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特許7136793ＩＫＫＥ、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２キナーゼ阻害剤としての５－（ピリミジン－４－イル）－２－（ピロリジン－１－イル）ニコチノニトリル化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-09-05
(45)【発行日】2022-09-13
(54)【発明の名称】ＩＫＫＥ、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２キナーゼ阻害剤としての５－（ピリミジン－４－イル）－２－（ピロリジン－１－イル）ニコチノニトリル化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 401/14 20060101AFI20220906BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20220906BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220906BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20220906BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220906BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220906BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20220906BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220906BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20220906BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20220906BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220906BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20220906BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20220906BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220906BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220906BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220906BHJP
【ＦＩ】
C07D401/14 CSP
A61K31/506
A61K45/00
A61P1/04
A61P3/04
A61P3/10
A61P9/00
A61P9/10 101
A61P11/00
A61P11/06
A61P13/12
A61P17/00
A61P17/06
A61P17/02
A61P19/00
A61P19/02
A61P19/10
A61P27/06
A61P29/00 101
A61P29/00
A61P35/00
A61P35/02
A61P37/02
【請求項の数】
18
(21)【出願番号】P 2019546380
(86)(22)【出願日】2018-02-23
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-03-19
(86)【国際出願番号】 GB2018050475
(87)【国際公開番号】W WO2018154315
(87)【国際公開日】2018-08-30
【審査請求日】2021-02-22
(31)【優先権主張番号】1702947.1
(32)【優先日】2017-02-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(73)【特許権者】
【識別番号】519303900
【氏名又は名称】ドメイネクス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001999
【氏名又は名称】特許業務法人はなぶさ特許商標事務所
(72)【発明者】
【氏名】ニュートン，ガリー カール
(72)【発明者】
【氏名】スチュワート，マーク リチャード
【審査官】三上 晶子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１６－５１３１２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５３１０５５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５０７４４９（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００９／１２２１８０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１０／０７５０７４（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｒが－ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ３である式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。【化1】
【請求項2】
前記化合物が式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物【化2】
【請求項3】
前記化合物は式（Ｉｂ）の化合物である請求項１に記載の化合物。【化3】
【請求項4】
【化4】
【請求項5】
前記化合物が、【化5】
【請求項6】
前記化合物は【化6】
【請求項7】
請求項１乃至請求項６のいずれか一項に記載の化合物を薬学的に適切な担体と共に含む医薬組成物。
【請求項8】
追加の活性剤も含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項9】
医薬として使用するための請求項１乃至請求項６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
炎症性及び組織修復障害；関節リウマチ；炎症性腸疾患；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；自己免疫疾患；ループス；全身性エリテマトーデス；ループス腎炎；家族性凍瘡状エリテマトーデス；皮膚ループス；多発性硬化症；乾癬性関節炎；強直性脊椎炎；アイカルディ・グティエール症候群；シェーグレン症候群；感染に関連する炎症；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；ウイルス感染に伴う炎症；敗血症性ショック；異常な炎症反応；変形性関節症；骨粗鬆症；線維化疾患；皮膚病；乾癬；アトピー性皮膚炎；紫外線（ＵＶ）による皮膚損傷；組織及び臓器の拒絶；アルツハイマー病；脳卒中；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；肥満；糖尿病；糸球体腎炎；がん；ホジキン病；悪液質；成人呼吸促迫症候群；毛細血管拡張性運動失調症；原発性開放隅角緑内障；及び巨細胞性動脈炎からなる群から選択される疾患又は障害の予防又は治療に使用するための請求項９に記載の化合物。
【請求項11】
前記疾患又は障害が、炎症性及び組織修復障害；関節リウマチ；自己免疫疾患；及びループスからなる群から選択される、請求項１０に記載の使用するための化合物。
【請求項12】
前記疾患又は障害が、関節リウマチ；全身性エリテマトーデス；ループス腎炎；家族性凍瘡状エリテマトーデス；皮膚ループス；又はループスである、請求項１０又は請求項１１に記載の使用するための化合物。
【請求項13】
乳がん、卵巣がん、腫瘍成長及び／又は生存がＩＫＫεキナーゼ活性に依存するがん、Ｒａｓ変異及びＲａｓ依存性腫瘍を有するがん、ｌｑ３２遺伝子座の増幅を伴うがん、Ｋ－ｒａｓ変異及びＫ－ｒａｓ依存性腫瘍を有するがん、Ｒａｓ変異を有するがん及びＲａｓ依存性のがん、肺がん、前立腺がん、骨髄腫、白血病、口腔がん、膵臓がん、腸がん又は皮膚がんであるがんの予防又は治療に使用するための、請求項９に記載の化合物。
【請求項14】
医薬として使用するための請求項７又は請求項８に記載の組成物。
【請求項15】
炎症性及び組織修復障害；関節リウマチ；炎症性腸疾患；喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；自己免疫疾患；ループス；全身性エリテマトーデス；ループス腎炎；家族性凍瘡状エリテマトーデス；皮膚ループス；多発性硬化症；乾癬性関節炎；強直性脊椎炎；アイカルディ・グティエール症候群；シェーグレン症候群；感染に関連する炎症；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）；ウイルス感染に伴う炎症；敗血症性ショック；異常な炎症反応；変形性関節症、骨粗鬆症；線維化疾患；皮膚病；乾癬；アトピー性皮膚炎；紫外線（ＵＶ）による皮膚損傷；組織及び臓器の拒絶；アルツハイマー病；脳卒中；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；肥満；糖尿病；糸球体腎炎；がん；ホジキン病；悪液質；成人呼吸促迫症候群；毛細血管拡張性運動失調症；原発性開放隅角緑内障；及び巨細胞性動脈炎からなる群から選択される疾患又は障害の予防又は治療に使用するための請求項１４に記載の組成物。
【請求項16】
前記疾患又は障害が、炎症性及び組織修復障害；関節リウマチ；自己免疫疾患；及びループスからなる群から選択される、請求項１５に記載の使用するための組成物。
【請求項17】
前記疾患又は障害が、関節リウマチ；全身性エリテマトーデス；ループス腎炎；家族性凍瘡状エリテマトーデス；皮膚ループス；又はループスである、請求項１５又は請求項１６に記載に記載の使用するための組成物。
【請求項18】
乳がん、卵巣がん、腫瘍成長及び／又は生存がＩＫＫεキナーゼ活性に依存するがん、Ｒａｓ変異及びＲａｓ依存性腫瘍を有するがん、ｌｑ３２遺伝子座の増幅を伴うがん、Ｋ－ｒａｓ変異及びＫ－ｒａｓ依存性腫瘍を有するがん、Ｒａｓ変異を有するがん及びＲａｓ依存性のがん、肺がん、前立腺がん、骨髄腫、白血病、口腔がん、膵臓がん、腸がん又は皮膚がんであるがんの予防又は治療に使用するための、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、式（Ｉ）のピリミジン化合物、式（Ｉ）のピリミジン化合物を含む組成物、及び、例えばプロテインキナーゼＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２の異常な活性に関連する疾患の治療における薬剤としての式（Ｉ）のピリミジン化合物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
プロテインキナーゼは、さまざまな基質タンパク質のアミノ酸側鎖のリン酸化を触媒し、そしてシグナル伝達、転写調節、細胞運動、及び細胞分裂を含む多くの細胞機能において重要な役割を果たしている。既知のプロテインキナーゼが約５００種類ある。異常又は不適切なプロテインキナーゼ活性は、特定の病状の発症及び維持に寄与する可能性がある。
この応用に特に関連する３つのプロテインキナーゼは：Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼイプシロン、ＩＫＫε（Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼ－３（ＩＫＫ３）又は誘導性Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼ（ＩＫＫｉ）としても知られている）、ＴＡＮＫ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｋｉｎａｓｅ－１、ＴＢＫ１（Ｔ２Ｋ又はＮＦ－κ Ｂ－活性化キナーゼとしても知られている）、及び塩誘導性キナーゼ２、ＳＩＫ２（ＱＩＫ又はＳＮＦ１ＬＫ２としても知られている）である。以下に説明するように、これらは多くの疾患に関連しているセリン－トレオニンキナーゼである。
この応用に特に関連する３つのプロテインキナーゼは：Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼイプシロン、ＩＫＫε（Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼ－３（ＩＫＫ３）又は誘導性Ｉ－κ－Ｂ－キナーゼ（ＩＫＫｉ）としても知られている）、ＴＡＮＫ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｋｉｎａｓｅ－１、ＴＢＫ１（Ｔ２Ｋ又はＮＦ－κ Ｂ－活性化キナーゼとしても知られている）、及び塩誘導性キナーゼ２、ＳＩＫ２（ＱＩＫ又はＳＮＦ１ＬＫ２としても知られている）である。以下に説明するように、これらは多くの疾患に関連しているセリン－トレオニンキナーゼである。
【0003】
ＩＫＫεとＴＢＫ１は高度な配列相同性を有しており、その結果、多くの重要な生物学的機能を共有している。異常なＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１の活性は、さまざまな病状を引き起こす可能性がある。研究により、ＩＫＫε阻害剤及び／又はΤΒΚ１／ＩＫＫεのデュアル阻害剤は、特定のがん（例えば、タモキシフェン耐性乳がんを含む乳がん、シスプラチン耐性卵巣がんを含む卵巣がん、非小細胞肺がん、及び口腔がん）、肥満、肥満関連障害の治療、及び喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬、関節リウマチとクローン病などのＩＬ－１７及び／又は好中球が重要な役割を果たすと考えられている疾患に有効性を示す可能性があることが示されている。研究では、ＴＢＫ１の阻害剤ががんの治療に効果がある可能性があることも示されている。他の研究は、ＩＫＫε及びＴＢＫ１の阻害剤が敗血症性ショックの治療／予防及び／又は炎症性疾患の治療に有効性がある可能性があることを示唆している。
【0004】
ＩＫＫεとＴＢＫ１は、Ｉ型インターフェロン（インターフェロンベータなど）の産生やインターフェロンシグネチャー遺伝子（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｓ，ＩＳＧｓ）の刺激において重要な役割を果たすことも知られている。Ｉ型インターフェロン及び／又はこの遺伝子シグネチャーのアップレギュレーションは、インターフェロノパチーと総称されることもある多くの異なる疾患に関連している（Ｖｏｌｐｉ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，１４：３５，２０１６）。アップレギュレーションされたＩＳＧシグネチャーを示すこのような疾患の１つは、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）である（Ｌｉｓｎｅｖｓｋａｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，２０１４，３８４，１８７８）。ΤΒΚΙ／ＩＫＫεのデュアル阻害剤は、Ｔｒｅｘｌノックアウトマウスモデルで有効性を示すことが報告されている（Ｈａｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１９５，４５７３）。これらのマウスは、ＴＲＥＸ１酵素の喪失の結果としてＩＳＧシグネチャーの上昇を含むループス様症状を発症する。ＴＲＥＸ１変異は、全身性エリテマトーデス、家族性凍瘡状エリテマトーデス（ｆａｍｉｌｉａｌ
ｃｈｉｌｂｌａｉｎ ｌｕｐｕｓ）、アイカルディ・グティエール症候群（Ａｉｃａｒ
ｄｉ－ Ｇｏｕｔｉｅｒｅｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）などの多くの自己免疫疾患を持つ患者に見られる。そして、これらの突然変異は、これらの病気を引き起こすのに重要な役割を果たすと考えられている（Ｇｒｉｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２０１５，１１２，５１１７）。
ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，１４：３５，２０１６）。アップレギュレーションされたＩＳＧシグネチャーを示すこのような疾患の１つは、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）である（Ｌｉｓｎｅｖｓｋａｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ，２０１４，３８４，１８７８）。ΤΒΚΙ／ＩＫＫεのデュアル阻害剤は、Ｔｒｅｘｌノックアウトマウスモデルで有効性を示すことが報告されている（Ｈａｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１９５，４５７３）。これらのマウスは、ＴＲＥＸ１酵素の喪失の結果としてＩＳＧシグネチャーの上昇を含むループス様症状を発症する。ＴＲＥＸ１変異は、全身性エリテマトーデス、家族性凍瘡状エリテマトーデス（ｆａｍｉｌｉａｌ
ｃｈｉｌｂｌａｉｎ ｌｕｐｕｓ）、アイカルディ・グティエール症候群（Ａｉｃａｒ
ｄｉ－ Ｇｏｕｔｉｅｒｅｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）などの多くの自己免疫疾患を持つ患者に見られる。そして、これらの突然変異は、これらの病気を引き起こすのに重要な役割を果たすと考えられている（Ｇｒｉｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２０１５，１１２，５１１７）。
【0005】
ＳＩＫ２は、マクロファージのシグナル伝達経路で役割を果たすことが報告されている。ＳＩＫ２はＣＲＴＣ３やＨＤＡＣ４などの抗炎症性調節因子をリン酸化し、ＩＬ－１０などの抗炎症性サイトカインの発現のダウンレギュレーションと、ＩＬ－１２やＴＮＦ－αなどの炎症性サイトカインの産生のアップレギュレーションをもたらす（Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２０１２，１０９（４２），１６９８６）。したがって、ＳＩＫ２阻害剤は、自己免疫疾患を含む炎症性疾患の治療に応用されると考えられている。
【0006】
ＩＫＫε、ＴＢＫ１、及び／又はＳＩＫ２メカニズムによって媒介される可能性のある病状には：炎症性及び組織修復障害、特に関節リウマチ、炎症性腸疾患、喘息及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；さまざまな形態のループス（全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、家族性凍瘡状エリテマトーデス、及び皮膚ループスを含む）、多発性硬化症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、アイカルディ・グティエール症候群、シェーグレン症候群などの自己免疫疾患；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）などの特定のウイルス感染を含む感染に関連する炎症；敗血症性ショックなどの異常な炎症反応；変形性関節症、骨粗鬆症及び線維化疾患；乾癬、アトピー性皮膚炎、及び紫外線（ＵＶ）による皮膚損傷を含む皮膚病；組織及び臓器の拒絶；アルツハイマー病；脳卒中；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；肥満；糖尿病；糸球体腎炎；ホジキン病を含むがん；悪液質；成人呼吸促迫症候群；毛細血管拡張性運動失調症、原発性開放隅角緑内障；そして巨細胞性動脈炎が含まれる。
【0007】
特定のピリミジニル－アミンは、プロテインキナーゼ阻害剤として作用することが知られている。例えば、国際公開第ＷＯ２００５／０１２２６２号、国際公開第ＷＯ２００９／０３２８６１号、国際公開第ＷＯ２０１１／０４６９７０号、国際公開第ＷＯ２０１２／１４２３２９号、及び国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号は、特定の上記化合物を開示している。国際公開第ＷＯ２００５／０１２２６２号では、化合物はＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＧＳＫ３、オーロラキナーゼ、及びＰＬＫ１の１つ以上の阻害剤であると述べられている。国際公開第ＷＯ２００９／０３２８６１号では、化合物は例えば、ｃ－Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）のようなプロテインキナーゼの阻害剤であると述べられている。国際公開第ＷＯ２０１１／０４６９７０号、国際公開第ＷＯ２０１２／１４２３２９号及び国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に開示されているピリミジニル－アミンは、ＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１の阻害剤として記載されている。驚くべきことに、本発明者らは、非常に特異的な置換パターンを有するピリジン置換ピリミジニル－アミンの特定のサブセットが、前述の化合物と比較して特に良好な薬物動態特性を有することを発見した。したがって、異常なＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２活性により疾患が引き起こされる患者集団に有用性を見出すこと、そして薬剤としての使用に特に適していることが期待される。
【発明の概要】
【0008】
本発明は、Ｒが－ＣＨ３又は－ＣＨ２ＣＨ３である式（Ｉ）の化合物を提供する。
より詳細には、本発明は、式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）の化合物を提供する。
さらにより詳細には、本発明は、
からなる群から選択される化合物を提供する。
【化1】
【化2】
【化3】
【0009】
本発明の化合物は、ＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２酵素（好ましくはＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１酵素）の阻害剤であり、したがって、異常なＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２活性、特に異常なＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１活性に関連する又はそれらにより引き起こされる疾患の治療に有用である。ＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２酵素の非常に効果的な阻害剤であることに加えて、本発明の化合物は、以下の実施例のセクションに示すように、優れた代謝安定性及び優れたｉｎ ｖｉｖｏでの薬物動態特性を有する。
【0010】
特に、マウスでの薬物動態研究により示されるように、本発明の化合物は、より大きな分布容積の結果として、先行技術の化合物よりも長い半減期を有することを本発明者らは見出した。当該化合物は、ヒト肝細胞クリアランスアッセイで確立されたように、良好な肝臓安定性も持っている。
【0011】
ある種（ここではマウス）の分布容積の増加は、ヒトを含む他の種のより高い分布容積を示すことが知られている（Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔ．Ａｎｄ Ｄｉｓｐ．，２０１１，３９，２１０３）。そのようなものとして、本発明の化合物はまた、ヒトにおいて大きな分布容積及び長い半減期を有し、故に先行技術の化合物よりもヒトの投与に関して優れていると期待される。
【発明を実施するための形態】
【0012】
詳細な説明
本発明の式（Ｉ）、式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）の化合物は、キラル（不斉）中心を含む。個々の立体異性体（エナンチオマー）及びこれらの混合物は、本発明の範囲内にある。立体化学が特に示されていない場合、両方のエナンチオマーは本発明の範囲内である。
本発明の式（Ｉ）、式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）の化合物は、キラル（不斉）中心を含む。個々の立体異性体（エナンチオマー）及びこれらの混合物は、本発明の範囲内にある。立体化学が特に示されていない場合、両方のエナンチオマーは本発明の範囲内である。
【0013】
本発明の好ましい一実施形態では、Ｒは－ＣＨ３である。例えば、本発明の化合物は式（Ｉａ）の化合物である：
Ｒが－ＣＨ３である実施形態では、本発明の化合物は、
及びそれらの混合物から選択することができる。
本発明の別の好ましい実施形態では、Ｒは－ＣＨ２ＣＨ３である。例えば、本発明の化合物は式（Ｉｂ）の化合物である：
Ｒが－ＣＨ２ＣＨ３である実施形態では、本発明の化合物は、
及びそれらの混合物から選択することができる。
本発明の特に好ましい一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
である。
本発明の別の特に好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は
である。
【化4】
【化5】
本発明の別の好ましい実施形態では、Ｒは－ＣＨ２ＣＨ３である。例えば、本発明の化合物は式（Ｉｂ）の化合物である：
【化6】
【化7】
本発明の特に好ましい一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
【化8】
本発明の別の特に好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は
【化9】
【0014】
本発明は、本発明の化合物の塩を含む。本発明の化合物は、例えば、鉱酸；例えば非置換又は例えばハロゲンで置換された炭素原子数１～４のアルカンカルボン酸、飽和又は不飽和ジカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸、アミノ酸のような強い有機カルボン酸；又は非置換又は例えばハロゲンで置換された（Ｃ１－Ｃ４）－アルキルスルホン酸又はアリールスルホン酸などの有機スルホン酸などの酸と付加塩を形成する。薬学的に許容される酸付加塩には、一般に、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、フタル酸、アスパラギン酸、及びグルタミン酸、リジン及びアルギニンから形成されるものが含まれる。それ自体が薬学的に許容されない塩、例えばシュウ酸などの酸に由来するものは、本発明
の化合物及びそれらの薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用であり得る。
の化合物及びそれらの薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用であり得る。
【0015】
本発明の化合物はまた、溶媒和物、例えば水和物を形成してもよく、これらも本発明の範囲内に含まれる。
【0016】
すべての個々の立体異性体、及びそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。さらに、例えば水素原子が重水素で置き換えられる同位体も本発明に含まれる。特定の同位体は、有益な生物学的特性を有し得る。例えば、他の同位体よりも改善した代謝安定性又は向上した治療活性があり、又は、特定の同位体が、例えば、炭素－１１、窒素－１３、又はフッ素－１８同位体変異体がポジトロン断層撮影法に使用されえるような生体撮像の目的に有用である可能性がある。
【0017】
異常なキナーゼ活性は、多くの病気に関係している。例えば、ｃ－Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）は、例えば脳卒中、脊髄損傷、多発性硬化症及び頭部外傷などの海馬ニューロンの興奮毒性；虚血／再灌流傷害及び、例えば脳卒中、心筋梗塞、うっ血性心不全、心肥大及びアテローム性動脈硬化を引き起こしえるか、又はこれらに関連する可能性のある病状、を含む疾患に関係している。ＪＮＫは、パーキンソン病やアルツハイマー病；神経管先天異常；関節リウマチやアテローム性動脈硬化などの慢性炎症性疾患；肥満及びインスリン抵抗性糖尿病；及びがんなどの神経変性疾患にも関連している。例えば乳がんなど多くの疾患は個々の患者に同じ総体的な症状を示すことが知られており、疾患は患者ごとに異なる様々な生化学的メカニズムによって引き起こされ、維持されえることが知られている。したがって、多くのそのような疾患の場合、治療の有効性は、病状を促進及び維持する生化学的メカニズムに大きく依存する。
【0018】
本発明の化合物は、ＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２の阻害剤であり、したがって、異常なＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２活性に関連する又は引き起こされる疾患の治療に有用である。ＩＫＫε、ＴＢＫ１、及び／又はＳＩＫ２メカニズムによって媒介される可能性のある病状には以下が含まれる：炎症性及び組織修復障害、例えば関節リウマチ、炎症性腸疾患、喘息及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；自己免疫疾患、例えばループス（例えば、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、家族性凍瘡状エリテマトーデス、及び皮膚ループス）、多発性硬化症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、アイカルディ・グティエール症候群、及びシェーグレン症候群；感染に関連する炎症、例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を含むウイルス感染に関連する炎症；異常な炎症反応、例えば、敗血症性ショック；変形性関節症、骨粗鬆症及び線維化疾患；皮膚病、例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎、及び紫外線（ＵＶ）による皮膚損傷；組織及び臓器の拒絶；アルツハイマー病；脳卒中；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；肥満；糖尿病；糸球体腎炎；がん、例えば、ホジキン病；悪液質；成人呼吸促迫症候群；毛細血管拡張性運動失調症、原発性開放隅角緑内障；そして巨細胞性動脈炎。
【0019】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１の阻害剤であり、異常なＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１活性に関連する又は引き起こされる疾患の治療に有用である。
【0020】
本発明の化合物は、少数のキナーゼ、ＩＫＫε、ＴＢＫ１、及び／又はＳＩＫ２の選択的阻害剤であるため、選択性の低い化合物よりも副作用の少ない疾患の治療に使用できると予想される。また、特定の患者集団における疾患の標的化、すなわち異常なＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２活性によって疾患が特異的に引き起こされる場合に特定の有用性を見出すことも期待される。
【0021】
特に、本発明の化合物は、炎症性及び組織修復障害、特に関節リウマチ；及び自己免疫疾患、特にループスの治療に有用であると期待される。ループスのサブタイプは、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、家族性凍瘡状エリテマトーデス、及び皮膚ループスが含まれるが、これらに限定されない。本発明の化合物は、増加したインターフェロンシグネチャー遺伝子（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｓ，ＩＳＧｓ）プロファイル、特に自己免疫疾患、特にループス、さらに特に増加したＩＳＧｓプロファイルを伴うループス、例えば家族性凍瘡状エリテマトーデスに関連する疾患又は障害の治療にも有用であると期待される。本発明の化合物は、インターフェロン関連疾患の治療にも有用であると期待される。「インターフェロン関連疾患」という用語に分類される疾患は、Ｉ型インターフェロン及び／又はＩＳＧプロファイルのアップレギュレーションが共通して見られる疾患である。「インターフェロン関連疾患」の例には、家族性凍瘡状エリテマトーデス、アイカルディ・グティエール症候群、脊樵内軟骨腫症、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ－Ｍｅｒｔｅｎ症候群、及びＳＡＶＩ（乳児発症ＳＴＩＮＧ関連血管炎）が含まれる。
【0022】
また、本発明の化合物は、がんの治療、特に疾患がＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１活性又はＳＩＫ２活性に関連する患者集団の治療に有用であると期待される。ＩＫＫεは、タモキシフェン耐性乳がんを含む乳がん、シスプラチン耐性卵巣がんを含む卵巣がん、腫瘍成長及び／又は生存がＩＫＫεキナーゼ活性に依存するがん、Ｒａｓ変異及びＲａｓ依存性腫瘍を有するがん、及びｌｑ３２遺伝子座の増殖を伴うがんに関与している。ＴＢＫ１は、Ｋ－ｒａｓ変異及びＫ－ｒａｓ依存性腫瘍を有するがん、Ｒａｓ変異を有するがん及びＲａｓ依存性のがん、乳がん、肺がん、特に非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、前立腺がん、骨髄腫、白血病、口腔がん、膵臓がん、腸がん及び皮膚がんに関与している。ＳＩＫ２はがん細胞の成長を促進することが示されており、がん細胞におけるＳＩＫ２の枯渇は、がん細胞の成長の大幅な減少、Ｇ１／Ｓ移行の遅延及びセリン４７３上のアポトーシス調節因子ＡＫＴのリン酸化の減少をもたらす。培養液中及び異種移植片において、ＳＩＫ２の喪失はまた、がん細胞を化学療法剤パクリタキセルに感作させた（Ａｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ、２０１０）。ＳＩＫ２は、特に卵巣がんの成長と転移に関連している。
【0023】
がん、特にＩＫＫε、ＴＢＫ１、及び／又はＳＩＫ２に関連するがんに加えて、本発明の化合物は、肥満（ＩＫＫεが関係する）の治療及び予防；そして低酸素により誘発される血管新生が重要な疾患、例えば敗血症性ショック、及び原発性開放隅角緑内障（すべてＴＢＫ１が関与している）の治療と予防に特に有用であると予想される。
【0024】
したがって、本発明は、薬学的に適切な担体と共に本発明による化合物を含む医薬組成物を提供する。そのような組成物は、単独の活性剤として本発明の化合物を含有してもよく、又はさらなる活性剤を含有してもよい。
【0025】
本発明はさらに、本発明による化合物又は組成物の被験体への投与を含む、被験体（好ましくは人間の被験体）におけるＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２メカニズムにより媒介される疾患（特に、ＩＫＫε及び／又はＴＢＫ１メカニズムによって媒介される疾患；及び／又は特に上記の疾患のいずれか）を治療又は予防する方法；治療における使用、及び／又は薬剤としての使用、特に上記の疾患のいずれかの治療又は予防における使用のための本発明による化合物又は組成物；及び上記の疾患のいずれかの治療に使用するための薬剤の製造に使用するための本発明による化合物を提供する。好ましくは、化合物又は組成物は、哺乳動物、特にヒトに投与される。
【0026】
本発明の化合物は、単独の活性剤として使用され得るが、１つ以上のさらなる活性剤（「追加の活性剤」とも呼ばれ得る）と組み合わせて使用されることも可能である。そのようなさらなる活性剤は、本発明によるさらなる化合物であってもよく、又はそれらは異な
る治療剤、例えば上記の疾患の１つ、特に本発明の化合物が標的とする疾患と同じ疾患を標的とする薬剤であってもよい。本発明の化合物は、１つ以上のさらなる活性剤と共製剤化され得るか、又は別個に製剤化され、１つ以上のさらなる活性剤と連続的、同時的又は逐次的に投与され得る。
る治療剤、例えば上記の疾患の１つ、特に本発明の化合物が標的とする疾患と同じ疾患を標的とする薬剤であってもよい。本発明の化合物は、１つ以上のさらなる活性剤と共製剤化され得るか、又は別個に製剤化され、１つ以上のさらなる活性剤と連続的、同時的又は逐次的に投与され得る。
【0027】
治療効果を達成するために必要な活性剤の量は、当然、特定の化合物、投与経路、被験体の種類、種、年齢、体重、性別、及び被験体の医学的状態と被験体の腎及び肝機能を含む治療中の被験体、及び治療中の特定の障害又は疾患、そしてその重症度によって異なる。通常の熟練した医師又は獣医は、病状の進行を防止、対抗、又は阻止するために必要な薬剤の有効量を容易に決定及び処方できる。
【0028】
優れた薬物動態特性により、本発明の化合物は、他の既知のＩＫＫε、ＴＢＫ１及び／又はＳＩＫ２阻害剤よりも低い総投薬量で及び／又はより少ない頻度での投与で提供され得る。
【0029】
本発明の化合物は有利に、１日量を１回で投与してもよく、又は１日総投薬量を１日２、３又は４回の分割量で投与してもよい。
【0030】
本発明による医薬製剤には、経口投与、非経口投与（皮下、皮内、筋肉内、静脈内（ボーラス（ｂｏｌｕｓ）又は注入）、及び関節内を含む）、吸入（各種の定量加圧エアロゾルによって生成され得る微粒子ダスト又はミストを含む）、ネブライザー又は吸入器、経直腸投与、腹腔内投与及び局所投与（真皮、頬、舌下、及び眼内を含む）に適したものが含まれるが、最も適切な経路は、例えば受容者の病状及び障害に依存し得る。本発明による好ましい医薬製剤は、経口及び非経口投与に適したものである；そして、より好ましくは経口投与に適したものである。別の実施形態において、本発明の化合物は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所使用により鼻腔内形式で投与され、又は当業者に周知の経皮皮膚パッチの形式を使用する経皮経路により投与され得る。経皮送達システムの形態で投与されるために、投薬量の投与は、当然、投薬計画を通して断続的ではなく連続的である。
【0031】
製剤は、単位剤形で便利に提供されてもよく、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。すべての方法には、活性剤を、１つ又は複数の副成分を構成する担体と組み合わせるステップが含まれている。一般に、製剤は、活性剤を液体担体又は微粉化した固体担体又はその両方と均一かつ密接に組み合わせ、その後、必要に応じて製品を所望の製剤に成形することにより調製される。
【0032】
本発明の経口投薬量は、示されている効果のために使用される際、成人の場合、１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）から１０ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ／日から５．０ｍｇ／ｋｇ／日、さらにより好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ／日から３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。１日の総経口投薬量の例は、１ｍｇから３００ｍｇ、より好ましくは約１０ｍｇから約２５０ｍｇ、さらにより好ましくは約７５ｍｇから約２００ｍｇ（例えば１００ｍｇ）であり得る。経口投与の場合、治療される患者への投薬量の対症的調整のために、組成物は、好ましくは、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、及び５００ミリグラムの活性剤を含む別個の単位で提供される錠剤又は他の形態で提供される。薬剤は、典型的には、約０．０１ｍｇから約５００ｍｇの活性剤、好ましくは約１ｍｇから約３００ｍｇの活性剤、より好ましくは約１０ｍｇから約２５０ｍｇの活性剤、最も好ましくは約７５ｍｇから約２００ｍｇの活性剤（例えば、１００ｍｇの活性剤）を含む。静脈内では、最も好ましい用量は、定速注入の間に約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲になる。
【0033】
経口投与に適した本発明の製剤は、それぞれが所定量の活性剤を含むカプセル、カシェ剤、丸剤又は錠剤などの別個の単位として；粉末又は顆粒として；水性液体又は非水性液体の溶液又は懸濁液として；又は水中油型液体エマルジョン又は油中水型液体エマルジョンとして提供され得る。活性剤は、ボーラス、舐剤又はペーストとして提供されてもよい。
【0034】
本化合物は、例えば、即時放出又は持続放出に適した形態で投与することができる。即時放出又は持続放出は、本化合物を含む適切な医薬組成物の使用により、又は特に持続放出の場合、皮下インプラント又は浸透圧ポンプなどのデバイスの使用により達成され得る。
【0035】
経口投与用の例示的な組成物には、例えば、バルクを与えるための微結晶セルロース、懸濁剤としてのアルギン酸又はアルギン酸ナトリウム、粘度増強剤としてのメチルセルロース、及び当分野で知られている甘味料又は香味料などを含むことができる懸濁液；及び、例えば、微結晶セルロース、リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、ソルビトール、グルコース及び／又はラクトース及び／又は当分野で知られている他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤及び潤滑剤などを含むことができる即時放出錠剤が含まれる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、グルコース又はベータラクトースなどの天然糖、コーン甘味料、アカシア、トラガカント又はアルギン酸ナトリウムなどの天然及び合成ゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれるが、これらに限定されない。本発明の化合物は、舌下及び／又は頬側投与により口腔を通して送達することもできる。成形錠剤、圧縮錠剤又は凍結乾燥錠剤は、使用できる例示的な形態である。例示的な組成物には、マンニトール、ラクトース、スクロース及び／又はシクロデキストリンなどの速溶性希釈剤で本化合物を製剤にするものが含まれる。そのような製剤には、セルロース（アビセル）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高分子量賦形剤も含まれ得る。そのような製剤は、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＳＣＭＣ）、無水マレイン酸共重合体（例えば、ガントレッツ）、及びポリアクリル共重合体（例えば、カーボポール９３４）のような放出を制御する薬剤などの粘膜付着を助ける賦形剤も含むことができる。加工及び使用を容易にするために、潤滑剤、滑剤、香料、着色剤、及び安定剤を追加することもできる。これらの投薬形態で使用される潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。液体形態での経口投与の場合、経口薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの任意の経口、非毒性、薬学的に許容される不活性担体と組み合わせることができる。
【0036】
非経口投与用の製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を対象受容者の血液と等張にする溶質を含み得る水性及び非水性滅菌注射液、並びに、懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液を含む。製剤は、単位用量容器又は複数用量容器、例えば密封アンプル及びバイアルで提供されてもよく、使用直前に生理食塩水又は注射用水などの滅菌液体担体の添加のみを必要とする場合のみに凍結乾燥された（凍結乾燥）状態で保管されてもよい。即時注射液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、及び前述の種類の錠剤から調製され得る。非経口投与のための典型的な組成物には、例えば、マンニトール、１，３－ブタンジオール、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液のような適切な非毒性の非経口的に許容される希釈剤若しくは溶媒、又は合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む他の適切な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁剤、及びオレイン酸又はクレモホールを含む脂肪酸を含むことができる注射可能な溶液又は懸濁液が含まれる。
【0037】
経鼻、エアロゾル又は吸入投与の典型的な組成物には、例えば、ベンジルアルコール又は他の適切な防腐剤、生物学的利用能を高める吸収促進剤、及び／又は当技術分野で知られている他の可溶化剤又は分散剤を含み得る生理食塩水の溶液が含まれる。
【0038】
直腸投与用の製剤は、カカオバター、合成グリセリドエステル又はポリエチレングリコールなどの通常の担体を含む坐剤として提供される場合がある。そのような担体は、通常、常温では固体であるが、直腸腔内で液化及び／又は溶解して薬物を放出する。
【0039】
例えば頬側又は舌下の口内局所投与用製剤には、ショ糖とアカシア又はトラガカントなどの風味付けされた基剤に活性剤を含むロゼンジ、並びにゼラチンとグリセリン又はショ糖とアカシアなどの基剤に活性剤を含むトローチが含まれる。局所投与のための典型的な組成物には、プラスチベース（ポリエチレンでゲル化された鉱油）などの局所担体が含まれる。
【0040】
特に上述した薬剤及び／又は成分に加えて、本発明の製剤は当該製剤の種類に関連する当技術分野における従来の他の薬剤、例えば香味剤が含まれ得る経口投与に適した薬剤を含み得ることを理解されたい。
【実施例】
【0041】
以下の実施例は本発明を説明する。
［使用された略語］
Ａｃ－アセチル
ａｑ－水性（ａｑｕｅｏｕｓ）
ＣＶ－カラムボリューム
ｄｂａ－ジベンジリデンアセトン
ＤＣＭ－ジクロロメタン
ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド
ｄｐｐｆ－１，１’－フェロセンジイル－ビス（ジフェニルホスフィン）
ｅｑ－当量
ｈ－時間
ｑｕａｎｔ－定量
ｍｉｎ－分
ＴＥＡ－トリエチルアミン
Ｒｔ－保持時間
［使用された略語］
Ａｃ－アセチル
ａｑ－水性（ａｑｕｅｏｕｓ）
ＣＶ－カラムボリューム
ｄｂａ－ジベンジリデンアセトン
ＤＣＭ－ジクロロメタン
ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド
ｄｐｐｆ－１，１’－フェロセンジイル－ビス（ジフェニルホスフィン）
ｅｑ－当量
ｈ－時間
ｑｕａｎｔ－定量
ｍｉｎ－分
ＴＥＡ－トリエチルアミン
Ｒｔ－保持時間
【0042】
［使用した分析方法］
分析ＬＣ－ＭＳ
ＨＰＬＣ分析法：
方法Ａ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）３μｍ、５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％；４５℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、１．０ｍｉｎ ３７．５％、３．０ｍｉｎ ９５％、３．５ｍｉｎ ９５％、３．５１ｍｉｎ ５％、４．０ｍｉｎ ５％；２．２５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｂ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）３μｍ、５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；４５℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、１．０ｍｉｎ ３７．５％、３．０ｍｉｎ ９５％、３．５ｍｉｎ ９５％、３．５１ｍｉｎ ５％、４．０ｍｉｎ ５％；２．２５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｃ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８ ５μｍ、１５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；４０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、０．５ｍｉｎ ５％、７．５ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１
０．０１ｍｉｎ ５％、１３ｍｉｎ ５％；１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｄ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８ ５μｍ、１５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水性ｐＨ９，１０ｍＭ重炭酸アンモニウム；Ｂ＝ＭｅＯＨ；４０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、０．５ｍｉｎ ５％、７．５ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．０１ｍｉｎ ５％、１３ｍｉｎ ５％；１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
分析ＬＣ－ＭＳ
ＨＰＬＣ分析法：
方法Ａ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）３μｍ、５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％；４５℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、１．０ｍｉｎ ３７．５％、３．０ｍｉｎ ９５％、３．５ｍｉｎ ９５％、３．５１ｍｉｎ ５％、４．０ｍｉｎ ５％；２．２５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｂ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）３μｍ、５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；４５℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、１．０ｍｉｎ ３７．５％、３．０ｍｉｎ ９５％、３．５ｍｉｎ ９５％、３．５１ｍｉｎ ５％、４．０ｍｉｎ ５％；２．２５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｃ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８ ５μｍ、１５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；４０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、０．５ｍｉｎ ５％、７．５ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１
０．０１ｍｉｎ ５％、１３ｍｉｎ ５％；１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
方法Ｄ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８ ５μｍ、１５０×４．６ｍｍ；Ａ＝水性ｐＨ９，１０ｍＭ重炭酸アンモニウム；Ｂ＝ＭｅＯＨ；４０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ ５％、０．５ｍｉｎ ５％、７．５ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．０１ｍｉｎ ５％、１３ｍｉｎ ５％；１．５ｍＬ／ｍｉｎ。
【0043】
ＮＭＲ
ＮＭＲはまた多くの実施例に特徴づけるように使用された。ＮＭＲスペクトルは、特に明記しない限り、室温でＢｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ４００、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＲＸ
４００又はＪｅｏｌ ４００ ＥＣＳ ＮＭＲ機器で取得された。１Ｈ ＮＭＲスペクトルはｐｐｍで報告され、残留溶媒ピーク、例えばＤＭＳＯ－ｄ６（２．５０ｐｐｍ）、ＣＤＣｌ３（７．２６ｐｐｍ）又はＣＤ３ＯＤ（３．３１ｐｐｍ）を参照する。
ＮＭＲはまた多くの実施例に特徴づけるように使用された。ＮＭＲスペクトルは、特に明記しない限り、室温でＢｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ４００、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＲＸ
４００又はＪｅｏｌ ４００ ＥＣＳ ＮＭＲ機器で取得された。１Ｈ ＮＭＲスペクトルはｐｐｍで報告され、残留溶媒ピーク、例えばＤＭＳＯ－ｄ６（２．５０ｐｐｍ）、ＣＤＣｌ３（７．２６ｐｐｍ）又はＣＤ３ＯＤ（３．３１ｐｐｍ）を参照する。
【0044】
精製のための分取ＨＰＬＣ方法
逆相分取ＨＰＬＣ－ＭＳ：分取Ｃ－１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）５μｍ、１００×２１．２ｍｍ）を使用する分取ＬＣ－ＭＳによる分離精製が、多くの実施例の精製に使用された。
これは、酸性（～ｐＨ２）又は塩基性（～ｐＨ９）のいずれかの条件を使用して実行された。
一般的な酸性条件：
Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；２０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ 初期２％から５０％、初期ごとに０．１ｍｉｎ％、７．０ｍｉｎ ４０％から９５％、９．０ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．１ｍｉｎ 初期％に戻る；１２．０ｍｉｎ 初期％；２０．０ｍＬ／ｍｉｎ。
一般的な塩基性条件：
Ａ＝水ｐＨ９（重炭酸アンモニウム１０ｍＭ）；Ｂ＝ＭｅＯＨ；２０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ 初期２％から５０％、初期ごとに０．１ｍｉｎ％、７．０ｍｉｎ ４０％から９５％、９．０ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．１ｍｉｎ 初期％に戻る；１２．０ｍｉｎ 初期％；２０．０ｍＬ／ｍｉｎ。
逆相分取ＨＰＬＣ－ＭＳ：分取Ｃ－１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）５μｍ、１００×２１．２ｍｍ）を使用する分取ＬＣ－ＭＳによる分離精製が、多くの実施例の精製に使用された。
これは、酸性（～ｐＨ２）又は塩基性（～ｐＨ９）のいずれかの条件を使用して実行された。
一般的な酸性条件：
Ａ＝水＋０．１％ギ酸；Ｂ＝ＭｅＯＨ＋０．１％ギ酸；２０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ 初期２％から５０％、初期ごとに０．１ｍｉｎ％、７．０ｍｉｎ ４０％から９５％、９．０ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．１ｍｉｎ 初期％に戻る；１２．０ｍｉｎ 初期％；２０．０ｍＬ／ｍｉｎ。
一般的な塩基性条件：
Ａ＝水ｐＨ９（重炭酸アンモニウム１０ｍＭ）；Ｂ＝ＭｅＯＨ；２０℃；％Ｂ：０．０ｍｉｎ 初期２％から５０％、初期ごとに０．１ｍｉｎ％、７．０ｍｉｎ ４０％から９５％、９．０ｍｉｎ ９５％、１０．０ｍｉｎ ９５％、１０．１ｍｉｎ 初期％に戻る；１２．０ｍｉｎ 初期％；２０．０ｍＬ／ｍｉｎ。
【0045】
［式（Ｉ）の化合物の合成］
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリルの合成（第１例）：
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリルの合成（第１例）：
【化10】
【0046】
５－ブロモ－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリル
（中間体３）
５－ブロモ－２－クロロニコチノニトリル（４．１０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、（Ｓ）－（＋）－３－フルオロピロリジン．ＨＣｌ（２．５０ｇ、１９．９ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）及びＴＥＡ（５．３０ｍＬ，３８．０ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）で混合し、電子レンジで２０分間、１００℃で加熱した。反応を小規模で２回繰り返した（５－ブロモ－２－クロロニコチノニトリル（２．０５ｇ、９．４３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）；（Ｓ）－（＋）－３－フルオロピロリジン．ＨＣｌ（１．２５ｇ、９．９５ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）；ＴＥＡ（２．６５ｍＬ，１９．０ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ）；アセトニトリル（１５ｍＬ））。３つの反応物を混合し、溶媒を真空下で除去した。化合物１（５－ブロモ－２－クロロニコチノニトリル）がまだいくらか残っていたため、残留物を乾燥アセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解し、（Ｓ）－（＋）－３－フルオロピロリジン．ＨＣｌ（０．４８９ｇ、３．９ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（１０．０ｍＬ、７１．７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃で４時間加熱した。反応物を室温まで冷却させ、溶媒を真空下で除去した。残留物をＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解し、０．１Ｎ
ＨＣｌ（２００ｍＬ）、次にブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空下で除去して、淡褐色の固体として中間体３を得た（９．６０ｇ、収率９４．０％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝３．１５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ２７０（ＭＨ＋）。
（中間体３）
【化11】
ＨＣｌ（２００ｍＬ）、次にブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空下で除去して、淡褐色の固体として中間体３を得た（９．６０ｇ、収率９４．０％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝３．１５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ２７０（ＭＨ＋）。
【0047】
５－（２－クロロ－ピリミジン－４－イル）－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリル（中間体４）
中間体３（９．６０ｇ、３５．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ビス－ピナコラトジボロン（１０．８ｇ、４２．５ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及びＫＯＡｃ（６．９８ｇ、７１．１ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を１，４－ジオキサン（２５０ｍＬ）に溶解した。混合物をＮ２（ｇ）で１５分間脱酸素化した。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＤＣＭ（１．４５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を加え、溶液を３時間加熱還流した。中間体のボロン酸とボロン酸エステルが形成された（ＬＣＭＳ Ｒｔ＝２．３４ｍｉｎ及び３．３７ｍｉｎ（方法Ｂ
）、ｍ／ｚ＝２３６及び３１８）。Ｋ２Ｃ０３（９．８１ｇ、７１．１ｍｍｏｌ、２．００ｅｑ）、２，４－ジクロロピリミジン（５．８２ｇ、３９．１ｍｍｏｌ、１．１０ｅｑ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）３（３．２５ｇ、２．８ｍｍｏｌ、８ｍｏｌ％）及びＨ２Ｏ（１２５ｍＬ）を反応物に加え、混合物を１００℃でさらに２時間加熱した。混合物を室温まで冷却させ、溶液を１６時間放置した。溶媒を真空下で除去し、ＤＣＭ（４００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、層が分離された。有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空下で除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰカートリッジ、イソヘキサン中２５％酢酸エチル～イソヘキサン中５０％酢酸エチル）により精製した。所望の物質を含むフラクションを混合し、そして真空下で溶媒を除去した。当該フラクションの分析により、トリフェニルホスフィンオキシドの存在が示された。粗化合物（８．９０ｇ）を３つのバッチに分離し、それぞれをフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰカートリッジ１００ｇ、イソヘキサン中２０％酢酸エチル～イソヘキサン中５０％酢酸エチル）により個別に精製した。溶媒を真空下で除去し、中間体４の３つのバッチを混合し黄色の固体を得た（７．７７ｇ、７２％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝３．０８ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ３０４（ＭＨ＋）。
【化12】
）、ｍ／ｚ＝２３６及び３１８）。Ｋ２Ｃ０３（９．８１ｇ、７１．１ｍｍｏｌ、２．００ｅｑ）、２，４－ジクロロピリミジン（５．８２ｇ、３９．１ｍｍｏｌ、１．１０ｅｑ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）３（３．２５ｇ、２．８ｍｍｏｌ、８ｍｏｌ％）及びＨ２Ｏ（１２５ｍＬ）を反応物に加え、混合物を１００℃でさらに２時間加熱した。混合物を室温まで冷却させ、溶液を１６時間放置した。溶媒を真空下で除去し、ＤＣＭ（４００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、層が分離された。有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空下で除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰカートリッジ、イソヘキサン中２５％酢酸エチル～イソヘキサン中５０％酢酸エチル）により精製した。所望の物質を含むフラクションを混合し、そして真空下で溶媒を除去した。当該フラクションの分析により、トリフェニルホスフィンオキシドの存在が示された。粗化合物（８．９０ｇ）を３つのバッチに分離し、それぞれをフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰカートリッジ１００ｇ、イソヘキサン中２０％酢酸エチル～イソヘキサン中５０％酢酸エチル）により個別に精製した。溶媒を真空下で除去し、中間体４の３つのバッチを混合し黄色の固体を得た（７．７７ｇ、７２％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝３．０８ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ３０４（ＭＨ＋）。
【0048】
５－ブロモ－２－ブロモメチル－ピリジン（中間体６）
５－ブロモ－２－（ヒドロキシメチル）ピリジン（１４．０ｇ、７４．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をアセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解し、三臭化リン（９．０ｍＬ、９７．０ｍｍｏｌ、１．３０ｅｑ）を１０分間かけて滴下し、白い懸濁液を得た。得られた混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を５０％ＮａＯＨ（ａｑ）でｐＨ７に達するまで中和する前に、水（１５ｍＬ）を加えた。水（１００ｍＬ）とＤＣＭ（２００ｍＬ）を加え、混合物を分離した。水層をＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄した。混合された有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして真空下で溶媒を除去して紫色のオイルを得た（１８．５ｇ、９９．５％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝２．７１ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ２５０、２５２（ＭＨ＋）。中間体６は、以降の反応でさらに精製することなく使用された。
【化13】
【0049】
１－（５－ブロモ－ピリジン－２－イルメチル）－４－エチル－ピペラジン（中間体７）
アセトニトリル（１５０ｍＬ）中の中間体６（１８．５ｇ、７４．０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の攪拌溶液に、Ｎ－エチルピペラジン（１０．３ｍＬ、８１．０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）及びＴＥＡ（３１．０ｍＬ、２２２ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）を添加し、そして当該溶液を室温で２．５時間撹拌した。真空下で溶媒を除去し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ３４０ｇ、１％ＴＥＡを含むＤＣＭ中の０％～１５％のメタノール）により精製した。所望の生成物を含むフラクションを混合し、真空下で溶媒を除去した。生成物をさらに４８時間真空下乾燥して、茶色の固体として中間体７を得た（１５．２ｇ、７２．３％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．
１５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ２８４，２８６（ＭＨ＋）。
【化14】
１５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ２８４，２８６（ＭＨ＋）。
【0050】
ベンズヒドリリデン－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イル］－アミン（中間体８）
中間体７（１５．２ｇ、５３．４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ベンゾフェノンイミン（１１．７ｍＬ、６９．５ｍｍｏｌ、１．３０ｅｑ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５９９ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）、キサントホス（１．３４ｇ、４．８１ｍｍｏｌ、９ｍｏｌ％）及びＫＯｔＢｕ（９．０ｇ、８０．２ｍｍｏｌ、１．５０ｅｑｕｉｖ）を１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）に混合し、当該混合物をＮ２（ｇ）で２０分間脱酸素した後、１２０℃に５時間加熱した。追加のＰｄ（ＯＡｃ）２（１２０ｍｇ、１ｍｏｌ％）、キサントホス（１４８ｍｇ、１ｍｏｌ％）及びＫＯｔＢｕ（３５９ｍｇ、６ｍｏｌ％）を加え、当該混合物を１２０℃で１時間撹拌した。反応物を室温まで冷却し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、生成物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。混合された有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして真空下で溶媒を除去した。暗褐色のオイルとして所望の標的中間体８を得た（２１．５ｇ、ｑｕａｎｔ）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝２．１３ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ３８５（ＭＨ＋）。中間体８は、以後の反応でさらに精製することなく使用された。
【化15】
【0051】
６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミン（中間体９）
中間体８（２１．５ｇ、５５．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ヒドロキシルアミン．ＨＣｌ（７．８０ｇ、１１２ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）及び酢酸ナトリウム（１１．５ｇ、１３９ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）をエタノール（２００ｍＬ）で混合し、室温で２時間撹拌した。当該混合物を濾過し、真空下で溶媒を除去して、茶色のオイルを得た。これが酢酸エチル（１００ｍＬ）と０．５Ｍ ＮａＯＨ（ａｑ）（５０ｍＬ）の間で分配され、分離された。混合された有機物を０．５Ｍ ＮａＯＨ（ａｑ）（５０ｍＬ）で洗浄し、混合された水層を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で洗浄した。水層を０．５Ｎ ＨＣｌ（ａｑ）で中和し、溶媒を真空下で除去して黄色の固体を得た。これをメタノールに溶解し、キャッチリリースカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＣＸ－２；５０ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、１．０Ｍ ＮＨ３／メタノール（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去して、粗生成物を得た。これをＤＣＭに溶解し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ３４０ｇ、ＤＣＭ１％ＴＥＡ中５％メタノール～ＤＣＭ１％ＴＥＡ中１５％メタノール）により精製した。フラクションを分析し、所望の物質を含むフラクションを混合し、真空下で溶媒を除去して、黄色のオイルとして中間体９を得、これは静置すると固化して黄色のワックス（２．１２ｇ、１８％）を形成した；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．７９ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ ｚ２２１（ＭＨ＋）。
【化16】
【0052】
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルア
ミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリル（第１例）：
中間体４（１．６ｇ、５．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、中間体９（１．４ｇ、６．４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４８０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）、Ｄａｖｅｐｈｏｓ（４００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、２０ｍｏｌ％）とＮａＯｔＢｕ（７６０ｍｇ、７．９ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）で混合し、当該混合物をＮ２で１５分間脱酸素した後、電子レンジで１２０℃で２０分加熱した。混合物をシリカにロードし、フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ、１００ｇ、５％（メタノール中０．７Ｍ ＮＨ３）／ジクロロメタンで溶出）により精製して、オレンジ色の固体（１．４ｇ）として所望の生成物を得た。この物質を逆相分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２）によりさらに精製し、続いて溶媒を蒸発させ、凍結乾燥して、白色固体として第１例（６５０ｍｇ、２３％）を得た。第１例はギ酸塩として分離された；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝８．０９ｍｉｎ（方法Ｄ）、Ｒｔ＝５．０６ｍｉｎ（方法Ｃ）、ｍ／ｚ ４８８（ＭＨ＋）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ９．８０（１Ｈ、ｓ）、９．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．８６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）、８．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．５１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、８．１９（１Ｈ、ｓ）、８．１５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．５Ｈｚ）、７．４５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、７．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、５．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５２．８Ｈｚ）、４．１１－３．９０（３Ｈ、ｍ）、３．８９－３．７０（１Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｓ）、２．４９－２．３０（１０Ｈ、ｍ）、２．３０－２．１０（２Ｈ、ｍ）、０．９８（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）。
ミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリル（第１例）：
【化17】
【0053】
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｒ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリルの合成（第２例）：
【化18】
【0054】
５－（２－クロロ－ピリミジン－４－イル）－２－メトキシ－ニコチノニトリル（中間体１１）
５－ブロモ－２－メトキシニコチノニトリル（１０）（１２．５ｇ、５８．７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ビス－ピナコラトジボロン（１７．９ｇ、７０．４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及びＫＯＡｃ（８．６ｇ、８８．０ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を１，４－ジオキサン（１４０ｍＬ）に混合し、そして当該溶液をＮ２で２５分間脱酸素した。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．３０ｇ、１．７６ｍｍｏｌ、３ｍｏｌ％）を加え、得られた溶液を１００℃で２時間加熱した。２，４－ジクロロピリミジン（９．６ｇ、６４．５ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１６．２ｇ、１１７ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）３（３．４ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を添加し、溶液を１００℃で１．５時間加熱した。混合物を室温まで冷却した後、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）でさらに希釈した。生成物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）に抽出し、混合された有機層を相分離器に通した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物をイソプロパノールから再結晶し、次いで濾過し、真空乾燥して、褐色固体として中間体１１を得た（１１．３ｇ、７８％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝２．８８ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ＝２４７（ＭＨ＋）。
【化19】
【0055】
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－メトキシ－ニコチノニトリル（中間体１２）
中間体１１（８６２ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ、１．１０ｅｑ）、中間体５（７００ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２９０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）、Ｄａｖｅｐｈｏｓ（２５０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、２０ｍｏｌ％）及びＮａＯｔＢｕ（３３６ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を１，４－ジオキサン（１５ｍＬ）で混合した。当該混合物をＮ２で脱酸素してから、電子レンジで１５分間１００℃に加熱した。溶媒を真空下で除去し、得られた残留物をメタノールに溶解した。この溶液をキャッチリリースカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ、ＳＣＸ－２；２５ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、１Ｍ ＮＨ３／メタノール（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去して、茶色の泡状物として粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ５０ｇ、ＤＣＭ中０％ＭｅＯＨ～ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ）で精製した。所望の物質を含むフラクションを混合し、溶媒を真空下で除去して、薄茶色の固体として所望の標的中間体１２を得た（１．３０ｇ、ｑｕａｎｔ）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．８４ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ４３１（ＭＨ＋）。
【化20】
【0056】
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－ヒドロキシ－ニコチノニトリル（中間体１３）
中間体１２（５００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をジオキサン（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌに溶解し、そして当該混合物を電子レンジで１５分間１００℃に加熱した。溶媒を真空下で除去し、残留物を８０％メタノール／ＤＣＭで粉砕した。溶媒を真空下で除去して、薄茶色の固体として所望の中間体１３を得た（１．０２ｇ、ｑｕａｎｔ）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．３７ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ４１７（ＭＨ＋）。
【化21】
【0057】
２－クロロ－５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－ニコチノニトリル（中間体１４）
中間体１３（５．６０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＰＯＣｌ３（３０ｍＬ）と混合し、得られた懸濁液を１１０℃で３時間加熱した。当該反応混合物を氷水溶液に４５分かけて滴下し、次いでｐＨ７に達するまで０．５Ｍ ＮａＯＨ（ａｑ）で中和した。ゲルが形成され、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）及びＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈した。当該混合物を分離し、水層をＤＣＭ（２×２００ｍＬ）でさらに洗浄した。混合した有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして真空下で溶媒を除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ５０ｇ、１％ＴＥＡを含むＤＣＭ中０％ＭｅＯＨ～１％ＴＥＡを含むＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨ）で精製した。所望の物質を含むフラクションを混合し、溶媒を真空下で除去して、黄色の固体として中間体１４を得た（２５０ｍｇ、１０％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．７５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ４３５（ＭＨ＋）。
【化22】
【0058】
５－｛２－［６－（４－エチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－２－（（Ｒ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－ニコチノニトリル（第２例）
中間体１４（８５．０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を（Ｒ）－フルオロピロリジン（２７．０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）及びＴＥＡ（８２．０μＬ、０．５９ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）とアセトニトリル（２ｍＬ）中で混合し、当該混合物を電子レンジで１００℃で１時間加熱した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物をメタノールに再溶解した。この溶液をキャッチリリースカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＣＸ－２；５ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、そして１．０Ｍ ＮＨ３／メタノール（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去し、残留物をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、ｐＨ９で逆相ＬＣ－ＭＳにより精製した。所望の生成物を含むフラクションを混合し、真空下で溶媒を除去した。残留物を１：１Ｈ２Ｏ／アセトニトリルに溶解し、凍結（－７８℃）し、溶媒を凍結乾燥により除去して、オフホワイトの固体として第２例を得た（３１．０ｍｇ、３８％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝８．１０ｍｉｎ（方法Ｄ）、Ｒｔ＝５．０５ｍｉｎ（方法Ｃ）ｍ／ｚ ４８８（ＭＨ＋）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ９．７９（１Ｈ、ｓ）、９．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．８６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、８．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）、８．５１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、８．１５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．７、２．３Ｈｚ）、７．４６（１
Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、５．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５３．１Ｈｚ）、４．１２－３．９０（３Ｈ、ｍ）、３．８９－３．７９（１Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｓ）、２．４８－２．１０（１２Ｈ、ｍ）、０．９６（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）。
【化23】
Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、５．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５３．１Ｈｚ）、４．１２－３．９０（３Ｈ、ｍ）、３．８９－３．７９（１Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｓ）、２．４８－２．１０（１２Ｈ、ｍ）、０．９６（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）。
【0059】
２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－５－｛２－［６－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－ニコチノニトリル（第３例）の合成：
【化24】
【0060】
１－（５－ブロモ－ピリジン－２－イルメチル）－４－メチル－ピペラジン（中間体１５）
アセトニトリル中（１５ｍＬ）の中間体６（７５０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、１．００ｅｑ）の攪拌溶液に、Ｎ－メチルピペラジン（４００μＬ、３．６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及びＴＥＡ（１．２５ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ、３．０ｅｑ）を添加し、当該混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。得られた固体をメタノールに溶解し、キャッチリリースカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＣＸ－２；２５ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、１Ｍアンモニア・メタノール溶液（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去して、暗赤色のオイルとして中間体１５を得た（６８８ｍｇ、８５％）。ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝１．１１ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ２７０（ＭＨ＋）。これをさらに精製することなく次のステップで使用した。
【化25】
【0061】
ベンズヒドリリデン－［６－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イル］－アミン（中間体１６）
中間体１６（６８８ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ベンゾフェノンイミン（５５５μＬ、３．３ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（２８．５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）、キサントホス（１３２ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、９ｍｏｌ％）とＫＯｔＢｕ（４２８ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ、１．５ｅｑｕｉｖ）を１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）で混合し、当該混合物をＮ２で１５分間脱酸素した後、１２０℃で３時間加熱した。反応物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして真空下で溶媒を除去した。得られた粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ ＫＰ－Ｓｉｌカートリッジ、ＤＣＭ～ＤＣＭ中２０％メタノール、生成物を１６％メタノールで溶出）で精製した。所望の物質を含むフラクションを混合し、溶媒を真空下で除去して、黄色のオイルとして中間体１６を得た（２３３ｍｇ、２５％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝２．１５ｍｉｎ（方法Ａ）、ｍ／ｚ ３７１（ＭＨ＋）。
【化26】
【0062】
６－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミン（中間体１７）
中間体１６（２３３ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ヒドロキシルアミン．ＨＣｌ（８８ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）及び酢酸ナトリウム（１２９ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）をエタノール（１０ｍＬ）中で混合し、室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物をメタノールに溶解した。この溶液をキャッチリリースカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＣＸ－２；５ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、１．０Ｍアンモニア・メタノール（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去して、淡黄色のオイルとして中間体１７を得た（１１０ｍｇ、８５％）；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝０．２４ｍｉｎ（方法Ｂ）、ｍ／ｚ ２０７（ＭＨ＋）。
【化27】
【0063】
２－（（Ｓ）－３－フルオロ－ピロリジン－１－イル）－５－｛２－［６－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－ピリジン－３－イルアミノ］－ピリミジン－４－イル｝－ニコチノニトリル（第３例）
中間体４（６０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、中間体１７（４５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１８．０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）、Ｄａｖｅｐｈｏｓ（１６．０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、２０ｍｏｌ％）及びＮａＯｔＢｕ（２１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を１，４－ジオキサン（２ｍＬ）で混合し、そして当該混合物をＮ２で１５分間脱酸素した後、１００℃で１５分間電子レンジで加熱した。溶媒を真空下で除去し、残留物をメタノールに溶解した。この溶液をキャッチリリースカートリッジ（ｂｉｏｔａｇｅ ＳＣＸ－２；５ｇ）に通し、メタノール（４ＣＶ）で洗浄し、１．０Ｍアンモニア・メタノール（４ＣＶ）で溶出した。溶媒を真空下で除去した。粗生成物をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、ｐＨ２で逆相分取ＬＣ－ＭＳにより精製した。所望の生成物を含むフラクションを混合し、真空下で溶媒を除去した。残留物を１：１のＨ２Ｏ／アセトニトリルに溶解し、凍結（－７８℃）し、そして溶媒を凍結乾燥により除去し、黄色の固体として第３例を得た（３５．０ｍｇ、３８．０％）。第３例はギ酸塩として分離された；ＬＣ－ＭＳ Ｒｔ＝７．９７ｍｉｎ（方法Ｄ）、Ｒｔ＝４．９９ｍｉｎ（方法Ｃ）ｍ／ｚ ４７４（ＭＨ＋）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ９．７９（１Ｈ、ｓ）、９．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．８６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、８．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．５２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、８．１７（１Ｈ、ｓ）、８．１５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．７、２．８Ｈｚ）、７．４６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、７．３６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ）、５．４９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝５３．１Ｈｚ）、４．１２－３．９０（３Ｈ、ｍ）、３．８９－３．７９（１Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｓ）、２．４７－２．１３（１０Ｈ、ｍ）、２．１９（３Ｈ、ｓ）。
【化28】
【0064】
［生物学的試験］
第１例と第３例は、ギ酸塩として試験された。第２例はフリーベースとしてテストされた。
第１例と第３例は、ギ酸塩として試験された。第２例はフリーベースとしてテストされた。
【0065】
ＩＫＫε及びＴＢＫ１酵素の効能
本発明の化合物（上記のように合成される）、及び比較例１～５（国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に記載のように合成され得る）において、以下のようにＩＫＫε及びＴＢＫ１酵素に対する効能について試験した：
本発明の化合物（上記のように合成される）、及び比較例１～５（国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に記載のように合成され得る）において、以下のようにＩＫＫε及びＴＢＫ１酵素に対する効能について試験した：
【0066】
時間分解蛍光ベースのＬａｎｔｈａｓｃｒｅｅｎTMアッセイを使用して、阻害試験を実施した。フルオレセイン標識基質ペプチドのリン酸化は、テルビウム標識リン酸特異的抗体を使用して測定される。テルビウムは３４０ｎｍで励起され、フルオレセインへのＦＲＥＴエネルギー移動は４９５ｎｍ及び５２０ｎｍで測定される。５２０と４９５の間の放出比は、キナーゼによる基質のリン酸化レベルの基準である。
【0067】
キナーゼ阻害アッセイ（５μＬ）を３８４ウェルプレートフォーマットで２０℃で実施した。化合物ＩＣ５０値は、重複に８点又は１０点の曲線を使用した放射分析（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ）に基づいて、ＡＴＰ（２０μＭ）のＫａｐｐ（ａｐｐａｒｅｎｔ Ｋｍ）で決定した。最終反応条件は、それぞれ３８０ｎＭフルオレセイン－１ｋＢα基質（ＤＲＨＤＳＧＬＤＳＭＫＤＥ）［ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ１］、２０μΜ ＡＴＰ、０．９～３ｎＭ ＩＫＫε又は６～８ｎＭ ＴＢＫ１キナーゼが含まれ、さらに１％ＤＭＳＯのキナーゼアッセイ緩衝液が含まれていた。当該キナーゼアッセイ緩衝液には５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０５％Ｂｒｉｊ－３５が含まれていた。
ｔｒｏｇｅｎ）に基づいて、ＡＴＰ（２０μＭ）のＫａｐｐ（ａｐｐａｒｅｎｔ Ｋｍ）で決定した。最終反応条件は、それぞれ３８０ｎＭフルオレセイン－１ｋＢα基質（ＤＲＨＤＳＧＬＤＳＭＫＤＥ）［ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ１］、２０μΜ ＡＴＰ、０．９～３ｎＭ ＩＫＫε又は６～８ｎＭ ＴＢＫ１キナーゼが含まれ、さらに１％ＤＭＳＯのキナーゼアッセイ緩衝液が含まれていた。当該キナーゼアッセイ緩衝液には５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０５％Ｂｒｉｊ－３５が含まれていた。
【0068】
化合物希釈液は、１０ｍＭ ＤＭＳＯストックからＤＭＳＯへの希釈により調製された。化合物希釈系列をキナーゼアッセイ緩衝液でさらに希釈して、５％ＤＭＳＯストックを得、アッセイ時の最終濃度は１％ＤＭＳＯであった。
【0069】
キナーゼの添加によりキナーゼリン酸化アッセイを開始し、ＩＫＫε及びＴＢＫ１キナーゼについてそれぞれ１時間又は２．５時間反応を進行させた。両方の条件ともリン酸化の直線性の範囲内であった。１０ｍＭ ＥＤＴＡの添加によって反応を停止し、ＩｋＢαペプチドのセリン３２でのリン酸化に対する１．５ｎＭテルビウム標識抗体との１時間のインキュベーション後に、両者ともＴＲ－ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でリン酸化が検出された。
【0070】
ＳＩＫ２は、Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ社のＫｉｎａｓｅ ＨｏｔＳｐｏｔＳＭ技術を利用し、放射標識３３Ｐ－ＡＴＰを用いて測定された。濃度２０μＭのペプチドＡＭＡＲＡＡＳＡＡＬＡＡＲＲＲ［ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ２］を基質として使用した。ＩＣ５０値は、ＡＴＰ（３０μΜ）のＫａｐｐ（ａｐｐａｒｅｎｔ Ｋｍ）で決定した。
【0071】
本発明の例示された化合物のＩＫＫε、ＴＢＫ１及びＳＩＫ２の酵素効力を以下の表１に示す。本発明の実施例化合物は、ＩＫＫε（例えば、ＩＫＫεについて、＜２５ｎＭのＩＣ５０）、ＴＢＫ１（例えば、ＴＢＫ１について、＜２０ｎＭのＩＣ５０）及びＳＩＫ２に対して高い酵素効力を有する。
【0072】
【表1】
【0073】
薬物動態
薬物動態評価は、雌性Ｂａｌｂ－Ｃマウスで実施された。静脈内投与（ＩＶ）の場合、化合物は典型的に、５ｍＬ／Ｋｇの投与容積で０．５ｍｇ／Ｋｇで尾静脈から投与された。化合物は典型的に、５％ＤＭＳＯ／９５％（２０％ｗ／ｖ Ｋｅｌｐｔｏｓｅのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４）のビヒクルで投与された。当業者に知られている他の投与ビヒクルも使用することができる。動物の使用を最小限に抑えるために、化合物は通常、他の３つの化合物を含むカセットとして投与され、１回の実験での総化合物負荷が２ｍｇ／Ｋｇを超えないようにした。
薬物動態評価は、雌性Ｂａｌｂ－Ｃマウスで実施された。静脈内投与（ＩＶ）の場合、化合物は典型的に、５ｍＬ／Ｋｇの投与容積で０．５ｍｇ／Ｋｇで尾静脈から投与された。化合物は典型的に、５％ＤＭＳＯ／９５％（２０％ｗ／ｖ Ｋｅｌｐｔｏｓｅのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４）のビヒクルで投与された。当業者に知られている他の投与ビヒクルも使用することができる。動物の使用を最小限に抑えるために、化合物は通常、他の３つの化合物を含むカセットとして投与され、１回の実験での総化合物負荷が２ｍｇ／Ｋｇを超えないようにした。
【0074】
血液サンプルは、ＩＶ投与後１分から１０時間の８つの時点、通常は投与後１分、５分、１５分、３０分、１時間、３時間、６時間、及び１０時間の終末麻酔（イソフルラン）下の心臓穿刺により採取された。場合によっては、利便性を高めるために、２時間、４時間、及び８時間の最後の３時点を使用した。時点ごとにＮ＝３匹の動物を使用した。遠心分離により直ちに血漿が得られ、結果のサンプルは分析まで凍結された。サンプルは、続いて化合物をコントロール血漿に添加することによって作成された検量線とともに、血漿タンパク質をアセトニトリルで沈殿させることにより定量分析用に準備された。分析は、エレクトロスプレーイオン化（Ａｇｉｌｅｎｔ６５５０システム）を使用した飛行時間型質量分析と組み合わせた超高速液体クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０システム）によるものであった。薬物動態パラメーターは、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ｖ６．４を使用した平均濃度データの非コンパートメント分析（ｎｏｎ－ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ）によって決定された。
【0075】
（ｉ）マウスの分布容積（Ｖｄ）
分布容積（Ｖｄ）は、薬物が血漿中にあるように、どこにでも同じ濃度で存在すると仮定した場合に、薬物が分布しているとみなされる理論上の容積である。
分布容積（Ｖｄ）は、薬物が血漿中にあるように、どこにでも同じ濃度で存在すると仮定した場合に、薬物が分布しているとみなされる理論上の容積である。
【0076】
定常状態でのＶｄ（Ｖｄｓｓ）は、クリアランス（Ｃｌ）に平均滞留時間（ＭＲＴ）を掛けて計算される。クリアランスは、投与量（Ｄｏｓｅ）を濃度時間曲線下面積（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｃｕｒｖｅ）で割ることによって測定される。Ｃｌ＝Ｄｏｓｅ／ＡＵＣ０－∞
Ｖｄｓｓ＝Ｃｌ×ＭＲＴ
Ｖｄｓｓ＝Ｃｌ×ＭＲＴ
【0077】
平均滞留時間は、二次モーメント曲線下面積（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｏｍｅｎｔ ｃｕｒｖｅ）（ＡＵＭＣ）を濃縮時間曲線下面積（ＡＵＣ）で除算することにより計算される。二次モーメント曲線は、濃度対濃度×時間をプロットすることで生成できる。
ＭＲＴ＝ＡＵＭＣ／ＡＵＣ
ＭＲＴ＝ＡＵＭＣ／ＡＵＣ
【0078】
（ｉｉ）マウスのｔ１／２（推定）
該化合物の半減期（ｔ１／２）は、薬物の血漿中濃度が半分になる時間である。終末相半減期は通常、最後の３点を使用した対数濃度／時間プロットの勾配から推定される。ＣｌとＶｄの両方が、観察された半減期に寄与している。Ｖｄが大きくＣｌが小さいと、ｔ１／２が長くなる。
該化合物の半減期（ｔ１／２）は、薬物の血漿中濃度が半分になる時間である。終末相半減期は通常、最後の３点を使用した対数濃度／時間プロットの勾配から推定される。ＣｌとＶｄの両方が、観察された半減期に寄与している。Ｖｄが大きくＣｌが小さいと、ｔ１／２が長くなる。
【0079】
表２は、本発明の例示化合物のマウスのＶｄ及びｔ１／２を示す。表２の結果は、本発明の化合物が優れた薬物動態特性を有することを示している。表３は、国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に記載されている特定の化合物のマウスのＶｄ及びｔ１／２を示している。表３の化合物は、本発明の化合物と構造的に類似している。
【0080】
表２及び表３から分かるように、本発明の化合物はすべて、比較例１、２、４及び５と比較し、マウスにより高いＶｄ及びｔ１／２を有する。Ｖｄが高いほど、化合物の組織分布が大きいことを示す。化合物の半減期（ｔ１／２）が長いと、化合物の投与頻度が低くなるため好ましい。したがって、本発明の化合物は、比較例よりも好ましい薬物動態特性を有する。
【0081】
【表2】
【0082】
【表3】
【0083】
代謝安定性
ヒト肝細胞（肝臓細胞）の安定性
市販の凍結保存によりプールされたヒト肝細胞を購入し、使用前に液体窒素で保存した。凍結保存されたヒト肝細胞（２ｍＭ Ｌ－グルタミンと２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したウィリアムズＥ培地での最終細胞密度は０．５×１０６生細胞／ｍＬ）の懸濁液を加えて反応を開始する前に、２ｍＭ Ｌ－グルタミン及び２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したウィリアムズＥ培地及び適切な試験化合物（最終基質濃度は３μΜ、最終ＤＭＳＯ濃度は０．２５％）は、３７℃でプレインキュベートした。最終的なインキュベーション量は５００μＬとなる。通常、ベラパミルとウンベリフェロンの２種類のコントロール化合物は、ビヒクルコントロールとともに各テストに含めた。
ヒト肝細胞（肝臓細胞）の安定性
市販の凍結保存によりプールされたヒト肝細胞を購入し、使用前に液体窒素で保存した。凍結保存されたヒト肝細胞（２ｍＭ Ｌ－グルタミンと２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したウィリアムズＥ培地での最終細胞密度は０．５×１０６生細胞／ｍＬ）の懸濁液を加えて反応を開始する前に、２ｍＭ Ｌ－グルタミン及び２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したウィリアムズＥ培地及び適切な試験化合物（最終基質濃度は３μΜ、最終ＤＭＳＯ濃度は０．２５％）は、３７℃でプレインキュベートした。最終的なインキュベーション量は５００μＬとなる。通常、ベラパミルとウンベリフェロンの２種類のコントロール化合物は、ビヒクルコントロールとともに各テストに含めた。
【0084】
０分、５分、２０分、４０分、及び６０分後に、５０μＬのインキュベーション液を、内部標準を含む１００μＬのメタノールに移すことにより、反応を停止させた。続いて、
終結プレートを４℃、２５００ｒｐｍで遠心分離してタンパク質を沈殿させた。
終結プレートを４℃、２５００ｒｐｍで遠心分離してタンパク質を沈殿させた。
【0085】
タンパク質沈殿後、サンプル上清を最大４つの化合物のカセットにまとめ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ条件で分析した。
Ｉｎピーク面積比（化合物ピーク面積／内部標準ピーク面積）を時間に対してプロットし、そして直線の勾配が決定された。
除去速度定数（ｋ）＝－（勾配）
半減期（ｔ１／２）（ｍｉｎ）＝０．６９３／ｋ
Ｖ（μＬ／１０６細胞）＝インキュベーション容量（μＬ）／インキュベーション中の細胞数（×１０６）
固有クリアランス（Ｃｌｉｎｔ）（μＬ／ｍｉｎ／数百万の細胞）＝Ｖ×０．６９３／ｔ１／２
Ｉｎピーク面積比（化合物ピーク面積／内部標準ピーク面積）を時間に対してプロットし、そして直線の勾配が決定された。
除去速度定数（ｋ）＝－（勾配）
半減期（ｔ１／２）（ｍｉｎ）＝０．６９３／ｋ
Ｖ（μＬ／１０６細胞）＝インキュベーション容量（μＬ）／インキュベーション中の細胞数（×１０６）
固有クリアランス（Ｃｌｉｎｔ）（μＬ／ｍｉｎ／数百万の細胞）＝Ｖ×０．６９３／ｔ１／２
【0086】
２つのコントロール化合物が過去に指定された制限内にない場合、結果は不合格とされ、実験が繰り返される。
【0087】
本発明の例示化合物のヒト肝細胞（肝臓細胞）安定性の結果を以下の表４に示す。本発明の化合物は、良好な代謝安定性を有する。国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に記載されている特定の化合物のヒト肝細胞（肝臓細胞）安定性は、比較例として表５に含まれる。比較例として選択された化合物は、本発明の化合物と構造的類似性を有する国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に例示されている化合物である。表４及び表５から、本発明の化合物は、国際公開第２０１４／１２８４８６号に開示されている比較例１～比較例５と匹敵する又はそれ以上の代謝安定性を有することがわかる。
【0088】
【表4】
【0089】
【表5】
【0090】
要約すると、本明細書で報告される化合物の生物学的試験は、本発明の化合物が標的酵素ＩＫＫε及びＴＢＫ１に対して匹敵する効力、及び国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に例示される比較例と比較して匹敵するヒト肝細胞代謝安定性を有することを示す。非常に驚くべきことに、化合物の薬物動態試験は、Ｖｄ（分布容積）及び測定されたｔ１／２（半減期）に基づいて本発明の化合物が国際公開第ＷＯ２０１４／１２８４８６号に例示された比較例よりも優れた薬物動態を有することを示した。