特許 7162853 液相ペプチド合成用担体結合ペプチドの分析方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B1)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-10-21

(45)【発行日】2022-10-31

(54)【発明の名称】液相ペプチド合成用担体結合ペプチドの分析方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 1/04 20060101AFI20221024BHJP

   B01D 15/42 20060101ALI20221024BHJP

   G01N 30/02 20060101ALI20221024BHJP

   G01N 30/88 20060101ALI20221024BHJP

   B01D 15/40 20060101ALI20221024BHJP

   B01D 15/32 20060101ALI20221024BHJP

【ＦＩ】

C07K1/04

B01D15/42

G01N30/02 N

G01N30/88 H

G01N30/88 J

B01D15/40

B01D15/32

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2021203703

(22)【出願日】2021-12-15

【審査請求日】2021-12-22

(31)【優先権主張番号】P 2021111127

(32)【優先日】2021-07-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 令和３年６月８日、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０２１， ２６（１２）， ３４９７ （ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３９０／ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ２６１２３４９７）にて公開。

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】517349083

【氏名又は名称】ペプチスター株式会社

(73)【特許権者】

【識別番号】390037327

【氏名又は名称】積水メディカル株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】根本 圭崇

(72)【発明者】

【氏名】阿部 準

(72)【発明者】

【氏名】森 利裕

【審査官】幸田 俊希

(56)【参考文献】

【文献】特開２０２０－１７６１０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１９／１９８８３３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／０２１２３３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／２２１８８９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開２０１７－０１９７８７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／０５６６１９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特開２０１４－１０１３２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１０／１１３９３９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１０／１０４１６９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】これで解決！逆相ＨＰＬＣ分析の問題－カラムの基本と分離のノウハウ－，2019年，https://www.cerij.or.jp/service/09_chromatography/seminar/2019_JASIS_1/pdf，[retrieved on 2022.2.16]

【文献】これでレベルアップ ★逆相ＨＰＬＣ分析におけるメソッド開発に役立つノウハウとトラブルシューティングの解説★，2013年，https://www.cerij.or.jp/service/09_chromatography/seminar/2013_JASIS/pdf，[retrieved on 2022.2.16]

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００

Ｇ０１Ｎ ３０／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

炭素数１～４のアルコールを含む溶液 を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体の脱保護後条件下で副生する液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドとを同時に分析する方法であって、
前記液相ペプチド合成用担体が、下記の式（Ｉ）の化合物である、分析方法。

【化1】

［式中、環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ ¹¹ は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ ¹⁴ と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ ¹⁷ －（Ｒ ¹⁷ は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ ¹² は、それぞれ独立して酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【化2】

但しＲ ²⁰ は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ ³ は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ ²¹ －（Ｒ ²¹ は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｑ個のＲ ¹³ は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～４の整数かつｐ＋ｑが１以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ ¹² に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ａ）：

【化3】

（式中、＊は結合位置を示し；
ｒ、ｓは、それぞれ０～４の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ ¹⁸ －（Ｒ ¹⁸ は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ ¹⁵ は、独立して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【化4】

但しＲ ²⁰ は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ ³ は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ ²¹ －（Ｒ ²¹ は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｓ個のＲ ¹⁶ は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ ¹⁴ は、水素原子を示すか、Ｒ ¹¹ と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ ¹⁵ に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ ¹⁹ （Ｒ ¹⁹ は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］

【請求項2】

炭素数１～４のアルコールを含む溶液を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体の脱保護後条件下で副生する液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドとを同時に分析する方法であって、
前記液相ペプチド合成用担体が、下記の式（１）、（１３）または（１４）のいずれかの化合物である、分析方法。

【化5】

（式中、Ｘ ² は－ＣＨ ₂ ＯＲ ⁴⁴ （ここでＲ ⁴⁴ は水素原子、ハロゲノカルボニル基、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＣＨ ₂ ＮＨＲ ⁴⁵ （ここで、Ｒ ⁴⁵ は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）、ハロゲノメチル基、ホルミル基、又はオキシムを示し、Ｒ ³¹ 、Ｒ ³² 、Ｒ ³³ 、Ｒ ³⁴ 及びＲ ³⁵ のうちの少なくとも１個は式（ｃ）

【化6】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ ²⁰ は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し；
Ｘ ³ はＯ又はＣＯＮＲ ²¹ （ここでＲ ²¹ は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し；
Ｄは式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）又は（１２）

【化7】

（ここで、Ｒ ³⁷ 、Ｒ ³⁸ 、Ｒ ³⁹ は、同一又は異なって、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し；Ｒ ⁴⁰ は単結合又は炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｒ ⁴¹ 、Ｒ ⁴² 及びＲ ⁴³ はそれぞれ、炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す）
で表される基を示す）

【化8】

（式中、Ｘ ⁴ は－ＯＲ ⁶¹ （ここでＲ ⁶¹ は水素原子、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＮＨＲ ⁴⁵ 、アジド、ハロゲン、イソシアネート、Ｘ ⁵ と一緒になって＝Ｎ－ＯＨ又は＝Ｏを示し、Ｘ ⁴ が－ＯＲ ⁶¹ 、－ＮＨＲ ⁴⁵ 、アジド又はハロゲンの場合Ｘ ⁵ は水素原子又は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し、Ｘ ⁴ がイソシアネートの場合Ｘ ⁵ は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し；
Ｒ ⁵¹ ～Ｒ ⁶⁰ のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｘ ⁴ が－ＯＲ ⁶¹ 、－ＮＨＲ ⁴⁵ 、アジド又はハロゲンであり、かつＸ ⁵ が水素原子のとき、若しくはＸ ⁴ とＸ ⁵ が一緒になって＝Ｏのとき、Ｒ ⁵⁵ とＲ ⁵⁶ は酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）

【化9】

（式中、Ｘ ⁶ はヒドロキシ基又はハロゲン原子を示し、Ｒ ⁷¹ ～Ｒ ⁸⁵ のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し、Ｒ ⁸⁰ とＲ ⁸¹ は単結合で結合してフルオレン環を形成していてもよく、酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）

【請求項3】

炭素数１～４のアルコールを含む溶液を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体の脱保護後条件下で副生する液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドとを同時に分析する方法であって、
前記液相ペプチド合成用担体が、下記の式（２０）または（２１）のいずれかの化合物である、分析方法。

【化10】

（式中、Ｘ ² は－ＣＨ ₂ ＯＲ ⁴⁴ （ここでＲ ⁴⁴ は水素原子、ハロゲノカルボニル基、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＣＨ ₂ ＮＨＲ ⁴⁵ （ここで、Ｒ ⁴⁵ は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）、ハロゲノメチル基、ホルミル基、又はオキシムを示し、Ｒ ³¹ 、Ｒ ³² 、Ｒ ³³ 、Ｒ ³⁴ 及びＲ ³⁵ のうちの少なくとも１個は式（ｄ）

【化11】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ ²⁰ は炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基またはアルキレン基を示し；
Ｘ ³ は存在しないか、酸素原子を示し；
Ｅは存在しないか、炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す。）

【化12】

（式中、Ｘ ⁴ はヒドロキシル基または－ＮＨＲ ⁹⁰ （ここで、Ｒ ⁹⁰ は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）を示し、Ｘ ⁵ は水素原子又はハロゲン原子で置換されていても良いフェニル基を示し；
Ｒ ⁵¹ ～Ｒ ⁶⁰ のうちの少なくとも１個は式（ｄ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示す。）

【請求項4】

前記液相ペプチド合成用担体が、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドに直接またはリンカーを介して結合して、それらを有機溶媒に溶解性で水に不溶性にする化合物である請求項１～３のいずれか１項に記載の分析方法。

【請求項5】

分析に用いる試料が、分析対象物に対して固液分離を行っていない反応液である請求項１～４のいずれか１項に記載の分析方法。

【請求項6】

分析に用いる試料が、分析対象物に対して固液分離又はクロマトグラフィーによる精製を行った後のものである請求項１～４のいずれか１項に記載の分析方法。

【請求項7】

検出された又は検出されなかった液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体の脱保護後条件下で副生する液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、検出された目的ペプチド又は検出された最終目的ペプチドとを関連付けて評価する請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドの分析方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ペプチドの製造技術には、固相ペプチド合成法と液相ペプチド合成法とがあるが、医薬品等として用いられるペプチドを製造するには、大量生産に向いている液相ペプチド合成法が広く採用されている。そして、最近、保護アミノ酸や保護ペプチドの有機溶媒への溶解性を大きく向上させる化合物である液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）が報告されている（特許文献１～１４）。

【0003】

この液相ペプチド合成用担体を用いる液相ペプチド合成は、縮合反応及び脱保護反応を有機溶媒中で行うことができるため、各工程の反応率を分析することができるという利点がある。そして、そのような反応率や品質管理、副反応の管理、不純物の分析には、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が使用されている。非特許文献１では、液相ペプチド合成用担体を用いて合成したペプチド化合物の分析について、アセトニトリル系の溶離液でＨＰＬＣ分析をおこなう技術が開示されている。この文献で分析されている物質は、液相ペプチド合成用担体を脱離させた後のペプチドであった。また、非特許文献２では、アセトニトリル系溶媒にて、液相ペプチド合成用担体であるｎａｎｏｓｔａｒを用いたペプチド伸長反応の反応率を、ｎａｎｏｓｔａｒが結合した状態で分析する技術が開示されている。しかし、非特許文献２における分析は、液相ペプチド合成用担体が結合した物質どうしを分析する技術であり、液相ペプチド合成用担体が結合している物質と、結合していない物質の双方を同時に分析する技術について、言及はなかった。さらに、非特許文献３では、液相ペプチド合成用担体であるＴｒｔ（ＯＨ）－Ｋ１０とペプチドとの結合反応を行った後、Ｔｒｔ（ＯＨ）－Ｋ１０とペプチドの残存量、及びＴｒｔ（ＯＨ）－Ｋ１０が結合したペプチドの生成を、アセトニトリル系の溶離液を用いたＨＰＬＣで分析をおこなう技術が開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特許第５１１３１１８号公報

【文献】特許第５９２９７５６号公報

【文献】特許第６０９２５１３号公報

【文献】特許第５７６８７１２号公報

【文献】特許第５８０３６７４号公報

【文献】特許第６１１６７８２号公報

【文献】特許第６２０１０７６号公報

【文献】特許第６２８３７７４号公報

【文献】特許第６２８３７７５号公報

【文献】特許第６３２２３５０号公報

【文献】特許第６３９３８５７号公報

【文献】特許第６５３１２３５号公報

【文献】国際公開第２０２０／１７５４７２号

【文献】国際公開第２０２０／１７５４７３号

【非特許文献】

【0005】

【文献】Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ． ２０１７，５６，７８０３－７８０７

【文献】Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ． ２０２１、６０，７７８６－７７９５．

【文献】Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ． ２０１８、５７，２１０５－２１０９．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、又は液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸若しくはペプチド化合物、さらに液相ペプチド合成用担体を脱離させた後のペプチドを同時にＨＰＬＣで分析することができれば、前述の通り、反応率や品質管理、副反応の管理が容易となる。しかしながら、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、又は液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸若しくはペプチド化合物は、脂溶性が高く、一般的にＨＰＬＣ分析で用いられるアセトニトリル系の溶離液に溶解しない場合もあった。また、液相ペプチド合成用担体が結合したペプチドはＨＰＬＣカラム固定相に吸着し、アセトニトリル系の溶離液では、溶出させることが困難であることもあった。さらに、脱保護した際に、液相ペプチド合成用担体由来の成分と目的とするペプチド成分の極性が大きく異なるため、ペプチドの品質を測定するための分析条件では液相ペプチド合成用担体由来の成分は分析することができず、試料の液相ペプチド合成用担体由来の成分含有の有無により溶離液を選択する必要があった。
従って、本発明は、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、又は液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸若しくはペプチド化合物の分析及びそれらの化合物と、液相ペプチド合成用担体を脱離させた後のペプチド（以下、目的ペプチドということがある。）又は前記目的ペプチドより、Ｎ末端若しくはＣ末端の保護基を脱離させたペプチド、又は、前記Ｎ末端若しくはＣ末端の保護基を脱離させたペプチドからさらに液相合成用担体ではない一般的な保護基を脱離させた後のペプチド（以下、最終目的ペプチドということがある）などとを同時に正確に分析できる手段を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

そこで本発明者は、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、又は液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸若しくはペプチド化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドのような極性が大きく異なる成分とを同時に分析できる手段を見出すべく種々検討したところ、ＨＰＬＣなどの液体クロマトグラフィーの溶離液としてアセトニトリルではなく、アルコール類を使用することにより、これらの成分の分析ができ、さらにそれらの化合物と目的ペプチドなどが同時に正確に分析できることを見出し、本発明を完成した。

【0008】

すなわち、本発明は、次の発明［１］～［１２］を提供するものである。
［１］アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物の分析方法。
［２］液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドとを同時に分析する［１］記載の方法。
［３］アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物を用いた液相ペプチド製造方法における、各工程の反応追跡又は後処理の追跡をする分析方法。
［４］液相ペプチド製造方法が、次の工程ａ～ｅの何れか１つ以上の工程を追跡する［３］記載の分析方法。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はアミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸若しくはペプチドとを結合させる工程、
ｂ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｃ．縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程、
ｄ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｅ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。
［５］前記液相ペプチド合成用担体が、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドに直接又はリンカーを介して結合して、それらを有機溶媒に溶解性で水に不溶性にする化合物である［１］～［４］のいずれかに記載の分析方法。
［６］溶離液が、炭素数１～４のアルコール類を含む溶液である［１］～［５］のいずれかに記載の分析方法。
［７］分析に用いる試料が、分析対象物に対して固液分離を行っていない反応液である［１］～［６］のいずれかに記載の分析方法。
［８］分析に用いる試料が、分析対象物に対して固液分離又はクロマトグラフィーによる精製を行った後のものである［１］～［６］のいずれかに記載の分析方法。
［９］検出された又は検出されなかった液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、検出された目的ペプチド又は検出された最終目的ペプチドとを関連付けて評価する［１］～［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］前記液相ペプチド合成用担体が、下記の式（Ｉ）の化合物である、［１］～［９］のいずれかに記載の方法。

【0009】

【化1】

【0010】

［式中、環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ¹¹は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ¹⁴と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁷－（Ｒ¹⁷は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ¹²は、それぞれ独立して酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0011】

【化2】

【0012】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｑ個のＲ¹³は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～４の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ¹²に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ａ）：

【0013】

【化3】

【0014】

（式中、＊は結合位置を示し；
ｒ、ｓは、それぞれ０～４の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁸－（Ｒ¹⁸は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ¹⁵は、独立して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0015】

【化4】

【0016】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｓ個のＲ¹⁶は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ¹⁴は、水素原子を示すか、Ｒ¹¹と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ¹⁵に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ¹⁹（Ｒ¹⁹は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
［１１］前記液相ペプチド合成用担体が、下記の式（１）、（１３）または（１４）のいずれかの化合物である、［１］～［９］のいずれかに記載の方法。

【0017】

【化5】

【0018】

（式中、Ｘ²は－ＣＨ₂ＯＲ⁴⁴（ここでＲ⁴⁴は水素原子、ハロゲノカルボニル基、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＣＨ₂ＮＨＲ⁴⁵（ここで、Ｒ⁴⁵は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）、ハロゲノメチル基、ホルミル基、又はオキシムを示し、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³、Ｒ³⁴及びＲ³⁵のうちの少なくとも１個は式（ｃ）

【0019】

【化6】

【0020】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し；
Ｘ³はＯ又はＣＯＮＲ²¹（ここでＲ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し；
Ｄは式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）又は（１２）

【0021】

【化7】

【0022】

（ここで、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹は、同一又は異なって、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し；Ｒ⁴⁰は単結合又は炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｒ⁴¹、Ｒ⁴²及びＲ⁴³はそれぞれ、炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す）
で表される基を示す）

【0023】

【化8】

【0024】

（式中、Ｘ⁴は－ＯＲ⁶¹（ここでＲ⁶¹は水素原子、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド、ハロゲン、イソシアネート、Ｘ⁵と一緒になって＝Ｎ－ＯＨ又は＝Ｏを示し、Ｘ⁴が－ＯＲ⁶¹、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド又はハロゲンの場合Ｘ⁵は水素原子又は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し、Ｘ⁴がイソシアネートの場合Ｘ⁵は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し；
Ｒ⁵¹～Ｒ⁶⁰のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｘ⁴が－ＯＲ⁶¹、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド又はハロゲンであり、かつＸ⁵が水素原子のとき、若しくはＸ⁴とＸ⁵が一緒になって＝Ｏのとき、Ｒ⁵⁵とＲ⁵⁶は酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）

【0025】

【化9】

【0026】

（式中、Ｘ⁶はヒドロキシ基又はハロゲン原子を示し、Ｒ⁷¹～Ｒ⁸⁵のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し、Ｒ⁸⁰とＲ⁸¹は単結合で結合してフルオレン環を形成していてもよく、酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）
［１２］前記液相ペプチド合成用担体下記の式（２０）または（２１）のいずれかの化合物である、［１］～［９］のいずれかに記載の方法。

【0027】

【化10】

【0028】

（式中、Ｘ²はヒドロキシル基または－ＮＨＲ⁹⁰（ここで、Ｒ⁹⁰は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）を示し、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³、Ｒ³⁴及びＲ³⁵のうちの少なくとも１個は式（ｄ）

【0029】

【化11】

【0030】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ²⁰は炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基またはアルキレン基を示し；
Ｘ³は存在しないか、酸素原子を示し；
Ｅは存在しないか、炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す。

【0031】

【化12】

【0032】

（式中、Ｘ⁴はヒドロキシル基または－ＮＨＲ⁹⁰（ここで、Ｒ⁹⁰は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）を示し、Ｘ⁵は水素原子又はハロゲン原子で置換されていても良いフェニル基を示し；
Ｒ⁵¹～Ｒ⁶⁰のうちの少なくとも１個は式（ｄ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示す。

【発明の効果】

【0033】

本発明によれば、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミド（以下、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドということがある）が溶離液に溶解しないという問題や、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドが溶出しないという問題が解決できる。また、ＨＰＬＣにおいて、溶離液にさらに酸性化合物を加えることにより、一連のペプチド合成において、全く同じ溶離液を用いた分析で各工程の反応率を把握できる。さらに、ペプチド成分の分析も同時に行うことができるので、脱保護した後の目的ペプチド又は最終目的ペプチドに液相ペプチド合成用担体由来の成分が混入していないことも判断できる。

【図面の簡単な説明】

【0034】

【図1】実施例４で合成したＨ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨを分析条件１で分析したＨＰＬＣ分析結果である。

【発明を実施するための形態】

【0035】

本発明の一態様は、アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物の分析方法である。
本発明の分析方法の一態様としては、アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物と、目的ペプチド又は最終目的ペプチドとを同時に分析する方法が挙げられる。
また、本発明の分析方法の一態様としては、アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物を用いた液相ペプチド製造方法における、各工程の反応追跡又は後処理の追跡をする分析方法が挙げられる。
本発明のより好ましい態様は、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を用いる液相ペプチド製造方法の任意の段階又は当該方法で得られた目的ペプチド又は最終目的ペプチドを含有する試料を、アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーに付すことを特徴とする、液相ペプチド合成用担体又は液相ペプチド合成用担体由来の化合物の分析方法である。

【0036】

本明細書において、目的ペプチドの語は、液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸又はペプチドを用いて行う縮合反応により得られるペプチドであって、液相ペプチド合成用担体を脱離させた後のペプチドをいう。当該目的ペプチドは、液相ペプチド合成用担体が脱離したものであり、Ｎ末端又はＣ末端に保護基を有するペプチドである。なお、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基などのアミノ酸（アミノ酸残基）側鎖の官能基が、ｔＢｕ基などの液相合成用担体ではない一般的な保護基により保護されていても良い。
最終目的ペプチドとは、前記目的ペプチドより、Ｎ末端若しくはＣ末端の保護基を脱離させたペプチド、又は、前記Ｎ末端若しくはＣ末端の保護基を脱離させたペプチドからさらに液相合成用担体ではない一般的な保護基保護基を脱離させた後のペプチドをいう。
追跡とは、時間経過と連動した化学反応の進行度を観測することをいい、当該化学反応に係る出発物質の減少、当該化学反応に係る生成物の増大等を観測することを意味する。より具体的には、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチド（以下、アミノ基保護アミノ酸ということがある）の含量、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸又はペプチドの含量、液相ペプチド合成用担体又は液相ペプチド合成用担体由来の成分の含量、液相ペプチド合成用担体と結合した目的ペプチドや最終目的ペプチドの含量を定量的又は定性的に観測することをいう。
同時に分析するとは、ＨＰＬＣカラムへの一回の試料の注入により、２以上の所望の成分を観測することをいう。
関連付けて評価するとは、例えば、検出された目的ペプチド又は検出された最終目的ペプチドと、検出された又は検出されなかった液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物との含量の比に基づき純度を算出する場合などをいう。

【0037】

本発明の分析方法の分析対象となる試料は、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を用いる液相ペプチド製造方法の任意の段階又は当該方法で得られた目的ペプチド又は最終目的ペプチドを含有する試料である。当該試料中には、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸又はペプチド、目的ペプチド、最終目的ペプチドの１種又は２種以上が含まれる。これらの試料の具体的な例としては、分析対象物に対して固液分離を行っていない反応液や分析対象物に対して固液分離又はクロマトグラフィーによる精製を行った後のものを挙げることができる。従来の方法では、分析対象物に対して固液分離を行っていない反応液や分析対象物に対して固液分離又はクロマトグラフィーによる精製を行った後のものを試料として使用した場合であっても、本発明の態様のひとつである同時分析、特に最終目的ペプチドとの同時分析は困難であり、上記試料を用いた同時分析は本発明の好ましい形態の一つである。

【0038】

まず、本発明の分析方法を好適に使用できる液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を用いる液相ペプチド製造方法について説明する。
当該液相ペプチド製造方法は、次の工程ａ～ｅを含む液相ペプチド製造方法であるのが好ましい。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はアミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸若しくはペプチドとを結合させる工程、
ｂ．有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとを縮合させる工程、
ｃ．縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程、
ｄ．反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程、
ｅ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程。

【0039】

工程ａに用いられる液相ペプチド合成用担体は、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドに直接又はリンカーを介して結合して、それらを有機溶媒に溶解性で水に不溶性にする化合物であるのが好ましい。
このような液相ペプチド合成用担体としては、例えば前記特許文献１－１４に記載の化合物が挙げられる。好ましい液相ペプチド合成用担体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。

【0040】

【化13】

【0041】

［式中、環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ¹¹は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ¹⁴と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁷－（Ｒ¹⁷は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ¹²は、それぞれ独立して酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0042】

【化14】

【0043】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｑ個のＲ¹³は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
ｐ、ｑは、それぞれ０～４の整数かつｐ＋ｑが１以上４以下を示し；
環Ａは、ｐ個のＸＲ¹²に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ａ）：

【0044】

【化15】

【0045】

（式中、＊は結合位置を示し；
ｒ、ｓは、それぞれ０～４の整数かつｒ＋ｓが４以下を示し；
ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁸－（Ｒ¹⁸は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｒ個のＲ¹⁵は、独立して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0046】

【化16】

【0047】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｓ個のＲ¹⁶は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示し；
Ｒ¹⁴は、水素原子を示すか、Ｒ¹¹と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｒ個のＺＲ¹⁵に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）で表される基を示し；
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ¹⁹（Ｒ¹⁹は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］

【0048】

式（Ｉ）中の環Ａは、ヘテロ原子を含んでいてもよく、単環性でも、多環性でよいＣ４～２０の芳香環を示す。当該芳香環としては、Ｃ６～２０の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～２０の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環、１，１’－ビナフタレン環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。ベンゼン環が最も好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。

【0049】

Ｒ¹¹は、水素原子を示すか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが前記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ¹⁴と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。Ｒ¹¹とＲ¹⁴が一緒になって形成してもよい環としては、フルオレン環又はキサンテン環が好ましい。

【0050】

ｐ個のＸは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁷－（Ｒ¹⁷は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、又は－ＮＲ¹⁷－が好ましく、－Ｏ－、又は－ＮＲ¹⁷－がさらに好ましく、－Ｏ－又は－ＮＨが最も好ましい。
ここで、Ｒ¹⁷としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などの直鎖又は分岐鎖のＣ1～１０のアルキル基が挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。

【0051】

ｐ個のＲ¹²は、それぞれ独立して酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0052】

【化17】

【0053】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｑ個のＲ¹³は、それぞれ独立して水素原子であるか、又は酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
ｐ、ｑは、それぞれ０～４の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示す。

【0054】

本明細書において、脂肪族炭化水素基を有する有機基とは、その分子構造中に脂肪族炭化水素基を有する一価の有機基である。当該脂肪族炭化水素基を有する有機基中の脂肪族炭化水素基の部位は、特に限定されず、末端に存在してもよく、それ以外の部位に存在してもよい。
当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～３０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。

【0055】

アルキル基の具体例としては、炭素数１～３０のアルキル基が挙げられ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、トリデシル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基、アラキル基、べへニル基、テトラコサニル基、ヘキサコサニル基、イソステアリル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基、各種ステロイド基から水酸基などを除外した基が挙げられる。
アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。

【0056】

上記の脂肪族炭化水素基には、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換していてもよい。脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得る脂肪族炭化水素基としては、炭素数１～２０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数２～２０のアルケニルオキシ基、炭素数３～６のシクロアルキルオキシ基などの一価の基、それらから誘導される二価の基などが挙げられる。また、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換している脂肪族炭化水素基に、さらに酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換した繰り返し構造を有していてもよい。
具体的には、Ｒ¹²として１２－ドコシルオキシ－１－ドデシル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル基、２，２，２－トリス（オクタデシルオキシメチル）エチル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）シクロへキシルメチル基などが挙げられる。これら３種が好ましい。

【0057】

上記の脂肪族炭化水素基には、酸素原子を介してシリル基若しくは脂肪族炭化水素基が置換されていてもよく、その置換基の例としては、次の式（ｂ）で示される基が挙げられる。

【0058】

【化18】

【0059】

ここで、Ｒ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかである有機基が置換していてもよい。

【0060】

シリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基などが挙げられる。

【0061】

好ましいシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基である。シリル基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。

【0062】

また、シリルオキシ基が結合したアルキル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が１～３個結合した、炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましい。好ましいシリルオキシ基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。

【0063】

炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基は、分岐鎖であることが好ましく、４級炭素原子を有することがさらに好ましい。

【0064】

ｐ、ｑは、それぞれ０～４の整数かつｐ＋ｑが1以上４以下を示す。ここで、ｐは、１～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。

【0065】

環Ａは、ｐ個のＸＲ¹²に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。

【0066】

Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示す。
ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。ベンゼン環が最も好ましい。
Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。

【0067】

Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環、又は前記式（ａ）で表される基を示す。
式（ａ）中のｒ、ｓは、それぞれ０～４の整数かつｒ＋ｓが０～４を示す。
ｒは、０～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。

【0068】

ｒ個のＺは、それぞれ独立して－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ¹⁸－（Ｒ¹⁸は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、又は－ＮＲ¹⁷－が好ましく、－Ｏ－、又は－ＮＲ¹⁷－がさらに好ましく、－Ｏ－又は－ＮＨが最も好ましい。
ここで、Ｒ¹⁸としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。

【0069】

ｒ個のＲ¹⁵は、独立して酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ｂ）のいずれかである有機基を示し；

【0070】

【化19】

【0071】

但しＲ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ³は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ²¹－（Ｒ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ｄはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す。

【0072】

ｓ個のＲ¹⁶は、それぞれ独立して酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基を示す。
Ｒ¹⁵及びＲ¹⁶で表される酸素原子を介してシリル基又は脂肪族炭化水素基で置換されていてもよい脂肪族炭化水素基を有する有機基は、前記のＲ¹²及びＲ¹³と同じものが挙げられ、前記のＲ¹²及びＲ¹³と同じものが好ましい。

【0073】

Ｒ¹⁴は、水素原子を示すか、Ｒ¹¹と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。

【0074】

環Ｂは、ｒ個のＺＲ¹⁵に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。

【0075】

Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ¹⁹（Ｒ¹⁹は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。
ここで、Ｒ¹⁹としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。

【0076】

前記の式（Ｉ）の化合物のうち、好ましい液相ペプチド合成用担体の具体例としては、下記式（１）、（１３）又は（１４）で表される化合物が挙げられる。その一つとしては、式（１）で表される化合物を用いることができる（特許文献６、７）。

【0077】

【化20】

【0078】

（式中、Ｘ²は－ＣＨ₂ＯＲ⁴⁴（ここでＲ⁴⁴は水素原子、ハロゲノカルボニル基、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＣＨ₂ＮＨＲ⁴⁵（ここで、Ｒ⁴⁵は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）、ハロゲノメチル基、ホルミル基、又はオキシムを示し、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³、Ｒ³⁴及びＲ³⁵のうちの少なくとも１個は式（ｃ）

【0079】

【化21】

【0080】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ²⁰は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し；
Ｘ³はＯ又はＣＯＮＲ²¹（ここでＲ²¹は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し；
Ｄは式（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）又は（１２）

【0081】

【化22】

【0082】

（ここで、Ｒ³⁷、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹は、同一又は異なって、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又は置換基を有していても良いアリール基を示し；Ｒ⁴⁰は単結合又は炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｒ⁴¹、Ｒ⁴²及びＲ⁴³はそれぞれ、炭素数１～３の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す）
で表される基を示す）

【0083】

また、液相ペプチド合成用担体としては、式（１３）で表される化合物を用いることができる（特許文献８、９、１２）。

【0084】

【化23】

【0085】

（式中、Ｘ⁴は－ＯＲ⁶¹（ここでＲ⁶¹は水素原子、活性エステル型カルボニル基又は活性エステル型スルホニル基を示す）、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド、ハロゲン、イソシアネート、Ｘ⁵と一緒になって＝Ｎ－ＯＨ又は＝Ｏを示し、Ｘ⁴が－ＯＲ⁶¹、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド又はハロゲンの場合Ｘ⁵は水素原子又は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し、Ｘ⁴がイソシアネートの場合Ｘ⁵は炭素数１～４の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基若しくはアルケニル基、又はシクロアルキル基を示し；
Ｒ⁵¹～Ｒ⁶⁰のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｘ⁴が－ＯＲ⁶¹、－ＮＨＲ⁴⁵、アジド又はハロゲンであり、かつＸ⁵が水素原子のとき、若しくはＸ⁴とＸ⁵が一緒になって＝Ｏのとき、Ｒ⁵⁵とＲ⁵⁶は酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）

【0086】

また、液相ペプチド合成用担体としては、式（１４）で表される化合物を用いることができる（特許文献１０、１１）。

【0087】

【化24】

【0088】

（式中、Ｘ⁶はヒドロキシ基又はハロゲン原子を示し、Ｒ⁷¹～Ｒ⁸⁵のうちの少なくとも１個は式（ｃ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し、Ｒ⁸⁰とＲ⁸¹は単結合で結合してフルオレン環を形成していてもよく、酸素原子を介して結合してキサンテン環を形成していてもよい）

【0089】

さらに、前記の式（Ｉ）の化合物のうち、好ましい液相ペプチド合成用担体の具体例としては、下記式（２０）又は（２１）で表される化合物が挙げられる。その一つとしては、式（２０）で表される化合物を用いることができる（特許文献２、５）。

【0090】

【化25】

【0091】

（式中、Ｘ²はヒドロキシル基または－ＮＨＲ⁹⁰（ここで、Ｒ⁹⁰は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）を示し、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³、Ｒ³⁴及びＲ³⁵のうちの少なくとも１個は式（ｄ）

【0092】

【化26】

【0093】

で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示し；
Ｒ²⁰は炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基またはアルキレン基を示し；
Ｘ³は存在しないか、酸素原子を示し；
Ｅは存在しないか、炭素数６～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示す）

【0094】

また、液相ペプチド合成用担体としては、式（２１）で表される化合物を用いることができる（特許文献３、４）。

【0095】

【化27】

【0096】

（式中、Ｘ⁴はヒドロキシル基または－ＮＨＲ⁹⁰（ここで、Ｒ⁹⁰は水素原子、炭素数１～６の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル基、又はアラルキル基を示す）を示し、Ｘ⁵は水素原子又はハロゲン原子で置換されていても良いフェニル基を示し；
Ｒ⁵¹～Ｒ⁶⁰のうちの少なくとも１個は式（ｄ）で表される基を示し、残余は水素原子、ハロゲン原子、炭素数１～４のアルキル基又は炭素数１～４のアルコキシ基を示す）

【0097】

本発明の製造法に用いられる原料の一つである、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸又は液相ペプチド合成用担体に結合したペプチドとは、アミノ酸又はペプチドの反応性基の一つが前記の液相ペプチド合成用担体と結合しており、少なくとも一つのアミノ基が反応性の状態であるアミノ酸又はペプチドをいう。好ましくは、アミノ酸又はペプチドのカルボキシル基が前記の液相ペプチド合成用担体と結合し、一方、アミノ基は保護されておらず反応性であるものである。液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸アミドとは、アミノ酸アミドの少なくとも一つのアミド基が前記の液相ペプチド合成用担体と結合し、少なくとも一つのアミノ基は保護されておらず反応性であるアミノ酸アミドをいう。
なお、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドが、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後に、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。その場合の水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。

【0098】

液相ペプチド合成用担体は、アミノ酸又はペプチドのカルボキシル基に、直接又はリンカーを介して結合するように導入される。
ここでいうリンカーとは、リンカーの一方がカルボキシル基と結合し、他方が液体ペプチド合成用担体と結合する２つの反応基をもつ有機基である。好ましいリンカーは、分子量が約２０００以下（好ましくは約１５００以下、より好ましくは約１０００以下）の有機基であって、反応基として、同じでも異なってもよく、アミノ基、カルボキシル基、及びハロメチル基からなる群より選ばれる少なくとも２つの基を分子内にもつ化合物である。例えば、以下の化合物を挙げることができる。

【0099】

【化28】

【0100】

【化29】

【0101】

（式中、ｔは１～６、好ましくは１～４の整数である）

【0102】

【化30】

【0103】

（式中、Ｘ⁹はハロゲン原子、好ましくは塩素又は臭素である）

【0104】

【化31】

【0105】

（式中、ｕは２～４０、好ましくは２～３５、より好ましくは、２～２８の整数である）
（上記リンカーの構造式は、カルボキシル基等に結合する前の状態かつ液体ペプチド合成用担体と結合する前の状態を示す）

【0106】

上記リンカーを含む液相ペプチド合成用担体のカルボキシル基への導入は、上記リンカーの一方をカルボキシル基に結合した後に他方を液相ペプチド合成用担体に結合しても良く、あるいは、上記リンカーの一方を液相ペプチド合成用担体に結合した後に他方をカルボキシル基に結合してもよい。これらのリンカーのカルボキシル基への導入手段は、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）／ＨＯＢｔによるアミド化を挙げることができる。また、上記リンカーの一方と液相ペプチド合成用担体との結合は、互いに結合するリンカーの基及び液体ペプチド合成用担体の基に応じて、公知の方法を適宜参照して行うことができる。例えば、ＤＩＰＣＩによるエステル化を挙げることができる。

【0107】

前記の液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドは、液相ペプチド合成用担体をＴＨＦ等の有機溶媒に溶解し、例えばＢｏｃ保護アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミド及び縮合剤、例えば、ＤＩＰＣＩを添加して縮合を行い、アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドのカルボキシル基に液相ペプチド合成用担体が結合した中間体であるＮ－Ｂｏｃ－液相合成用担体保護アミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドを製造できる。

【0108】

もう一方の原料である、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドとは、アミノ酸又はペプチドのアミノ基がアミノ保護基で保護されており、一方、カルボキシル基は保護されておらず反応性であるアミノ酸又はペプチドを意味する。アミノ酸又はペプチドが１以上のアミノ基を有する場合は、少なくとも一つのアミノ基がアミノ保護基で保護されていれば良い。
アミノ保護基としては、Ｆｍоｃ基、Ｂоｃ基、Ｃｂｚ基、Ａｃ基などが挙げられ、このうち塩基性条件で脱保護できるＦｍоｃ基がより好ましい。
なお、アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドが、水酸基、アミノ基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基等の反応性に富む官能基を有する場合、これらの官能基にペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
水酸基の保護基としてはｔＢｕ基、Ｔｒｔ基、Ｂｚ基、アセチル基、シリル基等が挙げられ、アミノ基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、Ｃｂｚ基、Ｔｒｔ基、Ｍｍｔ基、ｉｖＤｄｅ基等が挙げられ、グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ基、Ｐｍｃ基、ニトロ基等が挙げられ、カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられ、チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ基等が挙げられ、インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられ、イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ基、Ｂｕｍ基、Ｔｒｔ基等を挙げることができる。

【0109】

アミノ保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドは、例えば、アミノ保護基でアミノ基を保護したいアミノ酸又はペプチドに、例えばＴＨＦなどの溶媒中でクロロギ酸９－フルオレニルメチルエステルを縮合剤の存在下に反応させることにより、製造することができる。

【0110】

本発明の工程ｂは前記の化合物を縮合させる工程であり、工程ｂに用いられる反応溶媒は有機溶媒を含む溶媒である。本発明で用いる前記の液相ペプチド合成用担体でアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドを保護すれば、当該液相ペプチド合成用担体で保護されたアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドが、有機溶媒に溶解するようになるため、液相ペプチド合成が可能となる。
そのような有機溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、シクロヘキサン、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ），メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、２－メチルＴＨＦ、４－メチルテトラヒドロピラン（４－メチルＴＨＰ）、酢酸イソプロピル、クロロホルム、ジクロロメタン、Ｎ－メチルピロリドンを挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、ＤＭＦ、シクロヘキサン、ＣＰＭＥ，ＭＴＢＥ、２－メチルＴＨＦ、４－メチルＴＨＰ、酢酸イソプロピル、Ｎ－メチルピロリドンである。さらに、上記溶媒の２種以上の混合溶媒でもよい。

【0111】

縮合反応は、前記有機溶媒を含む溶媒中で、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドと、アミノ基保護アミノ酸と、縮合剤とを混合することにより行うことができる。

【0112】

液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対する、アミノ基保護アミノ酸の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、通常１．０１～４当量、好ましくは１．０３～３当量、より好ましくは１．０５～２当量、さらに好ましくは１．１～１．５当量である。本発明のペプチド製造法では、未反応のアミノ酸の活性エステルをその後に添加するスカベンジャーで捕捉して不活性化することができる。そのため、過剰のアミノ基保護アミノ酸を用いても、残存の問題が生じない。

【0113】

縮合剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる縮合剤を、本発明においても用いることができる、例えば、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ（６－Ｃｌ））、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ）、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を挙げることができる。好ましくは、ＤＭＴ－ＭＭ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、又はＣＯＭＵである。縮合剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。

【0114】

縮合工程において、反応を促進し、ラセミ化などの副反応を抑制するために、好ましくは、活性化剤が添加される。ここで活性化剤とは、縮合剤との共存化で、アミノ酸を、対応する活性エステル、対称酸無水物などに導いて、ペプチド結合（アミド結合）を形成させやすくする試薬である。活性化剤としては、ペプチド合成において一般的に用いられる活性化剤を用いることができる。例えば、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－１，２，３－トリアゾールカルボン酸エチル（ＨＯＣｔ）、１－ヒドロキシ－7－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、３－ヒドロキシ－４－ケトベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド（ＨＯＮｂ）、ペンタフルオロフェノール、シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）等を挙げることができる。好ましくは、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、ＨＯＣｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＮｂ、ＨＯＳｕ、Ｏｘｙｍａである。活性化剤の使用量は、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドに対して、好ましくは１～４当量、より好ましくは１～２当量、さらに好ましくは１．０５～１．３当量である。

【0115】

前記溶媒の使用量は、液相ぺプチド合成用担体結合ペプチド等を溶解した濃度が、好ましくは０．１ｍＭ～１Ｍとなる量であり、より好ましくは１ｍＭ～０．５Ｍとなる量である。
反応温度は、ペプチド合成において一般的に用いられる温度が、例えば、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。反応時間（１サイクルの時間）は、通常０．５～３０時間である。

【0116】

工程ｃは、縮合反応後の反応液に、アミノ酸活性エステルスカベンジャーを添加する工程である。
アミノ酸活性エステルスカベンジャーとしては、有機溶媒中で反応を継続する観点から、アミノ基含有化合物が好ましく、特に２価以上の水溶性アミン、アルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミン、アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれるアミノ基含有化合物が好ましい。

【0117】

２価以上の水溶性アミンとしては、例えば、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジンを挙げることができ、好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミンであり、より好ましくは、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミンであり、さらに好ましくは、１－メチルピペラジンである。

【0118】

用いることができるアルキルアミンとしては、例えば、炭素数１～１４のアルキルアミンを挙げることができ、好ましくは炭素数２～１０のアルキルアミン、より好ましくは炭素数２～８のアルキルアミン、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキルアミンである。また本発明で用いることができる芳香族アミンとしては、たとえば炭素数６～１４の芳香族アミンを挙げることができ、好ましくは炭素数６～１０の芳香族アミンである。具体的なアルキルアミン、芳香族アミン、ヒドロキシルアミンとしては、これに限定されないが、例えば、プロピルアミン、ブチルアミン、ヘキシルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ヒドロキシルアミンをあげることができ、特に好ましくは、プロピルアミンである。
アミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類としては、下記の一般式（１５）～（１７）で示される化合物が好ましい。
すなわち、次の一般式（１５）で表されるアミノスルホン酸類及びアミノ硫酸類；

【0119】

【化32】

【0120】

（Ｒ⁹¹は炭素数１～１０の２価の有機基を示し、Ｘ⁷は単結合又は酸素原子を示す）
一般式（１６）で表されるアミノホスホン酸類及びアミノリン酸類；

【0121】

【化33】

【0122】

（Ｒ⁹²は炭素数１～１０の２価の有機基を示し、Ｘ⁸は単結合又は酸素原子を示す）
一般式（１７）で表されるアミノアルコール類が好ましい。

【0123】

【化34】

【0124】

（ｎは０～２０の整数を示し、Ｒ⁹³、Ｒ⁹⁴はそれぞれ独立して水素原子、メチル基、エチル基、又はヒドロキシメチル基を示す）

【0125】

一般式（１５）中のＲ⁹¹及び一般式（１６）のＲ⁹²は、独立して、炭素数１～１０の２価の有機基であり、好ましくは、炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、炭素数６～１０のアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基などが挙げられる。
このうち、これらの化合物の溶解性の点から、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、炭素数６～８のアリーレン基がより好ましく、炭素数１～６の直鎖又は分岐際のアルキレン基がさらに好ましく、炭素数１~５の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基がよりさらに好ましい。
一般式（１５）において、Ｘ⁷が単結合の場合はアミノスルホン酸類であり、Ｘ⁷が酸素原子の場合はアミノ硫酸類である。
一般式（１６）において、Ｘ⁸が単結合の場合はアミノホスホン酸類であり、Ｘ⁸が酸素原子の場合はアミノリン酸類である。

【0126】

一般式（１７）中のｎは、０～２０の整数を示す。このうちｎは、０～２０が好ましく、０～６がより好ましく、０～４がさらに好ましい。一般式（１７）中のＲ⁹³、Ｒ⁹⁴は、水素原子またはヒドロキシルメチル基が好ましい。

【0127】

前記アミノ基含有化合物のうち、アミノ酸活性エステルスカベンジャーとしてアミノスルホン酸類、アミノ硫酸類、アミノホスホン酸類、アミノリン酸類及びアミノアルコール類から選ばれる化合物を用いるのがより好ましい。これらの化合物をスカベンジャーとして用いることにより、アミノ酸活性エステルが除去できるだけでなく、酸性条件とすることなくジベンゾフルベン（ＤＢＦ）などの副生成物を除去できるため、ペプチドの液相製造を単離操作をせずにワンポットで合成することが可能になる。

【0128】

工程ｃにおけるアミノ基含有化合物の添加量は、理論上残存する活性アミノ酸エステル１当量に対して、好ましくは１～１０当量、より好ましくは１～６当量、さらに好ましくは１～４当量である。アミノ基含有化合物の添加量が少なすぎると、アミノ酸活性エステルのスカベンジ（捕捉）が不充分となり、残存したアミノ酸活性エステルと工程ｄで生成したアミノ基が反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させる。一方、多すぎると、同時に脱アミノ保護基反応が進行し、残存しているアミノ酸活性エステルが再生したアミノ基と反応するダブルヒットが起こり、純度、収率を低下させる。

【0129】

工程ｄは、反応液中の前記アミノ保護基でアミノ基が保護された化合物のアミノ保護基を脱離する工程である。
当該アミノ保護基の脱離工程は、アミノ保護基の種類により相違する。例えば、アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合は反応液を塩基性条件とすればよい。アミノ保護基がＢｏｃ基の場合は反応液を酸性条件とすればよい。アミノ保護基がＣｂｚ基の場合は接触還元すればよい。アミノ保護基がＡｃ基の場合は、強酸又は強塩基条件で脱保護すればよい。このうち、ワンポット液相合成とするには、アミノ保護基をＦｍｏｃ基とするのがより好ましい。

【0130】

アミノ保護基がＦｍｏｃ基の場合のアミノ保護基の脱離工程について説明する。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、反応液を塩基性にできればよいが、アミン化合物、例えば、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］－５－ノネン（ＤＢＮ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］－オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン類；１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピぺリジン、ピペラジンなどの１級又は２級のアミノ基を少なくとも１つ持つ２価以上の水溶性アミン類を用いることができる。好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミンであり、より好ましくは、ＤＢＵ、ピぺリジン、１－メチルピペラジンであり、さらに好ましくはＤＢＵである。本明細書において、工程ｃにおいて使用する塩基をアミン化合物ということがある。
工程ｃにおいて添加するアミン化合物の当量は、系に存在するＦｍｏｃ基の量に対して、１～３０当量、好ましくは４～２０当量、より好ましくは４～１０当量である。

【0131】

また、前記アミン化合物に加えて、脱Ｆｍｏｃ反応により生じるＤＢＦ（ジベンゾフルベン）のトラッピング剤を添加するのが好ましい。ここで用いられるＤＢＦのトラッピング剤としては、メルカプト化合物が挙げられる。用いることができるメルカプト化合物としては、メルカプト基を有する酸、例えばメルカプト脂肪酸又はそのアルカリ金属塩、下記の一般式（１８）又は（１９）

【0132】

【化35】

【0133】

（式中、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示し、Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す）
で表される化合物が挙げられる。

【0134】

メルカプト脂肪酸又はそのアルカリ金属塩としては、メルカプトＣ１～２０脂肪酸又はそのアルカリ金属塩が好ましく、メルカプトＣ１～６脂肪酸又はそのアルカリ金属塩がより好ましい。
一般式（１８）又は（１９）中Ｌ１及びＬ２は、それぞれ２価の有機基を示す。当該２価の有機基としては、炭素数１～１０の２価の有機基が好ましく、より好ましくは、メルカプト基を有していてもよい炭素数１～１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数６～１０のアリーレン基、メルカプト基を有していてもよい炭素数４～９のヘテロアリーレン基が挙げられる。具体的には、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、メルカプトトリメチレン基、メルカプトプロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、ペンタメチレン基、フェニレン基、ナフチレン基、インドール基、ベンズイミダゾール基、キノリル基、イソキノリン基などが挙げられる。
Ｍは水素原子又はアルカリ金属を示す。具体的には、水素原子、ナトリウム、カリウムが挙げられる。
具体的には、メルカプトメタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム、２－メルカプトエタンスルホン酸、３－メルカプトプロパンスルホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンスルホン酸、２－メルカプトベンズイミダゾール－５－スルホン酸ナトリウム、メルカプトメタンホスホン酸ナトリウム、メルカプトエタンホスホン酸、３－メルカプトプロパンホスホン酸ナトリウム、１，３－ジメルカプトプロパンホスホン酸ナトリウムなどが挙げられる。

【0135】

メルカプト化合物の添加量は、理論上副生するＤＢＦの量に対して１～３０当量が好ましく、１～１０当量がより好ましく、１～５当量がさらに好ましい。
前記アミン化合物とメルカプト化合物は、同時に添加してもよく、メルカプト化合物、次いでアミン化合物の順に添加してもよく、アミン化合物を加えＦｍｏｃ基を除去したのちにメルカプト化合物を加えてもよい。
Ｆｍｏｃ脱離工程は、－２０～４０℃の温度で、５分～５時間行えばよい。

【0136】

工程ｅは、反応液に水溶液を添加した後、分液して、液相ペプチド合成用担体が結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体を含有する有機溶媒層を得る工程である。
工程ｄの反応液に水溶液を添加した後、水層と有機溶媒層を分液する。
水層には、アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドと活性エステルスカベンジャーとの縮合体と、ＤＢＦ－トラッピング剤付加体が含まれる。すなわち、アミノ保護基の脱離工程で副生するＤＢＦ－トラッピング剤付加体は、工程ｅの水溶液の添加だけで、容易に水層に抽出される。
一方、有機溶媒層には、液相ペプチド合成用担体に結合したアミノ酸、ペプチド又はアミノ酸アミドと、前記アミノ保護基が脱離したアミノ酸又はペプチドとの縮合体が含まれる。
ここで、用いられる水溶液としては、水、塩化ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸三ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸三カリウム水溶液等が挙げられる。
このように、本発明の工程ｅによれば、単に水溶液を添加して分液するだけで、酸性水溶液を使用する必要がないので、アミノ酸活性エステルと生成物であるペプチドとの分液不良が起こることがない。また、固液分離を必要としないので、ペプチドの液相製造を単離せずにワンポット合成が可能になる。
また、得られた有機溶媒層は、さらに任意のアミノ酸との縮合反応に利用できる。

【0137】

本発明の分析対象となる試料としては、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を用いる液相ペプチド製造方法の任意の段階、すなわち前記工程ａ～工程ｅの任意の段階における反応液、その濃縮物又はその抽出物などが挙げられる。
また、当該方法で得られた目的ペプチド又は最終目的ペプチドを含有する試料としては、工程ｅの反応液、その抽出液、分液、及び工程ｅの後にすべての保護基を脱離させた後の反応液、その抽出液、分液、固液分離により得られた固体又はろ液などが挙げられる。

【0138】

分析手段は、ＨＰＬＣ又は超臨界液体クロマトグラフィーであり、本発明では、これらの液体クロマトグラフィーの溶離液として、アセトニトリルではなく、アルコール類を使用する。アルコール類を使用すれば、種々のペプチドだけでなく液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドなどが溶解し、これらの成分を同時に分析することができる。
用いられるアルコール類としては、炭素数１~４のアルコール、例えばエタノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノール、が挙げられ、エタノール、イソプロパノールがより好ましく、イソプロパノールがさらに好ましい。なお、溶離液としては、これらのアルコール類を含む溶液であればよく、アルコール類に加えて各種の有機溶媒、酸、塩基、塩、対イオン形成物などを含有していてもよい。

【0139】

本発明の分析方法においては、操作自体は、通常のＨＰＬＣ又は超臨界液体クロマトグラフィーの操作に従っておこなえばよい。

【0140】

ＨＰＬＣは、逆相ＨＰＬＣが好ましく、固定相（カラム充填剤）は、通常使用されるもののなかから分析対象試料に含有される目的ペプチドの長さ、液相ペプチド合成用担体の物性等を勘案し、適宜に選択することが可能である。好適な一例としては、オクタデシルシリカ（ＯＤＳ）を挙げることができ、充填剤粒子の粒形、孔の大きさ、ＯＤＳの密度等についても適宜に選択することができる。前記ＯＤＳを固定相とする市販品のカラムとしては、ＭｏｎｏＢｉｓカラム 低圧ＯＤＳエンドキャップ（メソポア１１ｎｍ） ３．２ ｘ １５０ mm（京都モノテック）、ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯ Ｃ１８ ４．６ ｘ １
５０ mm 粒子径２．６μｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製）などが挙げられる。

【0141】

超臨界流体クロマトグラフィーに用いるカラムとしては、ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ ２．１ ｘ ５０ mm １３０Å（Ｗａｔｅｒｓ）等の市販品を使用することができる。

【0142】

本発明によれば、液相ペプチド合成用担体結合ペプチドが溶離液に溶解しないという問題や液相ペプチド合成用担体結合ペプチドが溶出しないという問題が解決できる。また、溶離液に酸性化合物を加えることにより、一連のペプチド合成において、全く同じ溶離液を用いた分析で各工程の反応率を把握できる。さらに、ペプチド成分の分析も同時に行うことができるので、脱保護した後の目的ペプチド（最終目的ペプチド）に液相ペプチド合成用担体由来の成分が混入していないことも判断できる。

【実施例】

【0143】

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。

【0144】

なお、液相ペプチド合成用担体として、以下に示す化合物を使用した。
・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型ベンジル化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｂ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。

【0145】

【化36】

【0146】

・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型ジフェニルメタン化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｄ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。

【0147】

【化37】

【0148】

Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）は、Ｄ－ＳＴａｇのアミノ基がＦｍｏｃ基で保護された化合物である。
・ＴＩＰＳ２－ＯＨ（Ｃ１１）型キサンテン化合物（積水メディカル社製）（以下、Ｘ－ＳＴａｇと記すことがある）。但し、ＴＩＰＳは、トリイソプロピルシリル基を示す。

【0149】

【化38】

【0150】

Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）は、Ｘ－ＳＴａｇのアミノ基がＦｍｏｃ基で保護された化合物である。

【0151】

また、以下の実施例では、Ｂ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護ｔＢｕ保護グルタミン酸（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ）と結合した化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）と表記し、下記の構造を示すものとする。Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨに限らず、他のアミノ酸と結合した場合も、これに準ずる表記とする。

【0152】

【化39】

【0153】

また、Ｄ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護ｔＢｕ保護スレオニン（Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ））と結合した化合物を、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）と表記し、これは下記の構造を示すものとする。

【0154】

【化40】

【0155】

また、Ｘ－ＳＴａｇがＦｍｏｃ保護ｔＢｕ保護スレオニン（Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ））と結合した化合物をＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）と表記し、これは下記の構造を示すものとする。

【0156】

【化41】

【0157】

分析条件１（ＨＰＬＣ）
カラム：ＭｏｎｏＢｉｓカラム 低圧ＯＤＳエンドキャップ（メソポア１１ｎｍ） ３．２ ｘ １５０ mm（京都モノテック）
移動相Ａ：０．１％ ギ酸含有 ５％ イソプロパノール水溶液
移動相Ｂ：０．１％ ギ酸含有 ９５％ イソプロパノール水溶液
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：６０℃
検出波長：２２０ｎｍ
グラジエント条件：５％Ｂ（０分）→５％Ｂ（２分）→９５％Ｂ（１２分）→９５％Ｂ（１７．５分）→５％Ｂ（１８分）→５％Ｂ（２４分）

【0158】

分析条件２（ＳＦＣ）
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ ２．１ ｘ ５０ mm １３０Å（Ｗａｔｅｒｓ）
移動相Ａ：ＣＯ２
移動相Ｂ：メタノール／イソプロパノール／２８％アンモニア水溶液（５００／５００／１）溶液
圧力（ＡＢＰＲ）：２０００ｐｓｉ
流速：１．１ｍＬ／分
カラム温度：４５℃
検出波長：２２０ｎｍ
グラジエント条件：５％Ｂ（０分）→１５％Ｂ（５分）→２５％Ｂ（６分）→２５％Ｂ（７分）→５％Ｂ（８分）→５％Ｂ（１０分）

【0159】

分析条件３（ＨＰＬＣ）
カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯ Ｃ１８ ４．６ ｘ １５０ mm 粒子径２．６μｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製）
移動相Ａ：０．０２５％ ＴＦＡ含有水溶液
移動相Ｂ：０．０２５％ ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：６０℃
検出波長：２２０ｎｍ
グラジエント条件：５％Ｂ（０分）→５％Ｂ（２分）→９９％Ｂ（１２分）→９９％Ｂ（６５分）→５％Ｂ（６６分）→５％Ｂ（８０分）

【0160】

実施例１
Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
Ｂ－ＳＴａｇ ２．４０ｇ（３．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ６ｍＬ、ＴＨＦ９ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ ３.２１ｇ（７．５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ １．４４ｇ（７．５ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン３６．８ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。分析条件１にてＢ－ＳＴａｇが生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、タウリン０．９４ｇ（７．５ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ３８ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．４２ｇ（８．６ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ５．１ｍＬ（３４ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸ナトリウム水溶液７５ｍＬを滴下し、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１７ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液６ｍＬ、ＤＭＦ １．２ｍＬを加え、分液した。有機層を濃縮したのち、残渣にＣＰＭＥ２７ｍＬ加え、Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｂ－ＳＴａｇ：１３．８分；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１４．１分；Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１２．２分

【0161】

２）Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＤＭＦ７ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ２.３８ｇ（４．１ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ １．６７ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ２．１ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、タウリン０．５５ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ １６ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．１９ｇ（３．９ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ２．７ｍＬ（１８ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液９．６ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水３８ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬ、ＤＭＦ ２．７ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１４．６分；Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１３．１分

【0162】

３）Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ２ｍＬ、ＤＭＦ７ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ２.４３ｇ（４．１ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ １．６７ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ２．１ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、タウリン０．５５ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ １６ｍＬを加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．１９ｇ（３．９ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ２．７ｍＬ（１８ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを滴下し、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水３８ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬ、ＤＭＦ ２．７ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１４．７分；Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１３．０分

【0163】

４）Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ２ｍＬ、ＤＭＦ７ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ一水和物 １.３３ｇ（４．１ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ １．６７ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ２．１ｍＬを加え、室温で１時間半撹拌した。分析条件１にてＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、タウリン０．５５ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ １６ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．１９ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ １．３ｍＬを添加し、ＤＢＵ２．７ｍＬ（１８ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液９．６ｍＬを滴下した後、５％炭酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水３８ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬ、ＤＭＦ ２．７ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１４．５分；Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１２．７分

【0164】

５）Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ２ｍＬ、ＤＭＦ７ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ １．６７ｇ（４．１ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ １．６７ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ２．１ｍＬを加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、タウリン０．５５ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ １６ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．１９ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ １．３ｍＬを添加し、ＤＢＵ２．７ｍＬ（１８ｍｍｏｌ）を加え、４０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液９．６ｍＬを滴下した後、５％炭酸ナトリウム水溶液６０ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水３８ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬ、ＤＭＦ ２．７ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ４０ｍＬを加え析出した固体をろ取し、得られた固体を３０℃で減圧乾燥した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ） ４．５８ｇを得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１４．５分；Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：１３．１分

【0165】

６）Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）９６２ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸９．５ｍＬ、水０．２９ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．２９ｍＬ、ジチオトレイトール８６５ｍｇ、アニソール０．５８ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ジイソプロピルエーテル７２ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をジイソプロピルエーテル１０ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨ ２７５ｍｇを得た。得られたＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨを分析条件１にて分析し、純度は８０．１％であり、Ｂ－ＳＴａｇ及びＢ－ＳＴａｇをトリフルオロ酢酸で処理することで生成するＢ－ＳＴａｇ由来の化合物は検出されなかった。
保持時間（分析条件１）：Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨ：０．９分
なお純度は、保持時間０～１９分までの総ピーク面積に対する目的ペプチドのピーク面積比として算出した。以下の実施例でも同様である。

【0166】

実施例２
Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
Ｂ－ＳＴａｇ ０．７９ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ２ｍＬ、ＴＨＦ３ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ １．０６ｇ（２．５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ ０．４８ｇ（２．５ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン１２．２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。分析条件２にてＢ－ＳＴａｇが生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール１５０μＬ（２．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．７４ｇ（４．５ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ４．５ｍＬを添加し、ＤＢＵ１．７ｍＬ（１１．３ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液６ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液１９ｍＬを加えた後、室温まで昇温し分液した。得られた有機層に２０％食塩水２０ｍＬを加え、分液した。有機層を濃縮したのち、残渣にＣＰＭＥ９ｍＬ加え、Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件２）：Ｂ－ＳＴａｇ：２．１分；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：３．１分；Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：３．８分

【0167】

２）Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０.７９ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５７ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬを加え、室温で１時間撹拌した。分析条件２にてＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間半撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、２５分撹拌した。分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：４．４分；Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：５．０分

【0168】

３）Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０．８１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬを加え、室温で５５分撹拌した。分析条件２にてＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。分析条件２にてＦｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：５．６分；Ｈ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：６．６分

【0169】

４）Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ・一水和物 ０．４７ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６４ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件２にてＨ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．５ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．５ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。分析条件２にてＦｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：６．１分；Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：７．２分

【0170】

５）Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ ０．５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件２にてＨ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で７０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。分析条件２にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、水 ３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ４０ｍＬを加え析出した固体をろ取し、得られた固体を３０℃で減圧乾燥した。Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ） １．５６ｇを得た。
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：６．３分；Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）：７．０分

【0171】

６）Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
Ｈ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）９６２ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸７．５ｍＬ、水０．２１ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．２１ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．４２ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ６０ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ１０ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨ ２７５ｍｇを得た。得られたＨ－Ａｓｐ－Ａｌａ―Ａｓｎ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－ＯＨを分析条件１にて分析し、純度は７４．２％であり、Ｂ－ＳＴａｇは検出されず、Ｂ－ＳＴａｇをトリフルオロ酢酸で処理することで生成するＢ－ＳＴａｇ由来の化合物が０．６％検出した。

【0172】

実施例３
Ｂ－ＳＴａｇ０．１６ｇ（０．２ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸３．２ｍＬ、水０．０９ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．０９ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．１８ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応液を分析条件１及び分析条件２にて分析し、Ｂ－ＳＴａｇ由来の化合物を検出した。
保持時間（分析条件１）：１１．２分；１１．６分；１２．３分；１２．４分；１２．６分
保持時間（分析条件２）： ０．２分；０．４分；０．６分；１．１分；２．１分
実施例２ではＢ－ＳＴａｇ等の脱保護後に目的物ペプチドをＭＴＢＥを用いて晶出させ分離精製したため、Ｂ－ＳＴａｇ由来の化合物はわずかしか検出されなかったが、晶出操作前の混合液中のＢ－ＳＴａｇ由来の化合物は、分析条件１、２いずれを用いても分離性能良く検出できることがわかった。

【0173】

実施例４
Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
１）Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
Ｂ－ＳＴａｇ １．５９ｇ（２．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ４ｍＬ、ＴＨＦ６ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ ２.１３ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ ０．９６ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン ２４．５ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。分析条件１にてＢ－ＳＴａｇが生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール（ＡＥ）３００μＬ（５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム１．４８ｇ（９．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ９ｍＬを添加し、ＤＢＵ３．４ｍＬ（２２．５ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液１２ｍＬを滴下した後、５％炭酸ナトリウム水溶液３８ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１０ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．８ｍＬを加え、分液した。有機層を減圧濃縮し、残渣にＣＰＭＥ ６ｍＬを加えＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液１５．２ｇを得た。
保持時間（分析条件１）：Ｂ－ＳＴａｇ：１３．８分；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１４．３分；Ｈ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１２．３分

【0174】

２）Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液７．６ｇ（１ｍｍｏｌ相当）にＣＭＰＥ １．９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で９０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、２０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１４．２分；Ｈ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１２．４分

【0175】

３）Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ ０．４８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で５５分撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１４．３分；Ｈ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１２．４分

【0176】

４）Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ ０．５６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．６５ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７８ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で５０分撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８９μＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１４．１分；Ｈ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１２．５分

【0177】

５）Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕの合成
上記のＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液にＣＰＭＥ１ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ ０．５２ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、ＡＥ ８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２，４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７５分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕが生成物のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕに対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下したのち、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加え、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕを含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣として、Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇを得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１４．１分；Ｈ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ：１２．６分

【0178】

６）Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨの合成
上記のＨ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｍｅｔ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（Ｏ－Ｂ－ＳＴａｇ）－ＯｔＢｕ １．６４ｇ（１．０ｍｍｏｌ相当）にトリフルオロ酢酸１４．３ｍＬ、水０．３６ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．３６ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．７１ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ ８１ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ １４ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨ ５２３ｍｇを得た。得られたＨ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨを分析条件１にて分析し、純度は６２．３％であり、Ｂ－ＳＴａｇ及びＢ－ＳＴａｇをトリフルオロ酢酸で処理することで生成するＢ－ＳＴａｇ由来の化合物は検出されなかった。
分析条件１によるＨＰＬＣ分析結果を図１に示した。１．９分のピークが目的物であるＨ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨを示す。実施例３で検出したＢ－ＳＴａｇ由来の化合物（保持時間１１．２分～１２．６分）は検出されなかった。
保持時間（分析条件１）：Ｈ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ―Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－ＯＨ：１．９分

【0179】

実施例５
Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂の合成
１）Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）の合成
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ） １．０９ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、ＤＩＥＰＡ ０．３２ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．３０ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ０．６７ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間撹拌し、分析条件１にてＦｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液２．４ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液１０ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水２５ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液８ｍＬ、ＤＭＦ １．８ｍＬを加え、分液し、ＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
このＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．６ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ ０.５５ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で７０分撹拌した。分析条件１にてＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エタノール（ＡＥＥＥ）６２μＬ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、７０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水２５ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液８ｍＬ、ＤＭＦ １．８ｍＬを加え、分液したＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４，５分；ＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．０分；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４．５分；Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．４分

【0180】

２）Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．７ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ ０.８８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、ＡＥＥＥ６２μＬ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、５０分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを滴下した後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４，０分；Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．５分

【0181】

３)Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ ０.８８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、ＡＥＥＥ６２μＬ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、６５分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを滴下した後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４，０分；Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．６分

【0182】

４）Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ ０.７１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で７０分撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、ＡＥＥＥ６２μＬ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＭＦ ０．４ｍＬ、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、６５分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４，０分；Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．８分

【0183】

５）Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０.８２ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１にてＨ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、ＡＥＥＥ６２μＬ（０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ３．０ｍＬを添加し、ＤＭＦ ０．４ｍＬ、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、６５分撹拌した。分析条件１にてＦｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液３．２ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液１３ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液４ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ２４ｍＬ、ＩＰＡ１８ｍＬ、ＣＰＭＥ６ｍＬ、水１２ｍＬを加え、析出した固体をろ取し、得られた固体を３０℃で減圧乾燥した。Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ） １．８４ｇを得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１４，２分；Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）：１２．８分

【0184】

６）Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂の合成
Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）１．１４ｇ（０．５０ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸９．５ｍＬ、水０．２５ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．２５ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ７０ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ１０ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂ ２２７ｍｇを得た。得られたＨ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂を分析条件１にて分析し、純度は７１．０％であり、Ｄ－ＳＴａｇ及びＤ－ＳＴａｇをトリフルオロ酢酸で処理することで生成するＤ－ＳＴａｇ由来の化合物は検出されなかった。
保持時間（分析条件１）：Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂：０．９分

【0185】

実施例６
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ） ０．２２ｇ（０．２ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸３．２ｍＬ、水０．０９ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．０９ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．１８ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応液を分析条件１及び分析条件２にて分析し、Ｄ－ＳＴａｇ由来の化合物を検出した。
保持時間（分析条件１）：１１．８分；１１．９分；１２．６分；１３．０分
保持時間（分析条件２）：０．５分；１．４分；２．０分；２．５分
実施例３と同様に、Ｄ－ＳＴａｇにおいても、Ｄ－ＳＴａｇ等の脱保護後条件下で副生するＤ－ＳＴａｇ由来の化合物は、分析条件１、２いずれを用いても分離性能良く検出できることがわかった。

【0186】

実施例７
Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂の合成
１）Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）の合成
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ） １．１１ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ８ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、ＤＩＥＰＡ ０．３３ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．３０ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ０．６７ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間撹拌し、分析条件１及び分析条件２にてＦｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、１Ｍ硫酸水溶液２．４ｍＬを滴下し、５％炭酸ナトリウム水溶液９ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水２３ｍＬ、５％炭酸ナトリウム水溶液８ｍＬ、ＤＭＦ １．６ｍＬを加え、分液し、ＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
このＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ ０.５４ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１１０分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、アミノメタンホスホン酸０．１５ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１００分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸水素カリウム水溶液２０ｍＬを滴下した後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１５ｍＬ、ＤＭＦ １．６ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１５．０分；ＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．６分；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．８分；Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１２．５分
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：３．２分；ＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）：２．０分；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：３．６分；Ｈ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：５．０分

【0187】

２）Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．６ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ ０.８８ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．４７ｍＬ（２．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。分析条件１および分析条件２にてＨ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、２－アミノエタノール（ＡＥ）８１μＬ（１．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、９０分撹拌した。分析条件１および分析条件２にてＦｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸水素カリウム水溶液１３ｍＬを滴下した後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．１分；Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１２．６分
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．０分；Ｈ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．８分

【0188】

３）Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ ０.５７ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で７５分撹拌した。分析条件１および分析条件２にてＨ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、アミノメタンホスホン酸０．１５ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを加え、室温で１０５分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、８５分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸水素カリウム水溶液１６ｍＬを滴下した後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．１分；Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１２．６分
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．０分；Ｈ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．６分

【0189】

４）Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液に、ＣＰＭＥ０．５ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ ０.７１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．５６ｇ（１．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．７１ｍＬ（４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で７５分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、３-アミノプロパンスルホン酸０．１９ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ２．４ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．４０ｇ（２．４ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ ０．９１ｍＬ（６．１ｍｍｏｌ）を加え、１００分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸水素カリウム水溶液１６ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水１３ｍＬ、ＤＭＦ ０．９ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．２分；Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１２．８分
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．１分；Ｈ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．６分

【0190】

５）Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）の合成
上記のＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を濃縮して得た残渣２，３６ｇのうち０．４７ｇ（０．２ｍｍｏｌ相当）をはかり取り、２－メチルテトラヒドロフラン１．８ｍＬ、ＤＭＦ０．４ｍＬ、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ ０.１７ｇ（０．３ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ ０．１１ｇ（０．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＰＡ ０．１４ｍＬ（０．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で７５分撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＨ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、硫酸水素２－アミノエチル３８ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ ０．６ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。０℃に冷却し、３－メルカプト－１－プロパンホスホン酸（参考例１にて合成）７６ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ ０．１８ｍＬ（１．２ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。分析条件１及び分析条件２にてＦｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）が生成物のＨ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）に対し５％以下になったことを確認後、５％炭酸水素カリウム水溶液５ｍＬ、ＣＰＭＥ１ｍＬ、ＴＨＦ１ｍＬを加えた後、室温まで昇温し、分液した。得られた有機層に２０％食塩水３ｍＬ、ＤＭＦ ０．２ｍＬを加え、分液した。Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）を含むＣＰＭＥ溶液を得た。
得られたＣＰＭＥ溶液を減圧下で濃縮し、残渣にＭｅＣＮ ４ｍＬ、ＩＰＡ１ｍＬを加え、析出した固体をろ取し、得られた固体を減圧乾燥した。Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ） ０．３１ｇを得た。
保持時間（分析条件１）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１４．９分；Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：１２．９分
保持時間（分析条件２）：Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．４分；Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）：７．８分

【0191】

６）Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂の合成
Ｈ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）０．２５ｇ（０．１１ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸３．２ｍＬ、水０．０９ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．０９ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．１８ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ３０ｍＬをゆっくりと滴下し、沈澱物を濾取した。ろ取した沈殿物をＭＴＢＥ５ｍＬで３回洗浄行った後、沈澱物を減圧下で乾燥し、Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂ ７８ｍｇを得た。得られたＨ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂を分析条件１にて分析し、純度は８２．０%であり、Ｘ－ＳＴａｇは検出されず、Ｘ－ＳＴａｇをトリフルオロ酢酸で処理することで生成するＸ－ＳＴａｇ由来の化合物を０．２％検出した。
保持時間（分析条件１）：Ｈ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－ＮＨ₂：０．９分

【0192】

実施例８
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ） ０．２２ｇ（０．２ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸３．２ｍＬ、水０．０９ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．０９ｍＬ、３，６－ジオキサ－１，８－オクタンジチオール０．１８ｍＬを添加し、室温で２時間撹拌した。反応液を分析条件１及び分析条件２にて分析し、Ｘ－ＳＴａｇ由来の化合物を検出した。
保持時間（分析条件１）：１１．４分；１２．０分；１２．３分；１２．７分；１３．４分
保持時間（分析条件２）：０．５分；２．４分；２．８分；４．１分；４．９分
実施例７ではＸ－ＳＴａｇ等の脱保護後に目的物ペプチドをＭＴＢＥを用いて晶出させ分離精製したため、Ｘ－ＳＴａｇ由来の化合物はわずかしか検出されなかったが、晶出操作前の混合液中のＸ－ＳＴａｇ由来の化合物は、分析条件１、２いずれを用いても分離性能良く検出できることがわかった。

【0193】

参考例１
３－メルカプト－１－プロパンホスホン酸の合成
３－ブロモ－１－プロパンホスホン酸ジエチル７７７ｍｇ（３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル６ｍＬに溶解し、トリフェニルメタンチオール１．６６ｇ（６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン０．５４ｍＬ（３．９ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１８時間撹拌した。ＭＴＢＥ２０ｍＬ、水２０ｍＬを加え分液し、有機層を２０％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。得られた有機層を濃縮し、濃縮残渣２．３９ｇを得た。残渣をヘプタン／酢酸エチル（２／１）に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、３－（トリフェニルメチルチオ）－１－プロパンホスホン酸ジエチル１．３６ｇを定量的収率で得た。
上記で得た３－（トリフェニルメチルチオ）－１－プロパンホスホン酸ジエチル１．３６ｇをアセトニトリル１０ｍＬに溶解し、トリメチルシリルブロミド１，９５ｍＬ（１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。メタノール４ｍＬを加え、過剰なトリメチルシリルブロミドと反応させたのち、減圧濃縮した。濃縮残渣にアセトニトリル１５ｍＬを加え、溶解していない固体を濾別した。ろ液を濃縮し、濃縮残渣２．３２ｇを得た。得られた残渣にトリフルオロ酢酸２２．８ｍＬ、水０．６ｍＬ、トリイソプロピルシラン０．６ｍＬを加え、室温で２時間撹拌した。反応液にＭＴＢＥ２４ｍＬを加え、析出した固体を濾別したのち、ろ液を濃縮し、濃縮残渣３．３０ｇを得た。残渣にＭＴＢＥ３５ｍＬ、ヘプタン１２ｍＬ、水１０ｍＬを加え、分液した。有機層から水５ｍＬで２回再抽出したのち、水層を合わせ減圧濃縮した。濃縮残渣０．７２ｇを得た。残渣を水に溶解し、ＨＰＬＣカラムクロマトグラフィ（カラム：ＹＭＣ社製ＯＤＳ－ＡＱ－ＨＧ；１０ｍｍ×２５０ｍｍ）で精製し、目的とする３－メルカプト－１－プロパンホスホン酸０．３０ｇを得た。
¹Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ₆，５００ＭＨｚ）σ＝１．６０（２Ｈ，ｍ）、１．７１（２Ｈ，ｍ）、２．３２（１Ｈ，ｂｒ）、２．５３（２Ｈ，ｍ）
ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ １５７．００［Ｍ＋Ｈ⁺］

【0194】

比較例１
Ｂ－ＳＴａｇ ０．７９ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ２ｍＬ、ＴＨＦ３ｍＬに溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ １．０６ｇ（２．５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ ０．４８ｇ（２．５ｍｍｏｌ）、４－ジメチルアミノピリジン１２．２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。分析条件３にて分析したところ、Ｂ－ＳＴａｇ及び生成物のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｏ－（Ｂ－ＳＴａｇ）の両方が検出されなかった。

【0195】

比較例２
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ） １．０９ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ９ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、ＤＩＥＰＡ ０．３２ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．３０ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ０．６７ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間撹拌し、分析条件３にて分析したところ、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｄ－ＳＴａｇ）及び生成物のＮＨ₂－（Ｄ－ＳＴａｇ）の両方が検出されなかった。

【0196】

比較例３
Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ） １．１１ｇ（１．０ｍｍｏｌ）をＣＰＭＥ８ｍＬ、ＤＭＦ２ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、ＤＩＥＰＡ ０．３３ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）、２－メルカプト－１－エタンスルホン酸ナトリウム０．３０ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＢＵ０．６７ｍＬ（４．５ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間撹拌し、分析条件３にて分析したところ、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（Ｘ－ＳＴａｇ）及び生成物のＮＨ₂－（Ｘ－ＳＴａｇ）の両方が検出されなかった。

【0197】

比較例１～３に示したように、分析条件３においては、Ｆｍｏｃの結合の有無によらずＢ－ＳＴａｇ、Ｄ－ＳＴａｇ、Ｘ－ＳＴａｇのいずれも検出することができなかった。従って、アセトニトリルを使用したＨＰＬＣ測定系では、これらの液相ペプチド合成用担体それ自体及び、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を検出することはできず、また目的ペプチド又は最終目的ペプチドと液相ペプチド合成用担体及び液相ペプチド合成用担体由来の不純物を同時に分析検出することもできない。一方、実施例１～８に示したように、溶離液にイソプロパノールを使用した分析条件１、２では、液相ペプチド合成用担体それ自体及び、液相ペプチド合成用担体とアミノ酸、ペプチド若しくはアミノ酸アミドが結合した化合物を検出することができ、また目的ペプチド又は最終目的ペプチドと、液相ペプチド合成用担体由来の不純物も分析検出することができた。

【要約】

【課題】液相ペプチド合成用担体由来の成分と目的ペプチドなどとを同時に正確に分析できる手段を提供すること。
【解決手段】アルコール類を溶離液として用いる高速液体クロマトグラフィー又は超臨界流体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする、液相ペプチド合成用担体、液相ペプチド合成用担体由来の成分、液相ペプチド合成用担体が結合しているアミノ酸及び液相ペプチド合成用担体が結合しているペプチド化合物から選ばれる１種以上の化合物の分析方法。
【選択図】なし

【図1】