特許7178090膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム並びにアンモニア及びそのメチル化類似体の除去におけるそのポリマーソームの使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-11-16
(45)【発行日】2022-11-25
(54)【発明の名称】膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム並びにアンモニア及びそのメチル化類似体の除去におけるそのポリマーソームの使用
(51)【国際特許分類】
A61K 31/765 20060101AFI20221117BHJP
A61K 31/191 20060101ALI20221117BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20221117BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20221117BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20221117BHJP
【ＦＩ】
A61K31/765
A61K31/191
A61K47/12
A61K47/34
A61P3/00
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2018567213
(86)(22)【出願日】2017-08-15
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-09-05
(86)【国際出願番号】 IB2017054966
(87)【国際公開番号】W WO2018033856
(87)【国際公開日】2018-02-22
【審査請求日】2020-08-07
(31)【優先権主張番号】16184371.9
(32)【優先日】2016-08-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】16200067.3
(32)【優先日】2016-11-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(31)【優先権主張番号】16203817.8
(32)【優先日】2016-12-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】515271560
【氏名又は名称】イーティーエイチ チューリッヒ
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ルルー，ジーン‐クリストフ
(72)【発明者】
【氏名】マトーリ，シモン
(72)【発明者】
【氏名】シュミット，アーロン クリストフ
【審査官】金子 亜希
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５２４４５２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００７－２０８２５５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５０４９３７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５１０１０９（ＪＰ，Ａ）
【文献】R. C. Hayward et al.，Langmuir，2006年，22，4457-4461
【文献】Y. Men et al.，Polymer Chemistry，2016年，7，3977-3982
【文献】Z. Song et al.，ACS Appl. Mater. Interfaces，2016年，8，17033-17037
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／７６５
Ａ６１Ｋ ３１／１９１
Ａ６１Ｋ ４７／１２
Ａ６１Ｋ ４７／３４
Ａ６１Ｐ ３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より大きく約３．８以下である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソーム。
【請求項2】
前記ブロックコポリマーがジブロックコポリマーである、請求項１に記載のポリマーソーム。
【請求項3】
前記ポリマーソームが水和された場合に、前記酸が、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４のｐＨを生じる濃度にある、請求項１又は２に記載のポリマーソーム。
【請求項4】
前記酸が酸性水溶液内にある、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項5】
前記酸性水溶液中のｐＨが、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４である、請求項４に記載のポリマーソーム。
【請求項6】
前記酸が、ヒドロキシ酸、最も好ましくはクエン酸である、請求項１～５のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項7】
前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が、約１．３以上、３．１未満である、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項8】
前記ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が、約１．４以上、３．１未満である、請求項１～６のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載のポリマーソーム、及び少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物。
【請求項10】
前記組成物が、液体、半固体又は固体の形態にある、請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
経腸使用又は局所使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリマーソーム又は請求項９若しくは１０に記載の組成物。
【請求項12】
アンモニア、トリメチルアミン（ＴＭＡ）、若しくはジメチルアミン（ＤＭＡ）に関連する疾患又は障害、又はその症状、好ましくは高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症の治療に使用するための、請求項１１に記載のポリマーソーム又は組成物。
【請求項13】
ａ．有機溶媒、好ましくは、水非混和性又は部分的水混和性有機溶媒にＰＳとＰＥＯのブロックコポリマーを溶解し、コポリマー含有有機相を形成すること；ｂ．前記ポリマーソームを形成するように、前記コポリマー含有有機溶媒相と酸含有水相を混合すること；及び
ｃ．前記有機溶媒を除去すること、
を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のポリマーソームを作製する方法。
【請求項14】
前記水相が５０～７００ｍＭの酸を含む、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム並びにアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、トリメチルアミン（ＴＭＡ））の除去におけるそれらの使用に関する。より具体的には、本発明は、非生分解性両親媒性ブロックコポリマーを含むポリマーソーム、並びに例えば、高アンモニア血症、トリメチルアミン尿症、心血管疾患及び／又は慢性腎疾患の治療のためのアンモニア及び／又はそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）の除去におけるポリマーソームの経腸（例えば、経口）使用若しくは局所使用に関する。
【背景技術】
【0002】
アンモニア（ＮＨ３）及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ（Ｎ（ＣＨ３）３）は、類似の物理化学的性質（例えば、低分子量、類似のｐＫａ及びｌｏｇＰなど）を有する。これらは両方とも、主に消化管で生成され、体内におけるそれらの過剰な存在は、様々な障害及びそれらの症状に関連している。
【0003】
アンモニア
アンモニア（ＮＨ３）は、肝機能障害（例えば、肝硬変、急性肝不全、門脈大循環シャント、先天性アンモニア代謝異常による）を患っている患者に蓄積する神経毒性のある内因性代謝産物である（Ｍａｔｏｏｒｉ及びＬｅｒｏｕｘ ＡＤＤＲ ２０１５；９０：５５－６８）。
アンモニア（ＮＨ３）は、肝機能障害（例えば、肝硬変、急性肝不全、門脈大循環シャント、先天性アンモニア代謝異常による）を患っている患者に蓄積する神経毒性のある内因性代謝産物である（Ｍａｔｏｏｒｉ及びＬｅｒｏｕｘ ＡＤＤＲ ２０１５；９０：５５－６８）。
【0004】
血液における高アンモニアレベル（高アンモニア血症）は、潜在的に死に至る深刻な急性及び慢性の症状を有する神経精神医学的状態である肝性脳症に関連する（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１４；６０：７１５－７３５）。肝性脳症は、米国だけで２００９年に２００００超の入院をもたらし、７０億米国ドルを超えるコストがかかっている（Ｓｔｅｐａｎｏｖａら，Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１２；１０：１０３４－１０４１．ｅ１；Ｐｏｏｒｄａｄ，Ａｌｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒａｐ ２００６；２５：３－９）。肝性脳症による単一入院当たりの入院コストは、２００４年の２２，５１１米国ドルから２０１０年の３７，３９８米国ドルへと増加した（Ｎｅｆｆら、Ｃｌｉｎｉｃｏｅｃｏｎ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｒｅｓ．２０１３；５：１４３－１５２）。
【0005】
体内のアンモニアの主な供給源の１つは、結腸におけるウレアーゼ産生細菌である（Ｍａｔｏｏｒｉ及びＬｅｒｏｕｘ、前出）。したがって、肝性脳症のための臨床実践ガイドラインは、むしろ非特異的様式で結腸アンモニアの生成及び吸収に取り組む非吸収性二糖類ラクツロース（一般的に使用される下剤）及び抗生物質リファキシミン（例えば、Ｘｉｆａｘａｎ（商標））を肝性脳症の第一選択療法及び第二選択療法として勧めている（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、前出）。これらの両方の経口に利用可能な療法は、患者集団の大部分において肝性脳症の症状及び進行を制御するのに失敗し、これらの療法下にある多くの患者は、下痢などの副作用に苦しむ（Ｖｉｌｓｔｒｕｐら、前出；Ｒｏｓｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１２；９２：３２１－３３１；Ｌｅｅｖｙら，Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ ２００７；Ｍｕｌｌｅｎら、Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１４；１２：１３９０－１３９７．ｅ２）。
【0006】
経口投与される球状炭素吸着体（ＡＳＴ－１２０、Ｋｒｅｍｅｚｉｎ（登録商標））はまた、肝性脳症の動物モデルにおけるアンモニアの隔離及び高アンモニア血症関連症状の改善について開示されている（Ｂｏｓｏｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１１；５３：１９９５－２００２）。機構的に、アンモニアは、腸内でＡＳＴ－１２０微粒子に吸着し、その後、糞を介して排泄される。肝性脳症患者での臨床試験において、ＡＳＴ－１２０治療は、おそらくアンモニアの不十分な結合により、神経心理学的症状に臨床的改善をもたらさなかった（Ｂａｊａｊら、Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ ２０１３；５８：Ｓ８４，Ｂｏｓｏｉら、前出）。炭素吸着剤は、様々な化合物に結合し、重要な内因性又は外因性物質との干渉のリスクを有することが知られている（Ｓｃｈｕｌｍａｎら，Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ ２００６；４７：５６５－５７７；Ｎｅｕｖｏｎｅｎ及びＥｌｏｎｅｎ Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９８０；１７：５１－５７；Ｎｅｕｖｏｎｅｎ及びＯｌｋｋｏｌａ Ｍｅｄ Ｔｏｘｉｃｏｌ １９８８；３：３３－５８）。
【0007】
侵襲的であり、主に、重症の急性高アンモニア血症の症状を治療するのに適しているので、体外のアプローチ（例えば、血液透析）に基づくアンモニア除去治療戦略は、肝性脳症の慢性的性質によって理想的ではない。
【0008】
高アンモニア血症誘発性肝性脳症を患っている患者のための理想的な治療法は、腸内治療（例えば、経口）であり、アンモニア取り込みに強力かつ選択的であり、かつ胃腸管の過酷な環境において安定である。
【0009】
トリメチルアミン
トリメチルアミン（ＴＭＡ）（Ｎ（ＣＨ３）３）は、栄養物質（例えば、コリン、カルニチン、レシチン）の細菌代謝によって腸内で生成される第三級アミンである（Ｗａｎｇ Ｚら、（２０１１）．Ｎａｔｕｒｅ ４７２（７３４１），５７－６３；Ｗｉｓｅ ＰＭら（２０１１）．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２４（１１），１０５８－１０６３）。その後、ＴＭＡは、肝臓においてフラビンモノオキシゲナーゼ３によって酸化され、非臭気トリメチルアミン－Ｎ－オキシド（ＴＭＡＯ）になる（Ｙｅｕｎｇ ＣＫら、（２００７）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，４６４（２），２５１－２５９）。ＴＭＡ及びその代謝物ＴＭＡＯは、いくつかの疾患の病因に関与している。
トリメチルアミン（ＴＭＡ）（Ｎ（ＣＨ３）３）は、栄養物質（例えば、コリン、カルニチン、レシチン）の細菌代謝によって腸内で生成される第三級アミンである（Ｗａｎｇ Ｚら、（２０１１）．Ｎａｔｕｒｅ ４７２（７３４１），５７－６３；Ｗｉｓｅ ＰＭら（２０１１）．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２４（１１），１０５８－１０６３）。その後、ＴＭＡは、肝臓においてフラビンモノオキシゲナーゼ３によって酸化され、非臭気トリメチルアミン－Ｎ－オキシド（ＴＭＡＯ）になる（Ｙｅｕｎｇ ＣＫら、（２００７）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，４６４（２），２５１－２５９）。ＴＭＡ及びその代謝物ＴＭＡＯは、いくつかの疾患の病因に関与している。
【0010】
トリメチルアミン尿症（魚臭症候群としても知られている）は、フラビンモノオキシゲナーゼ３欠乏と関連する常染色体劣性障害である（Ｙｅｕｎｇら、前出）。トリメチルアミン尿症に罹患している患者は、体液（尿、汗）及び呼気中のＴＭＡ量の上昇により、一般に、（多くの場合、腐った魚に関連する）悪臭が漂う（Ｗｉｓｅら、前出）。トリメチルアミン尿症の診断は、通常、食事のコリン負荷並びにその後のＴＭＡ及びＴＭＡＯの尿分析に基づく（Ｗｉｓｅら、前出）。知覚可能な匂いは、主に皮膚表面から生じ、食事に依存して変化する（Ｗｉｓｅら、前出）。それらの悪臭により、トリメチルアミン尿症患者は、多くの場合心理的な症状（例えば、うつ病、自殺傾向）及び社会的孤立に苦しむ（Ｔｏｄｄ ＷＡ（１９７９）．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，９４（６），９３６－９３７）。
【0011】
ＴＭＡＯレベルの上昇はまた、心血管疾患及び慢性腎疾患のリスクの増加と関連しており（Ｔａｎｇ ＷＷら（２０１３）．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６８（１７），１５７５－１５８４；Ｔａｎｇ ＷＷら（２０１５）．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ １１６（３），４４８－４５５）；腸の微生物ＴＭＡ生産の阻害は、アテローム硬化性病変の減少につながった（Ｗａｎｇ Ｚら（２０１５）．Ｃｅｌｌ １６３（７），１５８５－１５９５）。
【0012】
さらに、ＴＭＡは、細菌性膣炎における不快臭の一因であることが見出された（Ｂｌａｎｋｅｎｓｔｅｉｎ Ｔら（２０１５）．Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ２９２（２），３５５－３６２）。
【0013】
トリメチルアミン尿症の治療
トリメチルアミン尿症の治療において、アブラナ科野菜及びカルニチン、コリン、又はレシチンが豊富な食品を避けるなどの食事制限は、悪臭を減少させるために推奨されている（Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（１９９９）、食物インドールの存在下でのヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の阻害のインビトロ及びインビボ研究（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ－ｖｉｖｏ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｉｎｄｏｌｅｓ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５８，１０４７－１０５５；Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（２００３）。トリメチルアミン尿症に関連するヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の生化学的及び臨床的態様（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４（２），１５１－１７０；Ｄａｎｋｓ ＤＭら（１９７６）。トリメチルアミン尿症：食事は必ずしも魚臭を抑制しない（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ：ｄｉｅｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ａｌｗａｙｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｆｉｓｈｙ ｏｄｏｒ）、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２９５（１７），９６２－９６２）。しかしながら、これらの制限措置は、患者にとって厄介であり、必ずしも悪臭体蒸気の十分な減少をもたらさない（Ｄａｎｋｓら、前出）。腸においてＴＭＡ生成微生物の成長及び代謝を阻害する特定の経口適用抗生物質（例えば、ネオマイシン、メトロニダゾール）は、一時的に症状を緩和することができる（Ｄａｎｋｓら、前出；Ｔｒｅａｃｙ Ｅら（１９９５）．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ，１８（３），３０６－３１２）。しかしながら、有益な効果は全ての患者において観察されず（Ｔｒｅａｃｙら、前出）、長期の抗生物質の使用は、胃腸の副作用のリスクを有する（Ｌｅｖｙ Ｊ（２０００） Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９５（１），Ｓ８－Ｓ１０）。経口投与された活性炭への吸着によるＴＭＡの除去はまた、トリメチルアミン尿症に罹患する特定の患者に有益であることが示されている（Ｙａｍａｚａｋｉ Ｈら（２００４）日本人のトリメチルアミン尿症の患者におけるトリメチルアミンの尿排泄に対する食事サプリメント、活性炭及び銅クロロフィリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ａｎｄ ｃｏｐｐｅｒ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ，ｏｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７４（２２），２７３９－２７４７）。さらに、ＴＭＡはプロトン化状態で低揮発性であるので、酸性石鹸の使用が推奨される（Ｗｉｌｃｋｅｎ Ｂ （１９９３） 魚臭症候群における酸性石鹸（Ａｃｉｄ ｓｏａｐｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｓｈ ｏｄｏｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）．ＢＭＪ： Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，３０７（６９１７），１４９７）。
トリメチルアミン尿症の治療において、アブラナ科野菜及びカルニチン、コリン、又はレシチンが豊富な食品を避けるなどの食事制限は、悪臭を減少させるために推奨されている（Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（１９９９）、食物インドールの存在下でのヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の阻害のインビトロ及びインビボ研究（Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ－ｖｉｖｏ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｉｎｄｏｌｅｓ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５８，１０４７－１０５５；Ｃａｓｈｍａｎ ＪＲら（２００３）。トリメチルアミン尿症に関連するヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ３型（ＦＭＯ３）の生化学的及び臨床的態様（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｆｌａｖｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｆｏｒｍ ３（ＦＭＯ３） ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｒｕｇ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４（２），１５１－１７０；Ｄａｎｋｓ ＤＭら（１９７６）。トリメチルアミン尿症：食事は必ずしも魚臭を抑制しない（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ：ｄｉｅｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ａｌｗａｙｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｆｉｓｈｙ ｏｄｏｒ）、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２９５（１７），９６２－９６２）。しかしながら、これらの制限措置は、患者にとって厄介であり、必ずしも悪臭体蒸気の十分な減少をもたらさない（Ｄａｎｋｓら、前出）。腸においてＴＭＡ生成微生物の成長及び代謝を阻害する特定の経口適用抗生物質（例えば、ネオマイシン、メトロニダゾール）は、一時的に症状を緩和することができる（Ｄａｎｋｓら、前出；Ｔｒｅａｃｙ Ｅら（１９９５）．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ，１８（３），３０６－３１２）。しかしながら、有益な効果は全ての患者において観察されず（Ｔｒｅａｃｙら、前出）、長期の抗生物質の使用は、胃腸の副作用のリスクを有する（Ｌｅｖｙ Ｊ（２０００） Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９５（１），Ｓ８－Ｓ１０）。経口投与された活性炭への吸着によるＴＭＡの除去はまた、トリメチルアミン尿症に罹患する特定の患者に有益であることが示されている（Ｙａｍａｚａｋｉ Ｈら（２００４）日本人のトリメチルアミン尿症の患者におけるトリメチルアミンの尿排泄に対する食事サプリメント、活性炭及び銅クロロフィリンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｈａｒｃｏａｌ ａｎｄ ｃｏｐｐｅｒ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｎ，ｏｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｕｒｉａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７４（２２），２７３９－２７４７）。さらに、ＴＭＡはプロトン化状態で低揮発性であるので、酸性石鹸の使用が推奨される（Ｗｉｌｃｋｅｎ Ｂ （１９９３） 魚臭症候群における酸性石鹸（Ａｃｉｄ ｓｏａｐｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｓｈ ｏｄｏｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）．ＢＭＪ： Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，３０７（６９１７），１４９７）。
【0014】
アンモニアメチル化類似体ジメチルアミン（ＤＭＡ）は、ＴＭＡ及びアンモニアと類似の物理化学的性質を共有し、ＧＩ管で生成される。これは、既知の発癌物質の前駆体である。
【0015】
本発明の説明はいくつかの文書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【0016】
本発明は、経腸（例えば、経口）及び局所経路を介するアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）の解毒／除去のための膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソームの組成物、調製及び使用を説明する。本明細書で示されるように、本発明のポリマーソームは、模擬胃腸液中のアンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を強力に隔離し、この過酷な環境に抵抗する。さらに、本発明のポリマーソームは、乳濁液（例えば、ローション及びクリームなどの局所製剤）中のＴＭＡを強力に隔離する。
【0017】
より具体的には、本発明のポリマーソームは、例えば、膜貫通ｐＨ勾配リポソーム（例えば、実施例１を参照）とは異なり、腸内で遭遇する状態を模倣する媒体で希釈したときに、それらの隔離特性を呈することが示された。様々な模擬胃腸状態（高胆汁塩濃度（実施例６～８及び１３）、低浸透圧及び高浸透圧（実施例９）、消化酵素の存在（実施例１０）及び高カチオン濃度（実施例１１）の下でアンモニア取り込みを示すことにより、胃腸環境におけるポリマーソームの安定性及び有効性が以下の実施例で実証された。ポリマーソームの安定性及び有効性は、例えば、局所製剤（実施例１３）に対応する水中油型（ｏ／ｗ）乳濁液中でも実証された。
【0018】
本発明は、例えば、非生分解性両親媒性ブロックコポリマー（例えば、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレングリコール）、ＰＳ－ｂ－ＰＥＧとしても知られる））で構成されたポリマーソームについて記載する。
【0019】
より具体的には、本発明の一態様によると、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含み、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。
【0020】
より具体的には、本発明の一態様によると、（ａ）本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含み、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。
【0021】
より具体的には、本発明の一態様によると、（ａ）本明細書で定義される疎水性非荷電非生分解性ポリマーと親水性非荷電非生分解性ポリマーのブロックコポリマーを含む膜であって、該疎水性非荷電非生分解性ポリマー／親水性非荷電非生分解性ポリマーの分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。
【0022】
本発明のより具体的な態様によると、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。本発明のより具体的な態様によると、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。本発明のより具体的な態様によると、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーを含み、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。本発明のポリマーソームは架橋されてもよいし、されなくてもよい。
【0023】
特定の実施形態において、ポリマーソームであって、（ａ）その膜が、ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）であり；かつ（ｂ）そのコアが酸を包囲する、ポリマーソームが提供される。特定の実施形態において、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、を含むポリマーソームが提供される。特定の実施形態において、（ａ）ポリ（スチレン）（ＰＳ）とポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）のブロックコポリマーからなり、該ＰＳ／ＰＥＯ分子量比が１．０より高く、４．０未満（例えば、１．０より高く、３．０未満）である膜；及び（ｂ）酸を包囲するコア、からなるポリマーソームが提供される。
【0024】
本発明のポリマーソームの特定の実施形態において、該ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマーである。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、ポリマーソームが水和したときに、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４のｐＨを生じる濃度にある。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、酸性水溶液中にある。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、酸性水溶液中のｐＨは、１～６、好ましくは２～５、より好ましくは２～４である。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該酸は、（ｉ）クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、酒石酸若しくは乳酸などのヒドロキシ酸；（ｉｉ）酢酸などの小鎖脂肪酸；（ｉｉｉ）ウロン酸などの糖酸；（ｉｖ）マロン酸などのジカルボン酸；（ｖ）プロパン－１，２，３－トリカルボン酸若しくはアコニット酸などのトリカルボン酸；（ｖｉ）１，２，３，４－ブタンテトラカルボン酸などのテトラカルボン酸；（ｖｉｉ）１，２，３，４，５－ペンタンペンタカルボン酸などのペンタカルボン酸；（ｖｉｉｉ）ポリ（アクリル酸）若しくはポリ（メタクリル酸）などのポリマーポリ（カルボン酸）；（ｉｘ）エチレンジアミン四酢酸などのポリアミノカルボン酸；又は（ｘ）それらの少なくとも２つの組合せである。より具体的な実施形態において、該酸は、ヒドロキシ酸、好ましくはクエン酸である。別の特定の実施形態において、本発明のポリマーソームは、酸含有水相と、コポリマーを含む有機溶媒を混合することを含む方法によって調製される。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、有機溶媒は、水非混和性又は部分的水混和性である。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニアを包囲する。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニア又はそのメチル化類似体を包囲し、該メチル化類似体は好ましくはＴＭＡである。本発明のポリマーソームの別の特定の実施形態において、該ポリマーソームコアは、さらに、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を包囲する。
【0025】
本発明の別の態様によると、本発明のポリマーソーム、及び少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物が提供される。
【0026】
本発明の組成物の別の特定の実施形態において、該組成物は、液体、又は固体の形態にある。本発明の組成物の別の特定の実施形態において、該組成物は、液体、半固体又は固体の形態にある。
【0027】
本発明の別の態様によると、腸内使用のために、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。本発明の別の態様によると、経腸使用又は局所使用のための、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。
【0028】
本発明の別の態様によると、局所使用のための、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物が提供される。
【0029】
別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、アンモニアを除去する際に使用するためのものである。
【0030】
別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去する際に使用するためのものである。
【0031】
本発明のポリマーソーム又は組成物は、アンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状、好ましくは高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症の治療に使用するためのものである。
【0032】
別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、高アンモニア血症の治療に使用するためのものである。
【0033】
別の態様によると、本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎若しくはその症状の治療に使用するためのものである。
【0034】
使用するためのポリマーソームの特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。
【0035】
別の態様において、それを必要とする対象に、ポリマーソーム又は組成物を（例えば、経腸又は局所）投与することを含む本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物を使用する方法が提供される。別の態様において、それを必要とする対象への（例えば、経腸又は局所）投与のための本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物の使用が提供される。別の態様において、薬剤としての本発明のポリマーソーム又は本発明の組成物の使用が提供される。
【0036】
別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、アンモニアを除去するための（薬剤の製造のための）ものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるアンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去するための（薬剤の製造のための）ものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるアンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状、及び好ましくは、高アンモニア血症又はトリメチルアミン尿症、より好ましくは高アンモニア血症の治療のため（薬剤の製造のため）のものである。別の態様によると、上記の方法（複数可）又は使用（複数可）は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎若しくはその症状の治療のため（薬剤の製造のため）のものである。上記の方法（複数可）又は使用（複数可）の特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。
【0037】
本発明のさらに別の態様によると、本発明のポリマーソームを作製する方法であって、（ａ）有機溶媒、好ましくは水非混和性又は部分的水混和性有機溶媒にＰＳとＰＥＯのブロックコポリマーを溶解して、コポリマー含有有機相を形成すること；（ｂ）ポリマーソームを形成するために、酸含有水相とコポリマー含有有機溶媒相を混合すること；及び（ｃ）有機溶媒を除去すること、を含む方法が提供される。
【0038】
本発明の方法の特定の実施形態において、該水相は、５０～７００ｍＭの酸を含む。
【0039】
別の態様において、本発明は、それを必要とする対象においてアンモニアを除去するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。
【0040】
別の態様において、本発明は、それを必要とする対象における高アンモニア血症を治療するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。
【0041】
別の態様において、本発明は、アンモニアメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を除去するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。
【0042】
別の態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるトリメチルアミン尿症若しくはその症状又はＴＭＡ関連心血管疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連腎疾患若しくはその症状又はＴＭＡ関連細菌性膣炎又はその症状を治療するための上記のポリマーソーム又は組成物、及び該ポリマーソーム又は組成物を使用するための説明書を含むキットを提供する。
【0043】
キットの特定の実施形態において、トリメチルアミン尿症の症状及び／又は細菌性膣炎の症状は、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭である。
【0044】
本発明の他の目的、利点及び特徴は、添付の図面を参照して、単なる例として与えられる以下のその具体的な実施形態の非限定的な説明を読めばより明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0045】
【図1】膜水和法を用いて調製した膜貫通ｐＨ勾配リポソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図2】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図3】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図4】膜水和法を用いて調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図5】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図6】有機溶媒としてジクロロメタン又はトルエンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３～２．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図7】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約３．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図8】有機溶媒としてクロロホルムを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯの、高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図9】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、低浸透圧及び高浸透圧条件下でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図10】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、消化酵素の存在下でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図11】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高カリウム濃度でのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【図12】有機溶媒としてジクロロメタンを用い、様々な濃度の酸を用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込みを示すグラフである（ｎ＝３～４、平均値及び標準偏差）。
【図13】有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．４又は２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有する膜貫通ｐＨ勾配ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの、高胆汁塩濃度で、Ｏ／Ｗ乳濁液での前暴露後の、インビトロＴＭＡ取り込みを示すグラフである（ｎ＝３、平均値及び標準偏差）。
【発明を実施するための形態】
【0046】
本発明は、アンモニア及び／又はそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）を捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配を有するポリマーソーム、該ポリマーソームを含む組成物、該ポリマーソームを作製するためのプロセス並びにこれらのポリマーソーム及び組成物の使用を包含する。
【0047】
ポリマーソーム
ポリマーソームは小胞であり、その二重膜は合成コポリマーから構成されている。それらは、レーザー回折によって決定されるように、５０ｎｍ～１００μｍ又はそれ以上の範囲、特定の実施形態において１００ｎｍ～４０μｍの範囲の平均直径を有する。１００ｎｍ～４０μｍと変動する平均直径を有する本発明の被試験ポリマーソームは、効果的にアンモニアをカプセル化することができたが、４０μｍ超の直径を有するポリマーソームはまた効果的であり得ないと考える理由はない。
ポリマーソームは小胞であり、その二重膜は合成コポリマーから構成されている。それらは、レーザー回折によって決定されるように、５０ｎｍ～１００μｍ又はそれ以上の範囲、特定の実施形態において１００ｎｍ～４０μｍの範囲の平均直径を有する。１００ｎｍ～４０μｍと変動する平均直径を有する本発明の被試験ポリマーソームは、効果的にアンモニアをカプセル化することができたが、４０μｍ超の直径を有するポリマーソームはまた効果的であり得ないと考える理由はない。
【0048】
本発明のポリマーソームは、非生分解性両親媒性ブロックコポリマーを含み、有機溶媒を用いて調製される。
【0049】
本発明の作用機序は、ポリマーソーム膜全域のｐＨ勾配に基づく。水性ポリマーソームコア中に含有される酸性剤は、腸及び皮膚における生理学的ｐＨとは異なる（より低い）ｐＨを有する。したがって、アンモニア及びそのメチル化類似体（例えば、ＴＭＡ）は、それらの荷電していない状態でポリマーソームの疎水性ポリマー膜を通って拡散し、その後、内部区画内でそのプロトン化（イオン化）状態（例えば、アンモニアの場合にはアンモニウム）で捕捉することができる。アンモニア及びＴＭＡは、主に腸及び皮膚のｐＨでそのプロトン化状態で存在するが、ごく一部が常にその非イオン化状態にある。この画分は、ポリマーソーム中に拡散し、ポリマーソーム内にそのプロトン化状態で捕捉することができ、この結果、平衡に変わり、小胞内により多くのアンモニア及びＴＭＡをもたらす。
【0050】
したがって、本明細書で使用する「アンモニアを捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配」の性質及び／又は「アンモニア及び／又はそのメチル化類似体を捕捉するための膜貫通ｐＨ勾配」は、腸内及び皮膚上で遭遇する状態を模倣する媒体に希釈した場合に、アンモニア（及び／又はそのメチル化類似体）を隔離する本発明のポリマーソームの能力を指す。
【0051】
本明細書で使用する用語「アンモニアメチル化類似体」は、そのように限定されないが、ＴＭＡ及びＤＭＡを指す。特定の実施形態において、それはＴＭＡを指す。
【0052】
ブロックコポリマー
「ポリマー」は、連結されたモノマー単位を含む巨大分子である。モノマー単位は、単一の種類（均質）、又は様々な種類（異種）のものであり得る。２種以上の異なるモノマーが共に結合して、重合する場合、その成果物はコポリマーと呼ばれる。別の種類の２以上のモノマー（別のブロック）に共有結合した単一種の２以上のモノマー（ブロック）の配列で作られたコポリマーは、ブロックコポリマーと呼ばれる。共に共有結合した２つのブロックの種類で作られたコポリマーはジブロックと呼ばれ、３つのブロックの種類で作られたコポリマーはトリブロックなどと呼ばれる。ブロックコポリマーは、それらを生成するために使用される特定の合成の結果として、異なる末端基を含むことができる。
「ポリマー」は、連結されたモノマー単位を含む巨大分子である。モノマー単位は、単一の種類（均質）、又は様々な種類（異種）のものであり得る。２種以上の異なるモノマーが共に結合して、重合する場合、その成果物はコポリマーと呼ばれる。別の種類の２以上のモノマー（別のブロック）に共有結合した単一種の２以上のモノマー（ブロック）の配列で作られたコポリマーは、ブロックコポリマーと呼ばれる。共に共有結合した２つのブロックの種類で作られたコポリマーはジブロックと呼ばれ、３つのブロックの種類で作られたコポリマーはトリブロックなどと呼ばれる。ブロックコポリマーは、それらを生成するために使用される特定の合成の結果として、異なる末端基を含むことができる。
【0053】
本発明のポリマーソームは、ブロックコポリマーを含む。特定の実施形態において、本発明のブロックコポリマーは、ジブロック又はトリブロックコポリマーである。これらのブロックコポリマーは、両親媒性であり、少なくとも２つのポリマー、すなわち、芳香族の疎水性の高いポリマー（例えば、ポリ（スチレン））及び親水性非荷電非生分解性ポリマーで形成されている。より具体的な実施形態において、ブロックコポリマーは、ジブロックコポリマー（例えば、ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ））、又はトリブロックコポリマー（例えば、ＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ））（すなわち、ＰＳ ＰＥＯブロックコポリマー））である。
【0054】
「両親媒性」コポリマーは、親水性（水溶性）基と疎水性（水不溶性）基の両方を含有するものである。
【0055】
本明細書で使用する用語「非生分解性」は、胃腸状態で非加水分解性（例えば、胃腸管における酵素（例えば、プロテアーゼ、リパーゼ）による分解又は他の手段（例えば、ｐＨ）を介した分解に対する耐性）を意味する。
【0056】
疎水性非荷電非生分解性ポリマー
特定の実施形態において、本発明のコポリマーに使用される疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（エチルエチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ２Ｈ５））ｎ－、すなわち、－（Ｃ４Ｈ８）ｎ－）又はポリ（スチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｐｈ））ｎ－、すなわち、－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ６Ｈ５））ｎ－、すなわち－（Ｃ８Ｈ８）ｎ－）である。特定の実施形態において、疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（スチレン）である。本発明で使用するためのポリ（スチレン）には、非置換スチレンモノマー及び／又は置換／官能化スチレンモノマーが含まれ得る。具体的に別段の定義がない限り、したがって、用語「ポリ（スチレン）」は、もっぱら非置換のスチレンモノマー、置換モノマーと非置換モノマーの混合物、又はもっぱら置換モノマーを含むポリ（スチレン）を命名するために一般的に本明細書で使用される。スチレンモノマー上の１以上の置換基は、フェニル上及び／又は炭素上に置換基を含んでよく、その上にフェニルが結合しており、かつ／又はフェニル（例えば、二環系、三環系など、Ｃ３～Ｃ６アリール（複数可）及び／又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル（複数可）を含む）と多環誘導体を形成し得る。潜在的な置換基には、アルキル（Ｃ１～Ｃ７（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７、より具体的には、Ｃ１、Ｃ２又はＣ３）、アリール（Ｃ３～Ｃ６）、Ｃ３～Ｃ８のシクロアルキル、アリールアルキル、アセトキシル、アルコキシル（メトキシル、エトキシル、プロパノキシル、ブトキシルなど）、ハロゲン（Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆなど）、アミン、アミド、アルキルアミン、ＮＯ２が含まれる。置換基は、それ自体が置換されていてよい。そのように限定されないが、置換スチレンモノマーには、アセトキシスチレン、ベンズヒドリルスチレン、ベンジルオキシメトキシスチレン、ブロモスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、クロロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、フルオロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、ｔｅｒｔ－ブトキシスチレン、ｔｅｒｔ－ブチルスチレン、クロロメチルスチレン、ジクロロスチレン、ジフルオロスチレン、ジメトキシスチレン、ジメチルスチレン、ジメチルビニルベンジルアミン、ジフェニルメチルペンテン、（ジフェニルホスフィノ）スチレン、エトキシスチレン、イソプロペニルアニリン、イソプロペニル－α，α－ジメチルベンジルイソシアネート、［Ｎ－（メチルアミノエチル）アミノメチル］スチレン、メチルスチレン、ニトロスチレン、ペンタフルオロフェニル、４－ビニル安息香酸、ペンタフルオロスチレン、（トリフルオロメチル）スチレン（２－、３－又は４－）、トリメチルスチレン、ビニルアニリン（３－又は４－）、ビニルアニソール、ビニル安息香酸（３－、４－）、ビニルベンジルクロリド、（ビニルベンジル）トリメチルアンモニウムビニルビフェニル、４－ビニルベンゾシクロブテン（４－など）、ビニルアントラセン（９－など）、２－ビニルナフタレン、ビニルビフェニル（３－、４－など）などが含まれる。特定の実施形態において、置換スチレンモノマーは、アルキルスチレン（例えば、メチルスチレン）又はｔｅｒｔ－ブチルスチレンである。一実施形態において、ＰＳは、少なくとも１つの置換スチレンモノマーを含む。置換基には、非イオン性基（例えば、メチル基又はｔｅｒｔ－ブチル基）であり得る。別の特定の実施形態において、ポリ（スチレン）中のスチレンモノマーは置換されていない。
特定の実施形態において、本発明のコポリマーに使用される疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（エチルエチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ２Ｈ５））ｎ－、すなわち、－（Ｃ４Ｈ８）ｎ－）又はポリ（スチレン）（－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｐｈ））ｎ－、すなわち、－（ＣＨ２－ＣＨ（Ｃ６Ｈ５））ｎ－、すなわち－（Ｃ８Ｈ８）ｎ－）である。特定の実施形態において、疎水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリ（スチレン）である。本発明で使用するためのポリ（スチレン）には、非置換スチレンモノマー及び／又は置換／官能化スチレンモノマーが含まれ得る。具体的に別段の定義がない限り、したがって、用語「ポリ（スチレン）」は、もっぱら非置換のスチレンモノマー、置換モノマーと非置換モノマーの混合物、又はもっぱら置換モノマーを含むポリ（スチレン）を命名するために一般的に本明細書で使用される。スチレンモノマー上の１以上の置換基は、フェニル上及び／又は炭素上に置換基を含んでよく、その上にフェニルが結合しており、かつ／又はフェニル（例えば、二環系、三環系など、Ｃ３～Ｃ６アリール（複数可）及び／又はＣ３～Ｃ６シクロアルキル（複数可）を含む）と多環誘導体を形成し得る。潜在的な置換基には、アルキル（Ｃ１～Ｃ７（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７、より具体的には、Ｃ１、Ｃ２又はＣ３）、アリール（Ｃ３～Ｃ６）、Ｃ３～Ｃ８のシクロアルキル、アリールアルキル、アセトキシル、アルコキシル（メトキシル、エトキシル、プロパノキシル、ブトキシルなど）、ハロゲン（Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆなど）、アミン、アミド、アルキルアミン、ＮＯ２が含まれる。置換基は、それ自体が置換されていてよい。そのように限定されないが、置換スチレンモノマーには、アセトキシスチレン、ベンズヒドリルスチレン、ベンジルオキシメトキシスチレン、ブロモスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、クロロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、フルオロスチレン（２－、３－、４－又はアルファ）、ｔｅｒｔ－ブトキシスチレン、ｔｅｒｔ－ブチルスチレン、クロロメチルスチレン、ジクロロスチレン、ジフルオロスチレン、ジメトキシスチレン、ジメチルスチレン、ジメチルビニルベンジルアミン、ジフェニルメチルペンテン、（ジフェニルホスフィノ）スチレン、エトキシスチレン、イソプロペニルアニリン、イソプロペニル－α，α－ジメチルベンジルイソシアネート、［Ｎ－（メチルアミノエチル）アミノメチル］スチレン、メチルスチレン、ニトロスチレン、ペンタフルオロフェニル、４－ビニル安息香酸、ペンタフルオロスチレン、（トリフルオロメチル）スチレン（２－、３－又は４－）、トリメチルスチレン、ビニルアニリン（３－又は４－）、ビニルアニソール、ビニル安息香酸（３－、４－）、ビニルベンジルクロリド、（ビニルベンジル）トリメチルアンモニウムビニルビフェニル、４－ビニルベンゾシクロブテン（４－など）、ビニルアントラセン（９－など）、２－ビニルナフタレン、ビニルビフェニル（３－、４－など）などが含まれる。特定の実施形態において、置換スチレンモノマーは、アルキルスチレン（例えば、メチルスチレン）又はｔｅｒｔ－ブチルスチレンである。一実施形態において、ＰＳは、少なくとも１つの置換スチレンモノマーを含む。置換基には、非イオン性基（例えば、メチル基又はｔｅｒｔ－ブチル基）であり得る。別の特定の実施形態において、ポリ（スチレン）中のスチレンモノマーは置換されていない。
【0057】
親水性非荷電非生分解性ポリマー
本発明のブロックコポリマー中のポリ（スチレン）と共に使用することができる親水性非荷電非生分解性ポリマーには、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（エチルオキサゾリン）、ポリ（メチルオキサゾリン）、及びオリゴエチレングリコールアルキルアクリレートのポリマーが含まれる。特定の実施形態において、親水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリエチレンオキシドである。
本発明のブロックコポリマー中のポリ（スチレン）と共に使用することができる親水性非荷電非生分解性ポリマーには、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（エチルオキサゾリン）、ポリ（メチルオキサゾリン）、及びオリゴエチレングリコールアルキルアクリレートのポリマーが含まれる。特定の実施形態において、親水性非荷電非生分解性ポリマーは、ポリエチレンオキシドである。
【0058】
本発明における使用のためのポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）は、一般式：（－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎ－、すなわち、－（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ－）を有し、非置換及び置換／官能化エチレンオキシドモノマーを含む。したがって、具体的に特に定義しない限り、用語「ポリ（エチレンオキシド）」又はＰＥＯは、もっぱら非置換のエチレンオキシドモノマー、置換モノマーと非置換モノマーの混合物又はもっぱら置換モノマーを含むＰＥＯを命名するために本明細書で一般的に使用される。一実施形態において、ＰＥＯは、少なくとも１つの置換エチレンオキシドモノマーを含む。別の実施形態において、エチレンオキシドモノマーは、置換されていない。
【0059】
ポリマーの割合
ＰＳとＰＥＯのブロック（例えば、ジブロックＰＳ－ｂ－ＰＥＯ又はトリブロックＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ）の分子量は、二重層の構造及び安定性が保持される限り、変更することができる。本発明者らは、安定したＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、１．０より高く、４未満のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量比（例えば、実施例６～１３を参照）を形成することを見出した。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１より高く、約３．９以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は約１．３以上、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．８以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．１未満である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．０以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．０以下である。
ＰＳとＰＥＯのブロック（例えば、ジブロックＰＳ－ｂ－ＰＥＯ又はトリブロックＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ）の分子量は、二重層の構造及び安定性が保持される限り、変更することができる。本発明者らは、安定したＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、１．０より高く、４未満のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量比（例えば、実施例６～１３を参照）を形成することを見出した。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１より高く、約３．９以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は約１．３以上、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．９未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．８以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．８未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．７未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．６未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．５未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．４未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．２未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約３．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３．１未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３．１未満である。特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、３未満である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．９以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．２以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．８以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．７以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．７以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．６以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．６以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．５以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．５以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．４以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．４以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．３以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．３以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．２以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．２以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．１以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．１以下である。別の特定の実施形態において、該比は、１より高く、約２．０以下である。別の特定の実施形態において、該比は、約１．１より高く、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．２～約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．３以上で、約２．０以下である。特定の実施形態において、該比は、約１．４以上で、約２．０以下である。
【0060】
上記の文の一般性を制限することなく、約４００ｇ／モル～２０，０００ｇ／モルの分子量を有するＰＥＯは、本発明に包含される。しかしながら、出願人らは、より高い分子量のＰＥＯは本発明で効果的に使用することができなかったことを予想する理由はない。分子量のより低いポリマーは、操作しやすいかもしれない。典型的には、ＰＥＯの分子量は、１０００～５０００ｇ／モルである。ＰＳ分子量は、上記の比を満たすように選択される。本発明によると、ＰＥＯが例えば、約２０，０００ｇ／モルの分子量を有する場合、ＰＳ分子量は約６０，０００ｇ／モル未満である。
【0061】
疎水性非荷電非生分解性ポリマー＋親水性非荷電非生分解性ポリマー（ジブロックコポリマー又はトリブロックコポリマー（例えば、ＰＳ－ｂ－ΡΕΟコポリマー又はＰＥＯ－ｂ－ＰＳ－ｂ－ΡΕΟコポリマー））で作られたポリマーソームの特性
この仮説に限定されないが、小胞膜内の高度に疎水性のポリマー（例えば、パイスタッキング相互作用を行う能力を有する芳香族（例えば、ＰＳ））の強力な相互作用は、胃腸液並びに油及び界面活性剤などの局所製剤に含まれる賦形剤に対する耐性を提供すると考えられている。実際、脂質（リポソーム）で作られる小胞、又はポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ；ポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレングリコール）、ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＧとしても知られる；及びポリ（２－メチルオキサゾリン）－ｂ－ポリ（ジメチルシロキサン）－ｂ－ポリ（２－メチルオキサゾリン）、ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）などの他の両親媒性ジブロックコポリマーは、単純緩衝液（例えば、実施例３を参照）でアンモニアを取り込むことができないか、又は単純緩衝液でアンモニアを取り込むことができるが、腸液を模倣する媒体（例えば、実施例１及び２を参照）ではそれらを隔離する性質を失う。
この仮説に限定されないが、小胞膜内の高度に疎水性のポリマー（例えば、パイスタッキング相互作用を行う能力を有する芳香族（例えば、ＰＳ））の強力な相互作用は、胃腸液並びに油及び界面活性剤などの局所製剤に含まれる賦形剤に対する耐性を提供すると考えられている。実際、脂質（リポソーム）で作られる小胞、又はポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ；ポリ（ブタジエン）－ｂ－ポリ（エチレングリコール）、ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＧとしても知られる；及びポリ（２－メチルオキサゾリン）－ｂ－ポリ（ジメチルシロキサン）－ｂ－ポリ（２－メチルオキサゾリン）、ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）などの他の両親媒性ジブロックコポリマーは、単純緩衝液（例えば、実施例３を参照）でアンモニアを取り込むことができないか、又は単純緩衝液でアンモニアを取り込むことができるが、腸液を模倣する媒体（例えば、実施例１及び２を参照）ではそれらを隔離する性質を失う。
【0062】
ポリマーソームの調製方法
コポリマーの調製
コポリマーを作製するための任意の公知の方法を用いることができる。本明細書に記載の実施例で使用されるコポリマーは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ社（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ及びＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）及びＰｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ社（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ）から購入した。
コポリマーの調製
コポリマーを作製するための任意の公知の方法を用いることができる。本明細書に記載の実施例で使用されるコポリマーは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ社（ＰＳ－ｂ－ＰＥＯ及びＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡ）及びＰｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ社（ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ）から購入した。
【0063】
ポリマーソームの調製
コポリマーを有機溶媒に溶解し、有機相を形成し、後者を酸性水溶液（例えば、クエン酸）（水相）と混合する。そのように限定されないが、混合は、水相中のポリマーを微細分散させ、その後、安定したポリマーソームを形成すると考えられる。混合工程は、異なる技術を介して行うことができる。例えば、水中油型（ｏ／ｗ）乳濁液（すなわち、酸性水溶液（すなわち、水相）中のポリマー含有有機溶媒相（すなわち、油相）、逆相蒸発、ナノ沈殿、又はダブル乳化の方法を用いて、ポリマー含有有機相と水相を混合することができる。
コポリマーを有機溶媒に溶解し、有機相を形成し、後者を酸性水溶液（例えば、クエン酸）（水相）と混合する。そのように限定されないが、混合は、水相中のポリマーを微細分散させ、その後、安定したポリマーソームを形成すると考えられる。混合工程は、異なる技術を介して行うことができる。例えば、水中油型（ｏ／ｗ）乳濁液（すなわち、酸性水溶液（すなわち、水相）中のポリマー含有有機溶媒相（すなわち、油相）、逆相蒸発、ナノ沈殿、又はダブル乳化の方法を用いて、ポリマー含有有機相と水相を混合することができる。
【0064】
ｏ／ｗ乳化法では、ポリマー含有有機溶媒を、しばらくの間、及び乳濁液を形成するのに十分な時間、超音波処理下で水性酸性相と混合する。以下の実施例において、水性相は、ポリマー含有有機溶媒相の添加前に３０分間、攪拌しながら有機溶媒で飽和させた。その後、ポリマー含有有機溶媒相を、以下の機械の特定のパラメータ：振幅７０、周期０．７５（ＵＰ２００Ｈ、２００Ｗ、２４ｋＨｚ、ヒールシャー超音波技術）を使用して、（超音波処理機によって生成される熱を低減するために）氷浴中で３分間、超音波処理下で酸含有水相に添加した。乳濁液を作製するための当技術分野で公知の任意の方法を用いることができる。超音波処理、並びに乳濁液を生成するのに適切な特定の超音波処理パラメータ及び時間の使用は、使用される乳化技術に依存する。乳濁液は、本発明の調製方法で安定である必要はない。
【0065】
逆相蒸発法で、ポリマー含有有機溶媒と酸含有水相を含む二相系を超音波処理すると、油中水型（ｗ／ｏ）乳濁液が形成する。粘性ゲルのような状態が形成されるまで、外側相を減圧下で蒸発させた。ポリマーソームは、ゲル状態の崩壊に際して形成する（Ｓｚｏｋａ及びＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ．ＰＮＡＳ １９７８；７５：４１９４－４１９８）。
【0066】
ナノ沈殿法では、ポリマーを、適切な有機溶媒に溶解し、そこへ酸含有水をゆっくりと添加した。
【0067】
ダブル乳化法では、ポリマーソームは、酸含有水性内相を含有するｗ／ｏ／ｗダブル乳濁液、中間相の完全又は部分的に水不混和性のポリマー含有有機溶媒、及び水性外相中で形成する。
【0068】
次いで、有機溶媒は、任意の公知の技術を用いてポリマーソームから除去される。溶媒は、対象による有害な溶媒摂取又は皮膚暴露を避けるために、投与前に除去される。そのように限定されないが、周囲圧力より低い圧力の印加、熱、濾過、クロスフロー濾過、透析、又はこれらの方法の組み合わせを用いて、溶媒を除去してもよい。
【0069】
有機溶媒の除去後、ポリマーソームを（ポリマーソームの内外にある酸性水溶液と共に）そのまま使用し、非カプセル化媒体の組成を変更するために精製し、かつ／又はさらに従来の医薬乾燥手順（例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥）により乾燥させることができる。乾燥工程は、保存及び輸送が容易である固体の剤形（粉末又はカプセル又は錠剤）の調製を可能にする。次いで、ポリマーソームを経口投与することが意図される場合は、乾燥ポリマーソームを水性媒体（例えば、水、ジュース）中に再分散させるか、又はそのまま（例えば、カプセル、錠剤）患者が摂取することができる。ポリマーソームを局所的に投与することが意図される場合は、ポリマーソームを、水溶液、ゲル、泡又はローション若しくはクリームなどの乳濁液などの任意の関連する局所製剤中に分散させることができる。全ての（そのまま、精製及び／又は乾燥された）そのような形態において、ポリマーソームコアは酸を含有する。胃腸管内又は皮膚上の製剤中にある場合、この酸はポリマーソームの膜貫通ｐＨ勾配を提供する。本発明のそのように形成されたポリマーソームは、コア内のｐＨ及び／又は浸透圧を調節するためにポリマーソームの調製中に添加することができる酸、潜在的には塩（すなわち、ナトリウム、カリウム又はカルシウムなどの対イオンで部分的に脱プロトン化された酸）を含有し、その水和物の形態では、ポリマーソームはさらに水を含有する。
【0070】
ポリマーソームが水和される（すなわち、水性の酸性コアを含有する）場合は、そのコアのｐＨは、一般に約１～６（１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５又は６）である。特定の実施形態において、それは、約１～約５、約１～約４．５、約１～約４、約１．５～約５、約１．５～約４．５、約１．５～約４、約２～約５、約２～約４．５、約２～約４、約２．５～約５、約２．５～約４．５、約２．５～約４、約３～約５、約３～約４．５、及び約３～約５である。
【0071】
必ずしも、本発明のポリマーソームの安定性のために必要ではないが、それらはまた、架橋することができる。例えば、架橋剤のｐ－キシリレン－ジクロリド、１，４－ビス－クロロメチルジフェニル、モノクロロジメチルエーテル、ジメチルホルマール、トリス－（クロロメチル）－メシチレン、又はｐ，ｐ’－ビス－クロロメチル－１，４－ジフェニルブタンとのフリーデル・クラフツ反応を用いて、ポリ（スチレン）を架橋することができる（Ｄａｖａｎｋｏｖ及びＴｓｙｕｒｕｐａ，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ １９９０；１３：２７－４２）。
【0072】
溶媒
本発明において使用される溶媒はコポリマーを溶解し、次いで、ポリマー含有溶媒は、酸性水相と混合される。混合工程の間に（例えば、ｏ／ｗ乳濁液）、ポリマーの微細分散物が水性相中に形成される。混合工程の後に、溶媒は、患者／対象が摂取しないことを確実にするために除去（例えば、蒸発）される。
本発明において使用される溶媒はコポリマーを溶解し、次いで、ポリマー含有溶媒は、酸性水相と混合される。混合工程の間に（例えば、ｏ／ｗ乳濁液）、ポリマーの微細分散物が水性相中に形成される。混合工程の後に、溶媒は、患者／対象が摂取しないことを確実にするために除去（例えば、蒸発）される。
【0073】
約２％～約４０％（ｖ／ｖ）の濃度の溶媒相／水相比率を使用することができる。特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～３０％（ｖ／ｖ）である。別の特定で実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～２０％（ｖ／ｖ）である。別の特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約５％～１５％（ｖ／ｖ）である。別の特定の実施形態において、溶媒相／水相比率は、約１０％（ｖ／ｖ）である。特定の実施形態において、生じる乳濁液中の溶媒相／水相比率は、約９％（ｖ／ｖ）である。
【0074】
特定の実施形態において、溶媒は有機溶媒である。
【0075】
そのように限定されないが、該溶媒は、塩素化溶媒（例えば、ジクロロメタン、例えば、実施例５～６、８～１０、１２参照；又はクロロホルム、例えば、実施例７参照）、アレーン又はアレーン誘導体（例えば、トルエン、例えば、実施例６参照）、脂肪族溶媒又は脂肪族溶媒誘導体（例えば、ヘキサン、１－ヘキサノール）、ケトン又はケトン誘導体（例えば、２－ヘキサノン）、エーテル又はエーテル誘導体（例えば、ジエチルエーテル）、又はそれらの混合物（例えば、ｏ／ｗ乳濁液、ｗ／ｏ／ｗダブル乳濁液又は逆相蒸発技術を使用する場合）であり得る。
【0076】
特定の実施形態において、ｏ／ｗ乳濁液を用いて、ポリマー含有有機相と水相を混合する場合、本発明に有用な溶媒は、水不混和性又は部分的水不混和性の有機溶媒である。そのように限定されないが、そのような溶媒には、例えば、ジクロロメタン、例えば、実施例５～６、８～１０、１２参照；又はクロロホルム、例えば、実施例７参照）、アレーン又はアレーン誘導体（例えば、トルエン、例えば、実施例６参照）、脂肪族溶媒又は脂肪族溶媒誘導体（例えば、ヘキサン、１－ヘキサノール）、ケトン又はケトン誘導体（例えば、２－ヘキサノン）、エーテル又はエーテル誘導体（例えば、ジエチルエーテル）、又はそれらの混合物が含まれる。
【0077】
酸及び酸性溶液
ポリマーソームのコアにおける酸性溶液は、好ましくは、塩基性化合物（例えば、アンモニア、ＴＭＡ、ＤＭＡ）の高い保持のために、低ｐＨで高い緩衝能を有する。該酸は、動物に対して無毒であり、ポリマーソーム膜から透過しない（又は弱くしか透過しない）。
ポリマーソームのコアにおける酸性溶液は、好ましくは、塩基性化合物（例えば、アンモニア、ＴＭＡ、ＤＭＡ）の高い保持のために、低ｐＨで高い緩衝能を有する。該酸は、動物に対して無毒であり、ポリマーソーム膜から透過しない（又は弱くしか透過しない）。
【0078】
そのように限定されないが、ポリマーソームコアに包囲される酸は、（ｉ）クエン酸、イソクエン酸、リンゴ酸、酒石酸、又は乳酸などのヒドロキシ酸；（ｉｉ）酢酸などの小鎖脂肪酸；（ｉｉｉ）ウロン酸などの糖酸；（ｉｖ）マロン酸などのジカルボン酸；（ｖ）プロパン－１，２，３－トリカルボン酸又はアコニット酸などのトリカルボン酸；（ｖｉ）１，２，３，４－ブタンテトラカルボン酸などのテトラカルボン酸；（ｖｉｉ）１，２，３，４，５－ペンタンペンタカルボン酸などのペンタカルボン酸；（ｖｉｉｉ）ポリ（アクリル酸）又はポリ（メタクリル酸）などのポリマーポリ（カルボン酸）；（ｉｘ）エチレンジアミン四酢酸などのポリアミノカルボン酸；又は（ｘ）それらの少なくとも２つの組合せである。特定の実施形態において、クエン酸が使用される。上記の特定の酸は、特定の用量で、特定の薬理学的活性を有してよいが、本発明のポリマーソームで使用されるカプセル化された酸は、直接的な薬理学的機能又は撮像機能を発揮することを目的としないが、単に膜貫通ｐＨ勾配を作るために使用される。本発明は、それらがまた特定の薬理学的活性を有するか否かに関わらず、上記の酸のいずれか１種の使用を包含する。しかしながら、本発明の特定の実施形態又は態様に従って、該酸は、抗生物質、抗癌薬、抗高血圧薬、抗真菌薬、抗不安薬、抗炎症薬、免疫調節薬、抗ウイルス薬、又は脂質低下剤として知られる上記の酸のいずれか以外の酸ではあり得ない。
【0079】
特定の実施形態において、本方法で使用される酸の濃度は、５０～７００ｍＭで変化し得る。クエン酸が使用される場合、５０～８００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度で約１００ｍＭ～６００ｍＭのクエン酸溶液が最適に使用される（図１２参照）。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１００～７５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１００～７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。別の特定の実施形態において、オスモル濃度は１１５～７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。
【0080】
コア内の酸は、ポリマーソームが水和された場合に、１～６のｐＨを生じる濃度で存在する。
【0081】
使用方法
本発明の膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソームは、それを必要とする対象におけるアンモニア若しくはそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状（例えば、高アンモニア血症（経腸）又はトリメチルアミン尿症（経腸又は局所））の腸内治療（例えば、経口、結腸、直腸）、又は局所治療に使用することができる。
本発明の膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソームは、それを必要とする対象におけるアンモニア若しくはそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状（例えば、高アンモニア血症（経腸）又はトリメチルアミン尿症（経腸又は局所））の腸内治療（例えば、経口、結腸、直腸）、又は局所治療に使用することができる。
【0082】
本明細書で使用する「アンモニア若しくはアンモニアメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状」には、高アンモニア血症（例えば、肝機能障害によって誘導される）、肝性脳症、肝硬変、急性肝不全、急性増悪慢性肝不全、門脈大循環バイパス、門脈大循環シャント、薬物誘発性高アンモニア血症、肝アンモニア代謝の先天性欠損症（原発性高アンモニア血症）、肝アンモニア代謝に影響を与える先天性欠損症（二次性高アンモニア血症）、トリメチルアミン尿症、ＴＭＡ関連心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、末梢動脈疾患、冠状動脈疾患、心筋梗塞）、ＴＭＡ関連腎疾患（例えば、腎臓の尿細管間質性線維症及び機能不全、腎不全、慢性腎疾患関連死亡）又はＴＭＡ関連細菌性膣炎、若しくはその症状が含まれる。アンモニア若しくはそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害に関連して本明細書で使用する用語「その症状」には、（例えば、皮膚及び／又は尿及び／又は呼気及び／又は膣からの）悪臭が含まれる。
【0083】
ポリマーソームは、異なる剤形で対象に経腸投与することができ、例えば、水性媒体（例えば、水、ジュース）に分散するか、又はそのまま対象が乾燥形態（例えば、カプセル、錠剤）で摂取することができる。ポリマーソームは、糞により排泄される。ポリマーソームはまた、異なる剤形で対象に局所投与することができ、例えば、水性溶液、泡、ゲル、又は乳濁液（例えば、ｏ／ｗ又はｗ／ｏ）などの局所製剤（例えば、ローション、クリーム）中に分散させることができる。
【0084】
本明細書で使用する用語「対象」又は「それを必要とする対象」は、本発明の有効量のポリマーソーム又はその組成物の摂取から利益を得る対象を指す。それは、動物、哺乳動物、特定の実施形態においてヒトを指す。本発明の組成物はまた、獣医学的用途に使用され、ペット又は他の動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマなどのペット；及び牛、魚、ブタ、家禽など）に使用され得る。特定の実施形態において、該対象は、（例えば、肝機能障害によって誘発される）高アンモニア血症を患っている。特定の実施形態において、該対象は、肝性脳症、肝硬変、急性肝不全、急性増悪慢性肝不全、門脈大循環バイパス、門脈大循環シャント、薬物誘発性高アンモニア血症、肝アンモニア代謝の先天的欠陥（原発性高アンモニア血症）、又は肝アンモニア代謝に影響を与える先天性欠損症（二次性高アンモニア血症）、又はそれらの任意の症状を患っている。別の特定の実施形態において、該対象は、トリメチルアミン尿症、ＴＭＡ関連心血管疾患、ＴＭＡ関連腎疾患、ＴＭＡ関連細菌性膣炎、又はそれらの任意の症状を患っている。
【0085】
組成物
本発明のポリマーソームは、液体（例えば、液体懸濁液）、半固体（例えば、ローション若しくはクリームなどの乳濁液）又は固体形態（例えば、粉末、カプセル、錠剤、坐剤）として保存され得る。
本発明のポリマーソームは、液体（例えば、液体懸濁液）、半固体（例えば、ローション若しくはクリームなどの乳濁液）又は固体形態（例えば、粉末、カプセル、錠剤、坐剤）として保存され得る。
【0086】
本発明はまた、薬剤の調製におけるポリマーソーム及び／又は組成物の使用に関する。
【0087】
本発明はまた、本発明の上記のポリマーソームを含む医薬組成物に関する。
【0088】
そのように限定されないが、本発明のポリマーソーム又はその組成物は、経腸経路（すなわち、胃腸管を介して）又は局所経路を介して投与され得る。例えば、経口経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、例えば、錠剤、被覆錠剤、硬質若しくは軟質ゼラチンカプセル、又は懸濁液の形態であり得る。例えば、直腸／結腸内経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、例えば、坐剤又は懸濁液の形態であり得る。例えば、局所経路が使用される場合は、該ポリマーソームは、ローション若しくはクリームなどの乳濁液（例えば、ｏ／ｗ又はｗ／ｏ）、ゲル及び泡、又は水溶液の形態であり得る。
【0089】
本発明の組成物は、限定されないが、水性又は非水性溶液を含む薬学的に許容される担体を含有することができる。非水性溶媒の例としては、限定されないが、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、乳濁液などが挙げられる。水性担体には、限定されないが、水、アルコール、生理食塩水、及び緩衝液が含まれる。薬学的に許容される担体はまた、生理学的に許容される水性ビヒクル（例えば、糖溶液、生理食塩水）又は経腸若しくは局所経路に適する他の公知の担体を含むことができる。
【0090】
錠剤、被覆錠剤、又は硬質ゼラチンカプセルの調製のために、本発明のポリマーソームは、任意の公知の薬学的に不活性の、無機若しくは有機賦形剤及び／又は担体と混合することができる。適切な賦形剤／担体の例としては、ラクトース、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク又はステアリン酸若しくはその塩が挙げられる。
【0091】
懸濁液の調製ために（ポリマーソームが水に溶解しないので、液体形態は懸濁液である）、使用され得る賦形剤には、例えば、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びグルコースが含まれ得る。
【0092】
乳濁液の調製のために、本発明のポリマーソームは、任意の公知の薬学的に不活性な、無機若しくは有機の賦形剤及び／又は担体と混合することができる。適切な賦形剤／担体の例としては、水、界面活性剤（例えば、ポリソルベート、ソルビタンエステル、ラウリル硫酸ナトリウムなど）、油（例えば、鉱油又は植物油）が挙げられる。
【0093】
本発明の組成物はまた、防腐剤、安定剤、湿潤剤、甘味料、着色剤、着臭剤、浸透圧の変化のための塩、緩衝剤、又は抗酸化剤を含有し得る。それらはまた、他の治療活性剤を含有し得る。
【0094】
担体などの本発明の組成物の製造に使用される全ての賦形剤は、無毒であり、より一般的に薬学的に許容されることが前提である。薬学的に許容される担体、賦形剤などの本明細書で使用する「薬学的に許容される」は、本発明の特定の組成物が投与される対象にとって薬理学的に許容され、実質的に無毒であることを意味する。
【0095】
併用療法
本発明のポリマーソームはまた、併用療法で、すなわち、同時若しくは連続投与のための少なくとも１種の他の活性剤又は療法と組み合わせて投与することができる。併用療法は、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状のための少なくとも１種の他の薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。
本発明のポリマーソームはまた、併用療法で、すなわち、同時若しくは連続投与のための少なくとも１種の他の活性剤又は療法と組み合わせて投与することができる。併用療法は、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害、又はその症状のための少なくとも１種の他の薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。
【0096】
例えば、併用療法は、少なくとも１種の他の抗高アンモニア血症薬若しくは療法と組み合わせるか、又は高アンモニア血症を有する対象の疾患若しくは状態の少なくとも１種の他の症状の予防又は治療に使用される薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。この文脈において、本発明のポリマーソーム又は組成物と組み合わせて（同時に又は連続的に）投与され得る活性成分又は療法の例としては、ラクツロース、リファキシミン、グリセロールフェニルブチレート、ラクチトール、分岐鎖アミノ酸、ネオマイシン、メトロニダゾール、プロバイオティクス、グルタミナーゼ阻害剤、Ｌ－オルニチン－Ｌ－アスパラギン酸、血液透析、腹膜透析、フェニル酪酸ナトリウム、ナトリウムフェニルアセテート／安息香酸ナトリウム、又はカルグルミン酸が挙げられる。
【0097】
別の例として、併用療法は、少なくとも１種の他の抗トリメチルアミン尿症剤若しくは療法と組み合わせるか、又はトリメチルアミン尿症を有する対象の疾患若しくは状態の少なくとも１種の他の症状の予防又は治療に使用される薬剤又は療法と組み合わせた本発明のポリマーソーム又は組成物を含むことができる。この文脈において、本発明のポリマーソーム又は組成物と組み合わせて（同時に又は連続的に）投与され得る活性成分又は療法の例としては、特定の経口適用される抗生物質（例えば、ネオマイシン、メトロニダゾール）、活性炭、酸性石鹸が挙げられる。
【0098】
キット
本発明のポリマーソーム又は組成物の少なくとも１種及びそれらの使用説明書を含むキットも本発明の範囲内である。該キットはさらに、少なくとも１種の追加試薬、又は本発明のポリマーソームの１以上の追加の種類を含有することができる。キットは、典型的には、キットの内容の使用目的を示すラベルを含む。用語ラベルは、キット上又はキットと共に供給される、又はそうでなければキットに付属する任意の書き込み、又は記録物質を含む。該キットはさらに、１以上の容器（複数可）、試薬（複数可）、投与装置（複数可）を含み得る。
本発明のポリマーソーム又は組成物の少なくとも１種及びそれらの使用説明書を含むキットも本発明の範囲内である。該キットはさらに、少なくとも１種の追加試薬、又は本発明のポリマーソームの１以上の追加の種類を含有することができる。キットは、典型的には、キットの内容の使用目的を示すラベルを含む。用語ラベルは、キット上又はキットと共に供給される、又はそうでなければキットに付属する任意の書き込み、又は記録物質を含む。該キットはさらに、１以上の容器（複数可）、試薬（複数可）、投与装置（複数可）を含み得る。
【0099】
投薬量
本発明のポリマーソーム又はその組成物が投与される投薬量は、年齢、（例えば、他の疾患又は状態の）対象が摂取する他の薬剤を含む多くの要因並びに他の臨床的に関連する要因に依存する。典型的には、単回用量内に含有される本発明のポリマーソーム又はその組成物の量は、著しい毒性を誘導することなく、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害又はその症状（例えば、高アンモニア血症、トリメチルアミン尿症）を効果的に治療する量である。
本発明のポリマーソーム又はその組成物が投与される投薬量は、年齢、（例えば、他の疾患又は状態の）対象が摂取する他の薬剤を含む多くの要因並びに他の臨床的に関連する要因に依存する。典型的には、単回用量内に含有される本発明のポリマーソーム又はその組成物の量は、著しい毒性を誘導することなく、アンモニア又はそのメチル化類似体に関連する疾患又は障害又はその症状（例えば、高アンモニア血症、トリメチルアミン尿症）を効果的に治療する量である。
【0100】
本発明のポリマーソーム又はその組成物の有効量はまた、直接測定され得る。有効量は、毎日又は毎週、又はその画分で与えられ得る。典型的には、ブロックコポリマーの質量で表される本発明のポリマーソームの用量は、１日あたり体重１ｋｇあたり約１ｍｇから最大約５００ｍｇの範囲（例えば、１日あたり体重１ｋｇあたり１ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、又は２５０ｍｇ）である。投薬量は、単一又は複数の投与計画で提供され得る。例えば、いくつかの実施形態において、有効量は、１日あたり約２５０ｍｇ～約５００ｍｇ、１日あたり約５００ｍｇ～約１０００ｍｇ、１日あたり約１ｇ、１日あたり約２～１２ｇ、１週間あたり約１４～約８６ｇの組成物などの範囲であり得る。
【0101】
本発明は、本明細書に記載の割合で、上記有機相と水相を混合する技術を使用して、本明細書に記載の溶媒及び酸又は酸性溶液を用いて調製された本明細書に記載のブロックコポリマー、又はそれを含む組成物の任意の組み合わせを包含する。
【0102】
本発明を説明する文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」及び「その」及び類似の指示対象の使用は、特に本明細書に示されていないか、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、単数と複数の両方を包含すると解釈されるべきである。
【0103】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する」は、特に断りのない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「を含むが、これらに限定されない」を意味する）と解釈されるべきである。
【0104】
本明細書における値の範囲の列挙は、特に本明細書に示されない限り、範囲内に入るそれぞれ別個の値に個々に言及する簡略方法として役立つことを単に意図し、かつ各別個の値は、本明細書に個々に列挙されているように本明細書に組み込まれる。範囲内の値の全てのサブセットも、個々に本明細書に列挙されているように、本明細書に組み込まれる。
【0105】
本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特に示されない限り、又は特に文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。
【0106】
本明細書に提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることが意図され、特に請求しない限り、本発明の範囲を限定するものではない。
【0107】
本明細書中の言語は、本発明の実施に不可欠な任意の非請求要素を示すものとして解釈されるべきではない。
【0108】
本明細書では、用語「約」はその通常の意味を有する。実施形態において、それは、限定された数値のプラス又はマイナス１０％を意味し得る。
【0109】
特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【0110】
本発明は、以下の非限定的実施例によりさらに詳細に示される。
【0111】
実施例１：膜水和法を用いて調製したリポソームのインビトロアンモニア取り込み
リポソーム調製
５４：４５：１モル％で（ｉ）１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）又は１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、（ｉｉ）コレステロール及び（ｉｉｉ）１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ＰＥＯ）－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＯ）で構成されるリポソームを、膜水和法により調製した。ＤＰＰＣ ３６．７ｍｇ／ｍＬ、ＤＳＰＣ ３９．５ｍｇ／ｍＬ、コレステロール１９．３ｍｇ／ｍＬ、及びＤＳＰＥ－ＰＥＯ １３．９ｍｇ／ｍＬのストック溶液をクロロホルムで調製した。
リポソーム調製
５４：４５：１モル％で（ｉ）１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）又は１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、（ｉｉ）コレステロール及び（ｉｉｉ）１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ＰＥＯ）－２０００］（ＤＳＰＥ－ＰＥＯ）で構成されるリポソームを、膜水和法により調製した。ＤＰＰＣ ３６．７ｍｇ／ｍＬ、ＤＳＰＣ ３９．５ｍｇ／ｍＬ、コレステロール１９．３ｍｇ／ｍＬ、及びＤＳＰＥ－ＰＥＯ １３．９ｍｇ／ｍＬのストック溶液をクロロホルムで調製した。
【0112】
ＤＳＰＣリポソームについて、８．２ｍｇのコレステロール、２０．２ｍｇのＤＳＰＣ、及び１．３ｍｇのＤＳＰＥ－ＰＥＯを、クロロホルムストック溶液としてガラスバイアルに添加した。ＤＰＰＣリポソームについては、１９．７ｍｇのＤＰＰＣ、８．７ｍｇのコレステロール、及び１．４ｍｇのＤＳＰＥ－ＰＥＯを、クロロホルムストック溶液としてガラスバイアルに添加した。その後、有機溶媒を２時間の窒素流によって除去し、一晩、真空下で貯蔵保存した。５５℃に加熱し、脂質膜がそれ以上見えなくなるまでゆっくりと混合しながら、乾燥膜を３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ２．０で２５０ｍＭのクエン酸溶液１ｍＬで水和した（脂質濃度＝２９．８ｍｇ／ｍＬ）。リポソームはｐＨ２のクエン酸溶液を封入した。プロセスの終了時に、リポソーム内外にクエン酸が存在する。
【0113】
インビトロアンモニア取り込み
膜貫通ｐＨ勾配を、胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）及びデオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ、両方とも２５ｍＭ）の非存在下及び存在下でｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調節したリン酸緩衝液（最終濃度５０ｍＭ）に希釈して、３７℃に維持した並んだ拡散セル内で生成した。デュアルチャンバシステムを、ポリカーボネート膜（孔サイズ＝５０ｎｍ）によって分離し、物理的に一方の側にリポソームを隔離した。脂質及び拡散細胞内のアンモニア濃度は、それぞれ、１．７５ｍｇ／ｍＬ及び１．５ｍＭであった。割り当てた時間に、４０μＬのアリコートを、リポソームを含まない区画から採取し、アンモニア濃度を、等量のアルカリ性の次亜塩素酸ナトリウム溶液及びフェノールニトロプルシド溶液を用いてベルテロー反応によって決定した。アンモニア取り込み能を、式１：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総脂質質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総脂質質量［ｇ］
を用いて定量した。
膜貫通ｐＨ勾配を、胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）及びデオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ、両方とも２５ｍＭ）の非存在下及び存在下でｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに調節したリン酸緩衝液（最終濃度５０ｍＭ）に希釈して、３７℃に維持した並んだ拡散セル内で生成した。デュアルチャンバシステムを、ポリカーボネート膜（孔サイズ＝５０ｎｍ）によって分離し、物理的に一方の側にリポソームを隔離した。脂質及び拡散細胞内のアンモニア濃度は、それぞれ、１．７５ｍｇ／ｍＬ及び１．５ｍＭであった。割り当てた時間に、４０μＬのアリコートを、リポソームを含まない区画から採取し、アンモニア濃度を、等量のアルカリ性の次亜塩素酸ナトリウム溶液及びフェノールニトロプルシド溶液を用いてベルテロー反応によって決定した。アンモニア取り込み能を、式１：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総脂質質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総脂質質量［ｇ］
を用いて定量した。
【0114】
リポソーム製剤は、リン酸緩衝液中でアンモニアを捕捉することができたが、胆汁塩含有媒体では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図１に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0115】
実施例２：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約（すなわち、小数点２桁目を四捨五入した）１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、水中油型（ｏ／ｗ）乳化法を用いて生成した。より具体的には、６０ｍｇのＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ（約１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比（すなわち、２５００ｇ／モル／１５００ｇ／モル）、ＰＢＤ（２５００）－ｂ－ＰＥＯ（１５００））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解した。ポリマージクロロメタン溶液（ポリマー含有有機溶媒相、すなわち、油相）を、氷浴中で３分間超音波処理しながら（振幅７０、周期０．７５、継続時間３分）、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ２．０で２５０ｍＭのクエン酸溶液（酸性水相）１ｍＬを滴加し、９％（ｖ／ｖ）の溶媒／水相比を有する乳濁液を形成させた。有機溶媒を、４０℃で少なくとも５分間、ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた。ポリマーソームはｐＨ２のクエン酸溶液をカプセル化した。プロセスの最後に、ポリマーソームの内外にクエン酸がある。
ポリマーソーム調製
ＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、水中油型（ｏ／ｗ）乳化法を用いて生成した。より具体的には、６０ｍｇのＰＢＤ－ｂ－ＰＥＯ（約１．７のＰＢＤ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比（すなわち、２５００ｇ／モル／１５００ｇ／モル）、ＰＢＤ（２５００）－ｂ－ＰＥＯ（１５００））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解した。ポリマージクロロメタン溶液（ポリマー含有有機溶媒相、すなわち、油相）を、氷浴中で３分間超音波処理しながら（振幅７０、周期０．７５、継続時間３分）、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ２．０で２５０ｍＭのクエン酸溶液（酸性水相）１ｍＬを滴加し、９％（ｖ／ｖ）の溶媒／水相比を有する乳濁液を形成させた。有機溶媒を、４０℃で少なくとも５分間、ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた。ポリマーソームはｐＨ２のクエン酸溶液をカプセル化した。プロセスの最後に、ポリマーソームの内外にクエン酸がある。
【0116】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、１．７５ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を用いて、実施例１に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。アンモニア捕捉能を、式２：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］
を用いて定量した。
インビトロアンモニア取り込みを、１．７５ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を用いて、実施例１に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。アンモニア捕捉能を、式２：
アンモニア捕捉能＝カプセル化アンモニア［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総アンモニア［μモル］－遊離アンモニア［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］
を用いて定量した。
【0117】
ＰＢＤ ＰＥＯポリマーソームは、リン酸緩衝液中でアンモニアを捕捉することができたが、胆汁塩含有媒体では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図２に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0118】
実施例３：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比を有するＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソーム（約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比（ＰＭＯＸＡ（５２０）－ｂ－ＰＤＭＳ（２５３０）－ｂ－ＰＭＯＸＡ（５２０）））を実施例２に記載のように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＭＯＸＡ－ｂ－ＰＤＭＳ－ｂ－ＰＭＯＸＡポリマーソーム（約２．４のＰＤＭＳ／ＰＭＯＸＡ数平均Ｍｗ比（ＰＭＯＸＡ（５２０）－ｂ－ＰＤＭＳ（２５３０）－ｂ－ＰＭＯＸＡ（５２０）））を実施例２に記載のように生成した。
【0119】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩なし（すなわち、リン酸緩衝液のみ）で、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩なし（すなわち、リン酸緩衝液のみ）で、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0120】
ＰＭＯＸＡ ＰＤＭＳ ＰＭＯＸＡポリマーソームは、胆汁塩を含まない（すなわち、リン酸緩衝液のみの）媒体中では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図３に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0121】
実施例４：膜水和法を用いて調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、膜水和法を用いて生成した。より具体的には、２９．８ｍｇのＰＳ－ｂ－ＰＥＯ（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解し、ガラスバイアルに添加した。その後、有機溶媒を２時間、窒素流によって除去し、真空下で一晩保存した。乾燥膜を、６５℃に加熱し、１．２５時間超音波処理しながら、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、ｐＨ２．０の２５０ｍＭのクエン酸溶液１ｍＬで水和した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームを、膜水和法を用いて生成した。より具体的には、２９．８ｍｇのＰＳ－ｂ－ＰＥＯ（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比））を、１００μＬのジクロロメタンに溶解し、ガラスバイアルに添加した。その後、有機溶媒を２時間、窒素流によって除去し、真空下で一晩保存した。乾燥膜を、６５℃に加熱し、１．２５時間超音波処理しながら、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、ｐＨ２．０の２５０ｍＭのクエン酸溶液１ｍＬで水和した。
【0122】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0123】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩を含まない（すなわち、リン酸緩衝液のみの）媒体中では捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図４に報告する。グラフ中の各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0124】
実施例５：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．０（ＰＳ（１９７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．０（ＰＳ（１９７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0125】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩組成物を変更して（ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、タウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）３０ｍＭ、最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。この胆汁塩濃度は、生理的濃度の２倍に相当する。
インビトロアンモニア取り込みを、胆汁塩組成物を変更して（ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、タウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）３０ｍＭ、最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、実施例２に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。この胆汁塩濃度は、生理的濃度の２倍に相当する。
【0126】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができなかった（ｎ＝３）。結果を図５に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0127】
実施例６：有機溶媒としてジクロロメタン又はトルエンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３～２．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．６（ＰＳ（３１５０－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．８（ＰＳ（３５７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように生成した。ＰＳ／ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように調製したが、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにトルエンを使用し、かつポリマー量を少なくした（２０ｍｇ）。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．６（ＰＳ（３１５０－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約１．８（ＰＳ（３５７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））、又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように生成した。ＰＳ／ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載のように調製したが、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにトルエンを使用し、かつポリマー量を少なくした（２０ｍｇ）。
【0128】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、約１．３～２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ ＰＥＯポリマーソームについて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。ＰＳ ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ）を、リン酸濃度を変更して（２５ｍＭ）、４４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ６．８で、実施例５に記載したように評価した。
インビトロアンモニア取り込みを、約１．３～２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ ＰＥＯポリマーソームについて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。ＰＳ ＰＥＯポリマーソーム（約２．８（ＰＳ（６０００）－ｂ－ＰＥＯ（２１８０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ）を、リン酸濃度を変更して（２５ｍＭ）、４４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、ｐＨ６．８で、実施例５に記載したように評価した。
【0129】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図６に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0130】
実施例７：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約３．８のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマー合成
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯを、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）により合成した。まず、市販のＰＥＯモノメチルエーテル（２１５０ｇ／ｍｏｌ－1）を、ＴＨＦ中のブロモイソブチリルブロミド（５．０当量）及びトリエチルアミン（５．０当量）と反応させ、マクロ開始剤を得た。その後の重合反応では、このマクロ開始剤（１．０当量）、ＣｕＢｒ（１．６当量）、及び４，４’－ジノニル－２，２’－ジピリジル（１．４当量）をシュレンクフラスコに移し、真空アルゴンサイクルにより脱気した。スチレン（７０当量）を別の反応フラスコに加え、アルゴンを用いて脱気し、反応フラスコに移した。反応を２４時間、１１５℃で行った。最終生成物の精製を、塩基性アルミナのカラムを通して溶液を通過させ、その後、ヘキサンで２回沈殿させることによって達成した。ポリマーの数平均分子量を、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって決定し、芳香族ポリスチレンピークとＰＥＧ骨格の積分値を比較し、ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０）のポリマー組成物を得た。
ポリマー合成
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯを、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）により合成した。まず、市販のＰＥＯモノメチルエーテル（２１５０ｇ／ｍｏｌ－1）を、ＴＨＦ中のブロモイソブチリルブロミド（５．０当量）及びトリエチルアミン（５．０当量）と反応させ、マクロ開始剤を得た。その後の重合反応では、このマクロ開始剤（１．０当量）、ＣｕＢｒ（１．６当量）、及び４，４’－ジノニル－２，２’－ジピリジル（１．４当量）をシュレンクフラスコに移し、真空アルゴンサイクルにより脱気した。スチレン（７０当量）を別の反応フラスコに加え、アルゴンを用いて脱気し、反応フラスコに移した。反応を２４時間、１１５℃で行った。最終生成物の精製を、塩基性アルミナのカラムを通して溶液を通過させ、その後、ヘキサンで２回沈殿させることによって達成した。ポリマーの数平均分子量を、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって決定し、芳香族ポリスチレンピークとＰＥＧ骨格の積分値を比較し、ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０）のポリマー組成物を得た。
【0131】
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約３．８（ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約３．８（ＰＳ（８１００）－ｂ－ＰＥＯ（２１５０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0132】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ポリマー濃度を１．２４ｍｇ／ｍＬに変更して、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、ポリマー濃度を１．２４ｍｇ／ｍＬに変更して、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0133】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図７に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0134】
実施例８：有機溶媒としてクロロホルムを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高胆汁塩濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにクロロホルムを用いて、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、有機溶媒としてジクロロメタンの代わりにクロロホルムを用いて、実施例２に記載したように生成した。
【0135】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0136】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図８に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0137】
実施例９：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約１．３又は２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの低浸透圧及び高浸透圧条件下でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００）又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００）又は約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0138】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８で緩衝液を変更して（低浸透圧条件：ＳＣ ２５ｍＭ及びＳＤＣ ２５ｍＭを含有するリン酸緩衝液１０ｍＭ、最終オスモル濃度１６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；高浸透圧性条件：ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、及びＳＴＣの３０ｍＭを含有するリン酸緩衝液５０ｍＭ、塩化ナトリウムを添加すると、最終オスモル濃度は６２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに達する、すなわち、生理的条件で胃腸管に見られるものよりも劇的に極端な条件）、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８で緩衝液を変更して（低浸透圧条件：ＳＣ ２５ｍＭ及びＳＤＣ ２５ｍＭを含有するリン酸緩衝液１０ｍＭ、最終オスモル濃度１６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；高浸透圧性条件：ＳＣ ３０ｍＭ、ＳＤＣ ３０ｍＭ、及びＳＴＣの３０ｍＭを含有するリン酸緩衝液５０ｍＭ、塩化ナトリウムを添加すると、最終オスモル濃度は６２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに達する、すなわち、生理的条件で胃腸管に見られるものよりも劇的に極端な条件）、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0139】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、低浸透圧及び高浸透圧条件下で、胆汁酸塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図９に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0140】
実施例１０：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約２．５のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの消化酵素の存在下でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約２．５（ＰＳ（５１５０）－ｂ－ＰＥＯ（２０６０）のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0141】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、緩衝液を変更して（リン酸緩衝液５０ｍＭ、ＳＣ １２．５ｍＭ、ＳＤＣ １２．５ｍＭ、ブタ膵臓からのトリプシン １ｍｇ／ｍＬ（約１００００ユニット／ｍＬ）、ウシ膵臓からのα－キモトリプシン（ＩＩ型） １ｍｇ／ｍＬ（約４０ユニット／ｍＬ）、ブタ膵臓からのリパーゼ（ＩＩ型） ３ｍｇ／ｍＬ（約３００ユニット／ｍＬ））、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。酵素の活性は、米国薬局方（ＵＳＰ３９－ＮＦ３４）の模擬腸液中のプロテアーゼ及びリパーゼ活性に相当する。実施例５で使用したものよりも低い胆汁塩濃度を選択して、酵素活性を確実にし、反応速度を四時間に制限し、消化酵素の分解生成物による干渉を回避した。
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇで、緩衝液を変更して（リン酸緩衝液５０ｍＭ、ＳＣ １２．５ｍＭ、ＳＤＣ １２．５ｍＭ、ブタ膵臓からのトリプシン １ｍｇ／ｍＬ（約１００００ユニット／ｍＬ）、ウシ膵臓からのα－キモトリプシン（ＩＩ型） １ｍｇ／ｍＬ（約４０ユニット／ｍＬ）、ブタ膵臓からのリパーゼ（ＩＩ型） ３ｍｇ／ｍＬ（約３００ユニット／ｍＬ））、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。酵素の活性は、米国薬局方（ＵＳＰ３９－ＮＦ３４）の模擬腸液中のプロテアーゼ及びリパーゼ活性に相当する。実施例５で使用したものよりも低い胆汁塩濃度を選択して、酵素活性を確実にし、反応速度を四時間に制限し、消化酵素の分解生成物による干渉を回避した。
【0142】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体及び消化酵素含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図１０に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0143】
実施例１１：有機溶媒としてジクロロメタンを用いて、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームの高いカリウム濃度でのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３（ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0144】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、２５０ｍＭのカリウム濃度（最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、２５０ｍＭのカリウム濃度（最終ｐＨ６．８及びオスモル濃度７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例５に記載の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0145】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、２５０ｍＭのカリウム濃度で、胆汁塩含有媒体中でアンモニアを捕捉することができた（ｎ＝３）。結果を図１１に示す。グラフの各点はｎ＝３のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
【0146】
実施例１２：有機溶媒としてジクロロメタンを使用し、酸濃度を変更して、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することによって調製した、約１．３のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのインビトロアンモニア取り込み
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、ｐＨ２．０のクエン酸溶液 １００ｍＭ（１１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２００ｍＭ（２３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２５０ｍＭ（３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、３００ｍＭ（３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、４００ｍＭ（４６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、５００ｍＭ（５８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）又は６００ｍＭ（７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソーム（約１．３ＰＳ（２６００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）を、ｐＨ２．０のクエン酸溶液 １００ｍＭ（１１５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２００ｍＭ（２３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、２５０ｍＭ（３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、３００ｍＭ（３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、４００ｍＭ（４６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、５００ｍＭ（５８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）又は６００ｍＭ（７００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）を用いて、実施例２に記載したように生成した。
【0147】
インビトロアンモニア取り込み
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８（最終オスモル濃度３００～４００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）で、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。
インビトロアンモニア取り込みを、ｐＨ６．８（最終オスモル濃度３００～４００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）で、実施例３に記載（すなわち、リン酸緩衝液のみ）の並んだ拡散セルを用いて調べた。
【0148】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩を含まない媒体（ｎ＝３～４）中でアンモニアを捕捉することができた。結果を図１２に示す。グラフの各点はｎ＝３～４のグループの平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。膜貫通ｐＨ勾配ポリマーソーム中のアンモニアの捕獲能（ポリマー１ｇ当たり捕捉されるアンモニア）は、ＡＳＴ－１２０活性炭（炭１ｇ当たり捕捉されるアンモニア、Ｂｏｓｏｉら、前出）で作られたアンモニア吸着微小粒子のそれよりも２０倍高かった。特許請求の範囲は、実施例に記載の好ましい実施形態によって限定されるべきではないが、全体としての説明と一致する最も広い解釈が与えられるべきである。
【0149】
実施例１３：有機溶媒としてジクロロメタンを使用して、ポリマー含有有機溶媒相と水性酸性相を混合することにより調製した、約１．４～２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比を有するＰＳ－ｂ－ＰＥＯポリマーソームのＯ／Ｗ乳濁液への前暴露後の、高胆汁酸塩濃度でのインビトロＴＭＡ取り込み
ポリマーソーム調製
ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（約１．４（ＰＳ（２７７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））及び約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比）を、実施例２に記載したように生成した。
ポリマーソーム調製
ポリ（スチレン）－ｂ－ポリ（エチレンオキシド）（約１．４（ＰＳ（２７７０）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））及び約２．０（ＰＳ（３９００）－ｂ－ＰＥＯ（２０００））のＰＳ／ＰＥＯ数平均分子量（Ｍｗ）比）を、実施例２に記載したように生成した。
【0150】
インビトロＴＭＡ取り込み
膜貫通ｐＨ勾配を、それぞれ３０ｍＭの胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）、デオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ）、及びタウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）の存在下（約１．４及び２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）又は非存在下（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）で、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌに調整した５０ｍＭのリン酸緩衝液での希釈によって、３７℃に維持した並んだ拡散セルで生成した。Ｏ／Ｗ乳濁液へのポリマーソームの前暴露を伴う実験において（クリーム又はローションへの組み込みを模倣するため）、１０％（ｖ／ｖ）のＯ／Ｗ乳濁液（５％（ｍ／ｖ）のポリソルベート８０、１５％（ｖ／ｖ）の鉱油、及び総体積に到達するのに十分なリン酸緩衝生理食塩水）を、取り込み実験の直前にポリマーソーム分散液（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）に添加した。
膜貫通ｐＨ勾配を、それぞれ３０ｍＭの胆汁塩コール酸ナトリウム（ＳＣ）、デオキシコール酸ナトリウム（ＳＤＣ）、及びタウロコール酸ナトリウム（ＳＴＣ）の存在下（約１．４及び２．０のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）又は非存在下（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）で、ｐＨ６．８及び３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌに調整した５０ｍＭのリン酸緩衝液での希釈によって、３７℃に維持した並んだ拡散セルで生成した。Ｏ／Ｗ乳濁液へのポリマーソームの前暴露を伴う実験において（クリーム又はローションへの組み込みを模倣するため）、１０％（ｖ／ｖ）のＯ／Ｗ乳濁液（５％（ｍ／ｖ）のポリソルベート８０、１５％（ｖ／ｖ）の鉱油、及び総体積に到達するのに十分なリン酸緩衝生理食塩水）を、取り込み実験の直前にポリマーソーム分散液（約１．４のＰＳ／ＰＥＯ数平均Ｍｗ比）に添加した。
【0151】
デュアルチャンバシステムを、物理的に一方の側にポリマーソームを隔離するポリカーボネート膜（孔サイズ＝５０ｎｍ）により分離した。拡散セル内のポリマー及びＴＭＡの濃度は、それぞれ、１．７５ｍｇ／ｍＬ及び１．５ｍＭであった。割り当てられた時間で、４０μＬのアリコートを、ポリマーソームを含まないコンパートメントから取り、ＴＭＡの濃度を、ＴＭＡ標準物質で較正したＰｏｃｋｅｔＣｈｅｍ（商標）ＢＡ ＰＡ－４１４０（Ａｒｋｒａｙ社）によって測定した。ＴＭＡ捕捉能を、式３を用いて定量し、総ＴＭＡ濃度は、１０分のインキュベーションでの細胞中のＴＭＡ量を指す。
式３：
ＴＭＡ捕捉能＝カプセル化ＴＭＡ［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総ＴＭＡ［μモル］－遊離ＴＭＡ［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］
式３：
ＴＭＡ捕捉能＝カプセル化ＴＭＡ［μモル］／総ポリマー質量［ｇ］
＝（総ＴＭＡ［μモル］－遊離ＴＭＡ［μモル］）／総ポリマー質量［ｇ］
【0152】
ＰＳ ＰＥＯポリマーソームは、胆汁塩含有媒体及びＯ／Ｗ乳濁液中でＴＭＡを捕捉することができた（ｎ＝３）。ポリマーソームが、腸管環境を模倣した過酷な条件下で、又はＯ／Ｗ乳濁液（例えば、局所投与用のローション若しくはクリーム）への組み込み後にＴＭＡを効率的に捕捉したことをデータは示す。結果を図１３に示す。グラフの各ヒストグラムバーはグループ（ｎ＝３）の平均を表し、エラーバーは標準偏差を表す。
参考文献
参考文献
【表1】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】