的にはＫＲＡＳ変異又はＲＡＦ変異を発現する固形腫瘍を治療するために使用され、多くの場合、ＮＳＣＬＣ、特に少なくとも１種のＫＲＡＳ変異、特に本明細書に記載するものなどの機能獲得型変異を発現するＮＳＣＬＣを有する患者を治療するために使用される。
【0043】
非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）
肺がんは前世界の男女に発症する一般的な種類のがんである。非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）は最も一般的な種類（約８５％）の肺がんであり、その患者のおよそ７０％が診断時に病期が進行（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）している。肺がんは一般に喫煙と関連があるが、非喫煙者も肺がん、特にＮＳＣＬＣに罹患する。喫煙との関連性が高いことから、非喫煙者は診断が遅れることが多いが、肺がん患者の１０～１５％は喫煙経験がない。ＮＳＣＬＣの約３０％が活性化型ＫＲＡＳ変異を含み、これらの変異はＥＧＦＲ ＴＫＩに対する耐性に関与している（Ｐａｏ Ｗ，Ｗａｎｇ ＴＹ，Ｒｉｅｌｙ ＧＪ，ｅｔ ａｌ（２００５） ＰＬｏＳ Ｍｅｄ；２（１）：ｅ１７）。
肺がんは前世界の男女に発症する一般的な種類のがんである。非小細胞がん（ＮＳＣＬＣ）は最も一般的な種類（約８５％）の肺がんであり、その患者のおよそ７０％が診断時に病期が進行（ステージＩＩＩＢ又はステージＩＶ）している。肺がんは一般に喫煙と関連があるが、非喫煙者も肺がん、特にＮＳＣＬＣに罹患する。喫煙との関連性が高いことから、非喫煙者は診断が遅れることが多いが、肺がん患者の１０～１５％は喫煙経験がない。ＮＳＣＬＣの約３０％が活性化型ＫＲＡＳ変異を含み、これらの変異はＥＧＦＲ ＴＫＩに対する耐性に関与している（Ｐａｏ Ｗ，Ｗａｎｇ ＴＹ，Ｒｉｅｌｙ ＧＪ，ｅｔ ａｌ（２００５） ＰＬｏＳ Ｍｅｄ；２（１）：ｅ１７）。
【0044】
現在開発中の免疫療法は、従来の治療では効果がなかった患者を含め、肺がん患者に高い有益性をもたらし始めている。最近になって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を阻害する２種の阻害剤であるペンブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）（キイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）（登録商標））及びニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）（オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ）（登録商標））のＮＳＣＬＣに対する使用が承認された。ところがその結果から、ＰＤ－１阻害剤単剤で治療した多くの患者において治療が十分な有益性をもたらさないことが示唆されている。
【0045】
ＫＲＡＳの直接阻害は困難であることが証明されており、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣのがん治療の標的は依然として捕えられないままである。現時点において、ＫＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの患者に使用することができる標的治療は承認されていない。
【0046】
ＢＲＡＦ変異は３％以下のＮＳＣＬＣで観察されており、ＥＧＦＲ変異陽性ＮＳＣＬＣにおける耐性獲得機序としても説明されている（Ｐａｉｋ ＰＫ，Ａｒｃｉｌａ ＭＥ，Ｆａｒａ Ｍ，ｅｔ ａｌ（２０１１）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．Ｍａｙ ２０；２９（１５）：２０４６－５１）。
【0047】
卵巣がん
卵巣がんは婦人科がんの中で最も致死率の高いがんであり、多様な予後を示す異なる組織型及び分子型のサブタイプからなる多様性の大きい疾患である。上皮型は卵巣がんの９０％を占める。
卵巣がんは婦人科がんの中で最も致死率の高いがんであり、多様な予後を示す異なる組織型及び分子型のサブタイプからなる多様性の大きい疾患である。上皮型は卵巣がんの９０％を占める。
【0048】
上皮性卵巣がんの最も一般的な組織型は漿液性がんであり、上皮性卵巣がんの６０～７０％を占める。２段階異型度分類方式（ｔｗｏ ｔｉｅｒｅｄ ｇｒａｄｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）によれば、漿液性がんは、分子型、免疫組織化学的特徴、疫学像、及び臨床像の異なる低悪性度漿液性（ＬＧＳ）及び高悪性度漿液性（ＨＧＳ）に分類される。ＬＧＳがんは漿液性上皮性卵巣がんの１０％以下を占め、ＫＲＡＳ変異（４０％以下）又はＢＲＡＦ変異（２～６％）を有する卵巣がんは主としてＬＧＳがんである。ＬＧＳがんは、第１選択薬に対してのみならず、再発症例においても化学療法抵抗性を示す。
【0049】
膵臓がん
本明細書において使用される「膵臓がん」という用語は膵管腺がん（ＰＤＡＣ）を含む。ＰＤＡＣは最も一般的なタイプの膵臓がんである。
本明細書において使用される「膵臓がん」という用語は膵管腺がん（ＰＤＡＣ）を含む。ＰＤＡＣは最も一般的なタイプの膵臓がんである。
【0050】
ＫＲＡＳ変異型がん及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ
本発明は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
本発明は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
【0051】
他の態様において、本発明は、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）の治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬品的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
【0052】
他の態様において、本発明は、ＫＲＡＳ変異型卵巣がんの治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬品的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
【0053】
他の態様において、本発明は、ＫＲＡＳ変異型膵臓がんの治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬品的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
【0054】
他の態様において、本発明は、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するための、（ａ）化合物ＡであるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩、及び（ｂ）化合物ＢであるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩を含む、組合せ医薬を提供する。
【0055】
「ＢＲＡＦ変異型」腫瘍又はがんという語には、変異したＢＲＡＦタンパク質を発現する（ｅｘｈｉｂｉｔ）任意の腫瘍を包含する。Ｂ－Ｒａｆ変異の例としては、これらに限定されるものではないが、Ｖ６００Ｅ及びＶ６００Ｋが挙げられる。Ｂ－Ｒａｆ変異の殆どは、２つの部位：Ｎ－ｌｏｂｅにあるグリシンに富むＰ－ｌｏｏｐ並びに活性領域及びその近辺に集中している。Ｖ６００Ｅ変異は様々ながんで検出されており、１７９９位のヌクレオチドのチミンがアデニンに置き換わったことに起因する。それにより、コドン６００のバリン（Ｖ）がグルタミン酸（Ｅ）に置き換わる（現在はＶ６００Ｅと呼ばれている）。
【0056】
「ＫＲＡＳ変異型」腫瘍又はがんという語は、変異したＫＲＡＳタンパク質を発現する、特にＫＲＡＳの機能獲得型変異、特にＧ１２Ｘ、Ｇ１３Ｘ、Ｑ６１Ｘ、又はＡ１４６Ｘ ＫＲＡＳ変異（ここでＸは、その位置に天然に存在するアミノ酸以外の任意のアミノ酸である）を有する任意の腫瘍を包含する。例えば、Ｇ１２Ｖ変異は、コドン１２のグリシンがバリンに置換されていることを意味する。腫瘍のＫＲＡＳ変異の例としては、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＡ１４６Ｔが挙げられる。したがって、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ、卵巣がん、及び膵臓がんは、これらに限定されるものではないが、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＡ１４６Ｔ ＮＳＣＬＣ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、及びＡ１４６Ｔ ＣＲＣ、卵巣がん、又は膵臓がんを含む。例えば、本明細書に開示する併用療法によって治療されるがんとしては、ＫＲＡＳＱ６１Ｋ肺がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ卵巣がん、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ膵臓がん、及びＫＲＡＳＧ１２Ｒ膵臓がんが挙げられる。
【0057】
「ＢＲＡＦ変異型」腫瘍又はがんという語は、変異したＢＲＡＦタンパク質を発現する任意の腫瘍を包含する。Ｂ－Ｒａｆ変異の例としては、これらに限定されるものではないが、Ｖ６００Ｅ及びＶ６００Ｋが挙げられる。Ｂ－Ｒａｆ変異の殆どは、２つの部位：Ｎ－ｌｏｂｅにあるグリシンに富むＰ－ｌｏｏｐ並びに活性領域及びその近辺に集中している。Ｖ６００Ｅ変異は様々ながんで検出されており、１７９９位のヌクレオチドのチミンがアデニンに置き換わったことに起因する。それにより、コドン６００のバリン（Ｖ）がグルタミン酸（Ｅ）に置き換わる（現在はＶ６００Ｅと呼ばれている）。
【0058】
本明細書に記載する組合せ医薬により治療されるがんは、初期、中期、又は切除不能な状態にあるものとすることができる。
【0059】
併用療法の使用
一態様においては、対象のＫＲＡＳ変異型腫瘍、特にＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）等の、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）に１つ又は複数の変化を有する切除不能な固形がんである増殖性疾患を治療（例えば、進行の緩和、阻止、又は遅延のうちの１つ又は複数）する方法が提供される。この方法は、本明細書に開示する組合せ（例えば、治療有効量のＥＲＫ１／２阻害剤及び治療有効量の化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩を含む組合せ）を対象に投与することを含む。
一態様においては、対象のＫＲＡＳ変異型腫瘍、特にＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）等の、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）に１つ又は複数の変化を有する切除不能な固形がんである増殖性疾患を治療（例えば、進行の緩和、阻止、又は遅延のうちの１つ又は複数）する方法が提供される。この方法は、本明細書に開示する組合せ（例えば、治療有効量のＥＲＫ１／２阻害剤及び治療有効量の化合物Ａ又はその医薬的に許容される塩を含む組合せ）を対象に投与することを含む。
【0060】
本明細書に記載する組合せは、対象に全身に（例えば、経口、非経口、皮下、静脈内、直腸内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経皮、又は吸入若しくは腔内注入による）、又は局所的に、又は鼻、喉、若しくは気管支等の粘膜に適用することにより投与することができる。幾つかの実施形態において、これらの組合せ及び方法に使用するためのＥＲＫ１／２阻害剤は経口投与される。幾つかの実施形態において、本発明の組合せ及び方法に使用するためのＣＲＡＦ阻害剤は経口投与される。ＥＲＫ１／２阻害剤及びＣＲＡＦ阻害剤を組み合わせて使用する場合、両方を経口投与してもよく、治療医が決定した投与スケジュールに従い、一緒に（同時に）又は任意の順序で別々に投与することもできる。適切な用量及び投与スケジュールを本明細書に開示する。
【0061】
更なる併用療法
特定の実施形態において、本明細書に記載する方法及び組成物は、抗体分子、化学療法、他の抗がん治療剤（例えば、標的抗がん治療、遺伝子治療、ウイルス治療、ＲＮＡ治療骨髄移植（ＲＮＡ ｔｈｅｒａｐｙ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、ナノ治療、又は腫瘍溶解薬）、細胞傷害性薬剤、免疫療法（例えば、サイトカイン、免疫賦活薬、細胞免疫治療）、外科手技（例えば、乳腺腫瘍摘出術又は乳房切除術）、若しくは放射線術、又は上述したもの任意の組合せ等の１種又は複数種の他の抗がん治療方式と組み合わせて投与される。追加治療は、術後補助療法又は術後補助療法の形態とすることができる。幾つかの実施形態において、追加治療は、酵素阻害剤（例えば、低分子酵素阻害剤）又は転移阻害剤である。本発明の組合せと組み合わせて投与することができる例示的な細胞傷害性薬剤としては、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路を干渉することができる薬剤、細胞死を促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤、及び放射線（例えば、局所又は全身照射（例えば、ガンマ線照射）が挙げられる。他の実施形態においては、追加治療は外科手術若しくは放射線療法又はそれらの組合せである。他の実施形態においては、追加治療は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の１つ若しくは複数を標的とする治療、ＨＳＰ９０阻害剤、又はチューブリン阻害剤である。
特定の実施形態において、本明細書に記載する方法及び組成物は、抗体分子、化学療法、他の抗がん治療剤（例えば、標的抗がん治療、遺伝子治療、ウイルス治療、ＲＮＡ治療骨髄移植（ＲＮＡ ｔｈｅｒａｐｙ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、ナノ治療、又は腫瘍溶解薬）、細胞傷害性薬剤、免疫療法（例えば、サイトカイン、免疫賦活薬、細胞免疫治療）、外科手技（例えば、乳腺腫瘍摘出術又は乳房切除術）、若しくは放射線術、又は上述したもの任意の組合せ等の１種又は複数種の他の抗がん治療方式と組み合わせて投与される。追加治療は、術後補助療法又は術後補助療法の形態とすることができる。幾つかの実施形態において、追加治療は、酵素阻害剤（例えば、低分子酵素阻害剤）又は転移阻害剤である。本発明の組合せと組み合わせて投与することができる例示的な細胞傷害性薬剤としては、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路を干渉することができる薬剤、細胞死を促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤、及び放射線（例えば、局所又は全身照射（例えば、ガンマ線照射）が挙げられる。他の実施形態においては、追加治療は外科手術若しくは放射線療法又はそれらの組合せである。他の実施形態においては、追加治療は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の１つ若しくは複数を標的とする治療、ＨＳＰ９０阻害剤、又はチューブリン阻害剤である。
【0062】
別法として、又は上述の組合せと組み合わせて、本明細書に記載する方法及び組成物は、１種又は複数種の免疫調節剤（例えば、共刺激分子の活性化剤（ａｃｔｉｖａｔｏｒ）又は阻害分子の阻害剤、例えば、免疫チェックポイント分子の阻害剤）；ワクチン、例えば、治療用がんワクチン；又は他の形態の細胞免疫療法；と組み合わせて投与することができる。
【0063】
他の治療剤、手順、又は様式（例えば本明細書に記載されているもの）を任意の組合せ及び順序で本発明の治療と組み合わせて使用することができる。本発明の組成物及び組合せは、他の治療方法の前に、他の治療方法と同時に、この種の他の治療のサイクルの間に、又は疾患の寛解期間に投与することができる。
【0064】
本明細書においては、がん、特に、ＭＡＰＫ経路内に少なくとも１つの機能獲得型変異を発現する固形腫瘍の治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤及び／又はＣ－Ｒａｆ阻害剤を含む方法、組合せ、及び組成物を開示する。
【0065】
選択した用語は以下の定義を有し、本明細書全体を通してこの定義を有する。
【0066】
本明細書において使用される、冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、この冠詞の文法上の目的語が１つ又は１つを超える（例えば、少なくとも１つである）ことを指す。
【0067】
文脈上明らかに他の指示がない限り、本明細書において使用される「又は」という語は「及び／又は」という語を意味するために使用され、「及び／又は」と互換的に使用される。
【0068】
「約（ａｂｏｕｔ）」及び「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、一般に、測定された量について、測定の性質又は精度を考慮した上で許容される誤差の程度を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。特に、特定の値に「約」を付記して投与量を記述する場合は、この特定の値に対し±１０％の範囲を包含することを意図している。当技術分野において慣用されているように、投与量は、その遊離形態にある治療剤の量を指す。例えば、化合物Ｂの投与量が１００ｍｇと記述されており、化合物Ｂがその塩酸塩として使用される場合、使用される治療剤の量は化合物Ｂの遊離形態が１００ｍｇであることに相当する。
【0069】
「組合せ、併用（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」又は「～と組み合わせて、～と併用して（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」は、治療又は治療剤を、物理的に混合若しくは同時に投与しなければならない、及び／又は一緒に送達するために配合しなければならないことを示唆する意図はないが、これらの送達方法は本明細書に記載する範囲に包含される。これらの組合せにおける治療剤は、１つ又は複数の他の追加治療又は治療剤と同時に、その前に、又はその後に投与することができる。治療剤又は治療プロトコルの投与は任意の順序で行うことができる。一般に、各薬剤は、その薬剤に関し決められた用量及び／又はスケジュールで投与されることになる。この組合せに利用される追加の治療剤は、単一の組成物中で一緒に投与することができ、又は異なる組成物中で別々に投与することができることが更に理解されるであろう。一般に、組み合わせて利用される追加の治療剤は、それらが個々で利用される場合の量を超えない量で利用されることが期待される。幾つかの実施形態において、組み合わせて利用される場合の量は、単剤治療として利用される量よりも少ない。
【0070】
本明細書において使用される「相乗」という語は、例えば化合物Ａであるｃ－ＲＡＦ阻害剤化合物及び化合物ＢであるＥＲＫ１／２阻害剤化合物等の２種類の治療剤によって生み出される、例えば増殖性疾患、特にがん又はその症状の症状増悪を遅延させる作用が、各薬物を単独で投与した場合の効果の単純な相加よりも高いことを指す。相乗効果は、例えば、（Ｌｅｈａｒ ｅｔ ａｌ ２００９）に記載されているものなどの適切な方法を用いて算出できる。
【0071】
実施形態においては、追加の治療剤（例えば、ＣＲＡＦ阻害剤）は、単剤の用量水準に対し、治療用量又は治療用量よりも少ない量で投与される。特定の実施形態において、阻害、例えば増殖阻害又は腫瘍収縮を達成するのに必要とされる第２の治療剤の濃度は、第２の治療剤を別々に投与する場合よりも、第２の治療剤、例えばＥＲＫ１／２阻害剤を第１の治療剤を組み合わせて使用するか又は投与する場合の濃度の方が低い。特定の実施形態においては、阻害、例えば増殖阻害を達成するために必要とされる第１治療剤の濃度又は投与量は、第１治療剤を別々に投与する場合よりも、第１治療剤を第２治療剤と組み合わせて投与する場合の方が低い。特定の実施形態における併用療法において、阻害、例えば増殖阻害を達成するために必要とされる第２治療剤の濃度又は投与量は、単独療法としての第２治療剤の治療用量よりも低く、例えば、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、又は８０～９０％低い。特定の実施形態における併用療法において、阻害、例えば増殖阻害を達成するのに必要とされる第１治療剤の濃度又は投与量は、単剤療法としての第１治療剤の治療用量よりも低く、例えば、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、又は８０～９０％低い。
【0072】
「阻害」、「阻害剤」、又は「拮抗剤」という語は、所与の分子又は経路の特定のパラメータ、例えば活性を低下させることを含む。例えば、標的キナーゼ（ＣＲＡＦ又はＥＲＫ１／２）の活性を５％、１０％、２０％、３０％、４０％又はそれを超えて阻害することが、この語に包含される。したがって、この阻害は１００％であり得るが、必ずしも１００％である必要はない。
【0073】
「がん」という語は、異常細胞の望ましくない、且つ制御されない増殖を特徴とする疾患を指す。がん細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を介して身体の他の部分に広がることがある。本明細書において使用する「がん」又は「腫瘍」という語は、前悪性及び悪性のがん及び腫瘍を含む。
【0074】
本明細書において使用する「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という語は、１つ又は複数の療法を施した結果として、疾患、例えば、増殖性疾患の進行、重症度及び／又は持続期間が緩和若しくは改善されるか、又は疾患の１つ若しくは複数の症状（好ましくは、１つ又は複数の認識可能な症状）が改善されることを指す。特定の実施形態において、「治療する」、「治療」、及び「治療すること」という語は、必ずしも患者によって認識できるとは限らない、腫瘍の成長等の増殖性疾患の少なくとも１種の測定可能な物理的パラメータの改善を指す。他の実施形態において、「治療する」、「治療」、及び「治療すること」という語は、増殖性疾患の進行を、例えば、認識可能な症状の安定化によって身体的に、若しくは例えば、身体的パラメータの安定化によって生理学的に、のいずれか又はその両方により抑制することを指す。他の実施形態において、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という語は、腫瘍サイズ又はがん細胞数の低下又は安定化を指す。
【0075】
医薬組成物及びキット
投与レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）が得られるように調整される。例えば、単回ボーラス投与を行ってもよいし、数回に分割した用量をある期間に亘って投与してもよいし、又は治療の緊急性に比例させて用量を減量又は増量してもよい。
投与レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）が得られるように調整される。例えば、単回ボーラス投与を行ってもよいし、数回に分割した用量をある期間に亘って投与してもよいし、又は治療の緊急性に比例させて用量を減量又は増量してもよい。
【0076】
本明細書において使用される単位剤形は、治療を受ける対象の単位投与量として適した物理的に分離した単位を指す。各単位は、必要な医薬担体と一緒に所望の治療効果を発揮するように計算された予め定められた量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の詳細は、（ａ）活性化合物の独自の特徴及び達成すべき具体的な治療効果、並びに（ｂ）個体の過敏症（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）を治療するためのこの種の活性化合物の配合の技術分野に固有の制限により指示され、これらに直接依存する。
【0077】
本発明の医薬組成物は「治療有効量」又は「予防有効量」の本発明の化合物を含むことができる。「治療有効量」とは、必要な投与量及び期間で所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重等の因子に応じて変化し得る。治療有効量はまた、ＣＲＡＦ阻害剤及び／又はＥＲＫ１／２阻害剤の治療上有益な効果が毒性又は有害作用を上回る量でもある。「治療上有効な投与量」は、好ましくは、測定可能なパラメータ、例えば、腫瘍増大率を、所望の方法により、無治療の対象と比較して少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、更に好ましくは少なくとも約６０％、一層好ましくは少なくとも約８０％調節するものである。測定可能なパラメータ、例えば、ある化合物ががんを望ましく調節する能力は、適切な投与量及びスケジュールの確立を支援するためにヒト腫瘍における効力を予測する動物モデルシステムで評価することができる。或いは、組成物のこの特性は、当業者に公知のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、化合物が望ましくないパラメータを調節する能力を試験することにより評価することができる。
【0078】
「予防有効量」とは、必要な投与量及び期間で所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。通常、予防用量は、疾患の前段階又は初期段階で対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ないことになる。
【0079】
また、本発明の範囲には、本明細書に記載する化合物の１種又は複数種を含むキットが含まれる。このキットはまた、１種又は複数種の他の構成要素；使用指示書；本発明化合物と一緒に使用するための他の試薬；投与される化合物を調製するための混合容器等の器具又は他の材料；医薬的に許容される担体；並びに対象に投与するための注射器等の器具又は他の材料；も含むことができる。
【0080】
本発明の組合せは、治療機能又は保護機能又はその両方を有し、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで使用することができる。例えば、これらの分子は、本明細書に記載するがん等の様々な疾患を治療、予防、及び／又は診断するために、培養細胞にｉｎ ｖｉｔｒｏ若しくはｅｘ ｖｉｖｏで、又はヒト対象に投与することができる。
【0081】
したがって、一態様において、本発明は、他の抗がん化合物と組み合わせて使用することにより抗がん化合物の効力を増強する方法、特に、化合物Ｂと一緒に化合物Ａを使用することにより、いずれか一方の化合物を単剤として類似の用量で投与しても安全には達成することができない増強された効力を達成する方法を提供する。これらの組合せは、ＭＡＰＫ経路における１つ又は複数の機能獲得型変異、特にＲＡＳ及び／又はＲａｆ遺伝子変異を発現するがんの治療に特に有用である。
【実施例】
【0082】
以下に示す実施例は本発明の理解を助けるために記載するものであって、その範囲をいかなる形でも限定することを意図するものではなく、そのように解釈すべきではない。
【0083】
実施例１：Ｎ－（３－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）－６－モルホリノピリジン－４－イル）－４－メチルフェニル）－２－（トリフルオロメチル）イソニコチンアミド
化合物Ａ（化合物Ａ）は次に示す構造を有するモルホリン置換ビアリール化合物である。
化合物Ａ（化合物Ａ）は次に示す構造を有するモルホリン置換ビアリール化合物である。
【化7】
【0084】
化合物Ａは、公開ＰＣＴ出願である国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットの実施例１１５６である。化合物Ａの調製、化合物Ａの医薬的に許容される塩、及び化合物Ａを含む医薬組成物も同ＰＣＴ出願に開示されている（例えば、７３９～７４１頁参照）。
【0085】
実施例１Ａ
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＲａｆ活性測定
ＲＡＦ酵素及び触媒的に不活性なＭＥＫ１基質タンパク質は全て従来法を用いて社内で製造した。ＣＲＡＦ ｃＤＮＡを、Ｙ３４０Ｅ及びＹ３４１Ｅ活性化型変異を有する完全長タンパク質としてＳｆ９昆虫細胞で発現させるために、バキュロウイルス遺伝子発現ベクターにサブクローニングした。ＳＦ９昆虫細胞で発現させるために、ｈ１４－３－３ゼータｃＤＮＡをバキュロウイルス遺伝子発現ベクターにサブクローニングした。両方のタンパク質を同時発現させたＳｆ９細胞を溶解し、固定化ニッケルクロマトグラフィーにかけ、イミダゾールで溶出した。第２カラム（ＳｔｒｅｐＩＩ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｏｌｕｍｎ）を使用し、デスチオビオチンで溶出した。タンパク質のタグをＰｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎ酵素を用いて除去し、タグを除去するためにフロースルー（ｆｌｏｗ ｔｈｒｏｕｇｈ）工程を用いてタンパク質を更に精製した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＲａｆ活性測定
ＲＡＦ酵素及び触媒的に不活性なＭＥＫ１基質タンパク質は全て従来法を用いて社内で製造した。ＣＲＡＦ ｃＤＮＡを、Ｙ３４０Ｅ及びＹ３４１Ｅ活性化型変異を有する完全長タンパク質としてＳｆ９昆虫細胞で発現させるために、バキュロウイルス遺伝子発現ベクターにサブクローニングした。ＳＦ９昆虫細胞で発現させるために、ｈ１４－３－３ゼータｃＤＮＡをバキュロウイルス遺伝子発現ベクターにサブクローニングした。両方のタンパク質を同時発現させたＳｆ９細胞を溶解し、固定化ニッケルクロマトグラフィーにかけ、イミダゾールで溶出した。第２カラム（ＳｔｒｅｐＩＩ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃｏｌｕｍｎ）を使用し、デスチオビオチンで溶出した。タンパク質のタグをＰｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎ酵素を用いて除去し、タグを除去するためにフロースルー（ｆｌｏｗ ｔｈｒｏｕｇｈ）工程を用いてタンパク質を更に精製した。
【0086】
Ｃ－Ｒａｆ ＦＬは完全長Ｃ－Ｒａｆタンパク質を指す。
【0087】
ＡＴＰ結合部位に変異を持つ不活性化型Ｋ９７Ｒを含む完全長ＭＥＫ１をＲＡＦの基質として利用する。Ｎ末端に（ｈｉｓ）６タグを有するＭＥＫ１ ｃＤＮＡを大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）用発現ベクターにサブクローニングした。大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）溶菌液からＭＥＫ１基質を、ニッケルアフィニティークロマトグラフィーに続いて陰イオン交換を行うことにより精製した。最終ＭＥＫ１調製物をビオチン標識し（Ｐｉｅｒｃｅ ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ）、濃縮した。
【0088】
アッセイ材料
アッセイバッファー：５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）
反応停止バッファー：６０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０
活性化ｂ－Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）
ビオチン化Ｍｅｋ（ｋｉｎａｓｅ ｄｅａｄ型）
Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（商標）から入手可能、＃６７６０６１７Ｒ）
抗ｐｈｏｓｐｈｏ－ＭＥＫ１／２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．より入手可能、＃９１２１）
３８４ウェル少量アッセイプレート（Ｗｈｉｔｅ Ｇｒｅｉｎｅｒ（登録商標）プレート）
アッセイバッファー：５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）
反応停止バッファー：６０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０
活性化ｂ－Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）
ビオチン化Ｍｅｋ（ｋｉｎａｓｅ ｄｅａｄ型）
Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（商標）から入手可能、＃６７６０６１７Ｒ）
抗ｐｈｏｓｐｈｏ－ＭＥＫ１／２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．より入手可能、＃９１２１）
３８４ウェル少量アッセイプレート（Ｗｈｉｔｅ Ｇｒｅｉｎｅｒ（登録商標）プレート）
【0089】
アッセイ条件
ｂ－Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）：およそ４ｐＭ
ｃ－Ｒａｆ：およそ４ｎＭ
ビオチン化Ｍｅｋ（キナーゼデッド型）：およそ１０ｎＭ
ＡＴＰ：ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）用１０μＭ、ＣＲＡＦ用１μＭ
化合物のプレインキュベーション時間：室温下で６０分間
反応時間：室温下で１～３時間
ｂ－Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）：およそ４ｐＭ
ｃ－Ｒａｆ：およそ４ｎＭ
ビオチン化Ｍｅｋ（キナーゼデッド型）：およそ１０ｎＭ
ＡＴＰ：ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）用１０μＭ、ＣＲＡＦ用１μＭ
化合物のプレインキュベーション時間：室温下で６０分間
反応時間：室温下で１～３時間
【0090】
アッセイプロトコル
Ｒａｆ及びビオチン化Ｍｅｋ（ｋｉｎａｓｅ ｄｅａｄ型）を最終濃度の２×になるようにアッセイバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％ＢＳＡ、及び１ｍＭ ＤＴＴ）中で混合し、１００％ＤＭＳＯで希釈した４０×のＲａｆキナーゼ阻害剤試験化合物０．２５ｍｌを含むアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ白色３８４ウェルアッセイプレート＃７８１２０７）に５ｍｌ／ウェルで分注した。プレートを室温で６０分間インキュベートした。
Ｒａｆ及びビオチン化Ｍｅｋ（ｋｉｎａｓｅ ｄｅａｄ型）を最終濃度の２×になるようにアッセイバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％ＢＳＡ、及び１ｍＭ ＤＴＴ）中で混合し、１００％ＤＭＳＯで希釈した４０×のＲａｆキナーゼ阻害剤試験化合物０．２５ｍｌを含むアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ白色３８４ウェルアッセイプレート＃７８１２０７）に５ｍｌ／ウェルで分注した。プレートを室温で６０分間インキュベートした。
【0091】
アッセイバッファーで希釈した２×ＡＴＰを５ｍｌ／ウェルで添加することによりＲａｆキナーゼ活性測定反応を開始した。３時間後（ｂ－Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ））又は１時間後（ｃ－Ｒａｆ）に反応を停止し、ウサギ抗ｐ－ＭＥＫ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃９１２１）抗体及びＡｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎ ＩｇＧ（ＰｒｏｔｅｉｎＡ）検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃６７６０６１７Ｒ）を使用し、抗体（１：２０００希釈）及び検出用ビーズ（両ビーズを１：２０００希釈）の反応停止／ビーズバッファー（２５ｍＭ ＥＤＴＡ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）中混合物１０ｍｌをウェルに添加することにより、リン酸化物を測定した。検出用ビーズを光から保護するために、添加は暗条件下で行った。プレートにカバーを載せ、室温で１時間インキュベートした後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器で発光を読み取った。各化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）をＸＬ Ｆｉｔデータ解析ソフトウェアを用いて非線形回帰により求めた。
【0092】
上述のアッセイにより、化合物Ａは以下に報告する阻害効果を示した。
【0093】
化合物Ａはｂ－Ｒａｆ及びｃ－Ｒａｆの両方に対するｔｙｐｅ ＩＩ阻害剤である。
【0094】
【表1】
【0095】
実施例１Ｂ
次表に示すように、化合物Ａは、ＭＡＰＫ経路内における変異を発現する多くのヒトがん細胞株に対し活性を示す。ＢＲＡＦ又はＲＡＳに少なくとも１つの変異を有する細胞株に対する活性が特に強力であることに注目されたい。
次表に示すように、化合物Ａは、ＭＡＰＫ経路内における変異を発現する多くのヒトがん細胞株に対し活性を示す。ＢＲＡＦ又はＲＡＳに少なくとも１つの変異を有する細胞株に対する活性が特に強力であることに注目されたい。
【0096】
【表2】
【0097】
実施例１Ｃ
ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に抵抗性のＢＲＡＦ Ｖ６００変異型黒色腫細胞における化合物Ａの活性を調査するために、ＭＥＫ１／２変異、ＮＲＡＳ変異、又はＢＲＡＦのスプライスバリアントを発現するＢＲＡＦ Ｖ６００変異黒色腫細胞株Ａ３７５から派生させた機構的なモデルから化合物Ａの増殖抑制活性を評価した。これらの変異は、前臨床試験及び臨床サンプルの両方において、ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に対する耐性を付与することが実証されている。親Ａ３７５細胞株及び種々の突然変異対立遺伝子を発現するその派生細胞株における化合物Ａの増殖阻害効果を、ＢＲＡＦ阻害剤であるベムラフェニブ（Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）及びＭＥＫ阻害剤であるセルメチニブ（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）の有効性と比較して以下にまとめる。この突然変異はＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤の両方に対する耐性を付与し、ＩＣ５０値が５０倍を超えて増大した。それとは対照的に、耐性モデルは依然として化合物Ａに対し感受性を有し、ＩＣ５０は２～３倍しか増大しなかった。これらのデータは、ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に抵抗性を示すようになったＢＲＡＦ Ｖ６００黒色腫患者における化合物Ａの使用を支持するものである。
ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に抵抗性のＢＲＡＦ Ｖ６００変異型黒色腫細胞における化合物Ａの活性を調査するために、ＭＥＫ１／２変異、ＮＲＡＳ変異、又はＢＲＡＦのスプライスバリアントを発現するＢＲＡＦ Ｖ６００変異黒色腫細胞株Ａ３７５から派生させた機構的なモデルから化合物Ａの増殖抑制活性を評価した。これらの変異は、前臨床試験及び臨床サンプルの両方において、ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に対する耐性を付与することが実証されている。親Ａ３７５細胞株及び種々の突然変異対立遺伝子を発現するその派生細胞株における化合物Ａの増殖阻害効果を、ＢＲＡＦ阻害剤であるベムラフェニブ（Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）及びＭＥＫ阻害剤であるセルメチニブ（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）の有効性と比較して以下にまとめる。この突然変異はＢＲＡＦ及びＭＥＫ阻害剤の両方に対する耐性を付与し、ＩＣ５０値が５０倍を超えて増大した。それとは対照的に、耐性モデルは依然として化合物Ａに対し感受性を有し、ＩＣ５０は２～３倍しか増大しなかった。これらのデータは、ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤に抵抗性を示すようになったＢＲＡＦ Ｖ６００黒色腫患者における化合物Ａの使用を支持するものである。
【0098】
【表3】
【0099】
実施例１Ｄ
化合物Ａを、ヒドロキシプロピルメチルセルロース／ヒプロメロース、コロイド状二酸化ケイ素、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン／ポビドン、及びステアリン酸マグネシウムと一緒に配合し、化合物Ａを約５０ｍｇ含有する錠剤に成形した。この錠剤を、絶食状態の対象に、所望の投与量を得るのに十分な数で１日１回投与した。対象を１００ｍｇの用量で１日１回、又は１日当たり２００ｍｇの用量で治療した。化合物Ａの初回投与（サイクル１、１日目）から４８時間後まで、及び反復投与（サイクル１、１５日目）から２４時間後まで、ＰＫ評価用の一連の血液サンプルを採取した。最大血中濃度（Ｃｍａｘ）４４７ｎｇ／ｍｌ及び８８９ｎｇ／ｍｌは、それぞれ単回用量１００ｍｇ及び単回用量２００ｍｇを投与後４時間以内に到達した。投与１日目の投与間隔（２４時間）ごとの平均血中濃度（ｐｌａｓｍａ ｅｘｐｏｓｕｒｅ）（ＡＵＣｔａｕ）は、化合物Ａの用量１００ｍｇ及び２００ｍｇに対しそれぞれ５６７９ｈｒ・ｎｇ／ｍｌ及び１００１９ｈｒ・ｎｇ／ｍｌであった。患者における半減期は２３～２４時間前後と算出される。１日１回１００ｍｇの投与で、血漿中に化合物Ａが僅かに蓄積し、蓄積率は１．８であった。これらのデータに基づき、１日１回の投与スケジュールを確立した。この研究は継続中であるため、提示する全てのデータは予備的なものと看做す。
化合物Ａを、ヒドロキシプロピルメチルセルロース／ヒプロメロース、コロイド状二酸化ケイ素、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン／ポビドン、及びステアリン酸マグネシウムと一緒に配合し、化合物Ａを約５０ｍｇ含有する錠剤に成形した。この錠剤を、絶食状態の対象に、所望の投与量を得るのに十分な数で１日１回投与した。対象を１００ｍｇの用量で１日１回、又は１日当たり２００ｍｇの用量で治療した。化合物Ａの初回投与（サイクル１、１日目）から４８時間後まで、及び反復投与（サイクル１、１５日目）から２４時間後まで、ＰＫ評価用の一連の血液サンプルを採取した。最大血中濃度（Ｃｍａｘ）４４７ｎｇ／ｍｌ及び８８９ｎｇ／ｍｌは、それぞれ単回用量１００ｍｇ及び単回用量２００ｍｇを投与後４時間以内に到達した。投与１日目の投与間隔（２４時間）ごとの平均血中濃度（ｐｌａｓｍａ ｅｘｐｏｓｕｒｅ）（ＡＵＣｔａｕ）は、化合物Ａの用量１００ｍｇ及び２００ｍｇに対しそれぞれ５６７９ｈｒ・ｎｇ／ｍｌ及び１００１９ｈｒ・ｎｇ／ｍｌであった。患者における半減期は２３～２４時間前後と算出される。１日１回１００ｍｇの投与で、血漿中に化合物Ａが僅かに蓄積し、蓄積率は１．８であった。これらのデータに基づき、１日１回の投与スケジュールを確立した。この研究は継続中であるため、提示する全てのデータは予備的なものと看做す。
【0100】
実施例２：ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣモデルにおける化合物Ａの抗腫瘍活性
Ｈ３５８モデル：
腫瘍細胞接種１４日後に、平均腫瘍体積が２５９．４４～２６２．４７ｍｍ３の範囲にあるＳＣＩＤ ｂｅｉｇｅ担腫瘍ＮＣＩ－Ｈ３５８雌性マウスを３群に無作為に割付けた（ｎ＝８匹／群）。
Ｈ３５８モデル：
腫瘍細胞接種１４日後に、平均腫瘍体積が２５９．４４～２６２．４７ｍｍ３の範囲にあるＳＣＩＤ ｂｅｉｇｅ担腫瘍ＮＣＩ－Ｈ３５８雌性マウスを３群に無作為に割付けた（ｎ＝８匹／群）。
【0101】
治療期間中、動物に、投与液量を動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｌとし、溶媒、化合物Ａのいずれかを毎日３０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇで連続１４日間経口投与した。腫瘍体積を週３回デジタルノギスで測定し、治療期間を通して全動物の体重を記録した。
【0102】
Ｃａｌｕ６モデル：
平均腫瘍体積が１８０ｍｍ３となった腫瘍移植後１７日目に、担腫瘍Ｃａｌｕ６雌性ヌードマウスを治療群に無作為に割付けた（ｎ＝６匹／群）。化合物Ａによる治療は１７日目に開始し、１６日間継続した。投与液量は１０ｍｌ／ｋｇとした。無作為割付け時及びその後の研究期間中、腫瘍体積を週２回測定した。
平均腫瘍体積が１８０ｍｍ３となった腫瘍移植後１７日目に、担腫瘍Ｃａｌｕ６雌性ヌードマウスを治療群に無作為に割付けた（ｎ＝６匹／群）。化合物Ａによる治療は１７日目に開始し、１６日間継続した。投与液量は１０ｍｌ／ｋｇとした。無作為割付け時及びその後の研究期間中、腫瘍体積を週２回測定した。
【0103】
Ｈ７２７モデル：
平均腫瘍体積が２７５．７４ｍｍ３の範囲にある担腫瘍ＮＣＩ－Ｈ３５８雌性ヌードマウスを２群に無作為に割付けた（ｎ＝８匹／群）。治療期間中、動物に、投与液量を動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｌとし、溶媒又は化合物Ａのいずれかを１００ｍｇ／ｋｇの用量で連続１４日間経口投与した。腫瘍体積を週３回デジタルノギスで測定し、治療期間を通して全動物の体重を記録した。図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示すように、化合物Ａは、ＫＲＡＳｍｔ ＮＳＣＬＣモデルにおいて単剤活性を示した。
平均腫瘍体積が２７５．７４ｍｍ３の範囲にある担腫瘍ＮＣＩ－Ｈ３５８雌性ヌードマウスを２群に無作為に割付けた（ｎ＝８匹／群）。治療期間中、動物に、投与液量を動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｌとし、溶媒又は化合物Ａのいずれかを１００ｍｇ／ｋｇの用量で連続１４日間経口投与した。腫瘍体積を週３回デジタルノギスで測定し、治療期間を通して全動物の体重を記録した。図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示すように、化合物Ａは、ＫＲＡＳｍｔ ＮＳＣＬＣモデルにおいて単剤活性を示した。
【0104】
細胞ベースのアッセイにおいて、化合物Ａは、ＭＡＰＫシグナル伝達を活性化する種々の変異を含む細胞株において増殖抑制活性を示した。例えば、化合物Ａは、非小細胞肺がん細胞株Ｃａｌｕ－６（ＫＲＡＳ Ｑ６１Ｋ）、大腸がん細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳ Ｇ１３Ｄの増殖を阻害し、ＩＣ ５０値は０．２～１．２μＭの範囲にあった。ｉｎ ｖｉｖｏでは、ＮＳＣＬＣ由来Ｃａｌｕ－６（ＫＲＡＳ Ｑ６１Ｋ）及びＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ）異種移植片を含む幾つかのヒトＫＲＡＳ変異モデルを化合物Ａで治療することにより腫瘍が縮小した。全ての場合において腫瘍抑制効果は用量依存的であり、有意な体重減少が認められないことから判断されるように、忍容性が良好であった。ヌードマウス及びヌードラットに移植したＣａｌｕ－６モデルはどちらも化合物Ａに対し感受性を示し、マウスで１日１回（ＱＤ）の用量を１００、２００、及び３００ｍｇ／ｋｇとし、ラットでＱＤ７５及び１５０ｍｇ／ｋｇとした場合に縮小が認められた。このモデルにおける腫瘍増殖静止は、マウス及びラットにおいてそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇＱＤ及び３５ｍｇ／ｋｇＱＤで認められた。別のヒトＮＳＣＬＣ（ＮＣＩ－Ｈ３５８）モデルにおいて、マウスでは用量２００ｍｇ／ｋｇのＱＤで、ヒト卵巣Ｈｅｙ－Ａ８を異種移植したマウスでは３０ｍｇ／ｋｇのＱＤという低用量でも縮小が達成された。更に、Ｃａｌｕ－６異種移植片における用量分割（ｄｏｓｅ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）効力試験のデータから、化合物ＡをＱＤ投与及び１日２回分割投与（ＢＩＤ）すると、異なる投与量間で同程度の腫瘍抑制活性を示すことが実証された。これらの結果は、臨床におけるＱＤ又はＢＩＤ投与レジメンの探索を支持するものである。まとめると、忍容性が良好な用量の化合物Ａについて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにおいてＭＡＰＫ経路抑制及び増殖抑制活性が認められたことは、化合物ＡがＭＡＰＫ経路に活性化型の障害を持つ腫瘍を有する患者において抗腫瘍活性を示す可能性があり、したがって、特にＫＲＡＳ変異を有するＮＳＣＬＣ患者の治療に、単剤として、又はＭＡＰＫ経路の異なる段階に影響を及ぼす阻害剤等の第２の薬剤と組み合わせて、有用となり得ることを示唆している。化合物Ａは、ＭＡＰＫ経路、例えばＲＡＳ又はＲＡＦにおいて機能獲得型変異を発現する、卵巣がん、膵臓がん、及び黒色腫等の他の様々ながんに対し、単剤としての活性を示すことが分かっており、モデルシステムにおいて化合物Ｂ等のＥＲＫ阻害剤と組み合わせて使用すると、これらの状態に対してより効果が高くなることが示されている。
【0105】
実施例３：
化合物ＢはＥＲＫ１／２の阻害剤である。この化合物は公開ＰＣＴ出願である国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットに開示されており、その調製も記載されている。
化合物ＢはＥＲＫ１／２の阻害剤である。この化合物は公開ＰＣＴ出願である国際公開第２０１５／０６６１８８号パンフレットに開示されており、その調製も記載されている。
【化8】
【0106】
幾つかの実施形態において、この化合物はその塩酸塩として使用される。
【0107】
３日間の増殖アッセイにおいて、化合物Ｂは、肺がん細胞株Ｃａｌｕ６（ＫＲＡＳＱ６１Ｋ）、卵巣がん細胞株ＨｅｙＡ８（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ）、膵臓がん細胞株ＡｓＰＣ－１（ＫＲＡＳＧ１２Ｄ）、及びＰＳＮ１（ＫＲＡＳＧ１２Ｒ）等のＫＲＡＳ変異を有する細胞株のサブセットにおいて１μＭ未満のＩＣ５０値で細胞増殖を強力に阻害した。
【0108】
実施例４：ＫＲＡＳ変異型細胞株に対する化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せの効果
化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せの増殖に対する効果を、ＮＳＣＬＣ（４）、大腸がん（ＣＲＣ）（４）、及び膵管腺がん（ＰＤＡＣ）（６）由来の１４種のＫＲＡＳ変異細胞株パネルを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。
化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せの増殖に対する効果を、ＮＳＣＬＣ（４）、大腸がん（ＣＲＣ）（４）、及び膵管腺がん（ＰＤＡＣ）（６）由来の１４種のＫＲＡＳ変異細胞株パネルを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。
【0109】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ））は細胞溶解後にウェル中に存在するＡＴＰ量を測定するものである。溶解時に放出されるＡＴＰを、ルシフェラーゼ及びその基質であるルシフェリンが関与する酵素反応で測定する。発光量はＡＴＰ量に比例し、そのＡＴＰ量はウェル内の生細胞数に比例する。このアッセイは薬物処理後の生細胞の割合を求めるために使用される。
【0110】
１４種の細胞株を含むＣＴＧアッセイに使用する試薬、培地、及び細胞密度を次の表に記載する。
【0111】
細胞を、白色３８４ウェル組織培養プレート（＃３７０７、Ｃｏｒｎｉｎｇ、米国ニューヨーク州）に、次表の情報に従い５０μｌ／ウェルでｄｕｐｌｉｃａｔｅ ｓｅｔｓで播種した。翌日、化合物用プレート（＃７８８８７６、Ｇｒｅｉｎｅｒ、米国ノースカロライナ州モンロー（Ｍｏｎｒｏｅ））中、化合物をＤＭＳＯで希釈し、７段階の１：３希釈系列を作成した（必要な最終濃度の１０００倍）。超音波分注器（ａｃｏｕｓｔｉｃ ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ）（ＡＴＳ１００、ＥＤＣ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、米国カリフォルニア州）を用いて化合物を細胞プレートに分注することにより１：１０００希釈を達成した。例えば、化合物用プレートの１０ｍＭの化合物Ａを含む１つのウェルから、化合物５０ｎＬを細胞５０ｕＬに移すことにより、その所与のウェルにおけるその化合物の最終濃度を１０μＭとした。２．３項に、ＡＴＳ１００を使用して本発明者らのアッセイプレートで作成した組合せのマトリクス（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｇｒｉｄ）の配置と濃度について概説する。次いでアッセイプレートを３７℃の加湿ＣＯ２インキュベーターに戻した。
【0112】
化合物を５日間インキュベートした後、ＣＴＧ生存活性測定試薬を２５μＬ／ウェルで各ウェルに添加し（総体積７５μｌ）、室温で１５分間インキュベートした後、プレートをマイクロプレートリーダーを用いて０．１秒の超高感度発光測定プロトコル（ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、米国マサチューセッツ州ホプキントン（Ｈｏｐｋｉｎｇｔｏｎ））で読み取った。
【0113】
その所与の細胞株のデータを未処理ウェル（ＤＭＳＯのみで処理）の平均値に対し正規化した。次いでその値を１から差し引いて阻害率として表すために１００を乗じた。次いで正規化したデータを、自社開発のソフトウェア（ＨＥＬＩＯＳ）による４変数ロジスティック（４ＰＬ）回帰曲線フィッティングモデルを用いて曲線当てはめを行った。化合物が単剤で細胞増殖を５０％阻害した曲線をＩＣ５０（最大半量阻害濃度）として報告した。
【0114】
【表4】
【0115】
【表5】
【0116】
全ての場合において、化合物Ａの濃度を０．０１４～１０μＭの範囲とし、化合物Ｂの濃度を０．０１１～８．０μＭの範囲として、その組合せをチェッカーボード方式のマトリックス（ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄ ｆｏｒｍａｔｔｅｄ ｍａｔｒｉｘ）で評価した。組合せが特定の細胞株において相乗的であるか否かは、相乗効果に関する２つの測定値：５０又は７５％の阻害レベルにおける相乗効果スコア（ｓｙｎｅｒｇｙ ｓｃｏｒｅ）及び併用指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）（ＣＩ）を用いて決定した（Ｌｅｈａｒ ｅｔ ａｌ ２００９）。
【0117】
試験に供した細胞株の７／１４において、化合物Ａと化合物Ｂとを組み合わせることにより中程度～高度の相乗効果が認められた。各細胞株についてのこれらの値を次表にまとめる。
【0118】
【表6】
【0119】
このスコア／数値を解釈するための一般的な目安を次の表に示す。
【0120】
【表7】
【0121】
試験に供した細胞株セットにおいては、相乗効果は主としてＮＳＣＬＣ及びＰＤＡＣ細胞系に由来するモデルで観察され、この２つの系列ではそれぞれＣａｌｕ－６（ＫＲＡＳＱ６１Ｋ）及びＨＵＰＴ４（ＫＲＡＳＧ１２Ｖ）モデルの反応が最も高かった。
【0122】
実施例５：疾患の異種移植片モデルにおける化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せ
Ｃａｌｕ－６ＮＳＣＬＣ腫瘍の細胞１０００万個を含む５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）を胸腺欠損雌性マウスの側腹部皮下に注射することにより生着させた。腫瘍がおよそ２５０ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に応じて無作為に治療群に割付けた（ｎ＝７）。試験薬剤を指示された用量で１日１回（ｑｄ）又は１日置きに（ｑ２ｄ）経口投与した。無作為割付け後の経過日数に対する治療群の腫瘍体積（Ａ－Ｂ）。初期からの体重変化率の平均（Ｃ）。これらの治療に関するデータを図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示す。
Ｃａｌｕ－６ＮＳＣＬＣ腫瘍の細胞１０００万個を含む５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）を胸腺欠損雌性マウスの側腹部皮下に注射することにより生着させた。腫瘍がおよそ２５０ｍｍ３に到達したら、マウスを腫瘍体積に応じて無作為に治療群に割付けた（ｎ＝７）。試験薬剤を指示された用量で１日１回（ｑｄ）又は１日置きに（ｑ２ｄ）経口投与した。無作為割付け後の経過日数に対する治療群の腫瘍体積（Ａ－Ｂ）。初期からの体重変化率の平均（Ｃ）。これらの治療に関するデータを図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示す。
【0123】
ヒトＮＳＣＬＣ異種移植片（Ｃａｌｕ－６）に対し化合物Ａ及び化合物Ｂによる併用治療を行うと、いずれかの単剤と比較して奏効の深さ及び奏効期間が向上した。化合物Ａを３０ｍｇ／ｋｇ ｑｄで投与することにより２６％Ｔ／Ｃを達成し、一方、化合物Ｂを７５ｍｇ／ｋｇ ｑ２ｄ又は５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄで投与することによりそれぞれ４％Ｔ／Ｃ及び２２％の縮小を達成した（１７日間投与後）。化合物Ａの３０ｍｇ／ｋｇ ｑｄ投与及び化合物Ｂの５０ｍｇ／ｋｇ ｑｄ又は７５ｍｇ／ｋｇ ｑ２ｄ投与を組み合わせると、投与後１７日目にそれぞれ６６％及び５１％の縮小を達成した。化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せにより奏効の深さが増大したことに加えて、奏効期間も向上した。化合物Ａ及び化合物Ｂの単剤を投与したマウスの腫瘍は治療中に増悪したが、化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せは（化合物Ｂの用量に関係なく）投与後４２日間腫瘍縮小を維持した。総括すると、これらのデータは、化合物Ａ及び化合物Ｂの併用治療により、ＭＡＰＫ経路内の機能獲得型変異によりＭＡＰＫ経路が活性化された患者においてより高く且つより持続的な反応を得ることができることを示唆している。更にこれらの結果は、化合物Ａと組み合わせて化合物Ｂを間欠的に投与することの探索の可能性を支持するものである。体重減少が認められなかったことから判断されるように、試験を行った組合せは忍容性が良好である。
【0124】
実施例６：ＭＡＰＫ経路が変化した切除不能な固形がんの成人患者に化合物Ａ単独で又は化合物Ｂと一緒に投与する第Ｉ相用量設定試験
単剤としての化合物Ａ
本試験において推奨される化合物Ａの開始用量及び投与レジメンは、前臨床試験で得られた前臨床安全性試験、忍容性データ、ＰＫ／ＰＤデータ、並びに探索的なヒトの有効用量範囲予測に基づき、経口１００ｍｇ ＱＤである。１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、又は４００ｍｇの開始用量を用いることができる。予備データから、開始用量を１日１回２５０ｍｇとすると固形腫瘍に有効となる可能性が示唆されている。投薬の自由度を最大限にするために、化合物Ａは５０ｍｇ及び／又は１００ｍｇの経口投与用錠剤として調製することができる。化合物Ａの臨床応用に提案された処方は、化合物Ａに、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、コロイド状二酸化ケイ素、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン（ポビドン）及びステアリン酸マグネシウムから選択される１種又は複数種の賦形剤を組み合わせたものを含み、好適には化合物Ａを５０ｍｇ又は１００ｍｇ含有する経口投与用錠剤の剤形で調製することができる。
単剤としての化合物Ａ
本試験において推奨される化合物Ａの開始用量及び投与レジメンは、前臨床試験で得られた前臨床安全性試験、忍容性データ、ＰＫ／ＰＤデータ、並びに探索的なヒトの有効用量範囲予測に基づき、経口１００ｍｇ ＱＤである。１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、又は４００ｍｇの開始用量を用いることができる。予備データから、開始用量を１日１回２５０ｍｇとすると固形腫瘍に有効となる可能性が示唆されている。投薬の自由度を最大限にするために、化合物Ａは５０ｍｇ及び／又は１００ｍｇの経口投与用錠剤として調製することができる。化合物Ａの臨床応用に提案された処方は、化合物Ａに、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、コロイド状二酸化ケイ素、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン（ポビドン）及びステアリン酸マグネシウムから選択される１種又は複数種の賦形剤を組み合わせたものを含み、好適には化合物Ａを５０ｍｇ又は１００ｍｇ含有する経口投与用錠剤の剤形で調製することができる。
【0125】
用量漸増のための暫定用量を次表に記載する。
【0126】
【表8】
【0127】
用量拡大パートでは、化合物Ａの単剤群の患者は、推奨用量及び用量漸増データに基づき選択されたレジメンにより化合物Ａで治療する。この用量は、治験対象となる全ての適応症の成人患者に対し安全かつ忍容性があると期待されている。
【0128】
このヒト初回投与治験の臨床レジメンは、化合物Ａを１日１回連続投与するスケジュールである。ＱＤレジメンは、前臨床試験において有効且つ忍容性が良好であることが実証されている。Ｃａｌｕ６異種移植片に対しては、ＱＤ又は分割ＢＩＤレジメンのいずれも同程度の効果が達成され、有効性には総曝露量が関係していることが示唆された。予測されたヒトＰＫ及び予測された半減期（約９時間）も、ＱＤ投与により有効な曝露が達成され得ることを示唆している。
【0129】
更に、有効投与量は、ＭＡＰキナーゼ経路阻害を示唆するバイオマーカーを監視することによって決定することができる。特にＤＵＳＰ６（二重特異性ホスファターゼ６）はこの経路の既知のバイオマーカーであり、ＤＵＳＰ６は、ｉｎ ｖｉｖｏレベルで、化合物Ａの有効血中量に対応する投与量の化合物Ａが投与された対象において低下することが示されている。したがってＤＵＳＰ６は、化合物Ａで治療された対象の薬力学的バイオマーカーとして、単剤の場合も他の治療剤と併用した場合も使用することができる。
【0130】
化合物Ａ及び化合物Ｂの組合せ
化合物Ｂはその塩酸塩として使用することができる。この試験を行うために、１種若しくは複数種の賦形剤と一緒に配合するか又は化合物のみで、ソフト又はハードゲルカプセル等の医薬的に許容されるカプセルに含有させるか、強制経口投与に便利な溶媒と混合して経口投与することができる。
化合物Ｂはその塩酸塩として使用することができる。この試験を行うために、１種若しくは複数種の賦形剤と一緒に配合するか又は化合物のみで、ソフト又はハードゲルカプセル等の医薬的に許容されるカプセルに含有させるか、強制経口投与に便利な溶媒と混合して経口投与することができる。
【0131】
化合物Ｂと組み合わせた化合物Ａの用量漸増は、単剤としての化合物Ａに関し特定された投与レジメンで開始した。化合物Ａの開始用量は単剤用量よりも低くした。したがって、この用量を選択する際は、十分な効力を示すには低過ぎる用量を投与される可能性がある患者数を制限しながら、毒性を示す可能性がある量の薬物への曝露を最小限に抑えるべきである。
【0132】
化合物Ａのレジメンは単剤としての化合物Ａに選択されたものと同じレジメンとした。単剤拡大パートで化合物Ａ単剤のレジメンも探索する場合、安全性及び曝露量を含む全ての利用可能なデータに基づき好ましい１つのレジメンを、組合せ用に選択することになる。新たなデータに基づき、併用治療群の化合物Ａの投与レジメンの切り替えを決定することができる。
【0133】
化合物Ｂは、前臨床モデルにおける活性に基づき、有効な腫瘍抑制効果をもたらすのに十分な曝露を受けると予測される投与量で投与した。前臨床試験に基づけば、効力は有効血中濃度を超えた時間によって決まると思われるので、一実施形態においては化合物Ｂの血中濃度を監視することによって投与量を決定することができる。効力を得るために望ましい最低血中濃度は約６００ｎＭ又は約３５０ｎｇ／ｍＬと予測される。したがって、投与量及び投与スケジュール（頻度）は、少なくとも１日間若しくは少なくとも１週間、又は治療医が適切と判断した１、２、３、若しくは４週間等の治療サイクルに亘って、化合物Ｂの血中濃度がこの最低血中濃度を超えるように維持することを目標として導出することができる。
【0134】
この治験の臨床レジメンは、化合物Ａ及び化合物Ｂを１日１回連続投与するスケジュールとした。
【0135】
更にこれを臨床試験で得られた予備結果により確定した。化合物Ａを１２００ｍｇＱＤで治療した非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有する対象は、固形がんの治療効果判定規準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）の規準に従い、－３５％の部分奏効をもたらすことが示された。
【0136】
用量拡大パートでは、併用療法群の患者を、用量漸増データに基づき薬剤併用に推奨される用量及びレジメンで治療する。適切な投与量が自由に得られるように、化合物Ｂは、ゲルカプセル当たり約５ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、又は１００ｍｇの用量等の様々な量の化合物Ｂ（任意選択でその塩酸塩として）を含有するゲルカプセルの形態で調製することができる。
【0137】
併用群の患者は、化合物Ａの１日量を約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、又は約２５０ｍｇ、及び化合物Ｂの１日量を約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、又は約１００ｍｇとして治療することができる。例えば、患者に、総用量約１００ｍｇの化合物Ａを毎日及び総用量約１００ｍｇの化合物Ｂを毎日投与することができ、その用量は、好ましくは１日１回投与される。患者はまた、総用量約２００ｍｇの化合物Ａを毎日及び総用量約１００ｍｇの化合物Ｂを毎日投与することができ、その用量は、好ましくは１日１回投与される。
【0138】
併用療法を受ける患者には、切除不能な又は遠隔転移を有するＫＲＡＳ変異型又はＢＲＡＦ変異型（例えばＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異型）ＮＳＣＬＣを有するＮＳＣＬＣ患者、例えば成人患者が含まれる。これらの患者は、標準的な治療を受けた後に増悪したか、又は有効な標準的治療が存在しない可能性のある患者である。
【0139】
試験の有効性は、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１に準拠して、全奏効率（ＯＲＲ）、疾病管理率（ＤＣＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）を測定することにより評価することができる。
【0140】
均等物
本発明の特定の実施形態について述べてきたが、上述の明細書は例示的なものであって限定的なものではない。本明細書及び以下に記載する特許請求の範囲を検討することにより、当業者には本発明の多くの変形形態が明らかになるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲をその均等物の全範囲と一緒に、及び明細書をこの種の変形形態と一緒に参照することによって決定すべきである。
また、本発明は以下の態様を含みうる。
[１]
（ｉ）化合物Ａ：
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と；
（ｉｉ）化合物Ｂ：
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬。
[２]
前記ｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、別々に、同時に、又は順次投与される、上記[１]に記載の組合せ医薬。
[３]
経口投与用である、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[４]
前記ｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤は経口投与形態にある、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[５]
前記ＥＲＫ阻害剤は経口投与形態にある、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[６]
上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬及び少なくとも１種の医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
[７]
増殖性疾患の治療に使用するための、上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬又は上記[６]に記載の医薬組成物。
[８]
上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬の、増殖性疾患を治療するための医薬を調製するための使用。
[９]
それを必要とする対象における増殖性疾患を治療するための方法であって、前記対象に治療有効量の上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬又は治療有効量の上記[６]に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
[１０]
前記増殖性疾患は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）に１つ又は複数の変化を有する固形腫瘍から選択される、上記[７]に記載の組合せ医薬又は上記[８]に記載の組合せ医薬の使用又は上記[９]に記載の方法。
[１１]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１２]
前記増殖性疾患は、切除不能な又は遠隔転移を有するＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）である、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１３]
前記増殖性疾患は、切除不能な又は遠隔転移を有するＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１４]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型膵臓がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１５]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）である、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１６]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型卵巣がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１７]
前記がんは、ＲＡＦ変異であるＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、及びＧ４６４Ｅ、並びにＲＡＳ変異であるＡ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの変異を発現する、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１８]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、別々に投与される、上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の方法。
[１９]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、一緒に投与される、上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の方法。
[２０]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、１日量を約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、又は約２５０ｍｇとして投与される、上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の方法。
[２１]
前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、１日当たり約５０ｍｇ、又は１日当たり約７５ｍｇ、又は１日当たり約１００ｍｇの用量で投与される、上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の方法。
[２２]
前記ｃ－ＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、経口投与される、上記[２１]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２１]に記載の方法。
[２３]
前記ＥＲＫ阻害剤である化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩は、化合物Ａと併用される場合は、間欠的に投与される、上記[２２]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２２]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２２]に記載の方法。
[２４]
前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、単回の１日量を約５０ｍｇ又は約７５ｍｇ又は約１００ｍｇとして投与される、上記[２３]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２３]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２３]に記載の方法。
[２５]
化合物Ａは１日量を１００ｍｇ（例えば１日１回）として投与され、化合物Ｂは１日量を１００ｍｇ（例えば１日１回）として投与される、上記[２４]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２４]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２４]に記載の方法。
[２６]
化合物Ａは１日量を２００ｍｇ（例えば、１日１回）として投与され、化合物Ｂは１日量を１００ｍｇ（例えば、１日１回）として投与される、上記[２５]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２５]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２５]に記載の方法。
[２７]
ＫＲＡＳ変性型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[２８]
ＫＲＡＳ変異及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[２９]
ＫＲＡＳ変異型膵臓がんの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３０]
ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）の治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３１]
ＫＲＡＳ変異及び／又はＢＲＡＦ変異型卵巣がんの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３２]
ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３３]
ＫＲＡＳ変異又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３４]
ＫＲＡＳ変異型膵臓がんの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３５]
ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）の治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３６]
ＫＲＡＳ変異型卵巣がんの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤、又はその医薬的に許容される塩。
[３７]
上記[１]に記載のｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩の１種又は複数種の投与単位と、（ｂ）上記[１]に記載のＥＲＫ阻害剤の１種又は複数種の投与単位と、少なくとも１種の医薬的に許容される担体と、を含む、組合せ製剤。
[３８]
上記[１]～[６]のいずれかに記載の組合せ医薬を、それを同時に又は順次投与するための指示書と一緒に含む、前記ＭＡＰＫ経路に機能獲得型変異を発現するがんの治療に使用するための、キット。
本発明の特定の実施形態について述べてきたが、上述の明細書は例示的なものであって限定的なものではない。本明細書及び以下に記載する特許請求の範囲を検討することにより、当業者には本発明の多くの変形形態が明らかになるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲をその均等物の全範囲と一緒に、及び明細書をこの種の変形形態と一緒に参照することによって決定すべきである。
また、本発明は以下の態様を含みうる。
[１]
（ｉ）化合物Ａ：
【化9】
であるＣＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と；
（ｉｉ）化合物Ｂ：
【化10】
であるＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、を含む組合せ医薬。
[２]
前記ｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、別々に、同時に、又は順次投与される、上記[１]に記載の組合せ医薬。
[３]
経口投与用である、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[４]
前記ｃ－Ｒａｆキナーゼ阻害剤は経口投与形態にある、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[５]
前記ＥＲＫ阻害剤は経口投与形態にある、上記[１]又は[２]に記載の組合せ医薬。
[６]
上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬及び少なくとも１種の医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
[７]
増殖性疾患の治療に使用するための、上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬又は上記[６]に記載の医薬組成物。
[８]
上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬の、増殖性疾患を治療するための医薬を調製するための使用。
[９]
それを必要とする対象における増殖性疾患を治療するための方法であって、前記対象に治療有効量の上記[１]～[５]のいずれかに記載の組合せ医薬又は治療有効量の上記[６]に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
[１０]
前記増殖性疾患は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）に１つ又は複数の変化を有する固形腫瘍から選択される、上記[７]に記載の組合せ医薬又は上記[８]に記載の組合せ医薬の使用又は上記[９]に記載の方法。
[１１]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、ＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣ、ＫＲＡＳ変異型膵臓がん、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）、及びＫＲＡＳ変異型卵巣がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１２]
前記増殖性疾患は、切除不能な又は遠隔転移を有するＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）である、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１３]
前記増殖性疾患は、切除不能な又は遠隔転移を有するＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１４]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型膵臓がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１５]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）である、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１６]
前記増殖性疾患は、ＫＲＡＳ変異型卵巣がんである、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１７]
前記がんは、ＲＡＦ変異であるＶ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、及びＧ４６４Ｅ、並びにＲＡＳ変異であるＡ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの変異を発現する、上記[１０]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]に記載の方法。
[１８]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、別々に投与される、上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の方法。
[１９]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩とは、一緒に投与される、上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１７]のいずれかに記載の方法。
[２０]
前記ｃ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、１日量を約１００ｍｇ、又は約１５０ｍｇ、又は約２００ｍｇ、又は約２５０ｍｇとして投与される、上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[１９]のいずれかに記載の方法。
[２１]
前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、１日当たり約５０ｍｇ、又は１日当たり約７５ｍｇ、又は１日当たり約１００ｍｇの用量で投与される、上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の組合せ医薬の使用、又は上記[１０]～[２０]のいずれかに記載の方法。
[２２]
前記ｃ－ＲＡＦ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、経口投与される、上記[２１]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２０]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２１]に記載の方法。
[２３]
前記ＥＲＫ阻害剤である化合物Ｂ又はその医薬的に許容される塩は、化合物Ａと併用される場合は、間欠的に投与される、上記[２２]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２２]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２２]に記載の方法。
[２４]
前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、単回の１日量を約５０ｍｇ又は約７５ｍｇ又は約１００ｍｇとして投与される、上記[２３]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２３]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２３]に記載の方法。
[２５]
化合物Ａは１日量を１００ｍｇ（例えば１日１回）として投与され、化合物Ｂは１日量を１００ｍｇ（例えば１日１回）として投与される、上記[２４]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２４]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２４]に記載の方法。
[２６]
化合物Ａは１日量を２００ｍｇ（例えば、１日１回）として投与され、化合物Ｂは１日量を１００ｍｇ（例えば、１日１回）として投与される、上記[２５]に記載の使用のための組合せ医薬、又は上記[２５]に記載の組合せ医薬の使用、又は上記[２５]に記載の方法。
[２７]
ＫＲＡＳ変性型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[２８]
ＫＲＡＳ変異及びＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[２９]
ＫＲＡＳ変異型膵臓がんの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３０]
ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）の治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３１]
ＫＲＡＳ変異及び／又はＢＲＡＦ変異型卵巣がんの治療に使用するためのＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３２]
ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）の治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３３]
ＫＲＡＳ変異又はＢＲＡＦ変異型ＮＳＣＬＣの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３４]
ＫＲＡＳ変異型膵臓がんの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３５]
ＫＲＡＳ変異型大腸がん（ＣＲＣ）の治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩。
[３６]
ＫＲＡＳ変異型卵巣がんの治療に使用するためのｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩であって、前記ｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩は、ＥＲＫ阻害剤又はその医薬的に許容される塩と、別々に、同時に、又は順次投与するために調製される、ｃ－Ｒａｆ阻害剤、又はその医薬的に許容される塩。
[３７]
上記[１]に記載のｃ－Ｒａｆ阻害剤又はその医薬的に許容される塩の１種又は複数種の投与単位と、（ｂ）上記[１]に記載のＥＲＫ阻害剤の１種又は複数種の投与単位と、少なくとも１種の医薬的に許容される担体と、を含む、組合せ製剤。
[３８]
上記[１]～[６]のいずれかに記載の組合せ医薬を、それを同時に又は順次投与するための指示書と一緒に含む、前記ＭＡＰＫ経路に機能獲得型変異を発現するがんの治療に使用するための、キット。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
