特許 7143335 生理活性物質の鼻腔内投与

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-09-16

(45)【発行日】2022-09-28

(54)【発明の名称】生理活性物質の鼻腔内投与

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/197 20060101AFI20220920BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/375 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/4415 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/455 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/51 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/522 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 31/714 20060101ALI20220920BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20220920BHJP

   A61P 3/02 20060101ALI20220920BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220920BHJP

【ＦＩ】

A61K31/197

A61K9/08

A61K31/375

A61K31/4415

A61K31/455

A61K31/51

A61K31/522

A61K31/714

A61K47/18

A61P3/02

A61P3/02 104

A61P3/02 105

A61P3/02 106

A61P3/02 107

A61P43/00 121

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2019568802

(86)(22)【出願日】2018-02-27

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-04-09

(86)【国際出願番号】 EP2018054777

(87)【国際公開番号】W WO2018158234

(87)【国際公開日】2018-09-07

【審査請求日】2021-02-26

(31)【優先権主張番号】17158850.2

(32)【優先日】2017-03-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】519318524

【氏名又は名称】ダッチ・リニューアブル・エナジー・ビー．ブイ．

【氏名又は名称原語表記】ＤＵＴＣＨ ＲＥＮＥＷＡＢＬＥ ＥＮＥＲＧＹ Ｂ．Ｖ．

【住所又は居所原語表記】Ｋｒｕｉｔｐａｄ １６，１３９８ ＣＰ ＭＵＩＤＥＮ ＴＨＥ ＮＥＴＨＥＲＬＡＮＤＳ

(74)【代理人】

【識別番号】100108855

【弁理士】

【氏名又は名称】蔵田 昌俊

(74)【代理人】

【識別番号】100103034

【弁理士】

【氏名又は名称】野河 信久

(74)【代理人】

【識別番号】100179062

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 正

(74)【代理人】

【識別番号】100199565

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 茂

(74)【代理人】

【識別番号】100153051

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 直樹

(74)【代理人】

【識別番号】100162570

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 早苗

(72)【発明者】

【氏名】ペリカーン、フーベルト・クレメンス

(72)【発明者】

【氏名】フィッセール、ロルフ・ローレンス

【審査官】深草 亜子

(56)【参考文献】

【文献】特開２０００－０３４２３２（ＪＰ，Ａ）

【文献】独国特許出願公開第０４４３０１５４（ＤＥ，Ａ１）

【文献】中国特許第１０１７５６９５４（ＣＮ，Ｂ）

【文献】ナイアシン栄養におけるトリプトファン経路の重要性，日本栄養・食糧学会誌，2010年，Vol.63, no.4，pp.135-141

【文献】「日本人の食事摂取基準（２０１５年版）」策定検討会報告書，2014年03月，pp.202-205

【文献】Riboflavin|C17H20N4O6-PubChem，2022年01月21日，https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Riboflavin#section=Solubility

【文献】Biotin|C10H16N2O3S-PubChem，2022年01月21日，https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Biotin#section=Solubility

【文献】Folic acid|C19H19N7O6-PubChem，2022年01月21日，https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Folic-acid#section=Solubility

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９

Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０

Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２

Ａ６１Ｐ ３／００ ３／１４

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

１種以上のビタミンおよび／またはカフェインから選択される水溶性生理活性物質の投与に使用するための水性組成物であって、前記使用が対象の鼻腔内に前記水性組成物を投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、少なくとも０．００１重量％の１種以上のビタミンおよび／または少なくとも０．００１重量％のカフェインを含み、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有する生理活性物質；ここで、前記水性組成物が、ニコチン酸およびアスコルビン酸の両者を含まない、
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；ならびに
・ 少なくとも６０重量％の水
を含む、水性組成物。

【請求項2】

前記生理活性物質が、その２０℃での水溶性の限界を下回る濃度で前記水性組成物中に存在する、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記水性組成物が、０．００１～２０重量％、好ましくは０．００５～１５重量％、より好ましくは０．００１～１０重量％、またはさらにより好ましくは０．００１～５重量％の１種以上の前記生理活性物質を含有する、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記水性組成物が、０．０５～８重量％、好ましくは０．１～７重量％、より好ましくは０．５～６重量％、またはさらにより好ましくは１～５重量％のニコチンアミドを含有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

前記生理活性物質が、アスコルビン酸、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸、ピリドキシン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、ならびにそれらの塩および混合物の群から選択されるビタミンである、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

前記ビタミンが、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンおよびメチルコバラミンからなる群から選択されるビタミンＢ１２成分である、請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

前記ビタミンがピリドキシン（ビタミンＢ６）である、請求項５に記載の組成物。

【請求項8】

前記生理活性物質が、２０℃において少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２０℃において少なくとも３３ｍｇ／ｍＬ、さらにより好ましくは２０℃において少なくとも６６ｍｇ／ｍｌの脱塩水に対する水溶性を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

前記水性組成物が、４．５～６．５の範囲内のｐＨを有し、前記水性組成物が、２００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２６０～３８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

前記方法が、前記組成物を一回ごとに０．０１～０．３ｍｌの一定量のスプレーで鼻腔内に投与することを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項11】

ビタミンＢ欠乏症の予防的または治療的処置に使用するための水性組成物であって、前記処置が、水性組成物を鼻腔内投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸、ピリドキシン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、ならびにそれらの塩および混合物（ただし、前記混合物はニコチン酸およびアスコルビン酸の両者を含まない）からなる群から選択されるビタミンである生理活性物質；ここで、１種以上の前記生理活性物質は、その２０℃での水溶性の限界を下回る濃度で前記水性組成物中に存在する、
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；および
・ 少なくとも６０重量％の水
を含み、前記水性組成物は、０．０１～０．３ｍｌの量のスプレーまたはエアロゾルとして鼻腔内に投与され、１０～１０，０００μｇの量の１種以上の生理活性物質を提供する、水性組成物。

【請求項12】

前記生理活性物質が、ピリドキシン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、ならびにそれらの塩および混合物からなる群から選択されるビタミンである、請求項１１に記載の予防的または治療的処置に使用するための組成物。

【請求項13】

・ 請求項１～１０のいずれか１項に記載の水性組成物を含む容器；および
・ 前記水性組成物と流体連通している、鼻腔内投与のための鼻腔アプリケーターデバイス
を含むキット。

【請求項14】

・ 請求項１１に記載の水性組成物を含む容器；および
・ 前記水性組成物と流体連通している、鼻腔内投与のための鼻腔アプリケーターデバイス
を含み、前記鼻腔アプリケーターデバイスが、スプレーまたはエアロゾルの形態の０．０１～０．３ｍＬの一定量の前記水性組成物を対象の鼻腔内に提供するように適合されており、前記一定量が、１０～１０，０００μｇの１種以上の生理活性物質を提供する、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、生理活性物質の鼻腔内投与、より詳細には完全に溶解した生理活性物質および鼻腔内吸収促進剤を含有する水性組成物の鼻腔内投与に関する。

【0002】

背景技術
鼻腔内投与は、水溶性生理活性物質の局所および全身送達に対する種々の魅力的な選択肢を提供する。鼻腔粘膜の性質は一連の独特な特質をもたらし、それらは、患者の安全性、利便性およびコンプライアンスを最大にするのに役立つ可能性がある。鼻腔粘膜を介した生理活性剤の投与により、活性物質は体循環に直接輸送され、したがって初回通過代謝が回避されるので、他の投与経路、例えば経口投与よりも利点がある。加えて、活性薬剤は、経鼻投与後、嗅粘膜を通過することにより、または鼻－脳経路（nose to brain pathway）として公知の鼻腔中の三叉神経系を介して輸送されることにより、ＣＮＳ内に直接吸収される。

【0003】

鼻腔内の鼻腔粘膜は理想的な吸収領域であるにもかかわらず、生まれながらの透過バリアおよび効率的な清浄メカニズムが、吸収可能な活性物質の総量を制限する。経鼻経路の主な不利な点として、限られた適用量（２５～２５０μＬ）、高分子量薬物（＞１，０００Ｄａ）が鼻腔粘膜を通過することの困難性、病的状態の存在、粘液線毛薬物クリアランス、酵素的バリア、および鼻腔粘膜の刺激がある。経鼻投与した場合の水溶性生理活性物質の吸収を改善する努力がなされてきた。

【0004】

ＥＰ－Ａ０９６７２１４は、メシル酸シルデナフィルおよび鼻腔内投与に適合した形態の医薬として許容される希釈剤または担体を含む、男性の勃起不全または女性の性障害を処置するための鼻腔内医薬製剤について記載している。例２は、メシル酸シルデナフィル、ニコチンアミド、および水を含有する鼻腔内溶液製剤について記載している。

【0005】

ＤＥ－Ａ４４３０１５４は、１００ｍＬの蒸留水；０．１グラムのニコチン酸；１グラムのニコチンアミド；および１０グラムのアスコルビン酸ナトリウムを含む水性抗うつ組成物について記載している。この組成物は、うつ病患者に、水性組成物（０．５～０．７ｍＬ）を点眼することにより、または組成物（１～１．２ｍＬ）を鼻腔粘膜に投与することにより適用された。

【0006】

ＵＳ ２０１４／００７２５８８は、インスリンおよび１～４０％ｗ／ｖの様々な濃度のＳｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５を含む組成物を開示している。Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）は、ポリエチレングリコールのヒドロキシ脂肪酸エステルである。ＵＳ ２０１４／００７２５８８は、ポリエチレングリコールのヒドロキシ脂肪酸エステルを治療薬と組み合わせて使用すると、ポリエチレングリコールのヒドロキシ脂肪酸エステルが製剤中に存在しない場合と比較して、はるかに高い度合いで粘膜面を通して治療薬が吸収されることを教示している。

【0007】

ＵＳ ２０１６ ０２２７２６ Ａ１は、ビタミンＢ１２を経鼻投与するための組成物、具体的には、約０．０２％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗのコバラミン化合物および医薬として許容される緩衝液を含む水溶液を開示しており、ここで、該組成物は約４～約６．５のｐＨを有し、コバラミン化合物はシアノコバラミンまたはヒドロキソコバラミンである。さらに、ＵＳ ２０１６ ０２２７２６ Ａ１は、以下の経鼻吸着促進剤：脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビトール無水物の部分エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、オレイン酸、レシチン、無水アルコール、Ｔｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０など）、Ｓｐａｎ（例えば、Ｓｐａｎ２０、Ｓｐａｎ４０、Ｓｐａｎ８０など）、ステアリン酸ポリオキシル４０、ステアリン酸ポリオキシエチレン５０、エデト酸二ナトリウム、プロピレングリコール、モノオレイン酸グリセリン、フジエエート（fusieate）、胆汁酸塩、オクトキシノール、およびそれらの組合せを開示している。これらの吸収促進剤の有効性は期待外れであることが多く、これらの促進剤には、例えば感作および刺激のような望ましくない副作用を生じるものもある。

【0008】

安全に使用でき、生理活性物質の有効な鼻腔内吸収を実現する、生理活性物質の鼻腔内製剤に対する必要性が依然として存在する。

【0009】

発明の概要
本発明者らは、予想外なことに、ニコチンアミドを適切な濃度で含むことによって、水溶液からの水溶性生理活性物質の鼻腔内吸収を著しく促進できることを発見した。

【0010】

よって、本発明の一側面は、水溶性生理活性物質を投与するための非治療的方法であって、前記方法が対象の鼻腔内に水性組成物を投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、少なくとも０．００１重量％の１種以上のビタミンおよび／または少なくとも０．００１重量％のカフェインを含み、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、ここで、前記水性組成物が、ナイアシンおよびアスコルビン酸の両者を含まない、生理活性物質；
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；ならびに
・ 少なくとも６０重量％の水
を含む、非治療的方法に関する。

【0011】

本発明の別の側面は、障害の予防的または治療的処置に使用するための水性組成物であって、前記処置が、水性組成物を鼻腔内投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、その２０℃での水溶性の限界を下回る濃度で前記水性組成物中に存在する、１種以上の生理活性物質；
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；および
・ 少なくとも６０重量％の水
を含み、前記水性組成物は、０．０１～０．３ｍｌの量のスプレーまたはエアロゾルとして鼻腔内に投与され、１０～１０，０００μｇの量の１種以上の生理活性物質を提供する、水性組成物に関する。

【0012】

本発明による水性製剤を適用することによって、鼻腔内吸収を促進することができる水溶性生理活性物質の例には、水溶性ビタミン、ペプチド、タンパク質、および例えばカフェインのようなアルカロイドが含まれる。

【0013】

理論に縛られることを望むものではないが、鼻腔粘膜を経由する吸収の増加は、ニコチンアミドが粘膜透過性を改善することに起因すると考えられる。

【0014】

本発明における生理活性物質の吸収の改善を考慮すると、より低用量の生理活性物質を投与する必要がある。これは、製剤中の生理活性物質の濃度を低減させることができ、および／または、投与量を低減させることができることを意味している。

【0015】

本発明は、また、水溶液からの生理活性物質の鼻腔内吸収の促進剤としてのニコチンアミドの使用であって、前記水溶液が０．０１～１０重量％のニコチンアミドをさらに含む、ニコチンアミドの使用を提供する。

【0016】

さらに、本発明は、
・ 上に定義される水性組成物を含む容器；および
・ 前記水性組成物と流体連通している、鼻腔内投与のための鼻腔アプリケーターデバイス
を含むキットに関する。

【0017】

態様の説明
第１の側面では、本発明は、水溶性生理活性物質を投与するための非治療的方法であって、前記方法が対象の鼻腔内に水性組成物を投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、少なくとも０．００１重量％の１種以上のビタミンおよび／または少なくとも０．００１重量％のカフェインを含み、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、ここで、前記水性組成物が、ナイアシンおよびアスコルビン酸（これらの酸の塩を含む）の両者を含まない、生理活性物質；
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；ならびに
・ 少なくとも６０重量％の水
を含む、非治療的方法に関する。

【0018】

「ニコチンアミド」という用語は、ここで使用される場合、ナイアシンアミドとしても公知のピリジン-3-カルボキサミド、ならびに生理学的に許容される（解離した）塩を指す。ニコチンアミドは、構造式Ｉ：

【0019】

【化1】

【0020】

で表される。

【0021】

「ビタミン」という用語は、ここで使用される場合、人が限られた量で必要とする生命の維持に必要な栄養素である有機化合物を意味する。「ビタミン」という用語には、必須脂肪酸または必須アミノ酸は含まれない。

【0022】

「ペプチド」という用語は、ここで使用される場合、形式的に水を失うことによる、あるカルボニル炭素から別の窒素原子への共有結合の形成によって、２～１００個のアミノ酸分子（同一または異なる）から誘導される化合物を意味する。

【0023】

「タンパク質」という用語は、ここで使用される場合、１００個を超えるアミノカルボン酸分子から誘導される、天然に存在するか、または（半）合成のポリペプチドを意味する。

【0024】

「カフェイン」という用語は、ここで使用される場合、1,3,7-トリメチルキサンチン、ならびに生理学的に許容される（解離した）塩を指す。

【0025】

生理学的に許容される適切な塩は、有機塩であっても無機塩であってもよい。生理学的に許容される適切な有機塩として、クエン酸塩およびギ酸塩が含まれるが、これらに限定されない。生理学的に許容される適切な無機塩として、塩化物およびヨウ化物が含まれるが、これらに限定されない。

【0026】

本発明によって用いられる水溶性生理活性物質は、好ましくは、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２０℃において少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは少なくとも３３ｍｇ／ｍＬ、さらにより好ましくは２０℃において少なくとも６６ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する溶解性を有する。典型的には、水溶性生理活性物質の２０℃における脱塩水に対する水溶性は、１００ｍｇ／ｍＬを超えない。

【0027】

好ましくは、水溶性生理活性物質は、０．５未満、より好ましくは０未満、さらにより好ましくは－０．５未満のｌｏｇ Ｐを有する。ｌｏｇ Ｐは、オクタノール／水分配係数を示し、物質の脂溶性を表す。

【0028】

以前に説明したように、水性組成物中のニコチンアミドは、生理活性物質の鼻腔内吸収を促進する。言い換えれば、好ましくは、ニコチンアミドは溶解促進剤として用いられない。したがって、特に好ましい態様では、生理活性物質は、その２０℃での水溶性を下回る濃度で水性組成物中に存在する。さらにより好ましくは、生理活性物質は、その２０℃での水溶性の９０％を下回る、より好ましくは８０％を下回る濃度で存在する。

【0029】

別の好ましい態様では、水性組成物は、０．００１～２０重量％、より好ましくは０．００５～１５重量％、さらにより好ましくは０．００１～１０重量％、最も好ましくは０．００１～５重量％の１種以上の生理活性物質を含有する。

【0030】

ニコチンアミドは、好ましくは、０．０５～８重量％、より好ましくは０．１～７重量％、さらにより好ましくは０．５～６重量％、最も好ましくは１～５重量％の濃度で水性組成物中に存在する。

【0031】

好ましい一態様では、水溶性生理活性物質は、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸（ビタミンＢ５）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、ビオチン（ビタミンＢ７）、葉酸（ビタミンＢ９）、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン（ビタミンＢ１２）、ならびにそれらの塩および混合物からなる群から選択されるビタミンである。好ましい態様では、用いられるビタミンは、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンおよびメチルコバラミンからなる群から選択されるビタミンＢ１２成分である。別の好ましい態様では、ビタミンはピリドキシン（ビタミンＢ６）である。さらに別の好ましい態様では、ビタミンは葉酸（ビタミンＢ９）である。

【0032】

さらに別の好ましい態様では、水溶性生理活性物質は1,3,7-トリメチルキサンチン（カフェイン）である。

【0033】

好ましくは、水性組成物は、４．５～６．５の範囲内、より好ましくは５．０～６．２の範囲内、さらにより好ましくは５．５～６．０の範囲内のｐＨを有する。

【0034】

好ましい態様では、水性組成物は、１重量％を超えない、好ましくは０．５重量％を超えない、界面活性剤、高分子賦形剤およびポリヒドロキシル賦形剤を含む。したがって、本質的に、界面活性剤、高分子賦形剤またはポリヒドロキシル賦形剤を含まない、経鼻投与用の水溶性生理活性物質の組成物を製剤化することが今や可能である。これらの賦形剤は、従前は吸収促進剤として使用されてきたが、望ましくない副作用があることは公知である。さらに、本発明の方法では水溶性生理活性物質のバイオアベイラビリティが改善されているので、低濃度の水溶性生理活性物質を使用することができる。この利点には、組成物の浸透圧の改善が含まれるので、高濃度の水溶性生理活性物質と比較して対象に対して痛みの少ない等張性組成物を調製することができる。

【0035】

水性組成物は、好ましくは２００～５００ｍＯｓｍ／Ｌ、より好ましくは２６０～３８０ｍＯｓｍ／Ｌの浸透圧を有する。

【0036】

本発明の方法は、好ましくは、０．０００１～０．３ｍｌ、より好ましくは０．００１～０．２ｍｌ、最も好ましくは０．０１～０．１ｍｌ、さらにより好ましくは０．０５～０．２ｍｌの用量の組成物を鼻腔内投与することを含む。組成物は、好ましくは、スプレーまたはエアロゾルとして投与される。

【0037】

「エアロゾル」という用語は、液体粒子の霧を意味する。かかる製剤のための分注システムは、圧縮された噴射ガスによって加圧された液体を含有する缶またはボトルであってもよい。

【0038】

「スプレー」という用語は、手動式ポンプによって生成され、アトマイザーのノズルを強制的に通過させられた液体粒子の微細分散液を意味する。

【0039】

典型的な点鼻スプレー製剤は、生理活性物質の水性組成物が入ったボトルからなる。対象によるポンプ操作によって生理活性物質が鼻腔内に送達される。

【0040】

好ましい態様では、１種以上の生理活性物質は、１０～１０，０００μｇ、好ましくは５０～１０００μｇ、さらにより好ましくは１００～５００μｇの用量で対象に投与される。

【0041】

第２の側面では、本発明は、
・ 水性組成物を含む少なくとも１つの容器であって、前記水性組成物が、
少なくとも０．００１重量％の１種以上のビタミンおよび／または少なくとも０．００１重量％のカフェインを含み、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有する、０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質；
０．０１～１０重量％のニコチンアミド；
少なくとも６０重量％の水
を含む、少なくとも１つの容器；
・ 前記水性組成物と流体連通している、鼻腔内投与のための鼻腔アプリケーターデバイス
を含むキットに関する。

【0042】

キットは、ここに定義される組成物を投与するための単純でユーザーフレンドリーな方式を提供する。

【0043】

好ましい態様では、鼻腔アプリケーターデバイスは、組成物を含む容器に接続されている。鼻腔アプリケーターデバイスは、好ましくは、一定量の組成物をスプレーまたはエアロゾルの形態で対象の鼻腔に提供するように適合されている。

【0044】

別の好ましい態様では、鼻腔アプリケーターデバイスは、組成物を含む容器に取り外し可能であるように接続されている。容器は、例えば、回して外すまたはクリップを外すことによって、鼻腔アプリケーターデバイスから取り外すことができる。このようにして、容器が空になった場合、使用者は新たな満杯の容器を鼻腔アプリケーターデバイスに取り付け、それによって、鼻腔アプリケーターデバイスの不必要な浪費を回避する。

【0045】

容器は、バイアル、アンプル、ボトル、または組成物を入れるのに適した他の容器であってもよい。容器は、鼻腔アプリケーターデバイスを受け入れるように適合された受け入れ手段を有することができ、その結果、容器が鼻腔アプリケーターデバイスに適切に接続された場合に、組成物が対象の鼻腔内に投与することができる。容器は、容器を開けるための手段、例えば、ねじ蓋、アンプルの場合のカット線、穴あけシール（puncture seal）、または容器を開けるための他の手段を含むことができ、そのため組成物を容器から鼻腔アプリケーターデバイスに移送することができる。このようにして、鼻腔アプリケーターデバイスは再充填することができ、使用者が、一回の使用後に鼻腔アプリケーターを捨てるのではなく、前記デバイスを再利用することを可能にする。

【0046】

本発明の第３の側面は、
障害の予防的または治療的処置に使用するための水性組成物であって、前記処置が、水性組成物を鼻腔内投与することを含み、前記水性組成物が、
・ ０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、その２０℃での水溶性の限界を下回る濃度で前記水性組成物中に存在する、１種以上の生理活性物質；
・ ０．０１～１０重量％のニコチンアミド；および
・ 少なくとも６０重量％の水
を含み、前記水性組成物は、０．０１～０．３ｍｌの量のスプレーまたはエアロゾルとして鼻腔内に投与され、１０～１０，０００μｇの量の１種以上の生理活性物質を提供する、水性組成物に関する。

【0047】

好ましい一態様では、この処置に用いられる水溶性生理活性物質は、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸（ビタミンＢ５）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、ビオチン（ビタミンＢ７）、葉酸（ビタミンＢ９）、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン（ビタミンＢ１２）、ならびにそれらの塩および混合物からなる群から選択されるビタミンである。好ましい態様では、用いられるビタミンは、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、およびメチルコバラミからなる群から選択されるビタミンＢ１２成分である。別の好ましい態様では、ビタミンはピリドキシン（ビタミンＢ６）である。さらに別の好ましい態様では、ビタミンは葉酸（ビタミンＢ９）である。好ましい態様では、水性組成物は、ナイアシンおよびアスコルビン酸の両者を含まない。

【0048】

さらに好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、アンフェタミンまたはその誘導体である。特に好ましい態様では、アンフェタミンまたはその誘導体は、メチルフェニデートである。

【0049】

さらに好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、カルシトニン、インスリン、オキシトシン、バソプレシン、上皮増殖因子、ソマトスタチン、グルカゴン、ＧＬＰ－１関連化合物、アンジオテンシン、ガストリン、テトラガストリン、ペンタガストリン、ブラジキニン、バシトラシン、ポリミキシン、コリスチン、チロシジン、グラミシジン、メラノコルチン、およびそれらの誘導体からなる群から選択されるペプチドである。好ましくは、ペプチドはカルシトニンである。上述したペプチドの誘導体には、ペプチド配列中の少なくとも１つのアミノ酸が修飾されている、置きかえられている、または欠失されている前記ペプチドの類似体が含まれる。修飾されたペプチドには、例えば、少なくとも１つのアミノ酸とポリアルケンオキシド部分またはポリヒドロキシル部分の連結が含まれる。あるいは、１つ以上のネイティブなアミノ酸をネイティブではないアミノ酸または合成アミノ酸によって置きかえることによって、ネイティブなアミノ酸配列が改変されてもよい。天然に存在するペプチド配列の異なる長さに相当する「フラグメント」を合成することによって、切断されたペプチド誘導体（ここでは少なくとも１つのアミノ酸が欠失されている）が生成されてもよい。

【0050】

さらに別の好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、エリスロポエチン、副腎皮質刺激ホルモン、血小板由来増殖因子、プロラクチン、黄体ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、セクレチン、腫瘍壊死因子、神経成長因子、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、免疫グロブリン、およびレニンからなる群から選択されるタンパク質である。特に好ましい態様では、タンパク質はエリスロポエチンである。

【0051】

吸収促進剤としてのニコチンアミドの使用は低分子量の物質に限らず、ニコチンアミドは、例えば１０００Ｄａを超える高分子量の活性物質の吸収も促進することが見出された。水溶性生理活性物質は、好ましくは１００～１００，０００Ｄａの分子量を有する。

【0052】

好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、１００～１５００Ｄａの分子量を有するビタミンである。

【0053】

別の好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、５００～１０，０００Ｄａ、好ましくは１０００～７０００Ｄａ、さらにより好ましくは５００～１０００Ｄａの分子量を有するペプチドである。

【0054】

別の好ましい態様では、処置に用いられる水溶性生理活性物質はタンパク質であり、その分子量は、好ましくは１０，０００～１００，０００Ｄａ、より好ましくは１０，０００～７５，０００Ｄａ、さらにより好ましくは１０，０００～５０，０００Ｄａである。

【0055】

上述した予防的または治療的処置における水性組成物の使用は、好ましくは、水溶性生理活性物質を投与する非治療的方法に関して以前に述べたような方法での鼻腔内投与を含む。

【0056】

好ましい態様では、障害は、ビタミン欠乏症、心疾患、内分泌障害、がん、喘息、呼吸障害および骨障害からなる群から選択される。

【0057】

好ましい態様では、障害は水溶性ビタミン欠乏症であり、処置に用いられる水溶性生理活性物質は、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ナイアシン（ビタミンＢ３）、パントテン酸（ビタミンＢ５）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、ビオチン（ビタミンＢ７）、葉酸（ビタミンＢ９）、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン（ビタミンＢ１２）、ならびにそれらの塩および混合物からなる群から選択されるビタミンであり、ただし、混合物はナイアシンおよびアスコルビン酸の両者を含まない。

【0058】

別の好ましい態様では、障害はビタミンＢ欠乏症であり、処置に用いられる生理活性物質は、チアミン、リボフラビン、パントテン酸、ピリドキシン、ビオチン、葉酸、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、ならびにそれらの塩および混合物からなる群から選択される。

【0059】

特に好ましい態様では、障害はビタミンＢ１２欠乏症であり、処置に用いられる生理活性物質は、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、およびメチルコバラミンからなる群から選択される。

【0060】

別の好ましい態様では、障害はビタミンＢ６欠乏症であり、処置に用いられる生理活性物質は、ピリドキシン（ビタミンＢ６）である。

【0061】

別の好ましい態様では、障害はビタミンＢ９欠乏症であり、処置に用いられる生理活性物質は、葉酸（ビタミンＢ９）である。

【0062】

別の態様では、障害は内分泌障害であり、水溶性生理活性物質は、水溶性ペプチドまたはタンパク質である。内分泌障害は、先端巨大症、アジソン病、副腎がん、副腎障害、甲状腺未分化がん、クッシング症候群、ド・ケルバン甲状腺炎、糖尿病、甲状腺濾胞がん、妊娠糖尿病、甲状腺腫、グレーブス病、成長障害、成長ホルモン欠乏症、橋本甲状腺炎、ヒュルトレ細胞甲状腺がん、高血糖症、副甲状腺機能亢進症、甲状腺機能亢進症、低血糖症、副甲状腺機能低下症、甲状腺機能低下症、低テストステロン、甲状腺髄様がん、ＭＥＮ １（多発性内分泌腫瘍症１型）、ＭＥＮ ２Ａ（多発性内分泌腫瘍症２Ａ型）、ＭＥＮ ２Ｂ（多発性内分泌腫瘍症２Ｂ型）、月経閉止、メタボリック症候群、肥満、骨粗しょう症、甲状腺乳頭がん、副甲状腺疾患、褐色細胞腫、下垂体障害、下垂体腫瘍、多嚢胞性卵巣症候群、前糖尿病、生殖、無痛性甲状腺炎、甲状腺がん、甲状腺疾患、甲状腺結節、甲状腺炎、ターナー症候群、１型糖尿病、２型糖尿病からなる群から選択されてもよい。

【0063】

第４の側面では、本発明は、
・ 水性組成物を含む少なくとも１つの容器であって、前記水性組成物が、
０．００１～２５重量％の１種以上の完全に溶解した生理活性物質であって、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有し、その２０℃での水溶性の限界を下回る濃度で前記水性組成物中に存在する、１種以上の生理活性物質；
０．０１～１０重量％のニコチンアミド；および
少なくとも６０重量％の水
を含む、水性組成物；
・ 前記水性組成物と流体連通している、鼻腔内投与のための鼻腔アプリケーターデバイス
を含み、前記鼻腔アプリケーターデバイスが、スプレーまたはエアロゾルの形態で０．０１～０．３ｍＬの一定量の前記水性組成物を対象の鼻腔に提供するように適合されており、前記一定量が、１０～１０，０００μｇの１種以上の前記生理活性物質を提供する、キットに関する。

【0064】

キットは、ここに定義される組成物を投与するための単純でユーザーフレンドリーな方式を提供する。

【0065】

好ましい態様では、鼻腔アプリケーターデバイスは、組成物を含む容器に接続される。

【0066】

別の好ましい態様では、鼻腔アプリケーターデバイスは、組成物を含む容器に取り外し可能であるように接続されている。容器は、例えば、回して外すまたはクリップを外すことによって、鼻腔アプリケーターデバイスから取り外すことができる。このようにして、容器が空になった場合、使用者は新たな満杯の容器を鼻腔アプリケーターデバイスに取り付け、それによって、鼻腔アプリケーターデバイスの不必要な浪費を回避する。

【0067】

容器は、バイアル、アンプル、ボトル、または組成物を入れるのに適した他の容器であってもよい。容器は、鼻腔アプリケーターデバイスを受け入れるように適合された受け入れ手段を有することができ、その結果、容器が鼻腔アプリケーターデバイスに適切に接続された場合に、組成物が対象の鼻腔内に投与することができる。容器は、容器を開けるための手段、例えば、ねじ蓋、アンプルの場合のカット線、穴あけシール（puncture seal）、または容器を開けるための他の手段を含むことができ、そのため組成物を容器から鼻腔アプリケーターデバイスに移送することができる。このようにして、鼻腔アプリケーターデバイスは再充填することができ、使用者が、一回の使用後に鼻腔アプリケーターを捨てるのではなく、前記デバイスを再利用することを可能にする。

【0068】

第５の側面では、本発明は、２０℃において少なくとも１５ｍｇ／ｍＬの脱塩水に対する水溶性を有する水溶性生理活性物質の、水溶液からの鼻腔内吸収の促進剤としてのニコチンアミドの使用であって、前記水溶液が、０．０１～１０重量％のニコチンアミドをさらに含む、ニコチンアミドの使用に関する。

【0069】

本発明の幾つかの例示的な態様に関して説明した。ある部分または要素の修正および代替実施が可能であり、それは、特許請求の範囲で定義される保護の範囲内に含まれる。

【0070】

［実施例］
以下の例１～６に述べる量のニコチンアミドおよび水溶性生理活性物質を含む水性組成物を調製し、被験者の鼻腔内に投与した。組成物は以下の一般的配合を有する：
・ 水溶性生理活性物質： ０．０４０～１０重量％
・ ニコチンアミド： ３．５～１０重量％
・ ｐＨ６．２（＋／－０．２）のリン酸塩緩衝剤： ０．１０重量％
・ 塩化ベンザルコニウム（防腐剤）： ０．０２重量％
・ 等張性を調節するための塩化ナトリウム： 十分量
・ 精製水： １００％まで
ニコチンアミドが存在しない対照組成物を調製した。

【0071】

水溶性生理活性物質を投与する前と投与の３０分および／または６０分後に血液を採取した。分析したすべての血漿は、全血を１０００Ｇで１０分間遠心分離することによって得た。

【0072】

例１ （ビタミンＢ６）
１５ｍｇのリン酸ピリドキシン（分子量１６９；ｌｏｇＰ －０．７７）および３５ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．１ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に投与した。対照として、１５ｍｇのリン酸ピリドキシン水性組成物を使用した。

【0073】

ビタミンＢ６／ピリドキシンの血漿濃度は、０分および６０分後にＨＰＬＣ分析によって決定した。

【0074】

ＨＰＬＣ計測および分析手順： 不活性インジェクター（ＬＫＢ ２１５４－００２型）および５００ｕＬの試料ループを装着したＬＫＢ ＨＰＬＣポンプ（チタン製部品を有する２１５０型）を使用した。５ｐｍ粒子の逆相材料（ＴＳＫ ＯＤＳ－１２０Ｔ）を充填した４．６×２５０ｍｍのＬＫＢ分析カラムを、同様の充填材料（ＬＫＢ Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ ｇｕａｒｄまたはＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ１８のいずれか）を含有する３ｃｍのガードカラムと共に使用した。溶出液は、１リットル当たり７５ｍｍｏｌのＮａＣｌＯ_４、８．５ｍＬのアセトニトリル、および０．５ｍＬのトリエタノールアミンを含有し、濃縮したＮａＣｌＯ_４でｐＨを３．３８に調節した、７５ｍｍｏｌ／ＬのＮａＨ_２ＰＯ_４緩衝液であった。流量は、１２０００ｋＰａの定圧において、１．２ｍＬ／分であった。Coburn SF, Mahuren JD. A versatile cation-exchange procedure for measuring the seven major forms of vitamin B6 in biologicalsamples. Anal Biochem, 1983, 129, 310-7に示された亜硫酸水素イオンでのリン酸ピリドキサールのポストカラム誘導体化のために、Ｔ接合器および反応コイルに接続されたＢｒａｕｎシリンジポンプを使用した。ポストカラム試薬は、１リットル当たり１ｇのメタ重亜硫酸ナトリウムを含有するＮａ_２ＨＰＯ_４緩衝液（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ１１．７）からなるものであった。ポストカラム試薬の流量は、６ｍＩ／時に保持した。カラム流出液は、５０ｐＬの毛管フローセルを備えたＬ５－２０型蛍光光度計（Perkin-Elmer Ltd., Beaconsfield, Bucks. HP9 1QA, U.K.）でモニタリングした。励起および発光波長は、それぞれ、３２５および４００ｎｍに設定した。注入量は１００ｐＬであった。

【0075】

結果を表１および２に示す。

【0076】

【表1】

【0077】

【表2】

【0078】

例２ （ビタミンＢ９）
４ｍｇの葉酸（ビタミンＢ９；分子量４４１；ｌｏｇＰ －０．０２）および３５ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．１ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に投与した。対照として、４ｍｇの葉酸水性組成物を使用した。

【0079】

電気化学発光イムノアッセイ（Access Folate assay, Beckman Coulter, Inc －競合的結合受容体アッセイ）を、血液試料中に存在する葉酸塩の定量化に使用した。簡潔に述べると、血清検体を、内在性結合タンパク質から葉酸塩を放出させるように処理した。反応混合物の中和後、葉酸塩－結合タンパク質、マウス抗葉酸塩結合タンパク質、葉酸－アルカリホスファターゼコンジュゲート、および常磁性粒子に結合したヤギ抗マウス捕捉抗体を反応容器に添加した。試料中の葉酸塩は、限られた量の葉酸塩－結合タンパク質上の結合部位に対し、葉酸－アルカリホスファターゼコンジュゲートと競合する。得られた複合体は、マウス抗葉酸塩結合タンパク質を介して固相に結合する。反応容器内でのインキュベーションの後、固相に結合した材料は磁界に保持されるが、結合していない材料は洗い流される。容器に化学発光基質Ｌｕｍｉ－Ｐｈｏｓ５３０を添加し、反応によって生じた光をルミノメーターで測定する。光の生成は、試料中の葉酸塩の濃度に反比例する。試料中の分析物の量は、保存されている多点検量線から決定する。このアッセイは、世界保健機関（ＷＨＯ）国際規格０３／１７８に標準化されている。（Beckman Coulter Assay Manual 2011, Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA）。使用した機器は、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＤＸＩ８００である。

【0080】

【表3】

【0081】

【表4】

【0082】

例３ （ビタミンＢ１２－ヒドロキソコバラミン ５００μｇ用量）
５ｍｇのヒドロキソコバラミン（分子量１３４６；ｌｏｇＰ －０．９）および５０ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．１ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に投与した。対照として、０．５ｍｇのヒドロキソコバラミン水性組成物を使用した。

【0083】

イムノアッセイ（Access Vitamin B12 assay, Beckman Coulter Inc.）を、血液試料中に存在する葉酸塩の定量化に使用した。簡潔に述べると、試料をアルカリ性シアン化カリウムおよびジチオスレイトールと共に反応容器に添加した。この処理は、Ｂ１２結合タンパク質を変性させ、すべての形態のビタミンＢ１２をシアノコバラミンの形態に変換する。中和後、内因子－アルカリホスファターゼコンジュゲート、およびヤギ－抗マウスＩｇＧ：マウスモノクローナル抗内因子で被覆された常磁性粒子を試料に添加した。試料中のビタミンＢ１２は内因子コンジュゲートに結合し、当該コンジュゲートが固相の抗内因子に結合することを防ぐ。反応容器内でのインキュベーションの後、固相に結合した材料は磁界に保持されたが、結合していない材料は洗い流された。化学発光基質Ｌｕｍｉ－Ｐｈｏｓ５３０が容器に添加され、反応によって生じた光をルミノメーターで測定する。光の生成は、試料中のビタミンＢ１２の濃度に反比例する。試料中の分析物の量を、保存されている多点検量線によって決定した。（取扱説明書：Beckman Coulter Assay Manual 2015, Beckman Coulter Inc, Brea, CA）。

【0084】

【表5】

【0085】

【表6】

【0086】

例４ （ビタミンＢ１２－ヒドロキソコバラミン、７５μｇ用量）
７５０μｇのヒドロキソコバラミン（分子量１３４６；ｌｏｇＰ －０．９）および５０ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．１ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に投与した。対照として、７５０μｇのヒドロキソコバラミン水性組成物を使用した。例３と同じ方法をヒドロキソコバラミンの定量化に使用した。

【0087】

イムノアッセイ（Access Vitamin B12 assay, Beckman Coulter Inc.）を、血液試料中に存在する葉酸塩の定量化に使用した。簡潔に述べると、試料をアルカリ性シアン化カリウムおよびジチオスレイトールと共に反応容器に添加した。この処理は、Ｂ１２結合タンパク質を変性させ、すべての形態のビタミンＢ１２をシアノコバラミンの形態に変換する。中和後に、内因子－アルカリホスファターゼコンジュゲート、およびヤギ－抗マウスＩｇＧ：マウスモノクローナル抗内因子で被覆された常磁性粒子を試料に添加した。試料中のビタミンＢ１２は内因子コンジュゲートに結合し、当該コンジュゲートが固相の抗内因子に結合しすることを防ぐ。反応容器内でインキュベーションの後、固相に結合した材料は磁界に保持されたが、結合していない材料は洗い流された。化学発光基質Ｌｕｍｉ－Ｐｈｏｓ５３０が容器に添加され、反応によって生じた光をルミノメーターで測定する。光の生成は、試料中のビタミンＢ１２の濃度に反比例する。試料中の分析物の量は、保存されている多点検量線によって決定する。（取扱説明書：Beckman Coulter Assay Manual 2015, Beckman Coulter Inc, Brea, CA）。

【0088】

【表7】

【0089】

【表8】

【0090】

例５ （ｒｈ－エリスロポエチン ０．０４０重量％）
４００μｇのｒｈ－エリスロポエチン（分子量３４０００；ｌｏｇＰ ０）および５０ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．１ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に投与した。対照として、４００μｇのｒｈ－エリスロポエチンを含む組成物を使用した。

【0091】

イムノアッセイ（Access erythropoietin(EPO), Beckman Coultier Inc.）を、エリスロポエチンの定量化に使用した。簡潔に述べると、試験は、Beckman Coulter DxI 800（Beckman Coulter Inc.）で行った。簡潔には、試料を、マウスモノクローナル抗ＥＰＯ抗体で被覆された常磁性粒子、ブロッキング試薬、およびアルカリホスファターゼコンジュゲートと共に反応容器に添加した。反応容器内でインキュベーションの後、固相に結合した材料は磁界に保持されたが、結合していない材料は洗い流された。次いで、化学発光基質Ｌｕｍｉ－Ｐｈｏｓ５３０が容器に添加され、反応によって生じた光をルミノメーターで測定する。光の生成は、試料中のＥＰＯの濃度に正比例する。試料中の分析物の量は、保存されている多点検量線によって決定した。（取扱説明書：Beckman Coulter Access EPO, Beckman Coulter Access Immunoassay Systems, Beckman Coulter, Inc, Fullerton CA 2009）。

【0092】

【表9】

【0093】

【表10】

【0094】

例６ （カフェイン）
１２．５ｍｇのカフェイン（分子量１９４；ｌｏｇＰ －０．７９）および５０ｍｇのニコチンアミドを含む１ｍＬの組成物を調製した。この水性組成物の０．２ｍＬを、点鼻スプレーを介して被験者の鼻腔に４回投与した。対照として、１２．５ｍｇ／ｍｌのカフェイン水性組成物を使用した。

【0095】

Ｃ_１８逆相カラムおよび移動相として１％氷酢酸：メタノール（８３：１７Ｖ／Ｖ）を使用するＨＰＬＣ分離法を、Pickard C.E., Stewart A.D., Hartley R.およびLucock M.D., A rapid HPLC method for monitoring plasma levels of caffeine and theophylline using solid phase extraction columns, Ann. Clin. Biochem., 1986, 23, 440-446に従って開発した。クロマトグラフィーの条件は、溶媒流０．５ｍｌ／分、注入量５μＬ、実行時間２０分、および２７４，４ｎｍでのＵＶ検出であった。ＵＶ検出と共に、化合物の質量に基づくピーク同定のためＭＳ検出を行った。Alvi S.N, Muhammad M., Hammami M., Validated HPLC Method for Determination of Caffeine Level in Human Plasma using Synthetic Plasma: Application to Bioavailability Studies, J Chromatogr Sci, 2011, 49(4), 292-296に記載されるように、カフェインおよび内標準である4-アミノアンチピリンを人口血漿に溶解させた。人口血漿は、塩化ナトリウム（１４５ｍＭ）、塩化カリウム（４．５ｍＭ）、塩化カルシウム（３２．５ｍＭ）、塩化マグネシウム（０．８ｍＭ）、尿素（２．５ｍＭ）およびグルコース（４．７ｍＭ）からなるものであった。保持時間を、カフェイン、4-アミノアンチピリンだけでなく、分解生成物であるテオブロミンおよびテオフィリンについても決定し、ピークの分離を最適化した。続いて、人口血漿中のカフェインの希釈範囲をカフェイン０，０５～４３，６μｇ／ｍｌ（最終濃度）の範囲内で調製し、加えて２，８または５，３μｇ／ｍｌ（最終濃度）のいずれかの内部標準を調製した。血漿は、輸送時は－２０℃に凍結されており、サンプリングの前に解凍し、穏やかに振とうして溶液を混合した。５．３μｇ／ｍｌ（最終濃度）の内部標準を１００μＬの血漿に添加した。この試料をボルテックス撹拌し、５分間遠心分離し、直接注入後に分析した。

【0096】

【表11】

【0097】

【表12】

【0098】

例１～６のそれぞれについて、平均増加の値を使用して、吸収の増加の割合を計算することにより、試験した水溶性生理活性物質の血中濃度に対するニコチンアミドの効果を決定した。その結果を表１３に要約する。

【0099】

【表13】