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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-10-28
(45)【発行日】2022-11-08
(54)【発明の名称】エリスロポエチン由来分子を含む局所適用のための美容用製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/64 20060101AFI20221031BHJP
A61K 8/68 20060101ALI20221031BHJP
A61K 8/55 20060101ALI20221031BHJP
A61K 8/44 20060101ALI20221031BHJP
A61K 8/46 20060101ALI20221031BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20221031BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20221031BHJP
C07K 14/505 20060101ALN20221031BHJP
C07K 7/00 20060101ALN20221031BHJP
【ＦＩ】
A61K8/64
A61K8/68
A61K8/55
A61K8/44
A61K8/46
A61Q19/00
A61Q19/08
C07K14/505
C07K7/00
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2019524882
(86)(22)【出願日】2017-11-07
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-11-21
(86)【国際出願番号】 EP2017001289
(87)【国際公開番号】W WO2018086732
(87)【国際公開日】2018-05-17
【審査請求日】2020-09-24
(31)【優先権主張番号】16002375.0
(32)【優先日】2016-11-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】519164024
【氏名又は名称】エーエスシー・リジェニティー・リミテッド
【住所又は居所原語表記】Ｕｎｉｔ ２．０２， ４１１－４１３ Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｗ１Ｃ ２ＰＥ Ｌｏｎｄｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ
(74)【代理人】
【識別番号】110001737
【氏名又は名称】弁理士法人スズエ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】バッダー、アウグスティヌス
【審査官】池田 周士郎
(56)【参考文献】
【文献】特表２００９－５０８４７１（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１２／００３９６０（ＷＯ，Ａ１）
【文献】中国特許出願公開第１０２２０５１１４（ＣＮ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５２７５６０（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１５／１７４６０１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】米国特許出願公開第２０１２／０１８９６７４（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１０－５３６７４５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５４０７６６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００６－５１９２６３（ＪＰ，Ａ）
【文献】Brines M.et al.，Nonerythropoetic, tissue-protective peptides derived from the tertiary structure of erythropoetin.，PNAS，2008年08月05日，vol. 105, no. 31，10925-10930
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ８／００－８／９９
Ａ６１Ｑ １／００－９０／００
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）少なくとも１種の、１０個から４０個までのアミノ酸からなる単離組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチドは、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発せず、及びＥＰＯペプチドバリアントであり、
ここにおいて、当該ＥＰＯペプチドバリアントが、
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２３）；
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２５）；
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２７）；
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２９）、
からなる群から選択される１種のアミノ酸配列を含むか、またはその１種のアミノ酸配列である）、
（ｉｉ）脂質化合物、脂質化合物の組成物又は脂質構造
（ここで、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物又は前記脂質構造に連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）、及び
（ｉｉｉ）血管系の弛緩を刺激し、及び／又は前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）の前記ＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する、少なくとも１種の誘発剤
（ここで、前記誘発剤は、前記ＣＤ９０発現皮膚細胞における窒素酸化物（ＮＯ）及び／又はアセチルコリンの生成を刺激する）
を含む、無傷の皮膚への局所適用のための美容用製剤又は組成物。
【請求項2】
前記脂質化合物又は前記脂質構造は、スフィンゴ脂質又はセラミド、或いはリン脂質又はホスファチジルコリンをベースとする、請求項１に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項3】
前記誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリン及び上記アミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか、それからなるポリペプチドからなる群から選択される１種以上のアミノ酸又はアミノ酸誘導体を含む、請求項１又は２に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項4】
ビタミンＢ５及び／又はビタミンＥ及び／又はコリンを含む、請求項３に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項5】
前記誘発剤は、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）にＮ末端及び／又はＣ末端で共有結合によって結合して、それにより複合体分子を形成している、請求項１～４の何れか１項に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項6】
皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、しわの減少、皮膚のアンチエイジング、並びに乾燥した皮膚の回避及び改善に局所使用するための、請求項１～５の何れか１項に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項7】
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２３）ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２９）
から成る群から選択される１つの１１－ｍｅｒのアミノ酸配列からなり、
ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）に結合可能であり、
脂質構造と、ＣＤ９０発現皮膚細胞における一酸化窒素（ＮＯ）及び／又はアセチルコリンの生成を刺激する誘発剤との組み合わせにおいて更に効果的である
単離ポリペプチド。
【請求項8】
皮膚の修復、皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、しわの減少、皮膚のアンチエイジング、並びに乾燥し、断裂した皮膚の回避及び改善を含む、皮膚の局所的な美容用の処置のための使用のための、請求項７に記載の単離ポリペプチド。
【請求項9】
（ｉ）少なくとも１種の単離組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチドは、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発せず、及び一般的アミノ酸配列：
Ｘ１Ｘ２ ＱＬＥＲＡＬＮ Ｘ５Ｘ６（配列番号３３）
によって表される１１－ｍｅｒの皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントであり、
ここで、Ｘ１はＱまたはＮであり、Ｘ２はＥまたはＤであり、Ｘ５Ｘ６は互いに独立してＳ又はＴであり、
ただし、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１）は除く）、及び
（ｉｉ）脂質化合物、脂質化合物の組成物又はスフィンゴ脂質若しくはリン脂質に基づく脂質構造
（ここで、当該皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントは、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物、組成物、又は前記脂質構造に連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）、及び
（ｉｉｉ）血管系の弛緩を刺激し、及び当該ＣＤ９０発現皮膚細胞での窒素酸化物（ＮＯ）の形成を刺激する、少なくとも１種の誘発剤
（ここで、前記誘発剤は、コリン、ビタミンＢ５であるか、又はアルギニン、フェニルアラニン、シトルリン、及びこの群から選択される２以上の同じ又は異なるアミノ酸を含む若しくはそれらからなるペプチドから選択される１種以上のアミノ酸を含む、若しくはそれからなる、
ここで、当該ＥＰＯペプチドバリアント、前記誘発剤及び脂質化合物、組成物若しくは構造は、トランスポーター分子複合体を形成し、それが標的とされる前記ＣＤ９０発現皮膚細胞の微小環境に対する当該組成物又は製剤のより近い近接をもたらし、それにより当該ＥＰＯペプチドバリアントに対する感受性をそれらに与え、それによってその当該組織保護効果を増強する）
を含む無傷の皮膚に対する局所適用のための美容用製剤又は組成物。
【請求項10】
前記皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントが、Ｎ末端及び／又はＣ末端で共有結合によって当該誘発剤に結合しており、それによって複合体分子を形成している、請求項９に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項11】
皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、しわの減少、皮膚のアンチエイジング、並びに乾燥した皮膚の回避及び改善の局所使用のための請求項９に記載の美容用製剤又は組成物。
【請求項12】
少なくとも１種の単離組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（前記組織保護ポリペプチドは、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発せず、並びに、以下の一般アミノ酸配列：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号３１）（ここで、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４は互いに独立してＱ又はＮであり、Ｘ２はＥ又はＤであり、Ｘ５、Ｘ６は互いに独立してＳ又はＴである）：
によって表わされる１１ｍｅｒの皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントである）
を含み、無傷の皮膚に対する当該ＥＰＯペプチドバリアントの皮膚保護効果の増強に使用するための美容用製剤又は組成物であって、前記増強が、誘発剤及び脂質化合物若しくは脂質組成物若しくは脂質構造を提供して、当該ＥＰＯペプチドバリアント分子複合体を形成することによって達成され、前記ＥＰＯペプチドバリアントのＣＤ９０発現皮膚細胞の微小環境への輸送を補助し、前記細胞にＥＰＯペプチドバリアントに対する感受性を与える、美容用製剤又は組成物であって、
前記誘発剤が、当該ＣＤ９０発現皮膚細胞での血管系の弛緩の刺激と窒素酸化物（ＮＯ）の形成を刺激し、コリン、ビタミンＢ５であるか、又はアルギニン、フェニルアラニン、シトルリン、及びこの群から選択される２以上の同じ又は異なるアミノ酸を含む若しくはそれらからなるペプチドから選択される１種以上のアミノ酸を含む、若しくはそれからなる、
皮膚保護性の美容用製剤又は組成物。
【請求項13】
請求項１２に記載の使用のための皮膚保護性の美容用製剤又は組成物であって、前記脂質化合物又は脂質組成物若しくは脂質構造は、イオン相互作用又は共有結合によって前記皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントに連結しているか又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、或いはミセル又はリポソーム構造を形成することによってその中に内包されているか、若しくはカプセル化されている、皮膚保護性の美容用製剤又は組成物。
【請求項14】
請求項１２又は１３に記載の使用のための皮膚保護性の美容用製剤又は組成物であって、前記皮膚保護性ＥＰＯペプチドバリアントが、Ｎ末端及び／又はＣ末端で共有結合により当該誘発剤に結合しており、それによって複合体分子を形成している美容用製剤又は組成物。
【請求項15】
請求項１２～１４の何れか１項に記載の使用のための皮膚保護性の美容用製剤又は組成物であって、前記誘発剤が、２又は３分子のＬ－アルギニンからなるペプチド、又は２又は３分子のＬ－シトルリンからなるペプチドである美容用製剤又は組成物。
【請求項16】
請求項１２～１５の何れか１項に記載の使用のための皮膚保護性の美容用製剤又は組成物であって、当該ＥＰＯペプチドバリアントが、以下の１１ｍｅｒのアミノ酸配列：ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ（配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ（配列番号２９）及び
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１）
からなる群から選択される美容用製剤又は組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【0001】
本発明は、ヒトの皮膚の美容的処置のために設計された美容用製剤及び新規のペプチド関連物質に関する。より詳細には、本発明は、ＣＤ９０陽性組織細胞を標的とし、エリスロポエチン（ＥＰＯ）の部分的な配列に対応するか又は由来するが、造血作用を実質的に誘発せず、しかしながら組織再生及び保護効果を誘発するペプチドに関する。
【0002】
特に、本発明は、脂質構造、及び血管系の弛緩を誘発し、標的皮膚細胞へのポリペプチド物質の経皮輸送を促進する薬剤と機能的な関係にあるＥＰＯ由来組織保護ペプチドを開示する。
【発明の背景】
【0003】
分化抗原群（Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）９０（ＣＤ９０）は、細胞接着分子であり、２５～３５ＫＤａの分子量を有する免疫グロブリンスーパーファミリーの最も小さなメンバーである。ＣＤ９０は、胸腺細胞分化抗原－１（Ｔｈｙ－１）としても知られ、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）モチーフを介して細胞表面に固定された糖タンパク質である。ヒトにおいて、ＣＤ９０は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）及びケラチノサイト幹細胞（ＫＳＣ）を含む幹細胞で発現し、線維芽細胞、ニューロン及び活性化内皮細胞のような非リンパ組織上では様々なレベルで発現する。ケラチノサイトは、表皮、即ち皮膚の最外層における主な細胞種を構成し、そこに見られる細胞の９０％を成す。これらの皮膚の基底層に見られるケラチノサイトは、「基底細胞」又は「基底ケラチノサイト」と呼ばれる。
【0004】
ＣＤ９０発現皮膚細胞は、成長因子、サイトカイン及び細胞外マトリックス成分を合成し、放出することによって、炎症及び創傷治癒に機能し、損傷した皮膚組織を修復するのを助ける。例えば、単球ＣＤ９０リガンドは、炎症の間に活性化された内皮細胞上のＣＤ９０に結合し、炎症、組織損傷及び感染部位へ免疫細胞の遊走を集中させる。
【0005】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、低酸素に応答した赤血球産生の調節因子として最初に同定された多面的サイトカイン糖タンパク質である。成熟したヒトの１６５アミノ酸長ＥＰＯタンパク質配列は、配列番号１、
ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣＡＥＨＣＳＬＮＥＮＩＴＶＰＤＴＫＶＮＦＹＡＷＫＲＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶＮＳＳＱＰＷＥＰＬＱＬＨＶＤＫＡＶＳＧＬＲＳＬＴＴＬＬＲＡＬＧＡＱＫＥＡＩＳＰＰＤＡＡＳＡＡＰＬＲＴＩＴＡＤＴＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ（配列番号１）
によって表され、４つのαヘリックスからなり、コンパクトな球状構造を形成している。ヒトリコンビナントエリスロポエチン（哺乳動物細胞で発現される）は、３つのＮ結合型及び１つのＯ結合型オリゴ糖鎖を含み、それらは併せて糖タンパク質の総分子量の約４０％を構成する。Ｎ結合型グリコシル化は、位置２４、３８及び８３に位置するアスパラギン残基（Ａｓｎ）で起こり、一方、Ｏ結合型グリコシル化は位置１２６に位置するセリン残基（Ｓｅｒ）で起こる。
ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣＡＥＨＣＳＬＮＥＮＩＴＶＰＤＴＫＶＮＦＹＡＷＫＲＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶＮＳＳＱＰＷＥＰＬＱＬＨＶＤＫＡＶＳＧＬＲＳＬＴＴＬＬＲＡＬＧＡＱＫＥＡＩＳＰＰＤＡＡＳＡＡＰＬＲＴＩＴＡＤＴＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ（配列番号１）
によって表され、４つのαヘリックスからなり、コンパクトな球状構造を形成している。ヒトリコンビナントエリスロポエチン（哺乳動物細胞で発現される）は、３つのＮ結合型及び１つのＯ結合型オリゴ糖鎖を含み、それらは併せて糖タンパク質の総分子量の約４０％を構成する。Ｎ結合型グリコシル化は、位置２４、３８及び８３に位置するアスパラギン残基（Ａｓｎ）で起こり、一方、Ｏ結合型グリコシル化は位置１２６に位置するセリン残基（Ｓｅｒ）で起こる。
【0006】
古典的な当初の理解によれば、ＥＰＯは、ＥＰＯ受容体分子を二量体化することによって造血を誘発し、それが、ＥＰＯ受容体関連ヤヌスチロシンキナーゼ２（Ｊａｋ２）及びＳｔａｔ５等の二次シグナル伝達分子の活性化を引き起こす（Brines and Cerami, Nat Rev Neurosci, 2005;6:484-94）。リコンビナントＥＰＯは様々な原因の貧血の治療に広く使用されている。
【0007】
ＥＰＯは組織保護特性も示す。中枢神経系において、ＥＰＯ及びＥＰＯ受容体は、ニューロン、グリア細胞及び脳血管系内皮によって発現される。ＥＰＯは、インビトロで、並びに外傷、卒中、虚血、炎症及びてんかん発作に関連するニューロン損傷の動物モデルにおいて、神経栄養性及び神経保護性であることが示された。ＥＰＯの有益な効果は、脳卒中、統合失調症及び進行性多発性硬化症の臨床試験でも証明されている。ＥＰＯは、アポトーシスを防止することにより直接的にと、及び炎症過程を調節し、神経形成及び血管形成を刺激することにより間接的にとの、両方でニューロンを保護する（Wang et al., Stroke 2004;35:1732-7）。
【0008】
エリスロポエチンの細胞保護効果のいくつかは、標準的なエリスロポエチン受容体及び共通β受容体であるβｃＲを含むヘテロ二量体へのそれの結合によって媒介されることが示されている（Brines et al., Proc Natl Acad Sci USA 2004;101:14 907-14 912）。興味深いことに、カルバミル化エリスロポエチンはこれらのヘテロ受容体に結合して組織保護効果を発揮するが、一方で古典的なエリスロポエチン受容体には結合せず、赤血球生成を刺激しない。βｃＲは赤血球生成には必要ではない。非造血細胞によって発現されるＥｐｏＲと組み合わされたβｃＲが組織保護受容体を構成し、故に組織保護ヘテロ受容体を作り出すと考えられる。
【0009】
皮膚及び他の組織におけるＥＰＯの組織再生及び創傷治癒促進効果は、全身的適用形態によって及び局所的適用形態によっても、インビボ及びインビトロで何度も実証された（例えば、Giri et al, Drug Design, Development and Therapy 2015:9；Gunter et al., J Transplant Ste Cell Biol 2(1):4, 2015；Hamed et al., Wound Rep Reg (2014) 22 23-33；ＷＯ２００４／００１０２３；ＷＯ２００５／０６３９６５；ＷＯ２００９／０８３２０３）。
【0010】
しかしながら、皮膚欠損及び損傷の再生に関しては、ＥＰＯ及びそのアナログが皮膚に浸透しないために、これらのポリペプチドの、欠損し又は損傷した皮膚創傷へのそれらの化合物の直接的な適用への有用性を制限する幾らつの問題が明らかとなってきている。静脈内、皮下又は筋肉内注射による適用でない限り、タンパク質エリスロポエチン又はアナログは、体内に入ることができない。
【0011】
ＥＰＯ単独の皮膚への局所適用は、それ自体が皮膚浸透性を欠くために失敗するであろう。これは、当該分子の適用可能性を厳しく制限する。これらの場合でも、全身適用が再生の能力をそもそも有するのか、むしろ従来の血球の増殖及び成熟を補助し、局所的な無傷の皮膚又は組織再生を補助しないのかどうかは物議を醸している。３００ユニットのＥＰＯ／ｋｇ体重を用いた皮下注射でさえ、皮膚の再生を誘発することができなかったことが報告されている。
【0012】
加えて、創傷は、数分間の間にＥＰＯを不活性化することで知られるプロテイナーゼに富み、そのため、急速なタンパク質分解に起因するＥＰＯの短い半減期のために、ＥＰＯは創傷修復を促進するために局所的に適用されるには制限された能力を有する。当分野で知られたＥＰＯ断片、或いはバリアント又は誘導体についても同じことが言える。これらのＥＰＯ誘導体又は断片又はバリアントの幾つかは、組織保護に有効であることが知られている（例えば、ＥＰ２９３３２６４、ＥＰ２３７１８５５、ＷＯ２００７／０１９５４５を参照のこと）。
【0013】
これらのＥＰＯ由来のポリペプチドの制限された利用可能性は、特に、皮膚の最も表面の領域が比較的無傷である、加齢した皮膚、瘢痕が豊富な組織に存在する皮膚の状態、更には神経皮膚炎又は皮膚炎のような炎症状態の場面においてはジレンマである。ＥＰＯ及びそのアナログの美容活性でさえ達成できないであろう。
【0014】
本発明の目的は、ＥＰＯ及びＥＰＯ断片、アナログ、ミメティック、バリアント及び誘導体の、影響の勾配及び時間様式ではなく、近接した幾何学的距離での皮膚細胞への適用可能性を確立し、改善することである。
【0015】
従って、上記制限を克服するために、組織保護特性を示し、且つ、例えば、皮膚の加齢、並びに病理学的事象に基づく皮膚細胞への外的及び内的の要因によって引き起こされる皮膚の損傷をなくす又は軽減するための皮膚細胞の生理学的及び生物学的機能を誘発し、及び実行する皮膚組織中のコンピテント細胞を効率的に標的とすることができる新規の化学物質の開発が必要である。
【発明の概要】
【0016】
この目的は、赤血球生成活性が無く、皮膚組織中のＣＤ９０陽性細胞及び他のコンピテント細胞を標的とすることができる皮膚組織保護ＥＰＯアナログ又はバリアントを含む新規の化学物質を提供することによって達成される。これらの新規の化学物質は、皮膚細胞の局所的な微小環境において機能的に有効であるように正確に調製されており、皮膚への局所的な美容的投与によって投与され得る。
【0017】
本発明の第１の側面において、
（ｉ）４０個以下且つ７個以上、好ましくは１０～４０個、より好ましくは１０～３０個のアミノ酸からなる組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）
（ここで、組織保護ペプチドは、
－エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティックに由来するペプチド、或いはＥｐｏＲ及び／又はβｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドのような、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、
－ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、
－造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、
（ｉｉ）脂質化合物又は脂質構造、好ましくは、少なくともスフィンゴ脂質及び／又はリン脂質、例えば、セラミド又はホスファチジルコリン
（ここで、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、混合によって、イオン相互作用、共有結合によって、脂質化合物又は脂質構造と連結しているか又は結合しているか、或いはミセル又はリポソーム構造を形成することによってその中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）
を含む、皮膚に局所投与する美容用製剤又は組成物が提供される。
（ｉ）４０個以下且つ７個以上、好ましくは１０～４０個、より好ましくは１０～３０個のアミノ酸からなる組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）
（ここで、組織保護ペプチドは、
－エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティックに由来するペプチド、或いはＥｐｏＲ及び／又はβｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドのような、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、
－ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、
－造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、
（ｉｉ）脂質化合物又は脂質構造、好ましくは、少なくともスフィンゴ脂質及び／又はリン脂質、例えば、セラミド又はホスファチジルコリン
（ここで、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、混合によって、イオン相互作用、共有結合によって、脂質化合物又は脂質構造と連結しているか又は結合しているか、或いはミセル又はリポソーム構造を形成することによってその中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）
を含む、皮膚に局所投与する美容用製剤又は組成物が提供される。
【0018】
本発明の好ましい実施形態においては、本美容用製剤又は組成物は、血管系の弛緩を誘発し、及び／又は組織保護ポリペプチドの受容細胞への輸送を促進する薬剤を追加で含む。例えば、誘発剤は、ＣＤ９０発現皮膚細胞における一酸化窒素（ＮＯ）及び／又はアセチルコリンの生成を刺激する。誘発剤は、共有結合によって本発明に従う組織保護ポリペプチドと直接結合し得、故に以下でより詳細に説明する複合体分子を生成し得る。
【0019】
前記組織保護ポリペプチド、及び任意に誘発剤と組み合わされる脂質構造、並びに関係する本発明に従う化合物は、この理論に縛られるものではないが、単一成分の特性のみを有するものではなく、特定の特性を有するトランスポーター分子複合体の一種を形成することが見いだされた。この本発明に従う製剤中の脂質－ペプチド－誘発剤分子－複合体は、明らかに、本分野の標準的な美容用ベースの製剤よりも、各皮膚細胞、例えば、ＣＤ９０陽性皮膚細胞の微小環境内に、各有効化合物をはるかによく輸送する。
【0020】
更に、誘発剤と組み合わされた組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、本発明の脂質製剤中で、それが存在しない同じ製剤におけるよりも、組織保護及び抗炎症に関してより効果的であることを示すことができた（約２～３倍）。従って、好ましくはスフィンゴ脂質又はリン脂質構造と組み合わされた誘発剤は、この状況において陽性の増強された効果を誘発し、また本発明に従う組織保護ポリペプチドの用量の低減を可能にする。本発明に従うポリペプチドによって引き起こされる望ましくない副作用は最小限に抑えることができる。
【0021】
既に前述したように、この製剤又は組成物中の組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、規定した誘発／弛緩剤と、好ましくはこのポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端において共有結合により結合され、それにより増強された組織保護効果を示す複合体分子を形成する。共有結合により提供される誘発／血管系弛緩剤とのこのような近接において、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と誘発／血管系弛緩剤とが共有結合により一緒に結合されていることが無い製剤と比較して、少なくとも５～５０％、好ましくは１０～３５％、更により効果的である。
【0022】
脂質、ポリペプチド及び誘発剤で構成される本発明の製剤（これらの成分は混合物として使用可能である）は既に非常に効果的であるが、前記成分、好ましくは本発明に従うポリペプチド及び誘発剤を一緒に共有結合させるか、又は少なくともイオン相互作用で結合させる場合、皮膚保護効果を更に高めることが可能である。
【0023】
本発明の美容用製剤又は組成物中の脂質化合物又は脂質構造は、混合によって、或いはイオン相互作用又はファンデルワールス力によって組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）に結合している。好ましい実施形態において、脂質化合物は結果としてミセル又はリポソーム構造のような単層又は二重層を形成し、その中に組織保護ポリペプチドが内包されているか、又はカプセル化されている。
【0024】
本発明に従う組織保護ペプチドの脂質環境のための基材が、例えば、ホスファチジルコリンのようなリン脂質化合物、又はセラミドのようなスフィンゴ脂質化合物によって提供され得る。しかしながら、他の脂質化合物又は構造が適切である。脂質成分は、血管の弛緩、組織再生／修復及び経皮浸透を促進又は増強させる。
【0025】
幾つかの場合において、共有結合による脂質化合物又は脂質構造の組織保護ポリペプチドへの結合は好都合であり得、それにより各標的細胞へのより近い近接を提供する。
【0026】
本発明に従う誘発／血管系弛緩剤は、好ましくはＬ－アルギニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－シトルリン等のようなＬ型のアミノ酸を含む。同じ又は異なるアミノ酸の、２、３又は４個のアミノ酸ユニットからなるポリペプチドが効果を強め得ることが見いだされた。
【0027】
好ましい実施形態において、本発明のこの美容用製剤中の誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリンからなる群から選択される、１種以上のアミノ酸又はアミノ酸誘導体、及び規定した通りのアミノ酸のうち２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか又はそれらからなるポリペプチドからなる群から選択される。
【0028】
２つ以上のユニットを含む具体的なアミノ酸物質は、例えば：
－アルギニン又は１～３個のアルギニン分子からなるペプチド、
－シトルリン又は１～３個のシトルリン分子からなるペプチド、
－少なくとも１つのＬ－アルギニン及び１つのシトルリン分子からなるペプチド、
－コリン及び／又はビタミンＢ５、及び／又はビタミンＥ、及び
－少なくとも１つのアルギニン分子及び／又は少なくとも１つのＬ－シトルリンに共有結合したコリン及び／又はビタミンＢ５、及び／又はビタミンＥからなる化合物、
－フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、クレアチン、又は１～３個の前記各アミノ酸からなるポリペプチド、及び
－規定した通りのアミノ酸のうち２つ以上の異なるアミノ酸を含むポリペプチド
である。
－アルギニン又は１～３個のアルギニン分子からなるペプチド、
－シトルリン又は１～３個のシトルリン分子からなるペプチド、
－少なくとも１つのＬ－アルギニン及び１つのシトルリン分子からなるペプチド、
－コリン及び／又はビタミンＢ５、及び／又はビタミンＥ、及び
－少なくとも１つのアルギニン分子及び／又は少なくとも１つのＬ－シトルリンに共有結合したコリン及び／又はビタミンＢ５、及び／又はビタミンＥからなる化合物、
－フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、クレアチン、又は１～３個の前記各アミノ酸からなるポリペプチド、及び
－規定した通りのアミノ酸のうち２つ以上の異なるアミノ酸を含むポリペプチド
である。
【0029】
原則として、上記及び下記に規定した本発明に従う全ての組織保護ポリペプチドは、本発明に従う美容用製剤において用いるのに適している。
【0030】
１つの実施形態において、本発明に従う組織保護ポリペプチドは、７～４０個のアミノ酸残基からなる。特に、それは７～３０個又は１１～１５このアミノ酸残基からなる。好ましい本発明の組織保護ポリペプチドは、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸残基を含む。
【0031】
例えば、製剤及び組成物並びに複合体分子中の、本発明に従う下記の組織保護ポリペプチドは、次の知られたアミノ酸配列：
５’－ＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶ－３’（配列番号３）
５’－ＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣ－３’（配列番号５）
５’－ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥ－３’（配列番号７）
５’－ＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ－３’（配列番号９）
５’－ＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲ－３’（配列番号１１）
５’－ＴＹＳＣＨＦＧＰＬＴＷＶＣＫＰＱＧＧ－３’（配列番号１３）
５’－ＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ－３’（配列番号１５）
５’－ＷＥＨＶＮＡＩＱＥＡＲＲＬＬ－３’（配列番号１７）
５’－ＨＡＤＲＥＬＥＫＩＧＡ－３’（配列番号１９）
又はその断片
を含む。
５’－ＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶ－３’（配列番号３）
５’－ＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣ－３’（配列番号５）
５’－ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥ－３’（配列番号７）
５’－ＦＲＫＬＦＲＶＹＳＮＦＬＲＧＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ－３’（配列番号９）
５’－ＭＥＶＧＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲ－３’（配列番号１１）
５’－ＴＹＳＣＨＦＧＰＬＴＷＶＣＫＰＱＧＧ－３’（配列番号１３）
５’－ＫＬＫＬＹＴＧＥＡＣＲＴＧＤＲ－３’（配列番号１５）
５’－ＷＥＨＶＮＡＩＱＥＡＲＲＬＬ－３’（配列番号１７）
５’－ＨＡＤＲＥＬＥＫＩＧＡ－３’（配列番号１９）
又はその断片
を含む。
【0032】
ポリペプチド、配列番号：３、５及び７は、ヒトＥＰＯ配列（配列番号１）の断片である。他のペプチドは、ＥＰＯ及びＥＰＯＲの境界である、らせん構造／面に由来するか、又は合成若しくは異なる天然のモチーフを含むか、或いは全長のリガンドの望ましくない可能性のある造血効果をほとんど持たないか又は持たない、タイプＩサイトカイン受容体リガンドの断片とコンセンサス配列を共有する（例えば、ＷＯ２００９／０９４１７２）。
【0033】
本発明に従う美容用製剤は、原則的には全長のＥＰＯ配列と同様に働くことに言及しておくべきである。しかしながら、開示されたポリペプチドの使用は、様々な理由からより有利である。
【0034】
更なる実施形態において、本発明に従う美容用製剤、及び複合体分子は、４０個以下、好ましくは２０個以下７個以上、特に、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸残基からなる各組織保護ポリペプチドを含み、エリスロポエチン受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）に結合することができ、好ましくは５つのアミノ酸残基ＬＥＲＡＬのコア配列を含む。
【0035】
好ましい実施形態において、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、１１ｍｅｒアミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１）のバリアントを含むか又はそれからなり、前記アミノ酸配列の１～４個のアミノ酸残基、好ましくは２、３又は４個のアミノ酸残基は、保存性又は非保存性のアミノ酸残基置換基で置き換えられている。
【0036】
特に、本発明は、コア配列ＬＥＲＡＬを含み、各変異によって配列番号２の配列に由来し、配列式：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号３１）
（式中、
Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ２は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ５、Ｘ６は、互いに独立にＳ又はＴである）
によって表される一般アミノ酸配列を含むか又はそれからなる単離ポリペプチドを提供し、前記ポリペプチドは、皮膚保護活性を有し、造血又は赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない。
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号３１）
（式中、
Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ２は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ５、Ｘ６は、互いに独立にＳ又はＴである）
によって表される一般アミノ酸配列を含むか又はそれからなる単離ポリペプチドを提供し、前記ポリペプチドは、皮膚保護活性を有し、造血又は赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない。
【0037】
コア配列ＬＥＲＡＬ、及びコア配列の左及び右の各配列トリプレット（Ｘ１Ｘ２Ｘ３）及び（Ｘ４Ｘ５Ｘ６）中に１つのアミノ酸置換を有するバリアントが好ましく、それは、それらが優れた、更に向上した皮膚組織保護活性を誘発するためである。
【0038】
本発明の他の好ましい実施形態において、この配列（配列番号３１）の組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）バリアントは、１１ｍｅｒの一般アミノ酸配列を含むか又はそれからなり、それは、７つのアミノ酸のコア配列を有し、次の一般配列式：
Ｘ１Ｘ２ ＱＬＥＲＡＬＮ Ｘ５Ｘ６（配列番号３３）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ５、Ｘ６は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される。
Ｘ１Ｘ２ ＱＬＥＲＡＬＮ Ｘ５Ｘ６（配列番号３３）
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ５、Ｘ６は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される。
【0039】
これらのポリペプチドは、本発明に従う美容用製剤を用いた局所的な美容的な皮膚の処置において優れた有効性を示し、皮膚によく適合することが見いだされた。
【0040】
ポリペプチドＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１、「ペプチド０」）（一般配列式配列番号３１に該当する）は、例えば、ＥＰ２３７１８５５から、非経口的に適用される治療的用途において組織保護効果を示す化合物として知られている。
【0041】
この一般式に該当する以下の単離ポリペプチドは、本出願の発明者によってよく調査された。
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）。
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）。
【0042】
これらの４つのアミノ酸配列を含むか又はこれらからなるポリペプチドは、最も有利であり、本発明の好ましい実施形態を代表する。それらは、皮膚の美容的処置において、参照の既知の「ペプチド０」と比較して、ニキビ、シワ又は皮膚断裂、及びアンチエイジングにまでも、明確に高い効果を示す。
【0043】
本発明の他の好ましい実施形態において、各組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）バリアントは、７ｍｅｒのアミノ酸配列：
Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４（配列番号３５）
（式中、Ｘ３、Ｘ４は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される７個のアミノ酸からなる。
Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４（配列番号３５）
（式中、Ｘ３、Ｘ４は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される７個のアミノ酸からなる。
【0044】
本発明の他の好ましい実施形態において、各組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）バリアントは、７ｍｅｒのアミノ酸配列：
Ｘ２Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４Ｘ５（配列番号３７）
（式中、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される９個のアミノ酸からなる。
Ｘ２Ｘ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ４Ｘ５（配列番号３７）
（式中、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５は、先に規定したとおりの意味を有する）
によって表される９個のアミノ酸からなる。
【0045】
好ましい本発明の美容用製剤は、先に規定したポリペプチド配列の少なくとも１種を、好ましくは、少なくとも１種の誘発／血管系弛緩剤及び／又は脂質化合物若しくは脂質構造と一緒に含む。
【0046】
製剤又は組成物に替えて、本発明は、美容的使用に適切な複合体分子を提供する。
【0047】
従って、本発明の１つの側面においては、少なくとも組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と誘発／血管系弛緩剤との間で共有結合により形成された複合体分子が提供される。
【0048】
第２の側面においては、少なくとも組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と脂質化合物又は脂質構造との間で共有結合により形成された複合体分子が提供される。
【0049】
最後に、少なくとも組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と、誘発／血管系弛緩剤と、脂質化合物又は脂質構造との間で共有結合により形成された複合体分子が提供され、これらの各代替物においては、複合体分子の成分が、上記、下記及び特許請求の範囲に規定したとおりに適用される。
【0050】
既に前述したように、そのような複合体分子を含む美容用製剤中のミセル又はリポソーム、或いは他の単層又は二重層構造のような脂質環境は、皮膚細胞、好ましくはコンピテント標的指向細胞、好ましくは皮膚組織のＣＤ９０＋細胞への、前記組織保護ペプチド、任意にそれに結合した第２の細胞活性剤の浸透を促進することが可能である。複合体分子の脂質成分は、血管の弛緩、組織再生／修復、並びに経皮輸送及び浸透も促進又は増強する。
【0051】
他の側面において、複合体分子は、少なくとも組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と誘発／血管系弛緩剤との間で共有結合により形成され、ここで前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、上記又は特許請求の範囲に示すアミノ配列によって表されるポリペプチドの一つであり、誘発剤は、前記細胞における一酸化窒素及び／又はアセチルコリン生成を直接又は間接的に刺激し得る。この複合体分子において、前記組織保護ポリペプチドは、前記誘発／血管系弛緩剤と、好ましくは共有結合によって結合している。
【0052】
本発明の好ましい実施形態において、規定した組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）と規定した誘発剤との間で共有結合したこの複合体分子は、イオン相互作用又はファンデルワールス力によってホスファチジルコリン又はセラミドのような脂質化合物に結合又は連結しているか、又はミセル又はリポソーム構造中に内包されている。
【0053】
好ましい実施形態において、この本発明の複合体分子中の誘発／血管系弛緩剤は、
－Ｌ－アルギニン、又は１～３個のＬ－アルギニン分子からなるペプチド、
－Ｌ－シトルリン、又は１～３個のＬ－シトルリン分子からなるペプチド、
－少なくとも１つのＬ－アルギニン及び１つのＬ－シトルリン分子からなるペプチド、
－コリン及び／又はビタミンＢ５、及び
－少なくとも１つのＬ－アルギニン分子及び／又は少なくとも１つのＬ－シトルリン分子と共有結合するコリン及び／又はビタミンＢ５からなる化合物
－フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、クレアチン、又は１～３個の前記各アミノ酸からなるポリペプチド、及び
－規定した通りのアミノ酸のうちで２つ以上の異なるアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される。
－Ｌ－アルギニン、又は１～３個のＬ－アルギニン分子からなるペプチド、
－Ｌ－シトルリン、又は１～３個のＬ－シトルリン分子からなるペプチド、
－少なくとも１つのＬ－アルギニン及び１つのＬ－シトルリン分子からなるペプチド、
－コリン及び／又はビタミンＢ５、及び
－少なくとも１つのＬ－アルギニン分子及び／又は少なくとも１つのＬ－シトルリン分子と共有結合するコリン及び／又はビタミンＢ５からなる化合物
－フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、クレアチン、又は１～３個の前記各アミノ酸からなるポリペプチド、及び
－規定した通りのアミノ酸のうちで２つ以上の異なるアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される。
【0054】
本発明に従う複合体分子は、下記構造：
【0055】
【化1】
【0056】
（式中、
Ｐは、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）、好ましくは本明細書に規定したアミノ酸配列の何れかのポリペプチドを表し、
Ａは、１種以上の同じ又は異なる誘発剤を表し、
好ましくは、Ａは、Ｌ－アルギニン、Ｌ－シトルリン、コリン、ビタミンＢ５を表し、
Ｌは、１種以上の同じ又は異なる脂質成分又は構造を表し、
－は、共有結合を表し、
Ｐは、組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）、好ましくは本明細書に規定したアミノ酸配列の何れかのポリペプチドを表し、
Ａは、１種以上の同じ又は異なる誘発剤を表し、
好ましくは、Ａは、Ｌ－アルギニン、Ｌ－シトルリン、コリン、ビタミンＢ５を表し、
Ｌは、１種以上の同じ又は異なる脂質成分又は構造を表し、
－は、共有結合を表し、
【0057】
【化2】
【0058】
は、イオン相互作用又はファンデルワールス力に起因するものを表し、
ｎ、ｎ’は、整数０、１、２、３、４、５～１０を表し、
ｍ、ｍ’は、整数０及び１を表し、
ここで、少なくともｎ若しくはｎ’又はｍ若しくはｍ’＝１である）
によって表され得る。
ｎ、ｎ’は、整数０、１、２、３、４、５～１０を表し、
ｍ、ｍ’は、整数０及び１を表し、
ここで、少なくともｎ若しくはｎ’又はｍ若しくはｍ’＝１である）
によって表され得る。
【0059】
本発明に従う複合体分子の好ましい実施形態は、以下の群：
Ｐ－アルギニン
Ｐ－アルギニン－アルギニン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－アルギニン
アルギニン－Ｐ－アルギニン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン
Ｐ－コリン
Ｐ－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－シトルリン
Ｐ－シトルリン－シトルリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
シトルリン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－シトルリン、
シトルリン－シトルリン－アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン、シトルリン－シトルリン－アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン－ビタミンＢ５
から選択され得、Ｐは、本明細書に規定した各組織保護ポリペプチドを表し、「－」は共有結合を表す。
Ｐ－アルギニン
Ｐ－アルギニン－アルギニン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－アルギニン
アルギニン－Ｐ－アルギニン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン
Ｐ－コリン
Ｐ－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
Ｐ－シトルリン
Ｐ－シトルリン－シトルリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン
Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン
アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－コリン－ビタミンＢ５
シトルリン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－シトルリン、
シトルリン－シトルリン－アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン、シトルリン－シトルリン－アルギニン－アルギニン－Ｐ－アルギニン－アルギニン－シトルリン－シトルリン－ビタミンＢ５
から選択され得、Ｐは、本明細書に規定した各組織保護ポリペプチドを表し、「－」は共有結合を表す。
【0060】
特に、Ｐは、アミノ酸配列：
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１） （「ペプチド０」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
によって表されるポリペプチドの１つを意味する。
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１） （「ペプチド０」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
によって表されるポリペプチドの１つを意味する。
【0061】
すでに先に概説したように、特定のアミノ酸配列を含む、上記及び特許請求の範囲に規定した組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、上記及び特許請求の範囲に規定した誘発剤と結合し、本発明の複合体分子を形成する。
【0062】
本発明に従う好ましい複合体分子は、
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－Ｒ （配列番号２１）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２９）
Ｒ－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－Ｒ （配列番号２１）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２３）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２５）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２７）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２９）
Ｒ－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）であり、
式中、Ｒは、誘発／血管系弛緩剤であり、好ましくは（Ｌ－アルギニン）ｎ、（Ｌ－シトルリン）ｍ、コリン及びビタミンＢ５からなる群から選択され、ｎ、ｍは、互いに独立に、１、２及び３である。
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－Ｒ （配列番号２１）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２９）
Ｒ－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－Ｒ （配列番号２１）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２３）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２５）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ－Ｒ （配列番号２７）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ－Ｒ （配列番号２９）
Ｒ－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
Ｒ－ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
Ｒ－ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）であり、
式中、Ｒは、誘発／血管系弛緩剤であり、好ましくは（Ｌ－アルギニン）ｎ、（Ｌ－シトルリン）ｍ、コリン及びビタミンＢ５からなる群から選択され、ｎ、ｍは、互いに独立に、１、２及び３である。
【0063】
本発明の概要は、以下のようにまとめることができる：
・本明細書に規定した組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、表皮層を介して能動的に、被補助的に又は受動的に浸透する。
・皮膚の１つ以上の領域において制御された標的能力又は滞留選好性があり、皮膚の特定の細胞に対する制御された標的化が達成される。
・組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、著しく減少したタンパク質分解の比率を有し、皮膚によく許容される。
・組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、皮膚における標的にその機能を発揮することができる。
・皮膚のエイジング又はニキビ或いはＵＶ放射による皮膚刺激に対する美容効果が見られる。
・保護分子である本発明の組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤を用いると、癌発症の危険性が反対に変換される。
・現在の教示に反して組織修復及び組織再生を達成する複合体相互作用誘発成分が、生成され、多因果的な相互作用、及び相互作用する能力に基づいている。
・好ましくはセラミド及び／又はホスファチジルコリン、或いは類似のスフィンゴ脂質又はリン脂質に基づく本発明に従う脂質組成物は、標準的な美容用脂質組成物と比較して、ポリペプチド単体、及び上記全ての規定した誘発／血管系弛緩剤との組合せの皮膚の修復、皮膚の再生及び皮膚の若返りを有意に補助する。
・本明細書に規定した組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、表皮層を介して能動的に、被補助的に又は受動的に浸透する。
・皮膚の１つ以上の領域において制御された標的能力又は滞留選好性があり、皮膚の特定の細胞に対する制御された標的化が達成される。
・組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、著しく減少したタンパク質分解の比率を有し、皮膚によく許容される。
・組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤は、皮膚における標的にその機能を発揮することができる。
・皮膚のエイジング又はニキビ或いはＵＶ放射による皮膚刺激に対する美容効果が見られる。
・保護分子である本発明の組織保護ポリペプチド、複合体分子及び製剤を用いると、癌発症の危険性が反対に変換される。
・現在の教示に反して組織修復及び組織再生を達成する複合体相互作用誘発成分が、生成され、多因果的な相互作用、及び相互作用する能力に基づいている。
・好ましくはセラミド及び／又はホスファチジルコリン、或いは類似のスフィンゴ脂質又はリン脂質に基づく本発明に従う脂質組成物は、標準的な美容用脂質組成物と比較して、ポリペプチド単体、及び上記全ての規定した誘発／血管系弛緩剤との組合せの皮膚の修復、皮膚の再生及び皮膚の若返りを有意に補助する。
【0064】
本発明の新規に合成したポリペプチド（「ペプチド１～４」）は、配列番号２１で表される既知のポリペプチド（「ペプチド０」）と比較して、少なくとも幾つかの生理的及び物理的性質に関して増強された効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【0065】
【発明を実施するための形態】
【0066】
本発明の詳細な説明
本明細書で用いられる用語「ペプチド複合体」は、組織保護ペプチドと脂質化合物及び／又は誘発剤との間の何れかの種類の結合を意味する。一般に、結合は共有結合であり、好ましくはペプチドと誘発剤との間の結合である。しかしながら、脂質化合物もまた、共有結合を介して本発明に従うペプチドと結合し得る。本明細書で用いられる用語ペプチド複合体は、より強いイオン又はファンデルワールス相互作用に基づく２つの成分間の結合も含む。後者はミセル及びリポソームのような、単層又は二重層の脂質構造の（自己）生成を好む。この用語は、広い表現で、ファンデルワールス結合（イオン相互作用）によって互いに結合する、ペプチド及び他の機能的に異なる分子、例えば、脂質化合物及び／又は誘発剤によって形成される機能的に有効な構造を含む。一般に、ペプチド構造内の何れかの機能的に活性な基（例えば、－ＯＨ、－ＮＨ２）は、本分野でよく知られた方法に従って、脂質化合物又は誘発／血管系弛緩剤の機能的に活性な基との共有結合による結合に用いられ得る。好ましくは、ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端或いはその近隣にある各基が、結合に用いられる。
本明細書で用いられる用語「ペプチド複合体」は、組織保護ペプチドと脂質化合物及び／又は誘発剤との間の何れかの種類の結合を意味する。一般に、結合は共有結合であり、好ましくはペプチドと誘発剤との間の結合である。しかしながら、脂質化合物もまた、共有結合を介して本発明に従うペプチドと結合し得る。本明細書で用いられる用語ペプチド複合体は、より強いイオン又はファンデルワールス相互作用に基づく２つの成分間の結合も含む。後者はミセル及びリポソームのような、単層又は二重層の脂質構造の（自己）生成を好む。この用語は、広い表現で、ファンデルワールス結合（イオン相互作用）によって互いに結合する、ペプチド及び他の機能的に異なる分子、例えば、脂質化合物及び／又は誘発剤によって形成される機能的に有効な構造を含む。一般に、ペプチド構造内の何れかの機能的に活性な基（例えば、－ＯＨ、－ＮＨ２）は、本分野でよく知られた方法に従って、脂質化合物又は誘発／血管系弛緩剤の機能的に活性な基との共有結合による結合に用いられ得る。好ましくは、ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端或いはその近隣にある各基が、結合に用いられる。
【0067】
本明細書で用いられる用語「組織保護ペプチド」は、細胞の損傷、及び内的及び外的要因によって引き起こされる細胞の加齢に対する保護効果を標的組織に対して誘発するペプチドを意味する。保護効果は、組織の欠損が防止される時又は細胞の本来の無傷な状態が取り戻される時に現れる。
【0068】
用語「誘発剤」又は「誘発／血管系弛緩剤」は、血管系の弛緩を刺激し、及び／又は組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）のＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する薬剤を意味し、本発明に従うと、選択されたアミノ酸、好ましくはそのＬ型のもの、及び特定のビタミンを含む。
【0069】
本明細書で用いられる用語「ＥＰＯバリアント／アナログ／断片／ミメティック」は、天然のヒトエリスロポエチンと比較してより短い、及び／又は異なるアミノ酸配列を有するペプチドを意味し、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び共通β受容体（ｃβＲ）と結合するか又は相互作用し、これらの受容体は、ヘテロ受容体を形成する。このようなペプチドは、組織保護又は組織再生効果を誘発し、造血効果を全く又は有意に誘発しない。
【0070】
用語「造血活性／効果」は、赤血球、リンパ系球及び骨髄性細胞のような血液細胞成分の何れかの有意な増加を意味する。更に、造血活性は、単離ペプチド又はペプチドアナログが、血管作動性作用（例えば、血管収縮）、血小板の過活動化、凝固促進作用、並びに血小板又はエリスロポエチン依存性細胞の増殖又は生成の刺激から選択される活性を有するかどうかをいう。
【0071】
本明細書で用いられるホスファチジルコリン（ＰＣ）は、頭部基としてコリンを組み込んだリン脂質の一種である。より具体的には、それはコリン頭部基及び種々の脂肪酸を含むグリセロリン酸から構成される。一般に、一つは、飽和脂肪酸（例えば、パルミチン酸又はヘキサデカン酸、Ｈ３Ｃ－（ＣＨ２）１４－ＣＯＯＨ；又はヘプタデカン酸、Ｈ３Ｃ－（ＣＨ２）１５－ＣＯＯＨ）であり、他は不飽和脂肪酸（例えば、レシチン中におけるオレイン酸、又は９Ｚ－オクタデセン酸）である。ＰＣは、生体膜の主成分であり、卵黄又はダイズのような種々の容易に入手可能な材料源から簡単に得ることができる。ホスファチジルコリンは摂取サプリメントとして用いられてきたが、それは局所的皮膚用クリームの成分としても含まれ、滑らかな皮膚を生じさせ、皮膚の水分レベルを増加させ、皮膚及び毛髪を整え、皮膚の再生を補助し、コリン及びリノール酸の両方を供給することができる。
【0072】
本明細書で用いられるセラミドは、スフィンゴ脂質の一般的な分類に属し、皮膚、特に角質層の表皮の上層の主成分である。表皮におけるその位置及び機能に従って、多くの種類のセラミドが存在する。用語セラミドは、スフィンガニン、４－ヒドロキシ－スフィンガニン又はフィトスフィンゴシンのようなスフィンゴシンファミリーからなる単脂質を含み、それらはそのアミン官能基を介して脂肪酸又は脂肪酸誘導体と結合している。皮膚の角質細胞間結合物の脂質、特にセラミドは、ラメラ二重層又はラメラに配置され、バリア全体を維持する目的のため、またその保護、抗浸透又は抗刺激の役割等を維持するために角質層の結合に関わっている。
【0073】
本明細書で用いられるリポソームは、大部分の水相から水性の内部画分を隔離する脂質二重層からなる。本明細書で用いられるミセルは、脂肪酸コア及び極性表面、又は表面に脂肪酸を有する極性コア（逆ミセル）を有する閉じた脂質単層である。
【0074】
驚くべきことに、無傷の皮膚を介した制御された浸透及び皮膚中での持続性が、本発明のＥＰＯペプチドをホスファチジルコリン及びセラミドに結合させたときに見いだされた。これらは、本発明に従うエリスロポエチン又はＥＰＯペプチドにイオン（ファンデルワールス）相互作用及びミセル形成によって結合する場合に、皮膚中のＥＰＯアナログの脂質層持続性を向上させる脂質構造である。これらの組み合わせは、脂質構造及び皮膚の層の中への局所吸収を生じさせるが、より深い領域への吸収は許容しない。ホスファチジルコリン、レシチン及びセラミドの組み合わせられた存在は、エリスロポエチン及びそのペプチドアナログにこの親油性の物理化学的性質を付加し、それは、タンパク質エリスロポエチンの無傷の皮膚層への利用可能性の欠如のために、それ以外の場合では無傷の皮膚内で存在しないであろう無性の皮膚への作用様式の発生を可能にし、同時に、非特異的勾配に基づく分布を可能にするというよりはむしろその皮膚の領域を標的とする。
【0075】
本発明の組成物は、ラメラ構造を形成する脂質成分を含み、最大４０％～５０％以上の濃度でも毒性のないホスファチジルコリン、レシチン、セラミド及びトリグリセリドを含む。セラミド及び／又はホスファチジルコリンは、本発明に従う脂質組成物の好ましい成分（５～７０％）である。
【0076】
本発明のポリペプチド複合体は、皮膚の１つ以上の領域における制御された標的能力又は滞留選好性、並びに皮膚の特定の細胞に対する制御された標的化を提供する。また、これらの層内での持続及び細胞膜への結合も可能である。
【0077】
これは、通常１００～４００ユニットｋｇ／（体重）からｋｇ（体重）あたり５～１２ユニットまで、又は１ユニット／ｋｇ（体重）未満までも使われるＥＰＯ由来ペプチドの量を減らすことを許容し、約１００ｃｍ２の特定の皮膚の領域を標的とする。
【0078】
治療範囲は、体重のｋｇあたり０．１～０．５ユニットにまで低減するが、ｋｇ（体重）の４０ユニットまで安全に拡張することができる。従って、理想的な範囲は、適用の通常の形態の０．１％パーセント以下である。これは、ＥＰＯ及びそのアナログの薬剤安全性及び副作用の低減に有意に貢献している。
【0079】
本明細書で用いられる用語「ペプチド複合体／複合体分子」は、組織保護ペプチドと脂質化合物及び／又は誘発剤との間の何れかの種類の結合を意味する。一般に、結合は共有結合であり、好ましくはペプチドと誘発剤との間の結合である。しかしながら、脂質化合物もまた、共有結合を介して本発明に従うペプチドと結合し得る。本明細書で用いられる用語ペプチド複合体は、より強いイオン又はファンデルワールス相互作用に基づく２つの成分間の結合も含む。後者はミセル及びリポソームのような、単層又は二重層の脂質構造の（自己）生成を好む。この用語は、広い表現で、ファンデルワールス結合（イオン相互作用）によって互いに結合する、ペプチド及び他の機能的に異なる分子、例えば、脂質化合物及び／又は誘発剤によって形成される機能的に有効な構造を含む。一般に、ペプチド構造内の何れかの機能的に活性な基（例えば、－ＯＨ、－ＮＨ２）は、本分野でよく知られる方法に従って、脂質化合物又は誘発剤の機能的に活性な基との共有結合による結合に用いられ得る。好ましくは、ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端或いはその近隣にある各基が、結合に用いられる。
【0080】
本明細書で用いられる用語「組織保護ペプチド」は、細胞の損傷、及び内的及び外的要因によって引き起こされる細胞の加齢に対する保護効果を標的組織に対して誘発するペプチドを意味する。保護効果は、組織の欠損が防止される時又は細胞の本来の無傷な状態が取り戻される時に現れる。
【0081】
本明細書で用いられる用語「ＥＰＯバリアント／アナログ／断片／ミメティック」は、天然のヒトエリスロポエチンと比較してより短い、及び／又は異なるアミノ酸配列を有するペプチドを意味し、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び共通β受容体（ｃβＲ）と結合するか又は相互作用し、これらの受容体は、ヘテロ受容体を形成する。このようなペプチドは、組織保護又は組織再生効果を誘発し、造血効果を全く又は有意に誘発しない。
【0082】
また、組織保護及び再生分子として、ＥＰＯの組織特異的効果及びそれ故のそれの所望の組織再生活性を達成することは、本発明に従うと、標的領域に到達する能力が関連するだけでなく、ＥＰＯ及びそのアナログから化学的又は構造的に独立しているか、又は少なくとも異なるアジュバント又はコシグナルの単一又は複数の混合物である、いわゆる「バイスタンダー」が関連する。
【0083】
単一分子単独としてのＥＰＯの使用の、無傷の及び又は開放した（創傷の）皮膚への用途においてでさえ、失敗又は機能の制限をもたらしているのは、この唯一原因の欠如である。これらの制限を、異なる分子への結合状態（単一の個体又はその多量体）において、タンデムの、３倍の、４倍の又はこの比率の更なる倍数としてのエリスロポエチン及び／又はそのアナログの新しい処方を作り出すことによって克服することが本発明の目的である。これらの分子は、可逆的若しくは不可逆的に化学的に結合するか、又はミセル法若しくはカプセル化形態において用いられるかのどちらかであるか、或いはＥＰＯはキャリア分子、ナノ又はマイクロ構造に可逆的又は不可逆的に結合する。
【0084】
分解への抵抗性、無傷の皮膚及び特定の標的組織への制御可能な動的利用可能性を生じさせ、従来は不可能であった未知の作用又は活性を解放するだけでなく、一方で同時に特異性及び使用の安全性を増加させるという多くの利点がある。この方法論（使用方法）又は新規の複合化学成分は、皮膚だけでなく、専門性及び選択された戦略に依存してヒト又は動物の体内のより深層の異種の内的標的にも適用可能である。
【0085】
本発明の組織保護ペプチド複合体を含むエリスロポエチン構造と組み合わされるビタミンは、イオン結合を受け、カスケード活性を誘発するのに関連する。ＥＰＯ又はそのアナログの組織保護特性は、組織修復の直接的な標的化が不可能である場合、効果的になり得ない。特に加齢した皮膚又は解放された創傷でさえ、ＥＰＯ単独では活性を示すことはできない。
【0086】
従って、本発明に従うペプチド複合体のビタミンＡとの組み合わせは、神経の再生を補助し、ビタミンＢ１～６との組合せは栄養に関する再生を補助し、ビタミンＣとの組み合わせはニューロンの発芽及び創傷の閉塞を補助し、ビタミン１２との組み合わせは抗炎症活性を補助する。
【0087】
これらの全ての活性は、イエス又はノーの応答を誘発する。これは、これらの分子の組み合わせでの存在がトリガーをイエスに変え、要素の一つは単独ではそれ自身によってこの効果を達成できず、これは細胞標的を「ノー」応答にしたままにすることを意味する。
【0088】
従って、本発明に従うと、局所的な美容的適用において皮膚保護効果を向上させるために、上記及び特許請求の範囲で規定した組織保護ペプチドをビタミンＡ、Ｂ１～６、Ｂ１２及びＣのようなビタミンと組み合わせることが好ましい。
【0089】
好ましい用途は、つやのある皮膚の促進及び血管の弛緩による皮膚の修復の加速を含む。これは、各皮膚細胞における一酸化窒素の利用能を引き起こす種々の薬剤によって達成され得る。
【0090】
一酸化窒素は、Ｌ－アルギニン、酸素及びＮＡＤＰＨから、種々の一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）酵素によって内因的に生合成される。血管内皮は一酸化窒素を周囲の平滑筋を弛緩させるための信号に用い、故に血管拡張をもたらし、血流を増加させる。反対に、Ｌ－アルギニンは、代謝されて一酸化窒素を放出する。一酸化窒素（ＮＯ）は、グアニル酸シクラーゼを刺激し続けてｃＧＭＰを産生する。ｃＧＭＰは、血管壁中の筋細胞の弛緩を誘発する。これは、ペプチド構造を維持することにより標的とされるＣＤ９０＋細胞の位置でもある。
【0091】
構造に、皮膚を浸透し、皮膚の血管領域に到達することを許容するのはホスファチジルコリン及びセラミド複合体である。
【0092】
この目的のために、Ｌ－アルギニンは本発明の組織特異的ペプチドに結合し得、並びに／或いは本特許出願に開示したペプチド複合体を得るためにホスファチジルコリン及び／又はセラミドとミセル又はリポソーム構造において混合され得る。前記ペプチド複合体に加えて、本発明の美容用製剤に遊離Ｌ－アルギニン及び他のアミノ酸を加えることも好ましい。
【0093】
驚くべきことに、前記脂質化合物、好ましくはセラミド及びホスファチジルコリン（レシチン）と混合されるアルギニン、並びにＬ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－プロリン、Ｌ－グルタミンのような他のアミノ酸は、特定の皮膚細胞の微小環境、ここではＣＤ９０陽性皮膚細胞と近接して影響を及ぼし、それらを本発明に従う組織保護ポリペプチドのような標的分子に対して敏感にすることが見いだされた。興味深いことに、本発明に従う脂質製剤は、ＣＤ９０細胞標的ペプチド無しで単独で既に、皮膚美容用に用いられる通常の脂質組成に対して組織保護性である（通常の脂質組成物の使用に依存するのと同じ状況下で、通常の脂質組成物に対して５～１５％の改善）。しかしながら、本発明に従う組織保護ポリペプチドとの組み合わせにおいては、この効果は、前記組織保護ペプチド無しの本発明の脂質組成物に対して１０％まで、また美容的処置において通常提供される、各組織保護ポリペプチド無しの通常の脂質組成物と比較して２５％まで更に向上する。これらの製剤混合物の効果は、本発明に従う複合体分子で達成され得るものに匹敵し、ここで、組織保護ポリペプチドは、共有結合によりＬ－アルギニンのような各アミノ酸分子等の誘発剤と結合している。従って、本発明に従う複合体分子は、それらが通常の美容用製品において用いられる脂質組成物と一緒に製剤化された場合、複合体分子の二つの各成分の混合物に対して利点のみを提供し、それに対して、本発明によって開示される脂質化合物／組成物が用いられた場合、複合体分子の使用はしばしば過剰であり、複合体分子の成分の混合物によって置き換えることもできる。
【0094】
この領域においては、血管は、より局所的に利用可能なｃＧＭＰを提供することにより、局所的に存在するホスホジエステラーゼに対して拮抗して作用する。この好ましい微小環境は、皮膚により栄養を与えるために誘導される。しかしながら、本発明の２重の効果は、改善された血管系栄養素及び酸素供給並びに廃棄物除去のために、補完的微小環境因子が局所領域により良好に到達することができることによる、局所的ＣＤ９０＋組織修復活性の劇的な増加である。
【0095】
既に述べたように、本発明の各ペプチド及びペプチド複合体のようなＥＰＯ及びＥＰＯアナログの皮膚組織標的化における効果は、ホスファチジルコリン又はセラミドのような脂質構造に結合されるか内包される場合、有意に向上する。グルコース等のような糖分子が本発明に従う製剤に提供される場合、同様の効果が見られ得る。
【0096】
これにより、分子は、分子上にバックパックのように配置され、そして皮膚を横切るか（糖）又は入り込んで体内に優先的に輸送される。これは、より少量での使用を許容し、脳又は筋のようなエネルギー消費組織並びに炎症部を標的とする。糖成分は、脳又は筋のような高代謝活性を有する組織へＥＰＯ及びそのアナログを輸送する。
【0097】
Ｌ－アルギニンは、最も代謝的に多用途なアミノ酸の一つである。その一酸化窒素の合成における役割に加え、Ｌ－アルギニンは、ポリアミン、プロリン、グルタミン酸、クレアチン、アグマチン及び尿素の合成のためにプリカーサーとして働く。幾つかのヒト及び実験動物での研究は、外因性のｌ－アルギニンの吸収は、通常の食事による消費よりも多い量で摂取されたときに多重の有利な薬理効果を有することを示唆している。このような効果は、血管又は心疾患のリスクの低減、勃起不全の低減、免疫反応の改善及び胃酸過多の抑制を含む。しかしながら、ｌ－アルギニンへの近年の関心は、主にその重要なシグナル分子である一酸化窒素（ＮＯ）との密接な関係性に集中している。ｌ－アルギニンは、ＮＯの生合成における唯一の基質であり、神経伝達、血管弛緩、細胞毒性及び免疫を含むヒトの体内での多様な生理学的プロセスにおいて不可欠な役割を担っている。アルギニン、好ましくはＬ－アルギニンは、本発明に従うとペプチドの前側及び末尾に、また１個から最大、例えば１０個まで又はそれ以上の分子のアルギニンの数、好ましくは１～３個として加えられる。
【0098】
クロリンは、アセチルコリンの合成のために用いられる。ＮＯの他に、この分子は、平滑筋細胞の弛緩に関与する。従って、血管壁中のＣＤ９０＋細胞への標的化が、アルギニンの組み合わされた効果を向上させる。ビタミンＢ５は、アセチルコリンを神経伝達物質とするためのコリンの代謝に必要である。従って、コリンの効果は、ｔをビタミンＢ５と組み合わせることにより向上し得る。ヨヒンビン（Ｃ２１Ｈ２６Ｎ２Ｏ３）は、平滑血管細胞におけるアルファ２アドレナリン受容体を阻害し、従って、血管系の弛緩を引き起こす天然化合物である。ヨヒンビンは、ホスファチジルコリン、セラミド又は本発明に従う構造の脂質部分に添加され得る。
【0099】
本明細書に開示される本発明に従うポリペプチド複合体分子及び単離ポリペプチドは、好ましくはｃｍ２あたり０．００１μｇから９.９９９μｇまでのＥＰＯ由来組織保護ペプチドの範囲で、より好ましくはｃｍ２あたり２０ユニットから５０ユニットまでの範囲で、しかしながら理想的にはｃｍ２あたり１００ユニット以下で皮膚に適用される局所製剤で用いられ得る。より高い濃度では、関連する副作用として微小血管新生が誘発される。
【0100】
本発明に従うポリペプチドの合成：
本発明の組織保護ポリペプチドは、化学合成を含むもの、ポリペプチドを製造する細胞からの精製を含むものを包含する、通常の技術を用いて製造され得る。ポリペプチドの化学合成のための技術は、本分野においてよく知られている。（例えば、Vincent, Peptide and Protein Drug Delivery, New York, N.Y., Decker, 1990.を参照のこと）。細胞からのポリペプチドの精製のための技術は、下記に提供される例に記載される。追加の精製技術の例は、本分野においてよく知られている。（例えば、Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-2002.を参照のこと）。細胞からポリペプチドを得ることは、ポリペプチドを産生する組換え核酸技術を用いて促進される。ポリペプチドを産生するための組換え核酸技術は、ポリペプチドをコードする組換え遺伝子を細胞内に導入するか、又は産生すること、及びポリペプチドを発現させることを含む。組換え遺伝子は、ポリペプチド発現の調節要素と共にポリペプチドをコードする核酸を含む。組換え遺伝子は、細胞ゲノム中に存在し得るか、又は発現ベクターの一部であり得る。細胞内での組換え遺伝子の発現は、発現ベクターの使用を通して促進される。好ましくは、組換え遺伝子に加えて発現ベクターはまた、宿主細胞における自律複製のための複製起点、選択可能なマーカー、限られた数の有用な制限酵素部位、及び高コピー数ための能力を含む。
本発明の組織保護ポリペプチドは、化学合成を含むもの、ポリペプチドを製造する細胞からの精製を含むものを包含する、通常の技術を用いて製造され得る。ポリペプチドの化学合成のための技術は、本分野においてよく知られている。（例えば、Vincent, Peptide and Protein Drug Delivery, New York, N.Y., Decker, 1990.を参照のこと）。細胞からのポリペプチドの精製のための技術は、下記に提供される例に記載される。追加の精製技術の例は、本分野においてよく知られている。（例えば、Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-2002.を参照のこと）。細胞からポリペプチドを得ることは、ポリペプチドを産生する組換え核酸技術を用いて促進される。ポリペプチドを産生するための組換え核酸技術は、ポリペプチドをコードする組換え遺伝子を細胞内に導入するか、又は産生すること、及びポリペプチドを発現させることを含む。組換え遺伝子は、ポリペプチド発現の調節要素と共にポリペプチドをコードする核酸を含む。組換え遺伝子は、細胞ゲノム中に存在し得るか、又は発現ベクターの一部であり得る。細胞内での組換え遺伝子の発現は、発現ベクターの使用を通して促進される。好ましくは、組換え遺伝子に加えて発現ベクターはまた、宿主細胞における自律複製のための複製起点、選択可能なマーカー、限られた数の有用な制限酵素部位、及び高コピー数ための能力を含む。
【0101】
幾つかの本発明の組織保護ポリペプチドの耐性試験
パッチ試験を３０人の被験者において暦上の３５週間行った。次いで、３０人の処置した被験者から２２人は、暦上の３９週間、同じ領域でこのパッチ試験を繰り返した。
パッチ試験を３０人の被験者において暦上の３５週間行った。次いで、３０人の処置した被験者から２２人は、暦上の３９週間、同じ領域でこのパッチ試験を繰り返した。
【0102】
ペプチド０～４を含む本発明に従う同じ脂質組成物を繰り返し処置した２２人の被験者に加え、追加の被験者（新規）がこの試験に加わった。本調査の目的は、最初の処置の２、３及び４週間後の試験物質対する二次的皮膚刺激アレルギー感作を検出することであった。試験物質は、皮膚に適用されるのと同じペプチドの濃度で適用した。パッチは、試験物質の被験者の皮膚への接触を局所的領域に限定し、閉塞性のある条件であるために曝露が過大になる。皮膚を２４、４８及び７２時間で確認した。
【0103】
結論：ＩＣＤＲＧ（国際接触皮膚炎研究班、International Contact Dermatitis Research Group）の国際的に認められたガイドラインに従うと、２４ｈ、４８ｈ及び７２時間でのパッチ試験の実施の後、３０人の被験者の何れにおいても試験領域において何れの皮膚疾患の証拠も検出されなかった。二次刺激を受けた２２人の被験者でも同様である。製品の使用は、二次的な（繰り返される）刺激の影響によって、何れの望まれない皮膚反応も引き起こさないであろう。
【0104】
本発明に従う美容試験に用いられたポリペプチド：
合成ペプチド：
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１） （「ペプチド０」）
ＥＰＯ－断片：
ＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶ （配列番号３） （断片１）
ＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣ （配列番号５） （断片２）
ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥ （配列番号７） （断片３）
及び全長ＥＰＯ。
合成ペプチド：
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３） （「ペプチド２」）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５） （「ペプチド１」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７） （「ペプチド４」）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９） （「ペプチド３」）
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１） （「ペプチド０」）
ＥＰＯ－断片：
ＱＱＡＶＥＶＷＱＧＬＡＬＬＳＥＡＶＬＲＧＱＡＬＬＶ （配列番号３） （断片１）
ＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥＮＩＴＴＧＣ （配列番号５） （断片２）
ＡＰＰＲＬＩＣＤＳＲＶＬＥＲＹＬＬＥＡＫＥＡＥ （配列番号７） （断片３）
及び全長ＥＰＯ。
【0105】
美容用適用試験（一般）：
盲検において、２０人の使用者の４５％のケースでしわの減少が改善し（５６％）、領域内においてサーモグラフィック熱測定によって、血流が増加したことが証明され（３５％増加）、従って血管系の若返りのための持続的な改善があった。用途の分野は、つやを増加させるスキンバーム、唇のつやを増加させる皮膚用の美容用製剤である。男性の健康の分野における勃起不全のための他の用途においては、クリームを陰茎の皮膚に局所的に適用し、血管系の修復及び血管系の流入を標的とする。
盲検において、２０人の使用者の４５％のケースでしわの減少が改善し（５６％）、領域内においてサーモグラフィック熱測定によって、血流が増加したことが証明され（３５％増加）、従って血管系の若返りのための持続的な改善があった。用途の分野は、つやを増加させるスキンバーム、唇のつやを増加させる皮膚用の美容用製剤である。男性の健康の分野における勃起不全のための他の用途においては、クリームを陰茎の皮膚に局所的に適用し、血管系の修復及び血管系の流入を標的とする。
【0106】
そのような効果を強化するために、有意な量のアルギニン（１０～１００ｍｇ／ｇ（製剤））を添加した。この組み合わせたアプローチの利点は、ＣＤ９０＋介在修復及び皮膚の審美性、若返りのためだけでなく、高い濃度では勃起不全における血管系の欠損の修復のための血管系供給効果である。
【0107】
本発明に従うと、効果を向上するために、ペプチド複合体を、皮膚における天然の一酸化窒素生成及び利用効率を増加させる天然由来化合物と組み合わせることもまた可能である。本発明に従う美容用製剤は、好ましくは、ビタミンＣ、Ｄ、Ｅ、Ａ及びＢ１２のようなビタミン、及び、例えば、ホウレンソウ、ビーツ、セロリ、ニンニク、ルッコラレタス、アイスバーグレタス、ニンジン、パセリ、キャベツ、ラディッシュ類、コラードグリーン、グレープシード抽出物等の天然の食糧材料源、テストステロンからエストロゲンへの変換を妨げる天然物質、プロシアニジンのグループに由来する化合物で富化させられ得る。従って、窒素の内皮排出量を２００％増加させることができ、天然のつや、皮膚の若返り及び修復が有意に（コントロールを４５％上回る）向上した。
【0108】
美容用製剤には、更なるアジュバント又は添加物が、本発明に従う組織保護ペプチド及びペプチド複合体の記載した効果を広幅化するか又は向上させるために添加され得る。そのような薬剤は、例えば：
・ピクノジェノール又はＱ１０（補酵素）
・チョウセンニンジン抽出物
・ケルセチン抽出物、それはフラボノイド、レスベラトロール、プロシアニジン、タンニン、茶カテキン、ゲニステインであり、皮膚の一酸化窒素レベルを増加させる。ピペリンは、レスベラトール（クロコショウ抽出物）を増強する。皮膚食品ケルセチン抽出物は、例えば、天然源としてのタマネギ、ニンニク、アサツキ、リンゴ、ブドウ及び赤ワイン、ナッツ並びにホウレンソウから得られる。サーモン、牧草で育てられた赤身肉、動物の臓器、卵黄は、合成のための代わりの原料である。
・ナイアシンは一酸化窒素シンターゼを増加させ、従って基本的なＮＯレベルを増加させる。
・カイエンペッパー（又は他の辛いチリ）からのアルカロイド抽出物。
・一酸化窒素を増やすための酸化防止剤が豊富なカフェインフリーのコーヒー抽出物。
・生のカカオは事実、他の多くのＮＯを上昇させる酸化防止剤と一緒に、ピクノジェノール及びグレープシード抽出物がする（プロトシアニジン）のと同じ一酸化窒素を上昇させる活性化合物を含む。
・イカリインは、ハーブ（イカリソウ、ホーニーゴートウィード）のフラボノイドである。ハーブは局所的に添加され、本発明に従い皮膚に直接影響を与えるテストステロン増強活性を可能にする。イカイリンは一酸化窒素生成を補助し、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ－５）の穏やかな阻害剤である。
・オメガ－３’及びオメガ－６’脂肪酸は、抗炎症作用を補助する位置に添加されると、血流及び一酸化窒素レベルを増加させる。
・ピクノジェノール又はＱ１０（補酵素）
・チョウセンニンジン抽出物
・ケルセチン抽出物、それはフラボノイド、レスベラトロール、プロシアニジン、タンニン、茶カテキン、ゲニステインであり、皮膚の一酸化窒素レベルを増加させる。ピペリンは、レスベラトール（クロコショウ抽出物）を増強する。皮膚食品ケルセチン抽出物は、例えば、天然源としてのタマネギ、ニンニク、アサツキ、リンゴ、ブドウ及び赤ワイン、ナッツ並びにホウレンソウから得られる。サーモン、牧草で育てられた赤身肉、動物の臓器、卵黄は、合成のための代わりの原料である。
・ナイアシンは一酸化窒素シンターゼを増加させ、従って基本的なＮＯレベルを増加させる。
・カイエンペッパー（又は他の辛いチリ）からのアルカロイド抽出物。
・一酸化窒素を増やすための酸化防止剤が豊富なカフェインフリーのコーヒー抽出物。
・生のカカオは事実、他の多くのＮＯを上昇させる酸化防止剤と一緒に、ピクノジェノール及びグレープシード抽出物がする（プロトシアニジン）のと同じ一酸化窒素を上昇させる活性化合物を含む。
・イカリインは、ハーブ（イカリソウ、ホーニーゴートウィード）のフラボノイドである。ハーブは局所的に添加され、本発明に従い皮膚に直接影響を与えるテストステロン増強活性を可能にする。イカイリンは一酸化窒素生成を補助し、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ－５）の穏やかな阻害剤である。
・オメガ－３’及びオメガ－６’脂肪酸は、抗炎症作用を補助する位置に添加されると、血流及び一酸化窒素レベルを増加させる。
【0109】
ペプチド送達製剤
本発明の製剤は、何れかのクリーム又はローションと組み合わせられる。この目的のために、従来のクリーム又はローション（最終９９％ 体積／体積）は、本発明の組織保護ポリペプチド、規定した１種以上の誘発／弛緩剤、及び本明細書に記載のスフィンゴ脂質又はリン脂質に基づく脂質化合物又は構造を含む組成物（０．５～３％、例えば、１％ｗ／ｗ）を含む組成物（「トリガーファクター複合体」と称する）と混合される。最終混合物における小さな画分であるため、トリガーファクター複合体は、クリーム又はローションの全体的な物理的性質、例えば、エマルジョン安定性又は保湿特性を変えない。
本発明の製剤は、何れかのクリーム又はローションと組み合わせられる。この目的のために、従来のクリーム又はローション（最終９９％ 体積／体積）は、本発明の組織保護ポリペプチド、規定した１種以上の誘発／弛緩剤、及び本明細書に記載のスフィンゴ脂質又はリン脂質に基づく脂質化合物又は構造を含む組成物（０．５～３％、例えば、１％ｗ／ｗ）を含む組成物（「トリガーファクター複合体」と称する）と混合される。最終混合物における小さな画分であるため、トリガーファクター複合体は、クリーム又はローションの全体的な物理的性質、例えば、エマルジョン安定性又は保湿特性を変えない。
【0110】
トリガーファクター複合体は、以下の成分を濃度減少順で含む：水、エタノール、グリセロール、ビタミンＥ酢酸エステル、水素化レシチン、コレステロール、Ｌ－アルギニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｌ－アラニン－グルタミン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、Ｌ－プロリン、Ｌ－タウリン、セラミドＮＧ、セラミドＮＰ、オレイン酸、パルミチン酸、アスコルビン酸ナトリウム、フェノキシエタノール、からし油、ＥＤＴＡ、オリゴペプチド。
【0111】
例えば、トリガー複合体は、（表１）に示す成分からなる。
【0112】
【表1】
【0113】
本発明は、ローション（低い脂質含量）に基づくペプチド送達製剤及びクリーム（高い脂質含量）に基づく製剤を含む。クリームは皮膚の水分を保つのを補助するため、典型的には乾燥した皮膚に最適である。ローションは、脂っこさが少なく、皮膚中により容易に吸収され、通常の皮膚に最適である。しかしながら、本発明で提供される組織保護及び誘発／血管系弛緩剤との組み合わせにおいて、ローション及びクリームの両方が全ての皮膚の最適な改善のために最適化されている。その結果、組織保護ペプチド送達製剤は、クリームにもローションにも限定されるものではないが、皮膚のタイプに従って選択され得る。
【0114】
ＮＤＳクリーム：ＮＤＳクリームは、クリームベース（９９％ 体積／体積）及びトリガーファクター複合体（１％ 体積／体積）から構成される。
【0115】
クリームベース：クリームベースは、水、ヒマワリ種油、ペンチレングリコール、スクアレン、オクチルドデカノール、アルガニアスピノサ核油、エチルヘキシルステアレート、ペルセアグラチシマ（アボカド）油、トリベヘニン、ポリリシノール酸ポリグリセロール－３、ソルビタンオレエート、シアバター、ソルビトール、オエノテラビエンニス（イブニングプリムローズ）油、及びトコフェリルアセテートを含む。
【0116】
ｉＡＲＰローション：ｉＡＲＰローションは、ローションベース（９９％ 体積／体積）及びトリガーファクター複合体（１％ 体積／体積）から構成される。
【0117】
ローションベース：ローションベースは、水、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ペンチレングリコール、プロピレングリコール、水素化ホスファチジルコリン及びグリセリンを含む。
【0118】
セラソーム９０４１：セラソーム９０４１はリポイドＧｍｂＨから購入し、下記の表（表２）に従う成分を含む。
【0119】
【表2】
【0120】
ＰＥＰＨＡ（登録商標）ＡＧＥ：Ｐｅｐｈａ（登録商標）ＡＧＥは、Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｒｕｂｅｓｃｅｎｓ（淡水性緑藻）抽出物であり、ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツＧｍｂＨから購入した。この抽出物は、コラーゲンＩＩＩの増強させた生成を謳っており、日焼けによる皮膚損傷を軽減する。この抽出物は、アミノ酸、ビタミンＢ３、藻類の糖及び亜鉛を含む。
【0121】
有効性試験
本発明の製剤のヒトの皮膚の環境における有効性を評価するために、赤斑回復アッセイ及び美容皮膚改善アッセイを行った。
本発明の製剤のヒトの皮膚の環境における有効性を評価するために、赤斑回復アッセイ及び美容皮膚改善アッセイを行った。
【0122】
美容皮膚改善アッセイ：
このアッセイにおいて、本発明の製剤の適用での美容的な顔面の皮膚の外観をモニターした。この目的のために、市販の最先端の顔面皮膚イメージング及びデータ分析プラットフォームである、キャンフィールドバイオビジア（登録商標）を用いた（https://www.canfieldsci.com/imaging-systems/visia-complexion-analysis/を参照のこと）。このプラットフォームは、ｉ）高度に標準化され、ｉｉ）高度に再現可能な、ｉｉｉ）定量的な、ｉｖ）非侵襲的な、及びｖｉ）被験者又はテスターの偏りのない皮膚品質分析の可能性を提供する。それは異なる角度から顔のいくつかの写真を記録し、吸収／反射スペクトルを記録する（図：キャンフィールドビジア（登録商標）顔面皮膚分析プラットフォームを参照のこと）。これらのデータを用いて、プラットフォームは「斑点」、「しわ」、「毛穴」、「滑らかさ」、「ＵＶ斑点」、及び「褐色斑点」（図：皮膚パラメータ１～３を参照のこと）を含む皮膚の質の幾つかのパラメータを定量する。備え付けのソフトウェアが、皮膚の特徴の基準の膨大なデータベースと比較することによって、全てのパラメータを標準化し、０％から１００％までの範囲の値を返し、個人間の被験者の比較を可能にする。
このアッセイにおいて、本発明の製剤の適用での美容的な顔面の皮膚の外観をモニターした。この目的のために、市販の最先端の顔面皮膚イメージング及びデータ分析プラットフォームである、キャンフィールドバイオビジア（登録商標）を用いた（https://www.canfieldsci.com/imaging-systems/visia-complexion-analysis/を参照のこと）。このプラットフォームは、ｉ）高度に標準化され、ｉｉ）高度に再現可能な、ｉｉｉ）定量的な、ｉｖ）非侵襲的な、及びｖｉ）被験者又はテスターの偏りのない皮膚品質分析の可能性を提供する。それは異なる角度から顔のいくつかの写真を記録し、吸収／反射スペクトルを記録する（図：キャンフィールドビジア（登録商標）顔面皮膚分析プラットフォームを参照のこと）。これらのデータを用いて、プラットフォームは「斑点」、「しわ」、「毛穴」、「滑らかさ」、「ＵＶ斑点」、及び「褐色斑点」（図：皮膚パラメータ１～３を参照のこと）を含む皮膚の質の幾つかのパラメータを定量する。備え付けのソフトウェアが、皮膚の特徴の基準の膨大なデータベースと比較することによって、全てのパラメータを標準化し、０％から１００％までの範囲の値を返し、個人間の被験者の比較を可能にする。
【0123】
健康的な対象は、本発明の配合物又は対照を含む化粧品クリームを盲検的に受け取り、即ち、対象は受け取った化粧品クリームが何であるかを知らなかった。被験者は、一日一回、夕方にクリームを適用するように、そしてどれくらい適用するかについて指示された。被験者の皮膚の質を、適用開始前及び１ヶ月後（３１±３日）に評価した。対照として、季節的及び生活様式の変化に伴う皮膚の質の変化を考慮するために、手の外面の質も同様にモニターした。化粧的処置及び内部対照のために顔の左側及び右側を使用するという仮定の選択肢は、主要な交絡因子としての被験者の追従性を排除するために使用されなかった。例えば、追従しない対象は、顔の半分の両方にクリームを単に適用すると決定すること、適用する半分及び対照の半分を誤って交換すること、又は他の化粧品を対照側に適用することを決定することができる。適用で誘発される、適用側ではあって対照側ではない皮膚品質の顕著な改善は、奇妙な全体的な顔の外観として現れ得、それによって対象がそのようなアッセイの指示に従わないことに対する強い動機付けを示す。それにもかかわらず、外面の手の表面の皮膚の質はどの被験者においても統計的に有意には変化せず、それによってアッセイ期間が全体的な皮膚の質の何れもの生活様式又は季節的な変化と相関しなかったことを示す。
【0124】
対照的に、本発明の製剤の適用は、対照と比較して統計的に有意に皮膚の質を改善した。データは、各被験者及びパラメータについて対（適用前、１ヶ月後）になっているため、差（１ヶ月後のパラメータ値－適用前のパラメータ値）は、被験者内正規化を可能にし、優れた被験者間比較性を可能にする。ビタミンＢ５のプロビタミンであるデクスパンテノールは、化粧用スキンケアクリームと医療用スキンケア処置の両方に一般的に使用され、皮膚の組織保護効果も発揮する。従って、それをコントロール参照として選択した。しかしながら、本発明の高度なペプチド送達製剤は、斑点、しわ及び滑らかさのような測定された皮膚パラメータの改善において良好に作用した（図を参照のこと）。更に、本発明の組織保護ペプチド（ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ、ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ、ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ又はＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ）を含む製剤は、前述のＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳペプチドを含む製剤よりも更に良好に作用した。例えば、４つの新規の本発明の組織保護ペプチドの何れかを含む製剤は、ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳペプチドを含む製剤よりも、斑点を統計的に有意に大幅に減少させた。
【0125】
図１は、試験されたポリペプチド（ペプチド０、１、２、３及び４）の効果を示す。
【0126】
斑点及びしわのパラメータは、製剤適用の１ヶ月後に変化した。
【0127】
斑点及びしわの減少は、美容的利点である。バーは平均値変化及び平均値変化の標準偏差を表す。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７において、ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡを使用して行った。有意水準は、０．０５（＊）及び０．０１（＊＊）である。デクススパンテノール（最終５％ 体積／体積）及びペプチドは、クリームによって送達した。
【0128】
図２：試験ポリペプチド（ペプチド０、１、２、３及び４）の有効性を示す。
【0129】
ＵＶ斑点、褐色斑点、毛穴及び滑らかさのパラメータは、製剤適用の１ヶ月後に変化した。
【0130】
ＵＶ斑点、褐色斑点又は毛穴の減少及び滑らかさの増加は、美容的利点である。バーは平均変化及び平均変化の標準偏差を表す。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７でｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡを用いて行った。有意水準は、０．０５（＊）、０．０１（＊＊）であった。デクススパンテノール（最終５％ 体積／体積）及びペプチドをクリームによって送達した。
【0131】
紅斑の研究：
何れかの製剤によって発揮される組織保護の有効性を測定する他の手段は、一般的な日焼けのようなＵＶＢ光誘発紅斑からの皮膚回復の速度である。紅斑は、皮膚の修復過程に関連している局所的高血圧（表在性毛細血管における血流の促進）に起因する皮膚の発赤の増強を伴う皮膚刺激である。修復過程が速いほど、高血圧はより速く停止され、従って皮膚の発赤はより速く正常レベルまで低下する。従って、発赤は皮膚の損傷状態の代用として測定することができる。
何れかの製剤によって発揮される組織保護の有効性を測定する他の手段は、一般的な日焼けのようなＵＶＢ光誘発紅斑からの皮膚回復の速度である。紅斑は、皮膚の修復過程に関連している局所的高血圧（表在性毛細血管における血流の促進）に起因する皮膚の発赤の増強を伴う皮膚刺激である。修復過程が速いほど、高血圧はより速く停止され、従って皮膚の発赤はより速く正常レベルまで低下する。従って、発赤は皮膚の損傷状態の代用として測定することができる。
【0132】
このアッセイにおいて、健康的な対象は、左腕の約１×１ｃｍ２の皮膚領域に２倍の最小紅斑量（ＭＥＤ）を受けた。事前に、他の皮膚領域をＷａｌｄｍａｎｎＵＶ８０２Ｌ装置のＵＶ６ランプ（２８０～３６０ｎｍ）によって放出される強度の増加するＵＶ光にさらすことによって、各被験者について個別にＭＥＤを決定した。
【0133】
２倍のＭＥＤへの曝露直後に、各１×１ｃｍ２の領域を２０μｌの製剤で処置するか、又は未処置のままにした。これらのアッセイで使用された製剤は、ローションによって送達されるデクスパンテノール（５％質量／質量）又は組織保護ペプチド（ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ、ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ、ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ、ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ、又はＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ）であった。ビタミンＢ５のプロビタミンであるデクスパンテノールは、化粧用スキンケアクリームと医療用スキンケア治療の両方で一般的に使用されており、皮膚の組織保護効果も発揮する。従って、それを対照標準処置として選択した。
【0134】
２倍のＭＥＤ曝露前及び６時間後に、コニカミノルタ社で製造された「クロマメーターＣＲ－４００」を用いて曝露領域の皮膚の発赤を分光測定した。曝露の６時間後のすべての対象におけるあらゆる領域の発赤を、曝露前の同じ領域の発赤に対して、測定された発赤値の除算によって正規化した。
【0135】
試験した全てのクリームは、未処置の皮膚と比較して、２倍のＭＥＤ誘発皮膚発赤（紅斑）を制限した。組織保護ペプチドＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳと組み合わせた本発明のペプチド送達製剤は、デクスパンテノールよりも効率的に紅斑を制限した。更に、本発明の組織保護ペプチド（ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ、ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ、ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ又はＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ）を含む製剤は、前述のＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳペプチドを含む製剤よりも更に良好に機能した（図を参照のこと）。従って、新規のペプチドを含むこれらの製剤で処置した皮膚領域は、後で、より低い正規化皮膚発赤値を示した。
【0136】
図３は、６時間以内の曝露前後のＵＶ光誘発紅斑からの皮膚回復の画像を示す。
【0137】
図４は、赤色光吸収として測定される炎症の観点からの６時間以内のＵＶ光誘発紅斑からの回復を示す。
【0138】
赤色光吸収値は、ＵＶ光曝露前の同じ皮膚面積の値に対して、除算によって正規化した。１の正規化された赤色光吸収値は、ＵＶ光曝露前の皮膚状態を表す。正規化された赤色光吸収値の１に向かう減少は、皮膚保護及び回復の増強を表す。バーは平均変化及び平均変化の標準偏差を表す。統計分析は、ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡを用いてＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７で行った。有意水準は、０．０５（＊）及び０．０１（＊＊）である。デクススパンテノール（最終５％ 体積／体積）及びペプチドは、ｉＡＲＰローションによって送達した。
【0139】
ニキビ試験１
試験者は顔及び首に重症なニキビがある２５歳の女性であった。彼女を本発明に従うポリペプチドを含まない、対照脂質（デクスパンテノール／パンテノール）に基づく標準的な化粧品製剤で１週間処置した。
試験者は顔及び首に重症なニキビがある２５歳の女性であった。彼女を本発明に従うポリペプチドを含まない、対照脂質（デクスパンテノール／パンテノール）に基づく標準的な化粧品製剤で１週間処置した。
【0140】
１週間後にニキビはわずかに減少した。
【0141】
次に、本発明に従う化粧品製剤を適用したが、これも本発明に従うポリペプチドを含まない。製剤は、デクスパンタノールの代わりにセラミド及びレシチン、並びにＬ－アルギニン等のアミノ酸を含んでいた。１週間後、当技術分野のパンテノール製剤に対して目に見える改善が観察された（図５、下の画像）。
【0142】
次に試験者を「ペプチド０」を含む本発明の製剤で処置した。３週目で、ニキビのわずかではあるが目に見える減少が観察された（図５、中央の画像）。その後、さらなる処置の間に更なる改善は検出されなかった。
【0143】
３週間後、試験者を同様の製剤で処置したが、これは参照ポリペプチド（「ペプチド０」）の代わりに「ペプチド４」を含んでいた。１週間後、有意な改善が見られた。８週間後、ニキビから完全に回復し、皮膚は完全に無傷な状態となった（図５、上の画像）。
【0144】
全体的な皮膚保護作用における相対的な美容的関連性
標準的な美容用脂質組成物＜アルギニンを含まない本発明の脂質／アミノ酸組成物＜アルギニンを含む本発明の脂質／アミノ酸組成物。
ＥＰＯ＜ＥＰＯ断片１～３＜ペプチド０、１＜ペプチド３＜ペプチド２＜ペプチド４。
標準的な美容用脂質組成物＜アルギニンを含まない本発明の脂質／アミノ酸組成物＜アルギニンを含む本発明の脂質／アミノ酸組成物。
ＥＰＯ＜ＥＰＯ断片１～３＜ペプチド０、１＜ペプチド３＜ペプチド２＜ペプチド４。
【0145】
ニキビ試験２
ニキビを患っている５人をそれぞれ含む４つの試験群（「ペプチド、０、２、３及び４」に対応する）（合計２０人の被験者）を本発明の製剤（トリガーファクター複合体を含む「ｉＡＲＰ－ローション」）で１日２回、１週間処置した。試験者の関連のある皮膚領域には望ましくない病変又は病理学的病変でさえ観察されなかった。従って、すべてのローションサンプル製品（ペプチド０、２、３又は４を含む）の実用的な適用は、皮膚刺激又は感作効果によって引き起こされる望ましくない何れの皮膚反応も引き起こさなかったと結論付けることができる。しかしながら、同じ製剤を用いた様々なペプチドは、様々な効果をもたらす（表３及び４）。それらは、物理化学的影響（ペプチド４は製剤及び粘度を安定化させる）、又はペプチド０（何れの効果も示さない）と比較してペプチド３の改善された抗ヒスタミン特性の両方を有する。
ニキビを患っている５人をそれぞれ含む４つの試験群（「ペプチド、０、２、３及び４」に対応する）（合計２０人の被験者）を本発明の製剤（トリガーファクター複合体を含む「ｉＡＲＰ－ローション」）で１日２回、１週間処置した。試験者の関連のある皮膚領域には望ましくない病変又は病理学的病変でさえ観察されなかった。従って、すべてのローションサンプル製品（ペプチド０、２、３又は４を含む）の実用的な適用は、皮膚刺激又は感作効果によって引き起こされる望ましくない何れの皮膚反応も引き起こさなかったと結論付けることができる。しかしながら、同じ製剤を用いた様々なペプチドは、様々な効果をもたらす（表３及び４）。それらは、物理化学的影響（ペプチド４は製剤及び粘度を安定化させる）、又はペプチド０（何れの効果も示さない）と比較してペプチド３の改善された抗ヒスタミン特性の両方を有する。
【0146】
全体的な製品評価において、ペプチド２、３及び４はペプチド０と比較して優れていた。
【0147】
ペプチド２及び３は、改善された全体的な皮膚耐性適合性を優れているとして示した。
【0148】
ペプチド４は依然として良好と評価されたが、製品の安定性との組み合わせではペプチド０の１２０～１４０に対して２００のスコアを得た（両方のスコアの合計）。
【0149】
本発明に従う製剤と組み合わせたペプチド２は、最高の製品総合スコアを達成した。
【0150】
全ての製剤は、ニキビに適用されたペプチド０ベースの製剤よりも２０％優れていた。
【0151】
【表3】
【0152】
【表4】
【0153】
一般的観察：
本発明の製剤は、重要な成分を皮膚に輸送し、対照脂質（デクスパンテノール）よりも改善された機能的結果をもたらす相乗的組成物である。既知のＥＰＯミメティックペプチドがそれらの構造において変更されて、以前のペプチドから知られているそれらの受容体結合活性を低下させる場合、安全性における大きな飛躍が達成される。これは、重要な栄養素及び血管拡張化合物（例えば、アルギニン及び本発明に従う他のもの）が詰まったＣＤ９０細胞微小環境を標的とするトランスポーター分子としてそれらを依然として使用することによって説明される。皮膚の内因性幹細胞周辺の領域（微小環境）に重要な栄養素と栄養素を持ち込むため。これはそれらの皮膚細胞が皮膚の修復及び皮膚の健康においてそれらの生理学的役割に従うことができることを確実にする。特に、セラミド等の脂質構造を含むように開発された製剤は、分子を皮膚に結合させ、皮膚外での利用可能性を防止する。
本発明の製剤は、重要な成分を皮膚に輸送し、対照脂質（デクスパンテノール）よりも改善された機能的結果をもたらす相乗的組成物である。既知のＥＰＯミメティックペプチドがそれらの構造において変更されて、以前のペプチドから知られているそれらの受容体結合活性を低下させる場合、安全性における大きな飛躍が達成される。これは、重要な栄養素及び血管拡張化合物（例えば、アルギニン及び本発明に従う他のもの）が詰まったＣＤ９０細胞微小環境を標的とするトランスポーター分子としてそれらを依然として使用することによって説明される。皮膚の内因性幹細胞周辺の領域（微小環境）に重要な栄養素と栄養素を持ち込むため。これはそれらの皮膚細胞が皮膚の修復及び皮膚の健康においてそれらの生理学的役割に従うことができることを確実にする。特に、セラミド等の脂質構造を含むように開発された製剤は、分子を皮膚に結合させ、皮膚外での利用可能性を防止する。
【0154】
また、一般に、発明に従う美容用製剤及び組成物における、及びアルギニンのようなア
ミノ酸を含み、且つセラミド／ホスファチジル由来の脂質に基づく上記の全ての製剤にお
ける、活性成分としての既知のＥＰＯ断片（１～３、上記参照のこと）及び全長ヒトＥＰ
Ｏは、紅斑及びニキビの研究において明確な効果を示す。
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
（ｉ）少なくとも１種の、１０個から４０個までのアミノ酸からなる単離組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチドは、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、及び造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、
（ｉｉ）脂質化合物、脂質化合物の組成物又は脂質構造（ここで、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物又は前記脂質構造に連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）、及び
（ｉｉｉ）血管系の弛緩を刺激し、及び／又は前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）の前記ＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する、少なくとも１種の誘発剤
を含む、皮膚への局所適用のための美容用製剤又は組成物。
［２］
前記脂質化合物又は前記脂質構造は、セラミドのようなスフィンゴ脂質又はホスファチジルコリンのようなリン脂質をベースとする、［１］に記載の美容用製剤又は組成物。
［３］
前記誘発剤は、前記ＣＤ９０発現皮膚細胞における窒素酸化物（ＮＯ）及び／又はアセチルコリンの生成を刺激する、［１］又は［２］に記載の美容用製剤又は組成物。
［４］
前記誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリン及び上記アミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか、それからなるポリペプチドからなる群から選択される１種以上のアミノ酸又はアミノ酸誘導体を含む、［１］～［３］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［５］
ビタミンＢ５及び／又はビタミンＥ及び／又はコリンを含む、［４］
［６］
前記誘発剤は、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）にＮ末端及び／又はＣ末端で共有結合によって結合している、［１］～［５］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［７］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティックに由来するペプチド、或いはＥｐｏＲ及び／又はβｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドである、［１］～［６］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［８］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、アミノ酸配列：
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１）、又は
そのバリアント
を含むか又はそれからなり、
式中、前記アミノ酸配列の１つ又は２つのアミノ酸残基は、保存性又は非保存性のアミノ酸残基置換基によって置き換えられており、その結果のペプチド配列は、皮膚組織保護性である、［７］に記載の美容用製剤又は組成物。
［９］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
のアミノ酸配列を含むか、その配列であり、
式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである、
［８］に記載の美容用製剤又は組成物。
［１０］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）
からなる群から選択されるアミノ酸配列の１つを含むか、又はその配列である、［８］又は［９］に記載の美容用製剤又は組成物。
［１１］
（ｉ）クリーム又はローションのベース組成物、及び（ｉｉ）前記組織保護ポリペプチド、スフィンゴ脂質及び／又はリン脂質、及びアルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリンからなる群から選択される１つ以上の分子、上記のアミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか又はそれからなるポリペプチド、ビタミンＢ５、ビタミンＥ、コリンを含む組成物を含む組成物から構成される［１］～［１０］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［１２］
（ａ）１０個から４０個までのアミノ酸からなる皮膚組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティック由来のペプチド、或いは前記ＥｐｏＲ及び／又は前記βｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドであり、造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、及び
（ｂ）血管系の弛緩を刺激し、及び／又は前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）の前記ＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する誘発剤（ここで、前記誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリンからなる群から選択される１つ以上の分子、上記のアミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか、それからなるポリペプチド、ビタミンＢ５、ビタミンＥ、コリンからなる群から選択される）
を少なくとも含み、前記皮膚組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、共有結合により、前記誘発剤と結合している、複合体分子。
［１３］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、アミノ酸配列：
５’－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－３’（配列番号３）、又は
そのバリアント
を含むか又はそれからなり、
式中、１つ又は２つのアミノ酸残基は、保存性又は非保存性のアミノ酸残基置換基によって置き換えられている、［１２］に記載の複合体分子。
［１４］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
のアミノ酸配列を含むか、該配列であり、
式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである、
［１３］に記載の複合体分子。
［１５］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）
からなる群から選択されるアミノ酸配列の１つを含むか、又は該配列である、［１３］又［１４］に記載の複合体分子。
［１６］
脂質化合物、脂質化合物の組成物又は脂質構造を更に含み、前記複合体分子は、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物又は前記脂質構造と連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている、［１２］～［１５］の何れか１つに記載の複合体分子。
［１７］
ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）に結合可能な単離ポリペプチドであって、
式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
（式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである）、
の１１ｍｅｒのアミノ酸配列からなり、
アミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１）は除外され、
前記ポリペプチドは、皮膚保護活性を有し、造血又は赤血球生成効果を誘発しない、又は本質的に誘発しない、
単離ポリペプチド。
［１８］
Ｘ ３ はＱであり、Ｘ ４ はＮである、
［１７］に記載の単離ポリペプチド。
［１９］
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）.
から選択される１つのアミノ酸配列からなる、
［１８］に記載の単離ポリペプチド。
［２０］
２０個以下のアミノ酸からなる単離皮膚組織保護ポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、［１７］～［１９］の何れか１つに記載のアミノ酸配列を含む、単離ポリペプチド。
［２１］
７、８、９又は１０個のアミノ酸残基からなり、配列ＬＥＲＡＬを含む、［１７］～［１９］の何れか１つに記載の単離ポリペプチドの皮膚組織保護断片。
［２２］
皮膚の修復、皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、しわの減少、皮膚のアンチエイジング、並びに乾燥し、断裂した皮膚の回避及び改善を含む、皮膚の局所的な美容用の処置のための使用のための、［１］～［１１］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物、又は［１２］～［１６］の何れか１つに記載の複合体分子、又は［１７］～［２０］の何れか１つに記載の単離ポリペプチド。
ミノ酸を含み、且つセラミド／ホスファチジル由来の脂質に基づく上記の全ての製剤にお
ける、活性成分としての既知のＥＰＯ断片（１～３、上記参照のこと）及び全長ヒトＥＰ
Ｏは、紅斑及びニキビの研究において明確な効果を示す。
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
（ｉ）少なくとも１種の、１０個から４０個までのアミノ酸からなる単離組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチドは、ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）のアゴニストであり、ＣＤ９０発現皮膚細胞を標的とし、及び造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、
（ｉｉ）脂質化合物、脂質化合物の組成物又は脂質構造（ここで、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物又は前記脂質構造に連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている）、及び
（ｉｉｉ）血管系の弛緩を刺激し、及び／又は前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）の前記ＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する、少なくとも１種の誘発剤
を含む、皮膚への局所適用のための美容用製剤又は組成物。
［２］
前記脂質化合物又は前記脂質構造は、セラミドのようなスフィンゴ脂質又はホスファチジルコリンのようなリン脂質をベースとする、［１］に記載の美容用製剤又は組成物。
［３］
前記誘発剤は、前記ＣＤ９０発現皮膚細胞における窒素酸化物（ＮＯ）及び／又はアセチルコリンの生成を刺激する、［１］又は［２］に記載の美容用製剤又は組成物。
［４］
前記誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリン及び上記アミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか、それからなるポリペプチドからなる群から選択される１種以上のアミノ酸又はアミノ酸誘導体を含む、［１］～［３］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［５］
ビタミンＢ５及び／又はビタミンＥ及び／又はコリンを含む、［４］
［６］
前記誘発剤は、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）にＮ末端及び／又はＣ末端で共有結合によって結合している、［１］～［５］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［７］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティックに由来するペプチド、或いはＥｐｏＲ及び／又はβｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドである、［１］～［６］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［８］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、アミノ酸配列：
ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ （配列番号２１）、又は
そのバリアント
を含むか又はそれからなり、
式中、前記アミノ酸配列の１つ又は２つのアミノ酸残基は、保存性又は非保存性のアミノ酸残基置換基によって置き換えられており、その結果のペプチド配列は、皮膚組織保護性である、［７］に記載の美容用製剤又は組成物。
［９］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
のアミノ酸配列を含むか、その配列であり、
式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである、
［８］に記載の美容用製剤又は組成物。
［１０］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）
からなる群から選択されるアミノ酸配列の１つを含むか、又はその配列である、［８］又は［９］に記載の美容用製剤又は組成物。
［１１］
（ｉ）クリーム又はローションのベース組成物、及び（ｉｉ）前記組織保護ポリペプチド、スフィンゴ脂質及び／又はリン脂質、及びアルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリンからなる群から選択される１つ以上の分子、上記のアミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか又はそれからなるポリペプチド、ビタミンＢ５、ビタミンＥ、コリンを含む組成物を含む組成物から構成される［１］～［１０］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物。
［１２］
（ａ）１０個から４０個までのアミノ酸からなる皮膚組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）（ここで、前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ペプチド断片、ＥＰＯペプチドバリアント、ＥＰＯアナログ又はＥＰＯミメティック由来のペプチド、或いは前記ＥｐｏＲ及び／又は前記βｃＲとの結合に関与するアミノ酸残基からなるペプチドであり、造血／赤血球生成活性を誘発しない若しくは本質的に誘発しない）、及び
（ｂ）血管系の弛緩を刺激し、及び／又は前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）の前記ＣＤ９０発現皮膚細胞への輸送を補助する誘発剤（ここで、前記誘発剤は、アルギニン、フェニルアラニン、リシン、グルタミン、チロシン、トリプトファン、バリン、プロリン、シトルリン、クレアチン、タウリンからなる群から選択される１つ以上の分子、上記のアミノ酸のうちで２つ以上の同じ又は異なるアミノ酸を含むか、それからなるポリペプチド、ビタミンＢ５、ビタミンＥ、コリンからなる群から選択される）
を少なくとも含み、前記皮膚組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、共有結合により、前記誘発剤と結合している、複合体分子。
［１３］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、アミノ酸配列：
５’－ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ－３’（配列番号３）、又は
そのバリアント
を含むか又はそれからなり、
式中、１つ又は２つのアミノ酸残基は、保存性又は非保存性のアミノ酸残基置換基によって置き換えられている、［１２］に記載の複合体分子。
［１４］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
のアミノ酸配列を含むか、該配列であり、
式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである、
［１３］に記載の複合体分子。
［１５］
前記組織保護ポリペプチド（ｔｐＰ）は、
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）
からなる群から選択されるアミノ酸配列の１つを含むか、又は該配列である、［１３］又［１４］に記載の複合体分子。
［１６］
脂質化合物、脂質化合物の組成物又は脂質構造を更に含み、前記複合体分子は、イオン相互作用によって又は共有結合によって、前記脂質化合物又は前記脂質構造と連結又は結合しているか、或いはそれと混合されているか、又はミセル若しくはリポソーム構造を形成することによって、その中に内包されているか、若しくはカプセル化されている、［１２］～［１５］の何れか１つに記載の複合体分子。
［１７］
ＥＰＯ受容体（ＥｐｏＲ）及び／又は共通β受容体（βｃＲ）に結合可能な単離ポリペプチドであって、
式：
Ｘ １ Ｘ ２ Ｘ ３ ＬＥＲＡＬ Ｘ ４ Ｘ ５ Ｘ ６ （配列番号３１）
（式中、
Ｘ １ 、Ｘ ３ 、Ｘ ４ は、互いに独立にＱ又はＮであり、
Ｘ ２ は、Ｅ又はＤであり、及び
Ｘ ５ 、Ｘ ６ は、互いに独立にＳ又はＴである）、
の１１ｍｅｒのアミノ酸配列からなり、
アミノ酸配列ＱＥＱＬＥＲＡＬＮＳＳ（配列番号２１）は除外され、
前記ポリペプチドは、皮膚保護活性を有し、造血又は赤血球生成効果を誘発しない、又は本質的に誘発しない、
単離ポリペプチド。
［１８］
Ｘ ３ はＱであり、Ｘ ４ はＮである、
［１７］に記載の単離ポリペプチド。
［１９］
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２３）
ＮＥＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２５）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＴＳ （配列番号２７）
ＱＤＱＬＥＲＡＬＮＳＴ （配列番号２９）.
から選択される１つのアミノ酸配列からなる、
［１８］に記載の単離ポリペプチド。
［２０］
２０個以下のアミノ酸からなる単離皮膚組織保護ポリペプチドであって、前記ポリペプチドは、［１７］～［１９］の何れか１つに記載のアミノ酸配列を含む、単離ポリペプチド。
［２１］
７、８、９又は１０個のアミノ酸残基からなり、配列ＬＥＲＡＬを含む、［１７］～［１９］の何れか１つに記載の単離ポリペプチドの皮膚組織保護断片。
［２２］
皮膚の修復、皮膚の若返り、自然な皮膚の輝き、しわの減少、皮膚のアンチエイジング、並びに乾燥し、断裂した皮膚の回避及び改善を含む、皮膚の局所的な美容用の処置のための使用のための、［１］～［１１］の何れか１つに記載の美容用製剤又は組成物、又は［１２］～［１６］の何れか１つに記載の複合体分子、又は［１７］～［２０］の何れか１つに記載の単離ポリペプチド。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】