特許 7182548 アザインデノイソキノリン化合物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-11-24

(45)【発行日】2022-12-02

(54)【発明の名称】アザインデノイソキノリン化合物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20221125BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20221125BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221125BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221125BHJP

【ＦＩ】

C07D471/04 112Z

C07D471/04 CSP

A61K31/4745

A61P35/00

A61P43/00 111

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2019534676

(86)(22)【出願日】2017-12-19

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-03-05

(86)【国際出願番号】 US2017067206

(87)【国際公開番号】W WO2018118852

(87)【国際公開日】2018-06-28

【審査請求日】2020-12-03

(31)【優先権主張番号】62/437,777

(32)【優先日】2016-12-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】519223284

【氏名又は名称】パードゥ リサーチ ファウンデーション

(73)【特許権者】

【識別番号】500212468

【氏名又は名称】ナショナル インスティテューツ オブ ヘルス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】クッシュマン，マーク，エス．

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ピン

(72)【発明者】

【氏名】ポミエ，イヴ，ジョージ

(72)【発明者】

【氏名】エルサイード，ムハンマド，エス．エー．

【審査官】安藤 倫世

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１４／００１８３６０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１４／０１８７５４７（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０２２９８８８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０３１８９４６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１０－５２０２２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】Journal of Medicinal Chemistry ，2014年，57(4)，1289-1298

【文献】Journal of Medicinal Chemistry ，2015年，58(9)，3997-4015

【文献】Bioorganic & Medicinal Chemistry ，2016年，24(7)，1469-1479

【文献】C.G.WERMUTH，最新創薬化学，上巻，1998年，p.375-80

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩ’）：

【化1】

によって示され、式中、
ｍは３であり；
Ｒ_１ はＦであり；
Ｒ_２は、

【化2】

である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩。

【請求項2】

請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を含む医薬組成物。

【請求項3】

癌を処置するための、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩。

【請求項4】

癌を処置するための、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項5】

癌を処置するための、ヒトトポイソメラーゼ１、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１、およびチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２に対する三重インヒビターとして機能する、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩。

【請求項6】

癌を処置するための、ヒトトポイソメラーゼ１、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１、およびチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２に対する三重インヒビターとして機能する、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項7】

癌を処置するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩の使用。

【請求項8】

癌を処置するための医薬の製造における、請求項２に記載の医薬組成物の使用。

【請求項9】

癌を処置するための医薬の製造における、ヒトトポイソメラーゼ１、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１、およびチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２に対する三重インヒビターとして機能する、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩の使用。

【請求項10】

癌を処置するための医薬の製造における、ヒトトポイソメラーゼ１、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１、およびチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２に対する三重インヒビターとして機能する、請求項２に記載の医薬組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本米国特許出願は、２０１６年１２月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／４３７，７７７号（その内容全体が本開示に参考として援用される）の優先権に関連し、これを主張する。

【0002】

政府の権利
本発明を、国立衛生研究所によって授与されたＣＡ０２３１６８の下で政府支援を受けて実施した。合衆国政府は本発明において一定の権利を有する。

【0003】

技術分野
本開示は、一般に、種々の治療用途のための新規の化合物に関する。特に、本開示は、癌の処置に有用なトポイソメラーゼ１（Ｔｏｐｉ）ならびにチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１および２（Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２）の三重インヒビターとしてのアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【背景技術】

【0004】

背景
この節は、本開示のより深い理解を容易にするのに役立ち得る態様を紹介する。したがって、これらの記述は、この観点から読まれるべきであり、先行技術であるかどうかを承認すると理解すべきではない。

【0005】

癌は、身体の他の部分に浸潤するか拡大する可能性がある、細胞の異常な成長を伴う疾患群である。ヒトに影響を及ぼす癌は１００種を超える。２０１６年に、米国のみで推定１，６８５，２１０件の症例が新規に癌と診断され、５９５，６９０件が癌により死亡した（Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２０１６－Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｉｎｃ．）。癌と戦うための新規且つ画期的な治療に対する要求は満たされておらず、増加し続けている。

【0006】

ＤＮＡトポイソメラーゼＩ（Ｔｏｐｉ）の阻害は、抗癌剤設計への首尾の良いアプローチであることが証明されている。カンプトセシン（ＣＰＴ）およびインデノイソキノリンは、Ｔｏｐｉインヒビターの２つの確立されたクラスである（Ｓｔａｋｅｒら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５，４８，２３３６－２３４５；Ｐｏｍｍｉｅｒら，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００９，８，１００８－１０１４））。ＣＰＴおよびインデノイソキノリンは、二重ＤＮＡ挿入およびＤＮＡ再連結プロセスを阻害するタンパク質結合機構によるＤＮＡ－Ｔｏｐ１共有結合切断複合体（Ｔｏｐ１ｃｃ）の安定化によって作用する（Ｐｍｍｉｅｒら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１２，１１，２５－３６）。その後の薬物安定化複合体とのＤＮＡ複製フォークの衝突により、ＤＮＡの二本鎖が破壊される。最終的に、これにより腫瘍細胞が死滅する。Ｔｏｐｉ媒介性ＤＮＡ切断後のＤＮＡ修復は、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１（Ｔｄｐ１）によって開始することができる複雑なプロセスであり（Ｐｌｏら，ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ ２００３，２，１０８７－１１００；Ｄａｖｉｅｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００２，３２４，９１７－９３２）、Ｔｄｐ１は、薬物耐性の発生で重要な役割を果たす（Ｐｅｒｅｇｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１２，８３，２７－３６）。Ｔｄｐ１は、Ｔｏｐ１ｃｃおよび他の３’末端ＤＮＡ遮断傷害で認められる３’－ホスホチロシルリンカーの加水分解を触媒する酵素のホスホリパーゼＤスーパーファミリーのメンバーである（Ｉｎｔｅｒｔｈａｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００１，９８，１２００９－１２０１４；Ｍｕｒａｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２８７，１２８４８－１２８５７）。

【0007】

他方では、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼＩＩ（Ｔｄｐ２）は、トポイソメラーゼＩＩ（Ｔｏｐ２）媒介性ＤＮＡ損傷に関連する修復機能が最近発見された金属依存性ホスホジエステラーゼのメンバーである（Ｐｏｍｍｉｅｒら，ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ ２０１４，１９，１１４－１２９）。Ｔｄｐ２は、５’－ホスホチロシル結合の加水分解を触媒し、それにより、捕捉されたＴｏｐ２が５’末端から放出されることによってＴｏｐ２－ＤＮＡ付加物が切断されるので、Ｔｄｐ２は正常なＤＮＡトポロジーの維持で重要な役割を果たす。したがって、Ｔｄｐ２の阻害は、Ｔｏｐ２標的薬物治療に対する内因性または獲得された耐性を克服するための有用なアプローチであり得る（Ｚｅｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１１，２８６，４０３－４０９；Ｌｅｄｅｓｍａら、Ｎａｔｕｒｅ，２００９，４６１，６７４）。より最近では、Ｔｄｐ２もＴｄｐ１の非存在下でＴｏｐｉ媒介性ＤＮＡ損傷の修復を促進すること、およびＴｄｐ１およびＴｄｐ２の両方を欠く細胞がＴｄｐ１欠損細胞よりもＴｏｐｉインヒビターに対する感受性が高いことが明らかにされた（Ｍａｅｄｅら，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１４，１３，２１４－２２０）。Ｔｄｐ２がＴｏｐｉおよびＴｄｐ１の潜在的な治療上の共通標的として役立ち得るという仮説を調査する必要がある（Ｐｏｍｍｉｅｒら，２０１４；Ｚｅｎｇら，２０１１）。

【発明の概要】

【0008】

アザインデノイソキノリン化合物を本明細書中に記載する。本明細書中に記載の化合物は、癌の処置に有用であり得る。特に、アザインデノイソキノリン化合物は、癌の処置に有用なトポイソメラーゼ１（Ｔｏｐｉ）ならびにチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１および２（Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２）の三重インヒビターとして有用であり得る。

【0009】

かかる化合物の医薬組成物および治療有効量のかかる化合物のみまたはかかる化合物を含む医薬組成物の投与による癌の処置方法も本明細書中に記載する。

【0010】

いくつかの例示的な実施形態では、式（Ｉ）

【化1】

を有するアザインデノイソキノリン化合物であって、式中、
ｍは１～約６の整数であり；
Ｒ^１は１～４個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^１は、２～４個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、任意の残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から各々独立して選択され；
Ｒ^２は、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアミノ、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、シアノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、ビス（ヒドロキシアルキル）アミノ、およびヒドロキシアルキルアミノアルキルアミノからなる群から選択され、ここで、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアミノの各々は任意選択的に置換されており；
Ｒ^３は１～３個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^３は、２～３個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され、
ここで、Ｒ^１またはＲ^３のうちの少なくとも１つは水素ではない、
アザインデノイソキノリン化合物またはその薬学的に許容され得る塩を本明細書中に記載する。

【0011】

いくつかの他の実施形態では、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^２は、以下：

【化2】

からなる群から選択される置換基であるアザインデノイソキノリン化合物を本明細書中に記載する。

【0012】

いくつかの例示的な実施形態では、式（Ｉ）を有する化合物またはその薬学的に許容され得る塩、水和物、もしくは溶媒和物、ならびに薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を含む医薬組成物を本明細書中に記載する。

【0013】

いくつかの他の例示的な実施形態では、癌患者を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）を有する化合物またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を前述の癌の緩和を必要とする患者に投与する工程を含む方法を本明細書中に記載する。

【0014】

いくつかの他の例示的な実施形態では、癌患者の処置のための物質であって、前述の癌の緩和を必要とする患者に対する薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を伴う式（Ｉ）を有する物質またはその薬学的に許容され得る塩を本明細書中に記載する。

【0015】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数の化合物を含む医薬組成物も本明細書中に記載する。１つの態様では、組成物は、癌患者を処置するための治療有効量の１つまたは複数の化合物を含む。他の構成要素および／または成分（他の治療活性化合物が含まれるが、これらに限定されない）、ならびに／もしくは１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤などが含まれ得ることを理解すべきである。

【0016】

本明細書中に記載の化合物を単独で使用することができるか、癌処置に有用な他の化合物（同一または異なる作用様式によって治療に有効であり得る化合物が含まれる）と組み合わせて使用することができるということが本明細書中で認識される。さらに、本明細書中に記載の化合物を癌の他の症状を処置するために投与される他の化合物（嘔気、嘔吐、疼痛、および骨粗鬆症などを緩和するために投与される化合物など）と組み合わせて使用することができるということが本明細書中で認識される。

【発明を実施するための形態】

【0017】

詳細な説明
本開示の原理の理解を促すために、ここで図面に例示されている実施形態が参照され、これらの実施形態を説明するために特定の用語が使用されるであろう。それにもかかわらず、本開示の範囲がそれによって制限されることを意図しないと理解されるであろう。

【0018】

本明細書中で使用される場合、以下の用語および句は、以下に記載の意味を有するものとする。別段の定義がない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般的に理解している意味を有する。

【0019】

「ハロゲン」は、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、またはＩを示す。「ハロゲン置換」または「ハロ」置換は、１つまたは複数の水素原子のＦ、ＣＩ、Ｂｒ、またはＩとの置換を示す。

【0020】

本明細書中で使用される場合、用語「アルキル」は、任意選択的に分岐し得る炭素原子の一価の飽和鎖をいう。アルキルが含まれる実施形態では、これらの実施形態の例示的な変形形態には、低級アルキル（Ｃｉ～Ｃｅアルキル、メチル、エチル、プロピル、および３－メチルペンチルなど）が含まれると理解される。

【0021】

本明細書中で使用される場合、用語「アルケニル」は、任意選択的に分岐し得る、少なくとも１つの二重結合を含む一価の不飽和炭素原子鎖をいう。アルケニルが含まれる実施形態では、これらの実施形態の例示的な変形形態には低級アルケニル（Ｃ２～Ｃ６およびＣ_２～Ｃ_４アルケニルなど）が含まれると理解される。

【0022】

本明細書中で使用される場合、用語「アルキニル」は、任意選択的に分岐し得る、少なくとも１つの三重結合を含む一価の不飽和炭素原子鎖をいう。アルキニルが含まれる実施形態では、これらの実施形態の例示的な変形形態には低級アルキニル（Ｃ２～Ｃ６およびＣ_２～Ｃ_４アルキニルなど）が含まれると理解される。

【0023】

本明細書中で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、その一部が環を形成する、一価の炭素原子鎖をいう。シクロアルキルが含まれる実施形態では、これらの実施形態の例示的な変形形態には低級シクロアルキル（Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、および３－エチルシクロペンチルなど）が含まれると理解される。

【0024】

本明細書中で使用される場合、用語「シクロアルケニル」は、その一部が環を形成する、一価の不飽和炭素原子鎖をいう。シクロアルケニルが含まれる実施形態（ｅｍｏｂｏｄｉｍｅｎｔ）では、これらの実施形態の例示的な変形形態には低級シクロアルケニル（Ｃ３～Ｃ８、Ｃ３～Ｃ６シクロアルケニルなど）が含まれると理解される。

【0025】

本明細書中で使用される場合、用語「アルキレン」は、任意選択的に分岐し得る、二価の飽和炭素原子鎖をいう。アルキレンが含まれる実施形態では、これらの実施形態の例示的な変形形態には低級アルキレン（Ｃ２～Ｃ４、アルキレン、メチレン、エチレン、プロピレン、および３－メチルペンチレンなど）が含まれると理解される。

【0026】

本明細書中で使用される場合、用語「複素環の」または「複素環」は、一価の炭素原子およびヘテロ原子の鎖をいい、ここで、ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から選択され、その一部（少なくとも１つのヘテロ原子）が環を形成する。用語「複素環」には、「芳香族複素環」および「非芳香族複素環」の両方が含まれ得る。複素環には、４～７員の単環および８～１２員の二環（イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジニル、チアジニル、ジチアニル、ジオキサニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、ピラニル、テトラゾリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、ピリジニル、ピロリル、ジヒドロピロリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、モルホリニル、テトラヒドロチオフェニル、チオフェニル、アゼチジニル、オキセタニル、チイラニル、オキシラニル、およびアジリジニルなど）が含まれる。「複素環」を、水素原子を保有することができる１つまたは複数の位置で任意選択的に置換することができる。

【0027】

本明細書中で使用される場合、用語「アリール」には、単環および多環の芳香族炭素環基（前述の基のそれぞれを任意選択的に置換することができる）が含まれる。用語「任意選択的に置換されたアリール」は、１つまたは複数の独立して選択された置換基（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、またはアルコキシ、アルキルスルホニル（ａｌｋｙｌｓｕｌｆｏｎｙ）、シアノ、およびニトロなど）によって任意選択的に置換することができる炭素原子の芳香族単環または多環（フェニルおよびナフチルなど）をいう。

【0028】

用語「ヘテロアリール」または「芳香族複素環」には、好ましくは５～７員環、より好ましくは５～６員環の置換または非置換の芳香族単環構造であって、その環構造は少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含む環構造が含まれる。用語「ヘテロアリール」には、１個または２個の環を有し、前述の環の少なくとも１つが芳香族複素環である（例えば、他の環系が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、芳香族炭素環、ヘテロアリール、および／または複素環であり得る）環系も含まれ得る。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンが含まれる。

【0029】

アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキレン、および複素環の各々を、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、カルボン酸、およびその誘導体（エステル、アミド、および亜硝酸塩が含まれる）、ヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アルキル（ａｌｋｙ）アミノおよびジアルキルアミノ、アシルアミノ、およびチオなど、ならびにその組み合わせなどの独立して選択された基によって任意選択的に置換することができると理解される。

【0030】

用語「任意選択的に置換された」または「任意選択的置換基」は、本明細書中で使用される場合、問題の基が非置換であるか、１つまたは複数の指定の置換基によって置換されていることを意味する。問題の基が１つを超える置換基によって置換されているとき、置換基は、同一であっても異なっていてもよい。さらに、「独立して」、「独立して存在する」、および「～から独立して選択される」という用語を使用するとき、問題の基は同一でも異なっていてもよいことを意味する。本明細書中に定義の一定の用語は、構造内に１回を超えて存在してよく、そのように存在する際、各用語は、他の用語と独立して定義されるものとする。

【0031】

用語「患者」には、ヒトおよび非ヒト動物（伴侶動物（イヌおよびネコなど）および家畜など）が含まれる。家畜は、食糧生産のために飼育された動物である。処置すべき患者は、好ましくは哺乳動物、特に好ましくはヒトである。

【0032】

用語「薬学的に許容され得る担体」は、当該分野で認識されており、任意の対象となる組成物またはその構成要素の運搬または輸送に関与する薬学的に許容され得る材料、組成物、またはビヒクル（液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料など）をいう。各担体は、対象となる組成物およびその構成要素に適合し、且つ患者に有害でないという意味で「許容され得」なければならない。薬学的に許容され得る担体としての機能を果たし得る材料のいくつかの例には、以下が含まれる：（１）糖（ラクトース、グルコース、およびスクロースなど）；（２）デンプン（トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなど）；（３）セルロースおよびその誘導体（カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなど）；（４）トラガカント末；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤（カカオバターおよび坐剤用ワックスなど）；（９）油（ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油など）；（１０）グリコール（プロピレングリコールなど）；（１１）ポリオール（グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなど）；（１２）エステル（オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど）；（１３）寒天；（１４）緩衝剤（水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど）；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質なしの水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）医薬処方物で使用される他の非毒性の適合物質。

【0033】

本明細書中で使用される場合、用語「投与」には、本明細書中に記載の化合物および組成物の患者への全ての導入手段が含まれ、経口（ｐｏ）、静脈内（ｉｖ）、筋肉内（ｉｍ）、皮下（ｓｃ）、経皮、吸入、口内、眼内、舌下、膣、および直腸などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書中に記載の化合物および組成物を、従来の非毒性の薬学的に許容され得る担体、アジュバント、およびビヒクルを含む単位投薬形態および／または処方物に含めて投与することができる。

【0034】

本明細書中に記載の化合物および組成物の一日の総使用量を、妥当な医学的判断の範囲内で主治医が決定することができると理解すべきである。任意の特定の患者のための特定の治療有効用量は、種々の要因（処置される障害および障害の重症度；使用される特定の化合物の活性；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全身健康、性別、および食事：使用される特定の化合物の投与時間および排出率、処置の持続時間、使用される特定の化合物と組み合わせるか、同時に使用される薬物；および通常の技術を有する研究者、獣医、医師、または他の臨床従事者に周知の類似の要因が含まれる）に依存するであろう。

【0035】

投与経路に応じて、広範な容認投薬量（約＾μｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇの範囲に収まる用量が含まれる）が本明細書中で意図される。投薬量は、単回量であるか分割することができ、広範な種々の服薬プロトコール（１日１回、１日２回、１日３回、または２日に１回、週１回、および月１回などが含まれる）にしたがって投与することができる。各々の場合において、本明細書中に記載の治療有効量は、投与例に対応しているか、あるいは、日毎の、週毎の、または月毎の総用量に対応している。

【0036】

本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」は、研究者、獣医師、医師、または他の臨床従事者によって探求される組織系、動物、またはヒトにおける生物学的応答または医薬の応答（処置される疾患または障害の症状の軽減が含まれる）を誘発する活性化合物または医薬品の量をいう。１つの態様では、治療有効量は、任意の医学的処置に適用可能である妥当な便益／リスク比で疾患または疾患の症状を処置または軽減することができる量である。

【0037】

本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」は、患者に投与すべき量をいい、体表面積、患者の体重、および／または患者の状態に基づき得る。さらに、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ，Ｅ．Ｊ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．１９６６，５０（４），２１９（その開示が本明細書中で参考として援用される）に記載のように、ヒトについて決定された投薬量と動物（試験動物が含まれる）について決定された投薬量（実例として、体表１平方メートルあたりのミリグラム数に基づく）に相互関係が存在することが認識される。体表面積を、患者の身長および体重から近似的に決定することができる（例えば、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔａｂｌｅｓ １９７０，Ｇｅｉｇｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ａｒｄｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ ５３７－５３８を参照のこと）。治療有効量の本明細書中に記載の化合物を、かかる癌または悪性疾患の緩和を必要とする患者などで見出され得る悪性細胞集団または癌細胞集団の成長阻害（または死滅）に有用な任意の量と定義することができる。典型的には、かかる有効量は、患者体重に対して、約５ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約２５０ｍｇ／ｋｇ、および／または約５ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇの化合物の範囲である。有効用量はまた、投与経路、任意の賦形剤の使用、および化合物の他の従来および非従来の治療上の処置（他の抗腫瘍剤および放射線療法などが含まれる）との同時使用の可能性に応じて変動し得ることが認識される。

【0038】

本開示では、用語「約」は、値または範囲のある程度の変動を可能にする（例えば、記載の値または記載の範囲の限度の１０％以内、５％以内、または１％以内）。本開示では、用語「実質的に」は、値または範囲のある程度の変動を可能にする（例えば、記載の値または記載の範囲の限度の９０％以内、９５％以内、または９９％以内）。

【0039】

いくつかの例示的な実施形態では、本発明は、式（Ｉ）

【化3】

を有するアザインデノイソキノリン化合物であって、式中、
ｍは１～約６の整数であり；
Ｒ^１は１～４個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^１は、２～４個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、任意の残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から各々独立して選択され；
Ｒ^２は、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアミノ、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、シアノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、ビス（ヒドロキシアルキル）アミノ、およびヒドロキシアルキルアミノアルキルアミノからなる群から選択され、ここで、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアミノの各々は任意選択的に置換されており；
Ｒ^３は１～３個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^３は、２～３個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され、
ここで、Ｒ^１またはＲ^３のうちの少なくとも１つは水素ではない、
アザインデノイソキノリン化合物またはその薬学的に許容され得る塩に関する。

【0040】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^１のうちの１つはクロロまたはフルオロであり、残りの置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0041】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^１のうちの１つはニトロであり、残りの置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0042】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^２がハロまたはシアノであるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0043】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^２は、以下：

【化4】

からなる群から選択される置換基であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0044】

いくつかの例示的な実施形態では、式（ＩＩ）

【化5】

を有するアザインデノイソキノリン化合物であって、式中、
ｍは１～約６の整数であり；
Ｒ^１は１～４個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^１は、２～４個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、任意の残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から各々独立して選択され；
Ｒ^２は、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアミノ、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、シアノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、ビス（ヒドロキシアルキル）アミノ、およびヒドロキシアルキルアミノアルキルアミノからなる群から選択され、ここで、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアミノの各々は任意選択的に置換されている；
アザインデノイソキノリン化合物またはその薬学的に許容され得る塩を本明細書中に記載する。

【0045】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）を有し、ここで、Ｒ^１のうちの１つはクロロまたはフルオロであり、残りの置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0046】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）を有し、ここで、Ｒ^１のうちの１つはニトロであり、残りの置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0047】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）を有し、ここで、Ｒ^２がハロまたはシアノであるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0048】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）を有し、ここで、Ｒ^２は、以下：

【化6】

からなる群から選択される置換基であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0049】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）を有し、ここで、Ｒ^３のうちの１つはアルコキシであり、残りのＲ^３置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0050】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）を有し、ここで、Ｒ^３のうちの１つはアルコキシであり、残りのＲ^３置換基は水素であるアザインデノイソキノリン化合物に関する。

【0051】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を含む医薬組成物に関する。

【0052】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤を含む医薬組成物に関する。

【0053】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、癌患者を処置する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示の医薬組成物を前述の癌の緩和を必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。

【0054】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、癌患者を処置する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示の化合物を、１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤と共に前述の癌の緩和を必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。

【0055】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、癌患者を処置する方法であって、治療有効量の本明細書中に開示の化合物および治療有効量の同一または異なる作用様式の１つまたは複数の他の化合物を、１つまたは複数の薬学的に許容され得る担体、希釈剤、および賦形剤と共に前述の癌の緩和を必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。

【0056】

いくつかの実施形態では、本発明は、癌患者を処置する方法であって、治療有効量の、ヒトトポイソメラーゼ１、チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ１、およびチロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２に対する三重インヒビターとして機能する化合物を投与する工程を含む方法に関する。

【0057】

いくつかの他の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）

【化7】

を有し、式中、
ｍは１～約６の整数であり；
Ｒ^１は１～４個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^１は、２～４個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、任意の残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から各々独立して選択され；
Ｒ^２は、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアミノ、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、シアノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、ビス（ヒドロキシアルキル）アミノ、およびヒドロキシアルキルアミノアルキルアミノからなる群から選択され、ここで、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノアルキルアミノ、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアミノの各々は任意選択的に置換されており；
Ｒ^３は１～３個の置換基を示し、前述の置換基の各々が水素、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され；または、Ｒ^３は、２～３個の置換基を示し、前述の置換基のうちの２個は隣接した置換基であり、付着した炭素と一緒になって任意選択的に置換された複素環を形成し、残りの置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシ、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアルコキシ、シアノ、ニトロ、任意選択的に置換されたアルキルチオ、任意選択的に置換されたアルキルスルホニル、カルボン酸、およびスルホン酸からなる群から独立して選択され、
ここで、Ｒ^１またはＲ^３のうちの少なくとも１つは水素ではない、
癌の処置で用いる物質またはその薬学的に許容され得る塩に関する。

【0058】

本発明を、以下の非限定的な化合物例および方法例を考慮してより深く理解することができる。

【0059】

化合物７の調製を、最初に、６（Ｋｉｓｅｌｅｖら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２，５５，１６８２－１６９７）をＴＨＦ中にて３－ブロモプロパノール、Ｐｈ_３Ｐ、およびＤＩＡＤで処理することによる光延反応（スキーム１）によって調査したが、中程度の収率（３９％）しか得られず、純粋な生成物を得るために冗長なクロマトグラフィを必要とした。次いで、３－ブロモプロピル側鎖を導入するために１，３－ジブロモプロパンとのＳＮ２置換を調査した。反応条件の徹底的な最適化後、化合物６を無水ＤＭＦ中にて水素化ナトリウムで処理し、その後にヨウ化ナトリウム（０．１当量）および１，３－ジブロモプロパンを－１０℃～０℃で添加した場合、３０時間で化合物７を収率７２％で得ることができると判断された。以前に報告された反応条件を超えるこの収率の改善は、ＮａＩの使用に起因していた（Ｋｉｓｅｌｅｖら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，１２８９－１２９８）。グラムスケールでの化合物７の実用的な調製により、側鎖の変動が最大の７－アザインデノイソキノリン類似体を合成することが可能となり、それにより、構造活性相関（ＳＡＲ）研究が容易になった。

【化8】

^ａ試薬および条件：（ａ）３－ブロモプロパノール、トリフェニルホスフィン、ＤＩＡＤ、ＴＨＦ、２３℃、６０時間、３９％；（ｂ）ｉ）ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃～２３℃、３時間；ｉｉ）１，３－ジブロモプロパン、０．１当量ＮａＩ、－１０～０℃、３０時間、７２％。

【化9】

^ａ試薬および条件：（ａ）アミン（８のためのピロリジン、９のための１－メチルピペラジン、１０のためのピペラジン、１２のための２－アミノ－２－チアゾリン、および１３のための４－（２－アミノエチル）モルホリン、１６のための１－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン、および１７のための４－アミノピペリジン）、ＮａＩ、Ｋ２ＣＯ３、１，４－ジオキサン、還流、６時間（８、６８％；９、７７％；１０、６６％；１２、５７％；１３、５０％；１６、５３％、１７、６３％、または（ｂ）アミン（１１のためのメチルアミン、１４のためのイソプロピルアミン、１５のためのエチルアミン、ＮａＩ、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ、室温、１２時間（１１、６８％；１４、８０％；１５、７３％）。

【0060】

ＳＡＲ研究を、ラクタムγ－アミノプロピル側鎖の変動に制限した。スキーム２に示すように、化合物８、９、１０、１２、１３、１６、および１７は、Ｋ_２Ｃ0_３およびＮａＩの存在下にて１，４－ジオキサン中で化合物７を対応するアミンと共に加熱還流することにより収率５０～７７％で調製され、一方で、化合物１１、１４、および１５は、室温のトリエチルアミンおよび０．１当量のＮａＩの存在下にてＤＭＦ中で７をメチルアミン、イソプロピルアミン、およびエチルアミンで処理することにより、それぞれ収率６８％、８０％、および７３％で得られた。

【0061】

無水物１１ａおよびｌｉｂ（スキーム３）を、公開文献の手順によって調製した（Ｋａｎｇ，Ｂ．－Ｒら，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２０１４，２３，１３４０－１３４９）。ラジカル開始剤ＡＩＢＮの存在下での５－メトキシ－３－メチルピコリノニトリルの臭素化により、中間体ブロミド１２ａが生成され（Ｋｉｓｅｌｅｖら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，６１０６－６１１６）、これをさらに精製せずに次の工程で直接使用した。Ｅｔ_３Ｎによってアセトニトリル中での１２ａおよびｌｌａ～ｂの縮合を促進することにより、２工程での収率約２５％で化合物１３ａ～ｂを得た。１３ａ～ｂの二酸化セレンでの酸化により、アザインデノイソキノリン中間体１４ａ～ｂを得た。０℃のＤＭＦ中での化合物１４ａ～ｂのＮａＨでの処理、その後の１－クロロ－３－ブロモプロパンとの反応により、共通中間体１５ａ～ｂを得た。スキーム４に示すように、共通中間体１５ａ～ｂを、ＤＭＦ中での対応するアミンのアルキル化による最終化合物１６ａ～ｊおよび１７ａ～ｉの合成のために使用した。

【化10】

試薬および条件：（ａ）Ｅｔ_３Ｎ、ＣＨ_３ＣＮ、還流、２４時間、２工程で２５％；（ｂ）Ｓｅ0_２、１，４－ジオキサン、還流、２４時間、８６％；（ｃ）ｉ、ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃～ＲＴ、３時間；ｉｉ）１－ブロモ－３－クロロプロパン、－１０～０℃、２４時間、７８％。

【化11】

【0062】

生物学的結果および考察
全ての合成された化合物７～１７を、Ｔｏｐｉ、Ｔｄｐ１、およびＴｄｐ２に対するその阻害活性について試験した。ヒト癌細胞株のＮＣＩ－６０パネルに対するその抗増殖活性も評価した。Ｔｏｐｉ阻害を、Ｔｏｐｉ媒介性ＤＮＡ切断アッセイにおいて薬物が酵素結合ＤＮＡ破壊を誘導する能力として記録した（Ｄｅｘｈｅｉｍｅｒら，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００８，３，１７３６－１７５０）。このアッセイの結果を、カンプトセシン（１８）およびＭＪ－ＩＩＩ－６５（１９）（それぞれ、ＮＳＣ ７０６７４４およびＬＭＰ７４４としても公知）のＴｏｐｉ阻害活性と比較して示し、半定量様式で以下のように示した：０、検出可能な活性なし；＋、弱い活性；＋＋、化合物１９の活性より低い活性；＋＋＋、１９の活性に類似の活性；＋＋＋＋、１８と等効力の活性。表１に示すように、全ての化合物７～１７は、中程度から強いＴｏｐｉ阻害活性を示した。化合物７は、強度レベル＋＋のＴｏｐｉ阻害活性を示した。側鎖中に種々のアミノ基を有する類似体（ピロリジン、８；１－メチルピペラジン、９；およびピペラジン、１０）のさらなる評価により、レベル＋＋の類似のＴｏｐｉ阻害活性が明らかとなった。興味深いことに、プロピル鎖の末端にメチルアミンが導入された化合物１１は、７と比較してレベル＋＋＋のＴｏｐｉ阻害活性の改善が認められた。特に、イソプロピルアミン１４およびエチルアミン１５の両化合物は、レベル＋＋＋＋の優れたＴｏｐｉ阻害活性が証明された。４－２（アミノエチル）モルホリン化合物１３および２－アミノ－２－チアゾリン化合物１２は、７と比較してそれぞれレベル＋＋＋およびレベル＋＋＋＋のＴｏｐｉ阻害活性の改善が認められた。化合物８～１０の効力と比較した化合物１１～１５の効力の改善は、Ｔｏｐｉ阻害活性について７－アザインデノイソキノリンの側鎖中の第二級アミンが第三級アミンより良好であることを示す。

【0063】

７－アザインデノイソキノリンのＴｄｐ１阻害活性を、チロシン残基とＤＮＡオリゴヌクレオチド基質（Ｎ１４Ｙ）の３’末端との間のホスホジエステル結合の加水分解を阻害し、したがって、遊離３’リン酸を有するオリゴヌクレオチド（Ｎ１４Ｐ）の生成を防止する７－アザインデノイソキノリンの能力を測定することによって決定した（Ｄｅｘｈｅｉｍｅｒら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，５２，７１２２－７１３１）。７－アザインデノイソキノリンのＴｄｐ１阻害活性を、表１にまとめている。Ｔｄｐ１阻害効力を、半定量スケールを使用して二連で決定した：０、ＩＣ５０＞１１１μＭ；＋、３７μＭと１１１μＭとの間のＩＣ_ｓ０；＋＋、１２μＭと３７μＭとの間のＩＣ_ｓ０；＋＋＋、１μＭと１２μＭとの間のＩＣ_ｓ０；および＋＋＋＋、ＩＣ_ｓ０＜１μＭ。

【0064】

【表1】

【0065】

【表2】

【0066】

抗癌剤としての潜在能力を調査するために、７－アザインデノイソキノリン７～１７を、６０種のヒト癌細胞株に対する国立がん研究所創薬プログラムスクリーニングにおいて評価した（「ＮＣＩ－６０」、Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ，Ｒ．Ｈ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ２００６，６，８１３－８２３）。選択した細胞株を使用して得たＧＩ５０値を、平均グラフ中点（ＭＧＭ）値と共に表１にまとめている。ＭＧＭは、試験範囲（０．０１μＭ～１００μＭ）の上下のＧＩ５０値をスクリーニング試験で用いる最小（０．０１μＭ）および最大（１００μＭ）の薬物濃度として採用した全試験細胞株の平均ＧＩ５０の計算に基づいた。これらの新規化合物の多くは、低マイクロモルからマイクロモル以下の範囲のＧＩ５０ ＭＧＭ（０．０４５～１．６６μＭ）で種々の細胞株に対して有意な効力を示す。Ｔｏｐｉ＋＋＋＋化合物１２、１４、および１５は、最も高い細胞傷害性を示し、ＭＧＭ値はそれぞれ０．０５８、０．０５８、および０．０７９μＭであった。これら３つの化合物間の細胞傷害性の差異は低いが、Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２の阻害において明確な差異があり、このことは、Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２の阻害がこれらの化合物の細胞傷害性に有意に寄与しないことを示唆している。Ｔｏｐｉ＋＋＋化合物は、１１（ＭＧＭ ０．７１４μＭ）、１３（ＭＧＭ ０．１７７μＭ）、および１６（ＭＧＭ １．６５０μＭ）である。Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２の阻害効力に基づいて、１６が最も効力が低いと予想され、それは明らかにそうである。しかし、１１が最も細胞傷害性が高いと予想されるであろうが、実際は１３が３つの化合物のうちで最も細胞傷害性が高い。Ｔｏｐｉ＋＋化合物である７（ＭＧＭ ０．１１２μＭ）、８（ＭＧＭ ０．０４５μＭ）、９（ＭＧＭ ０．５６２μＭ）、１０（ＭＧＭ ０．３１６μＭ）、および１７（１濃度予備試験における細胞傷害性が低かったので試験していない）のうちで、Ｔｄｐ１およびＴｄｐ２の阻害に基づいて１７が最も細胞傷害性が高いと予想されるが、実際は細胞傷害性が最も低い。Ｔｏｐｉ、Ｔｄｐ１、およびＴｄｐ２に対する化合物の性能に基づいて、化合物７または１０は細胞傷害性が最も低いはずであるが、実際は１７が最も低い。他方では、驚いたことに、化合物８は、相対的に中等度のＴｏｐｉ阻害活性を有するにもかかわらず、系列全体で最も細胞傷害性の高い化合物である。概して、これらの三重インヒビターは非常に細胞傷害性が高い抗癌剤であるが、３つの酵素に対するその阻害活性のみに基づいて、その相対的細胞傷害性を合理化することができない。これらの７－アザインデノイソキノリンの酵素阻害活性と細胞傷害性との間の一致性の欠如に寄与し得る他の要因には、細胞取り込みの相違、細胞内分布、代謝、細胞からの流出、オフターゲット効果、および有意な相乗効果を発揮するのに十分なＴｄｐ１およびＴｄｐ２に対する効力の欠如が含まれる。

【0067】

化合物１６ａ～ｊおよび１７ａ～ｉをＴｏｐｉ媒介性ＤＮＡ切断アッセイで試験してＴｏｐｉ中毒活性を評価し、結果を表２にまとめた。さらに、これらの化合物をＮＣＩ－６０ヒト腫瘍細胞株スクリーニングにおいて抗増殖活性について試験した。Ｔｏｐ１媒介性ＤＮＡ切断アッセイは、１μＭカンプトセシンの活性に基づいた規程を使用してＴｏｐｉ毒の活性をスコアリングする。試験薬を、３’－［^３２Ｐ］標識二本鎖ＤＮＡ断片およびＴｏｐｉ酵素と共に０．１、１、１０、および１００μＭの濃度でインキュベートした。Ｔｏｐｉ毒は、Ｔｏｐ１－ＤＮＡ切断複合体に結合してこれを捕捉する。次いで、ＤＮＡ切断パターンを、ゲル電気泳動によって実証する。１μＭ ＣＰＴを使用して得られたレーンの目視比較により、新規の化合物の活性が示される。最後に、０（活性なし）から＋＋＋＋（１μＭ ＣＰＴの活性に等しい活性）までの範囲の半定量的スコアを使用して、新規の化合物の活性を記載する（スコアリング規程の完全な説明については、表２の説明文を参照のこと）。化合物の生物学的活性を、表２にまとめている。化合物は、良好から中等度のＴｏｐｉ阻害活性を有する。合成した１９種の化合物のうちで、化合物１６ｄはスコア＋＋＋＋の最良の活性を示し、一方で、他の５つの化合物はスコア＋＋＋の良好な活性を示した。他方では、５つの化合物の活性は弱く、スコアは「＋」でしかなかった。いくつかの化合物は、高濃度でＴｏｐｉ抑制因子として作用する。これはおそらく高薬物濃度で薬物がＤＮＡへ結合し、ＤＮＡが切断反応の基質としては不十分なものとなることに起因すると思われる。

【0068】

化合物の例
概略。Ｂｒｕｋｅｒ ＡＲＸ３００またはＢｒｕｋｅｒ ＤＸ－２ ５００（それぞれ、ＱＮＰプローブまたは多核種広帯域観察用（ＢＢＯ）プローブ）分光計を使用して、３００または５００（2/3および７５または１２５（^１３Ｃ）ＭＨｚでＮＭＲスペクトルを得た。カラムクロマトグラフィを、２３０～４００メッシュシリカゲルを使用して行った。Ｍｅｌ－Ｔｅｍｐ装置にて毛細管を使用して融点を決定し、補正は行わない。Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ １６００シリーズＦＴＩＲ分光計を使用してソルトガラス上またはＫＢｒペレットとしてＩＲスペクトルを得た。ＥＳＩ－ＭＳ分析はＦｉｎｎｉｇａｎＭＡＴ ＬＣＱ Ｃｌａｓｓｉｃ質量分析計にて記録した。ＡＰＣＩ－ＭＳ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ ６３２０イオントラップ質量分析計を使用して行った。ＥＩ／ＣＩＭＳ分析は、Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ Ｅｎｇｉｎｅ質量分析計を用いて得た。全ての質量スペクトル分析を、パデュー大学のＣａｍｐｕｓ－Ｗｉｄｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｃｅｎｔｅｒで行った。ＨＰＬＣ分析を、Ｗａｔｅｒｓ １５２５バイナリＨＰＬＣポンプ／Ｗａｔｅｒｓ ２４８７デュアルλ吸光度検出システムにて５μｍ Cis逆相カラムを使用して行った。報告した全ての収率は、純粋な単離化合物に関する。化学物質および溶媒は試薬級のものであり、さらに精製せずに商業的供給元から入手した状態で使用した。全ての生物学的に試験した化合物の純度は、ＨＰＬＣにより推定したか、元素分析により決定した場合に９５％以上であった。ＨＰＬＣについて、ＵＶ検出器によって２５４ｎｍでモニタリングしたとき、主要生成物のピーク領域は、合わせた総ピーク領域の９５％以上であった。

【0069】

７－アザ－６－（３－ブロモプロピル）－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，ｌｌ－ジオキソ－ｌｌＨ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（７）（Ｋｉｓｅｌｅｖら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，１２８９－１２９８）。水素化ナトリウム（２３４ｍｇ、９．２８ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（７０ｍｇ、０．４６４ｍｍｏｌ）を、７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］－イソキノリン（６、１．５ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２３０ｍＬ）の懸濁液に０℃で添加した。反応混合物を室温に加温し、３時間撹拌した後、暗色溶液が形成された。溶液を塩含有氷水浴中で－１０℃～０℃に冷却し、１，３－ジブロモプロパン（４．６８６ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０時間撹拌し、水（２００ｍＬ）で反応を停止させた。生成物を酢酸エチル（５×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を、水（６×１５０ｍＬ）およびブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。残渣をエーテルでトリチュレートし、濾過し、エーテルで洗浄して、化合物７を赤色固体として得た（１．４７ｇ、７２％）：融点１７０～１７２℃。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．４８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．１６－５．０５ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．５２－２．３７ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４４４．０ （ＭＨ^＋， １００）．

【0070】

光延アプローチ。７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］－イソキノリン（６、９７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（２３６ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３０ｍＬ）に希釈した。３－ブロモプロパノール（１２９ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、その後にＤＩＡＤ（１８２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で６０時間撹拌し、反応混合物を濃縮乾固した。固体を、ヘキサン－酢酸エチル（２：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して、生成物７を赤色固体として得た（５０ｍｇ、３９％）。

【0071】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－６－［３－（４－ピロリジン－１－イル）プロピル］－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－ＨＨ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（８）。７－アザ－６－（３－ブロモプロピル）－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（７、１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ピロリジン（２１４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（２０８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物８を得た（８８ｍｇ、６８％）：融点２４８～２５０℃。ＩＲ （フィルム） ３４１２， １６１３， １４８３， １３３５， １３００ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．０７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９９ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８７－３．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．２８－３．２３ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．８５－２．８０ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．５５－２．４９ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．２８－２．２３ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１０－２．０ ７ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４３５．１ （ＭＨ^＋， １００）． ＨＰＬＣ純度： ９９．４２％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ_２３Ｈ_２３Ｎ_４０_５の計算値， ４３５．１６６９； 実測値， ４３５．１６５６． ＨＰＬＣ純度： ９９．４２％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0072】

光延アプローチ。７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］－イソキノリン（６、９７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（２３６ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で希釈した。３－（１－ピロリジニル）－１－プロパノール（１１７ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、その後にＤＩＡＤ（１８２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で７２時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固した。固体を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して、赤色固体生成物８を得た（５２ｍｇ、４０％）。

【0073】

３－（１－ピロリジニル）－１－プロパノール。炭酸カリウム（１．４ｇ、０．９４ｍｏｌ）およびピロリジン（０．８７ｍＬ、１．８ｍｏｌ）を、３－ブロモプロパノール（１ｇ、０．６３５ｍｏｌ）の３０ｍＬのＴＨＦ撹拌溶液に０℃で添加し、得られた混合物を室温で１５時間撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、セライトで濾過した。濾液を濃縮し、残渣を、５０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、黄色油状物質を得た（０．５７ｇ、７０％）。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｂ） δ ３．７９ （ｔ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．７１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．５７－２．５１ （ｍ， ４ Ｈ）， １．７５－１．６６ （ｍ， ６ Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｂ） δ ６４．１８， ５６．０２， ５４．０９， ２９．２４， ２３．２７．

【0074】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－６－［３－（３Ｈ－メチルピペラジン－１－イル）プロピル］－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（９）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、１－メチルピペラジン（３００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（２０８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、橙色固体生成物を得た（１０７ｍｇ、７７％）：融点２１１～２１３℃。ＩＲ （フィルム） ３４２９， １６６６， １５００， １３３４， １２８６ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．０７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．６０－２．５５ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．４６－２．２８ （ｍ， ８ Ｈ）， ２．２６ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．０６－２．０１ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４６４．１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２４Ｈ２６Ｎ５Ｏ５の計算値， ４６４．１９３４； 実測値， ４６４．１９２８． ＨＰＬＣ純度： ９８．３４％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ９０：１０）．

【0075】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－６－［３－（ピペラジン－１－イル）プロピル］－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１０）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ピペラジン（２５８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（２０８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（８８ｍｇ、６６％）：融点１３４～１３５℃。ＩＲ （フィルム） ３４１８， ２９２５， １６７１， １６１３， １４８４， １３３６ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ３） δ ９．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．０６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．５８－２．５４ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．４３－２．２５ （ｍ， ８ Ｈ）， ２．０４－１．９８ （ｍ， ２ Ｈ）； １．９１ （ｂｒｓ， １ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４５０．１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２３Ｈ２３Ｎ５Ｏ５の計算値， ４５０．１７７８； 実測値， ４５０．１７７９． ＨＰＬＣ純度： １００％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ８０：２０）．

【0076】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－６－［３－（メチルアミノプロピル］－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１１）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、メチルアミン（２Ｍ ＴＨＦ溶液）（３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２５ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を室温で１２時間撹拌し、水（５ｍＬ）で反応を停止させた。生成物を、クロロホルム（５×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水（６×２０ｍＬ）およびブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含む１％トリメチルアミン含有ジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（８０ｍｇ、６８％）：融点２５９～２６２℃。ＩＲ （フィルム） ３４３５， ２９６４， ２７８２， １６８２， １５５５， １４８１， １３３６， １３０２ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．４８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７０， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９７ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．７７－２．７２ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．４５ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．０９－１．９６ （ｍ， ３ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３９５．１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ_２ｏＨｉ_８Ｎ_４０_５の計算値， ３９５．１３５６； 実測値， ３９５．１３５７． ＨＰＬＣ純度： ９６．９８％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ８５：１５）．

【0077】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－６－［３－（（４，５－ジヒドロチアゾール－２－イル）アミノ）プロピル］－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１２）。化合物７（１０６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、２－アミノ－２－チアゾリン（３３３ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（６３ｍｇ、５７％）：融点１７５～１７７℃。ＩＲ （フィルム） ３４３０， １６４１， １６１３， １５０４， １４８２， １３３５ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ_３） δ ９．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ ）， ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９７ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．６４ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．２４ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．２０－２．１５ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４６６．１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ_２２Ｈｉ_９Ｎ_５０_５Ｓの計算値， ４６６．１１８５； 実測値， ４６６．１１８２． ＨＰＬＣ純度： ９７．５０％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ９０：１０）．

【0078】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－６－［３－（（２－モルホリノエチル）アミノ）プロピル］－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１３）。化合物７（１０６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、４－（２－アミノエチル）－モルホリン（３１４ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（５８ｍｇ、５０％）：融点２１４～２１６℃。ＩＲ （フィルム） ２７７０， １４３７， １３３２， １２１９ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．９７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９９ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．９４－３．８９ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．２０－３．１５ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．０８－３．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．８０－２．７５ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．６５ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．２２－２．１８ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４９４．２ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ６の計算値， ４９４．２０４０； 実測値， ４９４．２０３８． ＨＰＬＣ純度： ９８．４４％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ９０：１０）．

【0079】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－６－［３－（イソプロピルアミノ）プロピル］－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１４）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、イソプロピルアミン（１７７ｍｇ、６ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２５ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を室温で１２時間撹拌し、水（５ｍＬ）で反応を停止させた。生成物を、クロロホルム（５×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水（６×２０ｍＬ）およびブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含む１％トリメチルアミン含有ジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（１００ｍｇ、８０％）：融点２７８～２８０℃。ＩＲ （フィルム） ２９６１， ２８０５， １６７７， １６１０， １３３７， １２８８， ８５４ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．６１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．２８－３．２１ （ｍ， １ Ｈ）， ３．０９－３．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１６－２．１０ （ｍ， ２ Ｈ）， １．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ６ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４２３．２ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２２Ｈ_２２Ｎ_４０５の計算値， ４２３．１６６９； 実測値， ４２３．１６６８． ＨＰＬＣ純度： ９８．７３％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ８０：２０）．

【0080】

７－アザ－６－［３－（エチルアミノ）プロピル］－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１５）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、無水ＤＭＦ（３５ｍＬ）、ＮａＩ（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、エチルアミン（３ｍＬの２Ｍ ＴＨＦ溶液、６ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２５ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１２時間撹拌し、次いで、水（５ｍＬ）で反応を停止させた。生成物をクロロホルム（６×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水（５×３０ｍＬ）およびブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含む１％トリメチルアミン含有ジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（８９ｍｇ、７３％）：融点２６６～２６８℃。ＩＲ （フィルム） ３５８３， ２９４６， １６８２， １５７１， １４８２， １３３６， １３００ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．６５－８．５９ （ｍ， ２ Ｈ）， ８．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０８－３．０１ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．９７－２．８９ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１５－２．０９ （ｍ， ２ Ｈ）， １．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ： ｍ／ｚ ４０９ （ＭＨ^＋） ； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２ｉＨ_２０Ｎ_４Ｏ_５の計算値， ４０９．１５１２； 実測値， ４０９．１５１６． ＨＰＬＣ純度： ９８．３２％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ９０：１０）．

【0081】

７－アザ－５，６－ジヒドロ－６－［３－（４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル）プロピル］－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１６）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、１－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン（２７０ｍｇ、６ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１２０ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～２０％メタノールを含むジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（７８ｍｇ、５３％）：融点２１４～２１６℃。ＩＲ （フィルム） ３４３９， １６３６， １５０７， １４８３， １２５６ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ９．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ ）， ８．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５９－３．５５ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．９７ （ｔ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．５９－２．４４ （ｍ， １２ Ｈ）， ２．０８－２．０３ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４９４．２ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ６の計算値， ４９４．２０４０； 実測値， ４９４．２０４１． ＨＰＬＣ純度： ９６．９７％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ９０：１０）．

【0082】

６－［３－（４－アミノピペリジン－１－イル）プロピル］－７－アザ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－３－ニトロ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１７）。化合物７（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、４－アミノピペリジン（６００ｍｇ、６ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１６５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロロホルム（１４０ｍＬ）に再溶解した。クロロホルム溶液を水（３×１０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。固体残渣を、５～１５％メタノールを含む１％トリメチルアミン含有ジクロロメタンで溶出するカラムクロマトグラフィ（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（８７ｍｇ、６３％）：融点２５８～２６０℃。ＩＲ （フィルム） ３４４０， １６４１， １４３６， １３３５， １３０１， １０８４ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．６５－８．５７ （ｍ， ３ Ｈ）， ８．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９８ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．５０－２．３９ （ｍ， ７ Ｈ）， ２．０４－１．９０ （ｍ， ６ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４６４．１； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ： ＭＨ^＋ Ｃ２４Ｈ２６Ｎ５Ｏ５の計算値， ４６４．１９３４； 実測値， ４６４．１９１９． ＨＰＬＣ純度： ９５．１０％ （Cis逆相， ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ， ８０：２０）．

【0083】

７－アザ－３－クロロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５－オキソ－１１Ｈ－インデノ－［１，２－ｃ］イソキノリン（１３ａ）。５－メトキシ－３－メチルピコリノニトリル（１．０６ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（１．４１ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）、およびＡＩＢＮ（１１８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を１，２－ジクロロエタン（４０ｍＬ）で希釈し、混合物を２４時間加熱還流した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、粗１２ａを得た。残渣をアセトニトリル（７０ｍＬ）に再溶解した。７－クロロイソクロマン－１，３－ジオン（１１ａ、２．１２ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加し、その後にトリエチルアミン（１．２ｍＬ、９．３６ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を２４時間加熱還流した。加熱溶液を濾過し、沈殿物をボイルしたアセトニトリル（３×４０ｍＬ）で洗浄して、灰色固体１３ａを得た（６９８ｍｇ、３２％）：融点２５８～２６２℃。生成物を、さらに精製せずに次の工程に導入した。ＡＰＣＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度）： ２９９ （ＭＨ^＋， １００）．

【0084】

７－アザ－３－フルオロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５－オキソ－１１Ｈ－インデノ－［１，２－ｃ］イソキノリン（１３ｂ）。５－メトキシ－３－メチルピコリノニトリル（２．０９ｇ、１４．１２ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（２．６ｇ、１４．６０ｍｍｏｌ）、およびＡＩＢＮ（２１４ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）をＣＣｌ_４（１００ｍＬ）で希釈し、混合物を２４時間加熱還流した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発乾固して、粗１２ａを得た。残渣をアセトニトリル（１４０ｍＬ）に再溶解した。７－フルオロイソクロマン－１，３－ジオン（ｌｉｂ、２．８ｇ、１４．２６ｍｍｏｌ）を添加し、その後にトリエチルアミン（１．６ｍＬ、１２．４８ｍＬ）を添加し、溶液を２４時間加熱還流した。加熱溶液を濾過し、沈殿物をボイルしたアセトニトリル（３×６０ｍＬ）で洗浄して、灰色固体１３ｂを得た（１．２６ｇ、３１．６％）：融点３０４～３１０℃。生成物を、さらに精製せずに次の工程に導入した。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ １２．３１ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４３ － ８．１７ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．９１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １４．１， ９．２， ４．０ Ｈｚ， ３ Ｈ）， ７．８０ － ７．５５ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３ Ｈ）； ＡＰＣＪＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ２８３．０ （ＭＨ^＋， １００）．

【0085】

７－アザ－３－クロロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１４ａ）。７－アザ－３－クロロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５－オキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１３ａ、６９８ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）およびＳｅ０_２（５２５ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（４０ｍＬ）で希釈し、混合物を２４時間加熱還流した。反応混合物を熱いうちに濾過し、沈殿物を熱ジオキサン（４×３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で蒸発乾固して、１４ａ（６２８ｍｇ、８６％）を橙色固体として得た：融点＞３００℃。ＩＲ （薄膜） ３４３４， １６５０， １４８１， １３０７， １０１７ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．３， ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３ Ｈ）； ＡＰＣＪＭＳ ｍ／ｚ （相対強度）： ３１１．３ （ＭＨ^＋， １００）．

【0086】

７－アザ－３－フルオロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１４ｂ）。７－アザ－３－フルオロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５－オキソ－１１Ｈ－インデノ－［１，２－ｃ］イソキノリン（１３ｂ、１．２６ｇ、４．４７ｍｍｏｌ）およびＳｅ０_２（０．９４ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１７０ｍＬ）で希釈し、混合物を２４時間加熱還流した。反応混合物を熱いうちに濾過し、沈殿物を熱ジオキサン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で蒸発乾固して、１４ｂを橙色固体として得た（０．８１ｇ、４０．５％）：融点３３１～３３４℃。^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．４１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．２， ７．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３ Ｈ）； ＩＲ （薄膜） ２９９４， １６８２， １６１２， １５７４， １５６０， １５３７ ｃｍ^－１； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ２９５．０ （Ｍ－Ｈ， １００）．

【0087】

３－クロロ－６－（３－クロロプロピル）－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１５ａ）。水素化ナトリウム（６２ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（２４ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）を、７－アザ－３－クロロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］－イソキノリン（１４ａ、２７０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３０ｍＬ）の懸濁液に０℃で添加した。反応混合物を室温に加温し、１．５時間撹拌した後、暗赤色溶液が形成された。溶液を０℃に再度冷却し、１－ブロモ－３－クロロプロパン（０．４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を２４時間撹拌し、水（１００ｍＬ）で反応を停止させ、その後にクロロホルム（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水（３×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして赤色固体生成物を得た（０．０９ｇ、２６％）：融点１９５～１９７℃。ＩＲ （薄膜） ３０６２， １６５９， １６０７， １４８３ ｃｍ^－１；^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．０９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８２ － ４．６７ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．６５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．２４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．１８ － ２．０３ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３８９／３９１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ１９Ｈ１５Ｃｌ２Ｎ２Ｏ３ （ＭＨ^＋）の計算値 ３８９．０４６０， 実測値 ３８９．０４５２．

【0088】

６－（３－クロロプロピル）－３－フルオロ－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノ－リン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１５ｂ）。水素化ナトリウム（９０ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（２６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、７－アザ－３－フルオロ－５，６－ジヒドロ－９－メトキシ－５，１１－ジオキソ－１１Ｈ－インデノ［１，２－ｃ］イソキノリン（１４ｂ、０．５３６ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（４５ｍＬ）の懸濁液に０℃で添加した。反応混合物を室温に加温し、２時間撹拌した後、暗赤色溶液が形成された。溶液を０℃に再度冷却し、１－ブロモ－３－クロロプロパン（７２６ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を２４時間撹拌し、水（１５０ｍＬ）で反応を停止させ、その後に酢酸エチル（３×７０ｍＬ）およびブライン（１×７０ｍＬ）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発乾固した。残渣を、ヘキサン－酢酸エチル（２：１）で溶出するカラムクロマトグラフィ（ｃｈｒｏｍｏｔｏｇｒａｐｈｙ）（シリカゲル）に供して、赤色固体生成物を得た（０．３１ｇ、４６％）：融点２４４～２４８℃。ＩＲ （薄膜） ３０５３， １７０１， １６５３， １５８９， １５４９， １５０７， １４８２， １４３５， １２８５ ｃｍ^－１； ³/₄ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．９１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．２８ － ２．１５ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３７３．０ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ１９Ｈ１５ＣｌＦＮ２Ｏ３ （ＭＨ^＋）の計算値 ３７３．０７５５， 実測値 ３７３．０７４８．

【0089】

化合物１６ａ～ｊの調製のための一般的手順。化合物１５ａ（０．１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．０５ｇ、１ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（４０ｍｇ）、および適切なアミン（１０当量）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を９０℃で一晩撹拌し、次いで、室温に冷却した。水（１０ｍＬ）を反応混合物に添加し、次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（３×１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２Ｓ０_４で乾燥させ、真空下で蒸発させた。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ－ＣＨＣｂ、５：９５）を使用して精製した。

【0090】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－モルホリノプロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ａ）。この化合物を赤色粉末として単離した（０．０３ｇ、６６％）：融点２５３～２５６℃。ＩＲ （薄膜） ３０６５， ２９４１， ２８０８， １６９８， １６６１， １６０８， １５９０， １５６２， １５３７， １５００ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．４７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８３ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．７３ － ３．５６ （ｍ， ３ Ｈ）， ３．２０ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．０３ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．２０ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４４０ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２３Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ４ （ＭＨ^＋）の計算値 ４４０．１３２２， 実測値 ４４０．１３７２； ＨＰＬＣ純度， ９６．２ ％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0091】

６－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）－３－クロロ－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｂ）。この化合物を橙赤色固体として単離した（０．０１８ｇ、４１％）：融点２８４～２８６℃。ＩＲ （薄膜） ２９１８， １６９６， １６７３， １６０７， １５６６， １５３５， １５０１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６２ － ７．４８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．１７ － ７．０１ （ｍ， １ Ｈ）， ６．８５ － ６．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ４．７１ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０２ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１０ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４２１ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ_２２Ｈｉ_７ＣｌＮ_４０_３ （ＭＨ^＋）の計算値 ４２１．１０６８， 実測値 ４２１．１０５９； ＨＰＬＣ純度， ９７．１７％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0092】

３－クロロ－６－（３－（（４，５－ジヒドロチアゾール－２－イル）アミノ）プロピル）－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｃ）。この化合物を赤色固体として単離した（０．０１２ｇ、２５％）：融点２９５～２９８℃。ＩＲ （薄膜） ２９２４， １６６６， １６０５， １５３６， １５０１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０６ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．８８ － ３．７８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７０ － ３．６２ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．５５ － ３．３８ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０９ （ｍ， ２ Ｈ）． ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４５７ （ＭＨ^＋， １００）， ４５５； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２２Ｈｉ_９ＣｌＮ_４０_３Ｓ （ＭＨ^＋）の計算値 ４５５．０９４５， 実測値 ４５５．０９２８； ＨＰＬＣ純度， １００ ％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0093】

３－クロロ－６－（３－（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）プロピル）－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ－［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｄ）。この化合物を深赤色固体として単離した（０．１８ｇ、３８％）：融点２７９～２８１℃。ＩＲ （薄膜） ３３２０， ２９４０， １６９８， １６６６， １６１０， １５８９， １５６３， １５３８， １５００ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_ｅ） δ ８．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８７ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．５８ － ４．４９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．６０－２．５８ （ｍ， ２ Ｈ）， １．９０－１．８５ （ｍ， ２ Ｈ）， １．４９－１．４２ （ｍ， ２ Ｈ）， １．１６ － １．００ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４５４ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ_２４Ｈ_２４ＣｌＮ_３０_４ （ＭＨ^＋）の計算値 ４５４．１５３４， 実測値 ４５４．１５２４； ＨＰＬＣ純度， ９６．７７％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0094】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（ピペラジン－１－イル）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｅ）。この化合物を赤色粉末として単離した（０．０４４ｇ、７８％）：融点２６４～２６８℃。ＩＲ （薄膜） ２９３７， ２８０８， ２４６９， １６９７， １６６９， １６０６， １５６５， １５３６， １５０２ ｃｍ^－１．； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８７ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．１０ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．７６ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．３５ （ｍ， ４ Ｈ）， １．８９ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４３９ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ_２３Ｈ_２３ＣｌＮ_４０_３ （ＭＨ^＋）の計算値 ４３９．１５３７， 実測値 ４３９．１５２５； ＨＰＬＣ純度， ９８．５６ ％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0095】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（イソプロピルアミノ）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｆ）。この化合物を調製するための反応を４５ｍＬ圧力容器中で行い、生成物を赤色粉末として単離した（０．０３２ｇ、６０％）：融点２５０～２５１℃。ＩＲ （薄膜） ３０６５， ２９４２， ２７８２， １７００， １６６４， １６０９， １５９０， １５６３， １５３９， １４９９ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_ｅ） δ ８．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５８ （ｓ， １ Ｈ）， ４．８５ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０６ （ｓ， １ Ｈ）， ２．８８ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０３ （ｍ， ２ Ｈ）， １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ６ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４１２ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ_２２Ｈ_２２ＣｌＮ_３０_３ （ＭＨ^＋）の計算値 ４１２．１４２８， 実測値 ４１２．１４２０； ＨＰＬＣ純度， １００．００％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0096】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（メチルアミノ）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｇ）。この化合物を調製するための反応を４５ｍＬ圧力容器中で行い、生成物を赤色粉末として単離した（０．０３８ｇ、７７％）：融点２７４～２７５℃。ＩＲ （薄膜） ２９４１， ２７７７， １６９９， １６６９， １６０８， １５６５， １５３５， １５００ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８５ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．３３ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．９１ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．０５ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３８４ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２０Ｈ１８ＣｌＮ３Ｏ３ （ＭＨ^＋）の計算値 ３８４．１１１５， 実測値 ３８４．１１０８； ＨＰＬＣ純度， ９５．８１％ （ＭｅＯＨ－ＨｉＯ， ８５：１５）．

【0097】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（エチルアミノ）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｈ）。この化合物を調製するための反応を４５ｍＬ圧力容器中で行い、生成物を赤色粉末として単離した（０．０４ｇ、８０％）：融点２６４～２６６℃。ＩＲ （薄膜） ２９４５， ２７５６， ２４９７， １７１０， １６６１， １６０８， １５６６， １５３７， １４９９ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．４７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．７３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．００ （ｍ， ２ Ｈ）， １．０６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３９８ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＮ３Ｏ３ （ＭＨ^＋）の計算値 ３９８．１２７２， 実測値 ３９８．１２５８； ＨＰＬＣ純度， ９７．０７％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0098】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（ピロリジン－１－イル）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｉ）。この化合物を赤色粉末として単離した（０．０４５ｇ、８３％）：融点２４２～２４４℃。ＩＲ （薄膜（ｔｈｉｎ ｆｉｍ）） ３０６３， ２９３４， ２７８７， １６９９， １６６４， １６０８， １５６５， １５３７， １５０１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．９０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．１１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， ４ Ｈ）， １．９６ （ｍ， ２ Ｈ）， １．５７ （ｍ， ４ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４２４ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２３Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ３ （ＭＨ^＋）の計算値 ４２４．１４２８， 実測値 ４２４．１４１９； ＨＰＬＣ純度， ９６．９３％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0099】

３－クロロ－９－メトキシ－６－（３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１６ｊ）。この化合物を赤色粉末として単離した（０．０４２ｇ、７２％）：融点２５３～２５５℃。ＩＲ （薄膜） ２９３１， ２７８９， １６９９， １６６６， １６０７， １５６５， １５３７， １５０１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ_６） δ ８．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８９ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．３７ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１２ （ｍ， ８ Ｈ）， １．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， １．８７ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４５３ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＥＳＩＭＳ Ｃ２４Ｈ_２５ＣｌＮ_４Ｏ_３ （ＭＨ^＋）の計算値 ４５３．１６９４， 実測値 ４５３．１６８６； ＨＰＬＣ純度， ９５．８８％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0100】

化合物１７ａ～ｉの調製のための一般的手順。化合物１５ｂ（５０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．０５ｇ、１ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（４０ｍｇ）、および適切なアミン（１０当量）をＤＭＦ（５ｍＬ）中で混合した。混合物を９０℃で一晩撹拌し、次いで、室温に冷却した。水（３０ｍＬ）を反応フラスコに添加し、次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（３×１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２Ｓ０_４で乾燥させ、蒸発させて赤色残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ－ＣＨＣｂ、５：９５）によって精製して、化合物１７ａ～ｉを得た。化合物１７ｆ～ｈを、同一の手段を使用して調製したが、１５ｍＬ圧力容器中で反応させた。

【0101】

３－フルオロ－９－メトキシ－６－（３－モルホリノプロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２ｃ］－イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ａ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（４６ｍｇ、８４％）：融点１７５～１７８℃。ＩＲ （薄膜） ３０７０， ２８５６， ２８０６， １６９８， １６５８， １５９３， １５４８， １５１１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７２ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．３４ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．２０ （ｍ， ４ Ｈ）， １．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ ｍ／ｚ （相対強度） ４２４ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２３Ｈ２３ＦＮ３Ｏ４の計算値， ４２４．１６７３； 実測値， ４２４．１６６５； ＨＰＬＣ純度： ９６．０６％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0102】

６－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）－３－フルオロ－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］－シクロ－ペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｂ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（３７．５ｍｇ、６９％）：融点１７６～１８０℃。ＩＲ （薄膜） ３５４３， ２９６９， １７０７， １６５７， １５９２， １５７２， １５０８ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９５ － ７．６９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １ Ｈ）， ６．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ４．８１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．１４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２７－２．１６ （ｍ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ ｍ／ｚ （相対強度） ４０５ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２２Ｈ１８ＦＮ４Ｏ３の計算値， ４０５．１３６３； 実測値， ４０５．１３５７； ＨＰＬＣ純度： ９６．６０％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0103】

６－（３－（（４，５－ジヒドロチアゾール－２－イル）アミノ）プロピル）－３－フルオロ－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］－シクロペンタ－［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｃ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（２５ｍｇ、４３％）：融点２２６～２５０℃。ＩＲ （薄膜） ２９３７， １６９９， １６５７， １５９３， １５４９， １５１０ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．６８ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．０９ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４３９ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２２Ｈ２０ＦＮ４Ｏ３Ｓの計算値， ４３９．１２４０； 実測値， ４３９．１２３３； ＨＰＬＣ純度： ９５．０１％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0104】

３－フルオロ－６－（３－（４－ヒドロキシピペリジン－１－イル）プロピル）－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］－シクロペンタ［１，２－ｃ］－イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｄ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（３０ｍｇ、５０％）：融点２０５～２０９℃。ＩＲ （薄膜） ３２６３， ２９４２， １６６８， １５９１， １５５１， １５１０ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５４ － ８．４４ （ｍ， １ Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５３ （ｓ， １ Ｈ）， ４．８８ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．５７ （ｍ， １ Ｈ）， ２．４０ （ｍ， ２ Ｈ）， １．８９ （ｍ， ４ Ｈ）， １．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， １．０７ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４３７ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２４Ｈ２４ＦＮ３Ｏ４の計算値， ４３７．１９８９； 実測値， ４３７．１９８１； ＨＰＬＣ純度： ９５．２４％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0105】

３－フルオロ－９－メトキシ－６－（３－（ピペラジン－１－イル）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ－［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｅ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（４４ｍｇ、７８％）：融点２３７～２３９℃。ＩＲ （薄膜） ２９３６， ２８０８， １６９９， １６５８， １５９３， １５５０， １５１０ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．６９ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．３０ （ｍ， ４ Ｈ）， １．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ ｍ／ｚ （相対強度） ４２３ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２３Ｈ２３Ｎ４Ｏ３Ｆの計算値， ４２３．１８３３； 実測値， ４２３．１８２４； ＨＰＬＣ純度： ９５．２８％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0106】

３－フルオロ－６－（３－（イソプロピルアミノ）プロピル）－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｆ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（４１ｍｇ、７５％）：融点２８５～２９２℃。ＩＲ （薄膜） ２７１４， １７０５， １６５９， １５８８， １５５２， １５１１ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ５．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．３６ － ８．２２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．４， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７５ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５７ （ｔ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０５ （ｍ， １ Ｈ）， ２．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．０４ （ｍ， ２ Ｈ）， １．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ６ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ ｍ／ｚ （相対強度） ３９６ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２２Ｈ２３ＦＮ３Ｏ３の計算値， ３９６．１７２４； 実測値， ３９６．１７１９； ＨＰＬＣ純度： ９６．７０％ （ＭｅＯＨ－ＨｉＯ， ８５：１５）．

【0107】

３－フルオロ－９－メトキシ－６－（３－（メチルアミノ）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｇ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（３１ｍｇ、６３％）：融点２５９～２６５℃。ＩＲ （薄膜） １６６７， １５５４， １５１３， １４８４， １４５４ ｃｍ^－１； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ５．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．４， ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８６ － ７．７５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８７ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．００ （ｔ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．５４ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．１１ （ｍ， ２ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ３６８ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２０Ｈ１９ＦＮ３Ｏ３の計算値， ３６８．１４１１； 実測値， ３６８．１４０２； ＨＰＬＣ純度： ９５．０５％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0108】

６－（３－（エチルアミノ）プロピル）－３－フルオロ－９－メトキシ－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｈ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（１８．８ｍｇ、３７．１％）：融点２８６～２８８℃。ＩＲ （薄膜） ３４５１， ２９２４， ２８５１． ２７８３， １７００， １６７１， １６１６， １５９２， １５７３， １５５２， １５１１ ｃｍ^４； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ５．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．９１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．４， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８４ － ７．７２ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０４ － ２．８２ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， １．２６ － １．０８ （ｍ， ３ Ｈ）； ＭＡＬＤＩ ｍ／ｚ （相対強度） ３８２ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２１Ｈ２１ＦＮ３Ｏ３の計算値， ３８２．１５６７； 実測値， ３８２．１５５８； ＨＰＬＣ純度： ９５．５８％ （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０， ８５：１５）．

【0109】

３－フルオロ－９－メトキシ－６－（３－（ピロリジン－１－イル）プロピル）－５Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］シクロペンタ［１，２－ｃ］イソキノリン－５，１１（６Ｈ）－ジオン（１７ｉ）。この化合物を暗赤色固体として単離した（２０ｍｇ、３７％）：融点１５７～１６２℃。ＩＲ （薄膜） １７０２， １６６３， １６１４， １５７２， １５５０， １５１０， １４８０， １４４６， １４３４ ｃｍ^４； ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ８．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ５．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ８．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．７４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．７， ２．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５４ （ｔ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．９０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．７３ （ｍ， ４ Ｈ）， １．９８ （ｍ， ３ Ｈ）， １．６０ （ｍ， ５ Ｈ）； ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ （相対強度） ４０８ （ＭＨ^＋， １００）； ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ｍ／ｚ ＭＨ^＋ Ｃ２７Ｈ２３ＦＮ３Ｏ３の計算値， ４０８．１７２４； 実測値， ４０８．１７１７； ＨＰＬＣ純度： ９５．０８％． （ＭｅＯＨ－Ｈ_２０Ｏ， ８５：１５）．

【0110】

トポイソメラーゼＩ媒介性ＤＮＡ切断反応（Ｄｅｘｈｅｉｍｅｒら，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００８，３，１７３６－１７５０）。３’－［^３２Ｐ］標識１１７－ｂｐ ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、以前に記載のように調製した。オリゴヌクレオチドは、１６１－ｂｐ ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（－）ファージミドＤＮＡ中に以前に同定されたＴｏｐｉ切断部位を含む。およそ２ｎＭの放射性標識されたＤＮＡ基質を、組換えＴｏｐｉと共に２０μＬの反応緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１５μｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中で種々の濃度の試験化合物の存在下にて２５℃で２０分間インキュベートした。ＳＤＳ（０．５％最終濃度）を添加することによって反応を停止させ、その後に２体積のローディングダイ（８０％ホルムアミド、１０ｍＭ水酸化ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡナトリウム、０．１％キシレンシアノール、および０．１％ブロモフェノールブルー）を添加した。各反応混合物のアリコートを、２０％変性ＰＡＧＥに供した。ゲルを乾燥させ、ホスフォイメージャーおよびＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を使用して可視化した。切断部位に、１１７ｂｐオリゴヌクレオチド上の実際の部位を反映するように番号をつけた（Ａｎｔｏｎｙら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００７，３５，４４７４－４４８４）。

【0111】

組換えＴｄｐ１アッセイ（Ｎｇｕｙｅｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２，５５，４４５７－４４７８）。３’－ホスホチロシンを含む５’－［^３２Ｐ］標識一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｎ１４Ｙ）を１ｎＭで１０ｐＭ組換えＴＤＰ１と共に、インヒビターの非存在下または存在下で、５０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．５）、８０ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、４０μｇ／ｍＬ ＢＳＡ、および０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＬＭＰ１アッセイ緩衝液中にて室温で１５分間インキュベートした。１体積のゲルローディング緩衝液（９９．５％（ｖ／ｖ）ホルムアミド、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０１％（ｗ／ｖ）キシレンシアノール、および０．０１％（ｗ／ｖ）ブロモフェノールブルー）を添加して反応を停止させた。試料を、１２分間隔で複数ローディングする１６％変性ＰＡＧＥに供した。ゲルを乾燥させ、ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒスクリーン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に露光した。ゲル画像を、Ｔｙｐｈｏｏｎ ８６００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してスキャンし、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してデンシトメトリー分析を行った。

【0112】

組換えＴｄｐ２アッセイ（Ｇａｏら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２８７，３０８４２－３０８５２）。ＴＤＰ２反応を、以下のように修正して以前に記載のように行った。１８量体の一本鎖オリゴヌクレオチドＤＮＡ基質（ＴＹ１８、α^３２Ｐ－コルジセピン－３’標識）を、１ｎＭで２５ｐＭ組換えヒトＴＤＰ２と共に、インヒビターの非存在下
または存在下で、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、８０ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ_３／４、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、４０μｇ／ｍＬ ＢＳＡ、および０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＬＭＰ２アッセイ緩衝液中にて室温で１５分間インキュベートした。反応を停止させ、全細胞抽出および組換えＴｄｐ１反応（前段落を参照のこと）と同様に処理した。

【0113】

当業者は、上記の特定の実施態様に合わせて多数の修正を行うことができることを認識するであろう。実施態様は、記載の特定の限定事項に限定されるべきではない。他の実施態様が可能である。

【0114】

本発明を図面および上記の説明において図示および詳述してきたが、これらは例示と見なされるべきであり、特徴を制限すると見なされるべきではなく、一定の実施形態のみを表示および説明しており、本発明の精神の範囲内の全ての変更形態および修正形態が保護されることが望ましいと理解される。