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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-12-05
(45)【発行日】2022-12-13
(54)【発明の名称】保湿剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/42 20060101AFI20221206BHJP
A61K 31/164 20060101ALI20221206BHJP
A61P 17/16 20060101ALI20221206BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20221206BHJP
【ＦＩ】
A61K8/42
A61K31/164
A61P17/16
A61Q19/00
【請求項の数】
25
(21)【出願番号】P 2018033584
(22)【出願日】2018-02-27
(65)【公開番号】P2018177767
(43)【公開日】2018-11-15
【審査請求日】2020-10-05
(31)【優先権主張番号】P 2017074792
(32)【優先日】2017-04-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000000066
【氏名又は名称】味の素株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110002147
【氏名又は名称】弁理士法人酒井国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ビスワス シュヴェンドゥ
(72)【発明者】
【氏名】池田 直哲
(72)【発明者】
【氏名】桐生 翔一朗
(72)【発明者】
【氏名】服部 岳
(72)【発明者】
【氏名】本河 史恵
(72)【発明者】
【氏名】石井 博治
【審査官】駒木 亮一
(56)【参考文献】
【文献】特開２０００－０５３５２４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５０５７９５（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１４／１７５００１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開２００５－２００３９１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０００－３５５５３１（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ８／００－ ８／９９
Ａ６１Ｑ １／００－９０／００
Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／３２７
Ａ６１Ｐ １／００－４３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
Ｊａｐｉｏ－ＧＰＧ／ＦＸ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（１）：【化1】
Ａは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｘは、水素原子、または炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。〕で表される化合物を含む、保湿剤。
【請求項2】
前記式（１）で表される化合物が、下記式（２）～（６）：【化2】
ＡおよびＢはそれぞれ、前記式（１）のものと同じである。〕のいずれか一つにより表される化合物である、請求項１記載の保湿剤。
【請求項3】
前記式（１）で表される化合物が、前記式（２）で表される化合物である、請求項２記載の保湿剤。
【請求項4】
前記式（１）で表される化合物が、前記式（３）で表される化合物である、請求項２記載の保湿剤。
【請求項5】
前記式（１）で表される化合物が、前記式（４）で表される化合物である、請求項２記載の保湿剤。
【請求項6】
前記式（１）で表される化合物が、前記式（５）で表される化合物である、請求項２記載の保湿剤。
【請求項7】
前記式（１）で表される化合物が、前記式（６）で表される化合物である、請求項２記載の保湿剤。
【請求項8】
Ａが、炭素原子数１～１１の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、請求項１～７のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項9】
Ａが、炭素原子数７～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、請求項１～７のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項10】
Ａが、炭素原子数７～１１の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである、請求項８または９記載の保湿剤。
【請求項11】
Ａが、炭素原子数７の直鎖のアルキルである、請求項１０記載の保湿剤。
【請求項12】
Ｂが、炭素原子数２～８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、請求項１～１１のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項13】
Ｂが、炭素原子数２もしくは３の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、請求項１２記載の保湿剤。
【請求項14】
Ａ、ＢおよびＸにおける炭化水素基がアルキルである、請求項１～１３のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項15】
前記式（２）で表される化合物が、Ｎ－オクタノイルイソロイシンエチルエステル、Ｎ－オクタノイルイソロイシンイソプロピルエステル、Ｎ－ラウロイルイソロイシンエチルエステル、またはＮ－ラウロイルイソロイシンイソプロピルエステルである、請求項３記載の保湿剤。
【請求項16】
前記式（３）で表される化合物が、Ｎ－オクタノイルロイシンエチルエステル、Ｎ－オクタノイルロイシンイソプロピルエステル、Ｎ－ラウロイルロイシンエチルエステル、またはＮ－デカノイルロイシンイソプロピルエステルである、請求項４記載の保湿剤。
【請求項17】
前記式（４）で表される化合物が、Ｎ－オクタノイルアラニンエチルエステル、Ｎ－オクタノイルアラニンイソプロピルエステル、またはＮ－デカノイルアラニンイソプロピルエステルである、請求項５記載の保湿剤。
【請求項18】
前記式（５）で表される化合物が、Ｎ－ヘキサノイルバリンエチルエステル、Ｎ－オクタノイルバリンエチルエステル、Ｎ－オクタノイルバリンイソプロピルエステル、Ｎ－デカノイルバリンイソプロピルエステル、またはＮ－ラウロイルバリンエチルエステルである、請求項６記載の保湿剤。
【請求項19】
前記式（６）で表される化合物が、Ｎ－オクタノイルグリシンエチルエステル、またはＮ－オクタノイルグリシンイソプロピルエステルである、請求項７記載の保湿剤。
【請求項20】
角層機能改善作用を有する、請求項１～１９のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項21】
プロフィラグリン、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、およびロリクリンからなる群より選ばれる１または２以上のタンパク質の産生促進作用を有する、請求項１～２０のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項22】
前記化合物を０．０１～１０００ｍＭの濃度で含む組成物である、請求項１～２１のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項23】
保湿剤が皮膚外用剤である、請求項１～２２のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項24】
保湿剤が化粧料である、請求項１～２２のいずれか一項記載の保湿剤。
【請求項25】
化粧料がリーブオン化粧料である、請求項２４記載の保湿剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、保湿剤などに関する。
【背景技術】
【0002】
角層は、内部で水分を保持する保湿能と、外界からの外来物（例、異物、ウイルスおよび細菌）の侵入を抑制するバリア能を角層機能として備えている。このような角層機能に作用する物質として、皮脂、細胞間脂質、天然保湿因子等が知られている。
【0003】
皮膚組織の顆粒層内に貯蔵されているプロフィラグリンは、角化の際に脱リン酸化を経てフィラグリンに分解される。フィラグリンは、顆粒層から角層に移動して、ケラチン繊維と結合及び凝集し、ケラチンパターンを形成する。その後、フィラグリンは、ウロカニン酸等の低分子に分解されて、保水、紫外線吸収に関与する天然保湿因子となる。そのため、フィラグリンの産生が促進されるほど、その分解物である天然保湿因子の量が増えて、肌の保湿能が向上すると考えられる。
【0004】
角層を構成する角質細胞と角質細胞間に存在する細胞間脂質等により、外界からの外来物の侵入が抑制されている。そのため、角質細胞の数や大きさ等が不十分であると、角層に隙間が生じ、バリア能が低下する。
【0005】
ケラチン１０等のケラチンとフィラグリンとが凝集した構造体を包含する角質細胞の周辺には、角質細胞の細胞膜を裏打ちするきわめて強靭で巨大な不溶性構造物である周辺帯が存在している。周辺帯の主な構造要素は、有棘細胞で産生されるインボルクリン、顆粒細胞で産生されるロリクリン等のタンパク質であり、これらがトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）１等の酵素により架橋されている。そのため、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、ロリクリンは、角質細胞の形成に強く影響し、肌のバリア能と関連すると考えられる。
【0006】
フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、及びロリクリンの発現は、グリシルプロリン等の特定のペプチドにより促進されることが報告されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】国際公開第２０１４／１７５００１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
しかし、グリシルプロリン等の特定のペプチドは、フィラグリン等保湿関連タンパク質の発現促進作用が弱く、角層内部で水分を保持する保湿能の改善には不十分であると考えられる。このような特定のペプチドはまた、肌のバリア能と関連するタンパク質の発現促進作用も弱く、外来物の侵入を抑制するバリア能の改善にも不十分であると考えられる。すなわち、このような特定のペプチドは、角質機能の改善に不十分であると考えられる。
【0009】
本発明は、角層内部で水分を保持する保湿能を改善できる保湿剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは、鋭意検討した結果、特定のアシル中性アミノ酸エステルが角層内部で水分を保持する保湿能の改善に関連するタンパク質の産生を向上できること、したがって、保湿剤として有望であることを見出した。本発明者らはまた、特定のアシル中性アミノ酸エステルが外来物の侵入を抑制するバリア能も改善できる付加価値の高い保湿剤として有用であることなどを見出し、本発明を完成するに至った。
【0011】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕下記式（１）：
〔式中、
Ａは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｘは、水素原子、または炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。〕で表される化合物を含む、保湿剤。
〔２〕前記式（１）で表される化合物が、下記式（２）～（６）：
〔式中、
ＡおよびＢはそれぞれ、前記式（１）のものと同じである。〕のいずれか一つにより表される化合物である、〔１〕の保湿剤。
〔３〕Ａが、炭素原子数１～１１の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕または〔２〕の保湿剤。
〔４〕Ｂが、炭素原子数２～８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕～〔３〕のいずれかの保湿剤。
〔５〕Ｂが、炭素原子数２もしくは３の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔４〕の保湿剤。
〔６〕Ａが、炭素原子数７～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕～〔５〕のいずれかの保湿剤。
〔７〕Ａ、ＢおよびＸにおける炭化水素基がアルキルである、〔１〕～〔６〕のいずれかの保湿剤。
〔８〕角層機能改善作用を有する、〔１〕～〔７〕のいずれかの保湿剤。
〔９〕プロフィラグリン、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、およびロリクリンからなる群より選ばれる１または２以上のタンパク質の産生促進作用を有する、〔１〕～〔８〕のいずれかの保湿剤。
〔１０〕前記化合物を０．０１～１０００ｍＭの濃度で含む組成物である、〔１〕～〔９〕のいずれかの保湿剤。
〔１１〕保湿剤が皮膚外用剤である、〔１〕～〔１０〕のいずれかの保湿剤。
〔１２〕保湿剤が化粧料である、〔１〕～〔１１〕のいずれかの保湿剤。
〔１３〕化粧料がリーブオン化粧料である、〔１２〕の保湿剤。
〔１〕下記式（１）：
【化1】
Ａは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、
Ｘは、水素原子、または炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。〕で表される化合物を含む、保湿剤。
〔２〕前記式（１）で表される化合物が、下記式（２）～（６）：
【化2】
ＡおよびＢはそれぞれ、前記式（１）のものと同じである。〕のいずれか一つにより表される化合物である、〔１〕の保湿剤。
〔３〕Ａが、炭素原子数１～１１の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕または〔２〕の保湿剤。
〔４〕Ｂが、炭素原子数２～８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕～〔３〕のいずれかの保湿剤。
〔５〕Ｂが、炭素原子数２もしくは３の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔４〕の保湿剤。
〔６〕Ａが、炭素原子数７～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である、〔１〕～〔５〕のいずれかの保湿剤。
〔７〕Ａ、ＢおよびＸにおける炭化水素基がアルキルである、〔１〕～〔６〕のいずれかの保湿剤。
〔８〕角層機能改善作用を有する、〔１〕～〔７〕のいずれかの保湿剤。
〔９〕プロフィラグリン、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、およびロリクリンからなる群より選ばれる１または２以上のタンパク質の産生促進作用を有する、〔１〕～〔８〕のいずれかの保湿剤。
〔１０〕前記化合物を０．０１～１０００ｍＭの濃度で含む組成物である、〔１〕～〔９〕のいずれかの保湿剤。
〔１１〕保湿剤が皮膚外用剤である、〔１〕～〔１０〕のいずれかの保湿剤。
〔１２〕保湿剤が化粧料である、〔１〕～〔１１〕のいずれかの保湿剤。
〔１３〕化粧料がリーブオン化粧料である、〔１２〕の保湿剤。
【発明の効果】
【0012】
本発明の保湿剤は、角層内部で水分を保持する保湿能を発揮することができる。
本発明の保湿剤はまた、角層における外界からの外来物の侵入を抑制するバリア能を発揮することができる。
本発明の保湿剤はさらに、有効量の濃度範囲内において、親水性有機溶媒および疎水性有機溶媒（油）と安定的に配合することができる。特に、本発明の保湿剤は、乳化剤を使用せずとも、有効量の濃度範囲内において親水性有機溶媒と安定的に配合することができる。
本発明の保湿剤はまた、親水性有機溶媒と配合することで配合物の濡れ性が良くなり、肌馴染みを改善することができる。
本発明の保湿剤はさらに、Ｎ－アシルアミノ酸エステルにおけるアシル鎖長が長い場合であっても細胞毒性が認められ得ないため、皮膚に対する安全性の観点から優れている。
本発明の保湿剤はさらに、本発明の保湿剤と疎水性有機溶媒（油）との混合液、および本発明の保湿剤と親水性有機溶媒との混合液において透明の性状を呈することができるため、外観的に高級感を付与することができ、更に肌への視覚上の影響を回避できる。したがって、本発明の保湿剤は、例えば、塗布による白残りを軽減できるという利点がある。
本発明の保湿剤はまた、角層における外界からの外来物の侵入を抑制するバリア能を発揮することができる。
本発明の保湿剤はさらに、有効量の濃度範囲内において、親水性有機溶媒および疎水性有機溶媒（油）と安定的に配合することができる。特に、本発明の保湿剤は、乳化剤を使用せずとも、有効量の濃度範囲内において親水性有機溶媒と安定的に配合することができる。
本発明の保湿剤はまた、親水性有機溶媒と配合することで配合物の濡れ性が良くなり、肌馴染みを改善することができる。
本発明の保湿剤はさらに、Ｎ－アシルアミノ酸エステルにおけるアシル鎖長が長い場合であっても細胞毒性が認められ得ないため、皮膚に対する安全性の観点から優れている。
本発明の保湿剤はさらに、本発明の保湿剤と疎水性有機溶媒（油）との混合液、および本発明の保湿剤と親水性有機溶媒との混合液において透明の性状を呈することができるため、外観的に高級感を付与することができ、更に肌への視覚上の影響を回避できる。したがって、本発明の保湿剤は、例えば、塗布による白残りを軽減できるという利点がある。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】図１は、オクタノイルバリン（実施例３：Ｃ８Ｖａｌ）、オクタノイルアラニン（実施例４：Ｃ８Ａｌａ）、グリシルプロリン（比較例２：Ｇｌｙ－Ｐｒｏ）およびバリン（比較例３：Ｖａｌ）の各保湿関連タンパク質遺伝子の増幅量（コントロールの増幅量に対する相対値）を示す図である。試験した保湿関連タンパク質遺伝子は、左から、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１（ＴＧ１）、ケラチン１０、およびロリクリンをコードする遺伝子である（図２も同様）。
【図2】図２は、オクタノイルロイシン（実施例５：Ｃ８Ｌｅｕ）、オクタノイルイソロイシン（実施例６：Ｃ８Ｉｌｅ）、オクタノイルグリシン（実施例７：Ｃ８Ｇｌｙ）、グリシルプロリン（比較例２：Ｇｌｙ－Ｐｒｏ）およびバリン（比較例３：Ｖａｌ）の各保湿関連タンパク質遺伝子の増幅量（コントロールの増幅量に対する相対値）を示す図である。
【図3】図３は、ブタノイルバリン（実施例８：Ｃ４Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例９：Ｃ６Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１０：Ｃ８Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１１：Ｃ１０Ｖａｌ）、ラウロイル（ドデカノイル）バリン（実施例１２：Ｃ１２Ｖａｌ）およびメタノイルバリン（実施例１３：Ｃ２Ｖａｌ）の各保湿関連タンパク質遺伝子の増幅量（コントロールの増幅量に対する相対値）を示す図である。試験した保湿関連タンパク質遺伝子は、左から、フィラグリン、インボルクリン、およびトランスグルタミナーゼ１（ＴＧ１）をコードする遺伝子である。
【図4】図４は、ラウロイルバリン（実施例１４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例１７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例１８：Ｃ４Ｖａｌ）、およびアセチルバリン（実施例１９：Ｃ２Ｖａｌ）のフィラグリン遺伝子の増幅量（コントロールの増幅量に対する相対値）を示す図である。
【図5】図５は、ラウロイルアラニン（実施例２０：Ｃ１２Ａｌａ）、デカノイルアラニン（実施例２１：Ｃ１０Ａｌａ）、オクタノイルアラニン（実施例２２：Ｃ８Ａｌａ）、ヘキサノイルアラニン（実施例２３：Ｃ６Ａｌａ）、ブタノイルアラニン（実施例２４：Ｃ４Ａｌａ））のフィラグリン遺伝子の増幅量（コントロールの増幅量に対する相対値）を示す図である。
【図6】図６は、ラウロイルバリン（比較例４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例２５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例２６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例２７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例２８：Ｃ４Ｖａｌ）、およびアセチルバリン（実施例２９：Ｃ２Ｖａｌ）の細胞（コントロールの吸光度に対する百分率）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明は、上記式（１）で表される化合物を含む保湿剤を提供する。
【0015】
Ａは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。Ａにおける炭化水素基の炭素原子数は、好ましくは１６以下であり、より好ましくは１５以下であり、さらにより好ましくは１３以下であり、なおさらにより好ましくは１１以下であってもよい。Ａにおける炭化水素基の炭素原子数はまた、２以上、３以上、４以上、５以上、または６以上であってもよい。より具体的には、Ａにおける炭化水素基の炭素原子数は、好ましくは２～１６、より好ましくは３～１５、さらにより好ましくは４～１３、なおさらにより好ましくは５～１１であってもよい。Ａにおける炭化水素基は、飽和もしくは不飽和である。このような炭化水素基としては、例えば、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが挙げられる。
【0016】
Ａがアルキルである場合、アルキルは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ａにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ａにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ａにおけるアルキルとしては、例えば、メチル、エチル、プロピル（例、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル）、ペンチル（例、ｎ－ペンチル、ｉｓｏ－ペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、１－エチルプロピル）、ヘキシル（例、ｎ－ヘキシル、ｉｓｏ－ヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル）、ヘプチル（例、ｎ－ヘプチル、１－メチルヘキシル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、１，１－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル）、オクチル（例、ｎ－オクチル、１－メチルヘプチル、２－メチルヘプチル、３－メチルヘプチル、１，１－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル）、ノニル（例、ｎ－ノニル、３，５，５－トリメチルヘキシル）、デカニル（例、ｎ－デカニル）、ウンデカニル（例、ｎ－ウンデカニル）、ドデカニル（例、ｎ－ドデカニル）、トリデカニル（例、ｎ－トリデカニル）、テトラデカニル（例、ｎ－テトラデカニル）、ペンタデカニル（例、ｎ－ペンタデカニル）、ヘキサデカニル（例、ｎ－ヘキサデカニル）、およびヘプタデカニル（例、ｎ－ヘプタデカニル）が挙げられる。
【0017】
Ａがアルケニルである場合、アルケニルは、炭素原子数２～１７の直鎖もしくは分岐鎖のアルケニルである。Ａにおけるアルケニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ａにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ａにおけるアルケニルとしては、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、へキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、およびヘプタデセニルが挙げられる。
【0018】
Ａがアルキニルである場合、アルキニルは、炭素原子数２～１７の直鎖もしくは分岐鎖のアルキニルである。Ａにおけるアルキニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ａにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ａにおけるアルキニルとしては、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、へキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル、ウンデシニル、ドデシニル、トリデシニル、テトラデシニル、ペンタデシニル、ヘキサデシニル、およびヘプタデシニルが挙げられる。
【0019】
好ましくは、Ａは、炭素原子数１～１７の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ａにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ａにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。このようなアルキルの具体例は、上述したとおりである。
【0020】
特定の実施形態では、Ａにおける基の炭素原子数は、７～１７（好ましくは７～１１）であってもよい。Ａにおける基の炭素原子数が７以上である場合、上記式（１）で表される化合物は、角層機能の改善に関連する各種タンパク質をコードする遺伝子の発現を顕著に誘導でき、しかも細胞毒性が認められ得ないという利点がある。このようなタンパク質としては、例えば、皮膚組織内で天然保湿因子を生成し得るタンパク質（例、フィラグリン、プロフィラグリン）、および皮膚バリア能に関与し得るタンパク質（例、フィラグリン、インボルクリン、トランスグルタミナーゼ１、ケラチン１０、ロリクリン）が挙げられる。
【0021】
別の特定の実施形態では、Ａにおける基の炭素原子数は、６以下であってもよい。Ａにおける基の炭素原子数が６以下である場合、上記式（１）で表される化合物は、分配係数（ＬｏｇＰ）が１～４の範囲内にあり、更に分子量が５００Ｄａ以下であるため、経費吸収性に優れ、角層中に高濃度で提供することができるという利点がある。
【0022】
Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。Ｂにおける炭化水素基の炭素原子数は、好ましくは２～１５であり、より好ましくは２～１２であり、さらにより好ましくは２～８であり、なおさらにより好ましくは２～６であり、特に好ましくは２または３であってもよい。Ｂにおける炭化水素基は、飽和もしくは不飽和である。このような炭化水素基としては、例えば、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが挙げられる。
【0023】
Ｂがアルキルである場合、アルキルは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ｂにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｂにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｂにおけるアルキルとしては、例えば、エチル、プロピル（例、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル）、ペンチル（例、ｎ－ペンチル、ｉｓｏ－ペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、１－エチルプロピル）、ヘキシル（例、ｎ－ヘキシル、ｉｓｏ－ヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル）、ヘプチル（例、ｎ－ヘプチル、１－メチルヘキシル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、１，１－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル）、オクチル（例、ｎ－オクチル、１－メチルヘプチル、２－メチルヘプチル、３－メチルヘプチル、１，１－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル）、ノニル（例、ｎ－ノニル、３，５，５－トリメチルヘキシル）、デカニル（例、ｎ－デカニル）、ウンデカニル（例、ｎ－ウンデカニル）、ドデカニル（例、ｎ－ドデカニル）、トリデカニル（例、ｎ－トリデカニル）、テトラデカニル（例、ｎ－テトラデカニル）、ペンタデカニル（例、ｎ－ペンタデカニル）、ヘキサデカニル（例、ｎ－ヘキサデカニル）、ヘプタデカニル（例、ｎ－ヘプタデカニル）、およびオクタデカニル（例、ｎ－オクタデカニル）が挙げられる。
【0024】
Ｂがアルケニルである場合、アルケニルは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖のアルケニルである。Ｂにおけるアルケニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｂにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｂにおけるアルケニルとしては、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、へキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、およびオクタデセニルが挙げられる。
【0025】
Ｂがアルキニルである場合、アルキニルは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖のアルキニルである。Ｂにおけるアルキニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｂにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｂにおけるアルキニルとしては、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、へキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル、ウンデシニル、ドデシニル、トリデシニル、テトラデシニル、ペンタデシニル、ヘキサデシニル、ヘプタデシニル、およびオクタデシニルが挙げられる。
【0026】
好ましくは、Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ｂにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｂにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。このようなアルキルの具体例は、上述したとおりである。
【0027】
Ｘは、水素原子、または炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。Ｘにおける炭化水素基の炭素原子数は、例えば１～４であってもよい。Ｘにおける炭化水素基は、飽和もしくは不飽和である。このような炭化水素基としては、例えば、アルキル、アルケニル、およびアルキニルが挙げられる。
【0028】
Ｘがアルキルである場合、アルキルは、炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ｘにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｘにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｘにおけるアルキルとしては、例えば、メチル、エチル、プロピル（例、ｎ－プロピル、イソプロピル）、ブチル（例、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル）、およびペンチル（例、ｎ－ペンチル、ｉｓｏ－ペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、１－エチルプロピル）が挙げられる。
【0029】
Ｘがアルケニルである場合、アルケニルは、炭素原子数２～５の直鎖もしくは分岐鎖のアルケニルである。Ｘにおけるアルケニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｘにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｘにおけるアルケニルとしては、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、およびペンテニルが挙げられる。
【0030】
Ｘがアルキニルである場合、アルキニルは、炭素原子数２～５の直鎖もしくは分岐鎖のアルキニルである。Ｘにおけるアルキニルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｘにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。Ｘにおけるアルキニルとしては、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、およびペンチニルが挙げられる。
【0031】
好ましくは、Ｘは、炭素原子１～５の直鎖もしくは分岐鎖のアルキルである。Ｘにおけるアルキルの炭素原子数の例および好ましい例は、Ｘにおける上述した炭化水素基の炭素原子数と同様である。このようなアルキルの具体例は、上述したとおりである。
【0032】
特定の実施形態では、本発明の保湿剤は、上記式（１）〔式中、Ａは、炭素原子数２～１０の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、Ｂは、炭素原子数２～１８の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、Ｘは、炭素原子数１～５の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基である。〕で表される化合物を含んでいてもよい。
【0033】
好ましくは、上記式（１）で表される化合物は、上記式（２）～（６）のいずれか一つで表される化合物である。上記式（２）～（６）で表される化合物におけるＡおよびＢについて、炭化水素基（例、アルキル、アルケニル、アルキニル）および炭素原子数の定義、例、好ましい例および具体例は、式（１）において上述したものと同様である。
【0034】
特定の実施形態では、上記式（２）～（６）で表される化合物におけるＡおよびＢは、それぞれ独立して、異なる炭素原子数および異なる炭化水素基を有していてもよい。例えば、上記（２）～（４）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数２～１７の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、上記（５）および（６）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数６以下、または７～１７（好ましくは７～１１、より好ましくは８～１１）の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であってもよい。また、上記（２）～（４）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数２～１１の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、上記（５）および（６）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数７～１１（好ましくは８～１１）の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であってもよい。さらに、上記（２）～（４）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数５～１１の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であり、上記（５）および（６）で表される化合物におけるＡが、炭素原子数７～１１（好ましくは８～１１）の直鎖もしくは分岐鎖の炭化水素基であってもよい。
【0035】
式（１）～（６）で表される化合物は、Ｎ－アシル中性アミノ酸エステル（中性アミノ酸誘導体）に対応する。式（１）～（６）で表される化合物は、窒素原子、カルボニル基の炭素原子およびＸのいずれもが結合する炭素原子について光学異性体（Ｌ体もしくはＤ体）であってもよく、またはそれらの混合物であってもよい。好ましくは、式（１）～（６）で表される化合物は、Ｌ体である。
【0036】
本発明の保湿剤に含まれる化合物の調製は、Ｎ－アシル中性アミノ酸およびアルコールを反応させることにより適宜行うことができる。Ｎ－アシル中性アミノ酸およびアルコールの反応は、カルボン酸化合物およびアルコールからのエステルの生成のための一般的な方法により行うことができる。このような反応は、当該分野において周知である。例えば、反応は、触媒を適宜添加することにより行うことができる。反応はまた、適温（例、１５～２００℃）で数時間（例、０．５～８時間）行うことができる。より具体的には、本発明の保湿剤に含まれる化合物の調製は、後述する製造例Ａの方法により行うことができる。本発明の化合物の調製はまた、特開平１１－２４０８２８号に記載される方法においてＮ－アシル中性アミノ酸およびアルコールの種類を変更することを除き、特開平１１－２４０８２８号に記載される方法と同様にして行われてもよい。本発明の保湿剤に含まれる化合物は、有機合成分野で用いられる任意の精製方法（例、抽出）により適宜精製することができる。
【0037】
本発明の保湿剤は、例えば、化粧料、医薬品および医薬部外品等の製品の開発に有用である。本発明の保湿剤は、上記式（１）で表される化合物および担体（例、化粧料、医薬または医薬部外品として許容され得る担体）を含む組成物の形態で提供されてもよい。この場合、本発明の保湿剤は、上述した成分に加えて、任意の作用（例、生物学的作用、または化学的作用）を有する１種または２種以上（例、２種、３種、４種）の有効成分をさらに含んでいてもよい。このような有効成分としては、例えば、低分子化合物が挙げられる。
【0038】
用語「低分子化合物」とは、分子量１５００以下の化合物をいう。低分子化合物は、天然化合物または合成化合物である。低分子化合物の分子量は、１２００以下、１０００以下、９００以下、８００以下、７００以下、６００以下、５００以下、４００以下、または３００以下であってもよい。低分子化合物の分子量はまた、３０以上、４０以上、または５０以上であってもよい。低分子化合物としては、例えば、アミノ酸、オリゴペプチド、ビタミン、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、単糖、オリゴ糖、脂質、脂肪酸、およびそれらの代謝物、ならびにそれらの塩が挙げられる。
【0039】
塩としては、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、無機塩基との塩、有機塩基との塩、およびアミノ酸との塩が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、塩化水素、臭化水素、リン酸、硫酸、硝酸との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、シュウ酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸との塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、アルカリ金属（例、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例、カルシウム、マグネシウム）、および亜鉛、アルミニウム等の他の金属、ならびにアンモニウムとの塩が挙げられる。有機塩基との塩としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、プロピレンジアミン、エチレンジアミン、ピリジン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンとの塩が挙げられる。アミノ酸との塩としては、例えば、塩基性アミノ酸（例、アルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチン）、および酸性アミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）との塩が挙げられる。
【0040】
本発明の保湿剤が組成物である場合に本発明の保湿剤にさらに含まれていてもよい低分子化合物は、別の保湿剤であってもよい。本発明の保湿剤が組成物である場合に本発明の保湿剤がさらに別の保湿剤を含む場合、より保湿作用を向上できることから、このような実施形態も好ましい。
【0041】
このような別の保湿剤としては、ピロリドンカルボン酸、３－アセチル－２－エトキシカルボニル－２－メチル－１，３－チアゾリジン－４－カルボン酸、アミノ酸（例、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、ヒドロキシプロリン）、グリシルグリシン、アラニルグルタミン、ジペプチド－２（バリルトリプトファン）、ジペプチド－４（システニルグリシン）、ジペプチド－８（アラニルヒドロキシプロリン）、ジペプチド－９（グルタミルリジン）、ジペプチド－１１（システニルリジン）、ジペプチド－１７（グリシルプロリン）、ジペプチド－１９（ロイシルグルタミン酸）、ならびにそれらの塩（例、上述した塩）が挙げられる。１種または２種以上の保湿剤を組み合わせて使用することができる。
【0042】
本発明の保湿剤が組成物である場合、本発明の保湿剤はまた、増粘剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、保存剤、紫外線防止剤、香料、色素等の他の成分を含んでいてもよい。これらの成分の具体的な種類および量は、適宜設定することができる。
【0043】
増粘剤としては、例えば、カラギーナン、デキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、カルボキシビニルポリマー（カルボマー）、（アクリル酸／アクリル酸アルキル（Ｃ１０－３０））コポリマー、キサンタンガムが挙げられる。
【0044】
安定化剤としては、例えば、アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡが挙げられる。
【0045】
ｐＨ調製剤としては、例えば、上述したような水溶液（緩衝液）、塩酸等の酸性物質、水酸化ナトリウム等の塩基性物質が挙げられる。
【0046】
保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エチル、安息香酸ナトリウム、サリチル酸、ソルビン酸、パラベン（例、メチルパラベン、プロピルパラベン）、亜硫酸水素ナトリウムが挙げられる。
【0047】
紫外線防止剤としては、例えば、紫外線吸収剤（例、ｔ－ブチルメトキシジベンゾイルメタン、メトキシケイヒ酸エチルヘキシル、オキシベンゾン－３）、および紫外線散乱剤（例、酸化チタン、酸化亜鉛）が挙げられる。
【0048】
香料としては、例えば、リモネン、シトラール、メントール、バラ油、ローズ油が挙げられる。
【0049】
色素としては、例えば、有機顔料（例、赤色２０１号等の赤色顔料、青色４０４号等の青色顔料、橙色２０３号等の橙色顔料、黄色２０５号等の黄色顔料、緑色３号等の緑色顔料、ジルコニウムレーキ等の有機レーキ顔料、クロロフィル等の天然色素）、および無機顔料（例、酸化チタン等の白色顔料、酸化鉄等の有色顔料、タルク等の体質顔料、マイカ等のパール顔料）が挙げられる。
【0050】
例えば、本発明の保湿剤は、被験体（例、ヒト等の哺乳動物、鳥類、爬虫類等の動物）の所望の部位（例、皮膚、毛髪、体毛、頭皮）に有効量（例、０．００１ｍｇ～１００ｇ）を適用（例、塗布、投与）することにより、用いることができる。好ましくは、本発明の保湿剤は、ヒトに適用される。本発明の保湿剤が適用される被験体の状態は、健常な状態、または異常な状態（例、疾患）である。このような異常な状態としては、例えば、肌荒れ、皮膚の乾燥、鱗屑、ターンオーバーの乱れ、皮膚疾患（例、アトピー性皮膚炎等の皮膚炎）が挙げられる。
【0051】
本発明の保湿剤はまた、角層機能の改善に関連する上述の各種タンパク質をコードする遺伝子の発現を誘導する有効量の化合物を含むことができる。このような有効量は、遺伝子の発現を誘導できる量である限り特に限定されないが、遺伝子発現の誘導に十分な量が好ましい。このような十分な量は、例えば０．０１～１０００ｍＭの濃度であってもよい。このような十分な量はまた、化合物の使用量を低減する観点から、５００ｍＭ以下、１００ｍＭ以下、５０ｍＭ以下、１０ｍＭ以下、５ｍＭ以下、または１ｍＭ以下であってもよい。
【0052】
本発明の保湿剤はまた、化粧料または外用剤であってもよい。本発明の化粧料または外用剤は、常法に従って、例えば所望の部位（例、皮膚、毛髪、頭皮）に適用可能な任意の形態の製剤とすることができる。
【0053】
本発明の保湿剤は、好ましくは、皮膚、毛髪、または頭皮に対する化粧料または外用剤として用いることができる。皮膚に対する化粧料または外用剤としては、例えば、乳液、化粧水、クリーム、ジェル、美容液、フェイスマスクが挙げられる。毛髪に対する化粧料または外用剤としては、例えば、毛髪用乳液、ヘアトリートメント、ヘアコンディショナー、シャンプー、ヘアローションが挙げられる。頭皮に対する化粧料または外用剤としては、例えば、育毛剤が挙げられる。好ましい化粧料としては、例えば、リーブオン化粧料、乳液、化粧水、クリーム、ジェル、美容液、フェイスマスクが挙げられる。好ましい外用剤としては、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ムース剤、ゲルが挙げられる。
【実施例】
【0054】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。以下の製造例において原料として用いたＮ－アシル中性アミノ酸は全てＬ体である。
【0055】
製造例Ａ：アルコールおよびＮ－アシル中性アミノ酸からのＮ－アシル中性アミノ酸エステルの合成
エタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）またはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）にＮ－アシル中性アミノ酸（０．１４ｍｏｌ）を添加し、混合した。混合物にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（５．３ｇ、０．０３ｍｏｌ）を添加し、アルコールが蒸発されないように還流管を付け、バス温１２５℃で３時間撹拌した。生成物を真空減圧により濃縮した後、生成物を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、飽和重曹水（２４０ｍＬ）で４回洗浄した。有機相をさらに超純水（４８０ｍＬ）で２回洗浄した。硫酸ナトリウムによって有機層から水を除去した。更に、酸ナトリウムをろ過して除去した後、有機層を真空減圧により濃縮して生成物（アシル中性アミノ酸エステル）を得た。
エタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）またはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）にＮ－アシル中性アミノ酸（０．１４ｍｏｌ）を添加し、混合した。混合物にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（５．３ｇ、０．０３ｍｏｌ）を添加し、アルコールが蒸発されないように還流管を付け、バス温１２５℃で３時間撹拌した。生成物を真空減圧により濃縮した後、生成物を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、飽和重曹水（２４０ｍＬ）で４回洗浄した。有機相をさらに超純水（４８０ｍＬ）で２回洗浄した。硫酸ナトリウムによって有機層から水を除去した。更に、酸ナトリウムをろ過して除去した後、有機層を真空減圧により濃縮して生成物（アシル中性アミノ酸エステル）を得た。
【0056】
製造例１：Ｎ－オクタノイルアラニンイソプロピルエステル（Ｃ８Ａｌａ－ｉＰＡ）の製造
【0057】
【化3】
【0058】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルアラニン（Ｃ８Ａｌａ、３０．００ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｖａｌ－ｉＰＡを得た（収率９７％）。
【0059】
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｒ．ｔ．）：δ６．０７７－６．０９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），５．０１５－５．０７８（１Ｈ，ｓｅｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．５１１－４．５８３（１Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．１８４－２．２２２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．５９９－１．６６９（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．３７２－１．３９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．２４４－１．２９８（１４Ｈ，ｍ），０．８５９－０．８９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）ｐｐｍ．
【0060】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２５８．２［Ｍ＋Ｈ］＋，２８０．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0061】
製造例２：Ｎ－オクタノイルバリンイソプロピルエステル（Ｃ８Ｖａｌ－ｉＰＡ）の製造
【0062】
【化4】
【0063】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ、３４．０６ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って８時間反応されることによりＣ８Ｖａｌ－ｉＰＡを得た（収率９３％）。
【0064】
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｒ．ｔ．）：δ５．９５５－５．９７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），５．０２４－５．０８７（１Ｈ，ｓｅｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．５２８－４．５６１（１Ｈ，ｄｄ），２．２１６－２．２５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．１３５－２．１８２（１Ｈ，ｓｅｘ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．６１０－１．７６５（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２５６－１．３１４（１４Ｈ，ｍ），０．８６０－０．９４９（９Ｈ，ｍ）ｐｐｍ．
【0065】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２８６．２［Ｍ＋Ｈ］＋，３０８．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0066】
製造例３：Ｎ－オクタノイルグリシンイソプロピルエステル（Ｃ８Ｇｌｙ－ｉＰＡ）の製造
【0067】
【化5】
【0068】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルグリシン（Ｃ８Ｇｌｙ、２８．１８ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｇｌｙ－ｉＰＡを得た（収率９７％）。
【0069】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋，２６６．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0070】
製造例４：Ｎ－オクタノイルイソロイシンイソプロピルエステル（Ｃ８Ｉｌｅ－ｉＰＡ）の製造
【0071】
【化6】
【0072】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルイソロイシン（Ｃ８Ｉｌｅ、３６．０３ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｉｌｅ－ｉＰＡを得た（収率７１％）。
【0073】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３００．２［Ｍ＋Ｈ］＋，３２２．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0074】
製造例５：Ｎ－オクタノイルロイシンイソプロピルエステル（Ｃ８Ｌｅｕ－ｉＰＡ）の製造
【0075】
【化7】
【0076】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルロイシン（Ｃ８Ｌｅｕ、３６．０３ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｌｅｕ－ｉＰＡを得た（収率９７％）。
【0077】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３００．２［Ｍ＋Ｈ］＋，３２２．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0078】
製造例６：Ｎ－ラウロイルイソロイシンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ｉｌｅ－ｉＰＡ）の製造
【0079】
【化8】
【0080】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－ラウロイルイソロイシン（Ｃ１２Ｉｌｅ、４３．８９ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１２Ｉｌｅ－ｉＰＡを得た（収率８５％）。
【0081】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３５６．３［Ｍ＋Ｈ］＋，３７８．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0082】
製造例７：Ｎ－オクタノイルアラニンエチルエステル（Ｃ８Ａｌａ－Ｅｔ）の製造
【0083】
【化9】
【0084】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルアラニン（Ｃ８Ａｌａ、３０．００ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｖａｌ－Ｅｔを得た（収率９０％）。
【0085】
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｒ．ｔ．）：δ６．０６３－６．０７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．５５２－４．６２４（１Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．１７６－４．２３０（２Ｈ，q，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．１８６－２．２２４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．５９９－１．６７０（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．３８９－１．４０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．２６７－１．３０２（１１Ｈ，ｍ），０．８６０－０．８９２（３Ｈ，ｍ）ｐｐｍ．
【0086】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２４４．２［Ｍ＋Ｈ］＋，２６６．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0087】
製造例８：Ｎ－オクタノイルバリンエチルエステル（Ｃ８Ｖａｌ－Ｅｔ）の製造
【0088】
【化10】
【0089】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ、３４．０６ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って８時間反応させることによりＣ８Ｖａｌ－Ｅｔを得た（収率９３％）。
【0090】
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｒ．ｔ．）：δ５．９５２－５．９７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．５５７－４．５９１（１Ｈ，ｄｄ），４．１５９－４．２４１（２Ｈ，ｍ），２．２１７－２．２５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．１２１－２．２０２（１Ｈ，ｓｅｘ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．６１０－１．６８１（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２６８－１．３０３（１１Ｈ，ｍ），０．８６０－０．９５２（９Ｈ，ｍ）ｐｐｍ．
【0091】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２７２．２［Ｍ＋Ｈ］＋，２９４．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0092】
製造例９：Ｎ－オクタノイルグリシンエチルエステル（Ｃ８Ｇｌｙ－Ｅｔ）の製造
【0093】
【化11】
【0094】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルグリシン（Ｃ８Ｇｌｙ、２８．１８ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｇｌｙ－Ｅｔを得た（収率９６％）。
【0095】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２３０．２［Ｍ＋Ｈ］＋，２５２．１［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0096】
製造例１０：Ｎ－オクタノイルイソロイシンエチルエステル（Ｃ８Ｉｌｅ－Ｅｔ）の製造
【0097】
【化12】
【0098】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルイソロイシン（Ｃ８Ｉｌｅ、３６．０３ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｉｌｅ－Ｅｔを得た（収率９７％）。
【0099】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２８６．２［Ｍ＋Ｈ］＋，３０８．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0100】
製造例１１：Ｎ－オクタノイルロイシンエチルエステル（Ｃ８Ｌｅｕ－Ｅｔ）の製造
【0101】
【化13】
【0102】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－オクタノイルロイシン（Ｃ８Ｌｅｕ、３６．０３ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ８Ｇｌｙ－Ｅｔを得た（収率９８％）。
【0103】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２８６．２［Ｍ＋Ｈ］＋，３０８．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0104】
製造例１２：Ｎ－ラウロイルイソロイシンエチルエステル（Ｃ１２Ｉｌｅ－Ｅｔ）の製造
【0105】
【化14】
【0106】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－ラウロイルイソロイシン（Ｃ１２Ｉｌｅ、４３．８９ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１２Ｉｌｅ－Ｅｔを得た（収率９１％）。
【0107】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３４２．３［Ｍ＋Ｈ］＋，３６４．３［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0108】
製造例１３：Ｎ－ラウロイルロイシンエチルエステル（Ｃ１２Ｌｅｕ－Ｅｔ）の製造
【0109】
【化15】
【0110】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－ラウロイルロイシン（Ｃ１２Ｌｅｕ、４３．８９ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１２Ｌｅｕ－Ｅｔを得た（収率８８％）。
【0111】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３４２．３［Ｍ＋Ｈ］＋，３６４．３［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0112】
製造例１４：Ｎ－ラウロイルバリンエチルエステル（Ｃ１２Ｖａｌ－Ｅｔ）の製造
【0113】
【化16】
【0114】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－ラウロイルバリン（Ｃ１２Ｖａｌ、４１．９２ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って８時間反応させることによりＣ１２Ｖａｌ－Ｅｔを得た（収率８７％）。
【0115】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ３２８．３［Ｍ＋Ｈ］＋，３５０．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0116】
製造例１５：Ｎ－デカノイルバリンイソプロピルエステル（Ｃ１０Ｖａｌ－ｉＰＡ）の製造
【0117】
【化17】
【0118】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－デカノイルバリン（Ｃ１０Ｖａｌ、３８ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１０Ｖａｌ－ｉＰＡを得た（収率９８％）。
【0119】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ ３１４．５［Ｍ＋Ｈ］＋，３３６．４［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0120】
製造例１６：Ｎ－デカノイルアラニンイソプロピルエステル（Ｃ１０Ａｌａ－ｉＰＡ）の製造
【0121】
【化18】
【0122】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－デカノイルアラニン（Ｃ１０Ａｌａ、３４．６ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１０Ａｌａ－ｉＰＡを得た（収率９７％）。
【0123】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ ２８５．４［Ｍ＋Ｈ］＋，３０７．４［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0124】
製造例１７：Ｎ－デカノイルロイシンイソプロピルエステル（Ｃ１０Ｌｅｕ－ｉＰＡ）の製造
【0125】
【化19】
【0126】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－デカノイルロイシン（Ｃ１０Ｌｅｕ、３９．９ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはイソプロピルアルコール（４１８ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って反応させることによりＣ１０Ｌｅｕ－ｉＰＡを得た（収率９７％）。
【0127】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ ３２８．５［Ｍ＋Ｈ］＋，３５０．３［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0128】
製造例１８：Ｎ－ヘキサノイルバリンエチルエステル（Ｃ６Ｖａｌ－Ｅｔ）の製造
【0129】
【化20】
【0130】
Ｎ－アシルアミノ酸としてＮ－ヘキサノイルバリン（Ｃ６Ｖａｌ、３０．１４ｇ、０．１４ｍｏｌ）、アルコールとしてはエタノール（３２０ｍＬ、５．４８ｍｏｌ）を使用し、製造例Ａの合成法に従って８時間反応させることによりＣ６Ｖａｌ－Ｅｔを得た（収率８２％）。
【0131】
ＥＳＩ－ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ） ｍ／ｚ ２４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋，２６６．２［Ｍ＋Ｎａ］＋
【0132】
参考製造例１～３：Ｎ－ラウリルバリンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ）、Ｎ－ラウリルアラニンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－ｉＰＡ）、およびＮ－ラウリルアラニンエチルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－Ｅｔ）の製造
Ｎ－ラウリルバリンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ）、Ｎ－ラウリルアラニンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－ｉＰＡ）、およびＮ－ラウリルアラニンエチルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－Ｅｔ）の製造は、特開平１１－２４０８２８号公報の記載に従って行った。
Ｎ－ラウリルバリンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ）、Ｎ－ラウリルアラニンイソプロピルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－ｉＰＡ）、およびＮ－ラウリルアラニンエチルエステル（Ｃ１２Ａｌａ－Ｅｔ）の製造は、特開平１１－２４０８２８号公報の記載に従って行った。
【0133】
実施例１：アシル中性アミノ酸エステルの評価
（１）疎水性有機溶媒（油）との相溶性の評価
１ｇの各種サンプルを測り取り、５ｇの流動パラフィンに添加し、２５℃で１０分間撹拌して混合した。撹拌停止後、２５℃で１０分静置し、目視により各種サンプルおよび流動パラフィンの分離状態を確認し、下記の基準によって評価を行った。
とても好ましい（Ａ）：全く分離が確認されず透明な溶液
好ましい（Ｂ）：ほとんど分離が確認されず透明な溶液
あまり好ましくない（Ｃ）：局所的に分離し濁りが生じた
全く好ましくない：（Ｄ）：明確に分離が起きた
（１）疎水性有機溶媒（油）との相溶性の評価
１ｇの各種サンプルを測り取り、５ｇの流動パラフィンに添加し、２５℃で１０分間撹拌して混合した。撹拌停止後、２５℃で１０分静置し、目視により各種サンプルおよび流動パラフィンの分離状態を確認し、下記の基準によって評価を行った。
とても好ましい（Ａ）：全く分離が確認されず透明な溶液
好ましい（Ｂ）：ほとんど分離が確認されず透明な溶液
あまり好ましくない（Ｃ）：局所的に分離し濁りが生じた
全く好ましくない：（Ｄ）：明確に分離が起きた
【0134】
（２）親水性有機溶媒との相溶性の評価
０．５ｇの各種サンプルを測り取り、１０ｇの１，３－ブチレングリコールに添加し、２５℃で１０分間撹拌して混合した。撹拌停止後、２５℃で１０分静置し、目視により各種サンプルおよび１，３－ブチレングリコールの分離状態を確認し、下記の基準によって評価を行った。
とても好ましい（Ａ）：全く分離が確認されず透明な溶液
好ましい（Ｂ）：ほとんど分離が確認されず透明な溶液
あまり好ましくない（Ｃ）：局所的に分離し濁りが生じた
全く好ましくない：（Ｄ）：明確に分離が起きた
０．５ｇの各種サンプルを測り取り、１０ｇの１，３－ブチレングリコールに添加し、２５℃で１０分間撹拌して混合した。撹拌停止後、２５℃で１０分静置し、目視により各種サンプルおよび１，３－ブチレングリコールの分離状態を確認し、下記の基準によって評価を行った。
とても好ましい（Ａ）：全く分離が確認されず透明な溶液
好ましい（Ｂ）：ほとんど分離が確認されず透明な溶液
あまり好ましくない（Ｃ）：局所的に分離し濁りが生じた
全く好ましくない：（Ｄ）：明確に分離が起きた
【0135】
（３）性状評価
各化合物を４℃に一日冷却した後、室温（２５℃）で３日間放置した。３日後、各化合物の性状を室温（２５℃）で確認した。
好ましい（Ａ）：性状が室温（２５℃）で液状である。したがって、加熱せずに他の液状成分と室温で混ぜるだけで処方を作製することが容易である。
好ましくない（Ｂ）：性状が室温（２５℃）で固形または結晶形であり、加熱せずに他の液状成分と室温で混ぜるだけで処方を作製することが困難である。
各化合物を４℃に一日冷却した後、室温（２５℃）で３日間放置した。３日後、各化合物の性状を室温（２５℃）で確認した。
好ましい（Ａ）：性状が室温（２５℃）で液状である。したがって、加熱せずに他の液状成分と室温で混ぜるだけで処方を作製することが容易である。
好ましくない（Ｂ）：性状が室温（２５℃）で固形または結晶形であり、加熱せずに他の液状成分と室温で混ぜるだけで処方を作製することが困難である。
【0136】
【表1】
【0137】
その結果、アシル中性アミノ酸エステルは、疎水性有機溶媒（油）および親水性有機溶媒と安定的に配合することができた（表１）。したがって、アシル中性アミノ酸エステルは、製造・使用の面において優れることが示された。
アシル中性アミノ酸エステルはまた、処方の作製を容易にした（表１）。したがって、アシル中性アミノ酸エステルは、ハンドリング性に優れることが示された。
アシル中性アミノ酸エステルはまた、処方の作製を容易にした（表１）。したがって、アシル中性アミノ酸エステルは、ハンドリング性に優れることが示された。
【0138】
実施例２：アシル中性アミノ酸エステルのエステラーゼによる加水分解の評価
５ｍｇのアシル中性アミノ酸エステルを１ｘＰＢＳバッファーに添加し、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を２．１５μｌ（０．２ｗｔ％）添加した後超音波照射によって均一に混合した。混合物にエステラーゼ（Ｅｓｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｌｉｖｅｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）のバッファー溶液をアシルアミノ酸１分子対してエステラーゼが５Ｕｎｉｔになるように添加し、撹拌して混合した。この混合物を３０℃に加温した振とう機において２４時間振とう・撹拌し反応させた。反応物を１２０００ｘｇの遠心分離器によって遠心し、上澄みを高速液体クロマトグラフィー（島津社製）に分析した。コントロールとしてはエステラーゼ溶液の代わりにバッファーのみを添加した。使用したエステラーゼ（Ｅｓｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｌｉｖｅｒ）は、ヒト皮膚中に存在するエステラーゼ酵素のモデルとして使用した〔Ｂｏｎｉｎａ，Ｆ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１４，１２３－１３４（２００１）；Ｗｏｎｇ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，５２，１９１－２０２（１９８９）；Ｖａｖｒｏｖａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ．１０４，４１－４９（２００５）〕。
５ｍｇのアシル中性アミノ酸エステルを１ｘＰＢＳバッファーに添加し、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を２．１５μｌ（０．２ｗｔ％）添加した後超音波照射によって均一に混合した。混合物にエステラーゼ（Ｅｓｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｌｉｖｅｒ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）のバッファー溶液をアシルアミノ酸１分子対してエステラーゼが５Ｕｎｉｔになるように添加し、撹拌して混合した。この混合物を３０℃に加温した振とう機において２４時間振とう・撹拌し反応させた。反応物を１２０００ｘｇの遠心分離器によって遠心し、上澄みを高速液体クロマトグラフィー（島津社製）に分析した。コントロールとしてはエステラーゼ溶液の代わりにバッファーのみを添加した。使用したエステラーゼ（Ｅｓｔｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｌｉｖｅｒ）は、ヒト皮膚中に存在するエステラーゼ酵素のモデルとして使用した〔Ｂｏｎｉｎａ，Ｆ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１４，１２３－１３４（２００１）；Ｗｏｎｇ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，５２，１９１－２０２（１９８９）；Ｖａｖｒｏｖａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ．１０４，４１－４９（２００５）〕。
【0139】
アシル中性アミノ酸エステルのエステル結合がエステラーゼによって加水分解されると、ＨＰＬＣクロマトグラム上では、アシル中性アミノ酸エステルのピーク面積が減少し、アシル中性アミノ酸と同一溶出時間に新しいピークが確認される。このピークの出現によってアシル中性アミノ酸エステルがエステラーゼによって加水分解され、アシル中性アミノ酸が生成されたと結論付けることができる。
【0140】
試験物質としては、製造例１～１８、および参考製造例１～３により製造した化合物を用いた。
【0141】
エステラーゼの存在下では、Ｃ６Ｖａｌ－Ｅｔ、Ｃ８Ａｌａ－ｉＰＡ、Ｃ８Ｖａｌ－ｉＰＡ、Ｃ８Ｇｌｙ－ｉＰＡ、Ｃ８Ｉｌｅ－ｉＰＡ、Ｃ８Ｌｅｕ－ｉＰＡ、Ｃ８Ａｌａ－Ｅｔ、Ｃ８Ｖａｌ－Ｅｔ、Ｃ８Ｇｌｙ－Ｅｔ、Ｃ８Ｉｌｅ－Ｅｔ、Ｃ８Ｌｅｕ－Ｅｔ、Ｃ１２Ｉｌｅ－Ｅｔ、Ｃ１０Ａｌａ－ｉＰＡ、Ｃ１０Ｖａｌ－ｉＰＡ、Ｃ１０Ｌｅｕ－ｉＰＡ、Ｃ１２Ａｌａ－Ｅｔ、Ｃ１２Ａｌａ－ｉＰＡ、Ｃ１２Ｖａｌ－Ｅｔ、Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ、Ｃ１２Ｉｌｅ－ｉＰＡ、Ｃ１２Ｌｅｕ－Ｅｔのすべてが加水分解され、Ｃ６Ｖａｌ、Ｃ８Ａｌａ、Ｃ８Ｖａｌ、Ｃ８Ｇｌｙ、Ｃ８Ｉｌｅ、Ｃ８Ｌｅｕ、Ｃ１０Ａｌａ、Ｃ１０Ｖａｌ、Ｃ１０Ｌｅｕ、Ｃ１２Ａｌａ、Ｃ１２Ｖａｌ、Ｃ１２Ｉｌｅ、Ｃ１２Ｌｅｕが生成された。
【0142】
実施例３～７および比較例２～３：オクタノイル中性アミノ酸による保湿関連タンパク質等の遺伝子の増幅量の比較
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、３０ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、６０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（オクタノイルバリン（実施例３：Ｃ８Ｖａｌ）、オクタノイルアラニン（実施例４：Ｃ８Ａｌａ）、オクタノイルロイシン（実施例５：Ｃ８Ｌｅｕ）、オクタノイルイソロイシン（実施例６：Ｃ８Ｉｌｅ）、オクタノイルグリシン（実施例７：Ｃ８Ｇｌｙ）、グリシルプロリン（比較例２：Ｇｌｙ－Ｐｒｏ）、およびバリン（比較例３：Ｖａｌ））を各図に示す濃度となるように添加し、４８時間反応させた。反応後、細胞より全ＲＮＡを抽出し、逆転写を行い、リアルタイムＰＣＲにて標的遺伝子（フィラグリン、インボルクリン、卜ランスグルタミナーゼ（ＴＧ）１、ケラチン１０、およびロリクリン）の増幅量を測定し（ｎ＝２）、コントロール（無添加）の増幅量と比較した。補正遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いた。計算は比較ＣＴ法を用い、プライマーおよびプロ一ブはＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎを用い、蛍光色素はＦＡＭを用いた。結果を図１～２に示す。
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、３０ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、６０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（オクタノイルバリン（実施例３：Ｃ８Ｖａｌ）、オクタノイルアラニン（実施例４：Ｃ８Ａｌａ）、オクタノイルロイシン（実施例５：Ｃ８Ｌｅｕ）、オクタノイルイソロイシン（実施例６：Ｃ８Ｉｌｅ）、オクタノイルグリシン（実施例７：Ｃ８Ｇｌｙ）、グリシルプロリン（比較例２：Ｇｌｙ－Ｐｒｏ）、およびバリン（比較例３：Ｖａｌ））を各図に示す濃度となるように添加し、４８時間反応させた。反応後、細胞より全ＲＮＡを抽出し、逆転写を行い、リアルタイムＰＣＲにて標的遺伝子（フィラグリン、インボルクリン、卜ランスグルタミナーゼ（ＴＧ）１、ケラチン１０、およびロリクリン）の増幅量を測定し（ｎ＝２）、コントロール（無添加）の増幅量と比較した。補正遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いた。計算は比較ＣＴ法を用い、プライマーおよびプロ一ブはＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎを用い、蛍光色素はＦＡＭを用いた。結果を図１～２に示す。
【0143】
図１～２から明らかなとおり、実施例３～７の各標的遺伝子の増幅量は、比較例２および３と比べて高かった。これらの結果は、アシル中性アミノ酸が保湿関連タンパク質の産生を促進できることを示している。
【0144】
実施例８～１３：アシルバリンによる保湿関連タンパク質等の遺伝子の増幅量の比較
サンプルとして、ブタノイルバリン（実施例８：Ｃ４Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例９：Ｃ６Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１０：Ｃ８Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１１：Ｃ１０Ｖａｌ）、ラウロイルバリン（実施例１２：Ｃ１２Ｖａｌ）およびアセチルバリン（実施例１３：Ｃ２Ｖａｌ）を用いたこと、および、標的遺伝子をフィラグリン、インボルクリン、および卜ランスグルタミナーゼ（ＴＧ）１としたことのほかは、実施例３と同様に行った。結果を図３に示す。
サンプルとして、ブタノイルバリン（実施例８：Ｃ４Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例９：Ｃ６Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１０：Ｃ８Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１１：Ｃ１０Ｖａｌ）、ラウロイルバリン（実施例１２：Ｃ１２Ｖａｌ）およびアセチルバリン（実施例１３：Ｃ２Ｖａｌ）を用いたこと、および、標的遺伝子をフィラグリン、インボルクリン、および卜ランスグルタミナーゼ（ＴＧ）１としたことのほかは、実施例３と同様に行った。結果を図３に示す。
【0145】
図３から明らかなとおり、実施例８～１３のいずれにおいても、各標的遺伝子の増幅量がコントロールと比較して高かった。これらの結果は、炭素原子数２～１２のアシル基を有するアシル中性アミノ酸またはその塩は、アシル基の種類に拘らず保湿関連タンパク質の産生を促進できることを示している。
【0146】
実施例１４～２４：アシルバリンまたはアシルアラニンによるフィラグリン遺伝子増幅量の比較
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、１５ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、３０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（ラウロイルバリン（実施例１４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例１７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例１８：Ｃ４Ｖａｌ）、アセチルバリン（実施例１９：Ｃ２Ｖａｌ）、ラウロイルアラニン（実施例２０：Ｃ１２Ａｌａ）、デカノイルアラニン（実施例２１：Ｃ１０Ａｌａ）、オクタノイルアラニン（実施例２２：Ｃ８Ａｌａ）、ヘキサノイルアラニン（実施例２３：Ｃ６Ａｌａ）、ブタノイルアラニン（実施例２４：Ｃ４Ａｌａ））を各図に示す濃度となるように添加し、２４時間反応させた。反応後、細胞より全ＲＮＡを抽出し、逆転写を行い、リアルタイムＰＣＲにて標的遺伝子（フィラグリン）の増幅量を測定し（ｎ＝２）、コントロール（無添加）の増幅量を１００％とし、この値と比較した。補正遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いた。計算は比較ＣＴ法を用い、プライマーおよびプロ一ブはＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎを用い、蛍光色素はＦＡＭを用いた。
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、１５ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、３０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（ラウロイルバリン（実施例１４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例１５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例１６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例１７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例１８：Ｃ４Ｖａｌ）、アセチルバリン（実施例１９：Ｃ２Ｖａｌ）、ラウロイルアラニン（実施例２０：Ｃ１２Ａｌａ）、デカノイルアラニン（実施例２１：Ｃ１０Ａｌａ）、オクタノイルアラニン（実施例２２：Ｃ８Ａｌａ）、ヘキサノイルアラニン（実施例２３：Ｃ６Ａｌａ）、ブタノイルアラニン（実施例２４：Ｃ４Ａｌａ））を各図に示す濃度となるように添加し、２４時間反応させた。反応後、細胞より全ＲＮＡを抽出し、逆転写を行い、リアルタイムＰＣＲにて標的遺伝子（フィラグリン）の増幅量を測定し（ｎ＝２）、コントロール（無添加）の増幅量を１００％とし、この値と比較した。補正遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いた。計算は比較ＣＴ法を用い、プライマーおよびプロ一ブはＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎを用い、蛍光色素はＦＡＭを用いた。
【0147】
増幅量に応じて、以下の評価を行った。結果を表２～３および図４～５に示す。
とても好ましい（Ａ）：２００％以上
好ましい（Ｂ）：１００％以上２００％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：５０％以上１００％未満
全く好ましくない（Ｄ）：５０％未満
とても好ましい（Ａ）：２００％以上
好ましい（Ｂ）：１００％以上２００％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：５０％以上１００％未満
全く好ましくない（Ｄ）：５０％未満
【0148】
【表2】
【0149】
【表3】
【0150】
以上の実施例２～２４の結果（表２、３、図１～８）を考慮すると、アシル中性アミノ酸エステルは、フィラグリン等の保湿関連タンパク質の発現促進作用を向上させることができたことから、角層内部で水分を保持する保湿能を改善することができると考えられる。また、アシル中性アミノ酸エステルは肌のバリア能と関連するタンパク質の発現促進作用を向上させることができたことから、外来物の侵入を抑制するバリア能の改善することができると考えられる。また、これらの結果に加えて実施例１（表１）の結果も考慮すると、アシル中性アミノ酸エステルは、ハンドリング性に優れ、角層内部での作用により十分に角質機能改善能を示すことができると考えられる。
【0151】
実施例２５～３１：アシルバリンとアシルバリンエステルの細胞毒性の比較
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、１５ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、３０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（ラウロイルバリン（比較例４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例２５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例２６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例２７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例２８：Ｃ４Ｖａｌ）、アセチルバリン（実施例２９：Ｃ２Ｖａｌ）、ラウロイルバリン－ｉＰＡ（実施例３０：Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ）、ラウロイルバリン－Ｅｔ（実施例３１：Ｃ１２Ｖａｌ－Ｅｔ）を各図に示す濃度となるように添加し、２４時間反応させた。その後、培地を捨ててＮｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液２ｍＬ／ｗｅｌｌに置換し、さらに２時間培養した。Ｎｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液はＮｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ（クラボウ社）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地／生理食塩水（２：１）混合溶液で１／１００に希釈したものを使用した。Ｎｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液で染色した細胞は、ＰＢＳ（－）で一回洗浄した後、１％ＣａＣｌ２／１％ホルマリン溶液１．５ｍＬ／ｗｅｌｌで１分固定し、１％酢酸／５０％エタノール溶液１．５ｍＬ／ｗｅｌｌを添加して室温で２０分抽出を行い、プレートリーダーで吸光度５４０／６３０ｎｍを測定した。
ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）で前培養し、１５ｘ１０４細胞／ｍＬの濃度となるよう調整し、調整後の培養液２ｍＬ（すなわち、３０ｘ１０４細胞／ｗｅｌｌ）を６ｗｅｌｌプレートに添加して３７℃で１日培養した。サンプル（ラウロイルバリン（比較例４：Ｃ１２Ｖａｌ）、デカノイルバリン（実施例２５：Ｃ１０Ｖａｌ）、オクタノイルバリン（実施例２６：Ｃ８Ｖａｌ）、ヘキサノイルバリン（実施例２７：Ｃ６Ｖａｌ）、ブタノイルバリン（実施例２８：Ｃ４Ｖａｌ）、アセチルバリン（実施例２９：Ｃ２Ｖａｌ）、ラウロイルバリン－ｉＰＡ（実施例３０：Ｃ１２Ｖａｌ－ｉＰＡ）、ラウロイルバリン－Ｅｔ（実施例３１：Ｃ１２Ｖａｌ－Ｅｔ）を各図に示す濃度となるように添加し、２４時間反応させた。その後、培地を捨ててＮｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液２ｍＬ／ｗｅｌｌに置換し、さらに２時間培養した。Ｎｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液はＮｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ（クラボウ社）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地／生理食塩水（２：１）混合溶液で１／１００に希釈したものを使用した。Ｎｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ溶液で染色した細胞は、ＰＢＳ（－）で一回洗浄した後、１％ＣａＣｌ２／１％ホルマリン溶液１．５ｍＬ／ｗｅｌｌで１分固定し、１％酢酸／５０％エタノール溶液１．５ｍＬ／ｗｅｌｌを添加して室温で２０分抽出を行い、プレートリーダーで吸光度５４０／６３０ｎｍを測定した。
【0152】
細胞生存率に応じて、以下の評価を行った。結果を表４および図６に示す。
とても好ましい（Ａ）：９５％以上
好ましい（Ｂ）：７５％以上９５％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：５０％以上７５％未満
全く好ましくない（Ｄ）：５０％未満
とても好ましい（Ａ）：９５％以上
好ましい（Ｂ）：７５％以上９５％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：５０％以上７５％未満
全く好ましくない（Ｄ）：５０％未満
【0153】
【表4】
【0154】
実施例１４～２４の結果は、各アシル中性アミノ酸がフィラグリン遺伝子を増幅することができることを示す。また、実施例２５～３１、比較例４の結果は、実施例２５～３１の各アシル中性アミノ酸およびアシル中性アミノ酸エステルの細胞毒性が低いのに対し、比較例４のアシル中性アミノ酸の細胞毒性が高いことを示す。興味深いことに、アシル鎖長が長いＮ－アシルアミノ酸エステルは、同じくアシル鎖長が長いＮ－アシル－アミノ酸と異なり、細胞毒性が認められなかった。以上の細胞毒性の評価をまとめると、アシル中性アミノ酸エステルはアシル中性アミノ酸よりも好ましいことが理解できる。
【0155】
実施例３２：アシル中性アミノ酸エステルと親水性有機溶媒の相溶性試験
表５に記載の成分を、１．５ｍＬエッペンドルフチューブに秤量し、ボルテックスミキサー（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｖｏｒｔｅｘ Ｇｅｎｉｅ ２）による撹拌と、手を用いてサンプルを上下に激しく振とうすることにより均一撹拌し、撹拌後の様子を目視観察した。判断基準は、均一に透明溶解するものをＡ、油滴が分散し散乱光が確認できるものをＢとした。評価は、２５℃、－５℃、および４５℃で一日保存した条件下で行った。
表５に記載の成分を、１．５ｍＬエッペンドルフチューブに秤量し、ボルテックスミキサー（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｖｏｒｔｅｘ Ｇｅｎｉｅ ２）による撹拌と、手を用いてサンプルを上下に激しく振とうすることにより均一撹拌し、撹拌後の様子を目視観察した。判断基準は、均一に透明溶解するものをＡ、油滴が分散し散乱光が確認できるものをＢとした。評価は、２５℃、－５℃、および４５℃で一日保存した条件下で行った。
【0156】
【表5-1】
【0157】
【表5-2】
【0158】
その結果、アシル中性アミノ酸エステルは、有効量の濃度範囲内において親水性有機溶媒に対して溶状安定性が高かった（表５－１、５－２）。したがって、アシル中性アミノ酸エステルは、乳化剤を使用せずとも、有効量の濃度範囲内において親水性有機溶媒と安定的に配合できることが示された。
【0159】
実施例３３：アシル中性アミノ酸エステルと親水性有機溶媒の馴染み改善試験
上記相溶性試験に用いたサンプルを使い評価した（表６）。ポリスポイトを用いて、スライドガラス上に、サンプルを１滴、滴下し、５分間静置後のサンプルの広がりを、定規を用いて測定した。サンプルの広がりが大きい程、塗布時に馴染みやすいと考えられ、実使用上好ましい。アシル中性アミノ酸エステルまたは油剤を添加した多価アルコールの測定値をａ、多価アルコールのみの測定値をｂとして、次式により広がり度を評価した。広がり度は４段階評価を行った。
上記相溶性試験に用いたサンプルを使い評価した（表６）。ポリスポイトを用いて、スライドガラス上に、サンプルを１滴、滴下し、５分間静置後のサンプルの広がりを、定規を用いて測定した。サンプルの広がりが大きい程、塗布時に馴染みやすいと考えられ、実使用上好ましい。アシル中性アミノ酸エステルまたは油剤を添加した多価アルコールの測定値をａ、多価アルコールのみの測定値をｂとして、次式により広がり度を評価した。広がり度は４段階評価を行った。
【0160】
広がり度：（ａ／ｂ）ｘ１００
Ａ：１５０％以上
Ｂ：１３０％以上１５０％未満
Ｃ：１００％以上１３０％未満
Ｄ：１００％未満
Ａ：１５０％以上
Ｂ：１３０％以上１５０％未満
Ｃ：１００％以上１３０％未満
Ｄ：１００％未満
【0161】
【表6】
【0162】
その結果、アシル中性アミノ酸エステルは、親水性有機溶媒との馴染みを改善することができた（表６）。したがって、アシル中性アミノ酸エステルは、親水性有機溶媒との配合により、処方の濡れ性が良くなり、肌馴染みを改善できることが示された。
【0163】
実施例３４：オクタノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ）によるプロフィラグリン産生率の向上
まず、ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）にて３７℃、５％ＣＯ２、飽和水蒸気下で培養した。コンフルエント状態になった細胞を、６ウェルプレートに１５×１０４（細胞／ウェル）で播種した。３７℃で１日培養後、１００μＭのオクタイノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ）と１．３ｍＭのＣａＣｌ２を添加したＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地に交換し、１～２日毎に同様の培地交換を行い、６日間培養した。培養後、培地を取り除き、冷ＰＢＳ（－）にて２回洗浄し、プロテアーゼインヒビターとフォスファターゼインヒビター(ＥｚＲＩＰＡ Ｌｙｓｉｓ（ＡＴＴＯ社製）)を添加した抽出液（Ｍ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製））を２００μＬ／ウェルで各ウェルに添加し、振とう機（ＴＡＩＴＥＣ社製）にて２００ｒｐｍで５分間振とうさせた。スクレーパーで細胞をかき集め、沈殿物を含めた液体全量に２００μＬの変性剤（ＥｚＡｐｐｌｙ（ＡＴＴＯ社製））を添加後、振とう機（Ｂｉｏｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）にて１１００ｒｐｍ、１００℃で５分間、加熱振とうした。得られた溶液を遠心分離機（トミー精工社製）１００００Ｇにて４℃で１０分間遠心処理し、上澄みをウェスタンブロット用サンプルとした。
まず、ヒト正常表皮角化細胞ＮＨＥＫ（ＮＢ）（クラボウ社製）をＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２（クラボウ社製）にて３７℃、５％ＣＯ２、飽和水蒸気下で培養した。コンフルエント状態になった細胞を、６ウェルプレートに１５×１０４（細胞／ウェル）で播種した。３７℃で１日培養後、１００μＭのオクタイノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ）と１．３ｍＭのＣａＣｌ２を添加したＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地に交換し、１～２日毎に同様の培地交換を行い、６日間培養した。培養後、培地を取り除き、冷ＰＢＳ（－）にて２回洗浄し、プロテアーゼインヒビターとフォスファターゼインヒビター(ＥｚＲＩＰＡ Ｌｙｓｉｓ（ＡＴＴＯ社製）)を添加した抽出液（Ｍ－ＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製））を２００μＬ／ウェルで各ウェルに添加し、振とう機（ＴＡＩＴＥＣ社製）にて２００ｒｐｍで５分間振とうさせた。スクレーパーで細胞をかき集め、沈殿物を含めた液体全量に２００μＬの変性剤（ＥｚＡｐｐｌｙ（ＡＴＴＯ社製））を添加後、振とう機（Ｂｉｏｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）にて１１００ｒｐｍ、１００℃で５分間、加熱振とうした。得られた溶液を遠心分離機（トミー精工社製）１００００Ｇにて４℃で１０分間遠心処理し、上澄みをウェスタンブロット用サンプルとした。
【0164】
つぎに、ゲル１レーンあたり各ウェスタンブロット用サンプル２０μＬ（プロフィラグリン）、または（１）で調製したウェスタンブロット用サンプルを５０倍希釈した溶液５μＬ（ＧＡＰＤＨ）をｅ－ＰＡＧＥＬ ７．５％（ＡＴＴＯ社製）にアプライし、電気泳動装置（ＡＴＴＯ社製）にて２１ｍＡの定電流で１時間泳動した。電気泳動後のゲルからＰＶＤＦ膜に転写し、ＴＢＳ－Ｔ（ＡＴＴＯ社製）にて洗浄後、ＥｚＢｌｏｃｋ ＢＳＡ（ＡＴＴＯ社製）を用いてブロッキングした。次に、１次抗体液（Ａｎｔｉ Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ （ＡＫＨ１）抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）（プロフィラグリン）、Ａｎｔｉ ＧＡＰＤＨ（６Ｃ５）抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）（ＧＡＰＤＨ））にて抗原抗体反応を行った。２次抗体（Ａｎｔｉ－ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ），Ｍｏｕｓｅ，Ｇｏａｔ－ｐｏｌｙ，ＨＲＰ（ＫＰＬ社製））にて標識化し、化学発光法によりイメージアナライザー（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）でバンド強度(２５０－４００ｋＤａ（プロフィラグリン），３７ｋＤａ（ＧＡＰＤＨ）)を数値化した（ｎ＝２）。プロフィラグリンの発現量はＧＡＰＤＨの発現量にて規格化し、コントロール（オクタイノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ）無添加）の産生量を１００％として比較した。
【0165】
得られた結果を以下のとおり評価した。結果を表７に示す。
とても好ましい（Ａ）：２５０％以上
好ましい（Ｂ）：１５０％以上２５０％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：１００％以上１５０％未満
全く好ましくない（Ｄ）：１００％未満
とても好ましい（Ａ）：２５０％以上
好ましい（Ｂ）：１５０％以上２５０％未満
あまり好ましくない（Ｃ）：１００％以上１５０％未満
全く好ましくない（Ｄ）：１００％未満
【0166】
【表7】
【0167】
以上より、オクタノイルバリン（Ｃ８Ｖａｌ）がプロフィラグリンタンパク質の産生を向上させることが明らかとなった。
【0168】
実施例３５：アシル中性アミノ酸エステルの分配係数の評価
アシル中性アミノ酸エステルの分配係数（ＬｏｇＰ）の値をＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，（ＡＣＤ／Ｌａｂｓ）社製）という化学構造式用計算ソフトを用いて計算した。
アシル中性アミノ酸エステルの分配係数（ＬｏｇＰ）の値をＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，（ＡＣＤ／Ｌａｂｓ）社製）という化学構造式用計算ソフトを用いて計算した。
【0169】
【表8】
【0170】
表８からはＣ６Ａｌａ－iＰＡ、Ｃ６Ｖａｌ－Ｅｔ、Ｃ６Ｉｌｅ－Ｅｔ等のアシル中性アミノ酸エステルのＬｏｇＰ値が１～４の範囲内であり、より経皮吸収性に優れている性質を持っていることが理解できる（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１，１９７－２０６（２００９））。
【産業上の利用可能性】
【0171】
本発明の保湿剤は、例えば、化粧料、医薬品および医薬部外品等の製品の開発のために、ならびに化粧料、医薬品および医薬部外品等の製品として有用である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
