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特許7146968メチル／フルオロ－ピリジニル－メトキシ置換ピリジノン－ピリジニル化合物及びフルオロ－ピリミジニル－メトキシ置換ピリジノン－ピリジニル化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-09-26
(45)【発行日】2022-10-04
(54)【発明の名称】メチル／フルオロ－ピリジニル－メトキシ置換ピリジノン－ピリジニル化合物及びフルオロ－ピリミジニル－メトキシ置換ピリジノン－ピリジニル化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 401/14 20060101AFI20220927BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20220927BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220927BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20220927BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220927BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220927BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220927BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220927BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20220927BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20220927BHJP
A61P 19/06 20060101ALI20220927BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20220927BHJP
【ＦＩ】
C07D401/14 CSP
A61K31/506
A61K45/00
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P7/00
A61P35/00
A61P3/00
A61P3/10
A61P9/10
A61P29/00
A61P37/06
A61P1/04
A61P11/06
A61P17/06
A61P19/06
A61P19/08
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2021018583
(22)【出願日】2021-02-08
(62)【分割の表示】P 2020004547の分割
【原出願日】2014-06-06
(65)【公開番号】P2021073302
(43)【公開日】2021-05-13
【審査請求日】2021-03-10
(31)【優先権主張番号】61/832,736
(32)【優先日】2013-06-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】518293228
【氏名又は名称】アクラリス セラピューティクス，インコーポレイテッド
(73)【特許権者】
【識別番号】515339446
【氏名又は名称】ホッカーマン，スーザン エル．
(73)【特許権者】
【識別番号】515339457
【氏名又は名称】モナハン，ジョセフ ビー．
(73)【特許権者】
【識別番号】515339468
【氏名又は名称】セルネス，ショーン アール．
(74)【代理人】
【識別番号】100126505
【弁理士】
【氏名又は名称】佐貫 伸一
(74)【代理人】
【識別番号】100131392
【弁理士】
【氏名又は名称】丹羽 武司
(72)【発明者】
【氏名】ホッカーマン，スーザン エル．
(72)【発明者】
【氏名】モナハン，ジョセフ ビー．
(72)【発明者】
【氏名】セルネス，ショーン アール．
【審査官】三上 晶子
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１２／０１４２７０９（ＵＳ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１３／０１４３９０６（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（－）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オン、及び（＋）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オン、
から成る群から選択される化合物又はその薬剤的に許容できる塩。
【請求項2】
（－）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンである、請求項１に記載の化合物又はその薬剤的に許容できる塩。
【請求項3】
（＋）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンである、請求項１に記載の化合物又はその薬剤的に許容できる塩。
【請求項4】
治療上有効な量の請求項１に記載の化合物又はその薬剤的に許容できる塩、及び薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項5】
（－）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンである化合物又はその薬剤的に許容できる塩を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項6】
（＋）－３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンである化合物又はその薬剤的に許容できる塩を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項7】
抗炎症薬、抗アテローム硬化薬、免疫抑制薬、免疫調節薬、細胞分裂阻害薬、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン阻害薬及び細胞接着分子の阻害剤から成る群から選択される活性医薬成分を、治療上有効な量でさらに含む、請求項５又は６に記載の医薬組成物。
【請求項8】
対象における状態を治療するための、請求項４～７の何れか一項に記載の医薬組成物であって、前記状態が、自己免疫性障害、慢性炎症性障害、急性炎症性障害、自己炎症性障害、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、線維症及びがんから成る群から選択される状態である医薬組成物。
【請求項9】
対象における状態を治療するための、請求項４～７の何れか一項に記載の医薬組成物であって、前記状態が、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、グレーブス病、重症筋無力症、骨障害、変形性関節症、敗血症性ショック、エンドトキシンショック、エンドトキシン誘発性毒素ショック、エンドトキシンショック症候群、敗血症、関節炎、喘息、再潅流傷害、ニューロン虚血、脳卒中、慢性痛風、移植片対宿主疾患、移植片拒絶反応、糸球体腎炎、肺炎、転移性黒色腫、多発性骨髄腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、スチル病、家族性地中海熱から成る群から選択される状態である医薬組成物。
【請求項10】
前記対象がヒトである、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年６月７日出願の、仮特許出願第６１／８３２，７３６号の利益及び優先権を主張する非仮特許出願であり、当該仮特許出願の開示全体が参照により本明細書に組込まれる。
本出願は、２０１３年６月７日出願の、仮特許出願第６１／８３２，７３６号の利益及び優先権を主張する非仮特許出願であり、当該仮特許出願の開示全体が参照により本明細書に組込まれる。
【0002】
本開示は概して、酵素阻害活性を有する化合物、当該化合物を含む医薬組成物、及び、疾患を治療するのに役立つ方法に関する。より具体的には、本開示は、ピリジノン－ピリジニル化合物のクラス、当該化合物を含む医薬組成物、及び、ｐ３８キナーゼ介在疾患の治療に役立つ方法に関する。
【背景技術】
【0003】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は、リン酸化カスケードを用いて環境に対して協調的な細胞応答を引き起こし、外部刺激を中継及び伝播する酵素の保存されたファミリーである。ＭＡＰＫは、遺伝子発現、有糸分裂、分化及び／又は細胞生存／アポトーシスといった細胞活性を制御する、プロリン指向性セリン／スレオニン特異性タンパク質キナーゼである。現在までに、哺乳動物のＭＡＰＫの４つの異なるクラスが同定された：細胞外シグナル伝達キナーゼ（ＥＲＫ１及び２）、ｃ－ｊｕｎのＮ末端キナーゼ１（ＪＮＫ１～３）、ｐ３８ＭＡＰＫ（ｐ３８α、β、γ及びδ）並びにＥＲＫ５である。ＭＡＰＫは、協調した二重特異性ＭＡＰＫＫによる、ＴＸＹ活性化モチーフ内のＴｈｒ及びＴｙｒ残基の二重リン酸化によって活性化され、ここで、Ｘは、ＥＲＫ、ＪＮＫ及びｐ３８ＭＡＰＫでそれぞれＧｌｕ、Ｐｒｏ及びＧｌｙである。ＭＡＰＫは互いに６０～７０％の相同性を有するが、その活性化ループ配列及びサイズにおいて異なる。活性化ループは、酵素活性部位に隣接しており、そのリン酸化によって、酵素が活性部位残基を基質結合及び触媒作用に最適な配向へ位置変更することが可能になる。ＭＡＰＫの下流基質としては、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ－活性化タンパク質（ＭＡＰＫＡＰ）キナーゼ及び転写因子が挙げられ、これらのリン酸化は、直接的又は間接的のいずれかで、複数の点で、転写、核外輸送及びｍＲＮＡ安定性及び翻訳を包含する遺伝子発現を制御する。ＭＡＰＫ活性化による細胞の結果としては、炎症、アポトーシス、分化及び増殖が挙げられる。
【0004】
ヒトにおいて、別個の遺伝子は４つのｐ３８ＭＡＰキナーゼをコードする：ｐ３８α、β、γ及びδである。顕著なアミノ酸配列相同性が４つのアイソフォーム間で観察され、全体の配列同一性が６０％～７５％であり、キナーゼ領域内では９０％超の同一性である。組織選択性発現が観察され、ｐ３８γは骨格筋で主に見つかり、ｐ３８δは精巣、膵臓及び小腸で見つかる。対照的に、ｐ３８α及びβはより広範囲で発現される。
【0005】
ｐ３８ＭＡＰＫファミリーメンバーの広範な生物学的及び病態生理学的役割の理解は、その活性化につながるシグナル伝達ネットワークの複雑性と共に、過去１０年間で著しく向上した。生物学的、細胞的及びインビボの観点からこの経路を科学的に調査することは、αアイソフォーム、及び、より小さい程度でβアイソフォームを標的とする、正しく挙動し、選択性の小分子であるｐ３８ＭＡＰＫの阻害剤の利用性によって主に可能になった。ｐ３８αＭＡＰＫは、免疫及び炎症応答に関わる主要なアイソフォームである。そのようなものとして、その機能は、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－６及びＩＬ－８を包含する複数の炎症促進性サイトカインの、マクロファージ、単球、滑膜細胞及び内皮細胞といった細胞における生産及び活性に必須である。ｐ３８ＭＡＰＫはまた、炎症箇所でのエイコサ
ノイド及び一酸化窒素のそれぞれの主要な源であるＣＯＸ２及びｉＮＯＳといった重要な炎症性酵素の誘導の原因でもある。さらに、ｐ３８ＭＡＰＫ経路は、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１３を包含するマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現を制御する。
ノイド及び一酸化窒素のそれぞれの主要な源であるＣＯＸ２及びｉＮＯＳといった重要な炎症性酵素の誘導の原因でもある。さらに、ｐ３８ＭＡＰＫ経路は、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１３を包含するマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現を制御する。
【0006】
選択性及び強力な阻害剤の使用は、ｐ３８ＭＡＰＫ基質の複数のファミリーの発見を容易にし、転写因子、ＭＡＰＫＡＰキナーゼ及び他の酵素が挙げられる。ｐ３８ＭＡＰＫは、ミオサイト特異性エンハンサー結合因子２Ｃ（ＭＥＦ２Ｃ）、ＣＨＯＰ、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）α、ＰＰＡＲγコアクチベーター１及びｐ５３といった複数の転写因子を直接リン酸化し得る。これら転写因子は、アポトーシス、糖新生及び脂肪酸酸化に関わる酵素の合成といった細胞機能に関わる。ｐ３８ＭＡＰＫはまた、細胞質型ホスフォリパーゼＡ２及びＣｄｃ２５ホスファターゼといった酵素基質の直接又は間接的なリン酸化にも関わり、当該基質は、サイクリン依存性タンパク質キナーゼ活性の活性化及び細胞周期制御に関係する。したがって、炎症応答での役割に加え、ｐ３８ＭＡＰＫは、正常及び異常な細胞成長及び生存並びに細胞機能及びホメオスタシスに関わる他の機能も有する。
【0007】
ＭＡＰＫＡＰキナーゼ－ＭＫ２、ＭＫ－３及びＰＲＡＫ－がｐ３８ＭＡＰＫによって選択的にリン酸化される一方で、ＭＳＫ１／２、ＭＮＫ１／２及びＲＳＫｂのリン酸化はｐ３８ＭＡＰＫ及びＥＲＫの双方によって触媒される。ＲＳＫｂの活性化は、細胞生存で役割を有すると考えられているが、特異性阻害剤の欠如のために基質の同定は難しい。ＭＮＫは、ｍＲＮＡのキャップ構造に結合し、タンパク質翻訳を強化する真核生物翻訳開始因子４Ｅのリン酸化に関わる。ＭＮＫは、炎症タンパク質をコードする転写物のｍＲＮＡ安定性を制御するタンパク質である、ｍＲＮＡ結合タンパク質ｈｎＲＮＰ－Ａ０をリン酸化する。ＭＳＫ１／２は、ＡＰ－１結合タンパク質を制御する転写因子ＣＲＥＢ及びＡＴＦ－１のリン酸化に関わる。さらに、ＭＳＫ１／２はクロマチンリモデリングに関わるヒストンＨ３をリン酸化できる。ＭＳＫ及びＭＮＫが炎症促進性サイトカインの媒介において役割を有することが根拠によって示唆される一方で、選択性阻害剤及び／又はノックアウトマウスでのインビボデータは欠如している。
【0008】
ＭＫ－２、ＭＫ－３及びＰＲＡＫは、ｐ３８ＭＡＰＫによってリン酸化及び活性化されると、類似した基質特異性を共有する。これらキナーゼの全て、低分子量熱ショックタンパク質Ｈｓｐ２７をリン酸化できる。研究によると、ＰＲＡＫ－及びＭＫ３－欠損マウスは、エンドトキシンショックに対して耐性を一切示さず、又は、リポポリサッカリド－（ＬＰＳ）－誘導サイトカイン生産における低下を一切示さないことが分かっている。対照的に、ＭＫ－２欠損マウスは、エンドトキシンショックに対する耐性及び正常に機能しない炎症応答を示し、並びに、ＴＮＦα、ＩＦＮγ及びＩＬ－６といったサイトカインの顕著に低下した生産を示す。したがって、ｐ３８／ＭＫ２の軸は特に、炎症促進性応答の媒介に必要十分である。
【0009】
最近、Ｄａｖｉｄｓｏｎら（２００４）、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐ３８ａｌｐｈａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：１１６５８－７１で、ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤の選択性を高める新規のアプローチが説明された。これらの研究では、ｐ３８依存性リン酸化及びＭＫ２の活性化を測定したアッセイを用いて高処理スクリーニングを行なった。ｐ３８：ＭＫ２複合体は、６ｎＭのＫｄと非常に安定する。ｐ３８のＭＫ２に対する結合親和性は、正荷電を持つ複数のアミノ酸残基を含むＭＫ２のＣ末端領域によって活発になる。ｐ３８：ＭＫ２複合体の結晶学的な研究は、ＭＫ２のＣ末端領域がｐ３８αの周りを包み込み、負荷電を持つＥＤ結合部位に結合することを示した。ｐ３８のＭＫ２に対する密接な結合は立体構造の変化を生じ得、ｐ３８：ＭＫ２相互作用
に特異的に依存するであろう阻害剤のための結合ポケットをさらに提供し得る。
に特異的に依存するであろう阻害剤のための結合ポケットをさらに提供し得る。
【0010】
ｐ３８：ＭＫ２相互作用を活用してＭＫ２をｐ３８基質として使用し、興味深い特性を示すｐ３８αの新規阻害剤が発見された（Ｄａｖｉｄｓｏｎら）。この阻害剤は、ＭＫ２のｐ３８α依存性リン酸化を阻害する（Ｋｉおよそ３００ｎＭ）一方で、ＡＴＦ２のｐ３８α依存性リン酸化（Ｋｉおよそ２０ｕＭ超）は省くことで、基質選択性を示した。この新規阻害剤は、全てのｐ３８の基質のｐ３８依存性リン酸化を遮断する従来のｐ３８ＡＴＰ競合的阻害剤と比較すると、機能において独特である。第２の独立した研究もまた、独自の機構的特性を有するｐ３８阻害剤を説明する。この研究は、ＭＫ２のｐ３８依存性リン酸化の選択性阻害のための新規の機構を示す。前のＤａｖｉｄｓｏｎらによる研究と違って、これらの機構的に独特な化合物は、ＡＴＰと競合し、ｐ３８／ＭＫ２複合体を安定させる。これらを一緒に踏まえると、これら２つの研究は、選択性ｐ３８／ＭＫ２軸の遮断は小分子阻害剤によって達成可能であるという概念を明らかに証明する。従来のｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤と比較すると、これらのｐ３８／ＭＫ２阻害剤は、疾患の動物モデル又はヒトの臨床の場で、効力を保持又は強化し、及び、改善した安全性の特徴を示すはずである。
【0011】
炎症サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ－６）及び炎症の原因である酵素（ＣＯＸ－２、ｉＮＯＳ及びＭＭＰ）の制御におけるｐ３８／ＭＫ２の役割のために、ｐ３８／ＭＫ２は魅力的な薬剤の標的である。複数の古典的ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤が、臨床試験での試験に達している。これら候補者の何人かは安全上又は他の理由で失敗したが、複数人は、関節リウマチ、疼痛、クローン病、急性冠症候群、多発性骨髄腫及び慢性閉塞性肺疾患といった疾患で臨床データを報告した。これらの疾患に加え、このサイトカインの生合成及び活性におけるｐ３８ＭＡＰＫ経路に関する重要な役割をもとに、複数のＩＬ－１β介在疾患がｐ３８阻害剤の影響を受け得る。これらの疾患としては、とりわけ、クリオピリン関連周期性障害（ＣＡＰＳ）のファミリー、慢性痛風、糖尿病、スチル病、家族性地中海熱が挙げられる。
【0012】
関節リウマチ（ＲＡ）は、軟骨及び骨の破壊につながる関節滑膜の炎症を特徴とする、全身性の自己免疫性慢性炎症性疾患である。ＲＡの現在の治療としては経口疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（メトトレキサート、レフルノミド、スルファサラジン）、及び、ＲＡ病変形成に関する２つの重要な炎症促進性サイトカインであるＩＬ－１（Ａｎｋｉｎｒａ（登録商標））又はＴＮＦα（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）及びＨｕｍｉｒａ（登録商標））に対して特異的に指向性である非経口投与の生物剤が挙げられる。後者のこれら薬剤のより優れた効能は、可能性のある欠点によって多少相殺され、当該欠点としては、非経口投与の必要性、難しい用量漸増法、長期の血漿内半減期による不十分な可逆性、宿主中和抗体応答の誘導及び高い治療費が挙げられる。ＲＡ病変形成において中心的な役割を果たすと考えられる幅広い範囲の炎症促進性メディエーター（ＴＮＦα、ＩＬ－１β及びＩＬ－６が挙げられる）を阻害するｐ３８阻害剤の潜在能力にもとづくと、ｐ３８阻害剤は、単一のサイトカイン調節（例えば、ＴＮＦα）に制限した生態に同等、又はより優れた臨床効果を有するだろうと予測される。向上した効能を有する経口投与のＤＭＡＲＤは、投与の利便性及び遵守、注射部位／アレルギー反応の欠如、優れた用量設定性及び品物の望ましいコストの点で、患者及び医師の双方に複数の利点を提供する。したがって、安全で効果的なｐ３８阻害剤は、潜在的に、未だ対処されていない明らかな医療上の必要性を満たし、ＲＡに取り組む患者及び医師のために顕著な価値をもたらす高い潜在能力を約束する。
【0013】
複数の古典的ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤が、臨床試験での試験に達している。これら候補者の何人かは安全上又は他の理由で失敗したが、複数人は、関節リウマチ、疼痛、クローン病、急性冠症候群、多発性骨髄腫及び慢性閉塞性肺疾患といった疾患で臨床データを報告
した。これらの疾患に加え、このサイトカインの生合成及び活性におけるｐ３８ＭＡＰＫ経路に関する重要な役割をもとに、複数のＩＬ－ｉｐ介在疾患がｐ３８阻害剤の影響を受け得る。これらの疾患としては、とりわけ、クリオピリン関連周期性障害（ＣＡＰＳ）のファミリー、慢性痛風、糖尿病、スチル病、家族性地中海熱が挙げられる。
した。これらの疾患に加え、このサイトカインの生合成及び活性におけるｐ３８ＭＡＰＫ経路に関する重要な役割をもとに、複数のＩＬ－ｉｐ介在疾患がｐ３８阻害剤の影響を受け得る。これらの疾患としては、とりわけ、クリオピリン関連周期性障害（ＣＡＰＳ）のファミリー、慢性痛風、糖尿病、スチル病、家族性地中海熱が挙げられる。
【0014】
ヒトの炎症経路に加え、ｐ３８ＭＡＰＫはイヌのＢ細胞成長及び生存に関連づけられる。Ｂ細胞成長におけるｐ３８ＭＡＰＫの役割は、この酵素の阻害がイヌのＢ細胞リンパ腫の治療に治療上効果を有し得ることを示す。イヌのリンパ腫は、イヌの腫瘍の１０～２５％及び造血器腫瘍の８０％超に相当する、ペット動物で診断される中で最も多い悪性腫瘍である。経口で利用可能な、選択性Ｂ細胞成長阻害剤は、未だ対処されていない大きな医療上の必要性を満たすであろう。
【0015】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２０００年３月３０日公開の特許文献１に記載されている。当該出願に記載される化合物は、置換尿素化合物のクラスを包含する。
【0016】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２０００年１１月３０日公開の特許文献２に記載されている。当該出願に記載される化合物は、インドール系化合物のクラスを包含する。
【0017】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２００２年５月３０日公開の特許文献３に記載されている。当該出願に記載される化合物は、結合インドール系誘導体のクラスを包含する。
【0018】
循環器疾患、代謝疾患及び／又は中枢神経系疾患の予防又は治療に役立つ化合物が、２００８年５月２９日公開の特許文献４に記載されている。当該出願に記載される化合物は、アルキル－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニル断片は、シクロプロピルラジカルで置換されており、例えば、６－ブチル－３－（３－シクロプロピルフェニル）－２－メチル－５－｛［２’－（５－オキソ－４，５－ジヒドロ－１，２，４－オキサジゾール－３－イル）ビフェニル－４－イル］メチル｝ピリミジン－４（３Ｈ）－オンである。
【0019】
ｐ３８キナーゼ及びｐ３８キナーゼ経路の様々な可能性のある阻害剤又は修飾因子が、２００５年３月３日公開の特許文献５に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリジノン－ピリジル化合物を包含し、ここで、ピリジル断片は様々なラジカルで置換されており、当該ラジカルとしては、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、ハロ、シアノ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、メトキシカルボニル及びヒドロキシアルケニルイミノラジカルが挙げられる。
【0020】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２００７年７月１９日公開の特許文献６に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニル断片は、メチルアミドラジカルで置換されている。
【0021】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２００４年１０月１４日公開の特
許文献７に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニル断片は、カルボニル架橋によってピペラジニル又はモルホリニルラジカルで置換されている。
許文献７に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニル断片は、カルボニル架橋によってピペラジニル又はモルホリニルラジカルで置換されている。
【0022】
ピリミジノン誘導体（タンパク質キナーゼの阻害剤として、炎症性疾患及び特定の種類のがんといった異常なタンパク質キナーゼ活性に関連する障害を治療するのに役立つ）が、２００８年７月１９日公開の特許文献８に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニル断片は、アミドアルキルアミド架橋によってシクロプロパニル又はモルホリニルラジカルで置換されている。
【0023】
ピリミジノン誘導体（タンパク質キナーゼの阻害剤として、炎症性疾患及び特定の種類のがんといった異常なタンパク質キナーゼ活性に関連する障害を治療するのに役立つ）が、２００８年１２月１８日公開の特許文献９に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリミジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニルラジカルは、アミド架橋によってシクロペンチル又はシクロヘキシルラジカルで置換されている。
【0024】
無制御のｐ３８ＭＡＰキナーゼ及び／又はＴＮＦ活性によって引き起こされる、又は、悪化する疾患及び状態を治療するのに役立つ化合物が、２００７年６月２７日公開の特許文献１０に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ジ－フルオロフェニル－メトキシ－ピリジノン－フェニル化合物を包含し、ここで、フェニルラジカルは、５環員ヘテロアリールラジカル（例えば、ピラゾリル又はイミダゾリル）で置換されている。
【0025】
リンパ腫及び自己炎症性疾患といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療に役立つ置換ピリジノン－ピリジニル化合物が、２０１２年６月７日公開の特許文献１１に記載されている。当該出願に記載される化合物は、ハロ及びアルキル置換基を有するピリジノン－ピリジニルの重心を有する。
【0026】
特許文献１１の対応出願が２０１２年６月１４日に特許文献１２として公開された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0027】
【文献】国際公開第２０００／０１７１７５号
【文献】国際公開第２０００／０７１５３５号
【文献】国際公開第２００２／０４２２９２号
【文献】国際公開第２００８／０６２９０５号
【文献】国際公開第２００５／０１８５５７号
【文献】米国特許第２００７／０１６７６２１号
【文献】国際公開第２００４／０８７６７７号
【文献】国際公開第２００７／０８１９０１号
【文献】国際公開第２００８／１５３９４２号
【文献】米国特許第７，０６７，５４０号
【文献】米国特許第２０１２／０１４２７０９号
【文献】国際公開第２０１２／０７８６８４号
【発明の概要】
【0028】
１つの実施形態では、式（Ｉ）の化合物：
【0029】
【化1】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され；ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＸは、詳細な説明で定義される通りである。
【0030】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物又はその薬剤的に許容できる塩及び薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物が提供される。
【0031】
様々な実施形態で、医薬組成物は１つ以上の追加の薬剤的に活性な化合物をさらに含む。
【0032】
さらに別の実施形態では、状態を治療する方法が提供され、当該方法は、対象に治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含み、ここで、治療する状態としては、限定はしないが、自己免疫性障害、慢性炎症性障害、急性炎症性障害、自己炎症性障害、疼痛、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、線維症、代謝疾患、がん、腫瘍、白血病、リンパ腫及び関節リウマチが挙げられる。
【0033】
様々な実施形態で、方法には、式（Ｉ）の化合物及び少なくとも１つの追加の薬剤的に活性な化合物の組合せを投与することが含まれる。
【0034】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物又はその薬剤的に許容できる塩を調製する方法が提供される。
【0035】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物又はその薬剤的に許容できる塩を作製するのに役立つ中間体が提供される。
上記の化合物は、次の詳細な説明でより十分に説明される。
上記の化合物は、次の詳細な説明でより十分に説明される。
【発明を実施するための形態】
【0036】
次の説明は、事実上単に例示的なものであり、本開示、本出願又は本使用を限定する意図はない。
【0037】
Ａ．定義
化合物の説明における一般名の使用を、明確にするためにここで定義する。
化合物の説明における一般名の使用を、明確にするためにここで定義する。
【0038】
本明細書では「置換基」、「ラジカル」、「基」、「部分」及び「断片」という語を同じ意味で使用する。
【0039】
「ヒドリド」という語句は、単一の－Ｈ原子（Ｈ）を意味し、記号「Ｈ」又は語句「水素」と同じ意味で使用され得る。
【0040】
置換基が「置換されていてもよい」と説明される場合は、置換基は（１）置換されていないか、又は、（２）置換されているかのいずれかであり得る。置換可能な位置が置換されていない場合、デフォルトの置換基はヒドリドラジカルである。
【0041】
本明細書で使用される単数形「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、文脈によって明らかに指示されない限りは、複数の参照を包含し得る。
【0042】
「アルキル」という語句は、単独、又は、「ハロアルキル」及び「アルキルアリール」といった他の語句内でのいずれかで、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子を含む非環式アルキルラジカルを指す。いくつかの実施形態では、アルキルはＣ１－Ｃ１０アルキル基又はＣ１－Ｃ６アルキル基である。アルキル基の例としては、限定はしないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル及びデシルが挙げられる。
【0043】
「ハロアルキル」という語句は、１つ以上のハロ基で置換されたアルキル部分を指す。ハロアルキル基の例としては－ＣＦ３及び－ＣＨＦ２が挙げられる。
【0044】
「アルコキシ」という語句は、ＲＯ－であり、ここでＲは本明細書で定義されるアルキルである。アルコキシ基の非制限的な例としては、メトキシ、エトキシ及びプロポキシである。アルキルオキシ及びアルコキシという語句は、同じ意味で使用され得る。
【0045】
「シアノ」という語句は、４つの共有結合のうち、窒素原子で共有する３つの共有結合を有する炭素ラジカルである。
【0046】
「アリール」という語句は、各環に最大６個の原子を有するいずれかの単環式、二環式又は三環式炭素環を指し、ここで、少なくとも１つの環は芳香族、又は、５又は６環員シクロアルキル基と縮合した炭素環式芳香族基を包含する５～１４個の炭素原子の芳香族環系である。アリール基の例としては、限定はしないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル及びインダニルが挙げられる。
【0047】
「アリールアルキル」という語句は、アリール置換アルキルラジカルを包含し、「アラルキル」という語句と同じ意味で使用され得る。例としては、ベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチル及びジフェニルエチルが挙げられる。ベンジル及びフェニルメチルという語句は、同じ意味で使用される。
【0048】
「アリールオキシ」という語句は、ＲＯ－であり、ここで、Ｒはアリールである。「アリールチオ」はＲＳ－であり、ここでＲはアリールである。
【0049】
「ヘテロアリール」という語句は、各環に最大６個の原子を有する単環式、二環式又は三環式環を指し、ここで、少なくとも１つの環は芳香族であり、Ｎ、Ｏ及びＳから成る群から選択される１～４個のヘテロ原子を環に含む。ヘテロアリールの非制限的な例としては、ピリジル、チエニル、フラニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ピラニル、ピラゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾイル、ピロリル、ピリダジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフラニル、
ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、イソインドリル、ベンゾトリアゾリル、プリニル、チアナフテニル及びピラジニルが挙げられる。ヘテロアリールの連結は、芳香族環を介して生じ得、又は、ヘテロアリールが二環式又は三環式であり、環の１つが芳香族ではなく、若しくは、ヘテロ原子を一切含まない場合は、非芳香族環又はヘテロ原子を一切含んでいない環によって生じ得る。「ヘテロアリール」はまた、ヘテロアリールを含んでいるいずれかの窒素のＮ－オキシド誘導体を包含することが理解される。
ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、イソインドリル、ベンゾトリアゾリル、プリニル、チアナフテニル及びピラジニルが挙げられる。ヘテロアリールの連結は、芳香族環を介して生じ得、又は、ヘテロアリールが二環式又は三環式であり、環の１つが芳香族ではなく、若しくは、ヘテロ原子を一切含まない場合は、非芳香族環又はヘテロ原子を一切含んでいない環によって生じ得る。「ヘテロアリール」はまた、ヘテロアリールを含んでいるいずれかの窒素のＮ－オキシド誘導体を包含することが理解される。
【0050】
「ヒドロキシアルキル」という語句は、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換された直鎖又は分岐鎖一価Ｃ１－Ｃ１０炭化水素基を指し、ヒドロキシアルキル基の例としては、限定はしないが、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル及びヒドロキシブチルが挙げられる。
【0051】
ヒドロカルビル置換基の炭素原子の数は、接頭辞「ＣＸ－ＣＹ」で示され得、ここでＸは置換基の炭素原子の最小数、Ｙは置換基の炭素原子の最大数である。
【0052】
「薬剤的に許容可能な」という語句は、医薬調製物での使用に適することを意味し、そのような使用のために安全であると概ね考えられ、そのような使用に関して国家政府又は州政府の規制当局によって公的に承認され、又は、米国薬局方又は他の一般的に認知される薬局方で動物、及びより具体的にはヒトでの使用に関して列挙されている。
【0053】
「薬剤的に許容可能な塩」という語句は、所望する薬理学的な活性を強化し得る塩を指す。薬剤的に許容可能な塩の例としては、無機又は有機酸と形成した酸付加塩、金属塩、及びアミン塩が挙げられる。無機酸と形成した酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸との塩が挙げられる。酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ｏ－（４－ヒドロキシ－ベンゾイル）－安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１、２－エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタン－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－クロロベンゼンスルホン酸、２－ナフタリンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４－メチル－ビシクロ［２．２．２］オクタ－２－エン１－カルボン酸、グルコ－ヘプトン酸、４、４’－メチレンビス（３－ヒドロキシ－２－ナフトエ）酸、３－フェニルプロピオン酸、トリメチル－酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシ－ナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸及びムコン酸等の有機酸と形成した酸付加塩の例。金属塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、鉄及び亜鉛イオンとの塩が挙げられる。アミン塩の例としては、アンモニア及びカルボン酸と塩を形成するのに十分強力な有機窒素性塩基との塩が挙げられる。
【0054】
「治療上有効な量」という語句は、疾患の治療のために対象に投与された時に、疾患の治療に効果をもたらすのに十分な量の化合物を指す。「治療上有効な量」は、化合物、疾患及びその重度、治療する対象の年齢、体重等によって変化し得る。
【0055】
本発明の化合物は、互変異性形態、幾何形態又は立体異性形態で存在し得る。化合物の対応するエステル、代謝物、オキシム、プロドラッグ、オニウム及びＮ－オキシドもまた、本発明によって包含される。本発明は、本発明の範囲に包含される、シス－及びトランス幾何異性体、Ｅ－及びＺ－幾何異性体、Ｒ－及びＳ－互変異性体、ジアステレオマー、アトロプ異性体、ｄ－異性体、ｌ－異性体、異性体及びそのラセミ体の混合物を包含する、そのような化合物全てを企図する。
【0056】
「シス」及び「トランス」という語句は、二重結合で結合した２つの炭素原子が、二重結合の同じ側にラジカル原子（「シス」）、又は、二重結合の反対側にラジカル原子（「トランス」）をそれぞれ有する幾何異性の形態を指す。
【0057】
説明される化合物のいくつかは、１つ以上の立体中心を有し、存在する各立体中心に関してＲ、Ｓ並びにＲ及びＳ形態の混合物を包含することが意図される。
【0058】
「アトロプ異性」という語句は、置換基の立体の歪みによって一重結合の周囲で回転が阻止されることから生じる異性の種類を指す。この現象によって、軸不斉を示す立体異性体が作られる。
【0059】
次のスキームは、本発明の特定のピリジノン－ピリジン化合物を参照して「アトロプ異性」を例示する：
【0060】
【化2】
【0061】
表題化合物のＢ及びＣ環の間の結合は妨害されており、容易な回転を可能にしない。立体の歪みの回転への障害は、各配座異性体が隔離され得るほど十分高い。本発明の化合物は、アトロプ異性体、すなわち、キラル回転異性体としても存在し得る。本発明はラセミ体、分割されたアトロプ異性体、及びその混合物を包含する。アトロプ異性体は、二酸化炭素及びエタノール／メタノールの移動相を用いる超臨界流体クロマトグラフィーを介して分離され得る。
【0062】
アトロプ異性体は通常安定であるが、しばしば熱的に平衡化され得る。アトロプ異性体は、同じであるが、反対の旋光性を有するだろう。キラル化合物のように、各アトロプ異性体は、酵素又は受容体と結合する場合に異なる特性を有し得、１つの異性体がしばしばもう一方よりも強力である。アトロプ異性体はしばしば医薬剤として使用される。公知の例としてはバンコマイシン及び誘導体が挙げられる。
【0063】
「３，５－ジフルオロピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0064】
【化3】
を指す。
【0065】
「３－フルオロピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分
【0066】
【化4】
を指す。
【0067】
「５－フルオロ－３－メチルピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0068】
【化5】
を指す。
【0069】
「６－フルオロピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0070】
【化6】
を指す。
【0071】
「６－フルオロ－４－メチルピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0072】
【化7】
を指す。
【0073】
「３－フルオロ－５－メチルピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0074】
【化8】
を指す。
【0075】
「５－フルオロピリジン－２－イル」という語句は、構造の部分：
【0076】
【化9】
を指す。
【0077】
「４－フルオロピリジン－３－イル」という語句は、構造の部分：
【0078】
【化10】
を指す。
【0079】
「５－フルオロピリミジン－４－イル」という語句は、構造の部分：
【0080】
【化11】
を指す。
【0081】
【表1-1】
【表1-2】
【0082】
Ｂ．化合物
本開示は、式（Ｉ）の構造を有する化合物：
本開示は、式（Ｉ）の構造を有する化合物：
【0083】
【化12】
又はその薬剤的に許容できる塩を提供し、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はＨ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ又は－ＣＦ３から成る群から選択され；
Ｒ２はＨ、メチル、シアノ又はフルオロから成る群から選択され；
Ｒ３は：
【0084】
【化13】
から成る群から選択され；
Ｒ４はＨ、メチル、ＯＨ及び－Ｏ－ＣＨ３から成る群から選択され；
Ｒ５はＨ又はＣ１－Ｃ３アルキルであり；
ｍは１又は２であり；
ｎは０又は１であり；
ｐは１であり；及び、
ｑは０又は１である。
【0085】
別の実施形態では、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【0086】
【化14】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はＨ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ又は－ＣＦ３から成る群から選択され；
Ｒ２はＨ、メチル、シアノ又はフルオロから成る群から選択され；
Ｒ４はＨ、メチル、ＯＨ及び－ＯＣＨ３から成る群から選択され；
Ｒ５はＨ又はＣ１－Ｃ３アルキルであり；
ｍは１又は２であり；及び、
ｎは０又は１である。
【0087】
式（ＩＩ）化合物の非制限的な例としては次の化合物及びその薬剤的に許容可能な塩が挙げられる：
【0088】
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【表2-5】
【表2-6】
【表2-7】
【表2-8】
【表2-9】
【表2-10】
【0089】
別の実施形態では、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【0090】
【化15】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はクロロ又はブロモであり；及び、
Ｒ２は－Ｈ又はメチルである。
【0091】
式（ＩＩＩ）化合物の非制限的な例としては、次の化合物及びその薬剤的に許容可能な塩が挙げられる：
【0092】
【表3-1】
【表3-2】
【0093】
別の実施形態では、式（ＩＶ）の構造を有する化合物：
【0094】
【化16】
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はＨ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ又は－ＣＦ３から成る群から選択され；
Ｒ２はＨ、メチル、シアノ又はフルオロから成る群から選択され；
Ｒ４はＨ、メチル、ＯＨ及び－ＯＣＨ３から成る群から選択され；
Ｒ５はＨ又はＣ１－Ｃ３アルキルであり；
ｍは１又は２であり；及び、
ｎは０又は１である。
【0095】
別の実施形態では、式（Ｖ）の構造を有する化合物：
【0096】
【化17】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はクロロ又はブロモであり；及び、
Ｒ２は－Ｈ又はメチルである。
【0097】
式（Ｖ）化合物の非制限的な例としては次の化合物及びその薬剤的に許容可能な塩が挙げられる：
【0098】
【表4-1】
【表4-2】
【0099】
別の実施形態では、式（ＶＩ）の構造を有する化合物：
【0100】
【化18】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はＨ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ又は－ＣＦ３から成る群から選択され；
Ｒ２はＨ、メチル、シアノ又はフルオロから成る群から選択され；
Ｒ４はＨ、メチル、ＯＨ及び－ＯＣＨ３から成る群から選択され；
Ｒ５はＨ又はＣ１－Ｃ３アルキルであり；
ｐは１であり；及び、
ｑは０又は１である。
【0101】
別の実施形態では、式（ＶＩＩ）の構造を有する化合物：
【0102】
【化19】
又はその薬剤的に許容できる塩が提供され、ここで：
ＸはＣＨ又はＮであり；
Ｒ１はクロロ又はブロモであり；及び、
Ｒ２は－Ｈ又はメチルである。
【0103】
式（ＶＩＩ）化合物の非制限的な例としては、次の化合物及びその薬剤的に許容可能な塩が挙げられる：
【0104】
【表5-1】
【表5-2】
【0105】
別の実施形態では、式Ｗの化合物を作製する方法が提供され、当該方法は：
極性溶媒中で式Ｙの化合物を化合物Ｚに接触させて混合物を形成すること；
混合物を十分な温度で、及び、十分な時間の間加熱すること；並びに、
約２未満のｐＫａを有する酸の存在下で、式Ｗの構造を有する反応生成物を形成することを含み：
極性溶媒中で式Ｙの化合物を化合物Ｚに接触させて混合物を形成すること；
混合物を十分な温度で、及び、十分な時間の間加熱すること；並びに、
約２未満のｐＫａを有する酸の存在下で、式Ｗの構造を有する反応生成物を形成することを含み：
【0106】
【化20】
ここで、Ｒ１０はブロモ又はクロロのいずれかである。別の実施形態では、極性溶媒はジオキサンである。別の実施形態では、温度は約７０℃～約１０５℃の範囲である。別の実施形態では、反応生成物を形成するのに十分な時間は２～約６時間の範囲である。別の実施形態では、酸は硫酸である。別の実施形態では、Ｒ１０はクロロである。別の実施形態では、Ｒ１０はブロモである。
【0107】
別の実施形態では、治療上有効な量の式Ｉの化合物又はその薬剤的に許容できる塩及び薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物が提供される。
【0108】
別の実施形態では、治療上有効な量の式Ｉの化合物又はその薬剤的に許容できる塩、薬剤的に許容可能な担体、及び、抗炎症薬、抗アテローム性動脈硬化薬、免疫抑制薬、免疫調節薬、細胞分裂阻害薬、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン阻害薬及び細胞接着分子の阻害剤から成る群から選択される活性医薬成分を含む医薬組成物が提供される。
【0109】
別の実施形態では、状態を治療する方法が提供され、当該方法は、治療上有効な量の式Ｉの化合物又はその薬剤的に許容可能な塩を、それを必要とする対象に投与することを含み、ここで、状態は、自己免疫性障害、慢性炎症性障害、急性炎症性障害、自己炎症性障害、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、線維症、代謝疾患、がん、腫瘍、白血病、リンパ腫から成る群から選択される。別の実施形態では、対象はイヌ及びヒトから選択される哺乳動物である。別の実施形態では、状態はリンパ腫である。別の実施形態では、状態は、関節リウマチである。
【0110】
Ｃ．一般的な合成スキーム
本発明の化合物は、以下で詳細を記す一般的な合成スキーム及び実験手順で例示される方法を用いて調製され得る。これらの一般的な合成スキーム及び実験手順は例示の目的で提示され、限定することは意図されていない。本発明の化合物を調製するために用いる出発材料は市販されており、又は、当該技術分野では公知の通常の方法を用いて調製され得る。
本発明の化合物は、以下で詳細を記す一般的な合成スキーム及び実験手順で例示される方法を用いて調製され得る。これらの一般的な合成スキーム及び実験手順は例示の目的で提示され、限定することは意図されていない。本発明の化合物を調製するために用いる出発材料は市販されており、又は、当該技術分野では公知の通常の方法を用いて調製され得る。
【0111】
本発明の化合物の調製のための代表的な手順がスキーム１及び２で説明される。置換ピリジン出発材料は購入し得、又は、中間体として提供される代表的な手順と一緒に当該技術分野で公知の方法を用いて調製され得る。スキーム１は完全に合成された１，４’－ビピリジン－２－オンの合成に焦点を当てる。ピリジノン１ｃの合成は、ジオキサンといった溶媒中でアセタール１ａ及びピリジン１ｂを反応させることで達成され得る。１ｃのフェノールの所望するヘテロアリール置換基（Ｒ３）とのアルキル化によって、アルキル化１ｄを得る。ピリジノン１ｄはＲ２及びＸ置換基次第で、３つの経路のうち１つを介して
表題化合物へ転化され得る。例えば、Ｒ２がメチルの場合、パラジウム触媒の存在下での１ｄのビニルスズ試薬との反応によってメチルケトン１ｉが提供される。イソプロパノールといった溶媒中でＮ－クロロサクシニミド（又は対応するブロモが所望される場合はＮ－ブロモスクシンイミド）を用いる１ｉのハロゲン化によって、１ｊが提供される。１ｊのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応によるin situエナミン形
成によって、中間体が提供され、当該中間体は次いで、ＤＭＦといった溶媒中で２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオンアミジンと反応させ、ピリジノン１ｇを得る。又は、ＸがＮである場合、そのハライドをエタノール中のパラジウム触媒の存在下で一酸化炭素と処理することで、１ｄはカルボキシル化され得、エステル１ｅを得る。水中水酸化リチウムでの１ｅのエステルを加水分解し、続いて、中間体カルボン酸をＣＤＩで処理、次にワインレブ条件化でメトキシメチルアミン及びジイソプロピルエチルアミンといったアミン塩基で処理し、１ｈを得る。ＴＨＦといった溶媒中でのワインレブアミド１ｈの所望するＲ２グリナード（Ｇｒｉｎａｒｄ）試薬との反応により、１ｉが提供される。ケトン１ｉは次いで１ｊに転化され、次いで、上記の通り、最終化合物１ｇに転化される。ピリジン又はピリミジンＤ環を準備する別の選択肢は、適切なパラジウム触媒を用いるスズキ条件下で１ｄを所望するボロン酸で反応させ、結合中間体を得ることであり、当該結合中間体は、次いで、ＮＣＳ又はＮＢＳを用いてハロゲン化され、１ｆが提供される。ＴＨＦといった溶媒中で臭化メチルマグネシウムを１ｆに添加することで、表題化合物１ｇが提供される。
スキーム１：
表題化合物へ転化され得る。例えば、Ｒ２がメチルの場合、パラジウム触媒の存在下での１ｄのビニルスズ試薬との反応によってメチルケトン１ｉが提供される。イソプロパノールといった溶媒中でＮ－クロロサクシニミド（又は対応するブロモが所望される場合はＮ－ブロモスクシンイミド）を用いる１ｉのハロゲン化によって、１ｊが提供される。１ｊのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応によるin situエナミン形
成によって、中間体が提供され、当該中間体は次いで、ＤＭＦといった溶媒中で２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオンアミジンと反応させ、ピリジノン１ｇを得る。又は、ＸがＮである場合、そのハライドをエタノール中のパラジウム触媒の存在下で一酸化炭素と処理することで、１ｄはカルボキシル化され得、エステル１ｅを得る。水中水酸化リチウムでの１ｅのエステルを加水分解し、続いて、中間体カルボン酸をＣＤＩで処理、次にワインレブ条件化でメトキシメチルアミン及びジイソプロピルエチルアミンといったアミン塩基で処理し、１ｈを得る。ＴＨＦといった溶媒中でのワインレブアミド１ｈの所望するＲ２グリナード（Ｇｒｉｎａｒｄ）試薬との反応により、１ｉが提供される。ケトン１ｉは次いで１ｊに転化され、次いで、上記の通り、最終化合物１ｇに転化される。ピリジン又はピリミジンＤ環を準備する別の選択肢は、適切なパラジウム触媒を用いるスズキ条件下で１ｄを所望するボロン酸で反応させ、結合中間体を得ることであり、当該結合中間体は、次いで、ＮＣＳ又はＮＢＳを用いてハロゲン化され、１ｆが提供される。ＴＨＦといった溶媒中で臭化メチルマグネシウムを１ｆに添加することで、表題化合物１ｇが提供される。
スキーム１：
【0112】
【化21】
【0113】
ベンジル置換基Ｒ３が最終工程で添加される所望の化合物の合成がスキーム２に示される。ピリジノン２ｃは、スキーム１で説明した通り、ジオキサンといった溶媒中でアセタール２ａ及びピリジン２ｂを反応させることで達成され得る。パラ－メトキシベンジルブロミドでの２ｃのフェノールの保護によってベンジル化２ｄを得る。パラジウム触媒の存在下におけるビニルスズ試薬と２ｄの反応によってメチルケトン２ｅが提供される。イソプロパノールといった溶媒中で、Ｎ－クロロサクシニミド（又は対応するブロモが所望される場合はＮ－ブロモスクシンイミド）を用いて１ｅをハロゲン化することで、２ｆを提
供する。２ｆのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応によるin situエナミン形成によって、中間体が提供され、当該中間体は次いで、ＤＭＦといった溶媒
中で２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオンアミジンと反応させ、ピリミジノン２ｇを得る。２ｇをＴＦＡ又はＨＣｌといった酸で処理することでベンジル基を脱保護し、２ｈが提供される。フェノール２ｈを所望するベンジルハライド置換基（Ｒ３ＣＨ２Ｂｒ又はＲ３ＣＨ２Ｃｌ）でアルキル化することで、所望するピリジノン２ｉが提供される。
スキーム２
供する。２ｆのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応によるin situエナミン形成によって、中間体が提供され、当該中間体は次いで、ＤＭＦといった溶媒
中で２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオンアミジンと反応させ、ピリミジノン２ｇを得る。２ｇをＴＦＡ又はＨＣｌといった酸で処理することでベンジル基を脱保護し、２ｈが提供される。フェノール２ｈを所望するベンジルハライド置換基（Ｒ３ＣＨ２Ｂｒ又はＲ３ＣＨ２Ｃｌ）でアルキル化することで、所望するピリジノン２ｉが提供される。
スキーム２
【0114】
【化22】
【実施例】
【0115】
Ｄ．種化合物の調製
中間体
中間体Ｉ：２－クロロメチル－３，５－ジフルオロ－ピリジンの調製
中間体
中間体Ｉ：２－クロロメチル－３，５－ジフルオロ－ピリジンの調製
【0116】
【化23】
工程Ａ：３，５－ジフルオロ－ピリジン－２－カルボン酸エチルエステルの調製
【0117】
【化24】
氷水浴を用いて冷やしたエタノール（５ｍＬ）中の３，５－ジフルオロピリジン－２－
カルボン酸の懸濁液（２．０ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）に、滴下しながら塩化チオニル（２ｍＬ）を添加した。溶液を６０℃で３時間加熱した。反応物を周囲温度まで戻し、真空中で濃縮し、エチルエステル、塩酸塩を黄色の油状物質（２．５ｇ）として得た。
工程Ｂ：（３，５－ジフルオロ－ピリジン－２－イル）－メタノールの調製
【0118】
【化25】
氷水浴を用いて冷やしたエタノール（１０ｍＬ）中のパートＡの３，５－ジフルオロ－ピリジン－２－カルボン酸エチルエステルの溶液（２．５ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）に、小分けして水素化ホウ素ナトリウム（１．４３ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を０℃で３０分間撹拌し、周囲温度で２時間撹拌した。反応物を０℃まで戻し、飽和塩化アンモニウムを滴下して加えた。溶媒を真空中で除去し、結果として得られる残渣を酢酸エチルと水で分けた。有機層を飽和塩化アンモニウム、水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。スラリーをろ過及び濃縮し、アルコールを黄色の油状物質（１．８ｇ）として得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ１４６（Ｍ＋Ｈ）。
【0119】
工程Ｃ：２－クロロメチル－３，５－ジフルオロ－ピリジンの調製
【0120】
【化26】
【0121】
化合物番号４９、実施例Ａ：３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンの調製
【0122】
【化27】
【0123】
工程Ａ：２’－クロロ－４－ヒドロキシ－６，５’－ジメチル－［１，４’］ビピリジニ
ル－２－オンの調製
ル－２－オンの調製
【0124】
【化28】
【0125】
ゴム製セプタムを取り付けたねじ蓋のバイアルに、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１１（２１）、４９１０－４９１３；２００９に記載されている通りに調製した２，２－ジメチル－６－（２－オキソ－プロピル）－［１，３］ジオキサン－４－オン（５００ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－５－メチル－ピリジン－４－イルアミン（５７５ｍｇ、４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を添加した。混合物を無水１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解した。混合物が均質になると、バイアルを攪拌機／９０℃に設定したホットプレート上に置いた。反応容器をこの温度で３．５時間加熱した。反応バイアルを熱から外し、ＨＰＬＣで分析し、ＨＰＬＣは、反応が９５％超で完成したことを示した。小瓶をホットプレート上に戻した。加熱した混合物に、Ｈ２ＳＯ４（２５０μＬ）を添加し、反応を１時間加熱した。反応バイアルを熱から外し、周囲温度まで冷やした後、開いたバイアル頂部の上で空気流を流すことでジオキサンを除去し、茶色の残渣を得た。水（約４ｍＬ）をバイアルに添加し、混合物を３０分間撹拌した。結果として得られた黄褐色の固体を、追加した水及びジエチルエーテルから洗浄してろ過し、所望した生成物（５３１ｍｇ、硫酸塩であることをもとに５７％）を黄褐色の固体として得、ＨＰＬＣによると約９５％の純度であった：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ２５０（Ｍ＋Ｈ）。
【0126】
工程Ｂ：２’－クロロ－４－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンの調製
【0127】
【化29】
【0128】
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中のパートＡの２’－クロロ－４－ヒドロキシ－６，５’－ジメチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オン（６．０ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、４－メトキシベンジルクロリド（２．７３ｍＬ、２０．１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６．９３ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）及び１８－クラウン－６（１００ｍｇ）を添加した。スラリーを６０℃で３時間加熱し、周囲温度で１８時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと水で分けた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶液を真空中で濃縮し、茶色の油状物質を得た。順相クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン）によって、アルキル化生成物を淡黄色固体（４．６ｇ）として得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ３７１（Ｍ＋Ｈ）。
【0129】
工程Ｃ：２’－アセチル－４－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンの調製
【0130】
【化30】
【0131】
１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）中の、パートＢの２’－クロロ－４－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オン（４．６ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）、トリブチル（１－エトキシビニル）スズ（４．６ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（８７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＣＥＭ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（商標）のマイクロ波を用いて１３０℃で２時間照射した。結果として得られた暗色の溶液をセライトに通してろ過し、酢酸エチルですすいだ。ろ過物を濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解し、加水分解が完全になるまで濃ＨＣｌで処理した。溶液を真空中で濃縮し、順相クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン）を用いて精製し、黄色の油状物質（３．３ｇ）としてアセチル化合物を得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ３７９（Ｍ＋Ｈ）。
【0132】
工程Ｄ：２’－アセチル－３－クロロ－４－ヒドロキシ－５’－メチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オンの調製
【0133】
【化31】
【0134】
２－プロパノール（１００ｍＬ）中のパートＣの２’－アセチル－４－（（４－メトキシベンジル）オキシ）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オン（３．３ｇ、８．７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ－クロロサクシニミド（１．２７ｇ、９．６ｍｍｏｌ）及び１０滴のジクロロ酢酸を添加した。スラリーを６０℃で３時間加熱した。結果として得られたスラリーを濃縮し、残渣を酢酸エチルと水で分けた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶液を真空中で濃縮した。残渣をジクロロメタンに懸濁し、結果として得られた白色の固体を真空ろ過によって回収し、塩素化脱保護生成物（１．１６ｇ）を得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ２９３（Ｍ＋Ｈ）。
【0135】
工程Ｅ：２’－アセチル－３－クロロ－４－（３，５－ジフルオロ－ピリジン－２－イル
メトキシ）－５’－メチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オンの調製
メトキシ）－５’－メチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オンの調製
【0136】
【化32】
【0137】
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中のパートＤの２’－アセチル－３－クロロ－４－ヒドロキシ－５’－メチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オン（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロメチル－３，５－ジフルオロ－ピリジン（２７７ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５９０ｍｇ、４．２８ｍｍｏｌ）及び１８－クラウン－６（１０ｍｇ）を添加し、反応物を６０℃で４時間撹拌した。冷やした後、溶液を酢酸エチルと水で分けた。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶液をろ過及び真空中で濃縮した。粗物質を、順相クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン）を用いて精製し、アルキル化生成物を黄色の固体（３９７ｍｇ）として得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ４２０（Ｍ＋Ｈ）。
【0138】
工程Ｆ：３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンの調製
【0139】
【化33】
【0140】
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の工程Ｅからの２’－アセチル－３－クロロ－４－（３，５－ジフルオロ－ピリジン－２－イルメトキシ）－５’－メチル－［１，４’］ビピリジニル－２－オン（３９７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（０．１８ｍＬ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を５５℃まで１８時間加熱した。溶液を半分の体積まで濃縮し、２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオンアミジンＨＣｌ（１９５ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（３９３ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）を添加した。スラリーを７５℃で１８時間加熱した。スラリーを周囲温度まで戻し、酢酸エチルと水で分けた。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶液を濃縮し、順相クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン）を用いて精製し、表題化合物を淡黄色の固体（２５５ｍｇ、４６％）として得た：ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ５１４（Ｍ＋Ｈ）。
【0141】
３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンのキラル分割
【0142】
ラセミ体の３－クロロ－４－（（３，５－ジフルオロピリジン－２－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オン（２５０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を、二酸化炭素及びエタノールの移動相を有する超臨界流体クロマトグラフィー（Ｔｈａｒ８０、分取ＳＦＣ、ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＤ－Ｈ、２５０×３０ｍｍＩＤカラム）を用いて分離した。分離方法では、５０ｍＬ／分の流速及び１０分のサイクル時間で４０％エタノールのアイソクラティック方法を用いた。旋光度はＷＺＺ－２Ｓ旋光計を用いて決定した。
【0143】
１．７７分で溶出した速い異性体は１１５ｍｇのアトロプ異性体１をもたらした：［α］Ｄ
２０－６０．７°（ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９７（ｄ、Ｊ＝５．０９Ｈｚ、１Ｈ）、８．８６（ｓ、１Ｈ）、８．６９（ｓ、１Ｈ）、８．６１（ｓ、１Ｈ）、８．２４（ｄ、Ｊ＝５．０８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｔ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．５０（ｓ、２Ｈ）、５．２６（ｓ、１Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．９８（ｓ、３Ｈ）、１．５４（ｓ、３Ｈ）、１．５２（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ５１４（Ｍ＋Ｈ）。
【0144】
３．６８分で溶出した遅い異性体は、１１２ｍｇのアトロプ異性体２をもたらした：［α］Ｄ
２０＋６１．９°（ＣＨ３ＯＨ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δｐｐｍ ８．９７（ｄ、Ｊ＝５．０９Ｈｚ、１Ｈ）、８．８６（ｓ、１Ｈ）、８．６９（ｓ、１Ｈ）、８．６１（ｓ、１Ｈ）、８．２４（ｄ、Ｊ＝５．０８Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｔ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．５０（ｓ、２Ｈ）、５．２６（ｓ、１Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．９８（ｓ、３Ｈ）、１．５４（ｓ、３Ｈ）、１．５２（ｓ、３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｅ５１４（Ｍ＋Ｈ）。
【0145】
化合物番号６５、実施例Ｂ：３－クロロ－４－（（５－フルオロピリミジン－４－イル）メトキシ）－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンの調製
【0146】
【化34】
【0147】
表題化合物を、化合物４９、実施例Ａの工程Ｅまで従い、しかし３－クロロ－４－ヒドロキシ－２’－（２－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリミジン－４－イル）－５’，６－ジメチル－２Ｈ－［１，４’－ビピリジン］－２－オンを、２－（クロロメチル）－３，５－ジフルオロピリジンではなく４－（クロロメチル）－５－フルオロピリミジンでアルキル化することで調製し、所望するベンジルエーテルを得た。表題化合物を、化合物４９、実施例Ａ、工程Ｆの一般的な手順に従って調製した。
【0148】
Ｅ．治療の方法
本開示は、ある状態を有する、又はある状態を有しやすい対象のそのような状態を治療する方法をさらに提供し、当該方法は、対象に治療上有効な量の１つ以上の上記化合物を投与することによってである。１つの実施形態では、治療は予防療法である。別の実施形態では、治療は対症療法である。別の実施形態では、回復療法である。
本開示は、ある状態を有する、又はある状態を有しやすい対象のそのような状態を治療する方法をさらに提供し、当該方法は、対象に治療上有効な量の１つ以上の上記化合物を投与することによってである。１つの実施形態では、治療は予防療法である。別の実施形態では、治療は対症療法である。別の実施形態では、回復療法である。
【0149】
１．状態
本発明に従って治療され得る状態としては、限定はしないが、自己免疫性障害、慢性炎症性障害、急性炎症性障害、自己炎症性障害、疼痛、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、線維症、代謝疾患、がん、腫瘍、白血病、リンパ腫等が挙げられる。
本発明に従って治療され得る状態としては、限定はしないが、自己免疫性障害、慢性炎症性障害、急性炎症性障害、自己炎症性障害、疼痛、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、線維症、代謝疾患、がん、腫瘍、白血病、リンパ腫等が挙げられる。
【0150】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法を用いて調節不全のサイトカイン、酵素及び／又は炎症性メディエーターの生産、安定性、分泌、翻訳後プロセシングから生じる障害を有する患者を治療する。調節不全であり得るサイトカインの例としては、腫瘍壊死因子アルファ及びインターフェロンアルファ、ベータ及びガンマと一緒にインターロイキン１、２、６、８、１０、１２、１７、２２及び２３であり得る。調節不全であり得る炎症性メディエーターの例としては、一酸化窒素、プロスタグランジン及びロイコトリエンが挙げられる。酵素の例としては、シクロオキシゲナーゼ、一酸化窒素シンターゼ及びマトリックスメタロプロテアーゼが挙げられる。
【0151】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法を用いて、調節不全であるｐ３８活性、活性化、生合成又は経路機能を有する患者を治療する。
【0152】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法を用いて、自己免疫性障害、慢性及び／若しくは急性炎症性障害並びに／又は自己炎症性障害を患う当該方法が必要な患者を治療する。障害の例としては、限定はしないが、大腸炎、多発性硬化症、関節炎、関節リウマチ、変形性関節症、若年性関節炎、乾癬性関節炎、クリオピリン関連周期性症候群、マックル・ウェルズ症候群、家族性感冒自己炎症性症候群、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群、急性膵炎、慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病性網膜症、スチル病、多発性硬化症、血管炎、サーコイドーシス、肺炎症、急性呼吸窮迫症候群、滲出型及萎縮型加齢黄斑変性症、自己免疫性溶血性症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性ニューロパシー、自己免疫性卵巣不全、自己免疫性精巣炎、自己免疫性血小板減少症、反応性関節炎、強直性脊椎炎、シリコーン移植関連自己免疫疾患、シェーグレン症候群、家族性地中海熱、全身性エリテマトーデス、血管炎症候群（例えば巨細胞性動脈炎、ベーチェット病及びウェジナー肉芽腫症といった）、白斑、自己免疫疾患の二次的な血液学的兆候（例えば貧血といった）、薬剤誘発性自己免疫、橋本甲状腺炎、下垂体炎、特発性血小板紫斑病、金属誘発性自己免疫、重症筋無力症、天疱瘡、自己免疫性難聴（例えばメニエール病が挙げられる）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ＨＷ関連自己免疫症候群及びギラン－バレー病が挙げられる；炎症性状態の例としては、限定はしないが、敗血症、敗血症性ショック、エンドトキシンショック、エンドトキシン誘発性毒素ショック、グラム陰性菌敗血、エンドトキシンショック症候群、糸球体腎炎、腹膜炎、間質性膀胱炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、酸素過剰誘発性炎症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、血管炎、移植片対宿主反応（すなわち、移植片対宿主疾患）、同種移植片拒絶（例えば、急性同種移植片拒絶及び慢性同種移植片拒絶）、初期の移植拒絶（例えば、急性同種移植片拒絶反応）、再潅流傷害、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、結合組織炎、膵臓炎、慢性感染症、脳膜炎、脳炎、心筋炎、歯肉炎、手術後の外傷、組織傷害、外傷性脳損傷、肝炎、全腸炎、副鼻腔炎、ぶどう膜炎、眼炎症、視神経炎、胃潰瘍、食道炎、腹膜炎、歯膜炎、皮膚筋炎、胃炎、筋炎、多発性筋痛、肺炎並びに気管支炎が挙げられる。線維症；限
定はしないが、肥満、ステロイド耐性、耐糖能障害、メタボリックシンドロームを包含する代謝疾患。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法を用いて腫瘍を患っている当該方法が必要な患者を治療し得る。これらの状態の例としては、限定はしないが、血管新生、多発性骨髄腫、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マスト細胞腫瘍、リンパ腫、ホジキン病、骨がん、口／咽頭癌、食道癌、喉頭癌、胃癌、腸癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、神経がん、脳がん、頭頚部癌、喉癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、乳癌、小細胞肺癌、黒色腫、皮膚癌、奇形腫、横紋筋肉腫、神経膠腫、転移性及び骨障害が挙げられる。いくつかの実施形態では、調節不全ｐ３８に関わる疾患としては、限定はしないがアテローム性動脈硬化症、アテローム性硬化症冠動脈の再狭窄、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、移植心冠動脈病変及び脳卒中を包含する心血管及び脳血管障害；炎症性又はアポトーシス性要素を有する中枢神経系障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄損傷、ニューロン虚血並びに末梢神経障害が挙げられる。患者という用語は、上記の状態を有するヒト及び非ヒト動物の双方を指す。非ヒト動物は、限定はしないが、イヌ及びネコの種といったペット動物であり得る。
定はしないが、肥満、ステロイド耐性、耐糖能障害、メタボリックシンドロームを包含する代謝疾患。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法を用いて腫瘍を患っている当該方法が必要な患者を治療し得る。これらの状態の例としては、限定はしないが、血管新生、多発性骨髄腫、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マスト細胞腫瘍、リンパ腫、ホジキン病、骨がん、口／咽頭癌、食道癌、喉頭癌、胃癌、腸癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、神経がん、脳がん、頭頚部癌、喉癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、乳癌、小細胞肺癌、黒色腫、皮膚癌、奇形腫、横紋筋肉腫、神経膠腫、転移性及び骨障害が挙げられる。いくつかの実施形態では、調節不全ｐ３８に関わる疾患としては、限定はしないがアテローム性動脈硬化症、アテローム性硬化症冠動脈の再狭窄、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、移植心冠動脈病変及び脳卒中を包含する心血管及び脳血管障害；炎症性又はアポトーシス性要素を有する中枢神経系障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄損傷、ニューロン虚血並びに末梢神経障害が挙げられる。患者という用語は、上記の状態を有するヒト及び非ヒト動物の双方を指す。非ヒト動物は、限定はしないが、イヌ及びネコの種といったペット動物であり得る。
【0153】
２．対象
本発明に従って治療される適切な対象には、哺乳動物対象が包含される。本発明に従った哺乳動物としては、限定はしないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、げっ歯動物、ウサギ、霊長動物等が挙げられ、子宮内の哺乳動物を包含する。対象はいずれかの性別及びいずれかの発達段階であり得る。
本発明に従って治療される適切な対象には、哺乳動物対象が包含される。本発明に従った哺乳動物としては、限定はしないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、げっ歯動物、ウサギ、霊長動物等が挙げられ、子宮内の哺乳動物を包含する。対象はいずれかの性別及びいずれかの発達段階であり得る。
【0154】
３．投与及び投薬
本発明の化合物は概して、治療上有効な量で投与される。
本発明の化合物は概して、治療上有効な量で投与される。
【0155】
本発明の化合物は、あらゆる適切な経路で、そのような経路に適した医薬組成物の形態で、意図する治療に効果的な用量で投与され得る。効果的な投与量は通常、単一又は分割用量で、１日当たり、体重１ｋｇ当たりで約０．００１～約１００ｍｇ、好ましくは約０．０１～約３０ｍｇ／ｋｇ／日である。年齢、種及び治療する状態によって、この範囲の下限よりも少ない投与量が適切であり得る。他の場合では、有害な副作用なしで、より多い用量が用いられ得る。より多い用量はまた、終日の投与のために複数のより小さな用量に分割され得る。
【0156】
Ｆ．医薬組成物
上記の状態の治療のために、本明細書で記載する化合物は以下のように投与され得る：
上記の状態の治療のために、本明細書で記載する化合物は以下のように投与され得る：
【0157】
経口投与
本発明の化合物は、化合物が胃腸管に入る、又は、口から直接血流へ吸収される（例えば、口腔又は舌下投与）よう嚥下することを包含する経口で投与され得る。
本発明の化合物は、化合物が胃腸管に入る、又は、口から直接血流へ吸収される（例えば、口腔又は舌下投与）よう嚥下することを包含する経口で投与され得る。
【0158】
経口投与に適した組成物としては、液体、ゲル又は粉末を含み得る錠剤、舐剤及びカプセルといった固形製剤が挙げられる。
【0159】
経口投与のための組成物は、即時放出、又は、遅延放出若しくは徐放出を包含する修飾放出として製剤化され得、腸溶性コーティングがあってもよい。
【0160】
液体製剤としては、軟カプセル又は硬カプセルで用いられ得る溶液、シロップ及び懸濁液が挙げられ得る。そのような製剤は、薬剤的に許容可能な担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、セルロース又は油を含み得る。製剤はまた、１つ以上の乳化剤及び／又は懸濁剤を含み得る。
【0161】
錠剤剤形では、存在する薬剤の量は、重量で剤形の約０．０５％～約９５％、より典型的には重量で剤形の約２％～約５０％であり得る。さらに、錠剤は、重量で剤形の約０．５％～約３５％、より典型的には剤形の約２％～約２５％で含む崩壊剤を含み得る。崩壊剤の例としては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又はカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン等が挙げられる。
【0162】
錠剤での使用のための適切な潤滑剤は、重量で約０．１％～約５％の量で存在し得、カルシウム、亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、ステアリルフマル酸ナトリウム等が挙げられる。
【0163】
錠剤での使用のための適切な結合剤としては、ゼラチン、ポリエチレングリコール、糖、ガム、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。錠剤での使用のための適切な希釈剤としては、マンニトール、キシリトール、ラクトース、ブドウ糖、スクロース、ソルビトール及びデンプンが挙げられる。
【0164】
錠剤での使用のための適切な表面活性剤及び流動促進剤は、重量で約０．１％～約３％の量で存在し得、ポリソルベート８０、ドデシル硫酸ナトリウム、滑石及び二酸化ケイ素が挙げられ得る。
【0165】
非経口投与
本発明の化合物は、血流、筋肉又は内臓器官へ直接投与され得る。非経口投与に適した手段としては、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、腹腔内、髄腔内、頭蓋内等が挙げられる。非経口投与に適したデバイスとしては、注射器（針及び針無しの注射器）及び点滴方法が挙げられる。
本発明の化合物は、血流、筋肉又は内臓器官へ直接投与され得る。非経口投与に適した手段としては、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、腹腔内、髄腔内、頭蓋内等が挙げられる。非経口投与に適したデバイスとしては、注射器（針及び針無しの注射器）及び点滴方法が挙げられる。
【0166】
非経口投与のための組成物は、即時放出、又は、遅延放出若しくは徐放出を包含する修飾放出として製剤化され得る。
【0167】
多くの非経口製剤は、塩、緩衝剤及び炭水化物を包含する賦形剤を含む水溶液である。
【0168】
非経口製剤はまた、脱水形態（例えば、凍結乾燥によって）又は滅菌非水性溶液としても調製され得る。これら製剤は、滅菌水といった適切な媒体と一緒に用いられ得る。溶解性強化剤もまた、非経口溶液の調製で用いられ得る。
【0169】
局所投与
本発明の化合物は、皮膚に局所的又は経皮的に投与され得る。この局所投与の製剤はとしては、ローション、溶液、クリーム、ゲル、ハイドロゲル、軟膏、泡状物質、インプラント、パッチ等が挙げられ得る。局所投与製剤のための薬剤的に許容可能な担体としては、水、アルコール、鉱油、グリセリン、ポリエチレングリコール等が挙げられ得る。局所投与はまた、電気穿孔、イオン泳動、音波泳動等によって実施され得る。
本発明の化合物は、皮膚に局所的又は経皮的に投与され得る。この局所投与の製剤はとしては、ローション、溶液、クリーム、ゲル、ハイドロゲル、軟膏、泡状物質、インプラント、パッチ等が挙げられ得る。局所投与製剤のための薬剤的に許容可能な担体としては、水、アルコール、鉱油、グリセリン、ポリエチレングリコール等が挙げられ得る。局所投与はまた、電気穿孔、イオン泳動、音波泳動等によって実施され得る。
【0170】
局所投与のための組成物は、即時放出、又は、遅延放出若しくは徐放出を包含する修飾放出として製剤化され得る。
【0171】
Ｇ．組合せ及び併用療法
本発明の化合物は、単独で、又は、他の薬剤的に活性な化合物と組合せて用いて、上記した状態といった状態を治療し得る。本発明の化合物及び他の薬剤的に活性な化合物は、同時（同一の剤形又は異なる剤形のいずれかで）又は順次投与され得る。したがって、１
つの実施形態では、本発明は、対象に治療上有効な量の１つ以上の本発明の化合物及び１つ以上の追加の薬剤的に活性な化合物を投与することで状態を治療する方法を含む。
本発明の化合物は、単独で、又は、他の薬剤的に活性な化合物と組合せて用いて、上記した状態といった状態を治療し得る。本発明の化合物及び他の薬剤的に活性な化合物は、同時（同一の剤形又は異なる剤形のいずれかで）又は順次投与され得る。したがって、１
つの実施形態では、本発明は、対象に治療上有効な量の１つ以上の本発明の化合物及び１つ以上の追加の薬剤的に活性な化合物を投与することで状態を治療する方法を含む。
【0172】
別の実施形態では、１つ以上の本発明の化合物、１つ以上の追加の薬剤的に活性な化合物及び薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物が提供される。
【0173】
別の実施形態では、１つ以上の追加の薬剤的に活性な化合物は、抗炎症薬、抗アテローム性動脈硬化薬、免疫抑制薬、免疫調節薬、細胞分裂阻害薬、抗増殖剤、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン阻害薬及び細胞接着分子の阻害剤から成る群から選択される。
【0174】
本明細書に記載されるｐ３８阻害剤組成物はまた、治療される状態に関する治療上の価値で選択される他の治療用薬剤と一緒に組合せて使用してもよい。概して、本明細書に記載される組成物、及び、併用療法を採用する実施形態での他の剤は、同一の医薬組成物で投与される必要はなく、異なる物理的及び化学的特徴のために、異なる経路で投与されてもよい。最初の投与は概して、確立されたプロトコルに従ってなされ、次いで、観察される効果をもとに、投与量、投与形態及び投与回数が続いて修正される。特定の例では、本明細書に記載するｐ３８阻害剤組成物を他の治療剤と一緒に組合せて投与するのがふさわしい。ほんの例として、本明細書に記載するｐ３８阻害剤組成物を摂取して患者が経験する副作用の１つが発疹である場合、最初の治療剤と組合せて抗ヒスタミン剤を投与するのがふさわしい。又は、ほんの例として、ｐ３８阻害剤の治療上の有効性は、治療上の効果も有する他の治療剤（治療レジメンも含む）の投与によって強化される。いずれの場合も、治療されている疾患、障害又は状態に関わらず、患者が経験する全体的な効果は、単に２つの治療剤を加算したものであるか、又は、患者は相乗効果を経験するかのいずれかである。
【0175】
薬剤が治療の組合せで使用される場合、治療上有効な投与量はさまざまである。併用療法レジメンでの使用のための薬剤及び他の剤の治療上有効な投与量を実験的に決定する方法は、実証されている方法論である。併用療法はさらに、患者の臨床管理を手助けする様々な時に開始及び停止する周期的な治療を包含する。いずれの場合も、複数の治療剤（その１つは本明細書に記載するｐ３８阻害剤）は、いずれかの順番で投与され、又は、同時でも投与される。同時の場合、複数の治療剤は単一、統一的な形態又は複数の形態（ほんの例として、単一のピル又は２つの別々のピルのいずれかとして）で提供されてもよい。
【0176】
いくつかの実施形態では、治療剤のうち１つが複数回用量で与えられ、又は、双方とも複数回用量として与えられる。同時でない場合、複数回用量間のタイミングは、０週間超から１２週間未満まで変化してもよい。
【0177】
さらに、併用方法、組成物及び製剤は、２つの剤のみの使用に限定されず、複数の治療薬の組合せの使用も企図される。軽減が望まれる状態を治療、予防又は改善するための投与レジメンは、様々な要因に従って修正されてもよいことが理解される。これらの要因としては、対象が患う障害、並びに、対象の年齢、体重、性別、食事及び医療状態が挙げられる。したがって、実際に採用される投与レジメンは大きくばらつき、いくつかの実施形態では、したがって、本明細書に記載する投与レジメンから逸脱する。
【0178】
本明細書で開示する併用療法を構成する医薬剤は、まとめた剤形又は実質同時投与を意図した別々の剤形であってもよい。併用療法を構成する医薬剤はまた、順次投与されてもよく、いずれかの剤が２工程投与を必要とするレジメンで投与される。２工程投与レジメンは、活性剤の順次投与、又は、別々の活性剤の間隔をあけた投与を必要としてもよい。複数投与工程間の時間間隔は、医薬剤の効力、溶解性、生物利用性、漿内半減期及び動態
プロファイルといった各医薬剤の特性次第で数分間から数時間の範囲に及ぶ。標的分子濃度の概日変動を用いて最適用量間隔を決定してもよい。
プロファイルといった各医薬剤の特性次第で数分間から数時間の範囲に及ぶ。標的分子濃度の概日変動を用いて最適用量間隔を決定してもよい。
【0179】
別の実施形態では、ｐ３８阻害剤は、患者に追加又は相乗効果を提供する手順と組合せて使用してもよい。ｐ３８阻害剤及び追加の療法は、疾患又は状態の発症の前、間、又は、後に投与されてもよく、ｐ３８阻害剤を含む組成物の投与のタイミングは、いくつかの実施形態で異なる。したがって、例えば、障害又は状態の発症を予防するために、ｐ３８阻害剤を予防剤として用い、状態又は疾患を進行する傾向を有する対象に持続的に投与する。ｐ３８阻害剤及び組成物は、症状の間、又は、症状の開始後できる限りすぐに対象に投与されてもよい。本発明の実施形態が本明細書で示され、説明されてきたが、当業者には、そのような実施形態は例として提供されているだけであることが明らかであろう。多くの変更、変化及び置き換えを、本発明を逸脱することなく、当業者は思いつくだろう。本発明のいくつかの実施形態では、本発明の実施の際に、本明細書に記載する実施形態に様々な代替手段が用いられることが理解されるべきである。
【0180】
ｐ３８阻害剤は、次のクラスの薬剤と組合せて使用され得る：ＮＳＡＩＤ、免疫抑制薬、免疫調節薬、細胞分裂阻害薬、抗増殖剤、血管新生阻害剤、生物剤、ステロイド、ビタミンＤ３類似体、レチノイド、他のキナーゼ阻害剤、サイトカイン阻害薬、コルチコステロイド及び細胞接着分子の阻害剤。対象がアテローム性動脈硬化症を患っている若しくは患う危険がある場合、又は、アテローム性動脈硬化症に関する状態を患っている若しくは患う危険がある場合、本明細書に記載するｐ３８阻害剤組成物は、アテローム性動脈硬化症若しくはアテローム性動脈硬化症に関する状態を治療するための１つ以上の剤又は方法と一緒に、いずれかの組合せで使用してもよい。アテローム性動脈硬化症又はアテローム性動脈硬化症に関する状態を治療する治療剤／治療の例としては、限定はしないが、次のうちいずれかが挙げられる：トルセトラピブ、アスピリン、ナイアシン、ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例えば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン及びシンバスタチン）、コレセベラム、コレスチラミン、コレスチポール、ゲムフィブロジル、プロブコール及びクロファイブレート。
【0181】
対象が炎症状態を患っている若しくは患う危険がある場合、本明細書に記載するｐ３８阻害剤組成物は、炎症状態を治療するための１つ以上の剤又は方法と一緒に、いずれかの組合せで使用してもよい。自己免疫及び／又は炎症状態を治療する治療剤／治療の例としては、限定はしないが、次のうちいずれかが挙げられる：コルチコステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えばイブプロフェン、ナプロキセン、アセトアミノフェン、アスピリン、フェノプロフェン（ＮＡＬＦＯＮ）、フルルビプロフェン（ＡＮＳＡＩＤ）、ケトプロフェン、オキサプロジン（ＤＡＹＰＲＯ）、ジクロフェナク・ナトリウム（ＶＯＬＴＡＲＥＮ）、ジクロフェナクカリウム（ＣＡＴＡＦＬＡＭ）、エトドラク（ＬＯＤＩＮＥ）、インドメタシン（ＩＮＤＯＣＩＮ）、ケトロラク（ＴＯＲＡＤＯＬ）、スリンダク（ＣＬＩＮＯＲＩＬ）、トルメチン（ＴＯＬＥＣＴＩＮ）、メクロフェナム酸（ＭＥＣＬＯＭＥＮ）、メフェナム酸（ＰＯＮＳＴＥＬ））ナブメトン（ＲＥＬＡＦＥＮ）、ピロキシカム（ＦＥＬＤＥＮＥ）、ＣＯＸ－２阻害薬（例えば、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ））、免疫抑制薬（例えば、メトトレキサート（ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ）、レフルノミド（ＡＲＡＶＡ）、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ）、シクロスポリン（ＮＥＯＲＡＬ、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ）、タクロリムス及びシクロフォスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）、ＣＤ２０遮断剤（ＲＩＴＵＸＩＭＡＢ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）遮断剤（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ）、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）及びアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ）、アバタセプト（ＣＴＬＡ４－Ｉｇ）及びインターロイキン－１受容体拮抗薬（例えばアナキンラ（ＫＩＮＥＲＥＴ））、インターロイキン６阻害剤（例えば、ＡＣＴＥＭＲＡ）、インターロイキン１７阻害剤（例えば、ＡＩＮ４５７）、ヤヌスキナーゼ阻害剤（例えば、ＴＡＳＯＣＩＴＩＮＩＢ）、Ｓｙｋ阻害剤（例えばＲ７
８８）、クロロキン及びその誘導体。
８８）、クロロキン及びその誘導体。
【0182】
がん及び腫瘍性疾患での使用に関しては、ｐ３８阻害剤は次のクラスの薬剤のうち１つ以上と一緒に最も有利に使用される：抗がん剤は、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、ＫＤＲ抗体、ＡＫＴ阻害剤、ＰＤＫ－１阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ｃ－ｋｉｔ／Ｋｄｒチロシンキナーゼ阻害剤、Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、ＰＤＧＦＲ－ベータ阻害剤、ＫＩＴ阻害剤、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＤＧＦ受容体ファミリー阻害剤、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ阻害剤、ＲＥＴチロシンキナーゼ受容体ファミリー阻害剤、ＶＥＧＦ－３受容体アンタゴニスト、Ｒａｆタンパク質キナーゼファミリー阻害剤、血管新生阻害剤、Ｅｒｂ２阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＧＦ－１Ｒ抗体、ＮＦｋＢ阻害剤、プロテオソーム阻害剤、化学療法薬剤又はグルコース還元剤である。
【0183】
Ｈ．生物学的評価
【0184】
【表6】
【0185】
実施例Ｃ：ｐ３８阻害性効力及びｐ３８／ＭＫ２基質選択性：この実験では、本発明の化合物のｐ３８経路を阻害する効力を評価する。ｐ３８はリン酸化を介してＭＫ２及びＰＲＡＫを活性化し、双方は次いでＨｓｐ２７と相互作用し、炎症の増大及びショックを管理する能力の低下につながる。実験では、ＭＫ２及びＰＲＡＫの活性の半分を阻害するのに必要な本発明の化合物の量を測定した。これは、本発明の化合物が、自己免疫状態、リンパ腫及び関節リウマチを包含する多くの疾患を治療するのに役立つ炎症応答の低下を手助けするのにどれだけ効果的であるかを測定するものである。化合物の、新規のＭＫ２基質
選択性阻害活性機構を、ＨＳＰ－２７由来のペプチド基質の、ｐ３８／ＭＫ２対ｐ３８／ＰＲＡＫ誘導リン酸化の遮断における、阻害剤効力を比較する酵素アッセイで評価する。化合物の活性化リン酸化－ｐ３８αを阻害する能力を、ｐ３８α／ＭＫ２及びｐ３８α／ＰＲＡＫカスケードアッセイ形式を用いて評価する。ｐ３８αのキナーゼ活性を、ＧＳＴ－ＭＫ２又はＧＳＴ－ＰＲＡＫをリン酸化するその能力によって決定する。ｐ３８αによるＭＫ２又はＰＲＡＫの活性化を、蛍光標識したＭＫ２／ＰＲＡＫ特異性ペプチド基質、Ｈｓｐ２７ペプチド（ＦＩＴＣ－ＫＫＫＡＬＳＲＱＬＳＶＡＡ）のリン酸化を測定することで定量化する。Ｈｓｐ２７ペプチドのリン酸化を、ＩＭＡＰ技術（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）社、カリフォルニア州、サニーベール）を用いて数量化する。キナーゼ反応を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．０１％ＢＳＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び２％ＤＭＳＯ中の３８４ウェルプレート（グライナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ）社、７８１２８０）で実行する。阻害剤濃度は０．０２～３０，０００ｎＭの間でばらつき、一方で、Ｈｓｐ２７ペプチド基質及びＭｇＡＴＰはそれぞれ１μＭ及び１０μＭで一定に保たれる。活性化ｐ３８αを、カスケード反応での１ｎＭの非リン酸化ＧＳＴ－ＭＫ２との反応のために３０ｐＭの最終濃度まで添加する。ｐ３８α／ＰＲＡＫカスケードに関しては、非活性化ＧＳＴ－ＰＲＡＫを１０ｎＭで一定に保つ一方で、ｐ３８αを２００ｐＭの最終濃度まで添加する。キナーゼ反応を室温でインキュベートし、ＩＭＡＰ結合溶液の添加によって１２０分後にクエンチした。これらの条件下で、およそ２０％の基質Ｈｓｐ２７ペプチドがリン酸化される。反応をＨｓｐ２７ペプチド及びＭｇＡＴＰの添加によって開始するプリインキュベーション実験を除いて、反応は活性化ｐ３８αの添加によって開始される。ｐ３８αの阻害剤とのプリインキュベーション、又はｐ３８αの非活性化ＧＳＴ－ＭＫ２若しくは非活性化ＧＳＴ－ＰＲＡＫ及び阻害剤とのプリインキュベーションを、ＡＴＰ及びＨｓｐ２７ペプチドを添加して触媒作用を開始する前に、２×最終アッセイ濃度で、室温にて、２４０分間実施する。ｐ３８α化合物阻害活性効力を、ｐ３８α／ＭＫ２カスケードアッセイの用量反応ＩＣ５０値又はＫｉ値から定量化する一方で、基質選択性を、ｐ３８α／ＰＲＡＫ：ｐ３８α／ＭＫ２のＩＣ５０値の割合として算出する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、自己免疫疾患及びリンパ腫といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
選択性阻害活性機構を、ＨＳＰ－２７由来のペプチド基質の、ｐ３８／ＭＫ２対ｐ３８／ＰＲＡＫ誘導リン酸化の遮断における、阻害剤効力を比較する酵素アッセイで評価する。化合物の活性化リン酸化－ｐ３８αを阻害する能力を、ｐ３８α／ＭＫ２及びｐ３８α／ＰＲＡＫカスケードアッセイ形式を用いて評価する。ｐ３８αのキナーゼ活性を、ＧＳＴ－ＭＫ２又はＧＳＴ－ＰＲＡＫをリン酸化するその能力によって決定する。ｐ３８αによるＭＫ２又はＰＲＡＫの活性化を、蛍光標識したＭＫ２／ＰＲＡＫ特異性ペプチド基質、Ｈｓｐ２７ペプチド（ＦＩＴＣ－ＫＫＫＡＬＳＲＱＬＳＶＡＡ）のリン酸化を測定することで定量化する。Ｈｓｐ２７ペプチドのリン酸化を、ＩＭＡＰ技術（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）社、カリフォルニア州、サニーベール）を用いて数量化する。キナーゼ反応を、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．０１％ＢＳＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び２％ＤＭＳＯ中の３８４ウェルプレート（グライナー（Ｇｒｅｉｎｅｒ）社、７８１２８０）で実行する。阻害剤濃度は０．０２～３０，０００ｎＭの間でばらつき、一方で、Ｈｓｐ２７ペプチド基質及びＭｇＡＴＰはそれぞれ１μＭ及び１０μＭで一定に保たれる。活性化ｐ３８αを、カスケード反応での１ｎＭの非リン酸化ＧＳＴ－ＭＫ２との反応のために３０ｐＭの最終濃度まで添加する。ｐ３８α／ＰＲＡＫカスケードに関しては、非活性化ＧＳＴ－ＰＲＡＫを１０ｎＭで一定に保つ一方で、ｐ３８αを２００ｐＭの最終濃度まで添加する。キナーゼ反応を室温でインキュベートし、ＩＭＡＰ結合溶液の添加によって１２０分後にクエンチした。これらの条件下で、およそ２０％の基質Ｈｓｐ２７ペプチドがリン酸化される。反応をＨｓｐ２７ペプチド及びＭｇＡＴＰの添加によって開始するプリインキュベーション実験を除いて、反応は活性化ｐ３８αの添加によって開始される。ｐ３８αの阻害剤とのプリインキュベーション、又はｐ３８αの非活性化ＧＳＴ－ＭＫ２若しくは非活性化ＧＳＴ－ＰＲＡＫ及び阻害剤とのプリインキュベーションを、ＡＴＰ及びＨｓｐ２７ペプチドを添加して触媒作用を開始する前に、２×最終アッセイ濃度で、室温にて、２４０分間実施する。ｐ３８α化合物阻害活性効力を、ｐ３８α／ＭＫ２カスケードアッセイの用量反応ＩＣ５０値又はＫｉ値から定量化する一方で、基質選択性を、ｐ３８α／ＰＲＡＫ：ｐ３８α／ＭＫ２のＩＣ５０値の割合として算出する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、自己免疫疾患及びリンパ腫といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
【0186】
化合物を上記アッセイに従って試験し、以下のＩＣ５０値をもたらした：
【0187】
【表7】
【0188】
実施例Ｄ：ヒトの単球におけるサイトカインの制御：ｐ３８経路は、ＴＮＦα、ＩＬ－１β及びＩＬ－６を包含する複数の炎症促進性サイトカインの生合成に必要不可欠であるこ
とが示されている。したがって、ｐ３８ＭＡＰＫ経路の阻害は、炎症促進性サイトカインの生合成を減少させることで炎症応答を低下させるだろう。本実験では、ＴＮＦα、ＩＬ－６及びＩＬ－１β（炎症促進性サイトカイン）の生合成を半分阻害するのに必要な本発明の化合物の量を示す。これは、自己免疫状態、リンパ腫及び関節リウマチを包含する多くの疾患の治療を助ける効果である炎症の低下に役立つ本発明の化合物の有効性を反映する。ｐ３８阻害剤のサイトカイン生産を遮断する効力及び効能の評価は、ヒトＵ９３７細胞株を用いて実行される。Ｕ９３７ヒト前単球細胞株を、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（メリーランド州、ロックビル）から取得する。これらの細胞は、Ｂｕｒｎｅｔｔｅ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅら、（２００９）．ＳＤ０００６：ａ ｐｏｔｅｎｔ， ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｏｒａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３８ ｋｉｎａｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ８４（１）：４２－６０）が説明する通り、単球／マクロファージ表現型に分化する。分化したＵ９３７細胞を、完全な培地の９６ウェルの組織培養プレート（２００，０００個の細胞／ウェル）に播種する。２４時間後、細胞を６０分間、化合物の存在下又は不在下で前処理し、次いで、ＬＰＳ（０．１μｇ／ｍＬ）で４時間刺激する。次いで、培養培地を、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα、ＩＬ－６又はＩＬ－１βの量の決定のために回収する。４パラメーターロジスティックモデルを用いて、及び、最良の最小二乗法へのあてはめを繰り返した後にＩＣ５０の値を求め、サイトカイン濃度を組み換えタンパク質の標準曲線から推定する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫又は炎症といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
とが示されている。したがって、ｐ３８ＭＡＰＫ経路の阻害は、炎症促進性サイトカインの生合成を減少させることで炎症応答を低下させるだろう。本実験では、ＴＮＦα、ＩＬ－６及びＩＬ－１β（炎症促進性サイトカイン）の生合成を半分阻害するのに必要な本発明の化合物の量を示す。これは、自己免疫状態、リンパ腫及び関節リウマチを包含する多くの疾患の治療を助ける効果である炎症の低下に役立つ本発明の化合物の有効性を反映する。ｐ３８阻害剤のサイトカイン生産を遮断する効力及び効能の評価は、ヒトＵ９３７細胞株を用いて実行される。Ｕ９３７ヒト前単球細胞株を、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（メリーランド州、ロックビル）から取得する。これらの細胞は、Ｂｕｒｎｅｔｔｅ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅら、（２００９）．ＳＤ０００６：ａ ｐｏｔｅｎｔ， ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｏｒａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３８ ｋｉｎａｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ８４（１）：４２－６０）が説明する通り、単球／マクロファージ表現型に分化する。分化したＵ９３７細胞を、完全な培地の９６ウェルの組織培養プレート（２００，０００個の細胞／ウェル）に播種する。２４時間後、細胞を６０分間、化合物の存在下又は不在下で前処理し、次いで、ＬＰＳ（０．１μｇ／ｍＬ）で４時間刺激する。次いで、培養培地を、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα、ＩＬ－６又はＩＬ－１βの量の決定のために回収する。４パラメーターロジスティックモデルを用いて、及び、最良の最小二乗法へのあてはめを繰り返した後にＩＣ５０の値を求め、サイトカイン濃度を組み換えタンパク質の標準曲線から推定する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫又は炎症といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
【0189】
化合物を上記アッセイに従って試験し、以下のＩＣ５０値をもたらした：
【0190】
【表8】
【0191】
実施例Ｅ：ヒトの単球におけるリン酸化タンパク質分析：本実験は、本発明の化合物のＪＮＫ経路を阻害する有効性及び選択性を示す。ＪＮＫ経路は、炎症性サイトカインの生産を増加させることで炎症の増大をもたらす。この経路の阻害はより小さい炎症につながり、したがって、自己免疫状態、リンパ腫及び関節リウマチを包含する多くの疾患を治療するだろう。古典的ｐ３８阻害剤は、ｐ３８の基質の下流のリン酸化を遮断する一方で、ＪＮＫといった並行した経路の活性を上昇させる。異なるクラスのｐ３８阻害剤のｐ３８及びＪＮＫ経路制御に対する影響の評価を、２つの経路に関してそれぞれリン酸化ＨＳＰ２７及びリン酸化ＪＮＫを用いて行う。ｐ３８阻害剤のリン酸化タンパク質に影響を与える効力及び効能の評価は、ヒトＵ９３７細胞株を用いて実行される。Ｕ９３７ヒト前単球細胞株を、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（メリーランド州、ロックビル）から取得
する。これらの細胞は、Ｂｕｒｎｅｔｔｅ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅら、（２００９）．ＳＤ０００６：ａ ｐｏｔｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｏｒａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３８ ｋｉｎａｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
８４（１）：４２－６０）が説明する通り、単球／マクロファージ表現型に分化する。浮遊細胞（Ｔ７５ｃｍ２の組織培養フラスコ内で１ミリリットル当たりおよそ５０万個）を１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と抗生物質を含むＲＰＭＩで成長させる。１日目に、フォルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ、２０ｎｇ／ｍｌ）を培養フラスコに添加し、細胞を一晩３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートする。２日目に、細胞を遠心分離し、ＰＭＡ無しの新しい培地で再懸濁することで、細胞を洗浄する。付着した細胞をかきとり、遠心分離し、１ミリリットル当たり１００万個の密度である新しい培地で再懸濁することで、付着した細胞を３日目に回収する。ＰＭＡで分化したＵ９３７細胞を次いで９６ウェルの平底組織培養プレート（１００ｍｌ／ウェル）の各ウェルに配分し、１ウェル当たり１００，０００個の細胞を回復させ、一晩インキュベートする。アッセイの日に、新しい培地（５０ｍｌ／ウェル）をプレートに添加し、続いて化合物（２５ｍｌ／ウェル、濃度応答）を１時間添加する。細胞を１００ｍｌの最終アッセイ体積で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激する。３０分後、完全な溶解緩衝液（５０ｍｌ／ウェル、ＭＳＤ Ｔｒｉｓ溶解緩衝液、プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を補充）を添加し、プレートを振盪機上に４℃で３０分間置き、－２０℃で冷凍保存する。細胞溶解物（２５ｍｌ／ウェル）を解凍し、リン酸化Ｈｓｐ２７／合計Ｈｓｐ２７又はリン酸化ＪＮＫ／合計ＪＮＫの決定のためにアッセイプレートからメソスケール（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ）検出プレートへ移す。
する。これらの細胞は、Ｂｕｒｎｅｔｔｅ（Ｂｕｒｎｅｔｔｅら、（２００９）．ＳＤ０００６：ａ ｐｏｔｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｏｒａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３８ ｋｉｎａｓｅ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ
８４（１）：４２－６０）が説明する通り、単球／マクロファージ表現型に分化する。浮遊細胞（Ｔ７５ｃｍ２の組織培養フラスコ内で１ミリリットル当たりおよそ５０万個）を１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と抗生物質を含むＲＰＭＩで成長させる。１日目に、フォルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ、２０ｎｇ／ｍｌ）を培養フラスコに添加し、細胞を一晩３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートする。２日目に、細胞を遠心分離し、ＰＭＡ無しの新しい培地で再懸濁することで、細胞を洗浄する。付着した細胞をかきとり、遠心分離し、１ミリリットル当たり１００万個の密度である新しい培地で再懸濁することで、付着した細胞を３日目に回収する。ＰＭＡで分化したＵ９３７細胞を次いで９６ウェルの平底組織培養プレート（１００ｍｌ／ウェル）の各ウェルに配分し、１ウェル当たり１００，０００個の細胞を回復させ、一晩インキュベートする。アッセイの日に、新しい培地（５０ｍｌ／ウェル）をプレートに添加し、続いて化合物（２５ｍｌ／ウェル、濃度応答）を１時間添加する。細胞を１００ｍｌの最終アッセイ体積で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激する。３０分後、完全な溶解緩衝液（５０ｍｌ／ウェル、ＭＳＤ Ｔｒｉｓ溶解緩衝液、プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を補充）を添加し、プレートを振盪機上に４℃で３０分間置き、－２０℃で冷凍保存する。細胞溶解物（２５ｍｌ／ウェル）を解凍し、リン酸化Ｈｓｐ２７／合計Ｈｓｐ２７又はリン酸化ＪＮＫ／合計ＪＮＫの決定のためにアッセイプレートからメソスケール（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ）検出プレートへ移す。
【0192】
化合物を上記アッセイに従って試験し、以下のＩＣ５０及びＥＣ５０値をもたらした：
【0193】
【表9】
【0194】
実施例Ｆ：ヒトの全血からのエンドトキシン誘導サイトカイン生産：ヒトの全血（ＨＷＢ；２５～４５ｍｌ）を、ＮＳＡＩＤフリーのドナーからヘパリンナトリウム（１０ｍｌ、１５８ＵＳＰ単位）を含むバキュテナー回収管内へ集め、プール化し、優しく振動し、９６ウェルの丸底組織培養プレート（１８０ｍｌ／ウェル）の各ウェルに配分した。化合物（１０ｍｌ／ウェル、濃度応答）を添加し、使い捨ての９６ポリプロピレンのピンツールを用いて１５～２０秒間優しく混合し、プレートを３７℃／５％ＣＯ２で１時間インキュベートする。ＨＷＢを２００ｍｌの最終アッセイ体積で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激させる。３時間後、プレートを２４０ｘｇで５分間回転し、赤血球をペレット化する。血漿を慎重に別の９６ウェルの丸底プレートに写し、アッセイ培地（１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と抗生物質を含むＤＭＥＭ）で２倍に希釈する。最後に、希釈した血漿（２
５ｍｌ／ウェル）を、ＩＬ－１、ＩＬ－６又はＴＮＦαの決定のためにＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ検出プレートへ移す。
５ｍｌ／ウェル）を、ＩＬ－１、ＩＬ－６又はＴＮＦαの決定のためにＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ検出プレートへ移す。
【0195】
実施例Ｇ：Ａ５４９細胞におけるＩＬ－１誘導ＩＬ－６生産の決定：付着したＡ５４９細胞（Ｔ７５ｃｍ２組織培養フラスコ当たりおよそ５００万個）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と抗生物質を含むＦ－１２Ｋ培地で成長させる。細胞をトリプシン処理し、洗浄及び１ミリリットル当たり３０万個で再懸濁する。Ａ５４９細胞を次いで９６－ウェルの平底組織培養プレート（１００ｍｌ／ウェル）の各ウェルに配分し、及び１ウェル当たり３０，０００個の細胞を回復させて一晩インキュベートする。アッセイの日に、新しい培地（５０ｍｌ／ウェル）をプレートに添加し、続いて化合物（２５ｍｌ／ウェル、濃度応答）を１時間添加する。細胞を１００ｍｌの最終アッセイ体積で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激する。３時間後、培養した培地（２５ｍｌ／ウェル）をアッセイプレートから、ＩＬ－６量の決定のために、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅのカスタムコーティングした検出プレートに移す。検出プレートを４℃で一晩インキュベートし、続いてｓｕｌｆｏ標識の抗体カクテル（２５ｍｌ／ウェル）を、力強く振盪させながら室温で１時間添加する。リード緩衝液（１５０ｍｌ／ウェル、ｄＨ２Ｏで４倍に希釈したＭＳＤ４×リード緩衝液）を添加し、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ６０００を用いてプレートを読む。検出プレートの電気刺激の際に、リード緩衝液の共反応物が電気化学反応を強化し、光の形態でエネルギーが放出される。このシグナルを内部ＣＣＤカメラで捕捉し、定量化する。Ａ５４９細胞の生存率をＭＴＴアッセイを用いて決定する。ＬＰＳとの細胞の３時間のインキュベーション及び培養した培地の回収後、アッセイプレートをひっくり返し、優しく叩いていずれかの残留液体を除去する。ＭＴＴ（アッセイ培地で調製する１ｍｇ／ｍｌ溶液）を添加（１００ｍｌ／ウェル）し、プレートを３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーターに３時間戻す。プレートを再度ひっくり返し、いずれかの液体も除去し、一晩乾燥させる。イソプロパノール（１００ｍｌ／ウェル）を添加して、結果として得られるホルマザン結晶を可溶化し、プレートをＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ分光光度計を用いて５７０ｎｍ／６５０ｎｍで読む。
【0196】
実施例Ｈ：関節リウマチ滑膜線維芽細胞（ＲＡＳＦ）におけるＩＬ－１β誘導プロスタグランジン生産：関節リウマチ滑膜線維芽細胞（ＲＡＳＦ）は、膝全置換を行った女性ＲＡ患者の炎症性滑膜に由来する。滑膜組織は隣接の軟骨から裂いて、コラゲナーゼで単一細胞内へ分散させる。細胞は拡大し、バンク化する。ＲＡＳＦ細胞をさらに、上記Ｂｕｒｎｅｔｔｅが説明するように培養する。ＲＡＳＦ細胞を、完全な成長培地の９６ウェルの組織培養プレート（５×１０４個の細胞／ウェル）に播種する。２４時間後、培地を、１％ＦＢＳを含む新しい成長培地と取り換える。細胞を化合物又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）媒体対照の段階濃度（３０，０００～０．０１ｎＭ）で１時間処理し、次いで、１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１β（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）社、ミネソタ州、ミネアポリス）で１８～２０時間、３７℃にて刺激し、培養上清（conditioned media)）を回収する。培養培地のＰＧＥ２量をＥＬＩＳＡ（ケイマンケミカル（Ｃａｙｍａｎ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社、ミシガン州、アンアーバー）で定量化する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫又は関節リウマチといったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社、ミシガン州、アンアーバー）で定量化する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫又は関節リウマチといったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
【0197】
実施例Ｊ：ＨＵＶＥＣ細胞における基質選択性：化合物をｐ３８／ＭＫ２の選択性阻害での生化学的特徴付け工程から特定する場合、化合物を次に細胞ベースアッセイに配置し、酵素の細胞翻訳可能性（translatability）を確認する。これらのアッセイは、ヒト臍帯
静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用い、Ｈｓｐ２７リン酸化（ｐ３８／ＭＫ２活性化のバイオマーカー）を阻害する一方、別のｐ３８の下流基質であるＭＳＫに関連している組織因子（ＴＦ）を生産することを証明するものである。９６ウェル形式では、付着したＨＵＶＥＣ（５継代以下）を１時間、参照として非選択性ｐ３８阻害剤又は対照のための媒体を
含む段階希釈した化合物で処理する。Ｈｓｐ２７リン酸化に関して、細胞を次いで５００ｐｇ／ｍＬのＩＬ－１βで０．５時間刺激し、培地を除去し、細胞を溶解し、溶解物内のリン酸化Ｈｓｐ２７を酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）（ライフテクノロジー（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社、カリフォルニア州、カールスバッド）で定量化する。ＴＦ放出の手順は、ＩＬ－１β刺激が５時間続く以外はＥＬＩＳＡベースアッセイ（アメリカン・ダイアグノスティカ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）社、コネチカット州、スタンフォード）と同様である。ＴＦ阻害ＩＣ５０：ＨＳＰ２７リン酸化阻害ＩＣ５０の割合をこれらの細胞における基質選択性指数として定義する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫及び自己炎症性疾患といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用い、Ｈｓｐ２７リン酸化（ｐ３８／ＭＫ２活性化のバイオマーカー）を阻害する一方、別のｐ３８の下流基質であるＭＳＫに関連している組織因子（ＴＦ）を生産することを証明するものである。９６ウェル形式では、付着したＨＵＶＥＣ（５継代以下）を１時間、参照として非選択性ｐ３８阻害剤又は対照のための媒体を
含む段階希釈した化合物で処理する。Ｈｓｐ２７リン酸化に関して、細胞を次いで５００ｐｇ／ｍＬのＩＬ－１βで０．５時間刺激し、培地を除去し、細胞を溶解し、溶解物内のリン酸化Ｈｓｐ２７を酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）（ライフテクノロジー（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社、カリフォルニア州、カールスバッド）で定量化する。ＴＦ放出の手順は、ＩＬ－１β刺激が５時間続く以外はＥＬＩＳＡベースアッセイ（アメリカン・ダイアグノスティカ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）社、コネチカット州、スタンフォード）と同様である。ＴＦ阻害ＩＣ５０：ＨＳＰ２７リン酸化阻害ＩＣ５０の割合をこれらの細胞における基質選択性指数として定義する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫及び自己炎症性疾患といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
【0198】
実施例Ｋ：イヌＢ細胞の成長制御：ｐ３８阻害剤は、独特にもイヌのＢ細胞増殖及び生存を阻害することが示されている。イヌＢ細胞に対するこの選択性効果は、米国で４０，０００超のペット動物に影響を及ぼす致死的疾患であるイヌＢ細胞リンパ腫の治療上での処置で利用され得る。ｐ３８阻害剤のＢ細胞成長に対する影響の定量化は、Ｂ細胞リンパ腫における効能の細胞の指標である。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。これらのアッセイは、Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｗａｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓと共同研究しているＳａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルで得たビーグル犬の脾臓を用いる。白血球を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ１０７７による遠心分離によって脾細胞から単離する。増殖への効果を評価するため、白血球を次いで４８時間、媒体又は試験化合物の存在下の９６ウェルプレートで培養する。細胞を、ＴＬＲ４刺激に関してはＬＰＳ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓＢ細胞マイトジェン又はコンカナバリン－Ａ Ｔ細胞マイトジェンで刺激し、次いで、増殖を、ＢＲＤＵ組込みＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ、ドイツ、マンハイム）で定量化する。アポトーシス実験のために、白血球を９６－ウェルポリプロピレンＵ底プレート上にプレート化し、アクチノマイシンＤ又はシクロヘキシミド（アポトーシスの割合を増大する必要がある場合）の不在又は存在下で、ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤又はスタウロスポリン（陽性対照として）で最大２４時間処理する。アポトーシスをＣａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ３／７発光アッセイ（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）社、ウィスコンシン州、マディソン）を用いて決定する。双方のアッセイで、増加していく濃度の阻害剤でインキュベーションした後に作製される値を、阻害剤なしの陰性対照と比較する。
【0199】
実施例Ｌ：ラットにおけるＬＰＳ誘導ＴＮＦα生産：経口投薬より１８時間前にラットを絶食させ、実験の間中、水へは自由にアクセスできるようにする。各実験群は５匹の動物から成る。化合物を、０．５％メチルセルロース（シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）社、ミズーリ州、セントルイス）、０．０２５％Ｔｗｅｅｎ ２０（シグマアルドリッチ社）を含む媒体中の懸濁液として調製する。化合物又は媒体を、１ｍＬの体積で、経口の経管栄養法で投与する。１つの実験で２つの媒体群を用いて実験内のばらつきを調整する。０．５ｍＬの滅菌生理食塩水（バクスターヘルスケア（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）社、イリノイ州、ディアフィールド）中１ｍｇ／ｋｇの用量で化合物を静脈内注射した４時間後、ＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ血清型０１１１：Ｂ４、シグマアルドリッチ社）を投与する。最大ＴＮＦα及びＩＬ－１β生産に対応する時間点である、ＬＰＳ注射から９０分後、心穿刺を介して血液を血清分離管で回収する。凝血後、血清を取り出し、－２０℃で保存し、ＩＬ－１β及びＴＮＦα量をＥＬＩＳＡ（前述のＢｕｒｎｅｔｔｅ）で定量化する。本明細書に記載され、本アッセイで評価される式（Ｉ）の種化合物は、リンパ腫又は炎症といったｐ３８キナーゼ介在疾患の治療で治療効果を提供することが予想される。
【0200】
言及した文献は全て、参照によって、本明細書に記述されたように組込まれる。本発明又はその例示的な実施形態の要素を紹介する場合に、冠詞「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」及び「前記（ｓａｉｄ）」は、１つ以上の要素があることを意味することが意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という語句は包含的であり、列挙した要素以外に追加の要素があり得ることを意味することが意図される。本発明は具体的な実施形態に対して説明してきたが、これら実施形態の詳細は限定として解釈されるべきではない。