特許 7188837 ＴＲＯＰ－２を標的化するトポイソメラーゼ－Ｉ阻害抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）による小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）の療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-12-05

(45)【発行日】2022-12-13

(54)【発明の名称】ＴＲＯＰ－２を標的化するトポイソメラーゼ－Ｉ阻害抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）による小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）の療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20221206BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20221206BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20221206BHJP

   A61K 33/24 20190101ALI20221206BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20221206BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20221206BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221206BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20221206BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221206BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 L ZNA

A61K31/4745

A61K31/282

A61K33/24

A61K39/395 T

A61K45/00

A61K47/68

A61P35/00

A61P35/04

A61P43/00 121

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2019542544

(86)(22)【出願日】2018-02-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-03-19

(86)【国際出願番号】 US2018019025

(87)【国際公開番号】W WO2018156634

(87)【国際公開日】2018-08-30

【審査請求日】2020-09-04

(31)【優先権主張番号】62/463,316

(32)【優先日】2017-02-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】15/820,708

(32)【優先日】2017-11-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504149971

【氏名又は名称】イミューノメディクス、インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＩＭＭＵＮＯＭＥＤＩＣＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ゴールデンバーグ， デイヴィッド エム．

(72)【発明者】

【氏名】ゴーヴィンダン， セレングラム ブイ．

【審査官】深草 亜子

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０１９３３５７（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／１７２４２７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／２１０１０８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】The New England Journal of Medicine，2002年，Vol.346，pp.85-91

【文献】Journal of Clinical Oncology，2016年，Vol.34, No.15 suppl.，Abs8559

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３９／３９５－３９／４４

Ａ６１Ｋ ４７／６８

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／２４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗Ｔｒｏｐ－２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と、
シスプラチナム又はカルボプラチンとを含む、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）の治療用キットであって、
前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣがサシツズマブゴビテカンであり、
前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣ、及びシスプラチナム又はカルボプラチンを、第２選択以降の療法として、ＳＣＬＣについて以前チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）治療を受けたことがあるヒト患者に投与するためのものであり、
前記ＣＰＩが抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、キット。

【請求項2】

前記がんが転移性（ｍＳＣＬＣ）である、請求項１に記載のキット。

【請求項3】

前記ヒト患者が以前、標準的な抗がん剤による治療から再発したか、この治療に抵抗性であった者である、請求項１又は２に記載のキット。

【請求項4】

前記ヒト患者が以前、トポテカン又はイリノテカンによる治療から再発したか、これらの治療に抵抗性であった者である、請求項１又は２に記載のキット。

【請求項5】

前記ＳＣＬＣが白金含有薬剤による化学療法に感受性である、請求項１～４のいずれか一項に記載のキット。

【請求項6】

前記ＳＣＬＣが白金含有薬剤による化学療法に抵抗性である、請求項１～４のいずれか一項に記載のキット。

【請求項7】

前記ＳＣＬＣの治療が、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％又は少なくとも４０％の腫瘍サイズの低減をもたらす、請求項１～６のいずれか一項に記載のキット。

【請求項8】

前記ＳＣＬＣの治療が、サイズの低減又は転移の排除をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のキット。

【請求項9】

前記がんが他の療法に不応性であるが、前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣに応答するものである、請求項１～８のいずれか一項に記載のキット。

【請求項10】

前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣを、（ｉ）毎週、（ｉｉ）隔週、（ｉｉｉ）１週の療法、それに続く、２、３又は４週の休止、（ｉｖ）２週の療法、それに続く、１、２、３又は４週の休止、（ｖ）３週の療法、それに続く、１、２、３、４又は５週の休止、（ｖｉ）４週の療法、それに続く、１、２、３、４又は５週の休止、（ｖｉｉ）５週の療法、それに続く、１、２、３、４又は５週の休止、及び（ｖｉｉｉ）月１回からなる群から選択されるサイクルを有するスケジュールで週１回又は２回前記ヒト患者に投与するためのものである、請求項１～９のいずれか一項に記載のキット。

【請求項11】

前記サイクルが４、６、８、１０、１２、１６又は２０回反復される、請求項１０に記載のキット。

【請求項12】

前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣを、非コンジュゲート化抗体、免疫複合体、遺伝子療法、化学療法、治療的ペプチド、サイトカイン療法、局所放射線療法、手術、干渉ＲＮＡ療法、薬物、毒素及びサイトカインからなる群から選択される１種又は複数の治療様式と組み合わせて投与するためのものである、請求項１～１１のいずれか一項に記載のキット。

【請求項13】

前記薬物、毒素又は化学療法剤が、５－フルオロウラシル、アファチニブ、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アントラサイクリン、アキシチニブ、ＡＶＬ－１０１、ＡＶＬ－２９１、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリオスタチン－１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレブレックス、クロラムブシル、シスプラチナム（ＣＤＤＰ）、Ｃｏｘ－２阻害剤、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、ＳＮ－３８、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテカン、シクロホスファミド、クリゾチニブ、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ジナシクリブ、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン（２Ｐ－ＤＯＸ）、シアノ－モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エルロチニブ、エストラムスチン、エピドフィロトキシン、エルロチニブ、エンチノスタット、エストロゲン受容体結合剤、エトポシド（ＶＰ１６）、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、エキセメスタン、フィンゴリモド、フラボピリドール、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’－Ｏ－ジオレオイル－ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ－ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ホスタマチニブ、ガネテスピブ、ＧＤＣ－０８３４、ＧＳ－１１０１、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イダルビシン、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラパチニブ、レノリダミド、ロイコボリン、ＬＦＭ－Ａ１３、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ナベルビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニトロソ尿素、オラパリブ、プリコマイシン、プロカルバジン、パクリタキセル、ＰＣＩ－３２７６５、ペントスタチン、ＰＳＩ－３４１、ラロキシフェン、セムスチン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、タモキシフェン、テマゾロミド（ＤＴＩＣの水性形態）、トランス白金、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、バタラニブ、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンカアルカロイド及びＺＤ１８３９からなる群から選択される、請求項１２に記載のキット。

【請求項14】

小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）の治療のための医薬組成物の製造における抗Ｔｒｏｐ－２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用であって、
前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣがサシツズマブゴビテカンであり、
前記抗Ｔｒｏｐ－２抗体－ＡＤＣを、シスプラチナム又はカルボプラチンと組み合わせて、第２選択以降の療法として、ＳＣＬＣについて以前チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）治療を受けたことがあるヒト患者に投与するための医薬組成物であることを特徴とするものであり、
前記ＣＰＩが抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、使用。

【請求項15】

前記ＣＰＩが、ニボルマブ又はアテゾリズマブである、請求項１～１３のいずれか一項に記載のキット。

【請求項16】

前記ＣＰＩが、ニボルマブ又はアテゾリズマブである、請求項１４に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、／２０１７／１１／２２に出願された米国特許出願第１５／８２０，７０８号の一部継続であり、これは、２０１６／３／１４に出願された米国特許出願第１５／０６９，２０８号の一部継続であり、これは、２０１５／３／２５に出願された米国特許出願第１４／６６７，９８２号（現在は、登録米国特許第９，４９３，５７３号）の一部継続であり、これは、２０１３／０７／２３に出願された米国出願第１３／９４８，７３２号（現在は、米国特許第９，０２８，８３３号）の分割であり、これは、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で、２０１２／１２／１３に出願された米国特許仮出願第６１／７３６，６８４号及び２０１３／１／７に出願された第６１／７４９，５４８号の利益を主張した。出願第１５／０６９，２０８号は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で２０１５／３／１６に出願された米国特許仮出願第６２／１３３，６５４号、２０１５／３／１６に出願された第６２／１３３，７２９号、２０１５／３／２５に出願された第６２／１３８，０９２号、２０１５／５／４に出願された第６２／１５６，６０８号、及び２０１５／１０／１５に出願された第６２／２４１，８８１号の利益を主張した。出願第１５／０６９，２０８号は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で、２０１６／１２／１に出願された米国特許仮出願第６２／４２８，６５５号の利益を主張した。本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で、２０１７／２／２４に出願された米国特許仮出願第６２／４６３，３１６号の利益を主張する。各優先権出願の文書は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。２０１８年２月１４日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーはＩＭＭ３７０ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、７，８８７バイトのサイズである。

【0003】

本発明は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を治療するための、抗Ｔｒｏｐ－２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の組成物及び使用方法に関する。好ましくは、ＡＤＣは、サシツズマブゴビテカンなどの抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８コンジュゲートである。より好ましくは、薬物を抗体または抗体断片に結合させるために、ＣＬ２Ａなどのリンカーを使用することができる。しかし、他のリンカー、他の既知の細胞毒性薬物及び薬物を抗体にコンジュゲートする他の既知の方法を利用することができる。最も好ましくは、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化ＲＳ７抗体である。抗体または断片を、抗体または断片あたり１～１２、１～６、１～５、６～８または７～８コピーの薬物部分または薬物－リンカー部分に結合させることができる。ＡＤＣは、第１選択白金含有化学療法に対して化学感受性または化学抵抗性のいずれかであるＳＣＬＣ患者の療法に有用である。ある特定の実施形態では、ＡＤＣは、ＳＣＬＣの第１選択療法に有用であり得る。驚いたことに、ＡＤＣは、同様にトポイソメラーゼＩの阻害剤であるにもかかわらず、トポテカン療法から再発したかこの療法に応答しないかのいずれかのＳＣＬＣ患者において有用である。ＡＤＣは、転移性ＳＣＬＣ（ｍＳＣＬＣ）の第２選択とそれ以降のステージで同様に活性である。ＡＤＣは、単独で、または手術、放射線療法、化学療法、免疫調節剤、サイトカイン、化学療法剤、アポトーシス促進剤、抗血管新生剤、細胞毒性剤、薬物、毒素、放射性核種、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、第２の抗体もしくは抗体断片及び免疫複合体からなる群から選択される１つもしくは複数の治療様式とともに、併用療法として、使用することができる。好ましい実施形態では、ＡＤＣと他の治療様式との組み合わせは、相乗効果を示し、ＡＤＣもしくは他の治療様式のいずれかの単独よりも、または個々に施されるＡＤＣと他の治療様式の効果の総和よりも、がん細胞死を誘導するのに有効である。驚いたことに、抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの皮下投与は、投与部位において許容できない局所毒性をもたらさず、代替の実施形態では、ＡＤＣを静脈内または皮下に投与することができる。

【背景技術】

【0004】

神経内分泌前駆細胞由来の小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）は全肺癌のおよそ１５％を構成し、依然として、６％で、最も低い５年生存率のうちの１つである（Ａｌｖａｒａｄｏ－Ｌｕｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｔｒａｎｓｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５：２６－３８、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ ６７：７－３０）。これは、小細胞肺癌が非常に侵襲性であり、患者の約３分の２が診断時に転移性疾患を有するであるからである（Ｆｒｕｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２４（６）：ｖｉ９９－１０５）。ステージＩＶのＳＣＬＣの第１選択療法は対症的であり、さらに、６０～７５％の高い初期応答率を有するが、転帰は通常悪く、白金ベースの化学療法（Ｆｒｕｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２４（６）：ｖｉ９９－１０５）を用いて、わずか５．５か月の無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値及び＜１０か月の全生存期間（ＯＳ）中央値を有する（Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｃａｎｃｅｒ １１７：１２６２－７１、Ｗｏｌｆｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ ８１：７７－８４）。

【0005】

特に、第１選択治療に抵抗性がある（すなわち、応答持続期間＜３か月）場合、第２選択療法に対する応答はより悪く、例えば、＜１０％であり、第２または第３選択の化学療法の後にわずか４または５か月の生存期間中央値を有する（Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １４：９８６－９４、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，２００８，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃｏｍｐｒ Ｃａｎｃ Ｎｅｔｗ ６：３２３－３１）。１９９８年以来、この状況において承認された唯一の薬物は、白金ベースの療法に感受性（３か月を超える応答持続期間）であった再発性患者に必要とされるトポテカンである（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４：５４４１－７、Ｐｅｒｅｚ－Ｓｏｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４：２７８５－９０）。しかし、イリノテカン、タキサン、ビノレルビン及びゲムシタビンも化学感受性の再発性疾患を有する患者に頻繁に与えられる（Ｆｕｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ５３：１６９－７２、Ｓｍｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７７：３４７－５１、Ｓａｎｄｌｅｒ，２００１，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｌｉｓｔｏｎ Ｐａｒｋ）１５：１１－２、ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ １２：５５７－６１）。

【0006】

対照群にトポテカンを含む最近の無作為化第ＩＩ及びＩＩＩ相臨床試験の総説は、第２選択において１３～１７％の応答を示したが（Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：５４０１－６、Ｊｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２９：２８７－９３、Ｈｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ５：１５４３７）、化学感受性疾患を有する患者の間で２０％程度、化学抵抗性である患者についてはわずか４％の応答率を有していた（ｖｏｎ Ｐａｗｅｌ，２００３，Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ４１（Ｓｕｐｐｌ ４）：Ｓ３－８）。しかし、第２選択におけるこれらの応答及び／または疾患の安定化は、生存の向上につながらない。例えば、Ｈａｇｍａｎｎら（Ｈａｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ６：１１４８－５４１８）は、トポテカンについて２２．５％の応答、ならびに２．４か月のＰＦＳ中央値及び５か月のＯＳ中央値を報告した。第３選択の状況では、客観的応答は達成されず、さらに、１．３か月のＰＦＳ中央値及び２．５か月のＯＳ中央値が報告された（Ｈａｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ６：１１４８－５４１８）。他の確立された単剤化学療法または白金とエトポシドの組み合わせによる再治療も期待外れであり、トポテカン単独と類似した生存転帰をもたらした（Ｈａｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ６：１１４８－５４１８）。イリノテカンは、非常に低い応答を示したか、応答を示さず、１．７か月の無増悪期間（ＴＴＰ）中央値を示し、さらに、４．６か月のＯＳ中央値も報告された（Ｐａｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ６５：１８７－９１）。ゲムシタビンはいかなる客観的応答も与えず、６週のＴＴＰ中央値及び６．４か月のＯＳ中央値をもたらし、さらに、ペメトレキセドは４３患者の中で２応答を達成した（ＯＲＲ、４％）（Ｊａｌａｌ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｏｎｃｏｌ ４：９３－６）。したがって、ＳＣＬＣを有する患者、特に、広範な疾患を有する患者の管理の進展は、過去２０年間にわたって期待外れであった。ほぼすべての患者は、初期に再発し、１年以内に亡くなる。

【0007】

第１選択またはそれ以降のステージのＳＣＬＣを有する患者のためのより効果的な治療が必要とされている。標準的な化学療法、例えば、白金含有化学療法、トポテカンまたはイリノテカンに抵抗性である患者のためのより優れた療法が特に必要とされている。

【発明の概要】

【0008】

本発明は、第１選択そうでなければ第２選択以降のいずれかのＳＣＬＣを治療するための向上した方法及び組成物に関する。方法及び組成物は、例えば、白金ベースの、またはイリノテカン及びトポテカンのようなカンプトテシン化合物を用いる標準的な化学療法に抵抗性であるＳＣＬＣ患者を治療することに特に有用である。本方法は、抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣによる、好ましくは抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８ＡＤＣによる治療を含む。より好ましい実施形態では、抗体部分を薬物部分に結合させるために、ＣＬ２Ａリンカーなどのリンカーが使用される。最も好ましくは、抗Ｔｒｏｐ－２はヒト化ＲＳ７（ｈＲＳ７）抗体または抗原結合抗体断片である。本方法及び組成物は、以下に詳細に記載される好ましい投薬量で使用される場合に、より大きな効力を有し、管理可能な毒性のみを有する、ＳＣＬＣの標準的ケアよりも実質的に向上した治療を提供する。

【0009】

様々な実施形態では、ＡＤＣは、単独で、あるいは１つまたは複数の他の治療様式、例えば、手術、放射線療法、化学療法、免疫調節剤、サイトカイン、化学療法剤、アポトーシス促進剤、抗血管新生剤、細胞毒性剤、薬物、毒素、放射性核種、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、第２の抗体もしくは抗体断片または免疫複合体とともに、併用療法として、使用することができる。好ましくは、ＡＤＣと他の治療様式との組み合わせは、単独または個々の治療の効果の総和よりも効果的である。

【0010】

特定の実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体は、軽鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡ、配列番号１）、ＣＤＲ２（ＳＡＳＹＲＹＴ、配列番号２）及びＣＤＲ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ、配列番号３）、ならびに重鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＮＹＧＭＮ、配列番号４）、ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ、配列番号５）及びＣＤＲ３（ＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ、配列番号６）を含む、ヒト化ＲＳ７抗体でもよい（例えば、その図及び実施例セクションが参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，２３８，７８５号を参照されたい）。しかし、以下に述べるように、他の抗Ｔｒｏｐ－２抗体が知られており、主題のＡＤＣで使用することができる。がん治療に有用ないくつかの細胞毒性薬物が当技術分野で周知であり、任意のそのような既知の薬物を目的の抗体にコンジュゲートすることができる。より好ましい実施形態では、抗体にコンジュゲートされる薬物はカンプトテシン、最も好ましくはＳＮ－３８である（例えば、図及び実施例セクションが参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，０２８，８３３号を参照されたい）。

【0011】

抗体部分は、モノクローナル抗体、抗原結合抗体断片、二重特異性もしくは他の多価抗体または抗体ベースの他の分子でもよい。抗体は、様々なアイソタイプのもの、好ましくは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４、より好ましくは、ヒトＩｇＧ１のヒンジ及び定常領域配列を含むものでもよい。抗体またはその断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体、ならびにそれらの変形形態、例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００７；３１７：１５５４－１５５７）によって記載されているような半ＩｇＧ４抗体（「ユニボディ」と称される）でもよい。より好ましくは、抗体またはその断片は、特定のアロタイプに属するヒト定常領域配列を含むように設計または選択することができ、これは、ＡＤＣがヒト対象に投与される場合に免疫原性の低減をもたらすことができる。投与のための好ましいアロタイプとしては、非Ｇ１ｍ１アロタイプ（ｎＧ１ｍ１）、例えば、Ｇ１ｍ３、Ｇ１ｍ３，１、Ｇ１ｍ３，２またはＧ１ｍ３，１，２が挙げられる。より好ましくは、アロタイプは、ｎＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ３、ｎＧ１ｍ１，２及びＫｍ３アロタイプ（Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ，２００９，ｍＡｂｓ １（４）：１－７）からなる群から選択される。

【0012】

抗体または抗体断片にコンジュゲートされる薬物は、アントラサイクリン、カンプトテシン、チューブリン阻害剤、マイタンシノイド、カリケアマイシン、オーリスタチン、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、トリアゼン、葉酸類似体、タキサン、ＣＯＸ－２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素阻害剤、エピポドフィロトキシン、白金配位化合物、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、ホルモンアンタゴニスト、代謝拮抗剤、アルキル化剤、有糸分裂阻害薬、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ９０）阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、アポトーシス促進剤及びこれらの組み合わせからなる群から選択することができる。

【0013】

有用な特定の薬物は、５－フルオロウラシル、アファチニブ、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アントラサイクリン、アキシチニブ、ＡＶＬ－１０１、ＡＶＬ－２９１、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリオスタチン－１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチナム、ＣＯＸ－２阻害剤、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、ＳＮ－３８、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテカン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ジナシクリブ、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン（２－ＰＤｏｘ）、２－ＰＤｏｘのプロドラッグ形態（プロ－２－ＰＤｏｘ）、シアノ－モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エンドスタチン、エピルビシングルクロニド、エルロチニブ、エストラムスチン、エピドフィロトキシン、エルロチニブ、エンチノスタット、エストロゲン受容体結合剤、エトポシド（ＶＰ１６）、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、エキセメスタン、フィンゴリモド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’－Ｏ－ジオレオイル－ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ－ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、フラボピリドール、ホスタマチニブ、ガネテスピブ、ＧＤＣ－０８３４、ＧＳ－１１０１、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イダルビシン、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、ラパチニブ、レノリダミド、ロイコボリン、ＬＦＭ－Ａ１３、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ナベルビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニトロソ尿素、オラパリブ、プリコマイシン、プロカルバジン、パクリタキセル、ＰＣＩ－３２７６５、ペントスタチン、ＰＳＩ－３４１、ラロキシフェン、セムスチン、ＳＮ－３８、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、タモキシフェン、テマゾロミド、トランス白金、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、バタラニブ、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンカアルカロイド及びＺＤ１８３９からなる群から選択することができる。好ましくは、薬物はＳＮ－３８である。

【0014】

主題のＡＤＣの好ましい最適な投薬は、好ましくは、毎週、週２回または隔週のいずれかで与えられる、４ｍｇ／ｋｇ～１８ｍｇ／ｋｇの間の投薬量を含むことができる。最適な投薬スケジュールは、連続した２週の療法、それに続く、１週、２週、３週もしくは４週の休止、または１週おきの療法と休止、または１週の療法、それに続く、２週、３週もしくは４週の休止、または３週の療法、それに続く、１週、２週、３週もしくは４週の休止、または４週の療法、それに続く、１週、２週、３週もしくは４週の休止、または５週の療法、それに続く、１週、２週、３週、４週もしくは５週の休止、または２週に１回、３週に１回もしくは月１回の投与の治療サイクルを含むことができる。治療を任意のサイクル数、好ましくは少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４または少なくとも１６サイクルにわたって延ばすことができる。使用される例示的投薬量としては、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ及び２４ｍｇ／ｋｇを挙げることができる。好ましい投薬量は、４、６、８、９、１０、１２、１４、１６または１８ｍｇ／ｋｇである。より好ましい投薬量は、６～１２、６～８、７～８、８～１０、１０～１２または８～１２ｍｇ／ｋｇである。ＡＤＣの最適な投薬量の選択において、様々な因子、例えば、年齢、全体的な健康状態、特定の器官の機能または重量、及び特定の器官系（例えば、骨髄）に対する以前の療法の効果が考慮され得ること、ならびに療法の過程で投薬量及び／または投与頻度を増大または低下させることができることを当業者は理解するであろう。わずか４～８用量の後に腫瘍縮小のエビデンスが観察されるという状況で、必要に応じて、投薬量を反復することができる。本明細書に開示される投与の最適化された投薬量及びスケジュールは、動物モデル研究から予測することができなかったであろう予期しない優れた効力及び毒性の低減をヒト対象において示す。驚いたことに、優れた効力は、１つまたは複数の標準的抗がん療法に対して抵抗性であることが以前に分かった腫瘍の治療を可能にする。さらに驚いたことに、治療は、カンプトテシン、例えば、ＳＮ－３８の親化合物であるイリノテカンに以前に抵抗性であった腫瘍で有効であることが分かった。

【0015】

ＡＤＣはＳＣＬＣ及びｍＳＣＬＣなどのがんの療法に有用である。そのような使用は、がんの進行の第１選択、第２選択またはそれ以降のステージでもよい。組成物及び使用方法は、カンプトテシン抵抗性及びカンプトテシン感受性のがんで効果的である。一般に、抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣは、Ｔｒｏｐ－２抗原を発現する任意のがんを治療するのに有用である。しかし、好ましい特定の実施形態では、がんはＳＣＬＣまたはｍＳＣＬＣである。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】ｈＲＳ７（抗Ｔｒｏｐ－２）、ｈＰＡＭ４（抗ＭＵＣ５ａｃ）、ｈＭＮ－１４（抗ＣＥＡＣＡＭ５）または非特異的対照ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）のＳＮ－３８コンジュゲートを用いた、Ｃａｐａｎ１ヒト膵臓癌を有する胸腺欠損ヌードマウスの前臨床インビボ療法を示す図である。

【図2】対照と比較した、抗ＴＲＯＰ２－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８コンジュゲートを用いたＢｘＰＣ３ヒト膵臓癌を有する胸腺欠損ヌードマウスの前臨床インビボ療法を示す図である。

【図3A】図３ＡはＣＬ２－ＳＮ－３８及びＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の構造を示す図である。図３ＢはＣＯＬＯ２０５結腸腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．４ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣＯＬＯ２０５マウス（Ｎ＝６）を治療し、腫瘍を週２回測定した。図３ＣはＣａｐａｎ１膵臓腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．２ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣａｐａｎ１マウス（Ｎ＝１０）を治療し、腫瘍を毎週測定した。

【図3B】図３ＡはＣＬ２－ＳＮ－３８及びＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の構造を示す図である。図３ＢはＣＯＬＯ２０５結腸腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．４ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣＯＬＯ２０５マウス（Ｎ＝６）を治療し、腫瘍を週２回測定した。図３ＣはＣａｐａｎ１膵臓腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．２ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣａｐａｎ１マウス（Ｎ＝１０）を治療し、腫瘍を毎週測定した。

【図3C】図３ＡはＣＬ２－ＳＮ－３８及びＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の構造を示す図である。図３ＢはＣＯＬＯ２０５結腸腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．４ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣＯＬＯ２０５マウス（Ｎ＝６）を治療し、腫瘍を週２回測定した。図３ＣはＣａｐａｎ１膵臓腺癌を使用した、ｈＡ２０ＡＤＣ及び生理食塩水対照に対するＣＬ２連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ対ＣＬ２Ａリンカー連結化抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの比較効力を示す図である。矢印で示すように、４週にわたって週２回動物を治療した。０．２ｍｇ／ｋｇ ＡＤＣでＣａｐａｎ１マウス（Ｎ＝１０）を治療し、腫瘍を毎週測定した。

【図4A】図４Ａはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量を投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される；長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｌｕ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５～７）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を合計で４回の注射について４日毎（ｑ４ｄ×４）注射した。図４Ｂはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５）に、ＡＤＣを８回（ｑ４ｄ×８）、またはイリノテカンのＭＴＤを合計で５回の注射について２日毎（ｑ２ｄ×５）注射した。図４Ｃはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｐａｎ１（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｄはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＢｘＰＣ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｅはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。４週にわたって週２回与えたＡＤＣに加えて、ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍を有するマウス（Ｎ＝８）にＣＰＴ－１１のＭＴＤを与えた（ｑ２ｄ×５）。

【図4B】図４Ａはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量を投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される；長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｌｕ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５～７）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を合計で４回の注射について４日毎（ｑ４ｄ×４）注射した。図４Ｂはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５）に、ＡＤＣを８回（ｑ４ｄ×８）、またはイリノテカンのＭＴＤを合計で５回の注射について２日毎（ｑ２ｄ×５）注射した。図４Ｃはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｐａｎ１（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｄはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＢｘＰＣ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｅはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。４週にわたって週２回与えたＡＤＣに加えて、ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍を有するマウス（Ｎ＝８）にＣＰＴ－１１のＭＴＤを与えた（ｑ２ｄ×５）。

【図4C】図４Ａはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量を投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される；長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｌｕ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５～７）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を合計で４回の注射について４日毎（ｑ４ｄ×４）注射した。図４Ｂはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５）に、ＡＤＣを８回（ｑ４ｄ×８）、またはイリノテカンのＭＴＤを合計で５回の注射について２日毎（ｑ２ｄ×５）注射した。図４Ｃはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｐａｎ１（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｄはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＢｘＰＣ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｅはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。４週にわたって週２回与えたＡＤＣに加えて、ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍を有するマウス（Ｎ＝８）にＣＰＴ－１１のＭＴＤを与えた（ｑ２ｄ×５）。

【図4D】図４Ａはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量を投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される；長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｌｕ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５～７）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を合計で４回の注射について４日毎（ｑ４ｄ×４）注射した。図４Ｂはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５）に、ＡＤＣを８回（ｑ４ｄ×８）、またはイリノテカンのＭＴＤを合計で５回の注射について２日毎（ｑ２ｄ×５）注射した。図４Ｃはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｐａｎ１（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｄはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＢｘＰＣ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｅはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。４週にわたって週２回与えたＡＤＣに加えて、ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍を有するマウス（Ｎ＝８）にＣＰＴ－１１のＭＴＤを与えた（ｑ２ｄ×５）。

【図4E】図４Ａはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量を投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される；長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｌｕ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５～７）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を合計で４回の注射について４日毎（ｑ４ｄ×４）注射した。図４Ｂはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有するマウス（Ｎ＝５）に、ＡＤＣを８回（ｑ４ｄ×８）、またはイリノテカンのＭＴＤを合計で５回の注射について２日毎（ｑ２ｄ×５）注射した。図４Ｃはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。Ｃａｐａｎ１（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｄはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。ＢｘＰＣ－３腫瘍を有するマウス（Ｎ＝１０）を示される薬剤で４週にわたって週２回治療した。図４Ｅはいくつかの固形腫瘍異種移植片疾患モデルにおけるｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣの治療効力を示す図である。ヒト非小細胞肺、結腸直腸、膵臓、または扁平上皮細胞肺の腫瘍異種移植片を有するマウスで、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣ治療の有効性を研究した。すべてのＡＤＣ及び対照に、示される量で投与した（用量あたりのＳＮ－３８の量として表される。長い矢印＝コンジュゲートの注射、短い矢印＝イリノテカンの注射）。４週にわたって週２回与えたＡＤＣに加えて、ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍を有するマウス（Ｎ＝８）にＣＰＴ－１１のＭＴＤを与えた（ｑ２ｄ×５）。

【図5A】図５ＡはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＳＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＢはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＬＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＣはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける好中球数の変化。図５ＤはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける血小板数の変化。

【図5B】図５ＡはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＳＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＢはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＬＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＣはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける好中球数の変化。図５ＤはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける血小板数の変化。

【図5C】図５ＡはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＳＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＢはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＬＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＣはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける好中球数の変化。図５ＤはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける血小板数の変化。

【図5D】図５ＡはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＳＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＢはＳｗｉｓｓ－ＷｅｂｓｔｅｒマウスにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。５６匹のＳｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに２腹腔内用量のバッファーまたはｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を３日間隔で投与した（用量あたり４、８または１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８；用量あたり２５０、５００または７５０ｍｇのコンジュゲートタンパク質／ｋｇ）。最後の注射から７及び１５日後に、各群の７のマウスを安楽死させ、血球計数及び血清化学検査を行った。グラフは、各群におけるＡＬＴレベルが上昇した動物のパーセントを示す。図５ＣはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける好中球数の変化。図５ＤはカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性を示す図である。バッファー（対照）または用量あたり０．９６ｍｇ／ｋｇまたは１．９２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８当量（６０及び１２０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートタンパク質）のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を群あたり６匹のサルに３日間隔で２回注射した。１、３及び６日目にすべての動物から採血した。１１日目に、０．９６ｍｇ／ｋｇ群において４匹のサルを採血し、１．９２ｍｇ／ｋｇ群において３匹を採血した。カニクイザルにおける血小板数の変化。

【図6】ＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒト乳腺癌に対する抗Ｔｒｏｐ－２－パクリタキセルＡＤＣのインビトロ有効性を示す図である。

【図7】ＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌に対する抗Ｔｒｏｐ－２－パクリタキセルＡＤＣのインビトロ効力を示す図である。

【図8A】図８ＡはＣａｐａｎ１ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＢはＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＣはＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。

【図8B】図８ＡはＣａｐａｎ１ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＢはＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＣはＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。

【図8C】図８ＡはＣａｐａｎ１ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＢはＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。図８ＣはＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃腺癌における抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣのインビトロ効力の比較（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８対ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）を示す図である。

【図9A】図９ＡはＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌におけるネイキッドまたはＳＮ－３８コンジュゲート化のｈＲＳ７抗体対１６２－４６．２抗体の細胞毒性の比較を示す図である。図９ＢはＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒト乳腺癌におけるネイキッドまたはＳＮ－３８コンジュゲート化のｈＲＳ７抗体対１６２－４６．２抗体の細胞毒性の比較を示す図である。

【図9B】図９ＡはＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌におけるネイキッドまたはＳＮ－３８コンジュゲート化のｈＲＳ７抗体対１６２－４６．２抗体の細胞毒性の比較を示す図である。図９ＢはＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒト乳腺癌におけるネイキッドまたはＳＮ－３８コンジュゲート化のｈＲＳ７抗体対１６２－４６．２抗体の細胞毒性の比較を示す図である。

【図10】ＲＥＣＩＳＴの判断基準による最良応答に関するＩＭＭＵ－１３２第Ｉ／ＩＩ相データを示す図である。

【図11】無増悪期間及び最良応答（ＲＥＣＩＳＴ）に関するＩＭＭＵ－１３２第Ｉ／ＩＩ相データを示す図である。

【図12】ＩＭＭＵ－１３２、カルボプラチンもしくはシスプラチン単独、非標的化ＡＤＣまたは生理食塩水対照と比較した、ＩＭＭＵ－１３２とカルボプラチンまたはシスプラチンを用いる併用療法を示す図である。

【図13】ＩＭＭＵ－１３２もしくはカルボプラチン単独または生理食塩水対照と比較した、ＩＭＭＵ－１３２＋カルボプラチンを用いる併用療法を示す図である。

【図14】ＩＭＭＵ－１３２もしくはシスプラチナム単独または生理食塩水対照と比較した、ＩＭＭＵ－１３２＋シスプラチナムを用いる併用療法を示す図である。

【図15】ＩＭＭＵ－１３２、カルボプラチンもしくはシスプラチン単独または生理食塩水対照と比較した、ＩＭＭＵ－１３２とカルボプラチンまたはシスプラチンを用いる併用療法で治療したマウスにおける悪液質を示す図である。

【図16】応答評価可能な患者における抗腫瘍応答及び持続期間のグラフ表示である。（Ａ）選択された標的病変についての直径の合計の最高パーセンテージ変化及びＲＥＣＩＳＴ１．１の判断基準による最高の全体的応答記述子。サシツズマブゴビテカンの開始用量、及び以前の第１選択療法に感受性であったか、抵抗性であったかに関して患者を識別した。非確証部分応答を有する患者は、最初に観察された客観的応答から４～６週後の次のＣＴ評価で≧３０％を維持することができなかった。ＲＥＣＩＳＴ１．０によるこれらの患者の最高の全体的応答は安定疾患であった。（Ｂ）安定疾患以上を達成した患者についての治療開始からの応答持続期間。腫瘍縮小が≧３０％を達成したタイミングを、サシツズマブゴビテカンの開始用量及び第１選択療法への感受性とともに示す。（Ｃ）安定疾患以上を達成した患者についての応答の動態。治療を続けている、確証部分応答を有する２人の患者を破線で示す。

【図17】サシツズマブゴビテカン試験に登録されたすべての５３人のＳＣＬＣ患者に対する（Ａ）カプラン・マイヤー由来の無増悪生存曲線及び（Ｂ）全生存曲線。

【図18】進行性ＳＣＬＣと診断された６４歳の男性を示す図である。この男性は、２０１３年７月～２０１３年１１月まで第１選択療法としてカルボプラチンを受け、２０１３年１１月及び１２月にエトポシドが加えられた。疾患は２０１４年５月に再発した。サシツズマブゴビテカン開始より前に、ベースライン（２０１４年５月）時の腫瘍病変は、気管分岐部のリンパ節（２０ｍｍ）及び右副腎腫瘍（Ａ）（４３×３４ｍｍの直径の副腎腫瘤）、ならびに肝臓の右葉及び左葉の複数の測定不可能な病変、右門の肥厚、左上葉肺結節ならびに食道肥厚を含んでいた。療法の２か月後の応答評価は、ＲＥＣＩＳＴ１．１によると５０％の低減を示した（Ｂ）（副腎腫瘤は１４ｍｍに縮小し、気管分岐部のリンパ節は１７ｍｍに縮小する）。第２の応答評価で、副腎腫瘤はもはや目に見えなくなり、一方で、気管分岐部の節は治療開始から約１１か月で（１１ｍｍへの）その最大縮小を経験し、８２％の最大縮小をもたらした。患者は、２１か月の応答持続期間（２０１４年７月～２０１６年３月）を経験した。（Ｃ）Ｔｒｏｐ－２について染色され、２＋としてスコア化されたが、腫瘍細胞間のまばらな分布をともなう、副腎腫瘤由来の生検の免疫組織像。

【図19】５７歳の男性におけるＩＭＭＵ－１３２療法の効果を示す図である。この男性は、１３歳以来、１箱／日の喫煙者であり、２０１２年に転移性小細胞神経内分泌癌と診断され、２０１２年１０月～２０１３年１月まで第１選択療法としてカルボプラチン及びエトポシドを受け、再発の際に、２０１３年９月～２０１３年１１月までトポテカンを受け、応答がなかった。進行中の疾患のため、この患者を、２０１３年１１月～２０１４年４月までカルボプラチンとエトポシドの組み合わせに移行させ、さらに、２０１４年５月～２０１４年６月までパクリタキセルに移行させた。２０１４年９月に、患者はサシツズマブゴビテカンを開始し、持続的反応を達成した。ベースライン及び合計が２３０ｍｍから１３８ｍｍに低減（４０％縮小）した治療の２か月後からの５つの標的病変のうちの４つのＣＴ画像を示す。（Ａ）ベースライン時で７９×６５ｍｍという測定値である右副腎腫瘤の軸方向切片、（Ｂ）最初の評価で４８×２６ｍｍへの低減を示す。（Ｃ）ベースライン時で５２×３８ｍｍという測定値である左副腎腫瘤、（Ｄ）最初の評価で３６×１７ｍｍ。（Ｅ）冠状面に示されるベースライン時の左腋窩腫瘤（６０×５５ｍｍ）及び治療の２か月後（Ｆ）（これは３０×２４ｍｍに縮小した）。（Ｇ）冠状面に示される右上葉肺腫瘤（２１×１２ｍｍ）。１６×１２ｍｍに縮小した（Ｈ）。（Ｉ）陰性～３＋の腫瘍細胞の範囲染色を有するが、全体として２＋とスコア化された、Ｔｒｏｐ－２について染色された肺生検の免疫組織像。

【発明を実施するための形態】

【0017】

定義
別段の指定がない限り、「ａ」または「ａｎ」は１つまたは複数を意味する。

【0018】

本明細書で使用する場合、「約」は、プラスまたはマイナス１０％を意味する。例えば、「約１００」は９０～１１０の間の任意の数を含むであろう。

【0019】

本明細書に記載の抗体は、完全長（すなわち、天然に存在するか、通常の免疫グロブリン遺伝子断片組換え方法によって形成される）免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ抗体）、または免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な（すなわち、特異的に結合する）部分、例えば抗体断片を指す。

【0020】

抗体断片は、抗体の一部であり、例えば、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどである。抗体断片は、以下に述べるように、単一ドメイン抗体及びＩｇＧ４半分子を含むこともできる。構造にかかわらず、抗体断片は、完全長抗体によって認識されるのと同じ抗原と結合する。用語「抗体断片」は、抗体の可変領域からなる単離断片、例えば、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片ならびにペプチドリンカーによって軽可変領域及び重可変領域が結合している組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）も含む。

【0021】

キメラ抗体は、１つの種に由来する抗体、好ましくは、げっ歯類抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインを含むが、抗体分子の定常ドメインはヒト抗体のものに由来する、組換えタンパク質である。獣医学の用途については、キメラ抗体の定常ドメインは、他の種、例えば、ネコまたはイヌに由来してもよい。

【0022】

ヒト化抗体は、１つの種に由来する抗体、例えば、げっ歯類抗体からのＣＤＲが、げっ歯類抗体の重可変鎖及び軽可変鎖からヒトの重可変ドメイン及び軽可変ドメイン（例えば、フレームワーク領域配列）に移されている組換えタンパク質である。抗体分子の定常ドメインはヒト抗体のものに由来する。ある特定の実施形態では、親（げっ歯類）抗体由来の限られた数のフレームワーク領域アミノ酸残基を、ヒト抗体フレームワーク領域配列中に置換することができる。

【0023】

ヒト抗体は、例えば、抗原負荷に応じて特定のヒト抗体を産生するように「操作されている」トランスジェニックマウスから得られる抗体である。この技法では、ヒト重鎖及び軽鎖座位の要素が、内在性のマウス重鎖及び軽鎖座位の標的破壊を含む胚性幹細胞株に由来するマウス系統に導入される。トランスジェニックマウスは、特定の抗原に対して特異的なヒト抗体を合成することができ、このマウスを使用して、ヒト抗体分泌ハイブリドーマを生成することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得る方法は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４），Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６（１９９４）、及びＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）によって記載されている。遺伝子または染色体のトランスフェクション方法、及びファージディスプレイ技術によっても、完全ヒト抗体を構築することができ、それらすべては当技術分野で既知である。免疫化されたドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからのヒト抗体及びその断片のインビトロ生成について、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３（１９９０）を参照されたい。この技法では、抗体可変ドメイン遺伝子が線維状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的な抗体断片として提示される。糸状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づく選抜もそうした特性を示す抗体をコードする遺伝子の選抜をもたらす。このようにして、ファージはＢ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは様々な型式で行うことができ、総説として、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５５６４－５７１（１９９３）を参照されたい。ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞によって生成することもできる。その実施例セクションが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号を参照されたい。

【0024】

治療剤は、抗体部分と別々に、同時にもしくは連続して投与される、または抗体部分、すなわち、抗体もしくは抗体断片または細断片にコンジュゲートされている、化合物、分子または原子であり、疾患の治療に有用である。治療剤の例としては、抗体、抗体断片、薬物、毒素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、アポトーシス促進剤、抗血管新生剤、ホウ素化合物、光活性薬剤または色素及び放射性同位体が挙げられる。有用な治療剤は、以下により詳細に記載されている。

【0025】

免疫複合体は、少なくとも１つの治療剤及び／または診断剤にコンジュゲートした、抗体、抗体断片または融合タンパク質である。

【0026】

多重特異性抗体は、構造が異なる少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ、あるいはハプテン及び／または抗原もしくはエピトープに同時に結合することができる抗体である。多特異性多価抗体は、１つより多い結合部位を有するコンストラクトであり、結合部位は特異性が異なる。

【0027】

二重特異性抗体は、２つの異なる標的に同時に結合することができる抗体である。二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）及び二重特異性抗体断片（ｂｓＦａｂ）は、例えば腫瘍関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つのアーム及び治療剤または診断剤を有する標的化可能なコンジュゲートに特異的に結合する少なくとももう１つのアームを有することができる。分子工学を使用して、様々な二重特異性融合タンパク質を生成することができる。

【0028】

抗Ｔｒｏｐ－２抗体
主題のＡＤＣは、Ｔｒｏｐ－２に結合する抗体またはその断片を含むことができる。特定の好ましい実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体は、軽鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡ、配列番号１）、ＣＤＲ２（ＳＡＳＹＲＹＴ、配列番号２）及びＣＤＲ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ、配列番号３）、ならびに重鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＮＹＧＭＮ、配列番号４）、ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ、配列番号５）及びＣＤＲ３（ＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ、配列番号６）を含む、ヒト化ＲＳ７抗体（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，２３８，７８５号を参照されたい）でもよい。

【0029】

ＲＳ７抗体は、ヒト原発性扁平上皮細胞肺癌の粗製の膜調製物に対して産生させたマウスＩｇＧ_１であった（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１３３０，１９９０）。ＲＳ７抗体は、クラスター１３として特徴づけられる４６～４８ｋＤａの糖タンパク質を認識する（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐ．８：９８－１０２，１９９４）。抗原は、ＥＧＰ－１（上皮糖タンパク質－１）と呼ばれたが、Ｔｒｏｐ－２とも称される。

【0030】

Ｔｒｏｐ－２はＩ型膜貫通タンパク質であり、ヒト（Ｆｏｒｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９５；６２：６１０－８）及びマウス細胞（Ｓｅｗｅｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９８；７５：３２４－３０）の両方からクローニングされた。腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサーとしてのその役割（Ｒｉｐａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９８；７６：６７１－６）に加えて、ヒトＴｒｏｐ－２の発現が、結腸癌細胞の腫瘍発生及び侵襲性に必要であることが示され、これは、Ｔｒｏｐ－２の細胞外ドメインに対するポリクローナル抗体で効果的に低減させることができた（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２００８；７：２８０－５）。

【0031】

固形がんに対する治療標的としてのＴｒｏｐ－２への興味の高まり（Ｃｕｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ ２００９；１７９６：３０９－１４）は、乳房（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００５；１１：４３５７－６４）、結腸直腸（Ｏｈｍａｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；１２：３０５７－６３、Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓ ２００９；２４：８７５－８４）及び口腔扁平上皮細胞（Ｆｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｄｅｒｎ Ｐａｔｈｏｌ ２００８；２１：１８６－９１）の癌腫において過剰発現しているＴｒｏｐ－２の臨床的意義を実証づけたさらなる報告によって証明される。高レベルのＴｒｏｐ－２を発現する前立腺基底細胞がインビトロ及びインビボでの幹様活性について強化されているという最新の証拠は、特に注目すべきである（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００８；１０５：２０８８２－７）。

【0032】

フローサイトメトリー及び免疫組織化学染色研究によって、ＲＳ７ ＭＡｂが様々な腫瘍タイプに関する抗原を検出し、正常ヒト組織への結合は制限されていることが示された（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）。Ｔｒｏｐ－２は、肺、胃、膀胱、乳房、卵巣、子宮及び前立腺の癌腫などの癌腫が主に発現している。動物モデルにおいて放射標識されたマウスＲＳ７ ＭＡｂを使用する局在及び療法の研究によって、腫瘍標的化及び治療効力が示された（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０、Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１）。

【0033】

肺、乳房、膀胱、卵巣、子宮、胃及び前立腺由来の腫瘍において、強いＲＳ７染色が示された（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５５：９３８，１９９３）。肺癌の場合は、扁平上皮癌及び腺癌の両方を含んでいた（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５５：９３８，１９９３）。両方の細胞型は強く染色され、これは、ＲＳ７抗体が肺の非小細胞癌の組織学的クラスを区別しないことを示す。

【0034】

ＲＳ７ ＭＡｂは、標的細胞中に迅速に内部移行される（Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３）。ＲＳ７ ＭＡｂの内部移行速度定数は、２つの他の迅速に内部移行するＭＡｂの内部移行速度定数の中間であり、これは、免疫毒素生成に有用であることが示された（同上）。免疫毒素コンジュゲートの内部移行が抗腫瘍活性のための必要条件であることが十分に実証づけされている（Ｐａｓｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４７：６４１，１９８６）。薬物免疫複合体の内部移行は、抗腫瘍効力の主要因子として説明された（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：１１８９，１９８８）。したがって、ＲＳ７抗体は治療適用のためのいくつかの重要な特性を示す。

【0035】

ｈＲＳ７抗体が好ましいが、他の抗Ｔｒｏｐ－２抗体が知られており、及び／または公的に入手可能であり、代替の実施形態では、主題のＡＤＣにおいて利用することができる。ヒト化抗体またはヒト抗体が免疫原性の低減に好ましいが、代替の実施形態では、キメラ抗体も有用であり得る。以下に述べるように、抗体のヒト化方法は当技術分野で周知であり、入手可能なマウス抗体またはキメラ抗体をヒト化形態に変換するのに利用することができる。

【0036】

抗Ｔｒｏｐ－２抗体はいくつかの供給源から市販されており、これには、ＬＳ－Ｃ１２６４１８、ＬＳ－Ｃ１７８７６５、ＬＳ－Ｃ１２６４１６、ＬＳ－Ｃ１２６４１７（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）；１０４２８－ＭＭ０１、１０４２８－ＭＭ０２、１０４２８－Ｒ００１、１０４２８－Ｒ０３０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）；ＭＲ５４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ｓｃ－３７６１８１、ｓｃ－３７６７４６、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）；ＭＭ０５８８－４９Ｄ６、（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ，ＣＯ）；ａｂ７９９７６及びａｂ８９９２８（ＡＢＣＡＭ（登録商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）が含まれる。

【0037】

他の抗Ｔｒｏｐ－２抗体が特許文献に開示されている。例えば、米国公開第２０１３／００８９８７２号は、抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ｋ５－７０（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５１）、Ｋ５－１０７（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５２）、Ｋ５－１１６－２－１（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５３）、Ｔ６－１６（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１３４６）及びＴ５－８６（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５４）を開示し、これらは、特許生物寄託センター、筑波、日本に寄託された。米国特許第５，８４０，８５４号は、抗Ｔｒｏｐ－２モノクローナル抗体ＢＲ１１０（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１１６９８）を開示した。米国特許第７，４２０，０４０号はハイブリドーマ細胞株ＡＲ４７Ａ６．４．２によって産生された抗Ｔｒｏｐ－２抗体を開示しており、これは、受託番号１４１２０５－０５としてＩＤＡＣ（カナダ国際寄託機関（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ ｏｆ Ｃａｎａｄａ）、Ｗｉｎｎｉｐｅｇ，Ｃａｎａｄａ）に寄託された。米国特許第７，４２０，０４１号はハイブリドーマ細胞株ＡＲ５２Ａ３０１．５によって産生された抗Ｔｒｏｐ－２抗体を開示し、これは、受託番号１４１２０５－０３としてＩＤＡＣに寄託された。米国公開第２０１３／０１２２０２０号は、抗Ｔｒｏｐ－２抗体３Ｅ９、６Ｇ１１、７Ｅ６、１５Ｅ２、１８Ｂ１を開示した。代表的な抗体をコードするハイブリドーマは、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に受託番号ＰＴＡ－１２８７１及びＰＴＡ－１２８７２で寄託された。米国特許第８，７１５，６６２号は、寄託番号ＰＤ０８０１９、ＰＤ０８０２０及びＰＤ０８０２１でＡＩＤ－ＩＣＬＣ（Ｇｅｎｏａ，Ｉｔａｌｙ）に寄託されたハイブリドーマによって産生される抗Ｔｒｏｐ－２抗体を開示している。米国特許出願公開第２０１２０２３７５１８号は、抗Ｔｒｏｐ－２抗体７７２２０、ＫＭ４０９７及びＫＭ４５９０を開示している。米国特許第８，３０９，０９４号（Ｗｙｅｔｈ）は、配列表で特定される抗体Ａ１及びＡ３を開示している。本段落の上記で引用した各特許または特許出願の実施例セクションは、参照によって本明細書に組み込まれる。非特許文献Ｌｉｐｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８１，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，７８：５１４７－５０）は、抗Ｔｒｏｐ－２抗体１６２－２５．３及び１６２－４６．２を開示した。

【0038】

多数の抗Ｔｒｏｐ－２抗体が当技術分野で既知であり、及び／または公的に入手可能である。以下に述べるように、既知の抗原に対する抗体の調製方法は、当技術分野で慣例的であった。ヒトＴｒｏｐ－２タンパク質の配列も当技術分野で既知であった（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＡＡ５４８０１．１を参照されたい）。ヒト化抗体、ヒト抗体またはキメラ抗体を生成する方法も既知であった。当業者は、当技術分野で一般的知識に照らして本開示を読めば、主題のＡＤＣにおいて抗Ｔｒｏｐ－２抗体の部類を作製及び使用することができたであろう。

【0039】

抗Ｔｒｏｐ－２抗体の使用がＡＤＣ以外の免疫治療剤ために開示された。マウスＩｇＧ２ａ抗体エドレコロマブ（パノレックス（登録商標））が結腸直腸癌の治療に使用されたが、このマウス抗体は、ヒトの臨床的使用にあまり適していない（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７，Ｂｒ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ９６：４１７－４２３）。エドレコロマブの低用量は、皮下投与はワクチン抗原に対して液性免疫応答を誘導することが報告された（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７）。完全ヒト抗Ｔｒｏｐ－２抗体であるアデカツムマブ（ＭＴ２０１）は転移性乳癌及び初期の前立腺癌で使用されており、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を介して作用すると報告されている（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７）。単鎖の抗Ｔｒｏｐ－２／抗ＣＤ３二重特異性抗体コンストラクトであるＭＴ１１０は、卵巣癌に対する効力が報告された（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７）。Ｔｒｏｐ－２、ＣＤ３及びＦｃ受容体に対して結合親和性を有するハイブリッドマウス／ラット抗体であるカツマキソマブは、卵巣癌に対して活性であることが報告された（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７）。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素に融合した抗Ｔｒｏｐ－２単鎖抗体を含む免疫毒素であるプロキシニウム（Ｐｒｏｘｉｎｉｕｍ）は、頭頸部癌及び膀胱癌で試験された（Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＆ Ｇｉｒｅｓ，２００７）。これらの研究のどれも、抗Ｔｒｏｐ－２抗体－薬物コンジュゲートの使用のいかなる開示も含んでいなかった。

【0040】

カンプトテシンコンジュゲート
抗体または抗原結合抗体断片に結合したカンプトテシン治療剤を含む免疫複合体を調製するための非限定な方法及び組成物は、以下に記載される。好ましい実施形態では、定められたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分（すなわち、定められた数の単量体単位を含むＰＥＧ）を薬物と抗体の間に配置することによって薬物の溶解度が高められ、ここで、定められたＰＥＧは好ましくは１～３０単量体単位を含む、より好ましくは１～１２単量体単位を含む、最も好ましくは６～８単量体単位を含む、低分子量ＰＥＧである。

【0041】

好ましくは、第１のリンカーは一端で薬物を結合し、もう一端でアセチレンまたはアジド基で終結し得る。この第１のリンカーは、一端にアジドまたはアセチレン基を、もう一端に異なる反応基、例えばカルボン酸またはヒドロキシル基を有する定められたＰＥＧ部分を含むことができる。上記二官能性の定められたＰＥＧをアミノアルコールのアミン基に結合させることができ、後者のヒドロキシル基をカルボネートの形態の薬物のヒドロキシル基に結合させることができる。あるいは、上記で定められた二官能性ＰＥＧの非アジド（またはアセチレン）部分を、場合により、Ｌ－アミノ酸またはポリペプチドのＮ末端に結合させ、Ｃ末端をアミノアルコールのアミノ基に結合させ、後者のヒドロキシ基をそれぞれカルボネートまたはカルバメートの形態の薬物のヒドロキシル基に結合させる。

【0042】

抗体カップリング基及び第１のリンカーのアジド（またはアセチレン）基に相補的な反応基、すなわちアセチレン（またはアジド）を含む第２のリンカーは、アセチレン－アジド環化付加反応を介して薬物－（第１のリンカー）コンジュゲートと反応して、疾患標的化抗体にコンジュゲートするのに有用な最終的な二官能性薬物生成物を提供することができる。抗体カップリング基は、好ましくは、チオールまたはチオール反応基のいずれかである。

【0043】

ＳＮ－３８などのＣＰＴ類似体を含む薬物－リンカー前駆体の調製における、Ｃ－２０カルボネートの存在下での１０－ヒドロキシル基の選択的再生方法を以下に提供する。薬物中の反応性ヒドロキシル基、例えばＳＮ－３８中のフェノール性ヒドロキシルのための他の保護基、例えばｔ－ブチルジメチルシリルまたはｔ－ブチルジフェニルシリルを使用することもでき、これらは、抗体カップリング部分に誘導体化薬物を連結するより前に、テトラブチルアンモニウムフルオリドによって脱保護される。ＣＰＴ類似体の１０－ヒドロキシル基は、代わりに、「ＢＯＣ」以外のエステルまたはカルボネートとして保護され、その結果、この保護基を先に脱保護することなく二官能性ＣＰＴが抗体にコンジュゲートされる。保護基は、バイオコンジュゲートが投与された後に、生理的ｐＨ条件下で容易に脱保護される。

【0044】

「クリックケミストリー」と称されるアセチレン－アジドカップリングでは、アジド部がＬ２にあり、アセチレン部がＬ３にあってもよい。あるいは、Ｌ２がアセチレンを含み、Ｌ３がアジドを含んでもよい。「クリックケミストリー」は、アセチレン部分とアジド部分の間の銅（＋１）触媒化環化付加反応を指す（Ｋｏｌｂ ＨＣ ａｎｄ Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ ＫＢ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２００３；８：１１２８－３７）が、クリックケミストリーの別の形態が知られており、これを使用してもよい。クリックケミストリーはほぼ中性のｐＨ条件の水溶液中で生じるので、薬物コンジュゲーションに適用できる。クリックケミストリーの利点は、これが化学選択的であり、チオール－マレイミド反応などの他の周知のコンジュゲーション化学反応を補完することである。

【0045】

例示的な好ましい実施形態は、以下に示す一般式（１）の薬物誘導体と抗体のコンジュゲートを対象とする。
ＭＡｂ－［Ｌ２］－［Ｌ１］－［ＡＡ］_ｍ－［Ａ’］－薬物（１）
式中、ＭＡｂは疾患標的化抗体であり、Ｌ２は、抗体カップリング部分とアセチレン（またはアジド）基の１つまたは複数とを含むクロスリンカーの成分であり、Ｌ１は、一端にＬ２のアセチレン（またはアジド）部分に相補的なアジド（またはアセチレン）を、もう一端にカルボン酸またはヒドロキシル基などの反応基を有する定められたＰＥＧを含み、ＡＡはＬ－アミノ酸であり、ｍは０、１、２、３または４の値の整数であり、Ａ’は、エタノールアミン、４－ヒドロキシベンジルアルコール、４－アミノベンジルアルコールまたは置換もしくは無置換のエチレンジアミンの群から選択される付加的なスペーサーである。「ＡＡ」のＬアミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンから選択される。Ａ’基がヒドロキシルを含む場合、これは、それぞれカルボネートまたはカルバメートの形態の薬物のヒドロキシル基またはアミノ基に連結している。

【0046】

式１の好ましい実施形態では、Ａ’はＬ－アミノ酸に由来する置換エタノールアミンであり、ここで、アミノ酸のカルボン酸基は、ヒドロキシメチル部分に置き換えられている。Ａ’は、以下のＬ－アミノ酸のうちのいずれか１つに由来してもよい：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリン。

【0047】

式１の好ましい実施形態のコンジュゲートの例では、ｍは０であり、Ａ’はＬ－バリノールであり、薬物はＳＮ－３８で例示される。式１の別の例では、ｍは１であり、誘導体化Ｌ－リジンによって代表され、Ａ’はＬ－バリノールであり、薬物はＳＮ－３８で例示される。本実施形態では、アミド結合は、リジンアミノ基のためのオルソゴナル保護基を使用して、リジンなどのアミノ酸のカルボン酸とバリノールのアミノ基の間で最初に形成される。リジンのＮ末端の保護基は除去され、リジンの側鎖の保護基はインタクトな状態に保たれ、Ｎ末端は、もう一端にアジド（またはアセチレン）を有する定められたＰＥＧのカルボキシル基に結合される。次いで、バリノールのヒドロキシル基が１０－ヒドロキシ保護化ＳＮ－３８の２０－クロロホルメート誘導体に結合され、この中間体は、抗体結合部分とクリック環化付加化学反応に関与する相補的なアセチレン（またはアジド）基とを保有するＬ２成分に結合される。最後に、リジン側鎖とＳＮ－３８の両方における保護基の除去によって、本実施例の生成物が得られる。

【0048】

理論に拘束されることを望むものではないが、細胞内のタンパク質分解の後に生成される低分子量ＳＮ－３８生成物、すなわち、バリノール－ＳＮ－３８カルボネートは、バリノールのアミノ基及びカルボネートのカルボニルを含む分子内環化を介する、インタクトなＳＮ－３８のさらなる遊離経路を有する。

【0049】

別の好ましい実施形態では、一般式１のＡ’はＡ－ＯＨであり、Ａ－ＯＨは、４－アミノベンジルアルコールまたはベンジル位においてＣ_１－Ｃ_１０アルキル基で置換されている置換４－アミノベンジルアルコールなどの折り畳み可能な部分であり、後者は、そのアミノ基を介して、Ｌ－アミノ酸または４つまでのＬ－アミノ酸部分を含むポリペプチドに結合しており、ここで、Ｎ末端は抗体結合基で終結するクロスリンカーに結合している。

【0050】

好ましい実施形態の別の例では、一般式１のＡ’のＡ－ＯＨは置換４－アミノベンジルアルコールに由来し、「ＡＡ」は、一般式１においてｍ＝１である単一Ｌ－アミノ酸から構成され、薬物はＳＮ－３８で例示される。ＡＡの単一アミノ酸は、以下のＬ－アミノ酸のうちのいずれか１つから選択され得る：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリン。４－アミノベンジルアルコール部分の置換基Ｒ（Ａ’のＡ－ＯＨ実施形態）は、水素またはＣ１－Ｃ１０アルキル基から選択されるアルキル基である。単一アミノ酸ＡＡがＬ－リジンであり、Ｒ＝Ｈであり、薬物がＳＮ－３８で例示されるこの式の例は、ＭＡｂ－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（以下に示す）と称される。構造は、ＣＬ２リンカーで見られるＰｈｅ－Ｌｙｓジペプチドに対する単一リジン残基の置換という点で、リンカーＭＡｂ－ＣＬ２－ＳＮ－３８と異なる。Ｐｈｅ－Ｌｙｓジペプチドは、リソソーム酵素のカテプシンＢ切断部位として設計され、これは、結合薬物の細胞内放出に重要であると考えられた。驚いたことに、カテプシン切断部位の排除にもかかわらず、ＣＬ２Ａリンカーを含む免疫複合体は、ＣＬ２リンカーを含むものよりも、インビボで明らかに効果的である。

【0051】

【化1】

【0052】

好ましい実施形態では、ＡＡは、細胞内ペプチダーゼによって切断可能なポリペプチド部分、好ましくは、ジ、トリまたはテトラペプチドを含む。例は、Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ及びＡｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号９）（Ｔｒｏｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，１９８２）である。

【0053】

別の好ましい実施形態では、コンジュゲートのＬ１成分は、１～３０の反復単量体単位を有する定められたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）スペーサーを含む。さらに好ましい実施形態では、ＰＥＧは、１～１２の反復単量体単位を有する定められたＰＥＧである。ＰＥＧの導入は、市販されているヘテロ二官能化ＰＥＧ誘導体を使用することを含み得る。ヘテロ二官能性ＰＥＧは、アジドまたはアセチレン基を含み得る。

【0054】

好ましい実施形態では、Ｌ２は、２～４０個、好ましくは２～２０個、より好ましくは２～５の範囲の複数のアセチレン（またはアジド）基及び単一抗体結合部分を有する。代表例では、「Ｌ２」成分が２つのアセチレン基に付加されており、２つのアジド付加ＳＮ－３８分子の結合がもたらされる。ＭＡｂへの結合はスクシンイミドをともない得る。

【0055】

好ましい実施形態では、二官能性薬物が抗体結合基としてチオール反応性部分を含む場合、抗体のチオールは、チオール化試薬を使用して抗体のリジン基に生成される。ＭＡｂのリジン基の修飾によって抗体にチオール基を導入するための方法は、当技術分野で周知である（Ｗｏｎｇ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９９１），ｐｐ２０－２２）。あるいは、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）などの還元剤を使用する、抗体の鎖間ジスルフィド結合の穏やかな還元（Ｗｉｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．４：５２１－５２７（１９９３））によって、抗体に７～１０個のチオールを生成することができ、これは、抗原結合領域から離れたＭＡｂの鎖間領域に複数の薬物部分を組み入れるという利点がある。より好ましい実施形態では、還元されたジスルフィドスルフヒドリル基へのＳＮ－３８の結合は、抗体分子あたり共有結合した６～８個のＳＮ－３８部分を有する抗体－ＳＮ－３８免疫複合体の形成をもたらす。システイン操作されている抗体の使用など、薬物または他の治療剤の結合のためのシステイン残基を提供する他の方法が既知である（その実施例セクションが参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第７，５２１，５４１号を参照されたい）。

【0056】

代替の好ましい実施形態では、化学療法剤部分は、ドキソルビシン（ＤＯＸ）、エピルビシン、モルホリノドキソルビシン（モルホリノ－ＤＯＸ）、シアノモルホリノ－ドキソルビシン（シアノモルホリノ－ＤＯＸ）、２－ピロリノド－ドキソルビシン（２－ＰＤＯＸ）、Ｐｒｏ－２ＰＤＯＸ、ＣＰＴ、１０－ヒドロキシカンプトテシン、ＳＮ－３８、トポテカン、ラルトテカン、９－アミノカンプトテシン、９－ニトロカンプトテシン、タキサン、ゲルダナマイシン、アンサマイシン及びエポチロンからなる群から選択される。より好ましい実施形態では、化学療法剤部分はＳＮ－３８である。好ましくは、好ましい実施形態のコンジュゲートでは、抗体は、少なくとも１つの化学療法剤部分、好ましくは１個～約１２個の化学療法剤部分、最も好ましくは約６個～約８個の化学療法剤部分に連結する。

【0057】

さらに、好ましい実施形態では、リンカー成分「Ｌ２」は、上記抗体の１つまたは複数のリジン側鎖アミノ基に導入されたチオール反応性残基と反応するチオール基を含む。そのような場合では、抗体は、当技術分野で十分に説明されている手順によって、マレイミド、ビニルスルホン、ブロモアセトアミドまたはヨードアセトアミドなどのチオール反応基で事前に誘導体化される。

【0058】

本発明において、ＣＰＴが１０－ヒドロキシル基をさらに有するＣＰＴ薬物－リンカーを調製することができる方法が驚いたことに発見された。この方法は、限定されないが、ｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）誘導体としての１０－ヒドロキシル基の保護、それに続く、薬物－リンカーコンジュゲートの最後から２番目の中間体の調製を含む。通常、ＢＯＣ基の除去はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などの強酸による処理を必要とする。こうした条件下で、除去される保護基を含むＣＰＴ２０－Ｏ－リンカーカルボネートも切断を受けやすく、それによって、未修飾のＣＰＴを生じさせる。実際に、リンカー分子のリジン側鎖のために穏やかに除去可能なメトキシトリチル（ＭＭＴ）保護基を使用することについての理論的根拠は、当技術分野で明確に述べられているように、まさにこの可能性を回避することであった（Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００２）。フェノール系ＢＯＣ保護基の選択的除去は、短期間、最適には３～５分間反応を行うことによって可能であることが発見された。こうした条件下で、主な生成物は、１０－ヒドロキシル位の「ＢＯＣ」が除去されているが、「２０」位のカルボネートはインタクトであるものであった。

【0059】

代替のアプローチは、最終生成物が、１０－ＯＨ保護基を脱保護する必要なしに抗体へのコンジュゲーションの準備ができているように、「ＢＯＣ」以外の基でＣＰＴ類似体の１０－ヒドロキシ位を保護することを含む。１０－ＯＨをフェノール系カルボネートまたはフェノール系エステルに変換する１０－ヒドロキシ保護基は、コンジュゲートのインビボ投与後に、生理的ｐＨ条件によって、またはエステラーゼによって、容易に脱保護される。生理的条件下における１０－ヒドロキシカンプトテシンの２０位の三級カルボネートと比べて１０位のフェノール系カルボネートの急速な除去が、Ｈｅ ｅｔ ａｌ．（Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １２：４００３－４００８（２００４））によって、記載されている。ＳＮ－３８の１０－ヒドロキシ保護基は「ＣＯＲ」でもよく、式中、Ｒは置換アルキル、例えば「Ｎ（ＣＨ_３）_２－（ＣＨ_２）_ｎ－」（式中、ｎは１～１０であり、末端アミノ基は、場合により、水溶解度を高めるために四級塩の形態である）でもよく、または単純アルキル残基、例えば「ＣＨ_３－（ＣＨ_２）_ｎ－」（式中、ｎは０～１０である）の形態であり、またはこれは、アルコキシ部分、例えば、「ＣＨ_３－（ＣＨ_２）ｎ－Ｏ－」（式中、ｎは０～１０）もしくは「Ｎ（ＣＨ_３）_２－（ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－」（式中ｎは２～１０）もしくは「Ｒ_１Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－」（式中、Ｒ_１はエチルまたはメチルであり、ｎは０～１０の値の整数である）でもよい。これらの１０－ヒドロキシ誘導体は、最終誘導体がカルボネートになる場合、選択される試薬のクロロホルメートによる処理によって容易に調製される。典型的には、ＳＮ－３８などの１０－ヒドロキシ含有カンプトテシンは、塩基としてトリエチルアミンを使用して、モル当量のクロロホルメートのジメチルホルムアミド溶液で処理される。これらの条件下で、２０－ＯＨ位は影響を受けない。１０－Ｏ－エステルを形成するために、選択される試薬の酸塩化物が使用される。

【0060】

一般式１の薬物誘導体と抗体のコンジュゲートの調製の好ましい方法（記述子Ｌ２、Ｌ１、ＡＡ及びＡ～Ｘは以前のセクションに記載されている通りである）では、二官能性薬物部分、［Ｌ２］－［Ｌ１］－［ＡＡ］_ｍ－［Ａ－Ｘ］－薬物が最初に調製され、続いて、抗体（本明細書で「ＭＡｂ」と示す）への二官能性薬物部分のコンジュゲーションが起こる。

【0061】

一般式１の薬物誘導体と抗体のコンジュゲートの調製の好ましい方法（記述子Ｌ２、Ｌ１、ＡＡ及びＡ－ＯＨは以前のセクションに記載されている通りである）では、最初にアミド結合を介してＡＡのＣ末端にＡ－ＯＨを連結し、続いて、Ｌ１のカルボン酸基にＡＡのアミン末端をカップリングさせることによって、二官能性薬物部分が調製される。ＡＡが存在しない（すなわちｍ＝０の）場合、Ａ－ＯＨは、アミド結合を介してＬ１に直接的に結合される。クロスリンカー、［Ｌ１］－［ＡＡ］_ｍ－［Ａ－ＯＨ］が薬物のヒドロキシルまたはアミノ基に結合され、これに続いて、クリックケミストリーを介してＬ１及びＬ２におけるアジド（またはアセチレン）とアセチレン（またはアジド）基の反応を利用して、Ｌ１部分への結合が起こる。

【0062】

一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体（ＭＡｂ）である。他の実施形態では、抗体は多価及び／または多特異性ＭＡｂでもよい。抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒトモノクローナル抗体でもよく、該抗体は、インタクト、断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆ（ａｂ’）_２）もしくはサブ断片（単鎖コンストラクト）の形態でもよく、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡアイソタイプもしくはそれら由来のサブ分子のものでもよい。

【0063】

抗体調製
Ｔｒｏｐ－２などの事実上すべての標的抗原に対するモノクローナル抗体を調製するための技法は当技術分野で周知である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）、及びＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１，ｐａｇｅｓ ２．５．１－２．６．７（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ １９９１）を参照されたい。手短に言えば、モノクローナル抗体は、抗原を含む組成物をマウスに注射すること、脾臓を取り出してＢリンパ球を得、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを生成し、ハイブリドーマをクローン化し、抗原に対して抗体を産生する陽性クローンを選抜し、抗原に対して抗体を産生するクローンを培養し、ハイブリドーマ培養から抗体を単離することによって、得ることができる。

【0064】

様々な確立された技法によって、ＭＡｂをハイブリドーマ培養から単離及び精製することができる。そのような単離技法としては、プロテイン－Ａまたはプロテイン－Ｇセファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ａｔ ｐａｇｅｓ ２．７．１－２．７．１２ ａｎｄ ｐａｇｅｓ ２．９．１－２．９．３を参照されたい。Ｂａｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ（ＩｇＧ），”ｉｎ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１０，ｐａｇｅｓ ７９－１０４（Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９２）も参照されたい。

【0065】

キメラ抗体またはヒト化抗体の生成などの様々な技法は、抗体のクローニング及び構築の手順を含み得る。目的の抗体に対する抗原結合Ｖκ（可変軽鎖）及びＶ_Ｈ（可変重鎖）配列は、様々な分子クローニング手順、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ、５’－ＲＡＣＥ及びｃＤＮＡライブラリースクリーニングによって得ることができる。マウスＭＡｂを発現する細胞由来のＭＡｂのＶ遺伝子は、ＰＣＲ増幅によってクローニングし、シークエンスすることができる。それらの確実性を確証するために、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６：３８３３（１９８９））によって記載されているように、クローニングしたＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ遺伝子をキメラＡｂとして細胞培養中で発現させることができる。次いで、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））によって記載されているように、Ｖ遺伝子配列に基づいて、ヒト化ＭＡｂを設計及び構成することができる。

【0066】

一般的な分子クローニング技法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，２^ｎｄ Ｅｄ（１９８９））によって、マウスＭＡｂを産生する任意の既知のハイブリドーマ株またはトランスフェクトされた細胞株からｃＤＮＡを調製することができる。ＭＡｂのＶκ配列は、プライマーのＶＫ１ＢＡＣＫ及びＶＫ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９）またはＬｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１５：２８６（１９９３））によって記載された伸長プライマーセットを使用して増幅することができる。Ｖ_Ｈ配列は、プライマー対のＶＨ１ＢＡＣＫ／ＶＨ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９）またはＬｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））によって記載されたマウスＩｇＧの定常領域にアニーリングするプライマーを使用して、増幅することができる。ヒト化Ｖ遺伝子は、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））によって記載されているように、長いオリゴヌクレオチド鋳型の合成及びＰＣＲ増幅の組み合わせによって構築することができる。

【0067】

ＶκについてのＰＣＲ産物は、ステージングベクター、例えば、Ｉｇプロモーター、シグナルペプチド配列及び簡便な制限部位を含む、ｐＢＲ３２７系ステージングベクター、ＶＫｐＢＲにサブクローニングすることができる。Ｖ_ＨについてのＰＣＲ産物は、同様のステージングベクター、例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ系ＶＨｐＢＳにサブクローニングすることができる。プロモーター及びシグナルペプチド配列とともにＶκ及びＶ_Ｈ配列を含む発現カセットをＶＫｐＢＲ及びＶＨｐＢＳから及び切除し、適切な発現ベクター、例えば、それぞれｐＫｈ及びｐＧ１ｇにライゲーションすることができる（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））。発現ベクターを適切な細胞にコトランスフェクトすることができ、キメラＭＡｂ、ヒト化ＭＡｂまたはヒトＭＡｂの産生について上清液をモニターすることができる。あるいは、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１（１９８９）によって記載されているように、さらに、Ｌｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，８０：２６６０（１９９７）でも示される））で示されるように、Ｖκ及びＶ_Ｈの発現カセットを切除し、単一発現ベクター、例えばｐｄＨＬ２にサブクローニングすることができる。

【0068】

代替の実施形態では、血清フリー培地におけるトランスフェクション、増殖及び発現に事前に適合されている宿主細胞に発現ベクターをトランスフェクトすることができる。使用することができる例示的細胞株としては、Ｓｐ／ＥＥＥ、Ｓｐ／ＥＳＦ及びＳｐ／ＥＳＦ－Ｘ細胞株が挙げられる（例えば、米国特許第７，５３１，３２７号、第７，５３７，９３０号及び第７，６０８，４２５号を参照されたい。これらの実施例セクションは参照によって本明細書に組み込まれる）。これらの例示的細胞株はＳｐ２／０骨髄腫細胞株に基づいており、突然変異Ｂｃｌ－ＥＥＥ遺伝子でトランスフェクトされており、トランスフェクト遺伝子配列を増幅するためにメトトレキサートに曝露されており、タンパク質発現のための血清フリー細胞株に事前に適合させられている。

【0069】

キメラ抗体
キメラ抗体は、ヒト抗体の可変領域が、例えば、マウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、マウス抗体の可変領域に置き換えられている、組換えタンパク質である。キメラ抗体は、対象に投与された場合に、免疫原性の低下及び安定性の増大を示す。マウス免疫グロブリン可変ドメインをクローニングするための一般的な技法は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６：３８３３（１９８９）に開示されている。キメラ抗体を構築するための技法は当業者に既知である。一例を挙げると、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １３：４６９（１９９４）は、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体であるマウスＬＬ２のＶ_κ及びＶ_ＨドメインをコードするＤＮＡ配列をそれぞれのヒトκ及びＩｇＧ_１定常領域ドメインと組み合わせることによって、ＬＬ２キメラを生成した。

【0070】

ヒト化抗体
主題のＡＤＣは、Ｔｒｏｐ－２に結合する抗体またはその断片を含むことができる。特定の好ましい実施形態では、抗Ｔｒｏｐ－２抗体は軽鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡ、配列番号１）、ＣＤＲ２（ＳＡＳＹＲＹＴ、配列番号２）及びＣＤＲ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ、配列番号３）、ならびに重鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＮＹＧＭＮ、配列番号４）、ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ、配列番号５）及びＣＤＲ３（ＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ、配列番号６）を含む、ヒト化ＲＳ７抗体（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，２３８，７８５号を参照されたい）でもよい。

【0071】

ヒト化ＭＡｂを生成するための技法は当技術分野で周知である（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８）、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）、Ｓａｎｄｈｕ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７（１９９２）、及びＳｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１５０：２８４４（１９９３）を参照されたい）。マウス免疫グロブリンの重可変鎖及び軽可変鎖からヒト抗体の対応する可変ドメインにマウスＣＤＲを移すことによって、キメラまたはマウスのモノクローナル抗体をヒト化することができる。キメラモノクローナル抗体中のマウスフレームワーク領域（ＦＲ）もヒトＦＲ配列で置き換えられる。マウスＣＤＲをヒトＦＲに単純に移すことは、抗体親和性の低減または喪失さえもたらすことが多いので、マウス抗体の本来の親和性を回復するために、さらなる改変が必要とされる可能性がある。これは、そのエピトープに対して良好な結合親和性を有する抗体を得るために、ＦＲ領域中の１つまたは複数のヒト残基をそれらのマウスの対応物で置き換えることによって達成することができる。例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６（１９９１） ａｎｄ Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８）を参照されたい。置換のための好ましい残基としては、ＣＤＲ残基側鎖の１、２または３オングストローム以内に位置する、ＣＤＲ配列に隣接して位置する、またはＣＤＲ残基と相互作用することが予想される、ＦＲ残基が挙げられる。

【0072】

ヒト抗体
コンビナトリアルアプローチまたはヒト免疫グロブリン座位で形質転換されたトランスジェニック動物のいずれかを使用して完全ヒト抗体を生成するための方法が、当技術分野で既知である（例えば、Ｍａｎｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｎｅｗ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２７：３１５－２８、Ｃｏｎｒａｄ ａｎｄ Ｓｃｈｅｌｌｅｒ，２００５，Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ．８：１１７－２６、Ｂｒｅｋｋｅ ａｎｄ Ｌｏｓｅｔ，２００３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３：５４４－５０）。完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体のトランスフェクション方法、及びファージディスプレイ技術によって構築することもでき、これらすべては当技術分野で既知である。例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３（１９９０）を参照されたい。そのような完全ヒト抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体よりもさらに少ない副作用しか示さないこと、及び実質的に内在性のヒト抗体としてインビボで機能することが期待される。

【0073】

一代替法では、ヒト抗体を生成するためにファージディスプレイ技法を使用することができる（例えば、Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｇｅｎｅｔ．Ｍｏｌ．Ｒｅｓ．４：１２６－４０）。ヒト抗体は、正常なヒトから、または特定の病態、例えばがんを示すヒトから生成することができる（Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ ａｌ．，２００５）。病的な個体からヒト抗体を構築することの利点は、循環抗体レパートリーが疾患関連抗原に対する抗体に偏る可能性があるということである。

【0074】

この方法体系の１つの非限定例では、Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ｅｔ ａｌ．（２００５）が骨肉腫患者由来のヒトＦａｂ抗体断片のファージディスプレイライブラリーを構築した。一般に、全ＲＮＡは循環血リンパ球から得られた（同上）。組換えＦａｂがμ、γ及びκ鎖抗体レパートリーからクローニングされ、ファージディスプレイライブラリーに挿入された（同上）。ＲＮＡがｃＤＮＡに変換され、重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列に対して特異的プライマー（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７）を使用してＦａｂ ｃＤＮＡライブラリーを作製するのに使用された。ライブラリー構築は、Ａｎｄｒｉｓ－Ｗｉｄｈｏｐｆ ｅｔ ａｌ．（２０００，Ｉｎ：Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），１^ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ ｐｐ．９．１ ｔｏ ９．２２）に従って行われた。最終的なＦａｂ断片が制限エンドヌクレアーゼで消化され、バクテリオファージゲノムに挿入されて、ファージディスプレイライブラリーが作製された。そのようなライブラリーは、当技術分野で既知の標準的なファージディスプレイ方法によってスクリーニングすることができる。ファージディスプレイは様々な型式で行うことができ、それらの総説について、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５５６４－５７１（１９９３）を参照されたい。

【0075】

ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞によって生成することもできる。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６７，６１０号及び第５，２２９，２７５号を参照されたい。これらの技法は例示的であり、ヒト抗体または抗体断片を作製及びスクリーニングための任意の既知の方法を利用することができることを当業者は理解するであろう。

【0076】

別の代替法では、ヒト抗体を産生するように遺伝子操作されているトランスジェニック動物を使用して、標準的な免疫化プロトコールを使用して、実質的にすべての免疫原性標的に対する抗体を生成することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６（１９９４）、及びＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）によって開示されている。そのようなシステムの非限定例は、Ａｂｇｅｎｉｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１－２３）である。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）及び同様の動物では、マウス抗体遺伝子が失活させられ、機能的ヒト抗体遺伝子に置き換えられているが、マウス免疫系の残部はインタクトなままである。

【0077】

ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は、アクセサリー遺伝子及び調節配列とともに可変領域配列の大部分を含むヒトＩｇＨ及びＩｇｋａｐｐａ座位の一部を含む生殖系列配置ＹＡＣ（酵母人工染色体）で形質転換された。ヒト可変領域レパートリーを使用して、抗体産生Ｂ細胞を生成することができ、これは、既知の技法によってハイブリドーマに加工することができる。標的抗原で免疫化されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は、通常の免疫応答によってヒト抗体を産生し、これは、上述した標準的な技法によって収集する及び／または産生させることができる。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）の様々な系統が利用可能であり、それらのそれぞれは、異なるクラスの抗体を産生することができる。トランスジェニックにより生成されたヒト抗体は、治療的可能性を有し、同時に通常のヒト抗体の薬物動態特性を保持することが示された（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。請求される組成物及び方法はＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）システムの使用に限定されるのではなくて、ヒト抗体を産生するように遺伝子操作されている任意のトランスジェニック動物を利用することができることを当業者は理解するであろう。

【0078】

既知の抗体及び標的抗原
上述したように、好ましい実施形態では、ＡＤＣはがんの治療に有用である。ある特定の実施形態では、標的のがんは１種または複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現し得る。がんの療法に有用であり得る特定の抗体としては、限定されないが、ＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ＬＬ２またはＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ベルツズマブ（ｈＡ２０、抗ＣＤ２０）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１、抗ＣＤ２０）、ランブロリズマブ（抗ＰＤ－１受容体）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１受容体）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）、ＲＳ７（抗上皮糖タンパク質－１（ＥＧＰ－１、Ｔｒｏｐ－２としても知られる））、ＰＡＭ４またはＫＣ４（両方とも抗ムチン）、ＭＮ－１４（抗癌胎児抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅまたはＣＥＡＣＡＭ５としても知られる）、ＭＮ－１５またはＭＮ－３（抗ＣＥＡＣＡＭ６）、Ｍｕ－９（抗結腸特異的抗原－ｐ）、Ｉｍｍｕ３１（抗アルファ－フェトプロテイン）、Ｒ１（抗ＩＧＦ－１Ｒ）、Ａ１９（抗ＣＤ１９）、ＴＡＧ－７２（例えば、ＣＣ４９）、Ｔｎ、Ｊ５９１またはＨｕＪ５９１（抗ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原））、ＡＢ－ＰＧ１－ＸＧ１－０２６（抗ＰＳＭＡ二量体）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ）、Ｇ２５０（抗炭酸脱水酵素ＩＸ ＭＡｂ）、Ｌ２４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）；トシツモマブ（抗ＣＤ２０）；ＰＡＭ４（別名クリバツズマブ、抗ムチン）及びトラスツズマブ（抗ＥｒｂＢ２）が挙げられる。好ましくは、抗体はｈＲＳ７抗体である。

【0079】

そのような抗ＴＡＡ抗体は当技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，６８６，０７２号、第５，８７４，５４０号、第６，１０７，０９０号、第６，１８３，７４４号、第６，３０６，３９３号、第６，６５３，１０４号、第６，７３０，３００号、第６，８９９，８６４号、第６，９２６，８９３号、第６，９６２，７０２号、第７，０７４，４０３号、第７，２３０，０８４号、第７，２３８，７８５号、第７，２３８，７８６号、第７，２５６，００４号、第７，２８２，５６７号、第７，３００，６５５号、第７，３１２，３１８号、第７，５８５，４９１号、第７，６１２，１８０号、第７，６４２，２３９、及び米国特許出願公開第２００５０２７１６７１号、第２００６０１９３８６５号、第２００６０２１０４７５号、第２００７００８７００１。それぞれの実施例セクションは参照により本明細書に組み込まれる）。有用な特定の既知の抗体としては、ｈＰＡＭ４（米国特許第７，２８２，５６７号）、ｈＡ２０（米国特許第７，１５１，１６４号）、ｈＡ１９（米国特許第７，１０９，３０４号）、ｈＩＭＭＵ－３１（米国特許第７，３００，６５５号）、ｈＬＬ１（米国特許第７，３１２，３１８号）、ｈＬＬ２（米国特許第５，７８９，５５４号）、ｈＭｕ－９（米国特許第７，３８７，７７２号）、ｈＬ２４３（米国特許第７，６１２，１８０号）、ｈＭＮ－１４（米国特許第６，６７６，９２４号）、ｈＭＮ－１５（米国特許第８，２８７，８６５号）、ｈＲ１（米国特許第９，４４１，０４３号）、ｈＲＳ７（米国特許第７，２３８，７８５号）、ｈＭＮ－３（米国特許第７，５４１，４４０号）、ＡＢ－ＰＧ１－ＸＧ１－０２６（米国特許出願第１１／９８３，３７２号、ＡＴＣＣ ＰＴＡ－４４０５及びＰＴＡ－４４０６として寄託された）及びＤ２／Ｂ（ＷＯ２００９／１３０５７５）が挙げられ、各列挙した特許または出願の文書は、図及び実施例セクションに関して参照によって本明細書に組み込まれる。

【0080】

標的にされ得る他の有用な腫瘍関連抗原としては、炭酸脱水酵素ＩＸ、Ｂ７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＳＡｐ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０（例えば、Ｃ２Ｂ８、ｈＡ２０、１Ｆ５ ＭＡｂ）、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＴＬＡ－４、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ（例えば、アバスチン（登録商標）、フィブロネクチンスプライス変異型）、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン（例えば、Ｌ１９）、ＥＧＰ－１（Ｔｒｏｐ－２）、ＥＧＰ－２（例えば、１７－１Ａ）、ＥＧＦ受容体（ＥｒｂＢ１）（例えば、アービタックス（登録商標））、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、Ｈ因子、ＦＨＬ－１、Ｆｌｔ－３、葉酸受容体、Ｇａ７３３、ＧＲＯ－β、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因（ＨＩＦ）、ＨＭ１．２４、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ヒストンＨ２Ｂ、ヒストンＨ３、ヒストンＨ４、インスリン様増殖因子（ＩＬＧＦ）、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－λ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、ＩＰ－１０、ＩｇＦ－１Ｒ、Ｉａ、ＨＭ１．２４、ガングリオシド、ＨＣＧ、Ｌ２４３が結合するＨＬＡ－ＤＲ抗原、ＣＤ６６抗原類、すなわちＣＤ６６ａ－ｄまたはこれらの組み合わせ、ＭＡＧＥ、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＭＡ、ＰＡＭ４抗原、ＰＤ－１受容体、ＰＤ－Ｌ１、ＮＣＡ－９５、ＮＣＡ－９０、Ａ３、Ａ３３、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＫＳ－１、Ｌｅ（ｙ）、メソテリン、Ｓ１００、テネイシン、ＴＡＣ、Ｔｎ抗原、トーマス－フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、腫瘍血管新生抗原、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＩＬ受容体（Ｒ１及びＲ２）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ならびにがん幹細胞抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５及びがん遺伝子産物が挙げられる。

【0081】

より療法抵抗性の前駆体悪性細胞集団であるとみなされるがん幹細胞（Ｈｉｌｌ ａｎｄ Ｐｅｒｒｉｓ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．２００７；９９：１４３５－４０）は、ある特定のがんタイプにおいて標的にされ得る抗原、例えば、前立腺癌（Ｍａｉｔｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｒｎｓｔ Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐｏｓ．Ｐｒｏｃ．２００６；５：１５５－７９）、非小細胞肺癌（Ｄｏｎｎｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２００７；１２２（３）：３８５－９１）及び膠芽腫（Ｂｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；６７（９）：４０１０－５）におけるＣＤ１３３、ならびに結腸直腸癌（Ｄａｌｅｒｂａ ｅｒ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００７；１０４（２４）１０１５８－６３）、膵臓癌（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；６７（３）：１０３０－７）及び頭頸部扁平上皮癌（Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００７；１０４（３）９７３－８）におけるＣＤ４４を有する。乳癌療法のための別の有用な標的は、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２００３；３７５：５１－９）によって記載されたＬＩＶ－１抗原である。

【0082】

チェックポイント阻害剤抗体が、がん療法で使用されてきた。免疫チェックポイントは、自己免疫寛容を維持すること及び末梢組織損傷を最小限にするために免疫系応答度を調節することに関与する、免疫系における阻害性経路を指す。しかし、腫瘍細胞は、免疫系チェックポイントを活性化させて、腫瘍組織に対する免疫応答の有効性を低下させることもできる。細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られる）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１、ＣＤ２７９としても知られる）及びプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７４としても知られる）に対する例示的チェックポイント阻害剤抗体は、疾患細胞、組織または病原体に対する免疫応答の有効性を高めるために、１種または複数の他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例示的抗ＰＤ１抗体としては、ランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５、ＭＥＲＣＫ）、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８、ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＡＭＰ－２２４（ＭＥＲＣＫ）及びピディリズマブ（ＣＴ－０１１、ＣＵＲＥＴＥＣＨ ＬＴＤ．）が挙げられる。抗ＰＤ１抗体は、例えば、ＡＢＣＡＭ（登録商標）（ＡＢ１３７１３２）、ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ（登録商標）（ＥＨ１２．２Ｈ７、ＲＭＰ１－１４）及びＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（Ｊ１０５、Ｊ１１６、ＭＩＨ４）から市販されている。例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、ＭＤＸ－１１０５（ＭＥＤＡＲＥＸ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＭＥＤＩＭＭＵＮＥ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）及びＢＭＳ－９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）が挙げられる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体も、例えば、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（ＭＩＨ１）から市販されている。例示的抗ＣＴＬＡ４抗体としては、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）及びトレメリムマブ（ＰＦＩＺＥＲ）挙げられる。抗ＰＤ１抗体は、例えば、ＡＢＣＡＭ（登録商標）（ＡＢ１３４０９０）、ＳＩＮＯ ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＣ．（１１１５９－Ｈ０３Ｈ、１１１５９－Ｈ０８Ｈ）及びＴＨＥＲＭＯ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ ＰＩＥＲＣＥ（ＰＡ５－２９５７２、ＰＡ５－２３９６７、ＰＡ５－２６４６５、ＭＡ１－１２２０５、ＭＡ１－３５９１４）から市販されている。イピリムマブは、最近、転移性黒色腫の治療についてＦＤＡの承認を受けた（Ｗａｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ １１：８９）。

【0083】

マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は先天免疫及び適応免疫ならびにアポトーシスの重要な制御因子である。ＣＤ７４がＭＩＦに対する内在性受容体であることが報告されている（Ｌｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９７：１４６７－７６）。ＭＩＦ媒介性細胞内経路に対するアンタゴニストの抗ＣＤ７４抗体の治療効力は、幅広い病態、例えば、膀胱、前立腺、乳房、肺及び結腸のがんの治療に有用であり得る（例えば、Ｍｅｙｅｒ－Ｓｉｅｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １２：３４、Ｓｈａｃｈａｒ ＆ Ｈａｒａｎ，２０１１，Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ５２：１４４６－５４）。ミラツズマブ（ｈＬＬ１）は、ＭＩＦ媒介性疾患の治療のための治療的使用の例示的抗ＣＤ７４抗体である。

【0084】

様々な他の有用な抗体が当技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，６８６，０７２号、第５，８７４，５４０号、第６，１０７，０９０号、第６，１８３，７４４号、第６，３０６，３９３号、第６，６５３，１０４号、第６，７３０．３００号、第６，８９９，８６４号、第６，９２６，８９３号、第６，９６２，７０２号、第７，０７４，４０３号、第７，２３０，０８４号、第７，２３８，７８５号、第７，２３８，７８６号、第７，２５６，００４号、第７，２８２，５６７号、第７，３００，６５５号、第７，３１２，３１８号、第７，５８５，４９１号、第７，６１２，１８０号、第７，６４２，２３９及び米国特許出願公開第２００６０１９３８６５号。それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。

【0085】

使用される抗体は、多種多様な既知の供給源から商業的に入手することができる。例えば、様々な抗体分泌ハイブリドーマ株がアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能である。腫瘍関連抗原を含めた様々な疾患標的に対する多数の抗体がＡＴＣＣに寄託されており、及び／または可変領域配列を公表されており、請求される方法及び組成物で使用するために利用可能である。例えば、米国特許第７，３１２，３１８号、第７，２８２，５６７号、第７，１５１，１６４号、第７，０７４，４０３号、第７，０６０，８０２号、第７，０５６，５０９号、第７，０４９，０６０号、第７，０４５，１３２号、第７，０４１，８０３号、第７，０４１，８０２号、第７，０４１，２９３号、第７，０３８，０１８号、第７，０３７，４９８号、第７，０１２，１３３号、第７，００１，５９８号、第６，９９８，４６８号、第６，９９４，９７６号、第６，９９４，８５２号、第６，９８９，２４１号、第６，９７４，８６３号、第６，９６５，０１８号、第６，９６４，８５４号、第６，９６２，９８１号、第６，９６２，８１３号、第６，９５６，１０７号、第６，９５１，９２４号、第６，９４９，２４４号、第６，９４６，１２９号、第６，９４３，０２０号、第６，９３９，５４７号、第６，９２１，６４５号、第６，９２１，６４５号、第６，９２１，５３３号、第６，９１９，４３３号、第６，９１９，０７８号、第６，９１６，４７５号、第６，９０５，６８１号、第６，８９９，８７９号、第６，８９３，６２５号、第６，８８７，４６８号、第６，８８７，４６６号、第６，８８４，５９４号、第６，８８１，４０５号、第６，８７８，８１２号、第６，８７５，５８０号、第６，８７２，５６８号、第６，８６７，００６号、第６，８６４，０６２号、第６，８６１，５１１号、第６，８６１，２２７号、第６，８６１，２２６号、第６，８３８，２８２号、第６，８３５，５４９号、第６，８３５，３７０号、第６，８２４，７８０号、第６，８２４，７７８号、第６，８１２，２０６号、第６，７９３，９２４号、第６，７８３，７５８号、第６，７７０，４５０号、第６，７６７，７１１号、第６，７６４，６８８号、第６，７６４，６８１号、第６，７６４，６７９号、第６，７４３，８９８号、第６，７３３，９８１号、第６，７３０，３０７号、第６，７２０，１５５号、第６，７１６，９６６号、第６，７０９，６５３号、第６，６９３，１７６号、第６，６９２，９０８号、第６，６８９，６０７号、第６，６８９，３６２号、第６，６８９，３５５号、第６，６８２，７３７号、第６，６８２，７３６号、第６，６８２，７３４号、第６，６７３，３４４号、第６，６５３，１０４号、第６，６５２，８５２号、第６，６３５，４８２号、第６，６３０，１４４号、第６，６１０，８３３号、第６，６１０，２９４号、第６，６０５，４４１号、第６，６０５，２７９号、第６，５９６，８５２号、第６，５９２，８６８号、第６，５７６，７４５号、第６，５７２；８５６号、第６，５６６，０７６号、第６，５６２，６１８号、第６，５４５，１３０号、第６，５４４，７４９号、第６，５３４，０５８号、第６，５２８，６２５号、第６，５２８，２６９号、第６，５２１，２２７号、第６，５１８，４０４号、第６，５１１，６６５号、第６，４９１，９１５号、第６，４８８，９３０号、第６，４８２，５９８号、第６，４８２，４０８号、第６，４７９，２４７号、第６，４６８，５３１号、第６，４６８，５２９号、第６，４６５，１７３号、第６，４６１，８２３号、第６，４５８，３５６号、第６，４５５，０４４号、第６，４５５，０４０号、６，４５１，３１０号、第６，４４４，２０６号、６，４４１，１４３号、第６，４３２，４０４号、第６，４３２，４０２号、第６，４１９，９２８号、第６，４１３，７２６号、第６，４０６，６９４号、第６，４０３，７７０号、第６，４０３，０９１号、第６，３９５，２７６号、第６，３９５，２７４号、第６，３８７，３５０号、第６，３８３，７５９号、第６，３８３，４８４号、第６，３７６，６５４号、第６，３７２，２１５号、第６，３５９，１２６号、第６，３５５，４８１号、第６，３５５，４４４号、第６，３５５，２４５号、第６，３５５，２４４号、第６，３４６，２４６号、第６，３４４，１９８号、第６，３４０，５７１号、第６，３４０，４５９号、第６，３３１，１７５号、第６，３０６，３９３号、第６，２５４，８６８号、第６，１８７，２８７号、第６，１８３，７４４号、第６，１２９，９１４号、第６，１２０，７６７号、第６，０９６，２８９号、第６，０７７，４９９号、第５，９２２，３０２号、第５，８７４，５４０号、第５，８１４，４４０号、第５，７９８，２２９号、第５，７８９，５５４号、第５，７７６，４５６号、第５，７３６，１１９号、第５，７１６，５９５号、第５，６７７，１３６号、第５，５８７，４５９号、第５，４４３，９５３号、第５，５２５，３３８号を参照されたい。これらは例示的なものに過ぎず、多種多様の他の抗体及びそれらのハイブリドーマが当技術分野で既知である。選択された目的の疾患関連標的に対する抗体についてＡＴＣＣ、ＮＣＢＩ及び／またはＵＳＰＴＯデータベースを簡単に検索することによって、実質的にすべての疾患関連抗原に対する抗体配列または抗体分泌ハイブリドーマを得ることができることを当業者は理解するであろう。当技術分野で周知である標準的な技法を使用して、クローニングした抗体の抗原結合ドメインを増幅すること、切除すること、発現ベクターにライゲーションすること、適合した宿主細胞にトランスフェクトすること、及びタンパク質産生に使用することができる。

【0086】

抗体のアロタイプ
治療的抗体の免疫原性は、輸注反応の危険性の増大及び治療応答の持続期間の減少と関係がある（Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４８：６０２－０８）。治療的抗体が受容者の免疫応答を誘導する程度は、抗体のアロタイプによってある程度決定され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：２１３－２１）。抗体のアロタイプは、抗体の定常領域配列中の特定の位置におけるアミノ酸配列変動に関連している。重鎖γ型定常領域を含むＩｇＧ抗体のアロタイプは、Ｇｍアロタイプと呼ばれている（１９７６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１７：１０５６－５９）。

【0087】

一般的なＩｇＧ１ヒト抗体については、最も広く認められるアロタイプはＧ１ｍ１である（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：２１３－２１）。しかし、Ｇ１ｍ３アロタイプもコーカサス人に頻繁に生じる（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。Ｇ１ｍ１抗体は、Ｇ１ｍ３患者などの非Ｇ１ｍ１（ｎＧ１ｍ１）レシピエントに投与された場合に免疫応答を誘導する傾向があるアロタイプ配列を含むことが報告されている（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。非Ｇ１ｍ１アロタイプ抗体は、Ｇ１ｍ１患者に投与された場合にそれほど免疫原性ではない（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。

【0088】

ヒトＧ１ｍ１アロタイプは、重鎖ＩｇＧ１のＣＨ３配列中に、アミノ酸のアスパラギン酸をＫａｂａｔの位置３５６に、及びロイシンをＫａｂａｔの位置３５８に含む。ｎＧ１ｍ１アロタイプは、アミノ酸のグルタミン酸をＫａｂａｔの位置３５６に、及びメチオニンをＫａｂａｔの位置３５８に含む。Ｇ１ｍｌアロタイプとｎＧ１ｍｌアロタイプの両方ともグルタミン酸残基をＫａｂａｔの位置３５７に含み、これらのアロタイプはＤＥＬアロタイプ及びＥＥＭアロタイプと称されることもある。Ｇ１ｍ１アロタイプ抗体及びｎＧ１ｍ１アロタイプ抗体についての重鎖定常領域配列の非限定例を、例示的抗体のリツキシマブ（配列番号７）及びベルツズマブ（配列番号８）について以下に示す。

【0089】

リツキシマブ重鎖可変領域配列（配列番号７）

【化2】

【0090】

ベルツズマブ重鎖可変領域（配列番号８）

【化3】

【0091】

Ｊｅｆｆｅｒｉｓ及びＬｅｆｒａｎｃ（２００９，ｍＡｂｓ １：１－７）は、ＩｇＧアロタイプに特徴的である配列変動及び免疫原性に対するそれらの影響を概説した。彼らは、Ｇ１ｍ３アロタイプは、Ｇ１ｍ１７アロタイプのＫａｂａｔの２１４のリジン残基と比較して、Ｋａｂａｔの位置２１４のアルギニン残基を特徴とすることを報告した。ｎＧ１ｍ１，２アロタイプはＫａｂａｔの位置３５６のグルタミン酸、Ｋａｂａｔの位置３５８のメチオニン、及びＫａｂａｔの位置４３１のアラニンを特徴とした。Ｇ１ｍ１，２アロタイプはＫａｂａｔの位置３５６のアスパラギン酸、Ｋａｂａｔの位置３５８のロイシン、及びＫａｂａｔの位置４３１のグリシンを特徴とした。重鎖定常領域配列の変異型に加えて、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ及びＬｅｆｒａｎｃ（２００９）は、Ｋｍ１アロタイプはＫａｂａｔの位置１５３のバリン及びＫａｂａｔの位置１９１のロイシンを特徴とし、Ｋｍ１，２アロタイプはＫａｂａｔの位置１５３のアラニン及びＫａｂａｔの位置１９１のロイシンを特徴とし、Ｋｍ３アロタイプはＫａｂａｔの位置１５３のアラニン及びＫａｂａｔの位置１９１のバリンを特徴とする、カッパ軽鎖定常領域中のアロタイプ変異型を報告した。

【0092】

治療的抗体に関して、ベルツズマブ及びリツキシマブは、それぞれ、ＣＤ２０に対するヒト化及びキメラのＩｇＧ１抗体であり、多種多様の血液悪性腫瘍及び／または自己免疫疾患の療法に有用である。表１は、リツキシマブ対ベルツズマブのアロタイプ配列を比較する。表１に示すように、リツキシマブ（Ｇ１ｍ１７，１）はＤＥＬアロタイプのＩｇＧ１であり、ベルツズマブにおけるアルギニンに対してリツキシマブにおけるリジンであるＫａｂａｔの位置２１４（重鎖ＣＨ１）に付加的な配列変動を有する。ベルツズマブはリツキシマブよりも対象において免疫原性が低いことが報告されており（例えば、Ｍｏｒｃｈｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２７：３３４６－５３、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｂｌｏｏｄ １１３：１０６２－７０、Ｒｏｂａｋ ＆ Ｒｏｂａｋ，２０１１，ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２５：１３－２５を参照されたい）、これは、ヒト化抗体とキメラ抗体の間の違いに起因する効果であった。しかし、ＥＥＭとＤＥＬアロタイプの間のアロタイプの違いは、ベルツズマブのより低い免疫原性も説明すると思われる。

【0093】

【表1】

【0094】

ｎＧ１ｍ１遺伝子型の個体において治療的抗体の免疫原性を低減するために、Ｋａｂａｔの２１４のアルギニンを特徴とするＧ１ｍ３アロタイプならびにＫａｂａｔの位置３５６のグルタミン酸、Ｋａｂａｔの位置３５８のメチオニン及びＫａｂａｔの位置４３１のアラニンを特徴とするｎＧ１ｍ１，２ヌル－アロタイプに対応する抗体のアロタイプを選択することが望ましい。驚いたことに、長期間にわたるＧ１ｍ３抗体の反復皮下投与が有意な免疫応答を引き起こさなかったことが分かった。代替の実施形態では、Ｇ１ｍ３アロタイプと共通のヒトＩｇＧ４重鎖は、Ｋａｂａｔの２１４にアルギニンを、Ｋａｂａｔの３５６にグルタミン酸を、Ｋａｂａｔの３５９にメチオニンを、Ｋａｂａｔの４３１にアラニンを有する。免疫原性は少なくとも部分的にそれらの位置の残基に関係するように思われるので、治療的抗体のためのヒトＩｇＧ重鎖定常領域配列の使用も好ましい実施形態である。Ｇ１ｍ３ ＩｇＧ１抗体とＩｇＧ４抗体の組み合わせも治療的投与に有用であり得る。

【0095】

ナノボディ
ナノボディは、約１２～１５ｋＤａのサイズ（約１１０アミノ酸の長さ）のシングルドメイン抗体である。ナノボディは、フルサイズの抗体のように、標的抗原に選択的に結合することができ、抗原に対して同様の親和性を有する。しかし、そのサイズがはるかに小さいので、これは、固形腫瘍中により良好に侵入することができる。より小さなサイズは、ナノボディの安定性にも寄与し、これは、ｐＨ及び温度の極端な状態に対してフルサイズ抗体よりも抵抗性である（Ｖａｎ Ｄｅｒ Ｌｉｎｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔ １４３１：３７－４６）。シングルドメイン抗体は、最初は、ラクダ科動物（ラクダ、アルパカ、ラマ）が軽鎖なしの完全に機能的な抗体を有するという発見に続いて開発された（例えば、Ｈａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７７：１３－２２）。重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）ならびに２つの定常ドメイン（Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３）からなる。抗体のように、多価及び／または二重特異性コンストラクトとしてナノボディを開発及び使用することができる。がん及び他の障害において臨床的使用の可能性がある様々な標的抗原、例えば、ＩＬ－６Ｒ、ｖＷＦ、ＴＮＦ、ＲＳＶ、ＲＡＮＫＬ、ＩＬ－１７Ａ ＆ Ｆ及びＩｇＥ（例えば、ＡＢＬＹＮＸ（登録商標）、Ｇｈｅｎｔ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を標的にするナノボディのヒト化形態は、商業的に開発中である（例えばＳａｅｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ８：６００－８、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２０１３，Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ８２：７７５－９７、Ｉｂａｎｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２０３：１０６３－７２）。

【0096】

ナノボディの血漿半減期はフルサイズ抗体のものよりも短く、腎臓の経路によって主に排除される。ナノボディはＦｃ領域を欠くので、これは補体依存性細胞毒性を示さない。

【0097】

ナノボディは、標的抗原によるラクダ、ラマ、アルパカまたはサメの免疫化、それに続く、ｍＲＮＡの単離、ライブラリーへのクローニング及び抗原結合についてのスクリーニングによって、生成することができる。標準的な技法（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５，Ｓａｎｄｈｕ，１９９２，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７，Ｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１５０：２８４４）によって、ナノボディ配列をヒト化することができる。ヒト化は、ラクダ科動物とヒトのＦＲ配列の間の相同性が高いので、比較的簡単である。

【0098】

様々な実施形態では、主題のＡＤＣは、標的がん細胞へのコンジュゲート化薬物の標的送達のために、ナノボディを含むことができる。有用なナノボディは、例えば、それぞれの実施例セクションが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，８０７，１６２号、７，９３９，２７７号、第８，１８８，２２３号、第８，２１７，１４０号、第８，３７２，３９８号、第８，５５７，９６５号、第８，６２３，３６１号及び第８，６２９，２４４号に開示されている。

【0099】

抗体断片
抗体断片は抗体の抗原結合部分、例えば、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖなどである。特定のエピトープを認識する抗体断片を既知の技法によって生成することができる。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、例えば、抗体分子のペプシン消化によって生成することができる。これら及び他の方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ、米国特許第４，０３６，９４５号及び第４，３３１，６４７号ならびにその中に含まれる参考文献によって記載されている。さらに、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．８９：２３０（１９６０）、Ｐｏｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７３：１１９（１９５９），Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ ＶＯＬ．１，ｐａｇｅ ４２２（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９６７）、ならびにＣｏｌｉｇａｎ ａｔ ｐａｇｅｓ ２．８．１－２．８．１０及び２．１０．－２．１０．４を参照されたい。あるいは、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ’断片の迅速且つ容易な同定を可能にするために、Ｆａｂ’発現ライブラリーを構築することができる（Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７４－１２８１）。

【0100】

単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）は、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む。ＶＬ及びＶＨドメインは、結合して標的結合部位を形成する。これら２つのドメインは、ペプチドリンカー（Ｌ）によってさらに共有結合している。ｓｃＦｖ分子は、ＶＬドメインがＳｃＦｖ分子のＮ末端部分である場合ＶＬ－Ｌ－ＶＨとして、またはＶＨドメインがＳｃＦｖ分子のＮ末端部分である場合ＶＨ－Ｌ－ＶＬとして、示される。ｓｃＦｖ分子を作製するための方法及び適切なペプチドリンカーを設計ための方法は、米国特許第４，７０４，６９２号、米国特許第４，９４６，７７８号、Ｒ．Ｒａａｇ ａｎｄ Ｍ． Ｗｈｉｔｌｏｗ，“Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｈａｉｎ Ｆｖｓ．” ＦＡＳＥＢ Ｖｏｌ ９：７３－８０ （１９９５）及びＲ．Ｅ．Ｂｉｒｄ ａｎｄ Ｂ．Ｗ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ，Ｖｏｌ ９：１３２－１３７（１９９１）に記載されている。

【0101】

他の抗体断片、例えば単一ドメイン抗体断片が当技術分野で既知であり、請求されるコンストラクトで使用することができる。単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）は、例えばラクダ、アルパカまたはラマから標準的な免疫化技法によって得ることができる（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＳ ２６：２３０－２３５，２００１、Ｙａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８１：１６１－７５，２００３、Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２４：１３－２５，２００７を参照されたい）。ＶＨＨは強力な抗原結合能を有し得、従来のＶＨ－ＶＬ対に接近し難い新規なエピトープと相互作用することができる（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。アルパカの血清ＩｇＧは、約５０％のラクダ科動物重鎖のみのＩｇＧ抗体（ＨＣＡｂ）を含む（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。既知の抗原、例えばＴＮＦ－αでアルパカを免疫化することができ、標的抗原に結合し、これを中和するＶＨＨを単離することができる（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。実質的にすべてのアルパカＶＨＨのコード配列を増幅するＰＣＲプライマーが特定されており、これを使用してアルパカＶＨＨファージディスプレイライブラリーを構築することができ、このライブラリーは、当技術分野で周知である標準的なバイオパニング技法による抗体断片の単離に使用することができる（Ｍａａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。

【0102】

抗体断片は、完全長抗体のタンパク分解性加水分解またはＥ．ｃｏｌｉもしくは別の宿主における断片をコードするＤＮＡの発現によって、調製することもできる。抗体断片は、従来の方法による完全長抗体のペプシンまたはパパイン消化によって得ることができる。例えば、抗体断片は、ペプシンによって抗体を酵素切断して、Ｆ（ａｂ’）_２で示されるおおよそ１００ｋＤの断片をもたらすことによって、生成することができる。チオール還元剤、及び場合により、ジスルフィド結合の切断によって生じるスルフヒドリル基のためのブロッキング基を使用してこの断片をさらに切断して、おおよそ５０ＫｄのＦａｂ’一価断片を生成することができる。あるいは、パパインを使用する酵素切断は、２つの一価Ｆａｂ断片及び１つのＦｃ断片を直接的に生成する。

【0103】

断片がインタクトな抗体によって認識される抗原に結合する限り、一価の軽－重鎖断片を形成するための重鎖の分離、断片のさらなる切断、または他の酵素的、化学的もしくは遺伝子的技法などの抗体を切断する他の方法を使用することもできる。

【0104】

二重特異性及び多重特異性抗体
二重特異性抗体は、いくつかの生物医学的用途に有用である。例えば、腫瘍細胞表面抗原及びＴ細胞表面レセプターに対する結合部位を有する二重特異性抗体は、Ｔ細胞による特定の腫瘍細胞の溶解を導くことができる。神経膠腫とＴ細胞上のＣＤ３エピトープとを認識する二重特異性抗体が、ヒト患者における脳腫瘍の治療で首尾よく使用されている（Ｎｉｔｔａ，ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．１９９０；３５５：３６８－３７１）。好ましい二重特異性抗体は、抗ＣＤ３Ｘ抗Ｔｒｏｐ－２抗体である。代替の実施形態では、抗ＣＤ３抗体またはその断片を、Ｂ細胞関連抗原に対する抗体または断片、例えば、抗ＣＤ３Ｘ抗ＣＤ１９、抗ＣＤ３Ｘ抗ＣＤ２０、抗ＣＤ３Ｘ抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３Ｘ抗ＨＬＡ－ＤＲまたは抗ＣＤ３Ｘ抗ＣＤ７４に結合させることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される治療剤コンジュゲーションに関する技法及び組成物を標的化部分としての二重特異性または多重特異性抗体とともに使用することができる。

【0105】

例えば、その実施例セクションが参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第７，４０５，３２０号で開示されるように、二重特異性または多重特異性抗体を生成するための多数の方法が既知である。二重特異性抗体は、クアドローマ方法によって生成することができ、これは、それぞれが異なる抗原部位を認識するモノクローナル抗体を産生する、２つの異なるハイブリドーマの融合を含む（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３；３０５：５３７－５４０）。

【0106】

二重特異性抗体を生成するための別の方法は、ヘテロ二官能性クロスリンカーを使用して、２つの異なるモノクローナル抗体を化学的につなぐ（Ｓｔａｅｒｚ， ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５；３１４：６２８－６３１、Ｐｅｒｅｚ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５；３１６：３５４－３５６）。二重特異性抗体は、２つの親モノクローナル抗体のそれぞれを還元して、それぞれの半分子にして、次いで、これらを混合して、再び酸化させてハイブリッド構造体を得ることによって、生成することもできる（Ｓｔａｅｒｚ ａｎｄ Ｂｅｖａｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９８６；８３：１４５３－１４５７）。別の代替法は、２つまたは３つの別々に精製されたＦａｂ’断片を適切なリンカーを使用して化学的に架橋結合することを含む（例えば、欧州特許出願第０４５３０８２号を参照されたい）。

【0107】

他の方法は、レトロウイルス由来シャトルベクターを介して別々の選択マーカーをそれぞれの親のハイブリドーマに遺伝子導入し、続いて、これらを融合すること（ＤｅＭｏｎｔｅ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９０，８７：２９４１－２９４５）、または異なる抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子を含む発現プラスミドをハイブリドーマ細胞株にトランスフェクションすることによって、ハイブリッドハイブリドーマ生成の効率を改善することを含む。

【0108】

適切な組成及び長さ（通常、１２アミノ酸残基より多くからなる）のペプチドリンカーを用いて同種のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを結合させて、結合活性を有する単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を形成することができる。ｓｃＦｖを製造する方法は、米国特許第４，９４６，７７８号及び米国特許第５，１３２，４０５号に開示されており、これらのそれぞれの実施例セクションは参照によって本明細書に組み込まれる。１２アミノ酸残基未満にペプチドリンカー長さを短くすることは、同じ鎖上のＶ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインの対形成を防ぎ、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを他の鎖にある相補的ドメインと対形成させ、機能的多量体の形成をもたらす。３～１２アミノ酸残基のリンカーで結合しているＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインのポリペプチド鎖は、主として二量体（ダイアボディと呼ばれる）を形成する。０～２アミノ酸残基のリンカーを用いると、三量体（トリアボディと呼ばれる）及び四量体（テトラボディと呼ばれる）が支持されるが、オリゴマー化の正確なパターンは、リンカーの長さに加えて、Ｖドメインの組成及び配向（Ｖ_Ｈ－リンカー－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ）に依存するように思われる。

【0109】

多特異性または二重特異性抗体を生成するためのこれらの技法は、低収量、精製の必要性、低い安定性または技法の労働集約性の点から様々な困難を示す。ごく最近、「ドックアンドロック」（ＤＮＬ）として知られる技法が利用されて、実質的にすべての所望の抗体、抗体断片及び他のエフェクター分子の組み合わせが生成された（例えば、米国特許第７，５２１，０５６号、第７，５２７，７８７号、第７，５３４，８６６号、第７，５５０，１４３号、第７，６６６，４００号、第７，８５８，０７０号、第７，８７１，６２２号、第７，９０６，１２１号、第７，９０６，１１８号、第８，１６３，２９１号、第７，９０１，６８０号、第７，９８１，３９８号、第８，００３，１１１及び第８，０３４，３５２号を参照されたい。これらのそれぞれの実施例セクションは、参照により本明細書に組み込まれる）。この技法は、アンカリングドメイン（ＡＤ）ならびに二量体化及びドッキングドメイン（ＤＤＤ）と称される相補的タンパク質結合ドメインを利用し、これらは互いに結合し、二量体、三量体、四量体、五量体及び六量体の範囲の複合体構造の構築を可能にする。これらは、大規模な精製の必要なしに高収量で安定な複合体を形成する。ＤＮＬ技法は、単一特異性、二重特異性または多重特異性抗体の組立を可能にする。二重特異性または多重特異性抗体を作製するための当技術分野で既知の技法のうちのいずれかを本出願で請求される方法の実施で利用することができる。

【0110】

コンジュゲーションプロトコール
抗体またはその断片を１種または複数の治療剤または診断剤にコンジュゲートすることができる。治療剤は同じである必要があるのではなくて、例えば薬物及び放射性同位体のように、異なっていてもよい。例えば、^１３１Ｉを抗体または融合タンパク質のチロシンに組み込むことができ、薬物をリジン残基のイプシロンアミノ基に結合させることができる。治療剤及び診断剤は、例えば還元されたＳＨ基及び／または炭化水素側鎖に結合させることもできる。抗体または融合タンパク質との治療剤または診断剤の共有結合性または非共有結合性コンジュゲートを作製するための多くの方法が当技術分野で既知であり、任意のそのような既知の方法を利用することができる。

【0111】

ジスルフィド結合形成を介して、還元された抗体成分のヒンジ領域に治療剤または診断剤を結合させることができる。あるいは、ヘテロ二官能性クロスリンカー、例えば、Ｎ－スクシニル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）を使用して、そのような薬剤を結合させることができる。Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５６：２４４（１９９４）。そのようなコンジュゲーションのための一般的な技法は当技術分野で周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮ ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＣＲＯＳＳ－ＬＩＮＫＩＮＧ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９１）、Ｕｐｅｓｌａｃｉｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ １８７‐２３０（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）、Ｐｒｉｃｅ，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ，ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＡＮＤ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ ６０‐８４（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９９５）を参照されたい。あるいは、抗体のＦｃ領域中の炭水化物部分を介して、治療剤または診断剤をコンジュゲートすることができる。炭水化物基は、チオール基に結合している同じ薬剤の装薬を増加させるのに使用することができ、または炭水化物部分は、異なる治療剤または診断剤を結合させるのに使用することができる。

【0112】

抗体の炭水化物部分を介してペプチドを抗体成分にコンジュゲートするための方法は、当業者に周知である。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４１：８３２（１９８８）、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４６：１１０１（１９９０）、及びＳｈｉｈ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，０５７，３１３号を参照されたい。一般的な方法は、酸化された炭水化物部分を有する抗体成分を少なくとも１つの遊離アミン官能基を有する担体ポリマーと反応させることを含む。この反応は、最初のシッフ塩基（イミン）結合をもたらし、これを２級アミンへの還元によって安定化させて、最終的なコンジュゲートを形成することができる。

【0113】

免疫複合体の抗体成分として使用される抗体が抗体断片である場合、Ｆｃ領域は存在しなくてもよい。しかし、完全長抗体または抗体断片の軽鎖可変領域に炭水化物部分を導入することが可能である。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９１９（１９９５）、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，４４３，９５３号（１９９５）、Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，米国特許第６，２５４，８６８号を参照されたい。操作された炭水化物部分は、治療剤または診断剤に結合させるために使用される。

【0114】

標的化分子に担体部分を結合させるための代替方法は、クリックケミストリー反応の使用を含む。クリックケミストリーアプローチは、小さなサブユニットをモジュール方式で一緒に結合することによって複雑な物質を迅速に生成する方法として、元々考案された（例えば、Ｋｏｌｂ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ ４０：３００４－３１、Ｅｖａｎｓ，２００７，Ａｕｓｔ Ｊ Ｃｈｅｍ ６０：３８４－９５を参照されたい）。「クリック反応」と称されることが多いヒュスゲン１，３－双極子環化付加銅触媒反応（Ｔｏｒｎｏｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍ ６７：３０５７－６４など、クリックケミストリー反応の様々な形態が当技術分野で既知である。他の代替法は、ディールス・アルダーなどの環化付加反応、求核置換反応（特に、エポキシ及びアジリジン化合物のような小さなひずみのある環に対するもの）、尿素化合物のカルボニル化学形成及ならびにチオール－イン反応におけるアルキンなどの炭素－炭素二重結合を含む反応を含む。

【0115】

アジドアルキンヒュスゲン環化付加反応は、第１の分子に結合している末端アルキン基の反応を触媒するために、還元剤の存在下で銅触媒を使用する。アジド部分を含む第２の分子の存在下で、アジドは活性化アルキンと反応して、１，４－二置換１，２，３－トリアゾールを形成する。銅触媒反応は室温で生じ、十分に特異的であり、反応生成物の精製が必要とされないことが多い（Ｒｏｓｔｏｖｓｔｅｖ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ ４１：２５９６、Ｔｏｒｎｏｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ ６７：３０５７）。アジド及びアルキン官能基は、水性媒体中の生体分子に対して大部分は不活性であり、複雑な溶液中で反応が生じるのを可能にする。形成されたトリアゾールは化学的に安定であり、酵素的開裂を受けにくく、それによって、クリックケミストリー生成物が生物システムにおいて非常に安定になる。銅触媒は生細胞に対して毒性を持つが、銅ベースのクリックケミストリー反応は、免疫複合体形成のためにインビトロで使用することができる。

【0116】

生体分子の共有結合的修飾のために、銅を含まないクリック反応が提唱された（例えば、Ａｇａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２６：１５０４６－４７を参照されたい）。銅を含まない反応は、銅触媒の代わりに環ひずみを使用して、［３＋２］アジド－アルキン環化付加反応を促進する（同上）。例えば、シクロオクチンは、内部アルキン結合を含む８炭素環構造である。閉環構造は、アセチレンの実質的な結合角変形を誘導し、これによって、アジド基と非常に反応して、トリアゾールが形成される。したがって、シクロオクチン誘導体は、銅を含まないクリック反応に使用することができる（同上）。

【0117】

Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ ４９：３０６５－６８）によって別のタイプの銅を含まないクリック反応が報告され、これは、ゆがみ促進性アルキン－ニトロン環化付加を含む。元のシクロオクチン反応の遅い速度に対処するために、三重結合に隣接して電子求引基が結合している（同上）。そのような置換シクロオクチンの例としては、二フッ素化シクロオクチン、４－ジベンゾシクロオクチノール及びアザシクロオクチンが挙げられる（同上）。別の銅を含まない反応は、Ｎ－アルキル化イソオキサゾリンを得るために、ゆがみ促進性アルキン－ニトロン環化付加を含む（同上）。この反応は、並外れて速い反応キネティクスを有することが報告され、ペプチド及びタンパク質の部位特異的修飾のためのワンポット３ステッププロトコールで使用された（同上）。ニトロンはＮ－メチルヒドロキシルアミンとの適切なアルデヒドの縮合によって調製され、環化付加反応はアセトニトリルと水の混合物中で生じた（同上）。これら及び他の既知のクリックケミストリー反応は、インビトロで担体部分を抗体に結合させるのに使用することができる。

【0118】

Ａｇａｒｄ ｅｔ ａｌ．（２００４，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２６：１５０４６－４７）は、過アセチル化Ｎ－アジドアセチルマンノサミンの存在下でＣＨＯ細胞において発現させた組換え糖タンパク質によって、対応するＮ－アジドアセチルシアル酸が糖タンパク質中の炭水化物中へ生物学的に組み込みこまれることを示した。アジド誘導体化糖タンパク質は、ビオチン化シクロオクチンと特異的に反応して、ビオチン化糖タンパク質を形成したが、アジド部分を有さない対照の糖タンパク質は非標識のままであった（同上）。Ｌａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２０：６６４－６６７）は、同様の技法を使用して、過アセチル化Ｎ－アジドアセチルガラクトサミンとともにインキュベートしたゼブラフィッシュの胚において、細胞表面グリカンを代謝的に標識した。アジド誘導体化グリカンは、二フッ素化シクロオクチン（ＤＩＦＯ）試薬と反応して、インビボでグリカンの可視化を可能にした。

【0119】

ディールス・アルダー反応も分子のインビボ標識に使用された。Ｒｏｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ ４９：３３７５－７８）は、トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）反応性部分を保有する腫瘍局在性抗ＴＡＧ７２（ＣＣ４９）抗体と^１１１Ｉｎ標識されたテトラジンＤＯＴＡ誘導体の間で、インビボで５２％の収率を報告した。ＴＣＯ標識されたＣＣ４９抗体が結腸癌異種移植片を有するマウスに投与され、１日後に^１１１Ｉｎ－標識されたテトラジンプローブが注射された（同上）。放射標識されたプローブと腫瘍局在性抗体の反応は、放射標識されたプローブの注射から３時間後の生存マウスのＳＰＥＣＴイメージングにより示されるように、腫瘍中に明白な放射能局在をもたらし、腫瘍対筋肉比は１３：１であった（同上）。この結果により、ＴＣＯとテトラジン標識分子のインビボ化学反応が確証された。

【0120】

生体分子へのそのような部分の化学的コンジュゲーションの代替方法は当技術分野で周知であり、任意のそのような既知の方法を利用することができる。免疫複合体形成の一般的な方法は、例えば、米国特許第４，６９９，７８４号、第４，８２４，６５９号、第５，５２５，３３８号、第５，６７７，４２７号、第５，６９７，９０２号、第５，７１６，５９５号、第６，０７１，４９０号、第６，１８７，２８４号、第６，３０６，３９３号、第６，５４８，２７５号、第６，６５３，１０４号、第６，９６２，７０２号、第７，０３３，５７２号、第７，１４７，８５６号及び第７，２５９，２４０号に開示されており、それぞれの実施例セクションは参照により本明細書に組み込まれる。

【0121】

好ましいコンジュゲーションプロトコールは、中性または酸性ｐＨで容易な、チオール－マレイミド、チオール－ビニルスルホン、チオール－ブロモアセトアミドまたはチオール－ヨードアセトアミド反応に基づく。これにより、例えば、活性エステルを使用する際に必要とされると思われるような、コンジュゲーションのためのより高いｐＨ条件の必要性が取り除かれる。例示的コンジュゲーションプロトコールのさらなる詳細は、実施例セクションにおいて以下に記載される。

【0122】

治療的治療
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の治療有効量の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を対象に投与することを含む、対象を治療する方法に関する。本明細書に記載のＡＤＣで治療することができる疾患としては、限定されないが、例えば、別のＣＤ２２エピトープ（ｈＲＦＢ４）に対する抗ＣＤ２２抗体、例えば、ｈＬＬ２ ＭＡｂ（エプラツズマブ。米国特許第６，１８３，７４４号を参照されたい）、または他のＢ細胞抗原、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０またはＨＬＡ－ＤＲに対する抗体を使用する、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病）が挙げられる。他の疾患としては、限定されないが、内胚葉由来消化器系上皮の腺癌、乳癌及び非小細胞肺癌などのがん、及び他の癌腫、肉腫、グリア系腫瘍、骨髄性白血病などが挙げられる。特に、悪性の固形腫瘍または造血器新生物、例えば、胃腸、胃、結腸、食道、肝臓、肺、乳房、膵臓、肝臓、前立腺、卵巣、精巣、脳、骨、尿路上皮またはリンパ系の腫瘍、肉腫または黒色腫によって生成される、またはこれらと関係がある抗原、例えば、がん胎児性抗原に対する抗体が、好都合に使用される。そのような治療剤は、病態及びコンジュゲートの忍容性に応じて１回または反復して与えることができ、場合により、他の治療様式、例えば、手術、外部放射線、放射免疫療法、免疫療法、化学療法、アンチセン療法、干渉ＲＮＡ療法、遺伝子療法などと組み合わせて使用することもできる。各組み合わせは、腫瘍タイプ、ステージ、患者の状態及び以前の療法ならびに管理医師によって考慮される他の因子に適合される。

【0123】

本明細書で使用する場合、用語「対象」は、任意の動物（すなわち、脊椎動物及び無脊椎動物）、例えば、限定されないが哺乳動物、例えば、ヒトを指す。本用語が特定の年齢または性別に限定されることは意図されない。したがって、雄または雌を問わず、成体及び新生対象ならびに胎児が本用語に包含される。本明細書で与えられる用量はヒトに対するものであるが、体重または平方メートルサイズに従って、他の哺乳動物及び小児のサイズに調整することができる。

【0124】

好ましい実施形態では、ｈＲＳ７ ＭＡｂなどの抗Ｔｒｏｐ－２抗体を含む治療的コンジュゲートは、その実施例セクションが参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第７，２３８，７８５号、第７，５１７，９６４号及び第８，０８４，５８３号に開示されているように、癌腫、例えば、食道、膵臓、肺、胃、結腸及び直腸、膀胱、乳房、卵巣、子宮、腎臓及び前立腺の癌腫を治療するのに使用することができる。ＨＲＳ７抗体は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＣＤＲ１（ＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡ、配列番号１）、ＣＤＲ２（ＳＡＳＹＲＹＴ、配列番号２）及びＣＤＲ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ、配列番号３）、ならびに重鎖ＣＤＲ配列ＣＤＲ１（ＮＹＧＭＮ、配列番号４）、ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧ、配列番号５）及びＣＤＲ３（ＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ、配列番号６）を含むヒト化抗体である。

【0125】

好ましい実施形態では、ヒト疾患の治療で使用される抗体はヒトまたはヒト化（ＣＤＲ移植）バージョンの抗体であるが、マウス及びキメラバージョンの抗体を使用することができる。免疫応答を最小限にするために、送達薬剤と同じ種のＩｇＧ分子がたいていは好ましい。反復治療を考慮する場合、これは特に重要である。ヒトについては、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ抗体は、患者から抗ＩｇＧ免疫応答を発生させる可能性が低い。ｈＬＬ１及びｈＬＬ２などの抗体は、標的細胞上の内部移行抗原に結合した後、迅速に内部移行し、これは、運ばれている化学療法薬も同様に細胞中に迅速に内部移行することを意味する。しかし、内部移行速度が遅い抗体も選択的療法を行うために使用することができる。

【0126】

別の好ましい実施形態では、本発明のカンプトテシンコンジュゲートと組み合わせて使用される治療剤は、１種または複数の同位体を含むことができる。疾患組織を治療するのに有用な放射性同位体としては、限定されないが、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^６２Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^４７Ｓｃ、^１１１Ａｇ、^６７Ｇａ、^１４２Ｐｒ、^１５３Ｓｍ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１８９Ｒｅ、^２１２Ｐｂ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、^５９Ｆｅ、^７５Ｓｅ、^７７Ａｓ、^８９Ｓｒ、^９９Ｍｏ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１６９Ｅｒ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２２７Ｔｈ及び^２１１Ｐｂが挙げられる。治療的放射性核種は、好ましくは、オージェ放射体について２０～６，０００ｋｅＶの範囲の、好ましくは６０～２００ｋｅＶの範囲の、ベータ放射体にについて１００～２，５００ｋｅＶの、及びアルファ放射体について４，０００～６，０００ｋｅＶの崩壊エネルギーを有する。有用なベータ粒子放射核種の最大崩壊エネルギーは、好ましくは２０～５，０００ｋｅＶ、より好ましくは１００～４，０００ｋｅＶ、最も好ましくは５００～２，５００ｋｅＶである。オージェ放射粒子をともなって実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。例えば、Ｃｏ－５８、Ｇａ－６７、Ｂｒ－８０ｍ、Ｔｃ－９９ｍ、Ｒｈ－１０３ｍ、Ｐｔ－１０９、Ｉｎ－１１１、Ｓｂ－１１９、Ｉ－１２５、Ｈｏ－１６１、Ｏｓ－１８９ｍ及びＩｒ－１９２である。有用なベータ粒子放射核種の崩壊エネルギーは、好ましくは＜１，０００ｋｅＶ、より好ましくは＜１００ｋｅＶ、最も好ましくは＜７０ｋｅＶである。アルファ粒子の生成をともなって実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。そのような放射性核種としては、限定されないが、Ｄｙ－１５２、Ａｔ－２１１、Ｂｉ－２１２、Ｒａ－２２３、Ｒｎ－２１９、Ｐｏ－２１５、Ｂｉ－２１１、Ａｃ－２２５、Ｆｒ－２２１、Ａｔ－２１７、Ｂｉ－２１３、Ｔｈ－２２７及びＦｍ－２５５が挙げられる。有用なアルファ粒子放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２，０００～１０，０００ｋｅＶ、より好ましくは３，０００～８，０００ｋｅＶ、最も好ましくは４，０００～７，０００ｋｅＶである。有用なさらなる潜在的な放射性同位体としては、^１１Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^７５Ｂｒ、^１９８Ａｕ、^２２４Ａｃ、^１２６Ｉ、^１３３Ｉ、^７７Ｂｒ、^１１３ｍＩｎ、^９５Ｒｕ、^９７Ｒｕ、^１０３Ｒｕ、^１０５Ｒｕ、^１０７Ｈｇ、^２０３Ｈｇ、^１２１ｍＴｅ、^１２２ｍＴｅ、^１２５ｍＴｅ、^１６５Ｔｍ、^１６７Ｔｍ、^１６８Ｔｍ、^１９７Ｐｔ、^１０９Ｐｄ、^１０５Ｒｈ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｈｏ、^１９９Ａｕ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５１Ｃｒ、^５９Ｆｅ、^７５Ｓｅ、^２０１Ｔｌ、^２２５Ａｃ、^７６Ｂｒ、^１６９Ｙｂなどである。

【0127】

放射性核種及び他の金属は、例えば、抗体またはコンジュゲートに結合したキレート基を使用して送達することができる。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ及びＴＥＴＡなどの大環状キレートは、様々な金属及び放射性金属とともに、最も詳細には、それぞれガリウム、イットリウム及び銅の放射性核種とともに使用される。環のサイズを目的の金属に合わせることにより、そのような金属キレート錯体を非常に安定化させることができる。^２２３Ｒａを錯体化するための大環状ポリエーテルのような他の環型のキレートを使用することができる。

【0128】

本明細書に記載のカンプトテシンコンジュゲートと組み合わせて使用される治療剤としては、例えば、化学療法薬、例えば、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、エピドフィロトキシン、タキサン、代謝拮抗剤、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗生物質、Ｃｏｘ－２阻害剤、有糸分裂阻害薬、血管新生阻害剤及びアポトーシス促進剤、特に、ドキソルビシン、メトトレキサート、タキソール、他のカンプトテシン、ならびにこれら及び他のクラスの抗がん剤由来の他のものなども挙げられる。他のがん化学療法薬としては、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、トリアゼン、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、白金配位化合物、ホルモンなどが挙げられる。適切な化学療法剤は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１９ｔｈ Ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９９５）及びＧＯＯＤＭＡＮ ＡＮＤ ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，７ｔｈ Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９８５）ならびにこれらの刊行物の改訂版に記載されている。実験薬などの他の適切な化学療法剤は当業者に既知である。

【0129】

有用な例示的薬物としては、限定されないが、５－フルオロウラシル、アファチニブ、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アントラサイクリン、アキシチニブ、ＡＶＬ－１０１、ＡＶＬ－２９１、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリオスタチン－１、ブスルファン、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、１０－ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、Ｃｏｘ－２阻害剤、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、ＳＮ－３８、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテカン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ジナシクリブ、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン（２Ｐ－ＤＯＸ）、シアノ－モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エルロチニブ、エストラムスチン、エピドフィロトキシン、エルロチニブ、エンチノスタット、エストロゲン受容体結合剤、エトポシド（ＶＰ１６）、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、エキセメスタン、フィンゴリモド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’－Ｏ－ジオレオイル－ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ－ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、フラボピリドール、ホスタマチニブ、ガネテスピブ、ＧＤＣ－０８３４、ＧＳ－１１０１、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イダルビシン、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ラパチニブ、レノリダミド、ロイコボリン、ＬＦＭ－Ａ１３、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ナベルビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニトロソ尿素、オラパリブ、プリコマイシン、プロカルバジン、パクリタキセル、ＰＣＩ－３２７６５、ペントスタチン、ＰＳＩ－３４１、ラロキシフェン、セムスチン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、タモキシフェン、テマゾロミド（ＤＴＩＣの水性形態）、トランス白金、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、バタラニブ、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンカアルカロイド及びＺＤ１８３９が挙げられる。そのような薬剤は、本明細書に記載のコンジュゲートの一部でもよく、または代わりに、コンジュゲートより前、コンジュゲートと同時、またはコンジュゲーの後のいずれかで、記載されるコンジュゲートと組み合わせて投与されてもよい。あるいは、当技術分野で既知である１種または複数の治療的ネイキッド抗体を記載されるコンジュゲートと組み合わせて使用することができる。例示的治療的ネイキッド抗体は、上に記載される。

【0130】

好ましい実施形態では、ＤＮＡ切断抗体コンジュゲート（例えば、ＳＮ－３８－ＡＤＣ）と組み合わせて使用される治療剤は、微小管阻害剤、例えば、ビンカアルカロイド、タキサン、マイタンシノイドまたはオーリスタチンである。例示的な既知の微小管阻害剤としては、パクリタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルタンシン、エポチロン、ドセタキセル、ディスコデルモリド、コンブレスタチン、ポドフィロトキシン、ＣＩ－９８０、フェニルアヒスチン、ステガナシン、クラシン、２－メトキシエストラジオール、Ｅ７０１０、メトキシベンゼンスルホンアミド、ビノレルビン、ビンフルニン、ビンデシン、ドラスタチン、スポンギスタチン、リゾキシン、タシドチン、ハリコンドリン、ヘミアステリン、クリプトフィシン５２、ＭＭＡＥ及びエリブリンメシレートが挙げられる。

【0131】

代替の好ましい実施形態では、ＤＮＡ切断ＡＤＣ、例えば、ＳＮ－３８－抗体コンジュゲートと組み合わせて使用される治療剤は、ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、オラパリブ、タラゾパリブ（ＢＭＮ－６７３）、ルカパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ９７２２、ＭＫ４８２７、ＢＧＢ－２９０、ＡＢＴ－８８８、ＡＧ０１４６９９、ＢＳＩ－２０１、ＣＥＰ－８９８３または３－アミノベンズアミドである。

【0132】

別の代替法では、抗体または免疫複合体と組み合わせて使用される治療剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）、ＰＣＩ－４５２９２、ＣＣ－２９２（ＡＶＬ－２９２）、ＯＮＯ－４０５９、ＧＤＣ－０８３４、ＬＦＭ－Ａ１３またはＲＮ４８６である。

【0133】

さらに別の代替法では、抗体または免疫複合体と組み合わせて使用される治療剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、イデラリシブ、ウォルトマニン、デメトキシビリジン、ペリホシン、ＰＸ－８６６、ＩＰＩ－１４５（デュベリシブ）、ＢＡＹ８０－６９４６、ＢＥＺ２３５、ＲＰ６５３０、ＴＧＲ１２０２、ＳＦ１１２６、ＩＮＫ１１１７、ＧＤＣ－０９４１、ＢＫＭ１２０、ＸＬ１４７、ＸＬ７６５、パロミド５２９、ＧＳＫ１０５９６１５、ＺＳＴＫ４７４、ＰＷＴ３３５９７、ＩＣ８７１１４、ＴＧ１００－１１５、ＣＡＬ２６３、ＰＩ－１０３、ＧＮＥ４７７、ＣＵＤＣ－９０７、ＡＥＺＳ－１３６またはＬＹ２９４００２である。

【0134】

カンプトテシンコンジュゲートと一緒に使用することができる治療剤は、標的化部分にコンジュゲートした毒素を含むこともできる。この関連で使用することができる毒素とてしては、リシン、アブリン、ＲＮＡ分解酵素（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ Ｉ、ランピルナーゼ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌのエンテロトキシン－Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素が挙げられる（例えば、Ｐａｓｔａｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９８６），４７：６４１、及びＳｈａｒｋｅｙ ａｎｄ Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ．２００６ Ｊｕｌ－Ａｕｇ；５６（４）：２２６－４３を参照されたい）。本明細書における使用に適したさらなる毒素は当業者に既知であり、Ｕ．Ｓ．６，０７７，４９９に開示されている。

【0135】

さらに別のクラスの治療剤は、１種または複数の免疫調節剤を含むことができる。有用な免疫調節剤は、サイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリスロポエチン、トロンボポエチン及びこれらの組み合わせから選択することができる。特に有用なものは、リンホトキシ、例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、造血因子、例えばインターロイキン（ＩＬ）、コロニー刺激因子、例えば、顆粒球－コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージ－コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターフェロン、例えば、インターフェロン－α、－β、－γまたは－λ、及び例えば、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子である。サイトカインの中に含まれるものは、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓増殖因子；プロスタグランジン、線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質；腫瘍壊死因子－α及び－β；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－β；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－β；インスリン様増殖因子－Ｉ及び－ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン－α、－β、－γ及び－λ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２；ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２５、ＬＩＦ、ＫｉｔリガンドまたはＦＬＴ－３、アンギオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、腫瘍壊死因子ならびにリンホトキシン（ＬＴ）である。本明細書で使用する場合、用語サイトカインは、天然源由来または組換え細胞培養由来のタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な均等物を含む。

【0136】

有用なケモカインとしては、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＩＰ１－アルファ、ＭＩＰ１－β及びＩＰ－１０が挙げられる。

【0137】

抗体または抗体断片にコンジュゲートしたカンプトテシンを含む主題の免疫複合体は、単独で、または１種もしくは複数の他の治療剤、例えば、第２の抗体、第２の抗体断片、第２の免疫複合体、放射性核種、毒素、薬物、化学療法剤、放射線療法、ケモカイン、サイトカイン、免疫調節剤、酵素、ホルモン、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡと組み合わせて使用することができることを、当業者は理解するであろう。そのようなさらな治療剤は、主題の抗体－薬物免疫複合体と別々に、この複合体と組み合わせて、またはこの複合体に結合させて、投与することができる。

【0138】

製剤及び投与
コンジュゲートの適切な投与経路としては、限定はされないが、経口、非経口、皮下、直腸、経粘膜、腸の投与、筋肉内、髄内、髄腔内、直接脳室内、静脈内、硝子体内、腹腔内、鼻腔内または眼内の注射が挙げられる。好ましい投与経路は非経口である。あるいは、全身的な様式よりもむしろ局部的に、例えば、固形腫瘍中へ化合物を直接注射することによって、化合物を投与することができる。

【0139】

既知の方法に従って免疫複合体を製剤化して、医薬的に有用な組成物に調製することができ、これによって、免疫複合体は、医薬的に適切な賦形剤と混合物中で組み合わされる。無菌リン酸緩衝食塩水は医薬的に適切な賦形剤の一例である。他の適切な賦形剤は当業者に周知である。例えば、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ ＡＮＤ ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ １９９０）及びＧｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０）ならびにこれらの改訂版を参照されたい。

【0140】

好ましい実施形態では、免疫複合体は、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３－（Ｎ－モルホリニル）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、及びピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）［Ｐｉｐｅｓ］からなる群から選択されるバッファーを使用して、グッドの生物学的バッファー（ｐＨ６～７）中で製剤化される。より好ましいバッファーは、好ましくは２０～１００ｍＭの濃度範囲の、より好ましくは約２５ｍＭのＭＥＳまたはＭＯＰＳである。最も好ましいのは２５ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６．５である。製剤は、２５ｍＭトレハロース及び０．０１％ｖ／ｖポリソルベート８０を賦形剤としてさらに含むことができ、賦形剤の添加の結果として最終的なバッファー濃度は２２．２５ｍＭに変えられる。好ましい保存方法は、コンジュゲートの凍結乾燥製剤としてであり、－２０℃～２℃の温度範囲で保存され、最も好ましい保存は２℃～８℃である。

【0141】

免疫複合体は、例えば、ボーラス注射、緩徐注入または持続注入による静脈内投与用に製剤化することができる。好ましくは、本発明の抗体は、約４時間未満の期間にわたって、より好ましくは約３時間未満の期間にわたって注入される。例えば、最初の２５～５０ｍｇを３０分以内、好ましくは、さらには１５分以内に注入することができ、残りを次の２～３時間にわたって注入することができる。注射用の製剤は、単位剤形で、例えばアンプル中に、または多回用量容器中に、添加された防腐剤とともに提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液のような形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤及び／または分散剤などの調合剤を含むことができる。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、例えば発熱物質を含有しない無菌水で構成するための粉末形態でもよい。

【0142】

治療的コンジュゲートの作用持続期間を制御するために、さらなる医薬的方法を用いることができる。制御放出調製物は、免疫複合体を複合体化または吸着するためのポリマーを使用して調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン－ｃｏ－酢酸ビニル）のマトリックス及びステアリン酸二量体とセバシン酸のポリ酸無水物コポリマーのマトリックスを含む。Ｓｈｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１４４６（１９９２）。そのようなマトリックスからの免疫複合体の放出速度は、免疫複合体の分子量、マトリックス内の免疫複合体の量及び分散される粒子のサイズに依存する。Ｓａｌｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５５：１６３（１９８９）、Ｓｈｅｒｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，上記。他の固形剤形は、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ ＡＮＤ ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ １９９０）及びＧｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０）ならびにこれらの改訂版に記載されている。

【0143】

一般に、ヒトに投与される免疫複合体の投薬量は、患者の年齢、体重、身長、性別、一般的な医学的状態及び以前の病歴などの因子によって変動する。状況に応じて、より低いまたはより高い投薬量を投与することもができるが、単回静脈内注入として約１ｍｇ／ｋｇ～２４ｍｇ／ｋｇの範囲の免疫複合体の投薬量をレシピエントに提供することが望ましい場合がある。例えば、７０ｋｇの患者に対する１～２０ｍｇ／ｋｇの投薬量は７０～１，４００ｍｇであり、または１．７ｍ患者の患者に対して４１～８２４ｍｇ／ｍ^２である。必要に応じて、投薬量は反復することができ、例えば、４～１０週にわたって週１回、８週にわたって週１回、または４週にわたって週１回である。これは、維持療法において、必要に応じて、数か月にわたって隔週、または何か月にもわたって月１回もしくは３カ月に１回のように、より低頻度に与えることもできる。好ましい投薬量としては、限定されないが、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ及び２４ｍｇ／ｋｇを挙げることができる。１～２４ｍｇ／ｋｇの範囲の任意の量を使用することができる。しかし、好ましい実施形態では、投薬量範囲は、４～１６ｍｇ／ｋｇ、６～１２ｍｇ／ｋｇまたは８～１０ｍｇ／ｋｇであり得る。

【0144】

投薬量は、好ましくは、週に１回または２回、複数回投与される。４週、より好ましくは、８週、より好ましくは、１６週またはそれ以上の最小投薬スケジュールを使用することができる。投与スケジュールは、（ｉ）毎週、（ｉｉ）隔週、（ｉｉｉ）１週の療法、それに続く、２、３または４週の休止、（ｉｖ）２週の療法、それに続く、１、２、３または４週の休止、（ｖ）３週の療法、それに続く、１、２、３、４または５週の休止、（ｖｉ）４週の療法、それに続く、１、２、３、４または５週の休止、（ｖｉｉ）５週の療法、それに続く、１、２、３、４または５週の休止、及び（ｖｉｉｉ）月１回からなる群から選択されるサイクルで、週１回または２回の投与を含むことができる。サイクルは、４、６、８、１０、１２、１６または２０回またはそれ以上反復することができる。

【0145】

あるいは、免疫複合体は２または３週毎に１投薬量として投与することができ、合計で少なくとも３投薬量について反復することができる。または、４～６週にわたって週２回である。投薬量が２００～３００ｍｇ／ｍ^２（１．７ｍの患者に対して投薬あたり３４０ｍｇ、または７０ｋｇの患者に対して４．９ｍｇ／ｋｇ）まで下げられる場合、これは、４～１０週にわたって１回またはさらには週２回投与することができる。あるいは、投与スケジュールを減らすこと（すなわち、２～３か月にわたって２または３週毎）ができる。しかし、週１回または２～３週毎に１回の１２ｍｇ／ｋｇなどのより高い用量でさえ、反復投薬サイクルの間、緩徐静脈注入により投与することができることが決定されている。投薬スケジュールは、場合により、他の間隔で反復することができ、投薬量は、用量及びスケジュールを適切に調整して、様々な非経口経路を通して与えることができる。

【0146】

好ましい実施形態では、免疫複合体は、がんの療法に有用である。がんの例としては、限定されないが、癌腫、リンパ腫、膠芽腫、黒色腫、肉腫及び白血病、骨髄腫またはリンパ系腫瘍が挙げられる。そのようながんのより具体的な例を以下に記載し、それらとしては、以下が挙げられる：扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、星状細胞腫、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌、腹膜癌、胃部または胃の癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃腸癌、膵臓癌、多形神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、肝細胞癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺髄様癌、分化甲状腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌。用語「がん」は、原発性の悪性細胞または腫瘍（例えば、細胞が元の悪性腫瘍または腫瘍の部位以外の対象の体内の部位に遊走していないもの）及び二次悪性細胞または腫瘍（例えば、最初の腫瘍部位と異なる二次部位への悪性細胞または腫瘍細胞の転移、遊走から生じるもの）を含む。

【0147】

他のがんまたは悪性腫瘍の例としては、限定されないが、以下が挙げられる：急性小児リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌腫、成人（原発性）肝細胞癌、成人（原発性）肝臓癌、成人急性リンパ性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ球性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝臓癌、成人軟部組織肉腫、エイズ関連リンパ腫、エイズ関連悪性腫瘍、肛門癌、星状細胞腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、腎盂及び尿管の癌、中枢神経系（原発性）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、子宮頸癌、小児（原発性）肝細胞癌、小児（原発性）肝臓癌、小児急性リンパ性白血病、小児急性骨髄性白血病、小児脳幹神経膠腫、小児小脳星状細胞腫、小児大脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視床下部及び視経路グリオーマ、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児松果体及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児原発性肝臓癌、小児横紋筋肉腫、小児軟部組織肉腫、小児視覚路及び視床下部神経膠腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、膵臓内分泌部島細胞癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮癌、食道癌、ユーイング肉腫及び関連腫瘍、膵外分泌癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、女性乳癌、ゴーシェ病、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、胃腸腫瘍、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、ヘアリーセル白血病、頭頸部癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、下咽頭癌、腸癌、眼内黒色腫、島細胞癌、島細胞膵臓癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、唇及び口腔の癌、肝臓癌、肺癌、リンパ増殖性障害、マクログロブリン血症、男性乳癌、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、転移性潜在性原発性扁平上皮頸部癌、転移性原発性扁平上皮頸部癌、転移性扁平上皮頸部癌、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病（Ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄白血病（Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、潜在性原発性転移性扁平上皮頸部癌、中咽頭癌、骨／悪性線維性肉腫、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性潜在腫瘍、膵臓癌、パラプロテイン血症、真性多血症、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝臓癌、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂及び尿管癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性及び松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行上皮癌、移行性腎盂及び尿管癌、絨毛性腫瘍、尿管及び腎盂細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、腟癌、視覚路及び視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、ならびに新生物の他に、上に列挙した器官系に位置する任意の他の過剰増殖性疾患。

【0148】

本明細書で記載及び主張する方法及び組成物は、悪性または前がん性状態を治療するのに、及び限定されないが、上記の障害を含めた新生物または悪性状態への進行を予防するのに使用することができる。そのような使用は、新生物またはがんへの前述の進行が既知であるか、その疑いがある状態において、特に、過形成、化生、または最も詳細には異形成からなる非新生物の細胞増殖が生じている場合に、指示される（そのような異常な増殖状態の総説について、Ｒｏｂｂｉｎｓ ａｎｄ Ａｎｇｅｌｌ， Ｂａｓｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２ｄ Ｅｄ．，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ｐｐ．６８－７９（１９７６）を参照されたい）。

【0149】

異形成はがんの前兆であることが多く、上皮に主に見出される。これは、非新生物性細胞増殖の最も無秩序な形態であり、個々の細胞均一性及び細胞の構築的配向の喪失をともなう。異形成は、慢性の刺激または炎症が存在する場合に特徴的に生じる。治療することができる異形成障害としては、限定されないが、以下が挙げられる。無汗性外胚葉異形成、前後異形成、窒息性胸郭異形成、心房指異形成（ａｔｒｉｏｄｉｇｉｔａｌ ｄｙｓｐｌａｓｉａ）、気管支肺異形成症、大脳異形成、子宮頸部異形成、軟骨外胚葉異形成、鎖骨頭蓋異形成、先天性外胚葉異形成、頭蓋骨幹異形成、頭蓋手根足根骨異形成、頭蓋骨幹端異形成、象牙質異形成症、骨幹異形成、外胚葉異形成、エナメル質異形成、脳眼異形成、片肢性骨端骨異形成（ｄｙｓｐｌａｓｉａ ｅｐｉｐｈｙｓｉａｌｉｓ ｈｅｍｉｍｅｌｉａ）、多発性骨端異形成、点状骨端異形成、上皮異形成、顔面指趾生殖器異形成、家族性線維性顎異形成、家族性白色襞性異形成、線維筋性異形成、線維性骨異形成、開花性骨異形成、遺伝性腎‐網膜異形成、発汗性外胚葉形成異形成、無汗性外胚葉異形成、リンパ性減少性胸腺異形成、乳房異形成、下顎顔面異形成、骨幹端異形成、モンディーニ異形成、単骨性線維性骨異形成、粘膜上皮異形成、多発性骨端異形成、眼耳脊椎異形成、眼歯指異形成、眼脊椎異形成、歯原性異形成、眼下顎異形成（ｏｐｔｈａｌｍｏｍａｎｄｉｂｕｌｏｍｅｌｉｃ ｄｙｓｐｌａｓｉａ）、根尖性セメント質異形成、多骨性線維性骨異形成、偽軟骨発育不全脊椎骨端異形成、網膜異形成、中隔視神経異形成、脊椎骨端異形成及び心室橈骨異形成。

【0150】

治療することができるさらなる新生物発生前の障害としては、限定されないが、良性異常増殖性（ｄｙｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）障害（例えば、良性腫瘍、線維嚢胞性状態、組織肥大、腸のポリープまたは腺腫及び食道異形成）、白斑症、角化症、ボーエン病、農夫皮膚、日光口唇炎及び日光角化症が挙げられる。好ましい実施形態では、本発明の方法は、癌、特に上に列挙したものの増殖、進行及び／または転移を阻害するのに使用される。

【0151】

さらなる過剰増殖性疾患、障害及び／または状態としては、限定されないが、以下が挙げられる。悪性腫瘍及び関連障害、例えば、白血病（急性白血病、例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病［骨髄芽球性、前骨髄性、骨髄単球性、単球性及び赤血白血病を含める］を含める）ならびに慢性白血病（例えば、慢性骨髄性［顆粒球性］白血病及び慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病及びノナ－ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、ならびに固形腫瘍、例えば、限定されないが、肉腫及び癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌腫、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌腫、嚢胞腺癌腫、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーム、胆管癌、絨毛上皮腫、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫（ｅｍａｎｇｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫及び網膜芽細胞腫の進行及び／または転移。

【0152】

免疫複合体で治療することができる自己免疫疾患としては、以下を挙げることができる。急性及び慢性の免疫性血小板減少、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後の腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、ＡＮＣＡ関連脈管炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬または線維化性肺胞隔炎。

【0153】

キット
様々な実施形態が、患者のがんを治療するのに適した成分を含むキットに関係する。例示的キットは、本明細書に記載の少なくとも１つの薬物コンジュゲート化抗体を含むことができる。投与のための成分を含む組成物が、経口送達によるなどの消化管を介する送達用に製剤化されない場合、ある他の経路を通してキット成分を送達することができる装置を含むことができる。非経口送達などの用途のための装置の１つのタイプは、対象の体内に組成物を注射するのに使用されるシリンジである。吸入装置を使用することもできる。

【0154】

キット成分は一緒に包装されてもよく、または２つ以上の容器に分離されていてもよい。いくつかの実施形態では、容器は、再構成に適した組成物の無菌凍結乾燥製剤を含むバイアルでもよい。キットは、再構成及び／または他の試薬の希釈に適した１種または複数のバッファーも含むことができる。使用することができる他の容器としては、限定されないが、パウチ、トレイ、箱、チューブなどが挙げられる。キット成分を容器内で無菌的に包装及び維持することができる。含めることができる別の成分は、その使用のためにキットを使用する人に対する指示書である。

【実施例】

【0155】

以下の実施例は本発明の実施形態の例示であり、特許請求の範囲を制限するものではない。

【0156】

実施例１．ＩＭＭＵ－１３２（サシツズマブゴビテカン）、抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）によるＧＩ癌の標的療法
Ｔｒｏｐ－２は、多くの上皮癌で非常に広く認められる腫瘍関連糖タンパク質である。その発現上昇は、より侵襲性の疾患及び予後不良と関連づけられた。Ｔｒｏｐ－２の細胞外ドメインに結合するヒト化ＭＡｂをＣＰＴ－１１の活性成分であるＳＮ－３８にコンジュゲートした（ＩＭＭＵ－１３２；平均薬物：ｍＡｂ比＝７．６）。ヒト腫瘍異種移植片における強力な活性の後に、ＧＩ癌を含めた種々の固形腫瘍を有する複数の患者（ｐｔｓ）において第Ｉ／ＩＩ相試験を開始した。

【0157】

方法：標準療法に失敗した後に、転移性がんを有する患者を登録し、３週サイクルの１日目及び８日目に与える８．０ｍｇ／ｋｇの用量で開始した。ＭＴＤを１２ｍｇ／ｋｇであると決定し、８及び１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルを第ＩＩ相試験のために選択した。

【0158】

結果：進行ＧＩ癌を有する６０人の患者を第Ｉ／ＩＩ相試験に登録した。２９人のＣＲＣ患者（９人は１０ｍｇ／ｋｇで治療し、２０人は８ｍｇ／ｋｇで治療した）において、１人はＰＲ（部分応答）を有し、１４人はＲＥＣＩＳＴによる最良応答としてＳＤ（安定疾患）を有しており、ＰＲについて５０＋週の無増悪期間（ＴＴＰ）（－６５％）及びＳＤ患者について２１＋週の中央値（５人継続）を有していた。１３人のＣＲＣ患者はＫＲＡＳ突然変異を有しており、７人は１９．１＋週のＴＴＰ中央値を有するＳＤを示した（範囲、１２．０～３４．０；３人継続）。治療した１５人の膵臓癌患者（８ｍｇ／ｋｇで５人、１０ｍｇ／ｋｇで７人、及び１２ｍｇ／ｋｇで３人）のうち、７人は１５．０週のＴＴＰ中央値に対する最良応答としてＳＤを有していた。食道癌を有する１１人の患者（９人は８ｍｇ／ｋｇで、１人は１０ｍｇ／ｋｇで、及び１人は１８ｍｇ／ｋｇで開始した）の中で、８人がＣＴ評価を受け、これは、３０＋週のＴＴＰを有する１人のＰＲ、ならびに１７．４＋、２１．９、２６．３及び２９．９週のＳＤを有する４人を示した。５人の胃癌患者（８ｍｇ／ｋｇで２人及び１０ｍｇ／ｋｇで３人）のうち、３人のみがＣＴ評価を受け、すべてＳＤを示した（１人が１９％の標的病変低減及び２９＋週の進行中のＴＴＰを有していた）。

【0159】

好中球減少が主な用量制限毒性であり、他の一般に報告されている毒性として疲労、下痢、悪心及び嘔吐をともなった。しかし、全試験における７５人の患者からの毒性プロファイルは、それぞれわずか１７．３％及び２．７％のグレード３及びグレード４の好中球減少、及びほんの６．７％のグレード３の下痢を示した。

【0160】

結論：ＩＭＭＵ－１３２は、種々の再発転移性ＧＩ癌の患者において高い治療指数を示した。これは、内部移行するがん選択的ｍＡｂにコンジュゲートした中程度に毒性の薬物を有し、これは、２１日サイクルで週１回×２で、何か月にもわたって反復して与えることができる。

【0161】

実施例２．抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８抗体－薬物コンジュゲートの生成及び使用
ヒト化ＲＳ７（ｈＲＳ７）抗Ｔｒｏｐ－２抗体を、その図及び実施例セクションは参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，２３８，７８５号に記載されているように生成した。ＣＬ２Ａリンカーに結合したＳＮ－３８を生成し、米国特許第７，９９９，０８３号（その実施例１０及び１２が参照により本明細書に組み込まれる）に従って、ｈＲＳ７（抗Ｔｒｏｐ－２）、ｈＰＡＭ４（抗ＭＵＣ５ａｃ）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）またはｈＭＮ－１４（抗ＣＥＡＣＡＭ５）抗体にコンジュゲートした。このコンジュゲーションプロトコールは、抗体分子あたり約６個の結合ＳＮ－３８分子の比をもたらした。

【0162】

皮下のヒト膵臓または結腸腫瘍異種移植片を有する免疫無防備状態の胸腺欠損ヌードマウス（雌）を特定のＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８コンジュゲートまたは対照コンジュゲートのいずれかで治療したか、また未治療のままにした。特定のコンジュゲートの治療効力が観察された。図１はＣａｐａｎ１膵臓腫瘍モデルを示し、ｈＲＳ７（抗Ｔｒｏｐ－２）、ｈＰＡＭ４（抗ＭＵＣ－５ａｃ）及びｈＭＮ－１４（抗ＣＥＡＣＡＭ５）抗体の特定のＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８コンジュゲートが、対照ｈＡ２０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８コンジュゲート（抗ＣＤ２０）及び未治療対照よりも良好な有効性を示した。ヒト膵臓癌のＢＸＰＣ３モデルにおいて同様に、特異的ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は、対照治療よりも優れた治療効力を示した（図２）。

【0163】

実施例３．インビボにおける種々の上皮癌に対する抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８ＡＤＣの有効性
要約
本研究の目的は、いくつかのヒト固形腫瘍タイプに対するＳＮ－３８－抗Ｔｒｏｐ－２（ｈＲＳ７）ＡＤＣの効力を評価すること、ならびにマウス及びサル（後者は、ヒトと同様にｈＲＳ７への組織交差反応性を有する）においてその忍容性を評価することであった。２つのＳＮ－３８誘導体、ＣＬ２－ＳＮ－３８及びＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を抗Ｔｒｏｐ－２－ヒト化抗体、ｈＲＳ７にコンジュゲートした。この免疫複合体を、安定性、結合及び細胞毒性についてインビトロで特徴づけた。効力は、Ｔｒｏｐ－２抗原を発現する５つの異なるヒト固形腫瘍－異種移植モデルで試験した。毒性は、マウス及びカニクイザルで評価した。

【0164】

２つのＳＮ－３８誘導体のｈＲＳ７コンジュゲートは、薬物置換（約６）、細胞結合（Ｋ_ｄ約１．２ｎｍｏｌ／Ｌ）、細胞毒性（ＩＣ_５０約２．２ｎｍｏｌ／Ｌ）及びインビトロ血清安定性（ｔ／_１／２約２０時間）が同等であった。ＡＤＣへの細胞の曝露は、ＰＡＲＰ切断につながるシグナリング経路を示したが、ｐ５３及びｐ２１のアップレギュレーションにおける遊離ＳＮ－３８との違いが認められた。非標的化対照ＡＤＣと比較して、Ｃａｌｕ－３（Ｐ≦０．０５）、Ｃａｐａｎ－１（Ｐ＜０．０１８）、ＢｘＰＣ－３（Ｐ＜０．００５）及びＣＯＬＯ２０５腫瘍（Ｐ＜０．０３３）を有するマウスにおいて、無毒用量のｈＲＳ７－ＳＮ－３８によって有意な抗腫瘍効果がもたらされた。マウスは２×１２ｍｇ／ｋｇ（ＳＮ－３８当量）の用量に忍容性を示し、ＡＬＴ及びＡＳＴ肝臓酵素レベルが一時的にだけ上昇した。２×０．９６ｍｇ／ｋｇで注入されたカニクイザルは、血球数の一過的な減少のみを示したが、重要なことに、その値は正常範囲を下回らなかった。

【0165】

要約すると、抗Ｔｒｏｐ－２ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣは、様々なヒト固形腫瘍タイプに対して有意且つ特異的な抗腫瘍効果をもたらした。これは、サルにおいて十分な忍容性が示され、Ｔｒｏｐ－２の組織発現は臨床的に適切な用量でヒトと同様であった。

【0166】

序論
主に、活性ＳＮ－３８代謝物へのＣＰＴ－１１プロドラッグの低い変換率により、固形腫瘍を有する患者の好結果のイリノテカン治療は限られている。他のものたちは、この変換の必要性を回避するための、及びＳＮ－３８を受動的に腫瘍に送達するための手段として、非標的化形態のＳＮ－３８を検討した。本発明者らは、ヒト化抗Ｔｒｏｐ－２抗体、ｈＲＳ７にＳＮ－３８を共有結合的にコンジュゲートした。この抗体－薬物コンジュゲートは、すべて無毒用量（例えば、≦３．２ｍｇ／ｋｇの累積ＳＮ－３８当量の用量）で、非小細胞肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌及び扁平上皮細胞肺癌を含めた様々な皮下ヒトがん異種移植モデルにおいて特異的な抗腫瘍効果を有する。Ｔｒｏｐ－２は多くの上皮癌だけでなく、いくつかの正常組織でも広く発現しているので、カニクイザルにおいて用量漸増研究を行って、このコンジュゲートの臨床的安全性を評価した。サルは、２４ｍｇ ＳＮ－３８当量／ｋｇに忍容性を示し、軽微な可逆的毒性のみを有していた。その腫瘍標的化及び安全性プロファイルを考えれば、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８は、イリノテカンへ応答性の固形腫瘍の管理において有意な改善をもたらす。

【0167】

材料及び方法
細胞株、抗体、及び化学療法剤－本研究で使用するすべてのヒトがん細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した。これらには、Ｃａｌｕ－３（非小細胞肺癌）、ＳＫ－ＭＥＳ－１（扁平上皮細胞肺癌）、ＣＯＬＯ２０５（結腸腺癌）、Ｃａｐａｎ－１及びＢｘＰＣ－３（膵臓腺癌）ならびにＰＣ－３（前立腺腺癌）が含まれる。ヒト化ＲＳ７ ＩｇＧ及び対照ヒト化抗ＣＤ２０（ｈＡ２０ ＩｇＧ、ベルツズマブ）及び抗ＣＤ２２（ｈＬＬ２ ＩｇＧ、エプラツズマブ）抗体は、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．によって調製された。イリノテカン（２０ｍｇ／ｍＬ）は、Ｈｏｓｐｉｒａ，Ｉｎｃ．から得た。

【0168】

ＳＮ－３８免疫複合体及びインビトロ態様－ＣＬ２－ＳＮ－３８の合成は以前に記載されている（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５１：６９１６－２６）。ｈＲＳ７ ＩｇＧへのそのコンジュゲーション及び血清安定性は、記載（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５１：６９１６－２６、Ｇｏｖｉｎｄａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ １５：６０５２－６１）のように行った。ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（分子量１４８０）及びそのｈＲＳ７コンジュゲートの調製、ならびに安定性、結合及び細胞毒性研究は、上記の実施例に記載されているように行った。

【0169】

インビボにおける治療的研究－すべての動物研究について、ＳＮ－３８免疫複合体及びイリノテカンの用量は、ＳＮ－３８当量で示す。６の平均ＳＮ－３８／ＩｇＧ置換比に基づくと、２０ｇのマウスに対する５００μｇ ＡＤＣの用量（２５ｍｇ／ｋｇ）は、０．４ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８を含む。イリノテカンの用量は、同様にＳＮ－３８当量として示す（すなわち、４０ｍｇイリノテカン／ｋｇは、２４ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８に相当する）。

【0170】

４～８週齢のＮＣｒ雌胸腺欠損ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウス、及び１０週齢の雄Ｓｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓから購入した。忍容性研究は、ＳＮＢＬ ＵＳＡ，Ｌｔｄによって、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ；２．５～４ｋｇの雄及び雌）において行われた。

【0171】

異なるヒトがん細胞株を動物に皮下移植した。腫瘍体積（ＴＶ）は、キャリパーを使用して２寸法で測定することによって決定し、体積はＬ×ｗ^２／２と定義し、式中、Ｌは腫瘍の最も長い寸法であり、ｗは最も短い寸法である。療法開始時に、腫瘍は０．１０～０．４７ｃｍ^３のサイズの範囲であった。各実験の治療レジメン、投薬量及び動物数は結果に記載する。凍結乾燥したｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８及び対照ＡＤＣを再構成し、必要に応じて、無菌生理食塩水中に希釈した。静脈内投与したイリノテカンを除いて、すべての試薬は腹腔内投与した（０．１ｍＬ）。投薬レジメンは、本発明者らの以前の調査の影響を受け、この場合、様々な期間にわたって４日毎または週２回ＡＤＣを与えた（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５１：６９１６－２６、Ｇｏｖｉｎｄａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ １５：６０５２－６１）。この投薬頻度は、ＡＤＣへのより持続的な暴露を可能にするために、コンジュゲートのインビトロ血清半減期の考慮を反映した。

【0172】

統計－増殖曲線は、経時的な、最初のＴＶの変化パーセントとして示す。腫瘍増殖の統計解析は曲線下面積（ＡＵＣ）に基づいた。個々の腫瘍増殖のプロファイルは、線形－曲線モデリングを介して得た。増殖曲線の統計解析の前にｆ検定を用いて群間の等分散性を決定した。片側ｔ検定を使用した生理食塩水対照Ｐ≦０．０５の有意性）を除いて、両側ｔ検定を使用して、様々な治療群と対照の間の統計的有意性を評価した（Ｐ≦０．０５の有意性）。ＡＵＣの統計学的比較は、進行が原因で群内の最初の動物を安楽死させるときまでしか行わなかった。

【0173】

薬物動態及び生体内分布－^１１１Ｉｎで放射標識したｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７ ＩｇＧを皮下ＳＫ－ＭＥＳ－１腫瘍（約０．３ｃｍ^３）を有するヌードマウスに注射した。１つの群に２０μＣｉ（２５０μｇタンパク質）の^１１１Ｉｎ－ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を静脈内注射し、一方、別の群に２０μＣｉ（２５０μｇタンパク質）の^１１１Ｉｎ－ｈＲＳ７ ＩｇＧを与えた。様々な時点で、マウス（時点あたり５匹）に麻酔をかけ、これらから心臓内穿刺を介して採血し、次いで安楽死させた。腫瘍及び様々な組織を取り出し、γシンチレーションによってカウントして、グラム組織あたりの注射された用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）を決定した。第３の群は、２５０μｇの非標識ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を注射し、その３日後に^１１１Ｉｎ－ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を投与し、同様に剖検した。ｆ検定を使用して等分散性を決定した後、両側ｔ検定を使用して、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７ ＩｇＧの取り込みを比較した。ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウェア（Ｐａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ．）を使用して、血液クリアランスに対する薬物動態解析を行った。

【0174】

Ｓｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウス及びカニクイザルにおける忍容性－手短に言えば、マウスを４群に選別し、それぞれ、結果に記載されているように、０日目及び３日目に、ナトリウム酢酸バッファー対照または３つの異なる用量のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（４、８もしくは１２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８）のいずれかの２ｍＬの腹腔内注射を与え、続いて、血液及び血清を採取した。カニクイザル（３匹の雄及び３匹の雌；２．５～４．０ｋｇ）に２つの異なる用量のｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を投与した。投薬量、時間及び考えられる血液毒性及び血清化学の評価のために採血したサルの数を結果に記載する。

【0175】

結果
ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の安定性及び効力－２つの異なる結合を使用して、ｈＲＳ７ ＩｇＧにＳＮ－３８をコンジュゲートした（図３Ａ）。最初のものはＣＬ２－ＳＮ－３８と呼ばれ、以前に記載されている（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５１：６９１６－２６、Ｇｏｖｉｎｄａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ １５：６０５２－６１）。ＣＬ２Ａリンカーを生成するために、リンカー内のフェニルアラニン部分を除去するためのＣＬ２の合成の変更を用いた。この変更によって合成が簡単になったが、コンジュゲーションの結果は影響を受けなかった（例えば、ＣＬ２－ＳＮ－３８とＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の両方ともＩｇＧ分子あたり約６個のＳＮ－３８が組み込まれた）。サイド・バイ・サイド比較により、血清安定性、抗原結合またはインビトロ細胞毒性に有意差は見られなかった。ＣＬ２中のフェニルアラニン残基は、リソソームのプロテアーゼであるカテプシンＢに対して設計された切断部位の一部であるので、この結果は驚くべきことであった。

【0176】

ＣＬ２からＣＬ２ＡへのＳＮ－３８リンカーの変化がインビボ効力に影響しなかったことを確証するために、ＣＯＬＯ２０５（図３Ｂ）またはＣａｐａｎ－１腫瘍（図３Ｃ）を有するマウスにおいてｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ及びｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８を比較し、それぞれ、週２回×４週の０．４ｍｇまたは０．２ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８を使用し、両方の研究で０．２５ｃｍ^３サイズの出発腫瘍を用いた。ｈＲＳ７－ＣＬ２ＡとＣＬ２－ＳＮ－３８の両方のコンジュゲートが、未治療（ＣＯＬＯ２０５モデルにおいてＡＵＣ_１４日Ｐ＜０．００２対生理食塩水；Ｃａｐａｎ－１モデルにおいてＡＵＣ_２１日Ｐ＜０．００１対生理食塩水）、及び非標的化抗ＣＤ２０対照ＡＤＣ、ｈＡ２０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（ＣＯＬＯ－２０５モデルにおいてＡＵＣ_１４日Ｐ＜０．００３；Ｃａｐａｎ－１モデルおいてＡＵＣ_３５日：Ｐ＜０．００２）と比較して、腫瘍増殖を有意に阻害した。Ｃａｐａｎ－１モデルの研究の終わり（１４０日目）で、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８で治療したマウスの５０％及びｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８マウスの４０％は腫瘍がなく、一方で、ｈＡ２０－ＡＤＣ治療動物の２０％のみが目に見える疾患徴候を有していなかった。図３に示すように、ＣＬ２ＡリンカーはＣＬ２と比較していくらか高い効力をもたらした。

【0177】

作用機構－インビトロ細胞毒性研究によって、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８がいくつかの異なる固形腫瘍株に対してｎｍｏｌ／Ｌ範囲のＩＣ_５０値を有することが示された（表２）。すべての細胞株において、遊離ＳＮ－３８についてのＩＣ_５０はコンジュゲートより低かった。Ｔｒｏｐ－２の発現とｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８への感受性の間に明らかな相関はなかったが、ＡＤＣ対遊離ＳＮ－３８のＩＣ_５０比は、Ｔｒｏｐ－２－発現がより高い細胞において、より低く、これは、より多くの抗原が存在する場合に薬物を内部移行させる能力が増強されることを反映する可能性が最も高い。

【0178】

ＳＮ－３８は、細胞中のいくつかのシグナリング経路を活性化し、アポトーシスを導くことが知られている（例えば、Ｃｕｓａｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：３５３５－４０、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．２００９，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２７４：４７－５３、Ｌａｇａｄｅｃ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ９８：３３５－４４）。本発明者らの最初の研究は、初期シグナリングイベントに関与する２つのタンパク質の発現（ｐ２１^{Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１}及びｐ５３）ならびにインビトロでの１つの後期アポトーシスイベント［ポリ－ＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の切断］を検討した（非表示）。ＢｘＰＣ－３では、ＳＮ－３８はｐ２１^{Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１}発現の２０倍の増大を引き起こし（非表示）、一方で、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は１０倍の増大しかもたらさなかった（非表示）。この知見は、この細胞株における、遊離ＳＮ－３８についてのより高い活性と矛盾がない（表２）。しかし、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は、Ｃａｌｕ－３において、ｐ２１^{Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１}の発現を遊離ＳＮ－３８よりも２倍より多く増大させた（非表示）。

【0179】

ｐ５３発現において、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８媒介性シグナリングイベントと遊離ＳＮ－３８媒介性シグナリングイベントの間でより大きな相違が観察された（非表示）。ＢｘＰＣ－３とＣａｌｕ－３の両方において、遊離ＳＮ－３８によるｐ５３のアップレギュレーションは４８時間まで明らかでなかったが、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は２４時間以内にｐ５３をアップレギュレートした（非表示）。さらに、ＡＤＣに曝露された細胞におけるｐ５３の発現は、ＳＮ－３８と比較して、両方の細胞株においてより高かった（非表示）。興味深いことに、ｈＲＳ７ ＩｇＧはｐ２１^{Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１}の発現に対して認識できるほどの効果はなかったけれども、これは、ＢｘＰＣ－３とＣａｌｕ－３の両方においてｐ５３のアップレギュレーションを確かに誘導し、しかしこれは４８時間曝露後のみであった（非表示）。後期のアポトーシスイベントに関しては、ＳＮ－３８またはコンジュゲートのいずれかとともにインキュベートした場合に、ＰＡＲＰの切断は両方の細胞株で明らかであった（非表示）。切断されたＰＡＲＰの存在は、ＢｘＰＣ－３において２４時間でより高く（非表示）、これは、ｐ２１の高発現及びそのより低いＩＣ_５０と相関する。遊離ＳＮ－３８による、ＡＤＣより高い程度の切断は、細胞毒性の知見と矛盾がない。

【0180】

ｈＲＳ７－ＳＮ－３８の有効性－Ｔｒｏｐ－２はいくつかのヒト癌腫で広く発現しているので、いくつかの異なるヒトがんモデルで研究を行い、これは、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８結合を使用して開始したが、後に、ＣＬ２Ａ－結合を有するコンジュゲートを使用した。ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８の０．０４ｍｇのＳＮ－３８／ｋｇを４日毎×４で与えたＣａｌｕ－３を有するヌードマウスは、同等量の非標的化ｈＬＬ２－ＣＬ２－ＳＮ－３８を投与した動物と比較して、応答が有意に向上した（それぞれ、ＴＶ＝０．１４±０．２２ｃｍ^３対０．８０±０．９１ｃｍ^３；ＡＵＣ_４２日Ｐ＜０．０２６；図４Ａ）。０．４ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８まで用量を増大させた場合に、用量応答が観察された（図４Ａ）。このより高い用量レベルで、特異的ｈＲＳ７コンジュゲートを与えたすべてのマウスは２８日以内に「治癒し」、１４７日目の研究の終わりまで腫瘍がないままであったが、不適切なＡＤＣで治療した動物において、腫瘍が再増殖した（特定対不適切ＡＵＣ_９８日：Ｐ＝０．０５）。ｈＲＳ７ ＩｇＧとＳＮ－３８の混合物を受けたマウスでは、腫瘍は、５６日目までに＞４．５倍進行した（ＴＶ＝１．１０±０．８８ｃｍ^３；ＡＵＣ_５６日Ｐ＜０．００６対ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８）（図４Ａ）。

【0181】

有効性はまた、ヒト結腸（ＣＯＬＯ２０５）及び膵臓（Ｃａｐａｎ－１）腫瘍異種移植片でも検討した。ＣＯＬＯ２０５腫瘍を有する動物（図４Ｂ ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／１７／１０／３１５７．ｌｏｎｇ－Ｆ３）では、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８（０．４ｍｇ／ｋｇ、ｑ４ｄｘ８）は、ｏｖｅｒ ｔｈｅ ２８日間の治療期間にわたって腫瘍増殖を防止し、対照の抗ＣＤ２０ ＡＤＣ（ｈＡ２０－ＣＬ２－ＳＮ－３８）またはｈＲＳ７ ＩｇＧと比較して、有意に小さな腫瘍を有していた（それぞれ、ＴＶ＝０．１６±０．０９ｃｍ^３、１．１９±０．５９ｃｍ^３及び１．７７±０．９３ｃｍ^３；ＡＵＣ_２８日Ｐ＜０．０１６）。

【0182】

【表2】

【0183】

ヒト血清よりもマウス血清がイリノテカンをＳＮ－３８により効率的に変換することができる（Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６０：４２０６－１０）ので、イリノテカンのＭＴＤ（２４ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇ、ｑ２ｄ×５）は、ＣＯＬＯ２０５細胞において、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８と同じくらい有効であったが、イリノテカン中のＳＮ－３８用量（累積で２，４００μｇ）はコンジュゲート（合計で６４μｇ）よりも３７．５倍大きかった。

【0184】

Ｃａｐａｎ－１を有する動物（図４Ｃ）は、ｈＲＳ７－ＣＬ２－ＳＮ－３８コンジュゲートと同等のＳＮ－３８用量で与えた場合、イリノテカン単独に対して有意な応答を示さなかった（例えば、３５日目で、平均腫瘍サイズは、０．４ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８を与えたイリノテカン治療動物における１．７８±０．６２ｃｍ^３に対して、０．４ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇ ｈＲＳ７－ＳＮ－３８を与えた動物で０．０４±０．０５ｃｍ^３であった；ＡＵＣ_３５日目Ｐ＜０．００１；図４Ｃ）。イリノテカン用量を４ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８まで１０倍に増大させた場合、応答は向上したが、依然として、０．４ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８用量レベルのコンジュゲートほど有意ではなかった（ＴＶ＝０．１７±０．１８ｃｍ^３対１．６９±０．４７ｃｍ^３、ＡＵＣ_４９日Ｐ＜０．００１）（図４Ｃ）。等用量の非標的化ｈＡ２０－ＣＬ２－ＳＮ－３８もイリノテカン治療動物と比べて有意な抗腫瘍効果があったが、特異的ｈＲＳ７コンジュゲートは不適切なＡＤＣよりも有意に優れていた（ＴＶ＝０．１７±０．１８ｃｍ^３対０．８０±０．６８ｃｍ^３、ＡＵＣ_４９日＜０．０１８）（図４Ｃ）。

【0185】

次いで、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８ＡＤＣを用いる研究をヒト上皮癌の２つの他のモデルに広げた。ＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腫瘍を有するマウス（図４Ｄ）では、生理食塩水または同等量の非標的化ｈＡ２０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（それぞれ、ＴＶ＝０．２４±０．１１ｃｍ^３対１．１７±０．４５ｃｍ^３及び１．０５±０．７３ｃｍ^３；ＡＵＣ_２１日Ｐ＜０．００１）または１０倍高いＳＮ－３８当量の用量で与えたイリノテカン（それぞれ、ＴＶ＝０．２７±０．１８ｃｍ^３対０．９０±０．６２ｃｍ^３；ＡＵＣ_{ｄａｙ２５}Ｐ＜０．００４）で治療した対照マウスと比べると、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は再び腫瘍増殖を有意に阻害した（図４Ｄ）。興味深いことに、０．４ｍｇ／ｋｇのＡＤＣで治療した、ＳＫ－ＭＥＳ－１ヒト扁平上皮細胞肺腫瘍を有するマウス（図４Ｅ）では、腫瘍増殖阻害は、生理食塩水または非コンジュゲート化ｈＲＳ７ ＩｇＧより優れていた（それぞれ、ＴＶ＝０．３６±０．２５ｃｍ^３対１．０２±０．７０ｃｍ^３及び１．３０±１．０８ｃｍ^３；ＡＵＣ_２８日、Ｐ＜０．０４３）が、非標的化ｈＡ２０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８またはイリノテカンのＭＴＤは特異的ｈＲＳ７－ＳＮ－３８コンジュゲートと同じ抗腫瘍効果をもたらした（図５Ｅ）。

【0186】

すべてのマウス研究において、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣは体重減少に関して十分な忍容性を示した（非表示）。

【0187】

ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の生体内分布－ＳＫ－ＭＥＳ－１ヒト扁平上皮細胞肺癌異種移植片を有するマウス（非表示）において、それぞれの^１１１Ｉｎ－標識された基質を使用して、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８または非コンジュゲート化ｈＲＳ７ ＩｇＧの生体内分布を比較した。薬物動態解析を行って、非コンジュゲート化ｈＲＳ７と比較して、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８のクリアランスを決定した（非表示）。ＡＤＣは、同等量の非コンジュゲート化ｈＲＳ７よりも速く排除され、ＡＤＣは約４０％短い半減期及び平均滞留時間を示した。それにもかかわらず、これは、腫瘍取り込みに対して最小限の影響しか与えなかった（非表示）。２４時間及び４８時間の時点で有意差はあったが、７２時間（ピーク取り込み）まで、腫瘍中の両方の薬剤の量は同様であった。正常組織の中で、肝臓及び脾臓の違いが最も著しかった（非表示）。注射後２４時間で、肝臓中にｈＲＳ７ ＩｇＧよりも＞２倍多いｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８が存在した（非表示）。逆に、脾臓では、ピーク取り込み時（４８時間時点）に、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８よりも３倍多い親ｈＲＳ７ ＩｇＧが存在した（非表示）。残りの組織の取り込み及びクリアランスは、一般に、血中濃度の違いを反映した（非表示）。

【0188】

療法のために週２回の投与を与えたので、^１１１Ｉｎ－標識抗体の注射の３日前に０．２ｍｇ／ｋｇ（２５０μｇタンパク質）のｈＲＳ７ ＡＤＣの前投与を最初に受けた動物群の腫瘍取り込みを検討した。前投与されたマウスの^１１１Ｉｎ－ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の腫瘍取り込みは、前投与を与えなかった動物と比べると、すべての時点で実質的に低減した（例えば、７２時間で、前投与を受けなかった動物の２５．４％±８．１％ＩＤ／ｇに対して、前投与の腫瘍取り込みは１２．５％±３．８％ＩＤ／ｇであった；Ｐ＝０．０１２３；非表示ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／１７／１０／３１５７．ｌｏｎｇ－Ｆ４）。前投薬は、血液クリアランスまたは組織取り込みに対して認識できるほどの影響を与えなかった（非表示）。これらの研究は、いくつかの腫瘍モデルにおいて、特異的抗体の腫瘍癒着を前投与（複数可）によって低減させることができることを示唆し、これは、なぜＡＤＣ用量の増加とともに治療応答の特異性が低下され得るか、及びなぜさらなる用量漸増が示されないかを説明すると思われる。

【0189】

Ｓｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウス及びカニクイザルにおけるｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の忍容性。Ｓｗｉｓｓ－Ｗｅｂｓｔｅｒマウスは、それぞれ４、８及び１２ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇのｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８の３日間にわたる２回投与に忍容性を示し、最小限の一過的な体重減少があった。造血毒性は生じず、血清化学によって、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ、図５Ａ）及びアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ、図５Ｂ）の上昇が明らかなっただけであった。治療してから７日後に、ＡＳＴは３治療群すべてで正常レベルを超えて上昇し（＞２９８Ｕ／Ｌ）（図５Ａ）、最大割合のマウスは２×８ｍｇ／ｋｇ群内であった。しかし、治療後１５日までに、ほとんど動物は正常範囲内に入った。ＡＬＴレベルも、治療の７日以内に正常範囲を超え（＞７７Ｕ／Ｌ）（図５Ｂ）、１５日目までに正常化のエビデンスがあった。これらすべてのマウスの肝臓は、組織損傷の組織学的エビデンスを示さなかった（非表示）。腎機能に関して、治療群においてグルコース及び塩化物のレベルのみがいくらか上昇した。２×８ｍｇ／ｋｇでは、７匹のマウスのうち５匹でグルコースレベルがわずかに上昇し（２７３～３２０ｍｇ／ｄＬの範囲、正常の上限２６３ｍｇ／ｄＬ）、これは、注射後１５日までに正常に戻った。同様に、塩化物レベルはわずかに上昇し、２つの最高投薬量群（２×８ｍｇ／ｋｇ群において５７％及び２×１２ｍｇ／ｋｇ群において１００％のマウス）において１１６～１２７ｍｍｏｌ／Ｌの範囲（正常範囲の上限１１５ｍｍｏｌ／Ｌ）であり、注射後１５日過ぎまで上昇したままであった。これは、ほとんどの塩化物が消化管による吸収を介して得られるので、胃腸毒性も示し得るが、しかし、終了時に、検討したいかなる器官系においても組織損傷の組織学的エビデンスはなかった（非表示）。

【0190】

マウスはｈＲＳ７が認識するＴｒｏｐ－２を発現しないので、臨床的使用のためのｈＲＳ７コンジュゲートの可能性を決定するために、より適切なモデルが必要とされた。免疫組織学的研究によって、ヒト及びカニクイザルの両方の複数の組織における結合が明らかになった（乳房、眼、消化管、腎臓、肺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、前立腺、唾液腺、皮膚、胸腺、甲状腺、扁桃腺、扁桃、尿管、膀胱及び子宮；非表示）。この交差反応性に基づいて、忍容性研究をサルで行った。

【0191】

２×０．９６ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇのｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８を受けた群は、注入後及び研究の終了まで有意な臨床事象がなかった。体重減少は７．３％を超えず、１５日目までに順化体重に戻った。一過的な減少が血球数データの多くで認められた（好中球及び血小板のデータを図５Ｃ及び図５Ｄに示す）が、値は正常範囲を下回らなかった。血清化学において異常な値は見られなかった。１１日目（最後の注射から８日後）に剖検した動物の組織病理検査は、造血器官（胸腺、下顎リンパ節及び腸間膜リンパ節、脾臓ならびに骨髄）、胃腸器官（胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸及び直腸）、雌の生殖器（卵巣、子宮及び膣）において、ならびに注射部位で微視的な変化を示した。これらの変化は、最小から中程度の範囲であり、すべての組織で回復期間の終わり（３２日目）に完全に回復した（この後の時点で完全な回復に向かっている傾向があった胸腺及び消化管を除く）。

【0192】

２×１．９２ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇ用量レベルのコンジュゲートでは、胃腸合併症及び骨髄抑制に起因する１匹の死亡があり、この群内の他の動物は、類似しているが、２×０．９６ｍｇ／ｋｇ群よりも重度の有害事象を示した（非表示）。これらのデータは、用量制限毒性はイリノテカンのものと同一、すなわち、腸毒性及び血液学毒性であったことを示す。したがって、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８に対するＭＴＤは２×０．９６～１．９２ｍｇ ＳＮ－３８／ｋｇの間にあり、これは、２×０．３～０．６ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８のヒト同等用量に相当する。

【0193】

考察
Ｔｒｏｐ－２は、肺、乳房、結腸直腸、膵臓、前立腺及び卵巣癌を含めた多くの上皮腫瘍で発現しているタンパク質であり、これによって、Ｔｒｏｐ－２は、細胞毒性剤を送達するための潜在的に重要な標的になる（Ｏｈｍａｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １２：３０５７－６３、Ｆｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ９９：１２９０－９５、Ｃｕｂａｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７９６：３０９－１４）。ＲＳ７抗体は、Ｔｒｏｐ－２に結合すると内部移行し（Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５：５８５７ｓ－６３ｓ）、これによって、細胞毒の直接的細胞内送達が可能になる。

【0194】

ＳＮ－３８は、いくつかの細胞株においてナノモル範囲のＩＣ_５０値を有する、強力なトポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤である。これは、結腸直腸癌の治療に使用され、肺、乳房及び脳の腫瘍においても活性を有するプロドラッグ、すなわちイリノテカンの活性型である。本発明者らは、ＡＤＣの形態で直接的に標的化されるＳＮ－３８は、活性ＳＮ－３８へのＣＰＴ－１１の低く且つ及び患者によって変わりやすい生物変換を克服することによって、ＣＰＴ－１１よりも有意に向上した治療剤になるであろうと推論した（Ｍａｔｈｉｊｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７：２１８２－９４）。

【0195】

元のＣＬ２誘導体に挿入されたＰｈｅ－Ｌｙｓペプチドは、カテプシンＢを介して起こり得る切断を可能にした。合成プロセスを単純化するために、ＣＬ２Ａにおいて、フェニルアラニンを除き、それにより、カテプシンＢ切断部位を除去した。興味深いことに、この生成物は、ＣＬ２を用いて得られた幅広いプロファイルと比較して、より良好に規定されたクロマトグラフィープロファイルを有していたが（非表示）、さらに重要なことに、この変更は、サイド・バイ・サイド試験において、コンジュゲートの結合、安定性または効力に影響を与えなかった。これらのデータは、ＣＬ２中のＳＮ－３８が、主として、カテプシンＢ切断部位ではなく、ＳＮ－３８のラクトン環に結合しているｐＨ感受性ベンジルカルボネートにおける切断によって、コンジュゲートから放出されたことを示唆する。

【0196】

様々な固形腫瘍細胞株に対するｈＲＳ７ ＡＤＣのインビトロ細胞毒性は、一貫して、ｎｍｏｌ／Ｌ範囲のＩＣ_５０値を有していた。しかし、遊離ＳＮ－３８に曝露された細胞は、ＡＤＣと比較して低いＩＣ_５０値を示した。遊離ＳＮ－３８とコンジュゲート化ＳＮ－３８の間のこの相違は、ＥＮＺ－２２０８（Ｓａｐｒａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １４：１８８８－９６、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １９：８４９－５９）及びＮＫ０１２（Ｋｏｉｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６６：１００４８－５６）についても報告された。ＥＮＺ－２２０８は、分枝ＰＥＧを利用してＰＥＧあたり約３．５個～４個のＳＮ－３８分子を連結し、一方で、ＮＫ０１２は重量基準で２０％のＳＮ－３８を含むミセルナノ粒子である。本発明者らのＡＤＣを用いると、この相違（すなわち、遊離ＳＮ－３８対コンジュゲート化ＳＮ－３８の効力の比）は、腫瘍細胞中でＴｒｏｐ－２発現レベルが増大するにつれて低下し、これは、薬物の標的送達にとっての利点を示唆する。インビトロ血清安定性に関して、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８のＣＬ２形態とＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８形態の両方が、約２０時間というｔ／_１／２をもたらし、これは、ＥＮＺ－２２０８について報告された１２．３分という短いｔ／_１／２（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １９：８４９－５９）と対照的であるが、２４時間後の、生理的条件下におけるＮＫ０１２からのＳＮ－３８の５７％の放出（Ｋｏｉｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６６：１００４８－５６）と類似している。

【0197】

ｈＲＳ７－ＳＮ－３８（ＣＬ２－ＳＮ－３８またはＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８のいずれか）による腫瘍を有するマウスの治療は、５つの異なる腫瘍モデルにおいて腫瘍増殖を有意に阻害した。これらのうちの４つで、腫瘍退縮が観察され、Ｃａｌｕ－３の場合には、最高用量のｈＲＳ７－ＳＮ－３８を受けたすべてのマウスは、研究の終わりに腫瘍がなかった。ヒトの場合と異なり、マウスにおいて、イリノテカンは血漿エステラーゼによってＳＮ－３８に非常に効率的に変換され、５０％を越える変換率を有し、ヒトにおけるよりも、マウスにおいてより高い効力をもたらす（Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６０：４２０６－１０、Ｆｕｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １７：１８１５－２４）。１０倍高いまたは同等のＳＮ－３８レベルでイリノテカンが投与された場合、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８は腫瘍増殖の制御において有意に良好であった。イリノテカンを２４ｍｇ／ｋｇ ｑ２ｄ×５（３７．５倍多いＳＮ－３８）というそのＭＴＤで投与した場合のみ、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８の有効性と等しかった。患者において、本発明者らは、イリノテカンの生物変換はかなり低いと思われるので、この利点がさらにいっそうｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８に有利であると予測するであろう。

【0198】

本発明者らは、いくつかの抗原発現細胞株、例えばＳＫ－ＭＥＳ－１において、抗原結合ＡＤＣを使用して、非結合性の不適切なコンジュゲートよりも良好な治療応答を保証しないことも示した。これは、異常なまたは予期しない発見ではない。実際、上述した非結合性ＳＮ－３８コンジュゲートは、イリノテカンと比較して治療活性を高めるので、不適切なＩｇＧ－ＳＮ－３８コンジュゲートは、いくらかの活性を有すると期待される。これは、腫瘍が、正常組織よりも良好に巨大分子の通過を可能にする、未成熟の漏れやすい血管を有するという事実と関連している（Ｊａｉｎ，１９９４，Ｓｃｉ Ａｍ ２７１：５８－６１）。本発明者らのコンジュゲートを用いると、リソソームのレベル（例えば、３７℃でｐＨ５．３；データ非表示）を模倣するレベルにｐＨが下げられる場合、約１３時間以内にＳＮ－３８の５０％が放出されるが、血清の中性ｐＨでは、放出率はほぼ２倍低減する。不適切なコンジュゲートが酸性の腫瘍微小環境に入る場合、いくらかのＳＮ－３８を局部的に放出することが予想される。腫瘍の生理機能及び薬物への先天的な感受性などの他の因子もこの「ベースライン」活性の規定において役割を果たす。しかし、より長い滞留時間を有する特定のコンジュゲートは、特異的抗体を捕獲するための十分な抗原が存在する限り、このベースライン応答を超える増強された効力を有するはずである。ＳＫ－ＭＥＳ－１モデルにおける生体内分布研究も、連続的な投薬の結果として腫瘍抗原が飽和する場合、特定のコンジュゲートの腫瘍取り込みが低減し、これによって、不適切なコンジュゲートで見られたものと類似した治療結果がもたらされることを示した。

【0199】

本発明者らのＡＤＣと他のＳＮ－３８送達薬剤の発表された報告を直接的に比較すること困難であるが、いくつか一般的な観察を行うことができる。本発明者らの療法研究では、最も高い個々の用量は０．４ｍｇ／ｋｇのＳＮ－３８であった。Ｃａｌｕ－３モデルでは、１．６ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８または２０ｇのマウスにおいて３２μｇ ＳＮ－３８の全累積用量について、４回の注射のみが与えられた。ＥＮＺ－２２０８を用いる複数の研究が、１０ｍｇ／ｋｇ×５というそのＭＴＤを使用して行われ（Ｓａｐｒａ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １４：１８８８－９６、Ｐａｓｔｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６：４８０９－２１）、ＮＫ０１２を用いる前臨床研究は、３０ｍｇ／ｋｇ×３というそのＭＴＤを含んでいた（Ｋｏｉｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６６：１００４８－５６）。したがって、それぞれ、ＥＮＺ－２２０８及びＮＫ０１２において報告された用量よりも３０倍及び５５倍少ないＳＮ－３８当量のｈＲＳ７－ＳＮ－３８を用いて、有意な抗腫瘍効果が得られた。１０倍少ないｈＲＳ７ ＡＤＣ（０．０４ｍｇ／ｋｇ）を用いてさえ、有意な抗腫瘍効果が観察されたが、ＥＮＺ－２２０８のより低い用量は提示されておらず、ＮＫ０１２の用量が７．５ｍｇ／ｋｇに４倍下げられた場合、効力は失われた（Ｋｏｉｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６６：１００４８－５６）。正常なマウスは、２４ｍｇ／ｋｇ ＳＮ－３８（１，５００ｍｇ／ｋｇのコンジュゲート）の１週間にわたる累積用量で急性毒性を示さず、これは、ＭＴＤがより高かったことを示す。したがって、腫瘍を有する動物は、７．５～１５倍低い量のＳＮ－３８当量で効果的に治療された。

【0200】

生体内分布の研究によって、ｈＲＳ７－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８は、親ｈＲＳ７ ＩｇＧと類似した腫瘍取り込みを有するが、２倍高い肝臓取り込みをともなって、かなり急速に排除されることが明らかになり、これは、ＳＮ－３８の疎水性による可能性がある。ＡＤＣが肝臓を介して排除されるので、肝臓毒性及び胃腸毒性が用量制限であることが予想された。マウスは肝臓のトランスアミナーゼの増加のエビデンスを有していたが、胃腸毒性はいくらよく見ても穏やであり、一過的な体重減少のみがあり、組織病理学検査の際に認められた異常はなかった。興味深いことに、血液毒性は認められなかった。しかし、サルは、イリノテカンについて予想されたものと同一の毒性プロファイルを示し、胃腸毒性及び血液毒性は用量制限であった。

【0201】

ｈＲＳ７によって認識されるＴｒｏｐ－２はマウスで発現していないので、Ｔｒｏｐ－２のヒトと類似した組織発現を有するサルで毒性研究を行うことは重要であった。サルは穏やかな且つ可逆的な毒性を有する０．９６ｍｇ／ｋｇ／用量（約１２ｍｇ／ｍ^２）に忍容性を示し、これは、約０．３ｍｇ／ｋｇ／用量（約１１ｍｇ／ｍ^２）のヒト用量に外挿する。ＮＫ０１２の第Ｉ相臨床試験では、固形腫瘍を有する患者は、用量制限毒性としてグレード４の好中球減少をともなって、３週毎の２８ｍｇ／ｍ^２のＳＮ－３８に忍容性を示した（ＤＬＴ；Ｈａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６：５０５８－６６）。同様に、ＥＮＺ－２２０８を用いる第Ｉ相臨床試験によって、用量制限的発熱性好中球減少が明らかにされ、３週毎の１０ｍｇ／ｍ^２、または患者がＧ－ＣＳＦを投与された場合は１６ｍｇ／ｍ^２の投与が推奨された（Ｋｕｒｚｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ－ＮＣＩ－ＥＯＲＴＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；２００９ Ｎｏｖ １５－１９；Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ；Ｐｏｓｔｅｒ Ｎｏ Ｃ２１６、Ｐａｔｎａｉｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ－ＮＣＩ－ＥＯＲＴＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；２００９ Ｎｏｖ １５－１９；Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ；Ｐｏｓｔｅｒ Ｎｏ Ｃ２２１）。サルが２２ｍｇ／ｍ^２という累積ヒト同等用量に忍容性を示したので、ｈＲＳ７がいくつかの正常組織に結合するとしても、ｈＲＳ７ ＡＤＣの単一治療に対するＭＴＤは、他の非標的化ＳＮ－３８薬剤のものと類似している得るように思われる。実際に、毒性プロファイルがイリノテカンのものと類似していたので、抗Ｔｒｏｐ－２抗体の特異性は、ＤＬＴの規定において役割を果たすようには思われなかった。さらに重要なことに、ほんの０．０３ｍｇ ＳＮ－３８当量／ｋｇ／用量のヒト同等用量で応答したマウスと同様に、抗腫瘍活性がヒトにおいて達成され得るならば、有意な抗腫瘍応答が臨床的に実現され得る。

【0202】

結論として、サルにおける毒性学研究は、マウスにおけるインビボのヒトがん異種移植モデルと組み合わせて、Ｔｒｏｐ－２を標的化するこのＡＤＣが、異なる上皮起源のいくつかの腫瘍において有効な治療であることを示した。

【0203】

実施例４．ｈＲＳ７及びパクリタキセルを含む抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ
パクリタキセル（タキソール（登録商標））をｈＲＳ７抗ヒトＴｒｏｐ－２抗体とコンジュゲートすることによって、新しい抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を作製した（ｈＲＳ７－パクリタキセル）。最終生成物は、２．２の平均薬物対抗体置換比を有していた。標的として２つの異なるＴｒｏｐ－２－陽性細胞株、すなわち、ＢｘＰＣ－３（ヒト膵臓腺癌）及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８（ヒトトリプルネガティブ乳癌）を使用して、このＡＤＣをインビトロで試験した。ＡＤＣを添加する１日前に、細胞を組織培養から収集し、ウェルあたり２０００細胞で９６ウェルプレートにプレーティングした。翌日、遊離パクリタキセル（６．１×１０^－１１～４×１０^－６Ｍ）または薬物当量のｈＲＳ７－パクリタキセルに細胞を曝露した。比較のために、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８及び遊離ＳＮ－３８も３．８４×１０^－１２～２．５×１０^－７Ｍの範囲で試験した。プレートを３７℃で９６時間インキュベートした。このインキュベーション期間の後に、ＭＴＳ基質をすべてのプレートに加え、発色について、未処理の対照ウェルがおよそ１．０のＯＤ_{４９２ｎｍ}の読み取り値を有するまで、３０分間隔で読み取った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＰｒｉｓｍソフトウェア（ＩＣ_５０値をもたらすＳ字状用量反応曲線を作成するための非線形回帰）を使用して、未処理細胞に対する増殖のパーセントとして増殖阻害を測定した。

【0204】

ｈＲＳ７－パクリタキセルＡＤＣは、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８乳房細胞株において細胞毒性活性を示し（図６）、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８よりもおよそ４．５倍高いＩＣ_５０値を有していた。遊離パクリタキセルは、遊離ＳＮ－３８よりもはるかに強力であった（図６）。遊離ＳＮ－３８に対するＩＣ_５０は１．５４×１０^－９Ｍであったが、遊離パクリタキセルに対するＩＣ_５０は６．１×１０^－１１Ｍ未満であった。ＢｘＰＣ－３膵細胞株について同様の結果が得られ（図７）、ｈＲＳ７－パクリタキセルＡＤＣは、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣよりもおよそ２．８倍高いＩＣ_５０値を有していた。これらの結果は、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣと類似したナノモル範囲のＩＣ_５０値をともなって、抗Ｔｒｏｐ－２コンジュゲート化パクリタキセルのインビトロでの効力を示す。

【0205】

実施例５．抗Ｔｒｏｐ－２抗体の細胞結合アッセイ
ヒトＴｒｏｐ－２に対する２つの異なるマウスモノクローナル抗体をＡＤＣコンジュゲーションのために得た。第１の１６２－４６．２は、ローラボトル中で増殖したハイブリドーマ（ＡＴＣＣ、ＨＢ－１８７）から精製した。第２の抗体、ＭＡＢ６５０は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から購入した。結合の比較のために、Ｔｒｏｐ－２陽性ヒト胃癌、ＮＣＩ－Ｎ８７を標的として使用した。結合アッセイの前日に、細胞（１．５×１０^５／ウェル）を９６ウェルプレートにプレーティングした。翌朝、１６２－４６．２、ＭＡＢ６５０及びマウスＲＳ７（０．０３～６６ｎＭ）を用いて、用量／応答曲線を作成した。これらの一次抗体を細胞とともに４℃で１．５時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、すべてのウェルに抗マウス－ＨＲＰ二次抗体を４℃で１時間加えた。ウェルを再び洗浄し、続いて、発光基質を加えた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用してプレートを読み取り、値は相対発光単位として報告する。

【0206】

３つの抗体すべてが、ＲＳ７について０．５７ｎＭ、１６２－４６．２について０．５２ｎＭ及びＭＡＢ６５０について０．４９ｎＭという類似したＫ_Ｄ値を有していた。しかし、ＲＳ７に対する１６２－４６．２とＭＡＢ６５０の最大結合（Ｂ_ｍａｘ）を比較すると、これらは、それぞれ２５％及び５０％低減し（Ｂ_Ｍａｘは、ＲＳ７について１１，２５０、１６２－４６．２について８，４７１及びＭＡＢ６５０について６，０１８）、これは、ＲＳ７と比べて異なる結合特性を示す。

【0207】

実施例６．抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ（ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８）の細胞毒性
ＳＮ－３８及びＭＡＢ６５０を用いて新規な抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣを作製し、これは、６．８９の平均薬物対抗体置換比をもたらした。細胞毒性アッセイを行って、標的として２つの異なるヒト膵臓腺癌細胞株（ＢｘＰＣ－３及びＣａｐａｎ－１）ならびにヒトトリプルネガティブ乳癌細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－４６８）を使用して、ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８ＡＤＣとｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣを比較した。

【0208】

ＡＤＣを添加する１日前に、細胞を組織培養から収集し、９６ウェルプレートにプレーティングした。翌日、３．８４×１０^－１２～２．５×１０^－７Ｍの薬物範囲で、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８、ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８及び遊離ＳＮ－３８に細胞を曝露した。非コンジュゲート化ＭＡＢ６５０をＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８と同じタンパク質当量の用量で対照として使用した。プレートを３７℃で９６時間インキュベートした。このインキュベーション期間の後に、ＭＴＳ基質をすべてのプレートに加え、発色について、未処理細胞についておよそ１．０のＯＤ_{４９２ｎｍ}に達するまで３０分間隔で読み取った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＰｒｉｓｍソフトウェア（ＩＣ_５０値をもたらすＳ字状用量反応曲線を作成するための非線形回帰）を使用して、未処理細胞に対する増殖のパーセントとして増殖阻害を測定した。

【0209】

図８に示すように、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８及びＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８は、これらの細胞株において、ＳＮ－３８－ＡＤＣに典型的な低ｎＭ範囲のＩＣ_５０値をともなって、同様の増殖阻害効果を有していた。ヒトＣａｐａｎ－１膵臓腺癌細胞株（図８Ａ）では、ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８ＡＤＣについての４．１ｎＭ及び遊離ＳＮ－３８についての１．０ｎＭと比較して、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣは３．５ｎＭのＩＣ_５０を示した。ヒトＢｘＰＣ－３膵臓腺癌細胞株（図８Ｂ）では、ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８ＡＤＣについての３．０ｎＭ及び遊離ＳＮ－３８についての１．０ｎＭと比較して、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣは２．６ｎＭのＩＣ_５０を示した。ヒトＮＣＩ－Ｎ８７胃腺癌細胞株（図８Ｃ）では、ＭＡＢ６５０－ＳＮ－３８ＡＤＣについての４．１ｎＭ及び遊離ＳＮ－３８についての４．３ｎＭと比較して、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣは３．６ｎＭのＩＣ_５０を示した。

【0210】

要約すると、これらのインビトロアッセイでは、２つの抗Ｔｒｏｐ－２抗体、ｈＲＳ７及びＭＡＢ６５０のＳＮ－３８コンジュゲートは、いくつかの腫瘍細胞株に対して等しい効力を示し、これは、遊離ＳＮ－３８のものと類似していた。抗Ｔｒｏｐ－２抗体の標的化機能は、インビトロよりもインビボではるかに有意な因子であると思われるので、このデータは、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８について上記の実施例で示したように、１つのクラスとしての抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８ＡＤＣがインビボで非常に効果的であろうということを支持する。

【0211】

実施例７．抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ（１６２－４６．２－ＳＮ－３８）の細胞毒性
ＳＮ－３８及び１６２－４６．２を用いて新規な抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣを作製し、これは、６．１４の薬物対抗体置換比をもたらす。細胞毒性アッセイを行って、標的として２つの異なるＴｒｏｐ－２－陽性細胞株、ＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒトトリプルネガティブ乳癌を使用して、１６２－４６．２－ＳＮ－３８ＡＤＣ及びｈＲＳ７－ＳＮ－３８ＡＤＣを比較した。

【0212】

ＡＤＣを添加する１日前に、細胞を組織培養から収集し、ウェルあたり２０００細胞で９６ウェルプレートにプレーティングした。翌日、３．８４×１０^－１２～２．５×１０^－７Ｍの薬物範囲で、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８、１６２－４６．２－ＳＮ－３８または遊離ＳＮ－３８に細胞を曝露した。非コンジュゲート化１６２－４６．２及びｈＲＳ７をそれぞれ１６２－４６．２－ＳＮ－３８及びｈＲＳ７－ＳＮ－３８と同じタンパク質当量の用量でコントロールとして使用した。プレートを３７℃で９６時間インキュベートした。このインキュベーション期間の後に、ＭＴＳ基質をすべてのプレートに加え、発色について、未処理の対照ウェルがおよそ１．０のＯＤ_{４９２ｎｍ}の読み取りを有するまで３０分間隔で読み取った。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ及びＰｒｉｓｍソフトウェア（ＩＣ_５０値をもたらすＳ字状用量反応曲線を作成するための非線形回帰）を使用して、未処理細胞に対する増殖のパーセントとして増殖阻害を測定した。

【0213】

図９Ａ及び図９Ｂに示すように、１６２－４６．２－ＳＮ－３８ＡＤＣは、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８と比較して、類似したＩＣ_５０値を有していた。ＢｘＰＣ－３ヒト膵臓腺癌細胞株に対して試験した場合（図９Ａ）、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８は、１６２－４６．２－ＳＮ－３８についての１０．６ｎＭ及び遊離ＳＮ－３８についての１．６ｎＭと比較して、５．８ｎＭのＩＣ_５０を有していた。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒト乳腺癌細胞株に対して試験した場合（図９Ｂ）、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８は、１６２－４６．２－ＳＮ－３８についての６．１ｎＭ及び遊離ＳＮ－３８についての０．８ｎＭと比較して、３．９ｎＭのＩＣ_５０を有していた。遊離抗体単独は、いずれのＴｒｏｐ－２陽性がん細胞株にも細胞毒性をほとんど示さなかった。

【0214】

要約すると、同じ細胞毒性薬物にコンジュゲートした３つの異なる抗Ｔｒｏｐ－２抗体のインビトロでの効力を比較した場合、３つのＡＤＣすべては、様々なＴｒｏｐ－２陽性がん細胞株に対して同等の細胞毒性作用を示した。これらのデータは、薬物－コンジュゲート化ＡＤＣに組み込まれた抗Ｔｒｏｐ－２抗体のクラスが、Ｔｒｏｐ－２発現固形腫瘍に対する有効な抗がん治療剤であることを支持する。

【0215】

実施例８．ＳＮ－３８にコンジュゲートしたｈＲＳ７抗体を含むＩＭＭＵ－１３２抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣを用いた臨床試験
概要
本実施例は、ＩＭＭＵ－１３２、すなわち、ｐＨ感受性リンカーによってＳＮ－３８にコンジュゲートした内部移行ヒト化ｈＲＳ７抗Ｔｒｏｐ－２抗体のＡＤＣ（平均薬物－抗体比＝７．６）を用いた第Ｉ相臨床試験及び進行中の第ＩＩ相延長の結果を報告する。Ｔｒｏｐ－２は、高い密度（約１×１０^５）、頻度及び特異性で多くのヒト癌腫が発現しており、正常組織の発現が限られている、Ｉ型膜貫通カルシウム伝達タンパク質である。Ｃａｐａｎ－１ヒト膵臓腫瘍異種移植片を有するヌードマウスにおける前臨床研究によって、ＩＭＭＵ－１３２が、最大に忍容性を示したイリノテカン療法に由来するものよりも１２０倍多くのＳＮ－３８を腫瘍に送達することができることが明らかにされた。

【0216】

本実施例は、複数の以前の療法（一部はトポイソメラーゼ－Ｉ／ＩＩ阻害薬を含む）に失敗した２５人の患者の初期第Ｉ相試験、ならびに結腸直腸癌（ＣＲＣ）、小細胞及び非小細胞肺癌（それぞれ、ＳＣＬＣ、ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膵臓癌（ＰＤＣ）、食道癌及び他の癌を含む６９人の患者を報告する現在進行中の第ＩＩ相延長を報告する。

【0217】

以下に詳細に述べるように、Ｔｒｏｐ－２は血清で検出されなかったが、ほとんどの保存された（ａｒｃｈｉｖｅｄ）腫瘍で強く発現していた（≧２^＋）。３＋３試験設計において、ＩＭＭＵ－１３２は、８ｍｇ／ｋｇ／用量で開始し、次いで、用量制限好中球減少の前に１２及び１８ｍｇ／ｋｇで、２１日反復サイクルの１日目及び８日目に与えた。最小限の遅延で累積治療を最適化するために、第ＩＩ相は、８及び１０ｍｇ／ｋｇ（それぞれ、ｎ＝３０及び１４）に焦点を合わせる。この時点で関連するＡＥを報告する４９人の患者において、好中球減少≧Ｇ３が２８％（４％Ｇ４）で生じた。これらの患者において初期の最も一般的な非血液毒性は、疲労（５５％；≧Ｇ３＝９％）、悪心（５３％；≧Ｇ３＝０％）、下痢（４７％；≧Ｇ３＝９％）、脱毛症（４０％）及び嘔吐（３２％；≧Ｇ３＝２％）であった。ホモ接合性ＵＧＴ１Ａ１^＊２８／^＊２８が６人の患者で見つかり、そのうちの２人はより重度の血液毒性及びＧＩ毒性を有していた。第Ｉ相及び拡大相において、ＲＥＣＩＳＴ／ＣＴによって最良応答について評価可能な４８人の患者（ＰＤＣを除く）が現時点で存在する。ＣＲＣ（Ｎ＝１）、ＴＮＢＣ（Ｎ＝２）、ＳＣＬＣ（Ｎ＝２）、ＮＳＣＬＣ（Ｎ＝１）及び食道癌（Ｎ＝１）の患者を含む７人（１５％）の患者は部分応答（ＰＲ）を有しており、別の２７人の患者（５６％）は、安定疾患（ＳＤ）有しており、合計で３８人の患者（７９％）が疾患応答を有していた。１３人のＣＴ評価可能なＰＤＣ患者のうちの８人（６２％）はＳＤを有しており、患者の最後の以前の療法における８．０週と比較して、１２．７週の無増悪期間（ＴＴＰ）中央値を有していた。残りの４８人の患者のＴＴＰは１２．６＋週（範囲６．０～５１．４週）である。

【0218】

血漿ＣＥＡ及びＣＡ１９－９は応答と相関した。数か月にもわたる投薬にもかかわらず、抗ｈＲＳ７または抗ＳＮ－３８抗体は検出されなかった。コンジュゲートは３日以内に血清から排除され、これは、ＳＮ－３８の５０％が毎日放出され、血清中のＳＮ－３８の＞９５％が非グルクロン酸抱合形態でＩｇＧに結合しており、イリノテカンが与えられた患者で報告されたＳＮ－３８よりも１００倍も高い濃度であるインビボ動物研究と矛盾がない。これらの結果は、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８含有ＡＤＣが、管理可能な下痢及び好中球減少をともなって、転移性固形がんで治療的に活性であることを示す。

【0219】

薬物動態
２つのＥＬＩＳＡ方法を使用して、ＩｇＧのクリアランス（抗ｈＲＳ７イディオタイプ抗体による捕獲）及びインタクトなコンジュゲート（抗ＳＮ－３８ＩｇＧ／抗ｈＲＳ７イディオタイプ抗体を有するプローブによる捕獲）を測定した。ＳＮ－３８はＨＰＬＣによって測定した。全ＩＭＭＵ－１３２画分（インタクトなコンジュゲート）は、ＩｇＧよりも急速に排除され（非表示）、これは、コンジュゲートからのＳＮ－３８の既知の段階的放出を反映する。ＳＮ－３８（未結合及び全体）のＨＰＬＣ測定によって、血清中の＞９５％のＳＮ－３８がＩｇＧに結合していることが示された。低濃度のＳＮ－３８Ｇは、ＩｇＧに結合したＳＮ－３８がグルクロン酸抱合から保護されていることを示唆する。コンジュゲートに対するＥＬＩＳＡとＳＮ－３８のＨＰＬＣの比較によって、両方の重複が明らかになり、これは、ＥＬＩＳＡがＳＮ－３８のクリアランスのモニタリングの代用物であることを示唆する。

【0220】

投薬レジメン及び患者調査の概要を表３に示す。

【0221】

【表3】

【0222】

臨床試験ステータス
３つの以前の療法という中央値を有する種々の転移性がんを有する合計で６９人の患者（第Ｉ相の２５人の患者を含む）を報告した。８人の患者は臨床的進行を有し、ＣＴ評価の前に離脱した。１３人のＣＴ評価可能な膵臓癌患者は別々に報告した。ＰＤＣ患者におけるＴＴＰ中央値（無増悪期間）は、先の最後の療法に対する中央値８週のＴＴＰと比較して１１．９週（範囲２～２１．４週）であった。

【0223】

種々の癌を有する合計で４８人の患者は、少なくとも１回のＣＴ評価を受け、これから、最良応答（図１０）及び無増悪期間（ＴＴＰ；図１１）を決定した。最良応答データを要約すると、ＴＮＢＣ（トリプルネガティブ乳癌）を有する８人の評価可能な患者のうち、６／８（７５％）の全応答［ＰＲ＋ＳＤ］に関して、２人のＰＲ（部分応答）、４人のＳＤ（安定疾患）及び２人のＰＤ（進行性疾患）があった。ＳＣＬＣ（小細胞肺癌）については、４人の評価可能な患者のうち、２／４（５０％）の全応答に関して、２人のＰＲ、０人のＳＤ及び２人のＰＤがあった。ＣＲＣ（結腸直腸癌）については、１８人の評価可能な患者のうち、１２／１８（６７％）の全応答に関して、１人のＰＲ、１１人のＳＤ及び６人のＰＤがあった。食道癌につついては、４人の評価可能な患者のうち、３／４（７５％）の全応答に関して、１人のＰＲ、２人のＳＤ及び１人のＰＤがあった。ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）については、５人の評価可能な患者のうち、４／５（８０％）の全応答に関して、１人のＰＲ、３人のＳＤ及び１人のＰＤがあった。治療したすべての患者にわたって、３４／４８（７１％）の全応答に関して、４８人の評価可能な患者のうち、７人のＰＲ、２７人のＳＤ及び１４人のＰＤがあった。これらの結果は、抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣ（ｈＲＳ７－ＳＮ－３８）が、ヒト患者において、幅広い固形腫瘍に対して有意な臨床的効力を示したことを示す。

【0224】

療法の報告された副作用（有害事象）を表４に概説する。表４のデータから明らかなように、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８の治療効力は、許容可能に低レベルの有害な副作用を示すＡＤＣの投薬量で達成された。

【0225】

【表4】

【0226】

抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣに対する例示的部分応答がＣＴデータによって確証された（非表示）。ＣＲＣにおける例示的ＰＲとして、ＣＲＣと最初に診断された６２歳の女性は原発性半結腸切除術を受けた。４か月後、彼女は肝転移が原因で肝切除術を受け、ＦＯＬＦＯＸで７か月及び５ＦＵで１か月の治療を受けた。彼女は、主として肝臓に複数の病変を呈し（免疫組織像により３＋Ｔｒｏｐ－２）、最初の診断から約１年後に８ｍｇ／ｋｇの開始用量でｈＲＳ７－ＳＮ－３８試験に入った。彼女の最初のＣＴ評価では、ＰＲが達成され、標的病変が３７％低減した（非表示）。この患者は治療を続け、治療の１０か月後に６５％の減少という最大低減を達成し（非表示）、ＣＥＡは７８１ｎｇ／ｍＬから２６．５ｎｇ／ｍＬへ減少した後、３か月後に進行した。

【0227】

ＮＳＣＬＣにおける例示的ＰＲとして、６５歳の男性はステージＩＩＩＢのＮＳＣＬＣ（扁平細胞（ｓｑ．ｃｅｌｌ））と診断された。７０００ｃＧｙのＸＲＴを一緒に用いたカルボプラチン／エトポシド（３か月）の初期治療は、１０か月続く応答をもたらした。次いで、彼はタルセバ維持療法を開始し、腰の椎弓切除術を受けることに加えて、これをＩＭＭＵ－１３２試験が考慮されるまで続けた。彼は、タルセバの５か月後にＩＭＭＵ－１３２の最初の投与を受け、その時は、大量の胸水とともに右肺に５．６ｃｍの病変を呈した。彼は、２か月後に６回目の投与をちょうど終了し、この時に、最初のＣＴによって、原発性標的病変が３．２ｃｍに低減したことが示された（非表示）。

【0228】

ＳＣＬＣにおける例示的ＰＲとして、６５歳の女性は低分化ＳＣＬＣと診断された。無応答で２か月後に終了したカルボプラチン／エトポシド（Ｔｏｐｏ－ＩＩ阻害剤）、続いて、同じく無応答で２か月後に終了したトポテカン（Ｔｏｐｏ－Ｉ阻害剤）を受けた後、彼女は、局部ＸＲＴ（３０００ｃＧｙ）を受け、これは１か月後に終了した。しかし、翌月まで進行が続いた。この患者は、翌月にＩＭＭＵ－１３２を開始した（１２ｍｇ／ｋｇ；６．８ｍｇ／ｋｇまで低減；Ｔｒｏｐ－２発現３＋）、ＩＭＭＵ－１３２の２か月後に、主な肺病変の実質的な低減を含めて、標的病変の３８％の低減が生じた（非表示）。この患者は、１２回の投与を受けた後、３か月後に進行した。

【0229】

これらの結果は、複数の以前の療法の後に失敗したまたは進行した患者においてでさえ、抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣが効果的であったことを示すという点において重要である。

【0230】

結論として、使用された投薬量で、主な毒性は管理可能な好中球減少であり、グレード３の毒性はほとんどなかった。ＩＭＭＵ－１３２は、トポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤療法の際に再発の前歴を有する患者を含めて、トリプルネガティブ乳癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌及び食道癌を有する再発性／不応性患者において、活性（ＰＲ及び持続的ＳＤ）のエビデンスを示した。これらの結果は、現行の療法に抵抗性である幅広いがんにおける抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣの効力を示す。

【0231】

実施例９．穏やかなに還元された抗体への二官能性ＳＮ－３８生成物のコンジュゲーション
抗ＣＥＡＣＡＭ５ヒト化ＭＡｂ、ｈＭＮ－１４（ラベツズマブとしても知られる）、抗ＣＤ２２ヒト化ＭＡｂ、ｈＬＬ２（エプラツズマブとしても知られる）、抗ＣＤ２０ヒト化ＭＡｂ、ｈＡ２０（ベルツズマブとしても知られる）、抗ＥＧＰ－１ヒト化ＭＡｂ、ｈＲＳ７、及び抗ムチンヒト化ＭＡｂ、ｈＰＡＭ４（クリバツズマブとしても知られる）を、ＣＬ２Ａリンカーを使用してＳＮ－３８にコンジュゲートした。各抗体を、５．４ｍＭ ＥＤＴＡを含む４０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．４中で３７℃（バス）で４５分間、５０～７０倍モル過剰で使用するジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元した。還元生成物をサイズ排除クロマトグラフィー及び／または透析濾過によって精製し、ｐＨ６．５の適切なバッファーにバッファー交換した。エルマンアッセイによってチオール含量を決定し、これは６．５～８．５ＳＨ／ＩｇＧの範囲であった。あるいは、抗体は、５～７の範囲のｐＨのリン酸バッファー中のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で還元し、続いてインサイチュコンジュゲーションを行った。還元ＭＡｂを、共溶媒として７～１５％ｖ／ｖのＤＭＳＯを使用して、約１０～１５倍モル過剰のＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８と反応させ、周囲温度で２０分間インキュベートした。遠心分離ＳＥＣ、疎水性カラムの通過、最後に限外濾過－透析濾過によって、コンジュゲートを精製した。３６６ｎｍの吸光度及び標準値と相関させることによって、ＳＮ－３８について生成物をアッセイし、一方で、タンパク質濃度を２８０ｎｍの吸光度から推定し、この波長でのＳＮ－３８の吸光度のスピルオーバーについ補正した。このように、ＳＮ－３８／ＭＡｂ置換比を決定した。精製したコンジュゲートは、ガラスバイアル中に凍結乾燥製剤として保存し、真空下で蓋をし、－２０℃の冷凍庫で保存した。これらのコンジュゲートについて得られたＳＮ－３８モル置換比（ＭＳＲ）は、典型的には５～７の範囲であった。

【0232】

実施例１０．ＳＣＬＣにおける抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣとの併用療法
シスプラチナムは進行性小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）においてイリノテカンと組み合わせて使用される主な化学療法剤のうちの１つであるので、ヒトＳＣＬＣ腫瘍（ＤＭＳ５３）を有するマウスにおいて、シスプラチナムとＩＭＭＵ－１３２の組み合わせを試験する実験を行った。さらに、カルボプラチンもＳＣＬＣで臨床的に使用されているので、この腫瘍モデルでカルボプラチンを試験した。

【0233】

マトリゲルと１：１で混合された、ＤＭＳ５３ストック腫瘍（２０％ｗ／ｖ）＋組織培養から収集した細胞（マウスあたり５ｘ１０^６細胞）でできている腫瘍懸濁液を、雌のＣ．Ｂ．－１７ＳＣＩＤマウスに皮下注射した。腫瘍が一旦０．２７０±０．０４８ｃｍ^３の平均腫瘍体積に達したら、それぞれ９匹のマウスの９つの異なる治療群に動物を分けた。３つのマウス群にＩＭＭＵ－１３２（５００、２５０または１００μｇ、腹腔内）を与えたが、対照群に、ｈ６７９、ヒト化抗ヒスタミン－スクシニル－グリシンＩｇＧで作られた非腫瘍標的化抗体－薬物コンジュゲート（ｈ６７９－ＳＮ－３８；５００μｇ腹腔内）を与えた。すべて、４週にわたって週２回投与した。２つの群に、シスプラチナム（５ｍｇ／ｋｇ腹腔内）またはカルボプラチン（５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）のいずれかの化学療法のみを４週にわたって週１回与えた。２つの群に、ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ静脈内、週１回×４週）＋シスプラチナムまたはカルボプラチンのいずれかの組み合わせを与えた。最後の未治療マウス対照群に、生理食塩水（１００μＬ腹腔内、週２回×４週）を与えた。週２回腫瘍を測定し、マウスを秤量した。

【0234】

結果
様々な群の平均腫瘍体積を図１２に示す。ＩＭＭＵ－１３２の３用量すべてが、生理食塩水対照動物と比較して有意な抗腫瘍効果を与えた（Ｐ＜０．０１６１；ＡＵＣ片側ｔ検定）。最高用量のＩＭＭＵ－１３２（５００μｇ）を用いる療法は、対照のｈ６７９－ＳＮ－３８を含めたすべての単独療法群と比較して、腫瘍を有するマウスにおいて有意に大きな腫瘍退縮をもたらした（Ｐ＜０．００３２；ＡＵＣ両側ｔ検定）。

【0235】

併用群については、対照のカルボプラチン単独療法群の最初のマウスが４１日目（療法１４日目）に腫瘍体積＞１．０ｃｍ^３のそのエンドポイントに達した時点で、ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ）＋カルボプラチン（図１３）が有意性（Ｐ＝０．０９８３；ＡＵＣ両側ｔ検定）近づいていた。しかし、絶対平均腫瘍体積に関して、この日に、ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ）＋カルボプラチンの組み合わせは、カルボプラチン単独療法と比較すると、有意に小さな腫瘍を有していた（それぞれ、０．１６６±０．０１９ｃｍ^３対０．６０２±０．２２４ｃｍ^３；Ｐ＝０．０００４、両側ｔ検定）。ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ、週２回）のみで治療したマウスと比較すると、ＩＭＭＵ－１３２（週１回）＋カルボプラチンで治療した動物は、７３日目時点で有意に小さな腫瘍を有していた（いくつかのマウスがエンドポイントに達したため、比較の最終日；それぞれ、０．７４５±０．１６２ｃｍ^３対０．２８２±０．１５３ｃｍ^３；Ｐ＝０．０００３、ＡＵＣ両側ｔ検定）。

【0236】

ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ）＋シスプラチナムの組み合わせで治療したマウス（図１４）は、シスプラチナム単独療法と比較すると、有意な腫瘍増殖阻害を示した（Ｐ＝０．０００２、ＡＵＣ両側ｔ検定。７３日目（シスプラチナム単独療法群のいくつかのマウスがエンドポイントに達したため、比較の最終日）に腫瘍体積を比較した場合、併用群は、シスプラチナム単独療法群のものよりも約６．２倍小さい腫瘍を有していた（それぞれ、０．１２３±０．０４０ｃｍ^３対０．７５８±０．２４０ｃｍ^３；Ｐ＜０．０００１、両側ｔ検定）。同様に、単独療法群において、ＩＭＭＵ－１３２は週２回投与されたにもかかわらず、シスプラチナムと組み合わせたＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ）の週１回スケジュールで治療したマウスは、ＩＭＭＵ－１３２（２５０μｇ）のみで治療した動物よりも有意に小さな腫瘍を有していた（Ｐ＜０．０００１、ＡＵＣ両側ｔ検定）。最後に、ＩＭＭＵ－１３２＋シスプラチナムの組み合わせは、ＩＭＭＵ－１３２＋カルボプラチンの組み合わせ及び高用量のＩＭＭＵ－１３２（５００μｇ）の単独療法治療群を含めたすべての他の群より優れていることが分かった（Ｐ＜０．００６６、ＡＵＣ両側ｔ検定）。

【0237】

ＩＭＭＵ－１３２＋カルボプラチン治療とＩＭＭＵ－１３２＋シスプラチナム治療の両方とも、マウスによって十分な忍容性が示された。この腫瘍モデルの異常な態様は、ＤＭＳ５３腫瘍を有するマウスが悪液質を示し（図１５）、開始から平均して１５％を越える体重が下がったという観察であった。例えば、生理食塩水対照マウスでは、腫瘍量が２７日目の０．２７０±０．０５３ｃｍ^３から４１日目の０．６８３±０．１８５ｃｍ^３に増えたので、動物の体重は１６．９％±３．４％下がった。しかし、ＩＭＭＵ－１３２（５００μｇ）単独療法またはＩＭＭＵ－１３２＋カルボプラチンもしくはシスプラチナムの組み合わせの抗腫瘍効果が明らかになったように、マウスは体重が再び増加し始めた。例えば、ＩＭＭＵ－１３２＋カルボプラチン群では、マウスは３８日目までにその最大体重を減らしたが（１５．３％±５．６％）、その後、腫瘍が退行するにつれて、マウスはこの減らした体重を取り戻し始め、マウスは５８日目までに出発体重の１００％に戻った。その間に、腫瘍は、２７日目の０．２７０±０．０５０ｃｍ^３の出発サイズから０．１２８±０．０．０１８ｃｍ^３に退行した。しかし、動物は、療法開始時よりも大きなサイズに腫瘍が再増殖したので、体重を再び下げ始めた（７３日目で０．２８２±０．１５３ｃｍ^３）。手短に言えば、これらの療法により腫瘍量が減少するにつれて、悪液質の衰弱化効果がこれらのマウスで逆転されており、これは、このヒトＳＣＬＣ疾患モデルにおけるこれらの組み合わせの利益をさらに示す。

【0238】

実施例１１．抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８ＡＤＣによるヒトｍＳＣＬＣ患者の療法
概要
トポイソメラーゼＩ阻害剤であるトポテカンは、第１選択の白金含有レジメンに感受性の患者において第２選択療法として承認されているが、転移性小細胞肺癌（ｍＳＣＬＣ）の治療について新しい治療剤はここ２０年許可されていない。本実施例では、ＴＲＯＰ－２を標的化する抗体から構成され、イリノテカンの活性代謝物、ＳＮ－３８（トポイソメラーゼＩ阻害剤でもある）を含む、新規な抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、サシツズマブゴビテカンを研究した。２つの以前の療法（範囲１～７）の中央値を有する患者に２１日サイクルの１日目及び８日目にＡＤＣを与え、中央値で１０投与（範囲、１～６３）を与えた。主なグレード≧３毒性は管理可能な好中球減少、疲労及び下痢であった。最大６３反復投与にもかかわらず、ＡＤＣは免疫原性でなかった。

【0239】

４３人の評価可能な患者の４９パーセントは、ベースラインからの腫瘍サイズの低減があり、客観的応答率（部分応答）は１６％であり、安定疾患は患者の４９％で達成された。無増悪生存期間の中央値及び全生存期間の中央値は、治療企図（Ｎ＝５３）解析に基づくと、それぞれ３．６か月及び７．０か月であった。このＡＤＣは、第１選択の化学療法に化学感受性または化学抵抗性であった患者において、及び第２選択のトポテカン療法を失敗した患者においても活性であった。これらのデータは、進行性ｍＳＣＬＣに対する新しい治療剤としてのサシツズマブゴビテカンの使用を支持する。

【0240】

方法
ステージＩＶの転移性疾患のための少なくとも１つの以前の標準療法選択に対して再発性であった、または不応性であったｍＳＣＬＣを有する、及びＣＴによって測定可能な腫瘍を有する、≧１８歳の患者を登録した。患者らは、０または１の米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス、十分な骨髄、肝臓及び腎臓の機能、ならびに第Ｉ相試験に記載されているような他の適格性を有することが必要とされた（Ｓｔａｒｏｄｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２１：３８７０－８）。以前の療法は、少なくとも登録の４週前に終了していなければならなかった。

【0241】

種々のがんに対して行われるバスケット試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ、ＮＣＴ０１６３１５５２）のこの部分の全体的目的は、ｍＳＣＬＣを有する患者においてサシツズマブゴビテカンの安全性及び抗腫瘍活性を評価することである。サシツズマブゴビテカンは、５０ｍｇ／時間の初期注入速度で静脈内投与し、これは、３時間以内に終了した（その後の注入は６０～９０分以内に終了した）。輸注反応の危険性を低減するために、場合により、前投薬（例えば、ジフェンヒドラミン、アセトアミノフェン及びデキサメタゾン）を処方した。２１日サイクルの１日目及び８日目に８または１０ｍｇ／ｋｇの用量を与え、偶発的に遅延があった（最大２週）。毒性は、血液細胞低減、投与の遅延及び／またはプロトコールに指定されるような修正（例えば、前用量の２５％）のための支持的造血増殖因子療法によって、または標準的医療行為によって、管理した。治療は、疾患の進行、代替抗がん療法の開始、許容できない毒性または同意の撤回まで続けた。

【0242】

ｍＳＣＬＣを有する５３人の患者を登録した（３０人の女性、２３人の男性、年齢の中央値６３歳（範囲、４４～８２）。最初の診断からサシツズマブゴビテカンによる治療までの時間の中央値は９．５か月であった（範囲、３～５３）。ほとんどの患者は重度に前治療されており、２つの以前の療法選択という中央値を有していた（範囲、１～７）。すべての人にシスプラチナムまたはカルボプラチン＋エトポシドを与えた。２２人（４１％）の患者は１つの以前の療法選択を有しており、一方で、１４人（２６％）及び１７人（３２％）は、それぞれ、２及び≧３つの以前の化学療法レジメンが与えられていた。さらに、１８人（３３％）はトポテカン及び／またはイリノテカンを受けており、９人（１６％）がタキサンを受けており、５人（９％）が、ニボルマブ（Ｎ＝４）またはアテゾリズマブ（Ｎ＝１）を含む免疫チェックポイント阻害剤療法を受けていた。

【0243】

３か月より長いか短い、白金含有フロントライン療法に対する応答持続期間に基づくと、２７人（５１％）及び２６人（４９％）の化学感受性及び化学抵抗性患者がそれぞれいた。ほとんどの患者は、肺（６６％）、肝臓（５９％）、リンパ節（７６％）、胸部（３４％）、副腎（２５％）、骨（２３％）及び胸膜（６％）を含めた複数の器官への転移をともなう広範な疾患を有していた。他の疾患部位には、膵臓（Ｎ＝４）、脳（Ｎ＝２）、皮膚（Ｎ＝２）及び食道壁、卵巣及び洞（各１）が含まれていた。

【0244】

主要エンドポイントは客観的応答が確証された患者の割合であり、これは、各施設の放射線グループまたは契約した地域の放射線サービスによって、疾患の進行までおよそ８週毎に評価された。客観的応答は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ、バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－４７）によって評価した。部分応答（ＰＲ）または完全応答（ＣＲ）は、初期応答から４～６週以内の確証を必要とした。臨床的有用性率（ＣＢＲ）は、客観的応答＋安定疾患（ＳＤ）≧４か月を有する患者と定義される。生存は、死亡または同意の撤回まで３か月毎にモニターした。

【0245】

安全性評価は、予定された来院の間に行い、または是認されればそれ以上の頻度で行った。血球数及び血清化学は、サシツズマブゴビテカンの投与の前、及び臨床的に必要な場合に、慣例的に確認した。

【0246】

統計解析－解析に含まれるデータは、２０１３年１１月～２０１６年６月まで登録され、２０１７年１月３１まで経過観察した患者に由来した。有害事象（ＡＥ）の頻度及び重症度は、ＭｅｄＤＲＡ優先用語及び器官別大分類（ＭｅｄＤＲＡ Ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ Ｔｅｒｍ ａｎｄ Ｓｙｓｔｅｍ Ｏｒｇａｎ Ｃｌａｓｓ）（ＳＯＣ）バージョン１０によって定義し、重症度はＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３によって評価した。サシツズマブゴビテカンを与えたすべての患者は毒性について評価した。

【0247】

プロトコールは、≧２回の投与（１サイクル）を受け、最初の８週間のＣＴ評価を受けた患者について客観的応答率（ＯＲＲ）を決定することを備えていた。応答持続期間はＲＥＣＩＳＴ１．１の判断基準に従って定め、客観的応答を有するものは応答の最初のエビデンス時から進行まで記録し、一方で、安定疾患の持続期間は治療開始から進行まで記録した。ＰＦＳ及びＯＳは、治療開始から進行の客観的評価が決定されるまで（ＰＦＳ）または死亡まで（ＯＳ）定めた。応答持続期間、ＰＦＳ及びＯＳは、ＭｅｄＣａｌｃ統計ソフトウェア、バージョン１６．４．３（Ｏｓｔｅｎｄ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を使用して、９５％信頼区間（ＣＩ）のカプラン・マイヤー方法によって推定した。

【0248】

腫瘍のＴｒｏｐ－２免疫組織化学ならびにサシツズマブゴビテカン及び成分の免疫原性－Ｔｒｏｐ－２についての保存（Ａｒｃｈｉｖａｌ）腫瘍検体をＩＨＣによって染色し、以前に報告されたように（Ｓｔａｒｏｄｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２１：３８７０－８）解明した。陽性は少なくとも１０％の腫瘍細胞が染色されることを必要とし、強度は、１＋（弱）、２＋（中）及び３＋（強）としてスコア化した。サシツズマブゴビテカン、ＩｇＧ抗体及びＳＮ－３８への抗体応答を、スポンサーによって行われる酵素結合免疫吸着測定法によって、ベースラインで、次いで、各偶数のサイクルの前に得た血清試料中でモニターした（Ｓｔａｒｏｄｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２１：３８７０－８）。アッセイの感受性は、ＡＤＣ及びＩｇＧについて５０ｎｇ／ｍＬであり、抗ＳＮ－３８抗体について１７０ｎｇ／ｍＬである。

【0249】

【表5】

【0250】

結果
患者－２０１３年１１月～２０１６年６月まで、ｍＳＣＬＣを有する５３人の患者を登録した（３０人の男性、２３人の女性、年齢の中央値６３歳（範囲、４４～８２）（表５）。最初の診断からサシツズマブゴビテカンによる治療までの時間の中央値は９．５か月（範囲、３～５３）であった。ほとんどの患者は重度に前治療されており、２つの以前の療法選択という中央値（範囲、１～７）を有していた。すべての人にシスプラチンまたはカルボプラチン＋エトポシドを与えた。２２人（４１％）の患者は１つの以前の療法選択を有しており、一方で、１４人（２６％）及び１７人（３２％）それぞれ、２及び≧３つの以前の化学療法レジメンが与えられていた。さらに、１８人（３３％）はトポテカン及び／またはイリノテカンを受けており、９人（１６％）がタキサンを受けており、５人（９％）が、ニボルマブ（Ｎ＝４）またはアテゾリズマブ（Ｎ＝１）を含む、免疫チェックポイント阻害剤療法を受けていた。３か月より長いか短い、白金含有フロントライン療法に対する応答持続期間に基づくと、２７人（５１％）及び２６人（４９％）の化学感受性及び化学抵抗性患者がそれぞれいた。ほとんどの患者は、肺（６６％）、肝臓（５９％）、リンパ節（７６％）、胸部（３４％）、副腎（２５％）、骨（２３％）及び胸膜（６％）を含めた複数の器官への転移をともなう広範な疾患を有していた（表５）。他の疾患部位には、膵臓（Ｎ＝４）、脳（Ｎ＝２）、皮膚（Ｎ＝２）及び食道壁、卵巣及び洞（各１）が含まれていた。

【0251】

治療曝露、安全性及び忍容性－登録した５３人の患者のうち、２０１６年５月に最初に治療した２人は、２０１７年１月３１日の締切り日時点でサシツズマブゴビテカン療法を続けていた。すべての他の患者は治療を中止し、そうでなければ、生存をモニターした。５９０用量より多く（２９５サイクルを超える）を投与し、患者あたり１０用量（範囲、１～６３）の中央値であった。注入関連反応は報告されなかった。

【0252】

１５人の患者の初期用量は８ｍｇ／ｋｇの開始用量で与え、１０ｍｇ／ｋｇは次の３８人の患者の開始用量であった。２つの用量群の間で、２５人の患者は≧１０用量（≧５サイクル）を受け、２人は６２及び６３用量（＞３０サイクル）を受けた。治療期間の中央値は２．５か月（範囲、１～２３）であった。好中球減少（グレード≧２）は用量低減に対する唯一の指標であり、２．５用量の中央値（範囲、１～９）の後、１０ｍｇ／ｋｇ用量レベルで、２９％（１１／３８）の患者において記録された。８ｍｇ／ｋｇで治療した１５人の患者のうちの２人（１３％）は低減があり、１人は２用量後であり、もう一人は４１用量（２０サイクル）後であった。一旦低減されると、さらなる低減はまれであった。治療関連死は観察されなかった。

【0253】

本試験では、１０人の患者は最初の応答評価の前に脱落し、４人は１用量を受け、５人は２用量を受け、もう１人は４用量後であった。３人は、１または２回用量を受けた後、応答評価に不適格であり、これは、１人はＳＣＬＣとＮＳＣＬＣの混合組織像を有しており、他の２人は、サシツズマブゴビテカンの第１用量を受けた後に試験前の脳及び／または脊髄転移と診断されたからである。第２用量に間に合うよう回復しなかった、１用量後にＣＴＣＡＥグレード３有害事象（好中球減少及び疲労）を報告した２人の患者は、プロトコール指針に準拠して中止された。４人の患者は２用量後に研究から離脱し、２人は同意を撤回し、２人はグレード２の疲労が原因で離脱した。さらなる患者は、同時多発性合併性のために４回の治療後に研究を離れ、最初の応答評価の前に突然死亡した。

【0254】

少なくとも１用量のサシツズマブゴビテカンを受けた５３人の患者において最も頻繁に報告されたＡＥは、悪心、下痢、疲労、脱毛症、好中球減少、嘔吐及び貧血であった（表６）。グレード３または４の好中球減少は３４％（１８／５３）の患者で生じ、１人の患者のみが発熱性好中球減少を有していた。他のグレード３または４の有害事象は少なく、これには、疲労（１３％）、下痢（９％）、貧血（８％）、アルカリホスファターゼの増大（８％）及び低ナトリウム血（８％）が含まれていた。８ｍｇ／ｋｇ用量群において用量低減を必要とする患者はより少なかったが（１３％対１０ｍｇ／ｋｇの２８％）、１０ｍｇ／ｋｇ用量レベルは同様に十分な忍容性を示し、少数の患者で用量変更及び／または増殖因子の支持があった。

【0255】

【表6】

【0256】

有効性－記載のように、登録した５３人のｍＮＳＣＬＣ患者のうち、１０人は最初のＣＴ応答評価より前に中止になり、サシツズマブゴビテカンの少なくとも２用量及び少なくとも１回の経過観察スキャンを受けた後に、プロトコール要求の応答の客観的評価により４３人の患者を残した。図１６は、４３人の患者についての標的病変の直径の合計の最高パーセンテージ変化のウォーターフォールプロット（図１６Ａ）、ＰＲまたはＳＤステータスの達成者についての応答の持続期間を示すグラフ（図１６Ｂ）、ならびにＰＲ及びＳＤを有する患者の経時的応答変化を追跡するプロット（図１６Ｃ）を含む、応答の一連のグラフ表示を提供する。

【0257】

４３人のＣＴ評価可能な患者のうちの２１人（４９％）は、ベースラインからの腫瘍サイズの低減を経験した（図１６Ａ）。確証部分応答（≧３０％低減）は７人の患者で生じ、１６％のＯＲＲをもたらした（表７）。これらの患者における応答に対する時間の中央値は２．０か月（範囲、１．８～３．６か月）であり、５．７か月（９５％ＣＩ：３．６、１９．９）というカプラン・マイヤーによって推定された応答持続期間の中央値を有していた。７人の応答者のうちの２人は、最後の経過観察時に進行中の応答を有しており（すなわち、患者は生きており、疾患の進行がなく代替抗がん治療を開始していなかった）、治療開始から１人は７．２＋月であり、もう一人は８．７＋月であった（図１Ｂ、図１Ｃ）。

【0258】

【表7】

【0259】

安定疾患（ＳＤ）は２１人の患者（４９％）で決定され、その後の確証的なＣＴで維持されなかった（非確証ＰＲまたはＰＲｕ）＞３０％の腫瘍低減を初期に有していた６人（１４％）及び≧２０％の腫瘍低減を有していた３人の患者を含んでいた。１０人の患者が≧４か月（カプラン・マイヤー由来中央値＝５．６か月、９５％ＣＩ：５．２、９．７）にわたるＳＤを有していたことに注目することは重要であり、これは、確証ＰＲ群についてのＰＦＳ中央値（７．９か月、９５％ＣＩ：７．６、２１．９；Ｐ＝０．１６２０）及び４０％（１７／４３）の臨床的有用性率（ＣＢＲ：ＰＲ＋ＳＤ≧４か月）と有意差がなかった。実際に、これらの１０人のＳＤ患者についてのＯＳでさえ、７人の確証ＰＲ患者と有意差がなかった（それぞれ、８．３か月、９５％ＣＩ ７．５、２２．４か月対９．２か月、９５％ＣＩ：６．２、２０．９；Ｐ＝０．５５９９）。これは、適切な持続期間（≧４か月）にわたってＳＤを維持することは、目的のエンドポイントであるはずであることを示唆する。治療企図（ＩＴＴ）基準（Ｎ＝５３）で、ＰＦＳ中央値は３．６か月（９５％ＣＩ：２．０、４．３）であり（図１７（Ａ））、一方で、ＯＳ中央値は７．０か月（９５％ＣＩ：５．５、８．３）であり、１７人の患者は生きており、５人は経過観察から消えた（１人は１．８か月後、１人は５か月後、３人は１１．４～１２．８か月後）（図１７（Ｂ））。

【0260】

客観的応答評価を有する４３人の患者のうちの１３人は８ｍｇ／ｋｇで治療し、１人は確証され（８％）、１人は非確証ＰＲであり、３人はＳＤであった。１０ｍｇ／ｋｇ群（Ｎ＝３０）では、６人の患者は確証ＰＲを有し（２０％）、１２人はＳＤを有しており、これには、＞３０％（ＰＲｕ）の低減を示す１回のＣＴをともなう５人が含まれる。ＣＢＲは４７％（１４／３０）であり、これは、１０ｍｇ／ｋｇの開始用量がより良好な全体的応答をもたらしたことを示唆する。

【0261】

応答評価を有する２４人の患者は、第１選択の白金ベースの化学療法に感受性であると分類された（表７）。４人（１７％）は確証ＰＲを達成し、９人はＳＤを有しており、これには、＞３０％の腫瘍低減（ＰＲｕ）を示す単一スキャンをともなう４人が含まれる。１９人の患者は抵抗性であり、３人（１６％）は確証ＰＲを有しており、６人はＳＤを有しており、これには、ＰＲｕを有する２人が含まれる。化学感受性群及び化学抵抗性群に対するＰＦＳ中央値は、それぞれ３．８か月（９５％ＣＩ：２．８、６．０）及び３．６か月（９５％ＣＩ：１．８、３．８）であり、一方で、ＯＳ中央値は、それぞれ８．３か月（９５％ＣＩ：７．０、１３．２）及び６．２か月（９５％ＣＩ：４．０、１０．５）であった（表７）。化学感受性群と化学抵抗性群の間で、ＰＦＳまたはＯＳにおける有意差は見られなかった（それぞれ、Ｐ＝０．３９８１及びＰ＝０．３１００）。

【0262】

第２選択の設定で、４３人の患者のうちの１９人がサシツズマブゴビテカンを受け、３／１９（１６％）がＰＲを有しており、７人が最良応答としてＳＤを有していた（後者のうちの２人は、＞３０％の腫瘍縮小のＳＤを有していた）。これらの患者で見られた応答は、第３選択以上の療法としてサシツズマブゴビテカンが与えられた患者（Ｎ＝２４）について見られたものと同じであり、４人は確証ＰＲ（１６％）であり、８人はＳＤであり、これには、１回のＣＴにおいて＞３０％の腫瘍縮小を有する４人のＳＤ患者が含まれる。ＰＦＳまたはＯＳの持続期間における有意差は見られなかった（それぞれ、Ｐ＝０．９５３８及びＰ＝０．６８５３）。応答解析を表７に概説する。

【0263】

免疫チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）による以前の治療を受けた５人の患者の中で、１人は非確証ＰＲを経験し（最初の評価で５４％縮小し、さらなる治療または評価なしで同意を撤回した）、２人はＳＤを達成し（１人は８．７か月続く１７％の腫瘍縮小を有ており、もう一人は３．７か月にわたって腫瘍サイズに変化がなかった）、１人は進行中の疾患を有しており、一方で、５番目の患者はサシツズマブゴビテカンの１サイクル後に同意を撤回した。ＣＰＩ治療患者のすべては、ＣＰＩへの応答に失敗したか、サシツズマブゴビテカンを受ける前に進行したかのいずれかであり、これは、患者が、ＣＰＩ治療を受けた後にＩＭＭＵ－１３２に応答性であり得ることを示唆する。

【0264】

第３選択以降の療法としてサシツズマブゴビテカンを受けた２４人の患者のうち、１５人はトポテカン及び／またはイリノテカンを以前に受けていたが、９人はこれらの薬剤をかつて受けたことがなかった。これら２つの群の客観的応答は類似しており、ＰＦＳにおいて有意差がなかった（３．８対３．７か月；Ｐ＝０．７３４１）。しかし、以前のトポテカン療法を受けた、サシツズマブゴビテカンで治療された者は、受けなかった者よりも有意に長いＯＳを有していた（８．８か月、９５％ＣＩ：６．２、２０．９対５．５か月、９５％ＣＩ：３．２、８．３；Ｐ＝０．０３５７）。この群のより長いＯＳは、白金感受性の患者におけるトポテカンの既知の活性を反映する可能性があり、したがって、より良好な長期の転帰を有し得る。

【0265】

第１選択のカルボプラチン＋エトポシド療法に対して再発した後サシツズマブゴビテカンが与えられた患者を図１８に示す。かなりの腫瘍低減を有する別の例を図１９に示す。

【0266】

腫瘍検体の免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色－保存腫瘍検体を２９人の患者から得たが、４個は検査に不適切であり、２５個の評価可能な腫瘍を残し、そのうちの９２％は陽性であり、２個（８％）が強い（３＋）染色を有し、１３個（５２％）が中程度（２＋）の染色を有していた。これらの患者のうちの２３人は客観的応答評価を有していた。この群には確証ＰＲを有する５人及び非確証ＰＲを有する２人がいた。５人は２＋染色を有していたが、他の２人は１＋であり（非表示）、これは、高い発現程ほどより良好な応答を提供することを示唆する。しかし、ＩＨＣスコアに対するＰＦＳ値及びＯＳ値の評価は、明らかな傾向を示さず（非表示）、０と１＋の組み合わせのＩＨＣスコアを有する患者（Ｎ＝１０）と２＋と３＋の組み合わせのＩＨＣスコアを有する患者（Ｎ＝１３）についてのＰＦＳ及びＯＳに関するカプラン・マイヤー推定値は、ＩＨＣスコアに基づくと、有意差を示さなかった（ＰＦＳ、Ｐ＝０．２６６１；ＯＳ、Ｐ＝０．７１８６）（非表示）。

【0267】

ＡＤＣ、ＳＮ－３８またはｈＲＳ７抗体の免疫原性－最高で２２か月もの間治療を継続した患者において、サシツズマブゴビテカン、該抗体、またはＳＮ－３８に対する中和抗体は検出されなかった。

【0268】

考察
フロントライン化学療法に対するＳＣＬＣの再発は、２つのカテゴリー、すなわち、最初の白金ベースの療法の３か月以内に生じる抵抗性の再発、及び治療してから少なくとも３か月に生じる感受性の再発に分けられ続けている（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４：５４４１－７、Ｐｅｒｅｚ－Ｓｏｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４：２７８５－９０）。再発性ＳＣＬＣの最良の管理に関して、依然としていくらかのあいまい性があるが、本明細書において研究されるＡＤＣで使用されているＳＮ－３８と類似しているトポイソメラーゼ－Ｉ阻害剤であるトポテカンは、多数の試験によって支持されるように、化学感受性再発に対して承認された唯一の製品である（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４：５４４１－７、Ｈｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ５：１５４３７）。しかし、トポテカンが化学抵抗性フロントライン患者において５％の、及び化学感受性患者において１７％の客観的応答率を有していた、１４の論文で報告された１０００人を超える患者のメタ解析（Ｈｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ５：１５４３７）において示されるように、トポテカンの効力及び有害事象は以前の研究でかなり異なっていた。患者の６９％、１％及び２４％において、それぞれ、グレード≧３の好中球減少、血小板減少及び貧血があり、患者のおよそ２％がこの化学療法で亡くなった（Ｈｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ５：１５４３７）。したがって、トポテカンは、白金ベースの化学療法に感受性を示した後に再発した患者におけるこの第２選択の設定において、いくらかの有望さを示すが、考慮すべき血液毒性がある。しかし、この結論でさえ、Ｌａｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１５，Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｏｎｃｏｌ １０：１１０－５）によって最近問題にされ、彼らは、白金感受性は、現在承認されている適応症であるトポテカンによる治療後のＰＦＳ及びＯＳの改善と強く関係しないことを主張した。

【0269】

２つ（範囲、１～７）の中央値の以前の療法の後の伸展性進行疾患の患者（ステージＩＶ）においてサシツズマブゴビテカンを用いた本明細書に報告される結果が有望であることは本設定内である。４９パーセントの患者が、ＲＥＣＩＳＴ１．１によると、ベースラインからの腫瘍測定値の低減を示し、１６％のＯＲＲ及び５．７か月の応答持続期間の中央値（９５％ＣＩ：３．６、１９．９）を有していた。安定疾患は３５％の患者で見られ、これらのＳＤ患者の１４％は最良応答として＞３０％の腫瘍縮小を有していたが、第２のスキャンで維持されていなかった。≧４か月での臨床的有用性率は４０％であった。ＰＦＳ及びＯＳの中央値はそれぞれ３．６及び７．０か月であった。ＳＤを有する１０人の患者に対するＯＳ中央値は８．３か月（９５％ＣＩ：７．５、２２．４）であり、これは、ＰＲを有する患者に対する９．２か月というＯＳ中央値（９５％ＣＩ：６．２、２０．９）と統計的に異ならない（Ｐ＝０．５５９９）ことは興味深い。開始用量として１０ｍｇ／ｋｇを受けた群（Ｎ＝３０）では、６人（２０％）で確証された客観的応答があり、さらなる５人患者は≧３０％の腫瘍低減（ＰＲｕ）を示す単回のＣＴを有していた。さらに、１０ｍｇ／ｋｇ用量でのこの群の臨床的有用性率は４７％であった。これは、１０ｍｇ／ｋｇという好ましい用量を支持する。腫瘍のＴｒｏｐ－２の免疫組織化学染色に基づく、必要とされる患者の選抜がないことも注目すべきであり、より強い染色がより良い応答に相関するという示唆があったが、ＩＨＣスコアに関して、ＰＦＳまたはＯＳにおいて有意差は見られなかった。

【0270】

述べたように、ＰＦＳ及びＯＳは、ＳＤ＞４か月またはＰＲを有する患者間で実質的に異ならなかった。非確証ＰＲ（すなわち、１回のＣＴに関して＞３０％の腫瘍低減）またはＳＤを有する患者は、一般に、ほとんどのＯＲＲ評価において考慮されない。しかし、本明細書の結果は、確証ＰＲまたは４か月より長く続くＳＤを有する患者間で応答持続期間の違いがないことを示す（図１６Ｂ）。実際に、ＰＲまたはＳＤについての個々の患者応答の動的追跡（特に、ＳＤが、ＰＲを確証させるものと同様の時間枠である≧４か月続く場合）は、数か月にわたってベースライン腫瘍サイズより下のままでいることによって、両方の群に対して臨床的有用性を示唆する（図１６Ｃ）。確証ＰＲを有する患者のＰＦＳについて、≧４か月続くＳＤを有する患者群より長いという傾向（Ｐ＝０．１６２０）があったが、これら２群に対するＯＳは有意差がなかった（Ｐ＝０．５５９９）。したがって、この初期解析の患者数は比較的少ないが、データは、免疫チェックポイント阻害剤を受けている患者の経過観察と類似した適切な持続期間が達成される場合、臨床活性の重要な指標として、疾患の安定化をより考慮すべきであることを示唆する。

【0271】

以前の化学感受性（Ｎ＝２４）または化学抵抗性（Ｎ＝１９）に基づく患者の評価は、サシツズマブゴビテカン治療と応答の違いがないことを示す（表７）。ＰＦＳ及びＯＳの結果は、化学抵抗性群について、それぞれ３．６か月及び６．２か月であるＰＦＳ及びＯＳと比較して、第１選択において化学感受性であった患者について、３．８か月及び８．３か月であった。統計的差異がない故に、患者が第１選択の化学療法に化学感受性または化学抵抗性であることに関係なく、第２選択以降の選択療法においてサシツズマブゴビテカンを患者に投与することができるように思われる。これはトポテカンと異なり、トポテカンは第１選択のシスプラチン及びエトポシド化学療法に≧３か月の応答を示したＳＣＬＣ患者においてのみ指示される（（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４：５４４１－７、Ｐｅｒｅｚ－Ｓｏｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４：２７８５－９０）。Ｐｅｒｅｚ－Ｓｏｌａｒ ｅｔ ａｌ． （１９９６， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １４：２７８５－９０）によって研究された２８人の患者のうち、１１％はＰＲを有しており、生存期間中央値は５か月であり、１年生存は３．５％であった。

【0272】

トポテカン及びＳＮ－３８の両方は、ＤＮＡ複合体を安定化させ、一本鎖ＤＮＡ切断の蓄積を引き起こすことによって、ＤＮＡが合成される場合にスーパーコイル状ＤＮＡヘリックスを緩めることに関与するＤＮＡトポイソメラーゼＩ酵素の阻害剤であるが（Ｔａｋｉｍｏｔｏ ＆ Ａｒｂｕｃｋ，１９６６，Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ．Ｉｎ：Ｃｈａｂｎｅｒ ＆ Ｌｏｎｇ（Ｅｄｓ．）．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ；ｐ．４６３－８４）、サシツズマブゴビテカンは、トポテカン療法後に再発した患者において活性を示した。したがって、トポテカン抵抗性または再発は、サシツズマブゴビテカンの投与について禁忌ではない可能性があり、シスプラチン及びエトポシドに化学抵抗性であった患者において同様の活性であったので、化学感受性ステータスにかかわらず、転移性ＳＣＬＣの患者において、第２選択治療剤として特に価値があり得る。

【0273】

第２選択の設定におけるトポテカンの承認以来２０年で、第２選択以降の療法における転移性ＳＣＬＣ療法のための新しい薬剤は認可されていない。しかし、Ｔ細胞チェックポイント受容体プログラム細胞死タンパク質（ＰＤ－１）及び細胞毒性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）の阻害剤がごく最近進展している（Ａｎｔｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ １７：８８３－９５）。これらの著者は、再発性ＳＣＬＣの患者において、ＣＴＬＡ－４抗体イピリムマブをともなって、またはともなわずに、ニボルマブの第Ｉ～ＩＩ相試験を行った。ニボルマブ単独は、１０％の応答率を達成し、一方で、併用は１９～２３％の応答率及び３２％の疾患制御率を有していた（Ａｎｔｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ １７：８８３－９５）。しかし、ＳＣＬＣにおける、化学療法をともなう、またはともなわない最近のイピリムマブの研究は、これらの結果を確証することができなかった（Ｒｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３４：３７４０－４８）。本発明者らは免疫チェックポイント阻害剤を用いる療法に失敗した患者においてサシツズマブゴビテカンが活性を有し得ることを観察したので、特に、他のがんタイプを有する患者において免疫チェックポイント阻害剤を用いる療法の後にそのような応答を示すエビデンスが理由で、これをさらに研究している（Ｂａｒｄｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３５：２１４１－４８、Ｆａｌｔａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｌｉｎ Ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ Ｃａｎｃｅｒ １４：ｅ７５－９、Ｈｅｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３５：２７９０－９７、Ｔａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３５：ａｂｓｔｒａｃｔ ３２７）。

【0274】

免疫療法の最近の進展及びＳＣＬＣの新規な他の標的の同定（Ｒｕｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ １８：４２－５１）にもかかわらず、ＳＣＬＣは、特に第１選択療法に化学抵抗性である集団において、依然として致命的な疾患である。進行性、再発性、ステージＩＶのＳＣＬＣを有する重度に前治療された患者におけるサシツズマブゴビテカンの現在の結果は、このＡＤＣが、トポテカンの前または後の両方で、化学感受性ＳＣＬＣ患者及び化学抵抗性ＳＣＬＣ患者の両方の療法において有用であることを示唆する。

【0275】

様々な修正及び変形を本発明の生成物、組成物、方法及びプロセスに対して変更を行うことができることは、当業者に明白である。したがって、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に入ることを条件として、本発明がそのような修正及び変形を包含することが意図される。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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