特許 7186461 細胞構造体連結方法および連結補助具

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-12-01

(45)【発行日】2022-12-09

(54)【発明の名称】細胞構造体連結方法および連結補助具

(51)【国際特許分類】

   C12M 1/00 20060101AFI20221202BHJP

   C12M 3/00 20060101ALI20221202BHJP

   C12N 5/07 20100101ALI20221202BHJP

【ＦＩ】

C12M1/00 C

C12M3/00 A

C12N5/07

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2020512950

(86)(22)【出願日】2018-04-09

(86)【国際出願番号】 JP2018014891

(87)【国際公開番号】W WO2019198124

(87)【国際公開日】2019-10-17

【審査請求日】2021-04-05

(73)【特許権者】

【識別番号】511155187

【氏名又は名称】株式会社サイフューズ

(74)【代理人】

【識別番号】100094112

【弁理士】

【氏名又は名称】岡部 讓

(74)【代理人】

【識別番号】100101498

【弁理士】

【氏名又は名称】越智 隆夫

(74)【代理人】

【識別番号】100120064

【弁理士】

【氏名又は名称】松井 孝夫

(72)【発明者】

【氏名】松林 久美香

(72)【発明者】

【氏名】岸井 保人

【審査官】松原 寛子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／１００７８２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５２９０８１（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１７／０３４２３７３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１０／１１５１８７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】松林久美香ら，血管再生の最前線 1.バイオ3Dプリンタを用いた人工血管再生，最新医学，2017年，Vol.72, No.12，pp.1686-1692

【文献】松林久美香ら，細胞構造体連結による臨床利用可能な血管様細胞構造体の作製，再生医療，2015年，Vol.14, Suppl.，p.307, P-01-072

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｍ １／００

Ｃ１２Ｍ ３／００

Ｃ１２Ｎ ５／０７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を所定の期間の培養を経て成熟させて連結するための連結補助具であって、前記連結補助具は、
前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入可能な棒状体であって、前記中空部に挿入され、前記成熟の後に前記棒状体が収縮して前記細胞構造体の内面に密着可能な外径を有する円形状の断面と、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長と、を有する棒状体と、
前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部であって、前記挟持部はアームで連結される第一嵌合部と第二嵌合部とに二分割され、前記アームは前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合う方向に付勢力を生じる前記挟持部を有する２つの押さえ具と、を備え、
前記棒状体は酸素透過性のある材料でできていて、
前記２つの押さえ具のそれぞれの前記挟持部は、前記アームの前記付勢力により前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合った際に前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなり、
前記２つの押さえ具のそれぞれについて、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない前記細胞構造体の両端部において、前記挟持部は前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合った状態で前記細胞構造体のそれぞれの端面と少なくとも一部で接触を行う連結補助具。

【請求項2】

請求項１に記載の連結補助具であって、
前記酸素透過性のある材料はジメチルポリシロキサンである連結補助具。

【請求項3】

請求項２に記載の連結補助具であって、
前記棒状体は、前記棒状体の一端から他端まで前記棒状体の軸方向に沿って貫通して培養液が流れる管路を有する連結補助具。

【請求項4】

請求項１に記載の連結補助具であって、
前記挟持部と、前記両端部のそれぞれの前記端面との前記接触は、前記２以上の細胞構造体の前記両端部のそれぞれの全周にわたっての接触である連結補助具。

【請求項5】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を所定の期間の培養を経て成熟させて連結するための連結補助具であって、前記連結補助具は、
前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入可能な棒状体であって、前記中空部に挿入された、前記成熟の後に前記棒状体が収縮して前記細胞構造体の内面に密着可能な外径を有する円形状の断面と、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長と、を有する棒状体と、
前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部であって、前記挟持部はアームで連結される第一嵌合部と第二嵌合部とに二分割され、前記アームは前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合う方向に付勢力を生じる前記挟持部を有する押さえ具と、を備え、
前記棒状体は、前記棒状体の一端から他端まで前記棒状体の軸方向に沿って貫通して培養液が流れる管路を有し、
前記押さえ具は、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない両端部の一方において、その一方の端部の端面に接触する円周に沿って配置される突起を備え、
前記棒状体は酸素透過性のある材料でできていて、
前記押さえ具の前記挟持部は、前記アームの前記付勢力により第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合った際に前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなり、
前記押さえ具について、前記接触状態にない前記細胞構造体の両端部の他方において、前記挟持部は前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合った状態で前記細胞構造体の端面と少なくとも一部で接触を行う連結補助具。

【請求項6】

請求項５に記載の連結補助具であって、
前記押さえ具の前記挟持部は、前記棒状体の前記断面の前記外径と同じ内径を有する連結補助具。

【請求項7】

請求項５に記載の連結補助具であって、
前記酸素透過性のある材料はジメチルポリシロキサンである連結補助具。

【請求項8】

請求項７に記載の連結補助具であって、
前記棒状体は、前記棒状体の一端から他端まで前記棒状体の軸方向に沿って貫通して培養液が流れる管路を有する連結補助具。

【請求項9】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を、一端から他端まで軸方向に沿って貫通する管路を内部に有し酸素透過性のある材料でできた前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長を有する棒状体と押さえ具を使用して連結するための細胞構造体連結方法であって、
前記前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部であって、前記挟持部はアームで連結される第一嵌合部と第二嵌合部とに二分割され、前記アームは前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合う方向に付勢力を生じ、前記アームの前記付勢力により前記第一嵌合部と前記前記第二嵌合部とが組み合った際に前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなる前記挟持部をそれぞれが有する２つの押さえ具であって、
前記細胞構造体連結方法は、
前記棒状体を前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入する挿入工程と、
前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない側の前記細胞構造体の両端部において、前記２つの押さえ具のそれぞれの前記挟持部が前記アームの前記付勢力により前記第一嵌合部と前記前記第二嵌合部とを組み合わされて前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなった状態でその両端部の端面の少なくとも一部に接触するように、前記細胞構造体を前記棒状体に固定する固定工程と、
前記棒状体の前記管路に培養液を流して所定の期間前記２以上の細胞構造体を培養して成熟させる成熟工程と、を備える細胞構造体連結方法。

【請求項10】

請求項９に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記固定工程は、前記２以上の細胞構造体の前記接触状態にある箇所が離間したときに、再度その箇所を接触状態にして２つの押さえ具で、その両端部の端面に接触するように前記細胞構造体を前記棒状体に固定する工程と、を備える細胞構造体連結方法。

【請求項11】

請求項９に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記成熟工程は、前記２以上の細胞構造体の前記中空部が収縮して前記中空部が前記棒状体の外周の面と密着する工程を有する細胞構造体連結方法。

【請求項12】

請求項９に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記酸素透過性のある材料はジメチルポリシロキサンである細胞構造体連結方法。

【請求項13】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を、一端から他端まで軸方向に沿って貫通する管路を内部に有し酸素透過性のある材料でできた前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長を有する棒状体と押さえ具を使用して連結するための細胞構造体連結方法であって、前記前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部であって、前記挟持部はアームで連結される第一嵌合部と第二嵌合部とに二分割され、前記アームは前記第一嵌合部と前記第二嵌合部とが組み合う方向に付勢力を生じ、前記アームの前記付勢力により前記第一嵌合部と前記前記第二嵌合部とが組み合った際に前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなる前記挟持部を有する押さえ具であって、
前記細胞構造体連結方法は、
前記棒状体を前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入する挿入工程と、
前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない側の前記細胞構造体の両端部の一方において、前記棒状体の円周に沿って配置される突起に一方の端部の端面に接触させ、他方の端部の端面において、前記押さえ具の前記挟持部が前記アームの前記付勢力により前記第一嵌合部と前記前記第二嵌合部とを組み合わされて前記挟持部の内径が前記棒状体の前記断面の前記外径と同じとなった状態で前記他方の前記端部の前記端面と少なくとも一部で接触するように前記細胞構造体を前記棒状体に固定する固定工程と、
前記棒状体の前記管路に培養液を流して所定の期間前記２以上の細胞構造体を培養して成熟させる成熟工程と、を備える細胞構造体連結方法。

【請求項14】

請求項１３に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記固定工程は、前記２以上の細胞構造体の前記接触状態にある箇所が離間したときに、再度その箇所を接触状態にして前記細胞構造体の両端部の一方において、前記棒状体の前記突起にその一方の端部の端面に接触させ、その他方の端部の端面において前記押さえ具で前記他方の端部の端面に接触するように前記細胞構造体を前記棒状体に固定する工程と、を備える細胞構造体連結方法。

【請求項15】

請求項１３に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記成熟工程は、前記２以上の細胞構造体の前記中空部が収縮して前記棒状体の外周の面と密着する工程を有する細胞構造体連結方法。

【請求項16】

請求項１３に記載の細胞構造体連結方法であって、
前記酸素透過性のある材料はジメチルポリシロキサンである細胞構造体連結方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を連結するための連結方法および連結補助具に関する。

【背景技術】

【0002】

従来、特許文献１に開示されるように、隣接するように接触した細胞塊同士が融合する性質を利用し、基板の法線方向に延在するように予め固定されている複数の針状体からなる支持体を利用し、複数の細胞塊が隣接するように細胞塊（スフェロイド）を立体的に積層して立体構造体を作製する手法が知られている。

【0003】

この手法では、細胞塊５１を取り出してその支持体の複数の針状体の各々にそれぞれに突き刺して細胞塊が串刺しになった状態を製作する手法が開示されている。たとえば、血管用の細胞構造体５としては、針状体を管状にならべて、細胞塊５１をそれぞれに穿刺させるものである。そして一定時間培養すると、図７Ｂのように、隣接する細胞塊５１が融合して、針状体５２には管状の細胞構造体５が形成される。そして、図７Ｃのように、細胞構造体５を針状体から抜き去ると、長さＬの管状の内側に中空部を有する管状の細胞構造体５を取り出すことが可能となる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特許第４５１７１２５号明細書

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

この手法では、管状の細胞構造体５の長さＬを長くするには、針状体５２の長さを長くし、それに穿刺させる細胞塊５１の数を増やすことになる。しかし、針状体５２の長さを長くすると針状体５２の真直度、および隣接する針状体５２との平行度の問題が生じ、または製造上の問題から、針状体５２の長さを長くする手法には限界がある。

【0006】

このため、針状体５２の長さを長くすること無く、細胞構造体５の長さＬを長くできる方法および装置が求められる。

【0007】

本発明はこれらの課題に鑑みてなされたものであり、容易に細胞構造体５の長さＬを長くできる方法および連結補助具を提供するものである。

【課題を解決するための手段】

【0008】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を所定の期間の培養を経て成熟させて連結するための連結補助具であって、前記連結補助具は、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入可能な棒状体であって、前記中空部に挿入され、前記成熟の後に前記棒状体が収縮して前記細胞構造体の内面に密着可能な外径を有する円形状の断面と、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長と、を有する棒状体と、前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部を有する２つの押さえ具と、を備え、前記棒状体は酸素透過性のある材料でできていて、前記２つの押さえ具のそれぞれは、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない前記細胞構造体の両端部において、前記挟持部はその両端部のそれぞれの端面と接触を行う連結補助具により解決する。

【0009】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を所定の期間の培養を経て成熟させて連結するための連結補助具であって、前記連結補助具は、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入可能な棒状体であって、前記中空部に挿入された、前記成熟の後に前記棒状体が収縮して前記細胞構造体の内面に密着可能な外径を有する円形状の断面と、前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長と、を有する棒状体と、前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部を有する押さえ具と、を備え、前記棒状体は、前記棒状体の一端から他端まで前記棒状体の軸方向に沿って貫通して培養液が流れる管路を有し、前記押さえ具は、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない両端部の一方において、その一方の端部の端面に接触する円周に沿って配置される突起を備え、前記棒状体は酸素透過性のある材料でできていて、前記押さえ具は、前記接触状態にない前記細胞構造体の両端部の他方において、その他方の端部の端面に接触する連結補助具により解決する。

【0010】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を、一端から他端まで軸方向に沿って貫通する管路を内部に有し酸素透過性のある材料でできた前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長を有する棒状体で連結するための細胞構造体連結方法であって、前記棒状体を前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入する挿入工程と、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない側の前記細胞構造体の両端部において、前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部を有し前記棒状体の断面の外径とほぼ同じ内径を有する２つの押さえ具で、その両端部の端面に接触するように前記細胞構造体を前記棒状体に固定する固定工程と、前記棒状体の前記管路に培養液を流して所定の期間前記２以上の細胞構造体を培養して成熟させる成熟工程と、を備える細胞構造体連結方法により解決する。

【0011】

内側に中空部を有する管状の２以上の細胞構造体を、一端から他端まで軸方向に沿って貫通する管路を内部に有し酸素透過性のある材料でできた前記２以上の細胞構造体のそれぞれの長さの合計より長い全長を有する棒状体で連結するための細胞構造体連結方法であって、前記棒状体を前記２以上の細胞構造体のそれぞれの前記中空部に挿入する挿入工程と、前記２以上の細胞構造体の一端同士を接触状態にして前記細胞構造体を前記棒状体に挿入したときにおける前記接触状態にない側の前記細胞構造体の両端部の一方において、前記棒状体の円周に沿って配置される突起に一方の端部の端面に接触させ、他方の端部の端面において、前記棒状体を挟持して嵌合して前記棒状体に固定可能な挟持部を有し前記棒状体の断面の外径とほぼ同じ内径を有する押さえ具で、前記他方の端部の端面に接触するように前記細胞構造体を前記棒状体に固定する固定工程と、前記棒状体の前記管路に培養液を流して所定の期間前記２以上の細胞構造体を培養して成熟させる成熟工程と、を備える細胞構造体連結方法により、解決する。

【発明の効果】

【0012】

本発明の連結方法および連結補助具によれば、長い細胞構造体を製造する場合において、短い細胞構造体を複数作って連結することにより製造することができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明の実施の形態１における細胞構造体の連結補助具と、連結方法を示した図である。

【図2】本発明の実施の形態１における細胞構造体の連結補助具と、連結方法であって、細胞構造体が縮んだ状態を示した図である。

【図3】本発明の細胞構造体の連結補助具の押さえ具の一の実施の形態を示した図である。

【図4】本発明の細胞構造体の連結補助具の押さえ具の一の実施の形態を示した図である。

【図5】本発明における細胞構造体を連結する際に連結補助具を取り付けた細胞構造体を取り付ける培養装置を示した図である。

【図6】本発明の実施の形態２における細胞構造体の連結補助具と、連結方法を示した図である。

【図7A】細胞構造体を形成する工程において、細胞塊を針状体に穿刺した状態を示した模式図である。

【図7B】細胞構造体を形成する工程において、隣接した細胞塊が融合して細胞構造体が形成された状態を示した模式図である。

【図7C】細胞構造体を形成する工程において、形成された細胞構造体を針状体から抜き去る上程を示した状態を示した模式図である。

【発明を実施するための形態】

【0014】

（実施の形態１）
まず、本発明の細胞構造体５の連結方法とそれを実現する連結補助具１の実施の形態１について図１から図４を用いて説明する。図１は、２つの細胞構造体５が取り付けられている連結補助具１を示している。図２は、２つの細胞構造体５の接合面が離間して隙間６ができた状態を示している。図３は、連結補助具１を構成する押さえ具３の一実施の形態を示した図である。図３の左側の図は細胞構造体５の軸方向から見た図であり、図３の右側の図は図３の左側と直交する方向から見た図である。図４は、連結補助具１を構成する押さえ具３の他の実施の形態を示した図である。

【0015】

連結補助具１は、棒状体２と、押さえ具３と、を備えている。細胞構造体５は、たとえば図７Ａから図７Ｃおよび前記のとおりの工程で形成されたもので、細胞構造体５の内側に、断面の円形状の中空部を有する管状の構造をしている。ここで、細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとを準備して、それらを連結するものである。この明細書では、細胞構造体５ａ，５ｂの内径をＲとする。

【0016】

棒状体２は、断面が円の細長い円筒状の部材である。棒状体２の外径はＲである。細胞構造体５ａ，５ｂを連結するための工程で、棒状体２を細胞構造体５ａ，５ｂに挿入すると、細胞構造体５ａ，５ｂの内径は棒状体２の外径Ｒより若干大きい。しかし、細胞構造体５ａ，５ｂの内径は、培養した状態での時間の経過にしたがって細胞構造体５ａ，５ｂを構成する細胞が成熟する過程で徐々に収縮する性質があるので、棒状体２は、培養した状態で時間が経過すると細胞構造体５ａ，５ｂと棒状体２との間に隙間無くぴったりと細胞構造体５ａ，５ｂに挿嵌された状態となる。その内部には、棒状体２の一端から他端までに至る棒状体２の長手方向の軸方向に沿って貫通するような管路２ａを有する。棒状体２の長さは、棒状体２は、少なくとも細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとを合わせた長さの合計よりも長い。すなわち、棒状体２を細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとの中空部に挿嵌した際に、細胞構造体５ａの一端と細胞構造体５ｂの一端とを接触状態にしても、連結された細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂの両端には棒状体２が一定量露出される程度の長さがある。棒状体２の先端２ｂは細胞構造体５ａの中空部が挿入しやすいようにテーパ形状になっている。

【0017】

棒状体２は、管路２ａと棒状体２の外表面との間に酸素透過性を有するような構造を有している。たとえば、管路２ａと棒状体２の外表面との間に酸素透過用の小さい貫通孔を配置させてもよい。また、酸素透過用の小さい貫通孔を配置させることなく、ジメチルポリシロキサン（ＰＤＭＳ）のような酸素透過性の或る材料としてもよい。酸素が溶解した培養液を管路２ａ内に導入することで、その培養液の通過において、酸素が棒状体２の外表面に至って細胞構造体５ａの全長にわたって、細胞構造体５ａが内面から酸素を受け入れることができる。

【0018】

押さえ具３は、挟持部３１と、握り部３２とを有している。挟持部３１は棒状体２を挟持して嵌合して棒状体２に固定可能である。挟持部３１は、嵌合部３１ａ（第一嵌合部）と嵌合部３１ｂ（第二嵌合部）とに二分割されていて、嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが組み合ったときに内周の径がＲの円形状となる。挟持部３１の嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂのそれぞれは、握り部３２のアーム３２ａとアーム３２ｂとに接続されている。握り部３２はバネ部３３を有していて、アーム３２ａとアーム３２ｂとが広がって嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが組み合って、内周が半径Ｒの円形状を構成するように、握り部３２を付勢している。この状態では、嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが棒状体２の外周を挟持するとともに、棒状体２に嵌りこむ（図３の実線の状態）。アーム３２ａとアーム３２ｂとが狭めて、握り部３２の付勢方向と反対方向に力を加えることで、嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが二分割されて、嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが棒状体２を挟持した状態から解除される（図３の一点鎖線）。

【0019】

図３に示すように、嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂとが棒状体２を挟持した状態では、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの端部の端面７に嵌合部３１ａと嵌合部３１ｂが閉じ、挟持部３１の側面８が接触する。この状態では、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂが棒状体２の上で移動しないように、押さえ具３が細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの両端で規制する。このとき、押さえ具３は、理想的には、図３に示すように、挟持部３１の側面８と、細胞構造体５ａ，５ｂの両端部のそれぞれの端面７とが、端面７の全周にわたって接触する構造となっている。特に、押さえ具３の挟持部３１の側面８が平面であることが好ましい。これにより、培養が進行した状態において、細胞構造体５ａ，５ｂの両端部のそれぞれの端面７の平面度が高くなる。ただし、挟持部３１の側面８と、細胞構造体５ａ，５ｂの両端部のそれぞれの端面７とが、端面７の全周にわたって接触しなくても、少なくとも一部と接触する構造となっていて、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの端部が棒状体２の上で移動しないように、押さえ具３が細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの両端で規制することができる限り、細胞構造体５ａ，５ｂの連結に必要な効果を奏する。また、押さえ具３のアーム３２ａ，３２ｂをピンセットで広げたり狭めたりできるように、アーム３２ａ，３２ｂにピンセットの先端２ｂを挿入可能な挿入孔３４ａ，３４ｂを、アーム３２ａ，３２ｂのそれぞれに配置することができる（図４）。

【0020】

続いて、連結補助具１を用いて、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂを如何に連結させるかについて、実施の形態１における細胞構造体連結方法を説明する。まず、棒状体２を、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂを、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの中空部に挿入する（挿入工程）。続いて、細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとの対向する一端同士の間に隙間６がないように接触状態にする。この状態で、接触状態にない細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂの両端部において、棒状体２を２つの押さえ具３ａ，３ｂで挟持して、押さえ具３ａと押さえ具３ｂとを棒状体２に嵌合させる。このとき、２つの押さえ具３ａ，３ｂは、２つの押さえ具３ａ，３ｂのそれぞれの側面８が、細胞構造体５ａ，５ｂの両端部の端面７に接触して、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある端面に細胞構造体５ａ，５ｂのそれぞれが相対的に互いに近づく方向に押圧力がかかるような位置で、棒状体２を２つの押さえ具３ａ，３ｂで挟持して細胞構造体５ａ，５ｂを固定する（固定工程）。

【0021】

この状態で、酸素を透過した培養液を棒状体２の管路２ａ内を通して、細胞構造体５ａ，５ｂの内外を培養液に浸して所定の期間培養して成熟させる（成熟工程）。図５を参照して、成熟工程において、細胞構造体５ａ，５ｂに挿入された棒状体２に培養液を供給する例として、培養維持装置４１を使用する例を説明する。図５は培養維持装置４１の概略図である。培養維持装置４１は、密閉された培養チャンバ４３からなり、内部は培養液４３ａで満たされている。培養チャンバ４３は、培養チャンバ４３の内部に導入する第一入口４６ｄおよび第二入口４７ｄと、その培養液４３ａを培養チャンバ４３から排出する第一出口４６ｃおよび第二出口４７ｃとを備える。また、培養維持装置４１は、第一出口４６ｃからポンプ４４を経由して第一入口４６ｄに流体的に連通する第一管路４６と、第二出口４７ｃからポンプ４４を経由して第二入口４７ｄに流体的に連通する第二管路４７とを備えている。第二入口４７ｄ、第一出口４６ｃ、第二出口４７ｃは、開放端部であり、第一入口４６ｄにはアダプタを介して棒状体２が取り付けられる。

【0022】

培養液４３ａは、第一管路４６と第二管路４７の内部をポンプ４４の駆動力で還流する。培養液４３ａで満たされた培養チャンバ４３を始点にみると、培養液４３ａは第一出口４６ｃから第一管路４６ｂに流れ出てポンプ４４に向かう。また、培養液４３ａは第二出口４７ｃから第二管路４７ｂに流れ出てポンプ４４に向かう。その後、ポンプ４４にて必要な栄養と酸素が供給された培養液４３ａは、ポンプ４４の駆動力で、第一管路４６ａから第一入口４６ｄを経て培養チャンバ４３に戻る。また、第二管路４７ａから第二入口４７ｄを経て培養チャンバ４３に戻る。第一管路４６は主に棒状体２の内部の貫通管路を通って、細胞構造体５ａ，５ｂの内部に培養液４３ａを供給するためのものである。また、第二管路４７は主に細胞構造体５ａ，５ｂの外部に培養液４３ａを行き渡らせるためのものである。培養液４３ａを所定の期間、培養維持装置４１内で循環させることにより、細胞構造体５ａ，５ｂが培養されて成熟する。

【0023】

成熟工程の進行とともに、細胞構造体５ａ，５ｂは棒状体２の軸方向に縮むため、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある端面に押圧力が減少し、場合によってはその接触状態にあった端面が離間して隙間６を生じることがある。その際には、２つの押さえ具３ａ，３ｂのそれぞれの距離を近づけて、再度、離間した隙間６を接触状態にして、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある端面に押圧力が維持されるような位置で、再度、２つの押さえ具３ａ，３ｂで棒状体２を圧接挟持させる。

【0024】

所定期間の培養を経て細胞構造体５ａ，５ｂの細胞が成熟する成熟工程の完了により、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある箇所の細胞が融合して、細胞構造体５ａ，５ｂが連結する。

【0025】

（実施の形態２）
続いて、本発明の細胞構造体５の連結方法とそれを実現する連結補助具１の実施の形態２について図６を用いて説明する。実施の形態１では、２つの押さえ具３ａ，３ｂを使用した。実施の形態２の連結補助具４では、棒状体２と１つの押さえ具３とを使用して、細胞構造体５ａ，５ｂを連結させる点で異なっている。以下、実施の形態２について、実施の形態１と異なる点について説明する。図６は本発明の実施の形態２における細胞構造体の連結補助具４と、連結方法を示した図である。

【0026】

実施の形態２の棒状体２には、テーパを施した棒状体２の先端２ｂと反対側の端部付近に突起２ｃが配置されている。突起２ｃは、その端部付近に棒状体２の円周に沿って、棒状体２の半径方向に突出して配置される鍔形状を有している。半径方向の距離は、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂの厚さより厚く、細胞構造体５ａの端部を突起２ｃに突き当てることが可能である。その他の点では、棒状体２は実施の形態１と同じである。実施の形態２の押さえ具３は、図３および図４に示すように、実施の形態１と全く同じである。ただし、実施の形態１では２つの押さえ具３ａ，３ｂが必要であるが、実施の形態２では１つの押さえ具３のみが使用される。

【0027】

続いて、連結補助具４を用いて、細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂを如何に連結させるか、実施の形態２における細胞構造体連結方法について説明する。まず、棒状体２を細胞構造体５ａ，細胞構造体５ｂを、細胞構造体５ａ，細胞構造体５の中空部に挿入する（挿入工程）。そして、細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとの対向する一端同士の間に隙間６がないように接触状態にする。この時、細胞構造体５ａの端面が突起２ｃに突き当たるようにする。細胞構造体５ａと細胞構造体５ｂとの対向する一端同士の間に隙間がないように接触状態にする工程と、細胞構造体５ａの端面が突起２ｃに突き当たるようにする工程の順序は問わない。

【0028】

細胞構造体５ａの端面が突起２ｃに突き当たった状態で、接触状態にない細胞構造体５ｂの端部において、棒状体２を押さえ具３で挟持して押さえ具３を棒状体２に嵌合させる。このとき、押さえ具３は、その側面が細胞構造体５ｂの端部の端面に接触して、細胞構造体５ｂの接触状態にある端面に細胞構造体５ａ，５ｂのそれぞれが相対的に互いに近づく方向に押圧力がかかるような位置で、棒状体２を押さえ具３で挟持して細胞構造体５ａ，５ｂを固定する（固定工程）。そうすると、押さえ具３と反対側にある細胞構造体５ａの端面が突起２ｃに突き当たって押圧される。この結果、接触状態にある細胞構造体５ａ，５ｂの端面が圧接される。

【0029】

この状態で、酸素を透過した培養液を棒状体２の管路２ａ内を通して、細胞構造体５ａ，５ｂの内外を培養液に浸して所定の期間培養して成熟させる（成熟工程）。成熟工程は実施の形態１の図５に示した装置と同様の装置で行う。その成熟工程の進行とともに、細胞構造体５ａ，５ｂは棒状体２の軸方向に縮むため、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある端面に押圧力が減少し、場合によってはその接触状態にあった端面が離間して隙間６を生じることがある。その際には、実施の形態１と同じように、押さえ具３を突起２ｃの方向に近づけて、再度、離間した隙間６を接触状態にして、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある端面に押圧力が維持されるような位置で、再度、押さえ具３で棒状体２を圧接挟持させる。

【0030】

所定の期間の培養を経て細胞構造体５ａ，５ｂの細胞が成熟する成熟工程の完了により、細胞構造体５ａ，５ｂの接触状態にある箇所の細胞が融合して、細胞構造体５ａ，５ｂが連結する。

【符号の説明】

【0031】

１，４ 連結補助具
２ 棒状体
３ 押さえ具
５ 細胞構造体
６ 隙間
２ｃ 突起
３１ 挟持部
３１ａ，３１ｂ 嵌合部
３２ 握り部
３２ａ，３２ｂ アーム
３３ バネ部
３４ａ，３４ｂ 挿入孔
４１ 培養維持装置
４３ 培養チャンバ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】