特許 7161404 アミノ酸及びペプチド接合体及び接合方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-10-18

(45)【発行日】2022-10-26

(54)【発明の名称】アミノ酸及びペプチド接合体及び接合方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/00 20060101AFI20221019BHJP

   C07K 7/00 20060101ALI20221019BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20221019BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20221019BHJP

【ＦＩ】

C07K14/00 ZNA

C07K7/00

A61P37/04

A61K39/00 H

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2018544904

(86)(22)【出願日】2017-02-24

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-04-04

(86)【国際出願番号】 IB2017051054

(87)【国際公開番号】W WO2017145097

(87)【国際公開日】2017-08-31

【審査請求日】2020-02-21

(31)【優先権主張番号】2016900701

(32)【優先日】2016-02-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(73)【特許権者】

【識別番号】501410698

【氏名又は名称】オークランド ユニサービシーズ リミティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100134784

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和美

(72)【発明者】

【氏名】マーガレット アン ブリンブル

(72)【発明者】

【氏名】ジェフリー マーティン ウィリアムズ

(72)【発明者】

【氏名】ピーター ロードリック ダンバー

(72)【発明者】

【氏名】ダニエル バードン

【審査官】吉門 沙央里

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１２－５２３３７９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１２－５０２０５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】Muneaki KURINURA，Structure-activity relationship of lipopeptide from outer membrane of escherichia coli and synthesis of highly immunopotenting lipopeptide derivatives with an achiral lipo-part，Chem. Pharm. Bull，1993年，41(3)，627-629

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（ＩＦ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物：

【化1】

前記式において、
ｍは、２～６の整数であり；
ｎは、１または２であり；
Ｚ１およびＺ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、および－Ｃ（Ｏ）Ｓ－からなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６、およびＲ７は、ｍおよびｎの各場合に、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族であり；
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族であり；
Ｒ、Ｒ３、およびＲ８は、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族であり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６脂肪族、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）－、またはＡ２であり；
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１脂肪族またはＣ４～２０ヘテロ脂肪族から選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１脂肪族またはＣ２～２０ヘテロ脂肪族であり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ₂、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３のいずれかに存在する任意の脂肪族またはヘテロ脂肪族は、選択的に置換されており、
ここで、１）Ａ１は、エピトープを含むペプチドであるか、あるいは、２）Ｒ９は、Ａ２であり、かつエピトープを含むペプチドである。

【請求項2】

Ｚ１およびＺ２は、それぞれ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

ｍは２～５である、請求項１または２に記載の化合物。

【請求項4】

ｍは２である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

ｎは１である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項6】

Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキルであり、および／またはＬ３は、メチルまたは線状Ｃ１５アルキルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

Ｒ１およびＲ２は、ｍの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素であり、および／またはＲ３はＣ１～６アルキルまたは水素であり、および／またはＲ４およびＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素であり、および／またはＲ６およびＲ７は、ｎの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素であり、および／またはＲ８は独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素であり、および／またはＲ９は、Ｃ１～６アルキル、水素、アミノ保護基、Ｌ３-Ｃ（Ｏ）またはＡ２である、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

前記化合物は、下記式（ＩＤ）の化合物である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【化2】

【請求項9】

前記式（ＩＦ）の化合物は、
下記式：

【化3】

を有するか；または
下記式：

【化4】

を有するか；または
下記式：

【化5】

を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

前記エピトープはペプチドエピトープである、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項11】

Ｌ１およびＬ２が接合されている前記化合物のアミノ酸が、Ｎ－末端アミノ酸残基であり、および／またはＡ１がセリンまたは第１のＮ－末端アミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項12】

前記ペプチドは、配列番号１～１２１のいずれか１つのアミノ酸配列の８個以上の連続アミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれからなるか、またはそれからなる、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項13】

１）Ａ１が、８～２２０個のアミノ酸を含むペプチドであり、かつエピトープを含むか、あるいは、２）Ｒ９は、Ａ２であり、かつエピトープを含むペプチドである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項14】

有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。

【請求項15】

対象にワクチンを接種するか免疫応答を誘発する薬剤の製造における、請求項１～１３のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、または請求項１４に記載の薬学的組成物、の使用。

【請求項16】

対象にワクチンを接種するか免疫応答を誘発するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物を含む、請求項１４に記載の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アミノ酸及びペプチド接合体、アミノ酸及びペプチッド接合体の製造方法、前記方法により製造される接合体、前記接合体を含む薬学的組成物、対象における免疫応答を誘発する方法及び対象にワクチンを接種する方法、それらのための接合体の使用、及びそれらのための薬剤の製造における接合体の使用に関する。本発明はまた、本発明のアミノ酸－及びペプチド接合体の合成に有用な化合物の製造方法及びそのような化合物に関する。

【背景技術】

【0002】

合成ペプチドワクチンは、一般に、タンパク質抗原の免疫原性部分の合成コピーを含む。ワクチン開発へのこのようなアプローチは、多くの利点、例えば合成の容易さ、潜在的に有毒な生物学的副産物の回避、及び簡単な特性を有する。

【0003】

ペプチドワクチンの開発における重要な問題は、唯一のワクチン成分としてのペプチドにより示される免疫原性の欠如である。先天性免疫系の成分を活性化するように企画されたアジュバント（例えば、フロイントアジュバント）を、ワクチンに含めることは、通常必要である。

【0004】

ペプチドワクチン企画の他の手段は、目的のペプチドエピトープが適切なアジュバントに共有結合されている自己アジュバントワクチンを創造することである。そのような自己アジュバントワクチンは、外部アジュバントとの抗原の単純な同時配合に比較して、抗原取り込み、提示及び樹状細胞成熟を増強することができる。

【0005】

いくつかの自己アジュバントワクチンは、開発されてきたが、しかしワクチンの調製は複雑にされ得る。

【0006】

新規の自己アジュバントワクチン、及び自己アジュバントワクチンの新規製造方法についての継続的な必要性がある。それらの必要性を満たし；及び／または少なくとも有用な選択技術を公衆に提供することが、本発明の目的である。

【0007】

本発明の他の目的は、ほんの一例として与えられる以下の説明から明らかになるのであろう。

【0008】

本明細書に含まれている、文書、行為、材料、装置、物品又は同様のもののすべての議論は、本発明のための文脈を提供する目的のために過ぎない。それらの事項のいずれか又はすべては、従来技術基盤の一部を形成するか、又は優先日前に存在していた本発明に関連する分野において共通の一般的知識であったことは、容認されるものとして解釈されるべきではない。

【発明の概要】

【0009】

一態様において、本発明は、広範には下記式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体、またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物：

【0010】

【化1】

【0011】

前記式において、
ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～７の整数であり、ｖは、０～５の整数であり、
ただし：
ｍ、ｖ、及びｗの合計は、少なくとも３であり；
ｍ及びｗの合計は、０～７であり；
ｎは、１または２であり；
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＳＯ_２－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、－ＮＲＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ－、及び－ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ－からなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、ｍ、ｖ、ｗ、及びｎの各場合に、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族であり、
Ｒ、Ｒ３、及びＲ８は、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族であり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６脂肪族、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）－、またはＡ２であり；
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１脂肪族またはＣ４～２０ヘテロ脂肪族から選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１脂肪族またはＣ２～２０ヘテロ脂肪族であり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意の脂肪族またはヘテロ脂肪族は、選択的に置換される。

【0012】

本明細書に記載された実施形態または好ましい形態の任意のものは、他に言及がない限り、または文脈上他に指示されない限り、本明細書において単独で任意の態様、または本明細書に記載された任意の１つ以上の実施形態または好ましい形態の組み合わせに関する。

【0013】

様々な実施形態において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、ｍ、ｖ、ｗ、及びｎの各場合に、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ、Ｒ３、及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり；
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキル、Ｃ５～２１アルケニル、Ｃ５～２１アルキニル、またはＣ４～２０ヘテロアルキルから選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１アルキル、Ｃ５～２１アルケニル、Ｃ５～２１アルキニル、Ｃ３～６シクロアルキル、またはＣ２～２０ヘテロアルキルであり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルは、選択的に置換される。

【0014】

様々な実施形態において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、ｍ、ｖ、ｗ、及びｎの各場合に、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ、Ｒ３、及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり；
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキル、Ｃ５～２１アルケニル、またはＣ４～２０ヘテロアルキルから選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１アルキル、Ｃ５～２１アルケニル、Ｃ３～６シクロアルキル、またはＣ２～２０ヘテロアルキルであり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルは、選択的に置換される。

【0015】

様々な実施形態において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、ｍ、ｖ、ｗ、及びｎの各場合に、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ、Ｒ３、及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり；
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキル、Ｃ５～２１アルケニル、またはＣ４～２０ヘテロアルキルから選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１アルキル、Ｃ２－２１アルケニル、Ｃ３～６シクロアルキル、またはＣ２～２０ヘテロアルキルであり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルは、選択的に置換される。

【0016】

様々な実施形態において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、ｍ、ｖ、ｗ、及びｎの各場合に、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ、Ｒ３、及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、またはＣ３～６シクロアルキルであり；
Ｒ９は、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり；
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキルまたはＣ４～２０ヘテロアルキルから選択され；
Ｌ３は、Ｃ１～２１アルキル、Ｃ３～６シクロアルキル、またはＣ２～２０ヘテロアルキルであり；
Ａ１は、アミノ酸、ペプチド、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２、またはＮＨＰ２であり、ここで、Ｐ１は、カルボキシル保護基であり、Ｐ２は、カルボキサミド保護基であり；
Ａ２は、アミノ酸またはペプチドであり；
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルは、選択的に置換される。

【0017】

様々な実施形態において、Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ－、及び－Ｃ（Ｏ）Ｓ－からなる群から選択される。

【0018】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＡ）の化合物である：

【0019】

【化2】

【0020】

様々な実施形態において、ｖは、０～４、０～３、または０～２であるか、ｖは、０または１、例えば０である。

【0021】

特定の実施形態において、ｖは、０～３である。例示的な実施形態において、ｖは、０である。

【0022】

様々な実施形態において、ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～６、０～５、０～４、０～３、０～２、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２である。

【0023】

様々な実施形態において、ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～５である。

【0024】

特定の実施形態において、ｍ及びｗは、それぞれ独立して、１～４である。

【0025】

様々な実施形態において、ｍは、１～６、例えば２～６、１～５、または２～５である。様々な実施形態において、ｍは、１～５である。様々な実施形態において、ｍは、１～３である。例示的な実施形態において、ｍは、２である。

【0026】

様々な実施形態において、ｗは、１または２である。例示的な実施形態において、ｗは、１である。

【0027】

様々な実施形態において、ｍ及びｗの合計は、０～６、０～５、０～４、０～３、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、２～７、２～６、２～５、２～４、または２～３である。

【0028】

様々な実施形態において、ｍ及びｗの合計は、２～７である。

【0029】

特定の実施形態において、ｍ及びｗの合計は、２～５である。

【0030】

例示的な実施形態において、ｍ及びｗの合計は、３である。

【0031】

様々な実施形態において、ｖは、０～３であり；ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～５であり；ｍ及びｗの合計は、２～７である。

【0032】

様々な実施形態において、ｖは、１または０であり；ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～５であり；ｍ及びｗの合計は、２～７である。

【0033】

様々な実施形態において、ｖは、１または０であり；ｍ及びｗは、それぞれ独立して、１～４であり；ｍ及びｗの合計は、２～７である。

【0034】

様々な実施形態において、ｖは、１または０であり；ｍ及びｗは、それぞれ独立して、１～４であり；ｍ及びｗの合計は、２～５である。

【0035】

特定の実施形態において、ｖは、１または０であり；ｍは、１～６であり；ｗは、１または２である。特定の実施形態において、ｖは、１または０であり；ｍは、１～５であり；ｗは、１または２である。

【0036】

特定の実施形態において、ｖは、０または１であり；ｍは、１～３であり；ｗは、１または２である。

【0037】

例示的な実施形態において、ｖは、０であり；ｍは、２であり；ｗは、１である。

【0038】

例示的な実施形態において、ｎは、１である。

【0039】

特定の実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１脂肪族、例えば、Ｃ９～２１脂肪族、Ｃ１１～２１脂肪族、またはＣ１１～、Ｃ１３～、Ｃ１５～、Ｃ１７～、またはＣ１９～脂肪族である。

【0040】

特定の実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ５～２１アルキルである。

【0041】

様々な実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ９～２１アルキルである。別の実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ１１～２１アルキルである。

【0042】

様々な例示的な実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１５、Ｃ１７、またはＣ１９アルキル、好ましくはｎ－アルキルである。

【0043】

様々な特に考慮される実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ１５アルキルである。

【0044】

様々な実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、９～２１個の炭素原子の直鎖を含む。

【0045】

例示的な実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、線状Ｃ１５アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、Ｃ１～２１アルキルである。

【0046】

様々な実施形態において、Ｌ３は、メチルまたは線状Ｃ１５アルキルである。

【0047】

例示的な実施形態において、Ｌ３は、メチルである（すなわち、Ｒ９は、アセチルである）。

【0048】

いくつかの実施形態において、アミノ保護基は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、ノシル（ｏ－またはｐ－ニトロフェニルスルホニル）、Ｂｐｏｃ（２－（４－ビフェニル）イソプロポキシカルボニル）及びＤｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソヘキシリデン）エチル）である。

【0049】

様々な実施形態において、アミノ保護基は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである。

【0050】

いくつかの実施形態において、アミノ保護基は、Ｆｍｏｃである。

【0051】

いくつかの実施形態において、カルボキシル保護基は、ｔｅｒｔ－ブチル、ベンジルまたはアリ―ルである。

【0052】

様々な実施形態において、カルボキサミド保護基は、Ｄｃｍｐまたはトリチルである。

【0053】

様々な実施形態において、Ｒ１及びＲ２は、ｍの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒ１及びＲ２は、ｍの各場合に、それぞれ水素である。

【0054】

様々な実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１～６アルキルまたは水素である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒ３は、水素である。

【0055】

様々な実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、ｗの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素、好ましくは水素である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒ４及びＲ５は、ｗの各場合に、それぞれ水素である。

【0056】

様々な実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、ｖの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒｘ及びＲｙは、ｖの各場合に、それぞれ水素である。

【0057】

様々な実施形態において、Ｒ６及びＲ７は、ｎの各場合に、それぞれ独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ水素である。

【0058】

様々な実施形態において、Ｒ８は、独立して、Ｃ１～６アルキルまたは水素である。例示的な実施形態において、Ｒ８は、水素である。

【0059】

様々な実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～６アルキル、水素、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。例示的な実施形態において、Ｒ９は、水素、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。

【0060】

様々な実施形態において、Ｒ８は、水素であり、Ｒ９は、水素、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）またはＡ２である。

【0061】

様々な実施形態において、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ水素であるか；Ｒ９は、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）またはＡ２である。

【0062】

様々な実施形態において、Ｒ８は、水素であり、Ｒ９は、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）である。様々な特に考慮される実施形態において、Ｒ９は、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）であり、ここで、Ｌ３は、メチルである。

【0063】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＦ）の化合物である。

【0064】

【化3】

【0065】

前記式において、ｍは、２～６、好ましくは２の整数で、残りの変数は、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義される通りである。

【0066】

様々な実施形態において、式（ＩＦ）の化合物は、下記式（ＩＦ－１）の化合物である。

【0067】

【化4】

【0068】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＢ）の化合物である。

【0069】

【化5】

【0070】

前記式において、
ｋは、０～４の整数であり；
Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６脂肪族である。

【0071】

様々な実施形態において、式（ＩＢ）の化合物は、下記式（ＩＣ）の化合物である。

【0072】

【化6】

【0073】

様々な実施形態において、ｋは、０～３、０～２、０～１、１～４、１～３、または１～２であるか、ｋは、０または１である。

【0074】

特定の実施形態において、ｋは、０～３である。

【0075】

特定の実施形態において、ｋは、０または１である。

【0076】

例示的な実施形態において、ｋは、０である。

【0077】

特定の実施形態において、ｋは、ｖと同じである。

【0078】

様々な実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、またはＣ３～６シクロアルキルである。

【0079】

様々な実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、またはＣ３～６シクロアルキルである。

【0080】

様々な実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、またはＣ３～６シクロアルキルである。

【0081】

様々な実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ独立して、水素またはＣ１～６アルキル、好ましくは水素から選択される。例示的な実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、及びＲｃは、それぞれ水素である。

【0082】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＤ）の化合物である。

【0083】

【化7】

【0084】

特定の実施形態において、化合物は、Ｌ１及びＬ２が、それぞれ線状Ｃ１５アルキルである式（ＩＤ）の化合物である。

【0085】

様々な実施形態において、Ｌ１及びＬ２が、それぞれ独立して、Ｃ１１～２１アルキルであり；ｍは、２であり；ｖは、０であり；ｗは、１であり；Ｒ１及びＲ２は、各場合に、それぞれ水素であり；Ｒ３は、水素であり；Ｒ４及びＲ５は、それぞれ水素である。

【0086】

様々な実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、それぞれ水素であり；Ｒ９は、水素、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。

【0087】

様々な実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、それぞれ水素であり；Ｒ９は、水素、アミノ保護基、またはＬ３－Ｃ（Ｏ）であり、ここで、Ｌ３は、線状Ｃ１５アルキルまたはメチルである。

【0088】

様々な実施形態において、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、Ｃ１１～２１アルキルであり；ｍは、２であり；ｖは、０であり；ｗは、１であり；Ｒ１及びＲ２は、各場合に、それぞれ水素であり；Ｒ３は、水素であり；Ｒ４及びＲ５は、それぞれ水素であり；ｎは、１であり；Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、それぞれ水素であり；Ｒ９は、水素、アミノ保護基、またはＬ３－Ｃ（Ｏ）であり、ここで、Ｌ３は、線状Ｃ１５アルキルまたはメチルである。

【0089】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、下記式（ＩＥ）を有する。

【0090】

【化8】

【0091】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥＥ）を有する。

【0092】

【化9】

【0093】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥ－１）を有する。

【0094】

【化10】

【0095】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥＥ－１）を有する。

【0096】

【化11】

【0097】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥ－２）を有する。

【0098】

【化12】

【0099】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥＥ－２）を有する。

【0100】

【化13】

【0101】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥＥ－３）を有する。

【0102】

【化14】

【0103】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＥＥ－４）を有する。

【0104】

【化15】

【0105】

様々な実施形態において、脂質部分が接合されているアミノ酸－またはペプチド接合体のアミノ酸は、システイン残基である。

【0106】

当業者は、特定の実施形態において、部分Ｌ１－Ｚ１－及びＬ２－Ｚ２－が、脂肪酸基、例えば、脂肪酸エステルであり得ることを理解するであろう。様々な実施形態において、部分は、飽和または不飽和脂肪酸エステルであり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸は、飽和される。

【0107】

様々な実施形態において、脂肪酸は、Ｃ４～２２脂肪酸である。いくつかの実施形態において、脂肪酸は、Ｃ６～２２脂肪酸である。

【0108】

特定の実施形態において、脂肪酸はＣ１０～２２脂肪酸である。特に考慮される特定の実施形態において、脂肪酸はＣ１２～２２脂肪酸である。様々な例示的な実施形態において、脂肪酸はＣ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８またはＣ２０脂肪酸である。

【0109】

いくつかの実施形態において、脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、α－リノレン酸、及びアラキドン酸である。

【0110】

様々な実施形態において、脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、またはステアリン酸である。

【0111】

特定の例示的な実施形態において、脂肪酸はパルミチン酸である（及び、部分Ｌ１－Ｚ１－及びＬ２－Ｚ２－は、それぞれパルミトイル基である）。

【0112】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、アミノ酸－接合体である。

【0113】

いくつかの実施形態において、Ａ１はＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ２またはＮＨＰ２であり／あるか、Ｒ９は水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。

【0114】

いくつかの実施形態において、Ａ１はＯＰ１またはＯＨでありあるか、Ｒ９は水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。

【0115】

様々な実施形態において、Ａ１はＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２またはＮＨＰ２であり、Ｒ９は水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ３～６シクロアルキル、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。

【0116】

様々な実施形態において、Ａ１はＯＨまたはＯＰ１であり、Ｒ９は水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。

【0117】

様々な実施形態において、Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態において、Ｒ９は、水素またはＬ３－Ｃ（Ｏ）である。

【0118】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、ペプチド接合体である。

【0119】

様々な実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、アミノ酸またはペプチドである。

【0120】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチドである。

【0121】

一実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、エピトープを含むペプチドである。

【0122】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチドエピトープを含むペプチドである。

【0123】

別の実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチドであり、前記ペプチドは、ペプチドエピトープを含む。

【0124】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、エピトープによって置換されたペプチドである。

【0125】

いくつかの実施形態において、エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合される。

【0126】

特定の実施形態において、Ａ１はペプチドである。

【0127】

特定の例示的な実施形態において、Ａ１はペプチドであり、Ｒ９はＡ２ではない（すなわち、Ｒ９はアミノ酸またはペプチドではない）。

【0128】

様々な実施形態において、前記ペプチドはエピトープを含む。

【0129】

様々な実施形態において、エピトープはペプチドエピトープである。

【0130】

特定の実施形態において、エピトープは、リンカー基を介してカップリングされるか、結合される。

【0131】

様々な実施形態において、脂質部分が接合されたペプチド接合体のアミノ酸は、Ｎ－末端アミノ酸残基である。

【0132】

様々な実施形態において、Ａ１はセリンまたは、第１のＮ－末端アミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである。

【0133】

いくつかの実施形態において、Ａ１は、第１のＮ－末端アミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである。

【0134】

様々な実施形態において、ペプチド接合体は、１つ以上の可溶化基を含む。

【0135】

いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内に２つ以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む。

【0136】

様々な実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内に２つ以上の連続する親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である。

【0137】

様々な実施形態において、２つ以上の親水性アミノ酸残基は、セリン残基に隣接する。

【0138】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、可溶化基を含むペプチドである。

【0139】

様々な実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチド鎖内に２つ以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含むペプチドである。

【0140】

特定の実施形態において、Ａ１は、ペプチド鎖内に２つ以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含むペプチドである。

【0141】

いくつかの実施形態において、Ａ１は、第１のＮ－末端アミノ酸残基としてセリンを含み、ペプチド鎖内にセリンに隣接した２つ以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含むペプチドである。

【0142】

いくつかの実施形態において、前記化合物は、リンカーまたはその１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、前記ペプチドは、リンカーまたはその１つ以上のアミノ酸を含む。

【0143】

いくつかの実施形態において、前記ペプチドは、脂質部分が結合されたアミノ酸にリンカーを介して結合されたペプチドエピトープを含む。

【0144】

いくつかの実施形態において、前記ペプチドは、２つ以上のエピトープを含む。

【0145】

いくつかの実施形態において、前記ペプチドは、ペプチド抗原を含む。

【0146】

いくつかの実施形態において、リンカーは、約２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０または２～８個のアミノ酸長さのアミノ酸配列である。

【0147】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、３個以上、４個以上、または５個以上の連続するアミノ酸を含む。

【0148】

様々な実施形態において、ペプチド接合体はリポペプチドである。

【0149】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、自己アジュバントペプチドである。

【0150】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、それぞれ独立して、約８～２２０、８～２００、８～１７５、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～９０、８～８０、８～７０、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、８～２０または８～１５個のアミノ酸を含むペプチドである。例示的な一実施形態において、Ａ１及びＡ２は、それぞれ独立して、約８～６０個のアミノ酸を含むペプチドである。

【0151】

他の実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、それぞれ独立して、約８～２２０、８～２００、８～１７５、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～９０、８～８０、８～７０、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、８～２０または８～１５個のアミノ酸を含むペプチドである。

【0152】

他の実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、それぞれ独立して、約５～１５０、５～１２５、５～１００、５～７５、５～６０、５～５０、５～４０、５～３０、５～２５、５～２０、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～７５、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５または８～２０個のアミノ酸を含むペプチドである。

【0153】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、それぞれ独立してペプチドであり、前記ペプチドは、８～６０個のアミノ酸を含む。

【0154】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、それぞれ独立してペプチドエピトープを含むか、ペプチドエピトープで置換されたペプチドであり、前記ペプチドエピトープは、８～６０個のアミノ酸を含む。

【0155】

適切なペプチドエピトープは、限定なく、２０１５年１２月２２日付に出願されたＷＯ２０１６／１０３１９２に記載されたものを含み、同文献の全体は本明細書に参照として組み込まれる。

【0156】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープを含むか、それは実質的になるか、それらからなる。様々な実施形態において、１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープは、ＭＨＣＩエピトープである。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号７６～１０１のいずれか１つからなる群から選択される１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの８個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるか、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。

【0157】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなる組換えペプチドを含む。様々な実施形態において、組換えペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるか、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなる。

【0158】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、実質的にそれらからなる。

【0159】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、下記：
（ａ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｂ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｃ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｄ）配列ＳＫＫＫＫＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｅ）配列ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｆ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｇ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｈ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｉ）配列ＳＫＫＫＫＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｊ）配列ＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：１０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｋ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｌ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｍ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｎ）配列ＳＫＫＫＫＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｏ）配列ＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ［配列番号：１５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｐ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：１６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｑ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：１７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｒ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：１８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｓ）配列ＳＫＫＫＫＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：１９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｔ）配列ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ［配列番号：２０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｕ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬ［配列番号：２１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｖ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬ［配列番号：２２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｗ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬ［配列番号：２３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｘ）配列ＳＫＫＫＫＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬ［配列番号：２４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｙ）配列ＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬ［配列番号：２５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｚ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：２６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ａａ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：２７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｂｂ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：２８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｃｃ）配列ＳＫＫＫＫＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：２９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｄｄ）配列ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：３０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｅｅ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬ［配列番号：３１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｆｆ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬ［配列番号：３２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｇｇ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬ［配列番号：３３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｈｈ）配列ＳＫＫＫＫＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬ［配列番号：３４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｉｉ）配列ＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬ［配列番号：３５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｊｊ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：３６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｋｋ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：３７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｌｌ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：３８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｍｍ）配列ＳＫＫＫＫＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：３９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｎｎ）配列ＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡ［配列番号：４０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｏｏ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＮＬＴＴＭＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡＬＩＡＧＧＳＩ［配列番号：４１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｐｐ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＮＬＴＴＭＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡＬＩＡＧＧＳＩ［配列番号：４２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｑｑ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＮＬＴＴＭＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡＬＩＡＧＧＳＩ［配列番号：４３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｒｒ）配列ＳＫＫＫＫＬＮＬＴＴＭＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡＬＩＡＧＧＳＩ［配列番号：４４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｓｓ）配列ＬＮＬＴＴＭＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡＬＩＡＧＧＳＩ［配列番号：４５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｔｔ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡ［配列番号：４６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｕｕ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡ［配列番号：４７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｖｖ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡ［配列番号：４８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｗｗ）配列ＳＫＫＫＫＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡ［配列番号：４９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｘｘ）配列ＦＬＬＭＬＬＷＴＬＶＶＬＬＩＣＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩＬＬＡＲＬＦＬＹＡＬＡＬＬＬＬＡＳＡ［配列番号：５０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｙｙ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＱＧＩＹＶＬＶＭＬＶＬＬＩＬＡＹＲＲＲＷＲＲＬＴＶＣＧＧＩＭＦＬＡＣＶＬＶＬＩＶＤＡＶＬＱＬＳＰＬＬ［配列番号：５１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸、
（ｚｚ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＱＧＩＹＶＬＶＭＬＶＬＬＩＬＡＹＲＲＲＷＲＲＬＴＶＣＧＧＩＭＦＬＡＣＶＬＶＬＩＶＤＡＶＬＱＬＳＰＬＬ［配列番号：５２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ａａａ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＱＧＩＹＶＬＶＭＬＶＬＬＩＬＡＹＲＲＲＷＲＲＬＴＶＣＧＧＩＭＦＬＡＣＶＬＶＬＩＶＤＡＶＬＱＬＳＰＬＬ［配列番号：５３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｂｂｂ）配列ＳＫＫＫＫＬＱＧＩＹＶＬＶＭＬＶＬＬＩＬＡＹＲＲＲＷＲＲＬＴＶＣＧＧＩＭＦＬＡＣＶＬＶＬＩＶＤＡＶＬＱＬＳＰＬＬ［配列番号：５４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｃｃｃ）配列ＬＱＧＩＹＶＬＶＭＬＶＬＬＩＬＡＹＲＲＲＷＲＲＬＴＶＣＧＧＩＭＦＬＡＣＶＬＶＬＩＶＤＡＶＬＱＬＳＰＬＬ［配列番号：５５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｄｄｄ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＳＧＮＲＴＹＧＰＶＦＭ（Ｃ）（Ｓ）ＬＧＧＬＬＴＭＶＡＧＡＶＷＬＴＶＭＳＮＴＬＬＳＡＷＩＬＴＡＧＦＬＩＦＬＩＧＦＡ［配列番号：５６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｅｅｅ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＳＧＮＲＴＹＧＰＶＦＭ（Ｃ）（Ｓ）ＬＧＧＬＬＴＭＶＡＧＡＶＷＬＴＶＭＳＮＴＬＬＳＡＷＩＬＴＡＧＦＬＩＦＬＩＧＦＡ［配列番号：５７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｆｆｆ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＳＧＮＲＴＹＧＰＶＦＭ（Ｃ）（Ｓ）ＬＧＧＬＬＴＭＶＡＧＡＶＷＬＴＶＭＳＮＴＬＬＳＡＷＩＬＴＡＧＦＬＩＦＬＩＧＦＡ［配列番号：５８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｇｇｇ）配列ＳＫＫＫＫＳＧＮＲＴＹＧＰＶＦＭ（Ｃ）（Ｓ）ＬＧＧＬＬＴＭＶＡＧＡＶＷＬＴＶＭＳＮＴＬＬＳＡＷＩＬＴＡＧＦＬＩＦＬＩＧＦＡ［配列番号：５９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｈｈｈ）配列ＳＧＮＲＴＹＧＰＶＦＭ（Ｃ）（Ｓ）ＬＧＧＬＬＴＭＶＡＧＡＶＷＬＴＶＭＳＮＴＬＬＳＡＷＩＬＴＡＧＦＬＩＦＬＩＧＦＡ［配列番号：６０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｉｉｉ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＳＮＥＥＰＰＰＰＹＥＤＰＹＷＧＮＧＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰ［配列番号：６１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｊｊｊ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＳＮＥＥＰＰＰＰＹＥＤＰＹＷＧＮＧＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰ［配列番号：６２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｋｋｋ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＳＮＥＥＰＰＰＰＹＥＤＰＹＷＧＮＧＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰ［配列番号：６３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｌｌｌ）配列ＳＫＫＫＫＳＮＥＥＰＰＰＰＹＥＤＰＹＷＧＮＧＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰ［配列番号：６４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｍｍｍ）配列ＳＮＥＥＰＰＰＰＹＥＤＰＹＷＧＮＧＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰ［配列番号：６５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｎｎｎ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡＧＲＧＳＭＮＰＶＣＬＰＶＩＶＡＰＹＬＦＷＬＡＡＩＡＡＳ［配列番号：６６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｏｏｏ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡＧＲＧＳＭＮＰＶＣＬＰＶＩＶＡＰＹＬＦＷＬＡＡＩＡＡＳ［配列番号：６７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｐｐｐ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡＧＲＧＳＭＮＰＶＣＬＰＶＩＶＡＰＹＬＦＷＬＡＡＩＡＡＳ［配列番号：６８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｑｑｑ）配列ＳＫＫＫＫＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡＧＲＧＳＭＮＰＶＣＬＰＶＩＶＡＰＹＬＦＷＬＡＡＩＡＡＳ［配列番号：６９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｒｒｒ）配列ＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡＧＲＧＳＭＮＰＶＣＬＰＶＩＶＡＰＹＬＦＷＬＡＡＩＡＡＳ［配列番号：７０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｓｓｓ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＡＡＩＡＡＳＣＦＴＡＳＶＳＴＶＶＴＡＴＧＬＡＬＳＬＬＬＬＡＡＶＡＳＳＹＡＡＡＱＲＫＬＬＴＰＶＴＶＬＴ［配列番号：７１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸、
（ｔｔｔ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＡＡＩＡＡＳＣＦＴＡＳＶＳＴＶＶＴＡＴＧＬＡＬＳＬＬＬＬＡＡＶＡＳＳＹＡＡＡＱＲＫＬＬＴＰＶＴＶＬＴ［配列番号：７２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｕｕｕ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＡＡＩＡＡＳＣＦＴＡＳＶＳＴＶＶＴＡＴＧＬＡＬＳＬＬＬＬＡＡＶＡＳＳＹＡＡＡＱＲＫＬＬＴＰＶＴＶＬＴ［配列番号：７３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｖｖｖ）配列ＳＫＫＫＫＡＡＩＡＡＳＣＦＴＡＳＶＳＴＶＶＴＡＴＧＬＡＬＳＬＬＬＬＡＡＶＡＳＳＹＡＡＡＱＲＫＬＬＴＰＶＴＶＬＴ［配列番号：７４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｗｗｗ）配列ＡＡＩＡＡＳＣＦＴＡＳＶＳＴＶＶＴＡＴＧＬＡＬＳＬＬＬＬＡＡＶＡＳＳＹＡＡＡＱＲＫＬＬＴＰＶＴＶＬＴ［配列番号：７５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｘｘｘ）配列番号：１～７５のいずれか１つの配列、
（ｙｙｙ）ＥＳＮＥＥＰＰＰＰＹ［配列番号：７６］、
ＳＮＥＥＰＰＰＰＹ[配列番号：７７］、
ＨＳＤＹＱＰＬＧＴ[配列番号：７８］、
ＰＬＧＴＱＤＱＳＬ[配列番号：７９］、
ＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹ[配列番号：８０］、
ＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹ[配列番号：８０］、
ＬＧＴＱＤＱＳＬＹ[配列番号：８１］、
ＧＴＱＤＱＳＬＹＬ[配列番号：８２］、
ＧＴＱＤＱＳＬＹＬ[配列番号：８３］、
ＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧ[配列番号：８４］、
ＱＳＬＹＬＧＬＱＨ[配列番号：８５］、
ＳＬＹＬＧＬＱＨＤ[配列番号：８６］、
ＳＬＹＬＧＬＱＨＤ[配列番号：８６］、
ＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ[配列番号：８７］、
ＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹ[配列番号：８８］、
ＧＬＰＰＰＰＹＳＰ[配列番号：８９］、
ＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲ[配列番号：９０］、
ＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲ[配列番号：９０］、
ＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹ[配列番号：９１］、
ＲＤＤＳＳＱＨＩＹ[配列番号：９２］、
ＨＩＹＥＥＡＧＲＧ[配列番号：９３］、
ＩＬＬＡＲＬＦＬＹ[配列番号：９４］、
ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫＩ[配列番号：９５］、
ＬＬＷＴＬＶＶＬＬ[配列番号：９６］、
ＦＬＹＡＬＡＬＬＬ[配列番号：９７］、
ＣＬＧＧＬＬＴＭＶ[配列番号：９８］、
ＬＩＶＤＡＶＬＱＬ[配列番号：９９］、
ＬＴＡＧＦＬＩＦＬ[配列番号：１００］、
ＴＶＣＧＧＩＭＦＬ[配列番号：１０１］
のいずれか１つの配列からの８個以上の連続するアミノ酸残基
（ｚｚｚ）配列番号：７６～１０１のいずれか１つの配列、
（ａａａａ）または前記（ａ）～（ｚｚｚ）の２つ以上の任意の組み合わせ、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0160】

例示的な一実施形態において、前記ペプチドは、潜在膜タンパク質２（ＬＭＰ２）、例えば、全長ＥＢＶ ＬＭＰ２（アミノ酸１－４９７）に由来した１つ以上のエピトープを含む。特に考慮される一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４または７５のいずれか１つからの８個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0161】

特に考慮される別の実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４または７５のいずれか１つからの１２個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0162】

特に考慮される別の実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４または７５のいずれか１つからの１５個以上、１８個以上、２０個以上または２５個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0163】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４または７５のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0164】

特に考慮される別の実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１～７５のいずれか１つからの１５個以上、１８個以上、２０個以上または２５個以上連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0165】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１～７５のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0166】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：７６～１０１のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。１つの例において、前記ペプチドは、配列番号：７６～９３のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0167】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：７６～１０１のいずれか２つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。１つの例において、前記ペプチドは、配列番号：７６～９３のいずれか２つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0168】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、下記：
（ａ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＧＡＲＧＰＥＳＲＬＬＥＦＹＬＡＭＰＦＡＴＰＭＥＡＥＬＡＲＲＳＬＡＱＤＡＰＰＬ[配列番号：１０２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｂ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＧＡＲＧＰＥＳＲＬＬＥＦＹＬＡＭＰＦＡＴＰＭＥＡＥＬＡＲＲＳＬＡＱＤＡＰＰＬ[配列番号：１０３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｃ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＧＡＲＧＰＥＳＲＬＬＥＦＹＬＡＭＰＦＡＴＰＭＥＡＥＬＡＲＲＳＬＡＱＤＡＰＰＬ[配列番号：１０４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｄ）配列ＳＫＫＫＫＧＡＲＧＰＥＳＲＬＬＥＦＹＬＡＭＰＦＡＴＰＭＥＡＥＬＡＲＲＳＬＡＱＤＡＰＰＬ[配列番号：１０５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｅ）配列番号：１０２～１０５のいずれか１つの配列、
（ｆ）配列ＧＡＲＧＰＥＳＲＬＬＥＦＹＬＡＭＰＦＡＴＰＭＥＡＥＬＡＲＲＳＬＡＱＤＡＰＰＬ[配列番号：１０６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｇ）配列番号：１０６の配列、
（ｈ）配列ＬＡＭＰＦＡＴＰＭ[配列番号：１０７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｉ）配列番号：１０７の配列、
（ｊ）配列ＦＡＴＰＭＥＡＥＬ[配列番号：１０８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｋ）配列番号：１０８の配列、
（ｌ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１０９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｍ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１１０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｎ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１１１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、及びＸａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｏ）配列ＳＫＫＫＫＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１１２］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｐ）配列番号：１０９～１１２のいずれか１つの配列、
（ｑ）配列ＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１１３］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｒ）配列番号：１１３の配列、
（ｓ）配列ＥＦＴＶＳＧＮＩＬ[配列番号：１１４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｔ）配列番号：１１４の配列、
（ｕ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＬＱＱＬＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦＬＡＱＰＰＳＧＱＲＲ[配列番号：１１５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｖ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＬＱＱＬＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦＬＡＱＰＰＳＧＱＲＲ[配列番号：１１６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｗ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＬＱＱＬＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦＬＡＱＰＰＳＧＱＲＲ[配列番号：１１７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｘ）配列ＳＫＫＫＫＬＱＱＬＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦＬＡＱＰＰＳＧＱＲＲ[配列番号：１１８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｙ）配列番号：１１５～１１８のいずれか１つの配列、
（ｚ）配列ＬＱＱＬＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦＬＡＱＰＰＳＧＱＲＲ[配列番号：１１９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ａａ）配列番号：１１９の配列、
（ｂｂ）配列ＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬＰＶＦ[配列番号：１２０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｃｃ）配列番号：１２０の配列、
（ｄｄ）配列ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ[配列番号：１２１］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｅｅ）配列番号：１２１の配列、
（ｆｆ）または前記（ａ）～（ｅｅ）の２つ以上の任意の組み合わせ、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0169】

例示的な一実施形態において、ペプチドエピトープは、ＮＹ－ＥＳＯ－１に由来する。特に考慮される一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つからの８個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0170】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0171】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１１３及び１１９のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0172】

一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０５、１１２及び１１８のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0173】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、１つ以上のオボアルブミンタンパク質エピトープを含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。様々な実施形態において、１つ以上のオボアルブミンタンパク質は、ＭＨＣＩエピトープである。様々な実施形態において、１つ以上のオボアルブミンタンパク質は、ＭＨＣＩＩエピトープである。

【0174】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、下記：
（ａ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３Ｘａａ_４ＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２４］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_４は不在であるか、１つ以上の親水性アミノ酸であり、
（ｂ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２Ｘａａ_３ＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２５］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、Ｘａａ_２は不在であるか、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ_３は不在であるか、１～１０個の親水性アミノ酸であり、
（ｃ）配列Ｘａａ_１Ｘａａ_２ＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２６］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、ここで、Ｘａａ_１は不在であるか、Ｓであり、及びＸａａ_２は不在であるか、１～４個の親水性アミノ酸であり、
（ｄ）配列ＳＫＫＫＫＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２７］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｅ）配列番号：１２４～１２７のいずれか１つの配列、
（ｆ）配列ＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２８］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｇ）配列番号：１２８の配列、
（ｈ）配列ＳＩＩＮＦＥＫＬ[配列番号：１２９］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｉ）配列番号：１２９の配列、
（ｊ）配列ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ[配列番号：１３０］からの８個以上の連続するアミノ酸残基、
（ｋ）配列番号：１３０の配列、
（ｌ）または前記（ａ）～（ｋ）のいずれか２つ以上の任意の組み合わせ、
を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0175】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１２４～１３０のいずれか１つからなる群から選択される１つ以上のオボアルブミンタンパク質エピトープを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１２４～１３０のいずれか１つのアミノ酸配列からの８個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。

【0176】

様々な実施形態において、ペプチドは、配列番号１２４～１３０のいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、実質的にそれらからなる。

【0177】

一実施形態において、ペプチド接合体は、２つ以上のエピトープ、例えば、２つ以上のペプチドエピトープを含む。

【0178】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体は、抗原性ペプチドを含む。

【0179】

特に考慮される実施形態において、前記ペプチドは、合成ペプチドである。

【0180】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の単離された化合物である。

【0181】

様々な実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、純粋であるか、精製されるか、実質的に純粋である式（Ｉ）の化合物である。

【0182】

別の態様において、本発明は、広範囲には、式（ＸＶ）の化合物の製造方法から構成され、この方法は、
式（ＸＶＩ）のエポキシド：

【0183】

【化16】

【0184】

及び式（ＩＩＩ）のチオールを含むアミノ酸含有接合パートナーを、

【0185】

【化17】

【0186】

エポキシド及びアミノ酸含有接合パートナーを接合するのに効果的な条件下で反応せしめて、式（ＸＶ）の化合物またはその塩または溶媒和物を生成することを含み：

【0187】

【化18】

【0188】

前記式において、
Ｘ１０は、Ｌ１－Ｚ１－、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨＲ、ＨＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－、Ｐ１０－Ｏ－、Ｐ１１－Ｓ－、Ｐ１２－ＮＲ－またはＰ１２－ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－であり；
Ｘ１１は、Ｘ１０がＰ１０－Ｏ－、Ｐ１１－Ｓ－、Ｐ１２－ＮＲ－またはＰ１２－ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－であり、前記条件がＰ１０、Ｐ１１またはＰ１２を除去するのに効果的である場合、Ｘ１０または－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨＲまたはＨＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－であり；
Ｐ１０、Ｐ１１及びＰ１２は、それぞれ独立して、保護基であり；
ｍは、２～６の整数であり；
ｎ、Ｌ１、Ｚ１、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物またはその任意の実施形態において定義された通りである。

【0189】

様々な実施形態において、ｍは、２～５、２～４または２～３である。例示的な実施形態において、ｍは２である。

【0190】

様々な実施形態において、Ｘ１０は、Ｌ１－Ｚ１－または－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨＲ、Ｐ１０－Ｏ－、Ｐ１１－Ｓ－またはＰ１２－ＮＲ－であり；Ｘ１１は、Ｘ１０または－ＯＨ、－ＳＨまたは－ＮＨＲである。

【0191】

様々な実施形態において、Ｘ１０は、Ｌ１－Ｚ１－、－ＯＨまたはＰ１０－Ｏ－であり；Ｘ１１は、Ｘ１０または－ＯＨである。

【0192】

様々な実施形態において、Ｘ１０は、Ｌ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、ＯＨまたはＰ１０－Ｏ－であり；Ｘ１１は、Ｌ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｐ１０－Ｏ－またはＯＨである。

【0193】

様々な実施形態において、Ｘ１０は、Ｌ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－またはＰ１０－Ｏ－であり；Ｘ１１は、Ｌ１－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｐ１０－Ｏ－またはＯＨである。

【0194】

例示的な実施形態において、Ｘ１０は、Ｐ１０－Ｏ－であり；Ｘ１１は、Ｐ１０－Ｏ－またはＯＨである。

【0195】

様々な実施形態において、Ｒ９は水素ではなく、及び／またはＡ１はＯＨではない。

【0196】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下または３個以下のアミノ酸残基を含む接合パートナーを含有するペプチドである。

【0197】

様々な実施形態において、接合パートナーを含むアミノ酸のＣ－末端は、カルボキシル保護基またはカルボキサミド保護基によって保護され、及び／または、接合パートナーを含むアミノ酸のＮα－アミノ基は、アミノ保護基によって保護される。

【0198】

例示的な実施形態において、Ｒ９はアミノ保護基である。

【0199】

様々な実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＮＨＰ２である。特定の実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１である。

【0200】

例示的な実施形態において、Ｒ９は、アミノ保護基であり、Ａ１は、ＯＰ１である。

【0201】

様々な実施形態において、本方法は、酸、例えば、強酸の存在下でエポキシド及びアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0202】

特定の実施形態において、酸は、塩酸、硫酸またはそれらの混合物を含む。

【0203】

特定の実施形態において、酸は、ルイス酸、例えば、ＢＦ_３を含む。

【0204】

他の実施形態において、本方法は、中性条件下でエポキシド及びアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0205】

様々な実施形態において、中性条件は、アルコール、例えば、エタノールのようなプロトン性溶媒を含む。

【0206】

他の実施形態において、本方法は、塩基、例えば、弱塩基（ｍｉｌｄ ｂａｓｅ）の存在下で、エポキシド及びアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0207】

いくつかの実施形態において、塩基は、有機アミン、例えば、トリエチルアミンである。

【0208】

様々な実施形態において、本方法は、アルケンをエポキシ化するのに効果的な条件下で式（ＸＶＩＩ）のアルケン及び酸化剤を反応せしめてエポキシドを生成することを含む：

【0209】

【化19】

【0210】

様々な実施形態において、酸化剤は、有機過酸化物のような過酸化物、例えば、ｍ－クロロ過安息香酸または有機Ｎ－オキシド、例えば、ピリジンＮ－オキシドである。

【0211】

様々な実施形態において、本方法は、ＬＧが、脱離基の下記式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物：

【0212】

【化20】

【0213】

及び塩基をエポキシ化に効果的な条件下で反応せしめてエポキシドを生成することを含む。

【0214】

様々な実施形態において、式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物は、Ｌ－アスパラギン酸から調製される。

【0215】

様々な実施形態において、本方法は、式（ＸＶＩ）のエポキシドの単一立体異性体または立体異性体的に富化された混合物を生成することをさらに含む。

【0216】

様々な実施形態において、式（ＸＶＩ）のエポキシドの単一立体異性体または立体異性体的に富化された混合物を生成することは、エポキシドのラセミ混合物を分解することを含む。

【0217】

様々な実施形態において、本方法は、式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物の単一立体異性体または立体異性体的に富化された混合物を生成することを含む。

【0218】

様々な実施形態において、本方法は、１つ以上のさらなる合成ステップによって、式（ＸＶ）の化合物を本発明の式（ＩＦ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物に転換させることを含む。

【0219】

【化21】

【0220】

様々な実施形態において、本方法は、１つ以上のさらなる合成ステップによって、式（ＸＶ）の化合物を本発明の式（ＩＦ－１）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物に転換させることを含む。

【0221】

【化22】

【0222】

様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、Ｒ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２－に転換させることを含む。

【0223】

様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、Ｒ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基の水素原子をＬ２－Ｃ（Ｏ）－で置換するために、式（ＸＶ）の化合物をアシル化することを含む。

【0224】

様々な実施形態において、Ｘ１１は、Ｐ１０－Ｏ－またはＯＨであり；１つ以上の合成ステップは、Ｘ１１のヒドロキシル基のＰ１０または水素原子をＬ１－Ｃ（Ｏ）－で置換するために、式（ＸＶ）の化合物をアシル化すること；及び／またはＲ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基の水素原子をＬ２－Ｃ（Ｏ）－で置換するために、式（ＸＶ）の化合物をアシル化することを含む。

【0225】

別の態様において、本発明は、広範囲には式（ＸＶ）の化合物またはその塩または溶媒和物から構成される：

【0226】

【化23】

【0227】

前記式において、
Ｘ１１は、Ｌ１－Ｚ１－、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨＲ、ＨＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－、Ｐ１０－Ｏ－、Ｐ１１－Ｓ－、Ｐ１２－ＮＲ－、またはＰ１２－ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－であり；
Ｐ１０、Ｐ１１、及びＰ１２は、それぞれ独立して、保護基であり；
ｍは、２～６の整数であり、
ｎ、Ｌ１、Ｚ１、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0228】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の式（ＩＦ）のアミノ酸－またはペプチド－接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の合成における式（ＸＶ）または式（ＸＶＩ）の化合物の使用から構成される。

【0229】

別の態様において、本発明は、広範囲には、式（ＸＸ）の化合物またはその塩または溶媒和物を製造する方法から構成され、本方法は、
下記式（ＸＸＩ）の化合物：

【0230】

【化24】

【0231】

及び下記式（ＩＩＩ）のチオールを含むアミノ酸含有接合パートナーを、

【0232】

【化25】

【0233】

式（ＸＸＩ）の化合物及びアミノ酸含有接合パートナーを接合するのに効果的な条件下で反応せしめて、下記式（ＸＸ）の化合物を生成することを含む：

【0234】

【化26】

【0235】

前記式において、
Ｒｍ及びＲｎは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＬＧは、脱離基であり；
ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～７の整数であり、ｖは、０～５の整数であり、
ただし：
ｍ、ｖ、及びｗの合計は、少なくとも３であり；
ｍ及びｗの合計は、０～７であり；
ｎ、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0236】

様々な実施形態において、Ｒｍ及びＲｎは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキルまたはアリールから選択される。

【0237】

特定の実施形態において、Ｒｍは、水素、Ｃ１～６アルキルまたはアリールであり；Ｒｎは、Ｃ１～６アルキルまたはアリールである。

【0238】

様々な実施形態において、脱離基は、ハロゲン化塩（例えば、クロロ、ブロモまたはヨード）またはスルホン酸塩（例えば、トシレートまたはメシレート）である。

【0239】

様々な実施形態において、ｍ及びｖは、化合物が５～７員環状アセタールを含むものである。

【0240】

特定の実施形態において、環状アセタールは、６員環状アセタールである。

【0241】

様々な実施形態において、環状アセタールは、５員環状アセタールであり、ｗは、１超過の整数である。

【0242】

様々な実施形態において、ｍはｍ２であり、ｖは、１である。

【0243】

様々な実施形態において、Ｒ９は水素ではなく、及び／またはＡ１はＯＨではない。

【0244】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下または３個以下のアミノ酸残基を含むペプチド含有接合パートナーである。

【0245】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーのＣ－末端は、カルボキシル保護基またはカルボキサミド保護基によって保護され、及び／または、アミノ酸含有接合パートナーのＮα－アミノ基は、アミノ保護基によって保護される。

【0246】

例示的な実施形態において、Ｒ９はアミノ保護基である。

【0247】

様々な実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＮＨＰ２である。特定の実施形態において、Ａ１はＯＰ１である。

【0248】

例示的な実施形態において、Ｒ９はアミノ保護基であり、Ａ１はＯＰ１である。

【0249】

様々な実施形態において、本方法は、式（ＸＸＩ）の化合物及び式（ＩＩＩ）のアミノ酸含有接合パートナーを塩基の存在下で反応せしめることを含む。

【0250】

様々な実施形態において、塩基は、有機アミン、例えば、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリンまたはコリジンを含む。

【0251】

様々な実施形態において、式（ＸＸＩ）の環状アセタールは、単一立体異性体または立体異性体的に富化された混合物の形態で生成される。

【0252】

様々な実施形態において、本方法は、式（ＸＸ）の化合物を本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物を、１つ以上のさらなる合成ステップによって転換させることを含む。

【0253】

【化27】

【0254】

様々な実施形態において、本方法は、式（ＸＸ）の化合物を本発明の式（ＩＡ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物を、１つ以上の合成ステップによって転換させることを含む。

【0255】

【化28】

【0256】

様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、式（ＸＸ）の化合物中のアセタールを除去して、式（ＸＸＩＩＩ－１）の化合物を生成することを含む。

【0257】

【化29】

【0258】

様々な実施形態において、Ｒｍは、選択的に置換されたアリール、例えば、フェニルまたはメトキシ置換されたフェニルであり、本方法は、式（ＸＸ）の化合物中のアセタールを除去して、下記式（ＸＸＩＩＩ－２）または式（ＸＸＩＩＩ－３）の化合物を生成することを含む。

【0259】

【化30】

【0260】

【化31】

【0261】

様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、式（ＸＸＩＩＩ－１）の化合物において、Ｒ１及びＲ２が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１－に転換させるか、及び／または、Ｒｘ及びＲｙが取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２に転換させることを含む。

【0262】

様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、式（ＸＸＩＩＩ－２）の化合物において、Ｒｘ及びＲｙが取り付けられた炭素原子に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２－に転換させ、ＲｍＲｎＣＨ－基を除去してヒドロキシル基を生成し、ヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１に転換させること；または
式（ＸＸＩＩＩ－２）の化合物において、Ｒｘ及びＲｙが取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１－に転換させ、ＲｍＲｎＣＨ－基を除去してヒドロキシル基を生成し、ヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２に転換させることを含む。

【0263】

様々な実施形態において、前記ヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１－またはＬ２－Ｚ２－に転換させることは、ヒドロキシル基の水素原子をＬ１－Ｃ（Ｏ）－またはＬ２－Ｃ（Ｏ）－で置換するためのアシル化を含む。

【0264】

別の態様において、本発明は、広範囲には、式（ＸＸ）の化合物またはその塩または溶媒和物から構成される：

【0265】

【化32】

【0266】

前記式において：
Ｒｍ及びＲｎは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ｍ及びｗは、それぞれ独立して、０～７の整数であり、ｖは、０～５の整数であり、
ただし：
ｍ、ｖ、及びｗの合計は、少なくとも３であり；
ｍ及びｗの合計は、０～７であり；
ｎ、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0267】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の式（ＩＡ）のアミノ酸－またはペプチド－接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の合成における式（ＸＸ）または式（ＸＸＩ）の化合物の使用から構成される。

【0268】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の製造方法から構成され、本方法は、
炭素－炭素二重結合を含む第１の脂質含有接合パートナー、
炭素－炭素二重結合を含む第２の脂質含有接合パートナー、及び
チオールを含むアミノ酸含有接合パートナーを、
第１の脂質含有接合パートナー及び第２の脂質含有接合パートナーをアミノ酸含有接合パートナーに接合するのに効果的な条件下で、反応せしめて式（Ｉ）のアミノ酸またはペプチド－接合体またはその塩または溶媒和物を生成することを含み、
ここで、アミノ酸－またはペプチド接合体において、アミノ酸含有接合パートナーのチオールからの硫黄原子は、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合され、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子は、第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合される。

【0269】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチド含有接合パートナーであり、脂質含有接合パートナーは、ペプチド含有接合パートナーのペプチドにカップリングされる。

【0270】

いくつかの実施形態において、脂質含有接合パートナーは、アミノ酸含有接合パートナーの前記アミノ酸または１つのアミノ酸またはペプチド含有接合パートナーのペプチドに接合される。

【0271】

特定の実施形態において、脂質含有接合パートナーは、アミノ酸含有接合パートナーの前記アミノ酸または１つのアミノ酸に接合される。

【0272】

従って、別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の式（Ｉ）のペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物を製造する方法から構成され、本方法は、
炭素－炭素二重結合を含む第１の脂質含有接合パートナー、
炭素－炭素二重結合を含む第２の脂質含有接合パートナー、及び
チオールを含むペプチド含有接合パートナーを、
第１の脂質含有接合パートナー及び第２の脂質含有接合パートナーをペプチド含有接合パートナーに接合するのに効果的な条件下で、反応せしめて式（Ｉ）のペプチド接合体またはその塩または溶媒和物を生成することを含み、
ここで、ペプチド接合体において、ペプチド含有接合パートナーのチオールからの硫黄原子は、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合され、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子は、第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合される。

【0273】

様々な実施形態において、接合体は、リポペプチドであり、本方法は、リポペプチドを製造するためのものである。

【0274】

様々な実施形態において、第１及び第２の脂質含有接合パートナーは、同じ構造を有する（すなわち、第１及び第２の脂質含有接合パートナーは同じである）。

【0275】

様々な実施形態において、本方法は、チオールの硫黄原子を第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子に接合させた後、チオールが接合された炭素－炭素二重結合からの炭素原子を第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子に接合させることを含む。

【0276】

様々な実施形態において、第１の脂質含有接合パートナーは、式（ＩＩＡ）の化合物であり：

【0277】

【化33】

【0278】

第２の脂質含有接合パートナーは、式（ＩＩＢ）の化合物であり：

【0279】

【化34】

【0280】

アミノ酸含有接合パートナーは、式（ＩＩＩ）の構造を含み：

【0281】

【化35】

【0282】

前記式において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ａ１、ｋ、ｖ及びｎは、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0283】

様々な実施形態において、アミノ酸－またはペプチド接合体は、式（ＩＢ）の化合物であり：

【0284】

【化36】

【0285】

前記式において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ａ１、ｋ、ｖ及びｎは、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0286】

様々な実施形態において、脂質含有接合パートナーは、アミノ酸含有接合パートナーより化学量論的に過剰量である。

【0287】

様々な実施形態において、脂質含有接合パートナー（組み合わせる）とアミノ酸含有接合パートナーとのモル比は、少なくとも７：１である。

【0288】

様々な実施形態において、第１の脂質含有接合パートナーは、式（ＩＩＡ－１）の化合物であり：

【0289】

【化37】

【0290】

第２の脂質含有接合パートナーは、式（ＩＩＢ－１）の化合物であり：

【0291】

【化38】

【0292】

アミノ酸含有接合パートナーは、式（ＩＩＩ）の構造を含み：

【0293】

【化39】

【0294】

接合体は、式（ＩＣ）の化合物であり：

【0295】

【化40】

【0296】

前記式において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ａ１、ｋ、ｖ及びｎは、式（Ｉ）の化合物またはそのいずれかの実施形態において定義された通りである。

【0297】

様々な実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１～２１アルキルであり；ｋは、０－３、好ましくは０であり；Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ水素である。

【0298】

様々な実施形態において、Ｌ２は、Ｃ１１～２１アルキルであり；ｖは、０－３、好ましくは０であり；Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ水素である。

【0299】

様々な実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ水素であり；Ｒ９は、水素、アミノ保護基、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）またはＡ２である。

【0300】

様々な実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ水素であり；Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）であり、ここで、Ｌ３は、線状Ｃ１５アルキルまたはメチルである。

【0301】

様々な実施形態において、式（ＩＩＡ）及び式（ＩＩＢ）の化合物は、それぞれパルミチン酸ビニルである。

【0302】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、システイン、保護されたシステイン（Ｎα－アミン及び／またはカルボキシル保護されたシステインを含む）またはシステイン残基（Ｎα－アミンまたはカルボキシル保護されたシステイン残基を含む）、例えば、Ｎ－末端システイン残基（Ｎα－アミン保護されたシステイン残基を含む）を含むペプチドである。

【0303】

いくつかの実施形態において、本方法は、パルミチン酸ビニル及びＮα－アミノ保護されたシステイン、例えば、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＰ１またはＢｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＰ１を反応せしめることを含む。いくつかの実施形態において、Ｎα－アミノ保護されたシステインのカルボキシル基は保護される。

【0304】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーに脂質含有接合パートナーを接合するのに効果的な条件は、１または２以上の遊離ラジカルの生成を含む。一実施形態において、ペプチッド含有接合パートナーに、脂質含有接合パートナーを接合するのに効果的な条件は、１または２以上の遊離ラジカルの生成を含む。

【0305】

いくつかの実施形態において、１または２以上の遊離ラジカルの生成は、熱的に及び／または光化学的に開始される。特定の実施形態において、１または２以上の遊離ラジカルの生成は、遊離ラジカル開始剤の熱及び／または光化学分離により開始される。例示的な実施形態において、１または２以上の遊離ラジカルの生成は、熱開始剤の熱分解または光化学開始剤の光化学分解により開始される。

【0306】

いくつかの実施形態において、遊離ラジカル開始剤の熱分解は、適切な温度で、反応混合物を加熱することを含む。いくつかの実施形態において、反応混合物は、約４０℃～約２００℃、約５０℃～約１８０℃、約６０℃～約１５０℃、約６５℃～約１２０℃、約７０℃～約１１５℃、約７５℃～約１１０℃、または約８０℃～約１００℃の温度で加熱される。他の実施形態において、反応混合物は、少なくとも約４０℃、少なくとも約５０℃、少なくとも約６０℃、または少なくとも約６５℃の温度で加熱される。特に考慮される一実施形態において、反応混合物は、約９０℃の温度で加熱される。

【0307】

いくつかの実施形態において、遊離ラジカル開始剤の光化学分解は、好ましくは天然に存在するアミノ酸の側鎖と適合した周波数を有する紫外線による照射を含む。特に考慮される一実施形態において、紫外線は、約３６５ｎｍの周波数を有する。例示的な実施形態において、遊離ラジカル開始剤の光化学分解は、ほぼ周囲温度で実施される。

【0308】

特に考慮される一実施形態において、熱開始剤は、２，２′－アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）であり、特に考慮される一実施形態において、光開始剤は、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）である。

【0309】

特定の実施形態において、反応は、液体媒体下で行われる。一実施形態において、液体媒体は、溶媒を含む。一実施形態において、溶媒は、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，２－ジクロロエタン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。特に考慮される一実施形態において、溶媒は、ＮＭＰ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、またはそれらの混合物を含む。

【0310】

特に考慮される一実施形態において、溶媒は、ＤＭＳＯまたはＮＭＰを含む。例示的な実施形態において、溶媒は、ＮＭＰを含む。

【0311】

いくつかの実施形態において、反応は、副産物の形成を阻害し、及び／または式（Ｉ）の所望の生成化合物の収率または所望の生成化合物への転換を改善する１つ以上の添加剤の存在下で行われる。

【0312】

様々な実施形態において、１つ以上の添加剤は外来性チオール、酸、オルガノシラン、またはそれらの任意の２つ以上の組み合わせである。

【0313】

いくつかの例示的な実施形態において、外来性または外因性チオールは、還元されたグルタチオン（ＧＳＨ）、２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオール（ＤＯＤＴ）、１，４－ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、タンパク質及び立体障害チオールからなる群から選択される。特に考慮される実施形態において、外来性または外因性チオールは、ＤＴＴである。いくつかの実施形態において、外来性または外因性チオールは、立体障害チオール、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタンである。

【0314】

様々な実施形態において、酸添加剤は、強い無機または有機酸である。様々な実施形態において、酸は、強い有機酸である。様々な実施形態において、酸は、ＴＦＡである。

【0315】

様々な実施形態において、オルガノシランは、トリアルキルシラン、例えば、ＴＩＰＳである。

【0316】

いくつかの実施形態において、１つ以上の添加剤は、ＴＦＡ、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタン、ＴＩＰＳ及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。

【0317】

特定の実施形態において、１つ以上の添加剤は、酸及び外来性チオール、例えば、ＴＦＡ及びｔｅｒｔ－ブチルメルカブタンの組み合わせである。

【0318】

他の実施形態において、１つ以上の添加剤は、酸及びオルガノシラン、例えばＴＦＡ及びＴＩＰＳの組み合わせである。

【0319】

他の実施形態において、１つ以上の添加剤は、外来性チオールとオルガノシラン及び選択的に、酸との組み合わせ、例えば、ｔ－ＢｕＳＨとＴＩＰＳ、及びＴＦＡの組み合わせである。

【0320】

いくつかの実施形態において、反応は、約５分～約４８時間、５分～約２４時間、約５分～約１２時間、約５分～約６時間、約５分～約３時間、５分～約２時間または約５分～約１時間の期間にわたって実施される。例示的な実施形態において、反応は、約５分～約１時間の期間にわたって実施される。いくつかの実施形態において、反応は、接合パートナーの１つが少なくとも約７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９９％または１００％消費されるまで実施される。

【0321】

特定の実施形態において、反応は、実質的に酸素を含まない条件下で実施される。

【0322】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチド含有接合パートナーである。

【0323】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、エピトープを含む。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、エピトープ、例えば、ペプチドエピトープを含む。

【0324】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、２つ以上のエピトープを含む。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、２つ以上のエピトープを含む。

【0325】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチドからなる。

【0326】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチドエピトープを含むペプチドからなる。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、ペプチドからなる。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、ペプチドエピトープを含むペプチドからなる。

【0327】

いくつかの実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、接合パートナーの前記アミノ酸または１つのアミノ酸に結合されたエピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、ペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合されたエピトープを含む。いくつかの実施形態において、エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合される。

【0328】

いくつかの実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、リンカー基を介して接合パートナーの前記アミノ酸または１つのアミノ酸に結合されたペプチドエピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、リンカー基を介してペプチドに結合されたペプチドエピトープを含む。

【0329】

いくつかの実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチド含有接合パートナーは、抗原性ペプチドを含む。

【0330】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチド接合体は、合成ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、合成ペプチドは、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を含む方法によって調製されたペプチドである。

【0331】

様々な実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドのアミノ酸にカップリングさせてペプチド接合体を生成することを含む。

【0332】

様々な実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドのアミノ酸にカップリングさせてペプチド接合体を生成することを含む。

【0333】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、エピトープを含む。様々な実施形態において、エピトープは、ペプチドエピトープである。

【0334】

いくつかの実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせてペプチド接合体を生成することをさらに含む。

【0335】

いくつかの実施形態において、ペプチドをカップリングさせることは、１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドを個別にカップリングさせることを含む。

【0336】

いくつかの実施形態において、本方法は、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド接合体を生成するために、アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることをさらに含む。

【0337】

いくつかの実施形態において、本方法は、リンカー基を介して脂質部分が接合されたアミノ酸に結合されたペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることをさらに含む。

【0338】

いくつかの実施形態において、脂質部分が接合されたペプチド接合体のアミノ酸は、Ｎ－末端アミノ酸残基である。

【0339】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることをさらに含む。

【0340】

いくつかの実施形態において、本方法は、エピトープをアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸にカップリングさせることをさらに含む。

【0341】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープをアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸にカップリングさせることをさらに含む。

【0342】

いくつかの実施形態において、エピトープは、リンカー基を介してカップリングされるか、結合される。

【0343】

いくつかの実施形態において、本方法は、エピトープをペプチド接合体のペプチドにカップリングさせることをさらに含む。

【0344】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープをペプチド接合体のペプチドにカップリングさせることをさらに含む。

【0345】

いくつかの実施形態において、エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合される。

【0346】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、アミノ酸、例えば、システイン（Ｎα－アミノ及び／またはＣ－末端保護されたシステインを含む）からなる。

【0347】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーのＣ－末端は、保護基によって保護され、及び／または、アミノ酸含有接合パートナーのＮα－アミノ基は、保護基によって保護される。

【0348】

様々な実施形態において、アミノ酸のＣ－末端のカルボキシル基は、カルボキシル保護基またはカルボキサミド保護基によって保護され、及び／または、アミノ酸のＮα－アミノ基は、アミノ保護基によって保護される。

【0349】

様々な実施形態において、アミノ酸のＣ－末端のカルボキシル基は、カルボキシル保護基によって保護され、及び／または、アミノ酸のＮα－アミノ基は、アミノ保護基によって保護される。

【0350】

いくつかの実施形態において、ペプチドのＣ－末端のカルボキシル基は、カルボキシル保護基によって保護され、及び／または、ペプチドのＮα－アミノ基は、アミノ保護基によって保護される。

【0351】

いくつかの実施形態において、チオールを含むアミノ酸残基が末端アミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、チオールを含むアミノ酸残基がＮ－末端残基である。

【0352】

いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＲ９は、アミノ酸またはペプチド以外の基であり、本方法は、Ａ１及び／またはＲ９をアミノ酸またはペプチドで置換するために、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることを含む。

【0353】

いくつかの実施形態において、Ａ１は、アミノ酸またはペプチド以外の基であり、本方法は、Ａ１をアミノ酸またはペプチドで置換するために、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることを含む。

【0354】

いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２またはＮＨＰ２であり、及び／または、Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）であり、本方法は、Ａ１及び／またはＲ９をアミノ酸またはペプチドで置換するために、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることをさらに含む。

【0355】

いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＨ、ＯＰ１、ＮＨ_２またはＮＨＰ２であり、Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３－Ｃ（Ｏ）であり、本方法は、Ａ１及び／またはＲ９をアミノ酸またはペプチドで置換するために、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることを含む。

【0356】

いくつかの実施形態において、ペプチドをカップリングさせることは、１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドを個別にカップリングさせることを含む。

【0357】

いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることは、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成する。いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドをカップリングさせることは、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド接合体を生成する。いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドのカップリングは、リンカー基を介して脂質部分が接合されたアミノ酸に結合されたペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成する。

【0358】

いくつかの実施形態において、脂質部分が接合されるチオールを含むアミノ酸のＮα－アミノ基は、アシル化される。いくつかの実施形態において、チオールを含む接合パートナーを含むアミノ酸中のＲ９は、Ｌ３－Ｃ（Ｏ）－である。

【0359】

特定の実施形態において、前記方法は、脂質部分が接合されるアミノ酸接合体のアミノ酸のＮα－アミノ基またはペプチド接合体のアミノ酸残基をアシル化することをさらに含む。特定の実施形態において、前記方法は、Ｎα－アミノ基をアセチルなどのＣ２～２０脂肪酸でアシル化することをさらに含む。

【0360】

いくつかの実施形態において、Ｒ９は、水素またはアミノ保護基であり、前記方法は、Ｒ９での水素またはアミノ保護基をＬ３－Ｃ（Ｏ）で置換するために、アミノ酸接合体またはペプチド接合体をアシル化することをさらに含む。

【0361】

いくつかの実施形態において、Ｒ９でのアミノ保護基をＬ３－Ｃ（Ｏ）で置換するために、アミノ酸接合体またはペプチド接合体をアシル化することは、Ｒ９でアミノ保護基を除去して、Ｒ９で水素を生成することを含む。

【0362】

特定の実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーの前記アミノ酸またはは1つのアミノ酸、チオールを含む。特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸残基は、チオールを含む。

【0363】

特定の実施形態において、チオールは、システイン残基のチオールである。

【0364】

特定の実施形態において、システイン残基は、末端残基である。特定の実施形態において、システイン残基は、Ｎ－末端残基である。

【0365】

いくつかの実施形態において、システイン残基のアミノ酸は、アシル化される。

【0366】

一実施形態において、アミノ酸は、Ｃ２～２０脂肪酸でアシル化される。

【0367】

１つ例示的な実施形態において、Ｃ２～２０脂肪酸は、アセチルまたはパルミトイルである。別の例示的な実施形態において、Ｃ２～２０脂肪酸は、アセチルである。

【0368】

いくつかの実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチド接合体は、８～２２０、８～２００、８～１７５、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～９０、８～８０、８～７０、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、８～２０、または８～１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチッド含有接合パートナーは、８～２２０、８～２００、８～１７５、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～９０、８～８０、８～７０、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、８～２０、または８～１５個のアミノ酸を含む。

【0369】

１つの例示的な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチッド接合体は、８～６０個のアミノ酸を含むペプチドを含む。１つの例示的な実施形態において、ペブチドは、８～６０個のアミノ酸を含む。

【0370】

他の実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチッド接合体は、５～２２０、８～２２０、５～１７５、８～１７５、８～１５０、１０～１５０、１５～１２５、２０～１００、２０～８０、２０～６０、２５～１００、２５～８０、２５～６０、３０～８０、４０～６０、または５０～６０個のアミノ酸を含む。他の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、５～２２０、８～２２０、５～１７５、８～１７５、８～１５０、１０～１５０、１５～１２５、２０～１００、２０～８０、２０～６０、２５～１００、２５～８０、２５～６０、３０～８０、４０～６０、または５０～６０個のアミノ酸を含む。

【0371】

他の実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチド接合体は、５～１５０、５～１２５、５～１００、５～７５、５～６０、５～５０、５～４０、５～３０、５～２５、５～２０、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～７５、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、または８～２０個のアミノ酸を含む。他の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、５～１５０、５～１２５、５～１００、５～７５、５～６０、５～５０、５～４０、５～３０、５～２５、５～２０、８～１５０、８～１２５、８～１００、８～７５、８～６０、８～５０、８～４０、８～３０、８～２５、または８～２０個のアミノ酸を含む。

【0372】

様々な実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、短いペプチドである。いくつかの実施形態において、短いペプチドは、１０、９、８、７、６、５、４、または３未満のアミノ酸を含む。

【0373】

一実施形態において、アミノ酸含有接合パートナー及び／またはペプチド接合体は、１つ以上の可溶化基を含む。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、１つ以上の可溶化基を含む。

【0374】

特定の実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖に２つ以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列である。特定の実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖に２つ以上の連続する親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である。一実施形態において、親水性アミノ酸残基は、カチオン性アミノ酸残基である。一実施形態において、カチオン性アミノ酸残基は、アルギニンまたはリシン残基である。の特に考慮される一実施形態において、カチオン性アミノ酸残基は、リシン残基である。一実施形態において、配列は、２～２０、２～１５、２～１０、３～７または３～５個のアミノ酸を含む。一実施形態において、可溶化基は、トリ－、テトラ－、ペンタ－、ヘキサ－またはヘブタ－リシン配列である。特に考慮される一実施形態において、可溶化基は、テトラリシン配列である。

【0375】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナーは、脂質部分が接合されるアミノ酸残基に隣接したセリン残基を含む。特に考慮される実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、脂質部分が接合されるアミノ酸残基に隣接したセリン残基を含む。例示的な実施形態において、脂質部分が接合されるアミノ酸残基は、Ｎ－末端である。特に考慮される実施形態において、ペプチドは、セリン残基に隣接する２つ以上の親水性アミノ酸残基の連続配列をさらに含む。

【0376】

特定の実施形態において、ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナーは、セリン残基に隣接する２つ以上の親水性アミノ酸残基の連続配列を含む。

【0377】

特定の実施形態において、ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナーは、天然に存在するアミノ酸のみを含む。特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、天然に存在するアミノ酸のみを含む。他の実施形態において、ペプチド中の７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上のアミノ酸残基が、天然に存在するアミノ酸である。

【0378】

他の実施形態において、ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナー中の７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上のアミノ酸残基が、天然に存在するアミノ酸である。

【0379】

例示的な実施形態において、ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナーは、ペプチドエピトープを含むペプチドを含む。例示的な実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、１つ以上のペプチドエピトープを含む。

【0380】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープを含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。様々な実施形態において、１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープは、ＭＨＣＩエピトープである。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号７６～１０１のいずれか１つからなる群から選択される１つ以上のＥＢＶ ＬＭＰ２エピトープを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるか、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。

【0381】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなる組換えペプチドを含む。様々な実施形態において、組換えペプチドは、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるか、配列番号１～７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなる。

【0382】

例示的な一実施形態において、ペプチドエピトープは、ＮＹ－ＥＳＯ－１に由来する。特に考慮される一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つからの８個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0383】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、１つ以上のＮＹ－ＥＳＯ－１エピトープを含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。様々な実施形態において、１つ以上のＮＹ－ＥＳＯ－１エピトープは、ＭＨＣＩエピトープである。様々な実施形態において、ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つからの８個以上の連続するアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるか、配列番号：１０６、１０７、１０８、１１３、１１４、１１９、１２０及び１２１のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続するアミノ酸を含むか、それらからなるペプチドを含む。

【0384】

特に考慮される一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのアミノ酸の反応性官能基は、保護されていない。

【0385】

特定の実施形態において、ペプチド接合体の１つ以上のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基は、保護されていない。

【0386】

特定の実施形態において、アミノ酸接合体のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基は、保護されてない。

【0387】

特定の実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーの１つ以上のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基は保護されない。

【0388】

特定の実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチドを含み、ペプチドのアミノ酸の測鎖の反応性官能基は、保護されておらず、反応されるチオール以外の任意のチオールは、例外である。

【0389】

特に考慮される特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸の反応性官能基は、保護されていない。

【0390】

特に考慮される特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸の反応性官能基は、保護されておらず、反応されるチオール以外の任意のチオールは、例外である。

【0391】

当業者は、本明細書に記載されたように、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドを本明細書に記載されたような種々の他の部分に選択的に置換するか、変形するか、結合して、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーを生成することができることを理解するであろう。

【0392】

いくつかの実施形態において、本方法は、
ペプチドのアミノ酸配列を固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成し；
ペプチドエピトープを含むペプチド接合体、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド接合体またはリンカー基を介して脂質部分が接合されたアミノ酸に結合されたペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、ＳＰＰＳによってアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸を固相結合ペプチドにカップリングさせることを含む。

【0393】

いくつかの実施形態において、本方法は、
脂質含有接合パートナー及びアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめてアミノ酸またはペプチド接合体を生成し；
ペプチドのアミノ酸配列を固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成し；
ペプチドエピトープを含むペプチド接合体、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド接合体またはリンカー基を介して脂質部分が接合されたアミノ酸に結合されたペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、ＳＰＰＳによってアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸を固相結合ペプチドにカップリングさせることを含む。

【0394】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチド接合体のいずれか１つの脂質部分が接合されたアミノ酸またはアミノ酸接合体のアミノ酸のＮα－アミノ基をアシル化させることをさらに含む。

【0395】

いくつかの実施形態において、本方法は、固相支持体からペプチド接合体を切断することを含む。

【0396】

いくつかの実施形態において、本方法は、
ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列を固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成し；及び
本明細書に記載された実施形態のいずれかに従って、脂質含有接合パートナー及びペプチド含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0397】

例示的な実施形態において、本方法は、
ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳによって合成し、
ペプチドを固相支持体から切断し；及び
本明細書に記載された実施形態のいずれかに従って、脂質含有接合パートナー及びペプチド含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0398】

一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、脂質含有接合パートナーとの反応の前に精製されていない。

【0399】

いくつかの実施形態において、１つ以上の保護基は、ペプチドを固相支持体から切断時に除去される。特定の実施形態において、ペプチド内に存在するすべての保護基が除去される。

【0400】

一実施形態において、ＳＰＰＳは、Ｆｍｏｃ－ＳＰＰＳである。

【0401】

いくつかの実施形態において、反応されるチオールを担持するペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸残基は、Ｎ－末端アミノ酸残基であり、本方法は、ペプチドを固相から切断する前に、Ｎ－末端アミノ基をアシル化することを含む。特に考慮される実施形態において、Ｎ－末端残基は、システイン残基である。

【0402】

一実施形態において、本方法は、ペプチド接合体を反応媒体から分離し、及び選択的には、ペプチド接合体を精製することをさらに含む。

【0403】

別の態様において、本発明は、広範囲には、ペプチド接合体の製造方法から構成され、本方法は、
本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその塩または溶媒和物を生成し、及び
アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドのアミノ酸にカップリングさせてペプチド接合体を生成することを含む。

【0404】

様々な実施形態において、生成物ペプチド接合体は、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。

【0405】

様々な実施形態において、アミノ酸接合体のアミノ酸は、アミノ酸のα－炭素におけるエピマー化を低滅させる条件下でカップリングされる。様々な実施形態において、条件は、約３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、３、２または１モル％未満のアミノ酸がエピマー化されることである。様々な実施形態において、エピマー化を低滅させる条件は、カップリング試薬としてＰｙＢＯＰの使用を含む。様々な実施形態において、条件は、ＰｙＢＯＰ及び２，４，６－トリメチルピリジンの使用を含む。

【0406】

別の態様において、本発明は、広範囲には、免疫原性ペプチド－接合体の合成において、本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド－接合体またはその塩または溶媒和物の使用から構成される。

【0407】

様々な実施形態において、免疫原性ペプチド接合体は、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。

【0408】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の方法によって生成された本発明のアミノ酸－接合体またはペプチド接合体から構成される。

【0409】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の方法によって製造されたペプチド接合体から構成される。

【0410】

別の態様において、本発明は、広範囲には、本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその塩または溶媒和物を含む組成物から構成される。

【0411】

様々な実施形態において、前記組成物は、単離されるか、純粋か、精製されるか、実質的に精製された式（Ｉ）の化合物またはその塩または溶媒和物を含む。

【0412】

様々な実施形態において、前記組成物は、少なくとも約６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９７、９８または９９重量％の式（Ｉ）の化合物またはその塩または溶媒和物を含む。

【0413】

様々な実施形態において、前記組成物は、式（Ｉ）の化合物以外のアミノ酸－またはペプチド含有化合物を含有しないか、実質的に含有しない。

【0414】

別の態様において、本発明は、広範囲には、有効量の本発明の式（Ｉ）のペプチド接合体化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物から構成される。

【0415】

様々な実施形態において、特許請求の範囲の薬学的組成物は、有効量の本発明の式（Ｉ）の１つ以上のペプチド接合体化合物を含む。

【0416】

一実施形態において、前記薬学的組成物は、免疫原性組成物である。

【0417】

一実施形態において、前記薬学的組成物は外因性アジュバントを含まない。

【0418】

いくつかの実施形態において、前記薬学的組成物は、ワクチンである。

【0419】

一実施形態において、前記薬学的組成物は、有効量の本発明の２つ以上のペプチド接合体を含み、例えば、薬学的組成物は、有効量の本発明の３個以上のペプチド接合体を含む。

【0420】

一実施形態において、前記薬学的組成物は、本明細書に記載された１つ以上のペプチドと共に、有効量の本発明の１つ以上のペプチド接合体、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む。例えば、前記薬学的組成物は、有効量の本発明の２つ以上のペプチド接合体、及び本明細書に記載された１つ以上のペプチド、または有効量の本発明の１つ以上のペプチド接合体及び本明細書に記載された２つ以上のペプチドを含む。

【0421】

別の態様において、本発明は、広範囲には、対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発する方法として、有効量の本発明の式（Ｉ）１つ以上のペプチド接合体化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物または有効量の本発明の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法から構成される。

【0422】

別の態様において、本発明は、広範囲には、対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発するための薬剤の製造において、本発明の式（Ｉ）の１つ以上のペプチド接合体化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物または本発明の薬学的組成物の使用から構成される。

【0423】

別の態様において、本発明は、広範囲には、対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発するための本発明の式（Ｉ）の１つ以上のペプチド接合体化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物または本発明の薬学的組成物から構成される。

【0424】

別の態様において、本発明は、広範囲には、対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発するための本発明の式（Ｉ）の１つ以上のペプチド接合体化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物または本発明の薬学的組成物の使用から構成される。

【0425】

様々な実施形態において、本方法、用途、１つ以上の化合物または薬学的組成物は、対象に免疫応答を誘発するためのものである。

【0426】

様々な実施形態において、本方法、用途、１つ以上の化合物または薬学的組成物は、対象にワクチンを接種するためのものである。

【0427】

いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載された１つ以上のペプチド及び本発明の１つ以上のペプチド接合体または本発明の２つ以上のペプチド接合体、例えば、１つ以上のペプチド接合体と組み合わせた１つ以上のペプチドを対象に投与することを含む。

【0428】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載された１つ以上のペプチド及び本発明の１つ以上のペプチド接合体または本発明の２つ以上のペプチド接合体、例えば、１つ以上のペプチド接合体と組み合わせた１つ以上のペプチドは、対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発するために、または対象にワクチンを接種するか、免疫応答を誘発するための薬剤の製造に使用される。

【0429】

いくつかの実施形態において、２つ以上のペプチド接合体が使用されるか、投与される。

【0430】

いくつかの実施形態において、２つ以上のペプチド接合体または１つ以上のペプチド及び１つ以上のペプチド接合体は、同時に、順次にまたは個別に使用されるか、投与される。

【0431】

不斉中心は、本明細書に記載された化合物に存在することができる。不斉中心は、キラル炭素原子における３次元空間において置換基の立体配置に依存して、（Ｒ）または（Ｓ）として指定され得る。鏡像異性体的に富化され、ジアステレオマー的に富化された立体化学的異性体の混合物を含み、ジアステレオマー、鏡像異性体及びエピマー形態でだけではなく、ｄ－異性体及びｌ－異性体及びそれらの混合物を含むすべての立体化学的異性体形態の化合物が本発明の範囲内にある。

【0432】

個々の鏡像異性体は、商業的に利用可能な高光学純度の出発物質から、または鏡像異性体混合物を調製し、混合物を個々の鏡像異性体に分割することにより、合成的に調製され得る。分割方法は、鏡像異性体混合物のジアステレオマーの混合物への転換、及び、例えば、再結晶化またはクロマトグラフィー、及び当業界において公知されたいずれかの他の適切な方法による、ジアステレオマーの分離を含む。定義された立体化学の出発物質は、商業的に利用可能であるか、当業界において広く公知された技術によって製造し、必要なら、分割することができる。

【0433】

本明細書に記載された化合物はまた、ｃｉｓ、ｔｒａｎｓ、ｓｙｎ、ａｎｔｉ、ｅｎｔｇｅｇｅｎ（Ｅ）及びｚｕｓａｍｍｅｎ（Ｚ）異性体を含む立体配座または幾何異性体として存在することができる。そのようなすべての異性体及びそれらのいずれかの混合物は、本発明の範囲内にある。

【0434】

また、記載された化合物のいずれかの互変異性体またはそれらの混合物が本発明の範囲内にある。当業者なら理解できるように、非常に様々な官能基及び他の構造が互変異性体を示すことができる。例としては、これらに限定されるものではないが、ケト／エノール、イミン／エナミン、及びチオケトン／エンチオール互変異性体を含む。

【0435】

本明細書に記載された化合物はまた、アイソトポログ（ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅ）及びアイソトポーマー（ｉｓｏｔｏｐｏｍｅｒ）としても存在することができ、ここで、化合物中の１つ以上の原子が、異なるアイソトープに置換される。適切なアイソトープは、例えば、^１Ｈ、^２Ｈ（Ｄ）、^３Ｈ（Ｔ）、^１２Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１６Ｏ及び^１８Ｏを含む。本明細書に記載された化合物に、そのようなアイソトープを組み込むための手順は、当業者に明らかであろう。本明細書に記載された化合物のアイソトポログ及びアイソトポーマーもまた、本発明の範囲内である。

【0436】

また、薬学的に許容可能な塩を含み、本明細書に記載された化合物の塩も本発明の範囲内である。そのような塩は、塩基性窒素含有基の酸付加塩、塩基付加塩及び四級塩を含む。

【0437】

酸付加塩は、遊離塩基形態の化合物を無機または有機酸と反応せしめることにより、調製され得る。無機酸の例としては、これらに限定されるものではないが、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、及びリン酸を含む。有機酸の例としては、これらに限定されるものではないが、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、スルファニル酸、アジピン酸、酪酸、及びピバル酸を含む。

【0438】

塩基付加塩は、遊離酸形態の化合物を無機または有機塩基と反応せしめることにより調製され得る。無機塩基付加塩の例は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、及び他の生理学的に許容可能な金属塩、例えば、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムまたは亜鉛塩を含む。有機塩基付加塩の例は、アミン塩、例えば、トリメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン及びエチレンジアマンの塩を含む。

【0439】

化合物中の塩基性窒素含有基の四級塩は、例えば、化合物を、塩化、臭化及びヨウ化メチル、エチル、プロピル及びブチルのようなハルロゲン化アルキル、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル及びジアミルのような硫酸ジアルキルなどと反応せしめることにより調製され得る。

【0440】

本明細書に記載された化合物は、種々の溶媒によって、溶媒和物を形成するか、それとして存在することができる。溶媒が水である場合、溶媒和物は、水和物、例えば、１水和物、２水和物または３水和物と呼ぶことができる。本明細書に記載された化合物のすべての溶媒和物形態及び非溶媒和形態は、本発明の範囲内である。

【0441】

本明細書の式に使用された一般化学用語は、それらの通常の意味を有する。

【0442】

用語“脂肪族”は、飽和及び不飽和、非芳香族、直鎖、分枝鎖、非環式及び環式炭化水素を含むことが意図される。当業者は、脂肪族基が、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、及びシクロアルケニル基、及びそれらのハイブリッド、例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル及び（シクロアルキル）アルケニル基を含むことを理解するであろう。様々な実施形態において、脂肪族基は、１～１２、１～８、１～６または１～４個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、５～２１、９～２１または１１～２１個の炭素原子、例えば、１１、１３、１５、１７または１９個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、飽和されたものである。

【0443】

用語“ヘテロ脂肪族”は、１つ以上の鎖及び／または環炭素原子がヘテロ原子、好ましくは酸素、窒素及び硫黄から選択されたヘテロ原子によって独立して置換された脂肪族基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、ヘテロ脂肪族は、飽和されたものである。ヘテロ脂肪族基の例は、直鎖または分枝鎖、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル及びヘテロアルキニル基を含む。

【0444】

用語“アルキル”は、飽和された直鎖及び分枝鎖炭化水素基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１～１２、１～１０、１～８、１～６または１～４個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アルキル基は、５～２１、９～２１または１１～２１個の炭素原子、例えば、１１、１３、１５、１７または１９個の炭素原子を有する。直鎖アルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル及びｎ－オクチルを含む。分枝鎖アルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ネオペンチル、イソペンチル及び２，２－ジメチルプロピルを含む。

【0445】

用語“アルケニル”は、２つの炭素原子の間に少なくとも１つの二重結合を有する直鎖及び分枝鎖のアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２～１２、２～１０、２～８、２～６または２～４個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、５～２１、９～２１または１１～２１個の炭素原子、例えば、１１、１３、１５、１７または１９個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、１、２または３個の炭素－炭素二重結合を有する。アルケニル基の例は、これらに限定されるものではないが、ビニル、アリル、－ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）、－ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ_２、及び－Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ（ＣＨ_３）を含む。

【0446】

用語“アルキニル”は、２つの炭素原子の間に少なくとも１つの三重結合を有する直鎖及び分枝鎖のアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２～１２、２～１０、２～８、２～６または２～４個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、１、２または３個の炭素－炭素三重結合を有する。例としては、これらに限定されるものではないが、―Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ_３及び－Ｃ≡ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２を含む。

【0447】

用語“ヘテロアルキル”は、１つ以上の鎖内炭素原子がヘテロ原子、好ましくは酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子で置換されたアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、ヘテロアルキルは、飽和されたものである。ヘテロアルキル基は、例えば、ポリエチレングリコール基及びポリエチレングリコールエーテル基等を含む。

【0448】

用語“シクロアルキル”は、単環式、二環式または三環式のアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、環（複数）内に３～１２、３～１０、３～８、３～６、３～５個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、５または６個の環炭素原子を有する。単環式シクロアルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含む。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３～８、３～７、３～６、４～６、３～５または４～５個の環炭素原子を有する。二環系及び三環系は、架橋、スピロ及び融合シクロアルキル環系を含む。二環式及び三環式シクロアルキル系は、これらに限定されるものではないが、ビシクロ［２．１．１］ヘキサニル、ビシクロ［２．２．１］ヘブタニル、アダマンチル及びデカリニルを含む。

【0449】

用語“シクロアルケニル”は、２つの炭素原子の間に少なくとも１つの二重結合を有する非芳香族シクロアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、シクロアルケニル基は、１、２または３個の二重結合を有する。いくつかの実施形態において、シクロアルケニル基は、環（複数）内に４～１４、５～１４、５～１０、５～８または５～６個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、シクロアルケニル基は、５、６、７または８個の環炭素原子を有する。シクロアルケニル基の例は、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル及びヘキサジエニルを含む。

【0450】

用語“アリール”は、任意の環ヘテロ原子を含有しない環状芳香族炭化水素基含むことが意図される。アリール基は、単環式、二環式または三環式の環系を含む。アリール基の例は、これらに限定されるものではないが、フェニル、アズレニル、ヘプタレニル、ビフェニル、フルオレニル、フェナントレニル、アントラセニル、インデニル、インダニル、ペンタレニル及びナフチルを含む。いくつかの実施形態において、アリール基は、環（複数）内に６～１４、６～１２または６～１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アリール基は、フェニルまたはナフチルである。アリール基は、芳香族－脂肪族融合環系を含む。例としては、これらに限定されるものではないが、インダニル及びテトラヒドロナフチルを含む。

【0451】

用語“ヘテロシクリル”は、３個以上の環原子を含有し、そのうち１つ以上がヘテロ原子である非芳香族環系を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、ヘテロ原子は、窒素、酸素または硫黄である。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、１、２、３または４個のヘテロ原子を含む。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、３～１６、３～１４、３～１２、３～１０、３～８または３～６個の環原子を有する単環式、二環式及び三環式環を含む。ヘテロシクリル基は、部分的不飽和及び飽和環系、例えば、イミダゾリニル及びイミダゾリジニルを含む。ヘテロシクリル基は、ヘテロ原子を含有する融合及び架橋環系、例えば、キヌクリジルを含む。ヘテロシクリル基は、これらに限定されるものではないが、アゼリジニル、アゼチジニル、アゼパニル、ジアゼパニル、１，３－ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリジニルおよびトリチアニルを含む。

【0452】

用語“ヘテロアリール”は、５個以上の環原子を含有し、そのうち１つ以上がヘテロ原子である芳香族環系を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、ヘテロ原子は、窒素、酸素または硫黄である。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、５～１６、５～１４、５～１２、５～１０、５～８または５～６個の環原子を有する単環式、二環式及び三環式環系を含む。ヘテロアリール基は、これらに限定されるものではないが、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、フラニル、ベンゾフラニル、インドリル、アザインドリル（ピロロピリジニル）、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピラゾロピリジニル、トリアゾロピリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、イミダゾピリジニル、イソオキサゾロピリジニルキザニリル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、キノキサリニル、及びキナゾリニルを含む。ヘテロアリール基は、すべての環が芳香族である融合環系、例えば、インドリル、及び環の１つのみが芳香族である融合環系、例えば、２，３－ジヒドロインドリルを含む。

【0453】

用語“ハロ”または“ハロゲン”は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含むことが意図される。

【0454】

用語“ヘテロ原子”は、酸素、窒素、硫黄またはリンを含むことが考慮される。いくつかの実施形態において、ヘテロ原子は、酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される。

【0455】

本明細書で使用されるように、用語“置換された”は、示される基の１つ以上の水素原子が独立して選択された１つ以上の適切な置換基によって置換されたことを意味することが意図され、ただし、置換基または置換基が取り付けられた各原子の正常の原子価は、超過されず、置換は、安定した化合物を生成する。様々な実施形態において、本明細書に記載された化合物内の選択的置換基は、これらに限定されるものではないが、ハロ、ＣＮ、ＮＯ_２、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＲ１０、ＮＲ１０Ｒ２０、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１０、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ２０、ＳＯ_２Ｒ１０、ＯＲ１０、ＳＲ１０、Ｓ（Ｏ）Ｒ１０、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０及びＣ１～６脂肪族を含み；ここで、Ｒ１０及びＲ２０は、それぞれ独立して、Ｃ１～６脂肪族、例えば、Ｃ１～６アルキルである。

【0456】

本明細書で使用されるような用語“カルボキシル保護基”は、容易に除去され、カルボキシル基のＯＨ基を生成させることができ、合成手順の間、所望しない反応に対してカルボキシル基を保護する基を意味する。このような保護基は、文献［Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ． （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９９） 及び ‘Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ－Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ’ ｂｙ Ｆｅｒｎａｎｄｏ Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ （ｗｉｔｈ Ａｌｂｅｒｔ Ｉｓｉｄｒｏ－Ｌｌｏｂｅｔ ａｎｄ Ｍｅｒｃｅｄｅｓ Ａｌｖａｒｅｚ） Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００９ （１０９） ２４５５－２５０４］に記載されている。例としては、これらに限定されるものではないが、アルキル及びシリル基、例えば、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、メトキシメチル、２，２，２－卜リクロロエチル、ベンジル、ジフェニルメチル、トリメチルシリル及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルなどを含む。

【0457】

本明細書で使用されるような用語“アミン保護基”は、容易に除去され、アミン基のＮＨ_２基を生成することができ、合成手順の間、所望しない反応に対してアミン基を保護する基を意味する。このような保護基は、文献［Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ． （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９９） 及び ‘Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ－Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ’ ｂｙ Ｆｅｒｎａｎｄｏ Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ （ｗｉｔｈ Ａｌｂｅｒｔ Ｉｓｉｄｒｏ－Ｌｌｏｂｅｔ ａｎｄ Ｍｅｒｃｅｄｅｓ Ａｌｖａｒｅｚ） Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００９ （１０９） ２４５５－２５０４］に記載されている。例としては、これらに限定されるものではないが、アシル及びアシルオキシ基、例えば、アセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、Ｏ－ニトロフェニルアセチル、Ｏ－ニトロフェノキシアセチル、トリフルオロアセチル、アセトアセチル、４－クロロブチリル、イソブチリル、ピコリノイル、アミノカプロイル、ベンゾイル、メトキシカルボニル、９－フルオレニルメトキシカルボニル、２，２，２－トリフルオロエトキシカルボニル、２－トリメチルシリルエトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－ニトロベンジルカルボニル、２，４－ジクロロベンジルオキシカルボニルなどを含む。さらなる例としては、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、ノシル（ｏ－またはｐ－ニトロフェニルスルホニル）、Ｂｐｏｃ（２－（４－ビフェニル）イソプロポキシカルボニル）及びＤｄｅ（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソヘキシリデン）エチル）を含む。

【0458】

本明細書で使用されるような用語“カルボキサミド保護基”は、容易に除去され、カルボキサミド基のＮＨ_２基を生成することができ、合成手順の間、所望しない反応に対してカルボキサミド基を保護する基を意味する。このような保護基は、文献［Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ． （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９９） 及び ‘Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ－Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ’ ｂｙ Ｆｅｒｎａｎｄｏ Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ （ｗｉｔｈ Ａｌｂｅｒｔ Ｉｓｉｄｒｏ－Ｌｌｏｂｅｔ ａｎｄ Ｍｅｒｃｅｄｅｓ Ａｌｖａｒｅｚ） Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００９ （１０９） ２４５５－２５０４］に記載されている。例としては、これらに限定されるものではないが、９－キサンテニル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、メチルトリチル（Ｍｔｔ）、シクロプロピルジメチルカルボニル（Ｃｐｄ）及びジメチルシクロプロピルメチル（Ｄｍｃｐ）を含む。

【0459】

本明細書で使用されるように、用語“及び／または”は、“及び”または“または”またはその両方を意味する。

【0460】

名詞の後の用語“（複数）”は、単数形及び複数形、またはその両方を考慮する。

【0461】

本明細書で使用されるような用語“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”は、“少なくとも部分的に～からなる”ことを意味する。本明細書において、用語“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）”を含む各文を解釈する場合、その用語の前の特徴または特徴以外の特徴がまた存在することができる。“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）”及び“含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）”のような関連する用語は、同じ方式で解釈されるべきである。“含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）”も同じ方式で解釈されるべきである。

【0462】

本発明はまた、広範囲には、個々にまたは集合的に、本出願の明細書に言及されるか、示される部分、要素及び特徴で、前記部分、要素または特徴のうちの２つ以上の任意のまたはすべての組み合わせで構成されるものと言及されることができ、本発明が関連する技術分野における既知の等価物を有する特定の整数が本明細書に明示された場合、そのような既知の等価物は、個別に記載されたかのように、本明細書に組み込まれるものと見なされる。

【0463】

本明細書に記述された数の範囲（例えば、１～１０）に対する参照はまた、その範囲内のすべての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９及び１０）、及び、また、その範囲内の有理数の任意の範囲（例えば、２～８、１．５～５．５及び３．１～４．７）に対する参照を含み、従って、本明細書に明示的に記述されたすべての範囲のすべての下位範囲は、本明細書によって明示的に記述されることが考慮される。それらは、具体的に意図されたものの例に過ぎず、列挙された最低値と最高値との間のすべての数値の可能な組み合わせは、本出願で類似する方式で明示的に言及されたものと見なされるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0464】

本発明は、広範囲には、前記で定義された通りであるが、当業者は、本発明がこれらに限定されるものではなく、また、本発明は、以下の記載が例を与える実施形態も含むことを理解するであろう。

【0465】

本発明は、添付図面を参照して記載されるであろう。

【0466】

【図1】図１は、３６５ｎｍで ＡｃＣＳＫＫＫＫＮＬＶＰＣ（ｔＢｕ）ＶＡＴＶ１、パルミチン酸ビニル（７０当量）及びＤＭＰＡの溶液を照射した後の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。ピークａ（１１．０５分）：残留出発ペプチド１；ｂ（１８．５８分）：モノ－パルミトイル化ペプチド２；ｃ（２６．６６分）：ビス－パルミトイル化ペプチド３；ｅ、ｆ：２及び３のスルポキシド；^＊：ＤＭＰＡ光開始剤からの副産物。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８（３μ、１１０Å、４．６×１５０ｍｍ）；溶離液Ａ、水／０．１％ＴＦＡ；溶離液Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ；勾配：３０分にわたって、５－９５％Ｂ＠１ｍｌ／分。

【図2】図２は、図１からのピークｂの低分解能質量スペクトルである：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）９９９．９［Ｍ＋２Ｈ^＋］．

【図3】図３は、図１からのピークｃの低分解能質量スペクトルである：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）１１４１．３［Ｍ＋２Ｈ^＋］．

【図4A】図４Ａ～図４Ｃは、本明細書の実施例に記載されたように、ペプチド接合体及びＨｅｋＢｌｕｅ^ＴＭを使用したＴＬＲアルゴニズムアッセイの結果を示すグラフである。Ａ：アゴニスト５２０、５５０、５３０、５４０、５１０またはＰＢＳによって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｂ：アゴニスト５２０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｃ：アゴニスト５５０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。

【図4B】図４Ａ～図４Ｃは、本明細書の実施例に記載されたように、ペプチド接合体及びＨｅｋＢｌｕｅ^ＴＭを使用したＴＬＲアルゴニズムアッセイの結果を示すグラフである。Ａ：アゴニスト５２０、５５０、５３０、５４０、５１０またはＰＢＳによって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｂ：アゴニスト５２０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｃ：アゴニスト５５０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。

【図4C】図４Ａ～図４Ｃは、本明細書の実施例に記載されたように、ペプチド接合体及びＨｅｋＢｌｕｅ^ＴＭを使用したＴＬＲアルゴニズムアッセイの結果を示すグラフである。Ａ：アゴニスト５２０、５５０、５３０、５４０、５１０またはＰＢＳによって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｂ：アゴニスト５２０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。Ｃ：アゴニスト５５０（灰色のバー）及び５３０（黒色のバー）によって誘発されたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２細胞（左側）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞（右側）におけるＳＥＡＰ生成。

【図4D】図４Ｄ及び図４Ｅは、Ｄ：アゴニスト５２１（黒色のバー）、５５１（斜線のバー）及び５１１（灰色のバー）；Ｅ：アゴニスト５５２（斜線のバー）、５１２（黒色のバー）及び５００（灰色のバー）に対する反応へのＴ細胞クローン活性化を示すグラフである。

【図4E】図４Ｄ及び図４Ｅは、Ｄ：アゴニスト５２１（黒色のバー）、５５１（斜線のバー）及び５１１（灰色のバー）；Ｅ：アゴニスト５５２（斜線のバー）、５１２（黒色のバー）及び５００（灰色のバー）に対する反応へのＴ細胞クローン活性化を示すグラフである。

【図5】図５は、ビス－パルミトイル化ペプチド３の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。

【図6A】図６Ａ及び図６Ｂは、実施例８に記載されたように、表４に列挙されたＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＨ２及び（Ｒ）－及び（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びホモＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫコンストラクトを種々の濃度で使用したＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２（図６Ａ）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２（図６Ｂ）細胞におけるＴＬＲアルゴニズムアッセイの結果を示すグラフである：１０^－６モル／Ｌ（黒色のバー）、１０^－７モル／Ｌ（濃い灰色のバー）、１０^－８モル／Ｌ（中間灰色のバー）、１０^－９モル／Ｌ（対角線の斜線のバー）、１０^－１０モル／Ｌ（明るい灰色のバー）及び１０^－１１モル／Ｌ（四角い斜線のバー）。

【図6B】図６Ａ及び図６Ｂは、実施例８に記載されたように、表４に列挙されたＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＨ２及び（Ｒ）－及び（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びホモＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫコンストラクトを種々の濃度で使用したＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２（図６Ａ）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２（図６Ｂ）細胞におけるＴＬＲアルゴニズムアッセイの結果を示すグラフである：１０^－６モル／Ｌ（黒色のバー）、１０^－７モル／Ｌ（濃い灰色のバー）、１０^－８モル／Ｌ（中間灰色のバー）、１０^－９モル／Ｌ（対角線の斜線のバー）、１０^－１０モル／Ｌ（明るい灰色のバー）及び１０^－１１モル／Ｌ（四角い斜線のバー）。

【発明を実施するための形態】

【0467】

本発明は、本明細書で定義されたような式（Ｉ）のアミノ酸－及びペプチド接合体化合物を提供する。本発明者らは、有利に、このような接合体が驚くべき免疫原性活性を有することを見出した。

【0468】

式（Ｉ）のアミノ酸－及びペプチド接合体化合物は、本明細書に記載された方法及び手順を使用して製造され得る。

【0469】

本方法に有用な出発物質及び／または中間体は、公知された合成化学技術（例えば、付録を含み、文献［Ｌｏｕｉｓ Ｆ Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍａｒｙ Ｆ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｖ． １－１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６７－１９９９ ｅｄ．）またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ］に記載された一般的な方法（また、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎのオンラインデータベースを介して利用可能））を使用して製造することができるか、いくつかの実施形態において、商業的に利用可能であり得る。

【0470】

化合物の製造は、種々の化学基の保護及び脱保護を含み得る。保護及び脱保護に対する必要性及び適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護及び脱保護のための保護基及び方法は、当業界においてよく公知されている（例えば、文献［Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３^ｒｄ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）］参照）。

【0471】

スキームＡ１に示され、後述されるように、ｗは１であり、ｖは０であり、ｍは２～６、好ましくは２である式（Ｉ）の化合物である式（ＩＦ）の化合物は、エポキシドとアミノ酸含有接合パートナーの接合を含む方法を介して製造され得る。

【0472】

スキームＡ１：エポキシドとの接合による式（ＩＦ）の化合物の製造。

【0473】

【化41】

【0474】

本発明は、式（ＸＶ）の化合物の製造方法であって、効果的な条件下で、式（ＸＶＩ）のエポキシド及び式（ＩＩＩ）のチオールを含むアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめて、チオールのエポキシドへの接合によって式（ＸＶ）の化合物を生成することを含む方法を提供する。

【0475】

エポキシドと反応するアミノ酸含有接合パートナーは、アミノ酸、例えば、Ｎα－アミン保護システイン及び／または、Ｃ－末端保護システインからなることができる。代替的に、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチド、例えば、短いペプチドを含むことができる。このような実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、約１５個以下のアミノ酸残基、例えば、５、４または３個のアミノ酸残基を含むことができる。アミノ酸含有接合パートナーのＮα－アミノ基は、好ましくは、接合反応中の反応を抑制するために、保護するか、さもなければ置換する（すなわち、遊離アミン―ＮＨ_２基の形態で存在しない）。アミノ酸含有接合パートナーのＣ－末端も保護することができる。

【0476】

式（ＸＶＩ）の化合物内のＸ１０は、そこからＬ１－Ｚ１－及びＬ２－Ｚ２－が後続して形成され得る保護されたヒドロキシル、チオール、アミンまたはカルバメート基（それぞれ、Ｐ１０－Ｏ－、Ｐ１１－Ｓ－、Ｐ１２－ＮＲ－またはＰ１２－ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ－）であり得る。Ｘ１０が保護基である場合、保護基を接合反応において除去して、Ｘ１１が対応する脱保護基である式（ＸＶ）の化合物を生成することができる。例えば、Ｘ１０がＰ１０－Ｏ－基である場合、接合によって、式（ＸＶ）の化合物内のＸ１１として対応するヒドロキシル基を生成することができる。

【0477】

式（ＸＶＩ）のエポキシドは、Ｒ３が取り付けられた炭素原子に立体中心を含む。従って、エポキシドの単一立体異性体またはエポキシドの立体異性体的に富化された混合物は、式（ＸＶ）の化合物及び式（ＩＦ）の化合物を含んで形成された後続産物においてＲ３が取り付けられた炭素原子の立体化学を制御する反応に使用され得る。エポキシドの鏡像異性体的にエナンチオピュアであるか、鏡像異性体的に富化された混合物を生成する様々な方法が当業界において公知されている。様々な実施形態において、式（ＸＶＩ）のエポキシドの単一立体異性体または立体異性体的に富化された混合物を生成することは、エポキシドのラセミ混合物を分解することを含む。例えば、文献［Ｊａｃｏｂｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７，９３６－９３８］に記載されたような動力学加水分解によるラセミエポキシド混合物の分解。

【0478】

式（ＸＶＩ）のエポキシドは、アルケンをエポキシ化するのに効果的な条件下で、式（ＸＶＩＩ）のアルケンを酸化剤と反応せしめることによって生成することができる。アルケンをエポキシ化するための様々な方法が当業界において公知されている。特定の実施形態において、エポキシ化は、酸化剤として過酸化物または有機Ｎ－オキシドとアルケンを反応せしめることによって実施する。適切な過酸化物の例としては、有機過酸化物、例えば、ｍ－過安息香酸を含む。Ｎ－オキシドの例は、例えば、ピリジンＮ－オキシドなどを含む。他の適切な酸化剤は、当業者に明らかであろう。反応は、適切な溶媒、例えば、ジクロロメタンを含む液体反応媒体中で実施することができる。式（ＸＶＩＩ）のアルケンは、商業的に利用可能であるか、標準合成化学技術を使用して商業的に利用可能な前駆体から製造することができる。

【0479】

当業者は、例えば、Ｘ１０が（Ｎ－オキシドを形成することができる）アミン基または（例えば、スルホキシドまたはスルホンを形成することができる）チオエーテル基を含む場合、特定のＸ１０基がエポキシ化反応において酸化されやすいことを理解するであろう。このような基は、酸化を抑制するために反応中に保護することができるか、エポキシ化反応を実施した後、合成手順の適切な時点で所望の基に再還元させることができる。

【0480】

代替的に、式（ＸＶＩ）のエポキシドは、スキームＡ２に示されたように、ＬＧがハロゲンのような適切な脱離基である式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物を適切な溶媒中に塩基で処理して、脱離基を置換することによって製造することができる。

【0481】

スキームＡ２．脱離基置換によるエポキシ化。

【0482】

【化42】

【0483】

式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物は、商業的に利用可能であるか、商業的に利用可能な前駆体から製造することができる。有利には、いくつかの実施形態において、式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物は、鏡像異性体的にエナンチオピュアなα－アミノ酸から製造することができる。エポキシ化反応は、Ｒ３が取り付けられた炭素において立体化学が反転されるように、立体特異的に進行する。

【0484】

例えば、スキームＡ２－１に示されたように、ｍは２であり、それぞれのＲ１及びＲ２並びにＲ３、Ｒ４及びＲ５は水素であり、Ｘ１０は－ＯＨであり、ＬＧはブロモである、式（ＸＶＩＩ－Ａ）の化合物に対応する式（ＸＶＩＩ－Ａ１）の化合物は、Ｌ－アスパラギン酸から製造することができる（文献［Ｖｏｌｋｍａｎｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，５７，４３５２－４３６１］参照）．

【0485】

Ｌ－アスパルト酸は、例えば、臭化ナトリウムの存在下で、－１０～０℃の温度で亜硝酸ナトリウム及び硫酸のような強酸で処理して、亜硝酸をその場で生成させることによってブロモコハク酸（ＡＡ－１）に転換することができる。反応は立体化学が全般的に保持されるように立体特異的に進行する。

【0486】

ブロモコハク酸（ＡＡ－１）のブロモジオール（ＸＶＩＩ－Ａ１）への還元は、適切な還元剤を使用して、例えば、－７８℃でＴＨＦ中のボラン－ジメチルスルフィド錯体で処理し、反応混合物を室温で加温されるようにすることによって実施することができる。式（ＸＶＩ－１ａ）の化合物を生成するためのエポキシ化は、室温でジクロロメタン中のブロモジオール（ＸＶＩＩ－Ａ１）を塩基、例えば、炭酸セシウムと反応せしめることによって実施することができる。前記で言及されたように、反応は、立体化学が全般的に反転されるように立体特異的に進行する。

【0487】

エポキシド（ＸＶＩ－１ａ）の反対鏡像異性体は、同じ手順に従ってＤ－アスパラギン酸から製造することができる。

【0488】

スキームＡ２－１．Ｌ－アスパラギン酸からの鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシドの製造。

【0489】

【化43】

【0490】

再びスキームＡ１を参照すると、式（ＸＶ）の化合物は、後続して、１つ以上の合成ステップによって、式（ＩＦ）のアミノ酸またはペプチド接合体に転換することができる。１つ以上のステップにおいて、Ｒ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２－基に転換させる。

【0491】

Ｘ１１がＬ１－Ｚ１－でない場合、次いで、１つ以上のステップは、また、Ｘ１１をＬ１－Ｚ１－に転換させることを含む。Ｌ１－Ｚ１－及びＬ２－Ｚ２－基は、同時にまたは任意の手順で順次に導入され得る。

【0492】

特定の実施形態において、１つ以上のステップは、Ｒ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基の水素原子をＬ２－Ｃ（Ｏ）－で置換するために、式（ＸＶ）の化合物をアシル化することを含む。

【0493】

例示的な実施形態において、Ｘ１０はＰ１０－Ｏ－またはＯＨであり；Ｘ１１はＰ１０－Ｏ－またはＯＨである。

【0494】

様々な実施形態において、Ｘ１１は、Ｐ１０－Ｏ－またはＯＨであり；１つ以上の合成ステップは、Ｐ１０またはＸ１１のヒドロキシル基の水素原子をＬ１－Ｃ（Ｏ）－で置換し；及び／またはＲ３が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基の水素原子をＬ２－Ｃ（Ｏ）－で置換するために、式（ＸＶ）の化合物をアシル化することを含む。

【0495】

特定の実施形態において、下記のスキームＡ３に示され、実施例に記載されたように、本方法は、保護されたヒドロキシル基を有する式（ＸＶＩ－１）のエポキシドを式（ＩＩＩ）のアミノ酸含有接合パートナーと反応せしめて、式（ＸＶ－１ａ）の化合物を生成することを含む。

【0496】

スキームＡ３：エポキシド接合によるビス－エステル接合体の製造。

【0497】

【化44】

【0498】

接合反応は、酸、例えば、塩酸、硫酸またはそれらの混合物の存在下でエポキシド及びチオールを反応せしめることによって酸性条件下で実施することができる。反応は、約－１０～約５０℃、例えば、０～４０℃の温度で、ジクロロメタンのような適切な溶媒を含む液体反応媒体中で実施することができる。

【0499】

ヒドロキシル保護基Ｐ１０は、接合に効果的な条件下で除去可能であり、従って、接合反応中に除去して、式（ＸＶ－１ａ）の所望のジオールを生成するように選択する。適切な保護基は、当業者に明らかであり、例えば、酸不安定シリル保護基を含むことができる。

【0500】

代替的に、接合反応は、Ｘ１０がヒドロキシル基である式（ＸＶＩ）のエポキシド、例えば、式（ＸＶＩ－１ａ）のエポキシドを使用して実施することができる。

【0501】

式（ＸＶ－１ａ）のジオールは、エステル化に効果的な条件下で、ＸがＯＨまたは適切な脱離基（例えば、クロロまたはブロモのようなハロゲン化物）である式（ＶＩ－１）及び式（ＶＩ）の化合物との反応によって、式（ＩＦ－１）の化合物に転換することができる。

【0502】

エステル化に効果的な条件は、式（ＩＶ）及び／または式（ＶＩ－１）の化合物の性質に依存する。例えば、ＸがＯＨである場合、反応は、ＴＨＦのような適切な溶媒を含む液体媒体中でＤＭＡＰのような塩基及びＮ、Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のような活性化剤の存在下で実施することができる。

【0503】

様々な実施形態において、式（ＶＩ）及び式（ＶＩ－１）の化合物は同一である。例えば、式（ＶＩ）及び式（ＶＩ－１）の化合物は、それぞれパルミチン酸であり得る。そのような実施形態において、式（ＸＶ－１ａ）のジオールの式（ＩＦ－１）の化合物への転換は、単一ステップで達成することができる。

【0504】

特定の実施形態において、異なるＬ１及びＬ２基は、ジオールを式（ＶＩ－１）または式（ＶＩ）の化合物の化学量論的量と反応せしめて２つのアルコールのうちのより反応性のあるものをエステル化した後、生成されたエステルを式（ＶＩ）または式（ＶＩ－１）の化合物のうちの他の１つと反応せしめて、ジオールの第２級アルコールをエステル化することによって導入され得る。

【0505】

他の実施形態において、本方法は、下記のスキームＡ４に示されたように、式（ＸＶＩ－１）のエポキシド及び式（ＩＩＩ）のアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめて、式（ＸＶ－１ｂ）の化合物を生成することを含む。そのような実施形態において、ヒドロキシル保護基Ｐ１０は安定であり、接合反応条件下で除去されない。

【0506】

式（ＸＶ－１ｂ）の保護されたアルコールは、Ｌ１及びＬ２が異なる式（ＩＦ－１）の化合物に対する容易なアクセスを提供する。式（ＸＶ－１ａ）のジオールの以外に、そのような化合物に接近する式（ＸＶ－１ｂ）の化合物を使用すると、特定の実施形態において、例えば、式（ＸＶ－１ａ）のジオールのアルコールの間の選択性が乏しい場合、より便利であり得る。

【0507】

スキームＡ４：式（ＸＶ－１ｂ）の化合物を介したビス－エステル接合体の製造。

【0508】

【化45】

【0509】

式（ＸＶ－１ｂ）の化合物のβ－スルファニルヒドロキシル基は、エステル化に効果的な条件下で、式（ＶＩ）の化合物によってアシル化して、保護されたエステル（ＸＶＩＩＩ）を生成した後、保護基Ｐ１０を除去して、式（ＸＩＸ）のアルコールを生成することができる。保護基の除去のための条件は、使用される保護基に依存する。例えば、希釈ＨＦは、シリル保護基、例えば、ＴＢＤＭＳ、ＴＢＤＰＳなどを除去するために使用され得る。次いで、式（ＸＩＸ）のアルコールをエステル化に効果的な条件下で式（ＶＩ－１）の化合物によってアシル化して、所望の式（ＩＦ－１）の化合物を生成することができる。

【0510】

当業者は、ヒドロキシル基、例えば、式（ＸＶ－１ａ）、式（ＸＶ－１ｂ）及び式（ＸＩＸ）の化合物内のヒドロキシル基をチオール及びアミンのような種々の他の官能基に転換して、エステルの以外にＬ１－Ｚ１－及びＬ２－Ｚ２－基を有する式（Ｉ）の化合物に対するアクセスを生成することができることを理解するであろう。

【0511】

例えば、式（ＸＶ－１ｂ）の化合物は、下記のスキームＡ５に示されたように、式（ＩＦ－１）の化合物のチオエステル及びアミド類似体を製造するのに使用され得る。アミド類似体（ＩＦ－３）を製造するために、式（ＸＶ－１ｂ）の化合物内のヒドロキシル基を初めに、アジドに転換した後、対応するアミンに還元させることができる。反応は、アジドを生成するために、ＰＰｈ_３、Ｉ_２、イミダゾール及びＮａＮ_３を使用した後、アジドをアミンに還元させるために、ＰＰｈ_３を使用して、変形された光延条件（例えば、文献［Ｌ．Ｒｏｋｈｕｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ，２０１２，１２４，６８７－６９１］）下で、実施することができる。代替的に、アジドは、初めに、ヒドロキシル基を適切な脱離基、例えば、トシル基またはメシル基に転換した後、ＮａＮ_３で処理して得ることができる。

【0512】

式（ＶＩ）の化合物によるアミンのアシル化は、式（ＸＶＩＩＩ－２）のアミドを生成する。アシル化反応は、ＴＨＦのような適切な溶媒中で塩基、例えば、ＤＭＡＰ及び活性化剤、例えば、ＤＩＣの存在下で、式（ＶＩ）のカルボン酸を反応せしめることによって実施することができる。保護基Ｐ１０の脱保護及び生成されたアルコール（ＸＩＸ－２）のエステル化は、式（ＩＦ－３）の化合物を生成する。

【0513】

スキームＡ５．式（ＸＶ－１ｂ）の化合物を介したチオエステル及びアミドの製造。

【0514】

【化46】

【0515】

チオエステル類似体（ＩＦ－２）は、初めに、光延条件下で式（ＸＶ－１ｂ）の化合物を反応せしめて（例えば、ＰＰｈ_３、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ））、式（ＶＩ－２）の所望のチオ酸、例えば、チオパルミチン酸でトラップして、式（ＸＶＩＩＩ－１）の化合物を生成することによって製造することができる（例えば、文献［Ｏ．Ｓｃｈｕｌｚｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．，２００４，３３９，１７８７－１８０２］参照）。保護基Ｐ１０の脱保護及び生成されたアルコール（ＸＩＸ－１）のエステル化は、式（ＩＦ－２）の化合物を生成する。

【0516】

ビス－エステル（ＩＦ－１）のチオエステル及びアミド類似体はまた、スキームＡ６に示されたように、式（ＸＩＸ）の化合物から製造することができる。式（ＸＩＸ）の化合物は、式（ＸＶ－１ｂ）の化合物の式（ＸＶＩＩＩ－１）の化合物への転換のために、前記に記載された方法と類似の方法によって、式（ＩＦ－４）の化合物に転換させることができる。

【0517】

同様に、式（ＸＩＸ）の化合物は、式（ＸＶ－１ｂ）の化合物の式（ＸＶＩＩＩ－２）の化合物への転換のために、前記に記載された方法と類似の方法によって、式（ＩＦ－５）の化合物に転換させることができる。

【0518】

スキームＡ６．式（ＸＩＸ）の化合物を介したチオエステル及びアミドの製造。

【0519】

【化47】

【0520】

ビス－エステル（ＩＦ－１）のさらなる類似体は、スキームＡ６において式（ＸＩＸ）の化合物を式（ＸＩＸ－１）または式（ＸＩＸ－２）の化合物で置換した後、記載された合成配列に従うことによって、製造することができる。

【0521】

式（ＩＦ）の種々の他の化合物は、当業者が理解するような類似の方法によって製造することができる。

【0522】

式（ＶＩ）、式（ＶＩ－１）、式（ＶＩ－２）及び式（ＶＩ－３）の化合物は、商業的に利用可能であるか、標準合成化学技術を使用して、商業的に利用可能な前駆体から調製することができる。

【0523】

式（Ｉ）の化合物はまた、スキームＢ１に示されたように、アミノ酸含有接合パートナー及びアセタールの接合を含む方法によって製造することができる。

【0524】

スキームＢ１．アセタール（ＸＸＩ）を介した式（Ｉ）の化合物の製造。

【0525】

【化48】

【0526】

本発明は、式（ＸＸ）の化合物の製造方法であって、式（ＩＩＩ）のアミノ酸含有接合パートナー及びＬＧが適切な脱離基である式（ＸＸＩ）のアセタールを効果的な条件下で反応せしめて、式（Ｉ）の化合物を生成することを含む方法を提供する。反応において、式（ＩＩＩ）の化合物のチオールは、式（ＸＸＩ）のアセタール内の脱離基（ＬＧ）を置換する。適切な脱離基は、これらに限定されるものではないが、ハロ（例えば、クロロ、ブロモまたはヨード）またはスルポネート（例えば、トシラートまたはメシラート）を含む。他の適切な脱離基が、当業者に明らかであろう。

【0527】

式（ＸＸＩ）の化合物内のアセタール環のサイズは、様々であり得る。アセタール環は、５～７個の環原子を含むことができる（すなわち、５－７員環状アセタールであり得る）。特定の実施形態において、環状アセタールは、６員環である。環状アセタールが５員環状アセタールである場合、式（Ｉ）の化合物を生成するために、（ｍ、ｖ及びｗの合計が少なくとも３になるようにするために）ｗは少なくとも２であることが理解されるであろう。

【0528】

アセタールと反応するアミノ酸含有接合パートナーは、アミノ酸、例えば、Ｎα－アミン保護システイン、及び／またはＣ－末端保護されたシステインからなることができる。代替的に、アミノ酸含有接合パートナーは、ペプチド、例えば、短いペプチドを含むことができる。このような実施形態において、アミノ酸含有接合パートナーは、約１５個以下のアミノ酸残基、例えば、５、４または３個のアミノ酸残基を含むことができる。アミノ酸含有接合パートナーのＮα－アミノ基は、好ましくは接合反応中に反応を抑制するために、保護されるか、さもなければ置換する（すなわち、遊離アミン―ＮＨ_２基の形態で存在しない）。アミノ酸含有接合パートナーのＣ－末端も保護され得る。

【0529】

接合反応は、塩基の存在下で実施され得る。例えば、反応は、約５０℃の温度で適切な溶媒、例えば、ＤＭＦ中で有機アミンの存在下で実施することができる。適切な有機アミンは、これらに限定されるものではないが、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、コリジンなどを含む。

【0530】

式（ＸＸＩ）の化合物は、式（ＸＸＩＩ）の化合物の立体異性体的に純粋であるか、立体異性体的に富化された混合物を反応せしめることによって、立体異性体的に純粋な形態または立体異性体的に富化された混合物で生成することができる。有利には、４Ｒ）－または（４Ｓ）－（２，２－ジメチル－１，３－ジオキサン－４－イル）－メタノールのような立体異性体的に純粋な式（ＸＸＩＩ）の化合物は、容易に商業的に入手可能である。

【0531】

式（ＸＸＩＩ）の他の化合物は、当業界において公知された通常の方法によって製造することができる。スキームＢ１－１に示されたように、Ｐｇが適切なヒドロキシル保護基である式（ＸＸＩＩ－Ｂ）の化合物を式（ＸＸＩＩ－Ｃ１）の化合物と反応せしめて、式（ＸＸＩＩ－Ｄ）のアセタールを生成することができ、これは、次いで、保護基Ｐｇの除去によって、式（ＸＸＩＩ）の化合物に転換させることができる。代替的に、式（ＸＸＩＩ－Ｂ）の化合物をＲｏ及びＲｐがそれぞれ独立して、Ｃ１－４アルキルである式（ＸＸＩＩ－Ｃ２）の非環状アセタールと反応せしめることができる。アセチル化反応は、ジクロロメタンのような適切な溶媒中でカンファースルホン酸のような酸を使用して実施することができる。

【0532】

保護基Ｐｇの除去のための条件は、使用される保護基に依存する。例えば、シリルエーテル保護基、例えば、ＴＢＤＭＳは、ＴＨＦのような適切な溶媒中でテトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）のようなフッ素源での処理によって除去することができる。例えば、文献［Ｃ．Ｒ．Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，５１（４４） ５８４０－５８４２）；及び Ｓａｕｒｅｔ－Ｃｌａｄｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ （Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，１９９７，８（３），４１７－４２３）］を参照する。

【0533】

スキームＢ１－１．式（ＸＸＩＩ）の化合物の製造。

【0534】

【化49】

【0535】

再びスキームＢ１を参照すると、式（ＸＸＩ）の化合物は、脱離基の適切な前駆体との反応によって、式（ＸＸＩＩ）の化合物から製造することができる。例えば、トシラートまたはメシラート脱離基は、塩基及び適切な溶媒の存在下で塩化トシルまたは塩化メシルとの反応によって製造することができるし、ヨード脱離基は、ＰＰｈ_３及びＩ_２との反応によって製造することができる。

【0536】

式（ＸＸ）の化合物は、後続して１つ以上の合成ステップによって式（Ｉ）の化合物、例えば、式（ＩＡ）の化合物に転換させることができる。

【0537】

１つ以上の合成ステップは、アセタールを除去して、式（ＸＸＩＩＩ－１）のジオールを生成することを含むことができる。式（ＸＸＩＩＩ－１）の化合物においてＲ１及びＲ２が取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１－に転換させることができ、及び／またはＲｘ及びＲｙが取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２に転換させることができる。

【0538】

例えば、スキームＢ２に示されたように、式（ＸＸ）の化合物内のアセタールをジクロロメタンのような溶媒中でｐ－トルエンスルホン酸のような酸による処理によって除去して、式（ＸＸＩＩＩ－１）のジオールを生成することができる。式（ＸＸＩＩＩ－１）のジオールは、式（ＸＶ－１ａ）の化合物の式（ＩＦ－１）の化合物への転換のために記載された方式と類似の方式で１つ以上のアシル化ステップを介して式（ＩＡ）のビス－エステル化合物に転換させることができる。

【0539】

スキームＢ２．式（ＩＡ）のビス－エステル接合体の製造。

【0540】

【化50】

【0541】

代替的に、Ｒｍが選択的に置換されたアリール、例えば、フェニルまたはメトキシ置換されたフェニルである様々な実施形態において、１つ以上の合成ステップは、アセタールを除去して式（ＸＸＩＩＩ－２）または（ＸＸＩＩＩ－３）の化合物を生成することを含むことができる。１つ以上のステップは、式（ＸＸＩＩＩ－２）の化合物においてＲｘ及びＲｙが取り付けられた炭素原子に結合されたヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２－に転換させ、ＲｍＲｎＣＨ－基を除去し、ヒドロキシル基を生成し、ヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１に転換させるか；式（ＸＸＩＩＩ－２）の化合物においてＲｘ及びＲｙが取り付けられた炭素に結合されたヒドロキシル基をＬ１－Ｚ１－に転換させ、ＲｍＲｎＣＨ－基を除去してヒドロキシル基を生成し、ヒドロキシル基をＬ２－Ｚ２に転換させることを含むことができる。そのような方法は、有利には、異なるＬ１－Ｚ１及びＬ２－Ｚ２－基の導入を許容する。

【0542】

スキームＢ３に例示されたように、式（ＸＸ）の化合物のアセタールは、例えば、適切な還元剤、例えば、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）による処理によって除去することができる。次いで、式（ＸＸＩＩＩ－２）の式化合物の生成化合物は、式（ＶＩ）の化合物でアシル化して、所望のＬ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－基を導入され得る。式（ＸＸＶ－２）の化合物を生成するためのＲｍＲｎＣＨ－基の除去は、（例えば、ベンジルまたはｐ－メトキシベンジル基に対する）水素化分解またはＲｍＲｎＣＨ－基の性質に関連する任意の他の適切な方法によって実施することができる。次いで、式（ＸＸＶ－２）の化合物は、式（ＩＶ－１）の化合物へのアシル化によって、式（ＩＡ）の化合物に転換させることができる。アシル化ステップは、式（ＩＦ－１）の化合物の製造に関連して、本明細書に記載されたように実施することができる。

【0543】

スキームＢ３．式（ＸＸＩＩＩ－２）の化合物を介したビス－エステル接合体。

【0544】

【化51】

【0545】

式（ＩＡ）の化合物が、スキームＢ３における式（ＸＸＩＩＩ－２）、式（ＶＩ）及び式（ＶＩ－１）の化合物をそれぞれ式（ＸＸＩＩＩ－３）、式（ＶＩ－１）及び式（ＶＩ）の化合物で置換した後、記載された合成配列に従うことによって、式（ＸＸＩＩＩ－３）の化合物から製造され得ることが当業者に明らかであろう。

【0546】

アセタールまたはＲｍＲｎＣＨ－基の除去の際に生成されるヒドロキシル基、例えば、式（ＸＸＩＩＩ－１）、（ＸＸＩＩＩ－２）、（ＸＸＩＩＩ－３）及び（ＸＸＶ－２）の化合物内のヒドロキシル基をチオール及びアミンのような種々の他の官能基に転換させて、他のＺ１及びＺ２基を有する式（Ｉ）の化合物に対するアクセスを生成することができる。

【0547】

式（ＩＡ）のビス－エステル化合物のアミド及びチオエステル類似体は、式（ＩＦ－１）のビス－エステル化合物のアミド及びチオエステル類似体に関連して、前記に記載された方法と類似の方法によって調製することができることが理解されるであろう。

【0548】

本発明はまた、チオール－エン反応を介して式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供する。本方法は、第１及び第２の脂質含有接合パートナーをアミノ酸含有接合パートナーに接合させるのに効果的な条件下で、炭素－炭素二重結合を含む第１の脂質含有接合パートナー、炭素－炭素二重結合を含む第２の脂質含有接合パートナー及びチオールを含むアミノ酸含有接合パートナーを反応せしめることを含む。各々の脂質含有接合パートナーは、１つはＬ１を含み、他の１つはＬ２を含む脂質部分を含み、従って、反応において脂質部分のうちの１つはＬ１を含み、他の１つはＬ２を含む式（Ｉ）の化合物を生成する。

【0549】

チオール－エン反応は、非芳香族炭素－炭素二重結合にわたってチオールの添加（すなわち、炭素－炭素二重結合のヒドロチオール化（ｈｙｄｒｏｔｈｉｏｌａｔｉｏｎ））を含む。反応は、遊離ラジカルメカニズムを介して進行する。反応には３個の別個の相が存在する：開始、カップリング及び終結。

【0550】

通常的に、ラジカル生成は、アルケンのエン基にわたって伝播する求電子性チイルラジカルを生成させ、炭素－中心ラジカルを形成し、追加のチオール分子からの連鎖伝達は、炭素上のラジカルをクエンチ（ｑｕｅｎｃｈ）させて、最終産物を提供する。

【0551】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、本発明の方法において、チオールは、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子に接合されて、炭素－中心ラジカルを形成し、次いで、このような炭素－中心ラジカルは、クエンチされる代わりに、第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子と接合されて、式（Ｉ）の化合物を生成すると考えられる。

【0552】

従って、本方法は、チオールからの硫黄原子が第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合され、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子が第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合からの炭素原子に接合された式（Ｉ）のアミノ酸－及びペプチド接合体を提供する。

【0553】

第１及び第２の脂質含有接合パートナーは、同じであるか、異なることができる。当業者は、異なる脂質含有接合パートナーを同時に反応せしめれば、（潜在的に、最大４個の異なる）式（Ｉ）の化合物の混合物が生成され得ることを理解するであろう。従って、特定の例示的な実施形態において、第１及び第２の脂質含有接合パートナーは同じである。

【0554】

チオール－エン反応は、第１の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子価チオールに接合され、また、第２の脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の炭素原子が第１の脂質含有接合パートナーからの炭素－炭素二重結合の炭素原子に接合されることに対する位置選択性であり得る。当業者は、反応において種々の位置異性体が形成され得ることを理解するであろう。

【0555】

特定の実施形態において、本方法は、効果的な条件下で、式（ＩＩＡ）の第１の脂質含有接合パートナー及び式（ＩＩＢ）の第２の脂質含有接合パートナーをチオール含有アミノ酸含有接合パートナー（ＩＩＩ）と反応せしめて、式（ＩＢ）の化合物を生成することを含む（スキームＣ１）。

【0556】

スキームＣ１．チオール－エン反応による式（ＩＢ）の化合物の製造。

【0557】

【化52】

【0558】

式（ＩＢ）の化合物の形成に効果的な条件は、様々であり得る。様々な実施形態において、式（ＩＢ）の化合物の形成に効果的な条件は、少なくとも７：１、例えば、８：１、９：１、１０：１、２０：１、３０：１、４０：１、５０：１、６０：１または７０：１の脂質含有接合パートナー（ＩＩＡ）及び（ＩＩＢ）（組み合わせされる）対アミノ酸含有接合パートナーの化学量論的比のように、チオールより化学量論的に過剰量の脂質含有接合パートナーによって反応を実施することを含むことができる。

【0559】

アミノ酸含有接合パートナーの式（ＩＢ）の産物化合物への転換の程度は、様々であり得る。好ましくは、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０または７０％のアミノ酸含有接合パートナーが式（ＩＢ）の化合物に転換される。転換は、ＨＰＬＣによって決定することができる。

【0560】

前記に指摘したように、理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、このような条件下で、式（ＩＡ）のアルケンと式（ＩＩＩ）チオールとの反応は、式（Ｘ）の炭素－中心ラジカルの形成をもたらし、これは、式（ＩＩＩ）の別の分子のチオールからのプロトンの抽出によってクエンチされる代わりに、式（ＩＩＢ）の第２のアルケンによってトラップされて、所望のアミノ酸－またはペプチド接合体を生成すると考えられる。

【0561】

この反応は、反応過程で生成されたラジカル中間体によってＲ３が結合された炭素原子とＲｂ及びＲｃが結合された炭素原子との間の結合形成の立体化学を制御するか、これに影響を及ぼし得ないので、立体異性体の混合物の生成をもたらすことができる。反応は、通常的に、Ｒ３が結合された炭素原子に対するエピマーの混合物を生成する。

【0562】

特定の実施形態において、脂質含有－接合パートナー内のＺ１及びＺ２は、それぞれ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、チオレン方法で形成された式（Ｉ）の化合物は、本明細書に定義されたような式（ＩＣ）の化合物である。

【0563】

例示的な実施形態において、本発明のチオレン方法は、式（ＩＩＩ）の構造を含むアミノ酸含有接合パートナーを、ビニルエステルである式（ＩＩＡ）及び（ＩＩＢ）の脂質含有－接合パートナーと反応せしめて、式（ＩＤ）の化合物を生成することを含む。反応は、例えば、下記の実施例に記載されたように、アミノ酸含有接合パートナー；脂質含有－接合パートナー；光化学開始剤、例えば、ＤＭＰＡを含む反応混合物を照射することによって実施することができる。１つ以上の添加剤が含まれることができ、これは、副産物、例えば、立体障害チオール（例えば、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタン）、酸（例えば、ＴＦＡ）またはオルガノシラン（例えば、トリイソプロピルシラン）またはそれらの任意の２つ以上の組み合わせの形成を低滅させる。反応は、適切な期間の時間、例えば、３０分間、周囲温度でＮＭＰのような適切な溶媒中で実施することができる。

【0564】

反応は、通常的に、反応混合物中の１つ以上の遊離ラジカルの生成によって開始される。１つ以上の遊離ラジカルは、当業界において公知された任意の方法によって本方法において生成され得る。遊離ラジカルは、熱的及び／または光化学的に生成され得る。遊離ラジカルの生成を開始させるために、１つ以上の遊離ラジカル開始剤が使用され得る。適切な遊離ラジカル開始剤は、熱開始剤及び光開始剤を含む。

【0565】

遊離ラジカルは、加熱によって熱開始剤から生成される。熱開始剤の分解速度及び生成された遊離ラジカル形成は、開始剤及び開始剤が加熱される温度に依存する。一般的に、温度がより高いほど、より早い分解をもたらす。当業者は、過度の実験なしで、開始剤を加熱するための適切な温度を選択することができるであろう。

【0566】

種々の熱開始剤が市販されている。熱開始剤の例は、これらに限定されるものではないが、ｔｅｒｔ－アミルペルオキシベンゾエート、１，１’－アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）、２，２’－アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、過酸化ベンゾイル、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド、ｔｅｒｔ－ブチルペルアセテート、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシベンゾエート、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシイソプロピルカーボネート、ラウロイルペルオキシド、過酢酸、及び過硫酸カリウムを含む。

【0567】

遊離ラジカルは、光の照射によって、光開始剤から生成され得る。光開始剤の分解及び遊離ラジカル形成を誘発するのに必要な周波数の光は、開始剤に依存する。多くの光開始剤が、紫外線により開始され得る。

【0568】

脂質含有接合パートナーまたはアミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナーが感光性基を含む場合、特定の波長または波長範囲の光が開始剤を選択的に照射するために、使用され得る。特定の実施形態において、約３６５ｎｍの周波数が使用される。この周波数の光は、一般的に、天然に存在するアミノ酸の測鎖と適合できる。

【0569】

広範囲の光開始剤が、商業的に利用可能である。光開始剤の例は、これらに限定されるものではないが、アセトフェノン、アニソイン、アントラキノン、アントラキノン－２－スルホン酸、ベンジル、ベンゾイン、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾフェノン、３，３’，４，４’－ベンゾフェノンテトラカルボン酸二無水物、４－ベンゾイルビフェニル、２－ベンジル－２－（ジメチルアミノ）－４’－モルホリノブチロフェノン、４’－ビス（ジエチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’－ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、カンファーキノン、２－クロロチオキサンテン－９－オン、ジベンゾスベレノン、２，２－ジエトキシアセトフェノン、４，４’－ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、４－（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’－ジメチルベンジル、２，５－ジメチルベンゾフェノン、３，４－ジメチルベンゾフェノン、４’－エトキシアセトフェノン、２－エチルアントラキノン、３’－ヒドロキシアセトフェノン、４’－ヒドロキシアセトフェノン、３－ヒドロキシベンゾフェノン、４－ヒドロキシベンゾフェノン、１－ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２－ヒドロキシ－２－メチルプロピオフェノン、２－メチルベンゾフェノン、３－メチルベンゾフェノン、メティベンゾイルホルメート、２－メチル－４’－（メチルチオ）－２－モルホリノプロピオフェノン、フェナントレンキノン、４’－フェノキシアセトフェノン及びチオキサンテン－９－オンを含む。

【0570】

当業者は、例えば、脂質含有接合パートナー、アミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナー及び反応混合物中に存在する任意の他の成分の性質に関連して、本方法で使用するための適切な遊離ラジカル開始剤を選択することができるであろう。いくつかの実施形態において、開始剤は、約２０：１～約０．０５：１、約１０：１～約０．０５：１、約５：１～約０．０５：１、約３：１～約０．５：１の、チオールを含む出発物質に対した化学量論的比で反応内に存在する。

【0571】

脂質含有接合パートナー及びアミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナーは、公知された合成化学技術（例えば、付録を含み、文献［Ｌｏｕｉｓ Ｆ Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍａｒｙ Ｆ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｖ．１－１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６７－１９９９ ｅｄ．）またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ． Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ］に一般的に記載された方法（また、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎのオンラインデータベースを介して利用可能））を使用して製造することができるか、いくつかの実施形態において、市販されている。

【0572】

例えば、式（ＩＩＡ－１）の脂質含有接合パートナー化合物は、エステル化（または、Ｙがアシル基である場合、エステル交換）に効果的な条件下で、ＸがＯＨまたは適切な脱離基である式（ＶＩ）の化合物をＹがＨ、金属または半金属、またはアシル（例えば、アルキルカルボニル）である式（ＶＩＩ）の化合物と反応せしめることにより、製造することができる（スキームＣ２）。

【0573】

スキームＣ２．式（ＩＩＡ－１）の化合物の製造。

【0574】

【化53】

【0575】

エステル化（またはエステル交換）のための方法は、当業界においてよく公知されている。例えば、Ｘがクルロロであり、ＹがＨである場合、反応は、適切な溶媒中でピリジンまたはトリエチルアミンのような塩基の存在下で、実施することができる。酸塩化物は、その場でより反応性の種（例えば、ヨウ化ナトリウムを使用して対応するヨウ化物）に転換され得る。反応が実施される温度は、使用される酸種及び溶媒の反応性に依存する。

【0576】

例えば、式（ＩＩＡ－１）のビニルエステルは、酸または金属触媒を使用して酢酸ビニル（適切な触媒上で酢酸及びアセチレンまたは酢酸とエチレンとの反応によって工業的に生成されたそれ自体）へのエステル交換によって生成することができる。例えば、文献［ＥＰ０３７６０７５Ａ２ ａｎｄ Ｓ．Ｋ．Ｋａｒｍｅｅ，Ｊ．Ｏｉｌ Ｐａｌｍ Ｒｅｓ．，２０１２，１５１８－１５２３］を参照する。

【0577】

式（ＩＩＡ－１）のビニルエステルはまた、触媒（一般的に、パラジウムまたはルテニウム錯体）の存在下で末端アセチレンにカルボン酸の添加によって製造することができる。例えば、文献［Ｖ．Ｃａｄｉｅｒｎｏ，Ｊ．Ｆｒａｎｃｏｓ，Ｊ．Ｇｉｍｅｎｏ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ，２０１１，３０，８５２－８６２；Ｓ．Ｗｅｉ，Ｊ．Ｐｅｄｒｏｎｉ，Ａ．Ｍｅｉｓｓｎｅｒ，Ａ．Ｌｕｍｂｒｏｓｏ，Ｈ．－Ｊ．Ｄｒｅｘｌｅｒ，Ｄ．Ｈｅｌｌｅｒ，Ｂ．Ｂｒｅｉｔ，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，２０１３，１９，１２０６７－１２０７６］を参照する。非末端アセチレンも反応させることができる。 例えば、文献［Ｎ．Ｔｓｕｋａｄａ，Ａ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｙ．Ｉｎｏｕｅ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，２０１１，５２，２４８－２５０及びＭ．Ｒｏｔｅｍ，Ｙ．Ｓｈｖｏ，Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１９９３，４４８，１５９－２０４］を参照する。

【0578】

式（ＩＩＡ－Ｉ）のビニルエステルの製造方法のさらなる例は、ジビニル水銀と芳香族及び脂肪族酸との反応（例えば、文献［Ｄ．Ｊ．Ｆｏｓｔｅｒ，Ｅ．Ｔｏｂｌｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６１，８３，８５１］参照）；ＡｇＦの存在下でアレーンカルボン酸とトリメトキシ（ビニル）シランのＣｕ（ＩＩ）－触媒エステル化（例えば、文献［Ｆ．Ｌｕｏ，Ｃ．Ｐａｎ，Ｐ．Ｑｉａｎ，Ｊ．Ｃｈｅｎｇ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ２０１０，２００５］参照）；２モル％の［ＡｕＣｌ（ＰＰｈ_３）］及び２モル％のＡｇＯＡｃからなる触媒系による酢酸ビニルから第１級及び第２級アルコール及び、またカルボン酸へのビニル伝達反応（例えば、文献［Ａ．Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｍ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００８，４９，３７２９］参照）；及びＩｒ錯体（［Ｉｒ（ｃｏｄ）Ｃｌ］_２／Ｐ（ＯＭｅ）_３）－触媒ビニル交換（例えば、文献［Ｈ．Ｎａｋａｇａｗａ，Ｙ．Ｏｋｉｍｏｔｏ，Ｓ．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｙ．Ｉｓｈｉｉ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００３，４４，１０３］参照）を含む。

【0579】

式（ＩＩ－Ａ）の化合物を調製する他の適切な方法は、当業者に明らかであろう。

【0580】

式（ＩＩＢ－１）の脂質含有接合パートナー化合物は、式（ＩＩＡ－１）及び式（ＩＩＢ－１）の化合物が異なる場合、類似の方式で製造することができる。

【0581】

種々の式（ＶＩ）の化合物は、市販されている。他のものなどは、市販の前駆体から標準合成化学技術を使用して製造することができる。例えば、Ｘがクルロロである式（ＶＩ）の化合物は、適切な溶媒または溶媒の混合物中で対応するカルボン酸を塩化ティオニルで処理して製造することができる。

【0582】

同様に、式（ＶＩＩ）の化合物はまた、市販されているか、標準合成化学技術を使用して市販の前駆体から製造することができる。

【0583】

脂質含有接合パートナー及びアミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナー及び反応混合物に存在する任意の他の成分を反応容器内に導入する順序は、様々であり得る。反応は、ワンーポット法（ｏｎｅ－ｐｏｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）として実施することができる。

【0584】

反応における、脂質含有接合パートナー対アミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナーの比は、様々であり得る。いくつかの実施形態において、組み合わせされた（すなわち、合計）第１の脂質含有接合パートナー及び第２の脂質含有接合パートナー対アミノ酸含有接合パートナーのモル比は、少なくとも７：１、例えば、８：１、９：１、１０：１、２０：１、３０：１、４０：１、５０：１、６０：１または７０：１である。

【0585】

反応は、任意の適切な温度で実施することができる。いくつかの実施形態において、反応は、約－２５℃～約２００℃、約－１０℃～約１５０℃、約０℃～約１２５℃、約周囲温度～約１００℃の温度で実施される。いくつかの実施形態において、反応は、約２００℃未満、約１７５℃未満、約１５０℃未満、約１２５℃未満または約１００℃未満の温度で実施される。

【0586】

いくつかの実施形態において、反応は、周囲温度より高い温度で実施される。一実施形態において、反応は、４０～２００℃、５０～１５０℃、６０～１００℃、６５～９０℃または７０～８０℃の温度で実施される。いくつかの実施形態において、反応は、４０℃超過、５０℃超過、７５℃超過、１００℃超過または１５０℃超過の温度で実施される。

【0587】

反応が実施される温度は、反応において遊離ラジカルがどのように生成されるかに依存し得る。使用される温度は、反応速度を制御するために、選択され得る。温度は、反応速度を制御するために、反応過程の間に調整され得る。

【0588】

遊離ラジカルが（例えば、熱開始剤を使用して）熱的に生成される場合、反応は一般的に周囲温度より高い温度で実施されるであろう。温度は、遊離ラジカルが生成される種の反応性に依存するであろう。

【0589】

遊離ラジカルが光化学的に生成される場合、反応は、有利には周囲温度で実施することができる。特定の実施形態において、反応速度を遅延させるために、反応混合物を冷却させるか、逆に、反応速度を増加させるために、反応混合物を加熱することが所望され得る。

【0590】

当業者は、存在する他の反応物及び出発物質の反応性に関連して、前記方法を実施するための適切な温度を選択することができるであろう。

【0591】

反応が実施される温度は、当業界において公知された適切な方法によって、反応混合物を加熱または冷却させることにより、制御され得る。例えば、反応容器内の熱交換器、反応容器を取り囲む加熱ジャケットを使用するか、加熱された液体（例えば、オイルまたは砂浴）に反応容器を浸漬させることにより、反応混合物に熱を加えることができる。特定の例示的な実施形態において、反応混合物は、マイクロ波の照射によって加熱する。

【0592】

反応の進行は、いずれかの適切な手段、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、または高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターされ得る。反応は、少なくとも１つの出発物質の消費によってモニターされるように、実質的に完了時まで、進行するようにすることができる。いくつかの実施形態において、反応は、１分～７日、５分～７２時間、１０分～４８時間、１０分～２４時間、進行させる。他の実施形態において、反応は、７２時間未満、４８時間未満、２４時間未満、１２時間未満、６時間未満、４時間未満、２時間未満または１時間未満、進行させる。

【0593】

いくつかの実施形態において、反応は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％のアミノ酸含有接合パートナーが消費するまで、実施される。出発物質の消費は、いずれかの適切な方法、例えば、ＨＰＬＣによってモニターされ得る。

【0594】

反応混合物は、当業界において公知されたいずれかの適切な方法により、例えば、磁気または機械的攪拌機を使用して、混合することができる。使用される方法は、反応が実施される規模に依存し得る。

【0595】

反応は一般的に、液体反応媒体において実施される。液体反応媒体は、溶媒を含むことができる。適切な溶媒の例は、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、１、２－ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド、トリフルオロ酢酸、酢酸、アセトニトリル、及びそれらの混合物を含む。

【0596】

溶媒は、出発物質及び存在する他の反応物、例えば、遊離ラジカル開始剤の溶解度に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態において、脂質含有接合パートナーは、疎水性である。アミノ酸含有接合パートナーの疎水性または親水性は、例えば、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列に依存して変化することができる。ペプチド含有接合パートナー内の可溶化基の存在は、水のような極性溶媒における溶解度を増加させることができる。当業者は、過度の実験なしで、適切な溶媒を選択することができるであろう。

【0597】

反応は、実質的に酸素を含まない条件下で実施され得る。酸素は、反応において形成された遊離ラジカルをクエンチさせることができる。反応混合物は、遊離ラジカルが生成される前に、いずれかの溶存酸素を除去するために、実質的に酸素を含まない不活性ガス（例えば、窒素またはアルゴン）で脱気させることができる。代替的に、反応混合物の個々の成分は、反応容器において混合される前に、実質的に酸素を含まない不活性ガスで脱気され得る。反応は、実質的に酸素を含まない不活性ガスの雰囲気下で実施され得る。

【0598】

本発明の方法は、周囲圧力で実施され得る。

【0599】

望ましくない副産物の形成を阻害し、及び／または所望の産物の収率または所望の産物への転換を改善させる添加剤が本発明のチオレン方法の反応混合物に含まれることができる。１つ以上の添加剤は、外来性チオール、酸、オルガノシラン、またはそれらの任意の２つ以上の組み合わせであり得る。

【0600】

本発明者ら、いくつかの実施形態において、反応混合物中に添加剤として外来性または外因性チオールを含めると、望ましくない副産物の形成を低滅させることを見出した。外来性チオールは、いくつかの実施形態において、所望のチオール－エン反応の効率または転換を増加させることができる。適切な外来性チオールの例は、これらに限定されるものではないが、還元グルタチオン、ＤＯＤＴ、ＤＴＴ、タンパク質、立体障害チオールなどを含む。

【0601】

いくつかの実施形態において、外来性チオールは、ＤＴＴである。

【0602】

他の実施形態において、外来性チオールは、立体障害チオールである。適切な立体障害外来性チオールの非制限的例は、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタン及び１－メチルプロピルメルカブタンを含む。

【0603】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、特定の実施形態において、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタンのような外来性チオールが、式（Ｘ）のラジカルの式（ＩＩＢ）のアルケンへの伝播時に形成されるラジカル中間体をクエンチさせて、所望の式（ＩＢ）の化合物を生成することができるプロトンを提供することができ、生成されたチイルラジカルは、式（ＩＩＩ）のアミノ酸含有接合パートナーから別のモルのチイルラジカルを生成することによって反応を伝播させることができると考えられる。

【0604】

外来性チオールが、特定の実施形態において、式（Ｘ）のプロトンラジカルを生成することによって反応を早期にクエンチさせることもできることが明らかであろう。そのような実施形態において、外来性チオール及びそれが使用される量は、式（ＩＢ）の化合物の収率または化合物への転換（ＨＰＬＣによって決定されるように）が最適化されるように選択され得る。

【0605】

様々な実施形態において、外来性チオールは、約２００：１～約０．０５：１、１００：１～０．０５：１、８０：１～０．０５：１、６０：１～０．０５：１、４０：１～０．０５：１、２０：１～約０．０５：１、１０：１～約０．５：１、５：１～約１：１または３：１～約１：１のアミノ酸含有接合パートナーに対した化学量論的比で反応に存在する。特定の実施形態において、ｔ－ＢｕＳＨのような立体障害チオールは、約１００：１～０．０５：１、例えば、約８０：１、約４０：１または約３：１のアミノ酸含有接合パートナーに対した化学量論的比で反応に存在する。

【0606】

いくつかの実施形態において、酸が含まれる場合、また、望ましくない副産物の形成を低滅させることができる。酸は、強い無機酸、例えば、ＨＣｌまたは有機酸、例えば、ＴＦＡであり得る。特定の実施形態において、添加剤は、ＴＦＡである。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、反応混合物のｐＨを低下させると、そうでなければ、単一電子伝達に関与し、反応においてラジカル種を形成することができるリシンなどのような残基の電子が富化された測鎖のプロトン化を引き起こすことができると考えている。様々な実施形態において、反応混合物は、約０．０１～２５、０．０１～１５、０．０１～１０または１～１０％ｖ／ｖの酸添加剤を含む。特定の実施形態において、反応混合物は、１～１０％ｖ／ｖのＴＦＡ、例えば、５％ｖ／ｖのＴＦＡを含む。

【0607】

本発明者らは、いくつかの実施形態において、反応混合物内に添加剤として、ｔｅｒｔ－ブチルメルカブタン及びＴＦＡの両方を含む場合には、望ましくない副産物の形成を低滅させ、所望の産物の出発物質の転換を増加させることができることを見出した。従って、特定の例示的な実施形態において、反応混合物は、強い有機酸及び立体障害チオールの組み合わせのような酸及び外因性チオールの組み合わせ、例えば、ＴＦＡ及びｔｅｒｔ－ブチルメルカブタンの組み合わせを含む。

【0608】

オルガノシランがまた、チオール－エン反応において添加剤として含まれることができる。オルガノシランは、ラジカル系還元剤であり、その活性はケイ素原子上の置換基を変化させることによって調節され得る。様々な実施形態において、オルガノシランは、式（Ｒ^ｑ）_３ＳｉＨの化合物であり、ここで、各々の場合、Ｒｑは独立して水素または有機基、例えば、アルキルまたはアリールであり、ただし少なくとも１つのＲｑは水素ではない。オルガノシランの例は、これら限定されるものではないが、トリエチルシラン（ＴＥＳ）、トリフェニルシラン、ジフェニルシラン、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）などを含む。様々な実施形態において、オルガノシランは、トリアルキルシラン、例えば、ＴＩＰＳまたはＴＥＳである。

【0609】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、外来性チオールによる場合のように、特定の実施形態において、ＴＩＰＳのようなオルガノシランは、水素供与体として作用して、所望の式（ＩＢ）の化合物を生成することができ、反応の伝播を促進することができると考えている。

【0610】

様々な実施形態において、オルガノシランは、約２００：１～約０．０５：１、１００：１～０．０５：１、８０：１～０．０５：１、６０：１～０．０５：１、４０：１～０．０５：１、２０：１～０．０５：１、１０：１～０．５：１、５：１～約１：１または３：１～約１：１のアミノ酸含有接合パートナーに対した化学量論的比で反応に存在する。特定の実施形態において、ＴＩＰＳのようなトリアルキルシルランは、約１００：１～０．０５：１、例えば、約８０：１または約４０：１のアミノ酸含有接合パートナーに対した化学量論的比で反応に存在する。

【0611】

オルガノシランは、外来性チオールと組み合わせて添加剤として使用され得る。代替的に、オルガノシランは、外来性チオールの代わりに使用され得る。ＴＦＡのような酸がまた存在することができる。本発明者らは、特定の実施形態において、反応に、ＴＩＰＳをＴＦＡと共に使用するが、任意の外来性チオールは含まれない場合、ＴＩＰＳ、ｔ－ＢｕＳＨ及びＴＦＡの組み合わせを使用する場合よりも所望の式（ＩＢ）の化合物のより高い転換を提供することができることを見出した。

【0612】

添加剤は、一般的に、反応または方法のうち、任意の選択的な後続ステップに悪影響を及ぼさずに、望ましくない副産物の形成を最小化するのに十分な量で使用される。

【0613】

反応で生成された産物及び所望の産物への転換は、例えば、ＨＰＬＣによって決定され得る。

【0614】

反応混合物中の脂質含有接合パートナー及びアミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナーの濃度はまた、それぞれ反応に影響を及ぼすことができる。当業者は、例えば、過度の実験なしで、収率及び純度を最適化するために、反応混合物中の脂質含有接合パートナー及びペプチド含有接合パートナーの濃度を変えることができるであろう。

【0615】

いくつかの実施形態において、チオールを含む出発物質は、約０．０５ｍＭ～約１Ｍ、約０．５ｍＭ～約１Ｍ、約１ｍＭ～約１Ｍの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、濃度は、少なくとも約０．０５ｍＭ、０．５ｍＭまたは１ｍＭである。

【0616】

いくつかの実施形態において、アルケンを含む出発物質の濃度は、少なくとも約０．０５ｍＭ、０．５ｍＭまたは１ｍＭである。

【0617】

いくつかの実施形態において、アミノ酸接合体またはペプチド接合体は、反応後、反応媒体から分離され、選択的に精製される。接合体は、当業界において公知されたいずれかの適切な方法を使用して、例えば、沈殿によって反応媒体から分離され得る。

【0618】

いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチド接合体は、それを反応媒体から分離した後、精製される。例えば、接合体は、１つ以上の適切な溶媒を使用して、ＨＰＬＣによって精製され得る。

【0619】

本発明はまた、ペプチド接合体の製造方法を提供し、本方法は、
本発明の式（Ｉ）のアミノ酸－またはペプチド接合体またはその塩または溶媒和物を生成すること、及び
アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドのアミノ酸にカップリングさせてペプチド接合体を生成することを含む。

【0620】

本発明の方法において、生成されたペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナー及び／またはカップリングされたペプチドは、合成ペプチドを含むことができる。合成ペプチドは、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を使用して製造され得る。

【0621】

固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）の基本原理は、リンカー分子を介して、固相支持体、通常的に樹脂粒子に固定された成長ポリペプチド鎖へのアミノ酸の階段的添加であり、これは、ポリペプチド鎖が完了した場合、切断及び精製を可能にする。手短に言及すれば、固相樹脂支持体及び出発アミノ酸は、リンカー分子を介して互いに取り付けられる。そのような樹脂－リンカー－酸マトリックスは、商業的に利用可能である。

【0622】

樹脂にカップリングされるアミノ酸は、そのＮα－末端で化学的保護基によって保護される。

【0623】

アミノ酸はまた、測鎖保護基を有することができる。そのような保護基は、樹脂に取り付けられたペプチド鎖の保護されていないＮα－アミノ基とカップリングされたアミノ酸のカルボキシル基との間に新しいペプチド結合を形成する過程の間に望ましくないかまたは有害な反応が起こらないように抑制する。

【0624】

カップリングされるアミノ酸は、ペプチド鎖のＮ－末端アミノ酸の保護されていないＮα－アミノ基と反応せしめられ、これは、ペプチド鎖の鎖長さを１つのアミノ酸ほど増加させる。カップリングされるアミノ酸のカルボキシル基は、ペプチド鎖のＮα－アミノ基による反応を促進する適切な化学的活性化剤によって活性化され得る。次いで、ペプチド鎖のＮ－末端アミノ酸のＮα－アミノ基は、次のアミノ酸残基によるカップリングのために、製造において除去する。この技術は、可能な場合いつでも、自動化を魅力的にする多くの反復ステップからなる。当業者は、例えば、収束ペプチド合成が所望の場合、ペプチドが個々のアミノ酸の代わりに、固相結合アミノ酸またはペプチドのＮα－アミノ基にカップリングされ得ることを理解するであろう。

【0625】

所望のアミノ酸配列が達成された場合、前記ペプチドは、リンカー分子で固相支持体から切断される。

【0626】

ＳＰＰＳは、連続フロー方法またはバッチフロー方法を使用して実施され得る。連続フローは、分光光度計を介して反応進行状況をリアルタイムにモニタリングを可能にするが、樹脂上のペプチドと接触する試薬が希釈され、固相樹脂の物理的サイズの制約のために、スケールがより制限される２つの明白な欠点がある。バッチフローは、フィルター反応容器で起こり、反応物がアクセス可能であり、手動または自動に添加され得るので有用である。

【0627】

２つのタイプの保護基が、Ｎ－α－アミノ末端を保護するために通常的に使用される：“Ｂｏｃ”（ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）及び“Ｆｍｏｃ”（９－フルオレニルメチルオキシカルボニル）。Ｂｏｃ方法の試薬は、比較的安価であるが、これは、腐食性が高く、高価な装置及びより厳密な予防措置を取る必要がある。より高価であるが、腐食性が少ない試薬を使用するＦｍｏｃ方法が通常的には好ましい。

【0628】

ＳＰＰＳの場合、非常に種々の固体支持体相が利用可能である。合成に使用される固相支持体は、合成目的に適切な合成樹脂、合成ポリマーフィルムまたはシリコーンまたはケイ酸塩表面（例えば、制御された多孔性ガラス）であり得る。一般的に、樹脂は、通常的にポリスチレン懸濁液、またはポリスチレン－ポリエチレングリコール、またはポリマー支持体、例えば、ポリアミドが使用される。Ｂｏｃ－化学に適切なリンカーによって官能化された樹脂の例は、ＰＡＭ樹脂、オキシム樹脂ＳＳ、フェノール樹脂、臭化Ｗａｎｇ樹脂（ｂｒｏｍｉｎａｔｅｄ Ｗａｎｇ ｒｅｓｉｎ）及び臭化ＰＰＯＡ樹脂を含む。Ｆｍｏｃ化学に適切な樹脂の例は、アミノメチルポリスチレン樹脂、ＡＭＰＢ－ＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、Ｒｉｎｋ酸樹脂、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｓ ＡＣ樹脂、２－クロロトリチルクロライド樹脂、２－クロロトリチルアルコール樹脂、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｓ Ｔｒｔ－ＯＨ樹脂、Ｋｎｏｒｒ－２－クロロトリチル樹脂、ヒドラジン－２－クロロトリチル樹脂、ＡＮＰ樹脂、Ｆｍｏｃ光解離性樹脂、ＨＭＢＡ－ＢＨＡ樹脂、Ｔｅｎｔａｇｅｌ Ｓ ＨＭＢ樹脂、Ａｒｏｍａｔｉｃ Ｓａｆｅｔｙ Ｃａｔｃｈ樹脂、ＢＡｌ樹脂及びＦｍｏｃ－ヒドロキシルアミン２ クロロトリチル樹脂を含む。他の樹脂は、ＰＬ Ｃｌ－Ｔｒｔ樹脂、ＰＬ－Ｏｘｉｍｅ樹脂及びＰＬ－ＨＭＢＡ樹脂を含む。一般的に、樹脂は交換可能である。

【0629】

各々の樹脂の場合、適切なカップリング条件は、出発モノマーまたはサブユニットの取り付けに対する文献において公知されている。

【0630】

固相支持体の調製は、支持体を適切な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で溶媒和することを含む。固相は、通常的に、溶媒化の間、体積が増加し、これは次いでペプチド合成を実施するために利用可能な表面積を増加させる。

【0631】

次いで、ペプチド鎖を固相支持体に連結するためのリンカー分子を支持体に付着させる。リンカー分子は一般的に、最終的な切断がＣ－末端に遊離酸またはアミドのいずれかを提供するように設計される。リンカーは一般的に、樹脂特異的ではない。リンカーの例は、ペプチド酸、例えば、４－ヒドロキシメチルフェノキシアセチル－４’－メチルベンズヒドリルアミン（ＨＭＰ）またはペプチドアミド、例えば、ベンズヒドリルアミン誘導体を含む。

【0632】

ペプチド配列の第１アミノ酸は、リンカーを固相支持体に取り付けた後、リンカーに取り付けられることができるか、ペプチド配列の第１アミノ酸を含むリンカーを使用して、固相支持体に取り付けることができる。アミノ酸を含むリンカーは、商業的に利用可能である。

【0633】

次のステップは、第１アミノ酸のＮα－アミノ基を脱保護することである。Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳの場合、Ｎα－アミノ基の脱保護は、弱塩基処理（例えば、ピペラジンまたはピペリジン）によって実施することができる。測鎖保護基は、適度な酸分解（例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））によって除去することができる。Ｂｏｃ ＳＰＰＳの場合、Ｎα－アミノ基の脱保護は、例えば、ＴＦＡを使用して実施することができる。

【0634】

脱保護後、アミノ酸鎖伸長またはカップリングは、ペプチド結合の形成によって進行する。この過程は、カップリングされるアミノ酸のＣ－α－カルボキシル基の活性化を必要とする。これは例えば、現場試薬、予備形成された対称無水物、活性エステル、酸ハロゲン化物またはウレタン保護Ｎ－カルボキシ無水物を使用して達成することができる。現場方法は、同時活性化及びカップリングを可能にする。カップリング試薬は、カルボジイミド誘導体、例えば、Ｎ、Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはＮ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミドを含む。カップリング試薬はまた、ベンゾトリアゾールのウロニウムまたはホスホニウム塩誘導体も含む。そのようなウロニウム及びホスホニウム塩の例は、ＨＢＴＵ（Ｏ－１Ｈ－ベンゾトリアゾ－ル－１－イル）－Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェ－ト）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾ－ル－１－イル－オキシ－トリス－（ジメチルアミノ）－ホスホニウムヘキサフルオロホスフェ－ト）、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾ－ル－１－イル－オキシ－トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェ－ト）、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ（Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾ－ル－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェ－ト）、ＴＣＴＵ（Ｏ－１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾ－ル－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレ－ト）、ＨＡＴＵ（Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾ－ル－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェ－ト）、ＴＡＴＵ（Ｏ－（－７－アザベンゾトリアゾ－ル－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレ－ト）、ＴＯＴＵ（Ｏ－［シアノ（エトキシカルボニルアミノ］－Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ”－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレ－ト）、及びＨＡＰｙＵ（Ｏ－（ベンゾトリアゾ－ル－１－イル）オキシビス－（ピロリジノ）－ウロニウムヘキサフルオロホスフェ－トを含む。いくつかの実施形態において、カップリング試薬は、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＢＯＰまたはＰｙＢＯＰである。

【0635】

所望のアミノ酸配列を合成した後、ペプチドを樹脂から切断する。この過程に使用される条件は、測鎖保護基及びペプチドのアミノ酸組成の感受性に依存する。一般的に、切断は、保護基及びリンカーに由来する反応性カルボニウムイオンをクエンチさせるために、複数のスカベンジング剤を含有する環境で実施する。一般的な切断剤は、例えば、ＴＦＡ及びフッ化水素（ＨＦ）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドがリンカーを介して固相支持体に結合される場合、ペプチド鎖は、リンカーからペプチドを切断することにより、固相支持体から切断される。

【0636】

樹脂からペプチドを切断するために使用される条件は、１つ以上の測鎖保護基を同時に除去することができる。

【0637】

ＳＰＰＳにおける保護基の使用は、十分に確立されている。一般的な保護基の例は、これらに限定されるものではないが、アセトアミドメチル（Ａｃｍ）、アセチル（ＡＣ）、アダマンチルオキシ（ＡｄａＯ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、２－ブロモベンジル、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、２－ブロモベンジルオキシカルボニル（２－ＢＲ－Ｚ）、ｔｅｒｔ－ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔｅｒｔ－ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔＢｕ）、ｔｅｒｔ－ブチルチオ（ｔＢｕｔｈｉｏ）、２－クロロベンジルオキシカルボニル（２－Ｃｌ－Ｚ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、２、６－ジクロロベンジル（２、６－ＤｉＣｌ－Ｂｚｌ）、４、４’－ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、１－（４、４－ジメチル－２、６－ジオキソ－シクロヘキシリデン）３－メチル－ブチル（ｉｖＤｄｅ）、４－｛Ｎ－［１－（４、４－ジメチル－２、６－ジオキソ－シクロヘキシリデン）３－メチルブチル］－アミノ）ベンジルオキシ（ＯＤｍａｂ）、２、４－ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ホルミル（Ｆｏｒ）、メシチレン－２－スルホニル（Ｍｔｓ）、４－メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、４－メトキシ－２、３、６－トリメチル－ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、４－メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４－メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４－メチルトリチル（Ｍｔｔ）、３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、２、２、４、６、７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（Ｐｂｆ）、２、２、５、７、８－ペンタメチル－クロマン－６－スルホニル（Ｐｍｃ）、トシル（Ｔｏｓ）、トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）、トリメチルアセトアミドメチル（Ｔａｃｍ）、トリチル（Ｔｒｔ）及びキサンチル（Ｘａｎ）を含む。

【0638】

ペプチドのアミノ酸の１つ以上の測鎖が、例えば、追加のカルボキシル、アミノ、ヒドロキシまたはチオール基のような官能基を含有する場合、さらなる保護基が必要な場合がある。例えば、Ｆｍｏｃ戦略が使用される場合、Ｍｔｒ、Ｐｍｃ、ＰｂｆがＡｒｇの保護のために使用されることができ；Ｔｒｔ、ＴｍｏｂがＡｓｎ及びＧｌｎの保護のために使用されることができ；ＢｏｃがＴｒｐ及びＬｙｓの保護のために使用されることができ；ｔＢｕがＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒの保護のために使用されることができ；Ａｃｍ、ｔＢｕ、ｔＢｕｔｈｉｏ、Ｔｒｔ及びＭｍｔがＣｙｓの保護のために使用され得る。当業者は、多くの他の適切な組み合わせが存在することを理解するであろう。

【0639】

前記に概略されたＳＰＰＳ方法は、当業界においてよく公知されている。例えば、文献［Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８９；Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ：“Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ２ｎｄ Ｅｄ．，”Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，１９８４；Ｊｏｎｅｓ，“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，”Ｏｘｆｏｒｄ： Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９９４；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４６－２１４９（１９６３）；Ｍａｒｇｌｉｎ，Ａ．ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９：８４１－６６（１９７０）；ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ Ｒ．Ｂ．ＪＡＭＡ． ２１０（７）：１２４７－５４（１９６９）；ａｎｄ“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ-Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”（Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ ａｎｄ Ｐ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ，ｅｄｓ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）］を参照する。ペプチドまたはポリペプチドの自動合成のための装置は、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のような供給元から容易に商業的に利用可能であり、製造業者の指針に従って操作することができる。

【0640】

樹脂からの切断に続いて、例えば、遠心分離または濾過により、ペプチドを反応媒体から分離することができる。次いで、例えば、１つ以上の適切な溶媒を使用して、ＨＰＬＣにより、ペプチドを後続して精製することができる。

【0641】

有利には、本発明者らは、いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、樹脂からのペプチドを切断した後に、精製なしで、本発明の方法に使用することができることを見出した。

【0642】

本発明者らはまた、有利には、いくつかの実施形態において、ペプチドがＮα－アミノ基保護基または任意の測鎖保護基を含有しないペプチド含有接合パートナーを使用して、本発明のチオレン方法を実施することができることを見出した。反応は、一般的に、チオール及び非芳香族炭素－炭素二重結合の反応に対して選択的である。

【0643】

本発明の方法において所望しない競争反応を抑制するために、ペプチド含有接合パートナー（例えば、ペプチドのシステイン残基）に存在するチオール基を保護基で保護する必要があり得る。チオール基は、ペプチドに存在する１つ以上の他の保護基を除去するか、樹脂からペプチドを切断するために使用される条件下で、除去できない保護基によって保護することができる。

【0644】

典型的には、ペプチドは、適切な保護基を有するアミノ酸を使用して合成されるであろう。当業者は、過度の実験なしで、適切な保護基を選択することができるであろう。

【0645】

アミノ酸含有接合パートナー及び／または脂質含有接合パートナーは、反応される脂質含有接合パートナーの炭素－炭素二重結合の添加時に、１つ以上の不飽和炭素－炭素結合を含むことができる。当業者は、そのような実施形態において、反応される炭素－炭素二重結合に対するチオールの選択性が、例えば、１つ以上の追加の不飽和炭素－炭素結合に対する炭素－炭素二重結合の立体的及び／または電子的環境に依存することができることを理解するであろう。特定の実施形態において、反応される炭素－炭素二重結合は、アミノ酸含有接合パートナー及び脂質含有接合パートナー内の任意の他の不飽和炭素－炭素結合に対して活性化される。特定の実施形態において、反応される炭素－炭素二重結合は、ペプチド含有接合パートナー及び脂質含有接合パートナー内の任意の他の不飽和炭素－炭素結合に対して活性化される。

【0646】

いくつかの実施形態において、チオールを含むアミノ酸含有接合パートナーのアミノ酸のＮα－アミノ基は、アシル化され、例えば、アセチル化される。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、反応されるチオールまたは炭素－炭素二重結合を含むアミノ酸含有接合パートナーのアミノ酸のＮα－アミノ基をアシル化し、例えば、アセチル化することを含むことができる。

【0647】

ペプチド含有接合パートナーがＳＰＰＳによって合成された場合、アシル化は、樹脂からの切断の前、または後に実施することができる。いくつかの実施形態において、反応されるチオールを有するペプチド含有接合パートナーのアミノ酸残基は、Ｎ－末端アミノ酸残基、例えば、システインであり、本方法は、ペプチドを切断する前にＮ－末端アミノ基をアシル化することを含む。

【0648】

いくつかの実施形態において、本方法は、脂質部分が接合されたアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸残基のＮα－アミノ基をアシル化、例えば、アセチル化することをさらに含む。

【0649】

アミノ酸のＮα－アミノ基のアシル化は、適切な溶媒、例えば、ＤＭＦ中、塩基の存在下で、アシル化剤とアミノ酸またはペプチドを反応せしめることにより、実施することができる。アシル化剤の非限定的例は、酸ハロゲン化物、例えば、塩化アセチルのような酸塩化物、及び酸無水物、例えば、無水酢酸を含む。そのような剤は、商業的に利用可能であるか、当業界においてよく公知された方法によって製造することができる。適切な塩基の非限定的例は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４－メチルモルホリンなどを含む。

【0650】

他の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドの合成は、Ｎα－アミノ基でアシル化され、例えば、アセチル化され、反応されるチオールを含むアミノ酸を含むアミノ酸またはペプチドを１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドにカップリングさせることを含む。

【0651】

いくつかの実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせてペプチド接合体を生成することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸を、ＳＰＰＳによって固相樹脂支持体に結合されたアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、アミノ酸接合体のアミノ酸を、ＳＰＰＳによって固相樹脂支持体に結合されたペプチドにカップリングさせることを含む。本方法は、ＳＰＰＳによって固相樹脂支持体に結合されたペプチドを合成することを含むことができる。

【0652】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、アミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることをさらに含む。いくつかの実施形態において、カップリングされるペプチドは、ペプチドエピトープを含む。他の実施形態において、ペプチドエピトープは、カップリング時に形成される。カップリングは、本明細書に記載されたように、ＳＰＰＳによって実施することができる。

【0653】

いくつかの実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、アミノ酸接合体のアミノ酸をＳＰＰＳによって固相樹脂支持体に結合されたペプチドにカップリングさせることを含む。

【0654】

一実施形態において、カップリングされるペプチド接合体のペプチドは、固相樹脂支持体に結合され、本方法は、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、カップリングされるペプチド接合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることを含む。

【0655】

代替的実施形態において、本方法は、ペプチドエピトープを含むペプチド接合体を生成するために、ペプチド接合体のアミノ酸をＳＰＰＳによって固相樹脂支持体に結合されたアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることを含む。

【0656】

いくつかの実施形態において、本方法は、エピトープ、例えば、ペプチドエピトープをアミノ酸接合体またはペプチド接合体にカップリングさせることをさらに含む。本方法がペプチドエピトープをカップリングすることを含む場合、カップリングは、本明細書に記載されたように、ＳＰＰＳによって実施することができる。

【0657】

特定の実施形態において、エピトープ、例えば、ペプチドエピトープは、リンカー基を介してカップリングされるか、結合される。特定の実施形態において、リンカー基は、アミノ配列、例えば、２つ以上、３個以上または４個以上の連続するアミノ酸の配列である。特定の実施形態において、リンカーは、約２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、４～２０、４～１８、４～１６、４～１４、４～１２または４～１０個のアミノ酸を含む。

【0658】

当業者は、本明細書に記載されたように、アミノ酸またはペプチドを別のアミノ酸またはペプチドにカップリングさせることは、１つのカップリングパートナーのペプチドの前記アミノ酸または１つのアミノ酸のＮα－末端と他のカップリングパートナーのペプチドの前記アミノ酸または１つのアミノ酸のＣ－末端との間にペプチド結合を形成することを含むことができることを理解するであろう。

【0659】

いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳによって合成すること；ペプチド含有接合パートナーを反応せしめることを含む。

【0660】

いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳによって合成すること；及び脂質含有接合パートナーをペプチド含有接合パートナーと反応せしめることを含む。

【0661】

いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳによって合成することは、アミノ酸またはペプチドを固相樹脂支持体に結合されたアミノ酸またはペプチドにカップリングさせて、ペプチドのアミノ酸配列またはその一部を生成することを含む。特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーの全ペプチドのアミノ酸配列は、ＳＰＰＳによって合成される。

【0662】

ペプチド含有接合パートナーは、例えば、チオレン方法において、固相樹脂支持体に結合されたまま、脂質含有接合パートナーと反応せしめられ得る。代替的に、ペプチドは、固相樹脂支持体から切断することができ、例えば、脂質含有接合パートナーとの反応の前に選択的に精製することができる。

【0663】

ペプチド接合体及び／またはアミノ酸含有接合パートナー、例えば、ペプチド含有接合パートナーは、１つ以上の可溶化基を含むことができる。１つ以上の可溶化基は、例えば、水のような極性溶媒中のペプチド含有接合パートナーの溶解度を増加させる。例示的な実施形態において、可溶化基は、ペプチド接合体の生物学的活性に悪影響を及ぼさない。

【0664】

可溶化基の存在は、薬学的組成物としての、ペプチド接合体の配合及び／または投与に有利であり得る。

【0665】

いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合される。いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合される。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体のペプチド及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、可溶化基を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、可溶化基を含む。

【0666】

いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内のアミノ酸の測鎖に結合される。いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖のＣ－またはＮ－末端に結合される。いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内の２つのアミノ酸残基の間に結合される。いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内の１つのアミノ酸残基のＮα－アミノ基、及びペプチド鎖内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合される。

【0667】

適切な可溶化基の例は、これらに限定されるものではないが、親水性アミノ酸配列、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

【0668】

一実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内に２つ以上の親水性アミノ酸残基を含む親水性アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、可溶化基は、ペプチド鎖内に２つ以上の連続親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である。そのような可溶化基は、ＳＰＰＳによって、可溶化基の各々のアミノ酸をペプチド鎖に添加することによって形成することができる。

【0669】

別の実施形態において、可溶化基は、ポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールは、ペプチド鎖内の１つのアミノ酸残基のＮα－アミノ基、及びペプチド鎖内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合される。

【0670】

いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールは、約１～約１００、約１～約５０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約１０または約２～約４個のエチレングリコールモノマー単位を含む。ポリエチレングリコールをペプチドにカップリングさせる方法は、公知されている。

【0671】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、抗原、例えば、抗原性ペプチドを含む。一実施形態において、ペプチド接合体またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、抗原であるか、それを含み；または抗原は、選択的にリンカーを介してペプチドに結合される。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、抗原、例えば、抗原性ペプチドを含む。一実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、抗原であるか、それを含み；または抗原は、選択的にリンカーを介してペプチドに結合される。

【0672】

一実施形態において、抗原は、エピトープを含むペプチドを含む。一実施形態において、エピトープを含むペプチドは、エピトープを含む糖ペプチドである。一実施形態において、抗原は、エピトープを含む糖ペプチドを含む。

【0673】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、エピトープを含む。

【0674】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、２つ以上のエピトープを含み、例えば、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、２つ以上のエピトープを含む。

【0675】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、エピトープを含む糖ペプチドであるか、それを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、糖ペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合されたエピトープを含む糖ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、エピトープを含む糖ペプチドであるか、それを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、糖ペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、ペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合されたエピトープを含む糖ペプチドを含む。

【0676】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、タンパク質分解切断部位を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、タンパク質分解切断部位を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、タンパク質分解切断部位を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、タンパク質分解切断部位を含む。

【0677】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、１つ以上のリンカー基を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーのペプチドは、１つ以上のリンカー基を含む。

【0678】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、リンカー基を含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、リンカー基を含む。

【0679】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーは、リンカー基を介して、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合されたエピトープを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、リンカー基を介して、ペプチド含有接合パートナーのペプチドに結合されたエピトープを含む。

【0680】

リンカー基の例は、これらに限定されるものではないが、アミノ酸配列（例えば、ペプチド）、ポリエチレングリコール、アルキルアミノ酸などを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、タンパク質分解切断部位であるか、それを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、可溶化基であるか、それを含む。

【0681】

いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチド鎖内の２つのアミノ酸残基の間に結合される。

【0682】

いくつかの実施形態において、リンカー基は、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナー内の１つのアミノ酸残基のＮα－アミノ基、及びペプチド含有接合パートナー内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合される。いくつかの実施形態において、リンカー基は、ペプチド含有接合パートナー内の１つのアミノ酸残基のＮα－アミノ基、及びペプチド含有接合パートナー内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合される。

【0683】

特定の実施形態において、リンカー基は、それが結合されたアミノ酸からインビボで切断可能である。特定の実施形態において、リンカー基は、インビボで加水分解によって切断可能である。特定の実施形態において、リンカー基は、インビボで酵素加水分解によって切断可能である。リンカー基は、当業界において公知されたいずれかの適切な方法によって導入され得る。

【0684】

本方法は、エピトープをアミノ酸接合体のアミノ酸またはペプチド接合体のペプチドにカップリングさせることをさらに含むことができる。エピトープは、前記に記載されたように、リンカー基を介して結合され得る。いくつかの実施形態において、エピトープは、ペプチドエピトープである。いくつかの実施形態において、本方法は、エピトープを含む糖ペプチドをカップリングさせることを含む。

【0685】

特定の好ましい実施形態において、本発明のペプチド接合体が、抗原提示細胞による、適切な取り込み、プロセッシング及び提示を維持することが理解されるであろう。好ましくは、脂質含有接合体は、抗原提示細胞による、接合体内に存在するいずれかの抗原性ペプチドの提示を妨害しない。本明細書に提供された実施例は、本発明の接合体が、抗原提示細胞によって非接合された関連ペプチドと同等に提示されるということを確証する。

【0686】

合成されたペプチドのアイデンティティの確認は、例えば、アミノ酸分析、質量分析、エドマン分解（Ｅｄｍａｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）などによって簡便に達成され得る。

【0687】

本発明の方法は、液体反応媒体からアミノ酸接合体を分離することをさらに含むことができる。代替的に、本発明の方法は、液体反応媒体からペプチド接合体を分離することをさらに含むことができる。当業界において公知された任意の適切な分離方法、例えば、沈殿及び濾過が使用され得る。接合体は、例えば、１つ以上の適切な溶媒を使用して、ＨＰＬＣにより後続して精製され得る。

【0688】

本発明はまた、本発明の方法によって製造されたアミノ酸接合体及びペプチド接合体も関する。

【0689】

本発明はまた、アミノ酸接合体である式（Ｉ）の化合物にも関する。

【0690】

本発明はまた、ペプチド接合体である式（Ｉ）の化合物に関する。

【0691】

ペプチド接合体は、純粋であるか、精製されるか、実質的に純粋であり得る。

【0692】

本明細書において使用される場合、“精製された（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）”は、絶対的な純度を必要とせず；むしろ、問題の材料が以前の環境でよりも、より純粋である相対的な用語として意図される。実際、材料は、典型的に、例えば、種々の他の成分を除去するために、分別化を行い、生成された材料は、その所望の生物学的活性または活性を実質的に保持している。用語“実質的に精製された（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｐｕｒｉｆｉｅｄ）”は、製造の間に関連することができる他の成分が、少なくとも約６０％不含有、好ましくは少なくとも約７５％不含有、最も好ましくは少なくとも約９０％不含有、少なくとも約９５％不含有、少なくとも約９８％不含有、またはそれ以上不含有する材料を意味する。

【0693】

用語“α－アミノ酸”または“アミノ酸”は、α－炭素として呼ばれる炭素に結合されたアミノ基及びカルボキシル基の両者を含有する分子を意味する。適切なアミノ酸は、有機合成または他の代謝経路により調製された天然に存在しないアミノ酸だけでなく、天然に存在するアミノ酸のＤ－及びＬ－異性体の両者を含む。文脈が他に特別に指示しない限り、本明細書において使用されるような用語アミノ酸は、アミノ酸類似体を含むことが意図される。

【0694】

特定の実施形態において、ペプチド含有接合パートナーは、天然アミノ酸のみを含む。用語“天然に存在するアミノ酸（ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）”は、天然において合成されたペプチドに通常、見出される２０個のアミノ酸のいずれか１つを意味し、一文字略語Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ及びＶで知られている。

【0695】

用語“アミノ酸類似体（ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎａｌｏｇ）”または“天然に存在しないアミノ酸（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ａｃｃｕｒｒｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）”は、アミノ酸と構造的に類似し、アミノ酸で置換され得る分子を意味する。アミノ酸類似体は、限定なく、アミノ基とカルボキシル基との間に１つ以上の追加のメチレン基が含まれたこと（例えば、α－アミノβ－カルボン酸）、またはアミノまたはカルボキシル基が類似の反応性基で置換されたこと（例えば、第１アミンが第２または第３アミンで置換されたこと、またはカルボキシル基がエステルまたはカルボキサミドで置換されたこと）を除いて、本明細書に定義されたように、アミノ酸に構造的に同一である化合物を含む。

【0696】

特に断りのない限り、当業者の技術範囲内である分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術が、本明細書に記載された方法を実施するのに使用され得る。そのような技術は、文献［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ＆ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ＆ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｄａｖｉｄ Ｗｉｌｄ，ｅｄ．，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ ＮＹ，１９９４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）；ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｒ．Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ，Ｗ．Ｈ．Ａｌｂｅｒｔ，ａｎｄ Ｎ．Ａ．Ｓｔａｉｎｅｓ，ｅｄｓ．，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇｓ ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｂＨ，１９９３）］に十分に説明されている。

【0697】

用語“ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）”などは、任意の長さのアミノ酸残基のいずれかのポリマーを指すために、本明細書において使用される。ポリマーは、線状または非線状（例えば、分枝鎖）であることができ、それは修飾されたアミノ酸またはアミノ酸類似体を含むことができる。前記用語はまた、天然においてもしくは介入によって、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂肪化、アセチル化、リン酸化、またはいずれか他の修飾または操作、例えば標識又は生活性成分との接合によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含する。

【0698】

本発明者らは、本発明のペプチド接合体が免疫学的活性を有することを見出した。

【0699】

細胞媒介性免疫は、主にＴ－リンパ球によって媒介される。病原性抗原は、主要組織適合性ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合された抗原提示細胞（例えば、マクロファージ、Ｂ－リンパ球及び樹状細胞）の表面上に発現される。ＭＨＣクラスＩＩにカップリングされた病原性抗原の提示は、ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞応答を活性化させる。抗原－ＭＨＣＩＩ複合体にＴ細胞が結合すると、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、サイトカインを放出し、増殖する。

【0700】

ＭＨＣクラスＩ分子に結合された病原性抗原の提示は、細胞毒性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞応答を活性化させる。抗原－ＭＨＣＩ複合体にＴ細胞が結合すると、ＣＤ８＋細胞は、パーフォリン及び他のメディエーターを分泌し、標的細胞死をもたらす。いずれかの理論に束縛されることを望むものではないが、本出願人らは、特定の実施形態において、ＣＤ８＋細胞によって増強された応答がＣＤ４＋細胞によって認識される１つ以上のエピトープの存在下で達成されると考えている。

【0701】

対象における細胞媒介性応答の開始または進行を評価し、モニターする方法は、当業界においてよく公知されている。便利な例示的な方法は、本明細書において同定されたもののように、細胞媒介性応答に関連する１つ以上のサイトカインの存在またはレベルが評価される方法を含む。同様に、細胞媒介性応答の開始及び進行を評価するか、モニターする細胞ベースの方法は、本発明での使用に適しており、Ｔ－リンパ球のような免疫細胞の１つ以上の集団の活性化または拡大の確認に標的化されたアッセイを含み、細胞増殖または活性化決定を含むことができる。

【0702】

特定の実施形態において、本発明の方法は、細胞媒介性免疫応答及び体液性応答の両方を誘発する。

【0703】

体液性免疫応答は、Ｂ細胞により生成される分泌抗体によって媒介される。分泌された抗体は、侵入した病原体の表面上に提示される抗原に結合し、それらを破壊するために合図をする。

【0704】

再び、体液性応答の開始または進行を評価し、モニターする方法は、当業界においてよく公知されている。それらには、抗体結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、皮膚ブリックテストなどが含まれる。

【0705】

理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、いくつかの実施形態において、ペプチド接合体がＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を刺激すると考えている。

【0706】

Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、病原体関連分子パターンを認識し、細胞に危険信号を伝達する高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）である（文献［Ｋａｗａｉ，Ｔ．，Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１１，３４，６３７－］）。ＴＬＲ２は、樹状細胞、マクロファージ及びリンパ球を含む種々の異なる細胞型の範囲で発現される細胞表面受容体である（文献［Ｃｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｓｈｅｒ，Ａ．，Ｓｅｄｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１０，３３，４９２－５０３］）。

【0707】

ＴＬＲ２は、リポ多糖類、ペブチドグリカン及びリポテイコ酸を含む広範囲の微生物成分を認識する。それは、ＴＬＲ１またはＴＬＲ６とヘテロ二量体を形成する点において、ＴＬＲの中でユニークであり；他のＰＲＲと複合体を形成する能力は、ＴＬＲ２に対する広範囲のアゴニストを説明することができる（文献［Ｆｅｌｄｍａｎｎ，Ｍ．，Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２００５，４３５，６１２－６１９］）。リガンド結合及びヘテロ二量体化の際に、シグナル伝達がＭｙＤ８８経路を介して起こり、ＮＦκＢ活性化及びこれによる炎症及びエフェクターサイトカインの生成を起こす。

【0708】

細菌の細胞壁成分に由来するジ－及びトリアシル化されたリポペプチドが、ＴＬＲ２アゴニストとして集中的に研究されて来ている（文献［Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．Ｙ．，Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔ．ａｎｄ Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２００７，８，４１２－４１７］）。リポペプチドは、樹状細胞の成熟を促進し、細胞表面上の共刺激分子のアップレギュレーション及び増強された抗原提示を引き起こすことが報告されている。リポペプチドはまた、マクロファージを刺激してサイトカインを放出し、Ｂ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むリンパ球の活性化を促進することも報告されている。

【0709】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体は、ＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４に匹敵するＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４の少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％活性のＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、例えば、モジュレートされた免疫応答が所望の実施形態においての場合、ペプチド接合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４の活性よりも低いＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。例えば、ペプチド接合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４の活性の約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満または約１０％未満のＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。

【0710】

いくつかの実施形態において、ペプチド接合体及び／またはペプチド含有接合パートナーのペプチドは、脂質部分がペプチドに接合されたアミノ酸に隣接したセリンアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、セリンは、アミノ酸のＣ－末端に結合される。この位置でのセリンアミノ酸残基の存在が、ＴＬＲ２結合を増強させることができる。

【0711】

本開示を読む当業者には理解されるように、ペプチド接合体は、例えば２つ以上のエピトープを含むエピトープを含むことができる。エピトープは、リンカー基を介してペプチドにカップリングされるか、結合されることができる。いくつかの実施形態において、エピトープは、ペプチドエピトープである。当業者は、広範囲のペプチドエピトープが本発明に使用され得ることを理解するであろう。

【0712】

抗原
非常に多くの抗原、例えば腫瘍抗原、または種々の病原性生物からの抗原が特徴付けられており、本発明での使用に適切なことは理解されるであろう。現在、特徴付けられているか、否かにかかわらず、免疫応答を誘発することができるすべての抗原が考慮される。

【0713】

従って、抗原の選択に依存して、本発明の接合体は、これらに限定されるものではないが、感染性疾患の治療及び予防、癌の治療及び予防、及び例えば、骨髄移植または造血幹細胞移植を受けた患者に免疫抑制の間、またはその後のウィルス再活性化の治療を含み、広範囲の免疫療法に適用されることが見出された。

【0714】

また、１つ以上の保存的アミノ酸置換のような１つ以上のアミノ酸置換を含む抗原が考慮される。

【0715】

“保存的アミノ酸置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）”は、アミノ酸残基が、化学的に類似するか、誘導体化された測鎖を有する別の残基で置換されたものである。同様の測鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、例えば、当業界において定義されている。それらのファミリーは、例えば、塩基性測鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性測鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性測鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性測鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β―分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族測鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。これらに限定されるものではないが、Ｎ－アルキル化されたアミノ酸（例えば、Ｎ－メチルアミノ酸）、Ｄ－アミノ酸、β－アミノ酸及びγ－アミノ酸を含み、天然に存在しないアミノ酸で置換されたペプチドであるので、アミノ酸類似体（例えば、リン酸化されるか、グリコシル化されたアミノ酸）もまた本発明において考慮される。

【0716】

抗原のフラグメント及び変異体も特に考慮される。

【0717】

ペプチドの“フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ）”は、酵素または結合活性に必要な機能を果たし、及び／またはペプチドの３次元構造、例えば、ポリペプチドの３次元構造を提供するペプチドの下位配列である。

【0718】

本明細書において使用されるような用語“変異体（ｖａｒｉａｎｔ）”は、例えば、１つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加された特異的に同定された配列とは異なるペプチド配列を含むペプチド配列を指す。変異体は、天然に存在する変異体または天然に存在しない変異体である。変異体は、同じか、他の種から由来したものであり、相同体（ホモｌｏｇｕｅ）、パラログ（ｐａｒａｌｏｇｕｅ）及びオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇｕｅ）を包含することができる。特定の実施形態において、ペプチドを含むペプチドの変異体は、野生型ペプチドのそれと同じかまたは類似の生物学的活性を有する。ペプチドに関連する用語“変異体”は、本明細書において定義されたようなすべての形態のペプチドを包含する。

【0719】

当業者は、本発明の接合体が、特定の実施形態において、例えば、癌を含む腫瘍性疾患の治療において、Ｔ細胞応答を刺激するのに特に適切であることを理解するであろう。１つ以上の腫瘍抗原を含む本発明の接合体が特に考慮される。本発明のペプチド接合体の製造に使用するために考慮される腫瘍抗原は一般的に、１つ以上のペプチドを含むことが理解されるであろう。例えば、本発明の薬学的組成物を含む本発明の特定の実施形態において、１つ以上の追加の腫瘍抗原が存在することができ、ここで、１つ以上の腫瘍抗原はペプチドを含まない。腫瘍抗原は、典型的には、ユニーク抗原または共有抗原のいずれかに分類され、後者のグループは、分化抗原、癌特異的抗原、及び過剰発現抗原を含む。各クラスの抗原の例は、本発明において使用に適している。治療、例えば免疫療法治療、または癌を含む腫瘍性疾患に対するワクチンを接種に使用するための代表的な腫瘍抗原が下記に論じられる。それらの免疫方法を使用して調製された１つ以上の抗原を含む化合物、ワクチン及び組成物が特に考慮される。

【0720】

特定の実施形態において、腫瘍抗原は、ペプチド含有腫瘍抗原、例えばポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原である。特定の実施形態において、腫瘍抗原は、糖類含有腫瘍抗原、例えば、糖脂質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原である。特定の実施形態において、腫瘍抗原は、ポリペプチド含有腫瘍抗原、例えば、ＲＮＡベクターコンストラクトまたはＤＮＡベクターコンストラクト、例えば、プラスミドＤＮＡを発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原である。

【0721】

本発明における使用に適切な腫瘍抗原は、（ａ）ペプチドエピトープ（例えば、８～２０個のアミノ酸長さの範囲であり得るが、この範囲以外の長さも一般的である）、リポポリペブティド及び糖タンパク質を含むペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖類、ムチン、ガングリオシド、糖脂質及び糖タンパク質を含む糖類含有腫瘍抗原、及び（ｃ）抗原性ポリペプチドを発現するポリヌクレオシドのような非常に種々の分子を包含する。再び、当業者は、本発明の接合体または組成物に存在する腫瘍抗原が典型的には、ペプチドを含むことを認識するであろう。しかし、１つ以上の接合体が、それ自体はペプチドを含まないが、例えば、アミノ酸含有またはペプチド含有接合パートナーに結合された腫瘍抗原を含む本発明の実施形態が考慮される。同様に、それ自体はペプチドを含まない１つ以上の腫瘍抗原が存在する本発明の組成物が考慮される。

【0722】

特定の実施形態において、腫瘍抗原は、例えば、（ａ）癌細胞に関連する全長分子、（ｂ）欠失、付加及び／または置換された部分を有する分子を含む相同体及びその修飾された形態、及び（ｃ）それらのフラグメントであって、前記フラグメントが抗原性または免疫原性を保持する場合のフラグメントである。特定の実施形態において、腫瘍抗原は、組換え形態で提供される。特定の実施形態において、腫瘍抗原は、例えば、ＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ制限抗原、またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ制限抗原を含む。特定の実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ制限抗原、またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ制限抗原を含む合成ペプチドを含む。

【0723】

共有腫瘍抗原は、一般的に、発生的に抑制された遺伝子の脱抑制を可能にするエピジェネティックな変化にために、腫瘍によって発現されるネイティブの変異誘発されていない配列であると見なされる。従って、共有抗原は、正常組織には発現は存在しないので、典型的には、過剰発現または分化関連抗原よりも好まししいと考慮される。また、同じ抗原を多くの癌患者において標的化することができる。例えば、癌－精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１は、多くの腫瘍を有する大多数の患者、及び他の腫瘍を有するかなり少数の患者に存在する。別の例において、乳房分化腫瘍抗原ＮＹＢＲ－１及びＮＹＢＲ－１．１は、乳癌患者の一部に見出される。従って、共有腫瘍抗原は、開発のための魅力的な標的となる。

【0724】

本発明の接合体に、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＣＴＳＰ－１、ＣＴＳＰ－２、ＣＴＳＰ－３、ＣＴＳＰ－４、ＳＳＸ２及びＳＣＰ１を含む癌－精巣抗原、及び乳癌抗原ＮＹＢＲ－１及びＮＹＢＲ－１．１のような共有腫瘍抗原を使用することが、本明細書において特に考慮される。

【0725】

１つの例示的な実施形態において、ペプチド含有接合パートナーまたはペプチド接合体のペプチドは、ＮＹ－ＥＳＯ－１に由来した１つ以上のエピトープを含む。一実施形態において、前記ペプチドは、ＮＹ－ＥＳＯ－１残基７９～１１６に由来した１つ以上のエピトープを含む。一実施形態において、前記ペプチドは、ＮＹ－ＥＳＯ－１残基１１８～１４３に由来した１つ以上のエピトープを含む。一実施形態において、前記ペプチドは、ＮＹ－ＥＳＯ－１残基１５３～１８０に由来した１つ以上のエピトープを含む。

【0726】

１つの特に考慮される実施形態において、ペプチド含有接合パートナーまたはペプチド接合体のペプチドは、配列番号：１～２０のいずれか１つからの８個以上の連続するアミノ酸、１０個以上の連続するアミノ酸、１２個以上の連続するアミノ酸、１５個以上の連続するアミノ酸、２０個以上の連続するアミノ酸または２５個以上の連続するアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、実質的にそれらからなるか、それらからなる。

【0727】

様々な実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：１～２０のいずれか１つからなる群から選択される１つ超過のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、前記ペプチドは、配列番号：４～７、１２、１３及び１８～２０からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む。

【0728】

同様に、抗原前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）を含む前立腺ワクチンＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ（ＡＰＣ８０１５、Ｐｒｕｖｅｎｇｅ^ＴＭ）は、９５％の前立腺癌細胞に存在する。少なくとも部分的には、前立腺癌患者のかなりの割合におけるこのような有効性の可能性があるため、Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔは、無症候性のホルモン不応性前立腺癌の治療に使用するためのものとして２０１０年にＦＤＡにより承認された。本発明の接合体におけるＰＡＰ抗原の使用は、本発明において特に考慮される。

【0729】

ユニーク抗原は、個体に対してユニークであるか、低割合の癌患者により共有され、典型的には、ユニークタンパク質配列を生成する突然変異によって発生する抗原であると考慮される。ユニーク腫瘍抗原の代表的な例には、突然変異Ｒａｓ抗原及び突然変異ｐ５３抗原が含まれる。本明細書を読んだ当業者には理解されるように、本発明の方法は、例えば、患者特異的療法の調製において、例えば１つ以上のユニーク腫瘍抗原に特異的なＴ細胞応答を誘発するために、１つ以上のユニーク腫瘍抗原を含む接合体の容易な製造を可能にする。

【0730】

従って、代表的な腫瘍抗原は、これらに限定されるものではないが、（ａ）ＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ及びＭＡＧＥファミリーのポリペプチド、例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６及びＭＡＧＥ－１２（例えば、黒色腫、肺、頭頸部、ＮＳＣＬＣ、乳房、胃腸、及び膀胱腫瘍を対処するために使用され得る）のような抗原、（ｂ）突然変異抗原、例えば、ｐ５３（種々の固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（例えば、黒色腫、膵臓癌及び結腸直腸癌に関連する）、ＣＤＫ４（例えば、黒色腫に関連する）、ＭＵＭ１（例えば、黒色腫に関連する）、カスパーゼ－８（例えば、頭頸部癌に関連する）、ＣＩＡ ０２０５（例えば、膀胱癌に関連する）、ＨＬＡ－Ａ２－Ｒ１７０１、βカテニン（例えば、黒色腫に関連する）、ＴＣＲ（例えば、Ｔ細胞非ホジキンリンパ種に関連する）、ＢＣＲ－ａｂｌ（例えば、慢性骨髄性白血病に関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＭＡ ０２０５、ＣＤＣ－２７及びＬＤＬＲ－ＦＵＴ、（ｃ）過剰発現抗原、例えば、ガレクチン４（例えば、結腸直腸癌に関連する）、ガレクチン９（例えば、ホジキン病に関連する）、プロテイナーゼ３（例えば、慢性骨髄性白血病に関連する）、ウィルムス腫瘍抗原－１（ＷＴ１、例えば、種々の白血病に関連する）、炭酸脱水酵素（例えば、腎癌に関連する）、アルドラーゼＡ（例えば、肺癌に関連する）、ＰＲＡＭＥ（例えば、黒色腫に関連する）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（例えば、乳癌、結腸癌、肺癌及び卵巣癌に関連する）、α－フェトプロテイン（例えば、肝癌に関連する）、ＫＳＡ（例えば、結腸直腸癌に関連する）、ガストリン（例えば、膵臓癌及び胃癌に関連する）、テロメラーゼ触媒タンパク質、ＭＵＣ－１（例えば、乳癌および卵巣癌に関連する）、Ｇ－２５０（例えば、腎細胞癌に関連する）、ｐ５３（例えば、乳癌、結腸癌に関連する）、及び癌胎児性抗原（例えば、乳癌、肺癌、及び結腸直腸癌のような胃腸管の癌に関連する）、（ｄ）共有抗原、例えば、黒色腫－メラニン細胞分化抗原、例えば、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ Ａ、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラニン細胞刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質－１／ＴＲＰ１及びチロシナーゼ関連タンパク質－２／ＴＲＰ２（例えば、黒色腫に関連する）、（ｅ）例えば、前立腺癌に関連する前立腺関連抗原、例えばＰＡＰ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ－Ｐ１、ＰＳＭ－Ｐ１、ＰＳＭ－Ｐ２、（ｆ）免疫グロブリンイディオタイプ（例えば、骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫に関連する）、及び（ｇ）他の腫瘍抗原、例えば、ポリペプチド及び糖類含有抗原：（ｉ）糖タンパク質、例えばシアリルＴｎ及びシアリルＬｅ．ｓｕｐ．ｘ（例えば乳癌、及び結腸直腸癌に関連する）及び種々のムチン；糖タンパク質は担体タンパク質にカップリングされる（例えば、ＭＵＣ－１はＫＬＨにカップリングされる）；（ｉｉ）リポポリペブティド（例えば、脂質部分に結合されたＭＵＣ－１）；（ｉｉｉ）担体タンパク質（例えば、ＫＬＨ）にカップリングされた多糖類（例えば、Ｇｌｏｂｏ Ｈ合成六糖類）、（ｉｖ）また、担体タンパク質（例えば、ＫＬＨ）にカップリングされたガングリオシド、例えばＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤ３（例えば、脳、肺癌、黒色腫に関連する）を含むポリペプチド及び糖類含有抗原のような他の腫瘍抗原を含む。

【0731】

本発明の使用に適する他の代表的な腫瘍抗原は、ＴＡＧ－７２（例えば、米国特許第５、８９２、０２０号を参照）；ヒト癌抗原（例えば、米国特許第５、８０８、００５号を参照）；骨細胞腫細胞からのＴＰ１及びＴＰ３抗原（例えば、米国特許第５、８５５、８６６号を参照）；腺癌細胞からのトムセン－フリーデンライヒ（Ｔｈｏｍｓｅｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ）（ＴＦ）抗原（例えば、米国特許第５、１１０、９１１号を参照）；ヒト前立腺腺癌種からのＫＣ－４抗原（例えば、米国特許第４、７４３、５４３号を参照）；ヒト結腸直腸癌抗原（例えば、米国特許第４、９２１、７８９号を参照）；嚢胞腺癌からのＣＡ１２５抗原（例えば、米国特許第４、９２１、７９０号を参照）；ヒト乳癌からのＤＦ３抗原（例えば、米国特許第４、９６３、４８４号及び第５、０５３、４８９号を参照）；ヒト乳房腫瘍抗原（例えば、米国特許第４、９３９、２４０号を参照）；ヒト黒色腫のｐ９７抗原（例えば、米国特許第４、９１８、１６４号を参照）；癌またはオロソムコイド関連抗原（ＣＯＲＡ）（例えば、米国特許第４、９１４、０２１号を参照）；ヒト乳癌の糖タンパク質のＴ及びＴｎハブテン、ＭＳＡ乳癌糖タンパク質；ＭＦＧＭ乳癌抗原；ＤＵ－ＰＡＮ－２膵膓癌抗原；ＣＡ１２５卵巣癌抗原；ＹＨ２０６肺癌抗原、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）肝細胞癌抗原；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）大腸癌抗原；上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）乳癌抗原；チロシナーゼ；ｒａｆ癌遺伝子産物；ｇｐ７５；ｇｐ１００；ＥＢＶ－ＬＭＰ １＆２；ＥＢＶ－ＥＢＮＡ １、２＆３Ｃ；ＨＰＶ－Ｅ４、６、７；ＣＯ１７－１Ａ；ＧＡ７３３；ｇｐ７２；ｐ５３；プロテイナーゼ３；テロメラーゼ；及び黒色腫ガングリオシドを含む。現在特徴づけられているか、否かにかかわらず、それらの及び他の腫瘍抗原が、本発明における使用に考慮される。

【0732】

特定の実施形態において、腫瘍抗原は、突然変異されたか、変更された細胞成分に由来する。変更された細胞成分の代表的な例には、これらに限定されるものではないが、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｉｌｍｓの腫瘍遺伝子によってエンコードされる変更されたタンパク質、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣ及びＭＣＣ遺伝子によってエンコードされるタンパク質、並びに、受容体又は受容体様コンストラクト、例えば、ｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体、及びコロニー刺激因子（ＣＳＦ）受容体を含む。

【0733】

本発明において使用されるポリヌクレオチド含有抗原は、前記に列挙されたものなどのようなポリペプチド腫瘍抗原をエンエンコードするポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、ポリヌクレオチド含有抗原は、これらに限定されるものではないが、インビボでポリペプチド腫瘍抗原を発現することができるＤＮＡまたはＲＮＡベクターコンストラクト、例えばプラスミドベクター（例えば、ｐＣＭＶ）を含む。

【0734】

本発明はまた、免疫抑制されているか、免疫抑制された患者、例えば、骨髄移植、造血幹細胞移植を受けたか、そうではなければ免疫抑制を受けている患者において効果的な抗－ウィルス性免疫を誘発するために、Ｔ細胞を刺激することができるウィルス性抗原を含む接合体の製造を考慮する。

【0735】

同様に、ヒトパピローマウイルス、Ａ型肝炎ウィルス、及びＢ型肝炎ウィルスのように、癌を引き起こすと報告されているか、増加された癌発生率に関連するウィルスに由来する抗原が本発明において使用するために考慮される。

【0736】

例えば、特定の実施形態において、腫瘍抗原は、これらに限定されるものではないが、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ－４０、Ｈ－Ｒａｓ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、エプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）抗原、Ｅ６及びＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型及びＣ型肝炎ウィルス抗原、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウィルス抗原、ＴＳＰ－１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｍｎ－２３Ｈ１、ＴＡＧ－７２－４、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、ベータ－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５－３（ＣＡ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０（Ｍａｃ－２結合タンパク質／サイクロフィリン（ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ）Ｃ－関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳなどを含む。

【0737】

特定の実施形態において、腫瘍抗原は、腫瘍発生に関連するウィルス性タンパク質、例えば、エプスタイン・バール・ウイルス、Ｅ６及びＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、及び、Ｂ型及びＣ型肝炎、及びヒトＴ細胞リンパ球向性ウィルスからの抗原を含む。

【0738】

このようなウイルスタンパク質、並びに、種々の他のウィルス性タンパク質も、例えばウィルス性疾患に対する治療の時に、Ｔ細胞活性の標的になり得ることが理解されるであろう。実際に、本発明は、Ｔ細胞活性が免疫において役割を果たすことと認識されている任意の感染（効果的にすべてのウィルス感染及び結核のような多くの細菌感染も）において有用であり得る。本明細書に記載された感染性疾患は、単なる例として提供され、決して本発明の範囲を限定するものと意図されない。本発明が種々の他の疾患及び病状の治療において有用であり得ることが理解されるであろう。

【0739】

病原性有機体に対するワクチンを接種に使用される代表的な抗原が下記に論じられる。それらの免疫化方法を使用して製造された１つ以上の抗原を含む化合物、ワクチン及び組成物が具体的に考慮される。

【0740】

結核抗原
非常に多くの結核菌（Ｍ．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）抗原が特徴付けられており、本発明における使用に適切なことが理解されるであろう。現在特徴付けられているか否かにかかわらず、免疫応答を誘発することができるすべての結核菌抗原が考慮される。

【0741】

使用するのに適切な例示的結核菌抗原は、初期分泌性抗原標的（ＥＳＡＴ）－６、Ａｇ８５Ａ、Ａｇ８５Ｂ（ＭＰＴ５９）、Ａｇ８５Ｂ、Ａｇ８５Ｃ、ＭＰＴ３２、ＭＰＴ５１、ＭＰＴ５９、ＭＰＴ６３、ＭＰＴ６４、ＭＰＴ８３、ＭＰＢ５、ＭＰＢ５９、ＭＰＢ６４、ＭＴＣ２８、Ｍｔｂ２、Ｍｔｂ８．４、Ｍｔｂ９．９、Ｍｔｂ３２Ａ、Ｍｔｂ３９、Ｍｔｂ４１、ＴＢ１０．４、ＴＢ１０Ｃ、ＴＢ１１Ｂ、ＴＢ１２．５、ＴＢ１３Ａ、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ＴＢ１５Ａ、ＴＢ１６、ＴＢ１６Ａ、ＴＢ１７、ＴＢ１８、ＴＢ２１、ＴＢ２０．６、ＴＢ２４、ＴＢ２７Ｂ、ＴＢ３２、ＴＢ３２Ａ、ＴＢ３３、ＴＢ３８、ＴＢ４０．８、ＴＢ５１、ＴＢ５４、ＴＢ６４、ＣＦＰ６、ＣＦＰ７、ＣＦＰ７Ａ、ＣＦＰ７Ｂ、ＣＦＰ８Ａ、ＣＦＰ８Ｂ、ＣＦＰ９、ＣＦＰ１０、ＣＦＰ１１、ＣＦＰ１６、ＣＦＰ１７、ＣＦＰ１９、ＣＦＰ１９Ａ、ＣＦＰ１９Ｂ、ＣＦＰ２０、ＣＦＰ２１、ＣＦＰ２２、ＣＦＰ２２Ａ、ＣＦＰ２３、ＣＦＰ２３Ａ、ＣＦＰ２３Ｂ、ＣＦＰ２５、ＣＦＰ２５Ａ、ＣＦＰ２７、ＣＦＰ２８、ＣＦＰ２８Ｂ、ＣＦＰ２９、ＣＦＰ３０Ａ、ＣＦＰ３０Ｂ、ＣＦＰ５０、ＣＷＰ３２、ｈｓｐＸ（アルファ－結晶）、ＡＰＡ、ツベルクリン（Ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ）精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、ＳＴ－ＣＦ、ＰＰＥ６８、ＬｐｐＸ、ＰｓｔＳ－１、ＰｓｔＳ－２、ＰｓｔＳ－３、ＨＢＨＡ、ＧｒｏＥＬ、ＧｒｏＥＬ２、ＧｒｐＥＳ、ＬＨＰ、１９ｋＤａリポタンパク質、７１ｋＤａ、ＲＤ１－ＯＲＦ２、ＲＤ１－ＯＲＦ３、ＲＤ１－ＯＲＦ４、ＲＤ１－ＯＲＦ５、ＲＤ１－ＯＲＦ８、ＲＤ１－ＯＲＦ９Ａ、ＲＤ１－ＯＲＦ９Ｂ、Ｒｖ１９８４ｃ、Ｒｖ０５７７、Ｒｖ１８２７、ＢｆｒＢ、Ｔｐｘ．Ｒｖ１３５２、Ｒｖ１８１０、ＰｐｉＡ、Ｃｕｔ２、ＦｂｐＢ、ＦｂｐＡ、ＦｂｐＣ、ＤｎａＫ、ＦｅｃＢ、Ｓｓｂ、ＲｐｌＬ、ＦｉｘＡ、ＦｉｘＢ、ＡｈｐＣ２、Ｒｖ２６２６ｃ、Ｒｖ１２１１、Ｍｄｈ、Ｒｖ１６２６、Ａｄｋ、ＣｌｐＰ、ＳｕｃＤ（文献［Ｂｅｌｉｓｌｅ ｅｔ ａｌ，２００５］；米国特許第７、０３７、５１０号；米国特許第２００４／００５７９６３号；米国特許第２００８／０１９９４９３号；米国特許第２００８／０２６７９９０号）、または前記に言及された抗原のいずれかの少なくとも１つの抗原性部分またはＴ細胞エピトープを含む。

【0742】

肝炎抗原
多くの肝炎抗原が特徴付けられており、本発明における使用に適切である。例示的なＣ型肝炎抗原は、Ｃ－ｐ２２、Ｅ１－ｇｐ３５、Ｅ２－ｇｐ７０、ＮＳ１－ｐ７、ＮＳ２－ｐ２３、ＮＳ３－ｐ７０、ＮＳ４Ａ－ｐ８、ＮＳ４Ｂ－ｐ２７、ＮＳ５Ａ－ｐ５６／５８及びＮＳ５Ｂ－ｐ６８を含み、そこから誘導された１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、各々は（単独でまたは組み合わせて）本発明における適用に適切である。現在特徴付けられているか否かにかかわらず、免疫応答を誘発することができるすべての肝炎抗原が考慮される。

【0743】

インフルエンザ抗原
多くのインフルエンザ抗原が特徴付けられており、本発明における使用に適切である。本発明における使用に適切な例示的なインフルエンザ抗原は、ＰＢ、ＰＢ２、ＰＡ、ヘマグルチニン（ＨＡ）またはノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｍｉｄａｓｅ）（ＮＡ）タンパク質のいずれか、ＮＰ、Ｍ及びＮＳを含み、それらに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、各々は（単独でまたは組み合わせて）本発明における適用に適切である。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、免疫応答を誘発することができるすべてのインフルエンザ抗原が考慮される。

【0744】

炭疽菌抗原
多くの炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）抗原が、ワクチン開発のための潜在的候補として同定されており、本発明において有用である。例えば、ＰＡ８３は、ワクチン開発のためのそのような抗原の１つである。現在、炭疽菌用の唯一のＦＤＡ承認されたワクチンは、“吸着炭疽菌ワクチン（Ａｎｔｈｒａｘ Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｓｏｒｂｅｄ）”（ＡＶＡ）またはＢｉｏＴｈｒａｘ^{(登録商標)}として市販されている。このワクチンは、アルミニウムアジュバントに吸着された炭疽菌の非被包性菌株の無細胞上清液から誘導される。ＰＡは、ＡＶＡの一次免疫原である。本発明における使用に適切な他の例示的な炭疽菌抗原は、保護抗原（ＰＡまたはＰＡ６３）、ＬＦ及びＥＦ（タンパク質）、ポリ－γ－（Ｄ－グルタミン酸）カプセル、胞子抗原（内生胞子特異的成分）、ＢｃｌＡ（外膜特異的タンパク質）、ＢｘｐＢ（胞子関連タンパク質）及び分泌タンパク質を含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべての炭疽菌抗原が考慮される。

【0745】

野兎病抗原
多くの野兎病（Ｆ．ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）抗原が、ワクチン開発のための潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、ＡｃｐＡ及びＩｇｌＣが、ワクチン開発のために適切な抗原である。本発明における使用に適切な他の例示的な野兎病抗原は、Ｏ－抗原、ＣＰＳ、外膜タンパク質（例えば、ＦｏｐＡ）、リポタンパク質（例えば、Ｔｕｌ４）、分泌タンパク質及びリポ多糖を含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべての野兎病抗原が考慮される。

【0746】

ブルセラ症抗原
多くのＢ．アボルトシス（Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓｉｓ）抗原が、ワクチン開発のための潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、Ｏｍｐ１６は、ワクチン開発のためのそのような抗原の１つである。本発明における使用に適切な他の例示的なブルセラ症抗原は、Ｏ－抗原、リポ多糖、外膜タンパク質（例えば、Ｏｍｐ１６）、分泌タンパク質、リボゾームタンパク質（例えば、Ｌ７及びＬ１２）、バクテリオフェリチン（ｂａｃｔｅｒｉｏｆｅｒｒｉｔｉｎ）、ｐ３９（推定上のペリプラズム結合タンパク質）、ｇｒｏＥＬ（熱ショックタンパク質）、ルマジンシンターゼ、ＢＣＳＰ３１表面タンパク質、ＰＡＬ１６．５ＯＭリポタンパク質、カタラーゼ、２６ｋＤａペリプラズムタンパク質、３ｌｋＤａ Ｏｍｐ３１、２８ｋＤａ Ｏｍｐ、２５ｋＤａ Ｏｍｐ及び１０ｋＤＡ Ｏｍリポタンパク質を含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべてのブルセラ症抗原が考慮される。

【0747】

髄膜炎抗原
多くの髄膜炎（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）抗原が、ワクチン開発のための潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、Ｃｙｓ６、ＰｏｒＡ、ＰｏｒＢ、ＦｅｔＡ及びＺｎｕＤは、ワクチン開発に適切な抗原である。本発明における使用に適切な他の例示的な髄膜炎抗原は、Ｏ－抗原、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）、ＴｂｐＢ、ＮｓｐＡ、ＮａｄＡ、外膜タンパク質、ＢグループＣＰＳ、分泌タンパク質及びリポ多糖を含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべての髄膜炎抗原が考慮される。

【0748】

デング熱抗原
多くのフラビウイルス（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）抗原が、デング熱を治療するためのワクチン開発の潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、デングウィルスエンベロープタンパク質Ｅ１～Ｅ４及び膜タンパク質Ｍ１～Ｍ４は、ワクチン開発に適切な抗原である。本発明における使用に適切な他の例示的なデング熱抗原は、Ｃ、ｐｒｅＭ、１、２Ａ、２Ｂ、３、４Ａ、４Ｂ及び５を含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべてのデング熱抗原が考慮される。

【0749】

エボラ抗原
多くのエボラウイルス抗原が、エボラ感染症を治療するためのワクチン開発の潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、フィロウィルスザイール（Ｆｉｌｏｃｉｒｉｄａｅ Ｚａｉｒｅ）エボラウイルス及びスーダン（Ｓｕｄａｎ）エボラウイルスビリオンスパイク糖タンパク質前駆体抗原ＺＥＢＯＶ－ＧＰ及びＳＥＢＯＶ－ＧＰのそれぞれがワクチン開発に適切である。本発明における使用に適切な他の例示的なエボラ抗原は、ＮＰ、ｖｐ３５、ｖｐ４０、ＧＰ、ｖｐ３０、ｖｐ２４及びＬを含む。現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべてのエボラ抗原が考慮される。

【0750】

ウエストナイル（Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅ）抗原
多くのウエストナイルウイルス抗原が、感染を治療するためのワクチン開発の潜在的候補として同定されており、本発明に有用である。例えば、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）からのフラビウイルスエンベロープ抗原（Ｅ）は、ＷＮＶビリオン（ＷＮＶＥ）の表面上に発現される非毒性タンパク質であり、ワクチン開発に適切である。本発明における使用に適切な他の例示的なＷＮＶ抗原は、Ｃｐ、Ｐｒｍ、ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ及びＮＳ５を含む。

【0751】

現在、特徴付けられているか否かにかかわらず、それに由来する１つ以上の抗原性部分またはエピトープと共に、免疫応答を誘発することができるすべてのウエストナイル抗原が考慮される。

【0752】

前記に列挙されたか、参照された抗原は、例示的なものであり、本発明を限定しない。

【0753】

本発明はまた、有効量の本発明のペプチド接合体、またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒、及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物に関する。

【0754】

薬学的組成物は、有効量の本発明の２つ以上のペプチド接合体を組み合わせて含むことができる。いくつかの実施形態において、前記薬学的組成物は、本発明の１つ以上のペプチド接合体、及び本明細書に記載されたような１つ以上のペプチドを含むことができる。

【0755】

用語“薬学的に許容可能な担体”は、本発明のペプチド接合体またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒、及び薬学的に許容可能な担体と共に、対象に投与することができる担体（アジュバントまたはビヒクル）を指す。

【0756】

前記組成物に使用され得る薬学的に許容可能な担体は、これらに限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、例えば、ｄ－α－トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクスネート、薬学的投与形態で使用される界面活性剤、例えば、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎｓ）または他の類似のポリマー送達マトリックス、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂を含む。シクロデキストリン、例えば、α－、β－及びγ－シクロデキストリンまたは化学的に変形された誘導体、例えば２－及び３－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデックストリン、または他の可溶化誘導体がまた送達を増強させるために有利に使用され得る。油溶液または懸濁液はまた、エマルジョン及び／または懸濁液のような薬学的に許容可能な投与形態の配合において典型的に使用される、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、またはカルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤を含むことができる。

【0757】

前記組成物は、これらに限定されるものではないが、経口または非経口（局所、皮下、筋肉内及び静脈内を含む）投与を含むいずれかの選択された経路によって、対象に投与するように配合される。

【0758】

例えば、前記組成物は、意図された投与経路及び標準的な薬学的実施法に関連して選択された適切な薬学的に許容可能な担体（賦形剤、希釈剤、助剤、及びそれらの組み合わせを含み）と共に配合され得る。例えば、前記組成物は、粉末、液体、錠剤またはカプセルとして経口的に、または軟膏、クリームまたはローションとして局所的に投与され得る。適切な配合物は、乳化剤、酸化防止剤、香料または着色剤を含み、必要なら、追加の剤を含有することができ、即時－、遅延－、変形－、持続－、パルス－または制御－放出に適切であり得る。

【0759】

前記組成物は、生物学的利用能、免疫原性を最適化するか、長期間を含み、免疫原性または治療学籍範囲内で血漿、血液または組職濃度を維持するように配合され得る。また、例えば、制御された送達調製物を使用して、作用部位における抗原濃度を最適化することができる。

【0760】

前記組成物は、定期的投与のために、例えば、持続的な露出を提供するために、配合され得る。有利な免疫応答を誘発する戦略、例えば、１つ以上の“ブースター（ｂｏｏｓｔｅｒ）”ワクチンを接種を使用する戦略は、当業界においてよく公知されており、そのような戦略が採択され得る。

【0761】

前記組成物は、非経口路を介して投与され得る。非経口投与形態の例には、水溶液、活性剤である等張性食塩水または５％グルコース、または他のよく公知された薬学的に許容可能な賦形剤が含まれる。例えば、シクロデキストリンまたは当業者に周知の他の可溶化剤は、治療剤の送達のための薬学的賦形剤として使用され得る。

【0762】

経口投与に適切な投与形態の例は、これらに限定されるものではないが、治療的有効量の組成物を提供することができる錠剤、カプセル、トローチ剤製（ｌｏｚｅｎｇｅ）、または同様の形態、またはシロップ、水溶液、エマルジョンなどのような任意の液体形態を含む。カプセルは、ゼラチンまたはセルロースのような任意の標準薬学的に許容可能な材料を含有することができる。錠剤は、活性成分の混合物を固体担体及び滑剤で圧縮することにより、従来の手順に従って配合され得る。固体担体の例は、澱粉及び糖ベントナイトを含む。活性成分はまた、結合剤、例えばラクトースまたはマンニトール、従来の充填剤及び錠剤化剤を含有するハードシェル錠剤またはカプセルの形態で投与され得る。

【0763】

経皮投与に適切な投与形態の例は、これらに限定されるものではないが、経皮パッチ、経皮用バンデージなどを含む。

【0764】

組成物の局所投与に適切な投与形態の例は、皮膚に直接適用されるか、パッド、パッチなどのような媒介物を介して適用されるか否かにかかわらず、任意のローション、スティック、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ゲルなどを含む。

【0765】

組成物の坐剤投与に適切な投与形態の例は、身体腔中に挿入される任意の固体投与形態、特に直腸、膣及び尿道に挿入されることを含む。

【0766】

組成物の注射に適切な投与量形態の例は、静脈内注射、皮下、真皮下及び筋肉内投与または経口投与による単一投与または複数回投与のようなボーラス（ｂｏｌｕｓ）を介した送達を含む。

【0767】

組成物のデポ（ｄｅｐｏｔ）投与に適切な投与形態の例は、ペプチド接合体のペレット（ｐｅｌｌｅｔ）、または固体形態を含み、ここで、ペプチド接合体は、生分解性ポリマー、マイクロエマルジョン、リポソームのマトリックスにトラップされているか、マイクロカプセル化されている。

【0768】

組成物のための注入装置の例は、所望の回数の投与または正常状態投与を提供するための注入ポンプを含み、移植可能な薬物ポンプを含む。

【0769】

組成物のための移植可能な注入装置の例は、ペプチド接合体が生分解性ポリマーまたは合成ポリマー、例えばシリコーン、シリコーンゴム、シラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）または類似ポリマーを介して、その内部にカプセル化されるか、分散された任意の固体形態を含む。

【0770】

組成物の経粘膜送達に適切な投与形態の例は、活性成分の以外に、当業界において適切であることが公知された担体を含有する、浣腸剤、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、噴霧溶液、粉末及び類似の製剤用の保管溶液を含む。そのような投与形態は、薬学的に許容可能な水性または有機溶媒、またはその混合物及び／または粉末中の溶液及び／または懸濁液を含む組成物を含む、組成物の吸入または吹送に適切な形態を含む。組成物の経頃粘膜投与は、任意の粘膜を使用することができるが、典型的には、鼻、頬、膣及び直腸組織を使用する。組成物の経鼻投与に適切な配合物は、ポリマー粒子の水性または油性溶液を含む液体形態、例えば鼻スプレー、点鼻液で、または噴霧器によるエアロゾル投与によって投与され得る。配合物は、例えば生理食塩水、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤を使用した溶液、生物学的利用能を増強させる吸収促進剤、フルオロカボン及び／または当業界において公知された他の可溶化剤または分散剤中の水溶液として調製され得る。

【0771】

組成物の口腔または舌下投与に適切な投与形態の例は、トローチ剤、錠剤などを含む。組成物の眼内投与に適切な投与形態の例は、薬学的に許容可能な水性または有機溶媒中の溶液及び／または懸濁液を含む挿入物及び／または組成物を含む。

【0772】

ワクチンを含む組成物の配合物の例は、例えば文献［Ｓｗｅｅｔｍａｎ，Ｓ． Ｃ．（Ｅｄ．）．Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ．Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，３３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，２００２，２４８３ ｐｐ．；Ａｕｌｔｏｎ，Ｍ． Ｅ．（Ｅｄ．） Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ．Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ Ｄｅｓｉｇｎ．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，２０００，７３４ ｐｐ．；及び、Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ １９９９，６７６ ｐｐ．］に見出され得る。薬物送達システムの調製に使用された賦形剤は、例えば、文献［Ｋｉｂｂｅ，Ｅ．Ｈ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，２０００，６６５ ｐｐ］を含み、当業者において公知された様々な文献に記載されている。ＵＳＰはまた、錠剤またはカプセルとして配合されたものを含む放出調節経口投与形態の例を提供する。例えば、また、持続放出及び遅延放出錠剤及びカプセルの薬物放出能力を決定するための特定の試験を記載しているＴｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ ２３／Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ １８，Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ＭＤ，１９９５ （以下、“ＵＳＰ”）を参照する。持続放出及び遅延放出物品についての薬物放出についてのＵＳＰ試験は、試験の経過時間に対する投与単位からの薬物溶解に基づかれる。種々の試験装置及び手順の説明は、ＵＳＰに見出され得る。持続放出投与形態の分析に関するさらなる指針は、Ｆ．Ｄ．Ａ．によって提供されている（文献［Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｒａｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，１９９７］参照）。

【0773】

組成物は、１つ以上の外因性アジュバントを含むことができるが、有利には、いくつかの実施形態において、これは必要ではない。いくつかの実施形態において、ペプチド接合体は、エピトープを含み、自己アジュバントである。

【0774】

本発明は、対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発する方法であって、有効量の本発明のペプチド接合体を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発するための本発明のペプチド接合体の使用、及び対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発するための薬剤の製造における本発明のペプチド接合体の使用に関する。

【0775】

本発明はまた、対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発する方法であって、有効量の本発明の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発するための本発明の薬学的組成物の使用、及び対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発するための薬剤の製造における本発明の１つ以上のペプチド接合体の使用に関する。

【0776】

対象にワクチンを接種するか、対象における免疫応答を誘発するために、本明細書に記載された１つ以上のペプチド及び／または本発明の１つ以上のペプチド接合体、例えば、１つ以上のペプチド接合体と共に、本明細書に記載された１つ以上のペプチドの投与または使用が、本明細書において考慮される。

【0777】

２つ以上のペプチド接合体、または１つ以上のペプチド、及び１つ以上のペプチド接合体が投与されるか、使用される場合、２つ以上のペプチド接合体、または１つ以上のペプチド、及び１つ以上のペプチド接合体は、同時に、順次にまたは別に、投与されるかまたは使用され得る。

【0778】

“対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）”は、哺乳動物、例えばヒトである脊椎動物を意味する。哺乳動物は、これらに限定されるものではないが、ヒト、家畜、スポーツ用動物、ペット、霊長類、マウス及びラットを含む。

【0779】

“有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）”は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、種々の投与経路により、１つ以上の投与で投与され得る。

【0780】

有効量は、他の因子中で、指示される疾患、疾患の重症度、対象の年齢及び相対的健康状態、投与される化合物の効力、投与方式及び所望の治療に依存して変化するであろう。当業者は、これらの任意の他の関連する因子に関して、適切な投与量を決定することができるであろう。

【0781】

組成物の効力は、インビトロ及びインビボの両方で評価することができる。例えば、組成物は、細胞媒介性免疫応答を誘発するその能力についてインビトロまたはインビボで試験することができる。インビボ研究のために、組成物を動物（例えば、マウス）に供給するか、注入することができ、次いで、免疫応答を誘発するその効果を評価する。結果に基づいて、適切な投与量範囲及び投与経路を決定することができる。

【0782】

組成物は、単回投与または複数回投与のスケジュールとして投与することができる。複数回投与量は、１次免疫化スケジュール及び／またはブースター免疫化スケジュールに使用することができる。

【0783】

特定の実施形態において、免疫応答の誘発は、免疫応答を上昇するか、増強することを含む。例示的な実施形態において、免疫応答の誘発は、体液性及び細胞媒介性応答の誘発を含む。

【0784】

特定の実施形態において、免疫応答の誘発は、免疫を提供する。

【0785】

免疫応答は、疾患または病状の治療のために誘発される。当業者は、本明細書に記載されたペプチド接合体が、例えばエピトープの性質に依存して、種々の疾患及び病状の治療に有用であることを理解するであろう。

【0786】

いくつかの実施形態において、疾患または病状は、本明細書に記載された種々の抗原に関連するそれらから選択される。

【0787】

いくつかの実施形態において、疾患または病状は、感染性疾患、癌またはウィルス再活性化後骨髄移植、またはいずれかの他の理由による深遠な免疫抑制の誘発である。

【0788】

本明細書で使用されるように、用語“治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）”及び関連する用語“治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”及び“治療する（ｔｒｅａｔ）”は、一般的に、いくつかの所望の治療効果が達成されるヒトまたは非ヒト対象の治療に関する。治療効果は、例えば、疾患または病状の阻害、低滅、改善、停止または予防であり得る。

【0789】

組成物は、全身性及び／または粘膜免疫を誘発するために使用され得る。増強された全身性及び／または粘膜免疫は、増強されたＴＨ１及び／またはＴＨ２免疫応答に反映され得る。増強された免疫応答は、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ａ及び／またはＩｇＡの産生増加を含むことができる。

【実施例】

【0790】

１．実施例１
本実施例は、チオール－エン反応による本発明のペプチド接合体３の調製を記載する。

【0791】

１．１ 一般的な詳細及び方法
保護されたアミノ酸及びカップリング試薬は、ＧＬ－Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）から購入した。固体支持体合成に使用される樹脂は、Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ ＧｍｂＨ（Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ）からのペプチド配列の第１（Ｃ－末端）残基及びリンカーによって誘導体化されたテンタゲル（Ｔｅｎｔａｇｅｌ）樹脂であり、他の溶媒及び試薬は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）及びＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから入手した。

【0792】

下記に記載されたペプチド合成を、標準の反復Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成技術を使用して、トリビュートペプチド合成機（Ｔｒｉｂｕｔｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｒ）（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｔｕｃｓｏｎ， ＡＺ）上で、実施した。

【0793】

０．１ｍモルの規模で実施された例示的な脱保護及びカップリングサイクルは、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンの２回の処理（４ｍｌ×５分）を使用して、樹脂結合アミノ酸からＦｍｏｃ保護基を除去した後、ＤＭＦによる樹脂の洗浄を伴う。別途の容器において、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．５ｍモル）及びカップリング剤（１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１、２、３－トリアゾロ［４、５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサプルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、０．４５ｍモル）をＤＭＦ（１．５ｍｌ）に溶解し、塩基（４－メチルモルホリン（ＮＭＭ）、１ｍモル）を添加した。１分間混合した後、この溶液を樹脂に移し、これを室温（ＲＴ）で１時間撹拌し、排水し、洗浄した。

【0794】

５％（ｖ／ｖ）エタンジチオール（ＥＤＴ）を含有する５ｍｌのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）に樹脂を懸濁させ、室温で３時間撹拌することによって、ペプチドの切断（０．１ｍモルの規模）を達成した。次いで、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）を１％（ｖ／ｖ）に添加し、さらに５分間続けて撹拌した後、ＴＦＡを冷却したジエチルエーテル（４０ｍｌ）に排水させた。沈殿した材料を遠心分離によってペレット化し、エーテルを捨て、ペレットをエーテル（２５ｍｌ）で１回洗浄し、空気乾燥させるか、凍結乾燥させた。

【0795】

逆相（ＲＰ）－ＨＰＬＣを、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ ＨＰＬＣシステムを使用して、２１０ｎｍまたは２２５ｎｍでのＵＶ検出によって実施した。半分取精製のために、ペプチドサンプルを溶離液Ａ（水／０．１％ＴＦＡ）及び溶離液Ｂ（ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の適切な混合物において平衡化された逆相Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８カラム（５μ、１１０Å；１０×２５０ｍｍ）内に注入した後、溶離液Ｂの増加する勾配を生成し、構成成分を溶出させた。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８カラム（３μ、１１０Å；４．６×１５０ｍｍ）を使用して分析ＨＰＬＣを同様に実施した。

【0796】

Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１２０ Ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ質量分析計を使用して、低分解能質量スペクトルを得た。

【0797】

ＮＭＲスペクトルを、^１Ｈ ＮＭＲに対して４００ＭＨｚで、及び^１３Ｃ ＮＭＲに対して１００ＭＨｚで作動するＢｒｕｋｅｒ ＢＲＸ４００分光計を使用して得た。

【0798】

１．２ ペプチド合成
ペプチド１（表１に与えられた配列）を、一般的な詳細において前記に記載されたように合成し、下記に示した（スキーム１）。

【0799】

前記ペプチドは、チオール－エン反応におけるこの位置で望ましくない副反応を避けるために、メチオニン残基がＣｙｓ（ｔＢｕ）残基で置換され、遊離チオール基及びポリリシン可溶化タグによって、Ｎ－末端で誘導体化されたよく認識されているＣＭＶ ｐｐ６５ペプチド（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ[配列番号：１２２］）の組み合わせである。

【0800】

スキーム１

【0801】

【化54】

【0802】

（ｉ）反復Ｆｍｏｃ－ＳＰＰＳ；（ｉｉ）Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｉｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｉｖ）Ａｃ_２Ｏ／ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｖ）ＴＦＡ／ＥＤＴ。

【0803】

反復Ｆｍｏｃ－ＳＰＰＳを使用して、最後から２番目のアミノ酸までペプチド配列を合成した後、ＤＭＦ中のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ、ＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンとの反応によって樹脂上ペプチドのＮ－末端残基としてＦｍｏｃ－システインを導入した。Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを使用して除去した。

【0804】

生成されたアミン基を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の２０％無水酢酸及び４－メチルモルホリン（１ｍモル）の混合物で処理することにより、アセトアミドに転換した。

【0805】

ＴＦＡ／ＥＤＴによって、樹脂からペプチドを切断し、エーテルの中に沈殿させた後、固体を１：１の水／ＭｅＣＮの中に溶解し、凍結乾燥した。次いで、ペプチドを、ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製し、９５％超過の材料を提供した。

【0806】

【表1】

【0807】

１．３ ペプチド接合体合成
ペプチド接合体３を下記に記載し、示されたようにチオール－エン反応によってペプチド１から合成した（スキーム２）。

【0808】

スキーム２

【0809】

【化55】

【0810】

（ｖｉ）パルミチン酸ビニル、ＤＭＰＡ、ｔＢｕＳＨ、ＮＭＰ、３６５ｎｍ、ＨＰＬＣに基づいた８３％転換（４９％ ２；３４％ ３）．

【0811】

ペプチド基質１（１．７ｍｇ、１μモル）及びパルミチン酸ビニル（２０ｍｇ、７０μモル、７０当量）をマグネチックスターラーバーが装着された小さなポリプロピレンバイアル内に秤量し、１００μｌの脱気されたＮＭＰを添加した後、（０．５ｍｌの脱気されたＮＭＰ中の６．５ｍｇＤＭＰＡ及び１７μｌの^ｔＢｕＳＨの溶液１０μｌを添加することにより）０．５μモルのＤＭＰＡ及び３μモルの ^ｔＢｕＳＨ を添加した。容器を窒素でフラッシュし、混合物を激しく撹拌しながら、３６５ｎｍで３０分間照射した。

【0812】

ＨＰＬＣによる反応混合物のサンプルの分析（図１参照）は、一部の残留出発物質（ピークａ）及びモノ－パルミトイル化ペプチド２及びビス－パルミトイル化されたペプチド３（それぞれピークｂ及びｃ）の両方の形成を示した。

【0813】

水及びアセトニトリル（各２００μｌ）を添加し、生成された混合物を凍結乾燥し、成分を半分取用ＲＰ－ＨＰＬＣで単離した。

【0814】

１．４ ペプチド接合体３の分析
図１からのピークｂ及びｃの低分解能質量スペクトルが図２及び図３にそれぞれ示されている。

【0815】

ピークｃの質量スペクトルによって、第２の２－（パルミトイルオキシ）エチル基のペプチド基質への導入が確認される（Ｍ＋２８２）。

【0816】

理論に束縛されることを望むものではないが、チオール化されたペプチドを含有する反応混合物の照射後、生成されるチイルラジカルは、パルミチン酸ビニルの分子と反応して、ラジカル中間体４を生成し（スキーム３）、その後、（ｉ）クエンチされ、モノ－パルミトイル化産物２を提供するか、（ｉｉ）パルミチン酸ビニルの別の分子と反応して、より多くの非極性ビス－パルミトイル化された産物３を生成すると考えられる。２つの経路は、テロメル化され、３を生成するのに有利である、この実験で使用されたパルミチン酸ビニルの濃度（７０当量）で競争的なものと考えられる。高次の伝播が観察されなかった（すなわち、２分子超過のパルミチン酸ビニルの添加により生じる産物が観察されなかった）。

【0817】

スキーム３

【0818】

【化56】

【0819】

産物２及び３の一部の酸化が明らかであったし（図１のピークｅ及びｆの両方ともＭ＋１６）、おそらく、チオエーテルが新しく形成されたはずである。これは、使用されている小規模システムから酸素を排除することが困難なためかもしれません。これらの酸化物は、対応するチオエーテルに容易に還元され得る。

【0820】

２．実施例２
本実施例は、次を研究したものである：
１．公知されたＴＬＲ２アゴニストであるＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較して、２つの変異－ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨ_２）－ＳＫＫＫＫ及びホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫ－における本発明のネズミ及びヒトＴＬＲ２アゴニズム。すべての場合において、アゴニストは、社内で製造し、実施例１に記載されたように、半分取ＨＰＬＣにより単離したが、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫは、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎから購入した。さらに、短いペプチドエピトープに接合された場合のＴＬＲ２アゴニズムの保持をＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較して評価した。本実施例において、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫ－‘ＮＬＶ’を本発明３に記載されたように生成し（実施例１に記載されたように、半分取ＨＰＬＣによって単離した）、ただし、接合体ペプチド配列は、ＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）であった。マッチングされたＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）をまた製造した。

【0821】

２．接合された短い合成ペプチド及び長い合成ペプチドの同種ＣＤ８＋ Ｔ細胞クローンへの放出及び提示。本実施例において、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫ－‘ＮＬＶ’を本発明３に記載されたように生成し（実施例１に記載されたように、半分取ＨＰＬＣによって単離した）、ただし、接合体ペプチド配列は、ペプチドのＴ細胞認識を保持するようにするために、ＮＬＶＰ（Ｔｂｕ）ＶＡＴＶＫ（Ａｃ）ではなく、ＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）であった。放出及び提示をペプチド－マッチングされたＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫコンストラクトによって誘発されたものと比較した。

【0822】

３．接合された長い合成ペプチドの同種ＣＤ８＋ Ｔ細胞クローンへのプロセッシング及び提示。本実施例において、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫ－‘ＶＰＧ’を本発明３に記載されたように生成し（実施例１に記載されたように、半分取ＨＰＬＣによって単離した）、ただし、接合体ペプチド配列は、ＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ（配列番号：１１３）であった。このより長い配列内からのＨＬＡ－Ａ２－拘束性エピトープＥＦＴＶＳＧＮＩＬ（配列番号：１１４）のプロセッシング及び提示を、長いペプチドのみで観察されたもの及びペプチド－マッチングされたＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫコンストラクトによって観察されたものと比較した。

【0823】

ＴＬＲ２アゴニズム及びペプチドプロセッシング並びにＣＤ８＋ Ｔ細胞への提示の研究に使用されたすべてのコンストラクトは、下記表２のように示す：

【0824】

【表2】

【0825】

スキーム３Ａ．表２に示したＰａｍ１Ｃｙｓ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨ_２）及びホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）の構造。

【0826】

【化57】

【0827】

２．１ ＨｅｋＢｌｕｅ細胞を使用したＴｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）アゴニズム
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ検出培地、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２は、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから購入した。これらのＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞は、両方とものレポーター遺伝子ＳＥＡＰ（分泌された胚性アルカリホスファターゼ）及びヒトまたはネズミＴＬＲ２のいずれかのコトランスフェクションによって生成した。ＳＥＡＰレポーター遺伝子は、５つのＡＰ－１及び５つのＮＦ_ＫＢ結合部位に融合されたＩＦＮ－Ｂ最小プロモーターの制御下にある。細胞を製造業者の指針に従って培養した。

【0828】

アッセイの当日、ＴＬＲアゴニスト５１０、５２０、５３０、５４０、５５０またはＰＢＳ（陰性対照）を、９６ウェルプレートにおいて、２０μｌの体積のエンドトキシンフリー水中に示された濃度で添加した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２またはＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２細胞を、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ検出培地において、約２．７８×１０^５細胞／ｍｌで再懸濁し、１８０μｌの細胞懸濁液を各々のウェルに添加した（約５×１０^４個の細胞）。細胞を、５％ＣＯ_２下で、３７℃で１０～１２時間インキュベートした。６３５ｎＭで、ＥｎＳｐｉｒｅプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してＳＥＡＰ発現を定量化した。データは、バックグラウンドを減算した後、３重ウェルについての平均＋／－ＳＤ ＡＢＳまたはｍＡＢＳ（６３５ｎｍ）値として提示される。

【0829】

２．２．１ 結果
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２の両方において、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫは１ｎＭ以上で試験された最も強力なアゴニスト（Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ）と同等のＳＥＡＰ生成を誘発し、サブｎＭ濃度で同等の生成を誘発した（図４Ａ）。両方のシステムにおいて、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫまたはホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨ_２）－ＳＫＫＫＫより明らかにより強力なアゴニストであった。ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨ２）－ＳＫＫＫＫは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２において、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと同等のＳＥＡＰ生成を誘発し、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２において、同等の生成を誘発した（図４Ａ）。ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ／ＮＨ_２）－ＳＫＫＫＫは、両方ともＰａｍ１ＣＹｓ－ＳＫＫＫＫより明らかにより強力なＴＬＲ２アゴニストであった。重要なことに、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２においてサブμＭ濃度で活性ではないＰａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと異なり、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ／ＮＨ_２）－ＳＫＫＫＫは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２及び－ｈＴＬＲ２の両方でサブｎＭ濃度まで活性であり（図４Ａ）、これは、トランスジェニックマウスモデル（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ）における将来の適用を強化する。これらのデータは、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ／ＮＨ_２）－ＳＫＫＫＫが公知された強力なＴＬＲ１／２及びＴＬＲ２／６アゴニストＰａｍ３Ｃｙｓ及びＰａｍ２Ｃｙｓと同等の生物学的機能及び活性を示すことを示唆する。

【0830】

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２及び－ｈＴＬＲ２の両方において、ペプチドＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）とＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫの接合は、接合されないＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較する場合、アゴニズムの相対的な損失を誘導した（図４Ｂ）。これがコンストラクトの凝集によるものかどうかは、具体的には決定されなかった。対照的に、ペプチドＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）とホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫの接合は、任意のアゴニズムの損失をもたらさずに、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫ－ＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）は、特にｎＭ濃度でＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫよりも強力なアゴニストで維持された（図４Ｃ）。これらのデータは、ホモＰａｍ２Ｃｙｓが疎水性ペプチドカーゴ（ｃａｒｇｏ）に接合された場合、Ｐａｍ２Ｃｙｓよりも強力な溶解性及び生物活性を保持し、これらのコンストラクトの相対的なインビボでの生物学的利用能を一部保持することができることを示唆する。

【0831】

２．２ ＣＤ８＋ Ｔ細胞クローンへのペプチドプロセッシング及び提示
エプスタイン・バール・ウイルス形質転換されたＴＬＲ２＋ ＨＬＡ－Ａ２＋リンパ芽球様Ｂ－細胞株（ＬＣＬ）をすべてのペプチドプロセッシング及び提示アッセイにおいて抗原提示細胞として使用した。ＬＣＬを所望の濃度で示されるように、ＲＦ１０＋ペプチド／コンストラクトの中で１６時間インキュベートした。未処理ＬＣＬをＲＦ１０のみでインキュベートした。ＬＣＬ／コンストラクトインキュベーションをアッセイの性質及び処理当たりに必要なＬＣＬの数に依存して、９６ウェルプレート（Ｕ字底、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）または４８ｗｐ（平底、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実施した。インキュベーション後、ＬＣＬをＲＰＭＩ １６４０で完全に洗浄して、結合されないコンストラクト／ペプチドを除去した。

【0832】

フローサイトメトリー検出を可能にするために、ＣＤ８＋ Ｔ細胞クローンを、製造業者のプロトコルに従って、０．５μＭＣｅｌｌＴｒａｃｅ^ＴＭＶｉｏｌｅｔ（“ＣＴＶ”）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ^ＴＭ）によって予め染色した後、ＡＰＣウェル内にシーディングした。ロードされ、洗浄されたＬＣＬ及びＣＴＶ－染色されたＴ細胞クローンを９６ウェルプレートウェル（Ｕ字底）に４：１（ＬＣＬ：Ｔ細胞）の比で、２回反復実験でシーディングした（使用される通常の細胞数は１．２５×１０^４細胞／ｍｌ Ｔ細胞及び５×１０^４細胞／ｍｌ ＡＰＣである）。シーディングの後、プレートを穏やかに遠心分離して（≦３００ ｘ ｇ、３分）、即時の相互作用を可能にし、標準細胞培養インキュベーターで２６時間インキュベートした。

【0833】

Ｔ細胞活性化を検出するために、サンプルを抗－ＣＤ８：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００及び抗－ＣＤ１３７：ＰＥ抗体（いずれもＢｉｏｌｅｇｅｎｄ）によって染色した。サンプルを暗所で、３０分間氷上でインキュベートした後、洗浄緩衝液で２回洗浄して、結合されない抗体を除去した。ＤＡＰＩ（１μｇ／ｍｌ最終濃度）を各々のサンプルに添加した直後、生存／死滅排除が可能なように、確認した。

【0834】

ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアのＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩを使用してデータの取得を行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用してデータ分析を行った。データは、ＣＤ１３７発現に対して陽性の生存クローン細胞の平均％＋ＳＤとして提示される（図４Ｄ～図４Ｅ）。

【0835】

２．２．１ 結果
ＬＣＬによる内在化及びペプチド提示後、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫ－ＮＬＶ（５５１）は、ＮＬＶ－保有－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ（５２１）と同等のＴ細胞クローン活性化を誘発し、ＮＬＶ－保有－Ｐａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ（５１１）より優れたＴ細胞クローン活性化を誘発した（図４Ｄ）。図４Ｄの点線及び実線は、それぞれバックグラウンドＴ細胞クローンの活性化及び１０ｎＭの遊離ＮＬＶペプチドがロードされたＬＣＬとのコインキュベーション（ｃｏ－ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ）によって誘発された活性化を示す。ペプチドＮＬＶＰＭＶＡＴＶＫ（Ａｃ）が、全体Ｔ細胞エピトープを表すので、このシステムではペプチドプロセッシングが必要なく、コンストラクト内在化、ペプチド放出及びＬＣＬのＭＨＣ Ｉ経路内への輸送によって、Ｔ細胞活性化を決定した。

【0836】

ＬＣＬによる内在化及びエピトープ提示後、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ（ＮＨＡｃ）－ＳＫＫＫＫ－ＶＰＧ（５５２）は、ＶＰＧ－保有－Ｐａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ（５１２）より優れたＴ細胞クローン活性化を誘発し、及び両方のコンストラクトは、ＶＰＧペプチド単独（５００）の場合より優れていた（図４Ｅ）。例えば、ペブチダーゼ活性を介した、長いペプチドＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ内からの最小エピトープＥＦＴＶＳＧＮＩＬの放出がＴ細胞活性化に必要であるので、これらのデータは、おそらく、表面ＴＬＲ１／２またはＴＬＲ２／６結合の後、エンド／リソソーム経路へのペプチドの標的化を介して、長い合成ペプチドとホモＰａｍ２Ｃｙｓ部分の接合が、ＴＬＲ２＋抗原提示細胞によるエピトーププロセッシング及び提示を改善させることを示唆し、接合が同種Ｔ細胞によるペプチドエピトープのインビボ認識を改善することができることを示唆する。図４Ｅの点線は、バックグラウンドＴ細胞クローンの活性化を示す。

【0837】

３．実施例３
本実施例は、チオール－エン反応による本発明６のアミノ酸接合体の製造を説明する。

【0838】

３．１ 方法
ＣＨ_２Ｃｌ_２（約８５０μｌ）中に溶解されたＦｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ（３．４ｍｇ、１０μモル）、パルミチン酸ビニル（１４１ｍｇ、５００μモル）及びＤＭＰＡ（０．５ｍｇ、２μモル）から構成された１ｍｌの総体積の溶液の６０分間の３６５ｎｍでの照射は、主成分としてモノ－パルミトイル化Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ５及び副成分としてビス－パルミトイル化されたＦｍｏｃ－Ｃｙｓ６（ｍ／ｚ ＥＳＩ、９０８．５［Ｍ＋Ｈ］）から構成された産物混合物を提供した（スキーム４）。溶媒の蒸発後、シリカ上のカラムクロマトグラフィーにより、最初に４：１のヘキサン／酢酸エチルで溶離した後、２：１のヘキサン／酢酸エチルで交換し、最後に１：１のヘキサン／酢酸エチルで溶離することによって、各々の成分を単離することができた。これは、５（４．６ｍｇ、７５％）及び６（０．９ｍｇ、１０％）を提供した。

【0839】

スキーム４

【0840】

【化58】

【0841】

この合成方法は、出発物質が安価であり、反応を大規模に実施することができ、産物が比較的容易に単離するので、有用である。

【0842】

しかしながら、（ＨＰＬＣによる）６への転換は低かったし、反応のメカニズムは、新たに形成されたキラル中心が、新たに形成されたキラル中心にエピマーの混合物を提供することができることを示す。

【0843】

４．実施例 ４
本実施例は、本発明６のアミノ酸接合体の合成を説明する。

【0844】

４．１ 方法
次いで、スキーム５において概説したように、容易に入手可能な３－ブテノールから化学的合成を実施した。

【0845】

ビス－パルミトイル化された産物６は、所望の保護基を有する保護されたシステインとの反応によって、異なるＮ－末端保護基で生成することができる。

【0846】

エポキシドは、分解されて（例えば、動力学加水分解を使用する：文献［Ｍ．Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｊ．Ｆ．Ｌａｒｒｏｗ，Ｆ．Ｋａｋｉｕｃｈｉ，Ｅ．Ｎ．Ｊａｃｏｂｓｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７，９３６－９３８］）、選択されたジアステレオマーを提供することができる。

【0847】

スキーム５

【0848】

【化59】

【0849】

ステップｉ

【0850】

【化60】

【0851】

室温で、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２００ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（１０．６０ｇ、７０ｍモル）及びイミダゾール（４．７７ｇ、７０ｍモル）の撹拌溶液に、３－ブテン－１－オール１００（５．９８ｍｌ、６９ｍモル）を１０分にかけて滴下した。反応混合物を室温で９０分間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔ_２Ｏ（１５０ｍｌ）で希釈し、水（３×１００ｍｌ）及び塩水（５０ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をシリカゲルによる濾過によって精製し、１０１（１１．９９ｇ、９１％）を無色の液体として得た。

【0852】

ステップｉｉ

【0853】

【化61】

【0854】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍｌ）中のアルケン１０１（２．００ｇ、１０．７４ｍモル）の溶液を室温で撹拌されるようにした。ＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍｌ）中のｍＣＰＢＡ（２．７８ｇ、１６．１２ｍモル）の溶液を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、３０分にかけて前記の撹拌溶液に滴下した。反応混合物を室温で１８時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔ_２Ｏ（７０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（３０ｍｌ）、２ＭのＮａＯＨ水溶液（３０ｍｌ）及び塩水（３０ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、３：１）により精製して、無色油として１０２（１．８５ｇ、８５％）を得た。

【0855】

ステップｉｉｉ

【0856】

【化62】

【0857】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍｌ）中のチオール２００（０．５３ｇ、１．３４ｍモル）の溶液及びメタノール、濃塩酸及び濃硫酸の新たに製造した混合物（１００：７：１、２ｍｌ）を０℃で３０分間撹拌されるようにした。次いで、エポキシド１０２を混合物に添加し、生成された溶液を４０℃で１９時間還流されるようにした。次いで、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（３０ｍｌ）で洗浄した。水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×３０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、１：３）により精製して、無色油として１０３（０．５０ｇ、７７％）を得た。

【0858】

ステップｉｖ

【0859】

【化63】

【0860】

室温でＴＨＦ（９ｍｌ）中のジオール１０３（０．３２７ｇ、０．６７ｍモル）及びパルミチン酸（０．５１６ｇ、２．０１ｍモル）の撹拌溶液に、ジイソプロピルカルボジイミド（０．４１４ｍｌ、２．６８ｍモル）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１ｇ、０．０７ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１９時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のベッドを通して濾過し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製して、２０１（０．３０１ｇ、４７％）を黄色油として得た。

【0861】

ステップｖ

【0862】

【化64】

【0863】

トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）中のジエステル２０１（０．３５ｇ、０．３６４ｍモル）の溶液を室温で１時間撹拌されるようにした後、混合物を真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、９：１→０：１）により精製して、６（０．３３ｇ、定量）を無色油として得た。

【0864】

Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨは、下記の文献に記載されている：文献［Ｈ．－Ｋ．Ｃｕｉ，Ｙ．Ｇｕｏ，Ｙ．Ｈｅ，Ｆ．－Ｌ．Ｗａｎｇ，Ｈ．－Ｈ．Ｃｈａｎｇ，Ｙ．Ｊ．Ｗａｎｇ，Ｆ．－Ｍ．Ｗｕ，Ｃ．－Ｌ．Ｔｉａｎ，Ｌ．Ｌｕ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｎｇ．，２０１３，５２（３６），９５５８－９５６２］。

【0865】

４．２ アミノ酸接合体６の分析
前記のセクション４．１に記載された方法によって合成されたアミノ酸接合体６は、実施例３に記載されたようなＦｍｏｃ－システイン溶液及びパルミチン酸ビニルの溶液の照射時に得られた６と同じ分析特性を有した（質量スペクトルは同じであった）。

【0866】

ビス－パルミトイル化されたＦｍｏｃ－Ｃｙｓ６の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルが図５に示されている。特性化データは、下記の通りである：^１Ｈ ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ、ＣＤＣｌ_３）δ７．７５（２Ｈ、ｄ、Ｆｍｏｃ Ａｒ－Ｈ）、７．６０（２Ｈ、ｄ、Ｆｍｏｃ Ａｒ－Ｈ）、７．３９（２Ｈ、ｔ、Ｆｍｏｃ Ａｒ－Ｈ）、７．３１（２Ｈ、ｔ、Ｆｍｏｃ Ａｒ－Ｈ）、５．７５（１Ｈ、ｂｒｏａｄ ｄ、ＮＨ）、５．０６（１Ｈ、ｍ、Ｈ－２’）、４．６６（１Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、４．４０（２Ｈ、ｄ、ＣＨ_２（Ｆｍｏｃ））、４．２６（１Ｈ、ｔ、ＣＨ（Ｆｍｏｃ））、４．１１（２Ｈ、ｍ、Ｈ－４’）、３．１３（１Ｈ、２ｘ ｄｄ、Ｈ－２）、３．０６（１Ｈ、２ｘ ｄｄ、Ｈ－２）、２．７６（２Ｈ、ｍ、Ｈ－１’）、２．２８（４Ｈ、ｍ、Ｈ－１’’）、２．０３（１Ｈ、ｍ、Ｈ－３’）、１．９４（１Ｈ、ｍ、Ｈ－３’）、１．５９（４Ｈ、ｍ、Ｈ－２’’）、１．２４（４８Ｈ、ｍ、１４×ＣＨ_２（パルミトイル））、０．８８（６Ｈ、ｔ、２ｘＣＨ_３（パルミトイル））．ＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］９０８．６０６５；Ｃ_５４Ｈ_８６ＮＯ_８Ｓは、［Ｍ＋Ｈ］９０８．６０６９を必要とする。

【0867】

４．３ 鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシド１０２Ａ及び１０２Ｂの製造及び使用
ジアステレオマー的に純粋なアミノ酸接合体６は、鏡像異性体的に純粋な出発物質から立体特異的に生成された鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシド１０２Ａまたは鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシド１０２Ｂを使用して製造することができる。生成された鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシドを、前記セクション４．１のステップ（ｉｉｉ）に記載されたものと同様の手順でチオール２００または下記に記載されたようにジスルフィド８０４と反応せしめて、対応するジアステレオマー的に純粋なジオール１０３Ａまたは１０３Ｂを生成することができ、次いで、本明細書に記載されたような対応するジアステレオマー的に純粋な接合体６Ａまたは６Ｂに転換させることができる。

【0868】

鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシド１０２Ａ及び鏡像異性体的にエナンチオピュアなエポキシド１０２Ｂを、Ｌ－アスパラギン酸からの（Ｒ）－（２－ヒドロキシエチル）オキシラン（１０２Ａ）の製造に対して、文献［Ｖｏｌｋｍａｎｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，５７，４３５２－４３６１］に記載された手順に従って、それぞれＬ－アスパラギン酸及びＤ－アスパラギン酸から製造した。

【0869】

（Ｓ）－２－ブロモコハク酸
０℃で６Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４（３３ｍｌ）中の臭化ナトリウム（１５．４６ｇ、１５０．２４ｍモル）の溶液にＬ－アスパラギン酸（５．００ｇ、３７．５６ｍモル）を添加した。生成された混合物に亜硝酸ナトリウム（３．１１ｇ、４５．０７ｍモル）を少量ずつ９０分にかけて添加した。反応混合物を０℃でさらに２時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＨ_２Ｏ（１７ｍｌ）で希釈し、Ｅｔ_２Ｏ（１００ｍｌ）で抽出した。水層を塩水（２０ｍｌ）で希釈し、さらにＥｔ_２Ｏ（３×１００ｍｌ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させ、表題化合物（２．９８ｇ、４１％）を白色固体として得た。粗産物をさらに精製することなく後続合成ステップで使用した。［α］_Ｄ ^１９．７－７１．５（ｃ ０．４６ ＥｔＯＡｃ中）（ｌｉｔ－７３．５（ｃ ６．０ ＥｔＯＡｃ中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ）１２．８（２Ｈ、ｂｒ ｓ、２×ＣＯ_２Ｈ）、４．５４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．５、６．４Ｈｚ、Ｈ－１）、３．１０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１７．２、８．６Ｈｚ、Ｈ－２）、２．９０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１７．１、６．４Ｈｚ、Ｈ－２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ）１７１．０（Ｃ、ＣＯ_２Ｈ）、１７０．１（Ｃ、ＣＯ_２Ｈ）、４０．５（ＣＨ、Ｃ－１）、３９．５（ＣＨ_２、Ｃ－２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0870】

（Ｒ）－２－ブロモコハク酸
（Ｒ）－２－ブロモコハク酸をＬ－アスパラギン酸の代わりにＤ－アスパラギン酸を使用して、（Ｓ）－２－ブロモコハク酸の調製のために、前記に記載された手順に従って調整した。［α］_Ｄ ^２０．２＋６６．５（ｃ ０．２、ＥｔＯＡｃ中）。残りの分光分析データは、（Ｓ）－２－ブロモコハク酸で観察されたものと同一であった。

【0871】

（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオール
－７８℃でＴＨＦ（３５ｍｌ）中の（Ｓ）－２－ブロモコハク酸（２．９８ｇ、１５．２０ｍモル）の溶液にＢＨ_３・ＤＭＳ錯体（４．３３ｍｌ、４５．６１ｍモル）を９０分にかけて滴下した。反応を－７８℃で２時間撹拌されるようにした後、室温で加温させ、さらに６０時間撹拌されるようにした。次いで、反応を０℃に冷却させ、ＭｅＯＨ（１５ｍｌ）をゆっくり添加した。次いで、混合物を真空下で濃縮させ、残基をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）で希釈した。この過程を３回繰り返して、表題化合物（２．５５ｇ、定量）を黄色油として得た。粗産物をさらに精製することなく後続合成ステップで使用した。［α］_Ｄ ^１９．６－３６．８（ｃ ０．５ ＣＨＣｌ_３中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） ４．３４（１Ｈ、ｄｑ、Ｊ＝７．７、５．３Ｈｚ、Ｈ－２）、３．９２－３．７８（４Ｈ、ｍ、Ｈ－１、Ｈ－４）、２．４０（２Ｈ、ｂｒ ｓ、２×ＯＨ）、２．２０－２．０６（２Ｈ、ｍ、Ｈ－３）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６７．１（ＣＨ_２、Ｃ－１）、６０．１（ＣＨ_２、Ｃ－４）、５５．２（ＣＨ、Ｃ－２）、３７．８（ＣＨ_２、Ｃ－３）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0872】

（Ｒ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオール
（Ｒ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールを、（Ｓ）－２－ブロモコハク酸の代わりに（Ｒ）－２－ブロモコハク酸を使用して（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールの製造のために、前記に記載された手順に従って製造した。［α］_Ｄ ^２１．３＋２０．０（ｃ ０．１７、ＣＨＣｌ_３中）。残りの分光分析データは、（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールで観察されたものと同一であった。

【0873】

（Ｒ）－（２－ヒドロキシルエチル）オキシラン（１０２Ａ）
室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（４６ｍｌ）中の（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオール（２．３１ｇ、１３．７６ｍモル）の溶液にＣｓ_２ＣＯ_３（８．７４ｇ、２４．７７ｍモル）を添加した。生成された混合物を室温で７２時間撹拌されるようにした。次いで、反応をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮させ、定量的転換によって表題化合物を黄色油として得た。組物質をさらに精製することなく後続合成ステップで使用した。［α］_Ｄ ^２２．９＋３５．０（ｃ ０．６１ ＣＨＣｌ_３中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ３．８３－３．７９（２Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、３．１２－３．０８（１Ｈ、ｍ、Ｈ－３）、２．８１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．８、４．１Ｈｚ、Ｈ－４）、２．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．８、２．８Ｈｚ、Ｈ－４）、２．０３－１．９５（１Ｈ、ｍ、Ｈ－２）、１．７８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、ＯＨ）、１．７１（１Ｈ、ｄｑ、Ｊ＝１４．６、５．９Ｈｚ、Ｈ－２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６０．０（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５０．５（ＣＨ、Ｃ－３）、４６．５（ＣＨ_２、Ｃ－４）、３４．６（ＣＨ_２、Ｃ－２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0874】

（Ｓ）－（２－ヒドロキシルエチル）オキシラン（１０２Ｂ）
（Ｓ）－（２－ヒドロキシルエチル）オキシラン（１０２Ｂ）を（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールの代わりに（Ｒ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールを使用して、（Ｒ）－（２－ヒドロキシルエチル）オキシラン（１０２Ａ）の製造のために、前記に記載された手順に従って製造した。［α］_Ｄ ^２２．９－３５．２（ｃ ０．２３ ＣＨＣｌ_３中）。残りの分光分析データは、（Ｓ）－２－ブロモ－１、４－ブタンジオールで観察されたものと同一であった。

【0875】

ジアステレオマー的に純粋な６Ａの製造

【0876】

【化65】

【0877】

０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍｌ）中のジスルフィド８０４（１．５９ｇ、２．０６ｍモル）の撹拌溶液に亜鉛粉末（０．９４ｇ、１４．４２ｍモル）及び新たに製造されたメタノール混合物、濃塩酸及び濃硫酸（１００：７：１、５ｍｌ）を添加した。生成された混合物を０℃で３０分間撹拌されるようにした後、エポキシド１０２Ａ（０．７３ｇ、８．２４ｍモル）を添加した。反応混合物を５５℃で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（５０ｍｌ）で洗浄した。水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、１：３）により精製して、１０３Ａ（１．７２ｇ、８８％）を無色油として得た。

【0878】

Ｒ_ｆ０．１５（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ １：３）；［α］_Ｄ ^２０．２－３．５（ｃ ０．３２ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純（ｎｅａｔ））／ｃｍ^－１ ３３４７、２９７６、１７０３、１５１８、１４４９、１４１３、１３６９、１３３５、１２４９、１１５１；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ７．７７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５、ＦｍｏｃＨ）、７．６１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．８１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、ＮＨ）、４．５３－４．５０（１Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、４．４０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、３．９４－３．８８（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、３．８５－３．８１（２Ｈ、ｍ、Ｈ－６）、３．０３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．０、４．２Ｈｚ、Ｈ－２）、２．９４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．３、６．１Ｈｚ、Ｈ－２）、２．８２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．０、２．９Ｈｚ、Ｈ－３）、２．５６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．０、９．０Ｈｚ、Ｈ－３）、１．７４－１．７１（１Ｈ、ｍ、Ｈ－５）、１．５０（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、８３．１（Ｃ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、６９．９（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．２（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６１．２（ＣＨ_２、Ｃ－６）、５４．７（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、４１．２（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３７．５ ３７．５（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３５．７（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２８．０（３×ＣＨ_３、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ５１０．１９２１ Ｃ_２６Ｈ_３３ＮＮａＯ_６Ｓの計算値５１０．１９２１。

【0879】

次いで、ジアステレオマー的に純粋なジオール１０３Ａを前記セクション４．１のステップｉｖ及びｖに記載されたものと同様の手順に従って、ジアステレオマー的に純粋な接合体６Ａに転換させた。

【0880】

ジアステレオマー的に純粋な６Ｂの調製

【0881】

【化66】

【0882】

０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（１４ｍｌ）中のジスルフィド８０４（２．０１ｇ、２．５３ｍモル）の撹拌溶液に亜鉛粉末（１．１５ｇ、１７．５１ｍモル）及び新たに調製されたメタノール混合物、濃塩酸及び濃硫酸（１００：７：１、７ｍｌ）を添加した。生成された混合物を０℃で３０分間撹拌されるようにした後、エポキシド１０２Ｂ（０．８９ｇ、１０．１１ｍモル）を添加した。反応混合物を５５℃で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（５０ｍｌ）で洗浄した。水層をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、３：１）により精製し、１０３Ｂ（２．１７ｇ、８８％）を無色油として得た。

【0883】

Ｒ_ｆ ０．１５（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ １：３）；［α］_Ｄ ^２２＋８．５（ｃ ０．３ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３４７、２９７６、１７０３、１５１８、１４４９、１４１３、１３６９、１３３５、１２４９、１１５１；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）７．７７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．７４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＮＨ）、４．５１－４．４７（１Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、４．４２－４．３９（２Ｈ、ｍ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、３．９３（１Ｈ、ｂｒ ｓ、Ｈ－４）、３．８５－３．８１（２Ｈ、ｍ、Ｈ－６）、３．３１（１Ｈ、ｂｒ ｓ、ＯＨ－４）、３．００－２．７８（２Ｈ、ｍ、Ｈ－２）、２．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．５、３．２Ｈｚ、Ｈ－３）、２．５５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．８、８．４Ｈｚ、Ｈ－３）、２．３６（１Ｈ、ｂｒ ｓ、ＯＨ－６） １．７３（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．３、Ｈ－５）、１．５０（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、８３．１（Ｃ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、６９．９（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．２（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６１．２（ＣＨ_２、Ｃ－６）、５４．７（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、４１．２（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３７．５ ３７．５（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３５．７（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２８．０（３×ＣＨ_３、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ５１０．１９２１ Ｃ_２６Ｈ_３３ＮＮａＯ_６Ｓの計算値５１０．１９２１。

【0884】

次いで、ジアステレオマー的に純粋なジオール１０３Ｂを前記セクション４．１のステップｉｖ及びｖに記載されたものと同様の手順に従って、ジアステレオマー的に純粋な接合体６Ｂに転換させた。

【0885】

５．実施例５
ペプチド配列ＳＫＫＫＫＶＰＧＶＬＬＫＥＦＴＶＳＧＮＩＬＴＩＲＬＴＡＡＤＨＲ[配列番号：１１２］を含む本発明のペプチド接合体１０Ａ及び１０Ｂを下記に記載し、示されたように、６を使用して調製した（スキーム６）．

【0886】

スキーム６

【0887】

【化67】

【0888】

（ｉ）反復Ｆｍｏｃ－ＳＰＰＳ；（ｉｉ）ビス－パルミトイル化されたＦｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ ６、ＰｙＢＯＰ、コリジン、ＤＭＦ；（ｉｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｉｖ）Ａｃ_２Ｏ／ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｖ）ＴＦＡ／ＥＤＴ。

【0889】

所望のペプチド配列を、前述したように、標準的な反復Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳ技術を使用して合成した。

【0890】

最後から２番目のアミノ酸残基をカップリングさせた後、次いで、樹脂結合ペプチド鎖をＤＭＦ中のＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサプルオロホスフェート）及びコリジンを使用して、アミノ酸接合体６によって誘導体化した。アミノ酸接合体のカップリング条件は、アミノ酸のα－炭素が活性化時にエピマー化される傾向を減少させるものである。アミノ酸接合体（０．０７５ｍモル）及びＰｙＢＯＰ（０．１ｍモル）を組み合わせてＤＭＦ（０．３ｍｌ）中に溶解させた。純２、４、６－トリメチルピリジン（０．１ｍモル）を添加した。３０秒間混合した後、溶液を０．０２５ｍモルの樹脂に移した後、９０分間撹拌し、排水し、洗浄した（ＤＭＦ）。

【0891】

次いで、Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中の２０％ピペリジンを使用して除去し、８を生成した。

【0892】

次いで、ペプチド８をＤＭＦ（２ｍｌ）中の２０％無水酢酸及び４－メチルモルホリン（１ｍモル）の混合物への処理によって対応するアセトアミド９に転換させた。

【0893】

代替的に、ペプチド８を樹脂から切断して、対応するペプチド接合体１０Ａを生成した。５％（ｖ／ｖ）エタンジチオールを含有する１ｍｌのトリフルオロ酢酸中の樹脂（０．０１５ｍモル）を室温で３時間撹拌した。次いで、上清液を、焼結を介して冷却したジエチルエーテル（１０ｍｌ）に排水した。次いで、樹脂をさらに１ｍｌのＴＦＡで洗浄し、これをまたエーテルに添加した。沈殿した材料を遠心分離によってペレット化し、ペレットをエーテル（５ｍｌ）で１回洗浄した後、１：１ＭｅＣＮ／水（＋０．１％ｔｆａ）中に溶解させて、凍結乾燥させた。

【0894】

ペプチド９を同じ手順を使用して樹脂から切断した。

【0895】

１０Ａ及び１０Ｂの精製を、溶離液Ａは水（＋０．１％ｔｆａ）であり、溶離液ＢはＭｅＣＮ（＋０．１％ｔｆａ）である、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８（５μ、１１０Å）１０×２５０ｍｍカラムを使用して、半分取ＨＰＬＣによって実施した。組ペプチドサンプルをカラム上に注入した後、３０分にかけて５％Ｂ～９５％Ｂの勾配を４ｍｌ／分の流動で生成させ、溶離時に所望の産物材料をカラムから回収し、凍結乾燥させた。

【0896】

１０Ａ：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）１３６３．８［Ｍ＋３Ｈ^＋］。ＨＰＬＣ分析：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｐｒｏｔｅｏ Ｃ１２（４μ、９０Å、４．６×２５０ｍｍ）；溶離液Ａ、水／０．１％ＴＦＡ；溶離液Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ；勾配：５－９５％Ｂ、３０分経過、＠１ｍｌ／分．保持時間：２３．４分。

【0897】

１０Ｂ：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）１３７７．７［Ｍ＋３Ｈ^＋］。ＨＰＬＣ分析：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｐｒｏｔｅｏ Ｃ１２（４μ、９０Å、４．６×２５０ｍｍ）；溶離液Ａ、水／０．１％ＴＦＡ；溶離液Ｂ：ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ；勾配：５－９５％Ｂ、３０分経過、＠１ｍｌ／分．保持時間：２５．２分。

【0898】

６．実施例６
ペプチド１及びパルミチン酸ビニルのチオール－エン反応を表２に要約したように、様々な条件下で下記の一般的な手順に従って実施した。

【0899】

６．１ ペプチド１の合成
ペプチド１を下記に記載されたように調製した。

【0900】

アミノメチルポリスチレン樹脂（１００ｍｇ、０．１ｍモル、ローディング１．０ｍモル／ｇ）を、ジクロロメタン及びＤＭＦ（２ｍｌ、１．９：０．１ｖ／ｖ）の混合物の中で、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＨＭＰＰ（ＨＭＰＰ＝ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸）（１０５ｍｇ、０．２ｍモル）及びＤＩＣ（３１μｌ、０．２ｍモル）と室温で１時間反応せしめた。カップリングの完了を、カイザー試験（Ｋａｉｓｅｒ ｔｅｓｔ）を使用してモニターし、カップリングが未完了された場合、新たに調製された試薬によってカップリング手順を繰り返した。各々のカップリングステップの間に室温で４０分間、ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを使用して、トリビュートペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）を使用して、残りのペプチド配列の固相ペプチド合成を実施し、各々のＦｍｏｃ－脱保護ステップの間に室温で５分間ＤＭＦ（ｖ／ｖ）中の２０％ピペリジン溶液によって２回繰り返した。

【0901】

ペプチド配列の合成後、Ｎ－末端アセチル化を室温で１５分間ＤＭＦ（ｖ／ｖ）及びＤＩＰＥＡ（０．２５ｍｌ）中の２０％無水酢酸溶液を使用して完了させた。

【0902】

樹脂－結合ペプチドを室温で２時間ＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ_２Ｏ／ＤＯＤＴ（１０ｍｌ、９４：１：２．５：２．５ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）への処理によって切断した。窒素流動によってＴＦＡを蒸発させた後、ペプチドを冷ジエチルエーテル中で沈殿させ、遠心分離によって単離させ、冷ジエチルエーテルで２回洗浄し、０．１％ＴＦＡ（１：１、ｖ／ｖ）を含有するアセトニトリル：水の中に溶解させ、凍結乾燥させて粗ペプチドを提供した。

【0903】

半分取Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ－１８カラム（ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、５μ １０．０×２５０ｍｍ）を使用したＲＰ－ＨＰＬＣによる精製は、ペプチド１（７４ｍｇ、４３％０．１ｍモルスケールに基づく）、［（Ｍ＋２Ｈ）^２＋、計算値８５８．５、測定値８５８．６Ｄａ）］を提供した。

【0904】

６．２ チオレン反応の一般的な手順
原液１：脱気されたＮ－メチル－２－ピロリドン（０．５ｍｌ）中のＤＭＰＡ（６．５ｍｇ、２５．３μモル）。

【0905】

原液２：脱気されたＮ－メチル－２－ピロリドン（必須濃度）中のパルミチン酸ビニル

【0906】

ペプチド１（１．７１ｍｇ、１．０μモル）を原液１（１０μｌ、０．５μモル）中に溶解させた後、ｔｅｒｔ－ブチルチオール及び／またはトリイソプロピルシラン及びトリフルオロ酢酸（５％ｖ／ｖ）及び原液２を添加した。反応混合物を室温でＵＶランプを使用して３６５ｎｍの波長で照射し、その後、３０分間隔でＬＣ－ＭＳ分析のためにサンプルを除去した。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水へのクエンチすることによって分析サンプルを調製し、Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ－１８カラム（ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、５μ ４．６×１５０ｍｍ）を使用して分析した。

【0907】

【表3】

【0908】

７．実施例７
本実施例は、種々の出発物質からの本発明のアミノ酸接合体の合成を説明する。

【0909】

７．１ アルコール８００からのアミノ酸接合体８０６の合成
ステップｉ

【0910】

【化68】

【0911】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍｌ）中の４－ペンチン－１－オール８００（５ｍｌ、５３．７２ｍモル）の撹拌溶液に、イミダゾール（３．６６ｇ、５３．７２ｍモル）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロライド（８．１０ｇ、５３．７２ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔ_２Ｏ（２００ｍｌ）で希釈し、水（３×１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をシリカゲルによる濾過によって精製して、表題化合物８０１（１０．６４ｇ、定量）を無色液体として得た。アルキン８０１を特性化することなく後続合成ステップで使用した。

【0912】

ステップｉｉ

【0913】

【化69】

【0914】

室温でヘキサン（１５０ｍｌ）中のアルキン８０１（１４．０８ｇ、７０．００ｍモル）の撹拌溶液に、キノリン（１１．７５ｍｌ、１００．００ｍモル）及びリンドラー触媒（Ｌｉｎｄａｒ’ｓ ｃａｔａｌｙｓｔ）（１．４０８ｇ）を添加した。反応混合物をＨ_２－充填バルーン（１ａｔｍ）に連結させ、室温で５時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８０２（１４．０９ｇ、９９％）を無色液体として得た。

【0915】

Ｒ_ｆ０．８８（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）５．８２（１Ｈ、ｄｄｔ、Ｊ＝１７．０、１０．２、６．７Ｈｚ、Ｈ－４）、５．０２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１７．１Ｈｚ、Ｈ_ａ－５）、４．９５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、Ｈ_ｂ－５）、３．６２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、Ｈ－１）、２．１０（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、Ｈ－３）、１．６１（２Ｈ、ｐ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｈ－２）、０．９０（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０５（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）１３８．６（ＣＨ、Ｃ－４）、１１４．５（ＣＨ_２、Ｃ－５）、６２．６（ＣＨ_２、Ｃ－１）、３２．０（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３０．５（ＣＨ_２、Ｃ－３）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0916】

ステップｉｉｉ

【0917】

【化70】

【0918】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍｌ）中のアルケン８０２（８．６４６ｇ、４３．１６ｍモル）の撹拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（８．１９１ｇ、４７．４７ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}を通して濾過し、Ｅｔ_２Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、飽和水溶液ＮａＨＣＯ_３（３×１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８０３（８．０９ｇ、８７％）を無色液体として得た。

【0919】

Ｒ_ｆ０．５１（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）３．７０－３．６０（２Ｈ，ｍ，Ｈ－１）、２．９６－２．９２（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、２．７５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、４．０Ｈｚ、Ｈ－５）、２．４７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．８Ｈｚ、Ｈ－５）、１．７３－１．５３（４Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）６２．７（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．２（ＣＨ、Ｃ－４）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－５）、２９．１（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２９．０（ＣＨ_２、Ｃ－３）、２５．９（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、１８．３（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0920】

ステップｉｖ

【0921】

【化71】

【0922】

０℃でＴＨＦ（０．３５ｍｌ）中のラセミエポキシド８０３（８．２７２ｇ、３８．２４ｍモル）、（Ｒ、Ｒ）－（＋）－Ｎ、Ｎ’－ビス（３、５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチルサリチリデン）－１、２－シクロヘキサンジアミノコバルト（ＩＩ）（０．１２１ｇ、０．１９ｍモル）及び氷酢酸（０．０４ｍｌ、０．７６ｍモル）の撹拌溶液に水（０．３８ｍｌ）を滴下した。反応混合物を室温で４８時間撹拌されるようにした。次いで、混合物を真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８０３ａ（４．１２ｇ、４９％）を黄色油として得た。

【0923】

Ｒ_ｆ０．５１（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；［α］_Ｄ ^２１．４＋４．６５（ｃ １．１５ ＣＨＣｌ_３中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）３．７０－３．６０（２Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、２．９６－２．９２（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、２．７５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、４．０Ｈｚ、Ｈ－５）、２．４７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．８Ｈｚ、Ｈ－５）、１．７３－１．５３（４Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６２．７（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．２（ＣＨ、Ｃ－４）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－５）、２９．１（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２９．０（ＣＨ_２、Ｃ－３）、２５．９（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、１８．３（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0924】

ステップｖ

【0925】

【化72】

【0926】

０℃で市販のＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍｌ）中のジスルフィド８０４（０．７５１ｇ、０．９４ｍモル）の撹拌溶液に、亜鉛粉末（０．５０８ｇ、７．７８ｍモル）及び新たに調製されたメタノール混合物、濃塩酸及び濃硫酸（１００：７：１、２ｍｌ）を添加した。生成された混合物を０℃で３０分間撹拌されるようにした。次いで、混合物を６５℃で５分間撹拌されるようにした後、エポキシド８０３ａ（０．８３９ｇ、３．８８ｍモル）を添加した。反応混合物を６５℃で１９時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（５０ｍｌ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、１：３）によって精製し、表題化合物８０５（０．５６８ｇ、６０％）を無色油として得た。

【0927】

Ｒ_ｆ０．３４（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ １：３）；［α］_Ｄ ^２１．０－２６．７（ｃ ０．０３ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３２１、２９３１、１７０６、１５３２、１４５０、１３６９、１２４８、１１５２、１０５０；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） ７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、ＮＨ）、４．５１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．３、５．２Ｈｚ、Ｈ－１）、４．３９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、３．７３－３．５８（３Ｈ、ｍ、Ｈ－４、Ｈ－７）、３．０３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．９、４．４Ｈｚ、Ｈ－２）、２．９５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．９、５．７Ｈｚ、Ｈ－２）、２．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．６、２．９Ｈｚ、Ｈ－３）、２．５３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．６、８．９Ｈｚ、Ｈ－３）、１．７２－１．６１（４Ｈ、ｍ、Ｈ－５、Ｈ－６）、１．４９（９Ｈ、ｓ、Ｃ（ＣＨ_３）_３））；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） １６９．８（Ｃ、ＣＯ_２ｔＢｕ）、１５６．１（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４３．９（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４１．１（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．９（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．３（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、８３．２（Ｃ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、７０．１（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．３（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６２．８（ＣＨ_２、Ｃ－７）、５４．７（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．２（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、４１．２（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３５．５（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３３．４（ＣＨ_２、Ｃ－５）、２９．２（ＣＨ_２、Ｃ－６）、２８．１（３×ＣＨ_３、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ５２４．２０７７ Ｃ_２７Ｈ_３５ＮＮａＯ_６Ｓの計算値５２４．２０７５。

【0928】

ステップｖｉ

【0929】

【化73】

【0930】

室温でＴＨＦ（３ｍｌ）中のジオール８０５（０．１１４ｇ、０．２４３ｍモル）及びパルミチン酸（０．１８０ｇ、０．７０２ｍモル）の撹拌溶液に、Ｎ、Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（０．１４５ｍｌ、０．９３６ｍモル）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１１ｇ、０．０９４ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、１Ｍクエン酸（３０ｍｌ）及び塩水（３０ｍｌ）で洗浄し、真空下で濃縮させた。次いで、残基をＴＦＡ（３ｍｌ）中に再溶解させ、室温で４５分間撹拌されるようにした。反応混合物を再び真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、９：１→０：１）によって精製し、表題化合物８０６（０．２２０ｇ、９８％）を無色油として得た。

【0931】

Ｒ_ｆ０．１５（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ １：１）；［α］_Ｄ ^２１．３＋１０．０（ｃ ０．０８ ＣＨＣｌ_３中)；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ２９１９、２８５１、１７２３、１５２１、１５２１、１２２１、１１０８、１０５４；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３）７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３０（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ＝１１．２、０．９Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．７８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＮＨ）、５．０４－４．９５（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、４．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．２、５．２Ｈｚ、Ｈ－１）、４．３８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、４．１３－３．９９（２Ｈ、ｍ、Ｈ－７）、３．１６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．９、４．５Ｈｚ、Ｈ－２）、３．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．０、５．３Ｈｚ、Ｈ－２）、２．７８－２．７０（２Ｈ、ｍ、Ｈ－３）、２．３４－２．２５（４Ｈ、ｍ、２×ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、１．７４－１．５６（８Ｈ、ｍ、２×ＰａｍＣＨ_２βアルキル、Ｈ－５、Ｈ－６）、１．３２－１．２２（４８Ｈ、ｍ、２４×ＰａｍＣＨ_２アルキル）、０．８８（６Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２×ＰａｍＣＨ_３アルキル）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） １７４．３（Ｃ、ＣＯ_２Ｈ）、１７４．０（Ｃ、ＰａｍＣＯ_２）、１７３．５（Ｃ、ＰａｍＣＯ_２）、１５６．０（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４３．７（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２１．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、７２．１（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．５（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６３．８（ＣＨ_２、Ｃ－７）、５３．６（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、３６．５（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３４．６（ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、３４．５（ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、３４．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３１．９（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、２９．７－２９．２（２１×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル、Ｃ－５）、２５．０（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２βアルキル）、２４．６（ＣＨ_２、Ｃ－６）、２２．７（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、１４．１（２×ＣＨ_３、ＰａｍＣＨ_３アルキル）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ９４４．６０４５ Ｃ_５５Ｈ_８７ＮＮａＯ_８Ｓの計算値９４４．６０２８。

【0932】

７．１．２ アルコール８０７からのアミノ酸接合体８１１の合成
ステップｉ

【0933】

【化74】

【0934】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍｌ）中の５－ヘキセン－１－オール８０７（５．００ｍｌ、４１．６４ｍモル）の撹拌溶液に、イミダゾール（２．８６ｇ、４３．０６ｍモル）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロライド（６．３４ｇ、４２．０６ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１９時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍｌ）で希釈し、水（２００ｍｌ）及び塩水（２００ｍｌ）で洗浄し、無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル）によって精製し、表題化合物８０８（８．８４６ｇ、定量）を無色油として得た。

【0935】

Ｒ_ｆ０．９０（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）５．８１（１Ｈ、ｄｄｔ、Ｊ＝１７．１、１０．１、６．７Ｈｚ、Ｈ－５）、５．００（１Ｈ、ｄｑ、Ｊ＝１７．２、１．７Ｈｚ、Ｈ_ａ－６）、４．９４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、Ｈ_ｂ－６）、３．６１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、Ｈ－１）、２．０６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、Ｈ－４）、１．５９－１．５０（２Ｈ、ｍ、Ｈ－２）、１．４７－１．３９（２Ｈ、ｍ、Ｈ－３）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０５（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １３９．０（ＣＨ、Ｃ－５）、１１４．３（ＣＨ_２、Ｃ－６）、６３．１（ＣＨ_２、Ｃ－１）、３３．５（ＣＨ_２、Ｃ－４）、３２．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２５．２（ＣＨ_２、Ｃ－３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0936】

ステップｉｉ

【0937】

【化75】

【0938】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍｌ）中のアルケン８０８（７．５８ｇ、３５．３５ｍモル）の撹拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（９．１５ｇ、５３．０５ｍモル）を少量ずつ添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔ_２Ｏ（２００ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}を通して濾過し、２Ｍ水溶液ＮａＯＨ（２００ｍｌ）及び塩水（２００ｍｌ）で洗浄し、無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８０９（６．９１ｇ、８５％）を無色油として得た。

【0939】

Ｒ_ｆ０．６０（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３）３．６１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、Ｈ－１）、２．９３－２．８８（２Ｈ、ｍ、Ｈ－５）、２．７４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、４．０Ｈｚ、Ｈ－６）、２．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、３．０Ｈｚ、Ｈ－６）、１．６３－１．４６（６Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６３．０（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．３（ＣＨ、Ｃ－５）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－６）、３２．６（ＣＨ_２、Ｃ－４）、３２．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２２．３（ＣＨ_２、Ｃ－３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0940】

ステップｉｉｉ

【0941】

【化76】

【0942】

０℃でＴＨＦ（０．３ｍｌ）中のラセミエポキシド８０９（５．８８７ｇ、２５．５６ｍモル）、（Ｒ、Ｒ）－（＋）－Ｎ、Ｎ’－ビス（３、５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチルサリチリデン）－１、２－シクロヘキサンジアミノコバルト（ＩＩ）（０．０８３ｇ、０．１３ｍモル）及び氷酢酸（０．０３ｍｌ、０．５１ｍモル）の撹拌溶液に水（０．２５３ｍｌ）を滴下した。反応混合物を室温で４８時間撹拌されるようにした。次いで、混合物を真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８０９ａ（２．９１３ｇ、４９％）を黄色油として得た。

【0943】

Ｒ_ｆ０．６０（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；［α］_Ｄ ^２０．４＋５．０（ｃ ０．０２ ＣＨＣｌ_３中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ３．６１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、Ｈ－１）、２．９３－２．８８（２Ｈ、ｍ、Ｈ－５）、２．７４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、４．０Ｈｚ、Ｈ－６）、２．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、３．０Ｈｚ、Ｈ－６）、１．６３－１．４６（６Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６３．０（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．３（ＣＨ、Ｃ－５）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－６）、３２．６（ＣＨ_２、Ｃ－４）、３２．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２２．３（ＣＨ_２、Ｃ－３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0944】

ステップｉｖ

【0945】

【化77】

【0946】

０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍｌ）中のジスルフィド８０４（０．５００ｇ、０．６４９ｍモル）の撹拌溶液に、亜鉛粉末（０．３００ｇ、４．５４ｍモル）及び新たに製造されたメタノール混合物、濃塩酸及び濃硫酸（１００：７：１、２ｍｌ）を添加した。生成された混合物を０℃で３０分間撹拌されるようにした。次いで、混合物を６５℃で５分間撹拌されるようにした後、エポキシド８０９ａ（０．６００ｇ、２．６０ｍモル）を添加した。反応混合物を６５℃で１９時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（５０ｍｌ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、４：１→１：３）によって精製し、表題化合物８１０（０．５５３ｇ、８３％）を無色油として得た。

【0947】

Ｒ_ｆ０．３９（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ １：３）；［α］_Ｄ ^２１．２－２５．０（ｃ ０．０７ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３４３、２９３４、２８６２、１７０５、１５１３、１４５０、１３６９、１３４４、１２４８、１１５２；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） ７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３０（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ＝１１．２、１．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、ＮＨ）、４．５２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．５、５．２Ｈｚ、Ｈ－１）、４．３９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、３．７０－３．５９（３Ｈ、ｍ、Ｈ－４、Ｈ－８）、３．０３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．７、４．７ Ｈｚ、Ｈ－２）、２．９４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．７、５．４Ｈｚ、Ｈ－２）、２．８０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．６、３．４Ｈｚ、Ｈ－３）、２．５１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．４、８．７Ｈｚ、Ｈ－３）、１．６０－１．３８（１５Ｈ、ｍ、Ｈ－５、Ｈ－６、Ｈ－７、Ｃ（ＣＨ_３）_３））；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） １６９．７（Ｃ、ＣＯ_２ｔＢｕ）、１５６．０（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４３．８（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、８３．１（Ｃ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、６９．８（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．２（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６２．５（ＣＨ_２、Ｃ－８）、５４．６（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、４１．１（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３５．８（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３５．４（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３２．４（ＣＨ_２、Ｃ－７）、２８．０（３×ＣＨ_３、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、２１．９（ＣＨ_２、Ｃ－６）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ５３８．２２２６ Ｃ_２８Ｈ_３７ＮＮａＯ_６Ｓの計算値５３８．２２３４。

【0948】

ステップｖ

【0949】

【化78】

【0950】

室温でＴＨＦ（３ｍｌ）中のジオール８１０（０．１９０ｇ、０．３７０ｍモル）及びパルミチン酸（０．２８４ｇ、１．１０ｍモル）の撹拌溶液に、Ｎ、Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（０．２２６ｍｌ、１．４７ｍモル）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１８ｇ、０．１４７ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈した。１Ｍクエン酸（３０ｍｌ）及び塩水（３０ｍｌ）で洗浄し、真空下で濃縮させた。次いで、残基をＴＦＡ（３ｍｌ）中に再溶解させ、室温で４５分間撹拌されるようにした。反応混合物を再び真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、９：１→０：１）によって精製し、表題化合物８１１（０．３０１ｇ、定量）を無色油として得た。

【0951】

Ｒ_ｆ０．２０（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ １：１）；［α］_Ｄ ^２１．２＋１０．０（ｃ ０．０７ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３３１、２９１７、２８５０、１７２８、１６９２、１５３２、１４６７、１４５１、１２４４、１２２１、１１９８、１１７５；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） ７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３０（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ＝１１．２、１．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９ＮＨ）、５．０３－４．９２（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、４．７１－４．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ－１）、４．４０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、４．１１－４．００（２Ｈ、ｍ、Ｈ－８）、３．１５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．９、４．４Ｈｚ、Ｈ－２）、３．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．８、５．８Ｈｚ、Ｈ－２）、２．７８－２．６５（２Ｈ、ｍ、Ｈ－３）、２．３１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、２．２８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、１．７４－１．５５（８Ｈ、ｍ、２×ＰａｍＣＨ_２βアルキル、Ｈ－５、Ｈ－７）、１．４５－１．１７（５０Ｈ、ｍ、２４×ＰａｍＣＨ_２アルキル、Ｈ－６）、０．８８（６Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２×ＰａｍＣＨ_３アルキル）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＨＣｌ_３） １７４．３（Ｃ、ＣＯ_２Ｈ）、１７４．０（Ｃ、ＰａｍＣＯ_２）、１７３．９（Ｃ、ＰａｍＣＯ_２）、１５６．１（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４３．７（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、７２．４（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．４（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６４．０（ＣＨ_２、Ｃ－８）、５３．６（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、３６．６（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３４．６（ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、３４．５（ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、３４．４（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３２．７（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３２．０（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、２９．７－２９．３（２０×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、２８．３（ＣＨ_２、Ｃ－７）、２５．０（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２βアルキル）、２５．０（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２βアルキル）、２２．７（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、２１．７（ＣＨ_２、Ｃ－６）、１４．４（２×ＣＨ_３、ＰａｍＣＨ_３アルキル）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ９５８．６２３９ Ｃ_５６Ｈ_８９ＮＮａＯ_８Ｓの計算値９５８．６２３８。

【0952】

７．１．３ アルケン８１４からのアミノ酸接合体８２０の合成
Ａ）アルコール８１２からのアルケン８１４の合成
ステップｉ

【0953】

【化79】

【0954】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（８０ｍｌ）中の６－ヘブチン－１－オール８１２（３．３３ｍｌ、２６．７５ｍモル）の撹拌溶液に、イミダゾール（１．７６ｇ、２７．０１ｍモル）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロライド（４．０７ｇ、２７．０１ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔ_２Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、水（３×１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をシリカゲルによる濾過によって精製し、アルキン８１３（５．６８ｇ、定量）を無色液体として得た。アルキン８１３を特性化することなく後続合成ステップで使用した。

【0955】

ステップｉｉ

【0956】

【化80】

【0957】

室温でヘキサン（１４０ｍｌ）中のアルキン８１３（５．３４ｇ、２５．１８ｍモル）の撹拌溶液に、キノリン（４．１８ｍｌ、３５．２６ｍモル）及びリンドラー触媒（０．５３ｇ）を添加した。反応混合物をＨ２－充填バルーン（１ａｔｍ）に連結させ、室温で２時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８１４（５．３４ｇ、定量）を無色液体として得た。

【0958】

Ｒ_ｆ０．９１（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ５．８１（１Ｈ、ｄｄｔ、Ｊ＝１７．０、１０．３、６．７Ｈｚ、Ｈ－６）、４．９９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１７．０Ｈｚ、Ｈ_ａ－７） ４．９３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、Ｈ_ｂ－７）、３．６０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ－１）、２．０５（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｈ－５）、１．５６－１．３１（６Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０５（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １３９．１（ＣＨ、Ｃ－６）、１１４．２（ＣＨ_２、Ｃ－７）、６３．２（ＣＨ_２、Ｃ－１）、３３．８（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３３．７（ＣＨ_２、Ｃ－４）、２８．７（ＣＨ_２、Ｃ－３）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２５．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0959】

Ｂ）アルコール８１５からのアルケン８１４の合成
ステップｉ

【0960】

【化81】

【0961】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍｌ）中の１、６－ヘキサンジオール（８１５）（１６．００ｇ、１３５．３９ｍモル）の撹拌溶液に、イミダゾール（９．２２ｇ、１３５．３９ｍモル）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロライド（２０．４１ｇ、１３５．３９ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１９時間撹拌されるようにした。次いで、混合物を濾過し、Ｈ_２Ｏ（１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、４：１）によって精製し、表題化合物８１６（２５．１３ｇ、８０％）を無色液体として得た。アルコール８１６を特性化することなく後続合成ステップで使用した。

【0962】

ステップｉｉ

【0963】

【化82】

【0964】

０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（１１ｍｌ）中のアルコール８１６（４．９０ｇ、２１．１０ｍモル）の撹拌溶液に、ジメチルスルホキシド（１１．０８ｍｌ、１５４．０５ｍモル）、Ｅｔ_３Ｎ（１４．７１ｍｌ、１０５．５２ｍモル）及び三酸化硫黄ピリジン錯体（９．８９ｇ、６３．３１ｍモル）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌されるようにした。次いで、混合物を水（２０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を水（５０ｍｌ）及び塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８１７（４．７１ｇ、９７％）を無色油として得た。アルデヒド８１７を特性化することなく後続合成ステップで使用した。

【0965】

ステップｉｉｉ

【0966】

【化83】

【0967】

－７８℃でＴＨＦ（３０ｍｌ）中の臭化メチルトリフェニルホスホニウム（４．６０ｇ、１２．８９ｍモル）の撹拌溶液に、ｎ－ブチルリチウム（７．１６ｍｌ、１．８Ｍ、１２．８９ｍモル）の溶液を滴下した。生成された混合物を室温で加温させ、１時間撹拌されるようにした。次いで、反応混合物を－７８℃に冷却させ、ＴＨＦ（６ｍｌ）中のアルデヒド８１７（２．５６ｇ、１１．２１ｍモル）を滴下した。反応混合物を－７８℃で３時間撹拌されるようにした後、室温で加温させ、さらに１５時間撹拌されるようにした。次いで、混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×７０ｍｌ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を水（２×５０ｍｌ）及び塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９９：１）によって精製し、表題化合物８１４（２．５０ｇ、９８％）を無色液体として得た。

【0968】

Ｒ_ｆ０．９１（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ５．８１（１Ｈ、ｄｄｔ、Ｊ＝１７．０、１０．３、６．７Ｈｚ、Ｈ－６）、４．９９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１７．０Ｈｚ、Ｈ_ａ－７） ４．９３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、Ｈ_ｂ－７）、３．６０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ－１）、２．０５（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、Ｈ－５）、１．５６－１．３１（６Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４）、０．８９（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０５（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １３９．１（ＣＨ、Ｃ－６）、１１４．２（ＣＨ_２、Ｃ－７）、６３．２（ＣＨ_２、Ｃ－１）、３３．８（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３３．７（ＣＨ_２、Ｃ－４）、２８．７（ＣＨ_２、Ｃ－３）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２５．３（ＣＨ_２、Ｃ－２）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0969】

Ｃ）アルケン８１４からのアミノ酸接合体８２０の合成
ステップｉ

【0970】

【化84】

【0971】

室温でＣＨ_２Ｃｌ_２（４０ｍｌ）中のアルケン８１４（４．３０ｇ、１８．４０ｍモル）の撹拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（４．４６ｇ、２５．８４ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}を通して濾過し、Ｅｔ_２Ｏ（６０ｍｌ）で希釈し、飽和水溶液ＮａＨＣＯ_３（３×１００ｍｌ）及び塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無数Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８１８（４．３０ｇ、９６％）を無色液体として得た。

【0972】

Ｒ_ｆ０．６３（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ３．６０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、Ｈ－１）、２．９２－２．８８（１Ｈ、ｍ、Ｈ－６）、２．７４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、Ｈ－７）、２．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．８Ｈｚ、Ｈ－７）、１．５６－１．３６（８Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４、Ｈ－５）、（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６３．１（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．３（ＣＨ、Ｃ－６）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－７）、３２．８（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３２．５（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２５．８（ＣＨ_２、Ｃ－４）、２５．７（ＣＨ_２、Ｃ－３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0973】

ステップｉｉ

【0974】

【化85】

【0975】

０℃でＴＨＦ（０．１ｍｌ）中のラセミエポキシド８１８（２．２３ｇ、９．１３ｍモル）、（Ｒ、Ｒ）－（＋）－Ｎ、Ｎ’－ビス（３、５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチルサリチリデン）－１、２－シクロヘキサンジアミノコバルト（ＩＩ）（０．０３ｇ、０．０５ｍモル）及び氷酢酸（０．０１ｍｌ、０．１８ｍモル）の撹拌溶液に水（０．０９ｍｌ）を滴下した。反応混合物を室温で４８時間撹拌されるようにした。次いで、混合物を真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ、９：１）によって精製し、表題化合物８１８ａ（１．０９ｇ、４９％）を黄色油として得た。

【0976】

Ｒ_ｆ０．６３（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ ９：１）；［α］_Ｄ ^２１．３＋４．２（ｃ ０．９０ ＣＨＣｌ_３中）；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ３．６０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、Ｈ－１）、２．９２－２．８８（１Ｈ、ｍ、Ｈ－６）、２．７４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、Ｈ－７）、２．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．０、２．８Ｈｚ、Ｈ－７）、１．５６－１．３６（８Ｈ、ｍ、Ｈ－２、Ｈ－３、Ｈ－４、Ｈ－５）、（９Ｈ、ｓ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、０．０４（６Ｈ、ｓ、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ６３．１（ＣＨ_２、Ｃ－１）、５２．３（ＣＨ、Ｃ－６）、４７．１（ＣＨ_２、Ｃ－７）、３２．８（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３２．５（ＣＨ_２、Ｃ－２）、２６．０（３×ＣＨ_３、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、２５．８（ＣＨ_２、Ｃ－４）、２５．７（ＣＨ_２、Ｃ－３）、１８．４（Ｃ、ＳｉＣ（ＣＨ_３）_３）、－５．３（２×ＣＨ_３、Ｓｉ（ＣＨ_３）_２。分光分析データは、文献に報告されたものと一致した。

【0977】

ステップｉｉｉ

【0978】

【化86】

【0979】

０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍｌ）中のジスルフィド８０４（０．３０ｇ、０．３７５ｍモル）の撹拌溶液に、亜鉛粉末（０．２０ｇ、３．０１ｍモル）及び新たに調製されたメタノール混合物、濃塩酸及び濃硫酸（１００：７：１、１ｍｌ）を添加した。生成された混合物を０℃で３０分間撹拌されるようにした後、エポキシド８１８ａ（０．３４４ｇ、１．１３ｍモル）を添加した。反応混合物を７０℃で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、塩水（３０ｍｌ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物を無数ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、１：３）によって精製し、表題化合物８１９（０．３５０ｇ、８８％）を無色油として得た。

【0980】

Ｒ_ｆ０．４（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ １：３）；［α］_Ｄ ^２０．８－２０．０（ｃ ０．０３ ＥｔＯＡｃ中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３６５、３９３３、１７０３、１５１４、１４５０、１３６９、１３４３、１２４８、１１５１、１０４６；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＭｅＯＤ） ７．７９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、４．３４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、４．２８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．２、５．１Ｈｚ、Ｈ－１）、４．２３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、３．７２－３．６１（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、３．５７－３．７９（２Ｈ、ｍ、Ｈ－９）、３．０１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．８、５．０Ｈｚ、Ｈ－２）、２．８６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．７、８．３Ｈｚ、Ｈ－２）、２．６９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．４、４．９Ｈｚ、Ｈ－３）、２．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．４、７．０Ｈｚ、Ｈ－３）、１．５７－１．３４（１７Ｈ、ｍ、Ｈ－５、Ｈ－６、Ｈ－７、Ｈ－８、Ｃ（ＣＨ_３）_３）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＭｅＯＤ） １７１．８（Ｃ、ＣＯ_２ｔＢｕ）、１５８．１（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４５．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４２．６（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２８．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２８．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２６．４（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２１．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、８３．３（Ｃ、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、７１．９（ＣＨ、Ｃ－４）、６８．２（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６２．９（ＣＨ_２、Ｃ－９）、５６．５（ＣＨ、Ｃ－１）、５０．２（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、４０．８（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３７．３（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３５．５（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３３．６（ＣＨ_２、Ｃ－８）、２８．３（３×ＣＨ_３、Ｃ（ＣＨ_３）_３）、２６．９（ＣＨ_２、Ｃ－７）、２６．６（ＣＨ_２、Ｃ－６）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ５５２．２３９０ Ｃ_２９Ｈ_３９ＮＮａＯ_６Ｓの計算値５５２．２３９３。

【0981】

ステップｉｖ

【0982】

【化87】

【0983】

室温でＴＨＦ（４．６ｍｌ）中のジオール８１９（０．１６８ｇ、０．３１７ｍモル）及びパルミチン酸（０．２４４ｇ、０．９５１ｍモル）の撹拌溶液に、Ｎ、Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（０．１９１ｍｌ、１．２６９ｍモル）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１６ｇ、０．１２７ｍモル）を添加した。反応混合物を室温で１７時間撹拌されるようにした。次いで、混合物をＣｅｌｉｔｅ^{（登録商標）}のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、１Ｍクエン酸（３０ｍｌ）及び塩水（３０ｍｌ）で洗浄し、真空下で濃縮させた。次いで、残基をＴＦＡ（３ｍｌ）中に再溶解させ、室温で４５分間撹拌されるようにした。反応混合物を再び真空下で濃縮させた。粗産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ、９：１→０：１）によって精製し、表題化合物８２０（０．３０１ｇ、定量）を無色油として得た。

【0984】

Ｒ_ｆ０．２１（石油エーテル－ＥｔＯＡｃ １：１）；［α］_Ｄ ^２０．８＋７．５（ｃ ０．２４ ＣＨＣｌ_３中）；ν_ｍａｘ（純）／ｃｍ^－１ ３３１９、２９１９、２８５１、１７２２、１５２１、１４７１、１４５０、１２２１、１０５５；δ_Ｈ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） ７．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．６１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、７．３０（２Ｈ、ｔｄ、Ｊ＝１１．２、１．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＨ）、５．８２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、ＮＨ）、５．００－４．９４（１Ｈ、ｍ、Ｈ－４）、４．６４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１２．３、５．６Ｈｚ、Ｈ－１）、４．４０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ）、４．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、ＦｍｏｃＣＨ_２）、４．１０－４．００（２Ｈ、ｍ、Ｈ－９）、３．１４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．８、４．３Ｈｚ、Ｈ－２）、３．０４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１３．８、５．６Ｈｚ、Ｈ－２）、２．７６－２．６７（２Ｈ、ｍ Ｈ－３）、２．３１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、２．２８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、１．６５－１．５６（８Ｈ、ｍ、２×ＰａｍＣＨ_２βアルキル、Ｈ－８、Ｈ－５）、１．３９－１．１８（５２Ｈ、ｍ、２４×ＰａｍＣＨ_２アルキル、Ｈ－６、Ｈ－７）、０．８８（６Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２×ＰａｍＣＨ_３アルキル）；δ_Ｃ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ_３） １７４．４（Ｃ、ＣＯ_２Ｈ）、１５６．１（Ｃ、ＦｍｏｃＣＯ）、１４３．７（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１４１．３（Ｃ、Ｆｍｏｃ）、１２７．８（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２７．１（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２５．２（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、１２０．０（ＣＨ、Ｆｍｏｃ）、７２．４（ＣＨ、Ｃ－４）、６７．５（ＣＨ_２、ＦｍｏｃＣＨ_２）、６４．２（ＣＨ_２、Ｃ－９）、５３．６（ＣＨ、Ｃ－１）、４７．１（ＣＨ、ＦｍｏｃＣＨ）、３６．５（ＣＨ_２、Ｃ－３）、３４．６（ＣＨ_２、Ｃ－２）、３４．３（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２αアルキル）、３３．０（ＣＨ_２、Ｃ－５）、３１．９（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル） ２９．７－２８．４（２１×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル、Ｃ－８）、２５．５（ＣＨ_２、Ｃ－７）、２５．０（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２βアルキル）、２４．８（ＣＨ_２、Ｃ－６）、２２．７（２×ＣＨ_２、ＰａｍＣＨ_２アルキル）、１４．１（２×ＣＨ_３、ＰａｍＣＨ_３アルキル）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ９７２．６３５８ Ｃ_５７Ｈ_９１ＮＮａＯ_８Ｓの計算値９７２．６３９２。

【0985】

８．実施例８
本実施例は、Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫの（Ｒ）－及び（Ｓ）－コンストラクトのＴＬＲアゴニズムを説明する。

【0986】

８．１ 方法
Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ及びＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫの鏡像異性体的にエナンチオピュアなエピマー（Ｒ）－及び（Ｓ）－バージョンを、本明細書の実施例（実施例４及び５）に記載されたものと類似の方法を使用して社内で生成した。さらに、ｈ－Ｐａｍ－２－Ｃｙｓ及びＰａｍ－２－ＣｙｓによるＴＬＲアゴニズムへのＣ－末端修飾の影響を評価するために、一対のＳＫＫＫＫ－ＮＨ_２及びＳＫＫＫＫ－ＮＡｃアゴニストセットを調製した。調製されたアゴニストが表４に列挙されている。

【0987】

表４のアゴニストのＴＬＲ２アゴニズムを実施例２のセクション２．１に記載されたものと同様の手順に従って、６－ｌｏｇ_１０希釈系列（１０^－６Ｍ～１０^－１１Ｍ）にわたって、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｍＴＬＲ２（図６Ａ）細胞及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ^ＴＭ－ｈＴＬＲ２（図６Ｂ）細胞において研究した。（Ｒ／Ｓ）－Ｐａｍ－１－Ｃｙｓ－ＮＨ_２を１０^－６及び１０^－９Ｍでのみ試験した。データは、バックグラウンド減算後、３重ウェルについての平均＋／－ＳＤ吸光度（６３５ｎｍ）値として提示され、点線は、培地のみで処理されたウェルにおける吸光度を示した。

【0988】

【表4】

【0989】

スキーム７．表４に引用されたＰａｍ１Ｃｙｓ－、（Ｒ）－及び（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－、（Ｒ）－及び（Ｓ）－Ｐａｍ３Ｃｙｓ－、及び（Ｒ）－及び（Ｓ）－ホモＰａｍ２Ｃｙｓ－の構造

【0990】

【化88】

【0991】

８．２ 結果
８．２．１ ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２に対するコンストラクトの生物学的利用能
Ｐａｍ１Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＨ_２は、１０^－６Ｍでは、ｈＴＬＲ２に対するアゴニズムを示したが、１０^－９Ｍでは示さず、ｍＴＬＲ２に対しては、いかなる濃度でもアゴニズムを示さなかった。対照的に、試験されたすべてのＰａｍ２Ｃｙｓ、ホモＰａｍ２Ｃｙｓ及びＰａｍ３Ｃｙｓコンストラクトは、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方に対してアゴニズムを示した。典型的には、エピマー及びＣ－末端マッチングされたホモＰａｍ２Ｃｙｓ及びＰａｍ２Ｃｙｓコンストラクトは、希釈系列にわたって同等のアゴニズム強度及びパターンを示し、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方に対してエピマーマッチングされたＰａｍ３Ｃｙｓより顕著により強力なアゴニストであった（Ｐａｍ３Ｃｙｓより１０倍以上もう低い濃度でＮＦ_ＫＢ生成を誘発する）。

【0992】

８．２．２ （Ｒ）－対（Ｓ）－立体化学の効果
試験されたすべてのコンストラクトセットにおいて、一対の（Ｒ）－バージョンは、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方について（Ｓ）－バージョンよりも強力なアゴニズムを示した。（Ｒ）－Ｐａｍ３Ｃｙｓは、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方について（Ｓ）－Ｐａｍ３Ｃｙｓよりも約１０倍以上低い濃度でＮＦ_ＫＢ生成を維持した。（Ｒ）－ホモＰａｍ２Ｃｙｓは、Ｃ－末端修飾にかかわらず、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方について（Ｓ）－ホモＰａｍ２Ｃｙｓよりも約１０倍以上低い濃度でＮＦ_ＫＢ生成を維持した。（Ｒ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓは、Ｃ－末端修飾にかかわらず、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方について（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓよりも約１００倍以上低い濃度でＮＦ_ＫＢ生成を維持した。興味深いことに、（Ｒ）－ホモＰａｍ２Ｃｙｓ及び（Ｒ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓは、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方において、ｌｏｇ_１０希釈系列にわたって同等のアゴニストであったが、（Ｓ）－ホモＰａｍ２Ｃｙｓは、約１０～１００倍以上低い濃度でＮＦ_ＫＢ生成を誘発して、ｍＴＬＲ２及びｈＴＬＲ２の両方において（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓよりも強力なアゴニストであった。（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓは、Ｓ）－Ｐａｍ３Ｃｙｓと同様のアゴニズム強度及びパターンを示した。

【0993】

８．２．３ Ｃ－末端－ＮＨ _２ 及び－Ｎａｃの効果
Ｃ－末端－ＮＨ_２及びＣ－末端－ＮＡｃを有するエピマーマッチングされたホモＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較する場合、ｍＴＬＲ２またはｈＴＬＲ２のいずれについても差別的アゴニズムが観察されなかった。Ｃ－末端－ＮＨ_２及びＣ－末端－ＮＡｃを有するエピマーマッチングされたＰａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較する場合、ｈＴＬＲ２について差別的アゴニズムが観察されなかった。Ｃ－末端－ＮＨ_２及びＣ－末端－ＮＡｃを有する（Ｓ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫと比較する場合、ｍＴＬＲ２について差別的アゴニズムが観察されなかった。ｍＴＬＲ２について（Ｒ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＨ_２を（Ｒ）－Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ－ＮＡｃと比較する場合、１０^－１０及び１０^－１１ＭのみでＮＫ_ＫＢ生成における増加が観察された。

【0994】

９．実施例９
ペプチド配列ＳＫＫＫＫＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ[配列番号：１２７］を含む本発明のペプチド接合体８２１及び８２２は、下記に記載され、示されたように、６を使用して調製した（スキーム８）。

【0995】

ペプチド配列ＳＫＫＫＫＫＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲＥＳＩＩＮＦＥＫＬＴＥＷＴ（配列番号：１２７）は、オボアルブミン（ＯＶＡ）タンパク質（ニワトリ卵白の主要構成成分）に由来し、単一のＥによって連結された２つの免疫原性ペプチドエピトープ（下線部分）を含む。ＯＶＡは、例えば、腫瘍細胞がそれを発現するように操作／形質感染され得るので、マウスにおけるモデル抗原として有用である。

【0996】

エピトープの詳細は、下記の通りである：
ＳＩＩＮＦＥＫＬ：Ｈ－Ｋ２^ｂ制限される（ネズミＭＨＣクラスＩ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞によって認識される。ＯＶＡアミノ酸２５７－２６４。
ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ：Ｉ－Ａｄ制限される（ネズミＭＨＣクラスＩＩ）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によって認識される。ＯＶＡアミノ酸３２３－３３９。

【0997】

【化89】

【0998】

スキーム８．（ｉ）反復Ｆｍｏｃ－ＳＰＰＳ；（ｉｉ）（Ｒ）－または（Ｓ）－ビス－パルミトイル化されたＦｍｏｃ－Ｃｙｓ－ＯＨ ６、ＰｙＢＯＰ、コリジン、ＤＭＦ；（ｉｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｉｖ）ＴＦＡ／ＥＤＴ／水。

【0999】

所望のペプチド配列を、前述したように、標準反復Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳ技術を使用して合成した。

【1000】

最後から２番目のアミノ酸残基をカップリングさせた後、樹脂結合ペプチド鎖をその後に、ＤＭＦ中のＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）及びコリジンを使用して、アミノ酸接合体６の所望のジアステレオマーによって誘導体化した。アミノ酸接合体のカップリングのための条件は、アミノ酸のα－炭素が活性化時にエピマー化される傾向を減少させることである。アミノ酸接合体（０．０３２ｍモル）及びＰｙＢＯＰ（０．０３３ｍモル）を組み合わせ、ＤＭＦ（０．２５ｍｌ）中に溶解させた。純２、４、６－トリメチルピリジン（０．０５ｍモル）を添加した。３０秒間混合した後、溶液を０．０１６ｍモルの樹脂に移した後、９０分間撹拌し、排水し、洗浄して（ＤＭＦ）、８２３を提供した。

【1001】

次いで、Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを使用して除去して８２４を生成した。

【1002】

示された位置においてＲ立体配座を有するペプチド接合体８２１（スキーム８）または示された位置にＳ立体配座を有するペプチド接合体８２２を生成するために、ペプチド８２４を樹脂から切断した。２．５％（ｖ／ｖ）エタンジチオール及び２．５％ｖ／ｖ水を含有する１．５ｍｌのトリフルオロ酢酸中の樹脂（０．０１６ｍモル）を室温で２時間撹拌した。次いで、上清液を、焼結を介して冷却したジエチルエーテル（１０ｍｌ）に排水した。次いで、樹脂をさらに１ｍｌのＴＦＡで洗浄し、これをまたエーテルに添加した。沈殿された材料を遠心分離によってペレット化し、ペレットをエーテル（５ｍｌ）で１回洗浄した後、１：１ＭｅＣＮ／水（＋０．１％ｔｆａ）中に溶解させ、凍結乾燥させた。

【1003】

８２１及び８２２の精製を、溶離液Ａは水（＋０．１％ｔｆａ）であり、溶離液ＢはＭｅＣＮ（＋０．１％ｔｆａ）である、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８（５μ、１１０Å）１０×２５０ｍｍカラムを使用して、半分取ＨＰＬＣによって実施した。組ペプチドサンプルをカラム上に注入した後、下記の勾配を生成した：４ｍｌ／分の流動で、３分にかけて５％Ｂ～４５％Ｂ、続いて１６分にかけて４５％Ｂ～６５％Ｂ。溶離時、所望の産物材料をカラムから収集し、凍結乾燥させた。

【1004】

【表5】

【1005】

本発明の範囲を前述の実施例のみに限定しようとする意図ではない。当業者なら理解するように、本発明の範囲を逸脱することがなく、多くの変形が可能である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【配列表】

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