ホーム > 特許ランキング > Ｄｉｅｔ４Ｌｉｆｅ ＡｐＳ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-08-04
(45)【発行日】2022-08-15
(54)【発明の名称】食品ペプチド
(51)【国際特許分類】
C07K 14/435 20060101AFI20220805BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20220805BHJP
C07K 7/08 20060101ALI20220805BHJP
A23L 33/18 20160101ALI20220805BHJP
A23G 4/14 20060101ALI20220805BHJP
A23C 9/152 20060101ALI20220805BHJP
A23C 9/13 20060101ALI20220805BHJP
A23L 2/52 20060101ALI20220805BHJP
A23L 2/66 20060101ALI20220805BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20220805BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220805BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220805BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20220805BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20220805BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220805BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20220805BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/48 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/06 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20220805BHJP
A61K 9/68 20060101ALI20220805BHJP
【ＦＩ】
C07K14/435 ZNA
C07K7/06
C07K7/08
A23L33/18
A23G4/14
A23C9/152
A23C9/13
A23L2/00 F
A23L2/66
A23L2/00 J
A61P3/04
A61P3/10
A61P9/10 101
A61P9/12
A61P1/16
A61P35/00
A61K38/08
A61K38/10
A61K9/20
A61K9/48
A61K9/14
A61K9/06
A61K9/10
A61K9/68
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2018551497
(86)(22)【出願日】2016-12-16
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-02-28
(86)【国際出願番号】 EP2016081572
(87)【国際公開番号】W WO2017103200
(87)【国際公開日】2017-06-22
【審査請求日】2019-12-06
(31)【優先権主張番号】15200440.4
(32)【優先日】2015-12-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】518213569
【氏名又は名称】ダイエット４ライフ・アンパルトセルスカブ
【氏名又は名称原語表記】Ｄｉｅｔ４Ｌｉｆｅ ＡｐＳ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(72)【発明者】
【氏名】ヤン・ステイステズ
(72)【発明者】
【氏名】ジエホイ・ジョウ
(72)【発明者】
【氏名】ランディ・イェッセン
(72)【発明者】
【氏名】ヨハン・パルムフェルト
(72)【発明者】
【氏名】エリク・トアンゴー・ハンセン
【審査官】山本 晋也
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２００８／０７４３２９（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２００８／００１０４５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２００９／００８２２６５（ＵＳ，Ａ１）
【文献】Thomas E.Christos et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，1993年，Vol.3, No.6，p.1035-1040
【文献】Gary A. Cain et al.，Bioorganic & Medicinal Chemsitry Letters，1993年，Vol.3, No.8，p.1767-1772
【文献】Bernadette Cusack et al.，The Journal of Biological Chemistry，1995年，Vol.270, No.31，p.18359-18366
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アミノ酸配列Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－Ｐ－Ｙ－Ｉ－Ｌ－Ｒ２（式ＩＩ；配列番号２）からなる単離されたポリペプチドであって、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択されるアミノ酸であり；Ｒ１はＮ末端（－ＮＨ２）または保護基を規定し；Ｒ２はＣ末端（－ＣＯＯＨ）を規定する、単離されたポリペプチド。
【請求項2】
ＡＡ１がＡである、および／または、ＡＡ２がＳである、および／または、ＡＡ３がＤである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項3】
アミノ酸配列が天然アミノ酸のみを含む、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項4】
ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＳＤＫＰＹＩＬ、ＤＫＰＹＩＬ、ＡＡＤＫＰＹＩＬ、ＡＴＤＫＰＹＩＬ、ＡＳＥＫＰＹＩＬ、およびＡＧＤＫＰＹＩＬから選択される配列を有する、請求項１－３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項5】
アミノ酸配列ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－Ｐ－Ｙ－Ｉ－Ｌを含む１７－５０アミノ酸のポリペプチドであって；ここで、ＡＡ１がＡ、Ｌ、Ｉ、およびＶから選択される省略可能なアミノ酸である；ＡＡ２がＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸である；およびＡＡ３がＤ、Ｅ、およびＧから選択されるアミノ酸である、ポリペプチド。
【請求項6】
ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＳＤＫＰＹＩＬ、ＤＫＰＹＩＬ、ＡＡＤＫＰＹＩＬ、ＡＴＤＫＰＹＩＬ、およびＡＧＤＫＰＹＩＬから選択される配列を含む、１７－５０アミノ酸のポリペプチド。
【請求項7】
請求項１～６のいずれか一項に規定されるポリペプチドを含む組成物。
【請求項8】
対象における持続満腹感を促進するのに使用するための、請求項１～６のいずれか一項に規定されるポリペプチド。
【請求項9】
体重管理における使用のため、および／または対象における過体重および／または肥満の発生を予防または減少させるための、ならびに／または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病を予防または減少させるのに使用するための、請求項１～６のいずれかに規定されるポリペプチド。
【請求項10】
アミノ酸配列ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－ＡＡ４－Ｐ－Ｙ－Ｉ－Ｌ（式ＩＩＩ、配列番号３）を含む、またはからなる、アミノ酸の直鎖配列であり、かつ５０アミノ酸長以下であるポリペプチド、を含む経口組成物であって、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、Ｒ、Ｋ、ＥおよびＧから選択されるアミノ酸であり；ＡＡ４はアミノ酸Ｋであり、
前記組成物が前記ポリペプチドを少なくとも５ｍｇかつ５ｇ未満含む、経口組成物。
【請求項11】
対象における持続満腹感を促進するまたは食物摂取を減少させる方法における使用のための医薬組成物であって、請求項１－６のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項７もしくは１０に記載の組成物を含む、医薬組成物。
【請求項12】
対象における肥満の発生を予防し、または減少させる方法における使用のための医薬組成物であって、請求項１－６のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項７もしくは１０に記載の組成物を含む、医薬組成物。
【請求項13】
循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病を減少させ、または処置する方法における使用のための、医薬組成物であって、請求項１－６のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項７もしくは１０に記載の組成物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、メタボリックシンドローム（過体重および肥満、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、糖尿病および／またはがんを含む）の発生を予防し、または減少させるための、新規ペプチド、栄養剤を含むそのようなペプチドを含む組成物、ならびに満腹感および持続満腹感を誘導する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
肥満は、世界中の多数のヒトに影響を与える一般的な病状であり、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病などの病気が発生するリスクに関連し、このリスクを誘導し、または増加させる。
【0003】
いくつかの肥満の制御因子が同定されている。しかしながら、集中的な研究にもかかわらず、肥満の制御の理解は未だ不十分である。
【0004】
タンパク質は、炭水化物および脂肪よりも満腹感(satiating)があり、食物摂取に対するその効果は、そのエネルギー含量のみからなり得る効果よりも大きい。タンパク質が食物摂取の制御システムをトリガーする機構は不明である。しかしながら、タンパク質の摂取から生じる満腹信号は、タンパク質消化の際に消化管において始まっている可能性がある。
【0005】
したがって、食品タンパク質分解産物（ペプチドおよびアミノ酸）は、腸の腸内分泌細胞におけるシグナル伝達を誘導し、これは神経作用、局所作用（自己分泌およびパラクリン）および全身作用（内分泌）（図２）を伴う様々な消化管ホルモン（例えば、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）；図１）の分泌を導き、最終的に満腹感（食事として摂取した食物の量）および持続満腹感（食事間の時間の長さ）を導く。（いくつかの）腸内分泌細胞が遊離アミノ酸および低分子ペプチド（ジペプチドおよびトリペプチド）に応答することは周知であり、これらは腸細胞によって容易に取り込まれ、代謝され、かつ／または体循環に輸送される。消化の速度（すなわち、消化管の通過時間、消化酵素の分泌など）は、高度に調節されたプロセスであり、未消化タンパク質の細胞応答および／または消化管内のアミノ酸およびペプチドの増加は、消化管ホルモン（例えば、ＧＬＰ－１、ペプチドチロシン－チロシン（ＰＹＹ）、ニューロテンシン（ＮＴ））の分泌を導き、これは満腹感を誘導する。これらの信号が、長期の遅い放出のために消化管内で持続すると、持続満腹感が増強される。そのような機構の一つは回腸ブレーキであり、これは、部分的に消化された食物における未知の成分が遠位の小腸に到達し、消化管ホルモン（ＧＬＰ－１、ＰＹＹ、ＮＴ、およびおそらく、未知の他のホルモン）の分泌の形式で応答を呼び出す。しかし、回腸ブレーキの背後にある正確な機構は未知である。
【0006】
この持続満腹感を誘導する信号の原因となる具体的なペプチドのほとんどは未知であり、これらのペプチドのいずれかを同定できることは非常に重要である。
【0007】
本発明の目的
本発明の実施態様の目的は、対象に持続満腹感を誘導またはシグナル伝達する新規ポリペプチドを提供することである。
本発明の実施態様の目的は、対象に持続満腹感を誘導またはシグナル伝達する新規ポリペプチドを提供することである。
【0008】
本発明のポリペプチドは、体重管理における使用のために、および／または、過体重および／または肥満の発生の予防または減少のために、または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病の予防または減少のために、非常に多様な代謝疾患に関連する疾患を処置するのに使用され得る。
【発明の概要】
【0009】
食品タンパク質分解産物（ペプチドおよびアミノ酸）は、腸の腸内分泌細胞におけるシグナル伝達を誘導し、これは中枢性作用（ＣＮＳ）、局所作用（自己分泌およびパラクリン）および全身作用（内分泌）（図２）の全てを伴う様々な消化管ホルモン（例えば、ＧＬＰ－１；図１）の分泌を導き、最終的に満腹感および持続満腹感を導く。
【0010】
本発明者は、新規の食肉由来ポリペプチドが腸細胞株のシグナル伝達に優れており（図３）、非常に限られたペプチドのみがシグナル伝達できる（図４）ことを見出した。本発明の発明者は、タンパク質分解物中に存在するペプシン分解抵抗性のオクタペプチド（ＡＳＤＫＰＹＩＬ、配列番号６）を含むポリペプチド（図５）を同定し、そのペンタペプチド（ＫＰＹＩＬ、配列番号９）は重要な生理活性を有する最小の配列である（図６）。オクタペプチド配列は、筋特異的アルファ－アクチニン－２タンパク質に特有であり、全ての動物種間で保存されている。このペプチドは新規だが、天然の栄養剤として適用でき、満腹感および持続満腹感を誘導する。
【0011】
したがって第１の態様において、本発明は、アミノ酸配列
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式Ｉ、配列番号１）
を含む単離されたポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式Ｉ、配列番号１）
を含む単離されたポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
【0012】
第２の態様において、本発明は、アミノ酸配列
Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８－Ｒ２（式ＩＩ、配列番号２）
からなる単離されたポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；Ｒ１はＮ末端（－ＮＨ２）または保護基を規定し；Ｒ２はＣ末端（－ＣＯＯＨ）を規定する。
Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８－Ｒ２（式ＩＩ、配列番号２）
からなる単離されたポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；Ｒ１はＮ末端（－ＮＨ２）または保護基を規定し；Ｒ２はＣ末端（－ＣＯＯＨ）を規定する。
【0013】
第３の態様において、本発明は、ＡＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号６）、ＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号７）、ＤＫＰＹＩＬ（配列番号８）、ＫＰＹＩＬ（配列番号９）、ＡＧＤＫＮＹＩＬ（配列番号１０）、ＡＧＤＫＮＹＩＴ（配列番号１１）、ＡＧＤＫＳＹＩＴ（配列番号１２）、ＡＤＧＫＰＹＩＶ（配列番号１３）、ＡＥＤＫＤＦＩＴ（配列番号１４）、ＡＡＤＫＰＹＩＬ（配列番号１５）、ＡＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号１６）、ＡＧＤＫＰＹＩＴ（配列番号１７）、ＡＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号１８）、ＡＤＧＫＰＹＶＴ（配列番号１９）、ＡＧＤＫＰＹＩＬ（配列番号２０）、ＡＳＤＫＰＮＩＬ（配列番号２１）、ＡＳＤＫＰＹＩＴ（配列番号２２）、ＡＡＤＫＰＦＩＬ（配列番号２３）、ＡＳＤＫＡＹＩＴ（配列番号２４）、ＡＧＤＫＡＹＩＴ（配列番号２５）、ＡＮＧＫＰＦＩＴ（配列番号２６）、ＡＧＤＫＮＦＩＴ（配列番号２７）、ＡＳＤＫＳＹＩＴ（配列番号２８）、ＡＳＤＫＴＹＩＴ（配列番号２９）、ＡＳＤＫＮＹＩＴ（配列番号３０）、ＡＧＤＫＫＹＩＴ（配列番号３１）、ＡＧＤＫＮＹＩＳ（配列番号３２）、ＡＡＤＫＮＹＩＴ（配列番号３３）、ＡＧＤＫＮＹＩＭ（配列番号３４）、ＡＡＤＫＮＦＩＭ（配列番号３５）、ＡＡＤＫＮＦＩＴ（配列番号３６）、およびＡＧＤＫＧＩＲＳ（配列番号３７）から選択される配列を有し、または含むポリペプチドに関する。
【0014】
第４の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドを含む組成物に関する。
【0015】
さらなる態様において、本発明は、対象における持続満腹感を促進するのに使用するため、体重管理における使用のため、および／または対象における過体重および／または肥満の発生を予防または減少させるため、または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病を予防または減少させるための、本発明におけるポリペプチドに関する。
【0016】
さらなる態様において、本発明は、対象における肥満の発生を予防し、または減少させる方法、および／または対象の持続満腹感を促進する方法、および／または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂肪肝、がんおよび／または糖尿病を減少させ、または処置する方法に関し、この方法は、アミノ酸配列
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－ＡＡ４－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式ＩＩＩ、配列番号３）
を含む、またはからなるポリペプチドを、それを必要とする対象に腸内投与することを含み、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、Ｒ、Ｋ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ４はＫおよびＲから選択されるアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－ＡＡ４－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式ＩＩＩ、配列番号３）
を含む、またはからなるポリペプチドを、それを必要とする対象に腸内投与することを含み、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、Ｒ、Ｋ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ４はＫおよびＲから選択されるアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
【0017】
さらなる態様において、本発明は、対象における持続満腹感を促進するのに使用するため、および／または体重管理における使用のため、および／または対象における肥満の発生を予防または減少させるため、および／または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、循環器疾患、高血圧、がんおよび／または糖尿病を予防または減少させるのに使用するための、本発明における組成物に関する。
【0018】
さらなる態様において、本発明は、対象における持続満腹感を促進する方法、および／または対象における肥満の発生を予防または減少させる方法、および／または循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧、循環器疾患、高血圧、がんおよび／または糖尿病を減少または処置する方法に関し、この方法は本発明における組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1】ＧＬＵＴａｇ細胞（白丸）またはＧＬＰ－１を産生しない対照細胞株（黒丸）からのＧＬＰ－１の放出に対する、タンパク質加水分解物の効果についての用量反応曲線。細胞（試料毎に約５ｘ１０＾５個）を、種々の量（重量／体積）の食肉タンパク質加水分解物の非存在下または存在下において、５．５６ｍＭグルコースを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で最大で９０分間インキュベートした。上清を０．４５ミクロンのフィルターに通して濾過し、ＥＬＩＳＡプロトコルに記述されるように、ＧＬＰ－１の含量をアッセイした。データは、４通りの試料からの平均値＋ＳＥＭである。
【0020】
【図2】腸内分泌細胞における食物栄養素によるシグナル伝達。Horm Res Paediatr. 2015;83(1):1-10からの図。
【0021】
【図3】３種の異なる腸細胞株における食肉タンパク質加水分解物（黒丸）または乳清タンパク質加水分解物（白丸）によるシグナル伝達（細胞内蛍光の増加として測定）の刺激：上段）マウス腸細胞株；中段）ＧＬＵＴａｇ細胞；下段）ＣａＣｏ２細胞。
【0022】
【図4】タンパク質加水分解物のサイズ排除分画および生理活性の試験。太い実線で示される２８０ｎｍの吸光度、黒丸で示される分画の活性。
【0023】
【図5】合成ペプチドによって同定された配列ＡＳＤＫＰＹＩＬの検証。食肉加水分解物、および精製した分画の配列決定によって同定された純粋な合成ペプチドの用量反応関係の比較。
【0024】
【図6】マウス腸細胞（ｍＩＣ）およびヒト腸細胞（ｈＩＣ）におけるＡＳＤＫＰＹＩＬの最小の活性配列の同定。ＡＳＤＫＰＹＩＬのアミノ末端またはカルボキシ末端からの短縮化は異なる結果を有する。カルボキシ末端のロイシンの削除は、ｍＩＣ細胞において効力を２桁を超えて減少させ、ｈＩＣにおいて活性を消失させる。カルボキシ末端からのさらなる２、３または４個のアミノ酸の削除を伴うペプチドは活性を持たない。アミノ末端からの最初の３つのアミノ酸の削除は、活性に大きな影響を与えない。しかしながら、ＰＹＩＬはｍＩＣにおいて完全な配列と比較して２桁低い活性を有し、ｈＩＣにおいて活性を有さないため、４つ目のアミノ酸であるリジンが非常に重要である。
【0025】
【図7】ＡＳＤＫＰＹＩＬにおけるにおける非常に重要な残基の同定（ｄ－Ａｌａ（ＡＤ）スキャン）。ＡＳＤＫＰＹＩＬの全ての残基の、アラニンのｄ異性体への体系的な置換および対応する生理活性。結果は、１）最後の４つのアミノ酸（ＰＹＩＬ、配列番号４）が非常に重要であり、２）Ｋの置換は効力を３０倍を超えて減少させ、３）アスパラギン酸残基の置換は効力を約１０倍改善し、４）最初の２つの位置のアラニンおよびセリンは重要でないことを示した。
【0026】
【図8】齧歯類の腸におけるペプチドの安定性。０．００１ｍｇ／ｍｌの表示されたペプチドを、齧歯類の腸の断片（マウスおよびラットの腸は類似の結果を与えた）と共に、３７℃で最大で１０分間インキュベートした。活性の回収率を、所定の通りに用量反応曲線で検定した。
【0027】
【0028】
【図10】３種の既知の消化管ホルモンであるニューロテンシン、ニューロメジンＮ、およびＸｅｎｉｎの配列と、ＤＣ７－２（ＡＳＤＫＰＹＩＬ）の配列との比較。ＰＹＩＬ配列は保存されているが、ＹはＸｅｎｉｎにおいてＷに置換されている。
【0029】
【図11】ａ－アクチニン２（Ｈｓ：ヒトＡＣＴＮ１～４）のアイソフォームにおけるＤＣ７－２の配列（ａａ８９１～８９８）の比較および種間（Ｄｍ：キイロショウジョウバエ；Ｃｅ：線虫(Caenorhabditis elegans)；Ｄｄ：キイロタマホコリカビ；Ｓｐ：分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)；Ｄｒ：ゼブラフィッシュ）の保存。
【0030】
【図12】１０～１１週齢で２０～２２ｇの２４匹のＢａｌｂ／ｃ雌性マウスを、１２時間の明暗周期(dark light cycle)に順応させ、一戸建ての代謝ケージ中に配置した。表示された用量のＤＣ７－２を投与した後、飼料および水の摂取を６時間モニターした。
【0031】
【図13】ＤＣ７－２の配列に基づくオクタペプチド、ヘプタペプチド、ヘキサペプチドおよびペンタペプチドにおけるＮ末端置換の細胞シグナル伝達活性の要約。２０アミノ酸の１文字の略称を、対応するＥＣ５０を中心とするプロット上に示した。ＤＣ７－２における天然アミノ酸を、各ペプチドについて灰色の円で示す。
【0032】
【図14】腸ホモジネートにおける、ＤＣ７－２ファミリーのペプチドの安定性。２０アミノ酸の１文字の略称を、ペプチドの活性の半分を分解する腸ホモジネートの濃度に対して対数として表した、対応する安定性と共にプロット上に示す。全てのペプチドを、１０－５Ｍで小腸全体（２０匹のマウス由来のプール）のホモジネートの様々な希釈液と共にインキュベートした。３７℃で９０分間のインキュベーション後、分解を１Ｍリン酸（終濃度０．４Ｍ、ｐＨ約１．２）の添加によって停止した。各ペプチドインキュベーション混合物をＮａＯＨで中和し、即座に腸細胞における活性を検定した。各ペプチドは、分解なしの対照（すなわち、腸ホモジネートの添加前にリン酸を添加した）を含む。ＤＣ７－２の天然アミノ酸を、各ペプチドについて灰色の円で示す。
【0033】
【図15】血清におけるＤＣ７－２ファミリーのペプチドの安定性。
【0034】
【図16】腸ホモジネートおよび血清におけるＸ－ＫＰＹＩＬヘキサペプチドの安定性。
【0035】
【図17】１０～１１週齢で２０～２２ｇの２４匹のＢａｌｂ／ｃ雌性マウスを、１２時間の明暗周期に順応させた。マウスを６匹毎に４つの群に分け、一戸建ての代謝ケージ中に配置した。次に、飼料および水の摂取を６時間モニターするために、マウスに賦形剤を単独で投与した（１日目）。３日目に、同一の群は表示された用量のＤＣ７－２を受け、飼料および水の摂取を６時間モニターした。
【0036】
【図18】２５～３０ｇのＳｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ雄性マウスを１２時間の暗／明サイクルに順応させ、一戸建ての代謝ケージ中に配置した。暗サイクルの開始直前に賦形剤単独（１％のＢＳＡを含む０．５ｍｌのＰＢＳ）または賦形剤＋ＤＣ７－２を投与した後、食物摂取を１時間毎に６時間（暗サイクルの間）モニターした。４回の実験（各実験は処理毎に６～８匹のマウスを含む）からの平均値およびＳＥＭ。データを直線回帰でフィットし（Ｒ２＞０．９９）、９５％の信頼区間を灰色の線で示す。ＤＣ７－２を含む処置について蓄積した食物摂取は、これら４回の実験について、対照と比較して６４％＋／－５％であった。
【0037】
【図19】２５～３０ｇのＳｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ雄性マウスを１２時間の暗／明サイクルに順応させ、一戸建ての代謝ケージ中に配置した。暗サイクルの開始直前に賦形剤単独（１％のＢＳＡを含む０．５ｍｌのＰＢＳ）または賦形剤＋ＤＣ７－２を投与した後、食物摂取を１時間毎に１２時間（暗サイクルの間）モニターし、その後断続的に最大３０時間までモニターした。
【0038】
【図20】Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ雄性（２５～３０ｇ）または雌性（２０～２５ｇ）マウスを１２時間の暗／明サイクルに順応させ、ケージ毎に６～８匹の群で配置した。賦形剤（１％のＢＳＡを含む０．５ｍｌのＰＢＳ）単独または賦形剤＋ＤＣ７－２を毎日３回（０８：００；１６：００；２４：００）投与し、食物摂取を毎日、１週間モニターした。データを直線回帰でフィットし（Ｒ２＞０．９９）、９５％の信頼区間（灰色の線）を示す。
【発明を実施するための形態】
【0039】
本発明の発明者は、腸細胞のシグナル伝達を誘導するのに使用され得、結果的に持続満腹感を誘導し得る、新規ポリペプチドを見出した。特定のペプチドが筋特異的アルファ－アクチニン２タンパク質のタンパク質消化物から同定されたが、類似のポリペプチドが腸内の同様の受容体に結合し、同様の生理活性（すなわち、満腹感および持続満腹感を誘導するシグナル）を与えることが想定される。類似のペプチドは、例えば保存的置換または切断型を含み得る。本発明のポリペプチドを使用する理論的根拠は、相対的に短い長さのペプチドによるエネルギー含量が、持続満腹感に対する効果と比較して低いためである。
【0040】
定義
本開示において、「one」、「a」、「an」などの用語を使用する場合、これらは他の指示がない限り「少なくとも１つ」、または「１以上」を意味する。さらに用語「含む」は、「含有する」を意味することを意図しており、したがって明示的に記載された成分、特徴、条件または工程以外のそれらの存在を許容する。
本開示において、「one」、「a」、「an」などの用語を使用する場合、これらは他の指示がない限り「少なくとも１つ」、または「１以上」を意味する。さらに用語「含む」は、「含有する」を意味することを意図しており、したがって明示的に記載された成分、特徴、条件または工程以外のそれらの存在を許容する。
【0041】
いくつかの特定の実施態様において、本発明におけるアミノ酸配列のＮ末端の最初の１、２または３番目のアミノ酸はＤ型である。Ｎ末端のトリミングおよびそれによるペプチドの分解は、これらのポリペプチドのＮ末端にＤ型のアミノ酸を有することによって、少し遅延する。あるいは、いくつかの実施態様において、本発明におけるアミノ酸配列のＮ末端の最初の１、２または３番目のアミノ酸はベータ型またはガンマ型のアミノ酸である。ベータアミノ酸は、２０個の標準天然アミノ酸のようにアルファ炭素ではなく、ベータ炭素に結合しているアミノ基を有する。本明細書において、アミノ酸残基を表す文字の後の大文字の下付き文字Ｄは、Ｄ型に特定されたアミノ酸を指す（ＷＤがＤ型のトリプトファンを指すなど）。本明細書において、アミノ酸残基を表す文字の後の大文字の下付き文字Ｌは、Ｌ型に特定されたアミノ酸を指す（ＷＬがＬ型のトリプトファンを指すなど）。他の指示がない場合、アミノ酸は天然のＬ型である。
【0042】
あるいは、本発明におけるアミノ酸配列のＮ末端の最初の１、２または３番目のアミノ酸は、保護基（例えばフッ素）の取り込みによって修飾され得、あるいは環状アミノ酸または他の適切な非天然アミノ酸が使用される。
【0043】
ペプチドの「バリアント」または「類似体」は、基準のペプチド（典型的に天然または「親」のポリペプチド、または式ＩまたはＩＩのポリペプチド）と実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチドを指す。ペプチドバリアントは、天然アミノ酸配列中の特定の位置における１以上のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有し得る。この定義における「バリアント」は、未だ機能的活性を有する。いくつかの実施態様において、バリアントは基準のポリペプチドと少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施態様において、バリアントは基準のポリペプチドと少なくとも８５％の配列同一性を有する。他の実施態様において、バリアントは基準のポリペプチドと少なくとも９０％の配列同一性を有する。さらなる実施態様において、バリアントは基準のポリペプチドと少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0044】
「保存的な」アミノ酸置換は、アミノ酸残基を、類似の物理化学的性質を持つ側鎖を有するアミノ酸残基に置換することである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で公知であり、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。保存的アミノ酸置換の特定の形式は、遺伝暗号によりコードされた通常の２０個のアミノ酸以外のアミノ酸への置換を含む。本発明の好ましい実施態様は合成ペプチドの使用を必要とするため、本明細書に開示されるペプチドにそのような「天然に存在しない」アミノ酸残基を与えることは問題とはならず、それにより、アミノ酸残基の側鎖における天然の飽和炭素鎖をより短いまたはより長い飽和炭素鎖に交換できる（例えば、リジンを側鎖－（ＣＨ２）ｎＮＨ３を有するアミノ酸（ｎは４以外）に置換し得、アルギニンを側鎖（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝ＮＨ２）ＮＨ２を有するアミノ酸（ｎは３以外）に置換し得る、など）。同様に、酸性アミノ酸であるアスパラギン酸およびグルタミン酸は、側鎖－（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨを有するアミノ酸残基（ｎ＞２）に置換され得る。
【0045】
本発明のポリペプチドは、いくつかの実施態様において、天然に存在するアミノ酸のみを含むポリペプチドよりも高い安定性を有することで利益を得る場合があり、その修飾（ポリペプチドのＮ末端の修飾など）ははるかに高い安定性を有することを可能にする。
【0046】
したがって、いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、Ｎ末端に保護基（アセチル基、フルオレニルメトキシカルボニル基、ホルミル基、パルミトイル基、ミリスチル基、ステアリル基、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）からなる群から選択される保護基など）を持つ。
【0047】
活性ペプチドはまた、重要でないアミノ基または他の反応基を介した共役のために、例えば、種々の長さ（例えば１０～１００Å）および種々の機能性（例えばホモ官能性またはヘテロ官能性）のスペーサーを含む、適切な二価または多価の化学架橋剤（例えばスベリン酸ジサクシンイミジル）との架橋を介して、二量体化または多量体化し得る。あるいは、光活性化または酵素的架橋を用いて、インビボ(in vivo)における安定性および効力を増加させ得る。
【0048】
上述のペプチドの修飾は、本発明のペプチドの安定性を大きく増加させる。本明細書における用語「安定性」は、インビボにおける安定性（そのようなポリペプチドを受ける対象の腸における安定性など）を指す。上述の保護基は、ペプチドをインビボにおけるプロテアーゼの攻撃から保護する。
【0049】
本発明におけるポリペプチドは食肉のタンパク質消化物に由来し得、ペプシン分解抵抗性であり得る。したがって、いくつかの実施態様において、本発明におけるポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸のみを含み得る。
【0050】
他の実施態様において、本発明におけるポリペプチドは、対照ペプチドと比較して、消化管における分解に対してより安定である（例えば、本発明の実施例で記述される安定性アッセイにおいて測定される）。いくつかの実施態様において、本発明におけるポリペプチドは、配列ＲＲＰＹＩＬ（配列番号３９）を含む対照ペプチドと比較して、消化管における分解に対してより安定である（例えば、本発明の実施例で記述される安定性アッセイにおいて測定される）。
【0051】
いくつかの実施態様において、本発明におけるポリペプチドは、腸におけるインビボまたはインビトロ(in vitro)の分解の半減期（Ｔ1/2）を有し（例えば、本発明の実施例２で記述される安定性アッセイにおいて測定される）、この半減期は２分より大きい（４分より大きいなど、６分より大きいなど、８分より大きいなど、１０分より大きいなど、１５分より大きいなど、２０分より大きいなど、２５分より大きいなど、３０分より大きいなど、３５分より大きいなど、４０分より大きいなど、４５分より大きいなど、５０分より大きいなど、５５分より大きいなど、６０分より大きいなど）。
【0052】
２つのアミノ酸配列に関して、用語「実質的に同一」は、配列が最適に配列した場合（初期設定のギャップ重み(gap weight)を用いたＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによってなど）に、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約９８、または少なくとも約９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。いくつかの実施態様において、２つの異なるペプチド配列間の配列同一性を測定する場合、１つまたは２つのアミノ酸のギャップは、２つのペプチド配列を配列同一性の値に対して何ら影響を与えずに配列した場合に許容される。いくつかの実施態様において、同一でない残基の位置は、保存的なアミノ酸置換によってのみ異なる。配列同一性は典型的に、配列分析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、様々な置換、欠失および他の修飾（保存的なアミノ酸置換を含む）に割り当てられる類似度の測定を用いて、類似の配列を比べる。例えば、公開されているＧＣＧソフトウェアは「Ｇａｐ」および「ＢｅｓｔＦｉｔ」などのプログラムを含み、これらは初期設定のパラメータを用いて、密接に関連したポリペプチド（異なる種の生物由来の相同ポリペプチドなど）間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定できる。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１．参照。ポリペプチド配列はまた、ＦＡＳＴＡまたはＣｌｕｓｔａｌＷを用いて、初期設定または推奨のパラメータを適用して比較できる。ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１．、ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）におけるプログラムは、問い合わせ配列と検索配列との間の最良の重複領域の配列比較および配列同一性の割合を提供する(Pearson, Methods Enzymol. 1990; 183:63-98; Pearson, Methods Mol. Biol. 2000;132:185-219)。配列を様々な生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する場合、別の好ましいアルゴリズムは、初期設定のパラメータを用いたコンピュータープログラムＢＬＡＳＴ（特にｂｌａｓｔｐ）である。例えば、Altschul et al., J. Mol. Biol. 1990;215:403-410；Altschul et al., Nucleic Acids Res. 1997;25:3389-402 (1997)参照のこと；それぞれは参照によって本明細書に組み込まれる。２つの実質的に同一なアミノ酸配列における「対応する」アミノ酸の位置は、本明細書で言及されるいずれかのタンパク質分析ソフトウェアで、典型的に初期設定のパラメータを用いて配列された位置である。
【0053】
本明細書における用語「機能的活性」は、細胞内カルシウムの上昇または消化管ホルモンの細胞放出によって蛍光として測定される細胞のシグナル伝達（例えば、実施例に記述されるシグナル伝達アッセイにおいて測定される）を刺激するポリペプチドを指す。バリアントの機能的活性は、本明細書に記述されるアッセイで検査した場合、基準のポリペプチド（オクタペプチドＡＳＤＫＰＹＩＬなど）の特異的活性の少なくとも約２５％（少なくとも約５０％など、少なくとも約７５％など、少なくとも約９０％など）を示し得る。あるいは、バリアントの機能的活性は、本明細書に記述されるアッセイで検査した場合、基準のポリペプチド（オクタペプチドＡＳＤＫＰＹＩＬなど）よりも高い活性を示し得る。
【0054】
「単離された」分子は組成物中における支配的な種の分子であり、これはこの分子が属する分子の分類に関して見出される（すなわち、この分子は組成物中の分子種の少なくとも約５％を構成し、典型的に、組成物中の分子種（例えばペプチド）の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上を構成する）。通常、特定のペプチド配列の組成物は、組成物中に存在する全てのペプチド種、または少なくとも提案されている使用に関して実質的に活性なペプチド種について、９０～９９％のペプチドの均一性を示し得る。合成的に作成する場合、特定のペプチド配列の組成物は、組成物中に存在する全てのペプチド種、または少なくとも提案されている使用に関して実質的に活性なペプチド種について、９８％～９９％またはそれよりも高く、１００％に近いペプチドの均一性を示す。
【0055】
他の指示がない限り、本発明におけるポリペプチドは、アミノ酸の直鎖配列である。本明細書における用語「直鎖配列」は、標準的なＮ末端からＣ末端の方向に標準的なペプチド結合によって連結したアミノ酸の特定の配列を指す。ペプチドはペプチド結合のみを含み得る。しかしながら、いくつかの実施態様において、ペプチド配列の第２の部分が、アミノ酸配列の第１の部分における末端アミノ酸の側鎖に結合し、連続し得る。この用語はまた、配列中（ＡＡ１～ＡＡ８中など）のアミノ酸が、ペプチド配列中の遠位（ＡＡ１～ＡＡ８中の遠位など）にある別のアミノ酸と（例えば側鎖を介して）結合し得ることを除外しない。
【0056】
本発明に関して、「処置」または「処置する」は、文脈によって矛盾しない限り、疾患または障害の１以上の症状または臨床関連症状を予防、軽減、管理、治癒または減少させることを指す。例えば、疾患または障害の症状または臨床関連症状が同定されていない患者の「処置」は予防的または予防のための治療であり、一方、疾患または障害の症状または臨床関連症状が同定されている患者の「処置」は通常、予防的または予防のための治療を構成しない。
【0057】
用語「患者」および「対象」は、本発明の方法を用いて処置され得る任意のヒトまたは動物を指す。
【0058】
本発明の多くの態様は、対象の持続満腹感を促進するポリペプチドまたは組成物の使用に関する。本発明におけるポリペプチドまたは組成物で処置され得るメタボリックシンドロームまたは障害の根本的な原因は、持続満腹感を感じずに、カロリーを過剰摂取することである。対象における持続満腹感を誘導または促進することによって、そのようなカロリーの全量（脂肪および炭水化物に由来するカロリーを含む）を対象において減少させる。したがって本発明のポリペプチドおよび組成物は、メタボリックシンドロームまたは障害（肥満、インスリン欠乏またはインスリン抵抗性関連障害、糖尿病（例えば、２型糖尿病など）、耐糖能障害、脂質代謝異常、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心臓病理学、脳卒中、非アルコール性脂肪肝疾患、高血糖、脂肪肝、脂質異常症、過体重および肥満に関連する免疫系の機能障害、循環器疾患、高コレステロール、トリグリセリドの上昇、喘息、睡眠時無呼吸、変形性関節症、神経変性、胆嚢疾患、シンドロームＸ、炎症性疾患、免疫異常、アテローム性脂質異常症(atherogenic dyslipidemia)、およびがんなど）を予防または減少させるのに使用され得る。
【0059】
本発明のポリペプチドの調製
本発明はまた、上述の本発明のポリペプチドを調製する方法に関する。その合成または調製方法は、限定されないが、組換え（ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡまたは核酸の他の形式のいずれかから作成される）、合成およびトランスジェニックな手法を含む。
本発明はまた、上述の本発明のポリペプチドを調製する方法に関する。その合成または調製方法は、限定されないが、組換え（ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡまたは核酸の他の形式のいずれかから作成される）、合成およびトランスジェニックな手法を含む。
【0060】
本明細書に記述される本発明のポリペプチドは、組換え核酸技術を用いて作成され得る。一般に、所望のポリペプチドをコードする核酸配列を発現ベクターに挿入し、これを次に宿主細胞に形質転換または遺伝子導入する。
【0061】
代替の好ましい選択肢として、本発明のポリペプチドは、合成手法によって（すなわちポリペプチド合成によって）作成される。いくつかの実施態様において、本発明は、全体で約５残基～約２０残基の非天然アミノ酸を含む類似体を生産する方法に関する。いくつかの実施態様において、類似体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の非天然アミノ酸（以下の天然に存在しないアミノ酸残基のいずれかなど）を含む。
【0062】
本発明のポリペプチドはまた、天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る。天然に存在しないアミノ酸は、限定されないが、ベータ－アラニン、デスアミノヒスチジン（desaminohistidine）、トランス－３－メチルプロリン、２，４－メタノプロリン、シス－４－ヒドロキシプロリン、トランス－４－ヒドロキシプロリン、Ｎ－メチルグリシン、アロスレオニン、メチルスレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３－および４－メチルプロリン、３，３－ジメチルプロリン、ｔｅｒｔ－ロイシン、ノルバリン、２－アザフェニルアラニン、３－アザフェニルアラニン、４－アザフェニルアラニン、および４－フルオロフェニルアラニンを含む。天然に存在しないアミノ酸残基をポリペプチドに組み込むいくつかの方法が当分野で公知である。例えば、インビトロにおける系が利用でき、ここでナンセンス変異は化学的にアミノアシル化されたサプレッサーｔＲＮＡを用いて抑制される。アミノ酸を合成する方法およびｔＲＮＡをアミノアシル化する方法は、当分野で公知である。ナンセンス変異を含むプラスミドの転写および翻訳は、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｓ３０抽出物および市販の酵素ならびに他の試薬を含む無細胞系において実行される。ポリペプチドはクロマトグラフィーによって精製される。例えば、Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993;およびChung et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10145-9, 1993参照。第２の方法において、翻訳は、変異ＲＮＡおよび化学的にアミノアシル化されたサプレッサーｔＲＮＡのマイクロインジェクションによって、アフリカツメガエル卵母細胞において実行される(Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996)。第３の方法において、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞は、置換される天然アミノ酸（例えば、フェニルアラニン）の非存在下、および所望の天然に存在しないアミノ酸（例えば、２－アザフェニルアラニン、３－アザフェニルアラニン、４－アザフェニルアラニン、または４－フルオロフェニルアラニン）の存在下において培養される。天然に存在しないアミノ酸は、その天然の対応物の代わりにポリペプチドに組み込まれる。Koide et al., Biochem. 33:7470-6, 1994参照。天然に存在するアミノ酸残基は、インビトロにおける化学修飾によって天然に存在しない種に変換され得る。化学修飾は、部位特異的変異誘発と組み合わされ得、置換の範囲をさらに拡張し得る(Wynn and Richards, Protein Sci. 2:395-403, 1993)。
【0063】
合成的な調製の別の代替として、本発明のポリペプチドは、実施例の節で記述される方法などによって、そのようなポリペプチドを含む任意の天然源（筋組織（アルファ－アクチニン２タンパク質を含む任意の供給源など）のタンパク質加水分解物など）から精製され得る。
【0064】
したがって、いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドの配列は、天然に見出される配列（アルファ－アクチニン２タンパク質のフラグメントなど）に由来する。
【0065】
本発明のポリペプチドは、当分野で公知の多様な手法（限定されないが、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、疎水性、クロマトフォーカシングおよびサイズ排除）、電気泳動法（例えば、分離用等電点電気泳動法（ＩＥＦ））、溶解度差（例えば、硫安沈殿法）または抽出法を含む）によって精製され得る（例えば、Protein Purification, J.-C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989参照）。本発明のポリペプチドは、抗体カラム上でアフィニティークロマトグラフィーによって精製され得る。さらなる精製は、従来の化学的な精製手段（高速液体クロマトグラフィーなど）によって達成され得る。精製の他の方法（クエン酸バリウム沈殿法を含む）は当分野で公知であり、精製に適用され得る（例えば、Scopes, R., Protein Purification, Springer-Verlag, N.Y., 1982参照）。
【0066】
治療の目的を含む本発明の方法について、本発明の特定のペプチドを高純度で有することは重要ではない。しかしながら、本発明の特定のペプチドの濃度が高いほど、ポリペプチドの組成物を受けた対象によって摂取された全タンパク質の量および全カロリー量に対する、満腹感および持続満腹感の誘導に関する効果が高くなる。本発明の着想は、対象に大量のカロリーを投与することなく、満腹感および持続満腹感を誘導するポリペプチドを投与することであると理解されるはずである。
【0067】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドの組成物は実質的に純粋である。したがって、本発明のある実施態様において、本発明のポリペプチドは、少なくとも約９０～９５％の均一性、好ましくは少なくとも約９８％の均一性に精製される。純度は、例えばＨＰＬＣおよびアミノ末端アミノ酸配列決定法によって評価され得る。
【0068】
投与および医薬組成物
本発明におけるポリペプチドの投与は、そのような処置を必要とする患者に、いくつかの投与経路（例えば、舌、舌下、頬側、口内、経口、胃腸内、経鼻、肺（例えば細気管支および肺胞またはそれらの組合せ）、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼（例えば結膜）、尿管、および非経口）を介してなされ得る。
本発明におけるポリペプチドの投与は、そのような処置を必要とする患者に、いくつかの投与経路（例えば、舌、舌下、頬側、口内、経口、胃腸内、経鼻、肺（例えば細気管支および肺胞またはそれらの組合せ）、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼（例えば結膜）、尿管、および非経口）を介してなされ得る。
【0069】
これらの種類のポリペプチドは本来、口を通って腸粘膜に移動しなければならない供給源に由来するため、何らかの経口投与が好ましい。
【0070】
本発明の組成物は、数種の投与形式（例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、マイクロエマルション、多重エマルション、泡、膏薬、ペースト、硬膏、軟膏、錠剤、コーティング錠、リンス、カプセル（例えば、硬ゼラチンカプセルおよび軟ゼラチンカプセル）、坐薬、レクタルカプセル、点滴薬、ゲル、粉末、噴霧剤、エアロゾル、吸入剤、点眼剤、眼軟膏、洗眼剤(ophthalmic rinse)、膣内ペッサリー、腟内リング、膣軟膏、注射液、インサイチュ変換溶液(in situ transforming solution)（例えばインサイチュゲル化、インサイチュ硬化、インサイチュ沈殿、インサイチュ結晶化）、輸液、および埋込剤として）で投与され得る。
【0071】
当業者は、組成物および医薬組成物の適切な用量が処置される個人および目的に応じて様々であり得ることを認識する。例えば、個々の患者の年齢、体重および病歴が治療効果に影響を与え得る。さらに、より低用量の組成物が、症状の一時的な休止を引き起こすのに必要であり得るが、より高用量が、疾患、障害または適応症に関連する症状の完全な休止を引き起こすのに必要であり得る。有能な医師はこれらの要素を考慮して投与計画を調整し、過度な実験なしに所望の治療結果を達成する用量を保証できる。また、臨床医および／または処置医は治療を個々の患者の応答と組み合わせて、いつ、およびどのように中断、調整および／または終結すべきかを知っていることを注記しておく。用量はまた、医薬組成物のために選択される本発明の特定のポリペプチドの強度に依存し得る。
【0072】
組成物または医薬組成物の用量は様々であり得る。組成物の投与は１日に１回であり得る。いくつかの実施態様において、１日に複数回の投与が対象になされ得る。いくつかの実施態様において、全投与量は少なくとも２つの投与周期で投与される。いくつかの実施態様において、この周期は１時間、１日、１年、１週間または２週間であり得る。本発明のさらなる実施態様において、全投与量は２以上の別々の投与周期または別々の投与量で投与される。
【0073】
いくつかの実施態様において、対象は組成物を投与され得、この組成物は、対象の体重に対して約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約５０００ｍｇ／ｋｇの範囲の１日の投与量で提供される。対象に投与された投与量はまた、１日に投与される本発明のポリペプチドの全量に関して測定され得る。いくつかの実施態様において、対象は、１日に約０．００１～約３０００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約２０００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約１８００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約１６００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約１４００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約１２００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約１０００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は１日に最大で約８００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に約０．００１ミリグラム～約７００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約７００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約６００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約５００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約４００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約３００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約２００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約１００ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。いくつかの実施態様において、対象は、投与毎に最大で約５０ミリグラムの本発明のポリペプチドを投与される。
【0074】
本発明のポリペプチドが添加された組成物は、あらゆる食品組成、食品製品、または食品成分であり得る。ここで、用語「食物」は、広い意味で用いられ、ヒト用の食物および動物用の食物（すなわち飼料）を包含する。好ましい態様において、食物はヒトが摂取するための食物である。食物は溶液状または固体であり得、これは使用および／または適用方法および／または投与方法に依存する。
【0075】
食物（機能性食品など）として（またはその調製において）使用される場合、本発明の組成物は、栄養的に許容され得る担体、栄養的に許容され得る希釈剤、栄養的に許容され得る賦形剤、栄養的に許容され得るアジュバント、栄養的に有効な成分のうち１つ以上と組み合わせて使用され得る。
【0076】
本発明の組成物は食品成分として使用され得る。
【0077】
本明細書において、用語「食品成分」は、機能性食品または食料に栄養補助食品として添加される、または添加され得る製剤を含む。本明細書における用語「食品成分」はまた、粘度を増すことなく、ゲル化、テクスチャー化(texturising)、安定化、懸濁化、製膜化および構造化、みずみずしさの保持ならびに食感の改善を必要とする多様な製品において、低いレベルで使用され得る製剤を指す。
【0078】
食品成分は、溶液状または固体であり得、これは使用および／または適用方法および／または投与方法に依存する。
【0079】
本発明の組成物は栄養補助食品であり得、または栄養補助食品に添加され得る。
本発明の組成物は機能性食品であり得、または機能性食品に添加され得る。
本発明の組成物は機能性食品であり得、または機能性食品に添加され得る。
【0080】
本明細書において、用語「機能性食品」は栄養学的効果および／または味覚の満足感を提供できるだけでなく、消費者にさらなる有利な効果を供給できる食物を意味する。
【0081】
したがって、機能性食品は通常の食品であり、食物に純粋な栄養学的効果以外の特定の機能性（例えば、医学的利益または生理学的利益）を与える、通常の食品に組み込まれる構成要素または成分（本明細書で記述される構成要素または成分など）を有する。
【0082】
機能性食品の法的な定義はないが、この分野の当事者のほとんどは機能性食品が特定の健康効果を有するものとして販売される食品であることに同意する。
【0083】
いくつかの機能性食品は栄養補助食品である。ここで、用語「栄養補助食品」は、栄養学的効果および／または味覚の満足感を提供できるだけでなく、消費者に治療効果（または他の有利な効果）を供給できる食物を意味する。栄養補助食品は、食物と医薬との間の従来の境界線を横切っている。
【0084】
調査は、消費者が心疾患に関連する機能性食品の要求に最も重点を置くことを示唆してきた。がんを予防することは、消費者が大きな関心を示す栄養学の別の態様であるが、興味深いことに、これは消費者が最低限の制御を発揮できると感じる分野である。実際に、世界保健機関によると、がんの原因の少なくとも３５％は食生活関連である。さらに骨粗鬆症、消化管の健康、および肥満の効果に関する要求は、機能性食品の購入を刺激し、市場の発展を駆動する可能性のある重要な要素である。
【0085】
本発明の組成物は、食品（ジャム、マーマレード、ゼリー、乳製品（ミルクまたはチーズなど）、肉製品、鶏肉加工品、魚加工品、野菜ベースのスープ、およびベーカリー製品のうち１つ以上など）の調製において使用され得、または食品に添加され得る。
【0086】
例示の目的で、本発明の組成物は、ソフトドリンク、フルーツジュースまたは乳清タンパク質を含む飲料、健康茶、ココアドリンク、乳飲料および乳酸菌飲料、ヨーグルトおよび飲むヨーグルト、チーズ、アイスクリーム、氷菓およびデザート、菓子類、ビスケットケーキおよびケーキの素、スナック菓子、朝食用シリアル、即席麺類およびカップ麺、即席スープおよびカップスープ、バランスのとれた食物および飲料、甘味料、食感を改善したスナックバー、線維バー(fibre bar)、ベーク安定フルーツフィリング(bake stable fruit filling)、ケアグレーズ(care glaze)、チョコレートベーカリーフィリング、チーズケーキ風味のフィリング、フルーツ風味のケーキフィリング、ケーキおよびドーナツアイシング(cake and doughnut icing)、熱安定ベーカリーフィリング、即席ベーカリーフィリングクリーム、クッキー用フィリング、既製のベーカリーフィリング、低カロリーフィリング、成人用栄養飲料、酸性化大豆／ジュース飲料、無菌性／レトルトチョコレート飲料、バーミックス(bar mix)、飲料粉末、カルシウム強化大豆／プレーン(plaim)およびチョコレートミルク、カルシウム強化コーヒー飲料の成分として使用され得る。
【0087】
本発明における組成物はさらに、食品（アメリカンチーズソース、粉チーズ＆細切りチーズ用の固化防止剤、チップディップ、クリームチーズ、ドライブレンドホイップトッピング(dry blended whip topping)の無脂肪サワークリーム、冷凍／解凍生ホイッピングクリーム、冷凍／解凍安定ホイップトッピング、低脂肪＆低カロリーのナチュラルチェダーチーズ、低脂肪スイススタイルヨーグルト、炭酸冷凍デザート、およびノベルティバー(novelty bar)、ハードパックアイスクリーム、ラベルフレンドリー(label friendly)、経済および耽溺を改善した(improved economics & indulgence)ハードパックアイスクリーム、低脂肪アイスクリーム：ソフトクリーム、バーベキューソース、チーズディップソース、コテージチーズドレッシング、ドライミックスアルフレッドソース、ミックスチーズソース、ドライミックストマトソースおよび他の食品など）の成分として使用され得る。
【0088】
特定の態様において、食料は好ましくは飲料である。
特定の態様において、食料は好ましくはベーカリー製品（パン、デニッシュペストリー、ビスケットまたはクッキーなど）である。
特定の態様において、食料は好ましくはベーカリー製品（パン、デニッシュペストリー、ビスケットまたはクッキーなど）である。
【0089】
本発明はまた、本発明におけるポリペプチドまたは本発明における組成物を別の食品成分と混合することを含む、食物または食品成分を調製する方法を提供する。
【0090】
本発明の特定の実施態様
本発明のある態様は、アミノ酸配列
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式Ｉ、配列番号１）
を含む、単離したポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
本発明のある態様は、アミノ酸配列
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－Ｋ－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式Ｉ、配列番号１）
を含む、単離したポリペプチドに関し、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
【0091】
本発明の別の態様は、対象の持続満腹感を促進する方法、または対象における肥満の発生を予防し、または減少させる方法に関し、この方法は、アミノ酸配列
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－ＡＡ４－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式ＩＩＩ、配列番号３）
を含む、またはからなるポリペプチドを、それを必要とする対象に腸内投与することを含み、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、Ｒ、Ｋ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ４はＫおよびＲから選択されるアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
ＡＡ１－ＡＡ２－ＡＡ３－ＡＡ４－ＡＡ５－ＡＡ６－ＡＡ７－ＡＡ８（式ＩＩＩ、配列番号３）
を含む、またはからなるポリペプチドを、それを必要とする対象に腸内投与することを含み、ここでＡＡ１はＡ、Ｌ、ＩおよびＶから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ３はＤ、Ｒ、Ｋ、ＥおよびＧから選択される省略可能なアミノ酸であり；ＡＡ４はＫおよびＲから選択されるアミノ酸であり；ＡＡ５はＰ、Ｎ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択され；ＡＡ６はＹ、Ｎ、Ｉ、ＷおよびＦから選択され；ＡＡ７はＩ、Ｌ、ＲおよびＶから選択され；ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、Ｓ、ＭおよびＴから選択され；ポリペプチドは５０アミノ酸長以下であり；または少なくとも８０％の配列同一性を有する、そのバリアントである。
【0092】
以下において、ＡＡ１～ＡＡ８は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩのいずれかのアミノ酸を指し得る。
【0093】
いくつかの実施態様において、ＡＡ１は存在しない。いくつかの実施態様において、ＡＡ１は、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｑ、Ｐ、Ｎ、Ｍ、Ｌ、Ｋ、Ｉ、Ｈ、Ｇ、Ｆ、Ｅ、Ｄ、Ｃ、およびＡから選択されるいずれか１つの天然アミノ酸である。いくつかの実施態様において、ＡＡ２は存在しない。いくつかの実施態様において、ＡＡ２はＹ、Ｗ、Ｖ、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｑ、Ｐ、Ｎ、Ｍ、Ｌ、Ｋ、Ｉ、Ｈ、Ｇ、Ｆ、Ｅ、Ｄ、Ｃ、およびＡから選択されるいずれか１つの天然アミノ酸である。いくつかの実施態様において、ＡＡ３は存在しない。いくつかの実施態様において、ＡＡ１は存在する。いくつかの実施態様において、ＡＡ２は存在する。いくつかの実施態様において、ＡＡ３は存在する。いくつかの実施態様においてＡＡ１はＡである。いくつかの実施態様において、ＡＡ２はＳである。いくつかの実施態様において、ＡＡ３はＤである。いくつかの実施態様において、ＡＡ３はＣ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、ＰおよびＱのいずれか１つのアミノ酸から選択される。いくつかの実施態様において、ＡＡ３はＥおよびＧから選択される。いくつかの実施態様において、ＡＡ３はＰである。いくつかの実施態様において、ＡＡ３はＣである。いくつかの実施態様において、ＡＡ４はＫである。いくつかの実施態様において、ＡＡ６はＹである。いくつかの実施態様において、ＡＡ７はＩである。いくつかの実施態様において、ＡＡ８はＬである。いくつかの実施態様において、アミノ酸配列は天然に見出されない。いくつかの実施態様において、ＡＡ８はＣ末端アミノ酸である。いくつかの実施態様において、ＡＡ５はＰである。いくつかの実施態様において、ＡＡ６はＹおよびＷから選択される。いくつかの実施態様において、ＡＡ７はＩおよびＬから選択される。
【0094】
いくつかの実施態様において、ＡＡ２はＳ、Ｔ、Ａ、Ｎ、ＥおよびＤから選択される省略可能なアミノ酸である。いくつかの実施態様において、ＡＡ５は、Ｐ、Ｓ、Ｄ、Ａ、Ｔ、ＫおよびＧから選択される。いくつかの実施態様において、ＡＡ６はＹ、Ｎ、ＩおよびＷから選択される。いくつかの実施態様において、ＡＡ８はＬ、Ｉ、Ｖ、ＳおよびＭから選択される。
【0095】
いくつかの実施態様において、ポリペプチドは、配列ＡＶＴＥＫＫＹＩＬＹＤＦＳＶＴＳ（配列番号５）、ＰＲＲＰＹＩＬ（配列番号３８）、ＲＲＰＹＩＬ（配列番号３９）、ＲＰＹＩＬ（配列番号４０）、ＲＲＰＷＩＬ（配列番号４１）、ＫＲＰＹＩＬ（配列番号４２）、ＫＫＰＹＩＬ（配列番号４３）、アダマントイル(Adamantoyl)－ＫＰＹＩＬ（配列番号９）、Ｈ－Ｌｙｓ－ｐｓｉ（ＣＨ２ＮＨ）Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＨ（配列番号４４）のいずれも含まない。いくつかの実施態様において、ポリペプチドは、Ｌｙｓの誘導体を含まない。
【0096】
いくつかの実施態様において、ポリペプチドは、配列ＡＶＴＥＫＫＹＩＬＹＤＦＳＶＴＳ、ＰＲＲＰＹＩＬ、ＲＲＰＹＩＬ、ＲＰＹＩＬ、ＲＲＰＷＩＬ、ＫＲＰＹＩＬ、ＫＫＰＹＩＬ、アダマントイル－ＫＰＹＩＬ、Ｈ－Ｌｙｓ－ｐｓｉ（ＣＨ２ＮＨ）Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－ＯＨのいずれか１つからなることはない。いくつかの実施態様において、ポリペプチドはＫＰＹＩＬの誘導体ではない。
【0097】
いくつかの実施態様において、アミノ酸配列は天然アミノ酸のみを含む。
【0098】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、５～５０（５～５０、５～４９、５～４８、５～４７、５～４６、５～４５、５～４４、５～４３、５～４２、５～４１、５～４０、５～３９、５～３８、５～３７、５～３６、５～３５、５～３４、５～３３、５～３２、５～３１、５～３０、５～２９、５～２８、５～２７、５～２６、５～２５、５～２４、５～２３、５～２２、５～２１、５～２０、５～１９、５～１８など、５～１７など、５～１６など、５～１５など、５～１４など、５～１３など、５～１２など、５～１１など、５～１０など、５～９など、５～８など、５～７など、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０など）アミノ酸長である。
【0099】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８など、１７など、１６など、１５など、１４など、１３など、１２など、１１など、１０など、９など、８など、７などのアミノ酸長未満である
【0100】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、５～５０（６～５０など、７～５０など、８～５０など、９～５０など、１０～５０など、１１～５０など、１２～５０など、１３～５０など、１４～５０など、１５～５０など、１６～５０など、１７～５０など、１８～５０など、１９～５０など、２０～５０など、２１～５０など、２２～５０など、２３～５０など、２４～５０など、２５～５０など、２６～５０など、２７～５０など、２８～５０など、２９～５０など、３０～５０など、３１～５０など、３２～５０など、３３～５０など、３４～５０など、３５～５０など、３６～５０など、３７～５０など、３８～５０など、３９～５０など、４０～５０など、４１～５０など、４２～５０など、４３～５０など、４４～５０など、４５～５０など、４６～５０など、４７～５０など、４８～５０など、４９～５０など）アミノ酸長である。
【0101】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、５（６など、７など、８など、９など、１０など、１１など、１２など、１３など、１４など、１５など、１６など、１７など、１８など、１９など、２０など、２１など、２２など、２３など、２４など、２５など、２６など、２７など、２８など、２９など、３０など、３１など、３２など、３３など、３４など、３５など、３６など、３７など、３８など、３９など、４０など、４１など、４２など、４３など、４４など、４５など、４６など、４７など、４８など、４９よりも大きいなど）アミノ酸長よりも大きい。
【0102】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、オクタペプチドまたはヘプタペプチドである。
【0103】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＳＤＫＰＹＩＬ、ＤＫＰＹＩＬ、およびＫＰＹＩＬから選択される配列を有し、または含む。
【0104】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＮＹＩＬ、ＡＧＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＳＹＩＴ、ＡＤＧＫＰＹＩＶ、ＡＥＤＫＤＦＩＴ、ＡＡＤＫＰＹＩＬ、ＡＴＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＰＹＩＴ、ＡＳＥＫＰＹＩＬ、ＡＤＧＫＰＹＶＴ、ＡＧＤＫＰＹＩＬ、ＡＳＤＫＰＮＩＬ、ＡＳＤＫＰＹＩＴ、ＡＡＤＫＰＦＩＬ、ＡＳＤＫＡＹＩＴ、ＡＧＤＫＡＹＩＴ、ＡＮＧＫＰＦＩＴ、ＡＧＤＫＮＦＩＴ、ＡＳＤＫＳＹＩＴ、ＡＳＤＫＴＹＩＴ、ＡＳＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＫＹＩＴ、ＡＧＤＫＮＹＩＳ、ＡＡＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＮＹＩＭ、ＡＡＤＫＮＦＩＭ、ＡＡＤＫＮＦＩＴ、およびＡＧＤＫＧＩＲＳから選択される配列からなり、または、を含む。
【0105】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは単離されたポリペプチドである。
【0106】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは合成的に作成される。
【0107】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは精製されたフラグメントである。
【0108】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは動物源から精製される。
【0109】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは動物源由来のタンパク質の酵素的処理によって作製される。
【0110】
いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、保護基を導入するために、Ｎ末端のアセチル化または他の化学修飾によって修飾されている。
【0111】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＫＰＹＩＬ、ＫＰＹＩＩ（配列番号４５）、ＫＰＹＩＶ（配列番号４６）、ＫＰＹＬＬ（配列番号４７）、ＫＰＹＬＩ（配列番号４８）、ＫＰＹＬＶ（配列番号４９）、ＫＰＹＶＬ（配列番号５０）、ＫＰＹＶＩ（配列番号５１）、ＫＰＹＶＶ（配列番号５２）、ＫＰＷＩＬ（配列番号５３）、ＫＰＷＩＩ（配列番号５４）、ＫＰＷＩＶ（配列番号５５）、ＫＰＷＬＬ（配列番号５６）、ＫＰＷＬＩ（配列番号５７）、ＫＰＷＬＶ（配列番号５８）、ＫＰＷＶＬ（配列番号５９）、ＫＰＷＶＩ（配列番号６０）、ＫＰＷＶＶ（配列番号６１）、ＲＰＹＩＬ（配列番号４０）、ＲＰＹＩＩ（配列番号６２）、ＲＰＹＩＶ（配列番号６３）、ＲＰＹＬＬ（配列番号６４）、ＲＰＹＬＩ（配列番号６５）、ＲＰＹＬＶ（配列番号６６）、ＲＰＹＶＬ（配列番号６７）、ＲＰＹＶＩ（配列番号６８）、ＲＰＹＶＶ（配列番号６９）、ＲＰＷＩＬ（配列番号７０）、ＲＰＷＩＩ（配列番号７１）、ＲＰＷＩＶ（配列番号７２）、ＲＰＷＬＬ（配列番号７３）、ＲＰＷＬＩ（配列番号７４）、ＲＰＷＬＶ（配列番号７５）、ＲＰＷＶＬ（配列番号７６）、ＲＰＷＶＩ（配列番号７７）、およびＲＰＷＶＶ（配列番号７８）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、または、を含む。
【0112】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＤＫＰＹＩＬ（配列番号８）、ＤＫＰＹＩＩ（配列番号７９）、ＤＫＰＹＩＶ（配列番号８０）、ＤＫＰＹＬＬ（配列番号８１）、ＤＫＰＹＬＩ（配列番号８２）、ＤＫＰＹＬＶ（配列番号８３）、ＤＫＰＹＶＬ（配列番号８４）、ＤＫＰＹＶＩ（配列番号８５）、ＤＫＰＹＶＶ（配列番号８６）、ＤＫＰＷＩＬ（配列番号８７）、ＤＫＰＷＩＩ（配列番号８８）、ＤＫＰＷＩＶ（配列番号８９）、ＤＫＰＷＬＬ（配列番号９０）、ＤＫＰＷＬＩ（配列番号９１）、ＤＫＰＷＬＶ（配列番号９２）、ＤＫＰＷＶＬ（配列番号９３）、ＤＫＰＷＶＩ（配列番号９４）、ＤＫＰＷＶＶ（配列番号９５）、ＤＲＰＹＩＬ（配列番号９６）、ＤＲＰＹＩＩ（配列番号９７）、ＤＲＰＹＩＶ（配列番号９８）、ＤＲＰＹＬＬ（配列番号９９）、ＤＲＰＹＬＩ（配列番号１００）、ＤＲＰＹＬＶ（配列番号１０１）、ＤＲＰＹＶＬ（配列番号１０２）、ＤＲＰＹＶＩ（配列番号１０３）、ＤＲＰＹＶＶ（配列番号１０４）、ＤＲＰＷＩＬ（配列番号１０５）、ＤＲＰＷＩＩ（配列番号１０６）、ＤＲＰＷＩＶ（配列番号１０７）、ＤＲＰＷＬＬ（配列番号１０８）、ＤＲＰＷＬＩ（配列番号１０９）、ＤＲＰＷＬＶ（配列番号１１０）、ＤＲＰＷＶＬ（配列番号１１１）、ＤＲＰＷＶＩ（配列番号１１２）、ＤＲＰＷＶＶ（配列番号１１３）、ＥＫＰＹＩＬ（配列番号１１４）、ＥＫＰＹＩＩ（配列番号１１５）、ＥＫＰＹＩＶ（配列番号１１６）、ＥＫＰＹＬＬ（配列番号１１７）、ＥＫＰＹＬＩ（配列番号１１８）、ＥＫＰＹＬＶ（配列番号１１９）、ＥＫＰＹＶＬ（配列番号１２０）、ＥＫＰＹＶＩ（配列番号１２１）、ＥＫＰＹＶＶ（配列番号１２２）、ＥＫＰＷＩＬ（配列番号１２３）、ＥＫＰＷＩＩ（配列番号１２４）、ＥＫＰＷＩＶ（配列番号１２５）、ＥＫＰＷＬＬ（配列番号１２６）、ＥＫＰＷＬＩ（配列番号１２７）、ＥＫＰＷＬＶ（配列番号１２８）、ＥＫＰＷＶＬ（配列番号１２９）、ＥＫＰＷＶＩ（配列番号１３０）、ＥＫＰＷＶＶ（配列番号１３１）、ＥＲＰＹＩＬ（配列番号１３２）、ＥＲＰＹＩＩ（配列番号１３３）、ＥＲＰＹＩＶ（配列番号１３４）、ＥＲＰＹＬＬ（配列番号１３５）、ＥＲＰＹＬＩ（配列番号１３６）、ＥＲＰＹＬＶ（配列番号１３７）、ＥＲＰＹＶＬ（配列番号１３８）、ＥＲＰＹＶＩ（配列番号１３９）、ＥＲＰＹＶＶ（配列番号１４０）、ＥＲＰＷＩＬ（配列番号１４１）、ＥＲＰＷＩＩ（配列番号１４２）、ＥＲＰＷＩＶ（配列番号１４３）、ＥＲＰＷＬＬ（配列番号１４４）、ＥＲＰＷＬＩ（配列番号１４５）、ＥＲＰＷＬＶ（配列番号１４６）、ＥＲＰＷＶＬ（配列番号１４７）、ＥＲＰＷＶＩ（配列番号１４８）、ＥＲＰＷＶＶ（配列番号１４９）、ＲＫＰＹＩＬ（配列番号１５０）、ＲＫＰＹＩＩ（配列番号１５１）、ＲＫＰＹＩＶ（配列番号１５２）、ＲＫＰＹＬＬ（配列番号１５３）、ＲＫＰＹＬＩ（配列番号１５４）、ＲＫＰＹＬＶ（配列番号１５５）、ＲＫＰＹＶＬ（配列番号１５６）、ＲＫＰＹＶＩ（配列番号１５７）、ＲＫＰＹＶＶ（配列番号１５８）、ＲＫＰＷＩＬ（配列番号１５９）、ＲＫＰＷＩＩ（配列番号１６０）、ＲＫＰＷＩＶ（配列番号１６１）、ＲＫＰＷＬＬ（配列番号１６２）、ＲＫＰＷＬＩ（配列番号１６３）、ＲＫＰＷＬＶ（配列番号１６４）、ＲＫＰＷＶＬ（配列番号１６５）、ＲＫＰＷＶＩ（配列番号１６６）、ＲＫＰＷＶＶ（配列番号１６７）、ＲＲＰＹＩＬ（配列番号３９）、ＲＲＰＹＩＩ（配列番号１６８）、ＲＲＰＹＩＶ（配列番号１６９）、ＲＲＰＹＬＬ（配列番号１７０）、ＲＲＰＹＬＩ（配列番号１７１）、ＲＲＰＹＬＶ（配列番号１７２）、ＲＲＰＹＶＬ（配列番号１７３）、ＲＲＰＹＶＩ（配列番号１７４）、ＲＲＰＹＶＶ（配列番号１７５）、ＲＲＰＷＩＬ（配列番号４１）、ＲＲＰＷＩＩ（配列番号１７６）、ＲＲＰＷＩＶ（配列番号１７７）、ＲＲＰＷＬＬ（配列番号１７８）、ＲＲＰＷＬＩ（配列番号１７９）、ＲＲＰＷＬＶ（配列番号１８０）、ＲＲＰＷＶＬ（配列番号１８１）、ＲＲＰＷＶＩ（配列番号１８２）、ＲＲＰＷＶＶ（配列番号１８３）、ＧＫＰＹＩＬ（配列番号１８４）、ＧＫＰＹＩＩ（配列番号１８５）、ＧＫＰＹＩＶ（配列番号１８６）、ＧＫＰＹＬＬ（配列番号１８７）、ＧＫＰＹＬＩ（配列番号１８８）、ＧＫＰＹＬＶ（配列番号１８９）、ＧＫＰＹＶＬ（配列番号１９０）、ＧＫＰＹＶＩ（配列番号１９１）、ＧＫＰＹＶＶ（配列番号１９２）、ＧＫＰＷＩＬ（配列番号１９３）、ＧＫＰＷＩＩ（配列番号１９４）、ＧＫＰＷＩＶ（配列番号１９５）、ＧＫＰＷＬＬ（配列番号１９６）、ＧＫＰＷＬＩ（配列番号１９７）、ＧＫＰＷＬＶ（配列番号１９８）、ＧＫＰＷＶＬ（配列番号１９９）、ＧＫＰＷＶＩ（配列番号２００）、ＧＫＰＷＶＶ（配列番号２０１）、ＧＲＰＹＩＬ（配列番号２０２）、ＧＲＰＹＩＩ（配列番号２０３）、ＧＲＰＹＩＶ（配列番号２０４）、ＧＲＰＹＬＬ（配列番号２０５）、ＧＲＰＹＬＩ（配列番号２０６）、ＧＲＰＹＬＶ（配列番号２０７）、ＧＲＰＹＶＬ（配列番号２０８）、ＧＲＰＹＶＩ（配列番号２０９）、ＧＲＰＹＶＶ（配列番号２１０）、ＧＲＰＷＩＬ（配列番号２１１）、ＧＲＰＷＩＩ（配列番号２１２）、ＧＲＰＷＩＶ（配列番号２１３）、ＧＲＰＷＬＬ（配列番号２１４）、ＧＲＰＷＬＩ（配列番号２１５）、ＧＲＰＷＬＶ（配列番号２１６）、ＧＲＰＷＶＬ（配列番号２１７）、ＧＲＰＷＶＩ（配列番号２１８）、およびＧＲＰＷＶＶ（配列番号２１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、または、を含む。
【0113】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号２２０）、ＳＤＫＰＹＩＩ（配列番号２２１）、ＳＤＫＰＹＩＶ（配列番号２２２）、ＳＤＫＰＹＬＬ（配列番号２２３）、ＳＤＫＰＹＬＩ（配列番号２２４）、ＳＤＫＰＹＬＶ（配列番号２２５）、ＳＤＫＰＹＶＬ（配列番号２２６）、ＳＤＫＰＹＶＩ（配列番号２２７）、ＳＤＫＰＹＶＶ（配列番号２２８）、ＳＤＫＰＷＩＬ（配列番号２２９）、ＳＤＫＰＷＩＩ（配列番号２３０）、ＳＤＫＰＷＩＶ（配列番号２３１）、ＳＤＫＰＷＬＬ（配列番号２３２）、ＳＤＫＰＷＬＩ（配列番号２３３）、ＳＤＫＰＷＬＶ（配列番号２３４）、ＳＤＫＰＷＶＬ（配列番号２３５）、ＳＤＫＰＷＶＩ（配列番号２３６）、ＳＤＫＰＷＶＶ（配列番号２３７）、ＳＤＲＰＹＩＬ（配列番号２３８）、ＳＤＲＰＹＩＩ（配列番号２３９）、ＳＤＲＰＹＩＶ（配列番号２４０）、ＳＤＲＰＹＬＬ（配列番号２４１）、ＳＤＲＰＹＬＩ（配列番号２４２）、ＳＤＲＰＹＬＶ（配列番号２４３）、ＳＤＲＰＹＶＬ（配列番号２４４）、ＳＤＲＰＹＶＩ（配列番号２４５）、ＳＤＲＰＹＶＶ（配列番号２４６）、ＳＤＲＰＷＩＬ（配列番号２４７）、ＳＤＲＰＷＩＩ（配列番号２４８）、ＳＤＲＰＷＩＶ（配列番号２４９）、ＳＤＲＰＷＬＬ（配列番号２５０）、ＳＤＲＰＷＬＩ（配列番号２５１）、ＳＤＲＰＷＬＶ（配列番号２５２）、ＳＤＲＰＷＶＬ（配列番号２５３）、ＳＤＲＰＷＶＩ（配列番号２５４）、ＳＤＲＰＷＶＶ（配列番号２５５）、ＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号２５６）、ＳＥＫＰＹＩＩ（配列番号２５７）、ＳＥＫＰＹＩＶ（配列番号２５８）、ＳＥＫＰＹＬＬ（配列番号２５９）、ＳＥＫＰＹＬＩ（配列番号２６０）、ＳＥＫＰＹＬＶ（配列番号２６１）、ＳＥＫＰＹＶＬ（配列番号２６２）、ＳＥＫＰＹＶＩ（配列番号２６３）、ＳＥＫＰＹＶＶ（配列番号２６４）、ＳＥＫＰＷＩＬ（配列番号２６５）、ＳＥＫＰＷＩＩ（配列番号２６６）、ＳＥＫＰＷＩＶ（配列番号２６７）、ＳＥＫＰＷＬＬ（配列番号２６８）、ＳＥＫＰＷＬＩ（配列番号２６９）、ＳＥＫＰＷＬＶ（配列番号２７０）、ＳＥＫＰＷＶＬ（配列番号２７１）、ＳＥＫＰＷＶＩ（配列番号２７２）、ＳＥＫＰＷＶＶ（配列番号２７３）、ＳＥＲＰＹＩＬ（配列番号２７４）、ＳＥＲＰＹＩＩ（配列番号２７５）、ＳＥＲＰＹＩＶ（配列番号２７６）、ＳＥＲＰＹＬＬ（配列番号２７７）、ＳＥＲＰＹＬＩ（配列番号２７８）、ＳＥＲＰＹＬＶ（配列番号２７９）、ＳＥＲＰＹＶＬ（配列番号２８０）、ＳＥＲＰＹＶＩ（配列番号２８１）、ＳＥＲＰＹＶＶ（配列番号２８２）、ＳＥＲＰＷＩＬ（配列番号２８３）、ＳＥＲＰＷＩＩ（配列番号２８４）、ＳＥＲＰＷＩＶ（配列番号２８５）、ＳＥＲＰＷＬＬ（配列番号２８６）、ＳＥＲＰＷＬＩ（配列番号２８７）、ＳＥＲＰＷＬＶ（配列番号２８８）、ＳＥＲＰＷＶＬ（配列番号２８９）、ＳＥＲＰＷＶＩ（配列番号２９０）、ＳＥＲＰＷＶＶ（配列番号２９１）、ＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号２９２）、ＴＤＫＰＹＩＩ（配列番号２９３）、ＴＤＫＰＹＩＶ（配列番号２９４）、ＴＤＫＰＹＬＬ（配列番号２９５）、ＴＤＫＰＹＬＩ（配列番号２９６）、ＴＤＫＰＹＬＶ（配列番号２９７）、ＴＤＫＰＹＶＬ（配列番号２９８）、ＴＤＫＰＹＶＩ（配列番号２９９）、ＴＤＫＰＹＶＶ（配列番号３００）、ＴＤＫＰＷＩＬ（配列番号３０１）、ＴＤＫＰＷＩＩ（配列番号３０２）、ＴＤＫＰＷＩＶ（配列番号３０３）、ＴＤＫＰＷＬＬ（配列番号３０４）、ＴＤＫＰＷＬＩ（配列番号３０５）、ＴＤＫＰＷＬＶ（配列番号３０６）、ＴＤＫＰＷＶＬ（配列番号３０７）、ＴＤＫＰＷＶＩ（配列番号３０８）、ＴＤＫＰＷＶＶ（配列番号３０９）、ＴＤＲＰＹＩＬ（配列番号３１０）、ＴＤＲＰＹＩＩ（配列番号３１１）、ＴＤＲＰＹＩＶ（配列番号３１２）、ＴＤＲＰＹＬＬ（配列番号３１３）、ＴＤＲＰＹＬＩ（配列番号３１４）、ＴＤＲＰＹＬＶ（配列番号３１５）、ＴＤＲＰＹＶＬ（配列番号３１６）、ＴＤＲＰＹＶＩ（配列番号３１７）、ＴＤＲＰＹＶＶ（配列番号３１８）、ＴＤＲＰＷＩＬ（配列番号３１９）、ＴＤＲＰＷＩＩ（配列番号３２０）、ＴＤＲＰＷＩＶ（配列番号３２１）、ＴＤＲＰＷＬＬ（配列番号３２２）、ＴＤＲＰＷＬＩ（配列番号３２３）、ＴＤＲＰＷＬＶ（配列番号３２４）、ＴＤＲＰＷＶＬ（配列番号３２５）、ＴＤＲＰＷＶＩ（配列番号３２６）、ＴＤＲＰＷＶＶ（配列番号３２７）、ＴＥＫＰＹＩＬ（配列番号３２８）、ＴＥＫＰＹＩＩ（配列番号３２９）、ＴＥＫＰＹＩＶ（配列番号３３０）、ＴＥＫＰＹＬＬ（配列番号３３１）、ＴＥＫＰＹＬＩ（配列番号３３２）、ＴＥＫＰＹＬＶ（配列番号３３３）、ＴＥＫＰＹＶＬ（配列番号３３４）、ＴＥＫＰＹＶＩ（配列番号３３５）、ＴＥＫＰＹＶＶ（配列番号３３６）、ＴＥＫＰＷＩＬ（配列番号３３７）、ＴＥＫＰＷＩＩ（配列番号３３８）、ＴＥＫＰＷＩＶ（配列番号３３９）、ＴＥＫＰＷＬＬ（配列番号３４０）、ＴＥＫＰＷＬＩ（配列番号３４１）、ＴＥＫＰＷＬＶ（配列番号３４２）、ＴＥＫＰＷＶＬ（配列番号３４３）、ＴＥＫＰＷＶＩ（配列番号３４４）、ＴＥＫＰＷＶＶ（配列番号３４５）、ＴＥＲＰＹＩＬ（配列番号３４６）、ＴＥＲＰＹＩＩ（配列番号３４７）、ＴＥＲＰＹＩＶ（配列番号３４８）、ＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号３４９）、ＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号３５０）、ＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号３５１）、ＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号３５２）、ＴＥＲＰＹＶＩ（配列番号３５３）、ＴＥＲＰＹＶＶ（配列番号３５４）、ＴＥＲＰＷＩＬ（配列番号３５５）、ＴＥＲＰＷＩＩ（配列番号３５６）、ＴＥＲＰＷＩＶ（配列番号３５７）、ＴＥＲＰＷＬＬ（配列番号３５８）、ＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号３５９）、ＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号３６０）、ＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号３６１）、ＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号３６２）、およびＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号３６３）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、または、を含む。
【0114】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、ＡＳＤＫＰＹＩＩ（配列番号３６４）、ＡＳＤＫＰＹＩＶ（配列番号３６５）、ＡＳＤＫＰＹＬＬ（配列番号３６６）、ＡＳＤＫＰＹＬＩ（配列番号３６７）、ＡＳＤＫＰＹＬＶ（配列番号３６８）、ＡＳＤＫＰＹＶＬ（配列番号３６９）、ＡＳＤＫＰＹＶＩ（配列番号３７０）、ＡＳＤＫＰＹＶＶ（配列番号３７１）、ＡＳＤＫＰＷＩＬ（配列番号３７２）、ＡＳＤＫＰＷＩＩ（配列番号３７３）、ＡＳＤＫＰＷＩＶ（配列番号３７４）、ＡＳＤＫＰＷＬＬ（配列番号３７５）、ＡＳＤＫＰＷＬＩ（配列番号３７６）、ＡＳＤＫＰＷＬＶ（配列番号３７７）、ＡＳＤＫＰＷＶＬ（配列番号３７８）、ＡＳＤＫＰＷＶＩ（配列番号３７９）、ＡＳＤＫＰＷＶＶ（配列番号３８０）、ＡＳＤＲＰＹＩＬ（配列番号３８１）、ＡＳＤＲＰＹＩＩ（配列番号３８２）、ＡＳＤＲＰＹＩＶ（配列番号３８３）、ＡＳＤＲＰＹＬＬ（配列番号３８４）、ＡＳＤＲＰＹＬＩ（配列番号３８５）、ＡＳＤＲＰＹＬＶ（配列番号３８６）、ＡＳＤＲＰＹＶＬ（配列番号３８７）、ＡＳＤＲＰＹＶＩ（配列番号３８８）、ＡＳＤＲＰＹＶＶ（配列番号３８９）、ＡＳＤＲＰＷＩＬ（配列番号３９０）、ＡＳＤＲＰＷＩＩ（配列番号３９１）、ＡＳＤＲＰＷＩＶ（配列番号３９２）、ＡＳＤＲＰＷＬＬ（配列番号３９３）、ＡＳＤＲＰＷＬＩ（配列番号３９４）、ＡＳＤＲＰＷＬＶ（配列番号３９５）、ＡＳＤＲＰＷＶＬ（配列番号３９６）、ＡＳＤＲＰＷＶＩ（配列番号３９７）、ＡＳＤＲＰＷＶＶ（配列番号３９８）、ＡＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号３９９）、ＡＳＥＫＰＹＩＩ（配列番号４００）、ＡＳＥＫＰＹＩＶ（配列番号４０１）、ＡＳＥＫＰＹＬＬ（配列番号４０２）、ＡＳＥＫＰＹＬＩ（配列番号４０３）、ＡＳＥＫＰＹＬＶ（配列番号４０４）、ＡＳＥＫＰＹＶＬ（配列番号４０５）、ＡＳＥＫＰＹＶＩ（配列番号４０６）、ＡＳＥＫＰＹＶＶ（配列番号４０７）、ＡＳＥＫＰＷＩＬ（配列番号４０８）、ＡＳＥＫＰＷＩＩ（配列番号４０９）、ＡＳＥＫＰＷＩＶ（配列番号４１０）、ＡＳＥＫＰＷＬＬ（配列番号４１１）、ＡＳＥＫＰＷＬＩ（配列番号４１２）、ＡＳＥＫＰＷＬＶ（配列番号４１３）、ＡＳＥＫＰＷＶＬ（配列番号４１４）、ＡＳＥＫＰＷＶＩ（配列番号４１５）、ＡＳＥＫＰＷＶＶ（配列番号４１６）、ＡＳＥＲＰＹＩＬ（配列番号４１７）、ＡＳＥＲＰＹＩＩ（配列番号４１８）、ＡＳＥＲＰＹＩＶ（配列番号４１９）、ＡＳＥＲＰＹＬＬ（配列番号４２０）、ＡＳＥＲＰＹＬＩ（配列番号４２１）、ＡＳＥＲＰＹＬＶ（配列番号４２２）、ＡＳＥＲＰＹＶＬ（配列番号４２３）、ＡＳＥＲＰＹＶＩ（配列番号４２４）、ＡＳＥＲＰＹＶＶ（配列番号４２５）、ＡＳＥＲＰＷＩＬ（配列番号４２６）、ＡＳＥＲＰＷＩＩ（配列番号４２７）、ＡＳＥＲＰＷＩＶ（配列番号４２８）、ＡＳＥＲＰＷＬＬ（配列番号４２９）、ＡＳＥＲＰＷＬＩ（配列番号４３０）、ＡＳＥＲＰＷＬＶ（配列番号４３１）、ＡＳＥＲＰＷＶＬ（配列番号４３２）、ＡＳＥＲＰＷＶＩ（配列番号４３３）、ＡＳＥＲＰＷＶＶ（配列番号４３４）、ＡＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号４３５）、ＡＴＤＫＰＹＩＩ（配列番号４３６）、ＡＴＤＫＰＹＩＶ（配列番号４３７）、ＡＴＤＫＰＹＬＬ（配列番号４３８）、ＡＴＤＫＰＹＬＩ（配列番号４３９）、ＡＴＤＫＰＹＬＶ（配列番号４４０）、ＡＴＤＫＰＹＶＬ（配列番号４４１）、ＡＴＤＫＰＹＶＩ（配列番号４４２）、ＡＴＤＫＰＹＶＶ（配列番号４４３）、ＡＴＤＫＰＷＩＬ（配列番号４４４）、ＡＴＤＫＰＷＩＩ（配列番号４４５）、ＡＴＤＫＰＷＩＶ（配列番号４４６）、ＡＴＤＫＰＷＬＬ（配列番号４４７）、ＡＴＤＫＰＷＬＩ（配列番号４４８）、ＡＴＤＫＰＷＬＶ（配列番号４４９）、ＡＴＤＫＰＷＶＬ（配列番号４５０）、ＡＴＤＫＰＷＶＩ（配列番号４５１）、ＡＴＤＫＰＷＶＶ（配列番号４５２）、ＡＴＤＲＰＹＩＬ（配列番号４５３）、ＡＴＤＲＰＹＩＩ（配列番号４５４）、ＡＴＤＲＰＹＩＶ（配列番号４５５）、ＡＴＤＲＰＹＬＬ（配列番号４５６）、ＡＴＤＲＰＹＬＩ（配列番号４５７）、ＡＴＤＲＰＹＬＶ（配列番号４５８）、ＡＴＤＲＰＹＶＬ（配列番号４５９）、ＡＴＤＲＰＹＶＩ（配列番号４６０）、ＡＴＤＲＰＹＶＶ（配列番号４６１）、ＡＴＤＲＰＷＩＬ（配列番号４６２）、ＡＴＤＲＰＷＩＩ（配列番号４６３）、ＡＴＤＲＰＷＩＶ（配列番号４６４）、ＡＴＤＲＰＷＬＬ（配列番号４６５）、ＡＴＤＲＰＷＬＩ（配列番号４６６）、ＡＴＤＲＰＷＬＶ（配列番号４６７）、ＡＴＤＲＰＷＶＬ（配列番号４６８）、ＡＴＤＲＰＷＶＩ（配列番号４６９）、ＡＴＤＲＰＷＶＶ（配列番号４７０）、ＡＴＥＫＰＹＩＬ（配列番号４７１）、ＡＴＥＫＰＹＩＩ（配列番号４７２）、ＡＴＥＫＰＹＩＶ（配列番号４７３）、ＡＴＥＫＰＹＬＬ（配列番号４７４）、ＡＴＥＫＰＹＬＩ（配列番号４７５）、ＡＴＥＫＰＹＬＶ（配列番号４７６）、ＡＴＥＫＰＹＶＬ（配列番号４７７）、ＡＴＥＫＰＹＶＩ（配列番号４７８）、ＡＴＥＫＰＹＶＶ（配列番号４７９）、ＡＴＥＫＰＷＩＬ（配列番号４８０）、ＡＴＥＫＰＷＩＩ（配列番号４８１）、ＡＴＥＫＰＷＩＶ（配列番号４８２）、ＡＴＥＫＰＷＬＬ（配列番号４８３）、ＡＴＥＫＰＷＬＩ（配列番号４８４）、ＡＴＥＫＰＷＬＶ（配列番号４８５）、ＡＴＥＫＰＷＶＬ（配列番号４８６）、ＡＴＥＫＰＷＶＩ（配列番号４８７）、ＡＴＥＫＰＷＶＶ（配列番号４８８）、ＡＴＥＲＰＹＩＬ（配列番号４８９）、ＡＴＥＲＰＹＩＩ（配列番号４９０）、ＡＴＥＲＰＹＩＶ（配列番号４９１）、ＡＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号４９２）、ＡＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号４９３）、ＡＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号４９４）、ＡＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号４９５）、ＡＴＥＲＰＹＶＩ（配列番号４９６）、ＡＴＥＲＰＹＶＶ（配列番号４９７）、ＡＴＥＲＰＷＩＬ（配列番号４９８）、ＡＴＥＲＰＷＩＩ（配列番号４９９）、ＡＴＥＲＰＷＩＶ（配列番号５００）、ＡＴＥＲＰＷＬＬ（配列番号５０１）、ＡＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号５０２）、ＡＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号５０３）、ＡＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号５０４）、ＡＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号５０５）、ＡＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号５０６）、ＬＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号５０７）、ＬＳＤＫＰＹＩＩ（配列番号５０８）、ＬＳＤＫＰＹＩＶ（配列番号５０９）、ＬＳＤＫＰＹＬＬ（配列番号５１０）、ＬＳＤＫＰＹＬＩ（配列番号５１１）、ＬＳＤＫＰＹＬＶ（配列番号５１２）、ＬＳＤＫＰＹＶＬ（配列番号５１３）、ＬＳＤＫＰＹＶＩ（配列番号５１４）、ＬＳＤＫＰＹＶＶ（配列番号５１５）、ＬＳＤＫＰＷＩＬ（配列番号５１６）、ＬＳＤＫＰＷＩＩ（配列番号５１７）、ＬＳＤＫＰＷＩＶ（配列番号５１８）、ＬＳＤＫＰＷＬＬ（配列番号５１９）、ＬＳＤＫＰＷＬＩ（配列番号５２０）、ＬＳＤＫＰＷＬＶ（配列番号５２１）、ＬＳＤＫＰＷＶＬ（配列番号５２２）、ＬＳＤＫＰＷＶＩ（配列番号５２３）、ＬＳＤＫＰＷＶＶ（配列番号５２４）、ＬＳＤＲＰＹＩＬ（配列番号５２５）、ＬＳＤＲＰＹＩＩ（配列番号５２６）、ＬＳＤＲＰＹＩＶ（配列番号５２７）、ＬＳＤＲＰＹＬＬ（配列番号５２８）、ＬＳＤＲＰＹＬＩ（配列番号５２９）、ＬＳＤＲＰＹＬＶ（配列番号５３０）、ＬＳＤＲＰＹＶＬ（配列番号５３１）、ＬＳＤＲＰＹＶＩ（配列番号５３２）、ＬＳＤＲＰＹＶＶ（配列番号５３３）、ＬＳＤＲＰＷＩＬ（配列番号５３４）、ＬＳＤＲＰＷＩＩ（配列番号５３５）、ＬＳＤＲＰＷＩＶ（配列番号５３６）、ＬＳＤＲＰＷＬＬ（配列番号５３７）、ＬＳＤＲＰＷＬＩ（配列番号５３８）、ＬＳＤＲＰＷＬＶ（配列番号５３９）、ＬＳＤＲＰＷＶＬ（配列番号５４０）、ＬＳＤＲＰＷＶＩ（配列番号５４１）、ＬＳＤＲＰＷＶＶ（配列番号５４２）、ＬＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号５４３）、ＬＳＥＫＰＹＩＩ（配列番号５４４）、ＬＳＥＫＰＹＩＶ（配列番号５４５）、ＬＳＥＫＰＹＬＬ（配列番号５４６）、ＬＳＥＫＰＹＬＩ（配列番号５４７）、ＬＳＥＫＰＹＬＶ（配列番号５４８）、ＬＳＥＫＰＹＶＬ（配列番号５４９）、ＬＳＥＫＰＹＶＩ（配列番号５５０）、ＬＳＥＫＰＹＶＶ（配列番号５５１）、ＬＳＥＫＰＷＩＬ（配列番号５５２）、ＬＳＥＫＰＷＩＩ（配列番号５５３）、ＬＳＥＫＰＷＩＶ（配列番号５５４）、ＬＳＥＫＰＷＬＬ（配列番号５５５）、ＬＳＥＫＰＷＬＩ（配列番号５５６）、ＬＳＥＫＰＷＬＶ（配列番号５５７）、ＬＳＥＫＰＷＶＬ（配列番号５５８）、ＬＳＥＫＰＷＶＩ（配列番号５５９）、ＬＳＥＫＰＷＶＶ（配列番号５６０）、ＬＳＥＲＰＹＩＬ（配列番号５６１）、ＬＳＥＲＰＹＩＩ（配列番号５６２）、ＬＳＥＲＰＹＩＶ（配列番号５６３）、ＬＳＥＲＰＹＬＬ（配列番号５６４）、ＬＳＥＲＰＹＬＩ（配列番号５６５）、ＬＳＥＲＰＹＬＶ（配列番号５６６）、ＬＳＥＲＰＹＶＬ（配列番号５６７）、ＬＳＥＲＰＹＶＩ（配列番号５６８）、ＬＳＥＲＰＹＶＶ（配列番号５６９）、ＬＳＥＲＰＷＩＬ（配列番号５７０）、ＬＳＥＲＰＷＩＩ（配列番号５７１）、ＬＳＥＲＰＷＩＶ（配列番号５７２）、ＬＳＥＲＰＷＬＬ（配列番号５７３）、ＬＳＥＲＰＷＬＩ（配列番号５７４）、ＬＳＥＲＰＷＬＶ（配列番号５７５）、ＬＳＥＲＰＷＶＬ（配列番号５７６）、ＬＳＥＲＰＷＶＩ（配列番号５７７）、ＬＳＥＲＰＷＶＶ（配列番号５７８）、ＬＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号５７９）、ＬＴＤＫＰＹＩＩ（配列番号５８０）、ＬＴＤＫＰＹＩＶ（配列番号５８１）、ＬＴＤＫＰＹＬＬ（配列番号５８２）、ＬＴＤＫＰＹＬＩ（配列番号５８３）、ＬＴＤＫＰＹＬＶ（配列番号５８４）、ＬＴＤＫＰＹＶＬ（配列番号５８５）、ＬＴＤＫＰＹＶＩ（配列番号５８６）、ＬＴＤＫＰＹＶＶ（配列番号５８７）、ＬＴＤＫＰＷＩＬ（配列番号５８８）、ＬＴＤＫＰＷＩＩ（配列番号５８９）、ＬＴＤＫＰＷＩＶ（配列番号５９０）、ＬＴＤＫＰＷＬＬ（配列番号５９１）、ＬＴＤＫＰＷＬＩ（配列番号５９２）、ＬＴＤＫＰＷＬＶ（配列番号５９３）、ＬＴＤＫＰＷＶＬ（配列番号５９４）、ＬＴＤＫＰＷＶＩ（配列番号５９５）、ＬＴＤＫＰＷＶＶ（配列番号５９６）、ＬＴＤＲＰＹＩＬ（配列番号５９７）、ＬＴＤＲＰＹＩＩ（配列番号５９８）、ＬＴＤＲＰＹＩＶ（配列番号５９９）、ＬＴＤＲＰＹＬＬ（配列番号６００）、ＬＴＤＲＰＹＬＩ（配列番号６０１）、ＬＴＤＲＰＹＬＶ（配列番号６０２）、ＬＴＤＲＰＹＶＬ（配列番号６０３）、ＬＴＤＲＰＹＶＩ（配列番号６０４）、ＬＴＤＲＰＹＶＶ（配列番号６０５）、ＬＴＤＲＰＷＩＬ（配列番号６０６）、ＬＴＤＲＰＷＩＩ（配列番号６０７）、ＬＴＤＲＰＷＩＶ（配列番号６０８）、ＬＴＤＲＰＷＬＬ（配列番号６０９）、ＬＴＤＲＰＷＬＩ（配列番号６１０）、ＬＴＤＲＰＷＬＶ（配列番号６１１）、ＬＴＤＲＰＷＶＬ（配列番号６１２）、ＬＴＤＲＰＷＶＩ（配列番号６１３）、ＬＴＤＲＰＷＶＶ（配列番号６１４）、ＬＴＥＫＰＹＩＬ（配列番号６１５）、ＬＴＥＫＰＹＩＩ（配列番号６１６）、ＬＴＥＫＰＹＩＶ（配列番号６１７）、ＬＴＥＫＰＹＬＬ（配列番号６１８）、ＬＴＥＫＰＹＬＩ（配列番号６１９）、ＬＴＥＫＰＹＬＶ（配列番号６２０）、ＬＴＥＫＰＹＶＬ（配列番号６２１）、ＬＴＥＫＰＹＶＩ（配列番号６２２）、ＬＴＥＫＰＹＶＶ（配列番号６２３）、ＬＴＥＫＰＷＩＬ（配列番号６２４）、ＬＴＥＫＰＷＩＩ（配列番号６２５）、ＬＴＥＫＰＷＩＶ（配列番号６２６）、ＬＴＥＫＰＷＬＬ（配列番号６２７）、ＬＴＥＫＰＷＬＩ（配列番号６２８）、ＬＴＥＫＰＷＬＶ（配列番号６２９）、ＬＴＥＫＰＷＶＬ（配列番号６３０）、ＬＴＥＫＰＷＶＩ（配列番号６３１）、ＬＴＥＫＰＷＶＶ（配列番号６３２）、ＬＴＥＲＰＹＩＬ（配列番号６３３）、ＬＴＥＲＰＹＩＩ（配列番号６３４）、ＬＴＥＲＰＹＩＶ（配列番号６３５）、ＬＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号６３６）、ＬＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号６３７）、ＬＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号６３８）、ＬＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号６３９）、ＬＴＥ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２３）、ＶＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号９２４）、ＶＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号９２５）、ＶＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号９２６）、ＶＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号９２７）、ＶＴＥＲＰＹＶＩ（配列番号９２８）、ＶＴＥＲＰＹＶＶ（配列番号９２９）、
ＶＴＥＲＰＷＩＬ（配列番号９３０）、ＶＴＥＲＰＷＩＩ（配列番号９３１）、ＶＴＥＲＰＷＩＶ（配列番号９３２）、ＶＴＥＲＰＷＬＬ（配列番号９３３）、ＶＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号９３４）、ＶＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号９３５）、ＶＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号９３６）、ＶＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号９３７）、およびＶＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号９３８）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、または、を含む。
ＬＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号６４６）、ＬＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号６４７）、ＬＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号６４８）、ＬＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号６４９）、ＬＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号６５０）、ＩＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号６５１）、ＩＳＤＫＰＹＩＩ（配列番号６５２）、ＩＳＤＫＰＹＩＶ（配列番号６５３）、ＩＳＤＫＰＹＬＬ（配列番号６５４）、ＩＳＤＫＰＹＬＩ（配列番号６５５）、ＩＳＤＫＰＹＬＶ（配列番号６５６）、ＩＳＤＫＰＹＶＬ（配列番号６５７）、ＩＳＤＫＰＹＶＩ（配列番号６５８）、ＩＳＤＫＰＹＶＶ（配列番号６５９）、ＩＳＤＫＰＷＩＬ（配列番号６６０）、ＩＳＤＫＰＷＩＩ（配列番号６６１）、ＩＳＤＫＰＷＩＶ（配列番号６６２）、ＩＳＤＫＰＷＬＬ（配列番号６６３）、ＩＳＤＫＰＷＬＩ（配列番号６６４）、ＩＳＤＫＰＷＬＶ（配列番号６６５）、ＩＳＤＫＰＷＶＬ（配列番号６６６）、ＩＳＤＫＰＷＶＩ（配列番号６６７）、ＩＳＤＫＰＷＶＶ（配列番号６６８）、ＩＳＤＲＰＹＩＬ（配列番号６６９）、ＩＳＤＲＰＹＩＩ（配列番号６７０）、ＩＳＤＲＰＹＩＶ（配列番号６７１）、ＩＳＤＲＰＹＬＬ（配列番号６７２）、ＩＳＤＲＰＹＬＩ（配列番号６７３）、ＩＳＤＲＰＹＬＶ（配列番号６７４）、ＩＳＤＲＰＹＶＬ（配列番号６７５）、ＩＳＤＲＰＹＶＩ（配列番号６７６）、ＩＳＤＲＰＹＶＶ（配列番号６７７）、ＩＳＤＲＰＷＩＬ（配列番号６７８）、ＩＳＤＲＰＷＩＩ（配列番号６７９）、ＩＳＤＲＰＷＩＶ（配列番号６８０）、ＩＳＤＲＰＷＬＬ（配列番号６８１）、ＩＳＤＲＰＷＬＩ（配列番号６８２）、ＩＳＤＲＰＷＬＶ（配列番号６８３）、ＩＳＤＲＰＷＶＬ（配列番号６８４）、ＩＳＤＲＰＷＶＩ（配列番号６８５）、ＩＳＤＲＰＷＶＶ（配列番号６８６）、ＩＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号６８７）、ＩＳＥＫＰＹＩＩ（配列番号６８８）、ＩＳＥＫＰＹＩＶ（配列番号６８９）、ＩＳＥＫＰＹＬＬ（配列番号６９０）、ＩＳＥＫＰＹＬＩ（配列番号６９１）、ＩＳＥＫＰＹＬＶ（配列番号６９２）、ＩＳＥＫＰＹＶＬ（配列番号６９３）、ＩＳＥＫＰＹＶＩ（配列番号６９４）、ＩＳＥＫＰＹＶＶ（配列番号６９５）、ＩＳＥＫＰＷＩＬ（配列番号６９６）、ＩＳＥＫＰＷＩＩ（配列番号６９７）、ＩＳＥＫＰＷＩＶ（配列番号６９８）、ＩＳＥＫＰＷＬＬ（配列番号６９９）、ＩＳＥＫＰＷＬＩ（配列番号７００）、ＩＳＥＫＰＷＬＶ（配列番号７０１）、ＩＳＥＫＰＷＶＬ（配列番号７０２）、ＩＳＥＫＰＷＶＩ（配列番号７０３）、ＩＳＥＫＰＷＶＶ（配列番号７０４）、ＩＳＥＲＰＹＩＬ（配列番号７０５）、ＩＳＥＲＰＹＩＩ（配列番号７０６）、ＩＳＥＲＰＹＩＶ（配列番号７０７）、ＩＳＥＲＰＹＬＬ（配列番号７０８）、ＩＳＥＲＰＹＬＩ（配列番号７０９）、ＩＳＥＲＰＹＬＶ（配列番号７１０）、ＩＳＥＲＰＹＶＬ（配列番号７１１）、ＩＳＥＲＰＹＶＩ（配列番号７１２）、ＩＳＥＲＰＹＶＶ（配列番号７１３）、ＩＳＥＲＰＷＩＬ（配列番号７１４）、ＩＳＥＲＰＷＩＩ（配列番号７１５）、ＩＳＥＲＰＷＩＶ（配列番号７１６）、ＩＳＥＲＰＷＬＬ（配列番号７１７）、ＩＳＥＲＰＷＬＩ（配列番号７１８）、ＩＳＥＲＰＷＬＶ（配列番号７１９）、ＩＳＥＲＰＷＶＬ（配列番号７２０）、ＩＳＥＲＰＷＶＩ（配列番号７２１）、ＩＳＥＲＰＷＶＶ（配列番号７２２）、ＩＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号７２３）、ＩＴＤＫＰＹＩＩ（配列番号７２４）、ＩＴＤＫＰＹＩＶ（配列番号７２５）、ＩＴＤＫＰＹＬＬ（配列番号７２６）、ＩＴＤＫＰＹＬＩ（配列番号７２７）、ＩＴＤＫＰＹＬＶ（配列番号７２８）、ＩＴＤＫＰＹＶＬ（配列番号７２９）、ＩＴＤＫＰＹＶＩ（配列番号７３０）、ＩＴＤＫＰＹＶＶ（配列番号７３１）、ＩＴＤＫＰＷＩＬ（配列番号７３２）、ＩＴＤＫＰＷＩＩ（配列番号７３３）、ＩＴＤＫＰＷＩＶ（配列番号７３４）、ＩＴＤＫＰＷＬＬ（配列番号７３５）、ＩＴＤＫＰＷＬＩ（配列番号７３６）、ＩＴＤＫＰＷＬＶ（配列番号７３７）、ＩＴＤＫＰＷＶＬ（配列番号７３８）、ＩＴＤＫＰＷＶＩ（配列番号７３９）、ＩＴＤＫＰＷＶＶ（配列番号７４０）、ＩＴＤＲＰＹＩＬ（配列番号７４１）、ＩＴＤＲＰＹＩＩ（配列番号７４２）、ＩＴＤＲＰＹＩＶ（配列番号７４３）、ＩＴＤＲＰＹＬＬ（配列番号７４４）、ＩＴＤＲＰＹＬＩ（配列番号７４５）、ＩＴＤＲＰＹＬＶ（配列番号７４６）、ＩＴＤＲＰＹＶＬ（配列番号７４７）、ＩＴＤＲＰＹＶＩ（配列番号７４８）、ＩＴＤＲＰＹＶＶ（配列番号７４９）、ＩＴＤＲＰＷＩＬ（配列番号７５０）、ＩＴＤＲＰＷＩＩ（配列番号７５１）、ＩＴＤＲＰＷＩＶ（配列番号７５２）、ＩＴＤＲＰＷＬＬ（配列番号７５３）、ＩＴＤＲＰＷＬＩ（配列番号７５４）、ＩＴＤＲＰＷＬＶ（配列番号７５５）、ＩＴＤＲＰＷＶＬ（配列番号７５６）、ＩＴＤＲＰＷＶＩ（配列番号７５７）、ＩＴＤＲＰＷＶＶ（配列番号７５８）、ＩＴＥＫＰＹＩＬ（配列番号７５９）、ＩＴＥＫＰＹＩＩ（配列番号７６０）、ＩＴＥＫＰＹＩＶ（配列番号７６１）、ＩＴＥＫＰＹＬＬ（配列番号７６２）、ＩＴＥＫＰＹＬＩ（配列番号７６３）、ＩＴＥＫＰＹＬＶ（配列番号７６４）、ＩＴＥＫＰＹＶＬ（配列番号７６５）、ＩＴＥＫＰＹＶＩ（配列番号７６６）、ＩＴＥＫＰＹＶＶ（配列番号７６７）、ＩＴＥＫＰＷＩＬ（配列番号７６８）、ＩＴＥＫＰＷＩＩ（配列番号７６９）、ＩＴＥＫＰＷＩＶ（配列番号７７０）、ＩＴＥＫＰＷＬＬ（配列番号７７１）、ＩＴＥＫＰＷＬＩ（配列番号７７２）、ＩＴＥＫＰＷＬＶ（配列番号７７３）、ＩＴＥＫＰＷＶＬ（配列番号７７４）、ＩＴＥＫＰＷＶＩ（配列番号７７５）、ＩＴＥＫＰＷＶＶ（配列番号７７６）、ＩＴＥＲＰＹＩＬ（配列番号７７７）、ＩＴＥＲＰＹＩＩ（配列番号７７８）、ＩＴＥＲＰＹＩＶ（配列番号７７９）、ＩＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号７８０）、ＩＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号７８１）、ＩＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号７８２）、ＩＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号７８３）、ＩＴＥＲＰＹＶＩ（配列番号７８４）、ＩＴＥＲＰＹＶＶ（配列番号７８５）、ＩＴＥＲＰＷＩＬ（配列番号７８６）、ＩＴＥＲＰＷＩＩ（配列番号７８７）、ＩＴＥＲＰＷＩＶ（配列番号７８８）、ＩＴＥＲＰＷＬＬ（配列番号７８９）、ＩＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号７９０）、ＩＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号７９１）、ＩＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号７９２）、ＩＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号７９３）、ＩＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号７９４）、ＶＳＤＫＰＹＩＬ（配列番号７９５）、ＶＳＤＫＰＹＩＩ（配列番号７９６）、ＶＳＤＫＰＹＩＶ（配列番号７９７）、ＶＳＤＫＰＹＬＬ（配列番号７９８）、ＶＳＤＫＰＹＬＩ（配列番号７９９）、ＶＳＤＫＰＹＬＶ（配列番号８００）、ＶＳＤＫＰＹＶＬ（配列番号８０１）、ＶＳＤＫＰＹＶＩ（配列番号８０２）、ＶＳＤＫＰＹＶＶ（配列番号８０３）、ＶＳＤＫＰＷＩＬ（配列番号８０４）、ＶＳＤＫＰＷＩＩ（配列番号８０５）、ＶＳＤＫＰＷＩＶ（配列番号８０６）、ＶＳＤＫＰＷＬＬ（配列番号８０７）、ＶＳＤＫＰＷＬＩ（配列番号８０８）、ＶＳＤＫＰＷＬＶ（配列番号８０９）、ＶＳＤＫＰＷＶＬ（配列番号８１０）、ＶＳＤＫＰＷＶＩ（配列番号８１１）、ＶＳＤＫＰＷＶＶ（配列番号８１２）、ＶＳＤＲＰＹＩＬ（配列番号８１３）、ＶＳＤＲＰＹＩＩ（配列番号８１４）、ＶＳＤＲＰＹＩＶ（配列番号８１５）、ＶＳＤＲＰＹＬＬ（配列番号８１６）、ＶＳＤＲＰＹＬＩ（配列番号８１７）、ＶＳＤＲＰＹＬＶ（配列番号８１８）、ＶＳＤＲＰＹＶＬ（配列番号８１９）、ＶＳＤＲＰＹＶＩ（配列番号８２０）、ＶＳＤＲＰＹＶＶ（配列番号８２１）、ＶＳＤＲＰＷＩＬ（配列番号８２２）、ＶＳＤＲＰＷＩＩ（配列番号８２３）、ＶＳＤＲＰＷＩＶ（配列番号８２４）、ＶＳＤＲＰＷＬＬ（配列番号８２５）、ＶＳＤＲＰＷＬＩ（配列番号８２６）、ＶＳＤＲＰＷＬＶ（配列番号８２７）、ＶＳＤＲＰＷＶＬ（配列番号８２８）、ＶＳＤＲＰＷＶＩ（配列番号８２９）、ＶＳＤＲＰＷＶＶ（配列番号８３０）、ＶＳＥＫＰＹＩＬ（配列番号８３１）、ＶＳＥＫＰＹＩＩ（配列番号８３２）、ＶＳＥＫＰＹＩＶ（配列番号８３３）、ＶＳＥＫＰＹＬＬ（配列番号８３４）、ＶＳＥＫＰＹＬＩ（配列番号８３５）、ＶＳＥＫＰＹＬＶ（配列番号８３６）、ＶＳＥＫＰＹＶＬ（配列番号８３７）、ＶＳＥＫＰＹＶＩ（配列番号８３８）、ＶＳＥＫＰＹＶＶ（配列番号８３９）、ＶＳＥＫＰＷＩＬ（配列番号８４０）、ＶＳＥＫＰＷＩＩ（配列番号８４１）、ＶＳＥＫＰＷＩＶ（配列番号８４２）、ＶＳＥＫＰＷＬＬ（配列番号８４３）、ＶＳＥＫＰＷＬＩ（配列番号８４４）、ＶＳＥＫＰＷＬＶ（配列番号８４５）、ＶＳＥＫＰＷＶＬ（配列番号８４６）、ＶＳＥＫＰＷＶＩ（配列番号８４７）、ＶＳＥＫＰＷＶＶ（配列番号８４８）、ＶＳＥＲＰＹＩＬ（配列番号８４９）、ＶＳＥＲＰＹＩＩ（配列番号８５０）、ＶＳＥＲＰＹＩＶ（配列番号８５１）、ＶＳＥＲＰＹＬＬ（配列番号８５２）、ＶＳＥＲＰＹＬＩ（配列番号８５３）、ＶＳＥＲＰＹＬＶ（配列番号８５４）、ＶＳＥＲＰＹＶＬ（配列番号８５５）、ＶＳＥＲＰＹＶＩ（配列番号８５６）、ＶＳＥＲＰＹＶＶ（配列番号８５７）、ＶＳＥＲＰＷＩＬ（配列番号８５８）、ＶＳＥＲＰＷＩＩ（配列番号８５９）、ＶＳＥＲＰＷＩＶ（配列番号８６０）、ＶＳＥＲＰＷＬＬ（配列番号８６１）、ＶＳＥＲＰＷＬＩ（配列番号８６２）、ＶＳＥＲＰＷＬＶ（配列番号８６３）、ＶＳＥＲＰＷＶＬ（配列番号８６４）、ＶＳＥＲＰＷＶＩ（配列番号８６５）、ＶＳＥＲＰＷＶＶ（配列番号８６６）、ＶＴＤＫＰＹＩＬ（配列番号８６７）、ＶＴＤＫＰＹＩＩ（配列番号８６８）、ＶＴＤＫＰＹＩＶ（配列番号８６９）、ＶＴＤＫＰＹＬＬ（配列番号８７０）、ＶＴＤＫＰＹＬＩ（配列番号８７１）、ＶＴＤＫＰＹＬＶ（配列番号８７２）、ＶＴＤＫＰＹＶＬ（配列番号８７３）、ＶＴＤＫＰＹＶＩ（配列番号８７４）、ＶＴＤＫＰＹＶＶ（配列番号８７５）、ＶＴＤＫＰＷＩＬ（配列番号８７６）、ＶＴＤＫＰＷＩＩ（配列番号８７７）、ＶＴＤＫＰＷＩＶ（配列番号８７８）、ＶＴＤＫＰＷＬＬ（配列番号８７９）、ＶＴＤＫＰＷＬＩ（配列番号８８０）、ＶＴＤＫＰＷＬＶ（配列番号８８１）、ＶＴＤＫＰＷＶＬ（配列番号８８２）、ＶＴＤＫＰＷＶＩ（配列番号８８３）、ＶＴＤＫＰＷＶＶ（配列番号８８４）、ＶＴＤＲＰＹＩＬ（配列番号８８５）、ＶＴＤＲＰＹＩＩ（配列番号８８６）、ＶＴＤＲＰＹＩＶ（配列番号８８７）、ＶＴＤＲＰＹＬＬ（配列番号８８８）、ＶＴＤＲＰＹＬＩ（配列番号８８９）、ＶＴＤＲＰＹＬＶ（配列番号８９０）、ＶＴＤＲＰＹＶＬ（配列番号８９１）、ＶＴＤＲＰＹＶＩ（配列番号８９２）、ＶＴＤＲＰＹＶＶ（配列番号８９３）、ＶＴＤＲＰＷＩＬ（配列番号８９４）、ＶＴＤＲＰＷＩＩ（配列番号８９５）、ＶＴＤＲＰＷＩＶ（配列番号８９６）、ＶＴＤＲＰＷＬＬ（配列番号８９７）、ＶＴＤＲＰＷＬＩ（配列番号８９８）、ＶＴＤＲＰＷＬＶ（配列番号８９９）、ＶＴＤＲＰＷＶＬ（配列番号９００）、ＶＴＤＲＰＷＶＩ（配列番号９０１）、ＶＴＤＲＰＷＶＶ（配列番号９０２）、ＶＴＥＫＰＹＩＬ（配列番号９０３）、ＶＴＥＫＰＹＩＩ（配列番号９０４）、ＶＴＥＫＰＹＩＶ（配列番号９０５）、ＶＴＥＫＰＹＬＬ（配列番号９０６）、ＶＴＥＫＰＹＬＩ（配列番号９０７）、ＶＴＥＫＰＹＬＶ（配列番号９０８）、ＶＴＥＫＰＹＶＬ（配列番号９０９）、ＶＴＥＫＰＹＶＩ（配列番号９１０）、ＶＴＥＫＰＹＶＶ（配列番号９１１）、ＶＴＥＫＰＷＩＬ（配列番号９１２）、ＶＴＥＫＰＷＩＩ（配列番号９１３）、ＶＴＥＫＰＷＩＶ（配列番号９１４）、ＶＴＥＫＰＷＬＬ（配列番号９１５）、ＶＴＥＫＰＷＬＩ（配列番号９１６）、ＶＴＥＫＰＷＬＶ（配列番号９１７）、ＶＴＥＫＰＷＶＬ（配列番号９１８）、ＶＴＥＫＰＷＶＩ（配列番号９１９）、ＶＴＥＫＰＷＶＶ（配列番号９２０）、ＶＴＥＲＰＹＩＬ（配列番号９２１）、ＶＴＥＲＰＹＩＩ（配列番号９２２）、ＶＴＥＲＰＹＩＶ（配列番号９２３）、ＶＴＥＲＰＹＬＬ（配列番号９２４）、ＶＴＥＲＰＹＬＩ（配列番号９２５）、ＶＴＥＲＰＹＬＶ（配列番号９２６）、ＶＴＥＲＰＹＶＬ（配列番号９２７）、ＶＴＥＲＰＹＶＩ（配列番号９２８）、ＶＴＥＲＰＹＶＶ（配列番号９２９）、
ＶＴＥＲＰＷＩＬ（配列番号９３０）、ＶＴＥＲＰＷＩＩ（配列番号９３１）、ＶＴＥＲＰＷＩＶ（配列番号９３２）、ＶＴＥＲＰＷＬＬ（配列番号９３３）、ＶＴＥＲＰＷＬＩ（配列番号９３４）、ＶＴＥＲＰＷＬＶ（配列番号９３５）、ＶＴＥＲＰＷＶＬ（配列番号９３６）、ＶＴＥＲＰＷＶＩ（配列番号９３７）、およびＶＴＥＲＰＷＶＶ（配列番号９３８）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、または、を含む。
【0115】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドはアルファ－アクチニン１由来のアミノ酸配列（ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＮＹＩＬ、ＡＧＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＳＹＩＴ、ＡＤＧＫＰＹＩＶ、およびＡＥＤＫＤＦＩＴから選択される配列など）からなり、または、を含む。
【0116】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、アルファ－アクチニン２由来のアミノ酸配列（ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＡＡＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＮＹＩＴ、ＡＴＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＰＹＩＴ、ＡＳＥＫＰＹＩＬ、ＡＤＧＫＰＹＶＴ、ＡＧＤＫＰＹＩＬ、ＡＳＤＫＰＮＩＬ、ＡＳＤＫＰＹＩＴ、ＡＡＤＫＰＦＩＬ、ＡＳＤＫＡＹＩＴ、ＡＧＤＫＡＹＩＴ、ＡＮＧＫＰＦＩＴ、およびＡＧＤＫＮＦＩＴから選択される配列など）からなり、または、を含む。
【0117】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、アルファ－アクチニン３由来のアミノ酸配列（ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＡＡＤＫＰＹＩＬ、ＡＳＤＫＡＹＩＴ、ＡＳＤＫＳＹＩＴ、ＡＳＤＫＴＹＩＴ、ＡＳＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＮＹＩＬ、ＡＧＤＫＳＹＩＴ、ＡＧＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＫＹＩＴ、およびＡＧＤＫＮＹＩＳから選択される配列など）からなり、または、を含む。
【0118】
いくつかの特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、アルファ－アクチニン４由来のアミノ酸配列（ＡＳＤＫＰＹＩＬ、ＡＧＤＫＰＹＩＬ、ＡＡＤＫＮＹＩＴ、ＡＧＤＫＮＹＩＭ、ＡＧＤＫＮＹＩＴ、ＡＡＤＫＮＦＩＭ、ＡＡＤＫＮＦＩＴ、ＡＧＤＫＧＩＲＳ、およびＡＧＤＫＮＦＩＴから選択される配列など）からなり、または、を含む。
【0119】
本発明はさらに、本発明のポリペプチドを含む組成物に関する。いくつかの実施態様において、本発明の組成物は摂取により対象の持続満腹感を促進できる。
【0120】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物中の前記ポリペプチドの量は、約１０ｇ未満（９ｇ、８ｇ、７ｇ、６ｇ、５ｇ、４ｇ、３ｇ、２ｇ、１ｇ、９００ｍｇ、８００ｍｇ、７００ｍｇ、６００ｍｇ、５００ｍｇ、４００ｍｇ、３００ｍｇ、２００ｍｇ、１５０ｍｇ、１００ｍｇ、９０ｍｇ、８０ｍｇ、７０ｍｇ、６０ｍｇ、５０ｍｇ、４０ｍｇ、３０ｍｇ、２５ｍｇ、２０ｍｇ、１５ｍｇ、１０ｍｇ、または５ｍｇ未満など）である。
【0121】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物中の前記ポリペプチドの量は、少なくとも約５ｍｇ（少なくとも約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１ｇ、２ｇ、３ｇ、４ｇ、５ｇ、６ｇ、７ｇ、８ｇ、９ｇ、または１０ｇなど）である。
【0122】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物における細胞呼吸の過程に由来するエネルギー含量は、５０キロジュール（ｋＪ）未満（４０ｋＪ未満など、３０ｋＪ未満など、２０ｋＪ未満など、１０ｋＪ未満など、５０００ジュール（Ｊ）未満など、１０００Ｊ未満など、９００Ｊ未満など、８００Ｊ未満など、７００Ｊ未満など、６００Ｊ未満など、５００Ｊ未満など、４００Ｊ未満など、３００Ｊ未満など、２００Ｊ未満など、１００Ｊ未満など、５０Ｊ未満など）である。
【0123】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は食品組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は発酵組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は乳製品である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は医薬組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は栄養組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は発酵組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は乳製品である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は医薬組成物である。
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は栄養組成物である。
【0124】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は経口投与用の形状である。いくつかの実施態様において、経口投与用の形状は、錠剤、カプセル剤、カプレット、スラリー、小袋、懸濁液、チューインガム、および液体に溶解し得る粉末製剤を含む群から選択される。いくつかの実施態様において、経口投与用の形状は懸濁液である。いくつかの実施態様において、経口投与用の形状は、液体に溶解し得る粉末製剤である。いくつかの実施態様において、液体は水、ミルク、ジュースまたはヨーグルトである。
【実施例】
【0125】
実施例１
アッセイ：
Ｃａ２＋流動アッセイ：
細胞内カルシウムレベルの上昇を、蛍光カルシウムキレート色素Ｆｌｕｏ－４ ＡＭ(ThermoFischer Scientific, Denmark)を用いて測定した。簡潔に述べると、細胞を、９６ウェル組織培養プレート(Sarstedt, Germany)において、細胞培養の節で記述する適切な増殖培地中で、単層としてコンフルエンス付近まで増殖させた。アッセイの開始前に、細胞を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１％ＢＳＡ(Sigma-Aldrich, Denmark)、２％インク(Soluro GMBH, Germany)、０．０１％プルロニックＦ－１２７(Sigma-Aldrich, Denmark)および１ｍＭプロベネシド(Probenecide)(Sigma-Aldrich)を含むハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ、ThermoFischer Scientific, Denmark)を１：１で混合した完全培養培地中で、１．５μＭ Ｆｌｕｏ－４ ＡＭと共に、３７℃で６０分間インキュベートした。
アッセイ：
Ｃａ２＋流動アッセイ：
細胞内カルシウムレベルの上昇を、蛍光カルシウムキレート色素Ｆｌｕｏ－４ ＡＭ(ThermoFischer Scientific, Denmark)を用いて測定した。簡潔に述べると、細胞を、９６ウェル組織培養プレート(Sarstedt, Germany)において、細胞培養の節で記述する適切な増殖培地中で、単層としてコンフルエンス付近まで増殖させた。アッセイの開始前に、細胞を、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１％ＢＳＡ(Sigma-Aldrich, Denmark)、２％インク(Soluro GMBH, Germany)、０．０１％プルロニックＦ－１２７(Sigma-Aldrich, Denmark)および１ｍＭプロベネシド(Probenecide)(Sigma-Aldrich)を含むハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ、ThermoFischer Scientific, Denmark)を１：１で混合した完全培養培地中で、１．５μＭ Ｆｌｕｏ－４ ＡＭと共に、３７℃で６０分間インキュベートした。
【0126】
全てのテスト化合物を水に溶解し、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１％ＢＳＡおよび２％インクを含む１ｘＨＢＳＳ中に希釈した。過剰なＦｌｕｏ－４ ＡＭを何ら除去せず、テスト化合物をウェル中に直接加え、蛍光をマイクロタイタープレートリーダー(SpectraMax M5, Molecular Devices, USA)において４８８ｎｍの励起および５２５ｎｍの発光の装置設定を用いて測定した。
【0127】
細胞培養：
細胞培養培地、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４（ＤＰＢＳ）、グルタミン、トリプシン－ＥＤＴＡおよび抗生物質を、ThermoFischer Scientific (Denmark)から得た。ウシ胎児血清および他の全ての化学物質は、他に記述がない限り、Sigma-Aldrich (Denmark)から購入した。
細胞培養培地、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４（ＤＰＢＳ）、グルタミン、トリプシン－ＥＤＴＡおよび抗生物質を、ThermoFischer Scientific (Denmark)から得た。ウシ胎児血清および他の全ての化学物質は、他に記述がない限り、Sigma-Aldrich (Denmark)から購入した。
【0128】
インビトロにおいてプログルカゴン遺伝子を発現し、ＧＬＰ－１を分泌するマウス腸内分泌Ｌ細胞株を用いた。細胞を、１ｇ／Ｌ Ｄ－グルコース、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／ネオマイシンを含むＤＭＥＭ中で増殖させ、加湿インキュベーター中で９５％空気および５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
【0129】
他のマウス腸細胞株を、２ｍＭグルタミン、２．５ｇ／Ｌグルコース、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、６０ｎＭ亜セレン酸ナトリウム、５μｇ／ｍｌトランスフェリン、５μｇ／ｍｌインスリン、５０ｎＭデキサメタゾン、１０ｎＭ ＥＧＦ、１ｎＭトリヨードチロニン、２％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシン／ネオマイシンを添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、５％ＣＯ２－９５％空気雰囲気下、３７℃で培養した。
【0130】
ヒト腸細胞株を、１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシン／ネオマイシンを添加したマッコイ改変５Ａ培地中で、加湿インキュベーターにおいて５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
【0131】
細胞を、通常の方法で１：３で継代培養し、新たな培地を２日毎に与えた。
【0132】
ＧＬＰ－１レベルの決定：
ＧＬＰ－１レベルを、サンドウィッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて決定した。ＧＬＰ－１に対する一次抗体（０．０５Ｍ重炭酸／炭酸緩衝液中の２．５μｇ／ｍｌマウスモノクローナル（ＨＹＢ １４７－０６）；BioPorto Diagnostics A/S, Gentofte, Denmark）を、平底９６ウェルプレート(Sarstedt, Numbrecht, Germany)上に、４℃で少なくとも２４時間被覆した。この一次抗体はペプチドのアミド化したＣ末端に特異的であり、ＧＬＰ－１（７－３６）、ＧＬＰ－１（９－３６）およびＧＬＰ－１（１－３６）と反応するが、ＧＬＰ－１（７－３７）とは反応しない。プレートを４％ ｗ／ｖ ＢＳＡ(Sigma-Aldrich, Denmark)および０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０(Sigma-Aldrich)を含むＰＢＳ緩衝液を用いて１時間室温でブロックした後、プレートを０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ緩衝液で４回洗浄した。０ｐｇ／ｍｌ～１０００ｐｇ／ｍｌの範囲のＧＬＰ－１ペプチド（ヒトＧＬＰ－１（７－３６）、Sigma-Aldrich, Denmark）濃度での検量線を、０．５％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ緩衝液において作成し、試料を必要に応じて希釈した。試料および基準をマイクロタイタープレートに加え、一次抗体と共に室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを４回洗浄し、ウェルをＧＬＰ－１に対するビオチン化した二次抗体（１μｇ／ｍｌ；マウスモノクローナル（ＡＢＳ ０３３－０１）、BioPorto Diagnostics A/S, Gentofte, Denmark）と共に室温で２時間インキュベートした。さらなる洗浄の工程後、試料をストレプトアビジン－西洋ワサビペルオキシダーゼ（１：２００、Dako A/S, Denmark）と共に４５分間インキュベートし、次いでＴＭＢ溶液（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンおよびＨ２Ｏ２を含む、SMS-gruppen, Denmark）と共にインキュベートした。反応をＨ２ＳＯ４（０．２Ｍ）を加えることで停止し、黄色の最終生成物の吸光度をマイクロタイタープレート分光光度計(SpectraMax M5, Molecular Devices, USA)上で４５０ｎｍにおいて測定した。試料濃度を、基準溶液の濃度に対する内挿によって決定した。
ＧＬＰ－１レベルを、サンドウィッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて決定した。ＧＬＰ－１に対する一次抗体（０．０５Ｍ重炭酸／炭酸緩衝液中の２．５μｇ／ｍｌマウスモノクローナル（ＨＹＢ １４７－０６）；BioPorto Diagnostics A/S, Gentofte, Denmark）を、平底９６ウェルプレート(Sarstedt, Numbrecht, Germany)上に、４℃で少なくとも２４時間被覆した。この一次抗体はペプチドのアミド化したＣ末端に特異的であり、ＧＬＰ－１（７－３６）、ＧＬＰ－１（９－３６）およびＧＬＰ－１（１－３６）と反応するが、ＧＬＰ－１（７－３７）とは反応しない。プレートを４％ ｗ／ｖ ＢＳＡ(Sigma-Aldrich, Denmark)および０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０(Sigma-Aldrich)を含むＰＢＳ緩衝液を用いて１時間室温でブロックした後、プレートを０．１％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ緩衝液で４回洗浄した。０ｐｇ／ｍｌ～１０００ｐｇ／ｍｌの範囲のＧＬＰ－１ペプチド（ヒトＧＬＰ－１（７－３６）、Sigma-Aldrich, Denmark）濃度での検量線を、０．５％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ緩衝液において作成し、試料を必要に応じて希釈した。試料および基準をマイクロタイタープレートに加え、一次抗体と共に室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを４回洗浄し、ウェルをＧＬＰ－１に対するビオチン化した二次抗体（１μｇ／ｍｌ；マウスモノクローナル（ＡＢＳ ０３３－０１）、BioPorto Diagnostics A/S, Gentofte, Denmark）と共に室温で２時間インキュベートした。さらなる洗浄の工程後、試料をストレプトアビジン－西洋ワサビペルオキシダーゼ（１：２００、Dako A/S, Denmark）と共に４５分間インキュベートし、次いでＴＭＢ溶液（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンおよびＨ２Ｏ２を含む、SMS-gruppen, Denmark）と共にインキュベートした。反応をＨ２ＳＯ４（０．２Ｍ）を加えることで停止し、黄色の最終生成物の吸光度をマイクロタイタープレート分光光度計(SpectraMax M5, Molecular Devices, USA)上で４５０ｎｍにおいて測定した。試料濃度を、基準溶液の濃度に対する内挿によって決定した。
【0133】
細胞（試料毎に約５ｘ１０＾５個）を、種々の量（重量／体積）のタンパク質加水分解物（ブタの心臓）存在下または非存在下において、５．５６ｍＭグルコースを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で最大で９０分間インキュベートした。上清を０．４５ミクロンのフィルターに通して濾過し、ＥＬＩＳＡプロトコルに記述されるようにＧＬＰ－１の含量をアッセイした。データは４通りの試料からの平均値＋ＳＥＭである。
【0134】
肉の酵素消化による生理活性ペプチドの調製
ミンチした肉を蒸留水で１～１０倍希釈し、塩酸でｐＨを１～３に調製し、０．０１～１０％ペプシン（ｗ／ｗ）と共に、４～４０℃で３０分～１２時間、適切に混合しながらインキュベートした。不溶性物質を１００～１０００ｘｇで３～３０分遠心することによって除去し、上清をＮａＯＨで中和した。無菌条件を用いて、上清中の低分子量ペプチドを４～４０℃で３０分～１２時間のタンジェンシャル超遠心(tangential ultrafiltration)によって回収し、過剰量の水を２５～５０℃で最大で１２時間蒸発させた。濃縮した透析液を細胞での生理活性についてテストし、ＨＰＬＣによるさらなる精製のために使用した。
ミンチした肉を蒸留水で１～１０倍希釈し、塩酸でｐＨを１～３に調製し、０．０１～１０％ペプシン（ｗ／ｗ）と共に、４～４０℃で３０分～１２時間、適切に混合しながらインキュベートした。不溶性物質を１００～１０００ｘｇで３～３０分遠心することによって除去し、上清をＮａＯＨで中和した。無菌条件を用いて、上清中の低分子量ペプチドを４～４０℃で３０分～１２時間のタンジェンシャル超遠心(tangential ultrafiltration)によって回収し、過剰量の水を２５～５０℃で最大で１２時間蒸発させた。濃縮した透析液を細胞での生理活性についてテストし、ＨＰＬＣによるさらなる精製のために使用した。
【0135】
生理活性ペプチドＡＳＤＫＰＹＩＬの精製および同定
濃縮した透析液を、緩衝液Ｂ（２０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ８．２５／１０％ＡＣＮ）および緩衝液Ａ（同一の緩衝液における６０％ＡＣＮ）の０～４０％の勾配を用いて調整用Ｃ１８カラム上で分画した。分画を生理活性についてテストし、等張の０．１％ＦＡ中の４．５％ＡＣＮを含むＥＶＯ Ｃ１８カラムを用いて、３０分間の定組成溶離によってさらに精製した。分画にＭＳの特徴付けを行い、ｍ／ｚ４５３．７５（＋２）での支配的なピークが観察された。抽出したイオンクロマトグラムは、このピークが全ての活性分画に存在することを示す。４５３．７５のピークのデノボシーケンス(de novo sequencing)は、［Ａ］ＳＤＫＰＹ［Ｉ，Ｌ］［Ｉ，Ｌ］を与える。Ｎ末端のＡは親イオン－Ａ７から計算される。ＩおよびＬは等分子量のため、ＭＳでは分離されない。タンパク質配列の検索はマッチとしてＡＳＤＫＰＹＩＬのみを与える。ＡＳＤＫＰＹＩＬは、主要な筋タンパク質であるアルファ－アクチニン２においてのみ発見される。
濃縮した透析液を、緩衝液Ｂ（２０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ８．２５／１０％ＡＣＮ）および緩衝液Ａ（同一の緩衝液における６０％ＡＣＮ）の０～４０％の勾配を用いて調整用Ｃ１８カラム上で分画した。分画を生理活性についてテストし、等張の０．１％ＦＡ中の４．５％ＡＣＮを含むＥＶＯ Ｃ１８カラムを用いて、３０分間の定組成溶離によってさらに精製した。分画にＭＳの特徴付けを行い、ｍ／ｚ４５３．７５（＋２）での支配的なピークが観察された。抽出したイオンクロマトグラムは、このピークが全ての活性分画に存在することを示す。４５３．７５のピークのデノボシーケンス(de novo sequencing)は、［Ａ］ＳＤＫＰＹ［Ｉ，Ｌ］［Ｉ，Ｌ］を与える。Ｎ末端のＡは親イオン－Ａ７から計算される。ＩおよびＬは等分子量のため、ＭＳでは分離されない。タンパク質配列の検索はマッチとしてＡＳＤＫＰＹＩＬのみを与える。ＡＳＤＫＰＹＩＬは、主要な筋タンパク質であるアルファ－アクチニン２においてのみ発見される。
【0136】
エクスビボ(ex vivo)におけるペプチドの安定性
ペプチドは消化管におけるプロテアーゼによって分解される。しかしながら、この分解の速度はペプチドの配列に依存する。ＡＳＤＫＰＹＩＬペプチドシリーズの安定性を測定し、例えばＲＲＫＰＹＩＬと比較するために、１０または５０ｍｇ（湿重量）のマウスまたはラットの腸組織（回腸遠位部）を、Ｖ底２４ウェルプレートにおいて８００μｌ ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４中、３７℃で、３５０ｒｐｍで振盪しながら平衡化した。同一量の種々のペプチド（１μｇ／ｍｌの終濃度）を腸の断片に添加し、インキュベーションを継続した。種々の時点において、１００μｌのアリコートを取り出し、プロテアーゼ活性と非特異的に競合する乳清タンパク質加水分解物（１０ｍｇ／ｍｌの終濃度）中に希釈した。次いで、ペプチド溶液を希釈し、生理活性をテストした（図８）。同一の条件であるが腸の非存在下でインキュベートされたペプチドは、対照（分解なし）として役立つ。組織による単純な不活化を仮定すると、細胞の刺激についてのＥＣ５０の決定は、回収されたペプチドの計算（図９）を可能にする。
ペプチドは消化管におけるプロテアーゼによって分解される。しかしながら、この分解の速度はペプチドの配列に依存する。ＡＳＤＫＰＹＩＬペプチドシリーズの安定性を測定し、例えばＲＲＫＰＹＩＬと比較するために、１０または５０ｍｇ（湿重量）のマウスまたはラットの腸組織（回腸遠位部）を、Ｖ底２４ウェルプレートにおいて８００μｌ ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４中、３７℃で、３５０ｒｐｍで振盪しながら平衡化した。同一量の種々のペプチド（１μｇ／ｍｌの終濃度）を腸の断片に添加し、インキュベーションを継続した。種々の時点において、１００μｌのアリコートを取り出し、プロテアーゼ活性と非特異的に競合する乳清タンパク質加水分解物（１０ｍｇ／ｍｌの終濃度）中に希釈した。次いで、ペプチド溶液を希釈し、生理活性をテストした（図８）。同一の条件であるが腸の非存在下でインキュベートされたペプチドは、対照（分解なし）として役立つ。組織による単純な不活化を仮定すると、細胞の刺激についてのＥＣ５０の決定は、回収されたペプチドの計算（図９）を可能にする。
【0137】
実施例２
１）構造－活性相関および安定性（ＳＡＲ）
ａ．伸長型
ｂ．置換型
２）マウスにおけるインビボ研究
ｃ．飼料摂取に対する急性効果（持続満腹感）
ｄ．体重に対する長期効果が決定され得る
１）構造－活性相関および安定性（ＳＡＲ）
ａ．伸長型
ｂ．置換型
２）マウスにおけるインビボ研究
ｃ．飼料摂取に対する急性効果（持続満腹感）
ｄ．体重に対する長期効果が決定され得る
【0138】
ＤＣ７－２およびＮＴＲ－１の相互作用の構造モデリング研究に基づいて、結合の増加による効力の増加を示すオクタペプチド、ヘプタペプチド、ヘキサペプチドまたはペンタペプチドのペプチドを予測し得る。
【0139】
合成ペプチドを用いたＳＡＲ研究の比較、効力および安定性が増加したペプチドが予測され、かつ観察され得る。
【0140】
アッセイ：
合成ペプチド：
天然ホルモンニューロテンシン（ＱＬＹＥＮＫＰＲＲＰＹＩＬ）、生理活性のニューロテンシンフラグメントＮＴ（８－１３）（ＲＲＰＹＩＬ）および同定された生理活性オクタペプチドＤＣ７－２（ＡＳＤＫＰＹＩＬ）の配列に基づいて、オクタペプチド（Ｘ－ＳＤＫＰＹＩＬ）、ヘプタペプチド（Ｘ－ＤＫＰＹＩＬ）、ヘキサペプチド（Ｘ－ＫＰＹＩＬ）およびペンタペプチド（Ｘ－ＰＹＩＬ）のＮ末端アミノ酸の体系的な置換を伴う合成ペプチドを標準的な技術(Schafer-N, Denmark)を用いて合成した。全てのペプチドを、ＨＰＬＣグレードの純水に溶解し、－２０℃で保存した。
合成ペプチド：
天然ホルモンニューロテンシン（ＱＬＹＥＮＫＰＲＲＰＹＩＬ）、生理活性のニューロテンシンフラグメントＮＴ（８－１３）（ＲＲＰＹＩＬ）および同定された生理活性オクタペプチドＤＣ７－２（ＡＳＤＫＰＹＩＬ）の配列に基づいて、オクタペプチド（Ｘ－ＳＤＫＰＹＩＬ）、ヘプタペプチド（Ｘ－ＤＫＰＹＩＬ）、ヘキサペプチド（Ｘ－ＫＰＹＩＬ）およびペンタペプチド（Ｘ－ＰＹＩＬ）のＮ末端アミノ酸の体系的な置換を伴う合成ペプチドを標準的な技術(Schafer-N, Denmark)を用いて合成した。全てのペプチドを、ＨＰＬＣグレードの純水に溶解し、－２０℃で保存した。
【0141】
ペプチドの安定性：
濃度決定：
合成ペプチド(Schafer-N, Denmark)、ＮＴ(Sigma-Aldrich, Denmark)、ＮＴ（８－１３）(Sigma-Aldrich, Denmark)のタンパク質濃度を、Costar（登録商標）９６ウェルＵＶ透過性プレート(Corning, Sigma-Aldrich, Denmark)において２８０ｎｍの吸光度を測定することによって決定した。各ペプチドを、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）(Sigma-Aldrich, Denmark)を含むハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ、ThermoFischer Scientific, Denmark)中への希釈による４種の濃度において測定した。安定性アッセイのために、全てのペプチドを、ＨＢＳＳ；２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｐｈ７．４）中において３ｘ１０－５Ｍに希釈し、＋４℃で保存した。
濃度決定：
合成ペプチド(Schafer-N, Denmark)、ＮＴ(Sigma-Aldrich, Denmark)、ＮＴ（８－１３）(Sigma-Aldrich, Denmark)のタンパク質濃度を、Costar（登録商標）９６ウェルＵＶ透過性プレート(Corning, Sigma-Aldrich, Denmark)において２８０ｎｍの吸光度を測定することによって決定した。各ペプチドを、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）(Sigma-Aldrich, Denmark)を含むハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ、ThermoFischer Scientific, Denmark)中への希釈による４種の濃度において測定した。安定性アッセイのために、全てのペプチドを、ＨＢＳＳ；２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｐｈ７．４）中において３ｘ１０－５Ｍに希釈し、＋４℃で保存した。
【0142】
腸ホモジネート：
２０匹の雄性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ由来の小腸を、スピードを５に設定したIKA（登録商標）ベーシック１８Ultra-Turrax組織ホモジナイザーを用いて、３５０ｍｌのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）(ThermoFischer Scientific, Denmark)中でホモジナイズし、次いで１００μｍのナイロンメッシュフィルターを用いて濾過した。タンパク質濃度を、ビシンコニン酸アッセイ(ThermoFischer Scientific, Denmark)および基準としてウシ血清アルブミンを用いて６ｍｇ／ｍｌとした。腸ホモジネートを２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳで１０倍希釈し、ペプチドと共にインキュベートする前に、さらに３０Ｘ、９０Ｘ、２７０Ｘ、８１０Ｘまたは２４３０Ｘ希釈した。全ての溶液を、ペプチド溶液と混合する前に３７℃まで予熱した。
２０匹の雄性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ由来の小腸を、スピードを５に設定したIKA（登録商標）ベーシック１８Ultra-Turrax組織ホモジナイザーを用いて、３５０ｍｌのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）(ThermoFischer Scientific, Denmark)中でホモジナイズし、次いで１００μｍのナイロンメッシュフィルターを用いて濾過した。タンパク質濃度を、ビシンコニン酸アッセイ(ThermoFischer Scientific, Denmark)および基準としてウシ血清アルブミンを用いて６ｍｇ／ｍｌとした。腸ホモジネートを２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳで１０倍希釈し、ペプチドと共にインキュベートする前に、さらに３０Ｘ、９０Ｘ、２７０Ｘ、８１０Ｘまたは２４３０Ｘ希釈した。全ての溶液を、ペプチド溶液と混合する前に３７℃まで予熱した。
【0143】
ペプチドを１０－５Ｍで、小腸ホモジネートの希釈液と共に３７℃で９０分間振盪しながらインキュベートした。反応を１Ｍリン酸の添加（終濃度０．４Ｍ、ｐＨ約１．２）によって停止した。次いで、各ペプチドのインキュベーション混合物をｐＨ７．２～７．４までＮａＯＨで中和し、腸細胞における活性について即座にテストした。各ペプチドは分解なしの対照（すなわち、腸ホモジネートの添加の前に１Ｍリン酸の添加）を含んでいた。
【0144】
ウシ胎児血清：
全てのペプチドを１０－５Ｍで、ウシ胎児血清（ＦＢＡ；６６．７％の終濃度）(Sigma Aldrich, Denmark)と共に３７℃で３時間インキュベートした。ペプチド分解を１Ｍリン酸（終濃度０．４Ｍ、ｐＨ約１．２）を用いて終結させ、腸細胞における活性をテストする前に、ｐＨ７．２～７．４までＮａＯＨで中和した。小腸ホモジネートに関して、各ペプチドは分解なしの対照を含んでいた。
全てのペプチドを１０－５Ｍで、ウシ胎児血清（ＦＢＡ；６６．７％の終濃度）(Sigma Aldrich, Denmark)と共に３７℃で３時間インキュベートした。ペプチド分解を１Ｍリン酸（終濃度０．４Ｍ、ｐＨ約１．２）を用いて終結させ、腸細胞における活性をテストする前に、ｐＨ７．２～７．４までＮａＯＨで中和した。小腸ホモジネートに関して、各ペプチドは分解なしの対照を含んでいた。
【0145】
選択されたペプチドの動態研究：
ＤＣ７－２、ＮＴ、ＤＫＰＹＩＬおよびＮＴ－（８－１３）（１０－６Ｍの終濃度）を、ＦＢＳまたは２７０Ｘ希釈した腸ホモジネートのいずれかと共に３７℃で種々の時間、振盪しながらインキュベートした。分解を１Ｍリン酸で停止し、次いで試料を中和し、上述の腸細胞を用いて即座にテストした。各ペプチドは上述のように分解なしの対照を含んでいた。
ＤＣ７－２、ＮＴ、ＤＫＰＹＩＬおよびＮＴ－（８－１３）（１０－６Ｍの終濃度）を、ＦＢＳまたは２７０Ｘ希釈した腸ホモジネートのいずれかと共に３７℃で種々の時間、振盪しながらインキュベートした。分解を１Ｍリン酸で停止し、次いで試料を中和し、上述の腸細胞を用いて即座にテストした。各ペプチドは上述のように分解なしの対照を含んでいた。
【0146】
ヘキサペプチドの研究：
体系的なＮ末端置換（Ｘ－ＫＰＹＩＬ）(Schafer-N, Denmark)およびＮＴ（８－１３）を含む２０種のヘキサペプチドを１０－６Ｍで、ＦＢＳと共に１０分間、または２７０Ｘ希釈した腸ホモジネートと共に３０分間のいずれかにおいて、３７℃で振盪しながらインキュベートした。分解を１Ｍリン酸で停止した。ペプチド溶液をＮａＯＨで中和（ｐＨ７．２～７．４）し、希釈し、マウス腸細胞を用いて生理活性について即座にテストした。細胞の刺激についてのＥＣ５０の決定は回収したペプチドの計算を可能にした。
体系的なＮ末端置換（Ｘ－ＫＰＹＩＬ）(Schafer-N, Denmark)およびＮＴ（８－１３）を含む２０種のヘキサペプチドを１０－６Ｍで、ＦＢＳと共に１０分間、または２７０Ｘ希釈した腸ホモジネートと共に３０分間のいずれかにおいて、３７℃で振盪しながらインキュベートした。分解を１Ｍリン酸で停止した。ペプチド溶液をＮａＯＨで中和（ｐＨ７．２～７．４）し、希釈し、マウス腸細胞を用いて生理活性について即座にテストした。細胞の刺激についてのＥＣ５０の決定は回収したペプチドの計算を可能にした。
【0147】
オクタペプチドＡＳＤＫＰＹＩＬにおけるＮ末端アミノ酸の体系的な置換ならびに活性および安定性についてのその重要性。ＤＣ７－２の配列、活性および安定性を灰色で示す。
【表1】
【0148】
表の注釈１）血清での安定性は、実施例に記述されるように、未消化の試料と比較して、血清中での３７℃、１０分のインキュベーション後に残ったペプチド活性の割合として表される。２）腸での安定性は、実施例に記述されるように、腸ホモジネート中での３７℃、３０分のインキュベーション後に残った％活性として表される。
【0149】
ヘプタペプチドＳＤＫＰＹＩＬにおけるＮ末端アミノ酸の体系的な置換ならびに活性および安定性についてのその重要性。ＤＣ７－２中に含まれるペプチドの配列、活性および安定性を灰色で示す。
【表2】
【0150】
ヘキサペプチドＤＫＰＹＩＬにおけるＮ末端アミノ酸の体系的な置換ならびに活性および安定性についてのその重要性。ＤＣ７－２中に含まれるペプチドの配列、活性および安定性を灰色で示す。
【表3】
【0151】
ペンタペプチドＫＰＹＩＬにおけるＮ末端アミノ酸の体系的な置換ならびに活性および安定性についてのその重要性。ＤＣ７－２中に含まれるペプチドの配列、活性および安定性を灰色で示す。
【表4】
【0152】
結論として、この結果は、オクタペプチドおよびヘプタペプチドがより安定であり、ヘキサペプチドのＮ末端のａａが安定性に対して重要な意味を持つことを明示する。
【0153】
天然ホルモンのヘキサペプチドであるニューロテンシン（８－１３）（配列ＲＲＰＹＩＬを含むＮＴ）と比較すると、本発明のある特定のペプチドＤＫＰＹＩＬは血清中でほぼ１００倍安定であり、腸ホモジネート中で約１００～１０００ｘ安定である。
【0154】
インビボ研究
持続満腹感に対するＤＣ７－２の急性効果を図１２、１７～２０に示す。
持続満腹感に対するＤＣ７－２の急性効果を図１２、１７～２０に示す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【配列表】