▶ セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-10-04
(45)【発行日】2022-10-13
(54)【発明の名称】ＪＡＫ阻害剤化合物を使用する処置方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/4545 20060101AFI20221005BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20221005BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20221005BHJP
A61P 27/04 20060101ALI20221005BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20221005BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20221005BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20221005BHJP
A61P 33/00 20060101ALI20221005BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20221005BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20221005BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20221005BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20221005BHJP
【ＦＩ】
A61K31/4545
A61P27/02
A61P3/10
A61P27/04
A61P37/08
A61P11/00
A61P31/00
A61P33/00
A61P9/12
A61P35/00
A61K9/08
A61K9/14
【請求項の数】
31
(21)【出願番号】P 2019559282
(86)(22)【出願日】2018-04-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-06-25
(86)【国際出願番号】 US2018030140
(87)【国際公開番号】W WO2018204233
(87)【国際公開日】2018-11-08
【審査請求日】2021-03-25
(31)【優先権主張番号】62/492,568
(32)【優先日】2017-05-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】514190040
【氏名又は名称】セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】サラディー， ヴェンカット アール．
(72)【発明者】
【氏名】チャン， ハオ
(72)【発明者】
【氏名】クラインシェック， メラニー エー．
(72)【発明者】
【氏名】クレーター， グレン ディー．
【審査官】井上 能宏
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／０７９２０５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１３／０１４５６７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１１／０１７１７８（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
哺乳動物の眼疾患を処置するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含み、前記医薬組成物が前記哺乳動物の眼に投与されることを特徴とする、医薬組成物。
【請求項2】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎または糖尿病性黄斑浮腫である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記医薬組成物が、注射によって投与されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項5】
哺乳動物の眼疾患の処置に使用するための組成物であって、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物。
【請求項6】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
哺乳動物の眼疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項8】
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含み、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である、医薬組成物。
【請求項9】
前記医薬組成物が、吸入によって投与されることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与されることを特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与されることを特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項12】
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含み、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、医薬組成物。
【請求項13】
前記医薬組成物が、吸入によって投与されることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与されることを特徴とする、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与されることを特徴とする、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項16】
哺乳動物の呼吸器疾患の処置に使用するための組成物であって、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩を含み、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である、組成物。
【請求項17】
哺乳動物の呼吸器疾患の処置に使用するための組成物であって、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩を含み、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である、組成物。
【請求項18】
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である使用。
【請求項19】
前記医薬が、吸入による投与に適している、請求項１８に記載の使用。
【請求項20】
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、請求項１９に記載の使用。
【請求項21】
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、請求項１９に記載の使用。
【請求項22】
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である使用。
【請求項23】
前記医薬が、吸入による投与に適している、請求項２２に記載の使用。
【請求項24】
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、請求項２３に記載の使用。
【請求項25】
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、請求項２４に記載の使用。
【請求項26】
前記組成物が、吸入による投与に適している、請求項１６に記載の組成物。
【請求項27】
前記組成物が、ネブライザ吸入器による投与に適している、請求項２６に記載の組成物。
【請求項28】
前記組成物が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、請求項２６に記載の組成物。
【請求項29】
前記組成物が、吸入による投与に適している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項30】
前記組成物が、ネブライザ吸入器による投与に適している、請求項２９に記載の組成物。
【請求項31】
前記組成物が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、請求項３０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、特定のＪＡＫ阻害剤化合物またはその薬学的に許容される塩を使用して、眼およびある特定の呼吸器疾患を処置するための方法を対象とする。
【背景技術】
【0002】
サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子を含む、細胞間シグナル伝達分子である。サイトカインは、正常な細胞成長および免疫調節に極めて重要であるが、免疫介在疾患も推進させ、悪性細胞の成長に寄与する。高レベルの多くのサイトカインは、多数の疾患または状態、特に炎症によって特徴付けられるような疾患の病理に関係づけられてきた。疾患に関与するサイトカインの多くは、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）ファミリーの転写因子を介して信号伝達する（signal）、ヤヌスファミリーのチロシンキナーゼ（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路を通して作用する。
【0003】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバー、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。ＪＡＫ依存性サイトカイン受容体へのサイトカインの結合は、受容体の二量体化を誘導し、その結果、ＪＡＫキナーゼ上のチロシン残基がリン酸化し、ＪＡＫ活性化が生じる。次に、リン酸化ＪＡＫは、二量体化して細胞核に内部移行し、遺伝子転写を直接調節する様々なＳＴＡＴタンパク質と結合しそれをリン酸化し、とりわけ炎症性疾患に関連付けられた下流効果をもたらす。ＪＡＫは通常、ホモ二量体またはヘテロ二量体として対になってサイトカイン受容体に会合する。特定のサイトカインは特定のＪＡＫ対合に会合する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーのそれぞれは、炎症に関連するサイトカインの少なくとも１つのシグナル伝達に関与する。
【0004】
炎症は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、およびアトピー性角結膜炎を含む多くの眼疾患で、顕著な役割を演ずる。ブドウ膜炎は、多数の眼内炎症状態を包含し、しばしば自己免疫性であり、公知の感染誘発因子なく生ずる。この状態に、米国内で約２００万人の患者が罹患していると推定される。一部の患者では、ブドウ膜炎に関連した慢性炎症が組織破壊をもたらし、米国内で５番目に多い失明の原因である。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介して信号伝達するブドウ膜炎患者の眼において上昇したサイトカインには、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－２３、およびＩＦＮ－γが含まれる。（HoraiおよびCaspi、JInterferon Cytokine Res、２０１１年、３１巻、７３３～７４４頁；Ooiら、Clinical Medicine and Research、２００６年、４巻、２９４～３０９頁）。ブドウ膜炎に関する既存の療法は次善のものであり、多くの患者は管理が不十分である。ステロイドは、しばしば有効であるが、白内障および眼圧上昇／緑内障に関連する。
【0005】
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、網膜内の血管に対する損傷によって引き起こされる。それは、糖尿病の人々の間での失明の最も一般的な原因である。血管新生ならびに炎症経路は、その疾患において重要な役割を演ずる。しばしば、ＤＲは糖尿病患者における最も頻繁な失明の原因である糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）へと進行する。この状態に、米国のみで約１５０万人の患者が罹患しており、その約２０％が両眼を冒す疾患を有すると推定される。ＩＬ－６などのＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介して信号伝達するサイトカイン、ならびにＩＰ－１０およびＭＣＰ－１（あるいはＣＣＬ２と称する）などのその他のサイトカインは、それらの生成が部分的にはＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって推進されるものであり、ＤＲ／ＤＭＥに関連した炎症において役割を演ずると考えられる（Abcouwer、J Clin Cell Immunol、２０１３年、補遺１、１～１２頁；Sohnら、American Journal of Opthalmology、２０１１年、１５２巻、６８６～６９４頁; OwenおよびHartnett、CurrDiab Rep、２０１３年、１３巻、４７６～４８０頁；Cheungら、Molecular Vision、２０１２年、１８巻、８３０～８３７頁；Dongら、Molecular Vision、２０１３年、１９巻、１７３４～１７４６頁；Funatsuら、Ophthalmology、２００９年、１１６巻、７３～７９頁）。ＤＭＥに関する既存の療法は、次善のものであり：硝子体内抗ＶＥＧＦ処置は患者の一部にしか有効ではなく、ステロイドは白内障および眼圧上昇に関連付けられる。
【0006】
ドライアイ疾患（ＤＥＤ）は、米国内で約５００万人の患者が罹患している多因子障害である。眼表面炎症は、この疾患の発生および蔓延で重要な役割を演ずると考えられる。高レベルのＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、およびＩＦＮ－γなどのサイトカインが、ＤＥＤ患者の眼液中に示されており（Stevensonら、Arch Ophthalmol、２０１２年、１３０巻、９０～１００頁）、そのレベルはしばしば疾患の重症度に相関する。加齢黄斑変性およびアトピー性角結膜炎も、ＪＡＫ－依存性サイトカインに関連すると考えられる。
炎症性疾患で上昇するサイトカインの数、および各サイトカインが特定のＪＡＫ対合に関連することを考慮すれば、眼疾患の処置のためにＪＡＫファミリーの全てのメンバーに対する汎活性（pan-activity）を化学阻害剤に与えることが望ましいと考えられる。しかし、そのような阻害剤の広範な抗炎症効果は、正常な免疫細胞機能を抑制し、感染リスクの増加を潜在的にもたらす可能性がある。したがって、眼の中の作用部位に局所的に送達することができる阻害剤を提供し、それによって有害な全身免疫抑制の可能性を制限することが望ましいと考えられる。
２０１６年１１月２日に出願された、本発明の譲受人に譲渡された米国出願第１５／３４１，２２６号は、ＪＡＫ阻害剤として有用なジアミノ化合物を開示している。特に、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）
は、強力な汎－ＪＡＫ阻害剤としてこの出願に特に開示されている。この出願は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、および閉塞性細気管支炎を含む呼吸器疾患の、特定の処置での、化合物１の様々な使用を開示している。しかし、この出願は、眼疾患を処置するための化合物１の使用は開示していない。
炎症性疾患で上昇するサイトカインの数、および各サイトカインが特定のＪＡＫ対合に関連することを考慮すれば、眼疾患の処置のためにＪＡＫファミリーの全てのメンバーに対する汎活性（pan-activity）を化学阻害剤に与えることが望ましいと考えられる。しかし、そのような阻害剤の広範な抗炎症効果は、正常な免疫細胞機能を抑制し、感染リスクの増加を潜在的にもたらす可能性がある。したがって、眼の中の作用部位に局所的に送達することができる阻害剤を提供し、それによって有害な全身免疫抑制の可能性を制限することが望ましいと考えられる。
２０１６年１１月２日に出願された、本発明の譲受人に譲渡された米国出願第１５／３４１，２２６号は、ＪＡＫ阻害剤として有用なジアミノ化合物を開示している。特に、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）
【化1】
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】米国出願第１５／３４１，２２６号
【非特許文献】
【0008】
【文献】HoraiおよびCaspi、J Interferon Cytokine Res、２０１１年、３１巻、７３３～７４４頁
【文献】Ooiら、ClinicalMedicine and Research、２００６年、４巻、２９４～３０９頁
【文献】Abcouwer、JClin Cell Immunol、２０１３年、補遺１、１～１２頁
【文献】Sohnら、AmericanJournal of Opthalmology、２０１１年、１５２巻、６８６～６９４頁
【文献】OwenおよびHartnett、Curr Diab Rep、２０１３年、１３巻、４７６～４８０頁
【文献】Cheungら、MolecularVision、２０１２年、１８巻、８３０～８３７頁
【文献】Dongら、MolecularVision、２０１３年、１９巻、１７３４～１７４６頁
【文献】Funatsuら、Ophthalmology、２００９年、１１６巻、７３～７９頁
【文献】Stevensonら、Arch Ophthalmol、２０１２年、１３０巻、９０～１００頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、ＪＡＫ阻害剤５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩を使用して、眼疾患またはその症状を処置する方法に関する。
【0010】
一態様では、本発明は、ヒト患者の眼疾患を処置する方法であって、式
の化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（本明細書では以降、化合物１）、またはその薬学的に許容される塩を、患者の眼に投与することを含む方法を提供する。
【化2】
【0011】
一態様では、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である。特に、眼疾患は、ブドウ膜炎または糖尿病性黄斑浮腫である。
【0012】
別の態様では、本発明は、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）またはその薬学的に許容される塩の医薬組成物を提供し、この医薬組成物は、患者の眼に直接投与するのに適している。
【0013】
本発明はさらに、ある特定の呼吸器疾患を処置するのに化合物１を使用する方法に関する。
【0014】
一態様では、本発明は、哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、哺乳動物に投与することを含み、呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である方法を提供する。
【0015】
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、哺乳動物に投与することを含み、呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎（bronchiolitis obliterans organizing pneumonia）、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である方法を提供する。
本発明では、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物の眼に投与することを含む、方法。
（項目２）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎または糖尿病性黄斑浮腫である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記医薬組成物が、注射によって投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
哺乳動物の眼疾患の処置に使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩。
（項目６）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、項目５に記載の化合物。
（項目７）
哺乳動物の眼疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用。
（項目８）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物に投与することを含み、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である方法。
（項目９）
前記医薬組成物が、吸入によって投与される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与される、項目９に記載の方法。
（項目１２）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物に投与することを含み、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である方法。
（項目１３）
前記医薬組成物が、吸入によって投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
哺乳動物の呼吸器疾患の処置で使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩であって、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である化合物またはその塩。
（項目１７）
哺乳動物の呼吸器疾患の処置で使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩であって、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である化合物またはその塩。
（項目１８）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である使用。
（項目１９）
前記医薬が、吸入による投与に適している、項目１８に記載の使用。
（項目２０）
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、項目１９に記載の使用。
（項目２１）
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、項目１９に記載の使用。
（項目２２）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である使用。
（項目２３）
前記医薬が、吸入による投与に適している、項目２２に記載の使用。
（項目２４）
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、項目２４に記載の使用。
本発明では、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物の眼に投与することを含む、方法。
（項目２）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎または糖尿病性黄斑浮腫である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記医薬組成物が、注射によって投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
哺乳動物の眼疾患の処置に使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩。
（項目６）
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である、項目５に記載の化合物。
（項目７）
哺乳動物の眼疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用。
（項目８）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物に投与することを含み、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である方法。
（項目９）
前記医薬組成物が、吸入によって投与される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与される、項目９に記載の方法。
（項目１２）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を、前記哺乳動物に投与することを含み、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である方法。
（項目１３）
前記医薬組成物が、吸入によって投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記医薬組成物が、ネブライザ吸入器によって投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記医薬組成物が、乾燥粉末吸入器によって投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
哺乳動物の呼吸器疾患の処置で使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩であって、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である化合物またはその塩。
（項目１７）
哺乳動物の呼吸器疾患の処置で使用される、化合物５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩であって、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である化合物またはその塩。
（項目１８）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、またはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である使用。
（項目１９）
前記医薬が、吸入による投与に適している、項目１８に記載の使用。
（項目２０）
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、項目１９に記載の使用。
（項目２１）
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、項目１９に記載の使用。
（項目２２）
哺乳動物の呼吸器疾患を処置するための医薬の製造での、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩の使用であって、前記呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である使用。
（項目２３）
前記医薬が、吸入による投与に適している、項目２２に記載の使用。
（項目２４）
前記医薬が、ネブライザ吸入器による投与に適している、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
前記医薬が、乾燥粉末吸入器による投与に適している、項目２４に記載の使用。
【発明を実施するための形態】
【0016】
化学構造を、本明細書では、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）で実施されるようにＩＵＰＡＣ規則に従い命名する。
さらに、本発明の化合物の構造におけるテトラヒドロイミダゾピリジン部分（moiety）のイミダゾ部分（portion）は、互変異性型で存在する。化合物は、
として等しく表すことができる。
さらに、本発明の化合物の構造におけるテトラヒドロイミダゾピリジン部分（moiety）のイミダゾ部分（portion）は、互変異性型で存在する。化合物は、
【化3】
【0017】
ＩＵＰＡＣ規則によれば、これらの表現は、イミダゾピリジン部分の原子の異なる番号付けをもたらす。したがって、この構造は、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールと表記される。構造が特定の型で図示されまたは命名されるが、本発明はそれらの互変異性体も含むことが理解されよう。
（定義）
（定義）
【0018】
本発明について記述するとき、下記の用語は、他に指示しない限り下記の意味を有する。
【0019】
単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、使用の文脈が他を明示しない限り、対応する複数形の用語を含む。
【0020】
「約」という用語は、指定された値の±５パーセントを意味する。
【0021】
「治療有効量」という用語は、処置を必要とする患者に投与したときに処置を行うのに十分な量、例えば、所望の治療効果を得るのに必要な量を意味する。
【0022】
「処置する」または「処置」という用語は、患者（特に、ヒト）の処置される医学的状態、疾患、もしくは障害（例えば、呼吸器疾患）を予防し、改善し、もしくは抑制すること、または医学的状態、疾患、もしくは障害の症状を軽減させることを意味する。
【0023】
「単位剤形」または「単位用量」という用語は、患者に投薬するのに適した物理的に別個の単位を意味し、即ち、各単位は、単独でまたは１つもしくは複数の追加の単位と組み合わせるかのいずれかで治療効果を生じるように計算された所定量の治療剤を含有する。例には、カプセル剤、錠剤などが含まれる。
【0024】
本明細書で使用されるその他全ての用語は、それらが属する当業者に理解されるような、それらの通常の意味を有するものとする。
【0025】
「薬学的に許容される」という用語は、患者に投与するのに許容されることを意味する（例えば、指定された用法に関して許容される安全性を有する）。
【0026】
「薬学的に許容される塩」という用語は、患者に投与するのに許容される、酸および塩基（両性イオンを含む）から調製された塩（例えば、所与の投薬計画に関して許容される安全性を有する塩）を意味する。
【0027】
代表的な薬学的に許容される塩には、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸、フマル酸、ゲンチジン酸、グルコン酸、グルクロン酸（glucoronic acid）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２，６－ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロト酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、およびキシナホ酸の塩などが含まれる。
【0028】
「それらの塩」という用語は、例えば、酸の水素が金属陽イオンまたは有機陽イオンなどの陽イオンによって置き換えられたときに形成された化合物を意味する。
（化合物１）
（化合物１）
【0029】
本発明の方法は、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）
またはその薬学的に許容される塩を用いる。
【化4】
【0030】
化合物１は、米国出願第１５／３４１，２２６号または添付される実施例に記載されるように調製されてもよい。
【0031】
本発明の一態様では、化合物１は、有意な回折ピークを有する、とりわけ２θ値が６．２０±０．２０、９．５８±０．２０、１７．５３±０．２０、１９．２８±０．２０、および２１．５１±０．２０である、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンによって特徴付けられる結晶質遊離塩基水和物の形で用いられる。結晶質水和物の調製も、米国出願第１５／３４１，２２６号および以下の実施例に記載されている。
（医薬組成物）
（医薬組成物）
【0032】
本発明の化合物、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（１）およびその薬学的に許容される塩は、医薬組成物または医薬製剤の形で、典型的には使用される。そのような医薬組成物は、有利には、口腔、吸入、光注入（optical injection）、局所（経皮を含む）、直腸、経鼻、および非経口の投与形態を含むがこれらに限定されない任意の許容される投与経路によって、患者に投与されてもよい。
【0033】
本発明で使用される医薬組成物は、典型的には、治療有効量の化合物１を含有する。しかし、当業者なら、医薬組成物は、治療有効量よりも多く、即ちバルク組成物を、または治療有効量未満、即ち治療有効量を実現するために複数回投与に向けて設計された個々の単位用量を含有していてもよいことが理解されよう。組成物および使用について論じる場合、化合物１を本明細書では「活性剤」と呼んでもよい。
【0034】
典型的には、医薬組成物は、例えば、約０．０５から約３０重量％、および約０．１から約１０重量％の活性剤を含めて、約０．０１から約９５重量％の活性剤を含有する。
【0035】
任意の従来の担体または賦形剤を、本発明で利用される医薬組成物に使用してもよい。特定の担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組合せの選択は、特定の患者または医学的状態のタイプまたは疾患状態を処置するのに使用される投与形態に依存する。これに関し、特定の投与形態に適した医薬組成物の調製は、十分に医薬分野の当業者の範囲内にある。さらに、本発明の医薬組成物に使用される担体または賦形剤は、市販されている。さらなる例として、従来の製剤技法は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy、２０版、Lippincott Williams & White、Baltimore、Maryland（２０００年）、およびH.C. Anselら、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、７版、Lippincott Williams & White、Baltimore、Maryland（１９９９年）に記載されている。
【0036】
薬学的に許容される担体として働くことができる材料の代表的な例には、限定するものではないが、下記：ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；微結晶質セルロースなどのセルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびセルロースアセテート；粉末化トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐薬ワックスなどの賦形剤；落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩液；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；および医薬組成物に用いられる、その他の無毒性の適合性の物質が含まれる。
【0037】
医薬組成物は、活性剤と薬学的に許容される担体および１種または複数種の任意選択の成分とを完全にかつ密接に混合しまたはブレンドすることによって、典型的には調製される。次いで、得られた均一にブレンドされた混合物を、従来の手順および器材を使用して、錠剤、カプセル剤、丸薬などに成形しまたは投入することができる。
【0038】
一態様では、医薬組成物は、眼注射に適している。この態様では、化合物は、滅菌水性懸濁剤または液剤として製剤化されてもよい。そのような水性製剤に含めてもよい有用な賦形剤には、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロース、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ヒスチジン、α－α－トレハロース二水和物、スクロース、ポリソルベート２０、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、およびリン酸ナトリウムが含まれる。ベンジルアルコールは防腐剤として働いてもよく、等張性を調節するのに塩化ナトリウムを含めてもよい。さらに、塩酸および／または水酸化ナトリウムを、ｐＨ調節のために溶液に添加してもよい。眼注射用の水性製剤は、防腐剤が入っていないものとして調製されてもよい。
【0039】
別の態様では、医薬組成物は、吸入投与に適している。吸入投与用の医薬組成物は、典型的には、エアロゾルまたは粉末の形態で存在する。そのような組成物は、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、ネブライザ吸入器、または類似の送達デバイスなどの吸入器送達デバイスを使用して、一般に投与される。
【0040】
特定の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末吸入器を使用する吸入によって投与される。そのような乾燥粉末吸入器は、吸息中に患者の気流中に分散される自由流動性粉末としての医薬組成物を、典型的には投与する。自由流動性粉末組成物を実現するために、治療剤は、ラクトース、デンプン、マンニトール、デキストロース、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリラクチド－ｃｏ－グリコリド（ＰＬＧＡ）、またはこれらの組合せなどの適切な賦形剤で、典型的には製剤化される。典型的には、治療剤は、微細化され、適切な担体と組み合わせて、吸入に適した組成物に形成される。
【0041】
乾燥粉末吸入器で使用される代表的な医薬組成物は、ラクトース、および微細化形態の本発明の化合物を含む。そのような乾燥粉末組成物は、例えば、乾式粉砕ラクトースと治療剤とを組み合わせ、次いで成分を乾式ブレンドすることによって、作製することができる。次いで組成物を、乾燥粉末ディスペンサーに、または乾燥粉末送達デバイスと共に使用される吸入カートリッジもしくはカプセルに、典型的には投入する。
【0042】
吸入によって治療剤を投与するのに適した乾燥粉末吸入器送達デバイスは、当技術分野において記述されており、そのようなデバイスの例は市販されている。例えば、代表的な乾燥粉末吸入器送達デバイスまたは製品には、Ａｅｏｌｉｚｅｒ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；Ａｉｒｍａｘ（ＩＶＡＸ）；ＣｌｉｃｋＨａｌｅｒ（Ｉｎｎｏｖａｔａ Ｂｉｏｍｅｄ）；Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；Ｄｉｓｋｕｓ／Ａｃｃｕｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；Ｅｌｌｉｐｔａ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；Ｅａｓｙｈａｌｅｒ（Ｏｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ）；Ｅｃｌｉｐｓｅ（Ａｖｅｎｔｉｓ）；ＦｌｏｗＣａｐｓ（Ｈｏｖｉｏｎｅ）；Ｈａｎｄｉｈａｌｅｒ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；Ｐｕｌｖｉｎａｌ（Ｃｈｉｅｓｉ）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＳｋｙｅＨａｌｅｒ／Ｃｅｒｔｉｈａｌｅｒ（ＳｋｙｅＰｈａｒｍａ）；Ｔｗｉｓｔｈａｌｅｒ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）；Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ（Ａｖｅｎｔｉｓ）などが含まれる
【0043】
別の特定の実施形態では、医薬組成物は、定量吸入器を使用する吸入によって投与される。そのような定量吸入器は、圧縮推進ガスを使用して、測定された量の治療剤を典型的には放出する。したがって、定量吸入器を使用して投与される医薬組成物は、治療剤を液化噴射剤に加えた溶液または懸濁液を、典型的には含む。１，１，１，２－テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４ａ）および１，１，１，２，３，３，３－ヘプタフルオロ－ｎ－プロパン（ＨＦＡ ２２７）などのヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）、およびＣＣｌ３Ｆなどのクロロフルオロカーボンを含む、任意の適切な液化噴射剤が用いられてもよい。特定の実施形態では、噴射剤がヒドロフルオロアルカンである。一部の実施形態では、ヒドロフルオロアルカン製剤は、エタノールもしくはペンタンなどの共溶媒、および／またはトリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸、レシチン、およびグリセリンなどの界面活性剤を含有する。
【0044】
定量吸入器で使用される代表的な医薬組成物は、本発明の化合物を約０．０１％から約５重量％、約０％から約２０重量％のエタノール、および約０％から約５重量％の界面活性剤を含み、残りはＨＦＡ噴射剤である。そのような組成物は、冷やしたまたは加圧されたヒドロフルオロアルカンを、治療剤、エタノール（存在する場合）、および界面活性剤（存在する場合）が入っている適切な容器に加えることによって、典型的には調製される。懸濁剤を調製するには、治療剤を微細化し、次いで噴射剤と組み合わせる。次いで組成物をエアロゾルキャニスタに投入し、これは、定量吸入器デバイスの一部を典型的には形成する。
【0045】
吸入によって治療剤を投与するのに適した定量吸入器デバイスは、当技術分野で記述され、そのようなデバイスの例は、市販されている。例えば、代表的な定量吸入器デバイスまたは製品には、ＡｅｒｏＢｉｄ吸入器システム（Ｆｏｒｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；Ａｔｒｏｖｅｎｔ吸入エアロゾル（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；Ｆｌｏｖｅｎｔ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；Ｍａｘａｉｒ吸入器（３Ｍ）；Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ吸入器（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；Ｓｅｒｅｖｅｎｔ吸入エアロゾル（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）などが含まれる。
【0046】
別の特定の態様では、医薬組成物は、ネブライザ吸入器を使用する吸入によって投与される。そのようなネブライザデバイスは、患者の気道内に運ばれるミストとして医薬組成物を噴霧させる高速空気流を、典型的には生成する。したがって、ネブライザ吸入器で使用するために製剤化されたとき、治療剤は適切な担体に溶解して溶液を形成することができる。あるいは、治療剤は、微細化しまたはナノミリングしかつ適切な担体を組み合わせて懸濁剤を形成することができる。
【0047】
ネブライザ吸入器で使用される代表的な医薬組成物は、約０．０５μｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬの本発明の化合物、および霧状にした製剤に適合性の賦形剤を含む、液剤または懸濁剤を含む。一実施形態では、液剤は約３から約８のｐＨを有する。
【0048】
吸入によって治療剤を投与するのに適したネブライザデバイスは、当技術分野で記述されており、そのデバイスの例は市販されている。例えば、代表的なネブライザデバイスまたは製品には、Ｒｅｓｐｉｍａｔ Ｓｏｆｔｍｉｓｔ吸入器（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＡＥＲｘ肺送達システム（Ａｒａｄｉｇｍ Ｃｏｒｐ．）；ＰＡＲＩ ＬＣ Ｐｌｕｓ再使用可能ネブライザ（Ｐａｒｉ ＧｍｂＨ）などが含まれる。
【0049】
さらに別の態様では、本発明の医薬組成物は、代わりに経口投与を意図した剤形に調製されてもよい。経口投与に適した医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸薬、ロゼンジ剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形をとってもよく、または水性もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤として、または水中油もしくは油中水液体エマルジョンとして、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとしてであってもよく、それぞれは、所定量の本発明の化合物を、活性成分として含有してよい。
【0050】
固体剤形での経口投与が意図されるとき、本発明の医薬組成物は、活性剤および１種または複数種の薬学的に許容される担体、例えばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムを、典型的には含む。必要に応じてまたは代替として、そのような固体剤形は：充填剤または増量剤、結合剤、保湿剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、着色剤、および緩衝剤を含んでいてもよい。剥離剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、着香および芳香剤、防腐剤、および抗酸化剤も、本発明の医薬組成物中に存在させることができる。
【0051】
代替の製剤は、制御放出製剤、経口投与用の液体剤形、経皮パッチ、および非経口製剤を含んでいてもよい。そのような代替の製剤を調製する従来の賦形剤および方法は、例えば上掲のRemingtonによる参考文献に記載されている。
【0052】
下記の非限定的な例は、本発明の代表的な医薬組成物を示す。
（眼注射用の水性製剤）
（眼注射用の水性製剤）
【0053】
滅菌水性懸濁液の各ｍＬは、５ｍｇから５０ｍｇの化合物１、等張性用の塩化ナトリウム、防腐剤としての０．９９％（ｗ／ｖ）のベンジルアルコール、０．７５％のカルボキシメチルセルロースナトリウム、および０．０４％のポリソルベートを含む。水酸化ナトリウムまたは塩酸は、ｐＨを５から７．５に調整するのに含めてもよい。
（眼注射用の水性製剤）
（眼注射用の水性製剤）
【0054】
滅菌の防腐剤を含まない水性懸濁剤は、５ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの化合物１を、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０３％のポリソルベート２０、および５％のスクロース中に含む。
（乾燥粉末組成物）
（乾燥粉末組成物）
【0055】
微細化化合物１（１ｇ）を、ミリングしたラクトース（２５ｇ）とブレンドする。次いでこのブレンドされた混合物を、剥離可能なブリスタパックの個々のブリスタ内に、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの間の式Ｉの化合物を得るのに十分な量で投入する。ブリスタの内容物は、乾燥粉末吸入器を使用して投与される。
（乾燥粉末組成物）
（乾燥粉末組成物）
【0056】
微細化化合物１（１ｇ）を、ミリングされたラクトース（２０ｇ）とブレンドして、化合物の、ミリングされたラクトースに対する重量比が１：２０であるバルク組成物を形成する。ブレンドされた組成物を、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの間の式Ｉの化合物を送達することが可能な乾燥粉末吸入デバイスに充填する。
（定量吸入器組成物）
（定量吸入器組成物）
【0057】
微細化化合物１（１０ｇ）を、レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製された溶液中に分散させる。得られた懸濁液を噴霧乾燥し、次いで微細化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子を含む微細化組成物を形成する。次いで微細化組成物を、加圧された１，１，１，２－テトラフルオロエタンが入っている定量吸入器のカートリッジに、この定量吸入器により投与される場合に用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの式Ｉの化合物を得るのに十分な量で投入する。
（ネブライザ組成物）
（ネブライザ組成物）
【0058】
化合物１（２５ｍｇ）を、１．５～２．５当量の塩酸を含有する溶液に溶解し、その後、ｐＨを３．５から５．５に調整するための水酸化ナトリウム、および３重量％のグリセロールを添加する。溶液を、全ての成分が溶解するまで十分撹拌する。溶液は、用量当たり約０．１ｍｇから約４ｍｇの式Ｉの化合物を提供するネブライザデバイスを使用して投与する。
（有用性）
（有用性）
【0059】
本発明の化合物、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であることが示されている。
（眼疾患）
（眼疾患）
【0060】
多くの眼疾患は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症誘発性サイトカインの上昇と関連することが示されている。本発明の化合物は、４種全てのＪＡＫ酵素で強力な阻害を示すので、ＪＡＫを介して信号伝達する数多くのサイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ－２、およびＩＦＮ－γなど）のシグナル伝達および病原性作用を強力に阻害すること、ならびにその生成がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達により推進されるその他のサイトカイン（ＭＣＰ－１およびＩＰ－１０など）の増加を予防することが期待される。
【0061】
特に本発明の化合物は、６．７またはそれよりも大きいｐＩＣ５０値（ＩＣ５０値が２００ｎＭまたはそれよりも低い）を、サイトカイン上昇の下流効果の阻害を記録するアッセイも含めたアッセイ３から７に記述される細胞アッセイでのＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、およびＩＦＮγシグナル伝達の阻害に関して示した。
【0062】
アッセイ８の薬物動態研究は、１回の硝子体内注射後のウサギの眼内での持続曝露と、硝子体組織で観察されたものよりも少なくとも３桁低い血漿中濃度とを実証した。
【0063】
さらに、本発明の化合物の硝子体内投薬は、ラットの網膜／脈絡膜組織でのＩＬ－６誘導性ｐＳＴＡＴ３の有意な阻害、同様に、ウサギの硝子体ならびに網膜／脈絡膜組織でのＩＦＮ－γ誘導性ＩＰ－１０の有意な阻害を実証してきた。
【0064】
有意な全身レベルが存在しない状態での持続的な眼のＪＡＫ阻害は、全身に促される有害作用なしに、強力な局所的抗炎症活性を眼にもたらすと予測される。本発明の化合物は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、およびアトピー性角結膜炎を含むがこれらに限定されないいくつかの眼疾患において、有益であることが予測される。
【0065】
特に、ブドウ膜炎（HoraiおよびCaspi、J Interferon Cytokine Res、２０１１年、３１巻、７３３～７４４頁）、糖尿病性網膜症（Abcouwer、J Clin Cell Immunol、２０１３年、補遺１、１～１２頁）、糖尿病性黄斑浮腫（Sohnら、American Journal of Opthamology、２０１１年、１５２巻、６８６～６９４頁）、ドライアイ疾患（Stevensonら、Arch Ophthalmol、２０１２年、１３０巻、９０～１００頁）、および加齢黄斑変性（Knickelbeinら、Int Ophthalmol Clin、２０１５年、５５巻（３号）、６３～７８頁）は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介して信号伝達するある特定の炎症誘発性サイトカインの上昇によって特徴付けられる。したがって本発明の化合物は、関連する眼炎症を軽減し、かつ疾患の進行を反転させ、または症状緩和をもたらすことが可能であり得る。
【0066】
網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）は、高度に蔓延している視覚障害疾患である。網膜血流の閉塞は、網膜脈管構造の損傷、出血、および組織虚血をもたらし得る。ＲＶＯの原因は多因子的であり、血管メディエーターならびに炎症性メディエーターが共に重要であることが示されている（Deobhaktaら、International Journal ofInflammation、２０１３年、論文ＩＤ４３８４１２）。ＩＬ－６およびＩＬ－１３などのＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介して信号伝達するサイトカイン、ならびにその生成がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって部分的には推進されるＭＣＰ－１などのその他のサイトカインは、ＲＶＯ患者の眼組織で高レベルで検出されてきた（Shchukoら、Indian Journal of Ophthalmology、２０１５年、６３巻（１２号）、９０５～９１１頁）。したがって、化合物１は、関連する眼炎症を軽減し、かつ疾患の進行を反転させ、またはこの疾患の症状緩和をもたらすことが可能であり得る。多くのＲＶＯ患者が光凝固によって処置されるが、これは本質的に破壊的な療法である。抗ＶＥＧＦ剤も使用されるが、それらは一部の患者に有効なだけである。眼の炎症レベルを低減させるステロイド薬物治療（トリアムシノロンアセトニドおよびデキサメタゾン移植）は、ある特定の形のＲＶＯの患者に有益な結果を提供することも示されてきたが、それらは白内障、および眼圧上昇／緑内障を引き起こすことも示されてきた。
【0067】
したがって一態様では、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールまたはその薬学的に許容される塩を、哺乳動物の眼に投与することを含む方法を提供する。一態様では、眼疾患がブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞症、またはアトピー性角結膜炎である。一態様では、方法は、硝子体内注射によって本発明の化合物を投与することを含む。
（呼吸器疾患）
（呼吸器疾患）
【0068】
本発明の化合物、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（１）は、Ｔ細胞活性化の阻害、炎症に関連したサイトカインの阻害、およびげっ歯類の肺好酸球増加および好中球増加アッセイにおける活性を、実証してきた。したがって化合物は、ある特定の呼吸器疾患の処置に有用であると考えられる。
【0069】
好酸球性気道炎症は、好酸球性肺疾患とまとめて呼ばれる疾患の特徴的フィーチャである（Cottinら、Clin. Chest. Med.、２０１６年、３７巻（３号）、５３５～５６頁）。好酸球性疾患は、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、およびＩＬ－５シグナル伝達に関連付けられている。好酸球性肺疾患は、感染症（特に蠕虫感染症）、薬物誘発性肺臓炎（例えば、抗生物質、フェニトイン、またはｌ－トリプトファンなどの治療薬物によって誘発される）、真菌誘発性肺臓炎（例えば、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、過敏性肺臓炎、および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（以前は、チャーグ・ストラウス症候群として公知）を含む。未知の病因の好酸球性肺疾患には、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、およびレフレル症候群が含まれる。化合物１は、アッセイ１３のげっ歯類気道モデルで肺好酸球を有意に低減させること、および細胞アッセイでのＩＬ－１３、ＩＬ－４、およびＩＬ－２のシグナル伝達を強力に阻害することが示されてきた。
【0070】
ＩＬ－６遺伝子の多形性は、高いＩＬ－６レベル、および肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）を発生させる増大したリスクに関連していた（Fangら、J Am Soc Hypertens.、Interleukin-6 -572C/G polymorphism is associated with seruminterleukin-6 levels and risk of idiopathic pulmonary arterial hypertension、２０１７年、印刷発行前）。ＰＡＨにおけるＩＬ－６の役割が裏付けられ、ＩＬ－６受容体鎖ｇｐ１３０の阻害はＰＡＨのラットモデルでの疾患を改善した（Huangら、Can J Cardiol.、２０１６年、３２巻（１１号）、１３５６．ｅ１～１３５６．ｅ１０）。本発明の化合物は、ＩＬ－６シグナル伝達を阻害することが示されている。
【0071】
ＩＦＮγ、ＩＬ－１２、およびＩＬ－６などのサイトカインは、サルコイドーシスおよびリンパ管平滑筋腫症などの、ある範囲の非アレルギー性肺疾患に関与していた（El-Hashemiteら、Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.、２００５年、３３巻、２２７～２３０頁、およびEl-Hashemiteら、Cancer Res.、２００４年、６４巻、３４３６～３４４３頁）。本発明の化合物は、ＩＬ－６およびＩＦＮγシグナル伝達を阻害することも示されている。
【0072】
気管支拡張症および浸潤性肺疾患は、慢性好中球性炎症を伴う疾患である。本発明の化合物は、げっ歯類モデルの気道好中球増加を阻害することが示されてきた。
【0073】
病理的Ｔ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において極めて重要である。自己反応性Ｔ細胞は、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎（ＣＯＰ［特発性器質化肺炎］とも呼ばれる）において、ある役割を演ずる。より最近では、免疫チェックポイント阻害剤が肺臓炎を誘発し、別のＴ細胞媒介性肺疾患は、免疫チェックポイント阻害剤の使用の増加により出現した。これらのＴ細胞刺激剤で処置したがん患者では、致命的な肺臓炎が発生する可能性がある。本発明の化合物は、ヒト末梢血単核細胞から単離されたＴ細胞での活性化を阻害することが示されている。
【0074】
したがって一態様では、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の呼吸器疾患を処置する方法であって、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールもしくはその薬学的に許容される塩、または薬学的に許容される担体および本発明の化合物を含む医薬組成物、またはその薬学的に許容される塩を、哺乳動物に投与することを含み、呼吸器疾患が、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋腫症、気管支拡張症、または浸潤性肺疾患である方法を提供する。
【0075】
別の態様では、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の呼吸器疾患を処置する方法であって、本発明の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または薬学的に許容される担体および本発明の化合物を含む医薬組成物、またはそれらの薬学的に許容される塩を、哺乳動物に投与することを含み、呼吸器疾患が、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフレル症候群、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である方法を提供する。
【0076】
ＪＡＫ－シグナル伝達サイトカインは、Ｔ細胞、多くの免疫プロセスの中核をなす免疫細胞のサブタイプの活性化において、主な役割も演ずる。病理的Ｔ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において極めて重要である。自己反応性Ｔ細胞は、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎（ＣＯＳとも呼ぶ）において、ある役割を演ずる。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶反応の病因は、移植されたドナーの肺によるレシピエントＴ細胞の異常なＴ細胞活性化に関連付けられる。肺移植拒絶反応は、一次移植不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶反応（ＡＲ）、もしくはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）のように早期に生じる可能性があり、または慢性肺同種移植不全（ＣＬＡＤ）のように肺移植から何年も後に生じる可能性がある。ＣＬＡＤは、閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として既に公知であるが、現在は、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）、および好中球性同種移植不全を含む種々の病理的徴候を有し得る症候群と見なされる。慢性肺同種移植不全（ＣＬＡＤ）は、移植された肺の機能を徐々に失わせるので、肺移植レシピエントの長期管理における主な課題である（Gauthierら、Curr Transplant Rep.、２０１６年、３巻（３号）、１８５～１９１頁）。ＣＬＡＤは、処置に対する応答が不十分であり、したがって、この状態を予防または処置することが可能な、有効な化合物が未だに求められている。ＩＦＮ－γおよびＩＬ－５などのいくつかのＪＡＫ－依存性サイトカインは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶反応で上方制御される（Berasteguiら、Clin Transplant. ２０１７年、３１巻、ｅ１２８９８）。さらに、ＪＡＫ－依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にある、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０などのＣＸＣＲ３ケモカインの高い肺レベルは、肺移植患者の悪化する結果に関連する（Shinoら、PLOS One、２０１７年、１２巻（７号）、ｅ０１８０２８１）。全身性ＪＡＫ阻害は、腎臓移植拒絶反応で有効であることが示されている（Vicentiら、American Journal of Transplantation、２０１２年、１２巻、２４４６～５６頁）。したがってＪＡＫ阻害剤は、肺移植拒絶反応およびＣＬＡＤを処置しまたは予防するのに有効である潜在性を有する。肺移植拒絶反応の根拠として記述される類似のＴ細胞活性化事象も、造血幹細胞移植後に生じる可能性のある肺移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の主な駆動因子と見なされる。ＣＬＡＤと同様に、肺ＧＶＨＤは、極めて不十分な結果になる慢性の進行性状態であり、どの処置も現在認可されていない。サルベージ療法として全身ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを受けたステロイド難治性急性または慢性ＧＶＨＤの９５名の患者の遡及的な多施設調査研究は、肺ＧＶＨＤを持つ患者を含む大多数の患者において、ルキソリチニブに対する完全なまたは部分的な応答を実証した（Zeiserら、Leukemia、２０１５年、２９巻、１０号、２０６２～６８頁）。全身ＪＡＫ阻害は、深刻な有害事象および小さい治療指数に関連するので、肺移植拒絶反応または肺ＧＶＨＤを予防および／または処置するための、吸入型肺指向性非全身ＪＡＫ阻害剤が未だに求められている。
【0077】
したがって、本開示はさらに、哺乳動物における上記の追加の呼吸器状態を処置する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容される塩を、哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
（胃腸炎症性疾患）
（胃腸炎症性疾患）
【0078】
ＪＡＫ阻害剤として、化合物１またはその薬学的な塩は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎、および左側結腸炎）、クローン病、膠原性大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主疾患関連大腸炎、および感染性大腸炎を含むがこれらに限定されない胃腸炎症性疾患を処置するのに有用であり得る。潰瘍性大腸炎（Reimundら、J Clin Immunology、１９９６年、１６巻、１４４～１５０頁）、クローン病（Woywodtら、Eur J Gastroenterology Hepatology、１９９９年、１１巻、２６７～２７６頁）、膠原性大腸炎（Kumawatら、Mol Immunology、２０１３年、５５巻、３５５～３６４頁）、リンパ球性大腸炎（Kumawatら、２０１３年）、好酸球性食道炎（Weinbrand-Goichbergら、Immunol Res、２０１３年、５６巻、２４９～２６０頁）、移植片対宿主疾患関連大腸炎（Coghillら、Blood、２００１年、１１７巻、３２６８～３２７６頁）、感染性大腸炎（Stallmachら、Int J Colorectal Dis、２００４年、１９巻、３０８～３１５頁）、ベーチェット病（Zhouら、Autoimmun Rev、２０１２年、１１巻、６９９～７０４頁）、セリアック病（de Nittoら、World J Gastroenterol、２００９年、１５巻、４６０９～４６１４頁）、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ－４阻害剤誘発性大腸炎；（Yanoら、J Translation Med、２０１４年、１２巻、１９１頁）、ＰＤ－１－またはＰＤ－Ｌ１阻害剤誘発性大腸炎）、および回腸炎（Yamamotoら、Dig Liver Dis、２００８年、４０巻、２５３～２５９頁）は、ある特定の炎症誘発性サイトカイレベルの上昇によって特徴付けられる。多くの炎症誘発性サイトカインはＪＡＫ活性化を介して信号伝達するので、本出願に記述される化合物は、炎症を軽減させることができかつ症状緩和をもたらすことができ得る。
（炎症性皮膚疾患）
（炎症性皮膚疾患）
【0079】
アトピー性皮膚炎およびその他の炎症性皮膚疾患は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依拠する炎症誘発性サイトカインの上昇を伴っていた。したがって、化合物１またはその薬学的な塩は、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、乾癬、皮膚筋炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Netchiporoukら、Cell Cycle. ２０１４年、１３巻、３３３１～３３３５頁）およびサブタイプ（セザリー症候群、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、リンパ腫様丘疹症、慢性苔癬様粃糠疹、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、ＣＤ３０＋皮膚Ｔ細胞リンパ腫、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、非菌状息肉腫ＣＤ３０－皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫、レンネルトリンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫）、結節性痒疹、扁平苔癬、一次局所皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主疾患の皮膚症状、類天疱瘡、円板状ループス、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰／陰嚢／肛門周囲掻痒、硬化性苔癬、ヘルペス後鎮痙痛掻痒、毛孔性扁平苔癬、および禿髪性毛包炎を含むがこれらに限定されない、いくつかの皮膚炎症または掻痒状態に有益となり得る。特に、アトピー性皮膚炎（Baoら、JAK-STAT、２０１３年、２巻、ｅ２４１３７）、円形脱毛症（Xingら、Nat Med. ２０１４年、２０巻、１０４３～１０４９頁）、白斑（Craiglowら、JAMA Dermatol. ２０１５年、１５１巻、１１１０～１１１２頁）、結節性痒疹（Sonkolyら、J Allergy Clin Immunol. ２００６年、１１７巻、４１１～４１７頁）、扁平苔癬（Welz-Kubiakら、J Immunol Res. ２０１５年、ＩＤ：８５４７４７）、一次局所皮膚アミロイドーシス（Tanakaら、Br J Dermatol. ２００９年、１６１巻、１２１７～１２２４頁）、水疱性類天疱瘡（Felicianiら、Int J Immunopathol Pharmacol. １９９９年、１２巻、５５～６１頁）、および移植片対宿主疾患の皮膚症状（Okiyamaら、J Invest Dermatol. ２０１４年、１３４巻、９９２～１０００頁）は、ＪＡＫ活性化を介して信号伝達するある特定のサイトカインの上昇によって特徴付けられる。したがって、化合物１またはその薬学的に許容される塩は、これらのサイトカインによって推進される関連ある皮膚炎症または掻痒を軽減することを可能にし得る。
（その他の疾患）
（その他の疾患）
【0080】
化合物１またはその薬学的に許容される塩は、その他の炎症性疾患、自己免疫疾患、またはがんなどの、その他の疾患を処置するのに有用であり得る。化合物１またはその薬学的に許容される塩は、関節炎、リウマチ様関節炎、若年性関節リウマチ、移植拒絶反応、眼球乾燥、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン疾患、脊髄異形成症候群、疼痛、サルコペニア、悪液質、敗血症性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌、ホジキン病、乳がん、多発性骨髄腫、メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、卵巣明細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性多血症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫、および重症型地中海貧血の１つまたは複数を処置するのに有用であり得る。
（併用療法）
（併用療法）
【0081】
本開示の化合物１またはその薬学的に許容される塩は、疾患を処置するのに同じメカニズムによってまたは異なるメカニズムによって作用する１種または複数種の薬剤と組み合わせて使用されてもよい。異なる薬剤は、逐次的にまたは同時に、別々の組成物でまたは同じ組成物で投与されてもよい。併用療法に有用な種類の薬剤には、ベータ２アドレナリン作用性受容体アゴニスト、ムスカリン性受容体アンタゴニスト、グルココルチコイドアゴニスト、Ｇタンパク質共役受容体－４４アンタゴニスト、ロイコトリエンＤ４アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ３受容体アンタゴニスト、ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト、免疫グロブリンＥアンタゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤、ＩＬ－４アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ１受容体アンタゴニスト、ヒスタミン受容体アンタゴニスト、ＩＬ－１３アンタゴニスト、ＩＬ－５アンタゴニスト、５－リポキシゲナーゼ阻害剤、ベータアドレナリン作用性受容体アゴニスト、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ＣＦＴＲ刺激因子、免疫グロブリン修飾因子、インターロイキン３３リガンド阻害剤、ＰＤＥ３阻害剤、ホスホイノシチド－３キナーゼデルタ阻害剤、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、エラスターゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、トリコトリエンＥ４アンタゴニスト、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＰＧＤ２アンタゴニスト、ＴＮＦアルファリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、補体カスケード阻害剤、エオタキシンリガンド阻害剤、グルタチオンレダクターゼ阻害剤、ヒスタミンＨ４受容体アンタゴニスト、ＩＬ－６アンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激因子、免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＢ修飾因子、インターフェロンガンマリガンド、インターロイキン１３リガンド阻害剤、インターロイキン１７リガンド阻害剤、Ｌ－セレクチンアンタゴニスト、白血球エラスターゼ阻害剤、ロイコトリエンＣ４アンタゴニスト、ロイコトリエンＣ４シンターゼ阻害剤、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、メタロプロテアーゼ－１２阻害剤、メタロプロテアーゼ－９阻害剤、ダニアレルゲン修飾因子、ムスカリン性受容体修飾因子、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト、核因子カッパＢ阻害剤、ｐ－セレクチンアンタゴニスト、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ホスホイノシチド－３キナーゼガンマ阻害剤、ＴＬＲ－７アゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、アセチルコリン受容体アンタゴニスト、酸性哺乳動物キチナーゼ阻害剤、ＡＣＴＨ受容体アゴニスト、アクチン重合修飾因子、アデノシンＡ１受容体アンタゴニスト、アデニル酸シクラーゼ刺激因子、アドレナリン作用性受容体アンタゴニスト、副腎皮質刺激ホルモンリガンド、アルコールデヒドロゲナーゼ５阻害剤、アルファ１抗トリプシン刺激因子、アルファ１プロテイナーゼ阻害剤、アンドロゲン受容体修飾因子、アンギオテンシン変換酵素２刺激因子、ＡＮＰアゴニスト、Ｂｃｒタンパク質阻害剤、ベータ１アドレナリン作用性受容体アンタゴニスト、ベータ２アドレナリン作用性受容体アンタゴニスト、ベータ２アドレナリン作用性受容体修飾因子、ベータアミロイド修飾因子、ＢＭＰ１０遺伝子阻害剤、ＢＭＰ１５遺伝子阻害剤、カルシウムチャネル阻害剤、カテプシンＧ阻害剤、ＣＣＬ２６遺伝子阻害剤、ＣＣＲ３ケモカイン修飾因子、ＣＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、シャペロニン刺激因子、キチナーゼ阻害剤、コラーゲンＩアンタゴニスト、補体Ｃ３阻害剤、ＣＳＦ－１アンタゴニスト、ＣＸＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、サイトカイン受容体共通ベータ鎖修飾因子、細胞毒性Ｔリンパ球タンパク質－４刺激因子、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激因子、デオキシリボヌクレアーゼ刺激因子、ジペプチジルペプチターゼＩ阻害剤、ＤＮＡギラーゼ阻害剤、ＤＰプロスタノイド受容体修飾因子、Ｅ－セレクチンアンタゴニスト、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ受容体阻害剤、エラスチン修飾因子、エンドセリンＥＴ－Ａアンタゴニスト、エンドセリンＥＴ－Ｂアンタゴニスト、エポキシドヒドロラーゼ阻害剤、ＦＧＦ３受容体アンタゴニスト、Ｆｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＧＡＴＡ３転写因子阻害剤、グルコシルセラミダーゼ修飾因子、グルタミン酸受容体修飾因子、ＧＭ－ＣＳＦリガンド阻害剤、グアニル酸シクラーゼ刺激因子、Ｈ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤、ヘモグロビン修飾因子、ヘパリンアゴニスト、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ－２刺激因子、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、Ｉ－カッパＢキナーゼベータ阻害剤、ＩＣＡＭ１遺伝子阻害剤、ＩＬ－１７アンタゴニスト、ＩＬ－１７受容体修飾因子、ＩＬ－２３アンタゴニスト、ＩＬ－４受容体修飾因子、免疫グロブリンＧ修飾因子、免疫グロブリンＧ１アゴニスト、免疫グロブリンＧ１修飾因子、免疫グロブリンイプシロンＦｃ受容体ＩＡアンタゴニスト、免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＢアンタゴニスト、免疫グロブリンカッパ修飾因子、インスリン増感剤、インターフェロンベータリガンド、インターロイキン１様受容体アンタゴニスト、インターロイキン１８リガンド阻害剤、インターロイキン受容体１７Ａアンタゴニスト、インターロイキン－１ベータリガンド阻害剤、インターロイキン－５リガンド阻害剤、インターロイキン－６リガンド阻害剤、ＫＣＮＡ電位依存性カリウムチャネル－３阻害剤、キットリガンド阻害剤、ラミニン－５アゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ１受容体アンタゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ２受容体アンタゴニスト、ＬＯＸＬ２遺伝子阻害剤、Ｌｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＡＲＣＫＳタンパク質阻害剤、ＭＤＲ関連タンパク質４阻害剤、メタロプロテアーゼ－２修飾因子、メタロプロテアーゼ－９修飾因子、ミネラロコルチコイド受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ２受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ４受容体アンタゴニスト、ムスカリン性Ｍ５受容体アンタゴニスト、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａアゴニスト、ナチュラルキラー細胞受容体修飾因子、ニコチン性ＡＣｈ受容体アルファ７サブユニット刺激因子、ＮＫ細胞受容体修飾因子、核因子カッパＢ修飾因子、オピオイド成長因子受容体アゴニスト、Ｐ－糖タンパク質阻害剤、Ｐ２Ｘ３プリン受容体アンタゴニスト、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ペプチダーゼ１修飾因子、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホリパーゼＣ阻害剤、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１阻害剤、血小板活性化因子受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、プロスタサイクリンアゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ＳＨ２ドメインイノシトールホスファターゼ１刺激因子、シグナル伝達阻害剤、ナトリウムチャネル阻害剤、ＳＴＡＴ－３修飾因子、幹細胞抗原－１阻害剤、スーパーオキシドジスムターゼ修飾因子、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８阻害剤、ＴＧＦベータアゴニスト、ＴＧＦベータアンタゴニスト、トロンボキサンシンセターゼ阻害剤、胸腺間質リンホプロテインリガンド阻害剤、チモシンアゴニスト、チモシンベータ４リガンド、ＴＬＲ－８アゴニスト、ＴＬＲ－９アゴニスト、ＴＬＲ９遺伝子刺激因子、トポイソメラーゼＩＶ阻害剤、トロポニンＩ速骨格筋刺激因子、トロポニンＴ速骨格筋刺激因子、Ｉ型ＩＬ－１受容体アンタゴニスト、ＩＩ型ＴＮＦ受容体修飾因子、イオンチャネル修飾因子、ウテログロビン刺激因子、およびＶＩＰアゴニストが含まれるがこれらに限定するものではない。
【0082】
本発明のＪＡＫ阻害剤化合物１と組み合わせて使用され得る特定の薬剤には、酢酸ロシプトール（rosiptor acetate）、臭化ウメクリジニウム、セクキヌマブ、酢酸メテンケファリン、酢酸トリデカクチド、プロピオン酸フルチカゾン、アルファ－シクロデキストリン安定化スルホラファン、テゼペルマブ、フロ酸モメタゾン、ＢＩ－１４６７３３５、ズピルマブ、アクリジニウム、ホルモテロール、ＡＺＤ－１４１９、ＨＩ－１６４０Ｖ、リビパンセル、ＣＭＰ－００１、マンニトール、ＡＮＢ－０２０、オマリズマブ、トレガリズマブ、Mitizax、ベンラリズマブ、ゴリムマブ、ロフルミラスト、イマチニブ、ＲＥＧＮ－３５００、マシチニブ、アプレミラスト、ＲＰＬ－５５４、Actimmune、アダリムマブ、ルパタジン、パログレリル、ＭＫ－１０２９、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フマル酸ホルモテロール、モガムリズマブ、セラトロダスト、ＵＣＢ－４１４４、ネミラリシブ、ＣＫ－２１２７１０７、フェビピプラント、ダニリキシン、ボセンタン、アバタセプト、ＥＣ－１８、ズベリシブ、ドシパルスタット、シプロフロキサシン、サルブタモールＨＦＡ、エルドステイン、ＰｒＥＰ－００１、ネドクロミル、ＣＤＸ－０１５８、サルブタモール、エノボサルム、Ｒ－ＴＰＲ－０２２、レンジルマブ、フロ酸フルチカゾン、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、サルメテロール、ＰＴ－００７、ＰＲＳ－０６０、レメステムセル－Ｌ、シトルリン、ＲＰＣ－４０４６、一酸化窒素、ＤＳ－１０２、ゲリリムズマブ、アシテア、フロ酸フルチカゾン、ウメクリジニウム、ビランテロール、ＡＧ－ＮＰＰ７０９、Gamunex、インフリキシマブ、アンピオン、アクマピモド、カナキヌマブ、ＩＮＳ－１００７、ＣＹＰ－００１、シルクマブ、プロピオン酸フルチカゾン、メポリズマブ、ピタバスタチン、ソリスロマイシン、エタネルセプト、イバカフトル、アナキンラ、ＭＰＣ－３００－ＩＶ、臭化グリコピロニウム、臭化アクリジニウム、ＦＰ－０２５、リサンキズマブ、グリコピロニウム、フマル酸ホルモテロール、Adipocell、ＹＰＬ－００１、臭化チオトロピウム、臭化グリコピロニウム、マレイン酸インダカテロール、アンデカリキシマブ、オロダテロール、エソメプラゾール、イエダニワクチン、ヨモギ花粉アレルゲンワクチン、バモロロン、ゲファピキクサント（gefapixant）、レベフェナシン、ゲフィチニブ、レジョイン（ReJoin）、チペルカスト、ベドラドリン、ＳＣＭ－ＣＧＨ、ＳＨＰ－６５２、ＲＮＳ－６０、ブロダルマブ、ＢＩＯ－１１００６、臭化ウメクリジニウム、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、臭化イプラトロピウム、トラロキヌマブ、ＰＵＲ－１８００、ＶＸ－５６１、ＶＸ－３７１、オロパタジン、ツロブテロール、フマル酸ホルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レスリズマブ、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フマル酸ホルモテロール、臭化チオトロピウム、リゲリズマブ、ＲＵＴＩ、ベルチリムマブ、オマリズマブ、臭化グリコピロニウム、ＳＥＮＳ－１１１、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ＣＨＦ－５９９２、ＬＴ－４００１、インダカテロール、臭化グリコピロニウム、フロ酸モメタゾン、フェキソフェナジン、臭化グリコピロニウム、アジスロマイシン、ＡＺＤ－７５９４、ホルモテロール、ＣＨＦ－６００１、バテフェンテロール、ＯＡＴＤ－０１、オロダテロール、ＣＪＭ－１１２、ロシグリタゾン、サルメテロール、セチピプラント、吸入インターフェロンベータ、ＡＺＤ－８８７１、プレカナチド、フルチカゾン、サルメテロール、エイコサペンタエン酸モノグリセリド、レブリキズマブ、ＲＧ－６１４９、ＱＢＫＰＮ、モメタゾン、インダカテロール、ＡＺＤ－９８９８、ピルビン酸ナトリウム、ジロートン、ＣＧ－２０１、イミダフェナシン、ＣＮＴＯ－６７８５、ＣＬＢＳ－０３、モメタゾン、ＲＧＮ－１３７、プロカテロール、ホルモテロール、ＣＣＩ－１５１０６、ＰＯＬ－６０１４、インダカテロール、ベクロメタゾン、ＭＶ－１３０、ＧＣ－１１１２、アレルゴバクデポー（Allergovac depot）、ＭＥＤＩ－３５０６、ＱＢＷ－２５１、ＺＰＬ－３８９、ウデナフィル、ＧＳＫ－３７７２８４７、レボセチリジン、ＡＸＰ－１２７５、ＡＤＣ－３６８０、チマピプラント、アベジテロール、ＡＺＤ－７５９４、臭化イプラトロピウム、硫酸サルブタモール、タデキニグアルファ、ＡＣＴ－７７４３１２、ドルナーゼアルファ、イロプロスト、バテフェンテロール、フロ酸フルチカゾン、アリカホルセン、シクレソニド、エメラミド、アルホルモテロール、ＳＢ－０１０、オザグレル、ＢＴＴ－１０２３、デクトレクマブ、レバルブテロール、プランルカスト、ヒアルロン酸、ＧＳＫ－２２９２７６７、ホルモテロール、ＮＯＶ－１４、ルシナクタント、サルブタモール、プレドニゾロン、エバスチン、シペシル酸デキサメタゾン、ＧＳＫ－２５８６８８１、ＢＩ－４４３６５１、ＧＳＫ－２２５６２９４、ＶＲ－１７９、ＶＲ－０９６、ｈｄｍ－ＡＳＩＴ＋、ブデソニド、ＧＳＫ－２２４５０３５、ＶＴＸ－１４６３、エメダスチン、デクスプラミペキソール、レバルブテロール、Ｎ－６０２２、リン酸デキサメタゾンナトリウム、ＰＩＮ－２０１１０４、ＯＰＫ－００１８、ＴＥＶ－４８１０７、スプラタスト、ＢＩ－１０６０４６９、ゲミルカスト、インターフェロンガンマ、ダラザチド、ビラスチン、プロピオン酸フルチカゾン、キシナホ酸サルメテロール、ＲＰ－３１２８、臭化ベンシクロキジウム、レスリズマブ、ＰＢＦ－６８０、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、プランルカスト、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、臭化チオトロピウム一水和物、マシルカスト、ＲＧ－７９９０、ドキソフィリン、アベジテロール、臭化グリコピロニウム、ＴＥＶ－４６０１７、ＡＳＭ－０２４、プロピオン酸フルチカゾン、臭化グリコピロニウム、キシナホ酸サルメテロール、サルブタモール、ＴＡ－２７０、フルニソリド、クロモグリク酸ナトリウム、Ｅｐｓｉ－ｇａｍ、ＺＰＬ－５２１、サルブタモール、アビプタジル、ＴＲＮ－１５７、ザフィルルカスト、Stempeucel、ペミロラストナトリウム、ナドロール、プロピオン酸フルチカゾン＋キシナホ酸サルメテロール、ＲＶ－１７２９、硫酸サルブタモール、二酸化炭素＋臭化パーフルオロオクチル、ＡＰＬ－１、デクトレクマブ＋ＶＡＫ－６９４、アセチルサリチル酸リシン、ジロートン、ＴＲ－４、ヒト同種脂肪由来間葉系前駆細胞療法、ＭＥＤＩ－９３１４、ＰＬ－３９９４、ＨＭＰ－３０１、ＴＤ－５４７１、ＮＫＴＴ－１２０、ペミロラスト、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トランチンテロール、アルファルミノール一ナトリウム（monosodium alpha luminol）、ＩＭＤ－１０４１、ＡＭ－２１１、ＴＢＳ－５、ＡＲＲＹ－５０２、セラトロダスト、組換えミジスマーゼ、ＡＳＭ－８、デフラザコルト、バンブテロール、ＲＢｘ－１００１７６０９、イプラトロピウム＋フェノテロール、フルチカゾン＋ホルモテロール、エピナスチン、ＷＩＮ－９０１Ｘ、ＶＡＬＥＲＧＥＮ－ＤＳ、ＯｌｉｇｏＧ－ＣＯＰＤ－５／２０、ツロブテロール、オキシス タービュヘイラー（oxis Turbuhaler）、ＤＳＰ－３０２５、ＡＳＭ－０２４、ミゾラスチン、ブデソニド＋サルメテロール、ＬＨ－０１１、ＡＸＰ－Ｅ、ヒスタミンヒト免疫グロブリン、ＹＨＤ－００１、テオフィリン、アンブロキソール＋エルドステイン、ラマトロバン、モンテルカスト、プランルカスト、ＡＧ－１３２１００１、ツロブテロール、イプラトロピウム＋サルブタモール、トラニラスト、スレプタン酸メチルプレドニゾロン、コルホルシンダロペート、レピリナスト、およびドキソフィリンが含まれるがこれらに限定するものではない。
【0083】
本明細書には、化合物１、またはその薬学的に許容される塩、および１種または複数種のその他の治療剤を含む、医薬組成物も提供される。治療剤は、上記にて指定された薬剤の種類から、および上記の特定の薬剤のリストから選択されてもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、肺に送達するのに適している。一部の実施形態では、医薬組成物は、吸入または霧状にした投与に適している。一部の実施形態では、医薬組成物は、乾燥粉末または液体組成物である。
【0084】
さらに方法の態様では、本発明は、化合物１またはその薬学的に許容される塩、および１種または複数種のその他の治療剤を、哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物の疾患または障害を処置する方法を提供する。
【0085】
併用療法で使用される場合、薬剤は、単一の医薬組成物に製剤化されてもよく、または薬剤は、同じまたは異なる投与経路によって同時にまたは別々の時間に投与される個別の組成物で提供されてもよい。そのような組成物は、個別にパックすることができ、またはキットとして一緒にパックされてもよい。キット内の２種またはそれよりも多くの治療剤は、同じ投与経路によってまたは異なる投与経路によって投与されてもよい。
【0086】
本発明の化合物は、以下の実施例に記述されるように、酵素結合アッセイにおいてＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２酵素の強力な阻害剤であること、細胞アッセイにおいて細胞毒性のない強力な機能的活性を有すること、および前臨床モデルにおいてＪＡＫ阻害の薬力学的効果を生じることが実証されてきた。
【実施例】
【0087】
下記の合成および生物学的実施例は、本発明を例示するために提供され、本発明の範囲を如何様にも限定すると解釈するものではない。下記の実施例において、以下の略称は、他に指示されない限り下記の意味を有する。以下に定義されていない略称は、それらの一般に受け入れられる意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ－メチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ｍｉｎ＝分
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ＮＢＳ＝Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＲＴ＝室温
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）二ホウ素＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’－オクタメチル－［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２＝ジクロロメタンとのジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－フェロセン）－ジパラジウム（ＩＩ）錯体
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ－メチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ｍｉｎ＝分
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ＮＢＳ＝Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＲＴ＝室温
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）二ホウ素＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’－オクタメチル－［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２＝ジクロロメタンとのジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－フェロセン）－ジパラジウム（ＩＩ）錯体
【0088】
試薬および溶媒は、商業上の供給元（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入し、さらに精製することなく使用した。反応混合物の進行状態を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析高性能液体クロマトグラフィー（分析ＨＰＬＣ）、および質量分析法によってモニタした。反応混合物を、各反応において特に記述されるように作り上げ、一般にそれらは、抽出およびその他の精製方法、例えば温度依存性結晶化および溶媒依存性結晶化、および沈殿によって精製した。さらに、反応混合物を、カラムクロマトグラフィーによってまたは分取ＨＰＬＣによって通常通りに、典型的にはＣ１８またはＢＤＳカラム充填および従来の溶離液を使用して精製した。典型的な分取ＨＰＬＣ条件を、以下に記述する。
【0089】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ－ＮＭＲ分光法によって通常通り実施した。ＮＭＲ分析では、試料を重水素化溶媒（ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３、またはｄ６－ＤＭＳＯなど）に溶解し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを、標準観察条件下、Ｖａｒｉａｎ Ｇｅｍｉｎｉ ２０００機器（４００ＭＨｚ）で獲得した。化合物の質量分析による同定を、自動精製システムに連結されたＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）モデルＡＰＩ １５０ＥＸ機器またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）３１００機器で、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｃ１８、５μｍ ２１．２×１５０ｍｍ、またはＣ１８、５μｍ ２１×２５０、またはＣ１４、５μｍ ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流量：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ
注入体積：（１００～１５００μＬ）
検出器波長：２１４ｎｍ
（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｃ１８、５μｍ ２１．２×１５０ｍｍ、またはＣ１８、５μｍ ２１×２５０、またはＣ１４、５μｍ ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流量：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ
注入体積：（１００～１５００μＬ）
検出器波長：２１４ｎｍ
【0090】
粗製化合物を、約５０ｍｇ／ｍＬで、１：１の水：酢酸に溶解した。４分の分析規模の試験操作を、２．１×５０ｍｍ Ｃ１８カラムを使用して実施し、その後に、１５または２０分の分取規模の操作を、分析規模の試験操作の％Ｂ保持をベースにした勾配で、１００μＬ注入を使用して行った。正確な勾配は、試料に依存的であった。不純物が近くを流れる試料を、最良の分離に関し、２１×２５０ｍｍ Ｃ１８カラム、および／または２１×１５０ｍｍ Ｃ１４カラムでチェックした。所望の生成物を含有する画分を、質量分析による分析によって同定した。
（分析ＨＰＬＣ条件）
（方法Ａ）
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｂｏｎｕｓ－ＲＰ Ｃ１８、１５０×４．６０ｎｍ、３．５ミクロン
カラム温度：４０℃
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
試料の調製：１：１のＡＣＮ：１Ｍ ＨＣｌに溶解
移動相：Ａ＝水：ＴＦＡ（９９．９５：０．０５）
Ｂ＝ＡＣＮ：ＴＦＡ（９９．９５：０．０５）
検出器の波長：２５４ｎｍおよび２１４ｎｍ
勾配：合計２６分（時間（分）／％Ｂ）：０／５、１８／９０、２２／９０、２２．５／９０、２６／５
（方法Ｂ）
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ Ｂｏｎｕｓ－ＲＰ、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ
カラム温度：３０℃
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：１０μＬ
移動相：Ａ＝ＡＣＮ：水：ＴＦＡ（２：９８：０．１）
Ｂ＝ＡＣＮ：水：ＴＦＡ（９０：１０：０．１）
試料の調製：移動相Ｂに溶解
検出器の波長：２５４ｎｍおよび２１４ｎｍ
勾配：合計６０分（時間（分）／％Ｂ）：０／０、５０／１００、５５／１００、５５．１／０、６０／０
調製１：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン
（分析ＨＰＬＣ条件）
（方法Ａ）
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ Ｂｏｎｕｓ－ＲＰ Ｃ１８、１５０×４．６０ｎｍ、３．５ミクロン
カラム温度：４０℃
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
試料の調製：１：１のＡＣＮ：１Ｍ ＨＣｌに溶解
移動相：Ａ＝水：ＴＦＡ（９９．９５：０．０５）
Ｂ＝ＡＣＮ：ＴＦＡ（９９．９５：０．０５）
検出器の波長：２５４ｎｍおよび２１４ｎｍ
勾配：合計２６分（時間（分）／％Ｂ）：０／５、１８／９０、２２／９０、２２．５／９０、２６／５
（方法Ｂ）
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ Ｂｏｎｕｓ－ＲＰ、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ
カラム温度：３０℃
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：１０μＬ
移動相：Ａ＝ＡＣＮ：水：ＴＦＡ（２：９８：０．１）
Ｂ＝ＡＣＮ：水：ＴＦＡ（９０：１０：０．１）
試料の調製：移動相Ｂに溶解
検出器の波長：２５４ｎｍおよび２１４ｎｍ
勾配：合計６０分（時間（分）／％Ｂ）：０／０、５０／１００、５５／１００、５５．１／０、６０／０
調製１：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン
【化5】
【0091】
ピリジン－３，４－ジアミン（４４５ｇ、４．０７８ｍｏｌ）とＡＣＮ（１１．０Ｌ）との混合物を、２５℃から１５℃まで８０分間撹拌した。臭化ベンジル（４８５ｍＬ、４．０７８ｍｏｌ）を２０分にわたり添加し、反応混合物を２０℃で一晩撹拌した。反応混合物を１０℃に冷却し、濾過した。反応器にＡＣＮ（３Ｌ）を添加し、１０℃に冷却した。ケークを反応器すすぎ水で洗浄し、２５℃に温めたＡＣＮ（３Ｌ）で再び洗浄した。固体をフィルタ上で、窒素下２４時間、真空下５５℃で２時間、次いでＲＴで一晩、さらに４日間乾燥させて、表題化合物のＨＢｒ塩を得た（１１０２．２ｇ、３．９３４ｍｏｌ、収率９６％）。ＨＰＬＣ法Ａでの保持時間４．１２分。
調製２：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ａ）５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
調製２：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化6】
【0092】
６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－カルバルデヒド（５５０ｇ、２．４４４ｍｏｌ）、１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミンＨＢｒ（７２１ｇ、２．３３３ｍｏｌ）、およびＤＭＡｃ（２．６５Ｌ）の溶液を、６０分間撹拌し、重亜硫酸ナトリウム（２５７ｇ、２．４６８ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１３５℃に加熱し、３時間保持し、２０℃に冷やし、２０℃で一晩保持した。アセトニトリル（８Ｌ）を添加し、反応混合物を１５℃で４時間撹拌した。スラリーを、圧力フィルタ上で、中程度の濾過速度で濾過した。反応器にＡＣＮ（１Ｌ）を添加した。ケークをＡＣＮ反応器の洗浄液で洗浄し、窒素下で一晩、次いで真空下５０℃で２４時間乾燥させて、表題化合物のＨＢｒ塩を、密な湿潤ベージュ／褐色固体として得た（１２６４ｇ、２．４４４ｍｏｌ、収率１００％、純度９４％）。ＨＰＬＣ法Ａでの保持時間８．７７分。
【0093】
先のステップの生成物（１２６４ｇ、２．４４４ｍｏｌ）、ＭｅＴＨＦ（６Ｌ）および水（２．７５Ｌ）の混合物を、６５℃に加熱し、水酸化ナトリウム５０ｗｔ％（２５４ｇ、３．１７７ｍｏｌ）を５分にわたり添加し、反応混合物を６５℃で１時間撹拌し、ＲＴに冷却し、次いで５℃に冷却し、２時間保持した。スラリーを濾過し、反応器およびケークをＭｅＴＨＦ（１Ｌ）で洗浄した。得られたベージュから黄色の固体を、フィルタ上で窒素下３日間乾燥させて、表題化合物を、ベージュ／黄色の固体として得た（４７５ｇ、１．１７５ｍｍｏｌ、収率４８％）。母液（約８Ｌ）を濃縮して約２Ｌにし、そこで固形分が急に析出した。スラリーを５０℃に加熱し、２時間保持し、５℃に２時間にわたり冷却し、一晩撹拌し、濾過した。ケークをＭｅＴＨＦ（１００ｍＬ）で洗浄し、真空下４０℃で一晩乾燥させて、追加の表題化合物を得た（１４０ｇ、０．３４６ｍｏｌ、収率１４％）。
【0094】
先のステップの全生成物の混合物を、同じ規模（１５００ｇ、３．７１０ｍｏｌ）の第２のバッチの生成物、およびＭｅＴＨＦ（４Ｌ）と組み合わせ、２０℃で２時間撹拌し、濾過した。反応器およびケークをＭｅＴＨＦ（１．５Ｌ）で洗浄した。得られたベージュから黄色の固体を、窒素下で３日間乾燥させて、表題化合物をベージュ・黄色の固体として得た（１３２５ｇ、３．１８４ｍｏｌ、収率８６％（全体で収率６８％）、純度９７％）。ＨＰＬＣ法Ａでの保持時間８．７７分。
調製３：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
調製３：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化7】
【0095】
１５Ｌのフラスコに、５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（４４０ｇ、１．０８８ｍｏｌ）を添加し、その後、ＭｅＴＨＦ（４．５Ｌ）、メタノール（２．２５Ｌ）、および水（１．１２５Ｌ）を添加した。スラリーを２０℃に冷却し、１時間撹拌し、ＮａＢＨ４（２４７ｇ、６．５３０ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、２５℃で１８時間撹拌した。水（１．１２５Ｌ）を添加し、その後、２０ｗｔ％の塩化ナトリウム溶液（１．１２５Ｌ）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、層を分離させた。水性層を排出させた。ＮａＯＨ（５２２ｇ）と水（５Ｌ）とを予め混合した溶液を添加し、反応混合物を６０分間撹拌し、層を分離させ、水性層を排出した。同じ規模にある２つの追加のバッチを調製した。
【0096】
１つのバッチからの有機層を、ジャケットが５０℃に設定され内部温度が２０℃の、１５Ｌのジャケット付き反応器内で、減圧下で濃縮した。追加のバッチを反応器に添加し、一度に一つずつ濃縮し、体積が約６Ｌのスラリーを得た。スラリーを５０℃に加熱し、ＩＰＡｃ（６Ｌ）を添加し、混合物を６０℃で１．５時間保持し、２０℃に１０時間冷却し、６０℃に５０時間加熱し、２０℃に５時間冷却し、次いで５℃に冷却し、３時間保持した。混合物を濾過し、反応器およびケークを、予め５℃に冷却した、ＩＰＡｃ（１Ｌ）とＭｅＴＨＦ（１Ｌ）との予め混合した溶液で洗浄した。固形分を、フィルタ上４０℃で３日間、窒素下で乾燥させて、表題化合物（１０５９ｇ、２．５８９ｍｏｌ、収率７９％）をオフホワイトの固体として得た。材料をさらに、真空炉内で５０～６０℃で８時間、および２７℃で２日間乾燥させて、表題化合物（１０４３ｇ、２．５２６ｍｏｌ、収率７７％、純度９９％）を得た。ＨＰＬＣ法Ａでの保持時間６．７３分。
調製４：（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）トリフルオロホウ酸カリウム
（ａ）２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン
調製４：（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）トリフルオロホウ酸カリウム
【化8】
【0097】
１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン（５２０ｇ、１６８２ｍｍｏｌ）およびジオキサン（５１９３ｍＬ）の混合物を、窒素でパージし、次いでビス（ピナコラト）二ホウ素（６４１ｇ、２５２３ｍｍｏｌ）を添加し、その後、酢酸カリウム（４９５ｇ、５０４６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素でパージし、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４１．２ｇ、５０．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を窒素でパージし、窒素下１０３℃で５時間、加熱し、ＲＴに冷却した。反応混合物を、真空蒸留によって濃縮し、酢酸エチル（５２０４ｍＬ）と水（５２１２ｍＬ）との間で分配した。反応混合物をセライトに通して濾過し、有機層をブライン（２６０６ｍＬ）で洗浄し、その後、真空蒸留により溶媒除去して、粗製生成物が濃厚な黒色油（約８００ｇ）として得られた。
【0098】
粗製生成物をＤＣＭ（１２８９ｍＬ）に溶解し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（２６２７ｇのシリカをヘキサン中に予備スラリー化し、ヘキサン（１０．３５Ｌ）中２０％の酢酸エチルで溶離した）。溶媒を、真空蒸留によって除去して、薄黄色の油（６００ｇ）を得た。ＨＰＬＣ法Ｂによる保持時間３３．７４分。
（ｂ）（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）トリフルオロホウ酸カリウム
（ｂ）（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）トリフルオロホウ酸カリウム
【0099】
先のステップの生成物（２００ｇ、５６１ｍｍｏｌ）を、完全な溶解までアセトン（１０１１ｍＬ）と混合し、メタノール（９９９ｍＬ）を添加し、その後、水（１３１０ｍＬ）に溶解した３Ｍの二フッ化水素カリウム（３０７ｇ、３９３０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３．５時間撹拌した。有機溶媒のほとんどを、真空蒸留によって除去した。水（７５９ｍＬ）を添加し、得られた濃厚スラリーを３０分間撹拌し、濾過した。ケークを水（５０６ｍＬ）で洗浄し、固形分をフィルタ上で３０分間乾燥させた。固形分をアセトン（１２３７ｍＬ）中でスラリー化し、１時間撹拌した。得られたスラリーを濾過し、固形分をアセトン（２４７ｍＬ）で洗浄した。アセトン溶液を真空蒸留によって濃縮し、全てのアセトンおよび水が蒸留されるまでトルエン（２９８３ｍＬ）をゆっくり添加することにより、一定体積（２Ｌ）を維持した。トルエン溶液を蒸留して、回転蒸発により濃厚な黄色スラリーにし、その時間中に生成物が白色の固形分として沈殿した。トルエンの追加の一部（４７７ｍＬ）を混合物に添加し、１時間撹拌した。次いで混合物を濾過し、トルエン（１７９ｍＬ）ですすぎ、５０℃で２４時間真空下乾燥させて、表題化合物（１０４ｇ、３１０ｍｍｏｌ、収率５５％）を自由流動性のふわふわした僅かにオフホワイトの固体として得た。ＨＰＬＣ法Ｂによる保持時間２７．７１分。
調製５：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ａ） ５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
調製５：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化9】
【0100】
ビス（ピナコラト）二ホウ素（２５０ｇ、９８４ｍｍｏｌ）およびＩＰＡ（１．８８Ｌ）の混合物を撹拌して溶解し、次いで二フッ化水素カリウム（５３８ｇ、６．８９１ｍｏｌ）を水（２．３１Ｌ）に溶かした溶液を、１０分にわたり少量ずつ添加した。反応混合物を１時間撹拌し、濾過した。ゲル様固形分を、混合物が透明なヒドロゲルを形成するまで水（１．３３Ｌ）でスラリー化し、さらに４５分間スラリー化した。得られた固形分／ゲルを濾過し、次いでアセトン（１．０８Ｌ）中で再スラリー化し、濾過し、フィルタ上で３０分間空気乾燥し、一晩乾燥させてふわふわの白色固体（１９６．７ｇ）を得た。
【0101】
５Ｌのフラスコに、５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（１３５ｇ、３３１ｍｍｏｌ）、（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－トリフルオロホウ酸カリウム（１３３ｇ、３９７ｍｍｏｌ）、および先のステップの白色固体生成物（４０．５ｇ）を添加し、その後、ＭｅＴＨＦ（１．２３Ｌ）およびＭｅＯＨ（１．７５Ｌ）を添加した。得られたスラリーを、窒素で３回脱気した。スラリーに、炭酸セシウム（４３１ｇ、１．３２３ｍｏｌ）を水（１．３５Ｌ）に溶かした脱気溶液を添加した。スラリーを２回脱気し、Ｐｄ（ａｍｐｈｏｓ）２Ｃｌ２（１１．７１ｇ、１６．５３ｍｍｏｌ）を添加し、スラリーを再び２回脱気し、反応混合物を６７℃で一晩撹拌し、２０℃に冷却した。層を分離し、ＭｅＴＨＦ（５５０ｍＬ）で逆抽出した。有機層を合わせ、固形分が沈殿するまで回転蒸発により濃縮した。ＭｅＴＨＦ（７００ｍＬ）を添加し、反応混合物を６５℃で撹拌した。層を分離し、水性相をＭｅＴＨＦ（１３５ｍＬ）で逆抽出した。有機相を合わせ、約３００ｍＬに濃縮した結果、濃厚な橙色のスラリーが得られた。スラリーにＭｅＯＨ（２７０ｍＬ）を添加し、その後、１Ｍ ＨＣｌ（１．３２５Ｌ）を２０℃で、素早く撹拌しながら添加した。反応混合物を５分間撹拌し、水（１Ｌ）を添加し、得られたスラリーを１時間撹拌した。固形分を濾過し、水（１５０ｍＬ）で洗浄し、フィルタ上で１０分間、および窒素下４５℃で１６時間乾燥させて、薄黄色の固体として表題化合物の２ＨＣｌ塩（２２１．１ｇ、３５１ｍｍｏｌ、純度９２．２％）を得た。ＨＰＬＣ法Ｂによる保持時間２３．４１分。
調製６：５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール
調製６：５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール
【化10】
【0102】
１Ｌのフラスコに、エタノール中のスラリー（３４８ｍＬ）として５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン、２ＨＣｌ（４０ｇ、６３．４ｍｍｏｌ）と、ＭｅＯＨ中１．２５ＭのＨＣｌ（１０１ｍＬ）と、水（１７．１４ｍＬ）とを加えた。反応混合物を、窒素で５分間脱気し、１０ｗｔ％のＰｄ／Ｃ、５０ｗｔ％のＨ２Ｏ（４．０５ｇ、１．９０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応器を密閉し、Ｈ２でパージし、１～２ｐｓｉに加圧し、５０℃に温め、反応混合物を一晩撹拌し、セライトに通して濾過した。反応器およびフィルタを、メタノール（１００ｍＬ）で洗浄した。
【0103】
濾過した溶液を、第２のバッチの生成物と、９８ｍｍｏｌ規模で組み合わせ、３９０ｇに濃縮した。ＥｔＯＡｃ（２．０４Ｌ）を、撹拌しながらゆっくり添加し、次いで溶液を撹拌しながら５℃に冷却した。固形分を濾過し、ＥｔＯＡｃ（５１０ｍＬ）で洗浄し、一晩、窒素下４５℃で乾燥させて、表題化合物の２ＨＣｌ塩（５８ｇ、収率８０％）を、オフホワイトの固体として得た。ＨＰＬＣ法Ｂによる保持時間１２．８３分。
（実施例１）
５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールの結晶質水和物
（実施例１）
５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノールの結晶質水和物
【化11】
【0104】
３Ｌのフラスコに、ＮＭＰ（２３９ｍＬ）、および５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール、２ＨＣｌ（７４．５ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら添加し、その後、ＮＭＰ（７４ｍＬ）を添加した。酢酸（３１．３ｍＬ）を添加し、反応混合物を５５℃へと１０分間温め、次いで２５℃に冷却した。１－メチルピペリジン－４－オン（６１．０ｍＬ、４９６ｍｍｏｌ）を１回で添加し、反応混合物を２５℃で３０分間撹拌し、１５℃に冷却した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９８ｇ、４６３ｍｍｏｌ）を添加し、外部ジャケットを５分後に２０℃に設定した。３時間後、温度を２５℃よりも低く維持しながら、水酸化アンモニウム（３６５ｍＬ、５７９０ｍｍｏｌ）を４５分にわたり滴下添加した。反応混合物を２０℃で１．５時間撹拌し、オフホワイトのスラリーを形成させた。メタノール（７０９ｍＬ）を添加し、反応混合物を、５５℃で一晩、ゆっくり撹拌した。水（１．１９Ｌ）を５５℃で３０分にわたり添加し、混合物を１０℃に冷却し、２時間撹拌し、濾過した。ケークを、１：１のＭｅＯＨ：水（３３４ｍＬ）で洗浄し、フィルタ上４５℃で２０分間、窒素ブリードを伴う真空下で乾燥させて、黄色の固形分（８７ｇ）を得た。
【0105】
固形分に、５％の水／アセトン（１．５Ｌ）を、５５℃でゆっくり撹拌しながら添加し、反応混合物を５５℃で６時間加熱し、１０℃に冷却し、濾過し、５％の水／アセトン（４５０ｍＬ）で洗浄した。固形分を、窒素ブリードを伴う真空下、５０℃で一晩乾燥させ、空気中で２０時間平衡化し、真空炉内で４８時間乾燥させ、空気で平衡化して、表題化合物（７１．３ｇ、収率９１％）を、自由流動性の薄黄色の固体として得た。ＨＰＬＣ法Ｂによる保持時間１２．２９分。
（実施例２）
粉末Ｘ線回折
（実施例２）
粉末Ｘ線回折
【0106】
実施例１の生成物の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを、出力電圧４５ｋＶおよび電流４０ｍＡでＣｕ－Ｋα放射線（λ＝１．５４０５１Å）を使用して、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８－Ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計で得た。試料での強度が最大化するよう設定した、入射スリット、発散スリット、散乱スリットを有するＢｒａｇｇ－Ｂｒｅｎｔａｎｏジオメトリーの機器を操作した。測定のため、少量の粉末（５～２５ｍｇ）を、試料ホルダ上に穏やかに加圧して、滑らかな表面を形成し、Ｘ線曝露に供した。試料を、２θが２°から４０°の２θ－２θモードで、０．０２°のステップサイズおよびステップ当たりスキャン速度０．３０°秒でスキャンした。データ獲得を、Ｂｒｕｋｅｒ ＤｉｆｆｒａｃＳｕｉｔｅ測定ソフトウェアによって制御し、Ｊａｄｅソフトウェア（バージョン７．５．１）により解析した。機器を、コランダム標準で、±０．０２°の２シータ角内に較正した。観察されたＰＸＲＤ ２θピーク位置、および格子面間隔（d-spacing）を、表１に示す。
生物学的アッセイ
【表1-1】
【表1-2】
【0107】
５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（化合物１）は、下記の生物学的アッセイで特徴付けられている。
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
【0108】
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ ＪＡＫ生化学アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３、およびＴｙｋ２）を、共通キナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ－３５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、および１ｍＭ ＥＧＴＡ）中で実施した。組換えＧＳＴタグ付きＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ付きＳＴＡＴ１ペプチド基質を、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た。
【0109】
段階希釈した化合物を、４種のＪＡＫ酵素のそれぞれおよび基質と共に白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内で、周囲温度で１時間プレインキュベートした。ＡＴＰを続けて添加して、１％のＤＭＳＯを含む１０μＬの全体積中で、キナーゼ反応を開始させた。ＪＡＫ１、２、３、およびＴｙｋ２に関する最終酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、および０．２５ｎＭであり、対応する、使用されたＫｍ ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭ、および１０μＭであり、一方、基質濃度は、４種全てのアッセイに関して２００ｎＭである。キナーゼ反応を、周囲温度で１時間進行させ、その後、ＴＲ－ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（１０ｍＭ最終濃度）およびＴｂ－抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２ｎＭ最終濃度）の調製物１０μＬを添加した。プレートを周囲温度で１時間インキュベートさせ、その後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。放射比シグナル（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、これを利用して、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づいて阻害パーセント値を計算した。
【0110】
用量応答分析では、阻害パーセントデータを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）で４－パラメーターロバストフィットモデルから決定した。結果を、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の負の対数）として表し、その後、Ｃｈｅｎｇ－Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用してｐＫｉ（解離定数Ｋｉの負の対数）に変換した。
【0111】
本発明の化合物は、下記の酵素効力（enzyme potency）を示した。
アッセイ２：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＬ－１３の阻害
【表2】
【0112】
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ ＪＡＫＩ細胞効力アッセイは、ＢＥＡＳ－２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）中のインターロイキン－１３（ＩＬ－１３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）誘導性ＳＴＡＴ６リン酸化を測定することによって実施した。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）とコンジュゲートし、一方、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してビオチン化した。
【0113】
ＢＥＡＳ－２Ｂ細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ－１２培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、３７℃で成長させた。アッセイの１日目、細胞を７，５００個／ウェルの密度で、２５μＬの培地を含む白色ポリ－Ｄ－リシンコーティング３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播き、インキュベーター内で一晩接着させた。アッセイの２日目、培地を除去し、試験化合物の用量応答を含有する１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、および１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）で置き換えた。化合物を、ＤＭＳＯ中で段階希釈し、次いで培地中でさらに１０００倍希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。細胞を、試験化合物と共に、３７℃で１時間インキュベートし、その後、１２μｌの事前に温められたＩＬ－１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍＬ）を添加して刺激した。３７℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ－１３を含有する）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ ＳＤＳ、１％ ＮＰ－４０、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ならびにＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｕｌｔｒａミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を補充）を添加した。プレートを周囲温度で３０分間振盪させ、その後、検出試薬を添加した。ビオチン－抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６コンジュゲートアクセプタービーズの混合物を最初に添加し、周囲温度で２時間インキュベートし、その後、ストレプトアビジンコンジュゲートドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加した。最短で２時間のインキュベーション後、アッセイプレートをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取った。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎルミネセンスシグナルを記録し、これを利用して、ＤＭＳＯおよびバックグラウンド対照に基づいて阻害パーセント値を計算した。
【0114】
用量応答分析では、阻害パーセントデータを化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアで４－パラメーターロバストフィットモデルから決定した。結果は、ＩＣ５０値の負の対数、ｐＩＣ５０として表してもよい。本発明の化合物は、このアッセイにおいて、ｐＩＣ５０値８．２を示した。
アッセイ３：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣ中のＩＬ－２／抗ＣＤ３刺激ＩＦＮγの阻害
アッセイ３：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣ中のＩＬ－２／抗ＣＤ３刺激ＩＦＮγの阻害
【0115】
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３刺激インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害に関する試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）で測定した。ＪＡＫを通してＩＬ－２がシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0116】
（１）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を使用して健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で培養した。細胞を、培地（５０μＬ）に、２００，０００個／ウェルで播き、１時間培養した。化合物を、ＤＭＳＯ中で段階希釈し、次いで培地中でさらに５００倍に希釈した（２×最終アッセイ濃度に）。試験化合物（１００μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；最終濃度１μｇ／ｍＬ）を、事前に温めたアッセイ培地（５０μＬ）に２４時間添加した。
【0117】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を５００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、－８０℃で凍結した。ＩＬ－２／抗ＣＤ３に応答する試験化合物の阻害効力を決定するために、上清ＩＦＮγ濃度を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を介して測定した。ＩＣ５０値を、化合物濃度に対するＩＦＮγの濃度の阻害曲線の解析から決定した。データを、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表す。本発明の化合物は、このアッセイにおいて約７．３のｐＩＣ５０値を示した。
アッセイ４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ－２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
アッセイ４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ－２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
【0118】
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に関する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを使用して、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞で測定した。ＩＬ－２はＪＡＫを通してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0119】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、フィコエリスロビリン（ＰＥ）コンジュゲート抗ＣＤ４抗体（Ｃｌｏｎｅ ＲＰＡ－Ｔ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同定し、一方、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４、Ｃｌｏｎｅ ４７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ５リン酸化を検出した。
【0120】
（１）抗ＣＤ３によるサイトカイン刺激を、２４時間の代わりに３０分間行ったこと以外、アッセイ３のパラグラフ（１）のプロトコールに従った。
【0121】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を、事前に温めた固定溶液（２００μＬ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で１０分間、３７℃、５％ＣＯ２で固定し、ＤＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ（１０００μＬ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に４℃で３０分間再懸濁した。細胞を、ＤＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）中２％のＦＢＳで２回洗浄し、次いで抗ＣＤ４ ＰＥ（１：５０希釈）および抗ＣＤ３抗ＣＤ３ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）中に、暗所で、室温で６０分間再懸濁した。インキュベーション後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、その後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＩＬ－２／抗ＣＤ３に応答する試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ５のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＣＤ４＋Ｔ細胞において測定した。ＩＣ５０値は、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の解析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。本発明の化合物は、このアッセイにおいて約７．７のｐＩＣ５０値を示した。
アッセイ５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激ｐＳＴＡＴ６の阻害
アッセイ５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激ｐＳＴＡＴ６の阻害
【0122】
インターロイキン－４（ＩＬ－４）刺激ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害に関する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを使用して、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）Ｔ細胞で測定した。ＩＬ－４はＪＡＫを通してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0123】
ＣＤ３＋Ｔ細胞を、フィコエリスロビリン（ＰＥ）コンジュゲート抗ＣＤ３抗体（Ｃｌｏｎｅ ＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）使用して同定し、一方、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ６抗体（ｐＹ６４１、Ｃｌｏｎｅ １８／Ｐ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ６リン酸化を検出した。
【0124】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、アッセイ３および４におけるように健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、培地（２００μＬ）中に２５０，０００個／ウェルで播き、１時間培養し、次いで、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、および１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）中に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯ中に段階希釈し、次いでアッセイ培地中でさらに５００倍に（２×最終アッセイ濃度に）希釈した。試験化合物（５０μＬ）を、３７℃、５％ＣＯ２で１時間、細胞と共にインキュベートし、その後、ＩＬ－４（５０μＬ）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を、事前に温めたアッセイ培地に３０分間添加した。サイトカイン刺激後、細胞を、事前に温めた固定溶液（１００μＬ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で１０分間、３７℃、５％ＣＯ２で固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＤＰＢＳ中２％ＦＢＳ）で２回洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ（１０００μＬ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に４℃で３０分間再懸濁した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで抗ＣＤ３ ＰＥ（１：５０希釈）および抗ｐＳＴＡＴ６ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）中に、暗所で、室温で６０分間再懸濁した。インキュベーション後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、その後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【0125】
ＩＬ－４に応答する試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ６のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ３＋Ｔ細胞で測定した。ＩＣ５０値を、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の解析から決定した。データは。ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）として表す。本発明の化合物は、このアッセイにおいて８．１のｐＩＣ５０の値を示した。
アッセイ６：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞でのＩＬ－６刺激ｐＳＴＡＴ３の阻害
アッセイ６：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞でのＩＬ－６刺激ｐＳＴＡＴ３の阻害
【0126】
アッセイ５のプロトコールに類似したプロトコールを使用して、インターロイキン－６（ＩＬ－６）刺激ＳＴＡＴ３リン酸化阻害に関する試験化合物の効力を決定した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ３抗体（ｐＹ７０５、Ｃｌｏｎｅ ４／Ｐ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＳＴＡＴ３リン酸化を検出した。
【0127】
本発明の化合物は、このアッセイにおいて７．４のｐＩＣ５０値を示した。
アッセイ７：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＦＮγ－誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害
アッセイ７：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＦＮγ－誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害
【0128】
インターフェロンγ（ＩＦＮγ）刺激ＳＴＡＴ１リン酸化の阻害に関する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを使用して、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）由来のＣＤ１４陽性（ＣＤ１４＋）単球で測定した。ＩＦＮγがＪＡＫを通してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0129】
単球を、イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）コンジュゲート抗ＣＤ１４抗体（Ｃｌｏｎｅ ＲＭ０５２、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して同定し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ｐＳＴＡＴ１抗体（ｐＹ７０１、Ｃｌｏｎｅ ４ａ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ１リン酸化を検出した。
【0130】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を使用して健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で培養した。細胞を、培地（２００μＬ）中、２５０，０００個／ウェルで播き、２時間培養し、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、および１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯ中で段階希釈し、次いで培地中でさらに１０００倍に希釈して、最終ＤＭＳＯ濃度を０．１％にした。試験化合物の希釈物を、３７℃、５％ＣＯ２で１時間、細胞と共にインキュベートし、その後、事前に温めたＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、０．６ｎｇ／ｍＬの最終濃度で３０分間、培地（５０μＬ）に添加した。サイトカイン刺激後、細胞を、事前に温めた固定溶液（１００μＬ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で１０分間、３７℃、５％ＣＯ２で固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、１：１０の抗ＣＤ１４ＦＩＴＣ：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。細胞をもう一度洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１００μＬ）に、４℃で３０分間再懸濁した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次いで１：１０の抗ｐＳＴＡＴ１ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に、暗所で、ＲＴで３０分間再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【0131】
試験化合物の阻害効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ１のメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）をＣＤ１４＋単球で測定した。ＩＣ５０値を、ＭＦＩ対化合物濃度の阻害曲線の解析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。本発明の化合物は、このアッセイにおいて約７．５のｐＩＣ５０値を示した。
アッセイ８：ウサギの眼における眼の薬物動態
アッセイ８：ウサギの眼における眼の薬物動態
【0132】
このアッセイの目的は、ウサギの眼組織における試験化合物の薬物動態を決定することであった。
（溶液製剤）
（溶液製剤）
【0133】
本発明の化合物、５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（５－（１－メチルピペリジン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（１）を、１０％の２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンに溶解して４ｍｇ／ｍＬの目標濃度に到達させるか、または精製水に溶解して１ｍｇ／ｍＬの目標濃度に到達させた。試験化合物の溶液の両側硝子体内注射（５０μＬ／眼）を、それぞれシクロデキストリンおよび水ビヒクル製剤に関して、それぞれ２００μｇ／眼および５０μｇ／眼の、２つの投薬群でニュージーランド白色家兎に投与した。試験化合物濃度を、眼組織：硝子体、房水、網膜／脈絡膜、および虹彩－毛様体で、注射後の所定の時点（３０分、４時間、１日、３日、７日、１４日）で測定した。２羽のウサギ（４つの眼）に、各時点で投薬した。硝子体組織において、化合物１は、約１２時間の半減期での濃度の初期減少と、最終的に約３．６日の終末相半減期とを特徴とする、濃度の２相減少を示した。化合物は、網膜および脈絡膜領域に同様に素早く分布することがわかり、硝子体組織において類似した薬物動態プロファイルを示す。
（懸濁液製剤）
（懸濁液製剤）
【0134】
懸濁液製剤を、実施例１の結晶質化合物１と、０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ Ｅ５）＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０とを組み合わせて、１０ｍｇ／ｍＬの目標濃度を実現することによって調製した。試験化合物の懸濁液の両側硝子体内注射（５０μＬ／眼）を、ニュージーランド白色家兎（５００μｇ／眼）に投与した。試験化合物濃度を、注射から３０分、２週間、４週間、６週間、および８週間後に懸濁液製剤アッセイにおけるように眼組織で測定した。化合物は、約３μｇ／ｍＬ／日のクリアランス速度で、３０分から６週間まで、硝子体内の薬物濃度の線形減少を示した。挙動は、ビヒクル内の化合物１の溶解度、および溶液製剤における眼の薬物動態挙動に一致する。血漿中の薬物濃度を測定し、硝子体組織内の濃度よりも少なくとも３桁少ないことがわかった。
アッセイ９：薬力学アッセイ：ラットにおけるＩＬ６－誘導性ｐＳＴＡＴ３の阻害
アッセイ９：薬力学アッセイ：ラットにおけるＩＬ６－誘導性ｐＳＴＡＴ３の阻害
【0135】
ＩＬ－６誘導性ｐＳＴＡＴ３を阻害する試験化合物の単回硝子体内投与の能力を、ラットの網膜／脈絡膜ホモジネートで測定した。
【0136】
懸濁液製剤を、実施例１の結晶質化合物１と、精製水中０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ Ｅ５ ＬＶ）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．９％塩化ナトリウムとを組み合わせて、３ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの目標濃度を実現することによって調製した。
【0137】
メスＬｅｗｉｓラットに、懸濁液製剤または薬物ビヒクルを硝子体内（ＩＶＴ）投薬（１つの眼につき５μＬ）した。３日後、ＩＬ－６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ；０．１ｍｇ／ｍＬ；１つの眼につき５μＬ）またはビヒクルを硝子体内投与して、ｐＳＴＡＴ３を誘導させた。眼組織を、ＩＬ－６の２回目のＩＶＴ注射から１時間後に切り取った。網膜／脈絡膜組織を均質化し、ｐＳＴＡＴ３レベルを、ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して測定した。ＩＬ－６誘導性ｐＳＴＡＴ３の阻害パーセントを、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＬ－６群と比較して計算した。１００％よりも大きい阻害は、ビヒクル／ビヒクル群で観察されたレベルを下回るｐＳＴＡＴ３レベルの低減を反映する。
【0138】
ＩＬ－６チャレンジ前の３日間の前処置で、懸濁液製剤を投与した本発明の化合物の１５μｇ用量および５０μｇ用量は、ＩＬ－６誘導性ｐＳＴＡＴ３を、網膜／脈絡膜組織でそれぞれ３３％および１０９％阻害した。
アッセイ１０：薬力学アッセイ：ウサギにおけるＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０の阻害
アッセイ１０：薬力学アッセイ：ウサギにおけるＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０の阻害
【0139】
インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）誘発性ＩＰ－１０タンパク質レベルを阻害する、試験化合物の単回硝子体内投与の能力を、ウサギの硝子体および網膜／脈絡膜組織で測定した。
【0140】
実施例１の化合物１の１ｍｇ／ｍＬおよび４ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液製剤を、アッセイ８におけるように調製した。懸濁液製剤を、実施例１の結晶質化合物１と、精製水中０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ Ｅ５）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０、および９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムとを組み合わせて、２０ｍｇ／ｍＬの目標濃度を実現することによって調製した。
【0141】
オスのニュージーランド白色家兎（Ｌｉｖｅｏｎ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａ）を研究に使用した。動物を、研究施設（Ｊｕｂｉｌａｎｔ Ｂｉｏｓｙｓ Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）に到着後に順応させた。各ウサギに、眼1つ当たり５０μＬの合計用量体積で、合計２回の硝子体内（ＩＶＴ）注射をした。１回目のＩＶＴ注射（眼1つ当たり４５μＬ）は、処方された時点で（即ち、溶液製剤に関して２４時間、または懸濁液製剤に関して１週間）、試験化合物またはビヒクルを送達した。２回目のＩＶＴ注射（眼1つ当たり５μＬ）は、ＩＰ－１０誘導のためにＩＦＮγ（１μｇ／眼；原液１ｍｇ／ｍＬ；Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはビヒクルを送達した。簡単に言うと、注射の日に、ウサギにケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射して麻酔をかけた。深く麻酔をかけたら、それぞれの眼を滅菌食塩液ですすぎ、３１ゲージ針を備えた０．５ｍＬのインスリン注射器（５０単位＝０．５ｍＬ）を使用して、両眼の鼻上側に、直筋から３．５ｍｍおよび縁（limbus）から４ｍｍの位置にＢｒａｕｎｓｔｅｉｎ固定キャリパー（２ ３／４”）でマークすることにより、ＩＶＴ注射を行った。
【0142】
組織を、ＩＦＮγによる２回目のＩＶＴ注射の２４時間後に収集した。硝子体液（ＶＨ）および網膜／脈絡膜組織（Ｒ／Ｃ）を収集し、均質化し、ＩＰ－１０タンパク質レベルを、ウサギＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）ＥＬＩＳＡキット（Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して測定した。ＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０の阻害パーセントを、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＦＮγ群と比較して計算した。
【0143】
溶液として投薬する場合、ＩＦＮγチャレンジ前の２４時間の前処置では、４５μｇの化合物１は、ＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０を、硝子体液および網膜／脈絡膜組織中でそれぞれ７０％および８６％阻害し、一方、１８０μｇの化合物は、ＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０を、硝子体液および網膜／脈絡膜組織中でそれぞれ９１％および１００％阻害した。
【0144】
ＩＦＮγチャレンジ前の１週間の前処置では、化合物１の結晶質懸濁液製剤が、硝子体液および網膜／脈絡膜組織の両方でＩＦＮγ－誘導性ＩＰ－１０を１００％阻害した。
アッセイ１１：マウスの血漿および肺における薬物動態
アッセイ１１：マウスの血漿および肺における薬物動態
【0145】
試験化合物の血漿および肺レベル、ならびにそれらの比は、下記の手法で決定した。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＢＡＬＢ／ｃマウスをアッセイで使用した。試験化合物は、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度で、ｐＨ４のクエン酸緩衝液中２０％のプロピレングリコール中で個々に製剤化し、５０ｕＬの投薬溶液を、経口吸引によってマウスの気管に導入した。投薬後の様々な時点で（典型的には、０．１６７、２、６、２４時間）、心臓穿刺を介して血液試料を取り出し、無傷の肺をマウスから切り取った。血液試料を４℃で、約１２，０００ｒｐｍで４分間遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機、５８０４Ｒ）して、血漿を収集した。肺をパッド乾燥させ、計量し、滅菌水中１：３の希釈で均質化した。試験化合物の血漿および肺レベルを、試験マトリックスの標準曲線に構成された分析標準に対してＬＣ－ＭＳ分析により決定した。肺の血漿に対する比を、肺ＡＵＣ（μｇ時間／ｇ）の血漿ＡＵＣ（μｇ時間／ｍＬ）に対する比として決定し、ＡＵＣは、試験化合物濃度対時間の曲線下の面積として従来より定義されている。
【0146】
本発明の化合物は、マウスの血漿における曝露よりも約５５倍多い、肺における曝露を示した。
アッセイ１２：肺組織におけるＩＬ－１３誘導性ｐＳＴＡＴ６誘導のネズミ（マウス）モデル
アッセイ１２：肺組織におけるＩＬ－１３誘導性ｐＳＴＡＴ６誘導のネズミ（マウス）モデル
【0147】
Ｉｌ－１３は、喘息の病態生理の基礎をなす重要なサイトカインである（Kudlaczら、Eur. J. Pharmacol、２００８年、５８２巻、１５４～１６１頁）。ＩＬ－１３は、キナーゼのＪａｎｕｓファミリー（ＪＡＫ）のメンバーを活性化する細胞表面受容体に結合し、これらは次いでＳＴＡＴ６をリン酸化し、その後、さらなる転写経路を活性化する。記述されるモデルでは、ＩＬ－１３の用量は、マウスの肺に局所的に送達されて、ＳＴＡＴ６のリン酸化（ｐＳＴＡＴ６）を誘導し、次いでこれをエンドポイントとして測定する。
【0148】
Ｈａｒｌａｎからの成体ｂａｌｂ／ｃマウスを、アッセイで使用した。研究当日、動物に、イソフルランで軽く麻酔をかけ、ビヒクルまたは試験化合物（０．５ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸で５０μＬの合計体積）を、経口吸引を介して投与した。動物を、用量を与えた後に側臥位に置き、麻酔からの完全な回復に関してモニタし、その後、それらの飼育ケージに戻した。４時間後、動物にもう一度短く麻酔をかけ、経口吸引を介してビヒクルまたはＩＬ－１３（０．０３μｇの合計用量が送達、５０μＬの合計体積）を負荷し、その後、麻酔からの回復をモニタし、それらの飼育ケージに戻した。ビヒクルまたはＩＬ－１３投与の１時間後、肺を、抗ｐＳＴＡＴ６ ＥＬＩＳＡ（ウサギｍＡｂ捕捉／コーティング抗体；マウスｍＡｂ検出／リポート抗体；抗ｐＳＴＡＴ６－ｐＹ６４１；二次抗体：抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ）を使用して両方のｐＳＴＡＴ６検出のために収集し、アッセイ１１で既に述べたように全薬物濃度に関して分析した。
【0149】
モデルの活性は、ビヒクルで処置されたＩＬ－１３チャレンジ対照マウスと比較して、５時間での、処置された動物の肺に存在するｐＳＴＡＴ６のレベルの減少によって証明された。ビヒクルで処置されＩＬ－１３チャレンジされた対照動物と、ビヒクルで処置されビヒクルチャレンジされた対照動物との差は、任意の所与の実験で、それぞれ０％および１００％の阻害効果を決定付けた。本発明の化合物は、ＩＬ－１３チャレンジの４時間後に、ＳＴＡＴ６リン酸化の約６０％の阻害を示した。
アッセイ１３：肺のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ－誘発性好酸球性炎症のネズミモデル
アッセイ１３：肺のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ－誘発性好酸球性炎症のネズミモデル
【0150】
気道好酸球増加は、ヒト喘息の特徴である。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａは、ヒトの喘息を悪化させかつマウスの肺の好酸球性炎症を誘発させ得る、真菌空中アレルゲンである（Havauxら、Clin Exp Immunol. ２００５年、１３９巻（２号）:１７９～８８頁）。マウスでは、アルテルナリアが、肺の組織常在２型自然リンパ球を間接的に活性化し、それが応答して（例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－７）、ＪＡＫ－依存性サイトカイン（例えば、ＩＬ－５およびＩＬ－１３）を放出し、好酸球性炎症を調整することが実証されてきた（Bartemesら、J Immunol. ２０１２年、１８８巻（３号）:１５０３～１３頁）。
【0151】
Ｔａｃｏｎｉｃからの７から９週齢のオスＣ５７マウスを、研究で使用した。研究当日、イソフルランで動物に軽く麻酔をかけ、ビヒクルまたは試験化合物（０．１～１．０ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸にわたり５０μＬの合計体積）のいずれかを、口腔咽頭吸引を介して投与した。動物を、用量を与えた後に側臥位に置き、麻酔からの完全な回復に関してモニタし、その後、それらの飼育ケージに戻した。１時間後、動物にもう一度短く麻酔をかけ、口腔咽頭吸引を介してビヒクルまたはアルテルナリア抽出物（２００ｕｇの合計抽出物が送達、５０μＬの合計体積）を負荷し、その後、麻酔からの回復をモニタし、それらの飼育ケージに戻した。アルテルナリア投与の４８時間後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、好酸球を、Ａｄｖｉａ １２０血液検査システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を使用してＢＡＬＦ中でカウントした。
【0152】
モデルにおける活性は、ビヒクルで処置されたアルテルナリアチャレンジ対照動物と比較して、４８時間での、処置された動物のＢＡＬＦ中に存在する好酸球のレベルの減少によって証明される。データは、ビヒクル処置されたアルテルナリアチャレンジＢＡＬＦ好酸球応答の阻害パーセントとして表される。阻害パーセントを計算するために、各条件ごとのＢＡＬＦ好酸球の数を、平均的なビヒクル処置されたアルテルナリアチャレンジＢＡＬＦ好酸球のパーセントに変換し、１００パーセントから差し引く。本発明の化合物は、アルテルナリアチャレンジの４８時間後に、ＢＡＬＦ好酸球カウント数の約８８％の阻害を示した。
アッセイ１４：肺モデルのＬＰＳ／Ｇ－ＣＳＦ／ＩＬ－６／ＩＦＮγカクテル－誘発性気道好中球性炎症のネズミモデル
アッセイ１４：肺モデルのＬＰＳ／Ｇ－ＣＳＦ／ＩＬ－６／ＩＦＮγカクテル－誘発性気道好中球性炎症のネズミモデル
【0153】
気道好中球増加は、ある範囲のヒトの呼吸器疾患の特徴である。化合物１を、気道好中球増加が誘発されるように、ＬＰＳ／Ｇ－ＣＳＦ／ＩＬ－６／ＩＦＮγカクテルを使用して、好中球性気道炎症のモデルで試験をした。
【0154】
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからの７から９週齢のオスＢａｌｂ／Ｃ（野生形）マウスを、研究で使用した。研究当日、イソフルランで動物に軽く麻酔をかけ、ビヒクルまたは試験化合物（１．０ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸にわたり５０μＬの合計体積）のいずれかを、口腔咽頭吸引を介して投与した。動物を、用量を与えた後に側臥位に置き、麻酔からの完全な回復に関してモニタし、その後、それらの飼育ケージに戻した。１時間後、動物にもう一度短く麻酔をかけ、口腔咽頭吸引（ＯＡ）を介してビヒクルまたはＬＰＳ；０．０１ｍｇ／ｋｇ／Ｇ－ＣＳＦ；５μｇ／ＩＬ－６；５μｇ／ＩＦＮγ；５μｇ（１００μＬの合計体積）を負荷した。ＬＰＳ／Ｇ－ＣＳＦ／ＩＬ－６／ＩＦＮγカクテル投与の２４時間後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、好中球をカウントした。
【0155】
化合物１でのＯＡ処置後、気道好中球の統計的に有意な低減があり（ビヒクル処置したマウスと比較して８４％）、ＪＡＫ－依存性シグナル伝達の遮断が好中球性気道炎症に対して有効であることが実証された。
アッセイ１５：ヒト３Ｄ気道培養物中のＩＦＮγおよびＩＬ－２７誘導性ケモカインＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０の阻害
アッセイ１５：ヒト３Ｄ気道培養物中のＩＦＮγおよびＩＬ－２７誘導性ケモカインＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０の阻害
【0156】
上皮気道組織培養物を、Ｍａｔｔｅｋ（ＡＩＲ－１００）から得た。培養物を、喘息患者由来であった。細胞培養物インサートにおいて、ヒトから誘導された気管／気管支上皮細胞を、細胞の下の温められた培養培地と上の気体試験雰囲気との気－液界面を可能にする多孔質膜支持体上で成長および分化させた。組織を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内の維持培地（Ｍａｔｔｅｋ、ＡＩＲ－１００－ＭＭ）で培養した。４人のドナーについて試験をした。０日目、組織培養物を、１０μＭ、１μＭ、および／または０．１μＭの試験化合物で処置した。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ）で希釈して、最終濃度０．１％にした。０．１％のＤＭＳＯをビヒクル対照として使用した。試験化合物を、培養物と共に、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、その後、最終濃度１００ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する事前に温めた培地を添加した。組織培養物を８日間維持した。培地を２日ごとに、化合物およびＩＦＮγまたはＩＬ－２７を含有する新鮮な培地で置き換えた。８日目、組織培養物および上清を、分析用に収集した。上清試料を、ルミネックス分析（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）およびＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）に関してアッセイした。データは、阻害％＋／－標準偏差（±ＳＴＤＶ）として表される。阻害パーセントは、ビヒクル処置した細胞と比較した、ＩＦＮγまたはＩＬ－２７誘導性ＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ９分泌に対する化合物阻害効力によって決定した。データは、３または４ドナーからの平均である。化合物１は、ビヒクル対照と比較したときに、ＩＦＮγ誘導性ＣＸＣＬ１０分泌を、９９％±２．０（１０μＭで）、７１％±１９（μＭで）、および１７％±１２（０．１μＭで）阻害することができた。化合物１は、ビヒクルと比較したときに、ＩＦＮγ誘導性ＣＸＣＬ９分泌を、１００％±０．３（１０μＭで）、９９％±０．９（１μＭで）、および７４％±１７（０．１μＭで）阻害することができた。化合物１は、ビヒクル対照と比較したときに、ＩＬ－２７誘導性ＣＸＣＬ１０分泌を１０８％±１１（１０μＭで）、９８％±１０（１μＭで）、および７３％±８．５（０．１μＭで）阻害することができた。化合物１は、ビヒクル対照と比較したときに、ＩＬ－２７誘発性ＣＸＣＬ９分泌を１００％±０（１０μＭで）、９５％±３．７（１μＭで）、および７５％±３．５（０．１μＭで）阻害することができた。
アッセイ１６：ＩＬ－５媒介性好酸球生存アッセイ
アッセイ１６：ＩＬ－５媒介性好酸球生存アッセイ
【0157】
ＩＬ－５媒介性好酸球生存に関する試験化合物の効力を、ヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離したヒト好酸球で測定した。ＩＬ－５はＪＡＫを通してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0158】
ヒト好酸球を、健康なドナーの新鮮なヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離した。血液を、０．９％塩化ナトリウム溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中の４．５％デキストラン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合した。赤血球を、３５分間沈降させた。白血球に富む上層を除去し、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に層にし、６００ｇで３０分間遠心分離した。血漿および単核細胞層を除去し、その後、顆粒球層を水で溶解して、汚染赤血球を全て除去した。好酸球を、ヒト好酸球単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してさらに精製した。精製された好酸球の画分を、抗ＣＤ１６ ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）と共に暗所で、４℃で１０分間インキュベートした。純度は、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【0159】
細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ １６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、１０，０００個／ウェルで培地（５０μＬ）に播いた。プレートを、３００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去した。化合物を、ＤＭＳＯ中で段階希釈し、次いでさらに５００倍に希釈して、培地中で２×の最終アッセイ濃度にした。試験化合物（５０μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、その後、ＩＬ－５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１ｎｇ／ｍＬおよび１０ｐｇ／ｍｌ）を、事前に温めたアッセイ培地（５０μＬ）に７２時間添加した。
【0160】
サイトカイン刺激後、細胞を３００ｇで５分間遠心分離し、冷ＤＰＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄した。生存率およびアポトーシスを入手するために、細胞をヨウ化プロピジウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＡＰＣ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共にインキュベートし、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＩＣ５０値は、細胞生存率パーセント対化合物濃度の生存率曲線の解析から決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１は、１０ｐｇ／ｍｌのＩＬ－５の存在下で７．９±０．５のｐＩＣ５０値を、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－５の存在下で６．５±０．２のｐＩＣ５０値を示した。
アッセイ１７：薬力学的アッセイ：ウサギの眼におけるＩＦＮγ誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害
アッセイ１７：薬力学的アッセイ：ウサギの眼におけるＩＦＮγ誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害
【0161】
試験化合物の単回硝子体内投与が、ＳＴＡＴ１タンパク質（ｐＳＴＡＴ１）のインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮγ）誘発性リン酸化を阻害する能力を、ウサギ網膜／脈絡膜組織で測定した。
【0162】
懸濁液製剤を、実施例１の化合物１と、精製水中０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ Ｅ５）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０、および９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムとを組み合わせて、２０ｍｇ／ｍＬの目標濃度を実現することによって調製した。
【0163】
オスのニュージーランド白色家兎（Ｌｉｖｅｏｎ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｎｄｉａ）を、研究に使用した。動物を、研究施設（Ｊｕｂｉｌａｎｔ Ｂｉｏｓｙｓ Ｌｔｄ．、Ｉｎｄｉａ）に到着後に順応させた。それぞれのウサギに、合計２回の硝子体内（ＩＶＴ）注射をし、その合計用量体積は眼1つ当たり５０μＬであった。１回目のＩＶＴ注射（眼1つ当たり４５μＬ）は、０．９ｍｇの試験化合物またはビヒクルを送達した。１週間後、２回目のＩＶＴ注射（眼1つ当たり５μＬ）は、ＩＦＮγ（１μｇ／眼、原液１ｍｇ／ｍＬ；Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ）またはビヒクルを、ＩＰ－１０の誘導のために送達した。注射当日に、ウサギにケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内注射して麻酔をかけた。深く麻酔をかけたら、それぞれの眼を滅菌食塩液ですすぎ、３１ゲージ針を備えた０．５ｍＬのインスリン注射器（５０単位＝０．５ｍＬ）を使用して、両眼の鼻上側に、直筋から３．５ｍｍおよび縁から４ｍｍの位置にＢｒａｕｎｓｔｅｉｎ固定キャリパー（２ ３／４”）でマークすることにより、ＩＶＴ注射を行った。
【0164】
組織を、ＩＦＮγでの２回目のＩＶＴ注射の２時間後に収集した。網膜／脈絡膜組織（Ｒ／Ｃ）を収集し、均質化し、ｐＳＴＡＴ１レベルを、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ＷＥＳ機器上で、定量的ウェスタンブロットにより測定した。ＩＦＮγ－誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害パーセントを、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／ＩＦＮγ群と比較して計算した。
【0165】
ＩＦＮγチャレンジ前の１週間の前処置で、実施例１の化合物１の懸濁液製剤は、ＩＦＮγ－誘導性ｐＳＴＡＴ１を８５％阻害した。
【0166】
本発明について、特定の態様またはその実施形態を参照しながら記載してきたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができまたは均等物を置換することができることが、当業者に理解されよう。さらに、適用可能な特許法および規則により認められる限り、本明細書に引用される全ての刊行物、特許、および特許出願の全体は、各文書が個々に本明細書に参照により組み込まれる場合と同じ範囲まで、参照により本明細書に組み込まれる。