(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-09-20
(45)【発行日】2022-09-29
(54)【発明の名称】ＣＤ２２６アゴニスト抗体
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220921BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220921BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220921BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20220921BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220921BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 13/10 20060101ALI20220921BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220921BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20220921BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20220921BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20220921BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20220921BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20220921BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20220921BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20220921BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220921BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 13/02 20060101ALI20220921BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220921BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61P35/00
A61P13/10
A61P15/00
A61P1/04
A61P1/02
A61P11/02
A61P11/04
A61P27/16
A61P1/16
A61P11/00
A61P17/00
A61P1/18
A61P13/08
A61P13/12
A61P21/00
A61P13/02
A61P43/00 111
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2021503016
(86)(22)【出願日】2019-07-19
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-11-25
(86)【国際出願番号】 US2019042604
(87)【国際公開番号】W WO2020023312
(87)【国際公開日】2020-01-30
【審査請求日】2021-01-27
(31)【優先権主張番号】62/703,522
(32)【優先日】2018-07-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/795,744
(32)【優先日】2019-01-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100217663
【弁理士】
【氏名又は名称】末広 尚也
(74)【代理人】
【識別番号】100104282
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 康仁
(72)【発明者】
【氏名】クマール，ナレーシュ
【審査官】上村 直子
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１０２９９４４４９（ＣＮ，Ａ）
【文献】特開２０１３－１９３９９５（ＪＰ，Ａ）
【文献】International Immunology，2004年，Vol.16, No.4，pp.533-538
【文献】Journal of Experimental Medicine，2015年，Vol.212, No.12，pp.2165-2182
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／１３
Ｃ０７Ｋ １６／２８
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ヒトＣＤ２２６抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項2】
配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項3】
配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含む、請求項１に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項4】
配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＬＣからなる、請求項１に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項5】
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
【請求項6】
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、請求項５に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
【請求項7】
請求項６に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項8】
配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含む、ＤＮＡ分子。
【請求項9】
請求項８に記載のＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞。
【請求項10】
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、請求項９に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
【請求項11】
請求項１０に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
【請求項12】
請求項１～４、７、および１１のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項13】
固形腫瘍癌を治療するための医薬組成物であって、有効量の、請求項１～４、７、および１１のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を含み、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、組成物。
【請求項14】
固形腫瘍癌の治療のための医薬品の製造のための、請求項１～４、７、および１１のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体の使用であって、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬の分野に属する。より具体的には、本発明は、ヒトＣＤ２２６（ｈＣＤ２２６）に対するアゴニスト抗体、そのようなアゴニスト抗ヒトＣＤ２２６抗体を含む組成物、およびそのようなアゴニスト抗ヒトＣＤ２２６抗体を癌の治療のために使用する方法に関する。
【背景技術】
【0002】
免疫チェックポイント経路は、免疫応答の抑制または活性化に関与している（Ｉｓａｋｏｖ Ｎ，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ２０１６；２（２）：１７）。自己免疫疾患療法では、免疫応答が抑制されるように、免疫抑制経路の効果を促進すること、すなわち、アゴナイズすることが望ましいものであり得る。逆に、癌療法では、免疫応答が活性化または刺激されるように、免疫刺激経路の効果を促進すること、すなわちアゴナイズすることが望ましいものであり得る。
【0003】
ＣＤ２２６は、免疫共刺激受容体として機能する（Ｄｏｕｇａｌｌ ＷＣ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１７；２７６：１１２－１２０（２０１７））。したがって、ＣＤ２２６経路は免疫刺激経路であり、すなわち、それは免疫応答を活性化／刺激する（Ｍａｎａｋａ，Ｉ，Ａ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．；２００８；２０５（１３）：２９５９－２９６４；Ｖａｎ Ｖｏ，Ａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；２０１６；６９：７０－７６；Ｓｈｅｎｇｋｅ，Ｈ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．；２０１４；２８９（１０）：６９６９－６９７７）。ＣＤ２２６経路の免疫刺激効果の促進（アゴニズム）は、例えば、癌を治療する際に有益であり得、ＣＤ２２６経路の免疫刺激効果を促進する治療分子はＣＤ２２６経路アゴニストである。
【0004】
ＣＤ２２６は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、血小板、単球、ＣＤ８＋Ｔ細胞、および活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上で（Ｖａｎ Ｖｏ，Ａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；２０１６；６９：７０－７６）、ならびに甲状腺癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、尿路上皮癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、および黒色腫において（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ，ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ／ＥＮＳＧ０００００１５０６３７－ＣＤ２２６／ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）、発現される。
【0005】
ＣＤ２２６は、ヒトおよびマウスの多くの組織における造血、上皮、および内皮細胞において広く発現されるＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２）およびＣＤ１５５（ＰＶＲ）と相互作用する（Ｖａｎ Ｖｏ，Ａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；２０１６；６９：７０－７６；Ｓｈｅｎｇｋｅ，Ｈ，Ｔｈｅ Ｊ．ｏｆ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４；２８９（１０）：６９６９－６９７７）。ＣＤ１１２（ＰＶＬＲ２）は、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、および尿路上皮癌において発現される。（Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ／ＥＮＳＧ０００００１３０２０２－ＮＥＣＴＩＮ２／ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）。ＣＤ１５５（ＰＶＲ）は、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、カルチノイド、結腸直腸癌、頭頸部癌、胃癌、腎臓癌、尿路上皮癌、精巣癌、前立腺癌、皮膚癌、および黒色腫において発現される。（Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ，ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ／ＥＮＳＧ００００００７３００８－ＰＶＲ／ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）。ＣＤ１５５はまた、軟部組織肉腫において発現される（Ａｔｓｕｍｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．２０１３；５：１７７１－１７７６）。
【0006】
ＮＫ細胞およびＴ細胞上のＣＤ２２６と、腫瘍細胞上のＣＤ１１２およびＣＤ１５５との間の相互作用、ならびに抗原提示細胞は、細胞媒介性細胞毒性およびサイトカイン生成を増加させる（Ｉｇｕｃｈｉ－Ｍａｎａｋａ，Ａ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００８；２０５（１３）：２９５９－２９６４および本明細書における参照）。ＣＤ２２６はＣＤ２２６／ＴＩＧＩＴ経路の一部であり、ＣＤ２２６は免疫刺激受容体として機能し、ＴＩＧＩＴは免疫抑制受容体として機能し、ＣＤ２２６はＣＤ１５５およびＣＤ１１２との結合でＴＩＧＩＴと競合する（Ｄｏｕｇａｌｌ ＷＣ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１７；２７６：１１２－１２０（２０１７）；Ｂｌａｋｅ，Ｓ，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；２０１６；２２（２１）：５１８２－５１８８）。ＴＩＧＩＴはまた、ＣＤ２２６／ＣＤ１５５の相互作用に必要であるＣＤ２２６ホモ二量体化を阻害する（Ｄｏｕｇａｌｌ ＷＣ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１７； ２７６： １１２－１２０ （２０１７））。
【0007】
ＣＤ２２６の免疫刺激効果をアゴナイズすることは、癌を治療する上で有益であり得ることが示唆されている（Ｐａｕｋｅｎ，ＫＥ ａｎｄ ＥＪ Ｗｈｅｒｒｙ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１４：２６：７８５－７８７；）。したがって、抗腫瘍免疫応答を増加させることは、癌療法の有効な手段であり得る。ＣＤ２２６は、ＮＫ細胞およびＴ細胞の機能を制御する上で有用であり得、それは腫瘍細胞に対するＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性細胞毒性の接着共受容体刺激、免疫学的なシナプス形成、Ｔ細胞増殖および分化、ならびにサイトカイン分泌と関係している。（Ｇｕｉｌｌｅｒｅｙ，Ｃ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１５； １２５（５）： ２０７７－２０８９）。
【0008】
ＣＤ２２６を欠くマウスにおいて、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、非プロフェッショナル抗原提示細胞によって提示される抗原を認識するときに共刺激のためにＣＤ２２６を必要とし、ＮＫ細胞は、他のＮＫ活性化リガンドの不足によって生じるＮＫ細胞媒介性細胞毒性に比較的耐性である腫瘍細胞の排除のためにＣＤ２２６を必要とすることが示された（Ｇｉｌｆｉｌｌａｎ，Ｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．； ２００８； ２０５（１３）：２９６５－２９７３）。したがって、ＣＤ２２６は、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞を活性化することができる標的細胞の範囲を拡大し、そのため、他の活性化分子またはアクセサリー分子による認識を回避する腫瘍および／またはウイルスに対する免疫監視のために重要であり得る（Ｇｉｌｆｉｌｌａｎ，Ｓ，Ｊ．Ｅｘｐ ．Ｍｅｄ．； ２００８； ２０５（１３）：２９６５－２９７３）。
【0009】
特定の抗ＣＤ２２６抗体が報告されており、マウスＩｇＧ１ ＫＲＡ２３６（Ｂｏｔｔｉｎｏ，Ｃ，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４； ５：５６）、ラットＩｇＧ２ａ ＴＸ２５（Ｖａｎ Ｖｏ，Ａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ； ２０１６； ６９：７０－７６）、ラットＩｇＧ２ｂ １０ｅ５（Ｄａｒｄａｌｈｏｎ，Ｖ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５； １７５：１５５８－１５６５）、マウスＴＸ９４、ＴＸ９５、ＴＸ９６、ＴＸ１０７、およびＴＸ１０８（Ｏｋｕｍｕｒａ，Ｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１７； ３６（３）：１３５－１３９）、２Ｅ６および３Ｂ９（Ｈｏｕ，Ｓ，Ｔｈｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ； ２０１４； ２８９（１０）：６９６９－６９７７）、ＮｅｗＥ１（Ｇａｕｄ，Ｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．２０１８； １１： ｅａａｒ３０８３； ｄｏｉ： １０．１１２６／ｓｃｉｓｉｇｎａｌ．ａａｒ３０８３）、ＤＸ１１ （Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＭＣＡ２２５７）、１１Ａ８ （ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３３８３１１）、ならびにＬｅｏＡ１ （Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ ＭＡＢＴ３９８）などが挙げられる。
【0010】
しかし、ヒト抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体は報告されておらず、癌治療のために臨床開発中の抗ＣＤ２２６抗体はない。したがって、ヒトＣＤ２２６に結合し、免疫応答を増強し、癌の治療に有用である、アゴニスト抗体の必要性が存在する。
【0011】
本明細書に記載の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体は、ヒトＣＤ２２６に結合し、Ｔ細胞由来のＩＦＮγ生成を刺激し、単剤療法として、ネズミ腫瘍モデルにおいて腫瘍増殖を阻害する。一実施形態では、本発明の抗体は、限定されないが、インビボ安定性、熱安定性、溶解性、低い自己会合、および薬物動態特性を含む所望の物理的および化学的安定性を示し、したがって、癌の治療に潜在的に有用である。別の実施形態では、本発明の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体は、完全なヒト抗体である。別の実施形態では、本発明の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体は、ヒト化抗体である。
【0012】
本開示はまた、ヒトＣＤ２２６（配列番号１３）またはその細胞外フラグメント（例えば、配列番号１４）に結合して、癌のネズミ腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を単剤療法として阻害するヒト抗ヒトＣＤ２２６ ＩｇＧ１エフェクターヌル（ＩｇＧ１－ＥＮ）抗体を提供し、抗ヒトＣＤ２２６抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）を含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。
【0013】
本開示はまた、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる哺乳動物細胞を提供する。別の実施形態では、本開示は、抗ヒトＣＤ２２６抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。
【0014】
本開示はまた、抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスを提供し、本抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することおよび抗体を回収することを含み、本抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。本開示はまた、本プロセスによって生成される抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。本開示はまた、本プロセスによって生成される抗ヒトＣＤ２２６抗体、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。
【0015】
本開示はまた、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本開示はまた、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。
【0016】
本開示はまた、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む抗ヒトＣＤ２２６抗体と、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む薬学的組成物を提供する。別の実施形態では、本開示は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗ヒトＣＤ２２６抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含む。別の実施形態では、抗ヒトＣＤ２２６抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる。
【0017】
本開示は、治療の方法および使用のための方法を提供する。免疫系における共刺激受容体としてのＣＤ２２６の役割が研究されている。例えば、ＣＤ２２６を欠損したマウスは、野生型（ＷＴ）細胞よりもインビトロでＣＤ２２６リガンド発現性腫瘍に対して有意に低い細胞毒性活性を示した（Ｉｇｕｃｈｉ－Ｍａｎａｋａ，Ａ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００８； ２０５（１３）：２９５９－２９６４）。したがって、ＣＤ２２６経路が活性化されると、免疫系活性が増加し、ＣＤ２２６経路を刺激（アゴナイズ）することによって癌を治療する際に利用することができ、アゴニスト抗ヒトＣＤ２２６抗体はＮＫ細胞および／またはＴ細胞活性を活性化することによって癌に対する治療効果をもたらし得る。
【0018】
ＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５の発現は、様々なヒト固形物に関係しており、結腸直腸癌（Ｍａｓｓｏｎ，Ｄ．，Ｇｕｔ，２００１； ４９：２３６－２４０； Ｔａｈａｒａ－Ｈａｎａｏｋａ，Ｓ．Ｂｌｏｏｄ，２００６； １０７：１４９１－１４９６）、胃癌（Ｔａｈａｒａ－Ｈａｎａｏｋａ， Ｓ．，Ｂｌｏｏｄ，２００６； １０７：１４９１－１４９６）、卵巣癌（Ｃａｒｌｓｔｅｎ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００７：６７：１３１７－１３２５）、膵臓の癌腫（Ｎｉｓｈｉｗａｄａ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ； ２０１５； ３５：２２８７－２２９８）、ならびに前立腺、腎細胞、膵臓、結腸、非小細胞肺、卵巣、および乳房の癌腫（Ｓｌｏａｎ，Ｋ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ２００４； ４：７３）が含まれる。
【0019】
肺腺癌におけるＣＤ１５５の過剰発現は、リンパ節転移と有意に関連し、ＣＤ１５５過剰発現が陽性の患者における腫瘍の気管支肺胞癌比率および無憎悪生存率は、ＣＤ１５５過剰発現が陰性の患者よりも有意に低かった（Ｎａｋａｉ，Ｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．； ２０１０； １０１（５）：１３２６－１３３０）。多変量生存分析によって、ＣＤ１５５の発現は好ましくない転帰における独立した危険因子であることが明らかにされた（Ｎａｋａｉ，Ｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．； ２０１０； １０１（５）：１３２６－１３３０）。
【0020】
本開示は、癌を治療する方法を提供し、それを必要とする患者に、有効量の、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む抗ヒトＣＤ２２６抗体を投与することを含む。別の実施形態では、本開示はまた、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示はまた、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。
【0021】
いくつかの実施形態では、本開示はまた、癌が固形腫瘍癌であることを提供する。別の実施形態では、本開示はまた、固形腫瘍癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌であることを提供する。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0022】
本開示は、療法における使用のための、ヒトＣＤ２２６（配列番号１３）またはその細胞外フラグメント（例えば、配列番号１４）に結合する抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供し、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。
【0023】
一実施形態では、本開示は、療法が癌の治療であることを提供する。別の実施形態では、本開示は、癌が固形腫瘍癌であることを提供する。別の実施形態では、本開示は、固形腫瘍癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌であることを提供する。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0024】
本開示は、癌の治療のための医薬品の製造のための、ヒトＣＤ２２６（配列番号１３）またはその細胞外フラグメント（例えば、配列番号１４）に結合する抗ヒトＣＤ２２６抗体の使用を提供し、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含むことを提供する。別の実施形態では、本開示は、抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。
【0025】
一実施形態では、本開示はまた、癌が固形腫瘍癌であることを提供する。別の実施形態では、本開示はまた、固形腫瘍癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌であることを提供する。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0026】
本開示はまた、ヒト抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体を提供する。一実施形態では、ヒト抗ヒト抗体は、インビボで投与される場合、抗腫瘍効果を有する。本開示は、ヒト抗ヒト抗体を発現することができる哺乳動物細胞を提供する。本開示はまた、ヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスを提供し、本抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することと、抗体を回収することと、を含む。
【0027】
本開示はまた、療法における使用のためのヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。一実施形態では、ヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体は、アゴニスト抗体である。別の実施形態では、ヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体は、免疫応答を刺激する。別の実施形態では、ヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体は、インビボで投与される場合、抗腫瘍活性を有する。
【0028】
本開示はまた、癌の治療における使用のためのヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。一実施形態では、本開示は、固形腫瘍癌の治療における使用のためのヒト抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体を提供する。別の実施形態では、抗体は免疫応答を刺激する。別の実施形態では、抗体は、インビボで投与される場合、抗腫瘍活性を有する。
【0029】
一実施形態では、本開示は、固形腫瘍癌の治療における使用のためのヒト抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。別の実施形態では、本開示は、固形腫瘍癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌であることを提供する。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0030】
本開示は、癌の治療のための医薬品の製造のためのヒト抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、癌が固形腫瘍癌であることを提供する。別の実施形態では、本開示は、固形腫瘍癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌または尿路上皮癌であることを提供する。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0031】
一実施形態では、本発明は癌を治療する方法を提供し、有効量の本明細書に開示される抗体を１つ以上の抗腫瘍薬と、同時、別々、または連続した組み合わせで投与することを含む。抗腫瘍薬の非限定的な例には、ラムシルマブ、ネシツムマブ、オララツマブ、ゲムシタビン、ペメトレキセド、ガルニセルチブ、アベマシクリブ、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射懸濁液のためのパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、セツキシマブ、ＥＧＦＲ阻害薬、Ｒａｆ阻害薬、Ｂ－Ｒａｆ阻害薬、ＣＤＫ４／６阻害薬、ＣＤＫ７阻害薬、イドレアミン２，３－ジオキシゲナーゼ阻害薬（ｉｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ＴＧＦβ阻害薬、ＴＧＦβ受容体阻害薬、ＩＬ－１０、ならびにペグ化ＩＬ－１０（例えば、ペギロデカキン）が含まれる。
【0032】
別の実施形態では、本発明は癌を治療する方法を提供し、有効量の本明細書に開示される抗体の化合物を１つ以上の免疫腫瘍薬と、同時、別々、または連続した組み合わせで投与することを含む。免疫腫瘍薬の非限定的な例には、ニボルマブ、イピリムマブ、ピジリズマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、抗Ｔｉｍ３抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＬＹ３３０００５４（配列番号１０および配列番号１１としてそれぞれＷＯ２０１７／０３４９１６およびＵＳ２０１７／００５８０３３に示される重鎖および軽鎖の配列）が含まれる。別の好ましい実施形態では、免疫腫瘍薬は抗ＰＤ－１抗体である。別の好ましい実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はペンブロリズマブである。
【0033】
別の実施形態では、ＣＤ２２６抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、本発明は、抗体を発現することができる哺乳動物細胞、哺乳動物細胞を培養することおよび抗体を回収することを含む抗体を生成するためのプロセス、本プロセスによって生成される抗体、ならびに本抗体および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【0034】
別の実施形態では、ＣＤ２２６抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含む。別の実施形態では、本発明は、抗体を発現することができる哺乳動物細胞、哺乳動物細胞を培養することおよび抗体を回収することを含む抗体を生成するためのプロセス、本プロセスによって生成される抗体、ならびに本抗体および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0035】
別の実施形態では、抗ヒトＣＤ２２６抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる。別の実施形態では、本開示は、抗体を発現することができる哺乳動物細胞、哺乳動物細胞を培養することおよび抗体を回収することを含む抗体を生成するためのプロセス、本プロセスによって生成される抗体、ならびに本抗体および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【0036】
本開示はまた、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子、本ＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。
【0037】
本開示はまた、癌を治療する方法を提供し、それを必要とする患者に、有効量の本発明の抗体を投与することを含む。
【0038】
本開示はまた、療法における使用のための本発明の抗体を提供する。一実施形態では、本開示はまた、使用が癌を治療することであることを提供する。
【0039】
本開示はまた、癌の治療のための医薬品の製造のための本発明の抗体を提供する。
【0040】
一実施形態では、本開示はまた、癌が固形腫瘍癌であることを提供する。別の実施形態では、固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、（胃）癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である。好ましい実施形態では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【0041】
好ましい一実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２２６に結合し、ＣＤ２２６のＣＤ１１２との結合を遮断するが、ＣＤ１５５との結合を遮断しない、抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。
【0042】
別の好ましい実施形態では、本発明はまた、アゴニスト機能を示す、すなわち、インビトロで抗ヒトＣＤ２２６抗体に曝露されたＣＤ２２６＋Ｔ細胞におけるＴ細胞活性を刺激し、例えば、抗ヒトＣＤ２２６抗体に曝露されていないＣＤ２２６＋Ｔ細胞によるインビトロでのインターフェロンガンマ分泌のレベルと比較して増加したインターフェロンガンマ分泌を示す、抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。一実施形態では、インターフェロンガンマ分泌は、本明細書に開示される方法を使用してアッセイすることができる。
【0043】
別の好ましい実施形態では、本発明はまた、アゴニスト機能を示す、すなわち、本明細書に開示されるように、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞において、ＮＦ－ＫＢ活性化レポーター遺伝子を、例えば、本明細書に開示されるように、抗ヒトＣＤ２２６抗体に曝露されていないＨＥＫ細胞と比較して誘導する、抗ＣＤ２２６抗体を提供する。
【0044】
別の好ましい実施形態では、本発明は、血小板を活性化しない抗ヒトＣＤ２２６抗体を提供する。一実施形態では、アッセイは血小板表面上のｐ－セレクチオン（ＣＤ６２Ｐ）の発現を決定するフローサイトメトリーを使用して実施され、血小板の活性化状態を決定する。
【0045】
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、重鎖と軽鎖とがジスルフィド結合によって相互接続されるように、２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）を有するポリペプチド複合体を指し、抗体はＩｇＧサブクラス抗体である。各ＨＣは、Ｎ末端ＨＣＶＲおよび重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。各ＬＣは、Ｎ末端ＬＣＶＲおよび軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。ある特定の生物系で発現される場合、天然のヒトＦｃ配列を有する抗体はＦｃ領域においてグリコシル化される。典型的には、グリコシル化は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位の抗体のＦｃ領域に生じる。Ｎ－グリカンは、典型的には、アスパラギンに結合する。抗体は、他の位置でもグリコシル化され得る。
【0046】
本発明の抗体は、非天然由来ポリペプチド複合体である。本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗体中のポリペプチドのうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする非天然ポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子である。
【0047】
ＨＣＶＲ領域およびＬＣＶＲ領域は、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存されている領域とともに点在する、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置している３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。したがって、ＨＣの３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称され、ＬＣの３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。
【0048】
ＨＣＶＲ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＨＣＶＲコード化ＤＮＡを、ＨＣＣＲをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長ＨＣ遺伝子に変換することができる。ヒトならびに他の哺乳動物のＨＣＣＲ遺伝子の配列は、当技術分野で知られている。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。
【0049】
ＬＣＶＲ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＬＣＶＲコード化ＤＮＡを、ＬＣ定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長ＬＣ遺伝子に変換することができる。ヒトならびに他の哺乳動物のＬＣＣＲ遺伝子の配列は、当技術分野で知られている。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。ＬＣＣＲは、カッパまたはラムダ定常領域であることができる。好ましくは、本発明の抗体について、ＬＣＣＲはカッパ定常領域である。
【0050】
本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細胞において発現し得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。
【0051】
本発明の抗体は、哺乳動物細胞において容易に生成することができ、これらの非限定的な例には、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞が含まれる。宿主細胞は、当該技術分野において周知の技術を使用して培養される。
【0052】
目的のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて異なる周知の方法によって宿主細胞に導入され得る。
【0053】
タンパク質精製の様々な方法が用いられ得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）、およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。
【0054】
本発明の別の実施形態では、抗体（または抗体をコードする核酸）は、単離された形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境に見出される任意の他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、または核酸が（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超の対象の高分子種を含むことを意味する。
【0055】
本発明の抗体、またはそれを含む薬学的組成物は、非経口経路によって投与され得、非限定的な例は、皮下投与および静脈内投与である。本発明の抗体は、単独で薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と一緒に単回用量または複数回用量で患者に投与され得る。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）、本明細書に開示される抗体、および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【0056】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ２２６」は、配列番号１３、ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ１５７６２、で示されるアミノ酸配列を有する受容体を指す。ＣＤ２２６細胞外ドメイン－Ｈｉｓタグ構築体の例は、ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ、製品番号Ｑ１５４７６２に認められる。
【0057】
「ＣＤ２２６」の同義語は、ＤＮＡＸアクセサリー分子－１、ＤＮＡＭ－１、ＤＮＡＭ１、ＰＴＡ１、およびＴＬｉＳＡ１である。
【0058】
本明細書で使用される場合、「抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体」は、（ａ）ヒトＣＤ２２６（配列番号１３）またはその細胞外フラグメント（例えば、配列番号１４）に結合し、ｂ）例えば、本明細書に開示されるようなＴ細胞サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－ガンマ）放出アッセイでアッセイされるとき、またはインビボで、例えば、対象の血液または血清におけるＴ細胞サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－ガンマ）放出によってアッセイされるとき、インビトロで免疫応答を刺激し、（ｃ）対象にインビボで投与される場合、抗腫瘍活性をもたらす、抗体を指す。
【0059】
治療用モノクローナル抗体の文脈において、「ヒト」、「ヒト化」、および「全ヒト」という用語は、当業者によく知られている（Ｗｅｉｎｅｒ ＬＪ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６； ２９： １－９； Ｍａｌｌｂｒｉｓ Ｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ａｅｓｔｈｅｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１６； ９： １３－１５）。
【0060】
「ＣＤ１５５」の同義語は、ポリオウイルス受容体、ＰＶＲ、Ｎｅｃｌ－５、ＮＥＣＬ５、Ｔａｇｅ４、ＨＶＥＤ、およびＰＶＳである。
【0061】
「ＣＤ１１２」の同義語は、ネクチン細胞接着分子２、ネクチン－２、ＮＥＣＴＩＮ２、ＰＲＲ－２、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＲ２、およびＨＶＥＢである。
【0062】
ＣＤ２２６経路の免疫刺激効果は、例えば、活性化シグナルを増強する細胞表面上のＬＦＡ－１との結合によって媒介され得る。ＬＦＡ－１の関与は、ＣＤ２２６Ｒ細胞質ドメインのＦｙｎキナーゼ媒介リン酸化をもたらす（Ｍａｒｃｕｓ，Ａ，Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４； １２２： ９１－１２８）。別の例では、ＣＤ２２６はまた、ＮＫ細胞の細胞毒性およびサイトカイン生成を増強するその能力に不可欠である活性な生化学的シグナルを媒介することもでき、これらのシグナルは、保存されたＩＴＴまたはＩＴＴ様モチーフ（ｐＹｘＮｘ）によって開始され、Ｓｒｃファミリーキナーゼによるリン酸化を受け、アダプターＧｒｂ２を動員する。次に、Ｇｒｂ２はＶａｖ－１、ＰＩ３’Ｋ、およびＰＬＣ－γ１を活性化し、Ｅｒｋ、Ａｋｔ、およびカルシウムフラックスの活性化をもたらす。そのような経路は、アクチン重合化および顆粒極性化を促進し、それによって細胞毒性を高める。ＣＤ２２６はＣＤ８＋Ｔ細胞を含む他の免疫細胞で発現されるとき、ＣＤ２２６がこれらの細胞で同様のシグナルおよび効果を媒介すると推測することは合理的である。（Ｚｈａｎｇ，Ｚ，ＪＥＭ、２０１５； ２１２（１２）：２１６５）。
【0063】
ＣＤ２２６活性をインビトロでアッセイするための方法は、当業者に知られており、例えば、Ｇａｕｄ， Ｇ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．２０１８； １１： ｅａａｒ３０８３； ｄｏｉ： １０．１１２６／ｓｃｉｓｉｇｎａｌ．ａａｒ３０８３が挙げられる。
【0064】
固形腫瘍のインビボネズミモデルは、当業者によく知られており、本明細書に示され、開示されており、例えば、Ｓａｎｍａｍｅｄ ＭＦ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１６；２７：１１９０－１１９８、Ｍａｎｎｉｎｇ ＨＣ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ ２０１６； ５７（Ｓｕｐｐｌ． １）： ６０Ｓ－６８Ｓ、Ｔｅｉｃｈ ＢＡ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ． ２００６； ５： ２４３５、Ｒｏｎｇｖａｕｘ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；３１：６３５－７４、Ｓｔｙｌｌｉ ＳＳ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２０１５； ６１９－２６、Ｏｈ Ｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ．２０１４； １２： １０７－１１７、Ｎｅｗｃｏｍｂ， ＥＷ， ｅｔ ａｌ．， Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．２０１０； １７３： ４２６－４３２、Ｓｏｎｇ Ｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２０１３； １１０： １７９３３－８、およびＲｕｔｔｅｒ ＥＭ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１７； ７： ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０２４６２－０が挙げられる。
【0065】
本明細書で使用される場合、固形腫瘍に関して、「抗癌活性」という用語は、腫瘍のサイズの縮小、抗ＣＤ２２６アゴニスト抗体で治療されていない患者と比較して、抗ＣＤ２２６アゴニスト抗体で治療された患者における１つの病期から別の病期への患者の癌の進行における減少、または抗ＣＤ２２６アゴニスト抗体で治療されていない患者と比較して、抗ＣＤ２２６アゴニスト抗体で治療された患者における転移性癌の発生率の減少を指す。
【0066】
臨床的な固形腫瘍癌治療の文脈において、ＣＤ２２６経路の免疫刺激効果の活性化（アゴニズム）は、当技術分野の当業者によく知られている技法を使用して腫瘍退縮を検査することによって評価することができ、例えば、Ｘ線画像化、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、ポジトロン放出断層撮影、超音波画像化、組織生検、腫瘍生検、外科的アクセスおよび視覚的レビュー、病理学的分析、免疫組織化学、体液または組織バイオマーカー分析、身体的検査、ならびに触診のうちの１つ以上を使用する。
【0067】
投薬計画は、最適な所望の反応（例えば、治療効果）を提供するように調整され得る。安全性および有効性を最適化するために治療投与量を滴定し得る。局所的もしくは全身性またはそれらの組み合わせで静脈内（ｉ．ｖ．）または非静脈内投与のための投与スケジュールは、典型的には、単一ボーラス投与もしくは連続注入から、１日当たり複数回の投与（例えば、４～６時間おき）までの範囲であるか、または治療する医師および患者の状態によって示されるとおりである。投与量および投与頻度は、患者を治療する医師によって決定されてよい。
【0068】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（または「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延、妨害、抑制、緩和、停止、軽減、または反転させることを指す。
【0069】
「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、哺乳動物、またはヒトの生物学的もしくは医学的応答またはそれに対する所望の治療効果を誘発するであろう本発明の抗体または本発明の抗体を含む薬学的組成物の量を意味する。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。
【0070】
有効量は、既知技法の使用によって、そして同様の状況下で得られる結果を観察することによって、当業者によって容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、これらに限定されないが、患者のサイズ、年齢、および全体的な健康状態；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度、または関与、または重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択される投薬計画；付随する医薬品の使用；ならびに他の関連する状況を含む、多数の因子が担当診断医によって考慮される。
【0071】
本明細書で使用される場合、患者の「有効応答」、または治療に対する患者の「応答性」という用語は、本開示の抗体の投与の際に患者に付与される臨床上または治療上の利益を指す。そのような利益には、生存期間（全生存期間および無増悪生存期間を含む）を延長すること、客観的な応答（完全奏効または部分奏効を含む）をもたらすこと、安定化した疾患、または癌の兆候または症状を改善すること、のうちのいずれか１つ以上を含む。
【0072】
本明細書に開示される方法の潜在的な利点は、許容される耐容性、毒性、および／または有害事象を含む許容される安全性プロファイルによって患者において顕著なかつ／または延長された抗腫瘍活性を生じる可能性であり、それによって患者は、総体的に治療方法から利益を得る。本開示の治療の効能は、癌治療を評価する際に一般的に使用される様々なエンドポイントによって測定することができ、限定されないが、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの縮小、進行までの時間、全生存期間、無増悪生存期間、全奏効率、奏効の期間、および生活の質が含まれる。
【0073】
本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」という用語は、血液、リンパ管、または骨髄ではない組織における腫瘍を指す。
【0074】
本明細書で使用される場合、「完全奏効（ＣＲ）」という用語は、標的病変すべての消失を指す。いかなる病的リンパ節（標的であるか非標的であるかを問わず）は、短軸が１０ｍｍ未満に減少しなければならない。腫瘍マーカーの結果は正常化しているはずである。
【0075】
本明細書で使用される場合、「部分奏効（ＰＲ）」という用語は、ベースライン径の和を対照として、標的病変の径の和における少なくとも３０％減少を意味する。
【0076】
本明細書で使用される場合、「進行性疾患（ＰＤ）」という用語は、試験における最小の径の和を対照として（ベースラインの和が最小の場合はそれを含む）、標的病変の径の和における少なくとも２０％増加を意味する。相対的な２０％の増加に加えて、合計は少なくとも５ｍｍの絶対的な増加も示さなければならない。１つ以上の新しい病変の出現も進行とみなされる。進行のあいまいな所見（例えば、非常に小さく不確実な新しい病変；嚢胞性変化または既存の病変の壊死）については、次の予定された評価まで治療を続けることができる。次回の予定された評価で進行が確認された場合、進行の日付は進行が疑われたより早い日付であるべきである。
【0077】
本明細書で使用される場合、「無増悪生存期間（ＰＦＳ）」という用語は、任意の試験薬の初回投与の日付からＸ線写真によって記録されたＰＤの日付、または何らかの原因による死亡の日付のいずれか早い方までの期間として定義される。
【0078】
本明細書で使用される場合、「全生存期間（ＯＳ）」という用語は、任意の試験薬の初回投与の日付から何らかの原因による死亡の日付までの期間として定義される。
【0079】
本明細書で使用される場合、「抗体１」は、配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、配列番号４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列と、配列番号７のＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号８のＬＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号９のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１０のＬＣアミノ酸配列と、配列番号１１のＨＣ ＤＮＡ配列と、配列番号１２のＬＣ ＤＮＡ配列と、を有する抗体を指す。
【0080】
本明細書で配列が示される抗体の各々におけるフレームワークおよびＣＤＲ配列は、Ｎｏｒｔｈ， ｅｔ ａｌ．．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１：４０６：２２８－２５６の方法と一致する注釈規則を使用して注釈が付けられている。
本明細書で使用される配列識別子を表１に列挙する。
本明細書で使用される配列識別子を表１に列挙する。
【表1】
【0081】
抗体の特性評価、生成、発現、および精製
哺乳動物細胞における、配列番号１１に示されるＨＣポリヌクレオチド配列、および配列番号１２に示されるＬＣポリヌクレオチド配列を使用する抗体生成は、配列番号９に示されるＨＣアミノ酸配列および配列番号１０のＬＣアミノ酸配列を有する全長抗体（以後、「抗体１」と称される）の生成をもたらす。
哺乳動物細胞における、配列番号１１に示されるＨＣポリヌクレオチド配列、および配列番号１２に示されるＬＣポリヌクレオチド配列を使用する抗体生成は、配列番号９に示されるＨＣアミノ酸配列および配列番号１０のＬＣアミノ酸配列を有する全長抗体（以後、「抗体１」と称される）の生成をもたらす。
【0082】
本発明の抗体は、ファージディスプレイを含むがこれに限定されない、既知の方法を使用して生成してもよい。さらに、上述するものに由来する抗体は、本明細書に記載のアッセイを用いてさらにスクリーニングすることができる。
【0083】
ＨＣとＬＣの可変領域のポリペプチドおよび抗体１の完全なＨＣとＬＣアミノ酸配列、およびそれらをコードするヌクレオチド配列は、「アミノ酸およびヌクレオチド配列」というタイトルのセクションで列挙される。
【0084】
ヒトＣＤ２２６の配列は配列番号１３に示され、ヒトＣＤ２２６細胞外ドメイン（ＥＣＤ）－Ｆｃ融合の配列は配列番号１４に示される。
【0085】
本発明の抗体は、限定されないが、抗体１を含み、基本的に以下のように作成および精製することができる。適切な宿主細胞、例えば、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯは、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比、またはＨＣおよびＬＣの両方をコードする単一ベクター系を使用した抗体を分泌するための発現系によって一過性または安定的にトランスフェクトすることができる。抗体が分泌された既知組成培地は、多くの一般的に使用される技術のうちのいずれかを使用して精製されてもよい。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）のような適合緩衝液で平衡化された、ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に簡便に適用され得る。カラムは、非特異的結合構成成分を除去するために洗浄され得る。結合抗体は、例えば、ｐＨ勾配（１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ３．０に対して２０ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液ｐＨ７、または１００ｍＭグリシン緩衝液ｐＨ３．０に対してリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４など）によって溶出され得る。抗体画分は、紫外線吸光度またはＳＤＳ－ＰＡＧＥなどによって検出され得、次いで、プールされ得る。意図する使用に応じて、さらなる精製は任意選択的である。抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌ろ過され得る。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技法によって効果的に除去され得る。生成物は、－７０℃ですぐに冷凍されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。
【0086】
抗体１はヒトＣＤ２２６に結合する
本明細書に開示される抗体がヒトＣＤ２２６に結合する能力は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。ヒトＣＤ２２６との結合を測定するために、９６ウェルプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ ２ＨＢ）をヒトＣＤ２２６－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって４℃で一晩コーティングする。ウェルをブロッキング緩衝液（１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ）で２時間ブロッキングする。ウェルを０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳで３回洗浄する。次に、抗体１またはコントロールＩｇＧ（１００μＬ）を異なる濃度で添加し、室温で１時間インキュベートする。洗浄後、プレートを１００μＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）２－ＨＲＰコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とともに室温で４５分間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで１００μＬの３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンとともにインキュベートする。４５０ｎｍにおける吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取る。半数効果濃度（ＥＣ５０）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して計算する。
本明細書に開示される抗体がヒトＣＤ２２６に結合する能力は、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。ヒトＣＤ２２６との結合を測定するために、９６ウェルプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ ２ＨＢ）をヒトＣＤ２２６－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって４℃で一晩コーティングする。ウェルをブロッキング緩衝液（１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ）で２時間ブロッキングする。ウェルを０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳで３回洗浄する。次に、抗体１またはコントロールＩｇＧ（１００μＬ）を異なる濃度で添加し、室温で１時間インキュベートする。洗浄後、プレートを１００μＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）２－ＨＲＰコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とともに室温で４５分間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで１００μＬの３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンとともにインキュベートする。４５０ｎｍにおける吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取る。半数効果濃度（ＥＣ５０）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して計算する。
【0087】
基本的に上記のように実施される実験では、抗体１はヒトＣＤ２２６に０．１ｎＭのＥＣ５０で結合する。
【0088】
抗体１はカニクイザルＣＤ２２６に結合する
本明細書に開示される抗体が細胞表面カニクイザルＣＤ２２６に結合する能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。カニクイザルＣＤ２２６発現性安定細胞は、Ｆｕｇｅｎｅ－６試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、カニクイザルＣＤ２２６プラスミドＤＮＡをヒトＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトすることによって生成する。安定細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地において、０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを使用して選択する。フローサイトメトリーでは、コンフルエントな付着細胞を、Ｇｉｂｃｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して剥離し、完全培地で洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液（２．５％ウシ胎児血清＋１ｍＭ ＥＤＴＡ含有リン酸緩衝化生理食塩水）に再懸濁させ、次いで９６ウェルＶ底プレートに細胞５×１０４個／ウェルの密度で移す。細胞を、抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１（ＦＡＣＳ緩衝液中で１００μｇ／ｍＬから開始し、全７濃度をＦＡＣＳ緩衝液で１：３に連続希釈して調製）によって室温で３０分間染色する。
本明細書に開示される抗体が細胞表面カニクイザルＣＤ２２６に結合する能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。カニクイザルＣＤ２２６発現性安定細胞は、Ｆｕｇｅｎｅ－６試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、カニクイザルＣＤ２２６プラスミドＤＮＡをヒトＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトすることによって生成する。安定細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地において、０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを使用して選択する。フローサイトメトリーでは、コンフルエントな付着細胞を、Ｇｉｂｃｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して剥離し、完全培地で洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液（２．５％ウシ胎児血清＋１ｍＭ ＥＤＴＡ含有リン酸緩衝化生理食塩水）に再懸濁させ、次いで９６ウェルＶ底プレートに細胞５×１０４個／ウェルの密度で移す。細胞を、抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１（ＦＡＣＳ緩衝液中で１００μｇ／ｍＬから開始し、全７濃度をＦＡＣＳ緩衝液で１：３に連続希釈して調製）によって室温で３０分間染色する。
【0089】
ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄後、二次抗体アロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ，Ｆ（ａｂ’）２フラグメント特異抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１：２００希釈で添加し、細胞を室温で３０分間インキュベートする。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させる。７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）生存率染色液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各試料に添加してから直ちに、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０細胞アナライザーで試料を処理する。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアを使用して分析する。平均蛍光強度（ＭＦＩ）比を、（実験抗体のＭＦＩ）／（コントロールＩｇＧのＭＦＩ）として計算する。
【0090】
基本的に上記のように実施される実験では、抗体１は０．１４μｇ／ｍＬの濃度で、２９１７．５（１１４９５／３．９４）の高いＭＦＩ比を示す。
【0091】
抗体１は細胞表面でヒトＣＤ２２６に結合する
本明細書に開示される抗体が細胞表面ヒトＣＤ２２６に結合する能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。ヒトＣＤ２２６発現性安定細胞は、Ｆｕｇｅｎｅ－６試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ヒトＣＤ２２６プラスミドＤＮＡをヒトＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトすることによって生成する。安定細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地において、０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを使用して選択する。フローサイトメトリーでは、コンフルエントな付着細胞を、Ｇｉｂｃｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して剥離し、完全培地で洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液（２．５％ウシ胎児血清＋ １ｍＭ ＥＤＴＡ含有リン酸緩衝化生理食塩水）に再懸濁させ、次いで９６ウェルＶ底プレートに細胞５×１０４個／ウェルの密度で移す。細胞を、抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１（ＦＡＣＳ緩衝液中で１００μｇ／ｍＬから開始し、全１０濃度をＦＡＣＳ緩衝液で１：３に連続希釈して調製）によって室温で３０分間染色する。
本明細書に開示される抗体が細胞表面ヒトＣＤ２２６に結合する能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。ヒトＣＤ２２６発現性安定細胞は、Ｆｕｇｅｎｅ－６試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ヒトＣＤ２２６プラスミドＤＮＡをヒトＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトすることによって生成する。安定細胞を、１０％ウシ胎仔血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地において、０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンを使用して選択する。フローサイトメトリーでは、コンフルエントな付着細胞を、Ｇｉｂｃｏ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して剥離し、完全培地で洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液（２．５％ウシ胎児血清＋ １ｍＭ ＥＤＴＡ含有リン酸緩衝化生理食塩水）に再懸濁させ、次いで９６ウェルＶ底プレートに細胞５×１０４個／ウェルの密度で移す。細胞を、抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１（ＦＡＣＳ緩衝液中で１００μｇ／ｍＬから開始し、全１０濃度をＦＡＣＳ緩衝液で１：３に連続希釈して調製）によって室温で３０分間染色する。
【0092】
ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄後、二次抗体アロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ，Ｆ（ａｂ’）２フラグメント特異抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１：２００希釈で添加し、細胞を室温で３０分間インキュベートする。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させる。７－アミノ－アクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ）生存率染色液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各試料に添加してから直ちに、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０細胞アナライザーで試料を処理する。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアを使用して分析する。平均蛍光強度（ＭＦＩ）比を、（実験抗体のＭＦＩ）／（コントロールＩｇＧのＭＦＩ）として計算する。
【0093】
基本的に上記のように実施される実験では、抗体１は０．１４μｇ／ｍＬの濃度で、８５０．７８（７６４０／８．９８）の高いＭＦＩ比を示す。
【0094】
抗体１における結合速度／親和性の結果
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を使用して、抗体１に結合する固定化ヒトＣＤ２２６－Ｆｃの結合速度を測定することができる。組換えヒトＣＤ２２６－Ｆｃ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＣＭ５センサーチップにアミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して共有結合によって固定化させる。ＣＤ２２６抗体試験は、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液において１００μＬ／分の流速で実施する。試料を様々な濃度で注入し、２５℃で測定する。表面は、各試料注入後、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ２．１によって流速１０μＬ／分で３０分間再生させ、次いで緩衝液で１０秒間安定化させる。１．９５ｎＭから１０００ｎＭまでの範囲の濃度のセンサーグラムは、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ソフトウェアを使用して評価する。平衡解離定数（ＫＤ）または結合親和定数は、定常状態フィッティングから計算する。基本的に上記のように実施される実験では、抗体１はヒトＣＤ２２６に、表２に示される親和定数で結合する。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を使用して、抗体１に結合する固定化ヒトＣＤ２２６－Ｆｃの結合速度を測定することができる。組換えヒトＣＤ２２６－Ｆｃ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ＣＭ５センサーチップにアミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して共有結合によって固定化させる。ＣＤ２２６抗体試験は、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液において１００μＬ／分の流速で実施する。試料を様々な濃度で注入し、２５℃で測定する。表面は、各試料注入後、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ２．１によって流速１０μＬ／分で３０分間再生させ、次いで緩衝液で１０秒間安定化させる。１．９５ｎＭから１０００ｎＭまでの範囲の濃度のセンサーグラムは、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ソフトウェアを使用して評価する。平衡解離定数（ＫＤ）または結合親和定数は、定常状態フィッティングから計算する。基本的に上記のように実施される実験では、抗体１はヒトＣＤ２２６に、表２に示される親和定数で結合する。
【表2】
【0095】
抗体１のＮＦ－カッパＢルシフェラーゼレポーターアッセイ活性
本明細書に開示される抗体がＮＦ－カッパＢを活性化する能力は、以下のように測定することができる。ＮＦ－カッパＢルシフェラーゼレポーターおよびｐＧＬ４．３２ ［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦ－ｋａｐｐａＢ－ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］プラスミドのＨＥＫ２９３細胞への二重一過性トランスフェクションはプラスミドＤＮＡによって実施し、１０％ウシ胎児血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地中で、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用する。細胞を３７℃で一晩培養し、翌日に細胞を９６ウェルプレートに分割する。抗体１またはコントロールのヒトＩｇＧ１を、培地中に３倍希釈で１０ポイント希釈し、２００ｎＭで開始してプレートに添加する。次いで、細胞を抗体とともに５％ＣＯ２中で３７℃、１８時間インキュベートし、次いで、ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ（商標））を使用して処理する。発光は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーを使用して測定する。半数効果濃度（ＥＣ５０）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して計算する。
本明細書に開示される抗体がＮＦ－カッパＢを活性化する能力は、以下のように測定することができる。ＮＦ－カッパＢルシフェラーゼレポーターおよびｐＧＬ４．３２ ［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦ－ｋａｐｐａＢ－ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］プラスミドのＨＥＫ２９３細胞への二重一過性トランスフェクションはプラスミドＤＮＡによって実施し、１０％ウシ胎児血清および１％ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）含有ダルベッコ改変イーグル培地中で、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用する。細胞を３７℃で一晩培養し、翌日に細胞を９６ウェルプレートに分割する。抗体１またはコントロールのヒトＩｇＧ１を、培地中に３倍希釈で１０ポイント希釈し、２００ｎＭで開始してプレートに添加する。次いで、細胞を抗体とともに５％ＣＯ２中で３７℃、１８時間インキュベートし、次いで、ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ（商標））を使用して処理する。発光は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーを使用して測定する。半数効果濃度（ＥＣ５０）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して計算する。
【0096】
基本的に上記のように実施される実験では、抗体１はヒトＣＤ２２６媒介性ＮＦ－ｋＢレポーターを４．１１ｎＭのＥＣ５０で誘発する。
【0097】
抗体１はＴ細胞由来インターフェロン－ガンマ生成を促進する
本明細書に開示される抗体のＴ細胞由来インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－ガンマ）生成を促進する能力は、以下のように測定することができる。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって全血またはロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｓ）から単離する。ＣＤ８ Ｔ細胞は、ＰＢＭＣからＣＤ８ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を製造業者の説明書に従って使用して単離し、Ｘ Ｖｉｖｏ－１５培地（Ｌｏｎｚａ）に７５万個／ｍＬの濃度で再懸濁させる。抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１は、Ｘ Ｖｉｖｏ－１５培地（Ｌｏｎｚａ）中で２００μｇ／ｍＬに希釈することによって調製する。抗ヒトＣＤ３抗体クローンＨｉｔ３Ａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および抗ヒトＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を、それぞれ１０μｇ／ｍＬおよび２μｇ／ｍＬの濃度でＣＤ８ Ｔ細胞懸濁液に添加する。細胞を９６ウェルＵ底プレートにウェル当たり１００μＬ、続いて抗体を等容量で加え、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内で３７℃、９６時間インキュベートする。上清を収集し、ヒトＩＦＮ－ガンマレベルをＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）ヒトＩＦＮ－ガンマＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標） ＥＬＩＳＡキットを使用して測定する。簡単に説明すると、試料上清およびＩＦＮ－ガンマ標準をアッセイ緩衝液で希釈し、ＩＦＮ－ガンマ捕捉抗体でプレコーティングしたプレートに加え、室温で２時間インキュベートする。洗浄後、２００μＬのＩＦＮ－ガンマ検出抗体を添加し、室温で２時間インキュベートする。洗浄後、プレートに２００μＬの基質溶液を１０分間添加することによって発色させ、続いて５０μＬの停止溶液を添加し、シグナルをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーによって４５０ｎｍで測定する。データ分析を、ＳｏｆｔＭａｘ ＰｒｏソフトウェアとＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して実施する。
本明細書に開示される抗体のＴ細胞由来インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－ガンマ）生成を促進する能力は、以下のように測定することができる。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって全血またはロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｓ）から単離する。ＣＤ８ Ｔ細胞は、ＰＢＭＣからＣＤ８ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を製造業者の説明書に従って使用して単離し、Ｘ Ｖｉｖｏ－１５培地（Ｌｏｎｚａ）に７５万個／ｍＬの濃度で再懸濁させる。抗体１またはコントロールヒトＩｇＧ１は、Ｘ Ｖｉｖｏ－１５培地（Ｌｏｎｚａ）中で２００μｇ／ｍＬに希釈することによって調製する。抗ヒトＣＤ３抗体クローンＨｉｔ３Ａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および抗ヒトＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を、それぞれ１０μｇ／ｍＬおよび２μｇ／ｍＬの濃度でＣＤ８ Ｔ細胞懸濁液に添加する。細胞を９６ウェルＵ底プレートにウェル当たり１００μＬ、続いて抗体を等容量で加え、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内で３７℃、９６時間インキュベートする。上清を収集し、ヒトＩＦＮ－ガンマレベルをＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）ヒトＩＦＮ－ガンマＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標） ＥＬＩＳＡキットを使用して測定する。簡単に説明すると、試料上清およびＩＦＮ－ガンマ標準をアッセイ緩衝液で希釈し、ＩＦＮ－ガンマ捕捉抗体でプレコーティングしたプレートに加え、室温で２時間インキュベートする。洗浄後、２００μＬのＩＦＮ－ガンマ検出抗体を添加し、室温で２時間インキュベートする。洗浄後、プレートに２００μＬの基質溶液を１０分間添加することによって発色させ、続いて５０μＬの停止溶液を添加し、シグナルをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーによって４５０ｎｍで測定する。データ分析を、ＳｏｆｔＭａｘ ＰｒｏソフトウェアとＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して実施する。
【0098】
基本的に上記のように実施される実験では、抗体１は、ＩＦＮ－ガンマサイトカイン生成によって測定されるとき、ＣＤ３／ＣＤ２８共刺激によるヒトＰＢＭＣの準最適な活性化を増強する。この関連で、抗体１の１００μｇ／ｍＬによる処置は、コントロールＩｇＧ処置よりもＩＦＮ－ガンマの生成を１．６倍増加させる。
【0099】
確立された腫瘍モデルにおける抗体１の抗腫瘍効能
ＨＣＣ８２７ヒト非小細胞肺癌（ＡＴＣＣ）腫瘍細胞株は、それぞれの培地で維持され、移植のために採取される。腫瘍細胞（マウス当たり１×１０７個の細胞）を、７週齢のメスＮＯＤ／ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部に皮下注射する。腫瘍がサイズで約２５０ｍｍ３～３５０ｍｍ３に達するとき、マウスを５～８群に無作為化する。ナイーブヒトＰＢＭＣをＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で９～１０日間刺激して、ヒト増殖Ｔ細胞を生成し、保管する。ヒトＰＢＭＣ（ＮＹ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）は、ＳｅｐＭａｔｅチューブ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＦｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳで遠心分離して調製し、保管する。増殖したＴ細胞を解凍し、２．５×１０６個の細胞をマウスに注入する。コントロールとして、腫瘍細胞のみをＴ細胞なしで何匹かのマウスに移植する。処理は０日目または１日目から開始する。処理群は、コントロールＩｇＧおよび抗体１を含む。動物に腹腔内注射で１０ｍｇ／ｋｇの抗体を週に１回、４週間投与する。体重（ＢＷ）を週２回記録し、ＢＷの変化率を、次の式、（観測日のＢＷ－初日のＢＷ）／初日のＢＷ×１００％を使用して計算する。腫瘍体積を、電子キャリパーを使用して週に２回測定する。腫瘍体積は、式、腫瘍体積（ｍｍ３）＝π／６＊長さ＊幅２を用いて計算する。Ｔ／Ｃ％は、幾何平均値がΔＴ＞０の場合、式１００×ΔＴ／ΔＣを使用して計算する。ΔＴ＝研究の観測日の薬物処理群の平均腫瘍体積－投与の初日の薬物処理群の平均腫瘍体積、ΔＣ＝研究の観測日のコントロール群の平均腫瘍体積－投与の初日のコントロール群の平均腫瘍体積である。ＳＡＳソフトウェア（バージョン９．２）のＭＩＸＥＤ手順を使用して、時間および処理による繰り返しのある二元配置反復測定分散分析を用いて、腫瘍体積データの統計分析が実施される。
ＨＣＣ８２７ヒト非小細胞肺癌（ＡＴＣＣ）腫瘍細胞株は、それぞれの培地で維持され、移植のために採取される。腫瘍細胞（マウス当たり１×１０７個の細胞）を、７週齢のメスＮＯＤ／ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部に皮下注射する。腫瘍がサイズで約２５０ｍｍ３～３５０ｍｍ３に達するとき、マウスを５～８群に無作為化する。ナイーブヒトＰＢＭＣをＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で９～１０日間刺激して、ヒト増殖Ｔ細胞を生成し、保管する。ヒトＰＢＭＣ（ＮＹ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）は、ＳｅｐＭａｔｅチューブ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＦｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳで遠心分離して調製し、保管する。増殖したＴ細胞を解凍し、２．５×１０６個の細胞をマウスに注入する。コントロールとして、腫瘍細胞のみをＴ細胞なしで何匹かのマウスに移植する。処理は０日目または１日目から開始する。処理群は、コントロールＩｇＧおよび抗体１を含む。動物に腹腔内注射で１０ｍｇ／ｋｇの抗体を週に１回、４週間投与する。体重（ＢＷ）を週２回記録し、ＢＷの変化率を、次の式、（観測日のＢＷ－初日のＢＷ）／初日のＢＷ×１００％を使用して計算する。腫瘍体積を、電子キャリパーを使用して週に２回測定する。腫瘍体積は、式、腫瘍体積（ｍｍ３）＝π／６＊長さ＊幅２を用いて計算する。Ｔ／Ｃ％は、幾何平均値がΔＴ＞０の場合、式１００×ΔＴ／ΔＣを使用して計算する。ΔＴ＝研究の観測日の薬物処理群の平均腫瘍体積－投与の初日の薬物処理群の平均腫瘍体積、ΔＣ＝研究の観測日のコントロール群の平均腫瘍体積－投与の初日のコントロール群の平均腫瘍体積である。ＳＡＳソフトウェア（バージョン９．２）のＭＩＸＥＤ手順を使用して、時間および処理による繰り返しのある二元配置反復測定分散分析を用いて、腫瘍体積データの統計分析が実施される。
【0100】
基本的に上記のように実施された実験において、抗体１で処置されたマウスは、有意な腫瘍増殖阻害を示した（Ｔ／Ｃ％＝５６．７、Ｐ＜．０１）。
【0101】
アミノ酸およびヌクレオチド配列
配列番号１（抗体１ ＨＣＤＲ１）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号２（抗体１ ＨＣＤＲ２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号３（抗体１ ＨＣＤＲ３）
ＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩ
配列番号４（抗体１ ＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ
配列番号５（抗体１ ＬＣＤＲ２）
ＹＲＡＳＴＬＱＳ
配列番号６（抗体１ ＬＣＤＲ３）
ＱＱＳＹＳＴＰＤＴ
配列番号７（抗体１ ＨＣＶＲ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号８（抗体１ ＬＣＶＲ）
ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＬＬＩＹＲＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＤＧＳＧＴＨＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＤＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９（抗体１ ＨＣ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０（抗体１ ＬＣ）
ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＬＬＩＹＲＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＤＧＳＧＴＨＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＤＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１（抗体１ ＨＣ ＤＮＡ）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｔｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｔａｇｃａｇｃｔａｔｇｃｃａｔｇａｇｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｔｃａｇｃｔａｔｔａｇｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｃａｃａｔａｃｔａｃｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇｇｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｔｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇａｔｃｇｇｔｇｇｇａｇｃｔｔｃａｔｇａｔｇｃｔｔｔｔｇａｔａｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃａａｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｔｔｃａｇｃｔａｇｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃａｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａｇａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｇｃｃｇａｇｇｇｇｇｃａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｔｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａａｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｔｃｃｔｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｇｇａｇａｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａａｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｃａａａ
配列番号１２（抗体１ ＬＣ ＤＮＡ）
ｇｔｃａｔｃｔｇｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃｇｇｇｃａａｇｔｃａｇａｇｃａｔｔａｇｃａｇｃｔａｔｔｔａａａｔｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａｇｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｃｃｇｔｇｃａｔｃｃａｃｔｔｔａｃａａａｇｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃｇａｔｇｇａｔｃｔｇｇａａｃａｃａｔｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａａｃａｇａｇｔｔａｃａｇｔａｃｃｃｃｃｇａｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇａａｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃ ａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ
配列番号１３（ヒトＣＤ２２６）
ＭＤＹＰＴＬＬＬＡＬＬＨＶＹＲＡＬＣＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＱＹＴＬＦＶＡＧＧＴＶＬＬＬＬＦＶＩＳＩＴＴＩＩＶＩＦＬＮＲＲＲＲＲＥＲＲＤＬＦＴＥＳＷＤＴＱＫＡＰＮＮＹＲＳＰＩＳＴＳＱＰＴＮＱＳＭＤＤＴＲＥＤＩＹＶＮＹＰＴＦＳＲＲＰＫＴＲＶ
配列番号１４（ヒトＣＤ２２６－細胞外ドメイン－Ｆｃ）
ＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＨＩＥＧＲＭＤＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
本発明は、以下の態様を含み得る。
［１］
抗ヒトＣＤ２２６抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［２］
配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［３］
配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含む、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［４］
配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＬＣからなる、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［５］
前記抗体は、アゴニスト抗体である、［１］～［４］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［６］
［１］～［５］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［７］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［６］に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［８］
［７］に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［９］
配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含む、ＤＮＡ分子。
［１０］
［９］に記載のＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞。
［１１］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［１０］に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［１２］
［１１］に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［１３］
［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
［１４］
固形腫瘍癌を治療［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を投与することを含み、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、方法。
［１５］
固形腫瘍癌の治療における使用のための、［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体であって、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［１６］
固形腫瘍癌の治療のための医薬品の製造のための、［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体の使用であって、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、使用。
［１７］
抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［１８］
［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［１９］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［１７］に記載の抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［２０］
療法における使用のための、［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２１］
癌の治療における使用のための、［２０］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２２］
前記癌は固形腫瘍癌である、［２１］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２３］
前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、［２２］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２４］
癌の治療のための医薬品の製造のための、［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体の使用。
［２５］
前記癌は固形腫瘍癌である、［２４］に記載の使用。
［２６］
前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、［２５］に記載の使用。
配列番号１（抗体１ ＨＣＤＲ１）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号２（抗体１ ＨＣＤＲ２）
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号３（抗体１ ＨＣＤＲ３）
ＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩ
配列番号４（抗体１ ＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ
配列番号５（抗体１ ＬＣＤＲ２）
ＹＲＡＳＴＬＱＳ
配列番号６（抗体１ ＬＣＤＲ３）
ＱＱＳＹＳＴＰＤＴ
配列番号７（抗体１ ＨＣＶＲ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号８（抗体１ ＬＣＶＲ）
ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＬＬＩＹＲＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＤＧＳＧＴＨＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＤＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９（抗体１ ＨＣ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＥＬＨＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０（抗体１ ＬＣ）
ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＬＬＩＹＲＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＤＧＳＧＴＨＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＤＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１（抗体１ ＨＣ ＤＮＡ）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｔｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｔａｇｃａｇｃｔａｔｇｃｃａｔｇａｇｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｇｇｔｃｔｃａｇｃｔａｔｔａｇｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇｔａｇｃａｃａｔａｃｔａｃｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇｇｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｔｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇａｔｃｇｇｔｇｇｇａｇｃｔｔｃａｔｇａｔｇｃｔｔｔｔｇａｔａｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃａａｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｔｔｃａｇｃｔａｇｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃａｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａｇａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｇｃｃｇａｇｇｇｇｇｃａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｔｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａａｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｔｃｃｔｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｇｇａｇａｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａａｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔｔｃｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｃａａａ
配列番号１２（抗体１ ＬＣ ＤＮＡ）
ｇｔｃａｔｃｔｇｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃｇｇｇｃａａｇｔｃａｇａｇｃａｔｔａｇｃａｇｃｔａｔｔｔａａａｔｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａｇｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｃｃｇｔｇｃａｔｃｃａｃｔｔｔａｃａａａｇｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃｇａｔｇｇａｔｃｔｇｇａａｃａｃａｔｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａａｃａｇａｇｔｔａｃａｇｔａｃｃｃｃｃｇａｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃｇａａｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃ ａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ
配列番号１３（ヒトＣＤ２２６）
ＭＤＹＰＴＬＬＬＡＬＬＨＶＹＲＡＬＣＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＱＹＴＬＦＶＡＧＧＴＶＬＬＬＬＦＶＩＳＩＴＴＩＩＶＩＦＬＮＲＲＲＲＲＥＲＲＤＬＦＴＥＳＷＤＴＱＫＡＰＮＮＹＲＳＰＩＳＴＳＱＰＴＮＱＳＭＤＤＴＲＥＤＩＹＶＮＹＰＴＦＳＲＲＰＫＴＲＶ
配列番号１４（ヒトＣＤ２２６－細胞外ドメイン－Ｆｃ）
ＥＥＶＬＷＨＴＳＶＰＦＡＥＮＭＳＬＥＣＶＹＰＳＭＧＩＬＴＱＶＥＷＦＫＩＧＴＱＱＤＳＩＡＩＦＳＰＴＨＧＭＶＩＲＫＰＹＡＥＲＶＹＦＬＮＳＴＭＡＳＮＮＭＴＬＦＦＲＮＡＳＥＤＤＶＧＹＹＳＣＳＬＹＴＹＰＱＧＴＷＱＫＶＩＱＶＶＱＳＤＳＦＥＡＡＶＰＳＮＳＨＩＶＳＥＰＧＫＮＶＴＬＴＣＱＰＱＭＴＷＰＶＱＡＶＲＷＥＫＩＱＰＲＱＩＤＬＬＴＹＣＮＬＶＨＧＲＮＦＴＳＫＦＰＲＱＩＶＳＮＣＳＨＧＲＷＳＶＩＶＩＰＤＶＴＶＳＤＳＧＬＹＲＣＹＬＱＡＳＡＧＥＮＥＴＦＶＭＲＬＴＶＡＥＧＫＴＤＮＨＩＥＧＲＭＤＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
本発明は、以下の態様を含み得る。
［１］
抗ヒトＣＤ２２６抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［２］
配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［３］
配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣを含む、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［４］
配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＨＣ、および配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＬＣからなる、［１］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［５］
前記抗体は、アゴニスト抗体である、［１］～［４］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［６］
［１］～［５］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［７］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［６］に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［８］
［７］に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［９］
配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含む、ＤＮＡ分子。
［１０］
［９］に記載のＤＮＡ分子を含む、哺乳動物細胞。
［１１］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［１０］に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［１２］
［１１］に記載のプロセスによって生成される、前記抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［１３］
［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
［１４］
固形腫瘍癌を治療［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を投与することを含み、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、方法。
［１５］
固形腫瘍癌の治療における使用のための、［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体であって、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、抗ヒトＣＤ２２６抗体。
［１６］
固形腫瘍癌の治療のための医薬品の製造のための、［１］～［５］、［８］、および［１２］のいずれか一項に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体の使用であって、前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、使用。
［１７］
抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［１８］
［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６抗体を発現することができる、哺乳動物細胞。
［１９］
抗ヒトＣＤ２２６抗体を生成するためのプロセスであって、［１７］に記載の抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、プロセス。
［２０］
療法における使用のための、［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２１］
癌の治療における使用のための、［２０］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２２］
前記癌は固形腫瘍癌である、［２１］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２３］
前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、［２２］に記載の使用のための抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体。
［２４］
癌の治療のための医薬品の製造のための、［１７］に記載の抗ヒトＣＤ２２６アゴニスト抗体の使用。
［２５］
前記癌は固形腫瘍癌である、［２４］に記載の使用。
［２６］
前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、軟部組織肉腫、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、または尿路上皮癌である、［２５］に記載の使用。
【配列表】