特許 7181854 ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要とする患者の同定

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-11-22

(45)【発行日】2022-12-01

(54)【発明の名称】ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要とする患者の同定

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/6886 20180101AFI20221124BHJP

   C12M 1/34 20060101ALI20221124BHJP

   C12M 1/00 20060101ALI20221124BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20221124BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20221124BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20221124BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221124BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20221124BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20221124BHJP

   G01N 37/00 20060101ALI20221124BHJP

【ＦＩ】

C12Q1/6886 Z ZNA

C12M1/34 B

C12M1/00 A

C12M1/34 F

A61K31/337

A61K39/395 T

A61K45/06

A61P35/00

G01N33/53 M

G01N33/53 N

G01N33/574 A

G01N37/00 102

【請求項の数】 58

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2019236560

(22)【出願日】2019-12-26

(62)【分割の表示】P 2015544488の分割

【原出願日】2013-11-29

(65)【公開番号】P2020099324

(43)【公開日】2020-07-02

【審査請求日】2020-01-23

(31)【優先権主張番号】12195182.6

(32)【優先日】2012-11-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】12196177.5

(32)【優先日】2012-12-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】306021192

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ベロウソフ， アントン

(72)【発明者】

【氏名】ビアンキーニ， ジャンパオロ

(72)【発明者】

【氏名】ジャンニ， ルカ

(72)【発明者】

【氏名】トーマス， マルレーネ

【審査官】市島 洋介

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１１／１２７１８０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１２／１４３５２３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】Neoplasia，2006年，Vol.8, No.3，pp.190-198

【文献】J. Korean Med. Sci.，2009年，Vol.24，pp.910-917

【文献】J. Clin. Oncol.，2001年，Vol.19, No.10，pp.2587-2595

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｑ １／００－３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定するためのインビトロ方法であって、該ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法において、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤及び化学療法剤と併用され、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療が患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療を受けており、前記方法は
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がＰＤ－Ｌ１カットオフ値と比べ増加していることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程と
を含み、ここで、前記試料が、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）によるＥＲの＜１％染色を示す場合、前記試料は非発現か又は低量発現のＥＲ発現量を有すると評価され、
前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、並びに
前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２切断阻害剤である、及び／又は前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２二量体化阻害剤である、方法。

【請求項2】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療するための医薬であって、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤、化学療法剤、及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を含み、そのがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、及びＰＤ－Ｌ１カットオフ値に比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有していることが決定されたがん患者が、該医薬を用いた治療のために選定され、ここで、がん患者からの試料が、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）によるＥＲの＜１％染色を示す場合、前記がんは非発現か又は低量発現のＥＲ発現量を有すると評価され、
前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、並びに
前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２切断阻害剤である、及び／又は前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２二量体化阻害剤である、医薬。

【請求項3】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤及び化学療法剤と組み合わせて治療するための医薬、又は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤及び化学療法剤と組み合わせて治療するための医薬であって、前記医薬がプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を含み、そのがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、及びＰＤ－Ｌ１カットオフ値に比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有することが決定されたがん患者が、該医薬を用いた治療のために選定され、ここで、前記がん患者からの試料が、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）によるＥＲの＜１％染色を示す場合、前記がんは非発現か又は低量発現のＥＲ発現量を有すると評価され、
前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、並びに
前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２切断阻害剤である、及び／又は前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２二量体化阻害剤である、医薬。

【請求項4】

がんを、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤及び化学療法剤を用いた併用療法により治療するための医薬組成物であって、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を含み、前記がんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、及びＰＤ－Ｌ１カットオフ値と比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有することが決定されたものであり、ここで、前記がんからの試料が、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）によるＥＲの＜１％染色を示す場合、前記がんは非発現か又は低量発現のＥＲ発現量を有すると評価され、
前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、並びに
前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２切断阻害剤である、及び／又は前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２二量体化阻害剤である、医薬組成物。

【請求項5】

化学療法剤を更に含む、請求項４に記載の医薬組成物。

【請求項6】

がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定するためのインビトロ方法であって、該ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法において、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤及び化学療法剤と併用され、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療が患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤と化学療法剤とを含む治療を受けており、前記方法は
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）とインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がＰＤ－Ｌ１カットオフ値と比べ増加していること、及びＩＦＮγカットオフ値と比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量が測定される場合に患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程と
を含み、ここで、前記試料が、免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）によるＥＲの＜１％染色を示す場合、前記試料は非発現か又は低量発現のＥＲ発現量を有すると評価され、
前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり、並びに
前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２切断阻害剤である、及び／又は前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤が、ＨＥＲ２に結合する抗体（抗ＨＥＲ２抗体）であり且つＨＥＲ２二量体化阻害剤である、方法。

【請求項7】

前記がんがＩＦＮγカットオフ値と比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すると決定される、請求項２又は３に記載の医薬、又は請求項４又は５に記載の医薬組成物。

【請求項8】

ＥＲ発現量がＥＲ（－）である、請求項２、３及び７の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ＨＥＲ２受容体に結合する、請求項２、３、７及び８の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５、７及び８の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ＨＥＲ２細胞外ドメインのサブドメインＩＶに結合する、請求項９に記載の医薬、又は請求項９に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ハーセプチン（登録商標）／トラスツズマブである、請求項２、３及び７から１０の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１０の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２のヘテロ二量体化又はＨＥＲ２のホモ二量体化を阻害する、請求項２、３及び７から１１の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１１の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２受容体に結合する、請求項２、３及び７から１２の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１２の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合する、請求項１３に記載の医薬、又は請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記抗ＨＥＲ２抗体がＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩの間の接合点に結合する、請求項１４に記載の医薬、又は請求項１４に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである、請求項２、３及び７から１５の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１５の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項17】

前記化学療法剤がタキソール（登録商標）又はその誘導体である、請求項２、３及び７から１６の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１６の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項18】

前記タキソール誘導体がドセタキセルである、請求項１７に記載の医薬、又は請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、
（ａ）重鎖が、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）及びRHWPGGFDY（配列番号３）と配列同一性をそれぞれ有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２並びにＨＶＲ－Ｈ３を含み、且つ
（ｂ）軽鎖が、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）と配列同一性をそれぞれ有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含む
請求項２、３及び７から１８の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から１８の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記抗体がヒトコンセンサス配列に由来するＶＨ及びＶＬフレームワーク領域を更に含む、請求項１９に記載の医薬、又は請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項21】

ＶＨフレームワーク配列がＫａｂａｔサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する、請求項２０に記載の医薬、又は請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項22】

ＶＬフレームワーク配列がＫａｂａｔカッパＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶサブグループ配列に由来する、請求項２０に記載の医薬、又は請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、
（ａ）重鎖配列が、重鎖配列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA（配列番号２０）と少なくとも９５％の配列同一性を有し、且つ
（ｂ）軽鎖配列が、軽鎖配列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR（配列番号２１）と少なくとも９５％の配列同一性を有する、
請求項１９に記載の医薬、又は請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項24】

前記がんが固形がんである、請求項２、３及び７から２３の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から２３の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記固形がんが乳がん又は胃がんである、請求項２４に記載の医薬、又は請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記固形がんが乳がんである、請求項２４に記載の医薬、又は請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項27】

ＰＤ－Ｌ１の発現量がｍＲＮＡ発現量である、請求項２、３及び７から２６の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から２６の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項28】

ＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡ発現量が、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、マイクロアレイ、又はリアルタイムＰＣＲにより評価される、請求項２７に記載の医薬、又は請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項29】

ＰＤ－Ｌ１の発現量がタンパク質発現量である、請求項２、３及び７から２６の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から２６の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項30】

前記ＰＤ－Ｌ１のタンパク質発現量が、免疫アッセイ、ゲル又はブロットベースの技法、ＩＨＣ法、質量分析、フローサイトメトリー、もしくはＦＡＣＳ法で評価される、請求項２９に記載の医薬、又は請求項２９に記載の医薬組成物。

【請求項31】

治療される患者がヒトである、請求項２、３及び７から３０の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から３０の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項32】

前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤、前記化学療法剤、及び前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤が、ネオアジュバント設定又はアジュバント設定又は転移性がんを治療する設定で投与される、請求項２、３及び７から３１の何れか一項に記載の医薬、又は請求項４、５及び７から３１の何れか一項に記載の医薬組成物。

【請求項33】

ＥＲ発現量がＥＲ（－）である、請求項１又は６に記載の方法。

【請求項34】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ＨＥＲ２受容体に結合する、請求項１、６及び３３の何れか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ＨＥＲ２細胞外ドメインのサブドメインＩＶに結合する、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２切断阻害剤であり、ハーセプチン（登録商標）／トラスツズマブである、請求項１、６及び３３から３５の何れか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２のヘテロ二量体化又はＨＥＲ２のホモ二量体化を阻害する、請求項１、６及び３３から３６の何れか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２受容体に結合する、請求項１、６及び３３から３７の何れか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ二量体化阻害剤であり、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合する、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記抗ＨＥＲ２抗体がＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩの間の接合点に結合する、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである、請求項１、６及び３３から４０の何れか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記化学療法剤がタキソール（登録商標）又はその誘導体である、請求項１、６及び３３から４１の何れか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記タキソール誘導体がドセタキセルである、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、
（ａ）重鎖が、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）及びRHWPGGFDY（配列番号３）と配列同一性をそれぞれ有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２並びにＨＶＲ－Ｈ３を含み、且つ
（ｂ）軽鎖が、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）と配列同一性をそれぞれ有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含む
請求項１、６及び３３から４３の何れか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記抗体がヒトコンセンサス配列に由来するＶＨ及びＶＬフレームワーク領域を更に含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

ＶＨフレームワーク配列がＫａｂａｔサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来する、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

ＶＬフレームワーク配列がＫａｂａｔカッパＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶサブグループ配列に由来する、請求項４５に記載の方法。

【請求項48】

前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、
（ａ）重鎖配列が、重鎖配列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA（配列番号２０）と少なくとも９５％の配列同一性を有し、且つ
（ｂ）軽鎖配列が、軽鎖配列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR（配列番号２１）と少なくとも９５％の配列同一性を有する、
請求項４４に記載の方法。

【請求項49】

前記がんが固形がんである、請求項１、６及び３３から４８の何れか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記固形がんが乳がん又は胃がんである、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記固形がんが乳がんである、請求項４９に記載の方法。

【請求項52】

ＰＤ－Ｌ１の発現量がｍＲＮＡ発現量である、請求項１、６及び３３から５１の何れか一項に記載の方法。

【請求項53】

ＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡ発現量が、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、マイクロアレイ、又はリアルタイムＰＣＲにより評価される、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

ＰＤ－Ｌ１の発現量がタンパク質発現量である、請求項１、６及び３３から５１の何れか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＰＤ－Ｌ１のタンパク質発現量が、免疫アッセイ、ゲル又はブロットベースの技法、ＩＨＣ法、質量分析、フローサイトメトリー、もしくはＦＡＣＳ法で評価される、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

治療される患者がヒトである、請求項１、６及び３３から５５の何れか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の阻害剤、前記化学療法剤、及び前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤が、ネオアジュバント設定又はアジュバント設定又は転移性がんを治療する設定で投与される、請求項１、６及び３３から５６の何れか一項に記載の方法。

【請求項58】

ＥＲ、及びＰＤ－Ｌ１の発現量を検出することができる核酸又は抗体を含む、請求項１、６及び３３から５７の何れか一項に記載の方法を実施するためのキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、患者がＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としているかどうかを決定する手段及び方法に関する。患者由来の試料において、ＥＲが非発現か又は低量であって、且つ、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していることがインビトロで測定される場合、その患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定される。該患者は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブなど）と化学療法剤（ドセタキセル（ｄｏｄｅｔａｘｅｌ）など）とを含む治療を受けているか、或いはそのような治療が該患者のために計画されている。また、本明細書中には、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブなど）と化学療法剤（ドセタキセルなど）とを含む治療が計画されているがん患者におけるがんを治療するための手段及び方法も提供され、該患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を受けることができる。

【背景技術】

【0002】

受容体チロシンキナーゼのＨＥＲファミリーは細胞増殖、分化及び生存の重要な媒介物である。この受容体ファミリーには、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１又はＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２又はｐ１８５^ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４又はｔｙｒｏ２）を含む４つの異なるメンバーが含まれる。

【0003】

ｅｒｂＢ１遺伝子でコードされたＥＧＦＲは、ヒト悪性腫瘍に原因として関与している。特に、ＥＧＦＲ発現の増加は、乳房、膀胱、肺、頭部、頸部及び胃のがん並びに神経膠芽腫において観察されている。ＥＧＦＲ受容体の発現の増加は、同じ腫瘍細胞によるＥＧＦＲリガンドであるトランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ－α）の産生の増加にしばしば関連し、自己分泌刺激経路による受容体の活性化が生じる。Baselga and Mendelsohn Pharmac. Ther. 64:127-154 (1994)。ＥＧＦＲ又はそのリガンドであるＴＧＦ－α及びＥＧＦに対するモノクローナル抗体は、そのような悪性腫瘍の治療における治療剤として評価されている。例えば、Baselga and Mendelsohn., supra; Masui et al. Cancer Research 44:1002-1007 (1984);及びWu et al. J. Clin. Invest. 95:1897-1905 (1995)を参照。

【0004】

ＨＥＲファミリーの第２のメンバーであるｐ１８５^ｎｅｕは、元々は、化学的に処理されたラットの神経芽細胞腫由来のトランスフォーミング遺伝子の産物として同定された。ｎｅｕプロト原癌遺伝子の活性化型は、コードされたタンパク質の膜貫通領域の点突然変異（バリンからグルタミン酸へ）から生じる。ｎｅｕのヒト相同体の増幅は、乳房及び卵巣のがんで観察され、悪い予後と相関している（Slamon et al., Science, 235:177-182 (1987); Slamon et al., Science, 244:707-712 (1989)；及び米国特許第４９６８６０３号）。今日まで、ｎｅｕプロト原癌遺伝子におけるものに類似した点突然変異はヒトの腫瘍に関しては報告されていない。ＨＥＲ２の過剰発現（遺伝子増幅に起因して頻繁だが均一ではない）はまた、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓及び膀胱の癌腫を含む他の癌腫においても観察されている。特に、King et al., Science, 229:974 (1985); Yokota et al., Lancet: 1:765-767 (1986); Fukushige et al., Mol Cell Biol., 6:955-958 (1986); Guerin et al., Oncogene Res., 3:21-31 (1988); Cohen et al., Oncogene, 4:81-88 (1989); Yonemura et al., Cancer Res., 51:1034 (1991); Borst et al., Gynecol. Oncol., 38:364 (1990); Weiner et al., Cancer Res., 50:421-425 (1990); Kern et al., Cancer Res., 50:5184 (1990); Park et al., Cancer Res., 49:6605 (1989); Zhau et al., Mol. Carcinog., 3:254-257 (1990); Aasland et al. Br. J. Cancer 57:358-363 (1988); Williams et al. Pathobiology 59:46-52 (1991)；及びMcCann et al., Cancer, 65:88-92 (1990)を参照。ＨＥＲ２は前立腺がんで過剰発現され得る(Gu et al. Cancer Lett. 99:185-9 (1996); Ross et al. Hum. Pathol. 28:827-33 (1997); Ross et al. Cancer 79:2162-70 (1997);及び Sadasivan et al. J. Urol. 150:126-31 (1993))。

【0005】

ラットｐ１８５^ｎｅｕ及びヒトＨＥＲ２ タンパク質産物に対する抗体が記述されている。Ｄｒｅｂｉｎとその同僚らは、ラットｎｅｕ遺伝子産物であるｐ１８５^ｎｅｕに対する抗体を産生させた。例えば、Drebin et al., Cell 41:695-706 (1985); Myers et al., Meth. Enzym. 198:277-290 (1991)；及び国際公開第９４／２２４７８号参照。Ｄｅｒｂｉｎらは、Oncogene 2:273-277(1988)で、ｐ１８５^ｎｅｕの２つの異なる領域と反応性のある抗体の混合物が、ヌードマウス中に移植されたｎｅｕ形質転換ＮＩＨ－３Ｔ３細胞に相乗的な抗腫瘍効果を生じることを報告している。また１９９８年１０月２０日発行の米国特許第５８２４３１１号も参照。

【0006】

Hudziakら、Mol. Cell. Biol. 9(3):1165-1172(1989)には、ヒト乳房腫瘍細胞株ＳＫ－ＢＲ－３を用いて特徴付けられたＨＥＲ２抗体のパネルの作製が記載されている。抗体への曝露に続いてＳＫ－ＢＲ－３細胞の相対的細胞増殖が、７２時間後の単層のクリスタルバイオレット染色により決定された。このアッセイを使用して、最大阻害は細胞増殖を５６％抑制した４Ｄ５と呼ばれる抗体で得られた。パネルの他の抗体は、このアッセイにおいてより少ない度合いで細胞増殖を低減した。抗体４Ｄ５は、ＴＮＦ－αの細胞傷害効果に対してＨＥＲ２過剰発現乳房腫瘍細胞株を感作させることが更に見出された。また１９９７年１０月１４日発行の米国特許第５６７７１７１号も参照。Ｈｕｄｚｉａｋらによって議論されたＨＥＲ２抗体は、Fendly et al. Cancer Research 50:1550-1558 (1990); Kotts et al. In Vitro 26(3):59A (1990); Sarup et al. Growth Regulation 1:72-82 (1991); Shepard et al. J. Clin. Immunol. 11(3):117-127 (1991); Kumar et al. Mol. Cell. Biol.11(2):979-986 (1991); Lewis et al. Cancer Immunol. Immunother. 37:255-263 (1993); Pietras et al. Oncogene 9:1829-1838 (1994); Vitetta et al. Cancer Research 54:5301-5309 (1994); Sliwkowski et al. J. Biol. Chem.269(20):14661-14665 (1994); Scott et al. J. Biol. Chem. 266:14300-5 (1991); D’souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91:7202-7206 (1994); Lewis et al. Cancer Research 56:1457-1465 (1996)；及びSchaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997)において更に特徴付けられている。

【0007】

マウスＨＥＲ２抗体４Ｄ５の組換え型ヒト化バージョン（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５?８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、トラスツズマブ又はハーセプチン^ＴＭ；米国特許第５８２１３３７号）は、広範な抗がん治療を以前に受けているＨＥＲ２過剰発現転移性乳がんの患者において臨床的に活性である(Baselga et al., J. Clin. Oncol. 14:737-744 (1996))。トラスツズマブは、腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する転移性乳がんの患者の治療のために、１９９８年９月２５日、食品医薬品局から販売許可を受けた。

【0008】

ヒト化抗ＥｒｂＢ２抗体には、本明細書において出典明示により援用される米国特許第５８２１３３７号の表３に記載のｈｕＭＡｂ４Ｄ５－１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－７、及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８（ハーセプチン（登録商標））；ヒト化５２０Ｃ９（国際公開第９３／２１３１９号）並びに本明細書において出典明示により援用される国際公開第０１／０００２４５号に記載のヒト化２Ｃ４が含まれる。

【0009】

ペルツズマブペルツズマブ（例えば、国際公開第０１／０００２４５号参照）は、ＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）として知られる最初の新クラスの薬剤である。ペルツズマブはＨＥＲ２の二量体化ドメインに結合し、その結果ＨＥＲ２が活性な二量体受容体複合体を形成する能力を阻害するので、最終的に細胞の増殖と分裂をもたらす下流のシグナルカスケードが阻害される(Franklin, M.C., Cancer Cell 5 (2004) 317-328参照）。ペルツズマブは、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに対する完全ヒト化組換えモノクローナル抗体である。ペルツズマブがヒト上皮細胞上のＨＥＲ２に結合すると、ＨＥＲ２の、他のＨＥＲファミリーメンバー（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４を含む）との複合体形成及びおそらくＨＥＲ２のホモ二量体化も阻害される。複合体の形成を阻害することで、ペルツズマブは、成長刺激効果、並びにＨＥＲ１、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４のリガンド（例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦアルファ、アンフィレグリン及びヘレグリン）によって活性化される細胞生存シグナルを阻止する。ペルツズマブの別名は２Ｃ４である。ペルツズマブは、ヒトＩｇＧ１（Ｋ）フレームワーク配列に基づく完全ヒト化組換えモノクローナル抗体である。ペルツズマブの構造は、２つの重鎖（４４９残基）と２つの軽鎖（２１４残基）からなる。トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））と比べ、ペルツズマブは軽鎖で１２のアミノ酸差異を有し、ＩｇＧ１重鎖で２９のアミノ酸差異を有する。

【0010】

様々な特性をもつ他のＨＥＲ２抗体が、Tagliabue et al. Int. J. Cancer 47:933-937 (1991); McKenzie et al. Oncogene 4:543-548 (1989); Maier et al. Cancer Res. 51:5361-5369 (1991); Bacus et al. Molecular Carcinogenesis 3:350-362 (1990); Stancovski et al. PNAS (USA) 88:8691-8695 (1991); Bacus et al. Cancer Research 52:2580-2589 (1992); Xu et al. Int. J. Cancer 53:401-408 (1993); WO94/00136; Kasprzyk et al. Cancer Research 52:2771-2776 (1992);Hancock et al. Cancer Res. 51:4575-4580 (1991); Shawver et al. Cancer Res. 54:1367-1373 (1994); Arteaga et al. Cancer Res. 54:3758-3765 (1994); Harwerth et al. J. Biol. Chem. 267:15160-15167 (1992)；米国特許第５７８３１８６号；及びKlapper et al. Oncogene 14:2099-2109 (1997)に記載されている。

【0011】

相同性スクリーニングは、結果的に他の２つのＨＥＲ受容体ファミリーメンバー；ＨＥＲ３（米国特許第５１８３８８４号及び第５４８０９６８号、並びにKraus et al. PNAS (USA) 86:9193-9197 (1989))及びHER4(欧州特許出願第599274号; Plowman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750 (1993);及びPlowman et al., Nature, 366:473-475 (1993))を同定した。これらの受容体は双方とも、少なくともいくつかの乳がん細胞株で発現増加を示す。

【0012】

ＨＥＲ受容体は通常、細胞内に様々な組み合わせで見出され、ヘテロ二量体化は、様々なＨＥＲリガンドに対する細胞応答の多様性を増加させると考えられる(Earp et al. Breast Cancer Research and Treatment 35: 115-132 (1995))。ＥＧＦＲには６つの異なるリガンド；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ－α）、アンフィレグリン、ヘパリン結合上皮増殖因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、ベータセルリン及びエピレグリンが結合する(Groenen et al. Growth Factors 11:235-257 (1994))。単一の遺伝子の選択的スプライシングから生じるヘレグリンタンパク質のファミリーは、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４に対するリガンドである。ヘレグリンファミリーは、アルファ、ベータ及びガンマヘレグリン(Holmes et al., Science, 256:1205-1210 (1992)；米国特許第５６４１８６９号；及びSchaefer et al. Oncogene 15:1385-1394 (1997))；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）、グリア増殖因子（ＧＧＦ）；アセチルコリン受容体誘導活性（ＡＲＩＡ）；並びに感覚及び運動神経由来因子（ＳＭＤＦ）を含む。概説については、Groenen et al. Growth Factors 11:235-257 (1994); Lemke, G. Molec. & Cell. Neurosci. 7:247-262 (1996)及びLee et al. Pharm. Rev. 47:51-85 (1995)参照。近年、更に３つのＨＥＲリガンドが同定された；ＨＥＲ３又はＨＥＲ４の何れかに結合することが報告されているニューレグリン－２（ＮＲＧ－２）(Chang et al. Nature 387 509-512 (1997)；及びCarraway et al Nature 387:512-516 (1997))；ＨＥＲ４に結合するニューレグリン－３(Zhang et al. PNAS (USA) 94(18):9562-7 (1997))；及びＨＥＲ４に結合するニューレグリン－４(Harari et al. Oncogene 18:2681-89 (1999))。ＨＢ－ＥＧＦ、ベータセルリン及びエピレグリンもまたＨＥＲ４に結合する。

【0013】

ＥＧＦ及びＴＧＦαはＨＥＲ２に結合しないが、ＥＧＦはＥＧＦＲ及びＨＥＲ２を刺激してヘテロ二量体を形成し、それがＥＧＦＲを活性化させ、ヘテロ二量体におけるＨＥＲ２のリン酸基転移を生じる。二量体化及び／又はリン酸基転移はＨＥＲ２チロシンキナーゼを活性化するように見える。上掲のEarp et al.,を参照。同様に、ＨＥＲ３がＨＥＲ２と共発現される場合、活性シグナル伝達複合体が形成され、ＨＥＲ２に対する抗体はこの複合体を破壊する能力がある(Sliwkowski et al., J. Biol. Chem., 269(20):14661-14665 (1994))。加えて、ヘレグリン（ＨＲＧ）に対するＨＥＲ３の親和性は、ＨＥＲ２と共発現される場合に更に高い親和性にまで増大する。また、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３タンパク質複合体に関しては、Levi et al., Journal of Neuroscience 15: 1329-1340 (1995); Morrissey et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 1431-1435 (1995);及びLewis et al., Cancer Res., 56:1457-1465 (1996)を参照。ＨＥＲ３と同様に、ＨＥＲ４は活性なシグナル伝達複合体をＨＥＲ２と形成する(Carraway及びCantley, Cell 78:5-8(1994))。

【0014】

抗体変異体組成物もまた、当該技術分野で記述されている。米国特許第６３３９１４２号は、抗ＨＥＲ２抗体と一又は複数のその酸性変異体の混合物とを含むＨＥＲ２抗体組成物を記載しており、ここで、その酸性変異体の量は約２５％未満である。トラスツズマブは例示的なＨＥＲ２抗体である。Ｒｅｉｄらは、Ｗｅｌｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ（２００３年１月）で「ヒト化抗体の特徴を変える細胞培養方法の効果」（「Effects of Cell Culture Process Changes on Humanized Antibody Characteristics」）をポスター発表し、重鎖上のＶＨＳシグナルペプチド、Ｎ末端グルタミン、及びピログルタミン酸の組み合わせが原因でＮ末端不均一性を有する無名のヒト化ＩｇＧ１抗体組成物を記載している。Ｈａｒｒｉｓらは、ＩＢＣ抗体産生会議（２００２年２月）での口頭発表「理想的なクロマトグラフィーによる抗体の特徴づけ方法」（「The Ideal Chromatographic Antibody Characterization Method」）で、Ｅ２５（ヒト化抗－ＩｇＥ抗体）の重鎖上のＶＨＳ伸長を報告している。Ｒｏｕｓｅらは、ＷＣＢＰで「高分解能質量分析による糖タンパク質の特徴づけ及び生物薬剤開発への応用」（「Glycoprotein Characterization by High Resolution Mass Spectrometry and Its Application to Biopharmaceutical Development」）（２００４年１月６日～９日）をポスター発表し、軽鎖上のＡＨＳ又はＨＳシグナルペプチド残基から生じたＮ末端不均一性を有するモノクローナル抗体組成物を記載している。ＩＢＣ会議での発表（２０００年９月）「よく特徴づけられた生物学的製剤のための比較可能性研究及びアッセイの戦略的利用」（「Strategic Use of Comparability Studies and Assays for Well Characterized Biologicals」）においてＪｉｌｌ Ｐｏｒｔｅｒは、重鎖に三つの余分なアミノ酸残基を有するＺＥＮＡＰＡＸ^ＴＭの遅延溶出形態について論じた。米国特許第２００６／００１８８９９号は、主要種ペルツズマブ抗体とアミノ末端リーダー伸長変異体、並びに他の変異体形態のペルツズマブ抗体を含む組成物を記載している。

【0015】

ＨＥＲ抗体に関する特許公開には：米国特許第５６７７１７１号、米国特許第５７２０９３７号、米国特許第５７２０９５４号、米国特許第５７２５８５６号、米国特許第５７７０１９５号、米国特許第５７７２９９７号、米国特許第６１６５４６４号、米国特許第６３８７３７１号、米国特許第６３９９０６３号、米国特許出願公開第２００２／０１９２２１１号、米国特許第６０１５５６７号、米国特許第６３３３１６９号、米国特許第４９６８６０３号、米国特許第５８２１３３７号、米国特許第６０５４２９７号、米国特許第６４０７２１３号、米国特許第６７１９９７１号、米国特許第６８００７３８号、米国特許出願公開第２００４／０２３６０７８号、米国特許第５６４８２３７号、米国特許第６２６７９５８号、米国特許第６６８５９４０号、米国特許第６８２１５１５号、国際公開第９８／１７７９７号、米国特許第６１２７５２６号、米国特許第６３３３３９８号、米国特許第６７９７８１４号、米国特許第６３３９１４２号、米国特許第６４１７３３５号、米国特許第６４８９４４７号、国際公開第９９／３１１４０号、米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４号、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４号、米国特許出願公開第２００５／０００２９２８号、米国特許第６５７３０４３号、米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７号、国際公開第９９／４８５２７号、米国特許出願公開第２００２／０１４１９９３号、国際公開第０１／００２４５号、米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号、米国特許出願公開第２００４／００１３６６７号、国際公開第００／６９４６０号、国際公開第０１／００２３８号、国際公開第０１／１５７３０号、米国特許第６６２７１９６号、米国特許第６６３２９７９号、国際公開第０１／００２４４号、米国特許出願公開第２００２／００９０６６２号、国際公開第０１／８９５６６号、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号、米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号、国際公開第０４／２４８６６号、米国特許出願公開第２００４／００８２０４７号、米国特許出願公開第２００３／０１７５８４５号、国際公開第０３／０８７１３１号、米国特許出願公開第２００３／０２２８６６３号、国際公開第２００４／００８０９９号、米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号、国際公開第２００４／０４８５２５号、米国特許出願公開第２００４／０２５８６８５号、米国特許第５９８５５５３号、米国特許第５７４７２６１号、米国特許第４９３５３４１号、米国特許第５４０１６３８号、米国特許第５６０４１０７号、国際公開第８７／０７６４６号、国際公開第８９／１０４１２号、国際公開第９１／０５２６４号、欧州特許第４１２１１６号、欧州特許第４９４１３５号、米国特許第５８２４３１１号、欧州特許第４４４１８１号、欧州特許出願公開第１００６１９４号、米国特許出願公開第２００２／０１５５５２７号、国際公開第９１／０２０６２号、米国特許第５５７１８９４号、米国特許第５９３９５３１号、欧州特許出願公開第５０２８１２号、国際公開第９３／０３７４１号、欧州特許出願公開第５５４４４１号、欧州特許第６５６３６７号、米国特許第５２８８４７７号、米国特許第５５１４５５４号、米国特許第５５８７４５８号、国際公開第９３／１２２２０号、国際公開第９３／１６１８５号、米国特許第５８７７３０５号、国際公開第９３／２１３１９号、国際公開第９３／２１２３２号、米国特許第５８５６０８９号、国際公開第９４／２２４７８号、米国特許第５９１０４８６号、米国特許第６０２８０５９号、国際公開第９６／０７３２１号、米国特許第５８０４３９６号、米国特許第５８４６７４９号、ＥＰ第７１１５６５号、国際公開第９６／１６６７３号、米国特許第５７８３４０４号、米国特許第５９７７３２２号、米国特許第６５１２０９７号、国際公開第９７／００２７１号、米国特許第６２７０７６５号、米国特許第６３９５２７２号、米国特許第５８３７２４３号、国際公開第９６／４０７８９号、米国特許第５７８３１８６号、米国特許第６４５８３５６号、国際公開第９７／２０８５８号、国際公開第９７／３８７３１号、米国特許第６２１４３８８号、米国特許第５９２５５１９号、国際公開第９８／０２４６３号、米国特許第５９２２８４５号、国際公開第９８／１８４８９号、国際公開第９８／３３９１４号、米国特許第５９９４０７１号、国際公開第９８／４５４７９号、米国特許第６３５８６８２号、米国特許出願公開第２００３／００５９７９０号、国際公開第９９／５５３６７号、国際公開第０１／２００３３号、米国特許第２００２／００７６６９５号、国際公開第００／７８３４７号、国際公開第０１／０９１８７号、国際公開第０１／２１１９２号、国際公開第０１／３２１５５号、国際公開第０１／５３３５４号、国際公開第０１／５６６０４号、国際公開第０１／７６６３０号、国際公開第０２／０５７９１号、国際公開第０２／１１６７７号、米国特許第６５８２９１９号、米国特許出願公開第２００２／０１９２６５２号、米国特許出願公開第２００３／０２１１５３０号、国際公開第０２／４４４１３号、米国特許出願公開第２００２／０１４２３２８号、米国特許第６６０２６７０号、国際公開第０２／４５６５３号、国際公開第０２／０５５１０６号、米国特許出願公開第２００３／０１５２５７２号、米国特許出願公開第２００３／０１６５８４０号、国際公開第０２／０８７６１９号、国際公開第０３／００６５０９号、国際公開第０３／０１２０７２号、国際公開第０３／０２８６３８号、米国特許出願公開第２００３／００６８３１８号、国際公開第０３／０４１７３６号、ＥＰ第１３５７１３２号、米国特許第２００３／０２０２９７３号、米国特許出願公開第２００４／０１３８１６０号、米国特許第５７０５１５７号、米国特許第６１２３９３９号、欧州特許第６１６８１２号、米国特許出願公開第２００３／０１０３９７３号、米国特許出願公開第２００３／０１０８５４５号、米国特許第６４０３６３０号、国際公開第００／６１１４５号、国際公開第００／６１１８５号、米国特許第６３３３３４８号、国際公開第０１／０５４２５号、国際公開第０１／６４２４６号、米国特許出願公開第２００３／００２２９１８号、米国特許出願公開第２００２／００５１７８５号、米国特許第６７６７５４１号、国際公開第０１／７６５８６号、米国特許出願公開第２００３／０１４４２５２号、国際公開第０１／８７３３６号、米国特許出願公開第２００２／００３１５１５号、国際公開第０１／８７３３４号、国際公開第０２／０５７９１号、国際公開第０２／０９７５４号、米国特許出願公開第２００３／０１５７０９７号、米国特許出願公開第２００２／００７６４０８号、国際公開第０２／０５５１０６号、国際公開第０２／０７０００８号、国際公開第０２／０８９８４２号及び国際公開第０３／８６４６７号がある。

【0016】

ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ／ハーセプチン^ＴＭで治療された患者が、ＨＥＲ２タンパク質過剰発現／遺伝子増幅に基づいて本療法のために選ばれる；例えば、国際公開第９９／３１１４０号（Patonら）、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４号（Hellmann, S.）、及び米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４号（Patonら）；並びに国際公開第０１／８９５６６号、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号、及び米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号（Massら）参照。また、ＨＥＲ２過剰発現及び増幅検出のための免疫組織化学染色法（ＩＨＣ法）及び蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ法）に関しては、Ｃｏｈｅｎらの米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７号を参照。国際公開第２００４／０５３４９７号及び米国特許出願公開第２００４／０２４８１５号（Bacusら）、並びに米国特許出願公開第２００３／０１９０６８９号（Crosby及びSmith）は、トラスツズマブ療法に対する応答の決定又は予測について言及している。米国特許出願公開第２００４／０１３２９７号（Bacusら）は、ＡＢＸ０３０３ ＥＧＦＲ抗体療法に対する応答の決定又は予測に関する。国際公開第２００４／００００９４号（Bacusら）は、小分子性ＥＧＦＲ－ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤であるＧＷ５７２０１６に対する応答の決定に関する。国際公開第２００４／０６３７０９号（Amlerら）は、ＥＧＦＲ阻害剤であるエルロチニブＨＣｌに対する感受性の決定のためのバイオマーカー及び方法に関する。米国特許出願公開第２００４／０２０９２９０号（Cobleighら）は、乳がん予後のための遺伝子発現マーカーに関する。

【0017】

ＨＥＲ２二量体化阻害剤（詳細が本明細書で上に記載されているペルツズマムなど）で治療されるべき患者は、ＨＥＲ活性化又は二量体化に基づいて本療法のために選ばれる。ペルツズマム及びそれを用いた療法のための患者の選定に関する特許公開には：国際公開第０１／００２４５号（Adamsら）；米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号（Sliwkowski, M.）；米国特許出願公開第２００４／００１３６６７号（Sliwkowski, M.）；並びに国際公開第２００４／００８０９９号、及び米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号（Bossenmaierら）がある。

【0018】

ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブは、腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現するか、又はＨＥＲ２遺伝子が増幅する転移性乳がん患者の治療のために：
ａ）転移性疾患のために少なくとも二つの化学療法レジメンを受けた患者の治療のための単剤療法として。事前の化学療法は、患者に不適切ではない限り、アントラサイクリン及びタキサンを少なくとも含んでいなければならない。ホルモン受容体陽性患者は、不適切ではない限り、ホルモン療法も受けていなければならない。
ｂ）転移性疾患のための化学療法を受けず、アントラサイクリンが合わない患者の治療のためのパクリタキセルとの併用で、及び
ｃ）転移性疾患のための化学療法を受けなかった患者の治療のためのドセタキセルとの併用で、
当該技術分野で必要とされている。

【0019】

ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブはまた、初期の乳がんにおいてはアジュバント療法としても使用され得る。ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブはまた、手術、化学療法（ネオアジュバント（すなわち、手術前）又はアジュバント）、及び（適切ならば）放射線療法に続く、ＨＥＲ２陽性の早期乳がん患者の治療のために認可されている。加えて、カペシタビン又は５－フルオロウラシル及びシスプラチンとの併用でのハーセプチンは、ＨＥＲ２陽性の局所進行性又は転移性食道胃接合部腺癌に罹患し、その転移性疾患の治療のために事前に抗がん治療を受けなかった患者の治療のために必要とされている。ネオアジュバントペルツズマブとトラスツズマブ療法の有効性及び安全性は、第２相試験で評価された（ＮＥＯＳＰＨＥＲＥ）；Gianni (2012) Lancet Oncol 13, 25-32。

【0020】

当該技術分野において、ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブ を用いた乳がん患者の治療は、例えば、ＨＥＲ２陽性がんの患者のために推奨され、慣用されている。ＨＥＲ２陽性がんは、免疫組織化学法によって検出される高レベルのＨＥＲ２（タンパク質）発現（例えば、ＨＥＲ２（＋＋＋））、又はｉｎ ｓｉｔｕハイブリリダイゼーション法で検知されるＨＥＲ２遺伝子増幅（例えば、腫瘍細胞あたりのＨＥＲ２遺伝子コピー数が４コピーを超えるか、もしくはＣＥＰ１７シグナル数に対するＨＥＲ２遺伝子コピー数の比率が≧２．０のような、ＩＳＨ陽性）、或いはこれら両方が、乳房組織生検材料又は乳房組織切片等の患者から得られた試料中、或いは転移部位に由来する組織中に見出される場合に存在する。

【0021】

国際公開第２０１１／１０９７８９号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００９／０８９１４９号、及び国際公開第２００６／１３３３９６号は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤の治療的使用を開示している。更に、国際公開第２０１０／０７７６３４号は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びそれらの治療的使用を開示している。

【発明の概要】

【0022】

本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、且つ、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べて増加していることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法に関する。

【0023】

したがって、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを組み合わせるＰＤ－Ｌ１モジュレーター併用療法に対するがん患者にとっての必要性を決定する方法であって、
－ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む療法が計画されているか、又は前記治療を受けている患者の腫瘍試料を試験する工程と；
－前記腫瘍試料中のエストロゲン受容体及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を決定する工程とを含み、
それによって、ＥＲが非発現か又は低量であり、且つ、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していることが、前記患者におけるＰＤ－Ｌ１モジュレーター併用療法の使用の成功を示唆する、方法を提供する。

【0024】

驚くべきことに、添付の実施例に示されるように、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性（ＥＲ（－））がんの患者（ＥＲが非発現か又は低量のがん患者）で、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブ等）と化学療法剤（ドセタキセル／タキソテール（登録商標）等）での治療を受けている患者は、ＥＲ陰性（ＥＲ（－））がんの患者試料中、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールに比べ増加している場合、エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性（ＥＲ（＋））がんの患者に比べて有意に低い本療法に対する病理学的完全奏功率を示すことが本発明において見出された。用語「プログラム死リガンド１」、「ＣＤ２７４」及び「ＰＤ－Ｌ１」は、本明細書で互換的に使用される。したがって、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールに比べ増加しているＥＲ陰性（ＥＲ（－））がんの患者は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤を用いた追加の併用療法から恩恵を受けるであろう。この患者群は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（ハーセプチン^ＴＭ／トラスツズマブ）と化学療法剤（ドセタキセル／タキソテール（登録商標））を用いた治療に加えて、ＰＤ－Ｌ１阻害剤を用いた併用療法を受けると、病理学的完全奏功率（ｐＣＲ）が上昇することが予測される。すなわち、ＥＲ陰性（ＥＲ（－））がんの患者は、その患者由来の試料中、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールに比べ増加している場合、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブ等）と化学療法剤（ドセタキセル／タキソテール（登録商標））を用いた治療に加えて、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を服用するべきである。以下、ＥＲ陰性がんの患者又はＥＲ陰性がんの患者由来の（生検／腫瘍）試料は、本明細書中で「ＥＲ（－）」と記される。同様に、ＥＲ陽性がんの患者又はＥＲ陽性がんの患者由来の（生検／腫瘍）試料は、本明細書中で「ＥＲ（＋）」と記される。

【0025】

上記に従って、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現で、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールに比べ増加していると決定されるがん患者を選定することと、及び有効量のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤を前記患者に投与することとを含む方法に関する。同様に、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、コントロールに比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。したがって、本明細書で企図されるのは、がんの治療での使用のための、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む医薬組成物であって、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現で、且つプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していると決定される。

【0026】

上記に従って、本明細書中で提供される、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法は、工程ａ）の前に追加の工程を含み得、前記工程は、前記がん患者由来の試料を得ることである（又は得ることを含む）。よって、本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、前記がん患者由来の試料を得る工程を含み、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、且つプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを更に含む、方法を提供する。

【0027】

更に、患者試料中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量に加えて測定される場合、患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性が更により確実に決定され得ることが、本明細書中で見出され、添付の実施例に示されている。ＥＲが非発現か又は低量である患者は、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量が増加していて、且つインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量が低下している場合、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療に対する病理学的完全奏功率が有意に低いことが本明細書中に示されている。

【0028】

したがって、本明細書において提供される方法は、好ましくは、患者由来試料中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を測定することを更に含み、それによって患者は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がコントロールと比べ低下している場合、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定される。上記に従い、本発明は、好ましい態様において、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）の発現量、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量、及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加し、且つインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がコントロールと比べ低下していることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法に関する。

【0029】

したがって、コントロールと比べ低下しているインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量は、前記患者におけるＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法の使用の成功を示唆する。上記に従い、本明細書において、がんの治療での使用のための医薬組成物を提供し、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有すること、及びコントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を有することが決定される。したがって、本明細書において提供されるのは、がんの治療における使用のための、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤とを含む医薬組成物であって、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有すること、及びコントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を有することが決定される。

【0030】

本明細書で使用される用語「がん患者」は、がんに罹患している疑いのある患者、がんに罹患している患者、又はがんに罹患しやすい患者を指す。本発明に従って治療されるべきがんは、乳がん又は胃がん等の固形がんである。更に、がんは、卵巣がん又は結腸直腸がんであってもよい。がんは、好ましくは、「ＨＥＲ２陽性」がんである。

【0031】

がんは、好ましくは、早期乳がん等の乳がんである。乳がんは早期乳がん又は転移性乳がんであり得る。したがって、（治療されるべき）がん患者は、固形がんに罹患していることが疑われているか、現在固形がんに罹患しているか、又は固形がんに罹患しやすい患者であり、固形がんは乳がん又は胃がんであり得る。がんは、好ましくは、早期乳がん等の乳がんである。患者は、好ましくは、ヒトである。

【0032】

上述の通り、エストロゲン受容体（ＥＲ）の発現量、プログラム死リガンド（ＰＤ－Ｌ１）の発現量、及び、場合によってインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）の発現量は、患者由来の試料においてインビトロで測定され得る。本明細書において提供される方法は、好ましくは、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）を患者由来の試料においてインビトロで測定することを含む。本明細書において評価／分析される試料は、好ましくは、腫瘍組織試料である。患者（又は患者群）は、前記試料において、ＥＲが非発現か又は低量で、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加し、且つ、場合によってインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がコントロールと比べ低下していることがインビトロで測定される場合、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定される。

【0033】

用語「ＥＲ」は「エストロゲン受容体」の略称である。同様に、用語「ＰＤ－Ｌ１」は「プログラム死リガンド」の、「ＩＦＮ－γ」は「インターフェロンガンマ」の略称である。したがって、用語「ＥＲ」は、本明細書において「エストロゲン受容体」と互換的に使用され得る。同様に、用語「ＰＤ－Ｌ１」は「プログラム死リガンド」と、「ＩＦＮ－γ」は「インターフェロンガンマ」と、本明細書において互換的に使用され得る。

【0034】

治療されるべき患者及び／又はがんの（腫瘍／生検）試料は、好ましくは、エストロゲン受容体（ＥＲ）が非発現か又は低量であることを特徴とするか、或いはそのことに関連している。患者の試料は、好ましくは、腫瘍試料である。ＥＲ発現量は、ＥＲ陰性（ＥＲ（－））であり得る。用語「ＥＲ（－）」は、本明細書において用語「ＥＲ陰性」と互換的に使用され得る。

【0035】

「ＥＲ陰性」発現量は、例えば、the Guideline on Hormone Receptor Testing in Breast Cancer S. Nofech-Mozes, E. Vella, S. Dhesy-Thind, 及びW. Hanna (A Quality Initiative of the Program in Evidence-Based Care (PEBC), Cancer Care Ontario (CCO); Report Date: April 8, 2011)に記載されているような、慣用的且つ標準的方法によって決定され得る。上記ガイドライン（及びその中で引用されている文献）は、その内容全体が本明細書において援用される。これらのガイドラインは、インターネット
（ｃａｎｃｅｒｃａｒｅ．ｏｎ．ｃａ）で、及び
ＰＥＢＣ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ＆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅのページ：
https://www.cancercare.on.ca/toolbox/qualityguidelines/clin-program/pathlabebs/で入手可能である。

【0036】

「ＥＲ陰性」発現量を決定するための慣用的且つ標準的方法は、これらのガイドライン、及び以下の文献にも記載されている：
Nofech-Mozes S, Vella ET, Dhesy-Thind S, Hagerty KL, Mangu PB, Temin S, et al. Systematic review on hormone receptor testing in breast cancer.Applied Immunohistochem Mol Morphol. 2012 May;20(3):214-63. doi: 10.1097/PAI.0b013e318234aa12. Epub 2011 Nov 11.
Nofech-Mozes S, Vella ET, Dhesy-Thind S, Hanna WM. Cancer Care Ontario guideline recommendations for hormone receptor testing in breast cancer. Clin Oncol (R Coll Radiol). Epub 2012 May 17.

【0037】

「ＥＲ陰性」発現は、例えば、ＥＲが非発現かもしくは低量である場合、及び／又はプロゲステロン受容体（ＰＲ）が非発現かもしくは低量である場合、ＩＨＣ法（免疫組織化学染色法）により決定され得る。略語「ＰＲ」は、本明細書において、用語「プロゲステロン受容体」と互換的に使用される。試料又は患者は、以下の（ＩＨＣ法による）染色パターンに従って、本明細書において「ＥＲ陰性」と評価され得る：

【0038】

（細胞質ではなく）核のみの染色を評価しなければならない。

【0039】

染色には、以下の三つの分類がある：
陽性：ＥＲ又はＰＲの≧１０％染色
低陽性：ＥＲ又はＰＲの１％から９％染色
陰性：ＥＲ及びＰＲの＜１％染色

【0040】

したがって、試料又は患者は、特に、試料がＩＨＣ法による次の染色パターン：ＥＲ及びＰＲの＜１％染色を示す場合、「ＥＲ陰性」と本明細書において評価され得る。

【0041】

試料又は患者は、試料がＩＨＣ法で「陽性」染色：ＥＲ又はＰＲの≧１％染色（すなわち、試験／評価された細胞の１％超がエストロゲン受容体又はプロゲステロン受容体を有する／ＩＨＣ法（免疫組織化学染色法）によりエストロゲン受容体の染色を示す）を示す場合、本明細書において「ＥＲ陽性」と評価され得る。

【0042】

試料又は患者は、好ましくは、試料がＩＨＣ法で次の染色パターン：ＥＲの＜１％染色（すなわち、試験／評価された細胞の１％未満がエストロゲン受容体を有する／ＩＨＣ法（免疫組織化学染色法）によりエストロゲン受容体（単数又は複数）の染色を示す）を示す場合、本明細書において「ＥＲ陰性」と評価され得る。試料又は患者は、もっとも好ましくは、腫瘍組織試料中の核がＩＨＣ法によるＥＲの＜１％染色を示す場合、「ＥＲ陰性」と評価される。したがって、本明細書で上に提供した三つの分類から、「ＥＲ陰性」の評価は、ＩＨＣ法によるＥＲの＜１％染色に基づく。

【0043】

同様に、「ＥＲ陰性」発現は、当該技術分野で慣用的に用いられている更なる方法によって決定され得る。例えば、「ＥＲ陰性」は、ｍＲＮＡ／ＲＮＡが非発現か又は低量である場合に決定され得る。使用される慣用的方法は、限定されないが：Ａｌｌｒｅｄスコア、ＩＲＳ、Ｒｅｍｍｅｌｅスコア、又は他の適切な生化学的検出方法を含む。当業者であれば、これらの方法のカットオフは、ＩＨＣ法により上で定義したカットオフと一致していなければならないことを認識している。

【0044】

本明細書において使用される、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、及び／又はインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の核酸配列並びにアミノ酸配列はよく知られており、ＮＣＢＩなどのデータベースから検索可能である。例示的配列が本明細書において提供されている（例えば、配列番号３８－５１参照）。

【0045】

マーカー（プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及び／又はインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ））のカットオフ値を設定するため、並びに解析される個体もしくは患者から得られた試料を測定するために使用される方法と試料のタイプは、相互に一致するか、或いは同じである。カットオフ値、すなわち、それを超える値が過剰発現（例えば、コントロールと比べたプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現増加）と認められる値は、コントロール群で得られる。カットオフ値、すなわち、それを下回る値が発現低下（例えば、コントロールと比べたインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現低下）と認められる値は、コントロール群で得られる。

【0046】

カットオフ値の根拠とされるコントロール群は、試験中の個体／患者の群と一致するように選ばれる。すなわち、本発明の方法が、乳がん又は胃がんの患者におけるＰＤ－Ｌ１併用療法の必要性を決定するために使用される場合、コントロール群もそれぞれ、乳がん又は胃がんの患者である。ＰＤＬ－１とＩＦＮ－γ両方のためのカットオフ値を設定するために使用されるコントロール群はそれぞれ、少なくとも４０、又は少なくとも５０、又は少なくとも１００の個体／患者を含む。カットオフを超える発現量又はそれに相当する値は過剰発現を表していると考えられ、また、カットオフ以下の値は発現低下と考えられる。

【0047】

一実施態様において、個体／患者由来の腫瘍組織試料における「ＩＦＮ－γ」発現量が、カットオフ値と比較される。カットオフを超える値はＩＦＮ－γの過剰発現を表していると考えられ、また、カットオフ以下の値はＩＦＮ－γの発現低下と考えられる。一実施態様において、発現低下は、ＩＦＮ－γの発現量が、コントロール群でそれぞれ設定された最も高い五分位値、四分位値、又は三分位値以下である場合に認められる。一実施態様において、ＩＦＮ－γのカットオフ値は、最も高い三分位値である。一実施態様において、カットオフ値は７０百分位値から８０百分位値である。一実施態様において、ＩＦＮ－γのカットオフ値は、７３百分位値であって、すなわち、このカットオフを超える値はＩＦＮ－γの過剰発現を表すと考えられ、７３百分位値以下の値はＩＦＮ－γの発現低下と考えられる。一実施態様において、個体／患者は、試料（腫瘍組織試料など）中のＩＦＮ－γ発現が低下している（すなわち、ＩＦＮ－γカットオフ値以下）場合、ＰＤ－Ｌ１併用療法を必要としていると決定される。一実施態様において、個体／患者は、ＩＦＮ－γが過剰発現している（すなわち、上記のＩＦＮ－γカットオフを超える）場合、ＰＤＬ－１併用療法を必要としていないと決定される。

【0048】

一実施態様において、個体／患者由来の腫瘍組織試料中のＰＤ－Ｌ１発現量がカットオフ値と比較される。カットオフを超える値はＰＤ－Ｌ１の過剰発現を表すと考えられ、カットオフ以下の値はＰＤ－Ｌ１の発現低下と考えられる。一実施態様において、ＰＤＬ－１の過剰発現は、ＰＤＬ－１の発現量がコントロール群で設定された５０百分位から７５百分位のカットオフ値を超える場合に認められる。一実施態様において、ＰＤＬ－１の過剰発現は、コントロール群で設定された、ＰＤＬ－１の発現量が５０百分位から７０百分位のカットオフ値を超える場合に認められる。一実施態様において、個体／患者は、ＰＤＬ－１が過剰発現している（すなわち、測定されたＰＤＬ－１発現量がＰＤＬ－１カットオフ値を超える）場合、ＰＤＬ－１併用療法を必要としていると決定される。

【0049】

更なる一実施態様において、ＰＤＬ－１の過剰発現は、腫瘍組織試料中ＩＦＮ－γの発現量低下を有する個体／患者亜群に見出される。一実施態様において、ＰＤＬ－１の過剰発現は、ＰＤＬ－１の発現量がこの亜群で設定された４０百分位から６５百分位のカットオフ値を超える場合に認められる。一実施態様において、ＰＤＬ－１の過剰発現は、ＰＤＬ－１の発現量がこの亜群で設定された５０百分位から６０百分位のカットオフ値を超える場合に認められる。一実施態様において、個体／患者は、ＩＦＮ－γ発現低下を有する亜群のＰＤＬ－１発現量が５４百分位値を超える場合、ＰＤＬ－１併用療法を必要としていると決定される。

【0050】

一実施態様において、個体／患者は、腫瘍組織試料中のＩＦＮ－γ発現が低下しており（すなわち、ＩＦＮ－γカットオフ値以下）、且つＰＤＬ－１が過剰発現している（すなわち、ＰＤＬ－１カットオフ値を超える）場合、ＰＤＬ－１併用療法を必要としていると決定される。

【0051】

用語「コントロールと比べ増加しているプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量」は、上に定義又は説明されている通り、本明細書において「ＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤＬ－１）の発現量」と互換的に使用され得る。

【0052】

用語「コントロールと比べ低下しているインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量」は、本明細書において「ＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量」と互換的に使用され得る。

【0053】

本発明は以下の態様に関する。

【0054】

本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定する工程と；
ｂ）工程（ａ）で、（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲが非発現か又は低量発現であること、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がＰＤ－Ｌ１カットオフ値を超えること、且つインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がＩＦＮγカットオフ値以下であることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法に関する。

【0055】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、ＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有すること、及びＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有するあることが決定されるがん患者を選定することと、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0056】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、ＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有すること、及びＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0057】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤とを含む、がんの治療での使用のための医薬組成物であって、それにより前記がんが、（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量であること、ＰＤ－Ｌ１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有すること、且つＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を有することが決定される、医薬組成物に関する。

【0058】

本明細書で示された「ＰＤ－Ｌ１阻害剤」、「ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法」、「がん」、「がん患者」、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター」、「化学療法剤」、「試料」、「発現量」などの説明及び定義はすべて、本発明の上記態様に準用される。

【0059】

患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量はインビトロで同時に測定、又は任意の組み合わせで続いて測定され得る。エストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量は、例えば、同時に測定され得る。エストロゲン受容体（ＥＲ）の発現量が最初に測定され、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の測定がそれに続いてもよい。プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量が最初に測定され、エストロゲン受容体（ＥＲ）とインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の（同時の又は順次の）測定が）続いてもよい。インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量が最初に測定され、エストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の（同時の又は順次の）測定が続いてもよい。患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量の測定のいかなる順番／組み合わせも本明細書で想定され、これに含まれる。

【0060】

本明細書において企図されるのは、第１の工程（１）で（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲが非発現か又は低量測定され、第２の工程（２）でＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量が測定され、且つ、第３の工程（３）でＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）が測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定することである。

【0061】

本発明は以下の態様に関する：

【0062】

本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定する工程と；
ｂ）第１の工程（１）において（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲが非発現か又は低量測定され、第２の工程（２）において ＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量が測定され、且つ、第３の工程（３）において ＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量が測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法に関する。

【0063】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、第１の工程（１）において（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、第２の工程（２）においてＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すること、及び第３の工程（３）においてＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0064】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、第１の工程（１）において（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、第２の工程（２）においてＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すること、且つ第３の工程（３）においてＰＤＬ－１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0065】

本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤とを含む、がんの治療での使用のための医薬組成物であって、それにより前記がんが、（ＥＲ（－）／ＥＲ陰性のように）ＥＲ非発現か又は低量発現であること、ＩＦＮγカットオフ値以下のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すること、ＰＤ－Ｌ１カットオフ値を超えるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定される、医薬組成物に関する。

【0066】

本明細書で示された「ＰＤ－Ｌ１阻害剤」、「ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法」、「がん」、「がん患者」、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター」、「化学療法剤」、「試料」、「発現量」などの説明及び定義のすべてが、本発明の上記態様に準用される。

【0067】

以下は、本発明に従いＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としている患者を決定することを可能にする例示的カットオフ値に関する。患者由来試料中のＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮガンマの発現量が当該カットオフ値を下回るか上回るかは、慣用的手法（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘなど）によって簡単に決定され得る。

【0068】

遺伝子発現解析でのＩＦＮガンマの発現に関する結果が４．８以上である場合、併用療法（ＨＥＲ２標的薬とＰＤＬ１標的薬）は推奨されず、更なるＰＤＬ１評価も必要ない。遺伝子発現解析でのＩＦＮガンマの発現に関する結果が４．８未満の場合、ＰＤＬ－１の評価も並行して行う必要がある。
次いで、ＰＤＬ－１遺伝子発現の解析結果が５．３以上の場合、併用治療（ＨＥＲ２標的薬とＰＤＬ１標的薬）が推奨される。この例示的手順を図１９に示す。

【0069】

これに関連して、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘは以下の通り実施され得る：腫瘍細胞の全ＲＮＡが、Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒペルツズマム ＦＦＰＥＴ ＲＮＡキット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用してＦＦＰＥ腫瘍切片から抽出された。ＲＮＡは、ＷＴ－Ｏｖａｔｉｏｎ ＦＦＰＥ Ｓｙｓｔｅｍ Ｖ２（Ｎｕｇｅｎ）を使用してハイブリダイゼーション用に処理され、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｕ１３３ Ｐｌｕｓ ２．０アレイにハイブリダイズされた。ハイブリダイズされたアレイは洗浄され、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｓｔａｔｉｏｎ ４５０上で染色され、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）Ｓｃａｎｎｅｒ ３０００ ７Ｇでスキャンされた。

【0070】

述べた通り、患者由来試料中のＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮガンマの発現量は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘなどの慣用的手法によって決定され得る。以下は、そのような決定のための例示的手順（本明細書で遺伝子発現プロファイリングとも呼ばれる）に関する：

【0071】

腫瘍生検試料は、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＨＧ－Ｕ１３３Ｐｌｕｓ２全ヒトゲノムマイクロアレイプラットフォームでの遺伝子発現のためにプロファイリングされ得る。ＲｏｃｈｅのＨｉｇｈＰｕｒｅ ＲＮＡ抽出、ＮｕＧｅｎの増幅、並びにＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸの標準的ハイブリダイゼーション及びスキャニングの手順が使用され得る。これらの手順等は参照により本明細書に援用される。すべてのアレイスキャンは通常、標準的なＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＱＣに合格する。

【0072】

ロバストマルチアレイアルゴリズム（ＲＭＡ）は生信号を前処理するために使用され得る（本明細書に参照により援用される、Irizarry et al, 2003、www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12925520）。以下に報告されるように、目的の遺伝子のために利用可能なすべてのプローブセットが取得可能である。ＣＤ２７４遺伝子について、いくつかのプローブセットがこの遺伝子を表現するのに利用可能であった場合、（所定のプローブセットの発現の算術平均として定義される）平均発現の最高値を有するプローブセットが当該遺伝子を表すために選ばれた：
ＣＤ２７４（ＰＤＬ１）
ＰＤＬ１用に選択された、２２３８３４＿ａｔ
２２７４５８＿ａｔ
選択されたプローブセットは、遺伝子の最後のエクソン／３’ＵＴＲに対応し、既知のＲｅｆＳＥｑ ｍＲＮＡをすべて捕捉する（図６参照）。

【0073】

IFNG
２１０３５４＿ａｔ
このプローブセットもまた、遺伝子の最後のエクソン／３’ＵＴＲを表し、既知のＲｅｆＳＥｑ ｍＲＮＡをすべて捕捉する（図７参照）。

【0074】

上記に従い、インターフェロンガンマの発現量はエストロゲン受容体（ＥＲ）の発現前、及び／又はプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現前に測定され得る。エストロゲン受容体（ＥＲ）及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量測定の工程は無くてもよい。

【0075】

添付の実施例に示すように、ＰＤ－Ｌ１併用療法は、例えば、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）４．８以上である場合、推奨されない。

【0076】

したがって、本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
（ａ）前記患者由来の試料におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定する工程と、
（ｂ）インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量が工程（ａ）のＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）４．８以上である場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていないと決定する工程とを含む、方法を提供する。

【0077】

インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）４．８未満である場合、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、及び、場合によっては、エストロゲン受容体（ＥＲ）の発現量が前記患者由来試料においてインビトロで測定され得る。

【0078】

したがって、本発明は、がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が前記患者のために計画されているか、又は患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
（ａ）前記患者由来の試料におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量をインビトロで測定する工程と、
（ｂ）インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）４．８未満である場合、且つＥＲが非発現か又は低量であって、また、場合によっては、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していることが工程（ａ）で測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法を提供する。

【0079】

患者由来の試料において測定されるプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加している場合、本発明に従い、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法必要としていると決定され得る。例えば、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）５．３以上であり得る。

【0080】

本明細書で示された「ＰＤ－Ｌ１阻害剤」、「ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法」、「がん」、「がん患者」、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター」、「化学療法剤」、「試料」、「発現量」などの説明及び定義のすべてが、ここで準用される。

【0081】

したがって、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量、及び（約）４．８未満のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0082】

更に、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量、及び（約）４．８未満のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法に関する。

【0083】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤とを含む、がんの治療における使用のための医薬組成物が提供され、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、また、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量、及び（約）４．８未満のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有することが決定される。

【0084】

がんの治療における使用のための前記医薬組成物は化学療法剤を更に含んでもよい。

【0085】

本明細書で提供される方法は、上記に従い、前記試料中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を測定し、コントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量が測定される場合に患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程を含んでもよい。例えば、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の「低下した発現量」は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して発現量が（約）４．８未満であり得る。したがって、コントロールと比べ低下した発現量のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を有すると決定されるがんは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘのような慣用的方法で測定して（約）４．８未満のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有することが決定され得る。

【0086】

この発現量は、遺伝子産物／タンパク質の活性に反映され得ることが本明細書中で想定される。したがって、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γの活性も発現量に加えて、或いはその代わりに、本発明に従い測定及び評価され得る。ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及びＩＦＮ－γの発現量及び／又は活性を検出並びに評価するための、該当する手段及び方法は当業者に知られている。使用される例示的方法は、限定されないが、ウェスタンブロット、ノーザンブロット、リアルタイムＰＣＲなどの分子評価を含む。それらの方法は本明細書で詳述している。

【0087】

ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γの発現量は、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γのｍＲＮＡ発現量であり得る。 遺伝子産物がＲＮＡ、特にｍＲＮＡ（例えばスプライシングされていないか、部分的にスプライシングされているか、又はスプライシングされている、ｍＲＮＡ）である場合、測定はノーザンブロッティング法、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ｍＲＮＡ転写物のための一もしくは複数のプローブかプローブセットを備えたマイクロアレイ又はＤＮＡチップ上でのハイブリダイゼーション、或いはリアルタイムＰＣＲのような定量ＰＣＲ法等、ＰＣＲ法を利用して実施される。（特定の）ｍＲＮＡを結合するためのこれらの方法、及び他の好適な方法は当該技術分野でよく知られており、例えば、Sambrook及びRussell (2001, loc. cit.)に記載されている。当業者は、成分、特に前記遺伝子産物の量を、検出信号の強度と測定されるべき遺伝子産物の量との相関関係、好ましくは、線形相関関係を利用することによって決定することができる。

【0088】

発現量は、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γのタンパク質発現量であり得る。タンパク質発現量の定量は、例えば、ウェスタンブロット法、免疫アッセイ、ゲル又はブロットベースの技法、ＩＨＣ法、質量分析、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ法等の周知の技術を利用することによって実施され得る。ポリペプチド（一又は複数）／タンパク質（一又は複数）の定量のための方法は、通常、当業者に既知である。溶液中の精製されたポリペプチドの量は、例えば、吸光分光分析等の物理学的方法によって決定され得る。混合物中の特定のポリペプチドを定量する方法は、例えば抗体の結合などの、特異的な結合に依存し得る。抗体の特異性を利用する特異的検出及び定量の方法は、例えば免疫組織化学染色法（ｉｎ ｓｉｔｕ）を含む。ウエスタンブロット法は、電気泳動によるタンパク質混合物の分離と、抗体を用いた特異的検出を組み合わせている。電気泳動は、２次元電気泳動のように、多次元であり得る。通常、ポリペプチドは、１次元に沿ったそれらの見かけの分子量、及び他の方向に沿ったそれらの等電点によって、２次元電気泳動で分離されている。別法として、タンパク質の定量法は、質量分析又は酵素結合免疫吸着法を含むがこれらに限定されない。

【0089】

また、本発明との関連で、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）の使用も想定される。（ＨＴＳ）の適切な手法は、当該技術分野で知られている。当業者は、このような手順又は既知のＨＴＳ手法を、本発明の方法の実施に容易に適合させることができる立場にある。通常、このようなアッセイは液相で実施され、試験すべきそれぞれの細胞／組織／細胞培養物について少なくとも一つの反応バッチが作られる。使用される典型的な容器は、例えば、３８４、１５３６又は３４５６ウェルを備えるマイクロタイター・プレート（すなわち、「原型」の９６反応器の倍数）である。ロボット、データ処理及び制御ソフトウェア、並びに高感度検出器は、ＨＴＳ装置の更に一般に使用される構成要素である。試料（一又は複数）と試薬（一又は複数）の添加及び混合のためのステーションからステーションへのマイクロタイター・プレートの移送、それらの試薬のインキュベーション、並びに最終読み出し（検出）には、多くの場合、ロボットシステムが使用される。通常、多くのプレートの同時調製、インキュベーション及び解析にＨＴＳを用いることができる。前記アッセイを単一反応で行うことができる（これが通常好ましい）が、洗浄及び／又は移送工程も含むことがある。検出は、放射活性、発光又は蛍光、例えば蛍光－共鳴－エネルギー移動（ＦＲＥＴ）及び蛍光分極（ＦＰ）等を利用して実施することができる。本明細書に記載の生体試料をそのような状況で使用することもできる。特に、細胞アッセイ及びインビボアッセイをＨＴＳに用いることができる。細胞アッセイは、細胞抽出物、すなわち、細胞、組織及びこれらに類するものからの抽出物も含み得る。インビボアッセイが、本明細書中で使用されるべきモジュレーター／阻害剤／化学療法剤の検証試験で特に有用であるが、しかし生体試料（特に、がんに罹患しているか、又は罹患しやすい患者／被験体から得られた試料）として細胞（一もしくは複数）又は組織（一もしくは複数）の使用がここでは好ましい。最初のアッセイの結果によっては、実験を再実行することによって絞り込まれたセット（例えば、最初のアッセイで「陽性」と判明した試料）に関して更なるデータを収集する追跡アッセイを実施し、観察結果を確認及び精緻化することができる。

【0090】

本発明の方法の文脈で使用される場合、「コントロール」の非限定的な例は、例えば、一又は複数の健康な被検体から、或いはＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法が必要ないとわかっているがん／腫瘍に罹患している患者から得られた試料／細胞／組織など、好ましくは、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていない患者由来のコントロールである。例えば、そのようなコントロール（試料）は、追加的なＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法から恩恵を受けない患者由来のものでもあってもよい。もう一つの「コントロール」の非限定的例は「内標準」であり、例えば、精製されたか或いは合成的に製造されたタンパク質及び／又はペプチドもしくはＲＮＡの混合物であり、上記のコントロールを使用してこれらの量をそれぞれ計ることができる。

【0091】

「コントロール」の更なる非限定的例は、「健康な」コントロールであり得、例えば、がん／腫瘍に罹患していない健康な被検体又は患者から得られた試料／細胞／組織、或いはそのような被検体から得られた細胞である。上記に従い、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γの発現量の基準値又はコントロール値は、対応する健康なコントロール被検体／患者（の試料）、すなわち、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＩＦＮ－γの「正常な」状態で決定されるものである。 前記コントロールは、試料／細胞／組織が腫瘍又はがん細胞を含有しない限りは、がんに罹患していることが疑われる個体又は患者から得られた試料／細胞／組織であってもよい。更に別の代替として、「コントロール」は、がんに罹患している個体又は患者から、前記がんの発生又は診断より前に得られた試料／細胞／組織であってもよい。

【0092】

本明細書において提供される方法に従って評価されるべき前記試料は、非疾患細胞及び／又は疾患細胞、すなわち、非がん性細胞及び／又はがん性細胞を含み得る。しかし、非がん性細胞中のがん性細胞の含有量は、例えば５０％よりも高くなければならない。前記試料は、例えば乳がん／乳房腫瘍細胞（一又は複数）など、がん／腫瘍細胞（一又は複数）も（或いは、それらだけを）含み得る。用語「試料」は、一般に、患者の腫瘍から得られる任意の生体試料を意味する。前記試料は組織切片又は組織生検材料であってもよい。試料はまた、転移性病変もしくは転移性病変の切片、又は循環性腫瘍細胞を含むことが分かっているか疑われる血液試料であってもよい。上記に従って、生体試料は、がん細胞と、ある程度の、すなわち、例えば５０％未満の、非がん性細胞（他の細胞）を含み得る。通常の知識を有する病理学者であれば、正常な組織細胞とがん細胞を識別することができる。組織生検材料、組織切片及び体液などを、哺乳動物（例えば、ヒト）から得るための方法は、当該技術分野で周知である。

【0093】

上述のように、本発明に従ってＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定されたがん患者は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているか、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含むそのような治療が該患者のために計画されている。ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療は、「ＨＥＲ２陽性がん」を有する患者、例えばＨＥＲ２陽性がんに罹患していることが疑われる患者、ＨＥＲ２陽性がんに罹患している患者、又はＨＥＲ２陽性がんに罹患しやすい患者に用いられる。本発明に従い治療されるべきがんは、好ましくは、「ＨＥＲ２陽性がん」、特に「ＨＥＲ２陽性乳がん」である。「ＨＥＲ２陽性がん」は、「ＨＥＲ２陽性乳がん」又は「ＨＥＲ２陽性胃がん」であり得る。更に、ＨＥＲ２陽性がんは、卵巣がん、肺がん、結腸直腸がん、腎臓がん、骨がん、骨髄のがん、膀胱がん、皮膚がん、前立腺がん、食道がん、唾液腺がん、膵臓がん、肝臓がん、頭頚部がん、中枢神経系（特に脳の）がん、子宮頸がん、軟骨のがん、 結腸がん、泌尿生殖器のがん、消化管がん、膵臓がん、滑膜のがん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、及び子宮がんであり得る。

【0094】

本明細書で使用される用語「ＨＥＲ２陽性がん」は、正常よりも高いレベルのＨＥＲ２を有するがん細胞を含む、がん／腫瘍組織などを指す。本発明の目的のために、「ＨＥＲ２陽性がん」は、免疫組織化学（ＩＨＣ）法でのスコアが少なくとも２＋、及び／又はｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率が≧２．０（すなわち、ＩＳＨ陽性）である。したがって、免疫組織化学的方法等で検出される高ＨＥＲ２（タンパク質）発現量及び／又はｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション）で検出されるＨＥＲ２遺伝子増幅（腫瘍細胞あたりのＨＥＲ２遺伝子のコピー数が４コピーを超えるか、もしくはＣＥＰ１７シグナル数に対するＨＥＲ２遺伝子のコピー数の比率が≧２．０など、ＩＳＨ陽性）が、乳房組織生検材料もしくは乳房組織切片など患者から得られた試料中に、又は転移性部位から派生した組織中に見出される場合、ＨＥＲ２陽性がんが存在する。一実施態様において、「ＨＥＲ２陽性がん」は、免疫組織化学（ＩＨＣ）法でのスコアがＨＥＲ２（３＋）、及び／又はＩＳＨ陽性である。

【0095】

ＨＥＲ２の発現量は免疫組織化学的方法で検出され得、一方、前記ＨＥＲ２遺伝子増幅状態は蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ法）などのｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法で測定され得る。タンパク質発現アッセイ並びに遺伝子増幅の検出のために、対応するアッセイ及びキットが当該技術分野でよく知られている。或いは他の方法、例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲがＨＥＲ２遺伝子の発現量を検出するために使用され得る。

【0096】

ＨＥＲ２発現量は、特に、免疫組織化学的方法によって検出され得る。これらの方法は当該技術分野でよく知られており、対応する市販のキットが利用可能である。本発明に従って利用され得る例示的キットは、特に、Ｄａｋｏ社が製造販売するＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔ^TM、又はＶｅｎｔａｎａ Ｐａｔｈｗａｙ^TMと呼ばれる検査キットである。ＨＥＲ２タンパク質の発現量は、提供される試薬を用いて、また、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ^ＴＭの手順に従うことによって評価することができる。当業者は、免疫組織化学的方法によってＨＥＲ２の発現量を決定するための更なる手段及び方法を知っているであろう； 例えば、国際公開第２００５／１１７５５３号を参照されたい。したがって、ＨＥＲ２の発現量は、容易にかつ再現性よく、過度の負担なしに当業者によって決定され得る。しかし、正確で再現性のある結果を確保するためには、試験手順の妥当性を確保することができる専門の実験室で試験を行わなければならない。

【0097】

ＨＥＲ２の発現量は、低い発現量、中程度の発現量、及び高い発現量に分類することができる。本発明の文脈で、ＨＥＲ２陽性疾患は、ＨＥＲ２の強い発現量（例えば、ＩＨＣでＨＥＲ２（３＋））によって定義され、例えば、がん患者の試料において決定されることが好ましい。

【0098】

本明細書中でＨＥＲ２（０）、ＨＥＲ２（＋）、ＨＥＲ２（＋＋）及びＨＥＲ２（＋＋＋）と示されている、ＨＥＲ２発現量を表すＩＨＣ染色パターンを評価するために推奨されるスコアリングシステムは、以下の通りである：

【0099】

【0100】

上記のＩＨＣ染色パターンは、ＨＥＲ２陽性乳がんの決定において慣用的に使用されている。本明細書で使用される用語「ＨＥＲ２（＋）」、「ＨＥＲ２（＋＋）」及び「 ＨＥＲ２（＋＋＋）」は、用語「ＨＥＲ２（１＋）」、「ＨＥＲ２（２＋）」及び「ＨＥＲ２（３＋）」に相当する。本発明の文脈において使用される「低いタンパク質発現量」は、０又は１＋のスコア（本明細書中で上に示した表の記載では「陰性評価」）に相当し、「弱から中程度のタンパク質発現量」は、２＋のスコア（「弱から中程度の過剰発現」、上の表参照）に相当し、「高いタンパク質発現量」は、３＋のスコア（「強度の過剰発現」、上の表参照）に相当する。本明細書で上に詳述したように、タンパク質発現量の評価（すなわち、表に示したようなスコアリングシステム）は、免疫組織化学的方法によって得られた結果に基づく。したがって、標準として又は慣用的に、ＨＥＲ２状態の判定は、ＦＤＡ承認の入手可能な２つの市販のキット、すなわちＤａｋｏ Ｈｅｒｃｅｐｔｅｓｔ^TM及びＶｅｎｔａｎａ Ｐａｔｈｗａｙ^TMのうちの一つを用いて免疫組織化学によって実施される。これらは、発現量を、０（一細胞当たり＜２００００個の受容体、ＩＨＣ染色による可視の発現なし）、１＋（一細胞当たり～１０００００個の受容体、部分的な膜染色、ＨＥＲ－２過剰発現細胞の＜１０％）、２＋（一細胞当たり～５０００００個の受容体、弱から中程度の完全な膜染色、ＨＥＲ２過剰発現細胞の＞１０％）、及び３＋（一細胞当たり（～２００００００個の受容体、強度の完全な膜染色、ＨＥＲ－２過剰発現細胞の＞１０％）に階層化する半定量アッセイである。

【0101】

或いは、ＨＥＲ２のタンパク質発現量を評価するための更なる方法、例えば、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法に基づく各種検出システム等が使用され得る。

【0102】

ＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２の遺伝子増幅を評価することによっても診断され得る。したがって、ＨＥＲ２陽性がんは、ＩＳＨによる該評価が陽性の場合に診断される。該評価に従って、ＨＥＲ２陽性がんは、特に腫瘍細胞あたりのＨＥＲ２遺伝子のコピー数が４を超える平均ＨＥＲ２遺伝子コピー数（それらの検査システムに関しては内部のセントロメア制御プローブ無しで）、又は＞＝２．０のＨＥＲ２／ＣＥＰ１７の比率（それらの検査システムに関しては内部の第１７番染色体のセントロメア制御プローブを使用）に関する。換言すれば、ＨＥＲ２陽性がんは、とりわけ４を超えるＨＥＲ２遺伝子のコピー数に関する。ＨＥＲ２遺伝子の増幅量は、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）法、色素産生ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）法、及びシルバーｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）法等のｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）法によって容易に同定され得る。これらの方法は当業者に知られている。これらの方法の原理は、標準的な教科書から推定することができる。ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって、ＨＥＲ２遺伝子増幅状態の決定のための市販のキットが入手可能である。

【0103】

下記のＩＨＣ染色パターンが、ＨＥＲ２陽性胃がんの決定のために推奨される（Ｄａｋｏ社製Ｈｅｒｃｅｐｔｅｓｔの添付文書を参照）。

【0104】

Ｈｅｒｃｅｐ Ｔｅｓｔ^ＴＭで染色された生検標本のうち、少なくとも５個の染色がある腫瘍細胞を含むクラスターが推奨される。少なくとも５個の染色がある腫瘍細胞クラスターは、５個の連続したＨＥＲ２染色腫瘍細胞からなる。

【0105】

【0106】

ＨＥＲ２陽性がん胃がんを判定するための、より精緻化されたＩＨＣ法の染色パターンは以下の通りである：

【0107】

【0108】

上に示したように、本発明に従い治療されるべきＨＥＲ２陽性がんは、乳がん、例えば、早期乳がんであってもよい。本明細書で使用される用語「早期乳がん」は、乳房又は腋窩リンパ節を越えて広がっていない乳がんを指す。このようながんは、一般に、ネオアジュバント又はアジュバント療法で治療することができる。本明細書で使用される用語「ネオアジュバント療法」は、手術より前になされる全身療法を指す。用語「アジュバント療法」は、手術の後になされる全身療法を指す。上記に従い、治療は、早期乳がんのネオアジュバント又はアジュバント療法であってもよい。

【0109】

上記に従い、評価される試料は、上で定義したＨＥＲ２陽性がんを有する患者由来の（から得られた）ものであり得る。例えば、該試料は、腫瘍性組織、腫瘍（一又は複数）から得られ、したがって、乳房腫瘍等のＨＥＲ２陽性腫瘍であることが疑われる腫瘍細胞（一もしくは複数）又は腫瘍組織（一もしくは複数）である。当業者は、当該技術分野で知られている標準的な手法や本明細書に開示されている方法を用いて、そのような腫瘍及び／又は相当するがんに罹患している個体／患者を同定できる立場にある。一般的に、前記腫瘍細胞又はがん細胞は、任意の生物学的供給源／生物体、特に、上記のがんに罹患している任意の生物学的供給源／生物体から得ることができる。本発明の文脈で特に有用な細胞は、好ましくは、ヒト細胞である。これらの細胞は、例えば生検から、又は生体試料から得られる。腫瘍／がん／腫瘍細胞／がん細胞は、固形腫瘍／がん／腫瘍細胞／がん細胞である。上記に従い、がん／腫瘍細胞は、乳房のがん／腫瘍細胞、又は乳房のがん／腫瘍細胞等のがん／腫瘍細胞を含む前記試料であり得る。上記に従い、前記腫瘍／がんは乳房の腫瘍／がんであり得る。

【0110】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターはＨＥＲ２阻害剤、例えば、ＨＥＲ二量体化／シグナル伝達阻害剤であり得る。ＨＥＲ二量体化阻害剤はＨＥＲ２二量体化阻害剤であり得る。ＨＥＲ二量体化阻害剤は、ＨＥＲのヘテロ二量体化又はホモ二量体化を阻害し得る。 ＨＥＲ二量体化阻害剤は、抗ＨＥＲ抗体であり得る。本明細書では、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、特に、それらが所望の生物活性を示す限り、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。また、ヒト抗体及びヒト化抗体、並びにＣＤＲ移植抗体も含まれる。

【0111】

ＨＥＲ抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３からなる群より選択されるＨＥＲ受容体に結合し得る。該抗体は、好ましくは、ＨＥＲ２に結合する。抗ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合し得る。該抗体は、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩの間の接合点に結合し得る。抗ＨＥＲ２抗体はペルツズマムであり得る。

【0112】

本明細書での目的のため、「ペルツズマム」及び「ｒｈｕＭＡｂ ２Ｃ４」（これらは互換的に使用される）は、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン（図２の通り、配列番号５と６にそれらのアミノ酸配列もそれぞれ示されている）を含む抗体を指す。図２には、変異体５７４／ペルツズマブの可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメインも示されている（図２の通り、配列番号７と８にそれらのアミノ酸配列もそれぞれ記されている）。ペルツズマブがインタクトな抗体である場合、ペルツズマブは好ましくはＩｇＧ１抗体を含み；軽鎖アミノ酸配列を含む一実施態様において、ペルツズマブは好ましくは軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を、図３Ａ／３Ｂと５Ａ／５Ｂにそれぞれ示したように含んでいる（図５Ａ／５Ｂは、変異体ペルツズマブの軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を示す）。図３Ｂに示されているペルツズマブの重鎖アミノ酸配列は、場合によってはＣ末端の４４９位に追加のアミノ酸「Ｋ」を含んでもよい。該抗体は、場合によっては、組換えチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＣ）細胞により産生されてもよい。本明細書の用語「ペルズマム」及び「ｒｈｕＭＡｂ ２Ｃ４」は、米国一般名（ＵＳＡＮ）又は国際一般名（ＩＮＮ）でペルズマムである薬剤のバイオシミラー版を包含する。ここでも、対応する配列を図２から５に示す。

【0113】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターは、ＨＥＲ切断（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）の阻害剤、例えばＨＥＲ２切断阻害剤であり得る。ＨＥＲ切断阻害剤は、ＨＥＲのヘテロ二量体化又はホモ二量体化を阻害し得る。前記ＨＥＲ切断阻害剤は抗ＨＥＲ抗体であり得る。

【0114】

本明細書では、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、特に、それらが所望の生物活性を示す限り、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。また、ヒト抗体及びヒト化抗体、並びにＣＤＲ移植抗体も含まれる。

【0115】

抗ＨＥＲ抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３からなる群より選択されるＨＥＲ受容体に結合し得る。該抗体は、好ましくは、ＨＥＲ２に結合する。ＨＥＲ２抗体はＨＥＲ２細胞外ドメインのサブドメインＩＶに結合し得る。ＨＥＲ２抗体は、好ましくは、ハーセプチン^TM／トラスツズマブ^TMである。

【0116】

本明細書での目的のため、「ハーセプチン^TM／トラスツズマブ」及び「ｒｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８」（これらは互換的に使用される）は、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン（それらのアミノ酸配列をそれぞれ図４に示す；ドメインは矢印で示す）。トラスツズマブがインタクトな抗体である場合、トラスツズマブは、好ましくは、図４に示すように、軽鎖アミノ酸配列及び重鎖アミノ酸配列を含む一実施態様において、ＩｇＧ１抗体を含む。該抗体は、場合によっては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＣ）細胞により産生されてもよい。本明細書の用語「トラスツズマブ」及び「ｒｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８」は、米国一般名（ＵＳＡＮ）又は国際一般名（ＩＮＮ）でトラスツズマブである薬剤のバイオシミラー版を包含する。

【0117】

プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）であり得る。繰り返すが、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、特に、それらが所望の生物活性を示す限り、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも二つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。また、ヒト抗体及びヒト化抗体、並びにＣＤＲ移植抗体も含まれる。

【0118】

例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書にその内容全体が援用される国際公開第２０１０／０７７６３４号において開示されている。本発明に従って使用される、該当する例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体を以下に記載する。

【0119】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含み得、
（ａ）ＨＶＲ－Ｈ１配列は、GFTFSX1SWIH（配列番号１）であり；
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２配列は、AWIX2PYGGSX3YYADSVKG（配列番号２）であり；
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３配列は、RHWPGGFDY（配列番号３）であり；
更に配列中、Ｘ１はＤ又はＧであり；Ｘ２はＳ又はＬであり；Ｘ３はＴ又はＳである。Ｘ１はＤであってもよく；Ｘ２はＳであってもよく、またＸ３はＴであってもよい。

【0120】

ポリペプチドは、式（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の重鎖フレームワーク配列を更に含み得る。該フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来してもよい。該フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩのコンセンサスフレームワークであってもよい。一又は複数のフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＨＣ－ＦＲ１が、EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）；
ＨＣ－ＦＲ２が、WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）；
ＨＣ－ＦＲ３が、RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）；
ＨＣ－ＦＲ４が、WGQGTLVTVSA（配列番号７）。

【0121】

重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含む可変領域軽鎖との組み合わせであってもよく、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１配列は、RASQX4X5X6TX7X8A（配列番号８）であり；
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２配列は、SASX9LX10S（配列番号９）であり；且つ、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３配列は、QQX11X12X13X14PX15T（配列番号１０）であり；
更に配列中、Ｘ４はＤ又はＶであり；Ｘ５はＶ又はＩであり；Ｘ６はＳ又はＮであり；Ｘ７はＡ又はＦであり；Ｘ８はＶ又はＬであり；Ｘ９はＦ又はＴであり；Ｘ１０はＹ又はＡであり；Ｘ１１はＹ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ１２はＬ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ１３はＹ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ１４はＨ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ１５はＡ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。

【0122】

Ｘ４はＤであってもよく；Ｘ５はＶであってもよく；Ｘ６はＳであってもよく；Ｘ７はＡであってもよく；Ｘ８はＶであってもよく；Ｘ９はＦであってもよく；Ｘ１０はＹであってもよく；Ｘ１１はＹであってもよく；Ｘ１２はＬであってもよく；Ｘ１３はＹであってもよく；Ｘ１４はＨであってもよく；Ｘ１５はＡであってもよい。

【0123】

ポリペプチドは、式（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の軽鎖フレームワーク配列を更に含み得る。該フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来してもよい。該フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークであってもよい。一又は複数のフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＬＣ－ＦＲ１が、DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）；
ＬＣ－ＦＲ２が、WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）；
ＬＣ－ＦＲ３が、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）；
ＬＣ－ＦＲ４が、FGQGTKVEIKR（配列番号１４）。

【0124】

抗ＰＤ－Ｌ１抗体（又はその抗原結合断片）は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み得、
（ａ）重鎖はＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３を含み、更に、
（ｉ）ＨＶＲ－Ｈ１配列は、GFTFSX1SWIH（配列番号１）であり；
（ｉｉ）ＨＶＲ－Ｈ２配列は、AWIX2PYGGSX3YYADSVKG（配列番号２）であり；
（ｉｉｉ）ＨＶＲ－Ｈ３配列は、RHWPGGFDY（配列番号３）であり；且つ、
（ｂ）軽鎖はＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含み、更に、
（ｉｖ）ＨＶＲ－Ｌ１配列は、RASQX4X5X6TX7X8A（配列番号８）であり；
（ｖ）ＨＶＲ－Ｌ２配列は、SASX9LX10S（配列番号９）であり；
（ｖｉ）ＨＶＲ－Ｌ３配列は、QQX11X12X13X14PX15T（配列番号１０）であり；
配列中、Ｘ１はＤ又はＧであり；ＸはＳ又はＬであり；Ｘ３はＴ又はＳであり；Ｘ４はＤ又はＶであってもよく；Ｘ５はＶ又はＩであってもよく；Ｘ６はＳ又はＮであってもよく；Ｘ７はＡ又はＦであってもよく；Ｘ８はＶ又はＬであってもよく；Ｘ９はＦ又はＴであってもよく；Ｘ１０はＹ又はＡであってもよく；Ｘ１１はＹ、Ｇ、Ｆ又はＳであってもよく；Ｘ１２はＬ、Ｙ、Ｆ又はＷであってもよく；Ｘ１３はＹ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであってもよく；Ｘ１４はＨ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであってもよく；Ｘ１５はＡ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴであってもよい。

【0125】

Ｘ１はＤであってもよく；Ｘ２はＳであってもよく、且つＸ３はＴであってもよい。更に、位置は次の通りであってもよい：Ｘ４＝Ｄ、Ｘ５＝Ｖ、Ｘ６＝Ｓ、Ｘ７＝Ａ及びＸ８＝Ｖ、Ｘ９＝Ｆ、並びにＸ１０＝Ｙ、Ｘ１１＝Ｙ、Ｘ１２＝Ｌ、Ｘ１３＝Ｙ、Ｘ１４＝Ｈ及び／又はＸ１５＝Ａ。更に、位置は次の通りであってもよい：Ｘ１＝Ｄ、Ｘ２＝Ｓ及びＸ３＝Ｔ、Ｘ４＝Ｄ、Ｘ５＝Ｖ、Ｘ６＝Ｓ、Ｘ７＝Ａ及びＸ８＝Ｖ、Ｘ９＝Ｆ、並びにＸ１０＝Ｙ、Ｘ１１＝Ｙ、Ｘ１２＝Ｌ、Ｘ１３＝Ｙ、Ｘ１４＝Ｈ及びＸ１５＝Ａ。

【0126】

前記抗体（又はその抗原結合断片）は、
（ａ）式（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の重鎖フレームワーク配列、及び
（ｂ）式（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の軽鎖フレームワーク配列
を更に含み得る。該フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来してもよい。

【0127】

可変領域の重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩのコンセンサスフレームワークであってもよい。一又は複数のフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＨＣ－ＦＲ１が、EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）；
ＨＣ－ＦＲ２が、WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）；
ＨＣ－ＦＲ３が、RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）；
ＨＣ－ＦＲ４が、WGQGTLVTVSA（配列番号７）。

【0128】

可変領域の軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークであってもよい。一又は複数のフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＬＣ－ＦＲ１が、DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）；
ＬＣ－ＦＲ２が、WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）；
ＬＣ－ＦＲ３が、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）；及び、
ＬＣ－ＦＲ４が、FGQGTKVEIKR（配列番号４）。

【0129】

前記抗体（もしくはその抗原結合断片）は、
（ａ）以下の可変重鎖フレームワーク配列：
（ｉ）ＨＣ－ＦＲ１が、EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）；
（ｉｉ）ＨＣ－ＦＲ２が、WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）；
（ｉｉｉ）ＨＣ－ＦＲ３が、RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）；
（ｉｖ）ＨＣ－ＦＲ４が、WGQGTLVTVSA（配列番号７）；及び、
（ｂ）以下の可変軽鎖フレームワーク配列：
（ｉ）ＬＣ－ＦＲ１が、DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）；
（ｉｉ）ＬＣ－ＦＲ２が、WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）；
（ｉｉｉ）ＬＣ－ＦＲ３が、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）；
（ｉｖ）ＬＣ－ＦＲ４が、FGQGTKVEIKR（配列番号１４）
であり得るか、又は上を含み得る。

【0130】

前記抗体（又はその断片）は、ヒト定常領域を更に含み得る。該定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４からなる群より選択され得る。該定常領域は、ＩｇＧ１であり得る。前記抗体（又はその断片）は、マウス定常領域を更に含み得る。該定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ及びＩｇＧ３からなる群より選択され得る。該定常領域は、ＩｇＧ２Ａであり得る。

【0131】

前記抗体（もしくはその断片）は、低減されたか又は最小のエフェクター機能を有し得る。最小エフェクター機能は、エフェクターを欠くＦｃ変異から生じ得る。エフェクターを欠くＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａであり得る。エフェクターを欠くＦｃ変異は、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａであり得る。最小エフェクター機能は非グリコシル化から生じ得る。

【0132】

前記抗体（又はその断片）は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み得、
（ａ）該重鎖は、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）及びRHWPGGFDY（配列番号３）とそれぞれ少なくとも８５％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３を含み、且つ
（ｂ）該軽鎖は、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）とそれぞれ少なくとも８５％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0133】

前記配列同一性は少なくとも９０％であってもよい。

【0134】

前記抗体（又はその断片）は：
（ａ）式（ＨＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｈ１）－（ＨＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｈ２）－（ＨＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｈ３）－（ＨＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の重鎖（ＶＨ）フレームワーク配列；及び
（ｂ）式（ＬＣ－ＦＲ１）－（ＨＶＲ－Ｌ１）－（ＬＣ－ＦＲ２）－（ＨＶＲ－Ｌ２）－（ＬＣ－ＦＲ３）－（ＨＶＲ－Ｌ３）－（ＬＣ－ＦＲ４）に従ってＨＶＲの間に並置された可変領域の軽鎖（ＶＬ）フレームワーク配列
を更に含み得る。

【0135】

前記抗体（又はその断片）は、ヒトコンセンサス配列に由来するＶＨ及びＶＬフレームワーク領域を更に含み得る。前記ＶＨフレームワーク配列は、ＫａｂａｔサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来し得る。前記ＶＨフレームワーク配列は、ＫａｂａｔサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク配列であり得る。前記ＶＨフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＨＣ－ＦＲ１が、EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）；
ＨＣ－ＦＲ２が、WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）；
ＨＣ－ＦＲ３が、RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）；
ＨＣ－ＦＲ４が、WGQGTLVTVSA（配列番号７）。
前記ＶＬフレームワーク配列は、ＫａｂａｔカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ、又はＩＶサブグループ配列に由来し得る。前記ＶＬフレームワーク配列は、ＫａｂａｔカッパＩコンセンサスフレームワーク配列であり得る。

【0136】

前記ＶＬフレームワーク配列は、以下であってもよい：
ＬＣ－ＦＲ１が、DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）；
ＬＣ－ＦＲ２が、WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）；
ＬＣ－ＦＲ３が、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）；
ＬＣ－ＦＲ４が、FGQGTKVEIKR（配列番号１４）。

【0137】

前記抗体（又はその断片）は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み得、
（ａ）該重鎖配列が、重鎖配列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA（配列番号２０）と少なくとも８５％の配列同一性を有し、また、
（ｂ）該軽鎖配列が、軽鎖配列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR（配列番号２１）と少なくとも８５％の配列同一性を有する。

【0138】

前記配列同一性は少なくとも９０％であってもよい。

【0139】

前記抗体（又はその断片）は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み得、
（ａ）該重鎖が、配列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA（配列番号２０）を含み、且つ
（ｂ）該軽鎖が、配列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR（配列番号２１）を含む。

【0140】

更に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は核酸によってコードされ得る。したがって、本明細書に記載されているのは、上記ポリペプチド／抗体（又はその断片）をコードする単離された核酸である。

【0141】

本明細書で提供されるのは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又はその抗原結合断片の軽鎖及び重鎖可変配列をコードする単離された核酸であって、
（ａ）該重鎖が、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）及びRHWPGGFDY（配列番号３）とそれぞれ少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３配列を更に含むか、又は
（ｂ）該軽鎖が、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）とそれぞれ少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を更に含む。

【0142】

前記配列同一性は９０％であってもよい。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトコンセンサス配列に由来するＶＬ及びＶＨフレームワーク領域を更に含み得る。前記ＶＨ配列は、ＫａｂａｔサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列に由来し得る。前記ＶＬ配列は、ＫａｂａｔカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ、又はＩＶサブグループ配列に由来し得る。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、マウス抗体由来の定常領域を含み得る。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒト抗体由来の定常領域を含み得る。該定常領域は、ＩｇＧ１であってもよい。核酸によってコードされた抗体は、低減されたか又は最小のエフェクター機能を有し得る。最小エフェクター機能は、エフェクターを欠くＦｃ変異から生じ得る。エフェクターを欠くＦｃ変異は、Ｎ２９７Ａであり得る。

【0143】

本明細書で更に提供されるのは、核酸を含むベクター、ベクターを含む宿主細胞である。前記宿主細胞は真核生物であってもよい。前記宿主細胞は哺乳類であってもよい。前記宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞であってもよい。前記宿主細胞は原核生物であってもよい。前記宿主細胞は、大腸菌であってもよい。本明細書で提供されるのは、また、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片をコードするベクターの発現に適した条件下で上記宿主細胞を培養することと、該抗体又は断片を回収することとを含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を作製するための方法でもある。

【0144】

以下に、本明細書で提供されるがん及び／又はがん患者を治療するための手法並びに方法をより詳しく述べる。

【0145】

したがって、本明細書で企図されるのは、（トラスツズマブ等の）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと、（本明細書に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体等の）プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含むがんの治療での使用のための医薬組成物であって、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、また、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定される。前記がんは、コントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すると決定され得る。前記医薬組成物は、化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）を更に含んでもよい。

【0146】

上記に従い、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を、それらを必要としている被験体に投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する。がんは、コントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量 を有すると決定され得る。

【0147】

本明細書で提供されるのは、がんの治療における使用のための、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤であって、それにより前記がんは、ＥＲが非発現か又は低量発現であること、また、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定される。本明細書で更に提供されるのは、がんの治療における使用のための、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤、及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）であって、それにより前記がんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、コントロールと比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定される。がんは、コントロールと比べ低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）発現量を有すると決定され得る。

【0148】

上に論じたように、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、前記がんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、コントロールに比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法を提供する。同様に、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんがＥＲ非発現か又は低量発現であること、また、コントロールに比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法を提供する。

【0149】

上記の「がん」、「がん患者」、「ＰＤ－Ｌ１阻害剤」、「ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法」、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター」、「化学療法剤」、「ＥＲ非発現か又は低量発現」、「増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）発現量」、「低下したインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）発現量」などに関する説明及び定義のすべてが、本明細書に関して準用される。

【0150】

用語「治療」（「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」）、「治療すること」（「ｔｒｅａｔｉｎｇ」）等は、一般的に、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを意味するために、本明細書で使用される。効果とは、ある疾患やその症状を完全にもしくは部分的に防ぐという意味で予防的であってもよく、並びに／或いは、疾患及び／又はその疾患に起因する副作用を部分的にもしくは完全に治癒させるという意味で治療的であってもよい。本明細書で使用される用語「治療」は、患者における疾患のいかなる治療も包含し、（ａ）患者が罹患しやすい疾患に関して予防すること；（ｂ）その疾患を阻害する、すなわち、その進行を停止させること；又は（ｃ）その疾患を軽減する、すなわち疾患を後退させることを含む。

【0151】

本発明の目的のための「患者」とは、ヒトと他の動物の両方、特に哺乳類やその他の生物体を含む。したがって、前記方法はヒトの治療と獣医学用途の両方に適用可能である。患者は、好ましくは、ヒトである。

【0152】

以下の説明は、本発明によるこれらの患者／患者群の治療／療法に、より詳細に関連している。

【0153】

前記医薬組成物は、個々の患者の臨床状態、医薬組成物の送達部位、投与方法、投与計画、及び施術者に既知の他の要因を考慮して、良好な医療行為と一致した様式で製剤化され、投与される。したがって、本明細書の目的のための医薬組成物の「有効量」は、このような条件により決定される。

【0154】

当業者であれば、個体に投与される医薬組成物中の、本明細書に記載のＰＤ－Ｌ１阻害剤（単数又は複数）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（単数又は複数）、及び化学療法剤（単数又は複数）の有効量は、とりわけ、化合物の性質に依存することを理解している。例えば、前記化合物が（ポリ）ぺプチド又はタンパク質である場合、用量あたり非経口投与される医薬組成物の薬学的総有効量は、約１μｇタンパク質／患者体重ｋｇ／日から１０ｍｇタンパク質／患者体重ｋｇ／日の範囲であるが、これは、上記のように治療的裁量に委ねられる。この用量は、より好ましくは、少なくとも０．０１ｍｇタンパク質／体重ｋｇ／日であり、また、ヒトに関してもっとも好ましくは、約０．０１から１ｍｇタンパク質／体重ｋｇ／日である。

【0155】

トラスツズマブに関し、以下の投与法が用いられ得る：
薬量と投与方法
ＨＥＲ２検査は、治療開始前に必須である。ハーセプチン療法は、細胞傷害性化学療法の適用の経験が豊富な医師によってのみ開始されるべきである。
ＭＢＣ
三週間スケジュール
推奨初回負荷用量は、８ｍｇ／体重ｋｇである。三週間間隔の推奨維持量は、初期負荷用量開始後三週間から、６ｍｇ／体重ｋｇである。
週間スケジュール
ハーセプチンの推奨初回負荷用量は、４ｍｇ／体重ｋｇである。ハーセプチンの推奨週間維持量は、初期負荷用量の一週間後に開始で、２ｍｇ／体重ｋｇである。
パクリタキセル又はドセタキセルとの組み合わせ投与
極めて重要な治験（Ｈ０６４８ｇ、Ｍ７７００１）において、パクリタキセル又はドセタキセルは、ハーセプチンの初回投与（用量については、パクリタキセル又はドセタキセルの製品特性概要を参照）の翌日に、また、先のハーセプチン投与に良好な耐容性を示した場合はその後のハーセプチン投与の直後に投与された。
アロマターゼ阻害剤との組み合わせ投与
極めて重要な治験（ＢＯ１６２１６）において、ハーセプチンとアナストロゾ－ルが１日目から投与された。ハーセプチンとアナストロゾ－ルとの相対的な投与タイミングについて制限はない（用量については、アナストロゾ－ル又は他のアロマターゼ阻害剤の製品特性概要を参照）。
ＥＢＣ
三週間及び週間スケジュール
三週間レジメンとしてハーセプチンの推奨初回負荷用量は、８ｍｇ／体重ｋｇである。三週間間隔のハーセプチンの推奨維持量は、初期負荷用量の三週間後に開始で、６ｍｇ／体重ｋｇである。

【0156】

週間レジメンとして（４ｍｇ／ｋｇの初回負荷用量に続き、毎週２ｍｇ／ｋｇ）、ドキソルビシンとシクロホスファミドを用いた化学療法に続く、パクリタキセルの併用で。（化学療法併用投与に関しては、第５節第１項参照）。
ＭＧＣ
三週間スケジュール
推奨初回負荷用量は、８ｍｇ／体重ｋｇである。三週間間隔の推奨維持量は、初期負荷用量の三週間後に開始で、６ｍｇ／体重ｋｇである。
乳がん（ＭＢＣ及びＥＢＣ）並びに胃がん（ＭＧＣ）
治療期間
ＭＢＣ又はＭＧＣの患者は、疾患が進行するまではハーセプチンで治療されるべきである。ＥＢＣの患者は、一年間か、又は最初の発症が何であれ、疾患の再発まではハーセプチンで治療されるべきである。

【0157】

減量
臨床試験中、ハーセプチンの用量は削減しなかった。患者は可逆的、化学療法によって誘発される骨髄抑制の期間中に治療を継続することができるが、この間、好中球減少症の合併症に関して注意深くモニターされる必要がある。パクリタキセル、ドセタキセルもしくはアロマターゼ阻害剤の減量又は投与延期についての情報は、製品特性概要を参照のこと。

【0158】

飲み忘れ
患者のハーセプチンの飲み忘れが一週間以内であれば、通常の維持量（週間レジメン： ２ｍｇ／ｋｇ；三週間レジメン：６ｍｇ／ｋｇ）をすぐに与えるべきである。次に予定されているサイクルまで待ってはいけない。次いで、その後の維持量（週間レジメン：２ｍｇ／ｋｇ；三週間レジメン：６ｍｇ／ｋｇ）を以前のスケジュールに従って与えるべきである。

【0159】

患者が一週間を超えてハーセプチンを飲み忘れた場合、ハーセプチンの再負荷用量を約９０分にわたって与えるべきである（週間レジメン：４ｍｇ／ｋｇ；三週間レジメン：８ｍｇ／ｋｇ）。次いで、その後のハーセプチンの維持量（週間レジメン：２ｍｇ／ｋｇ；三週間レジメン：６ｍｇ／ｋｇ）を、その時点から与えるべきである（週間レジメン：毎週；三週間レジメン：三週毎）。
特別な患者集団

【0160】

臨床データは、ハーセプチンの生体内分布は年齢又は血清クレアチニンによって変わらないことを示している。臨床治験では、高齢の患者はハーセプチンの減量をされなかった。腎臓又は肝臓障害を持つ高齢者に限った薬物動態試験は実施されていない。しかし、集団薬物動態分析では、年齢及び腎臓障害がトラスツズマブの生体内分布に影響を与えるとは示されなかった。

【0161】

投与方法
ハーセプチンの初期負荷用量は、９０分間の静脈内注入として投与されるべきである。静脈内プッシュ又は静脈内ボーラスとして投与してはならない。ハーセプチンの静脈内注入は、アナフィラキシーに対応する用意のある医療提供者によってなされるべきであり、また、応急用具の用意も必要である。発熱や悪寒又は他の注入関連症状等の症状のために、最初の注入開始後少なくとも６時間、また、その後の注入開始の後２時間は、患者を観察する必要がある（第４節第４項と第４節第８項を参照）。注入の一次中断又は注入速度の減速は、そのような症状の抑制に役立つ。症状が和らいだ時に注入を再開することができる。

【0162】

初期負荷用量で良好な耐容性が示された場合、その後の用量を３０分間の注入として投与することができる。本発明の医薬組成物は非経口で投与され得る。

【0163】

好ましくは、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に許容される担体」とは、非毒性の固体、半固体もしくは液体の、任意の形態の賦形剤、希釈剤、カプセル化材料又は処方助剤を意味する。本明細書中で用いられる用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下及び関節内の注射並びに注入を含む投与の様式を指す。本明細書中で提供される組成物の投与は、特に、一日２回、毎日、一日おき、三日毎、四日毎、五日毎、週に一度、二週に一度、三週に一度、月に一度等の投与を含む。

【0164】

医薬組成物はまた、徐放システムによって適切に投与される。徐放性組成物の適切な例には、例えばフィルム又はマイクロカプセルのような成形品の形態を有する半透明ポリマーマトリックスが含まれる。徐放性マトリックスは、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号、ＥＰ第５８４８１号）、Ｌ－グルタミン酸とガンマ－エチル－Ｌ－グルタミン酸との共重合体（Sidman, U. et al., Biopolymers 22:547-556 (1983)）、ポリ（メタクリル酸２－ヒドロキシエチル）（R. Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 (1981）、及びR. Langer, Chem. Tech. 12:98-105 (1982））、酢酸ビニルエチレン(R. Langer et al., Id.)又はポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ第１３３９８８号）を含む。徐放性医薬組成物は、リポソームに封入された化合物も含む。医薬組成物を含有するリポソームは、それ自体既知の方法：DE 3,218,121; Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82:3688-3692 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 77:4030-4034 (1980); EP第５２３２２号；ＥＰ第３６６７６号；ＥＰ第８８０４６号；ＥＰ第１４３９４９号；ＥＰ第１４２６４１号；日本特許出願第８３－１１８００８号；米国特許第４４８５０４５号及び第４５４４５４５号；並びにＥＰ第１０２３２４号で調製される。通常、前記リポソームは、小さな（約２００－８００オングストローム）単層タイプであり、脂質含量が約３０モルパーセントコレステロールを超えるが、選択される比率は、最適な治療のために調整される。

【0165】

非経口投与の場合、医薬組成物は、所望の純度で、単位投薬注射可能形態（溶液、懸濁液又は乳濁液）で、薬学的に許容される担体、すなわち用いる用量及び濃度でレシピエントに対して無毒性で、且つ製剤の他の成分と適合性である担体と混合することにより、一般に処方される。

【0166】

一般に、製剤は、医薬組成物の成分を、均一かつ密接に液体担体もしくは微粉固体担体又はその両方と接触させることによって調製される。次いで、必要に応じで、製品を所望の製剤へ成形する。好ましくは、担体は非経口担体、より好ましくは、レシピエントの血液と等張の溶液である。このような担体ビヒクルの例は、水、食塩水、リンゲル液、及びデキストローズ溶液を含む。リポソームと同様、不揮発性油及びオレイン酸エチルなどの非水性ビヒクルもまた本明細書で有用である。担体は、例えば等張性及び化学安定性を高める物質など、少量の添加剤を適切に含有する。このような物質は用いる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、及び他の有機酸もしくはその塩；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）（ポリ）ペプチド、例えば、ポリアルギニン又はトリペプチド；例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えば、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸又はアルギニンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びセルロースもしくはその誘導体、グルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；例えば、マンニトール又はソルビトールなどの糖アルコール；例えば、ナトリウムのような対イオン；及び／又はポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤を含む。

【0167】

治療的投与のために使用される医薬組成物の成分は無菌でなければならない。無菌状態は、滅菌濾過膜（例えば、０．２ミクロン膜）を通して濾過することにより容易に達成される。医薬組成物の治療成分は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器内、例えば、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアル中に配置されている。

【0168】

医薬組成物の成分は、通常、単位用量又は複数回用量容器中、例えば、密閉アンプルもしくはバイアル中で、水溶液として又は再構成用の凍結乾燥製剤として保存される。凍結乾燥製剤の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（ｗ／ｖ）の水溶液５ｍｌを充填し、得られた混合物を凍結乾燥する。注入溶液は、静菌性の注射用水を用いて凍結乾燥した化合物を再構成することにより調製される。

【0169】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）を含む、本明細書で提供されるがんの治療は、前記治療の個々の成分の同時、逐次又は別個の投与によって行ってもよい。例えば、本明細書に記載の一又は複数のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブ等）は、本明細書に記載の一又は複数のプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤（本明細書に提供及び記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体等）と同時投与されてもよい。又、本明細書に記載の一又は複数のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブ等）の逐次投与は、本発明に従って使用される、本明細書に記載の一又は複数のプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤（本明細書に提供及び記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体等）と同時に投与され得ることが、本明細書において想定されている。本明細書に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路の、本明細書に記載のモジュレーター（トラスツズマブ等）と、本明細書に記載の一又は複数のプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤（本明細書に提供及び記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体等）は、別個に投与されてもよい。例えば、本明細書に記載の一又は複数のＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（トラスツズマブ等）は第一の工程で投与され、続いて、一又は複数のプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤（本明細書に提供及び記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体等）と共に第二の工程で投与されてもよく、また、その逆でもよい。同様に、化学療法剤は、同時に、逐次的に、又は別々に投与されてもよい。ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター（単数又は複数）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤（単数又は複数）及び化学療法剤（単数又は複数）（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標）のようなタキソール誘導体等）の同時、逐次的、又は別個の投与の、いかなる組み合わせも本明細書において想定されている。

【0170】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）を含む、本明細書で提供されるがんの治療は、単独療法として適用され得る。しかし、本明細書で提供されるがんの治療は、一又は複数の追加の療法、例えば、手術、放射線療法及び／又は一もしくは複数の追加の化学療法剤等の一般的療法と共に（すなわち、更なる併用療法で）適用されてもよい。

【0171】

手術は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）を含む、本明細書で提供されるがんの治療の施与期間中又はその前後に、部分的もしくは完全な腫瘍切除の工程を含み得る。本明細書で提供されるＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）は、ネオアジュバント設定又はアジュバント設定で投与され得る（特に、がんのネオアジュバント療法又はアジュバント療法）。

【0172】

ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤、及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤は、ネオアジュバント設定で投与され得る。ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤、及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤は、アジュバント設定で、又は転移性設定で投与され得る。

【0173】

したがって、本明細書で提供されるＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤及び化学療法剤（タキソール、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））のようなタキソール誘導体等）は、 これらの治療を必要としている患者に対し、外科的処置／癌性組織の切除の間もしくは後に投与されてもよい。それゆえ、本発明は、ネオアジュバント療法、すなわち、必要としている患者／患者群に対し術前に与えられる、本明細書で提供されている療法での治療において有用である。本発明はまた、アジュバント療法（すなわち、術後）においても有用である。

【0174】

本明細書で使用される化学療法剤は、好ましくは、タキサン（用語「タキソール」は本明細書において「タキサン」と互換的に用いられる）、又はドセタキセル（タキソテル（登録商標））もしくはパクリタキセル等のタキサン誘導体（タキソール誘導体）である。ドセタキセル（タキソテル（登録商標））の使用は、本明細書において特に好ましい。

【0175】

（追加の）化学療法剤（単数又は複数）は、一又は複数の、以下の例示的で非限定的な薬物もしくは薬剤であってもよい：
シスプラチン、ビノレルビン、カルボプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、ドセタキセル、ベバシズマブ、ペメトレキセド、エトポシド、イリノテカン、イホスファミド（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄ）、トポテカン、
血管標的剤（例えば、コンブレタスタチンホスフェート、又はＮ－アセチルコルチノール－Ｏ－ホスフェート）を含む、（例えば、ベバシズマブ／アバスチン又はスーテント（リンゴ酸スニチニブ－ＳＵ－１１２４８）等の）ＶＥＧＦブロッカー（単数又は複数）、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、アンジオスタチン、ラゾキサン（ｒａｚｏｘｉｎ）、サリドマイドのような抗血管新生剤；
抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン）、プロゲストーゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、エキセメスタン）、抗プロゲストーゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド（ｌｕｐｒｏｌｉｄｅ））、テストステロン５α－ジヒドロリダクターゼの阻害剤（例えば、フィナステリド）、抗侵襲剤（例えば、マリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤、及びウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベータ受容体機能の阻害剤）、並びに増殖因子機能の阻害剤のような細胞増殖抑制剤（単数又は複数）（これらの増殖因子には、例えば、血小板由来増殖因子及び肝細胞増殖因子が、これらの阻害剤には増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体、チロシンキナーゼ阻害剤及びセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤が含まれる）；
生物学的応答調節物質（例えば、インターフェロン）；代謝拮抗剤（単数又は複数）（例えば、ゲムシタビン）；抗ホルモン化合物（単数又は複数）、例えば、抗エストロゲン（単数又は複数）；抗体（例えば、エドレコロマブ）；アジュバント（抗）ホルモン療法（単数又は複数）（すなわち、タモキシフェンのようなアジュバント（抗）ホルモン剤（単数又は複数）を用いる療法）；（アンチセンス療法等の）遺伝子療法のアプローチ；及び／又は免疫療法のアプローチ。

【0176】

化学療法はまた、（更に）、腫瘍内科学において使用されるような、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤（単数又は複数）、ＲＡＦ阻害剤（単数又は複数）、ＲＡＳ阻害剤（単数又は複数）、二重チロシンキナーゼ阻害剤（単数又は複数）、タキソール、タキサン（単数又は複数）（パクリタキセル又はドセタキセル等）、ドキソルビシン又はエピルビシン等のアントラサイクリン（単数又は複数）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾールもしくはレトロゾール）及び／又はビノレルビン等の、一又は複数の抗増殖／抗悪性腫瘍薬とそれらの組み合わせの使用を含むことができ；シクロホスファミド、メトトレキサート又はフルオロウラシル（５－ＦＵとしても知られている）は、このような併用療法において個別に、或いはこれら三種の薬物を含む併用療法（「ＣＭＦ療法」）の形態で、本明細書で提供されている他のいずれの追加の療法と任意選択的に組み合わせて使用することができる。本発明の併用療法で使用するための化学療法剤の特定の例は、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、エトポシド、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、イリノテカン（ＣＰＴ－１ １）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ（カペシタビンを含む））、ドキソルビシン、シクロホスファミド、テモゾロミド、ヒドロキシウレア、（ｉｉｉ）腫瘍内科学において使用されるような抗増殖／抗悪性腫瘍薬とそれらの組み合わせ、例えば、代謝拮抗剤（メトトレキサートのような抗葉酸、５－フルオロウラシルのようなフルオロピリミジン、プリン及びアデノシンの同族体、シトシンアラビノシド）；抗腫瘍抗生剤（例えば、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン及びイダルビシン、マイトマイシン－Ｃ、ダクチノマイシン、ミトラマイシン等のアントラサイクリン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソ尿素、チオテパ）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン等のビンカアルカロイド、及びタキソール、タキソテール等のタキソイド）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド及びテニポシド等のエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテンカン、並びにイリノテカン）；また、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）；及びチミジル酸合成酵素阻害剤（例えば、ラルチトレキセド）；並びに更なる種類の化学療法剤である。

【0177】

本発明に従って使用するための阻害剤／モジュレーター／化学療法剤は本明細書に記載されており、概して、既知の及び／又は市販の阻害剤／モジュレーター／化学療法剤を指す。しかし、まだ未作製の阻害剤、又は阻害活性が未試験の既知の化合物の使用も、本発明の文脈において想定される。

【0178】

更なる態様において、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを組み合わせるＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する患者にとっての必要性を決定するために、本発明は、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を検出することができる核酸（単数又は複数）又は抗体（単数又は複数）の使用に関する。前記用語のそれぞれの説明は上記でなされており、ここで準用される。

【0179】

核酸（例えば、オリゴヌクレオチド（単数又は複数）は、好ましくは、約１５から１００ヌクレオチドの長さである。当業者は、その一般的な知識及び本明細書で提供された教示に基づき、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を検出することができるオリゴ（又はポリ）ヌクレオチドを同定及び／もしくは調製することが容易な立場にある。特に、該核酸（単数又は複数）（例えば、オリゴ（又はポリ）ヌクレオチド）は、本明細書に記載の方法、例えば発現量の測定、においてプローブとして使用され得る。当業者は、例えば、類似プローブの同定に有用なコンピュータープログラムが本明細書で使用され得ることを理解するであろう。例えば、エストロゲン受容体をコードする核酸（又は、該核酸の一部）（例えば、配列番号３８）、ＰＤ－Ｌ１をコードする核酸（又は、該核酸の一部）（例えば、配列番号４２）及び、任意選択的に、ＩＦＮγをコードする核酸（又は、該核酸の一部）（例えば、配列番号４４）が、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及びＩＦＮγの発現量をそれぞれ検出するための特定のプローブを同定するためにこの文脈において使用され得る。ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及びＩＦＮγをコードする例示的核酸配列は、対応するデータべース、例えば、ＮＣＢＩデータベース（www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez）で入手可能である。

【0180】

ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及びＩＦＮγの発現量を検出／決定／評価するための手段を任意選択的に更に含む診断用組成物である組成物が、本明細書において更に提供される。この検出手段は、例えば、上記のヌクレオチド及び／又は抗体である。したがって、本発明は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としている患者を決定するための診断用組成物の調製のための、このような手段（例えば、ヌクレオチド及び／又は抗体）に関する。

【0181】

代替的態様において、本発明は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としている患者の決定における使用のための、このような検出手段（例えば、上記の核酸及び／又は抗体、及び／又は本発明に従って使用されるキットとの関連で下記に記載の「結合分子」）に関する。好ましくは、本発明は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としている患者の決定における使用のための抗体（単数又は複数）に関する。

【0182】

更に、本発明はまた、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を検出できる核酸（単数）又は抗体（単数）を含む、本明細書で提供する方法を実行するために有用なキットに関する。また、本明細書で提供する方法を実行するための本明細書に記載のキットの使用も、ここで想定されている。本明細書に記載の方法及び用途を実行するために有用な前記キットは、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を決定できるオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含み得る。例えば、前記キットは、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を特異的に測定するのに必要な化合物（単数又は複数）を含み得る。更に、本発明は、本発明の方法又は用途の実行のためのキットの調製のために、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を特異的に測定するのに必要な化合物（単数又は複数）の使用に関する。本発明の教示に基づき、当業者は、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を特異的に測定するのにどの化合物（単数又は複数）が必要であるか知っている。例えば、そのような化合物（単数又は複数）は、「結合分子（単数又は複数）」であり得る。特に、そのような化合物（単数又は複数）は、ＥＲ遺伝子／コード配列、ＰＤ－Ｌ１遺伝子／コード配列、及び、任意選択的にＩＦＮγ／コード配列の（遺伝子）生成物に特異的な、（ヌクレオチド）プローブ（単数又は複数）、プライマー（単数又は複数）（対（単数又は複数））、抗体（単数又は複数）、及び／又はアプタマー（単数又は複数）であり得る。本発明の（関連で調製される）キットは診断用キットであり得る。

【0183】

本発明の（関連で調製される）キット、又は本発明の方法及び用途は、取扱説明書（単数もしくは複数）を更に含むか、或いは備えている。例えば、前記取扱説明書（単数又は複数）は、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの（基準／コントロール）発現量の決定（方法）、又はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する患者にとっての必要性の決定（方法）において当業者の手引きとなるであろう。前記取扱説明書（単数もしくは複数）は、本明細書で提供されている方法もしくは用途を使用又は適用するための手引きを特に含み得る。本発明の（関連で調製される）キットは、本発明の方法及び用途を実行するために適切な／必要な物質／化学薬品及び／又は器具を更に含み得る。このような物質／化学薬品及び／又は器具は、例えば、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を特異的に測定するために必要な化合物（単数もしくは複数）の安定化及び／又は保存のための溶剤、希釈剤及び／又は緩衝剤である。

【0184】

本明細書で使用される場合、用語「含む」（「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）又はその文法上の変化形は、述べられた特徴、整数、工程又は構成要素を特定するものとして解釈されるべきであるが、一又は複数の特徴、整数、工程、構成要素もしくはそれらの群の追加を排除するものではない。この用語は、用語「からなる」（「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ」）及び「から本質的になる」（「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」）を包含する。したがって、用語「含む」（「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」／「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）／「有する」（「ｈａｖｉｎｇ」）は、更なる構成要素（又は機能、整数、工程等）が存在し得ることを意味する。

【0185】

用語「からなる」は、更なる構成要素（又は機能、整数、工程等）が存在し得ないことを意味する。

【0186】

本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語又はその文法上の変化形は、述べられた特徴、整数、工程又は構成要素を特定するものとして解釈されるべきであるが、追加の特徴、整数、工程、構成要素又はそれらの群が、特許請求されている組成物、装置又は方法の基本的且つ新規の特徴を実質的に変更しない場合に限り、一又は複数の特徴、整数、工程、構成要素もしくはそれらの群の追加を排除するものではない。したがって、用語「からなる」は、特定の更なる構成要素（又は特徴、整数、工程等）、つまり、組成物、装置又は方法の本質的な特性に実質的に影響を与えないものは存在し得ることを意味する。換言すると、用語「から本質的になる」（本明細書では用語「を実質的に含む」（「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ」と互換的に使用される）は、他の構成要素の存在によって装置又は方法の本質的な特性が実質的に影響されない限り、組成物、装置又は方法における必須の構成要素（又は特徴、整数、工程等）に加えた、他の構成要素の存在を許容する。

【0187】

用語「方法」は、化学、生物学、及び生物物理学の技術分野の当業者に既知の方法、手段、技術及び手順であるか、或いは既知の方法、手段、技術及び手順から彼らによって容易に開発される方法、手段、技術及び手順を含むがこれらに限定さない、所与の課題を達成するための方法、手段、技術及び手順を意味する。

【0188】

本明細書で使用される場合、用語「単離された」は、組成物がそのインビボ位置（例えば、水生生物又はコケ）から取り出されていることを表す。本発明の単離された組成物は、好ましくは、それらのインビボ位置に存在する他の物質（例えば、抗接着効果を含まない他のタンパク質）から実質的に遊離している（すなわち、精製されているか、又は半精製されている）。

【0189】

本明細書で使用される場合、用語「約」は、±１０％を指す。

【0190】

本発明はまた、以下の項目にも関する：
１．がん患者のＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する必要性を決定する方法であって、
（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が該患者のために計画されているか、又は（ｉｉ）該患者がＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けており、
ａ）前記患者由来の試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）とプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量をインビトロで測定する工程と、
ｂ）工程（ａ）で、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、且つプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量がコントロールと比べ増加していることが測定される場合、患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定する工程とを含む、方法。
２．ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療が計画されているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、コントロールに比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、化学療法剤及びプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法。
３．ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを含む治療を受けているがん患者のがんを治療する方法であって、がん患者のがんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、コントロールに比べ増加したプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現量を有することが決定されるがん患者を選定することと、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤の有効量を前記患者に投与することとを含む方法。
４．ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターとプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤とを含む、がんの治療における使用のための医薬組成物であって、それにより前記がんが、ＥＲ非発現か又は低量発現であること、且つインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量がコントロールと比べ増加したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量を有することが決定される、組成物。
５．化学療法剤を更に含む、項目４のがんの治療における使用のための医薬組成物。
６．前記患者由来の試料中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の発現量をインビトロで測定することと、コントロールと比べ低下したインターフェロンガンマの発現量が測定される場合に患者はＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としていると決定することとを更に含む、項目１から３の何れか一項に記載の方法。
７．ＥＲ発現量がＥＲ（－）である、項目１、２、３及び６の何れか一項に記載の方法；又は項目４及び５に記載の医薬組成物。
８．前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターがＨＥＲ２抗体ハーセプチン／トラスツズマブである、項目１、２、３、６及び７の何れか一項に記載の方法；又は項目４、５及び７の何れか一項に記載の医薬組成物。
９．前記化学療法剤が、タキソールもしくはタキソール誘導体である、項目１、２、３、６、７及び８の何れか一項に記載の方法；又は項目５、７及び８の何れか一項に記載の医薬組成物。
１０．前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）である、項目１、２、３、６、７及び８から９の何れか一項に記載の方法；又は項目４、５及び７から９の何れか一項に記載の医薬組成物。
１１．前記がんが固形がんである、項目１、２、３及び６から１０の何れか一項に記載の方法；又は項目４、５及び７から１０の何れか一項に記載の医薬組成物。
１２．前記固形がんが乳がん又は胃がんである、項目１１に記載の方法；又は項目１１に記載の医薬組成物。
１３．ＰＤ－Ｌ１の発現量がｍＲＮＡ発現量である、項目１、２、３及び６から１２の何れか一項に記載の方法；又は項目４、５及び７から１２の何れか一項に記載の医薬組成物。
１４．ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーターと化学療法剤とを組み合わせるＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法に対する患者にとっての必要性を決定するための、ＥＲ、ＰＤ－Ｌ１、及び、任意選択的にＩＦＮγの発現量を検出することができる核酸又は抗体の使用。
１５．前記ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ２）シグナル伝達経路のモジュレーター、前記化学療法剤、及び前記プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤がネオアジュバント設定で投与される、項目１、２、３及び６から１４の何れか一項に記載の方法；又は項目４、５及び７から１４の何れか一項に記載の医薬組成物。

【0191】

本発明は、以下の非限定的な図面及び実施例を参照して更に記載されている。特に断らない限り、組換え遺伝子技術の確立された方法は、例えば、その全内容が本明細書に参照により援用される、Sambrook, Russell 「Molecular Cloning, A Laboratory Manual」, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (2001)に記載の通りに使用された。

【図面の簡単な説明】

【0192】

図は以下を示す：

【図1】図１は、ＨＥＲ２タンパク質構造の模式図、及びその細胞外ドメインのドメインＩ－ＩＶの各アミノ酸配列を提供する。

【図2】図２Ａ及び２Ｂは、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４の可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）（図２Ａ）ドメイン及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）（図２Ｂ）ドメイン（配列番号は、それぞれ５と６）；変異体５７４／ペルツズマブのＶ_Ｌドメイン及びＶ_Ｈドメイン（配列番号は、それぞれ７と８）；並びにヒトＶ_Ｌコンセンサスフレームワーク及びＶ_Ｈコンセンサスフレームワーク（ヒトκ１、カッパ軽鎖サブグループＩ；ヒトＩＩＩ、重鎖サブグループＩＩＩ）（配列番号は、それぞれ９と１０）のアミノ酸配列の配列比較を記述する。アステリスクは、ペルツズマムとマウスモノクローナル抗体２Ｃ４間の、又はペルツズマムとヒトフレーワーク間の可変ドメインの差異を示す。括弧内は、相補性決定領域（ＣＤＲ）である。

【図3】図３Ａ及び３Ｂは、ペルツズマムの軽鎖（図３Ａ）及び重鎖（図３Ｂ）のアミノ酸配列を示す。太字はＣＤＲである。計算された分子量は、軽鎖が２３５２６２２ダルトン、及び重鎖が４９２１６５６ダルトン（システインは還元状態）である。炭化水素部分は、重鎖のＡｓｎ２９９に結合される。

【図4】図４Ａ及び４Ｂは、それぞれ、トラスツズマブの軽鎖（図４Ａ）及び重鎖（図４Ｂ）のアミノ酸配列を示す。矢印は、可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインの境界線である。

【図5】図５Ａ及び５Ｂは、それぞれ、変異体ペルツズマムの軽鎖配列（図５Ａ）及び変異体ペルツズマムの重鎖配列（図５Ｂ）を示す。

【図6】図６Ａ及び６Ｂ：遺伝子ＣＤ２７４に関する既知のｍＲＮＡ転写産物および関連するＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸプローブセット標的領域の位置。エキソンは灰色太字の長方形で示され、接合領域は細い水平線で示される。ｍＲＮＡ配列に対してマッピングされた配列を持つプローブセットは、黒い太字の長方形で示される。提供される座標は、染色体９のゲノム座標である。

【図7】図７Ａ及び７Ｂ：遺伝子ＩＦＮＧに関する既知のｍＲＮＡ転写産物及び関連するＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸプローブセット標的領域の位置。エキソンは灰色太字の長方形で示され、接合領域は細い水平線で示される。ｍＲＮＡ配列に対してマッピングされた配列を持つプローブセットは、黒い太字の長方形で示される。提供される座標は、染色体１２のゲノム座標である。

【図8】ＥＲ－およびＥＲ＋集団のサンプルにおける遺伝子ＩＦＮＧおよびＣＤ２７４の発現の分布。シンボルタイプは最終的なｐＣＲ状態に対応する（塗りつぶしあり：ｐＣＲ達成、塗りつぶしなし：ｐＣＲ未達成）。

【図9】図９Ａ：ＥＲ－応答者（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）および非応答者（ｐＣＲ＝ＮＯ）の遺伝子ＣＤ２７４の発現のボックスプロット。右側には、両方のカテゴリの発現ヒストグラムが表示される。図９Ｂ：ｔ検定統計量の分布（差のないＨ０仮説）。垂直のマークは、関連するサンプルで見つかった実際の値を示す。影付きの領域の面積はアルファレベルに対応している。

【図10】図１０Ａ：ＥＲ－応答者（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）および非応答者（ｐＣＲ＝ＮＯ）の遺伝子ＩＦＮＧの発現のボックスプロット。右側には、両方のカテゴリの発現ヒストグラムが表示される。図１０Ｂ：ｔ検定統計量の分布（差のないＨ０仮説）。垂直のマークは、関連するサンプルで見つかった実際の値を示す。影付きの領域の面積はアルファレベルに対応している。

【図11】図１１Ａ：ＥＲ＋応答者（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）および非応答者（ｐＣＲ＝ＮＯ）の遺伝子ＣＤ２７４の発現のボックスプロット。右側には、両方のカテゴリの発現ヒストグラムが表示される。図１１Ｂ：ｔ検定統計量の分布（差のないＨ０仮説）。垂直のマークは、関連するサンプルで見つかった実際の値を示す。影付きの領域の面積はアルファレベルに対応している。

【図12】図１２Ａ：ＥＲ＋応答者（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）および非応答者（ｐＣＲ＝ＮＯ）の遺伝子ＩＦＮＧの発現のボックスプロット。右側には、両方のカテゴリの発現ヒストグラムが表示される。図１２Ｂ：ｔ検定統計量の分布（差のないＨ０仮説）。垂直のマークは、関連するサンプルで見つかった実際の値を示す。影付きの領域の面積はアルファレベルに対応している。

【図13】ＥＲ－集団の最終ロジスティック回帰モデルの受信者動作特性。正のレベルは、正の応答状態と見なされる（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）。

【図14】ＥＲ－集団の最終ロジスティック回帰モデルのリフト曲線。正のレベルは、正の応答ステータスと見なされる（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）。Ｙ軸は、全体のその応答レベルの割合と比較した、選択された応答レベル（上の曲線がｐＣＲ＝ＹＥＳに対応する）における集団の部分の豊富さの比率を表示する。

【図15】ＥＲ－集団の予測される臨床反応状態の例。患者の年齢、がんの種類、ｐＮの状態、および関連する両方の遺伝子の発現によって制御される、予測される反応のプロファイルが示される。実際の予測ｐＣＲ確率（０．４４３に等しい）は、中央値付近の両方の遺伝子の発現を有する約６０才のＮ０ ＬＡＢＣ患者に対して与えられる。

【図16】ＥＲ＋集団の最終ロジスティック回帰モデルの受信者動作特性。正のレベルは、正の応答状態と見なされる（ｐＣＲ＝ＹＥＳ）。

【図17】ＥＲ－患者の年齢の分布。

【図18】ＥＲ＋患者の年齢の分布。

【図19】ＥＲ－患者の臨床応答を予測するＩＦＮＧおよびＣＤ２７４遺伝子の発現に関するディシジョンツリービュー。ｐＣＲの説明に必要な最初の２つの分割は、ＩＦＮＧとＣＤ２７４に対するものである。

【実施例】

【0193】

実施例は発明を例示する。

【0194】

実施例１：ＨＥＲ２標的療法と化学療法とを受けているがん患者は、ＥＲ非発現か又は低量発現で（ＥＲ陰性）、且つＰＤ－Ｌ１発現量が増加する場合、ＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法の恩恵を受ける。

【0195】

遺伝子発現の評価は、Ｒ Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ パッケージ「ａｆｆｙ」、Ｒ バージョン２．１５．０を用いて実施された。すべての探索的分析と予測モデルは、ＳＡＳ ＪＭＰバージョン１０．０を使用して作成された。

【0196】

４８ ＨＥＲ２＋、ＥＲ＋及び３９ ＨＥＲ２＋、ＥＲ－乳がん生検試料は、ＮｅｏＳｐｈｅｒｅ試験から得た。これらの試料は、患者から診断時に採取され、その後ドセタキセルとトラスツズマブでネオアジュバント設定で処理された。ベースラインでの主な臨床的共変量及び関係する集団での臨床応答（手術で評価されるような）の分布は、次の通りである。

【0197】

ＥＲ陰性試料：
患者の年齢（図１７参照）

【0198】

【0199】

【0200】

【0201】

【0202】

【0203】

ＥＲ陽性試料：
患者の年齢（図１８参照）

【0204】

【0205】

【0206】

【0207】

【0208】

【0209】

【0210】

遺伝子発現プロファイリング
腫瘍生検試料は、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＨＧ－Ｕ１３３Ｐｌｕｓ２全ヒトゲノムマイクロアレイプラットフォームでの遺伝子発現のためにプロファイリングされた。ＲｏｃｈｅのＨｉｇｈＰｕｒｅ ＲＮＡ抽出、ＮｕＧｅｎの増幅、並びに標準的なＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸのハイブリダイゼーション及びスキャニングの手順が使用された。すべてのアレイスキャンは、標準的なＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＱＣに合格した。

【0211】

ロバストマルチアレイアルゴリズム（ＲＭＡ）が、生信号の前処理のために使用された（Irizarry et al, 2003. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12925520）。以下の報告の通り、目的の遺伝子のために利用可能なすべてのプローブセットを取得した。ＣＤ２７４遺伝子について、いくつかのプローブセットが該遺伝子を表すのに利用可能であった場合、（所定のプローブセットの発現の算術平均として定義される）平均発現の最高値を有するプローブセットを該遺伝子を表すために選択した：

【0212】

ＣＤ２７４（ＰＤＬ１）
ＰＤＬ１用に選択された、２２３８３４＿ａｔ
２２７４５８＿ａｔ
選択されたプローブセットは、遺伝子の最後のエクソン／３’ＵＴＲに対応し、既知のＲｅｆＳＥｑ ｍＲＮＡをすべて捕捉する（図６参照）。

【0213】

ＩＦＮＧ
２１０３５４＿ａｔ
本プローブセットもまた、遺伝子の最後のエクソン／３’ＵＴＲを表し、既知のＲｅｆＳＥｑ ｍＲＮＡをすべて捕捉する（図７参照）。

【0214】

図８は、ＥＲ－とＥＲ－集団両方の試料における上記遺伝子の発現の同時分布を示す。記号の種類は最終ｐＣＲ状態（塗りつぶしあり：ｐＣＲ達成、塗りつぶしなし-ｐＣＲ未達成）に対応している。

【0215】

ＥＲ及びｐＣＲ層でのＣＤ２７４とＩＦＮＧ発現の分布についての更なる詳細は、付録Ｉに見出される。

【0216】

各ＥＲ部分母集団について、選択された遺伝子の発現と、患者の年齢、がんの種類及びリンパ節状態に合わせて調整された臨床応答との関係を示すロジスティック回帰モデルを構築した。
応答～患者年齢＋がんの種類＋ｐＮ＋ＣＤ２７４＋ＩＦＮＧ

【0217】

１．ＥＲ－集団
モデル出力の要約を以下に示す。オッズ比（ＯＲ）は、バイオマーカー値の単位変化当たりで示される。発現値はｌｏｇ２スケールで示されているため、一単位変化は２倍の過剰発現に相当する。詳細は付録を参照のこと。

【0218】

【0219】

特定の患者の治療に対する応答可能性予測の最終モデルは、ＣＤ２７４とＩＦＮＧの発現を含み、以下のようである：
ｐ（ｐＣＲ）＝－３．７３７＋１．６０７＊ＣＤ２７４－１．０６９＊ＩＦＮＧ

【0220】

２．ＥＲ＋集団
モデル出力の要約を以下に示す。オッズ比（ＯＲ）は、バイオマーカー値の単位変化当たりで示される。発現値はｌｏｇ２スケールで示されているため、一単位変化は２倍の過剰発現に相当する。詳細は付録を参照のこと。

【0221】

【0222】

ＰＤＬ１発現の役割は、ネオアジュバント設定でトラスツズマブと化学療法との併用療法を受けたＨＥＲ２＋乳がん患者のＥＲ－部分母集団において明らかである。すなわち、診断時のＰＤＬ１過剰発現は、ネオアジュバント療法への低い応答率（つまり、トラスツズマブと化学療法との併用療法への低い応答率）に対応する。これは患者の年齢、がんの種類、又はリンパ節状態に関係なく当てはまる。二つのバイオマーカー、ＰＤＬ１とＩＮＦＧの何れの遺伝子発現のベースライン評価も、それぞれ、患者がＰＤＬ－１標的療法をトラスツズマブと化学療法に追加された場合に、より大きな恩恵を受ける可能性があるかどうかの識別を可能にする。

【0223】

以下は、本発明に従いＰＤ－Ｌ１阻害剤併用療法を必要としている患者を決定することを可能にするカットオフ値に関する。

【0224】

遺伝子発現解析でのＩＦＮＧの発現に関する結果が４．８以上である場合、併用療法（ＨＥＲ２標的薬とＰＤＬ１標的薬）は推奨されず、更なるＰＤＬ１評価も必要ないだろう。遺伝子発現解析でのＩＦＮＧに関する結果が４．８未満の場合、ＰＤＬ－１の評価も並行して行う必要がある。次いで、ＰＤＬ－１遺伝子発現解析の結果が５．３以上であれば、併用療法（ＨＥＲ２標的薬とＰＤＬ１標的薬）が推奨される（図１９参照）。

【0225】

【0226】

【0227】

本発明は、以下のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列に関する：

【0228】

本明細書で提供される配列は、特に、ＮＣＢＩデータベースで入手可能で、また、国際公開第２０１０／０７７６３４号に開示されており、www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=geneで利用可能であり；これらの配列は、注釈がつけられ変更された配列にも関する。本発明はまた、本明細書で提供される相同配列と、短い配列の変異体が使用される技術及び方法を提供する。

【0229】

配列番号１－２１は、本発明に従って使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体を定義する。配列番号１－２１は配列表に示される。

【0230】

配列番号２２から３７は、ＨＥＲ２タンパク質のドメインＩ－ＩＶのアミノ酸配列の配列（配列番号２２－２５、図１も参照のこと）、及び抗ＨＥＲ２抗体の配列を示す；（配列番号２６から３７；図２－５も参照のこと）。

【0231】

配列番号２６：
図２に示した通り、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４の可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）（図２Ａ）ドメインのアミノ酸配列（それぞれ配列番号５及び６）。

【0232】

配列番号２７：
図２に示した通り、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４の可変重鎖（Ｖ_Ｈ）（図２Ｂ）ドメインのアミノ酸配列。

【0233】

配列番号２８：
図２に示した通り、変異体５７４／ペルツズマブの可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）（図２Ａ）ドメインのアミノ酸配列。

【0234】

配列番号２９：
図２に示した通り、変異体５７４／ペルツズマブの可変重鎖（Ｖ_Ｈ）（図２Ｂ）ドメインのアミノ酸配列。

【0235】

配列番号３０：
図２に示した通り、ヒトＶ_Ｌ コンセンサスフレームワーク（ｈｕｍ κ１、カッパ軽鎖サブグループＩ；ｈｕｍＩＩＩ、重鎖サブグループＩＩＩ）。

【0236】

配列番号３１：
図２に示した通り、ヒトＶ_Ｈコンセンサスフレームワーク（ｈｕｍ κ１、カッパ軽鎖サブグループＩ；ｈｕｍＩＩＩ、重鎖サブグループＩＩＩ）。

【0237】

配列番号３２：
図３Ａに示した通り、ペルツズマム軽鎖のアミノ酸配列。

【0238】

配列番号３３：
図３Ｂに示した通り、ペルツズマム重鎖のアミノ酸配列。

【0239】

配列番号３４：
図４Ａに示した通り、トラスツズマブ軽鎖ドメインのアミノ酸配列。矢印は、可変軽鎖ドメインの境界線である。

【0240】

配列番号３５：
図４Ｂに示した通り、トラスツズマブ重鎖のアミノ酸配列。矢印は、可変重鎖ドメインの境界線である。

【0241】

配列番号３６：
可変ペルツズマム軽鎖配列のアミノ酸配列（図５Ａ）。

【0242】

配列番号３７：
可変ペルツズマム重鎖配列のアミノ酸配列（図５Ｂ）。

【0243】

配列番号３８
ホモサピエンスプロゲステロン受容体（ＰＲ）をコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿００００１１．９
>gi|224589802:c101000544-100900355 Homo sapiens chromosome 11, GRCh37.p10 Primary Assembly

【0244】

配列番号３９：
ホモサピエンスプロゲステロン受容体（ＰＲ）のアミノ酸配列
PRGR_HUMAN Length: 933 December 07, 2012 15:10 Type: P Check: 6067 ..

【0245】

配列番号４０：
ホモサピエンスエストロゲン受容体（ＥＲ）をコードするヌクレオチド配列
（ＮＭ＿０００１２５．３）

【0246】

配列番号４１：
ホモサピエンスエストロゲン受容体（ＥＲ）をコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿０００００６．１１
>gi|224589818:152011631-152424409 Homo sapiens chromosome 6, GRCh37.p10 Primary Assembly

【0247】

配列番号４２：
ホモサピエンスエストロゲン受容体（ＥＲ）のアミノ酸配列
>ENST00000206249_6


配列番号４３：
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）をコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿０００００９．１１

>gi|224589821:5450503-5470567 Homo sapiens chromosome 9, GRCh37.p10 Primary Assembly

【0248】

配列番号４４
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（ＣＤ２７４）、転写変異体１、ｍＲＮＡをコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１４１４３．３

>gi|292658763|ref|NM_014143.3| Homo sapiens CD274 molecule (CD274), transcript variant 1, mRNA

【0249】

配列番号４５：
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（プログラム細胞死１リガンド１アイソフォームａ前駆体［ホモ・サピエンス］）のアミノ酸配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５４８６２．１

>gi|7661534|ref|NP_054862.1| programmed cell death 1 ligand 1 isoform a precursor [Homo sapiens]

【0250】

配列番号４６：
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（ＣＤ２７４）、転写変異体２、 ｍＲＮＡをコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２６７７０６．１
>gi|390979638|ref|NM_001267706.1| Homo sapiens CD274 molecule (CD274), transcript variant 2, mRNA

【0251】

配列番号４７：
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（プログラム細胞死１リガンド１アイソフォームｂ前駆体［ホモ・サピエンス］）のアミノ酸配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２５４６３５．１

>gi|390979639|ref|NP_001254635.1| programmed cell death 1 ligand 1 isoform b precursor [Homo sapiens]

【0252】

配列番号４８：
ホモサピエンスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）（ホモサピエンスＣＤ２７４分子（ＣＤ２７４）、転写変異体３、ノンコーディングＲＮＡ）をコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＲ＿０５２００５．１

>gi|390979640|ref|NR_052005.1| Homo sapiens CD274 molecule (CD274), transcript variant 3, non-coding RNA

【0253】

配列番号４９：
ホモサピエンスインターフェロンガンマをコードするヌクレオチド配列（Homo sapiens chromosome 12, GRCh37.p10 Primary Assembly）
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿００００１２．１１

>gi|224589803:c68553521-68548550 Homo sapiens chromosome 12, GRCh37.p10 Primary Assembly

【0254】

配列番号５０：
ホモサピエンスインターフェロンガンマ、ｍＲＮＡをコードするヌクレオチド配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００６１９．２

>gi|56786137|ref|NM_000619.2| Homo sapiens interferon, gamma (IFNG), mRNA

【0255】

配列番号５１：
ホモサピエンスインターフェロンガンマ、インターフェロンガンマ前駆体［ホモ・サピエンス］のアミノ酸配列
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００６１０．２
>gi|56786138|ref|NP_000610.2| interferon gamma precursor [Homo sapiens]

【0256】

本明細書で引用したすべての参考文献は、参照により全文が援用される。ここで本発明を十分に説明したが、本発明は、本発明の精神、範囲又はその如何なる実施態様にも影響を及ぼすことなく、条件、パラメータ等の広範且つ同等の範囲内で実施され得ることを当業者は理解するであろう。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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