▶ フェリング ベスローテン フェンノートシャップの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-09-09
(45)【発行日】2022-09-20
(54)【発明の名称】アンギオテンシン－１－受容体アンタゴニスト
(51)【国際特許分類】
C07K 7/14 20060101AFI20220912BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20220912BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220912BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20220912BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20220912BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220912BHJP
【ＦＩ】
C07K7/14 ZNA
A61P9/12
A61P13/12
A61P15/00
A61K38/08
A61P43/00 111
【請求項の数】
26
(21)【出願番号】P 2018561231
(86)(22)【出願日】2017-06-02
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-07-18
(86)【国際出願番号】 EP2017063455
(87)【国際公開番号】W WO2017207760
(87)【国際公開日】2017-12-07
【審査請求日】2020-06-01
(31)【優先権主張番号】62/344,831
(32)【優先日】2016-06-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】16185403.9
(32)【優先日】2016-08-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】500297535
【氏名又は名称】フェリング ベスローテン フェンノートシャップ
(74)【代理人】
【識別番号】230104019
【弁護士】
【氏名又は名称】大野 聖二
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(74)【代理人】
【識別番号】100144794
【弁理士】
【氏名又は名称】大木 信人
(72)【発明者】
【氏名】ステロースキィ，ヤセク
(72)【発明者】
【氏名】ケーブル，エドワード アール
【審査官】竹内 祐樹
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１２－５１４０３３（ＪＰ，Ａ）
【文献】JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY，1988年，VOL:31, NR:3，PAGE(S):510 - 516
【文献】European Journal of Phramacology，Vol.343，1998年，p.323-331
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）：ＡＡ１－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－ＡＡ８－ＯＨ （Ｉ）
［式中、
ＡＡ１は、サルコシンおよび（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
ＡＡ４は、チロシンまたはメタ－チロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ハロおよびヒドロキシルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されていてよく；
ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ＮＨ２、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されていてよく；
ＡＡ８は、１－Ｄ－ナフチルアラニンと、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニンと、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ハロ、ＣＮ、およびアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているＤ－フェニルアラニンとからなる群から選択されるＤ－アミノ酸残基であり、１つの前記置換基はＤ－フェニルアラニンのフェニル環上の２位にあり、
式（Ｉ）においてＡｒｇ、Ｖａｌ、ＡＡ４、ＡＡ５、ＨｉｓおよびＰｒｏはそれぞれＬ－アミノ酸残基である］
の、アンギオテンシン－１－受容体アンタゴニスト活性を有する、化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項2】
ＡＡ４が少なくとも１つの置換基で置換されていてよいチロシンであり、ここで、前記少なくとも１つの置換基は前記チロシンのフェニル環上の３位にある、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
ＡＡ４が、チロシン、メタ－チロシン、３－ヒドロキシチロシンまたは３－クロロチロシンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項4】
ＡＡ５が、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ＣＨ３、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ＮＨ２、チエニルおよびチアゾリルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されていてよい、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
ＡＡ５が、バリン、イソロイシン、シクロブチルグリシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ロイシン、ｏ－メチルトレオニン、リシン、フェニルアラニン、チロシン、４－アミノフェニルアラニン、３－チエニルアラニン、２－チエニルアラニン、または４－チアゾリルアラニンである、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
ＡＡ５が、バリン、イソロイシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシンまたはＯ－メチルスレオニンである、請求項５に記載の化合物。
【請求項7】
ＡＡ８が、Ｄ－１－ナフチルアラニンと、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニンと、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮおよびフェニルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているＤ－フェニルアラニンとからなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
ＡＡ８が、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－ブロモフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニン、Ｄ－２－トリフルオロメチルフェニルアラニン、Ｄ－２－シアノフェニルアラニン、Ｄ－２－フェニルフェニルアラニン、Ｄ－２，４－ジクロロフェニルアラニン、またはＤ－２，６－ジメチルフェニルアラニンである、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
ＡＡ１がサルコシンである、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
ＡＡ４が、チロシン、メタ－チロシン、３－ヒドロキシチロシンまたは３－クロロチロシンである、請求項９に記載の化合物。
【請求項11】
ＡＡ５が、バリン、イソロイシン、リシン、チロシン、４－アミノフェニルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルアラニン、Ｏ－メチルトレオニン、３－チエニルアラニン、２－チエニルアラニン、または４－チアゾリルアラニンである、請求項９または１０に記載の化合物。
【請求項12】
ＡＡ８が、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－ブロモフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニン、Ｄ－２－トリフルオロメチルフェニルアラニン、Ｄ－２－シアノフェニルアラニン、Ｄ－２－フェニルフェニルアラニン、Ｄ－２，４－ジクロロフェニルアラニン、またはＤ－２，６－ジメチルフェニルアラニンである、請求項９、１０または１１に記載の化合物。
【請求項13】
ＡＡ１が、（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項14】
ＡＡ４がチロシンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項15】
ＡＡ５がバリンまたはシクロヘキシルグリシンである、請求項１３または１４に記載の化合物。
【請求項16】
ＡＡ８が、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニンまたはＤ－２－フェニルフェニルアラニンである、請求項１３、１４または１５に記載の化合物。
【請求項17】
（１） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；（２） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（３） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－ＣＦ３））－ＯＨ；
（４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（５） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－ＣＮ））－ＯＨ；
（６） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈ））－ＯＨ；
（７） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２，４－ｄｉＣｌ））－ＯＨ；
（８） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２，６－ｄｉＭｅ））－ＯＨ；
（９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（１０） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン）－ＯＨ；
（１１） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｂｒ））－ＯＨ；
（１２） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｔｙｒ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１３） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ａｐｈ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈａ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１５） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｐｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１６） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｐｈｅ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１７） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（１８） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｐｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（１９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２０） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ａｐｈ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２１） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２２） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－（３－Ｔｈｉ）－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２３） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－（２－Ｔｈｉ）－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－（Ａｌａ（４－Ｔｈｚ））－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２５） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２６） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－ＣＦ３））－ＯＨ；
（２７） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（２８） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ（３－Ｃｌ）－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（２９） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３０） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－（ｍ－Ｔｙｒ）－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３１） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３２） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＤＯＰＡ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３３） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ａｐｈ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（３５） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン）－ＯＨ；
（３６） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈ））－ＯＨ；
（３７） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（３８） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン）－ＯＨ；
（３９） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈ））－ＯＨ；
（４０） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－１Ｎａｌ）－ＯＨ；
（４１） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン）－ＯＨ；
（４２） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈ））－ＯＨ；
（４３） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｐｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（４４） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｐｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（４５） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；または
（４６） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項18】
（４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；（９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（２９） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３１） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（４５） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；または
（４６） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項19】
（９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項20】
請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項21】
高血圧症の処置に使用するための、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項22】
高血圧症が、妊娠、子癇前症または腎疾患によって誘発される、請求項２１に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項23】
子癇前症のまたは妊娠により誘発される腎疾患の処置に使用するための、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項24】
高血圧症の処置のための医薬の製造における、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項25】
高血圧症が、妊娠、子癇前症または腎疾患によって誘発される、請求項２４に記載の化合物の使用。
【請求項26】
子癇前症のまたは妊娠により誘発される腎疾患の処置のための医薬の製造における、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年８月２３日出願の欧州特許出願第１６１８５４０３．９号、および２０１６年６月２日出願の米国特許仮出願第６２／３４４８３１号の優先権を主張する。先行出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１６年８月２３日出願の欧州特許出願第１６１８５４０３．９号、および２０１６年６月２日出願の米国特許仮出願第６２／３４４８３１号の優先権を主張する。先行出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、ある特定のアンギオテンシン－１－受容体アンタゴニスト、ならびに関連組成物および方法に関するものである。
【背景技術】
【0003】
レニン－アンギオテンシン系（ＲＡＳ）またはレニン－アンギオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）は、血圧および体液バランスを調節しているホルモン系である。ＲＡＳをブロックすると血圧が下降する。したがって、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害剤およびアンギオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含めて、ＲＡＳをブロックする臨床的介入が、高血圧症を処置するために開発されてきた。
【0004】
通常には、プロホルモンであるアンギオテンシノーゲンは不活性前駆体であるアンギオテンシンＩに変換され、その後、ＡＣＥによって活性ペプチドホルモンであるアンギオテンシンＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）に変換される。Ａｎｇ ＩＩはさらにＡｎｇ ＩＩＩ、Ａｎｇ ＩＶおよびＡｎｇ（１～７）に代謝され得る。
【0005】
ヒトでは、Ａｎｇ ＩＩの効果は、アンギオテンシン－１－受容体（ＡＴ１Ｒ）およびアンギオテンシン－２－受容体（ＡＴ２Ｒ）を含めて、７回膜貫通型Ｇタンパク質共役受容体を介して媒介される。Ａｎｇ ＩＩの血圧効果は、ＡＴ１Ｒによって主として媒介される。ＡＴ１Ｒの活性化は、血圧上昇に至る血管収縮を含めて、種々の効果を起こす可能性がある。逆に、ＡＴ１Ｒをブロックすると血圧を下降させることができる。いくつかのアンギオテンシン受容体遮断薬が高血圧症を処置するために開発されてきた。
【0006】
開発された最初のアンギオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）の１つは、１９７０年代におけるペプチド性ＡＴ１Ｒアンタゴニストサララシン（すなわち、［Ｓａｒ１、Ｖａｌ５、Ａｌａ８］ＡｎｇＩＩ）であり、これはＦＤＡによって承認され、米国でＳＡＲＥＮＩＮとして販売された。別のペプチド性アンタゴニスト、サリレジン（すなわち、［Ｓａｒ１、Ｉｌｅ８］ＡｎｇＩＩ）が日本において治験に入った。
【0007】
これら両化合物に関して臨床的有用性は、部分アゴニスト活性、短い作用持続時間、および持続静注による投与といった、いくつかの要因によって限られていた。続いて、この領域における研究開発活動は、部分アゴニスト活性を有さずかつ経口的に与えることができる、非ペプチド性小分子ＡＲＢであるサルタン種、例えばロサルタン、バルサルタンなど、に方向を変えた。いくつかの非ペプチド性ＡＲＢが治療的使用に承認され、ＳＡＲＥＮＩＮは市場から撤退した。
【0008】
非ペプチド性小分子ＡＲＢであるサルタン種は、妊娠中での使用は推奨されていない。ＡＲＢへの胎児の暴露は、新生児のおよび長期の合併症を引き起こす恐れがある。例えば、妊娠の第二期と第三期においては、サルタンによる母体処置は避けるべきことが推奨されてきた。したがって、妊娠中の高血圧障害に対する治療選択肢が欠落している。
【発明の概要】
【0009】
本開示は、ある特定のペプチド性化合物が、アゴニスト活性がまったくないかまたは低下した状態で、アンギオテンシン－１－受容体アンタゴニスト活性を呈した、という予期せぬ発見に基づいている。これらの化合物は、胎児への曝露も減少させることができたことと共に、胎児のまたは新生児の合併症を引き起こすことなく、妊娠中の高血圧障害（例えば、慢性高血圧症または妊娠性高血圧症）または子癇前症の処置に有効であることができる。
【0010】
一態様では、本開示は、式（Ｉ）：
ＡＡ１－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－ＡＡ８－ＯＨ （Ｉ）
［式中、ＡＡ１は、サルコシンおよび（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ＡＡ４は、チロシンまたはメタ－チロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ハロおよびヒドロキシルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ＮＨ２、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ８は、１－ナフチルアラニンと、（３－ベンゾチエニル）アラニンと、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ハロ、ＣＮ、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているフェニルアラニンとからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、少なくとも１つの置換基はフェニルアラニンのフェニル環上の２位にある］
の化合物または薬学的に許容されるその塩を特徴とする。ＡＡ８はＤ－アミノ酸残基であり、かつ式（Ｉ）においてＡｒｇ、Ｖａｌ、ＡＡ４、ＡＡ５、ＨｉｓおよびＰｒｏはそれぞれＬ－アミノ酸残基である。
ＡＡ１－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－ＡＡ８－ＯＨ （Ｉ）
［式中、ＡＡ１は、サルコシンおよび（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ＡＡ４は、チロシンまたはメタ－チロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ハロおよびヒドロキシルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ＮＨ２、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ８は、１－ナフチルアラニンと、（３－ベンゾチエニル）アラニンと、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ハロ、ＣＮ、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているフェニルアラニンとからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、少なくとも１つの置換基はフェニルアラニンのフェニル環上の２位にある］
の化合物または薬学的に許容されるその塩を特徴とする。ＡＡ８はＤ－アミノ酸残基であり、かつ式（Ｉ）においてＡｒｇ、Ｖａｌ、ＡＡ４、ＡＡ５、ＨｉｓおよびＰｒｏはそれぞれＬ－アミノ酸残基である。
【0011】
別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物のうちの少なくとも１つまたはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。
【0012】
別の態様では、本開示は、高血圧症（例えば、妊娠により誘発される高血圧症）を処置する方法を特徴とする。この方法は、本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含む。
【0013】
さらに別の態様では、本開示は、子癇前症をまたは妊娠により誘発される腎疾患を処置する方法を特徴とする。この方法は、本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含む。
【0014】
さらなる一態様では、高血圧症（例えば、妊娠により誘発される高血圧症）、子癇前症または腎疾患（例えば、妊娠により誘発される腎疾患）の処置に使用するための組成物（例えば、医薬組成物）が提供され、組成物は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む。
【0015】
さらなる一態様では、高血圧症（例えば、妊娠により誘発される高血圧症）、子癇前症または腎疾患（例えば、妊娠により誘発される腎疾患）の処置のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【0016】
その他の特徴、目的、および利点は、説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本開示は、全体として、ＡＴ１Ｒアンタゴニスト（例えば、ＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチド）および高血圧症、子癇前症、または腎疾患（例えば、妊娠中の患者における）の処置のためのそれらの使用に関するものである。
【0018】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドは、式（Ｉ）：
ＡＡ１－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－ＡＡ８－ＯＨ （Ｉ）
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。式（Ｉ）において、ＡＡ１は、サルコシンおよび（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ＡＡ４は、チロシンまたはメタ－チロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ハロおよびヒドロキシルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ＮＨ２、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ８は、１－ナフチルアラニンと、（３－ベンゾチエニル）アラニンと、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ハロ、ＣＮ、アリール（例えば、フェニル、１－ナフチル、または２－ナフチル）およびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているフェニルアラニンとからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、少なくとも１つの置換基はフェニルアラニンのフェニル環上の２位にある。ＡＡ８はＤ－アミノ酸残基であり、かつ式（Ｉ）においてＡｒｇ、Ｖａｌ、ＡＡ４、ＡＡ５、ＨｉｓおよびＰｒｏはそれぞれＬ－アミノ酸残基である。
ＡＡ１－Ａｒｇ－Ｖａｌ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－ＡＡ８－ＯＨ （Ｉ）
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。式（Ｉ）において、ＡＡ１は、サルコシンおよび（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ＡＡ４は、チロシンまたはメタ－チロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、ハロおよびヒドロキシルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、それらはそれぞれ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ＮＨ２、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されており；ＡＡ８は、１－ナフチルアラニンと、（３－ベンゾチエニル）アラニンと、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ４～６シクロアルキル、ハロ、ＣＮ、アリール（例えば、フェニル、１－ナフチル、または２－ナフチル）およびヘテロアリールからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているフェニルアラニンとからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、少なくとも１つの置換基はフェニルアラニンのフェニル環上の２位にある。ＡＡ８はＤ－アミノ酸残基であり、かつ式（Ｉ）においてＡｒｇ、Ｖａｌ、ＡＡ４、ＡＡ５、ＨｉｓおよびＰｒｏはそれぞれＬ－アミノ酸残基である。
【0019】
用語「アルキル」とは、－ＣＨ３または－ＣＨ（ＣＨ３）２などの、飽和、線状または分枝状炭化水素の部分を指す。用語「ハロアルキル」とは、－ＣＨ２Ｃｌまたは－ＣＦ３などの、少なくとも１つのハロ基（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）で置換されている飽和、線状または分枝状炭化水素の部分を指す。用語「シクロアルキル」とは、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルなどの飽和、環状炭化水素の部分を指す。用語「アリール」とは、１つまたは複数の芳香環を有する炭化水素の部分を指す。アリールの部分の例には、フェニル（Ｐｈ）、フェニレン、ナフチル、ナフチレン、ピレニル、アントリルおよびフェナントリルが含まれる。用語「ヘテロアリール」とは、少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ）を含有する１つまたは複数の芳香環を有する部分を指す。ヘテロアリールの部分の例には、フリル、フリレン、フルオレニル、ピロリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、およびインドリルが含まれる。
【0020】
一部の実施形態では、ＡＡ４は、少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されているチロシンであることができ、ここで、上記少なくとも１つの置換基は上記チロシンのフェニル環上の３位にある。例えば、ＡＡ４は、チロシン、メタ－チロシン、３－ヒドロキシチロシンまたは３－クロロチロシンであることができる。
【0021】
一部の実施形態では、ＡＡ５は、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、スレオニン、リジンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であることができ、それらはそれぞれ、ＣＨ３、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ＮＨ２、チエニルおよびチアゾリルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で任意選択で置換されている。例えば、ＡＡ５は、バリン、イソロイシン、シクロブチルグリシン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ロイシン、ｏ－メチルトレオニン、リシン、フェニルアラニン、チロシン、４－アミノフェニルアラニン、３－チエニルアラニン、２－チエニルアラニン、または４－チアゾリルアラニンであることができる。
【0022】
一部の実施形態では、ＡＡ８は、非置換Ｄ－１－ナフチルアラニンと、非置換Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニンと、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮおよびフェニルからなる群から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているＤ－フェニルアラニンとからなる群から選択されるアミノ酸残基であることができる。例えば、ＡＡ８は、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－ブロモフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニン、Ｄ－２－トリフルオロメチルフェニルアラニン、Ｄ－２－シアノフェニルアラニン、Ｄ－２－フェニルフェニルアラニン、Ｄ－２，４－ジクロロフェニルアラニン、またはＤ－２，６－ジメチルフェニルアラニンであることができる。理論に縛られることを望むものではないが、上記のＡＡ８のアミノ酸残基が、式（Ｉ）の化合物におけるアンギオテンシン－１－受容体のアゴニスト活性を減少させるまたは排除する助けとなっている可能性があると考えられる。
【0023】
一部の実施形態では、ＡＡ５またはＡＡ８が、ヘテロアリール基を有するアミノ酸置換である場合、ヘテロアリール基は１、２または３つの芳香環を含むことができ、それらはそれぞれ５員環であっても６員環であってもよい。このような実施形態では、ヘテロアリール基は１、２、３個またはそれより多い、Ｎ、ＯまたはＳなどの、環式ヘテロ原子を含むことができる。例えば、ヘテロアリール基は、１個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する１つの芳香環、２個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する１つの芳香環、３個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する１つの芳香環、１個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する２つの芳香環、２個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する２つの芳香環、または３個の環式ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含有する２つの芳香環、を含む基であることができる。
【0024】
一部の実施形態では、ＡＡ１はサルコシンであることができる。そのような実施形態では、ＡＡ４は、チロシン、メタ－チロシン、３－ヒドロキシチロシンまたは３－クロロチロシンであることができ；ＡＡ５は、バリン、イソロイシン、リシン、チロシン、４－アミノフェニルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロペンチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルアラニン、ｏ－メチルトレオニン、３－チエニルアラニン、２－チエニルアラニン、または４－チアゾリルアラニンであることができ；ＡＡ８は、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－ブロモフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニン、Ｄ－２－トリフルオロメチルフェニルアラニン、Ｄ－２－シアノフェニルアラニン、Ｄ－２－フェニルフェニルアラニン、Ｄ－２，４－ジクロロフェニルアラニン、またはＤ－２，６－ジメチルフェニルアラニンであることができる。
【0025】
一部の実施形態では、ＡＡ１は、（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－２，３，４，５，６－ペンタヒドロキシヘキシル）グリシンであることができる。そのような実施形態では、ＡＡ４はチロシンであることができ；ＡＡ５は、バリンまたはシクロヘキシルグリシンであることができ；ＡＡ８は、Ｄ－１－ナフチルアラニン、Ｄ－（３－ベンゾチエニル）アラニン、Ｄ－２－クロロフェニルアラニン、Ｄ－２－メチルフェニルアラニンまたはＤ－２－フェニルフェニルアラニンであることができる。
【0026】
式（Ｉ）の例示的な化合物（すなわち、化合物１～４６）には下の表１に列挙されるものが含まれる。表１には参照化合物１～４も含まれている。特記しない限り、表１のアミノ酸コードは、Ｓａｒ（アキラルである）およびＧｌａｃ（そのキラリティーはアルファ炭素原子上にない）を除いて、そのＬ－異性体を指す。
【0027】
【表1】
【0028】
本開示で使用される天然または非天然アミノ酸の略称の正式名が下の表２にまとめられている。
【0029】
【表2】
【0030】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
（４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ
（９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（２９） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３１） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（４５） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；または
（４６） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ
であることができる。
（４） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ
（９） Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；
（２９） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（３１） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ））－ＯＨ；
（４５） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ；または
（４６） Ｇｌａｃ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｃｈｇ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－（Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ））－ＯＨ
であることができる。
【0031】
本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチド（例えば、式（Ｉ）の化合物）は、当技術分野で知られている方法または本明細書に記載の方法によって作製することができる。下の実施例１～６では、化合物１～４６が実際にどのように調製されたかについての詳細な説明が提供されている。
【0032】
本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドを調製するための反応は適切な溶媒中で実施することができ、こういった溶媒は有機合成に関する当業者であれば容易に選択することができる。適切な溶媒は、反応が実施される温度で、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸点までにわたることができる温度で、出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であることができる。所定の反応は、１種類の溶媒中でまたは２種類以上の溶媒の混合物中で実施することができる。特定の反応段階に応じて、当業者であれば特定の反応段階に適した溶媒を選択することができる。
【0033】
本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドの調製には、種々の化学基の保護および脱保護が関与することができる。保護および脱保護の必要性、および適切な保護基の選択については、当業者であれば容易に決定することができる。保護基の化学については、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に、見いだすことができる。
【0034】
本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドはまた、中間体または最終化合物中に存在する原子の同位体すべてを含むことができる。同位体には、同じ原子番号だが、異なる質量数を有するそういった原子が含まれる。例えば、水素の同位体には、トリチウムおよび重水素が含まれる。
【0035】
すべての化合物および薬学的に許容されるその塩は、水および溶媒（例えば、水和物および溶媒和物）などの他の物質と一緒に見いだされてもよく、または単離されていてもよい。
【0036】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドは、実質的に単離されている。「実質的に単離されている」とは、化合物が、形成または検出された環境から少なくとも部分的または実質的に分離されていることを意味する。部分的分離には、例えば、本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドに富む組成物が含まれてもよい。実質的な分離には、本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドを、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％または少なくとも約９９重量％含有する組成物が含まれてもよい。化合物およびそれらの塩を単離するための方法は、当技術分野において常套である。
【0037】
本開示はまた、有効成分としての本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチド（例えば、式（Ｉ）の化合物）のうちの少なくとも１種（例えば、２種以上）またはその薬学的に許容される塩の有効量と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体（例えば、アジュバントまたは希釈剤）とを含有する医薬組成物を特徴とする。薬学的に許容される塩の例には、酸付加塩、例えば、ハロゲン化水素酸（ｈｙｄｒｏｈａｌｏｇｅｎ ａｃｉｄ）（例えば塩酸または臭化水素酸）、鉱酸（例えば硫酸、リン酸および硝酸）、および脂肪族、脂環式、芳香族もしくは複素環式のスルホン酸またはカルボン酸（例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸）との反応により形成される塩が含まれる。
【0038】
医薬組成物中の担体は、組成物の有効成分と相溶性があり（好ましくは、有効成分を安定化することが可能であり）、処置しようとする対象に有害でないという意味において「許容され」なければならない。１種または複数の可溶化剤を、活性ＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドの送達のための医薬用担体として活用することができる。その他の担体の例には、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウムおよびＤ＆Ｃ黄色＃１０が含まれる。
【0039】
本明細書に記載の医薬組成物は、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、香味剤、保存剤、着色料およびそれらの任意の混合物から選択される少なくとも１種のさらなる添加物を任意選択で含むことができる。かかる添加物およびその他の添加物の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」；Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編、第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＵＳＡ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ＵＫ、２０００、において見いだすことができる。
【0040】
本明細書に記載の医薬組成物は、非経口、経口、局所、経鼻、直腸、口腔、もしくは舌下の投与に適合されていてもよく、または気道経由の、例えば、エアロゾルもしくは空中浮遊微粉末（ａｉｒ－ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｆｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ）の形態での投与に適合されていてもよい。本明細書で使用される場合、用語「非経口」とは、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、腹腔内、眼内、耳内または頭蓋内の注射、ならびに適切な任意の注入技法を意味する。一部の実施形態では、本組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、微小粒子、顆粒剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤、スプレー式点鼻薬、経皮パッチ剤または坐剤の形態であることができる。
【0041】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、水溶液に溶けている、本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドを含有することができる。例えば、本組成物は、希釈剤として働く（例えば、塩化ナトリウムを０．９ｗｔ％含有する）塩化ナトリウム水溶液を含むことができる。
【0042】
さらに、本開示は、高血圧症または子癇前症を処置するためにまたはそのような処置向けの医薬を製造するために、上で概説のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドを使用する方法を特徴とする。この方法は、本明細書に記載の、有効量の医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、妊娠中の患者）に投与するステップを含むことができる。一部の実施形態では、高血圧症は妊娠により誘発される。一部の実施形態では、高血圧症は慢性高血圧症または妊娠性高血圧症であることができる。「有効量」とは、処置される対象に治療効果を与えるのに必要とされる、医薬組成物の量を意味する。有効用量は、当業者であれば理解されるように、処置される疾患の種類、投与経路、賦形剤の使用、およびその他の治療上の処置との同時使用の可能性に応じて変化することになる。
【0043】
本明細書で使用される場合、用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書に記載の疾患もしくは障害または１種もしくは複数のその症状を回復させる、緩和する、それらの発生を遅らせる、またはそれらの進行を妨げることを意味する。一部の実施形態では、処置は、１種または複数の症状が発症した後に投与してもよい。他の実施形態では、処置は、症状の非存在下で投与してもよい。例えば、処置は、症状の発生前に（例えば、症状の病歴に照らしておよび／または遺伝的因子もしくはその他の感受性因子に照らして）感受性がある個体に投与してもよい。処置はまた、例えば、症状の再発を防止するまたは遅延させるために、症状が解消した後に継続することもできる。
【0044】
本明細書に記載のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドの典型的な投与量は、広範囲で変化することができ、患者各々の個別のニーズおよび投与経路などの種々の要因によって異なるであろう。例示的な１日投与量（例えば、皮下投与向け）は、少なくとも約０．５ｍｇ（例えば、少なくとも約１ｍｇ、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇまたは少なくとも約１５ｍｇ）および／または最大でも約２００ｍｇ（例えば、最大でも約１５０ｍｇ、最大でも約１００ｍｇ、最大でも約７５ｍｇ、最大でも約５０ｍｇ、最大でも約２０ｍｇまたは最大でも約１５ｍｇ）のＡＴ１Ｒアンタゴニストペプチドであることができる。当業者または医師であれば、目前にある状態に対応するために、この投与量の範囲および実用的な実施にとって妥当な変形形態を考慮するであろう。
【0045】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１日１回投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、１日１回より多い頻度で（例えば、１日２回、１日３回または１日４回）投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）注入などの連続注入によって投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、１日１回より少ない頻度で（例えば、２日に１回、３日に１回または毎週１回）投与することができる。
【0046】
加えて、本開示は、高血圧症または子癇前症の処置に使用するための、上で概説の組成物を特徴とする。
【0047】
一部の実施形態では、高血圧症は妊娠により誘発される。一部の実施形態では、高血圧症は、慢性高血圧症または妊娠性高血圧症であることができる。
【0048】
本明細書で引用されたすべての刊行物（例えば、特許、特許出願公開、および論文）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0049】
以下の実施例は、例示的なものであり、限定することを目的としない。
【実施例】
【0050】
一般的な合成方法
１．アミノ酸誘導体
アミノ酸誘導体を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈｅ）およびＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）を除いて、民間プロバイダー（例えば、Ａａｐｐｔｅｃ、Ｃｈｅｍ Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＰＰＬ、ＰｅｐＴｅｃｈ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から購入した。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈｅ）およびＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）は以下の通り調製した。
１．アミノ酸誘導体
アミノ酸誘導体を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈｅ）およびＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）を除いて、民間プロバイダー（例えば、Ａａｐｐｔｅｃ、Ｃｈｅｍ Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＰＰＬ、ＰｅｐＴｅｃｈ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）から購入した。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｐｈｅ）およびＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｍｅ）は以下の通り調製した。
【0051】
【化1】
【0052】
Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｂｒ）－ＯＨ（９２３ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（３６６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、重炭酸ナトリウム（５０４ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および５０％アセトニトリル－水（１０ｍｌ）を、マイクロ波対応ガラスバイアル内部で混合した。アルゴンを混合物中に１分間バブルし、バイアルを直ちにクリンプ止めした。反応混合物を、マイクロ波反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ）内部で撹拌しながら７０℃で３０分間加熱した。反応中に形成された元素状パラジウムをセライト上で濾別した。濾液を５０ｍｌの遠心チューブに入れ、ＨＣｌで酸性化し、水で容量限度まで希釈した。油状生成物を遠心分離により分離した。ペレットを水で洗浄し、ｔｅｒｔ－ブタノールに溶かし、凍結乾燥して、目的生成物を白色粉末として得た。収量：９３０ｍｇ（１００％）。
【0053】
Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ＭＥ）の合成
Ｏ－メチルスレオニン（２．６６３ｇ、２０ｍｍｏｌ）を重炭酸ナトリウム（５．０４ｇ、６０ｍｍｏｌ）の水溶液（１００ｍｌ）に溶かした。アセトニトリル（５０ｍｌ）を添加し、それに続いて、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（６．７４７ｇ、２０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル懸濁液（５０ｍｌ）を数回に分けて供給した。反応混合物を２時間撹拌し、その間に均一となった。次いで、これを２Ｍ ＨＣｌで酸性化し、水１００ｍｌで希釈した。結果として得られる沈殿物を濾過により収集し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、目的生成物を白色粉末として得た。収量：６．７４５ｇ（９５％）。
Ｏ－メチルスレオニン（２．６６３ｇ、２０ｍｍｏｌ）を重炭酸ナトリウム（５．０４ｇ、６０ｍｍｏｌ）の水溶液（１００ｍｌ）に溶かした。アセトニトリル（５０ｍｌ）を添加し、それに続いて、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（６．７４７ｇ、２０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル懸濁液（５０ｍｌ）を数回に分けて供給した。反応混合物を２時間撹拌し、その間に均一となった。次いで、これを２Ｍ ＨＣｌで酸性化し、水１００ｍｌで希釈した。結果として得られる沈殿物を濾過により収集し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、目的生成物を白色粉末として得た。収量：６．７４５ｇ（９５％）。
【0054】
２．ペプチド合成
樹脂はＰｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから購入した。Ｄ－グルカミンはＣｈｅｍＩｍｐｅｘまたはＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａから購入した。すべてのさらなる試薬、化学薬品および溶媒は、Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈおよびＶＷＲから購入した。
樹脂はＰｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから購入した。Ｄ－グルカミンはＣｈｅｍＩｍｐｅｘまたはＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａから購入した。すべてのさらなる試薬、化学薬品および溶媒は、Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈおよびＶＷＲから購入した。
【0055】
本明細書に記載の化合物を、Ｆｍｏｃ法を利用する固相ペプチド化学における標準方法により合成した。ペプチドを、Ｔｒｉｂｕｔｅペプチド合成装置もしくはＳｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚｏｎａ）を使用して手動でまたは自動的にいずれかで、あるいは手動のおよび自動の合成の組合せにより、組み立てた。
【0056】
分取ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ ＬＣ Ｓｙｓｔｅｍで、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８カラム、１００Å、５μｍ、３０×１００ｍｍ、流速４０ｍＬ／分でまたは５０×１００ｍｍカラムで、流速８０ｍＬ／分で、行った。分析用逆相ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ｒｒ Ｓｅｒｉｅｓ液体クロマトグラフで、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８カラム、１．８μｍ、２．６×５０ｍｍを使用して、流速０．６ｍＬ／分で、またはＡｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｃ１８カラム、１．８μｍ、４．６×５０ｍｍを使用して、流速２ｍＬ／分で、行った。最終の化合物分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓクロマトグラフで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ １１０Å Ｃ１８カラム、３μｍ、２×１５０ｍｍ、流速０．３ｍＬ／分での逆相ＨＰＬＣにより行った。質量スペクトルは、ＭＡＴ Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱエレクトロスプレー質量分析計でまたはＬＴＱ ＸＬエレクトロスプレー質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で記録した。別段の記載がない限り、すべての反応は室温で行った。以下の標準的な参考文献によれば、一般的な実験設定に関して、ならびに必要とされる出発原料および試薬の利用可能性に関して、さらなる指針が提供される：Ｋａｔｅｓ，Ｓ．Ａ．、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．編、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、２０００；Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．、Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．、第２版、１９９１；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８４；Ｂｉｓｅｌｌｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８、２７３、２２４９８～２２５０５；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３、８５、２１４９～２１５４； および、Ｃｈａｎｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ Ｐ．Ｄ．、「Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、２０００。
【0057】
以下の保護基を利用して、所与のアミノ酸側鎖の官能基を保護した：Ａｒｇの場合、Ｐｂｆ（２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル）；Ｔｙｒの場合、ｔＢｕ（ｔ－ブチル）；Ｌｙｓの場合、Ｂｏｃ（ｔ－ブトキシカルボニル）；およびＨｉｓの場合、Ｔｒｔ（トリチル）。
【0058】
各合成は、最初のアミノ酸を２－クロロトリチル樹脂へ手動で結合させることから始めた。全体としては、Ｆｍｏｃ－アミノ酸を０．１～０．２Ｍの濃度でジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶かし、続いてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５当量）を添加した。結果として得られる溶液を乾燥２－クロロトリチル樹脂（２当量）に添加した。混合物を４時間反応させ、続いてメタノール（１０％ｖ／ｖ）を添加した。さらに３０分後、試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。
【0059】
Ｔｒｉｂｕｔｅ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＮＭＭを介して行った。合成の間、３～５倍過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる６０分の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＵＶによりモニターした。２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の複数回の（必要に応じて１０回まで）２分間洗浄を行った。
【0060】
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＮＭＰ中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを介して行った。合成の間、３～５倍過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる６０分の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。
【0061】
ＤＭＦ中でのＤＩＣ／ＨＯＢｔまたはＤＩＣ／Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ媒介のカップリングを、手動モードですべてのアミノ酸に対して用いた。合成の間、３倍までの過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる少なくとも２時間の単回サイクルを使用した。カップリングの完全性を、ニンヒドリン（Ｋａｉｓｅｒ）試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。
【0062】
Ｎ末端Ｇｌａｃ残基を２段階で手動で導入した。第１の段階では、カップリング試薬としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を使用して、樹脂上にブロモ酢酸またはクロロ酢酸を結合させた。第２の段階では、樹脂をＮＭＰ中のＤ－グルカミン（４当量）と反応させてハロゲンを置換した。Ｎ－ブロモアセチルペプチド樹脂は室温でＤ－グルカミンと反応させ、Ｎ－クロロアセチルペプチド樹脂は５０℃で反応させた。Ｄ－グルカミンはＮＭＰへの溶解度に限界がある。この反応は、ＮＭＰに懸濁させたＤ－グルカミンを用いて実行することができる。任意選択で、Ｄ－グルカミンを最初にＮＭＰ中のＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、３～６当量）と最大１時間反応させて、シリル化Ｄ－グルカミンの溶液を得た。次いで、この溶液をＮ－ハロアセチルペプチド樹脂に添加した。Ｄ－グルカミンとの反応をおよそ１６時間行った。
【0063】
ペプチド合成の完了時に、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄した。樹脂を、９５％ＴＦＡ／水およびＴＩＳ（最大５％ｖ／ｖ）で２時間処理して、側鎖保護基を除去し、同時に樹脂からペプチドを切断した。切断カクテルのほとんどを蒸発させ、粗ペプチドはジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離または濾過によって分離した。
【0064】
粗ペプチドを最大１０ｍＬの水－アセトニトリル混合物に溶かし、分取ＨＰＬＣカラムにロードした。
【0065】
成分Ａとして０．０１％ＴＦＡの水と成分Ｂとして０．０１％ＴＦＡの９５％アセトニトリルとを含有するトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）バッファで、各粗ペプチドを精製した。ペプチドを成分Ｂの勾配で溶出した。逆相分析ＨＰＬＣで決定して９５％を超える純度を有する画分をプールし、凍結乾燥した。調製した化合物は、少なくとも９５％純粋であることが通常には見いだされた。
【0066】
具体的に例示される化合物の合成を下に提供する。
【実施例1】
【0067】
化合物１の合成．
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．３９ｍｍｏｌ／ｇ、１．８７ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－１－ＮＡｌ（１．３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、６．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍｌ）溶液と２．５時間反応させた。ＭｅＯＨ（２．５ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂を４０ｍｌの２器の反応容器の間で分割した（０．６５ｍｍｏｌ毎１容器）。
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．３９ｍｍｏｌ／ｇ、１．８７ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－１－ＮＡｌ（１．３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、６．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍｌ）溶液と２．５時間反応させた。ＭｅＯＨ（２．５ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂を４０ｍｌの２器の反応容器の間で分割した（０．６５ｍｍｏｌ毎１容器）。
【0068】
Ｔｒｉｂｕｔｅペプチド合成装置を使用して固相ペプチド合成を行った。Ｔｒｉｂｕｔｅ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＮＭＭを介して行った。合成の間、１容器当たり２．５ｍｍｏｌの活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（３．８倍過量）を用いる６０分間の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＵＶによりモニターした。２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の複数回の（必要に応じて１０回まで）２分間洗浄を行った。以下のアミノ酸を逐次結合させた：Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ。自動合成の終了時に、２つの反応容器からの樹脂を混合した。
【0069】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ３０ｍＬおよびＴＩＳ １ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離により単離し、真空中で乾燥させた。粗ペプチドの収量：１．５１３ｇ。
【0070】
粗ペプチドを５０％アセトニトリル２０ｍＬに溶かした。２回のランで５０ｘ１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製したが、１回のラン当たり粗ペプチド溶液１０ｍｌをロードした。純度の低い画分を混合し、ＨＰＬＣカラムに再ロードした。３回のランからの純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的化合物１を白色粉末として得た。収量：５２１．１ｍｇ（ペプチド含有量７４．３％に対して２９％）。
【0071】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例2】
【0072】
化合物４の合成
当該ペプチドは、２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５２ｍｍｏｌ／ｇ）１３．１５８ｇ（２０ｍｍｏｌ）から手動で始め、組み立てた。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（４．２１９ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．８ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（７５ｍｌ）を乾燥樹脂に添加した。反応を６時間行った。メタノール（８ｍｌ）を添加後、混合物を３０分間撹拌し、試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。
当該ペプチドは、２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５２ｍｍｏｌ／ｇ）１３．１５８ｇ（２０ｍｍｏｌ）から手動で始め、組み立てた。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（４．２１９ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８．８ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（７５ｍｌ）を乾燥樹脂に添加した。反応を６時間行った。メタノール（８ｍｌ）を添加後、混合物を３０分間撹拌し、試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。
【0073】
以後、ＮＭＰでのＤＩＣ／Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ媒介カップリングを用いた。合成の間、活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を２倍過量まで使用して、少なくとも２時間および最大２４時間の単回サイクルを使用した。カップリングの完全性を、ニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。
【0074】
最初に、（６～８）フラグメントを、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨとＦｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨとの逐次カップリングにより組み立て、続いて、Ｎ末端Ｆｍｏｃを除去した。樹脂をＤＣＭで洗浄し、真空中で乾燥させた。乾燥した樹脂の重量は１７．８２ｇであった。置換は０．５６ｍｍｏｌ／ｇであった。
【0075】
（６～８）樹脂１４．２９ｇ（８ｍｍｏｌ）を使用して合成を継続した。以下のアミノ酸誘導体を逐次結合させた：Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ。Ｎ末端Ｆｍｏｃ基を除去して（２～８）ペプチド樹脂を得た。
【0076】
この時点で、樹脂を２つの不均等な分量に分割した：大きい方の分量（５／８、５ｍｍｏｌ）を化合物４の連続合成で使用し、小さい方の分量（３／８、３ｍｍｏｌ）を化合物２９の合成で使用した（下を参照されたい）。
【0077】
Ｂｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ（１０ｍｍｏｌ）を樹脂の大きい方の分量に結合させて、化合物４の固相ペプチド合成を終結させた。
【0078】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ８０ｍＬおよびＴＩＳ ４ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、濾過によって収集し、真空中で乾燥させた。
【0079】
沈殿物（５．０１ｇ）を５０％アセトニトリル５０ｍＬに溶かした。５回のランで５０ｘ１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製したが、１回のラン当たり粗ペプチド溶液１０ｍｌをロードした。純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的化合物４を白色粉末として得た。収量：３０３９ｍｇ（ペプチド含量７５％に対して４５％）。
【0080】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例3】
【0081】
化合物９の合成
当該ペプチドは、２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（ＣｒｅｏＳａｌｕｓ ＣＡＴ＃ＳＣ５０５５、置換１．７ｍｍｏｌ／ｇ；）５８．８ｇ（１００ｍｍｏｌ）から手動で始め、組み立てた。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ）－ＯＨ（２８．１ｇ、７０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４９．３ｍｌ、２８０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（４５０ｍｌ）を乾燥樹脂に添加した。反応を２時間行った。メタノール（７５ｍｌ）を添加後、混合物を１０分間撹拌し、試薬を排出した。樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＥＡ（１７：２：１、ｖ／ｖ／ｖ）、２×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、および２×ＤＣＭ、で洗浄した。
当該ペプチドは、２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（ＣｒｅｏＳａｌｕｓ ＣＡＴ＃ＳＣ５０５５、置換１．７ｍｍｏｌ／ｇ；）５８．８ｇ（１００ｍｍｏｌ）から手動で始め、組み立てた。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ）－ＯＨ（２８．１ｇ、７０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４９．３ｍｌ、２８０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（４５０ｍｌ）を乾燥樹脂に添加した。反応を２時間行った。メタノール（７５ｍｌ）を添加後、混合物を１０分間撹拌し、試薬を排出した。樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＥＡ（１７：２：１、ｖ／ｖ／ｖ）、２×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、および２×ＤＣＭ、で洗浄した。
【0082】
以後、ＮＭＰでのＤＩＣ／Ｏｘｙｍａ Ｐｕｒｅ媒介カップリングを用いた。合成の間、活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を２倍過量まで使用して、少なくとも２時間および最大１６時間の単回サイクルを使用した。カップリングの完全性を、ニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（１０分間の洗浄、続いて３０分間の洗浄）で行った。
【0083】
最初に、（２～８）フラグメントを、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ，Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ、の逐次カップリングにより組み立てた。アルギニン上のＮ末端Ｆｍｏｃ基を除去した。
【0084】
この時点で、樹脂を２つの不均等な分量に分割した。大きい方の分量（３／５、４２ｍｍｏｌ）を化合物９の連続合成で使用した。
【0085】
Ｂｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ（６５ｍｍｏｌ）を大きい方の分量の樹脂に結合させて、化合物９の固相ペプチド合成を終結させた。
【0086】
ペプチド樹脂９８．６ｇをコールドカクテルＴＦＡ／ＴＥＳ／Ｈ２Ｏ（９４：３：３、ｖ／ｖ／ｖ）１Ｌに添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濾過し、樹脂ビーズを９５％ＴＦＡ（３×７０ｍＬ）で洗浄した。濾液を回転蒸発させて体積をおよそ１５０ｍＬに減少させた。ジエチルエーテル（５００ｍＬ）を添加した。沈殿物を濾過により収集し、エーテルで洗浄し、次いで乾燥して、粗生成物（４３．９ｇ）を得た。
【0087】
粗ペプチドのＨＰＬＣ精製は、Ｃ１８カラム（１０１．６×２５０ｍｍ、１６μｍ粒径、１００Å孔径、Ｋｒｏｍａｓｉｌ）で行った。成分Ａは０．１％ＴＦＡとし、成分Ｂは０．１％ＴＦＡの６０％アセトニトリルとした。ＴＦＡ塩として目的の化合物９を含有する混合画分を、塩交換用カラムに再ロードした。カラムを、３％アセトニトリルの０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液、ｐＨ４．５、４Ｌで洗浄した。酢酸バッファ系を使用して化合物を溶出した。酢酸バッファ系の成分Ａは１％ＡｃＯＨとし、成分Ｂは１％ＡｃＯＨの６０％アセトニトリルとした。混合画分を凍結乾燥して、酢酸塩として目的化合物９を得た。収量：２９．５３２ｇ（ペプチド含有量８２．５％に対して５７．９％）。
【0088】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例4】
【0089】
化合物２９の合成
上の実施例２に記載の（２～８）ペプチド樹脂（３ｍｍｏｌ）をＮＭＰで十分に洗浄した。クロロ酢酸（１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液（５０ｍＬ）を添加し、カップリングを５時間行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。樹脂を、マイクロ波ペプチド合成装置Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅに対応している反応容器に移し、もう一度ＮＭＰで洗浄した。固体のＤ－グルカミン（１２ｍｍｏｌ）を湿潤樹脂の上面に添加し、容器をＬｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅの反応チャンバの内部に置いた。ＮＭＰ（３０ｍｌ）を供給し、反応混合物を、窒素攪拌を伴ってマイクロ波照射により５０℃で１６時間加熱した。次いで、樹脂をＤＭＦ、水、メタノールおよびＤＣＭで逐次洗浄した。
上の実施例２に記載の（２～８）ペプチド樹脂（３ｍｍｏｌ）をＮＭＰで十分に洗浄した。クロロ酢酸（１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液（５０ｍＬ）を添加し、カップリングを５時間行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。樹脂を、マイクロ波ペプチド合成装置Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅに対応している反応容器に移し、もう一度ＮＭＰで洗浄した。固体のＤ－グルカミン（１２ｍｍｏｌ）を湿潤樹脂の上面に添加し、容器をＬｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅの反応チャンバの内部に置いた。ＮＭＰ（３０ｍｌ）を供給し、反応混合物を、窒素攪拌を伴ってマイクロ波照射により５０℃で１６時間加熱した。次いで、樹脂をＤＭＦ、水、メタノールおよびＤＣＭで逐次洗浄した。
【0090】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ６０ｍＬおよびＴＩＳ ３ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離によって単離した。
【0091】
沈殿物を５０％アセトニトリル４０ｍＬに溶かした。４回のランで５０ｘ１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製したが、１回のラン当たり１０ｍｌの粗ペプチド溶液をロードした。純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的化合物２９を白色粉末として得た。収量：２０１３．５ｍｇ（ペプチド含量８０％に対して４６％）。
【0092】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例5】
【0093】
化合物４３の合成
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ、９４９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（３１６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、Ｃｈｅｍ－Ｉｍｐｅｘ）およびＤＩＰＥＡ（３．７５ｍｍｏｌ、６６０μｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）溶液と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。この樹脂の３分の１（０．２５ｍｍｏｌ）をＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器に入れ、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置を使用して化合物４６の合成で使用した。
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ、９４９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（３１６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、Ｃｈｅｍ－Ｉｍｐｅｘ）およびＤＩＰＥＡ（３．７５ｍｍｏｌ、６６０μｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）溶液と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。この樹脂の３分の１（０．２５ｍｍｏｌ）をＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器に入れ、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置を使用して化合物４６の合成で使用した。
【0094】
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＮＭＰ中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを介して行った。合成の間、４倍過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる６０分の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。以下のアミノ酸を逐次結合させた：Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－シクロペンチルグリシン－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ。Ｎ末端Ｆｍｏｃ基を除去し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。
【0095】
ブロモ酢酸（２．５ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液（５ｍｌ）を樹脂に添加した。反応を４時間行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。Ｄ－グルカミン（１ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５ｍｌ）に懸濁させた。Ｎ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（３ｍｍｏｌ）を懸濁液に添加した。混合物を３０分間撹拌し、その間にほとんどのＤ－グルカミンが溶けた。シリル化Ｄ－グルカミンのほぼ透明な溶液を樹脂に添加した。反応を一晩行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで洗浄した。
【0096】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ５ｍＬおよびＴＩＳ ０．２ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離によって単離した。
【0097】
沈殿物を５０％アセトニトリル５ｍＬに溶かした。３０×１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによりペプチドを精製した。純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的の化合物４３を白色粉末として得た。収量：６６．６ｍｇ（ペプチド含量７８．７％に対して１７％）。
【0098】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例6】
【0099】
化合物４６の合成
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、（カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５２ｍｍｏｌ／ｇ）、２．６３２ｇ、４ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ）（２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２０ｍｌ）と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（２ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂の半分（１ｍｍｏｌ）を４器のＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器の間で分割した（０．２５ｍｍｏｌ毎１容器）。固相ペプチド合成を、各容器について同一のカップリングプロトコールを使用して、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置で並行して続けた。
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、（カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５２ｍｍｏｌ／ｇ）、２．６３２ｇ、４ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｍｅ）（２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２０ｍｌ）と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（２ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂の半分（１ｍｍｏｌ）を４器のＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器の間で分割した（０．２５ｍｍｏｌ毎１容器）。固相ペプチド合成を、各容器について同一のカップリングプロトコールを使用して、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置で並行して続けた。
【0100】
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＮＭＰ中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを介して行った。合成の間、４倍過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる６０分の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。以下のアミノ酸を逐次結合させた：Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－シクロヘキシルグリシン－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ。Ｎ末端Ｆｍｏｃ基を除去し、樹脂をＴｒｉｂｕｔｅペプチド合成装置に対応している４０ｍｌの石英反応容器内で混合した。（２～８）ペプチド樹脂をＮＭＰで十分に洗浄した。
【0101】
クロロ酢酸（５ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液（１５ｍＬ）を添加し、カップリングをＴｒｉｂｕｔｅ合成装置で１６時間行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。固体のＤ－グルカミン（４ｍｍｏｌ）を湿潤樹脂の上面に添加し、続いて、ＮＭＰ（２０ｍｌ）を添加した。反応容器をＴｒｉｂｕｔｅ合成装置の中に置いて、ボルテックス撹拌しながらＩＲ照射により５０℃で１６時間加熱した。次いで、樹脂をＤＭＦ、水、メタノールおよびＤＣＭで逐次洗浄した。
【0102】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ２０ｍＬおよびＴＩＳ ０．５ｍｌで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離によって単離した。
【0103】
沈殿物を５０％アセトニトリル２０ｍＬに溶かした。２回のランで５０ｘ１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製したが、１回のラン当たり粗ペプチド溶液１０ｍｌをロードした。純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的化合物４６を白色粉末として得た。収量：６０１．２ｍｇ（ペプチド含量７５．７％に対して３８％）。
【0104】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例7】
【0105】
化合物３１の合成
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、（カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５８ｍｍｏｌ／ｇ）、１．２６６ｇ、２ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（４２２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８８０μｌ、５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍｌ）と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂を４器のＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器の間で分割した（０．２５ｍｍｏｌ毎１容器）。固相ペプチド合成は、各容器について同一のカップリングプロトコールを使用して、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置で並行して続けた。
出発２－クロロトリチルポリスチレン樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、（カタログ番号ＲＣＴ－１０８３－ＰＩ、１．５８ｍｍｏｌ／ｇ）、１．２６６ｇ、２ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ（２－Ｃｌ）（４２２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（８８０μｌ、５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１０ｍｌ）と４時間反応させた。ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を添加後、混合物をさらに３０分間回転させた。試薬を排出し、樹脂をＤＭＦで洗浄した。樹脂を４器のＳｙｍｐｈｏｎｙ反応容器の間で分割した（０．２５ｍｍｏｌ毎１容器）。固相ペプチド合成は、各容器について同一のカップリングプロトコールを使用して、Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置で並行して続けた。
【0106】
Ｓｙｍｐｈｏｎｙ合成装置でのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングは、ＮＭＰ中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを介して行った。合成の間、４倍過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる６０分の単回サイクルを使用した。アルギニンを３時間にわたって結合させた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％ピペリジンのＤＭＦを用いたペプチド樹脂の２回洗浄（５分間の洗浄、続いて２０分間の洗浄）で行った。以下のアミノ酸を逐次結合させた：Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－シクロヘキシルグリシン－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ、およびＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ。Ｎ末端Ｆｍｏｃ基を除去し、樹脂を手動ペプチド合成容器内で混合した。（２～８）ペプチド樹脂をＮＭＰで十分に洗浄した。
【0107】
ブロモ酢酸（１．３８９ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１．５４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液（２０ｍＬ）を添加し、カップリングを一晩行った。試薬を排出し、樹脂をＮＭＰで洗浄した。
【0108】
Ｄ－グルカミン（７２５ｍｇ、４ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（４０ｍｌ）に懸濁させ、続いてＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミドを添加した。混合物を３０分間撹拌して、シリル化Ｄ－グルカミンのほぼ透明な溶液を得た。溶液を樹脂に添加し、反応を一晩行った。次いで、樹脂をＤＭＦ、メタノールおよびＤＣＭで逐次洗浄した。
【0109】
粗ペプチドを、９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ ２０ｍＬおよびＴＩＳ ０．５ｍｌで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発後、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離によって単離した。
【0110】
沈殿物を５０％アセトニトリル２０ｍＬに溶かした。２回のランで５０ｘ１００ｍＭカラムでの分取ＨＰＬＣによってペプチドを精製したが、１回のラン当たり粗ペプチド溶液１０ｍｌをロードした。純粋な画分をプールし、凍結乾燥して、目的化合物３１を白色粉末として得た。収量：３８４ｍｇ（ペプチド含量８３．５％に対して３２％）。
【0111】
観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）が、下の表３に提供されている。
【実施例8】
【0112】
化合物２、３、５～８、１０～２８、３０、３２～４２、４４および４５の合成
化合物２、３、５～８、１０～２８、３０、３２～４２、４４および４５を実施例１～７に記載の方法を使用して合成した。
化合物２、３、５～８、１０～２８、３０、３２～４２、４４および４５を実施例１～７に記載の方法を使用して合成した。
【0113】
化合物１～４６の観測および理論ＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）、ならびにこれらの化合物の純度が、下の表３にまとめられている。
【0114】
【表3】
【実施例9】
【0115】
ＦＬＩＰＲアッセイによって測定したＡＴ１受容体アゴニスト活性およびアンタゴニスト活性
ＡＴ１受容体（ＡＴ１Ｒ）アゴニストは、カルシウムイオンの細胞内フラックスを増大する。ＡＴ１Ｒアンタゴニストはアゴニスト効果を低下させることができる。上に記載の化合物１～４６のアゴニスト活性およびアンタゴニスト活性を、細胞をベースとした蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイで評価した。化合物をまずアゴニズム（パートＩ）について試験し、続いて、ＡＴ１ＲアゴニストであるアンギオテンシンＩＩを添加してアンタゴニスト活性を試験した（パートＩＩ）。このアッセイでは、安定なｈＡＴ１Ｒ発現細胞株（ＣｈａｎＴｅｓｔ ｈＡＴ１Ｒ；ＣｈａｎＴｅｓｔ Ｃｏｒｐ Ａ６２８）を使用した。アゴニストに応答したカルシウムの細胞内フラックスは、Ｃａ２＋（細胞内貯蔵から放出された）とカルシウム感受性色素との相互作用を介して誘導された蛍光のリアルタイム測定によって測定した。パートＩでは、細胞を様々な濃度の試験化合物に曝露し、アゴニスト活性（ＥＣ５０および有効性）について直ちに測定した。パートＩＩでは、試験化合物との２０分のインキュベーションに続いて、一定濃度のアゴニスト（アンギオテンシンＩＩ）を添加し、結果として得られる蛍光を再度測定してアンタゴニスト活性（ＩＣ５０および有効性）を決定した。
ＡＴ１受容体（ＡＴ１Ｒ）アゴニストは、カルシウムイオンの細胞内フラックスを増大する。ＡＴ１Ｒアンタゴニストはアゴニスト効果を低下させることができる。上に記載の化合物１～４６のアゴニスト活性およびアンタゴニスト活性を、細胞をベースとした蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）アッセイで評価した。化合物をまずアゴニズム（パートＩ）について試験し、続いて、ＡＴ１ＲアゴニストであるアンギオテンシンＩＩを添加してアンタゴニスト活性を試験した（パートＩＩ）。このアッセイでは、安定なｈＡＴ１Ｒ発現細胞株（ＣｈａｎＴｅｓｔ ｈＡＴ１Ｒ；ＣｈａｎＴｅｓｔ Ｃｏｒｐ Ａ６２８）を使用した。アゴニストに応答したカルシウムの細胞内フラックスは、Ｃａ２＋（細胞内貯蔵から放出された）とカルシウム感受性色素との相互作用を介して誘導された蛍光のリアルタイム測定によって測定した。パートＩでは、細胞を様々な濃度の試験化合物に曝露し、アゴニスト活性（ＥＣ５０および有効性）について直ちに測定した。パートＩＩでは、試験化合物との２０分のインキュベーションに続いて、一定濃度のアゴニスト（アンギオテンシンＩＩ）を添加し、結果として得られる蛍光を再度測定してアンタゴニスト活性（ＩＣ５０および有効性）を決定した。
【0116】
ＣｈａｎＴｅｓｔ ｈＡＴ１Ｒ安定細胞を、１０％（ｖ／ｖ）の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ－ＨＩ）、４ｍＭグルタマックス、１％ＮＥＡＡ、５０ｎｇ／ｍＬプラスモシン、４００μｇ／ｍＬ Ｇ４１８を含有するＨａｍ‘ｓ Ｆ１２で、加湿雰囲気内で５％ＣＯ２中で３７℃で維持した。
【0117】
ＦＬＩＰＲアッセイについては、ＣｈａｎＴｅｓｔ ｈＡＴ１Ｒ細胞をＴｒｙｐｓｉｎ ＥＤＴＡ溶液６ｍｌでトリプシン処理し、１０％ＦＢＳ－ＨＩ、４ｍＭグルタマックスを含有するフェノールレッドフリーのＤＭＥＭ中で回収し、カウントし、遠心沈殿し、同じ培地に再懸濁させた。細胞懸濁液を、３８４ウェルの黒色ＰＤＬ透明底プレートのウェルに、２．５×１０４細胞／ウェル、２０μｌ／ウェルで添加した。
【0118】
ＦＬＩＰＲアッセイ
ローディングバッファの調製：
・ローディングバッファ：Ｃａｌｃｉｕｍ ５ Ｂｕｌｋ Ａｓｓａｙ試薬１バイアルを１× ＨＢＳＳ－２０ｍＭ へペスバッファ１００ｍｌに溶かした。
・プロベネシドを１Ｍ ＮａＯＨ中に１Ｍで再懸濁させた。プロベネシドが溶液になったら、等容量のＨ２Ｏを添加して、５００ｍＭの溶液を調製し、続いて、５ｍＭの使用濃度へとローディングバッファで１：１００希釈を行った。１Ｍ ＮａＯＨを使用してｐＨを７．４に調整した。
ローディングバッファで細胞をロードする
・細胞プレートをインキュベーターから取り出し、プロベネシド（５ｍＭ）を含有するローディングバッファ２５μｌを各ウェルに添加した。
・プレートを、加湿雰囲気中、５％ＣＯ２中、３７℃で１時間インキュベートした。
カルシウム画像の取得
・ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａを、以下のデフォルトパラメーターで、ならびにフィルター選択により定めた励起波長４７０～４９５ｎｍおよび発光波長５１５～５７５ｎｍの読み取りモードで設定した。
〇 ゲイン５０
〇 励起強度８０％（デフォルト）
〇 露光時間０．４秒（デフォルト）
・細胞プレートを３８４ウェル化合物プレートと共にＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａに移した。アッセイの残りのステップを、ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａによって前進させた。１０秒の間、１秒の間隔でベースライン読み取りを行い、続いて、１０×化合物５μｌを添加した。次いで、化合物誘発蛍光シグナルを、１秒間隔での読み取りによって３分間測定した。
・細胞プレートをＦＬＩＰＲから取り出し、さらなる１７分間放置しておいた。
・次いで、細胞プレートを３８４ウェルアンギオテンシンＩＩアゴニスト希釈プレートと共に、ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａに戻し移した。１０秒の間、１秒の間隔でベースライン読み取りを行い、続いて、１０×アンギオテンシンＩＩアゴニスト５．５μｌを添加した。次いで、アゴニスト誘発蛍光シグナルを、１秒間隔での読み取りによって３分間測定した。
・全体として、ＦＬＩＰＲアッセイの各ウェルは、総容量５５．５μｌで以下の成分で構成されていた：
２０μｌ ２．５×１０４細胞
２５μｌ Ｃａｌｃｉｕｍ ５ローディングバッファ
５μｌ １０×試験化合物または参照化合物
５．５μｌ １０×アンギオテンシンＩＩアゴニスト（最終濃度１０ｎＭ）
ローディングバッファの調製：
・ローディングバッファ：Ｃａｌｃｉｕｍ ５ Ｂｕｌｋ Ａｓｓａｙ試薬１バイアルを１× ＨＢＳＳ－２０ｍＭ へペスバッファ１００ｍｌに溶かした。
・プロベネシドを１Ｍ ＮａＯＨ中に１Ｍで再懸濁させた。プロベネシドが溶液になったら、等容量のＨ２Ｏを添加して、５００ｍＭの溶液を調製し、続いて、５ｍＭの使用濃度へとローディングバッファで１：１００希釈を行った。１Ｍ ＮａＯＨを使用してｐＨを７．４に調整した。
ローディングバッファで細胞をロードする
・細胞プレートをインキュベーターから取り出し、プロベネシド（５ｍＭ）を含有するローディングバッファ２５μｌを各ウェルに添加した。
・プレートを、加湿雰囲気中、５％ＣＯ２中、３７℃で１時間インキュベートした。
カルシウム画像の取得
・ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａを、以下のデフォルトパラメーターで、ならびにフィルター選択により定めた励起波長４７０～４９５ｎｍおよび発光波長５１５～５７５ｎｍの読み取りモードで設定した。
〇 ゲイン５０
〇 励起強度８０％（デフォルト）
〇 露光時間０．４秒（デフォルト）
・細胞プレートを３８４ウェル化合物プレートと共にＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａに移した。アッセイの残りのステップを、ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａによって前進させた。１０秒の間、１秒の間隔でベースライン読み取りを行い、続いて、１０×化合物５μｌを添加した。次いで、化合物誘発蛍光シグナルを、１秒間隔での読み取りによって３分間測定した。
・細胞プレートをＦＬＩＰＲから取り出し、さらなる１７分間放置しておいた。
・次いで、細胞プレートを３８４ウェルアンギオテンシンＩＩアゴニスト希釈プレートと共に、ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａに戻し移した。１０秒の間、１秒の間隔でベースライン読み取りを行い、続いて、１０×アンギオテンシンＩＩアゴニスト５．５μｌを添加した。次いで、アゴニスト誘発蛍光シグナルを、１秒間隔での読み取りによって３分間測定した。
・全体として、ＦＬＩＰＲアッセイの各ウェルは、総容量５５．５μｌで以下の成分で構成されていた：
２０μｌ ２．５×１０４細胞
２５μｌ Ｃａｌｃｉｕｍ ５ローディングバッファ
５μｌ １０×試験化合物または参照化合物
５．５μｌ １０×アンギオテンシンＩＩアゴニスト（最終濃度１０ｎＭ）
【0119】
ＦＬＩＰＲ Ｃａｌｃｉｕｍ ５アッセイからの経時的推移の結果を、相対蛍光単位（ＲＦＵ）として表した。最大値マイナス最小値（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）を使用してシグナルの強度を定量化した。平均ＲＦＵを、反復値から計算し、ｘ軸上の対数スケールの化合物濃度に対してｙ軸上にプロットし、単結合部位、４パラメーター濃度応答モデル：（ＭＩＮ＋（（ＭＡＸ－ＭＩＮ）／（１＋（（ＥＣ５０／ｘ）＾Ｈｉｌｌ））））を使用して非線形回帰分析を行い、その結果、濃度応答曲線を作製した。報告パラメーターには、アゴニスト効力ＥＣ５０（最大アゴニスト応答の半分を引き起こす濃度）、アンタゴニスト効力ＩＣ５０（アンタゴニスト化合物に関して、アゴニスト応答の最大阻害の半分を引き起こす濃度）および有効性（％ＭＰＥ：最大可能効果のパーセント）が含まれた。
【0120】
化合物１～４６および４つの参照化合物を上のアッセイで試験した。４つの参照化合物は、（１）サリレシン（すなわち、［Ｓａｒ１、Ｉｌｅ８］ＡｎｇＩＩ：Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ＯＨ、（「参照化合物１」）、（２）［Ｓａｒ１、Ｄ－Ｐｈｅ８］ＡｎｇＩＩ：Ｓａｒ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ（「参照化合物２」）、Ｓａｍａｎｅｎら Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ １９８８、３１、５１０～５１６、（３）アンギオテンシンＩＩ：Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－ＯＨ（すなわち、アンタゴニスト活性を有さない内因性アゴニスト）（「参照化合物３」）、および（４）バルサルタン「参照化合物４」）である。結果が下の表４にまとめられている。
【0121】
表４に示すように、化合物１～４６は、参照アンタゴニスト（すなわち参照化合物１、２および４）と同様のアンタゴニスト活性を示し、かつ、参照であるペプチド性ＡＴ１Ｒアンタゴニスト（すなわち、参照化合物１および２）と比較して有意に低下したアゴニスト活性を有していた。このことによって、これらの化合物は、望ましくない昇圧効果を引き起こさずに、妊娠中の患者における障害（例えば、高血圧障害、子癇前症または腎疾患）を処置するために使用することができる、ことが示唆されている。
【0122】
【表4】
【実施例10】
【0123】
子癇前症のインビボ動物モデルにおける評価
本開示に記載の化合物を、改変と共にＨｅｒｉｎｇら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ２０１０、５６、３１１～３１８によって記載の通りに、子癇前症のインビボ動物モデルにおいて評価した。簡潔にいえば、ＧＤ１３から２０の実験で使用するために、交配日指定妊娠のベンダーカテーテル処置（ｖｅｎｄｏｒ－ｃａｔｈｅｔｅｒｉｚｅｄ）（頸静脈および頸動脈）ラットが妊娠日（ＧＤ）１０に到着した。ＧＤ１０～１２の母体体重（ＢＷ）を使用して、処置指定のため妊娠状態の予測に役立てた。ＧＤ１２に、ラットを処置群に割り当てた。ＧＤ１３に、ラットに、典型的には、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプを、１つにはアンギオテンシンＩＩ（または対照ラットについては生理食塩水、ＩＶ注入）を含有するものを、および１つには試験化合物（または対照ラットについては媒体、ＳＣ注入）を含有するものを、植え込んだ。ＧＤ１４からＧＤ２０まで、毎日のＢＷ測定を行った。ＧＤ１４からＧＤ１９までの間で、平均動脈圧（ＭＡＰ）測定を、少なくとも２つの別々の日（ＧＤ１４およびＧＤ１７）で行なったが、毎日行ってもよい。ＧＤ１９に、最終ＭＡＰ測定に続いて、ラットを尿収集のために代謝ケージの中に４時間置いた。尿試料を遠心分離し、上清をラットアルブミンＥＬＩＳＡによって分析して、アルブミン尿について試験した。
本開示に記載の化合物を、改変と共にＨｅｒｉｎｇら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ２０１０、５６、３１１～３１８によって記載の通りに、子癇前症のインビボ動物モデルにおいて評価した。簡潔にいえば、ＧＤ１３から２０の実験で使用するために、交配日指定妊娠のベンダーカテーテル処置（ｖｅｎｄｏｒ－ｃａｔｈｅｔｅｒｉｚｅｄ）（頸静脈および頸動脈）ラットが妊娠日（ＧＤ）１０に到着した。ＧＤ１０～１２の母体体重（ＢＷ）を使用して、処置指定のため妊娠状態の予測に役立てた。ＧＤ１２に、ラットを処置群に割り当てた。ＧＤ１３に、ラットに、典型的には、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプを、１つにはアンギオテンシンＩＩ（または対照ラットについては生理食塩水、ＩＶ注入）を含有するものを、および１つには試験化合物（または対照ラットについては媒体、ＳＣ注入）を含有するものを、植え込んだ。ＧＤ１４からＧＤ２０まで、毎日のＢＷ測定を行った。ＧＤ１４からＧＤ１９までの間で、平均動脈圧（ＭＡＰ）測定を、少なくとも２つの別々の日（ＧＤ１４およびＧＤ１７）で行なったが、毎日行ってもよい。ＧＤ１９に、最終ＭＡＰ測定に続いて、ラットを尿収集のために代謝ケージの中に４時間置いた。尿試料を遠心分離し、上清をラットアルブミンＥＬＩＳＡによって分析して、アルブミン尿について試験した。
【0124】
本開示に記載の化合物によって、１９日目に、媒体と比較してＭＡＰおよびアルブミン尿の低下が示され、したがって、子癇前症に伴う妊娠性高血圧症およびタンパク尿が改善されることがわかった。
【0125】
その他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【配列表】