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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-10-07
(45)【発行日】2022-10-18
(54)【発明の名称】液相ペプチド製造方法
(51)【国際特許分類】
C07K 1/02 20060101AFI20221011BHJP
C07K 1/04 20060101ALI20221011BHJP
C07K 1/06 20060101ALI20221011BHJP
C07K 1/107 20060101ALI20221011BHJP
【ＦＩ】
C07K1/02
C07K1/04
C07K1/06
C07K1/107
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2021111126
(22)【出願日】2021-07-02
【審査請求日】2021-11-24
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】517349083
【氏名又は名称】ペプチスター株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】390037327
【氏名又は名称】積水メディカル株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】根本 圭崇
【審査官】山▲崎▼ 真奈
(56)【参考文献】
【文献】特開２００４－０６７５５５（ＪＰ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１１１１１６７３１（ＣＮ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１９／１９８８３４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２０／２６２５９０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１１／０７８２９５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１０／１１３９３９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１０／１０４１６９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／２３１７６０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１９８８３３（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用い、当該液相ペプチド合成用担体が導入された化合物のＣ末端方向にペプチド伸長反応することを特徴とする液相ペプチド製造方法であって、当該液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）：
【化1】
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示し；Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；Ｒｂは、水素原子、又は式（ａ）：
【化2】
ｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物である液相ペプチド製造方法。
【請求項2】
アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基のみに液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる請求項１に記載の液相ペプチド製造方法。
【請求項3】
アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる請求項１に記載の液相ペプチド製造方法。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか１項記載の方法で製造されるペプチドの未修飾官能基を修飾する工程を含む液相ペプチド製造方法。
【請求項5】
次の工程ａ～ｄを含むことを特徴とする請求項１～４のいずれか１項に記載の液相ペプチド製造方法。ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸若しくは側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドのＣ末端側に、カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護されたアミノ酸又はペプチドを縮合させる工程、
ｃ．反応液中の前記カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護された化合物のカルボキシル保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水、酸性水溶液、塩基性水溶液又は塩含有水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、前記カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体であって当該カルボキシル保護基が脱離された化合物を含有する有機溶媒層を得る工程。
【請求項6】
次の工程ａ、ｂ、ｂ´、ｃ及びｄを含むことを特徴とする請求項１～４のいずれか１項に記載の液相ペプチド製造方法。ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドのＣ末端側に、カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護されたアミノ酸又はペプチドを縮合させる工程、
ｂ´．縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程、
ｃ．反応液中の前記カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護された化合物のカルボキシル保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水、酸性水溶液、塩基性水溶液又は塩含有水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、前記カルボキシル保護基でカルボキシル基が保護されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体であって当該カルボキシル保護基が脱離された化合物を含有する有機溶媒層を得る工程。
【請求項7】
前記工程ｂ´における前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、アミノ基含有化合物である請求項６記載の液相ペプチド製造方法。
【請求項8】
前記工程ｂ´における前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、２価以上の水溶性アミン、アルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミン、アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれるアミノ基含有化合物である請求項６又は７記載の液相ペプチド製造方法。
【請求項9】
前記工程（ｂ）における前記カルボキシル保護基が、ｔＢｕ基、メチル基、エチル基及びＢｚ基から選ばれる保護基である請求項６～８のいずれか１項に記載の液相ペプチド製造方法。
【請求項10】
側鎖に官能基を有するアミノ酸が、システイン、セリン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン及びアスパラギンから選ばれるアミノ酸であり、側鎖に官能基を有するペプチドが、システイン残基、セリン残基、スレオニン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン酸残基、グルタミン残基及びアスパラギン残基から選ばれるアミノ酸残基を有するペプチドである請求項１～９のいずれか１項に記載の液相ペプチド製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、液相におけるペプチド製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ペプチドの製造技術には、固相ペプチド合成法と液相ペプチド合成法とがあるが、ペプチドのアミノ酸残基が長くなるにつれ、ペプチドの溶媒への溶解性が低下することから、固相法による製造が主流となっていた。
最近、保護アミノ酸や保護ペプチドの有機溶媒への溶解性を大きく向上させる、液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）が報告され、液相ペプチド合成法によるペプチドの大量合成が可能となってきた（特許文献１～１４）。
最近、保護アミノ酸や保護ペプチドの有機溶媒への溶解性を大きく向上させる、液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）が報告され、液相ペプチド合成法によるペプチドの大量合成が可能となってきた（特許文献１～１４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【文献】特許第５１１３１１８号公報
【文献】特許第５９２９７５６号公報
【文献】特許第６０９２５１３号公報
【文献】特許第５７６８７１２号公報
【文献】特許第５８０３６７４号公報
【文献】特許第６１１６７８２号公報
【文献】特許第６２０１０７６号公報
【文献】特許第６２８３７７４号公報
【文献】特許第６２８３７７５号公報
【文献】特許第６３２２３５０号公報
【文献】特許第６３９３８５７号公報
【文献】特許第６５３１２３５号公報
【文献】国際公開第２０２０／１７５４７２号
【文献】国際公開第２０２０／１７５４７３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかしながら、そのような液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）を使用するペプチド合成としては、ペプチドを構成するアミノ酸残基の側鎖官能基に液相合成用担体を導入したペプチド合成に関する報告はなく、Ｎ末端側とＣ末端側のそれぞれに対し自由に修飾を施そうとしても難しく、ペプチドを設計するうえで障害となっていた。一方、固相法においても同様な問題があり、Ｃ末端を固相から切り離した後に修飾を行う方法はあるが、切り離したペプチドにはＴａｇがついていないため、溶解性が大きく損なわれており、その修飾には溶媒を大量に用いる必要があるなど、工業化においてコストが上昇する要因となっていた。
本発明の課題は、液相ペプチド合成用担体を用いる新たな液相ペプチド合成法を提供することにある。
本発明の課題は、液相ペプチド合成用担体を用いる新たな液相ペプチド合成法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明者は、ペプチドを構成するアミノ酸残基の側鎖官能基に液相合成用担体を導入したアミノ酸を原料として用いることにより、液相において、Ｎ末端方向、Ｃ末端方向のどちら側にも自由に修飾でき、ペプチドの伸長が可能になることを見出し、本発明を完成した。
【0006】
すなわち、本発明は、次の発明［１］～［１２］を提供するものである。
［１］側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いることを特徴とするペプチドの製造方法。
［２］アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基のみに液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる［１］に記載のペプチドの製造方法。
［３］アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる［１］に記載のペプチドの製造方法。
［４］上記［１］～［３］で製造されるペプチドの未修飾官能基を修飾する工程を含むペプチドの製造方法。
［５］次の工程ａ～ｄを含むことを特徴とする［１］～［４］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸若しくは側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｃ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が導入されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［６］次の工程ａ、ｂ、ｂ´、ｃ及びｄを含むことを特徴とする［１］～［４］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ´．縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程、
ｃ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が導入されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［７］側鎖に官能基を有するアミノ酸が、システイン、セリン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン及びアスパラギンから選ばれるアミノ酸であり、側鎖に官能基を有するペプチドが、システイン残基、セリン残基、スレオニン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン酸残基、グルタミン残基及びアスパラギン残基から選ばれるアミノ酸残基のうち少なくとも1つを有するペプチドである［１］～［６］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［８］前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、アミノ基含有化合物である［６］又は［７］記載の液相ペプチド製造方法。
［９］前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、２価以上の水溶性アミン、アルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミン、アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれるアミノ基含有化合物である［６］～［８］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１０］前記アミノ保護基が、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基及びＡｃ基から選ばれる保護基である［１］～［９］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１１］前記液相ペプチド合成用担体が、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドに直接またはリンカーを介して結合して、それらを有機溶媒に溶解性で水に不溶性にする化合物である［１］～［１０］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１２］前記液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）：
［１］側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いることを特徴とするペプチドの製造方法。
［２］アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基のみに液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる［１］に記載のペプチドの製造方法。
［３］アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いる［１］に記載のペプチドの製造方法。
［４］上記［１］～［３］で製造されるペプチドの未修飾官能基を修飾する工程を含むペプチドの製造方法。
［５］次の工程ａ～ｄを含むことを特徴とする［１］～［４］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸若しくは側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｃ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が導入されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［６］次の工程ａ、ｂ、ｂ´、ｃ及びｄを含むことを特徴とする［１］～［４］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程、
ｂ．前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｂ´．縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程、
ｃ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｄ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が導入されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［７］側鎖に官能基を有するアミノ酸が、システイン、セリン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン及びアスパラギンから選ばれるアミノ酸であり、側鎖に官能基を有するペプチドが、システイン残基、セリン残基、スレオニン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン酸残基、グルタミン残基及びアスパラギン残基から選ばれるアミノ酸残基のうち少なくとも1つを有するペプチドである［１］～［６］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［８］前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、アミノ基含有化合物である［６］又は［７］記載の液相ペプチド製造方法。
［９］前記アミノ酸活性エステルスカベンジャーが、２価以上の水溶性アミン、アルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミン、アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれるアミノ基含有化合物である［６］～［８］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１０］前記アミノ保護基が、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基及びＡｃ基から選ばれる保護基である［１］～［９］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１１］前記液相ペプチド合成用担体が、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドに直接またはリンカーを介して結合して、それらを有機溶媒に溶解性で水に不溶性にする化合物である［１］～［１０］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
［１２］前記液相ペプチド合成用担体が、下記式（Ｉ）：
【0007】
【化1】
【0008】
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、又は式（ａ）：
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、又は式（ａ）：
【0009】
【化2】
【0010】
（式中、＊は結合位置を示し；
ｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物である［１］～［１１］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
ｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
で表される化合物である［１］～［１１］のいずれかに記載の液相ペプチド製造方法。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、ペプチドを構成するアミノ酸残基の側鎖官能基に液相合成用担体を導入したアミノ酸を原料として用いることにより、液相において、Ｎ末端方向、Ｃ末端方向のどちら側にも自由に修飾を施すことができ、また、所望の方向へのペプチドの伸長が可能になる。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本発明のペプチドの製造方法は、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を原料として用いることを特徴とする。
当該側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物の一例としては、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基のみに液相ペプチド合成用担体が導入された化合物が挙げられる。また、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物が挙げられる。前記アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物は、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されており、これとは別にＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物である。別の観点からは、少なくとも（１）アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基、（２）アミノ酸又はペプチドのＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基のいずれか一方の基、の２箇所に液相ペプチド合成用担体が導入されている化合物である。本明細書では、このような液相ペプチド合成用担体の導入形態について、「双方に液相ペプチド合成用担体が導入された」と表現している。
当該側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物の一例としては、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基のみに液相ペプチド合成用担体が導入された化合物が挙げられる。また、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物が挙げられる。前記アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基及びＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基の双方に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物は、アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されており、これとは別にＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物である。別の観点からは、少なくとも（１）アミノ酸又はペプチドの側鎖官能基、（２）アミノ酸又はペプチドのＮ末端アミノ基又はＣ末端カルボキシル基のいずれか一方の基、の２箇所に液相ペプチド合成用担体が導入されている化合物である。本明細書では、このような液相ペプチド合成用担体の導入形態について、「双方に液相ペプチド合成用担体が導入された」と表現している。
【0013】
さらに、本発明の方法により製造されるペプチドは、そのＮ末端又はＣ末端の未修飾官能基を修飾することができる。なお、未修飾官能基を修飾するとは、ペプチドの未修飾官能基に対して、分解安定性、生理活性安定性など構造上の安定性の付与、薬物輸送（ＤＤＳ）の向上、抗体の開発や製造のための免疫原性の増強等を目的として行う修飾、製造されたペプチドをイメージングや検出に用いるための標識など、それ自体公知の用途・目的のためにされる修飾をいい、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）類、エチレンジアミン、ＤＯＴＡ等のキレーターやそれらの金属錯体、ビオチン等のタンパク質、核酸、糖類等、これもそれ自体公知の物質、材料を用いて行うことができる。目的、修飾に用いる物質、材料、修飾の方法等は適宜に改変、応用して行うことができ何ら限定されない。
【0014】
本発明のペプチド製造法は、側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドを原料として用いるため、液相ペプチド製造法に適用するのが好ましい。
従って、本発明のペプチド製造法の一態様としては、有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入し、次いで前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドをＮ末端方向、Ｃ末端方向又はその両方に伸長させ、又は未修飾官能基を修飾する、液相ペプチド製造法が挙げられる。
従って、本発明のペプチド製造法の一態様としては、有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入し、次いで前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドをＮ末端方向、Ｃ末端方向又はその両方に伸長させ、又は未修飾官能基を修飾する、液相ペプチド製造法が挙げられる。
【0015】
用いられる液相ペプチド合成用担体は、側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドを有機溶媒に可溶化する担体である。
このような液相ペプチド合成用担体としては、例えば前記特許文献１－１４に記載の化合物が挙げられる。好ましい液相ペプチド合成用担体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。
このような液相ペプチド合成用担体としては、例えば前記特許文献１－１４に記載の化合物が挙げられる。好ましい液相ペプチド合成用担体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。
【0016】
【化3】
【0017】
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、又は式（ａ）：
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、又は式（ａ）：
【0018】
【化4】
【0019】
（式中、＊は結合位置を示し；
ｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
ｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
【0020】
式（Ｉ）中の環Ａは、ヘテロ原子を含んでいてもよく、単環性でも、多環性でもよいＣ４～１８の芳香環を示す。当該芳香環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
【0021】
Ｒ11は、水素原子を示すか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが前記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ14と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。Ｒ11とＲ14が一緒になって形成してもよい環としては、フルオレン環又はキサンテン環が好ましい。
【0022】
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
ここで、Ｒ17としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ17としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0023】
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示す。
ｑ個のＲ13は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示す。
【0024】
本明細書において、脂肪族炭化水素基を有する有機基とは、その分子構造中に脂肪族炭化水素基を有する一価の有機基である。当該脂肪族炭化水素基を有する有機基中の脂肪族炭化水素基の部位は、特に限定されず、末端に存在してもよく、それ以外の部位に存在してもよい。
当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～３０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。
当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～３０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。
【0025】
アルキル基の具体例としては、炭素数１～３０のアルキル基が挙げられ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、トリデシル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基、アラキル基、べへニル基、テトラコサニル基、ヘキサコサニル基、イソステアリル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基、各種ステロイド基から水酸基などを除外した基が挙げられる。
アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。
アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。
【0026】
上記の脂肪族炭化水素基には、酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基が置換していてもよい。
脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得るシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。従って、前記脂肪族炭化水素基には、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が置換していてもよい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
好ましい酸素原子を介して置換するシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。なお、当該シリルオキシ基は、前記脂肪族炭化水素基に１～３個置換しているのが好ましい。
脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得るシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。従って、前記脂肪族炭化水素基には、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が置換していてもよい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
好ましい酸素原子を介して置換するシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。なお、当該シリルオキシ基は、前記脂肪族炭化水素基に１～３個置換しているのが好ましい。
【0027】
脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得る脂肪族炭化水素基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数２～６のアルケニルオキシ基、炭素数３から６のシクロアルキルオキシ基などの一価の基、それらから誘導される二価の基などが挙げられる。
【0028】
ｐ、ｑは、それぞれ０～３の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示す。ここで、ｐは、１～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
【0029】
環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
【0030】
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示す。
ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。
ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。
【0031】
Ｒｂは、水素原子、又は前記式（ａ）で表される基を示す。
式（ａ）中のｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが０～４を示す。
ｒは、０～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
式（ａ）中のｒ、ｓは、それぞれ０～３の整数かつｒ＋ｓが０～４を示す。
ｒは、０～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
【0032】
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
ここで、Ｒ18としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ18としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0033】
ｒ個のＲ15は、独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
Ｒ15及びＲ16で表される酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基は、前記のＲ12及びＲ13と同じものが挙げられ、前記のＲ12及びＲ13と同じものが好ましい。
ｓ個のＲ16は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
Ｒ15及びＲ16で表される酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基は、前記のＲ12及びＲ13と同じものが挙げられ、前記のＲ12及びＲ13と同じものが好ましい。
【0034】
Ｒ14は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。
【0035】
環Ｂは、ｒ個のＺＲ15に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
【0036】
Ｙは、ヒドロキシ基、ＮＨＲ19（Ｒ19は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。
ここで、Ｒ19としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
ここで、Ｒ19としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
【0037】
本発明の工程aは、有機溶媒を含む溶媒中で、側鎖に官能基を有するアミノ酸若しくは側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する工程である。
原料である側鎖に官能基を有するアミノ酸は、側鎖に水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有するアミノ酸であり、好ましくは側鎖にチオール基、アミノ基、カルバミド基又はカルボキシル基を有するアミノ酸であり、具体的には、システイン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン及びアスパラギンから選ばれるアミノ酸である。
側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドは、側鎖に水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドであり、好ましくは側鎖にチオール基、アミノ基、カルバミド基又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含むペプチドであり、具体的には、システイン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン酸残基、グルタミン残基及びアスパラギン残基から選ばれるアミノ酸残基を含むペプチドである。
原料である側鎖に官能基を有するアミノ酸は、側鎖に水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有するアミノ酸であり、好ましくは側鎖にチオール基、アミノ基、カルバミド基又はカルボキシル基を有するアミノ酸であり、具体的には、システイン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン及びアスパラギンから選ばれるアミノ酸である。
側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドは、側鎖に水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドであり、好ましくは側鎖にチオール基、アミノ基、カルバミド基又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含むペプチドであり、具体的には、システイン残基、グルタミン酸残基、アスパラギン酸残基、グルタミン残基及びアスパラギン残基から選ばれるアミノ酸残基を含むペプチドである。
【0038】
工程ａにおいて、側鎖に官能基を有するアミノ酸若しくは側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体を導入する反応は、有機溶媒を含む溶媒中で行われる。これらのアミノ酸又はペプチドに液相ペプチド合成用担体を導入すれば、得られた化合物は有機溶媒に溶解性になる。従って、その後の縮合反応工程及び保護基の脱離工程などを液相で行うことができるようになる。
そのような有機溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、シクロヘキサン、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドンを挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
そのような有機溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、シクロヘキサン、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドンを挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
【0039】
液相ペプチド合成用担体は、前記側鎖官能基に、直接又はリンカーを介して結合するように導入される。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方が、前記側鎖官能基と結合し、他方が液相ペプチド合成用担体と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましいリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよく、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。例えば、以下の化合物を挙げることができる。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方が、前記側鎖官能基と結合し、他方が液相ペプチド合成用担体と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましいリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよく、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。例えば、以下の化合物を挙げることができる。
【0040】
【化5】
【0041】
【化6】
【0042】
【化7】
【0043】
【化8】
（上記リンカーの構造式は、側鎖官能基等に結合する前の状態かつ液相ペプチド合成用担体と結合する前の状態を示す）。
【0044】
上記リンカーを含む液相ペプチド合成担体の前記側鎖官能基への導入は、上記リンカーの一方を前記側鎖官能基に結合した後に他方を液相ペプチド合成用担体に結合しても良く、あるいは、上記リンカーの一方を液相ペプチド合成用担体に結合した後に他方を前記側鎖官能基に結合してもよい。これらのリンカーの前記側鎖官能基への導入手段は、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、ＤＩＰＣＩ／ＨＯＢｔによるアミド化を挙げることができる。また、上記リンカーの一方と液相ペプチド合成用担体との結合は、互いに結合するリンカーの基及び液相ペプチド合成用担体の基に応じて、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、ＤＩＰＣＩによるエステル化を挙げることができる。
【0045】
前記側鎖官能基への液相ペプチド合成用担体の導入は、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、通常のアミド化法又はエステル化法に従って行えばよく、縮合剤の存在下に反応させればよい。
縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができる。好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体に対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。
縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができる。好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体に対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。
【0046】
工程ｂは、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程である。
【0047】
工程ｂの他方の原料である、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとは、アミノ酸又はペプチドのアミノ基がアミノ保護基で保護されており、一方、カルボキシル基は保護されておらず反応性であるアミノ酸又はペプチドを意味する。アミノ酸又はペプチドが１以上のアミノ基を有する場合は、少なくとも一つのアミノ基がアミノ保護基で保護されていれば良い。
アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基、Ａｃ基などが挙げられ、このうち塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃ基がより好ましい。
なお、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドが、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルバミド基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ｍｔｔ基、Ｘａｎ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。
アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基、Ａｃ基などが挙げられ、このうち塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃ基がより好ましい。
なお、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドが、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルバミド基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルバミド基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ｍｔｔ基、Ｘａｎ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。
【0048】
アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドは、例えば、アミノ基が保護されていないアミノ酸又はペプチドに、例えばＴＨＦなどの溶媒中でクロロギ酸９－フルオレニルメチルエステルを塩基の存在下に反応させることにより、製造することができる。
【0049】
本発明の工程ｂは前記の原料を縮合させる工程であり、工程ｂに用いられる反応溶媒は有機溶媒を含む溶媒である。工程ａで得られた前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチドは、既に有機溶媒に溶解しており、工程ｂの縮合反応は、そのまま継続して行うことができる。
従って、工程ｂでは、前記工程ａと同じ有機溶媒、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、シクロヘキサン、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドンなどが使用できる。好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
従って、工程ｂでは、前記工程ａと同じ有機溶媒、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、シクロヘキサン、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドンなどが使用できる。好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。
【0050】
縮合反応は、前記有機溶媒を含む溶媒中で、前記側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入されたアミノ酸又はペプチド（以下、側鎖官能基担体導入ペプチドと略する）と、前記アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチド（以下、アミノ基保護アミノ酸と略する）と、縮合剤とを混合することにより行うことができる。
【0051】
側鎖官能基担体導入ペプチドに対する、アミノ基保護アミノ酸の使用量は、側鎖官能基担体導入ペプチドに対して、通常１．０１～４当量、好ましくは１．０３～３当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。
本発明の液相ペプチド製造法では、アミノ基保護アミノ酸を過剰に使用した場合には、未反応のアミノ酸の活性エステルが残存することがあるが、その場合には、スカベンジャーを添加してアミノ酸活性エステルとスカベンジャーが反応した化合物を生成させて不活性化することができる。
本発明の液相ペプチド製造法では、アミノ基保護アミノ酸を過剰に使用した場合には、未反応のアミノ酸の活性エステルが残存することがあるが、その場合には、スカベンジャーを添加してアミノ酸活性エステルとスカベンジャーが反応した化合物を生成させて不活性化することができる。
【0052】
縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤を本発明においても用いることができる、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができる。好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、側鎖官能基担体導入ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。
【0053】
縮合工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するために、好ましくは、活性化剤が添加される。ここで活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、対称酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤を用いることができる。例えば、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－１，２，３－トリアゾールカルボン酸エチル（ＨＯＣｔ）、１－ヒドロキシ－7－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、３－ヒドロキシ－４－ケトベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド（ＨＯＮｂ）、ペンタフルオロフェノール、シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）等を挙げることができる。好ましくは、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＮｂ、ＨＯＳｕ、Ｏｘｙｍａである。活性化剤の使用量は、側鎖官能基担体導入ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。
【0054】
前記溶媒の使用量は、側鎖官能基担体導入ペプチド等を溶解した濃度が、好ましくは０．１ｍＭ～１Ｍとなる量であり、より好ましくは１ｍＭ～０．５Ｍとなる量である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。
【0055】
工程ｂにより、反応液中には、前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物が存在するので、当該アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程（工程ｃ）を行えばよいが、アミノ基保護アミノ酸を過剰に使用した場合には、未反応のアミノ酸の活性エステルが残存することがある。当該アミノ酸活性エステルは、Ｎ末端の脱保護時に目的のペプチドにさらにアミノ酸残基が一つ以上余分に挿入されるというダブルヒットを引き起こす可能性がある。そこで、前記脱保護工程の前に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加して、アミノ酸活性エステルを不活化する（工程ｂ´）のが好ましい。
そこで、次に、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程ｂ´について説明する。
そこで、次に、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程ｂ´について説明する。
【0056】
アミノ酸活性エステルスカベンジャーとしては、有機溶媒中で反応を継続する観点から、アミノ基含有化合物が好ましく、特に２価以上の水溶性アミン、アルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミン、アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれるアミノ基含有化合物が好ましい。
【0057】
２価以上の水溶性アミンとしては、例えば、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジンを挙げることができ、好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミンであり、より好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミンであり、さらに好ましくは１－メチルピペラジンである。
【0058】
用いることができるアルキルアミンとしては、例えば、炭素数１～１４のアルキルアミンを挙げることができ、好ましくは炭素数２～１０のアルキルアミン、より好ましくは炭素数２～８のアルキルアミン、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキルアミンである。また本発明で用いることができる芳香族アミンとしては、たとえば炭素数１～１４の芳香族アミンを挙げることができ、好ましくは炭素数６～１０の芳香族アミンである。具体的なアルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミンとしては、これに限定されないが、例えば、プロピルアミン、ブチルアミン、ヘキシルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ヒドロキシルアミンを挙げることができ、特に好ましくは、プロピルアミンである。
アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類としては、下記の一般式で挙げられるものが好ましい。
すなわち、次の一般式（１）で表されるアミノスルホン酸類及びアミノ硫酸類；
アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類としては、下記の一般式で挙げられるものが好ましい。
すなわち、次の一般式（１）で表されるアミノスルホン酸類及びアミノ硫酸類；
【0059】
【化9】
【0060】
（Ｒ1は炭素数１～１０の２価の有機基を示し、Ｘ1は単結合又は酸素原子を示す）
一般式（２）で表されるアミノホスホン酸類及びアミノリン酸類；
一般式（２）で表されるアミノホスホン酸類及びアミノリン酸類；
【0061】
【化10】
【0062】
（Ｒ2は炭素数１～１０の２価の有機基を示し、Ｘ2は単結合又は酸素原子を示す）
一般式（３）で表されるアミノアルコール類が好ましい。
一般式（３）で表されるアミノアルコール類が好ましい。
【0063】
【化11】
【0064】
（ｎは０～２０の整数を示し、Ｒ3、Ｒ4はそれぞれ独立して水素原子、メチル基、エチル基、又はヒドロキシメチル基を示す）
【0065】
一般式（１）中のＲ1及び一般式（２）のＲ2は、独立して、炭素数１～１０の２価の有機基であり、好ましくは、炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、炭素数６～１０のアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基などが挙げられる。
このうち、これらの化合物の溶解性の点から、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、炭素数６～８のアリーレン基がより好ましく、炭素数１～６の直鎖又は分岐際のアルキレン基がさらに好ましく、炭素数１~５の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基がよりさらに好ましい。
一般式（１）において、Ｘ1が単結合の場合はアミノスルホン酸類であり、Ｘ２が酸素原子の場合はアミノ硫酸類である。
一般式（２）において、Ｘ２が単結合の場合はアミノホスホン酸類であり、Ｘ２が酸素原子の場合はアミノリン酸類である。
このうち、これらの化合物の溶解性の点から、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、炭素数６～８のアリーレン基がより好ましく、炭素数１～６の直鎖又は分岐際のアルキレン基がさらに好ましく、炭素数１~５の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基がよりさらに好ましい。
一般式（１）において、Ｘ1が単結合の場合はアミノスルホン酸類であり、Ｘ２が酸素原子の場合はアミノ硫酸類である。
一般式（２）において、Ｘ２が単結合の場合はアミノホスホン酸類であり、Ｘ２が酸素原子の場合はアミノリン酸類である。
【0066】
一般式（３）中のｎは、０～２０の整数を示す。このうちｎは、０～２０が好ましく、０～６がより好ましく、０～４がさらに好ましい。一般式（３）中のＲ3、Ｒ4は、水素原子またはヒドロキシルメチル基が好ましい。
【0067】
前記アミノ基含有化合物のうち、アミノ酸活性エステルスカベンジャーとしてアミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれる化合物を用いるのがより好ましい。これらの化合物をスカベンジャジャーとして用いることにより、アミノ酸活性エステルが除去でき、ペプチドの液相製造を単離せずにワンポット合成が可能になる。
【0068】
工程ｂ´におけるアミノ基含有化合物の添加量は、理論上残存する活性アミノ酸エステル１当量に対して、好ましくは１～１０当量、より好ましくは１～６当量、さらに好ましくは１～４当量である。アミノ基含有化合物の添加量が少なすぎると、アミノ酸活性エステルのスカベンジ（捕捉）が不充分となり、残存したアミノ酸活性エステルと工程ｃで生成したアミノ基が反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させる。一方、多すぎると、同時に脱アミノ保護基反応が進行し、残存しているアミノ酸活性エステルがアミノ保護基の脱離により再生したアミノ基と反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させる。
【0069】
工程ｃは、反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程である。
当該アミノ保護基の脱離工程は、アミノ保護基の種類により相違する。例えば、アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合は反応液を塩基性条件とすればよい。アミノ保護基がＢｏｃ基の場合は反応液を酸性条件とすればよい。アミノ保護基がＣｂｚ基の場合は接触還元すればよい。アミノ保護基がＡｃ基の場合は、強酸又は強塩基条件で脱保護すればよい。このうち、ワンポット液相合成とするには、アミノ保護基をＦｍｏｃ基とするのがより好ましい。
当該アミノ保護基の脱離工程は、アミノ保護基の種類により相違する。例えば、アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合は反応液を塩基性条件とすればよい。アミノ保護基がＢｏｃ基の場合は反応液を酸性条件とすればよい。アミノ保護基がＣｂｚ基の場合は接触還元すればよい。アミノ保護基がＡｃ基の場合は、強酸又は強塩基条件で脱保護すればよい。このうち、ワンポット液相合成とするには、アミノ保護基をＦｍｏｃ基とするのがより好ましい。
【0070】
アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合のアミノ保護基の脱離工程について説明する。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、反応液を塩基性にできればよいが、アミン化合物、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン類；１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピぺリジン、ピペラジンなどの１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミン類を用いることができる。好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジンである。さらに好ましくはＤＢＵである。
工程ｃにおいて添加するアミン化合物の当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、１～３０当量、好ましくは４～２０当量、より好ましくは４～２０当量である。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、反応液を塩基性にできればよいが、アミン化合物、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン類；１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピぺリジン、ピペラジンなどの１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミン類を用いることができる。好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジンである。さらに好ましくはＤＢＵである。
工程ｃにおいて添加するアミン化合物の当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、１～３０当量、好ましくは４～２０当量、より好ましくは４～２０当量である。
【0071】
また、前記アミン化合物に加えて、脱Ｆｍｏｃ反応により生じるＤＢＦ（ジベンゾフルベン）のトラッピング剤を添加するのが好ましい。ここで用いられるＤＢＦのラッピング剤としては、メルカプト化合物が挙げられる。用いることができるメルカプト化合物としては、メルカプト基を有し、ＤＢＦと反応した化合物が水溶性を示すものであれば特に限定されないが、例えばメルカプト脂肪酸又はそのアルカリ金属塩、下記の一般式（４）又は（５）
【0072】
【化12】
【0073】
（式中、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示し、Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す）で表される化合物が挙げられる。
【0074】
メルカプト脂肪酸又はそのアルカリ金属塩としては、メルカプトＣ１～２０脂肪酸又はそのアルカリ金属塩が好ましく、メルカプトＣ１～６脂肪酸又はそのアルカリ金属塩がより好ましい。
一般式（４）又は（５）中Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示す。当該２価の有機基としては、炭素数１～１０の２価の有機基が好ましく、より好ましくは、メルカプト基を有していてもよい炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数６～１０のアリーレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数４～９のヘテロアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、メルカプトトリメチレン基、メルカプトプロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基、インドール基、ベンズイミダゾール基、キノリル基、イソキノリン基などが挙げられる。
Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す。具体的には、水素原子、ナトリウム、カリウムが挙げられる。
具体的には、メルカプトメタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸、１，３－ジメルカプトプロパンスルホン酸、２－メルカプトベンズイミダゾール－５－スルホン酸ナトリウム、メルカプトメタンホスホン酸ナトリウム、メルカプトエタンホスホン酸、３－メルカプトプロパンホスホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンホスホン酸ナトリウムなどが挙げられる。
一般式（４）又は（５）中Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示す。当該２価の有機基としては、炭素数１～１０の２価の有機基が好ましく、より好ましくは、メルカプト基を有していてもよい炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数６～１０のアリーレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数４～９のヘテロアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、メルカプトトリメチレン基、メルカプトプロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基、インドール基、ベンズイミダゾール基、キノリル基、イソキノリン基などが挙げられる。
Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す。具体的には、水素原子、ナトリウム、カリウムが挙げられる。
具体的には、メルカプトメタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸、１，３－ジメルカプトプロパンスルホン酸、２－メルカプトベンズイミダゾール－５－スルホン酸ナトリウム、メルカプトメタンホスホン酸ナトリウム、メルカプトエタンホスホン酸、３－メルカプトプロパンホスホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンホスホン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【0075】
メルカプト化合物の添加量は、理論上副生するＤＢＦ及びＤＢＦ－アミン付加体の量に対して１～３０当量が好ましく、１．２～２０当量がより好ましく、１．５～１５当量がさらに好ましい。
前記アミン化合物とメルカプト化合物は、同時に添加してもよく、メルカプト化合物、次いでアミン化合物の順に添加してもよく、塩基を加えＦｍｏｃ基を除去したのちにメルカプト化合物を加えてもよい。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、－２０～４０℃の温度で、５分～８時間行えばよい。
前記アミン化合物とメルカプト化合物は、同時に添加してもよく、メルカプト化合物、次いでアミン化合物の順に添加してもよく、塩基を加えＦｍｏｃ基を除去したのちにメルカプト化合物を加えてもよい。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、－２０～４０℃の温度で、５分～８時間行えばよい。
【0076】
工程ｄは、反応液に水溶液を添加した後、分液して、前記側鎖官能基及びカルボキシル基が液相ペプチド合成用担体で保護されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が保護されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程である。
工程ｃの反応液に水溶液を添加した後、水層と有機溶媒層を分液する。
水層には、アミノ保護基が脱離した活性エステルスカベンジャーと、ＤＢＦ－トラッピング剤付加体が含まれる。すなわち、アミノ保護基の脱離工程で副生するＤＢＦはＤＢＦ－トラッピング剤付加体となって、工程ｄの水溶液の添加だけで、容易に水層に抽出される。
一方、有機溶媒層には、側鎖官能基及びカルボキシル基が液相ペプチド合成用担体で保護されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体が含まれる。
ここで、用いられる水溶液としては、水、酸性水溶液、塩基性水溶液、塩化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸三ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸三カリウム水溶液等が挙げられる。
このように、本発明の工程ｄによれば、単に水溶液を添加して分液するだけで、アミノ酸活性エステルと生成物であるペプチドとの分液不良が起こることがない。また、固液分離を必要としないので、ペプチドの液相製造を単離せずにワンポット合成が可能になる。一連の工程は、マイクロフロー技術を用いて実施しても良い。マイクロフロー技術を用いたペプチド合成技術については、例えばＮａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ７， Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１３４９１（２０１６）に記載がある。
また、得られた有機溶媒層は、さらに任意のアミノ酸との縮合反応に利用できる。
工程ｃの反応液に水溶液を添加した後、水層と有機溶媒層を分液する。
水層には、アミノ保護基が脱離した活性エステルスカベンジャーと、ＤＢＦ－トラッピング剤付加体が含まれる。すなわち、アミノ保護基の脱離工程で副生するＤＢＦはＤＢＦ－トラッピング剤付加体となって、工程ｄの水溶液の添加だけで、容易に水層に抽出される。
一方、有機溶媒層には、側鎖官能基及びカルボキシル基が液相ペプチド合成用担体で保護されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドとの縮合体が含まれる。
ここで、用いられる水溶液としては、水、酸性水溶液、塩基性水溶液、塩化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸三ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸三カリウム水溶液等が挙げられる。
このように、本発明の工程ｄによれば、単に水溶液を添加して分液するだけで、アミノ酸活性エステルと生成物であるペプチドとの分液不良が起こることがない。また、固液分離を必要としないので、ペプチドの液相製造を単離せずにワンポット合成が可能になる。一連の工程は、マイクロフロー技術を用いて実施しても良い。マイクロフロー技術を用いたペプチド合成技術については、例えばＮａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ７， Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１３４９１（２０１６）に記載がある。
また、得られた有機溶媒層は、さらに任意のアミノ酸との縮合反応に利用できる。
【実施例】
【0077】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
なお、液相ペプチド合成用担体として、以下に示す化合物を使用した。
・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型ベンジル化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｂ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。
なお、液相ペプチド合成用担体として、以下に示す化合物を使用した。
・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型ベンジル化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｂ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。
【0078】
【化13】
【0079】
・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型ジフェニルメタン化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｄ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。
【0080】
【化14】
【0081】
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）は、上記Ｄ－ＳＴａｇのアミノ基がＦｍｏｃ基で保護された化合物である。
また、以下の実施例では、Ｂ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護ｔＢｕ保護グルタミン酸（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ）と結合した化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕと表記し、下記の構造を示すものとする。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕに限らず、他のアミノ酸と結合した場合も、これに準ずる表記とする。
また、以下の実施例では、Ｂ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護ｔＢｕ保護グルタミン酸（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ）と結合した化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕと表記し、下記の構造を示すものとする。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕに限らず、他のアミノ酸と結合した場合も、これに準ずる表記とする。
【0082】
【化15】
【0083】
また、Ｄ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護システイン（Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ）と結合した化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨと表記し、これは下記の構造を示すものとする。システインに限らず、他のアミノ酸と結合した場合も、これに準ずる表記とする。
【0084】
【化16】
【0085】
実施例１
Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
Ｂ－ＳＴａｇ １．５９ｇ（２．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ４ｍＬ、ＴＨＦ６ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ ２.１３ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ ０．９６ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン ２４．５ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。Ｂ－ＳＴａｇが生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール（ＡＥ）３００μＬ（５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．４８ｇ（９．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ９ｍＬを添加し、ＤＢＵ３．４ｍＬ（２２．５ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液１２ｍＬを滴下した後、５％炭酸ナトリウム水溶液３８ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１０ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．８ｍＬを加え、分液した。得られた有機層を減圧濃縮し、残渣にＣＰＭＥ ６ｍＬを加えＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液１５．２ｇを得た。
Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
Ｂ－ＳＴａｇ １．５９ｇ（２．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ４ｍＬ、ＴＨＦ６ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ ２.１３ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ ０．９６ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン ２４．５ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。Ｂ－ＳＴａｇが生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール（ＡＥ）３００μＬ（５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．４８ｇ（９．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ９ｍＬを添加し、ＤＢＵ３．４ｍＬ（２２．５ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液１２ｍＬを滴下した後、５％炭酸ナトリウム水溶液３８ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１０ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．８ｍＬを加え、分液した。得られた有機層を減圧濃縮し、残渣にＣＰＭＥ ６ｍＬを加えＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液１５．２ｇを得た。
【0086】
２）Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液７．６ｇ（１ｍｍｏｌ相当）にＣＭＰＥ １．９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で９０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液７．６ｇ（１ｍｍｏｌ相当）にＣＭＰＥ １．９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で９０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0087】
３）Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で５５分撹拌した。Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で５５分撹拌した。Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0088】
４）Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ ０．５６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ ０．５６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0089】
５）Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ ０．５２ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣として、Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇを得た。
上記のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ ０．５２ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣として、Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇを得た。
【0090】
６）Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
上記のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇ（１．０ｍｍｏｌ相当）にトリフルオロ酢酸１４．３ｍＬ、水０．３６ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．３６ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．７１ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ ８１ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ １４ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨ ５２３ｍｇを得た。得られたＨ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの純度は７１．３%であった。
上記のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇ（１．０ｍｍｏｌ相当）にトリフルオロ酢酸１４．３ｍＬ、水０．３６ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．３６ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．７１ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ ８１ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ １４ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨ ５２３ｍｇを得た。得られたＨ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの純度は７１．３%であった。
【0091】
実施例２
Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨの合成
ＨＯ－（Ｄ－ＳＴａｇ） ２．６１ｇ（３．０ｍｍｏｌ）をトルエン１５ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ １．０８ｍＬ（３．２ｍｍｏｌ）、メタンスルホン酸 ５８μＬ（０．９ｍｍｏｌ）を添加し、湯浴にて７５℃に加熱した。７５℃で３時間撹拌した後、室温まで冷却し、トリエチルアミン１６５μＬ（０．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を減圧濃縮した後、ＣＰＭＥ １０ｍＬを加え、減圧濃縮する溶媒置換濃縮の操作を２回行った後、ＣＰＭＥ １５ｍＬを加え、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨを含むＣＰＭＥ溶液１６．８ｇを得た。
Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨの合成
ＨＯ－（Ｄ－ＳＴａｇ） ２．６１ｇ（３．０ｍｍｏｌ）をトルエン１５ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ １．０８ｍＬ（３．２ｍｍｏｌ）、メタンスルホン酸 ５８μＬ（０．９ｍｍｏｌ）を添加し、湯浴にて７５℃に加熱した。７５℃で３時間撹拌した後、室温まで冷却し、トリエチルアミン１６５μＬ（０．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を減圧濃縮した後、ＣＰＭＥ １０ｍＬを加え、減圧濃縮する溶媒置換濃縮の操作を２回行った後、ＣＰＭＥ １５ｍＬを加え、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨを含むＣＰＭＥ溶液１６．８ｇを得た。
【0092】
２）Ｈ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨを含むＣＰＭＥ溶液５．６６ｇ（１．０ｍｍｏｌ相当）に、ＣＰＭＥ３．９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｌ-グルタミン酸ジｔ－ブチル塩酸塩 ０.３７ｇ（１．２ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．４７ｇ（１．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．６３ｍＬ（３．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨが生成物のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．８１ｍＬ（５．４ｍｍｏｌ）を加え、２５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液２．８ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１２ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨを含むＣＰＭＥ溶液５．６６ｇ（１．０ｍｍｏｌ相当）に、ＣＰＭＥ３．９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｌ-グルタミン酸ジｔ－ブチル塩酸塩 ０.３７ｇ（１．２ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．４７ｇ（１．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．６３ｍＬ（３．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－ＯＨが生成物のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．８１ｍＬ（５．４ｍｍｏｌ）を加え、２５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液２．８ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１２ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0093】
３）Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０.８１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＨ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０.８１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0094】
４）Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ・一水和物 ０.４７ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６４ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で７０分撹拌した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。得られた有機層にＦｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨの活性エステルがスカベンジャーとして用いたＡＥと縮合した化合物がないことを確認し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
上記のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ・一水和物 ０.４７ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６４ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で７０分撹拌した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。得られた有機層にＦｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨの活性エステルがスカベンジャーとして用いたＡＥと縮合した化合物がないことを確認し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
【0095】
５）Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ ０.５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ３０ｍＬを加え、析出した固体をろ取し、得られた固体を３０℃で減圧乾燥した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕ １．２４ｇを得た。
上記のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ ０.５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ３０ｍＬを加え、析出した固体をろ取し、得られた固体を３０℃で減圧乾燥した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕ １．２４ｇを得た。
【0096】
６）Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕ ９０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸７．５ｍＬ、水０．２１ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．２１ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．４２ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ５８ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ８ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥しＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨ ２７５ｍｇを得た。得られたＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの純度は８８．４%であった。
Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｄ－ＳＴａｇ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯｔＢｕ ９０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸７．５ｍＬ、水０．２１ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．２１ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．４２ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ５８ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ８ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥しＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨ ２７５ｍｇを得た。得られたＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの純度は８８．４%であった。
【要約】
【課題】液相ペプチド合成用担体を用いる新たな液相ペプチド合成法を提供すること。
【解決手段】側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いるペプチドの製造方法。
【選択図】なし
【解決手段】側鎖に官能基を有するアミノ酸又は側鎖に官能基を有するアミノ酸残基を含むペプチドの側鎖官能基に液相ペプチド合成用担体が導入された化合物を用いるペプチドの製造方法。
【選択図】なし