特許 7155144 組織因子標的化ＩｇＧ３免疫複合体に関連する方法及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-10-07

(45)【発行日】2022-10-18

(54)【発明の名称】組織因子標的化ＩｇＧ３免疫複合体に関連する方法及び組成物

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20221011BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20221011BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20221011BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20221011BHJP

   C07K 14/745 20060101ALI20221011BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20221011BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20221011BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20221011BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20221011BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221011BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20221011BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20221011BHJP

   A61K 38/36 20060101ALI20221011BHJP

   A61K 41/00 20200101ALI20221011BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221011BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20221011BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20221011BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20221011BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20221011BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20221011BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/12

C12N15/13

C07K19/00

C07K14/745

C07K16/28

C12N15/63 Z

C12N15/861 Z

C12N15/864 100Z

A61P35/00

A61P35/02

A61P35/04

A61K38/36

A61K41/00

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K35/76

A61K35/761

A61K48/00

A61K47/68

A61K47/64

【請求項の数】 19

(21)【出願番号】P 2019550815

(86)(22)【出願日】2018-03-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-04-16

(86)【国際出願番号】 US2018022443

(87)【国際公開番号】W WO2018170134

(87)【国際公開日】2018-09-20

【審査請求日】2021-03-12

(31)【優先権主張番号】62/471,045

(32)【優先日】2017-03-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/576,278

(32)【優先日】2017-10-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/623,269

(32)【優先日】2018-01-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514137997

【氏名又は名称】オハイオ・ステイト・イノベーション・ファウンデーション

(74)【代理人】

【識別番号】100101890

【弁理士】

【氏名又は名称】押野 宏

(74)【代理人】

【識別番号】100098268

【弁理士】

【氏名又は名称】永田 豊

(72)【発明者】

【氏名】フ・ツィウェイ

【審査官】林 康子

(56)【参考文献】

【文献】特表２００７－５００７４４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５３４４２７（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００６／００２４７３０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２００３－５０４３１５（ＪＰ，Ａ）

【文献】Trends in Biotechnology, 2016, Vol.34, No.11, pp.895-908

【文献】Oncotarget, 2017, Vol.8, No,1, pp.1481-1494

【文献】Cancer Res, 2008, Vol.68, No.10, pp.3863-3872

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００

Ｃ０７Ｋ １／００～１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫複合体タンパク質を含む組成物であって、前記免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化されたＩｇＧ３免疫グロブリンのＦｃ領域と第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化されたＩｇＧ３免疫グロブリンのＦｃ領域との二量体を含む、組成物。

【請求項2】

（ｉ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖が、ヒト又はマウスの第ＶＩＩ因子の軽鎖を含むか、
（ｉｉ）前記組成物が、組織因子（ＴＦ）発現細胞を標的とするか、
（ｉｉｉ）前記ＩｇＧ３免疫グロブリンが、Ｒ４３５Ｈにおける変異を含むか、又は、
（ｉｖ）光感受性物質が、前記免疫複合体タンパク質と結合されている、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記免疫複合体タンパク質が、配列番号２又は配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

核酸であって、配列番号１又は配列番号５の核酸配列を含む、核酸。

【請求項5】

請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫複合体タンパク質をコードする発現ベクター。

【請求項6】

前記発現ベクターが、複製欠損アデノウイルスベクター又はアデノ随伴発現ベクターである、請求項５に記載の発現ベクター。

【請求項7】

免疫複合体タンパク質を含む組成物であって、前記免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化されたＩｇＧ１免疫グロブリンのＦｃ領域と第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化されたＩｇＧ３免疫グロブリンのＦｃ領域との二量体を含む、組成物。

【請求項8】

（ｉ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖が、ヒト又はマウスの第ＶＩＩ因子の軽鎖を含むか、
（ｉｉ）前記組成物が、組織因子（ＴＦ）発現細胞を標的とするか、
（ｉｉｉ）前記ＩｇＧ３免疫グロブリンが、Ｒ４３５Ｈにおける変異を含むか、又は、
（ｉｖ）光感受性物質が、前記免疫複合体タンパク質と結合されている、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記光感受性物質が、光線力学色素を含む、請求項２又は８に記載の組成物。

【請求項10】

ａ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、
ｂ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、
ｃ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、
ｄ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、
ｅ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、
ｆ）前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ３免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記第ＶＩＩ因子の軽鎖と複合化された前記ＩｇＧ１免疫グロブリンの前記Ｆｃ領域が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項７又は８に記載の組成物。

【請求項11】

分泌される分子として、請求項７、８、又は１０のいずれか一項に記載の免疫複合体タンパク質をコードする発現ベクター。

【請求項12】

前記発現ベクターが、複製欠損アデノウイルスベクター又はアデノ随伴発現ベクターである、請求項１１に記載の発現ベクター。

【請求項13】

医薬組成物であって、
請求項１～３、７、８、又は１０のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項14】

疾患の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行う方法に使用され、
前記方法が、有効量の請求項１～３、７、８、若しくは１０のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、請求項１～３、７、８、若しくは１０のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記疾患が、組織因子（ＴＦ）発現に関連する、請求項１４に記載の組成物又は医薬組成物。

【請求項16】

前記疾患が、血管新生腫瘍、血栓形成、関節リウマチ、子宮内膜症、又は黄斑変性を伴う病理学的血管新生を含む、請求項１５に記載の組成物又は医薬組成物。

【請求項17】

前記疾患が、ＴＦを発現するマクロファージに関連する、請求項１４に記載の組成物又は医薬組成物。

【請求項18】

前記疾患が、ウイルス感染又はアテローム性動脈硬化である、請求項１４に記載の組成物又は医薬組成物。

【請求項19】

請求項１に記載の組成物が、がんの転移を予防又は治療することができる、請求項１４に記載の組成物又は医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

〔関連出願の相互参照〕
本出願は、２０１７年３月１４日に出願された米国特許仮出願第６２／４７１，０４５号、２０１７年１０月２４日に出願された米国特許仮出願第６２／５７６，２７８号、及び２０１８年１月２９日に出願された米国特許仮出願第６２／６２３，２６９号の利益を主張するものであり、これら３つの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

〔政府支援条項〕
本発明は、国立先進トランスレーショナル科学センターによって与えられた助成金番号ＵＬ１ＴＲ００１０７０の下、政府支援でなされた。政府は、本発明において、ある特定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

組織因子（「ＴＦ」）は、凝固カスケードの主要な初発因子である膜貫通糖タンパク質である。正常な生理学的条件下では、活性ＴＦは血液と接触していない。血管損傷中に、内皮下のＴＦ及びコラーゲンの血液への曝露が、凝固因子及び血小板の活性化を引き起こし、続いて止血栓の形成を引き起こす。様々な臨床現場におけるＴＦ発現の不適切な誘導は、生命を脅かす血栓症を引き起こし、かつ／又は病理学的合併症の原因になり得る。プラーク破裂後のＴＦ曝露は、急性心筋梗塞及び脳卒中につながる血栓閉塞の原因であると考えられる。これらの環境では、凝固因子によって活性化される炎症誘発性シグナル伝達経路もまた、浮腫の形成及び梗塞サイズの増加の一因となる。血管形成に関連する血管損傷は、再狭窄に関連する細胞シグナル伝達経路を誘導すると考えられるＳＭＣ上のＴＦの上方制御を引き起こす。がん及びグラム陰性敗血症におけるＴＦ過剰発現は、生命を脅かす血栓症及び炎症経路の活性化を引き起こす。

【0004】

ＴＦは、病理学的血管形成のモジュレータである。生体内研究により、ＴＦは患者又は動物モデルからの腫瘍血管系（Ｃｏｎｔｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．１９９６、Ｆｏｌｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．１９９６、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．１９９９、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．２００１、Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１、Ｄｕａｎｍｕ ｅｔ ａｌ．２０１１）、眼（Ｂｏｒａ ｅｔ ａｌ．２００３）、及び子宮内膜（Ｋｒｉｋｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１０）の血管新生における生体内での血管新生ＶＥＣ上の選択的発現のため、生体内で特有な病理学的血管新生血管内皮細胞（ＶＥＣ）表面受容体でもあることが明らかになった。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、黄斑変性（Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ｅｔ ａｌ．１９８７）、関節リウマチ（Ａｆｕｗａｐｅ ｅｔ ａｌ．２００２）、子宮内膜症（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．１９９９）などの血管形成依存性のがん及び非悪性ヒト疾患（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．２００２）において中心的な役割を果たす。具体的には、ＶＥＧＦは、これらの血管形成依存性の疾患の病理学的血管新生（通常は微小血管又は毛細血管）のＶＥＣ上のＶＥＧＲ受容体と結合することにより、血管形成を誘発する（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ２０１６）。ＶＥＧＦ誘導の生体内血管形成の血管内皮モデルを使用して、ＴＦが血管形成に特異的な受容体であり、第ＶＩＩ因子を標的とした治療薬の標的であることが示され、ＴＦ標的化剤が、がん（固形がん及び白血病）、湿潤型の加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、子宮内膜症及び関節リウマチを治療する治療上の可能性を有し得ることを示唆している。

【0005】

ＴＦは、固形がんにおけるがん細胞、がん幹細胞（ＣＳＣ）（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ２０１６）、及び腫瘍血管内皮細胞の一般的かつ特異的なバイオマーカー及び治療標的である。ＴＦは、これらのがん細胞内で高発現しており、例えば、乳がんでは８０％～１００％、トリプルネガティブ乳がん（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ２０１８）では５０％～８５％、肺がんでは４０％～８０％、及び卵巣がんでは８４％である。これら３種類のがんは制御が難しいだけでなく、更に米国及び世界中の死亡の主な原因であり、化学療法及び放射線療法（Ｖｉｄａｌ ｅｔ ａｌ．２０１４、Ｍｏｎｃｈａｒｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．２０１２、Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．２０１０）に対するＣＳＣに基づく耐性を多くの場合に発症する。乳がん、肺がん、卵巣がんに加えて、ＴＦは、他の多くのヒト固形がん、並びに白血病及び肉腫でも高い割合で発現しており（Ｈｕ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ２０１８）、例えば、原発性黒色腫では９５％及び転移性黒色腫では１００％、膵臓がんでは５３％～９０％、結腸直腸がんでは５７％～１００％、肝細胞がんでは６３％～１００％、原発性及び転移性の前立腺がんでは６０％～７８％、並びに神経膠腫では４７％～７５％である。ごく最近では、ＴＦは、乳がん、肺がん、及び卵巣がんにおけるがん幹細胞によって発現され、ＴＦ標的化剤は、薬剤耐性を有さないＴＦ発現がん幹細胞を根絶することができることが示された（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ２０１６）。

【0006】

ＴＦは、実験動物において、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ＡＭＤのモデルで発現される（Ｂｏｒａ ｅｔ ａｌ．２００３）ことも示されている。ＴＦは、子宮内膜病変内の血管新生血管内皮細胞で発現（Ｋｒｉｋｕｎ ｅｔ ａｌ．２０１０）されたことも示されている。

【0007】

必要なのは、ＴＦ発現血管形成ＶＥＣ及びがん細胞を特異的に標的とし、ＴＦ発現細胞を標的とする他の薬剤よりも強い抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す免疫標的化剤に関連する方法及び組成物である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

免疫複合体タンパク質を含む組成物であって、当該免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子の軽鎖又は完全長（Ｋ３４１Ａを有するか又は有さない）と複合化されたＩｇＧ３免疫グロブリンのＦｃ領域を含む、組成物が本明細書に開示される。これらの免疫複合体は、本明細書では、第３世代の組織因子標的化ＩＣＯＮと称され、それぞれＬ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３と命名された。Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３を使用するための方法及びキットも開示される。

【0009】

免疫複合体タンパク質を含む組成物も本明細書に開示され、当該免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子の軽鎖又は完全長（Ｋ３４１Ａを有するか又は有さない）と複合化されたＩｇＧ１及びＩｇＧ３の免疫グロブリンのハイブリッドＦｃ領域を含む。これらの免疫複合体は、本明細書では、第４世代の組織因子標的化ＩＣＯＮと称され、それぞれＬ－ＩＣＯＮ４及びＩＣＯＮ４と命名された。

【0010】

本発明の１つ以上の実施形態の詳細が、添付の図面及び以下の説明において開示される。本発明の他の特性、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から、明らかとなろう。

【0011】

本明細書に組み込まれ、また本明細書の一部を構成する添付の図面は、本開示のいくつかの態様を例証し、以下の説明と共に、本開示の原理を説明するよう機能する。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1A】第３世代及び第４世代の組織因子標的化免疫複合体（ＩＣＯＮ）の図面及び特性評価を示す。１Ａは、ＴＦ標的化免疫複合体（ＩＣＯＮ）の第１世代、第２世代、第３世代（Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３）、及び第４世代（Ｌ－ＩＣＯＮ４及びＩＣＯＮ４）の図面を示す。注釈：ロードされた、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１タンパク質の量は３μｇ／レーンであり、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質の量はＬ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１の約半量（１．５μｇ）であった。

【図1B】第３世代及び第４世代の組織因子標的化免疫複合体（ＩＣＯＮ）の図面及び特性評価を示す。１Ｂは、ＩＣＯＮ１、Ｌ－ＩＣＯＮ１、Ｌ－ＩＣＯＮ３、及びＩＣＯＮ３の分子量を示す。注釈：ロードされた、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１タンパク質の量は３μｇ／レーンであり、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質の量はＬ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１の約半量（１．５μｇ）であった。

【図1C】第３世代及び第４世代の組織因子標的化免疫複合体（ＩＣＯＮ）の図面及び特性評価を示す。１Ｃは、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３の蛍光ウエスタンブロッティングを示す。注釈：ロードされた、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１タンパク質の量は３μｇ／レーンであり、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質の量はＬ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ１の約半量（１．５μｇ）であった。

【図2】組換えＬ－ＩＣＯＮ１タンパク質とＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質との間のアフィニティ精製の違いを示す。Ｌ－ＩＣＯＮ１又はＬ－ＩＣＯＮ３のＣＨＯプロデューサ細胞からの、１μｇ／ｍｌビタミンＫ１（Ｓｉｇｍａ）を添加した無血清培地（ＳＦＭ４ＣＨＯ）１ｍＬは、プロテインＡ又はプロテインＧ磁気マイクロビーズ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）と共に培養され、捕捉されたタンパク質は１×ＳＤＳローディングバッファで溶出され、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、続いて１：１０，０００希釈抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（Ｓｉｇｍａ）及びＥＣＬ試薬（Ｐｅｉｒｃｅ）を使用したウエスタンブロッティングにより分析された。Ｌ－ＩＣＯＮタンパク質を含まない新鮮な無血清培地（ＳＦＭ）は、陰性培地対照として使用された。

【図3A】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図3B】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図3C】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図3D】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図3E】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図3F】Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質がマウス及びヒトのがん細胞の両方と結合でき、これにより、動物研究からヒト臨床試験への変換が可能になり、Ｌ－ＩＣＯＮ３療法は様々な固形がんを治療する治療上の可能性を有することを示す。（ｎｓ：有意差なし）。

【図4A】Ｌ－ＩＣＯＮ３が、標的とするがん細胞を死滅させる、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）を引き起こすことができることを示す。図４Ａは、生体外において、Ｌ－ＩＣＯＮ３が、Ｌ－ＩＣＯＮ１よりもＡＤＣＣを媒介してヒト卵巣がん細胞を死滅させるのに有効であることを示す。ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）は、アイソタイプ陰性対照として使用された。

【図4B】Ｌ－ＩＣＯＮ３が、標的とするがん細胞を死滅させる、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）を引き起こすことができることを示す。図４Ｂは、ＣＤＣを示す。ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）は、アイソタイプ陰性対照として使用された。

【図5A】生体外において、Ｌ－ＩＣＯＮ１が、ＩＣＯＮよりもがん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）に強く結合し、ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスの同所性マウスモデルの生体内でのヒトのがん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）の治療でより有効であることを示す。ＩＣＯＮ、Ｌ－ＩＣＯＮ１をコードする、又は対照として挿入物をコードしないアデノウイルスベクター（Ａｄブランク）が毎週の腫瘍内注射によって投与された（矢線）。

【図5B】生体外において、Ｌ－ＩＣＯＮ１が、ＩＣＯＮよりもがん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）に強く結合し、ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスの同所性マウスモデルの生体内でのヒトのがん（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）の治療でより有効であることを示す。ＩＣＯＮ、Ｌ－ＩＣＯＮ１をコードする、又は対照として挿入物をコードしないアデノウイルスベクター（Ａｄブランク）が毎週の腫瘍内注射によって投与された（矢線）。図５Ｂの各群には、５匹のマウスが存在した。

【図6A】生体内において、マウスＴＮＢＣの同所性マウスモデルで、Ｌ－ＩＣＯＮ３がＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効であることを示す。図６Ａは、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質が、マウスのトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）４Ｔ１細胞と結合できることを示す。

【図6B】生体内において、マウスＴＮＢＣの同所性マウスモデルで、Ｌ－ＩＣＯＮ３がＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効であることを示す。図６Ｂは、生体内において、マウスＴＮＢＣ４Ｔ１の同所性マウスモデルで、Ｌ－ＩＣＯＮ３がＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効であることを示す。図６Ｂ～図６Ｃの各群には、５匹のマウスが存在した。

【図6C】生体内において、マウスＴＮＢＣの同所性マウスモデルで、Ｌ－ＩＣＯＮ３がＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効であることを示す。図６Ｃは、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３の治療後の全てのマウスが生存した一方で、アデノウイルスベクターの腫瘍内注射の開始後１１日目で、全ての対照マウスが死亡したことを示す。図６Ｂ～図６Ｃの各群には、５匹のマウスが存在した。

【図7】ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスの同所性患者由来異種移植片（ＰＤＸ）マウスモデルにおいて、Ｌ－ＩＣＯＮ３が、患者のＴＮＢＣの治療に有効であることを示す。同所性ＴＮＢＣ ＰＤＸモデルは、ドナーＮＳＧマウス（ＮＯＤ ＳＣＩＤガンマ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＪＡＸ ＴＭ０００８９、乳腫瘍マーカー：ＴＮＢＣ ＥＲ／ＰＲ／ＨＥＲ２、ＢＲＣＡ１Ｖ７５７ｆｓ）からのＢＲＣＡ－１変異を有するＴＮＢＣ ＰＤＸを、４週齢の雌ＣＢ－１７ＳＣＩＤ（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ）の第４の左乳腺脂肪パッドに移植することによって、０日目に生成された。腫瘍が平均体積１３０ｍｍ^３（９日目）に達したら、マウスは対照群とＬ－ＩＣＯＮ３群（各群ｎ＝５）とに無作為化され、腫瘍内（ｉ．ｔ．）に、Ａｄブランク（対照ベクター）及びＡｄＬ－ＩＣＯＮ３アデノウイルスベクターの１×１０^１０ウイルス粒子（ＶＰ）がそれぞれ注射された。追加の腫瘍内注射は、１３、１７、及び２０日目に行われた。治療効果は、腫瘍の幅（Ｗ）及び長さ（Ｌ）を、ノギスによってミリメートル（ｍｍ）で測定し、式（Ｗ）^２×Ｌ／２（ｍｍ^３）を使用して腫瘍体積（ｍｍ^３）を計算することで決定された。データは平均±ＳＥＭとして提示され、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して統計的有意性についてｔ検定により分析される。

【図8】図８Ａ及び図８Ｂは、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３に特異的なプライマーを使用したＰＣＲにより、Ｌ－ＩＣＯＮ３挿入ｃＤＮＡが、アデノ随伴ウイルス血清型９（ＡＡＶ９）を作製する前のプラスミドＤＮＡ（ｐＡＡＶ－ＣＭＶ）、及び未処理のＡＡＶ９ウイルスベクター（ＡＡＶ９－Ｌ－ＩＣＯＮ３）に正しいサイズで存在することを示す。Ｍ：キロベース（Ｋｂ）のＤＮＡラダー。ｅＧＦＰ：陰性対照ベクターとしての高感度緑色蛍光タンパク質。

【図9】ＡＡＶ９－Ｌ－ＩＣＯＮ３の１回の静脈内注射によるＬ－ＩＣＯＮ３療法（ｎ＝５）が、図７で説明した同所性マウスモデルにおける患者のＴＮＢＣ ＰＤＸの治療に有効であることを示す。ＡＡＶ９－ｅＧＦＰは、陰性対照ベクター（ｎ＝２）であった。

【図10A】第ＶＩＩ因子ヒト発色性アッセイによって決定された、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮの凝固促進活性を示す。陽性凝固対照としての活性型ｆＶＩＩ（ＦＶＩＩａ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）；ＦＶＩＩａ－ＦＦＲ：凝固非活性対照としての活性部位阻害ＦＶＩＩａ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）。これらの凝固活性は、表１にも列挙される。代表的なデータは、２つの独立した実験からの平均±ＳＥＭとして提示される。図１０Ａ～図１０Ｂは、Ｌ－ＩＣＯＮ１が検出可能な凝固促進活性を有さず、一方、ＩＣＯＮがＦＶＩＩａ（１００％）の約５～６％の凝固促進活性を有することを示す。図１０は、非凝固の軽鎖を有するＩＣＯＮの修飾により、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３からの凝固促進活性が完全に枯渇したことを示唆する。

【図10B】第ＶＩＩ因子ヒト発色性アッセイによって決定された、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮの凝固促進活性を示す。陽性凝固対照としての活性型ｆＶＩＩ（ＦＶＩＩａ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）；ＦＶＩＩａ－ＦＦＲ：凝固非活性対照としての活性部位阻害ＦＶＩＩａ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）。これらの凝固活性は、表１にも列挙される。代表的なデータは、２つの独立した実験からの平均±ＳＥＭとして提示される。図１０Ａ～図１０Ｂは、Ｌ－ＩＣＯＮ１が検出可能な凝固促進活性を有さず、一方、ＩＣＯＮがＦＶＩＩａ（１００％）の約５～６％の凝固促進活性を有することを示す。図１０は、非凝固の軽鎖を有するＩＣＯＮの修飾により、Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３からの凝固促進活性が完全に枯渇したことを示唆する。

【図11】血管形成依存性のヒト疾患及びマクロファージ関連のヒト疾患における組織因子の選択的発現のフロー図の例である。

【発明を実施するための形態】

【0013】

定義
「ａ」及び「ａｎ」という冠詞は、冠詞の文法上の目的語の１つ、又は１つを超える（即ち、少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「１つの要素」は、１つの要素又は１つを超える要素を意味する。

【0014】

「約」とは、本明細書において使用される際、量、時間的な持続時間など等の測定可能な値を指すとき、かかる変動が、開示される方法を実施するのに適切である際、指定される値から．＋－．２０％又は．＋－．１０％、より好ましくは．＋－．５％、更により好ましくは．＋－．１％、なおより好ましくは．＋－．０．１％の変動を包含することを意味する。

【0015】

「予防的」治療は、病変を発症するリスクを減少させる目的で、疾患の兆候を呈しないか、又は早期兆候のみを呈する対象に施される治療である。本発明の化合物は、病変を発症する可能性を低減するため、又は発症した場合、病変の重症度を最小化するために、予防的治療として与えることができる。

【0016】

「治療的」処置は、病変の兆候又は症状を呈する対象に、それらの兆候又は症状を減退又は排除する目的で施される治療である。兆候又は症状は、生化学的、細胞的、組織学的、機能的、自覚的、又は他覚的であり得る。

【0017】

ポリペプチドの「断片」は、全長ポリペプチド又はタンパク質発現産物よりも小さい、ポリペプチドの任意の部分を指す。断片は、一態様において、１つ以上のアミノ酸残基が、全長ポリペプチドのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端から除去されている、全長ポリペプチドの欠失アナログである。したがって、「断片」は、以下に記載される欠失アナログのサブセットである。

【0018】

互換的に使用される「アナログ（analogue）」、「アナログ（analog）」、又は「誘導体」は、自然発生の分子に対して、特定の場合では異なる程度に、構造において実質的に同様であり、同じ生物活性を有する化合物、例えばペプチド又はポリペプチドを指す。アナログは、（ｉ）ポリペプチドの１つ以上の末端、及び／又は自然発生のポリペプチド配列の１つ以上の内部領域の、１つ以上のアミノ酸残基の欠失、（ｉｉ）ポリペプチドの１つ以上の末端（通常は「付加」アナログ）及び／又は天然ポリペプチド配列の１つ以上の内部領域（通常は「挿入」アナログ）の、１つ以上のアミノ酸の挿入若しくは付加、又は（ｉｉｉ）自然発生のポリペプチド配列内の他のアミノ酸での１つ以上のアミノ酸の置換を伴う１つ以上の変異に基づいて、そのアナログが由来する自然発生のポリペプチドと比較して、アミノ酸配列の組成が異なる。

【0019】

「異常」という用語は、生物、組織、細胞、又はその構成要素の文脈において使用されるとき、「正常な」（予想される）それぞれの特徴を示す、生物、組織、細胞、又はその構成要素とは少なくとも１つの観察可能な又は検出可能な特徴（例えば、年齢、治療、時刻など）が異なる、生物、組織、細胞、又はその構成要素を指す。１つの細胞又は組織型に対して正常であるか、又は予想される特徴は、異なる細胞又は組織型に対しては異常である場合がある。

【0020】

本明細書において使用される場合、疾患を「緩和する」ことは、疾患又は障害の少なくとも１つの兆候又は症状の頻度又は重症度を低減することを意味する。

【0021】

「核酸」は、ポリヌクレオチドを指し、ポリリボヌクレオチド及びポリデオキシリボヌクレオチドを含む。本発明による核酸は、ピリミジン及びプリン塩基、好ましくはシトシン、チミン、及びウラシル、並びにアデニン及びグアニンのそれぞれの任意のポリマー又はオリゴマーを含み得る。（Ａｌｂｅｒｔ Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７９３－８００（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂ．１９８２）を参照されたく、これは、全ての目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる）。実際に、本発明は、任意のデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、又はペプチド核酸成分、及びこれらの塩基のメチル化、ヒドロキシメチル化又はグルコシル化形態などのような任意の化学的バリアントを企図する。ポリマー又はオリゴマーは、組成が異種又は同種であり得、自然発生源から単離され得るか、又は人工的又は合成的に生成され得る。更に、核酸はＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又はこれらの混合物であり得、ホモ二量体、ヘテロ二量体、及びハイブリッド状態を含む、一本鎖又は二本鎖の形態で永久的又は過渡的に存在し得る。

【0022】

本明細書において使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質又はペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限は設けられない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに接合された２つ以上のアミノ酸を含む、任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書において使用される場合、この用語は、短鎖（当該技術分野において、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマーとしても一般的に称される）、並びにより長い鎖（当該技術分野において、タンパク質として一般的に称され、これには多くの型が存在する）の両方を指す。「ポリペプチド」としては、とりわけ、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同的なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、修飾されたポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドとしては、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はこれらの組み合わせが挙げられる。

【0023】

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」には、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスＲＮＡ、スモールヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、リボザイム、ゲノムＤＮＡ、合成形態、及び混合ポリマーのセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方が含まれ、非天然若しくは誘導体化、合成、又は半合成のヌクレオチド塩基を含むように化学的又は生化学的に修飾することができる。また、野生型若しくは合成遺伝子の改変が想定され、欠失、挿入、１つ以上のヌクレオチドの置換、又は他のポリヌクレオチド配列への融合が含まれるが、これらに限定されない。

【0024】

本明細書で使用される、「診断」という用語は、疾患又は障害の存在の決定を指す。本発明のいくつかの実施形態において、特定の疾患又は障害の存在の決定を可能にする診断を行うための方法が提供される。

【0025】

「疾患」は、対象が恒常性を維持することができず、疾患が改善されない場合、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象における「障害」は、対象が恒常性を維持することができるが、対象の健康状態が、障害がないときよりも良くない、健康状態である。未治療のまま放置されると、障害は、対象の健康状態における更なる悪化を必ずしも引き起こさない。

【0026】

本明細書において使用される場合、「療法」又は「治療レジメン」という用語は、障害又は疾患状態を緩和又は改変するために採用される活動、例えば、薬理学的、外科的、食物的、及び／又は他の技術を使用して、疾患又は障害の少なくとも１つの兆候又は症状を低減又は排除することが意図される治療過程を指す。治療レジメンは、処方された投与量の１つ以上の薬物又は手術を含み得る。療法は、ほとんどの場合有益であり、かつ障害又は疾患状態の少なくとも１つの兆候又は症状を低減又は排除するが、一部の例において、療法の効果は、望ましくない作用、又は副作用を有する。療法の効果はまた、対象の生理学的状態、例えば、年齢、性別、遺伝的特徴、体重、他の病状などによって影響を受ける。本明細書に開示される組成物を使用する本明細書に開示される療法は、独立型の療法として、又は手術、放射線療法、化学療法、他の形態の免疫療法（免疫チェックポイント遮断、ＣＡＲ－ＮＫ及び－Ｔ細胞、サイトカイン、ナチュラルキラー細胞、光線力学療法などが含まれるが、これらに限定されない）と組み合わせて使用することができる。

【0027】

「治療有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床医によって求められている、組織、系、又は対象の生物学的又は医学的応答を生じさせる、対象化合物の量を指す。「治療有効量」という用語は、投与されるとき、治療されている障害又は疾患の兆候又は症状のうちの１つ以上の発症を予防するか、あるいはある程度緩和させるのに十分である、化合物の当該量を含む。治療有効量は、化合物、疾患及びその重症度、並びに治療される対象の年齢、体重などに応じて、変動するであろう。

【0028】

疾患を「治療する」ことは、この用語が本明細書において使用される場合、対象によって経験される疾患又は障害の少なくとも１つの兆候又は症状の頻度又は重症度を低減することを意味する。

【0029】

「細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、具体的に示されない限り、個々の細胞、細胞株、初代培養物、又はこのような細胞に由来する培養物も指す。「培養物」は、同じ又は異なる種類の単離された細胞を含む組成物を指す。細胞株は、無限に再現することができ、このため、細胞株を「不死」にする、特定の種類の細胞の培養物である。細胞培養物は、寒天等の培地上で成長させた細胞の集団であり得る。初代細胞培養物は、細胞からの培養物であるか、又は生きた生物から直接採られ、これは、不死化されていない。

【0030】

「生物学的試料」という用語は、組織（例えば、組織生検）、器官、細胞（培養物において維持される細胞を含む）、細胞溶解物（若しくは溶解物画分）、細胞若しくは細胞性物質に由来する生体分子（例えば、ポリペプチド若しくは核酸）、又は対象からの体液を指す。体液の非限定的な例としては、血液、尿、血漿、血清、涙液、リンパ液、胆汁、脳脊髄液、間質液、房水若しくは硝子体液、初乳、痰、羊水、唾液、肛門及び膣分泌物、汗、精液、浸出液、滲出液、並びに滑液が挙げられる。

【0031】

範囲：本開示を通じて、本発明の種々の態様は、範囲形式において提示され得る。範囲形式での説明は、便宜性及び簡潔性のためであるに過ぎず、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことが理解されるべきである。したがって、範囲の説明は、具体的に開示された全ての可能な部分範囲、並びにその範囲内の個々の数値を有すると見なされるべきである。例えば、１～６等の範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６など等の具体的に開示された部分範囲、並びにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有すると見なされるべきである。これは、その範囲の幅にかかわらず適用される。

【0032】

本明細書において教示される方法によると、対象は、有効量の薬剤が投与される。有効量及び有効投与量という用語は、同義的に使用される。有効量という用語は、所望の生理学的応答をもたらすために必要な任意の量として定義される。薬剤を投与するための有効量及びスケジュールは、経験的に判定され得、このような判定を行うことは、当該技術分野の技術内である。投与のための投与量範囲は、疾患又は障害の１つ以上の症状が影響される（例えば、低減又は遅延される）、所望の効果をもたらすのに十分に大きいものである。投与量は、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応などの相当な有害な副作用を引き起こすほど大きくあるべきではない。一般的に、投与量は、年齢、状態、性別、疾患の種類、疾患若しくは障害の程度、投与経路、又は他の薬物がレジメンに含まれているかどうかと共に変動し、当業者によって判定することができる。投与量は、いずれかの禁忌がある場合には、個々の医師によって調整することができる。投与量は、変更することができ、かつ１回以上の投与で毎日、１日、又は数日間投与することができる。指針は、所与のクラスの医薬製品に対する適切な投与量に関する文献において見出すことができる。

【0033】

本明細書において使用される際、治療（treatment）、治療する（treat）、又は治療している（treating）という用語は、疾患若しくは状態、又は疾患若しくは状態の症状の影響を低減する方法を指す。このため、開示される方法において、治療は、確立された疾患若しくは状態、又は疾患若しくは状態の症状の重症度の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の低減を指し得る。例えば、疾患を治療するための方法は、対照と比較して、対象における疾患の１つ以上の症状の１０％の低減が存在する場合、治療と見なされる。したがって、低減は、未感作又は対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％又は１０％～１００％の任意の割合の低減であり得る。治療が、必ずしも、疾患、状態、又は疾患若しくは状態の症状の治癒又は完全切除を指すわけではないことが理解される。

【0034】

本明細書において使用される場合、疾患又は障害を予防する（prevent）、予防している（preventing）、及び予防（prevention）という用語は、対象が疾患又は障害の１つ以上の症状を示し始める前、又はそれとほぼ同時に行われる、行為、例えば、治療薬の投与を指し、これは、疾患又は障害の１つ以上の症状の発病又は増悪を阻害又は遅延する。本明細書において使用される場合、減少、低減、又は阻害への言及は、対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上の変化を含む。このような用語は、完全な排除を含むことができるが、必ずしも含まない。

【0035】

概説
ＴＦ発現の血管新生血管内皮細胞（ＶＥＣ）及びがん細胞を標的とする第１世代の薬剤が以前に報告されている。第１世代は、ＩｇＧ１のＦｃ領域に融合したＫ３４１Ａの変異を有するマウス又はヒトの第ＶＩＩ因子（１～４０６ａａ、組織因子への天然リガンド）からなるＩＣＯＮと名付けられた免疫複合体剤と呼ばれる（図１Ａ）（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．１９９９、米国特許出願第２００５／０２１４２９８号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＩＣＯＮでコードされた酵素前駆体第ＶＩＩ因子の前凝固作用は、位置３４１（Ｋ３４１Ａ）（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．２００１）に存在するリジンの標的化された変異を介して有意に排除された。ＩＣＯＮは、組換えタンパク質の静脈内注射又はアデノウイルスベクターの病巣内注射によって投与されることができる。実験に基づく黒色腫、前立腺及び頭頸部腫瘍の病巣内ＩＣＯＮ免疫療法は、顕著な腫瘍抑制、場合によっては、正常組織に影響を与えることなく（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０１０、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ２０００）完全な根絶をもたらす。ＴＦ発現がん細胞と結合すると、ＩＣＯＮはその作用機序として、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）依存性の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介できる。ＴＦ標的化されたＰＤＴの場合、Ｈｕらは、単量体のｆＶＩＩペプチドを光感受性物質（ＰＳ）ベルテポルフィン（ＶＰ）及びＳｎ（ＩＶ）クロリンｅ６（ＳｎＣｅ６）（それぞれｆＶＩＩ－ＶＰ及びｆＶＩＩ－ＳｎＣｅ６と呼ばれる）と複合化させ、ヒトの乳がん（Ｄｕａｎｍｕ ｅｔ ａｌ．２０１１、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ２０１０、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．２０１１）及び肺がん（Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１１）のマウスモデルにおいて、ｆＶＩＩ標的化されたＰＤＴが生体内及び生体外で血管新生血管内皮細胞及びがん細胞を選択的かつ効果的に殺傷できることが示された。

【0036】

ＩＣＯＮは、相対的に大きな分子量（２１０ｋＤａ）を有し、腫瘍組織内に浸透する能力を制限することがあり得る。ＩＣＯＮの分子量（ＭＷ）を小さくし、免疫療法の安全性（凝固活性の低下）を高めるために、ＩｇＧ１Ｆｃに融合したｆＶＩＩの軽鎖（１～１５２ａａ）のみで構成される、本明細書でＬ－ＩＣＯＮ１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＸ７６００９７）と呼ばれる第２世代のＩＣＯＮが設計された（図１ａ）。Ｌ－ＩＣＯＮ１の分子量は約１００ｋＤａであり（腫瘍微小環境へのより良い浸透のため）、これはＩｇＧ１抗体の分子量のわずか３分の２であり、ＩＣＯＮよりも５０％以上縮小し（図１ｂ）、Ｌ－ＩＣＯＮ１は凝固活性を有さないが（生体内でより安全）（図７及び表１）、凝固活性部位に変異（Ｋ３４１Ａ）を有する第１世代のＩＣＯＮは、ＦＶＩＩａの５％の凝固活性のままである（図７及び表１）。Ｌ－ＩＣＯＮ１は、同所性マウスモデルのトリプルネガティブ乳がんの治療においてＩＣＯＮよりも有効である。

【0037】

本明細書で開示される第３世代のＴＦ標的化ＩＣＯＮタンパク質（ＩＣＯＮ）は、本明細書ではＬ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３と呼ばれ、Ｋ３４１Ａを有する第ＶＩＩ因子（ｆＶＩＩ）の軽鎖又は完全長のｆＶＩＩが組換えＤＮＡ技術によりＩｇＧ３Ｆｃに融合される（図１ａ）。図１に示すように、第３世代のＬ－ＩＣＯＮ３及び第２世代のＬ－ＩＣＯＮ１は、がん細胞などの組織因子（ＴＦ）を発現する細胞と同様の結合活性を有するが、Ｌ－ＩＣＯＮ３は、生体外で第２世代のＬ－ＩＣＯＮ１よりも強力なＡＤＣＣ細胞傷害をがん細胞に対して引き起こすことができる。

【0038】

本明細書に配列番号２のアミノ酸配列が開示され、これはＬ－ＩＣＯＮ３を表す。配列番号１も開示され、これはＬ－ＩＣＯＮ３をコードする核酸である。

【0039】

本明細書に配列番号３のアミノ酸配列が開示され、これはＩＣＯＮ３を表す。配列番号４も開示され、ＩＣＯＮ３をコードする核酸である。

【0040】

ヒトＩｇＧ３は、全てのＩｇＧサブクラスの最も強力なエフェクタ機能を示すが、未解明の理由のために短い半減期を有する。ＩｇＧ３は、ＩｇＧサルベージ受容体（ＦｃＲｎ）と結合するが、ＩｇＧ１とＩｇＧ３との間の細胞内競合に起因して、ＩｇＧ１の存在下では、ＦｃＲｎを介したＩｇＧ３の輸送及びレスキューが阻害される。これは、ＩｇＧ３が、全ての他のＩｇＧサブクラスに見出されるヒスチジンの代わりにアルギニンを有する、位置４３５における単一のアミノ酸違いによって生じることが示されている。したがって、血液循環内における生体内でのＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質の半減期を延長するために、Ｒ４３５Ｈ変異は、部位特異的変異誘発法によりＬ－ＩＣＯＮ３のＩｇＧ３Ｆｃドメインに導入できる（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．１９９９、Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．２０１１）。

【0041】

Ｌ－ＩＣＯＮ３の第ＶＩＩ因子の軽鎖の組織因子との結合は、播種性血管内凝固の原因とならないように留意することが重要である。したがって、Ｌ－ＩＣＯＮ３は、血液凝固を引き起こさない（Ｌ－ＩＣＯＮ１内のｆＶＩＩ軽鎖のものと同様であり、図７及び表１を参照）。

【0042】

全ての第３（Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３）及び第４（Ｌ－ＩＣＯＮ４及びＩＣＯＮ４）ＩＣＯＮは、それを必要とする対象に対して投与されることができる。投与は、治療に関与する病態の種類に応じて局所的又は全身的である。投与は、例えば、精製された組換え免疫複合体タンパク質又は複製欠損アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）又は分泌型の免疫複合体をコードするｃＤＮＡを運ぶ他のウイルスベクターの静脈内、筋肉内、腫瘍内、皮下、滑液嚢内、眼内、斑内、又は皮内注射のような当該技術分野で即知である任意の方法を介することができる。

【0043】

ＴＦ標的化ＩＣＯＮは、単独療法として、並びに手術、放射線療法、化学療法、他の治療用抗体、抗体薬物複合体、免疫チェックポイント遮断、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ及びＮＫ細胞、樹状細胞、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、及び／又は骨髄由来サプレッサ細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）などのような免疫サプレッサ細胞の枯渇、と組み合わせて使用されることができる。併用免疫療法は、がん細胞、腫瘍血管新生、がん幹細胞、ＭＤＳＣ、Ｔｒｅｇ、ＴＡＭ、を含むがこれに限定されない、一部又は全ての主要な腫瘍区画上の異なる分子を標的とすることができ、又は理想的には、これらの主要な腫瘍区画で一般的に発現される同様の分子を標的とする。

【0044】

他の投与経路は、流体の非経口投与などであり得る。対象は、１つ以上の免疫複合体タンパク質の静脈内若しくは腫瘍内注射、若しくは他の部位での注射、又は１種類以上の免疫複合体タンパク質の分泌型をコードするｃＤＮＡを保有する１つ以上の発現ベクターの静脈若しくは腫瘍内注射、若しくは他の部位での注射によって治療されることができる。いくつかの実施形態では、対象は、有効量の１つ以上の複製欠損アデノウイルスベクター、又は１種類以上の免疫複合体タンパク質の分泌型をコードするｃＤＮＡを保有する１つ以上のアデノ随伴ベクターの静脈若しくは腫瘍内注射によって治療されることができる。多くの典型的な実施形態は、有効量の、免疫複合体の分泌型をコードするベクターの腫瘍内及び／又は筋肉内注射を伴う。

【0045】

治療的処置をもたらすために必要なＬ－ＩＣＯＮ３の量はそれ自体固定されておらず、医薬担体と組み合わせて投与される組成物中の成分の濃度、以下により詳細に説明される免疫系応答を向上させる、投与される組成物中の補助化合物、並びに治療される患者の年齢、体重、及び臨床状態に必然的に依存する。好ましい組成物は、患者に許容不可能な毒性を生じることなく、有効量で免疫複合体を送達する。

【0046】

本発明の医薬組成物又は製剤は、他の担体、アジュバント、安定剤、防腐剤、分散剤、及び論点の薬剤の種類を考慮した当該技術分野で従来の他の薬剤も含み得る。

【0047】

がんに適用される場合、本発明は、ヒト腫瘍細胞、ＣＳＣ若しくは腫瘍血管内皮細胞、又は３つ全ての腫瘍区画を特異的に標的とする標的化ドメイン、及び標的化された細胞に対する細胞溶解性免疫応答又は細胞傷害効果を活性化するエフェクタドメインを有する免疫複合体を使用する。

【0048】

がん治療では、抗腫瘍免疫複合体は、様々ながん（固形がん、白血病、リンパ腫）、特に、黒色腫、腎臓、前立腺、乳房、卵巣、脳、神経芽細胞腫、頭頸部、膵臓、膀胱、及び肺のがんを含む、原発性又は転移性固形腫瘍の治療、及び予防に使用される。免疫複合体は、腫瘍脈管系、特に血管内皮細胞、ＣＳＣ及び／又は腫瘍細胞を標的とするために使用され得る。腫瘍の脈管構造は、以下のように、免疫療法のためのいくつかの利点を提供する。（ｉ）組織因子を含む血管を標的とする一部は、全ての腫瘍に対して同様なはずである。（ｉｉ）脈管構造に標的化された免疫複合体は、それらの標的に到達するために腫瘍塊に浸潤する必要はない。（ｉｉｉ）各血管は、その生存率が血管の機能的完全性に依存する多数の腫瘍細胞に栄養を与えるため、腫瘍血管系を標的とすることにより、増幅された治療反応が生じるであろう。（ｉｖ）血管の内側を覆う内皮層全体の調節を必要とするため、血管系は、免疫複合体に対する耐性を発達させる可能性が低い。新しい血管の成長を阻害する前述の抗血管形成法とは異なり、Ｌ－ＩＣＯＮ３は血管新生に対する細胞溶解反応を誘発できる。本明細書に開示される組成物は、転移性がんを特異的に治療することができ、又はがんの転移を予防できることに留意されたい。

【0049】

Ｌ－ＩＣＯＮ３は、関節リウマチ、滲出性（「湿潤」）型の黄斑変性症、子宮内膜症、ウイルス感染症、アテローム性動脈硬化、血栓形成、及び血管新生に関連する他の疾患の患者の治療にも有効であり得る。

【0050】

一実施形態では、ＴＦ標的化光線力学療法（ＰＤＴ）又は抗体薬物複合体（ＡＤＣ）療法のために、光感受性物質又は薬物をＬ－ＩＣＯＮ３と結合させることができる。標的化分子と複合化され得る光感受性物質は、光線力学色素を含む。色素は、適切な種類の放射線、例えば、典型的には約６３０ｎｍ～約７５０ｎｍの特定の波長の光への曝露後に標的化された組織に損傷を引き起こすことが可能でなければならない。多数の利用可能な光線力学色素のいずれか、例えば、ジヘマトポルフィリンエーテル並びにヘマトポルフィリンの二量体及び三量体のような、誘導体（その例は米国特許第４，９６８，７１５号及び同第５，１９０，９６６号に開示される）を含むヘマトポルフィリンを含む、米国特許第６，６９３，０９３号及び同第６，４４３，９７６号に開示されたもの、及びその改善物であって、後述の例が、米国特許第５，０２８，６２１号、同第４，８６６，１６８号、同第４，６４９，１５１号、及び同第５，４３８，０７１号に開示されている、もの；米国特許第５，０７９，２６２号に開示及び例示されるような、光線力学化合物の供給源としてのアミノレブリン酸（ヘマトポルフィリンの前駆体）；ホウ素化ポルフィリン、ベンゾポルフィリン、及びそれらの誘導体を含み、米国特許第４，８８３，７９０号、同第４，９２０，１４３号、同第５，０９５，０３０号、及び同第５，１７１，７４９号に開示される緑色ポルフィリンによって更に例示されるような、ポルフィリン；メロシアニン；ポルフィセン：ポルフィマーナトリウム；ベルテポルフィン（Ｖｙｓｕｄｉｎｅ（商標）、ＣＩＢＡ Ｖｉｓｉｏｎ）；フォトフリンＩＩ（商標）；ＰＨ－１０（商標）；メソ－テトラ（ヒドロキシフェニル）－クロリン及びバクテリオクロリンによって例示されるようなクロリンであって、後者が米国特許第５，１７１，７４１号、同第５，１７３，５０４号に例示されている、もの；米国特許第５，１６６，１９７号に開示されるような亜鉛フタロシアニン；スズエチルエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２（商標）、Ｍｉｒａｖａｎｔ）のようなプルプリン；例が米国特許第５，１９８，４６０号、同第５，００２，９６２号、及び同第５，０９３，３４９号に開示されている、フェオフォルバイド；上記のそれぞれのモノクローナル抗体－色素複合体、任意で上記のいずれか若しくは全ての混合物を使用できる。

【0051】

化合物に対して特定に言及して上述されたが、活性化合物の鏡像異性体、立体異性体、代謝産物、誘導体、及び塩を利用することもできる。これらの化合物の合成方法は、当業者に既知である。薬学的に許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の鉱酸又は有機酸塩、及びカルボン酸の酸性残基のアルカリ塩又は有機塩などが含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩として、例えば、非毒性無機酸又は有機酸から形成される、親化合物の従来の非毒性塩又は第四級アンモニウム塩が含まれる。従来の非毒性塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導されたもの、及び酢酸、プロピオン、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などの有機酸から調製された塩が含まれる。薬学的に許容される塩は、従来の化学法によって、塩基性部分又は酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中若しくは有機溶媒中、又は２種の混合物中、これらの化合物の遊離酸又は遊離塩基の形態を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させることにより調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８に記載されている。

【0052】

プロドラッグは、生体内で活性な親薬物を放出する共有結合した物質である。プロドラッグは、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができ、常用の操作又は生体内のいずれかでこの修飾が開裂されて親化合物がもたらされるように行われる。プロドラッグには、ヒドロキシ基又はアミノ基が、プロドラッグが哺乳動物対象に投与されたとき、開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシル又は遊離アミノを形成する任意の基に結合されている化合物が含まれる。プロドラッグの例としては、アルコール及びアミン官能基の酢酸、ギ酸及び安息香酸誘導体が含まれるが、これらに限定されない。

【0053】

更に、配列番号２によって表されるＬ－ＩＣＯＮ３に追加の修飾を加えることができることが想定される。例えば、修飾されていないバージョンと同等の少なくとも１つの機能的活性を示し、更に修飾されたタンパク質又はポリペプチドが、例えば、生産費が安い、副作用が少ない、及び／又はより良い若しくはより長い有効性、若しくは生物学的利用能を有するなどの修飾されていないバージョンよりも追加の利点を保有する、修飾されたＬ－ＩＣＯＮ３を作製できる。

【0054】

修飾されたＬ－ＩＣＯＮ３は、アミノ酸の欠失及び／又は置換を保有することができ、したがって、欠失を有するタンパク質、置換を有するタンパク質、並びに欠失及び置換を有するタンパク質は、修飾されたタンパク質である。いくつかの実施形態では、これらの修飾タンパク質は、例えば一緒に、融合タンパク質又はリンカーを有するタンパク質のような挿入又は付加されたアミノ酸を更に含み得る。

【0055】

置換又は代替バリアントは、典型的には、ポリペプチド内の１つ以上の部位で１つのアミノ酸の別のアミノ酸への交換を含み、ポリペプチドの１つ以上の特性、特にそのエフェクタ機能及び／又は生物学的利用能を調節するように設計され得る。実施形態のキメラポリペプチドにおける確実な特定のアミノ酸交換は、上記で詳述されている。更なる置換は、保存的であり得、若しくは非保存的であり得、すなわち、１つのアミノ酸は、類似の型及び電荷のうちの１つに代替えされる。保存的置換は、当該技術分野において周知であり、例えば、アラニンに対してセリン、アルギニンに対してリジン、アスパラギンに対してグルタミン又はヒスチジン、アスパルテートに対してグルタメート、システインに対してセリン、グルタミンに対してアスパラギン、グルタメートに対してアスパルテート、グリシンに対してプロリン、ヒスチジンに対してアスパラギン又はグルタミン、イソロイシンに対してロイシン又はバリン、ロイシンに対してバリン又はイソロイシン、リジンに対してアルギニン、メチオニンに対してロイシン又はイソロイシン、フェニルアラニンに対してチロシン、ロイシン、又はメチオニン、セリンに対してトレオニン、トレオニンに対してセリン、トリプトファンに対してチロシン、チロシンに対してトリプトファン又はフェニルアラニン、及びバリンに対してイソロイシン又はロイシンへの変更が含まれる。

【0056】

欠失又は置換に加えて、修飾されたポリペプチドは、典型的にはポリペプチド内の少なくとも１つの残基の付加を伴う残基の挿入を保有し得る。これは、標的化ポリペプチド又は単純に単一の残基の挿入を含み得る。融合タンパク質と呼ばれる末端付加については、以下に開示される。

【0057】

また、アミノ酸及び核酸配列は、付加的なＮ若しくはＣ末端アミノ酸又は５’若しくは３’配列のような付加的な残基を含み得、更に、タンパク質発現が関係する生物学的タンパク質活性の維持を含む上記の基準を配列が満たす限り、本質的に本明細書に開示される配列の１つに記載されるとおりであることも理解されるであろう。末端配列の付加は、例えば、遺伝子内に生じることが知られている、コード領域の５’若しくは３’部分のいずれかに隣接する様々な非コード配列を含み得るか、又は様々な内部配列、すなわちイントロンを含み得る、核酸配列に特に適用される。

【実施例】

【0058】

実施例１：Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３
図１ａに示すように、第３世代（第３世代）のＩＣＯＮ、すなわちＬ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３は、ヒトＩｇＧ３Ｆｃドメインに融合したｆＶＩＩ軽鎖（１～１５２ａａ）又は完全長（Ｋ３４１Ａ変異を有する４０６ａａ）で構成される。Ｌ－ＩＣＯＮ３（配列番号１）及びＩＣＯＮ３（配列番号３）のｍＲＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（それぞれ、受託番号ＫＹ２２３６０９及びＫＹ２２３６１０）に寄託されている。

【0059】

Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３の分子量（ＭＷ）
Ｌ－ＩＣＯＮ３ペプチドのモノマーは、４１９アミノ酸残基（配列番号２）を含む。モノマーＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質の重量は、４７キロダルトンである。二量体Ｌ－ＩＣＯＮ３の推定分子量は、９４ｋＤａである。ＳＤＳ－ＰＡＧＥでのＬ－ＩＣＯＮ３の実際の分子量は、約１００ｋＤａである（図１ｂ）。Ｌ－ＩＣＯＮ３のＦｃ部分は、検出用の抗ヒトＩｇＧ抗体を使用したウエスタンブロッティングによって更に検証された（図１ｃ）。

【0060】

ＩＣＯＮ３ペプチドのモノマーは、「ＭＶＳＱＡＬＲＬＬＣ」（配列番号４）から開始する６７３残基を含む。推定されたモノマーＩＣＯＮ３タンパク質の重量は、７５ｋＤａである。

【0061】

Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３の親和性精製の方法
Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３の親和性精製のための方法を開発するために、免疫沈殿ウエスタンブロッティング（ＩＰ－ＷＢ）が実施された。図２の結果は、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質はプロテインＧ親和性カラムでのみ精製できるのに対し、Ｌ－ＩＣＯＮ１はプロテインＡ及びプロテインＧ親和性カラムで精製できることを示した。同様に、ＩＣＯＮ３は、プロテインＧ親和性カラムによって精製することができる。

【0062】

ヒト及びマウスがん細胞に対するＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質の結合活性
Ｌ－ＩＣＯＮ３の結合活性は、高ＴＦ発現ヒトトリプルネガティブ乳がん株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を使用して、がん細胞のＥＬＩＳＡにおけるＬ－ＩＣＯＮ１の結合活性と比較された。図３ａの結果は、Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＬ－ＩＣＯＮ１が、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に等しく結合できることを示した（ｎｓ：有意差なし）。がん細胞のＥＬＩＳＡの結果は、Ｌ－ＩＣＯＮ３がヒトＴＮＢＣ（図３ａ及び３ｂのＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、黒色腫（図３ｃのＳＫ－Ｍｅｌ－２８）、及び卵巣がん（図３ｄのＯＶＣＡＲ５）、並びにマウスＴＮＢＣ（図３ｅの４Ｔ１）及び黒色腫（図３ｆのＢ１６Ｆ１０）を含む２つの非常に攻勢なマウスがん株と結合できることを更に示した。

【0063】

がん細胞の殺傷におけるＬ－ＩＣＯＮ３依存性ＡＤＣＣ及びＣＤＣ効果
図４ａの結果は、Ｌ－ＩＣＯＮ３タンパク質が、標的とするがん細胞（ヒト卵巣がんＯＶＣＡＲ５細胞）を殺傷するＡＤＣＣが引き起こすことができることを示した。実際に、Ｌ－ＩＣＯＮ３依存性ＡＤＣＣは、第２世代のＩＣＯＮ（Ｌ－ＩＣＯＮ１）よりも強い効果を有した（図４ａ）。図４ｂの結果は、Ｌ－ＩＣＯＮ３が、標的とするがん細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）を殺傷するために補体依存性細胞傷害を引き起こすことができ、その効果は、Ｌ－ＩＣＯＮ１と同様（ｎｓ：有意差なし）であることを示した。

【0064】

実施例２：血管形成依存性のヒト疾患及びマクロファージ関連のヒト疾患を治療する可能性を有する組織因子に対する治療用抗体様免疫複合体
組織因子（ＴＦ）は、４７ｋＤａの膜結合細胞表面受容体（１～３）である。これは、凝固第ＩＩＩ因子、又はＣＤ１４２である、トロンボプラスチンとしても既知である。生理学的条件下では、ＴＦは、循環末梢血リンパ球（ＰＢＬ）及び静止血管内皮細胞によって発現されない。ＴＦ発現は、血液と直接接触していない細胞、例えば、周皮細胞、線維芽細胞、及び平滑筋細胞のような細胞に制限され、これらは、内皮下血管壁に局在し、循環凝固因子ＶＩＩ（ｆＶＩＩ）から隔離される。これらの細胞では、ＴＦの大部分は、細胞内プール（４）に局在される。血管壁の完全性を破壊すると、周皮細胞及び平滑筋細胞のＴＦが放出され、ｆＶＩＩによって結合され、血液循環から漏出して、出血を止めるために血液凝固を引き起こすことができる（５、６）。凝固の最初のイニシエータとしての役割に加えて、ＴＦはまた、病理学的血管形成のモジュレータでもある（７～９）。

【0065】

血管形成は、既存の血管からの新しい毛細血管の形成であり、生理学的条件（再生及び組織修復）、並びにがん（１０、１１）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、子宮内膜症、及び関節リウマチ（ＲＡ）（１２～１４）を含むがこれらに限定されない２０以上のヒト疾患（１０）の両方に関与する。がんにおいて、血管形成は、良性過形成小瘤から悪性病変（１１）への過渡期にこのプロセスが非常に重要であるという認識により、Ｈａｎａｈａｎ及びＷｅｉｎｂｅｒｇ（１５、１６）によって「がんの特徴」の１つとして特定された。病理学的血管新生の内層である血管形成血管内皮細胞に特異的な標的とする分子の同定は、これらの血管形成依存性の一般的なヒト疾患の血管新生標的化療法の発見と開発に重要である。

【0066】

がん、加齢黄斑変性、子宮内膜症の病理学的血管新生における組織因子
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、黄斑変性（１８）、関節リウマチ（１９）、及び子宮内膜症（２０）などの血管形成依存性のがん及び非悪性ヒト疾患（１７）において中心的な役割を果たす。具体的には、ＶＥＧＦは、これらの血管形成依存性の疾患の病理学的血管新生（通常は微小血管又は毛細血管）のＶＥＣ上のＶＥＧＲ受容体と結合することにより、血管形成を誘発する。ＶＥＧＦは、血管形成の研究で一般的に使用されるＶＥＣモデルであるヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）上でＴＦ発現を誘導できることが以前から知られている。ＶＥＧＦ受容体は腫瘍ＶＥＣでより高いレベルで相対的に発現しているが、それらは通常のＶＥＣでも発現されており（２１）、ＶＥＧＦ受容体が血管新生細胞に特異的ではないことを表す。病理学的血管形成をより良好に模倣するために、理想的な血管形成のＶＥＣモデルは、微小又は毛管血管から誘導されるべきである。血管内皮成長因子誘導の生体外の血管新生血管内皮モデルを使用して、ＶＥＧＦＲとは異なり、ＴＦは血管新生特異的受容体であり、ｆＶＩＩ－ＩｇＧ１Ｆｃ免疫複合体（ＩＣＯＮと命名され、後述される）を使用した第ＶＩＩ因子（ｆＶＩＩ）が標的化された免疫療法、及びｆＶＩＩ複合化された光感受性物質を使用した光線力学療法の標的であることが報告された（２２）。更にＴＦは、動物モデルから患者の腫瘍血管（７，２３－２７）、眼（１２）、及び子宮内膜症（１４）の血管新生における生体内の血管形成ＶＥＣ上での選択的発現により、生体内で特有な病理学的血管形成内皮細胞表面受容体でもある。

【0067】

がんの病理学的血管新生における組織因子
腫瘍血管内皮細胞でのＴＦ発現は、１９９６年に７人の乳がん患者からの原発性腫瘍組織においてＣｏｎｔｒｉｎｏらによって最初に報告された（２３）。重要なことに、ＴＦ発現が隣接する乳房組織の正常な血管内皮細胞で検出されなかったことも報告した。ＨＵ及びＧａｒｅｎは、ＴＦが生体外及び生体内においてヒト黒色腫異種移植片の腫瘍血管新生において選択的に発現されたことを独立して報告した（２４、２８）。ＴＦは、ヒト肺（２６）及び化学療法抵抗性の乳房（２７）腫瘍異種移植片の腫瘍血管内皮細胞に特異的に発現したが、マウスの脳、肺、脾臓の静止した血管内皮細胞（２６）には発現されなかったことが更に示された。

【0068】

加齢黄斑変性の血管新生における組織因子
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、先進国及び発展途上国の高齢者集団（５５歳以上）の失明の主な原因である。中心視力の重度の喪失は、網膜の黄斑領域を損傷する病理学的脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の形成の結果として、ＡＭＤの滲出性（湿潤）形態で生じることが多い。Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ大学での在職中にＫａｐｌａｎ研究所と協力して、２００３年にＢｏｒａ、Ｈｕらは、ＣＮＶ膜の内皮細胞は、ブタモデル（１２）でＴＦを選択的に発現した一方、正常な網膜血管内皮はＴＦを発現しなかったことを報告した。正常な脈絡膜内皮もＴＦ（１２）を発現しなかった。別の研究において、Ｇｒｏｓｓｎｉｋｌａｕｓらは、２７歳～８４歳までの７人の女性及び３人の男性から得られた１０個の外科的に切除された中心窩下のＣＮＶ検体内、並びに７４歳～９９歳までの女性４人及び６人の男性からの１０個のアイバンクの中心窩下ＣＮＶについて、ＶＥＧＦ及びＴＦ発現の免疫染色を行った。ＶＥＧＦがマクロファージ内において可変的に発現され、網膜色素上皮内（ＲＰＥ）で強く発現し、検死後の眼及び外科用標本の両方でＣＮＶの主要成分であることが見出された。ＶＥＧＦは、更に線維芽細胞内及び光受容体内でも発現した。ＴＦは、マクロファージ内で強く発現され、ＲＰＥ内で可変的に発現された。炎症活性の外科的に切除されたＣＮＶ対炎症非活性の外科的に切除されたＣＮＶにおいてＶＥＧＦ及びＴＦに対するより強い染色が存在した（２９）。

【0069】

子宮内膜症の血管新生における組織因子
子宮内膜症は、子宮内膜組織、子宮の内側層、子宮の外側の存在によって特徴付けられる婦人科疾患である。子宮内膜病変は、骨盤腹膜及び卵巣上に主に位置するが、心膜、胸膜、肺、及び更に脳内に位置することもできる。この疾患は、全ての再生産年齢の女性の最大１０％に影響を及ぼし、不妊女性での普及率は２０～５０％に上昇する。Ｌｏｃｋｗｏｏｄ博士実験室は、子宮内膜症におけるＴＦの発現を広範に調査した（３０－３３）。正常な子宮内膜では、ＴＦ発現は、分泌期の間質細胞に限定され、腺上皮における発現ははるかに低い。しかしながら、子宮内膜症では、ＴＦは、腺上皮細胞及び間質細胞の両方において大幅に過剰発現される。興味深いことに、最も強いＴＦ免疫染色は、子宮内膜組織のマクロファージ上で観察された。２０１０年、ＬｏｃｋｗｏｏｄグループのＫｒｉｋｕｎと共同でＨｕらは、異所性子宮内膜病変の内皮細胞はＴＦを高度に発現（１４）したが、一方で患者の正常な増殖性子宮内膜の腺細胞、間質細胞、内皮細胞及び血管壁にはＴＦは検出されなかった（１４）ことを報告した。

【0070】

がんにおける組織因子発現
固形がん、白血病、及び肉腫のがん細胞上の組織因子発現
腫瘍血管新生における発現に加えて、ＴＦはまた、多くの種類の固形がん（３４～３６）及び白血病（ＡＭＬ及びＡＬＬ）（３６）のがん細胞上で高度に発現される。例えば、ＴＦ発現は、乳がん患者８０％～１００％、肺がん患者４０％～８０％、及び卵巣がん患者８４％（３６）のがん細胞上で検出される。乳がん、肺がん、卵巣がんと同様に、ＴＦは他の多くのヒト固形がんでも高い割合で発現され（３６、３７）、例えば、原発性黒色腫では９５％及び転移性黒色腫では１００％、膵臓がんでは５３％～９０％、結腸直腸がんでは５７％～１００％、肝細胞がんでは６３％～１００％、原発性及び転移性前立腺がんでは６０％～７８％、並びに神経膠腫では４７％～７５％である。

【0071】

白血病は、骨髄に由来する末梢血、及び多くの場合に脾臓、肝臓、リンパ節にも浸潤する造血組織の悪性新生物である。ＡＭＬ及びＡＬＬを含む急性白血病は、未成熟細胞又は芽球の増殖によって特徴付けられる。未治療の場合、ほとんどの場合、死亡は通常６か月以内に発生する。ＡＬＬは、最も一般的な小児悪性疾患及び２番目に一般的な成人白血病であり、ＡＭＬは、２番目に一般的な小児悪性疾患である。ＴＦは、ヒト白血病ＨＬ－６０（３８～４２）、Ｍｏｌｔ－４（４３）、ＴＨＰ－１（４３）細胞株、並びにＡＭＬ（３８、４４～４８）及びＡＬＬ（３９、４９）患者の白血病細胞上で発現することが報告された。ＴＦは、エンドトキシ又は他のサイトカイン（４１）によって刺激されない限り、正常な末梢単核細胞上、そして骨髄前駆細胞上（４５）でも発現されない。Ｔｆは、白血病患者の血漿中（３９、４９）及びＨＬ－６０培地中（３９）でも検出された。

【0072】

肉腫において、ＴＦ発現もまた、マウスＭｅｔｈ－Ａ肉腫細胞上（５０）、ラット骨肉腫細胞上（５１）、及びカポジ肉腫上（５２）の血管由来でも検出された。ＴＦが、ヒト肉腫内で発現しているかを調査することが残存する。

【0073】

がん幹細胞上の組織因子発現
がん細胞及び腫瘍の血管新生の他に、がん幹細胞（ＣＳＣ）もまた、腫瘍微小環境において重要な腫瘍区画である。ＣＳＣは、腫瘍の血管形成、複数の治療に対する耐性（５３、５４）及び転移（５３、５５、５６）に寄与する。標的化ＣＳＣ療法は、根本的にがんを治療することができ、薬剤耐性、再発、及び転移を克服することができる。ＴＦはまた、ＣＤ１３３＋及びＣＤ２４－ＣＤ４４＋がん始原幹細胞でも発現され、ＴＦは、ヒトのがん細胞株（乳がん、肺がん、卵巣がん、頭頸部がんなど）、腫瘍異種移植片及び乳がん患者から単離されたＣＳＣの新規ながん標的として機能することができることが示されている。更に、ＴＦ標的化免疫療法剤ＩＣＯＮは、薬剤耐性を有さないＣＳＣを根絶することができる（３７）。

【0074】

総合すると、ＴＦは、がん細胞、腫瘍血管新生、及びがん幹細胞に対するがんの一般的かつ選択的な治療標的であり、ＴＦ標的化療法は、これら３つの主要な腫瘍区画を選択的かつ効果的に標的とする及び排除する能力を有する新規な治療的アプローチを表すと思われる。これらの発見は、再発や薬剤耐性のないＩＣＯＮの顕著な効果の結果、すなわち、ヒト及びマウスの前立腺、黒色腫、及び頭頸部がん（２５、２８、５７）のマウスモデルにおける十分に確立された原発腫瘍（最大６００ｍｍ^３）及び転移の完全な根絶の観察を明白にし得る。

【0075】

関節リウマチにおける組織因子
関節リウマチ（ＲＡ）は慢性的であり、多くの場合に原因不明の進行性の全身性炎症状態である。滑膜組織への単核浸潤（Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞及びマクロファージ）、及び末梢関節の対称性びらん性関節炎が特徴となるが、全身症状も引き起こし得る。腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、ＲＡ（５８）の病因において重要な役割を果たす。

【0076】

関節炎の関節におけるＴＦ発現
Ｂｕｓｓｏら（５９）は、ＲＡ患者１０人の滑膜組織標本を免疫組織化学的に染色し、ＴＦ発現が、線維芽細胞、平滑筋細胞、及びマクロファージにおいて検出されたが、内皮細胞では検出されなかったことを報告した。Ｃｈｅｎら（６０）は、ＫＩ－６７陽性滑膜細胞、Ｂ細胞及び内皮細胞上でＴＦ発現を観察した。ＲＡの内皮細胞におけるＴＦ発現に関する議論の結果は、ＴＦ発現が評価された時点に起因し得る。内皮細胞（ＨＭＶＥＣ及びＨＵＶＥＣ）上のＴＮＦαによるＴＦの誘導は一過性であり、ＴＮＦαとのインキュベーションの４～６時間後にピークになることが示されている。したがって、炎症誘発性サイトカイン及び成長因子の刺激により、内皮細胞はＲＡの初期段階（急性期）でＴＦを発現し、その後、内皮ＴＦ発現はＲＡの後期段階（慢性期）で減少又は消失し得ると思われる。したがって、ＴＦは、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｋｉ－６７陽性滑膜細胞、及びＲＡ内の血管形成ＶＥＣによって発現される。

【0077】

ＲＡにおける血管形成及び血管形成内皮ＴＦ。ＲＡはまた血管新生に関連しており、これにより、炎症した滑膜組織（１０、６１～７０）への白血球の内皮下浸潤を可能にする。ＴＮＦα及びＶＥＧＦのような多数の血管形成メディエータ、並びに関節炎の毛細血管形成の増加をもたらす不均衡を有するＲＡ滑膜の内在性阻害剤がある。具体的には、血管内皮細胞（ＶＥＣ）は、滑膜炎症（７１）の根底にある多数の機構に関与する。血管形成ＶＥＣは、血管透過性の増加、白血球の血管外浸潤（炎症の主要な特徴）、並びにＲＡの開始及び進行中の多数の炎症性メディエータの分泌に関与する。抗血管形成は、ＲＡ（６１）の治療において試験されている。ＴＮＦα、ＩＬ－１、及びＶＥＧＦのような多数の炎症誘発性サイトカイン及び成長因子は、ＶＥＣ（７２）上でのＴＦを誘導するための既知の刺激である。したがって、血管形成ＶＥＣは、ＲＡのＴＦ標的化治療のための標的として機能することができる。

【0078】

ＴＦを発現するＲＡにおけるマクロファージ。マクロファージが、ＲＡの開始及び進行においていくつかの役割を果たすことが十分に報告されている。第１に、マクロファージは、自己抗原を異常に提示し、自己反応性Ｔ細胞の活性化をもたらす抗原提示細胞のうちの１つとして機能できる。第２に、マクロファージは、炎症誘発性サイトカイン、ケモカイン、成長因子、並びにＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１８、ＩＬ－１５、及びＩＬ－３２のような酵素を産生及び分泌して、他の細胞を更に活性化し、疾患の進行に寄与する。第３に、マクロファージは、滑膜細胞を刺激して、コラゲナーゼ及びプロテアーゼのような酵素を放出させ、軟骨及び骨の損傷を引き起こし得る。標的化マクロファージは、ＲＡの治療のための新規な治療的アプローチであることを表す。ＴＦは、リウマチ滑膜（５９、６０）内のマクロファージによって発現されることが報告されている。重要なことに、ＴＦは、非刺激単球（７３、７４）によって通常発現されないが、ＴＦは、細菌ＬＰＳ（７５）、ＴＮＦα（７６）、及びＩＬ－１（７７）を含む炎症性メディエータによって単球上に誘導されることができる。

【0079】

ＴＦを発現するＲＡにおける線維芽細胞。ＴＦは、ヒト線維芽細胞株（７８、７９）及びヒト胚性線維芽細胞（８０）上で発現されることが報告されている。滑膜線維芽細胞は、広範なサイトカイン、ケモカイン、成長因子、及びＭＭＰのような酵素を分泌することによってＲＡの病因に関与する。研究は、滑膜線維芽細胞の増殖を阻害することにより、炎症性関節炎（８１）の重症度を軽減できることを示した。したがって、ＴＦとの結合を介した線維芽細胞の標的化は、ＲＡの治療のための新規な治療薬の開発につなげることができる。

【0080】

ＴＦを発現するＲＡにおけるＢ細胞。Ｂ細胞は、ＲＡにおける関節炎の関節に浸潤する別の種類の免疫細胞である。Ｂ細胞はＲＡの病因に重要な役割を果たし、自己抗体産生の形質細胞の前駆体としてだけでなく、抗原提示、Ｔ細胞活性化、サイトカイン産生（８２）にも関与している。したがって、Ｂ細胞指向療法は、ＲＡの治療（８３～８５）に治療効果を提供することができる。最近の研究では、ヒトＲＡにおけるＢ細胞がＴＦ（６０）を発現するのに対し、正常なＢ細胞はＴＦ（８６）を発現しないことを示した。ＲＡに関連したＢ細胞がＴＦを発現する理由は依然として不明である。これは、炎症性サイトカイン及びケモカインのうち１つ又は混合物による誘導に起因し得る。証拠として、総Ｂ細胞の３０％に相当する正常なヒトＢ細胞の亜集団（ＣＤ１９＋ＣＤ７９ｂ＋ＣＤ３８＋ＣＤ４０＋ＣＤ５－）は、ホルボールミリスチン酸アセテート（ＰＭＡ）（８６、８７）による誘導後にＴＦを発現した。興味深いことに、Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、ＬＰＳ又はＰＭＡ（８６）による刺激後でもＴＦを発現しない。ＮＫ細胞は、がんの動物モデル（５７）における生体外及び生体内でのＴＦ標的化ＩＣＯＮ免疫療法のＡＤＣＣ効果を媒介する主要なエフェクタ細胞であることが観察された。ＮＫ細胞における陰性のＴＦ発現の発見は、有効性をより良好に理解するだけでなく、臨床試験におけるＴＦ標的免疫複合体の安全性を確保にするためにも非常に重要である。

【0081】

Ｔｆ及び血管形成の誘導に寄与するＲＡ、子宮内膜症、及び腫瘍の微小環境におけるサイトカイン及び成長因子（Ｈｕ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．２０１８（印刷中））。炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ１９９６＜／Ｙｅａｒ＞＜ＲｅｃＮｕｍ＞８８＜／ＲｅｃＮｕｍ＞＜ＩＦＮｎ、ＧＭ－ＣＳＦなど）、抗炎症性サイトカイン（ＩＬ－１０、ＩＬ－１Ｒα、ＴＧＦβ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３など）、ケモカイン（例えば、ＩＬ－８、ＭＩＰ－１Ｌ－８、ＭＩＰ－１Ｐ－１Ｐ－１１０など）、成長因子（例えば、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ）を含む多数のサイトカイン及びケモカインが、関節リウマチ滑膜（８８）及び／又はＲＡ患者（８９～９１）の血漿中に存在する。これらの刺激の一部は、ＶＥＣ（例えば、ＶＥＧＦ）（１９）の血管形成及び血管透過性の増加、及び／又はＶＥＣ（例えば、ＴＮＦ＜／Ａ（９２）若しくは単球（ＬＰＳ）（７５）、ＴＮＦＮ（７６）、ＩＬ－１（７７）でのＴＦの誘導に寄与することができる。それらのうちのいくつか、例えば、強力な成長因子であるＶＥＧＦは、血管形成依存性のがん、及びＡＭＤ（１８）、ＲＡ（１９）、子宮内膜症（２０）のような非悪性ヒト疾患（１７）で中心的及び共通の役割を果たす。

【0082】

マクロファージに関連するヒト疾患における組織因子
アテローム性動脈硬化における組織因子
アテローム性動脈硬化は、冠動脈のような中型から大型の動脈に脂質が蓄積することを特徴とする進行性疾患である。アテローム性動脈硬化中の、血管壁におけるアテローム性動脈硬化プラークの形成は、動脈の内腔の狭窄をもたらす。アテローム性動脈硬化及びその後のアテローム血栓症は、世界中の主要な死亡の原因となる。アテローム性動脈硬化プラークは、主に、プラーク内のマクロファージ上及び血管平滑筋細胞、並びに壊死性の核内の微小胞（微粒子又は細胞外小胞としても既知である）及び泡沫細胞由来の破片に発現されるＴＦのレベルが高いことに起因して凝固促進性が高い。興味深いことに、プラーク内の９０％を超える微小胞はＣＤ１４陽性であり（９３）、単球／マクロファージのそれらの起源を示唆する。Ｍａｃｋｍａｎのグループを含むいくつかのグループは、アテローム血栓症化及びアテローム性動脈硬化（９４～９９）におけるＴＦを簡潔に再調査した。アテローム性動脈硬化における動物モデルは、マウス、ウサギ、ブタ、及び非ヒト霊長類において開発されており、このなかでマウス及びウサギは、最も一般的に使用されるモデルである。重要なのは、ヒトのアテローム性動脈硬化と同様に、ウサギモデル及びＡｐｏｅ^－／－マウスモデルのおけるアテローム性動脈硬化病変にも高レベルのＴＦが存在することである（Ｔａｔｓｕｍｉ及びＭａｃｋｍａｎによる批評を参照）（９５）。これらの動物モデルにおけるＴＦ発現の所見は非常に重要である。これは、基礎科学研究のためにヒトのアテローム性動脈硬化の進行を模倣する動物モデルだけでなく、ヒトのアテローム性動脈硬化の治療のためのＴＦ標的化治療薬を試験するための動物モデルも提供するためである。更に、高脂血症及びＩＩ型家族性高コレステロール血症を有する患者は、高濃度のＴＦ発現単球及びＴＦ陽性微小胞のレベルが高い。重要なことに、ＴＦは、非刺激単球（７３，７４）によって通常発現されないが、ＴＦは、細菌リポ多糖（ＬＰＳ、エンドトキシンとしても既知）（７５）、ＴＮＦα（７６）、及びＩＬ－１（７７）を含む炎症性メディエータによって単球上に誘導されることができる。

【0083】

ＨＩＶに感染したマクロファージ上の組織因子発現
ヒト免疫不全ウイルス－１（ＨＩＶ－１）の発見後すぐに、ＨＩＶ－１には、生体内の末梢血に２種類の主要な標的とする細胞、すなわち広範に研究されてきたＴリンパ球及びマクロファージ（１００、１０１）を有することが見出され、これらは軽視されているが、以下で説明する観察に基づいて広範に調査する価値がある。ウイルス複製サイクルは通常Ｔ細胞において迅速及び細胞変性であるが、感染したマクロファージは生体外及び生体内で数か月間生存し、感染性ウイルス粒子を含む大きな液胞を蓄積する。結果として、ＨＩＶ遺伝子が活発に発現し、ウイルス粒子は、ＨＩＶに感染したマクロファージ（１００）に組み入れられる。したがって、マクロファージは、宿主内での初期段階のウイルス伝播及び伝播のためのＨＩＶ感染の病因において重要な役割を果たし、より重要なことには、ウイルス持続の貯蔵庫として、重要な役割を果たす。更に、慢性ＨＩＶ感染におけるマクロファージは、細胞膜受容体の組織因子（ＴＦ）（１０２）を選択的に発現する。しかしながら、ＴＦは、刺激を受けていない単球（７３）、並びに血管壁の他の静止血液細胞及び血管内皮細胞（２４、２５、１０３～１０５）によっては通常発現されない。マクロファージ上のＴＦの上昇は、生体内凝固、すなわち動脈及び静脈血栓症のリスクの増加に寄与し、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）（１０２）後のＨＩＶ患者における一般的な副作用である。更に、マクロファージＴＦのレベルは、血漿中のＨＩＶレベル（１０２）と相関した。ＴＦ発現は、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）（１０２）によって単球上に誘導され得、これは胃腸管由来の細菌産物であり、慢性的にＨＩＶに感染した個体（１０６）において高い循環レベルを有する。したがって、ＨＩＶに感染したマクロファージは、ウイルスを拡散させるための貯蔵庫であると考えられ、組織因子発現による血管内血栓症のリスクの増加に寄与する。

【0084】

エボラに感染したマクロファージにおける組織因子発現
エボラウイルスは、重度の出血性発熱に起因して、ヒトにおける発生では約８０％、サルモデルではほぼ１００％の急性死亡率を引き起こし得る。エボラ出血熱の凝固異常を裏付ける機構は、エボラウイルスが、ウイルス複製（１０７）中に霊長類単球及びマクロファージにおいてＴＦ発現を誘導できることである。組換え線虫抗凝固タンパク質ｃ２（ｒＮＡＰｃ２）によるｆＶＩＩａ／ＴＦの遮断は、エボラ出血熱のアカゲザルモデルにおけるＴＦ活性のレベルを低下させ、治療された非ヒト霊長類の生存率を有意に増加させた（１０８）。

【0085】

組織因子は、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって発現されない
興味深いことに、Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、ＬＰＳ又はＰＭＡ（８６）による刺激後でもＴＦを発現しない。以前に、ＮＫ細胞が、がんの動物モデル（５７）における生体外及び生体内でのＴＦ標的化ＩＣＯＮ免疫療法の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）効果を媒介する主要なエフェクタ細胞であることを観察した。ＮＫ細胞における陰性のＴＦ発現の発見は、有効性をより良好に理解するだけでなく、臨床試験におけるＴＦ標的免疫複合体の安全性を確保にするためにも非常に重要である。上記のように、ＴＦは、非刺激単球（７３、７４）及びＢ細胞（８６）によって通常発現されないが、ＴＦは、ＬＰＳ（７５）、ＴＮＦα（７６）、及びＩＬ－１（７７）を含む炎症性メディエータによって単球上、及びＰＭＡ（８６、８７）によってＢ細胞上に誘導されることができる。

【0086】

前臨床研究におけるＴＦ抗体及び抗体様免疫複合体の標的化
第２及び第３世代のＴＦ標的化抗体様免疫複合体（より軽いＩＣＯＮのためのＬ－ＩＣＯＮ）
Ｌ－ＩＣＯＮ１をより有効にするために、Ｌ－ＩＣＯＮ３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６０９）及びＩＣＯＮ３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６１０）と命名された第３世代ＩＣＯＮが生成された。Ｌ－ＩＣＯＮ３及びＩＣＯＮ３は、ＩｇＧ３Ｆｃ（第３世代、図１ａ及び図１ｂ）に融合されたＦＶＩＩ軽鎖（最初の１５２ａａ）又は完全長（Ｋ３４１Ａを有するか又は有さない）で構成される。ＩｇＧ３抗体は、ＩｇＧ１抗体よりも有効なＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ効果を引き起こすことができることが、十分に報告されている。第３世代のＬ－ＩＣＯＮ３及び第２世代のＬ－ＩＣＯＮ１は、がん細胞に対して同様の結合活性を有し、Ｌ－ＩＣＯＮ３は、生体外での第２世代のＩＣＯＮ（Ｌ－ＩＣＯＮ１）よりも強いＡＤＣＣ細胞傷害を引き起こすことができる。Ｌ－ＩＣＯＮ３はまた、がんの動物モデルにおいてＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効である。

【0087】

第４世代のＴＦ標的化抗体様免疫複合体
ＩｇＧ１抗体（より長い血清半減期）及びＩｇＧ３抗体（より強いＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ）の利点を組み合わせるために、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３のＦｃのハイブリッドは、第ＶＩＩ因子の軽鎖又は第ＶＩＩ因子の完全長（Ｋ３４１Ａを有するか又は有さない）のＣ末端に融合され、第４世代のＩＣＯＮとして、それぞれＬ－ＩＣＯＮ４及びＩＣＯＮ４と命名された。ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性は、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３混合アイソタイプ（１０９）の改変抗体において増強されたことが以前に示された。

【0088】

ＴＦ標的化抗体及び抗体薬物複合体（ＡＤＣ）
いくつかのヒト化モノクローナル抗体（ＴＦ－ＨｕＭａｂ）及び／又は抗体薬物複合体（ＴＦ－ＡＤＣ）は、前臨床試験及び臨床研究（１１０、１１１）で研究されている。オランダ内のグループは、ＴＦ及びＴＦ発現ＮＳＯ細胞（１１０）の細胞外ドメインの精製ペプチドを使用して、ヒト化マウスにおけるＴＦに対するヒト化ＩｇＧ１抗体（組織因子ＨｕＭａｂ）を生成した。ＴＦ－０１１、－０９８及び－１１１と命名されたこれらのうちの３つは、ＴＦ：ｆＶＩＩ依存性細胞内シグナル伝達の効率的な阻害、ＡＤＣＣ、及び急速な受容体の内在化を誘導することができたが、生体外でのＴＦ凝固活性に最小限の影響を有した。これらのＴＦ ＨｕＭａｂクローンを細胞傷害剤ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦと複合化させ、ＴＦ－０１１－ＭＭＡＥ（ＨｕＭａｘ－ＴＦ－ＡＤＣ）が最も強力なＡＤＣであり、生体内での作用の主要な機構はアウリスタチンを介した腫瘍細胞の殺傷であることを示した。ＴＦ－０１１－ＭＭＡＥは、ＴＦ発現レベルが変化する患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおける完全な腫瘍退縮を誘導した。興味深いことに、ＴＦ標的化ＡＤＣは、それらの腫瘍細胞の２５％～５０％でＴＦを発現するＰＤＸモデルにおいても有効であった。低ＴＦ発現の腫瘍細胞モデルにおけるＡＤＣの有効性の理由は、ＴＦ標的化ＡＤＣが、生体外（２２、３７）及び生体外（２４、２８）内のＴＦ標的化ＩＣＯＮによって個別に標的化され及び根絶され得る、腫瘍血管新生及び／又はがん幹細胞のような他のＴＦ陽性腫瘍の区画も標的とし得ることである。ＡＤＣの結果は、ＡＤＣを使用したＴＦ標的化免疫療法が、それらの腫瘍細胞上で低レベルのＴＦ発現を伴っても、複数種類の固形がんにおいて治療の可能性を有し得ることを、独立して実証した。

【0089】

同じグループは、ＴＦ標的化ＡＤＣの有効性を、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２（１１２）のような他のがん細胞受容体を標的化するものと更に比較した。ＴＦ、ＥＧＦＲ、及びＨＥＲ２に特異的な抗体を、抗体を介した内在化により強力な細胞傷害を誘導する毒素であるｄｕｏｓｔａｔｉｎ－３と複合化させた。ＴＦ－ＡＤＣが、異種移植片マウスモデルにおけるＥＧＦＲ－及びＨＥＲ２－ＡＤＣと比較して、腫瘍成長の低減において相対的に強力であったことを示した。

【0090】

結論
要約すると、ＴＦは、血管形成依存性のヒト疾患、特に固形がん、ＡＭＤ、子宮内膜症、及びＲＡの血管新生における血管形成血管内皮細胞上に選択的に発現される。がんにおいて、ＴＦは、固形がん細胞、ＡＭＬ及びＡＬＬ白血病細胞、並びに肉腫細胞を含むがん細胞、がん幹細胞によっても過剰発現される。更に、ＴＦは、腫瘍微小環境においてＴＡＭ及びＭＤＳＣ（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．未公開データ）による可能性がある。ＲＡにおいて、ＴＦは、関節炎の関節における、マクロファージ、Ｂ細胞、線維芽細胞、及びＫｉ－６７陽性滑膜細胞によって局所的に更に発現される。マクロファージに関連するヒト疾患では、ＴＦは、アテローム性動脈硬化における単球由来マクロファージ及び泡沫細胞、並びにＨＩＶ及びエボラに感染したマクロファージによって異常に発現される。これらのＴＦ発現細胞（血管新生ＶＥＣ、がん細胞、ＣＳＣ、マクロファージ／泡沫細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞）は全て疾患の進行に関与するが、正常なＶＥＣ、単球、Ｔ及びＮＫ細胞はＴＦを発現しない。したがって、標的化ＴＦは、これらの臨床的に有意な疾患を広く治療する能力を有する新規な治療的アプローチを表す。

【0091】

上述のように、ＴＦに対する治療抗体を作製するための２つのアプローチが存在する。一方のアプローチは、ＴＦの天然リガンドであるｆＶＩＩをＩｇＧ１又はＩｇＧ３Ｆｃに融合することであり、もう一方のアプローチはヒト抗体を作製することであった。ｆＶＩＩを含む抗体様免疫複合体（ＩＣＯＮ及びＬ－ＩＣＯＮ）は、ＴＦに対する親和性が高く、ヒト化の必要がないため、抗ＴＦヒト化抗体及び抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を超える利点を有する。ＩＣＯＮ及びＬ－ＩＣＯＮ分子は、その天然リガンドｆＶＩＩを使用してＴＦと結合するように設計されており、凝固促進活性部位変異（Ｋ３４１Ａ）を有する完全長のペプチド又は凝固促進活性が完全に枯渇した軽鎖ペプチドのいずれかであり、それぞれ、抗ＴＦ抗体で達成できるよりもはるかに高い親和性と特異性を有する。ＩＣＯＮ及びＬ－ＩＣＯＮは、抗ＴＦ Ａｂ及びＴＦ－ＡＤＣと比較していくつかの重要な利点を有する：（ｉ）ＴＦ対して１０^－８～１０^－９Ｍ（１１４）の範囲のＫｄを有する抗ＴＦ抗体とは対照的に、ＴＦと結合するｆＶＩＩの解離定数（Ｋｄ）は最大１０^－１２Ｍ（１１３）である。（ｉｉ）ＩＣＯＮ及びＬ－ＩＣＯＮは、組換えＤＮＡ技術によって生成され、これらのＴＦ標的化タンパク質剤を、モノクローナル抗体（１１０）に必要とされるヒト化プロセスを必要とせずに、臨床試験のためにヒト源から作製されることを可能にする。（ｉｉｉ）ＡＤＣが強力な薬物を抗体に共有結合させることによって作製されているという事実により、ＡＤＣの大部分は不均質な混合物として存在し、高度な部位特異的な複合技術（１１５）を必要とする。更に、ＡＤＣにおけるＴＦに対するこれらの抗体は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを介した治療抗体ではなく、抗体／抗原結合時の内在化を介して、細胞傷害剤をがん細胞に送達する標的化分子のように機能する。ＡＤＣのアプローチは、ｆＶＩＩ標的化された光線力学療法（３６）のアプローチと類似しており、ｆＶＩＩは、内在化を介してＴＦ発現がん細胞（２６、２７、１０４、１０５）、腫瘍ＶＥＣ（２２、２６、２７、１０４、１０５）、及びＣＳＣ（２２）に光感受性物質を選択的に送達する標的化分子として機能する（ＴＦへのｆＶＩＩ結合後３０分でピークの内在化に達する）（１０４）。

【0092】

３つの世代のＴＦ標的化ＩＣＯＮのなかで、データは、第２世代のＬ－ＩＣＯＮ１が第１世代のＩＣＯＮよりも有効（図５）であり、並びに第３世代のＬ－ＩＣＯＮ３が、生体外でのがん細胞へのＡＤＣＣの媒介（図４ａ）、及びステージＩＶのヒト乳がん動物であるマウス乳がん４Ｔ１の生体内での同所性マウスモデルの治療（図６ｂ）において第２世代のＬ－ＩＣＯＮ１よりも有効であることを示す。ＴＦ標的化抗体様免疫複合体又は抗体のいずれかの理想的な特徴は、ＴＦと結合するだけであり、これらのヒト疾患における播種性血管内凝固障害を引き起こさないように、凝固促進活性を有さないことである。この点に関して、Ｌ－ＩＣＯＮ３は、その凝固促進活性が完全に枯渇しているため、理想的である。

【0093】

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１４．Ｇ．Ｋｒｉｋｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ”ｉｃｏｎ”ｔａｒｇｅｔｓ ａｂｅｒｒａｎｔｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｃａｕｓｉｎｇ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ１７６，１０５０－１０５６（２０１０）．
１５．Ｄ．Ｈａｎａｈａｎ，Ｒ．Ａ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｔｈｅ ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｅｌｌ１００，５７－７０（２０００）．
１６．Ｄ．Ｈａｎａｈａｎ，Ｒ．Ａ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ１４４，６４６－６７４（２０１１）．
１７．Ｎ．Ｆｅｒｒａｒａ，ＶＥＧＦ ａｎｄ ｔｈｅ ｑｕｅｓｔ ｆｏｒ ｔｕｍｏｕｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃａｎｃｅｒ２，７９５－８０３（２００２）．
１８．Ｍ．Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ，Ｒ．Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｓ．Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｒｙｂｋａ，Ｙ．Ｅ．Ｓｈｉｎｇ，Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｂｙ ｈｅｐａｒｉｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１４７，９５－１０５（１９８７）．
１９．Ａ．Ｏ．Ａｆｕｗａｐｅ，Ｓ．Ｋｉｒｉａｋｉｄｉｓ，Ｅ．Ｍ．Ｐａｌｅｏｌｏｇ，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＶＥＧＦ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ１７，９６１－９７２（２００２）．
２０．Ｊ．Ｆｕｊｉｍｏｔｏ，Ｈ．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｒ．Ｈｉｒｏｓｅ，Ｈ．Ｗｅｎ，Ｔ．Ｔａｍａｙａ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ４８ Ｓｕｐｐｌ１，１４－２０（１９９９）．
２１．Ｚ．Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｅｘｐｏｓｕｒｅｓ ｔｏ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｈａｌｌｍａｒｋ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ３６ Ｓｕｐｐｌ１，Ｓ１８４－２０２（２０１５）．
２２．Ｚ．Ｈｕ，Ｊ．Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｘｕ，Ｗ．Ｒｕｆ，Ｃ．Ｊ．Ｌｏｃｋｗｏｏｄ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ａｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ２０，８５－９６（２０１７）．
２３．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｉｎｏ，Ｇ．Ｈａｉｒ，Ｄ．Ｌ．Ｋｒｅｕｔｚｅｒ，Ｆ．Ｒ．Ｒｉｃｋｌｅｓ，Ｉｎ ｓｉｔｕ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ２，２０９－２１５（１９９６）．
２４．Ｚ．Ｈｕ，Ｙ．Ｓｕｎ，Ａ．Ｇａｒｅｎ，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｄｅｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ９６，８１６１－８１６６（１９９９）．
２５．Ｚ．Ｈｕ，Ａ．Ｇａｒｅｎ，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ９８，１２１８０－１２１８５（２００１）．
２６．Ｊ．Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ａ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ１１，１０６９－１０８１（２０１１）．
２７．Ｊ．Ｄｕａｎｍｕ，Ｊ．Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｘｕ，Ｃ．Ｊ．Ｂｏｏｔｈ，Ｚ．Ｈｕ，Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ａ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ１０４，１４０１－１４０９（２０１１）．
２８．Ｚ．Ｈｕ，Ａ．Ｇａｒｅｎ，Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｔｕｍｏｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ９７，９２２１－９２２５（２０００）．
２９．Ｈ．Ｅ．Ｇｒｏｓｓｎｉｋｌａｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｖｉｓ８，１１９－１２６（２００２）．
３０．Ｇ．Ｋｒｉｋｕｎ，Ｆ．Ｓｃｈａｔｚ，Ｈ．Ｔａｙｌｏｒ，Ｃ．Ｊ．Ｌｏｃｋｗｏｏｄ，Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ．Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ１１２７，１０１－１０５（２００８）．
３１．Ｃ．Ｊ．Ｌｏｃｋｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ－ｏｎｌｙ ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ １５ Ｓｕｐｐｌ３，１４４－１５１（２０００）．
３２．Ｆ．Ｓｃｈａｔｚ，Ｇ．Ｋｒｉｋｕｎ，Ｒ．Ｃａｚｅ，Ｍ．Ｒａｈｍａｎ，Ｃ．Ｊ．Ｌｏｃｋｗｏｏｄ，Ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｄｅｃｉｄｕａｌ ｃｅｌｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，ｍｅｎｓｔｒｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ６８，８４９－８６０（２００３）．
３３．Ｇ．Ｋｒｉｋｕｎ，Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ，ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ（Ｃａｉｒｏ）２０１２，３０６８３０（２０１２）．
３４．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｉｎｏ，Ｇ．Ａ．Ｈａｉｒ，Ｍ．Ａ．Ｓｃｈｍｅｉｚｌ，Ｆ．Ｒ．Ｒｉｃｋｌｅｓ，Ｄ．Ｌ．Ｋｒｅｕｔｚｅｒ，Ｉｎ ｓｉｔｕ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩａ ａｓ ｐｒｏｂｅｓ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ１４５，１３１５－１３２２（１９９４）．
３５．Ｎ．Ｓ．Ｃａｌｌａｎｄｅｒ，Ｎ．Ｖａｒｋｉ，Ｌ．Ｖ．Ｒａｏ，Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ７０，１１９４－１２０１（１９９２）．
３６．Ｚ．Ｈｕ，Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｏｔｈｅｒ Ｓｏｌｉｄ Ｃａｎｃｅｒｓ ａｎｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ－Ｃｕｒｒｅｎｔ ａｎｄ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ、Ｅｓｒａ Ｇｕｎｄｕｚ ａｎｄ Ｍｅｈｍｅｔ Ｇｕｎｄｕｚ（Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－７７６－５、ＩｎＴｅｃｈ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｔｅｃｈｏｐｅｎ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｓｈｏｗ／ｔｉｔｌｅ／ｆａｃｔｏｒ－ｖｉｉ－ｔａｒｇｅｔｅｄ－ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ－ｔｈｅｒａｐｙ－ｆｏｒ－ｂｒｅａｓｔ－ｃａｎｃｅｒ－ａｎｄ－ｉｔｓ－ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ－ｐｏｔｅｎｔｉａｌ－ｆｏｒ－ｏｔｈｅｒ－ｓから入手可能。Ｅ．Ｇｕｎｄｕｚ，Ｇｕｎｄｕｚ，Ｍ．，Ｅｄ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ－Ｃｕｒｒｅｎｔ ａｎｄ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ（ＩｎＴｅｃｈ，２０１１），ｐｐ．１７５－１９６．
３７．Ｚ．Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ｔｕｍｏｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ，ｌｕｎｇ ａｎｄ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ８，１４８１－１４９４（２０１７）．
３８．Ｈ．Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ５３，５３５－５４９（１９８９）．
３９．Ｔ．Ｋｕｂｏｔａ，Ｋ．Ａｎｄｏｈ，Ｈ．Ｓａｄａｋａｔａ，Ｈ．Ｔａｎａｋａ，Ｎ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ６５，５９－６３（１９９１）．
４０．Ｊ．Ｃ．Ｆｒｅｅｂｕｒｎ，Ｗ．Ｓ．Ｇｉｌｍｏｒｅ，Ｊ．Ｊ．Ｓｔｒａｉｎ，Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｏｎ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＨＬ－６０ ａｎｄ Ｕ９３７ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ２３，２８６Ｓ（１９９５）．
４１．Ｆ．Ｒ．Ｒｉｃｋｌｅｓ，Ｇ．Ａ．Ｈａｉｒ，Ｒ．Ａ．Ｚｅｆｆ，Ｅ．Ｌｅｅ，Ｒ．Ｄ．Ｂｏｎａ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ７４，３９１－３９５（１９９５）．
４２．Ｇ．Ａ．Ｈａｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ２０，１－１１（１９９６）．
４３．Ｍ．Ｔａｎａｋａ，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ－ｌｉｋｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｂｙ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ５６，２０１－２１１（１９８９）．
４４．Ｋ．Ａｎｄｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ．Ｓｐｅｃｉａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ５９，７４８－７５４（１９８７）．
４５．Ｋ．Ａ．Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ５６，４２５－４３０（１９８９）．
４６．Ｍ．Ｔａｎａｋａ，Ｔ．Ｋｉｓｈｉ，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｂｙ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ （ＡＭＬ）ｃｅｌｌｓ．Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ４，１－８（１９９０）．
４７．Ｍ．Ｔａｎａｋａ，Ｈ．Ｙａｍａｎｉｓｈｉ，Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ１７，１０３－１１１（１９９３）．
４８．Ｔ．Ｎａｋａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ．Ｃｌｉｎ Ａｐｐｌ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ６，１４－１７（２０００）．
４９．Ｔ．Ｎａｋａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｒｅｌａｐｓｅｄ ａｃｕｔｅ ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ６４，１４５－１５０（２０００）．
５０．Ｙ．Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｓｏｍａｔｉｃ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｓｔｏｒｅｓ ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｉｎ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｅｔｈ－Ａ ｓａｒｃｏｍａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ９７，２２１３－２２２４（１９９６）．
５１．Ｊ．Ｇ．Ｂｌｅｄｓｏｅ，Ｓ．Ｍ．Ｓｌａｃｋ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｒａｔ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｔｏ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｍａｔｅｒ Ｓｃｉ Ｐｏｌｙｍ Ｅｄ９，１３０５－１３１２（１９９８）．
５２．Ｙ．Ｍ．Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ Ｋａｐｏｓｉ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１，ｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎ，ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ１４４，５１－５９（１９９４）．
５３．Ｔ．Ｍ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｗ．Ｈ．ＭｃＢｒｉｄｅ，Ｆ．Ｐａｊｏｎｋ，Ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ＣＤ２４（－／ｌｏｗ）／ＣＤ４４＋ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ－ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ９８，１７７７－１７８５（２００６）．
５４．Ｇ．Ｆｅｒｒａｎｄｉｎａ，Ｍ．Ｐｅｔｒｉｌｌｏ，Ｇ．Ｂｏｎａｎｎｏ，Ｇ．Ｓｃａｍｂｉａ，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＤ１３３ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ１３，８２３－８３７（２００９）．
５５．Ｃ．Ｓｈｅｒｉｄａｎ ｅｔ ａｌ．，ＣＤ４４＋／ＣＤ２４－ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ：ａｎ ｅａｒｌｙ ｓｔｅｐ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ８，Ｒ５９（２００６）．
５６．Ｖ．Ａｄｏｒｎｏ－Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ：ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ，ｓｅｅｄｓ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ａｎｄ ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ７５，９２４－９２９（２０１５）．
５７．Ｚ．Ｈｕ，Ｊ．Ｌｉ，Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｃｒｕｃｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｉｃｏｎ（ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ／ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１Ｆｃ）ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１１，４９（２０１０）．
５８．Ｒ．Ｏ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．Ｆｅｌｄｍａｎｎ，Ｒ．Ｎ．Ｍａｉｎｉ，Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｊｏｉｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ８９，９７８４－９７８８（１９９２）．
５９．Ｎ．Ｂｕｓｓｏ，Ｃ．Ｍｏｒａｒｄ，Ｒ．Ｓａｌｖｉ，Ｖ．Ｐｅｃｌａｔ，Ａ．Ｓｏ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ４８，６５１－６５９（２００３）．
６０．Ｌ．Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｓｙｎｏｖｉｕｍ：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｐａｎｎｕｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｃｔａ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ，（２０１３）．
６１．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｖａｓｃｕｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ５１，１－７（２００９）．
６２．Ｐ．Ｒ．Ｃｏｌｖｉｌｌｅ－Ｎａｓｈ，Ｄ．Ｌ．Ｓｃｏｔｔ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ５１，９１９－９２５（１９９２）．
６３．Ｅ．Ｍ．Ｐａｌｅｏｌｏｇ，Ｒ．Ａ．Ｆａｖａ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｆｕｔｕｒｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ２０，７３－９４（１９９８）．
６４．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ｇ．Ｓｚｅｇｅｄｉ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｍｅｄ４６，２７－４１（１９９８）．
６５．Ｄ．Ｇ．Ｓｔｕｐａｃｋ，Ｃ．Ｍ．Ｓｔｏｒｇａｒｄ，Ｄ．Ａ．Ｃｈｅｒｅｓｈ，Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｂｒａｚ Ｊ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ ３２，５７３－５８１（１９９９）．
６６．Ｅ．Ｍ．Ｐａｌｅｏｌｏｇ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ４ Ｓｕｐｐｌ３，Ｓ８１－９０（２００２）．
６７．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ｌ．Ｇａｓｐａｒ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ１０，１７３９－１７５３（２００５）．
６８．Ｎ．Ｍａｒｕｏｔｔｉ，Ｆ．Ｐ．Ｃａｎｔａｔｏｒｅ，Ｅ．Ｃｒｉｖｅｌｌａｔｏ，Ａ．Ｖａｃｃａ，Ｄ．Ｒｉｂａｔｔｉ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ２１，５５７－５６６（２００６）．
６９．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ｔ．Ｂｅｓｅｎｙｅｉ，Ｇ．Ｐａｒａｇｈ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ４２，５６３－５７３（２００９）．
７０．Ａ．Ｍａｒｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｒ ａ ｃｏｍｍｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ？Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ，（２０１１）．
７１．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｌｌｅｒｇｙ４，３１９－３２３（２００５）．
７２．Ｈ．Ｗａｄａ，Ｙ．Ｗａｋｉｔａ，Ｈ．Ｓｈｉｋｕ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ＆ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ：ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｉｎ ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ６ Ｓｕｐｐｌ１，Ｓ２６－３１（１９９５）．
７３．Ｂ．Ｏｓｔｅｒｕｄ，Ｅ．Ｂｊｏｒｋｌｉｄ，Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ．Ａｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ２９，１７５－１８４（１９８２）．
７４．Ｊ．Ｃ．Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ６２，２０７－２１８（１９９５）．
７５．Ｔ．Ｌｕｔｈｅｒ，Ｃ．Ｆｌｏｓｓｅｌ，Ｖ．Ｈｉｅｔｓｃｈｈｏｌｄ，Ｒ．Ｋｏｓｌｏｗｓｋｉ，Ｍ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ（ＴＦ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ－－ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｔｏ ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｕｔ６１，３７５－３７８（１９９０）．
７６．Ｊ．Ｍ．Ｈｅｒｂｅｒｔ，Ｐ．Ｓａｖｉ，Ｍ．Ｃ．Ｌａｐｌａｃｅ，Ａ．Ｌａｌｅ，ＩＬ－４ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＬＰＳ－，ＩＬ－１ ｂｅｔａ－ ａｎｄ ＴＮＦ ａｌｐｈａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ．ＦＥＢＳ ｌｅｔｔｅｒｓ３１０，３１－３３（１９９２）．
７７．Ｊ．Ｍ．Ｈｅｒｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌｆｏｒｍｉｎ－Ａ１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｂｅｔａ（ＩＬ１ ｂｅｔａ）ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ４８，１２１１－１２１７（１９９４）．
７８．Ｅ．Ｃａｍｅｒｅｒ，Ａ．Ｂ．Ｋｏｌｓｔｏ，Ｈ．Ｐｒｙｄｚ，Ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ，ｔｈｅ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｉｎｉｔｉａｔｏｒ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ８１，１－４１（１９９６）．
７９．Ｕ．Ｒ．Ｐｅｎｄｕｒｔｈｉ，Ｄ．Ａｌｏｋ，Ｌ．Ｖ．Ｒａｏ，Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩａ ｔｏ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ：ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ（Ａ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ９４，１２５９８－１２６０３（１９９７）．
８０．Ｅ．Ｆ．Ｇｒａｂｏｗｓｋｉ，Ｄ．Ｂ．Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ，Ｙ．Ｎｅｍｅｒｓｏｎ，Ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｂｙ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｆｌｏｗ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｂｌｏｏｄ８１，３２６５－３２７０（１９９３）．
８１．Ｍ．Ｊｕａｒｅｚ，Ａ．Ｆｉｌｅｒ，Ｃ．Ｄ．Ｂｕｃｋｌｅｙ，Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｗｉｓｓ ｍｅｄｉｃａｌ ｗｅｅｋｌｙ１４２，ｗ１３５２９（２０１２）．
８２．Ｔ．Ｄｏｒｎｅｒ，Ｇ．Ｒ．Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ１５，２４６－２５２（２００３）．
８３．Ｔ．Ｄｏｒｎｅｒ，Ｐ．Ｅ．Ｌｉｐｓｋｙ，Ｂ－ｃｅｌｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｔｏｄａｙ ａｎｄ ｔｏｍｏｒｒｏｗ．Ｅｘｐｅｒｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ７，１２８７－１２９９（２００７）．
８４．Ｔ．Ｄｏｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｎ Ｂ－ｃｅｌｌ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ ９，８２－８９（２００９）．
８５．Ｔ．Ｄｏｒｎｅｒ，Ｎ．Ｋｉｎｎｍａｎ，Ｐ．Ｐ．Ｔａｋ，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ１２５，４６４－４７５（２０１０）．
８６．Ｈ．Ｍｅｃｈｉｃｈｅ，Ｐ．Ｃｏｒｎｉｌｌｅｔ－Ｌｅｆｅｂｖｒｅ，Ｐ．Ｎｇｕｙｅｎ，Ａ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｃａｎ ｅｘｐｒｅｓｓ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｐｈｏｒｂｏｌ ｍｙｒｉｓｔａｔｅ ａｃｅｔａｔｅ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ９４，１４６－１５４（２００５）．
８７．Ｈ．Ｍｅｃｈｉｃｈｅ，Ｐ．Ｎｇｕｙｅｎ，ＩＬ－４ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｐｈｏｒｂｏｌ ｍｙｒｉｓｔａｔｅ ａｃｅｔａｔｅ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ９７，１５８－１５９（２００７）．
８８．Ｒ．Ｂａｄｏｌａｔｏ，Ｊ．Ｊ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ａｃｕｔｅ－ｐｈａｓｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａｎｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｓｅｍｉｎ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ２６，５２６－５３８（１９９６）．
８９．Ｚ．Ｓｚｅｋａｎｅｃｚ，Ａ．Ｐａｋｏｚｄｉ，Ａ．Ｓｚｅｎｔｐｅｔｅｒｙ，Ｔ．Ｂｅｓｅｎｙｅｉ，Ａ．Ｅ．Ｋｏｃｈ，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ（Ｅｌｉｔｅ Ｅｄ）１，４４－５１（２００９）．
９０．Ｋ．Ｄ．Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｅｒｏｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｔｉｍｅ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ６２，３１６１－３１７２（２０１０）．
９１．Ｈ．Ｋｏｋｋｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｐｒｅｄａｔｅｓ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ６２，３８３－３９１（２０１０）．
９２．Ｊ．Ｆｒｉｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ａｃｒｏｓｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ ｂｙ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）ｏｃｃｕｒｓ ｖｉａ ａ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ ａｎｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＴＮＦ．Ｂｌｏｏｄ１００，１３３４－１３３９（２００２）．
９３．Ｍ．Ｍａｙｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ，ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｍｉｃｓ ｏｎ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｐｌａｑｕｅｓ．Ｃｉｒｃ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｇｅｎｅｔ２，３７９－３８８（２００９）．
９４．Ｍ．Ｃａｍｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ４１，７３７－７４６（２０１５）．
９５．Ｋ．Ｔａｔｓｕｍｉ，Ｎ．Ｍａｃｋｍａｎ，Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ Ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｊ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ２２，５４３－５４９（２０１５）．
９６．Ｄ．Ｓａｈａ，Ｓ．Ｓ，Ｅ．Ｇ．Ｓｅｒｇｅｅｖａ，Ｚ．Ｉ．Ｉｏｎｏｖａ，Ａ．Ｖ．Ｇｏｒｂａｃｈ，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ２１，１１５２－１１５７（２０１５）．
９７．Ａ．Ｐ．Ｏｗｅｎｓ，３ｒｄ，Ｎ．Ｍａｃｋｍａｎ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｃｕｒｒ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ Ｒｅｐ１４，３９４－４０１（２０１２）．
９８．Ｐ．Ｍｅｅｒａｒａｎｉ，Ｐ．Ｒ．Ｍｏｒｅｎｏ，Ｇ．Ｃｉｍｍｉｎｏ，Ｊ．Ｊ．Ｂａｄｉｍｏｎ，Ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ；ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｏｂｅｓｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ４５，１０３－１１０（２００７）．
９９．Ｊ．Ｆ．Ｖｉｌｅｓ－Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ．Ｊ．Ｂａｄｉｍｏｎ，Ａｔｈｅｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ：ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ３６，２５－３０（２００４）．
１００．Ｐ．Ｂｅｎａｒｏｃｈ，Ｅ．Ｂｉｌｌａｒｄ，Ｒ．Ｇａｕｄｉｎ，Ｍ．Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ，Ｍ．Ｊｏｕｖｅ，ＨＩＶ－１ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ７，２９（２０１０）．
１０１．Ｚ．Ｆ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｓ．Ｆａｕｃｉ，Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＦＡＳＥＢ Ｊ ５，２３８２－２３９０（１９９１）．
１０２．Ｎ．Ｔ．Ｆｕｎｄｅｒｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ１１５，１６１－１６７（２０１０）．
１０３．Ｙ．Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ１４，３４６－３５３（２００７）．
１０４．Ｚ．Ｈｕ，Ｂ．Ｒａｏ，Ｓ．Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｄｕａｎｍｕ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｕｓｉｎｇ ａ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ，（２０１０）．
１０５．Ｚ．Ｈｕ，Ｂ．Ｒａｏ，Ｓ．Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｄｕａｎｍｕ，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｍｉｃｅ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ１０，２３５（２０１０）．
１０６．Ｊ．Ｍ．Ｂｒｅｎｃｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ１２，１３６５－１３７１（２００６）．
１０７．Ｔ．Ｗ．Ｇｅｉｓｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｅｂｏｌａ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ：ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｐｒｉｍａｔｅ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｓ ａ ｋｅｙ ｅｖｅｎｔ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ１８８，１６１８－１６２９（２００３）．
１０８．Ｔ．Ｗ．Ｇｅｉｓｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｂｏｌａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩａ／ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ：ａ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ．Ｌａｎｃｅｔ３６２，１９５３－１９５８（２００３）．
１０９．Ａ．Ｎａｔｓｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｆ ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ ｍｉｘｅｄ ｉｓｏｔｙｐｅ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ６８，３８６３－３８７２（２００８）．
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１１１．Ｘ．Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｃｏｎｆｅｒｓ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＳＣ１ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ８，５９０８６－５９１０２（２０１７）．
１１２．Ｂ．Ｅ．ｄｅ Ｇｏｅｉｊ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｎａｂｌｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ１４，１１３０－１１４０（２０１５）．
１１３．Ｅ．Ｗａｘｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｏｌｕｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ：ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩａ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３１，３９９８－４００３（１９９２）．
１１４．Ｌ．Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ，ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｔｉ－ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｕｓｅ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ８５，３７９－３８９（２００１）．
１１５．Ｖ．Ｃｈｕｄａｓａｍａ，Ａ．Ｍａｒｕａｎｉ，Ｓ．Ｃａｄｄｉｃｋ，Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｎａｔ Ｃｈｅｍ８，１１４－１１９（２０１６）．
１１６．Ｚｈｉｗｅｉ Ｈｕ^＊，Ｒｕｌｏｎｇ Ｓｈｅｎ，Ａｍａｎｄａ Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ｌｉａｎｂｏ Ｙｕ，Ｂｈｕｖａｎｅｓｗａｒｉ Ｒａｍａｓｗａｍｙ，Ｃｈｅｒｙｌ Ａ．Ｌｏｎｄｏｎ，Ｔｉａｎ Ｘｕ ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ．Ｃａｒｓｏｎ ＩＩＩ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ－Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｅｃｏｎｄ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＩＣＯＮ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．３－７－２０１８に受領。
１１７．Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｋｅ ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｔｒｅａｔ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．２０１８，７（１），８；ｄｏｉ：１０．３３９０／ａｎｔｉｂ７０１０００８．

【0094】

実施例３：第４世代のＩＣＯＮ
１．Ｌ－ＩＣＯＮ４：Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＬ－ＩＣＯＮ３の組み合わせ
上記のように、Ｌ－ＩＣＯＮ１（配列番号１４）、Ｌ－ＩＣＯＮ１（ＷＴ）（配列番号１６）、及びＬ－ＩＣＯＮ１（Ｅ３３３Ａ）（配列番号１８）と命名された３つのＬ－ＩＣＯＮ１タンパク質が存在する。それらのｃＤＮＡ配列は、それぞれ受託番号ＫＸ７６００９７、ＫＸ７６００９８、及びＫＸ７６００９９でＧｅｎＢａｎｋに寄託されている。

【0095】

Ｌ－ＩＣＯＮ３（ＷＴ）（配列番号２）又はＬ－ＩＣＯＮ３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６０９）、及びＬ－ＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）（配列番号６）と命名された、２つのＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質も存在する。

【0096】

Ｌ－ＩＣＯＮ４は、３つのＬ－ＩＣＯＮ１タンパク質のうちのそれぞれと、２つのＬ－ＩＣＯＮ３タンパク質のうちのそれぞれとの組み合わせから誘導されることができる。これらは表２に列挙される。

【0097】

２．ＩＣＯＮ４：ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮ３の組み合わせ
ＩＣＯＮ１（ＷＴ）（配列番号１０）、及びＩＣＯＮ１（Ｅ３３３Ａ）（配列番号１２）と命名された、２つのＩＣＯＮ１タンパク質も存在する。これらの新規なＩＣＯＮ１タンパク質内のＩｇＧ１Ｆｃ配列は、元のＩＣＯＮ配列（ヒトＩＣＯＮ ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ２７２７７４）とは異なる。これらの新規なＩＣＯＮ１における主な違いは、元のＩＣＯＮ（又はＩＣＯＮ１、ＡＦ２７２７７４と呼ばれる）と比較して、６アミノ酸残基の短いヒンジ領域を有することである。

【0098】

ＩＣＯＮ３（ＷＴ）（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６１０）（配列番号４）、及びＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）（配列番号８）と命名された、２つのＩＣＯＮ３タンパク質が存在する。

【0099】

したがって、ＩＣＯＮ４は、２つのＬ－ＩＣＯＮ１のうちのそれぞれと２つのＩＣＯＮ３のうちのそれぞれとの組み合わせから誘導されることができる（表３）。

【0100】

特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、開示される発明に属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において引用される刊行物及びそれらが引用される資料は、参照により具体的に組み込まれている。

【0101】

当業者であれば、日常的な実験のみを使用して、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を理解するか、又は解明することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

【0102】

配列
配列番号１：ヒト第ＶＩＩ因子軽鎖－ヒトＩｇＧ３Ｆｃ（Ｌ－ＩＣＯＮ３）ｍＲＮＡの完全なコード配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６０９）。

【表1】

【0103】

（ＨｉｎｄＩＩＩ－ＥｃｏＲＩ－Ｋｏｚａｋ－ＡＴＧ－ｈｆＶＩＩＬ－ＢａｍＨＩ－ｈＩｇＧ３Ｆｃ－終止－ＮｏｔＩ）

【0104】

配列番号２：ＩＣＯＮ３ペプチドのモノマー

【表2】

【0105】

配列番号３：ヒト第ＶＩＩ因子（Ｋ３４１Ａ）－ヒトＩｇＧ３Ｆｃ（ＩＣＯＮ３）ｍＲＮＡの完全なコード配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＹ２２３６１０）。

【0106】

【表3】

【0107】

配列番号４：ＩＣＯＮ３ペプチドのモノマー

【表4】

【0108】

配列番号５：Ｌ－ＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）

【表5】

【0109】

配列番号６：Ｌ－ＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）のモノマー

【表6】

【0110】

配列番号７：ＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）

【表7】

【0111】

配列番号８：ＩＣＯＮ３（Ｒ４３５Ｈ）のモノマー

【表8】

【0112】

配列番号９：ＩＣＯＮ１（ＷＴ）

【表9】

【0113】

配列番号１０：ＩＣＯＮ１のモノマー（ＷＴ）

【表10】

【0114】

配列番号１１：ＩＣＯＮ１（Ｅ３３３Ａ）

【表11】

【0115】

配列番号１２：ＩＣＯＮ１のモノマー（Ｅ３３３Ａ）

【表12】

【0116】

配列番号１３：Ｌ－ＩＣＯＮ１（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＸ７６００９７）

【表13】

【0117】

配列番号１４：Ｌ－ＩＣＯＮ１のモノマー

【表14】

【0118】

配列番号１５：Ｌ－ＩＣＯＮ１（ＷＴ）（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＸ７６００９８）

【表15】

【0119】

配列番号１６：Ｌ－ＩＣＯＮ１（ＷＴ）のモノマー

【表16】

【0120】

配列番号１７：Ｌ－ＩＣＯＮ１（Ｅ３３３Ａ）（ＧｅｎＢａｎｋ ＫＸ７６００９９）

【表17】

【0121】

配列番号１８：Ｌ－ＩＣＯＮ１（Ｅ３３３Ａ）のモノマー

【表18】

【0122】

表

【0123】

【表19】

^＊Ｌ－ＩＣＯＮ１及びＩＣＯＮの比較のために、１０ｎＭ ＦＶＩＩａの凝固活性は１００％と指定される。
^＊＊ＦＶＩＩａの濃度は１．００ｎＭであったが、他のタンパク質は１．２５ｎＭに希釈された。

【0124】

【表20】

【0125】

【表21】

【0126】

参考文献
１．Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ＪＨ，Ｆａｋｈｒａｉ Ｈ ａｎｄ Ｅｄｇｉｎｇｔｏｎ ＴＳ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ，ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｃａｓｃａｄｅ．Ｃｅｌｌ．１９８７；５０（１）：１２９－１３５．
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１０．Ｃｈｅｎｇ Ｊ，Ｘｕ Ｊ，Ｄｕａｎｍｕ Ｊ，Ｚｈｏｕ Ｈ，Ｂｏｏｔｈ ＣＪ ａｎｄ Ｈｕ Ｚ．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ａ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ．２０１１；１１（９）：１０６９－１０８１．
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１２．Ｂｏｒａ ＰＳ，Ｈｕ Ｚ，Ｔｅｚｅｌ ＴＨ，Ｓｏｈｎ ＪＨ，Ｋａｎｇ ＳＧ，Ｃｒｕｚ ＪＭ，Ｂｏｒａ ＮＳ，Ｇａｒｅｎ Ａ ａｎｄ Ｋａｐｌａｎ ＨＪ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｌａｓｅｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｓｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｅｘｕｄａｔｉｖｅ（ｗｅｔ）ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ．２００３；１００（５）：２６７９－２６８４．
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２１．Ｍｏｎｃｈａｒｍｏｎｔ Ｃ，Ｌｅｖｙ Ａ，Ｇｉｌｏｒｍｉｎｉ Ｍ，Ｂｅｒｔｒａｎｄ Ｇ，Ｃｈａｒｇａｒｉ Ｃ，Ａｌｐｈｏｎｓｅ Ｇ，Ａｒｄａｉｌ Ｄ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｌａｆｒａｓｓｅ Ｃ ａｎｄ Ｍａｇｎｅ Ｎ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａ ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｌｅｔｔｅｒｓ．２０１２；３２２（２）：１３９－１４７．
２２．Ｋｏｃｈ Ｕ，Ｋｒａｕｓｅ Ｍ ａｎｄ Ｂａｕｍａｎｎ Ｍ．Ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｔ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ ｆａｉｌｕｒｅｓ－－ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１０；２０（２）：１１６－１２４．
２３．Ｔｅｚｅｌ ＴＨ，Ｂｏｄｅｋ Ｅ，Ｓｏｎｍｅｚ Ｋ，Ｋａｌｉａｐｐａｎ Ｓ，Ｋａｐｌａｎ ＨＪ，Ｈｕ Ｚ ａｎｄ Ｇａｒｅｎ Ａ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－Ｆｃ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｏｃｕｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｆｌａｍｍ．２００７；１５（１）：３－１０．
２４．Ｈｕ Ｚ ａｎｄ Ｇａｒｅｎ Ａ．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｔｕｍｏｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ．２０００；９７（１６）：９２２１－９２２５．
２５．Ｈｕ Ｚ ａｎｄ Ｌｉ Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｃｒｕｃｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｉｃｏｎ（ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ／ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１Ｆｃ）ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１０；１１：４９．
２６．Ｈｕ Ｚ，Ｒａｏ Ｂ，Ｃｈｅｎ Ｓ ａｎｄ Ｄｕａｎｍｕ Ｊ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｍｉｃｅ．ＢＭＣ ｃａｎｃｅｒ．２０１０；１０：２３５．
２７．Ｈｕ Ｚ，Ｒａｏ Ｂ，Ｃｈｅｎ Ｓ ａｎｄ Ｄｕａｎｍｕ Ｊ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｕｓｉｎｇ ａ ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．２０１１；１２６（３）：５８９－６００．
２８．Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｍａｐｐｉｎｇ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｆｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ－ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＦｃＲｎ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２９，２８１９－２８２５，ｄｏｉ：１０．１００２／（ＳＩＣＩ）１５２１－４１４１（１９９９０９）２９：０９＆＃６０；２８１９：ＡＩＤ－ＩＭＭＵ２８１９＆＃６２；３．０．ＣＯ；２－６（１９９９）．
２８．Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ，Ｎ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ＦｃＲｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｇｉｖｅｓ ｒｉｓｅ ｔｏ ｓｈｏｒｔ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ３ ａｎｄ ｏｆｆｅｒｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２，５９９，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１６０８（２０１１）．

【0127】

〔実施の態様〕
（１） 免疫複合体タンパク質を含む組成物であって、前記免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子と複合化されたＩｇＧ３免疫グロブリンのＦｃ領域を含む、組成物。
（２） 前記第ＶＩＩ因子が第ＶＩＩ因子の軽鎖である、実施態様１に記載の組成物。
（３） 前記第ＶＩＩ因子が完全長である、実施態様１に記載の組成物。
（４） 前記第ＶＩＩ因子が、Ｋ３４１Ａにおける変異を含む、実施態様３に記載の組成物。
（５） 前記組成物が、組織因子（ＴＦ）発現細胞を標的とする、実施態様１に記載の組成物。
（６） 第ＶＩＩ因子の軽鎖が、ヒト及びマウスの第ＶＩＩ因子を含む、実施態様２に記載の組成物。
（７） ＩｇＧ３が、Ｒ４３５Ｈにおける変異を含む、実施態様１に記載の組成物。
（８） 前記免疫複合体タンパク質が、配列番号２を含む、実施態様１に記載の組成物。
（９） 前記免疫複合体タンパク質が、配列番号１を含む核酸よってコードされる、実施態様１に記載の組成物。
（１０） 前記免疫複合体タンパク質が、発現ベクター中で分泌される分子としてコードされる、実施態様１に記載の組成物。
（１１） 前記発現ベクターが、複製欠損アデノウイルスベクターである、実施態様６に記載の組成物。
（１２） 前記発現ベクターが、アデノ随伴発現ベクターである、実施態様６に記載の組成物。
（１３） 光感受性物質が、前記免疫複合体と結合される、実施態様１に記載の組成物。
（１４） 前記光感受性物質が、光線力学色素を含む、実施態様１０に記載の組成物。
（１５） 疾患の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行う方法であって、有効量の実施態様１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（１６） 前記疾患が、組織因子（ＴＦ）発現に関連する、実施態様１５に記載の方法。
（１７） 前記疾患が、血管新生腫瘍、血栓形成、関節リウマチ、子宮内膜症、又は黄斑変性を伴う病理学的血管新生を含む、実施態様１６に記載の方法。
（１８） 前記疾患が、ＴＦを発現するマクロファージに関連する、実施態様１５に記載の方法。
（１９） 前記疾患が、エボラ又はＨＩＶなどのウイルス感染である、実施態様１５に記載の方法。
（２０） 前記疾患が、アテローム性動脈硬化である、実施態様１５に記載の方法。
（２１） 実施態様１に記載の組成物が、がんの転移を予防することができる、実施態様１５に記載の方法。
（２２） 実施態様１に記載の組成物が、転移性がんを治療することができる、実施態様１５に記載の方法。
（２３） 前記対象が、薬学的に許容される担体中の前記免疫複合体タンパク質の投与によって治療される、実施態様１５に記載の方法。
（２４） 免疫複合体タンパク質を含む組成物であって、前記免疫複合体タンパク質が、第ＶＩＩ因子と複合化されたＩｇＧ１及びＩｇＧ３の免疫グロブリンのハイブリッドＦｃ領域を含む、組成物。
（２５） 前記第ＶＩＩ因子が第ＶＩＩ因子の軽鎖である、実施態様２４に記載の組成物。
（２６） 前記第ＶＩＩ因子が完全長である、実施態様２４に記載の組成物。
（２７） 前記第ＶＩＩ因子が、Ｋ３４１Ａにおける変異を含む、実施態様２４に記載の組成物。
（２８） 前記組成物が、組織因子（ＴＦ）発現細胞を標的とする、実施態様２４に記載の組成物。
（２９） 第ＶＩＩ因子の軽鎖が、ヒト及びマウスの第ＶＩＩ因子を含む、実施態様２５に記載の組成物。
（３０） ＩｇＧ３が、Ｒ４３５Ｈにおける変異を含む、実施態様２４に記載の組成物。
（３１） 前記免疫複合体タンパク質が、発現ベクター中で分泌される分子としてコードされる、実施態様２４に記載の組成物。
（３２） 前記発現ベクターが、複製欠損アデノウイルスベクターである、実施態様３１に記載の組成物。
（３３） 前記発現ベクターが、アデノ随伴発現ベクターである、実施態様３１に記載の組成物。
（３４） 光感受性物質が、前記免疫複合体と結合される、実施態様２４に記載の組成物。
（３５） 前記光感受性物質が、光線力学色素を含む、実施態様３４に記載の組成物。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【配列表】

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