特許 7117724 歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用に基づく顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-08-04

(45)【発行日】2022-08-15

(54)【発明の名称】歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用に基づく顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/18 20060101AFI20220805BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20220805BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20220805BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20220805BHJP

   A61K 47/08 20060101ALI20220805BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220805BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220805BHJP

   C07K 14/475 20060101ALI20220805BHJP

   C07K 14/50 20060101ALI20220805BHJP

   C07K 14/78 20060101ALI20220805BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20220805BHJP

   A61K 47/38 20060101ALN20220805BHJP

   A61K 47/34 20170101ALN20220805BHJP

【ＦＩ】

A61K38/18

A61P19/00

A61P1/02

A61K9/06

A61K47/08

A61K47/10

A61K47/36

C07K14/475

C07K14/50

C07K14/78

A61K47/42

A61K47/38

A61K47/34

【請求項の数】 2

(21)【出願番号】P 2018006198

(22)【出願日】2018-01-18

(65)【公開番号】P2019123696

(43)【公開日】2019-07-25

【審査請求日】2020-12-02

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】000190943

【氏名又は名称】新田ゼラチン株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】507126487

【氏名又は名称】公立大学法人奈良県立医科大学

(73)【特許権者】

【識別番号】599029420

【氏名又は名称】田畑 泰彦

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】柳生 貴裕

(72)【発明者】

【氏名】桐田 忠昭

(72)【発明者】

【氏名】田畑 泰彦

(72)【発明者】

【氏名】塚本 啓司

(72)【発明者】

【氏名】平岡 陽介

【審査官】濱田 光浩

(56)【参考文献】

【文献】特開２００８－０６３２６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１０－５１８９４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】BRONJを予防するためのHA複合体の開発，歯薬療法, 2014, ，2014年，Vol. 33, No. 2，p. 92, O-04

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３８／１８

Ａ６１Ｐ １９／００

Ａ６１Ｐ １／０２

Ａ６１Ｋ ９／０６

Ａ６１Ｋ ４７／４２

Ａ６１Ｋ ４７／３８

Ａ６１Ｋ ４７／３６

Ａ６１Ｋ ４７／３４

Ａ６１Ｋ ４７／１０

Ａ６１Ｋ ４７／０８

Ｃ０７Ｋ １４／４７５

Ｃ０７Ｋ １４／５０

Ｃ０７Ｋ １４／７８

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

成長因子と、ハイドロゲルとからなる、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤であって、
前記成長因子は、ｂＦＧＦであり、
前記ハイドロゲルは、等電点が４．５～５．５のゼラチンからなるゼラチンハイドロゲルであり、
前記ゼラチンハイドロゲルは、その含水率が９０～９９質量％であり、
前記予防剤は、歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用を有する、歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用に基づく顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤。

【請求項2】

前記成長因子と前記ハイドロゲルは、歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用に基づく顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防用キットとして構成されている、請求項１に記載の歯肉および歯槽粘膜の再生促進作用に基づく顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤、これに使用される成長因子およびハイドロゲル、ならびにその予防用キットに関する。

【背景技術】

【0002】

ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤を生体内の各所の治療に用いることが提案されている。たとえば国際公開第９４／０２７６３０号（特許文献１）は、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤が骨再生治療に有用であることを教示している。国際公開第２０１１／０１０３９９号（特許文献２）は、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤によって角膜内皮損傷に関連する疾患を治療することができることを教示している。さらに、下記非特許文献１は、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤が生体内でｂＦＧＦを徐放することにより、血管新生が起こったことを報告している。特開２００９－０６７７３２号公報（特許文献３）は、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤が歯周組織の再生に有用であることを教示している。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【文献】国際公開第９４／０２７６３０号

【文献】国際公開第２０１１／０１０３９９号

【文献】特開２００９－０６７７３２号公報

【非特許文献】

【0004】

【文献】Y. Tabata et al., "Biodegradation of Hydrogel Carrier Incorporating Fibroblast Growth Factor," TISSUE ENGINEERING, Vol 5, Number 2., P127-138（1999）

【文献】P. Barba-Recreo et al., "Adipose-derived stem cells and platelet-rich plasma for preventive treatment of bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw in a murine model," Journal of Cranio-Maxillio-Facial Surgery, 43, P1161-1168(2015)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

歯科領域では、ビスホスホネート系薬剤を投与した患者に対して抜歯などの口腔外科手術、歯周外科手術、歯内治療および歯周治療を行なった場合、上記患者に顎骨壊死症状が頻発するといった問題がある。その発症原因は、未だ特定されていない。このため上記患者に対して抜歯をしないこと、または抜歯をする場合には上記薬剤の投与を避けること以外に有効な予防法は知られておらず、その開発が切望されている。これまで上述のゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤が、上記患者の顎骨壊死の治療および予防に使用されたという報告、ならびに同製剤が上記患者の顎骨壊死の治療および予防に有用であるとの示唆などは全く知られていない。上記非特許文献２においても、幹細胞、多血小板血漿（以下、「ＰＲＰ」とも記す）およびＢＭＰ２の組み合わせ投与により顎骨壊死症状が改善されたが、ＰＲＰのみの投与では顎骨壊死症状が改善されなかったことが報告されている。

【0006】

本発明は、上記実情に鑑みて提案され、ビスホスホネート系薬剤を投与した患者などに対し、抜歯などの口腔外科手術、歯周外科手術、歯内治療または歯周治療を行なった後に起きる顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤、これに使用される成長因子およびハイドロゲル、ならびにその予防用キットを提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤が、抜歯窩における歯周組織の再生などを促進することにより、顎骨壊死の発症を有効に阻止することができることを知見した。これによりゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤を、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤とすることに想到した。さらにｂＦＧＦおよびゼラチンハイドロゲルの組み合わせを成長因子とハイドロゲルとの組み合わせに拡張しても、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤となり得ることも知見した。すなわち本発明は、以下のとおりの特徴を有する。

【0008】

本発明に係る顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤は、成長因子と、ハイドロゲルとを含む。

【0009】

上記成長因子は、ＡＲ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－７、β－ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＥＧ－ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＦＧＦ－４、ＦＧＦ－７、ＧＤＦ－１５、ＧＤＮＦ、ＧＨ、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ－１、ＩＧＦＢＰ－２、ＩＧＦＢＰ－３、ＩＧＦＢＰ－４、ＩＧＦＢＰ－６、ＩＧＦ－Ｉ、インスリン、ＳＣＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＯＰＧ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＰＩＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３、ＢＤＮＦ、ＥＰＯ、ＴＰＯ、ｂＦＧＦおよびＰＲＰからなる群より選ばれる１種または２種以上の因子、またはそれらの誘導体を含むことが好ましい。

【0010】

上記成長因子は、ｂＦＧＦであることがさらに好ましい。
上記ハイドロゲルは、ゼラチン、コラーゲン、ヒドロキシプロピルセルロース、ＣＭＣ、フィブリノーゲン、トロンビン、セルロース、グリコサミノグリカン、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、でんぷん、フィブロイン、ポリグリコール酸、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、ゼラチンスポンジおよびコラーゲンスポンジからなる群より選ばれる１種または２種以上の成分を含むことが好ましい。

【0011】

上記ハイドロゲルは、等電点が４．５～５．５のゼラチンからなるゼラチンハイドロゲルであることがさらに好ましい。

【0012】

上記ゼラチンハイドロゲルは、その含水率が９０～９９質量％であることが好ましい。
本発明は、上記顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤を構成するために使用される、成長因子である。

【0013】

さらに本発明は、上記顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤を構成するために使用される、ハイドロゲルである。

【0014】

本発明は、上記成長因子と、上記ハイドロゲルとを備える、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防用キットである。

【発明の効果】

【0015】

上記によれば、ビスホスホネート系薬剤を投与した患者などに対し、抜歯などの口腔外科手術、歯周外科手術、歯内治療または歯周治療を行なった後に起きる顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤、これに使用される成長因子およびハイドロゲル、ならびにその予防用キットを提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】実施例および比較例に係る薬剤を投与した薬剤関連顎骨壊死モデルラットについて、抜歯から３週間後の抜歯窩の肉眼写真を説明する図面代用写真であって、（Ａ）は、実施例１を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の肉眼写真を示し、（Ｂ）は、比較例１を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の肉眼写真を示し、（Ｃ）は、比較例２を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の肉眼写真を示し、（Ｄ）は、比較例３を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の肉眼写真を示す。

【図2】実施例および比較例に係る薬剤を投与した薬剤関連顎骨壊死モデルラットについて、抜歯から３週間後の抜歯窩の病理組織写真を説明する図面代用写真であって、（Ａ）は、実施例１を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の病理組織写真を示し、（Ｂ）は、比較例１を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の病理組織写真を示し、（Ｃ）は、比較例２を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の病理組織写真を示し、（Ｄ）は、比較例３を適用した上記モデルラットの抜歯から３週間後の抜歯窩の病理組織写真を示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

以下、本発明に係る実施形態について、さらに詳細に説明する。ここで、本明細書において「Ａ～Ｂ」という形式の表記は、範囲の上限下限（すなわちＡ以上Ｂ以下）を意味し、Ａにおいて単位の記載がなく、Ｂにおいてのみ単位が記載されている場合、Ａの単位とＢの単位とは同じである。

【0018】

≪顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤≫
本発明は、成長因子と、ハイドロゲルとを含む顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤（以下、単に「予防剤」とも記す）に係る。この予防剤は、ハイドロゲルに担持された成長因子が、たとえば抜歯窩において作用することにより、歯肉および歯槽粘膜の再生を促進し、もって顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の発症を有効に阻止することができる。

【0019】

ここで顎骨壊死とは、顎骨が薬剤（骨吸収抑制薬、抗がん剤、ステロイドなど）、放射線照射、細菌、ウイルスその他の外的要因、および白血球、リンパ球、サイトカインなどの内的要因の少なくとも一方によって壊死に至る疾患をいう。顎骨骨髄炎とは、顎骨が細菌、ウイルスその他の外的要因、および白血球、リンパ球、サイトカインなどの内的要因の少なくとも一方によって炎症を起こす疾患をいう。抜歯後治癒不全とは、抜歯、歯牙の自然脱落後の抜歯窩における上皮による被覆が、細菌、ウイルスその他の外的要因、および白血球、リンパ球、サイトカインなどの内的要因の少なくとも一方によって不十分となるために歯肉および歯槽粘膜が治癒しない疾患をいう。

【0020】

＜成長因子＞
予防剤は、成長因子を含む。この成長因子は、ＡＲ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－７、β－ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＥＧ－ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＦＧＦ－４、ＦＧＦ－７、ＧＤＦ－１５、ＧＤＮＦ、ＧＨ、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ－１、ＩＧＦＢＰ－２、ＩＧＦＢＰ－３、ＩＧＦＢＰ－４、ＩＧＦＢＰ－６、ＩＧＦ－Ｉ、インスリン、ＳＣＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＯＰＧ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＰＩＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３、ＢＤＮＦ、ＥＰＯ、ＴＰＯ、ｂＦＧＦおよびＰＲＰからなる群より選ばれる１種または２種以上の因子、またはそれらの誘導体を含むことが好ましい。特に成長因子は、ｂＦＧＦであることがさらに好ましい。これらの成長因子によって予防剤は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の発症をさらに有効に阻止することができる。なお本明細書において、たとえば「ＴＧＦβ」、「ＴＧＦβ１」、「ＴＧＦβ３」は、それぞれ異なる遺伝子にコードされた「ＴＧＦβ」のアイソフォームを意味する。

【0021】

成長因子として用いるＡＲ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－７、β－ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＥＧ－ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＦＧＦ－４、ＦＧＦ－７、ＧＤＦ－１５、ＧＤＮＦ、ＧＨ、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ－１、ＩＧＦＢＰ－２、ＩＧＦＢＰ－３、ＩＧＦＢＰ－４、ＩＧＦＢＰ－６、ＩＧＦ－Ｉ、インスリン、ＳＣＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＯＰＧ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＰＩＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ３、ＢＤＮＦ、ＥＰＯ、ＴＰＯ、ｂＦＧＦおよびＰＲＰは、いずれも従来公知の方法によって準備することができる。たとえば成長因子は、脳下垂体、脳、網膜、黄体、副腎、腎、胎盤、前立腺、胸腺などの臓器および血液、リンパ液などから抽出することにより準備することができる。さらに成長因子は、組換えＤＮＡ技術などの遺伝子工学的手法を用いて製造することにより準備することができる。たとえばヒトの腎臓のｍＲＮＡから調製されたｃＤＮＡライブラリーを用いてヒトの成長因子（たとえばｂＦＧＦ）のｃＤＮＡクローンを準備し、このｃＤＮＡクローンを発現ベクターに導入するとともに所定の細胞内で発現させる。これによりｂＦＧＦを製造することができる。成長因子の同定は、ウエスタンブロッティングなどの従来公知の生化学的手法により行なうことができる。

【0022】

ここで本明細書において「成長因子」には、上述した各種の因子とともに、これらの因子の誘導体であって細胞増殖因子として作用し得るものも含む。このような誘導体として、上記の抽出により得られ、または遺伝子工学的手法で得られた成長因子のアミノ酸配列にアミノ酸が１または２以上付加されたもの、上記成長因子のアミノ酸配列において一部のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたもの、または一部のアミノ酸が欠損されたものなどを挙げることができる。

【0023】

予防剤に含まれる成長因子の濃度は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の発症を有効に阻止することができる限り、限定されるべきではない。しかしながら予防剤として口腔内へ適用する便宜上、１回の投与あたり０．０５μｇ～２０ｍｇの範囲から適宜選択することが好ましい。１回の投与あたり５０～２０００μｇの範囲とすることがさらに好ましい。

【0024】

＜ハイドロゲル＞
予防剤は、ハイドロゲルを含む。このハイドロゲルは、ゼラチン、コラーゲン、ヒドロキシプロピルセルロース、ＣＭＣ、フィブリノーゲン、トロンビン、セルロース、グリコサミノグリカン、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、でんぷん、フィブロイン、ポリグリコール酸、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、ゼラチンスポンジおよびコラーゲンスポンジからなる群より選ばれる１種または２種以上の成分を含むことが好ましい。特にハイドロゲルは、等電点が４．５～５．５のゼラチンからなるゼラチンハイドロゲルであることがさらに好ましい。ハイドロゲルがゼラチンハイドロゲルである場合、ゼラチンハイドロゲルの含水率は９０～９９質量％であることが好ましい。このようなハイドロゲルによって予防剤は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の発症をさらに有効に阻止することができる。

【0025】

本明細書において「ハイドロゲル」とは、水に対して不溶性の三次元の網目構造を有することにより、内部に水を含んで膨潤する物質をいう。

【0026】

ハイドロゲルは、成長因子を確実に担持するため、成長因子との親和性および安定性の向上などの目的に応じて他の成分を加えることもできる。他の成分としては、たとえばアミノ糖またはその高分子量体、塩基性アミノ酸またはそのオリゴマー、もしくはその高分子量体、ポリアリルアミン、ポリジエチルアミノエチルアクリルアミド、ポリエチレンイミンなどの塩基性高分子などを挙げることができる。

【0027】

さらにハイドロゲルは、それ自身の安定性維持および成長因子の活性維持などの目的に応じ、製剤上許容し得る担体（安定化剤、保存剤、可溶化剤、ｐＨ調整剤、増粘剤など）を含むことができる。ハイドロゲルの徐放効果を調整する各種添加剤を含むことも可能である。

【0028】

予防剤に含まれるハイドロゲルの量は、抜歯窩のサイズなどに依存するため限定されるべきではない。しかしながら予防剤として口腔内へ適用する便宜上、１回の投与あたり０．０５～５０ｇの範囲から適宜選択することが好ましい。１回の投与あたり０．１～１０ｇの範囲とすることがさらに好ましい。

【0029】

以下、本実施形態ではハイドロゲルの例示として、「ゼラチンハイドロゲル」を取り上げて説明する。

【0030】

（ゼラチンハイドロゲル）
ゼラチンハイドロゲルは、ゼラチンから製造される。このゼラチンは、ヒト、ブタ、ウシなどの哺乳類のほか、サケ、タイ、サメなどの魚類などを含む種々の動物由来のコラーゲンに対し、アルカリ加水分解、酸加水分解または酵素分解などの処理を行なうことによってコラーゲンを変性させ、さらに温水を用いて抽出することにより得ることができる。ゼラチンは、微生物を用いた発酵法、化学合成または遺伝子組換え操作により得ることもできる。

【0031】

さらにゼラチンハイドロゲルは、ゼラチンを修飾したゼラチン誘導体から製造することもできる。ゼラチン誘導体としては、ゼラチンに対してアニジル基、チオール基、アミノ基、カルボキシル基、硫酸基、リン酸基、アルキル基、アシル基、フェニル基、ベンジル基などの残基を導入したもの、乳酸、グリコール酸などとの共重合体、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールとの共重合体などを挙げることができる。

【0032】

ゼラチンハイドロゲルの製造に用いるゼラチンは、コラーゲンのアルカリ処理によって得られ、上述のようにその等電点が４．５～５．５となる所謂酸性ゼラチンであることが好ましい。ゼラチンハイドロゲルは、原料となるゼラチンの等電点が４．５～５．５である場合、静電相互作用によって成長因子を保持する保持能力を高く維持することができるという効果が得られる。ただし、ゼラチンハイドロゲルの製造に用いるゼラチンは、コラーゲンの酸処理によって得られる所謂アルカリ性ゼラチンであってもよい。すなわちハイドロゲルは、等電点が８．５～９．５のゼラチンからなるゼラチンハイドロゲルであっても好適に使用することができる。

【0033】

ゼラチンハイドロゲルは、従来公知の架橋剤を用いてゼラチンの分子間を架橋することにより製造することができる。架橋剤として、グルタルアルデヒド、ＥＤＣなどの水溶性カルボジイミド、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、チオール基などの間に化学結合を作る縮合剤などを用いることができる。さらに熱脱水処理、紫外線、ガンマ線、電子線照射によってもゼラチンの分子間を架橋することができる。これらの架橋処理を組み合わせることもできる。塩架橋、静電的相互作用、水素結合、疎水性相互作用などの物理的な処理によってゼラチンの分子間を架橋することもできる。

【0034】

ゼラチンハイドロゲルを製造する場合、ゼラチンおよび架橋剤の濃度は、それぞれゼラチンが１～２０質量％、架橋剤が０．０１～１質量％であることが好ましい。架橋反応の条件は特に制限すべきではないが、たとえば０～４０℃、好ましくは２５～３０℃とし、１～４８時間、好ましくは１２～２４時間とすることができる。ゼラチンの架橋度は、ゼラチンハイドロゲルの含水率によって規定することができる。予防剤におけるゼラチンハイドロゲルの含水率は、上述のように９０～９９質量％であることが好ましい。

【0035】

一般に、ゼラチンハイドロゲルは、その含水率が高い程分解されやすく、もって生体吸収性は高くなる。「含水率」とは、ハイドロゲルの全体質量に対するハイドロゲル中の水の質量比率（質量％）をいう。ゼラチンハイドロゲルの含水率は、９０質量％未満となると、生体内での分解速度が著しく低下することにより、成長因子の十分な徐放効果を得られない可能性がある。上記含水率が９９質量％以上となると、生体内で直ちに溶解するため、成長因子を保持することができない。これにより患部から成長因子が流出するため、顎骨壊死の予防効果を得られない恐れがある。

【0036】

ゼラチンの等電点の測定およびゼラチンハイドロゲルの含水率の測定には、それぞれ従来公知の測定方法を用いることができる。

【0037】

ゼラチンハイドロゲルの具体的な製造方法は、複数存在するが、たとえば以下のとおりとすればよい。まず豚皮アルカリ処理により得られる等電点５のゼラチン（商品名：「ｂｅＭａｔｒｉｘゼラチンＬＳ－Ｈ」、新田ゼラチン株式会社製）を超純水に溶解し、３７℃で加温しながら撹拌することにより５質量％または１０質量％のゼラチン水溶液を調製する。このゼラチン水溶液に対し、２５質量％のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を所定量添加し、４℃、１２時間の条件で架橋反応を進ませる。このとき、グルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液の添加量を調整することにより、ゼラチンハイドロゲルの含水率を調製することができる。たとえば５質量％のゼラチン水溶液１０ｍＬに対し、２５質量％のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を２０μＬ添加することによって含水率９８質量％のゼラチンハイドロゲルを製造することができる。

【0038】

上記架橋反応により、水に不溶のゼラチンハイドロゲル前駆体が製造される。このゼラチンハイドロゲル前駆体を、室温（２５℃）、１時間の条件下で１００ｍＭのグリシン溶液に浸漬することにより、ゼラチンハイドロゲル前駆体に残存しているアルデヒド基およびグルタルアルデヒドを不活化する。続いて、ゼラチンハイドロゲル前駆体を室温で１時間、超純水中で洗浄することを２度行うことによりゼラチンハイドロゲルを製造することができる。

【0039】

得られたゼラチンハイドロゲルは、液体窒素中で凍結し、続いて乾燥することによって乾燥ゼラチンハイドロゲルとして保存することができる。予防剤として用いる際には、この乾燥ゼラチンハイドロゲルに対し、上述の成長因子を含む水溶液を所望の濃度となるように所定量滴下することによってゼラチンハイドロゲルに成長因子を含浸させ、もってゼラチンハイドロゲルの内部に成長因子を担持させることができる。

【0040】

≪予防用キットに備わる成長因子≫
本発明は、上述した顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤を構成するために使用される成長因子（以下、単に「成長因子」とも記す）にも係る。このような成長因子は、その特性および該特性の測定方法などが、上述の＜成長因子＞の欄で説明した成長因子と同じであるので、繰り返しとなる説明を省略する。

【0041】

≪予防用キットに備わるハイドロゲル≫
本発明は、上述した顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤を構成するために使用されるハイドロゲル（以下、単に「ハイドロゲル」とも記す）にも係る。このようなハイドロゲルは、その特性および該特性の測定方法などが、上述の＜ハイドロゲル＞の欄で説明したハイドロゲルと同じであるので、繰り返しとなる説明を省略する。

【0042】

≪予防用キット≫
本発明は、上述の成長因子と、上述のハイドロゲルとを備える顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防用キットに係る。すなわちこの予防用キットは、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤を構成するために使用される成長因子およびハイドロゲルを備えて構成される。

【0043】

＜作用＞
以上より本発明は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤として有用となる。これによりビスホスホネート系薬剤を投与した患者に対して抜歯などの口腔外科手術、歯周外科手術、歯内治療および歯周治療を行なった後に起きる顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の発症を有効に阻止することができる。

【実施例】

【0044】

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【0045】

＜薬剤関連顎骨壊死モデルラットの作製＞
１０週齢の雌ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットの尾静脈へ抜歯７日前および抜歯直前にそれぞれ、ビスホスホネート系薬剤に属するゾレドロン酸水和物を６０μｇ／ｋｇ注射することにより、抜歯によって顎骨壊死を発症する薬剤関連顎骨壊死モデルラットを作製した。なお、薬剤関連顎骨壊死モデルラットの作製に際しての詳細は、Journal of Cranio-Maxillio-Facial Surgery, 43(7), p1144-1150(2015)に記載されている。

【0046】

＜実施例１＞
（予防剤の作製）
ゼラチンハイドロゲル（牛骨ゼラチン、等電点５、商品名：「メドジェル（登録商標）」、株式会社メドジェル製）の凍結乾燥体０．８ｍｇに対し、ｂＦＧＦを含む溶液（商品名：「ｂＦＧＦ、ヒト、組換え体」、和光純薬工業株式会社製）４μｇ／８μＬを含浸させることにより、ゼラチンハイドロゲルにｂＦＧＦを担持させた製剤（実施例１の予防剤）を作製した。上記の「４μｇ／８μＬ」とは、上記溶液８μＬ中にｂＦＧＦを４μｇ含むことを意味する。ゼラチンハイドロゲルの含水率は、９４．２質量％である。

【0047】

（薬剤関連顎骨壊死モデルラットへの予防剤の投与）
全身麻酔下において、上記薬剤関連顎骨壊死モデルラットの左右下顎第一大臼歯を抜歯し、合計１４歯の抜歯窩に上記実施例１の予防剤をそれぞれ填入し、さらに上記抜歯窩を縫合した。

【0048】

＜実施例２＞
（予防剤の作製）
実施例１で用いたゼラチンハイドロゲルの凍結乾燥体に代え、コラーゲンスポンジ（アテロコラーゲン、商品名：「テルダーミス」、オリンパステルモバイオマテリアル株式会社製）０．４８ｍｇに対し、ｂＦＧＦを含む溶液（商品名：「ｂＦＧＦ、ヒト、組換え体」、和光純薬工業株式会社製）４０μｇ／８μＬを含浸させることにより、コラーゲンスポンジにｂＦＧＦを担持させた製剤（実施例２の予防剤）を作製した。上記の「４０μｇ／８μＬ」とは、上記溶液８μＬ中にｂＦＧＦを４０μｇ含むことを意味する。

【0049】

（薬剤関連顎骨壊死モデルラットへの予防剤の投与）
全身麻酔下において、上記薬剤関連顎骨壊死モデルラットの左右下顎第一大臼歯を抜歯し、合計３歯の抜歯窩に上記実施例２の予防剤をそれぞれ填入し、さらに上記抜歯窩を縫合した。

【0050】

＜実施例３＞
（予防剤の作製）
実施例１で用いたゼラチンハイドロゲルの凍結乾燥体に代え、３質量％ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達株式会社製）１５μｇに対し、ｂＦＧＦを含む溶液（商品名：「ｂＦＧＦ、ヒト、組換え体」、和光純薬工業株式会社製）４０μｇ／８μＬを溶解させることにより、ハイドロキシプロピルセルロースにｂＦＧＦを担持させた製剤（実施例３の予防剤）を作製した。上記の「４０μｇ／８μＬ」とは、上記溶液８μＬ中にｂＦＧＦを４０μｇ含むことを意味する。

【0051】

（薬剤関連顎骨壊死モデルラットへの予防剤の投与）
全身麻酔下において、上記薬剤関連顎骨壊死モデルラットの左右下顎第一大臼歯を抜歯し、合計３歯の抜歯窩に上記実施例３の予防剤をそれぞれ填入し、さらに上記抜歯窩を縫合した。

【0052】

＜比較例１＞
（予防剤の作製）
実施例１で用いたゼラチンハイドロゲルの凍結乾燥体に対し、リン酸緩衝液（商品名：「ＰＢＳ」、和光純薬工業株式会社製）８μＬを含浸させることにより、ゼラチンハイドロゲルにリン酸緩衝液を担持させた製剤（比較例１の予防剤）を作製した。

【0053】

（薬剤関連顎骨壊死モデルラットへの予防剤の投与）
実施例１と同じ方法により、上記薬剤関連顎骨壊死モデルラットの１４歯の抜歯窩に対し上記比較例１の予防剤を填入し、さらに上記抜歯窩を縫合した。

【0054】

＜比較例２＞
（予防剤の作製および薬剤関連顎骨壊死モデルラットへの予防剤の投与）
上記薬剤関連顎骨壊死モデルラット４匹に対し全身麻酔下において、左右下顎第一大臼歯を抜歯し、その抜歯窩に上記実施例１で用いたｂＦＧＦの溶液（比較例２の予防剤）をそれぞれ４μｇ／８μＬで填入し、さらに上記抜歯窩を縫合した。

【0055】

＜比較例３＞
上記薬剤関連顎骨壊死モデルラット１４匹に対し全身麻酔下において、左右下顎第一大臼歯を抜歯し、その抜歯窩に薬剤その他の溶液を何ら填入することなく、上記抜歯窩を縫合した。

【0056】

＜結果および考察＞
実施例１～３および比較例１～３を適用された薬剤関連顎骨壊死モデルラットを通常の飼育方法により３週間飼育し、各ラットの抜歯３週間後の抜歯窩の再生状況および顎骨壊死の発症状況を肉眼および病理組織により観察した。その結果を、図面代用写真として図１および図２に示す。図１および図２の肉眼写真および病理組織写真については、各実施例および比較例が適用された薬剤関連顎骨壊死モデルラットのうち、代表的な症状を呈したラットの写真を選択した。なお、実施例２および実施例３における抜歯３週間後の抜歯窩の再生状況および顎骨壊死の発症状況を示す肉眼観察写真および病理組織観察写真については、適切な写真が得られなかったので、これらの図面としての掲載を省略した。

【0057】

さらに各実施例および比較例において、顎骨壊死症状が現れたラットの数、および上記症状が現れなかったラットの数を、それぞれ表１の顎骨壊死症状「有」の欄および「無」の欄に示す。

【0058】

【表1】

【0059】

図１および図２によれば、実施例１のように成長因子（ｂＦＧＦ）と、ハイドロゲル（ゼラチンハイドロゲル）とを含む予防剤を適用された薬剤関連顎骨壊死モデルラットの抜歯窩は、上皮組織に被覆されていることが分かる。さらに表１から実施例１～３を適用された薬剤関連顎骨壊死モデルラットは、比較例１～３を適用された薬剤関連顎骨壊死モデルラットに比べ、顎骨壊死を発症する割合が大幅に低下していることが理解される。

【0060】

以上から実施例１～３は、顎骨壊死、顎骨骨髄炎または抜歯後治癒不全の予防に用いる予防剤として有効であることが理解される。

【0061】

以上のように本発明の実施の形態および実施例について説明を行なったが、上述の各実施の形態および実施例の構成を適宜組み合わせることも当初から予定している。

【0062】

今回開示された実施の形態および実施例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上述した説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

【図1】

【図2】