特許 7123434 破骨細胞分化抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-08-15

(45)【発行日】2022-08-23

(54)【発明の名称】破骨細胞分化抑制剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/31 20060101AFI20220816BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20220816BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20220816BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220816BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220816BHJP

   A23L 33/105 20160101ALI20220816BHJP

   A21D 2/38 20060101ALN20220816BHJP

   A23L 21/10 20160101ALN20220816BHJP

   A61K 127/00 20060101ALN20220816BHJP

   A61K 135/00 20060101ALN20220816BHJP

   A61P 19/08 20060101ALN20220816BHJP

   A21D 2/36 20060101ALN20220816BHJP

【ＦＩ】

A61K36/31

A61P19/10

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P43/00 105

A23L33/105

A21D2/38

A23L21/10

A61K127:00

A61K135:00

A61P19/08

A21D2/36

【請求項の数】 1

(21)【出願番号】P 2021043778

(22)【出願日】2021-03-17

【審査請求日】2021-07-13

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 ２０２０年８月２０日にＷＥＢ（ｈｔｔｐｓ：／／ｖｉｒｔｕａｌ．ｗｃｏ－ｉｏｆ－ｅｓｃｅｏ．ｏｒｇ／）上で開催された「Ｖｉｒｔｕａｌ ＷＣＯ－ＩＯＦ－ＥＳＣＥＯ ２０２０」で発表

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】397036365

【氏名又は名称】株式会社アイビー化粧品

(74)【代理人】

【識別番号】100098545

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 伸一

(74)【代理人】

【識別番号】100189717

【弁理士】

【氏名又は名称】太田 貴章

(72)【発明者】

【氏名】常陰 幸乃

(72)【発明者】

【氏名】竹入 雅敏

(72)【発明者】

【氏名】新井 啓子

(72)【発明者】

【氏名】木村 吉秀

【審査官】深草 亜子

(56)【参考文献】

【文献】特開２００６－１１７５５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０２０－５２７５４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００７－２１０９１６（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２００７／１３６０６８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開２００９－２１５２５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１０－０３０９０５（ＪＰ，Ａ）

【文献】生物機能開発研究所紀要，2004年，Vol.4，pp.11-14

【文献】Molecular Biology Reports，2020年，Vol.47，pp.5001-5012

【文献】Ultrasonics Sonochemistry，2018年，Vol.47，pp.1-9

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３６／００－３６／９０６８

Ａ２３Ｌ ３３／００－３３／１９５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

クレソンの水を含んでいてもよいエタノール抽出物（但しケルセチンを含む抽出物を除く）を有効成分とする破骨細胞分化抑制剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防や治療に有用な破骨細胞分化抑制剤に関する。

【背景技術】

【0002】

我が国の高齢化社会の進行に伴い、国民の骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の罹患率が上昇していることは周知の通りであり、今日、骨代謝を改善する方法の研究開発が精力的に行われている。骨代謝を改善する方法は種々存在するが、その中で、骨代謝異常の一因である、破骨細胞による骨の溶解（骨吸収）と骨芽細胞による骨の再生のバランスの崩壊を回復させるため、破骨細胞の分化を抑制することで骨吸収を抑制する方法が着目されており、例えば特許文献１には、ブナの木タール中に存在するグアヤコールが破骨細胞の分化を抑制することが記載されている。しかしながら、破骨細胞の分化を抑制する成分の探索は、今なお意義深い状況にある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【文献】特開２００５－２８１２９４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

そこで本発明は、骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防や治療に有用な破骨細胞分化抑制剤を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明者らは、上記の点に鑑みて鋭意検討を行った結果、クレソン（Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）の抽出物が、破骨細胞分化抑制作用を有することを見出した。

【0006】

上記の知見に基づいてなされた本発明の破骨細胞分化抑制剤は、請求項１記載の通り、クレソンの水を含んでいてもよいエタノール抽出物（但しケルセチンを含む抽出物を除く）を有効成分とする。

【発明の効果】

【0007】

本発明によれば、骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防や治療に有用な破骨細胞分化抑制剤を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】実施例における、各種の抽出溶媒を用いて調製したクレソンの抽出物の破骨細胞分化抑制作用を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0009】

本発明の破骨細胞分化抑制剤は、クレソンの抽出物を有効成分とする。

【0010】

本発明において用いるクレソンは、オランダガラシ、ミズガラシ、セイヨウゼリなどとも呼ばれ、香味野菜などとして食されるよく知られた植物である。クレソンは、天然に自生しているものであってもよいし、生産者によって栽培されているものであってもよい。

【0011】

本発明において、クレソンの抽出物は、例えば、摘み取ったり切り取ったりしたクレソンの葉や茎（細断したり乾燥したり粉砕したりしてもよい）に、抽出溶媒としての水や各種の有機溶媒、例えばメタノールやエタノールやイソプロピルアルコールなどのアルコール（水を含んでいてもよい）、アセトン（水を含んでいてもよい）、エーテル、ヘキサン、酢酸エチル、アセトニトリルなどを加え、室温で１時間～１週間静置することで成分抽出したり、還流することで成分抽出したりしてからろ過することで、ろ液として得ることができる。抽出溶媒は、単一の溶媒を用いてもよいし複数の溶媒を混合して用いてもよい。得られたろ液は、そのまま液状抽出物として用いてもよいし、減圧濃縮や凍結乾燥を行って固形物や粉末にして用いてもよい。なお、ろ液をさらに硫安分画、ゲルろ過、イオンクロマトグラフィーなどによって精製し、得られた画分を液状抽出物として用いてもよい。また、例えば最初にヘキサンを用いて抽出操作を行った後、順次、酢酸エチル、アセトン、水といったように、用いる溶媒の極性を徐々に高くして抽出操作を行い、いずれかの溶媒を用いることで得られたろ液を液状抽出物として用いてもよい。

【0012】

本発明における破骨細胞分化抑制剤は、各種の製剤形態に製剤化することでそれ自体を医薬品や健康食品などとして服用や摂取することができることに加え、各種の飲食品に配合して摂取することができる。その服用量や摂取量は、適用対象者の年齢や性別や体重、症状の程度などに基づいて適宜決定することができ、適切量を服用や摂取することにより、その破骨細胞分化抑制作用に基づいて、骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防効果や治療効果を期待することができる。

【実施例】

【0013】

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。

【0014】

実施例１：各種の抽出溶媒を用いて調製したクレソンの抽出物の破骨細胞分化抑制作用
（実験方法）
国産のクレソンの葉と茎を、７０℃で２４時間乾燥してからミルサーで粉砕した後、１０倍量の抽出溶媒（用いた抽出溶媒は下記の７種類）を加え、室温で約１６時間静置することで成分抽出してからろ過し、ろ液を得た。得られたろ液を減圧濃縮した後、抽出溶媒に水が含まれる場合には凍結乾燥を行い、クレソンの抽出物を赤褐色や黒緑色の固形物として得た（色の違いは用いた抽出溶媒の違いによる）。
・ ５０％（ｗ／ｗ）エタノール（含水量５０％）
・ ８０％（ｗ／ｗ）エタノール（含水量２０％）
・ エタノール
・ 酢酸エチル
・ アセトン
・ メタノール
・ アセトニトリル

【0015】

ＲＡＮＫＬ刺激によって誘導されるマウスマクロファージ様細胞株ＲＡＷ２６４細胞の破骨細胞分化に与えるクレソンの抽出物の影響を、クレソンの抽出物の存在下で破骨細胞分化を誘導し、分化した破骨細胞の数を計測することで評価した。具体的には、４８ウェルプレートに、１ウェルあたり約５０００個のＲＡＷ２６４細胞（理化学研究所）を３００μＬの培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）に１０％ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ社）、２ｍＭ Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（Ｗａｋｏ社）、ＮＥＡＡ（Ｗａｋｏ社）、５０μｇ／ｍＬ ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（Ｗａｋｏ社）を加えたもの）で播種し、各種の抽出溶媒を用いて調製したクレソンの抽出物のそれぞれをＤＭＳＯに溶解した被験サンプル１０μｇ／ｍＬと、ＲＡＮＫＬ（オリエンタル酵母工業社）５ｎＭを添加した後、ＣＯ_２インキュベータ内で、３７℃で５日間培養し、破骨細胞分化を誘導した。５日後、４％ホルムアルデヒドにて細胞を固定し、アセトンエタノール（１：１）で透過処理してから、ＴＲＡＰ染色することによって分化した破骨細胞を染色し、顕微鏡観察にて、多核化した細胞（３核以上を持つ多核細胞）の数を計測した。ＴＲＡＰ染色は、ＴＲＡＰ染色液（０．０１％ Ｎａｐｈｔｈｏｌ ＡＳ－ＭＸ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）、０．０６％ Ｆａｓｔ ｒｅｄ ｖｉｏｌｅｔ ＬＢ ｓａｌｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）、５０ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｔａｒｔｒａｔｅ、９０ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ、ｐＨ５．０）をウェルに添加し、室温で４時間以上インキュベートすることで行った。

【0016】

（実験結果）
図１に示す（コントロール：被験サンプルの調製に用いた容量と同じ容量のＤＭＳＯのみを添加）。図１から明らかなように、いずれの抽出溶媒を用いて調製したクレソンの抽出物も、１０μｇ／ｍＬの濃度で破骨細胞分化抑制作用を発揮し、分化した破骨細胞の数を減少させた。抽出溶媒として含水エタノールを用いた場合、含水量が少ないほど破骨細胞分化抑制作用は強かった。

【0017】

製剤例１：錠剤
以下の成分組成からなる破骨細胞の分化を抑制するための錠剤を自体公知の方法で製造した。
クレソンのエタノール抽出物 １
乳糖 ８０
ステアリン酸マグネシウム １９ （単位：重量％）

【0018】

製剤例２：ビスケット
以下の成分組成からなる破骨細胞の分化を抑制するためのビスケットを自体公知の方法で製造した。
クレソンのアセトン抽出物 １
薄力粉 ３２
全卵 １６
バター １６
砂糖 ２４
水 １０
ベーキングパウダー １ （単位：重量％）

【0019】

製剤例３：ゼリー
以下の成分組成からなる破骨細胞の分化を抑制するためのゼリーを自体公知の方法で製造した。
クレソンの８０％エタノール抽出物 ０．０１
ゲル化剤 １．３
砂糖 ２０
ｐＨ調整剤 ２．５
水 ７６．１９ （単位：重量％）

【産業上の利用可能性】

【0020】

本発明は、骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防や治療に有用な破骨細胞分化抑制剤を提供することができる点において、産業上の利用可能性を有する。

【要約】

【課題】 骨粗鬆症や関節リウマチなどの骨代謝疾患の予防や治療に有用な破骨細胞分化抑制剤を提供すること。
【解決手段】 クレソンの抽出物を有効成分とする。
【選択図】 図１

【図1】