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特許7158426メンタアルベンシス抽出物を含む微塵による皮膚細胞損傷ケア用、皮膚バリア強化用、及び抗老化又は抗炎症組成物

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-10-13

(45)【発行日】2022-10-21

(54)【発明の名称】メンタアルベンシス抽出物を含む微塵による皮膚細胞損傷ケア用、皮膚バリア強化用、及び抗老化又は抗炎症組成物

(51)【国際特許分類】

A61K 36/534 20060101AFI20221014BHJP

A23L 33/105 20160101ALI20221014BHJP

A61K 8/9728 20170101ALI20221014BHJP

A61K 8/9789 20170101ALI20221014BHJP

A61K 35/74 20150101ALI20221014BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20221014BHJP

A61P 17/16 20060101ALI20221014BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20221014BHJP

A61P 39/02 20060101ALI20221014BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20221014BHJP

A61Q 17/00 20060101ALI20221014BHJP

A61Q 19/00 20060101ALI20221014BHJP

A61Q 19/08 20060101ALI20221014BHJP

A61Q 19/10 20060101ALI20221014BHJP

A61K 127/00 20060101ALN20221014BHJP

【ＦＩ】

A61K36/534

A23L33/105

A61K8/9728

A61K8/9789

A61K35/74 G

A61P17/00

A61P17/16

A61P29/00

A61P39/02

A61P43/00 111

A61Q17/00

A61Q19/00

A61Q19/08

A61Q19/10

A61K127:00

【請求項の数】 17

(21)【出願番号】P 2019572193

(86)(22)【出願日】2018-05-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-08-27

(86)【国際出願番号】 KR2018005418

(87)【国際公開番号】W WO2019004590

(87)【国際公開日】2019-01-03

【審査請求日】2021-03-16

(31)【優先権主張番号】10-2017-0083668

(32)【優先日】2017-06-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2017-0083707

(32)【優先日】2017-06-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(31)【優先権主張番号】10-2017-0083726

(32)【優先日】2017-06-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】506213681

【氏名又は名称】アモーレパシフィックコーポレーション

【氏名又は名称原語表記】ＡＭＯＲＥＰＡＣＩＦＩＣＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

【住所又は居所原語表記】１００，Ｈａｎｇａｎｇ－ｄａｅｒｏ，Ｙｏｎｇｓａｎ－ｇｕ，Ｓｅｏｕｌ，ＲｅｐｕｂｌｉｃｏｆＫｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000556

【氏名又は名称】特許業務法人有古特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】キム，ヒョンジュン

(72)【発明者】

【氏名】キム，ミジン

(72)【発明者】

【氏名】イ，テリョン

【審査官】原口美和

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５１３８７６（ＪＰ，Ａ）

【文献】韓国公開特許第１０－２０１４－００５２５７６（ＫＲ，Ａ）

【文献】韓国公開特許第１０－２０１６－０１０９３５５（ＫＲ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００９／０１５５３９５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特開２０１２－１８８３９９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１１－１４８７４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００８－０３１１１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０００－２１２０２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】Toxicology Letters，2017年03月21日，Vol. 273，pp. 26-35

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ３６／５３４

Ａ２３Ｌ３３／１０５

Ａ６１Ｋ８／９７２８

Ａ６１Ｋ８／９７８９

Ａ６１Ｋ３５／７４

Ａ６１Ｐ１７／００

Ａ６１Ｐ１７／１６

Ａ６１Ｐ２９／００

Ａ６１Ｐ３９／０２

Ａ６１Ｐ４３／００

Ａ６１Ｑ１７／００

Ａ６１Ｑ１９／００

Ａ６１Ｑ１９／０８

Ａ６１Ｑ１９／１０

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を有効成分として含む、微塵による皮膚損傷ケア用組成物であって、
前記メンタアルベンシスは、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）微生物で発酵したメンタアルベンシスであり、
前記メンタアルベンシス抽出物は、水、又はＣ _１～Ｃ _６の無水若しくは含水低級アルコールの抽出物である、
皮膚損傷ケア用組成物。

【請求項2】

前記微塵による皮膚損傷ケアは、皮膚バリア強化、抗老化、及び抗炎症からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を有効成分として含む、皮膚バリア強化用組成物であって、
前記メンタアルベンシスは、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）微生物で発酵したメンタアルベンシスであり、
前記メンタアルベンシス抽出物は、水、又はＣ _１～Ｃ _６の無水若しくは含水低級アルコールの抽出物である、皮膚バリア強化用組成物。

【請求項4】

メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を有効成分として含む、抗老化組成物であって、
前記メンタアルベンシスは、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）微生物で発酵したメンタアルベンシスであり、
前記メンタアルベンシス抽出物は、水、又はＣ _１～Ｃ _６の無水若しくは含水低級アルコールの抽出物である、抗老化組成物。

【請求項5】

メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を有効成分として含む、
抗炎症組成物であって、
前記メンタアルベンシスは、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）微生物で発酵したメンタアルベンシスであり、
前記メンタアルベンシス抽出物は、水、又はＣ _１～Ｃ _６の無水若しくは含水低級アルコールの抽出物である、抗炎症組成物。

【請求項6】

前記メンタアルベンシス抽出物は、組成物の総重量に対して０．０００００１～３０重量％の範囲で含まれた、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記メンタアルベンシス抽出物は、メンタアルベンシス葉抽出物である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ.）微生物は、アセトバクターアセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅｔｉ）である、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

当該組成物は、ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項10】

当該組成物は、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）及びＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項３に記載の組成物。

【請求項11】

当該組成物は、ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）及びＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項４に記載の組成物。

【請求項12】

当該組成物は、ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）及びＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項５に記載の組成物。

【請求項13】

当該組成物は、角質形成細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）に適用される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記メンタアルベンシス抽出物は、１０～５００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

当該組成物は、化粧料組成物である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

当該組成物は、薬学的組成物である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

当該組成物は、健康機能食品組成物である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書には、微塵による皮膚細胞損傷をケアする組成物が開示される。より詳しくは、正常状態の皮膚細胞に比べ、微塵によって発現程度が変化する皮膚細胞遺伝子であるバイオマーカーなどを有意に変化させて皮膚細胞損傷をケアする、メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を含む組成物が開示される。

【背景技術】

【0002】

皮膚は、外部環境に直接的に露出する身体部位であって、我々の身体の重要な器官を保護する保護膜の役割を果たすだけでなく、水分の蒸発を調節し、外部感染から身を保護する役割を果たす。しかしながら、いくら外部からのウイルスの侵入を防ぐ皮膚であっても、過度な紫外線や汚染物質などに露出すると、皮膚刺激を誘発するようになり、特に強い風や砂塵を伴う黄砂によって損傷を受けるようになる。

【0003】

黄砂は、中国やモンゴルなどの内陸に位置した砂漠で小さな砂や黄土が上空に巻き上げられて上層風に乗って遠くまで運ばれ、地上に落下する現象である。韓国でも毎年春期になると黄砂が周期的に発生する。黄砂は有機物と無機物の複合体であって、発生時期や場所によって物理的特性や構成成分が非常に多様であり、生物学的に影響を与え得る金属成分も含んでいる。黄砂のようなサイズの大きい粒子は主に発源地や周辺に留まり、その中の粒子サイズの小さい細塵が韓国まで運ばれてきており、該細塵を吸い込むと、下部気管支及び肺のガス交換部分にまで沈着して呼吸器系に損傷を生じさせ得ると報告されたことがある。また、黄砂や細塵の多い地域に住む人々の皮膚では皮膚細胞の損傷が増大するのが観察されたことがある。

【0004】

一方、皮膚の構成層のうちの表皮は人体内部の水分蒸発を防ぐ重要な役割を果たす。表皮は、外部から順に角質層、顆粒層、有棘層、基底層に区分され、角質層の細胞は煙瓦のような役割を果たし、角質細胞の間の細胞間脂質はモルタルのような役割を果たして、皮膚バリアを構成する。また、健康な人の角質細胞には高濃度の自然保湿因子（ＮａｔｕｒａｌＭｏｉｓｔｕｒｉｎｇＦａｃｔｏｒ、ＮＭＦ）が存在して皮膚の水分保持を助け、例えば、アミノ酸のような物質は水溶性であるため効果的に水分と結合し、水分が蒸発して皮膚が乾燥することを抑制する。

【0005】

しかしながら、近年のように環境の変化や生活パターンの変化に伴う冷・暖房による人為的な温度調節、社会生活で発生される各種のストレスや環境汚染による皮膚ストレス、化粧習慣による頻繁な洗顔、及び経年による自然的な皮膚老化などの種々の原因によって角質層の水分が減少して皮膚が乾燥し、皮膚表面が荒くなって肌がかさかさし、しっとり感を失って生気がなさそうにみえるなどの現象が生じるため、皮膚保湿剤の必要性が増加しつつある。また、外部から受ける過度な物理的、化学的刺激、紫外線、ストレス、及び栄養欠乏などは皮膚の正常機能を低下させ、弾力損失、角質化、しわ生成などの現象を促進させ、特に紫外線によって表皮真皮境界部はひどく損傷を受ける。さらに、外部から受ける過度な物理的、化学的刺激、紫外線、及びストレスなどは、皮膚の正常機能を低下させ、弾力損失、角質化、しわ生成などの皮膚老化現象を促進させ、特に紫外線によって表皮真皮境界部はひどく損傷を受ける。

【0006】

ＩＬ－３６Ｇは、皮膚バリアの弱化によって生じる乾癬などにおける有用なバイオマーカーであることが知られている（非特許文献１参照）。また、Ｓ１００Ａ７は、皮膚バリア機能の障害によるアトピー皮膚炎及び乾癬に関連した指標であることが知られている（非特許文献２参照）。さらに、ＬＣＥ３Ｄもまた、乾癬リスク遺伝子に関連した指標であることが知られている（非特許文献３参照）。

【0007】

また、インターロイキン１は、細胞老化関連分泌現象（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｅｃｒｅｔｏｒｙｐｈｅｎｏｔｙｐｅ、ＳＡＳＰ）で分類されており、特に、インターロイキン１ａ及び１ｂ（ＩＬ－１ａ及びＩＬ－１ｂ）は、代表的な老化マーカーであって細胞老化（Ｃｅｌｌｕｌａｒｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ）に関与すると知られている（非特許文献４参照）。ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ及びＰＴＧＳ２は皮膚炎症に関与し、ＸＤＨは、刺激源に長期間露出した場合に誘発された酸化ストレス（ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ）を示し、その結果、外因性皮膚老化を示す指標であるという点も知られた（非特許文献５参照）。また、皮膚炎症に関して、ＰＴＧＳ２（＝ＣＯＸ－２）及びＩＬ－１ａが、刺激源に露出した皮膚細胞で発現量が向上するという事実も知られており（非特許文献６参照）、ＸＤＨ（ｘａｎｔｈｉｎｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）は、皮膚の酸化ストレス（ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ）を示す指標であって、皮膚老化に関与することもまた知られている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【文献】AM D’Erme et al.,“IL-36c(IL-1F9)Is a Biomarker for Psoriasis Skin Lesions”, Journal of Investigative Dermatology, Volume 135, 2015.

【文献】Son et al.,“S100A7(psoriasin)inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretion through IjB/NF-jB signalling”, Experimental Dermatology, John Wiley & Sons A/S, 2016.

【文献】Bergboer et al., Psoriasis Risk Genes of the Late Cornified Envelope-3Group Are Distinctly Expressed Compared with Genes of Other LCE Groups”, The American Journal of Pathology, Vol. 178, No. 4, April 2011.

【文献】Jean-Philippe Coppe et al., The Senescence-Associated Secretory Phenotype: The Dark Side of Tumor Suppression”, Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease, volume 5, 2010.

【文献】Kim H.J. et al., "Transcriptome analysis of airborne PM ２.５-induced detrimental effects on human keratinocytes", Toxicology Letters 273, 26-35, 2017.

【文献】Natalia D Magnani et al., “Skin Damage Mechanisms Related to Airborne Particulate Matter Exposure”, toxicological sciences, 149(1), 2016, 227-236.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

そこで、本発明者らは、微塵が皮膚に有害な影響を及ぼし、かかる影響によって皮膚細胞遺伝子の発現にも影響を及ぼすことで皮膚細胞損傷のような症状が発現することを知見した。

【0010】

したがって、一側面において、本発明は、微塵による皮膚細胞の損傷ケア用組成物を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0011】

前記目的を達成するために、一側面において、本発明は、メンタアルベンシス抽出物を有効成分として含む皮膚外用剤組成物であって、微塵によって発現量に影響を受ける皮膚細胞内遺伝子であるＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）からなる群より選択される一つ以上の発現量を正常レベルに調節する微塵による皮膚損傷ケア用組成物を提供する。

【発明の効果】

【0012】

一側面において、本発明によって提供される微塵による皮膚損傷ケア用組成物を用いることで、微塵によって変化する遺伝子発現量を正常レベルに戻して皮膚細胞の損傷をケアすることができる。

【0013】

一側面において、本発明によって提供される抗老化組成物及び抗炎症組成物を用いることで、炎症又は老化刺激によって変化する遺伝子発現量を正常レベルに戻して皮膚細胞の損傷を低下させることができる。

【0014】

一側面において、本発明によって提供される皮膚バリア強化用組成物を用いることで、皮膚バリア弱化を引き起こす刺激源によって変化する遺伝子発現量を正常レベルに戻して皮膚細胞の損傷を低下させることができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】微塵抽出液の処理による細胞生存率を示す図であり、ここで、ＡＤＳＰはアジアダストストーム粒子（Ａｓｉａｎｄｕｓｔｓｔｏｒｍｐａｒｔｉｃｌｅ）であって黄砂を示し、ＰＭ１０（Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｍａｔｔｅｒ１０）は粒子の大きさが１０μｍである微塵を示し、ＰＭ２．５（Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｍａｔｔｅｒ２．５）は粒子の大きさが２．５μｍである微塵を示す。

【図2a】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＳ１００Ａ７遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2b】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＩＬ－１ａ遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2c】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＩＬ－１Ｂ遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2d】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＩＬ－３６Ｇ遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2e】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＰＴＧＳ２遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2f】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＬＣＥ３Ｄ遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図2g】ＰＭ２．５の微塵によって刺激された皮膚細胞内でＸＤＨ遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加することを示した図である。

【図3a】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＳ１００Ａ７遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3b】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＩＬ－１ａ遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3c】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＩＬ－１Ｂ遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3d】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＩＬ－３６Ｇ遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3e】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＰＴＧＳ２遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3f】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＬＣＥ３Ｄ遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【図3g】微塵によって刺激された皮膚細胞で変化したＸＤＨ遺伝子の発現量がメンタアルベンシス抽出物の処理によって正常レベルに戻ることを示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0016】

以下、本発明を詳しく説明する。

【0017】

メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）は、シソ科ハッカ属の多年宿根草に属し、夜息香、蕃荷菜、仁丹草、歐薄荷とも呼ばれる。メンタアルベンシスは、さわやかで透き通ったような清凉感のある風味が特徴で、冷ややかな気候で育った葉と幹の香りが濃い。主にメントール成分が含有されて特有の香りを発散し、ビタミンなどの栄養成分も含有されている。

【0018】

本発明の一側面において、前記組成物は、メンタアルベンシス抽出物を含む。

【0019】

一側面において、メンタアルベンシスの葉又は茎を用いてよいが、これに限定されるものではない。

【0020】

前記微生物が添加されたメンタアルベンシスは、具体的に、２２～３０℃で２４～７２時間発酵されてよい。一実施例において、前記抽出物は、２６℃で約４８時間発酵される。

【0021】

本発明の一側面において、前記メンタアルベンシスを特定の抽出溶媒で抽出してメンタアルベンシス抽出物を調製してよい。

【0022】

本発明の一側面である、前記メンタアルベンシス抽出物は、メンタアルベンシスの葉又は茎を水又は有機溶媒で抽出して調製されてよい。具体的に、メンタアルベンシスの葉又は茎を水、Ｃ_１～Ｃ_６の無水又は含水低級アルコール、アセトン、ブチレングリコール、エチルアセテート、ジエチルアセテート、ジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、及びヘキサンからなる群より選択されたいずれか一つ以上の抽出溶媒で抽出して調製されてよい。

【0023】

一側面において、前記メンタアルベンシス抽出物は、常温抽出されたものであってよい。

【0024】

一側面において、前記メンタアルベンシス抽出物は、前記抽出溶媒で抽出されてから、ろ過、濃縮、分離、又は乾燥工程の一つ以上をさらに経て得られたものであってよい。特に、前記メンタアルベンシス抽出物は、１回以上のろ過工程を経たものであってよく、一実施例において、２回のろ過工程を経る。

【0025】

一実施例において、前記分離工程は、遠心分離工程を含んでよい。

【0026】

具体的に、前記抽出は、水、Ｃ_１～Ｃ_６の無水又は含水低級アルコール、アセトン、及びブチレングリコールを含む極性溶媒、及びエチルアセテート、ジエチルアセテート、ジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、及びヘキサンを含む低極性溶媒のいずれか一つ以上を溶媒として用いることであってよい。

【0027】

より具体的に、前記溶媒は、５０～９０％のエタノール水溶液であってよく、６０～８０％又は６５～７５％のエタノール水溶液であってよい。前記溶媒が５０～９０％のエタノール水溶液である場合、メンタアルベンシスから有効成分を効果的に抽出することができる。一実施例において、前記溶媒は、約７０％のエタノール水溶液であってよい。

【0028】

一側面において、前記抽出物は、抽出後、冷却コンデンサ付きの蒸留装置で適正の温度に減圧濃縮されてよい。

【0029】

なお、本発明に係るメンタアルベンシス抽出物は、当該技術分野における通常の方法で抽出して得てよく、前述した方法によって限定されるものではない。

【0030】

本発明の一観点である、組成物において、当該組成物は、メンタアルベンシス抽出物を、組成物の総重量を基準に０．０００００１～３０重量％の範囲で含んでよい。該含量が０．０００００１～３０重量％の範囲である場合、メンタアルベンシス抽出物が優れた微塵による皮膚損傷ケア効果を示した。

【0031】

具体的に、０．００００００１重量％以上、０．００００００５重量％以上、０．００００００７重量％以上、０．００００００９重量％以上、０．０００００１重量％以上、０．０００００２重量％以上、０．０００００４重量％以上、０．０００００６重量％以上、０．０００００８重量％以上、０．００００１重量％以上、０．００００３重量％以上、０．００００５重量％以上、０．００００７重量％以上、０．００００９重量％以上、０．０００１重量％以上、０．０００３重量％以上、０．０００５重量％以上、０．０００７重量％以上、０．０００９重量％以上、０．００１重量％以上、０．０１重量％以上、０．１重量％以上、１重量％以上、３重量％以上、５重量％以上、７重量％以上、９重量％以上、１０重量％以上、１３重量％以上、１５重量％以上、１７重量％以上、１９重量％以上、２１重量％以上、２３重量％以上、２５重量％以上、２７重量％以上、２９重量％以上、３０重量％以上、３１重量％以上であってよく、３２重量％以下、３１重量％以下、３０重量％以下、２９重量％以下、２８重量％以下、２６重量％以下、２４重量％以下、２２重量％以下、２０重量％以下、１８重量％以下、１６重量％以下、１４重量％以下、１２重量％以下、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、６重量％以下、４重量％以下、２重量％以下、１重量％以下、０．１重量％以下、０．０９重量％以下、０．０４重量％以下、０．０１重量％以下、０．００６重量％以下、０．００１重量％以下、０．０００９重量％以下、０．０００７重量％以下、０．００００５重量％以下、０．００００３重量％以下、０．００００１重量％以下、０．０００００９重量％以下、０．０００００７重量％以下、０．０００００５重量％以下、０．０００００３重量％以下、０．０００００１重量％以下、０．００００００９重量％以下、０．００００００７重量％以下、０．００００００５重量％以下、０．００００００３重量％以下、０．００００００２重量％以下、０．００００００１重量％以下、０．０００００００９重量％以下であってよいが、これに制限されるものではない。

【0032】

本発明の他の側面は、前記組成物の微塵による皮膚損傷ケア用途を含む。

【0033】

本発明の他の側面において、対象の微塵による皮膚損傷ケアのための方法であって、当該方法は、メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の有効量を、これを必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。

【0034】

本発明の他の側面において、微塵による皮膚損傷ケアのための組成物を製造するに際するメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の用途を提供する。

【0035】

本発明の他の側面において、微塵による皮膚損傷ケアのためのメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を提供する。

【0036】

本明細書で用いられる「微塵」とは、人間の目に見えない極めて小さな物質で大気中に長い間浮遊する又は飛びちる粒子状の物質のことを言い、粒径１０μｍ以下の物質のことを言う。特に粒径が２．５μｍ以下の粒子状の物質は「超微塵」と言い、本願発明において「微塵」は「超細塵」をも含むことを意図する。

【0037】

本明細書で用いられる用語「ケア」とは、刺激から皮膚細胞を効果的に保護し、且つ前記刺激によって特定の遺伝子の発現量が変化することを抑制、防止又は復元することを言う。

【0038】

一側面において、本発明は、微塵によって損傷された皮膚細胞で特定の遺伝子の発現量を正常レベルに調節することで、微塵による皮膚細胞の損傷を抑制する組成物を提供する。

【0039】

具体的に、本発明において微塵によって発現量に影響を受ける皮膚細胞内遺伝子としては、ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）などが挙げられる。前記ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）は、微塵によって発現量が増加する遺伝子であるので、これらの遺伝子の発現量を抑制して正常レベルに調節することで皮膚細胞の損傷を抑制する。

【0040】

本発明で用いられる、微塵によって発現量が増加する遺伝子は［表１］に提示されている。［表１］は、微塵によって発現量が増加する遺伝子を表すものであり、該表におけるＮａｍｅは、ＮＣＢＩのｇｅｎｅｂａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＩＤを意味し、ＧｅｎｅＳｙｍｂｏｌは、公式遺伝子シンボルを意味し、Ｇｅｎｅｔｉｔｌｅは、各遺伝子の名前を意味する。このような内容は、非特許文献１の記載から確認することができる。

【0041】

【表1】

【0042】

前記遺伝子又はタンパク質の発現量の分析は、マイクロアレイ、ＰＣＲ、ＮＧＳ（ＮｅｓｔＧｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ；次世代塩基配列分析）、ウエスタンブロット、ノーザンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射線免疫分析、放射免疫拡散法、組織免疫染色、免疫沈降分析法などの当業界で公知の種々の分析方法を用いて分析されてよい。

【0043】

微塵によって皮膚細胞の損傷が生じ、このときに炎症が誘導されて皮膚細胞の損傷がさらに生じるようになる。このような皮膚細胞損傷の悪循環をメンタアルベンシス抽出物がケアすることで皮膚状態を改善できるようになる。

【0044】

本発明の他の側面は、本発明に係る組成物の抗老化用途及び抗炎症用途を含む。

【0045】

本発明の他の側面において、対象の抗老化のための方法であって、当該方法は、メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の有効量を、これを必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。

【0046】

本発明の他の側面において、抗老化のための組成物を製造するに際するメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の用途を提供する。

【0047】

本発明の他の側面において、抗老化のためのメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を提供する。

【0048】

本発明の他の側面において、対象の抗炎症のための方法であって、当該方法は、メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の有効量を、これを必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。

【0049】

本発明の他の側面において、抗炎症のための組成物を製造するに際するメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の用途を提供する。

【0050】

本発明の他の側面において、抗炎症のためのメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を提供する。

【0051】

一側面において、本発明は、炎症又は老化刺激によって損傷された皮膚細胞で特定の遺伝子の発現量を正常レベルに調節することで、炎症又は老化を抑制する組成物を提供する。

【0052】

一側面において、具体的に、本発明において炎症又は老化刺激によって発現量に影響を受ける皮膚細胞内遺伝子としては、ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）などが挙げられる。前記ＩＬ－１ａ（ＮＭ＿０００５７５）、ＩＬ－１Ｂ（ＮＭ＿０００５７６）、ＰＴＧＳ２（ＮＭ＿０００９６３）、ＸＤＨ（ＮＭ＿０００３７９）は、炎症又は老化刺激によって発現量が増加する遺伝子であるので、これらの遺伝子の発現量を抑制して正常レベルに調節することで皮膚細胞の炎症又は老化を抑制する。

【0053】

一側面において、本発明で用いられる炎症又は老化刺激によって発現量が増加する遺伝子は［表２］に提示されている。該表におけるＮａｍｅは、ＮＣＢＩのｇｅｎｅｂａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＩＤを意味し、ＧｅｎｅＳｙｍｂｏｌは、公式遺伝子シンボルを意味し、Ｇｅｎｅｔｉｔｌｅは、各遺伝子の名前を意味する。

【0054】

【表2】

【0055】

本発明の他の側面は、本発明に係る組成物の皮膚バリア強化用途を含む。

【0056】

一側面において、本発明は、皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって損傷された皮膚細胞で特定の遺伝子の発現量を正常レベルに調節することで、皮膚バリアを強化させる組成物を提供する。

【0057】

一側面において、具体的に、本発明で皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって発現量に影響を受ける皮膚細胞内遺伝子としては、Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、及びＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）などが挙げられる。前記Ｓ１００Ａ７（ＮＭ＿００２９６３）、ＩＬ－３６Ｇ（ＮＭ＿０１９６１８）、及びＬＣＥ３Ｄ（ＮＭ＿０３２５６３）は、皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって発現量が増加する遺伝子であるので、これらの遺伝子の発現量を抑制して正常レベルに調節することで皮膚バリアを強化させることができる。

【0058】

一側面において、本発明で用いられる皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって発現量が増加する遺伝子は［表３］に提示されている。該表におけるＮａｍｅは、ＮＣＢＩのｇｅｎｅｂａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＩＤを意味し、ＧｅｎｅＳｙｍｂｏｌは、公式遺伝子シンボルを意味し、Ｇｅｎｅｔｉｔｌｅは、各遺伝子の名前を意味する。

【0059】

【表3】

【0060】

本発明の他の側面において、対象の皮膚バリア強化のための方法であって、当該方法は、メンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の有効量を、これを必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。

【0061】

本発明の他の側面において、皮膚バリア強化のための組成物を製造するに際するメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の用途を提供する。

【0062】

本発明の他の側面において、皮膚バリア強化のためのメンタアルベンシス（ＭｅｎｔｈａＡｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物を提供する。

【0063】

本発明の一観点である、前記組成物は、化粧料組成物であってよく、薬学的組成物であってよく、健康機能食品組成物であってよい。

【0064】

前記化粧料組成物は、例えば、各種クリーム、ローション、スキンローションなどのような化粧品類と、クレンジング、洗顔剤、せっけん、美容液などがある。

【0065】

一側面において、本発明に係る前記メンタアルベンシス抽出物を含む組成物が添加された化粧料は、溶液、乳化物、粘性型混合物などの形状をとることができる。

【0066】

すなわち、一側面において、本発明の化粧料は、その剤形において特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、エッセンス、パック、ゲル、パウダー、メーキャップベース、ファウンデーション、ローション、軟膏、パッチ、美容液、クレンジングフォーム、クレンジングクリーム、クレンジングウォーター、ボディーローション、ボディークリーム、ボディーオイル、ボディーエッセンス、シャンプー、リンス、ボディー洗浄剤、せっけん、染毛剤、スプレーなどのような剤形を有してよい。

【0067】

各剤形の化粧料組成物において、前記メンタアルベンシス抽出物以外の他の成分は、その他の化粧料の剤形又は使用目的に応じて当業者が適宜選定して配合してよい。

【0068】

また、一側面において、本発明に係る化粧料は、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質、及び海草エキスからなる群より選択された組成物を含んでよい。

【0069】

一側面において、本発明に係る化粧料には、前記必須成分とともに必要に応じて通常化粧料に配合される他の成分を配合してもよい。

【0070】

その他添加してもよい配合成分としては、乳脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。

【0071】

また、その他添加してもよい配合成分はこれに限定されるものではなく、且つ、前記いずれの成分も本発明の目的及び効果を損傷させない範囲内で配合可能である。

【0072】

一側面において、本発明に係るメンタアルベンシス抽出物を含む薬学的組成物は、当該薬学組成物の製造に通常用いる適切な担体、賦形剤、及び希釈剤をさらに含んでよい。

【0073】

前記メンタアルベンシス抽出物を含む薬学的組成物は、その剤形として、それぞれ通常の方法に従い錠剤、カプセル、散剤、又はシロップなどの経口剤、若しくは軟膏、ゲル、クリーム、パッチ、又はスプレーなどの外用剤などを含む薬剤学的製剤に適合した如何なるものに剤形化してよい。

【0074】

一般に、前記薬学的組成物によって投与される有効成分の実投与量は、症状の重症度、選択された投与経路、対象の年齢、性別、体重、及び健康状態などの種々の関連因子に鑑みて決定されるべきであると理解されてよい。一般に、有効成分の投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日～３０００ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、１０ｍｇ／ｋｇ／日～５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってよい。

【0075】

本発明の一観点である健康機能食品組成物において、健康食品は、日常食事で欠乏されやすい栄養素や人体に有用な機能を持つ原料や成分（機能性原料）を用いて製造したものであって、人体の正常な機能を維持したり生理機能活性化を通じて健康を維持して改善したりする食品を意味するものであってよいが、これに制限されない。前記健康食品は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、液状、丸剤などの形態で製造、加工されてよいが、これらに限定されず、法律に則っていかなる形態でも製造、加工されてよい。

【0076】

具体的に、健康飲料組成物は、指示された割合にて必須成分として前記化合物を含有する以外に、他の成分に特別な制限がなく、通常の飲料のように各種の香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有してよい。天然炭水化物の例としては、モノサッカライド、ポリサッカライド、シクロデキストリンなどのような一般的な糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールが挙げられる。上述したもの以外の香味剤として、天然香味剤（タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、グリシルヒジンなど）及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を用いてよい。

【0077】

一般に、前記健康機能食品組成物によって投与される有効成分の実投与量は、症状の重症度、選択された投与経路、対象の年齢、性別、体重、及び健康状態などの種々の関連因子に鑑みて決定されるべきであると理解されてよい。一般に、有効成分の投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日～１０００ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、０．０２ｍｇ／ｋｇ／日～６ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってよい。

【0078】

以下、実施例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的に説明する。なお、これらの実施例は本発明に対する理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲が下記の例によって制限されるものではない。

【0079】

［実施例１］メンタアルベンシス抽出物の調製
メンタアルベンシス葉及びアセトバクターアセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅｔｉ）を準備した後、これらを２６℃で４８時間発酵させた。そして、当該醗酵物を、精製水とエタノールとを３：７の割合で混合した抽出溶媒、すなわち、７０％エタノールを抽出溶媒として常温抽出した。常温抽出後に１次ろ過を施して抽出物に含まれていた固相の材料を除去し、次いで、抽出物を濃縮してエタノールを除去した後、これを分離及び精製した。そして、遠心分離及び２次ろ過後に乾燥して、メンタアルベンシス抽出物を得た。

【0080】

［実施例２］微塵の捕集及び抽出
微塵の捕集は、ローボリウムエアサンプラー（Ｓｅｎｓｉｄｙｎｅ、Ｇｉｌｌｉａｎ、ＬｏｗＶｏｌｕｍｅＡｉｒＳａｍｐｌｅｒ、ＦＬ、Ｕ.Ｓ.ａ.）を利用し、フィルタパック（Ｆｉｌｔｅｒｐａｃｋ）は測定日毎の午前１０時前後にフィルタとデニューダを取り替えて約２４時間試料を採取した。２８日間に亘ってソウル市の風下地域（韓国京畿道竜仁市處仁區所在、韓国外国語大学校外国学総合研究センター生活館６階屋上）で毎日微塵を捕集し、測定時間は真空ポンプのオンと同時にタイマーを作動させ、真空ポンプのオフ時にタイマーの時間を記録した。採取流量は１６．７Ｌ／ｍｉｎとし、測定開始時の流量計（Ｍｏｄｅｌ４１４３、ＴＳＩＩｎｃ.）で流量を測定し、測定の終了時に再度流量を測定した。フィルタパック（ｆｉｌｔｅｒｐａｃｋ）に組み込まれるＴｅｆｌｏｎフィルタは、試料採取の前と後に重さを測定した。Ｔｅｆｌｏｎフィルタの重さを測定する前に２４時間に亘って相対湿度４０％のデシケーター（ＮＩＫＫＯ、Ｊａｐａｎ）に恒量させてから、小数点５桁が表示される電子秤（ＤＶＧ２１５ＣＤ、Ｏｈａｕｓ）で重さを２回測定してその平均値を記録した。試料を採取した後も、重さを測定する前にデシケーターで２４時間に亘って恒量させてから重さを２回測定し、採取前に測定した重さと比較して質量濃度を算出した。微塵の抽出は、Ｔｅｆｌｏｎフィルタを１ｍＬのエタノールに濡らしてから１４ｍＬのＤＷを入れてフィルタのエアロゾル捕集面が水面に当接するようにした状態で蓋を閉じた後に超音波洗浄器で３０分間超音波を与えて行った。ろ過段階で水分による誤差を最小化するために乾燥器（ｄｅｃｉｃａｔｏｒ）で４８時間フィルタの水分を完全に除去した後、０．１ｍｇまで測定可能な超精密秤（ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＣＯＭＰＡＮＹ社製）を利用してフィルタの重さを秤量し、フィルタの抽出前と後の重さを秤量した。

【0081】

［実施例３］（正常ヒト）角質形成細胞株の培養
（正常ヒト）角質形成細胞株（Ｈｕｍａｎｎｏｒｍａｌｅｐｉｄｅｒｍａｌｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）は、ロンザ社（Ｌｏｎｚａ、Ｉｎｃ.，米国メリーランド州ウォーカーズビル所在）から購入して継代培養した後、ＣＯ_２培養器（ＣＯ_２ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。細胞培養液はロンザ社の指針書に従った。５００ｍｌのＫＢＭ－２（ＫＢＭＴＭ－２、ＣＣ－３１０３）培地にＫＧＭ－２ブレットキットＣＣ－４１５２（ＫＧＭＴＭ－２Ｂｕｌｌｅｔｋｉｔ、ＣＣ－４１５２）（成分：ＢＰＥ（Ｂｏｖｉｎｅｐｉｔｕｉｔａｒｙｅｘｔｒａｃｔ））、ヒト上皮成長因子（ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ、ｈＥＧＦ）、インシュリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、ヒドロコルチゾン（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、トランスフェリン（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）、エピネフリン（Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、及びゲンタマイシン硫酸塩＋アムホフェリシン－Ｂ（ＧｅｎｔａｍｙｃｉｎＳｕｆｌａｔｅ＋Ａｍｐｈｏｆｅｒｉｃｉｎ－Ｂ：ＧＡ－１０００））を添加したＫＧＭ－２ブレットキットＣＣ－３１０７（ＫＧＭＴＭ－２ＢｕｌｌｅｔＫｉｔ、ＣＣ－３１０７）を用いた。

【0082】

［実施例４］（正常ヒト）角質形成細胞株への微塵の処理及び細胞毒性の測定
微塵処理による細胞毒性の有無を確認するために、Ｍｏｓｓｍａｎら（Ｊ.Ｉｍｍｕｎｏｌ. Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５，５５-６３，１９８３）の方法で（正常ヒト）角質形成細胞株を用いたＭＴＴ実験を行った。

【0083】

具体的に、２４－ウェルプレートを用い、前記実施例２で採取して得た直径２．５μｍの微塵を精製水に分散させて微塵分散液を製造した後、実施例３の細胞培養条件下、２．５×１０^５ウェル細胞数の条件で培養した細胞に前記微塵分散液を処理して２４時間培養した後、ＭＴＴ（３－４,５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２,５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）５ｍｇ／ｍｌを混合し、３７℃で３時間さらに培養した。次いで、培地を除去し、形成されたホルマザン結晶（ｆｏｒｍａｚａｎｃｒｙｓｔａｌ）をＤＭＳＯ５００μｌに溶解した。該溶解物を９６－ウェルプレートに移して分注（ａｌｉｑｕｏｔ）し、吸光度５４０ｎｍにおけるＯＤ値を測定した。測定結果は図１に示される。

【0084】

図１に示されるように、前記細胞株において２．５μｍ以下の微塵を分散させた分散液による細胞毒性に対して８０％の生存率を示す濃度（ＩＣ２０）値は、２．５μｍ以下の微塵水溶性抽出液の場合に１２．５μｇ／ｍｌであった。

【0085】

［実施例５］次世代塩基配列分析（ｎｅｘｔＧｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）による微塵の細胞遺伝子変化の確認
ＲＮＡ－塩基配列データ処理及び分析のために、Ｔｒａｐｎｅｌｌｅｔａｌ.（２０１２）によって開発された一般的な分析段階を参照した。ＦａｓｔＱＣ（http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/）を用いてＲＮＡ－ｓｅｑデータ品質を確認し、ＦＡＳＴＸ（http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/）を用いて、正確度が落ちるベース及びアダプタ配列を除去した。次いで、Ｔｏｐｈａｔ（Ｔｒａｐｎｅｌｌｅｔａｌ.，２００９）とヒトゲノム（ｈｇ１９）を用いてアラインメントを行い、各サンプルのデータ量をＲＳｅＱＣと再命名されたＥＶＥＲ－ｓｅｑを用いて確認した（Ｗａｎｇｅｔａｌ.,２０１２）。また、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓを用いて転写体（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）の発現レベルを定量し、微塵分散液処理サンプルと正常サンプルとの転写レベルを比較した（Ｔｒａｐｎｅｌｌｅｔａｌ.，２０１０）。ＦＤＲａｄｊｕｓｔｅｄｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０５に、≧２．０ｆｏｌｄ－ｃｈａｎｇｅの厳しいカットオフを適用して、直径２．５μｍの微塵の分散液の処理時の有意な発現差を示す遺伝子を決定した。測定結果は、下記の［表４］及び［図２ａ］～［図２ｇ］に示されている。

【0086】

【表4】

【0087】

［実施例６］リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ定量
実施例２で抽出した直径２．５μｍの微塵を実施例３で培養したヒト正常角質皮膚細胞に対し細胞培養培地１ｍｌに１２．５μｇの量で処理し、表３に表した遺伝子のプライマー（ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓＴａｑＭａｎ(登録商標) Ｐｒｉｍｅｒｓ）で相対的ｍＲＮＡ発現量を測定した。メンタアルベンシス抽出物は実施例１で調製したものを用いた。

【0088】

【表5】

【0089】

培地にメンタアルベンシス抽出物を２０ｐｐｍの濃度で処理してから２４時間経過後、培養液を除去し、２ｍｌのリン酸塩緩衝液（ＰｈｏｓｐｈａｔｅＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）で細胞を洗浄した後、トリゾール試薬（Ｔｒｉｚｏｌｒｅａｇｅｎｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて細胞内のＲＮＡを分離した。分離したＲＮＡをキアゲン社製のＲＮＡキット（ＱＩＡＧＥＮＲＮｅａｓｙｋｔ、ＱＩＡＧＥＮ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）でもう１回精製した後、エジュラント社製のバイオアナライザ２１００モデル機器（Ａｇｉｌｅｎｔ２１００ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＳａｎｔａＣｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いてＲＮＡの質（ｑｕａｌｉｔｙ）を確認した。インビトロゲン社製の逆転写キット（ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＲＴ）ｋｉｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、これを前記［表５］のプライマーを用いたリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲ：ｒｅａｌｔｉｍｅ－ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）によって定量的に分析した。遺伝子の発現パターンの変化をアプライドバイオシステム社製のタックマン遺伝子発現システム（ＴａｑＭａｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｓｓａｙｋｉｔ、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ、ＣＡ）を用いて細胞の遺伝子変化をリアルタイムＰＣＲで評価し、その結果を［図３］に示した。用いたＱ－ＲＴ－ＰＣＲとリアルタイムＰＣＲはいずれもライフテクノロジーから配布する標準プロトコールに従って行い、具体的に、９５℃で２０秒間処理した後、９５℃で３秒及び６０℃で３０秒を処理する工程を４０周期行った。

【0090】

［図３ａ］～［図３ｇ］に示されるように、微塵によって刺激された皮膚細胞で発現量が増加又は減少する遺伝子が存在し、メンタアルベンシス抽出物の処理によってインターロイキン１アルファ（ＩＬ－１ａ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ－１Ｂ）、インターロイキン３６ガンマ（ＩＬ－３６Ｇ）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ７（Ｓ１００Ａ７）、後期角化皮３Ｄ（ＬＣＥ３Ｄ）、プロスタグランジン－エンド過酸化物合成酵素２（ＰＴＧＳ２）、キサンチン脱水素酵素（ＸＤＨ）遺伝子の発現量が減少することを確認することができた。

【0091】

また、［図３ａ］～［図３ｇ］に示されるように、炎症又は老化刺激によって刺激された皮膚細胞で発現量が増加する遺伝子が存在し、メンタアルベンシス抽出物の処理によってインターロイキン１アルファ（ＩＬ－１ａ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ－１Ｂ）、プロスタグランジン－エンド過酸化物合成酵素２（ＰＴＧＳ２）、キサンチン脱水素酵素（ＸＤＨ）遺伝子の発現量が減少することを確認することができた。

【0092】

したがって、メンタアルベンシス抽出物は、炎症又は老化刺激による皮膚細胞損傷から皮膚細胞を効果的に保護し、且つ前記炎症又は老化刺激によって前述した特定の遺伝子の発現量が変化することを抑制又は防止して、正常レベルの発現量を有するようにすることができることが分かる。

【0093】

さらに、［図３ａ］～［図３ｇ］に示されるように、皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって刺激された皮膚細胞で発現量が増加する遺伝子が存在し、メンタアルベンシス抽出物の処理によってインターロイキン３６ガンマ（ＩＬ－３６Ｇ）、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ７（Ｓ１００Ａ７）、後期角化皮３Ｄ（ＬＣＥ３Ｄ）遺伝子の発現量が減少することを確認することができた。

【0094】

したがって、メンタアルベンシス抽出物は、皮膚バリア弱化を引き起こす刺激による皮膚細胞損傷から皮膚細胞を効果的に保護し、且つ前記皮膚バリア弱化を引き起こす刺激によって前述した特定の遺伝子の発現量が変化することを抑制又は防止して、正常レベルの発現量を有するようにすることができることが分かる。

【0095】

したがって、メンタアルベンシス抽出物は、微塵による刺激から皮膚細胞を効果的に保護し、且つ前記刺激によって前述した特定の遺伝子の発現量が変化することを抑制又は防止して、正常レベルの発現量を有するようにすることができることが分かる。

【0096】

以下、本発明に係る組成物の剤形例を説明するが、化粧料組成物、薬学的組成物及び健康機能食品組成物は種々の剤形への応用が可能であり、これらは本発明を限定するためのものではなく単に本発明を具体的に説明するためのものである。

【0097】

［剤形例１］錠剤
本発明の実施例に係るメンタアルベンシス抽出物１００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して錠剤を製造した。

【0098】

【表6】