特許 7116793 マシモレリン含有組成物によるヒトにおける成長ホルモン欠損を評価する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-08-02

(45)【発行日】2022-08-10

(54)【発明の名称】マシモレリン含有組成物によるヒトにおける成長ホルモン欠損を評価する方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/74 20060101AFI20220803BHJP

   A61P 5/10 20060101ALI20220803BHJP

   A61K 38/27 20060101ALI20220803BHJP

【ＦＩ】

G01N33/74

A61P5/10

A61K38/27

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2020534516

(86)(22)【出願日】2018-12-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-06-10

(86)【国際出願番号】 EP2018085622

(87)【国際公開番号】W WO2019121762

(87)【国際公開日】2019-06-27

【審査請求日】2020-06-23

(31)【優先権主張番号】62/607,866

(32)【優先日】2017-12-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/609,059

(32)【優先日】2017-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】503300502

【氏名又は名称】エテルナ ツェンタリス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

【氏名又は名称原語表記】ＡＥｔｅｒｎａ Ｚｅｎｔａｒｉｓ ＧｍｂＨ

【住所又は居所原語表記】Ｗｅｉｓｍｕｅｌｌｅｒｓｔｒａｓｓｅ ５０，Ｄ－６０３１４ Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ ａｍ Ｍａｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ

(74)【代理人】

【識別番号】110000109

【氏名又は名称】特許業務法人特許事務所サイクス

(72)【発明者】

【氏名】アンマー ニコラ

(72)【発明者】

【氏名】ミュラー ギルベルト

(72)【発明者】

【氏名】ザクセ リヒャルト

(72)【発明者】

【氏名】ジンダーマン ヘルベルト

【審査官】三木 隆

(56)【参考文献】

【文献】特表２００９－５２６９８９（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１０／０２１６７０６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】中国特許出願公開第１０６３１０２２９（ＣＮ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５２０１０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１０－５４０５８８（ＪＰ，Ａ）

【文献】Vrinda Agrawal，The macimorelin-stimulated growth hormone test for adult growth hormone deficiency diagnosis，Expert Rev. Mol. Diagn.，2014年05月16日，Vol.14 No.6，Page.647-654

【文献】Jose M. Garcia，Macimorelin as a Diagnostic Test for Adult GH Deficiency，J Clin Endocrinol Metab，2018年08月，Vol.103 No.8，Page.3083-3093

【文献】Garcia, Jose Manuel，Validation for macimorelin as a diagnostic test for adult growth hormone deficiency (AGHD) : A phase 3 study in comparison with the insulin-torelance test (ITT)，Endocrine Reviews，2017年04月，Vol.38 No.3 Supp. Supplement 1，Abstract Number: LB SUN 59

【文献】J. M. Garcia，Macimorelin (AEZS-130)-Stimulated Growth Hormone (GH) Test: Validation of a Novel Oral Stimulation Test for the Diagnosis of Adult GH Deficiency，J Clin Endocrinol Metab，2013年06月，Vol.98 No.6，Page.2422-2429

【文献】Vrinda Agrawal，The macimorelin-stimulated growth hormone test for adult growth hormone deficiency diagnosis，Expert Review of Molecular Diagnostics，2014年05月16日，Vol.14 No.6，Page.647-654

【文献】Alexander S. Lutsenko，Current aspects of diagnosis and treatment of adult GH-deficiency，Problemy endokrinologii，2019年11月23日，Vol.65 No.5，Page.373-388

【文献】Jose M Garcia，Sensitivity and specificity of the macimorelin test for diagnosis of AGHD，Endocrine Connections，2021年01月，Vol.10 No.1，Page.76-83

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３３／７４

Ａ６１Ｐ ５／１０

Ａ６１Ｋ ３８／２７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｂ）成長ホルモン分泌を誘導するのに有効な量のマシモレリンを投与後４０～９５分以内に被験体から採取した１～３個の各血液サンプルの成長ホルモンレベルを測定すること；
（ｃ）血液サンプルの各々において成長ホルモンレベルが単一閾値よりも低い対象を、成長ホルモン欠乏を有すると判定するために、または血液サンプルの少なくとも１個において成長ホルモンレベルが単一閾値よりも低くない対象を、成長ホルモン欠乏を有さないと判定するために、工程（ｂ）で得られた測定された成長ホルモンレベルと単一の閾値とを比較すること；
を含み、
工程（ｂ）において、２～３個の血液サンプルを使用し、
単一の閾値が２．８ｎｇ／ｍｌである、
マシモレリンを用いて成長ホルモン欠乏を診断するためのインビトロスクリーニング方法：ただし、医療的診断方法を除く。

【請求項2】

工程（ｂ）において、３個の血液サンプルを使用する、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

血液サンプルが血清サンプルである、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

血液サンプルが血漿サンプルである、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項5】

被験体が、対象体重ｋｇ当たり０．５ｍｇのマシモレリンが投与された被験体である、請求項１～４のいずれかに記載の方法。

【請求項6】

被験体が、マシモレリンが経口投与された被験体である、請求項１～５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

工程（ｂ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後および６０±５分後に対象から採取された２個の血液サンプルを使用する、請求項１、３～６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

工程（ｂ）において、マシモレリンの投与の６０±５分後および９０±５分後に対象から採取された２個の血液サンプルを使用する、請求項１、３～６のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

工程（ｂ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後、６０±５分後および９０±５分後に対象から採取された３個の血液サンプルを使用する、請求項１～６のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

マシモレリンがサッカリンを含む組成物中にある、請求項１～９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

組成物が、遊離塩基として計算して３．５％ｗ／ｗのマシモレリン、９３．１％ｗ／ｗの噴霧乾燥ラクトース一水和物、２．０％ｗ／ｗのＡ型クロスポビドン、０．１％ｗ／ｗのコロイド状二酸化ケイ素、１．０％ｗ／ｗのステアリルフマル酸ナトリウム、および０．３％ｗ／ｗのサッカリンナトリウム二水和物を含む、請求項１～１０のいずれかに記載の方法。

【請求項12】

対象が成人である、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。

【請求項13】

対象がヒトの子供である、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。

【請求項14】

対象が非ヒト哺乳動物である、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は２０１７年１２月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／６０７，８６６号、および２０１７年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／６０９，０５９号の優先権を主張し、それらの内容は全ての目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【発明の背景】

【0002】

成長ホルモン（ＧＨ）は、蛋白質、脂質、及び炭水化物の恒常性を調節する主要な身体システム全体の代謝ホルモンであり、身体と心の成長、発達、及び維持に必要である。ＧＨは視床下部腺からの成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）による刺激により、下垂体前葉で産生される。ＧＨは、２４時間の間に約６～１０回のランダムなバーストの拍動様式で下垂体から分泌される。

【0003】

成長ホルモン欠乏（ＧＨＤ）は、ＧＨ欠乏の源に基づいて、１）下垂体または“古典的” ＧＨＤ，２）視床下部ＧＨＤ，３）機能的ＧＨＤ、および４）特発性ＧＨＤという４つのカテゴリーに大別される。ＧＨＤは、小児期または成人期に臨床的に顕性化することがある。小児期発症のＧＨＤは、低身長、小陰茎、脂肪の増加、声の高音化、および比較的拮抗されないインスリン作用による低血糖傾向を特徴とする。成人におけるＧＨＤの結果は、若年成人が最大骨密度を達成できず、除脂肪体重に負の影響を及ぼすことから、中年期の心血管リスク因子、および高齢被験者のＱＯＬ（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ）に及ぼす影響まで様々でありうる。成人成長ホルモン欠乏（ＡＧＨＤ）は、罹患率の増加（メタボリックシンドローム、骨粗鬆症、筋肉消耗性ＱＯＬ低下）および心血管イベントの発生率の増加（この集団において観察される死亡率の増加の主な原因）をもたらすことが認識されている。遺伝子組換えヒト成長ホルモンは、ＡＧＨＤの治療のために１９９６年に承認された。米国では、小児におけるＧＨＤの発症率は４，０００人に１人から１万人に１人と推定されている。米国の成人５万人以上がＧＨＤであり、成人としてＧＨＤに移行するＧＨＤ小児を含め、毎年６，０００件の新規症例が報告されている（Ｈｕｍａｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｗｗｗ．ｈｇｆｏｕｎｄ．ｏｒｇ）．

【0004】

２０１１年の内分泌学会の臨床ガイドライン［Ｍｏｌｉｔｃｈ ２０１１］をはじめとする公表文献［Ｗｏｏｄｈｏｕｓｅ １９９９； Ｂｉｌｌｅｒ ２０００； Ａｔｔａｎａｓｉｏ ２００２； Ｈｏｆｆｍａｎ ２００４； Ｂｏｌｌｅｒｓｌｅｖ ２００６］によれば、ＧＨＤに対するＧＨ療法は、小児の成長発達、体組成、運動能力、内皮機能、炎症性バイオマーカー、骨密度、ＱＯＬ指標に利益をもたらす。したがって、ＧＨＤの診断は重要である。

【0005】

公表されたガイドラインでは、ＡＧＨＤの評価は臨床所見、既往歴に基づいて行い、生化学的確認のために適切なＧＨ刺激試験（ＧＨＳＴ）を用いることが推奨されている［Ｙｕｅｎ ２０１１； Ｙｕｅｎ ２０１３］。ＧＨはパルス状に分泌されるため、ＧＨレベルのランダムな測定（すなわち、ｎｇ／ｍＬで表されるＧＨの血中濃度）は、ＧＨ欠乏対象とＧＨ充足対象とを確実には区別しない。従って、ＡＧＨＤの診断は、疾患を有することが疑われる被験者におけるピークＧＨレベルを決定するために、健常者において一定レベル以上の内因性ＧＨ放出を誘発することが知られている薬剤を用いたＧＨＳＴに依存することが多い。このような誘発剤には、インスリン負荷試験（ＩＴＴ）で使用されるインスリン、アルギニン＋ＧＨ放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、アルギニン単独、クロニジン、レボドパ、およびグルカゴン刺激試験（ＧＳＴ）におけるグルカゴンが含まれる。

【0006】

ＩＴＴは、ＧＨＤの評価のゴールドスタンダードと考えられてきた。インスリンの静脈内投与は、低血糖を誘発するために使用され、それは次にＧＨ放出につながる。しかしながら、この検査は、低血糖に関連する潜在的なリスクのために、対象の集中的な医学的モニタリングが必要であることを理由として、労働集約的である。副作用は、危険であると報告されることが多い。また、高齢者及び発作性障害や虚血性心疾患を有する被験者にはＩＴＴは禁忌である［Ｙｕｅｎ ２０１１； Ｙｕｅｎ ２０１３］。ＧＨＲＨ＋アルギニンは、米国で唯一承認されたＧＨＲＨの形態であるＧｅｒｅｆが市場から撤退した２００８年までは、米国におけるＩＴＴの代替品であった。

【0007】

ＧＳＴは、使用量が増加した代替品である［Ｍｏｌｉｔｃｈ ２０１１； Ｙｕｅｎ ２０１１； Ｙｕｅｎ ２０１３］。ＧＳＴでよくみられる副作用には、吐気、嘔吐、頭痛などがある。さらに、試験の長さ（３～４時間）および筋肉内注射の必要性に制限がある。安全で信頼性のある代替試験に対する、現実に満たされていない医学的必要性が依然として存在する。

【0008】

成長ホルモン分泌促進薬（ＧＨＳ）活性を有する経口的に入手可能なペプチド模倣グレリン受容体アゴニストであるマシモレリンに基づいてＧＨＤを診断するための試験が、ＬａｒｓｅｎによってＷＯ ２００７／０９３８２０ Ａ１に開示されている。

【0009】

グレリンは、ＧＨ放出を強力に刺激する［Ｋｏｊｉｍａ １９９９］。グレリンのＧＨ放出効果は、主に下垂体及び視床下部レベルに存在する特異的受容体が介在すると考えられている［Ｎｏｇｕｅｉｒａｓ ２００６］。ヒト視床下部及び下垂体由来のＧＨＳ受容体を含む膜標品において、マシモレリンはその天然リガンドであるグレリンと同等のヒトＧＨＳ受容体への結合能を示すことが示された［Ｂｒｏｇｌｉｏ ２００２］。マシモレリンは消化管から容易に吸収され、グレリンと同じ作用を発揮すると推測される。

【0010】

健康被験者に経口投与した直後にマシモレリンがＧＨパルスの放出を発揮する能力に基づき、マシモレリンは成人のＧＨ欠乏の経口診断薬として開発されている。

【0011】

化合物としてのマシモレリンおよびＧＨＤの治療におけるその使用は、ＭａｒｔｉｎｅｚらによってＷＯ ０１／９６３００ Ａ１に開示されている。

【0012】

Ｍａｃｉｍｏｒｅｌｉｎ ＧＨＳＴは、Ｇａｒｃｉａらにより発表されてい（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ２４２２－９， ２０１３、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ２０１８， ３０８３－３０９３、及び２０１７年の第９９回内分泌学会年会で提示されたポスター「成人成長ホルモン欠乏症（ＡＧＨＤ）の診断検査としてのＭａｃｉｍｏｒｅｌｉｎの検証 ： インスリン負荷試験（ＩＴＴ）との対比による第３相試験」）。

【発明の概要】

【0013】

本発明は、以下を提供する。
（１） （ａ）ＧＨ分泌を誘導するのに有効な量のマシモレリンを投与後２５～９５分以内に被験体から採取した１～３個の血液サンプルを提供すること；
（ｂ）工程（ａ）で提供された各血液サンプルのＧＨレベルを測定すること；
（ｃ）工程（ｂ）で得られた測定されたＧＨレベルと単一の閾値とを比較すること；
（ｄ）工程（ａ）で提供された血液サンプルの各々においてＧＨレベルが前記単一閾値よりも低い対象を、ＧＨＤを有すると判定すること、または工程（ａ）で提供された血液サンプルの少なくとも１個においてＧＨレベルが前記単一閾値よりも低くない対象を、ＧＨＤを有さないと判定すること；
を含む、マシモレリンを用いてＧＨＤを診断するためのインビトロスクリーニング方法。
（２） 工程（ａ）において、２～３個の血液サンプルが提供される、（１）に記載の方法。
（３） 工程（ａ）において、３個の血液サンプルが提供される、（１）に記載の方法。
（４） 単一の閾値が２．８ｎｇ／ｍｌである、（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５） 工程（ａ）において、血液サンプルが血清サンプルである、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６） 工程（ａ）において、血液サンプルが血漿サンプルである、（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（７） 工程（ａ）において、対象体重ｋｇ当たり約０．５ｍｇのマシモレリンが投与される、（１）～（６）のいずれかに記載の方法。
（８） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与が経口投与である、（１）～（７）のいずれかに記載の方法。
（９） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の６０±５分後に対象から採取される１個の血液サンプルが提供される、（１）、（４）～（８）のいずれかに記載の方法。
（１０） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後および６０±５分後に対象から採取される２個の血液サンプルが提供される、（１）、（２）、（４）～（８）のいずれかに記載の方法。
（１１） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の６０±５分後および９０±５分後に対象から採取される２個の血液サンプルが提供される、（１）、（２）、（４）～（８）のいずれかに記載の方法。
（１２） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後、６０±５分後および９０±５分後に対象から採取される３個の血液サンプルが提供される、（１）、（３）～（８）のいずれかに記載の方法。
（１３） 工程（ａ）において、マシモレリンがサッカリンを含む組成物中で投与される、（１）～（１２）のいずれかに記載の方法。
（１４） 組成物が、遊離塩基として計算して３．５％ｗ／ｗのマシモレリン、９３．１％ｗ／ｗの噴霧乾燥ラクトース一水和物、２．０％ｗ／ｗのＡ型クロスポビドン、０．１％ｗ／ｗのコロイド状二酸化ケイ素、１．０％ｗ／ｗのステアリルフマル酸ナトリウム、および０．３％ｗ／ｗのサッカリンナトリウム二水和物を含む、（１）～（１３）のいずれかに記載の方法。
（１５） 対象が成人である、（１）～（１４）のいずれかに記載の方法。
（１６） 対象がヒトの子供である、（１）～（１４）のいずれかに記載の方法。
（１７） 対象が非ヒト哺乳動物である、（１）～（１４）のいずれかに記載の方法。
（１８） ＧＨＤのインビトロ診断において使用するための物質マシモレリンであって、
（ａ）ＧＨ分泌を誘導するのに有効な量のマシモレリンの投与後２５～９５分以内に被験体から１～３個の血液サンプルが提供され、
（ｂ）工程（ａ）で提供された各血液サンプルのＧＨレベルが測定され；
（ｃ）工程（ｂ）で得られた測定されたＧＨレベルが、単一の閾値と比較され；
（ｄ）工程（ａ）で提供された血液サンプルの各々においてＧＨレベルが前記単一の閾値よりも低い被験者はＧＨＤを有すると決定され、または工程（ａ）で提供された血液サンプルの少なくとも１個においてＧＨレベルが前記単一の閾値よりも低くない被験者は、ＧＨＤを有さないと決定される。
物質マシモレリン。
（１９） 工程（ａ）において、２～３個の血液サンプルが提供される、（１８）に記載の使用のための物質マシモレリン。
（２０） 工程（ａ）において、３個の血液サンプルが提供される、（１８）に記載の使用のための物質マシモレリン。
（２１） 単一の閾値が２．８ｎｇ／ｍｌである、（１８）～（２０）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２２） 工程（ａ）において、血液サンプルが血清サンプルである、（１８）～（２１）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２３） 工程（ａ）において、血液サンプルが血漿サンプルである、（１８）～（２１）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２４） 工程（ａ）において、対象体重ｋｇ当たり約０．５ｍｇのマシモレリンが投与される、（１８）～（２３）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２５） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与が経口投与である、（１８）～（２４）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２６） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の６０±５分後に対象から採取される１個の血液サンプルが提供される、（１８）、（２１）～（２５）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２７） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後および６０±５分後に対象から採取される２個の血液サンプルが提供される、（１８）、（１９）、（２１）～（２５）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２８） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の６０±５分後および９０±５分後に対象から採取される２個の血液サンプルが提供される、（１８）、（１９）、（２１）～（２５）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（２９） 工程（ａ）において、マシモレリンの投与の４５±５分後、６０±５分後および９０±５分後に対象から採取される、３個の血液サンプルが提供される、（１８）、（２０）～（２５）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（３０） 工程（ａ）において、マシモレリンがサッカリンを含む組成物中で投与される、（１８）～（２９）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（３１） 組成物が、遊離塩基として計算して３．５％ｗ／ｗのマシモレリン、９３．１％ｗ／ｗの噴霧乾燥ラクトース一水和物、２．０％ｗ／ｗのＡ型クロスポビドン、０．１％ｗ／ｗのコロイド状二酸化ケイ素、１．０％ｗ／ｗのステアリルフマル酸ナトリウム、および０．３％ｗ／ｗのサッカリンナトリウム二水和物を含む、（１８）～（３０）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（３２） 対象が成人である、（１８）～（３１）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（３３） 対象がヒトの子供である、（１８）～（３１）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。
（３４） 対象が非ヒト哺乳動物である、（１８）～（３１）のいずれかに記載の使用のための物質マシモレリン。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】３０分血液採取のヒストグラムカウント（時間窓２５～３４分）

【図2】４５分血液採取のヒストグラムカウント（時間窓４０～４９分）

【図3】６０分血液採取のヒストグラムカウント（時間窓５０～６９分）

【図4】９０分血液採取のヒストグラムカウント（８４～１６４分）

【図5】ＡＧＨＤ尤度カテゴリーによるマシモレリンＧＨＳＴ（ＭＡＣ）及びＩＴＴにおけるピークＧＨ濃度（Ｎ＝１３９）

【図6】コア試験および再現性サブ試験のピークＧＨ値の散布図（ｎ＝３３）

【発明の好ましい実施形態】

【0015】

特に、本発明はマシモレリン含有組成物、およびマシモレリン含有組成物の経口投与後に被験者から２５～９５分の範囲内、好ましくは４０～９５分の範囲内で１、２または３個の投与後サンプルを採取し、１～３個の投与後サンプル中のＧＨレベルを単一の閾値（カットオフ点としても知られる）と比較することによってＧＨＤを診断する方法に関する。本組成物は、マシモレリン、ラクトース一水和物、クロスポビドン、二酸化ケイ素、ステアリルフマル酸ナトリウム、およびサッカリンを含む。

【0016】

本発明の一つの態様において、対象におけるＧＨＤを決定するための新規な方法が提供される。この方法は、（ａ）ＧＨ分泌を誘導するのに有効な量のマシモレリンを被験体に経口投与する工程；および（ｂ）（ｉ）工程（ａ）の６０±５分後に被験体から採取した１個の血液サンプル、または（ｉｉ）工程（ａ）の４５±５分後および工程（ａ）の６０±５分後に被験体から採取した２個の血液サンプル、または（ｉｉｉ）工程（ａ）の６０±５分後および工程（ａ）の９０±５分後に被験体から採取した２個の血液サンプル、または（ｉｖ）工程（ａ）の４５±５分後、工程（ａ）の６０±５分後および工程（ａ）の９０±５分後に被験体から採取した３個の血液サンプルにおけるＧＨレベルを測定する工程を含む。典型的には、この方法は、被験体から任意のさらなる血液サンプルが採取される任意のさらなる工程を含まない。すなわち、本発明によれば、投与後サンプルの所与の数、すなわち、１個、２個、または３個を超えるサンプルも、または投与前または投与と同時の血液サンプルを、比較のために採取、測定、または使用することはない。

【0017】

本方法はさらに、（ｃ）１個、２個、または３個の血液サンプル中のＧＨレベルを単一の閾値と比較し、（ｄ）１個、２個、または３個の血液サンプル中のすべてのＧＨレベルが前記単一の閾値よりも低い場合には、対象がＧＨＤを有すると判定し（ＧＨＤの診断）、１個、２個、または３個の血液サンプル中の少なくとも１個のＧＨレベルが前記単一の閾値よりも低くない場合に、対象がＧＨＤを有さないと判定する（ＧＨＤの診断）する工程を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、１個、２個、または３個の血液サンプルは血清サンプルである。他の実施形態では、１個、２個、または３個の血液サンプルは血漿サンプルである。典型的には、２個または３個の血液サンプルが採取される場合、それらは同じタイプであり、例えば、それらは２個の血清サンプルまたは２個の血漿サンプルである。
いくつかの実施形態においては、約０．５ｍｇ／ｋｇ対象体重のマシモレリンが、工程（ａ）において経口投与される。

【0019】

いくつかの実施形態においては、１個の血液サンプルは、工程（ａ）の６０±５分後に対象から採取される。いくつかの実施形態では２個の血液サンプルが工程（ａ）の４５±５分後および工程（ａ）の６０±５分後に対象から採取されるか、または２個の血液サンプルは工程（ａ）の６０±５分後および工程（ａ）の９０±５分後に対象から採取される。いくつかの実施形態では、３個の血液サンプルが工程（ａ）の４５±５分後、工程（ａ）の６０±５分後、および工程（ａ）の９０±５分後に対象から採取される。

【0020】

いくつかの実施形態では、工程（ｂ）で１個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが単一の所定の閾値と比較され、例えば、所定の閾値は２．８ｎｇ／ｍｌである。

【0021】

被験者は、１個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルが単一の所定の閾値よりも低い場合、ＧＨＤを有すると判定され、１個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルが単一の所定の閾値よりも低くない場合、ＧＨＤを有さないと判定される。

【0022】

いくつかの実施形態では、工程（ｂ）で２個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが単一の所定の閾値と比較され、例えば、所定の閾値は２．８ｎｇ／ｍｌである。被験者は、２個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルが両方とも単一の所定の閾値よりも低い場合、ＧＨＤを有すると判定され、２個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルの少なくとも１個が単一の所定の閾値よりも低くない場合、ＧＨＤを有さないと判定される。

【0023】

例えば、工程（ｂ）で２個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが１．６および１．７ｎｇ／ｍＬであり、これらのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬの単一の閾値と比較される場合、工程（ｂ）で２個の血液サンプル中で測定された両方のＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬより低いため、対象はＧＨＤを有すると判定される。

【0024】

別の例では、工程（ｂ）で２個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが２．６および３．５ｎｇ／ｍＬであり、これらのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬの単一の閾値と比較される場合、２個の血液サンプル中の対象のＧＨレベルのうちの少なくとも１個（３．５ｎｇ／ｍＬのもの）が２．８ｎｇ／ｍＬ以上であるため、対象はＧＨＤを有さないと判定される。

【0025】

いくつかの実施形態では、工程（ｂ）において３個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが単一の所定の閾値と比較され、例えば、所定の閾値は２．８ｎｇ／ｍｌである。被験者は、３個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルが全て単一の所定の閾値よりも低い場合、ＧＨＤを有すると判定され、３個の血液サンプル中の被験者のＧＨレベルの少なくとも１個が単一の所定の閾値よりも低くない場合、ＧＨＤを有さないと判定される。

【0026】

例えば、工程（ｂ）において３個の血液サンプルにおいて測定されたＧＨレベルが１．１、１．３および１．５ｎｇ／ｍＬであり、これらのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬの単一の閾値と比較される場合、工程（ｂ）において３個の血液サンプルにおいて測定された全てのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬより低いため、対象はＧＨＤを有すると決定される。

【0027】

別の例では、工程（ｂ）で３個の血液サンプル中で測定されたＧＨレベルが２．４、２．５および３．６ｎｇ／ｍＬであり、これらのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬの単一の閾値と比較される場合、３個の血液サンプル中の対象のＧＨレベルの少なくとも１個（３．６ｎｇ／ｍＬのＧＨレベル）が２．８ｎｇ／ｍＬ以上であるため、対象はＧＨＤを有さないと判定される。

【0028】

いくつかの実施形態では、工程（ａ）において、マシモレリンはサッカリンを含む組成物中で投与される。例えば、組成物は、３．５％のマシモレリン（遊離塩基として計算）、９３．１％の噴霧乾燥ラクトース一水和物、２．０％のＡ型クロスポビドン、０．１％のコロイド状二酸化ケイ素、１．０％のステアリルフマル酸ナトリウム、および０．３％のサッカリンナトリウム二水和物を含み得る。

【0029】

いくつかの実施形態において、ＧＨレベルが試験される対象は、成人ヒトまたは小児である。他の場合において、ＧＨレベルが試験される対象は、非ヒト哺乳動物である。

【0030】

定義
本明細書で使用する場合、「被験体」とは、ヒトまたは脊椎動物、特にブタ、イヌ、ネコ、ウマ／ロバ、雄ウシ／牝ウシ、ヤギ／ヒツジ、げっ歯類、ウサギ、キツネなどの哺乳動物類の動物、ならびにチンパンジー、サルなどの非ヒト霊長類である。「被験体」は、任意の性別（雄または雌）または年齢（幼若または成熟）であり得る。

【0031】

本明細書中で使用する場合、用語「有効量」は、所望の効果を生じるのに十分な量である、所定の物質の量のことをいう。例えば、レシピエントにおけるＧＨ分泌を誘導するためのマシモレリンの有効量は、レシピエントへの投与時にＧＨの分泌の検出可能な増加を達成することができる化合物量である。任意の所定量のマシモレリンは、それがＧＨ分泌を刺激するための有効な量であるかどうかに関して、ルーチンの試験によって決定することができる。典型的には、マシモレリンの有効量は、下限としてはレシピエントの体重１ｋｇ当たり約０．０１、約０．０２、約０．０５、約０．１０、約０．２０ｍｇから、上限としては、約１、約２、約５、約１０、約２０、約２５、約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であり、または下限値のいずれか１個および上限値のいずれか１個によって規定される範囲内、例えば、約０．２０～約２ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．５ｍｇ／ｋｇ体重である。

【0032】

本明細書中で使用される場合、「マシモレリン」とは、成長ホルモン分泌促進因子（ＧＨＳ）活性を有するグレリン受容体アゴニストとして作用するペプチド模倣化合物をいう。その化学構造およびＧＨＤの処置における使用は、米国特許第６，８６１，４０９号、国際公開ＷＯ０１／９６３００号、および国際公開ＷＯ２００７／０９３８２０号に開示されている。

【0033】

本明細書で使用される場合、「血液サンプル」という用語は、全血サンプル、ならびに血清または血漿サンプルなどの全血の画分を包含する。２個以上の「血液サンプル」が同じ方法スキームにおいて試験のために使用される場合はいつでも、これらの「血液サンプル」は同じ形態であり、例えば、第１のサンプルが血清である場合、第２のサンプルおよび任意の後続のサンプルも血清である。
本明細書で使用される場合、「約」とは、基準値のマイナス及びプラス１０％を包含する範囲を意味する。例えば、「約１０」とは、９～１１の範囲を意味する。

【0034】

本出願において引用される全ての特許、特許出願、およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号を含む他の刊行物は、全ての目的のために全体が参照により援用される。

【0035】

発明の詳細な説明
一般に、サンプルはＧＨ分泌を誘導する誘発剤の投与後にＧＨレベルを決定するために、ＧＨＳＴを受けている対象から採取される。採取されるサンプルの数および試験期間は、試験中の対象の負担を記載するための、ならびに試験を実施する医療専門家（ＨＣＰ）の努力を記載するための重要なパラメータである。サンプルの数が少ないほど、および／または試験期間が短いほど、被験者およびＨＣＰにとってこのような試験を行うことの容認は高くなる。これは、被験者が子供である場合に特に当てはまる。

【0036】

以下の表１は、内分泌学会および米国臨床内分泌学会（ＡＡＣＥ）によって推奨されている通りに、注射を介して投与されたＧＨＳＴ中に採取された血液サンプルの総数を要約したものである。

【0037】

【表1】

【0038】

注射によって投与した全てのＧＨＳＴが、少なくとも１個の投与前サンプル、すなわち０分および／または前を含む、少なくとも１２０分の時間窓の間に少なくとも５個のサンプルを採取することが明らかに見られる。従って、投与前レベルを含む完全なＧＨレベルプロファイルは臨床標準であると結論できる。

【0039】

この規格は数年間存在する。１９９８年、Ｄａｖｉｅｓは、０分、３０分、６０分、９０分、および１２０分の時点で血液サンプルを採取するＩＴＴを記載した。２００２年、Ｇｏｍｅｚは、ベースライン、９０分、１２０分、１５０分、１８０分、２１０分および２４０分で血液サンプルを採取するＧＳＴを記載した。２００２年に６つのＧＨＳＴを比較した試験において、Ｂｉｌｌｅｒは－３０～１５０分以内に６個の血液サンプルを採取した（Ｂｉｌｌｅｒ，Ｂ．Ｍ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．（２００２），８７（５），ｐ２０６７-２０７９）。

【0040】

より少ない数の血液サンプルを使用する提案（例えば、Ｊａｂｂａｒら、Ｓｃ．およびＪ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ，２００９，３５９-６４、またはＡｉｍａｒｅｔｔｉら、Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，２００１，１２９-３４）にもかかわらず、臨床内分泌学者の２つの主要な関連は、最近の２０１６年のように、完全なＧＨプロファイルの採取を推奨した（表１を参照のこと）。これは、被験者に対するＧＨＳＴの負担によるものと考えられる。多数の血液サンプルは、血液サンプリング中のエラーまたはＧＨ決定が血液サンプルの使用を無効にする場合には、ＧＨＳＴの繰り返しを妨げるであろう。

【0041】

国際公開第２００７／０９３８２０Ａ１およびＧａｒｃｉａら（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２０１３，２４２２－９，ｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２０１８，３０８３－３０９３及びＰｏｓｔｅｒ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｏｎ ９９ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｉｎ ２０１７）に開示されたマシモレリンに基づいたの試験は、これまで唯一の経口投与ＧＨＳＴである。

【0042】

ＷＯ２００７／０９３８２０Ａ１の請求項１は、以下を対象とする：
１． ヒトまたは動物対象における成長ホルモン欠乏を評価する方法であって、対象にＥＰ１５７２［すなわち、マシモレリン］またはＥＰ１５７３を経口投与すること、対象から少なくとも１個の投与後サンプルを得ること、サンプル（単数又は複数）中の成長ホルモンのレベルを決定すること、およびサンプル（単数又は複数）中の成長ホルモンのレベルが対象における成長ホルモン欠乏を示すかどうかを評価することを含む方法。

【0043】

さらに、経口投与のための、マシモレリン、ラクトース一水和物、クロスポビドン、二酸化ケイ素、およびステアリルフマル酸ナトリウムを含有する組成物が開示されている。
必要なサンプル数は、「少なくとも１個の投与後サンプル」（請求項１）または「２又は３又は４又は５個のサンプル」（ｐ．７、２５行目）であると言及されている。

【0044】

しかしながら、そのようなかなり一般的な記述とは別に、ＷＯ２００７／０９３８２０ Ａ１は、特定の数のサンプルまたはそれに対応する時点に関しては言及していない。さらに、完全なＧＨレベルプロファイルの臨床標準と比較して、より少数のサンプルで十分であるはずである理由についても与えられていない。

【0045】

「少なくとも１個の投与後サンプル」の特定の数については言及していないが、ＷＯ２００７／０９３８２０Ａ１は、
－ 投与前から３００分サンプルまでの範囲の１個の投与前サンプルおよび１１個の投与後サンプルを有するマシモレリンに基づくＧＨＳＴを開示する実施例１（１６頁の８行目）、
－ 投与前から１５０分サンプルまでの範囲の１個の投与前サンプルおよび６個の投与後サンプルを有するマシモレリンに基づくＧＨＳＴを開示する実施例２（１８頁の５～６行目）、および
－ 投与前から１２０分サンプルまでの範囲の１個の投与前サンプルおよび５個の投与後サンプルを有するマシモレリンに基づくＧＨＳＴを開示する実施例３（１８頁の２５～２８行目）、実施例３は「標準プロトコル」としてマークされている；
に提示されるように、完全ＧＨレベルプロファイルのサンプリングを開示している。

【0046】

結果として、当業者は、完全なＧＨレベルプロフィールのみが、Ｌａｒｓｅｎによって開示され、先行技術から公知の臨床標準と整合している、と結論付けるであろう。投与前サンプルを省略できるかどうか、または５個未満のサンプル数が適切であるかどうか、または「少なくとも１個の投与後サンプル」を採取するためにどの時点を選択すべきかについての教示もガイダンスも存在しない。

【0047】

２０１３年に、Ｇａｒｃｉａら（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ． ２０１３，２４２２－９）は、投薬の１５～３０分前、投薬の直前、および投薬の３０、４５、６０、７５、９０、１２０および１５０分後にＧＨレベルを測定するマシモレリンに基づいたＧＨＳＴを開示した。投与された試験の組成は開示されていない。
Ｇａｒｃｉａ ２０１３により開示されたマシモレリンＧＨＳＴの性能を表２にまとめる。

【0048】

【表2】

【0049】

今回は驚くべきことに、対象へのマシモレリン含有組成物の経口投与後、投与後４０～９５分の範囲内に１個、２個または３個の投与後サンプルを該対象から採取し、上記の１個、２個または３個のサンプル中のＧＨのレベルを測定し、単一のカットオフ値未満 （例えば、２．８ｎｇ／ｍｌ未満）である場合に、下垂体関連ＧＨＤがヒトまたは動物対象において診断されることが見出された。マシモレリン含有組成物は、マシモレリン、ラクトース、クロスポビドン、二酸化ケイ素、ステアリルフマレート、およびサッカリンを含む。

【0050】

典型的には、マシモレリン含有組成物を使用してＧＨＤを診断するための試験（さらに「マシモレリン試験」と呼ばれる）は、医療現場、例えば、医療行為または診療所または病院において、医療専門家（ＨＣＰ）によって行われる。ＨＣＰは、被験者がＧＨＤの危険因子を示すことから、ＧＨＤ診断を確定するためにＧＨＳＴを必要とするという最初の評価の後に、マシモレリン試験を処方する。被験者におけるマシモレリン含有組成物の使用を妨げる禁忌は知られていない。

【0051】

ＨＣＰは、被験者がマシモレリン試験の前に６～８時間絶食していることを保証する。典型的には、ＨＣＰが、単回使用容器中に提供されるマシモレリン含有組成物を含むマシモレリン試験キットを使用し、キットに含まれる説明書に従って、０．５ｍｇ／ｍＬのマシモレリン溶液を調製する。次いで、ＨＣＰは対象の体重に基づいて溶液の個別の量を決定し、対象に個別の量を飲ませる。

【0052】

マシモレリン溶液の投与後、被験者は４０～９５分間待機し、１個、２個または３個のサンプルがその時間窓内に被験者から採取される。マシモレリン溶液の投与前に採取したサンプルはない（投与前サンプルはない）。マシモレリン試験は安全性が高く、概して忍容性が非常に良好であるため、臨床試験中に確立されたマシモレリンの安全性プロファイルに基づいて、重度の副作用はないことが予想される。常時の医学的監督は不要である。軽度から中等度の副作用としては、味覚異常（４．５％）、浮動性めまい、頭痛、疲労（各３．９％）、悪心及び空腹感（各３．２％）、下痢、上気道感染（各１．９％）、熱感、多汗症、鼻咽頭炎及び副鼻腔徐脈（各１．３％）が生じることがある。

【0053】

血中ＧＨレベルは、適切なＧＨアッセイを用いて、例えば自動化学発光免疫アッセイを用いて測定される。

【0054】

マシモレリンによって誘導された測定されたＧＨレベルは、単一の閾値、例えば２．８ｎｇ／ｍＬの閾値と比較することによってＧＨＤを診断するために評価される。閾値を下回る測定されたＧＨレベルは、ＧＨＤを有することを示し、閾値を下回らないＧＨレベルは、ＧＨＤを有さないことを示す。

【0055】

本発明の一つの態様においては、１個の投与後サンプルが。投与後４０～５０分以内、すなわち、投与後４５分の前後５分の時間窓内、すなわち言い換えれば、投与後４５±５分以内に対象から採取される。

【0056】

本発明の一つの態様においてはは、１個の投与後サンプルが、投与後５５～６５分以内、すなわち、投与後６０分の前後５分の時間窓内、すなわち言い換えれば、投与後６０±５分以内に対象から採取される。

【0057】

本発明の一つの態様においては、１個の投与後サンプルが、投与後８５～９５分以内、すなわち、投与後９０分の前後５分の時間窓内、すなわち言い換えれば、投与後９０±５分以内に対象から採取される。

【0058】

別の態様においては、２個の投与後サンプルが、投与後４０～６５分以内に被験体から採取される。好ましくは、２個の投与後サンプルのうちの第１のサンプルが、投与後４０～５０分以内に対象から採取され、第２のサンプルが、投与後５５～６５分以内に、すなわち、第１のサンプルは投与後４５分の前後５分の時間窓内、すなわち、投与後４５±５分以内に採取され、第２のサンプルは投与後６０分の前後５分の時間窓内、すなわち投与後６０±５分以内に採取される。

【0059】

別の態様においては、２個の投与後サンプルが、投与後５０～９５分以内に被験体から採取される。好ましくは、２個の投与後サンプルのうちの第１のサンプルが、投与後５５０～６５分以内に対象から採取され、第２のサンプルが、投与後８５～９５分以内に、すなわち、第１のサンプルは投与後６０分の前後５分の時間窓内、すなわち、投与後６０±５分以内に採取され、第２のサンプルは投与後９０分の前後５分の時間窓内、すなわち投与後９０±５分以内に採取される。

【0060】

別の態様においては、３個の投与後サンプルが、投与後４０～９５分以内に被験体から採取される。好ましくは、３個の投与後サンプルのうちの第１のサンプルが、投与後４０～５０分以内に対象から採取され、第２のサンプルが、投与後５５～６５分以内に、第３のサンプルが、投与後８５～９５分以内に、すなわち、第１のサンプルは投与後４０分の前後５分の時間窓内、すなわち、投与後４０±５分以内に採取され、第２のサンプルは投与後６０分の前後５分の時間窓内、すなわち投与後５５～６５分以内、すなわち、投与後６０±５分以内に採取され、第３のサンプルは投与後９０分の前後５分の時間窓内、すなわち投与後８５～９５分以内、すなわち、投与後９０±５分以内に採取される。

【0061】

本発明のさらに別の態様において、ＧＨＤであると診断される前記ヒトまたは動物被験体は、小児または成人のいずれでもよい。動物対象の例としては、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ネコ、またはイヌが挙げられる。

【0062】

本発明のさらに別の態様において、被験体から採取されるべき前記１個の投与後サンプルは、血液サンプル、血清サンプル、または血漿サンプルである。前記２個の投与後サンプルは必要に応じて、２個の血液サンプル、例えば、２個の血清サンプルまたは２個の血漿サンプルである。前記３個の投与後サンプルは、必要に応じて、３個の血液サンプル、例えば３個の血清サンプルまたは３個の血漿サンプルである。

【実施例】

【0063】

実施例１：ＧＨＤを診断するためのマシモレリン含有組成物
マシモレリン含有組成物は、表３に列挙した以下の成分を含む。

【0064】

【表3】

【0065】

１単位用量は、水中の経口溶液の調製のための１．０００ｇのマシモレリンを含有する組成物からなる。典型的には、調製された溶液は、溶液１ｍｌ当たり０．５ｍｇのマシモレリンを含有する。

【0066】

再構成された溶液の体重調整されたアリコートが、対象に投与され、対象の体重１キログラム当たり０．５ｍｇの用量をもたらす。

【0067】

前記単位用量は、１００％の含有量を有する遊離塩基として計算されたマシモレリンについて定義される。前記単位用量内のマシモレリン遊離塩基またはその遊離塩基相当の質量は、含有量に従って調節される。

【0068】

マシモレリンは、適切な薬学的な塩として前記単位用量中に含めることができる。適切な薬学的な塩の例は、酢酸塩およびトリフルオロ酢酸塩である。

【0069】

前記単位用量は、ＧＨＤ試験の容易な利用可能性のために、適切な容器に充填してもよい。適切な容器の例は、小袋（サッシェ）またはポーチ、またはプラスチックのガラスで作られた適切なサイズの容器である。

【0070】

単位用量および対象の体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇの推奨用量に基づいて、複数の量のマシモレリン含有組成物を１容器当たりに提供することができる。

【0071】

１２０ｋｇまでの対象については、マシモレリン含有組成物を有する容器は、６３．６ｍｇのマシモレリン、１６９１．８ｍｇの噴霧乾燥ラクトース一水和物、３６．６ｍｇのＡ型クロスポビドン、１．８ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素、１８．２ｍｇのステアリルフマル酸ナトリウム、および５．５ｍｇのサッカリンナトリウム二水和物を含み得る。１２０ｍＬの水中で再構成する場合、１ｍＬで０．５ｍｇのマシモレリンを提供する。

【0072】

必要であれば、容器は、前記単位用量に加えて少量のマシモレリン含有組成物で充填されてもよい（「過剰充填」）。このような過剰充填は、例えば吸収効果のために容器内に少量の組成物が残っているにもかかわらず、マシモレリン溶液の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬであることを確実にする。過剰充填の量は容器のタイプに依存し、経験的に決定されなければならない。

【0073】

１２０ｋｇまでの被験者を対象としたポリエチレン積層アルミ箔で作られた小袋（サッシェ）の場合、過剰充填量は３．６ｍｇである。

【0074】

実施例２：悪い味をマスクするためのマシモレリン含有組成物におけるサッカリンの使用
多施設無作為化二元クロスオーバー試験において、ＡＧＨＤが確認された１００例の被験者にＧＨＳＴとしてＧＨＲＨ＋Ｌ－Ａｒｇおよびマシモレリンを投与し、ＡＧＨＤに対するマシモレリンの診断的効力を判定した。

【0075】

この研究は、２つのパートで行われた。第１のパートでは、実施例１に記載したサッカリンを含まないマシモレリン含有組成物を使用し、５２人中１２人（２１％）の被験者により軽度から中等度の悪い味が報告された。

【0076】

試験停止中、サッカリンは適切な味マスキング剤であることが見出されたが、苦味は依然として完全にはマスキングされなかった。試験の第２のパートでは、実施例１に記載のマシモレリン含有組成物（サッカリンを含むもの）を使用し、４８人の被験者のうち１人（２％）のみが軽度の悪い味を報告した。

【0077】

実施例３：ＡＧＨＤの診断のためのマシモレリンの診断能をＩＴＴと比較する
多施設非盲検無作為化２方向クロスオーバー臨床試験においては、１５７例の被験者に少なくとも１回のマシモレリン（実施例１に記載のマシモレリン含有組成物を使用）またはＩＴＴを投与し、安全性データセットに含めた。このうち、有効なマシモレリン試験及び有効なＩＴＴが得られた１３９例を有効性データセットとし、ＡＧＨＤの可能性が高い（グループＡ、Ｎ＝３８）、中間（グループＢ、Ｎ＝３７）、低い（グループＣ、Ｎ＝３９）、及び健常な適合対照（グループＤ、Ｎ＝２５）に層別化した。

【0078】

血液サンプルの採取
血液サンプルを、マシモレリンの投与の前および３０、４５、６０、および９０分後、ならびに有効性データセット被験体へのインスリンの投与の前および１５、３０、４５、６０、９０、および１２０分後に採取し、そしてＧＨレベルを、すべてのサンプルについて測定した。
研究プロトコールは、前記の各々の時点について５分間の時間窓を許容し、これは、例えば、ＧＨ誘発剤投与後２５～３５分以内に採取された血液サンプルが３０分時点において有効に採取されたことを意味する。
マシモレリン投与後の時点ごとの採血の分布を、以下の表４および図１～４に示す。

【0079】

【表4】

【0080】

マシモレリンＧＨＳＴとＩＴＴとの一致
マシモレリンについて２．８ｎｇ／ｍＬ、ＩＴＴについて５．１ｎｇ／ｍＬのＧＨカットオフレベルを用いて、マシモレリンとＩＴＴ ＧＨＳＴの間のパーセント一致率は、表５に示す通りであることを見出した。マシモレリンのＧＨレベルが２．８ｎｇ／ｍＬ、ＩＴＴのＧＨレベルが５．１ｎｇ／ｍＬを下回る場合を陽性テストであるといい、ＡＧＨＤが示唆される。

【0081】

【表5】

【0082】

マシモレリン投与の０、３０、４５、６０および９０分後に採取した採血を評価する場合、これらのマシモレリンサンプルにおいて測定された最も高い（ピーク）ＧＨレベルを使用し、すべてのＩＴＴサンプルにわたって測定された最も高いＧＨレベルと比較する。マシモレリン試験の陰性の結果の９５．３８％が、ＩＴＴ検査の陰性結果と一致することが判明した。同様に、マシモレリン試験の陽性の結果の７４．３２％が、ＩＴＴ試験の陽性の結果と一致し、その結果、マシモレリンとＩＴＴ ＧＨＳＴとの間で８４．１７％という全体としての一致が得られた（「０＆３０＆４５＆６０＆９０分（ピークレベル）」の欄を参照）。

【0083】

４５分のマシモレリンＧＨレベルのみを使って、全てのＩＴＴサンプルで測定された最も高いＧＨレベルと比較した場合、陰性の一致率は８６．１５％であり、陽性の一致率は７８．３８％であり、全体の一致率はマシモレリンとＩＴＴ ＧＨＳＴの間で８２．０１％である（「４５分」の欄を参照）。

【0084】

４５分および６０分の最高（ピーク）マシモレリンＧＨレベルを使って、全てのＩＴＴサンプルで測定された最も高いＧＨレベルと比較した場合、陰性の一致率は９５．３８％であり、陽性の一致率は７５．６８％であり、全体の一致率はマシモレリンとＩＴＴ ＧＨＳＴの間で８４．８９％である（「４５分および６０分（ピークレベル）」の欄を参照）。

【0085】

４５、６０、９０分の最高（ピーク）マシモレリンＧＨレベルを、全てのＩＴＴサンプルで測定された最も高いＧＨレベルと比較した場合、陰性の一致率は９５．３８％であり、陽性の一致率は７４．３２％であり、全体の一致率はマシモレリンとＩＴＴ ＧＨＳＴの間で８４．１７％である（「４５＆６０＆９０分（ピークレベル）」の欄を参照）。

【0086】

陰性の％一致率の値（すなわち、ＩＴＴ ＧＨＤ診断における陰性に一致するマシモレリンＧＨＤ診断における陰性）は、陽性の％一致率と比較して、より重要であると考えられる。なぜなら、偽陽性のＧＨＳＴ結果に基づいた、このような治療を必要としない対象の慢性的なＧＨ治療は、回避すべきであるからである。それにもかかわらず、高い陽性の％一致率も求められている。しかしながら、医療従事者が、ＧＨＳＴだけでなく、対象者の身体検査、病歴、臨床症状、随伴する危険因子および臨床検査パラメータによって導かれる全体的な臨床像に基づいて診断を下すため、陽性の一致率の基準はそれほど厳密ではないかもしれない。

【0087】

マシモレリンＧＨＳＴおよびＩＴＴにおけるピークＧＨ応答
表５のボックスプロットは、マシモレリンＧＨＳＴおよびＩＴＴにおいて達成されたピークＧＨ濃度を、ＡＧＨＤ尤度グループによって要約する。ＩＴＴと比較して、マシモレリンＧＨＳＴにおけるより高いピークＧＨレベルが、試験の全てのグループで一貫して見られることは明らかである。さらに、データはピークＧＨレベルがＡＧＨＤを有する可能性と逆相関すること、すなわち、中間体尤度に割り当てられた被験者（グループＢ）は、低尤度に割り当てられた被験者（グループＣ）よりもＧＨレベルが低かったことを示す。

【0088】

マシモレリンＧＨＳＴの再現性
マシモレリンＧＨＳＴの再現性を評価するために、有効な第１のマシモレリン試験（コア試験）を受けた３３人の被験者に、第２のマシモレリン試験（再現性試験延長）を行った。第２のマシモレリン試験の結果は、９４％で第１の試験の結果と一致し、すなわち、３３人の被験者のうち３１人において、カットオフ値未満またはそれを超える試験結果の結果が再現可能であった（図６）。

【0089】

マシモレリン投与後の一般的な有害反応
試験中に発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、マシモレリンＧＨＳＴ後の安全性解析対象集団の計１５４例中のうちの３９例（２５．３％）、ＩＴＴ投与後の計１５７例のうちの１５１例（９６．２％）において記録され、有害事象の総発現件数はそれぞれ７７件、７６１件（ＡＥｓ）であった（表６）。

【0090】

【表6】

【0091】

１：いずれかのＴＥＡＥが発現した被験者数、各被験者は各カテゴリー内で１回のみカウントされる、
２：有害事象発現例数／全例数、３：全有害事象発現例数、
＊Ａ： 少なくとも１例のマシモレリンＧＨＳＴを有する全被験者
＊＊Ｂ：反復性マシモレリンＧＨＳＴ

【0092】

発生頻度が低い順に含まれていたＩＴＴ後の重度のＴＥＡＥ：傾眠、多汗症各５例（３．２％）、無力症４例（２．５％）、空腹感３例（１．９％）、神経過敏２例（１．３％）、振戦１例（０．６％）。マシモレリンＧＨＳＴ後のＴＥＡＥは軽度から中等度であった：味覚異常（４．５％）、浮動性めまい、頭痛、疲労（各３．９％）、悪心、空腹感（各３．２％）、下痢、上気道感染（各１．９％）、熱感、多汗症、鼻咽頭炎、副鼻腔徐脈（各１．３％）。

【0093】

参考文献一覧

【0094】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】