特許 7184819 試料のリアルタイム糖鎖アッセイを実施するためのシステム及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-11-28

(45)【発行日】2022-12-06

(54)【発明の名称】試料のリアルタイム糖鎖アッセイを実施するためのシステム及び方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/48 20060101AFI20221129BHJP

   G01N 30/88 20060101ALI20221129BHJP

【ＦＩ】

G01N33/48 Z

G01N30/88 N

【請求項の数】 45

(21)【出願番号】P 2019570860

(86)(22)【出願日】2018-08-01

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-10-15

(86)【国際出願番号】 US2018044891

(87)【国際公開番号】W WO2019028191

(87)【国際公開日】2019-02-07

【審査請求日】2021-07-28

(31)【優先権主張番号】62/539,798

(32)【優先日】2017-08-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】500049716

【氏名又は名称】アムジエン・インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ウー，チャオ－シャン

【審査官】海野 佳子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１２／０３７４０７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２０１４／００３０７３２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１０－５３６３５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０５－２２７９４３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表平０６－５１１０８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平０２－０６９６５５（ＪＰ，Ａ）

【文献】Carolin Huhn, et al.，IgG glycosylation analysis，Proteomics，Wiley-VCH，2009年02月01日，9(4)，882 - 913

【文献】St Amand M M, et al.,，Development of at-line assay to monitor charge variants of MAbs during production，Biotechnology Progress，American Chemical Society，2014年01月01日，30(1)，249 - 255

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３３／４８－３３／９８

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製する方法であって、
（ａ）ポリペプチドを含む試料を、保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、
（ｂ）前記試料中のポリペプチドを、前記ポリペプチド結合カラムに結合させる工程と、
（ｃ）グリカナーゼを、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させ、前記結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させる工程と、
（ｄ）キャリア溶液を、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させて前記ポリペプチド結合カラムを通過させ、それにより、前記遊離した糖鎖を前記ポリペプチド結合カラムから出す工程と、
（ｅ）前記ポリペプチド結合カラムの下流で、前記遊離した糖鎖を糖鎖標識化試薬と混合する工程と、
（ｆ）前記遊離した糖鎖と前記糖鎖標識化試薬との混合物を、前記ポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルに移動させる工程と、
（ｇ）前記遊離した糖鎖と前記糖鎖標識化試薬との前記混合物を、前記反応コイル内でインキュベートし、それにより前記糖鎖を標識する工程と、
（ｈ）前記混合物を、前記反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させる工程と、
（ｉ）前記冷却コイルを介して前記混合物の温度を低下させる工程と、
（ｊ）前記冷却された混合物を、前記冷却コイルの下流に配置された糖鎖結合カラムに移動させる工程と、
（ｋ）前記標識糖鎖を前記糖鎖結合カラムに結合する工程と、
（ｌ）溶離バッファを前記糖鎖結合カラムに移動させて前記糖鎖結合カラムを通過させ、前記糖鎖結合カラムに結合した前記標識糖鎖を溶離する工程と
を含む、方法。

【請求項2】

（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｊ）、及び（ｌ）の１つ以上は自動的に実施される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

（ａ）～（ｌ）は、閉じたシステム内で実施される、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

（ｅ）の後、かつ（ｆ）の前に、前記冷却コイルの下流及び前記糖鎖結合カラムの上流に配置された真空装置に前記混合物を移動し、前記真空装置を使用して、前記遊離した糖鎖と前記糖鎖標識化試薬との前記混合物から気泡を実質的に除去することをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

（ｌ）の後、前記溶離した糖鎖を前記糖鎖結合カラムの下流に配置された混合チャンバを通過させ、前記標識糖鎖の溶離バッファ成分を、開始時のクロマトグラフィ移動相の条件に適合するように調整することをさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

（ａ）は、前記試料を、前記試料を収容する容器から前記ポリペプチド結合カラムに移動させることを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記容器はバイオリアクターを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

（ｇ）は、前記糖鎖を前記糖鎖標識化試薬で蛍光標識化することを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

（ｇ）は、前記反応コイル内の前記混合物に熱を加えることを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

（ｍ）前記溶離した糖鎖を、前記糖鎖結合カラムから糖鎖分析デバイスに移動させる工程をさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

（ｎ）前記糖鎖分析デバイスを使用して前記糖鎖を分離し、定量する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ポリペプチド結合カラムに流体的に結合し、前記ポリペプチド結合カラムの下流に位置する弁を、前記弁が、前記ポリペプチド結合カラムを通過して流れる前記試料の残りを廃棄物チャンバに誘導する第１の位置に移動させることをさらに含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

（ｅ）の前に、前記第１の弁が前記遊離した糖鎖を前記ポリペプチド結合カラムから出して前記糖鎖標識化試薬の方に誘導する第２の位置に、前記弁を移動させることをさせるに含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

マルチポート弁と、前記マルチポート弁の上流の保持コイルと、前記マルチポート弁の第１のポートに流体的に結合され、前記マルチポート弁の前記第１のポートの下流にあるポリペプチド結合カラムと、前記ポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルと、前記反応コイルの下流に配置された冷却コイルと、前記冷却コイルの下流に配置され、前記マルチポート弁の第２のポートに流体的に結合され、前記マルチポート弁の前記第２のポートの下流にある糖鎖結合カラムとを含む閉じたシステムにおいて糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製する方法であって、
（ａ）前記閉じたシステムに通信的に結合されたコントローラによって、ポリペプチドを含む試料を、前記ポリペプチドを収容する容器から前記保持コイルに移動させる工程と、
（ｂ）前記試料が前記ポリペプチド結合カラムに流れ、それにより、前記試料中の実質的に全ての前記ポリペプチドが前記第１のポリペプチドカラムに結合するように、前記コントローラによって、前記マルチポート弁を、前記保持コイルが前記マルチポート弁の前記第１のポートを介して前記ポリペプチド結合カラムに流体的に結合する第１の位置に配置する工程と、
（ｃ）前記マルチポート弁が前記第１の位置にあるとき、前記コントローラによって、グリカナーゼを、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させ、前記結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させ、その後、前記コントローラによって、キャリア溶液を、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させ前記ポリペプチド結合カラムを通過させ、それにより、前記遊離した糖鎖を前記ポリペプチド結合カラムから出す工程と、
（ｄ）前記コントローラによって、前記遊離した糖鎖を前記反応コイルの方に移動させる工程と、
（ｅ）糖鎖標識化試薬が前記遊離した糖鎖及び酵素と混合するように、前記コントローラによって、前記遊離した糖鎖が前記反応コイルに到達する前に前記遊離した糖鎖の方に前記糖鎖標識化試薬を移動させる工程と、
（ｆ）前記コントローラによって、前記混合物を前記反応コイルに移動させ、それにより、前記混合物中の前記糖鎖を標識する工程と、
（ｇ）前記コントローラによって、前記混合物を前記反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させ、それにより、前記混合物の温度を低下させる工程と、
（ｈ）前記コントローラによって、前記冷却された混合物を前記冷却コイルの下流に配置された糖鎖カラムに移動させ、それにより、実質的に全ての前記標識糖鎖が前記糖鎖結合カラムに結合する工程と、
（ｉ）前記コントローラによって、前記マルチポート弁を、前記糖鎖結合カラムが前記マルチポート弁の前記第２のポートを介して溶離バッファ溶液源に流体的に結合される第２の位置に配置する工程と、
（ｊ）前記マルチポート弁が前記第２の位置にあるとき、前記コントローラによって、前記溶離バッファを前記溶離バッファ源から前記糖鎖結合カラム移動させ前記糖鎖結合カラムを通過させ、それにより、前記糖鎖結合カラムに結合した糖鎖を溶離する工程と、
（ｋ）前記コントローラによって、前記溶離した糖鎖を糖鎖分析デバイスに移動させる工程と
を含む、方法。

【請求項15】

（ｅ）の後、且つ（ｆ）の前に、前記コントローラによって、前記ポリペプチド結合カラムの下流及び前記反応コイルの上流に配置された真空装置に前記混合物を移動させ、それにより、前記混合物から気泡を実質的に除去することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

（ｊ）の後、かつ（ｋ）の前に、前記コントローラによって、前記溶離した糖鎖を、前記糖鎖結合カラムの下流及び前記糖鎖分析デバイスの上流に配置された混合チャンバを通過させることをさらに含む、請求項１４又は１５に記載の方法。

【請求項17】

前記ポリペプチド結合カラムを摂氏約３８度の温度に維持するように、前記プロセッサによって、前記ポリペプチド結合カラムを制御することをさらに含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記反応コイルを摂氏約８０度の温度に維持するように、前記プロセッサによって、前記反応コイルを制御することを更に含む、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

（ｆ）は、前記コントローラによって、前記混合物を前記反応コイルに移動させ、それにより、前記混合物中の前記糖鎖を蛍光標識することを含む、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製するための閉じたシステムであって、
ポリペプチドを収容するように適合された容器と、
前記容器に流体的に結合され、前記容器から前記ポリペプチドの試料を受け取るように配置されている保持コイルと、
前記保持コイルに流体的に結合され、前記保持コイルの下流に位置するマルチポート弁と、
前記マルチポート弁に流体的に結合され、前記保持コイルから前記マルチポート弁の第１のポートを介して前記試料を受け取るように配置されたポリペプチド結合カラムと、
グルカナーゼが前記ポリペプチド結合カラムに結合した前記ポリペプチドに注入されるように、前記マルチポート弁に流体的に結合され、前記ポリペプチド結合カラムに前記グルカナーゼを供給するように配置されたグルカナーゼ源と、
前記マルチポート弁に流体的に結合され、前記ポリペプチド結合カラムにキャリア溶液を供給するように配置されたキャリア溶液源であって、前記キャリア溶液は、前記ポリペプチド結合カラムから糖鎖を遊離させ、運ぶように適合されている、キャリア溶液源と、
前記ポリペプチド結合カラムの下流に配置された第１のポンプであって、糖鎖標識化試薬が前記糖鎖と混合されるように、前記糖鎖標識化試薬を、前記ポリペプチド結合カラムから運ばれた前記遊離した糖鎖の方に誘導する第１のポンプと、
前記ポリペプチド結合カラム及び前記第１のポンプの下流に配置された反応コイルであって、前記糖鎖標識化試薬と前記遊離した糖鎖とを含む前記混合物を受け取り、前記遊離した糖鎖の標識化を可能にするように適合されている、反応コイルと、
前記反応コイルの下流に配置され、前記反応コイルから前記混合物を受け取るように適合された冷却コイルであって、前記混合物の温度を低下するように構成されている、冷却コイルと、
前記冷却コイルと、前記マルチポート弁の第２のポートを介して前記マルチポート弁とに流体的に結合された糖鎖結合カラムであって、実質的に全ての前記標識糖鎖を結合するように構成されており、前記マルチポート弁の前記第２のポートを介して溶離バッファ溶液を受け取るように適合されており、前記溶離バッファ溶液は、結合した標識糖鎖を溶離し、前記溶離した標識糖鎖を前記糖鎖結合カラムの下流の糖鎖分析デバイスに運ぶ、糖鎖結合カラムと
を含む、閉じたシステム。

【請求項21】

前記容器はバイオリアクターを含む、請求項２０に記載のシステム。

【請求項22】

前記反応コイルの上流、並びに前記ポリペプチド結合カラム及び前記第１のポンプの下流に配置された真空装置をさらに含み、前記真空装置は、前記糖鎖標識化試薬と前記遊離した糖鎖とを含む前記混合物から気泡を実質的に除去するように構成されている、請求項２０又は２１に記載のシステム。

【請求項23】

前記ポリペプチド結合カラムの下流及び前記反応コイルの上流に配置された混合チャンバをさらに含み、前記混合チャンバは、前記標識糖鎖の溶離バッファ成分を、開始時のクロマトグラフィ移動相の条件に適合するように調整することを促進する、請求項２０～２２のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項24】

前記マルチポート弁は、１２個のサテライトポート及び中心共通ポート弁を含む、請求項２０～２３のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項25】

前記ポリペプチド結合カラムは、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム、プロテインＡ／Ｇカラム、プロテインＬカラム、アミノ酸カラム、アビジンカラム、ストレプトアビジンカラム、炭水化物結合カラム、炭水化物カラム、グルタチオンカラム、ヘパリンカラム、疎水性相互作用カラム、イムノアフィニティカラム、ヌクレオチド／補酵素カラム、特殊カラム、及び固定化金属アフィニティクロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）カラムからなる群から選択される、請求項２０～２４のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項26】

前記グルカナーゼは、エンドグリコシダーゼ、グリコサミダーゼ、及びＯ－グリカナーゼ、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２０～２５のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項27】

前記エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＤ、エンドグリコシダーゼＦ（エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、及びエンドグリコシダーゼＦ３、並びにこれらの組み合わせ）、エンドグリコシダーゼＨ、エンドグリコシダーゼＳ、エンドグリコシダーゼＭ、及びエンドグリコシダーゼＢからなる群から選択される、請求項２６に記載のシステム。

【請求項28】

前記グリコサミダーゼは、グリコペプチダーゼ、ペプチドＮ－グリコシダーゼ、ＰＮＧａｓｅ、Ｎ－グリコヒドロラーゼ、及びＮ－グリカナーゼからなる群から選択され、任意選択的に、前記ＰＮＧａｓｅはペプチド：Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧＦ）である、請求項２６に記載のシステム。

【請求項29】

前記Ｏ－グリカナーゼは、ｅｎｄｏ－ＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ｄ又はｅｎｄｏＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ａである、請求項２６に記載のシステム。

【請求項30】

前記糖鎖標識化試薬は、蛍光団又は発色団であり、
任意選択的に、前記蛍光団は、２－アミノ安息香酸、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸二ナトリウム塩、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩、及びアントラニルアミド、４－メトキシベンズアミジンからなる群から選択される、又は、前記発色団は、３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン、又はフェニルヒドラジンを含む、請求項２０～２９のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項31】

前記糖鎖結合カラムは、多孔質黒鉛状炭素カラムである、請求項２０～３０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項32】

前記マルチポート弁の上流に配置された、前記ポリペプチドの前記試料を前記容器から前記保持コイルに圧送するための第２のポンプをさらに含む、請求項２０～３１のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項33】

（ｉ）前記マルチポート弁の前記第１のポート及び前記第２のポートを選択的に開閉するように構成された、前記マルチポート弁に通信的に結合されたコントローラ、及び／又は、
（ｉｉ）前記反応コイルを摂氏約８０度の温度に維持するように構成された、前記反応コイルに直接隣接して配置された加熱要素
をさらに含む、請求項２０～３２のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項34】

糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製するための閉じたシステムであって、
マルチポート弁と、
前記マルチポート弁の上流の保持コイルと、
前記マルチポート弁の第１のポートに流体的に結合され、前記マルチポート弁の前記第１のポートの下流にあるポリペプチド結合カラムと、
前記ポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルと、
前記反応コイルの下流に配置された冷却コイルと、
前記冷却コイルに流体的に結合し、前記冷却コイルの下流にある糖鎖結合カラムであって、前記マルチポート弁の第２のポートを介して前記マルチポート弁に流体的に結合される、糖鎖結合カラムと、
前記マルチポート弁に通信的に結合されたコントローラであって、メモリと、プロセッサと、前記メモリに記憶された論理とを含み、前記論理は、
（ａ）ポリペプチドを含有する試料を前記保持コイルに移動させ、
（ｂ）前記試料が前記第１のカラムに流れ、それにより、前記試料中の実質的に全ての前記ポリペプチドが前記ポリペプチド結合カラムに結合するように、前記マルチポート弁を、前記保持コイルが前記マルチポート弁の前記第１のポートを介して前記ポリペプチド結合カラムに流体的に結合する第１の位置に配置し、
（ｃ）前記マルチポート弁が前記第１の位置にあるとき、グルカナーゼを、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させ、前記結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させ、その後、キャリア溶液を、前記保持コイルを介して前記ポリペプチド結合カラムに移動させ前記ポリペプチド結合カラムを通過させて、それにより、実質的に全ての前記遊離した糖鎖を前記ポリペプチド結合カラムから出し、
（ｄ）前記遊離した糖鎖を前記反応コイルの方に移動させ、
（ｅ）糖鎖標識化試薬が前記遊離した糖鎖と混合するように、前記遊離した糖鎖が前記反応コイルに到達する前に、前記遊離した糖鎖の方に前記糖鎖標識化試薬を移動させ、
（ｆ）前記遊離した糖鎖と前記糖鎖標識化試薬との前記混合物を前記反応コイルに移動させ、それにより、前記混合物中の前記糖鎖を標識し、
（ｇ）前記混合物を前記反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させ、前記冷却コイルは前記混合物の温度を低下させ、
（ｈ）前記混合物を前記糖鎖結合カラムに移動させ、それにより、前記標識糖鎖は前記糖鎖結合カラムに結合し、
（ｉ）前記マルチポート弁を、前記糖鎖結合カラムが前記マルチポート弁の前記第２のポートを介して溶離バッファ溶液源に流体的に結合される第２の位置に配置し、
（ｊ）前記マルチポート弁が前記第２の位置にあるとき、溶離バッファ溶液を前記溶離バッファ溶液源から前記糖鎖結合カラムに移動させ前記糖鎖結合カラムを通過させ、それにより、前記糖鎖結合カラムに結合した糖鎖を溶離する
ように、前記プロセッサによって実行可能である、コントローラと
を含む、閉じたシステム。

【請求項35】

（Ａ）前記糖鎖標識化試薬と前記遊離した糖鎖とを含む前記混合物から気泡を実質的に除去するように構成された、前記反応コイルの上流、並びに前記ポリペプチド結合カラム及び前記第１のポンプの下流に配置された真空装置、及び／又は、
（Ｂ）前記標識糖鎖の溶離バッファ成分を、開始時のクロマトグラフィ移動相の条件に適合するように調整することを促進する、前記ポリペプチド結合カラムの下流及び前記反応コイルの上流に配置された混合チャンバ
をさらに含む請求項３４に記載のシステム。

【請求項36】

（Ａ）前記論理は、前記試料を、前記試料を収容する容器から前記保持コイルに移動させるように前記プロセッサによって実行可能であり、
（Ｂ）前記容器はバイオリアクターを含み、
（Ｃ）前記論理は、前記溶離した糖鎖を前記糖鎖結合カラムから糖鎖分析デバイスに移動させるように前記プロセッサによって実行可能であり、
（Ｄ）前記ポリペプチド結合カラムは、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム、プロテインＡ／Ｇカラム、プロテインＬカラム、アミノ酸カラム、アビジンカラム、ストレプトアビジンカラム、炭水化物結合カラム、炭水化物カラム、グルタチオンカラム、ヘパリンカラム、疎水性相互作用カラム、イムノアフィニティカラム、ヌクレオチド／補酵素カラム、特殊カラム、及び固定化金属アフィニティクロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）カラムからなる群から選択され、
（Ｅ）前記グルカナーゼは、エンドグリコシダーゼ、グリコサミダーゼ、及びＯ－グリカナーゼ、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択され、又は、
（Ｆ）上記の組み合わせである、
請求項３４又は３５に記載のシステム。

【請求項37】

前記（Ｅ）について、
（ｉ）前記エンドグリコシダーゼは、ｅｎｄｏ Ｄ、エンドグリコシダーゼＦ（エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、及びエンドグリコシダーゼＦ３、並びにこれらの組み合わせ）、エンドグリコシダーゼＨ、ｅｎｄｏ Ｓ、ｅｎｄｏ Ｍ、及びｅｎｄｏ Ｂからなる群から選択され、
（ｉｉ）前記グリコサミダーゼは、グリコペプチダーゼ、ペプチドＮ－グリコシダーゼ、ＰＮＧａｓｅ、Ｎ－グリコヒドロラーゼ、及びＮ－グリカナーゼからなる群から選択され、任意選択的に、前記ＰＮＧａｓｅは、ペプチド：Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧＦ）であり、及び／又は、
（ｉｉｉ）前記Ｏ－グリカナーゼは、ｅｎｄｏ－ＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ｄ又はｅｎｄｏＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ａである、
請求項３６に記載のシステム。

【請求項38】

前記糖鎖結合カラムは、多孔質黒鉛状炭素カラムである、請求項３４～３７のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項39】

前記糖鎖標識化試薬は、蛍光団又は発色団であり、任意選択的に、前記蛍光団は、２－アミノアクリドン、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸二ナトリウム塩、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩、及びアントラニルアミド、４－メトキシベンズアミジンからなる群から選択され、又は、前記発色団は、３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン、又はフェニルヒドラジンを含む、請求項３４～３８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項40】

前記コントローラは、前記ポリペプチド結合カラムを摂氏約３８度、任意選択的に、摂氏約８０度の温度に維持するように構成されている、請求項３４～３９のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項41】

前記試料中の前記ポリペプチドは、治療的ポリペプチドである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法又は請求項２０～４０のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項42】

前記治療的ポリペプチドは、抗体又はその抗原結合フラグメント、抗体又は抗体フラグメントの誘導体、及び融合ポリペプチドからなる群から選択され、
任意選択的に、前記抗体は、インフリキシマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、パリビズマブ、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、アラシズマブペゴル、ａｌｄ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アルチヌマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、トシリズマブ、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビバツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃｃ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、クレネズマブ、ｃｒ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デミシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エピラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エキシビビルマブ、エキシビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ｆｂｔａ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ｇｓ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ－ｃｄ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パジバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピジリズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチデ、セクキヌマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、トレメリムマブ、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトクス、及び表１に示す抗体からなる群から選択され、又は、
前記治療的ポリペプチドは、糖タンパク質、ＣＤポリペプチド、ＨＥＲ受容体ポリペプチド、細胞接着ポリペプチド、成長因子ポリペプチド、インスリンポリペプチド、インスリン関連ポリペプチド、凝固ポリペプチド、凝固関連ポリペプチド、アルブミン、ＩｇＥ、血液型抗原、コロニー刺激因子、受容体、神経栄養因子、インターフェロン、インターロイキン、ウイルス抗原、リポタンパク質、カルシトニン、グルカゴン、心房性ナトリウム利尿因子、肺表面活性剤、腫瘍壊死因子α及びβ、エンケファリナーゼ、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮＡｓｅ、インヒビン、アクチビング、インテグリン、プロテインＡ、プロテインＤ、リウマチ因子、免疫毒素、骨形成タンパク質、スーパーオキシドジスムターゼ、表面膜ポリペプチド、崩壊促進因子、ＡＩＤＳエンベロープ、輸送ポリペプチド、ホーミング受容体、アドレシン、調節ポリペプチド、イムノアドヘシン、ミオスタチン、ＴＡＬＬポリペプチド、アミロイドポリペプチド、胸腺間質性リンパ球新生因子、ＲＡＮＫリガンド、ｃ－キットポリペプチド、ＴＮＦ受容体、及びアンジオポエチン、及びそれらの生物学的に活性なフラグメント、アナログ、又はバリアントからなる群から選択されるポリペプチドである、請求項４１に記載の方法又はシステム。

【請求項43】

請求項２０又は３４に記載の閉じたシステムによって実施されるオンラインリアルタイムアッセイを監視する方法であって、
前記閉じたシステム内の条件が、所定の性能閾値を満たすかどうかを判断する工程と、
前記閉じたシステム内の前記条件が、前記所定の性能閾値を満たしていないと判断した場合に、前記閉じたシステム内の前記条件が、前記所定の性能閾値を満たすまで少なくとも１つの細胞培養構成要素を調整する工程と
を含み、
任意選択的に、少なくとも１つの細胞培養構成要素を調整する工程は、ｐＨ、圧力、温度、媒体流、媒体含有量、ガス供給戦略、撹拌、添加剤含有量、添加剤供給量、又は潅流量のうちの１つ以上を調整することを含む、方法。

【請求項44】

請求項２０又は３４に記載の閉じたシステムを使用して生産時間を延長する方法であって、
前記閉じたシステム内の条件が、所定の性能閾値を満たすかどうかを判断する工程と、
前記閉じたシステム内の前記条件が、前記所定の性能閾値を満たしていないと判断した場合に、前記閉じたシステム内の前記条件が、前記所定の性能閾値を満たすまで少なくとも１つの細胞培養構成要素を調整する工程と
を含み、
任意選択的に、少なくとも１つの細胞培養構成要素を調整する工程は、ｐＨ、圧力、温度、媒体流、媒体含有量、ガス供給戦略、撹拌、添加剤含有量、添加剤供給量、又は潅流量のうちの１つ以上を調整することを含む、方法。

【請求項45】

リスクを軽減する方法であって、
請求項２０又は３４に記載の前記閉じたシステムの運転に関連するプロセス及び製品品質データを決定する工程と、
前記プロセス及び製品品質データが、所定のリスク閾値を満たすかどうかを判断する工程と、
前記プロセス及び製品品質データが、前記所定のリスク閾値を満たすかどうかに基づき、前記閉じたシステムの運転を継続するかどうかを判断する工程と
を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１７年８月１日に出願された「Ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｅｒｆｏｒｍｉｎｇ ａ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｇｌｙｃａｎ Ａｓｓａｙ ｏｆ ａ Ｓａｍｐｌｅ」という名称の米国仮特許出願第６２／５３９，７９８号明細書の優先権の利益を主張し、その開示全体を参照により本明細書に援用する。

【0002】

本開示は、全般的に、糖鎖アッセイに関し、より具体的には、試料のリアルタイム糖鎖アッセイの実施に関する。

【0003】

配列表
本願は、電子フォーマットの配列表とともに出願されている。「５１９７０＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名称のファイルとして提出された配列表は、２０１８年７月３１日に作成され、サイズは２６３，９８０バイトである。電子フォーマットの配列表における情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0004】

アッセイは、一般に、薬物、生化学的物質、又は細胞などの分析物の１つ以上の属性を定量化するために実施される。このようなアッセイの一例は、試料の重要品質特性（ＣＱＡ：Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ Ａｔｔｒｉｂｕｔｅ）（目標製品品質プロファイル（ＱＴＰＰ：Ｑｕａｌｉｔｙ Ｔａｒｇｅｔ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｒｏｆｉｌｅ）により特定される）を検出し、定量化することができる多属性法（ＭＡＭ：ｍｕｌｔｉ－ａｔｔｒｉｂｕｔｅ ｍｅｔｈｏｄ）アッセイである（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｍｕｌｔｉ－ａｔｔｒｉｂｕｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｒｏｇｅｒｓ ＲＳ，Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ＮＳ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｂ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｐ，Ｂａｉｌｅｙ Ｒ，Ｂａｌｌａｎｄ Ａ．ＭＡｂｓ．２０１５；７（５）：８８１－９０）。ＭＡＭアッセイは、例えば、高分子遊離試験（ＬＭＲＴ）実験室内で実施される手動操作プロセスである。ＭＡＭは、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）－質量分析法（ＭＳ）をベースとしたペプチドマッピング法であり、以下の３工程を有する：（１）試料調製（例えば、ポリペプチド変性、還元、アルキル化、及び消化を含み得る）、（２）ＬＣによる消化ポリペプチドの分離及びそれらのＭＳによる検出、並びに（３）目的ＣＱＡに関するデータの分析及び参照基準と比較した場合の新たな信号（即ちピーク）の検出。

【0005】

ＣＱＡは、特定の値又は範囲値内に存在する化学的、物理的又は生物学的特性である。例えば、ポリペプチド治療的高分子において、物理的属性及びアミノ酸（ポリペプチドの構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ））の修飾は重要なＣＱＡであり、製造中及び製造後、並びに薬物開発中に監視される。ポリペプチド全体又は一部のピークサイズ及びピーク形状の変化を追跡する従来の分析アッセイとは異なり、ＭＡＭはアミノ酸レベルにおける特定のＣＱＡを検出する。

【0006】

治療用ポリペプチドの糖鎖プロファイルの分析は、多くの場合、ＣＱＡ、例えば、である。これはバイオ後続品の場合に特に当てはまり、バイオ後続品のグリコシル化プロファイルは、先行製品のグリコシル化プロファイルと同等でなければならない。糖鎖アッセイを実施するための既知のプロセスでは、製品の試料を、分析のために、手動で収集し、試験室に届け、手動で濃縮し、精製し、例えば、調製することが必要である。これらの既知の手動操作プロセスの典型的な所要時間は約５日である。この時間経過によりコストがかさむとともに、薬物（先行製品及びバイオ後続品）の開発及び結果的な薬物発売が遅延する。薬物開発中、例えば、最適なグリコシル化のための培養条件を最適化するときに例えば５日の遅れが蓄積し、重要且つ新規のポリペプチド医薬品を患者に届けることを妨げる。更に、このような遅延により、製造後にプロファイルが決定されることとなり、製造パラメータをリアルタイムで調整することとは対照的に、仕様を満たさない製品を再製造することになる。したがって、糖鎖分析を、こうした分析のための試料調製を含め、促進するための効率的且つより迅速な方法が必要とされている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【文献】Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｍｕｌｔｉ－ａｔｔｒｉｂｕｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ．Ｒｏｇｅｒｓ ＲＳ，Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ＮＳ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｂ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｐ，Ｂａｉｌｅｙ Ｒ，Ｂａｌｌａｎｄ Ａ．ＭＡｂｓ．２０１５；７（５）：８８１－９０

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示の一態様は、糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製する方法を提供する。本方法は、（ａ）ポリペプチドを含む試料を保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに移動させる工程と、（ｂ）試料中のポリペプチドをポリペプチド結合カラムに結合させる工程と、（ｃ）グリカナーゼを保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに移動させ、結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させる工程と、（ｄ）キャリア溶液を、保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに、及びポリペプチド結合カラムを通して移動させ、それにより、遊離した糖鎖を第１のポリペプチドカラムから出す工程と、（ｅ）ポリペプチド結合カラムの下流で、遊離した糖鎖を糖鎖標識化試薬と混合する工程と、（ｆ）遊離した糖鎖と糖鎖標識化試薬との混合物をポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルに移動させる工程と、（ｇ）遊離した糖鎖と糖鎖標識化試薬との混合物を反応コイル内でインキュベートし、それにより糖鎖を標識する工程と、（ｈ）混合物を反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させる工程と、（ｉ）冷却コイルにより混合物の温度を低減させる工程と、（ｊ）冷却された混合物を冷却コイルの下流に配置された糖鎖結合カラムに移動させる工程と、（ｋ）標識糖鎖を糖鎖結合カラムに結合する工程と、（ｌ）溶離バッファを糖鎖結合カラムに及び糖鎖結合カラムを通して移動させ、糖鎖結合カラムに結合した標識糖鎖を溶離する工程と、を含む。

【0009】

本開示の別の態様は、マルチポート弁と、マルチポート弁の上流の保持コイルと、マルチポート弁の第１のポートに流体的に結合され、マルチポート弁の第１のポートの下流にあるポリペプチド結合カラムと、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルと、反応コイルの下流に配置された冷却コイルと、冷却コイルの下流に配置され、マルチポート弁の第２のポートに流体的に結合され、マルチポート弁の第２のポートの下流にある糖鎖結合カラムとを含む閉じたシステムにおいて糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製する方法を提供する。本方法は、（ａ）閉じたシステムに通信的に結合されたコントローラによって、ポリペプチドを含む試料を、ポリペプチドを収容する容器から保持コイルに移動させることと、（ｂ）試料がポリペプチド結合カラムに流れ、それにより、試料中の実質的に全てのポリペプチドが第１のポリペプチドカラムに結合するように、コントローラによって、マルチポート弁を、保持コイルがマルチポート弁の第１のポートを介してポリペプチド結合カラムに流体的に結合する第１の位置に配置することと、（ｃ）マルチポート弁が第１の位置にあるとき、コントローラによって、グリカナーゼを保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに移動させ、結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させることと、その後、コントローラによって、キャリア溶液を、保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに、及びポリペプチド結合カラムを通して移動させ、それにより、遊離した糖鎖をポリペプチド結合カラムから出すことと、（ｄ）コントローラによって、遊離した糖鎖を反応コイルの方に移動させることと、（ｅ）糖鎖標識化試薬が遊離した糖鎖及び酵素と混合するように、コントローラによって、遊離した糖鎖が反応コイルに到達する前に遊離した糖鎖の方に糖鎖標識化試薬を移動させることと、（ｆ）コントローラによって、混合物を反応コイルに移動させ、それにより、混合物中の糖鎖を標識することと、（ｇ）コントローラによって、混合物を反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させ、それにより、混合物の温度を低減することと、（ｈ）コントローラによって、冷却された混合物を冷却コイルの下流に配置された糖鎖カラムに移動させ、それにより、実質的に全ての標識糖鎖が糖鎖結合カラムに結合することと、（ｉ）コントローラによって、マルチポート弁を、糖鎖結合カラムがマルチポート弁の第２のポートを介して溶離バッファ溶液源に流体的に結合される第２の位置に配置することと、（ｊ）マルチポート弁が第２の位置にあるとき、コントローラによって、溶離バッファを溶離バッファ源から糖鎖結合カラムに、及び糖鎖結合カラムを通して移動させ、それにより、糖鎖結合カラムに結合した糖鎖を溶離することと、（ｋ）コントローラによって、溶離した糖鎖を糖鎖分析デバイスに移動させることと、を含む。

【0010】

本開示の別の態様は、糖鎖分析のために試料をリアルタイムで調製するための閉じたシステムを提供する。閉じたシステムは、マルチポート弁と、マルチポート弁の上流の保持コイルと、マルチポート弁の第１のポートに流体的に結合され、マルチポート弁の第１のポートの下流にあるポリペプチド結合カラムと、ポリペプチド結合カラムの下流に配置された反応コイルと、反応コイルの下流に配置された冷却コイルと、冷却コイルに流体的に結合し、冷却コイルの下流にある糖鎖結合カラムであって、マルチポート弁の第２のポートを介してマルチポート弁に流体的に結合される、糖鎖結合カラムと、マルチポート弁に通信的に結合されたコントローラと、を含む。コントローラは、メモリと、プロセッサと、メモリに記憶された論理とを含み、論理は、（ａ）ポリペプチドを含有する製品の試料を保持コイルに移動させ、（ｂ）試料が第１のカラムに流れ、それにより、試料中の実質的に全てのポリペプチドがポリペプチド結合カラムに結合するように、マルチポート弁を、保持コイルがマルチポート弁の第１のポートを介してポリペプチド結合カラムに流体的に結合する第１の位置に配置し、（ｃ）マルチポート弁が第１の位置にあるとき、グルカナーゼを保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに移動させ、結合されたポリペプチドから糖鎖を遊離させ、その後、キャリア溶液を、保持コイルを介してポリペプチド結合カラムに、及びポリペプチド結合カラムを通して移動させ、それにより、実質的に全ての遊離した糖鎖をポリペプチド結合カラムから出し、（ｄ）遊離した糖鎖を反応コイルの方に移動させ、（ｅ）糖鎖標識化試薬が遊離した糖鎖と混合するように、遊離した糖鎖が反応コイルに到達する前に遊離した糖鎖の方に糖鎖標識化試薬を移動させ、（ｆ）遊離した糖鎖と糖鎖標識化試薬との混合物を反応コイルに移動させ、それにより、混合物中の糖鎖を標識し、（ｇ）混合物を反応コイルの下流に配置された冷却コイルに移動させ、冷却コイルは混合物の温度を低減させ、（ｈ）混合物を糖鎖結合カラムに移動させ、それにより、標識糖鎖は糖鎖結合カラムに結合し、（ｉ）マルチポート弁を、糖鎖結合カラムがマルチポート弁の第２のポートを介して溶離バッファ溶液源に流体的に結合される第２の位置に配置し、（ｊ）マルチポート弁が第２の位置にあるとき、溶離バッファ溶液を溶離バッファ溶液源から糖鎖結合カラムに、及び糖鎖結合カラムを通して移動させ、それにより、糖鎖結合カラムに結合した糖鎖を溶離するように、プロセッサによって実行可能である。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】本開示の教示に従い組み立てられたオンラインリアルタイム糖鎖アッセイを実施するためのシステムの概略図である。

【図2】図１に示されるシステムのコントローラの概略図である。

【図3A】図１のシステムの有効性を３２日の生産時間にわたり監視した研究結果を示すグラフである。

【図3B】図１のシステムの有効性を３２日の生産時間にわたり監視した研究結果を示すグラフである。

【図3C】図３Ａの４日間にわたる結果のスナップショットを示すグラフである。

【図3D】研究結果を示す更なるグラフである。

【図3E】研究結果を示す更なるグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0012】

図１は、本開示の教示に従い組み立てられたシステム１００の概略図を示す。実験室（例えば、高分子遊離試験実験室）に又はその中に位置し得るシステム１００は、以下に更に詳細に記載するように、糖鎖分析のためにポリペプチドを含有する製品の試料を自動的に又は実質的に自動的に調製し、その試料の糖鎖アッセイを自動的に実施するための閉じたシステムである。システム１００を使用して本プロセスを自動化する（又は実質的に自動化する）ことによって、アッセイを、全プロセスをわずか数時間（例えば、２～３時間）で実施することができ且つ所望の結果を得ることができるように、リアルタイムで（又は実質的にリアルタイムで）実施することができ、これは従来知られている手動操作プロセスに通常必要な５日に比べると大幅な向上である。更に、システム１００を用いるプロセスの閉じた性質により滅菌条件を維持する。

【0013】

この態様では、ポリペプチドは治療的ポリペプチドである。治療的ポリペプチドについては以下で論じる。

【0014】

図１に示されるシステム１００は、概して、マルチポート弁１０４と、保持コイル１０８と、第１のカラム１１２と、反応コイル１２０と、第２のカラム１２４と、コントローラ１３２とを含む。図１に示される態様では、システム１００はまた、容器１３６と、廃棄物チャンバ１３８と、第１のポンプ１４０と、酵素源１４２と、第１のバッファ源１４４と、第２のポンプ１４６と、第２のバッファ源１４８と、真空装置１５０と、冷却コイル１５２と、第３のバッファ源１５４と、第４のバッファ源１５６と、混合チャンバ１５７と、糖鎖を分析するための分析デバイス１５８とを含む。しかしながら、他の態様においては、システム１００はこれらの構成要素の１つ以上を含まなくてもよい。一例として、システム１００は、容器１３６、真空装置１５０、冷却コイル１５２、及び／又は分析デバイス１５８を含まなくてもよい。いずれにせよ、以下に更に詳細に記載するように、所望するときにシステム１００の構成要素間の流体連通を容易にするように、概して、従来の配管がシステム１００の各構成要素間に延びる。

【0015】

マルチポート弁１０４は、概して、システム１００の各種構成要素間の流体連通を制御するように構成されている。この態様では、マルチポート弁１０４は、１２個のサテライトポート及び中心共通ポートを有する弁である。換言すると、マルチポート弁１０４は、中心ポート１６０と、中心ポート１６０に選択的に流体的に結合される１２個のサテライトポート１６４～１７５とを有する。マルチポート弁１０４は、中心ポート１６０をそれぞれ１２個の異なるサテライトポート１６４～１７５と流体的に結合する１２個の異なる位置間で移動可能である（そのうちのいくつかは図１のシステム１００の運転において利用されない）。他の態様においては、マルチポート弁１０４は、より多い又はより少ないサテライトポートを有することができる、異なるタイプの弁であり得る、又は１つ以上の異なる弁（それぞれが１つ以上のポートを有する）に置換することができる。一例として、マルチポート弁１０４は、コントローラ１３２に別々に接続され且つコントローラ１３２によって制御される複数の単一ポート弁に置換することができ、単一ポート弁のそれぞれはサテライトポート１６４～１７５の１つを効果的に置換する。

【0016】

容器１３６は、概して、調製され、分析される糖鎖を有するポリペプチドを含有する製品を保持する又は貯蔵するように構成されている。この態様における容器１３６は、製品を保持する又は貯蔵するバイオリアクターの形態をとる。しかしながら、その代わりに、他の態様においては、容器１３６は、フラスコ、プレート等などの細胞培養容器の形態をとることができる。弁１０４が、容器１３６内に収容された製品の試料を所望するときに容器１３６から得ることができるように、容器１３６は、配管の導管１８０を介して弁１０４のサテライトポート１６４に流体的に結合されている。

【0017】

保持コイル１０８は弁１０４の上流に位置し、配管の導管１８４を介して弁１０４の中心ポート１６０に流体的に結合されている。したがって、保持コイル１０８は、中心ポート１６０がサテライトポート１６４に流体的に結合される第１の位置に弁１０４があるとき、弁１０４を介して容器１３６から製品の試料を受け取るように配置されている。

【0018】

第１のポンプ１４０は保持コイル１０８の上流に位置し、配管の導管１８８を介して保持コイル１０８に流体的に結合されている。以下に更に詳細に記載するように、この態様におけるポンプ１４０は、一般に、各種材料を得るのに役立つように、且つそれら材料をシステム１００の各種構成要素に及び各種構成要素間で移動するのに役立つように構成されたシリンジポンプの形態をとる。他の態様においては、ポンプ１４０は、異なるタイプのポンプであり得る並びに／又は複数のポンプ１４０を異なる材料に対して及び／若しくは異なる構成要素に材料を出力するために使用することができる。

【0019】

弁１９２は、第１のポンプ１４０と保持コイル１０８との間に位置し、第１のポンプ１４０を保持コイル１０８に選択的に流体的に結合する。より具体的には、弁１９２は、ポンプ１４０が保持コイル１０８に流体的に結合される第１の位置と、ポンプ１４０が保持コイル１０８から流体的に分離される第２の位置との間で移動可能である。換言すると、ポンプ１４０は、弁１９２の位置に応じて保持コイル１０８に選択的に流体的に結合される。

【0020】

所望するとき、及び弁１０４が第１の位置（中心ポート１６０がサテライトポート１６４に流体的に結合される）にあり、弁１９２が第１の位置にあるとき、第１のポンプ１４０は、弁１０４を介した容器１３６から保持コイル１０８への製品の試料の移動を促進することができる。製品の試料は、更に、結合のために第１のカラム１１２に送られ得る。

【0021】

第１のカラム１１２は弁１０４の下流に位置し、配管の導管１９６を介して弁１０４のサテライトポート１６５に流体的に結合された入口を有する。したがって、中心ポート１６０がサテライトポート１６５に流体的に結合される第２の位置に弁１０４があるとき、第１のポンプ１４０は、製品の試料を保持コイル１０８から弁１０４を介して第１のカラム１１２へと移動させる（例えば、圧送する、送る）ことができる。第１のカラム１１２は、第１のカラム１１２を廃棄物チャンバ１３８又は反応コイル１２０のいずれかと選択的に流体的に接続するように構成された三方弁１９８に流体的に結合される出口を有する。より具体的には、三方弁１９８は、第１のカラム１１２が廃棄物チャンバ１３８に流体的に結合され、真空装置１５０から流体的に分離される第１の位置と、第１のカラム１１２が真空装置１５０に流体的に結合され、廃棄物チャンバ１３８から流体的に分離される第２の位置との間で移動可能である。この態様では、（例えば、コントローラ１３２による、弁１９８に電流を適用することによる）三方弁１９８の作動に応答して三方弁１９８が第１の位置から第２の位置にのみ移動するように、三方弁１９８の第１の位置がデフォルト位置である。しかしながら、他の態様においては、三方弁１９８の第２の位置がデフォルト位置であってもよい。いずれにせよ、第１のカラム１１２が試料を受け取るとき、第１のカラム１１２はそれを通って試料が流れる際に、試料の実質的に全てのポリペプチドを結合するように構成されており、三方弁１９８はその第１の位置にある。このようにして、第１のカラム１１２は、試料中のポリペプチドを、三方弁１９８を介して廃棄物チャンバ１３８に送られ得る試料の残りから実質的に分離する。

【0022】

本明細書においては、ポリペプチド結合カラムとも呼ぶことができる第１のカラム１１２は、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム、プロテインＡ／Ｇカラム、プロテインＬカラム、アミノ酸カラム、アビジンカラム、ストレプトアビジンカラム、炭水化物結合カラム、炭水化物カラム、グルタチオンカラム、ヘパリンカラム、疎水性相互作用カラム、イムノアフィニティカラム、ヌクレオチド／補酵素カラム、特殊カラム、及び固定化金属アフィニティクロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）カラムからなる群から選択される。例えば、サブクラス１、２、又は４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、又はＩｇＥのヒトＩｇＧ（及びヒトＶＨ３ファミリーのヒトＦｃ部分及び／又はＦａｂ領域を含む）であるポリペプチドの場合にはプロテインＡカラムが有用である。プロテインＧは、サブクラス１～４のヒトＩｇＧを精製するために使用することができる。融合タンパク質はプロテインＡ及びプロテインＧの結合部位を提供するので、組換え融合タンパク質Ａ／Ｇもまた、これらのヒト抗体のクラス全てを精製するために使用することができる。したがって、プロテインＡ／Ｇ融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＭを精製するために使用することができる。更に、プロテインＬは、標的抗体が適切なカッパ（κ）サブタイプ軽鎖（即ち、ＶκＩ、ＶκＩＩＩ、及びＶκＩＶサブタイプ）を有するという条件で、ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤを精製するために使用することができ、プロテインＬは抗体の可変（Ｖ）鎖に結合するので、プロテインＬは、適切なκ鎖サブタイプも有するＦａｂフラグメント及びｓｃＦｖフラグメントを精製するためにも使用することができる。

【0023】

試料の実質的に全てのポリペプチドが第１のカラム１１２に結合した後、配管の導管２００を介して弁１０４のサテライトポート１６６に流体的に結合された酵素源１４２によって、グルカナーゼを含有する（例えば、からなる）溶液がシステム１００に供給される。この態様では、グルカナーゼを含有する溶液は、弁１０４が、中心ポート１６０がサテライトポート１６６に流体的に結合される第３の位置にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるときに、弁１０４を通って及びポンプ１４０の支援を得て保持コイル１０８に移動する。更に、グルカナーゼを含有する溶液は、弁１０４が第２の位置（中心ポート１６０がサテライトポート１６５に流体的に結合される）にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるとき、弁１０４を通って及び再びポンプ１４０の支援を得て保持コイル１０８から第１のカラム１１２に移動する。しかしながら、他の態様においては、グルカナーゼを含有する溶液は、第１のカラム１１２に異なる手法で（例えば、ポンプ１４０の支援なしに第１のカラム１１２に直接的に）供給され得る。いずれにせよ、グルカナーゼを含有する溶液が第１のカラム１１２に到達すると、溶液中のグルカンス（ｇｌｕｃａｎｓｅｓ）は第１のカラム１１２に結合したポリペプチドを温浸する。温浸は、一般に、第１のカラム１１２をインキュベートすることによって促進され、この態様では、第１のカラム１１２を約３５℃～約４０℃の温度に、より好ましくは、約３７℃の温度に維持することによって行われる。この目的のため、第１のカラム１１２を所望の温度に維持するのに必要な熱を供給するために、加熱要素（例えば、加熱コイル、誘導加熱器、ヒートポンプ、カートリッジヒータ）を第１のカラム１１２に接続することができる。いずれにせよ、溶液中のグルカンス（ｇｌｕｃａｎｓｅｓ）での温浸は、結合したポリペプチドの糖鎖を、結合したポリペプチドから溶液中に遊離する役割を果たすと理解される。

【0024】

溶液中のグルカナーゼは、エンドグリコシダーゼ、グリコサミダーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｄａｓｅ）、及びＯ－グリカナーゼ、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択されることが好ましい。グルカナーゼがエンドグリコシダーゼである又はエンドグリコシダーゼを含む場合、エンドグリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼＤ、エンドグリコシダーゼＦ（エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、及びエンドグリコシダーゼＦ３、並びにこれらの組み合わせ）、エンドグリコシダーゼＨ、エンドグリコシダーゼＳ、エンドグリコシダーゼＭ、及びエンドグリコシダーゼＢからなる群から選択されることが好ましい。グルカナーゼがグリコサミダーゼである又はグリコサミダーゼを含む場合、グリコサミダーゼは、グリコペプチダーゼ、ペプチドＮ－グリコシダーゼ、ＰＮＧａｓｅ、Ｎ－グリコヒドロラーゼ、及びＮ－グリカナーゼからなる群から選択されることが好ましい。グルカナーゼがＰＮＧａｓｅである又はＰＮＧａｓｅを含む場合、ＰＮＧａｓｅは、ペプチド：Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧＦ）を含むことが好ましい。グルカナーゼがＯ－グリカナーゼである又はＯ－グリカナーゼを含む場合、Ｏ－グリカナーゼは、ｅｎｄｏ－ＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ｄ又はｅｎｄｏＧａｌＮＡｃ－ａｓｅ Ａであることが好ましい。

【0025】

結合されたポリペプチドの糖鎖を溶液中に遊離させた（又は実質的に遊離させた）後、且つ三方弁１９８がその第２の位置にある（又は移動した）状態で、遊離した糖鎖（グルカナーゼを含む溶液中の）が第１のカラム１１２から出るように、キャリア溶液（例えば、脱イオン（ＤＩ）水）を第１のカラム１１２に及び第１のカラム１１２を通して移動させる。キャリア溶液は、概して、配管の導管２０４を介して弁１０４のサテライトポート１６７に流体的に結合される第１のバッファ源１４４によってシステム１００に供給される。この態様では、キャリア溶液は、弁１０４が、中心ポート１６０がサテライトポート１６７に流体的に結合される第４の位置にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるときに、弁１０４を通って及びポンプ１４０の支援を得て保持コイル１０８に移動する。更に、キャリア溶液は、弁１０４が第２の位置（中心ポート１６０がサテライトポート１６５に流体的に結合される）にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるとき、弁１０４を通って及び再びポンプ１４０の支援を得て保持コイル１０８から第１のカラム１１２に及び第１のカラム１１２を通って移動する。しかしながら、他の態様においては、キャリア溶液は、第１のカラム１１２に異なる手法で（例えば、第１のカラム１１２に直接的に及び／又はポンプ１４０の支援なしに）供給され得る。いずれにせよ、キャリア溶液は、遊離した糖鎖（及びグルカナーゼ）を第１のカラム１１２を通して運び又は移動させ、第１のカラム１１２から出すと理解される。

【0026】

第２のポンプ１４６は、第１のカラム１１２の下流に位置している。以下に更に詳細に記載するように、第１のポンプ１４０と同様に、本態様における第２のポンプ１４６は、一般に、各種材料を得るのに役立つように、且つそれら材料をシステム１００の各種構成要素に及び各種構成要素間で移動するのに役立つように構成されたシリンジポンプの形態をとる。他の態様においては、ポンプ１４６は、異なるタイプのポンプであり得る並びに／又は複数のポンプ１４６を異なる材料に対して及び／又は異なる構成要素に材料を出力するために使用することができる。

【0027】

弁２０８は、第２のポンプ１４６を、第１のカラム１１２の下流の導管２１２に選択的に流体的に結合するために、第２のポンプ１４６と、第１のカラム１１２の下流に位置する配管の導管２１２との間に位置している。より具体的には、弁２０８は、ポンプ１４０が保持コイル１０８に流体的に結合される第１の位置と、ポンプ１４０が保持コイル１０８から流体的に分離される第２の位置との間で移動可能である。換言すると、ポンプ１４０は、弁１９２の位置に応じて保持コイル１０８に選択的に流体的に結合される。

【0028】

本態様における第２のポンプ１４６はまた、第２のバッファ源１４８に流体的に結合され、第２のバッファ源１４８は、例えば、発蛍光団（例えば、２－アミノ安息香酸、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸二ナトリウム塩、８－アミノナフタレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩、及びアントラニルアミド、４－メトキシベンズアミジンからなる群から選択される）又は発色団（例えば、３－メチル－１－フェニル－２－ピラゾリン－５－オン、又はフェニルヒドラジン）などの糖鎖標識化試薬を供給するように構成されている。したがって、弁２０８が第１の位置にあるとき、第２のポンプ１４６は、糖鎖標識化試薬を、導管２１２を通し、第１のカラム１１２から配管の導管２１６を通して運ばれる遊離した糖鎖の方に移動させる（例えば、圧送する、誘導する）ことができる。したがって、糖鎖標識化試薬は遊離した糖鎖と、第１のカラム１１２の下流の位置で混合される。

【0029】

真空装置１５０は、第１のカラム１１２及び第２のポンプ１４６両方の下流に位置している。真空装置１５０は、配管の導管２２０を介して導管２１６（遊離した糖鎖を第１のカラム１１２から運ぶ）と導管２１２（糖鎖試薬を第２のポンプ１４６から運ぶ）との両方に流体的に結合される。したがって、真空装置１５０は、遊離した糖鎖と糖鎖試薬との混合物を受け取るように配置されている。混合物が真空装置１５０を通って流れる際、真空装置１５０は、従来技術で知られるようにシステム１００の下流構成要素の性能を妨げる可能性のある（例えば、勾配送達（ｇｒａｄｉｅｎｔ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）を妨げることにより）ガス（例えば、気）泡を混合物から除去する（即ち、混合物を脱気する）。

【0030】

反応コイル１２０は、真空装置１５０（したがって、同様に第１のカラム１１２及び第２のポンプ１４６）の下流に位置している。反応コイル１２０が、糖鎖標識化試薬と遊離した糖鎖とを含む混合物を受け取るように配置されるように、反応コイル１２０の入口２２４は、配管の導管２３０を介して真空装置１５０の出口２２８に流体的に結合する。反応コイル１２０は更に、一般に、遊離した糖鎖の標識化（例えば、蛍光標識化）を促進するように構成されている。これは一般に、反応コイル１２０内の混合物をインキュベートすることによって行われる。この目的のために、この態様における反応コイル１２０は、反応コイル１２０に接続された（例えば、取り囲み、直接隣接して配置された）加熱要素２３２によって加熱される。換言すると、加熱要素２３２は、標識化を促進するために、熱、好ましくは、約７５℃～約８５℃の温度を有する熱、より好ましくは、約８０℃の温度を有する熱を反応コイル１２０に加えることができる。加熱要素２３２は、例えば、加熱コイル、誘導加熱器、ヒートポンプ、カートリッジヒータ、電気抵抗ワイヤ、又は反応コイル１２０の１つ以上の部分を加熱するのに適した他の要素の形態をとることができる。

【0031】

本態様においてステンレス鋼で作製される冷却コイル１５２は、反応コイル１２０の下流に位置し、反応コイル１２０に流体的に結合される。より具体的には、冷却コイル１５２が、糖鎖標識化試薬と遊離された（且つここでは標識された）糖鎖とを含む混合物を受け取るように配置されるように、冷却コイル１５２の入口２３４は、配管の導管２４２を介して反応コイル１２０の出口２３８に流体的に結合する。冷却コイル１５２は、（例えば、コントローラ１３２によって）反応コイル１２０が維持する温度よりも低い温度に維持される。したがって、冷却コイル１５２は、それを通って混合物が流れる際に混合物の温度を低下させるだけでなく、混合物を薄め、それにより、混合物の有機物含有量を低減させる。そうすることにより、反応コイル１２０は、糖鎖が第２のカラムに結合する能力を高める。

【0032】

本明細書では糖鎖結合カラム１２４とも呼ばれる第２のカラム１２４は、好ましくは、多孔質黒鉛状炭素カラムの形態をとり、冷却コイル１５２の下流に位置し、導管２４６を介して冷却コイル１５２に流体的に結合される。したがって、第２のカラム１２４は、冷却され、希釈した混合物を冷却コイル１５２から受け取るように配置されている。冷却コイル１５２から第２のカラム１２４への、冷却され、希釈した混合物の移動を促進するために、第２のポンプ１４６は、弁２０８が第１の位置にあるとき、バッファ溶液（例えば、０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル（５％）溶液で形成された）を、弁２０８に流体的に結合された第３のバッファ源１５４から、導管２１２、２２０、２３０、２３４、及び２４６を通して第２のカラム１２４に移動させることができる。いずれにせよ、第２のカラム１２４が冷却コイル１５２から混合物を受け取ると、第２のカラム１２４は、それを通って混合物が流れる際、混合物の標識糖鎖を結合するように構成されている。このようにして、第２のカラム１２４は混合物中の標識糖鎖を、廃棄所（図示せず）に送られ得る残りの混合物から分離する。

【0033】

第２のカラム１２４はまた、配管の導管２５０を介して弁１０４のサテライトポート１６９に流体的に結合される。この態様では、導管２５０は第２のカラム１２４の上流の導管２４６に合流する又は交差するが、他の態様においては、その代わりに、導管２５０は導管２４６をバイパスし、第２のカラム１２４に直接接続することができる。いずれにせよ、溶離バッファ溶液（例えば、０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリル（５％）溶液で形成された）は、結合し、標識された糖鎖の実質的に全てを溶離するように、導管２５０を介して、第２のカラム１２４に及び第２のカラム１２４を通って移動する。溶離バッファ溶液は、概して、配管の導管２５４を介して弁１０４のサテライトポート１６８に流体的に結合される第４のバッファ源１５６によって供給される。この態様では、溶離バッファ溶液は、弁１０４が、中心ポート１６０がサテライトポート１６８に流体的に結合される第５の位置にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるときに、弁１０４を通って及びポンプ１４０の支援を得て第４のバッファ源１５６から保持コイル１０８に移動する。更に、溶離バッファ溶液は、弁１０４が、中心ポート１６０がサテライトポート１６９に流体的に結合される第６の位置にあるとき、且つ弁１９２が第１の位置にあるとき、弁１０４を通って及び再びポンプ１４０の支援を得て保持コイル１０８から第２のカラム１２４に及び第２のカラム１２４を通って移動する。しかしながら、他の態様においては、溶離バッファ溶液は、第２のカラム１２４に異なる手法で（例えば、第２のカラム１２４に直接的に及び／又はポンプ１４０の支援なしに）供給され得る。いずれにせよ、供給される溶離バッファ溶液は第２のカラム１２４に結合した糖鎖を実質的に溶離し、それらの溶離した糖鎖を第２のカラム１２４内を通して運び又は移動させ、第２のカラム１２４から出す。

【0034】

この態様では、溶離バッファ溶液は糖鎖を第２のカラム１２４から、第２のカラム１２４の下流に位置し、配管の導管２５８を介して第２のカラム１２４に流体的に結合される混合チャンバ１５７に運ぶ。溶離バッファ溶液と糖鎖との混合物は混合チャンバ１５７を通って流れ、混合チャンバ１５７は、混合物の有機物含有量を低減させ、糖鎖の溶離バッファ成分を、開始時のクロマトグラフィ移動相の条件に適合するように調整する役割を果たす。換言すると、混合チャンバ１５７は、混合物が容器１３６から入手する元試料を代表することを確実にするのに役立つ。

【0035】

混合物が、所定の時間量、混合チャンバ１５７内にあった後、混合物は、例えば溶離バッファ溶液を使用して、例えば、液体クロマトグラフィデバイス、高速液体クロマトグラフィデバイス、超高速液体クロマトグラフィデバイス、質量分析デバイス、糖鎖分析デバイス、別の分析デバイス、又はこれらの組み合わせの形態をとることができる分析デバイス１５８に移動することができる。この態様では、分析デバイス１５８は第２のカラム１２４の下流に位置し、配管の導管２６２を介して第２のカラム１２４に流体的に結合される。したがって、この態様では、混合物は、糖鎖分析のために（例えば、混合物中の糖鎖を定量し、分離するために）分析デバイス１５８に自動的に移動させることができる。しかしながら、他の態様においては、分析デバイス１５８はシステム１００の一部ではない（例えば、第３のカラム１２８に流体的に結合されない）場合があり、その場合、混合物は、分析デバイス１５８に異なる手法で（例えば、手作業で）移動させることができる。

【0036】

上で簡単に述べたように、システム１００はコントローラ１３２も含み、コントローラ１３２は、本態様においては、システム１００の各種構成要素に通信的に結合又は接続され、システム１００の各種構成要素に信号（例えば、制御信号、データ）を送信すること、及びシステム１００の各種構成要素から信号（例えば、データ）を受信することによってシステム１００の上記運転を監視及び促進する又は指示する。コントローラ１３２は、システム１００の他の構成要素に直接隣接して（例えば、システム１００と同じ環境内に）配置され得る、又はシステム１００の他の構成要素から離れて配置され得る。図示されているように、コントローラ１３２は、通信ネットワーク３００を介してマルチポート弁１０４に、それぞれ通信ネットワーク３２０、３２４を介して第１及び第２のポンプ１４０、１４６に、通信ネットワーク３３６を介して分析デバイス１５８に、それぞれ通信ネットワーク３４０、３４４を介して弁１９２、２０８に、及び通信ネットワーク３４８を介して熱要素２３２に通信的に結合又は接続されている。他の態様においては、コントローラ１３２は、システム１００のより多数の又は少数の構成要素、例えば、保持コイル１０８、第１のカラム１１２、反応コイル１２０、第２のカラム１２４、容器１３６、冷却コイル１５２、混合チャンバ１５７、及び／又は三方弁１９８に通信的に結合若しくは接続され得る。

【0037】

本発明で使用する場合、「通信的に結合される（ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ）」及び「接続される（ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ）」という語句は、直接的に結合される若しくは接続される、又は１つ以上の中間構成要素を介して間接的に結合される若しくは接続される、を意味するものと定義される。このような中間構成要素は、ハードウェア及び／又はソフトウェアベースの構成要素を含むことができる。ネットワーク３００～３４８は、無線ネットワーク、有線ネットワーク、又は有線ネットワークと無線ネットワークとの組み合わせ（例えば、携帯電話ネットワーク及び／又は８０２．１１ｘ準拠のネットワーク）であり得るとともに、インターネットなどの公衆アクセス可能ネットワーク、プライベートネットワーク、又はこれらの組み合わせを含むことができると理解される。ネットワーク３００～３４８のタイプ及び構成は実装依存であり、現在利用可能な又は後に開発される、コントローラ１３２とシステム１００の構成要素との間の記載した通信を促進する任意のタイプの通信ネットワークを使用することができる。

【0038】

図２に示すように、コントローラ１３２は、プロセッサ３５２と、メモリ３５６と、通信インターフェース３６０と、計算論理３６４とを含む。プロセッサ３５２は、汎用プロセッサ、デジタルシグナルプロセッサ、ＡＳＩＣ、フィールドプログラマブルゲートアレイ、グラフィックス処理ユニット、アナログ回路、デジタル回路、又は任意の他の既知の若しくは後に開発されるプロセッサであり得る。プロセッサ３５２はメモリ３５６内の命令に従って動作する。メモリ３５６は揮発性メモリ又は不揮発性メモリであり得る。メモリ３５６は、読み取り専用メモリ（ＲＯＭ）、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、フラッシュメモリ、電子的に消去可能なプログラム読み取り専用メモリ（ＥＥＰＲＯＭ）、又は他の種類のメモリのうちの１つ以上を含むことができる。メモリ３５６は、光、磁気（ハードドライブ）、又は任意の他の形態のデータストレージデバイスを含むことができる。

【0039】

通信インターフェース３６０は、ネットワーク３００～３４８を介したコントローラ１３２と冷却システム１００の構成要素との間の電子通信を可能にする又は促進するために提供される。通信インターフェース３６０は、例えば、１つ以上のユニバーサルシリアルバス（ＵＳＢ）ポート、１つ以上のイーサネットポート、及び／又は１つ以上の他のポート若しくはインターフェースであり得る、又はそれらを含み得る。電子通信は、例として、ＵＳＢ、ＲＳ－２３２、ＲＳ－４８５、ＷｉＦｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、及び／又は任意の他の適切な通信プロトコルを含む任意の既知の通信プロトコルを介して行うことができる。

【0040】

論理３６４は、概して、メモリ３５６に記憶されるコンピュータ読み取り可能命令として具現化される１つ以上の制御ルーチン及び／又は１つ以上のサブルーチンを含む。制御ルーチン及び／又はサブルーチンは、ＰＩＤ（比例積分微分）、ファジー論理、非線形、又は任意の他の適切な種類の制御を実施することができる。プロセッサ３５２は、一般に、論理３６４を実行し、システム１００の運転に関連するアクションを実施する。

【0041】

概して、論理３６４は、実行されると、システム１００が本明細書中に記載の所望の手法で動作するように、プロセッサ３５２にシステム１００の構成要素、特に、マルチポート弁１０４、第１及び第２のポンプ１４０、１４６、分析デバイス１５８、第１及び第２の弁１９２、２０８、並びに加熱要素２３２を制御させる。より具体的には、論理３６４は、実行されると、プロセッサ３５２に、（ｉ）マルチポート弁１０４を本明細書中に記載される位置のいずれかに又は位置のいずれかの間で移動させ、それによって上述のようにシステム１００の各種構成要素を流体的に結合することができ、（ｉｉ）第１のポンプ１４０を制御させることができ（例えば、上述のように、ポンプ１４０に材料を得させる又は誘導させる）、（ｉｉｉ）第２のポンプ１４６を制御させることができ（例えば、上述のように、ポンプ１４６に材料を得させる又は誘導させる）、（ｉｖ）弁１９２を開閉させることができ、（ｖ）弁２０８を開閉させることができ、（ｖｉ）反応コイル１２０に熱を選択的に加えることにより反応コイル１２０の温度を制御するように、加熱要素２３２（用いられる場合）を制御させることができ、（ｖｉｉ）分析デバイス１５８を制御させることができる。

【0042】

他の態様においては、論理３６４は、プロセッサ３５２によって実行されると、更なる、より少ない、及び／又は異なった機能を実施させることができる。一例として、論理３６４は、プロセッサ３５２によって実行されると、糖鎖を第２のカラム１２４から分析デバイス１５８に移動させることはできない、又は分析デバイス１５６に所望の分析を実施させることはできない。更に、他の態様においては、論理３６４は、本明細書中に記載される順序と異なる順序でプロセッサ３５２によって実行され得る。最後に、システム１００を使用して、（同じ製品及び／又は異なる製品からの）複数の試料のリアルタイム分析を実施することができるため、論理３６４は、任意の異なる回数、プロセッサ３５２によって実行され得ると理解される。

【0043】

図３Ａ～図３Ｅは、抗体ベースの治療的ポリペプチドの試料の調製におけるシステム１００の有効性を監視するためのオンライン及びリアルタイムグリコシル化プロファイル研究の結果を示す。特に、研究では、システム１００の有効性を３２日の生産時間にわたり監視した。研究では、３２日間の生産時間の４日目の％Ａ１Ｇ０Ｆ、％Ａ２Ｇ０Ｆ、％Ａ２Ｇ１Ｆ（糖鎖）、及び％Ｍ５（マンノース５）などのＣＱＡデータを監視及び収集を開始した。図３Ａ及び図３Ｂに示されるように、システム１００は本明細書に記載する所期の機能を３２日の生産時間の全時間にわたって首尾良く且つ効果的に実施し、図３Ｄ及び図３Ｅに示されるように、４日目～３２日目に収集したＣＱＡデータは一定であった。即ち、時間が経過するにつれて製品品質に変化はなく、システム１００の有効性及び堅牢性を示した。これは、生産時間の２０日目に、酸素タンクの漏れのせいで容器１３６への酸素ガス流が２時間遮断されたにもかかわらずそのような状態であった。更に、容器１３６をより高い分解能で監視し、生産時間継続のリスクを評価するために、容器１３６からのサンプリング頻度を増加した（この場合、２４時間毎に１回から６時間毎に１回に）。しかしながら、図３Ａ～図３Ｃに示されるように、この中断はＣＱＡデータのいくつかに一時的に影響を及ぼしただけであり、ＣＱＡデータは中断前の値に素早く戻り、安定した。したがって、生産時間を継続する決定をした。

【0044】

治療的ポリペプチド
以下の１つ以上に結合するタンパク質を含むタンパク質は、開示される組成物及び方法に有用であり得る。これらには、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、及びＣＤ３４を含むＣＤタンパク質が含まれる（受容体結合を妨害するものを含む）。ＨＥＲ受容体ファミリータンパク質、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、及びＥＧＦ受容体。細胞接着分子、例えば、ＬＦＡ－Ｉ、ＭｏＩ、ｐｌ５０、９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－Ｉ、ＶＣＡＭ、及びα ｖ／β ３インテグリン。成長因子、例えば、血管内皮増殖因子（「ＶＥＧＦ」）、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、ミュラー管抑制物質、ヒトマクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ－Ｉ－α）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＮＧＦ－βなどの神経成長因子、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、例えばａＦＧＦ及びｂＦＧＦなどの線維芽細胞増殖因子、上皮成長因子（ＥＧＦ）、形質転換成長因子、例えば、とりわけＴＧＦ－α及びＴＧＦ－β、例えばＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４又はＴＧＦ－β５、インスリン様成長因子Ｉ及びインスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、並びに骨誘導因子。インスリン及びインスリン関連タンパク質、例えば、インスリン、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン、及びインスリン様成長因子結合タンパク質。凝固及び凝固関連タンパク質（例えば、とりわけ第ＶＩＩＩ因子、組織因子、フォンヴィレブランド因子、プロテインＣ、α－１－アンチトリプシン、プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼ及び組織プラスミノーゲン活性化因子（「ｔ－ＰＡ」）、ボンバジン（ｂｏｍｂａｚｉｎｅ）、トロンビン、及びトロンボポエチン；（ｖｉｉ）他の血液タンパク質及び血清タンパク質、例えば、以下に限定されないが、アルブミン、ＩｇＥ及び血液型抗原。コロニー刺激因子及びその受容体、例えば以下のもの、とりわけ、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＧ－ＣＳＦ、並びにそれらの受容体、例えばＣＳＦ－１受容体（ｃ－ｆｍｓ）。受容体、及び受容体関連タンパク質、例えば、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体、肥満（ＯＢ）受容体、ＬＤＬ受容体、成長ホルモン受容体、トロンボポエチン受容体（「ＴＰＯ－Ｒ」、「ｃ－ｍｐｌ」）、グルカゴン受容体、インターロイキン受容体、インターフェロン受容体、Ｔ細胞受容体、ｃ－Ｋｉｔなどの幹細胞因子受容体、及び他の受容体。受容体リガンド、例えば、ＯＸ４０受容体のリガンドであるＯＸ４０Ｌ。神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、及びニューロトロフィン－３、－４、－５、又は－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、又はＮＴ－６）。リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、及びプロリラキシン；インターフェロン及びインターフェロン受容体、例えば、インターフェロン－α、－β、及び－γ、並びにそれらの受容体。インターロイキン及びインターロイキン受容体、例えば、ＩＬ－１～ＩＬ－３３及びＩＬ－１～ＩＬ－３３受容体、例えば、とりわけＩＬ－８受容体。ウイルス抗原、例えば、ＡＩＤＳエンベロープウイルス抗原。リポタンパク質、カルシトニン、グルカゴン、心房性ナトリウム利尿因子、肺表面活性物質、腫瘍壊死因子－α及び－β、エンケファリナーゼ、ＲＡＮＴＥＳ（活性化制御で、正常Ｔ細胞で発現及び分泌される）、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、ＤＮＡｓｅ、インヒビン、及びアクチビン。インテグリン、プロテインＡ又はＤ、リウマチ因子、免疫毒素、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシドジスムターゼ、表面膜タンパク質、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＡＩＤＳエンベロープ、輸送タンパク質、ホーミング受容体、アドレシン、調節タンパク質、イムノアドヘシン、抗体。ミオスタチン、ＴＡＬＬタンパク質、例えば、ＴＡＬＬ－Ｉ、アミロイドタンパク質、例えば、以下に限定されないが、アミロイドβタンパク質、胸腺間質性リンパ球新生因子（「ＴＳＬＰ」）、ＲＡＮＫリガンド（「ＯＰＧＬ」）、ｃ－キット、ＴＮＦ受容体、例えば、ＴＮＦ受容体１型、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、アンジオポエチン、並びに前述のいずれかの生物学的に活性なフラグメント又はアナログ又はバリアント。

【0045】

例示的なポリペプチド及び抗体としては、Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）（アルテプラーゼ）；アリロクマ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（ダルベポエチンα）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（エポエチンα、又はエリスロポエチン）；Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（インターフェロンβ－Ｉａ）；Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）；Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）（インターフェロン－β）；ボコシズマブ（Ｌ１Ｌ３として示される抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体、米国特許第８０８０２４３号明細書を参照）；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）；Ｄｙｎｅｐｏ（登録商標）（エポエチンデルタ）；Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）；ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）；ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）；Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）；Ｅｐｒｅｘ（登録商標）（エポエチンα）；Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）；エボロクマブ；Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（ソマトロピン）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）；Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（ソマトロピン［ｒＤＮＡ由来］注射液）；Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）；Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）（インターフェロンＡｌｆａｃｏｎ－１）；Ｎａｔｒｅｃｏｒ（登録商標）（ネシリチド）；Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アナキンラ）、Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）（サルガモスチム）；ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エピラツズマブ）；Ｂｅｎｌｙｓｔａ（商標）（ベリムマブ）；Ｍｅｔａｌｙｓｅ（登録商標）（テネクテプラーゼ）；Ｍｉｒｃｅｒａ（登録商標）（メトキシポリエチレングリコールエポエチンβ）；ＭｙＩｏｔａｒｇ（登録商標）（ゲムツズマブオゾガマイシン）；Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）；Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）（セルトリズマブペゴル）；Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）（エクリズマブ）；パキセリズマブ（抗補体Ｃ５）；ＭＥＤＩ－５２４（Ｎｕｍａｘ（登録商標））；Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ）；エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標））；Ｔｒａｂｉｏ（登録商標）（レルデリムマブ）；ＴｈｅｒａＣｉｍ ｈＲ３（ニモツズマブ）；Ｏｍｎｉｔａｒｇ（ペルツズマブ、２Ｃ４）；Ｏｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ－Ｉ）；ＯｖａＲｅｘ（登録商標）（Ｂ４３．１３）；Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビジリズマブ）；カンツズマブメルタンシン（ｈｕＣ２４２－ＤＭｌ）；ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標）（エポエチンβ）；Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）（オプレルベキン）；Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）（ＰＥＧ化フィルガストリム、ＰＥＧ化Ｇ－ＣＳＦ、ＰＥＧ化ｈｕ－Ｍｅｔ－Ｇ－ＣＳＦ）；Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（フィルグラスチム）；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標）（ムロモナブ－ＣＤ３）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）（エポエチンα）；Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）、Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）（アブシキシマブ）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＨｕＭａｘ－ＣＤ４（ザノリムマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）；Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）；Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（登録商標）（インターフェロンα－２ａ）；Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）（バシリキシマブ）；Ｓｔｅｌａｒａ（商標）（ウステキヌマブ）；Ｐｒｅｘｉｇｅ（登録商標）（ルミラコキシブ）；Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）（パリビズマブ）；１４６Ｂ７－ＣＨＯ（抗ＩＬ１５抗体、米国特許第７１５３５０７号明細書を参照）、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ）；Ｖａｌｏｒｔｉｍ（登録商標）（ＭＤＸ－１３０３、抗炭疽菌防御抗原ｍＡｂ）；ＡＢｔｈｒａｘ（商標）；Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）；Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ＩＬ－１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分及び両ＩＬ－１受容体成分（Ｉ型受容体及び受容体補助タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃと融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）；Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン）、Ｚｅｔｉａ（エゼチマイブ）、アタシセプト（ＴＡＣＩ－Ｉｇ）、抗α４β７ ｍＡｂ（ベドリズマブ）；ガリキシマブ（抗ＣＤ８０モノクローナル抗体）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）；ＢＲ２－Ｆｃ（ｈｕＢＲ３／ｈｕＦｃ融合タンパク質、可溶性ＢＡＦＦ拮抗薬）；Ｓｉｍｐｏｎｉ（商標）（ゴリムマブ）；マパツズマブ（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体－１ ｍＡｂ）；オクレリズマブ（抗ＣＤ２０ヒトｍＡｂ）；ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）；Ｍ２００（ボロシキシマブ、抗α５β１インテグリンｍＡｂ）；ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ、抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂ及びＶＥＧＦＲ－Ｉ（ＩＭＣ－１８Ｆ１）；抗ＢＲ３ ｍＡｂ；抗Ｃ．ディフィシル毒素Ａ及び毒素Ｂ Ｃ ｍＡｂｓ ＭＤＸ－０６６（ＣＤＡ－１）及びＭＤＸ－１３８８）；抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ－ＰＥ３８抱合体（ＣＡＴ－３８８８及びＣＡＴ－８０１５）；抗ＣＤ２５ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＴＳＬＰ抗体；抗ＴＳＬＰ受容体抗体（米国特許第８１０１１８２号明細書）；Ａ５として示される抗ＴＳＬＰ抗体（米国特許第７９８２０１６号明細書）；抗ＣＤ３ ｍＡｂ（ＮＩ－０４０１）；アデカツムマブ（ＭＴ２０１、抗ＥｐＣＡＭ－ＣＤ３２６ ｍＡｂ）；ＭＤＸ－０６０、ＳＧＮ－３０、ＳＧＮ－３５（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）；ＭＤＸ－１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）；ＨｕＭａｘ ＣＤ３８（抗ＣＤ３８ ｍＡｂ）；抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ；抗Ｃｒｉｐｔｏ ｍＡｂ；抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症第１期フィブロゲン（ＦＧ－３０１９）；抗ＣＴＬＡ４ ｍＡｂ；抗エオタキシン１ ｍＡｂ（ＣＡＴ－２１３）；抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ；抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ；抗スクレロスチン抗体（米国特許第８７１５６６３号明細書又は米国特許第７５９２４２９号明細書を参照）、Ａｂ－５として示される抗スクレロスチン抗体（米国特許第８７１５６６３号明細書又は米国特許第７５９２４２９号明細書）；抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ；抗ＧＤＦ－８ヒトｍＡｂ（ＭＹＯ－０２９）；抗ＧＭ－ＣＳＦ受容体ｍＡｂ（ＣＡＭ－３００１）；抗ＨｅｐＣ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ）；ＭＥＤＩ－５４５、ＭＤＸ－１１０３（抗ＩＦＮα ｍＡｂ）；抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ；抗ＩＧＦ－ＩＲ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－Ｉｎｆｌａｍ）；抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０ ｍＡｂ（ブリアキヌマブ）；抗ＩＬ－２３ｐ１９ ｍＡｂ（ＬＹ２５２５６２３）；抗ＩＬ１３ ｍＡｂ（ＣＡＴ－３５４）；抗ＩＬ－１７モノクローナル抗体（ＡＩＮ４５７）；抗ＩＬ２Ｒａモノクローナル抗体（ＨｕＭａｘ－ＴＡＣ）；抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ；抗インテグリン受容体ｍＡｂ（ＭＤＸ－Ｏｌ８、ＣＮＴＯ９５）；抗ＩＰＩＯ潰瘍性大腸炎ｍＡｂ（ＭＤＸ－１１００）；抗ＬＬＹ抗体；ＢＭＳ－６６５１３；抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ（ＭＤＸ－１３０７）；抗メソテリンｄｓＦｖ－ＰＥ３８抱合体（ＣＡＴ－５００１）；抗ＰＤｌｍＡｂ（ＭＤＸ－１ １０６（ＯＮＯ－４５３８））；抗ＰＤＧＦＲα抗体（ＩＭＣ－３Ｇ３）；抗ＴＧＦβ ｍＡｂ（ＧＣ－１００８）；抗ＴＲＡＩＬ受容体－２ヒトｍＡｂ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２）；抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ；抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ－１ ｍＡｂ；抗ＺＰ３ ｍＡｂ（ＨｕＭａｘ－ＺＰ３）；並びに配列番号８及び配列番号６の配列を含むアミロイドβ ｍＡｂ（米国特許第７９０６６２５号明細書）が挙げられる。

【0046】

方法及び医薬製剤に適した抗体の例としては、表１に示す抗体が挙げられる。好適な抗体のその他の例としては、インフリキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、パリビズマブ、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、アラシズマブペゴル、ａｌｄ５１８、アレムツズマブ、アリロクマ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ、アルチヌマブ（ａｌｔｉｎｕｍａｂ）、アトリズマブ、アトロリムマブ、トシリズマブ、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビバツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃｃ４９、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、クレネズマブ、ｃｒ６２６１、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダラツムマブ、デミシズマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エナバツズマブ、エンリモマブペゴル、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エピラツズマブ、エレヌマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エボロクマブ、エキシビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ｆｂｔａ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ｇｓ６６２４、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、イムシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インフリキシマブ、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リゲリズマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マスリモマブ、マブリリムマブ、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ－ｃｄ３、ナコロマブタフェナトクス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブモナトクス、オレゴボマブ、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パジバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ピジリズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチデ、セクキヌマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テフィバズマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、トレメリムマブ、チシリムマブ、チルドラキズマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトクスが挙げられる。

【0047】

抗体としては、アダリムマブ、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、セツキシマブ、コナツムマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エレヌマブ、エボロクマブ、インフリキシマブ、ナタリズマブ、パニツムマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロモソズマブ、テゼペルマブ、及びトラスツズマブ、並びに表１から選択される抗体も挙げられる。

【0048】

【表1】

【0049】

【表2】

【0050】

【表3】

【0051】

前述の記載に基づき、本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法は、糖鎖分析のためのポリペプチドを含有する製品の試料の自動的な（又は実質的に自動的な）調製、及びその試料の糖鎖アッセイの自動的な（又は実質的に自動的な）実施を容易にすることは認識されよう。したがって、調製及び分析を実質的にリアルタイムで実施することができる。換言すると、全プロセスを従来のプロセスにより現在可能にされているものよりもはるかに素早く実施することができる。

【0052】

本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法は、システム１００を使用した糖鎖分析のために試料調製プロセス及びその試料の糖鎖アッセイの実施を容易に監視することを可能にし、これにより更に、リスクを軽減することができ、且つ製品の生産時間を延長することができることも理解すべきである。特に、このプロセスは、例えば、コントローラ１３２などのコントローラを使用して、及び／又はシステム１００のオペレータが手動で、システム１００内の条件が最適であるかどうか、即ち、それらが所定の性能閾値を満たすかどうかを判断することによって監視され得る。図３Ｄ及び図３Ｅに示されるように、生産時間が開始、継続、又は延長され得るように、例えば、一連のグリコシル化種（この場合、％Ｍ５、Ａ１Ｇ０Ｆ、Ａ２Ｇ０Ｆ、％ＨＭ、％Ｆｕｃ、％Ｇａｌ、Ａ２Ｇ１Ｆ、及び％ハイブリッド）のグリコシル化率値を得、方法の適格性評価時に収集したそれらグリコシル化種の過去の値と比較し、システム１００内の条件が最適であるかどうかを判断することができる。しかしながら、システム１００内の条件が最適ではないと判断した場合、少なくとも１つの細胞培養構成要素は、閉じたシステム内の条件が最適になるまで調整され得る。調整され得る細胞培養構成要素の例としては、ｐＨ、圧力、温度、媒体流（例えば、媒体流量、媒体供給量）、媒体含有量（アミノ酸、栄養素、糖、バッファを含む）、ガス供給戦略（例えば、酸素と二酸化炭素の混合物のガス比率）、撹拌（例えば、撹拌速度）、添加剤（例えば、金属添加剤、糖添加剤）、添加剤（例えば、消泡剤）供給量、及び潅流量が挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、閉じたシステム内の条件が最適であるように１つのみの細胞培養構成要素を調整する必要があり得る一方で、他の場合では、複数の細胞培養構成要素を調整する必要があり得る。あるいは、条件が最適ではないと判断された場合、又は少なくとも１つの細胞培養構成要素を調整した後であってもシステム１００内の条件が最適ではない場合、コントローラ及び／又はシステム１００のオペレータはシステム１００を停止してもよい。

【0053】

このようにして、本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法はまた、条件が最適ではないとき、又はシステム１００の運転を継続することが望ましくないときのシステム１００の継続運転に伴うリスクを軽減する。特に、リスクは、システム１００の現在の運転に関連するプロセスパラメータ及び製品品質データ、例えば、ｐＨ、温度、溶存酸素、細胞生存性、細胞密度、力価、凝集、チャージバリアント、グリコシル化等を決定する（例えば、計算する又は得る）こと、プロセスパラメータ及び製品品質データが所定のリスク閾値（システム１００の運転前に、コントローラ１３２などのコントローラによって及び／又はシステム１００のオペレータからの入力に応答して判断される）を満たすかどうかを判断すること、及びその後、プロセスパラメータ及び製品品質データが所定のリスク閾値を満たすかどうかに基づき、システム１００の運転を継続する、停止する、又は調整するかどうかを判断することによって緩和され得る。所定のリスク閾値は、例えば、（１）入手可能なプロセスパラメータデータ及び製品品質データを適用し、システム１００又はそれ以外の類似のシステムの従前の運転に関連する過去の平均多変量（ＭＶ）データを計算すること、次いで、（２）計算した過去の平均ＭＶデータを閾値（閾値は、計算した過去の平均ＭＶデータ自体又は計算した過去の平均ＭＶデータに基づく何らかの値若しくは一連の値であり得る）として確立することによって判断してもよい。一例では、所定のリスク閾値は、計算した過去の平均ＭＶデータからの許容可能な偏差（例えば、３つの標準偏差）を示し得る。代替的に又は付加的に、所定のリスク閾値は、システム１００のオペレータからの入力に基づき判断してもよい。場合によっては、システム１００の現在の運転に関連するプロセスパラメータ及び製品品質データが所定のリスク閾値を満たしていない（例えば、超える）ときにはシステム１００は停止されてもよい。しかしながら、他の場合、システム１００の現在の運転に関連するプロセスパラメータ及び製品品質データが所定のリスク閾値を満たしていないときには、又は更には、プロセスパラメータ及び製品品質データが所定のリスク閾値を満たしてはいるものの所定のリスク閾値に近接しているときには、システム１００を調整してもよい。例えば、及び上で簡単に述べたように、容器１３６からのサンプリング頻度は調整してもよい。

【0054】

更に、本出願人は、本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法はまた、システム１００を使用する生産時間の延長を可能にすることを見出した。従来のプロセスでは、典型的には、最大でも３２～４０日の生産時間を可能にする。しかしながら、本出願人は、本明細書中に記載されるデバイス、システム、及び方法は、１００ではないにしても５０～８０の集団倍加数を可能にする、即ち、１００日ではないにしても約５０～８０日の生産時間を可能にすることを見出した。したがって、製品が品質目標を満たし且つリスクが緩和されることを確実にするためにシステム１００の運転を監視しつつ、より多くの製品を得ることができる。

【0055】

本開示を実施するために本発明者が知る最良のモードを含む本開示の好適な実施形態が本明細書中に記載される。本明細書中に多くの例が示され、説明されているが、当業者であれば、各種実施形態の詳細は相互排他的である必要はないことは速やかに理解するであろう。その代わり、当業者は本明細書の教示を読むと、一実施形態の１つ以上の特徴を残りの実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせることができるであろう。更に、図示実施形態は単なる例示であり、本開示の範囲を限定するものと解釈すべきでないことも理解するであろう。本明細書中に記載されるあらゆる方法は、本明細書中に特に明記されない限り又は文脈により明確に否定されない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書中に記載される一切の例又は例示的な語（例えば、「などの」）の使用は、本開示の例示的実施形態の態様をより明らかにすることを単に意図しており、本開示の範囲に制約を課すものではない。明細書中のいずれの語も、任意の請求されない要素を本開示の実施に必須であるものとして示すと解釈されるべきではない。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【配列表】

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