ホーム > 特許ランキング > 国立大学法人佐賀大学
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-08-19
(45)【発行日】2022-08-29
(54)【発明の名称】管腔構造体の製造方法
(51)【国際特許分類】
C12M 3/00 20060101AFI20220822BHJP
C12N 5/07 20100101ALI20220822BHJP
【ＦＩ】
C12M3/00 Z
C12N5/07
【請求項の数】
6
(21)【出願番号】P 2021507436
(86)(22)【出願日】2020-03-13
(86)【国際出願番号】 JP2020012567
(87)【国際公開番号】W WO2020189792
(87)【国際公開日】2020-09-24
【審査請求日】2021-09-07
(31)【優先権主張番号】P 2019048229
(32)【優先日】2019-03-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】504209655
【氏名又は名称】国立大学法人佐賀大学
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(72)【発明者】
【氏名】中山 功一
【審査官】福澤 洋光
(56)【参考文献】
【文献】特許第４５１７１２５（ＪＰ，Ｂ１）
【文献】特許第６３３４８３７（ＪＰ，Ｂ１）
【文献】特開２０１５－２１３４５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１６／０４７７３７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０６１３７４５６（ＣＮ，Ａ）
【文献】ARAI, Kenichi，Fabrication of scaffold-free tubular cardiac constructs using a Bio-3D printer，PLOS ONE，2018年12月07日，Vol. 13, No. 12，e0209162
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｍ ３／００
Ｃ１２Ｎ ５／０７
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
長手方向を有する板状の支持体の厚み方向の面に針状体が櫛状に配列された、管腔状細胞構造体製造用治具部材であって、前記厚み方向の面に隣接する前記長手方向に沿った面は、前記針状体の先端側に向かってテーパー状に形成されたものである、前記部材。【請求項2】
前記支持体の両端側の一部の領域が、前記針状体の長さ方向に沿って突出した形状である、請求項１に記載の部材。【請求項3】
複数の部品にモジュール化されたものである、請求項１又は２に記載の部材。【請求項4】
請求項１～３のいずれか１項に記載の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させた、管腔状細胞構造体製造用治具。【請求項5】
請求項１～３のいずれか１項に記載の部材を把持するための把持部材を用いて配列させた、請求項４に記載の治具。【請求項6】
請求項１～３のいずれか１項に記載の部材の針状体の先端領域に細胞塊を配置させ、当該細胞塊配置後の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させ、前記細胞塊を培養することを特徴とする、管腔状細胞構造体の製造方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、櫛状に針状体を配列させた剣山状部材を用いて、細胞の管腔構造体を製造する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
従来、細胞凝集塊（スフェロイド）を、剣山状に配列させた針に仮固定することにより、細胞の立体構造体を製造する技術が知られている（特許文献１）。この技術によれば、細胞だけで立体化できる点が特徴であり、血管などの管腔構造体を構築することも可能である。
【0003】
血管などの細長い管腔構造体を製造するには、その構造体の目的とする長さの針を有する剣山を用意して、そこにスフェロイドを積層する必要がある。
しかしながら、使用する針は極細針であるため、針が長すぎる場合は、自立した剣山状部材を作製することが困難である。
他方、剣山の針の長さに収まる長さの管腔構造体を複数製造し、管腔構造体の先端部同士を接触させて培養することにより、構造体を連結して長い管腔構造体を得ることができる。
しかし、この方法では、つなぎ目が残る可能性があり、また技術者の熟練を要するため再現性及び量産性に課題が残る。
［先行技術文献］
［特許文献］
［特許文献１］特許第４５１７１２５号
しかしながら、使用する針は極細針であるため、針が長すぎる場合は、自立した剣山状部材を作製することが困難である。
他方、剣山の針の長さに収まる長さの管腔構造体を複数製造し、管腔構造体の先端部同士を接触させて培養することにより、構造体を連結して長い管腔構造体を得ることができる。
しかし、この方法では、つなぎ目が残る可能性があり、また技術者の熟練を要するため再現性及び量産性に課題が残る。
［先行技術文献］
［特許文献］
［特許文献１］特許第４５１７１２５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
従って、技術者の熟練を要さず、つなぎ目のない長いチューブ状構造体を容易に製造する方法が望まれていた。
【0005】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、櫛状に配列させた剣山状部材にスフェロイドを設置し、この剣山状部材を円弧状に配列することにより目的の管腔状構造体を製造することに成功し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【0006】
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）長手方向を有する板状の支持体の厚み方向の面に針状体が櫛状に配列された、管腔状細胞構造体製造用治具部材であって、前記厚み方向の面に隣接する前記長手方向に沿った面は、前記針状体の先端側に向かってテーパー状に形成されたものである、前記部材。
（２）前記支持体の両端側の一部の領域が、前記針状体の長さ方向に沿って突出した形状である、（１）に記載の部材。
（３）複数の部品にモジュール化されたものである、（１）又は（２）に記載の部材。
（４） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させた、管腔状細胞構造体製造用治具。
（５） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材を把持するための把持部材を用いて配列させた、（４）に記載の治具。
（６） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材の針状体の先端領域に細胞塊を配置させ、当該細胞塊配置後の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させ、前記細胞塊を培養することを特徴とする、管腔状細胞構造体の製造方法。
（１）長手方向を有する板状の支持体の厚み方向の面に針状体が櫛状に配列された、管腔状細胞構造体製造用治具部材であって、前記厚み方向の面に隣接する前記長手方向に沿った面は、前記針状体の先端側に向かってテーパー状に形成されたものである、前記部材。
（２）前記支持体の両端側の一部の領域が、前記針状体の長さ方向に沿って突出した形状である、（１）に記載の部材。
（３）複数の部品にモジュール化されたものである、（１）又は（２）に記載の部材。
（４） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させた、管腔状細胞構造体製造用治具。
（５） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材を把持するための把持部材を用いて配列させた、（４）に記載の治具。
（６） （１）～（３）のいずれか１項に記載の部材の針状体の先端領域に細胞塊を配置させ、当該細胞塊配置後の部材を、前記長手方向に沿った面を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させ、前記細胞塊を培養することを特徴とする、管腔状細胞構造体の製造方法。
【発明の効果】
【0007】
本発明により、細長いチューブ状の細胞構造体を容易に製造することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】管腔状細胞構造体製造用の治具部材を示す図である。
【図2】管腔状細胞構造体製造用の治具部材を示す図である。
【図3】本発明の治具部材のテーパー角を示す図である。
【図4】管腔状細胞構造体製造用の治具部材の針状体の先端にスフェロイドを１列に配列させた図である。
【図5】針状体の先端にスフェロイドを１列に配列させた管腔状細胞構造体製造用の治具部材を、針状体の先端を円の中心に向けて配列させたことを示す図である。
【図6】針状体の先端を円の中心に向けて配列させたことを示す図である。
【図7】本発明の管腔状細胞構造体製造用治具を示す図である。
【図8】管腔状細胞構造体製造用治具部材を機械化によりセットすることを示す図である。
【図9】管腔状細胞構造体製造用のモジュール式治具部材を示す図である。
【図10】実施例により作製した管腔状細胞構造体製造用治具を示す図である。
【図11】実施例により作製した管腔状細胞構造体製造用治具を示す図である。
【図12】管腔状細胞構造体製造用の治具部材の針状体の先端にスフェロイドを１列に配列させた図である。
【図14】本発明の管腔状細胞構造体製造用治具を用いて作製した管腔状細胞構造体を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0009】
本発明は、長手方向を有する板状の支持体の厚み方向の面に針状体が櫛状に配列された、管腔状細胞構造体製造用治具部材であって、前記厚み方向の面に隣接する前記長手方向に沿った面は、前記針状体の先端に向かってテーパー状に形成されたものである、前記部材に関する。
【0010】
図１は、本発明の管腔状細胞構造体製造用治具部材１０の斜視図である。
図１において、管腔状細胞構造体製造用治具部材（以下「部材」という）１０は、長手方向を有する板状の支持体１０１の厚み方向の面１０５に針状体１０２が櫛状に配列されている。そして、部材の厚み方向の面１０５に隣接する、長手方向に沿った面１０３は、針状体１０２の先端側に向かってテーパー状に形成されている。
また、本発明において、「管腔状細胞構造体」とは、空洞を有する略円柱状の細胞製組織（ストロー又はマカロニ形状の組織）であり、細胞が凝集してできた細胞塊（スフェロイド）同士が融合することにより形成されたものである。このような「管腔状細胞構造体」は、空洞を有する限り特に限定されるものではなく、例えば血管、消化管、気管、末梢神経、尿管、尿道など管腔臓器に使用される。
図１において、管腔状細胞構造体製造用治具部材（以下「部材」という）１０は、長手方向を有する板状の支持体１０１の厚み方向の面１０５に針状体１０２が櫛状に配列されている。そして、部材の厚み方向の面１０５に隣接する、長手方向に沿った面１０３は、針状体１０２の先端側に向かってテーパー状に形成されている。
また、本発明において、「管腔状細胞構造体」とは、空洞を有する略円柱状の細胞製組織（ストロー又はマカロニ形状の組織）であり、細胞が凝集してできた細胞塊（スフェロイド）同士が融合することにより形成されたものである。このような「管腔状細胞構造体」は、空洞を有する限り特に限定されるものではなく、例えば血管、消化管、気管、末梢神経、尿管、尿道など管腔臓器に使用される。
【0011】
本発明において、前記支持体１０１の両端側の一部の領域は針状体１０２を設けない領域を有する端部部材１０４であり、後述する治具の把持部材が把持する領域を形成する。端部部材１０４は、針状体１０２の長さ方向に沿って突出した形状の突出部を設けることができるが（図１Ａ）、突出部を設けなくてもよい（図１Ｂ）。
また、針状体１０２の素材として、ステンレス製、ポリプロピレン製、ナイロン製等のものを使用できるが、これらに限定されるものではない。
また、針状体１０２の素材として、ステンレス製、ポリプロピレン製、ナイロン製等のものを使用できるが、これらに限定されるものではない。
【0012】
図２は、本発明の部材１０の正面図（Ａ）及び部材１０の前方（Ｘ１方向）からｙ１－ｙ２の面で見た断面図（Ｂ）である。
図２Ｂに示すように、長手方向に沿った面１０３は、針状体１０２の先端側に向かってテーパー状に形成されている。
本発明において、部材１０におけるテーパー形状のテーパー角は特に限定されることはない。
図２Ｂに示すように、長手方向に沿った面１０３は、針状体１０２の先端側に向かってテーパー状に形成されている。
本発明において、部材１０におけるテーパー形状のテーパー角は特に限定されることはない。
【0013】
図３は、部材１０におけるテーパー形状のテーパー角を示す模式図である。
図３Ａにおいて、支持体１０の底面の幅をＤ、上面の幅をｄ２、端部部材１０４の突出部の幅をｄ１とすると、テーパー比は（Ｄ－ｄ１）／Ｌ１又は（Ｄ－ｄ２）／Ｌ２で表すことができる。
（Ｄ－ｄ１）／Ｌ１は、図１又は図２における端部部材１０４の突出部の形状を基準として、部材１０の前方（図２におけるｘ１方向）から見たときのテーパー比を表し、（Ｄ－ｄ２）／Ｌ２は、支持体１０１の形状を基準としてｙ１－ｙ２方向で部材１０を切断した断面（図２Ｂ）を部材１０の前方（ｘ１方向）から見たときのテーパー比を表す。
図３Ａにおいて、支持体１０の底面の幅をＤ、上面の幅をｄ２、端部部材１０４の突出部の幅をｄ１とすると、テーパー比は（Ｄ－ｄ１）／Ｌ１又は（Ｄ－ｄ２）／Ｌ２で表すことができる。
（Ｄ－ｄ１）／Ｌ１は、図１又は図２における端部部材１０４の突出部の形状を基準として、部材１０の前方（図２におけるｘ１方向）から見たときのテーパー比を表し、（Ｄ－ｄ２）／Ｌ２は、支持体１０１の形状を基準としてｙ１－ｙ２方向で部材１０を切断した断面（図２Ｂ）を部材１０の前方（ｘ１方向）から見たときのテーパー比を表す。
【0014】
【0015】
従って、本発明のテーパー角をαとすると、
α＝２θ
となる。
テーパー角αは、部材１０の大きさや針状体１０２の長さに基づいて任意に設定することができる。
α＝２θ
となる。
テーパー角αは、部材１０の大きさや針状体１０２の長さに基づいて任意に設定することができる。
【0016】
図３Ｃにおいて、Ｌ３は、部材１０の底部から針状体１０２の先端までの距離、Ｌ４は針状体１０２の先端からテーパー角αの中心点Ｐまでの距離、Ｌ５は、部材１０の底部から中心点Ｐまでの距離を表す。この場合、本発明の部材は、針状体１０２の先端が中心点Ｐを向くように、部材１０を、Ｐを中心として半径Ｌ５の円を描くように円弧状に配列することができる（図５Ｂ，詳細は後述する）。従って、テーパー角αを例えば１０°とすると、部材１０は３６個配列できることとなる。
【0017】
図４は、本発明の部材１０の針状体１０２の先端側領域に、細胞が凝集して形成した細胞塊（スフェロイド）４０１を部材１０の長手方向に沿って配置させた態様を示す図である。細胞塊４０１は、部材１０を図５Ｂのように円弧状に配列させたときに、細胞塊が１層になるように、すなわち管腔状細胞構造体の表層が１層で構成されるように、１つの針状体あたり１個を配置させることも、複数層になるように複数個を配置させることもできる。
【0018】
ここで、細胞塊４０１を針状体１０２に「配置させる」とは、細胞塊４０１同士が融合できるように細胞塊４０１を針状体１０２に接触させることを意味し、細胞塊４０１を針状体１０２に突き刺す態様でも、針状体１０２同士の間に配置して細胞塊４０１を自然凝集させる態様でもよい。針状体と針状体との間隔が細胞塊４０１の直径と略同等又は直径よりも狭ければ、細胞塊４０１を針状体１０２に刺さなくても、例えば針状体４０１を水平にして（すなわち部材１０を水平にして）その上に細胞塊４０１を乗せることにより、細胞塊４０１が自然凝集して一本の糸のように一列の線状の構造体を形成することができる。
なお、説明の便宜のため、図４は、細胞塊４０１を針状体１０２に突き刺した態様を示す。
なお、説明の便宜のため、図４は、細胞塊４０１を針状体１０２に突き刺した態様を示す。
【0019】
細胞塊４０１を針状体１０２の長手方向に配置する個数は、管腔状細胞構造体の厚さとして反映されるため、目的とする管腔状細胞構造体に応じて、細胞凝集体４０１を配置する個数を適宜決定することができる。また、針状体４０１の一端から他端までの距離は、管腔状細胞構造体の長さとして反映される。従って、目的とする管腔状細胞構造体の長さに応じて、細胞塊４０１を配置する針状体の本数を適宜決定することができる。針状体４０１の一端から他端までの距離は、特に限定されるものではなく、例えば０．５ｃｍ～３０ｃｍであり、０．５ｃｍ、１ｃｍ、２ｃｍ、３ｃｍ、５ｃｍ、１０ｃｍ、１５ｃｍ、２０ｃｍのように設定することができる。また、一の針状体とその隣の針状体との距離も限定されるものではなく、０．１ｍｍ～２ｍｍとすることができる。
【0020】
図５は、図４に示す、細胞塊４０１を針状体１０２の先端に刺した部材１０を、針の先端を円（多角形であるが、円とみなす。以下同様。）の中心点（図３のＰ）に向けて配列したことを示す図であり、図６は、部材１０を配列させた後の針状体１０２の先端部拡大図である（細胞塊４０１は一部表示）。
図５Ａは、針状体１０２に細胞塊４０１を１層に刺したことを示し、Ａ１は一部拡大図である。なお、図５においても、細胞塊４０１を針状体１０２に刺した態様を示す。ここで、針状体１０２の先端側領域において、細胞塊４０１を刺す位置は、針状体１０２の先端が細胞塊４０１を貫通させる領域であればよく、細胞塊４０１の端と針状体１０２の先端とが同じ位置である必要はない。例えば、図５Ａ又はＡ１に示すように、針状体１０２の先端から少し奥の位置に細胞塊４０１を刺すことができる。
図５Ａは、針状体１０２に細胞塊４０１を１層に刺したことを示し、Ａ１は一部拡大図である。なお、図５においても、細胞塊４０１を針状体１０２に刺した態様を示す。ここで、針状体１０２の先端側領域において、細胞塊４０１を刺す位置は、針状体１０２の先端が細胞塊４０１を貫通させる領域であればよく、細胞塊４０１の端と針状体１０２の先端とが同じ位置である必要はない。例えば、図５Ａ又はＡ１に示すように、針状体１０２の先端から少し奥の位置に細胞塊４０１を刺すことができる。
【0021】
図５Ｂは、３６枚の部材１０を、その長手方向に沿った面１０３を対面させて針状体１０２の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させた管腔状細胞構造体製造用治具２０を示す。すなわち、管腔状細胞構造体製造用治具２０は、図３において針の先端を中心点Ｐに向けて円の半径がＬ５となるように配列させた形態となっている。
図５Ｂに示すように、部材１０の長手方向に沿った面１０３を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させると、例えば一の部材１０ａに刺さった細胞塊は、隣りの部材１０ｂに刺さった細胞塊と融合し、全体でリング状となる。そして、細胞塊４０１を刺した針状体１０２の本数分の長さが、管腔状構造体の長さとなる（図４、図５Ａ等）。
図５Ｂに示すように、部材１０の長手方向に沿った面１０３を対面させて前記針状体の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させると、例えば一の部材１０ａに刺さった細胞塊は、隣りの部材１０ｂに刺さった細胞塊と融合し、全体でリング状となる。そして、細胞塊４０１を刺した針状体１０２の本数分の長さが、管腔状構造体の長さとなる（図４、図５Ａ等）。
【0022】
また、図３において、中心点Ｐから針状体１０２の先端までの距離Ｌ４は、針状体１０２の先端を結んで描かれる円の半径となる。従って、細胞塊４０１から前記中心点Ｐまでの距離が管腔状構造体の内腔部の半径となる。例えば、図６の右パネルに示すように、細胞塊４０１を針状体１０２の先端から少し差し込むと（図では、針の尖った部分を除く針状体本体から０．３ｍｍ差し込む）、作製される管腔状細胞構造体の内腔の直径は、（図３Ｃに示すＬ４と差し込んだ距離の和）×２で示される。図６左パネルは、細胞塊の中心を結んだ線を円周としたときの直径Ｃ１が６ｍｍであることを示している。
細胞塊同士が融合した後は、部材１０を引き抜くことで、所定の長さ及び内腔径を有する管腔状細胞構造体を得ることができる。
細胞塊同士が融合した後は、部材１０を引き抜くことで、所定の長さ及び内腔径を有する管腔状細胞構造体を得ることができる。
【0023】
図７は、本発明の部材１０を配列させた管腔状細胞構造体製造用治具２０（以下「治具２０」という。）を表す。
本発明の一態様において、本発明の部材１０を配列させるために、部材１０の両端側領域を把持するための把持部材３０を用いることができる。図７Ａは、部材１０をスロットインで嵌め込むためのフラップ状の突出部３０１を示す。突出部３０１は、歯車状で弾力性のある部材（例えばポリエチレン製、ポリスチレン製等）であり、根元側と入口側が少し厚く、中央部が薄い形状となっている。把持部材３０の一の突出部とその隣りの突出部との間の空間に、部材１０の両端の端部部材１０４を嵌め込むと（図７Ｂ）、部材１０が把持部材３０により固定される。把持部材３０に１枚の部材１０をスライドしてセットした後の図を図７Ｂに示す。部材１０を円弧状に全て嵌め込むと（つまり、図３のテーパー角αが３６０°になるまで部材１０を嵌め込むと）、全体として円筒形の管腔状細胞構造体製造用治具２０が得られる（図７Ｃ）。
本発明の一態様において、本発明の部材１０を配列させるために、部材１０の両端側領域を把持するための把持部材３０を用いることができる。図７Ａは、部材１０をスロットインで嵌め込むためのフラップ状の突出部３０１を示す。突出部３０１は、歯車状で弾力性のある部材（例えばポリエチレン製、ポリスチレン製等）であり、根元側と入口側が少し厚く、中央部が薄い形状となっている。把持部材３０の一の突出部とその隣りの突出部との間の空間に、部材１０の両端の端部部材１０４を嵌め込むと（図７Ｂ）、部材１０が把持部材３０により固定される。把持部材３０に１枚の部材１０をスライドしてセットした後の図を図７Ｂに示す。部材１０を円弧状に全て嵌め込むと（つまり、図３のテーパー角αが３６０°になるまで部材１０を嵌め込むと）、全体として円筒形の管腔状細胞構造体製造用治具２０が得られる（図７Ｃ）。
【0024】
本発明においては、把持部材３０１に、細胞塊を刺した部材１０を嵌め込むために自動化することができる。
例えば、図８は、自動化ロボットのアーム４０に部材１０を把持させて、把持部材３０１に嵌め込み、又は抜去する作業を行わせることを示した図である。
例えば、図８は、自動化ロボットのアーム４０に部材１０を把持させて、把持部材３０１に嵌め込み、又は抜去する作業を行わせることを示した図である。
【0025】
また本発明の一つの態様において、部材１０は、複数の部品に要素分割し、モジュール式の部材とすることができる。図９は、部材１０を４つの部品に分割したモジュール式部材の態様を示す。部材１０において、針状体１０２を配置させた部材と、針状体を配置させない両端側の端部部材１０４を部品とすることで、任意の長さの部材１０とすることができる。端部部材１０４ａ１及び１０４ａ２は、針の長手方向に向かって突出部を有する態様であり、端部部材１０４ｂ１及び１０４ｂ２は、突出部を有さない態様である。端部部材１０４には、連結する方向（部材１０の長手方向）に凸部１０７と凹部１０６を設け、針状体１０２が配置され部品となった部材１０１ａ、１０１ｂにも凸部１０７と凹部１０６を設け、それぞれ凹部と凸部とが篏合するように成形することができる。これにより、部品となった部材１０１ａ、部材１０１ｂ、部材１０１ｃ（図示せず）、・・・のように複数個の部材を篏合連結させて、部材１０の長さを任意に調整することができる。その結果、作製される管腔状細胞構造体の長さが適宜調整される。なお、凸部と凹部の形状は部材同士を連結できる限り特に限定されるものではなく、方形でも円形でもよい。
【0026】
本発明においては、部材１０の針状体１０２の先端領域に細胞塊４０１を配置させた後（図４）、図５に示すように細胞塊４０１を配置した後の部材１０を、長手方向に沿った面１０３を対面させて前記針状体１０２の先端が円の中心を向くように円弧状に配列させ、細胞塊４０１を培養することにより、管腔状細胞構造体を製造することができる。
【0027】
本発明において使用される細胞の種類は特に限定されるものではなく、細胞塊（スフェロイド）を形成する任意の細胞を使用することができる。スフェロイドを形成する細胞としては、幹細胞（ＥＳ細胞、臍帯血由来細胞、未分化間葉系幹細胞、成体間葉系幹細胞等）などの未分化細胞又はその分化型細胞が挙げられる。これらの細胞が由来する組織は、例えば、関節軟骨、骨、脂肪組織、靱帯、腱、歯、耳介、鼻、肝臓、すい臓、血管、神経、心臓などが挙げられ、中でも肝臓細胞、心筋細胞などが好ましい。また、スフェロイドは、必ずしも単一の種類の細胞の凝集体として形成される必要はなく、スフェロイドが形成される限り、複数種類の細胞種から形成されてもよい。
また、細胞構造体を形成するまでの培養期間は、一般的培養条件（例えば３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下）で概ね３日～２１日である。
このようにして形成された細胞構造体は、細胞塊同士が融合して継ぎ目のないシームレス状の管腔状形態をとることができる。
また、細胞構造体を形成するまでの培養期間は、一般的培養条件（例えば３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下）で概ね３日～２１日である。
このようにして形成された細胞構造体は、細胞塊同士が融合して継ぎ目のないシームレス状の管腔状形態をとることができる。
【0028】
実施例
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。
［実施例１］
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。
［実施例１］
【0029】
図１０、図１１は、本発明の管腔状細胞構造体製造用治具４０の試作例である。
長さ５ｃｍのステンレス針を０．４ミリの等間隔で保持できるようポリカーボネートなどの樹脂をＣＮＣで微細加工した。この試作例では３６個で円を保持できるよう加工した。
［実施例２］
実施例１で作製した治具を用いて、針状体にスフェロイドを配置し、これを３６枚配列させて管腔状細胞構造体を製造した。スフェロイドは市販の皮膚線維芽細胞を１０日培養することにより作製し、得られたスフェロイドを上記治具に配置した。１本の針状体あたりスフェロイドを１００個用いた。この治具を３６枚配列させて、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で７日培養することにより、針状体に配置したスフェロイド同士を融合させた（図１２、１３）。
図１２は、管腔状細胞構造体製造用の治具部材の針状体の先端にスフェロイドを１列に配置させた図であり、図１３は、図１２に示す治具部材を円の中心に向けて配列させたときの中心部である。スフェロイド同士が融合して円柱状の構造体を形成していた。
治具部材を除去し、最終的に得られた管腔状細胞構造体を図１４に示す。
図１４に示すように、作製された管腔状細胞構造体は、部材１０１の長手方向に針状体を設置したときの一端の針から他端の針までの距離分の長さを有しており、しかも、構造体はつなぎ目のない形態となっていた。
長さ５ｃｍのステンレス針を０．４ミリの等間隔で保持できるようポリカーボネートなどの樹脂をＣＮＣで微細加工した。この試作例では３６個で円を保持できるよう加工した。
［実施例２］
実施例１で作製した治具を用いて、針状体にスフェロイドを配置し、これを３６枚配列させて管腔状細胞構造体を製造した。スフェロイドは市販の皮膚線維芽細胞を１０日培養することにより作製し、得られたスフェロイドを上記治具に配置した。１本の針状体あたりスフェロイドを１００個用いた。この治具を３６枚配列させて、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で７日培養することにより、針状体に配置したスフェロイド同士を融合させた（図１２、１３）。
図１２は、管腔状細胞構造体製造用の治具部材の針状体の先端にスフェロイドを１列に配置させた図であり、図１３は、図１２に示す治具部材を円の中心に向けて配列させたときの中心部である。スフェロイド同士が融合して円柱状の構造体を形成していた。
治具部材を除去し、最終的に得られた管腔状細胞構造体を図１４に示す。
図１４に示すように、作製された管腔状細胞構造体は、部材１０１の長手方向に針状体を設置したときの一端の針から他端の針までの距離分の長さを有しており、しかも、構造体はつなぎ目のない形態となっていた。
【符号の説明】
【0030】
１０：管腔状細胞構造体製造用治具部材、２０：管腔状細胞構造体製造用治具、３０：把持部材、４０：アーム
１０１：支持体、１０２：針状体、１０３：長手方向に沿った面、１０４：端部部材、１０５：厚み方向の面
３０１：突出部、４０１：細胞塊
１０１：支持体、１０２：針状体、１０３：長手方向に沿った面、１０４：端部部材、１０５：厚み方向の面
３０１：突出部、４０１：細胞塊
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
