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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-08-17
(45)【発行日】2022-08-25
(54)【発明の名称】組成物及びその使用
(51)【国際特許分類】
A23L 33/135 20160101AFI20220818BHJP
A61K 35/74 20150101ALI20220818BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220818BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220818BHJP
【ＦＩ】
A23L33/135 ZNA
A61K35/74 A
A61P29/00
A61P1/04
【請求項の数】
18
(21)【出願番号】P 2020566957
(86)(22)【出願日】2018-05-31
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-09-16
(86)【国際出願番号】 CN2018089319
(87)【国際公開番号】W WO2019227418
(87)【国際公開日】2019-12-05
【審査請求日】2021-01-07
【微生物の受託番号】CGMCC CGMCC 10984
【微生物の受託番号】GDMCC GDMCC 60087
【微生物の受託番号】GDMCC GDMCC 60090
【微生物の受託番号】GDMCC GDMCC 60091
【微生物の受託番号】GDMCC GDMCC 60092
【微生物の受託番号】GDMCC GDMCC 60093
(73)【特許権者】
【識別番号】517110612
【氏名又は名称】ビージーアイ シェンチェン
(74)【代理人】
【識別番号】100107766
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠重
(74)【代理人】
【識別番号】100070150
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠彦
(74)【代理人】
【識別番号】100107515
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100107733
【弁理士】
【氏名又は名称】流 良広
(74)【代理人】
【識別番号】100115347
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 奈緒子
(72)【発明者】
【氏名】ユェンチャン・ゾウ
(72)【発明者】
【氏名】リャン・シャオ
(72)【発明者】
【氏名】シャオピン・リ
(72)【発明者】
【氏名】ジンホン・ユー
(72)【発明者】
【氏名】チュアン・リウ
【審査官】戸来 幸男
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１７／０１５１２９１（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ２３Ｌ ３３／００－３３／２９
Ｃ１２Ｎ １／００－１／３８
ＦＳＴＡ／ＣＡｐｌｕｓ／ＡＧＲＩＣＯＬＡ／ＢＩＯＳＩＳ／
ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
Ｇｏｏｇｌｅ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号３の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を有するＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ及び／又はその代謝物と、配列番号４の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を有するＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ及び／又はその代謝物とを含むことを特徴とする組成物。
【請求項2】
前記配列番号３の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を有するＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓが、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９３のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣであり、
前記配列番号４の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を有するＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓが、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００８７のＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６である、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
更に、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ及び／又はその代謝物、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ及び／又はその代謝物、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ及び／又はその代謝物、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ及び／又はその代謝物、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ及び／又はその代謝物の少なくともいずれかを含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
前記Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓが、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９０のＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６である、請求項３に記載の組成物。
【請求項5】
前記Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓが、寄託番号ＤＳＭ １６８４１のＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項6】
前記Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉが、寄託番号ＣＧＭＣＣ １０９８４のＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項7】
前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉが、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９２のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項8】
前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓが、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９１のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１である、請求項３に記載の組成物。
【請求項9】
前記組成物が、更に、プロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスを含み、
前記プレバイオティクスが、フルクトオリゴサッカライド、ガラクトオリゴサッカライド、キシロオリゴサッカライド、ラクトスクロース、大豆オリゴサッカライド、イヌリン、及びオリゴサッカライドからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
【請求項10】
前記組成物が、更に、前記細菌の少なくとも１種の生存率を維持することができる物質を含み、
前記細菌の少なくとも１種の生存率を維持することができる物質が、システイン、グルタチオン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ジブチルメチルトルエン、トコフェロール、竹の葉の抗酸化剤、Ｄ－イソアスコルビン酸又はそのナトリウム塩、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、リン脂質、ビタミンＣ、及びビタミンＥからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項11】
前記組成物が、更に、薬学的に又は食品として許容される担体又は賦形剤を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項12】
前記薬学的に又は食品として許容される担体又は賦形剤が、グルコース、ラクトース、スクロース、デンプン、マンニトール、デキストリン、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、及び生理食塩水から選択される少なくとも１つである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項13】
前記組成物が、食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の形態である、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項14】
前記食品が、乳酸飲料、豆乳飲料、発酵食品、又は動物用飼料である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記医薬が、錠剤、顆粒、粉剤、腸溶性コーティング剤、溶液、又は懸濁液の形態である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項16】
潰瘍性大腸炎、一般的な腸炎、又は胃炎から選択される炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造における請求項１から１５のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項17】
前記組成物が、
哺乳動物の体重減少を制御すること、
哺乳動物の疾患活動性指数を低下させること、
哺乳動物の腸管病変を改善すること
からなる群から選択される活性を示す、請求項１６に記載の使用。
【請求項18】
請求項１から１５のいずれかに記載の組成物を、ヒトを除く投与対象に投与することを含むことを特徴とする潰瘍性大腸炎、一般的な腸炎、又は胃炎から選択される炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本願は、微生物製剤の分野、特に微生物又は微生物関連組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病（ＣＤ）は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の２つのタイプである。ＩＢＤは、原因不明の慢性腸炎症性疾患である。中でも、潰瘍性大腸炎の炎症は主に結腸と直腸、特に結腸粘膜と粘膜下で生じる。現在、病理学的研究によれば、潰瘍性大腸炎が、感受性遺伝子、粘膜免疫、及び腸内微生物に関連していることが明らかにされている。その臨床病理学的症状は、持続的な腹痛、下痢、便潜血、及び反復される病状を含む。生活水準の向上と食事の変化により、潰瘍性大腸炎の発症率は上昇している。
【0003】
病理学的メカニズムが不明であることから、潰瘍性大腸炎の臨床治療は特異性と妥当性を欠いている。基本的には、潰瘍性大腸炎を治療する３つの臨床療法、栄養療法、外科療法、及び薬物療法があり、中でも、薬物療法が最も重要である。臨床的には、ＵＣの主な薬剤は、サリチル酸、副腎グルココルチコイド、及び免疫抑制剤であり、これらはいずれもＵＣをある程度軽減させることができるが、欠点も有する。
【0004】
サリチル酸は、炎症応答緩和の目的を達成するように、プロスタグランジンの合成を効果的に阻害し、酸素フリーラジカルを除去することができるが、短期的に炎症を緩和することしかできず、ＵＣ疾患を治癒させることはできない。潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の臨床治療のために、サリチル酸の通常使用される西洋医学は、主に軽度、中等度、又は慢性のＵＣ患者向けであるスルファサラジン（ＳＡＳＰ）である。しかし、サリチル酸には、胃腸反応、頭痛、網状細胞の増加、精子の減少、アレルギー反応による発疹、肝臓毒性、白血球減少症、貧血などを引き起こす副作用があると共に、これらの薬剤の抗菌作用により微生物叢障害及び高薬剤耐性を引き起こし易い。
【0005】
副腎グルココルチコイド、典型的にはベータメタゾンは、重度又は発作性のＵＣ患者に好ましい。しかし、副腎グルココルチコイドは、代謝障害、水分の保持などの副作用を引き起こすことがあり、緊急薬としてのみ使用することができ、長期間投与することはできない。
【0006】
シクロスポリンなどの免疫抑制剤は、Ｔ細胞でのＩＬ－２の産生を阻害して免疫応答の進行に影響を及ぼすことができ、これにより潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を抑制する。ただし、免疫抑制療法は薬剤依存性が高く、長期に亘る治療サイクルを要し、腎毒性と二次感染を引き起こし易いので、補助療法としてのみ使用することができる。
【0007】
したがって、炎症関連疾患、特に潰瘍性大腸炎の治療に安全且つ有効な薬剤は存在しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本願の目的は、組成物及びその使用を提供することである。本願は、以下の技術的解決策を提案する。
【0009】
本願の一態様において、いくつかの実施形態では、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ及び／又はその代謝物と、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ及び／又はその代謝物とを含む組成物が提供される。
【0010】
本願の重要な点は、研究により、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せ投与が、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療することができ、特に潰瘍性大腸炎を効果的に予防又は治療できることを見出したことにある点に留意されたい。研究によれば、その予防又は治療効果は、以下の理由によって得られる。（１）Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓが、人体の腸内微小生態系（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｅｃｏｌｏｇｙ）を改善し、有益な細菌で構成される微小生態学的保護バリアを形成することによって、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療に対する有効性を示すこと、及び（２）Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓによって産生される代謝物が、炎症又は炎症関連疾患に対する予防又は治療を促進するプロバイオティック材料として機能できることである。したがって、本願で提案される組成物の重要な目的は、炎症又は炎症関連疾患、特に潰瘍性大腸炎又はその関連疾患を予防又は治療することである。
【0011】
一実施形態では、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとを含む組成物は、これらの２種類の細菌がヒトの腸内微小生態系を改善するので、有益な細菌で構成される生態学的保護バリアを形成することができ、これにより潰瘍性大腸炎の予防又は治療に対する有効性を示すことにも留意されたい。ヒトの腸内微小生態系の改善は、潰瘍性大腸炎だけでなく、一般的な腸炎、胃炎などの腸内微小生態系に関連する他の疾患に対しても予防又は治療効果を発揮することができることが理解できる。したがって、本願で提案される組成物は、炎症又は炎症関連疾患の予防又は治療に有用であり得る。
【0012】
好ましくは、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓは、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９３のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣであり、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓは、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００８７のＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６である。
【0013】
本願の重要な点は、研究により、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せ投与が、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療できることを見出したことにあり、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６が、研究において発見された最も有効な細菌の２株であるので、これらの２株を更に別々に寄託した点に留意されたい。一方、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ種又はＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ種に属し、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の組合せによって達成される有効性に到達する又は更にこれを超えることができる他の株も、本願の概念の範囲内で適用され得ることが理解できる。他方、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ種又はＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ種に属し、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の組合せによって達成される有効性に到達できない他の株も、本願の概念の範囲内で適用され得る。
【0014】
好ましくは、組成物は、更に、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ及び／又はその代謝物を含む。
【0015】
好ましくは、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓは、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９０のＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６である。
【0016】
好ましくは、組成物は、更に、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ及び／又はその代謝物を含む。
【0017】
好ましくは、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓは、寄託番号ＤＳＭ １６８４１のＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１である。
【0018】
好ましくは、組成物は、更に、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ及び／又はその代謝物を含む。
【0019】
好ましくは、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉは、寄託番号ＣＧＭＣＣ １０９８４のＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１である。
【0020】
好ましくは、組成物は、更に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ及び／又はその代謝物、ならびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ及び／又はその代謝物を含む。
【0021】
好ましくは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉは、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９２のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１であり、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓは、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９１のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１である。
【0022】
本願の研究により、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せ投与が、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療できるだけでなく、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せの有効性に影響を及ぼすことなく、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ、又はＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉを組成物に含有させることもできる、又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉとＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓを組成物に含有させることもできることが示された点に留意されたい。前記組合せスキームはいずれも、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療するのに十分である。
【0023】
好ましくは、組成物は、更に、プロバイオティクス及び／又はプレバイオティクスを含む。
【0024】
本願の重要な点は、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せ投与が、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療することができることにある点に留意されたい。Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せの有効性に影響を及ぼすことなく、プロバイオティクス又はプレバイオティクスを添加することができ、組成物がより多くの機能又は強化された有効性を有することができることを理解することができる。これらのプロバイオティクス又はプレバイオティクスは、既存の研究で報告されているプロバイオティクス又はプレバイオティクスであるができ、本明細書では特に限定されない。
【0025】
好ましくは、一実施形態では、プレバイオティクスは、フルクトオリゴサッカライド（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴサッカライド（ＧＯＳ）、キシロオリゴサッカライド（ＸＯＳ）、ラクトスクロース（ＬＡＣＴ）、大豆オリゴサッカライド（ＳＯＳ）、イヌリン、及びオリゴサッカライドからなる群から選択される少なくとも１つである。
【0026】
好ましくは、組成物は、更に、菌の少なくとも１つの生存率を維持することができる物質を含む。
【0027】
組成物中の各菌株の生存率を維持し、その有効性を確実にするために、菌株の生存率を維持することができる各種物質も、組成物に添加することができることが理解される。前記したこれらの物質は、既存の研究で報告されている生存率維持物質であることができるが、本明細書では特に限定されない。
【0028】
好ましくは、実施形態では、菌の少なくとも１つの生存率を維持することができる物質は、システイン、グルタチオン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ジブチルメチルトルエン、トコフェロール、竹の葉の抗酸化剤、Ｄ－イソアスコルビン酸又はそのナトリウム塩、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、リン脂質、ビタミンＣ、及びビタミンＥからなる群から選択される少なくとも１つである。
【0029】
好ましくは、組成物は、更に、薬学的に又は食品として許容される担体又は賦形剤を含む。
【0030】
本願の組成物は、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療するという有効性を有する点に留意されたい。一実施形態では、予防又は治療効果は、主に、組成物を経口投与することによって達成される。しがって、組成物はまた、使用時の利便性のために、薬学的に又は食品として許容される担体又は賦形剤を含むことができる。
【0031】
好ましくは、薬学的に又は食品として許容される担体又は賦形剤は、グルコース、ラクトース、スクロース、デンプン、マンニトール、デキストリン、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、及び生理食塩水から選択される少なくとも１つである。
【0032】
別の態様において、いくつかの実施形態では、炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造における組成物の使用が提供される。
【0033】
本願の組成物は、炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療するという有効性を有すると理解することができる。使用時の利便性のために、組成物を、食品、健康製品、食品添加物、又は医薬に製することができる。
【0034】
好ましくは、組成物は、特に、潰瘍性大腸炎又は関連疾患を治療又は予防するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造に有用であり得る。
【0035】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、哺乳動物の体重減少を制御するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造における組成物の使用が提供される。
【0036】
哺乳動物の体重減少は、特に、炎症によって引き起こされる。
【0037】
好ましくは、炎症は潰瘍性大腸炎である。即ち、潰瘍性大腸炎によって引き起こされる哺乳動物の体重減少が制御される。
【0038】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させるための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造における組成物の使用が提供される。
【0039】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、哺乳動物の腸管病変を改善するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造における組成物の使用が提供される。
【0040】
組成物による炎症又は炎症関連疾患を予防又は治療するという有効性は、炎症又は炎症関連疾患によって引き起こされる体重減少を制御すること、炎症又は炎症関連疾患による疾患活動性指数を低下させること、及び哺乳動物の腸管病変を改善することに、主に反映される点に留意されたい。したがって、本願の組成物はまた、哺乳動物の体重減少を制御する、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させる、又は哺乳動物の腸管病変を改善するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の調製に単独で使用することもできる。
【0041】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を投与することを含む、炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防するための方法が提供される。
【0042】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を投与することを含む、哺乳動物の体重減少を制御するための方法が提供される。
【0043】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を投与することを含む、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させるための方法が提供される。
【0044】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を投与することを含む、哺乳動物の腸管病変を改善するための方法が提供される。
【0045】
前記した様々な方法において、炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防する、哺乳動物の体重減少を制御する、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させる、又は哺乳動物の腸病理を改善するために、組成物は主に経口投与される点に留意されたい。
【0046】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を含む食品が提供される。
【0047】
好ましくは、食品は、乳酸飲料又は豆乳飲料である。本願における食品とは、広義には、任意の形態の可食性製品であり、乳酸飲料又は豆乳飲料に限定されない。例えば、食品は、発酵食品、動物用飼料などであることができる。
【0048】
前記した食品は、本願の組成物を含むので、炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防すること、哺乳動物の体重減少を制御すること、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させること、哺乳動物の腸管病変を改善することに対して効果を発揮することができる点に留意されたい。本願の食品の要点は、それに含有される本願の組成物であり、固体、液体などの具体的な形態は、各種食品又は使用要件に応じて決めることができ、本明細書では特に限定されないことが理解できる。実施形態では、本願の組成物は、主に、飲料用に便利な一般的な乳酸飲料又は豆乳飲料にされる。本願の組成物は、ミルクスライス、チーズバーなどの固形食品としてもよく、本明細書では特に限定されない。
【0049】
また、食品又はその投与量に含まれる有効なＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓの量は、本明細書では特に限定されず、実用上の実際のニーズに応じて柔軟に選択することができることに留意されたい。Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を例にすると、本願の研究では、組成物中のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の濃度が１０９ｃｆｕ／ｍＬである組成物の投与量が日量０．２ｍＬであるとき、潰瘍性大腸炎に対する優れた治療効果を達成することができることが示されている。この菌濃度又は投与量は、食品、健康製品、食品添加物、又は医薬のそれぞれの参照使用量又は参照投与量として使用できる。
【0050】
更なる態様において、いくつかでは、組成物を含むヘルスケア製品が提供される。
【0051】
前記した健康製品は、本願の組成物を含むので、炎症又は炎症関連疾患を治療又は予防すること、哺乳動物の体重減少を制御すること、哺乳動物の疾患活動性指数を低下させること、哺乳動物の腸管病変を改善することに対して効果を発揮することができる点に留意されたい。
【0052】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を含む食品添加物が提供される。
【0053】
本願の組成物は、一般的な食品素材と共に摂取されることができることに留意されたい。例えば、一般的な食品素材としては、米、麺、種々の穀物などのシリアル及びポテト（ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、スイートポテト（Ｉｐｏｍｏｅａ ｂａｔａｔａｓ）などのポテト；肉、鶏肉、魚、牛乳、卵などの動物食品；大豆及びその他の乾燥豆などの豆及びその製品；新鮮な豆、根茎、葉物野菜、ナス科野菜などの野菜及び果物；動物油又は植物油、デンプン、食用糖、アルコールなどの純粋に熱エネルギーを生成する食品が挙げられる。したがって、本願の組成物は、食品添加物、即ち、直接使用のための様々な食品素材に添加される単独の調整剤として用いることができるので、炎症又は炎症関連疾患の治療又は予防に対して効果を示す。
【0054】
更なる態様において、いくつかの実施形態では、組成物を含む医薬が提供される。
【0055】
好ましくは、医薬は、錠剤、顆粒、粉剤、腸溶性コーティング剤、溶液、又は懸濁液の形態である。
【0056】
前記した医薬は、本願の組成物を含むので、炎症又は炎症関連疾患の治療又は予防に対して効果を発揮することに留意されたい。本願の医薬は、本願の単一組成物であってもよいし、互いの活性に影響を及ぼさない限り、他の抗炎症剤と組み合わせてもよい。本願の医薬は、医薬中の組成物の各株の活性が影響されない限り、様々な既存剤型を有することができることが理解できる。更に、本願の医薬は、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、接着剤、等張化剤などの、医薬又は投与形態で一般的に有用な賦形剤を含むことができる。
【0057】
本願の医薬は、経口液体、錠剤、注射、経口崩壊錠剤、凍結乾燥粉末製剤、又は腸溶性コーティング剤から選択される任意の形態として投与することができる。好ましくは、医薬の有効成分（即ち、細菌成分）が胃酸によって分解されることなくスムーズに胃を通過できるように、医薬は、腸溶性コーティングカプセル又は腸溶性コーティング錠剤などの腸溶性コーティング剤である。より好ましくは、医薬は、経口使用のために腸溶性コーティング錠剤である。
【0058】
本願における腸溶性コーティング剤とは、胃液中では崩壊しないが、腸液中で崩壊、吸収され得る医薬剤型を意味する。腸溶性コーティング剤としては、腸溶性コーティングカプセル及び腸溶性コーティング錠剤が挙げられる。腸溶性コーティングカプセルは、通常の医薬で認められているカプセルシェル中に粉末状医薬を封入することによって形成される。腸溶性コーティング錠剤は、錠剤形態の通常の医薬の表面を腸溶性コーティングで覆うことによって形成される。本願における「腸溶性コーティング」は、「コーティング」と略され、胃酸で分解されないが、小腸で完全に分解され、本願の医薬を迅速に放出することができる、通常の医薬で認められている全てのコーティングを含む。例えば、本願のコーティングは、ｐＨ＝１の塩酸溶液などの合成胃酸中で、３６～３８℃で２時間より長い時間維持されることができ、好ましくは、１時間以内にｐＨ＝７．０の緩衝溶液などの合成腸液中で分解される。
【0059】
好ましくは、本願の腸溶性コーティング錠剤の腸溶性コーティングの厚みは、５～１００μｍであり、好ましくは２０～８０μｍである。腸溶性コーティングの成分は、公知の従来材料から選択される。
【0060】
本願の医薬の組成物におけの各種活性菌の量又はその投与量は、特に限定されず、実際に投与される対象の健康状態に応じて柔軟に選択することができる。しかし、本願の研究では、組成物中のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の濃度が１０９ｃｆｕ／ｍＬである組成物の投与量が日量０．２ｍＬであるとき、潰瘍性大腸炎に対する優れた治療効果を達成することができることが示されている。この菌濃度又は投与量は、医薬の参照使用量として使用できる。
【0061】
本願は、以下の有益な効果を達成した。
【0062】
Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓの組合せを含有させることによる、本願の組成物は、炎症又は炎症関連疾患、特に潰瘍性大腸炎の予防又は治療に対して優れた有効性を発揮することができる。したがって、本願は、安全且つ有効で、毒性及び副作用が少なく、耐性を生じさせにくい新たな組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0063】
【0064】
本願のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣは、２０１６年１０月１３日にＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９３である。寄託場所は、中国広東省広東市西安道中道１００号にある広東省微生物研究所（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｎｏ． １００ Ｘｉａｎｌｉｅ Ｚｈｏｎｇ Ｒｏａｄ、Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ、 ＰＲ Ｃｈｉｎａ）の実験棟の５階に位置する。
【0065】
本願のＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６は、２０１６年１０月１３日にＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００８７である。寄託場所は、中国広東省広東市西安道中道１００号にある広東省微生物研究所の実験棟の５階に位置する。
【0066】
本願のＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６は、２０１６年１０月１３日にＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９０である。寄託場所は、中国広東省広東市西安道中道１００号にある広東省微生物研究所の実験棟の５階に位置する。
【0067】
Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓから購入した。
【0068】
本願のＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１は、２０１５年６月１６日にＣｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＣＧＭＣＣ １０９８４である。寄託場所は、北京チャオヤン地区北城西路３号、パーク１、中国科学アカデミー微生物学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎｏ．３、Ｐａｒｋ １、Ｂｅｉｃｈｅｎ Ｗｅｓｔ Ｒｏａｄ、Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｂｅｉｊｉｎｇ）に位置する。
【0069】
本願のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１は、２０１６年１０月１３日にＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９２である。寄託場所は、中国広東省広東市西安道中道１００号にある広東省微生物研究所の実験棟の５階に位置する。
【0070】
本願のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１は、２０１６年１０月１３日にＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託され、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９１である。寄託場所は、中国広東省広東市西安道中道１００号にある広東省微生物研究所の実験棟の５階に位置する。
【発明を実施するための形態】
【0071】
腸内微小生態系の詳細な研究により、潰瘍性大腸炎の発症は、腸内微生物の組成と密接に関連していることが分かった。腸内細菌の不均衡は、腸粘膜の炎症と密接に関連しており、有害な細菌の過剰増殖が炎症を引き起こすことがあるので、潰瘍性大腸炎の発症を誘発する。健康なヒトの腸には多数の有益な細菌が存在し、これらの有益な細菌は腸の最初の生物学的バリアを構成する。
【0072】
前記した研究と知見に基づき、本願は、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ及び／又はその代謝物とＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ及び／又はその代謝物とを含む新たな組成物を開発、提案する。本願の組成物は、潰瘍性大腸炎だけでなく、一般的な腸炎、胃炎などの腸内微小生態系に関連する他の疾患に対しても予防又は治療効果を有することができる。したがって、本願で提案される組成物は、炎症又は炎症関連疾患の予防又は治療に有用であり得る。
【0073】
一実施形態によれば、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００９３のＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣと、寄託番号ＧＤＭＣＣ ６００８７のＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６とを含む組成物は、米国のＡＬＦＡＳＩＧＭＡ社が製造するＶＳＬ＃３プロバイオティクス化合物よりも潰瘍性大腸炎の治療効果が優れており、本願組成物が、炎症や関連疾患を治療又は予防するための食品、健康製品、食品添加物、又は医薬の製造に有用であり得ることを示している。
【0074】
以下、具体的な実施形態によって、本願を更に詳細に説明する。以下の実施例は、本願を更に説明するためのものであるに過ぎず、本願を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【0075】
実施例１
この実施例では、３６０００～５００００Ｄａの分子量を有するデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳと略記）によって誘発された潰瘍性大腸炎のマウスモデルを、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６とを含む組成物の潰瘍性大腸炎に対する治療効果を研究するための研究対象として用いた。更に、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６との組成物を、各種プロバイオティクスを組み合わせて適用する。添加されるプロバイオティクスは、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を含む。以下に、実施例を詳細に説明する。
この実施例では、３６０００～５００００Ｄａの分子量を有するデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳと略記）によって誘発された潰瘍性大腸炎のマウスモデルを、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６とを含む組成物の潰瘍性大腸炎に対する治療効果を研究するための研究対象として用いた。更に、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６との組成物を、各種プロバイオティクスを組み合わせて適用する。添加されるプロバイオティクスは、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を含む。以下に、実施例を詳細に説明する。
【0076】
１． 材料及び方法
１．１ 株の培養及び同定
１．１．１ Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ
この実施例において、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣを、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＦ２４－２８ＡＣ株のコロニーは淡黄色で扁平であり、不規則な波状の縁を有し、含水量が少なく、直径が約２～３ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状でグラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣを、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９３である。
１．１ 株の培養及び同定
１．１．１ Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ
この実施例において、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣを、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＦ２４－２８ＡＣ株のコロニーは淡黄色で扁平であり、不規則な波状の縁を有し、含水量が少なく、直径が約２～３ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状でグラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣを、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９３である。
【0077】
Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの具体的な単離及び同定ステップは、以下の通りである。
１．１．１．１ 株の分離と培養
サンプルを、健康な女性の糞便から得た。勾配希釈塗抹法によって株を分離した。培養培地は、嫌気性培養用のＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。嫌気性ガス成分は、Ｎ２：ＣＯ２：Ｈ２＝９０：５：５とした。４８時間培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一細菌の純粋培養物を得た。
１．１．１．１ 株の分離と培養
サンプルを、健康な女性の糞便から得た。勾配希釈塗抹法によって株を分離した。培養培地は、嫌気性培養用のＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。嫌気性ガス成分は、Ｎ２：ＣＯ２：Ｈ２＝９０：５：５とした。４８時間培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一細菌の純粋培養物を得た。
【0078】
１．１．１．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを用いてＰＣＲ増幅した。得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを用いてＰＣＲ増幅した。得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
【0079】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列のＰＣＲ増幅系は、１０×ＰＣＲバッファー ３μＬ、ｄＮＴＰ ２．５μＬ、上流プライマー２７Ｆ ０．５μＬ、下流プライマー１４９２Ｒ ０．５μＬ、Ｔａｑ酵素 ０．３μＬ、テンプレート １μＬ、ｄｄＨ２Ｏ １８．２μＬを含む。
【0080】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の増幅条件は、以下の通りである。
【0081】
増幅条件のうち、「６５℃－５７℃ ４０秒間」は、各サイクル後に温度が比例的に低下することを意味する。より具体的には、１回目のサイクルのアニーリング温度は、６５℃であり、２０回目のサイクルで、アニーリング温度は５７℃に低下する。
【0082】
この実施例における１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーの上流プライマーは、プライマー２７ｆであり、配列番号１の配列のものである。
１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーの下流プライマーは、プライマー１４９２ｒであり、配列番号２の配列のものである。
配列番号１：５’－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣＡＧ－３’
配列番号２：５’－ＴＡＧＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ－３’
１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーの下流プライマーは、プライマー１４９２ｒであり、配列番号２の配列のものである。
配列番号１：５’－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣＡＧ－３’
配列番号２：５’－ＴＡＧＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ－３’
【0083】
単離された株ＡＦ２４－２８ＡＣの得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列は、配列番号３の配列である。ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースによるアラインメント結果から、この実施例で単離したＡＦ２４－２８ＡＣ株は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓから購入したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＤＳＭ １９３４３と最も高い相同性を有することが示され、相同性は９９．０９％であった。したがって、ＡＦ２４－２８ＡＣ株を、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ種に属すると判断し、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣと命名し、寄託した。
【0084】
１．１．２ Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６
この実施例において、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＭ２５－６株のコロニーは淡黄色で針状であり、コロニーのサイズは小さく、直径は約０．５ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状でグラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００８７である。
この実施例において、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＭ２５－６株のコロニーは淡黄色で針状であり、コロニーのサイズは小さく、直径は約０．５ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状でグラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００８７である。
【0085】
Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の具体的な単離及び同定ステップは、以下の通りである。
１．１．２．１ 株の分離と培養
サンプルを、健康な男性の便から採取し、滅菌サンプルチューブに移し、１時間以内に選別のために実験室に戻した。採取した新鮮なサンプルを直ちに嫌気性操作ボックスに移した後、０．２ｇのサンプルを１ｍＬの滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳと略記）に懸濁させ、十分に振とう混合する。株を、勾配希釈塗抹法で分離した。培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。コーティングしたプレートを嫌気性培養のために３７℃に置いた。嫌気性ガス成分は、Ｎ２：ＣＯ２：Ｈ２＝９０：５：５である。３日間の培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一株の純粋培養物を得た。得られた単一株を、細菌濃度が約１０９ｃｆｕ／ｍＬに達するまで更に培養し、４００μＬの菌液を、グリセロール濃度が２０％となるように４００μＬの４０％グリセロールに添加した後、－８０℃で超低温保存した。
１．１．２．１ 株の分離と培養
サンプルを、健康な男性の便から採取し、滅菌サンプルチューブに移し、１時間以内に選別のために実験室に戻した。採取した新鮮なサンプルを直ちに嫌気性操作ボックスに移した後、０．２ｇのサンプルを１ｍＬの滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳと略記）に懸濁させ、十分に振とう混合する。株を、勾配希釈塗抹法で分離した。培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。コーティングしたプレートを嫌気性培養のために３７℃に置いた。嫌気性ガス成分は、Ｎ２：ＣＯ２：Ｈ２＝９０：５：５である。３日間の培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一株の純粋培養物を得た。得られた単一株を、細菌濃度が約１０９ｃｆｕ／ｍＬに達するまで更に培養し、４００μＬの菌液を、グリセロール濃度が２０％となるように４００μＬの４０％グリセロールに添加した後、－８０℃で超低温保存した。
【0086】
１．１．２．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを用いてＰＣＲ増幅した。得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを用いてＰＣＲ増幅した。得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
【0087】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列のための１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーとＰＣＲ増幅系は、「１．１．１．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」で記載したものと同じである。１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の増幅条件は、９５℃で４分間の前変性、その後の、９５℃で３０秒間の変性３０サイクル、５７℃で４０秒間のアニーリング、７２℃で９０秒間の伸長である。
【0088】
シークエンシングの結果から、単離された株ＡＭ２５－６の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列は、配列番号４の配列であることが示された。ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースによるアラインメント結果から、この実施例で単離したＡＭ２５－６株が、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓから購入したＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＤＳＭ １７２４４と最も高い相同性を有することが示され、相同性は９９．８６％であった。したがって、ＡＭ２５－６株を、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ種に属すると判断し、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６と命名し、寄託した。
【0089】
１．１．３ Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６
この実施例において、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０６－２６株のコロニーは、白色、凸状で、粘性があり、直径は約１～２ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状で、グラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９０である。
この実施例において、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、ペプトン酵母エキスグルコース（ＰＹＧ）培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０６－２６株のコロニーは、白色、凸状で、粘性があり、直径は約１～２ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状で、グラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９０である。
【0090】
Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６の具体的な単離及び同定ステップは、以下の通りである。
１．１．３．１ サンプル採取
この実験において、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、深センの健康な若い女性ボランティアの便サンプルから単離した。
１．１．３．１ サンプル採取
この実験において、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、深センの健康な若い女性ボランティアの便サンプルから単離した。
【0091】
１．１．３．２ 培養培地及びリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の調製
この実験における株の単離のための培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。ＰＹＧ培地の具体的成分は、ペプトン ５ｇ、トリプシンカゼイン ５ｇ、イーストパウダー １０ｇ、牛肉エキス ５ｇ、グルコース ５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（即ち、ポリソルベート８０） １ｍＬ、システイン－ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、ヘモグロビン ５ｍｇ、ビタミンＫ１ １μＬ、無機塩溶液 ４０ｍＬ、レサズリン １ｍｇ、蒸留水 ９５０ｍＬを含み、ｐＨ６．８～７．０に調整されている。滅菌条件は、１１５℃で２５分間のオートクレーブ滅菌である。固体培地を、嫌気性操作ボックス内の培養プレート上に入れた。このうち、１Ｌの無機塩溶液は、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．２５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ １ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ｇ、ＮａＨＣＯ３ １０ｇ、及びＮａＣｌ ２ｇを含む。
この実験における株の単離のための培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。ＰＹＧ培地の具体的成分は、ペプトン ５ｇ、トリプシンカゼイン ５ｇ、イーストパウダー １０ｇ、牛肉エキス ５ｇ、グルコース ５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（即ち、ポリソルベート８０） １ｍＬ、システイン－ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、ヘモグロビン ５ｍｇ、ビタミンＫ１ １μＬ、無機塩溶液 ４０ｍＬ、レサズリン １ｍｇ、蒸留水 ９５０ｍＬを含み、ｐＨ６．８～７．０に調整されている。滅菌条件は、１１５℃で２５分間のオートクレーブ滅菌である。固体培地を、嫌気性操作ボックス内の培養プレート上に入れた。このうち、１Ｌの無機塩溶液は、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．２５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ １ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ｇ、ＮａＨＣＯ３ １０ｇ、及びＮａＣｌ ２ｇを含む。
【0092】
ＰＢＳの調製：ＮａＣｌ ８ｇ、ＫＣｌ ０．２ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ ３．６３ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ０．２４ｇ、及び塩酸システイン ０．５ｇを秤量し、９００ｍＬの再蒸留水に溶解し、塩酸とＮａＯＨ溶液を用いてｐＨ７．４に調整し、水を１Ｌの一定量になるまで添加し、Ｎ２ガスを流入させて３０秒間脱酸素化し、溶液を嫌気性ボトル中に密封し、１１５℃で２５分間オートクレーブした後、使用した。
【0093】
１．１．３．３ 菌の分離
採取した新鮮な便サンプルを、直ちに嫌気性操作ボックスに移した後、約０．２ｇの便サンプルを滅菌ＰＢＳ溶液に懸濁させ、十分に混合した。嫌気性操作ボックス内の嫌気性ガス成分は、Ｎ２：Ｈ２：ＣＯ２＝９０：５：５（ｖ／ｖ）である。懸濁溶液を１０倍勾配で希釈し、培養培地を含む培養プレートに塗抹し、３７℃の嫌気性条件下で２日間培養した。２日間の培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一株の純粋培養物を得た後、グリセロール凍結保存又は真空凍結乾燥保存のため、－８０℃で保存した。
採取した新鮮な便サンプルを、直ちに嫌気性操作ボックスに移した後、約０．２ｇの便サンプルを滅菌ＰＢＳ溶液に懸濁させ、十分に混合した。嫌気性操作ボックス内の嫌気性ガス成分は、Ｎ２：Ｈ２：ＣＯ２＝９０：５：５（ｖ／ｖ）である。懸濁溶液を１０倍勾配で希釈し、培養培地を含む培養プレートに塗抹し、３７℃の嫌気性条件下で２日間培養した。２日間の培養後、単一コロニーを選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一株の純粋培養物を得た後、グリセロール凍結保存又は真空凍結乾燥保存のため、－８０℃で保存した。
【0094】
１．１．３．４ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定
単離した純粋培養株を１６Ｓ ｒＤＮＡのシークエンシングに付し、各株の分類情報を得た。単離した単一株をＰＹＧ液体培地中で、細菌濃度が約１０８ｃｆｕ／ｍｌに達するまで２４時間、更に培養した。各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、ゲノムＤＮＡをテンプレートとして用いることにより、１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅した。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
単離した純粋培養株を１６Ｓ ｒＤＮＡのシークエンシングに付し、各株の分類情報を得た。単離した単一株をＰＹＧ液体培地中で、細菌濃度が約１０８ｃｆｕ／ｍｌに達するまで２４時間、更に培養した。各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、ゲノムＤＮＡをテンプレートとして用いることにより、１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅した。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を電気泳動で検出、精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングし、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を、株の同定のため、ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースにアラインした。
【0095】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマー及びＰＣＲ増幅系は、「１．１．１．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の増幅条件は、「１．１．２．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。
【0096】
シークエンシングの結果から、単離された株ＴＦ０６－２６の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列は、配列番号５の配列であることが示された。ＥＺＢｉｏＣｌｏｕｄデータベースによるアラインメント結果は、この実施例で単離されたＴＦ０６－２６株が、Ｊａｐａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓから購入したＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ ＪＣＭ １０１８８と最も高い相同性を有することを示した。
【0097】
１．１．３．５ ＴＦ０６－２６の生理学的及び生化学的特性
ＴＦ０６－２６株は、カタラーゼ陰性、オキシダーゼ陰性、非運動性である。ＴＦ０６－２６株では、成長温度範囲は２５～４５℃、成長ｐＨ値範囲は５．０～８．０、ＮａＣｌ耐性濃度は２％、胆汁塩耐性濃度は０．３％である。ＴＦ０６－２６株及びＪａｐａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓから購入した関連参照株Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ ＪＣＭ １０１８８の基質利用性、ＡＰＩ ２０Ａ及びＡＰＩ ５０ＣＨＬ率を、表１に示す。表１中、「＋」は陽性反応、「－」は陰性反応、「ｗ」は弱い陽性反応を示す。
表１ ＴＦ０６－２６及びＪＣＭ １０１８８の基質利用性
ＴＦ０６－２６株は、カタラーゼ陰性、オキシダーゼ陰性、非運動性である。ＴＦ０６－２６株では、成長温度範囲は２５～４５℃、成長ｐＨ値範囲は５．０～８．０、ＮａＣｌ耐性濃度は２％、胆汁塩耐性濃度は０．３％である。ＴＦ０６－２６株及びＪａｐａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓから購入した関連参照株Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ ＪＣＭ １０１８８の基質利用性、ＡＰＩ ２０Ａ及びＡＰＩ ５０ＣＨＬ率を、表１に示す。表１中、「＋」は陽性反応、「－」は陰性反応、「ｗ」は弱い陽性反応を示す。
表１ ＴＦ０６－２６及びＪＣＭ １０１８８の基質利用性
【表1】
【0098】
表１におけるＴＦ０６－２６株及びＪＣＭ １０１８８株の炭素源利用性の比較によれば、ＴＦ０６－２６株及びＪＣＭ １０１８８株は、ラクトース、スクロース、サリチルアルコール、ガラクトース、フルクトース、マンノース、アルブチン、セロビオース、マルトース、メリビオース、トレハロース、及び２－ケトン－グルコネートの利用が大きく異なっており、ＴＦ０６－２６株及びＪＣＭ １０１８８株が異なる種に属するであろうことを示している。
【0099】
１．１．３．６ 新たな種ＴＦ０６－２６及び関連株ＪＣＭ １０１８８のゲノムハイブリダイゼーション試験
１６Ｓ ｒＤＮＡアラインメント結果を参照すると、ＴＦ０６－２６株は、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ ＪＣＭ １０１８８と最も高い相同性を有し、相同性は、９９．９％であった。更に、ＴＦ０６－２６とＪＣＭ １０１８８とを種レベルで識別するために、ゲノムハイブリダイゼーション試験を行った。
１６Ｓ ｒＤＮＡアラインメント結果を参照すると、ＴＦ０６－２６株は、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ ＪＣＭ １０１８８と最も高い相同性を有し、相同性は、９９．９％であった。更に、ＴＦ０６－２６とＪＣＭ １０１８８とを種レベルで識別するために、ゲノムハイブリダイゼーション試験を行った。
【0100】
ＤＮＡハイブリダイゼーションの結果から、ＴＦ０６－２６とＪＣＭ １０１８８の相同性が５１％であることが示された。「Ｂｅｒｇｅｒ’ｓ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｎｕａｌ」によれば、７０％を超えるＤＮＡハイブリダイゼーション値を有する２つ株は、同一の種であると判断できる。ＴＦ０６－２６とＪＣＭ １０１８８のＤＮＡハイブリダイゼーション値は７０％未満であるため、ＴＦ０６－２６は、既知の細菌とは異なる新たな株であると判断される。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＢＳＰ）の細菌命名規則によれば、この新たな株を、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ｓｐ．ｎｏｖと命名した。ＴＦ０６－２６株（即ち、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６）を、この種のモデル株として使用し、これを寄託した。
【0101】
１．１．４ Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１
この実施例において、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を、嫌気性ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＤＳＭ １６８４１株のコロニーは、淡黄色で直径約１ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状で、グラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＤＳＭＺ）から購入し、寄託番号は、ＤＳＭ １６８４１である。
この実施例において、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を、嫌気性ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＤＳＭ １６８４１株のコロニーは、淡黄色で直径約１ｍｍである。細菌の微視的形態は、短い棒状で、グラム陰性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１は、Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＤＳＭＺ）から購入し、寄託番号は、ＤＳＭ １６８４１である。
【0102】
１．１．５ Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１
この実施例において、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を、嫌気性ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０１－１１株のコロニーは、オフホワイトで、不透明、平滑であり、偽根の様な不規則な縁を有し、直径は約２ｍｍである。グラム染色と顕微鏡観察による細菌の微視的形態は、長い棒状で、運動性であり、鞭毛を有し、胞子は生成しない。細菌の直径は約０．５～１．０ｍｍ、長さは約２．０～８．０ｍｍである。Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１は、Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＧＭＣＣ）から得られ、寄託されており、寄託番号は、ＣＧＭＣＣ １０９８４である。
この実施例において、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を、嫌気性ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０１－１１株のコロニーは、オフホワイトで、不透明、平滑であり、偽根の様な不規則な縁を有し、直径は約２ｍｍである。グラム染色と顕微鏡観察による細菌の微視的形態は、長い棒状で、運動性であり、鞭毛を有し、胞子は生成しない。細菌の直径は約０．５～１．０ｍｍ、長さは約２．０～８．０ｍｍである。Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１は、Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＧＭＣＣ）から得られ、寄託されており、寄託番号は、ＣＧＭＣＣ １０９８４である。
【0103】
１．１．６ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１
この実施例において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１を、ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０８－１株のコロニーは、白色、低凸状で、略丸形、波状の縁であり、直径は約１～２ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状で、グラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９２である。
この実施例において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１を、ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＴＦ０８－１株のコロニーは、白色、低凸状で、略丸形、波状の縁であり、直径は約１～２ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状で、グラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９２である。
【0104】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１の具体的な単離及び同定ステップは、以下の通りである。
１．６．１．１ サンプル採取
この実験におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１は、広東省深センの１６歳の健康な女性ボランティアの便サンプルから得た。このボランティアの食事と体調を詳細に記録した。
１．６．１．１ サンプル採取
この実験におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１は、広東省深センの１６歳の健康な女性ボランティアの便サンプルから得た。このボランティアの食事と体調を詳細に記録した。
【0105】
１．１．６．２ 株の分離と培養
株単離用の培養培地を予め調製した。この実験における培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。ＰＹＧ培地の具体的成分は、ペプトン ５ｇ、トリプシンカゼイン ５ｇ、イーストパウダー １０ｇ、牛肉エキス ５ｇ、グルコース ５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（即ち、ポリソルベート８０） １ｍＬ、システイン－ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、硫化ナトリウム ０．２５ｇ、ヘモグロビン ５ｍｇ、ビタミンＫ１ １μＬ、無機塩溶液 ４０ｍＬ、レサズリン １ｍｇ、蒸留水 ９５０ｍＬを含み、ｐＨ６．８～７．０に調整されている。滅菌条件は、１１５℃で２５分間のオートクレーブ滅菌である。固形培地に１．５％寒天を添加し、嫌気性操作ボックス中の培養プレートに注いだ。１Ｌの無機塩溶液は、ＣａＣｌ２・２ Ｈ２Ｏ ０．２５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ １ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ｇ、ＮａＨＣＯ３ １０ｇ、及びＮａＣｌ ２ｇを含む。
株単離用の培養培地を予め調製した。この実験における培養培地は、ＨＵＡＮＫＡＩ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐａｎｙから購入したＰＹＧ培地とした。ＰＹＧ培地の具体的成分は、ペプトン ５ｇ、トリプシンカゼイン ５ｇ、イーストパウダー １０ｇ、牛肉エキス ５ｇ、グルコース ５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（即ち、ポリソルベート８０） １ｍＬ、システイン－ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、硫化ナトリウム ０．２５ｇ、ヘモグロビン ５ｍｇ、ビタミンＫ１ １μＬ、無機塩溶液 ４０ｍＬ、レサズリン １ｍｇ、蒸留水 ９５０ｍＬを含み、ｐＨ６．８～７．０に調整されている。滅菌条件は、１１５℃で２５分間のオートクレーブ滅菌である。固形培地に１．５％寒天を添加し、嫌気性操作ボックス中の培養プレートに注いだ。１Ｌの無機塩溶液は、ＣａＣｌ２・２ Ｈ２Ｏ ０．２５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ １ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ｇ、ＮａＨＣＯ３ １０ｇ、及びＮａＣｌ ２ｇを含む。
【0106】
採取した新鮮な便サンプルを嫌気性操作ボックスに移した後、０．２ｇの便サンプルを１ｍＬの滅菌ＰＢＳに懸濁し、十分に混合した。嫌気性操作ボックス中の嫌気性ガス成分は、Ｎ２：ＣＯ２：Ｈ２＝９０：５：５である。懸濁溶液を勾配希釈し、希釈溶液１００μＬを、培養培地を含む培養プレートに塗抹し、３７℃の嫌気性条件下で３～４日間培養した。３～４日間培養後、単一のコロニー選び、株の単離のために培養培地にストリーキングして、単一株の純粋培養物を得た後、同定及び機能検証を行った。
【0107】
１．１．６．３ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定
単離した純粋な培養株を、各株の分類情報を得るために１６Ｓ ｒＤＮＡのシークエンシングに付した。単離した単一株を、ＰＹＧ液体培地で２４時間更に培養した。菌液１ｍＬを１００００ｒ／ｍｉｎで５分間遠心分離し、単離株のゲノムＤＮＡの抽出のために、細菌細胞を回収した。テンプレートとしてのゲノムＤＮＡと１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを使用して、１６Ｓ ｒＤＮＡ配列のＰＣＲ増幅を行った。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングすることにより、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、株の同定のため、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＮＣＢＩデータベースにアラインした。
単離した純粋な培養株を、各株の分類情報を得るために１６Ｓ ｒＤＮＡのシークエンシングに付した。単離した単一株を、ＰＹＧ液体培地で２４時間更に培養した。菌液１ｍＬを１００００ｒ／ｍｉｎで５分間遠心分離し、単離株のゲノムＤＮＡの抽出のために、細菌細胞を回収した。テンプレートとしてのゲノムＤＮＡと１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを使用して、１６Ｓ ｒＤＮＡ配列のＰＣＲ増幅を行った。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングすることにより、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、株の同定のため、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＮＣＢＩデータベースにアラインした。
【0108】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマー及びＰＣＲ増幅系は、「１．１．１．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の増幅条件は、「１．１．２．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。
【0109】
シークエンシングの結果から、単離された株ＴＦ０８－１の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列は、配列番号６の配列であることが示された。ＮＣＢＩ ｂｌａｓｔによるアラインメント結果から、この実施例で単離されたＴＦ０８－１株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉと最も高い相同性を有し、相同性は、９９．９％であることが示された。したがって、ＴＦ０８－１を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ種に属すると判断し、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１と命名し、寄託した。
【0110】
１．１．７ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１
この実施例において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１は、ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＭ１３－１株のコロニーは、白色、凸状、粘性、不透明、円形、はっきりした縁を有し、直径は約２～３ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状で、グラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９１である。
この実施例において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１は、ＰＹＧ培地を使用して、３７℃の嫌気性条件で培養した。ＰＹＧ培地で２日間培養後のＡＭ１３－１株のコロニーは、白色、凸状、粘性、不透明、円形、はっきりした縁を有し、直径は約２～３ｍｍである。細菌の微視的形態は、棒状で、グラム陽性であり、胞子及び鞭毛を生成しない。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を、Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒに寄託し、寄託番号は、ＧＤＭＣＣ ６００９１である。
【0111】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１の具体的な単離及び同定ステップは、以下の通りである。
１．１．７．１ 株の分離及び培養
この実験におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１は、深センの健康な男性の便サンプルから単離した。株単離のステップは、以下の通りである。
（１）採取したサンプルを嫌気性操作ボックスに移した後、０．２ｇのサンプルを１ｍＬのＰＢＳ溶液に懸濁させ、十分に混合し勾配希釈した。
（２）希釈溶液１００μＬを、ＰＹＧ培地を含む培養プレート上に塗抹し、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性操作ボックス中の嫌気性ガス成分は、Ｎ２：Ｈ２：ＣＯ２＝９０：５：５である。ＰＹＧ培地は、「１．１．６．２ 株の分離及び培養」と同じである。
（３）４日間の培養後、培養プレートに生じた単一コロニーを選び、株の単離のため、培養培地にストリーキングした後、更に、３７℃の嫌気性条件で培養した。（４）得られた単一の株の純粋培養物を、グリセロール凍結保存又は真空凍結乾燥保存のため保存した。
１．１．７．１ 株の分離及び培養
この実験におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１は、深センの健康な男性の便サンプルから単離した。株単離のステップは、以下の通りである。
（１）採取したサンプルを嫌気性操作ボックスに移した後、０．２ｇのサンプルを１ｍＬのＰＢＳ溶液に懸濁させ、十分に混合し勾配希釈した。
（２）希釈溶液１００μＬを、ＰＹＧ培地を含む培養プレート上に塗抹し、３７℃の嫌気性条件で培養した。嫌気性操作ボックス中の嫌気性ガス成分は、Ｎ２：Ｈ２：ＣＯ２＝９０：５：５である。ＰＹＧ培地は、「１．１．６．２ 株の分離及び培養」と同じである。
（３）４日間の培養後、培養プレートに生じた単一コロニーを選び、株の単離のため、培養培地にストリーキングした後、更に、３７℃の嫌気性条件で培養した。（４）得られた単一の株の純粋培養物を、グリセロール凍結保存又は真空凍結乾燥保存のため保存した。
【0112】
１．１．７．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、テンプレートとしてのゲノムＤＮＡと１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを使用して、ＰＣＲ増幅を行った。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングすることにより、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、株の同定のため、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＮＣＢＩデータベースにアラインした。
各単離株のゲノムＤＮＡを抽出した後、テンプレートとしてのゲノムＤＮＡと１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマーを使用して、ＰＣＲ増幅を行った。１６Ｓ ｒＤＮＡ増幅産物を精製し、３７３０シークエンサーでシークエンシングすることにより、対応する株の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を得た。その後、株の同定のため、得られた１６Ｓ ｒＤＮＡ配列をＮＣＢＩデータベースにアラインした。
【0113】
１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の１６Ｓ ｒＤＮＡユニバーサルプライマー及びＰＣＲ増幅系は、「１．１．１．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。１６Ｓ ｒＤＮＡ配列の増幅条件は、「１．１．２．２ 株の１６Ｓ ｒＤＮＡの同定」と同じである。
【0114】
シークエンシングの結果から、単離された株ＡＭ１３－１の１６Ｓ ｒＤＮＡ配列は、配列番号７の配列であることが示された。ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔによるアラインメント結果から、この実施例で単離されたＡＭ１３－１株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓと最も高い相同性を有し、相同性は、１００％であることが示された。したがって、ＡＭ１３－１株を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ種に属すると判断し、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１と命名し、寄託した。
【0115】
１．２． マウスモデル
この実施例で選択したマウスモデルは、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ、分子量３６０００～５００００）によって誘発された潰瘍性大腸炎マウスモデルとした。
この実施例で選択したマウスモデルは、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ、分子量３６０００～５００００）によって誘発された潰瘍性大腸炎マウスモデルとした。
【0116】
具体的には、Ｈｕｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒから購入したＣ５７ｂｌ／６マウス系統を用いた。８４頭のマウスは８週齢であり、体重２０ｇ±２ｇで、ＳＰＦレベルのマウスハウス環境で飼育した。８４頭のマウスを無作為に７群に分け、フォローアップ実験のために各グループに１２頭のマウスを割り当てた。
【0117】
ＤＳＳモデリング：潰瘍性大腸炎マウスモデルを得るために、０．１５％のＤＳＳを各マウスに７日間与えた。
【0118】
１．３． 試験方法
８４頭のマウスを無作為に、各群１２頭の７群に分けた。７群は、それぞれ、正常群（即ち、コントロール群）、モデル群、組成物処理群、細菌組合せ１処理群、細菌組合せ２処理群、細菌組合せ３処理群、細菌組合せ４処理群、及びＶＳＬ＃３処理群である。７群は、具体的に以下のように処理した。
正常群（即ち、コントロール群）：各マウスに通常飼料を給餌し、１日当たり０．２ｍＬのＰＢＳバッファーを与えた。
モデル群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えると共に、１日当たり０．２ｍＬのＰＢＳバッファーを与えることによりＤＳＳモデリングを行った。
組成物処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの組成物細菌溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、組成物細菌溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ１処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ１溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ１溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ２処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ２溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ２溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ３処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ３溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ３溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ４処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ４溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ４溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
ＶＳＬ＃３処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬのＶＳＬ＃３溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、ＶＳＬ＃３溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
８４頭のマウスを無作為に、各群１２頭の７群に分けた。７群は、それぞれ、正常群（即ち、コントロール群）、モデル群、組成物処理群、細菌組合せ１処理群、細菌組合せ２処理群、細菌組合せ３処理群、細菌組合せ４処理群、及びＶＳＬ＃３処理群である。７群は、具体的に以下のように処理した。
正常群（即ち、コントロール群）：各マウスに通常飼料を給餌し、１日当たり０．２ｍＬのＰＢＳバッファーを与えた。
モデル群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えると共に、１日当たり０．２ｍＬのＰＢＳバッファーを与えることによりＤＳＳモデリングを行った。
組成物処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの組成物細菌溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、組成物細菌溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ１処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ１溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ１溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ２処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ２溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ２溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ３処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ３溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ３溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
細菌組合せ４処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬの細菌組合せ４溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、細菌組合せ４溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
ＶＳＬ＃３処理群：各マウスに同じ通常飼料を給餌し、ＤＳＳモデリング前の３日間毎日、０．２ｍＬのＶＳＬ＃３溶液を胃内投与した。ＤＳＳをマウスの飲用水にＤＳＳ最終濃度０．１５％で添加し、ＤＳＳ含有水を７日間マウスに与えることによりＤＳＳモデリングを行うと共に、ＤＳＳモデリング期間中、毎日、ＶＳＬ＃３溶液０．２ｍＬを胃内投与した。
【0119】
組成物細菌溶液、細菌組合せ１溶液、細菌組合せ２溶液、細菌組合せ３溶液、及び細菌組合せ４溶液は、それぞれ以下のステップによって調製した。
Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１をそれぞれ２４時間培養し、細菌細胞を遠心分離により回収した後、ＰＢＳバッファーに懸濁して、細菌懸濁液の更なる調製のために濃度を１０９ｃｆｕ／ｍＬに調整した。
Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１をそれぞれ２４時間培養し、細菌細胞を遠心分離により回収した後、ＰＢＳバッファーに懸濁して、細菌懸濁液の更なる調製のために濃度を１０９ｃｆｕ／ｍＬに調整した。
【0120】
組成物細菌溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液を等量混合して、組成物細菌溶液を得た。
細菌組合せ１溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ１溶液を得た。
細菌組合せ２溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ２溶液を得た。
細菌組合せ３溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ３溶液を得た。
細菌組合せ４溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ４溶液を得た。
細菌組合せ１溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ１溶液を得た。
細菌組合せ２溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ２溶液を得た。
細菌組合せ３溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ３溶液を得た。
細菌組合せ４溶液：Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣの細菌懸濁液、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６の細菌懸濁液、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１の細菌懸濁液を等量混合して、細菌組合せ４溶液を得た。
【0121】
ＶＳＬ＃３細菌溶液は、以下のステップによって調製した。
ＶＳＬ＃３は、米国のＡＬＦＡＳＩＧＭＡから購入したもので、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓを含む８種類の有用細菌を含むプロバイオティックス化合物である。ＶＳＬ＃３をＰＢＳバッファーで懸濁し、濃度を１０９ｃｆｕ／ｍＬに調整して、ＶＳＬ＃３細菌溶液を得た。
ＶＳＬ＃３は、米国のＡＬＦＡＳＩＧＭＡから購入したもので、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ、及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓを含む８種類の有用細菌を含むプロバイオティックス化合物である。ＶＳＬ＃３をＰＢＳバッファーで懸濁し、濃度を１０９ｃｆｕ／ｍＬに調整して、ＶＳＬ＃３細菌溶液を得た。
【0122】
ＤＳＳモデルの確立後、マウスの体重、飲食を毎日記録し、マウスの糞便性状と潜血を同時に観察した。マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩと略記）を、１日間目、３日間目、５日間目、及び７日間目に計算した。ＤＡＩスコアリング基準の詳細を表２に示す。実験終了後、全てのマウスを屠殺し、血液を採取し、断首し、結腸を採取し、撮像し、体重と結腸長さを測定した。結腸組織は－８０℃の冷蔵庫でパラホルムアルデヒド中に保存した。なお、正常群は、ＤＳＳモデルと同じ時間記録した。
表２ ＤＡＩ指数スコア表
表２ ＤＡＩ指数スコア表
【表2】
【0123】
表２中の「便の性状」について、「正常な便」は、便が有形であることを意味し、「緩い便」は、便が粘性で半有形であるが肛門には付着しない便を意味し、「水様下痢」は、便が水様で、肛門に付着し得ることを意味する。表２中の「便潜血／視認可能な出血」において、「正常な便」は、潜血が陰性であることを意味し、「視認可能な出血」は、便が赤色又は茶色の血液を有することを意味し、「血液あり」は、血液を肉眼では視認できないがテトラメチルベンジジンで検出できることを意味する。ＤＡＩ指数は、「体重減少」、「便の性状」、及び「便潜血／視認可能な出血」の合計を意味する。
【0124】
【0125】
表３中、「コントロール」は正常群、「組成物」は組成物処理群、「細菌組合せ１」は細菌組合せ１処理群、「細菌組合せ２」は細菌組合せ２処理群、「細菌組合せ３」は細菌組合せ３処理群、「細菌組合せ４」は細菌組合せ４処理群、「ＶＳＬ＃３」はＶＳＬ＃３処理群を意味する。「＊」は、モデル群と正常群のマウス間の体重差の有意レベルがＰ＜０．０５であることを意味し、「＊＊」は、モデル群と正常群の間のマウス間の体重差の有意レベルがＰ＜０．０１であることを意味し、「▲」は、モデル群と「組成物」群、「細菌組合せ１」群、「細菌組合せ２」群、「細菌組合せ３」群、「細菌組合せ４」群、又は「ＶＳＬ＃３」群のマウス間の体重差の有意レベルがＰ＜０．０５であることを意味する。
【0126】
表３と図１の結果から、コントロール群のマウスの体重の増加は緩慢であり、一方、ＤＳＳによって誘発された７群のマウスの体重は減少を続けた。３日間目に、コントロール群と比較して、モデル群の体重が有意に減少し始めた（＊Ｐ＜０．０５）。７日間目に、モデル群とコントロール群との間の体重差はより有意となった（＊＊Ｐ＜０．０１）。組成物、細菌組合せ１、細菌組合せ２、細菌組合せ３、細菌組合せ４、又はＶＳＬ＃３の介入は、ＵＣマウスの体重減少を遅延させることが可能である。７日間目に、組成物、細菌組合せ１、細菌組合せ２、細菌組合せ３、細菌組合せ４、又はＶＳＬ＃３の各群のマウスの体重減少の抑制は、モデル群と比較して有意に制御された（▲Ｐ＜０．０５）。この結果は、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む組成物、並びに細菌組合せ１～４、及びＶＳＬ＃３がいずれも、ＵＣ疾患によって引き起こされる体重減少を制御できることを示す。７日間目に、組成物群（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む）並びに細菌組合せ１～４群のマウスの体重がＶＳＬ＃３よりも僅かに高く、このことは、組成物（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む）並びに細菌組合せ（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を他のプロバイオティクスと共に含む）が、ＵＣマウスの体重減少の制御に対してＶＳＬ＃３より優れた効果を達成できることを示す。
【0127】
１．４．２． ＤＡＩの変化
ＤＳＳ誘発ＵＣマウスのＤＡＩ指数は、体重減少、便の性状、及び便潜血の変化によって変化した。１日間目、３日間目、５日間目、及び７日間目のマウスのＤＡＩ指数の統計学的値を、表４及び図２に示す。表４中、各群のマウスのＤＡＩ指数を平均している。
表４ マウスのＤＡＩ値
ＤＳＳ誘発ＵＣマウスのＤＡＩ指数は、体重減少、便の性状、及び便潜血の変化によって変化した。１日間目、３日間目、５日間目、及び７日間目のマウスのＤＡＩ指数の統計学的値を、表４及び図２に示す。表４中、各群のマウスのＤＡＩ指数を平均している。
表４ マウスのＤＡＩ値
【表4】
【0128】
表４中、「コントロール」は正常群、「組成物」は組成物処理群、「細菌組合せ１」は細菌組合せ１処理群、「細菌組合せ２」は細菌組合せ２処理群、「細菌組合せ３」は細菌組合せ３処理群、「細菌組合せ４」は細菌組合せ４処理群、「ＶＳＬ＃３」はＶＳＬ＃３処理群を意味する。「＊」は、モデル群と正常群のマウス間のＤＡＩ指数差の有意レベルがＰ＜０．０５であることを意味し、「＊＊」は、モデル群と正常群の間のマウス間のＤＡＩ指数差の有意レベルがＰ＜０．０１であることを意味し、「▲」は、モデル群と「組成物」群、「細菌組合せ１」群、「細菌組合せ２」群、「細菌組合せ３」群、「細菌組合せ４」群、又は「ＶＳＬ＃３」群のマウス間のＤＡＩ指数差の有意レベルがＰ＜０．０５であることを意味する。
【0129】
表４と図２のデータから、コントロール群のマウスのＤＡＩは基本的に変化せず、モデル群、組成物群、及び細菌組合せ１～４の各群、並びにＶＳＬ＃３群のマウスのＤＡＩは、ＤＳＳの誘発に伴って徐々に増加している。３日間目に、モデル群のマウスのＤＡＩは、コントロール群と比較して有意になり始めた（＊Ｐ＜０．０５）。７日間目に、モデル群のマウスのＤＡＩは、コントロール群と比較して最高レベルに達した（＊＊Ｐ＜０．０１）。組成物（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む）並びに細菌組合せ１～４（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を他のプロバイオティクスと共に含む）が、ＤＡＩの増加を制御することができ、組成物群と細菌組合せ１～４群のマウスのＤＡＩは、５日間目と７日間目に、モデル群と比較して有意に制御されている（▲Ｐ＜０．０５）。更に、組成物群と細菌組合せ１～４群のマウスのＤＡＩは、７日間目に、ＶＳＬ＃３よりも僅かに低く、このことは、組成物（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む）並びに細菌組合せ１～４（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を他のプロバイオティクスと共に含む）が、ＵＣマウスのＤＡＩ増加の制御に対してＶＳＬ＃３より優れた効果を有し得ることを示す。
【0130】
１．４．３．結腸長さの変化
ＵＣモデルマウスの結腸組織は、潰瘍及び炎症が結腸組織を短くするので、変化し得る。処理後、解剖学的に測定したマウスの結腸長さを、表５に示す。
表５ マウスの結腸の長さ
ＵＣモデルマウスの結腸組織は、潰瘍及び炎症が結腸組織を短くするので、変化し得る。処理後、解剖学的に測定したマウスの結腸長さを、表５に示す。
表５ マウスの結腸の長さ
【表5】
【0131】
表５中、「コントロール」は正常群、「組成物」は組成物処理群、「細菌組合せ１」は細菌組合せ１処理群、「細菌組合せ２」は細菌組合せ２処理群、「細菌組合せ３」は細菌組合せ３処理群、「細菌組合せ４」は細菌組合せ４処理群、「ＶＳＬ＃３」はＶＳＬ＃３処理群を意味する。「＊＊」は、モデル群と正常群のマウス間の結腸長さの差の有意レベルがＰ＜０．０１であることを意味し、「▲」は、モデル群と「組成物」、「細菌組合せ１」、「細菌組合せ２」、「細菌組合せ３」、「細菌組合せ４」、又は「ＶＳＬ＃３」のマウス間の結腸長さの差の有意レベルがＰ＜０．０５であることを意味する。
【0132】
表５の結果は、モデル群のマウスの結腸組織が、ＤＳＳ誘発後７日間で有意に短くなることを示し、これはまた、コントロール群と比較して非常に有意である（＊＊Ｐ＜０．０１）。組成物、細菌組合せ１、細菌組合せ２、細菌組合せ３、細菌組合せ４、又はＶＳＬ＃３の介入により、マウスの結腸短縮を有意に制御することができ、モデル群と比較して非常に有意である（＊Ｐ＜０．０５）。表５のデータによれば、組成物又は細菌組合せ１～４によって介入されるマウスの結腸長さは、ＶＳＬ＃３群のマウスよりも長いことが分かり、このことは、組成物（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む）並びに細菌組合せ１～４（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を他のプロバイオティクスと共に含む）が、ＵＣマウスの結腸短縮の制御に対してＶＳＬ＃３より強い効力を有し得ることを示す。
【0133】
表３～表５並びに図１及び図２の結果は、この実施例における組成物及びその細菌組合せ１～４が、潰瘍性大腸炎の予防又は治療に対して有効性を有し、達成された処理による効果が、ＶＳＬ＃３製品よりも僅かに優れていることを示す。
【0134】
実施例２
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示されたＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、表６にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表６ 食品組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示されたＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含む組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、表６にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表６ 食品組成物の処方
【表6】
【0135】
表６に示す処方割合にしたがって、牛乳及び砂糖を十分に混合した後、予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で５～１０分間滅菌し、４０～４３℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を、１～１００×１０６ｃｆｕ／ｇで添加し、これらの２種の菌株を含む食品組成物を得た。
【0136】
本実施例の食品組成物を、組成物処理群のマウス用のＤＳＳモデリング飼料に添加した。給餌スキーム及び検出スキームは、組成物処理群のマウスに、組成物を含有する細菌懸濁液を強制経口（ｇａｖａｇｅ）投与することに代えて、本実施例で調製した食品組成物と共にモデリング飼料を与えたこと以外は、実施例１と同様である。検出結果は、本実施例で調製した食品組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変（即ち、腸病変）を改善することができ、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0137】
実施例３
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ１の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、表７にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ１の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、表７にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
【表7】
【0138】
表７に示す処方割合にしたがって、牛乳及び砂糖を十分に混合した後、予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で５～１０分間滅菌し、４０～４３℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を、１～１００×１０６ｃｆｕ／ｇで添加し、これらの３種の菌株を含む食品組成物を得た。
【0139】
本実施例の食品組成物を、細菌組合せ１処理群のマウス用のＤＳＳモデリング飼料に添加した。給餌スキーム及び検出スキームは、細菌組合せ１処理群のマウスに、細菌組合せ１を含有する細菌懸濁液を強制経口投与することに代えて、本実施例で調製した食品組成物と共にモデリング飼料を与えたこと以外は、実施例１と同様である。検出結果は、本実施例で調製した食品組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変（即ち、腸病変）を改善することができ、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0140】
実施例４
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ２の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を、表８にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表８ 食品組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ２の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を、表８にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表８ 食品組成物の処方
【表8】
【0141】
表８に示す処方割合にしたがって、牛乳及び砂糖を十分に混合した後、予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で５～１０分間滅菌し、４０～４３℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を、１～１００×１０６ｃｆｕ／ｇで添加し、これらの３種の菌株を含む食品組成物を得た。
【0142】
本実施例の食品組成物を、細菌組合せ２処理群のマウス用のＤＳＳモデリング飼料に添加した。給餌スキーム及び検出スキームは、細菌組合せ２処理群のマウスに、細菌組合せ２を含有する細菌懸濁液を強制経口投与することに代えて、本実施例で調製した食品組成物と共にモデリング飼料を与えたこと以外は、実施例１と同様である。検出結果は、本実施例で調製した食品組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変（即ち、腸病変）を改善することができ、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0143】
実施例５
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ３の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を、表９にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表９ 食品組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ３の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を、表９にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表９ 食品組成物の処方
【表9】
【0144】
表９に示す処方割合にしたがって、牛乳及び砂糖を十分に混合した後、予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で５～１０分間滅菌し、４０～４３℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を、１～１００×１０６ｃｆｕ／ｇで添加し、これらの３種の菌株を含む食品組成物を得た。
【0145】
本実施例の食品組成物を、細菌組合せ３処理群のマウス用のＤＳＳモデリング飼料に添加した。給餌スキーム及び検出スキームは、細菌組合せ３処理群のマウスに、細菌組合せ３を含有する細菌懸濁液を強制経口投与することに代えて、本実施例で調製した食品組成物と共にモデリング飼料を与えたこと以外は、実施例１と同様である。検出結果は、本実施例で調製した食品組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変（即ち、腸病変）を改善することができ、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0146】
実施例６
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ４の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を、表１０にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表１０ 食品組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、細菌組合せ４の組成物を、食品組成物にした。
具体的には、培養したＭｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を、表１０にしたがって、賦形剤（例えば、牛乳、ビタミンＣ、及び砂糖など）と共に配合して、食品組成物を調製し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であるようにした。
表１０ 食品組成物の処方
【表10】
【0147】
表１０に示す処方割合にしたがって、牛乳及び砂糖を十分に混合した後、予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で５～１０分間滅菌し、４０～４３℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１を、１～１００×１０６ｃｆｕ／ｇで添加し、これらの４種の菌株を含む食品組成物を得た。
【0148】
本実施例の食品組成物を、細菌組合せ４処理群のマウス用のＤＳＳモデリング飼料に添加した。給餌スキーム及び検出スキームは、細菌組合せ４処理群のマウスに、細菌組合せ４を含有する細菌懸濁液を強制経口投与することに代えて、本実施例で調製した食品組成物と共にモデリング飼料を与えたこと以外は、実施例１と同様である。検出結果は、本実施例で調製した食品組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変（即ち、腸病変）を改善することができ、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0149】
実施例７
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６とを含む組成物を、表１１に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１１ 医薬組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６とを含む組成物を、表１１に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１１ 医薬組成物の処方
【表11】
【0150】
表１１に示す処方割合にしたがって、ラクトース、イーストパウダー、及びペプトンを精製水中に十分に混合した後、６０～６５℃に予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で２０～３０分間滅菌し、３６～３８℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、活性菌株（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６）を、それぞれ１～５０×１０６ｃｆｕ／ｇで添加した後、３６～３８℃で、ｐＨ６．０に達するまで発酵させ、遠心分離し、水分含量が３％未満になるまで凍結乾燥して、凍結乾燥品を得た。０．５ｇの凍結乾燥品を、等量のマルトデキストリンと混合し、カプセル状に製して、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ及びＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６を含むカプセル形態の医薬組成物を得た。
【0151】
本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１における組成物の細菌懸濁液に代えて用いた。組成物処理群のマウスに、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１の同じ処理スキーム及び検出スキームにしたがって、１日１カプセルを強制経口投与した。結果は、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物が、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変を改善し、潰瘍性大腸炎を治療又は予防に有用であることを示す。
【0152】
実施例８
本実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ１の組成物を、表１２に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１２ 医薬組成物の処方
本実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ１の組成物を、表１２に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１２ 医薬組成物の処方
【表12】
【0153】
表１２に示す処方割合にしたがって、ラクトース、イーストパウダー、及びペプトンを精製水中に十分に混合した後、６０～６５℃に予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で２０～３０分間滅菌し、３６～３８℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、活性菌株（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６）を、それぞれ１～５０×１０６ｃｆｕ／ｇで添加した後、３６～３８℃で、ｐＨ６．０に達するまで発酵させ、遠心分離し、水分含量が３％未満になるまで凍結乾燥して、凍結乾燥細菌組成物１を得た。０．５ｇの凍結乾燥細菌組成物１を、等量のマルトデキストリンと混合し、カプセル状に製して、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＣｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ ＴＦ０６－２６を含むカプセル形態の医薬組成物を得た。
【0154】
本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１における細菌組合せ１の細菌懸濁液に代えて用いた。細菌組成物１処理群のマウスに、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１の同じ処理スキーム及び検出スキームにしたがって、１日１カプセルを強制経口投与した。結果は、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変を改善し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0155】
実施例９
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ２の組成物を、表１３に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１３ 医薬組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ２の組成物を、表１３に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１３ 医薬組成物の処方
【表13】
【0156】
表１３に示す処方割合にしたがって、ラクトース、イーストパウダー、及びペプトンを精製水中に十分に混合した後、６０～６５℃に予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で２０～３０分間滅菌し、３６～３８℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、活性菌株（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１）を、それぞれ１～５０×１０６ｃｆｕ／ｇで添加した後、３６～３８℃で、ｐＨ６．０に達するまで発酵させ、遠心分離し、水分含量が３％未満になるまで凍結乾燥して、凍結乾燥細菌組成物２を得た。０．５ｇの凍結乾燥細菌組成物２を、等量のマルトデキストリンと混合し、カプセル状に製して、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＲｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ ＤＳＭ １６８４１を含むカプセル形態の医薬組成物を得た。
【0157】
本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１における細菌組合せ２の細菌懸濁液に代えて用いた。細菌組合せ２処理群のマウスに、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１の同じ処理スキーム及び検出スキームにしたがって、１日１カプセルを強制経口投与した。結果は、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変を改善し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0158】
実施例１０
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ３の組成物を、表１４に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１４ 医薬組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ３の組成物を、表１４に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１４ 医薬組成物の処方
【表14】
【0159】
表１４に示す処方割合にしたがって、ラクトース、イーストパウダー、及びペプトンを精製水中に十分に混合した後、６０～６５℃に予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で２０～３０分間滅菌し、３６～３８℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、活性菌株（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１）を、それぞれ１～５０×１０６ｃｆｕ／ｇで添加した後、３６～３８℃で、ｐＨ６．０に達するまで発酵させ、遠心分離し、水分含量が３％未満になるまで凍結乾燥して、凍結乾燥細菌組成物３を得た。０．５ｇの凍結乾燥細菌組成物３を、等量のマルトデキストリンと混合し、カプセル状に製して、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１を含むカプセル形態の医薬組成物を得た。
【0160】
本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１における細菌組合せ３の細菌懸濁液に代えて用いた。細菌組合せ３処理群のマウスに、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１の同じ処理スキーム及び検出スキームにしたがって、１日１カプセルを強制経口投与した。結果は、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変を改善し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0161】
実施例１１
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ４の組成物を、表１５に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１５ 医薬組成物の処方
この実施例では、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有効であることが示された細菌組合せ４の組成物を、表１５に示す処方にしたがって、潰瘍性大腸炎を治療するための医薬組成物にした。
表１５ 医薬組成物の処方
【表15】
【0162】
表１５に示す処方割合にしたがって、ラクトース、イーストパウダー、及びペプトンを精製水中に十分に混合した後、６０～６５℃に予熱し、２０Ｍｐａの圧力下で均一化し、約９０℃で２０～３０分間滅菌し、３６～３８℃に冷却した。その後、保護剤（即ち、ビタミンＣ）を添加し、次いで、活性菌株（Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１）を、それぞれ１～５０×１０６ｃｆｕ／ｇで添加した後、３６～３８℃で、ｐＨ６．０に達するまで発酵させ、遠心分離し、水分含量が３％未満になるまで凍結乾燥して、凍結乾燥細菌組成物４を得た。０．５ｇの凍結乾燥細菌組成物４を、等量のマルトデキストリンと混合し、カプセル状に製して、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓ ＡＦ２４－２８ＡＣ、Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓ ＡＭ２５－６、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉ ＴＦ０１－１１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＴＦ０８－１、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＡＭ１３－１）を含むカプセル形態の医薬組成物を得た。
【0163】
本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１における細菌組合せ４の細菌懸濁液に代えて用いた。細菌組合せ４処理群のマウスに、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物を、実施例１の同じ処理スキーム及び検出スキームにしたがって、１日１カプセルを強制経口投与した。結果は、本実施例で調製したカプセル形態の医薬組成物も、ＵＣマウスの体重減少を制御し、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）を低下させ、腸管病変を改善し、潰瘍性大腸炎の治療又は予防に有用であることを示す。
【0164】
前記した実施例は、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せが潰瘍性大腸炎を治療又は予防できることを示している。更に、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓの組合せの存在下で、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ ｉｎｕｌｉｎｉｖｏｒａｎｓ、及びＢｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｓｔｉｎｉのそれぞれを添加する又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓのそれぞれを添加することによっても、潰瘍性大腸炎を治療及び予防することができる。前記組合せ組成物は、様々な食品又は医薬として使用することができる。更に、前記組合せ組成物は、様々な食品又は医薬及び様々な健康製品又は食品添加物とすることができることが理解されよう。
【0165】
更に、研究は、Ｍｅｇａｍｏｎａｓ ｆｕｎｉｆｏｒｍｉｓとＡｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ ｓｔｅｒｃｏｒｉｈｏｍｉｎｉｓとの組合せによる治療効果は、主に微小生態系の改善に基づいており、これは、潰瘍性大腸炎だけでなく、一般的な腸炎、胃炎などの腸内微小生態系に関連する他の疾患の治療又は予防に有効であることを示している。したがって、本願の実施例で提供される組成物は、炎症又は炎症関連疾患、特に腸炎及び胃炎の治療又は予防に用いることができる。
【0166】
前記実施例の記載は、具体的な形態を参照して本開示を詳細に更に説明するためのものであり、本開示を限定するものとは解釈されない。当業者であれば、本開示の概念から逸脱することなく、いくつかの実施形態において、いくつかの簡単な推論又は置換を行うことができ、これらは本開示の範囲に属すると理解しよう。
【図1】
【図2】
【配列表】