特許 7161302 Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤、及びそれを含有する頭皮頭髪用化粧料

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-10-18

(45)【発行日】2022-10-26

(54)【発明の名称】Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤、及びそれを含有する頭皮頭髪用化粧料

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9789 20170101AFI20221019BHJP

   A61Q 5/02 20060101ALI20221019BHJP

   A61Q 5/12 20060101ALI20221019BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 36/752 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 36/185 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 36/234 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 36/736 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 36/28 20060101ALI20221019BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221019BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20221019BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61Q5/02

A61Q5/12

A61Q7/00

A61K36/752

A61K36/185

A61K36/234

A61K36/736

A61K36/28

A61P43/00 105

A61P17/14

【請求項の数】 3

(21)【出願番号】P 2018068176

(22)【出願日】2018-03-30

(65)【公開番号】P2019178099

(43)【公開日】2019-10-17

【審査請求日】2021-01-26

(73)【特許権者】

【識別番号】000226161

【氏名又は名称】日華化学株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】▲高▼▲崎▼ 文香

(72)【発明者】

【氏名】藤井 義宣

【審査官】田中 雅之

(56)【参考文献】

【文献】特開平０１－２３３２０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０３－１８８０１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１２－２３６７７４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０３－１８８０１３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００６－２８２５９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１１－０８４５２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１４－１２２１８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平１０－２２６６２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１３－２０３７３０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００７－０２２９５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０００－０８６４５９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０２－１２１９１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００２－２８４６４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１４－１８５１３１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００９－１０７９４１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平１０－０３６２２９（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許第０５４０７６７５（ＵＳ，Ａ）

【文献】Wella, Japan，Gentle Care Treatment (Fresh)，Mintel GNPD [online]，2005年03月，<URL:https://WWW.portal.mintel.com>，ID#351132

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ８／００－ ８／９９

Ａ６１Ｑ １／００－９０／００

Ａ６１Ｋ ３６／００－３６／９０６８

Ａ６１Ｐ １／００－４３／００

Ｍｉｎｔｅｌ ＧＮＰＤ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

チンピ抽出物およびセイヨウイラクサ抽出物を含有し、両者の配合比率が抽出物の乾燥物の重量比で２５：７５～７５：２５であることを特徴とするＷｎｔ１０ｂ産生促進剤。

【請求項2】

センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の植物抽出物をさらに含有することを特徴とする請求項１に記載のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤。

【請求項3】

請求項１または２に記載のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤を含有する頭皮頭髪用化粧料。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、毛乳頭細胞におけるＷｎｔ１０ｂ発現を促進させるＷｎｔ１０ｂ産生促進剤、及び該Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤を含有する頭皮頭髪用化粧料に関する。

【背景技術】

【0002】

不規則な生活やストレス等の社会環境、食生活の変化により、抜け毛や脱毛、細毛、薄毛の悩みは、壮年男性だけでなく、若年層や女性にも広がっていることから、養育毛用の頭皮頭髪用化粧料に対する社会的期待は高まっている。

【0003】

これを受けて、育毛促進、保湿、フケやかゆみの予防、抗炎症、脱毛予防等を目的とした多くの頭皮頭髪用化粧料が上市されている。しかし、毛髪を育てる・太くするという従来の養育毛理論では、毛髪のボリュームアップ効果は不十分であった。

【0004】

毛髪は、毛母細胞が分化し角化することで形成される。毛母細胞はまた、内毛根鞘細胞にも分化し、毛髪を固定したり、毛髪の角化が終わるまで保護し表皮に送り届けたりする役割を担う。

【0005】

このような毛母細胞の分化を担っている因子の一つが毛乳頭細胞で産生されるＷｎｔ１０ｂであり（非特許文献１）、Ｗｎｔ１０ｂの産生が促進されると、毛母細胞は増加し、毛幹や内毛根鞘細胞への分化が活性化されるため、ハリやコシのある丈夫な毛髪が形成されると考えられている。

【0006】

Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤としては、カルシトリオールが知られている。これまでに、カルシトリオールによりＷｎｔ１０ｂの産生が促進された毛乳頭細胞を、マウスの無毛部に移植すると毛が生えることが報告されている（非特許文献２）。

【0007】

カルシトリオールは、強力なカルシウム代謝作用を有することから血中のカルシウム値を上昇させ、蕁麻疹や高血圧、不整脈、筋脱力などの副作用の懸念がある。

【0008】

現在、毛乳頭細胞における十分なＷｎｔ１０ｂ産生促進作用を有し、安全性が高く、化粧料に配合可能な、更なる優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は知られていない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【文献】Biochem Biophys Res Commun. 2007、359巻、p516-522

【文献】Stem Cells Transl Med. 2012、8巻、p615-626

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

本発明は、毛乳頭細胞におけるＷｎｔ１０ｂ産生促進剤、及び該Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤を含有する頭皮頭髪用化粧料の提供を目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定の植物抽出物を用いることにより毛乳頭細胞における優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進効果が得られることを見出し、この知見に基づき本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物、センキ
ュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の植物抽出物を含有することを特徴とするＷｎｔ１０ｂ産生促進剤を提供するものである。

【0012】

また、本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも２種の植物抽出物を含有することが好ましく、さらにセンキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物から選ばれる少なくとも１種の植物抽出物を含有することがより好ましい。

【0013】

前記のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、頭皮頭髪用化粧料に含有することが好ましい。

【発明の効果】

【0014】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、毛乳頭細胞におけるＷｎｔ１０ｂ産生を飛躍的に増大させるため、これを用いて薄毛や脱毛の改善を図ることが出来る。すなわち、本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、特に毛母細胞の分化を飛躍的に促進する顕著な効果があることから、これを配合することにより、優れた育毛効果を有する頭皮頭髪用化粧料を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種の植物抽出物を含有する。

【0016】

本発明における育毛効果とは、頭髪が増える、太くなる、薄毛の予防、脱毛抑制、ハリやコシのある丈夫な毛髪になることなどを意味する。

【0017】

これらの植物抽出物は、いずれも医薬又は民間薬、食品、化粧料の成分として一般的に用いられているものであり、安全性が高い。

【0018】

本発明におけるチンピ抽出物とは、ミカン科ミカン属ウンシュウミカン（Citrus unshiu）または、マンダリンオレンジ（Citrus reticulata）の果皮から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0019】

本発明におけるセイヨウイラクサ抽出物とは、イラクサ科イラクサ属セイヨウイラクサ（Urtica dioica）の全草の各部位、好ましくは葉から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0020】

本発明におけるボタン抽出物とは、ボタン科ボタン属ボタン（Paeonia suffruticosa）の全草、好ましくは根から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0021】

本発明におけるセンキュウ抽出物とは、セリ科ハマゼリ属センキュウ（Cnidium officinale Makino）の全草、好ましくは根茎から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0022】

本発明におけるウメ抽出物とは、バラ科サクラ属ウメ（Prunus mume）の果実から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0023】

本発明におけるステビア抽出物とは、キク科ステビア属ステビア（Stevia rebaudiana）の全草、好ましくは葉及び／又は茎から得られる抽出物であり、同属植物から得られる抽出物も含まれる。

【0024】

本発明における上記植物抽出物としては従来の抽出方法により抽出したものを用いてもよいし、市販のものを用いても良い。

【0025】

抽出方法としては例えば、植物の各部位を適当な溶媒に浸漬して抽出する方法が挙げられる。

【0026】

抽出の際は、使用する植物をそのまま用いてもよいし、粉砕や乾燥等を施して用いてもよいが、粉砕して用いることが好ましく、乾燥させたものを用いることがさらに好ましい。また、抽出溶媒に浸漬している間、攪拌していてもよく、静置していてもよい。本発明の植物抽出物は、抽出操作を繰り返して高濃度の植物抽出物とすることもできる。

【0027】

抽出に使用する溶媒に特に制限はなく、水や、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の低級１価アルコール類；プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類などの極性溶媒や、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン等の炭化水素類を用いることができる。またこれらのうち、１種を単独で用いても、２種以上からなる混合溶媒を用いてもよい。特に、極性溶媒を用いることが好ましく、水、エタノールを用いることがさらに好ましい。

【0028】

抽出手順は特に制限はなく、例えば、抽出に使用する植物を２０～４０℃の前記溶媒中に１時間～７日間浸漬し、濾過する手順が挙げられる。

【0029】

また、得られた抽出液は、そのまま植物抽出物として用いても良いし、希釈、濃縮、凍結乾燥、精製等を行ったものを植物抽出物として用いることもできる。

【0030】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、Ｗｎｔ１０ｂ産生促進効果が優れていることから、チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも２種が含まれていることがより好ましい。

【0031】

Ｗｎｔ１０ｂ産生促進効果がさらに優れていることから、チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物からなる群より選ばれる少なくとも２種の植物抽出物と、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物から選ばれる少なくとも１種の植物抽出物とが含まれていることがより好ましい。

【0032】

チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物からなる群より選ばれる２種を組み合わせる場合、その割合としては、Ｗｎｔ１０ｂ産生促進効果がより優れるという観点から、抽出物の乾燥物の質量比で１０：９０～９０：１０が好ましく、２５：７５～７５：２５がさらに好ましい。

【0033】

チンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物からなる群より選ばれる２種以上と、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物から選ばれる１種以上とを組み合わせる場合、それらの割合としては、Ｗｎｔ１０ｂ産生促進効果がより優れるという観点から、抽出物の乾燥物の質量比で９５：５～５：９５が好ましく、９３：７～５０：５０がさらに好ましい。

【0034】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤においては、上記植物抽出物の少なくとも１種をそのまま本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤としてもよいし、以下に示す他の成分をさらに含ん
でいてもよい。

【0035】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤に使用可能な他の成分としては、例えば賦形剤、増粘剤、溶剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、保湿剤、血行促進剤、細胞賦活化剤、抗炎症剤、抗菌剤、過酸化物抑制剤、界面活性剤、基材成分、コンディショニング剤、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、キレート剤、香料、着色剤、育毛養毛効果を有する成分、上記以外の植物や動物や微生物由来の各種抽出物等が挙げられる。

【0036】

具体的には、乳糖、白糖等の賦形剤；天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体、塩化ナトリウム等の増粘剤；注射用水、プロピレングリコール、ゴマ油、トウモロコシ油、エタノール、ブチレングリコール、Ｄ－マンニトール、安息香酸ベンジル等の溶剤；リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩等の緩衝剤；メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、安息香酸等の防腐剤；亜硫酸塩、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ジブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、酢酸トコフェロール、アルブチン等の抗酸化剤；グリセリン、尿素、アミノ酸、ヒアルロン酸、スクワラン、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ホホバ油、シリコン油等の保湿剤；ビタミンＥ類、トウガラシチンキ等の血行促進剤；核酸等の細胞賦活化剤；グルチルリチン、アラントイン、ピロクトンオラミン等の抗炎症剤；ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩等の抗菌剤；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等の過酸化物抑制剤；ポリエキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、コカミドプロピルベタイン、コカミドモノエタノールアミド、ココイルメチルタウリンナトリウム、ベヘントリモニウムクロリド、ステアルトリモニウムクロリド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤；セタノール、パルミチン酸イソプロピル等の基材成分；ポリクオタニウム－１０等のコンディショニング剤；クエン酸、リンゴ酸等のｐＨ調整剤；メトキシケイヒ酸エチルヘキシル等の紫外線吸収剤；ＥＤＴＡ－２Ｎａ等のキレート剤；香料；カラメル等の着色剤；アロエ、ショウキョウ、ソウハクヒ等の生薬及びこれらの抽出物や、パントテニルエチルエーテル、酢酸トコフェロール、フォルスコリン等の化合物等の育毛養毛効果を有する成分；イチョウエキス、胎盤抽出物、乳酸菌培養抽出物等の上記以外の植物や動物や微生物由来の各種抽出物等が挙げられる。

【0037】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、医薬品、医薬部外品、薬用又は化粧用の製剤類をはじめとする各種の外用剤に配合することが可能であるが、その優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進効果により優れた育毛効果が得られるため、頭皮頭髪に適用する頭皮頭髪用化粧料に配合することが好適である。

【0038】

本発明の頭皮頭髪用化粧料は、上記本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤を含有するものである。

【0039】

本発明の頭皮頭髪用化粧料としては、例えば整髪料、ヘアトニック、シャンプー、コンディショナー、トリートメント、ヘアリンス、養毛剤、育毛剤等が挙げられる。

【0040】

本発明の頭皮頭髪用化粧料には、本発明の効果を損なわない範囲で、頭皮頭髪用化粧料に従来から使用される成分を配合することもできる。このような成分としてはＷｎｔ１０ｂ産生促進剤に使用可能な前記の他の成分を挙げることができる。
本発明の頭皮頭髪用化粧料における上記植物抽出物の総含有量は、特に限定されないが、製剤化する場合、剤形や使用回数、配合する賦形剤や添加剤の種類などに応じて適宜選択され得る。

【0041】

例えばいずれも抽出物を用いたヘアトニックの場合、上記植物抽出物の総含有量が例えば乾燥物の質量で好ましくは０．０００００１～１０質量％、より好ましくは０．００００１～５質量％、さらにより好ましくは０．０００１～３質量％であるという量が挙げられる。本発明の頭皮頭髪用化粧料においては、植物抽出物の総含有量がこのような範囲となるように、適宜Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤の配合量を調節すればよい。

【0042】

総含有量が前記下限未満であると本発明の作用が得られない恐れがあり、前記上限を超えると含有量に見合った作用が得られない傾向があり、コスト的に不利である。

【0043】

本発明の効果を得るために有効な上記植物抽出物の総量は、例えば抽出物の乾燥物として通常成人１日当たり０．００００５～０．０１ｇである。この範囲の量を１日数回、例えば１～２回で頭皮に使用することが好ましく、毛髪量、使用回数、剤形に応じて化粧料を使用すれば良い。

【0044】

以下、本発明を更に詳しく説明するために実施例によって説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。

【0045】

（１）製造方法
（原料製造例１）チンピ抽出物
ウンシュウミカンの果皮を５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しチンピ抽出物１４．３ｇ得た。

【0046】

（原料製造例２）セイヨウイラクサ抽出物
セイヨウイラクサの葉を５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しセイヨウイラクサ抽出物４．８ｇ得た。

【0047】

（原料製造例３）ボタン抽出物
ボタンの根を５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しボタン抽出物６．５ｇ得た。

【0048】

（原料製造例４）センキュウ抽出物
センキュウの根茎を５０ｇ採取し３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥センキュウ抽出物７．４ｇ得た。

【0049】

（原料製造例５）ウメ抽出物
ウメの果実を５０ｇ採取し３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥ウメ抽出物１０．３ｇ得た。

【0050】

（原料製造例６）ステビア抽出物
ステビアの葉、茎を５０ｇ採取し、３７５ｍｌの５０質量％エタノール水溶液に室温（約２５℃）下で浸漬した。２４時間後これをろ過し、得られた抽出液から水、エタノールを減圧留去後、凍結乾燥しステビア抽出物１７．２ｇ得た。

【0051】

（２）Ｗｎｔ１０ｂ産生促進試験
（２－１）細胞培養
細胞はヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡（株））を使用した。サブコンフルエント状態の毛乳頭細胞をトリプシン処理で剥離し、２４ウェルプレートの各ウェルに播種し、１０％胎仔ウシ血清含有ダルベッコ改変イーグル培地で、３７℃、５％ＣＯ₂条件下でサブコンフ
ルエントになるまで培養した。乾燥物換算で表２に記載の濃度となるように原料製造例１～６の各植物抽出物、比較成分であるカルシトリオール（Ｃａｙｍａｎ ＣＨＥＭＩＣＡＬ製）を同培地にそれぞれ添加し４８時間培養した。培養後、培地を除去し毛乳頭細胞にＩＳＯＧＥＮ－II（（株）ニッポンジーン製）を添加し付属のプロトコルに従って、トータルＲＮＡを得た。

【0052】

（２－２）ｃＤＮＡの合成
精製したトータルＲＮＡを元に、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ（株）製）を用い、付属のプロトコルに従ってｃＤＮＡを合成した。

【0053】

（２－３）リアルタイムＲＴ－ＰＣＲによるＷｎｔ１０ｂのｍＲＮＡ発現量の定量
ＰＣＲ用の９６ウェルプレートの各ウェルへ、ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑII（タカラバイオ（株）製）１２．５μＬ、フォワードプライマー（０．４μＭ）１μＬ、リバースプライマー（０．４μＭ）１μＬ、ｃＤＮＡ（２０ｎｇ／μＬ）２μＬ、ＲＮａｓｅフリー水８．５μＬを加え、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（タカラバイオ（株）製）用いてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲを行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲの反応は、９５℃で３０秒の初期変性、９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒のアニーリング・伸長反応からなるサイクルを４０回行った。表１にＷｎｔ１０ｂ増幅用プライマー及びハウスキーピング遺伝子として使用したグリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）の増幅用プライマー（インビトロジェン社製）の配列を示す。

【0054】

増幅過程の蛍光強度からｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｃｙｃｌｅ値（一定の蛍光強度に到達するのに要したサイクル数）を解析し、ΔΔＣｔ法によりＷｎｔ１０ｂ及びＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現強度を算出した。Ｗｎｔ１０ｂの発現強度をＧＡＰＤＨの発現強度で補正し、Ｗｎｔ１０ｂのｍＲＮＡ発現量を求めた。

【0055】

実施例１～３６と比較例１～２においてＷｎｔ１０ｂｍＲＮＡ発現量を(ａ)、比較例１のＷｎｔ１０ｂｍＲＮＡ発現量を（ｂ）とし、（ａ）／（ｂ）で表される値を発現量比とした。

【0056】

【表1】

【0057】

【表2】

【0058】

【表3】

【0059】

表２～３に示すように、カルシトリオールは、Ｗｎｔ１０ｂ産生効果が認められた（比較例２）。一方、本発明のチンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物は優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進剤が認められ（実施例１～１２）、さらにこれらを組み合わせると相乗効果がみられた（実施例１３～３６）。

【0060】

（３）育毛作用試験
本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤としてチンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物を頭皮頭髪用化粧料（シャンプー、コンディショナー、ヘアトニック）に配合して育毛効果を評価した。

【0061】

（３－１）頭皮頭髪用化粧料の調製
試験用頭皮頭髪用化粧料として、シャンプー、コンディショナー及びヘアトニックを以下の組成で調製した。なお、配合量の単位は質量部で、精製水の「残量」とは全量を１００質量部とするのに要する量である。また、シャンプーにおけるクエン酸２５質量％水溶液の適量とはｐＨを４～６に調整するのに要する量、塩化ナトリウム１０質量％水溶液の適量とは粘度を１０００～３０００ｍＰａ・ｓに調製するのに要する量である。コンディショナーにおけるクエン酸２５質量％水溶液の適量とは、ｐＨを３～６に調製するのに要する量である。

【0062】

（ｉ）シャンプー
ポリクオタニウム－１０ 0.3
コカミドプロピルベタイン 10
ココイルメチルタウリンナトリウム 5
コカミドモノエタノールアミド 1
メチルパラベン 0.2
クエン酸２５質量％水溶液 適量
塩化ナトリウム１０質量％水溶液 適量
香料 0.4
精製水 残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤 表４に記載の量
比較成分 表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計 100


（ii） コンディショナー
ジメチコン 3
セタノール 4
パルミチン酸イソプロピル 1
ステアルトリモニウムクロリド 2.5
メチルパラベン 0.2
クエン酸２５質量％水溶液 適量
香料 0.4
精製水 残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤 表４に記載の量
比較成分 表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計 100


（iii）ヘアトニック
エタノール 40
ポリオキシエチレン（４０モル）硬化ヒマシ油 1
メチルパラベン 0.2
香料 0.1
精製水 残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤 表４に記載の量
比較成分 表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計 100

【0063】

【表4】

【0064】

（３－２）評価
実施例３７～４２、比較例３～４の頭皮頭髪用化粧料組成物（シャンプー、コンディショナー、ヘアトニック）について、それぞれ３０～６０歳代の男女５名８グループを被験者とした。

【0065】

シャンプー及びコンディショナーは、毎日の入浴時に頭髪に３～１０ｇ使用してもらい、ヘアトニックは毎日の入浴後及び朝に頭皮に約１．３ｍＬ使用してもらった。このモニター試験を６ヶ月間継続し、試験開始前と終了後の各３日間において、１日１回の洗髪時の抜け毛数を数えた。１日当たりの抜け毛数を３日分の抜け毛数の平均値として算出し、試験開始前の平均抜け毛数に対する終了後の平均抜け毛数の減少率を算出し、下記の評価点基準に従って点数をつけた。次に、各被験者５名の評価点を合計し、合計点が大きいほどより育毛効果があると判定した。尚、この期間中、前記以外の頭皮頭髪用化粧料については、通常使用しているものをそのまま使用した。使用期間中に皮膚や身体の異常を訴えた者はいなかった。

【0066】

上記の結果から明らかなとおり、本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、頭皮頭髪用化粧料に配合することにより、顕著な育毛効果を発揮することが確認できた。

【0067】

（評価点基準）
５点：４０％以上の減少
４点：３０％以上から４０％未満の減少
３点：２０％以上から３０％未満の減少
２点：１０％以上から２０％未満の減少
１点：１％以上から１０％未満の減少
０点：１％未満の減少、変化なし、抜け毛が増加した

【産業上の利用可能性】

【0068】

本発明のＷｎｔ１０ｂ産生促進剤は、毛乳頭細胞における優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進効果を有しており、抜け毛や薄毛の予防などの頭髪状態改善を目的とした化粧料をはじめとする各種外用剤への利用が可能となる。

【0069】

また、本発明の頭皮頭髪用化粧料は優れた育毛作用を有しており、抜け毛や薄毛の予防や改善を図ることができる。