特許 7194595 グランザイムＢを指向するイメージングおよび治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-12-14

(45)【発行日】2022-12-22

(54)【発明の名称】グランザイムＢを指向するイメージングおよび治療

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20221215BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20221215BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20221215BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20221215BHJP

   A61K 47/62 20170101ALI20221215BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20221215BHJP

   G01N 33/573 20060101ALI20221215BHJP

   A61K 101/00 20060101ALN20221215BHJP

   A61K 103/00 20060101ALN20221215BHJP

   C12N 9/99 20060101ALN20221215BHJP

【ＦＩ】

C07K7/06 ZNA

C07K7/08

A61K51/08 200

A61K51/08 100

A61K49/00

A61K47/62

A61K47/54

G01N33/573 A

A61K101:00

A61K103:00

C12N9/99

【請求項の数】 13

(21)【出願番号】P 2018568685

(86)(22)【出願日】2017-06-30

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-09-12

(86)【国際出願番号】 US2017040212

(87)【国際公開番号】W WO2018005926

(87)【国際公開日】2018-01-04

【審査請求日】2020-06-25

(31)【優先権主張番号】62/357,845

(32)【優先日】2016-07-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/435,541

(32)【優先日】2016-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】592017633

【氏名又は名称】ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田 渉

(72)【発明者】

【氏名】マフムード，ウマー

(72)【発明者】

【氏名】ラリマー，ベンジャミン

(72)【発明者】

【氏名】ウェレンバーグ－クレー，エリック

【審査官】池上 文緒

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１２－５１３５９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】韓国公開特許第１０－２０１４－０１１９６３３（ＫＲ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００７／０１８４４９３（ＵＳ，Ａ１）

【文献】Circ. Res. (2015) vol.117, issue 6, p.502-512

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ ７／００

Ａ６１Ｋ ５１／０８

Ａ６１Ｋ ４９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉ：

【化1】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、以下：
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）または
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ－Ｘ^７（配列番号８）
のアミノ酸配列を含む、グランザイムＢに結合する基であり、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡまたはＧであり、
Ｘ^４は、ＩまたはＶであり、
Ｘ^５は、ＥまたはＤであり、
Ｘ^６は、ＰまたはＦであり、
Ｘ^７は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む求電子基であって－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基であり、
Ａが、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択されるキレート剤をさらに含む、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

Ｃは、以下のアミノ酸配列：
（ａ）ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）、
（ｂ）Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）、
（ｃ）ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）、
（ｄ）ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号２２）、または
（ｅ）ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｅ－Ａ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２３）である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

Ｃが、ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号２２）であり、そこに求電子基のＸ^７が結合している、請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ａが、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素からなる群から選択される１または複数のイメージング剤を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項5】

前記常磁性イオンが、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）からなる群から選択され、
前記ｘ線イメージング剤が、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、ビスマス（ＩＩＩ）、およびヨード化ｘ線イメージング剤からなる群から選択され、
前記放射性同位元素が、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択され、
前記フルオロフォアが、Ａｌｅｘａ ３５０、Ａｌｅｘａ ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＰＹ－Ｒ６Ｇ、１３ＢＯＤＬＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＬＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、イソチオシアン酸フルオレセイン、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、量子ドット、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ５３２、ＡＦ４８８、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７５０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、およびｄｓＲＥＤからなる群から選択される、
請求項４に記載の化合物。

【請求項6】

Ａが、ＰＥＴイメージング剤、ＳＰＥＣＴイメージング剤、およびコンピュータ断層撮影イメージング剤からなる群から選択されるイメージング剤である、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項7】

前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、または１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）である、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

Ｂが、１もしくは複数のアミノ酸残基、１もしくは複数の炭水化物、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

細胞試料中または組織試料中のグランザイムＢまたは免疫応答をイメージングする方法であって、
前記細胞試料または組織試料を、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物と接触させるステップを含む、方法。

【請求項10】

ａ）対象におけるグランザイムＢをイメージングし、
ｂ）対象における免疫応答をイメージングし、
ｃ）対象における疾患の処置をモニタリングし、又は
ｄ）対象における疾患の処置における免疫応答をモニタリングすることに使用するための、
請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、
前記疾患が、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択され、
前記対象は、適切なイメージング法でイメージングされる、
前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

対象における疾患を処置する方法に使用するための組み合わせ物であって、
請求項１～８のいずれか一項に記載の第１の化合物、またはその薬学的に許容される塩と；
請求項１～８のいずれか一項に記載の第２の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、
Ａは、毒性の放射性同位元素を含み、
前記対象は、適切なイメージング法でイメージングされ、
前記疾患が、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される、
前記組み合わせ物。

【請求項12】

前記第１の化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、および^２０１Ｔｌからなる群から選択される、非毒性の放射性同位元素を含み、
前記第１の化合物の基Ａが、任意に、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、およびデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択されるキレート剤をさらに含む、請求項１１に記載の組み合わせ物。

【請求項13】

前記第２の化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、アルファ放射体およびベータ放射体からなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む、請求項１１または１２に記載の組み合わせ物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

連邦政府による支援を受けた研究または開発
本発明は、助成金番号Ｐ５０－ＣＡ１２７００３および５Ｒ０１ＣＡ１６６５８２－０３の下に、米国国立衛生研究所により付与された政府助成によりなされた。米国連邦政府は、本発明において、一定の権利を有する。

【0002】

関連出願の相互参照
本出願は、それらの各々の開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０１６年７月１日に出願された米国仮出願第６２／３５７，８４５号明細書、および２０１６年１２月１６日に出願された同第６２／４３５，５４１号明細書の利益を主張する。

【0003】

技術分野
本発明は、イメージング法に有用な化合物に関し、より特定すると、ポジトロン断層撮影を含む医用イメージングを使用してグランザイムＢをイメージングするのに有用な化合物に関する。

【背景技術】

【0004】

グランザイムＢとは、細胞性免疫応答時に、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）によるエキソサイトーシスを介して放出されるセリンプロテアーゼであり、ＦＡＳ／ＦＡＳＬ経路と共に、Ｔ細胞ががん細胞死を媒介する２つの主要な機構のうちの１つを表す。グランザイムＢは、Ｔ細胞と、それらの標的との間で形成される免疫シナプスにおいて、小孔形成タンパク質であるパーフォリンと共に放出される。次いで、放出されたグランザイムＢの一部は、主にパーフォリン小孔を介してがん細胞に侵入し、そこでグランザイムＢは、複数の基質を活性化させてカスパーゼカスケードの活性化をもたらす。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

本出願は、とりわけ、細胞中または組織中のグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【0006】

【化1】

【0007】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）細胞または組織を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、細胞内または組織内のグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法を提示する。

【0008】

本出願は、対象におけるグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0009】

【化2】

【0010】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、対象におけるグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0011】

本出願は、細胞または組織の試料中の免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【0012】

【化3】

【0013】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）細胞または組織の試料を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、細胞または組織の試料中の免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0014】

本出願は、対象における免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0015】

【化4】

【0016】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、対象における免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0017】

本出願は、対象における疾患の処置をモニタリングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0018】

【化5】

【0019】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0020】

本出願は、対象における疾患の処置における免疫応答をモニタリングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0021】

【化6】

【0022】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0023】

一部の実施形態では、Ａは、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素からなる群から選択される１または複数のイメージング剤を含む。

【0024】

一部の実施形態では、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）からなる群から選択される。

【0025】

一部の実施形態では、ｘ線イメージング剤は、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、ビスマス（ＩＩＩ）、およびヨード化ｘ線イメージング剤からなる群から選択される。

【0026】

一部の実施形態では、放射性同位元素は、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される。

【0027】

一部の実施形態では、Ａは、ＰＥＴイメージング剤、ＳＰＥＣＴイメージング剤、およびコンピュータ断層撮影イメージング剤からなる群から選択されるイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌからなる群から選択される放射性同位元素を含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、^６８Ｇａを含むＰＥＴイメージング剤である。

【0028】

一部の実施形態では、Ａは、キレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、および１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）である。

【0029】

一部の実施形態では、Ａは、フルオロフォアである。一部の実施形態では、Ａは、Ａｌｅｘａ ３５０、Ａｌｅｘａ ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＰＹ－Ｒ６Ｇ、１３ＢＯＤＬＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＬＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、イソチオシアン酸フルオレセイン、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、量子ドット、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ５３２、ＡＦ４８８、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７５０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、およびｄｓＲＥＤからなる群から選択されるフルオロフォアである。

【0030】

本出願は、対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）対象に、第１の式Ｉ：

【0031】

【化7】

【0032】

［式中、
Ａは、非毒性の放射性同位元素を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）対象に、第２の式Ｉ：

【0033】

【化8】

【0034】

［式中、
Ａは、毒性の放射性同位元素を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
を含む方法をさらに提示する。

【0035】

一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される対象の細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。

【0036】

一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、グランザイムＢに結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。

【0037】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌからなる群から選択される、非毒性の放射性同位元素を含む。

【0038】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、キレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される。

【0039】

一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、アルファ放射体およびベータ放射体からなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む。一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、および^１３１Ｉからなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む。

【0040】

一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のアミノ酸残基、１もしくは複数の炭水化物、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ_１～３０チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、１または複数の－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－基を含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－の任意選択の連結基であり、ｐが、１～４０の整数である。一部の実施形態では、ｐは、１０～４０の整数である。一部の実施形態では、ｐは、２０～４０の整数である。一部の実施形態では、ｐは、２５～３５の整数である。

【0041】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0042】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体であり、クローンＧＢ１１、クローンＧｒＢ－７、およびＮＣＬ－Ｌ－Ｇｒａｎ－Ｂからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体断片である。

【0043】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約１００アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約５０アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約２５アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約１５アミノ酸残基の長さである。

【0044】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される。

【0045】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、ＦまたはＰである。

【0046】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0047】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0048】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ－Ｘ^７（配列番号８）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ^７は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む求電子基である。

【0049】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、ＦまたはＰである。

【0050】

一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈである。

【0051】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する有機低分子である。一部の実施形態では、有機低分子は、低分子ペプチド模倣体である。

【0052】

一部の実施形態では、Ｃは、式ＩＩＩ：

【0053】

【化9】

【0054】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、Ｃ_６～１０アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ_６～１０アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ^１およびＲ^２は、それらが接合した炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ^１０基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ^３およびＲ^７は、独立に、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^８は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ^１１）_２、ＨＥＴ、およびＣ_６～１０アリールにより置換され、式中、Ｃ_６～１０アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ^１１は、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である。

【0055】

一部の実施形態では、Ｃは、

【0056】

【表1】

【0057】

またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。

【0058】

一部の実施形態では、Ａは、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素のうちの１または複数を含むイメージング剤であり、
Ｂは、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0059】

一部の実施形態では、Ａは、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ_１～３０チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0060】

一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１または複数のＣ_１～_３０アルキレン基、１または複数のアミド基、１または複数のＣ_１～_３０アルキレンオキシ基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0061】

一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１または複数の－（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0062】

一部の実施形態では、Ａは、キレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、および１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）である。

【0063】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約１００アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約５０アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約２５アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合するポリペプチドは、約４～約１５アミノ酸残基の長さである。

【0064】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される。

【0065】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、ＦまたはＰである。

【0066】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0067】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0068】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ－Ｘ^７（配列番号８）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ^７は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む求電子基である。

【0069】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、ＦまたはＰである。

【0070】

一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈである。

【0071】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する有機低分子である。一部の実施形態では、有機低分子は、低分子ペプチド模倣体である。一部の実施形態では、Ｃは、式ＩＩＩ：

【0072】

【化10】

【0073】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、Ｃ_６～１０アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ_６～１０アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ^１およびＲ^２は、それらが接合した炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ^１０基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ^３およびＲ^７は、独立に、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^８は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ^１１）_２、ＨＥＴ、およびＣ_６～１０アリールにより置換され、式中、Ｃ_６～１０アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ^１１は、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である。

【0074】

一部の実施形態では、Ｃは、

【0075】

【表2】

【0076】

またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。

【0077】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢの不可逆的結合剤である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢの阻害剤である。

【0078】

一部の実施形態では、方法は、ステップｉ）の投与の前に、治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、治療剤の投与は、細胞もしくは組織の試料中、または対象において、免疫応答を誘導する。

【0079】

一部の実施形態では、治療剤は、抗炎症剤、ステロイド、免疫療法薬剤、化学療法剤、および治療用抗体からなる群から選択される。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤である。

【0080】

一部の実施形態では、疾患は、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膀胱がん、腎細胞癌、多発性骨髄腫、膵臓がん、および前立腺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、結腸がんである。一部の実施形態では、がんは、黒色腫である。

【0081】

一部の実施形態では、疾患は、移植片対宿主病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱、感染後糸球体腎炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂溶性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚性好酸球増加症、エリテマトーデス、座瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病と関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異形成、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト－小柳－原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性（ｃｈｒｏｎｉｃまたはｉｎｖｅｔｅｒａｔｅ）喘息、遅発性喘息および気道過敏、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、火傷と関連する腸病変、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン－バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発性神経炎、神経根障害、甲状腺機能亢進症、バセドウ病、赤芽球癆、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ、ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪過多、好酸球性筋膜炎、歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、男性型脱毛症、脱毛による老人性脱毛症、頭髪の発芽の欠如、ならびに／または頭髪の発生および頭髪の成長の減少による老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症、セザリー症候群、アジソン病、虚血症－再灌流による臓器の損傷、移植性疾患、虚血性疾患、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線により引き起こされる大腸炎、急性虚血性腎不全、慢性腎不全、酸素肺または薬物により引き起こされる中毒症、肺がん、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、加齢黄斑変性、ガラス体瘢痕化、角膜アルカリバーン、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、老化、発がん、癌腫の転移および高山病、ヒスタミンまたはロイコトリエンＣ４放出関連疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素により引き起こされる壊死、ウイルス性肝炎、ショック、無酸素症、Ｂ型ウイルス性肝炎、非Ａ型／非Ｂ型肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症型肝不全、遅発性肝不全、慢性肝炎の急性増悪（ａｃｕｔｅ－ｏｎ－ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｉｖｅｒ ｆａｉｌｕｒｅ）、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、老人性認知症、外傷、慢性細菌感染、リンパ系由来の悪性腫瘍、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性リンパ腫、および慢性リンパ球性リンパ腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患は、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、喘息、強皮症、およびシェーグレン症候群からなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患は、骨髄拒絶、臓器移植片拒絶、および移植片対宿主病からなる群から選択される。

【0082】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）；
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２７－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）；および
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）
からなる群から選択される。

【0083】

本出願は、式Ｉ：

【0084】

【化11】

【0085】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基であって、
ａ）Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）
［式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される］
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、
ｂ）式ＩＩＩ：

【0086】

【化12】

【0087】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩とからなる群から選択される基であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、Ｃ_６～１０アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ_６～１０アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ^１およびＲ^２は、それらが接合した炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ^１０基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ^３およびＲ^７は、独立に、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^８は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ^１１）_２、ＨＥＴ、およびＣ_６～１０アリールにより置換され、式中、Ｃ_６～１０アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ^１１は、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である、化合物、またはその薬学的に許容される塩をさらに提示する。

【0088】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）；
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２７－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）；および
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）
からなる群から選択される。

【0089】

別段の定義がない限り、本明細書で使用される、全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書では、本発明における使用のための方法および材料が記載されるが、当技術分野で公知の、他の適切な方法および材料もまた、使用することができる。材料、方法、および例は、例示的なものであるに過ぎず、限定的であることを意図するものではない。本明細書において言及される、全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースのエントリー、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。齟齬が生じる場合は、定義を含む本文献に従う。

【図面の簡単な説明】

【0090】

【図1】免疫療法で処置されたマウスと、非処置マウスとについてのウェスタンブロット解析を示す図である。

【図2A】処置腫瘍についてのウェスタンブロット解析を、非処置腫瘍と対比して示し、細胞傷害性Ｔ細胞応答と関連するマーカーの上昇を裏付け、グランザイムＢ発現の増大が最も顕著であることを裏付ける図である。

【図2B】ベータ－アクチンに照らして標準化された、グランザイムＢおよびＣＤ８の発現についての解析であって、処置腫瘍内のグランザイムＢと、非処置腫瘍内のグランザイムＢとの有意差（２０．４±４．１対４．７±１．６）を裏付ける一方で、ＣＤ８では、有意差が観察されなかった（２１．５±５．０対１４．３±３．０）ことを裏付ける解析を示す図である。

【図3A】接種後１０日目に切り出された、二重処置腫瘍（左の４つの腫瘍）および対照腫瘍（右の４つの腫瘍）についてのウェスタンブロット解析を示す図である。

【図3B】接種後１２日目に切り出された、二重処置腫瘍（左の４つの腫瘍）および対照腫瘍（右の４つの腫瘍）についてのウェスタンブロット解析を示す図である。

【図4】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの、精製グランザイムＢへの結合を、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの、ＢＳＡへの結合と比較して表すデータを示す図である。バーは、６連の平均値±ＳＤを表す。

【図5】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰによる、グランザイムＢの阻害を表すデータを示す図である。

【図6】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの、ＣＴ２６細胞内のグランザイムＢへの結合を、グランザイムＢ（すなわち、ＧＺＢ）を接種されなかったＣＴ２６細胞と比較して表すデータを示す図である。

【図7A】組合せ療法（抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ－４）で処置されたマウスの腫瘍対血液比と、非処置マウスの腫瘍対血液比とを示す図である。

【図7B】１時間および２時間のｅｘ ｖｉｖｏの生体内分布研究により、ＰＥＴイメージングの所見が確認されることを示す図である。腎臓による取込みは、腎臓からの排出と符合する。

【図8】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを使用する、マウスにおけるグランザイムＢ発現についての、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴ画像を示す図である。

【図9】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを使用する、マウスにおけるグランザイムＢ発現についての、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴ画像を示す図である。

【図10】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを使用する、マウスにおけるグランザイムＢ発現についての、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴ画像を示す図である。

【図11】 ^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを使用するＰＥＴ画像を示す図である。画像は、ＰＥＴイメージングが、二重処置ＣＴ－２６腫瘍と、対照ＣＴ－２６腫瘍とを識別することを示す。処置腫瘍の腫瘍対左室比（ＴＢＲ）についての、対照腫瘍と対比した解析は、処置腫瘍についての、１．６９±０．２６のＴＢＲに対して、非処置腫瘍の平均値ＴＢＲが、０．９３±０．１１であり、８３％の増大（Ｐ＜０．０５）を示す。

【図12】ＣＤ３＋Ｔ細胞および核と比べた、グランザイムＢの位置についての免疫蛍光解析を示す図である。免疫蛍光画像は、処置腫瘍内のグランザイムＢであって、ＣＤ３と共局在化しないグランザイムＢの上昇を示す。

【図13】免疫療法で処置されたマウスおよび非処置マウスにおける、グランザイムＢおよびＣＤ３についての免疫組織化学アッセイの代表的結果を示す図である。免疫細胞は、処置腫瘍および非処置腫瘍のいずれにも浸潤するが、処置腫瘍だけが、グランザイムＢを、活発に発現させることを例示する図である。

【図14】実施例９で記載される、ＣＴ２６腫瘍およびＭＣ３８腫瘍についての、ｅｘ ｖｉｖｏ免疫ブロット解析の結果を示す図である。図１４Ａは、腫瘍接種後１２日目における、非処置ＣＴ２６腫瘍および非処置ＭＣ３８腫瘍についてのウェスタンブロット解析を示す。図１４Ｂは、１２日目におけるタンパク質の発現についての定量化を示し、バーは、４連の平均値±ＳＥＭを表す。図１４Ｃは、ＭＣ３８腫瘍およびＣＴ２６腫瘍について、１２日目におけるグランザイム発現の定量化を示す。^＊＊対応のないｔ検定によるＰ＜０．００５。

【図15】生理食塩液（図１５Ａ）、単剤療法（図１５Ｂ）、Ｐ＋Ｃ組合せ療法（図１５Ｃ）、およびＰ＋Ｔ組合せ療法（図１５Ｄ）で処置されたＣＴ２６保有マウスについての、代表的なＰＥＴ－ＣＴ画像を示す図である。上の画像は、全身取込みの、冠状断面への最大値投影であり、下の画像は、同じデータの体軸断面へのスライスを表す。腫瘍を円で囲み、Ｔでマークし、腎臓に、Ｋでマークする。

【図16】生理食塩液（図１６Ａ）、単剤療法（図１６Ｂ）、Ｐ＋Ｃ組合せ療法（図１６Ｃ）、およびＰ＋Ｔ組合せ療法（図１６Ｄ）で処置されたＭＣ３８保有マウスについての、代表的な最大値投影と、体軸断面内の単一のＰＥＴ－ＣＴ画像の例とを示す図である。画像は、１２日目の、^６８Ｇａ－ＧＰの注射の１時間後に撮影した。腫瘍を円で囲み、Ｔでマークし、腎臓に、Ｋでマークする。

【図17】ＧＺＰ ＰＥＴイメージングの定量化による、グランザイムＢ取込みの比較を示す図である。図１７Ａは、測定される全ての腫瘍および処置型について、ＧＺＰ ＰＥＴイメージングにより決定された平均値ＴＢＲを表す箱髭図を示す。図１７Ｂは、生理食塩液で処置されたＣＴ２６腫瘍内およびＭＣ３８腫瘍内のグランザイムＢレベルについての、棒グラフによる比較（^＊＊ｐ＜０.００５）を示す。４つの処置アーム間で、ＣＴ２６保有マウス（図１７Ｃ）およびＭＣ３８保有マウス（図１７Ｄ）における、平均値ＴＢＲもまた比較した。ウェルチの対応のないｔ検定により、媒体処置マウスと比較した場合の^＊ｐ＜０.０５、^＊＊ｐ＜０.００５。

【図18】グランザイムＢ発現の定量化の後における腫瘍増殖を示す図である。生理食塩液で処置されたＣＴ２６保有マウスと比較した、単剤療法（図１８Ａ）、Ｐ＋Ｃ組合せ療法（図１８Ｂ）、およびＰ＋Ｔ組合せ療法（図１８Ｃ）についてのＣＴ２６増殖曲線を、黒実線で示す。ＰＥＴイメージングにより決定される高グランザイム腫瘍を、グレーの実線で示し、低グランザイム腫瘍を、グレーの点線で示す。単剤療法（図１８Ｄ）、Ｐ＋Ｃ組合せ療法（図１８Ｅ）、およびＰ＋Ｔ組合せ療法（図１８Ｆ）で処置されたＭＣ３８腫瘍についての増殖曲線を、グランザイムの取込みで差別化し、高グランザイムの処置マウスを、グレー実線で示し、低グランザイムの処置マウスを、グレー点線で示し、高グランザイムの媒体処置マウスを、黒点線で示し、低グランザイムの媒体処置マウスを、黒実線で示す。

【図19】応答の、ＧＺＰ ＰＥＴイメージングスコアとの相関を示す図である。図１９Ａは、各処置群についての全般的な生存を、このレジメンについての平均ＴＢＲと関連させるカプラン－マイヤープロットを示す。図１９Ｂは、各処置レジメンについて、ＴＢＲを、応答パーセントと対比したプロットを示す。ピアソンの相関によるｒ^２＝０．９１、ｐ＜０．０００５）。各データ点は、各処置アームについての平均値ＴＢＲ±ＳＥＭを表し、点線は、最良の当てはめ直線の９５％信頼区間を意味する。

【図20】ＮＯＴＡ－ＧＰ、ＧＺＰＰＥＧ、およびＧＺＰＳＥＲＰについて測定された、腫瘍（心臓）内のＰＥＴ信号の時間経過を示す図である。

【図21】実施例１４に記載される、ヒト黒色腫についてのグランザイムＢ解析およびペプチド結合の結果を示す図である。図２１Ａは、抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤で処置された患者に由来し、改変ＲＥＣＩＳＴ基準に基づき、処置レスポンダー（ＴＲ）または処置非レスポンダー（ＴＮＲ）として群分けされたヒト黒色腫試料を示す。図２１Ｂは、９例の患者における、グランザイムＢの、免疫蛍光顕微鏡法による、時間間隔を漸増させる場合の定量化を示し、治療の１６日後という早期における、応答患者と、非応答患者との間の、グランザイムＢ発現の有意差を明らかにする。図２１Ｃは、抗グランザイムＢ抗体（抗ＧｒＢ）またはヒト化ＧＺＰペプチド（臨床用ＧＺＰ）を使用する、マッチさせた試料の比較を示し、抗体とペプチドとの間の、同様の染色パターンであって、非処置患者より、処置患者においてはるかに強い染色パターンを明らかにする。図２１Ｄは、処置されたレスポンダーの黒色腫患者において、核染色（４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール）によりにより裏付けられる、ヒトＧＺＰ（ＧＺＰ Ｐｅｐ）と、抗ＧｒＢ（ＧｒＢ Ａｂ）との共局在化を示す。

【発明を実施するための形態】

【0091】

がん免疫療法は、近年にわたり、がん治療において、著明な進歩を表してきた。プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）などの免疫チェックポイントを指向する抗体は、一部の患者に対する肯定的な転帰により承認されている。免疫腫瘍学の分野への研究は、開発中のＣＡＲ－Ｔ細胞、ワクチン、低分子、および抗体を含む戦略と共に持続している。これらの療法の将来性にもかかわらず、これらは、万能療法ではない。これらの免疫療法は、著明な有害事象と関連する場合があり、これは、代償が大きく、応答率は、典型的に、２０～５０％であり、患者の大部分は、治療に応答しないことを意味する。さらに、応答は、しばしば、解剖学的イメージング（例えば、ＣＴ、ＭＲＩ）において、応答する腫瘍に、増殖の見かけを呈させる、免疫細胞浸潤物と関連するので、従来の方法を使用して、治療に対する個別の患者の応答を決定することは難しく、大量の、代謝的に活性な免疫細胞のために、ＦＤＧ－ＰＥＴイメージングとの親和性の増大を裏付けている。現行のイメージング技術の制約を踏まえ、がん免疫療法についての臨床研究は、典型的に、それらの研究の主要評価項目として、無進行生存ではなく、全生存を援用する。

【0092】

細胞傷害性Ｔ細胞活性についての下流のマーカーであるグランザイムＢであれば、がん免疫療法の有効性を評価する、新規のバイオマーカーとして用いられうるであろう。腫瘍内のグランザイムＢの発現は、ＣＴＬの存在または非存在について評価しうるだけでなく、活性のＴ細胞により放出されるエフェクタータンパク質であって、ＣＴＬ活性の尺度も統合するエフェクタータンパク質としてもまた評価することができ、したがって、ＣＴＬの存在の評価の達成を困難とする、Ｔ細胞枯渇の問題も説明する。したがって、本出願は、新規のグランザイムＢ特異的イメージング剤を提示する。代表的なグランザイムＢのイメージング剤を、がん免疫療法のモデルにおいて調べた。本出願は、グランザイムＢのイメージングはまた、がん免疫療法に対する応答を予測するのにも使用しうるについて記載する。

【0093】

化合物
本出願は、とりわけ、式Ｉ：

【0094】

【化13】

【0095】

［式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提示する。

【0096】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢの不可逆的結合剤である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢの阻害剤である。

【0097】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、式Ｉ－ａ：

【0098】

【化14】

【0099】

［式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【0100】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0101】

一部の実施形態では、Ｃは、
ａ）グランザイムＢに結合するポリペプチド、および
ｂ）グランザイムＢに結合する有機低分子
からなる群から選択される。

【0102】

一部の実施形態では、Ｃは、
ａ）グランザイムＢに結合するポリペプチドであって、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択されたアミノ酸（例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸）であり、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、およびＤからなる群から選択される、ポリペプチドと、
ｂ）式ＩＩＩ：

【0103】

【化15】

【0104】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩とからなる群から選択される基であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、Ｃ_６～１０アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ_６～１０アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ^１およびＲ^２は、それらが接合した炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ^１０基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ^３およびＲ^７は、独立に、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^８は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ^１１）_２、ＨＥＴ、およびＣ_６～１０アリールにより置換され、式中、Ｃ_６～１０アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ^１１は、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択され、
ｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である。

【0105】

一部の実施形態では、Ａは、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素からなる群から選択される１または複数のイメージング剤を含む。
一部の実施形態では、Ａは、１つ、２つ、または３つの、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素からなる群から選択されるイメージング剤を含む。一部の実施形態では、Ａは、１つのイメージング剤を含む。一部の実施形態では、Ａは、２つのイメージング剤を含む。一部の実施形態では、Ａは、３つのイメージング剤を含む。

【0106】

一部の実施形態では、Ａは、１または複数の、独立に選択された常磁性イオンを含みうる、１または複数のイメージング剤を含む。一部の実施形態では、常磁性イオンの各々は、独立に、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ａは、１つ、２つ、または３つの、独立に選択された常磁性イオンを含む。一部の実施形態では、１または複数の、独立に選択された常磁性イオンを、独立に、直接的または間接的に（例えば、キレート剤を介して）、本明細書で提示される化合物に結合させる。

【0107】

一部の実施形態では、Ａは、独立に選択されたｘ線イメージング剤である、１または複数のイメージング剤を含む。一部の実施形態では、ｘ線イメージング剤の各々は、独立に、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、ビスマス（ＩＩＩ）、およびヨード化ｘ線イメージング剤（例えば、ジアトリゾ酸塩、イオキサグル酸塩、メトリゾイン酸塩、イオパミドール、イオヘキソール、イオキシラン、イオプロミド、イオジキサノール、およびイオベルソール）からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ａは、１つ、２つ、または３つの、独立に選択されたｘ線イメージング剤を含む。

【0108】

一部の実施形態では、Ａは、１または複数の独立に選択された放射性同位元素を含む、１または複数のイメージング剤を含む。一部の実施形態では、本明細書では、本明細書で提示される方法のうちの１または複数において、イメージング剤として有用な放射性同位元素が提示される。加えて、本明細書で提示される放射性同位元素のうちの１または複数はまた、１または複数の治療的適用において、例えば、対象に、治療有効量で投与される場合に有用でもありうる。例えば、^１３１Ｉおよび^６４Ｃｕは、対象に、低濃度（例えば、５ｍＣｉ）で投与される場合に、イメージング剤（例えば、非毒性の放射性同位元素および／または非治療用の放射性同位元素）として有用でありうるが、対象に、高濃度で投与される場合に、治療剤（例えば、毒性の放射性同位元素および／または治療用の放射性同位元素）として有用でもありうる。一部の実施形態では、放射性同位元素の各々は、独立に、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される。一部の実施形態では、１または複数の、独立に選択された放射性同位元素を、独立に、直接的または間接的に（例えば、キレート剤を介して）、本明細書で提示される化合物に結合させる。

【0109】

一部の実施形態では、Ａは、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）イメージング剤、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージング剤、およびコンピュータ断層撮影イメージング剤からなる群から選択されるイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、ＰＥＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、ＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、コンピュータ断層撮影イメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、放射性同位元素によるコンピュータ断層撮影イメージング剤である。

【0110】

一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、および^２０１Ｔｌからなる群から選択される、１または複数の放射性同位元素を含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、および^２０１Ｔｌからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの放射性同位元素を含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、および^２０１Ｔｌからなる群から選択される、１つの放射性同位元素を含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。一部の実施形態では、Ａは、^６８Ｇａを含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である。

【0111】

一部の実施形態では、Ａは、キレート剤をさらに含む。キレート剤の例は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、および１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、キレート剤は、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）である。一部の実施形態では、Ａは、１または複数のキレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、Ａは、１つ、２つ、または３つのキレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、Ａは、１つのキレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、Ａは、２つのキレート剤をさらに含む。一部の実施形態では、Ａは、３つのキレート剤をさらに含む。

【0112】

一部の実施形態では、Ａは、独立に選択されたフルオロフォアである、１または複数のイメージング剤を含む。フルオロフォアの例は、Ａｌｅｘａ ３５０、Ａｌｅｘａ ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＰＹ－Ｒ６Ｇ、１３ＢＯＤＬＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＬＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、イソチオシアン酸フルオレセイン、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、量子ドット、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒファミリー、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、および蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、およびｄｓＲＥＤ）を含むがこれらに限定されない。

【0113】

一部の実施形態では、Ａは、Ａｌｅｘａ ３５０、Ａｌｅｘａ ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＰＹ－Ｒ６Ｇ、１３ＢＯＤＬＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＬＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、イソチオシアン酸フルオレセイン、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、量子ドット、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ５３２、ＡＦ４８８、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７５０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、およびｄｓＲＥＤからなる群から選択されるフルオロフォアである。一部の実施形態では、Ａは、１つ、２つ、または３つの、独立に選択されたフルオロフォアを含む。

【0114】

一部の実施形態では、Ｂは、１または複数のアミノ酸残基を含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、約１～約１００アミノ酸残基、例えば、約１～約１００、約１～約８０、約１～約６０、約１～約４０、約１～約２０、約１～約１０、約１～約５、約５～約１００、約５～約８０、約５～約６０、約５～約４０、約５～約２０、約５～約１０、約１０～約１００、約１０～約８０、約１０～約６０、約１０～約４０、約１０～約２０、約２０～約１００、約２０～約８０、約２０～約６０、約２０～約４０、約４０～約１００、約４０～約８０、約４０～約６０、約６０～約１００、約６０～約８０、または約８０～約１００アミノ酸残基を含む任意選択の連結基である。

【0115】

一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、１もしくは複数の炭水化物基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のＣ_１～５０アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ_１～５０アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ_１～５０チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ_１～３０チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である。

【0116】

一部の実施形態では、Ｂは、１または複数の－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－基を含む任意選択の連結基である。一部の実施形態では、Ｂは、式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－の任意選択の連結基であり、ｐは、約１～約１００、例えば、約１～約１００、約１～約８０、約１～約６０、約１～約４０、約１～約２０、約１～約１０、約１～約５、約５～約１００、約５～約８０、約５～約６０、約５～約４０、約５～約２０、約５～約１０、約１０～約１００、約１０～約８０、約１０～約６０、約１０～約４０、約１０～約２０、約２０～約１００、約２０～約８０、約２０～約６０、約２０～約４０、約４０～約１００、約４０～約８０、約４０～約６０、約６０～約１００、約６０～約８０、または約８０～約１００の整数である。一部の実施形態では、ｐは、約１０～約４０の整数である。一部の実施形態では、ｐは、約２０～約４０の整数である。一部の実施形態では、ｐは、約２５～約３５の整数である。

【0117】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体であって、クローンＧＢ１１、クローンＧｒＢ－７、およびＮＣＬ－Ｌ－Ｇｒａｎ－Ｂからなる群から選択される抗体である。一部の実施形態では、グランザイムＢに結合する抗体は、クローンＧｒＢ－７である。

【0118】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体断片である。一部の実施形態では、Ｃは、クローンＧＢ１１、クローンＧｒＢ－７、またはＮＣＬ－Ｌ－Ｇｒａｎ－Ｂから選択される抗体断片である。一部の実施形態では、Ｃは、クローンＧｒＢ－７の抗体断片である。

【0119】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体断片であり、この場合、抗体断片は、
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＡＥ（配列番号１３）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＡＣＦＶＶＡＥ（配列番号１４）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＡＦＶＶＡＥ（配列番号１５）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＡＶＶＡＥ（配列番号１６）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＡＶＡＥ（配列番号１７）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＡＡＥ（配列番号１８）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＧＥ（配列番号１９）；および
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＡＤ（配列番号２０）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0120】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する抗体断片であり、この場合、抗体断片は、
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＡＥ（配列番号１３）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＡＣＦＶＶＡＥ（配列番号１４）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＡＦＶＶＡＥ（配列番号１５）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＡＶＶＡＥ（配列番号１６）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＡＶＡＥ（配列番号１７）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＡＡＥ（配列番号１８）；
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＧＥ（配列番号１９）；および
ＧＴＥＡＡＡＡＳＳＣＦＶＶＡＤ（配列番号２０）
からなる群から選択される。

【0121】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド（例えば、プロテイナーゼ阻害剤９（ＰＩ－９）である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、および１または複数のタンパク質（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つのタンパク質）である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、および１つのタンパク質である。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびセルピンＰ９である。

【0122】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択されたアミノ酸（例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸）であり、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される。

【0123】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）およびＧからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡである。一部の実施形態では、Ｘ^２は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡであり、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各Ｇである。

【0124】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸であって、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、およびＴからなる群から選択される非帯電親水性アミノ酸である。

【0125】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｖである。

【0126】

一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｄである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｓである。

【0127】

一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｐである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｓである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｔである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｑである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｎである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ａである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｖである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｄである。

【0128】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号１に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号１に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号１に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号１に少なくとも９９．５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0129】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0130】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）；
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号２２）；
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｅ－Ａ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２３）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0131】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号２２）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｅ－Ａ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２３）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0132】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0133】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0134】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0135】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0136】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0137】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、
Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ（配列番号５）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される。

【0138】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、ＰまたはＦである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｐである。

【0139】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号５に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、配列番号５に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであって、配列番号５に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであって、配列番号５に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0140】

一部の実施形態では、ポリペプチドは、
Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号６）；および
Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号７）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0141】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0142】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号７のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0143】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、
Ｘ^１－Ｘ^２－Ｘ^３－Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ－Ｘ^７（配列番号８）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択されたアミノ酸（例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸）であり、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ^７は、求電子基である。

【0144】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）およびＧからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡである。一部の実施形態では、Ｘ^２は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡであり、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各Ｇである。

【0145】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸であって、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、およびＴからなる群から選択される非帯電親水性アミノ酸である。

【0146】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｖである。

【0147】

一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｄである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｓである。

【0148】

一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｐである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｓである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｔである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｑである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｎである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ａである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｖである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｄである。

【0149】

一部の実施形態では、Ｘ^７は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈである。一部の実施形態では、Ｘ^７は、表１のＡ欄に提示された置換基の群から選択される。

【0150】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号８に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号８に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号８に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号８に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号８のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0151】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、この場合、ポリペプチドは、
Ｘ^４－Ｘ^５－Ｘ^６－Ｄ－Ｘ^７（配列番号２１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択されたアミノ酸（例えば、天然アミノ酸または非天然アミノ酸）であり、
Ｘ^４は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ^５は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ^６は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ^７は、求電子基である。

【0152】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に、ベータＡ（すなわち、ベータ－アラニン）およびＧからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡである。一部の実施形態では、Ｘ^２は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^３は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１は、ベータＡであり、Ｘ^２およびＸ^３は、各Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各Ｇである。

【0153】

一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸である。一部の実施形態では、Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^３は、各々、独立に選択された、非帯電親水性アミノ酸であって、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、およびＴからなる群から選択される非帯電親水性アミノ酸である。

【0154】

一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｉである。一部の実施形態では、Ｘ^４は、Ｖである。

【0155】

一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｅである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｇである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｄである。一部の実施形態では、Ｘ^５は、Ｓである。

【0156】

一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｐである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｓである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｔである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｑである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｎである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ａである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｖである。一部の実施形態では、Ｘ^６は、Ｄである。

【0157】

一部の実施形態では、Ｘ^７は、配列番号９のアミノ酸配列のＣ末端を含む。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～６ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルキル）－（５～１０環のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルキル）－（５～１０環のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６アルコキシ）－（５～１０環のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ_１～６ハロアルコキシ）－（５～１０環のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である。一部の実施形態では、Ｘ^７は、－Ｃ（Ｏ）Ｈである。一部の実施形態では、Ｘ^７は、表１のＡ欄に提示された置換基の群から選択される。

【0158】

一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２１に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２１に少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２１に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２１に少なくとも９９.５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｃは、配列番号２１のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。

【0159】

一部の実施形態では、Ｃは、グランザイムＢに結合する有機低分子である。本明細書で使用される「有機低分子」という用語は、低分子量（例えば、９００ドルトン未満、８００ドルトン未満、７００ドルトン未満、６００ドルトン未満、または５００ドルトン未満）の有機化合物を指す。一部の実施形態では、有機低分子であるＣは、低分子ペプチド模倣体である。本明細書で使用される「ペプチド模倣体」という用語は、天然または合成のアミノ酸配列を表す、１または複数の官能基（例えば、アミン、アミド、カルボキシ、アルデヒドなど）を含む化合物を指す。

【0160】

一部の実施形態では、Ｃは、以下の構造：

【0161】

【化16】

【0162】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩である。

【0163】

一部の実施形態では、Ｃは、以下の構造：

【0164】

【化17】

【0165】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩である。

【0166】

一部の実施形態では、Ｃは、それらの各々の開示が、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、国際出願公開第２０１４／１５３６６７号パンフレットおよび同第２００３／０６５９８７号パンフレットにおいて提示される化合物の群から選択される、グランザイムＢに結合する有機低分子である。

【0167】

一部の実施形態では、Ｃは、式ＩＩＩ：

【0168】

【化18】

【0169】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、Ｃ_６～１０アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ_６～１０アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ^１およびＲ^２は、それらが接合した炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ^１０基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ^３およびＲ^７は、独立に、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＲ^８は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ^１１）_２、ＨＥＴ、およびＣ_６～１０アリールにより置換され、式中、Ｃ_６～１０アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ^１１は、水素、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択される。

【0170】

一部の実施形態では、ｍが０の場合、ｎは、０である。一部の実施形態では、ｎが０の場合、ｍは、０である。一部の実施形態では、ｍが０の場合、ｎは、０であり、ｎが０の場合、ｍは、０である。

【0171】

一部の実施形態では、ｍは、０である。一部の実施形態では、ｍは、１である。一部の実施形態では、ｍは、２である。一部の実施形態では、ｎは、０である。一部の実施形態では、ｎは、１である。一部の実施形態では、ｎは、２である。一部の実施形態では、ｍおよびｎは、各々、０である。

【0172】

一部の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、フェニル、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各フェニルおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換される。

【0173】

一部の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキル、フェニル、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各フェニルおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換される。

【0174】

一部の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_３～６シクロアルキル、フェニル、ピリジル、２－オキソピロリジン、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの基により任意選択で置換され、フェニル、ピリジル、および２－オキソピロリジンは、独立に、ハロ、ヒドロキシ、および１つ、２つ、または３つのハロ基により任意選択で置換される、Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの基により任意選択で置換される。

【0175】

一部の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は、各々、独立に、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_３～６シクロアルキル、フェニル、ピリジル、２－オキソピロリジン、および－Ｎ（Ｒ^１０）_２からなる群から選択され、式中、各Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_３～６シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの基により任意選択で置換され、フェニル、ピリジル、および２－オキソピロリジンは、独立に、ハロ、ヒドロキシ、および１つ、２つ、または３つのハロ基により任意選択で置換される、Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの基により任意選択で置換され、Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１～４アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルからなる群から選択され、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１～４アルキルは、任意選択で、Ｎ（Ｒ^１１）_２、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ベンゾチオフェニル、およびフェニルにより置換され、フェニルは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換される。

【0176】

一部の実施形態では、Ｒ^３は、ＨおよびＣ_１～４アルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ^３は、Ｈである。

【0177】

一部の実施形態では、各Ｒ^４は、Ｈ、ハロ、Ｃ_１～６アルキル、およびＣ_１～６ハロアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒ^４は、独立に、ＨまたはＣ_１～６アルキルである。一部の実施形態では、各Ｒ^４は、Ｈである。

【0178】

一部の実施形態では、各Ｒ^５は、Ｈ、ハロ、Ｃ_１～６アルキル、およびＣ_１～６ハロアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒ^５は、独立に、ＨまたはＣ_１～６アルキルである。一部の実施形態では、各Ｒ^５は、Ｈである。

【0179】

一部の実施形態では、各Ｒ^６は、Ｈ、ハロ、Ｃ_１～６アルキル、およびＣ_１～６ハロアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒ^６は、独立に、ＨまたはＣ_１～６アルキルである。一部の実施形態では、各Ｒ^６は、Ｈである。

【0180】

一部の実施形態では、Ｒ^７は、ＨおよびＣ_１～４アルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ^７は、Ｈである。

【0181】

一部の実施形態では、各Ｒ^８は、Ｈ、ハロ、Ｃ_１～６アルキル、およびＣ_１～６ハロアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒ^８は、独立に、ＨまたはＣ_１～６アルキルである。一部の実施形態では、各Ｒ^８は、Ｈである。

【0182】

一部の実施形態では、各Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、およびＲ^８は、Ｈである。

【0183】

一部の実施形態では、各ＨＥＴは、各々が、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、１つまたは２つのオキソ基により任意選択で置換され、独立に選択された、単環式、５～６員のヘテロアリール、二環式、８～１０員のヘテロアリール、単環式、４～６員のヘテロシクロアルキル、または二環式、８～１０員のヘテロシクロアルキル基である。

【0184】

一部の実施形態では、Ｒ^９は、非置換ＨＥＴ基である。一部の実施形態では、Ｒ^９は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルから選択される、１つまたは２つの基で置換されたＨＥＴ基である。一部の実施形態では、Ｒ^９は、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，３－トリアゾリル、およびテトラゾリルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ^９は、各々、独立に、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換される、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，３－トリアゾリル、およびテトラゾリルからなる群から選択される。

【0185】

一部の実施形態では、各ＨＥＴは、各々、独立に、ハロ、オキソ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキル、およびＣ_１～４ハロアルキルからなる群から選択される、１つまたは２つの置換基により任意選択で置換される、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、シノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、テトラゾリル、１，４－ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニルからなる群から独立に選択される。

【0186】

一部の実施形態では、式ＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、式ＩＩＩ－ａ：

【0187】

【化19】

【0188】

［式中、Ｒ^９は、式ＩＩＩの化合物について上記で規定した通りである］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【0189】

一部の実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、表１

【0190】

【表3-1】

【0191】

【表3-2】

【0192】

【表3-3】

【0193】

【表3-4】

に提示された化合物、またはその薬学的に許容される塩の群から選択される。

【0194】

一部の実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、表２

【0195】

【表4】

に提示された化合物、またはその薬学的に許容される塩の群から選択される。

【0196】

一部の実施形態では、式ＩＩＩの化合物は、表３

【0197】

【表5】

【0198】

［式中、

【0199】

【化20】

【0200】

は、基Ｃを、任意選択のリンカーＢまたは式Ｉの基Ａへと接続する結合を指し示す］
に提示された化合物、またはその薬学的に許容される塩の群から選択される。

【0201】

一部の実施形態では、Ａは、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素のうちの１または複数を含むイメージング剤であり、
Ｂは、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0202】

一部の実施形態では、Ａは、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ_１～３０アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ_１～３０チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0203】

一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１または複数のＣ_１～_３０アルキレン基、１または複数のアミド基、１または複数のＣ_１～_３０アルキレンオキシ基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0204】

一部の実施形態では、Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、１または複数の－（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0205】

一部の実施形態では、
Ａは、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素のうちの１または複数を含むイメージング剤であり、
Ｂは、約１～約１００アミノ酸残基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0206】

一部の実施形態では、
Ａは、放射性同位元素を含み、
Ｂは、約１～約１００アミノ酸残基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0207】

一部の実施形態では、
Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、約１～約１００アミノ酸残基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0208】

一部の実施形態では、
Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^５１Ｃｒ、^５２Ｆｅ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７５Ｓｅ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１５２Ｅｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌ、^２０３Ｐｂ、^２１０Ａｔ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、および^２２５Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂは、約１～約１００アミノ酸残基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される。

【0209】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－ｄ、Ｉ－ｅ、Ｉ－ｆ、Ｉ－ｇ、Ｉ－ｈ、Ｉ－ｉ、Ｉ－ｊ、Ｉ－ｋ、Ｉ－ｌ、Ｉ－ｍ、Ｉ－ｎ、またはＩ－ｏの化合物：

【0210】

【化21】

【0211】

または薬学的に許容されるこれらの塩
である。

【0212】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉ－ｐまたはＩ－ｑの化合物：

【0213】

【化22】

である。

【0214】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２７－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）、および
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）
からなる群から選択される化合物である。

【0215】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）；
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２７－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）；
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）；および
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｅ－Ａ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物４、配列番号２４）
からなる群から選択される化合物である。

【0216】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）である。

【0217】

合成
察知される通り、その塩を含む、本明細書で提示される化合物は、公知の有機合成法を使用して調製することができ、多数の可能な合成経路のうちのいずれかに従い合成することができる。例えば、本明細書で提示される式ＩＩＩの化合物は、その開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許出願第１０／５０３，１５５号明細書において記載された手順に従い調製することができる。調製したら、当技術分野における標準技法を使用して、式ＩＩＩの化合物を、基Ａ、または、任意選択で基Ｂに、共有結合的に結合させることができる。

【0218】

ペプチドの合成
１または複数のポリペプチドを含む、本明細書で提示される、式Ｉの化合物は、例えば、ペプチド結合を調製するための標準法（例えば、Merrifield et al, Journal of the American Chemical Society 85.14 (1963): 2149-2154において記載されている固相合成法）を使用して調製することができる。当業者には、ペプチドの合成法が周知であり、例えば、Bodanszky et al, Gastroenterology 71 (1976): 965-970; Houghten, Proceedings of the National Academy of Sciences 82.15 (1985): 5131-5135; Stewart et al, Solid phase peptide synthesis. Pierce Chemical Company, 1984において記載されている。このような合成における使用に適切な保護基は、上記の教科書のほか、McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, (1973):98においても見出されるであろう。これらの合成法は、１または複数のアミノ酸残基、または適切な、保護されたアミノ酸残基の、成長するペプチド鎖への逐次的な付加を伴う。通常、第１のアミノ酸残基のアミノ基またはカルボキシル基を、適切な、選択的に除去可能な保護基で保護する。リシンなど、反応性の側鎖基を含有するアミノ酸には、異なる、選択的に除去可能な保護基を活用する。

【0219】

一部の実施形態では、本出願のポリペプチドは、固相合成法を使用して調製することができる。例えば、アミノ酸を、その、保護されていないカルボキシル基またはアミノ基を介して、不活性の固体支持体へと接合させる。次いで、アミノ基またはカルボキシル基の保護基を、選択的に除去し、配列内の次のアミノ酸であって、相補的な（例えば、アミノまたはカルボキシル）基を適切に保護したアミノ酸を混合し、固体支持体へと既に接合させた残基と反応させる。次いで、アミノ基またはカルボキシル基の保護基を、新たに添加されたアミノ酸残基から除去し、次いで、さらなるアミノ酸（例えば、適切に保護されたアミノ酸）を添加する。所望のポリペプチド長が調製されるまで、この手順を繰り返す。所望のアミノ酸を、適正な配列で連結した後、任意の残りの末端保護基および側鎖基の保護基（および固体支持体）を、逐次的または共時的に除去して、最終的なペプチドをもたらすことができる。一部の実施形態では、本明細書で提示される式Ｉのポリペプチド化合物は、ベンジル化アミノ酸残基またはメチルベンジル化アミノ酸残基を含まない。他の箇所で記載される通り、コンフォメーションを制限する、分子内連結を形成するように、さらなる反応も必要でありうる。

【0220】

連結基
アフィニティーマトリックスの調製、多様な構造の修飾および安定化、リガンドおよび受容体の結合部位の同定、ならびに構造研究のために二官能性の架橋試薬が、広範に使用されている。２つの同一な官能基を有するホモ二官能性試薬は、同一なポリペプチドおよび異なるポリペプチドまたはポリペプチドの残基を架橋し、ポリペプチドのリガンドを、それらの特異的結合部位へと連結するときに、高度に効率的であることが示されている。ヘテロ二官能性試薬は、２つの異なる官能基を含有する。異なる官能基の示差的反応性を利用することにより、選択的かつ逐次的に、架橋を制御することができる。例えば、二官能性の架橋試薬は、アミノ、スルフヒドリル、グアニジノ、インドール、カルボキシルに特異的な基を含むがこれらに限定されない、それらの官能基の特異性に従い分けることができる。多くのヘテロ二官能性の架橋試薬は、一級アミン反応性基と、チオール反応性基とを含有する。

【0221】

ヘテロ二官能性の架橋試薬、および架橋試薬を使用する方法のさらなる例については、その開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８８９，１５５号明細書において記載されている。架橋試薬は、求核性のヒドラジド残基を、求電子性のマレイミド残基と組み合わせ、一例では、アルデヒドの、遊離チオールとのカップリングを可能とする。架橋試薬は、多様な官能基を架橋するように修飾することができ、したがって、ポリペプチドを架橋するのに有用である。表４は、連結基Ｂを含む式Ｉの化合物を調製するのに有用であると考えられる、ある特定のヘテロ二官能性架橋剤について詳述する。

【0222】

【表6】

【0223】

特定のペプチドが、その天然配列内に、特定の架橋試薬に適さない残基を含有する化合物のためには、保存的な遺伝子変化または一次配列内の合成によるアミノ酸変化を活用することができる。

【0224】

イメージング剤
当技術分野では、それらの抗体への接合法と同様、多くの適切なイメージング剤が公知である（例えば、それらの各々の開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第５，０２１，２３６号明細書；同第４，９３８，９４８号明細書；および同第４，４７２，５０９号明細書を参照されたい）。放射性標識された、本明細書で提示される式Ｉの化合物は、当技術分野で周知の方法に従い調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、ナトリウムおよび／もしくはヨウ化カリウム、ならびに次亜塩素酸ナトリウムなどの化学的酸化剤、もしくはラクトペルオキシダーゼなどの酵素的酸化剤と接触させることにより、ヨウ素化させることができる。さらなる例では、本明細書で提示される式Ｉの化合物は、本明細書で提示される二官能性キレート剤（例えば、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＮＯＤＡＧＡ）またはこれらの類似の誘導体の放射性金属化により、^６８Ｇａで標識することができる。

【0225】

当技術分野では、放射性同位元素を、有機化合物へと組み込むための合成法が周知であり、当業者は、本明細書で提示される化合物に適用可能な他の方法をたやすく認識するであろう。

【0226】

当業者は、記載される工程が、本明細書で提示される化合物を合成しうる、排他的な手段ではなく、合成有機反応の広範なレパートリーが、本明細書で提示される化合物の合成において潜在的に援用するのに利用可能であることを察知するであろう。当業者には、適切な合成経路を、どのようにして選択し、実行するのかが公知である。出発材料、中間体、および生成物の、適切な合成方法は、Advances in Heterocyclic Chemistry, Vols. 1-107 (Elsevier, 1963-2012); Journal of Heterocyclic Chemistry Vols. 1-49 (Journal of Heterocyclic Chemistry, 1964-2012); Carreira, et al. (Ed.) Science of Synthesis, Vols. 1-48 (2001-2010) and Knowledge Updates KU2010/1-4; 2011/1-4; 2012/1-2 (Thieme, 2001-2012); Katritzky, et al. (Ed.) Comprehensive Organic Functional Group Transformations, (Pergamon Press, 1996); Katritzky et al. (Ed.); Comprehensive Organic Functional Group Transformations II (Elsevier, 2^ndEdition, 2004); Katritzky et al. (Ed.), Comprehensive Heterocyclic Chemistry (Pergamon Press, 1984); Katritzky et al., Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, (Pergamon Press, 1996); Smith et al., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 6^th Ed. (Wiley, 2007); Trost et al. (Ed.), Comprehensive Organic Synthesis (Pergamon Press, 1991)などの典拠を含む文献を参照することにより同定することができる。

【0227】

本明細書で記載される化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者がたやすく選択しうる、適切な溶媒中で実行することができる。適切な溶媒は、反応を実行する温度（例えば、溶媒の凝固点～溶媒の沸点の範囲でありうる温度）では、出発材料（反応物）、中間体、または生成物と、実質的に非反応性でありうる。所与の反応は、１つの溶媒中で実行することもでき、１つを超える溶媒の混合物中で実行することもできる。特定の反応ステップに応じて、当業者は、特定の反応ステップに適する溶媒を選択することができる。

【0228】

本明細書で記載される化合物の調製は、多様な化学基の保護および脱保護を伴いうる。当業者は、保護および脱保護の必要、ならびに適切な保護基の選択を、たやすく決定することができる。保護基の化学反応については、例えば、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999)において見出すことができる。

【0229】

反応は、当技術分野で公知の任意の適切な方法に従いモニタリングすることができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、^１Ｈまたは^１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ－可視光）、質量分析など、分光的手段によりモニタリングすることもでき、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）、または薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などのクロマトグラフィー法によりモニタリングすることもできる。当業者は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および順相シリカクロマトグラフィーを含む、様々な方法により、化合物を精製することができる。

【0230】

本明細書の多様な箇所で、二価の連結置換基について記載する。各二価連結置換基は、連結置換基の順方向形態および逆方向形態の両方を含むことが具体的に意図される。例えば、－ＮＲ（ＣＲ’Ｒ’’）_ｎ－は、－ＮＲ（ＣＲ’Ｒ’’）_ｎ－および－（ＣＲ’Ｒ’’）_ｎＮＲ－の両方を含む。構造が、連結基を、明確に要請する場合、この群について列挙されるマーカッシュ変項も、連結基であることが理解される。

【0231】

ｎを整数とする「ｎ員の」という用語は、典型的に、環形成原子の数がｎである部分内の環形成原子の数について記載する。例えば、ピペリジニルは、６員のヘテロシクロアルキル環の例であり、ピラゾリルは、５員のヘテロアリール環の例であり、ピリジルは、６員のヘテロアリール環の例であり、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレンは、１０員のシクロアルキル基の例である。

【0232】

本明細書で使用される「任意選択で置換された」という語句は、置換されていないか、または置換されていることを意味する。本明細書で使用される「置換された」という用語は、水素原子が除去され、置換基で置きかえられていることを意味する。所与の原子における置換は、価数により限定されることを理解されたい。

【0233】

定義を通して、「Ｃ_ｎ～ｍ」という用語は、端点を含み、ｎおよびｍが、整数であり、炭素の数を指し示す範囲を指し示す。例は、Ｃ_１～４、Ｃ_１～６などを含む。

【0234】

本明細書で使用される「Ｃ_ｎ～ｍアルキル」という用語は、単独で、または他の用語と組み合わせて用いられ、直鎖状の場合もあり、分枝状の場合もある、飽和炭化水素基であって、ｎ～ｍ個の炭素を有する飽和炭化水素基を指す。アルキル部分の例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル；２－メチル－１－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、１，２，２－トリメチルプロピルなどの高級相同体などの化学基を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、アルキル基は、１～６個の炭素原子、１～４個の炭素原子、１～３個の炭素原子、または１～２個の炭素原子を含有する。

【0235】

本明細書で使用される「Ｃ_ｎ～ｍアルコキシ」という用語は、単独で、または他の用語と組み合わせて用いられ、、式－Ｏ－アルキル［式中、アルキル基は、ｎ～ｍ個の炭素を有する］の基を指す。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ－プロポキシおよびイソプロポキシ）、ｔｅｒｔ－ブトキシなどを含む。一部の実施形態では、アルキル基は、１～６個、１～４個、または１～３個の炭素原子を有する。

【0236】

本明細書で使用される「アミノ」という用語は、式－ＮＨ_２の基を指す。

【0237】

本明細書で使用される「アリール」という用語は、単独で、または他の用語と組み合わせて用いられ、、単環式の場合もあり、多環式（例えば、２つ、３つ、または４つの融合環を有する）の場合もある、芳香族炭化水素基を指す。「Ｃ_ｎ～ｍ アリール」という用語は、ｎ～ｍ個の環炭素原子を有するアリール基を指す。アリール基は、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどを含む。一部の実施形態では、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１５個の炭素原子、または６～１０個の炭素原子を有する。一部の実施形態では、アリール基は、置換フェニルまたは非置換フェニルである。

【0238】

本明細書で使用される「シクロアルキル」とは、環化アルキル基および／または環化アルケニル基を含む、非芳香族環状炭化水素を指す。シクロアルキル基は、単環基または多環基（例えば、２つ、３つ、または４つの融合環を有する）およびスピロ環を含みうる。シクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の環形成炭素（Ｃ_３～１０）を有しうる。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、オキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）またはＣ（Ｓ））により任意選択で置換することができる。シクロアルキル基はまた、シクロアルキリデンも含む。シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル（norcarnyl）などを含む。一部の実施形態では、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、またはアダマンチルである。一部の実施形態では、シクロアルキルは、６～１０個の環形成炭素原子を有する。一部の実施形態では、シクロアルキルは、アダマンチルである。シクロアルキルの定義にはまた、１または複数の芳香族環を、シクロアルキル環へと融合させた（すなわち、これと結合を共有させた）部分、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサンのベンゾ誘導体またはチエニル誘導体なども含まれる。融合芳香族環を含有するシクロアルキル基は、融合芳香族環の環形成原子を含む、任意の環形成原子を介して接合させることができる。

【0239】

本明細書で使用される「ハロ」とは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを指す。一部の実施形態では、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒである。

【0240】

本明細書で使用される「Ｃ_ｎ～ｍハロアルキル」という用語は、単独で、または他の用語と組み合わせて用いられ、１個から、同じでも異なっていてもよい２ｓ＋１個までのハロゲン原子を有するアルキル基を指し、ここで「ｓ」は、アルキル基内の炭素原子の数であり、ｎ～ｍ個の炭素原子を有する。一部の実施形態では、ハロアルキル基だけがフッ素化されている。一部の実施形態では、アルキル基は、１～６個、１～４個、または１～３個の炭素原子を有する。

【0241】

本明細書で使用される「ヘテロアリール」とは、硫黄、酸素、および窒素から選択される、少なくとも１個のヘテロ原子環員を有する、単環式または多環式の芳香族複素環を指す。一部の実施形態では、ヘテロアリール環は、窒素、硫黄、および酸素から独立に選択される、１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する。一部の実施形態では、ヘテロアリール部分内の、任意の環形成Ｎは、Ｎ－酸化物でありうる。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、５～１０個の環原子、および窒素、硫黄、および酸素から独立に選択される、１、２、３または４個のヘテロ原子環員を有する。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、５～６個の環原子、および窒素、硫黄、および酸素から独立に選択される、１または２個のヘテロ原子環員を有する。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、５員または６員のヘテロアリール環である。５員のヘテロアリール環は、５つの環原子を有する環を伴うヘテロアリールであって、１個または複数個の（例えば、１、２、または３個の）環原子が独立に、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択されるヘテロアリールである。例示的な５員環のヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、１，２，３－トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－トリアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、および１，３，４－オキサジアゾリルである。６員のヘテロアリール環は、６つの環原子を有する環を伴うヘテロアリールであって、１個または複数個の（例えば、１、２、または３個の）環原子が独立に、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択されるヘテロアリールである。例示的な６員環のヘテロアリールは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル、およびピリダジニルである。

【0242】

本明細書で使用される「ヘテロシクロアルキル」とは、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される、１個または複数個の環形成ヘテロ原子を有する、単環式または多環式の非芳香族複素環を指す。ヘテロシクロアルキルには、４、５、６、および７員の、単環式ヘテロシクロアルキル基が含まれる。ヘテロシクロアルキル基はまた、スピロ環も含みうる。ヘテロシクロアルキル基の例は、ピロリジン－２－オン、１，３－イソキサゾリジン－２－オン、ピラニル、テトラヒドロプラン、オキセタニル、アゼチジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イソキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、アゼパニル、ベンズアゼピン（benzazapene）などを含む。ヘテロシクロアルキル基の、環形成炭素原子および環形成ヘテロ原子は、任意選択で、オキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、またはＳ（Ｏ）_２など）により置換することができる。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を介して接合させることができる。一部の実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～３つの二重結合を含有する。一部の実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～２つの二重結合を含有する。ヘテロシクロアルキルの定義にはまた、１または複数の芳香族環を、シクロアルキル環へと融合させた（すなわち、これと結合を共有させた）部分、例えば、ピペリジン、モルホリン、アゼピンの、ベンゾ誘導体またはチエニル誘導体なども含まれる。融合芳香族環を含有するヘテロシクロアルキル基は、融合芳香族環の環形成原子を含む、任意の環形成原子を介して接合させることができる。一部の実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、窒素、酸素、または硫黄から独立に選択される、１または２個のヘテロ原子を伴う、４～１０、４～７または４～６個の環原子を有し、１または複数の酸化環員を有する。

【0243】

本明細書で使用される「ヒドロキシ」という用語は、式－ＯＨの基を指す。

【0244】

ある特定の箇所では、定義または実施形態は、具体的な環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環など）を指す。そうでないことが指し示されない限りにおいて、これらの環は、原子の価数を超えないことを条件として、任意の環員へと接合させることができる。例えば、アゼチジン環を、環の任意の位置において接合させうるのに対し、ピリジン－３－イル環は、３位に接合させる。

【0245】

本明細書で使用される「化合物」という用語は、描示される構造の、全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことを意図する。本明細書で、名称または構造により、１つの特定の互変異性体形態として同定される化合物は、そうでないことが指定されない限りにおいて、他の互変異性体形態を含むことを意図する。

【0246】

本明細書で提示される化合物はまた、互変異性体形態も含む。互変異性体形態は、隣接する二重結合との単結合の交換とそれに付随するプロトンの移動から生じる。互変異性体形態は、同じ実験式と、総電荷とを有する異性体性のプロトン化状態である、プロトトロピック互変異性体を含む。プロトトロピック互変異性体の例は、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対、およびプロトンが、複素環系の２つまたはこれを超える位置を占める円環形態、例えば、１Ｈ－イミダゾールおよび３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、２Ｈ－１，２，４－トリアゾール、および４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－イソインドールおよび２Ｈ－イソインドール、ならびに１Ｈ－ピラゾールおよび２Ｈ－ピラゾールを含む。互変異性体形態は、平衡状態にある場合もあり、適切な置換により、１つの形態へと立体的に固定されている場合もある。

【0247】

具体的に規定されない限りにおいて、本明細書で提示される化合物はまた、中間体または最終化合物において生じる、全ての原子の同位体も含みうる。同位体は、同じ原子数を有するが、異なる質量数を有する原子を含む。そうでないことが言明されない限りにおいて、原子を、同位体または放射性同位元素（例えば、重水素、［^１１Ｃ］、［^１８Ｆ］）と称する場合、原子は、同位体または放射性同位元素を、同位体または放射性同位元素の、少なくとも天然の存在度を超える量で含むと理解される。例えば、原子を、「Ｄ」または「重水素」と称する場合、位置は、０．０１５％（すなわち、重水素の組込み量のうちの少なくとも４５％）である、重水素の天然存在度の、少なくとも３０００倍である存在度で、重水素を有すると理解される。

【0248】

全ての化合物およびその薬学的に許容される塩は、水および溶媒（例えば、水和物および溶媒和物）など、他の物質と併せて見出すこともでき、単離することもできる。

【0249】

一部の実施形態では、化合物の調製は、例えば、所望の反応、または酸添加塩など、塩形態の形成の触媒に影響を及ぼす、酸または塩基の添加を伴いうる。

【0250】

酸の例は、無機酸の場合もあり、有機酸の場合もあり、強酸および弱酸を含むがこれらに限定されない。酸の一部の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、４－ニトロ安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、および硝酸を含む。一部の弱酸は、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、安息香酸、酒石酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、およびデカン酸を含むがこれらに限定されない。

【0251】

塩基の例は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、および炭酸水素ナトリウムを含む。一部の強塩基は、水酸化物、アルコキシド、金属アミド、金属水素化物、金属ジアルキルアミド、およびアリールアミンを含むがこれらに限定されず、この場合、アルコキシドは、メチルオキシド、エチルオキシド、およびｔ－ブチルオキシドの、リチウム塩、ナトリウム塩、およびカリウム塩を含み；金属アミドは、ナトリウムアミド、カリウムアミド、およびリチウムアミドを含み；水素化金属は、水素化ナトリウム、水素化カリウム、および水素化リチウムを含み；金属ジアルキルアミドは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、トリメチルシリル、およびシクロヘキシルで置換されたアミドの、リチウム塩、ナトリウム塩、およびカリウム塩を含む。

【0252】

一部の実施形態では、本明細書で提示される化合物またはこの塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離された」とは、化合物が、それが、形成されるかまたは検出された環境から、少なくとも部分的に、または実質的に分離されていることを意味する。部分的分離は、例えば、本明細書で提示される化合物が濃縮された組成物を含みうる。実質的な分離は、重量で、本明細書で提示される化合物またはこの塩のうちの少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％を含有する組成物を含みうる。当技術分野では、化合物およびそれらの塩を単離するための方法は、規定の方法である。

【0253】

当技術分野では、本明細書で使用される「周囲温度」および「室温」または「ｒｔ」という表現が理解されており、一般に、温度、例えば、ほぼ、反応が実行される部屋の温度である、反応温度、例えば、約２０℃～約３０℃の温度を指す。

【0254】

本明細書では、「薬学的に許容される」という語句を、穏当な医学的判断の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適し、妥当な有益性／危険性比に見合う、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すように援用する。

【0255】

本出願はまた、本明細書で記載される化合物の、薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」とは、開示される化合物の誘導体であって、既存の酸部分または塩基部分を、その塩形態へと転換することにより、親化合物を改変した誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例は、アミンなど、塩基性残基の、無機酸塩または有機酸塩；カルボン酸など、酸性残基の、アルカリ塩または有機塩などを含むがこれらに限定されない。本出願の薬学的に許容される塩は、親化合物の従来の非毒性の塩であって、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される塩を含む。本出願の薬学的に許容される塩は、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から、従来の化学的方法により合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態または塩基形態を、水中または有機溶媒中、または２つの混合物中に化学量論量の、適切な塩基または酸と反応させることにより調製することができる。このような溶媒として好ましくは、一般に、エーテル、エチル酢酸、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、またはブタノール）、またはアセトニトリル（ＭｅＣＮ）などの非水性媒体である。適切な塩のリストは、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418およびJournal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)において見出される。塩形態を調製するための従来の方法は、例えば、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH, 2002において記載されている。

【0256】

使用法
本出願は、グランザイムＢをイメージングする方法をさらに提示する。一部の実施形態では、イメージング方法を、細胞、組織、細胞試料、組織試料、または対象において実施する。本明細書で使用される「対象」という用語は、哺乳動物および無脊椎動物を含む、任意の動物を指す。例えば、マウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、霊長動物、魚類、およびヒトである。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、マウスである。一部の実施形態では、対象は、魚類（例えば、ゼブラフィッシュ）である。一部の実施形態では、方法は、対象に、有効量の、本明細書で提示される化合物（例えば、式Ｉの化合物）、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法である。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ法である。

【0257】

本出願は、細胞中または組織中のグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）細胞または組織を、式Ｉ：

【0258】

【化23】

【0259】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）細胞または組織を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、細胞内または組織内のグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、
式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0260】

本出願は、細胞試料中または組織試料中のグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【0261】

【化24】

【0262】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）細胞試料または組織試料を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、細胞試料中または組織試料中のグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0263】

本出願は、対象におけるグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0264】

【化25】

【0265】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、対象におけるグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0266】

本出願は、細胞または組織の試料中の免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【0267】

【化26】

【0268】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）細胞または組織の試料を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、細胞または組織の試料中の免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0269】

本出願は、対象における免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0270】

【化27】

【0271】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、対象における免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0272】

本出願は、対象における疾患の処置をモニタリングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0273】

【化28】

【0274】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0275】

本出願は、対象における疾患の処置における免疫応答をモニタリングする方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0276】

【化29】

【0277】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法をさらに提示する。

【0278】

一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、式Ｉ－ａ：

【0279】

【化30】

【0280】

［式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【0281】

一部の実施形態では、式Ｉの基Ａ、Ｂ、およびＣを、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定する。一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、式Ｉ－ａ、Ｉ－ｂ、Ｉ－ｃ、Ｉ－ｄ、Ｉ－ｅ、Ｉ－ｆ、Ｉ－ｇ、Ｉ－ｈ、Ｉ－ｉ、Ｉ－ｊ、Ｉ－ｋ、Ｉ－ｌ、Ｉ－ｍ、Ｉ－ｎ、もしくはＩ－ｏの化合物、または薬学的に許容されるこれらの塩である。一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、式Ｉ－ｐもしくは式Ｉ－ｑの化合物、または薬学的に許容されるこれらの塩である。

【0282】

一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、イメージングの前に、化合物を、疾患と関連する細胞または組織部位（例えば、対象における細胞または組織部位）において、蓄積させるのに十分な待機時間をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、イメージングの前に、化合物を、疾患と関連する細胞または組織部位（例えば、対象における細胞または組織部位）において、グランザイムＢに結合させるのに十分な待機時間をさらに含む。一部の実施形態では、十分な時間は、約３０秒間～約２４時間、例えば、約３０秒間～約２４時間、約３０秒間～約１２時間、約３０秒間～約６時間、約３０秒間～約２時間、約３０秒間～約１時間、約３０秒間～約３０分間、約３０秒間～約１０分間、約１０分間～約２４時間、約１０分間～約１２時間、約１０分間～約６時間、約１０分間～約２時間、約１０分間～約１時間、約１０分間～約３０分間、約３０分間～約２４時間、約３０分間～約１２時間、約３０分間～約６時間、約３０分間～約２時間、約３０分間～約１時間、約１時間～約２４時間、約１時間～約１２時間、約１時間～約６時間、約１時間～約２時間、約２時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約２時間～約６時間、約６時間～約２４時間、約６時間～約１２時間、または約１２時間～約２４時間である。

【0283】

一部の実施形態では、適切なイメージング法は、非侵襲性イメージング法である。一部の実施形態では、適切なイメージング法は、最小限に侵襲性のイメージング法である。本明細書で使用される「最小限に侵襲性のイメージング法」という用語は、内部プローブの使用、またはシリンジを介する、化合物または放射性トレーサーの注射を援用するイメージング法を含む。イメージング法の例は、蛍光透視イメージング、ｘ線イメージング、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、超音波イメージング、光音響イメージング、サーモグラフィーイメージング、断層撮影イメージング、心エコーイメージング、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）イメージング、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）イメージングを伴うＰＥＴ、ＰＥＴ－ＭＲＩ、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、および超音波イメージングを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、適切なイメージング法は、ＰＥＴイメージング、ＰＥＴ－ＣＴ、ＰＥＴ－ＭＲＩ、およびＳＰＥＣＴからなる群から選択される。一部の実施形態では、適切なイメージング法は、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）イメージング、コンピュータ断層撮影イメージングを伴うポジトロン断層撮影、および磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）を伴うポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、適切なイメージング法は、えり抜きのポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）イメージングである。

【0284】

一部の実施形態では、本明細書で記載される疾患は、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される。

【0285】

一部の実施形態では、疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、充実性腫瘍を含む。一部の実施形態では、がんは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫など）である。一部の実施形態では、がんは、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膀胱がん、腎細胞癌、多発性骨髄腫、膵臓がん、および前立腺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、有毛細胞白血病、カポジ肉腫、濾胞性リンパ腫、慢性骨髄性白血病、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、古典的ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、原発性骨髄線維症、本態性血小板血症後骨髄線維症、真性多血症後骨髄線維症、黒色腫、腎細胞癌、前立腺がん、非小型細胞肺がん、小型細胞肺がん、神経膠芽腫、肝細胞癌、尿路上皮癌、食道癌、胃食道癌、胃がん、多発性骨髄腫、結腸がん、直腸がん、頭頸部扁平上皮癌、上皮性卵巣がん（ＥＯＣ）、原発性腹膜がん、卵管癌、ＨＥＲ２＋乳がん、ＥＲ＋／ＰＲ＋／ＨＥＲ２－乳がん、トリプルネガティブ乳がん、胃がん、膵臓がん、膀胱がん、メルケル細胞がん、鼻咽頭がん、副腎皮質癌、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、平滑筋肉腫、末梢性未分化神経外胚葉性腫瘍、子宮頸部の扁平上皮癌、膣の扁平上皮癌、および外陰部の扁平上皮癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、結腸がんである。

【0286】

一部の実施形態では、疾患は、移植片対宿主病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱、感染後糸球体腎炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂溶性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚性好酸球増加症、エリテマトーデス、座瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病と関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異形成、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト－小柳－原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性（ｃｈｒｏｎｉｃまたはｉｎｖｅｔｅｒａｔｅ）喘息、遅発性喘息および気道過敏、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、火傷と関連する腸病変、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン－バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発性神経炎、神経根障害、甲状腺機能亢進症、バセドウ病、赤芽球癆、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ、ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪過多、好酸球性筋膜炎、歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、男性型脱毛症、脱毛による老人性脱毛症、頭髪の発芽の欠如、ならびに／または頭髪の発生および頭髪の成長の減少による老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症、セザリー症候群、アジソン病、虚血症－再灌流による臓器の損傷、移植性疾患、虚血性疾患、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線により引き起こされる大腸炎、急性虚血性腎不全、慢性腎不全、酸素肺または薬物により引き起こされる中毒症、肺がん、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、加齢黄斑変性、ガラス体瘢痕化、角膜アルカリバーン、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、老化、発がん、癌腫の転移および高山病、ヒスタミンまたはロイコトリエンＣ４放出関連疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素により引き起こされる壊死、ウイルス性肝炎、ショック、無酸素症、Ｂ型ウイルス性肝炎、非Ａ型／非Ｂ型肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症型肝不全、遅発性肝不全、慢性肝炎の急性増悪、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、老人性認知症、外傷、慢性細菌感染、リンパ系由来の悪性腫瘍、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性リンパ腫、および慢性リンパ球性リンパ腫からなる群から選択される。

【0287】

一部の実施形態では、疾患は、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、喘息、強皮症、およびシェーグレン症候群からなる群から選択される。

【0288】

一部の実施形態では、疾患は、骨髄拒絶、臓器移植片拒絶、および移植片対宿主病からなる群から選択される。

【0289】

本明細書で使用される「治療有効量」という語句は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医により、組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて求められる生物学的応答または医学的応答を誘発する、活性化合物または医薬剤の量を指す。一部の実施形態では、対象または個体へと投与される、化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与量は、約１μｇ～約２ｇ、例えば、約１μｇ～約２ｇ、約１μｇ～約１０００ｍｇ、約１μｇ～約５００ｍｇ、約１μｇ～約１００ｍｇ、約１μｇ～約５０ｍｇ、約１μｇ～約１ｍｇ、約１μｇ～約５００μｇ、約１μｇ～約１００μｇ、約１μｇ～約１０μｇ、約１０μｇ～約２ｇ、例えば、約１０μｇ～約２ｇ、約１０μｇ～約１０００ｍｇ、約１０μｇ～約５００ｍｇ、約１０μｇ～約１００ｍｇ、約１０μｇ～約５０ｍｇ、約１０μｇ～約１ｍｇ、約１０μｇ～約５００μｇ、約１０μｇ～約１００μｇ、約１００μｇ～約２ｇ、例えば、約１００μｇ～約２ｇ、約１００μｇ～約１０００ｍｇ、約１００μｇ～約５００ｍｇ、約１００μｇ～約１００ｍｇ、約１００μｇ～約５０ｍｇ、約１００μｇ～約１ｍｇ、約１００μｇ～約５００μｇ、約５００μｇ～約２ｇ、例えば、約５００μｇ～約２ｇ、約５００μｇ～約１０００ｍｇ、約５００μｇ～約５００ｍｇ、約５００μｇ～約１００ｍｇ、約５００μｇ～約５０ｍｇ、約５００μｇ～約１ｍｇ、約１ｍｇ～約２ｇ、約１ｍｇ～約１０００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～５０ｍｇ、または約５０ｍｇ～約５００ｍｇである。

【0290】

本明細書で使用される「～を処置すること」または「処置」という用語は、（１）疾患を阻害すること；例えば、疾患、状態、または障害の病態または症状を経つつあるか、または提示しつつある個体における、疾患、状態、または障害を阻害すること（すなわち、病態および／または症状のさらなる発症を止めること）；および（２）疾患を緩和すること；例えば、疾患の重症度を減じること、または疾患の１もしくは複数の症状を、軽減もしくは緩和することなど、疾患、状態、または障害の病態または症状を経つつあるか、または提示しつつある個体における、疾患、状態、または障害（すなわち、病態および／または症状に拮抗すること）を緩和することのうちの１または複数を指す。

【0291】

組合せ療法
疾患を処置する方法において援用する場合、本明細書で提示される化合物は、本明細書で提示される、さらなる薬剤のうちの１または複数と組み合わせて投与することができる。治療剤の例は、抗炎症剤、ステロイド、免疫療法剤、化学療法剤、および治療用抗体を含むがこれらに限定されない。

【0292】

一部の実施形態では、治療剤の投与は、細胞もしくは組織の試料中、または対象において、免疫応答を誘導する。一部の実施形態では、治療剤は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。一部の実施形態では、治療剤は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、この場合、Ａは、放射性同位元素である。

【0293】

一部の実施形態では、治療剤は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、この場合、Ａは、放射性同位元素（例えば、治療用放射性同位元素）を含む。一部の実施形態では、治療剤は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容される塩であり、この場合、Ａは、毒性の放射性同位元素を含む。毒性の放射性同位元素の例は、アルファ放射体（例えば、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ）およびベータ放射体（例えば、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、および^１７７Ｌｕ）を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、毒性の放射性同位元素は、ベータ放射体である。一部の実施形態では、毒性の放射性同位元素は、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、および^１７７Ｌｕからなる群から選択されるベータ放射体である。一部の実施形態では、毒性の放射性同位元素は、アルファ放射体である。一部の実施形態では、毒性の放射性同位元素は、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈからなる群から選択されるアルファ放射体である。

【0294】

本出願は、対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）対象に、第１の、式Ｉ：

【0295】

【化31】

【0296】

［式中、Ａは、非毒性のイメージング剤（例えば、非毒性の放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）対象に、第２の、式Ｉ：

【0297】

【化32】

【0298】

［式中、Ａは、毒性の放射性同位元素を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
を含む方法をさらに提示する。

【0299】

本出願は、対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）対象に、第１の、式Ｉ：

【0300】

【化33】

【0301】

［式中、Ａは、非治療用イメージング剤（例えば、非治療用放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）対象に、第２の、式Ｉ：

【0302】

【化34】

【0303】

［式中、Ａは、治療用放射性同位元素を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
を含む方法をさらに提示する。

【0304】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^５２Ｆｅ、^５８Ｃｏ、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８９Ｚｒ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^２０１Ｔｌからなる群から選択される、非毒性の放射性同位元素を含む。

【0305】

一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、^２１１Ａｔ、^２１２Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、および^１７７Ｌｕからなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む。

【0306】

一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される対象の細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、グランザイムＢに結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。

【0307】

一部の実施形態では、対象は、ステップｉ）の投与の前に、処置される疾患を有すると、同定および／または診断されている。一部の実施形態では、対象を、ステップｉｉ）のイメージングの後で、処置される疾患を有すると、同定および／または診断する。例えば、処置される疾患は、本明細書で記載される、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される。

【0308】

一部の実施形態では、対象は、ステップｉ）の投与の前に、１または複数の免疫療法剤で処置されている。一部の実施形態では、疾患は、ステップｉ）の投与の前に投与される、１または複数の免疫療法剤に対して、耐性であることが決定されている。

【0309】

一部の実施形態では、方法は、
ｉｖ）第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の投与の後で、１または複数の免疫療法剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ステップｉ）～ｉｖ）を、複数回にわたり繰り返す。

【0310】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩と、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩とは、同じである。一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、対象に、対象に投与された、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の量と比較して、高濃度で投与する。一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、対象に、対象に投与された、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の量と比較して、低濃度で投与する。一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、対象に、対象に投与された、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の量と比較して、ほぼ同じ濃度で投与する。

【0311】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩と、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩とは、異なる。

【0312】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａと同じである。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｂは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｂと同じである。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｃは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｃと同じである。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＢおよびＣは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＢおよびＣと同じである。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＢは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＢと同じである。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＣは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＣと同じである。

【0313】

一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａと異なる。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｂは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｂと異なる。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｃは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ｃと異なる。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＢおよびＣは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＢおよびＣと異なる。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＢは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＢと異なる。一部の実施形態では、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＣは、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基ＡおよびＣと異なる。

【0314】

本出願は、疾患を有する対象が、治療剤（例えば、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩）による処置に対して、肯定的な応答を示す可能性を決定する方法であって、
ｉ）対象に、第１の式Ｉの化合物：

【0315】

【化35】

【0316】

またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップと
を含み、式中、Ａは、非治療用イメージング剤（例えば、非治療用放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される、方法をさらに提示する。

【0317】

本出願は、治療剤（例えば、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩）による処置の有効性を予測する方法であって、
ｉ）対象に、第１の式Ｉの化合物：

【0318】

【化36】

【0319】

またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップと
を含み、式中、Ａは、非治療用イメージング剤（例えば、非治療用放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される、方法をさらに提示する。

【0320】

一部の実施形態では、方法は、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される細胞または組織に結合することが決定される場合、
ｉｖ）対象に治療剤を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップをさらに含む。

【0321】

一部の実施形態では、方法は、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される細胞または組織に結合することが決定される場合、
ｉｖ）対象に、第２の式Ｉの化合物：

【0322】

【化37】

【0323】

［式中、Ａは、治療用放射性同位元素を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
またはその薬学的に許容される塩を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
をさらに含む。

【0324】

一部の実施形態では、処置される疾患は、本明細書で記載される、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患は、本明細書で記載されるがんである。

【0325】

一部の実施形態では、第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、対象に、治療有効量で投与する。

【0326】

一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、ステップｉ）の投与の前に、治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、ステップｉｉ）のイメージングの後で、治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、
ｉｉｉ）ステップｉｉ）のイメージングの後で、治療有効量の治療剤を投与するステップと；
ｉｖ）本明細書で提示される方法のステップｉ）およびｉｉ）を反復するステップと
をさらに含む。一部の実施形態では、治療剤は、本明細書で提示される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩以外の化合物である。

【0327】

一部の実施形態では、ステップｉ）～ｉｖ）を、複数回にわたり繰り返す。

【0328】

一部の実施形態では、本明細書で提示される化合物と、１または複数のさらなる治療剤とを、投与レジメンに従い、ある期間にわたり投与する。例示的な投与レジメンは、以下の組合せ：

【0329】

【表7】

を含むがこれらに限定されず、

【0330】

この場合、「Ａ」は、本明細書で提示される化合物（例えば、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩）の投与を表し、「Ｂ」は、さらなる治療剤（例えば、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、この場合、群Ａは、毒性の放射性同位元素および／もしくは治療用放射性同位元素、または式Ｉの化合物以外の、本明細書で提示される治療剤、もしくはその薬学的に許容される塩を含む）の投与を表す。一部の実施形態では、細胞、細胞試料、組織、組織試料、または対象を、本明細書で提示される化合物の投与の後で、適切なイメージング法によりイメージングする。一部の実施形態では、細胞、細胞試料、組織、組織試料、または対象を、さらなる治療剤の投与の後で、適切なイメージング法によりイメージングする。

【0331】

一部の実施形態では、本出願は、対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0332】

【化38】

【0333】

［式中、Ａは、非毒性のイメージング剤（例えば、非毒性の放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）対象に治療剤を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
を含む方法を提示する。

【0334】

一部の実施形態では、本出願は、対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）対象に、式Ｉ：

【0335】

【化39】

【0336】

［式中、Ａは、非治療用イメージング剤（例えば、非治療用放射性同位元素）を含み、ＢおよびＣは、式Ｉの化合物について、本明細書で提示される規定に従い規定される］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）対象に治療剤を投与し、これにより、対象における疾患を処置するステップと
を含む方法を提示する。

【0337】

一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される対象の細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ステップｉｉｉ）の投与の前に、第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、グランザイムＢに結合するかどうかを決定するステップをさらに含む。

【0338】

一部の実施形態では、対象は、ステップｉ）の投与の前に、処置される疾患を有すると、同定および／または診断されている。一部の実施形態では、対象を、ステップｉｉ）のイメージングの後で、処置される疾患を有すると、同定および／または診断する。

【0339】

一部の実施形態では、対象は、ステップｉ）の投与の前に、１または複数の免疫療法剤で処置されている。一部の実施形態では、疾患は、ステップｉ）の投与の前に投与される、１または複数の免疫療法剤に対して、耐性であることが決定されている。

【0340】

一部の実施形態では、方法は、
ｉｖ）ステップｉｉｉ）の治療剤の投与の後で、１または複数の免疫療法剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ステップｉ）～ｉｖ）を、複数回にわたり繰り返す。

【0341】

一部の実施形態では、さらなる治療剤を、対象に、治療有効量で投与する。

【0342】

一部の実施形態では、治療剤は、抗体である。組合せ療法における使用のための抗体の例は、トラスツズマブ（例えば、抗ＨＥＲ２）、ラニビズマブ（例えば、抗ＶＥＧＦ－Ａ）、ベバシズマブ（例えば、抗ＶＥＧＦ）、パニツムマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、リツキサン（抗ＣＤ２０）、ｃ－ＭＥＴを指向する抗体、およびグランザイムＢの抗体阻害剤（例えば、クローンＧＢ１１、クローンＧｒＢ－７、およびＮＣＬ－Ｌ－Ｇｒａｎ－Ｂ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１）、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－１）、エロツズマブ（抗ＳＬＡＭ７）、およびダラツムマブ（抗ＣＤ３８）を含むがこれらに限定されない。

【0343】

一部の実施形態では、治療剤は、ステロイドである。ステロイドの例は、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびプレドニゾンなどのコルチコステロイドを含む。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、コルチコステロイドである。

【0344】

一部の実施形態では、治療剤は、抗炎症化合物である。抗炎症化合物の例は、アスピリン、サリチル酸コリン、セレコキシブ、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、ミソプロストールを伴うジクロフェナクナトリウム、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸ナトリウム、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サルサラート、サリチル酸ナトリウム、スリンダク、トルメチンナトリウム、およびバルデコシキブを含む。

【0345】

一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤である。化学療法剤の例は、細胞増殖抑制剤、シスプラチン、ドキソルビシン、タキソール、エトポシド、イリノテカン、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、タモキシフェン、５－フルオロウラシル、メトトレキサート、テモゾロミド、シクロホスファミド、ＳＣＨ ６６３３６、Ｒ１１５７７７、Ｌ７７８，１２３、ＢＭＳ ２１４６６２、ゲフィチニブ、エルロチニブ塩酸塩、ＥＧＦＲに対する抗体、イマチニブメシル酸塩、イントロン、ａｒａ－Ｃ、ゲムシタビン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、メルファラン、クロランブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミド、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、リン酸フルダラビン、オキサリプラチン、フォリン酸、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ－アスパラギナーゼ、テニポシド、１７α－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミソール、ビノレルビン、アナストラゾール、レトロゾール、カペシタビン、レロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、ベバシズマブ、ベキサール、ベルケイド、ゼバリン、トリセノックス、ゼローダ、ビノレルビン、ポルフィマー、エルビタックス、リポソーム剤、チオテパ、アルトレタミン、メルファラン、トラスツズマブ、フルベストラント、エキセメスタン、イホスファミド、リツキシマブ、Ｃ２２５、アレムツズマブ、クロファラビン、クラドリビン、アフィジコリン、スニチニブ、ダサチニブ、テザシタビン、Ｓｍｌ１、トリアピン、ジドックス、トリミドックス、アミドックス、３－ＡＰ、ＭＤＬ－１０１，７３１、ベンダムスチン、オファツムマブ、およびＧＳ－１１０１（また、ＣＡＬ－１０１としても公知である）を含むがこれらに限定されない。

【0346】

一部の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤（例えば、ブスルファン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド（シトキサン）、ダカルバジン、イホスファミド、メクロレタミン（ムスタルゲン）、およびメルファラン）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、およびストレプトゾシン）、トリアジン（例えば、ダカルバジン）、代謝拮抗剤（例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シタラビン（Ａｒａ－Ｃ）、フルダラビン、ゲムシタビン、およびメトトレキサート）、プリン類似体（例えば、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、およびペントスタチン（２－デオキシコホルマイシン））、有糸分裂阻害剤（例えば、ドセタキセル、エトポシド（ＶＰ１６）、テニポシド、パクリタキセル、タキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）、抗腫瘍性抗生剤（例えば、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、マイトマイシン、プリカマイシン、およびイダルビシン）、白金化学療法剤（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、毒素（例えば、リシンＡ鎖（Burbage, Leukemia research, 21.7 (1997): 681-690）、ジフテリア毒素Ａ（Massuda et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 94.26 (1997): 14701-14706; Lidor, American journal of obstetrics and gynecology, 177.3 (1997): 579-585）、百日咳毒素Ａサブユニット、大腸菌（E. coli）エンテロトキシン毒素Ａサブユニット、コレラ毒素Ａサブユニット、およびシュードモナス（Pseudomonas）属毒素のＣ末端、および遺伝子治療ベクター（例えば、シグナル伝達タンパク質（例えば、Ｓｒｃ、Ａｂｌ、およびＲａｓ）、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、およびＭｙｃ）からなる群から選択される。

【0347】

一部の実施形態では、治療剤は、免疫療法剤である。免疫療法剤は一般に、細胞（例えば、がん細胞）をターゲティングし、破壊するように、免疫エフェクター細胞および分子を誘発する。免疫エフェクターは、例えば、細胞（例えば、腫瘍細胞）の表面上のマーカーに特異的な抗体でありうる。抗体が単独で、治療のエフェクターとして用いられる場合もあり、細胞の殺滅を実行するように、他の細胞を動員する場合もある。多様なエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞を含むがこれらに限定されない。

【0348】

免疫療法剤の例は、アザチオプリン、クロランブシル、シクロホスファミド、シクロスポリン、ダクリズマブ、インフリキシマブ、メトトレキサート、タクロリムス、免疫刺激剤（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、腫瘍壊死因子；インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、およびインターフェロンガンマ；Ｆ４２Ｋ、ならびに他のサイトカイン類似体；ＭＩＰ－１、ＭＩＰ－１β、ＭＣＰ－１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ－８などのケモカイン；またはＦＬＴ３リガンドなどの増殖因子）、抗原性ペプチド、抗原性ポリペプチド、もしくは抗原性タンパク質、または自家もしくは同種の腫瘍細胞組成物（例えば、Ravindranath & Morton, International reviews of immunology, 7.4 (1991): 303-329を参照されたい）、ホルモン療法、アデノコルチコステロイド、プロゲスチン（例えば、ヒドロキシプロゲステロンカプロン酸エステル、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、および酢酸メゲストロール）、エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール）、抗エストロゲン（例えば、テストステロンプロピオン酸エステルおよびフルオキシメステロン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド）、およびゴナドトロピン放出ホルモン類似体（例えば、ロイプロリド）を含むがこれらに限定されない。当技術分野では、さらなる免疫療法剤が公知であり、例えば、Rosenberg et al, New England Journal of Medicine, 319.25 (1988): 1676-1680;およびRosenberg et al, Annals of surgery, 210.4 (1989): 474において見出すことができる。

【0349】

本明細書で提示される治療剤は、広範な投与量範囲にわたり有効である可能性があり、一般に、有効量で投与される。しかし、実際に投与される治療剤の量は、通例、イメージングされる状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、年齢、体重、および個体対象の応答、対象の症状の重症度などを含む、関与性の状況に従い、医師により決定されることが理解されるであろう。

【0350】

医薬組成物
医薬として援用する場合、本明細書で提示される化合物および治療剤は、医薬組成物の形態で投与することができる。これらの組成物は、本明細書または別の場所で記載される通りに調製することができ、局所処置が所望されるのか、全身処置が所望されるのか、および処置される領域に応じて、様々な経路を介して投与することができる。投与は、局所投与（経皮送達、表皮送達、眼内送達、ならびに鼻腔内送達、膣内送達、および直腸内送達を含む粘膜への送達を含む）、肺内投与（例えば、噴霧器を含む、粉末またはエアゾールの吸入または吹送による投与；気管内投与または鼻腔内投与）、経口投与、または非経口投与でありうる。非経口投与は、静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、筋内投与、または注射もしくは注入；または頭蓋内投与（例えば、髄腔内投与または脳室内投与）を含む。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態の場合もあり、例えば、連続灌流ポンプによる場合もある。一部の実施形態では、本明細書で提示される化合物（例えば、式Ｉの化合物）は、非経口投与に適する。一部の実施形態では、本明細書で提示される化合物（例えば、式Ｉの化合物）は、静脈内投与に適する。局所投与のための医薬組成物および製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体、および粉末を含みうる。従来の医薬の担体、水性、粉末、または油性基剤、増粘剤などは、必要または所望でありうる。一部の実施形態では、本明細書では、非経口投与に適する医薬組成物が提示される。一部の実施形態では、本明細書では、静脈内投与に適する組成物が提示される。

【0351】

また、有効成分としての、本明細書で提示される化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１または複数の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて含有する、医薬組成物も提示される。本明細書で提示される組成物を作製する場合、有効成分を、賦形剤と混合するか、賦形剤により希釈するか、または、例えば、カプセル、小袋、紙、または他の容器の形態で、このような担体中に封入することが典型的である。賦形剤は、希釈剤として用いられる場合、有効成分のための媒体、担体、または媒質として作用する、固体材料の場合もあり、半固体材料の場合もあり、液体材料の場合もある。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、トローチ、小袋、カシェ、エリキシル、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアゾール（固体媒質中または液体媒質中）、軟膏、ソフトゼラチンカプセルおよびハードゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射用溶液、および滅菌粉末パッケージの形態でありうる。

【0352】

適切な賦形剤の一部の例は、限定せずに述べると、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースを含む。製剤は、限定せずに述べると、加えて、滑石、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油などの滑沢剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルなどの保存剤；甘味剤；芳香剤、またはこれらの組合せを含む。

【0353】

キット
本出願は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含むキットをさらに提示する。一部の実施形態では、キットは、本明細書で提示される、１または複数のさらなる治療剤をさらに含む。

【0354】

一部の実施形態では、キットは、本明細書で提示される化合物の、１または複数の成分（例えば、１または複数のイメージング剤、１または複数のキレート剤、１または複数の連結基、およびグランザイムＢに結合する１または複数のペプチドまたは有機低分子）を含む。一部の実施形態では、キットの各構成要素を、キット内の個別の容器（例えば、個別のバイアル）内に保存する。一部の実施形態では、キットの構成要素を、水性媒質中にパッケージングすることもでき、凍結乾燥形態でパッケージングすることもできる。

【0355】

一部の実施形態では、キットは、例えば、添付文書またはラベルとしての指示書であって、投与される組成物の数量、投与のためのガイドライン、および／またはキットの構成要素を混合して、式Ｉの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩を調製するためのガイドラインを指し示す指示書をさらに含む。一部の実施形態では、指示書は、本明細書で提示される方法のうちの１または複数を実施するための指示書をさらに含む。

【0356】

本明細書で提示されるキットは、所望の場合、当業者にたやすく明らかである通り、例えば、１または複数の薬学的に許容される担体を伴う容器、さらなる容器など、１または複数の、従来の医薬キットの構成要素をさらに含みうる。

【実施例】

【0357】

本発明について、具体例により、より詳細に記載する。以下の例は、例示的な目的で提示するものであり、いかなる形であれ、本発明を限定することを意図するものではない。当業者は、変化させるか、または改変しても、本質的に同じ結果をもたらしうる、様々な、それほど重要でないパラメータを、たやすく認識するであろう。

【0358】

細胞系および試薬
ＣＴ－２６細胞を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から取り寄せ、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）培地中で培養した。ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ突然変異体黒色腫細胞は、既に記載されている、Ｔｙｒ：ＣｒｅＥＲ；ＢｒａｆＣＡ；Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウス（例えば、Dankort et al, Nature Genetics, 41.5, (2009):544-552を参照されたい）から発生させたものであり、Ｄａｖｉｄ Ｆｉｓｈｅｒ博士から恵与され、１０％ＦＢＳを伴うＤＭＥＭ中で培養された。抗マウスＰＤ１（クローンＲＭＰ１－１４）および抗マウスＣＴＬＡ４（クローン９Ｄ９）を、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）から得た。ダブラフェニブは、ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）から購入した。ウェスタンブロット解析のために、抗ＣＤ８（Ａｂ１０８２９２、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）、抗ＣＤ３（ｓｃ－２００４７、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄａｌｌａｓ、ＴＸ）、抗ＣＤ４（ｓｃ－１９６４３、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、抗ＦｏｘＰ３（１２６５３ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）、抗ｐＳＴＡＴ（７００３４９、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、抗グランザイムＢ（４２７５ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、およびベータ－アクチン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、４９７０Ｓ）１：１０００を購入した。

【0359】

グランザイムＢは、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から購入し、製造元のプロトコールに従い、カテプシンＢ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して活性化させた。酵素活性は、ＢＯＣ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｐ－ＳＢＺＬ（ＳＢＺＬ＝チオベンジルエステル）（Ｓｉｇｍａ）の切断、および４０５ｎｍにおける吸光度の測定（ＮａｎｏＤｒｏｐ ２０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を伴う、５，５’－ジチオ－ビス（２－ニトロ安息香酸）（Ｓｉｇｍａ）との反応により評価した。基質を添加する前における、３７℃で３０分間にわたるインキュベーションにより、グランザイムＢを阻害するのに、非放射性ガリウムで標識されたＮＯＴＡ－ＧＺＰの系列希釈液を使用した。加えて、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＺＰ（実施例１）を、グランザイムＢ、グランザイムＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、グランザイムＨ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、グランザイムＫ（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）の活性化形態、およびプログランザイムＢと共にインキュベートして、ペプチドの特異性を評価した。３７℃で、３０分間にわたるインキュベーションの後、サイズ除外クロマトグラフィーにより、酵素を精製し、結合放射能を、ガンマカウンター（Ｗｉｚａｒｄ ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）により評価した。

【0360】

マウスの処置プロトコール
マウスは、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認されている動物プロトコールに従い、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｔ Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌにより飼育され、維持された。ＣＴ－２６細胞１×１０^６個を、Ｍａｔｒｉｇｅｌで、１：１に希釈し、雌ＢＡＬＢ／Ｃマウスの右肩に注射した。

【0361】

イメージング研究のために、マウスを、ＣＴ－２６腫瘍の接種後３、６、および９日目において、媒体、２００μｇの抗ＰＤ－１マウス治療用抗体（抗ＰＤ１）、または２００μｇの抗ＰＤ１および１００μｇの抗ＣＴＬＡ－４マウス治療用抗体（抗ＣＴＬＡ－４）の両方の腹腔内注射により処置した。ＢＰ細胞１×１０^６個を、Ｍａｔｒｉｇｅｌで、１：１に希釈し、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右肩に注射した。腫瘍が、３～５ｍｍの直径に達したら、マウスを、媒体または０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）および０．２％のＴｗｅｅｎを伴う水性懸濁液中で調製されたダブラフェニブの、毎日の経口強制投与により処置した。ＢＲＡＦ阻害を開始した１日後、マウスを、指定された２００μｇの抗ＰＤ１による腹腔内注射へと、さらに無作為化した。ウェスタンブロットおよび免疫組織化学だけ、または相関解析のための、その後におけるイメージングのために、マウスを、指定日に屠殺した。

【0362】

相関増殖曲線解析を伴うイメージング研究のために、上記の通りに、ＣＴ－２６を注射されたＢＡＬＢ／Ｃマウスを、接種後、３日ごとに、３０日目まで、２００μｇの抗ＰＤ１および１００μｇの抗ＣＴＬＡ－４または抗ＰＤ１単独で処置した。マウスを、１４日目にイメージングし、腫瘍サイズを、毎週３回測定した。

【0363】

実施例９～１２に記載されるイメージング研究のために、抗マウスＰＤ－１（クローンＲＰＭ１－１４）療法、抗マウスＣＴＬＡ－４（クローン９Ｈ１０）療法、および抗マウスＴＩＭ－３（クローンＲＰＭ３－２３）療法を、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）から得た。

【0364】

腫瘍についての生化学的解析
実施例９～１２に記載される研究のために、腫瘍接種後１２日目に、ｅｘ ｖｉｖｏ解析のために、腫瘍を、屠殺されたマウスから切り出し、ウェスタンブロット法による解析の前に、１％のＳＤＳ溶液中で溶解させた。抗グランザイムＢ抗体（４２７５Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）、抗ＣＴＬＡ－４抗体（ａｂ１３４０９０、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）、抗ＰＤ－１抗体（１２Ａ７Ｄ７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、抗ＴＩＭ－３抗体（ａｂ１８５７０３、Ａｂｃａｍ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）、および抗β－アクチン抗体（４９７０Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）を使用し、その後、製造元の推奨に従い、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗ウサギポリクローナル抗体（ａｂ６７２１、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）により検出した。ＳｉｇｎａｌＦｉｒｅ（商標）ＥＣＬ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）を使用して、バンドを検出し、１分間にわたる曝露により、Ｋｏｄａｋ Ｉｎ－Ｖｉｖｏ Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｔｒａｌ イメージング Ｓｙｓｔｅｍ上で、Ｃａｒｅｓｔｒｅａｍ ＭＩソフトウェア（Ｃａｒｅｓｔｒｅｓａｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｂｒｉｄｇｅ ＣＴ）を使用して、イメージングした。各試料についての、目的の標的の、β－アクチンの光学強度に対する、正味の相対光学強度比により、画像を、定量的に解析した。

【0365】

ＰＥＴイメージング
マウスを、ＧＥ Ｔｒｉｕｍｐｈ ＰＥＴ／ＣＴ上でイメージングした。ＣＴ収集後、ＰＥＴ画像を、１５分間にわたり、２つの仰臥位において得た。３Ｄ－ＯＳＥＭ（反復４回、１６サブセット）を使用して、画像を構築し、散乱同時計数および偶発同時計数について補正した。各腫瘍について、平均値標準取込み値（ＳＵＶｍｅａｎ）を、目的の３Ｄ領域内で計算し、３０％閾値の等値曲線を使用して、腫瘍周囲で自動描図した。目的の領域はまた、左室、肝臓、肺、筋肉、および腎臓についても計算した。ＶｉｖｏＱｕａｎｔ（ＩｎｖｉＣＲＯ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、画像を後加工した。

【0366】

実施例９～１２に記載されるイメージング研究のために、接種後１２日目に、マウスに、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを静脈内注射し、その後、１時間後にイメージングした。イメージングは、齧歯動物用Ｔｒｉｕｍｐｈ ＰＥＴ／ＣＴ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を使用して実施した。ＰＥＴ画像を、１５分間にわたり収集するのに続き、ＣＴを収集した。３Ｄ－ＭＬＥＭを使用して（反復４回、２０サブセット）、再構成を達成し、散乱同時計数および偶発同時計数について補正した。画像の加工および解析には、ＶｉｖｏＱｕａｎｔソフトウェア（ＩｎｖｉＣＲＯ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を使用した。ＣＴ－解剖学相関を使用して、目的の３Ｄ領域を描図することにより、個別の腫瘍を、手作業で同定した。左心室を、目的の領域として同定することにより、バックグラウンドの血液プール放射能を測定した。^６８Ｇ ａＮＯＴＡ－ＧＰの比取込みは、腫瘍による全取込みを、バックグラウンドの血液プールで除して、腫瘍対血液比（ＴＢＲ）を導出することにより定量化した。

【0367】

生体内分布研究
尾静脈を介して、約１ｍＣｉの^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを注射した（実施例１を参照されたい）後、マウスを、１時間または２時間の時点において屠殺した。マウスの尿、血液、腫瘍、および重要臓器をサンプリングし、ガンマカウンター上で、放射能を評価した。

【0368】

統計学的解析
Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ４ソフトウェアを使用して、統計学的解析を実施した。競合的結合解析には、ＰＡ非線形回帰を使用した。ピアソン相関検定を実施して、ウェスタンブロットにより決定された、全腫瘍グランザイムＢ発現を、腫瘍対血液比（ＴＢＲ）と相関させた。処置腫瘍についてのＴＢＲと、非処置腫瘍についてのＴＢＲとを、対応のあるｔ検定により比較した。

【0369】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して 、実施例９～１２で記載される統計学的解析およびグラフ化を実施した。免疫療法で処置された腫瘍と、媒体で処置された腫瘍との全ての比較には、ウェルチの補正を伴う、対応のないｔ検定を使用した。群サイズで重み付けされた一次回帰を使用して、各処置アームについて、応答パーセントを、平均腫瘍対血液比であるＴＢＲと相関させた。ピアソンの相関係数に基づく統計学的推定を使用して、最良の当てはめ直線の、９５％の信頼区間を規定した。

【0370】

［実施例１］
グランザイムＢイメージング剤（^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰ）の合成

【0371】

【化40】

【0372】

標準的なＦＭＯＣ化学反応を使用して、ＮＯＴＡ－β－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ－ＣＨＯ（すなわち、ＮＯＴＡ－ＧＰ；ＮＯＴＡ－ＧＺＰ）を合成した。ＨＰＬＣおよび質量分析により、化学的純度を解析した。計算値ｍ／ｚ：１１７６．９４９。さらに、ペプチドについてのＨＰＬＣ解析は、９０％を超える純度を例示したが、これは、全ての実験について十分であった。

【0373】

^６８Ｇａは、^６８Ｇｅ／^６８Ｇａジェネレーター（ｉＴｈｅｍｂａ Ｌａｂｓ、Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ）から、０．６ＮのＨＣｌで溶出させて得た。溶離液を、約１００μｇのＮＯＴＡ－ＧＰを伴う、ｐＨ３．５～４．０の２Ｍ ＨＥＰＥＳによる緩衝液系へと添加した。標識化反応は、室温で、１０分間にわたり進めた。反応生成物を、逆相Ｃ１８ Ｓｅｐ－Ｐａｋ ｍｉｎｉカートリッジ上にロードし、７０％のエタノール２００μＬにより溶出させた。最終的な処方は、生理食塩液中に１０％のエタノールへと調整した。^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰ（すなわち、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＺＰ）の化学的純度および放射化学的純度は、放射薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を介して測定した。放射性標識化は、６７±１１％の収率、＞９５％の放射化学的純度、および５１９０±１１００ＭＢｑ／ｍｇの平均比活性をもたらした。

【0374】

［実施例１Ａ］
ビオチニル化ヒトグランザイムＢペプチドの合成
ビオチン－β－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ａｓｐ－ＣＨＯ（ｈＧＺＰ；配列番号２５）を、上記の実施例１で記載した手順に従い合成した。計算値ｍ／ｚ：９０７．０１０。

【0375】

［実施例２］
免疫療法に応答する、グランザイムＢの示差的発現
グランザイムＢの発現の差違を、免疫療法による処置の経過にわたり定量化するために、ＣＴ２６結腸がん保有マウス（ＢＡＬＢ／Ｃ）を、腫瘍の接種後３、６、および９日目に、２００ｎｇの抗ＰＤ－１抗体および１００ｎｇの抗ＣＴＬＡ－４抗体で処置した。１０日目に、マウスサブセットの（４匹の処置マウスおよび４匹の非処置マウス）を屠殺し、それらの腫瘍を切り出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥのために調製した。腫瘍についてのウェスタンブロット解析を実施した。グランザイムＢの発現を定量化し、ローディング対照としてのベータ－アクチンの発現に照らして標準化した。結果は、グランザイムＢが、処置マウスおよび非処置マウスのいずれにおいても、低レベルで発現し、２つの群間では、統計学的差違が見られないことを裏付けた。接種後１４日目に、マウスを屠殺し、１０日目のマウスと同じ方式で、ウェスタンブロットにより解析した。１４日目の処置マウスは、グランザイムＢの、１００倍の高発現を示し、図１に示される通り、処置マウスと、非処置マウスとの間では、有意（４倍）差が見られた。

【0376】

１４日目における、腫瘍への免疫細胞の浸潤および活性化についての初期解析は、二重薬剤免疫療法レジメン（抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４）、または対照としての媒体だけにより処置された、ＣＴ２６腫瘍内のウェスタンブロット法により、実施した。図２Ａに示される通り、処置マウスと、非処置マウスとの間では、ＣＤ８の発現レベルも、ＣＤ３の発現レベルも、有意には異ならなかった。ＣＤ４発現は、処置マウスでは、低レベルで存在し、非処置マウスでは、検出不能であった。グランザイムＢを含む、機構的マーカーへのさらなる探索は、処置マウスと、非処置マウスとにおける、グランザイムＢ（すなわち、ＧＺＢ）の発現の相違を明らかにした。β－アクチンの発現に照らして標準化された、ウェスタンブロットデータの定量化は、図２Ｂに示される通り、処置腫瘍において、非処置腫瘍（４．７±１．６）と比較して、有意に高レベルのＧＺＢ（ＧＺＢ：β－アクチン＝２０．４±４．１）を明らかにした。比較すると、ＣＤ８：β－アクチンは、処置マウスでは、２１．５±５．０であり、非処置マウスでは、１４．３±３．０であった。ＧＺＢの発現レベルおよびＣＤ８の発現レベルのいずれも、１０日目および１２日目と比較して上昇した。処置腫瘍の間では、ＧＺＢ発現のダイナミックレンジが見られ、処置腫瘍４例中１例は、非処置マウスと同様のレベルで、低度のＧＺＢ発現を裏付けた。理論に束縛されずに述べると、ＧＺＢ発現の不均質性は、分泌されるプロテアーゼのレベルが、免疫応答についてのバイオマーカーとして用いられうることを示唆する。ＧＺＢの一過性発現についてさらに検討するために、処置マウスおよび非処置マウスを、接種後１０および１２日目に屠殺し、上記で記載した方式で、ウェスタンブロット法にかけ、図３Ａ～３Ｂに示す。

【0377】

［実施例３］
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの、精製グランザイムＢへの結合
グランザイムＢを、プレートへと吸着させ、プレートを、脱脂粉乳でブロッキングした。^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを、１時間にわたり結合させ、ウェルを洗浄し、結合した^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを、２ＮのＮａＯＨを伴うインキュベーションにより回収し、ガンマカウンターによりカウントした。図４に示される通り、ペプチドは、グランザイムＢへの、対照タンパク質（ＢＳＡ）に対するより、有意に（Ｐ＜０．０５）高度な結合を呈示した。図４におけるバーは、６連の平均値±ＳＤを表す。図５に示される通り、ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性研究は、ＮＯＴＡ－ＧＰが、グランザイムＢ活性を、４７±５４ｎＭのＫｉで阻害することを示す。

【0378】

［実施例４］
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの、細胞への結合
ＣＴ２６細胞を、９６ウェルプレート内に播種し、７０％のコンフルエンシーまで増殖させた。^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを、１％のＢＳＡ＋ＲＰＭＩ緩衝液中に、１００μＣｉ／ｍＬへと希釈し、ウェルへと添加する前に、グランザイムＢ（６０ｎＭ）または媒体と共にプレインキュベートした。ペプチドを、洗浄および２ＭのＮａＯＨによる溶出の前に、細胞と共に、３０分間にわたりインキュベートした。ウェルを、ガンマカウンターによりカウントし、図６に示される通り、６つのウェルの平均値を、±ＳＤでプロットしたところ、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰが、グランザイムＢに結合し、がん細胞により特異的に取り込まれることが裏付けられる。

【0379】

［実施例５］
ｅｘ ｖｉｖｏにおける腫瘍特異性
^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰが、精製グランザイムＢに結合し、標的細胞内に、特異的に蓄積されたことを確認した後で、実施例２からウェスタンブロットデータを生成する（図１を参照されたい）のに使用された同じモデルを使用して、ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍への蓄積を、ＣＴ２６腫瘍保有マウスにおいて探索した。接種後１４日目に、マウスに、３７０ＭＢｑの^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを注射し、注射の１時間後に、マウスを屠殺した。腫瘍および血液を、組合せ療法（抗ＰＤ－１および抗ＣＴＬＡ－４）で処置された７匹のマウスから回収した。腫瘍を、サイズに基づき、レスポンダー（重量＜０．８ｍｇ）または非レスポンダー（重量≧０．８ｍｇ）として群分けした。ガンマカウンターを使用して、腫瘍中および血液中の両方における放射性^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの量を定量化し、重量に基づき調整し、腫瘍１グラム当たりの注射用量の、血液に対する比（ＴＢＲ）を、各群内の腫瘍についてプロットした。図７に示される通り、レスポンダーである各マウスは、非レスポンダー（範囲：－０．９５～２．４８）より、高度な取込み（範囲：６．０６～１３．７４）を示したが、これは、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰが、免疫療法に対して応答する腫瘍に対して特異的であることを指し示した。

【0380】

イメージングの後、マウスを屠殺し、腫瘍によるＧＺＢ発現を、ウェスタンブロットにより定量化した。ＴＢＲの、ＧＺＢ発現との比較は、取込みと、ＧＺＢ発現との有意な相関（Ｐ＜０．００１）を明らかにしたが、これは、腫瘍による、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの取込みが、ＧＺＢの発現に依存することを指し示す。注射の１時間後および２時間後における、さらなるｅｘ ｖｉｖｏ生体内分布研究は、腫瘍による示差的取込みと、急速な腎クリアランスとを確認した。図７Ｂに示される通り、処置腫瘍による取込みは、非処置対照腫瘍における、腫瘍１ｇ当たり０．７０および０．５５注射用量％と比較して、１時間における腫瘍１ｇ当たり１．１５注射用量％、および２時間における腫瘍１ｇ当たり１．０２注射用量％と測定された。

【0381】

［実施例６］
グランザイムＢ発現についての、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴイメージング
非侵襲的イメージング法において、グランザイムＢの発現を検出する^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの能力を評価するために、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを、実施例５と同じ方式で注射した。注射の１時間後、マウスを、ＰＥＴイメージングにかけた。ＰＥＴイメージングを、３０分間にわたり実施するのに続き、２分間にわたるＣＴ収集を行った。３Ｄ－ＯＳＥＭ（反復４回、１６サブセット）を使用して、画像を再構成し、偶発同時計数および散乱同時計数について補正し、図８に示す。画像は、処置マウスと、非処置マウスとの、腫瘍取込み（Ｔ）の顕著に異なる差違を示した。両方の群のマウスの腎臓における取込みもまた、観察したが、これは、ペプチドのクリアランスと符合した。このイメージング解析は、ＰＥＴイメージングを使用して、ｉｎ ｖｉｖｏにおける発現を検出ための、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの値を裏付けた。

【0382】

［実施例７］
腫瘍保有マウスにおける免疫療法に対する、グランザイムＢ応答についての、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴイメージング
組合せチェックポイント阻害剤療法で処置された、腫瘍保有マウスにおけるグランザイムＢ発現の予測的性格についてさらに査定するために、４匹の処置マウスおよび３匹の媒体だけによるマウスにおいて、既に記載された同じ方式で、イメージングを実施した。腫瘍による取込みは、両方のマウス群において、明確に差別化された。図９に示される通り、処置マウスでは、４匹中３匹のマウスにおいて、高度な取込みが観察され、これは、チェックポイント療法に対して応答性であると考えられたのに対し、１匹のマウスは、低度の取込みを示すが、これは、治療に対する非応答性を予測するであろう。図１０に示される通り、非処置マウスは、治療の欠如を踏まえると予期されることだが、トレーサーの取込みが低度な２匹のマウスを示す。１匹の非処置マウスは、高レベルのプローブの取込みを裏付けたが、これは、治療と関連しない、自発性免疫応答を表しうるであろう。

【0383】

接種後１４日目に、マウスに、約３７ＭＢｑの精製^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを、静脈内注射し、注射の１時間後にイメージングした。ＰＥＴイメージングは、処置腫瘍内、腎臓内、および膀胱内の取込みを明らかにしたが、後二者は、小型ペプチドに特徴的な腎クリアランスと符合する。腫瘍による取込みを、左室による取込みで除することにより、ＰＥＴイメージングによる^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの取込みを標準化して、腫瘍対血液比（ＴＢＲ）を導出した。図１１に示される通り、処置マウスの平均値ＴＢＲが、１．６９±０．２６と計算されるのに対し、非処置マウスの平均値ＴＢＲは、０．９３±０．１１であり、非処置マウスから、処置マウスへの、有意な増大（８３％、Ｐ＜０．０５）が見られた。^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰの取込みは、処置腫瘍および非処置腫瘍の両方にわたり観察された。ｅｘ ｖｉｖｏにおけるウェスタンブロットにより評価される、ＧＺＢ発現との相関は、この相関が、プローブ分布のばらつきではなく、腫瘍間における、ＧＺＢ発現のばらつきに起因することを裏付けた。

【0384】

［実施例８］
免疫療法後における、腫瘍内のグランザイムＢ発現について評価する、免疫蛍光染色
ＣＴＬの活性化の前に、ＧＺＢは、細胞傷害性顆粒内に含有されており、活性化の後、ＣＴＬとその標的細胞との間の免疫シナプスにおいて放出される。しかし、がん免疫療法ならびに放出後におけるＧＺＢの運命の文脈では、位置（例えば、細胞内対細胞外）は、十分には理解されていない。腫瘍微小環境内のＧＺＢの位置について、よりよく理解するために、腫瘍を、免疫組織化学および免疫蛍光により解析した。

【0385】

処置腫瘍および非処置腫瘍のスライスを、ＣＤ３に加えて、ＧＺＢについて染色して、ＧＺＢが、Ｔ細胞内に封鎖されているのか、分泌されているのかについて評価した。ＣＤ３についての染色は、処置腫瘍内では増大したＴ細胞浸潤物が、非処置腫瘍内では、低レベルであったことを示した。グランザイムＢ染色は、非処置腫瘍と、処置腫瘍とのさらなる差違も示し、ＧＺＢ位置の、２つの顕著に異なるパターンも示した。観察された第１のパターンは、低強度で小型の表面領域によるパターンであって、ＣＤ３染色と共局在化し、図１２に示される通り、処置腫瘍内および非処置腫瘍内の両方に見られ、ＣＴＬ細胞傷害性顆粒内に含有されるＧＺＢを表すと考えられるパターンであった。ＧＺＢ染色の第２のパターンは、一般に、ＣＤ３と共局在化しない、大型で強い染色領域を結果としてもたらした。ＧＺＢ ＩＦ試料についての蛍光閾値解析は、処置腫瘍内では、非処置内と対比して、より高強度の染色が見られることを示した（Ｐ＜０．０１）。理論に束縛されずに述べると、高強度のＧＺＢ染色領域は、これに先立つ、ＧＺＢのエキソサイトーシス領域に対応し、これは、腫瘍細胞の殺滅に既に参与しているＧＺＢ、または免疫シナプスから漏出したＧＺＢであって、細胞外腔内に残存するＧＺＢを表すことが提起される。これらの結果は、処置腫瘍内の高度なＧＺＢ発現が、免疫療法に応答して、プロテアーゼを分泌する活性ＣＴＬに起因し、免疫療法に対する腫瘍の応答をモニタリングするための、潜在的なバイオマーカーを表すことのさらなる証拠を提示した。図１３に示される通り、ＩＨＣ所見は、免疫蛍光による所見を確認する。

【0386】

［実施例９］
チェックポイント阻害剤の標的である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、およびＴＩＭ－３についてのウェスタンブロット解析
ＣＴ２６およびＭＣ３８を、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ、ＭＡ）中に、１：１（ｖ：ｖ）で希釈し、それぞれ、ｂａｌｂ／ｃマウスまたはＣ５７ＢＬ／６マウスの右上脇腹へと注射した。マウスを、腫瘍の接種後３、６、および９日目に、腹腔内注射により、生理食塩液（すなわち、媒体）、２００μｇの抗ＰＤ１（すなわち、単剤療法）、２００μｇの抗ＰＤ１および１００μｇの抗ＣＴＬＡ４（すなわち、Ｐ＋Ｃ組合せ治療）、または２００μｇの抗ＰＤ１および２５０μｇの抗ＴＩＭ－３（すなわち、Ｐ＋Ｔ組合せ治療）で処置した。１２日目に、マウスを、イメージングするか、またはｅｘ ｖｉｖｏにおけるウェスタンブロット解析のために屠殺した。生存マウスのイメージング実験では、腫瘍の大きさを、ＭＣ３８については、５日目から始め、ＣＴ２６については、１０日目から始めて、２～３日ごとに、カリパーで測定した。腫瘍が、５００ｍｍ^３の容量を超えるか、または潰瘍化したら、マウスを屠殺した。

【0387】

ＭＣ３８およびＣＴ２６の同系腫瘍を切り出し、図１４Ａ～１４Ｃに示される通り、１２日目に、免疫ブロットにより、チェックポイント阻害剤の標的分子である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、およびＴＩＭ－３のベースラインレベルを決定するように査定した。ＣＴＬＡ－４のレベルは、ＭＣ３８腫瘍内で、ＣＴ２６腫瘍内の２倍であった（ＣＴＬＡ－４：β－アクチン＝０．２２５対０．１２１、ｐ＝０．０４３）。ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＴＩＭ－３の発現レベルは、各腫瘍型間で、有意には異ならなかった。ＭＣ３８腫瘍内のグランザイムＢをイメージングする実行可能性を評価するために、グランザイムＢレベルについてもまた査定し、グランザイムＢ発現が、ＣＴ２６腫瘍（０．０１３、ｐ＝０．０１４）内より、ＭＣ３８腫瘍内で有意に高度（グランザイムＢ：β－アクチン＝０．１３８）であることを見出した。

【0388】

［実施例１０］
ＣＴ２６腫瘍保有マウスおよびＭＣ３８腫瘍保有マウスについての、グランザイムＢ ＰＥＴイメージング
１２日目に、^６８Ｇａ－ＮＯＴＡ－ＧＰを使用して、グランザイムＢレベルを、非侵襲的に評価するように、抗ＰＤ１単剤療法、Ｐ＋Ｃ組合せ治療、Ｐ＋Ｔ組合せ治療、または生理食塩液（実施例９を参照されたい）で処置された、ＣＴ２６腫瘍保有マウスおよびＭＣ３８腫瘍保有マウスをイメージングした。ＰＥＴイメージングは、解析される全てのマウスにおける、非腫瘍臓器による共通の取込みパターンであって、小型ペプチドに特徴的な腎クリアランスと符合する、腎臓および膀胱における蓄積を含むパターンを示した。しかし、図１５Ａ～１７Ｄに示される通り、腫瘍による取込みの程度は、腫瘍モデルおよび治療レジメンに基づき変動した。

【0389】

例えば、ＣＴ２６モデルでは、媒体処置マウスは、０．９７±０．０７の平均ＴＢＲにより反映される通り、腫瘍内および左室内で、トレーサー蓄積の差違を示さなかった。これと比較して、ＰＤ－１単剤療法およびＰ＋Ｃ組合せ療法を施されるＣＴ２６腫瘍保有マウスは、腫瘍による高度な取込みを示し、平均値ＴＢＲは、それぞれ、１．３２±０．１５（ｐ＜０．０５）および１．４８±０．１９（ｐ＜０．００５）であった。これに対し、Ｐ＋Ｔ組合せ療法で処置された、ＣＴ２６腫瘍を伴うマウスは、腫瘍によるトレースの蓄積の、媒体処置マウスと比較した上昇を裏付けなかった（図１７Ｃに示される通り、ＴＢＲ＝０．９９±０．１４）。３つの治療レジメン間で、応答を予測するのに、ＴＢＲ閾値を実験的に規定するために、媒体で処置されたＣＴ２６腫瘍についての最高のＴＢＲである、１．２７を、これを上回る腫瘍を、高取込みとして分類し、これを下回る腫瘍を、低取込みとして分類する値として規定した。ＣＴ２６モデルについてのこのカットオフを使用して、単剤療法処置マウス１２例中４例、Ｐ＋Ｃ組合せ療法処置マウス１２例中６例、およびＰ＋Ｔ組合せ療法処置マウス６例中０例を、高取込み例として分類した。

【0390】

ＭＣ３８腫瘍保有マウスもまた、治療レジメンに基づく、腫瘍による示差的な取込みを裏付けた。ＭＣ３８腫瘍を保有する生理食塩液処置マウスは、１．３７±０．０１６の平均ＴＢＲを示し、生理食塩液で処置されたＣＴ２６腫瘍保有マウスの平均ＴＢＲより有意に高度であり（ｐ＜０．００５）、図１７Ｂに示される通り、ＭＣ３８腫瘍内の、比較的高度なベースライングランザイムＢレベルを指し示し、ウェスタンブロット結果と符合する。ＣＴ２６モデルの場合と同様に、単剤療法およびＰ＋Ｃ組合せ療法のいずれにより処置されたＭＣ３８腫瘍保有マウスも、それぞれ、関与性の対照マウスと比較して、有意に高度なＴＢＲである、１．９９±０．２２（ｐ＜０．０５）および２．１７±０．２１（ｐ＜０．００５）をもたらした。しかし、ＣＴ２６モデルの場合と異なり、Ｐ＋Ｔ組合せ療法で処置されたＭＣ３８腫瘍は、図１７Ｄに示される通り、３つの処置の間で、最低の平均値ＴＢＲを示したが、この群もまた、対照腫瘍より高度な取込みをもたらした（ＴＢＲ＝１．７４±０．１２、ｐ＜０．０５）。高度な取込みを伴い、他の全ての媒体処置腫瘍と比較して、増殖の遅延を裏付けた、単一の媒体処置腫瘍を例外として、ＣＴ２６腫瘍について上記で記載した同じ根拠を使用して、ＭＣ３８腫瘍についての、高取込みおよび低取込みの閾値は、１.４５として規定した。高取込みＭＣ３８腫瘍の数は、単剤療法処置マウス５例中４例、Ｐ＋Ｃ組合せ療法処置マウス８例中８例、およびＰ＋Ｔ組合せ療法処置マウス７例中５例を含んだ。

【0391】

［実施例１１］
増殖曲線の解析
腫瘍は、２０日目までに完全に退縮するか、または研究の終了時まで増殖し続け、あらかじめ規定された最大容量に達するか、もしくは潰瘍化したので、実施例９～１０に記載されたＣＴ２６腫瘍の増殖は、二分枝的であった。これらの成長パターンに基づき、腫瘍容量が、０ｍｍ^３へと減少したら、マウスを、レスポンダーとして類別するか、腫瘍容量が、増大し続けたら、非レスポンダーとして類別した。図１８Ａ～１８Ｃは、各治療レジメンについて、腫瘍容量の一過性の変化を例示し、媒体で処置された腫瘍を、黒色で表す。媒体で処置されたＣＴ２６マウスのいずれも、サイズが退縮しなかったが、抗ＰＤ－１単剤療法処置マウス１２例中３例、Ｐ＋Ｃ組合せ療法処置マウス１２例中７例、およびＰ＋Ｔ組合せ療法処置マウス６例中０例は、治療に応答した。

【0392】

実施例９～１０で記載したＭＣ３８腫瘍モデルでは、応答パターンに基づき、３つの群：完全なレスポンダー、非レスポンダー、および部分的レスポンダーとして分類される第３の群を同定した。応答する腫瘍は、２０日目までに、サイズが退縮し、非応答腫瘍は、１４日目に、またはこの前に、サイズが、５００ｍｍ^３に達し、部分的応答腫瘍は、１４日目より遅い時点で、５００ｍｍ^３に達した。図１８Ｄ～１８Ｆは、治療レジメンに基づく、ＭＣ３８の場合の、腫瘍容量の変化についての、これらの一過性パターンを強調し、媒体処置された腫瘍の増殖曲線を、黒色で示す。媒体で処置されたＭＣ３８腫瘍７例中１例は、腫瘍増殖の、他の媒体処置腫瘍と比較した有意な遅延を示し、これにより、部分的レスポンダーとして分類された。この腫瘍は、１．４５を超えるＴＢＲを示し、図１８Ｄ～１８Ｆでは、それ自体、黒点線で示される。ＣＴ２６腫瘍と比較して、高百分率のＭＣ３８腫瘍が、治療に応答し、単剤療法で処置された腫瘍５例中４例、およびＰ＋Ｃ組合せ療法で処置された腫瘍８例中７例は、サイズが完全に退縮した。ＣＴ２６と異なり、ＭＣ３８腫瘍は、Ｐ＋Ｔ組合せ療法に応答し、７例中１例の腫瘍は、完全に応答し、さらに、７例中４例は、治療に応答して、部分的な応答に特徴的である、増殖の遅延を裏付けた。

【0393】

［実施例１２］
グランザイムＢ ＰＥＴイメージングを使用する、応答の予測
実施例９～１１で記載した、複数の腫瘍モデルおよび治療にわたる、グランザイムＢ ＰＥＴ（すなわち、ＧＺＰ ＰＥＴ）イメージングベースの応答予測の精度についての尺度として、ＣＴ２６腫瘍については、１．２７のＴＢＲ閾値を使用し、ＭＣ３８腫瘍については、１．４５のＴＢＲ閾値を使用する、取込みの分類を活用した。この分類系を使用して、応答マウス２７例中２５例を、ＧＺＰ ＰＥＴイメージングにより、高取込み例として類別する一方で、処置に応答しなかったマウス３８例中３４例を、低取込み例として分類した。これは、免疫療法に対する応答を予測する^６８Ｇａ－ＧＺＰ ＰＥＴの能力について、それぞれ、９３％および８９％の、全般的な感度および特異度を反映する。各治療型についてのプローブの感度および特異度を、表５に示す。

【0394】

【表8】

【0395】

個体ベースの画像応答についての、グランザイムＢ ＰＥＴイメージングの精度が、有効性についての、群ベースの予測を可能とするかどうかを比較するために、各治療についての平均ＴＢＲを、全般的な生存と相関させた。最良の生存転帰を伴う処置はまた、図１９Ａに示される通り、各治療の生存についてのカプラン－マイヤープロットに基づき、最高の平均ＴＢＲも示した。応答パーセントと、平均腫瘍取込みとの関係が、相関するかどうかを決定するために、図１９Ｂに示される通り、応答パーセントを、ＴＢＲに対してプロットした。結果として得られる曲線は、Ｒ^２＝０．８４と、有意に非ゼロの傾き（ｐ＜０．０００５）とを伴う、直線的関係を示し、処置群の平均ＴＢＲが、生存パーセントと直線的に相関することを示唆する。

【0396】

［実施例１３］
さらなるグランザイムＢペプチドの合成
ＮＯＴＡ－ベータＡ－ＰＥＧ_２７－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（ＧＺＰＰＥＧ；配列番号２６；ＰＥＧ＝－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－）、およびＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｔ－Ｅ－Ａ－Ａ－Ａ－Ａ－Ｓ－Ｓ－Ｃ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ－ＣＨＯ（ＧＺＰＳＥＲＰ；配列番号２７）を各々、実施例１で記載した、標準的なＦＭＯＣ化学反応に従い調製した。ＧＺＰＳＥＲＰの計算値ｍ／ｚ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝１９７３．３１。

【0397】

さらなる基の、マウスにおける薬物動態および腫瘍対バックグラウンド比に対する効果を調べるように、両方のペプチドをデザインした。ＮＯＴＡ－ＧＰ（実施例１）、ＧＺＰＰＥＧ、およびＧＺＰＳＥＲＰを使用して、動的ＰＥＴ解析を実施した。驚くべきことに、ＧＺＰＰＥＧは、ＮＯＴＡ－ＧＰとほぼ同一な、腫瘍による取込み反応速度を示した。セルピンＰ９－グランザイムＢ結合配列と、グランザイムＢペプチドとのハイブリッドブレンドであるＧＺＰＳＥＲＰは、はるかに低度な腫瘍対バックグラウンド比を結果としてもたらした。いかなる理論にも束縛されずに述べると、これらの効果は、ペプチドの強い疎水性の性質に起因し、これが、著明な凝集および肝臓による高度な取込みを結果としてもたらしたと考えられる。ＮＯＴＡ－ＧＰ、ＧＺＰＰＥＧ、およびＧＺＰＳＥＲＰについての、腫瘍／心臓内のＰＥＴ信号の時間経過を、図２０に示す。

【0398】

［実施例１４］
ヒト黒色腫検体についての免疫組織化学解析
クエン酸緩衝液中の、標準的な抗原回復の後、ホルマリン固定パラフィン包埋切片に対して、免疫組織化学を実施した。グランザイムＢ発現を、抗グランザイムＢ抗体（ａｂ５０４９、Ａｂｃａｍ）、またはＧＺＰのビオチニル化形およびヒト化形（ｈＧＺＰ、実施例１Ａを参照されたい）により検出した。結合した抗体は、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ウサギ抗体で検出し、ＩＨＣ染色のために、ＤＡＢ基質と共に反応させるか、または免疫蛍光による視覚化のために、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗ウサギ抗体もしくはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４ヤギ抗ウサギ抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に反応させる。結合したペプチドは、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン（Ａｂｃａｍ）で検出した後、ＤＡＢ基質またはオレゴングリーンコンジュゲートニュートラビジン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と反応させた。患者試料は、免疫療法処置または非処置として群分けし、処置された検体は、改変ＲＥＣＩＳＴ基準を使用して、レスポンダーまたは非レスポンダーとしてさらに識別した。蛍光定量化は、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）を使用して実施した。

【0399】

抗ＰＤ－１チェックポイント阻害剤（ｎ＝６のニボルマブおよびｎ＝３のペムブロリズマブ）で処置された患者から得られた、９例のヒト黒色腫生検試料のコホートを、改変ＲＥＣＩＳＴ基準に基づく応答と、遡及的に相関させた。抗ヒトグランザイムＢ抗体を使用して、ＩＨＣにより、図２１Ａに示される通り、処置ありの生検試料は、処置されたレスポンダーと、非レスポンダーとの、グランザイムＢ染色の量および強度の、顕著に異なる差違を裏付けた。処置されたレスポンダーと、非レスポンダーとの差違の程度および大きさを定量化するために、定量的蛍光顕微鏡法を実施した。蛍光顕微鏡解析は、処置されたレスポンダー検体によるグランザイムＢ発現が、処置された非レスポンダーの、最大で約１，０００倍であることを示し、図２１Ｂに示される通り、時間経過に伴う、処置された検体によるグランザイムＢ発現の連続的な増大を示唆した。最後に、処置されたレスポンダー試料を、免疫組織化学および免疫蛍光の両方で解析して、ヒト組織内のグランザイムＢを特異的に検出する、ｈＧＺＰ（実施例１Ａ）の能力を比較し、抗グランザイムＢ抗体と比較した。図２１Ｃ～２１Ｄに示される通り、両方の技法により、強い相関が観察されたことから、ｈＧＺＰの、ヒトグランザイムＢへの高度に特異的結合が指し示される。これらの結果は、腫瘍によるグランザイムＢ発現には、ヒトレスポンダーと、非レスポンダーとの間で有意差が見られ、これらの差違は、ヒトグランザイムＢ特異的プローブにより認識されることを示唆する。

【0400】

他の実施形態
本発明について、その詳細な記載と共に記載してきたが、前出の記載は、付属の特許請求の範囲により規定される本発明の範囲を、例示することを意図するものであり、これを限定することを意図するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内にある。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。

１．細胞中または組織中のグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）前記細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【化41】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）前記細胞または組織を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、前記細胞内または組織内のグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
２．対象におけるグランザイムＢをイメージングする方法であって、
ｉ）前記対象に、式Ｉ：

【化42】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）前記対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、前記対象におけるグランザイムＢをイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
３．細胞または組織の試料中の免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）前記細胞または組織の試料を、式Ｉ：

【化43】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩と接触させるステップと、
ｉｉ）前記細胞または組織の試料を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、前記細胞または組織の試料中の前記免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
４．対象における免疫応答をイメージングする方法であって、
ｉ）前記対象に、式Ｉ：

【化44】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）前記対象を、適切なイメージング法でイメージングし、これにより、前記対象における前記免疫応答をイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
５．対象における疾患の処置をモニタリングする方法であって、
ｉ）前記対象に、式Ｉ：

【化45】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）前記対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
６．対象における疾患の処置における免疫応答をモニタリングする方法であって、
ｉ）前記対象に、式Ｉ：

【化46】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと、
ｉｉ）前記対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと
を含み、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である、方法。
７．Ａが、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素からなる群から選択される１または複数のイメージング剤を含む、上記１から６の表
に記載の方法。
８．前記常磁性イオンが、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）からなる群から選択される、上記７に記載の方法。
９．前記ｘ線イメージング剤が、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、ビスマス（ＩＩＩ）、およびヨード化ｘ線イメージング剤からなる群から選択される、上記７に記載の方法。
１０．前記放射性同位元素が、 ^３ Ｈ、 ^１１ Ｃ、 ^１４ Ｃ、 ^１８ Ｆ、 ^３２ Ｐ、 ^３５ Ｓ、 ^３６ Ｃｌ、 ^５１ Ｃｒ、 ^５２ Ｆｅ、 ^５７ Ｃｏ、 ^５８ Ｃｏ、 ^５９ Ｆｅ、 ^６４ Ｃｕ、 ^６７ Ｃｕ、 ^６７ Ｇａ、 ^６８ Ｇａ、 ^７５ Ｓｅ、 ^７６ Ｂｒ、 ^７７ Ｂｒ、 ^８９ Ｚｒ、 ^９０ Ｙ、 ^９９ｍ Ｔｃ、 ^１１１ Ｉｎ、 ^１２３ Ｉ、 ^１２４ Ｉ、 ^１２５ Ｉ、 ^１３１ Ｉ、 ^１５２ Ｅｕ、 ^１５３ Ｓｍ、 ^１６６ Ｈｏ、 ^１７７ Ｌｕ、 ^１８６ Ｒｅ、 ^１８８ Ｒｅ、 ^２０１ Ｔｌ、 ^２０３ Ｐｂ、 ^２１０ Ａｔ、 ^２１１ Ａｔ、 ^２１２ Ｂｉ、 ^２１３ Ｂｉ、および ^２２５ Ａｃからなる群から選択される、上記７に記載の方法。
１１．Ａが、ＰＥＴイメージング剤、ＳＰＥＣＴイメージング剤、およびコンピュータ断層撮影イメージング剤からなる群から選択されるイメージング剤である、上記１から６のいずれかに記載の方法。
１２．Ａが、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である、上記１から６のいずれかに記載の方法。
１３．Ａが、 ^３ Ｈ、 ^１１ Ｃ、 ^１４ Ｃ、 ^１８ Ｆ、 ^３５ Ｓ、 ^５２ Ｆｅ、 ^５８ Ｃｏ、 ^６４ Ｃｕ、 ^６８ Ｇａ、 ^７６ Ｂｒ、 ^７７ Ｂｒ、 ^８９ Ｚｒ、 ^１１１ Ｉｎ、 ^１２３ Ｉ、 ^１２４ Ｉ、 ^１２５ Ｉ、 ^１３１ Ｉ、 ^１８６ Ｒｅ、 ^１８８ Ｒｅ、 ^２０１ Ｔｌからなる群から選択される放射性同位元素を含む、ＰＥＴイメージング剤またはＳＰＥＣＴイメージング剤である、上記１から６のいずれかに記載の方法。
１４．Ａが、 ^６８ Ｇａを含むＰＥＴイメージング剤である、上記１から６のいずれかに記載の方法。
１５．Ａが、キレート剤をさらに含む、上記１から１４のいずれかに記載の方法。
１６．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される、上記１５に記載の方法。
１７．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、および１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）からなる群から選択される、上記１５に記載の方法。
１８．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）である、上記１５に記載の方法。
１９．Ａが、フルオロフォアである、上記１から６のいずれかに記載の方法。
２０．Ａが、Ａｌｅｘａ ３５０、Ａｌｅｘａ ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＰＹ－Ｒ６Ｇ、１３ＢＯＤＬＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＬＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、イソチオシアン酸フルオレセイン、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、量子ドット、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ５３２、ＡＦ４８８、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７５０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、およびｄｓＲＥＤからなる群から選択されるフルオロフォアである、上記１から６のいずれかに記載の方法。
２１．対象における疾患を処置する方法であって、
ｉ）前記対象に、第１の式Ｉ：

【化47】

［式中、
Ａは、非毒性の放射性同位元素を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップと；
ｉｉ）前記対象を、適切なイメージング法でイメージングするステップと；
ｉｉｉ）前記対象に、第２の式Ｉ：

【化48】

［式中、
Ａは、毒性の放射性同位元素を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基である］
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与し、これにより、前記対象における前記疾患を処置する、ステップと
を含む方法。
２２．ステップｉｉｉ）の前記投与の前に、前記第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、処置される前記対象の細胞または組織に結合するかどうかを決定するステップをさらに含む、上記２１に記載の方法。
２３．ステップｉｉｉ）の前記投与の前に、前記第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が、グランザイムＢに結合するかどうかを決定するステップをさらに含む、上記２１に記載の方法。
２４．前記第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、 ^３ Ｈ、 ^１１ Ｃ、 ^１４ Ｃ、 ^１８ Ｆ、 ^３５ Ｓ、 ^５２ Ｆｅ、 ^５８ Ｃｏ、 ^６４ Ｃｕ、 ^６８ Ｇａ、 ^７６ Ｂｒ、 ^７７ Ｂｒ、 ^８９ Ｚｒ、 ^１１１ Ｉｎ、 ^１２３ Ｉ、 ^１２４ Ｉ、 ^１２５ Ｉ、 ^１３１ Ｉ、 ^１８６ Ｒｅ、 ^１８８ Ｒｅ、 ^２０１ Ｔｌからなる群から選択される、非毒性の放射性同位元素を含む、上記２１から２３のいずれかに記載の方法。
２５．前記第１の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、キレート剤をさらに含む、上記２１から２４のいずれかに記載の方法。
２６．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される、上記２５に記載の方法。
２７．前記第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、アルファ放射体およびベータ放射体からなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む、上記２１から２６のいずれかに記載の方法。
２８．前記第２の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の基Ａが、 ^２１１ Ａｔ、 ^２１２ Ｐｂ、 ^２１２ Ｂｉ、 ^２１３ Ｂｉ、 ^２２５ Ａｃ、 ^２２７ Ｔｈ、 ^９０ Ｙ、 ^１７７ Ｌｕ、および ^１３１ Ｉからなる群から選択される毒性の放射性同位元素を含む、上記２１から２６のいずれかに記載の方法。
２９．Ｂが、１もしくは複数のアミノ酸残基、１もしくは複数の炭水化物、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である、上記１から２８のいずれかに記載の方法。
３０．Ｂが、１もしくは複数のＣ _１～３０ アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ _１～３０ アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ _１～３０ チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基である、上記１から２８のいずれかに記載の方法。
３１．Ｂが、１または複数の－（ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ）－基を含む任意選択の連結基である、上記１から２８のいずれかに記載の方法。
３２．Ｂが、式－（ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ） _ｐ －の任意選択の連結基であり、ｐが、１～４０の整数である、上記１から２８のいずれかに記載の方法。
３３．ｐが、１０～４０の整数である、上記３２に記載の方法。
３４．ｐが、２０～４０の整数である、上記３２に記載の方法。
３５．ｐが、２５～３５の整数である、上記３２に記載の方法。
３６．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
３７．Ｃが、グランザイムＢに結合する抗体である、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
３８．Ｃが、グランザイムＢに結合する抗体であり、クローンＧＢ１１、クローンＧｒＢ－７、およびＮＣＬ－Ｌ－Ｇｒａｎ－Ｂからなる群から選択される、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
３９．Ｃが、グランザイムＢに結合する抗体断片である、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
４０．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドである、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
４１．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約１００アミノ酸残基の長さである、上記３６または４０に記載の方法。
４２．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約５０アミノ酸残基の長さである、上記３６または４０に記載の方法。
４３．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約２５アミノ酸残基の長さである、上記３６または４０に記載の方法。
４４．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約１５アミノ酸残基の長さである、上記３６または４０に記載の方法。
４５．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、前記ポリペプチドが、
Ｘ ^１ －Ｘ ^２ －Ｘ ^３ －Ｘ ^４ －Ｘ ^５ －Ｘ ^６ －Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ ^１ 、Ｘ ^２ 、およびＸ ^３ は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ ^４ は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ ^５ は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ ^６ は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される、上記３６または４０に記載の方法。
４６．Ｘ ^４ が、Ｉである、上記４５に記載の方法。
４７．Ｘ ^５ が、Ｅである、上記４５に記載の方法。
４８．Ｘ ^６ が、ＦまたはＰである、上記４５に記載の方法。
４９．前記ポリペプチドが、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記４５から４８のいずれかに記載の方法。
５０．Ｃが、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記４５に記載の方法。
５１．Ｃが、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記４５に記載の方法。
５２．Ｃが、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記４５に記載の方法。
５３．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、前記ポリペプチドが、
Ｘ ^１ －Ｘ ^２ －Ｘ ^３ －Ｘ ^４ －Ｘ ^５ －Ｘ ^６ －Ｄ－Ｘ ^７ （配列番号８）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ ^１ 、Ｘ ^２ 、およびＸ ^３ は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ ^４ は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ ^５ は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ ^６ は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ ^７ は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む求電子基である、上記３６または４０に記載の方法。
５４．Ｘ ^４ が、Ｉである、上記５３に記載の方法。
５５．Ｘ ^５ が、Ｅである、上記５３または５４に記載の方法。
５６．Ｘ ^６ が、ＦまたはＰである、上記５３から５５のいずれかに記載の方法。
５７．Ｘ ^７ が、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である、上記５３から５６のいずれかに記載の方法。
５８．Ｘ ^７ が、－Ｃ（Ｏ）Ｈである、上記５３から５６のいずれかに記載の方法。
５９．Ｃが、グランザイムＢに結合する有機低分子である、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
６０．前記有機低分子が、低分子ペプチド模倣体である、上記３６または５９に記載の方法。
６１．Ｃが、式ＩＩＩ：

【化49】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、各々、独立に、水素、Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキル、Ｃ _６～１０ アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ ^１０ ） _２ からなる群から選択され、式中、各Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ _６～１０ アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ ^１ およびＲ ^２ は、それらが接合した前記炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ ^１０ 基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ ^３ およびＲ ^７ は、独立に、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ ^４ 、Ｒ ^５ 、Ｒ ^６ 、およびＲ ^８ は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ ^９ は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ ^１０ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ ^１１ ） _２ 、ＨＥＴ、およびＣ _６～１０ アリールにより置換され、式中、Ｃ _６～１０ アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ ^１１ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である、上記１から３５のいずれかに記載の方法。
６２．Ｃが、

【表8】

またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される、上記１から３５および５９から６１のいずれかに記載の方法。
６３．Ａが、常磁性イオン、ｘ線イメージング剤、フルオロフォア、および放射性同位元素のうちの１または複数を含むイメージング剤であり、
Ｂが、１もしくは複数のアルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のアルキレンオキシ基、１もしくは複数のチオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチド、グランザイムＢに結合する抗体、グランザイムＢに結合する抗体断片、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される、上記１から６のいずれかに記載の方法。
６４．Ａが、放射性同位元素を含み、
Ｂが、１もしくは複数のＣ _１～３０ アルキレン基、１もしくは複数のアミン基、１もしくは複数のアミド基、１もしくは複数のＣ _１～３０ アルキレンオキシ基、１もしくは複数のＣ _１～３０ チオール基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される、上記１から６のいずれかに記載の方法。
６５．Ａが、 ^３ Ｈ、 ^１１ Ｃ、 ^１４ Ｃ、 ^１８ Ｆ、 ^３２ Ｐ、 ^３５ Ｓ、 ^３６ Ｃｌ、 ^５１ Ｃｒ、 ^５２ Ｆｅ、 ^５７ Ｃｏ、 ^５８ Ｃｏ、 ^５９ Ｆｅ、 ^６４ Ｃｕ、 ^６７ Ｃｕ、 ^６７ Ｇａ、 ^６８ Ｇａ、 ^７５ Ｓｅ、 ^７６ Ｂｒ、 ^７７ Ｂｒ、 ^８９ Ｚｒ、 ^９０ Ｙ、 ^９９ｍ Ｔｃ、 ^１１１ Ｉｎ、 ^１２３ Ｉ、 ^１２４ Ｉ、 ^１２５ Ｉ、 ^１３１ Ｉ、 ^１５２ Ｅｕ、 ^１５３ Ｓｍ、 ^１６６ Ｈｏ、 ^１７７ Ｌｕ、 ^１８６ Ｒｅ、 ^１８８ Ｒｅ、 ^２０１ Ｔｌ、 ^２０３ Ｐｂ、 ^２１０ Ａｔ、 ^２１１ Ａｔ、 ^２１２ Ｂｉ、 ^２１３ Ｂｉ、および ^２２５ Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂが、１または複数のＣ _１ ～ _３０ アルキレン基、１または複数のアミド基、１または複数のＣ _１ ～ _３０ アルキレンオキシ基、またはこれらの任意の組合せを含む任意選択の連結基であり、
Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される、上記１から６のいずれかに記載の方法。
６６．Ａが、 ^３ Ｈ、 ^１１ Ｃ、 ^１４ Ｃ、 ^１８ Ｆ、 ^３２ Ｐ、 ^３５ Ｓ、 ^３６ Ｃｌ、 ^５１ Ｃｒ、 ^５２ Ｆｅ、 ^５７ Ｃｏ、 ^５８ Ｃｏ、 ^５９ Ｆｅ、 ^６４ Ｃｕ、 ^６７ Ｃｕ、 ^６７ Ｇａ、 ^６８ Ｇａ、 ^７５ Ｓｅ、 ^７６ Ｂｒ、 ^７７ Ｂｒ、 ^８９ Ｚｒ、 ^９０ Ｙ、 ^９９ｍ Ｔｃ、 ^１１１ Ｉｎ、 ^１２３ Ｉ、 ^１２４ Ｉ、 ^１２５ Ｉ、 ^１３１ Ｉ、 ^１５２ Ｅｕ、 ^１５３ Ｓｍ、 ^１６６ Ｈｏ、 ^１７７ Ｌｕ、 ^１８６ Ｒｅ、 ^１８８ Ｒｅ、 ^２０１ Ｔｌ、 ^２０３ Ｐｂ、 ^２１０ Ａｔ、 ^２１１ Ａｔ、 ^２１２ Ｂｉ、 ^２１３ Ｂｉ、および ^２２５ Ａｃからなる群から選択される、放射性同位元素を含み、
Ｂが、１または複数の－（－ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ）－基を含む任意選択の連結基であり、
Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチド、およびグランザイムＢに結合する有機低分子からなる群から選択される、上記１から６のいずれかに記載の方法。
６７．Ａが、キレート剤をさらに含む、上記６３から６６のいずれかに記載の方法。
６８．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル－１，２－ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコール－Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレンテトラミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、および１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザ－１，４，７，１０－テトラ－（２－カルバモイルメチル）－シクロドデカン（ＴＣＭＣ）、ならびにデスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）からなる群から選択される、上記６７に記載の方法。
６９．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、および１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）からなる群から選択される、上記６７に記載の方法。
７０．前記キレート剤が、１，４，７－トリアザシクロノナン三酢酸（ＮＯＴＡ）である、上記６７に記載の方法。
７１．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドである、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７２．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約１００アミノ酸残基の長さである、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７３．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約５０アミノ酸残基の長さである、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７４．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約２５アミノ酸残基の長さである、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７５．前記グランザイムＢに結合するポリペプチドが、約４～約１５アミノ酸残基の長さである、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７６．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、前記ポリペプチドが、
Ｘ ^１ －Ｘ ^２ －Ｘ ^３ －Ｘ ^４ －Ｘ ^５ －Ｘ ^６ －Ｄ（配列番号１）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ ^１ 、Ｘ ^２ 、およびＸ ^３ は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ ^４ は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ ^５ は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ ^６ は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
７７．Ｘ ^４ が、Ｉである、上記７６に記載の方法。
７８．Ｘ ^５ が、Ｅである、上記７６または７７に記載の方法。
７９．Ｘ ^６ が、ＦまたはＰである、上記７６から７８のいずれかに記載の方法。
８０．前記ポリペプチドが、
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号２）；
Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（配列番号３）；および
ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（配列番号４）
からなる群から選択される配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、上記７６に記載の方法。
８１．Ｃが、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記７６に記載の方法。
８２．Ｃが、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記７６に記載の方法。
８３．Ｃが、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、上記７６に記載の方法。
８４．Ｃが、グランザイムＢに結合するポリペプチドであり、前記ポリペプチドが、
Ｘ ^１ －Ｘ ^２ －Ｘ ^３ －Ｘ ^４ －Ｘ ^５ －Ｘ ^６ －Ｄ－Ｘ ^７ （配列番号８）
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、
Ｘ ^１ 、Ｘ ^２ 、およびＸ ^３ は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ ^４ は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ ^５ は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ ^６ は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択され、
Ｘ ^７ は、配列番号８のアミノ酸配列のＣ末端を含む求電子基である、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
８５．Ｘ ^４ が、Ｉである、上記８４に記載の方法。
８６．Ｘ ^５ が、Ｅである、上記８４または８５に記載の方法。
８７．Ｘ ^６ が、ＦまたはＰである、上記８４から８６のいずれかに記載の方法。
８８．Ｘ ^７ が、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ ハロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ アルコキシ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～６ ハロアルコキシ、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ アルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ ハロアルキル）－（５～１０員のヘテロアリール）、－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ アルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）、および－Ｃ（Ｏ）－（Ｃ _１～６ ハロアルコキシ）－（５～１０員のヘテロアリール）からなる群から選択される求電子基である、上記８４から８７のいずれかに記載の方法。
８９．Ｘ ^７ が、－Ｃ（Ｏ）Ｈである、上記８４から８７のいずれかに記載の方法。
９０．Ｃが、グランザイムＢに結合する有機低分子である、上記６３から７０のいずれかに記載の方法。
９１．前記有機低分子が、低分子ペプチド模倣体である、上記６３から７０および９０のいずれかに記載の方法。
９２．Ｃが、式ＩＩＩ：

【化50】

の有機低分子、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、各々、独立に、水素、Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキル、Ｃ _６～１０ アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ ^１０ ） _２ からなる群から選択され、式中、各Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ _６～１０ アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換される；
またはＲ ^１ およびＲ ^２ は、それらが接合した前記炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ ^１０ 基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ ^３ およびＲ ^７ は、独立に、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ ^４ 、Ｒ ^５ 、Ｒ ^６ 、およびＲ ^８ は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ ^９ は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ ^１０ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ ^１１ ） _２ 、ＨＥＴ、およびＣ _６～１０ アリールにより置換され、式中、Ｃ _６～１０ アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０環のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０環のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ ^１１ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である、上記６３から７０、９０および９１のいずれかに記載の方法。
９３．Ｃが、

【表9】

またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択される、上記６３から７０、９０および９１のいずれかに記載の方法。
９４．Ｃが、グランザイムＢの不可逆的結合剤である、上記１から９３のいずれかに記載の方法。
９５．Ｃが、グランザイムＢの阻害剤である、上記１から９４のいずれかに記載の方法。
９６．ステップｉ）の前記投与の前に、治療剤を投与するステップをさらに含む、上記１から９５のいずれかに記載の方法。
９７．前記治療剤の投与が、細胞もしくは組織の試料中、または対象において、免疫応答を誘導する、上記９６に記載の方法。
９８．前記治療剤が、抗炎症剤、ステロイド、免疫療法薬剤、化学療法剤、および治療用抗体からなる群から選択される、上記９６または９７に記載の方法。
９９．前記治療剤が、化学療法剤である、上記９６または９７に記載の方法。
１００．前記疾患が、自己免疫障害、炎症性障害、皮膚障害、がん、および心血管障害からなる群から選択される、上記５から９９のいずれかに記載の方法。
１０１．前記疾患が、がんである、上記５から９９のいずれかに記載の方法。
１０２．前記がんが、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膀胱がん、腎細胞癌、多発性骨髄腫、膵臓がん、および前立腺がんからなる群から選択される、上記１００または１０１に記載の方法。
１０３．前記がんが、結腸がんである、上記１００または１０１に記載の方法。
１０４．前記疾患が、移植片対宿主病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱、感染後糸球体腎炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂溶性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚性好酸球増加症、エリテマトーデス、座瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病と関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮異形成、角膜白斑、眼天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス眼症、フォークト－小柳－原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性（ｃｈｒｏｎｉｃまたはｉｎｖｅｔｅｒａｔｅ）喘息、遅発性喘息および気道過敏、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、火傷と関連する腸病変、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン－バレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発性神経炎、神経根障害、甲状腺機能亢進症、バセドウ病、赤芽球癆、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ、ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症、皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、大動脈炎症候群、結節性多発動脈炎、心筋症、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、脂肪過多、好酸球性筋膜炎、歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変、糸球体腎炎、男性型脱毛症、脱毛による老人性脱毛症、頭髪の発芽の欠如、ならびに／または頭髪の発生および頭髪の成長の減少による老人性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症、セザリー症候群、アジソン病、虚血症－再灌流による臓器の損傷、移植性疾患、虚血性疾患、内毒素ショック、偽膜性大腸炎、薬物または放射線により引き起こされる大腸炎、急性虚血性腎不全、慢性腎不全、酸素肺または薬物により引き起こされる中毒症、肺がん、肺気腫、白内障、鉄沈着症、色素性網膜炎、加齢黄斑変性、ガラス体瘢痕化、角膜アルカリバーン、多形紅斑性皮膚炎、線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周炎、敗血症、膵炎、老化、発がん、癌腫の転移および高山病、ヒスタミンまたはロイコトリエンＣ４放出関連疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素により引き起こされる壊死、ウイルス性肝炎、ショック、無酸素症、Ｂ型ウイルス性肝炎、非Ａ型／非Ｂ型肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症型肝不全、遅発性肝不全、慢性肝炎の急性増悪、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、老人性認知症、外傷、慢性細菌感染、リンパ系由来の悪性腫瘍、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性リンパ腫、および慢性リンパ球性リンパ腫からなる群から選択される、上記５から１０３のいずれかに記載の方法。
１０５．前記疾患が、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、喘息、強皮症、およびシェーグレン症候群からなる群から選択される、上記５から１０３のいずれかに記載の方法。
１０６．前記疾患が、骨髄拒絶、臓器移植片拒絶、および移植片対宿主病からなる群から選択される、上記５から１０３のいずれかに記載の方法。
１０７．式Ｉの化合物が、
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）；
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ） _２７ －Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）；および
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）からなる群から選択される、上記１から６および９６から１０６のいずれかに記載の方法。
１０８．式Ｉ：

【化51】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ａは、１または複数のイメージング剤を含み、
Ｂは、任意選択の連結基であり、
Ｃは、グランザイムＢに結合する基であって、
ａ）Ｘ ^１ －Ｘ ^２ －Ｘ ^３ －Ｘ ^４ －Ｘ ^５ －Ｘ ^６ －Ｄ（配列番号１）
［式中、
Ｘ ^１ 、Ｘ ^２ 、およびＸ ^３ は、各々、独立に、ベータＡ、Ｇ、Ｑ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ、Ｒ、Ｄ、およびＥからなる群から選択され、
Ｘ ^４ は、ＩおよびＶからなる群から選択され、
Ｘ ^５ は、Ｅ、Ｇ、Ｄ、およびＳからなる群から選択され、
Ｘ ^６ は、Ｅ、Ｘ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｑ、Ｎ、Ａ、Ｈ、Ｖ、Ｆ、およびＤからなる群から選択される］
に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、
ｂ）式ＩＩＩ：

【化52】

の化合物、またはその薬学的に許容される塩とからなる群から選択される基であり、式中、
ｎは、０、１、または２であり；
ｍは、０、１、または２であり；
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、各々、独立に、水素、Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキル、Ｃ _６～１０ アリール、ＨＥＴ、および－Ｎ（Ｒ ^１０ ） _２ からなる群から選択され、式中、各Ｃ _１～６ アルキル、Ｃ _１～６ アルコキシ、Ｃ _３～６ シクロアルキルは、独立に、ハロおよびヒドロキシからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され、各Ｃ _６～１０ アリールおよびＨＥＴは、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換され；
またはＲ ^１ およびＲ ^２ は、それらが接合した前記炭素原子と一体となって、それらの各々が、任意選択で１つ、２つ、または３つのＲ ^１０ 基により置換されていてもよい５～６員のシクロアルキル基または５～６員のヘテロシクロアルキル基を形成することが可能であり；
各Ｒ ^３ およびＲ ^７ は、独立に、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
各Ｒ ^４ 、Ｒ ^５ 、Ｒ ^６ 、およびＲ ^８ は、独立に、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ ^９ は、独立に、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルからなる群から選択される１つ、２つ、または３つの置換基により任意選択で置換されうるＨＥＴであり；
Ｒ ^１０ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、および－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルからなる群から選択され、式中、－Ｃ（Ｏ）Ｃ _１～４ アルキルは、任意選択で、－Ｎ（Ｒ ^１１ ） _２ 、ＨＥＴ、およびＣ _６～１０ アリールにより置換され、式中、Ｃ _６～１０ アリールは、任意選択で１つ、２つ、または３つのハロ基により置換されていてもよく；
各ＨＥＴは、独立に選択された、単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロアリール基、または単環式もしくは二環式の５～１０員のヘテロシクロアルキル基であり、この場合、各ＨＥＴは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を含み、任意選択で１つまたは２つのオキソ基により置換され；
Ｒ ^１１ は、水素、Ｃ _１～４ アルキル、およびＣ _１～４ ハロアルキルから選択され、
ただしｍが０であれば、ｎは、０であり、ｎが０であれば、ｍは、０である、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
１０９．式Ｉの前記化合物が、
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物１；配列番号９）；
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－（ＯＣＨ _２ ＣＨ _２ ） _２７ －Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｆ－Ｄ（化合物２；配列番号１０）；および
^６８ Ｇａ－ＮＯＴＡ－ベータＡ－Ｇ－Ｇ－Ｉ－Ｅ－Ｐ－Ｄ（化合物３；配列番号１１）からなる群から選択される、上記１０８に記載の化合物。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】